BRPI0617219A2 - método automatizado para a preparação de uma composição radiofarmacêutica estéril marcada com 123i, cassete estéril, e, usos de aparelho de sintetizador automatizado, e do cassete - Google Patents

Abstract

MéTODO AUTOMATIZADO PARA A PREPARAçãO DE UMA COMPOSIçãO RADIOFARMACêUTICA ESTéRIL MARCADA COM ^ 123^I CASSETE ESTéRIL, E, USOS DE APARELHO DE SINTETIZADOR AUTOMATIZADO, E DO CASSETE. A presente invenção proporciona um método automatizado para a preparação de composições radiofarmacéuticas marcadas com ^ 123^I, juntamente com cassetes descartáveis para uso no método. O uso de uma aparelhagem de sintetizador automatizado na preparação de radiofármacos marcados com ^ 123^I também é descrito. Também é descrito o uso de cassetes da presente invenção na preparação de radiofármacos marcados com ^ 123^I.

Description

"MÉTODO AUTOMATIZADO PARA A PREPARAÇÃO DE UMACOMPOSIÇÃO RADIOFARMACÊUTICA ESTÉRIL MARCADA COM123I, CASSETE ESTÉRIL, E, USOS DE APARELHO DE SINTETIZADORAUTOMATIZADO, E DO CASSETE"

Campo da Invenção.

A presente invenção proporciona um método automatizadopara a preparação de composições radiofarmacêuticas marcadas com 123I,juntamente com cassetes descartáveis para uso no método. O uso de umaaparelhagem de sintetizador automatizado na preparação de radiofármacosmarcados com I também é descrito.Fundamentos da Invenção.

Métodos automatizados para a preparação de radiofármacosque compreendem um radioisótopo emissor de pósitron para tomografia deemissão de pósitron (PET) estão bem estabelecidos [D.Alexoff, em"Handbook of Radiofármacos", M.J. Welch & C.S.Redvanly (Eds.), páginas283-305 Wiley (2003)].

WO 02/051447 descreve uma aparelhagem de sintetizadorautomatizado da preparação de radiofármacos, que incorpora um módulodescartável contendo quantidades pré-dosadas de reagentes químicos. Écitado que o dispositivo é particularmente útil para radioisótopos emissores depósitron de vida curta 11C, 13N, 15O e 18F.

Esforços também têm sido feitos para investigar dispensaçãode radiofármaco automatizada (APD) [Solanki, Hosp.Pharmac, 7(4), 94-98(2000)].

Para radiofármacos marcados com 123I, a abordagemconvencional é realizar manualmente as etapas de preparação deradiofármaco. Luurtsema et al. [App.Rad.Isotop., 55, 783-788 (2001)] têm,contudo, relatado sobre um método de radiomarcação automatizado para a-metil-tirosina marcada com Ie I (IMT). Luurtsema et al. não usam umaabordagem de cassete, e relatam que a melhor padronização esperada não sematerializou para I, e que a variação na síntese automatizada requerotimização adicional. Foi citado que tal otimização é necessária para cadanovo radiofármaco.

Embora a automatização seja reconhecida como tendo opotencial de reduzir a dose de radiação para o operador, também tem sidorelatado que os processos automatizados da arte anterior são muito maislentos do que a sua contra-parte manual, o que os torna menos atrativos[Solanki, Hosp.Pharmac, 7(4), 94-98 (2000)]. Portanto há uma necessidade deuma abordagem automatizada que seja rápida, mais flexível, menos sujeita àvariabilidade, e que possa gerar tamanhos de batelada maiores em umamaneira mais eficiente.A Presente Invenção.

A presente invenção proporciona um método automatizado• 10lpara a preparação de Composições radiofarmacêuticas marcadas com I,juntamente com cassetes descartáveis para uso no método. O método éparticularmente adequado para uso conjuntamente com aparelhagem de"sintetizador automatizado" baseada em cassete que estão comercialmentedisponíveis, mas correntemente usados primariamente para a preparação deradiofármacos de PET de vida curta. O método é particularmente útil ondenúmeros grandes de doses unitárias de paciente são requeridas em uma baseregular, tal como em radiofarmácia servindo quer múltiplos hospitais quer umúnico hospital grande. Isto permite uma determinação única de purezaradioquímica (RCP), e como conseqüência torna o processo de controle dequalidade (QC) mais eficiente.

Ciclotrons de energia mais alta (30 MeV) são preferidos para a123produção de I, o que tende a significar que a manufatura de radioisótopoocorre em sítios remotos do sítio do usuário. Isto por sua vez significa que,em manufatura de 123I-radiofármaco convencional perdas consideráveisdevido ao decaimento radioativo ocorrem durante o transporte doradiofármaco radiomarcado com 123I para o usuário final. A necessidade deníveis de radioatividade no momento da manufatura do produto, significa quepode haver problemas de estabilidade (especialmente quando o radiofármaco

marcado com I é transportado em solução). A presente invenção suplantatais problemas porque o usuário final potencialmente poderia preparar oradiofármaco marcado com 123I no sítio final do usuário usando aaparelhagem automatizada e os cassetes da presente invenção.

A meia-vida mais longa de I (13,2 horas) comparada com ade 11C (20,4 min) e com a de 18F (109,6 min) e até mesmo com a de 99mTc (6horas), e conseqüentemente uma tempo-pressão reduzida, é uma razãopossível do motivo de parecer haver pouco interesse em automatizarprocessos I-radiofarmacêuticos. Outra é talvez a confiabilidade dasabordagens da arte anterior, e se puderem satisfazer aos requerimentos deGMP (Boa Prática de Manufatura) das Autoridades Regulatórias paraprodução comercial.

A presente invenção também permite a preparação deradiofármacos estéreis marcados com 123I que são menos propensos parapreparação via abordagens convencionais com solução aquosa, devido porexemplo à necessidade do uso de solventes não-aquosos ou da remoção deimpurezas indesejáveis não-biocompatíveis. A invenção também permitesínteses mais complexas, incluindo a preparação in situ de intermediáriosbifuncionais marcados com 123I.

Os cassetes da presente invenção contêm os reagentesquímicos não-reativos necessários para uma dada preparação de radiofármaco

marcado com I. Estes cassetes tornam o presente método mais flexível doque as abordagens da arte anterior. Uso dos cassetes na preparação deradiofármacos marcados com 123I também é descrito.

A presente invenção também proporciona o uso de umaaparelhagem de sintetizador automatizado baseado em cassete parapreparação radiofarmacêutica marcada com I.

Descrição Detalhada da Invenção

Em um primeiro aspecto, a presente invenção proporciona ummétodo automatizado para a preparação de uma composiçãoradiofarmacêutica estéril marcada com 123I que compreende uma moléculaalvo biológica marcada com I em um meio veículo biocompatível, na qualo citado método compreende:

(i) provisão de um cassete estéril, de uso único quecompreende um vaso de reação e alíquotas separadas dos seguintes reagentesnão-radioativos (A) e (B) e opcionalmente (C) a (G), cada um na formaestéril:

A. uma molécula alvo biológica ou um seu precursor;

B. solvente(s) adequado(s) para a dissolução de Reagente A eReagentes C a G se presentes, incluindo pelo menos um solvente que é ummeio veículo biocompatível;

C. um agente oxidante capaz de oxidar íon iodeto em umaespécie de iodação eletrofílica;

D. um fornecimento de iodeto- I;

E. um reagente de derivação bifuncional, não-radioativo capazde conjugar a molécula alvo biológica;

F. um reagente de terminação capaz de reduzir a citada espéciede iodação eletrofílica a íon iodeto;

G. um catalisador para reações de halogenação nucleofílica;

(ii) provisão de um fornecimento estéril de iodeto- I em umrecipiente adequado;

(iii) radiomarcação da mistura alvo biológica pelas etapas (iv),(v) ou (vi);

(iv) transferência controlada por microprocessador para ocitado vaso de reação de Reagente A e uma alíquota de iodeto- I de (ii),opcionalmente na presença de Reagente C, seguida por misturação na mesma

para dar a molécula alvo biológica marcada com I, com uso opcional deReagente F para interromper a reação de radioiodação; ou alternativamente

(v) radioiodação do reagente de derivação bifuncional portransferência controlada por microprocessador para o citado vaso de reação de

Reagente E e uma alíquota de iodeto- I de (ii), opcionalmente na presençade Reagente C, seguida por misturação na mesma para dar o reagente dederivação bifuncional marcada com I, com uso opcional de Reagente F parainterromper a reação de radioiodação, seguida pela radioiodação da moléculaalvo biológica por conjugação com o citado reagente de derivação bifuncionalmarcado com I; ou alternativamente

(vi) quando Reagente A for adequado para reações de troca dehalogênio, transferência controlada por microprocessador para o citado vasode reação de Reagente A e uma alíquota de iodeto- I de (ii), opcionalmentena presença de Reagente G, seguida por misturação na mesma para dar amolécula alvo biológica marcada com I, com uso opcional de aquecimentopara acelerar a citada reação de radioiodação;

(vii) quanto o produto de molécula alvo biológica marcadacom I de etapas (iv) a (vi) já estiver em um meio veículo biocompatível, eleé usado diretamente em etapa (viii), de outro modo o produto de etapas (iv) a

(vi) é quer dissolvido em um meio veículo biocompatível quer o solvente

usado em etapas (iv) a (vi) é removido e o resíduo redissolvido em um meio

veículo biocompatível;

o produto de etapa (vii) é quer usado diretamente quer é

opcionalmente submetido a um ou mais dos seguintes processos adicionais:

purificação; ajuste de pH; diluição; concentração ou esterilização terminal,

para dar a composição 123I-radiofarmacêutica desejada.

O "meio veículo biocompatível" é um fluido, especialmenteum líquido, no qual a molécula alvo biológica marcada com I é suspensa oudissolvida, de tal modo que a composição seja fisiologicamente tolerável, istoé, possa ser administrada a um corpo de mamífero sem toxicidade oudesconforto indevido. O meio veículo biocompatível é adequadamente umlíquido veículo injetável tal como água estéril, livre de pirogênio para injeção;uma solução aquosa tal como solução salina (que pode estar vantajosamenteequilibrada de modo que o produto final para injeção seja quer isotônico quernão-hipotônico); uma solução aquosa de uma ou mais substâncias ajustadorasde tonicidade (eg. sais de cátions de plasma com contra-íons biocompatíveis),açúcares (e.g. glicose ou sacarose), álcoois de açúcar (eg. sorbitol ou manitol),glicóis (eg. glicerol), ou outros materiais de poliol não-iônico (eg.poli(etileno-glicóis), propileno-glicóis e semelhantes). O meio veículobiocompatível também pode compreender solventes orgânicos biocompatíveistal como etanol. Tais solventes orgânicos são úteis para solubilizarformulações ou composições mais lipofílicas. Preferivelmente o meio veículobiocompatível é água livre de pirogênio para injeção, solução salina isotônicaou uma solução aquosa etanólica. O pH do meio veículo biocompatível parainjeção intravenosa está adequadamente dentro da faixa de 4,0 a 10,5.

O termo "molécula alvo biológica" significa: peptídeos ouanálogos de peptídeo de 3-100 meros que podem ser peptídeos lineares oupeptídeos cíclicos ou suas combinações; um substrato de enzima, antagonistaou inibidor; um composto ligante de receptor sintético; um oligonucleotídeo,ou fragmentos de oligo-DNA ou de oligo-RNA. A molécula alvo biológicapode ser de origem sintética ou natural, mas é preferivelmente sintética.

Peptídeos adequados para uso na presente invenção incluem:somatostatina, octreotídeo e análogos,peptídeos que se ligam no receptor ST, onde ST refere-se auma toxina estável ao calor produzida por E. coli e outros microorganismos;

- fragmentos de laminina eg. YIGSR, PDSGR, IKVAV,LRE e KCQAGTFALRGDPQG,

N-formil-peptídeos para selecionar sítios de acúmulo deleucócitos,

fator 4 de plaqueta (PF4) e seus fragmentos,

- peptídeos contendo (Arg-Gly-Asp) RGD, que podem eg.

selecionar angiogênese[R.Pasqualini et al.., Nat Biotechnol. 1997Jun;15(6):542-6]; [E. Ruoslahti, Kidney Int. 1997 maio; 51(5): 1413-7].

fragmentos de peptídeo de a2-antiplasmina, fibronectinaou beta-caseína, fibrinogênio ou trombospondina. As seqüências de aminoácido de a2-antiplasmina, fibronectina, beta-caseína, fibrinogênio etrombospondina podem ser encontradas nas seguintes referências: precursorde a2-antiplasmina [M.Tone et al., J.Biochem, 102, 1033, (1987)]; beta-caseína [L.Hansson et al., Gene, 139, 193, (1994)]; fibronectina [A.Gutman etal., FEBS Lett., 207, 145, (1996)]; precursor de trombospondina-1 [V.Dixit etal., Proc. Natl. Acad. ScL, USA, 83, 5449, (1986)]; R.F.Doolittle, Ann. Rev.Biochem., 53, 195, (1984);

peptídeos que são substratos ou inibidores de angiotensina,tal como: angiotensina II Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe (E. C. Jorgensenet al., J. Med. Chem., 1979, Vol. 22, 9, 1038-1044) [Sar, lie] Angiotensina II: Sar-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Ile (R.K. Turker et al.., Science, 1972, 177,1203).

Angiotensina I: Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu.

Preferivelmente os peptídeos da presente invençãocompreendem peptídeos de antiplasmina ou de angiotensina II. Peptídeos deantiplasmina compreendem uma seqüência de aminoácidos lida a partir daterminação-N de:

(i) a2-antiplasmina, i.e. NH2-Asn-Gln-Glu-Gm-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-OH ou variantes desta na qual um ou maisaminoácidos têm sido substituídos, adicionados ou removidos tais como:

NH2-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-Gly-OH,

NH2-Asn-Gln-Glu-Ala-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-Gly-OH,

NH2-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Gly-OH; ou

(ii) caseína ie. Ac-Leu-Gly-Pro-Gly-Gm-Ser-Lys-Val-Ile-Gly.

O termo "peptídeo cíclico" significa uma seqüência de 5 a 15aminoácidos na qual os dois aminoácidos são ligados juntos por uma ligaçãocovalente que pode ser uma ligação de dissulfeto ou peptídica ou uma ligaçãonão-peptídica sintética tal como uma ligação tio-éter, fosfodiéster, dissiloxanoou uretano. O termo "aminoácido" significa um L-ou D-aminoácido, análogode aminoácido ou mimético de aminoácido que pode ser opticamente puro,i.e. um único enantiômero e conseqüentemente um enantiômero quiral, ouuma mistura de enantiômeros. Preferivelmente os aminoácidos da presenteinvenção são opticamente puros. O termo "mimético de aminoácido "significa análogos sintéticos de aminoácidos naturalmente ocorrentes que sãoisósteres, i.e. têm sido planejados para imitarem a estrutura estérica eeletrônica do composto natural. Tais isósteres são bem conhecidos poraquelas pessoas experientes na arte e incluem mas não são limitados adepsipeptídeos, peptídeos retro-inversos, tio-amidas, ciclo-alcanos outetrazóis 1,5-dissubstituídos [veja M. Goodman, Biopolymers, 24, 137, (1985)].

Peptídeos sintéticos da presente invenção podem ser obtidospor síntese convencional em fase sólida, como descrito em P. Lloyd-Williams, F. Albericio e E. Girald; Chemical Approaches to the Synthesis ofPeptides and Proteins, CRC Press, 1997.

Substratos de enzima, antagonistas ou inibidores adequadosincluem glicose e análogos de glicose tais como fluorodesóxiglicose; ácidosgraxos, ou elastase, Angiotensina II ou inibidores de metaloproteinase. Umantagonista não-peptídico de Angiotensina II é Losartan.

Compostos ligantes de receptor sintéticos adequados incluemestradiol, estrogênio, progestina, progesterona e outros hormônios esteroidais;ligantes para o receptor de dopamina D-I ou D-2, ou transportador dedopamina tais como tropanos; e ligantes para o receptor de serotonina.

Moléculas alvo biológicas preferidas da presente invenção sãoligantes de transportador de dopamina tais como tropanos; ácidos graxos;ligantes de receptor de dopamina D-2; benzamidas; anfetaminas; benzil-guanidinas, iomazenil, benzofurano (IBF) ou ácido hipúrico. Derivados detropano preferidos são 123I-CIT (Dopascan™), 123I-CIT-FP (DaTSCAN™) e oisômero E de I-2p-carbometóxi-3 p-(4-fluoro-fenil)-N-( 1 -iodo-prop-1 -en-3-il)-nortropano (Altropane™). Dopascan™ e DaTSCAN™ são especialmentepreferidos. Estes e outros agentes de tropano são descritos por Morgan eNowotnik [Drug News Perspect, 12(3), 137-145 (1999). Ácidos graxospreferidos são I-BMIPP e I-EPPA. Derivados de anfetamina preferidossão I-IMP. Uma benzil-guanidina preferida é meta-iodo-benzil-guanidina(MIBG), ie. 123I-MIBG.

O "precursor" compreende um derivado não-radioativo damolécula alvo biológica, planejado de modo que a reação química com umaforma química conveniente de radioisótopo I (especialmente iodeto- I)ocorra sítio-especificamente; possa ser conduzida em número mínimo deetapas (idealmente uma etapa única); e sem a necessidade de purificaçãosignificativa (idealmente sem purificação adicional), para dar o produtoradioativo desejado. Tais precursores são sintéticos e podem serconvenientemente obtidos em pureza química boa. O "precursor" podeopcionalmente compreender um grupo protetor (P ) para certos gruposfuncionais da molécula alvo biológica. Precursores e seus métodos depreparação adequados são descritos por Bolton, J. Lab. Comp. Radiopharm.,45, 485-528 (2002).

O termo "grupo protetor" (P ) significa um grupo que inibeou suprime reações químicas indesejáveis, mas que é planejado para sersuficientemente reativo que pode ser clivado do grupo funcional em questãosob condições suficientemente brandas que não modificam o restante damolécula. Após desproteção o produto desejado é obtido. Grupos protetoressão bem conhecidos por aquelas pessoas experientes na arte e sãoadequadamente escolhidos de, para grupos amina: Boc (onde Boc é terc-butil-óxi-carbonila), Fmoc (onde Fmoc é fluorenil-metóxi-carbonila), trifluoro-acetila, alil-óxi-carbonila, Dde [i.e. 1 -(4,4-dimetil-2,6-dioxo-ciclo-hexilideno)-etila] ou Npys (i.e. 3-nitro-2-piridina-sulfenila); e para gruposcarboxila: metil-éster, terc-butil-éster ou benzil-éster. Para grupos hidroxila,grupos protetores adequados são: metila, etila ou terc-butila; alcóxi-metila oualcóxi-etila; benzila; acetila; benzoíla; tritila (Trt) ou trialquil-silila tal como(terc-butil)-dimetil-silila. Para grupos tiol, grupos protetores adequados são:tritila e 4-metóxi-benzila. O uso de outros grupos protetores são descritos em'Protective Groups in Organic Synthesis', Theorodora W. Greene e Peter G.M. Wuts, (Third Edition, John Wiley & Sons, 1999). Preferivelmente, oprecursor não compreende um grupo protetor, visto que tipicamente requereráuma etapa de processo adicional para remover o grupo protetor.

Precursores preferidos são aqueles que compreendem umderivado que quer sofre iodação eletrofilica ou nucleofílica quer sofrecondensação com um aldeído marcado ou com uma cetona marcada.Exemplos da primeira categoria são:

(a) derivados organometálicos tais como um trialquil-estanano

(eg. trimetil-estanila ou tributil-estanila), ou um trialquil-silano (eg. trimetil-silila) ou um composto orgânico de boro (eg. ésteres de boronatos ouorganotrifluoroboratos);

(b) um iodeto ou brometo de alquila / arila não-radioativo paratroca de halogênio;

(c) triflatos, mesilatos ou tosilatos de alquila / arila paraiodação nucleofílica;

(d) anéis aromáticos ativados para iodação eletrofílica (eg.fenóis);

(e) anéis aromáticos ativados para iodação nucleofílica (eg.sais de aril-iodônio, sais de aril-diazônio, sais de aril-trialquil-amônio ouderivados de nitro-arila);

(f) anéis aromáticos deficientes em elétrons adequados paraiodação nucleofílica, tais como hipurato e 2-iodo-benzil-guanidina.

O uso de precursores de iodeto de arila que não estão ativadospara troca nucleofílica tipicamente requer o emprego de um catalisador parareações de halogenação nucleofílica, como descrito abaixo.

O precursor preferivelmente compreende: um átomo dehalogênio não-radioativo tal como um brometo ou iodeto de arila (parapermitir troca de iodo radioativo); um anel arila precursor ativado (e.g. umgrupo fenol); um composto precursor organometálico (eg. trialquil-estanho,trialquil-silila ou composto orgânico de boro); ou um precursor orgânico talcomo triazinas ou um grupo de saída bom para substituição nucleofílica talcomo um sal de iodônio. Precursores e métodos de introdução de radioiodoem moléculas orgânicas são descritos por Bolton [J.Lab.Comp.Radiopharm.,45, 485-528 (2002)]. Precursores e métodos de introdução de radioiodo emproteína são descritos por Wilbur [Bioconj.Chem., 3(6), 433-470 (1992)].Compostos orgânicos de boro de éster de boronato e sua preparação sãodescritos por Kabalaka et al. [Nucl.Med.BioL, 29, 841-843 (2002) e 30, 369-373(2003)]. Organotrifluoroboratos adequados e sua preparação são descritospor Kabalaka et al. [Nucl.Med.BioL, 31, 935-938 (2004)].

Exemplos de grupos arila precursores adequados nos quaishalogênios radioativos, especialmente iodo, podem ser ligados são dadosabaixo:

<formula>formula see original document page 13</formula>

Ambos contêm substituintes que permitem substituição deradioiodo fácil em anel aromático. Substituintes alternativos contendo iodoradioativo podem ser sintetizados por iodação direta via troca de radio-halogênio, e.g.

O átomo de radioiodo é preferivelmente ligado via umaligação covalente direta em um anel aromático tal como um anel benzeno, ouum grupo vinila porque é sabido que átomos de iodo ligados em sistemasalifáticos saturados são propensos ao metabolismo in vivo e comoconseqüência perda do radioiodo.

O "precursor" pode ser opcionalmente fornecidocovalentemente ligado em uma matriz de suporte sólido, como é descrito paraa segunda modalidade abaixo.

O termo "cassete" significa uma peça da aparelhagemplanejada para encaixar removível e intercambiavelmente em umaaparelhagem de sintetizador automatizado (como definida abaixo), em um talmodo que movimento mecânico de partes móveis do sintetizador controla aoperação do cassete de fora do cassete, ie. externamente. Cassetes adequadoscompreendem um arranjo linear de válvulas, cada um ligado a uma porta ondereagentes ou frascos podem ser acoplados, quer por punção de agulha de umfrasco vedado por septo, quer por juntas macho-fêmea, impermeáveis a gás.Cada válvula possui uma junta macho-fêmea que forma interface com umbraço móvel correspondente do sintetizador automatizado. Rotação externa dobraço assim controla a abertura ou o fechamento da válvula quando o casseteé acoplado no sintetizador automatizado. Partes móveis adicionais dosintetizador automatizado são projetadas para engatar em pontas de êmbolo deseringa, e assim aumenta ou diminuem os volumes do cilindro de seringa.

O cassete é versátil, tipicamente possuindo várias posiçõesonde reagentes podem ser acoplados, e vários adequados para acoplamento defrascos de seringa de reagentes ou cartuchos de cromatografia (eg. SPE). Ocassete sempre compreende um vaso de reação. Tais vasos de reação sãopreferivelmente 1 a 10 cm , mais preferivelmente 2 a 5 cm em volume eestão configurados de tal modo que 3 ou mais portas do cassete sãoconectadas no mesmo, para permitir a transferência de reagentes ou solventesde várias portas do cassete. Preferivelmente o cassete possui 15 a 40 válvulasem um arranjo linear, mais preferivelmente 20 a 30, com 25 sendoespecialmente preferido. As válvulas do cassete são cada uma preferivelmenteidênticas, e mais preferivelmente são válvulas de 3 vias. Os cassetes dapresente invenção são projetados para serem adequados para manufaturaradiofarmacêutica e são portanto manufaturados de materiais que são de graufarmacêutico e idealmente também são resistentes à radiólise.

O termo "reagente de derivação bifuncional" possui seusignificado convencional, ie. um composto não-radioativo possuindo doisgrupos funcionais diferentes presentes: um adequado para radiomarcação comradioiodo, o outro adequado para conjugação com uma molécula alvobiológica para dar uma ligação covalente. O grupo funcional adequado pararadiomarcação com radioiodo adequadamente compreende um grupo"precursor" como descrito acima. Grupos funcionais adequados paraconjugação incluem: amina, tiocianato, maleimida e ésteres ativos. Taisreagentes bifuncionais podem ser reagidos com grupos funcionais de contra-parte adequados na molécula alvo biológica para formar o conjugadodesejado. Grupos funcionais adequados na molécula alvo biológica incluem:carboxilas (para formação de ligação amida com um reagente bifuncionalamina-funcionalizado); aminas (para formação de ligação amida com umreagente carboxil- ou éster ativo-fiincionalizado); halogênios, mesilatos etosilatos (para N-alquilação de um reagente amina-funcionalizado) e tióis(para reação com reagentes maleimida-funcionalizado).

Copulação de amida pode ser realizada diretamente (eg.usando síntese de peptídeo em fase sólida), ou na presença de um agenteativador adequado, tal como BOP [ie. benzotriazol-l-il-óxi-tris(dimetil-amino)-fosfônio] ouN,N'-diciclo-hexil-carbodiimida (DCCI).

A copulação também pode ser realizada via intermediáriosapropriados como é conhecido na arte, tais como ésteres ativados do grupocarboxila do grupo alvo biológico. Alternativamente, o grupo amina pendentedo reagente bifuncional pode ser primeiro convertido em um grupoisotiocianato (-NCS) ou isocianato (-NCO), que permite a conjugação emmoléculas alvo biológicas contendo amina, via a formação de ligaçõestiouréia ou uréia respectivamente. Alternativamente, o grupo amina pendentedo reagente bifuncional pode ser reagido com um diácido para introduzir umgrupo carboxila terminal via um grupo ligante. Um reagente bifuncionalpossuindo uma função carboxila pode ser usado em uma maneira similar paracopular diretamente em moléculas alvo biológicas contendo amina via umaligação amida. O reagente bifuncional também pode possuir um grupoplanejado para reagir com grupos tiol na molécula alvo biológica para formarligações tioéster estáveis. Exemplos de tais grupos são maleimidas (quepodem ser preparadas pela reação de anidrido maleico com a aminacorrespondente, seguida pelo aquecimento com anidrido acético), eacrilamidas (que podem ser preparadas pela reação de cloreto de acrilila coma amina).

O termo "éster ativo" significa um derivado de éster de umácido carboxílico que é planejado para ser um grupo de saída melhor, e comoconseqüência permite reação mais fácil com nucleófilos presentes no grupoalvo biológico tais como aminas. Exemplos de ésteres adequados são: N-hidróxi-succinimida (NHS), pentafluoro-fenol, pentafluoro-tio-fenol, para-nitro-fenol e hidróxi-benzotriazol.

Agentes de derivação bifuncionais adequados são descritos porFinn ["Chemistry Applied to Iodine Radionuclides", capítulo 13 páginas 423-5 440 em "Handbook of Radiopharmacs", Welch & Redvanly (Eds), Wiley(2002)] e Wilbur [Bioconj.Chem., 3(6), 433-470 (1992)]. Agentes dederivação preferidos incluem:

Bolton-Hunter [Bolton et al., Biochem. J., 133, 529-539(1973)];

para-iodo-benzoato de N-succinimidila [Zalutsky et al.,

App.Rad.Isot., 38, 1051-55 (1987)];

3-OH-4-iodo-benzoato de N-succinimidila [Vaidyanathan etal., Bioconj.Chem., 8, 724-9 (1997)];

N-cloro-iodo-tiramina [Holowaka et al., Anal.Biochem., 117,390-7(1981)].

O termo "agente oxidante capaz de oxidar íon iodeto em umaespécie de iodação eletrofílica" significa um composto que oxida íon iodeto aiodônio(I+) ou espécies de iodo similares positivamente carregadas.Preferivelmente, o agente oxidante é escolhido de modo que tenha efeitomínimo sobre o composto a ser radioiodado, ie. Reagente A ou Reagente E (oagente de derivação bifuncional). Tais oxidantes adequados são conhecidos naarte e incluem: peróxido de hidrogênio, Cloramina T, iodogênio, ácidoperacético e lactoperoxidase. Tais oxidantes preferidos são: ácido peracético eperóxido de hidrogênio. Também é considerado que a oxidação poderia serrealizada usando uma célula eletrolítica, que poderia formar umacaracterística adicional do cassete da presente invenção. Tais célulaseletrolíticas possuem a vantagem de proporcionarem condições de oxidaçãocontroladas, sem a necessidade de adicionar agentes químicos oxidantes.

O termo "reagente de terminação" significa um composto quepara a reação de radioiodação, pela reação com a espécie de radioiodaçãoativa para formar uma espécie que não é mais reativa com a molécula alvobiológica ou seu precursor. Reagentes adequados são conhecidos no campo, eincluem solução aquosa de metabissulfito de sódio. O agente de terminaçãotambém pode possuir a função de neutralizar qualquer oxidante em excessorestante, para proteger os produtos marcados como I que podem sersuscetíveis à degradação por oxidação.

Reagente B, ie. o(s) solvente(s) para Reagentes AeBeReagentes CaG quando presentes, poderia ser "meio veículo biocompatível"como definido acima, ou pode ser solventes orgânicos adequados parasolubilização de reagentes e para realização das reações do presente método.O presente método assim possui flexibilidade significativa, porque não élimitado aos meios aquosos.

O termo "catalisador para reações de halogenaçãonucleofílicas" significa um composto que ajuda a acelerar tais reações,reduzindo tempos de reação e talvez permitindo o uso de temperaturas dereação mais baixas. Tais catalisadores são conhecidos na arte, e tipicamenteincluem os íons cobre Cu(I) ou Cu(II), preferivelmente Cu(I). [Eeersls et al.,J.Lab.Comp.Radiopharm., 48(4), 241-257 (2005); Bolton, ibid, 45, 485-528(2002) e Prabhakar et al., Appl.Rad.Isotop., 50(6), 1011-1014 (1999)]. Taiscatalisadores são particularmente úteis quando um precursor não-ativado éusado.

O termo "controlado por microprocessador" possui seusignificado convencional. Assim, o termo "microprocessador" como aquiusado, refere-se a um processador de computador contido em um chip decircuito integrado, um tal processador também pode incluir memória ecircuitos associados. O microprocessador é projetado para realizar operaçõesaritméticas e lógicas usando circuito lógico que responde às e processa asinstruções básicas que acionam um computador. O microprocessador tambémpode incluir instruções programadas para executar ou controlar funçõesselecionadas, métodos computacionais, comutação, etc. Microprocessadores edispositivos associados estão comercialmente disponíveis em numerosasfontes, incluindo, mas não limitadas a: Cypress Semiconductor Corporation,San Jose, Califórnia; LBM Corporation; Applied Microsystems Corporation,Redmond, Washington, USA; Intel Corporation and National Semiconductor,Santa Clara, Califórnia. Com relação à presente invenção, o microprocessadorproporciona uma série programável de etapas reproduzíveis envolvendo eg.transferências de agentes químicos, aquecimento, filtração etc. Omicroprocessador da presente invenção preferivelmente também grava osdados de produção de batelada (eg. reagentes usados, condições de reação,materiais radioativos etc). Estes dados gravados são úteis para demonstrar aconformidade de GMP para manufatura radiofarmacêutica. Omicroprocessador também está preferivelmente ligado em uma leitora decódigo de barras para permitir a seleção fácil de condições de reação parauma dada corrida de produção, como descrito abaixo.

O radioisótopo 123I da presente invenção é produzido porciclotron como é conhecido na arte, e tipicamente provém na forma químicaiodeto em meios aquosos. O iodeto-1 7*7I (ii) opcionalmente pode conter iodeto- I não-radioativo como veículo, embora seja preferido que iodeto- I não-radioativo seja incluído como um reagente do cassete, como descrito acima.

O método da presente invenção pode ser realizado sobcondições de manufatura assépticas (ie. sala limpa) para dar o produtoradiofarmacêutico não-pirogênico, estéril desejado. É preferido, contido, queos componentes chave, especialmente o cassete e os reagentes associadosmais aquelas partes da aparelhagem que entram em contato com oradiofármaco (eg. frascos e tubulação de transferência) estejam estéreis. Oscomponentes e reagentes podem ser esterilizados por métodos conhecidos naarte, incluindo: filtração estéril, esterilização terminal usando e.g. irradiaçãogama, autoclavagem, tratamento químico (e.g. com óxido de etileno) ou comcalor seco. É preferido esterilizar antecipadamente os componentes não-radioativos, de modo que seja necessário o número mínimo de manipulaçõessobre o 123I-radiofármaco. Como uma precaução, contudo, é preferido incluirpelo menos uma filtração estéril em etapa (viii) do presente métodoautomatizado.

O precursor, agente oxidante, reagente de terminação e outrostais reagentes e solventes são cada um fornecidos em frascos ou vasosadequados que compreendem um recipiente vedado que permite manutençãode integridade estéril e/ou segurança radioativa, mais opcionalmente um gásinerte de espaço confinante (eg. nitrogênio ou argônio), enquanto permiteadição e remoção de soluções por seringa ou cânula. Um tal recipientepreferido é um frasco vedado por septo, no qual a tampa hermética a gás écrimpada com uma sobrevedação (tipicamente de alumínio). A tampa éadequada para perfuração única ou múltipla com uma agulha hipodérmica(e.g. uma tampa vedada de septo crimpado) enquanto mantém a integridadeestéril. Tais recipientes possuem a vantagem adicional de que a tampa podesuportar vácuo se desejado (eg. para modificar o gás de espaço confinante oudesgaseificar soluções), e suportar mudanças de pressão tais como reduçõesem pressão sem permitir ingresso de gases atmosféricos externos, tais comooxigênio ou vapor de água. O vaso de reação é adequadamente escolhido detais recipientes, e suas modalidades preferidas. O vaso de reação épreferivelmente feito de um plástico biocompatível (eg. PEEK).

Os produtos radiofarmacêuticos marcados com I do métododa presente invenção são fornecidos em um recipiente vedado como descritoacima, que pode conter doses únicas ou múltiplas para paciente. Doses únicasou "doses unitárias" podem assim ser retiradas para dentro de seringas de grauclínico em vários intervalos de tempo durante o tempo de vida viável dapreparação para adequar à situação clínica. Recipientes de doses múltiplaspreferidos compreendem um frasco de volume único (e.g. de volume de 10 a30 cm3) que contém radioatividade suficiente para doses múltiplas parapaciente. Seringas de dose unitária são projetadas para serem usadas comapenas um único paciente humano, e são portanto preferivelmentedescartáveis e adequadas para injeção em humano. As seringas de doseunitária cheias podem ser opcionalmente proporcionadas com uma blindagemde seringa para proteger o operador da dose radioativa. Tais blindagens deseringa radiofarmacêutica adequadas são conhecidas na arte e preferivelmentecompreendem quer chumbo quer tungstênio. O método da presente invençãopreferivelmente adicionalmente compreende subdispensação de composiçãoradiofarmacêutica marcada com I em doses unitárias para paciente.

Quando a etapa (viii) da presente invenção inclui uma etapa depurificação, esta poderá incluir uma ou mais das seguintes:

(i) filtração para remover particulados ou matéria insolúvel

indesejável;

(ii) cromatografia.

A cromatografia pode envolver metodologia convencional emfase normal ou em fase reversa, métodos de troca iônica ou de exclusão detamanho. Adequadamente toma a forma de cartuchos de HPLC, SPE(Extração em fase sólida) ou de cromatografia 'flash'. Em algumas situaçõeso produto desejado está essencialmente imobilizado no topo de uma matriz decoluna por causa da afinidade muito maior pela fase estacionária comparadacom a fase móvel. As impurezas podem ser assim eluídas em uma fase móvelpara a qual possuem afinidade maior do que para a fase estacionária em umrecipiente de resíduos adequadamente blindado. Após lavagem, o produtopurificado pode ser subseqüentemente simplesmente eluído usando umsistema eluente alternativo para o qual o produto exibe afinidade maior do quepara a fase estacionária. Qualquer tal cromatografia é preferivelmenterealizada usando colunas descartáveis, de modo que não haja o risco de quepreparações subseqüentes sejam contaminadas com o material de preparaçõesprévias. Tais cartuchos de cromatografia estão comercialmente disponíveisem uma variedade de fornecedores, incluindo Waters e Varian.

Quando a etapa (viii) da presente invenção inclui uma etapa de ajuste de pH, esta pode ser realizada usando um agente ajustador de pH. Otermo "agente ajustador de pH " significa um composto ou uma mistura decompostos útil para garantir que o pH do kit reconstituído esteja dentro delimites aceitáveis (aproximadamente pH 4,0 a 10,5) para administração ahumano ou mamífero. Agentes de ajuste de pH adequados incluem tampões farmaceuticamente aceitáveis, tais como tricina, fosfato ou TRIS [ie.tris(hidróxi-metil)-amino-metano], ácidos farmaceuticamente aceitáveis talcomo ácido acético, bases e bases farmaceuticamente aceitáveis tais comocarbonato de sódio, bicarbonato de sódio e suas misturas.

Quando a etapa (vii) da presente invenção inclui etapas de remoção de solvente e de redissolução, o solvente pode ser removido porvárias técnicas:

(i) cromatografia;

(ii) aplicação de pressão reduzida ou de vácuo;

(iii) evaporação devido a aquecimento ou borbulhamento de gás através da ou sobre a solução;

(iv) destilação azeotrópica.

A técnica de cromatografia aplica imobilização como descritoacima, e é um método preferido. Tais técnica de remoção de solvente sãoimportantes porque permitem a preparação de radiofármacos marcados com123I pela reação em solventes orgânicos, mas o radiofármaco final ainda éfornecido em um meio veículo biocompatível.

Isto é particularmente útil para precursores ou intermediáriosque quer são fracamente solúveis em meios aquosos quer são suscetíveis àhidrólise em meios aquosos e talvez ambos. Exemplos disto são: BZM(precursor para I-EBZM); precursores de trialquil-estanho, especialmentederivados de tributil-estanho ou trimetil-estanho. Conseqüentemente, quandoo precursor é fracamente solúvel ou é suscetível à hidrólise em meiosaquosos, o solvente usado é preferivelmente um solvente orgânico, maispreferivelmente um solvente orgânico miscível com água tal comoacetonitrila, etanol, dimetil-formamida (DMF), dimetil-sulfóxido (DMSO) ouacetona. Tais solventes preferidos são acetonitrila, etanol, DMF e DMSO.

O método de purificação também pode envolver remoção deexcesso de precursor não-radioativo do fármaco marcado com I. Isto éparticularmente importante quando o precursor também é biologicamenteativo (eg. um peptídeo com afinidade por um dado receptor in vivo), visto queremove qualquer possibilidade do precursor competir com o radiofármacomarcado com I pelo sítio alvo biológico de interesse in vivo. Estapurificação pode ser realizada como segue: o produto bruto é carregado emuma pré-coluna de HPLC. Impurezas polares são lavadas para o resíduo viauma válvula desviadora que fisicamente protege a coluna principal eintensifica a purificação. O produto e as impurezas lipofílicas são entãotransferidos via válvulas para a coluna principal. O produto écromatograficamente separado e coletado. O sinal de UV correspondente équantificado de modo que a atividade específica pode ser subseqüentementecalculada. A fração de produto pode ser opcionalmente processada via umacoluna SPE para permitir o ajuste do conteúdo de solvente orgânico.

Materiais adequados para a coluna de separação que dãoseparação elevadamente eficiente são conhecidos na arte e incluem: resinas detroca iônica, sílica, alumina e colunas e fase reversa. Preferivelmente a colunade separação é planejada para se de uso único, ie. descartável. Maispreferivelmente a coluna de separação é uma coluna SPE ou uma umCartucho de Cromatografia Flash (comercialmente disponível em umavariedade de fornecedores).O método da presente invenção pode ser realizado usandorobótica de laboratório ou um sintetizador automatizado. O termo"sintetizador automatizado" significa um módulo automatizado baseado noprincípio de operações unitárias como descrito por Satyamurthy et al.[Clin.Positr.Imag., 2(5), 233-253 (1999)]. O termo 'operações unitárias'significa que processos complexos são reduzidos a uma série de operações oureações simples, que podem ser aplicadas a uma variedade de materiais. Taissintetizadores automatizados são preferidos para o método da presenteinvenção, e estão comercialmente disponíveis em uma variedade defornecedores [Satyamurthy et al., acima], incluindo: GE Healthcare; CTI Inc;Ion Beam Applications S.A.(Chemin du Cyclotron 3, B-1348 Louvain-La-Neuve, Bélgica); Raytest (Germany) e Bioscan (USA).

Sintetizadores automatizados comerciais tambémproporcionam recipientes adequados para o resíduo radioativo líquido geradocomo um resultado da preparação radiofarmacêutica. Sintetizadoresautomatizados tipicamente não são proporcionados com blindagem contraradiação, porque são projetados para serem empregados em uma célula detrabalho radioativa adequadamente configurada. A célula de trabalhoradioativa proporciona blindagem à radiação adequada para proteger ooperador da dose de radiação potencial, bem como ventilação para remover osvapores químicos e/ou radioativos. Sintetizadores automatizados adequadosda presente invenção são aqueles que compreendem um cassete de uso únicoou descartável que compreende todos os reagentes, vasos de reação eaparelhagem necessários para realizar a preparação de uma dada batelada deradiofármaco marcado com I. Tais cassetes são descritos na segundamodalidade abaixo. O cassete significa que o sintetizador automatizado possuia flexibilidade para ser capaz de preparar uma variedade de radiofármacosmarcados com I, ou também radiofármacos marcados com F com riscomínimo de contaminação cruzada, por simples mudança do cassete. Aabordagem de cassete possui as vantagens de: montagem simplificadaconseqüentemente risco reduzido de erro do operador; conformidade de GMPmelhorada; capacidade multi-traçadora; mudança rápida entre corridas deprodução; checagem diagnostica automatizada de pré-corrida do cassete e dosreagentes; checagem cruzada de código de barras automatizada de reagentesquímicos versus a síntese a ser realizada; traçabilidade de reagente; uso únicoe conseqüentemente nenhum risco de contaminação cruzada, resistência aabuso e à falsificação. Como observado acima, a abordagem de cassetetambém é versátil de modo a suplantar o problema da arte anterior de ter quereprojetar toda uma aparelhagem de síntese automatizada cada vez que umradiofármaco diferente tiver que ser preparado.

É considerado que o processo da presente invenção pode serusado para produzir uma batelada de um dado radiofármaco marcado com Ique compreende radioatividade suficiente para quase qualquer número dedoses unitária de paciente. A única restrição sobre o limite superior de doses éo volume do vaso de reação e a concentração radioativa que pode seralcançada (eg. sem radiólise do radiofármaco marcado com 123I). O número dedoses unitárias de paciente por batelada é adequadamente de 1 a 200,preferivelmente 3 a 100, mais preferivelmente 5 a 50. A aparelhagem desintetizador automatizado comercial inclui um detector para medição

automatizada do conteúdo radioativo e da concentração de reagentes e de

produtos, de modo que a dose possa ser medida naquela maneira.

A batelada pode ser subdispensada em múltiplas dosesunitárias em recipientes radiofarmacêuticos adequados (como descrito acima)ou seringas de grau clínico como uma característica adicional do presentemétodo, ou a batelada de várias doses pode ser subdispensada como umexercício separado quer manualmente quer usando um método automatizadoseparado, tal como uma aparelhagem de enchimento de seringa. Em umaspecto preferido, esta subdispensação é realizada como parte do mesmoprocesso automatizado. Mais preferi velmente, a subdispensação é para dentrode recipientes radiofarmacêuticos. A capacidade para produzir dosesmúltiplas nesta maneira significa que o presente método é particularmente útilem uma radiofarmácia servindo uma população de pacientes na qual muitasdoses de paciente separadas do mesmo radiofármaco marcado com I sãonecessárias no mesmo dia.

Reagentes A ou Ε, o iodeto- I (ii), e/ou as composiçõesradiofarmacêuticas marcadas com 123I da presente invenção podemadicionalmente compreender componentes adicionais tais como radioprotetor,conservante antimicrobiano, agente ajustador de pH ou carga. O termo"radioprotetor" significa um composto que inibe as reações de degradação,tais como processos redox, por aprisionamento de radiais livres elevadamentereativos, tais como radicais livres contendo oxigênio decorrentes da radióliseda água. Os radioprotetores da presente invenção são adequadamenteescolhidos de: ácido ascórbico, ácido para-amino-benzóico (ie. ácido 4-amino-benzóico), ácido gentísico (ie. ácido 2,5-di-hidróxi-benzóico) e seussais com um cátion biocompatível como descrito acima.

O termo "conservante antimicrobiano" significa um agente queinibe o crescimento de microorganismos potencialmente nocivos tais comobactérias, leveduras ou bolores. O conservante antimicrobiano também podeexibir algumas propriedades bactericidas, dependendo da dose. O papelprincipal do(s) conservante(s) antimicrobiano(s) da presente invenção é inibiro crescimento de quaisquer tal microorganismo na composiçãoradiofarmacêutica após a reconstituição, i.e. no próprio produto diagnósticoradioativo. O conservante antimicrobiano contudo também pode seropcionalmente usado para inibir o crescimento de microorganismospotencialmente nocivos em um ou mais componentes do kit não-radioativo dapresente invenção antes da reconstituição. Conservante(s) antimicrobiano(s)adequado(s) inclui(em): os parabenos, ie. metil, etil, propil ou butil parabenosou suas misturas; benzil-álcool; fenol; cresol; cetrimida e tiomersal.Conservante(s) antimicrobiano(s) preferido(s) são os parabenos.

O termo "carga" significa um agente encorpantefarmaceuticamente aceitável que pode facilitar o manuseio do materialdurante produção e liofilização. Cargas adequadas incluem sais inorgânicostal como cloreto de sódio, e açúcares ou álcoois de açúcar solúveis em águatais como sacarose, maltose, manitol ou trealose.

Em um segundo aspecto, a presente invenção proporciona umcassete estéril, de uso único, adequado para uso no método da primeiramodalidade, que compreende o vaso de reação e os meios para realizar atransferência e a misturação de etapas (iv) a (vi) e manipulações de etapa(vii), mais meios para realizar o(s) processo(s) adicional(ais) opcional(ais) deetapa (viii) do método da primeira modalidade. Os componentes e reagentes(A)-(G) de cassete e seus aspectos preferidos são como descrito na primeiramodalidade, e estão na forma estéril, apirogênica.

Os componentes e reagentes (A)-(G) de cassete podem seresterilizados pelos métodos de esterilização descritos acima. Um métodopreferido é preparar a aparelhagem de cassete completa com reagentes (A)-(G), e realizar a esterilização terminal quer por radiação gama quer porautoclavagem, mais preferivelmente autoclavagem. Um métodoespecialmente preferido é proporcionar cada reagente na forma estéril em umrecipiente adequado, como descrito acima, e então montar o cassete completocom reagentes em um ambiente de sala limpa para dar o produto estérildesejado.

O cassete compreende os vários reagentes e agentes químicosnão-radioativos necessários para a preparação de uma dada composiçãoradiofarmacêutica marcada com I. Os cassetes são projetados para seremdescartáveis, mas também intercambiáveis. Isto significa que, tendo investidoem uma aparelhagem de sintetizador automatizado relativamente cara, ousuário pode simplesmente comprar os cassetes como os acessórios deconsumo necessários. É considerado que uma variedade de cassetes possuindocada um moléculas alvo biológicas diferentes (ou precursores para asmesmas) nos mesmos para gerar 123I-radiofármacos seria usadaconjuntamente com uma dada aparelhagem de sintetizador automatizado.

Reagente A (a molécula alvo biológica ou precursor comodefinido acima) do cassete pode ser opcionalmente fornecido covalentementeligado em uma matriz de suporte sólido. Nesta maneira, o produtoradiofarmacêutico desejado forma em solução, enquanto que os materiaisiniciais e as impurezas permanecem ligados na fase sólida. O cassete portantopode conter um cartucho que pode ser ligado em um sintetizadorautomatizado apropriadamente adaptado. O cartucho pode conter, à parte doReagente A ligado em suporte, uma coluna para remover o íon iodetoindesejado, e um vaso apropriado conectado de modo a permitir que a misturareacional seja evaporada e para permitir que o produto seja formuladoconforme requerido. Os reagentes e solventes e outros acessórios consumíveisrequeridos para o método automatizado também podem ser incluídosjuntamente com um disco compacto trazendo o programa de computador quepermite que o sintetizador seja operado de modo a atender aos requerimentosdo cliente para concentração radioativa, volumes de liberação etc.Convenientemente, todos os componentes do cassete são descartáveis paraminimizar a possibilidade de contaminação entre as corridas e serão estéreis ede qualidade assegurada. A facilidade de preparo e o QC do cassete antes dacorrida de produção são um avanço da abordagem de cassete, e é esperadoque ajudem a conferir confiabilidade e reprodutibilidade durante a preparação.

Os frascos e recipientes de reagentes do cassete podem estaropcionalmente codificados com cores de tal modo que seja mais fácil para ooperador identificar os materiais presentes. Contudo, não é necessário para aprodução rotineira porque o operador simplesmente usaria o cassete pré-carregado como fornecido. Os vários recipientes do cassete sãopreferivelmente identificados distintamente em um formato legível porcomputador (eg. código de barras) para permitir controle de microprocessadormais fácil, garantia de qualidade e manutenção de registros de batelada.

Em um terceiro aspecto, a presente invenção proporciona ouso de uma aparelhagem de sintetizador automatizado que está adaptada paraaceitar o cassete da segunda modalidade, para a preparação de umradiofármaco marcado com I.

O "sintetizador automatizado" é como definido para a primeiramodalidade acima, de tal modo que ele forma interface com o casseteintercambiável, de uso único da segunda modalidade. Este sintetizadorautomatizado é preferivelmente usado para realizar o método da primeiramodalidade, incluindo suas modalidades preferidas. Preferivelmente, oradiofármaco marcado com I é como definido na primeira modalidade(acima).

Em um quarto aspecto, a presente invenção proporciona o usodo cassete da segunda modalidade na preparação de uma composiçãoradiofarmacêutica marcada com I. Preferivelmente, o cassete é usado nométodo de preparação descrito na primeira modalidade. O método e oradiofármaco, mais suas modalidades preferidas are como descritos naprimeira modalidade. O cassete e suas modalidades preferidas são comodescritos na segunda modalidade.

A invenção é ilustrada por meio do seguinte Exemplo não-limitante. Exemplo 1 proporciona uma descrição profética de como CIT-FPmarcado com I poderia ser preparado usado a presente invenção.Exemplo 1: Preparação de FP-CIT marcado com 123I (DaTSCAN™).

Este é um Exemplo profético.

O precursor CIT-FP e precursor de trimetil-estanho seriampreparados pelo método de Baldwin et al. [Nucl.Med.Biol., 22, 211-219(1995)].

Os componentes que seriam usados na manufatura deDaTSCAN™ são:

1. Iodeto 1-123 de sódio em solução de hidróxido de sódio,

2. Iodeto 1-127 de sódio em solução de hidróxido de sódio,

3. Solução de acetato de sódio 0,2 M,

4. precursor de trimetil-estanho em solução etanólica,

5. H2O2 aquoso 30%,

6. H2SO4 aquoso 25%,

7. Solução aquosa de NaS2O5 30%.

E antecipado que todos os componentes não-radioativos (ie.itens 2-7 acima) teriam vida de prateleira aceitável para armazenagem emcassete como reagentes, e que pode ser possível co-armazenar algunscomponentes (e.g. 5, 6). O precursor (4) contudo provavelmente requereriacondições de armazenagem refrigerada, e quer seria introduzido no casseteimediatamente antes da produção quer o cassete inteiro seria armazenado a 0-5°C. É predito que os componente são compatíveis com as superfíciesplásticas do cassete e os volumes são compatíveis com as capacidades dofrasco e do vaso de reação.

O seguinte procedimento de 10 etapas é usado:

(i) iodeto I de sódio em uma solução de hidróxido de sódio édiluído com iodeto 127I de sódio em solução de hidróxido de sódio;

(ii) solução de acetato de sódio 0,2 M é adicionada;

(iii) a solução de (ii) seria adicionada no precursor de trimetil-estanho em solução etanólica;

(iv) Solução aquosa de H2O2 30% e solução aquosa de H2SO425% são então adicionadas para iniciar a radioiodação, e a reação é realizadano vaso de reação de cassete por 10 minutos na temperatura ambiente, comum volume de reação de 0,7-1,3 cm ;(ν) radioiodação é então interrompida usando o reagente determinação solução aquosa de is NaSiO5 30%;

(vi) o produto é então purificado por RP-HPLC com etanol /acetato de sódio aquoso como eluente;

(vii) o produto 123^I-FP-CIT é então carregado em uma colunaSPE, e a coluna é lavada com água e NaOH 0,05 M, antes da eluição doproduto com etanol como eluente.

Claims (20)

1. Método automatizado para a preparação de uma composiçãoradiofarmacêutica estéril marcada com I que compreende uma moléculaalvo biológica marcada com I em um meio veículo biocompatível,caracterizado pelo fato de compreender:(i) provisão de um cassete estéril, de uso único quecompreende um vaso de reação e alíquotas separadas dos seguintes reagentesnão-radioativos (A) e (B) e opcionalmente (C) a (G), cada um na formaestéril:A. a molécula alvo biológica ou um seu precursor;B. solvente(s) adequado(s) para a dissolução de Reagente A eReagentes C a G se presentes, incluindo pelo menos um solvente que é ummeio veículo biocompatível;C. um agente oxidante capaz de oxidar íon iodeto em umaespécie de iodação eletrofílica;D. um fornecimento de iodeto- I;E. um reagente de derivação bifuncional, não-radioativo capazde conjugar a molécula alvo biológica;F. um reagente de terminação capaz de reduzir a citada espéciede iodação eletrofílica a íon iodeto;G. um catalisador para reações de halogenação nucleofílica;(ii) provisão de um fornecimento estéril de iodeto-123I em umrecipiente adequado;(iii) radioiodação da molécula alvo biológica pelas etapas (iv),(v) ou (vi);(iv) transferência controlada por microprocessador para ocitado vaso de reação de Reagente A e uma alíquota de I-iodeto de (ii),opcionalmente na presença de Reagente C, seguida por misturação na mesmapara dar a molécula alvo biológica marcada com 123I, com uso opcional deReagente F para interromper a reação de radioiodação; ou alternativamente(v) radioiodação do reagente de derivação bifuncional portransferência controlada por microprocessador para o citado vaso de reação deReagente E e uma alíquota de iodeto- I de (ii), opcionalmente na presençade Reagente C, seguida por misturação na mesma para dar o reagente de• 123 ·derivação bifuncional marcada com I, com uso opcional de Reagente F parainterromper a reação de radioiodação, seguida pela radioiodação da moléculaalvo biológica por conjugação com o citado reagente de derivação bifuncionalmarcado com I; ou alternativamente(vi) quando Reagente A for adequado para reações de troca dehalogênio, transferência controlada por microprocessador para o citado vasode reação de Reagente A e uma alíquota de iodeto- I de (ii), opcionalmentena presença de Reagente G, seguida por misturação na mesma para dar amolécula alvo biológica marcada com I, com uso opcional de aquecimentopara acelerar a citada reação de radioiodação;(vii) quanto o produto de molécula alvo biológica marcadacom I de etapas (iv) a (vi) já estiver em um meio veículo biocompatível, eleé usado diretamente em etapa (viii), de outro modo o produto de etapas (iv) a(vi) é quer dissolvido em um meio veículo biocompatível quer o solventeusado em etapas (iv) a (vi) é removido e o resíduo redissolvido em um meioveículo biocompatível;(viii) o produto de etapa (vii) é quer usado diretamente quer éopcionalmente submetido a um ou mais dos seguintes processos adicionais:purificação; ajuste de pH; diluição; concentração ou esterilização terminal,para dar a composição I-radiofarmacêutica desejada.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que os Reagentes (A)-(G) presentes estão em uma quantidadeadequada para a preparação de uma única batelada de citada composiçãoradiofarmacêutica marcada com I.

3. Método de acordo com ad reivindicações 1 ou 2,caracterizado pelo fato de adicionalmente compreender subdispensação dacomposição radiofarmacêutica marcada com 123I em doses unitárias depaciente.

4. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-3, caracterizado pelo fato de que a molécula alvo biológica é escolhida de:uma tropana, um ácido graxo, um ligante de receptor de dopamina D-2, umaguanidina, anfetamina ou ácido hipúrico.

5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelofato de que a molécula alvo biológica é CIT, CIT-FP, IBZM, MIBG,BMIPPA ou IBF.

6. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-5, caracterizado pelo fato de adicionalmente compreender a provisão deReagente A em solução estéril por reconstituição automatizada com umsolvente não-radioativo adequado de um kit contendo o reagente liofilizado.

7. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-5, caracterizado pelo fato de adicionalmente compreender a provisão deReagente A ligado em um suporte de fase sólida.

8. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-7, caracterizado pelo fato de que o precursor compreendo um derivado detrialquil-estanho, um derivado de trialquil-silano, um anel aromáticoadequado para adição eletrofílica ou um derivado adequado para troca dehalogênio.

9. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-8, caracterizado pelo fato de que uma etapa (vii) de processo de purificaçãoadicional é incluída, a qual compreende a remoção de Reagente A não-marcado para dar uma composição radiofarmacêutica marcada com I livrede Reagente A.

10. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 9, caracterizado pelo fato de que uma etapa (viii) de processo de purificaçãoadicional é incluída, a qual compreende a remoção de iodeto- 123^I em excesso.

11. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 10, caracterizado pelo fato de que o processo é realizado usando umaaparelhagem de sintetizador automatizado.

12. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizadopelo fato de que a aparelhagem de sintetizador automatizado está adaptadapara aceitar o cassete de etapa (i) de acordo com a reivindicação 1 em umamaneira intercambiável e para operar os processos de etapas (iii), (iv), (v) e(vi) de reivindicação 1.

13. Método de acordo com as reivindicações 10 ou 11,caracterizado pelo fato de que a aparelhagem de sintetizador automatizadoestá adaptada para aceitar o recipiente de iodeto- I de etapa (ii) dereivindicação 1.

14. Cassete estéril, de uso único de acordo com asreivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que os reagentes ecomponentes de cassete estão na forma estéril, apirogênica.

15. Cassete de acordo com a reivindicação 14, caracterizadopelo fato de adicionalmente compreender meios para realizar a transferência ea misturação de etapas (iv) a (vi) de reivindicação 1, e manipulações de etapa(vii) mais meios para realizar o(s) processo(s) adicional(ais) opcional(ais) deetapa (viii).

16. Cassete de acordo com a reivindicação 14 ou 15,caracterizado pelo fato de que o Reagente A é fornecido de acordo com asreivindicações 6 a 8.

17. Uso de aparelho de sintetizador automatizado comodefinido em qualquer uma das reivindicações 11 a 13, caracterizado pelo fatode ser para a preparação de uma composição radiofarmacêutica marcada com 123^I.

18. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelofato de que a preparação é realizada pelo método como definido nasreivindicações 1 a 10.

19. Uso do cassete como definido em qualquer uma dasreivindicações 14 a 16, caracterizado pelo fato de ser na preparação dacomposição radiofarmacêutica marcada com 123I como definido nasreivindicações 1 a 13.

20. Uso de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelofato de que a preparação é realizada pelo método como definido nasreivindicações 1 a 13.