BRPI0618309A2 - inibidores de atividade de akt - Google Patents

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Dirk A Heerding
Tammy J Clark
Jack Dale Leber
Igor Safonov
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Smithkline Beecham Corp
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Abstract

INIBIDORES DE ATIVIDADE DE AKT Trata-se de novos compostos inventados de 1H- imidazo[4,5-c]piridin-2-il, o uso de tais compostos como inibidores de atividade de proteína cinase E e no tratamento de câncer e artrite.

Description

"INIBIDORES DE ATIVIDADE DE AKT"
CAMPO DA INVENÇÃO
Esta invenção refere-se a novos compostos de IH-imidazo[4,5-c]piridin-2-ila, o uso de tal composto como ini-bidores de proteína cinase B (em seguida PKB/Akt, PKB ouAkt) atividade e no tratamento de câncer e artrite.
ANTECEDENTE DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se a compostos contendolH-imidazo[4,5-c]piridin-2-ila que são inibidores da ativi-dade de uma ou mais dentre as isoformas da serine/treoninacinase, Akt (da mesma forma conhecida como proteína cinaseΒ). A presente invenção também refere-se à composições far-macêuticas que compreendem tais compostos e métodos de uti-lizar os compostos presentes no tratamento de câncer e ar-trite (Liu e outro, Current Qpin. Pharmacology 3:317-22(2003)).
Apoptose (morte celular programada) desempenha pa-péis essenciais no desenvolvimento embrionário e patogênesede várias doenças, tais como doenças neuronais degenerati-vas, doenças cardiovasculares e câncer. Trabalho recente le-vou à identificação de vários produtos de gene pró e anti-apoptóticos que estão envolvidos no regulamento ou execuçãoda morte celular programada. A expressão de genes anti-apoptóticos, tal como Bcl2 ou BcI-Xl inibe a morte celularapoptótica induzida por vários estímulos. Por outro lado, aexpressão de genes pró-apoptóticos, tal como Bax ou Bad, le-va à morte celular programada (Adams e outro, Science, 281:1322-1326 (1998)). A execução da morte celular programada émediada através de proteinases relacionadas caspase -Ir in-cluindo caspase-3, caspase-7, caspase-8 e caspase-9 etc(Thomberry e outro, Science, 281:1312-1316 (1998)) .
A fosfatidilinositol 31-OH cinase (série de reaçãode PI3K)/Akt/PKB parece ser importante para regular a sobre-vivência celular/ morte celular (Kulik e outro, Mol. Cell.Biol. 17:1595- 1606 (1997); Franke e outro, Cell, 88:435-437(1997); Kauffmann-Zeh e outro, Nature 385:544-548 (1997)Hemmings Science, 275:628 - 630 (1997); Dudek e outro, Sci-ence, 275:661-665 (1997)). Fatores de sobrevivência, taiscomo fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), fa-tor de crescimento de nervo (NGF) e fator-1 de crescimentosemelhante à insulina (IGF-I), promovem sobrevivência da cé-lula sob várias condições através da indução da atividade dePI3K (Kulik e outro, 1997, Hemmings 1997)'. PI3K ativado levaà produção de fosfatidilinositol (3,4,5)-trifosfato (Ptdlns(3,4,5)-P3), que, por sua vez, liga-se a, e promove a ativa-ção de, a serina/treonina cinase Akt, que contém um domíniode homologia de pleckstrin (PH) (Franke e outro, Cell, 81:727-736 (1995); Hemmings Science, 277:534 (1997); Downward,Curr. Opin. Cell Biol. 10:262-267 (1998), Alessi e outro,EMBO J. 15: 6541 -6551 (1996)). Inibidores específicos dePI3K ou mutantes de Akt/PKB negativos dominantes abolem asatividades promotoras de sobrevivência destes fatores decrescimento ou citocinas. Foi previamente descrito que ini-bidores de PI3K (LY294002 ou wortmannin) bloquearam a ativa-ção de Akt/PKB através de cinases a montante. Além disso, aintrodução de PI3K constitutivamente ativa ou mutantes deAkt/PKB promovem a sobrevivência da célula sob condições nasquais as células normalmente sofrem morte celular apoptótica(Kulik e outro, 1997, Dudek e outro, 1997).
Análise de níveis de Akt em tumores humanos mos-trou que Akt2 é super-expressa em um número significante decânceres ovariano (J. Q. Cheung e outro, Proc. Natl. Acad.Sei. U.S.A. 89:9267 - 9271 (1992)) e pancreático (J. Q.Cheung e outro, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 93:3636-3641(1996)). Semelhantemente, Akt3 foi constatada ser super-expressa linhagens celulares de câncer de mama e próstata(Nakatani e outro, J. Biol. Chem. 274:21528 - 21532 (1999).Foi demonstrado que Akt-2 foi super-expressa em 12% de car-cinomas de ovário e que a amplificação de Akt foi especial-mente freqüente em 50% de tumores não diferenciados, suges-tão que Akt pode da mesma forma estar associada com agressi-vidade do tumor (Bellacosa, e outro, Int. J. Câncer, 64,pág. 280-285, 1995). Atividade de Aktl cinase aumentada foirelatada em cânceres de mama, ovário e próstata (Sun e ou-tro, Am. J. Pathol. 159: 431-7 (2001)).
O suppressor de tumor PTEN, uma proteína e fosfa-tase de lipídio que especificamente removem o· 3' fosfato dePtdlns(3,4,5)-P3, é um regulador negativo das séries de rea-ção de PI3K/Akt (Li e outro, Science 275:1943-1947 (1997),Stambolic e outro, Cell 95:29-39 (1998), Sun e outro, Proc.Natl. Acad. Sei. U.S.A. 96:6199-6204 (1999)). Mutações daLinha germinativa de PTEN são responsáveis por síndromes decâncer humano tais como doença de Cowden (Liaw e outro, Na-ture Genetics 16:64-67 (1997)). PTEN é deletado em uma por-centagem grande de linhagens celulares de tumor e tumoreshumanos sem PTEN funcional mostrar níveis elevados de Aktativada (Li e outro, supra, Guldberg e outro, Câncer Resear-ch 57:3660-3663 (1997), Risinger e outro, Câncer Research57:4736-4738 (1997)).
Estas observações demonstram que as séries de rea-ção de PI3K/Akt desempenham papéis importantes para regulara sobrevivência ou apoptose da célula em tumorigênese.
Três membros da subfamília de Akt/PKB de seri-na/treonina proteína cinases reguladas pelo segundo mensa-geiro foram identificados e denominados Aktl/PKBa,Akt2/PKBP, e Akt3/PKBY respectivamente. As isoformas são ho-mólogas, particularmente em regiões que codificam os domí-nios catalíticos. Akt/PKBs são ativadas por eventos de fos-forilação que ocorrem em resposta à sinalização de PI3K.PI3K fosforila os fosfolipídeos de inositol de membrana, ge-rando o 3,4,5-trisfosfato de fosfatidil-inositol e 3,4- bis-fosfato de fosfatidilinositol do segundo mensageiro, osquais mostraram ligar-se ao domínio de PH de Akt/PKB. O mo-delo atual de ativação de Akt/PKB propõe o recrutamento daenzima à membrana através de fosfoinositpideos 3'-fosforilados onde a fosforilação dos sítios reguladores deAkt/PKB pelas cinases a montantes ocorrem (B.A. Hemmings,Science 275:628-630 (1997); B.A. Hemmings, Science 276:534(1997); J. Downward, Science 279:673-674 (1998)).
A fosforilação de Aktl/PKBa ocorre em dois sítiosreguladores, Thr308 na alça da ativação do domínio catalíticoe em Ser473 perto do terminal carbóxi (D. R. Alessi e outro.EMBO J. 15:6541-6551 (1996) e R. Meier e outro, J. Biol.Chem. 272:30491 -30497 (1997)). Sítios de fosforilação regu-ladores equivalentes ocorrem em Akt2/PKBp e Akt3/PKBY. A ci-nase a montante, que fosforila Akt/PKB no sítio da alça deativação foi clonada e denominada proteína cinase 1 depen-dente de 3'-fosfoinositídeo (PDKl). PDKl fosforila não ape-nas Akt/PKB, mas também S6 cinase ribossômica de p70,p90RSK, cinase regulada por glicocorticóide e soro (SGK), eproteína cinase C. A cinase a montante fosforilando o sítioregulador de Akt/PKB perto do terminal carbóxi ainda não foiidentificada, porém relatos recentes insinuam um papel paraa cinase ligada à integrina (ILK-I), uma serine/treoninaproteína cinase, ou autofosforilação.
A inibição de atividade e ativação de Akt pode serobtida através da inibição de PI3K com inibidores tais comoLY294002 e wortmannin. Porém, a inibição de PI3K tem o po-tencial de indiscriminadamente afetar não apenas todas astrês isozimas de Akt mas da mesma forma outras moléculas desinalização contendo o domínio PH que são dependentes de Pd-tlns (3,4,5)-P3, tal como a família de Tec de tirosina cina-ses. Além disso, foi descrito que Akt pode ser ativado atra-vés de sinais de crescimento que são independentes de PI3K.
Alternativamente, atividade de Akt pode ser inibi-da através do bloqueio da atividade de cinase a montantePDKl. O composto UCN-01 é um inibidor relatado de PDKl. Bio-chem. J. 375(2) :255 (2003). Novamente, a inibição de PDKlresultaria na inibição de proteína cinases múltiplas cujasatividades dependem de PDKl, tais como isoformas de PKC atí-pico, SGK e S6 cinases (Williams e outro, Curr. Biol.10:439-448 (2000).
Inibidores de molécula pequena de Akt são úteis notratamento de tumores, especialmente aqueles com Akt ativada(por exemplo, tumores nulos de PTEN e tumores com mutaçõesde ras) . PTEN é um regulador negativo critico de Akt e suafunção está perdida em muitos cânceres, incluindo carcinomasde mama e de próstata, glioblastomas, e várias sindromes decâncer incluindo sindrome de Bannayan-Zonana (Maehama, T. eoutro, Review of Biochemistryf 70: 247 (2001)), Cowden dise-ase (Parsons, R.; Simpson, L. Methods in Molecular Biology(Totowa, NJ, United States), 222 (Tumor Suppressor Genes,Volume 1): 147 (2003)), e Lhermitte-Duclos disease (Backman,S. e outro, Current Opinion in Neurobiology, 12(5): 516(2002) ) . Inibição de Akt foi da mesma forma implicada notratamento de leucemias, (J. C. Byrd, S. Stilgenbauer e LW.Flinn "Chronic lymphocytic leukemia." Hematology / the Edu-cation Program of the American Society of Hematology. Ameri-can Society of Hematology. Education Program (2004), 163-83) . Akt3 é supra-regulada em linhagens celulares de cânce-res de mama deficientes de receptor de estrogênio e de cân-cer de próstata independente de androgênio e Akt2 é super-expressa em carcinomas pancreáticos e ovarianos. Aktl é am-pliada em cânceres gástricos (Staal, Proc. Natl. Acad. Sei.USA 84: 5034-7 (1987) e supra-regulada em cânceres de mama(Stal e outro, Breast Câncer Res. 5: R37-R44 (2003)). Por-tanto, espera-se que um inibidor de Akt de molécula pequenaseja útil para o tratamento destes tipos de câncer bem comooutros tipos de câncer. Inibidores de Akt são da mesma formaúteis na combinação com outros agentes quimioterapêuticos.
É um objetivo da presente invenção fornecer novoscompostos que são inibidores de Akt/PKB.
É da mesma forma um objetivo da presente invençãofornecer composições farmacêuticas que compreendem um porta-dor farmacêutico e compostos úteis nos métodos da invenção.
É da mesma forma um objetivo da presente invençãofornecer um método para tratar o câncer que compreende admi-nistrar tais inibidores de atividade de Akt/PKB.
É da mesma forma um objetivo da presente invençãofornecer um método para tratar artrite que compreende admi-nistrar tais inibidores de atividade de Akt/PKB.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Esta invenção refere-se a novos compostos de Fór-mula (I) :
<formula>formula see original document page 8</formula>X é ausente ou selecionado a partir do grupo queconsiste em: 0, S e CR20R21,
onde R20R21 são independentemente selecionados apartir de: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclopropilasubstituída, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopen-tila, e ciclopentila substituída, alquilaC1-C4, e alquilaCi-C4 substituída
ou R20 R21 são empregados juntos com carbono ao qualeles são ligados formam ciclopropila, ciclobutila, ciclobu-tila substituída, ciclopentila ou ciclopentila substituída;
R2R2' são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclopropila substituí-da, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila e ci-clopentila substituída alquila C1-C4 e alquila C1-C4 substi-tuída,
ou R2R2' empregados juntos com o carbono ao qualeles são ligados formam ciclopropila, ciclopropila substitu-ída, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila ouciclopentila substituída;
R3 é selecionado a partir do grupo que consisteem: hidrogênio, ciclopropila, ciclopropila substituída, ci-clobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila, ciclopen-tila substituída, ciclopropilmetila, ciclopropilmetila subs-tituída, alquila C1-C4 e alquila C1-C4 substituída;
R4R4' são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclopropila substituí-da, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila, ci-clopentila substituída, alquila C1-C4, e alquila C1-C4 subs-tituída, ou R4R4' empregados juntos com o carbono ao qual e-Ies são ligados formam ciclopropila, ciclopropila substituí-da, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila ouciclopentila substituída;
R5R5' são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclopropila substituí-da, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila, ci-clopentila substituída, alquila Cx-C4, alquila Cx-C4 substi-tuída, ou R5R5 empregados juntos com o carbono ao qual elessão ligados formam ciclopropila, ciclopropila substituída,ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila ou ciclo-pentila substituída; e
R1 é selecionado a partir do grupo consistindo em:hidrogênio, alquila C1-C4, alquila C1-C4 substituída; equando X é ausente ou CR20R21, R1 pode adicionalmen-te ser flúor;
e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos,solvatos e pró-fármacos destes.
Esta invenção refere-se a um método de tratar cân-cer, que compreende administrar a um indivíduo em necessida-de deste uma quantidade eficaz de um composto de inibição deAkt/PKB da Fórmula (I).
Esta invenção refere-se a um método de tratar ar-trite, que compreende administrar a um indivíduo em necessi-dade deste uma quantidade eficaz de um composto de inibiçãode Akt/PKB da Fórmula (!) .A presente invenção da mesma forma refere-se àdescoberta que os compostos da Fórmula (I) são ativos comoinibidores de Akt/PKB.
Em um outro aspecto da invenção é fornecido novosprocessos úteis na preparação dos compostos de inibição deAkt/PKB presentemente inventados. Incluídas na presente in-venção são composições farmacêuticas que compreendem um por-tador farmacêutico e compostos úteis nos métodos da inven-ção .
Da mesma forma incluídos na presente invenção sãométodos de co-administrar os compostos de inibição deAkt/PKB presentemente inventados com outros ingredientes a-tivos.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Pedido Internacional No. PCT/US2004/024340, tendouma data de arquivamento Internacional de 28 de julho de2004; International Publication Number WO 2005/011700 e umadata de Publicação Internacional de 10 de fevereiro de 2005,os esquemas, processos e ensaios dos quais são incorporadosaqui através de referência, descreve e reivindica compostoscontendo ΙΗ-imidazo[4,5-c]piridin-2-ila, junto com sais far-maceuticamente aceitáveis, hidratos, solvatos e pró-fármacosdestes, como sendo úteis como inibidores de serina/treoninacinase, Akt (da mesma forma conhecido como proteína cinaseΒ) , particularmente no tratamento de câncer e artrite. Pedi-do internacional No. PCT/US2004/024340 especificamente nãodescreve quaisquer dos compostos dentro do escopo deste pe-dido.Foi agora constatado que os compostos da Fórmula(I) exibem vantagens sobre qual é considerado ser os compos-tos mais estruturalmente relacionados descritos no PedidoInternacional No. PCT/US2004/024340.
Por exemplo, os compostos dos Exemplos 1, 3, 4 e 9da presente invenção geralmente exibem atividade realçada eseletividade realçada para a inibição de crescimento de cé-lula de tumor sobre a inibição de crescimento de célula nor-mal quando comparado ao que é considerado ser os compostosmais estruturalmente relacionados descritos no Pedido Inter-nacional No. PCT/US2 004/024 340. Espera-se queesta atividade realçada e seletividade realçadaresulte em uma janela terapêutica mais ampla. Adicionalmen-te, os compostos descritos no Pedido Internacional No.PCT/US2004/024 340 geralmente exibem solubilidade inferior emágua. Um aspecto desta solubilidade inferior é que adversa-mente afeta a capacidade destes compostos de ser formuladosem formas de dosagem farmacêuticas adequadas para adminis-tração intravenosa (em seguida IV). Além de geralmente teratividade realçada e seletividade realçada para a inibiçãode crescimento de célula de tumor sobre a inibição de cres-cimento de célula normal, os compostos dos Exemplos 1, 3,que 4 e 9 da presente invenção exibem solubilidade que éconsiderada adequada para formulação em formas de dosagempara administração IV. Administração intravenosa é um métodovantajoso para administrar os compostos da presente invenção.Enquanto os compostos do Pedido Internacional No.PCT/US2 004/02 4 34 0 são úteis como inibidores de seri-na/treonina cinase, AKT (da mesma forma conhecido como pro-teína cinase Β), os compostos da Fórmula (I), particularmen-te os compostos dos Exemplos 1, 3, 4 e 9, geralmente exibempropriedades vantajosas, tais como solubilidade apropriada,atividade, seletividade, liberação e exposição, cujo totalos tornam vantajosos sobre o qual é considerado ser os com-postos mais estruturalmente relacionados descritos no PedidoInternacional No. PCT/US2004/024340.
Esta invenção refere-se a compostos da Fórmula (I)como descrito acima.
Os compostos presentemente inventados da Fórmula(I) inibem atividade de Akt/PKB. Em particular, os compostosdescritos aqui inibem cada das três isoformas de Akt/PKB.
Incluído entre os compostos presentemente inventa-dos da Fórmula (I) são aqueles em que:
X é ausente ou selecionado a partir do grupo queconsiste em: 0, S e CR20R21
onde R20R21 são independentemente selecionados apartir de: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclobutila, ci-clopentila, e alquila C1-C4, ou R20R21 empregados juntos com ocarbono ao qual eles são ligados formam ciclopropila, ciclo-butila ou ciclopentila;
R2R2' são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclobutila, ciclopen-tila, e alquila C1-C4,ou R2R2' empregados juntos com o carbono ao qualeles são ligados formam ciclopropila, ciclobutila ou ciclo-pentila;
R3 é selecionado a partir do grupo consistindo em:hidrogênio, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, e al-quila C1-C4;
R4R4' são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclobutila, ciclopen-tila, e alquila C1-C4,
ou R4R4' empregados juntos com o carbono ao qualeles são ligados formam ciclopropila, ciclobutila ou ciclo-pentila;
R5R5 são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclobutila, ciclopen-tila, e alquila C1-C4,
ou R5R5' empregados juntos com o carbono ao qualeles são ligados formam ciclopropila, ciclobutila ou ciclo-pentila; e
R1 é selecionado a partir do grupo consistindo em:hidrogênio e alquila C1-C4; e
quando X é ausente ou CR20R21, R1 pode adicionalmen-te ser flúor;
e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos,solvatos e pró-fármacos destes.
Incluídos entre os compostos presentemente inven-tados da Fórmula (I) estão aqueles em que:
X é ausente ou selecionado a partir do grupo queconsiste em: 0, S e CR2OR21, onde R20R21 são independentementeselecionados a partir de: hidrogênio, flúor, ciclopropila,ciclopropila substituída, ciclobutila, ciclobutila substitu-ída, ciclopentila, ciclopentila substituída, alquila C1-C4,e alquila C1-C4 substituída,
ou R20R21 empregados juntos com o carbono ao qualeles são ligados formam ciclopropila, ciclopropila substitu-ída, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila ouciclopentila substituída;
R2R2' são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclopropila substituí-da, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila, ci-clopentila substituída, alquila C1-C4, e alquila C1-C4 subs-tituída,
ou R2R2' empregados juntos com o carbono ao qualeles são ligados formam ciclopropila, ciclopropila substitu-ída, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila ouciclopentila substituída;
R3 é selecionado a partir do grupo que consisteem: hidrogênio, ciclopropila, ciclopropila substituída, ci-clobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila, ciclopen-tila substituída, alquila C1-C4 e alquila C1-C4 substituída;
R4R4 são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclopropila substituí-da, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila, ci-clopentila substituída, alquila C1-C4, alquila C1-C4 substi-tuída,
ou R4R4' empregados juntos com o carbono ao qualeles são ligados formam ciclopropila, ciclopropila substitu-ida, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila ouciclopentila substituída;
R5R5' são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclopropila substituí-da, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila, c1-clopentila substituída, alquila C1-C4, alquila C1-C4 substi-tuída, ou R5R5' empregados juntos com o carbono ao qual elessão ligados formam ciclopropila, ciclopropila substituída,ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila ou ciclo-pentila substituída; e
R1 é selecionado a partir do grupo consistindo em:hidrogênio, alquila C1-C4 e alquila C1-C4 substituída; e
quando X é ausente ou CR20R21, R1 pode adicionalmen-te ser flúor;
e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos,
solvatos e pró-fármacos destes.
Incluídos entre os compostos presentemente inven-tados da Fórmula (I) estão aqueles em que:
X é ausente ou selecionado a partir do grupo queconsiste em: 0, S e CR20R21, onde R20R21 são independentementeselecionados a partir de: hidrogênio, flúor, ciclopropila,ciclobutila, ciclopentila, e alquila C1-C4;
R2R2' são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclobutila, ciclopen-tila, e alquila C1-C4;
R3 é selecionado a partir do grupo consistindo em:hidrogênio, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, e al-quila C1-C4;R4R4 são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclobutila, ciclopen-tila, e alquila C1-C4;
R5R5 são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclobutila, ciclopen-tila, e alquila C1-C4; e
R1 é selecionado a partir do grupo consistindo em:hidrogênio e alquila C1-C4; e
quando X é ausente ou CR20R21, R1 pode adicionalmen-te ser flúor;
e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos,solvatos e pró-fármacos destes.
Incluídos entre os compostos presentemente inven-tados da Fórmula (I) estão aqueles em que:
X é ausente ou selecionado a partir do grupo queconsiste em: O, S e CR20R21, onde R20R21 são independentementeselecionados a partir de: hidrogênio, flúor, ciclopropila,ciclopropila substituída, ciclobutila, ciclobutila substitu-ída, ciclopentila, cicolpentila substituída, alquila C1-C4 ealquila C1-C4 substituída;
R2R2' são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclopropila substituí-da, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila, ci-colpentila substituída, alquila C1-C4, alquila C1-C4 substi-tuída;
R3 é selecionado a partir do grupo consistindo em:hidrogênio, ciclopropila, ciclopropila substituída, ciclobu-tila, ciclobutila substituída, ciclopentila, ciclopentilasubstituída, alquila C1-C4, alquila C1-C4 substituída;
R4R4 são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclopropila substituí-da, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila, ci-colpentila substituída, alquila C1-C4, alquila C1-C4 substi-tuída;
R5R5 são independentemente selecionados a partirde: hidrogênio, flúor, ciclopropila, ciclopropila substituí-da, ciclobutila, ciclobutila substituída, ciclopentila, ci-cólpentila substituída, alquila C1-C4 e alquila C1-C4 substi-tuída; e
R1 é selecionado a partir do grupo consistindo em:hidrogênio, alquila C1-C4 e alquila C1-C4 substituída; e
quando X é ausente ou CR20R21, R1 pode adicionalmen-te ser flúor;
e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos,solvatos e pró-fármacos destes.
Incluído entre os compostos presentemente inventa-dos da Fórmula (I) são:
4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(3S)-3-piperidinilmetil]óxi}-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol;
4-{2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-[(2-morfolinilmetil)óxi]-IH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il}-2-metil-3-butin-2-ol;4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(2S)-2-tiomorfolinilmetil]óxi}-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol;
4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(2S)-2-morfolinilmetil]óxi}-IH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol;
4-{2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-[(3-pirrolidinilmetil)óxi]-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il}-2-metil-3-butin-2-ol;
4-[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-({[(3S)-l-metil-3-piperidinil]metil}óxi)-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol;
4-[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-({ [(2S)-4-metil-2-tiomorfolinil]metil}óxi)-lH-imidazo[4, 5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol;
4-[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-({ [ (2S.) - 4-met i 1-2-mor folini lmetil} óxi) -lH-imidazo [4, 5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol;
4-[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-({ [(2R)-6-metil-2-morfolinil]metil}óxi)-lH-imidazo[4, 5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol; e
4-[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-({[(2S)-4-etil-2-morfolinil]metil}óxi)-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol;e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos,
solvatos e pró-fármacos destes.Compostos da Fórmula (I) estão incluídos nas com-posições farmacêuticas da invenção e empregados nos métodosda invenção.
Quando aqui empregado, os substituintes ciclopro-pila, ciclopropilmetila, ciclobutila, ciclopentila e alquilaC1-C4, são opcionalmente substituídos com a partir de 1 áto-mo de flúor a onde o substituinte for perfluorado. Adequada-mente, o substituinte é opcionalmente substituído com a par-tir de 1 a 8 átomos de flúor. Adequadamente, o substituinteé opcionalmente substituído com a partir de 1 a 5 átomos deflúor. Adequadamente, o substituinte é opcionalmente substi-tuído com a partir de 1 a 3 átomos de flúor.
Pelo termo "perfluorado" quando aqui empregado épretendido um substituinte onde todos os átomos de hidrogê-nio foram substituídos através de átomos de flúor.
Pelo termo "substituído" quando aqui empregado, amenos que de outra maneira definido, pretende-se que a por-ção química submetida seja substituída com a partir de 1 á-tomo de flúor até onde a porção química é perfluorada. Ade-quadamente, a porção química é substituída com a partir de 1a 8 átomos de flúor. Adequadamente, a porção química é subs-tituída com a partir de 1 a 5 átomos de flúor. Adequadamen-te, a porção química é substituída com a partir de 1 a 3 á-tomos de flúor. Pelo termo "alquila C1-C4" quando aqui em-pregado, é pretendido uma cadeia de hidrocarboneto insatura-da ou saturada, linear ou ramificada, contendo de 1 a 4 áto-mos de carbono. Exemplos de alquila C1-C4 quando aqui empre-gados incluem: -CH3, -CH2-CH3, -CH2-CH2 -CH3, -CH(CH3)2,-CH2-CF3, -C(CH3)3, -(CH2)3-CH3, -CH2-CH(CH3)2, -CH(CH3)-CH2-CH3, -CH=CH2, e -C=C-CH3.
A menos que de outra maneira declarado, os compos-tos descritos aqui da mesma forma incluem todas as formasestereoquimicas da estrutura; isto é, as configurações ReSpara cada centro assimétrico. Portanto, isômeros estereoquí-micos simples bem como misturas enantioméricas e diastereo-méricas dos presentes compostos estão dentro do escopo dainvenção.
Pelo termo "tratando" e derivados destes quandoaqui empregado, é pretendido terapia profilática e terapêutica.
Quando aqui empregado, o termo "quantidade eficaz"e derivados desta siginifica a quantidade de um fármaco ouagente farmacêutico que eliciará a resposta biológica ou mé-dica de um tecido, sistema, animal ou humano que está sendobuscada, por exemplo, através de um pesquisador ou clinico.Além disso, o termo "quantidade terapeuticamente eficaz" ederivados desta siginifica qualquer quantidade que, quandocomparada a um indivíduo correspondente que não recebeu talquantidade, resulta no tratamento melhorado, cura, preven-ção, ou melhora de uma doença, distúrbio, ou efeito colate-ral, ou uma diminuição na taxa de avanço de uma doença oudistúrbio. O termo da mesma forma inclui dentro de seu esco-po, quantidades eficazes para realçar a função fisiológicanormal.
Os novos compostos da Fórmula I são preparados co-mo mostrado no Esquema 1 abaixo, ou através de métodos aná-logos. Todos os materiais de partida estão comercialmentedisponíveis ou são facilmente preparados a partir de materi-ais de partida comercialmente disponíveis por aqueles de ex-periência na técnica.
Esquema 1
<formula>formula see original document page 22</formula>
(a) Br2, NaOAc; (b) EtNH2; (c) SnCl2, HCl; (d) cia-noacetato de etila, 190°C; (e) NaNO2, HCl; (f) NH2OH; (g)Et3N, dioxano; (h) n-BuLi, THF; (i) B(OMe)3; G) H2O2, NaOH;(k) 1, 1-dimetiletil 3-(hidroximetil)-1-piperidinacarboxilato, DEAD, PPh3 ligado ao polímero, CH2Cl2;(I) Pd(PPh3)4, IPr2NH, dioxano, 100°C; (M) TFA, CH2Cl2.
Compostos de Fórmula (I) podem ser preparados demaneira análoga aqueles mostrados no Esquema 1. Brominaçãode 3-nitro-4-etóxi piridina (1-Esquema 1) empregando-se bro-mo tamponado em acetato de sódio produz 3-bromo-4-(etilóxi)-5-nitropiridina (2-esquema 1) . Outros métodos alternativosexistem e são conhecidos por aqueles versados na técnica pa-ra realizar esta transformação. Uma compilação destes méto-dos pode ser encontrada em textos de síntese orgânica pa-drões tal como Larock, "Comprehensive Organic Transformati-ons," VCH, N.Y. (1989) . O grupo etóxi é deslocado em seguidapor uma amina primário tal como etil amina em um solventepolar tal como etanol para produzir compostos tal como 3-esquema 1. Nas aminas líquidas do caso, a reação pode serrealizada na ausência de solvente. A redução do grupo nitrocom introdução concomitante do grupo de cloro é obtida em-pregado-se cloreto de estanho (II) de acordo com o métododescrito por Kelley e outro, al. J. Med. Chem. 1995, 38(20),4131-34. O 5-bromo-2-cloro diaminopiridina correspondente écondensado com um éster ou ácido apropriado tal como cianoa-cetato de etila. O aquecimento continuado afeta uma reaçãode ciclodesidratação para produzir imidazopiridinas tal como4-esquema 1. A reação com NaNÜ2 em HCl concentrado seguindoatravés da reação com hidroxilamina produz uma bis-oxima queciclodesidrata-se na presença de uma base apropriada tal co-mo trietilamina para produzir um aminofurazam tal como 5-esquema 1. 0 grupo hidroxila é introduzido gerando-se um â-nion de arila através de troca de metal de halogênio empre-gando-se uma base adequada tal como n-butil lítio, reagindoo ânion com um eletrófilo de boro apropriado tal como trime-til borato e oxidando-se o aril boronato resultante com umagente de oxidação apropriado tal como peróxido de hidrogê-nio em base aquosa para produzir imidazopiridinóis tal como6-esquema 1. Outras bases tais como reagentes de Grignardpodem ser empregadas para afetar a troca de metal de halogê-nio. A eterificação do imidazopiridinol é realizada com umálcool apropriado tal como 1,1-dimetiletil 3-(hidroximetil)-1-piperidinacarboxilato empregando-se os métodos descritospor Mitsunobu, Synthesis 1981, 1 para produzir éteres talcomo 7-esquema 1. Alternativamente, a eterificação pode serrealizada reagindo-se um haleto apropriado tal como 1,1-dimetiletil 3-(clorometil)-1-piperidinacarboxilato com umálcool adequado tal como 6-Esquema 1 na presença de uma baseadequada tal como carbonato de potássio. O tratamento de umhaleto de arila apropriado tal como 7-esquema 1 com um cata-lisador apropriado tal como tetracistrifenilfosfina paládioe uma alcina terminal na presença de uma base adequada talcomo di-isopropilamina em um solvente apropriado tal comodioxano produz a aril alcina correspondente tal como 8-esquema 1. Remoção dos grupos protetores é obtida empregan-do-se um ácido de Lewis ou prótico tal como ácido trifluoro-acético em um solvente polar tal como cloreto de metilenoque produz compostos de Fórmula (I) tal como 9-esquema 1.
Pelo termo "co-administrando" e derivados destequando aqui empregado é significado administração simultâneaou qualquer maneira de administração seqüencial separada deum composto inibidor de AKT, como descrito aqui, e um ingre-diente ativo adicional ou ingredientes, conhecidos ser úteisno tratamento de câncer, incluindo quimioterapia e radiote-rapia, ou ser úteis no tratamento de artrite. 0 termo outroingrediente ativo ou ingredientes, quando aqui empregado a-qui, inclui qualquer composto ou agente terapêutico conheci-do ou que demonstra propriedades vantajosas quando adminis-trado a um paciente em necessidade de tratamento para câncerou artrite. Preferivelmente, se a administração não for si-multânea, os compostos são administrados em uma proximidadede tempo intima um do outro. Além disso, não importa se oscompostos são administrados na mesma forma de dosagem, porexemplo, um composto pode ser administrado topicamente e ou-tro composto pode ser administrado oralmente.
Tipicamente, qualquer agente anti-neoplástico quetem atividade versus um tumor suscetível a ser tratado podeser co-administrado no tratamento de câncer na presente in-venção. Exemplos de tais agentes podem ser encontrados emCâncer Principies and Practice of Oncology by V.T. Devita eS. Hellman (editors), 6a edição (5 de Fevereiro de 2001 ),Lippincott Williams & Wilkins Publishers. Uma pessoa de ex-periência ordinária na técnica poderia discernir quais com-binações de agentes seriam úteis com base nas característi-cas particulares das drogas e o câncer envolvido. Agentesanti-neoplásticos típicos úteis na presente invenção inclu-em, porém não são limitados a, agentes anti-microtúbulo taiscomo diterpenóides e vinca alcalóides; complexos de coorde-nação de platina; agentes de alquilação tais como mostardasnitrogenadas, oxazafosforinas, alquilsulfonatos, nitrosou-réias e triazenos; agentes antibióticos tais como antraci-clinas, actinomicinas e bleomicinas; inibidores de topoiso-merase II tal como epipodofilotoxinas; antimetabólitos taiscomo análogos de pirimidina e purina e compostos anti-folato; inibidores de topoisomerase I tais como camptoteci-nas; hormônios e análogos hormonais; inibidores de séries dereações de transdução de sinal; inibidores de angiogênese detirosina cinase de não receptor ; agentes imunoterapêuticos;
agentes pró-apoptóticos; e inibidores de sinalização do ci-clo celular.
Exemplos de um ingrediente ativo adicional ou in-gredientes (agente anti-neoplástico) para uso em combinaçãoou co-administrado com os compostos inibidores de AKT pre-sentemente inventados são os agentes quimioterapêuticos.
Agentes anti-microtúbulo e anti-mitótico são agen-tes específicos de fase ativos contra os microtúbulos de cé-lulas de tumor durante M ou a fase de mitose do ciclo celu-lar. Exemplos de agentes anti-microtúbulo incluem, porém,não são limitados a, diterpenóides e vinca alcalóides.
Diterpenóides que são derivados de fontes naturaissão agentes anti-câncer específicos de fase que operam nasfases de G2/M do ciclo celular. Acredita-se que os diterpe-nóides estabilizam a subunidade de β-tubulina dos microtúbu-los, através da ligação com esta proteína. A separação daproteína parece ser inibida com a mitose que é interrompidae a morte celular que segue. Exemplos de diterpenóides in-cluem, porém, não são limitados a, paclitaxel e seu doceta-xel analógico.
Paclitaxel, 13-éster de 2-benzoato de 5p,20-epóxi-1,2a,4,10-diacetato com (2R,3S)-N-benzoil-3-fenilisosserina;é um produto de diterpeno natural isolado da árvore de teixodo Pacífico Taxus brevifolia e está comercialmente disponí-vel como uma solução injetável TAXOL®. É um membro da famí-lia taxano de terpenes. Foi primeiro isolado em 1971 atravésde Wani e outro, J. Am. Chem, Soe, 93:2325. 1971), que ca-racterizou sua estrutura através de métodos cristalográficosde Raios X e químicos. Um mecanismo para sua atividade refe-re-se à capacidade do paclitaxel ligar tubulina, desse modoinibindo o crescimento da célula do câncer. Schiff e outro,Proc. Natl, Acad, Sei. USA, 77:1561-1565 (1980); Schiff eoutro, Nature, 277:665-667 (1979); Kumar, J. Biol, Chem,256: 10435-10441 (1981). Para uma revisão da síntese e ati-vidade anti-câncer de alguns derivados de paclitaxel veja:D. G. I. Kingston e outro, Studies in Organic Chemistry vol.26, entitled "New trends in Natural Products Chemistry1986", Attaur-Rahman, P.W. Le Quesne, Eds. (Elsevier, Ams-terdam, 1986) pp 219-235.
Paclitaxel foi aprovado para uso clínico no trata-mento de câncer ovariano refratário nos Estados Unidos(Markman e outro, , Yale Journal of Biology and Medicine,64:583, 1991; McGuire e outro, Ann. Intern, Med., 111:273, 1989) e para o tratamento de câncer de mama (Holmes eoutro, J. Nat. Câncer Inst., 83:1797,1991). É um candidatopotencial para o tratamento de neoplasmas na pele (Einzig eoutro, Proc. Am. Soe. Clin. Oncol., 20:46) e carcinomas decabeça e pescoço (Forastire e outro, Sem. Oncol., 20:56,1990). 0 composto da mesma forma mostra o potencial para otratamento de doença renal policística (Galanteie e outro,Nature, 368:750, 1994), câncer do pulmão e malária. Trata-mento de pacientes com paclitaxel resulta na supressão damedula óssea (linhagens celulares múltiplas, Ignoff, R.J. eoutro, Câncer Chemotherapy Pocket Guide, 1998) relacionada àduração da dosagem acima de uma concentração limiar (50nM)(Kearns, C.M. e outro, Seminars in Oncology, 3(6) p.16-23,1995).
Docetaxel, (2R, 3S)-N-carbóxi-3-fenilisosserina,éster N-terc-butilico, 13-éster com 2-benzoato de 4-acetatode 5p-20-epóxi-l,2a,4,7β,10β,13a-hexaidroxitax-ll-en-9-ona,triidrato; está comercialmente disponível como uma soluçãoinjetável como TAXOTERE®. Docetaxel é indicado para o trata-mento de câncer de mama. Docetaxel é um derivado semi-sintético de paclitaxel q.v., preparado empregando-se umprecursor natural, 10-desacetil-bacatina III, a partir daagulha da árvore de Teixo Européia. A dose que limita a to-xicidade de docetaxel é neutropenia.
Vinca alcalóides são agentes anti-neoplásticos es-pecíficos de fase derivados da planta de caramujo. Vinca al-calóides agem na fase M (mitose) do ciclo celular especifi-camente através da ligação à tubulina. Por consegüinte, amolécula de tubulina ligada é incapaz de polimerizar-se nosmicrotúbulos. Acredita-se que a mitose deve ser interrompidana metáfase com a morte célula que seguer. Exemplos de vincaalcalóides incluem, porém, não são limitados a, vimblastina,vincristina e vinorelbina.
Vinblastina, sulfato de vincaleucoblastina, estácomercialmente disponível como VELBAN® como uma solução in-jetável. Embora tenha possível indicação como uma segundaterapia de linha de vários tumores sólidos, é indicado prin-cipalmente no tratamento de câncer testicular e vários Iin-fomas incluindo Doença de Hodgkin; e linfomas linfociticos ehistiociticos. Mielosuppressão é a dose que limita o efeitocolateral de vimblastine.
Vincristina, vincaleucoblastina, 22-oxo-, sulfato,está comercialmente disponível como ONCOVIN® como uma solu-ção injetável. Vincristina é indicada para o tratamento deleucemias agudas e tem da mesma forma encontrado uso nos re-gimes de tratamento para os linfomas malignos de Hodgkin e não Hodgkin. Alopecia e efeitos neurológicos são o efeitocolateral mais comum de vincristina e em extensão menos mie-lossupressão e efeitos de mucosite gastrointestinais ocor-rem.
Vinorelbine, 31,4'-didesidro-41-desóxi-C1 -norvincaleucoblastina [R- (R*,R*)-2,3-diidroxibutanodioato(1:2) (sal)], comercialmente disponível como uma solução in-jetável de tartarato de vinorelbina (NAVELBINE®), é um vincaalcalóide semi-sintético. Vinorelbina é indicada como um a-gente único ou em combinação com outros agentes quimiotera-pêuticos, tal como cisplatina, no tratamento de vários tumo-res sólidos, particularmente pulmonar de célula não pequena,de mama avançado, e cânceres de próstata refratários de hor-mônio. Mielossuppressão é a dose mais comum que limita o e-feito colateral da vinorelbina.
Complexos de coordenação de platina são agentesanti-câncer específicos de não fase, que são interativos comDNA. Os complexos de platina entram nas células de tumor,passam por aquação e formam reticulações de intra e inter-filamento com DNA que causam efeitos biológicos adversos aotumor. Exemplos de complexos de coordenação de platina in-cluem, porém não são limitados a, cisplatina e carboplatina.
Cisplatina, cis-diaminadicloroplatina, está comer-cialmente disponível como PLATINOL® como uma solução injetá-vel. Cisplatina é indicada principalmente no tratamento decâncer ovariano e testicular metastático e câncer de bexigaavançado. Efeitos colaterais de limitação de dose primáriade cisplatina são nefrotoxicidade, que pode ser controladapor hidratação e diurese e ototoxicidade.
Carboplatina, platina, diamine [ 1,1-ciclobutano-dicarboxilato(2-)-O,O'], está comercialmente disponível comoPARAPLATIN® como uma solução injetável. Carboplatina é indi-cada principalmente no tratamento de primeira e segunda Ii-nha de carcinoma ovariano avançado. A supressão da medulaóssea é a dose que limita a toxicidade de carboplatina.
Os agentes de alquilação são agentes específicosanti-câncer de não fase e eletrófilos fortes. Tipicamente,agentes de alquilação formam ligações covalentes, através de alquilação, ao DNA através de frações nucleofílicas da molé-cula de DNA tais como grupos fosfato, amino, sulfidrila, hi-droxila, carboxila e imidazol. Tal alquilação rompe a funçãode ácido nucléico que leva à morte celular. Exemplos de a-gentes de alquilação incluem, porém, não são limitados a,mostardas nitrogenadas tais como ciclofosfamida, melfalan, eclorambucila; alquil sulfonatos tais como busulfan; nitro-souréias tal como carmustina; e triazenos tal como dacarba-zina.Ciclofosfamida, monoidrato de 2-óxido de 2-[bis(2-cloroetil)amino]tetraidro-2H-l,3,2-oxazafosforine, está co-mercialmente disponível como uma solução injetável ou com-primidos como CYTOXAN®) . Ciclofosfamida é indicada como umagente único ou em combinação com outros agentes quimiotera-pêuticos, no tratamento de linfomas malignos, mieloma múlti-plo e leucemias. Alopecia, náusea, vômito e leucopenia sãoos efeitos colaterais de limitação de dose mais comum de ci-clofosfamida.
Melfalan, 4-[bis(2-cloroetil)amino]-L-fenilalanina, está comercialmente disponível como uma solu-ção injetável ou comprimidos como ALKERAN®. Melfalan é indi-cado para o tratamento paliativo de mieloma múltiplo e car-cinoma epitelial não operável do ovário. A supressão da me-dula óssea é o efeito colateral de limitação de dose maiscomum de melfalan.
Clorambucila, ácido 4-[bis(2-cloroetil)amino]benzenobutanóico, está comercialmente dispo-nível como comprimidos de LEUKERAN®. Clorambucila é indicadopara o tratamento paliativo"de leucemia linfática crônica, elinfomas malignos tais como linfossarcoma, linfoma foliculargigantesco, e doença de Hodgkin. Supressão de medula óssea éo efeito colateral de limitação de dose mais comum de clo-rambucila.
Busulfan, dimetanossulfonato de 1,4-butanediol,está comercialmente disponível como comprimidos de MYLERAN®.
Busulfan é indicado para o tratamento paliativo de leucemiamielogenosa crônica. Supressão de medula óssea é o efeitocolateral de limitação de dose mais comum de busulfan.
Carmustina, 1,3-[bis(2-cloroetil)-1-nitrosouréia,está comercialmente disponível como frascos únicos de mate-rial liofilizado como BICNU®). Carmustina é indicada para otratamento paliativo como um agente único ou em combinaçãocom outros agentes para tumores cerebrais, mieloma múltiplo,doença de Hodgkin, e linfomas de não Hodgkin. Mielossupres-são atrasada é o efeito colateral de limitação de dose maiscomum de carmustina.
Dacarbazina, 5-(3,3-dimetil-l-triazeno)-imidazol-4-carboxamida, está comercialmente disponível como frascosúnicos de material como DTIC-Dome®. Dacarbazina é indicadapara o tratamento de melanoma maligno metastático e em com-binação com outros agentes para o tratamento de segunda li-nha de Doença de Hodgkin. Náusea, vômito, e anorexia são osefeitos colaterais de limitação de dose mais comuns da da-carbazina .
Antibióticos anti-neoplásticos são agentes especí- ficos de não fase que ligam ou intercalam com DNA. Tipica-mente, tal ação resulta em complexos de DNA estáveis ou rom-pimento de filamento, que rompe a função ordinária dos áci-dos nucléico que leva à morte celular. Exemplos de agentesanti-neoplástico antibióticos incluem, porém, não são Iimi-tados a, actinomicinas tal como dactinomicina, antrociclinastais como daunorrubicina e doxorrubicina; e bleomicinas.
Dactinomicina, da mesma forma conhecida como Acti-nomicina D, está comercialmente disponível em forma injetá-vel como COSMEGEN®. Dactinomicina é indicada para o trata-mento do tumor de Wilm e rabdomiossarcoma. Náusea, vômito eanorexia são os efeitos colaterais de limitação de dose maiscomuns de dactinomicina.
Daunorrubicina, cloridrato de (8S-cis-)-8-acetil-10-[(3-amino-2,3,6-tridesóxi-a-L-lixo-hexopiranosil)óxi]-7,8,9,10-tetraidro-6,8,ll-triidróxi-l-metóxi-5,12 naftaceno-diona, está comercialmente disponível como uma forma injetá-vel lipossômica como DAUNOXOME® ou como um injetável comoCERUBIDINE®. Daunorrubicina é indicado para indução da re-missão no tratamento de leucemia não linfocitica aguda esarcoma de Kaposi associado ao HIV avançado. Mielossuppres-são é o efeito colateral de limitação de dose mais comum dedaunorrubicina.
Doxorrubicina, cloridrato de (8S, 10S)-10-[(3-amino-2,3,6-tridesóxi-a-L-lixo-hexopiranosil)óxi]-8-glicoloil 7,8,9,10-tetraidro-6,8,ll-triidróxi-l-metóxi-5,12naftacenodiona, está comercialmente disponível como uma for-ma injetável como RUBEX® ou ADRIAMYCIN RDF®. Doxorrubicina éindicado principalmente para o tratamento de leucemia linfo-blástica aguda e leucemia mieloblástica aguda, porém, é damesma forma um componente útil no tratamento de alguns tumo-res sólidos e linfomas. Mielossupressão é o efeito colateralde limitação de dose mais comum da doxorrubicina.
Bleomicina, uma mistura de antibióticos de gl.ico-peptídeo citotóxicos isolados a partir de uma cepa de Strep-tomyces verticillus, está comercialmente disponível comoBLENOXANE®. Bleomicina é indicada como um tratamento palia-tivo, como um agente único ou em combinação com outros agen-tes, de carcinoma de célula escamosa, linfomas e carcinomastesticulares. Toxicidades pulmonares e cutâneas são os efei-tos colaterais de limitação de dose mais comuns de de bleo-micina.
Inibidores de topoisomerase II incluem, porém nãosão limitados a, epipodofilotoxinas.
Epipodofilotoxinas são agentes anti-neoplásticosespecíficos de fase derivados da planta mandrágora. Epipodo-filotoxinas tipicamente afetam células nas fases S e G2 dociclo celular através da formação de complexo ternário comtopoisomerase II e DNA que causam rompimentos no filamentode DNA. Os rompimentos do filamento acumulam-se e a mortecelular que segue. Exemplos de epipodofilotoxinas incluem,porém não são limitados a, etoposídeo e teniposídeo.
Etoposídeo, 41-demetil-epipodofilotoxina 9[4,6-0-(R)-etilideno-p-D-glicopiranosídeo], está comercialmentedisponível como uma solução injetável ou cápsulas como VePE-SID® e é geralmente conhecido como VP-16. Etoposídeo é indi-cado como um agente único ou em combinação com outros agen-tes de quimioterapia no tratamento de cânceres de pulmão decélula não pequena e testicular. Mielossupressão é o efeitocolateral mais comum do etoposídeo. A incidência de leucope-nia tende a ser mais grave do que a trombocitopenia.
Teniposídeo, 4'-demetil-epipodofilotoxina 9 [4,6-0-(R)-tenilidene-p-D-glicopiranosídeo], está comercialmentedisponível como uma solução injetável como VUMON® e é geral-mente conhecido como VM-2 6. Teniposídeo é indicado como umagente único ou em combinação com outros agentes de quimio-terapia no tratamento de leucemia aguda em crianças. Mielos-supressão é o efeito.colateral de limitação de dose mais co-mum do teniposideo. Teniposideo pode induzir a leucopenia etrombocitopenia.
Os agentes neoplásticos antimetabólitos são agen-tes anti-neoplástico específicos de fase que agem na fase S(síntese de DNA) do ciclo celular através da inibição dasíntese de DNA ou através da inibição da síntese básica depurina ou pirimidine e desse modo limitando a síntese deDNA. Por consegüinte, fase S não procede e a morte celularsegue. Exemplos de agentes anti-neoplásticos antimetabólitosincluem, porém não são limitados a, fluorouracila, metotre-xato, citarabina, mecaptopurina, tioguanina, e gencitabina.
5-fluorouracila, 5-fluoro-2,4-(1H,3H)pirimidinadiona, está comercialmente disponível comofluorouracila. A administração de 5-fluorouracila leva à i-nibição da síntese de timidilâto e está da mesma forma in-corporada no RNA e DNA. O resultado é tipicamente a mortecelular. 5-fluorouracila é indicada como um agente único ouem combinação com outros agentes de quimioterapia no trata-mento de carcinomas de mama, cólon, reto, estômago e pân-creas. Mielossupressão e mucosite são efeitos colaterais delimitação de dose de 5-fluorouracila. Outros análogos defluoropirimidina incluem 5-fluoro desoxiuridina (floxuridi-na) e monofosfato de 5-fluorodesoxiuridina.
Citarabina, 4-amino-l-p-D-arabinofuranosil-2(IH) -pirimidinona,' está comercialmente disponível como CYTOSAR-U®e é geralmente conhecida como Ara-C. Acredita-se que citara-bina exibe especificidade de fase celular na fase S atravésda inibição do alongamento de cadeia de DNA através da in-corporação terminal de citarabina no crescimento de cadeiade DNA. Citarabina é indicada como um agente único ou emcombinação com outros agentes de quimioterapia no tratamentode leucemia aguda. Outros análogos de citidina incluem 5-azacitidina e 221-difluorodesoxicitidina (gencitabina).Citarabina induz leucopenia, trombocitopenia, e mucosite.
Mercaptopurina, monidrato de 1,7-diidro-6H-purina-6-tiona, está comercialmente disponível como PURINETHOL®.Mercaptopurina exibe especificidade de fase celular na faseS através da inibição da síntese de DNA por um no mecanismoainda não especificado. Mercaptopurina é indicado como umagente único ou em combinação com outros agentes de quimio-terapia no tratamento de leucemia aguda. Espera-se que mie-lossupressão e mucosite gastrointestinal sejam efeitos cola-terais de mercaptopurina em doses altas. Um análogo de mer-captopurina útil é azatioprina.
Tioguanina, 2-amino-l,7-diidro-6H-purina-6-tiona,está comercialmente disponível como TABLOID®. Tioguanine e-xibe especificidade de fase celular na fase S através da i-nibição da síntese de DNA por um no mecanismo ainda não es-pecificado. Tioguanina é indicada como um agente único ou emcombinação com outros agentes de quimioterapia no tratamentode leucemia aguda. Mielossupressão, inclusive leucopenia,trombocitopenia, e anemia, são os efeitos colaterais de li-mitação de dose mais comuns da administração de tioguanina.Porém, efeitos colaterais gastrointestinais ocorrem e podemser de limitação de dose. Outros análogos de purina incluempentostatina, eritroidroxinoniladenina, fosfato de fludara-bina e cladribina.
Gencitabina, monocloridrato de 2'-dsóoxi-21,2'-difluorocitidina (β-isômero), está comercialmente disponívelcomo GEMZAR®. Gencitabina exibe especificidade de fase celu-lar na Fase S e através do bloqueio do progresso das célulasatravés do limite de Gl/S. Gencitabina é indicada em combi-nação com cisplatina no tratamento de câncer de pulmão decélula não pequena localmente avançado e sozinho no trata-mento de câncer pancreático localmente avançado. Mielossu-pressão, incluindo leucopenia, trombocitopenia, e anemia,são os efeitos colaterais de limitação de dose mais comunsda administração de gencitabina.
Metotrexato, ácido N-[4[[(2,4-diamino-6-pteridinil)metil]metilamino]benzoil]-L-glutâmico, está co-mercialmente disponível como metotrexato sódico. Metotrexatoexibe efeitos da fase celular especificamente na fase S a-través da inibição da síntese de DNA, reparo e/ou replicaçãoatravés da inibição de ácido diidrofólico reductase que érequerido para síntese de nucleotídeos de purina e timidila-to. Metotrexato é indicado como um agente único ou em combi-nação com outros agentes de quimioterapia no tratamento decoriocarcinoma, leucemia meníngea, linfoma de não Hodgkin, ecarcinomas de mama, cabeça, pescoço, ovário e bexiga. Mie-lossupressão e mucositis (leucopenia, trombocitopenia e ane-mia) e são efeitos colaterais esperados da administração demetotrexato.
Camptotecinas, incluindo, camptotecina e derivadosde camptotecina estão disponíveis ou sob desenvolvimento co-mo inibidores de topoisomerase I. Acredita-se que atividadecitotóxica de camptotecina esteja relacionada a sua ativida-de inibidora de Topoisomerase I. Exemplos de camptotecinasincluem, porém, não são limitados a irinotecana, topotecana,e as várias formas ópticas de 7-(4-metilpiperazino-metileno)-10,ll-etilenodióxi-20-camptotecina descritas abaixo.
HCl de irinotecana, cloridrato de (4S)-4,11-dietil-4-hidróxi-9-[(4-piperidinopiperidino)carbonilóxi]-IH-pirano[3',4',6,7]indolizino[1,2-b]quinolina-3,14(4H,12H)-diona, está comercialmente disponível como a solução injetá-vel CAMPTOSAR®.
Irinotecana é um derivado de camptotecina que li-ga-se, junto com seu metabólito ativo SN-38, ao complexo detopoisomerase I - DNA. Acredita-se que a citotoxicidade o-corre como um resultado de rompimentos de filamento duploirreparáveis causados por interação do complexo ternário detopoisomerase I: DNA: irintecana ou SN-38 com enzimas de re-plicação. Irinotecana é indicada para o tratamento de câncermetastático do cólon ou reto. Os efeitos colaterais de Iimi-tação de dose de HCl de irinotecana são mielossupressão, in-cluindo neutropenia, e efeitos GI, incluindo diarréia.
HCl de topotecana, monocloridrato de (S)-IO-[(dimetilamino)metil]-4-etil-4,9-diidróxi-lH-pirano[3', 4 ' ,6,7]indolizino[1,2-b]quinolina-3,14-(4H,12H)-diona, está comercialmente disponível como a solução injetá-vel HYCAMTIN®. Topotecana é um derivado de camptotecina queliga-se ao complexo de topoisomerase I - DNA e previne a re- ligação de rompimentos de filamento único causados por To-poisomerase I com respeito à cepa torsional da molécula deDNA. Topotecana é indicada para tratamento de segunda linhade carcinoma metastático do ovário e câncer do pulmão de cé-lula pequena. O efeito colateral de limitação de dose de HClde topotecana é mielossupressão, principalmente neutropenia.
Da mesma forma de interesse, é o derivado de camp-totecina da fórmula A que segue, atualmente sob desenvolvi-mento, incluindo a forma de mistura racêmica (R,S) bem comoos enantiômeros R e S:
<formula>formula see original document page 39</formula>
conhecidos pelo nome químico "7-(4-metipiperazino-metileno)-10,ll-etilenodióxi-20(R,S)-camptotecina (mistura racêmica)ou "7-(4-metilpiperazino-metileno)-10,ll-etilenodióxyi20(R) -camptotecina (enantiômero R) ou "7-(4-metilpiperazino-metileno) -10,ll-etilenodióxi-20(S)-camptotecina (enantiomerS) . Tais composto bem como compostos relacionados são des-critos, incluindo métodos de preparo, na Patente U.S. Nos.6.063.923; 5.342.947; 5.559.235; 5.491.237 e Pedido de pa-tente U.S. pendente No. 08/977.217 depositado em 24 de no-vembro de 1997.
Hormônios e análogos hormonais são compostos úteispara tratar cânceres em que há uma relação entre o(s) hormô-nio (s) e crescimento e/ou falta de crescimento do câncer.Exemplos de hormônios e análogos hormonais úteis no trata-mento de câncer incluem, porém não são limitados a, adreno-corticosteróides tais como prednisona e prednisolona que sãoúteis no tratamento de linfoma maligno e leucemia aguda emcrianças; aminoglutetimida e outros inibidores de aromatasetais como anastrozol, letrazol, vorazol e exemestano úteisno tratamento de carcinoma adrenocortical e carcinoma de ma-ma dependente de hormônio que contém receptores de estrogê-nio; progestrinas tal como acetato de megestrol útil no tra-tamento de câncer de mama dependente de hormônio e carcinomaendometrial; estrogênios, androgênios, e anti-androgêniostais como flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato deciproterona e 5a-reductases tais como finasterida e dutaste-rida, úteis no tratamento de carcinoma prostático e hiper-trofia prostática benigna; anti-estrogênios tais como tamo-xifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, iodoxifeno, bemcomo moduladores de receptor de estrogênio seletivos (SERMS)tais como aqueles descritos na Patente U.S. Nos. 5.681.835,5.877.219, e 6.207.716, úteis no tratamento de carcinoma demama dependente de hormônio e outro cânceres suscetíveis; ehormônios liberadores de gonadotropina (GnRH) e análogosdestes que estimulam a liberação de hormônio leuteinizante(LH) e/ou hormônio estimulador de foliculo (FSH) para o tra-tamento de carcinoma prostático, por exemplo, agonistas deLHRH e antagagonistas tais como acetato de gosserrelina eluprolida.
Inibidores de séries de reações de transdução desinal são aqueles inibidores, que bloqueiam ou inibem umprocesso químico que evoca uma mudança intracelular. Quandoempregado aqui, esta mudança é diferenciação ou proliferaçãocelular. Inibidores de trandução de sinal úteis na presenteinvenção incluem inibidores de tirosina cinases de receptor,tirosina cinases de não receptor, bloqueadores de domínio deSH2/SH3, serina/treonina cinases, fosfotidil inositol-3 ci-nases, sinalização de mio-inositol, e oncogenes de Ras.
Várias proteínas tirosina cinases catalisam a fos-forilação de resíduos de tirosila específicos em várias pro-teínas envolvidas no regulamento do crescimento celular.Tais proteína tirosina cinases podem ser classificadas am-plamente como cinases de receptor ou não receptor.
Tirosina cinases de receptor são proteínas detransmembrana que têm um domínio de ligação de ligando ex-tracelular, um domínio de transmembrana, e um domínio de ti-rosina cinase. Tirosina cinases de receptor estão envolvidasno regulamento do crescimento celular e geralmente são deno-minadas receptores do fator de crescimento. Ativação impró-pria ou descontrolada de muitas destas cinases, isto é, ati-vidade de receptor de fator de crescimento de cinase aber-rante, por exemplo, através de super-expressão ou mutação,foi mostrada resultar no crescimento celular descontrolado.Desta maneira, a atividade aberrante de tais cinases foi li-gada ao crescimento de tecido maligno. Conseqüentemente, i-nibidores de tais cinases poderiam forencer métodos de tra-tamento de câncer. Receptores de fator de crescimento inclu-em, por exemplo, receptor de fator de crescimento epidérmico(EGFr), receptor de fator de crescimento derivado de plaque-tas (PDGFr), erbB2, erbB4, receptor de fator de crescimentoendotelial vascular (VEGFr), tirosina cinase com domínios dehomologia de fator de crescimento epidérmico e semelhante àimunoglobulina (TIE-2), receptor de fator de crescimento deinsulina - I (IGFI), fator estimulador de colônia de macró-fago (cfms), BTK, ckit, cmet, receptores do fator de cresci-mento de fibroblasto (FGF), receptores de Trk (TrkA, TrkB, eTrkC), receptores de efrina (eph), e o protooncogene de RET.Vários inibidores de receptores de crescimento estão sob de-senvolvimento e incluem os antagonistas de ligando, anticor-pos, inibidores de tirosina cinase e oligonucleotídeos anti-sentido. Agentes e receptores de fator de crescimento queinibem a função do receptor do fator de crescimento, por e-xemplo, em Kath, John C, Exp. Opin. Ther. Patentes (2000)10 (6) : 803-818; Shawver e outro, DDT Vol 2, No. 2 fevereirode 1997; e Lofts, F. J. e outro, "Growth factor recèptors astargets", New Molecular Targets for Câncer Chemotherapy, ed.Workman, Paul e Kerr, David, CRC press 1994, London.
Tirosina cinases que não são cinases do receptorde fator de crescimento são denominadas tirosina cinases denão receptor. Tirosina cinases de não receptor para uso napresente invenção que são alvos ou alvos potenciais de fár-macos anti-câncer incluem cSrc, Lck, Fyn, Sim, Jak, cAbl,FAK (Cinase de adesão focai), Brutons tirosina cinase, eBcr-Abl. Tais cinases de não receptor e agentes que inibem afunção de tirosina cinase de não receptor são descritos emSinh, S. e Corey, S.J., (1999) Journal of Hematotherapy andStem Cell Research 8 (5): 465 - 80; e Bolen, J. B., Brugge,J.S., (1997) Annual review of Immunology. 15: 371-404.
Bloqueadores do domínio de SH2/SH3 são agentes querompem a ligação do domínio de SH2 ou SH3 que ligam-se emuma variedade de enzimas ou proteínas adaptador incluindo,subunidade de p85 de PI3-K, cinases da família de Src, molé-culas adaptadoras (She, Crk, Nek, Grb2) e Ras-GAP. Domíniosde SH2/SH3 como alvos para fármacos anti-câncer são discuti- dos em Smithgall, Τ. E. (1995), Journal of Pharmacologicaland Toxicological Methods. 34(3) 125-32.
Inibidores de Serina/Treonina Cinases incluindobloqueadores de cascata de MAP cinase que incluem bloqueado-res de Raf cinases (rafk), Cinase Regulada Extracelular ouMitógeno (MEKs), e Cinases Reguladas Extracelulares (ERKs);e bloqueadores do membro da família de Proteína Cinase C in-cluindo bloqueadores de PKCs (alfa, beta, gama, epsilon, mu,lambda, iota, zeta). Família de IkB cinase (IKKa, IKKb), ci-nases da família PKB, membros da família de akt cinase e ci- nases de beta receptor de TGF. Tais Serina/Treonina cinasese inibidores destas em Yamamoto, T., Taya, S., Kaibuchi, K.,(1999), Journal of Biochemistry. 126 (5) 799-803; Brodt, P,Samani, A., e Navab, R. (2000), Biochemical Pharmacology,60. 1101-1107; Massague, J., Weis-Garcia, F. (1996) CâncerSurveys. 27:41-64; Philip, P.A., e Harris, A.L. (1995), Cân-cer Treatment and Research. 78: 3-27, Lackey, K. e outroBioorganic and Medicinal Chemistry Letters, (10), 2000, 223-226; Patente U.S. No. 6, 268, 391 ; e Martinez-Iacaci, L, eoutro, Int. J. Câncer (2000), 88(1 ), 44-52.
Inibidores de membros da família de Fosfotidil i-nositol-3 Cinase incluindo bloqueadores de PI3-cinase, ATM,DNA-PK, e Ku pode da mesma forma ser úteis na presente in- venção. Tais cinases são discutidas em Abraham, R.T. (1996),Current Opinion in Immunology. 8 (3) 412-8; Canman, C.E.,Lim, D.S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308; Jackson, S.P.(1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biol-ogy. 29 (7):935-8; and Zhong, H. e outro, Câncer res, (2000)60(6), 1541-1545.
Da mesma forma de interesse na presente invençãosão inibidores de sinalização de Myo-inositol tais como blo-queadores de fosfolipase C e análogos de Mioinositol. Taisinibidores de sinal são descritos em Powis, G., and Kozi-kowski A., (1994) New Molecular Targets for Câncer Chemothe-rapy ed., Paul Workman and David Kerr, CRC press 1994, Lon-don.
Outro grupo de inibidores das séries de reações detransdução de sinal é inibidores de Ras Oncogene. Tais ini-bidores incluem inibidores de farnesiltransferase, geranil-geranil transferase, e CAAX proteases bem como oligonucleo-tídeos anti-sentido, ribozimas e imunoterapia. Tais inibido-res foram mostrados para bloquear a ativação de ras em célu-Ias que contêm o mutante tipo selvagem ras, desse mod agindoassim como agentes de antiproliferação. Inibição de Ras on-cogene é discutida em Scharovsky, O.G., Rozados, V.R., Ger-vasoni, S.I. Matar, P. (2000), Journal of Biomedical Scien-ce. 7(4) 292-8; Ashby, M.N. (1998), Current Opinion in Lipi-dology. 9 (2) 99 - 102; e BioChim. Biophys. Acta, (19899)1423(3):19-30.
Como mencionado acima, os antagonistas de anticor-po para ligação de ligando de cinase de receptor podem damesma forma servir como inibidores de transdução de sinal.
Este grupo de inibidores de séries de reações de transduçãode sinal inclui o uso de anticorpos humanizados ao domíniode ligação de ligando extracelular de tirosina cinases dereceptor. Por exemplo, anticorpo específico de EGFR ImcloneC225 (veja Green, M. C. e outro, Monoclonal Antibody Therapyfor Solid Tumors, Câncer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269-286); anticorpo de erbB2 Herceptina ® (veja, Tyrosine KinaseSignalling in Breast câncer:erbB Family Receptor TyrosineKniases, Breast câncer Res., 2000, 2(3), 176-183); e anti-corpo específico de VEGFR2 de 2CB (veja, Brekken, R.A. e ou-tro, Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a monoclonalAnti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice, Câncer Res.(2000) 60, 5117-5124).
Inibidores de angiogênese de cinase de não recep-tor podem da mesma forma ser úteis na presente invenção. I-nibidores de VEGFR e TIE2 relacionados à angiogênese sãodiscutidos acima com respeito aos inibidores de transduçãode sinal (ambos receptores são tirosina cinases de recep-tor) . Angiogênese em geral está ligada à sinalização deerbB2/EGFR visto que inibidores de erbB2 e EGFR mostraraminibir a angiogênese, principalmente expressão de VEGF. Con-seqüentemente, inibidores de tirosina cinase de não receptorpodem ser empregados em combinação com os compostos da pre-sente invenção. Por exemplo, anticorpos anti-VEGF que nãoreconhecem VEGFR (a tirosina cinase de receptor), porém li-gam-se ao ligando; inibidores de molécula pequena de inte-grina alfav beta3) que inibirão a angiogênese; endostatina eangiostatina (não RTK) podem da mesma forma mostrar ser ú-teis na combinação com os compostos descritos. (Veja, BrunsCJ e outro (2000), Câncer Res., 60: 2926-2935; Schreiber AB,Winkler ME, and Derynck R. (1986), Science, 232: 1250-1253;Yen L e outro, (2000), Oncogene 19: 3460-3469).
Agentes empregados em regimes imunoterapêuticospodem da mesma forma ser úteis em combinação com os compos-tos de fórmula (I). Há várias estratégias imunológicas paragerar uma resposta imune. Estas estratégias geralmente estãono domínio de vacinações de tumor. A eficácia de abordagensimunológicas pode ser grandemente realçada através da inibi-ção combinada das séries de reações sinalizadoras empregan-do-se um inibidor de molécula pequena. A discussão da abor-dagem de vacina de tumor/imunológica contra erbB2/EGFR é en-contrada em ReNIy RT e outro, (2000), Câncer Res. 60: 3569- 3576; e Chen Y, Hu D, Eling DJ, Robbins J, e Kipps TJ.(1998), Câncer Res. 58: 1965-1971.
Os agentes empregados em regimes pró-apoptóticos(por exemplo, oligonucleotídeos anti-sentido bcl-2) podem damesma forma ser empregados na combinação da presente inven-ção. Membros da família Bcl-2 de proteínas bloqueiam apopto-se. Supra-regulação de bcl-2 foi, portanto, uma quimiorre-sistência. Estudos mostraram que o fator de crescimento epi-dérmico (EGF) estimula os membros anti-apoptóticos da famí-lia bcl-2 (isto é, mcl-1). Portanto, estratégias projetadaspara infra-regular a expressão de bcl-2 em tumores demons-traram benefício clínico e estiveram agora nas tentativas deFase I/III, isto é, oligonucleotídeo anti-sentido de G3139bcl-2 de Genta. Tais estratégias pró-apoptóticas empregando-se a estratégia de oligonucleotídeo anti-sentido para bcl-2são discutidas em Water JS e outro, (2000), J. Clin. Oncol.18: 1812-1823; e Kitada S e outro, (1994), Antisense Res.Dev. 4: 71-79.
Inibidores de sinalização de ciclo celular inibemmoléculas envolvidas no controle do ciclo celular. Uma famí-lia de proteína cinases chamada cinases dependentes de ci-clina (CDKs) e sua interação com uma família de proteínaschamada ciclinas controla o progresso através do ciclo celu-lar eucariótico. A inativação e ativação coordenada de com-plexos de ciclina/CDK diferentes são necessárias para o pro-gresso normal através do ciclo celular. Vários inibidores dasinalização do ciclo celular estão sob desenvolvimento. Porexemplo, exemplos de cinases dependentes de ciclina, inclu-indo CDK2, CDK4 e CDK6 e inibidores para as mesmas são des-critos em, por exemplo, Rosania e outro, Exp. Opin. Ther.Patentes (2000) 10(2):215-230.Em uma modalidade, o método de tratamento de cân-cer da invenção reivindicada inclui a co-administração de umcomposto de fórmula I e/ou um sal farmaceuticamente aceitá-vel, hidrato, solvate ou pró-fármaco deste e pelo menos umagente anti-neoplástico, tal como aquele selecionado a par-tir do grupo que consiste em agentes anti-microtúbulo, com-plexos de coordenação de platina, agentes de alquilação, a-gentes antibióticos, inibidores de topoisomerase II, antime-tabólitos, inibidores de topoisomerase I, hormônios e análo-gos hormonais, inibidores de séries de reações de transduçãode sinal, inibidores de angiogênese de tirosina cinase denão receptor, agentes imunoterapêuticos, agentes pró-apoptóticos e inibidores de sinalização de ciclo celular.
Porque os compostos farmaceuticamente ativos dapresente invenção são ativos como inibidores de AKT eles e-xibem utilidade terapêutica no tratamento do câncer e artri-te .
Adequadamente, a presente invenção refere-se a ummétodo para tratar ou diminuir a gravidade de um câncer se-lecionado a partir de cerebral (gliomas), glioblastomas,leucemias, sindrome de Bannayan-Zonana, doença de Cowden,doença de Lhermitte-Duclos, mama, cólon, cabeça e pescoço,rim, pulmão, fígado, melanoma, ovariano, pancreático, prós-tata, sarcoma e tireóide.
Adequadamente, a presente invenção refere-se a ummétodo par tratar ou diminuir a gravidade de um câncer sele-cionado a partir de mama, ovariano, pancreático e próstata.Isolamento e Purificação de AKTl rotulada por His(aa 136-480)
Células de inseto que expressam AKTl rotulada porHis (aa 136-480) foram lisadas em 25 mM de HEPES, 100 mM deNaCl, 20 mM de imidazol; pH 7,5 empregando-se um polytron (5mLs de tampão de lise/g de células). Resíduos celulares fo-ram removidos através de centrifugação em 28.000 χ g durante30 minutos. O sobrenadante foi filtrado em seguida atravésde um filtro de 4,5 mícrons em seguida carregado sobre umacoluna de quelação de níquel pré-equilibrada com tampão delise. A coluna foi lavada com 5 volumes de coluna (CV) detampão de Iise em seguida com 5 CV de 20% de tampão B, ondeo tampão B é 25 mM de HEPES, 100 mM de NaCl, 300 mM de imi-dazol; pH 7,5. O AKTl rotulado por His (aa 136-480) foi elu-ído com um gradiente linear de 20-100% de tampão B sobre 10CV. Frações de eluição de AKTl rotulada por His (136-480)foram agrupadas e diluídas 3 vezes com tampão C onde o tam-pão C é 25 mM de HEPES, pH 7,5. A amostra foi, em seguida,cromatografada em uam coluna Q-Sefarose HP pré-equilibradacom tampão C. A coluna foi lavada com 5 CV de tampão C emseguida eluída com 5 CV 10%D, 5 CV 20% D, 5 CV 30% D, 5 CV50% D e 5 CV 100% D; onde o tampão D é 25 mM de HEPES, 1000mM de NaCl; pH 7,5. Frações contendo AKTl rotulada por His(aa 136-480) foram agrupadas e concentradas em um concentra-dor de corte de 10-kDa de peso molecular. AKTl rotulada porHis (aa 136-480) foi cromatografada em uma coluna de filtra-ção de gel Superdex 75 pré-equilibrada com 25 mM de HEPES,200 mM de NaCl, 1 mM de DTT; pH 7.5. Frações de AKTl rotula-da por His (aa 136-480) foram examinadas empregando-se SDS-PAGE e especificação de massa. A proteína foi agrupada, con-centrada e congelado a -80C.
AKT2 rotulada por His (aa 138-481) e AKT3 rotuladapor His (aa 135-479) foram isoladas e purificadas de uma ma-neira similar.
Ensaio de Enzima AKT rotulada por HisCompostos da presente invenção foram testadasquanto a atividade inibidora de AKT 1, 2, e 3 proteína seri-na cinase em ensaios de fosforilação de substrato. Este en-saio examina a capacidade de compostos orgânicos de moléculapequena inibir a fosforilação de serina de um substrato depeptídeo. Os ensaios de fosforilação de substrato usa os do-mínios catalíticos de AKT 1, 2, ou 3. AKT 1, 2 e 3 estão damesma forma comercialmente disponíveis a partir de UpstateUSA, Inc. O método mede a capacidade da enzima isolada cata-lisar a transferência do gama-fosfato a partir de ATP sobreo resíduo de serina de um peptídeo sintético biotiniladoSEQ. ID NO: 1 (Biotin-ahx-ARKRERAYSFGHHA-amida) . Fosforila- ção de substrato foi detectada pelo procedimento seguinte:
Ensaios foram realizados em placas de brancas combase em U de 384 poços. 10 nM de enzima AKT ativada foramincubadas durante 4 0 minutos em temperatura ambiente em umvolume de ensaio de 20ul contendo 50mM de MOPS, pH 7,5, 20mMde MgCl2, 4uM de ATP, 8uM de peptídeo, 0,04 de uCi [g-33]ATP/poço, 1 mM de CHAPS, 2 mM de DTT, e 1 ul de compostoteste em DMSO a 100%. A reação foi interrompida pela adiçãode 50 ul de mistura de conta de SPA (PBS de Dulbecco semMg2+ e Ca2+, 0,1% de Triton X-IOOf 5mM de EDTA, 50uM de ATP,2,5mg/ml de contas de SPA revestidas com Estreptavidina). Aplaca foi selada, as contas foram permitidas assentar duran-te a noite, e em seguida o placar foi contado em um contadorde Cintilação de Microplaca Packard Topcount (Packard Ins-trument Co., Meriden, CT).
Os dados para respostas à dose foram plotados como% de Controle calculado com a fórmula de redução de dados100*(U1-C2)/(C1-C2) versus concentração de composto onde U éo valor desconhecido, Cl é o valor de controle médio obtidopara DMS0, e C2 é o valor de controle médio obtido para 0,1M de EDTA. Os dados são ajustados à curva descrita por: y =( (Vmáx * χ) / (K + x) ) onde Vmáx é a assintota superior e Ké a IC50.
Clonagem de AKTl humana de tamanho natural (FL):Gene de AKTl humano de tamanho natural foi amplia-do por PCR a partir de um plasmideo que contém AKTl-ER mi-ristilada (gift de Robert T. Abraham, Duke University sobMTA, descrito em Klippel e outro, em Molecular and CelularBiology 1998 Volume 18 p.5699) empregando-se iniciador 5':SEQ. ID NO: 2
5'TATATAGGATCCATGAGCGACGTGGC 3' e o iniciador 3':SEQ. ID NO: 3 AAATTTCTCGAGTCAGGCCGTGCTGCTGG 3'. 0 iniciador5' incluiu um sitio BamHI e o iniciador 3' incluiu um sítioXhol para propósitos de clonagem. 0 produto resultante dePCR foi subclonado em pcDNA3 como um fragmento de BamHI /Xhol. Uma mutação na seqüência (TGC) codificando para umaCisteina25 foi convertida à seqüência de AKTl tipo selvagem(CGC) codificando para uma Arginina25 por mutagênese dirigi-da ao sitio empregando-se o Kit de Mutagênese Dirigida aoSitio QuikChange® (Stratagene). 0 iniciador mutagênico deAKTl: SEQ. ID NO: 4 5'ACCTGGCGGCCACGCTACTTCCTCC e iniciadorde seleção: SEQ. ID NO: 5 5'CTCGAGCATGCAACTAGAGGGCC (proje-tado para destruir um sitio de Xbal no sitio de clonagemmúltiplo de pcDNA3) foi empregado de acordo com as sugestõesdo fabricante. Para propósitos de expressão/purificação,AKTl foi isolada como um fragmento de BamHI / Xhol e clonadonos sítios BamHI/Xhol de pFastbacHTb (Invitrogen).
Expressão de AKTl humana de FL:
Expressão foi feita empregando-se o Sistema de Ex-perssã de Baculovirus de BAC-a-BAC de Invitrogen (catálogo#10359-016). Brevemente 1) o cDNA foi transferido a partirdo vetor de FastBac em DNA de bacmid, 2) o DNA de bacmid foiisolado e empregado para transfectar as células de insetoSf9, 3) o vírus foi produzido em células Sf9, 4) células T.ni foram infectadas com este vírus e enviadas para purificação.
Purificação de AKTl humana de FL:
Para a purificação de AKTl de tamanho natural, 130g de células sf9 (batelada #41646W02) foram re-suspensas emtampão de Iise (tampão A, 1 L, pH 7.5) contendo 25 mM deHEPES, 100 mM de NaCl, e 20 mM de imidazol. 0 Iise de célulafoi realizado através de Avestin (2 passagens a 15K-20Kpsi). Resíduos celulares foram removidos através de centri-fugação em 16K rpm durante 1 hora e o sobrenadante foi liga-do por batelada salto em 10 ml de contas de Sefarose HP deNíquel a 4°C durante noite. As contas foram transferidas emseguida para coluna e o material ligado foi eluído com Tam-pão B (25 mM de HEPES, 100 mM de NaCl, 300 mM de imidazol ,pH 7,5) . As frações de eluição de AKT foram agrupadas e di-luidas 3 vezes empregando-se tampão C (25 mM de HEPES, 5 mMde DTT; pH 7,5). A amostra foi filtrada e cromatografada so-bre uma coluna Q-HP de 10 mL pré-equilibrada com tampão C em2 mL/min.
A coluna Q-HP foi lavada com 3 volumes de coluna (CV) de tampão C, em seguida a etapa eluída com 5 CV 10%D, 5CV 20% D, 5 CV 30% D, 5 CV 50% D e 5 CV de 100% D; onde otampão D é 25 mM de HEPES, 1000 mM de NaCl, 5 mM de DTT; pH7,5. Frações de 5 mL coledas. Frações contendo AKT foram a-grupadas e concentradas em 5 ml. A proteína foi carregada emseguida em uma coluna de classificação Superdex 75 de 120 mlque foi pré-equilibrada com 25 mM de HEPES, 200 mM de NaCl,5 mM de DTT; pH 7,5. Frações de 2,5 mL foram coletadas. Fra-ções de eluição de AKT foram agrupadas, aliquotadas (1 ml) earmazenadas a -80C. Espect. de massa e análise de SDS-PAGEforam empregadas para confirmar a pureza e identidade deAKTl de tamanho natural purificada.
AKT2 de tamanho natural (FL) e e AKT3 de (FL) fo-ram isoladas e purificadas de uma maneira similar.
Ensaio de Enzima AKT de Tamanho naturalComposto da presente invenção foi testado quanto aatividade inibidora de AKT 1, 2, e 3 proteína serina cinaseem ensaios de fosforilação de substrato. Este ensaio examinaa capacidade de compostos orgânicos de molécula pequena deinibir a fosforilação de serina de um substrato de peptídeo.Os ensaios de fosforilação de substrato empregam os domínioscatalíticos de AKT 1, 2, ou 3. 0 método mede a capacidade daenzima isolada catalisar a transferência de gama-fosfato a partir de ATP sobre o resíduo de serina de um peptídeo sin-tético biotinilado SEQ. ID NO: 1 (Biotina-ahx-ARKRERAYSFGHHA-amida). Fosforilação de Substrato foi detec-tada pelo procedimento seguinte.
Ensaios foram realizados em placas brancas com ba-se em U de 384 poços. 10 nM de enzima AKT ativada foi incu-bada durante 4 0 minutos em temperatura ambiente em um volumede ensaio de 20ul contendo 50mM de MOPS, pH 7,5, 20mM de Mg-Cl2, 4uM de ATP, 8uM de peptídeo, 0,04 uCi [g-33P] ATP/poço,1 mM de CHAPS, 2 mM de DTT, e 1 ul de composto teste em DMSOa 100%. A reação foi interrompida pela adição de 50 ul demistura de conta de SPA (PBS de Dulbecco sem Mg2+ e Ca2+,0,1% de Triton X-100, 5mM de EDTA, 50uM de ATP, 2,5mg/mlcontas de SPA revestidas com Estreptavidina). A placa foiselada, as contas foram permitidas assentar durante a noite, e em seguida a placa foi contado em um Contador de Cintila-ção de Microplaca Packard Topcount (Packard Instrument Co.,Meriden, CT). Os dados para as respostas à dose foram plota-dos como % de controle calculado com a fórmula de redução dedados 100*(U1-C2)/(C1-C2) versus a concentração de composto onde U é o valor desconhecido, Cl é o valor de controle mé-dio obtido para DMSO, e C2 é o valor de controle médio obti-do para 0,1 M de EDTA. Os dados são ajustados à curva des-crita por: y = ( (Vmáx * χ) / (K + x) ) onde Vmáx é a assíntotasuperior e K é a IC50.
Depois de várias tentativas, o composto do Exemplo1 demonstrou uma atividade de IC50 média (upM): 0,002 um, FLAKT1; 0,013 um, FL AKT2; e 0, 009 um, FL AKT3 no ensaio deAKT anterior de tamanho natural.
A atividade contra linhagens celulares de tumor euma linhagem celular normal e as solubilidades dos compostosdos Exemplos 1 a 10 desta invenção foi comparada a que éconsiderada ser a maioria dos compostos estruturalmente re-lacionados preparados no Pedido Internacional No.PCT/US2004/024340. Especificamente, o composto do Exemplo140 no Pedido Internacional No. PCT/US2004/024340 (compostotrifluoroacetato de 4-(l-etil-7-{ [3-(4-morfolinil)propil]óxi}-4-fenil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-1, 2, 5-oxadiazol-3-amina, em seguida Composto R), o com-posto do Exemplo 151 no Pedido Internacional No.PCT/US2004/02434 0 (composto trifluoroacetato de 1-{ [2- (4-amino-1, 2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-4-fenil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}-3-(4-morfolinil)-2-propanol, em seguidaComposto S), o composto do Exemplo 152 no Pedido Internacio-nal No. PCT/US2004/024 34 0 (composto trifluoroacetato de 4-(l-etil-7-{[2-(4-morfolinil)etil]óxi}-4-fenil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-1,2,5-oxadiazol-3-amina, em se-guida Composto Τ), o composto do Exemplo 17 no Pedido Inter-nacional No. PCT/US2004/02 4 34 0 (composto trifluoroacetato de4-[l-etil-7-(piperidin-4-ilóxi)-IH-imidazo[4,5-c]piridina-2-il]-furazan-3-ilamina, em seguida Composto U), o composto doExemplo 127 no Pedido Internacional No. PCT/US2004/024340(composto: trifluoroacetato de 4-{l-etil-4-fenil-7-[(3-piperidinilmetil)óxi]-ΙΗ-imidazo-[4,5-c]piridin-2-il}-1,2,5-oxadiazol-3-amina, em seguida Composto V) , o composto do E-xemplo 215 no Pedido Internacional No. PCT/US2004/024340(composto trifluoroacetato de 4-[7-[(4-aminobutil)óxi]-2-(4-amino-1,2,5-oxadiazol-3-il)-1-etil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il}-2-metil-3-butin-2-ol, em seguida Composto W) , o com-posto do Exemplo 222 no Pedido Internacional No.PCT/US2 004/024 34 0 (composto 4-{2-(4-amino-l ,2,5-oxadiazol-3-il)-7-[(3-aminopropil)óxi]-1 - etil-1 H - imidazo[4,5-c]piridin-4yl}-2-metil-3-butyn-2-ol trifluoroacetate, em se-guida X Composto), o composto de Exemplo 223 no Pedido In-ternacional No. PCT/US2004/024 34 0 (composto: trifluoroaceta- to de 4-{ 2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-[ (4-piperidinilmetil)óxi]-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il}-2-metil-3-butin-2-ol, em seguida Composto Y) e o composto deExemplo 265 no Pedido Internacional No. PCT/US2004/024340(composto: 4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[3-({2-[4-(metilóxi)fenil]etil}amino)propil]óxi}-IH-
imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol, em seguidaComposto Z).
Composto R, S, T, U, V, W, X, Y e Z podem ser pre-parados como descrito no Pedido Internacional No. PCT/US2004/024 34 0.
Ensaios celulares: Ensaio de Inibição de Cresci-mento de Azul de MetileneLinhagens celulares de tumor empregadas neste en-saio foram BT474 (carcinoma de mama humano) e LNCaP (metás-tase de linfonodo de câncer de próstata). HFF (fibroblastode prepúcio humano normal) foi da mesma forma incluído. To-das as linhagens celulares foram cultivadas em meios de RPMI1640 (Invitrogen Corporation 22400-071) contendo 10% de SoroBovino Fetal (FBS) a 37°C em uma incubadora de CO2 a 5% ume-decida. As células foram colhidas empregando-se tripsi-na/EDTA, contadas empregando-se um hemacitômetro e semeadasem placas de cultura de tecido de 96 poços (Co-Star 35-3075), 100 uL por poço, nas seguintes densidades: BT47415.000 células/poço, LNCaP 5.000 células/poço e HFF 5.000células/poço. 10mM de matérias-primas de compostos em DMSOforam serialmente diluídos em DMSO através de nove diluiçõesde 3 vezes em placas de 96 poços (Costar Corning 3363), earmazenados a -8°C. No dia seguinte, as diluições de compos-to foram descongeladas e 4 uL de cada transferidos para 662uL de RPMI 1640 + 100 ug/mL de gentamicina, resultando emduas vezes as concentrações teste requeridas finais. 100 uLde compostos diluídos em RPMl 1640 foram adicionados a todasas linhagens celulares. A concentração final de DMSO em to-dos os poços, incluindo controles, foi 0,3%. As células fo-ram incubadas a 37C, C02 a 5% durante 3 dias. O médio foiremovido através de aspiração. Biomassa de célula foi calcu-lada através do manchamento de células com 80 uL de azul demetileno (Sigma M9140, 0,5% em 50:50 de etanol/água), e in-cubação em temperatura ambiente durante 1 hora. A mancha foiaspirada e as placas enxaguadas através da imersão em água,em seguida secas a ar. A mancha foi libertada a partir decélulas através da adição de 100 uL de solução solubilizado-ra (1% de N-Iauroil sarcosina, sal sódico, Sigma L5125, emPBS) e incubação em temperatura ambiente durante pelo menos30 minutos. As placas foram agitadas e a densidade óptica em620 nm foi medida em uma leitora de microplaca. 0 percentualde inibição do crescimento celular foi calculado relativoaos poços de controle tratados com veiculo. A concentraçãodo composto que inibe 50% do crescimento celular (IC50) foiinterpolada empregando-se a regressão non-linear (Levenberg-Marquadt) e a equação, y=Vmax* (1- (x"n/K~n+x"n) ) ) +Y2 . [Ref:Mager, Μ. E. (1972) Data Analysis in Biochemistry and Bio-physics. New York: Academic Press]
<table>table see original document page 58</column></row><table><table>table see original document page 59</column></row><table>
Os compostos farmaceuticamente ativos dentro doescopo desta invenção são úteis como inibidores de AKT emmamíferos, particularmente humanos, em necessidade destes.
A presente invenção, portanto, fornece um métodode tratar câncer, artrite e outras condições que requereminibição de AKT que compreende administrar uma quantidadeeficaz de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceutica-mente aceitável, hidrato, solvato ou um pró-fármaco deste.
Os compostos de Fórmula (I) da mesma forma fornecem um méto-do de tratar os estados de doença indicados acima por causada capacidade demonstrada de agir como inibidores de Akt. 0fármaco pode ser administrado a um paciente em necessidadedeste por qualquer rotina convencional de administração, in-cluindo, porém não limitada a, intravenosa, intramuscular,oral, subcutânea, intradérmica e parenteral.
Os compostos farmaceuticamente ativos da presenteinvenção são incorporados em formas de dosagem convenientestais como cápsulas, comprimidos, ou preparações injetáveis.Portadores farmacêuticos sólidos ou líquidos. Portadores só-lidos incluem, goma, lactose, diidrato de sulfato de cálcio,terra alba, sacarose, talco, gelatina, ágar, pectina, acá-cia, estearato de magnésio, e ácido esteárico. Portadoreslíquidos incluem xarope, óleo de amendoim, azeite de oliva,solução salina e água. Semelhantemente, o portador pode in-cluir qualquer material de liberação prolongado, tal comomonoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila, so- zinho ou com uma cera. A quantidade de portador sólido variaamplamente, porém, preferivelmente, será de cerca de 25 mg acerca de 1 g por unidade de dosagem. Quando um portador lí-quido é empregado, a preparação, por exemplo, será na formade um xarope, elixir, emulsão, cápsula de gelatina macia,líquido injetável estéril tal como uma ampola, ou uma sus-pensão líquida aquosa ou não aquosa.
As preparações farmacêuticas são feitas seguindoas técnicas convencionais de uma química farmacêutica envol-vendo misturação, granulando e compressão, quando necessá-rio, para formas de comprimido, ou misturação, preenchimentoe dissolução dos ingredientes, quando apropriado, para pro-duzir os produtos parenterais ou orais desejados.
Doses dos compostos farmaceuticamente ativos pre-sentemente inventados em uma unidade de dosagem farmacêuticacomo descrito acima será uma quantidade não tóxica, eficazpreferivelmente selecionada a partir da faixa de 0,001 - 100mg/kg do composto ativo, preferivelmente 0,001 - 50 mg/kg.Ao tratar um paciente humano em necessidade de um inibidorde Akt, a dose selecionada é administrada preferivelmentediariamente de 1 -6 vezes, oralmente ou parenteralmente.Formás preferidas de administração parenteral incluem topi-camente, retalmente, transdermicamente, através de injeção econtinuamente através de infusão. Unidades de dosagem orale/ou parenteral para administração humana contêm preferivel-mente de 0,05 a 3500 mg do composto ativo.
Dosagens ideais a ser administradas podem ser de-terminadas facilmente por aqueles versados na técnica, e va-riarão com o inibidor de Akt particular em uso, a resistên-cia da preparação, o modo de administração, e o avanço dacondição da doença. Fatores adicionais que dependem do paci-ente particular a ser tratado resultarão em uma necessidadede ajustar as dosagens, incluindo idade paciente, peso, die-ta, e tempo de administração.
0 método desta invenção de induzir atividade ini-bidora de Akt em mamíferos, incluindo humanos, compreendeadministrar a um indivíduo em necessidade de tal atividadeuma quantidade inibidora de Akt eficaz de um composto farma-ceuticamente ativo da presente invenção.
A invenção da mesma forma fornece o uso de um com-posto de Fórmula (I) na fabricação de um medicamento parauso como um inibidor de Akt.
A invenção da mesma forma fornece o uso de um com-posto de Fórmula (I) na fabricação de um medicamento parauso em terapia.A invenção da mesma forma fornece o uso de um com-posto de Fórmula (I) na fabricação de um medicamento parauso no tratamento do câncer.
A invenção da mesma forma fornece o uso de um com-posto de Fórmula (I) na fabricação de um medicamento parauso no tratamento de artrite.
A invenção da mesma forma fornece uma composiçãofarmacêutica para uso como um inibidor de Akt que compreendeum composto de Fórmula (I) e um portador farmaceuticamenteaceitável.
A invenção da mesma forma fornece uma composiçãofarmacêutica para uso no tratamento de câncer que compreendeum composto de Fórmula (I) e um portador farmaceuticamenteaceitável.
A invenção da mesma forma fornece uma composiçãofarmacêutica para uso no tratamento de artrite que compreen-de um composto de Fórmula (I) e um portador farmaceuticamen-te aceitável.
Nenhum efeito toxicológico inaceitável é esperadoquando o composto da invenção é administrado dew acordo coma presente invenção.
Além disso, os compostos farmaceuticamente ativosda presente invenção podem ser co-administrados com outrosingredientes ativos, taisl como outros compostos conhecidospara tratar câncer ou artrite, ou compostos conhecidos porter utilidade quando empregados em combinação com um inibi-dor de Akt.Sem outra elaboração, acredita-se que alguém ver-sado na técnica pode, enquanto empregando a descrição ante-rior, utilizar a presente invenção em sua extensão mais com-pleta. Portanto, os Exemplos seguintes devem, portanto, sercontruidos como meramente ilustrativos e não uma limitaçãodo escopo da presente invenção de qualquer forma.
Detalhes Experimentais
Os compostos dos Exemplos 1 a 10 são facilmentefeitos de acordo com o Esquema 1 ou através de métodos aná-logos.
Intermediário VII
<formula>formula see original document page 63</formula>
Preparação de 2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-4-cloro-1- etil-1 H-imidazo[4,5-piridin-7-ol
a) 5-Bromo-2-cloro-N -etil-piridina-3,4-diamina (II)
3-Bromo-5-nitropiridin-4-il)amina (I, 700 g, 2,86mol) foi dissolvido em HCl conc. (7L) e aquecido a 85°C.Cloreto de estanho (II) (1626 g, 8,58 mol) foi adicionado emporções. A reação foi aquecida em refluxo durante 1 h e, emseguida, permitida resfriar durante a noite em temperaturaambiente. O precipitado amarelo resultante foi coletado a-través de filtração, suspenso em água gelada (5L) e a mistu-ra foi ajustada em pH 12 com 12N de NaOH. A solução resul-tante foi extraída com CH2Cl2 (2 χ 4 L) e os extratos orgâ-nicos combinados foram secos em Na2SO4. O solvente foi remo-vido sob pressão reduzida para produzir 550 g (77% rendimen-to). do composto desejado (II). Este foi empregado na próximaetapa sem outra purificação. MS (ES+) m/z 250(M+H)+.
b) N-[5-Bromo-2-cloro-4-(etilamino)-3-piridinil]-2-cianoacetamida (III)
Em uma solução de 5-bromo-2-cloro-N4-etil-piridina-3,4-diamina (II, 550 g, 2,21 mol) em CH2Cl2 (5,5 L)foi adicionado cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (634,5 g, 3,31 mol), ácido cianoacético(282 g, 3,31 mol) e N-metilmorfolina (897 g, 8,84 mol). Umexoterma significante (-20°C) foi observado na adição decloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida eácido cianoacético. Depois da agitação em temperatura ambi-ente durante 2 h, o solvente foi removido sob pressão redu-zida. O resíduo resultante foi extraído com EtOAc morno(40°C, 20 L) e água (40°C, 8 L). A camada aquosa foi lavadacom adição de EtOAc (10 L) e os extratos orgânicos combina-dos foram lavados com água (10 L). O extrato orgânico foiconcentrado sob pressão reduzida em uma lama e filtrado. Osólido foi lavado com EtOAc e seco para produzir 534 g (76%rendimento) do composto desejado (III) como um sólido cris-talino branco. Este foi empregado na próxima etapa sem outrapurificação. MS (ES+) m/z 317(M+H)+.
c) (7-Bromo-4-cloro-1 - etil-1 H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-hidroxiimino-acetonitrilo (V)
Uma solução de N-[5-bromo-2-cloro-4-(etilamino)-3-piridinil] -2-cianoacetamida III, (458 g, 1,45 mol) em ácidoacético glacial (4,6 L) foi aquecida a 100°C. Depois de 3 h,análise de LC/MS indicou que a conversão para (7-bromo-4 -cloro-l-etil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)acetonitrilo (IV)foi concluída. Depois de permitir resfriar em temperaturaambiente, a reação foi carregada com nitrato de sódio (230g, 3,34 mol) em porções. Evolução de gás vigorosa e espuraa-ção foi observada junto com um exoterma de ~10°C. Depois deagitar em temperatura ambiente durante 16 h, o sólido foicoletado através de filtração e seco em um peso constantepara produzir 545 g do produto desejado (V) como um sólidoamarelo claro. Este foi empregado na próxima etapa sem outrapurificação . MS (ES+) m/z 328(M+H)+.
d) 4- (7-Bromo-4-cloro-l-etil-l H-imidazo[4, 5-c]piridin-2-il)-1,2,5-oxadiazol-3-amina (VI)
Em uma mistura de (7-bromo-4-cloro-l-etil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-hidroxiimino-acetonitrilo (V,545 g, 1,45 mol) em dioxano (5 L) foi adicionado trietilami-na (1L) e hidroxilamina (143 g, 55% em água). A reação foiaquecida em refluxo durante 6 h. Depois de resfriar a reaçãoem temperatura ambiente, a mistura foi filtrada e o filtradoconcentrado sob pressão reduzida para produzir um sólidomarrom. O sólido foi suspenso em metanol (1 L) e a suspensãofoi agitada a 65°C durante 0,5 h. 0 sólido foi coletado a-través de filtração e seco para produzir 321 g (70% de ren-dimento) do composto desejado (Vl) . Este foi empregado napróxima etapa sem outra purificação . MS (ES+) m/z343(M+H)e) 2-(4-amino-l ,2,5-oxadiazol-3-il)-4-cloro-l-etil-1 H-imidazo[4,5-c]piridin-7-ol (VII)
Uma suspensão de 4-(7-bromo-4-cloro-l-etil-l H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-1,2,5-oxadiazol-3-amina (VI, 50g, 0,14 mol) em THF (1 L) foi resfriado em um banho de ace-tona/gelo seco até que a temperatura interna esteja abaixode -75°C. Cloreto de isopropil magnésio (225 mL, 2M em éter,0,45 mol) foi adicionado lentamente em uma taxa para mantera temperatura de reação abaixo de -70°C. Depois de um adi-cional de 10 min. borato de trimetila (54 mL, 0,48 mol) foiadicionado e a reação foi mantida no banho de acetona-gelose co durante 1 h. 0 banho foi removido e a reação foi per-mitida alcançar a temperatura ambiente. Depois de 18 h., asuspensão amarela resultante foi resfriada a 0°C. Uma solu-ção de peróxido de hidrogênio a 30% (250 mL) e 3N de NaOH(100 mL) foi adicionada em uma taxa para manter a temperatu-ra de reação abaixo de 40°C. 0 banho de gelo foi, em segui-da, removido e a reação foi agitada vigorosamente em tempe-ratura ambiente durante 2 h. O volume do solvente orgânicofoi removido sob pressão reduzida e a camada aquosa foi aci-difiçado em pH 3 com IN de HCI. Depois de agitar a suspensãoresultante durante 30 min., acetato de etila (200 mL) foiadicionado. Depois de agitar para mais 1 h, o sólido foi co-letado através de filtração. A massa filtrante foi lavadaconsecutivamente com água, acetato de etila, tolueno e ace-tato de etila. 0 sólido foi seco em um peso constante paraproduzir 35,9 g (88% de rendimento) do composto desejado(VII) como um sólido amarelo pálido. Este foi empregado semoutra purificação . MS (ES+) m/z 281,3 (MH-H)+.
Exemplo 1
<formula>formula see original document page 67</formula>
Preparação de 4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(3S)-3-piperidinilmetil]óxi}-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol
a) 1,I-Dimetiletil (3S)-3-(bromometil)-1- piperi-dinacarboxilato
Em uma solução de 1,1-dimetiletil (3S)-3-(hidroximetil)-1-piperidinacarboxilato (30,0 g, 139 mmol) etetrabrometo de carbono (72,0 g, 217 mmol) em cloreto de me-tileno (150 mL) foi adicionado gota a gota uma solução detrifenil fosfina (42,4 g, 162 mmol) em cloreto de metileno(150 mL). Um banho de gelo foi empregado para manter umatemperatura interna entre 20 e 25°C durante a adição. Depoisde agitar a mistura em temperatura ambiente durante 1 h, ci-cloexano (500 mL) foi adicionado. Aproximadamente a metadedo solvente foi removida sob pressão reduzida. A soluçãorestante foi resfriada em um banho de gelo e o precipitadoresultando foi removido através de filtração. O filtrado foiconcentrado sob pressão reduzida e o resíduo submetido àcromatografia flash (0% a 25% de acetato de etila/hexanos,sílica gel) para produzir 35,1 g (91% de rendimento) do pro-duto desejado como um sólido. MS (ES+) m/z 278 (M+H)+.
b) 1,I-Dimetiletil 3-({[2-(4-amino-l ,2,5-oxadiazol-3-il)-4-cloro-l-etil-lH-imidazo[4,5-c]}piridin-7-il]óxi}metil)-1-piperidinacarboxilato
Uma mistura que consiste no composto intermediário15 VII (25,0 g, 89,1 mmol) , carbonato de césio (41,0 g, 126mmol) e o composto do Exemplo 1 (a) (35,0 g, 126 mmol) emDMF (200 mL) foi agitada a 40°C durante 8 h e em seguida a35°C durante 18 h. A mistura foi vertida agitando-se rapida-mente em água gelada (800 ml). Depois de 10 min., acetato deetila (300 mL) foi adicionado e a agitação continuou duran-te um adicional de 20 min. O sólido foi coletado através defiltração, lavado com acetato de etila (50 mL) e seco paraproduzir 36 g (85% de rendimento) do composto desejado. MS(ES+) m/z 478 (M+H)+.
c) 1,I-Dimetiletil 3-({[2-(4-amino-l ,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-4-(3-hidróxi-3-metil-l-butin-l-il)-lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}metil)-1-piperidinacarboxilatoDois recipientes de pressão de parede espessa fo-ram cada qual carregados com o composto do Exemplo 1 (b) (18g, 37,7 mmol), 2-metil-3-buti-2-ol (8,0 mL, 82,5 mmol),(Ph3P)4Pd (0,5 g, 0,43 mmol), pó de Zn (0,5 g, 7,4 mmol),NaI (1,1 g, 7,4 mmol), DBU (8 mL, 53,5 mmol), trietilamina(7,5mL, 54,5 mmol) e DMSO (150 mL) . Ambos recipientes forampurgados com argônio durante 10 min., em seguida, selados eaquecidos a 80°C durante 4 h. A mistura de um recipiente dereação foi vertida agitando-se rapidamente água gelada (1000mL) e à mistura resultante foi adicionado os teores do reci-piente de reação restante. Depois de 10 min., acetato de e-tila (300 mL) foi adicionado e a agitação continuou duranteum adicional de 20 min. 0 sólido foi coletado através defiltração, lavado com acetato de etila (50 mL) e seco paraproduzir 35,5 g (90% de rendimento) do composto desejado. MS(ES+) m/z 526 (M+H)+.
d) 4-{2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-1-etil-7-[(3-piperidinilmetil)óxi]-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il}-2-metil-3-butin-2-ol
O composto do Exemplo 1 (c) (35,0 g, 66,6 mmol) eTFA (350 mL de uma solução a 20% em cloreto de metileno, 808mmol) foi agitado em temperatura ambiente durante 2,5 h. Asolução foi vertida lentamente agitando-se rapidamente amistura em água, NaOH (36 g, 900 mmol) , acetato de etila(200 mL) e THF (1000 mL). A camada orgânica foi separada e acamada aquosa foi extraída com acetato de etila/THF adicio-nal (1:5 v/v, 150 mL). O extrato orgânico combinado foi la-vado com NaCl sat., seco em Na2S04. O solvente foi removidosob vácuo e o sólido resultante foi re-cristalizado a partirde etanol quente (1200 mL) para produzir 26,3 g (93% de ren-dimento) do composto titulo como um sólido cristalino bran-co. MS (ES+) m/z 426 (M+H)+.
Exemplo 2
<formula>formula see original document page 70</formula>
Preparação de sal de ácido diidroclórico de 4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(2R)-2-morfolinilmetil]óxi)-lH-imidazo[4,5-c]pipiridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol
a) 1,1-Dimetiletil 2-(hidroximetil)-4-morfolinacarboxilato
Uma solução de ácido 4—{[(1,1 —dimetiletil)óxi]carbonil}-2-morfolinacarboxíIico (2,0 g,21,6 mmol) em THF (45 mL) foi resfriada a 0°C. Uma soluçãode borano (39 mL, 39,0 mmol, 1 M em THF) foi adicionada du-rante 25 min por um funil de adição. Depois de aquecer emRT, a reação foi extinguida por adição gota a gota de meta-nol/ ácido acético (18 mL, 9:1 em v/v). 0 solvente foi remo-vido sob pressão reduzida e o resíduo dividido entre acetatode etila e 1 N de HCl. A camada aquosa foi extraída com ace-tato de etila e os extratos combinados foram lavados com á-gua, 1 N de NaOH, água, salmoura e secos em sulfato de só-dio. A remoção do solvente sob pressão reduzida proporcionou1,83 g (97%) do material desejado. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 1,49 (s, 9 H) 2,30 (br d, J=Il,37 Hz, 1 H) 2,69 - 2,79(m, J= 9, 51, 6, 41, 3, 28, 3,28 Hz, 1 H) 2,84 (ddd, J=13,77,10,86, 3,16 Hz, 2 H) 3,27 - 3, 38 (m, 1 H) 3,47 (br s, 1 H)3, 63 - 3, 75 (m, 2 H) 4,10 - 4,19 (m, 1 H) 4,27 (br s, 1 H) .
b) 1,1-dimetiletil 2-{[(fenilcarbonil)óxi]metil}-4-morfolinacarboxilato (enantiômero E2)
Em uma solução agitada de 2-(hidroximetil)-4-morfolinecarboxilato de 1,1-dimetiletila (4,467 g, 21 rnmols)em cloreto de metileno (58 mL) com piridina (12 mL) e DMAPcatalítico a 0°C foi adicionado gota a gota cloreto de ben-zoíla (3,18 g, 23 mmols). A mistura de reação foi permitidaaquecer em temperatura ambiente e agitada 18 horas. A mistu-ra de reação foi dividida entre 1 N de HCl e cloreto de me-tileno. A camada aquosa lavada com cloreto de metileno e oextrato orgânico combinado foi lavado com água em seguidasalmoura e seca em sulfato de sódio. O solvente foi removidosob pressão reduzida e o resíduo cromatografado em sílicaeluída com hexano / acetato de etila para produzir 5,80 g(88%) do composto racêmico. Isto foi resolvido através deHPLC quiral em uma coluna Chiralcel OD-H (21 χ 250 mm; 100mg por injeção) empregando uma fase móvel de 90:10 - hepta-no:etanol para produzir a primeira eluição enantiômero El(2,85 g; > 99% ee) e a segunda eluição enantiômero E2 (2,8g; > 99% ee) MS (ES+) m/z 322 (M+H)+.
c) 2-(Hidroximetil)-4-morfolinacarboxilato de 1,1-dimetiletila (enantiômero E2)
Uma solução de 2-{ [ (fenilcarbonil)ôxi]metil}-4-morfolinecarboxilato de 1,1-dimetiletila (enantiômero E2)(1,08 g, 3,36 mmols) em metanol (30 mL) com 6N de NaOH (5,6mL. 33,6 mmols) foi agitada em temperatura ambiente durante2 horas. O metanol foi removido sob pressão reduzida e amistura resultante foi dividida entre acetato de etila e á-gua. O extrato orgânico foi lavado com salmoura, seco emsulfato de sódio e solvente removido sob pressão reduzidapara produzir o composto desejado. IH NMR (400 MHz, DMS0-d6)d ppm 1,41 (s, 50H)3,25-3,37(m, 22H) 3,39-3,46(m, 7H)3,70(d, J=12,8 8 Hz, 6H) , 378-3, 88(m, 10H) 4,78(J=5,68 Hz,5H)
d) 1,l-dimetiletil-2-(bromometil)-A-morfolinacarboxilato (enantiômero E2)
Em uma solução do composto do Exemplo 2 (c) (0,67g, 3,1 mmols) em diclorometano (35 mL) a -20°C foi adiciona-do CBr4 (2,06 g, 6,17 mmols) seguido por adição gota a gotade uma solução de PPh3 (1,70 g, 6.48 mmols) em diclorometano(25 mL) . A mistura de reação foi mantida a -15°C durante 18horas, em seguida, agitada em temperatura ambiente durante1,5 hora. O solvente foi removido sob pressão reduzida e oresíduo purificado por cromatografia flash (sílica gel, EtO-Ac/hexanos) produziu 0,55 g (63%) do produto que foi empre-gado na próxima etapa.
e) 1, 1-DimetiIeti1-2-({ [2-(4-amino-1,2,5-oxadiazol-3-il)-4-cloro-l-etil-1H-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}metil)-4-morfolinacarboxilato (enantiômero E2)
O composto do intermediário VII (0,55 g, 1,95mmol), o composto do Exemplo 2 (d) (0, 546 g, 1,95 mmol) ecarbonato de césio (1,92 g, 5,8 mmols) em DMF (35 mL) foramagitados a 35°C durante 22 horas. A mistura de produto foidividida entre acetato de etila e água. Os extratos orgâni-cos foram lavados com salmoura e secos em sulfato de sódio.O solvente foi removido sob pressão reduzida para produzir0,90 g (96%) do produto que foi empregado na próxima etapa.
f) sal de ácido 4-(2-(4-amino-1,2,5-oxadiazol-3-il)-1-etil-7-{[(2R)-2-morfolinilmetil]óxi}-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol diidroclórico
Um vaso de pressão de parede espessa foi carregadocom o composto do Exemplo 2 (e) (0,90 g, 1,87 mmol), DBU(0,84 mL, 5,6 mmol), Et3N (0,57 mL, 5,6 mmols), Nal (0,084g, 0,56 mmol), pó de zinco (0,036 g, 0,56 mmol) 2-metil-3-butin-2-ol (0,47 g, 5,6 mmol), Pd(PPh3)4 (0,21 g, 0,19 mmol)e DMSO (60 mL) . O vaso de pressão foi, em seguida, selado eaquecido a 80°C durante 1 hora. Depois de resfriar em tempe-ratura ambiente, a reação foi extinguida adicionando-seNH4Cl saturado. A camada aquosa foi extraída com EtOAc e osextratos combinados foram lavados com água, salmoura, e se-cos em sulfato de sódio. O solvente foi removido sob pressãoreduzida e o resíduo submetido à cromatografia flash (sílicagel, MeOH/CH2Cl2) para produzir 2- ({ [2-(4-amino-l, 2, 5-oxadiazol-3-il)-l-etil-4-(3-hidróxi-3-metil-l-butin-l-il) -lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}metil)-4-morfolinacarboxilato de 1,1-dimetiletila. Isto foi dissolvi-do em metanol com HCl etéreo e deixada em temperatura ambi-ente durante 18 horas. Um sólido formou-se e foi coletadopara produzir o produto como o sal de di-cloridrato. MS(ES + ) m/z 428 (M+H)+. Isto foi designado a configuração Ratravés de comparação de HPLC quiral com o composto do Exemplo (4).
<formula>formula see original document page 74</formula>
Preparação de dicloridrato de 4 —(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-[(2-tiomorfolinilmetil)óxi]-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol (enantiômero El)
a) 2-(hidroximetil)-4-tiomorfolinacarboxilato de1,1-dimetiletilaUma solução de ácido 4-{2-[(1,1-dimetiletil)óxi]-2-oxoetil}-2-tiomorfolinacarboxilico (50,0 g, 0,202 mol) emTHF (840 mL) foi resfriada a 0°C. Uma solução de borano (910mL, 0, 909 mol, 1 M em THF) foi adicionado por meio de funilde adição. A reação foi mantida a 0°C no refrigerador duran-te a noite. A reação foi extinguida com 10% de ácido acéticoem metanol (420 ml) a 0°C. 0 solvente foi removido sob pres-são reduzida e o resíduo dividido entre acetato de etila e 1N de HCl. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilae extratos combinados foram lavados com água, 1 N de NaOH,água, salmoura e secos em sulfato de sódio. A remoção dosolvente sob pressão reduzida proporcionou 51,1 g do materi-al desejado. Isto foi diretamente empregado sem outra puri-ficação.
b) 2-{[(fenilcarbonil)óxi]metil}-4-tiomorfolinacarboxilato de 1,1-dimetiletila (enantiômero El)
À solução agitada de 2-(hidroximetil)-4-tiomorfolinacarboxilato de 1,1-dimetiletila (51 g, 0,21 mol)em cloreto de metileno (550 ml) com piridina (120 ml) e DMAPcatalítico a 0°C foi adicionado cloreto de benzoíla gota agota (27,6 ml, 0,24 mol). A mistura foi permitida aquecerem temperatura ambiente e agitada durante a noite. A reaçãofoi dividida entre IN de HCl e cloreto de metileno. O aquosofoi lavado com cloreto de metileno e o extrato orgânico com-binado foi lavado com água em seguida salmoura e seco emsulfato de sódio. O solvente foi removido sob pressão redu-zida e o resíduo cromatografado em sílica eluída com hexano/ acetato de etila para produzir 60 g do composto racêmico.60 g de racemato, benzoato de ((4-{2-[(1,1-dimetiletil)óxi]-2-oxoetil}-2-tiomorfolinil)metila foi resolvido através deHPLC quiral em uma Chiralpak DC, 20 microns (101,6 χ 250 mm,8 g por injeção) empregando fase móvel 100% de metanol paraproduzir a primeira eluição enantiômero El (24,0 g, 5,7 mi-nutos, 99% ee) e a segunda eluição enantiômero E2 (16,1 g,6,8 minutos, 98% ee) MS (ES+) m/z 338 (M+H)+.
c) 2-(hidroximetil)-4-tiomorfolinacarboxilato de1,1-dimetiletila (enantiômero El)
Uma solução do Exemplo de composto 3 (b) (13 g,0, 037 mol) em metanol (416 ml) com 6N de NaOH (65 ml, 0,39mol) foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. 0metanol foi removido sob pressão reduzida e a mistura resul-tante foi dividida entre acetato de etila e água. O extratoorgânico foi lavado com salmoura, seco em sulfato de sódio eo solvente removido sob pressão reduzida para produzir 7,9do composto desejado. IH NMR (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) d ppm1,52 (s, 9H) 2,12 (s, 2H) 2,30(s, 1H) 2,75(s, 1H) 2,84(s, 1H)3,34 (s, 1H) 3,47 (s, 1H) 3,70(s, 2H) 4,15(s, 1H) 4,27(s,1H) .
d) 2-(bromometil)-4-tiomorfolinacarboxilato de1,1-dimetiletila (enantiômero El)
Em uma solução do composto do Exemplo 3(c) (2,0 g,8,57 mmols) em diclorometano (96 mL) a -20°C foi adicionadoCBr4 (5,74 g, 17,1 mmols) seguido por adição gota a gota deuma solução de PPh3 (4,72 g, 18,0 mmols) em diclorometano(76 mL) . Depois de permitir a mistura aquecer em temperaturaambiente, o solvente foi removido sob pressão reduzida. Cro-matografia falsh (silica gel, EtOAc/hexanos) produziu 2,50 gde um material que foi diretamente empregado sem outra puri-ficação.
e) 2-({[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-4-cloro-1-etil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}metil)-A-tiomorfolinacarboxilato de 1,1-dimetiletila (enantiômero El)
Em uma solução do composto intermediário VII (2,36g, 8,40 mmols) em DMF (160 mL) foi adicionado carbonato decésio anidroso (8,32 g, 25,0 mmols) e 2-(bromometil)-4-tiomorfolinacarboxilato de 1,1-dimetiletila (enantiômero El)(2,50 g, 8,40 mmols). Depois de agitar em temperatura ambi-ente durante 4 horas, NH4Cl saturado foi adicionado e a rea-ção foi extraída com EtOAc. Os extratos orgânicos combinadosforam lavados com água, salmoura e secos em sulfato de só-dio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resí-duo submetido à cromatografia flash (MeOH/CH2Cl2, silicagel) para produzir 2,3 g do composto desejado contaminadocom 7-{[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-4-cloro-l-etil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}tetraidro-1,4-tiazepina-4(5H)-carboxilato de 1,1-dimetiletila. Isto foi empregadosem outra purificação na próxima etapa. MS (ES+) m/z 496(M+H) +.
f) 4-{2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-[(2-tiomorfolinilmetil)óxi]-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il}-2-metil-3-butin-2-ol (enantiômero El).
Um vaso de pressão de parede espessa foi carregadocom 2-({[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-4-cloro-l-etil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}metil)-4-tiomorfolinacarboxilato de 1,1-dimetiletila (enantiôraero El)(0,18 g, 1,35 mmol), pó de Zn (0,03 g, 0,40 mmol), Nal (0,06g, 0,40 mmol), DBU (0,61 mL, 4,00 mmol), TEA (0,56 mL, 4,00mmols), 2-metil-3-butin-2-ol (0,48 mL, 5,70 mmols),(Ph3P)4Pd (0,08 g, 0,08 mmol) e dioxano (35 mL). Depois depurgar a mistura com nitrogênio durante 10 minutos, o vasofoi selado e aquecido a 80 °C durante 2,5 horas. Depois depermitir a reação resfriar em temperatura ambiente, NH4Clsaturado foi adicionado e a reação foi extraída com EtOAc.
Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água,salmoura e secos em sulfato de sódio. O solvente foi removi-do sob pressão reduzida e o resíduo submetido à cromatogra-fia flash (MeOH/CH2Cl2, sílica gel). O produto protegido porBoc foi dissolvido em 25% de TFA/CH2C12 (10 mL). Depois de30 minutos, o solvente foi removido sob pressão reduzida. Oresíduo foi dividido entre 1 N de NaOH e acetato de etila. Acamada aquosa foi extraída com acetato de etila adicional.
Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura,secos em sulfato de sódio. O solvente foi removido sob.pres-são reduzida. Cromatografia flash (MeOH/CH2Cl2, sílica gel)produziu 0,22 g (37% de rendimento) do composto desejado. MS(ES+) m/z 444 (M+H)+.
g) dicloridrato de 4-{2-(4-amino-1,2,5-oxadiazol-3-il)-1-etil-7-[(2-tiomorfolinilmetil)óxi]-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il}-2-metil-3-butin-2-ol (enantiômero El)
Uma solução do composto 2-({ [2-(4-amino-1,2,5-oxadiazol-3-il)-4-cloro-1-etil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}metil)-4-tiomorfolinacarboxilato de 1,1-dimetiletilaenantiômero El (0,22 g, 5,00 mmols) em diclorometano (5 ml)foi tratada com 4N de HCI em dioxano (0,25 mL, 1,00 mmol) .Depois de 30 minutos, o precipitado foi isolado através defiltração para produzir 0,21 g (82% de rendimento) do com-posto titulo como um sólido amarelo pálido. MS (ES+) m/z 444(M+H) +.
Exemplo 4
Preparação de 4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(2S)-2-morfolinilmetillóxi)-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol
a) sulfato de hidrogênio de 2-[(Fenilmetil)amino]etila
Ácido clorossulfônico (13,3 mL, 0,2 mol) foi adi-cionado muito lentamente ao (2-[(fenilmetil)amino]etanol(30,2 g, 0,2 mol) em tetracloreto de carbono (100 mL) em umbanho de gelo. A suspensão branca espessa resultante foi a-gitada durante a noite em temperatura ambiente. A suspensãofoi diluída com clorofórmio e etanol, aquecida a 45°C e emseguida resfriada em um banho de gelo. 0 precipitado foi co-letado através de filtração, lavado com etanol e seco sobvácuo durante 16 horas a 40 0C para proporcionar o compostodesejado (34 g, 74%). MS(ES)+ m/z 232 [M+H]+.
b) (2S)-4-(Fenilmetil)-2-{[(fenilmetil)óxi]metilJmorfolina
O composto do Exemplo 4(a) (28,1 g, 0,116 mol) foiadicionado (2S)-2-{[(fenilmetil)óxi]metil}oxirano (19 g,10 0, 122 mol) em metanol / água (75 mL / 75 mL) em um banho degelo. Hidróxido de sódio (6M, 29 mL) foi adicionado durante5 minutos e uma vez concluído o banho foi removido e permi-tido agitar em temperatura ambiente durante 15 minutos. Areação foi, em seguida, agitada a 40°C em um banho de óleodurante 3 horas. A reação foi rapidamente resfriada em umbanho de gelo e hidróxido de sódio (28 g, 0,7 mol) e tolueno(150 mL) foram adicionados. Depois de 10 minutos, a reaçãofoi aquecida a 65°C durante 3 horas. Depois de permitir areação resfriar em temperatura ambiente, a camada orgânicafoi separada e a camada aquosa foi também extraída com tolu-eno. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com sal-moura, secos com sulfato de sódio, filtrados e concentradosem vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografiaflash (sílica gel, gradiente, 15% a 30% de acetato de etilaem hexano) para proporcionar o composto desejado como um ó-Leo (22,4 g, 65%). MS(ES)+ m/e 298 [M+H]+.
c) (2S)-2-(hidroximetil)-4-morfolinacarboxilato de1,1-dimetilet'ilaEm uma solução do composto do Exemplo 4 (b) (22,4g, 0,075 mol) em etanol (400 mL) foi adicionado 10% de palá-dio em carbono (2,4 g) e ácido trif luoroacético (7,0 mL,0,09 mol). A mistura foi agitada sob hidrogênio em 3,51Kg/cm2 durante 24 horas. A reação foi filtrada e concentradaem vácuo. Uma solução de carbonato de potássio (26 g) em á-gua (260 mL) foi adicionada ao resíduo seguido por uma solu-ção de di-terc-butil-dicarbonato (17 g) em acetato de etila(500 mL). Depois de 1 hora, a camada aquosa foi removida e acamada orgânica foi lavada com salmoura, seca com sulfato desódio, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi puri-ficado através de cromatografia flash (sílica gel, gradien-te, 15% a 100% de acetato de etila em hexano) para propor-cionar o composto desejado como um óleo (8 g, 50%). MS(ES)+m/e 218 [M+H]+.
d) (2S)-2-(bromometil)-4-morfolinecarboxilato de1,1-Dimetiletila
(2S)-2-(hidroximetil)-4-morfolinacarboxilato de1,1-Dimetiletila (18,5 g, 0,080 mol) e tetrabrometo de car-bono (34,5 g, 0,104 mol) foram dissolvidos em cloreto de me-tileno (400 mL) e resfriados em um banho de gelo. Uma solu-ção de trifenilfosfina (22 g, 0,084 mol) em cloreto de meti-leno (150 ml) foi adicionada gota a gota durante 30 minutos.
Depois de 1 hora a 0°C, a reação foi permitida aquecer emtemperatura ambiente e foi agitada durante a noite. O volumede reação foi reduzido por em vácuo e derramado em uma al-mofada de sílica gel e o produto eluído com 15% de acetatode etila em hexano. O filtrado foi concentrado em vácuo paraproporcionar o composto desejado como um óleo (12 g, 55%) .MS(ES)+ m/e 281 [M+H]+.
e) (2S)-2- ({ [2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-A-cloro-l-etil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}meti)-A-morfolinacarboxilato de 1,I-Dimetiletila
Em uma solução do composto do Exemplo 4 (d) (10,9g, 0, 039 mol) em dimetilformamida (150 mL) foi adicionadointermediário VII (7,8 g, 0, 028 mol) e carbonato de césio(11 g, 0, 034 mol). Depois de 72 horas a 45°C, a reação foivertida em cloreto de amônio e água (1,5 L) com agitação. Oprecipitado resultante foi coletado através de filtração elavado com 1 M de NaOH e água. O sólido foi dissolvido emtetraidrofurano e acetato de etila (quente) e seco com sul-fato de sódio, filtrado e concentrado 1/2 volume em vácuo eresfriado em um banho de gelo. O precipitado resultante foicoletado, lavado com acetato de etila e seco sob vácuo du-rante 2 horas a 40°C para proporcionar o composto desejado(10,2 g, 76%). MS(ES)+ m/e 480 [M+H]+.
f) (2S)-2- ({ [2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-1-etil-4-(3-hidróxi-3-metil-l-butin-l-il)-ΙΗ-imidazo[4 , 5-c]piridin-7-il]óxi}metil)-4-morfolinacarboxilato de 1,1-Dimetiletila
Um vaso de pressão de parede espessa foi carregadosob argônio com o composto do Exemplo 4 (e) (10,1 g, 0,021mol), 2-metil-3-butin-2-ol (10,2 mL, 100 mmols), zinco (0,27g, 4,2 mmols), iodeto de sódio (0,63 g, 4,2 mmols), trieti-lamina (5,8 mL, 0,42 mmol), 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (5,8 mL, 42 mmols), tetracis(trifenilfosfina) paládio(O) (1,0 g, 0,84 mmol) e dimetilsufóxido (100 mL). 0 vasoreação foi selado e aquecido a 80°C durante 3 horas. Depoisde resfriar em temperatura ambiente, a reação foi extinguidaderramando-se em cloreto de amônio saturado (1 L) e agitadadurante 30 minutos. O sólido foi coletado através de filtra-ção. A purificação através de cromatografia flash (silicagel, gradiente, 1% a 10% de metanol em clorofórmio) produziuo composto desejado como um sólido (10,5 g, 95%). MS(ES)+m/z 528 [M+H]+.
g) 4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(2S)-2-morfolinilmetil]óxi}-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol
Em uma suspensão de (2S)-2-({ [2- (4-amino-l, 2, 5-oxadiazol-3-il)-l-etil-4-(3-hidróxi-3-metil-l-butin-l-il) -lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi Jmetil)-4-morfolinacarboxilato de 1,I-Dimetiletila (14,2 g, 0,027 mol)em cloreto de metileno (150 mL) foi adicionado ácido triflu-oroacético (40 mL). Depois de 1 hora o solvente foi removidoem vácuo. 0 resíduo foi evaporado a partir de acetato de e-tila (2x) para produzir um sólido. O resíduo foi suspenso emágua e tratado com 1 N de NaOH em um banho de gelo até que amistura fosse básica (pH 8). O precipitado foi isolado porfiltração, lavado com água, acetato de etila e seco em umforno à vácuo a 40°C durante 4 horas. 0 sólido resultantefoi tratado com acetato de etila (250 ml) e agitado a 65°Cem seguida permitido resfriar em temperatura ambiente e emseguida colocado em um banho de gelo e em seguida filtrado eo sólido seco em um forno à vácuo a 40°C. 0 sólido resultan-te foi suspenso em 20% de tetraidrofurano/etanol (1,2 L).Carvão ativado Darco G60 (3,9 g) foi adicionado e a misturaaquecida em refluxo durante 90 minutos e filtrado quente a-través de celite. 0 solvente foi removido e re-tratado cometanol e removido em vácuo (2 x). O sólido resultante foiseco sob alto vácuo durante 24 horas a 40°C para proporcio-nar o composto titulo (7,24 g, 64%). MS(ES)+ m/e 428 [M+H]+.
Exemplo 5
<formula>formula see original document page 84</formula>
Preparação de 4-{2-(4-amino-1,2,5-oxadiazol-3-il)-1-etil-7-[(3-pirrolidinilmetil)óxi]-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il}-2-metil-3-butin-2-ol, sal de ácido bis-trifluoroacético
a) 3-(bromometil)-1-pirrolidinacarboxilato de 1,1-Dimetiletila.
Em uma solução de 3-(hidroximetil)-1-pirrolidinacarboxilato de 1,1-dimetiletila (0,56 g, 2,8mmols) com tetrabrometo de carbono (1,39 g, 4,2 mmols) emcloreto de metileno (10 mL) foi adicionado gota a gota umasolução de trifenil fosfina (0,73 g, 2,8 mmols em 5 mL decloreto de metileno). Na conclusão, a mistura foi agitada 18horas em temperatura ambiente. 0 solvente foi removido empressão reduzida e o resíduo agitado em 10% de acetato deetila 90% de hexano. A mistura foi filtrada e a solução re-sultante cromatografada em sílica eluindo com um gradientede 0 - 25% de EtOAc em hexano para proporcionar o compostodesejado (0,41 g, 55%). MS (ES+) m/z 264 (M+H)+.
b) 3-({[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-4-cloro-1-etil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}metil)-1-pirrolidinacarboxilato de 1,1-Dimetiletila.
Uma mistura consistindo em intermediário VII (100mg, 0,35 mmol) em DMF (2 mL) com carbonato de césio (290 mg,0,9 mmol) e o composto do Exemplo 5 (a) (290 mg, 1,1 mmol)foi agitado em temperatura ambiente durante 24 horas. A mis-tura foi vertida agitando-se rapidamente em água gelada (7mL) e agitação continuou durante 10 minutos. A isto foi adi-cionado cicloexano (7 mL) e agitação continuou durante umadicional de 20 minutos. O sólido foi coletado por filtraçãoem seguida lavado com cicloexano e seco em vácuo para pro-porcionar o composto desejado (111 mg, 69%). MS (ES+) m/z464 (M+H)+.
c) 3- ({ [2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-4-(3-hidróxi-3-metil-l-butin-l-il)-lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}metil)-1-pirrolidinacarboxilato de 1,I-Dimetiletila
Em um vaso de pressão de parede espessa foi carre-gado com o composto do Exemplo 5(b) (100 mg, 0,22 mmol), 2-metil-3-butin-2-ol (0,25 mL, 2,6 mmols), (Ph3P)4Pd (30 mg),diisopropil amina (0,4 mL) e dioxano (4 mL) . O vaso foi se-lado e agitado sob uma atmosfera de argônio a 100°C durante6 horas. A mistura foi concentrada em pressão reduzida emseguida triturada com acetato de etila (4 mL) para propor-cionar o composto desejado (82 mg, 75%) . MS (ES+) m/z 512(M+H)
d) 4-{2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-[(3-pirrolidinilmetil)óxi]-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il}-2-metil-3-butin-2-ol, sal de ácido bis-trifluoroacético
O composto do Exemplo 5(c) (75 mg, 0,15 mmol) foiagitado em uma solução a 20% de TFA em cloreto de metileno(3 mL) em temperatura ambiente durante 20 minutos. Tolueno(3 mL) foi adicionado e todos os voláteis removidos em pres-são reduzida. O resíduo foi purificado através de HPLC defase reversa preparativa para proporcionar o composto títulocomo o sal de di-TFA (40 mg, 43%). MS (ES+) m/z 412 (M+H)+.
Exemplo 6
<formula>formula see original document page 86</formula>Preparação de dicloridrato de 4-[2-(4-amino-l,2, 5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-({[(3S)-l-metil-3-piperidinil]metil)óxi)lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol
a) [(3S)-l-Metil-3-piperidinil] metanol
Em uma solução agitada de hidreto de alumínio delítio (10,5 ml de 1 M de solução em THF, 10,5 mmols) em éter(15 mL) a 20 0C foi adicionada gota a gota uma solução de(3S)-3-(hidroximetil)-1-piperidinacarboxilato de 1,1-dimetiletila (1,50 g, 7,0 mmols) em THF (5 mL). Depois de1,5 hora em temperatura ambiente, água (0,4 mL) foi adicio-nada seguido por 15% de solução de hidróxido de sódio aquosa(0,4 mL) em seguida água (1,2 mL). Isto foi agitado 20 minu-tos, em seguida, filtrado. 0 filtrado foi concentrado sobpressão reduzida para produzir 0,87 g empregado na próximaetapa sem outra purificação. MS (ES+) m/z 130,2 (M+H)+.
b) 4-[4-Cloro-l-etil-7-({[(3S)-l-metil-3-piperidinil]metil}óxi)-lH-imidazo[4,5-c]piridin-2-il]-1,2,5-oxadiazol-3-amina
Em uma mistura agitada que consiste em composto doExemplo 6 (a) (0, 260 g, 2 mmols) com ligação de polímero detrifenil fosfina (1,56 g de polímero de 1,6 mmol/g, 2,5mmols) em cloreto de metileno (35 mL) a 0°C foi adicionadagota a gota uma solução de azodicarboxilato de dietila (0,33mL, 2,2 mmols) em cloreto de metileno (5 mL). O banho deresfriamento foi removido e agitação continuou durante 20minutos. A esta mistura em temperatura ambiente foi adicio-nada uma solução do composto intermediário VII (280 mg, 1mmol) em THF (40 mL). A mistura foi agitada 18 horas em tem-peratura ambiente em seguida filtrada e ao filtrado foi adi-cionado acetato de etila (60 mL). A solução resultante foilavada com água (50 mL) em seguida salmoura (50 mL). O ex-trato orgânico foi seco em MgSO4, filtrado e o solvente re-movido sob pressão reduzida para produzir 0,40 g de sólidocru que foi empregado na próxima etapa sem outra purifica-ção. MS (ES+) m/z 392,3 (M+H)+.
c) sal de dicloridrato de 4-[2-(4-amino-1,2,5-oxadiazol-3-il)-1-etil-7- ({ [(3S)-l-metil-3-piperidinil]metil}óxi)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol
Um vaso de pressão de parede espessa foi carregadocom o composto do Exemplo 1 (b) (0,140 g, 0,35 mmol), pó deZn (0, 004 g, 0,06 mmol), Nal (0, 008 g, 0,0,05 mmol), DBU(0,08 mL, 0,54 mmol), TEA (0,075 mL, 0,53 mmol), 2-metil-3-butin-2-ol (0,07 mL, 0,75 mmol) e (Ph3P)4Pd (0,015 g, 0,013mmol) em DMSO (2 mL). A mistura foi vertida em água rapida-mente agitada (10 mL) com acetato de etila (5 mL) e cicloe-xano (5 mL). O sólido resultante foi coletado em seguidacristalizado a partir de etanol. O sólido cristalino foidissolvido em etanol quente em seguida HCl (0,175 mL de 4Mde solução em dioxano 0,70 mmol) foi adicionado. O precipi-tado foi coletado e seco sob pressão reduzida para propor-cionar o composto titulo (0,148 g) MS (ES + ) m/z 440.3(M+H) +.
Exemplo 7<formula>formula see original document page 89</formula>
Preparação de 4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{ [(4-metil-2-tiomorfolin)metil]óxi}-lH-imidazo[4, 5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol (enantiômero El)
Em uma solução de 4-{2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-[(2-tiomorfolinilmetil)óxi]-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il}-2-metil-3-butin-2-ol (enantiômero El) (0,88g, 1,98 mmol) em MeOH (38 mL) a °C foi adicionado NaCNBH3(0,14 g, 2,20 mmols) e ácido acético (0,57 mL). Isto foi se-guido através de adição gota a gota de formaldeido (0,25mL) . A reação foi permitida aquecer em temperatura ambiente.Depois de 18 horas, a reação foi vertida em 50% de NaHCO3aquoso. A solução foi resfriada a °C e o precipitado resul-tante foi coletado para produzir 0,90 g do composto deseja-do. MS(ES+) m/z 458.4 (M+H)+.
Exemplo 8<formula>formula see original document page 90</formula>
Preparação de 4-[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-1-etil-7- ({ [(2S)-4-metil-2-morfolin]metil)óxi)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ill-2-metil-3-butin-2-ol
Ao 4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(2S)-2-morfolinilmetil]óxi}-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol (0,13 g, 0,30 mmol) suspenso em me-tanol (2 mL) foi adicionado formaldeido (37% em água, 0,045mL, 0,6 mmol). Depois de 5 minutos, ácido acético (0,051 mL,0,9 mmol) foi adicionado seguindo através de triacetoxibo-roidreto de sódio (0,16 g, 0.75 mmol). Depois de 1 hora osolvente foi removido em vácuo e o resíduo suspenso em 1 Nde NaOH e extraído com acetato de etila/tetraidrofurano. Osextratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura esulfato de sódio seco. O filtrado foi concentrado em vácuopara proporcionar o composto desejado como um sólido (0,10g, 77%) MS(ES+) m/z 442 [M+H]+.
Exemplo 9<formula>formula see original document page 91</formula>
Preparação de dicloridrato de 4-[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7- ({ [(2R)-6-nnetil-2-morfolinil]metil)óxi)-lH-imidazo[4,5-]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol
a) (2S)-l-({[2,4-Bis(metilóxi)fenil]metil}amino)-3-[(fenilmetil)óxi]-2-propanol
Em uma solução agitada de 2,4-dimetoxibenzilamina(1,00 g, 5,99 mmols) em MeOH (30 mL) em temperatura ambientefoi adicionado éter de benzil (S) -( + )-glicidila (0,88g, 5,40mmol). Depois de 12 horas a reação foi concentrada em vácuo.O resíduo foi dissolvido em acetato de etila (75 mL) e lava-do seqüencialmente com 1 N de HCl (25 mL) e salmoura (25mL). A solução foi seca em MgSO4, filtrada e o solvente foiremovido sob pressão reduzida para produzir 1,35 g do óleocru que foi empregado na próxima etapa sem outra purifica-ção. MS (ES+) m/z 332,2 (M+H)+.
b) N-{[2,4-Bis(metilóxi)fenil]metil}-2-bromo-N-{(2R)-2-hidróxi-3-[(fenilmetil)óxi]propilJpropanamidaEm uma solução agitada do composto do Exemplo 9(a)(0,50 g, 1,50 mmol) e trietilamina (0,25 mL, 3,0 mmols) emCH2Cl2 (30 mL) a 0°C foi adicionado cloreto de 2-bromopropionila (0,280 g, 1,65 mmol). Depois de 12 horas emtemperatura ambiente, o solvente foi removido sob pressãoreduzida. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila (75mL) e lavado seqüencialmente com 1 N de HCl (25 mL) e sal-moura (25 mL) . A solução foi seca em MgSO4, filtrada e osolvente foi removido sob pressão reduzida para produzir0,51 g do óleo cru que foi empregado na próxima etapa semoutra purificação. MS (ES+) m/z 467,2 (M+H)+.
c) (6R)-4-{[2,4-Bis(metilóxi)fenil]metil}-2-metil-6-{[(fenilmetil)óxi]metil}-3-morfolinona
Uma mistura do composto do Exemplo 9(b) (0,40 g,0, 86 mmol) e hidreto de sódio (0, 067 g, 1,37 mmol) em THF(15 mL) foi agitada sob nitrogênio em temperatura ambientedurante 16 horas. A reação foi diluída com acetato de etila(50 mL) lavada com água (3 χ 15 mL) e salmoura (20 mL) . Asolução foi seca em MgSO4, filtrada e o solvente removidosob pressão reduzida para produzir o produto desejado. HPLCpreparativa (coluna YMC-Pack ODS-A, 30 mm i.d. χ 75 mm, 20mL/min, gradiente, A: água-0,1% de ácido trifluoroacético,B: acetonitrilo-0,1% ácido trifluoroacético, 10-90% de ace-tonitrilo durante 12 minutos, detecção de UV a 254 nm) pro-duziu 0,245 g (74% de rendimento) do composto de título. MS(ES+) m/z 386,2 (M+H)+.
d) (6R)-A-{[2,4-Bis(metilóxi)fenil]metil}-2-metil-6-{[(fenilmetil)óxi]metil}morfolinaUma solução do composto do Exemplo 9(c) (0,200 g,0,51 mmol) em THF foi adicionado LAH (1 M, 0,60 mL) a 0°Csob nitrogênio. A reação foi aquecida em temperatura ambien-te e agitada durante 12 horas. À reação foi adicionado água(0,02 mL), lentamente a 0°C e 1 N de NaOH (0,02 mL), a mis-tura foi permitida agitar em temperatura ambiente durante 1hora. Água adicional (0,07 mL) foi adicionada e agitada du-rante 30 minutos. A mistura foi filtrada. Os sólidos foramlavados várias vezes com acetato de etila. 0 filtrado foiconcentrado sob pressão reduzida para produzir 0,12 g do ó-Ieo cru que foi empregado na próxima etapa sem outra purifi-cação. MS (ES+) m/z 372,2 (M+H)+.
e) (6R)-2-metil-6-
{ [(fenilmetil)óxi]metil}morfolina
Uma solução do composto do Exemplo 9 (d) (0,12 g,0,32 mmol) em CH2CI2 (5 mL) em temperatura ambiente foi tra-tada com cloroformato de 1-cloroetila (0,10 mL, 1,4 mmol). Areação foi agitada e refluxada durante 2 horas, o solventefoi removido sob pressão reduzida para produzir um resíduocru. O resíduo foi dissolvido em MeOH (5 mL) e agitado e re-fluxado durante 1 hora. 0 solvente foi removido sob pressãoreduzida para produzir um resíduo cru 0,51 g do óleo cru quefoi empregado na próxima etapa sem outra purificação. MS(ES+) m/z 222,2 (M+H)+.
f) (6R)-2-metil-6-{[(fenilmetil)óxi]metil}-4-morfolinacarboxilato de 1,I-Dimetiletil
Uma solução do composto do Exemplo 9 (e) (0,20 g,0,90 mmol) em CH3CN (5 mL) em temperatura ambiente foi tra-tado com dicarbonato de di-terc-butila (0,22 g, 1,0 mmol). Aremoção dos orgânicos produziu o resíduo cru. HPLC prepara-tiva (coluna YMC-Pack ODS-A, 30 mm i.d. χ 75 mm, 20 mL/min,gradiente, A: água - 0,1% de ácido trifluoroacético, B: ace-tonitrilo-0,1% de ácido trifluoroacético, 10-90% de acetoni-trilo durante 12 minutos, detecção de UV a 254 nm) produziu0,214 g (79% de rendimento) do composto título. MS (ES+) m/z322,2 (M+H)+.
g) (2R)-2-(hidroximetil)-6-metil-4-morfolinacarboxilato de 1,I-Dimetiletila
Uma solução do composto do Exemplo 9(f) (0,20 g,0,62 mmol) em EtOH (5 mL) foi tratado com hidróxido de palá-dio (0,10 g) . A mistura foi colocada em um aparato Parr eagitada durante 16 horas sob 3,87 Kg/cm2 de atmosfera de H2.
A mistura foi filtrada em uma almofada de Celite e lavadacom MeOH (25 mL). O filtrado foi concentrado sob pressão re-duzida para produzir 0,15 g do óleo cru que foi empregado napróxima etapa sem outra purificação. MS (ES+) m/z 232,2 (M+H)
h) (6R)-2-metil-6-({ [ (4-metilfenil)sulfonil]óxi}metil)-4-morfolinacarboxilato de1,1-Dimetiletila
Uma solução do composto do Exemplo 9 (g) (0,15 g,0,65 mmol) em CH2Cl2 (5 mL) foi adicionada trietilamina(0,10 mL) , dimetilaminopiridina (0,02 g) e cloreto de tosila(0,15 g, 0,79 mmol). Depois de 12 horas a reação foi concen-trada em vácuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila(75 mL) e lavado seqüencialmente com 1 N de HCl (25 mL) esalmoura (25 mL). A solução foi seca em MgSO4, filtrada e osolvente removido sob pressão reduzida para produzir o resí-duo cru. 0 resíduo cru foi submetido à cromatografia flash(25 - 100% de EtOAc/Hex, sílica gel) para produzir 0,14 g docomposto desejado como sólido amarelo claro. MS (ES+) m/z286,2 (M+H-BOC)+, nenhum íon de origem foi observado.
i) (2S)-2- ({ [2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-4-cloro-l-etil-lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}metil)-6-metil-4-morfolinacarboxilato de 1,I-Dimetiletila
Uma mistura do composto do Exemplo 9 (h) (0,14 g,0,36 mmol), o composto intermediário VII (0,11 g, 0,40mmol), e carbonato de césio (0,20 g, 0,55 mmol) em DMF (9mL) foi agitado sob nitrogênio a 50°C durante 16 horas. De-pois de permitir a reação resfriar em temperatura ambiente,a mistura foi diluída com acetato de etila (50 mL) lavadacom água (3 χ 15 mL) e salmoura (20 mL). A solução foi secaem MgSO4, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzi-da para produzir o produto desejado. HPLC preparativa (colu-na YMC-Pack ODS-A, 30 mm i.d. χ 75 mm, 20 mL/min, gradiente,A: água-0,1% de ácido trifluoroacético, B: acetonitrilo-0,1%de ácido trifluoroacético, 10-90% de acetonitrile durante 12minutos, detecção de UV a 254 nm) produziu 0,124 g (70% derendimento) do composto de título como um sólido branco. MS(ES+) m/z 494,2 (M+H)+.
j) (2S)-2-({ [2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-1-etil-4-(3-hidróxi-3-metil-l-butin-l-il)-lH-imidazo[4,5-c]piridin-7-il]óxi}metil)-6-metil-4-morfolinacarboxilato de1,I-DimetiletilaUm vaso de pressão de parede espessa foi carregadocom o composto do Exemplo 9(i) (0,124 g, 0,25 mmol), pó deZn (0,02 g, 0,30 mmol), Nal (0,04 g, 0,27 mmol), DBU (0,20mL, 1,32 mmol), TEA (0,15 mL, 1,07 mmol), 2-metil-3-butin-2-ol (0,20 mL, 2,07 mmols) e (Ph3P)4Pd (0,04 g, 0,03 mmol) emDMSO (5 mL). Depois de purgar com nitrogênio durante 10 mi-nutos, o vaso de reação foi selado e aquecido a 80°C durante3 horas. A mistura de reação foi diluída com água e extraídacom acetato de etila. Os extratos orgânicos foram lavadoscom água, salmoura e secos em sulfato de sódio. O solventefoi removido sob pressão reduzida para proporcionar um resí-duo amarelo claro. O resíduo cru foi submetido à cromatogra-fia flash (0-10% de MeOH/CHCl3, sílica gel) para produzir umadicional de 0,10 g do composto desejado como sólido amareloclaro. MS (ES+) m/z 541 (M+H)+.
k) sal de dicloridrato de 4-[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7- ({ [(2S)-6-metil-2-morfolinil]metil}óxi)-ΙΗ-imidazo[4,5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol
Uma solução do composto do Exemplo 9(j) (0,10 g,0,18 mmol) em metanol (5 mL) foi adicionado 4N de HCl em1,4-dioxano (3,5 mL, 16,0 mmols). Depois de 3 horas em tem-peratura ambiente o solvente foi removido sob pressão redu-zida. O resíduo foi triturado com diclorometano e o sólidofoi coletado através de filtração para produzir 0, 063 g docomposto de título como sólido amarelo claro. MS (ES+) m/z441 (M+H)+.
Exemplo 10Preparação de 4-[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il) -l-etil-7- ({ [(2S)-4-etil-2-morfolinil]metil)óxi)-IH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol
Em uma solução do composto do Exemplo 4 (0,13 g,0,30 mmol) em MeOH (4 mL) a O0C foi adicionado acetaldeido(0,034 mL, 0,61 mmol) e ácido acético (0,052 mL 0,90 mmol).Isto foi seguido pela adição de NaCNBH3 (0, 048 g, 0,76mmol). A reação foi permitida aquecer em temperatura ambien-te. Depois de 18 horas, a reação foi vertida em 50% de NaH-CO3 aquoso. A solução foi resfriada a 0°C e o precipitadoresultante foi coletado para produzir 0,10 g do composto de-sejado. MS (ES+) m/z 456,4 (M+H)+.
Exemplo 11 - Composição de Cápsula
Uma forma de dosagem oral para administrar a pre-sente invenção é produzida preenchendo-se uma cápsula de ge-latina dura de dois pedaços padrão com os ingredientes nasproporções mostradas na Tabela I, abaixo.Tabela I
INGREDIENTESQUANTIPAPES
<table>table see original document page 98</column></row><table>
Exemplo 12 - Composição Parenteral InjetávelUma forma injetável para administrar a presenteinvenção é produzida agitando-se 1,5% em peso de 4— (2— (4 —amino-1,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(2S)-2-tiomorfoIinilmetil]óxi}-IH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol, em 10% em volume de propileno glicol emágua.
Exemplo 13 - Composição de ComprimidoA sacarose, diidrato de sulfato de cálcio e um i-nibidor de Akt como mostrado na Tabela II abaixo, são mistu-rados e granulados nas proporções mostradas com uma soluçãode gelatina a 10%. Os grânulos úmidos são avaliados, secos,misturados com o amido, talco e ácido esteárico, avaliados eprensados em um comprimido.
Tabela II
INGREPIENTES QUANTIPAPES
<table>table see original document page 98</column></row><table>[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol,sulfato de cálcio desidratado 30 mg
Sacarose 4 mg
Amido 2 mg
Talco 1 mg
ácido esteárico 0,5 mg
Enquanto as modalidades preferidas da invenção sãoilustradas pelo anterior, deve ser entendido que a invençãonão está limitada às instruções precisas descritas aqui eque o direito para todas as modificações que entram no esco-po das seguintes reivindicações é reservado.LISTAGEM DE SEQÜÊNCIAS
<110> Heerding, DirkClark, TamirtyLeber, JackSafonov, Igor
<120> INIBIDORES DE ATIVIDADE DE AKT
<130> PU61676
<140> Desconheciso
<141> 2006-11-10
<150> 60/735955<151> 2005-11-10
<150> 60/772289<151> 2006-02-10
<150> 60/826928<151> 2006-09-26
<160> 5
<170> FastSEQ para Windows versão 4.0
<210> 1<211> 14<212> PRT
<213> Seqüência artificial<220>
<223> Peptideo sintético biotinilado<400> 1
Ala Arg Lys Arg Glu Arg Ala Tyr Ser Phe Gly His His Ala1 5 10
<210> 2<211> 26<212> DNA
<213> Seqüência artificial<220>
<223> Iniciador<400> 2
tatataggat ccatgagcga cgtggc
<210> 3<211> 29<212> DNA
<213> Seqüência artificial<220>
<223> Iniciador<400> 3
aaatttctcg agtcaggccg tgctgctgg<210> 4<211> 25<212> DNA
<213> Seqüência artificial<220>
<223> Iniciador mutagênico AKTl<400> 4
acctggcggc cacgctactt cctcc
<210> 5<211> 23<212> DNA
<213> Seqüência artificial<220>
<223> Iniciador de seleção
<400> 5
ctcgagcatg caactagagg gcc
23

Claims (42)

1. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de ser sele-cionado a partir de:-4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{ [(3S) -3-piperidinilmetil]óxi}-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol;-4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{ [(2S)-2-tiomorfolinilmetil]óxi}-IH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il) -2-metil-3-butin-2-ol;-4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{ [(2S)-2-morfolinilmetil]óxi}-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol; e-4-[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-({ [(2R)-6-metil-2-morfolinil]metil}óxi)-lH-imidazo[4, 5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol ;e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos,solvatos e pró-fármacos destes.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ser:-4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(3S)-3-piperidinilmetil]óxi}-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol;e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos,solvatos e pró-fármacos destes.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ser:-4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(2S)-2-tiomorfolinilmetil]óxi}-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol;e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos,solvatos e pró-fármacos destes.
4. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ser:-4-(2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(2S)-2-morfolinilmetil]óxi}-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol;e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos,solvatos e pró-fármacos destes.
5. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ser:-4-[2-(4-amino-l,2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-({ [(2R)-6-metil-2-morfolinil]metil}óxi)-IH-imidazo[4, 5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol;e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos,solvatos e pró-fármacos destes.
6. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fa-to de compreender um composto de acordo com a reivindicação-1, e/ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, solvatoou pró-fármaco destes e um portador farmaceuticamente acei-tável .
7. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fa-to de compreender um composto de acordo com a reivindicação-2, e/ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, solvatoou pró-fármaco destes e um portador farmaceuticamente acei-tável.
8. Processo para preparar uma composição farmacêu-tica contendo um portador f.armaceuticamente aceitável e umaquantidade eficaz de um composto de acordo com a reivindica-ção 1 e/ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, sol-vato ou pró-fármaco destes, cujo processo CARACTERIZADO pelofato de compreender trazer o composto de acordo com a rei-vindicação 1 e/ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidra-to, solvato ou pró-fármaco destes em associação com um por-tador farmaceuticamente aceitável.
9. Método de tratar ou diminuir a gravidade de umadoença ou condição selecionada a partir de câncer e artriteem um mamífero em necessidade deste, CARACTERIZADO pelo fatode compreender administrar a tal mamífero uma quantidade te-rapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a reivin-dicação 1 e/ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato,solvato ou pró-fármaco deste.
10. Método, de acordo com a reivindicação 9,CARACTERIZADO pelo fato do mamífero ser um humano.
11. Método de tratar ou diminuir a gravidade deuma doença ou condição selecionada a partir de câncer e ar-trite em um mamífero em necessidade deste, CARACTERIZADO pe-lo fato de compreender administrar a tal mamífero uma quan-tidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo coma reivindicação 2 e/ou um sal farmaceuticamente aceitável,hidrato, solvato ou pró-fármaco destes.
12. Método, de acordo com a reivindicação 11,CARACTERIZADO pelo fato do mamífero ser um humano.
13. Método, de acordo com a reivindicação 9,CARACTERIZADO pelo fato do referido câncer ser selecionado apartir de cerebral (gliomas), glioblastomas, síndrome deBannayan-Zonana, doença de Cowden, doença de Lhermitte-Duclos, mama, cólon, cabeça e pescoço, rim, pulmão, fígado,melanoma, ovário, pancreático, próstatao, sarcoma e tireóide.
14. Método, de acordo com a reivindicação 11,CARACTERIZADO pelo fato do referido câncer ser selecionado apartir de cerebral (gliomas), glioblastomas, síndrome deBannayan-Zonana, doença de Cowden, doença de Lhermitte-Duclos, mama, cólon, cabeça e pescoço, rim, pulmão, fígado,melanoma, ovário, pancreático, próstata, sarcoma e tireóide.
15. Uso de um composto de acordo com a reivindica-ção 1 e/ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, sol-vato ou pró-fármaco destes, na fabricação de um medicamentoCARACTERIZADO pelo fato de ser para uso no tratamento ou di-minuição da gravidade de uma doença ou condição selecionou apartir de câncer e artrite.
16. Método de inibir atividade de Akt em um mamí-fero em necessidade deste, CARACTERIZADO pelo fato de com-preender administrar a tal mamífero uma quantidade terapeu-ticamente eficaz de um composto de acordo com a reivindica-ção 1 e/ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, sol-vato ou pró-fármaco destes.
17. Método, de acordo com a reivindicação 16,CARACTERIZADO pelo fato do mamífero ser um humano.
18. Método, de tratar câncer em um mamífero emnecessidade deste, CARACTERIZADO pelo fato de compreender:co-administrar a tal mamífero uma quantidadeterapeuticamente eficaz dea) um composto de acordo com a reivindicação 1e/ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, solvato oupró-fármaco destes; eb) pelo menos um agente anti-neoplástico.
19. Método, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de pelo menos um agente anti-neoplástico ser selecionado a partir do grupo que consisteessencialmente em agentes anti-microtúbulo, complexos de co-ordenação de platina, agentes de alquilação, agentes antibi-óticos, inibidores de topoisomerase II, antimetabólitos, i-nibidores de topoisomerase I, hormônios e análogos hormo-nais, inibidores de séries de reações de transdução de si-nal; inibidores de agiogênese de tirosina cinase de não re-ceptor; agentes imunoterapêuticos; agentes pró-apoptóticos;e inibidores de sinalização de ciclo celular.
20. Método, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de pelo menos um agente anti-neoplástico é um agente anti-microtúbulo selecionado a par-tir de diterpenóides e alcalóides de vinca.
21. Método, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de pelo menos um agente anti-neoplástico ser um diterpenóide.
22. Método, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de pelo menos um agente anti-neoplástico é uma alcalóide de vinca.
23. Método, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelox fato de pelo menos um agente anti-neoplástico ser um complexo de coordenação de platina.
24. Método, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de pelo menos um agente anti-neoplástico ser paclitaxel, carboplatina, ou vinorelbina.
25.Método, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de pelo menos um agente anti-neoplástico ser paclitaxel.
26. Método, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de pelo menos um agente anti-neoplástico ser carboplatina.
27. Método, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato . de pelo menos um agente anti-neoplástico ser vinorelbina.
28. Método, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de pelo menos um agente anti-neoplástico ser um inibidor de séries de reações de transdu-ção de sinal.
29. Método, de acordo com a reivindicação 28,CARACTERIZADO pelo fato de que o inibidor de séries de rea-ções de transdução de sinal ser um inibidor de uma cinase dereceptor de fator de crescimento selecionado a partir dogrupo que consiste em VEGFR2, TIE2, PDGFR, BTK, IGFR-1, Tr-kA, TrkB, TrkC, e c-fms.
30.Método, de acordo com a reivindicação 28,CARACTERIZADO pelo fato do inibidor de séries de reações detransdução- de sinal ser um inibidor de uma serina/treoninacinase selecionado a partir do grupo que consiste em rafk,akt, e PKC-zeta.
31.Método, de acordo com a reivindicação 28,CARACTERIZADO pelo fato do inibidor de séries de reações detransdução de sinal ser um inibidor de uma serina/treoninacinase selecionado a partir da família de src de cinases.
32.Método, de acordo com a reivindicação 31,CARACTERIZADO pelo fato do inibidor de séries de reações detransdução de sinal ser um inibidor de c-src.
33. Método, de acordo com a reivindicação 28,CARACTERIZADO pelo fato do inibidor de séries de reações detransdução de sinal ser um inibidor de oncogene de Ras sele-cionado a partir de inibidores de farnesil transferase e ge-ranilgeranil transferase.
34. Método, de acordo com a reivindicação 28,CARACTERIZADO pelo fato do inibidor de séries de reações detransdução de sinal ser um inibidor de uma serina/treoninacinase selecionado a partir do grupo que consiste em PI3K.
35. Método, de acordo com a reivindicação . 18,CARACTERIZADO pelo fato de pelo menos um agente anti-neoplástico ser um inibidor de sinalização ciclo celular.
36. Método, de acordo com a reivindicação 35,CARACTERIZADO pelo fato do inibidor de sinalização de ciclocelular ser selecionado a partir de inibidores do grupoCDK2, CDK4, e CDK6.
37. Combinação farmacêutica, de acordo com areivindicação 18, CARACTERIZADA pelo fato de ser para uso emterapia.
38. Uso de uma combinação farmacêutica, de acordocom a reivindicação 18, CARACTERIZADA pelo fato de ser paraa preparação de um medicamento útil no tratamento de câncer.
39. Método de tratar ou diminuir a gravidade deuma doença ou condição selecionada a partir de câncer e ar-trite em um mamífero em necessidade deste, CARACTERIZADO pe-lo fato de compreender administrar a tal mamífero uma quan-tidade terapeuticamente eficaz de 4-(2-(4-amino-l, 2, 5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(3S)-3-piperidinilmetil]óxi}-IH-imidazo[4, 5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol e/ou um salfarmaceuticamente aceitável, hidrato, solvato ou pró-fármacodestes.
40. Método de tratar ou diminuir a gravidade deuma doença ou condição selecionada a partir de câncer e ar-trite em um mamífero em necessidade deste, CARACTERIZADO pe-lo fato de compreender administrar a tal mamífero uma quan-tidade terapeuticamente eficaz de 4-(2-(4-amino-l, 2, 5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(2S)-2-tiomorfolinilmetil]óxi}--lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-nnetil-3-butin-2-ol e/ou umsal farmaceuticamente aceitável, hidrato, solvato ou pró-fármaco deste.
41. Método de tratar ou diminuir a gravidade deuma doença ou condição selecionada a partir de câncer e ar-trite em um mamífero em necessidade deste, CARACTERIZADO pe-lo fato de compreender administrar a tal mamífero uma quan-tidade terapeuticamente eficaz de 4-(2-(4-amino-l, 2,5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-{[(2S)-2-morfolinilmetil]óxi}-IH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)-2-metil-3-butin-2-ol e/ou um salfarmaceuticamente aceitável, hidrato, solvato ou pró-fármacodestes.
42. Método de tratar ou diminuir a gravidade deuma doença ou condição selecionada a partir de câncer e ar-trite em um mamífero em necessidade deste, CARACTERIZADO pe-lo fato de compreender administrar a tal mamífero uma quan-tidade terapeuticamente eficaz de 4-[2-(4-amino-l, 2, 5-oxadiazol-3-il)-l-etil-7-({[(2R)-6-metil-2-morfolinil]metil}óxi)-lH-imidazo[4,5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol e/ou um sal farmaceuticamente aceitável,hidrato, solvato ou pró-fármaco destes.
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