ES2909438T3

ES2909438T3 - Enantiómero (S) de mepacina como inhibidor de paracaspasa (MALT1) para tratar cáncer

Info

Publication number: ES2909438T3
Application number: ES14732248T
Authority: ES
Inventors: Daniel Krappmann; Daniel Nagel; Florian Schlauderer; Katja Lammens; Karl-Peter Hopfner; Robert A Chrusciel; Dale L Kling
Original assignee: Helmholtz Zentrum Muenchen Deutsches Forschungszentrum fuer Gesundheit und Umwelt GmbH
Current assignee: Helmholtz Zentrum Muenchen Deutsches Forschungszentrum fuer Gesundheit und Umwelt GmbH
Priority date: 2013-06-26
Filing date: 2014-06-25
Publication date: 2022-05-06
Anticipated expiration: 2034-06-25
Also published as: US20160137635A1; EP4001275A1; EP3013818B1; EP3013818A1; WO2014207067A1; EP4001275B1; US9718811B2

Abstract

Un proceso para la preparación de 10-{[(3S)-1-metilpiperidin-3-il]-metil}-10H-fenotiacina (el enantiómero S de mepacina) y solvatos, sales, formas isotópicamente marcadas y combinaciones de los mismos, que comprende la etapa de hacer reaccionar fenotiacina con un derivado de piperidina de la siguiente fórmula (3) **(Ver fórmula)** en donde LG es un grupo saliente, en donde A) el proceso comprende la etapa de convertir una amina terciaria de la siguiente fórmula (2) **(Ver fórmula)** al derivado de piperidina de fórmula (3) y/o B) en donde LG se selecciona del grupo que consiste en mesilato, triflato, y tosilato.

Description

DESCRIPCIÓN

Enantiómero (S) de mepacina como inhibidor de paracaspasa (MALT1) para tratar cáncer

Campo técnico de la invención

La presente invención se refiere al enantiómero (S) de mepacina, su aplicabilidad en terapia, una composición farmacéutica que comprende (S)-mepacina, y procesos para la preparación de (S)-mepacina y uno de sus intermedios.

Antecedentes de la invención

La mepacina, es decir, el compuesto 10-[(1 -metiliperidin-3-il)metil]-10H-fenotiacina, se usó inicialmente como un tranquilizante (Lord y Archibald, Can. J. Comp. Med. Vet. Sci., 1957, 21, 391-394). Los compuestos estructuralmente muy similares 10-[2-(1 -metilpiperidin-2-il)etil]-2-(metiltio)fenotiacina (tioridacina) y N,N-dimetil-1-(10H-fenotiacin-10-il)propan-2-amina (prometacina) se conocen en la técnica como fármacos antipsicóticos y ejercen efectos sedantes al actuar como antagonistas del receptor de serotonina (Seeman y Lee, Science, 1975, 188, 1217-1219). Recientemente, se ha encontrado que ciertos derivados de fenotiacina son inhibidores de una paracaspasa, en particular inhibidores de MALT1 y, por tanto, son útiles en tratar trastornos y enfermedades en cuyo desarrollo la disregulación de la actividad de la paracaspasa (en particular MALT1) desempeña un papel crucial. Los trastornos/enfermedades ejemplares que son tratables por los derivados de fenotiacina incluyen linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) y esclerosis múltiple.

El documento WO2007058850 A2 divulga novedosos compuestos de 1H-imidazol[4,5-c]pirinina-2-ilo, el uso de tal compuesto como inhibidores de proteína quinasa B y el tratamiento de cáncer y artritis.

El documento WO2013017637 A1 se refiere a la inhibición selectiva de la proteasa MALT1 por derivados de fenotiacina.

Madrid et al., Bioorganic Medicinal Chemistry Letters 2007, vol, 17, no. 11, 3014-3017 divulga la síntesis y actividad antituberculosa de fenotiacinas con unión reducida a receptores de dopamina y serotonina.

En vista de los anterior, sería deseable proporcionar compuestos que muestran un perfil terapéutico mejorado (por ejemplo, propiedades farmacológicas y/o metabólicas mejoradas, tal como mayor actividad contra una paracaspasa y efecto sedante y/o antipsicótico reducido). Un objeto adicional de la presente solicitud es la provisión de un proceso para la preparación de tales compuestos.

Compendio de la invención

La presente invención proporciona un proceso para la preparación de un compuesto del primer aspecto, que comprende la etapa de hacer reaccionar fenotiacina con un derivado de piperidina de la siguiente fórmula (3)

en donde LG es un grupo saliente,

en donde

A) el proceso comprende la etapa de convertir una amina terciaria de la siguiente fórmula (2)

al derivado de piperidina de fórmula (3) y/o

B) en donde LG se selecciona del grupo que consiste en mesilato, triflato, y tosilato.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1: La tioridacina se une en una posición en la interfaz entre la caspasa y la hélice de conexión del dominio Ig3 a1Ig3 de MALT1. (a) Superposición de la estructura MALT1^casp-ig3unida al péptido hex-LRSR (gris) y en complejo con tioridacina (gris oscuro). Para mostrar el montaje biológico como dímero, el compañero de simetría de la estructura unida a tioridacina se muestra en gris claro a la izquierda. (b) La reorganización conformacional de la hélice aC y aD y posteriormente las láminas p 3A y 3B se inhibe debido al impedimento estérico por tioridacina. (c) Vista de cerca de W580 dándose la vuelta y la interacción de tioridacina con el residuo E397. Se muestran las estructuras de MALT1 unida a tioridacina y sin ligando en gris oscuro y gris claro, respectivamente.

Figura 2: Enantiómeros de mepacina tienen diferente potencial inhibidor de MALT1. (a) y (b) Ensayo de extinción de triptófano con los enantiómeros únicos de tioridacina ((R): •; (S): ♦) y mepacina: ((R): •, (S): ■), respectivamente. (c) y (d) ensayo de corte de MALT1 con GST-MALTI^325-760Wt después de incubación con el enantiómero (R) o (S) de mepacina ((R): •, (S): ■) o tioridacina ((R): •; (S): ♦). Las curvas muestran la media de al menos tres experimentos independientes con la DE indicada.

Figura 3: (S)-Mepacina con impacto inhibidor más fuerte en MALT1. (a) y (b) Ensayo de corte de MALT1 fluorogénico después de incubación con uno de los enantiómeros (R) y (S) de mepacina ((R): •, (S): ■) y tioridacina ((R): •; (S): ♦). Las curvas muestran la media de al menos tres experimentos independientes y las barras de error representan la DE. (c) Detección de corte de RelB derivada de MALT1 celular. Tratamiento de la línea celular de ABC-DLBCL HBL1 (2,5 x 10⁵/ml) con cantidades crecientes de (S)-mepacina (panel superior) y (R)-mepacina (panel inferior). La inmunotransferencia es representativa de al menos tres experimentos y los valores CE50 se calcularon con PRISM5 (GraphPad).

Figura 4: (S)-Mepacina redujo selectivamente el crecimiento del tumor ABC DLBCL dependiente de MALT1. La línea celular de ABC DLBCL OCI-Ly10 y la línea celular de GCB DLBCL Su-DHL-6 se inyectaron en ratones inmunocomprometidos (NSG) donde crecieron a un tumor sólido. El tratamiento con 2 dosis de (S)-mepacina (6 mg/kg: ▼ ; 12 mg/kg: ▲; cada uno una vez al día) produjo una reducción de crecimiento selectiva del tumor OCI-Ly10, mientras el tumor control GCB DLBCL no estaba afectado.

Figura 5: (S)-Mepacina produjo una reducción de la gravedad de EAE y pérdida de peso. (a) El tratamiento de ratones eAe con (S)-mepacina (inyección intraperitoneal (IP) de 8 mg/kg dos veces al día) produjo una reducción de la gravedad de EAE. Se calculó la significancia (valor p) en relación con el control tratado con vehículo por ANOVA bidireccional (p < 0,01 a p < 0,0001 desde el día 2-30). (b) El tratamiento con (S)-mepacina produjo una inhibición de la formación de focos inflamatorios y desmielinización en la médula espinal. (c) El tratamiento con (S)-mepacina redujo la pérdida de peso inducida por EAE de los ratones.

Figura 6: (S)-Mepacina produjo una reducción de la gravedad de CIA. (a) El tratamiento de ratones CIA con (S)-mepacina (inyección IP de 4 u 8 mg/kg dos veces al día que produce una dosis diaria de 8 o 16 mg/kg) produjo una reducción dependiente de la dosis de la gravedad de la enfermedad. Se calculó la significancia (valor p) en relación con el control tratado con vehículo por ANOVA bidireccional, que varía del día 2-14 de p < 0,01 a p < 0,0001 para el tratamiento de 8 mg/kg y p< 0,0001 para el de 16 mg/kg. (b) El tratamiento con (S)-mepacina produjo una disminución de la inflamación relacionada con CIA, formación de pannus, daño al cartílago y resorción de hueso.

Descripción detallada de la presente invención

Aunque la presente invención se describe en detalle a continuación, se debe entender que esta invención no está limitada a las metodologías, protocolos y reactivos particulares descritos en el presente documento ya que estos pueden variar. También se debe entender que la terminología usada en el presente documento es para el fin de describir formas de realización particulares solo, y no se pretende que limite el ámbito de la presente invención que estará limitado solo por las reivindicaciones adjuntas. A menos que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen los mismos significados que comúnmente entiende un experto en la materia.

En lo siguiente, se describirán los elementos de la presente invención. Estos elementos se enumeran con formas de realización específicas, sin embargo, se debe entender que se pueden combinar de cualquier manera y en cualquier número para crear formas de realización adicionales. No se debe interpretar que los ejemplos diversamente descritos y formas de realización preferidas limitan la presente invención a solo las formas de realización explícitamente descritas. Se debe entender que esta descripción apoya y abarca formas de realización que combinan las formas de realización explícitamente descritas con cualquier número de los elementos divulgados y/o preferidos. Además, cualquier permutación y combinación de todos los elementos descritos en esta solicitud se debe considerar divulgada por la descripción de la presente solicitud a menos que el contexto indique otra cosa. Asimismo, si en una forma de realización del proceso para la preparación de un compuesto de la presente invención el grupo saliente LG es tosilato y en otra forma de realización del proceso para la preparación de un compuesto de la presente invención la etapa de hacer reaccionar fenotiacina con un derivado de piperidina de fórmula (3) se realiza en presencia de una base química, entonces en aún otra forma de realización del proceso para la preparación de un compuesto de la presente invención fenotiacina se puede hacer reaccionar con un derivado de piperidina de fórmula (3), en donde el grupo saliente LG es tosilato, en presencia de una base química.

Preferiblemente, los términos usados en el presente documento se describen en "A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)", H.G.W. Leuenberger, B. Nagel, y H. Kolbl, Eds., Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basilea, Suiza (1995).

La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique otra cosa, métodos convencionales de química, bioquímica y técnicas de ADN recombinante que se explican en la bibliografía en el campo (cf., por ejemplo, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a Edición, J. Sambrook et al. eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor 1989; M.B. Smith y J. March, "March's advanced organic chemistry: reactions, mechanisms, and structure", 5a edición, John Wiley & Sons, Inc., 2001; "Organikum", 18a edición, Deutscher Verlag der Wissenschaften, 1990).

A lo largo de esta especificación y las reivindicaciones que siguen, a menos que el contexto claramente requiera otra cosa, la palabra “comprender”, y variaciones tal como “comprende” y “que comprende”, se entenderá que implican la inclusión de un miembro, número o etapa o grupo de miembros, números enteros o etapas manifestado, pero no la exclusión de cualquier otro miembro, número entero o etapa o grupo de miembros, números enteros o etapas. Los términos “un”, y “una”, y “el” y “la” y referencias similares usados en el contexto de describir la invención (especialmente en el contexto de las reivindicaciones) se debe interpretar que cubren tanto el singular como el plural, a menos que se indique otra cosa en el presente documento o claramente se contradiga por el contexto. La enumeración de intervalos de valores en el presente documento se pretende solamente que sirva como un método abreviado de referirse individualmente a cada valor separado que está dentro del intervalo. A menos que se indique otra cosa en el presente documento, cada valor individual se incorpora a la especificación como si estuviera individualmente enumerado en el presente documento. Todos los métodos descritos en el presente documento se pueden realizar en cualquier orden adecuado a menos que se indique otra cosa en el presente documento o claramente se contradiga por el contexto.

El término “alquilo” se refiere a un monorradical de un hidrocarburo saturado lineal o ramificado. Preferiblemente, el grupo alquilo comprende de 1 a 10 átomos de carbono, es decir, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10 átomos de carbono, más preferiblemente de 1 a 8 átomos de carbono, tal como de 1 a 6 o de 1 a 4 átomos de carbono. Los grupos alquilo ejemplares incluyen metilo, etilo, propilo, iso-propilo, butilo, iso-butilo, tert-butilo, n-pentilo, iso-pentilo, sec-pentilo, neopentilo, 1,2-dimetil-propilo, iso-amilo, n-hexilo, iso-hexilo, sec-hexilo, n-heptilo, iso-heptilo, n-octilo, 2-etil-hexilo, nnonilo, n-decilo, y similares.

El término “alquenilo” se refiere a un monorradical de un hidrocarburo insaturado lineal o ramificado que tiene al menos un doble enlace carbono-carbono. En general, el número máximo de dobles enlaces carbono-carbono en el grupo alquenilo puede ser igual al número entero que se calcula dividiendo el número de átomos de carbono en el grupo alquenilo por 2 y, si el número de átomos de carbono en el grupo alquenilo es impar, redondeando el resultado de la división hacia abajo hasta el siguiente número entero. Por ejemplo, para un grupo alquenilo que tiene 9 átomos de carbono, el número máximo de dobles enlaces carbono-carbono es 4. Preferiblemente, el grupo alquenilo tiene de 1 a 4, es decir, 1, 2, 3, o 4 dobles enlaces carbono-carbono. Preferiblemente, el grupo alquenilo comprende de 2 a 10 átomos de carbono, es decir, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10 átomos de carbono, más preferiblemente de 2 a 8 átomos de carbono, tal como de 2 a 6 o de 2 a 4 átomos de carbono. Por tanto, en una forma de realización preferida, el grupo alquenilo comprende de 2 a 10 átomos de carbono y 1, 2, 3, 4, o 5 dobles enlaces carbono-carbono, más preferiblemente comprende de 2 a 8 átomos de carbono y 1, 2, 3, o 4 dobles enlaces carbono-carbono, tal como de 2 a 6 átomos de carbono y 1, 2, o 3 dobles enlaces carbono-carbono, o de 2 a 4 átomos de carbono y 1 o 2 dobles enlaces carbono-carbono. El doble(s) enlace(s) carbono-carbono puede estar en la configuración cis (Z) o trans (E). Los grupos alquenilo ejemplares incluyen vinilo, 1-propenilo, 2-propenilo (es decir, alilo), 1 -butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo, 1-pentenilo, 2-pentenilo, 3-pentenilo, 4-pentenilo, 1-hexenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 4-hexenilo, 5-hexenilo, 1-heptenilo, 2-heptenilo, 3-heptenilo, 4-heptenilo, 5-heptenilo, 6-heptenilo, 1-octenilo, 2-octenilo, 3-octenilo, 4-octenilo, 5-octenilo, 6-octenilo, 7-octenilo, 1-nonenilo, 2-nonenilo, 3-nonenilo, 4-nonenilo, 5-nonenilo, 6-nonenilo, 7-nonenilo, 8-nonenilo, 1-decenilo, 2-decenilo, 3-decenilo, 4-decenilo, 5-decenilo, 6-decenilo, 7-decenilo, 8-decenilo, 9-decenilo, y similares. Si un grupo alquenilo está unido a un átomo de nitrógeno, el doble enlace no puede estar en alfa respecto al átomo de nitrógeno.

El término “alquinilo” se refiere a un monorradical de un hidrocarburo insaturado lineal o ramificado que tiene al menos un triple enlace carbono-carbono. En general, el número máximo de triples enlaces carbono-carbono en el grupo alquinilo puede ser igual al número entero que se calcula dividiendo el número de átomos de carbono en el grupo alquinilo por 2 y, si el número de átomos de carbono en el grupo alquinilo es impar, redondeando el resultado de la división hacia abajo hasta el siguiente número entero. Por ejemplo, para un grupo alquinilo que tiene 9 átomos de carbono, el número máximo de triples enlaces carbono-carbono es 4. Preferiblemente, el grupo alquinilo tiene de 1 a 4, es decir, 1, 2, 3, o 4, más preferiblemente 1 o 2 triples enlaces carbono-carbono. Preferiblemente, el grupo alquinilo comprende de 2 a 10 átomos de carbono, es decir, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10 átomos de carbono, más preferiblemente de 2 a 8 átomos de carbono, tal como de 2 a 6 o de 2 a 4 átomos de carbono. Por tanto, en una forma de realización preferida, el grupo alquinilo comprende de 2 a 10 átomos de carbono y 1, 2, 3, 4, o 5 (preferiblemente 1, 2, o 3) triples enlaces carbono-carbono, más preferiblemente comprende de 2 a 8 átomos de carbono y 1,2, 3, o 4 (preferiblemente 1 o 2) triples enlaces carbono-carbono, tal como de 2 a 6 átomos de carbono y 1, 2, o 3 triples enlaces carbonocarbono, o de 2 a 4 átomos de carbono y 1 o 2 triples enlaces carbono-carbono. Los grupos alquinilo ejemplares incluyen etinilo, 1 -propinilo, 2-propinilo 1 -butinilo, 2-butinilo, 3-butinilo, 1 -pentinilo, 2-pentinilo, 3-pentinilo, 4-pentinilo, 1 -hexinilo, 2-hexinilo, 3-hexinilo, 4-hexinilo, 5-hexinilo, 1 -heptinilo, 2-heptinilo, 3-heptinilo, 4-heptinilo, 5-heptinilo, 6 heptinilo, 1-octinilo, 2-octinilo, 3-octinilo, 4-octinilo, 5-octinilo, 6-octinilo, 7-octinilo, 1-noninilo, 2-noninilo, 3-noninilo, 4-noninilo, 5-noninilo, 6-noninilo, 7-noninilo, 8-noninilo, 1-decinilo, 2-decinilo, 3-decinilo, 4-decinilo, 5-decinilo, 6-decinilo, 7-decinilo, 8-decinilo, 9-decinilo, y similares. Si el grupo alquinilo está unido a un átomo de nitrógeno, el triple enlace no puede estar en alfa respecto al átomo de nitrógeno.

El término “cicloalquilo” representa versiones cíclicas no aromáticas de “alquilo” con preferiblemente de 3 a 14 átomos de carbono, tal como de 3 a 10 átomos de carbono, es decir, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10 átomos de carbono, más preferiblemente de 3 a 6 átomos de carbono. El grupo cicloalquilo puede ser insaturado (es decir, puede contener uno o más dobles enlaces carbono-carbono). En una forma de realización, el grupo cicloalquilo es saturado (es decir, no contiene dobles enlaces carbono-carbono). Los grupos cicloalquilo ejemplares incluyen ciclopropilo, ciclopropenilo, ciclobutilo, ciclobutenilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloheptilo, cicloheptenilo, ciclooctilo, ciclooctenilo, ciclononilo, ciclononenilo, cilcodecilo, cilcodecenilo, y adamantilo. El término "cicloalquilo" también se pretende que incluya versiones bicíclicas y tricíclias de los mismos a. Si se forman anillos bicíclicos se prefiere que los respectivos anillos están conectados entre sí en dos átomos de carbono adyacentes, sin embargo, alternativamente los dos anillos están conectados a través del mismo átomo de carbono, es decir, forman un sistema de anillos espiro o forman sistemas de anillos “en puente”. Los ejemplos preferidos de cicloalquilo incluye, cicloalquilo de C3-C8, en particular ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, espiro[3,3]heptilo, espiro[3,4]octilo, espiro[4,3]octilo, biciclo [4.1.0]heptilo, biciclo[3.2.0]heptilo, biciclo[2.2.1]heptilo, biciclo[2.2.2]octilo, biciclo[5.1.0]octilo, y biciclo[4.2.0]octilo.

El término “arilo” o “anillo aromático” se refiere a un monorradical de un hidrocarburo cíclico aromático. Preferiblemente, el grupo arilo contiene de 3 a 14 átomos de carbono que pueden estar organizados en un anillo (por ejemplo, fenilo) o dos o más anillos condensados (por ejemplo, naftilo). Los grupos arilo ejemplares incluyen ciclopropenilio, ciclopentadienilo, fenilo, indenilo, naftilo, azulenilo, fluorenilo, antrilo, y fenantrilo. Preferiblemente, “arilo” se refiere a un anillo monocíclico que contiene 6 átomos de carbono o un sistema de anillos bicíclico aromático que contiene 10 átomos de carbono. Los ejemplos preferidos son fenilo y naftilo.

El término “heteroarilo” o “anillo heteroaromático” significa un grupo arilo como se ha definido anteriormente en el que uno o más átomos de carbono en el grupo arilo se sustituyen por heteroátomos, O, S o N. Preferiblemente, heteroarilo se refiere a un anillo monocíclico aromático de cinco o seis miembros en donde 1, 2 o 3 átomos de carbono se sustituyen por heteroátomos iguales o diferentes de O, N o S. Alternativamente, significa un sistema de anillos bicíclico o tricíclico aromático en donde 1, 2, 3, 4, o 5 átomos de carbono se sustituyen por heteroátomos iguales o diferentes de O, N o S. Preferiblemente, en cada anillo del grupo heteroarilo el máximo número de átomos de O es 1, el máximo número de átomos de S es 1, y el máximo número total de átomos de O y S es 2. Los grupos heteroarilo ejemplares incluyen furanilo, tienilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo (1,2,5-y 1,2,3-), pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo (1,2,3- y 1,2,4-), tetrazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo (1,2,3- y 1,2,5-), piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo (1,2,3-, 1,2,4-, y 1,3,5-), benzofuranilo (1- y 2-), indolilo, isoindolilo, benzotienilo (1- y 2-), 1H-indazolilo, bencimidazolilo, benzoxazolilo, indoxazinilo, bencisoxazolilo, benzotiazolilo, bencisotiazolilo, benzotriazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzodiazinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, benzotriazinilo (1,2,3- and 1,2,4-benzotriazinilo), piridazinilo, fenoxazinilo, tiazolopiridinilo, pirrolotiazolilo, fenotiazinilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, fenoxatiinilo, pirrolizinilo, indolizinilo, indazolilo, purinilo, quinolizinilo, ftalazinilo, naftiridinilo (1,5-, 1,6-, 1,7-, 1,8-, y 2,6-), cinolinilo, pteridinilo, carbazolilo, fenantridinilo, acridinilo, perimidinilo, fenantrolinilo (1,7-, 1,8-, 1,10-, 3,8-, y 4,7-), fenazinilo, oxazolopiridinilo, isoxazolopiridinilo, pirrolooxazolilo, y pirrolopirrolilo. Los grupos heteroarilo de 5 o 6 miembros incluyen furanilo, tienilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo (1,2,5-y 1,2,3-), pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo (1,2,3-y 1,2,4-), tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo (1,2,3-y 1,2,5-), piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo (1,2,3-, 1,2,4 , y 1,3,5-), y piridazinilo.

El término “heterociclilo” o “anillo heterocíclico” significa un grupo cicloalquilo como se ha definido anteriormente en el que de 1, 2, 3, o 4 átomos de carbono en el grupo cicloalquilo se sustituyen por heteroátomos de O, S o N. Preferiblemente, en cada anillo del grupo heterociclilo el máximo número de átomos de O es 1, el máximo número de átomos de S es 1, y el máximo número total de átomos de O y S es 2. El término “heterociclilo” también se pretende que abarque formas parcial o completamente hidrogenadas (tal como formas dihidro, tetrahidro o perhidro) de los grupos heteroarilo anteriormente mencionados. Los grupo heterociclilo ejemplares incluyen morfolino, isocromanilo, cromanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, indolinilo, isoindolinilo, di- y tetrahidrofuranilo, di- y tetrahidrotienilo, di- y tetrahidrooxazolilo, di- y tetrahidroisoxazolilo, di- y tetrahidrooxadiazolilo (1,2,5- y 1,2,3-), dihidropirrolilo, dihidroimidazolilo, dihidropirazolilo, di- y tetrahidrotriazolilo (1,2,3- y 1,2,4-), di-y tetrahidrotiazolilo, di- y tetrahidrotiazolilo, di- y tetrahidrotiadiazolilo (1,2,3- y 1,2,5-), di- y tetrahidropiridilo, di- y tetrahidropirimidinilo, di- y tetrahidropirazinilo, di- y tetrahidrotriazinilo (1,2,3-, 1,2,4-, y 1,3,5-), di- y tetrahidrobenzofuranilo (1- y 2-), di- y tetrahidroindolilo, di- y tetrahidroisoindolilo, di- y tetrahidrobenzotienilo (1- y 2), di- y tetrahidro-1H-indazolilo, di- y tetrahidrobenzimidazolilo, di- y tetrahidrobenzoxazolilo, di- y tetrahidroindoxazinilo, di- y tetrahidrobenzisoxazolilo, di- y tetrahidrobenzotiazolilo, di- y tetrahidrobenzisotiazolilo, di- y tetrahidrobenzotriazolilo, di- y tetrahidroquinolinilo, di- y tetrahidroisoquinolinilo, di- y tetrahidrobenzodiazinilo, di- y tetrahidroquinoxalinilo, di- y tetrahidroquinazolinilo, di- y tetrahidrobenzotriazinilo (1,2,3- y 1,2,4-), di- y tetrahidropiridazinilo, d i-y tetrahidrofenoxazinilo, d i-y tetrahidrotiazolopiridinilo (tal como 4,5,6-7-tetrahidro [1,3]tiazolo [5,4-c] piridinilo o 4,5,6-7-tetrahidro[ 1,3]tiazolo [4,5-c] piridinilo, por ejemplo, 4,5,6-7-tetrahidro[1,3]tiazolo[5,4-c]piridin-2-ilo o 4,5,6-7-tetrahidro[1,3]tiazolo[4,5-c]piridin-2-ilo), di- y tetrahidropirrolotiazolilo (tal como 5,6-dihidro-4Hpirrolo[3,4-d][1,3]tiazolilo), d i-y tetrahidrofenotiazinilo, d i-y tetrahidroisobenzofuranilo, d i-y tetrahidrocromenilo, d i-y tetrahidroxantenilo, di- y tetrahidrofenoxatiinilo, di- y tetrahidropirrolizinilo, di- y tetrahidroindolizinilo, di- y tetrahidroindazolilo, di- y tetrahidropurinilo, di- y tetrahidroquinolizinilo, di- y tetrahidroftalazinilo, di- y tetrahidronaftiridinilo (1,5-, 1,6-, 1,7-, 1,8-, y 2,6-), di- y tetrahidrocinolinilo, di- y tetrahidropteridinilo, di- y tetrahidrocarbazolilo, di- y tetrahidrofenantridinilo, di- y tetrahidroacridinilo, di- y tetrahidroperimidinilo, di- y tetrahidrofenantrolinilo (1,7-, 1,8-, 1,10-, 3,8-, y 4,7-), d i-y tetrahidrofenazinilo, d i-y tetrahidrooxazolopiridinilo, d i-y tetrahidroisoxazolopiridinilo, di-ytetrahidropirrolooxazolilo, y di-ytetrahidropirrolopirrolilo. Los grupos heterociclo de 5 o 6 miembros ejemplares incluyen morfolino, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, di- y tetrahidrofuranilo, di- y tetrahidrotienilo, di- y tetrahidrooxazolilo, di- y tetrahidroisoxazolilo, di- y tetrahidrooxadiazolilo (1,2,5- y 1,2,3-), dihidropirrolilo, dihidroimidazolilo, dihidropirazolilo, di- y tetrahidrotriazolilo (1,2,3- y 1,2,4-), di- y tetrahidrotiazolilo, di- y tetrahidroisotiazolilo, di- y tetrahidrotiadiazolilo (1,2,3- y 1,2,5-), di- y tetrahidropiridilo, di- y tetrahidropirimidinilo, di- y tetrahidropirazinilo, di- y tetrahidrotriazinilo (1,2,3-, 1,2,4-, y 1,3,5-), y di- y tetrahidropiridazinilo.

El término “halógeno” o “halo” significa fluoro, cloro, bromo o yodo.

El término “azido” significa -N³.

El término “opcionalmente sustituido” indica que uno o más átomo(s) de hidrógeno está(n) reemplazado(s) con un grupo (es decir, un sustituyente de 1^ernivel) diferente de hidrógeno tal como alquilo (preferiblemente alquilo de C^1-6), alquenilo (preferiblemente, alquenilo de C^2-6), alquinilo (preferiblemente, alquinilo de C^2-6), arilo (preferiblemente, arilo de 3 a 14 miembros), heteroarilo (preferiblemente, heteroarilo de 3 a 14 miembros), cicloalquilo (preferiblemente, cicloalquilo de 3 a 14 miembros), heterociclilo (preferiblemente, heterociclilo de 3 a 14 miembros), halógeno, -CN, azido, -NO², -OR⁷¹, -N(R⁷²)(R⁷³), -ON(R⁷²)(R⁷³), -N⁺(-O-)(R⁷²)(R⁷³), -S(O)^o-2R⁷¹, -S(O)^ü-2OR⁷¹, -OS(O)^ü-2R⁷¹, -OS(O)^ü.

²OR⁷¹, -S(O)^o-2N(R⁷²)(R⁷³), -OS(O)^o-2N(R⁷²)(R⁷³), -N(R⁷¹)S(O)^o-2R⁷¹, -NR⁷¹S(O)^ü-2ÜR⁷¹, -NR⁷¹S(O)^o-2N(R⁷²)(R⁷³), -C(=X¹)R⁷¹, -C(=X¹)X¹R⁷¹, -X¹C(=X¹)R⁷¹, y -X¹C(=X¹)X¹R⁷¹, en donde cada uno de los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterociclilo del sustituyente de 1^ernivel pueden estar ellos mismos sustituidos por uno, dos o tres sustituyentes (es decir, un sustituyente de 2° nivel) seleccionado del grupo que consiste en alquilo de C^1-6, alquenilo de C^2-6, alquinilo de C^2-6, arilo de 3 a 14 miembros, heteroarilo de 3 a 14 miembros, cicloalquilo de 3 a 14 miembros, heterociclilo de 3 a 14 miembros, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OR⁸¹, -N(R⁸²)(R⁸³), -ON(R⁸²)(R⁸³), -N⁺(-O-)(R⁸²)(R⁸³), -S(O)^o-2R⁸¹, -S(O)^o-2OR⁸¹, -OS(O)^o-2R⁸¹, -OS(O)^o-2OR⁸¹, -S(O)^o-2N(R⁸²)(R⁸³), -OS(O)^o-2N(R⁸²)(R⁸³), -N(R⁸¹)S(O)^o-2R⁸¹, -NR⁸¹S(O)^ü-2ÜR⁸¹, -NR⁸¹S(O)^o-2N(R⁸²)(R⁸³), -C(=X²)R⁸¹, -C(=X²)X²R⁸¹, -X²C(=X²)R⁸¹, y -X²C(=X²)X²R⁸¹, en donde cada uno de los grupos alquilo de C^1-6, alquenilo de C^2-6, alquinilo de C^2-6, arilo de 3 a 14 miembros, heteroarilo de 3 a 14 miembros, cicloalquilo de 3 a 14 miembros, heterociclilo de 3 a 14 miembros del sustituyente de 2° nivel está opcionalmente sustituido con uno, dos, o tres sustituyentes (es decir, un sustituyente de 3^ernivel) independientemente seleccionado del grupo que consiste en alquilo de C^1-3, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1-3), -NH², -NH(alquilo de C^1-3), -N(alquilo de C^1-3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1.3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C ^ ) ^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1.3), -C(=O)NH^2-z(alquilo de C ^ ^z, -NHC(=O)(alquilo de C^1.3), -NHC(=NH)NH^z-2(alquilo de C ^ ^z, y -N(alquilo de C^1-3)C(=NH)NH^2-z(alquilo de C ^ ) ^z, en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo;

en donde

R⁷¹, R⁷², y R⁷³se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -H, alquilo de C^1-6, alquenilo de C^2-6, alquinilo de C^2-6, cicloalquilo de 3 a 7 miembros, arilo de 5 o 6 miembros, heteroarilo de 5 o 6 miembros, y heterociclilo de 3 a 7 miembros, en donde cada uno de los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, y heterociclilo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo de C^1-3, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1-3), -NH², -NH(alquilo de C^1.

³), -N(alquilo de C^1-3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1-3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1-3), -C(=O)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -NHC(=O)(alquilo de C^1-3), -NHC(=NH)NH^z-2(alquilo de C^1-3)^z, y -N(alquilo de C^1-3)C(=NH)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo,

o R⁷², y R⁷³se pueden unir junto con el átomo de nitrógeno al que está unidos para formar un anillo de 5 o 6 miembros, que está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo de C^1-3, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1-3), -NH², -NH(alquilo de C^1.3), -N(alquilo de C^1-3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1-3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1-3), -C(=O)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -NHC(=O)(alquilo de C^1-3), -NHC(=NH)NH^z-2(alquilo de C^1-3)^z, y -N(alquilo de C^1-3)C(=NH)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo;

R⁸¹, R⁸², y R⁸³se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -H, alquilo de C^1-4, alquenilo de C^2-4, alquinilo de C^2-4, cicloalquilo de 3 a 6 miembros, arilo de 5 o 6 miembros, heteroarilo de 5 o 6 miembros, y heterociclilo de 3 a 6 miembros, en donde cada uno de los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, y heterociclilo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo de C^1-3, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1-3), -NH², -NH(alquilo de C^1.

³), -N(alquilo de C^1-3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1-3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1-3), C(=O)NH^2-z(alquilo de C^i-a)^z, -NHC(=O)(alquilo de C^1-3), -NHC(=NH)NH^z-2(alquilo de C^i-a)^z, y -N(alquilo de C^1-3)C(=NH)NH^2-z(alquilo de C^i-3)^z, en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo,

o R⁸²y R⁸³se pueden unir junto con el átomo de nitrógeno al que está unidos para formar un anillo de 5 o 6 miembros, que está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo de C^1-3, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1.3), -NH², -NH(alquilo de C^1.3), -N(alquilo de ^ ^.3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1.3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C ^ ^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1.3), -C(=O)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -NHC(=O)(alquilo de C^1-3), -NHC(=NH)NH^z-2(alquilo de C^1-3)^z, y -N(alquilo de C^1-3)C(=NH)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo;

X¹y X²se seleccionan independientemente de O, S y NR⁸⁴, en donde R⁸⁴es -H o alquilo de C^1-3.

Los sustituyentes de 1^ernivel típicos se seleccionan preferiblemente del grupo que consiste en alquilo de C^1-6, alquenilo de C^2-6, alquinilo de C^2-6, arilo de 3 a 14 miembros (tal como de 5 o 6 miembros), heteroarilo de 3 a 14 miembros (tal como de 5 o 6 miembros), cicloalquilo de 3 a 14 miembros (tal como de 3 a 7 miembros), heterociclilo de 3 a 14 miembros (tal como de 3 a 7 miembros), halógeno, -CN, azido, -NO², -OR⁷¹, -N(R⁷²)(R⁷³), -S(O)^0-2R⁷¹, -S(O)^0-2OR⁷¹, -OS(O)^0-2R⁷¹, -OS(O)^0-2OR⁷¹, -S(O)^0-2N(R⁷²)(R⁷³), -OS(O)^0-2N(R⁷²)(R⁷³), -N(R⁷¹)S(O)^0-2R⁷¹, -NR⁷¹S(O)^0-20R⁷¹, -C(=X¹)R⁷¹, -C(=X¹)X¹R⁷¹, -X¹C(=X¹)R⁷¹, y -X¹C(=X¹)X¹R⁷¹, tal como alquilo de C^1.4, alquenilo de C^2-4, alquinilo de C^2-4, arilo de 5 o 6 miembros, heteroarilo de 5 o 6 miembros, cicloalquilo de 3 a 7 miembros, heterociclilo de 3 a 7 miembros, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1.3), -NH², -NH(alquilo de C^1.3), -N(alquilo de C^1-3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1-3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1-3), -C(=O)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -NHC(=O)(alquilo de C^1-3), -NHC(=NH)NH^z-2(alquilo de C^1-3)^z, y -N(alquilo de C^1-3)C(=NH)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo; X¹se selecciona independientemente de O, S, NH y N(CH³); y R⁷¹, R⁷², y R⁷³son como se ha definido anteriormente o, preferiblemente, se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -H, alquilo de C^1-4, alquenilo de C^2-4, alquinilo de C^2-4, cicloalquilo de 5 o 6 miembros, arilo de 5 o 6 miembros, heteroarilo de 5 o 6 miembros, y heterociclilo de 5 o 6 miembros, en donde cada uno de los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, y heterociclilo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo de C^1-3, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1-3), -NH², -NH(alquilo de C^1-3), -N(alquilo de C^1-3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1-3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1-3), -C(=O)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -NHC(=O)(alquilo de C^1-3), -NHC(=NH)NH^z-2(alquilo de C^1-3)^z, y -N(alquilo de C^1-3)C(=NH)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo; o R⁷²y R⁷³se pueden unir junto con el átomo de nitrógeno al que está unidos para formar un anillo de 5 o 6 miembros, que está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo de C^1-3, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1-3), -NH², -NH(alquilo de C^1.3), -N(alquilo de C^1-3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1-3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1-3), -C(=O)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -NHC(=O)(alquilo de C^1-3), -NHC(=NH)NH^z-2(alquilo de C^1-3)^z, y -N(alquilo de C^1-3)C(=NH)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo.

Los sustituyentes de 2° nivel típicos se seleccionan preferiblemente del grupo que consiste en alquilo de C^1-4, alquenilo de C^2-4, alquinilo de C^2-4, arilo de 5 o 6 miembros, heteroarilo de 5 o 6 miembros, cicloalquilo de 5 o 6 miembros, heterociclilo, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1.3), -NH², -NH(alquilo de C^1.3), -N(alquilo de C^1-3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1-3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1-3), -C(=O)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -NHC(=O)(alquilo de C^1-3), -NHC(=NH)NH^z-2(alquilo de C^1-3)^z, y -N(alquilo de C^1-3)C(=NH)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo.

Los sustituyentes de 3^ernivel típicos se seleccionan preferiblemente del grupo que consiste en fenilo, furanilo, pirrolilo, tienilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, piridilo, piracinilo, pirimidinilo, piridacinilo, formas parcial o completamente hidrogenadas de los grupos anteriores, morfolino, alquilo de C^1-3, halógeno, -CF³, -OH, -OCH³, -SCH³, NH^2-z(CH³)^z, -C(=O)OH y -C(=O)OCH³, en donde z es 0, 1, o 2.

El término “aromático” como se usa en el contexto de hidrocarburos cíclicos (con o sin heteroátomo(s) en la estructura cíclica) significa que la molécula entera tiene que ser aromática. Por ejemplo, si un arilo monocíclico se hidrogena (ya sea parcial o completamente) la estructura cíclica hidrogenada resultante se clasifica como cicloalquilo para los fines de la presente invención. Asimismo, si un arilo bi- o policíclico (tal como naftilo) se hidrogena la estructura bi- o policíclica hidrogenada resultante (tal como 1,2-dihidronaftilo) se clasifica como cicloalquilo para los fines de la presente invención (incluso si un anillo, tal como en 1,2-dihidronaftilo, es todavía aromático). Se hace una distinción similar en la presente invención entre heteroarilo y heterociclilo. Por ejemplo, indolinilo, es decir, una variante dihidro de indolilo, se clasifica como heterociclilo para los fines de la presente invención, ya que solo un anillo de la estructura bicíclica es aromática y uno de los átomos de anillo es un heteroátomo.

La frase “forma parcialmente hidrogenada” de un compuesto o grupo insaturado como se usa en el presente documento significa que parte de la insaturación se ha eliminado añadiendo formalmente hidrógeno al compuesto o grupo inicialmente insaturado sin eliminar todas las fracciones insaturadas. La frase “forma completamente hidrogenada” de un compuesto o grupo insaturado se usa en el presente documento de forma intercambiable con el término “perhidro” y significa que toda la insaturación se ha eliminado añadiendo formalmente hidrógeno al compuesto o grupo inicialmente insaturado. Por ejemplo, formas parcialmente hidrogenadas de un grupo heteroarilo de 5 miembros (que contiene 2 dobles enlaces en el anillo, tal como furano) incluye formas dihidro de dicho grupo heteroarilo de 5 miembros (tal como 2,3-dihidrofurano o 2,5-dihidrofurano), mientras que la forma tetrahidro de dicho grupo heteroarilo de 5 miembros (por ejemplo, tetrahidrofurano, es decir, THF) es una forma completamente hidrogenada (o perhidro) de dicho grupo heteroarilo de 5 miembros. Asimismo, para un grupo heteroarilo de 6 miembros que tiene 3 dobles enlaces en el anillo (tal como piridilo), las formas parcialmente hidrogenadas incluyen formas di- y tetrahidro (tal como di- y tetrahidropiridilo), mientras que la forma hexahidro (tal como piperidinilo en el caso del heteroarilo piridilo) es el derivado completamente hidrogenado (o perhidro) de dicho grupo heteroarilo de 6 miembros. Por consiguiente, una forma hexahidro de un arilo o heteroarilo solo se puede considerar una forma parcialmente hidrogenada según la presente invención si el arilo o heteroarilo contiene al menos 4 fracciones insaturadas que consisten en dobles y triples enlaces entre átomos de anillo.

El término “opcional” u “opcionalmente” como se usa en el presente documento significa que el suceso, circunstancia o condición posteriormente descrita pude ocurrir o no, y que la descripción incluye casos donde dicho suceso, circunstancia o condición ocurre y casos en los que no ocurre.

“ Isómeros” son compuestos que tienen la misma fórmula molecular, pero se diferencian en estructura (“ isómeros estructurales”) o en la colocación geométrica de los grupos y/o átomos funcionales (“estereoisómeros”). Los “enantiómeros” son un par de estereoisómeros que son imágenes especulares no superponibles entre sí. Una “mezcla racémica” o “racemato” contiene un par de enantiómeros en cantidades iguales y se indica por el prefijo (±). Los “diastereómeros” son estereoisómeros que son imágenes especulares no superponibles entre sí. Los “tautómeros” son isómeros estructurales de la misma sustancia química que se convierten espontáneamente uno con otro, incluso cuando están puros.

El término “solvato” como se usa en el presente documento se refiere a un complejo de adición de un material disuelto en un solvente (tal como un solvente orgánico (por ejemplo, un alcohol alifático (tal como metanol, etanol, n-propanol, isopropanol), acetona, acetonitrilo, éter y similares), agua o una mezcla de dos o más de estos líquidos), en donde el complejo de adición existe en la forma de un cristal o cristal mixto. La cantidad de solvente contenida en el complejo de adición puede ser estequiométrica o no estequiométrica. Un “hidrato” es un solvato en donde el solvente es agua.

En compuestos isotópicamente marcados uno o más átomos se sustituyen por un átomo correspondiente que tiene el mismo número de protones, pero se diferencia en el número de neutrones. Por ejemplo, un átomo de hidrógeno se puede sustituir por un átomo de deuterio. Los isótopos ejemplares que se pueden usar en compuestos y procesos de la presente invención incluyen deuterio, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 32S, 36Cl y 125I.

El término “semivida” se refiere al periodo de tiempo que se necesita para eliminar la mitad de la actividad, cantidad, o número de moléculas. En el contexto de la presente invención, la semivida de un compuesto de la presente invención es indicativa para la estabilidad de dicho compuesto.

Los términos “paciente”, “ individuo” o “animal” se refieren a mamíferos. Por ejemplo, los mamíferos en el contexto de la presente invención son seres humanos, primates no humanos, animales domésticos tal como perros, gatos, ovejas, ganado, cabras, cerdos, caballos, etc., animales de laboratorio tal como ratones, ratas, conejos, cobayas, etc., así como animales en captividad tal como animales de zoos. El término “animal” como se usa en el presente documento también incluye seres humanos.

La expresión “enfermedad o trastorno que es tratable por un inhibidor de paracaspasa” como se usa en el presente documento se refiere a una enfermedad/trastorno que se asocia con actividad proteolítica desregulada, en particular constitutiva, de una paracaspasa comparado con el estado en un individuo sano. En una variante, la actividad proteolítica desregulada, en particular constitutiva, de una paracaspasa está causada por una mutación activante (por ejemplo, oncogénica) de CARMA1. En una variante, la actividad proteolítica desregulada, en particular constitutiva, de una paracaspasa está causada por la señalización constitutiva de receptor, preferiblemente por una señalización de receptor de antígeno de células B o T constitutiva. En una variante, la actividad proteolítica desregulada, en particular constitutiva, de una paracaspasa está causada por una mutación activante en un regulador (por ejemplo, activador) de la paracaspasa y/o en un regulador (por ejemplo, activador) de la señalización del receptor de antígeno, por ejemplo, en un regulador (por ejemplo, activador) de la señalización del receptor de antígeno de células B, tal como CD79A y/o CD79B. En una variante preferida, la paracaspasa es MALT1.

La expresión “actividad constitutiva” de una molécula (tal como una enzima o receptor) como se usa en el presente documento significa que la molécula ejerce su actividad biológica (tal como actividad proteolítica) en ausencia de un ligando unido a la molécula.

La expresión “actividad desregulada” de una enzima o receptor como se usa en el presente documento significa que la actividad biológica de la enzima o receptor está aumentada (o incluso constitutiva) ya que (i) una o más moléculas reguladoras inhibidoras de la enzima o receptor que normalmente limitan la actividad de la enzima o receptor con respecto a (1) la eficacia de la enzima o receptor (en donde la eficacia se puede expresar como moles de sustrato convertidos por unidad de tiempo o liberación de segundo(s) mensajero(s) por unidad de tiempo y/o (2) el periodo de tiempo durante el que la enzima o receptor es activo están alterados (por ejemplo, mutado o inhibido), disminuyendo de esta manera (o incluso suprimiendo) la actividad de las moléculas reguladoras inhibidoras, y/o (ii) una o más moléculas reguladoras activadoras de la enzima o receptor que aumentan la actividad de la enzima o receptor con respecto a (1) la eficacia de la enzima o receptor (en donde la eficacia se puede expresar como moles de sustrato convertidos por unidad de tiempo o liberación de segundo(s) mensajero(s) por unidad de tiempo y/o (2) el periodo de tiempo durante el que la enzima o receptor es activo están alterados (por ejemplo, mutado o aumentado), aumentando de esta manera la actividad de las moléculas reguladoras activadoras.

La expresión “mutación activadora” en una molécula (tal como una proteína o péptido) como se usa en el presente documento significa que (i) si la molécula sin mutar es un inhibidor, la mutación reduce o suprime la actividad inhibidora de la molécula, o (ii) si la molécula sin mutar es un activador, la mutación aumenta la actividad de la molécula.

La expresión “reducido” en relación con una propiedad farmacológica de un compuesto (por ejemplo, una propiedad farmacológica de un compuesto de la invención), tal como en “actividad reducida hacia el receptor de dopamina” o “efecto sedante y/o antipsicótico reducido, preferiblemente significa una reducción de la propiedad farmacológica en hasta o en al menos el 10%, en hasta o en al menos el 20%, en hasta o en al menos el 30%, en hasta o en al menos el 40%, en hasta o en al menos el 50%, en hasta o en al menos el 60%, en hasta o en al menos el 70%, en hasta o en al menos el 80%, en hasta o en al menos el 90%, en hasta o en al menos el 100%. Preferiblemente, la reducción se compara con un compuesto de referencia, tal como (R)-mepacina, (±)-mepacina y/o tioridacina.

El término “grupo saliente” como se usa en el presente documento se refiere a un fragmento molecular que sale con un par de electrones en el corte de un enlace heterolítico. La capacidad de un grupo saliente para salir en general se correlaciona con el pKa del ácido conjugado, estando asociado menor pKa con mejor capacidad de grupo saliente. Puesto que la capacidad del grupo saliente es un fenómeno cinético, que se refiere a una velocidad de reacción, mientras el pKa es un fenómeno termodinámico, que describe la posición de un equilibrio, la correlación no es perfecta. Sin embargo, es una regla general que los aniones más altamente estabilizados actúan como mejores grupos salientes. Los grupos salientes preferidos son los se pueden sustituir fácilmente en una reacción de sustitución (por ejemplo, LG-R' Y^-^ Y-R' lG-) que un grupo OH en la reacción de sustitución (por ejemplo, HO-R' Y^-^ Y-R' HO-) en condiciones de reacción comparables. Los grupos salientes ejemplares según la presente invención incluyen halógenos (es decir, -Cl, -Br, o -I) y fracciones sulfonato. Las fracciones sulfonato preferidas tienen la fórmula -OS(O)²R, en donde R es F, Cl, alquilo que tiene 1, 2, 3, 4, 5, o 6 átomos de carbono, alquilo perfluorado que tiene 1, 2, 3, 4, 5, o 6 átomos de carbono (tal como CF³o nonafluorobutilo), o arilo (por ejemplo, que tiene de 6 a 10 átomos de carbono, tal como fenilo o naftilo), opcionalmente sustituidos con de 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógenos (F, Cl, Br, I), alquilo que tiene 1, 2, 3, 4, 5, o 6 átomos de carbono, y nitro. Los grupos salientes ejemplares incluyen -Cl, -Br, -I, 4-toluenosulfonato (tosilato), 4-bromobencenosulfonato (brosilato), 4-nitrobencenesulfonato (4-nosilato), 2-nitrobencenosulfonato (2-nosilato), trifluorometanosulfonato (triflato), nonafluorobutanosulfonato (nonaflato), metilsulfonato (mesilato), 2,2,2-trifluoroetanosulfonato (tresilato), y fluorosulfonato. Véase también M.B. Smith y J. March, "March's advanced organic chemistry: reactions, mechanisms, and structure", 5a edición, John Wiley & Sons, Inc., 2001, en particular las páginas 445 a 449.

Una “base química” como se usa en el presente documento es cualquier compuesto que es capaz de recibir uno o más protones (teoría de ácido-base de Bnansted-Lowry). En una forma de realización, la base química es no nucleófila. Esto es preferido si el uso de una base química nucleófila produce reacciones secundarias indeseables (tal como inversión en un átomo asimétrico que produce racemización). La base química puede ser inorgánica (por ejemplo, NH³, un hidróxido metálico (tal como NaOH, KOH), una sal carbonato (tal como K²CO³, o Cs²CO³), o NaH) u orgánica (por ejemplo, una amina orgánica, tal como una amina cíclica (por ejemplo, 1,8-diazabicicloundec-7-eno (DBU)), una amina alifática (por ejemplo, una amina lineal o ramificada que puede tener 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, o 12 átomos de carbono y que tiene al menos un grupo amina primaria, secundaria o terciaria; los ejemplos incluyen trialquilaminas (tal como trietilamina, trimetilamina)), un alcóxido (tal como tert-butóxido de sodio o tert-butóxido de potasio), una sal amina (tal como diisopropilamina de litio (LDA) o tetrametilpiperidida de litio (LiTMP)), o una amida basada en silicio (tal como bis(trimetilsilil)amida de sodio (NaHMDS) o bis(trimetilsilil)amida de potasio (KHMDS))). Las aminas orgánicas preferidas incluyen trialquilaminas, en donde los grupos alquilo tienen independientemente 1, 2, 3, 4, 5, o 6 átomos de carbono, tal como trietilamina (TEA), N,N-diisopropiletilamina (DIEA) o trimetilamina.

Compuestos de la invención

Se divulga en el presente documento 10-{[(3S)-1-metilpiperidin-3-il]metil}-10H-fenoticina (el enantiómero (S) de mepacina, en lo que sigue (S)-mepacina) que tiene la siguiente fórmula:

Se pretende que (S)-mepacina abarque no solo (S)-mepacina como se representa, sino también sus solvatos (por ejemplo, hidratos), sales (en particular, sales farmacéuticamente aceptables), formas cristalinas, formas no cristalinas, formas amorfas, formas sin marcar y formas isotópicamente marcadas.

Puesto que (S)-mepacina contiene una funcionalidad básica puede formar sales con una variedad de ácidos inorgánicos u orgánicos. Los ácidos inorgánicos y orgánicos ejemplares, así como sales de adición ácida ejemplares de (S)-mepacina se dan en la definición de “sal farmacéuticamente aceptable” en la sección de “Composiciones farmacéuticas”, posteriormente. En una forma de realización preferida, la presente invención proporciona (S)-mepacina como su sal clorhidrato, acetato, o tartrato. (S)-Mepacina se puede convertir a su sal de adición ácida por medios convencionales que conoce el experto en la materia. La forma de base libre de (S)-mepacina se puede regenerar poniendo en contacto la sal con una base y aislando el compuesto parental usando medios convencionales (por ejemplo, uno o más de los siguientes: lavado, filtración, cromatografía líquida (normal o de fase inversa), extracción con dos solventes inmiscibles, concentración a presión reducida, y recristalización).

Según la invención, se puede proporcionar (S)-mepacina como una sustancia enantioméricamente pura. El término “enantioméricamente pura” significa que (S)-mepacina está esencialmente libre (o está libre) de su enantiómero (R). Por ejemplo, (S)-mepacina enantioméricamente pura significa que (S)-mepacina está presente en una proporción enantiomérica (er, S:R) de > 99, tal como > 99,1, > 99,2, > 99,3, > 99,4, > 99,5, > 99,6, > 99,7, > 99,8, > 99,9, > 99,95, > 99,99, > 99,995, o > 99,999. La expresión “(S)-mepacina está libre de su enantiómero (R)” significa que en una preparación de (S)-mepacina, (R)-mepacina no es detectable por medios convencionales.

Sorprendentemente, los inventores han encontrado que (S)-mepacina muestra una afinidad de unión mucho mayor y actividad inhibidora hacia MALT1 que (R)-mepacina o (±)-mepacina. En contraste, los enantiómeros de tioridacina, es decir, compuestos que son estructuralmente muy similares a mepacina y que también contienen un átomo de carbono asimétrico (en el anillo piperidinilo), no se diferencian entre sí con respecto a su afinidad de unión y actividad inhibidora hacia MALT1. En una forma de realización, los compuestos de la invención muestran propiedades farmacológicas adicionales (por ejemplo, biodisponibilidad, toxicidad, efectos secundarios (tal como con respecto a antagonismo al receptor de dopamina D2, efectos sedantes y/o antipsicóticos), dosificación, cumplimiento del paciente, compatibilidad, estabilidad, semivida, etc.), que son en al menos un aspecto, superiores a las propiedades farmacológicas mostradas por (R)-mepacina, (±)-mepacina y/o tioridacina. En una variante preferida, los compuestos divulgados reducen la actividad hacia el receptor de dopamina D2 (en particular, antagonismos del receptor de dopamina D2 reducido), preferiblemente comparado con un compuesto de referencia (por ejemplo, (R)-mepacina, (±)-mepacina y/o tioridacina). Se prefiere que los compuestos de la invención muestren efectos sedantes y/o antipsicóticos reducidos, por ejemplo, comparado con un compuesto de referencia (tal como (R)-mepacina, (±)-mepacina y/o tioridacina).

Composiciones farmacéuticas

Se divulga además en el presente documento una composición farmacéutica que comprende un compuesto del primer aspecto y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. En una forma de realización, la composición farmacéutica está esencialmente libre (o está libre) de (R)-mepacina. Por ejemplo, una “composición farmacéutica que está esencialmente libre de (R)-mepacina” significa que (S)-mepacina está presente en la composición farmacéutica en una proporción enantiomérica (er, S:R) de > 99, tal como > 99,1, > 99,2, > 99,3, > 99,4, > 99,5, > 99,6, > 99,7, > 99,8, > 99,9, > 99,95, > 99,99, > 99,995, o > 99,999. La expresión que una “composición farmacéutica está libre de (R)-mepacina” significa que (R)-mepacina no es detectable en dicha composición por medios convencionales.

La composición farmacéutica se puede administrar a un individuo por cualquier ruta, tal como por vía entérica, o parenteral.

Las composiciones divulgadas en el presente documento en general se aplican en “cantidades farmacéuticamente aceptables” y en “preparaciones farmacéuticamente aceptables”. Tales composiciones pueden contener sales, tampones, agentes conservantes, soportes y opcionalmente otros agentes terapéuticos. Las “sales farmacéuticamente aceptables” comprenden, por ejemplo, sales de adición ácida que se pueden, por ejemplo, formar mezclando una solución de compuestos con una solución de un ácido farmacéuticamente aceptable tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbónico o ácido fosfórico. Además, cuando el compuesto porta una fracción ácida, las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas del mismo pueden incluir sales de metales alcalinos (por ejemplo, sales de sodio o potasio); sales de metales alcalinotérreos (por ejemplo, sales de calcio o magnesio); y sales formadas con ligandos orgánicos adecuados (por ejemplo, cationes amonio, amonio cuaternario y amina formados usando contraiones tal como haluro, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, alquilsulfonato y arilsulfonato). Los ejemplos ilustrativos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no están limitados a, acetato, adipato, alginato, arginato, ascorbato, aspartato, bencenesulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, butirato, edetato de calcio, canforato, canforsulfonato, cansilato, carbonato, cloruro, citrato, clavulanato, ciclopentanopropionato, digluconato, diclorhidrato, dodecilsulfato, edetato, edisilato, estolato, esilato, etanosulfonato, formiato, fumarato, galactato, galacturonato, gluceptato, glucoheptonato, gluconato, glutamato, glicerofosfato, glicolilarsanilato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, yodhidrato, 2-hidroxi-etanosulfonato, hidroxinaftoato, yoduro, isobutirato, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metanosulfonato, metilsulfato, mucato, 2-naftalenosulfonato, napsilato, nicotinato, nitrato, N-metilglucamina sal de amonio, oleato, oxalato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato/difosfato, ftalato, picrato, pivalato, poligalacturonato, propionato, salicilato, estearato, sulfato, suberato, succinato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietyoduro, undecanoato, valerato, y similares (véase, por ejemplo, Berge et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977)).

El término “excipiente” cuando se usa en el presente documento se pretende que indique todas las sustancias en una composición farmacéutica que no son principios activos (por ejemplo, que son ingredientes terapéuticamente inactivos que no muestran ningún efecto terapéutico en la cantidad/concentración usada), tal como, por ejemplo, soportes, aglutinantes, lubricantes, espesantes, agentes tensioactivos, conservantes, emulsionantes, tampones, agentes saborizantes, colorantes o antioxidantes.

Las composiciones divulgadas en el presente documento pueden comprender un soporte farmacéuticamente aceptable. Como se usa en el presente documento, “soporte farmacéuticamente aceptable” incluye cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y de retraso de absorción, y similares que son fisiológicamente compatibles. El “soporte farmacéuticamente aceptable” puede estar en forma de un sólido, semisólido, líquido o combinaciones de los mismos. Preferiblemente, el soporte es adecuado para la administración entérica (tal como oral) o parenteral (tal como administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, raquídea o epidérmica (por ejemplo, por inyección o infusión)). Dependiendo de la ruta de administración, el compuesto activo, es decir, el compuesto divulgado en el presente documento, puede estar recubierto en un material para proteger el compuesto de la acción de ácidos y otras condiciones naturales que pueden inactivar el compuesto.

Una composición divulgada en el presente documento se puede administrar por una variedad de métodos conocidos en la técnica. Como apreciará el experto en la materia, la ruta y/o modo de administración variará dependiendo de los resultados deseados. Los compuestos activos se pueden preparar con soportes que protegerán el compuesto contra la liberación rápida, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes, parches transdérmicos, y sistemas de administración microencapsulados. Se pueden usar polímeros biodegradables, biocompatibles, tal como acetato de etilenvinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico. Los métodos para la preparación de tales formulaciones en general los conocen los expertos en la materia. Véase, por ejemplo, "Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems", J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, 1978.

Para administrar un compuesto de la invención por ciertas rutas de administración, puede ser necesario recubrir el compuesto con, o coadministrar el compuesto con, un material para prevenir su inactivación. Por ejemplo, el compuesto se puede administrar a un individuo en un soporte apropiado, por ejemplo, liposomas o un diluyente. Los diluyentes farmacéuticamente aceptables incluyen solución salina y soluciones tampón acuosas. Los liposomas incluyen emulsiones CGF de agua en aceite en agua, así como liposomas convencionales (Strejan et al., J. Neuroimmunol. 1984, 7, 27).

Los soportes farmacéuticamente aceptables incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. El uso de tales medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas se conoce en la técnica. Excepto en cuanto que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el compuesto activo, se contempla el uso de los mismos en las composiciones farmacéuticas de la invención. También se pueden incorporar compuestos activos suplementarios en las composiciones.

Las composiciones farmacéuticas típicamente deben ser estériles y estables en las condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición se puede formular como una solución, microemulsión, liposoma, u otra estructura ordenada adecuada para alta concentración de fármaco. El soporte puede ser un solvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, y polietilenglicol líquido, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos. Se puede mantener la fluidez apropiada, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, por el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersión y por el uso de tensioactivos. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tal como manitol, sorbitol, o cloruro de sodio en la composición. La absorción prolongada de las composiciones inyectables se puede producir incluyendo en la composición un agente que retrase la absorción, por ejemplo, sales monoestearato y gelatina.

Las soluciones inyectables estériles se pueden preparar incorporando el compuesto activo en la cantidad requerida en un solvente apropiado con uno o una combinación de ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido por esterilización con microfiltración.

En general, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son secado al vacío y secado por congelación (liofilización) que dan un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional de una solución previamente esterilizada filtrada del mismo.

Las pautas posológicas se ajustan para proporcionar la respuesta deseada óptima (por ejemplo, una respuesta terapéutica). Por ejemplo, se puede administrar una inyección en embolada única, se pueden administrar varias dosis divididas a lo largo del tiempo o la dosis se puede reducir o aumentar proporcionalmente según indiquen las exigencias de la situación terapéutica. Es especialmente ventajoso formular composiciones parenterales en forma de preparación farmacéutica para facilidad de administración y uniformidad de dosis. La forma farmacéutica como se usa en el presente documento se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para los individuos que se van a tratar; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado junto con el soporte farmacéutico requerido. La especificación para las formas farmacéuticas de la invención está dictada por y directamente dependientes de (a) las características únicas del compuesto activo y el efecto terapéutico particular que se va a lograr, y (b) las limitaciones inherentes en la técnica de combinar tal compuesto activo para el tratamiento de sensibilidad en individuos.

Los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) antioxidantes solubles en agua, tal como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y similares; (2) antioxidantes solubles en lípidos, tal como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol, y similares; y (3) agentes quelantes de metales, tal como ácido cítrico, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico, y similares.

Para formulaciones terapéuticas, las composiciones como se divulgan en el presente documento incluyen las adecuadas para administración entérica (tal como oral o rectal) o administración parenteral (tal como nasal, tópica (incluyendo vaginal, yugal y sublingual)). Las composiciones se pueden presentar convenientemente en forma farmacéuticas unitarias y se pueden preparar por cualquier método conocido en el arte de la farmacia. La cantidad de principio activo (en particular, la cantidad del compuesto divulgado en el presente documento) que se puede combinar con un material soporte para producir una composición farmacéutica (tal como una forma farmacéutica individual) variará dependiendo del individuo que se trata, y el modo particular de administración. La cantidad de principio activo que se puede combinar con un material soporte para producir una forma farmacéutica individual en general será esa cantidad de la composición que produce un efecto terapéutico.

En general, del 100% (para las formulaciones/composiciones farmacéuticas), la cantidad del principio activo (en particular, la cantidad del compuesto divulgado en el presente documento, opcionalmente junto con otros agentes terapéuticamente activos, si están presentes en las formulaciones/composiciones farmacéuticas) variará desde aproximadamente el 0,01% hasta aproximadamente el 99%, preferiblemente desde aproximadamente el 0,1% hasta aproximadamente el 70%, lo más preferiblemente desde aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 30%, en donde el resto preferiblemente está compuesto de uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

Las composiciones divulgadas en el presente documento que son adecuadas para la administración vaginal también incluyen óvulos vaginales, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en espray que contienen tales soportes como se sabe en la técnica que son apropiadas. Las formas farmacéuticas para la administración tópica o transdérmica de composiciones de esta invención incluyen polvos espráis, pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, soluciones, parches e inhalantes. El compuesto activo se puede mezclar en condiciones estériles con un soporte farmacéuticamente aceptable, y con cualquier conservante, tampón, o propelente que se pueda requerir.

Las expresiones “administración entérica” y “administrado por vía entérica” como se usan en el presente documento significan que el fármaco administrado se absorbe por el estómago y/o el intestino. Los ejemplos de administración entérica incluyen administración oral y rectal. Las expresiones “administración parenteral” y “administrado por vía parenteral” como se usan en el presente documento significan modos de administración diferentes de la administración entérica, habitualmente por inyección o aplicación tópica, e incluyen, sin limitación, administración intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraósea, intraorbital, intracardiaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, intracerebral, intracerebroventricular, subaracnoidea, intrarraquídea, epidural e intracisternal (tal como por inyección y/o infusión), así como administración tópica (por ejemplo, epicutánea, inhalación, o a través de membranas mucosas (tal como yugal, sublingual o vaginal)).

Los ejemplos de soportes acuosos y no acuosos adecuados que se pueden emplear en las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen agua, etanol, polioles (tal como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tal como aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables, tal como oleato de etilo. La fluidez apropiada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de materiales de recubrimiento, tal como lecitina, por el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones, y por el uso de tensioactivos.

Estas composiciones también pueden contener adyuvantes tales como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes de regulación del pH, y agentes dispersantes. La prevención de la presencia de microorganismos se puede asegurar tanto por procedimientos de esterilización, como por la inclusión de varios agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabeno, clorobutanol, ácido fenolsórbico, y similares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, tal como azúcares, cloruro de sodio, y similares en las composiciones. Además, la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable se puede producir por la inclusión de agentes que retrasan la absorción tal como monoestearato de aluminio y gelatina.

Independientemente de la ruta de administración seleccionada, los compuestos divulgados en el presente documento, que se pueden usar en una forma hidratada adecuada, y/o las composiciones farmacéuticas divulgadas en el presente documento, se formulan en formas posológicas farmacéuticamente aceptables por métodos convencionales que conocen los expertos en la materia (cf., por ejemplo, Remington, "The Science and Practice of Pharmacy", editado por Allen, Loyd V., Jr., 22a edición, Pharmaceutical Sciences, September 2012; Ansel et al., "Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems", 7a edición, Lippincott Williams & Wilkins Publishers, 1999).

Los niveles de dosis reales de los principios activos en las composiciones farmacéuticas divulgadas en el presente documento se pueden variar de modo que se obtenga una cantidad del principio activo que sea eficaz para alcanzar la respuesta terapéutica deseada para un paciente, composición y modo de administración particulares, sin que sea tóxico al paciente. El nivel de dosis seleccionado dependerá que una variedad de factores farmacocinéticos incluyendo la actividad de las composiciones particulares de la presente invención empleadas, la ruta de administración, el tiempo de administración, la velocidad de excreción del compuesto particular que se emplea, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usados en combinación con las composiciones particulares empleadas, la edad, sexo, peso, estado, salud general y antecedentes médicos del paciente que se trata, y factores similares bien conocidos en la técnicas médicas.

Un médico o veterinario que sean expertos en la materia pueden fácilmente determinar y recetar la cantidad eficaz de la composición farmacéutica requerida. Por ejemplo, el médico o veterinario podría empezar con dosis de los compuestos divulgados en el presente documento empleadas en la composición farmacéutica a niveles menores que los requeridos con el fin de lograr el efecto terapéutico deseado y aumentar gradualmente la dosis hasta que se logre el efecto deseado. En general, una dosis diaria adecuada de una composición divulgada en el presente documento será esa cantidad del compuesto que es la menor dosis eficaz para producir un efecto terapéutico. Tal dosis eficaz en general dependerá de los factores descritos anteriormente. Se prefiere que la administración sea oral, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, o subcutánea, preferiblemente administrada próxima al sitio de la diana. Si se desea, la dosis diaria eficaz de una composición terapéutica se puede administrar como dos, tres, cuatro, cinco, seis o más subdosis administradas por separado a intervalos apropiados a lo largo del día, opcionalmente en formas posológicas unitarias. Mientras es posible que un compuesto divulgado en el presente documento se administre solo, es preferible administrar el compuesto como una formulación/composición farmacéutica.

En una variante, los compuestos o composiciones divulgados en el presente documento se pueden administrar por infusión, preferiblemente infusión continua lenta durante un largo periodo, tal como más de 24 horas, con el fin de reducir los efectos secundarios tóxicos. La administración también se puede realizar por infusión continua durante un periodo de 2 a 24 horas, tal como de 2 a 12 horas. Tal pauta se puede repetir una o más veces según sea necesario, por ejemplo, después de 6 meses o 12 meses.

En aun otra variante, los compuestos o composiciones divulgados en el presente documento se administran para terapia de mantenimiento, tal como, por ejemplo, una vez a la semana durante un periodo de 6 meses o más.

Para la administración oral, la composición farmacéutica divulgada en el presente documento puede tomar la forma de, por ejemplo, comprimidos o cápsulas preparadas por medios convencionales con excipientes farmacéuticamente aceptables tal como agentes aglutinantes (por ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona, hidroxipropilmetilcelulosa), rellenos (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina, hidrogenofosfato de calcio), lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco, sílice), disgregantes (por ejemplo, fécula de patata, glicolato sódico de almidón), o agentes humectantes (por ejemplo, lauril sulfato de sodio). Las preparaciones líquidas para la administración oral pueden estar en forma de, por ejemplo, soluciones, jarabes, o suspensiones, o se pueden presentar como un producto seco para constitución con agua u otro vehículo adecuado antes del uso. Tal preparación líquida se puede preparar por medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables tal como agentes de suspensión (por ejemplo, sorbitol, jarabe, derivados de celulosa, grasas comestibles hidrogenadas), agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitina, goma arábiga), vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendra, ésteres oleaginosos, alcohol etílico, aceites vegetales fraccionados), conservantes (por ejemplo, p-hidroxicarbonatos de metilo o propilo, ácidos sóricos). Las preparaciones también pueden contener sales tampón, agentes saborizantes, colorantes y edulcorantes según se juzgue apropiado. Las preparaciones para la administración oral se pueden formular adecuadamente para dar liberación controlada de la composición farmacéutica de la invención.

La composición farmacéutica se puede formular como un supositorio, con aglutinantes y soportes tradicionales tal como triglicéridos. La formulación oral puede incluir soportes estándar tal como calidades farmacéuticas de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, celulosa, carbonato de magnesio, etc.

Para la administración por inhalación, la composición farmacéutica divulgada en el presente documento se administra convenientemente en forma de una presentación en espray aerosol desde un envase presurizado o un nebulizador, con el uso de un propelente adecuado (por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono, nitrógeno, u otro gas adecuado). En el caso de un aerosol presurizado, la unidad posológica se puede determinar proporcionando una válvula para administrar una cantidad medida. Se pueden formular cápsulas y cartuchos de, por ejemplo, gelatina, para uso en un inhalador o insuflador que contengan una mezcla de polvo de la composición farmacéutica de la invención y una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón.

La composición farmacéutica divulgada en el presente documento se puede formular para administración parenteral por inyección, por ejemplo, por inyección en embolada o infusión continua. Las formulaciones para inyección se pueden presentar en formas farmacéuticas unitarias (por ejemplo, en ampolla, en envase multidosis), y con un conservante añadido. La composición farmacéutica de la invención puede tomar tales formas como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleaginosos o acuosos, y puede contener agentes de formulación tal como agentes de suspensión, estabilización o dispersión. Alternativamente, el agente puede estar en forma de polvo para constitución con un vehículo adecuado (por ejemplo, agua sin pirógenos estéril) antes del uso. Típicamente, las composiciones para administración intravenosa son soluciones en un tampón acuoso isotónico estéril. Donde sea necesario, la composición también puede incluir un agente solubilizante y un anestésico local tal como lignocaína para aliviar el dolor en el sitio de inyección. En general, los ingredientes se suministran o bien por separado o mezclados en una forma posológica unitaria, por ejemplo, como polvo liofilizado seco o concentrado sin agua en un envase herméticamente sellado tal como un ampolla o bolsita indicando la cantidad de agente activo. Donde la composición se va a administrar por infusión, se puede dispersar con una botella de infusión que contiene agua o solución salina de calidad farmacéutica estéril. Donde la composición se administra por inyección, se puede proporcionar una ampolla de agua para inyección o solución salina estéril de modo que los ingredientes se puedan mezclar antes de la administración.

Las composiciones terapéuticas se pueden administrar con dispositivos médicos conocidos en la técnica. Por ejemplo, en una variante preferida, una composición terapéutica de la invención se puede administrar con un dispositivo de inyección hipodérmica sin aguja, tal como los dispositivos divulgados en los documentos US 5.399.163; US 5.383.851; u S 5.312.335; US 5.064.413; Us 4.941.880; US 4.790.824; o US 4.596.556. Los ejemplos de implantes bien conocidos y módulos útiles en la presente invención incluyen los descritos en: documento US 4.487.603, que divulga una bomba de microinfusión implantable para dispensar medicación a una velocidad controlada; documento US 4.486.194, que divulga un dispositivo terapéutico para administrar medicamentos a través de la piel; documento US 4.447.233, que divulga una bomba de infusión de medicación para administrar medicación a una velocidad de infusión precisa; documento US 4.447.234, que divulga un aparato de infusión implantable de flujo variable para la administración de fármaco continua; documento US 4.439.196, que divulga un sistema de administración de fármacos osmótico que tiene compartimentos multicámara; y documento US 4.475.196, que divulga un sistema de administración de fármacos osmótico.

Los expertos en la materia conocen muchos otros de tales implantes, sistemas de administración, y módulos. En ciertas variantes, los compuestos de la invención se pueden formular para asegurar distribución apropiada in vivo. Por ejemplo, la barrera hematoencefálica (BHE) excluye muchos compuestos muy hidrofílicos. Para asegurar que los compuestos terapéuticos de la invención cruzan la BHE (si se desea), se pueden formular, por ejemplo, en liposomas. Para métodos de fabricación de liposomas, véase, por ejemplo, los documentos US 4.522.811; US 5.374.548; y US 5.399.331. Los liposomas pueden comprender una o más fracciones que se transportan selectivamente a células u órganos específicos, y por tanto aumentan la administración de fármaco dirigida (véase, por ejemplo, Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29: 685). Las fracciones de direccionamiento ejemplares incluyen folato o biotina (véase, por ejemplo, documento US 5.416.016 a Low et al.); manósidos (Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun.

153: 1038); anticuerpos (P.G. Bloeman et al. (1995) FEBS Lett. 357: 140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39: 180); y receptor de proteína A tensioactivo (Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233: 134).

En una variante, los compuestos divulgados en el presente documento se formulan en liposomas. En una forma de realización más preferida, los liposomas incluyen una fracción de direccionamiento. En una variante lo más preferida, los compuestos terapéuticos en los liposomas se administran por inyección en embolada a un sitio próximo al área deseada, por ejemplo, el sitio de un tumor (por ejemplo, cáncer). La composición debe ser fluida al grado que exista fácil jeringabilidad. Debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento y se debe conservar frente a la acción contaminante de microorganismos tal como bacterias y hongos.

Una “dosis terapéuticamente eficaz” para terapia tumoral (por ejemplo, terapia contra el cáncer) se puede medir por respuestas de tumor objetivo (por ejemplo, cáncer) que pueden ser completas o parciales. Una respuesta completa (RC) se define como sin evidencia clínica, radiológica u otra de la enfermedad. Una respuesta parcial (RP) resulta de una reducción en un tamaño de tumor (por ejemplo, cáncer) agregado de más del 50%. La mediana de tiempo a evolución es una medida que caracteriza la durabilidad de la respuesta del tumor objetivo.

Una “dosis terapéuticamente eficaz” para terapia tumoral (por ejemplo, terapia contra el cáncer) también se puede medir por su capacidad para estabilizar la evolución de la enfermedad. La capacidad de un compuesto para inhibir un tumor (por ejemplo, cáncer) se puede evaluar en un sistema modelo animal predictivo de eficacia en tumores humanos (por ejemplo, cánceres humanos). Alternativamente, esta propiedad de una composición se puede evaluar examinando la capacidad del compuesto para inhibir crecimiento celular o apoptosis por ensayos in vitro que conoce el experto en la materia. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto terapéutico puede disminuir el tamaño del tumor (por ejemplo, tamaño de cáncer), o mejorar de otra manera los síntomas en un individuo. Un experto en la materia sería capaz de determinar tales cantidades en base a tales factores como el tamaño del individuo, la gravedad de los síntomas del individuo, y la composición particular o ruta de administración seleccionada.

La composición debe ser estéril y fluida al grado de que la composición sea administrable por jeringa. Además de agua, el soporte puede ser una solución salina tamponada isotónica, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, y polietilenglicol líquido, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos.

Una composición farmacéutica divulgada en el presente documento también, si se desea, se presenta en un paquete, o dispositivo dispensador que puede contener una o más formas posológicas unitarias que contienen dicho agente. El paquete puede, por ejemplo, comprender hoja metálica o plástica, tal como un blíster. El paquete o dispositivo dispensador puede estar acompañado con instrucciones para la administración.

La composición farmacéutica divulgada en el presente documento se puede administrar como el único agente activo o se puede administrar en combinación con otros agentes terapéuticamente activos.

Inhibición de la actividad paracaspacasa y aplicaciones terapéuticas

Se divulga además en el presente documento un compuesto del primer aspecto o una composición farmacéutica del segundo aspecto para inhibir una paracaspasa y para uso en terapia. En una variante, se utiliza (S)-mepacina enantioméricamente pura y/o la composición farmacéutica está esencialmente libre de (R)-mepacina.

Se contempla que el compuesto divulgado en el presente documento se pueda usar para inhibir una paracaspasa in vitro, tal como en una célula aislada, un cultivo celular aislado, o una muestra aislada de un sujeto.

Como se demuestra en los ejemplos posteriormente, los compuestos divulgados en el presente documento se pueden usar para tratar una enfermedad o trastorno que sea tratable por un inhibidor de una paracaspasa, en particular para tratar un cáncer que se asocia con actividad proteolítica desregulada, en particular constitutiva, de una paracaspasa comparada con el estado en un individuo sano.

En una variante, la paracaspasa es MALT1. En una variante preferida, la enfermedad o trastorno que es tratable por un inhibidor de una paracaspasa es un linfoma, preferiblemente linfoma de tejido linfoide asociado a mucosa (MALT) o linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), tal como subtipo de células B activadas de linfoma difuso de células B grandes (ABC-DLBCL). En una variante preferida, la enfermedad o trastorno que es tratable por un inhibidor de una paracaspasa es linfoma ABC-DLBCL o MALT.

Como se describe en el presente documento, el linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) es un tipo de linfoma agresivo. Un subtipo principal de DLBCL que se ha identificado basado en su actividad genética es el subtipo de células B de linfoma difuso de células B grandes (ABC-DLBCL). Como se ha expuesto anteriormente, Ferch et al., Exp. Med. 2009, 206, 2313-2320 mostraron que las células del linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) de tipo células B activadas agresivo (ABC) poseen complejos CARD11-BCL10-MALT1 (CBM) constitutivamente ensamblados que continua y selectivamente procesan A20. Además, la inhibición de la paracaspasa MALT1 produce muerte celular y retraso de crecimiento de ABC-DLBCL.

El linfoma MALT es un cáncer de los linfocitos células B. Habitualmente afecta a personas mayores que están en los 60. La mayoría de los linfomas no hodgkinianos (NHL) empiezan en los ganglios linfáticos, pero el linfoma MALT empieza en un tipo de tejido linfático llamado tejido linfoide asociado a mucosa (MALT). El estómago es el área más común para que el linfoma MALT se desarrolle, pero también puede empezar en otros órganos tal como el pulmón, tiroides, glándula salivar o intestino. Los linfomas MALT pueden empezar en áreas del cuerpo donde ha habido una infección o cuando la persona tiene una afección autoinmunitaria que afecta esa área. Puesto que el linfoma MALT se desarrolla fuera de los ganglios linfáticos, también se conoce como linfoma extraganglionar. El linfoma MALT gástrico está frecuentemente asociado (72-98%) con inflamación crónica como resultado de la presencia de Helicobacter pylori (Parsonnet J. (1994). New Engl. J. Med. 330 (18): 1267-71). El diagnóstico inicial se hace por biopsia de lesiones sospechosas en esofagogastroduodenoscopia (EGD, endoscopia superior). También se hacen ensayos simultáneos para H. pylori para detectar la presencia de este microbio. En otros sitios, también se sospecha la estimulación inmunitaria crónica en la patogénesis (por ejemplo, asociación entre enfermedades autoinmunitarias crónicas tal como síndrome de Sjogren y tiroiditis de Hashimoto, y linfoma MALT de la glándula salivar y el tiroides). En linfoma MALT la translocación frecuente de t(11;18)(q21;q21) crea una fusión entre el extremo C de MALT1 incluyendo el dominio paracaspasa y el extremo N de IAP2. El dominio paracaspasa de la proteína de fusión IAP2-MALT1 cataliza el corte de NIK y mediante ello aumenta la activación no canónica de NF-kB, que confiere resistencia a apoptosis (Rosebeck et al., Science 2011, 331, 468-472; Isaacson y Du, Nat. Rev. Cáncer 2004, 4, 644-53). Se han identificado dos translocaciones adicionales: t(1;14)(p22;q32) que desregula BCL10, y t(14;18)(q32;q21), que desregula MALT1. Se cree que las tres translocaciones activan la misma ruta, es decir, la ruta de API2-MALT.

Por tanto, los ejemplos en el presente documento posteriormente indican que con respecto a la inhibición de MALT1 y, por tanto, para el tratamiento de linfoma MALT y ABC-DLBCL, (S)-mepacina es mucho más eficaz que su enantiómero (R) o los enantiómeros estructuralmente muy similares de tioridacina.

Por tanto, en el presente documento se divulga (i) un compuesto divulgado en el presente documento (o una composición farmacéutica que comprende tal compuesto opcionalmente junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable) para uso en un método de tratar cualquier enfermedad o trastorno que sea tratable por un inhibidor de una paracaspasa en un individuo y (ii) un método de tratar una enfermedad o trastorno que es tratable por un inhibidor de una paracaspasa en un individuo, que comprende administrar una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto divulgado en el presente documento (o una composición farmacéutica que comprende tal compuesto opcionalmente junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable) al individuo. A este respecto, la enfermedad o trastorno que es tratable por un inhibidor de una paracaspasa es preferiblemente cáncer, más preferiblemente un cáncer que se asocia con actividad proteolítica desregulada (en particular constitutiva) de una paracaspasa comparado con el estado en un individuo sano. Preferiblemente, la enfermedad o trastorno que es tratable por un inhibidor de una paracaspasa es un linfoma, preferiblemente un linfoma extraganglionar, tal como un linfoma del estómago, tiroides, glándula salivar o intestino. Lo más preferiblemente, la enfermedad o trastorno que es tratable por un inhibidor de una paracaspasa es el subtipo de células B activadas del linfoma difuso de células B grandes o linfoma MALT. Además, el individuo es preferiblemente un mamífero y más preferiblemente un ser humano. Los compuestos divulgados en el presente documento (o la composición farmacéutica que comprende tal compuesto) se pueden administrar al individuo por cualquier ruta, preferiblemente por cualquier ruta descrita anteriormente en la sección “Composiciones farmacéuticas” para la administración de la composición farmacéutica de la invención.

Además, la actividad proteolítica de MALT1 se requiere para una activación óptima de una respuesta inmunitaria adaptativa. La inhibición farmacológica usando el péptido antagonista z-VRPR-FMK o destrucción genética de la actividad proteasa de MALT1 previene una respuesta transcripcional completa de NF-kB y producción de IL-2 en células T CD4, que revela que la actividad proteasa de MALT1 es esencial para activación óptima de células T (Duwel et al., J. Immunol. 2009, 182, 7718-7728). Además, los inhibidores de molécula pequeña no competitivos de MALT1 tioridacina y mepacina también alteran la producción completa de IL-2 en respuesta a la estimulación con TCR/CD28 en células T primarias (Nagel et al., Cancer cell 2012, 22, 825-837). La actividad proteasa de MALT1 no aumenta directamente la activación canónica de IKK/NF-kB desencadenada por TCR/CD28 (Rebeaud et al., Nat. Immunol.

2008, 9, 272-28; Duwel et al., J Immunol. 2009, 182, 7718-7728), sino que la actividad proteolítica de MALT1 garantiza una respuesta robusta y prolongada. El requisito de actividad de corte de MALT1 en fases posteriores de la activación, diferenciación y funciones efectoras de células T está soportado por los sustratos de MALT1 BCL10, A20, CYLD, RelB y Regnasa-1. El corte de los sustratos demuestra que la actividad de corte única de MALT1 contribuye a la función óptima de células T al inactivar múltiples reguladores negativos que influyen diversos procesos celulares que varían desde señalización, transcripción, estabilidad de ARNm a adhesión celular (Coornaert et al., Nat. Immunol. 2008, 9, 263-271; Rebeaud et al., Nat. Immunol. 2008, 9, 272-28; Duwel et al., J Immunol. 2009, 182, 7718-7728; Hailfinger et al., PNAS USA 2011, 108, 14596-14601; Staal et al., EMBO J. 2011, 30, 1742-1752; Uehata et al., Cell 2013, 153, 1036-1049). Por tanto, la acción inhibidora de los compuestos inhibidores de MALT1 de la invención en la activación de células T indica un potencial uso médico como inmunosupresor, por ejemplo, en el tratamiento de alergia y asma. Además, se ha demostrado recientemente que la actividad proteasa de MALT1 contribuye a la activación, diferenciación y función efectora de células T y, por tanto, el inicio y la puntuación clínica en encefalomielitis autoinmunitaria experimental (EAE) murina, que es el principal modelo animal para esclerosis múltiple (EM); cf. Baxter, Nat. Rev. Immunol. 2007, 7, 904-912; Mc Guire et al., J Immunol. 2013, 190, 2896-2903; Briistle et al., J. Clan. Invest.

2012, 122, 4698-4709.

Según esto, también se divulga en el presente documento (i) un compuesto de la invención (o una composición farmacéutica que comprende tal compuesto opcionalmente junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable) para uso en un método de tratamiento de enfermedades inmunitarias dependientes de paracaspasa y (ii) un método de tratar una enfermedad inmunitaria dependiente de paracaspasa en un individuo, que comprende administrar una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto divulgado en el presente documento (o una composición farmacéutica que comprende tal compuesto opcionalmente junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable) al individuo. A este respecto, la enfermedad inmunitaria dependiente de paracaspasa es preferiblemente una inflamación alérgica. En una variante preferida, la paracaspasa es MALT1. La enfermedad inmunitaria dependiente de paracaspasa también puede ser una enfermedad dirigida por células T donde las respuestas de células T se contrarrestan por los compuestos divulgados en el presente documento. A este respecto, la enfermedad inmunitaria dependiente de paracaspasa puede ser hipersensibilidad del sistema inmunitario o una inflamación crónica tal como alergia (como se mencionado) o asma. Además, la enfermedad inmunitaria dependiente de paracaspasa puede ser una enfermedad autoinmunitaria, que incluye, pero no está limitada a enfermedades tales como síndrome Sjogren, tiroiditis de Hashimoto, esclerosis múltiple, enfermedades intestinales inflamatorias (por ejemplo, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa), lupus eritematoso, psoriasis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide o artritis psoriásica. Además, el individuo es preferiblemente un mamífero y más preferiblemente un ser humano. Los compuestos divulgados en el presente documento (o la composición farmacéutica que comprende tal compuesto) se puede administrar al individuo por cualquier ruta, preferiblemente por cualquier ruta descrita anteriormente en la sección “Composiciones farmacéuticas” para la administración de la composición farmacéutica de la invención.

Procesos de preparación

La presente invención proporciona un proceso para la preparación de un compuesto del primer aspecto, que comprende la etapa de hacer reaccionar fenotiacina con un derivado de piperidina de fórmula (3)

en donde LG es un grupo saliente. El grupo saliente LG se puede seleccionar del grupo que consiste en -Cl, -Br, -I, y una fracción sulfonato. Preferiblemente, la fracción sulfonato se selecciona del grupo consistente en 4-toluenosulfonato (tosilato), trifluorometanosulfonato (triflato), metilsulfonato (mesilato). El grupo saliente LG es mesilato, triflato o tosilato, preferiblemente, tosilato. En cualquiera de las formas de realización anteriores, la etapa de hacer reaccionar fenotiacina con el derivado de piperidina de fórmula (3) se puede realizar en presencia de una base química, tal como NaH. En cualquiera de las formas de realización anteriores, la etapa de hacer reaccionar fenotiacina con el derivado de piperidina de fórmula (3) se puede realizar en un solvente, preferiblemente un solvente orgánico en el que sea soluble fenotiacina (por ejemplo, dimetilformamida (DMF)). Por ejemplo, la fenotiacina se puede disolver en un solvente, la base química se añade (preferiblemente en una cantidad para desprotonar la fenotiacina, tal como una cantidad de base química en exceso respecto a la cantidad de fenotiacina usada (por ejemplo, la proporción molar de la base química respecto a fenotiacina puede ser 1,1 -4,0-1, tal como 2,0-3,0:1)), y después el derivado de piperidina de fórmula (3), preferiblemente como una solución en un solvente (por ejemplo, el mismo solvente que el utilizado para disolver la fenotiacina), se añade para producir el compuesto del primer aspecto.

En cualquiera de las formas de realización anteriores, el proceso del sexto aspecto puede además comprender la etapa de aislar y/o purificar el compuesto del primer aspecto. La etapa de aislar y/o purificar el compuesto del primer aspecto se puede realizar por medios convencionales, tal como uno o más de los siguientes: lavado, filtración, cromatografía líquida (normal o de fase inversa), extracción con dos solventes inmiscibles, concentración a presión reducida, y recristalización. Si se desea proporcionar (S)-mepacina como una sal particular (tal como clorhidrato), la (S)-mepacina se puede disolver en un solvente apropiado (tal como etanol), se añade el ácido deseado (tal como HCl), y la sal de (S)-mepacina deseada se puede aislar y/o purificar por medios convencionales.

En cualquiera de las formas de realización anteriores, el proceso del sexto aspecto puede además comprender la etapa de convertir la amina terciaria de fórmula (2)

al derivado de piperidina de fórmula (3). Los reactivos y las condiciones de reacción para la conversión de un grupo alcohol en un grupo saliente las conoce el experto en la materia (cf., por ejemplo, M.B. Smith y J. March, "March's advanced organic chemistry: reactions, mechanisms, and structure", 5a edición, John Wiley & Sons, Inc., 2001, en particular las páginas 445 a 449, 518, 519, y 576). Por ejemplo, si en una forma de realización el grupo saliente LG en el derivado de piperidina de fórmula (3) va a ser una fracción sulfonato, la amina terciaria de fórmula (2) se puede hacer reaccionar con un compuesto cloruro de sulfonilo apropiado (por ejemplo, RS(O)2Cl, en donde R es F, Cl, alquilo que tiene 1, 2, 3, 4, 5, o 6 átomos de carbono (opcionalmente sustituidos con 1, 2, o 3 átomos independientemente seleccionados de F y Cl), alquilo perfluorado que tiene 1, 2, 3, 4, 5, o 6 átomos de carbono (tal como CF3 o nonafluorobutilo), o arilo (por ejemplo, que tiene de 6 a 10 átomos de carbono, tal como fenilo o naftilo), opcionalmente sustituido con de 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógenos (F, Cl, Br, I), alquilo que tiene 1,2, 3, 4, 5, o 6 átomos de carbono y nitro). En cualquiera de las formas de realización anteriores, la etapa de convertir la amina terciaria de fórmula (2) al derivado de piperidina de fórmula (3) se puede realizar en presencia de una base química, tal como una amina orgánica (por ejemplo, trietilamina). En caso de que el grupo saliente LG en el derivado de piperidina de fórmula (3) vaya a ser una fracción sulfonato, la conversión de la amina terciaria de fórmula (2) al derivado de piperidina de fórmula (3) se puede realizar en presencia de un catalizador de esterificación (por ejemplo, dimetilaminopiridina). En cualquiera de las formas de realización anteriores, la conversión se puede realizar en un solvente, por ejemplo, un solvente orgánico en que la amina terciaria de fórmula (2) sea soluble (por ejemplo, diclorometano), preferiblemente a una temperatura inicial por debajo de temperatura ambiente (por ejemplo, empezando a 0°C y calentando gradualmente a temperatura ambiente durante un periodo de 12 a 24 horas). En cualquiera de las formas de realización anteriores el derivado de piperidina de fórmula (3) se puede aislar y/o purificar por medios convencionales (tal como uno o más de los siguientes: lavado, filtración, cromatografía líquida (normal o de fase inversa), extracción con dos solventes inmiscibles, concentración a presión reducida, y recristalización), antes de hacerla reaccionar con fenotiacina para proporcionar (S)-mepacina.

En cualquiera de las formas de realización anteriores, el proceso del sexto aspecto puede además comprender la etapa de convertir un carbamato de fórmula (1)

en donde R es un grupo alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, a la amina terciaria de fórmula (2).

Los reactivos y las condiciones de reacción para la conversión de un grupo carbamato (tal como R'R''NC(O)OR) en una amina terciaria (tal como R'R''NCH³) los conoce el experto en la materia. En una forma de realización, la conversión del carbamato de fórmula (1) a la amina de fórmula (2) se puede realizar eliminando el grupo C(O)OR del carbamato de fórmula (1) y metilando selectivamente el átomo de nitrógeno (opcionalmente el grupo alcohol se protege antes de que la metilación tenga lugar y se elimina después de ello); cf., por ejemplo, M.B. Smith y J. March, "March's advanced organic chemistry: reactions, mechanisms, and structure", 5a edición, John Wiley & Sons, Inc., 2001, en particular las páginas 499 a 501 y 504. En una forma de realización alternativa, la conversión del carbamato de fórmula (1) a la amina terciaria de fórmula (2) se puede realizar en presencia de un agente reductor, tal como LiAlH⁴.

En cualquiera de las formas de realización anteriores, la conversión se puede realizar en un solvente (por ejemplo, un solvente orgánico en el que el carbamato de fórmula (1) sea soluble, por ejemplo, tetrahidrofurano (THF)), preferiblemente a una temperatura inicial por debajo de temperatura ambiente (por ejemplo, empezando a 0°C y calentando gradualmente a temperatura ambiente durante un periodo de 12 a 24 horas). En una forma de realización, después de completar la conversión, la mezcla de reacción se enfría por debajo de temperatura ambiente (por ejemplo, a una temperatura de 0°C), y después se añaden agua, una base química (por ejemplo, una base inorgánica, tal como NaOH), y agua otra vez (según Fieser, "Reagents for Organic Synthesis", Wiley (1967), 581-595). La amina terciaria de fórmula (2) se puede aislar y/o purificar por medios convencionales (tal como uno o más de los siguientes: lavado, filtración, cromatografía líquida (normal o de fase inversa), extracción con dos solventes inmiscibles, concentración a presión reducida, y recristalización), antes de convertirla al derivado de piperidina de fórmula (3).

En cualquiera de las formas de realización anteriores, el grupo R es preferiblemente alquilo de C^1-10(por ejemplo, metilo, etilo, propilo (tal como isopropilo), butilo (tal como tert-butilo), pentilo, hexilo), cicloalquilo de C^3-10(por ejemplo, ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo, o cicloheptilo), heterociclilo de 3 a 10 miembros (por ejemplo, heterociclilo de 5 o 6 miembros, tal como morfolino, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, piperidinilo, pipericinilo, di- y tetrahidrofuranilo, di- y tetrahidrotienilo), arilo de C^3-14(por ejemplo, fenilo o naftilo), o heteroarilo de 3 a 14 miembros (por ejemplo, heteroarilo de 5 o 6 miembros, tal como furanilo, tienilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, o pirimidinilo), en donde cada uno de los grupos alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo puede estar sin sustituir o sustituidos con uno o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, o 5, tal como 1, 2, o 3) sustituyentes de 1^ernivel individualmente seleccionados (tal como, alquilo de C^1-4, alquenilo de C^2-4, alquinilo de C^2-4, arilo de 5 o 6 miembros, heteroarilo de 5 o 6 miembros, cicloalquilo de 3 a 7 miembros, y heterociclilo de 3 a 7 miembros, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1-3), -NH², -NH(alquilo de C^1-3), -N(alquilo de ^ ^-3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1.3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C ^ ^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1.3), -C(=O)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -NHC(=O)(alquilo de C^1.3), -NHC(=NH)NH^z-2(alquilo de C ^ ^z, y -N(alquilo de C^1-3)C(=NH)NH^2-z(alquilo de C ^ ^z, en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo, en donde cada uno de los grupos sustituyentes de 1^ernivel alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo y heterociclilo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes de 2° nivel). Ejemplarmente, los grupos R incluyen alquilo de cadena lineal o cadena ramificada que tienen 1, 2, 3, 4, 5, o 6 átomos de carbono (tal como tert-butilo), cicloalquilo que tiene 3, 5, 6 o 7 átomos de carbono de anillo (tal como hexilo), y arilo que tienen 6 o 10 átomos de carbono de anillo (tal como fenilo), en donde cada uno de los grupos alquilo, cicloalquilo y arilo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes individualmente seleccionados del grupo que consiste en alquilo de C^1-4, arilo de 6 miembros, heteroarilo de 5 o 6 miembros, cicloalquilo de 3 a 7 miembros, heterociclilo de 3 a 7 miembros, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1.3), -NH², -NH(alquilo de C^1.3), -N(alquilo de C^1-3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1.3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C ^ ) ^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1.3), -C(=O)NH^2-z(alquilo de C ^ ) ^z, y -NHC(=O)(alquilo de C^1.3), en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo (preferiblemente, el uno, dos o tres sustituyentes se selecciona individualmente del grupo que consiste en alquilo de C^1-3, halógeno, -CF³, -OH, -OCH³, -SCH³, NH^2-z(CH³)^z, -C(=O)OH y -C(=O)OCH³, en donde z es 0, 1 o 2).

En una forma de realización el proceso del sexto aspecto comprende las etapas de (i) convertir una amina terciaria de fórmula (2) a un derivado de piperidina de fórmula (3) y después (ii) hacer reaccionar fenotiacina con el derivado de piperidina de fórmula (3), en donde las etapas (i) y (ii) son como se ha descrito anteriormente. En otra forma de realización el proceso del sexto aspecto comprende las etapas de (i) convertir un carbamato de fórmula (1) a una amina terciaria de fórmula (2), después (ii) convertir la amina terciaria de fórmula (2) a un derivado de piperidina de fórmula (3) y después (iii) hacer reaccionar fenotiacina con el derivado de piperidina de fórmula (3), en donde las etapas (i) a (iii) son como se ha descrito anteriormente.

Se divulga además en el presente documento un proceso para la preparación de una amina terciaria de fórmula (2)

el método comprende la etapa de hacer reaccionar un carbamato de fórmula (1)

en donde R es un grupo alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, con un agente reductor, tal como LiAlH⁴. Preferiblemente, el grupo R es alquilo de C^1-10(por ejemplo, metilo, etilo, propilo (tal como isopropilo), butilo (tal como tert-butilo), pentilo, hexilo), cicloalquilo de C^3-10(por ejemplo, ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo, o cicloheptilo), heterociclilo de 3 a 10 miembros (por ejemplo, heterociclilo de 5 o 6 miembros, tal como morfolino, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, piperidinilo, pipericinilo, di- y tetrahidrofuranilo, di- y tetrahidrotienilo), arilo de C^3-14(por ejemplo, fenilo o naftilo), o heteroarilo de 3 a 14 miembros (por ejemplo, heteroarilo de 5 o 6 miembros, tal como furanilo, tienilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, o pirimidinilo), en donde cada uno de los grupos alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo puede estar sin sustituir o sustituidos con uno o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, o 5, tal como 1,2, o 3) sustituyente de 1^ernivel individualmente seleccionados (tal como, alquilo de C^1-4, alquenilo de C^2-4, alquinilo de C^2-4, , arilo de 5 o 6 miembros, heteroarilo de 5 o 6 miembros, cicloalquilo de 3 a 7 miembros y heterociclilo de 3 a 7 miembros, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1-3), -NH², -NH(alquilo de C^1-3), -N(alquilo de ^ ^-3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1-3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C ^ ^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1-3), -C(=O)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -NHC(=O)(alquilo de C^1-3), -NHC(=NH)NH^z-2(alquilo de C^1-3)^z, y -N(alquilo de C^1-3)C(=NH)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo, en donde cada uno de los grupos sustituyentes de 1^ernivel alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo y heterociclilo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes de 2° nivel). Ejemplarmente, los grupos R incluyen alquilo de cadena lineal o cadena ramificada que tienen 1, 2, 3, 4, 5, o 6 átomos de carbono (tal como tert-butilo), cicloalquilo que tiene 3, 5, 6 o 7 átomos de carbono de anillo (tal como hexilo), y arilo que tienen 6 o 10 átomos de carbono de anillo (tal como fenilo), en donde cada uno de los grupos alquilo, cicloalquilo y arilo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes individualmente seleccionados del grupo que consiste en alquilo de C^1-4, arilo de 6 miembros, heteroarilo de 5 o 6 miembros, cicloalquilo de 3 a 7 miembros, heterociclilo de 3 a 7 miembros, halógeno, -CF³, -CN, azido, -NO², -OH, -O(alquilo de C^1-3), -S(alquilo de C^1-3), -NH², -NH(alquilo de C^1-3), -N(alquilo de C^1-3)², -NHS(O)²(alquilo de C^1-3), -S(O)²-NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, -C(=O)OH, -C(=O)O(alquilo de C^1-3), -C(=O)NH^2-z(alquilo de C^1-3)^z, y -NHC(=O)(alquilo de C^1-3), en donde z es 0, 1, o 2 y alquilo de C^1-3es metilo, etilo, propilo o isopropilo (preferiblemente, el uno, dos o tres sustituyentes se selecciona individualmente del grupo que consiste en alquilo de C^1-3, halógeno, -CF³, -OH, -OCH³, -SCH³, NH^2-z(CH³)^z, -C(=O)OH y -C(=O)OCH³, en donde z es 0, 1 o 2).

En cualquiera de las formas de realización anteriores, la reacción del carbamato de fórmula (1) con un agente reductor se puede realizar en un solvente, por ejemplo, un solvente orgánico en el que el carbamato de fórmula (1) es soluble, (por ejemplo, tetrahidrofurano (THF)), preferiblemente a una temperatura inicial por debajo de temperatura ambiente (por ejemplo, empezando a 0°C y calentando gradualmente a temperatura ambiente durante un periodo de 12 a 24 horas). En una forma de realización, después de completar la conversión, la mezcla de reacción se enfría por debajo de temperatura ambiente (por ejemplo, a una temperatura de 0°C), y después se añaden agua, una base química (por ejemplo, una base inorgánica, tal como NaOH), y agua otra vez (según Fieser, "Reagents for Organic Synthesis", Wiley (1967), 581-595). La amina terciaria de fórmula (2) se puede aislar y/o purificar por medios convencionales (tal como uno o más de los siguientes: lavado, filtración, cromatografía líquida (normal o de fase inversa), extracción con dos solventes inmiscibles, concentración a presión reducida, y recristalización).

Si se desea preparar los compuestos de la invención (o uno de sus intermedios, es decir, la amina terciaria de fórmula (2)) en un forma isotópicamente marcada, se pueden usar uno o más materiales de partida isotópicamente marcados (por ejemplo, un carbamato de fórmula (1) isotópicamente marcado, una amina terciaria de fórmula (2) isotópicamente marcada, un derivado de piperidina de fórmula (3) isotópicamente marcado y/o una fenotiacina isotópicamente marcada) en los procesos de la presente invención.

Los compuestos de la presente invención se prepararon como se describe anteriormente y en los ejemplos posteriores, o se prepararon por métodos análogos a los mismos, que los conoce fácilmente y están disponibles para un experto en la materia de la síntesis orgánica (véase, por ejemplo, H. Ulrich "Phenothiazines" en "Methods of Organic Chemistry", Houben-Weyl, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 510-556).

Ejemplos

Abreviaturas

DCM: diclorometano

DIEA: N,N-diisopropiletilamina

DMF: N,N-dimetilformamida

DMSO: dimetilsulfóxido

DTT: ditiotreitol

Cromatografía rápida: como se describe por Still, W.C., et al., J. Org. Chem. 1978, 43, 2923.

h: hora(s)

min: minuto(s)

TFA: ácido trifluoroacético

THF: tetrahidrofurano

Procedimientos experimentales

Clonación, expresión y purificación

Para cristalización y extinción de fluorescencia de triptófano se usó MALT1 humana (L339-R719). La expresión de proteína se realizó en Escherichia coli cepa Rosetta™ (DE3) (Novagen). Las células se resuspendieron en tampón de lisis (Hepes 50 mM pH 7,5, NaCl 300 mM, imidazol 7 mM y p-mercaptoetanol 4 mM), se lisaron por sonicación y se clarificaron por centrifugación. Las proteínas se purificaron adicionalmente por cromatografía de afinidad de Ni-NTA (Qiagen) y cromatografía de exclusión molecular (S200 26/60, GE-Healthcare). MALT1 monomérica y dimérica sin ligando eluyen como pico individual en tampón de exclusión molecular (Hepes 25 mM pH 7,5, NaCl 300 mM, DTT 5 mM) y se concentraron a 8 mg/ml.

Para el ensayo de corte enzimático MALT1325-760 etiquetada con GST se expresó en la cepa de E. coli BL21 (Novagen) durante 16 h a 18°C. Las células se recogieron y lisaron por sonicación en tampón de lisis (Hepes 50 mM pH 7,5, glicerol al 10%, Triton X-100 al 0,1% [vol/vol], Dt T 1 mM, NaCl 150 mM, MgCh 2 mM, incl. inhibidores de proteasas). MALT1 se purificó a través de un sistema de cromatografía líquida ÁKTA™ usando columnas de glutatión FastTrap (GE-Healthcare).

Ensayo de extinción de fluorescencia de triptófano

La extinción de la fluorescencia del triptófano W580 se midió con el espectrómetro de fluorescencia (FluoroMax-P, HORIBA Jobin Yvon) a una longitud de onda de extinción de 285 nm y una longitud de onda de emisión de 329 nm. La medida se realizó por etapas de titulación de 2 pl de soluciones madre de tioridacina y mepacina 400 pM, 800 pM, 4 mM, 8 mM en H2O frente a MALT1 monomérica (L339-R719) 0,5 pM en 1,6 ml de tampón de ensayo (Hepes 5 mM pH 7,0, NaCl 300 mM) a 20°C. El ensayo de extinción de enantiómeros de tioridacina y mepacina se realizó igualmente para medidas de racematos. Las medidas de espectroscopia CD (CD-Spektrometer Jasco J 810, JASCO, GmbH) se realizaron con una mezcla de reacción de 200 pl de monomérico 2,2 pM con una concentración final de tioridacina 0,1 mM, 0.25 mM y 0,5 mM en tampón de ensayo durante 2 min a 20°C.

Ensayo de actividad paracaspasa de MALT1

Para el ensayo de corte 20 ng de GST-MALTI^325-760y compuestos o DMSO se preincubaron en microplacas sin unión de 384 pocillos y después se añadió 50 pM de sustrato Ac-LRSR-AMC. Después de 30 min de incubación a 30°C, la fluorescencia del AMC cortado se midió durante 1 h usando un lector de microplacas Synergy 2 (Biotek). La actividad proteasa se expresó en unidades de fluorescencia relativa, donde los controles tratados con DMSO se ajustaron al 100% y la fluorescencia de los pocillos tratados con compuestos se calculó de forma apropiada. La CI⁵⁰de la inhibición se calculó usando PRISM 5 (GraphPad) y las curvas muestran la media de al menos tres experimentos independientes con la DE indicada. Mepacina, tioridacina y los enantiómeros respectivos se disolvieron en DMSO. Los controles se trataron con cantidades apropiadas de los solventes.

Cristalización

Se produjeron cristales unidos a tioridacina empapando cristales de MALT1 dimérica sin ligando (Wiesmann et al. (2012), J. Mol Biol., 419, 4-21) con tioridacina 1,5 mM en solución depósito (formiato de magnesio 200 mM, PEG3350 al 13%). Todos los cristales se crioprotegieron con 2,3-butanodiol al 15% en solución depósito y se congelaron rápidamente con nitrógeno líquido.

Recogida de datos de rayos X, determinación de la estructura y refinamiento

La recogida de datos de cristales unidos a tioridacina se realizó en la línea de haz ID29 (Instalación Europea de Radiación Sincrotrón, Grenoble) a una longitud de onda de 0,972390 A, también equipado con un detector de pixel PILATUS 6M (DECTRIS). Además, se recogió un segundo conjunto de datos del mismo cristal a una longitud de onda de 1,90 A. Todos los datos se procesaron usando XDS (Kabsch (1993), J. Appl. Cryst. 21, 916-24). El modelo se refinó con Phenix (Adams et al. (2010), Acta Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 66, 213-21). La determinación de la estructura de tioridacina unida a MALT1 se resolvió por sustitución molecular con PHASER (McCoy et al. (2007), J. Appl. Crystallogr. 40, 658-674) usando MALT1 sin ligando (entrada pdb: 3V55) como modelo de búsqueda. La estructura de MALT1 unida a tioridacina se resolvió a 2.7 A por refinamiento iterativo AutoBuster (Global Phasing, Cambridge) y etapas de construcción de modelo en Coot (Emsley et al. (2010), Acta Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 66, 486-501). Todas las figuras se generaron en PyMol (Schrodinger, LLC. PyMOL Molecular Graphics System, Versión 1.3r1. (2010)).

Solventes y reactivos

Todas las sustancias químicas y solventes se compraron de VWR o Sigma Aldrich y se usaron como se suministraron.

Manejo de reacciones

Todas las reacciones no acuosas se realizaron en una atmósfera de nitrógeno a manos que se indique de otra manera. La cromatografía en columna se realizó como se describe usando gel de sílice de calidad comercial BDH 60 A, 40-60 pm (Still et al., Org. Chem. 1978, 43, 2923-2925).

Espectroscopia de RMN

Los datos de RMN se registraron en espectrómetros Bruker Avance (400 MHz) o Bruker Fourier (300 MHz). Las medidas se llevaron a cabo a temperatura ambiente. Los datos se describen como (s = singlete, d = doblete, t = triplete, m = multiplete o sin resolver, br = señal ancha, contante(s) de acoplamiento en Hz, integración).

Espectrometría de masas

Los análisis de espectrometría de masas se realizaron usando un espectrómetro Micromass ZMD Electrospray equipado con un módulo se separación Waters 2795 y detector de haz de fotodiodo Water 996.

HPLC analítica

Los análisis de HPLC analítica se realizaron usando una columna Zorbax Eclipse XDB-C18 4,6 X 50 mm (empaquetamiento 1,8 pm) usando el siguiente método: solvente A - agua (TFA al 0,1%), solvente B - acetonitrilo (TFA al 0,07%) gradiente de 6 min desde el 5 al 95% de B; 1 min mantenimiento; después reciclar.

HPLC quiral

La pureza enantiomérica de los enantiómeros de tioridacina y mepacina se determinó por comparación con racematos comercialmente disponibles usando una columna ChiralPak IA 250 X 4,6 mm (L X D.I.) amilasa tris(3,5-dimetilfenilcarbamato). Para tioridacina se usó un gradiente isocrático de etanol al 1% en hexano que contenía modificador dietilamina al 0,1%. En el caso de mepacina se usó un gradiente isocrático de isopropanol al 1% en hexano que contenía modificador dietilamina al 0,1%. Ambos se corrieron a 1 ml/min.

Modelo de xenoinjerto de DLBCL

Se injertaron tumores en ratones NOD.Cg-Prkdc^scidIl2rg^tm1WjI/SzJ (NSG) hembras de 6 a 8 semanas de edad por inyección subcutánea de 4 x 10⁶células tumorales (OCI-Ly10 o Su-DHL-6) resuspendidas en matrigel (BD). Ambos tumores se injertaron simultáneamente en flancos opuestos de ratones individuales, con cuatro ratones para cada grupo de tratamiento. La inyección intraperitoneal (IP) de solvente o (S)-mepacina (una inyección al día) se inició 13 días después del trasplante y se dio continuamente cada 24 horas después de ello. Se usó una aplicación diaria de 150 o 300 |jg de compuesto por animal (~25 g), que corresponde a aproximadamente 6 o 12 mg/kg, respectivamente. El tamaño tumoral se midió en días alternos después de aparición visual usando un compás calibrador y se calculó como milímetros cuadrados (longitud x anchura). Los ratones se sacrificaron cuando los tumores estaban por encima de 250 mm²y los datos estadísticos se analizaron con una prueba ANOVA bidireccional.

Modelo de EAE (encefalomielitis alérgica experimental) progresiva crónica

Para el modelo de EAE primero péptidos MOG^{35 -55}1 mg/ml (MOG: glucoproteína de mielina/oligodendrocitos; número de registro AAF74786) se emulsionaron 1:1 en adyuvante de Freund completo (CFA, incl. M. tuberculum H37RA destruido por calor 5 mg/ml). El día 1 ratones C57Bl/6 hembras (8-10 semanas de edad) se trataron por vía subcutánea con 0,1 ml de MOG/CFA (MOG 0,1 mg/CFA 0,25 mg por ratón) en ambos flancos. Además, se inyectaron por vía intraperitoneal 0,2 ml de toxina pertúsica (1 mg en 1 ml de PBS) inmediatamente después (200 ng por ratón), seguido por una segunda inyección el día después. El día 10 los ratones se distribuyeron aleatoriamente entre 3 grupos con 10 ratones por grupo y una puntuación clínica media de ~ 1 y se inició el tratamiento IP de los ratones con PBS, (S)-mepacina 16 mg/kg (dos inyecciones al día, cada una de 8 mg/kg). La puntuación clínica de los ratones se determinó según los siguientes parámetros: puntuación 0 = sin signos obvios de disfunción motora en ratones comparados con el control sin inmunizar; 0,5 - flaccidez distal de la cola; 1 = cola lacia o flácida; 2 = cola flácida y debilidad en las patas traseras; 3 = cola flácida y parálisis completa de las patas traseras O cola flácida con parálisis de una pata frontal y una trasera; 4 = cola flácida, parálisis completa de la pata trasera y parcial de la delantera; 5 = parálisis completa de la pata trasera y completa de la delantera, sin movimiento alrededor de la jaula O el ratón se enrolla espontáneamente en la jaula O el ratón encontrado muerto debido a parálisis.

Al final del estudio los ratones se sacrificaron y se recogieron suero sanguíneo y también el cerebro y la médula espinal para análisis de histopatología. Aquí se contaron focos de infiltrado celular inflamatorio (al menos 50 jm ) en la médula espinal y se puntuaron usando los siguientes criterios: 0 = normal; 0,5 muy mínimo; 1 = mínimo, 2-4 en general menos de 100 jm de anchura/longitud; 2 = leve, 5-7 pequeños focos distintos; 3 = moderado, 8-10 áreas pequeñas más mayores coalescentes; 4 = marcado, 11-13 áreas pequeñas más mayores coalescentes; 5 = grave, con frecuencia > 13 múltiple coalescente. El porcentaje de área de materia blanca que tuvo desmielinización, edema, axones dilatados se estimó y usó para determinar una puntuación usando los siguientes criterios: 0 = normal; 1 = mínimo, 1-5% del total están afectados; 2 = leve, 5-25% del área total afectada; 3 = moderado, 26-50% del área total afectada; 4 = marcado, 51-75% del área total afectada; 5 = > 75% del área total afectada.

Modelo de CIA (artritis inducida por colágeno)

Para el modelo de CIA primero se preparó el inmunógeno emulsionando una combinación 1:1 (vol:vol) de solución de colágeno (4 mg/ml en ácido acético 0,01 M) y adyuvante de Freund completo (CFA, incl. M. tuberculosis H37RA destruido por calor 4 mg/ml). El día 0 ratones DBA1/J (8-10 semanas de edad) se inyectaron por vía subcutánea con emulsión colágeno/CFA (50 jl/ratón; 100 jg/ratón de colágeno en CFA) usando una jeringa de 1 ml con una aguja 25G. El día 20 siguió una segunda inyección con emulsión colágeno/CFA. Alrededor del día 28 los ratones se seleccionaron en tres grupos de tratamiento diferentes según su puntuación clínica con un IA (índice de artritis) medio de ~3-4 y el tratamiento con PBS, 8 y 16 mg/kg de (S)-mepacina (dos inyecciones al día, cada una o bien 4 mg/kg (que produce una dosis de 8 mg/kg/día) o 8 mg/kg (que produce una dosis de 16 mg/kg/día)) se empezó entonces. Los ratones se puntuaron según el índice de artritis con los siguientes criterios: 0 = sin efectos visibles de artritis; 1 = edema y/o eritema de 1 dedo; 2 = edema y/o eritema de 2 dedos; 3 = edema y/o eritema de más de 2 dedos; 4 = artritis grave de la garra entera y dedos. El índice se calcula por adición de puntuaciones de garras individuales a un IA máximo de 16.

Al final del estudio los ratones se sacrificaron y se recogieron las garras para análisis histopatológico. La inflamación se puntuó con los siguientes criterios: 0 = normal; 1 = infiltración mínima de células inflamatorias en membrana sinovial y tejido periarticular de articulaciones afectadas; 2 = infiltración leve, restringida a las articulaciones afectadas; 3 = infiltración moderada con edema moderado, si en garras, restringido a las articulaciones afectadas; 4 = infiltración marcada que afecta a la mayoría de las áreas con edema marcado; 5 = infiltración difusa grave con edema grave. Pannus: 0 = normal; 1 = infiltración mínima de pannus en cartílago y hueso subcondral; 2 = infiltración leve con destrucción de zona marginal de tejido duro en articulaciones afectadas; 3 = infiltración moderada con destrucción de tejido duro moderada en articulaciones afectadas; 4 = infiltración marcada con destrucción marcada de la arquitectura de las articulaciones, la mayoría de las articulaciones; 5 = infiltración grave asociada con destrucción total o casi total de la arquitectura de las articulaciones, afecta a todas las articulaciones. Daño al cartílago: 0 = normal; 1 = pérdida de mínima a leve de tinción con azul de toluidina sin pérdida obvia de condrocitos o ruptura de colágeno en las articulaciones afectadas; 2 = pérdida leve de tinción con azul de toluidina con pérdida de condrocitos leve focal (superficial) y/o ruptura de colágeno en las articulaciones afectadas; 3 = pérdida moderada de tinción con azul de toluidina con pérdida de condrocitos moderada multifocal (profundidad a zona media) y/o ruptura de colágeno en las articulaciones afectadas; 4 = pérdida marcada de tinción con azul de toluidina con pérdida de condrocitos marcada multifocal (profundidad a zona profunda) y/o ruptura de colágeno en la mayoría de las articulaciones; 5 = pérdida grave difusa de tinción con azul de toluidina con pérdida de condrocitos grave multifocal (profundidad a marca de marea) y/o ruptura de colágeno en todas las articulaciones. Resorción de hueso 0 = normal; 1 = mínima, áreas pequeñas de resorción, no fácilmente aparentes a bajos aumentos, osteoclastos raros en articulaciones afectadas; 2 = leve, áreas más numerosas de, no fácilmente aparentes a bajos aumentos, osteoclastos más numerosos en articulaciones afectadas; 3 = moderada, resorción obvia de hueso medular trabecular y cortical sin defectos de espesor total en la corteza, pérdida de algunas trabéculas medulares, lesión aparente a bajos aumentos, osteoclastos más numerosos en articulaciones afectadas; 4 = marcada, defectos de espesor total en hueso cortical, con frecuencia con distorsión del perfil de la superficie cortical restante, pérdida marcada de hueso medular, numerosos osteoclastos, afecta a la mayoría de las articulaciones; 5 = grave, defectos de espesor total en hueso cortical y destrucción de la arquitectura de las articulaciones de todas las articulaciones.

Ejemplo 1 - Síntesis de enantiómeros de mepacina

Se prepararon (R)- y (S)-mepacina de (R)- y (S)-carbamatos 1 comercialmente disponibles, respectivamente. La preparación de (S)-mepacina se ilustra en el esquema 1. La reducción mediada por L iA lH del grupo protector N-Boc de (S)-1 da el intermedio N-metilpiperidina (S)-2. La formación del tosilato seguido por la alquilación de fenotiacina da (S)-mepacina, (S)-4. La pureza enantiomérica de los enantiómeros se confirmó por análisis de HPLC quiral.

Esquema 1 (según la invención)

Reactivos y condiciones: a) LiAlH4, THF, de 0°C a temperatura ambiente, 95%; b) cloruro de 4-toluenosulfonilo, 4-dimetilaminopiridina, CH2O 2, de 0°C a temperatura ambiente, 85%; c) fenotiacina, NaH, DMF después (S)-3; d) etanol, HCl ac. 1 M, 49% (2 etapas).

De una manera análoga, se preparó (R)-mepacina a partir del carbamato (R)-1 (esquema 2).

Esquema 2 (no según la invención)

Reactivos y condiciones: a) LiAlH4, THF, de 0°C a temperatura ambiente, 67%; b) cloruro de 4-toluenosulfonilo, 4-dimetilaminopiridina, CH2Cl2, de 0°C a temperatura ambiente, 75%; c) fenotiacina, NaH, DMF después (R)-3; d) etanol, HCl ac. 1 M, 28% (2 etapas).

Síntesis de (S)-mepacina (según la invención)

[(3S)-1-Metilpiperídin-3-il]metanol [(S)-2)].

A una solución de (3S)-3-(hidroximetil)piperidina-1-carboxilato de tert-butilo, (S)-1 (5,0 g, 23,0 mmol) en THF (300 ml) a 0°C se añadió hidruro de litio y aluminio 2,0 M en THF (14,4 ml, 34,8 mmol) y la reacción se agitó durante 20 horas mientras se calentaba gradualmente a temperatura ambiente. La reacción se enfrió a 0°C y después se añadieron agua, hidróxido de sodio 1,0 M y agua (Fieser, "Reagents for Organic Synthesis", Wiley (1967)). Esta mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente y después se filtró a través de una almohadilla de Celite. La concentración del filtrado dio (S)-2 (3,0 g, 95%) como un aceite incoloro que se usó sin purificación adicional.

¹H RMN (300 MHz, CDCl^a) 8 (ppm) = 1,04-1,14 (m, 1H), 1,55-1,84 (m, 3H), 1,91-1,95 (m, 1H), 2,03-2,09 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,61-2,64 (m, 1H), 2,78-2,82 (m, 1H), 3,51-3,66 (m, 2H), 3,74-3,78 (m, 1H). MS (ESI+) para C⁷H¹⁵NO m/z 130 (M+H)⁺.

[(3S)-1-Metilpiperidin-3-il]metil-4-metilbencenosulfonato [(S)-3]

A una solución de (S)-2 (1,55 g, 12,0 mmol), dimetilaminopiridina (73 mg, 0,60 mmol) y trietilamina (3,34 ml, 24,0 mmol) en DCM (80 ml) a 0°C se añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (2,52 g, 13,2 mmol) y la reacción se agitó durante 18 horas mientras se calentaba gradualmente a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con 200 ml de DCM y se lavó tres veces con bicarbonato de sodio saturado, una vez con agua y una vez con salmuera. Los orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron a presión reducida para dar (S)-3 (2,9 g, 85%) como un aceite amarillo que se usó sin purificación adicional.

1H RMN (300 MHz, CDCla) 8 (ppm) = 0,93-1,05 (m, 1H), 1,51-1,74 (m, 4H), 1,87-2,03 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,67-2,78 (m, 1H), 3,46-3,56 (m, 1H), 3,85-3,96 (m, 2H), 7,32-7,40 (m, 2H), 7,787,82 (m, 2H).

Clorhidrato de (S)-mepacina [(S)-4]

Se añadió hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 680 mg, 17,0 mmol) a una solución de fenotiacina (1,12 g, 5,64 mmol) en DMF (35 ml) y se agitó durante 30 minutos. Se añadió después tosilato (S)-3 como una solución en DMF (5 ml) y la reacción se calentó a 50°C y se agitó durante 18 horas. La reacción se extinguió por la adición de 5 ml de cloruro de amonio saturado antes de transferir a un embudo separador, diluyendo con 50 ml de acetato de etilo y lavando tres veces con bicarbonato de sodio saturado, una vez con agua y una vez con salmuera. Los orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía de fase inversa (CombiFlash) usando un gradiente de acetonitrilo del 0-50% (que contenía TFA al 0,07%) en agua (que contenía TFA al 0,1%). Se combinaron fracciones similares, se neutralizaron con bicarbonato de sodio saturado y se extrajeron acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y concentró a presión reducida. El residuo (un aceite incoloro) se disolvió después en etanol y HCl 1 M, se concentró tres veces de etanol y una vez de acetato de etilo para dar (S)-4 (960 mg, rendimiento del 49%) como un sólido púrpura claro.

HPLC quiral tiempo de retención: 7,32 min. 1H RMN (300 MHz, MeOD) 8 (ppm) = 1,25-1,36 (m, 1H), 1,62-1,77 (m, 1H), 1,97-2,13 (m, 2H), 2,40-2,50 (m, 1H), 2,73-2,92 (m, 2H), 2,81 (s, 3H), 3,40-3,49 (m, 1H), 3,56-3,65 (m, 1H), 3,86 3,94 (m, 1H), 4,05-4,13 (m, 1H), 6,97-7,02 (m, 2H), 7,06-7,09 (m, 2H), 7,19-7,27 (m, 4H); MS (ESI+) para C19H22N2S m/z 311 (M+H)+.

(S)-mepacina proporcionó un único pico por HPLC quiral en condiciones en las que los enantiómeros individuales se resuelven. No se observó racemización en reposo o en solución.

Síntesis de (R)-mepacina (no según la invención)

[(3R)-1-Metilpiperídin-3-il]metanol [(R)-2)].

A una solución de (3R)-3-(hidroximetil)piperidina-1-carboxilato de tert-butilo, (R)-1 (500 mg, 2,32 mmol) en THF (10 ml) a 0°C se añadió hidruro de litio y aluminio 2,0 M en THF (1,39 ml, 2,79 mmol) y la reacción se agitó durante 20 horas mientras se calentaba gradualmente a temperatura ambiente. La reacción se enfrió a 0°C y después se añadieron agua, hidróxido de sodio 1,0 M y agua. Esta mezcla se agitó durante 2,5 horas a temperatura ambiente y después se filtró a través de una almohadilla de Celite antes de concentrar el filtrado a presión reducida para dar (R)-2 (200 g, 67%) como un aceite incoloro que se usó sin purificación adicional.

¹H RMN (300 MHz, CDCl^a) 8 (ppm) =1,05-1,15 (m, 1H), 1,55-1,82 (m, 3H), 1,91-1,96 (m, 1H), 2,04-2,10 (m, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,61-2,65 (m, 1H), 2,78-2,82 (m, 1H), 3,51-3,66 (m, 2H), 3,74-3,78 (m, 1H). MS (ESI+) para C⁷H¹⁵NO m/z 130 (M+H)⁺.

[(3R)-1-Metilpiperidin-3-il]metil-4-metilbencenosulfonato [(R)-3]

A una solución de (R)-2 (200 mg, 1,55 mmol), dimetilaminopiridina (9 mg, 0,077 mmol) y trietilamina (0,432 ml, 3,10 mmol) en DCM (10 ml) a 0°C se añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (325 mg, 1,70 mmol) y la reacción se agitó durante 18 horas mientras se calentaba gradualmente a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con 20 ml de DCM y se lavó tres veces con bicarbonato de sodio saturado, una vez con agua y una vez con salmuera. Los orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron a presión reducida para dar (R)-3 (366 g, 75%) como un aceite amarillo que se usó sin purificación adicional.

1H RMN (300 MHz, CDCla) 8 (ppm) = 0,94-1,08 (m, 1H), 1,54-1,77 (m, 4H), 1,88-2,03 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,68-2,78 (m, 1H), 3,49-3,57 (m, 1H), 3,86-3,97 (m, 2H), 7,32-7,39 (m, 2H), 7,78-7,82 (m, 2H).

Clorhidrato de (R)-mepacina [(R)-4]

Se añadió hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 48 mg, 1,20 mmol) a una solución de fenotiacina (80 mg, 0,40 mmol) en DMF (3 ml) y se agitó durante 30 minutos. Se añadió después tosilato (R)-3 como una solución en DMF (1 ml) y la reacción se calentó a 50°C y se agitó durante 18 horas. La reacción se extinguió por la adición de 1 ml de cloruro de amonio saturado y se diluyó con 50 ml de acetato de etilo. La fase orgánica se lavó tres veces con bicarbonato de sodio saturado, una vez con agua y una vez con salmuera. Los orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía de fase inversa (CombiFlash) usando un gradiente de acetonitrilo del 0-50% (que contenía TFA al 0,07%) en agua (que contenía TFA al 0,1%). Se combinaron fracciones similares, se neutralizaron con bicarbonato de sodio saturado y se extrajeron acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y concentró a presión reducida. Este aceite incoloro se disolvió después en etanol y HCl 1 M, se concentró tres veces de etanol y dos veces de acetato de etilo para dar (R)-4 (40 mg, rendimiento del 28%) como un sólido blanco.

HPLC quiral tiempo de retención: 7,50 min, 1H RMN (300 MHz, MeOD) 8 (ppm) = 1,25-1,36 (m, 1H), 1,62-1,77 (m, 1H), 1,97-2,13 (m, 2H), 2,40-2,50 (m, 1H), 2,73-2,92 (m, 2H), 2,81 (s, 3H), 3,40-3,49 (m, 1H), 3,56-3,65 (m, 1H), 3,86 3,94 (m, 1H), 4,05-4,13 (m, 1H), 6,97-7,02 (m, 2H), 7,06-7,09 (m, 2H), 7,19-7,27 (m, 4H). MS (ESI+) para C19H22N2S m/z 311 (M+H)+.

Ejemplo 2 - Síntesis de enantiómeros de tioridacina (no según la presente invención)

Se prepararon los isómeros de tioridacina enantioméricamente puros 7f y 7s como se describe (esquema 3 y Choi et al., Med. Chem. Lett. 14, 4379-4382 (2004)). La desmetilación de tioridacina racémica seguido por reacción con cloroformiato de (-)-mentilo proporcionó, después de separación cromatográfica, los diastereómeros 6f y 6s. La configuración absoluta de los diastereómeros no se estableció. La reducción de los diastereómeros individuales con LiAlH4 proporcionó 7f y 7s, respectivamente. La pureza enantiomérica de los isómeros se confirmó por análisis de HPLC quiral.

Esquema 3

Reactivos y condiciones: a) cloroformiato de 1 -cloroetilo, 1,2-dicloroetano, reflujo, después MeOH, reflujo; b) cloroformiato de (-)-mentilo, /-P^EtN, CH2Ch, temperatura ambiente; c: cromatografía en gel de sílice, 6f 19% (2 etapas, diastereómero que eluye más rápido) y 6s 21% (2 etapas, isómero que eluye más lento); d) LiAlH4, THF, 50°C, 7f 26%; 7s 19%; e) etanol, HCl ac. 1 M, cuant.

2-{2-[2-(Met/lt/o)-lOH-fenot/ac/n- 10-/l]et/l}-p/per/d/na-1 -carbox/lato de (1R,2S,5R)-2-/soprop/l-5-met/lddohex/lo ( 6f y 6s)

A una solución de tioridacina (800 mg, 2,16 mmol) en 1,2-dicloroetano a 0°C se añadió cloroformiato de 1 -cloroetilo (0,256 ml, 2,37 mmol) y la reacción se calentó a reflujo durante 3 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se concentró a presión reducida. Al residuo se añadió metanol (20 ml, 500 mmol) y la solución resultante se calentó a reflujo durante 18 horas. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se disolvió en 20 ml de DCM. A esta solución se añadió DIEA (0,827 ml, 4,75 mmol) seguido por cloroformiato de (R)-(-)-mentilo (0,555 ml, 2,59 mmol) antes de agitar durante 18 horas a temperatura ambiente. En ese momento el contenido del matraz se transfirió a un embudo separador, se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó tres veces con bicarbonato de sodio saturado, una vez con agua y una vez con salmuera. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron a presión reducida. El residuo que quedó se purificó por cromatografía rápida usando acetato de etilo al 0-10% en hexano para dar 6f (diastereómero que eluye más rápido, 225 mg, 19%) como un aceite incoloro y 6s (isómero que eluye más lento, 238 mg, 21%) como un aceite amarillo claro.

6f: HPLC tiempo de retención: 7,02 min. ¹H RMN (400 MHz, CDCl^s) 8 (ppm) = 0,83-0,85 (m, 3H), 0,90-0,96 (m, 5H), 0,98-1,06 (m, 1H), 1,08-1,16 (m, 1H), 1,36-1,44 (m, 2H), 1,51-1,72 (m, 13H), 1,90-2,07 (m, 3H), 2,17-2,28 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,83-2,90 (m, 1H)), 3,78-3,89 (m, 2H), 4,04-4,12 (m, 1H), 4,47-4,53 (m, 1H), 4,58-4,65 (m, 1H), 6,79-6,79 (m, 1H), 6,84-6,88 (m, 2H), 6,93-6,97 (m, 1H), 7,08-7,09 (m, 1H), 7,16-7,20 (m, 2H); MS (ESI+) para C³¹H⁴²N²O²S² m/z 539 (M+H)⁺.

6s: HPLC tiempo de retención: 6,76 min, ¹H RMN (400 MHz, CDCl^a) 8 (ppm) = 0,78-0,83 (m, 3H), 0,90-0,94 (m, 5H), 1,02-1,11 (m, 1H), 1,37-1,68 (m, 14H), 1,86-1,95 (m, 2H), 2,19-2,29 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,82-2,90 (m, 1H), 3,80-3,92 (m, 2H), 4,08-4,17 (m, 1H), 4,47-4,58 (m, 2H), 6,79-6,80 (m, 1H), 6,84-6,89 (m, 2H), 6,92-6,97 (m, 1H), 7,07-7,11 (m, 1H), 7,15-7,19 (m, 2H); MS (ESI+) para C³¹H⁴²N²O²S² m/z 539 (M+H)⁺.

Clorhidrato de 10-[2-(1-metilpiperidin-2-il)etil]-2-(metiltio)-10H-fenotiadna (7f)

A una solución de 6f (200 mg, 0,371 mmol) en THF (10 ml, 100 mmol) a 0°C se añadió hidruro de litio y aluminio 2,0 M en THF (0,278 ml, 0,557 mmol). La reacción se calentó a temperatura ambiente y después se calentó a 50°C durante 18 horas. En ese momento la reacción se enfió a 0°C y se añadieron agua, hidróxido de sodio 1 M y agua. La mezcla se agitó durante la noche y después se filtró a través de una almohadilla de Celite. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo restante se purificó por cromatografía rápida usando metanol al 0-5% en DCM para dar el producto deseado (36 mg, 26%) como un aceite incoloro. Este aceite se disolvió en etanol y HCl 1 M, se concentró a presión reducida y después se concentro dos veces de acetato de etilo para dar 7f como un sólido blanco en rendimiento cuantitativo.

HPLC quiral tiempo de retención: 12,85 min. 1H RMN (400 MHz, MeOD) 8 (ppm) = 1,48-1,58 (m, 2H), 1,70-2,10 (m, 6H), 2,51 (s, 3H), 2,69 (s, 3H), 2,97-3,17 (m, 2H), 3,37-3,47 (m, 1H), 4,05-4,19 (m, 2H), 6,92-6,96 (m, 2H), 7,00-7,04 (m, 1H), 7,08-7,10 (m, 1H), 7,12-7,14 (m, 1H), 7,20-7,23 (m, 1H), 7,25-7,29 (m, 1H); MS (ESI+) para C²¹H²⁶N²S² m/z 371 (M+H)⁺.

Clorhidrato de 10-[2-(1-metilpiperidin-2-il)etil]-2-(metiltio)-10H-fenotiacina (7s)

De una manera análoga, 6s (220 mg, 0,408 mmol) proporcionó 7s (29 mg, 19%) como un aceite incoloro. Este aceite se disolvió en etanol y HCl 1 M, se concentró a presión reducida y después se concentró de acetato de etilo dos veces para dar 7s como un sólido blanco en rendimiento cuantitativo.

HPLC quiral tiempo de retención: 12,11 min. 1H RMN (400 MHz, MeOD) 8 (ppm) = 1,48-1,58 (m, 2H), 1,70-2,10 (m, 6H), 2,51 (s, 3H), 2,69 (s, 3H), 2,97-3,17 (m, 2H), 3,37-3,47 (m, 1H), 4,05-4,19 (m, 2H), 6,92-6,96 (m, 2H), 7,00-7,04 (m, 1H), 7,08-7,10 (m, 1H), 7,12-7,14 (m, 1H), 7,20-7,23 (m, 1H), 7,25-7,29 (m, 1H); MS (ESI+) para C²¹H²⁶N²S² m/z 371 (M+H)⁺.

Ejemplo 3 - Estructura cristalina de MALT1 en complejo con tioridacina (no según la presente invención)

La recogida de datos de rayos X y las estadísticas de refinamiento se muestran en la tabla 1.

Tabla 1: Recogida de datos y estadística de refinamiento.

Los valores en paréntesis son para la coraza de resolución más alta

[a] Rfusión = (Z|I - <I>|)/ZI, donde I es la intensidad observada y <I> es la intensidad media obtenida después de múltiples observaciones de reflexiones de simetría relacionada.

[b] Rtrabajo = (£||Fo| - |Fc||/£Fo, donde Fo son factores de estructura observados y Fc calculados

[c] Rlibre usa el 5% de reflexiones elegidas aleatoriamente.

La estructura cristalina de MALT1casp-ig3 humana dimérica sin ligando en complejo con el derivado de fenotiacina tioridacina reveló que el derivado de fenotiacina se unía en un bolsillo localizado en el sitio opuesto relativo al sitio activo de caspasa, en la interfase entre el dominio caspasa y la hélice que conecta el dominio Ig3 a1ig3 de MALT1 (Fig. 1a). Este sitio de unión alostérico, lejos del centro catalítico explica bien el hecho de que ciertos derivados de fenotiacina actúen como inhibidores no competitivos, reversibles (Nagel et al., Cáncer cell, 2012, 22, 825-837). La superposición de la construcción MALT1casp-ig3 enzimática activa unida al péptido hex-LRSR-AOMK con la estructura unida de tioridacina indicaba que la unión del compuesto entre las hélices a1 ig3 y aC prevenía el cambio conformacional a una enzima activa, la llamada segunda etapa de activación de MALT1 (Fig. 1 y Wiesmann et al., J. Mol. Biol. (2012), 419, 4-21). Además de las reorganizaciones del bucle del sitio activo inducidas por ligando, tres desplazamientos principales de hélices aC, aD y las láminas p 3A y 3B son esenciales para lograr la conformación de proteasa competente enzimática (Fig. 1b). El movimiento de las hélices aC y seguido aD estaba impedido por la tioridacina emparedada y posteriormente las láminas p 3A y 3B no pudieron realizar su desplazamiento esencial (Fig. 1b). Un análisis detallado del sitio de unión del inhibidor mostró que el sistema de anillos tricíclico de tioridacina estaba unido en un bolsillo hidrofóbico compuesto de los residuos A394, F398, L401 en la hélice aC y L346, V344 y V381 en las láminas p 1 y 2, respectivamente. La orientación del anillo 2-metil-sulfanilfenotiacina se demostró recogiendo un conjunto de datos a una longitud de onda de 1,9 A para detectar la señal anómala del azufre. Tras la unión del inhibidor, la cadena lateral del residuo de triptófano W580 en la hélice a1ig3 se dio la vuelta fuera del surco hidrofóbico en un medio expuesto a solvente que llevó a un desplazamiento sustancial de hélice a1ig3 (Fig. 1c). Probablemente desencadenado por la rotación de esta hélice que conecta al dominio, el dominio Ig3 entero se volvió más flexible y se desplazó en la punta del dominio hasta 7 A comparado con la estructura de MALT1 unida a péptido (Fig. 1a).

Ejemplo 4 - Ensayo de extinción de fluorescencia de triptófano

Para verificar el mecanismo de inhibición de MALT1 por ciertos derivados de fenotiacina tal como mepacina y tioridacina se desarrolló un ensayo de extinción de fluorescencia de triptófano. Para este ensayo, se aprovechó el hecho de que W580 es el único residuo de triptófano en la construcción MALT1Casp-Ig3 y está muy próximo a la fracción tricíclica unida de los derivados de fenotiacina. La fluorescencia del triptófano de MALT1Casp-Ig3 monomérica se registró con cantidades crecientes de tioridacina (Fig. 2a). La titulación siguió hasta que se observó saturación de la extinción.

Ejemplo 5 - Potencial inhibidor de MALT1

Una inspección detallada del mapa de densidad de electrones del inhibidor sugiere que solamente el enantiómero (S) de tioridacina se une en la estructura cristalina (Fig. 1). Para analizar la influencia de la quiralidad en la afinidad de unión y el potencial inhibidor, los enantiómeros individuales de mepacina y tioridacina se prepararon como se ha descrito anteriormente y se analizaron en consecuencia.

Mientras que (R)- y (S)-tioridacina mostraron afinidad de unión (Kd: (R)-tioridacina: 23,0 ± 0,6 pM; (S)-tioridacina: 21,3 ± 0,5 pM; cf. Fig.2a) y valores CI50: ((R)-tioridacina: 5,0 ± 1,5 pM; (S)-tioridacina: 4,8 ± 0,9 pM; cf. Fig.2c) equivalentes, (S)-mepacina mostró una afinidad de unión significativamente mayor (Kd: 8,5 ± 0,3 pM; cf. Fig. 2b) y un potencial inhibidor aproximadamente 9 veces aumentado (CI50: 0,36 ± 0,05 pM; cf. Fig. 2d) comparada con (R)-mepacina (Kd: 29,9 ± 0,9 pM; CI50: 3,2 ± 1,1 pM; cf. Fig. 2b y 2d).

Para analizar adicionalmente la influencia de la quiralidad en la afinidad de unión y el potencial inhibidor de los enantiómeros individuales de mepacina y tioridacina, estos enantiómeros se analizaron usando un ensayo de corte de MALT1 fluorogénico y el corte de RelB celular a través de detección de inmunotransferencia (Nagel et al., Cáncer cell, 2012, 22, 825-837). Mientras que (R)- y (S)-tioridacina mostraron valores CI50 equivalentes en MALT1 recombinante ((R)-tioridacina: 4,99 ± 1,52 pM; (S)-tioridacina: 4,83 ± 0,88 pM; cf. Fig. 3b), (S)-mepacina mostró un potencial inhibidor aumentado significativo (Cl50: 0,36 ± 0,05 pM) comparada con (R)-mepacina (CI50: 3,24 ± 1,1 pM; cf. Fig. 3a). Una incubación de la línea celular HBL1 de ABC-DLBCL con ambos enantiómeros de mepacina mostró un rescate dependiente de la dosis de corte de RelB derivado de MALT1 (Fig. 3c). Comparable a sus efectos en MALT1 recombinante los enantiómeros tuvieron un impacto diferente en MALT1 celular, teniendo (S)-mepacina una CE50 mucho menor (0,40 ± 0,17 pM) comparada con el enantiómero (R) (1,76 ± 0,48 pM).

Ejemplo 6 - Potencial in vivo de (S)-mepacina

Para determinar el potencial in vivo de (S)-mepacina el compuesto se ensayó en diferentes modelos murinos preclínicos. En el modelo de xenoinjerto de DLBCL ratones NSG se inyectaron por vía subcutánea con la línea celular de ABC-DLBCL dependiente de MALT1 OCI-Ly10 y la línea celular de GCB DLBCL independiente de MALT1 Su-DHL6 en flancos opuestos de ratones individuales. Después de 13 días de crecimiento de tumor los ratones se trataron con PBS y dos dosis de (S)-mepacina. Ambas dosis produjeron una reducción de crecimiento selectiva del tumor ABC DLBCL, mientras el tumor control GCB DLBCL no estuvo afectado, lo que demuestra una potencia antitumoral específica y selectiva de (S)-mepacina (Fig. 4).

Para determinar adicionalmente el perfil de (S)-mepacina para una posible aplicación en trastornos inmunitarios se ensayó el compuesto en dos modelos murinos, EAE (encefalomielitis alérgica experimental) y CIA (artritis inducida por colágeno), que son modelos para esclerosis múltiple y artritis reumatoide, respectivamente. En el modelo de EAE los ratones se inmunizaron primero con péptidos MOG35-55 y el tratamiento con (S)-mepacina (16 mg/kg) empezó después de que desarrollaran una puntuación de enfermedad clínica de aproximadamente 1. El tratamiento con (S)-mepacina produjo una reducción en la gravedad de EAE (Fig. 5a). Este resultado se reflejó por los datos histopatológicos donde la formación de focos inflamatorios y desmielinización de neuronas también se redujo (Fig. 5b). Además, el tratamiento con (S)-mepacina redujo la pérdida de peso inducida por EAE de los ratones (Fig. 5c).

Se observó un resultado similar en el modelo de CIA donde el tratamiento de los ratones empezó con una puntuación clínica de 3-4. Aquí, (S)-mepacina también redujo significativamente la gravedad de la enfermedad (Fig. 6a). El fenotipo mejorado de los ratones enfermos también se correlacionó con una fuerte reducción de la inflamación, formación de pannus, daño al cartílago y resorción de hueso relacionados con CIA (Fig. 6b).

Claims

REIVINDICACIONES

Un proceso para la preparación de 10-{[(3S)-1 -metilpiperidin-3-il]-metM}-10H-fenotiacina (el enantiómero S de mepacina) y solvatos, sales, formas isotópicamente marcadas y combinaciones de los mismos, que comprende la etapa de hacer reaccionar fenotiacina con un derivado de piperidina de la siguiente fórmula (3)

en donde LG es un grupo saliente,

en donde

A) el proceso comprende la etapa de convertir una amina terciaria de la siguiente fórmula (2)

al derivado de piperidina de fórmula (3) y/o

B) en donde LG se selecciona del grupo que consiste en mesilato, triflato, y tosilato.

El proceso de la reivindicación 1, que además comprende la etapa de convertir un carbamato de la siguiente fórmula (1 )

en donde R es un grupo alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, a la amina terciaria de fórmula (2).

El proceso de la reivindicación 2, en donde la etapa de convertir el carbamato de fórmula (1) a la amina terciaria de fórmula (2) se realiza en presencia de un agente reductor.

El proceso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la etapa de hacer reaccionar fenotiacina con el derivado de piperidina de fórmula (3) y/o la etapa de convertir la amina terciaria de fórmula (2) al derivado de piperidina de fórmula (3) se realiza en presencia de una base química.