BRPI0619792A2 - anticorpo monoclonal anti-il 17 humanizado, composição e uso do referido anticorpo - Google Patents

Abstract

ANTICORPO MONOCLONAL ANTI-IL 17 HUMANIZADO, COMPOSIçãO E USO DO REFERIDO ANTICORPO. A presente invenção refere-se a anticorpos anti-IL-17 que são caracterizados como tendo uma alta afinidade e uma taxa de dissociação lenta para IL-17 humana. Os anticorpos da invenção podem ser anticorpos quiméricos, humanizados ou totalmente humanos, imunoconjugados dos anticorpos ou fragmentos fixadores de antígeno dos mesmos. Os anticorpos da invenção são úteis em particular para tratamento de distúrbios auto-imunes, inflamatórios, proliferativos celulares e de desenvolvimento.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTICORPO MONOCLONAL ANTI-IL 17 HUMANIZADO, COMPOSIÇÃO E USO DO REFERIDO ANTICORPO".

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se ao campo da medicina, particu- larmente ao campo de anticorpos monoclonais contra IL-17 humana. A in- venção refere-se à neutralização de anticorpos monoclonais anti-IL-17 que se ligam com alta afinidade a um epitopo antigênico não linear ou conforma- cional de IL-17 compreendendo os aminoácidos DGNVDYH. Os anticorpos da invenção podem ser anticorpos quiméricos, humanizados ou humanos, imunoconjugados dos anticorpos ou fragmentos fixadores de antígeno dos mesmos e são úteis como medicamento para o tratamento de distúrbios au- to-imunes, inflamatórios, proliferativos celulares e de desenvolvimento. Antecedentes da Invenção

A família IL-17 de citocinas atualmente inclui IL-17A, IL-17B, IL- 17C, IL-17D, IL-17E e IL-17F. Todos os membros da família IL-17 possuem quatro resíduos cisteína altamente conservados que estão envolvidos na for- mação de ligação dissulfeto intracadeias e possuem dois ou mais resíduos cis- teína que podem estar envolvidos nas ligações dissulfeto intercadeias. Os membros da família IL-17 não possuem qualquer semelhança de seqüência com quaisquer outras citocinas conhecidas. No entanto, um homólogo viral da IL- 17A foi encontrado na estrutura de leitura aberta 13 do herpesvírus saimiri (Yao, Z. et al., Immunity, 3:811, 1995) e tem 72% de identidade de resíduos aminoácido com a IL-17A humana. Foram reportadas diversas funções para os membros da família IL-17 que envolvem principalmente a regulação da resposta imune.

A interleucina 17 (IL-17, também denominada IL-17A) é uma glicoproteína homodimérico de 20-30 kD produzida predominantemente por células CD4+ T ativadas e funciona como uma citocina pró-inflamatória. Quando um membro particular da família IL-17 é mencionado simplesmente como "IL-17," entende-se que o membro da família indicado é a IL-17A. A IL- 17 é secretada por células T ativadas em pontos de inflamação foram da circulação sistêmica. A IL-17 se liga a um receptor transmembranoso tipo I denominado IL-17R que é uma proteína grande e expressa em toda parte que não demonstra semelhança de seqüência com outros receptores de ci- tocina conhecidos. A IL-17 possui diversas propriedades biológicas que in- cluem supra-regulação das moléculas de adesão e indução da produção de múltiplas citocinas e quimiocinas inflamatórias de vários tipos de células in- cluindo sinoviócitos, condrócitos, fibroblastos, células endoteliais, células epiteliais, queratinócitos, e macrófagos. Também, a IL-17 induz o recruta- mento de neutrófilos para um sítio inflamado através da indução da liberação de quimicinas, estimula a produção de prostaglandinas e metaloproteinases, e inibe a síntese de proteoglicano. Além disso, a IL-17 desempenha um pa- pel importante na maturação de células progenitoras hematopoiéticas. Já foi demonstrado que a IL-17 possui papéis sinalizadores em diferentes órgãos e tecidos incluindo pulmão, cartilagem articular, osso, cérebro, células hema- topoiéticas, rim, pele e intestino. Para uma recapitulação da atividade da IL- 17 vide, por exemplo, Kolls & Linden, Immunity 21:467-476, 2004, ou Fossi- ez, et al. Int. Rev. Immunol. 16:541, 1998.

Níveis aumentados de IL-17 (isto é, IL-17A) foram associados a diversas condições, doenças ou distúrbios que incluem inflamação das vias aéreas, artrite reumatóide ("RA"), osteoartrite, erosão óssea, abscessos e adesões intraperitoneais, distúrbio do intestino inflamado ("IBD"), rejeição de aloenxerto, psoríase, certos tipos de câncer, angiogênese, aterosclerose e esclerose múltipla ("MS") (para uma recapitulação vide Witkowski, et al., CeH Mol. Life Sei. 61:567-579, 2004). Tanto a IL-17 como a IL-17R são su- pra-reguladas no tecido sinovial de pacientes com RA. O bloqueio de uma bioatividade de IL-17 por meio da ligação de um anticorpo específico para IL- 17 ou de um receptor solúvel à IL-17 reduz a inflamação e a erosão óssea em vários modelos animais de artrite. (Vide, por exemplo, Lubberts et al., Arthritis & Rheumatism, 50:650-659, 2004). Além disso, a IL-17 tem efeitos independentes da IL-Ιβ sobre o rompimento da matriz de colágeno e infla- mação e lesão nas articulações, enquanto que a IL-17 tem sinergia com o TNF-α para amplificar a inflamação.

Por conseguinte, dada a sua distribuição localizado no sítio de inflamação, a IL-17 parece ser um novo alvo para o tratamento de RA e ou- tras doenças inflamatórias ou auto-imunes com um perfil de segurança po- tencialmente maior que os fármacos que atacam a circulação sistêmica de citocinas pró-inflamatórias tais como TNF-α. Os atuais bioprodutos aprova- dos pelo FDA (anticorpos ENBREL®, REMICADE® e HUMIRA®) que se ligam ao TNF-α e o neutralizam demonstraram eficácia na redução dos sinais e sintomas de RA e na diminuição da progressão da doença em um subgrupo de pacientes com RA. No entanto, nem os pacientes com RA respondem da mesma forma à inibição de uma bioatividade de TNF-α com esses bioprodu- tos. Adicionalmente, o mRNA da IL-17 é aumentado em lesões de esclerose múltipla e nas células mononucleares no sangue e no líquido cerebrospinal de pacientes com MS, particularmente durante a exacerbação clínica. Por conseguinte, são necessárias composições que antagonizem ou neutralizem a atividade de IL-17 para tratar distúrbios, doenças ou condições onde a presença de bioatividade de IL-17 causa ou contribui para um efeito patoló- gico indesejável ou onde uma redução na bioatividade de IL-17 contribui pa- ra um efeito terapêutico desejável, incluindo distúrbios inflamatórios, distúr- bios proliferativos celulares e de desenvolvimento e distúrbios auto-imunes tais como RA e MS e IBD.

Existe a necessidade de um anticorpo anti-IL-17 neutralizante que se ligue especificamente à IL-17 de origem humana assim como à IL-17 de um mamífero não humano permitindo dessa forma que o anticorpo seja usado em estudos pré-clínicos e clínicos in vivo. Além disso, existe a neces- sidade de um anticorpo específico para IL-1 que se ligue à IL-17 com alta afinidade e/ou que tenha uma taxa de dissociação baixa dessa forma permi- tindo que a dose terapêutica eficaz seja minimizada resultando em adminis- tração menos freqüente com tal anticorpo do que com um anticorpo que se liga à IL-17 com afinidade mais baixa (isto é, um mais K0 alto) e/ou que tem uma taxa de dissociação mais alta. Um anticorpo específico para IL-17 de alta afinidade também é desejável porque ele pode permitir que o anticorpo seja administrado ao paciente por via subcutânea em vez da via intravenosa. Também existe a necessidade de um anticorpo específico para IL-17 com um valor de IC50 baixo em um ensaio de bioatividade de IL-17 para gerar um anticorpo anti-IL-17 terapêutico com uma dose terapêutica eficaz mínima. Também é desejável fornecer um anticorpo específico para IL-17 onde uma resposta imune ao anticorpo criado pelo paciente que recebe o anticorpo é reduzida a um mínimo. A presente invenção satisfaz essas necessidades e oferece vantagens relacionadas.

Sumário da Invenção

Os anticorpos da invenção são anticorpos monoclonais anti-IL- 17 quiméricos, humanizados, ou totalmente humanos, e porções fixadoras de antígeno dos mesmos, que se ligam a um epitopo não linear compreen- dendo os aminoácidos DGNVDYH (SEQ ID N°: 276) de IL-17 e antagonizam M ou neutralizam pelo menos uma atividade biológica in vitro ou in vivo associ- ada à IL-17 ou a uma porção da mesma.

Em uma modalidade, os anticorpos da invenção têm um IC5o menor ou igual a cerca de 1 nM, 900 pM, 800 pM, 700 pM, 600 pM, 560 pM ou 500 pM em um ensaio repórter de IL-8 in vitro como descrito, por exem- plo, no exemplo 6A deste relatório ou menor ou igual a 560 pM em um en- saio repórter de GROa in vitro como descrito, por exemplo, no exemplo 6B deste relatório.

Em uma outra modalidade, os anticorpos da invenção caracteri- zam-se por uma forte afinidade de ligação (K0) para IL-17 humana, isto é, menor que cerca de 7 pM, 6,5 pM, 6,0 pM, 5,5 pM, 5,0 pM, 4,5 pM ou 4,0 pM. Alternativamente, os anticorpos da invenção caracterizam-se por um K0 para IL-17 humana não superior a cerca de 7 pM, 6,5 pM, 6,0 pM, 5,5 pM, 5,0 pM, 4,5 pM ou de preferência não superior a cerca de 4,0 pM. De prefe- rência os anticorpos da invenção são ainda caracterizados por uma taxa kotf de IL-17 humana menor que 2 χ 10"5 s"1.

Em uma outra modalidade, um anticorpo anti-IL-17 da invenção é caracterizado por se ligar especificamente à IL-17 humana assim como à IL-17 de macaco cinomolgo embora não se ligue à IL-17 de camundongo ou rato em níveis mais altos que o de referência. Além disso, um anticorpo anti- IL-17 da invenção se liga à IL-17 humana (isto é, IL-17A) mas não se liga à IL-17B, C, D1 E ou F humana.

Em uma modalidade, um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da in- venção compreende um polipeptídio de região variável de cadeia leve ("LC- VR") compreendendo 3 seqüências de CDR que estão presentes juntas em um Fab listado na Tabela 3 abaixo e que estão presentes no anticorpo da invenção na mesma posição de CDR que no Fab listado na Tabela 3. De preferência um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção compreende um polipeptídio LCVR com uma seqüência de aminoácidos selecionada do gru- po que consiste em SEQ ID NoS: 178-243.

Em uma outra modalidade, um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção compreende um polipeptídio de região variável de cadeia pesa- da ("HCVR") compreendendo 3 CDRs que estão presentes juntas em um Fab listado na Tabela 2 abaixo e que estão presentes no anticorpo da inven- ção na mesma posição de CDR que no Fab listado na Tabela 2. De prefe- rência um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção compreende um poli- peptídio HCVR com uma seqüência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NoS: 56-121.

Em uma outra modalidade, um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção compreende um polipeptídio LCVR compreendendo 3 CDRs que estão presentes juntas em um Fab listado na Tabela 3 e que estão pre- sentes no anticorpo da invenção na mesma posição de CDR que no Fab listado na Tabela 3 e compreende ainda um polipeptídio HCVR compreen- dendo 3 CDRs que estão presentes juntas em um Fab listado na Tabela 2 e que estão presentes no anticorpo da invenção na mesma posição de CDR que no Fab listado na Tabela 2. De preferência as 6 CDRs de um anticorpo da invenção, ou de um fragmento funcional do mesmo, existem juntas em um Fab listado na Tabela 1 abaixo e estão presentes no anticorpo da inven- ção na mesma posição de CDR que no Fab listado na Tabela 1.

Em uma modalidade preferida, um anticorpo monoclonal anti-IL- 17 da invenção compreende (i) um polipeptídio LCVR com uma seqüência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NoS: 178-243 e (ii) um polipeptídio HCVR com uma seqüência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°S: 56-121. Em uma modalidade mais preferida, um anticorpo da invenção compreendendo um polipeptídio LCVR com uma seqüência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°S: 178-243 compreende ainda o polipeptídio HCVR selecionado do grupo que consiste em SEQ ID N°S: 56-121 que está presente em um Fab listado na Tabela 1 que compreende LCVR particular presente no anticorpo.

Em uma outra modalidade, um anticorpo monoclonal da inven- ção é um anticorpo que compete pela ligação à IL-17 humana, ou a uma porção da IL-17 humana, com um anticorpo competitivo onde o anticorpo competitivo compreende dois polipeptídios com as seqüências de aminoáci- dos de SEQ ID N°S: 241 e 118.

Em uma outra modalidade, um LCVR de um anticorpo monoclo- nal anti-IL-17 da invenção compreende 1, 2 ou 3 peptídios, de preferência 3 peptídios, selecionados do grupo que consiste em peptídios com uma se- qüência como as mostradas em (a) SEQ ID N°S: 122-149; (b) SEQ ID N°S: 150-167, e (c) SEQ ID N°S: 168-177 (isto é, um peptídio de (a), um peptídio de (b) e um peptídio de (c) para um anticorpo compreendendo 3 referidos peptídios). Um peptídio com a seqüência mostrada nas SEQ ID N°S: 122- 149, quando presente em um anticorpo da invenção, está em CDRL1. Um peptídio com a seqüência mostrada nas SEQ ID N°S: 150-167, quando pre- sente em um anticorpo da invenção, está em CDRL2. Um peptídio com a seqüência mostrada nas SEQ ID N°S: 150-167, quando presente em um an- ticorpo da invenção, está em CDRL3.

Em uma outra modalidade, um HCVR de um anticorpo monoclo- nal anti-IL-17 da invenção compreende 1, 2 ou 3 peptídios, de preferência 3 peptídios, selecionados do grupo que consiste em peptídios com uma se- qüência como aquela mostrada em (a) SEQ ID N°s: 11-28; (b) SEQ ID N°s: 29-32, e (c) SEQ ID N°s: 33-55 e 261 (isto é, um peptídio de (a), um peptídio de (b) e um peptídio de (c) para um anticorpo compreendendo 3 referidos peptídios). Um peptídio com a seqüência mostrada nas SEQ ID N°s: 11-28, quando presente no referido anticorpo, está em CDRH1. Um peptídio com a seqüência mostrada nas SEQ ID N°s: 29-32, quando presente no referido anticorpo, está em CDRH2. Um peptídio com a seqüência mostrada nas SEQ ID N°s: 33-55 e 261, quando presente no referido anticorpo, está em CDRH3.

A presente invenção fornece ainda um anticorpo monoclonal anti-IL-17 compreendendo seis peptídios selecionados do grupo que consis- te em peptídios com uma seqüência como aquela mostrada em (a) SEQ ID N°s: 122-149; (b) SEQ ID N°s: 150-167, (c) SEQ ID N°s:168-177, (d) SEQ ID N°s: 11-28; (e) SEQ ID N°s: 29-32, e (f) SEQ ID N°s: 33-55 e 261 (isto é, um peptídio de cada um de (a-f)); de preferência os seis peptídios coexistem em um Fab listado na Tabela 1 deste relatório. Um peptídio com a seqüência mostrada nas SEQ ID N°s: 122-149, quando presente em um anticorpo da invenção, está em CDRL1. Um peptídio com a seqüência mostrada nas SEQ ID N°s: 150-167, quando presente em um anticorpo da invenção, está em CDRL2. Um peptídio com a seqüência mostrada nas SEQ ID N°s: 150-167, quando presente em um anticorpo da invenção, está em CDRL3. Um peptí- dio com a seqüência mostrada nas SEQ ID N°s: 11-28, quando presente no referido anticorpo, está em CDRH1. Um peptídio com a seqüência mostrada nas SEQ ID N°s: 29-32, quando presente no referido anticorpo, está em CDRH2. Um peptídio com a seqüência mostrada nas SEQ ID N°s: 33-55 and 261, quando presente no referido anticorpo, está em CDRH3.

A presente invenção fornece ainda um anticorpo monoclonal anti-IL-17 compreendendo os seis peptídios com as seqüências como aque- las mostradas nas SEQ ID N°s: 247, 248, 249, 244, 245 e 246. O peptídio com a seqüência mostrada em SEQ ID N°: 247 está em CDRL1. O peptídio com a seqüência mostrada em SEQ ID N°: 248 está em CDRL2. O peptídio com a seqüência mostrada em SEQ ID N0: 249 está em CDRL3. O peptídio com a seqüência mostrada em SEQ ID N0: 244 está em CDRH1. O peptídio com a seqüência mostrada em SEQ ID N°: 245 está em CDRH2. O peptídio com a seqüência mostrada em SEQ ID N0: 246 está em CDRH3.

Um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção pode compre- ender ou consistir em um anticorpo intato (isto é, comprimento integral), um anticorpo substancialmente intato ou uma porção fixadora de antígeno do mesmo, por exemplo, um fragmento Fab, um fragmento F(ab')2 ou um frag- mento Fv de cadeia simples. Além disso, um anticorpo da invenção pode ser marcado com um marcador detectável, imobilizado em uma fase sólida e/ou conjugado a um composto heterólogo, por exemplo, uma enzima, toxina ou molécula de polietileno glicol.

Em uma outra modalidade, a invenção fornece um método de preparação de um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção compreen- dendo manter uma célula hospedeira da invenção (isto é, célula hospedeira que fora transformada, transduzida ou infectada com um vetor (ou vetores) da invenção expressando um anticorpo da invenção) em condições apropri- adas para expressão de um anticorpo monoclonal da invenção, com o que 1,1 tal anticorpo é expresso. O método pode compreender ainda a etapa de iso- lar o anticorpo monoclonal da invenção da célula ou de preferência do meio de cultura no qual a célula cresce.

São contemplados usos diagnósticos para os anticorpos mono- clonais da invenção. Em uma aplicação em diagnóstico, a invenção fornece um método para determinar o nível de proteína IL-17 em uma amostra com- preendendo expor a amostra a ser testada a um anticorpo anti-IL-17 da in- venção em condições de ligação e determinar a ligação específica do anti- corpo à amostra. Um anticorpo anti-IL-17 da invenção pode ser usado para determinar os níveis de IL-17 em amostras de teste comparando-se os valo- res da amostra de teste com uma curva padrão gerada pela ligação do refe- rido anticorpo a amostras com quantidades conhecidas de IL-17. A invenção fornece ainda um kit compreendendo um anticorpo da invenção e, de prefe- rência, instruções de uso do anticorpo para detectar a proteína IL-17 em uma amostra.

A invenção fornece uma composição, de preferência uma com- posição farmacêutica, compreendendo um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção. A composição farmacêutica da invenção pode compreender ainda um veículo, excipiente é/ou diluente farmaceuticamente aceitável. Na referida composição farmacêutica, o anticorpo monoclonal anti-IL-17 da in- venção é o único componente ativo. De preferência a composição farmacêu- tica compreende uma população homogênea ou substancialmente homogê- nea de um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção. A composição para uso terapêutico é fisiologicamente compatível, estéril e pode ser liofilizada e opcionalmente fornecida com um diluente apropriado.

A invenção fornece um método para inibir pelo menos uma bioa- tividade de IL-17 em um animal, de preferência um mamífero, mais preferi- velmente um ser humano, com necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz, ou uma quantidade neutralizante de IL-17, de um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção ao referido animal. A invenção fornece ainda um método para tratar uma doença ou distúrbio melhorado pela neutralização ou antagonização de uma bioatividade de IL-17, por exemplo, inibição da transdução de sinal resultan- te da ligação de IL-17 ao seu receptor, que compreende administrar a um paciente (por exemplo, um ser humano) com necessidade de tal tratamento ou prevenção uma quantidade terapeuticamente eficaz ou uma quantidade neutralizante de IL-17 de um anticorpo monoclonal da invenção.

A invenção incorpora um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da in- venção para uso na produção de um medicamento para administração a um mamífero, de preferência um ser humano, para o tratamento, por exemplo, de um distúrbio auto-imune ou um distúrbio inflamatório ou um distúrbio pro- liferativo celular.

A invenção incorpora ainda um artigo fabricado compreendendo um material de embalagem e um anticorpo da invenção contido no referido material de embalagem, onde o referido material de embalagem compreen- de um encarte que indica que o anticorpo neutraliza especificamente uma atividade de IL-17 ou diminui o nível de IL-17 funcional presente no sistema.

A invenção fornece ainda moléculas de ácido nucléico isoladas codificando um anticorpo da invenção ou uma cadeia leve ou uma cadeia pesada do mesmo; um vetor (ou vetores) compreendendo o referido ácido nucléico, opcionalmente operacionalmente ligado a seqüências de controle reconhecidas por uma célula hospedeira transformada com o vetor; uma cé- lula hospedeira compreendendo aquele vetor; um processo para produzir um anticorpo da invenção compreendendo cultivar a célula hospedeira para que o ácido nucléico seja expresso e, opcionalmente, recuperar o anticorpo do meio de cultura da célula hospedeira.

A invenção fornece ainda moléculas de ácido nucléico isoladas codificando IL-17 de macaco cinomolgo (SEQ ID N°: 253) ou IL-17 de coelho (SEQ ID N°: 251); a proteína IL-17 codificada pelo ácido nucléico de macaco ou de coelho (SEQ ID N°s: 10 ou 9 respectivamente); vetores compreenden- do a referida molécula de ácido nucléico; célula hospedeira compreendendo o referido vetor; e um processo para produzir IL-17 de macaco cinomolgo ou IL-17 de coelho.

Breve Descrição dos Desenhos

A figura 1 mostra o alinhamento de seqüências de aminoácidos de membros da família IL-17 humana de proteínas (IL-17, IL-17B, IL-17C, IL- 17D, IL-17E e IL-17F).

A figura 2 mostra o alinhamento de seqüências de aminoácidos de IL-17 de ser humano, coelho, rato, macaco cinomolgo e espécies murino. Descrição Detalhada da Invenção

A invenção apresenta anticorpos monoclonais anti-IL-17 quimé- ricos, humanizados ou totalmente humanos, ou porções fixadoras de antíge- no dos mesmos, capazes de neutralizar ou antagonizar pelo menos uma atividade de IL-17 in vitro e/ou in vivo. De preferência, tais anticorpos da in- venção são ainda caracterizados como tendo um IC5o menor que cerca de 600 ou 560 pM, por exemplo, em um ensaio repórter de IL-8 in vitro ou em um ensaio repórter de GROa (vide, por exemplo, o exemplo 6) e/ou de pre- ferência tendo uma afinidade de ligação forte com IL-17 menor que 4 pM. Os anticorpos da invenção são ainda caracterizados por se ligarem especifica- mente à IL-17 humana e à IL-17 de macaco cinomolgo IL-17 (SEQ ID N°s: 1 e 10 respectivamente) mas não se ligarem à IL-17 murina ou de rato (SEQ ID N°s: 7 e 8 respectivamente). O epitopo antigênico ao qual os anticorpos monoclonais da invenção se ligam é um epitopo não linear de IL-17 humana (e de macaco) e compreende os resíduos DGNVDYH (SEQ ID N°: 276) de IL-17. Um anticorpo da invenção faz contato com o peptídio DGNVDYH quando está no contexto da IL-17 de comprimento integral. Definições

"Interleucina 17" também denominada "IL-17" ou "IL-17A" é uma proteína homodimérica glicosilada de 20-30 kD. O gene da IL-17 humana codifica uma proteína de 155 aminoácidos que tem uma seqüência de sinal de 19 aminoácidos e um segmento maduro de 136 aminoácidos. A IL-17 humana mostra uma identidade de seqüência de aminoácidos de 62,5% e 58% com as seqüências da IL-17 de aminoácidos de camundongo e de rato, respectivamente, como mostrado na figura 2. A IL-17 humana mostra identi- dade de seqüência de aminoácidos de 97,4% com a IL-17 de macaco cino- molgo.

Um anticorpo de comprimento integral como existe na natureza é uma molécula de imunoglobulina compreendida de quatro cadeias peptídi- cas, duas cadeias pesadas (H) (cerca de 50 - 70 kDa quando de comprimen- to integral) e duas cadeias leves (L) (cerca de 25 kDa quando de compri- mento integral) interconectadas por ligações dissulfeto. A porção amino- terminal de cada cadeia inclui uma região variável de cerca de 100 - 110 ou mais aminoácidos responsáveis principalmente pelo reconhecimento de an- tígenos. A porção carbóxi-terminal de cada cadeia define uma região cons- tante responsável principalmente pela função de efetores.

As cadeias leves são classificadas como capa ou lâmbda e ca- racterizam-se por uma região constante particular. Cada cadeia leve é com- preendida de uma região variável de cadeia leve N-terminal (doravante "LC- VR") e uma região constante de cadeia leve compreendida de domínio, CL. As cadeias pesadas são classificadas como gama, mu, alfa, delta ou épsilon, e definem o isótipo do anticorpo como IgG, IgM, IgA, IgD, e IgE, respectiva- mente e vários destes podem ser ainda divididos em subclasses (isótipos) por exemplo, IgGi, IgG2, IgG3, IgG4, IgAi e IgA2. Cada tipo de cadeia pesada caracteriza-se por uma região constante particular. Cada cadeia pesada é compreendida de uma região variável de cadeia pesada N-terminal (dora- vante "HCVR") e uma região constante de cadeia pesada. A região constan- te de cadeia pesada é compreendida de três domínios (CH1, CH2, e CH3) para IgG1 IgD1 e IgA; e 4 domínios (CH1, CH2, CH3, e CH4) para IgM e IgE.

As regiões HCVR e LCVR podem ainda ser subdivididas em re- giões de hipervariabilidade, denominadas regiões determinantes de com- plementaridade ("CDRs"), intercaladas com regiões que são conservadas, denominadas regiões de estrutura ("FR"). Cada HCVR e LCVR é composta de três CDRs e quatro FRs1 dispostas do terminal amino até o terminal car- bóxi na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Para os anticorpos de comprimento integral da invenção as cadeias leves de prefe- rência compreende, a jusante de FR4, um polipeptídio com a seqüência mostrada em SEQ ID N°: 277. Para os anticorpos de comprimento integral da invenção as cadeias pesadas de preferência compreendem, a jusante de M FR4, um polipeptídio com a seqüência mostrada em SEQ ID N°: 278. Dora- vante as CDRs da cadeia pesada são denominadas "CDRH1, CDRH2, e CDRH3" e as 3 CDRs da cadeia leve são denominadas "CDRL1, CDRL2 e CDRL3." As CDRs contêm a maioria dos resíduos que formam interações específicas com o antígeno. A numeração e o posicionamento dos resíduos de aminoácido das CDRs nas regiões HCVR e LCVR estão de acordo com a bastante conhecida convenção de numeração de Kabat.

O termo "anticorpo", com referência a um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção (ou simplesmente "anticorpo da invenção"), conforme usado neste relatório, refere-se a um anticorpo monoclonal. Um "anticorpo monoclonal" conforme usado neste relatório refere-se a um anticorpo de um roedor, de preferência um anticorpo murino, um anticorpo quimérico, um an- ticorpo humanizado ou um anticorpo totalmente humano, a menos de outra forma indicado. Os anticorpos monoclonais da invenção podem ser produzi- dos usando, por exemplo, técnicas de hibridoma bastante conhecidas na literatura, assim como tecnologias recombinantes, tecnologia de exibição de fagos, tecnologias sintéticas ou recombinantes ou combinações destas tec- nologias facilmente conhecidas na literatura. O termo "anticorpo monoclonal" conforme usado neste relatório não se limita a anticorpos produzidos por meio da tecnologia de hibridoma. "Anticorpo monoclonal" refere-se a um an- ticorpo que é derivado de uma única cópia ou clone, incluindo por exemplo, clone de eucariota, procariota ou fago, e não o método pelo qual ele é pro- duzido. Um "anticorpo monoclonal" pode ser um anticorpo intato (compreen- dendo uma região Fc completa ou de comprimento integral), um anticorpo substancialmente intato, ou uma porção ou fragmento de um anticorpo com- preendendo uma porção fixadora de antígeno, por exemplo, um fragmento Fab, um fragmento Fab1 ou um fragmento F(ab')2 de um anticorpo murino ou de um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. O fragmento "Fab" con- tém um domínio variável e constante da cadeia leve e um domínio variável e o primeiro domínio constante (CH1) da cadeia pesada. Os fragmentos de anticorpo "F(ab')2" compreendem um par de fragmentos Fab que geralmente são covalentemente ligados perto de seus terminais carbóxi por cisteínas de dobradiça entre os mesmos. Outros acoplamentos químicas de fragmentos de anticorpo também são conhecidos na literatura.

A região variável de cada par de cadeias leve-pesada forma um sítio fixador de antígeno do anticorpo. Por conseguinte, um anticorpo IgG intato tem dois sítios de ligação. Exceto em anticorpos bifuncionais ou bies- pecíficos, os dois sítios fixadores de antígeno do anticorpo são os mesmos. Conforme usado neste relatório, a "porção fixadora de antígeno" ou "região fixadora de antígeno" ou "domínio fixador de antígeno" refere-se alternada- mente à porção de uma molécula de anticorpo que contém os resíduos de aminoácidos que interagem com um antígeno e conferem ao anticorpo sua especificidade e afinidade para o antígeno. Esta porção de anticorpo inclui os resíduos de aminoácidos de "estrutura" necessários para manter a con- formação apropriada dos resíduos fixadores de antígeno. De preferência, as CDRs da região fixadora de antígeno dos anticorpos da invenção são intei- ramente ou substancialmente de origem murina, opcionalmente com certos resíduos de aminoácidos alterados, por exemplo, substituídos com um resí- duo de aminoácido diferente, (vide, por exemplo, as Tabelas 2 e 3) para oti- mizar uma propriedade particular do anticorpo, por exemplo, Kd, koff, IC50· De preferência as regiões de estrutura dos anticorpos da invenção são de ori- gem humana ou substancialmente de origem humana (pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de origem humana. As regiões de estrutura preferidas dos anticorpos da invenção têm as seguintes seqüên- cias: SEQ ID N°s: 262 (HCVR FR1), 263 (HCVR FR2), 264 (HCVR FR3), 265 (HCVR FR4), 266 (LCVR FR1), 267 (LCVR FR2), 268 (LCVR FR3), 269 (LCVR FR4) e obedecem a numeração de Kabat. Em outras modalidades, a região fixadora de antígeno de um anticorpo de IL-17 da invenção pode ser derivada de similares espécies não humanas que incluem, porém sem limi- tação, coelho, rato ou hamster. Alternativamente, a região fixadora de antí- geno pode ser derivada de uma seqüência humana.

Além disso, um "anticorpo monoclonal" conforme usado neste relatório pode ser um fragmento Fv de cadeia simples que pode ser produzi- do unindo-se do DNA codificando uma LCVR e o DNA codificando uma HC- 1,1 VR com uma seqüência Iigadora (vide Pluckthun, The Pharmacology of Mo- noclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg & Moore eds., Springer-Verlag, New York, págs. 269-315, 1994). Fica entendido que independentemente de os fragmentos serem especificados, o termo "anticorpo" conforme usado neste relatório inclui tais fragmentos assim como formas de cadeia simples. Contanto que a proteína retenha a capacidade de ligar especificamente ou preferivelmente ao seu alvo pretendido (isto é, epitopo ou antígeno), ela está incluída no termo "anticorpo". Os anticorpos podem ser glicosilados ou não e ainda assim se enquadram nos limites da invenção.

Uma população de "anticorpos monoclonais" refere-se a uma população homogênea ou substancialmente homogênea de anticorpos (isto é, pelo menos cerca de 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, mais preferivelmente pelo menos cerca de 97% ou 98% ou ainda mais preferivel- mente pelo menos 99% dos anticorpos na população vão competir em um ensaio ELISA pelo mesmo antígeno ou epitopo ou mais preferivelmente os anticorpos são idênticos na seqüência de aminoácidos. Os anticorpos po- dem ser glicosilados ou não e ainda assim se enquadram nos limites da in- venção. Os anticorpos monoclonais podem ser homogêneos se tiverem se- qüência de aminoácidos idêntica embora possam diferir em uma modificação pós-translacional, por exemplo, no padrão de glicosilação.

Um anticorpo "variante" neste relatório refere-se a uma molécula que difere na seqüência de aminoácidos da seqüência de aminoácidos de um anticorpo "parental" devido à adição, deleção e/ou substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos da seqüência do anticorpo parental. Em uma modalidade preferida, o anticorpo variante compreende pelo menos uma (por exemplo, de uma a cerca de dez, e de preferência 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8) adição, deleção e/ou substituição de aminoácido nas regiões CDR do anti- corpo parental. Identidade ou homologia em relação à seqüência do anticor- po variante é definida nesta invenção como a percentagem de resíduos de aminoácidos na seqüência do anticorpo variante que são idênticos aos resí- duos do anticorpo primitivo depois do alinhamento das seqüências e introdu- ção de hiatos, se necessário, para a percentagem máxima de identidade de seqüência. O anticorpo variante retém a capacidade de se ligar ao antígeno, ou de preferência, ao epitopo, ao qual o anticorpo parental se liga e de prefe- rência tem pelo menos uma propriedade ou bioatividade que é superior à- quele do anticorpo parental. Por exemplo, o anticorpo variante tem de prefe- rência uma afinidade de ligação mais forte, uma taxa de dissociação mais baixa, IC50 mais baixo ou capacidade aumentada para inibir uma bioativida- de de um antígeno em relação ao anticorpo parental. Um anticorpo variante de interesse particular nesta invenção é um anticorpo que apresenta um aumento de pelo menos cerca de 2 vezes, de preferência pelo menos cerca de 5 vezes, 10 vezes ou 20 vezes em uma propriedade ou bioatividade quando comparado com o anticorpo parental.

O anticorpo "parental" nesta invenção é um anticorpo que é codi- ficado por uma seqüência de aminoácidos usada para a preparação de um anticorpo variante. O anticorpo parental pode ter seqüência de estrutura de origem murina, mas de preferência a seqüência de estrutura é inteiramente ou substancialmente de origem humana. O anticorpo parental pode ser um anticorpo murino, quimérico, humanizado ou humano.

O termo "se liga especificamente" conforme usado neste relató- rio refere-se à situação em que um membro de um par de ligação específica não se liga significativamente a outras moléculas que não seus parceiros de ligação específica. O termo também se aplica onde, por exemplo, um domí- nio fixador de antígeno de um anticorpo da invenção é específico para um epitopo particular que é transportado por inúmeros antígenos, em cujo caso o anticorpo específico transportando o domínio fixador de antígeno vai ser capaz de se ligar aos vários antígenos transportando o epitopo. Por conse- guinte um anticorpo monoclonal da invenção se liga especificamente à IL-17 humana (isto é, IL-17A) ao passo que não se liga especificamente à IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E, IL-17F humana. Além disso, um anticorpo monoclo- nal da invenção se liga especificamente à IL-17 humana e à IL-17 de maca- co cinomolgo mas não se liga especificamente à IL-17 de rato nem à IL-17 murina. Além disso um anticorpo monoclonal da invenção se liga especifi- camente ao epitopo de IL-17 humana não linear ou conformacional compre- endendo os aminoácidos DGNDYH mas não se liga a um epitopo de IL-17 humana que não compreende os aminoácidos DGNDYH.

O termo "se liga de preferência" conforme usado neste relatório refere-se à situação em que um anticorpo se liga a um antígeno específico pelo menos cerca de 20% mais, de preferência pelo menos cerca de 50%, 2 vezes, 20 vezes, 50 vezes ou 100 vezes mais do que ele se liga a um antí- geno diferente conforme medido por uma técnica disponível na literatura, por exemplo, ELISA competitivo ou medição de K0 com um ensaio BIACORE ou KINEXA. Um anticorpo pode se ligar de preferência a um epitopo em um antígeno em relação a um epitopo diferente no mesmo antígeno. Por conse- guinte um anticorpo da invenção se liga de preferência à IL-17 humana em relação à IL-17 de coelho.

O termo "epitopo" refere-se à porção de uma molécula capaz de ser reconhecida e ligada por um anticorpo em uma ou mais das regiões fixa- doras de antígeno do anticorpo. Epítopos geralmente consistem em um gru- pamento superficial quimicamente ativo de moléculas tais como aminoácidos ou cadeias laterais de açúcares e têm características estruturais tridimensio- nais específicas assim como características de carga específicas. Por "epi- topo inibidor" e/ou "epitopo neutralizante" entende-se um epitopo que, quan- do no contexto da molécula antigênica intata e quando ligado por um anti- corpo específico para o epitopo, resulta em perda ou diminuição de uma ati- vidade biológica da molécula in vivo ou in vitro ou em um organismo conten- do a molécula.

O termo "epitopo", conforme usado neste relatório, refere-se ain- da a uma porção de um polipeptídio tendo atividade antigênica e/ou imuno- gênica em um animal, de preferência um mamífero, por exemplo, um ca- mundongo ou um ser humano. O termo "epitopo antigênico", conforme usa- do neste relatório, é definido como uma porção de um polipeptídio ao qual um anticorpo pode se ligar especificamente conforme determinado por qual- quer método bastante conhecido na literatura, por exemplo, por imunoensai- os convencionais. Epítopos antigênicos não precisam ser necessariamente imunogênicos, mas podem ser imunogênicos. Um "epitopo imunogênico, conforme usado neste relatório, é definido como uma porção de um polipep- tídio que cria uma resposta de anticorpo em um animal, conforme determi- nado por qualquer método conhecido na literatura. Um "epitopo não linear" ou "epitopo conformacional" compreende polipeptídios (ou aminoácidos) não contíguos na proteína antigênica à qual se liga um anticorpo específico para o epitopo.

As expressões "propriedade biológica" ou "característica biológi- ca", ou os termos "atividade" ou "bioatividade", com referência a um anticor- po da presente invenção, são usados alternadamente neste relatório e inclu- em, porém sem limitação, afinidade e especificidade para epitopo/antígeno, capacidade para neutralizar ou antagonizar uma atividade de IL-17 in vivo ou in vitro, IC5O, estabilidade in vivo do anticorpo e as propriedades imunogêni- cas do anticorpo. Outras propriedades ou características biológicas identifi- cáveis de um anticorpo reconhecido na literatura incluem, por exemplo, rea- tividade cruzada (isto é, com homólogos não humanos do peptídio alvo, ou com outras proteínas ou tecidos, em geral), e capacidade de preservar ní- veis de expressão altos de proteína em células de mamíferos. As proprieda- des ou características acima mencionadas podem ser observadas, medidas ou avaliadas usando técnicas reconhecidas na literatura que incluem, porém sem limitação, ELISA, ELISA competitivo, análise por ressonância de plas- mônio de superfície BIACORE ou KINEXA, ensaios de neutralização in vitro ou in vivo sem limite, ligação a receptores, produção e/ou secreção de cito- cina ou fator de crescimento, transdução de sinal e imuno-histoquímica com seções de tecidos de diferentes fontes incluindo de ser humano, primata, ou qualquer outra fonte.

O termo "inibir" ou "neutralizar" conforme usado neste relatório em relação a uma atividade de um anticorpo da invenção significa a capaci- dade de substancialmente antagonizar, proibir, prevenir, impedir, reduzir, romper, eliminar, interromper ou reverter, por exemplo, a progressão ou se- veridade daquilo que está sendo inibido incluindo, por exemplo, uma ativida- de ou propriedade biológica (por exemplo, uma atividade de IL-17), uma do- ença ou uma condição. A inibição ou neutralização de uma atividade de IL- M 17 resultante da ligação de um anticorpo da invenção com IL-17 é de prefe- rência de pelo menos cerca de 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou mais.

O termo "isolado" quando usado em relação a um ácido nucléico ou proteína (por exemplo, um anticorpo) refere-se a uma molécula de ácido nucléico ou proteína que é identificada e separada de pelo menos um con- taminante com o qual ela está normalmente associada em sua fonte natural. De preferência, um "anticorpo isolado" é um anticorpo que é substancial- mente livre de similares anticorpos com especificidades antigênicas diferen- tes (por exemplo, as composições farmacêuticas da invenção compreendem um anticorpo isolado que se liga especificamente à IL-17 e é substancial- mente livre de anticorpos que se ligam especialmente a outros antígenos que não a IL-17).

Os termos "numeração de Kabat" e "marcação de Kabat" são usados alternadamente neste relatório. Estes termos, que são reconhecidos na literatura, referem-se a um sistema de numeração de resíduos de amino- ácidos que são mais variáveis (isto é, hipervariáveis) que similares resíduos de aminoácidos nas regiões variáveis de cadeia pesada e de cadeia leve de um anticorpo (Kabat, et ai, Ann. NY Acad. Sei. 190:382-93 (1971); Kabat, et ai, Sequences of Proteins of Immunological lnterest, Fifth Edition, U.S. De- partment of Health and Human Services, NIH Publication N9 91-3242 (1991)).

Um polinucleotídeo é "operacionalmente ligado" a um outro poli- nucleotídeo quando ele é colocado em uma relação funcional com o outro polinucleotídeo. Por exemplo, um promotor ou intensificador é operacional- mente ligado a uma seqüência codificadora quando ele afeta a transcrição da seqüência. Um peptídio é "operacionalmente ligado" a um outro peptídio quando os polinucleotídeos que os codificam são operacionalmente ligados, de preferência eles estão na mesma estrutura de leitura aberta.

Os termos "indivíduo", "sujeito", e "paciente", usados alternada- mente neste relatório, referem-se a um mamífero, incluindo, porém sem limi- tação, murinos, símios, seres humanos, animais de criação mamíferos, ani- mais de esporte mamíferos, e animais domésticos mamíferos; de preferência o termo refere-se a seres humanos. Em uma certa modalidade, o indivíduo, de preferência um mamífero, de preferência um ser humano, é caracterizado 15 com uma doença ou distúrbio ou condição que se beneficiaria de uma bioati- vidade diminuída de IL-17.

O termo "vetor" inclui uma molécula de ácido nucléico capaz de transportar um outro ácido nucléico ao qual ele foi ligado incluindo, porém sem limitação, plasmídios e vetores virais. Certos vetores são capazes de replicação autônoma em uma célula hospedeira na qual eles são introduzi- dos ao passo que similares vetores podem ser integrados no genoma de uma célula hospedeira mediante introdução na célula hospedeira, e dessa forma, são replicados junto com o genoma hospedeiro. Além disso, certos vetores são capazes de direcionar a expressão dos genes aos quais eles estão operacionalmente ligados. Tais vetores são chamados neste relatório de "vetores de expressão recombinantes" (ou simplesmente "vetores de ex- pressão")e vetores exemplificativos são bastante conhecidos na literatura.

Conforme usado neste relatório, as expressões "célula", "célula hospedeira" e "cultura de células" são usadas alternadamente e incluem uma célula individual ou uma cultura de células que é um receptor de qual- quer polinucleotídeo isolado da invenção ou quaisquer vetores recombinan- tes compreendendo uma seqüência codificando uma HCVR, uma LCVR ou um anticorpo monoclonal da invenção. Células hospedeiras incluem a pro- gênie de uma única célula hospedeira, e a progênie pode não ser necessari- amente completamente idêntica (em termos de morfologia ou de comple- mento de DNA total) à célula primitiva original devido à mutação e/ou altera- ção natural, acidental, ou deliberada. Uma célula hospedeira inclui células transformadas, tranduzidas ou infectadas com um vetor recombinante ou um polinucleotídeo expressando um anticorpo monoclonal da invenção ou uma cadeia leve ou uma cadeia pesada do mesmo. Uma célula hospedeira que compreende um vetor recombinante da invenção, seja estavelmente incorpo- rado no cromossoma hospedeiro ou não, também pode ser chamada de "cé- lula hospedeira recombinante". As células hospedeiras preferidas para uso na invenção são células CHO (por exemplo, ATCC CRL-9096), células NSO, células SP2/0, células COS (ATCC por exemplo, CRL-1650, CRL-1651) e HeLa (ATCC CCL-2). Células hospedeiras adicionais para uso na invenção incluem células vegetais, células de levedura, outras células mamíferas e células procarióticas.

Caracterização de Anticorpo

A presente invenção refere-se a anticorpos monoclonais isola- dos que se ligam especificamente à IL-17 humana (isto é, IL-17A) com alta afinidade. Os anticorpos da invenção são de preferência anticorpos quiméri- cos, humanizados ou humanos ou porções fixadoras de antígeno dos mes- mos. Além disso, os anticorpos da invenção neutralizam ou antagonizam pelo menos uma atividade biológica de IL-17 in vivo e/ou in vitro. A ligação específica de um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção (inclusive de porções fixadoras de antígeno dos mesmos) à IL-17 permite que o referido anticorpo seja usado como agente terapêutico para doenças e distúrbios associados à IL-17, isto é, condições, doenças ou distúrbios que se benefici- am da inibição de uma atividade biológica de IL-17.

O epitopo de IL-17 antigênico ao qual os anticorpos da invenção se ligam é um epitopo não linear que compreende os aminoácidos ADGNVDYHMN (SEQ ID N°: 266), mais preferivelmente os aminoácidos DGNVDYH (SEQ ID N°: 267) da IL-17 humana. Os anticorpos que se ligam ao referido epitopo, ligam-se especificamente e preferivelmente à IL-17 hu- mana e à IL-17 de macaco cinomolgo em comparação com sua ligação à IL- 17 murina ou IL-17 de rato. Os anticorpos monoclonais da invenção ligam-se à IL-17 humana pelo menos 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, ou 100 ve- zes mais (por exemplo, maior afinidade ou maior especificidade) do que se ligam à IL-17 murina ou à IL-17 de rato; mais preferivelmente pelo menos 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550 ou 600 vezes mais do que se ligam à IL-17 murina ou à IL-17 de rato e ainda mais preferivelmente não se ligam à IL-17 murina ou à IL-17 de rato em níveis maiores que os níveis de referência determinados, por exemplo, pelo ensaio ELISA, pelo ensaio ELI- SA competitivo ou por valores de Kd em um ensaio BIACORE ou KINEXA.

Em uma modalidade preferida, a invenção fornece um anticorpo monoclonal anti-IL-17 que possui uma forte atividade de ligação para IL-17 humana, isto é, se liga à IL-17 humana, ou uma porção da mesma compre- endendo DGNVDYH (SEQ ID N°: 267) [isto é, o anticorpo o polipeptídio DGNVDYH], com uma afinidade de ligação (K0) para IL-17 humana menor que cerca de 7 pM, 6,5 pM ou 6 pM, de preferência menor que cerca de 5,5 pM, 5 pM ou 4,5 pM e mais preferivelmente menor que cerca de 4 pM. Alter- nativamente, os anticorpos da invenção caracterizam por um K0 para IL-17 humana não superior a cerca de 7 pM, 6,5 pM ou 6 pM, de preferência não maior que cerca de 5,5 pM, 5 pM ou 4,5 pM e mais preferivelmente não mai- or que cerca de 4 pM. As afinidades do anticorpo podem ser determinadas da maneira descrita nos exemplos abaixo ou por outros métodos disponíveis na literatura. De preferência os anticorpos anti-IL-17 da invenção que possu- em uma forte afinidade de ligação como descrito acima também se ligam a um epitopo de IL-17 humana não linear que compreende os aminoácidos ADGNVDYHMN (SEQ ID N0: 266), mais preferivelmente os aminoácidos DGNVDYH (SEQ ID N°: 267), onde o anticorpo faz contato com o polipeptí- dio DGNVDYH.

Em uma modalidade, os anticorpos da invenção têm uma taxa de dissociação (koft) para IL-17 humana menor que 5 χ 10"5, 4 χ 10"5, 3 χ 10"5 ou 2 χ 10"5 s"1. Em uma modalidade preferida, os anticorpos da invenção ca- racterizados por possuírem uma forte afinidade de ligação para IL-17 huma- na como descrito acima (Kd menor que cerca de 7 pM ou 6 pM, de preferên- cia menor que cerca de 5 pM ou 4,5 pM e ainda mais preferivelmente menor que cerca de 4 pM) também têm uma taxa de dissociação (kotf) para IL-17 humana menor que 5 x 10"5, 4 x 10"5, 3 x 10"5 ou 2 x 10"5 s"1 e ainda mais preferivelmente também se ligam a um epitopo de IL-17 humana não linear que compreende os aminoácidos ADGNVDYHMN (SEQ ID N°: 266), mais preferivelmente os aminoácidos DGNVDYH (SEQ ID N°: 267) da IL-17 hu- mana.

Em uma outra modalidade, os anticorpos da invenção têm um IC5O menor que 1nM, 900 pM, 800 pM, 700 pM, 650 pM, 600 pM, 560 pM, 550 pM ou 500 pM por exemplo em um ensaio repórter de IL-8 in vitro ou menor que cerca de 560 pM em um ensaio repórter de GROa (vide exemplo 6). Em uma modalidade preferida, os anticorpos da invenção caracterizam- se por possuírem uma forte afinidade de ligação para IL-17 humana como descrito acima (KD menor que cerca de 7 pM ou 6 pM, de preferência menor que cerca de 5 pM ou 4,5 pM e mais preferivelmente menor que cerca de 4 pM) e também têm um IC50 menor que 1nM, 900 pM, 800 pM, 700 pM, 650 pM, 600 pM, 560 pM, 550 pM ou 500 pM, por exemplo, em um ensaio repór- ter de IL-8 in vitro ou menor que cerca de 560 pM em um ensaio repórter de GROa e ainda mais preferivelmente também têm uma taxa de dissociação (koff) para IL-17 humana menor que 5 x 10"5, 4 x 10"5, 3 x 10"5 ou 2 x 10"5 s"1 e ainda mais preferivelmente também se ligam a um epitopo de IL-17 humana não linear que compreende os aminoácidos DGNVDYH (SEQ ID N°: 267) da IL-17 humana onde o anticorpo contata o polipeptídio DGNVDYH.

A modalidade mais preferida da invenção é um anticorpo anti-IL- 17 compreendendo uma seqüência de aminoácidos de cadeia leve consis- tindo em SEQ ID N°: 279 e uma seqüência de aminoácidos de cadeia pesa- da consistindo em SEQ ID N°: 280. De preferência este anticorpo compre- ende duas cadeias leves idênticas e duas cadeias pesadas idênticas. De preferência a cadeia leve com a seqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID N°: 279 é codificada por um ácido nucléico compreendendo a se- qüência mostrada em SEQ ID N°: 281 (incluindo a seqüência de sinal) ou SEQ ID N°: 283 (sem a seqüência de sinal). De preferência a cadeia pesada com a seqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID N°: 280 é codificada por um ácido nucléico compreendendo a seqüência mostrada em SEQ ID N°: 282 (incluindo a seqüência de sinal) ou SEQ ID N°: 284 (sem a seqüên- cia de sinal).

Anticorpos monoclonais ("mAbs") podem ser feitos usando o mé- todo de hibridoma bastante conhecido na literatura (vide por exemplo Kohler et al., Nature, 256:495, 1975) ou podem ser feitos por métodos de DNA re- combinante (por exemplo, como na Patente US N9 4.816.567). De um modo geral, um hibridoma pode ser produzido por fusão de uma linhagem de célu- la imortal adequada (por exemplo, uma linhagem de células de mieloma tal como SP2/0) com células produtoras de anticorpo do animal humanizado. As células produtoras de anticorpo, de preferência células do baço ou dos nódu- los linfáticos, são obtidas de animais imunizados com o antígeno de interes- se. As células fundidas (hibridomas) podem ser isoladas usando condições de cultura seletivas, e clonadas limitando a diluição. O meio de cultura no qual crescem os hibridomas é analisado quanto à produção de anticorpos monoclonais direcionados contra o antígeno. De preferência, a especificida- de de ligação dos mAbs produzidos por hibridomas é determinada por imu- noprecipitação ou por um ensaio de ligação in vitro, tal como radioimunoen- saio ou ELISA. Células que produzem anticorpos com as propriedades de ligação desejadas podem ser selecionadas por um ensaio adequado. Méto- dos para tal isolamento e rastreamento são bastante conhecidos na Iiteratu- ra.

Outros métodos adequados para produzir ou isolar anticorpos da invenção, incluindo anticorpos humanos ou artificiais, podem ser usados, incluindo, por exemplo, métodos que selecionam um anticorpo recombinante (por exemplo, Fv de cadeia simples ou Fab) de uma biblioteca, ou que de- pendem da imunização de animais transgênicos (por exemplo, camundon- gos) capazes de produzir um repertório de anticorpos humanos (vide, por exemplo, Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 90:2551-2555, 1993; Jakobovits et ai, Nature, 362:255-258, 1993; Patentes US Nos 5.545.806 e 5.545.807).

Anticorpos de cadeia simples, e anticorpos quiméricos, humani- zados ou primatizados (enxertado com CDR), assim como anticorpos de ca- deia simples quiméricos ou enxertados com CDR, e similares, compreen- dendo porções derivadas de diferentes espécies, também são contemplados pela presente invenção e pelo termo "anticorpo". As várias porções desses anticorpos podem ser unidas quimicamente por técnicas convencionais, sin- teticamente, ou podem ser preparadas como uma proteína contígua usando técnicas de engenharia genética. Por exemplo, ácidos nucléicos codificando uma cadeia quimérica ou humanizada podem ser expressos para produzir uma proteína contígua. Vide, por exemplo, Patente US Nq 4.816.567; Paten- te Européia N0 125.023 B1; Patente US N0 4.816.397; Patente Européia N0 120.694 B1; WO 86/01533; Patente Européia N0 194.276 B1; Patente US N0 5.225. 539; Patente Européia N0 239.400 B1 e Patentes US Nos 5.585.089 e 5.698.762.

Além disso, fragmentos funcionais de anticorpos (isto é, frag- mentos fixadores de antígeno), incluindo fragmentos de anticorpos quiméri- cos, humanizados, primatizados ou de cadeia simples, também podem ser produzidos e se enquadram no escopo da invenção. Fragmentos funcionais preferidos retêm uma função fixadora de antígeno de um anticorpo de com- primento integral correspondente. Fragmentos funcionais particularmente preferidos retêm a capacidade de inibir uma ou mais funções ou bioativida- des características de uma IL-17 madura mamífera, de preferência uma IL- 17 humana, tal como uma atividade de ligação, uma atividade de sinaliza- ção, e/ou estimulação ou inibição de uma resposta celular. Por exemplo, em uma modalidade, um fragmento funcional pode inibir a interação de IL-17 madura com seu receptor e/ou pode inibir uma ou mais funções mediadas pelo receptor.

Porções de anticorpo capazes de se ligar à IL-17 humana inclu- em, porém sem limitação, os fragmentos Fv, Fab, Fab' e F(ab')2 e estão a- brangidas pela invenção. Tais fragmentos podem ser produzidos por cliva- gem enzimática ou por técnicas recombinantes. Por exemplo, clivagem da papaína ou pepsina de um anticorpo intato pode gerar fragmentos Fab ou F(ab')2, respectivamente. A digestão da papaína de anticorpos produz dois fragmentos fixadores de antígeno idênticos, chamados fragmentos "Fab", cada um com um único sítio fixador de antígeno. O fragmento Fab também contém o domínio constante da cadeia leve e o primeiro domínio constante (CH1) da cadeia pesada. Tratamento da pepsina produz um fragmento F(ab')2 que tem dois sítios de combinação de antigênio e ainda é capaz de efetuar uma reticulação com o antígeno.

"Fv" é o fragmento de anticorpo mínimo que contém um sítio de reconhecimento e de ligação de antígeno completo. Esta região consiste em um dímero de domínio variável de uma cadeia pesada e uma cadeia leve em forte associação não-covalente. É nesta configuração que as três CDRs de cada domínio variável interagem para definir um sítio fixador de antígeno na superfície do dímero Vh-Vl. Coletivamente, as seis CDRs conferem especifi- cidade de ligação de antígeno ao anticorpo. Para superar a tendência de domínios HCVR e LCVR não-covalentemente ligados no Fv de dissociar quando co-expressos em uma célula hospedeira, pode ser construído um fragmento Fv de cadeia simples (scFv) no qual um polipeptídio flexível e a - dequadamente comprimido liga o terminal C da HCVR ao terminal N da LC- VR ou o terminal C da LCVR ao terminal N da HCVR. Um Iigante comumen- te usado é um peptídio de 15 resíduos (G^Ser)3. Para uma recapitulação de sFv, vide Pluckthun em The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg & Moore eds., Springer-Verlag, New York, págs. 269-315 (1994). Anticorpos também podem ser produzidos em uma variedade de formas truncadas usando genes de anticorpo nos quais um ou mais códons de interrupção foram introduzidos a jusante do sítio de interrupção natural. Por exemplo, um gene quimérico codificando uma porção da cadeia pesada de F(ab')2 pode ser projetado para incluir seqüências de DNA codificando o domínio CH1 e a região da dobradiça da cadeia pesada.

A seleção de fragmentos de anticorpo de bibliotecas usando tecnologias de enriquecimento tais como exibição de fagos (Matthews DJ & Wells JA. Science. 260:1113-7, 1993), exibição de ribossomas (Hanes, et al., Proc. Natl. Acad. Sei. (USA) 95:14130-5, 1998), exibição de bactérias (Sa- muelson P., et al., Journal of Biotechnology. 96:129-54, 2002) ou exibição de levedura (Kieke M.C., et al., Protein Engineering, 10:1303-10, 1997) mostrou constituir alternativas bem-sucedidas para a tecnologia de hibridoma clássi- ca (Recapitulação: Little M. et al., Immunology Today, 21:364-70, 2000). Anticorpos Variantes

Um anticorpo monoclonal murino ou um anticorpo humano (pro- duzido, por exemplo, em um camundongo transgênico) criado contra IL-17 pode constituir um anticorpo parental. Um anticorpo parental pode ser ainda alterado para criar uma forma quimérica ou humanizada do anticorpo ou ou- M tra forma variante do anticorpo usando métodos disponíveis na literatura, por exemplo, mutagênese por PCR. Tais anticorpos quiméricos, humanizados, ou variantes de alguma forma, podem ser servir como anticorpos parentais para nova variação ou mutagênse. Os anticorpos parentais da invenção po- dem ser mutageneizados, por exemplo, nos domínios de CDR (vide, por e- xemplo, as Tabelas 2 e 3) para criar anticorpos variantes que podem ser ras- treados quanto à presença de uma propriedade de interesse, por exemplo, afinidade de ligação (Kd mais baixo), IC50, especificidade, ligação preferenci- al etc. De preferência a propriedade de interesse no anticorpo variante é um aprimoramento em relação àquela propriedade no anticorpo parental. Um anticorpo variante por substituição de aminoácidos é preferido e tem pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 resíduos de aminoácidos da molécula do anticorpo parental removidos e um resíduo diferente inserido em seu lugar. O local de maior interesse para mutagênese por substituição é uma ou mais regiões CDR, mas alterações em FR também são contempladas. Substitui- ções conservativas de aminoácidos são preferidas; apesar disso, para alte- rações mais substanciais, alterações não-conservativas de aminoácidos po- dem ser introduzidas e os anticorpos resultantes rastreados quanto à propri- edade de interesse.

Uma maneira conveniente de gerar variantes por substituição de um anticorpo parental é a maturação por afinidade usando exibição de fa- gos. Em resumo, uma molécula de polinucleotídeo codificando um anticorpo parental é mutada em uma ou mais regiões CDR para gerar todas as substi- tuições de aminoácidos possíveis em cada resíduo de aminoácido no qual se deseja uma substituição. As variantes de anticorpo geradas desta manei- ra são exibidas de forma monovalente a partir de partículas de fagos fila- mentosos como fusões ao gene Ill produto de M13 acondicionado no interior de cada partícula. Os anticorpos variantes com exibição de fagos são rastre- ados quanto a sua atividade biológica (por exemplo, afinidade de ligação, especificidade, IC5o)· Para identificar locais candidatos da região CDR para modificação, podem ser formados mutágenos por varredura de alanina para identificar resíduos da região CDR que contribuem significativamente para ligação de antígeno.

Alternativa, ou adicionalmente, pode ser vantajoso analisar uma estrutura cristalina do complexo antígeno-anticorpo para identificar pontos de contato entre o anticorpo e a IL-17. Tais resíduos de contato e resíduos vizi- nhos são candidatos à substituição de acordo com as técnicas elaboradas nesta invenção ou conhecidas na literatura. Alternativamente, ou adicional- mente, mutagênese randômica ou mutagênese pontual pode ser efetuada em uma ou mais moléculas de polinucleotídeo codificando pelo menos uma CDR. A mutagênese pode ser efetuada, em uma ou mais posições, seja en- quanto a CDR está operacionalmente ligada à região de estrutura na região variável ou enquanto a CDR é independente de outra seqüência da região variável e depois a CDR alterada é devolvida para a região variável usando tecnologia de DNA recombinante. Uma vez gerados tais anticorpos variantes o quadro de variantes é submetido a rastreamento para verificar uma propri- edade ou atividade de interesse e os anticorpos com propriedades superio- res em um ou mais ensaios relevantes podem ser selecionados para desen- volvimento posterior.

Qualquer resíduo cisteína não envolvido na manutenção da con- formação apropriada de um anticorpo anti-IL-17 da invenção pode ser substi- tuído, geralmente por serina, para melhorar a estabilidade oxidativa da mo- lécula e prevenir reticulação aberrante. Ao contrário, ligações cisteína podem ser adicionadas ao anticorpo para melhorar sua estabilidade (particularmen- te quando o anticorpo é um fragmento de anticorpo tal como um fragmento Fv).

Um outro tipo de variante de aminoácido do anticorpo altera o padrão original de glicosilação do anticorpo. Por alteração entende-se dele- ção de uma ou mais porções carboidrato encontradas no anticorpo, e/ou a- dição de um ou mais sítios de glicosilação que não estão presentes no anti- corpo parental. A glicosilação de anticorpos é tipicamente N-Iigada ou O- ligada. N-Iigada refere-se à ligação da porção carboidrato à cadeia lateral de um resíduo asparagina. As seqüências tripeptídica asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina, onde X é qualquer aminoácido exceto prolina, são as 1,1 seqüências de reconhecimento para a ligação enzimática da porção carboi- drato à cadeia lateral asparagina. Assim sendo a presença de uma destas seqüências tripeptídicas em um polipeptídio cria um sítio de glicosilação po- tencial. Glicosilação O-Iigada refere-se à ligação de um dos açúcares N- aceilgalactosamina, galactose, ou xilose a um hidroxiaminoácido, mais co- mumente serina ou treonina, embora 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina tam- bém podem ser usadas.

A adição de sítios de glicosilação ao anticorpo é conveniente- mente realizada alterando-se a seqüência de aminoácidos de modo que ele contenha uma ou mais das seqüências tripeptídicas descritas acima (para sítios de glicosilação N-ligados). A alteração também pode ser feita pela adi- ção de, ou substituição por, um ou mais resíduos serina ou treonina à se- qüência do anticorpo original (para sítios de glicosilação O-ligados).

Seqüência

Um anticorpo monoclonal preferido da invenção compreende uma LCVR compreendendo um peptídio com uma seqüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 178-243 e/ou uma HCVR compreen- dendo um peptídio com uma seqüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 56-121. Em uma modalidade preferida, um anticorpo da invenção compreende uma LCVR compreendendo um peptídio com uma seqüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 178-243 e compreende ainda uma HCVR compreendendo um peptídio com uma se- qüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 56-121, onde a HCVR e a LCVR presentes em um anticorpo da invenção existem juntas em um Fab listado na Tabela 1. Por exemplo, um anticorpo da invenção com- preendendo um polipeptídio de LCVR com uma seqüência de aminoácidos de SEQ ID N°: 178, de preferência compreende ainda um polipeptídio de HCVR compreendendo uma seqüência de aminoácidos selecionada do gru- po que consiste em SEQ ID N°s: 56, 60, 68-93 e 95. Além disso, um anticor- po da invenção compreendendo um polipeptídio de LCVR com uma seqüên- cia de aminoácidos de SEQ ID N°: 241, de preferência compreende ainda um polipeptídio de HCVR compreendendo uma seqüência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 118 e 106. O versado na técnica vai perceber que os anticorpos da invenção não estão limitados às seqüências específicas de HCVR e LCVR listadas na Tabela 1 deste relató- rio, mas também incluem variantes dessas seqüências que, quando presen- tes em um anticorpo anti-IL-17 da invenção, retêm ou melhoram a capacida- de fixadora de antígeno e pelo menos uma outra propriedade funcional do anticorpo parental, por exemplo, especificidade para epitopo, capacidade para competir com o anticorpo parental pela ligação à IL-17, valores de IC5o e/ou K0 ou koft para ligação à IL-17 humana.

Além disso, um anticorpo monoclonal da invenção é um anticor- po que é competitivamente inibido de se ligar à IL-17 humana (ou uma por- ção da mesma compreendendo DGNVDYH) por um anticorpo monoclonal competitivo onde o anticorpo monoclonal competitivo compreende dois poli- peptídios com as seqüências de aminoácidos mostradas em SEQ ID N°s: 241 (LCVR) e 118 (HCVR). Esta inibição competitiva entre anticorpos pode ser medida por ensaios conhecidos na literatura, por exemplo, um ensaio ELISA competitivo.

De preferência, um anticorpo da invenção que compete com o anticorpo competitivo definido acima caracteriza-se ainda por se ligar especi- ficamente à IL-17 humana mas não se ligar à IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E ou IL-17F humana. Adicionalmente, o anticorpo caracteriza-se ainda por se ligar especificamente à IL-17 humana e à IL-17 de macaco cinomolgo mas não se ligar à IL-17 de rato ou à IL-17 de camundongo em níveis maiores que o nível de referência.

Mais preferivelmente, um anticorpo da invenção que compete pela ligação à IL-17 humana com um anticorpo competitivo compreendendo seqüências de aminoácidos mostradas em SEQ ID N°s: 241 e 118 caracteri- za-se ainda por se ligar a um epitopo não linear de IL-17 humana compreen- dendo os aminoácidos DGNVDYH (SEQ ID N°: 276). Ainda mais preferivel- mente, um anticorpo da invenção que compete pela ligação à IL-17 humana com um anticorpo competitivo compreendendo seqüências de aminoácidos mostradas em SEQ ID N°s: 241 e 118 caracteriza-se ainda por ter um K0 M para IL-17 humana menor que cerca de 7 pM, 6,5 pM ou 6 pM, de preferên- cia menor que cerca de 5,5 pM, 5 pM ou 4,5 pM e mais preferivelmente me- nor que cerca de 4 pM e/ou caracteriza-se por um IC50, de preferência em um ensaio repórter de IL-8 in vitro, que é menor que 700 pM, 650 pM, 600 pM, 560 pM, 550 pM ou 500 pM, ou por um IC50 em um ensaio repórter de in vitro GROa menor que cerca de 560 pM, e/ou tem uma taxa de dissociação (koff) para IL-17 humana menor que 5 x 10'5, 4 x 10"5, 3 x 10"5 ou 2 x 10"5 s"1.

Em uma modalidade, um anticorpo anti-IL-17 da invenção tem uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, onde a região variável de cadeia pesada compreende regiões CDR com as seguintes seqüências de aminoácidos: CDRH1 (SEQ ID N°: 244), CDRH2 (SEQ ID N°: 245), and CDRH3 (SEQ ID N°: 246); e/ou onde a região variável de cadeia leve compreende regiões CDR com as seguintes seqüências de aminoácidos: CDRL1 (SEQ ID N°: 247), CDRL2 (SEQ ID N°: 248) e CDRL3 (SEQ ID N°: 249). De preferência, as seis CDRs de um anticorpo da inven- ção existem juntas como em um Fab listado na Tabela 1 deste relatório. Ain- da mais preferivelmente, as CDRs de cadeia pesada estão no contexto das seguintes seqüências de estrutura: FR1 com SEQ ID N°: 262, FR2 com SEQ ID N°: 263, FR3 com SEQ ID N°: 264 e FR4 com SEQ ID N°: 265 e as CDRs de cadeia leve estão no contexto das seguintes seqüências de estrutura: FR1 com SEQ ID N°: 266, FR2 com SEQ ID N°: 267, FR3 com SEQ ID N0: 268 e FR4 com SEQ ID N°: 269, onde a ordem a partir do terminal amino é FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4.

Contempla-se ainda que um anticorpo anti-IL-17 da invenção compreende uma HCVR compreendendo uma CDRH1 compreendendo uma seqüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 11-28, e/ou uma CDRH2 compreendendo uma seqüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 29-32, e/ou uma CDRH3 compreendendo uma se- qüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 33-55 e 261. Em uma outra modalidade, um anticorpo anti-IL-17 da invenção compreende uma LCVR compreendendo uma CDRL1 compreendendo uma seqüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 122-149, e/ou uma C- DRL2 compreendendo uma seqüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 150-167, e/ou uma CDRL3 compreendendo uma seqüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 168-177. Em uma mo- dalidade preferida, um anticorpo anti-IL-17 da invenção compreende uma HCVR compreendendo uma CDRH1 compreendendo uma seqüência sele- cionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 11-28, e/ou uma CDRH2 compreendendo uma seqüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 29-32, e/ou uma CDRH3 compreendendo uma seqüência seleciona- da do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 33-55 e 261, e compreende ainda uma LCVR compreendendo uma CDRL1 compreendendo uma seqüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 122-149, e/ou uma C- DRL2 compreendendo uma seqüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 150-167, e/ou uma CDRL3 compreendendo uma seqüência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°s: 168-177.

A composição compreendendo uma CDR da invenção geralmen- te será uma seqüência de cadeia pesada ou leve de anticorpo ou uma por- ção substancial da mesma, onde a CDR está localizada em um local consis- tente com a numeração de Kabat. As três regiões CDR para cada cadeia, pesada e leve, são fornecidas em uma região de estrutura como uma se- qüência contígua representada pela seguinte fórmula: FR1-CDR1-FR2- CDR2-FR3-CDR3-FR4. As FR1, FR2, FR3 e FR4 da cadeia pesada ou da cadeia leve combinam-se para formar a região de estrutura completa de um anticorpo quando dispostas como uma seqüência contígua com as CDRs na ordem estabelecida. De preferência as regiões de estrutura de um anticorpo da invenção são de origem humana ou substancialmente de origem humana (isto é, mais de cerca de 80, 82, 85, 87, 90, 92, 95, 97%).

Em um anticorpo humanizado para uso terapêutico em seres humanos, a seqüência da estrutura é de preferência totalmente ou substan- cialmente de origem humana. De preferência a região de estrutura de cadeia leve de um anticorpo humanizado, humano ou quimérico da invenção com- preende FR1 com SEQ ID N°: 266, FR2 com SEQ ID N°: 267, FR3 com SEQ ID N°: 268 e FR4 com SEQ ID N°: 269. De preferência a região de estrutura 1,1 de cadeia pesada de um anticorpo humanizado, humano ou quimérico da invenção compreende FR1 com SEQ ID N°: 262, FR2 com SEQ ID N°: 263, FR3 com SEQ ID N°: 264, e FR4 com SEQ ID N°: 265. Por exemplo, uma modalidade preferida da LCVR do anticorpo 126 da invenção, descrito nas Tabelas 1, 2 e 3 deste relatório compreende (polipeptídios em ordem a partir do terminal N) FR1 com SEQ ID N°: 266, CDR1 com SEQ ID N°: 131, FR2 com SEQ ID N°: 267, CDR2 com SEQ ID N°: 167, FR3 com SEQ ID N°: 268, CDR3 com SEQ ID N°: 168 e FR4 com SEQ ID N°: 269. A seqüência de LCVR inteira, operacionalmente ligada a uma região constante capa humana é aquela mostrada em SEQ ID N°: 274. Ainda, uma modalidade preferida da HCVR do anticorpo 126 da invenção compreende (em ordem a partir do ter- minal N) FR1 com SEQ ID N°: 262, CDR1 com SEQ ID N°: 26, FR2 com SEQ ID N°: 262, CDR2 com SEQ ID N°: 30, FR3 com SEQ ID N0: 264, C- DR3 com SEQ ID N°: 52 e FR4 com SEQ ID N0: 265. A seqüência de HCVR inteira, operacionalmente ligada a uma região Fc de lgG4 humana é aquela mostrada em SEQ ID N°: 273.

Em uma modalidade, um anticorpo anti-IL-17 da invenção, onde toda a região variável ou uma porção dela é limitada por uma seqüência par- ticular como mostrado por uma SEQ ID Ne nesta invenção (vide, por exem- plo, Tabelas 1-3) caracteriza-se ainda por ser um anticorpo quimérico, hu- manizado, ou totalmente humano ou uma porção fixadora de antígeno do mesmo que antagoniza ou neutraliza pelo menos uma atividade de IL-17 humana in vivo ou in vitro. Um anticorpo IL-17 da invenção, onde toda a re- gião variável ou uma porção dela é limitada por uma seqüência particular como mostrado por uma SEQ ID Nq nesta invenção caracteriza-se ainda por se ligar especificamente à IL-17 humana mas não se ligar à IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E ou IL-17F humana. Adicionalmente, o anticorpo caracteriza- se ainda por se ligar especificamente à IL-17 humana e à IL-17 de macaco cinomolgo mas não se ligar à IL-17 de rato ou à IL-17 de camundongo em níveis maiores que o nível de referência.

Mais preferivelmente, tal anticorpo caracteriza-se ainda por se ligar a um epitopo não linear de IL-17 humana compreendendo os as DGNVDYH (SEQ ID N°: 276) onde o anticorpo faz contato com o polipeptídio com SEQ ID N°: 276. Ainda mais preferivelmente, tal anticorpo caracteriza- se ainda por ter um K0 para IL-17 humana menor que cerca de 7 pM, 6,5 pM ou 6 pM, de preferência menor que cerca de 5,5 pM, 5 pM ou 4,5 pM e mais preferivelmente menor que cerca de 4 pM e/ou caracteriza-se por um IC50, de preferência em um ensaio repórter de IL-8 in vitro, que é menor que 700 pM, 650 pM, 600 pM, 560 pM, 550 pM ou 500 pM, ou um IC50 em um ensaio repórter de GROa in vitro menor que cerca de 560 pM, e/ou tem uma taxa de dissociação (koff) para IL-17 humana menor que 5 χ 10"5, 4 χ 10"5, 3 χ 10"5 ou 2 χ 10"5S"1.

Expressão de Anticorpos

A presente invenção também se refere a linhagens celulares que expressam um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção ou uma porção do mesmo. A criação e o isolamento de linhagens celulares produzindo um anticorpo monoclonal da invenção podem ser feitos usando técnicas tradi- cionais conhecidas na literatura. Linhagens celulares preferidas incluem COS, CHO, SP2/0, NSO e levedura (disponíveis em repositórios públicos tais como ATCC, American Type Culture Collection, Manassas, VA).

Uma ampla variedade de sistemas de expressão hospedeiros podem ser usados para expressar um anticorpo da presente invenção inclu- indo sistemas de expressão procarióticos e eucarióticos (tais como levedura, baculovírus, planta, mamífero e outras células animais, animais transgêni- cos, e hibridomas), assim como sistemas de expressão de exibição de fago.

Um exemplo de um vetor de expressão bacteriano adequado é pUC119 e um vetor de expressão eucariota adequado é um vetor pcDNA3.1 modificado com um sistema de seleção dhfr enfraquecido. Outros sistemas de expres- são de anticorpos também são conhecidos na literatura e são contemplados nesta invenção.

Um anticorpo da invenção pode ser preparado por expressão recombinante de genes de cadeia leve e de cadeia pesada de imunoglobuli- na em uma célula hospedeira. Para expressar recombinantemente um anti- corpo, uma célula hospedeira é transformada, transduzida, infectada ou ou- 1,1 tros com um ou mais vetores recombinantes transportando fragmentos de DNA codificando as cadeias leve e/ou pesada de imunoglobulina de modo que as cadeias leve e/ou pesada são expressas na célula hospedeira. A ca- deia pesada e a cadeia leve podem ser expressas independentemente dos diferentes promotores aos quais elas estão operacionalmente ligadas em um vetor ou, alternativamente, a cadeia pesada e a cadeia leve podem ser ex- pressas independentemente dos diferentes promotores aos quais elas estão operacionalmente ligadas em dois vetores - um expressando a cadeia pesa- da e um expressando a cadeia leve. Opcionalmente a cadeia pesada e a cadeia leve podem ser expressas em células hospedeiras diferentes. Do, os anticorpos recombinantes são secretados no meio em que as células hospe- deiras são cultivadas, do qual os anticorpos podem ser recuperados ou puri- ficados. Metodologias tradicionais de DNA recombinante são usadas para obter genes de cadeia pesada e leve de anticorpos, para incorporar estes genes em vetores de expressão recombinantes, e para introduzir os vetores em células hospedeiras. Tais tecnologias de DNA recombinante tradicionais estão descritas, por exemplo, em Sambrook, Fritsch, & Maniatis (Eds.), Mo- lecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989; Ausubel, et al. (Eds.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, 1989.

Um DNA isolado codificando uma região HCVR pode ser conver- tido em um gene de cadeia pesada de comprimento integral ligando-se ope- racionalmente o DNA codificando HCVR a uma outra molécula de DNA codi- ficando regiões constantes de cadeia pesada (CH1, CH2, e CH3). As se- qüências dos genes da região constante de cadeia pesada humana são co- nhecidas na literatura. Vide, por exemplo, Kabat, et ai, Sequences of Prote- ins of Immunological lnterest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication Ne 91-3242 (1991). Fragmentos de DNA abrangendo essas regiões podem ser obtidos, por exemplo, por amplificação por PCR convencional. A região constante da cadeia pesada pode ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgA, IgE, IgM ou IgD), classe (e.g., IgGi, lgG2, lgG3 e IgG4) ou subclasse de região constante e qualquer variante alo- típica da mesma como descrito em Kabat (supra). Alternativamente, a por- ção fixadora de antígeno pode ser um fragmento Fab, um fragmento Fab', um fragmento F(ab')2, Fd, ou um fragmento Fv de cadeia simples (scFv). Para um gene da cadeia pesada do fragmento Fab, o DNA codificando HC- VR pode ser operacionalmente ligado a uma outra molécula de DNA codifi- cando somente uma região constante CH1 da cadeia pesada.

Um DNA isolado codificando uma região LCVR pode ser conver- tido em um gene de cadeia leve de comprimento integral (assim como em um gene de cadeia leve de Fab) ligando-se operacionalmente o DNA codifi- cando LCVR a uma outra molécula de DNA codificando uma região constan- te de cadeia leve, CL. As seqüências dos genes da região constante de ca- deia leve humana são conhecidas na literatura. Vide, por exemplo, Kabat, supra. Fragmentos de DNA abrangendo essas regiões podem ser obtidos por amplificação por PCR tradicional. A região constante de cadeia leve po- de uma região constante capa ou lâmbda.

Para criar um gene de scFv, os fragmentos de DNA codificando HCVR e LCVR são operacionalmente ligados a um outro fragmento codifi- cando um Iigante flexível, por exemplo, codificando a seqüência de aminoá- cidos (GIy4-Ser)3, de modo que as seqüências de HCVR e LCVR podem ser expressas como uma proteína de cadeia simples contígua, as regiões LCVR e HCVR unidas pelo Iigante flexível. Vide, por exemplo, Bird, et ai, Science 242:423-6, 1988; Huston1 et ai, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85:5879-83, 1988; McCafferty, etal., Nature 348:552-4, 1990.

Em uma modalidade, a invenção fornece um vetor, de preferên- cia (porém sem limitação) um plasmídio, um vetor de expressão recombinan- te, um vetor de expressão de levedura, ou um vetor de expressão retroviral compreendendo um polipeptídio codificando um anticorpo monoclonal anti- IL-17 da invenção. Alternativamente, um vetor da invenção compreende um polinucleotídeo codificando uma LCVR e/ou um polinucleotídeo codificando uma HCVR da invenção. Quando tanto uma seqüência codificando a LCVR quanto uma seqüência codificando a HCVR estão presentes no mesmo ve- tor, elas podem ser transcritas independentemente, cada uma a partir de um promotor separado ao qual ela está operacionalmente ligadas. Se as se- qüências codificando a LCVR e a HCVR estiverem presentes no mesmo e forem transcritas a partir de um promotor ao qual estão ambas operacional- mente ligadas, a LCVR pode ser 5' em relação à HCVR ou a LCVR pode ser 3' em relação à HCVR, e além disso, a região codificando a LCVR e a HCVR no vetor pode ser separada por uma seqüência Iigadora de qualquer dimen- são ou conteúdo, de preferência tal ligante, quando presente, é um polinu- cleotídeo codificando um sítio de entrada de ribossoma interno.

Para expressar um anticorpo da invenção, um DNA codificando uma cadeia leve e/ou pesada de comprimento parcial ou integral, obtido da maneira descrita acima, é inserido em um vetor de expressão de modo que o gene é operacionalmente ligado a seqüências de controle transcricional e translacional. O vetor de expressão e as seqüências de controle de expres- são são escolhidos para serem compatíveis com a célula hospedeira de ex- pressão usada. O gene da cadeia leve do anticorpo e o gene da cadeia pe- sada do anticorpo podem ser inseridos em vetores separados ou, mais tipi- camente, os dois genes são inseridos no mesmo vetor de expressão. Os genes do anticorpo são inseridos no vetor de expressão por métodos tradi- cionais. Adicionalmente, o vetor de expressão recombinante pode codificar um peptídio de sinal que facilita a secreção da cadeia leve e/ou pesada do anticorpo monoclonal anti-IL-17 de uma célula hospedeira. O gene da cadeia leve e/ou pesada do anticorpo monoclonal anti-IL-17 pode ser clonado no vetor de modo que o peptídio de sinal é operacionalmente ligado em estrutu- ra ao terminal amino do gene da cadeia do anticorpo. O peptídio de sinal pode ser um peptídio de sinal imunoglobulina ou um peptídio de sinal heteró- logo.

Além dos genes da cadeia pesada e/ou leve do anticorpo, um vetor de expressão recombinante da invenção transporta seqüências regula- doras que controlam a expressão dos genes das cadeias do anticorpo em uma célula hospedeira. O termo "seqüência reguladora" inclui promotores, intensificadores e similares elementos de controle da expressão (por exem- plo, sinais de poliadenilação), conforme necessário, que controlam a trans- crição ou a translação dos genes das cadeias do anticorpo. A criação do ve- tor de expressão, incluindo a seleção das seqüências reguladoras, pode de- pender de fatores tais como a escolha da célula hospedeira a ser transfor- mada, o nível de expressão da proteína desejada. Seqüências reguladoras preferidas para a expressão de células hospedeiras mamíferas incluem ele- mentos virais que direcionam níveis altos de expressão de proteína nas célu- las mamíferas, tais como promotores e/ou intensificadores derivados de ci- tomegalovírus (CMV), vírus símio 40 (SV40), adenovírus (por exemplo, o promotor tardio maior do adenovírus (AdMLP)) e vírus do polioma.

Além dos genes da cadeia pesada e/ou leve do anticorpo e das seqüências reguladoras, os vetores de expressão recombinantes da inven- ção pode transportar seqüências adicionais, tais como seqüências que regu- lam a replicação do vetor em células hospedeiras (por exemplo, origens de replicação) e um ou mais genes marcadores selecionáveis. O gene marca- dor selecionável facilitar a seleção das células hospedeiras nas quais o vetor fora introduzido. Por exemplo, tipicamente o gene marcador selecionável confere resistência a fármacos, tais como G418, higromicina, ou metotrexa- to, em uma célula hospedeira na qual o vetor fora introduzido. Genes mar- cadores selecionáveis preferidos incluem o gene dihidrofolato (dhfr) (para uso em células hospedeiras menos dhfr com seleção/amplificação com me- totrexato), o gene neo (para seleção de G418), e glutamina sintetase (GS) em uma linhagem celular negativa para GS (tal como NSO) para sele- ção/amplificação.

Para expressão das cadeias leve e/ou pesada, os vetores de expressão codificando as cadeias pesada e/ou leve são introduzidos em uma célula hospedeira por técnicas tradicionais, por exemplo, eletroporação, precipitação com fosfato de cálcio, transfecção com DEAE-dextrana, trans- dução, infecção e outras. Embora seja teoricamente possível expressar os anticorpos da invenção em células hospedeiras procarióticas ou eucarióti- cas, as células eucarióticas são preferidas, e mais preferivelmente células hospedeiras mamíferas, porque tais células são mais prováveis de montar e secretar um anticorpo apropriadamente multiplicado e imunologicamente 1,1 ativo. Células hospedeiras mamíferas preferidas para expressar os anticor- pos recombinantes da invenção incluem células de ovário de hamster chinês (células CHO) [incluindo células CHO menos dhfr, descritas em Urlaub & Chasin, Proc. Λ/aí/. Acad. Sei. USA 77:4216-20, 1980, usadas com um mar- cador selecionável DHFR, por exemplo, como as descritas em Kaufman & Sharp, J. Mol. BioL 159:601-21, 1982], células de mieloma NSO, células COS, e células SP2/0. Quando vetores de expressão recombinantes codifi- cando genes de anticorpo são introduzidos em células hospedeiras mamífe- ras, os anticorpos são produzidos por cultura das células hospedeiras por um período de tempo suficiente para permitir a expressão do anticorpo nas células hospedeiras ou, mais preferivelmente, secreção do anticorpo no meio de cultura no qual as células hospedeiras são cultivadas em condições apropriadas conhecidas na literatura. Os anticorpos podem ser recuperados da célula hospedeira e/ou do meio de cultura usando métodos de purificação tradicionais.

Células hospedeiras também podem ser usadas para produzir porções, ou fragmentos, de anticorpos intatos, por exemplo, fragmentos Fab ou moléculas scFv por técnicas que são convencionais. Ficará entendido pelo versado na técnica que variações do procedimento acima estão dentro do escopo da presente invenção. Por exemplo, pode ser desejável transfec- tar uma célula hospedeira com DNA codificando a cadeia leve ou a cadeia pesada de um anticorpo desta invenção. A tecnologia de DNA recombinante também pode ser usada para remover alguns ou todos os DNA codificando uma ou ambas das cadeias leve e pesada que não são necessárias para a ligação à IL-17. As moléculas expressas a partir destas moléculas de DNA truncadas também estão abrangidas pelos anticorpos da invenção.

A invenção fornece uma célula hospedeira compreendendo uma molécula de anticorpo nucléico da presente invenção. De preferência uma célula hospedeira da invenção compreende um ou mais vetores ou constru- ções compreendendo uma molécula de ácido nucléico da presente invenção. A célula hospedeira da invenção é uma célula na qual fora introduzido um vetor da invenção, o referido vetor compreendendo um polinucleotídeo codi- ficando uma LCVR de um anticorpo da invenção e/ou um polinucleotídeo codificando uma HCVR da invenção. A invenção também fornece uma célula hospedeira na qual foram introduzidos dois vetores da invenção, um com- preendendo um polinucleotídeo codificando uma LCVR de um anticorpo da invenção e um compreendendo um polinucleotídeo codificando uma HCVR presente em um anticorpo da invenção e cada um operacionalmente ligado a uma seqüência promotora. Os tipos de célula hospedeira incluem células mamíferas, bacterianas, vegetais e de levedura. De preferência a célula hospedeira é uma célula CHO, uma célula COS, uma célula SP2/0, uma cé- lula NSO, uma célula de levedura ou um derivado ou progênie de qualquer tipo de célula preferido.

Em um sistema preferido para expressão recombinante de um anticorpo da invenção, um vetor de expressão recombinante codificando a cadeia pesada do anticorpo e a cadeia leve do anticorpo é introduzido em células CHO menos dhfr, por exemplo, por transfecção mediada por fosfato de cálcio. No interior do vetor de expressão recombinante, os genes da ca- deia pesada e leve do anticorpo são cada um operacionalmente ligados a elementos reguladores de intensificador/promotor (por exemplo, derivados de SV40, CMV, adenovírus e similares, tais como um elemento regulador do intensificador CMV/promotor AdMLP ou um elemento regulador de um inten- sificador SV40/promotorr AdMLP) para induzir níveis altos de transcrição dos genes. O vetor de expressão recombinante também transporta um gene dh- fr, que permite a seleção de células CHO que foram transfectadas com o vetor usando seleção/amplificação com metotrexato. As células hospedeiras transformantes selecionadas são cultivadas para permitir a expressão das cadeias pesada e leve do anticorpo e o anticorpo intato é recuperado do meio de cultura. Técnicas tradicionais da biologia molecular são usadas para preparar o vetor de expressão recombinante, transfectar as células hospe- deiras, selecionar os transformantes, cultivar as células hospedeiras e recu- perar o anticorpo do meio de cultura. Os anticorpos, ou porções fixadoras de antígeno dos mesmos, da invenção podem ser expressos em um animal (por exemplo, um camundongo) que é transgênico para genes de imunoglobulina 1,1 humana (vide, por exemplo, Taylor, et al., Nucleic Acids Res. 20:6287-95, 1992).

Uma vez expressos, os anticorpos intatos, seus dímeros, cadei- as leve e pesada individuais, ou outras formas de imunoglobulina da presen- te invenção podem ser purificados de acordo com procedimentos tradicio- nais da literatura, incluindo precipitação com sulfato de amônio, troca iônica, afinidade, fase reversa, cromatografia em coluna de interação hidrofóbica, eletroforese em gel e outras. Imunoglobulinas substancialmente puras de pelo menos cerca de 90%, 92%, 94% ou 96% de homogeneidade são prefe- ridas, e 98 a 99% ou mais de homogeneidade são mais preferidos, para u- sos farmacêuticos. Uma vez purificados, parcialmente ou até a homogenei- dade, conforme desejado, os peptídios podem ser então usados terapêutica ou profilaticamente, conforme indicado nesta invenção.

Anticorpos Quiméricos

Conforme usado neste relatório, o termo "anticorpo quimérico" inclui imunoglobulinas monovalentes, divalentes ou polivalentes. Um anticor- po quimérico monovalente é um dímero formado por uma cadeia pesada quimérica associada através de pontes dissulfeto com uma cadeia leve qui- mérica. Um anticorpo quimérico divalente é um tetrâmero formado por dois dímeros cadeia pesada-cadeia leve associados através de pelo menos uma ponte dissulfeto. Uma cadeia pesada quimérica de um anticorpo compreende uma região fixadora de antígeno derivada da cadeia pesada de um anticorpo não humano específico para IL-17, que é operacionalmente ligado a pelo menos uma porção de uma região constante de cadeia pesada humana, ou substancialmente humana (ou uma espécie diferente daquela da qual foi derivada a região fixadora de antígeno) tal como CH1 ou CH2, ou de prefe- rência a uma região constante de cadeia pesada de comprimento integral. Uma cadeia leve quimérica de um anticorpo para uso em seres humanos compreende uma região fixadora de antígeno derivada total ou substancial- mente da cadeia leve de um anticorpo não humano específico para IL-17, operacionalmente ligada a pelo menos uma porção de uma região constante de cadeia leve (CL) humana, ou substancialmente humana (ou uma espécie diferente daquela da qual foi derivada a região fixadora de antígeno), ou de preferência a uma região constante de cadeia leve de comprimento integral. Anticorpos, fragmentos ou derivados tendo cadeias pesadas e cadeias leves quiméricas com a mesma especificidade de ligação de região variável ou especificidade diferente, também podem ser preparados pela associação apropriada das cadeias polipeptídicas individuais, de acordo com etapas de métodos conhecidos.

Com esta abordagem, hospedeiros expressando cadeias pesa- das quiméricas são cultivados separadamente de hospedeiros expressando cadeias leves quiméricos, e as cadeias de imunoglobulina são separada- mente recuperadas e então associadas. Alternativamente, os hospedeiros podem ser co-cultivados e as cadeias deixadas associarem-se espontanea- mente no meio de cultura, seguido de recuperação da imunoglobulina ou fragmento montado. Métodos para produzir anticorpos quiméricos são co- nhecidos na literatura (vide, por exemplo, as Patentes US Nos.: 6.284.471, 5.807.715, 4.816.567, e 4.816.397).

Anticorpos Humanizados

De preferência um anticorpo da invenção a ser usado com fins terapêuticos teria a seqüência da região de estrutura e constante (na medida em que ela exista no anticorpo) derivada do mamífero no qual ele seria usa- do como agente terapêutico para diminuir a possibilidade de o mamífero produzir uma resposta imune contra o anticorpo terapêutico. Anticorpos hu- manizados são de interesse particular uma vez que eles são considerados valiosos para aplicação terapêutica e para evitar a resposta de anticorpo an- ticamundongo humano freqüentemente observada com anticorpos de roedo- res. Adicionalmente, em anticorpos humanizados a porção efetora do anti- corpo é de origem humana de modo que ela pode interagir melhor com as outras partes do sistema imunológico humano (por exemplo, destruir as célu- las-alvo de maneira mais eficiente por citotoxicidade dependente do com- plemento ou citotoxicidade celular dependente do anticorpo). Também, anti- corpos humanizados injetados podem ter uma meia-vida mais parecida com 1,1 aquela dos anticorpos humanos naturais do que, por exemplo, com anticor- pos murinos, dessa forma possibilitando que sejam administradas doses menores e menos freqüentes. O termo "anticorpo humanizado" conforme usado neste relatório refere-se a um anticorpo compreendendo porções de anticorpos de origens diferentes, onde pelo menos uma porção é de origem humana. Por exemplo, o anticorpo humanizado pode compreender porções derivadas de um anticorpo de origem não humana com a especificidade re- querida, tal como um camundongo, e de um anticorpo de origem humana, unidas quimicamente por técnicas convencionais (por exemplo, sintéticas) ou preparadas como um polipeptídio contíguo usando técnicas de engenha- ria genética.

De preferência, um "anticorpo humanizado" possui CDRs que se originam (ou se originam substancialmente) de um anticorpo não humano (de preferência um anticorpo monoclonal de camundongo) enquanto que a região de estrutura e constante, na medida em que ela está presente, (ou uma porção significativa ou substancial da mesma, isto é, pelo menos cerca de 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%) é codificada por informa- ções de seqüências de ácidos nucléicos que ocorrem na região de imuno- globulina na linhagem germinativa humana (vide, por exemplo, o Internatio- nal ImMunoGeneTics Database) ou em formas recombinadas ou mutadas da mesma sejam os referidos anticorpos produzidos em células humanas ou não.

As CDRs de um anticorpo humanizado podem ser alteradas ou otimizadas a partir das CDRs de um anticorpo parental não humano do qual elas se originam para gerar propriedades desejadas, por exemplo, especifi- cidade, afinidade e/ou ligação preferencial. As CDRs alteradas ou otimizadas podem ter substituições, adições e/ou deleções de aminoácidos em compa- ração com uma CDR primitiva, de preferência cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 ao todo nos seis domínios de CDR. Por exemplo, as posições dos a- minoácidos das CDRs que estão sublinhados ou em negrito nas Tabelas 2 e 3 são posições que foram alteradas a partir das CDRs mostradas em Fab 1 das Tabelas 2 e 3. Alternativamente, o anticorpo murino 2321 pode ser um anticorpo parental para comparação das CDRs de um anticorpo da inven- ção.

Formas humanizadas de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) incluem um anticorpo intato, um anticorpo substancialmente intato, uma porção de um anticorpo compreendendo um sítio fixador de antígeno, ou uma porção de um anticorpo compreendendo um fragmento Fab, um fragmento Fab', F(ab')2, ou um fragmento Fv de cadeia simples. Os anticor- pos humanizados de preferência contêm uma seqüência mínima derivada de imunoglobulina não humana. Os anticorpos humanizados também podem compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo receptor nem nas seqüências de CDR ou de estrutura importadas. Em geral, o anticorpo humanizado vai compreender substancialmente tudo de pelo menos um, e tipicamente dois domínios variáveis, nos quais todos ou substancialmente todos os aminoácidos nas regiões CDR correspondem àqueles de üma imu- noglobulina não humana e todos ou substancialmente todos os aminoácidos na regiões FR são aqueles de uma seqüência de consenso de imunoglobuli- na humana. O anticorpo humano idealmente também compreende pelo me- nos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamen- te aquela de uma imunoglobulina humana [Jones et ai., Nature, 321:522- 525, 1986; Riechmann et al., Nature, 332:323-329, 1988; e Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596, 1992], Os anticorpos humanizados podem ser submetidos à mutagêne- se in vitro usando métodos de uso rotineiro na técnica (ou, quando se usa um animal transgênica para seqüências de Ig humana, mutagênese somáti- ca in vivo) e, portanto, as seqüências de aminoácidos da região de estrutura das regiões HCVR e LCVR dos anticorpos recombinantes humanizados são seqüências que, apesar de derivadas daquelas relacionadas com seqüên- cias de HCVR e LCVR da linhagem germinativa humana, podem não existir naturalmente no repertório de linhagem germinativa de anticorpo humano in vivo. Contempla-se que tais seqüências de aminoácidos das regiões de es- trutura de HCVR e LCVR dos anticorpos recombinantes humanizados são pelo menos 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 98% ou mais preferivelmente pelo M menos 99% idênticas a uma seqüência de linhagem germinativa humana. De preferência, os resíduos de estrutura do anticorpo parental (por exemplo, anticorpo murino ou geralmente o anticorpo do qual deriva o anticorpo hu- manizado) que mantêm ou afetam estruturas de sítio de combinação serão retidos. Estes resíduos podem ser identificados, por exemplo, por cristalo- grafia por raios X do anticorpo parental ou do fragmento Fab, dessa forma identificando a estrutura tridimensional do sítio fixador de antígeno. Uma es- tratégia para humanizar anticorpos é escolher uma seqüência da linhagem germinativa humana com a maior homologia à estrutura do anticorpo paren- tal como a estrutura para receber as CDRs doadoras. Esta abordagem da linhagem germinativa baseia-se nos mesmos fundamentos que a estratégia de melhor ajuste ("best-fit"), mas somente as seqüências da linhagem ger- minativa são procuradas nos bancos de dados.

O anticorpo humanizado da presente invenção pode compreen- der ou ser derivado de uma estrutura de cadeia leve da linhagem germinati- va humana. Em modalidades particulares, a seqüência da linhagem germi- nativa de cadeia leve é selecionada de seqüências VK humanas incluindo, por exemplo, A1, A10, A11, A14, A17, A18, A19, A2, A20, A23, A26, A27, A3, A30, A5, A7, B2, B3, L1, L10, L11, L12, L14, L15, L16, L18, L19, L2, L20, L22, L23, L24, L25, L4/18a, L5, L6, L8, L9, 01, 011, 012, 014, 018, 02, 04, e 08. Em certas modalidades, esta estrutura de linhagem germinati- va humana de cadeia leve é selecionada de V1 -11, V1 -13, V1 -16, V1 -17, V1 - 18, V1-19, V1-2, V1-20, V1-22, V1-3, V1-4, V1-5, V1-7, V1-9, V2-1, V2-11, V2-13, V2-14, V2-15, V2-17, V2-19, V2-6, V2-7, V2-8, V3-2, V3-3, V3-4, V4- 1, V4-2, V4-3, V4-4, V4-6, V5-1, V5-2, V5-4, e V5-6.

Em outras modalidades, o anticorpo humanizado da presente invenção pode compreender ou ser derivado de uma estrutura de cadeia pesada da linhagem germinativa humana. Em modalidades particulares, esta estrutura de linhagem germinativa humana de cadeia pesada é selecionada de VH1-18, VH1-2, VH1-24, VH1-3, VH1-45, VH1-46, VH1-58, VH1-69, VH1- 8, VH2-26, VH2-5, VH2-70, VH3-11, VH3-13, VH3-15, VH3-16, VH3-20, VH3-21, VH3-23, VH3-30, VH3-33, VH3-35, VH3-38, VH3-43, VH3-48, VH3- 49, VH3-53, VH3-64, VH3-66, VH3-7, VH3-72, VH3-73, VH3-74, VH3-9, VH4-28, VH4-31, VH4-34, VH4-39, VH4-4, VH4-59, VH4-61, VH5-51, VH6-1, e VH7-81. Vide o documento PCT WO 2005/005604 para uma descrição das diferentes seqüências de linhagem germinativa.

Em modalidades particulares, a região variável da cadeia leve e/ou a região variável da cadeia pesada compreendem uma região de estru- tura ou pelo menos uma porção de uma região de estrutura (por exemplo, contendo 2 ou 3 subregiões, tais como FR2 e FR3). Em certas modalidades, pelo menos FRL1, FRL2, FRL3, ou FRL4 é totalmente humana. Em outras modalidades, pelo menos FRH1, FRH2, FRH3, ou FRH4 é totalmente hu- mana. Em algumas modalidades, pelo menos FRL1, FRL2, FRL3, ou FRL4 é uma seqüência de linhagem germinativa (por exemplo, linhagem germinativa humana) ou compreende seqüências de consenso humanas para a estrutura particular. Em outras modalidades, pelo menos FRH1, FRH2, FRH3, ou F- RH4 é uma seqüência de linhagem germinativa (por exemplo, linhagem germinativa humana) ou compreende seqüências de consenso humanas para a estrutura particular. Em outras modalidades, toda a região de estrutu- ra é uma região de estrutura humana.

De um modo geral, anticorpos humanizados podem ser produzi- dos obtendo-se seqüências de ácidos nucléicos codificando a HCVR e a LCVR de um anticorpo, por exemplo, um anticorpo murino ou um anticorpo feito por um hibridoma, que se liga a um epitopo de IL-17 da invenção, iden- tificando-se as CDRs nas referidas HCVR e LCVR (não humanas), e enxer- tando-se estas seqüências de ácidos nucléicos codificando CDRs em se- qüências selecionadas de ácidos nucléicos codificanda estrutura humana.

Opcionalmente, uma região CDR pode ser otimizado por mutagênese ran- dômica ou em locais particular para substituir um ou mais aminoácidos na CDR por um aminoácido diferente antes de enxertar a região CDR na região de estrutura. Alternativamente, uma região CDR pode ser otimizada subse- qüente à inserção na região de estrutura humana usando métodos disponí- veis para o versado na técnica. De preferência, as seqüências de aminoáci- dos de estrutura humana são selecionadas de modo que seja provável que o 1,1 anticorpo resultante será adequado para administração in vivo a seres hu- manos. Isto pode ser determinado, por exemplo, com base no uso anterior de anticorpos contendo tal seqüência de estrutura humana. De preferência, a seqüência de estrutura humana não será significativamente imunogênica.

Alternativamente, as seqüências de aminoácidos das estruturas para o anticorpo a ser humanizado podem ser comparadas com aquelas de seqüências de estrutura humana conhecidas a serem usadas para enxerto de CDRs e selecionadas com base em suas seqüências correspondentes altamente semelhantes àquelas do anticorpo parental, por exemplo, um anti- corpo murino que se liga à IL-17 (por exemplo, um anticorpo compreenden- do uma HCVR com SEQ ID N°: 270 e outro compreendendo uma LCVR com SEQ ID N°: 271). Numerosas seqüências de estrutura humana já foram iso- ladas e suas seqüências reportadas na literatura. Isto aumenta a probabili- dade de que o anticorpo humanizado enxertado com CDR resultante, que contém CDRs do anticorpo parental (por exemplo, murino) ou CDRs otimi- zadas do anticorpo parental enxertado em estruturas humanas selecionadas (e possivelmente também a região constante humana) vão reter substanci- almente a estrutura fixadora de antígeno e assim reter a afinidade de ligação do anticorpo parental. Para reter um grau significativo de afinidade de liga- ção de antígeno, as regiões de estrutura humana selecionadas de preferên- cia serão aquelas que se acredita serem adequadas para administração in vivo, isto é, não imunogênicas.

Em qualquer dos métodos, é obtida a seqüência de DNA codifi- cando as regiões HCVR e LCVR do anticorpo anti-IL-17 de preferência muri- no. Métodos para clonar seqüências de ácidos nucléicos codificando imuno- globulinas são conhecidos na literatura. Tais métodos podem, por exemplo, envolver a amplificação das seqüências codificadoras de imunoglobulina a serem clonadas usando iniciadores apropriados por reação de cadeia de polimerase (PCR). Iniciadores adequados para amplificar seqüências de áci- dos nucléicos de imunoglobulina, e especificamente seqüências de HCVR e LCVR murino já foram relatados na literatura. Depois de tais seqüências co- dificadores de imunoglobulina serem clonadas, elas serão seqüências por métodos bastante conhecidos na técnica.

Depois de as seqüências codificadoras de CDR serem enxerta- das nas seqüências codificadoras de estrutura humana selecionadas, as seqüências de DNA resultantes codificando as seqüências pesada variável e leve variável "humanizadas" são então expressas para produzir um Fv hu- manizado ou um anticorpo humanizado que se liga à IL-17. As HCVR e LC- VR humanizadas podem ser expressas como parte de uma molécula total de anticorpo anti-IL-17, isto é, como uma proteína de fusão com seqüências de domínio constante humano cujas seqüências de DNA codificadoras foram obtidas a partir de uma biblioteca comercialmente disponível ou que foram obtidas usando, por exemplo, um dos métodos descritos acima para obten- ção de seqüências de DNA, ou que são conhecidos na literatura. No entanto, as seqüências de HCVR e LCVR também podem ser expressas na ausência de seqüências constantes para produzir um Fv anti-IL-17 humanizado. Não obstante, a fusão de seqüências constantes humanas à região variável é potencialmente desejável porque o anticorpo anti-IL-17 humanizado resul- tante pode possuir funções efetoras humanas.

Métodos para sintetizar DNA codificando uma proteína de se- qüência conhecida são bastante conhecidos na literatura. Com o uso de tais métodos, seqüências de DNA que codificam as seqüências de HCVR e LC- VR humanizadas em questão (com ou sem regiões constantes) são sinteti- zadas, e em seguida expressas em um sistema de vetor adequado para ex- pressão de anticorpos recombinantes. Isto pode ser feito em qualquer siste- ma de vetor que fornece as seqüências de HCVR e LCVR humanizadas em questão para serem expressas como uma proteína de fusão com seqüências de domínio constante humano e se associarem para produzir anticorpos fun- cionais (fixadores de antígeno) ou fragmentos de anticorpos.

Seqüências de domínio constante humano são conhecidas na literatura, e já foram relatadas na literatura. Seqüências de cadeia leve cons- tante humana preferidas incluem as seqüências de cadeia leve constante capa e lâmbda. Seqüências de cadeia pesada constante humana preferidas incluem IgGi humana, lgG2 humana, lgG3 humana, lgG4 humana (vide, por 1,1 exemplo, SEQ ID N°s: 257-260 respectivamente) e versões mutadas das mesmas que fornecem função efetora alterada, por exemplo, meia-vida in vivo aumentada, ligação reduzida ao receptor de Fc, perfil de desamidação alterado e similares.

Se presentes, as regiões de estrutura humana são de preferên- cia derivadas de uma região variável de anticorpo humano tendo semelhan- ça de seqüência com a região análoga ou equivalente do doador de região fixadora de antígeno (isto é, o anticorpo parental). Outras fontes de regiões de estrutura para porções de origem humana de um anticorpo humanizado incluem seqüências de consenso variáveis humanas (vide, por exemplo, Ket- tleborough, C.A. et ai. Protein Engineering 4:773-783 (1991); Carter et ai., WO 94/04679. Por exemplo, a seqüência do anticorpo ou região variável usada para obter a porção não humana pode ser comparada com seqüên- cias humanas como descrito em Kabat et al. Sequences of Proteins of Im- munological lnterest, Fifth Edition, NIH, U.S. Government Printing Office (1991). Em uma modalidade particularmente preferida, as regiões de estrutu- ra de uma cadeia de anticorpo humanizado são derivadas de uma região variável humana tendo pelo menos cerca de 60% de identidade de seqüên- cia total, de preferência pelo menos cerca de 70%, 80%, ou 90% de identi- dade de seqüência total e mais preferivelmente pelo menos cerca de 85% de identidade de seqüência total, com a região variável do doador não humano. Uma porção humana também pode ser derivada de um anticorpo humano tendo pelo menos de 65% de identidade de seqüência, e de preferência pelo menos cerca de 70% de identidade de seqüência, na porção particular (por exemplo, FR) sendo usada, em comparação com a porção equivalente (por exemplo, FR) do doador não humano.

Outras referências que descrevem métodos envolvidos na hu- manização de um anticorpo de camundongo que podem ser usados são, por exemplo, Queen et ai, Proc. NatL Acad. Sei. USA 88:2869, 1991; Patente US Nq 5.693.761; Patente US Nq 4.816.397; Patente US N5 5.225.539; os programas de computador ABMOD e ENCAD descritos em Levitt1 M., J. Mol. Biol. 168:595-620, 1983; a humanização pode ser essencialmente realizada seguindo-se o método de Winter et al. (Jones et al., Nature, 321:522-525, 1986; Riechmann et al., Nature, 332:323-327, 1988; Verhoeyen et al., Scien- ce, 239:1534-1536, 1988).

Anticorpos Humanos

Como uma alternativa â humanização, é possível gerar anticor- pos humanos. Anticorpos humanos podem ser produzidos usando várias técnicas conhecidas na literatura, incluindo bibliotecas de exibição de fagos (Hoogenboom & Winter, J. Mol. Biol., 227:381, 1991; Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581, 1991). As técnicas de Cole et al. e Boerner et al. também es- tão disponíveis para a preparação de anticorpos monoclonais humanos (Co- le et al., Monoclonal Antibodies and Câncer Therapy, Alan R. Liss, pág. 77 (1985) e Boerner et al., J. Immunol., 147:86-95, 1991). Igualmente, anticor- pos humanos podem ser feitos por introdução de Iocos de imunoglobulina humana em animais transgênicos, por exemplo, camundongos nos quais os genes de imunoglobulina endógena foram parcial ou completamente inativa- dos. Por meio de imunização, por exemplo, com um antígeno compreenden- do um epitopo imunogênico da invenção, obtém-se um repertório completo de produção de anticorpos humanos, que se parece bastante com aquele visto nos seres humanos em todos as aspectos, incluindo rearranjo dos ge- nes, montagem e repertório de anticorpos. Esta abordagem está descrita, por exemplo, nas Patentes US Nos 5.545.807, 5.545.806, 5.569.825, 5.589.369, 5.591.669, 5.625.126, 5.633.425, 5.661.016, e nas seguintes pu- blicações científicas: Marks et al., BioTechnology 10:779-783, 1992; Lonberg et al., Nature 368: 856-859, 1994; Morrison, Nature 368: 812-13, 1994; Fish- wild et al., Nature Biotechnology 14:845-51, 1996; Neuberger, Nature Biote- chnology 14: 826 (1996); Lonberg & Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995) e Jobkobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 90:2551,1993.

Genes de imunoglobulina humana introduzidos no camundongo, criando assim camundongos transgênicos capazes de responder a antíge- nos com anticorpos tendo seqüências humanas também estão descritos em Bruggemann et al. (Proc. Natl Acad. Sei. USA 86:6709-6713, 1989). Exis- tem diversas estratégias para a geração de mamíferos que produzem anti- corpos humanos. Em particular, há a abordagem de "minilocos" onde um locos de Ig exógena é imitado através da inclusão de pedaços (por exemplo, genes individuais) do Iocos da Ig (vide, por exemplo, as Patentes US Nos 5.545.807, 5.545.806, 5.625.825, 5.625.126, 5.633.425, 5.661.016, 5.770.429, 5.789.650 e 5.814.318, 5.612.205. 5.721.367, 5.789.215), intro- dução YAC de fragmentos grandes e substancialmente de linhagem germi- nativa dos Iocos de Ig (vide Mendez et al. Nature Genetics 15:146-156, 1997; Green & Jakobovits J. Exp. Med. 188:483-495, 1998), e introdução dos Iocos inteiros ou substancialmente inteiros através do uso de fusão de microcélulas (vide Pedido de Patente Européia N° EP 0 843 961 A1).

Qualquer camundongo transgênico capaz de responder à imuni- zação com anticorpos tendo seqüências humanas pode ser usado para pro- duzir um anticorpo anti-IL-17 da invenção quando são usados métodos dis- poníveis para o versado na técnica, por exemplo, quando tal camundongo é imunizado com um polipeptídio compreendendo um epitopo imunogênico da invenção.

Usos

Os anticorpos da presente invenção são úteis em aplicações terapêuticas, profiláticas, de diagnóstico e em pesquisa como descrito neste relatório. Um anticorpo da invenção pode ser usado para diagnosticar um distúrbio ou doença associada à expressão de IL-17 humana. De maneira similar, o anticorpo da invenção pode ser usado em um ensaio para monito- rar os níveis de IL-17 em um indivíduo sendo examinado quanto a uma con- dição associada à IL-17. Aplicações em pesquisa incluem métodos que utili- zam o anticorpo da invenção e um marcador para detectar IL-17 em uma amostra, por exemplo, em um líquido corporal humano ou em um extrato de célula ou de tecido. Os anticorpos da invenção podem ser usados com ou sem modificação, e são marcados por ligação covalente ou não covalente de uma porção detectável. A porção detectável pode ser qualquer porção que seja capaz de produzir, seja direta ou indiretamente, um sinal detectável. Por exemplo, a porção detectável pode ser um radioisótopo tal como, por exem- plo, 3H, 14C, 32P, 35S, ou 125I, um composto fluorescente ou quimiolumines- cente, tal como isotiocianato de fluoresceína, rodamina, ou luciferina; ou uma enzima, tal como fosfatase alcalina, beta-galactosidase, ou peroxidase de rábano-silvestre. Pode-se empregar qualquer método conhecido na Iitera- tura para conjugar separadamente o anticorpo à porção detectável, incluindo os métodos descritos por Hunter, et al., Nature 144:945, 1962; David, et al., Biochemistry 13: 1014, 1974; Pain, et al., J. Immunol. Meth. 40: 219, 1981; e Nygren, J. Histochem. and Cytochem. 30: 407, 1982.

Diversos protocolos convencionais para medir a IL-17, incluindo, por exemplo, ELISAs, RIAs, e FACS, são conhecidos na literatura e ofere- cem uma base para diagnosticar níveis alterados ou anormais da expressão de IL-17. Os valores de expressão normais ou de referência são estabeleci- dos usando qualquer técnica conhecida na literatura, por exemplo, por com- binação de uma amostra compreendendo um polipeptídio IL-17 com, por exemplo, anticorpos em condições adequadas para formar um complexo antígeno: anticorpo. O anticorpo é direta ou indiretamente marcado com uma substância detectável para facilitar a detecção do anticorpo ligado ou não ligado. Substâncias detectáveis adequadas incluem várias enzimas, grupos protéticos, materiais fluorescentes, materiais Iuminescentes e materiais ra- dioativos. Exemplos de enzimas adequadas incluem peroxidase de rábano- silvestre, fosfatase alcalina, β-galactosidase, ou acetilcolinesterase; exem- plos de complexos de grupos protéticos adequados incluem estreptavidi- na/biotina e avidina/biotina; exemplos de materiais fluorescentes adequados incluem umbeliferona, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, dicloro-triazinilamina fluoresceína, cloreto de dansil ou ficoeritrina; um exem- plo de um material Iuminescente inclui luminol; e exemplos de um material radioativo incluem 125I, 131I, 35S, ou 3H. (vide, por exemplo, Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC Press, Inc. (1987)). A quantidade de um complexo tradicional formado é quantificada por vários métodos, tais como, por exemplo, meios fotométricos. As quantidades do polipeptídio IL-17 expresso nas amostras são comparadas com os valores de referência.

A título de conveniência, o anticorpo da presente invenção pode ser fornecido em um kit, uma combinação acondicionada de reagentes em quantidades predeterminadas com instruções para realizar o ensaio diagnós- tico. Quando o anticorpo é marcado com uma enzima, o kit vai incluir subs- tratos e cofatores requeridos pela enzima (por exemplo, um precursor de substrato que oferece o cromóforo ou fluoróforo detectável). Além disso, po- dem ser incluídos outros aditivos, tais como estabilizantes, tampões (por e- xemplo, um tampão de bloqueio ou um tampão de lise) e similares As quan- tidades relativas dos vários reagentes podem ser amplamente variadas para proporcionar concentrações em solução dos reagentes que otimizam subs- tancialmente a sensibilidade do ensaio. Particularmente, os reagentes po- dem ser fornecidos como pós secos, geralmente liofilizados, incluindo exci- pientes que mediante dissolução vão fornecer uma solução de reagente com a concentração apropriada.

Usos Terapêuticos para o Anticorpo

IL-17 é uma citocina pró-inflamatória secretada por células T ativadas em sítios de inflamação, não na circulação sistêmica; ela não é fa- cilmente detectável no soro nem nos tecidos de uma pessoa saudável. A IL- 17 supra-regula moléculas de adesão, induz a produção de múltiplas citoci- nas e quimiocinas inflamatórias a partir de vários tipos de células que inclu- em sinoviócitos, condrócitos, fibroblastos, células endoteliais, células epiteli- ais, dessa forma induzindo o recrutamento de neutrófilos para um sítio infla- mado, estimula a produção de prostaglandinas e metaloproteinases, e inibe a síntese de proteoglicanos. Além disso, a IL-17 desempenha um papel im- portante na maturação de células progenitoras hematopoiéticas. A IL-17 tem papéis sinalizadores em diferentes órgãos e tecidos que incluem pulmão, cartilagem articular, osso, cérebro, células hematopoiéticas, rim, pele e intes- tino. A IL-17 compartilha 15 - 27% de homologia de aminoácidos com a IL-17 B, C e E e 44-50% de homologia de aminoácidos com a IL-17 D e F. A IL-17 se liga ao receptor de IL-17 com baixa afinidade (cerca de 1 nM), ao passo que os outros da família IL-17 não se ligam ao receptor de IL-17.

Níveis aumentados de IL-17 (isto é, IL-17A) foram associados a várias condições que incluem inflamação das vias aéreas, RA, osteoartrite, erosão óssea, abscessos e adesões intraperitoneais, IBD, rejeição de aloen- xerto, psoríase, certos tipos de câncer, angiogênese, aterosclerose e MS. Tanto a IL-17 quanto a IL-17R são supra-reguladas no tecido sinovial de pa- cientes com RA. A IL-17 exerce seu papel na patogênese de RA através de caminhos dependentes e independentes de IL-1-β e TNF-α. A IL-17 estimula a secreção de outras citocinas e quimiocinas, por exemplo, TNF-a, IL-Ιβ, IL- 6, IL-8 e Gro-a. A IL-17 contribui diretamente para a progressão da doença em RA. Injeção de IL-17 no joelho de camundongos promove a destruição da articulação independentemente da atividade de 1L-1 β (Ann. Rheum. Dis. 59:529-32, 2000). O anticorpo anti-IL-1 β não tem qualquer efeito sobre a inflamação induzida por IL-17 e os danos na articulação (J. Immunol. 167:1004-1013, 2001). Em um modelo de artrite murina induzida porSCW, a IL-17 induziu a infiltração de células inflamadas e a depleção de proteoglica- nos em camundongos do tipo selvagem e knock out com IL-1 β e knock out com TNF-α. Camundongos knock out com IL-17 são fenotipicamente nor- mais na ausência de um desafio antigênico, mas apresentam artrite acentu- adamente reduzida subseqüente à imunização com colágeno tipo Il (J. Im- munol. 171:6173-6177, 2003).

Esclerose múltipla ("MS") é uma doença auto-imune caracteriza- da por inflamação do sistema nervoso central ("SNC") com danos nos axô- nios que envolvem a bainha mielina. Uma marca da MS é que células T se infiltram no SNC. A MS afeta mais de 350.000 pessoas nos Estados Unidos e 2,5 milhões de pessoas no mundo. Existem muitas formas e a forma mais comum é a doença recidivante/remitente ("RRMS") seguida de um estágio progressivo secundário. Os agentes terapêuticos atuais consistem em inter- feron-β (AVONEX, BETASERON e REB1F) que reduz a taxa de recidi- va/exacerbação em 31% - 34%, mas pode produzir sintomas parecidos com gripo e/ou a síntese de anticorpos neutralizantes (por exemplo, cerca de 15% dos pacientes que recebem AVONEX produzem anticorpos neutralizan- tes em 18 meses. O TYSABRI, aprovado pela FDA para RRMS, foi subse- qüente retirado do mercado devido a problemas de imunossupressão do SNC. Ainda existe uma necessidade médica não preenchida no tratamento da MS. O mRNA de IL-17 é aumentado nas lesões da MS e nas células mo- 1,1 nonucleares (MNC) no sangue e no líquido cerebrospinhal de pacientes com MS. Números mais altos de MNC sangüíneas expressando mRNA de IL-17 são detectados durante a exacerbação clínica da MS comparado com a re- missão (Multiple Sclerosis, 5:101-104, 1999). Além disso, encefalomielite auto-imune experimental ("EAE"), um modelo animal pré-clínico para MS é significativamente suprimida em camundongos knock out com IL-17.

Portanto, uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da invenção pode ser útil para o tratamento ou a prevenção de condições onde a presença de IL-17 causa ou contribui para efeitos patológicos indesejados ou onde a diminuição da atividade de IL-17 tem um benefício terapêutico em mamíferos, de preferência seres hu- manos, que incluem, porém sem limitação, inflamação das vias aéreas, as- ma, RA, osteoartrite, erosão óssea, abscessos e adesões intraperitoneais, IBD, rejeição de aloenxerto, psoríase, certos tipos de câncer, angiogênese, aterosclerose e MS, assim como outros distúrbios, condições, doenças ou estados inflamatórios que incluem sem limitação: lúpus eritematoso, respos- ta à exposição a alérgenos, gastrite associado à Helicobacter pylori, asma brônquica, e rejeição de aloenxerto (por exemplo, renal), lúpus eritematoso sistêmico e nefrite associada a lúpus. O uso de um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da presente invenção para tratar ou prevenir pelo menos um dos distúrbios acima mencionados nos quais a atividade de IL-17 é prejudicial ou que favorece níveis reduzidos de IL-17 bioativa é contemplado nesta inven- ção. Adicionalmente, é contemplado o uso de um anticorpo monoclonal anti- IL-17 da presente invenção para uso na produção de um medicamento para o tratamento de peio menos um dos distúrbios acima mencionados.

Conforme aqui usado, os termos "tratamento", "tratar" e similares referem-se à obtenção de um efeito farmacológico e/ou fisiológico desejado. O efeito pode ser profilático no sentido de prevenir completamente ou parci- almente uma doença ou sintoma da mesma e/ou pode ser terapêutico no sentido de curar parcial ou completamente um doença e/ou um efeito adver- so atribuível ã doença. "Tratamento", conforme usado neste relatório, inclui a administração de um composto da presente invenção para tratamento de uma doença ou condição em um mamífero, particularmente em um ser hu- mano, e inclui: (a) prevenir que a doença ocorra em um indivíduo que seja predisposto à doença mas que ainda não foi diagnosticado como tendo a doença; (b) inibir a doença, isto é, parar seu desenvolvimento; e (c) aliviar a doença, isto é, causar a regressão da doença ou distúrbios ou aliviar os sin- tomas e as complicações da mesma. Os regimes de dosagem podem ser ajustados para proporcionar a resposta desejada ótima (por exemplo, uma resposta terapêutica ou profilática). Por exemplo, é possível administrar um único bolo, várias doses fracionadas podem ser administradas ao longo do tempo ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida ou aumentada con- forme indicado pelas exigências da situação terapêutica.

Composição Farmacêutica

Um anticorpo da invenção pode ser incorporado em composi- ções farmacêuticas adequadas para administração a um indivíduo (vide, por exemplo, o exemplo 14). Os compostos da invenção podem ser administra- dos isolados ou em combinação com um veículo, diluente e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável, em dose única ou em doses múltiplas. As composições farmacêuticas para administração são criadas de modo a se- rem apropriadas para o modo de administração escolhido, e diluentes, veícu- los e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis tais como agentes disper- santes, tampões, tensoativos, conservantes, agentes solubilizantes, agentes de isotonicidade, agentes estabilizantes e similares são usados conforme apropriado (vide, por exemplo, o exemplo 14 deste relatório). As referidas composições são criadas de acordo com técnicas convencionais como, por exemplo, em Reminqton, The Science and Practice of Pharmacy, 19th Editi- on, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA 1995 que oferece um compêndio de técnicas de formulação geralmente conhecidas pelos versa- dos na técnica.

Uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo monoclonal anti-IL-17 da presente invenção pode ser administrada a um in- divíduo com risco de apresentar ou apresentando patologias como as descri- tas neste relatório usando técnicas de administração tradicionais que inclu- 'i' em administração oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutânea, pulmonar, transdérmica, intramuscular, intranasal, bucal, sublingual, ou supositório.

Uma composição farmacêutica da invenção é de preferência uma "quantidade terapeuticamente eficaz" ou uma "quantidade profilatica- mente eficaz" de um anticorpo da invenção. Uma "quantidade terapeutica- mente eficaz" refere-se a uma quantidade eficaz, nas dosagens e pelos pe- ríodos de tempo necessários, para obter o resultado terapêutico desejado. Uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo pode variar de acordo com fatores tais como o estado da doença, a idade, o sexo, e o peso do in- divíduo, e a capacidade do anticorpo ou porção de anticorpo para criar uma resposta desejada no indivíduo. Uma quantidade terapeuticamente eficaz também é uma quantidade na qual qualquer feito tóxico ou prejudicial do anticorpo é superado pelos efeitos terapeuticamente benéficos. Uma "quan- tidade profilaticamente eficaz" refere-se a uma quantidade eficaz, nas dosa- gens e pelos períodos de tempo necessários, para obter o resultado profiláti- co desejado. Tipicamente, visto que uma dose profilático é usada nos indiví- duos antes da doença ou em um estágio inicial da doença, a quantidade pro- filaticamente eficaz será menor que a quantidade terapeuticamente eficaz.

Uma quantidade terapeuticamente eficaz ou profilaticamente eficaz é pelo menos a dose mínima, porém menor que uma dose tóxica, de um agente ativo que é necessária para conferir um benefício terapêutico a um indivíduo. Em outras palavras, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo da invenção é um quantidade que em mamíferos, de prefe- rência seres humanos, diminui uma bioatividade de IL-17, por exemplo, a ligação à IL17R, onde a presença de iL-17 causa ou contribui para efeitos patológicos indesejáveis ou uma redução nos níveis de IL-17 resulta em um efeito terapêutico benéfico em um mamífero, de preferência um ser humano.

A via de administração de um anticorpo da presente invenção pode ser oral, parenteral, por inalação, ou tópica. De preferência, os anticor- pos da invenção podem ser incorporados em uma composição farmacêutica adequada para administração parenteral. O termo parenteral conforme usa- do neste relatório inclui administração intravenosa, intramuscular, subcutâ- nea, retal, vaginal ou intraperitoneal. A distribuição sistêmica periférica por injeção intravenosa ou intraperitoneal ou subcutânea é preferida. Veículos adequados para tais injeções são conhecidos na técnica.

A composição farmacêutica tipicamente deve ser estéril e está- vel nas condições de produção e armazenamento no recipiente oferecido, incluindo, por exemplo, um frasco vedado ou uma seringa. Portanto, as composições farmacêuticas podem ser filtradas estéreis depois de fazer a formulação, ou de alguma forma tornadas microbiologicamente aceitáveis. Uma composição típica para infusão intravenosa poderia ter um volume de 250 - 1000 ml de líquido, tal como solução de Ringer estéril, solução salina fisiológica, solução de dextrose e solução de Hank e uma dose terapeutica- mente eficaz (por exemplo, 1 a 100 mg/ml, ou mais) de concentração de an- ticorpo. A dose pode variar dependendo do tipo e da severidade da doença. Como se sabe nas artes médicas, as dosagens para qualquer indivíduo de- pende de muitos fatores, que incluem o tamanho do paciente, a área super- ficial do corpo, a idade, o composto particular a ser administrado, o sexo, o tempo e a via de administração, o estado geral de saúde, e outros fármacos sendo administradas ao mesmo tempo. Uma dose típica pode variar, por exemplo, na faixa de 0,001 a 1000 μg; no entanto, doses abaixo ou acima desta faixa exemplificativa são previstas, especialmente considerando os fatores acima mencionados. O regime de dosagem parenteral diário pode variar de cerca de 0,1 μg/kg a cerca de 100 mg/kg de peso corporal total, de preferência de cerca de 0,3 μg/kg a cerca de 10 mg/kg e mais preferivelmen- te de cerca de 1 μg/kg a 1 mg/kg, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,5 a 10 mg/kg de peso corporal por dia. O progresso pode ser monitorado por avaliação periódica. Para administrações repetidas durante vários dias ou períodos maiores, dependendo da condição, a tratamento é repetido até que ocorra uma supressão desejada dos sintomas da doença. No entanto, outros regimes de dosagem podem ser úteis e não estão excluídos. A dosa- gem desejada pode ser distribuída pela administração de um único bolo, pe- la administração de vários bolos, ou pela administração por infusão contínua do anticorpo, dependendo do padrão de decaimento farmacocinético que o versado deseja obter.

Estas quantidades sugeridas de anticorpo estão bastante sujei- tas a critério terapêutico. O fator essencial na escolha da dose e do progra- 15 ma associados é o resultado obtido. Fatores a serem considerados neste contexto incluem o distúrbio particular sendo tratado, o mamífero particular sendo tratado, a condição clínica do paciente individual, a causa do distúr- bios, o local de distribuição do anticorpo, o tipo particular de anticorpo, o mé- todo de administração, o programa de administração, e similares fatores co- nhecidos pelos médicos.

Os agentes terapêuticos da invenção podem ser congelados ou Iiofilizados para armazenamento e reconstituídos em um veículo estéril ade- quado antes do uso. Liofilização e reconstituição podem levar a graus variá- veis de perda de atividade do anticorpo. As dosagens podem ter que ser a- justadas para compensar. Em geral, é preferido um pH entre 6 e 8.

Artigo Fabricado

Em uma outra modalidade da invenção, oferece-se um artigo fabricado contendo materiais úteis para o tratamento ou a prevenção dos distúrbios ou condições descritos acima. O artigo fabricado compreende um recipiente e um rótulo. Recipientes adequados incluem, por exemplo, garra- fas, frascos, seringas e tubos de ensaio. Os recipientes podem ser feitos de uma variedade de materiais tais como vidro ou plástico. O recipiente contém uma composição de um anticorpo da invenção que é eficaz para prevenir ou tratar o distúrbio ou condição e pode ter um orifício de acesso estéril (por exemplo o recipiente pode ser um saco de solução intravenosa ou um frasco com uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). O agente ativo na composição é um anticorpo anti-IL-17 da invenção. O rótulo no reci- piente, ou associado ao mesmo, indica que a composição é útil para tratar a condição selecionada. O artigo fabricado pode compreender ainda um se- gundo recipiente compreendendo um tampão farmaceuticamente aceitável, tal como uma solução salina tamponada com fosfato, uma solução de Ringer e uma solução de dextrose. Ele pode incluir ainda outros materiais desejá- veis do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo outros tampões, di- luentes, cargas, agulhas, seringas, e bulas com instruções de uso.

Os exemplos a seguir são oferecidos a título ilustrativo apenas, e não pretendem limitar o escopo da presente invenção de forma alguma. TABELA 1: SEQ ID Nas

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Tabela 2: Alinhamentos de CDR de cadeia pesada

SEQ Seq Seq

Fab n° CDR1 ID N° CDR2 ID N° CDR3 ID N°

1 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 2 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYWTGTGGY 34 3 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 4 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYWTGTGAY 35 5 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGLY 36 6 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGGY 37 7 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 8 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGVY 38 9 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYHTGTGGY 39 10 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGGY 37 11 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGVY 38 12 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGTY 40 13 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGGY 41 14 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGPY 42 15 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYYTGTGGY 43 16 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYHTGTGGY 39 17 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGVY 38 18 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYSTGTGGY 44 19 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 20 GYSFTDYNIN 12 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 21 GYSFTDYNLN 13 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 22 GYSFGDYNMN 14 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 23 GYSFRDYNMN 15 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 24 GYSFTWYNMN 16 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 25 GYSFNDYNMN 17 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 26 GYSFTDYNMS 18 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 27 GYSFTDYNTN 19 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 28 GYSFPDYNMN 20 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 29 HYSFTDYNMN 21 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 30 GYHFTDYNMN 22 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 31 GYPFTDYNMN 23 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 32 GYSFTDFNMN 24 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 33 GYSFTDYNMN 11 VINPMYGTTDYNQRFKG 30 YDYATGTGAY 33 34 GYSFTDYNMN 11 VINPAYGTTDYNQRFKG 31 YDYATGTGAY 33 35 GYSFTDYNMN 11 VINPEYGTTDYNQRFKG 32 YDYATGTGAY 33 36 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYWTGTGAY 35 37 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYSTGTGAY 45 38 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDAFTGTGAY 261 39 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYYTGTGAY 47 40 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYHTGTGAY 48 41 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYLTGTGAY 49 42 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATSTGAY 50 43 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYAPGTGAY 51 44 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGVY 52 45 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYYTGTGVY 53 46 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDPATGTGAY 54 47 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 48 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 49 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 50 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 51 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 52 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 53 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 54 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 55 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 56 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 57 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 58 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 59 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 60 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 61 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 62 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 63 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 64 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 65 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 66 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 67 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 68 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 69 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 70 GYSFTDYNMN 11 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYATGTGAY 33 71 GYSFTDYHLG 25 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGAY 46 72 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGAY 46 73 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYHTGTGVY 55 74 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYHTGTGAY 48 75 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGAY 46 76 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGAY 46 78 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYYTGTGAY 47 79 GYSFTDYHMS 27 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGAY 46 80 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYHTGTGAY 48 82 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYYTGTGAY 47 84 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGVY 52 85 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYYTGTGAY 47 86 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGAY 46 87 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGAY 46 88 GYSFTDYHLG 25 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGAY 46 89 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGVY 52 91 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYHTGTGAY 48 92 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYHTGTGAY 48 93 GYSFTDYHMS 27 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYHTGTGAY 48 94 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGAY 46 95 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYYTGTGAY 47 96 GYSFTDYHIH 26 VINPEYGTTDYNQRFKG 32 YDYFTGTGAY 46 97 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYHTGTGAY 48 98 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYYTGTGAY 47 99 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGAY 46 100 GYSFTDYHIH 26 VINPEYGTTDYNQRFKG 32 YDYATGTGAY 33 101 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGAY 46 102 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYFTGTGAY 46 103 GYSFTDYHIH 26 VINPEYGTTDYNQRFKG 32 YDYFTGTGAY 46 104 GYSFTDYHIH 26 VINPEYGTTDYNQRFKG 32 YDYFTGTGAY 46 105 GYSFTDYHIH 26 VINPEYGTTDYNQRFKG 32 YDYYTGTGAY 47 106 GYSFTDYHIH 26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYYTGTGAY 47 107 GYSFTDYHLG 25 VINPEYGTTDYNQRFKG 32 YDYHTGTGAY 48 108 GYSFTDYHLG 25 VINPNYGTTDYNQRFKG 29 YDYYTGTGAY 47 109 gysftdyhms 27 vinpeygttdynqrfkg 32 ydyftgtgay 46 110 gysftdyhih 26 vinpnygttdynqrfkg 29 ydyftgtgvy 52 111 gysftdyhih 26 vinpnygttdynqrfkg 29 ydyftgtgay 46 112 gysftdyhih 26 vinpnygttdynqrfkg 29 ydyhtgtgay 48 113 gysftdyhms 27 vinpnygttdynqrfkg 29 ydyytgtgay 47 114 gysftdyhih 26 vinpnygttdynqrfkg 29 ydyytgtgay 47 115 gysftdyhih 26 vinpnygttdynqrfkg 29 ydyytgtgay 47 116 gysftdyhms 27 vinpnygttdynqrfkg 29 ydyytgtgvy 47 117 gysftdyhis 28 vinpeygttdynqrfkg 32 ydyytgtgvy 53 118 gysftdyhih 26 vinpmygttdynqrfkg 30 ydyytgtgvy 53 119 gysftdyhih 26 vinpnygttdynqrfkg 29 ydyftgtgvy 52 120 gysftdyhis 28 vinpmygttdynqrfkg 30 ydyftgtgay 46 121 gysftdyhis 28 vinpeygttdynqrfkg 32 ydyftgtgay 46 122 gysftdyhih 26 vinpmygttdynqrfkg 30 ydyytgtgvy 53 123 gysftdyhih 26 vinpnygttdynqrfkg 29 ydyytgtgvy 53 124 gysftdynmn 11 vinpmygttdynqrfkg 30 ydyytgtgvy 53 125 gysftdyhih 26 vinpeygttdynqrfkg 32 ydyftgtgvy 52 126 gysftdyhih 26 vinpmygttdynqrfkg 30 ydyftgtgvy 52 127 gysftdyhih 26 vinpnygttdynqrfkg 29 ydyytgtgay 47 128 gysftdyhms 27 vinpmygttdynqrfkg 30 ydyytgtgay 47 129 gysftdyhih 26 vinpmygttdynqrfkg 30 ydyftgtgvy 52 130 gysftdyhms 27 vinpmygttdynqrfkg 30 ydyytgtgay 47 131 gysftdyhih 26 vinpeygttdynqrfkg 32 ydyftgtgvy 52 132 gysftdyhms 27 vinpmygttdynqrfkg 30 ydyftgtgvy 52

Consenso:

<table>table see original document page 68</column></row><table> X8 é N ou H

X9 é M,T,L ou I

X10 é N,G,H ou S

Tabela 3: Alinhamentos de CDR

<table>table see original document page 69</column></row><table> 27 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

28 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

29 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

30 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

31 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

32 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

33 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

34 RSSQS LVHS RG NTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

35 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

36 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

37 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

38 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

39 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

40 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

41 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

42 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

43 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

44 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

45 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

46 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

47 RSSKSLVHSRGNTYLH 125 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

48 RSSQSVVHSRGNTYLH 126 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

49 VSSQSLVHSRGNTYLH 127 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

50 RSSASLVHSRGNTYLH 128 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

51 RSSQSLKHSRGNTYLH 129 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

52 RSSQSLRHSRGNTYLH 130 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

53 RSSRSLVHSRGNTYLH 131 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

54 RSHQSLVHSRGNTYLH 132 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

55 RSSQSLVHSRGNTFLH 133 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

56 RSSQS LVH N RG NTYLH 134 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

57 RSSQS LVHS RG RTYLH 135 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168

58 RSSQSLVHRRGNTYLH 136 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168 59 rssqslvhsrgntyth 137 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 60 rssqslvhsrgntysh 138 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 61 rssqslvhsrgntyhh 139 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 62 rssqslvhargntylh 140 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 63 rssqslvhsrgntyfh 133 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 64 rssqslvhsrgntwlh 141 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 65 rssqslvhsrgnvylh 142 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 66 rssqslvhsrgktylh 143 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 67 rssqslvhlrgntylh 144 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 68 rssqslvhsrgntylh 122 kvsnrfi 167 sqsthlpft 168 69 rssqslvhsrgntylh 122 kvsnrfs 150 sqnhlpft 176 70 rssqslvhsrgntylh 122 kvsnrfs 150 sqstslpft 177 71 rsskslvhsrgntflh 145 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 72 rsskslvhsrgntylh 125 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 73 rssqslrhsrgntflh 146 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 74 rssqslvhsrgntflh 133 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 75 rssqslvhsrgntylh 122 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 76 rssqslvhsrgntflh 133 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 78 rssqslvhsrgntylh 122 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 79 rssqslkhsrgntylh 129 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 80 rssqslkhsrgntylh 129 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 82 rssqslvhsrgntflh 133 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 84 rssqslvhsrgntflh 133 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 85 rsskslvhsrgntylh 125 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 86 rsskslvhsrgntylh 125 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 87 rssqslkhsrgntflh 147 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 88 rssqslvhsrgntflh 133 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 89 rssqslrhsrgntylh 130 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 91 rssqslkhsrgntylh 129 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 92 rssqslkhsrgntflh 147 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 93 rssqslkhsrgntylh 129 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 94 rssqslvhsrgntflh 133 kvsnrfs 150 sqsthlpft 168 95

96

97

98

99

100

101

102

103

104

105

106

107

108

109

110

111

112

113

114

115

116

117

118

119

120

121

122

123

124

125

126

RSSQSLRHSRGNTYLH 130 KVSNRFH 152 SQSTHLPFT 168 RSSKSLVHSRGNTYLH 125 KVANRFS 153 SQSTHLPFT 168 RSSKSLVHSRGNTFLH 145 KVSVRFS 154 SQSTHLPFT 168 RSSQSLVHSRGNTFLH 133 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168 RSSQSLVHSRGNTFLH 133 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168 RSSKSLVHSRGNTYLH 125 KVSNNFS 155 SQSTHLPFT 168 RSSQSLVHSRGNTFLH 133 KVDNRFS 156 SQSTHLPFT 168 RSSRSLVHSRGNTFLH 148 KVTNRFS 157 SQSTHLPFT 168 RSSQSLRHSRGNTYLH 130 KVSNIFS 158 SQSTHLPFT 168 RSSKSLVHSRGNTFLH 145 KVSTRFS 159 SQSTHLPFT 168 RSSQSLRHSRGNTYLH 130 KVSNRFS 150 SQSTHYPFT 169 RSSQSLVHSRGNTFLH 133 KVRNRFS 160 SQSTHLPFT 168 RSSQSLRHSRGNTYLH 130 KVPNRFS 161 SQSTHYPFT 169 RSSQSLVHSRGNTFLH 133 KVSN FV 162 SQSTHYPFT 169 RSSQSLRHSRGNTYLH 130 KVSNRIS 163 SQSTHLPFT 168 RSSRSLVHSRGNTYLH 131 KVSNRFT 164 SQSTHYPFT 169 RSSQSLRHSRGNTFLH 146 KVSNRNS 165 SQSTHLPFT 168 RSSKSLVHSRGNTYLH 125 KVHNRFS 166 SQSTHLPFT 168 RSSQSLVHSRGNTFLH 133 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168 RSSQSLKHSRGNTYLH 129 KVSTRFS 159 SQSTHLPFT 168 RSSQSLVHSRGNTFLH 133 KVSNRFI 167 SQSTHLPFT 168 RSSQSLKHSHGNTYLH 149 KVSNRFI 167 SQSTHLPFT 168 RSSKSLVHSRGNTYLH 125 KVSNRFI 167 SQSTHLPFT 168 RSSQSLVHSRGNTFLH 133 KVSNRFI 167 SQSTHLPFT 168 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFI 167 SQSTHLPFT 168 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRF] 167 SQSTHYPFT 169 RSSQSLKHSRGNTFLH 147 KVSNRFI 167 SQSTHYPFT 169 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFI 167 SQSTHLPFT 168 RSSKSLVHSRGNTYLH 125 KVSNRFI 167 SQSTHLPFT 168 RSSRSLVHSRGNTYLH 131 KVSNRFI 167 SQSTHLPFT 168 RSSQSLVHSRGNTYLH 122 KVSNRFS 150 SQSTHLPFT 168 RSSRSLVHSRGNTYLH 131 KVSNRFI 167 SQSTHLPFT 168 127 RSSRSLVHSRGNTYLH 131 KVS N RF] 167 SQSTHLPFT 168 128 RSSQSLKHSRGNTYLH 129 KVS N RFI 167 SQSTHYPFT 169 129 RSS KS LVHS RG NTYLH 125 KVSNRFj 167 SQSTHLPFT 168 130 RSSQSLKHSRGNTYLH 129 KVSNRFI 167 SQSTHLPFT 168 131 RSSKSLVHSRGNTYLH 125 KVSNRFI 167 SQSTHLPFT 168 132 RSSKSLVHSRGNTYLH 125 KVSNRFI 167 SQSTHLPFT 168

Consenso: SEQ ID N°: 247 SEQ ID N°: 248 SEQ ID N°: 249 X1SX3X4SX6X7HX9X10GX12X13X14X15H X1VX3X4RX6X7 X1QX3X4X5X6PFT X1 é R ou V X3 é K ou I X1 é S ou N X3 é S ou H X3 é S,A,D,T,R,H ou P X3 é S ou T X4 é Q,K,R ou A X4 é N,V ou T X4 é T1L ou M X6 é V ou L X5 é R,l ou N X5 é H ou S X7 é R,V ou K X6 é F,l ou N ou X6 é L1I,V1Eou Y Xg é S,N,R,A ou L X7 é S,H,I,T ou V

X1O é H1R1N ou Y X12 é N1Kou R X13 é T ou V X14 é F1Y ou W X15 é L1T1S1Hou F

EXEMPLOS

Exemplo 1: ELISA I: Ligação do anticorpo à IL-17 de várias espécies

Um ensaio ELISA exemplificativo para medir a ligação de anti- corpos à IL-17 utiliza placas de microtitulação Costar 3366 vedadas que são revestidas por uma noite a 4°C com 50 μΙ de IL-17 humana a 1,0 μg/ml por cavidade (R&D Systems, nQ 317-IL/CF) em tampão de revestimento à base de carbonato (50 mM de carbonato de sódio, pH 9,0). Alternativamente, são usadas IL-17 de camundongo, rato, coelho ou macaco cinomolgo. IL-22 hu- mana (R&D Systems) é usada como antígeno de controle. IL-17 de coelho e de macaco cinomolgo não estão comercialmente disponíveis e portanto re- querem clonagem e expressão, ou síntese artificial, de acordo com métodos conhecidos na literatura que usam as seqüências de aminoácidos para IL-17 das várias espécies mostradas na figura 2 (SEQ ID N°s: 9 e 10). Seqüências de nucleotídeos exemplificativas codificando IL-17 das várias espécies estão mostradas nas SEQ ID N°s: 250-254.

A placa é subseqüente bloqueada pela adição de 100 μl de tam- pão de bloqueio (Pierce ns 37515). A placa é incubada por 1 hora a 37°C e em seguida lavada três vezes em tampão de lavagem (PBS pH 7,4 e 0,05% de Tween). Em seguida, 50 μl do anticorpo de amostra ou do anticorpo de controle (diluído até várias concentrações em PBS pH 7,4, por exemplo, 2, 0,4, 0,08, 0,016, 0,0032 e 0 μg/ml) são adicionados a cada cavidade e a pla- ca é ainda incubada por 1 hora a 37°C. A placa é então lavada três vezes com tampão de lavagem antes da adição de 50 μl por cavidade de fosfatase alcalina capa anti-humana conjugada diluída 1:1000 em PBS pH 7,4. As a- mostras de teste são incubadas por 1 hora a 37°C. Em seguida sal dissódico de fosfato de p-nitrofenila (PNPP, Pierce nQ 37620) é feito na hora por disso- lução em tampão de substrato de dietanolamina de acordo com as instru- ções do fabricante e 50 μl são adicionados a cada cavidade. Deixa-se o de- senvolvimento de cor prosseguir por cerca de 10 minutos à temperatura am- biente e em seguida o sinal de cor é medido a uma absorvência de 405 n, usando qualquer leitora de placa de ELISA apropriada. O grau de ligação é proporcional à produção de sinal de cor.

Os anticorpos da invenção se ligam à IL-17 humana em um en- saio ELISA como descrito neste relatório, mas não se ligam à IL-17 de ratou ou de camundongo. Preveu-se, segundo os dados de Biacore do exemplo 4 demonstrando que os anticorpos da invenção se ligam à IL-17 humana e de macaco, que os anticorpos da invenção também demonstrariam ligação à IL- 17 de macaco em um ensaio ELISA como o descrito neste relatório.

Exemplo 2: ELISA II: Ligação de anticorpos a proteínas da família IL-17

Um ELISA é usado para medir se os anticorpos da invenção se ligam seletiva e/ou preferivelmente à membros particulares da IL-17 humana (por exemplo, IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E ou IL-17F) ou à IL-22 humana (controle negativo).

Em um ensaio exemplificativo, cavidades de placa de ELISA (Nunc Immuno Maxisorp) são revestidas com 100 μl (0,5 mg/ml em 1X tam- pão de revestimento (BioFx)) de proteínas de membros da família IL-17 (R&D Systems), vedadas e incubadas por uma noite a 4°C. A solução no cavidade é removida por agitação e tampão de bloqueio (200 μl de BSA a 1,5% em PBS) é adicionado. As placas são incubadas em um agitador gira- tório por 30 minutos à temperatura ambiente. Em seguida 100 μl de um anti- corpo a ser testado é adicionado por cavidade em concentrações variáveis (por exemplo, 2, 0,4, 0,08, 0,016, 0,0032 e 0 μg/ml). As placas são nova- mente incubadas por uma noite (4°C) seguida de aquecimento em um agita- dor giratório (60 minutos à temperatura ambiente). Cada cavidade da placa é então lavado cinco vezes com tampão (1X tampão lsh, BioFX). Depois da 1,1 lavagem, um anticorpo secundário conjugado a HRP apropriado comercial- mente disponível (1:2000 em PBS com 1,5% de BSA) é adicionado (100 μl/cavidade). As placas são novamente incubadas em um agitador giratório (60 minutos à temperatura ambiente) seguida de tampão de lavagem (5X) da maneira descrita acima. O sinal colorimétrico é desenvolvido pela adição de TMB (100 μl/cavidade) até a saturação (aproximadamente 3 - 5 minutos) e então novo desenvolvimento é interrompido pela adição de solução de inter- rupção (100 μl/cavidade, BioFX). O sinal de cor é medido a 450 nm de ab- sorvência usando qualquer leitora de placa de ELISA apropriada. O grau de ligação é proporcional à produção de sinal de cor. Os anticorpos da invenção (por exemplo, Fabs 103, 104, 118, 121, 126 e 131 descritos na Tabelai) se ligam especificamente à IL-17 humana (isto é, IL-17A), mas, em condições semelhantes, não se ligam mais do que os níveis de referência à IL-17B hu- mana, IL-17C humana, IL-17D humana, IL-17E humana, IL-17F humana, IL- 17 murina ou IL-22 humana.

Exemplo 3: Isolamento e ativação de células para clonagem de IL-17 A. Esplenócitos de Rato

Usando fórceps e tesoura estéreis, retirar o baço de um rato sa- crificado por inalação de CO2 e colocar o baço em um tubo contendo 5 ml do meio RPMI 1640 + 10% de soro bovino fetal e penicilina/estreptomicina (so- lução de meio). Despejar o conteúdo do tubo em uma placa de Petri de 10 cm e remover a gordura do baço. Homogeneizar o baço suavemente usando um par de lâminas de microscopia pré-autoclavadas e totalmente congelada. Remover as células das lâminas por lavagem usando a solução de meio, pipetar algumas vezes e filtrar as células por um filtro de células (Fisher Sci- entific). Lavar as células uma vez com a solução de meio, contar as células e ressuspendê-las até uma concentração final de 2 χ 107 células/ml em 80 ml. Adicionar a solução de células a um balão T150, adicionar concanavalina A até uma concentração final de 3 μg/ml e incubar a 37°C por cerca de 15 ho- ras. Colher as células, lavar com PBS, congelar o pélete de células sobre gelo seco e proceder imediatamente a procedimentos tradicionais de isola- mento de RNA.

B. Células mononucleares de sangue periférico (PBMC) de macaco cino- molqo e de coelho

Carregar cerca de 7 ml de sangue total de macaco cinomolgo ou 10 ml de sangue total de coelho branco da Nova Zelândia em um sistema BD Vacutainer® CPT® para separação das células mononucleares do san- gue total. Centrifugar o tubo CPT de preparação de células por 20 minutos a 1500 χ de gravidade em um rotor de êmbolo oscilante horizontal. Recolher os linfócitos e monócitos na interface, lavar duas vezes com a solução de meio, contar e ressuspender na solução de meio a uma concentração final de 106 células/ml. Adicionar concanavalina A até uma concentração final de 3 μg/ml e incubar a 37°C por cerca de 15 horas. Recolher as células, lavar com PBS, congelar o pélete de células sobre gelo seco e proceder imedia- tamente a procedimentos tradicionais de isolamento de RNA.

Exemplo 4: Medindo constantes cinéticas de ligação

Um instrumento BIACORE® 2000 é usado para medir a cinética e a afinidade de ligação antígeno-anticorpo. O instrumento utiliza as proprie- dades óticas da ressonância de plasmônio de superfície para detectar alte- rações na concentração de proteínas de moléculas interatuantes em uma matriz biossensora de dextrano. Exceto onde observado, todos os reagentes e materiais foram adquiridos na BIACORE® AB. Todas as medições são efe- tuadas a 25°C. As amostras são ressuspendidas em tampão HBS-EP até uma concentração final de 2 μς/ηηΙ (150 mM de cloreto de sódio, 3 mM de EDTA, 0,005% (p/v) de tensoativo P-20, e 10 mM de HEPES, pH 7,4). A pro- teína A é imobilizada nas células de fluxo 1 a 4 de um chip sensor CM4 em um nível 500 unidades de resposta usando um kit de acoplamento de amina.

A ligação é avaliada usando múltiplos ciclos analíticos. Cada ciclo é realizado a uma taxa de fluxo de 5 μΙ/minuto e consiste nas seguintes etapas: injeção de cerca de 20 μΙ de uma composição de anticorpo a 2 μg/ml visando uma captura de 100 - 200 unidades de resposta, injeção de 250 μΙ de IL-17 humana, IL-17 de macaco cinomolgo, IL-17 de coelho branco da Nova Zelândia, IL-17 de rato ou IL-17 de camundongo (começando com 10 nM e usando diluições seriadas 1 para 2 para cada ciclo) seguida de 20 mi- 1,1 nutos para dissociação, e regeneração usando 30 μΙ de cloridrato de glicina 10 mM, pH 1,5. As taxas de associação e dissociação para cada ciclo são avaliadas usando um modelo de ligação "1:1 com transferência de massa" no software BIAevaIuation.

mAbs 103, 104, 118, 121, 126 e 131 de comprimento integral (vide Tabela 1) com uma região Fc de lgG4 Fc apresentam ligação com alta afinidade à IL- 17 humana e à IL-17 de macaco com um K0 menor que 5 pM, um Koff menor que 2 χ 10"5s"1 e um Kon de pelo menos 5 χ 106 M"1s"1. O Kd e o ko« são me- Ihorados (isto é, K0 mais baixo, kotf mais baixo) nestes mAbs variantes em relação ao Fab 2321 mAb (Fab parental de, por exemplo, Fab 103 e 104) compreendendo uma região variável murina [SEQ ID N°s: 261 (VH de 2321), 262 (VL de 2321)], uma região constante de cadeia pesada de IgG4 humana (SEQ ID N0: 260) e uma região constante de cadeia leve capa (SEQ ID N°: 272). Os anticorpos da invenção apresentam ligação não superior aos níveis de referência à IL-17 de camundongo ou à IL-17 de rato; não se detecta li- gação até 200 nM de IL-17 de camundongo e não se detecta ligação até 1 μΜ de IL-17 de rato. Quando os mAbs 103, 104, 121 e 126 de comprimento integral são testados, nas mesmas condições descritas acima, quanto à Iiga- ção à IL-17 de macaco cinomolgo e à IL-17 de rato, a ligação à IL-17 de coe- lho é fraca e bifásica ao passo que a ligação à IL-17 de macaco é semelhan- te à ligação à IL-17 humana. Valores específicos para certos mAbs (os valo- res estão apresentados como a média ± desvio padrão da média) da inven- ção quando testados neste ensaio estão listados na Tabela 4 abaixo. Obser- va-se que regiões Fc que não daquelas da lgG4 não afetam significativamen- te Kd e koff.

Tabela 4

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a A ligação é bifásica e os dados coincidem com o modelo de ligação de li- gando heterogêneo resultando duas afinidades.

Exemplo 5: Estudos de competição de ligação receptor de IL-17/anticorpo anti-IL-17

Este exemplo demonstra que os anticorpos da invenção compe- tem pela ligação à IL-17 com o receptor de IL-17.

Estudos de ligação BIACORE são realizados usando a proteína de fusão Fc do receptor de IL-17 (R&D η- 177-1R). Para demonstrar que a proteína de fusão Fc do receptor de IL-17 se liga à IL-17 humana, um ensaio BIACORE é realizado em tampão de ligação BIACORE (HBS-EP) + 1 mg/ml BSA a 25°C em um instrumento BIACORE 2000. Usa-se um chip CM4 com aproximadamente 600 unidades de resposta de proteína A imobilizado nas células de fluxo 1, 2 e 3 do chip. Aproximadamente 100 unidades de respos- ta de proteína de fusão Fc do receptor de IL-17 são capturadas na célula de fluxo 2 do chip. IL-17 humana é então exposta às células de fluxo 1 e 2 em concentrações variando de 600 nM a 9,4 nM. Depois de cada injeção de 250 1,1 μl de IL-17 humana, o complexo é deixado dissociar por cerca de 12 minutos passando-se tampão através do chip. Ao final da dissociação, usa-se uma injeção de 20 μl de glicina 10 mM pH 1,5 para regenerar o chip antes de co- meçar o ciclo de ligação seguinte. A célula de fluxo 1 é usada uma célula de fluxo de referência. Os dados são ajustados usando o modelo "Bivalent a- nalyte" no software BIAevaIuation Versão 3.2. Os resultados indicam que esta interação tem uma taxa de atividade ("on-rate") de 1,06 x 105 M'1s"1, uma taxa de dissociação rápida de 20,3 s"1 e uma taxa de dissociação lenta de 1,63 x 10"4 s"1. Portanto, esta interação tem um Kd ou afinidade de ligação de 1,5 nM e 0,19 mM que é muito mais fraca que as afinidades de ligação dos anticorpos da invenção à IL-1 humana.

A ligação para a experiência de competição também é medida em HBS-EP + 1 mg/ml de BSA a 25°C em um instrumento BIACORE 2000 com um chip CM4. Aproximadamente 1000 unidades de resposta de um an-

ticorpo da invenção são imobilizadas nas células de fluxo 2, 3 e 4 do chip; a célula de fluxo 1 é deixada vazia. Usando uma taxa de fluxo de 50 μl/ml, 25 μl de IL-17 humana 500 nM são injetados nas quatro células de fluxo, for- mando o complexo anticorpo:antígeno na superfície do chip. Depois de completada a injeção e formado o complexo, 250 μl de proteína de fusão Fc do receptor de IL-17 humana 500 nM são injetados nas quatro células de fluxo. Ao final desta injeção usa-se uma injeção de 25 μl de glicina 100 mM pH 1,5 para regenerar o chip. A mesma experiência de ligação é então repe- tida usando 250 μl de tampão no lugar da proteína de fusão Fc do receptor de IL-17.

Os perfis de ligação para a injeção de receptor no complexo an- ticorpo:antígeno e para a injeção de controle de tampão no complexo anti- corpo:antígeno são idênticos. Isto indica que não há sítios de ligação dispo- níveis para a IL-17 dimérica se ligar ao seu receptor depois que ela se ligou a um anticorpo da invenção. Este resultado também indica que o receptor que não é capaz de "retirar" a IL-17 de qualquer dos anticorpos depois de formado o complexo. Estes anticorpos podem inibir a ligação da IL-17 hu- mana ao seu receptor, e neutralizando assim a atividade biológica da IL-17 humana.

Exemplo 6A: Ensaio repórter de IL-8 in vitro

Para testar a capacidade de um anticorpo da invenção para neu- tralizar ou antagonizar uma bioatividade de IL-17, é possível utilizar o ensaio repórter de IL-8 descrito neste relatório. Esta abordagem também pode ser usada para determinar a potência dos Fabs ou mAbs da invenção em um ensaio à base de células. A linhagem celular HS27 humana (ATCC n° CRL- 1634) secreta IL-8 em resposta à IL-17. A secreção de IL-8 induzida por IL- 17 é inibida neutralizando-se anticorpos anti-IL-17 (vide, por exemplo, J. Imm. 155:5483-5486, 1995 ou Cytokine 9:794-800, 1997). Por conseguinte, a secreção de IL-8 induzida por IL-17 deve continuar livre se for adicionada IL-17 suficiente às células HS27 na ausência do anticorpo anti-IL-17 neutra- lizante.

As células HS27 são mantidas no meio de ensaio: meio com alto teor de glicose DMEM sem vermelho de fenol (Invitrogen n° 31053-028) com 10% de soro bovino fetal, 4 mM de L-glutamina, 1 mM de piruvato de sódio, penicilina G (100 U/500 ml) e estreptomicina (100 μg/500 ml). As células são cultivadas em balões T150 até estarem cerca de 80 - 90% confluentes no dia do ensaio. IL-17 humana (R&D Systems, n9 317-IL-050) é reconstituída em PBS estéril sem Ca2+ e Mg2+ guardada congelada, recém-descongelada para uso e diluído até 200 ng/ml no meio de ensaio. Uma alíquota de 50 μl da IL- 17 diluída é adicionada a cada cavidade de uma placa de cultura de tecido de fundo plano e 96 cavidades (Falcon n° 35-3072) com os cavidades exter- nos deixados vazios. Compartimentos em duplicata são usadas para um controle só do meio (100 μl/cavidade) e controle só de IL-17 (100 μl/cavidade). O teste é realizado em duplicata ou triplicata. Proteínas mAb de comprimento integral são diluídas até uma concentração máxima de 24 μg/ml no meio de ensaio. Diluições seriadas (tipicamente 1:5) são feitas em uma placa de ensaio separada e 50 μl das amostras de Fab nas várias dilui- ções são adicionadas às cavidades contendo IL-17 e em seguida incubados a 37°C por 1 hora. Meio de ensaio puro é usado como controle negativo.

Células HS27 (tipicamente cerca de 20.000 células em 100 μl de M meio de ensaio) são adicionadas a cada cavidade da placa contendo Fab + IL-17 (ou controles) e incubadas por cerca de 48 horas a 37°C. Os sobrena- dantes do meio são então recolhidos depois de céntrifugação das placas de 96 cavidades por 5 minutos a 500 vezes a gravidade e diluídos 1:15 ou 1:10 no meio de ensaio. O nível de neutralização de IL-17 é medido por determi- nação das quantidades de IL-8 no sobrenadante usando um kit de ELISA comercial de acordo com as instruções do fabricante exceto que o meio de ensaio é substituído por diluente padrão e o volume de substrato é 100 μl/cavidade (R&D Systems, ELISA D-8000C ou R&D DuoSet ELISA ns DY208hIL-8). As medições do ELISA (450 nm) são feitas em uma leitora de microplacas. As curvas de calibração são obtidas usando um ajuste logístico de 4 parâmetros com os valores de IL-8 (pg/ml) determinados a partir das curvas de calibração usando-se técnicas estatísticas tradicionais. Os valores de IC50 são obtidos usando-se técnicas estatísticas tradicionais.

Os mAbs 103, 104, 121 e 126 de comprimento integral da inven- ção (com região Fc de IgG4), quando testados no ensaio descrito (2 - 4 repli- cações), têm um IC50 médio (com base em um peso molecular estimado de 150 kD para cada mAb) entre 450 e 500 pM com a faixa de todos os valores medidos entre 365 e 618 pM.

Exemplo 6B: Ensaio repórter de GROa in vitro

Para testar a capacidade de um anticorpo da invenção para neu- tralizar ou antagonízar uma bioatividade de IL-17, é possível utilizar o se- guinte ensaio à base de células. A IL-17 pode estimular células epiteliais e outras células a secretar GROa. A capacidade de um anticorpo da invenção para neutralizar a secreção de GROa induzida por IL-17 da linhagem de cé- lulas epiteliais de adenocarcinoma colorretal humano HT-29 é testada neste ensaio.

Para testar se a IL-17 humana induziu de forma dose-dependen- te a secreção de GROa das células HT-29, IL-17 recombinante (R&D Sys- tems nQ 317-IL-050/CF; reconstituída em PMS estéril da Dulbecco sem Ca2+ e Mg2+ (D-PBS)) é diluída (até 4,5 μg/ml; 3X a concentração de teste mais alta) no meio de ensaio/cultura (McCoy1S 5A (Invitrogen); 10% de FBS (Invi- trogen); penicilina G (100 U/500 ml); e estreptomicina (100 μg/500 ml. IL-17 é ainda diluída seriadamente (1:5) no meio de ensaio. Vários concentrações de IL-17 (0,096 ng/ml - 1.500 ng/ml; 3,0 pM - 46.875 pM) são dispensadas (50 μΙ cada) nos cavidades internos de uma placa de 96 cavidades tratados com cultura de tecido. O meio de ensaio (50 μΙ) é dispensado em 3 cavida- des para um tratamento com "meio puro". O teste é realizado em triplicata (3 cavidades por tratamento). A placa contendo IL-17 em meio de ensaio é in- cubada por aproximadamente 60 - 90 minutos a 37°C, 5% de CO2, antes da adição das células HT-29.

Para avaliação de um anticorpo da invenção, por exemplo, mAb 126 com uma região Fc de lgG4, usa-se uma concentração de IL-17 que deu aproximadamente 70% de secreção máxima de GROa das células HT-29 (60 ng/ml). IL-17 humana recombinante (R&D Systems) é diluída (até 240 ng/ml; 4X concentração de trabalho) em meio de ensaio/cultura. A IL-17 dilu- ída é dispensada (50 μΙ) em 60 cavidades internas separadas das placas de 96 cavidades tratadas com cultura de tecido (Becton Dickinson Falcon nQ 35- 3072). Meio de ensaio (50 μΙ) é dispensado em 3 cavidades para um trata- mento com "meio puro".

Uma faixa de dose de um anticorpo da invenção a ser testada é tipicamente de 2,56 - 40.000 pM. Em uma placa de diluição separada, o an- ticorpo da invenção e o anticorpo de controle (estéril, em 1X PBS, pH 7,4) são diluídos até 160.000 pM no meio de ensaio. O anticorpo da invenção e o anticorpo de controle são ainda diluídos seriadamente (1:5) no meio de en- saio. Cada concentração de teste do anticorpo da invenção a ser testado é então adicionada (50 μΙ) as cavidades contendo IL-17. O teste é tipicamente realizado em triplicata. O meio de ensaio puro (50 μΙ) é usado para os con- troles de "meio puro" e "IL-17 pura". As placas contendo misturas de IL-17 e anticorpo da invenção são incubadas por 60 - 90 minutos a 37°C, 5% de CO2, antes da adição das células Ht-29.

Células HT-29 (células epiteliais de adenocarcinoma colorretal humano, ATCC ne HTB-38) são mantidas em meio de cultura/ensaio em ba- lões tratados com cultura de tecido usando técnicas tradicionais. As células HT-29 são cultivadas em balões de cultura de tecido até que estivessem 50 - 80% confluentes no dia do ensaio. No dia do ensaio, as células são enxa- guadas com HBSS (Cambrex ne CC-5024) e separadas dos balões de cultu- ra com tripsina + EDTA. A tripsina é inativada com meio de ensaio completo. As células HT-29 são então centrifugadas a 500Xg por 5 minutos à tempera- tura ambiente. O pélete de células é então ressuspendida no meio de ensaio e 20.000 células HT-29 (em 100 μΙ) são adicionadas a cada cavidade de tra- tamento das placas de 96 cavidades. Um volume igual de D-PBS é adicio- nado a cada um dos cavidades marginais não usados (sem células) para reduzir os efeitos marginais resultantes da evaporação. As placas de 96 ca- vidades foram colocadas em uma incubadora de cultura de tecido (37°C, 5% de CO2) por aproximadamente 48 horas.

No final do ensaio, as placas são centrifugadas (500Xg por 5 minutos à temperatura ambiente), e o meio de cultura de células é transferi- do para placas de polipropileno de 96 cavidades. Os níveis de GROa são medidos com um ELISA tipo sanduíche para GROa (R+D Systems DuoSet n° DY275), conforme as instruções do fabricante, exceto por: usar o meio de ensaio como o diluente de referência, usar o tampão de lavagem 1X ELISA da BioFX Labs, usar um volume de amostra e um volume de referência de 50 μl por cavidade, usar um substrato da BioFX Labs (substrato HRP, n9 TMBW-1000-01), e usar uma solução de interrupção da BioFX Labs (ne LSTP-1000-01) (100 μΙ por cavidade). No final das reações do ELISA, as placas são lidas a 450 nm em uma leitora de microplacas. As curvas de cali- bração para GROa são obtidas realizando-se um ajuste logístico de 4 parâ- metros. Os valores de GROa (concentração em pg/ml) para as amostras são obtidos a partir das curvas de calibração. A linhagem de células epiteliais de adenocarcinoma colorretal humano HT-29 secretou GROa quando estimula- da com IL-17, de maneira dose-dependente (Tabela 5). A lgG4 humana de controle não causou diminuição na secreção de GROa induzida por IL-17. Estes resultados (Tabela 6) demonstram que mAb 126 é capaz de neutrali- zar completamente a secreção de GROa induzida por IL-17 humana das células HT-29 in vitro usando as condições descritas. O valor de IC50 para mAb 126 neste ensaio é de aproximadamente 560 pM.

Tabela 5

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Abreviações: AVG = média; STDEV = desvio padrão.

Tabela 6

<table>table see original document page 84</column></row><table> <table>table see original document page 85</column></row><table>

Abreviações: conc. = concentração; AVG = média; STDEV = desvio padrão. Exemplo 7: Neutralização in vivo de hlL-17

A IL-17 humana é capaz de se ligar e estimular o receptor de IL- 17 de camundongo, levando a uma elevação e subseqüente secreção da quimiocina KC (CXCL1) de camundongo. São feitas experiências com tempo e dose variáveis para identificar a dose ideal de IL-17 humana e o tempo ideal para indução de KC de camundongo. Estas experiências indicam que uma dose de 150 μg/kg de IL-17 humana e um tempo de 2 horas após a administração de IL-17 dá níveis máximos de KC em soro de camundongo. Anticorpos de comprimento integral da presente invenção (por exemplo, Fab 126 ou Fab 121 com HCVR operacionalmente ligada a Fc de IgG4 humana, SEQ ID N°: 260 [ou SEQ ID N°: 278] e a LCVR operacionalmente ligada a uma região constante capa humana, SEQ ID N°: 263 [ou SEQ ID N°: 277]) são administrados por via intravenosa a camundongos a 1, 10, 100 e 1000 μg/kg, uma hora antes de uma injeção subcutânea de IL-17 humana. Duas horas depois da administração de IL-17 humana, os camundongos são sacri- ficados e os níveis de KC são determinados por ELISA usando um kit co- mercialmente disponível de acordo com as instruções do fabricante (KC Quantikine, R&D). Anticorpos condizentes com isótipos são usados como controles negativos. Os anticorpos bloqueiam a capacidade da IL-17 huma- na de estimular o receptor de IL-17 de camundongo, levando à inibição de uma elevação de KC de camundongo, de maneira dose-dependente. mAb126 (um anticorpo de comprimento integral compreendendo Fab 126), a uma dose de 20 μg/camundongo nas condições descritas, diminui o nível médio de KC em aproximadamente quatro vezes comparado com um anti- corpo de controle que não tinha qualquer efeito. Mab 121, a uma dose de 20 μg/camundongo nas condições descritas, diminui o nível médio de KC em aproximadamente três vezes comparado com um anticorpo de controle Exemplo 8: Mapeamento de epitopos

Dois dos anticorpos anti-IL-17 (Fab 126 e Fab 104) são usados para determinar que a humanização e a otimização do Fab murino parental (2321, SEQ ID N°s: 261 e 262) não alteram a capacidade de ligação de epi- topos dos Fabs resultantes da humanização e otimização do Fab parental. Os Fabs humanizados e otimizados se ligam ao mesmo epitopo que o Fab murino parental conforme determinado por um ELISA competitivo tradicional ou por análise por troca H-D e espec. de massa para mapeamento de epito- pos (vide, por exemplo, Hoofnagle, A., et al., Methods Mol. Biol. 250:283- 298, 2004; Hoofnagle, A., et al. , Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct., 32:1-25, 2003; Baerga-Ortiz, A., et al., Protein Sei. 11:1300-8, 2002) portanto, seria de esperar que os Fabs 1-132 da invenção derivados do mesmo Fab paren- tal se ligam ao mesmo epitopo.

Usando o ensaio de troca H-D e espec. de massa (H/DXMS) para mapear o epitopo, foi determinado que os aminoácidos entre 80 e 89 [ADGNVDYHMN (SEQ ID N°: 266)] da IL-17 humana (SEQ ID N°: 1) estão compreendidos no epitopo descontínuo ao qual os anticorpos da invenção se ligam. DGNVDYH (SEQ ID N°: 267) é uma seqüência essencial compre- endida no epitopo descontínuo ao qual os anticorpos da invenção se ligam baseada na comparação de variação da seqüência de IL-17 entre diferentes espécies e capacidade de ligação. Alterar a seqüência de aminoácidos de SEQ ID N°: 267 no contexto da seqüência inteira de IL-17, não resulta em ligação detectável à IL-17 alterada por um anticorpo da invenção. Os anti- corpos da invenção não se ligam à IL-17 de rato ou de camundongo em ní- veis maiores que o anticorpo de controle.

O ensaio H/DXMS é usado para identificar regiões de IL-17 às quais os anticorpos da invenção se ligam. A taxa de troca de hidrogênio da amida é dependente da estrutura e da acessibilidade do solvente ao hidro- gênio da amida. IL-17 livre ou o complexo IL-17:anticorpo em água é mistu- rado com água deuterada (D2O) para permitir a troca de prótons da amida por deutério. Os grupos amida da estrutura que participam na ligação de pro- teína são protegidos contra troca e permanecem protonados. Estas regiões são então identificadas por proteóiise péptica, acopladas com LC e espec- trometia de massa com ionização por eletrospray. IL-17 humana contendo um His C-terminal e um marcador Flag (IL-17-Flis) é expressa e purificada das células GS-CHO usando uma coluna IMAC. Duas alíquotas de 10 μg (7,7 μl) de solução de IL-17-Flis são transferidas para 2 Microcon, e 100 μg de mAb 104 ou mAb 126 (proporção molar de IL-17/Mab = 1/2) são adicio- nados ao Microcon. Vinte μg da solução de IL-17-Flis são transferidos para um outro Microcon e não se adiciona qualquer anticorpo. Em seguida o tam- 1,1 pão 1x PBS é adicionado a cada Microcon até o volume final de -180 μΙ e centrifugado a 14.000g por 14 minutos. Em seguida 150 ml do tampão 1x PBS é adicionado a cada Microcon até o volume final de -180 μΙ e centrifu- gado a 14.OOOg por 14 minutos. Estas etapas são necessárias para garantir que o antígeno livre e o complexo antígeno:anticorpo estão em condições idênticas de tampão.

A porção de proteína é recolhida e o volume final é ajustado em 50 μl (complexo) ou 80 μl (IL-17-Flis puro) com 1xPBS. Seis microlitros de IL-17-Flis ou complexo de IL-17-Flis e mAb são transferidos para um micro- frasco de plástico, e 14 μl de D2O 100% são adicionados ao mesmo, resul- tando em D2O 70% na amostra. A solução é incubada à temperatura ambi- ente por 10 minutos. A troca é imediatamente bruscamente bruscamente, digerida pela adição de 20 μl de solução de ácido fórmico a 1% e 2 μl de solução de pepsina a 2 mg/ml, e incubada à temperatura ambiente por 30 segundos ou a O0C por 10 minutos. O material digerido é imediatamente inje- tado em uma coluna manualmente. Waters 2795 HPLC e Micromass LTC Premier são usadas para todos os ensaios. A corrente de HPLC proveniente da bomba de HPLC é conectada a um tubo metálico (cerca de 1 ml), a um injetor manual, a uma coluna Zorbax C18 (2,1 χ 50 mm) operando nestas condições (temperatura da coluna: 0°C; fase móvel C: 0,15% de ácido fórmi- co em H20; D: 0,12% de ácido fórmico em ACN; tempo de operação: 23 minutos). A coluna é equilibrada com 98% de A (solução aquosa de ácido fórmico a 0,15%) e 2% B (0,12% de ácido fórmico em acetonitrila) a uma taxa de fluxo de 0,2 ml/min. Uma eluição por gradiente é efetuada a partir de 2% até 10% de B em 0,5 minuto, em seguida até 40% de B em 14,5 minu- tos, em seguida até 90% de B em 1 minuto com 2 minutos de retenção, e em seguida voltando para 2% de B em 1 minuto). A amostra proveniente de H- PLC é analisada por um espectrômetro de massa operado nestas condições (modo de íon: positivo; faixa de varredura de massa: 300-2000; voltagem de cone da amostra: 80; fluxo do gás de dessolvação (l/h): 700; temperatura de dessolvação: 300°C). O tubo metálico, o circuito injetor e a coluna são mer- gulhados em água gelada durante todo o ensaio. O espectro de massa de cada peptídio péptico de IL-17 é obtido depois da troca H/D com ou sem um mAb anti-IL-17 testado. Para peptídios pequenos, a massa média de cada peptídio é calculada com base seus íons isotópicos e suas intensidades. Pa- ra peptídios maiores, as massas médias são obtidas a partir de espectros de massa desconvoluídos depois da calibração interna.

Quando o anticorpo forma um complexo com IL-17, a região fi- xadora (epitopo) da IL-17 é protegida contra solvente. Isto leva a taxas mais baixas de troca do hidrogênio da amida quando comparadas com aquelas da IL-17 pura. Comparando a massa de peptídios da forma livre e do complexo depois da troca de deutério, os peptídios protegidos pela formação do com- plexo deveriam ser diferentes do peptídio correspondente na IL-17 livre. A Tabela 7 abaixo lista as diferenças de massa que são obtidas por H/DXMS para peptídios pépticos da IL-17. Esses peptídios pépticos cobrem toda a seqüência de IL-17-Flis. Como demonstram os dados na tabela, a diferença de massa do peptídio IL-17-Flis entre o complexo e ele mesmo é semelhante para ambos os anticorpos testados, isto é, eles se ligam ao mesmo epitopo. Uma diferença de massa grande é encontrada para o peptídio péptico 24- 87+117-133 (isto é, os aminoácidos 24 a 87 e 117 a 133 da IL-17) (estes dois peptídios são conectados através de uma ligação dissulfeto) e 66- 87+117-134, sugerindo que os resíduos nestas regiões estão envolvidos na ligação. Como esses peptídios pépticos são bastante grandes, outras diges- tões enzimáticas são necessárias para restringir os resíduos de aminoácidos específicos envolvidos na ligação. Além destes dados, os anticorpos da in- venção não se ligam a outro membro da família IL-17 (IL-17 B1C1D1E, e F) e tampouco se ligam à IL-17 de camundongo ou de rato. Estes dados junto com comparação e exame das seqüências do modela estrutural de homolo- gia com IL-17 sugerem que os resíduos 80-89 estão compreendidos em um epitopo não linear de IL-17 ao qual os anticorpos da invenção se ligam. Tabela 7

<formula>formula see original document page 89</formula>

Nota: a massa delta é obtida subtraindo a massa média de um peptídio pép- tico de IL-17-Flis puro da massa média do peptídio correspondente do com- plexo IL-17-Flis e anticorpo.

* Estes dados são de uma digestão de 10 minutos a 0°C (n=1). Todos os outros são da digestão ambiente por 0,5 minuto. Exemplo 9: Expressão de IL-17 em tecidos cancerosos

Vários lisados de células humanas não cancerosas e cancero- sas são testados quanto à presença da proteína IL-17. Tecidos (pedaços de aproximadamente 50 - 100 mg) são congelados por pressão sobre gelo se- co, descongelados sobre gelo e Lisados em 350 μL de tampão TPER (Pierce n° 78510) incluindo inibidores de protease (Pierce n° 78410) e inibidores de fosfatase em tubos contendo contas Lisantes de cerâmica (Qbiogene n° 6913-050; contas de cerâmica de 1,4 mm em tubos de 2,0 ml). Os tubos são colocados sobre gelo por 5-10 minutos e em seguida centrifugados a 13.000 χ de gravidade por 10 minutos a 4°C e o material é transferido para novos tubos para remover os restos. Recentrifugar da maneira descrita e transferir para um novo tubo. A concentração de proteínas é determinada usando um método de BSA tradicional. As amostras são analisadas quanto à presença de IL-17 usando um kit de ELISA de IL-17 comercial de acordo com as instruções do fabricante (R&D nQ DY317 usando solução de lava- gem, solução de substrato e solução de interrupção da BioFX Labs). Os ní- veis de IL-17 são normalizados para concentração de proteínas totais. Os níveis de IL-17 são aumentados entre duas e três vezes em tecido colônico canceroso (60 amostras testadas) em comparação com tecido colônico nor- mal (63 amostras testadas). Os níveis de IL-17 são aumentadas em médio três a quatro vezes em tecido renal canceroso (21 amostras testadas) em comparação com tecido renal normal (21 amostras testadas). Os níveis de IL-17 em tecido prostático canceroso (44 amostras testadas) são aumenta- dos em comparação com tecido prostático normal (7 amostras testadas). Os níveis de IL-17 não foram elevados em outros tipos de tecido tumoroso inclu- indo mama, pescoço, pulmão, laringe, tireóide, língua, ovário e cérebro.

Exemplo 10: Ativação de IL-17 de células microgliais

blL-17 induz uma linhagem de células microgliais de cérebro murino (BV-2) a secretar IFNand IL-12p70. A linhagem de células microgliais murinas BV-2 [adquiridas na Seios, com a permissão de Elisabeta Blasi (Mi- crobiology University of Perugia, Itália) que foi a primeira a isolá-las (E. Blasi et al., J. Immunology 1990, 27:229-237)] são cultivadas em balões de cultura de tecido revestidos com poli-D-lisina, até no máximo 60% de confluência em DMEM com alto teor de glicose (Invitrogen ns 31053-028) com 2 mM de L-glutamina (Invitrogen/GIBCO ne 25030-081), 10% de FBS (inativado com calor; Invitrogen/GIBCO ne 10082-147), 1 mM de piruvato de sódio (Invitro- gen/GIBCO nQ 11360-070), 100 μg/ml de normocina (InvivoGen) a 37QC, 5% de CO2-

No dia 0 do ensaio, as células BV-2 são enxaguadas (PBS da Dulbecco sem Ca2+ e Mg2+; Invitrogen), removidas (0,25% de tripsina + EDTA) seguido se inativação com tripsina e em seguida centrifugadas (500Xg por 5 minutos à temperatura ambiente). O pélete de células resultan- te é ressuspendido até uma densidade de célula de -7.000 células/100 μl de meio de cultura. 100 μl da suspensão de células são dispensados em 60 cavidades internas separadas de placas de 96 cavidades tratadas com cultu- ra de tecido e revestidas com poli-D-lisina. As placas são incubadas da ma- neira descrita, por exemplo 48 horas antes do tratamento com IL-17.

No dia 2 do ensaio, IL-17 de camundongo recombinante (mIL- 17) (livre de veículo; R&D Systems); reconstituída em PBS da Dulbecco es- téril sem Ca2+ e Mg2+ é diluída em uma placa de polipropileno até 1,5 μg/ml (a concentração de teste mais alta) em meio de cultura. A IL-17 de camun- dongo é ainda diluída seriadamente na placa de polipropileno. Um controle positivo é LPS diluído em meio de cultura até 1 μg/ml (a concentração de teste mais alta). O meio de ensaio é usado como controle negativo. O meio é suavemente aspirado das células, antes da adição dos tratamentos (150 μl/cavidade). O teste é realizado em triplicata (3 cavidades por tratamento). As placas de réplica separadas são incubadas por 24 horas ou 48 horas a 37°C, 5% de CO2.

No dia 3 e no dia 4 do ensaio, as placas são centrifugadas (500Xg por 5 minutos à temperatura ambiente), e em seguida o meio de cul- tura de células é transferido para placas de polipropileno de 96 cavidades, que são vedadas e congeladas (-80°C). Amostras do meio são descongela- das e analisadas quanto aos níveis de citocina e quimiocina com um kit 22- plex multiplex murino (Línco), conforme as instruções do fabricante (exceto: uma placa-filtro de policarbonato com paredes pretas (Millipore) substitui a placa-filtro incluída no kit). A fluorescência é lida em um instrumento Lumi- nex® (50 contas por conjunto de contas, ajuste de ganho de RP1 baixo). Os dados estão mostrados na Tabela 8 abaixo.

As curvas padrão são obtidas usando um ajuste logístico de quatro a cinco parâmetros. Os valores de IFNy e IL-12p70 (pg/ml) são de- terminados a partir das curvas padrão usando técnicas estatísticas tradicio- nais.

Tabela 8

24 horas após tratamento com IL-17

<table>table see original document page 92</column></row><table>

48 horas após tratamento com IL-17

<table>table see original document page 92</column></row><table>

Exemplo 11: Modelo de indução de DSS de distúrbio do intestino irritado

IBD é uma doença inflamatória crônica que inclui doença de Crohn e colite ulcerativa. Os níveis de proteína IL-17 são significativamente elevados no soro e nos tecidos colônicos de pacientes com colite ulcerativa e de pacientes com doença de Crohn. No entanto, a IL-17 não é detectável no soro de indivíduos normais, nem de pacientes com colite infecciosa ou colite isquêmica. O modelo de DSS (Dextrano Sulfato de Sódio) é um dos modelos pré-clínicos mais antigos e mais representativos para a doença do intestino irritado (IBD). No modelo de DSS (vide, por exemplo, FASEB Jour- nal. 2004;18:1550-1552) são induzidas lesões inflamatórias tanto agudas quanto crônicas. Os camundongos têm um alto grau de uniformidade das legiões com perda de peso corporal e comprimento do cólon. É reproduzível em relação ao transcurso de tempo e à severidade entre camundongos indi- viduais. Para indução da doença, os camundongos recebem 5% de DSS 30- 40 Kd) na água potável por 7 dias. O índice de atividade da doença (DAI) incluindo positivo para Hemoccult ou sangramento retal, fezes soltas e perda de peso corporal (5 - 8%) são observadas em torno no dia 8. Os pesos dos camundongos são monitorados diariamente durante 2 semanas. Os camun- dongos são sacrificados por volta do dia 12 até por volta do dia 15. A proteí- na IL-17 é significativamente aumentada no cólon tratado com DSS versus o M cólon naíve. Tratamento com anticorpo para IL-17 pode reduzir o índice de atividade da doença.

Exemplo 12: Modelo de EAE para esclerose múltipla

EAE é uma doença desmielinizante mediada por células CD4+ T do sistema nervoso central (SNC) quer serve como um modelo para MS em seres humanos. Os mecanismos patogênicos do desenvolvimento de EAE incluem ativação de células T específicas para antígeno e diferenciação de Th1 seguida de infiltração de células T e macrófagos no SNC. IL-17 contribui para a patologia de (MS). A análise de microarranjos de lesões de MS de pacientes humanos demonstrou um aumento de IL-17 (Lock, et al. Nat. Med. 8:500-508, 2002). As células mononucleares (MNC) expressando mRNA de IL-17 no sangue e no líquido cerebrospinhal são significativamente elevadas em números em pacientes com MS e números mais altos de MNC sangüí- neas expressando mRNA de IL-17 foram detectados durante exacerbação clínica da MS em comparação com remissão (Matusevicius, et al. Multiple Sclerosis. 5:1-1-104, 1999). A EAE é significativamente reduzida em camun- dongos knock out com IL-17 (Nakae et al., J. Immun. 171:6173-6177).

O exemplo descrito neste relatório demonstra que a proteína IL- 17 é aumentada no cordão espinhal de camundongos com EAE e que o tra- tamento com anticorpo anti-IL-17 murino reduz o escore de EAE no modelo de EAE ativo. Para indução da doença, camundongos C57BL/6 fêmeas de 8 - 9 semanas de idade são imunizados por via subcutânea no dia 0 com (i) 200 μl de toxina de coqueluche a 5 mg/ml (PT) e adjuvante de Freund com- pleto (CFA) ou (ii) PT, CFA e 300 μg/200 μg de MOG35-55 (glicoproteína de oligodendrócito de mielina emulsificada em CFA contendo 5 mg/ml de Myco- bacterium tuberculosis inativada com calor). No dia 2, os camundongos são novamente tratados com PT. Os camundongos são avaliados durante o es- tudo quanto os níveis de paralisia. A doença é esperada no grupo que rece- be MOG. Um anticorpo IgGi monoclonal para IL-17 antimurino ou um anti- corpo de controle de isótipo é administrado aos camundongos nos dias 1, 7 e 15 (BD Biosciences para anticorpo anti-IL-17 murino de rato). Os camun- dongos recebendo MOG são sacrificados quando o escore clínico atinge entre 1-3 (em uma escala de 0-4); isto ocorre entre os dias 14-31 para o es- tudo 1 na Tabela 9 abaixo e entre os dias 14-16 para o estudo 2 na Tabela 10 abaixo. Os sinais clínicos da doença desenvolvem-se em torno do dia 10. Os animais individuais são subjetivamente avaliados por pelo menos 2 avali- adores independentemente e cegados quanto à identidade dos grupos de tratamento de acordo com a severidade clínica da doença do SNC. Grau 0 significa normal; grau 1 significa completa claudicação da cauda; grau 2 sig- nifica fraqueza parcial unilateral da pata traseira; grau 3 significa paralisia total das patas traseiras; e grau 4 significa moribundo (vide J. Exp. Med. 194: 873-881, 2001). Um camundongo de controle é sacrificado no mesmo dia que um camundongo é tratado como MOG. Os cordões espinhais são isola- dos no momento do sacrifício e congelados para serem usados para análise da proteína IL-17 por ELISA. O grupo de tratamento com anticorpo para IL- 17 tem escores de doença significativamente mais baixos comparado com o controle de controle de isótipo.

Usados de cada cordão espinhal total são feitos em 1 ml (estudo 1 na Tabela 9 abaixo) ou em 0,4 ml (estudo 2 na Tabela 7 abaixo) de rea- gente de extração de proteína TPER (Pierce ne 78510) como inibidores de protease completa (Roche Applied Science ne 11697498), em tubos de 2 ml contendo contas de cerâmica (matriz Iisante D, QBiogene ne 6913050), e no instrumento FastPrep (Bio101) por 30 segundos em uma escala de 5,5. De- pois da Iise1 as amostras são centrifugadas (5 minutos a 14.000 rpm em uma microcentrífuga) para remover os restos. Os sobrenadantes são transferidos para outros tubos da microcentrífuga. A concentração de proteínas totais em cada Iisado é determinada com um kit de ensaio de proteína BCA (Pierce n° 23225), usando o protocolo de microplacas do fabricante. Os Iisados são congelados e armazenados a -80°C.

Depois de descongelar os lisados sobre gelo, e clarificar por centrifugação, os níveis de IL-17 de camundongo são medidos em amostras não diluídas por ELISA (R&D Quantikine η9 M1700) conforme as instruções do fabricante. As curvas padrão são obtidas usando um ajuste logístico de quatro parâmetros. Os valores de IL-17 são determinados a partir das curvas M padrão usando técnicas estatísticas tradicionais. Os níveis de IL-17 são normalizados para concentração de proteína em cada amostra e expressos como pg de IL-17/ml de proteína total em cada Iisado nas Tabelas 9 e 10 abaixo. Como demonstrado pelos dados nas tabelas, níveis aumentados de IL-17 foram detectados em camundongos com EAE. Tabela 9

Estudo 1

<table>table see original document page 95</column></row><table>

Todos os valores de ELISA para IL-17 estavam dentro da faixa de detecção do ELISA, média de duplicatas. Tabela 10

Estudo 2

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Todos os valores de ELISA para IL-17 estavam dentro da faixa de detecção do ELISA, média de duplicatas.

Exemplo 13: Modelo de artrite induzida por colágeno

A artrite induzida por colágeno (CIA) é um modelo de roedor amplamente usado para artrite reumatóide ("RA") e possui aspectos histopa- tológicos em comum com a RA humana. Ά artrite experimental, induzida em camundongos DBA/1 por imunização e reforço com emulsões de colágeno tipo II, é uma doença poliartrítica caracterizada por inflamação das articula- ções pequenas e erosão progressiva da cartilagem e do osso (Trentham, D, et al., J. Exp. Med. 146:857-858, 1977). Recentemente, Lubberts, et al., (Art- hritis & Rheumatism, 50:650-659, 2004; aqui incorporado) demonstraram que o anticorpo policlonal para IL-17 antimurino de coelho, administrado no início ou em um estágio posterior de CIA murino, melhorou os sinais clínicos da artrite.

No modelo de CIA, os camundongos que receberam uma única injeção de IL-17 lgG2a mAb antimurino de rato por via intraperitoneal (8 mg/kg R&D, MAB421 clone 50104.11) mostram escores clínicos significati- vãmente mais baixos que os camundongos injetados com 16 mg/kg de lgG2a de rato de controle. O reagente da fase aguda, proteína C-reativa (CRP), é um índice aceito de atividade da doença em pacientes com RA. Semelhante à CRP, a proteína amilóide sérica (SAP) murina sen/e como um indicador da doença no modelo de CIA murino (Bliven, M., et al., Arthritis & Rheumatism, 29:1131-1138, 1986). Nos animais tratados com 8 mg/kg de IL- 17 antimurino, os níveis de SAP foram significativamente mais baixos que naqueles tratados com o anticorpo de controle. Além disso, a diminuição nos escores clínicos e nos valores de SAP são equiparáveis a um grupo com IL- 1β anticamundongo (8 mg/kg) usado como controle positivo. Finalmente, uma redução significativa na inflamação sinovial a 8 mg/kg de anticorpo e na reabsorção óssea a 16 mg/kg de anticorpo está presente comparada com aquela de camundongos tratados com o anticorpo de controle. Um estudo de dose resposta pode ser conduzido no modelo de CIA com anticorpo anti-IL- 17 murino (por exemplo, a 0,1, 1 e 8 mg/kg). Os escores clínicos para IL-17 antimurino de rato mostram uma tendência de sensibilidade à dose. Um en- saio similar pode ser efetuado em macacos cinomolgos como um modelo para RA usando um anticorpo da invenção.

Exemplo 14: Purificação de mAb anti-IL-17

Um vetor expressando um mAb da invenção é estavelmente in- corporado em uma célula hospedeira apropriada (por exemplo, células CHO DG44 (dhfr-) (Chasin) ou células NSO) usando procedimentos tradicionais e purificadas usando uma coluna de afinidade de Proteína A. Em resumo, meio condicionado clarificado é aplicado a uma coluna de HiTrap rProtein A Sepharose FF de 5 ml (Amersham Biosciences) que fora equilibrada com PBS (pH 7,4). A coluna é lavada com 5 volumes de coluna de tampão de equilíbrio a uma taxa de fluxo de 110 cm/h para remover os componentes de ligação inespecífica. O anticorpo ligado é eluído usando um gradiente de pH linear (0,1 M de tampão fosfato de sódio pH 6,8 a 0,1 M de tampão citrato de sódio pH 2,5). O pico de proteína principal na eluição é recolhido e seu pH é ajustado até a neutralidade com 1 M de tampão Tris (pH 8,5). O lago de pro- teína é concentrado até 1-2 mg/ml usando uma membrana 10K Vivaspin (Vi- vasciences) e filtrado estéril (0,45 μιη) antes de ser armazenado a 4°C.

Para preparações volumosas de um mAb da invenção, o con- centrado livre de células é purificado por três colunas de cromatografia se- qüenciais (cromatografia de proteína A, de troca aniônica, e por interação hidrofóbica). A pureza do mAb depois destas etapas de cromatografia é maior que 99% segundo avaliação por cromatografia de exclusão por tama- nho analítica. O mAb é transferido para um tampão conforme listado abaixo dependendo da concentração do anticorpo. Os resultados de estabilidade química indicam um pH preferido entre 6,0 e 7,0 (inclusive); apesar de que para preparações a 20 mg/ml o pH pode estar entre 5,5 e 7,0 (inclusive, por exemplo, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,0, ou 7,0). Para um produto liofilizado, é preferido um nível de cloreto de sódio de 90-30 mM (90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35 ou 30 mM ou qualquer valor entre 30 e 90 mM), ao passo que para uma formulação líqui- da (por exemplo, a ser administrada por via subcutânea) é preferido um nível de cloreto de sódio de 100 - 150 mM (100, 110, 120, 130, 140, ou 150 mM ou qualquer valor entre 100 e 150 mM). O produto é então concentrado até uma concentração final de cerca de 10, 20 ou 25 mg/ml (alternativamente maior, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150 mg/ml ou mais) e filtrado estéril. O produto filtrado pode ser imediatamente congelado a -70°C ou pode ser liofilizado. É necessária uma proporção em peso míni- ma de 1:2 de anticorpo para Iioprotetor (por exemplo, sacarose ou trealose) para uma formulação Iiofilizada estável mas esta não é necessária para uma formulação líquida. Adicionalmente, 0,02% de tensoativo (p/v), isto é, polis- sorbato-80, é adicionado para que formulações de solução e soluções sejam liofilizadas. O material liofilizado é ressuspendido em água estéril para inje- ção ou cloreto de sódio a 0,9% estéril antes da administração.

Tabela 11

<table>table see original document page 98</column></row><table> Exemplo 15: Meia-vida do anticorpo in vivo

A farmacocinética sérica dos anticorpos da invenção (por exem- plo, mAb 126 e 121 [região Fc de lgG4 com Fab 126 ou 121 respectivamen- te) é determinada após administração intravenosa ou subcutânea em maca- cos cinomolgos machos. As concentrações dos anticorpos no soro são de- terminadas usando um ensaio ELISA de captura de antígeno tradicional no qual as placas são revestidas com IL-17 humana e anticorpo sérico ligado é detectado usando um anticorpo secundário anti-lgG4. Depois da administra- ção intravenosa de 1 mg/kg, o mAb 126 é eliminado com uma meia-vida média de 6,5 dias e o mAb 121 é eliminado com uma meia-vida média de cerca de 11 dias. Depois da administração subcutânea de 1 mg/kg, o mAb 1,1 126 tem uma meia-vida de eliminação média de 10,3 dias e o mAb 121 tem uma meia-vida de eliminação média de 13 dias.

Exemplo 16: Modelo de xenoenxerto de tumor

Paraestabelecerdexenoenxertodetumorcomosquaistestara atividade antitumoral dos anticorpos anti-1 IL-17 da invenção, 5 milhões de células de carcinoma colorretal são misturados com Matrigel e injetados por via subcutânea no flanco esquerdo de camundongos fêmeas atímicos (nu/nu) de 56 semanas de idade (Charles River laboratories, Wilmington. MA). Os camundongos são tratados por injeção subcutânea em intervalos de 7 dias com anticorpos de controle (por exemplo, lgG4 humana e IgGI de camundongo), 4 mg/kg de IL-17anti-humana, 8 mg/kg de IL-17 anticamun- dongo, ou uma combinação de 4 mg/kg de IL-17 anti-humana e 8 mg/kg IL- 17 anticamundongo por 4 semanas. A primeira administração de anticorpo tem início um dia antes de se implantar as células. Os tumores são medidos duas vezes por semana com um compasso e o peso corporal é monitorado duas vezes por semana. O plasma é recolhido de cada camundongo no dia 34 e os níveis de KC são medidos usando um kit de ELISA para KC confor- me as instruções do fabricante (R&D System). Comparados com os camun- dongos de controle injetados com IgG, os camundongos tratados com a combinação de anticorpo anti-IL-17 humana e anticorpo anti-IL-17 de ca- mundongo apresentam um volume de tumor significativamente reduzido. Além disso, os camundongos tratados com anticorpo anti-IL-17 humana e com anticorpo anti-IL-17 de camundongo apresentam KC plasmático drasti- camente reduzido. Os camundongos tratados com 4 mg/kg de anticorpo anti- iL-17 humana ou com 8 mg/kg de anticorpo anti-IL-17 de camundongo não revelaram redução significativa no volume de tumor nem nos níveis de KC plasmático. Os dados estão mostrados nas Tabelas 12 e 13 deste relatório.

Para medir o nível de IL17 nos tumores, os tumores dos mode- los de xenoenxerto em camundongo são preparados da maneira descrita no exemplo 9. Para medir o nível de proteína, Iisados de tumores são diluídos 1:10 em TPER + 1X Halt em uma placa de diluição de polipropileno de 96 cavidades. A concentração de proteína é determinada usando o protocolo de microplacas do ensaio de Coumassie Mais Proteína (Pierce n9 23236). BSA padrão é diluído em TPER + Halt. Os níveis de proteína IL-17 são determi- nados usando kits de ELISA para IL-17 humana e de camundongo da R&D System conforme as instruções do fabricante (human IL-17 DuoSet ELISA, R+D Systems, Cat. nQ DY317; mouse IL-17 ELISA, R+D System, Cat. n9 421). Tanto a IL-17 humana como a IL-17 de camundongo estavam aumen- tadas nos tumores dos modelos de xenoenxerto de tumor de cólon HCT116 e HT29 comparado com o modelo de xenoenxerto de tumor de pulmão H460.

Tabela 12: Volume do Tumor

(n=10)

<table>table see original document page 100</column></row><table>

O volume do tumor é calculado usando o método LogVol.AR Tabela 13: KC Níveis de quimiocina no plasma

35 após a implantação

(n=10)

<table>table see original document page 101</column></row><table> LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

<110> Eli Lilly and Company <120> ANTICORPOS ANTI-IL-17 <13 0> X-17062 <150> US 60/749,953 <151> 2005-12-13 <150> US 60/801,948 <151> 2006-05-19 <160> 280 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 155 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1

Met Thr Pro Gly Lys Thr Ser Leu Val Ser Leu Leu Leu Leu Leu Ser 1 5 10 15

Leu Glu Ala Ile Val Lys Ala Gly Ile Thr Ile Pro Arg Asn Pro Gly

20 25 30

Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn

35 40 45

Leu Asn Ile His Asn Arg Asn Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser

50 55 60

Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu 65 70 75 80

Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His

85 90 95

Leu Gly Cys Ile Asn Ala Asp Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser

100 105 110

Val Pro Ile Gln Gln Glu Ile Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His

115 120 125

Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys 130 135 140

Thr Cys Val Thr Pro Ile Val His His Val Ala 145 150 155

<210> 2 <211> 178 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2

Met Asp Trp Pro His Asn Leu Leu Phe Leu Leu Thr Ile Ser Ile Phe 1 5 10 15

Leu Gly Leu Gly Pro Trp Pro Lys Trp Lys Arg Lys Gly Gln Gly Arg

20 25 30

Pro Gly Pro Leu Ala Pro Gly Pro His Gln Val Pro Leu Asp Leu Val

35 40 45

Ser Arg Met Lys Pro Tyr Ala Arg Met Glu Glu Tyr Glu Arg Asn Ile

50 55 60

Glu Glu Met Val Ala Gln Leu Arg Asn Ser Ser Glu Leu Ala Gln Arg 65 70 75 80

Lys Cys Glu Val Asn Leu Gln Leu Trp Met Ser Asn Lys Arg Ser Leu

85 90 95

Ser Pro Trp Gly Tyr Ser Ile Asn His Asp Pro Ser Arg Ile Pro Val

100 105 110

Asp Leu Pro Glu Ala Arg Cys Leu Cys Leu Gly Cys Val Asn Pro Phe

115 120 125

Thr Met Trp Glu Asp Arg Ser Met Val Ser Val Pro Val Phe Ser Gln

130 135 140

Val Pro Val Arg Arg Arg Leu Cys Pro Pro Pro Pro Arg Thr Gly Pro 145 150 155 160

Cys Arg Gln Arg Ala Val Met Glu Thr Ile Ala Val Gly Cys Thr Cys 165 170 175

Ile Phe <210> 3

<211> 196

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

Met Thr Leu Leu Pro Gly Leu Leu Phe Leu Thr Trp Leu His Thr Cys 1 B 10 15

Leu Ala His His Asp Pro Ser Leu Arg Gly His Pro His Ser His Gly

20 25 30

Thr Pro His Cys Tyr Ser Ala Glu Glu Leu Pro Leu Gln Ala Pro Pro

35 40 45

His Leu Ile Ala Arg Gly Ala Lys Trp Gly Gln Ala Leu Pro Val Ala

50 55 60

Leu Val Ser Ser Leu Glu Ala Ala Ser His Arg Gly Arg His Glu Arg 65 70 75 80

Pro Ser Ala Thr Thr Gln Cys Pro Val Leu Arg Pro Glu Glu Val Leu

85 90 95

Glu Ala Asp Thr His Gln Arg Ser Ile Ser Pro Trp Arg Tyr Arg Val

100 105 110

Asp Thr Asp Glu Asp Arg Tyr Pro Gln Lys Leu Ala Phe Ala Glu Cys

115 120 125

Leu Cys Arg Gly Cys Ile Asp Ala Arg Thr Gly Arg Glu Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Asn Ser Val Arg Leu Leu Gln Ser Leu Leu Val Leu Arg Arg Arg 145 150 155 160

Pro Cys Ser Arg Asp Gly Ser Gly Leu Pro Thr Pro Gly Ala Phe Ala

165 170 175

Phe His Thr Glu Phe Ile His Val Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Leu

180 185 190

Pro Arg Ser Val 195

<210> 4 <211> 202 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4

Met Leu Val Ala Gly Phe Leu Leu Ala Leu Pro Pro Ser Trp Ala Ala 1 5 10 15

Gly Ala Pro Arg Ala Gly Arg Arg Pro Ala Arg Pro Arg Gly Cys Ala

20 25 30

Asp Arg Pro Glu Glu Leu Leu Glu Gln Leu Tyr Gly Arg Leu Ala Ala

35 40 45

Gly Val Leu Ser Ala Phe His His Thr Leu Gln Leu Gly Pro Arg Glu

50 55 60

Gln Ala Arg Asn Ala Ser Cys Pro Ala Gly Gly Arg Pro Ala Asp Arg 65 70 75 80

Arg Phe Arg Pro Pro Thr Asn Leu Arg Ser Val Ser Pro Trp Ala Tyr

85 90 95

Arg Ile Ser Tyr Asp Pro Ala Arg Tyr Pro Arg Tyr Leu Pro Glu Ala

100 105 110

Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu Thr Gly Leu Phe Gly Glu Glu Asp

115 120 125

Val Arg Phe Arg Ser Ala Pro Val Tyr Met Pro Thr Val Val Leu Arg

130 135 140

Arg Thr Pro Ala Cys Ala Gly Gly Arg Ser Val Tyr Thr Glu Ala Tyr 145 150 155 160

Val Thr Ile Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Pro Glu Pro Glu Lys Asp

165 170 175

Ala Asp Ser Ile Asn Ser Ser Ile Asp Lys Gln Gly Ala Lys Leu Leu

180 185 190

Leu Gly Pro Asn Asp Ala Pro Ala Gly Pro 195 200

<210> 5 <211> 177 <212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 5

Met Arg Glu Arg Pro Arg Leu Gly Glu Asp Ser Ser Leu Ile Ser Leu 1 5 10 15

Phe Leu Gln Val Val Ala Phe Leu Ala Met Val Met Gly Thr His Thr

20 25 30

Tyr Ser His Trp Pro Ser Cys Cys Pro Ser Lys Gly Gln Asp Thr Ser

35 40 45

Glu Glu Leu Leu Arg Trp Ser Thr Val Pro Val Pro Pro Leu Glu Pro

50 55 60

Ala Arg Pro Asn Arg His Pro Glu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asp Gly 65 70 75 80

Pro Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser Pro Trp Arg Tyr Glu Leu Asp Arg

85 90 95

Asp Leu Asn Arg Leu Pro Gln Asp Leu Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys

100 105 110

Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr Gly Ser His Met Asp Pro Arg Gly

115 120 125

Asn Ser Glu Leu Leu Tyr His Asn Gln Thr Val Phe Tyr Arg Arg Pro

130 135 140

Cys His Gly Glu Lys Gly Thr His Lys Gly Tyr Cys Leu Glu Phe Phe 145 150 155 160

Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys Val Cys Val Arg Pro Arg Val Met 165 170 175

Gly

<210> 6

<211> 132

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 6 Met Val Lys Tyr Leu Leu Leu Ser Ile Leu Gly Leu Ala Phe Leu Ser 1 5 10 15

Glu Ala Ala Ala Arg Lys Ile Pro Lys Val Gly His Thr Phe Phe Gln

20 25 30

Lys Pro Glu Ser Cys Ser Met Ser Arg Asn Ile Glu Ser Arg Ser Thr

35 40 45

Ser Pro Trp Asn Tyr Thr Val Thr Trp Asp Pro Asn Arg Tyr Pro Ser

50 55 60

Glu Val Val Gln Ala Gln Cys Arg Asn Leu Gly Cys Ile Asn Ala Gln 65 70 75 80

Gly Lys Glu Asp Ile Ser Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu Thr

85 90 95

Leu Val Val Arg Arg Lys His Gln Gly Cys Ser Val Ser Phe Gln Leu

100 105 110

Glu Lys Val Leu Val Thr Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Val Ile

115 120 125

His His Val Gln

130 <210> 7 <211> 158 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 7

Met Ser Pro Gly Arg Ala Ser Ser Val Ser Leu Met Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15

Leu Ser Leu Ala Ala Thr Val Lys Ala Ala Ala Ile Ile Pro Gln Ser

20 25 30

Ser Ala Cys Pro Asn Thr Glu Ala Lys Asp Phe Leu Gln Asn Val Lys

35 40 45

Val Asn Leu Lys Val Phe Asn Ser Leu Gly Ala Lys Val Ser Ser Arg

50 55 60

Arg Pro Ser Asp Tyr Leu Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Thr Leu His 65 70 75 80

Arg Asn Glu Asp Pro Asp Arg Tyr Pro Ser Val Ile Trp Glu Ala Gln

85 90 95

Cys Arg His Gln Arg Cys Val Asn Ala Glu Gly Lys Leu Asp His His

100 105 110

Met Asn Ser Val Leu Ile Gln Gln Glu Ile Leu Val Leu Lys Arg Glu

115 120 125

Pro Glu Ser Cys Pro Phe Thr Phe Arg Val Glu Lys Met Leu Val Gly

130 135 140

Val Gly Cys Thr Cys Val Ala Ser Ile Val Arg Gln Ala Ala 145 150 155

<210> 8 <211> 158 <212> PRT

<213> Rattus rattus <400> 8

Met Ser Pro Arg Arg Ile Pro Ser Met Cys Leu Met Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15

Leu Asn Leu Glu Ala Thr Val Lys Ala Ala Val Leu Ile Pro Gln Ser

20 25 30

Ser Val Cys Pro Asn Ala Glu Ala Asn Asn Phe Leu Gln Asn Val Lys

35 40 45

Val Asn Leu Lys Val Ile Asn Ser Leu Ser Ser Lys Ala Ser Ser Arg

50 55 60

Arg Pro Ser Asp Tyr Leu Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Thr Leu Ser 65 70 75 80

Arg Asn Glu Asp Pro Asp Arg Tyr Pro Ser Val Ile Trp Glu Ala Gln

85 90 95

Cys Arg His Gln Arg Cys Val Asn Ala Glu Gly Lys Leu Asp His His

100 105 110

Met Asn Ser Val Leu Ile Gln Gln Glu Ile Leu Val Leu Lys Arg Glu 115 120 125 Pro Glu Lys Cys Pro Phe Thr Phe Arg Val Glu Lys Met Leu Val Gly

130 135 140

Val Gly Cys Thr Cys Val Ser Ser Ile Val Arg His Ala Ser 145 150 155

<210> 9 <211> 153 <212> PRT

<213> Oryctolagus cuniculus <400> 9

Met Ser Leu Gly Arg Ile Ser Ser Val Ser Leu Leu Leu Leu Leu Cys 15 10 15

Leu Val Ala Thr Val Lys Asn Gly Ile Ala Met Pro Arg Asn Pro Gly

20 25 30

Cys Pro Asn Ala Glu Asp Lys Asn Phe Pro Gln Asn Val Lys Val Ser

35 40 45

Leu Asn Ile Leu Asn Lys Ser Val Asn Ser Arg Arg Pro Ser Asp Tyr

50 55 60

Tyr Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Thr Leu His Arg Asn Glu Asp Arg 65 70 75 80

Glu Arg Tyr Pro Ser Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His Leu Gly

85 90 95

Cys Val Asn Ala Glu Gly Asn Glu Asp His His Met Asn Ser Val Pro

100 105 110

Ile Gln Gln Glu Ile Leu Val Leu Arg Arg Glu Ser Gln His Cys Pro

115 120 125

His Ser Phe Arg Leu Glu Lys Met Leu Val Ala Val Gly Cys Thr Cys

130 135 140

Val Thr Pro Ile Ile His His Met Ala 145 150

<210> 10 <211> 155 <212> PRT <213> Macaca fascicularis

<400> 10

Met Thr Pro Gly Lys Thr Ser Leu Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ser 1 5 10 15

Leu Glu Ala Ile Val Lys Ala Gly Ile Ala Ile Pro Arg Asn Ser Gly 20 25 30

Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn 35 40 45

Leu Asn Ile His Asn Arg Asn Thr Ser Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser 50 55 60

Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu 65 70 75 80

Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His 85 90 95

Leu Gly Cys Val Lys Ala Asp Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser 100 105 110

Val Pro Ile Gln Gln Glu Ile Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Arg His 115 120 125

Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys 130 135 140

Thr Cys Val Thr Pro Ile Val His His Val Ala 145 150 155

<210> 11

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 11

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Asn Met Asn 15 10

<210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 12

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Asn Ile Asn 15 10

<210> 13 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto <400> 13

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Asn Leu Asn 1 5 10

<210> 14 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 14

Gly Tyr Ser Phe Gly Asp Tyr Asn Met Asn 15 10

<210> 15 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 15

Gly Tyr Ser Phe Arg Asp Tyr Asn Met Asn 15 10

<210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 16

Gly Tyr Ser Phe Thr Trp Tyr Asn Met Asn 15 10

<210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 17

Gly Tyr Ser Phe Asn Asp Tyr Asn Met Asn 1 5 10

<210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 18

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Asn Met Ser 1 5 10

<210> 19 <211> 10 <212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 19

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Asn Thr Asn 1 5 10

<210> 20 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 20

Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr Asn Met Asn 1 5 10

<210> 21 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Construto <400> 21

His Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Asn Met Asn 1 5 10

<210> 22

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 22 Gly Tyr His Phe Thr Asp Tyr Asn Met Asn

1 5 10

<210> 23

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 23

Gly Tyr Pro Phe Thr Asp Tyr Asn Met Asn 1 5 10

<210> 24

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 24

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Phe Asn Met Asn

1 5 10

<210> 25

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 25

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr His Leu Gly 1 5 10

<210> 26

<211> 10

<212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 26

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr His Ile His 15 10

<210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 27 Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 1 5 <210> 28 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 28

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr His Ile Ser 15 10

<210> 29 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 29

Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 1 5 10 15

<210> 30

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 30

Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 15 10 15

<210> 31 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 31

Val Ile Asn Pro Ala Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe Lys

1 5 10 15

<210> 32

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 32

Val Ile Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe Lys

15 10 15

<210> 33

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 33

Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 1 5 10

<210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 34 Tyr Asp Tyr Trp Thr Gly Thr 1 5 <210> 35 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 35

10

Tyr Asp Tyr Trp Thr Gly Thr Gly Ala Tyr

1 5 10

<210> 36

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 36

Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Leu Tyr 1 5 10 <210> 37

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 37

Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Gly Tyr

1 5 10

<210> 38

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 38

Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Val Tyr 1 5 10

<210> 39 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 39

Tyr Asp Tyr His Thr Gly Thr Gly Gly Tyr

1 5 10

<210> 40

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial

<220> <223> Construto Sintético <400> 40

Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Thr Tyr 15 10

<210> 41 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 41 Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr 1 5 <210> 42 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Construto Sintético <400> 42

10

Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Pro Tyr

15 10

<210> 43

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 43

Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Gly Tyr 15 10

<210> 44 <211> 10

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 44

Tyr Asp Tyr Ser Thr Gly Thr Gly Gly Tyr 1 5 10

<210> 45

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 45

Tyr Asp Tyr Ser Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 1 5 10

<210> 46

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial <22 0>

<223> Construto Sintético

<400> 46

Tyr Asp Ala Phe Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 1 5 10

<210> 47

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 47

Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 1 5 10

<210> 48

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial <22 0>

<223> Construto Sintético

<400> 48

Tyr Asp Tyr His Thr Gly Thr Gly Ala Tyr

1 5 10

<210> 49

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial

<22 0>

<223> Construto Sintético

<400> 49

Tyr Asp Tyr Leu Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 1 5 10

<210> 50

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial <22 0>

<223> Construto Sintético

<400> 50

Tyr Asp Tyr Ala Thr Ser Thr Gly Ala Tyr 1 5 10

<210> 51

<211> 10 <212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 51

Tyr Asp Tyr Ala Pro Gly Thr Gly Ala Tyr 15 10

<210> 52 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 52

Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr 1 5 10

<210> 53 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 53

Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Val Tyr

15 10

<210> 54

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 54 Tyr Asp Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 1 5 10

<210> 55

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 55 Tyr Asp Tyr His Thr Gly Thr Gly Val Tyr 1 5 10 <210> 56 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 56 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 57 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 57

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Trp Thr Gly Thr Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 58 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 58 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Trp Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 59 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <22 0>

<223> Construto Sintético <400> 59

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Leu Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 60 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 60 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 61 <211> 119 <212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 61

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 62 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <22 0>

<223> Construto Sintético <400> 62

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met Asn Trp Val Arg Gln. Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr His Thr Gly Thr Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 63 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 63

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 64 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 64

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 65 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 65

Gln Val Gln Leu Val Gln Sèr Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Pro Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 66 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 66

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 67 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 67 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp Tyr Ser Thr Gly Thr Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 68 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 68

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 69 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 69

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Leu Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 70 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 70

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Gly Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 71 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 71 Gln Val Gln Leu 1

Ser Val Lys Val 20

Asn Met Asn Trp 35

Gly Val Ile Asn 50

Lys Gly Arg Val 65

Met Glu Leu Ser

Ala Arg Tyr Asp 100

Thr Leu Val Thr

115 <210> 72 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

Val Gln Ser Gly Ala Glu 5 10

Ser Cys Lys Ala Ser Gly 25

Val Arg Gln Ala Pro Gly 40

Pro Asn Tyr Gly Thr Thr 55

Thr Ile Thr Ala Asp Glu 70

Ser Leu Arg Ser Glu Asp 85 90

Tyr Ala Thr Gly Thr Gly 105

Val Ser Ser

Val Lys Lys Pro Gly Ser 15

Tyr Ser Phe Arg Asp Tyr 30

Gln Gly Leu Glu Trp Met 45

Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 60

Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 75 80

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 110 <223> Construto Sintético <400> 72

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Trp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 73 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 73

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Asn Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 74 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 74

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 75 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 75 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gly Tyr Ser Phe Thr 30 Asp Tyr Asn Thr Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser 85 Leu Arg Ser Glu Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 76 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto <400> 76

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 77 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 77

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser His Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 78 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 78

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr His Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 79 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 79

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 80 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 80

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Phe

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 .90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 81 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 81

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 82 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 82 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gly Tyr Ser Phe Thr 30 Asp Tyr Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile 50 Asn Pro Ala Tyr 55 Gly Thr Thr Asp Tyr 60 Asn Gln Arg Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 83

<211> 119

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto

<400> 83

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 84 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 84

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ser Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 85 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 85

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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<223> Construto Sintético <400> 86

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50 55 60

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85 90 95

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100 105 110

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<223> Construto Sintético <400> 87

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20 25 30

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<223> Construto Sintético <400> 89

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20 25 30

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<223> Construto Sintético <400> 90 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

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20 25 30

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<223> Construto Sintético <400> 91

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20 25 30

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<223> Construto Sintético <400> 92

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<220>

<223> Construto Sintético <400> 93

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<223> Construto Sintético <400> 94

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<223> Construto Sintético <400> 95

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

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<223> Construto Sintético <400> 96

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<223> Construto Sintético <400> 97

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

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20 25 30

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<223> Construto Sintético <400> 98

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20 25 30

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Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

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<223> Construto Sintético <400> 100

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

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<223> Construto Sintético <400> 101

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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser 85 Leu Arg Ser Glu Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr His Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 102 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 102 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gly Tyr Ser Phe Thr 30 Asp Tyr His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser 85 Leu Arg Ser Glu Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

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<223> Construto Sintético <400> 103

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50 55 60

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20 25 30

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Gly Val Ile Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

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100 105 110

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<223> Construto Sintético <400> 105

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

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100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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<223> Construto Sintético <400> 106

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

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35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 107 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 107 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 His Leu Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp Tyr His Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 108 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto <400> 108

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

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50 55 60

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85 90 95

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100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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<223> Construto Sintético <400> 109

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

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35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

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100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 110 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 110

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 111 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 111

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

His Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 112

<211> 119

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 112

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

His Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser 85 Leu Arg Ser Glu Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 113 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 113 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25. Gly Tyr Ser Phe Thr 30 Asp Tyr His Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser 85 Leu Arg Ser Glu Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys Ala Arg Tyr Asp 100 Tyr Phe Thr Gly Thr 105 Gly Ala Tyr Trp Gly 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 114 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 114

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 115 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 115

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 116 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 116

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 117 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 117

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 118 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 118

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 119 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 119

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 120 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 120

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 121 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 121

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 122 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 122 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His

1 5 <210> 123 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto <400> 123

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser His Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15

<210> 124 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 124

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15

<210> 125 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 125

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15

<210> 126 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 126

Arg Ser Ser Gln Ser Val Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His

15 10 15

<210> 127

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 127

Val Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His

1 5 <210> 128 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto <400> 128

Arg Ser Ser Ala Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 129 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 129

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 <210> 130 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto <400> 130

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 131

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 131

Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 132

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 132

Arg Ser His Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 133

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 133

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Phe Leu His

1 5 10 15

<210> 134

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 134

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 135

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 135

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Arg Thr Tyr Leu His

15 10 15

<210> 136

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 136

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15 <210> 137 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 137

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Thr His

15 10 15

<210> 138

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 138

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Ser His

15 10 15

<210> 139

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 139

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr His His

15 10 15

<210> 140

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220> <223> Construto Sintético

<400> 140

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ala Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15

<210> 141

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 141

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Trp Leu His 1 5 10 15

<210> 142

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 142

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Val Tyr Leu His 1 5 10 15

<210> 143

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 143

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Lys Thr Tyr Leu His 1 5 10 15

<210> 144 <211> 16

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 144

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Leu Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 145

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 145

Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Phe Leu His

1 5 <210> 146 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto <400> 146

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser Arg Gly Asn Thr Phe Leu His 15 10 15

<210> 147 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 147

Arg Ser Ser Gln Ser Leü Lys His Ser Arg Gly Asn Thr Phe Leu His 1 5 10 15

<210> 148

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 148

Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Phe Leu His

1 5 10 15

<210> 149

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial

<22 0>

<223> Construto Sintético

<400> 149

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser His Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15

<210> 150 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto <400> 150

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5

<210> 151 <211> 7 <212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 151

Ile Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5

<210> 152

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 152

Lys Val Ser Asn Arg Phe His

1 5

<210> 153

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 153

Lys Val Ala Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 154

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 154 Lys Val Ser Val Arg Phe Ser

1 5

<210> 155

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 155

Lys Val Ser Asn Asn Phe Ser

1 5

<210> 156

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

< 4 O O > 156

Lys Val Asp Asn Arg Phe Ser 1 5

<210> 157

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 157

Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 158

<211> 7

<212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 158

Lys Val Ser Asn Ile Phe Ser

1 5

<210> 159

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 159

Lys Val Ser Thr Arg Phe Ser 1 5

<210> 160

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 160

Lys Val Arg Asn Arg Phe Ser 1 5

<210> 161

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 161

Lys Val Pro Asn Arg Phe Ser 1 5

<210> 162

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 162

Lys Val Ser Asn Arg Phe Val

1 5

<210> 163 1.1 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto <400> 163

Lys Val Ser Asn Arg Ile Ser 1 5

<210> 164

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 164

Lys Val Ser Asn Arg Phe Thr 1 5

<210> 165

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 165

Lys Val Ser Asn Arg Asn Ser 1 5

<210> 166 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 166

Lys Val His Asn Arg Phe Ser 1 5

<210> 167 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 167

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile 1 5

<210> 168

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 168

Ser Gln Ser Thr His Leu Pro Phe Thr

1 5 <210> 169

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 169

Ser Gln Ser Thr His Tyr Pro Phe Thr

1 5

<210> 170

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 170

Ser Gln Ser Thr His Ile Pro Phe Thr

1 5.

<210> 171

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 171

Ser Gln Ser Leu His Val Pro Phe Thr

1 5

<210> 172

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial

<220> <223> Construto Sintético

<400> 172

Ser Gln Ser Thr His Glu Pro Phe Thr

1 5

<210> 173

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 173

Asn Gln Ser Thr His Val Pro Phe Thr

1 5

<210> 174

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 174

Ser Gln Thr Thr His Val Pro Phe Thr

1 5

<210> 175

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial <22 0>

<223> Construto Sintético

<400> 175

Ser Gln Ser Met His Val Pro Phe Thr

1 5

<210> 176 <211> 9

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 176

Ser Gln Thr Thr His Leu Pro Phe Thr 1 5

<210> 177 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto <400> 177

Ser Gln Ser Thr Ser Leu Pro Phe Thr 5

178 112 PRT

Artificial

Construto Sintético 178

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

1

<210> <211> <212> <213> <22 0> <223> <400> Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 179 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 179

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 180 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 180

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

His Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 181 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 181

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 182 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 182

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 183 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 183

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 184 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 184

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 185 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 185

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 186 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 186 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 187 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 187

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

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35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 188 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 188

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

His Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

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50 55 60

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 189 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 189

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu HiS Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 190

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 190

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85 90 95 Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 191 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 191

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser

20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

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<210> 192 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 192

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

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50 55 60

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 193 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 193

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Val Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 194 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 194

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser He. Ser Cys Arg Ser Ser Ala Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

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100 105 110

<210> 195 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 195

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr LeU His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

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50 55 60

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85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 196 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 196

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 197 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 197

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 198 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 198

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser His Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 199 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 199

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 200 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 200

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 201 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 201

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Arg Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 202

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 202

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 203

<211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 203

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Thr His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 204 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 204

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Ser His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 205 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 205

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr His His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 206 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 206

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ala

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 207 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 207

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Trp Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 208 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 208

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Val Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 209 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 209

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Lys Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 210 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 210

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Leu

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 211 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 211

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Ile Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 212 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 212

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 213 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 213

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glü Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 214 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 214

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 215 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 215

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 216 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 216

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 217 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 217

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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe His Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 218 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 218 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ala Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 219

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 219

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Val Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 220 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 220

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Asn Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 221 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 221

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Asp Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 222 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 222

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser

20 25 30

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35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 223 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 223

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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser

20 25 30

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35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Ile Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 224 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 224

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Thr Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 225 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 225

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 226 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 226

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

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35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Arg Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 227 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <22 0>

<223> Construto Sintético <400> 227

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Pro Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 228 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 228

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Val Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 229 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 229

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Ile Ser Gly Val Pro

50 55 60

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 230 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 230

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 231 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 231

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asn Ser Gly Val Pro

50 55 60

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 232 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 232

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val His Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 233 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 233

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Thr Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 234 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 234

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 235 <211> 112 <212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 235

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser

20 25 30

His Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 236 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 236

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 237 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 237

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 238 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 238

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 239 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 239

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 240 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 240

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 241 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético

<400> 241

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 242

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 242

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 243

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 243

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 244

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial

<220> 223> Construto Sintético 220>

221> MISC_FEATURE

222> (1)..(1)

223> X is G or H 220>

221> MISC_FEATURE

222> (3).. (3)

223> X is S, Η, or P 220>

221> MISC_FEATURE

222> (5)..(5)

223> X is Τ, G, R, Ν, or

220>

221> MISC_FEATURE

222> (6)..(6)

223> X is D or W 220>

221> MISC_FEATURE

222> (7)..(7)

223> X is Y or F 22 0>

221> MISC_FEATURE

222> (8)..(8)

223> X is N or H 220>

221> MISC_FEATURE

222> (9).. (9)

223> X is Μ, I, L or T 220>

221> MISC_FEATURE

222> (10).. (10) <223> X is Ν, S, G, or H <400> 244

Xaa Tyr Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10

<210> 245 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <220>

<221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is Ν, Μ, A or E <400> 245

Val Ile Asn Pro Xaa Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 1 5 10 15

<210> 246

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3).. (3)

<223> X is Y or P <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> X is Α, S, F, L. Η, Y or W <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5)

<223> X is T or P <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6).. (6)

<223> X is G or S <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> X is Ρ, Α, V, G, L or T

1,1 <400> 246

Tyr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Gly Xaa Tyr 1 5 10

<210> 247

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> X is R or V

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3).. (3)

<223> X is S or H <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4) .. (4)

<223> X is Q, Κ, A or R <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> X is L or V

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7).. (7)

<223> X is V, K or R <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9).. (9)

<223> X is S, Ν, Α, R or L <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> X is R, Η, N or Y <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)..(12)

<223> X is Ν, R or K <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13).. (13)

<223> X is T or V

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (14)..(14)

<223> X is Υ, F or W <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> X is L, Τ, S, H or F <400> 247

Xaa Ser Xaa Xaa Ser Xaa Xaa His Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa His

1 5 10 15

<210> 248

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <220>

<221> MISC_FEATURE

1,1 <222> (1) . . (1)

<223> X is K or I <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3) .. (3)

<223> X is T, D, S, A, R, P or H <22 0>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> X is Ν, V or T <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> X is R, N or I <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> X is F, N or I

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7) <223> X is S, Η, V, T or I

<400> 248

Xaa Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5

<210> 249

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> X is S or N

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3) . . (3)

<223> X is S or T <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> X is Τ, M or L <22 0>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> X is H or S <220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6) . . (6)

<223> X is L, Υ, I, V or E

<400> 249

Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Phe Thr 1 5

<210> 250 <211> 468 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 250

atgactcctg ggaagacctc attggtgtca ctgctactgc tgctgagcct ggaggccata 60

gtgaaggcag gaatcacaat cccacgaaat ccaggatgcc caaattctga ggacaagaac 120 ttcccccgga ctgtgatggt caacctgaac atccataacc ggaataccaa taccaatccc 180 aaaaggtcct cagattacta caaccgatcc acctcacctt ggaatctcca ccgcaatgag 240 gaccctgaga gatatccctc tgtgatctgg gaggcaaagt gccgccactt gggctgcatc 300 aacgctgatg ggaacgtgga ctaccacatg aactctgtcc ccatccagca agagatcctg 3 60 gtcctgcgca gggagcctcc acactgcccc aactccttcc ggctggagaa gatactggtg 420 tccgtgggct gcacctgtgt caccccgatt gtccaccatg tggcctaa 468

<210> 251

<211> 462 <212> DNA

<213> Oryctolagus cuniculus <400> 251

atgtcgcttg ggaggatttc atctgtgtca ctgctgctgc tgctgtgttt ggtggctact 60 gtgaagaatg gaatagcaat gccgcgaaat ccaggatgtc caaatgctga ggacaagaac 120 ttcccccaga atgtaaaagt cagcctgaac atccttaaca agagtgtaaa ttcccgaagg 180 ccttcagact actacaatcg atctacttca ccttggactc tccaccgcaa cgaggatcgt 240 gagagatatc cctctgtgat ctgggaggcc aagtgccgcc acttgggctg tgtcaatgct 300

gaagggaatg aggaccacca catgaactct gtcccaatcc agcaagagat cctggtccta 360 cgcagggagt cccagcactg cccacactca ttccggctgg agaagatgct ggtggctgta 420 ggatgcacct gtgtaacccc catcatccat cacatggcct aa 462

<210> 252 <211> 477

<212> DNA

<213> Rattus rattus <400> 252 atgagtcccc ggagaattcc atccatgtgc ctgatgctgt tgctgctact gaacctggag 60

gctacagtga aggcagcggt actcatccct caaagttcag tgtgtccaaa cgccgaggcc 120

aataactttc tccagaacgt gaaggtcaac ctgaaagtcc tcaactccct tagctcaaaa 180

gcgagctcca gaaggccctc agactacctc aaccgttcca cttcaccctg gactctgagc 240

cgcaatgagg accctgatag atatccttct gtgatctggg aggcacagtg ccgccaccag 300

cgctgtgtca acgctgaggg gaagttggac caccacatga attctgttct catccagcaa 360

gagatcctgg tcctgaagag ggagcctgag aagtgcccct tcactttccg ggtggagaag 420

atgctggtgg gcgtgggctg cacctgcgtt tcctctattg tccgccatgc gtcctaa 477

<210> 253

<211> 468

<212> DNA

<213> Macaca fascicularis <400> 253

atgactcctg ggaagacctc attggtgcta ctgctgctgc tgctgagcct ggaggccata 60

gtgaaggcag gaatagcaat cccacgaaat tcaggatgcc caaattctga ggacaagaac 120

ttcccccgga ctgtgatggt caacctgaac atccataacc ggaataccag taccaatccc 180

aaaaggtcct cagattacta caaccgatcc acctcacctt ggaatctcca ccgcaatgag 240

gaccctgaga gatatccctc tgtgatctgg gaggcaaaat gccgccactt aggctgcgtc 300

aaggctgatg ggaacgtaga ctaccacatg aactctgtcc ccatccagca agagatcctg 360

gtcctgcgca gggagcctcg gcactgcccc aactccttcc ggctggagaa gatactggtg 420

tccgtgggct gcacctgtgt cacccccatt gtccaccatg tagcctaa 468 <210> 254 <211> 477 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 254

atgagtccag ggagagcttc atctgtgtct ctgatgctgt tgctgctgct gagcctggcg 60

gctacagtga aggcagcagc gatcatccct caaagctcag cgtgtccaaa cactgaggcc 120

aaggacttcc tccagaatgt gaaggtcaac ctcaaagtct ttaactccct tggcgcaaaa 180

gtgagctcca gaaggccctc agactacctc aaccgttcca cgtcaccctg gactctccac 240

cgcaatgaag accctgatag atatccctct gtgatctggg aagctcagtg ccgccaccag 300

cgctgtgtca atgcggaggg aaagctggac caccacatga attctgttct catccagcaa 360 gagatcctgg tcctgaagag ggagcctgag agctgcccct tcactttcag ggtcgagaag 420

atgctggtgg gtgtgggctg cacctgcgtg gcctcgattg tccgccaggc agcctaa 477

<210> 255

<211> 107

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 255

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 256

<211> 105

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 256

Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu

1 5 10 15

Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val

35 40 45 Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys

50 55 60

Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser 65 70 75 80

His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu

85 90 95

Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105

<210> 257

<211> 330

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 257

Ala Ser Phe Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 15 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Glu Trp Glu Thr Trp Arg Arg

275 280 285

Leu Tyr Trp Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330

<210> 258

<211> 325

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 258

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val . Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

115 120 125

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

130 135 140

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Asp Gly Val 145 150 155 160

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

165 170 175

Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu

180 185 190

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala

195 200 205

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

210 215 220

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 225 230 235 240

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

245 250 255

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

260 265 270

Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 275 280 285 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

290 295 300

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 305 310 315 320

Leu Ser Pro Gly Lys 325

<210> 259

<211> 377

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 259

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro

100 105 110

Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg

115 120 125

Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys

130 135 140

Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 145 150 155 160

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 165 170 175

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

180 185 190

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr

195 200 205

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

210 215 220

Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 225 230 235 240

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

245 250 255

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln

260 265 270

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

275 280 285

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

290 295 300

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn 305 310 315 320

Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Lèu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

325 330 335

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile

340 345 350

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln

355 360 365

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

370 375

<210> 260 <211> 326 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 260 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly 325

<210> 261 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 261

Tyr Asp Ala Phe Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 15 10

<210> 262 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 262

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 20 25

<210> 263 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 263

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly

1 5 10

<210> 264

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 264

Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30

<210> 265 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto <400> 265

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10

<210> 266 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto Sintético <400> 266

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys 20

<210> 267 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 267

Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15

<210> 268 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial <22 0>

<223> Construto Sintético <400> 268

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15

Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30

<210> 269

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético <400> 269

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 270

<211> 119

<212> PRT

<213> Mus sp.

<400> 270

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Arg Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Arg Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Ile Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Ser Pro Leu Thr Val Ser Ser

115 <210> 271 <211> 112 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 271

Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

<210> 272

<211> 107

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 272

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 15 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105

<210> 273 <211> 445 <212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 273

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445

<210> 274 <211> 219 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 274 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Vãl His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 275 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 275 Ala Asp Gly 1

<210> 276

<211> 7

<212> PRT

<213> Homo

<400> 276 Asp Gly Asn 1

<210> 277

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial <22 0>

<223> Construto Sintético

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 5 10 15

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

25 30

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

40 45

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

55 60

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

70 75 80

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 105

Asn Val Asp Tyr His Met Asn 5 10

sapiens

Val Asp Tyr His 5

<400> 277 Arg Thr Val Ala 1

Gln Leu Lys Ser 20

Tyr Pro Arg Glu 35

Ser Gly Asn Ser 50

Thr Tyr Ser Leu 65

Lys His Lys Val

Pro Val Thr Lys 100

<210> 278 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 278

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 "60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly 325

<210> 279 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto Sintético <400> 279

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ile Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glü Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 280

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto Sintético

<400> 280

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445

Claims (14)

1. Anticorpo monoclonal anti-IL-17 humanizado, caracterizado pelo fato de que se liga especificamente à IL-17 humana com um K0 menor que 7,0 pM.

2. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido anticorpo ainda tem uma constante de taxa de dissoci- ação ou uma taxa koff menor que 5 χ 10 5 s"1.

3. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e -2, caracterizado pelo fato de que o referido anticorpo se liga especificamente a um epitopo não linear de IL-17 humana, onde o epitopo compreende um polipeptídio com a SEQ ID N°: 276.

4. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a -3, caracterizado pelo fato de que o referido anticorpo neutraliza a bioativida- de de IL-17 em um ensaio repórter de IL-8 in vitro a um IC5o menor que 1 nM.

5. Anticorpo monoclonal anti-IL-17, caracterizado pelo fato de que o referido anticorpo compete pela ligação à IL-17 humana com um anti- corpo anti-IL-17 humanizado compreendendo dois polipeptídios com as se- qüências de aminoácidos mostradas na SEQ ID N°: 241 e na SEQ ID N°: -118.

6. Anticorpo monoclonal anti-IL-17 humanizado, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pesada (HCVR) compreendendo um polipeptídio com uma seqüência de aminoácidos sele- cionada do grupo que consiste nas SEQ ID Nes: 56-121.

7. Anticorpo monoclonal anti-IL-17 humanizado, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia leve (LCVR) compreendendo um polipeptídio com uma seqüência de aminoácidos sele- cionada do grupo que consiste nas SEQ ID Nos: 178-243.

8. Anticorpo anti-IL-17 humanizado, caracterizado pelo fato de que compreende um polipeptídio CDRL1 com a SEQ ID N°: 247, um polipep- tídio CDRL2 com a SEQ ID N°: 248, um polipeptídio CDRL3 com a SEQ ID N°: 249, um polipeptídio CDRH1 com a SEQ ID N°: 244, um polipeptídio CDRH2 com a SEQ ID N°: 245, e um polipeptídio CDRH3 com a SEQ ID N°: -246.

9. Anticorpo monoclonal humanizado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o referido anti- corpo é um anticorpo humanizado ou totalmente humano ou uma porção fixadora de antígeno do mesmo.

10. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo de compri- mento integral humanizado, um anticorpo substancialmente intacto humani- zado, um fragmento Fab, um fragmento F(ab')2 ou um fragmento Fv de ca- deia simples.

11. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende ainda uma re- gião constante de cadeia pesada selecionada do grupo que consiste em IgGi, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM e IgD.

12. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende um anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11 e em que a referida composição compreende ainda um veículo farmaceuticamente aceitável.

13. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que é para uso como medicamento.

14. Uso de uma quantidade eficaz do anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medicamento para o tratamento de uma ou mais con- dições selecionadas do grupo que consiste em artrite reumatóide, distúrbio do intestino inflamado, psoríase e esclerose múltipla.