BRPI0621580A2

BRPI0621580A2 - composiÇÕes e mÉtodos para imagem celular e terapia

Info

Publication number: BRPI0621580A2
Application number: BRPI0621580-7A
Authority: BR
Inventors: Chang Sok Oh; Dong-Fang Yu; Ali Azhdarinia; Saady Kohanim; David J Yang
Original assignee: Univ Texas
Priority date: 2006-04-19
Filing date: 2006-05-04
Publication date: 2011-05-10
Also published as: IL194826A0; ES2544244T3; CA2649869C; KR20140099557A; CN101516899A; AU2006342202A1; NO20084821L; EP2013221A1; AU2006342202B2; EP2013221B1; KR20090014164A; KR101653182B1; HK1123306A1; NO341574B1; AU2006342202C1; CA2649869A1; BRPI0621580B8; EP2013221A4; WO2007120153A1; DK2013221T3

Abstract

COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA IMAGEM CELULAR E TERAPIA. A presente invenção está relacionada geralmente aos campos de química e imagem rádionuclídea. Mais particularmente, trata de composições, kits, e métodos para imagem e terapia envolvendo compostos e derivados de N4.

Description

"COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA IMAGEM CELULAR E TERAPIA"

Antecedente da Invenção

1. Campo da Invenção

A presente invenção se refere geralmente aos campos de química e imagemrádionuclídea. Mais particularmente, trata de composições e métodos envolvendocompostos e derivados de N4.

2. Descrição de Invenção Relacionada

As modalidades de imagem rádionuclídea (Tomografia por Emissão de Pósitrons,PET; Tomografia Computadorizada por Emissão Fotônica Única, SPECT) fazer o mapa delocalização e concentração de compostos de rótulo de radionuclídeo. Para melhorar adiagnose, prognose, planejando e monitorando de tratamento de doença específico detecido, caracterização de doença de tecido é extensivamente determinada pordesenvolvimento de mais doença farmacêutica específicos. PET 18F-fluorodeoxiglicose(FDG) foi empregado para avaliar tumores e diagnosticar, infartações miocárdicas, edoenças neurológicas. Embora imagem metabólica de tumor empregando 18F-FDG foiestudada nas duas últimas décadas, sua prática clínica ainda é limitada pelos fatores talcomo acesso fácil, disponibilidade e custo de isótopo. Além disso, 18F química é complexa erequer síntese mais longa de tempo (por exemplo, 18F-FDG, 40 minutos-75 minutos), e édifícil de produzir os agentes simultaneamente múltiplos. Desse modo, deve ser desejávelpara desenvolver uma técnica de quelação simples pelos agentes de rotulação empregandoisótopos metálicos para radioimagem e radioterapia alvo específico de tecido.

Melhoria de imagem de tumor de cintilográfico beneficiará do desenvolvimento demais tumores radiofarmacêuticos específicos. Devido a maior especificidade de tumor,Iigandos de radiorrotulado bem como anticorpos tem aberto uma nova era em detecçãocintilográfico de desenvolvimento extenso pré-clínico de tumores e sofrido e avaliação(Mathias e outros, 1996, 1997a, 1997b). As modalidades de imagem rádionuclídea (porexemplo, PET, SPECT) são técnicas de imagem corte transversal diagnostica que mapea alocalização e concentração de radiotraçadores de rótulo de radionuclídeo. Embora CT eMRI fornecer informação anatômica considerável sobre a localização e a extensão detumores, estas modalidades de imagem tipicamente não pode diferenciar adequadamentelesões invasivas de edema, necrose de radiação, graduação ou gliose. PET e SPECTpodem ser empregados localizar e caracterizar tumores medindo-se atividade metabólica.Desse modo os métodos que permitem mais imagens específicas de tumores sãodesejáveis.

Um método para produção de compostos novos para imagem tem envolvido o usode derivado de etilenodicisteína (EC) que são evidentes das composições da presenteinvenção. Vários compostos têm sido rotulados com 99mTc empregando nitrogênio equelatos de enxofre (Blondeau e outros, 1967; Davison e outros, 1980). Os Iigandos detetradentado Bis-aminoetanotiol, também chamado composto de diaminoditol, sãoconhecido para formar complexos de Tc(V)O muito estáveis na base de ligação eficiente dogrupo de oxotecnécio para dois tiolenxofre e dois átomos de nitrogênio de amina. Oscomplexos de Radiometal de 2-pirroltionas rotulada com complexos de "mTc-2-pirroltionastem sido desenvolvido para uso como radiofarmacêuticos para imagem e terapia com (WO0180906A2). "mTc-L,L-etilenodicisteína (99mTc-EC) é um exemplo recente e bem sucedidode N2S2 quelatos. EC pode ser rotulado com 99mTc facilmente é eficazmente com pureza deradioquímica e estabilidade elevada, e é excretado através do rim pelo transporte tubularativo (Surma e outros, 1994; Van Nerom e outros, 1990, 1993; Verbruggen e outros, 1990,1992). Além disso, 99mTc quelado com etilenodicisteína (EC) e conjugado com umavariedade de Iigandos foi desenvolvido para uso como um agente de imagem para doençasde tecido específico, como uma ferramenta prognostica, e como uma ferramenta paraliberação terapêuticas a sítios específicos dentro de um corpo mamífero (WO 0191807A2,AU 0175210A5). "mTc-EC-quelatos foram desenvolvidos para imagem e exame renal defunção renal (Patente U.S. 5,986,074 e Patente U.S. 5,955,053). Um método de preparaçãode complexos de 99mTc-EC e um kit para desenpenho o referido método também foidesenvolvido (Patente U.S. 5,268,163 e WO 9116076A1). A Patente U.S. 6,691,724descreve droga conjugado de droga de etilenocisteína e é incorporado aqui por refêrenciaem sua totalidade.

Sumário da Invenção

A presente invenção apresenta compostos e métodos relativo a uma técnica dequelação simples para agentes de rotulação empregando isótopos metálicos que podem serpara radioimagem e radioterapia de tecido específico alvejado.

Um aspecto da presente invenção esta voltada para um composto fosfina umconjugado de composto N4 a um ligando alvejado, onde o composto N4 compreende afórmula:

<formula>formula see original document page 3</formula>

Onde A1l A2, A3 e A4, são cada um independentemente -(CH2)x-, onde X=2-4; eonde A1= -(CH2)2-, A3= -(CH2)2-, A2= -(CH2)3- e A4= -(CH2)3-, então o referido ligando dealvejamento é selecionado do grupo consistindo em ligando de alvejamento de receptor dedoença, ligando de doença ciclo celular, ligando de alvejamento de tumor de angiogênese,ligando de alvejamento de tumor de apoptose e um grupo de proteção; e onde A1= -(CH2)2-,A3= -(CH2)2-, A2= -(CH2)2- e A4= -(CH2)2-, então o referido ligando de alvejamento éselecionado do grupo consistindo em ligando de alvejamento de receptor de doença, umligando de doença ciclo celular, ligando de alvejamento de tumor de angiogênese, ligandode alvejamento de tumor de apoptose e um grupo de proteção. Em certas modalidadesonde A1= -(CH2)2-, A3= -(CH2)2-, A2= -(CH2)3-, e A4= -(CH2)3-, e o referido ligando dealvejamento pode ser um receptor de doença. O referido receptor de doença pode ser umligando de alvejamento de tumor. O referido ligando de alvejamento pode ser selecionadodo grupo consistindo em manose de tetra-acetato, α-β-tirosina, um derivado de tirosina,estrona, tamoxifeno, e metiltirosina alfa. O referido receptor de doença pode ser umtransportador de glicose, um receptor de estrogênio, ou um transportador de aminoácido.

Em certas modalidades onde A1= -(CH2)2-, A3= -(CH2)2-, A2= -(CH2)3-, e A4= -(CH2)3-, e oreferido ligando de alvejamento pode ser um grupo de proteção (por exemplo,trifluoroacetato de etila). Em certas modalidades onde A1= -(CH2)2-, A3= -(CH2)2-, A2= -(CH2)2-, e A4= -(CH2)2-, e o referido ligando de alvejamento pode ser um receptor de doença.

O referido receptor de doença pode ser um ligando de alvejamento de tumor, umtransportador de glicose, um receptor de estrogênio, ou um transportador de aminoácido. Oreferido ligando de alvejamento pode ser selecionado do grupo consistindo em manose detetra-acetato, α,β-tirosina, tirosina, um derivado de tirosina, estrona, tamoxifeno, emetiltirosina alfa. Em certas modalidades onde A1= -(CH2)2-, A3= -(CH2)2-, A2= -(CH2)2-, eA4= -(CH2)2-, o referido ligando de alvejamento pode ser um grupo de proteção (porexemplo, trifluoroacetato de etila).

Em certas modalidades, o ligando de alvejamento é selecionado do grupoconsistindo em amifostina, angiostatinaa, anticorpo monoclonal C225, anticorpo monoclonalCD31, anticorpo monoclonal CD40, capecitabina, inibidor COX-2, deóxicitidina, fulereno,herceptinaa, soro de albumina humana, lactose, hormônio luteinizante, piridoxal,quinazolina, talidomina, tranferrina e trimetil lisina. O inibidor COX-2 pode ser selecionadoda lista consistindo em celecoxibe, rofecoxib, e etoricoxib. Em certas modalidades, oligando de alvejamento é selecionado do grupo consistindo em manose de tetra-acetato, a-β-tirosina, tirosina, um derivado de tirosina, estrona, tamoxifeno, metiltirosina alfa, etrifluoroacetato de etila. O ligando de alvejamento pode ser um composto de anti-câncer. Oligando de alvejamento pode ser hidrofóbico. O referido composto pode ser hidrofóbico. Oligando de alvejamento podem ser um açúcar. Em certas modalidades, A1= -(CH2)3-, A3= -(CH2)2-, A2= -(CH2)2-, e A4= -(CH2)2-. Em certas modalidades, A1= -(CH2)2-, A3= -(CH2)2-, A2=-(CH2)3-, e A4= -(CH2)3-. Em certas modalidades, A1= -(CH2)2-, A3= -(CH2)3-, A2= -(CH2)3-, eA4= -(CH2)3-. Em certas modalidades, A1= -(CH2)3-, A3= -(CH2)3-, A2= -(CH2)3-, e A4= -(CH2)3-Em certas modalidades, A1= -(CH2)4-, A3= -(CH2)3-, A2= -(CH2)3-, e A4= -(CH2)3-. Em certasmodalidades, A1= -(CH2)4-, A3= -(CH2)3-, A2= -(CH2)4-, e A4= -(CH2)3-. Em certasmodalidades, A1= -(CH2)3-, A3= -(CH2)3-, A2= -(CH2)4-, e A4= -(CH2)4-. Em certasmodalidades, A1= -(CH2)3-, A3= -(CH2)4-, A2= -(CH2)4-, e A4= -(CH2)4-. Em certasmodalidades, A1= -(CH2)4-, A3= -(CH2)4-, A2= -(CH2)4-, e A4= -(CH2)4-. Em certasmodalidades, A1= -(CH2)2-, A3= -(CH2)2-, A2= -(CH2)3-, e A4 não é -(CH2)3-; ou A1= -(CH2)2-,A3= -(CH2)2-, A2= -(CH2)2-, e A4 não é -(CH2)2; então o referido ligando de alvejamento podeser selecionado do grupo consistindo em um ligando de alvejamento de receptor de doença,um ligando de doença ciclo celular, um ligando de angiogênese de tumor, um ligando dealvejamento de apoptose de tumor, e um grupo de proteção. O ligando de alvejamentopode ser um receptor de doença. O referido ligando de alvejamento de receptor de doençapode ser um ligando de alvejamento de tumor, um transportador de glicose, um receptor deestrogênio, um transportador de aminoácido, ou um grupo de proteção (por exemplo,trifluoroacetato de etila).

Em certas modalidades, o composto é definida como tendo a fórmula:

<formula>formula see original document page 5</formula>

onde A1, A2, A3, e A4, são cada independentemente -(CH2)x-, onde X=2-4; e R1, R2,e R3 são cada independentemente selecionado do grupo consistindo em: hidrogênio,

<formula>formula see original document page 5</formula><formula>formula see original document page 6</formula>

Onde R4 é selecionado do grupo consistindo em:

<formula>formula see original document page 6</formula>

O composto pode ser quelado a um átomo de metal. O referido átomo de metalnão pode ser radioativo. O referido átomo de metal pode ser cobre, cobalto, platina, ferro,arsênico, rênio, ou germânio. O referido composto pode ser quelado a um radionuclídeo. Oreferido radionuclídeo pode ser 99mTc, 188Re, 186Re, 183Sm, 166Ho, 90Y, 89Sr, 67Ga1 68Ga, 111In,183Gd, 59Fe, 225Ac, 212Bi, 211At, 45Ti, 60Cu, 61Cu, 67Cu, 64Cu ou 62Cu. Em certa modalidade, oreferido radionuclídeo é selecionado do grupo consistindo em 68Ga, 90Y1 99mTc, 68Ga, ou188Re. O referido radionuclídeo pode ser 99mTc. O composto pode ser compreende em umacomposição farmacêutica.

Outro aspecto da presente invenção se refere a um método para o tratamento decâncer fosfina administração a um indivíduo um composto da presente invenção. Oindivíduo pode ser um mamífero, tal como um humano. O composto pôde ser quelado a99mTc1 188Re, 186Re, 183Sm, 166Ho, 90Y1 89Sr1 67Ga1 68Ga1 111Inl 183Gdl 59Fe1 225Ac1 212Bil 211Atl45Ti1 60Cu1 61Cul 67Cu1 64Cu ou 62Cu. O composto pode ser administrado em combinaçãocom um segundo composto de anti-câncer, uma terapia de radiação, ou cirurgia.

Outro aspecto da presente invenção se refere a um método para imagem fosfinaadministra a um indivíduo o composto da presente invenção. O indivíduo pode ser ummamífero, tal como um humano. O composto pode ser quelado a 99mTc, 188Re, 186Re, 183Sml166Ho, 90Y189Sr, 67Ga, 68Ga1111Inl 183Gd, 59Fe, 225Ac, 212Bi, 211At, 45Ti, 60Cu, 61Cu, 67Cu164Cu ou62Cu. A referida imagem pode compreende imagem de PET ou imagem de SPET.

Outro aspecto da presente invenção se refere a um kit fosfina um composto dapresente invenção e um agente redutor. O kit pode compreende um radionuclídeo. Oradionuclídeo pode ser 99mTc1 188Rel 186Rel 183Sml 166Hol 90Y1 89Sr1 67Ga1 68Ga1 111Inl 183Gdl59Fe1 225Ac1 212Bil 211Atl 45Ti1 60Cu1 61Cul 67Cu1 64Cu ou 62Cu. O kit pode compreende umantioxidante (por exemplo, vitamina C, tocoferol, piridoxina, tiamina, ou rutina). O kit podecompreende um quelante de transição (por exemplo, glicoeptonato, gliconato, glucarate,eitrato, ou tartarate). O agente redutor pode ser estanho (II) cloreto ou trifenilfosfina.

O uso da palavra "um" ou "uma" quando empregado junto com o termo "incluindo"nas reivindicações e/ou a especificação pode significar "um", porém é também consistentecom o medido de "um ou mais," "pelo menos um," e "um ou mais do que um." Comoempregado aqui "outro" pode significar pelo menos um segundo ou mais.

É contemplado que qualquer modalidade discutida nesta especificação pode serimplementada com respeito a qualquer método ou composição da invenção, e vice-versa.Além disso, as composições da invenção podem ser empregadas para obter os métodos dainvenção.

Ao longo deste pedido, o termo "cerca de" é empregado para indicar que um valorinclui a variação inerente de erro para o dispositivo, o método sendo empregado paradeterminar o valor, ou a variação que existe entre os indivíduos estudados.

O uso do termo "ou" nas reivindicações é empregado para significar "e/ou" a menosque explicitamente indicada para como se referindo a alternativa somente ou as alternativassão mutuamente exclusivas.

Como empregado neste pedido e reivindicação, as palavras "compreendendo" (equalquer forma de compreensão, tal como "compreende" e "compreendendo"), "tendo" (equalquer forma de ter, tal como "tendo" e "tem"), "compreendendo" (e qualquer forma decompreensão, tal como "compreende" e "compreendendo"), ou "contendo" (e qualquer formade conter, tal como "contém" e "contendo") são inclusivos ou ilimitados e não excluiadicional, elementos não relatados ou etapas de método.Outros objetivos, características e vantagens da presente invenção serão aparentesda seguinte descrição detalhada. Deve ser entendido, entretanto, que a descriçãodetalhada e os exemplos específicos, ao mesmo tempo em que indicando modalidadesespecíficas da invenção, são determinados através de ilustração somente, uma vez quevárias alterações e modificações dentro do espírito e escopo da invenção serão aparentesaquele versado na técnica desta descrição detalhada.

Breve Descrição dos Desenhos

Os desenhos seguintes fazem parte da especificação presente e são incluídos parademonstrar certos aspectos adicionais da presente invenção. A invenção pode ser melhorentendida através de referência a um ou mais destes desenhos em combinação com adescrição detalhada de modalidades específicas apresentadas aqui.

FIGURA 1. Síntese de N4-DG.

FIGURA 2. In vitro captação celular de "mTc-N4-DG (CicIam) em células 231 decâncer de mama. 50,000 células/cavidades foram revestidas e permitidas para obterconfluência 70-80%. Os traçadores foram administrados em 4 μCi/cavidades e incubado às37°C durante 1-3 hrs. As células foram então colhidas e radioatividade foi calculada equantificada.

FIGURA 3. A captação celular de 68Ga-N4-DG2 (ciclam) em células de câncer dopulmão humano. A captação celular In vitro empregando células A549 mostra captaçãoaumentada de 68Ga-N4-DG considerando que 68Ga-N4 mostra captação pobre.

FIGURAS 4A-C. FIGURA 4A, a captação Celular de 68Ga-N4-DG2 (ciclam) emcélulas de tumor mamárias de rato. A captação celular in vitro empregando células 13762mostra captação aumentada de 68Ga-N4-DG considerando que 68Ga-N4 mostra captaçãopobre. FIGURA 4B, estudo de captação Celular de "mTc-N4-DG (ciclal). 50,000células/cavidades foram revestidas e permitidas para obter confluência 70-80%. Ostraçadores foram administrados os investigadores às 4 μCi/cavidades e incubada às 37°Cdurante 0,5-2 hrs. As células foram então colhidas e radioatividade foi calculada equantificada. FIGURA 4C, o estudo in vitro estude de N4 rotulado por 99mTc1 Biotina,compostos de AMT, e DOTA em células 13762 linhagem de câncer de mama. 50,000células/cavidades foram revestidas e permitidas para obter confluência 70-80%. Ostraçadores foram administrados às 4 μCi/cavidades e incubado às 37°C durante 0,5-1,5 hrs.

FIGURAS 5A-B. FIGURA 5A, 68Ga-N4-DG vise-versa 18F-FDG (uPET). Umadistribuição padrão similar foi observada entre 68Ga-N4-DG (ciclam) e 18F-FDG. FIGURA 5B,μΡΕΤ Imagens de 68Ga-N4. Ratos transportando tumores mamários injetado com 400 μΟ68Ga-N4. As imagens selecionadas foram mostradas durante 2 horas de pós-injeção.

FIGURA 6. Imagem de 10, 60, e 120 Minutos de "mTc-N4-DG (ciclam) em ratoscom e sem tumor. 10, 60, e 120 minutos cintigrafia plana de "mTc-N4-DG em ratos com esem tumor (linhagem de célula de tumor de mama) após 300 mCi/rato, injeção i.v., calculode 500,000 adquirido para demonstrar visualização de tumor. As relações de tumor a nãotumor são mostrados. T=tumor e M=músculo.

FIGURA 7. Comparação de 10, 60, e 120 minutos de imagem de "mTc-N4-DG(ciclam) & 99mTc-EC-DG de ratos transportando de linhagem de célula de tumor de mama.Cintigrafia plana de 60, e 120 minutos de "mTc-N4-DG & 99mTc-EC-DG comparação emratos transportando de linhagem de célula de tumor de mama. (300 mCi/rato, injeção i.v.,calculo de 500,000 adquirido). As relações de tumor a não tumor são mostrados. T=tumor eM=músculo.

FIGURA 8. As relações de densidade calculam tumor a músculo de imagem de"mTc-N4-DG (ciclam) com e sem rato transportado de linhagem de célula de câncer demama. As relações de tumor a músculo aumentado foram observadas com "mTc-N4-DG.

FIGUFRA 9. Comparação de imagem (ciclam) de "mTc-N4 & "mTc-N4 -AMT emcoelho imediato, e 1 hr, e 3 hr após injeção. Cintigrafia plana de "mTc-N4 & "mTc-N4-AMTem coelhos transportador de tumor VX2 (1 mCi/coelho, injeção i.v.) para compararvisualização de tumor. As relações de tumor/músculo aumentadas em grupos "mTc-N4-AMT.

FIGURA 10. Imagem de PET micro 68Ga. Os ratos transportadores de tumoresmamários injetados com 400 μΟ 68Ga-N4-AMT. Imagens de corpo total mostram aqueletumor (pata direita) deve ser imaginado a 2 horas de pós-injeção.

Descrição das Modalidades Ilustrativas

No campo da medicina nuclear, certas condições patológicas são localizadas, ousua extensão é avaliada, detectando-se a distribuição de quantidades pequenas decompostos traçadores rotulado de radioativamente administrado interiormente (chamado deradiotraçadores ou radiofarmacêuticos). Os métodos para detectar este radiofarmacêuticossão conhecidos geralmente como imagem ou métodos de radioimagem.

Definições

Um grupo "alquila" se refere a um hidrocarboneto alifático saturado, incluindocadeia linear, cadeia ramificada, e grupos alquila cíclicos. Os grupos alquila podecompreende qualquer combinação de sub-unidades acíclico e cíclico. Alem disso, o termo"alquila" como empregado aqui expressamente inclui grupos saturados bem como gruposnão saturados. Os grupos não saturados contêm um ou mais (por exemplo, um, dois, outrês), ligação dupla e/ou ligação tripla. Preferivelmente, a alquila é saturada. O termo"alquila" inclui grupos alquila substituída e não substituída. Quando substituído, o gruposubstituído pode ser hidroxila, ciano, alcóxi, —O, —S, NO2, N(CH3)2, amino, ou SH.Preferivelmente, o grupo alquila tem 1 a 12 carbonos. Mais preferivelmente, é uma alquilainferior de 1 a 7 carbonos, mais preferivelmente 2 a 4 carbonos, mais preferivelmenteselecionados do grupo consistindo em de -CH2-CH2-, -CH2 -CH2-CH2- e -CH2-CH2-CH2-CH2-.

A palavra "conjugada" e "conjugar" são definidos aqui como ligação quimicamentedentro da mesma molécula. Por exemplo, dois ou mais moléculas e/ou átomos podem serconjugados junto através de uma ligação covalentee, formando uma molécula única. Asduas moléculas podem ser conjugadas um ao outro através de uma conexão direta (porexemplo, onde os compostos são ligados através de uma ligação covalentee) ou oscompostos podem ser conjugados através de uma conexão indireta (por exemplo, onde osdois compostos são ligações covalenteemente a um ou mais ligadores, formando umamolécula única). Em outros exemplos, um átomo de metal pode ser conjugado a umamolécula através de uma interação de quelação.

O termo "derivado de N4" é definido como um composto de N4 que foi conjugado apelo menos uma outra molécula ou átomo. Em certas modalidades o derivado compreendeum composto de N4 que tem um quelado de átomo a isto. O derivado de N4 podecompreende um composto de N4 que é conjugada a um ligando de alvejamento (porexemplo, através de uma ligação covalentee) e/ou um Iigador (por exemplo, através de umaligação covalente) e/ou um quelato de metal (por exemplo, através de uma interação dequelação).

Como empregado aqui o termo "radionuclídeo" é definido como um nuclídeo deradioativo (uma espécie de átomo capaz de existir para um tempo de vida mensurável edistinta pela carga, massa, número, e estado de quantidade do núcleo) o qual, emmodalidades específicas, desintegram com emissão de radiação corpuscular oueletromagnética. O termo pode ser empregado alternadamente com o termo "radioisótopo".

O termo "o agente terapêutico" como empregado aqui é definido como um agenteque fornece tratamento para uma doença ou condição médica. O agente em umamodalidade específica melhora pelo menos um sintoma ou parâmetro da doença oucondição médica. Por exemplo, em terapia de tumor, o agente terapêutico reduz o tamanhodo tumor, inibi ou previne o desenvolvimento ou metástase do tumor, ou elimina o tumor.Os exemplos incluem uma droga, tal como uma droga de anti-câncer, uma composição deterapia de gene, um radionuclídeo, um hormônio, um nutriceutical, ou uma combinaçãodestes.

O termo "tumor" como empregado aqui é definido como um desenvolvimentodescontrolado e progressivo de células em um tecido. Um técnico versado esta ciente queoutros sinônimos dos termos existem, tal como neoplasma ou malignidade. Em umamodalidade específica, o tumor é um tumor sólido. Em outras modalidades específicas, otumor deriva, ou principalmente ou como uma forma metastática, de cânceres tal como dofígado, próstata, pâncreas, cabeça e pescoço, mama, cérebro, cólon, adenóide, oral, pele,pulmão, testes, ovários, cerviz, endométrio, bexiga, estômago, e epitélio.

O termo "droga" como empregado aqui é definido como um composto que auxiliarno tratamento de doença ou condição médica ou o qual controla ou melhora qualquercondição fisiológica ou patológica associada com a doença ou condição médica.

O termo "droga de anti-câncer" como empregado aqui é definido como uma drogapara o tratamento de câncer, tal como para um tumor sólido. A droga de anti-câncerpreferivelmente reduz o tamanho do tumor, inibe ou previne o desenvolvimento oumetástase do tumor, e/ou elimina o tumor. Os termos "droga de anti-câncer", "droga de anti-câncer", e "composto de anti-câncer" são empregados alternadamente aqui.

Como empregado aqui a especificação, "um" ou "uma" pode significar um ou mais.Como empregado aqui na reivindicação, quando empregado junto com a palavra"compreendendo", as palavras "um" ou "uma" pode significar um ou mais do que um. Comoempregado aqui "outro" pode significar pelo menos um segundo ou mais.

II. Composto de N4 E Derivados

A presente invenção fornece um método pelo qual compostos de N4, que sãotipicamente quelantes de hidrofóbico, pode ser conjugado a moléculas hidrofóbicas paraproduzir compostos novos que podem ser empregados para propósitos incluindo imagem eradioterapia. Certos compostos de N4 podem ser obtidos de fonte comercial tal comoSigma chemical company (St. Louis, MO) e Aldrich Chemical company (Milwaukee, Wl). APatente U.S. 5,880,281 descreve um método para produzir certos compostos de N4.

Os compostos de N4 são definidos aqui como tendo a estrutura:

Onde A1, A2, A3, e A4 são alquila; e

Onde R1, R2, R3, e R4 são hidrogênio. Os vários compostos de N4 são mostrados

<formula>formula see original document page 11</formula>

abaixo.

Estruturas de compostos de N4

<formula>formula see original document page 11</formula>

1) Número de Registro: 294-90-6índice Nome CA: 1,4,7,10-Tetraazaciclododecano (6CI,8CI,9CI)Outros Nomes:Ciclen; NSC 629374; Tetraaza-12-coroa-4

<formula>formula see original document page 12</formula>2) Número de Registro: 295-14-7

índice de Nome CA: 1,4,7,10-Tetraazaciclotridecano (6CI,8CI,9CI)Outros Nomes: Cielam 13

3) Número de Registro: 52877-36-8índice de Nome CA: 1,4,7,11-TetraazacicIotetradecano (9CI)

Outros Nomes: Isociclam

<formula>formula see original document page 12</formula>4) Número de Registro: 295-37-4

índice de Nome CA: 1,4,8,11-TetraazacicIotetradecano (6CI,7CI,8CI,9CI)Outros Nomes: Ciclam; JM 1498; NSC 180811

<formula>formula see original document page 12</formula>5) Número de Registro: 15439-16-4

índice de Nome CA: 1,4,8,12-Tetraazaciclopentadecano (8CI.9CI)Outros Nomes: Cielal<image>image see original document page 13</image>

6) Número de Registro: 24772-41-6índice de Nome CA: 1,5,9,13-Tetraazacicloexadecano (8CI.9CI)

<image>image see original document page 13</image>

7) Número de Registro: 43031-32-9índice de Nome CA: 1,5,9,13-Tetraazacicloeptadecano (9CI)

<image>image see original document page 13</image>

8) Número de Registro: 68966-28-9índice de Nome CA: 1,5,10,14-Tetraazaciclooctadecano (9CI)

<image>image see original document page 13</image>

9) Composto não ExistenteNome: 1,5,9,14-Tetraazaciclooctadecano

<image>image see original document page 13</image>

10) Composto não ExistenteNome: 1,5,10,15-Tetraazaciclononadecano<formula>formula see original document page 14</formula>

11. Número de Registro: 3713-77-7índice de Nome CA: 1,6,11,16-Tetraazacicloeicosana (8CI.9CI)

ΐ: composto não existente

í: disponível Não comercialmente

Os compostos de N4 podem ser empregados como quelantes. Por exemplo, ciclame outros compostos de N4 foram testados para sua a capacidade para aliviar envenenandocádmio agudo (Srivastava e outros, 1996). A Patente U.S. 4,141,654 descreve certoscompostos com similaridade estrutural para compostos de N4 que podem ser empregados aíons de actinídeo de quelato. A Patente U.S. 5,648,063 descreve compostos comsimilaridade estrutural para compostos de N4 que pode íons de metal de quelato e podetambém ser empregado em certo procedimentos diagnósticos de NMR. A Patente U.S.6,071,490 utiliza um ciclen modificado para imagem de PET. A Patente U.S. 6,613,305descreve Vitamina B12 ligada a vários compostos de N4.

A. Ligandos de alvejamento

Na presente invenção, é geralmente preferível para conjugar uma porção dealvejamento (por exemplo, uma droga de anti-câncer hidrofóbica) para o composto de N4;entretanto, em certas modalidades um composto de N4 que não é conjugada a uma porçãode alvejamento pode ser empregado para imagem e terapia. Uma porção de alvejamentopode ser conjugada à composto de N4 através de vários métodos. Um método é parasintetizar um haleto (por exemplo, iodado) porção de alvejamento. Por exemplo, o grupo dehidróxi de uma porção de alvejamento (por exemplo, uma molécula hidrofóbica) pode sercondespejado a um grupo de tosila-, mesila-, triflato ou haleto (por exemplo, iodo). Acondição de reação é tipicamente desempenhada em um solvente orgânico(dimetilformamida, DMF). Em certas modalidades da presente invenção o produto final ésolúvel em água após formação de sal de hidrocloreto. Alternativamente, outro método paraconjugar composto de N4 a uma porção de alvejavemto é para sintetizar um sulfonato (porexemplo, tosila - mesila ou triflato) porção de alvejamento. Di-, tri- ou todos os substitutosno composto de N4 podem ser preparados reagindo-se este iodado ou agentes dealvejamento de sulfonato. Para mono-substituinte, uma proteção seletiva de grupos denitrogênio é necessária. Os Iigandos de alvejamento que podem ser conjugados com umcomposto de N4 incluem aminoácidos (por exemplo, tirosina, serina), derivados deaminoácido (por exemplo, alfametiltirosina), tamoxifeno, estrona, e manose de tetra-acetato.Outros Iigandos podem também ser conjugados à composto de N4. Em geral, osIigandos para uso junto com a presente invenção ou possuirá ou um haleto ou um grupo dehidróxi que são capazes para reagir com e ligado covalentemente à composto de N4 emqualquer um ou ambos braços ácidos. Os Iigandos contemplados para uso na presenteinvenção inclua, porém não são limitados a, Iigandos de angiogênese/antiangiogênese,inibidores de topoisomerase de DNA1 marcadores de glicólise, Iigandos de antimetabólito,Iigandos de apoptose/hipoxia, intercaladores de DNA1 marcadores de receptor, peptídeos,nucleotídeos, antimicrobianos tal como antibióticos ou antifúngicos, Iigandos de órgãoespecífico e açúcares, e agentes que mímico de glicose.

É contemplado que virtualmente qualquer que ligando de alvejamento que éconhecido, ou pode ser descrito subseqüentemente, que possui um grupo de hidróxi ou umhaleto, ou alternativamente pode ter um grupo de hidróxi ou haleto introduzido em suaestrutura (por exemplo, pela adição de uma cadeia lateral, ou ligando-se um haleto a umgrupo fenol no ligando de alvejamento), pode ser empregado com a presente invenção. Emcertas modalidades, um ligando de alvejamento pode ser conjugado diretamente a umcomposto de N4 (por exemplo, através de uma ligação covalente entre o ligando dealvejamento e o composto de N4), ou um ligando de alvejamento pode ser conjugadoindiretamente a um composto de N4 através de um ligador. É previsto que Iigandos dealvejamento que tem previamente sido conjugado a outro (composto de não N4) quelante,tal como EC, pode ser conjugado a composto de N4 da presente invenção e empregadopara propósitos terapêuticos; em certos exemplos, pode ser requerido para modificar oligando de alvejamento (por exemplo, adicionar uma cadeia lateral que contém uma hidroxilaou um haleto) em ordem para ligação covalentemente o ligando de alvejamento à compostode N4. Por exemplo, a ligação covalente de Iigandos com compostos de EC sãotipicamente desempenho em água, e em certos exemplos pode ser preferido a ligaçãocovalentemente um ligando de alvejamento com um composto de N4 utilizando-se umareação em um solvente orgânico; nestes exemplos, um ligando de alvejamento que pode serligação covalentemente a EC através de uma reação em água pode ser modificado (porexemplo, um grupo de haleto ou hidróxi pode ser apresentado à estrutura) para permitir oligando de alvejamento a ser ligação covalentemente a um composto de N4 através de umareação em um solvente orgânico.

Os derivados de N4 podem ser empregados a tumores alvo (por exemplo,canceroso, pré-canceroso, benigno), angiogênese de tumor, hipoxia, deficiência deapoptose, receptores de doença (por exemplo, receptores de células que são indicativos decâncer), series de reações funcionais de doença (por exemplo, uma series de reaçõesmêtabólicas que foi alterado por um estado de doença), e ciclos de células doentes.Adicionalmente, os derivados de N4 podem ser empregados para a avaliação de umaefetividade de agente farmacêutico nestes processos bioquímicos.

Os derivativos de N4 podem também ser empregados como uma ferramentadiagnostica para predizer respostas a certos tipos de tratamento. Por exemplo, um derivadode N4 que compreende tamoxifeno (um ligando de alvejamento de receptor de estrogênio)pode ser empregado a imagem de tumores cancerosos; neste exemplo, a imagem podefornece informação importante cerca da doença tal como o qual grau as células cancerosasexpressam o receptor de estrogênio que pode ser empregado para predizer como a doençaresponderá os tratamentos que células alvo expressam o receptor de estrogênio (porexemplo, quando é identificado que expressam níveis elevados seletivamente de tumorescanceroso de receptor de estrogênio, esta informação indica que as células cancerosasresponderá provável a doses terapêuticas de agentes de anti-câncer que expressam célulasalvo o receptor de estrogênio). Este método é referido como "imagem guiada de terapia".

Uma vantagem de conjugar um composto de N4 com um Iigandos de alvejamentode tecido é que as propriedades de ligação específica do ligando de alvejamento de tecidopodem concentrar o sinal radioativo sob a área de interesse. É previsto que derivado de N4empregado para terapia e/ou imagem pode compreende um conjugado de composto de N4a um Iigandos de alvejamento designado para tumores cancerosos de alvejamento, tumorespré-cancerosos, receptores de doença, tecidos de hipóxico (hipoxia), series de reações deapoptose, ciclos de célula doente, e/ou series de reações funcionais de doença. Osderivados de N4 podem também ser empregados para avaliar a efetividade de agentefarmacêutico em vário metabólico e/ou series de reações bioquímicas ou reaçõesindividuais. Os exemplos de certo Iigandos de alvejamento que pode ser empregado apresente invenção pode ser encontrado na Tabela 1. Em certas modalidades, uma droga deanti-câncer pode ser empregada como um ligando de alvejamento. As drogas de anti-câncer são bem conhecidas na técnica (por exemplo, Connors11996). A Tabela 2 naPatente U.S. 6,691,724 listas vários exemplos de drogas de anti-câncer que pode serempregada como Iigandos de alvejamento em várias modalidades da presente invenção.

Tabela 1

<table>table see original document page 16</column></row><table>Alvejamento de Apoptose Anticorpo de monoclonal TRAIL, substrato decaspase-3, Bcl do membro familiar

1. Alvejamento de Angiogênese de Tumor

Ao longo deste pedido, "alvejamento de angiogênese de tumor" se refere ao uso deum agente para ligar a neovascularização de tumor e células de tumor. Os agentes sãoempregados para este propósito são conhecidos aquele de experiência ordinária na técnicapara uso em desempenho de várias medição de tumor, incluindo medição do tamanho deum tumor de leito vascular, e medição de volume do tumor. Algumas destas ligações deagentes à parede vascular. Aquele de experiência ordinária na técnica deve ser familiarcom os agentes que estão disponíveis para uso para este propósito. Um ligando dealvejamento de angiogênese de tumor é um ligando que é empregado para o propósito dealvejamento de angiogênese de tumor como definido acima. Os exemplos de Iigandos dealvejamento de angiogênese de tumor incluem celecoxibe, C225, herceptina, angiostatina, etalidomida, que foram desenvolvidos para a avaliação de processo bioquímico emangiogênese.

Em certas modalidades, um ligando de alvejamento de tumor pode associar comtecidos de tumor alvejando-se a hipoxia associada com células de tumor. Os exemplos deIigandos de alvejamento de tumor que tecidos de hipóxico alvo incluem nitroimidazol emetronidazol, e este Iigandos pode também ser empregado ao alvo outros tecidos dehipóxico que são hipóxico devido a uma razão diferente de câncer (por exemplo, acidentevascular cerebral).

2. Alvejamento de Apoptose de Tumor

"Alvejamento de apoptose de tumor" se refere ao uso de um agente para ligar auma célula que está sofrendo apoptose ou está em risco de sofrer apoptose. Estes agentessão geralmente empregados para fornece um indicador da extensão ou risco de apoptose,ou morte de célula programada, em uma população de células, tal como um tumor. Aquelede experiência ordinária na técnica deve familiarizar com agentes que são empregados paraeste propósito. Certos exemplos de agentes de alvejamento de apoptose são mostrados naTabela 1. Um "ligando de alvejamento de apoptose de tumor" é um ligando que é capaz dedesempenha "alvejamento de apoptose de tumor" como definido neste parágrafo. Osexemplos de um ligando de apoptose de tumor incluem um TRAIL (apoptose relacionado aTNF que induzindo ligando) anticorpo de monoclonal. TRAIL é um membro do ligando defator de necrose de tumor da família que rapidamente induz apoptose em uma variedade delinhagem de células transformadas. Outros exemplos de Iigandos de alvejamento deapoptose de tumor incluem um substrato de caspase-3, tal como peptídeo ou polipeptídeoque inclui o ácido aspártico da seqüência de 4 aminoácido-ácido glutâmico-valina-ácidoaspártico.A pesquisa significante esta voltada a criação e avaliação de compostos novos queafetam apoptose, tal como restabelecer sensibilidade de apoptose a células de câncer (oReed1 2003). É previsto que a presente invenção pode ser empregada para despachar aeficácia e/ou avaliação de composto de alvejamento de apoptose de tumor descrevesubseqüentemente e/ou conhecido.

3. Alvejamento de Receptor de Doença

Em "alvejamento de receptor de doença", certos de agente são explorados para suacapacidade para ligar a certos receptores celulares que são super-expresso em estados dedoença, tal como câncer. Os exemplos de tais receptores que são alvejados incluemreceptores de estrogênio, transportadores de aminoácido, receptores de andrógeno,receptores pituitários, receptores de transferrina, receptores de progesterona, etransportadores de glicose. Os exemplos de agentes que podem ser aplicados emalvejamento de receptor de doença são mostrados na Tabela 1. Os Iigandos dealvejamento de receptor de receptor (por exemplo, pentetreotídeo, octreotídeo, transferrina,e peptídeo pituitário) ligado aos receptores de células, alguns dos quais são super-expressoem certas células.

Alvo de estrogênio, estrona, e tamoxifeno o receptor de estrogênio. Os receptoresde estrogênio são super-expressos em certos tipos de câncer, e derivados de N4 quecompreende um ligando de alvejamento de receptor de estrogênio pode ser empregado emcertas modalidades para tumores de imagem. A expressão de receptores de estrogênio étambém alterada nas doenças de osteoporose e endometriose. É antecipado que umderivado de N4 compreendendo um ligando de alvejamento de receptor de estrogênio podeser empregado a imagem outras doenças tal como osteoporose e endometriose.

Os transportadores de glicose são super-expresso em várias células doentes comocertas células cancerosas. Manose de Tetra-acetato, desoxiglicose, certo polissacarídeos(por exemplo, neomicina, canamicina, tobramicina), e monossacarídeos (por exemplo,glicosamina) também ligados ao transportador de glicose e pode ser empregado comoligandos de alvejamento de receptor de doença. Desde que este Iigandos não sãoimunogênicos e são clareados rapidamente do plasma, imagem de receptor deve parece sermais promissor comparado a imagem de anticorpo.

Similarmente, os transportadores de aminoácido são também super-expresso emvárias células doentes tal como certas células cancerosas. Os derivados de aminoácidose/ou aminoácido (por exemplo, serina, tirosina, metiltirosina alfa) pode ser empregado comoligandos de alvejamento de receptor de doença.

Os Iigandos de alvejamento de receptor adicional estão disponíveis e pode serconjugado aos compostos de N4.Outros exemplos de Iigandos de alvejamento de receptor de doença incluemhormônio de Iuteinizante e transferrina. Ácido fólico, folato, tomudex, e metotrexato sãoexemplos de Iigandos de alvejamento de receptor de doença que liga receptores de folato.

"Alvejamento de tumor" se refere à capacidade de um composto para associarpreferencialmente com tumores (por exemplo, canceroso, pré-canceroso, e/ou benigno).Um "ligando de alvejamento de tumor" se refere a um composto a qual preferencialmenteliga a ou associam com tecidos de tumor, como comparado aos tecidos não tumor.Ligandos (por exemplo, moléculas pequenas ou anticorpos) o qual preferencialmentetumores alvo são bem conhecidos na técnica, e é antecipado que Iigandos de alvejamentode tumor que são atualmente conhecidos, ou que pode ser descrito subseqüentemente,pode ser empregado com a presente invenção.

4. Alvejamento de Ciclo de Célula doente

O alvejamento de ciclo de célula doente se refere ao alvejamento de agentes quesão super-regulado em células proliferante. Os compostos empregados para este propósitopodem ser empregados para medir vários parâmetros em células, tal como teor de DNA decélula de tumor.

Certo Iigandos de alvejamento de ciclo de célula doente são análogos denucleosídeo. Por exemplo, nucleosídeo de pirimidina (por exemplo, 2'-fluoro-2'-desoxi-5-iodo-1 -β-D-arabinofuranosiluracil [FIAU], 2'-fluoro-2'-desoxi-5-iodo-1 -β-D-ribofuranosil-uracil[FIRU], 2'-fluoro-2'-5-metil-1-β-D-arabinofuranosiluracil [FMAU], 2'-fluoro-2'-desoxi-5-iodovinil-1^-D-ribofuranosiluracil [IVFRU]) e acicloguanosine: 9-[(2-hidróxi-1-(hidroximetil)etóxi)metil]guanina (GCV) e 9-[4-hidróxi-3-(hidróxi-metil)butil]guanina (PCV)(Tjuvajev e outros, 2002; Gambhir e outros, 1998; Gambhir e outros, 1999) e outrosanálogos de acicloguanosine de 18F-rotulado, tal como 8-fluoro-9-[(2-hidróxi-1-(hidroximetil)etóxi)metil]guanina (FGCV) (Gambhir e outros, 1999; Namavari e outros, 2000),8-fluoro-9-[4-hidróxi-3-(hidroximetil)butil]guanina (FPCV) (Gambhir e outros, 2000; Iyer eoutros, 2001), 9-[3-fluoro-1-hidróxi-2-propóxi metiljguanina (FHPG) (Alauddin e outros, 1996;Alauddin e outros, 1999), e 9-[4-fluoro-3-(hidroximetil)butil]guanina (FHBG) (Alauddin eConti, 1998; Yaghoubi e outros, 2001) foi desenvolvido como substratos de repórter paraimagem do tipo selvagem e mutante (Gambhir e outros, 2000) expressão de HSV1-tk. Umou experiência ordinária na técnica estar familiarizada com estes e outros agentes que sãoempregados para alvejamento de ciclo de célula doente.

Os exemplos de Iigandos de alvejamento de doença incluem, por exemplo,adenosina e penciclovir. O FHBG analógico de nucleosídeo antiviral (um analógicopenciclovir), outro ligando de alvejamento de doença que, tem para medida in vivo deproliferação de célula empregando PET (Alauddin e outros, 2001), e é antecipado que dealvejamento similar podem ser empregados com a presente invenção.5. Doença para Alvejamento de Hipoxia

O alvejamento de hipoxia de célula doente se refere ao alvejamento de agentes quesão super-regulado em células de hipóxico. Os compostos empregados para este propósitopodem ser empregados a medição de vários parâmetros em células, tal como hipoxia decélula de tumor, resistência ou teor residual.

Certos Iigandos de alvejamento de hipoxia de célula doente incluem 2- ou 5-nitroimidazol análogos. Por exemplo, misonidazol (2-nitroimidazol) e metronidazol (5-nitroimidazol) análogos.

6. Doença para Alvejamento de Glicólise

O alvejamento de glicólise de célula doente se refere ao alvejamento de agentesque são super-regulado através de utilização de glicose em células. Os compostosempregados para este propósito podem ser empregados para medir vários parâmetros emcélulas, tal como desenvolvimento de célula de tumor, graus de inflamação. Os Iigandos dealvejamento de glicólise de célula doente inclui glicose, galactose, manose e análogos deribose.

B. Ligadores

Os grupos amino ou hidróxi não estão disponíveis (por exemplo, grupo funcionalácido), um ligando desejado ainda pode ser conjugado à composto de N4 (que pode ou nãopode ser radiorrotulado) empregando os métodos da invenção adicionado-se um ligador, talcomo etilenodiamina, propanol amino, dietilenotriamina, ácido aspártico, ácido poliaspártico,ácido glutâmico, ácido poliglutâmico, ou lisina. Por exemplo, Patente U.S. 6,737,247descreve vários Iigadores que pode ser empregado com a presente invenção e é dessemodo incorporado por referência em sua totalidade sem retratação. A Patente U.S.5,605,672 descreve vários "preferido de cadeia principal" que pode ser empregado comoIigadores na presente invenção e desse modo incorporado por referência em sua totalidade.

Em certas modalidades, um composto de N4 pode ser conjugado a um ligador, e o ligador éconjugado ao ligando de alvejamento. Em outras modalidades mais do que um ligador podeser empregado; por exemplo, um composto de N4 pode ser conjugado a um ligador, e oligador é conjugado a um segundo ligador, onde o segundo ligador é conjugado ao ligandode alvejamento. Em, certas modalidades, dois, três, quatro, ou mais Iigadores que sãoconjugadas junto pode ser empregado para conjugar um composto de N4 e ligando dealvejamento. Entretanto, é geralmente preferível para somente usar um único ligador paraconjugar um composto de N4 e um ligando de alvejamento.

C. Derivado de N4

O termo "derivado de N4" é definido aqui como um composto de N4 que foiconjugado a pelo menos uma outra molécula ou átomo. Em certas modalidades o derivadocompreende um composto de N4 que tem um quelado de átomo. O derivado de N4 podecompreende um composto de N4 que é conjugado a um ligando de alvejamento (porexemplo, através de uma ligação covalente) e/ou um Iigador (por exemplo, através de umaligação covalente) e/ou um quelato de metal (por exemplo, através de uma interação dequelação).

Certas modalidades da presente invenção se referem ao derivado de N4, métodospara produzir derivado de N4, e usos de derivado de N4. Em certas modalidades, umderivado de N4 é um composto tendo a fórmula:onde A1, A2, A3, e A4, são alquila;

<formula>formula see original document page 21</formula>

e R1, R2, e R3 são cada independentemente selecionado do grupo consistindo em:hidrogênio,

<formula>formula see original document page 21</formula>

Onde R4 é selecionado do grupo consistindo em:<formula>formula see original document page 22</formula>

O derivado de N4 pode ter um quelado de átomo de metal a este (isto é, o derivadode N4 pode ser rotulado com um radioisótopo). O átomo de metal pode ser radioativo ounão radioativo.

D. Rotulação de Radioisótopo

Para facilitar certas modalidades envolvendo, por exemplo, imagem ou o uso de umderivado de N4 como um quimioterapêutico, um radioisótopo pode ser quelado ao derivadode N4. Por exemplo, um derivado de N4 pode ser conjugado (preferivelmente quelado) para

99mTc, 188Re, 186Re, 183Sm, 166Ho, 90Y, 89Sr, 67Ga, 68Ga, 111In, 183Gd, 59Fe, 225Ac, 212Bi, 211At,45Ti, 60Cu, 61Cu, 67Cu, 64Cu ou 62Cu.

Geralmente, acredita-se que virtualmente qualquer a, β-emissor, γ-emissor, podeser empregado junto com a invenção. Preferido α emissores incluem bismuto-213, astatino-211, e rádio-223. Preferido β, γ-emissor, 166Ho, 188Re, 186Re, 153Sm, e 89Sr. Preferido β-emissor incluem 90Y e 225Ac. Preferido γ-emissor incluem 67Ga1 68Ga, 64Cu, 62Cu e 111In.Preferido α-emissor incluem 211At e 212Bi. É também previsto a qual substâncias para-magnéticas, tal como Gd, Mn, Cu ou Fe podem ser quelado com derivado de N4 para usojunto com a presente invenção.

Em radioimagem, o radiorrótulo é tipicamente um radionuclídeo de emissão degama-radiação e o radiotraçador é tipicamente localizado empregando uma câmaradetectando gama-radiação (este processo é freqüentemente referido como gama cintigrafia).O sítio de imagem é detectable porque o radiotraçador é selecionado ou para localizar emum sítio patológico (chamado de contraste positivo) ou, alternativamente, o radiotraçador éselecionado especificamente não para localizar em tais sítios patológicos (chamado decontraste negativo).

Uma variedade de radionuclídeos são conhecidas para ser útil para radioimagem eradioimunoterapia, incluindo 67GaI6sGa, 99mTc1 111In, 123I1 125I1 169Yb ou 186Re/188Re. Devido acaracterísticas de imagem melhores e preço mais baixo, tentativa foi feito para substituir oufornecer uma alternativa a 123I1 131I1 67Ga e 111In. Em compostos rotulados com compostosrotulados 99mTc correspondente quando possível. Devido a características físicas favoráveisbem como preço baixo extremamente ($0,21/mCi), 99mTc é preferido a radiofarmacêuticos derotulação. Embora foi relatado que conjugado de DTPA-droga pode ser rotulado com 99mTc(Mathias e outros, 1997), DTPA porção de não quelato com 99mTc como estavelmente comocom 111In (Goldsmith, 1997).

Vários fatores devem ser considerados para ótima radioimagem em humanos.Para maximizar a eficiência de detecção, um radionuclídeo que emite energia de gama nafaixa de 100 a 200 keV é tipicamente preferido. Para minimizar a dose de radiaçãoabsorvida ao paciente, a meia-vida física do radionuclídeo deve ser tão curta quanto oprocedimento de imagem permitirá. Para permitir exame a ser desempenhado em qualquerdia e a qualquer hora do dia, é vantajoso para ter uma fonte do radionuclídeo sempredisponível no sítio clínico. 99mTc é freqüentemente um radionuclídeo preferido porque emiteradiação gama a 140 keV, tem uma meia-vida física de 6 horas, e é prontamente disponívelem local empregando um gerador de molibdênio-99/tecnécio-99m.

Em certas modalidades, o derivado de N4 pode ser rotulado (por exemplo, quelado)com 68Ga para imagem de PET ou 188Re (uma beta e emissor de gama) para terapia deradionuclídeo interna. Como declarado acima, 99mTc1 68Ga e 188Re pode ser obtido degeradores que são acessíveis e disponíveis. Quando quelado com metais nos radioativos(por exemplo, cobre, cobalto, platina, ferro, arsênico, rênio, germânio), o resfriado (nãoradioativo) derivado de N4 pode ser empregado como um agente quimioterapêuticometálico. Um aspecto da exclusividade desta tecnologia é para usar o mesmo precursoresde sulfonato PET ou agentes iodados SPECT para reagir com um composto de N4 que éum quelante. O produto final pode então ser quelado com metais que é fácil, maisacessíveis, e mais disponíveis.

Tecnécio tem vários estados de oxidação: +1, +2, +4, +5, +6 e +7. Quando estiverno estado de oxidação +1, é chamado de Tc MIBI. Tc MIBI é tipicamente produzido comuma reação de calor (Seabold e outros 1999). Para certas modalidades da presenteinvenção envolvendo TC quelante para um composto de N4 ou um derivado de N4, étipicamente preferível que Tc esteja no estado de oxidação +4. Este estado de oxidação éideal para formar o quelato com um composto de N4 ou um derivado de N4. Desse modo,formando um complexo de tecnécio radioativo com a droga conjugada da invenção, ocomplexo de tecnécio, preferivelmente um sal de 99mTc pertechnetate, é tipicamente reagidocom a droga conjugada da invenção na presença de um agente redutor.

O preferido agente redutor para uso na presente invenção é íon estanoso na formade cloreto estanoso (SnCI2) para reduzir o Tc a seu estado de oxidação +4. Entretanto, écontemplado que outros agentes redutor, tal como íon de ditionato ou íon ferroso pode serútil junto com a presente invenção. Também é contemplado que o agente redutor pode serum agente redutor de fase sólida. A quantidade de agente redutor pode ser importantecomo é necessário para evitar a formação de um colóide. É preferivelmente, por exemplo,para uso de cerca de 10 a cerca de 100 μg SnCI2 por cerca de 100 a cerca de 300 mCi deTc pertechnetate. A maioria da quantidade preferida é cerca de 0,1 mg SnCI2 para cerca de200 mCi de Tc de pertechnetate e cerca de 2 ml de salina.

Além disso, para tumores de imagem com derivado de N4 rotulados comradionuclídeos, é previsto que estes compostos podem também ser empregados paraimagem de tecido relacionado a outras doenças, bem como diagnósticos se referindo aocâncer e outras doenças. Por exemplo, é contemplado que os derivados de N4 rotuladocom radionuclídeos da invenção podem ser úteis a imagem tumores, porém também outrascondições de tecido específicos, tal como infecção, tecido de hipóxico (acidente vascularcerebral), infarto miocárdio, células apoptótica, a doença de Alzheimer e endometriose.

Uma vantagem de imagem empregando um derivado de N4 que compreende um compostode N4 de radiorrotulado que é conjugado a um ligando de alvejamento de tecido é que aspropriedades de ligação específicas do ligando de alvejamento de tecido concentrado dosinal radioativo sob a área de interesse.

E. Kit para preparar derivado de N4 de radiorrotulado

Os complexos e meios para prepara tal complexo pode ser fornecido em uma formade kit que tipicamente inclui um frasco lacrado contendo uma quantidade predeterminada deum derivado de N4 da invenção e uma quantidade suficiente de agente redutor pararotulação o conjugado com um radionuclídeo. Em algumas modalidades da presenteinvenção, o kit inclui um radionuclídeo. Em certas modalidades adicionais, o radionuclídeo é99mTc. O kit pode também conter materiais de suplemento farmacêuticos convencionais talcomo, por exemplo, sais farmaceuticamente aceitáveis para ajustar a pressão osmótica,tampões, preservativos, antioxidantes, e outros.

Em certas modalidades, um quelante de transição e antioxidante são incluídos nacomposição para prevenir oxidação do derivado de N4. Em certas modalidades, oantioxidante é vitamina C (ácido ascórbico). Entretanto, é contemplado que qualquer outroantioxidante conhecido aquele de experiência ordinária na técnica, tal como tocoferol,piridoxina, tiamina, ou rutina, pode também ser empregado. Os exemplos de quelantes detransição para uso na presente invenção incluem, porém não são limitados a, glicoeptonato,gliconato, glucarate, citrato, e tartarate. Os componentes do kit podem ser em formaslíquida, congelada ou seca. Em certas modalidades, kit de componentes pode ser fornecidoem forma de liofilizado.

Usos para Derivados de N4

Os derivados N4 da invenção pode também ser empregado para propósitos deprognóstico. É previsto que derivados de N4 podem ser administrados a um paciente tendoum tumor. É previsto que o uso de um derivado de N4 radiorrotulado como uma estratégiade rotulação pode ser efetivo com Iigandos designado para receptores de doença dealvejamento, marcadores de hipoxia, falha de apoptose, ciclos de célula doente, series dereações de doença funcionais, e avaliação de efetividade de agentes farmacêutica destesprocessos bioquímicos. A imagem pode ser desempenhada para determinar a efetividadedo derivado de N4 contra o problema específico do paciente relativo aos receptores dedoença, marcadores de hipoxia, falha de apoptose, ciclos de célula doente, series dereações de doença funcionais, e avaliação da efetividade de agente farmacêutico nestesprocessos bioquímicos. Empregando estes médicos de metodologia podem rapidamentedeterminar que o derivado de N4 será muito efetivo ao paciente e designará a terapiacorrespondente ou modo de tratamento. Estas vantagens significantes do processo demetodologia sob métodos envolvendo primeiro selecionado uma droga e administrando umcírculo de quimioterapia, que pode envolver meses do tempo do paciente a um custofinanceiro e físico substancial antes da efetividade do agente quimioterapêutico de câncerpode ser determinado.

A presente invenção pode também ser empregada para monitorar o progresso depacientes anteriores que têm tratamento de radiação ou quimioterapia sofrendo bemsucedidamente para determinar se câncer ter permanecido em remissão ou émetastasendo. As pessoas com uma história de câncer na família ou tem diagnosticadocom um gene associado com câncer pode sofrer monitorando por profissionais de saúdeempregando a metodologia da invenção atual. Os métodos e os agentes farmacêuticos dainvenção atual podem também ser empregados por um profissional de saúde para monitorarse câncer tem iniciado a desenvolver em uma pessoa com fatores de risco de câncer, talcomo exposição ambiental para carcinógenos.

IV. Avaliação de Droga

Certos Iigandos com base em droga da presente invenção pode ser aplicado emmedição a resposta farmacológica de um indivíduo a uma droga. Uma faixa ampla deparâmetros pode ser medida em determinada resposta de um indivíduo a administração deuma droga. Aquele de experiência ordinária na técnica deve ser familiarizar com os tipos derespostas que podem ser medidas. Estas respostas dependem de vários fatores, incluindoa droga particular que está sendo avaliada, a doença particular ou condição para qual oindivíduo está sendo tratado, e características do indivíduo. Os agentes radiorrotuladopodem ser aplicados em avaliação de droga medida.

V. Preparações Farmacêuticas

As composições farmacêuticas da presente invenção compreendem umaquantidade efetiva de um derivado de N4 da presente invenção dissolvida ou dispersada emum veículo farmaceuticamente aceitável. As frases "farmacêutica" ou "farmacologicamenteaceitáveis" se referem às entidades moleculares e composições que não produzem umaadversa, alérgica ou outro desagradável quando administrado a um animal, tal como, porexemplo, um humano, como apropriado. A preparação de uma composição farmacêuticaque contém pelo menos um derivado de N4, tal como um derivado de N4 radiorrotulado, ouingrediente ativo adicional será conhecido por aquele versado na técnica levando em contada presente descrição, como exemplificado pelo Remington Pharmaceutical Sciences, 18Ed. Mack Printing Company, 1990, incorporado aqui por referência. Além disso, paraanimal (por exemplo, humano) administração, será entendido que preparações devemconhecer esterilidade, pirogenicidade, segurança geral e padrões de pureza como requeridopor FDA Office of Biological Standards.

Como empregado aqui, "veículo aceitável farmaceuticamente" inclui qualquer etodos os solventes, meios de dispersão, camadas, tensoativos, antioxidantes, preservativos(por exemplo, agentes antibacterianos, os agentes antifúngicos), agentes isotônicos,agentes retardante de absorção, sais, preservativos, drogas, estabilizadores de droga, géis,aglutinantes, excipientes, agentes de desintegração, lubrificantes, agente adoçante, agentearomatizante, tinturas, tais como materiais e combinações destes, como deve ser conhecidopor aquele de experiência ordinária na técnica (veja, por exemplo, RemingtonPharmaceutical Sciences, 18° Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329,incorporado aqui por referência). Exceto à medida que como qualquer veículo convencionalé incompatível com o ingrediente ativo, seu uso nas composições terapêuticas oufarmacêuticas é contemplado.

Os derivados de N4 da presente invenção podem compreende diferentes tipos deveículos dependendo e será administrado em forma sólido, líquido ou aerossol, e senecessário ser estéril para tal rotina de administração como injeção. A presente invençãopode ser administrada intravenosamente, intradermicamente, intraarterialmente,intraperitonealmente, intralesionalmente, intracranialmente, intraarticularmente,intraprostaticamente, intrapleuralmente, intratracealmente, intranasalmente,intravitrealmente, intravaginalmente, intrarectalmente, topicalmente, intratumoralmente,intramuscularmente, intraperitonealmente, subcutaneosamente, subconjunctival,intravesicularlmente, mucosalmente, intrapericardialmente, intraumbilicalmente,intraocularalmente, oralmente, topicalmente, localmente, injeção, infusão, infusão contínua,células alvo de banho de perfusão localizada diretamente, através de um cateter, através deum lavado, em composições de lipídio (por exemplo, lipossomas), ou por outro método ouqualquer combinação anterior como deve ser conhecido por aquele de experiência ordináriana técnica (veja, por exemplo, Remington Pharmaceutical Sciences, 18° Ed. Mack PrintingCompany, 1990, incorporado aqui por referência).

A quantidade de dosagem atual de uma composição da presente invençãoadministrada a um paciente pode ser determinada através de fatores físicos e fisiológicos talcomo peso corporal, severidade de condição, o tipo de doença sendo tratada, intervençõesterapêuticas prévias ou simultâneas, idiopatia do paciente e na rotina de administração. Omédico responsável para administração, em qualquer caso, determina a concentração deingrediente ativo em uma composição e dose apropriada para o indivíduo individual.

Em certas modalidades, composições farmacêuticas podem compreende, porexemplo, pelo menos cerca de 0,1% de um derivado de N4. Em outras incorporações, ocomposto ativo pode compreende entre cerca de 2% a cerca de 75% em peso da unidade,ou entre cerca de 25% a cerca de 60%, por exemplo, e qualquer faixa produzível aqui. Emoutros exemplos não limitados, uma dose pode também compreende de cerca de 0,1mg/kg/corpo em peso, 0,5 mg/kg/corpo em peso, 1 mg/kg/corpo em peso, cerca de 5mg/kg/corpo em peso, cerca de 10 mg/kg/corpo em peso, cerca de 20 mg/kg/corpo empeso, cerca de 30 mg/kg/corpo em peso, cerca de 40 mg/kg/corpo em peso, cerca de 50mg/kg/corpo em peso, cerca de 75 mg/kg/corpo em peso, cerca de 100 mg/kg/corpo empeso, cerca de 200 mg/kg/corpo em peso, cerca de 350 mg/kg/corpo em peso, cerca de 500mg/kg/corpo em peso, cerca de 750 mg/kg/corpo em peso, a cerca de 1000 mg/kg/corpo empeso ou mais por administração, e qualquer faixa produzível aqui. Os exemplos nãolimitados de uma faixa produzível dos números listados aqui, uma faixa de cerca de 10mg/kg/corpo em peso a cerca de 100 mg/kg/corpo em peso, etc., pode ser administrado,baseado nos números descritos acima.

Em qualquer caso, a composição pode compreende vários antioxidantes pararetardar oxidação de um ou mais componente. Adicionalmente, a prevenção da ação demicroorganismos pode ser realizada através de preservativos tais como váriosantibacteriano e agentes antifúngicos, incluindo, porém não limitado a parabenos (porexemplo, metilparabenos, propilparabenos), clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal oucombinações destes.

O derivado de N4 pode ser formulado em uma composição em uma base livre,forma neutra ou salgada. Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais formados comos derivados de grupos de carboxila livre de bases inorgânicas tal como, por exemplo,sódio, potássio, amônio, cálcio ou hidróxidos férricos; ou tais bases orgânicas comoisopropilamina, trimetilamina, histidina ou procaína.Em modalidades onde a composição está em uma forma líquida, um veículo podeser um solvente ou dispersão médio compreendendo, porém não limitado a, água, etanol,poliol (por exemplo, glicerol, glicol de propileno, glicol de polietileno líquido, etc.), Iipidios(por exemplo, triglicerídeos, óleos vegetais, lipossomas) e combinações destes. A própriafluidez pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de uma camada, tal como lecitina; pelamanutenção do requerido tamanho de partícula por dispersão em veículo tal como, porexemplo, poliol líquido ou lipídios; pelo uso de tensoativos tal como, por exemplo,hidroxipropilcelulose; ou combinações destes tais métodos. Em muitos casos, serápreferível para incluir agentes isotônicos, tal como, por exemplo, açúcares, cloreto de sódioou combinações destes.

As soluções injetáveis estéreis são preparadas incorporando-se o derivado de N4na quantidade requerida do solvente apropriado com várias quantidades dos outrosingredientes enumerado acima, como requerido, seguido através de esterilização filtrada.Geralmente, dispersões são preparadas incorporando-se os vários ingredientes ativosesterilizados em um veículo estéril que contém a dispersão básica médio e/ou os outrosingredientes. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis,suspensões ou emulsão, os métodos preferidos de preparação são técnicas de secador avácuo ou secagem por congelamento que produz um pó do ingrediente mais ativo qualqueringrediente desejado adicional de um meio líquido previamente estéril-filtrado médio. Omeio líquido deve ser adequadamente tamponado se necessário e o diluente líquido fezprimeiro isotônico antes da injeção com sal suficiente ou glicose. A preparação decomposições altamente concentradas para injeção direta é também contemplada, onde ouso de DMSO como solvente é previsto para resultar em penetração extremamente rápida,liberando concentrações elevadas dos agentes ativos a uma área pequena.

A composição deve ser estável sob as condições de manufatura e armazenamento,e preservada contra a ação contaminando de microorganismos, tal como bactérias e fungos.Será apreciado que contaminação de endotoxina deve ser mantida minimicamente em umnível seguro, por exemplo, menos do que 0,5 ng/mg de proteína.

Em modalidades particulares, absorção prolongada de uma composição injetávelpode ser realizada pelo uso nas composições de agente retardante de absorção, tal como,por exemplo, monoestearato de alumínio, gelatina ou combinações destes.

Combinação de Terapia

É um aspecto desta invenção que derivado de N4, tal como um derivado de N4 deradiorrotulado, da presente invenção pode ser empregado em combinação com outro agenteou método de terapia, preferivelmente outro tratamento de câncer. O derivado de N4 podepreceder ou segue o outro tratamento de agente por intervalos que variam de minutos asemanas. Em incorporações onde o outro agente e expressão constrói é separadamenteaplicado à cela, a pessoa geralmente asseguraria que um período significante de tempo nãoexpirou entre o tempo de cada entrega, tal que o agente e expressão constrói ainda poderiamostrar um efeito vantajosamente combinado na cela. Por exemplo, em tais exemplos, écontemplado aquele pode contatar a cela, tecido ou organismo substancialmentesimultaneamente com dois, três, quatro ou mais modalidades (isto é, dentro menos do quecerca de um minuto) com o derivado de N4. Em outros aspectos, um ou mais agentespodem ser administrados dentro de cerca de 1 minuto, cerca de 5 minutos, cerca de 10minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 60minutos, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cercade 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas, cerca de 24 horas, cerca de 25 horas,cerca de 26 horas, cerca de 27 horas, cerca de 28 horas, cerca de 29 horas, cerca de 30horas, cerca de 31 horas, cerca de 32 horas, cerca de 33 horas, cerca de 34 horas, cerca de35 horas, cerca de 36 horas, cerca de 37 horas, cerca de 38 horas, cerca de 39 horas, cercade 40 horas, cerca de 41 horas, cerca de 42 horas, cerca de 43 horas, cerca de 44 horas,cerca de 45 horas, cerca de 46 horas, cerca de 47 horas, a cerca de 48 horas ou mais antesde e/ou após administrar o derivado de N4. Em certas outras modalidades, um agente podeser administrado dentro de cerca de 1 dia, cerca de 2 dias, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias,cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, cerca de 7 dias, cerca de 8 dias, cerca de 9 dias, cerca de10 dias, cerca de 11 dias, cerca de 12 dias, cerca de 13 dias, cerca de 14 dias, cerca de 15dias, cerca de 16 dias, cerca de 17 dias, cerca de 18 dias, cerca de 19 dias, cerca de 20, acerca de 21 dias antes e/ou após administrar o derivado de N4. Em algumas situações,pode ser desejável para prolongar o período de tempo para tratamento significativamente,entretanto, onde várias semanas (por exemplo, cerca de 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7 ou cerca de 8 semanas ou mais) lapso entre asadministrações respectivas.

Varias combinações pode ser empregadas, o derivado de N4 é "A" e o agentesecundário, que pode ser qualquer outro agente terapêutico é "B":A/B/A B/A/B B/B/A A/A/B A/B/B B/A/A A/B/B/B B/A/B/BB/B/B/A B/B/A/B A/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A B/B/A/AB/A/B/A B/A/A/B A/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A

A administração da expressão terapêutica de construção da presente invenção aum paciente seguirá protocolos gerais para a administração de quimioterapêutica, levandoem conta a toxicidade, se qualquer, do vetor. É esperado que os ciclos de tratamento deveser repetido como necessário. Também é contemplado que várias terapias padrões, bemcomo também intervenção cirúrgica, pode ser aplicado em combinação com o derivado deN4. Estas terapias incluem, porém não são limitadas a quimioterapia, radioterapia,imunoterapia, terapia de gene e cirurgia.

A. Quimioterapia

As Terapias de câncer também incluem uma variedade de terapias de combinaçãocom ambas substância química e tratamentos com base em radiação. A quimioterapia decombinação incluir, por exemplo, cisplatina (CDDP), carboplatina, procarbazina,mecloretamina, ciclofosfamida, camptotecina, ifosfamida, melfalana, clorambucila,bussulfano, nitrossurea, dactinomicina, daunorrubicina, doxorubicina, bleomicina,plicomicina, mitomicina, etoposídeo (VP16), tamoxifeno, raloxifeno, agentes de ligação dereceptor de estrogênio, taxol, gemcitabien, navelbine, inibidores de transferase de proteínade farnesil, cisplatinaum, 5-fluorouracil, vincristina, vinblastina e metotrexato, ou qualquervariante analógico ou derivado do anteceder.

B. Radioterapia

Outros fatores que causam o dano ao DNA e tem sido empregado extensivamenteincluem o qual são geralmente conhecidos como raios γ, raios x, e/ou a liberação direta deradioisótopos para células de tumor. Outras formas de fatores danificado de DNA sãotambém contemplados tal como microondas e UV-irradiação. É mais provável que todo esteefeito de fatores uma faixa ampla de dano em DNA, nos precursores de DNA, na replicaçãoe reparação de DNA, e na montagem e manutenção de cromossomos. Varias dosagempara faixa de rios χ de doses diária de 50 a 200 de radiações durante períodos prolongadosde tempo (3 a 4 wk), para doses única de 2000 a 6000 de radiações. Varias dosagem pararadioisótopos varia amplamente e depende da meia-vida do isótopo, a força e tipo deradiação emitida, e a captação pelas células de neoplásico. Os termos "contatado" e"exposto", quando aplicado a uma célula, são empregado aqui para descrever o processopor qual uma construção terapêutica e um agente quimioterapêutico ou radioterapêutico sãoliberados a uma célula alvo ou é colocado em justaposição direta com a célula alvo. Paraobter morte de células ou estase, ambos os agentes são liberados a uma célula em umaquantidade combinada efetiva para matar a célula ou prevenir isto de dividir.

C. Imunoterapia

Imunoterapêuticos, geralmente, confiam no uso de células de efetoras imunes emoléculas para mirar para células de câncer eliminadas e alvo. As efetoras imunes podemser, por exemplo, um anticorpo específico para algum marcador na superfície de uma célulade tumor. O anticorpo somente pode servir como uma efetoras de terapia ou poderestabelece outras células para efetuar norte de células realmente. O anticorpo podetambém ser conjugado a uma droga ou toxina (quimioterapêutico, radionucleotídeo, ricina decadeia A, toxina de cólera, toxina da coqueluche, etc.) e serve somente como um agente dealvejamento. Alternativamente, as efetoras podem ser um linfócitos transportando umamolécula de superfície que interage, ou diretamente ou indiretamente, com um alvo decélula de tumor. Várias células de efetoras incluem células de T e células de NK citotóxicas.

Imunoterapia poderia desse modo se empregado como parte de uma terapiacombinada, possivelmente junto com terapia de gene. A aproximação geral para terapiacombinada é descrita abaixo. Geralmente, a célula de tumor deve ser algum marcador queé acessível ao alvejamento, isto é, não está presente na maioria de outras células. Muitosmarcadores de tumor existem e quaisquer destes podem ser adequados para alvejar nocontexto da presente invenção. Os marcadores de tumor comuns incluem antígenocarcinoembrionário, antígeno específico prostático, antígeno associado ao tumor urinário,antígeno fetal, tirosinase (p97), gp68, TAG-72, HMFG, Sialyl Lewis Antigen, MucA, MucB,PLAP, receptor de estrogênio, receptor de laminina, erb B e p155.

D. Terapia de gene

Em ainda outra modalidade, o tratamento secundário é uma terapia de genesecundária na qual um polinucleotídeo terapêutico é administrado antes, após, ou aomesmo tempo um primeiro agente terapêutico. A liberação do agente terapêutico junto comum vetor codificado um produto de gene terá um efeito anti-hiperproliferativo combinado emtecidos alvo.

E. Cirurgia

Cerca de 60% de pessoas com câncer sofrerá cirurgia de algum tipo, que incluipreventivo, diagnostica ou preparação, cirurgia curativa e paliativa. A cirurgia curativa é umtratamento de câncer que pode ser empregado junto com outras terapias, tal como otratamento da presente invenção, quimioterapia, radioterapia, terapia hormonal, terapia degene, terapias alternativas e/ou imunoterapia. A cirurgia curativa inclui resseção na qualtoda ou parte de tecido canceroso é fisicamente ou parcialmente removido, cortado, e/oueliminado. A resseção de tumor se refere a remoção física de pelo menos parte de umtumor. Além disso, a resseção de tumor, o tratamento através de cirurgia a laser,criocirurgia, eletrocirurgia, e cirurgia controlada miscopicalmente (Mohs surgery). Écontemplado adicional que a presente invenção pode ser empregada junto com a remoçãode cânceres superficiais, pré-cânceres, ou quantidades incidentais de tecido normal.

Exemplos

Os exemplos seguintes são incluídos para demonstrar modalidades preferidas dainvenção. Deve ser apreciado aquele versado na técnica que as técnicas descritas nosexemplos que seguem representando técnicas descritas pelo inventor para funcionar bemna prática da invenção, e desse modo podem ser consideradas que constituir modospreferidos para sua prática. Entretanto, aquele versado na técnica deve, devido a presentedescrição, observa que muitas alterações podem ser feitas nas modalidades específicas quesão descritas e ainda obtêm um resultado igual ou similar sem partir do espírito e escopo dainvenção.

Exemplo 1

Proteção de compostos de N4 para substitutos de N-mono

A. Proteção de ciclam com trifluoroacetato de etila

<formula>formula see original document page 32</formula>

4,006 g (20 mmol) de ciclam(1,4,8,11-Tetraazaciclotetradecano) interfere nasolução de 2,79 mL de aminain de trietil 15 ml_ de Metanol secado. 6,92 mL detrifluoroacetato de etila foi adicionado gota a gota à solução superior a temperatura ambientecom agitação. A adição continua durante um período de 5 minutos. A mistura de reaçãohomogênea foi resfriada com um banho de água gelada para controlar o exotérmico suave.A agitação foi continuada sob N2 durante 5 horas. Voláteis foram removidos a vácuo. Oresíduo foi passado por um plug(25g) de sílica-gel pequeno e eluído com 100% de EtOAc.O solvente eluído foi concentrado para determina o produto como uma espuma branca(8,972g, produz 95%).

B. Proteção de ciclen com trifluoroacetato de etila

<formula>formula see original document page 32</formula>

3,445 mg (20 mmol) de ciclen (1,4,7,10-Tetraazaciclododecano) em vez de ciclamfoi empregado nesta reação seguinte o método anterior (Exemplo 1, A). (8,276g, produz93%).

C. Proteção de ciclal com trifluoroacetato de etila

<formula>formula see original document page 32</formula>

4,287g (20 mmol) de ciclal (1,4,8,12-Tetraazaciclopentadecano) em vez de ciclamfoi empregado nesta reação seguinte o método anterior (Exemplo 1, A). (9,227g, produz95%).

Exemplo 2Preparação de derivado de sulfonados e tirosina iodado

<formula>formula see original document page 33</formula>

A. O-alquilação de tirosina com 3-bromopropanol

2953,3 mg (10 mmol) de éster de metil de N-(terc-butoxicarbonil)-L-tirosina (Boc-Tyrabaixo) em 30mL de solução de metanol(anidroso) foi adicionado em 50 ml_ de solução demetanol contendo de 540,2 mg (10 mmol) de sodiommetóxido. 1363 μ!_ (15 mmol) de 3-bromopropanol foi adicionado à solução de Boc-Tyr superior. A mistura foi agitada às 70°Cdurante 6 horas após a temperatura ambiente durante 20 minutos sob atmosfera denitrogênio. A mistura foi dissolvida em 20 ml_ de acetato de etilo após evaporado sobpressão reduzida para remover voláteis. A camada orgânica foi lavada com água (2 X 20ml_), secada com anidroso de sulfato de magnésio e remove o solvente empregandoevaporador rotatório. O líquido claro, tornando-se o sólido branco, hidroxipropil-Boc-Tyr(HOPr-Boc-Tyr abaixo), 2,9158g(produz 82,5%) foi produzido através da cromatografia decoluna empregando sistema de acetato de hexana-etila gradiente. (10:1 a 1:1).

B. Tosilação de 3-hidroxipropil-Boc-Tyr

1413,6 mg (4,0 mmol) de hidroxipropil-Boc-Tyr (HOPr-Boc-Tyr abaixo) em 10 ml depiridina(anidroso) foi despejado na solução de 1143,9 mg (6.0 mmol) de cloreto de p-Toluenossulfonil em 20 ml_ de piridina (anidroso) com agitado em banho de água gelada sobatmosfera de nitrogênio. A mistura foi colocada durante a noite em um refrigerador. Amistura de reação pode ser seguida pelo desenvolvimento de cor, seguido por separação defiltro de hidrocloreto de piridina. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para removerpiridina. O sólido branco, 1,8123g(produz 87,9%) foi produzido através de cromatografia decoluna empregando sistema de acetato de hexana-etila gradiente. (10:1 a 2:1)

C. Síntese de 3-lodopropil-Boc-Tyr (l-Pr-Boc-Tyr abaixo)

O iodeto de potássio 1992,1 mg (12 mmol) foi despejado na solução de TsO-Pr-

Boc-Tyr 1522,8 mg (3,0 mmol) em 15 ml de acetonitrilo (anidroso). A mistura não foidissolvida completamente em solvente e foi permitida a refluxo durante 2 horas. O sólido foifiltrado fora e solução filtrada foi evaporada para remover acetonitrilo. O resíduo estavaisolado através de cromatografia de coluna empregando hexana gradiente: sistema deacetato de etila (10:1 a 10:4). O líquido claro 1324,5 mg foi obtido (produz 95,3%).

Exemplo 3

Preparação de sulfonado e derivado de alfa-metiltirosina1) Di-Boc

2) 3-bromopropanol

3) ρ- toluenossulfonilclorito

4) iodeto de potássio

<formula>formula see original document page 34</formula>

A. N-proteção de tirosina de alfa-metil

Dicarbonato de Di-terc-butil 13,095 g (60 mmol) foi adicionado à solução de alfa-metiltirosina (AMT abaixo) 8,370 g (40 mmol) e amina de trietil (Anidroso) 11,2 mL (80 mmol)em 40 mL de DMF (Anidroso). A mistura foi evaporada sob pressão reduzida seguidafiltrando para livra-se de sólido após agitação durante a noite em temperatura ambiente. Osólido branco (Boc-AMT abaixo) 11,217 g (produz 90,6%) foi obtido através de isolamentode coluna do resíduo empregando sistema de acetato de hexana-etila gradiente (10:1 a10:7).

B. O-alquilação de Boc-AMT com 3-bromopropanol

3,094 g (10 mmol) de Boc-AMT foram empregados e segue empregado o métodoanterior (Exemplo 2, Β). O líquido claro, tornando-se o sólido branco (HO-Pr-Boc-AMTabaixo), 3,289 g (produz 89,5%) foi produzido através da cromatografia de colunaempregando sistema de acetato de hexana-etila gradiente. (10:1 a 10:5)

C. Tosilação de 3-HO-Pr-Boc-AMT

2,940 g (8,0 mmol) de HO-Pr-Boc-AMT foi empregado e seguido como métodosuperior 2-3). O sólido branco (TsO-Pr-Boc-AMT abaixo), 3,493g(produz 83,7%) foiproduzido através da cromatografia de coluna empregando sistema de acetato de hexana-etila gradiente (10:1 a 10:5).

D. Síntese de 3-lodopropil-Boc-Tyr (l-Pr-Boc-Tyr abaixo)

3,130 g (6,0 mmol) de TsO-Pr-Boc-AMT foi empregado e seguido como métodosuperior 2-4). O líquido claro (l-Pr-Boc-AMT abaixo), 2,801 g(produz 97,8%) foi produzidoatravés da cromatografia de coluna empregando sistema de acetato de hexana-etilagradiente. (10:1 a 10:4).

Exemplo 4

Preparação de sulfonado e derivado de Tamoxifeno iodado<formula>formula see original document page 35</formula>

A. Tosilação de Tamoxifeno de 4-hidroximetil-N,N-dietil

1,289g(8,0mmol) de Tamoxifeno de 4-hidroximetil-N,N-dietil (HO-TMX abaixo) foiempregado e seguido como método superior 2-3). O Líquido amarelo pálido (TsO-TMXabaixo), 1,445g(produz 82,5%) foi produzido através de cromatografia de coluna5 empregando hexana gradiente: éter de etila: amina de trietil = 100: 100: 5 a 100: 100: 20)

B. Síntese de 4-lodometil-N,N-dietil

1,168g(2,0mmol) de I-TMX foi empregado e seguido como o método anterior(Exemplo 2, D), o líquido claro (l-TMX abaixo), 1,058g(produz 98,1%) foi produzido apóspassagem curta da cromatografia de coluna empregando hexana gradiente: éter de etila:10 amina de trietil = 100: 100: 1 a 100: 100: 10)

Exemplo 5

Preparação de sulfonado e derivado de Estrona iodada

1) 3-bromopropanol

2) p- toluenossulfonilclorito

3) iodeto de potássio

A. O-alquilação de Estrona com 3-bromopropanol

2,703g(10mmol) de Estrona foi empregado e seguido como método superior 2-2).15 O líquido claro, tornando-se o sólido branco (HO-Pr-EST abaixo), 2,405g(produz 73,2%) foiproduzido através da cromatografia de coluna empregando sistema de acetato de hexana-etila gradiente. (10:1 a 10:5)

B. Tosilação de HO-Pr-EST

1,971g(6,0mmol) de HO-Pr-EST foi empregado e seguido como método superior 2-20 3). O sólido branco (TsO-Pr-EST abaixo), 2,253g(produz 77,8%) foi produzido através dacromatografia de coluna empregando sistema de acetato de hexana-etila gradiente (10:1 a10:5)C. Síntese de 3-lodopropil-EST

1,930g(4,0mmol) de TsO-Pr-EST foi empregado e seguido como método superior2-4). O líquido claro (l-Pr-EST abaixo) 1,720g(produz 98,1%) foi produzido através dacromatografia de coluna que usa sistema de acetato de hexana-etila gradiente. (10:1 a 10:4)

Exemplo 6

Reação de ciclal com 1,3,4,6-Tetra-0-acetil-2-0-trifluorometanossulfonil-beta-Dmannopiranose (precursor para síntese de FDG)

A. Exemplo de N1N',N", N"'-tetra substituindo ciclal-DG

<formula>formula see original document page 36</formula>

1,3,4,6-Tetra-0-acetil-2-0-trifluorometanossulfonil-beta-D-mannopiranose 200 mg(0,416 mmol) interferir na solução de ciclal 22,3mg (0,104 mmol) e amina de trietil 84,2 mg,116 micromL(0,832mmol) em 10mL de DMF(Anidroso). A mistura foi agitada às 50°Cdurante 16 horas sob a atmosfera de nitrogênio e evaporado para remover voláteis. Oresíduo interfere em 1,4-dioxana 6mL, então branco precipitado saiu. O sólido foi jogadofora através de filtragem. 1ml 4N-HCI em solução de 1,4-dioxana foi adicionado em gotaatravés de gota para solução filtrada, então pó marrom pálido precipitado. O sólido foicontrolado com filtragem e secado sob liofilizar.

O sólido foi dissolvido em água ácida de 1N-clorídrico. 3mL de solução e agitadodurante 30 minutos. 1N-NaHC03 foi adicionado a solução superior para pH = ca 9. Asolução foi purificada com membrana (MW corte < 500), e evaporado sob Liofilizar. O sólidomarrom pálido 63,2mg(produz 67,2%) foi controlado.

B. Exemplo de Ν,Ν',Ν'"- tri-substituído por ciclal-DG1,3,4,6-Tetra-0-acetil-2-0-trifluorometanossulfonil-beta-D-mannopiranose200mg(0,416mmol) interferir na solução de ciclal 29,6mg (0,138mmol) e amina de trietil84,2mg, 116micromL(0,832mmol) em DMF(Anidroso) 10mL. A mistura foi agitada às 50degdurante 16 horas sob atmosfera de nitrogênio e evaporado para remover voláteis. O resíduointerferir em 1,4-dioxana 6mL, então branco precipitado saiu. O sólido foi jogado foraatravés de filtragem. 1ml 4N-HCI em solução de 1,4-dioxana foi adicionado em gota atravésde gota para solução filtrada, então pó marrom pálido precipitado.

O sólido foi controlado com filtragem e secado sob liofilizar. O sólido foi dissolvidoem água ácida 1 N-clorídrico. 3mL de solução e agitada durante 30 minutos. 1 N-NaHC03foi adicionado a solução superior para pH = ca 9. A solução foi purificada com membrana(MW corte < 500), e evaporado sob Liofilizar. O sólido marrom pálido 58,8mg(produz57,4%) foi controlado.

C. Exemplo de N,N'-di-substituído por ciclal-DG

1,3,4,6-Tetra-0-acetil-2-0-trifluorometanossulfonil-beta-D-mannopiranose200mg(0,416mmol) interferir na solução de ciclal 44,6mg (0,208mmol) e amina de trietil84,2mg, 116micromL(0,832mmol) em 10mL de DMF(Anidroso). A mistura foi agitada às50deg durante 16 horas sob atmosfera de nitrogênio e evaporada para remover voláteis. Oresíduo interferir em 6mL de 1,4-dioxana, então branco precipitado saiu. O sólido foi jogadofora através de filtragem. 1ml 4N-HCI em solução de 1,4-dioxana foi adicionado em gotaatravés de gota para solução filtrada, então pó marrom pálido precipitado. O sólido foicontrolado com filtragem e secado sob liofilizar.

O sólido foi dissolvido em água ácida de 1N-clorídrico. 3mL de solução e agitadadurante 30 minutos. 1N-NaHC03 foi adicionado a solução superior para pH = ca 9. Asolução foi purificada com membrana (MW corte < 500), evaporado sob Liofilizar. O resíduodissolvido em água mínima. O sólido marrom pálido 23,9mg(produz 19,8%) foi controladoatravés de Liofilizar após isolamento de Sephadex G-75.

D. Exemplo de N-mono substituído por ciclal-DG

1,3,4,6-Treta-0-acetil-2-0-trifluorometanossulfonil-beta-D-mannopiranose 200 mg(0,416 mmol) interferir na solução de N,N',N"'-tris(trifluoroacetil)-ciclal(de Exemplo 1, C)209mg (0,416mmol) e amina de trietil 84,2mg, 116micromL (0,832mmol) em 10mL de DMF(Anidroso). A mistura foi agitada às 50°C durante 6 horas sob atmosfera de nitrogênio eevaporado para remover voláteis.

O resíduo foi interferido em 1,4-dioxana 6mL, então branco precipitado saiu. Osólido foi jogado fora através de filtragem. 1 ml 4N-HCI em solução de 1,4-dioxana foiadicionado em gota através de gota para solução filtrada, então pó marrom pálidoprecipitado. O sólido controlado com filtragem foi dissolvido em água ácida de 1N-clorídrico.3mL de solução e agitada durante 30 minutos. 1N-NaHC03 foi adicionado a soluçãosuperior para pH = ca 9. A solução foi evaporada sob Liofilizar e dissolvida em águamínima. O sólido branco 123,3 mg(produz 78,7%) foi controlado através de Liofilizar apósisolamento de Sephadex G-25.

Exemplo 7

Reação de ciclal com iodado de metiltirosina alfa (AMT)

As condições de reação similar podem ser empregadas para prepara outrosconjugado de agente de alvejamento ciclal.<formula>formula see original document page 38</formula>

Α. Exemplo de N,N',N"'-tetra substituído por AMT

I-AMT 286,4mg (0,6mmol) interferir na solução de ciclal 32,2 mg (0,15mmol) eamina de trietil 83,6μΙ_ (0,6mmol) em 10mL de DMF (Anidroso). A mistura foi agitada às70°C durante 16 horas sob atmosfera de nitrogênio e evaporado para remover voláteis. Aágua ácida de 1N-clorídrico. 5 mL de solução despejado na solução do resíduo evaporandoem 5 mL de etanol. A mistura de reação foi aquecida às 60°C durante 30 minutos semcondensador e resfriado. 1N-NaHC03 foi adicionado a solução superior para pH = ca 9. Osolvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo dissolvidos em água mínima. Asólido branco 91,3mg(produz 52,7%) foi controlado através de Liofilizar após isolamento deSephadex G-75.

B. Exemplo de N,N',N"'-tri-substituído por AMT

I-AMT 286,4mg(0,6mmol) interferir na solução de ciclal 42,9mg(0,2mmol) e aminade trietil 83,6micrlL(0,6mmol) em 10mL de DMF(Anidroso). A mistura foi agitada às 70degdurante 16 horas sob atmosfera de nitrogênio e evaporado para remover voláteis.5mL de solução de água ácida de 1 N-clorídrico despejou na solução do resíduoevaporando em 5mL de etanol. A mistura de reação foi aquecida às 60deg durante 30minutos sem condensador e resfriado. 1N-NaHC03 foi adicionado sob solução superiorpara pH = ca 9. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido emágua mínima. O sólido branco 76,7mg (produz 41,7%) foi controlado através de Liofilizarapós isolamento de Sephadex G-75.

C. Exemplo de N,N'-di-substituído por AMT

I-AMT 286,4mg(0,6mmol) interferir na solução de ciclal 64,3 mg (0,3mmol) e aminade trietil 83,6 μί (0,6mmol) em 10mL de DMF(Anidroso). A mistura foi agitada às 70degdurante 16 horas sob atmosfera de nitrogênio e evaporado para remover voláteis. 5mL desolução de água ácida de 1 N-clorídrico despejou na solução do resíduo evaporando em5mL de etanol. A mistura de reação foi aquecida às 60deg durante 30 minutos semcondensador e resfriado. 1N-NaHC03 foi adicionado sob solução superior para pH = ca 9.O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido em água mínima. Osólido branco 52,3mg (produz 25,9%) foi controlado através de Liofilizar após isolamento deSephadex G-75.D.

D. Exemplo de N-mono substituído por AMTI-AMT 286,4mg(0,6mmol) interferir na solução de N,N',N"-tris(trifluoroacetil)-ciclal(de exemplo 1-3) 301,4mg(0,6mmol) e amina de trietil 83,6micrlL(0,6mmol) em 10mLde DMF (Anidroso). A mistura foi agitada às 70deg durante 6 horas sob atmosfera denitrogênio e evaporado para remover voláteis. 2mL de 1N-potássio carbonato despejado nasolução de resíduo evaporado em 5ml de metanol e permitir manter em 40deg durante 1hora.

9mL de solução de água ácida de 1 N-clorídrico despejou na solução do resíduoevaporando em 5mL de etanol. A mistura de reação foi aquecida às 60deg durante 30minutos sem condensador e resfriado. 1N-NaHC03 foi adicionado sob solução superiorpara pH = ca 9. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido emágua mínima. O sólido branco 233,4mg (produz 86,5%) foi controlado através de Liofilizarapós isolamento de Sephadex G-25.

Exemplo 8

Reação de ciclal com sulfonado de metiltirosina alfa (TsO-AMT)Condições de reação similar por aqueles apresentados aqui podem serempregados para preparar outros conjugados de agentes de alvejamento cicla.

A. Exemplo de N,N',N"'-tetra-substituído por AMT

<formula>formula see original document page 39</formula>

TsO-AMT 313 mg (0,6mmol) interferir na solução de ciclal 32,2 mg (0,15mmol) eamina de trietil 167,2μί (1,2mmol) em 10mL de DMF (Anidroso). A reação foi seguida porexemplo superior de 7-1). O sólido branco 72,3mg(produz 41,7%) foi controlado.

B. Exemplo de N,N',N"-tri-substituído por AMT

TsO-AMT 313mg(0,6mmol) interferir na solução de ciclal 42,9mg(0,2mmol) e aminade trietil 167,2micrlL(1,2mmol) em 10mL de DMF (Anidroso). A reação foi seguida porexemplo superior de 7-2). O sólido branco 56,7mg (produz 30,8%) foi controlado.

C. Exemplo de N,N'-di-substituído por AMT

TsO-AMT 313,Omg (0,6mmol) interferir na solução de ciclal 64,3 mg (0,3mmol) eamina de trietil 167,2 μί(1,2ιτιιτιοΙ) em 10mL de DMF (Anidroso). A reação foi seguida porexemplo superior de 7-3). O sólido branco 45,4mg(produz 22,1%) foi controlado.

D. Exemplo de N-mono substituído por AMT

TsO-AMT 313,0mg(0,6 mmol) interferir na solução de Ν,Ν',Ν'"- tris(trifluoroacetil)-ciclal(por exemplo 1-3) 301,4 mg (0,6mmol) e amina de trietil 167,2 μί (1,2mmol) em 10mLde DMF (Anidroso). A reação foi seguida por exemplo superior de 7-4). O sólido branco197,2 mg (produz 73,1%) foi controlado.

Exemplo 9

Imagem empregando derivado de N4

A. Materiais e Métodos

Reação de ciclam com conjugado de manose de tetra-acetato (N4-DG-ciclam)

1,3,4,6-Tetra-0-acetil-2-0-trifluorometanossulfonil-beta-D-mannopiranose (300 mg,0,625 mmol) em 5 mL de DMF foi adicionado à mistura de 1,4,8,12-tetraazaciclopentacecana (N4) (250,2 mg, 1,237 mmol) e trietilamina (174 microL, 1,249mmol) em 5 mL de DMF. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante6 horas. O solvente de reação foi evaporado para secura às 40-45°C sob vácuo elevado. Asolução de 1,4-dioxana (10 mL) foi então adicionado. O precipitado foi filtrado. O ácidoclorídrico (4N) em solução de 1,4-dioxana (2 mL, 8 mmol) foi adicionado. A mistura foiresfriada em um banho gelado. A mistura foi filtrada através de um funil de Buchner elavada com éter de dietil (2x5 mL). O filtrado foi evaporado para secura, sólido brancoproduzido 383,1 mg (90,8%). 1H-NMR de N4-DG ô(ppm) 88,50 (s, 1H), 3,98-4,01 (m, 1H),3,76 (s, 2H), 3,54-3,60 (m, 9H), 3,38-3,45 (m, 8H), 3,31-3,37 (m, 1H), 3,18-3,22 (m, 1H),2,02-2,31 (m, 4H), 2,15 (s, 12H). 13C-NMR de N4-DG ô(ppm) 197,3, 175,2, 170,4, 165,6,67,0, 66,8, 66,4, 51,7, 45,3, 44,0, 43,6, 43,2, 42,9, 42,5, 41,9, 38,6, 37,5, 37.3, 31.8, 19.5,19.3, 14.5......O esquema sintético é mostrado em FIGURA 1.

Radiorrótuloing de N4-DG (N4-DG-ciclam)

N4-DG (5mg) foi dissolvido em 0.2 água de ml. Tin(II) solução de cloreto (0.1 ml,1 mg/ml) foi somado. Pertechnetate de sódio (Na99mTc04, 37-370 MBq, Mallinckrodt,Houston, o TX) foi somado. Finalmente, foi acrescentada água a esta solução para ajustar ovolume a 1 ml. Pureza de Radioquímica era determinada por TLC (ITLC SG, Ciências deGelman, Ann Arbor, o Ml) eluído com metanol: acetato de amônio (1:4). De rádio-TLCanálise (Bioscan, Washington, a DC), a pureza de radioquímica era mais que 97%.

Por 68Ga-rotulação, 68Ga eram eluído de um 68Ge/68Ga gerador (Laboratórios deProdutos Isótopos, Valença, a CA) usando 1N HCL. A solução ácida foi evaporada a secacom ou portador de GaCI3 somado ou nenhum portador somou. O soultion foi reconstituídoem água. N4-DG (5mg) dissolveu em 0.2 água de ml foi acrescentado então à soluçãoradioativa.

Em Vitro Captação Celular de 99mTc-N4-DG (N4-DG-ciclam) e N4-DG-ciclal)

Dois cela de câncer diferente enfileira (NSCLC A549 pulmonar humano, enfrente13762) era empregado para ensaios de captação celulares. As linhas de cela foram obtidasde Coleção de Cultura de Tipo americana (Rockville, MD). As celas foram chapeadas a 12poços tecido cultura prato que conteve bem 50,000 por cada. 4 pCi (0.148 MBq) de 99mTc -e 68Ga-N4-DG ou N4 (0.1 mg/cavidades) foi acrescentado bem a cada. Foram incubadascelas com radiotraçadores às 37oC a intervalos de tempo diferentes. Depois de incubação,celas foram lavadas com gelo-frio fosfato-tamponado salino (PBS) duas vezes e trypsinizedcom 0.5 ml de solução de tripsina. Então foram colecionadas celas e a radioatividade estavamedida por contador de gama. São expressados dados em mean±SD por cento captaçãorelação de três medidas.

Biodistribution de 99mTc-N4-DG em Ratos de Tumor-porte de PeitoOs animais foram morados em A Universidade de Texas M. D. Anderson facilidadede Centro de Câncer. Tudo protocolam envolvendo animais (ratos e coelhos [veja abaixo]) éaprovado pelo M. D. Anderson Animal Uso e Comitê de Cuidado. Fischer-344 Ratos(150±25g) (Harlan Sprague-Dawley, Indianapolis1 EM) (n=18) foi inoculadosubcutaneosamente com rato peito adenocarcinoma celas (106 células/rodent) na região demadeira em pernas que usam agulhas de 25-medida. Os estudos foram executados 12 a 15dias depois de inoculação. Tumor classifica segundo o tamanho aproximadamente 1 cmestava medido. Biodistribution estuda usando 99mTc-N4-DG foi administrado. Os roedoresforam divididos em três grupos, cada grupo que representa um intervalo de tempo (0.5, 2, e4 hrs, n=3/time apontam) e contendo total 9 roedores por combinação. A atividade deinjeção era 25±0.5 (Ci (0.925±0.019 MBq)/rat. A massa injetada de 99mTc-N4-DG era 0.1mg/rodent. Administração seguinte do radiotraçadores, os ratos foram sacrificados e ostecidos selecionados foram cortados, foram pesados e foram contados para radioatividade.O biodistribution de investigador em cada amostra foi calculado como porcentagem da doseinjetada por grama de tecido molhe peso (% ID/g). Foram calculadas Tumor/nontarget tecidoconta densidade relações do corresponder% valores de ID/g.

Cintilográfico Imagem Estudos

Fischer feminino 344 ratos (150±25 g) (Harlan Sprague-Dawley, Indianapolis, EM)foi inoculado subcutaneosamente com 0.1 ml de células de tumor mamárias da 13762 tumorcela linha suspensão (106 células/rat, uma linha de cela de tumor específico a Fischer ratos)nas pernas de hind. Foram executados estudos de Imagem 12 a 15 dias depois deinoculação. Tumor classifica segundo o tamanho aproximadamente 1-1.5 cm estava medido.

Foram obtidas imagens de Cintilográfico usando uma M-máquina fotográfica de SiemensSistemas Médicos (Propriedades de Hoffman, IL). A máquina fotográfica foi equipada comum collimator de paralelo-buraco de baixo-energia. O campo de visão é 53.3 cm χ 38.7 cm.A resolução de espaço intrínseca é 3.2 mm e o tamanho de pixel é 19.18 mm (32x32, zoom= 1) para 0.187 mm (1024x1024, zoom = 3.2). Com uma baixo-energia, collimator de alto-resolução (como exigido com 99mTc), o sistema é projetado para uma sensibilidade deplanar de pelo menos 172 counts/minute (cpm)/(Ci e resolução de espaço de 4-20 mm.uPET era empregado para PET imagem estuda (0.5 mCi/rat).Cintigrafia plana foi obtido a 0.5-4 hrs imediato depois de i.v. injeção de 99mTc-N4-DG ou 99mTc-N4 (0.3 mCi/rat; mass/rabbit de 0.1 mg). Comparar a acumulação deradiotraçador, ROIs (região de interesse em contas por pixel) era determinado. O ROIscontam entre tumor e músculo foi empregado para calcular tumor-para-nontumor relações.

B. Resultados

Em Vitro Estudos de Captação Celulares

Havia uma captação aumentada de 99mTc - ou 68Ga-N4-DG ou 99mTc-N4-AMTcomo uma função de tempo de incubação nas linhas de cela de câncer testadas (FIGURA 2,FIGURA 3, FIGURAS 4A-C). Captação de 99mTc-N4 como o grupo de controle era menosque 0.5% a qualquer hora ponto.

Biodistribution e Cintilográfico Imagem Estudos

Biodistribution de 99mTc-N4-DG tumor-agüentando ratos mostrou tumor-para-tecido conta densidade relações aumentadas como uma função de tempo (Table2). Imagensde Planar de tumor-agüentar modelos animais confirmaram que os tumores pudessem servisualizados claramente com 99mTc - ou 68Ga-N4-DG (FIGURAS 5A-B, FIGURA 6,FIGURA, 7) e N4-AMT (FIGURA 9, FIGURA 10). Computador esboçou região de interesse(ROI) mostrou aquelas relações de tumor/background em 99mTc-N4-DG grupo foiaumentado como uma função de tempo (FIGURA 8). O ótimo tempo de imagem era 1hr emum modelo de rato.

MESA 2. Biodistribution de 99mTc-N4-DG2-(Ciclam) em Ratos de Tumor-porte dePeito

<table>table see original document page 42</column></row><table>UTERO

0.575 ±0.067 0.294 ±0.032 0.230 ±0.002

MÚSCULO

0.122 ±0.021 0.060 ±0.007 0.048 ±0.002

TUMOR

0.624 ±0.050 0.345 ±0.019 0.274 ±0.020

TIRÓIDE

1.285 ±0.298 0.485 ±0.075 0.314 ±0.031

ESTÔMAGO

0.547 ±0.033 0.331 ±0.038 0.216 ±0.003

T/MÚSCULO

5.348 ±1.347 6.010 ±1.111 5.723 ±0.079

T/BLOOD

0.157 ±0.033 0.297 ±0.023 0.279 ±0.026

H/BLOOD

0.208 ±0.012 0.264 ±0.023 0.257 ±0.010

H/MÚSCULO

7.057 ±0.802 5.328 ±1.007 5.353 ±0.633

Os dados representam a média (desvio-padrão de 3 animais

Todos as composições e métodos descobriram e reivindicou nisto pode ser feito epode ser executado sem experimentação imprópria levando em conta a revelação presente.Enquanto foram descritos as composições e métodos desta invenção em termos deincorporações preferidas, será aparente a esses de habilidade na arte que podem seraplicadas variações às composições e métodos e nos passos ou na sucessão de passos dométodo descrita nisto sem partir do conceito, espírito e extensão da invenção. Maisespecificamente, será aparente que certos agentes que são quimicamente ambos ephysiologicalmente relacionaram pode ser substituído para os agentes descritos nistoenquanto os mesmos ou semelhantes resultados seriam alcançados. Todo tais substitutossemelhantes e modificações aparente para esse qualificado na arte é julgado para estardentro do espírito, extensão e conceito da invenção como definido pelas reivindicaçõesjuntadas.

REFERÊNCIAS

As referências seguintes, para a extensão que eles provêem detalhes processuaisou outros exemplares adicional para esses parta nisto, especificamente está nistoincorporado através de referência.

EUA Patente 4,141,654EUA Patente 5,268,163EUA Patente 5,648,063EUA Patente 5,880,281EUA Patente 5,955,053EUA Patente 5,986,074

EUA Patente 6,691,724EUA Patente 5,605,672EUA Patente 6,071,490EUA Patente 6,613,305EUA Patente 6,737,247

AU Appln. 01/75210A5PCT Appln. WO 01/80906A2PCT Appln. WO 01/91807A2PCT Appln. WO 91/16076A1

Alauddin e Conti, Nucl. Med. Biol., 25(3): 175-180 1998.Alauddin e outros, J. Nucl. Med., 42(11): 1682-1690, 2001.Alauddin e outros, Nucl. Med. Biol., 23(6):787-792 1996.Alauddin e outros, Nucl. Med. Biol., 26:371-376, 1999.Blondeau e outros, Lata. J. Chem., 45:49-52, 1967.Connors, Ann. Oncol., 7(5):445-52, 1996.

Davison e outros, lnorg. Chem., 20:1629-1632, 1980.Gambhir e outros, J. Nucl. Med., 39(11):2003-2011, 1998.Gambhir e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A., 96(5):2333-2338, 1999.Gambhir e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A., 97:2785-2790, 2000.Ourives, Sem. Nucl. Med., 27:85-93, 1997.

Iyer e outros, J. Nucl. Med., 42(1 ):96-105, 2001.Mathias e outros, J. Nucl. Med., 37:1003-1008, 1996.Mathias e outros, J. Nucl. Med., 38:133P, 1997b.Mathias e outros, J. Nucl. Med., 38:87P, 1997a.Namavari e outros, Nucl. Med. Biol, 27(2): 157-162 2000.

Reed, Cela de Câncer, 3:17-22, 2003.

As Ciências Farmacêuticas de Remington, 18° Ed. Mack Printing Companhia, 1289-1329, 1990.

Seabold e outros, J. Nucl. Med., 40(9): 1434-1440,1999.Srivastava e outros, J. Tox. Env. Saúde, 47:173-182, 1996.Surma e outros, Nucl. Med. Comm., 15:628- 635, 1994.

Tjuvajev e outros, J. Nucl. Med., 43(8):1072-1083 ,2002.

Van Nerom e outros, Eur. J. Nucl. Med., 16:417, 1990.

Van Nerom e outros, Eur. J. Nucl. Med., 20:738-746, 1993.

Verbruggen e outros, Eur. J. Nucl. Med., 16:429, 1990.

Verbruggen e outros, J. Nucl. Med., 33:551-557, 1992.

Yaghoubi e outros, J. Nucl. Med., 42:1225-1234, 2001.

Claims

1. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende um composto deN4 conjugado a um Iigante marcado, em que o composto de N4 compreende a fórmula:<formula>formula see original document page 46</formula>em que A1, A2, A3 e A4, são cada um independentemente -(CH2)x-, em que X=2-4; eem que se A1=-(CH2)2-, A3=-(CH2)2-, A2=-(CH2)3- e A4=-(CH2)3-, então o Iigante marcado éescolhido do grupo consistindo de um Iigante marcado de receptor de doença, Iigante dedoença ciclo celular, Iigante marcado de tumor de angiogênese, Iigante marcado de tumorde apoptose e um grupo protetor; e em que se A1=-(CH2)2-, A3=-(CH2)2-, A2=-(CH2)2- e A4=-(CH2)2-, então o Iigante marcado é escolhido do grupo consistindo de um Iigante marcado dereceptor de doença, Iigante de doença ciclo celular, Iigante marcado de tumor de angiogê-nese, Iigante marcado de tumor de apoptose e um grupo protetor.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de queA1=-(CH2)2-, A3=-(CH2)2-, A2=-(CH2)3- e A4=-(CH2)3-, e o Iigante marcado é um receptor dedoença.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de queo receptor de doença é um Iigante marcado de tumor.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de queo Iigante marcado é selecionado do grupo consistindo de tetra-acetato manose, o-/?-tirosina,tirosina, um derivado de tirosina, estrona, tamoxifen e alfa metiltirosina.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de queo receptor de doença é um transportador de glicose.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de queo receptor de doença é um receptor de estrogênio.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de queo receptor de doença é um transportador de aminoácido.

8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de queA1=-(CH2)2-, A3=-(CH2)2-, A2=-(CH2)3- e A4=-(CH2)3-, e o Iigante marcado é um grupo prote-tor.

9. Composto, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de queo grupo protetor é trifluoracetato de etila.

10. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A1=-(CH2)2-, A3=-(CH2)2-, A2=-(CH2)2- e A4=-(CH2)2-, e o Iigante marcado é um receptorde doença.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato deque o receptor de doença é um Iigante marcado de tumor.

12. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato deque o receptor de doença é um transportador de glicose.

13. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato deque o receptor de doença é receptor de estrogênio.

14. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato deque o receptor de doença é um transportador de aminoácido.

15. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato deque o Iigante marcado é selecionado do grupo consistindo de tetra-acetato manose, α-β-tirosina, tirosina, um derivado de tirosina, estrona, tamoxifen e alfa metiltirosina.

16. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A1=-(CH2)2-, A3=-(CH2)2-, A2=-(CH2)2- e A4=-(CH2)2-, e o Iigante marcado é um grupoprotetor.

17. Composto, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato deque o grupo protetor é trifluoracetato de etila.

18. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque o Iigante marcado é escolhido do grupo consistindo de amifostina, angiostatina, anticor-po monoclonal C225, anticorpo monoclonal CD31, anticorpo monoclonal CD40, capecitabi-na, inibidor de COX-2, deóxicitidina, fulereno, herceptina, soro de albumina humana, lactose,hormônio luteinizante, piridoxal, quinazolina, talidomina, tranferrina e trimetil lisina.

19. Composto, de acordo com a reivindicação 18, CARACTERIZADO pelo fato deque o Iigante marcado é um inibidor de COX-2.

20. Composto, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADO pelo fato deque o inibidor de COX-2 é escolhido da lista consistindo de celecoxib, rofecoxib e etoricoxib.

21. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque o Iigante marcado é selecionado do grupo consistindo de tetra-acetato manose, α-β-tirosina, tirosina, um derivado de tirosina, estrona, tamoxifen e alfa metiltirosina.

22. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque o Iigante marcado é um composto anti-câncer.

23. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque o Iigante marcado é hidrofóbico.

24. Composto, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato deque o composto é hidrofóbico.

25. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque o Iigante marcado é um açúcar.

26. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A1=-(CH2)3-, A3=-(CH2)2-, A2=-(CH2)3- e A4=-(CH2)2-.

27. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A1=-(CH2)2-, A3=-(CH2)2-, A2=-(CH2)3- e A4=-(CH2)3-.

28. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A1=-(CH2)2-, A3=-(CH2)3-, A2=-(CH2)3- e A4=-(CH2)3-.

29. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A1=-(CH2)3-, A3=-(CH2)3-, A2=-(CH2)3- e A4=-(CH2)3-.

30. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A1=-(CH2)4-, A3=-(CH2)3-, A2=-(CH2)3- e A4=-(CH2)3-.

31. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A1=-(CH2)4-, A3=-(CH2)3-, A2=-(CH2)4- e A4=-(CH2)3-.

32. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A1=-(CH2)3-, A3=-(CH2)3-, A2=-(CH2)4- e A4=-(CH2)4-.

33. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A1=-(CH2)3-, A3=-(CH2)4-, A2=-(CH2)4- e A4=-(CH2)4-.

34. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A1=-(CH2)4-, A3=-(CH2)4-, A2=-(CH2)4- e A4=-(CH2)4-.

35. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque se A1=-(CH2)2-, A3=-(CH2)2-, A2=-(CH2)3-, então A4 não é -(CH2)3-; quando A1=-(CH2)2-,A3=-(CH2)2-, A2=-(CH2)2-, então A4 não é -(CH2)2-; e o Iigante marcado é um escolhido dogrupo consistindo de um Iigante marcado de receptor de doença, Iigante de doença ciclocelular, Iigante marcado de tumor de angiogênese, Iigante marcado de tumor de apoptose eum grupo protetor.

36. Composto, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADO pelo fato deque o Iigante marcado é um Iigante marcado de receptor de doença.

37. Composto, de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADO pelo fato deque o Iigante marcado de receptor de doença é um Iigante marcado de tumor.

38. Composto, de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADO pelo fato deque o receptor de doença é um transportador de glicose.

39. Composto, de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADO pelo fato deque o receptor de doença é um receptor de estrogênio.

40. Composto, de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADO pelo fato deque o receptor de doença é um transportador de aminoácido.

41. Composto, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADO pelo fato deque o Iigante marcado é um grupo protetor.

42. Composto, de acordo com a reivindicação 41, CARACTERIZADO pelo fato deque o grupo protetor é trifluoracetato de etila.

43. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque adicionalmente possui a fórmula:<formula>formula see original document page 49</formula>em que A1, A2, A3 e A4, são cada um independentemente -(CH2)x-, em que X=2-4; eR1, R2 e R3 são cada um independentemente escolhidos do grupo consistindo de: hidrogê-nio,<formula>formula see original document page 49</formula>em que R4 é escolhido do grupo consistindo<formula>formula see original document page 49</formula>de:<formula>formula see original document page 50</formula>

44. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque o composto é quelado a um átomo de metal.

45. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque o átomo de metal é não radioativo.

46. Composto, de acordo com a reivindicação 45, CARACTERIZADO pelo fato deque o átomo de metal é cobre, cobalto, platina, ferro, arsênio, rênio ou germânio.

47. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque o composto é quelado a um radionuclídeo.

48. Composto, de acordo com a reivindicação 47, CARACTERIZADO pelo fato deque o radionuclídeo é 99mTc, 188Re, 186Re, 183Sm, 166Ho, 90Y, 89Sr, 67Ga, 68Ga, 111In, 183Gd,-59Fe, 225Ac, 212Bi, 211At, 45Ti1 60Cu, 61Cu, 67Cu, 64Cu ou 62Cu.

49. Composto, de acordo com a reivindicação 48, CARACTERIZADO pelo fato deque o radionuclídeo é 68Ga, 90Y, 99mTc, 67Ga ou 188Re.

50. Composto, de acordo com a reivindicação 49, CARACTERIZADO pelo fato deque o radionuclídeo é 99mTc.

51. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque o composto é compreendido em uma composição farmacêutica.

52. Método de tratamento de câncer, CARACTERIZADO pelo fato de que compre-ende administrar a um paciente o composto, conforme definido na reivindicação 1.

53. Método, de acordo com a reivindicação 52, CARACTERIZADO pelo fato de queo paciente é um mamífero.

54. Método, de acordo com a reivindicação 53, CARACTERIZADO pelo fato de queo mamífero é um humano.

55. Método, de acordo com a reivindicação 52, CARACTERIZADO pelo fato de queo composto é quelado a 99mTc1 188Re, 186Re, 183Sm, 166Hol 90Y1 89Sr1 67Ga, 68Ga, 111Inl 183Gd,-59Fe, 225Ac, 212Bi, 211At, 45Ti160Cu161Cu, 67Cu, 64Cu ou 62Cu.

56. Método, de acordo com a reivindicação 55, CARACTERIZADO pelo fato de queo composto é quelado a 99mTc.

57. Método, de acordo com a reivindicação 55, CARACTERIZADO pelo fato de queo composto é administrado em combinação com um segundo composto anti-câncer.

58. Método, de acordo com a reivindicação 55, CARACTERIZADO pelo fato de queo composto é administrado em combinação com terapia de radiação ou cirurgia.

59. Método para imagem, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende admi-nistrar a um paciente o composto conforme definido na reivindicação 1.

60. Método, de acordo com a reivindicação 59, CARACTERIZADO pelo fato de queo paciente é um mamífero.

61. Método, de acordo com a reivindicação 60, CARACTERIZADO pelo fato de queo mamífero é um humano.

62. Método, de acordo com a reivindicação 59, CARACTERIZADO pelo fato de queo composto é quelado a 99mTc, 188Re, 186Re, 183Sm, 166Ho, 90Y1 89Sr, 67Ga, 68Ga1 111In, 183Gd,-59Fe, 225Ac, 212Bi, 211At, 45Ti, 60Cu, 61Cu, 67Cu, 64Cu ou 62Cu.

63. Método, de acordo com a reivindicação 62, CARACTERIZADO pelo fato de queo composto é quelado a 99mTc.

64. Método, de acordo com a reivindicação 59, CARACTERIZADO pelo fato de quea imagem compreende PET imagem.

65. Método, de acordo com a reivindicação 59, CARACTERIZADO pelo fato de quea imagem compreende SPET imagem.

66. Kit, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende o composto, conforme de-finido na reivindicação 1 e um agente redutor.

67. Kit, de acordo com a reivindicação 66, CARACTERIZADO pelo fato de que adi-cionalmente compreende um radionuclídeo.

68. Kit, de acordo com a reivindicação 67, CARACTERIZADO pelo fato de que oradionuclídeo é 99mTc, 188Re, 186Re, 183Sm, 166Ho, 90Y, 89Sr1 67Ga, 68Ga, 111In, 183Gd, 59Fe,225Ac, 212Bi, 211At, 45Ti, 60Cu, 61Cu, 67Cu164Cu ou 62Cu.

69. Kit, de acordo com a reivindicação 68, CARACTERIZADO pelo fato de que oradionuclídeo é 99mTc.

70. Kit, de acordo com a reivindicação 66, CARACTERIZADO pelo fato de que adi-cionalmente compreende um antioxidante.

71. Kit, de acordo com a reivindicação 70, CARACTERIZADO pelo fato de que oantioxidante é vitamina C, tocoferol, piridoxina, tiamina ou rutina.

72. Kit1 de acordo com a reivindicação 71, CARACTERIZADO pelo fato de que oantioxidante é vitamina C.

73. Kit, de acordo com a reivindicação 66, CARACTERIZADO pelo fato de que adi-cionalmente compreende um quelador de transição.

74. Kit, de acordo com a reivindicação 73, CARACTERIZADO pelo fato de que oquelador de transição é glicoheptonato, glicarato, citrato ou tartarato.

75. Kit, de acordo com a reivindicação 74, CARACTERIZADO pelo fato de que oquelato de transição é gliconato ou glicarato.

76. Kit, de acordo com a reivindicação 66, CARACTERIZADO pelo fato de que oagente redutor é cloridrato de estanho (II) ou trifenilfosfina.