BRPI0709594A2 - sistema que compreende nanocápsulas, composições farmacêuticas e cocmética contendo o sistema e processo para a preparação do mesmo - Google Patents

Abstract

<B><UM>SISTEMA QUE COMPREENDE NANOCAPSULAS, COMPOSIçõES FARMACêUTICA E COSMéTICA CONTENDO O SISTEMA E PROCESSO PARA A PREPARAçãO DO MESMO.<D><MV> A invenção se refere a sistemas de nanocápsulas caracterizados porque têm alta estabilidade durante longos períodos de tempo. Estes sistemas são úteis para a liberação controlada de ingredientes cosmeticamente ou farmacologicamente ativos de natureza altamente lipofilica. O sistema compreende nanocápsulas com um tamanho médio inferior a 1 <109>m dispersas em um meio aquoso, em que as nanocápsulas têm uma estrutura compreendendo uma fase lipofílica contendo um componente fosfolipídico e um ou mais ácidos graxos de cadeia C~ 12~-C~ 24~ saturada e/ou insaturada ou derivados dos mesmos; e uma fase hidrofílica que compreende quitosana ou um derivado da mesma e um composto polioxialquilenado.

Description

SISTEMA. QUE COMPREENDE NANO CÁPSULAS, COMPOSIÇÕESFARMACÊUTICA E COSMÉTICA CONTENDO O SISTEMA E PROCESSO PARA

A PREPARAÇÃO DO MESMO

DESCRIÇÃO

CAMPO DA INVENÇÃO

A invenção se refere a sistemas nanoencapsuladoscaracterizados porque têm alta estabilidade durante longosperíodos de tempo. Estes sistemas são úteis para aliberação controlada de moléculas cosmeticamente oufarmacologicamente ativas, especialmente de naturezaaltamente lipofilica. Refere-se especificamente a sistemasque compreendem nanocápsulas dispersas em uma fase aquosa,composições cosméticas e farmacêuticas que os compreendem,assim como a processos para sua preparação.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Os sistemas para a liberação de agentes biologicamenteativos formam um campo de pesquisas em constantedesenvolvimento. É amplamente conhecido no campo damedicina galênica que a administração de ingredientesativos, especialmente aqueles de natureza altamentelipofilica, por via tópica (transdérmica ou pela mucosa) éparticularmente inadequada, devido ao fato que sua altalipofilicidade torna praticamente impossível sua penetraçãoatravés da barreira lipídica epidérmica.

Por esta razão, nas últimas duas décadas, diferentessistemas têm sido desenvolvidos para a liberação deste tipode moléculas que permitem aumentar a biodisponibilidade e aabsorção destes fármacos por via epitelial depois de suaaplicação. Dentre estes sistemas, é de particular interessea preparação de suspensões coloidais tais como lipossomas,microemulsões, nanosferas e nanoparticulas, constituídaspor uma fase oleosa em que o ingrediente ativo éincorporado, disperso em uma fase aquosa em que um ouvários agentes tensoativos são incorporados.

Assim, Calvo et al. [J. Pharm. Pharmacol., 1996, 48,1147-52] revelam sistemas coloidais para a liberação deindometacina por via ocular, consistindo de uma fase oleosade lecitina e poli-e-caprolactona dispersa em uma faseaquosa que contém poloxâmero como um agente tensoativo.

Por sua parte, o pedido EP 760 237 se refere amicroemulsões para a liberação de substâncias insolúveis emágua, tais como ciclosporina, que contém uma fase dispersalipofílica, consistindo de triglicerídios, lecitina e umtensoativo, e uma fase hidrofílica aquosa que contémpropilenoglicol.

O pedido W097/22358 revela microemulsões em que aciclosporina está dissolvida em um sistema que compreendeuma fase hidrofóbica, consistindo de tocoferol ou derivadosdo mesmo, e uma série de componentes hidrofílicos tais comocarbonato de propileno e polietilenoglicol, assim como umtensoativo.

No entanto, o principal inconveniente destes tipos desistemas coloidais é que eles têm uma carga líquidanegativa, de modo que seu contato com certos componentesbiológicos de caráter catiônico (alguma proteína, íons desódio e potássio) causa a neutralização da cargasuperficial, o rompimento do sistema e, conseqüentemente, aperda do ingrediente ativo. Por outro lado, estes sistemascarregados negativamente também podem sofrer uma repulsãoeletrostática por parte das membranas biológicas uma vezque ditas membranas também têm uma carga negativa.

A fim de superar esta limitação, tem sido realizado umimportante trabalho de pesquisa com o propósito dedesenvolver sistemas coloidais que tenham uma carga liquidapositiva e que, portanto, permita que eles sejam absorvidosem ambientes biológicos de caráter catiônico e/ou suaadesão a membranas biológicas, tais como mucosa e pele.

O pedido W096/37232 se refere a sistemas baseados emnanoemulsões, nanocápsulas e nanoparticulas consistindo deum núcleo lipofilico e revestidos com quitosana para aadministração de ingredientes ativos por vias diferentes. Aincorporação do polímero de quitosana hidrofílico na faseaquosa confere a carga líquida positiva ao dito sistema.Desde então, têm sido desenvolvido sistemas que incorporameste polímero ou outros que permitem que se proporcione acarga positiva desejada.

Assim, Calvo et al. [Colloid. Polim. Sci., 1997, 275,46-53] revelam os mesmos sistemas coloidais do pedidomencionado no parágrafo anterior, mas adicionalmenteincorporando poloxâmero como agente tensoativo na faseaquosa, para liberar moléculas lipofílicas usando diazepamcomo modelo. Na mesma linha, a publicação científica de El-Shabouri [Intern. J. Pharmac., 2002, 249, 101-8] descreveum sistema coloidal, em que, além da quitosana, o uso deglicolato de sódio ou gelatina-A na fase aquosa e suacapacidade para liberação de ciclosporina, são analisados.Do mesmo modo, o artigo de Filipovic-Grcic [J.Microencap., 2001, 18(1), 3-12] se refere a sistemasmucoadesivos baseados em um núcleo lipossômico revestidocom quitosana em que um marcador de alto peso molecular éincorporado (fluoresceina isotiocianato-dextrana),analisando a estabilidade de dito sistema em um fluidogástrico simulado como uma função da proporção de quitosanae seu peso molecular.

No entanto, um problema técnico importante associadoao uso deste tipo de sistemas no campo da medicina ecosmetologia, está relacionado a uma instabilidade, tantodurante a armazenagem como depois de sua administração invivo. Especificamente, a composição destes sistemasprovoca, durante armazenagem por períodos de tempo maislongos que um mês e a temperaturas superiores à temperaturaambiente, que o ingrediente ativo seja gradualmenteliberado da fase lipofilica e se mova para a fase aquosa emque o mesmo é insolúvel, levando a sua precipitação e aformação de cristais.

Em vista destes dados, o desenvolvimento de sistemasde nanocápsulas estáveis é especialmente necessário,particularmente para a liberação de ingredientes ativoslipofilicos e que têm, além de uma grande capacidade parauma associação de estas moléculas e sua liberação noambiente biológico apropriado, uma estabilidade que éclaramente melhorada durante sua armazenagem e transporte,características essenciais do ponto de vista daaplicabilidade industrial.Outro problema técnico é que a maioria destes sistemasé instável quando se submetem a processos de esterilização,tais como autoclavagem ou pasteurização. Estes processosenvolvem submeter os sistemas a temperaturas superiores aIOO'C por curtos períodos de tempo. Em geral, estascondições físicas fortes mudam drasticamente a solubilidadedos diferentes componentes e levam ao rompimento deemulsões ou partículas, com a formação de uma fase oleosaonde o ingrediente ativo poderia ser encontrado. Portantoseria altamente desejável encontrar um sistema para aliberação controlada de ingredientes ativos ou ingredientescosméticos com caráter lipofílico, que podem seradministrados topicamente e que sejam estáveis inclusivequando são submetidos e processos de esterilização.

BREVE DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Os inventores encontraram que um sistema denanocápsulas que compreendem um núcleo lipofílico quecompreende um componente fosfolipídico e um óleocompreendendo ácidos graxos de cadeia C12-C24 saturada e/ouinsaturada ou derivados dos mesmos, e uma fase hidrofílicaque compreende quitosana e um composto polioxialquilenado,tem uma alta estabilidade em suspensão aquosa por períodosde tempo de mais de dois anos em condições de armazenagemnormais, o que representa um aspecto chave daexeqüibilidade comercial e industrial destes sistemas.

Adicionalmente permite uma associação eficiente e liberaçãosubseqüente de moléculas altamente lipofílicas.

Uma vantagem adicional derivada destes sistemas é suacapacidade de submeter-se a processo de esterilização aaltas temperaturas enquanto mantém suas estrutura epropriedades, tais como tamanho de partícula e potencial Z.Este aspecto é particularmente relevante quando seu uso érequerido, por exemplo, em aplicações oculares em que aesterilização é compulsória. Além disso, a possibilidade deesterilizar estes sistemas permite a redução, e em algunscasos, a eliminação da necessidade do uso de conservantesnas formulações finais.

Portanto, um objeto da presente invenção consiste deum sistema que compreende nanocápsulas com um tamanho médioinferior a 1 μπι dispersas em um meio aquoso, em que asnanocápsulas têm uma estrutura compreendendo

a) uma fase lipofilica compreendendo:

a.l) pelo menos um componente fosfolipídico; e

a.2) um óleo que compreende um ou mais ácidosgraxos de cadeia C12-C24 saturada e/ou insaturada ouderivados dos mesmos;

b) uma fase hidrofílica compreendendo:

b.l) quitosana ou um derivado da mesma; e

b.2) um composto polioxialquilenado.

Em uma modalidade particular da invenção, o sistema denanocápsulas adicionalmente compreende uma moléculalipofilica ativa na fase lipofilica da nanocápsula, capazde prevenir, aliviar ou curar doenças. Em uma modalidadepreferida, a molécula lipofilica ativa é ciclosporina.

Em uma outra modalidade particular, o sistema denanocápsulas adicionalmente compreende uma moléculabiologicamente ativa de caráter hidrofílico adsorvida nasuperfície da nanocápsula, selecionada de peptídeos,proteínas, hormônios, antigenos/alérgenos, anticorpos,heparina, DNA, RNA e oligonucleotídeos.

Um segundo objeto da invenção se refere a umacomposição farmacêutica compreendendo o sistema definidopreviamente.

Outro objeto da invenção se refere a uma composiçãocosmética compreendendo o sistema definido previamente. Emuma modalidade particular da invenção, dita composiçãocosmética pode adicionalmente incorporar uma moléculacosmeticamente ativa.

Um objeto final da invenção se refere a um processopara a preparação do sistema definido anteriormentecompreendendo:

a) preparação da fase lipofílica pela dissolução docomponente fosfolipidico e o óleo em um solventeorgânico, e opcionalmente uma molécula lipofílica comoingrediente ativo;

b) preparação da fase hidrofílica pela dissolução emágua da quitosana e do composto polioxialquilenado;

c) aquecimento de ambas as fases até uma temperaturaentre 40 e 60°C;

d) mistura da fase lipofílica e hidrofílica comformação espontânea das nanocápsulas;

e) eliminação do solvente orgânico.

Os sistemas e composições da invenção sãoespecialmente adequados para a administração de moléculasbiologicamente ativas com um caráter lipofílico que sãoincorporadas na fase lipofílica das nanocápsulas.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃOO sistema da presente invenção compreende nanocápsulasque estão dispersas em um meio aquoso, em que ditasnanocápsulas têm uma estrutura compreendendo uma faselipofilica, em que um ingrediente ativo pode serincorporado, e uma fase hidrofilica.

O termo "nanocápsula" é entendido como um núcleo denatureza lipofilica cercado por uma fase hidrofilica quecompreende uma quitosana com carga positiva que "encapsula"

O núcleo. A nanocápsula está dispersa em um meio aquoso, emque dito meio aquoso pode compreender quantidadesadicionais de quitosana e/ou de outros polímeroshidrofílicos em dissolução. A interação iônica resultanteentre os diferentes componentes lipofilicos e hidrofílicosda nanocápsula gera entidades físicas características, quesão independentes e observáveis, cujo tamanho médio éinferior a 1 μm, isto é, um tamanho médio entre 1 e 999 nm.

"Tamanho médio" é entendido como o diâmetro médio dapopulação de nanocápsulas, que compreende a fase lipofilicae a fase hidrofilica, que se movem juntos no meio aquoso. Otamanho médio destes sistemas pode ser medido usandoprocedimentos padrão conhecidos por um técnico no assunto,e que estão descritos, por exemplo, na parte experimental aseguir.

As nanocápsulas do sistema da invenção sãocaracterizadas porque têm um tamanho de partícula médioinferior a 1 μm, preferivelmente têm um tamanho médio entre1 e 999 nm, preferivelmente entre 50 e 800 nm. O tamanhomédio das cápsulas é principalmente influenciado pelaquantidade do componente fosfolipídico (em quantidadesmaiores, o tamanho resultante é menor), pela quantidade epeso molecular da quitosana (o tamanho aumenta com umamaior quantidade ou peso molecular) , a densidade do óleousado, e pelos parâmetros do processo de preparação, taiscomo a velocidade de agitação e a temperatura de ambas asfases no processo de mistura.

Além disso, as nanocápsulas podem ter uma cargasuperficial (medida pelo potencial Z) atribuída aos gruposamina da quitosana, cuja magnitude pode variar entre +1 mVe +7 0 mV.Fase lipofilica

A fase lipofilica que está presente na nanocápsulacompreende pelo menos um componente fosfolipídico e um óleoconsistindo de um ou vários ácidos graxos (C12-C24) decadeia longa saturada e/ou insaturada, ou derivados dosmesmos. Sua função é alojar o ingrediente ativo lipofilicoquando este está presente, tanto se é ativo no sentidofarmacológico como cosmético, o qual será liberado maistarde em um ambiente biológico adequado.Componente fosfolipídico

Na presente descrição o componente fosfolipídico éentendido como sendo um tipo de lipídio iônico, que em suaforma mais simples está compreendido de um glicerol, aoqual dois ácidos graxos (1,2-diacilglicerol) e um grupofosfato estão ligados. Usualmente, o grupo fosfato é ligadopor uma ligação fosfodiéster a outro grupo de átomos, quefreqüentemente contém nitrogênio, tais como colina, serinaou etanolamina e muitas vezes têm uma carga elétrica.Outros fosfolipídios são derivados de aminoálcoolesfingosina ou dihidroesfingosina (esfingolipídios), e nãonecessariamente de glicerol. O composto resultante tem umaparte lipofilica para as cadeias dos ácidos graxos e umaparte hidrofilica para o grupo fosfato e a carga elétrica.

No sistema da invenção o componente fosfolipidico épreferivelmente selecionado de fosfogliceridios,esfingolipídios, cefalina e misturas dos mesmos. Osfosfogliceridios, tais como fosfatidilcolina,fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina,fosfatidilglicerina, fosfatidilinositol,lisofosfatidilcolina e ácido fosfatídico, são lipidiosformados por ácidos graxos, glicerina, ácido fosfórico eálcool (por exemplo, colina, serina, etanolamina, glicerinaou inositol). Esfingolipidios tais como esfingomielinas sãoformados por esfingosina, um ácido graxo, ácido fosfórico eum álcool ou aminoálcool. A cefalina é formada deglicerina, ácido fosfórico, dois ácidos graxos e duas basesalcoólicas (colina e esfingosina).

Em uma modalidade preferida da invenção, o componentefosfolipidico compreende fosfogliceridios. Maispreferivelmente compreende fosfogliceridios selecionados defosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina,lisofosfatidilcolina e ácido fosfatídico ou misturas dosmesmos.

Em outra modalidade preferida, o componentefosfolipidico é lecitina. Preferivelmente é usada lecitinade soja disponível comercialmente, apesar de lecitina deovo também poder ser usada.A lecitina é uma mistura complexa de compostoslipidicos, em que a maioria deles são compostosfosfolipidicos, especificamente fosfatidilcolina,fosfatidiletanolamina e lisofosfatidilcolina. Em geral, aslecitinas são denominadas por seu nome comercial e umnúmero que indica a percentagem de fosfatidilçolina em suacomposição. A percentagem de fosfatidilcolina nas lecitinaspode variar entre 35% até praticamente 100%, no entanto napresente invenção as lecitinas são preferivelmente usadasquando sua percentagem está entre 35% e 75%,preferivelmente entre 35% e 55%. 0 uso de lecitinas com umaporcentagem muito alta (superior a 80%) não é aconselháveldado que proporciona o aumento de presença de óleo livre nasuspensão de nanocápsulas1. Com este respeito, existemvárias lecitinas disponíveis no mercado que têm acaracterística de uma percentagem de fosfatidilcolina denão mais de 80%. Portanto, são usadas preferivelmenteEpikuron 135F, Epikuron 145V, Epikuron 170, Lipoid S30,Lipoid S45 e Lipoid S75.

Do mesmo modo, a razão fosfatidilcolina/fosfatidiletanolamina influencia a formação de nanocápsulascom propriedades de estabilidade adequadas. Portanto, foidemonstrado que o uso de Epikuron 135F, em que a razãofosfatidilcolina/fosfatidiletanolamina é aproximadamente7/1 e a proporção de fosfatidilcolina é superior a 35% nacomposição, proporciona os melhores resultados deestabilidade.

ÓleoO óleo compreendido na fase lipofílica consiste de umou vários ácidos graxos de cadeia C12-C24 insaturados e/ousaturados ou derivados dos mesmos. Exemplos de ditos ácidosgraxos incluem, a pesar de não se limitar a, ácidos graxossaturados tais como ácido láurico, ácido miristico, ácidopalmitico, ácido esteárico, ácido acacidico, ácidocarnacilico, ácido araquidico, ácido behênico, ácidolignocérico ou ácido cerótico; ácidos graxosmonoinsaturados tais como ácido lauroléico, ácidopalmitoléico, ácido oléico, ácido vaccênico, ácidogadoléico, ácido cetoléico, ou ácido erúcico; ácidos graxospoliinsaturados tais como ácido linoléico, ácidolinolênico, ácido gamalinolênico, ácido estearidônico,ácido araquidônico, ácido clupanodônico ou ácidodocosahexaenóico.

Do mesmo modo, derivados destes ácidos graxos podemser usados, entendendo por esta definição aqueles compostoscom um caráter altamente lipofilico e produzidos comoconseqüência da reação do grupo ácido com álcoois ouaminas, tais como, por exemplo, os ésteres ou amidas deditos ácidos graxos. Da mesma maneira, a definição dederivados de ácido graxo inclui aqueles ácidos graxos, seusésteres ou suas amidas que têm hidroxila, grupos éter ougrupos alquila como substituintes de sua cadeia dehidrocarboneto, tais como, por exemplo, ácido cerebrônico,ácido hidroxinervônico, ácido ricinoléico, ácidotuberculosteárico ou ácido fitânico; ou aqueles ácidosgraxos que têm a estrutura cíclica na cadeia dehidrocarboneto, tais como ácido lactobacilico ou ácidochaulmógrico.

Em termos gerais, quaisquer óleos vegetais podem serusados, tais como, por exemplo, óleo de girassol, óleo demilho, óleo de soja, óleo de algodão, óleo de amendoim,óleo de onagra, óleo de borragem, óleo de oliva, óleo decoco, óleo de palma, óleo de semente de cânhamo, óleo demiolo ou semente de abricó, óleo de gérmen de trigo, óleode gérmen de milho, óleo de manteiga de cacau, óleo demacadâmia, óleo de amêndoa, óleo de abacate, óleo decalêndula, óleo de semente de uva, óleo de gergelim, óleode jojoba, óleo de avelã, etc.

Surpreendentemente, foi descoberto que a incorporaçãodeste tipo de óleo na composição das nanocápsulas éparticularmente relevante para dar ao sistema altaestabilidade durante longos períodos de tempo se o mesmofor comparado com outros óleos usados no estado da técnica,tais como os óleos comercialmente chamados Migliol ouLabrafac. Em particular, tem sido observado usando ensaiossimulados em condições aceleradas que o sistema da invençãoé estável durante 5-6 meses, a temperaturas de cerca de37°C, o que é equivalente a quase dois anos em condições dearmazenagem normais à temperatura ambiente. Quando isto écomparado com os resultados de outros tipos de óleos taiscomo Migliol 840 e Labrafac Lipophile (consistindo de umamistura de diésteres ou triglicerídios de ácidos graxos decadeia Cs-Cio saturada) tem sido visto que a estabilidade dosistema aumenta até 6 vezes.Em uma modalidade preferida da invenção, o óleocompreendido na fase lipofilica é óleo de ricino. Dito óleoé obtido por prensagem a frio de sementes de RicinusCommunis L., no entanto, é um produto disponívelcomercialmente. Tem uma composição de ácidos graxos (Ci6-

C18) de cadeia longa: 2% (máximo) de ácido palmítico, 2,5%(máximo) de ácido esteárico, 2,5-6,0% de ácido oléico, 2,5-7,0% de ácido linoléico 1% (máximo) de ácido linolênico e85-92% de ácido ricinoléico.

Fase hidrofilica

A fase hidrofilica compreende quitosana ou um derivadoda mesma e um composto polioxialquilenado que atua comoagente tensoativo, além de água. A função desta fase éprovavelmente recobrir a nanocápsula, além de provê-la comuma a carga positiva que permite a mesma ser absorvidaatravés de ambientes biológicos de caráter catiônico ouabsorção sobre os mesmos.Quitosana

A quitosana é um polímero de origem natural derivadoda quitina (poli-N-acetil-D-glucosamina) , em que uma parteimportante dos grupos acetil do N foram eliminados porhidrólise. 0 grau de desacetilação é preferivelmentesuperior a 40%, mais preferivelmente superior a 60%. Em umavariante está entre 60-98%. Portanto, tem uma estrutura deaminopolissacarídeo e caráter catiônico. Compreende arepetição das unidades monoméricas de fórmula (I) :

<formula>formula see original document page 15</formula>em que η é um número inteiro, e, além disso, unidadesm em que o grupo amina é acetilado, A soma de η + mrepresenta o grau de polimerização, isto é, o número deunidades monoméricas na cadeia de quitosana.

A quitosana usada para produzir as nanocápsulas dapresente invenção tem um peso molecular entre 2 e 2000 kDa,preferivelmente entre 2 e 500 kDa, mais preferivelmenteentre 5 e 150 kDa. Exemplos de quitosanas comerciais quepodem ser usadas são UPG 113, UP CL 213 e UP CL113 quepodem ser obtidas de NovaMatrix, Drammen, Noruega.

Como uma alternativa a quitosana, um derivado da mesmatambém pode ser usado, entendendo como tal uma quitosana emque um ou mais grupos hidroxila e/ou um ou mais gruposamina foram modificados, com o objetivo de aumentar asolubilidade da quitosana ou aumentar a natureza adesiva damesma. Estes derivados incluem, entre outros, quitosanasacetiladas, alquiladas ou sulfonadas, derivados tiolados,tal como é descrito em Roberts, Chitin Chemistry,Macmillan, 1992, 166. Preferivelmente, quando um derivado éusado é selecionado de éteres 0-alquil, ésteres O-acil,trimetilquitosana, quitosanas modificadas compolietilenoglicol, etc. Outros derivados possíveis sãosais, tais como citrato, nitrato, lactato, fosfato,glutamato, etc. Em qualquer caso, um técnico no assuntosabe como identificar as modificações que podem ser feitasna quitosana sem afetar a estabilidade e a exeqüibilidadecomercial da formulação final.Composto polioxialquilenado

Por esta parte, composto polioxialquilenado éentendido como o significado de um polímero hidrofílicosintético de caráter não iônico que tem unidades de óxidode alquileno em sua estrutura, sendo preferido o uso de umpolioxietileno (PEO) ou um copolímero óxido de etileno-óxido de propileno (PEO-PPO - ethylene oxide-propyleneoxide). Neste último caso, quando um copolímero de PEO ePPO é usado, a proporção de PEO no copolímero pode variardentre 10% e 80% em peso, o resto (até 100%) sendo PPO.

Estes polímeros são comercializados com diferentespesos moleculares, no entanto, na presente invenção o usode derivados polioxietilenados que têm pesos molecularesentre 1000 e 25000 é preferido. Em uma modalidadepreferida, o derivado polioxietilenado é um copolímero detrês blocos (PE0-PP0-PE0) , tais como, por exemplo, aquelesdenominados comercialmente Poloxâmero. Têm sido obtidosbons resultados, por exemplo, com Pluronic F68 (Poloxâmero188) .

O composto polioxialquilenado é usado como agentetensoativo no sistema e sua presença é particularmentenecessária para conferir estabilidade ao mesmo, dado que deoutra maneira, as nanocápsulas se agregam durante aarmazenagem. Portanto, em sua ausência, um aumento notamanho de partícula tem sido observado depois de duassemanas a 37°C. Além disso, foi possível demonstrar que aincorporação deste composto quase não afeta o tamanho dasnanocápsulas formadas, tal como pode ser observado natabela I.

Tabela I: Influência da quantidade de poloxâmero naestabilidade da nanocápsula

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Em uma variante da invenção, o sistema tem umaproporção de componente fosfolipidico que estápreferivelmente entre 0,1% e 10% em peso com respeito aopeso total do sistema incluindo a água, preferivelmenteentre 0,5% e 5%, mais preferivelmente entre 1% e 2,5% empeso. Proporções inferiores a 0,1% do componentefosfolipidico poderiam não ser recomendáveis uma vez quepoderia levar a presença de óleo livre na suspensão denanocápsulas; por outro lado, uma proporção superior a 10%poderia levar a formação de partículas e não sistemasencapsulados devido à interação da quitosana com componentelipidico de carga positiva com carga negativa.

Por outro lado, em outra variante da invenção aproporção de óleo no sistema varia desde l%-20%,preferivelmente desde 2,5% e 10%, em peso com respeito aopeso total do sistema incluindo a água. Quantidades menoresenvolvem a redução de ingrediente ativo que pode serencapsulado, enquanto que quantidades maiores tornamnecessário aumentar a proporção de outros componentes, taiscomo o componente fosfolipidico, para evitar a presença deóleo livre no sistema.

Em outra variante da invenção a proporção dequitosana, ou de um derivado da mesma, é preferivelmenteentre 0,05% e 10% em peso com respeito ao peso total dosistema incluindo a água, preferivelmente entre 0,1% e 2%,e mais preferivelmente entre 0,25% e 1%. Proporções maioresque as mencionadas causam um aumento em viscosidade dasuspensão, o que pode ser vantajoso para algumasaplicações, mas dificultam consideravelmente a fase deeliminação do solvente e concentração da fórmula.

Por sua parte, a proporção de compostopolioxialquilenado é preferivelmente entre 0,05% e 10% empeso, preferivelmente entre 0,1% e 5% em peso, maispreferivelmente entre 1% e 2,5%.

Em todos os casos, a proporção restante corresponde emboa parte à água purificada onde as nanocápsulas estãodispersas. Isto não significa que outros ingredientes nãopossam estar presentes, ou nas nanocápsulas (um ou maisingredientes ativos lipofilicos, ingredientes cosméticos,etc), no meio aquoso onde estão dispersas (agentes deviscosidade, conservantes, fragrâncias, etc) ou absorvidossobre as mesmas (ingredientes ativos hidrofilicos, ácidohialurônico, etc).

Em uma variante do sistema da invenção, asnanocápsulas estão dispersas em um meio aquoso queadicionalmente compreende um polímero hidrofílico, cujafunção é dar propriedades de viscosidade ao sistema,aumentando em boa parte a densidade da mesma. A adiçãodeste componente é devido ao sistema de nanocápsulasdispersas em meio aquoso da invenção resultando em algunscasos fluido demais do ponto de vista da sua aplicação,especialmente quando se deseja fabricar composiçõescosméticas ou farmacêuticas semi-sólidas tais como géis,cremes, pomadas ou bálsamos. Entre os polímeroshidrofílicos com caráter de viscosidade os seguintes podemser usados, entre outros, carboidratos e derivados, ácidoscarboxílicos, poliglicóis tais como poli(álcool vinílico),derivados de polivinilpirrolidona, quitosana ou um derivadoda mesma, poloxâmeros, polietilenoglicol, ácido hialurônicoou misturas dos mesmos.

Outra variante da invenção incorpora, depois daformação das nanocápsulas, ácido hialurônico ou seus saisno meio aquoso, devido a suas diferentes propriedades efunções. Por um lado, é absorvido sobre as nanocápsulasvariando algumas de suas propriedades tais como a carga.Por outro lado, tem sido visto que estimula a interação commembranas celulares e mucina (proteína presente na mucosa) .Adicionalmente, dependendo da quantidade usada, podepermanecer dissolvido no meio aquoso e contribuir paramodular a viscosidade do sistema. Em qualquer caso, temsido visto que não afeta negativamente as propriedades dosistema, em particular as medidas de tamanho e potencial Zdo sistema, tal como pode ser visto na tabela II.Tabela II. Tamanho e potencial Z das nanocápsulas

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Um das aplicações mais interessantes do sistema dainvenção é para a administração de moléculas lipofilicas,especialmente quando são compostos farmacologicamente oucosmeticamente ativos. Os sistemas descritos na invençãotêm alta capacidade para a associação de moléculaslipofilicas biologicamente ativas dentro das nanocápsulas.

Portanto, o sistema de nanocápsulas da presenteinvenção pode compreender adicionalmente uma moléculalipofilica biologicamente ativa na fase lipofilica capaz deprevenir, aliviar ou curar doenças.

0 termo "molécula lipofilica biologicamente ativa" serefere a qualquer substância de caráter lipofilico que éusada no tratamento, cura, prevenção ou diagnóstico de umadoença ou que é usada para melhorar o bem estar físico emental de seres humanos e animais. Estas moléculas comcaráter lipofilico podem incluir proteínas, peptídeos,lipídios, oligonucleotídeos modificados (Iipofilizados),corticosteróides, vitaminas lipofilicas, tais como A, D, Ke Ε, agentes antifúngicos, agentes bacteriostáticos,agentes de cura, agentes anti-histamínicos, agentesanestésicos, agentes antipruriginosos, agentesantibióticos, agentes antivirais, agentes anti-sépticos,agentes anti-acne, agentes despigmentantes, agentes anti-seborréicos, agentes imunossupressores, fármacosantiinflamatórios não esteróides (ΑΙΝΕ), fármacosantiinflamatórios derivados de Capsicum.

Em uma modalidade preferida, a molécula lipofilicabiologicamente ativa é ciclosporina.

Em outra modalidade preferida, a molécula lipofilicabiologicamente ativa é um corticosteróide tal como, porexemplo, hidrocortisona, prednisona, fluticasona,prednisolona, triancinolona, acetonido de triancinolona,dexametasona, betametasona, beclometasona, dipropionato debeclometasona.

Em uma variante preferida, o corticosteróide évalerato de betametasona.

A proporção de ingrediente ativo encapsulado nasnanocápsulas pode ser de até 5% em peso com respeito aopeso total do sistema incluindo a água; quantidades maiorespoderiam reduzir a estabilidade do sistema e poderia tornarnecessário adicionar uma quantidade maior de componentefosfolipidico para encapsular todo o ingrediente ativo. Noentanto, a proporção adequada dependerá em cada caso doingrediente ativo a ser encapsulado.

No caso especifico de encapsular ciclosporina comoingrediente ativo, a proporção da mesma no dito sistemadeveria estar preferivelmente entre 0,01% e 5% em peso,mais preferivelmente entre 0,1% e 2%.

Quando valerato de betametasona é incorporado, apercentagem deste ingrediente que seria incluído no sistemaestará preferivelmente no intervalo entre 0,01% e 3%, maispreferivelmente entre 0,05% e 0,5%.

Em outro aspecto da invenção o sistema que compreendeas nanocápsulas também pode ser usado para a administraçãode ingredientes ativos que não têm a natureza altamentelipofílica. Nesse caso, são encapsulados nas nanocápsulas,mas estão absorvidos sobre a superfície destas últimas.

Esta variante pode ser útil para a preparação de sistemasestáveis para a administração de moléculas biologicamenteativas de caráter hidrofílico, tais como peptídeos,proteínas, hormônios (insulina, LRH, LD, etc.),antígenos/alérgenos (toxóide tetânico, toxina difteria,etc.) de acordo com o objetivo é para gerar tolerância ouresposta imune, anticorpos, heparina (baixo peso moleculare não fracionada), DNA, RNA e oligonucleotídeos, entreoutros.

Um segundo objeto da invenção se refere à composiçãofarmacêutica compreendendo o sistema nanoencapsulado talcomo definido anteriormente.

Exemplos de composições farmacêuticas incluem qualquercomposição líquida (isto é, suspensão ou dispersão denanocápsulas) para sua aplicação oral, bucal, sublingual,tópica, ocular, nasal ou vaginal, ou qualquer composição naforma de gel, pomada, creme ou bálsamo para suaadministração tópica, ocular, nasal ou vaginal.Em um aspecto preferido, a formulação é administradavia mucosa. A carga superficial positiva das nanocápsulasproporciona uma melhor absorção dos fármacos nassuperfícies das mucosas por meio de sua interação com amucosa e as superfícies das células epiteliais que sãonegativamente carregadas.

Em outro aspecto preferido, a formulação éadministrada de modo intradérmico ou transdérmico,entendendo como tal, administração através de ou sobre apele. Esta forma de administração é particularmenterelevante uma vez que o sistema da invenção não somenteestimula a absorção e penetração dos fármacos por viatransdérmica, mas também a adesão do sistema na superfíciedérmica e subseqüente liberação controlada do componenteativo (tipo "depósito").

Devido a suas boas propriedades para administraçãosobre ou através da pele, e devido a suas característicasde estabilidade a longo prazo, os sistemas de nanocápsulasda invenção também são bastante adequados para aplicaçõescosméticas.

Portanto, um objeto adicional da presente invençãoconsiste de uma composição cosmética compreendendo osistema de nanocápsulas definido previamente. Estascomposições cosméticas incluem qualquer composição líquida(suspensão ou dispersão de nanocápsulas) ou qualquercomposição compreendendo o sistema da invenção e que estána forma de gel, creme, pomada ou bálsamo para suaadministração tópica. Ditas composições são caracterizadasporque têm propriedades emolientes, protetoras e de curaincluso quando não têm qualquer molécula cosmeticamenteativa associada.

Em uma variante da invenção, a composição cosméticatambém pode incorporar moléculas ativas de naturezalipofilica que, apesar de não ter qualquer efeitoterapêutico, têm propriedades como um agente cosmético.

Entre as moléculas ativas que podem ser incorporadas nasnanocápsulas pode-se citar agentes emolientes,conservantes, substâncias de fragrância, agentes anti-acne,agentes antifúngicos, antioxidantes, desodorantes,antiperspirantes, agentes anti-caspa, despigmentantes,agentes anti-seborréicos, corantes, loções bronzeadoras,absorventes de luz UV, enzimas, substâncias de fragrância,entre outros.

As composições farmacêuticas e cosméticas podem, alémdisso, compreender agentes de controle de pH, tais como,por exemplo, agentes de tampão, que evitam que o pH dacomposição reduza a valores inferiores a 5, agentesantioxidantes, que inibem a oxidação do componentefosfolipidico e o óleo, assim como conservantes que evitammodificações estruturais importantes na formulação.

Portanto, em uma variante, é usado tampão citrato na faselipofilica, que tem uma função dupla que permite controlaro pH e agir ao mesmo tempo como agente antioxidante, eparabenos na fase hidrofilica como agentes conservantes.

Dependendo da sua função, estes componentes adicionaispodem estar presentes nas fases que compõem as nanocápsulasou no meio aquoso onde as últimas estão dispersas outotalmente ou parcialmente absorvidas sobre os mesmos. Umtécnico no assunto pode determinar que componentesadicionais podem ser usados, e se são necessários, muitosdeles sendo de uso comum em composições farmacêuticas ecosméticas.

Um objeto final da invenção se refere ao processo paraa preparação do sistema da invenção tal como definidoanteriormente, e que compreende nanocápsulas. Dito processocompreende, por um lado, a preparação da fase lipofilicapela dissolução do componente fosfolipidico e o óleo em umsolvente orgânico. A incorporação do ingrediente ativolipofilico opcional, tanto farmacêutico como cosmético, érealizada pela dissolução do mesmo em sua fase lipofilicajunto com o componente fosfolipidico e o óleo, sem importara ordem em que os componentes são adicionados na solução.

A escolha do solvente orgânico dependerá em grandeparte do ingrediente ativo incorporado. Embora o uso desolvente orgânico farmacéuticamente aceitável, tais como,por exemplo, etanol e isopropanol ser preferível, em algunscasos, tais como quando se quer encapsular ciclosporina, emque se recorre ao uso de acetona, uma vez que solventestais como etanol ou isopropanol, com alta afinidade pelaciclosporina, causam a difusão do ingrediente ativo à faseaquosa durante a mistura subseqüente da fase aquosa e afase lipofilica, tal como pode ser visto na seguintetabela.

Tabela III. Influência da quantidade de ciclosporina etipo de solvente orgânico na formação de nanocápsulasCarga de solvente

temperatura quitosana resultado

Ciclosporina orgânicoÉ preferível usar a menor quantidade possível desolvente orgânico, uma vez que têm que ser em seguidatotalmente ou parcialmente eliminados durante o resto doprocesso.

Em uma modalidade particular, o solvente orgânico éadicionado a uma quantidade de componente fosfolipídicoentre 0, 005% e 0,015% em peso, uma quantidade de óleo deaproximadamente 0, 025 % em peso e uma quantidade deingrediente ativo entre 0,0025% e 0,005% em peso, todas aspercentagens sendo medidas com respeito ao peso total desolvente orgânico.

Por outro lado, a fase hidrofílica é preparadadissolvendo a quitosana e o composto polioxialquilenado emágua. Em uma modalidade preferida, entre 0,0005% e 0,002%em peso de quitosana e entre 0,001% e 0, 005% em peso decomposto polioxialquilenado são dissolvidos em água, todasas percentagens sendo medidas com respeito ao peso total deágua.

Então, ambas as fases são aquecidas até umatemperatura entre 40° e 60°C, preferivelmente até 50°C eentão são misturadas. Isto é surpreendente, uma vez que nãoé esperado que as nanocápsulas, e um sistema estável, sejamformados neste intervalo de temperaturas. Foi possívelobservar que se forem aquecidas acima deste máximo, aspreparações resultantes poderiam não ser adequadas devido àexistência de óleo livre na suspensão. Ao contrário, seforem aquecidas abaixo de 40°C se observa o inicio dasolidificação dos componentes lipofilicos. Este estágio demistura pode ser realizado tanto adicionando a fase aquosaà fase orgânica, como a fase orgânica à fase aquosa, umavez que a ordem da adição não afeta as características dosistema. Ao misturar ambas as fases, as nanocápsulas sãoformadas espontaneamente por um processo de deslocamento desolvente, em que quando uma fase é incorporada na outra, osolvente orgânico se difunde na fase aquosa, formandogotículas de lipídio consistindo do componentefosfolipídico, o óleo e opcionalmente o ingrediente ativo.Os últimos são caracterizados porque são altamentenegativos, causando a imediata localização da quitosana aoredor deles, por interação iônica devido a sua cargapositiva de polímero, que também causa, além disso, que acarga superficial do sistema também seja positiva.

Uma vez que as nanocápsulas foram formadas, o solventeorgânico usado é eliminado por qualquer método conhecidopor um técnico no assunto. A eliminação do solventeorgânico é devido ao fato de que sua presença não éaconselhável em formulações farmacêuticas.

Então, um dos processos típicos na preparação desistemas de nanocápsulas é a concentração das mesmas paraaumentar a concentração de componente. Na presente invençãofoi observado que o volume inicial pode ser concentrado deforma imprevista até um volume 17 vezes inferior ao daformulação de nanocápsulas, abaixo da qual o sistemapoderia começar a perder estabilidade.

Depois da eliminação do solvente orgânico ou depois doestágio de concentração, agentes adicionais descritosanteriormente podem ser adicionados (agentes deviscosidade, ácido hialurônico ou seus sais, conservantes,etc).

Se o sistema vai ser usado para a administração demoléculas biologicamente ativas não lipofílicas, podem seradicionados depois da formação das nanocápsulas ou depoisda eliminação do solvente orgânico.

Além disso, foi surpreendentemente observado que osistema de nanocápsulas disperso em fase aquosa da presenteinvenção pode ser submetido a processo de esterilização aalta temperatura sem afetar sua estabilidade. Dito processoinclui, por exemplo, um processo de autoclavagem,tindalização, HTST (curta duração a alta temperatura - hightemperature short time) e UHT (temperatura ultra-alta -ultra high temperature). Estes processos são conhecidos portécnicos no assunto e são realizados com o objetivo detornar o sistema da invenção capaz de ser usado emaplicações que necessitem estar esterilizados como é o casode aplicação por via ocular. Do mesmo modo, outra vantagemderivada desta característica é permitir que o uso deconservantes na fabricação de fórmulas comerciais queobjetivam outras vias seja reduzido consideravelmente.

As condições usadas em geral para esterilização poralta temperatura podem ocasionar o derretimento dasnanocápsulas e, portanto, a liberação do ingrediente ativo.No entanto, foi possível observar que as nanocápsulas dapresente invenção mantêm seu tamanho e carga superficialdepois do processo de esterilização e, além disso, osurgimento de cristais de ingrediente ativo no sistema nãoé observado. Isto revela que não há liberação de ditoingrediente ativo das nanocápsulas para a fase aquosa.

Como uma característica adicional, é extremamenteimportante que os sistemas que foram submetidos ao processode esterilização também sejam estáveis durante longosperíodos de tempo, sua estabilidade foi testada em testesacelerados por pelo menos 4 meses a 37°C, equivalente amais que um ano em condições normais, tal como é mostradonos exemplos em anexo à invenção, portanto confirmando aexeqüibilidade industrial e comercial destes sistemas.

A continuação, alguns exemplos ilustrativos sãodescritos os quais revelam as características e vantagensda invenção, no entanto, não devem ser interpretados comolimitantes do objeto da invenção tal como é definido nasreivindicações.

Exemplos

Como processo comum aos exemplos detalhados acontinuação, as nanocápsulas foram caracterizadas do pontode vista de tamanho, potencial Z (ou carga superficial),eficácia de encapsulamento e presença de cristais deciclosporina A. Se realizaram estudos de estabilidade dasnanocápsulas em uma estufa Heidolph (Titramax 1000) e osprocessos de autoclavagem em uma Presoclave 75 (Selecta).

A distribuição de tamanho foi realizada usandoespectroscopia de correlação de fóton (PCS - photoncorrelation spectroscopy; Zeta Sizer, Nano series, Nano-ZS,Malvern Instruments, Reino Unido) obtendo valores detamanho médio da população de nanoparticula.

O Potencial Z foi medido usando anemometria de laser

Doppler (LDA - Laser Doppler Anemometry; Zeta Sizer, Nano

seres, Nano-ZS, Malvern Instruments, Reino Unido). Paradeterminar a mobilidade eletrosférica, as amostras foramdiluídas em água Milli-Q.

A liberação de Ciclosporina A e Valerato debetametasona das nanocápsulas de quitosana foi avaliadavisualmente, observando se havia formação de cristais nafase aquosa e quantificando a concentração de ciclosporinapor HPLC (solubilidade máxima em fase externa 16 μς/πιΐ) ouvalerato de betametasona (solubilidade máxima em faseexterna 5 μς/πιΐ), de acordo com o ingrediente ativoencapsulado. Desta maneira, se a quantidade quantificada nafase externa for igual à solubilidade máxima do ingredienteativo é deduzido que existe formação de cristal, apesar denão ser visível.

A quitosana (Protasan UP Cl 113) usada nos exemplos éde NovaMatrix-FMC Biopolymer, a ciclosporina A de LCLaboratories, o valerato de betametasona de Guinama, o óleode rícino de Galindo, a fosfatidilcolina de Degussa(Epikuron 135F), o poloxâmero 188 de BASF Corporation, aacetona de Vorquímica (Analema) e os produtos restantesusados são de Sigma Aldrich, sacarose, glicose e manitol.

Exemplo 1

Estudo de estabilidade de nanocápsulas de quitosana comciclosporina A em suspensão a 37°CAs nanocápsulas de quitosana com ciclosporina A sãopreparadas tal como descrito a continuação:

a) Preparação da fase oleosa com 250 mg de lecitina,0,5 ml de óleo de ricino, 50 ou 100 mg de ciclosporinaA e 25 ml de acetona.

b) Preparação da fase aquosa com 50 mg de quitosana,125 mg de poloxâmero 188 e 100 ml de água destilada.

c) Ambas as fases são aquecidas até 50°C, e então afase orgânica é adicionada à fase aquosa, asnanocápsulas se formam espontaneamente.

Então, a acetona é eliminada aplicando calor (37°C) avácuo e o volume restante é então concentrado até querestem 10 ml de água.

As nanocápsulas resultantes desta preparação têm umtamanho nanométrico inferior a um micron, e maisespecificamente entre 200-700 nm, potencial Z positivo (+10mV- +7 0 mV) , uma eficiência de encapsulamento deciclosporina A de praticamente 100% (isto foi diretamentequantificado depois da degradação e extração do compostoativo, e indiretamente depois da quantificação na faseaquosa externa).

As nanocápsulas foram submetidas a um estudo deestabilidade durante o qual foram armazenadas a 370C por 6meses, medindo o tamanho de partícula, o potencial Zeapresença de ciclosporina na fase aquosa em intervalos de 1mês. Devido ao fato de que a ciclosporina é insolúvel emágua, no caso de instabilidade a tendência é precipitar eocasionar o surgimento de cristais visíveis.Tabela IV:Características de nanocápsulas de quitosana comciclosporina A (1%) armazenadas a 37°C (Média ± DP).

<table>table see original document page 33</column></row><table>

Tal como mostrado na tabela IV, as nanocápsulas com 1%de ciclosporina, mantêm um diâmetro inferior a um micron,um potencial Z positivo, e são estáveis por pelo menos 2meses a 37°C.

Tabela V:

Características de nanocápsulas de quitosana comciclosporina A (0,5%) armazenadas a 37°C (Média ± DP).

<table>table see original document page 33</column></row><table><table>table see original document page 34</column></row><table>

Tal como pode ser observado na Tabela V, asnanocápsulas de quitosana incorporando ciclosporina A(0,5%), são estáveis por pelo menos 5 meses a 37°C,mantendo um diâmetro inferior a 1 μπ\, potencial Z positivoe a ausência de formação de cristal de ciclosporina A,indicando que a molécula permanece no núcleo oleoso dasnanocápsulas. O sistema é estável com respeito ao tamanho epotencial por um mínimo de 6 meses (tempo máximo doestudo).

Exemplo 2

Estudo de estabilidade de nanocápsulas de quitosana comciclosporina A ao processo de autoclavagem

As nanocápsulas de quitosana com ciclosporina A forampreparadas de acordo com o processo descrito no exemplo 1,e, então, uma alíquota foi submetida a um processo deautoclavagem (120°C por 20 min). O objetivo principal desteestudo foi avaliar se o tamanho e potencial dasnanocápsulas tinham sido modificados durante o processo deautoclavagem.

Tabela VI:

Características de nanocápsulas de quitosana comciclosporina A depois de um processo de autoclavagem (Média± DP)_

<table>table see original document page 34</column></row><table><table>table see original document page 35</column></row><table>

Tal como pode ser observado na Tabela VI, depois doprocesso de autoclavagem, as nanocápsulas mantêm seutamanho e carga superficial. Além disso, depois do processode autoclavagem, não apareciam cristais de ciclosporina A,o que revela que não há liberação significante da moléculaativa das nanocápsulas para a fase aquosa.

Exemplo 3

Estudo de estabilidade de nanocápsulas de quitosana comciclosporina A submetidas a autoclavagem em suspensão a 37 °C

As nanocápsulas de quitosana com ciclosporina A forampreparadas de acordo com o processo descrito no exemplo 1,então foram submetidas a autoclavagem seguindo o processodescrito no exemplo 2, e foram armazenadas a 37°C por 5meses. Com o objetivo de avaliar a estabilidade de seusistema, o tamanho de partícula, o potencial Zea presençade cristais de ciclosporina na fase aquosa foram medidos emintervalos de 1 mês.

Tabela VII:

Características de nanocápsulas de quitosana comciclosporina A submetidas a autoclavagem e armazenadas a37°C (Média ± DP) .<table>table see original document page 36</column></row><table>

As nanocápsulas com ciclosporina A, revestidas comquitosana, e submetidas a autoclavagem, são estáveis a 37°Cpor, pelo menos, 4 meses (tabela VII).

Exemplo 4

Preparação de nanocápsulas de quitosana com valerato debetametasona

As nanocápsulas de quitosana foram preparadas comvalerato de betametasona tal como descrito abaixo:

a) preparação da fase oleosa com 250 mg de lecitina,0,5 ml de óleo de ricino, 10 mg de valerato debetametasona e 25 ml de acetona.

b) preparação da fase aquosa com 50 mg de quitosana,-125 mg de poloxâmero 188 e 100 ml de água destilada.

c) ambas as fases são aquecidas até 50°C, e então afase orgânica é adicionada à fase aquosa, se formamespontaneamente as cápsulas.A eraulsão obtida é concentrada (eliminando o solventeorgânico) até um volume final de 10 ml, aplicando calor(37°C) e vácuo.

As nanocápsulas resultantes dessa preparação têm umtamanho nanométrico inferior a um micron, e maisespecificamente entre 200-600 nm) , potencial Z positivo(+25 mV- +60 mV) , uma eficiência de encapsulamento devalerato de betametasona de 99,9% (isto foi quantificadoindiretamente depois da quantificação da fase aquosaexterna). Mais especificamente, as características físico-químicas e eficiência de encapsulamento das nanocápsulassão descritas na Tabela VIII.

Tabela VIII:

Características físico-químicas e eficiência deencapsulamento de nanocápsulas de quitosana com valerato debetametasona (Média ± DP).

<table>table see original document page 37</column></row><table> Exemplo 5

Estudo de estabilidade de nanocápsulas de quitosana comvalerato de betametasona em suspensão a temperaturaambiente

As nanocápsulas preparadas tal como indicado noexemplo 4, foram submetidas a um estudo de estabilidade, emque foram armazenadas a temperatura ambiente durante 6meses, medindo o tamanho de partícula, o potencial Zeapresença de valerato de betametasona na fase aquosa. Talcomo mostrado na Tabela IX, mantêm tamanho nanométrico,potencial Z positivo, e o valerato de betametasonapermanece nos núcleos lipidicos das nanocápsulas.

Tabela IX:

Características de nanocápsulas de quitosana comValerato de betametasona armazenadas a temperatura ambiente(Média ± DP).

Tempo a

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Exemplo 6

Estudo de estabilidade de nanocápsulas de quitosana comvalerato de betametasona em suspensão a 37°C

As nanocápsulas preparadas tal como indicado noexemplo 4, foram submetidas a um estudo de estabilidade, emque foram armazenadas a 37°C por 6 meses, medindo o tamanhode partícula, potencial Zea presença de valerato debetametasona na fase aquosa. As nanocápsulas de quitosanacom valerato de betametasona são estáveis tal como mostradona tabela X.

Tabela X:Características de nanocápsulas de quitosana comvalerato de betametasona armazenadas a 370C (Média ± DP).

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Claims (29)

1. Sistema que compreende nanocápsulas com umtamanho médio inferior a 1 μιη dispersas em um meio aquoso,caracterizado porque as nanocápsulas têm uma estruturacompreendendo:a. uma fase lipofilica compreendendo:a.1) pelo menos, um componente fosfolipídico; ea.2) um óleo que compreende um ou mais ácidos graxos decadeia C12-C24 saturada e/ou insaturada ou derivados dosmesmos;b. uma fase hidrofilica compreendendo:b.1) quitosana ou um derivado da mesma; eb.2) um composto polioxialquilenado.

2. Sistema, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado porque o componente fosfolipídico compreendefosfoglicerídios, preferivelmente selecionados defosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina,lisofosfatidilcolina, ácido fosfatídico e misturas dosmesmos.

3. Sistema, de acordo com a reivindicação 2,caracterizado porque o componente fosfolipídico compreendelecitina, preferivelmente lecitina de soja.

4. Sistema, de acordo com a reivindicação 3,caracterizado porque a lecitina tem uma proporção defosfatidilcolina entre 35% e 75% em peso, preferivelmenteentre 35% e 55%.

5. Sistema, de acordo com quaisquer dasreivindicações 1 a 4, caracterizado porque o óleocompreende óleo de rícino.

6. Sistema, de acordo com quaisquer dasreivindicações 1 a 5, caracterizado porque o compostopolioxialquilenado é um polioxietileno ou um copolímero deóxido de etileno-óxido de propileno.

7. Sistema, de acordo com a reivindicação 6,caracterizado porque o composto polioxietilenado compreendeum poloxâmero, preferivelmente poloxâmero 188.

8. Sistema, de acordo com quaisquer dasreivindicações 1 a 7, caracterizado porque a proporção decomponente fosfolipidico no sistema está entre 0,1% e 10%em peso com respeito ao peso total incluindo a água,preferivelmente entre 0,5% e 5%, mais preferivelmente entre-1% e 2,5% em peso.

9. Sistema, de acordo com quaisquer dasreivindicações 1 a 8, caracterizado porque a proporção deóleo no sistema está entre 1% e 20% em peso com respeito aopeso total incluindo a água, preferivelmente entre 2,5% e-10%, mais preferivelmente entre 4,5% e 5,5% em peso.

10. Sistema, de acordo com quaisquer dasreivindicações 1 a 9, caracterizado porque a proporção dequitosana no sistema está entre 0,05% e 10% em peso comrespeito ao peso total incluindo a água, preferivelmenteentre 0,1% e 2%, mais preferivelmente entre 0,25% e 1% empeso.

11. Sistema, de acordo com quaisquer dasreivindicações 1 a 10, caracterizado porque a proporção docomposto polioxialquilenado no sistema está entre 0,05% e-10% em peso com respeito ao peso total incluindo a água,preferivelmente entre 0,1% e 5%, mais preferivelmente entre-1% e 2,5%.

12. Sistema, de acordo com quaisquer dasreivindicações 1 a 11, caracterizado porque o meio aquosoadicionalmente compreende um polímero hidrofílico deviscosidade.

13. Sistema, de acordo com a reivindicação 12,caracterizado porque o polímero de viscosidade éselecionado de entre poli(álcool vinílico),polivinilpirrolidona, quitosana, poloxâmeros,polietilenoglicol e misturas dos mesmos.

14. Sistema, de acordo com quaisquer dasreivindicações 1 a 13, caracterizado porque adicionalmentecompreende ácido hialurônico ou quaisquer de seus sais.

15. Sistema, de acordo com quaisquer dasreivindicações 1 a 14, caracterizado porque as nanocápsulastêm um tamanho médio de entre 1 e 999 nm, preferivelmenteentre 50 e 800 nm, mais preferivelmente entre 200 e 700 nm.

16. Sistema, de acordo com quaisquer dasreivindicações 1 a 15, caracterizado porque as nanocápsulastêm uma carga superficial positiva, preferivelmenterepresentada por um potencial Z entre +1 mV e +70 mV.

17. Sistema, de acordo com quaisquer dasreivindicações 1 a 16, caracterizado porque adicionalmentecompreende uma molécula lipofílica biologicamente ativa nafase lipofílica das nanocápsulas.

18. Sistema, de acordo com a reivindicação 17,caracterizado porque as moléculas lipofílicasbiologicamente ativas são selecionadas do grupo consistindode proteínas, peptídeos, lipídios, oligonucleotídeoslipofilizados, corticosteróides, vitaminas lipofilicas,tais como A, D, K e E, agentes antif úngicos, agentesbacteriostáticos, agentes de cura, agentes anti-histaminicos, agentes anestésicos, agentesantipruriginosos, agentes antibióticos, agentes antivirais,agentes anti-sépticos, agentes anti-acne, agentesdespigmentantes, agentes anti-seborréicos, agentesimunossupressores, fármacos antiinflamatórios nãoesteróides (AINE) e antiinflamatórios derivados deCapsilum.

19. Sistema, de acordo com as reivindicações 17ou 18, caracterizado porque a proporção da moléculalipofilica biologicamente ativa na nanocápsula é de até 5%em peso com respeito ao peso total do sistema incluindo aágua.

20. Sistema, de acordo com a reivindicação 17,caracterizado porque a molécula lipofilica é ciclosporina.

21. Sistema, de acordo com a reivindicação 20,caracterizado porque a proporção de ciclosporina nananocápsula está entre 0,01 e 2% em peso com respeito aopeso total do sistema incluindo a água.

22. Sistema, de acordo com a reivindicação 17,caracterizado porque a molécula lipofilica éhidrocortisona, prednisona, fluticasona, prednisolona,triancinolona, acetonido de triancinolona, dexametasona,betametasona, valerato de betametasona, beclometasona,dipropionato de beclometasona, preferivelmente valerato debetametasona.

23. Sistema, de acordo com quaisquer dasreivindicações 1 a 16, caracterizado porque adicionalmentecompreende uma molécula biologicamente ativa de caráterhidrofilico adsorvida na superfície da nanocápsula,selecionada de peptídeos, proteínas, hormônios,antígenos/alérgenos, anticorpos, heparina, DNA, RNA eoligonucleotídeos.

24. Composição farmacêutica, caracterizadaporque compreende um sistema tal como aquele definido emquaisquer das reivindicações 1 a 23.

25. Composição, de acordo com a reivindicação-24, caracterizada porque é para administração por via oral,bucal, sublingual, tópica, ocular, nasal ou vaginal.

26. Composição cosmética, caracterizada porquecompreende um sistema tal como aquele definido em quaisquerdas reivindicações 1 a 19.

27. Composição, de acordo com a reivindicação-26, caracterizada porque compreende uma molécula lipofílicacosmeticamente aceitável que é selecionada de agentesemolientes, conservantes, substâncias de fragrância,agentes anti-acne, agentes antifúngicos, antioxidantes,desodorantes, antiperspirantes, agentes anti-caspa,despigmentantes, agentes anti-seborréicos, corantes, loçõesbronzeadoras, absorventes de luz UV, enzimas e substânciasde fragrância.

28. Composição, de acordo com quaisquer dasreivindicações 24 a 27, caracterizada porque adicionalmentecompreende agentes de controle de pH, agentes antioxidantesou conservantes.

29. Processo para a preparação de um sistema,conforme descrito em quaisquer das reivindicações 1 a 22,caracterizado porque compreende:a. preparação da fase lipofilica dissolvendo ocomponente fosfolipidico e o óleo em um solventeorgânico, e opcionalmente uma molécula lipofilica comoingrediente ativo;b. preparação da fase hidrofilica dissolvendo aquitosana e o composto polioxialquilenado em água;c. aquecimento de ambas as fases até uma temperaturaentre 40 e 60°C;d. misturar a fase lipofilica e hidrofilica agitandocom formação espontânea das nanocápsulas; ee. eliminação do solvente orgânico.