BRPI0710938A2 - formulações contendo compostos de piridazina para o tratamento de doenças neuroinflamatórias - Google Patents

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Linda Van Eldik
Wenhui Hu
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Univ Northwestern
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Abstract

FORMULAçõES CONTENDO COMPOSTOS DE PIRIDAZINA PARA O TRATAMENTO DE DOENçAS NEUROINFLAMATóRIAS. A invenção relaciona-se aos compostos químicos, às composições e aos métodos de fazer e de usar o mesmos. Em particular, a invenção fornece compostos selecionados do piridazina da fórmula (i) é independente hidrogênio, hidróxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcoxi, alqueniloxi, cicloalquil, cicloalquenil, cicloalquinil, cicloalcoxi, arilo, ariloxi, arilalcoxi, aroil, heteroaril, heterociclic, acílico, aciloxi, amino, imino, azido, tiolato, tioalquil, tioalcoxi, tioaril, nitro, ciano, halo, sulfato, sulfenil, sulfinil, sulfonil, sulfonato, sulfóxido, silil, sililoxi, sililalquil, sililtio, =0, =S, fosfonate, ureido, carboxil, carbonila, carbamoil, ou carboxamida; e X é opcionalmente pirimidinil ou piridazinil substituida, um isómero, um sal farmaceuticamente aceitável, ou derivado disso. A invenção ainda relaciona-se às composições que compreendem os compostos, e aos métodos de usar os compostos e as composições para a modulação de caminhos celulares, para o tratamento ou a prevenção de doenças inflamatórios, para a pesquisa, a seleção da droga, e aplicações terapêuticas.

Description

FORMULAÇÕES CONTENDO COMPOSTOS DE PIRIDAZINA PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS NEUROINFLAMATÓRIAS Campo da invenção
A invenção refere-se a compostos químicos, composições e métodos de fazer e utilizar os mesmos. Em particular, a invenção prove compostos de piridazina selecionados, composições compreendendo os compostos, e métodos de utilizar os compostos e composições para modulação de vias celulares, para tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias, para tratamento ou prevenção de condições neurológicas, para pesquisa, triagem de drogas e aplicações terapêuticas.
Antecedentes da invenção O tratamento de condições neurológicas e de distúrbios é de grande importância na medicina e há necessidade de novas drogas e tratamentos para evitar avanço e reverter os danos dessas condições e distúrbios. Neuroinflamação é reconhecida como uma característica proeminente na patologia de muitas doenças e condições neurológicas. Neuroinflamação é um processo que resulta principalmente de ativação anormalmente elevada ou crônica de glia (microglia e astrócitos). Esse estado superativo de glia resulta em níveis aumentados de moléculas de tensão oxidativa e inf lamatório, o que pode levar a dano a neurônios ou morte. O dano neuronal ou morte pode induzir também ativação glial, facilitando a propagação de um ciclo de dano localizado de neuroinflamação (Griffin, WST e outros, Brain Pathol 8: 65-72, 1998) . O ciclo de inflamação foi proposto como um alvo terapêutico potencial no desenvolvimento de novas abordagens para tratar doença inflamatória. Entretanto, a maioria dos meios terapêuticos antiinflamatórios desenvolvidos até a presente data é paliativa e fornecem alívio sintomático de vida curta, mínimo com efeitos limitados sobre o avanço inflamatório da doença. Desse modo, há necessidade de meios terapêuticos inflamatórios que causem impacto sobre o avanço ou prevenção da doença.
Sumário Da Invenção
A presente invenção provê certos compostos de piridazina, composições que compreendem os compostos, e métodos de utilizar os compostos e composições para modulação de vias de células (por exemplo, vias de transdução de sinais) , para tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias, para tratamento ou prevenção de doenças e condições neurológicas, para pesquisa, triagem de drogas, e aplicações terapêuticas. Em particular, a invenção provê genericamente formas de dosagem, formulações e métodos que fornecem risco inferior de efeitos colaterais e/ou produzem perfis farmacocinéticos benéficos, em particular em doenças neuroinflamatórias.
A invenção considera uma composição, em particular uma formulação ou forma de dosagem, eficaz para fornecer risco inferior de efeitos colaterais e/ou perfil farmacocinético benéfico após tratamento compreendendo um composto da fórmula I:
<formula>formula see original document page 3</formula> Onde R1, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, R13 e R14 é independentemente hidrogênio, hidroxila,alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalcóxi, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, sulfato, sulfenila, sulfinila, sulfonila, sulfonato, sulfóxido, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, =S, fosfonato, ureido, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida; e X é opcionalmente pirimidinila ou piridazinila substituída, um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado do mesmo.
Em aspectos da invenção, um composto da fórmula I é fornecido onde R1, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, R13 e R14 é independentemente hidrogênio,hidroxila,alquila,
alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, =S, fosfonato, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida; e X é pirimidinila ou piridazinila, um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado do mesmo.
Em um aspecto, uma composição, formulação ou forma de dosagem é fornecida que é eficaz para fornecer risco inferior de efeitos colaterais e/ou um perfil farmacocinético benéfico após tratamento compreendendo um composto da fórmula II: <formula>formula see original document page 5</formula>
onde R1, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13 e R14 é independentemente hidrogênio, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalcóxi, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroila, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, sulfato, sulfenila, sulfinila, sulfonila, sulfonato, sulfóxido, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, =S, fosfonato, ureido, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida; ou um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado do mesmo.
Em um aspecto da invenção, um composto da fórmula I é fornecido onde R1, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13 e R34 é independentemente hidrogênio, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroila, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, =S, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida; ou um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado do mesmo. Em aspectos da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é alquila; cicloexila, arila, arilalcóxi, aroíla ou heteroarila substituída ou não substituída.
Em um aspecto específico, R1 em um composto da fórmula I ou II é arila, arilalcóxi, aroíla ou heteroarila substituída ou não substituída.
Em certos aspectos da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é:
<formula>formula see original document page 6</formula>
onde R15, R16 e R17 é independentemente hidrogênio, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno,alcóxi,alquenilóxi, cicloalquila,cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalcóxi, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, sulfóxido, sulfato, sulfonila, sulfenila, sulfinila, sulfonato, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, =S,fosfonato, ureido, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida.
Portanto, certos aspectos da invenção consideram uma composição, em particular uma formulação ou forma de dosagem, eficaz para fornecer risco mais baixo de efeitos colaterais e/ou um perfil farmacocinético benéfico após tratamento compreendendo uma quantidade de um composto da fórmula III:
<formula>formula see original document page 7</formula>
onde R4i R5i R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 é independentemente hidrogênio, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi,cicloalquila,cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalcóxi, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroila, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, sulfóxido, sulfato, sulfonila, sulfenila, sulfinila, sulfonato, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, =S, ureido, fosfonato, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida.
Em geral, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 em um composto da fórmula III não podem ser, todos, hidrogênio.
A invenção refere-se aos compostos da fórmula I, II ou III revelada aqui, em particular compostos puros ou substancialmente puros da fórmula I, II ou III.
A invenção também considera a utilização em composições e métodos da invenção de um composto da figura 1, em particular MW01-4-179LKM, MW01-7-084WH, MWOl-7 - 085WH, MW01-7-133WH, MWOl-2-151SRM, MW01-5-188WH ou MW01-7-057, ou isômeros, sais farmaceuticamente aceitáveis ou derivados dos mesmos. Uma composição da invenção, em particular uma formulação ou forma de dosagem, pode ser adicionalmente caracterizada por sua capacidade de reduzir seletivamente ou bloquear regulação ascendente de IL-1β e SlOOB, e/ou reduzir ou evitar perda de PSD-95 e/ou sinaptofisina.
Em aspectos, uma composição da invenção, em particular uma formulação ou forma de dosagem, pode fornecer um risco mais baixo de efeitos colaterais relacionados à QT.
Em aspectos específicos, a invenção prove ainda uma composição, em particular uma formulação ou forma de dosagem, compreendendo um composto da fórmula I, II ou III em uma quantidade terapeuticamente eficaz para tratar uma doença revelada aqui enquanto reduz atividade de inibição em canal de potássio hERG.
Em outro aspecto específico, a invenção prove uma composição, em particular uma formulação ou forma de dosagem, compreendendo um composto da fórmula I, II ou III em uma quantidade terapeuticamente eficaz para tratar uma doença revelada aqui enquanto reduz inibição hERG.
Em outro aspecto específico a invenção provê uma composição, em particular uma formulação ou forma de dosagem, compreendendo um composto da fórmula I, II ou III em uma quantidade terapeuticamente eficaz para tratar uma doença revelada aqui em um sujeito que recebe um meio terapêutico ou tratamento que prolonga o intervalo QT.
A invenção considera uma formulação para o tratamento de uma doença revelada aqui compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula I, II ou III, para fornecer um perfil farmacocinético benéfico, em particular um perfil farmacocinético controlado, em um veículo, excipiente ou portador farmaceuticamente aceitável. Em um aspecto uma formulação compreendendo um composto da fórmula I, II ou III é fornecida o qual está em uma forma ou que foi adaptado para administração a um sujeito para fornecer um perfil farmacocinético benéfico para tratar uma doença revelada aqui. Em uma modalidade, uma forma de dosagem é fornecida de tal modo que a administração da forma de dosagem a um sujeito que sofre de uma doença revelada aqui prove um perfil farmacocinético benéfico resultando em efeitos terapêuticos incluindo reduzir seletivamente ou bloquear regulação ascendente de IL-Ιβ e SIOOB, e/ou reduzir ou evitar perda de PSD-95 e/ou sinaptofisina durante um período de dosagem. Em particular, a composição está em uma forma adaptada para fornecer um perfil f armacocinético benéfico que resulta em um ou mais dos seguintes em um sujeito por um tempo controlado durante um período de dosagem: redução seletiva de regulação ascendente de IL-Ιβ e S100B, e/ou redução de perda de PSD-95 e/ou sinaptofisina.
Em outro aspecto, a invenção refere-se a uma forma de dosagem compreendendo quantidades de um composto da fórmula I, II ou III apropriado para administração a um sujeito para fornecer concentrações eficazes do composto em um ambiente de uso ou uma dose eficaz que resulta em efeitos terapêuticos na prevenção, tratamento ou controle de sintomas de uma doença revelada aqui, em particular uma doença neuroinflamatória. Em aspectos da invenção, o ambiente de uso é o cérebro ou plasma. Em um aspecto adicional, a invenção é dirigida a uma formulação ou forma de dosagem apropriada para administração uma vez, duas ou três vezes por dia para tratar uma doença revelada aqui compreendendo um ou mais compostos da fórmula I, II ou III em uma quantidade eficaz para fornecer risco mais baixo de efeitos colaterais e/ou um perfil farmacocinético benéfico em um período de dosagem.
Em um aspecto ainda adicional, a invenção considera uma forma de dosagem que compreende um ou mais compostos da fórmula I, II ou III em uma quantidade eficaz para manter o composto em uma concentração de droga em plasma e/ou cérebro eficaz que resulta em efeitos terapêuticos no sujeito.
A invenção refere-se adicionalmente a um método de preparar uma formulação estável ou forma de dosagem de um composto da fórmula I, II ou III adaptado para fornecer riscos mais baixos de efeitos colaterais e/ou perfis farmacocinéticos benéficos após tratamento. As formulações podem ser colocadas em um recipiente apropriado e rotulado para tratamento de uma doença indicada. Para administração de uma formulação da invenção, tal rotulação incluiria quantidade, freqüência e método de administração.
A invenção também prove métodos para fazer formulações comercialmente disponíveis que contêm um composto da fórmula I, II ou III que forneça risco mais baixo de efeitos colaterais e/ou um perfil farmacocinético benéfico no tratamento de uma doença revelada aqui.
A invenção refere-se ao uso de pelo menos um composto da fórmula I, II ou III para a preparação de um medicamento para fornecer riscos mais baixos de efeitos colaterais e/ou um perfil farmacocinético benéfico no tratamento de uma doença revelada aqui. A invenção refere-se adicionalmente a usos de uma composição farmacêutica da invenção na preparação de medicamentos para fornecer riscos mais baixos de efeitos colaterais e/ou um perfil farmacocinético benéfico na prevenção e/ou tratamento de uma doença revelada aqui.
Formulações ou medicamentos comercialmente disponíveis podem ser pílulas, tabletes, caplets, cápsulas de gelatina mole e dura, pastilhas, sachês, cachets, vegicaps, gotas líquidas, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossóis (como um sólido ou em um meio líquido) supositórios, soluções injetáveis estéreis e/ou pós, embalados, estéreis, que contêm um composto da fórmula I, II ou III.
Os compostos da fórmula I, II ou III e composições da invenção podem ser administrados de modo terapêutico ou profilático para tratar uma doença revelada aqui, em particular doença neuroinflamatória. Portanto a invenção provê um método para tratar uma doença revelada aqui, em particular uma doença neuroinflamatória, compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz ou quantidade profilaticamente eficaz de um composto da fórmula I, II ou III. Em um aspecto, a invenção provê um método para tratar uma doença revelada aqui em particular uma doença neuroinflamatória compreendendo administrar um composto da fórmula I, II ou III em uma quantidade eficaz para reduzir os riscos de efeitos colaterais e/ou fornecer um perfil farmacocinético benéfico. Em um aspecto, um método é fornecido para tratar uma doença revelada aqui, em particular uma doença neuroinflamatória, compreendendo administrar um composto da fórmula I, II ou III em uma quantidade eficaz para seletivamente inibir regulação ascendente de IL-Ιβ e S100B, reduzir ou evitar perda de PSD-95 e/ou sinaptofisina, e/ou evitar déficit comportamental.
Os aspectos da invenção fornecem métodos para tratar uma doença revelada aqui, em particular uma doença neuroinflamatória, compreendendo administrar um sujeito um composto da fórmula I, II ou III em uma quantidade eficaz para reduzir risco de efeitos colaterais relacionados à QR no sujeito. Certos aspectos da invenção fornecem métodos para tratar uma doença revelada aqui, em particular uma doença neuroinflamatória, compreendendo administrar a um sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula I, II ou III para tratar a doença enquanto reduz atividade inibidora em canal de potássio hERG. Outros aspectos da invenção fornecem métodos para tratar uma doença revelada aqui, em particular uma doença neuroinflamatória, compreendendo administrar a um sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula I, II ou III para tratar a doença enquanto reduz inibição de hERG. Aspectos adicionais da invenção fornecem métodos para tratar uma doença revelada aqui em um sujeito que sofre de uma doença revelada aqui e receber um meio terapêutico ou tratamento que prolongue intervalo de QT compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula I para reduzir os efeitos colaterais relacionados à QT. A invenção também provê um método para tratar e/ou prevenir uma doença revelada aqui em um sujeito compreendendo a administração ao sujeito uma ou mais, em particular duas, três ou quatro dosagens de uma formulação que compreende um ou mais compostos da fórmula I, II ou III em uma quantidade eficaz para manter o composto na concentração de droga eficaz no cérebro e/ou plasma que resulta em efeitos terapêuticos no sujeito.
Em aspectos específicos da invenção, é fornecido um método para tratar em um sujeito uma doença que envolve ou caracterizada por inflamação, em particular neuroinflamação, compreendendo a administração ao sujeito de um composto da fórmula I, II ou III em uma quantidade terapeuticamente eficaz que provê perfis farmacocinéticos benéficos, em um portador, excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
Em um aspecto adicional, a invenção provê um método que envolve a administração a um sujeito de um composto terapêutico da fórmula I, II ou III ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição que compreende um composto da fórmula I, II ou III e um veículo, excipiente ou portador farmaceuticamente aceitável que inibe ou reduz neuroinflamação, ativação de glia, ativação de astrócitos, ativação de microglia, citocinas pró-inflamatórias, enzimas relacionadas à tensão oxidativa, proteínas de fase aguda e/ou componentes da cascata de complemento, e fornecem risco mais baixo de efeitos colaterais relacionados à QT e/ou um perfil farmacocinético benéfico.
A invenção também provê um kit que compreende um ou mais compostos da fórmula I, II ou III, ou uma composição da invenção adaptada para fornecer risco mais baixo de efeitos colaterais e/ou um perfil farmacocinético benéfico. Em um aspecto, a invenção provê um kit para evitar e/ou tratar um distúrbio e/ou doença revelada aqui, compreendendo uma formulação ou forma de dosagem da invenção, um recipiente e instruções para uso.
Esses e outros aspectos, características e vantagens da presente invenção devem ser evidentes para aqueles versados na técnica a partir dos seguintes desenhos e descrição detalhada.
Descrição Das Figuras
A figura 1 mostra as estruturas de MW01-2151SRM, MWO1-6-18 9WH, MWO1-7-107WH, MWO1-4-179LKM, MWO1-7-084WH, MWO1-7-085WH, MW01-7-133WH e MW01-7-057.
A figura 2 representa um esquema sintético para MW01- 3 -18 3WH.
A figura 3 representa um esquema sintético para MW01-2-151SRM.
A figura 4 representa um esquema sintético para MW01-2-15ISRM.
A figura 5 representa um esquema sintético para MW01- 2 -15ISRM.
A figura 6 representa um esquema sintético para MW 01-2-151S RM.
A figura 7 representa um esquema sintético para MW01- 5 -18 8WH.
A figura 8 representa um esquema sintético para MW01 - 5 - 18 8WH .
A figura 9 representa um esquema sintético para MW01-5 -18 8WH.
As figuras 10A e 10B representam esquemas sintéticos para MWOl-6-189WH.
A figura 11 representa um esquema sintético para MW01-7 - 084WH.
A figura 12 representa um esquema sintético para MW01-7-08 5WH.
A figura 13 representa um esquema sintético para MW01- 7 -13 3WH.
A figura 14 representa um esquema sintético para MW01- 7 -10 7WH.
A figura 15 representa um esquema sintético para MW01-7-057.
A figura 16 mostra os gráficos e micrografias ilustrando produção de citocina pró-inflamatória por MW01-5-15ISRM. (A) Inibição dependente de concentração por MW01-5-15ISRM de aumentos induzidos por LPS de IL-Ιβ na linhagem de células microgliais BV2. (B) Acumulação estimulada por LPS do metabólito de NO, nitreto, não foi inibida por MW01-5-115ISRM em concentrações até 33μΜ. (C) MW01-5-1151SRM não suprime produção induzida por LPS de iNOS ou COX-2 em células BV-2 ativadas.
A figura 17 mostra gráficos e micrografias ilustrando produção de citocina pró-inflamatória por MW01-5-189WH. (A) Inibição dependente de concentração por MW01-5-189WH de aumentos induzidos por LPS de IL-Ιβ na linhagem de células microgliais BV2. (B) Acumulação estimulada por LPS do metabólito de NO, nitreto, não foi inibida por MW01-5-189WH em concentrações até 33μΜ. (C) MW01-5-189WH não suprime produção induzida por LPS de iNOS ou COX-2 em células BV-2 ativadas.
A figura 18 mostra gráficos e micrografias ilustrando produção de citocina pró-inflamatória por MWOl-5-107WH. (A) Inibição dependente de concentração por MWOl-5-107WH de aumentos induzidos por LPS de IL-1β na linhagem de células microgliais BV2. (B) Acumulação estimulada por LPS do metabólito de NO, nitreto, não foi inibida por MW01-5-107WH. (C) MWOl-5-107WH também inibiu a produção induzida por LPS de iNOS ou COX-2 em células BV-2 ativadas.
A figura 19 mostra gráficos e micrografias ilustrando produção de citocina pró-inflamatória por MW01-5-179WH. (A) Inibição dependente de concentração por MW01-5-179WH de aumentos induzidos por LPS de IL-1β na linhagem de células microgliais BV2. (B) Acumulação estimulada por LPS do metabólito de NO, nitreto, não foi inibida por MW01-5-179WH em concentrações até 33μΜ. (C) MW01-5-179WH não suprime produção induzida por LPS de iNOS ou COX-2 em células BV-2 ativadas.
A figura 20 mostra gráficos e micrografias ilustrando produção de citocina pró-inflamatória por MW01-5-084WH. (A) Inibição dependente de concentração por MW01-5-084WH de aumentos induzidos por LPS de IL-1β na linhagem de células microgliais BV2. (B) Acumulação estimulada por LPS do metabólito de NO, nitreto, não foi inibida por MW01-5 - 084WH em concentrações até 33μΜ. (C) MW01-5-084WH não suprime produção induzida por LPS de iNOS ou COX-2 em células BV-2 ativadas.
A figura 21 mostra gráficos e micrografias ilustrando produção de citocina pró-inflamatória por MW01-5-085WH. (A) Inibição dependente de concentração por MW01- 5-085WH de aumentos induzidos por LPS de IL-1β na linhagem de células microgliais BV2. (B) Acumulação estimulada por LPS do metabólito de NO, nitreto, não foi inibida por MWOl-5-085WH em concentrações até 33μΜ. (C) MW01-5-085WH não suprime produção induzida por LPS de iNOS ou COX-2 em células BV-2 ativadas.
A figura 22 mostra gráficos e micrografias ilustrando produção de citocina pró-inflamatória por MWOl-5-133WH. (A) Inibição dependente de concentração por MWOl-5-13 3WH de aumentos induzidos por LPS de IL-1β na linhagem de células microgliais BV2. (B) Acumulação estimulada por LPS do metabólito de NO, nitreto, não foi inibida por MW01-5-133WH em concentrações até 33μΜ. (C) MW01-5-133WH não suprime produção induzida por LPS de iNOS ou COX-2 em células BV-2 ativadas.
A figura 23 mostra gráficos e micrografias ilustrando produção de citocina pró-inflamatória por MW01-5-057WH. (A) Inibição dependente de concentração por MW01-5-057WH de aumentos induzidos por LPS de IL-1β na linhagem de células microgliais BV2. (B) Acumulação estimulada por LPS do metabólito de NO, nitreto, não foi inibida por MWOl-5-057WH em concentrações até 33μΜ. (C) MW01-5-057WH não suprime produção induzida por LPS de iNOS ou COX-2 em células BV-2 ativadas.
A figura 24 A-H mostra gráficos que ilustram atividade in vivo de MW01-2-151SRM no modelo de camundongo de infusão Αβ. Os gráficos são de supressão de MW01-2-15ISRM de neuroinflamação induzida por Αβ e dano sináptico e atividade no Y-maze. Seções de hipocampo ou extratos de camundongos infundidos com veículo (controle), camundongos infundidos com Αβ injetados com solvente, e camundongos infundidos com Αβ injetados com MW01-2-151SRM foram avaliados em relação a neuroinflamação por medição dos niveis das citocinas pró-inflamatórias ΙΙ,-Ιβ(Α), TNFa (Β), e S100B (C) , e o número de astrócitos positivos GFAP (D) , F4/80 (E) , o marcador presináptico, sinaptofisina (F) , e avaliado em relação a dano sináptico por análise dos niveis da proteína de densidade pós-sináptica 95 (PSD-95) (G) , e Y-maze (H) . Os dados são de um de dois experimentos independentes, e são a média + SEM para 4-5 camundongos por grupo experimental.
A figura 25 A-E mostra os gráficos que ilustram atividade in vivo de MW01-2-189SRM no modelo de camundongo de infusão Αβ. Os gráficos são de supressão de MW01-2-18 9SRM de neuroinflamação induzida por Αβ e dano sináptico e atividade no Y-maze. Seções de hipocampo ou extratos de camundongos infundidos com veículo (controle), camundongos infundidos com Αβ injetados com solvente, e camundongos infundidos com Αβ injetados com MW01-2-189SRM foram avaliados em relação à neuroinflamação por medição dos níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-iP(A) e S100B (B) , o marcador pré-sináptico, sinaptofisina (C), e avaliado em relação a dano sináptico por análise dos níveis da proteína de densidade pós-sináptica 95 (PSD-95) (D), e Y-maze (H) . Os dados de três amostras na MW01-2-189SRM foram analisados.
A figura 26 A-E mostra os gráficos que ilustram atividade in vivo de MW01-2-084SRM no modelo de camundongo de infusão Αβ. Os gráficos são de supressão de MW01-2-084SRM de neuroinflamação induzida por Αβ e dano sináptico e atividade no Y-maze. Seções de hipocampo ou extratos de camundongos infundidos com veiculo (controle), camundongos infundidos com Αβ injetados com solvente, e camundongos infundidos com Αβ injetados com MWOl- 2 -084SRM foram avaliados em relação a neuroinflamação por medição dos níveis das citocinas pró-inflamatórias ΙL-1β(Α), e S100B (B), o marcador presináptico, sinaptofisina (C), e avaliado em relação a dano sináptico por análise dos níveis da proteína de densidade pós-sináptica 95 (PSD-95) (D), e Y-maze (E) . Os dados são de cinco amostras por grupo analisado.
A figura 27 A-E mostra os gráficos que ilustram atividade in vivo de MWO1-2-085SRM no modelo de camundongo de infusão Αβ. Os gráficos são de supressão de MW01-2-085SRM de neuroinflamação induzida por Αβ e dano sináptico e atividade no Y-maze. Seções de hipocampo ou extratos de camundongos infundidos com veículo (controle), camundongos infundidos com Αβ injetados com solvente, e camundongos infundidos com Αβ injetados com MW01-2-085SRM foram avaliados em relação a neuroinflamação por medição dos níveis das citocinas pró-inf lamatórias ΙL-1β(Α), e S100B (B), o marcador presináptico, sinaptofisina (C), e avaliado em relação a dano sináptico por análise dos níveis da proteína de densidade pós-sináptica 95 (PSD-95) (D), e Y-maze (E) . Os dados são de três amostras na MWOl-2- 085SRM foram analisados.
A figura 28 A-E mostra gráficos que ilustram atividade in vivo de MW01-2-057WH no modelo de camundongo de infusão Αβ. Os gráficos são de supressão de MW01-2-057WH de neuroinflamação induzida por Αβ e dano sináptico e atividade no Y-maze. Seções de hipocampo ou extratos de camundongos infundidos com veículo (controle), camundongos infundidos com Αβ injetados com solvente, e camundongos infundidos com Αβ injetados com MW01-2-057WH foram avaliados em relação a neuroinflamação por medição dos níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-ip(A), e SlOOB (B), o marcador presináptico, sinaptofisina (C), e avaliado em relação a dano sináptico por análise dos níveis da proteína de densidade pós-sináptica 95 (PSD-95) (D), e Υ- maze (E). Os dados são de três amostras na MW01- 2 - 057SRM foram analisados. Não houve efeito significativo sobre PSD-95.
A figura 29 é um gráfico que mostra intervalo QTc de MW01-2 -15ISRM (15 mg/10 ml/kg/po) (Bazetfs). As alterações em QTc após administração oral de MW01-2-151SRM em 15 mg/kg em cobaias. Os intervalos de QT foram corrigidos em relação a alterações de batimento cardíaco utilizando a fórmula de Bazett. As linhas interrompidas representam limites de confiança de 95% (média ± 2SD) para alterações QTc no veículo (2% Tween 80 em água destilada) -controle tratado. Os cinco animais tratados são representados por símbolos individuais.
A figura 30 é um gráfico que mostra intervalo de QTc de Sotalol (0,3 mg/kg/iv) (Bazetfs) . As alterações em QTc após administração intravenosa de Sotalol em 0,3 mg/kg em cobaias. Os intervalos de QT foram corrigidos em relação a alterações de batimento cardíaco utilizando a fórmula de Bazett. As linhas interrompidas representam limites de confiança de 95% (média ± 2SD) para alterações QTc no veículo (0,9% NaCl) - controle tratado. Os cinco animais tratados são representados por símbolos individuais.
A figura 31 é um gráfico que mostra intervalo de QTc de MWO1-2-15ISRM (15 mg/10ml/kg/po) (Fredericia's) . As alterações em QTc após administração oral de MW01-2-151SRM em 15 mg/kg em cobaias. Os intervalos de QT foram corrigidos em relação a alterações de batimento cardíaco utilizando a fórmula de Fredericia. As linhas interrompidas representam limites de confiança de 95% (média ± 2SD) para alterações QTc no veículo (2% Tween 80 em água destilada) - controle tratado. Os cinco animais tratados são representados por símbolos individuais.
A figura 32 é um gráfico que mostra intervalo de QTc de Sotalol (0,3 mg/kg/iv) (Fredericia's). As alterações em QTc após administração intravenosa de Sotalol em 0,3mg/kg em cobaias. Os intervalos de QT foram corrigidos em relação a alterações de batimento cardíaco utilizando a fórmula de Fredericia. As linhas interrompidas representam limites de confiança de 95% (média ± 2SD) para alterações QTc no veículo (0,9% NaCl) - controle tratado. Os cinco animais tratados são representados por símbolos
individuais.
A figura 33 é um gráfico mostrando intervalo de QTc de administração oral de MW01-5-188WH (15 mg/kg p.o.) em cobaia.
A figura 34 são gráficos de resultados de estudos de toxicidade de fígado com MW01-5-188WH, MW01-2-151SRM, e MWO1-6-18 9WH. Os compostos foram administrados a camundongos C57B1/6 por gavagem oral (2,5 mg/dia, uma vez por dia durante 2 semanas). A toxicidade de fígado histológica foi avaliada por exame de arquitetura de tecido, necrose de células e infiltrado inflamatório. A escala de marcação vaia de O (melhor) até 9 (pior). MW01-5-188WH, MWO1-2 -15ISRM e MW01-6-189 não mostram diferenças significativas em marcação de toxicidade de fígado a partir dos camundongos de controle que não recebem gavagem de veículo.
A figura 35 mostra que MW01-5-188WH é prontamente detectado no plasma e cérebro após uma única administração de dose oral e não suprime respostas inflamatórias de tecido periférico ou causam lesão ao fígado após administração oral crônica. Os camundongos C57BL/6 foram administrados MW01-5-188WH (2,5 mg/kg) por gavagem oral, processado em cérebro e sangue em diferentes tempos após administração, e os níveis de composto em plasma e cérebro determinados como descrito aqui. MW01-5-188WH aparece rapidamente em plasma (A) e cérebro (B), atinge um pico em 15 min., e então diminui lentamente até níveis basais em 120 min. Os dados são a mean_SEM de três a seis camundongos em cada ponto de tempo. MW01-5-188WH não inibe produção aumentada de IL-1β (C) e TNF-α (D) no soro porém suprime a resposta de citocina nos cérebros dos mesmos camundongos (E, F). Os camundongos (n = 3 - 6 por grupo) foram administrados por gavagem oral diluente ou MW-01-5-188WH (2,5 mg/kg) uma vez por dia por 2 semanas e então desafiado com LPS (10 mg/kg, i.p.) por 6h. Os camundongos de controle foram injetados com solução salina. Os níveis de IL- 1β e TNF-a no soro e em sobrenadantes do cérebro foram determinados. Os dados representam média±SEM. ***p_0.001, significativamente diferente do diluente. A administração oral diária de diluente (G) ou MW01-5-188WH (H) (2,5 mg/kg) não resulta em nenhuma toxicidade histológica de fígado. Seções representativas de fígado a partir de camundongos tratados como em C-F foram coloridas com hematoxilina e eosina. Barra de escala, 125 μm. 188, foram coloridos com hematoxilina e eosina. Barra de escala, 125 μτη. 188, MWOl-5-188WH.
A figura 36 mostra gráficos de dados de estabilidade utilizando microssomas humanas (A, B) e de rato (C,D) com MW01-2-151SRM em duas quantidades diferentes, por dois períodos de tempo. EeF mostram microssomas humanas (E) e (F) de rato com estabilidade de MWOl-2-151SRM por diferentes períodos de tempo em comparação com minaprine.
A figura 37 mostra um esquema sintético para síntese dos compostos da fórmula I onde R11 é benzila, 4-piridila, iso-butila ou metila. Reagentes e condições: a) PhCH2NH2NH2, CH3COONa, etanol, refluxo, 29h; b) POCl3, PVL5, 120°C, 12 h; c) CH3COOH, refluxo, 5 h; d) 1-(2-pirimidil) piperazina, 1-butanol, 130°C, 41 h; e) POCl3, 100°C, 3 h; f) ácido borônico, Pd(O). 2 R = benzila; 3 R = 4-piridila; 4 R = iso-butila; 5 R = metila.
A figura 38 mostra um esquema sintético para síntese dos compostos da fórmula I onde R1 é metila.
A figura 39 mostra um esquema sintético para síntese de análogos de pirazina da invenção. A) NaOH,
41°C, MeOH; b) Tf2O, DMAP, piridina, rt; c) 1-(2-pirimidil) piperazina, DMSO, 60°C.
Descrição Detalhada De Modalidades
Por conveniência, certos termos empregados no relatório descritivo, exemplos, e reivindicações apensas são coletados aqui.
Faixas numéricas mencionadas aqui por pontos finais incluem todos os números e frações agrupadas naquela faixa (por exemplo, 1 a 5 inclui 1, 1,5, 2, 2,75, 3, 3,90, 4 e 5) . Também deve ser entendido que todos os números e frações da mesma são presumidos como sendo modificados pelo termo "aproximadamente" .O termo "aproximadamente" significa mais ou menos 0,1 a 50%, 5-50%, ou 10-40%, preferivelmente 10-20%, mais preferivelmente 10% ou 15%, do número ao qual referência está sendo feita. Além disso, deve ser entendido que "um", "uma", e "o, a" incluem referentes no plural a menos que o teor determine claramente de outro modo. Desse modo, por exemplo, referência a uma composição compreendendo "um composto" inclui uma mistura de dois ou mais compostos.
Como utilizado aqui os termos "administrar" e "administração" se referem a um processo pelo qual uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula I, II ou III ou composição considerada aqui é distribuída a um sujeito para fins de prevenção e/ou tratamento. Composições são administradas de acordo com boas práticas médicas levando em consideração a condição clínica do sujeito, o local e método e administração, dosagem, idade do paciente, sexo, peso corpóreo, e outros fatores conhecidos pelos médicos.
Como utilizado aqui, o termo "co-administração" ou "co-administrado" se refere à administração de pelo menos dois compostos, ou agente(s), ou terapias a um sujeito. Em algumas modalidades, a co-administração de dois 30 ou mais agentes/terapias é simultânea. Em outras modalidades, um primeiro agente/terapia é administrado antes de um segundo agente/terapia. Nesse aspecto, cada componente pode ser administrado separadamente, porém suficientemente próximo em tempo para fornecer o efeito desejado, em particular um efeito benéfico, aditivo ou sinérgico. Aqueles versados na técnica entendem que as formulações e/ou vias de administração dos vários agentes/terapias utilizados podem variar. A dosagem apropriada para co-administração pode ser prontamente determinada por uma pessoa versada na técnica. Em algumas modalidades, quando agentes/terapias são co-administradas, os respectivos agentes/terapias são administrados em dosagens inferiores do que apropriado para sua administração sozinha. Desse modo, a co-administração é especialmente desejável em modalidades onde a co-administração dos agentes/terapias diminui a dosagem necessária de um agente(s) potencialmente perigoso (por exemplo, tóxico) conhecido.
O termo "tratar" se refere à ação de reverter, 20 aliviar, ou inibir o avanço de uma doença, ou um ou mais sintomas dessa doença, à qual esse termo se aplica. Dependendo da condição do sujeito, o termo também se refere a evitar uma doença, e inclui evitar o inicio de uma doença, ou evitar os sintomas associados a uma doença. Um tratamento pode ser executado em um modo agudo ou crônico.
O termo também se refere a reduzir a gravidade de uma doença ou sintomas associados a essa doença antes da aflição com a doença. Essa prevenção ou redução da gravidade de uma doença antes da aflição se refere à administração de um composto ou composição da presente invenção a um sujeito que não está no momento de administração afligido com a doença. "Prevenção" também se refere a prevenir a recorrência de uma doença ou de um ou mais sintomas associados a tal doença. "Tratamento" e "terapeuticamente" se refere ao ato de tratar, como "tratamento" é definido acima. A finalidade de prevenção e intervenção é combater a doença, condição ou distúrbio e inclui a administração de um composto ativo para evitar ou retardar o inicio dos sintomas ou complicações, ou aliviar os sintomas ou complicações, ou eliminar a doença, condição ou distúrbio.
Os termos "sujeito", "indivíduo" ou "paciente" são utilizados de forma intercambiável aqui e se referem a um animal preferivelmente um animal de sangue quente como um mamífero. Mamífero inclui sem limitação quaisquer membros dos Mamíferos. Um mamífero, como um indivíduo, ou paciente, na presente revelação, pode ser da família de Primatas,Carnívora,Proboscídea, Perissodátila,
Artiodátila, Roedores e Lagomorpha. Entre outras modalidades específicas um mamífero da presente invenção pode ser Canis familiaris (cão), Felis catus (gato), Elephas maximus (elefante), Equus caballus (cavalo), Sus domesticus (porco), Camelus dromedarious (camelo), Cervux axis (cervo), Giraffa camelopardalis (girafa), Bos taurus (gado/vacas), Capra hircus (cabra), Ovis aries (carneiro), Mus musculus (camundongo) , Lepus brachyurus (coelho) , Mesocricetus auratus (hamster), Cavia porcellus (porquinho-da-índia), Meriones unguiculatus (gerbil) ou Homo sapiens (ser humano). Em uma modalidade específica, o mamífero é um ser humano. Em outras modalidades, os animais podem ser tratados; os animais podem ser vertebrados, incluindo tanto pássaros como mamíferos. Em aspectos da invenção, os termos incluem animais domésticos criados para alimento ou como animais domésticos, incluindo eqüinos, bovinos, carneiros, aves domésticas, peixes, porcos, caninos, felinos e animais de zoológico, cabras, macacos (por exemplo, gorila ou chimpanzé) e roedores como ratos e camundongos.
Sujeitos típicos para tratamento incluem pessoas afligidas com ou suspeitas de terem ou sendo predispostas a uma doença revelada aqui, ou pessoas suscetíveis a, que sofrem de ou que sofreram de uma doença revelada aqui. Um sujeito pode ou não ter uma predisposição genética para uma doença revelada aqui. No contexto de certos aspectos da invenção, o termo "sujeito" se refere genericamente a um indivíduo que receberá ou que recebeu tratamento (por exemplo, administração de um composto da fórmula I, II ou III, e opcionalmente um ou mais outros agentes) para uma condição caracterizada por inflamação, a disregulação de atividade de proteína cinase, e/ou disregulação de processos apotóticos. Em certos aspectos, um sujeito pode ser um sujeito saudável.
Em aspectos específicos, um sujeito mostra sinais de déficits cognitivos e neuropatologia de doença de Alzheimer. Em modalidades da invenção os sujeitos são suscetíveis a, ou sofrem de doença de Alzheimer.
Como utilizado aqui, o termo "sujeito saudável" significa um sujeito, em particular um mamífero, não tendo doença, distúrbio, enfermidade, mal diagnosticado, mais particularmente uma doença, distúrbio, enfermidade ou mal conhecido por prejudicar ou de outro modo diminuir a memória.
O termo "diagnosticado", como utilizado aqui, se refere ao reconhecimento de uma doença por seus sinais e sintomas (por exemplo, resistência a terapias convencionais), ou análise genética, análise patológica, análise histológica, e similar.
Como utilizado aqui, o termo "modular" se refere à atividade de um composto (por exemplo, um composto da fórmula I, II ou III) de afetar (por exemplo, promover ou retardar) um aspecto de função celular, incluindo, porém não limitado a, crescimento de célula, proliferação, apoptose e similares.
"Quantidade terapeuticamente eficaz" se refere à quantidade ou dose de um composto ativo da fórmula I, II ou III ou composição compreendendo o mesmo, que levará a um ou mais efeitos desejados, em particular um ou mais efeitos terapêuticos ou perfis farmacocinéticos benéficos. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma substância pode variar de acordo com fatores como o estado da doença, idade, sexo, e peso do sujeito, e a capacidade da substância de eliciar uma resposta desejada no sujeito. Um regime de dosagem pode ser ajustado para fornecer a resposta terapêutica ótima ou perfil farmacocinético. Por exemplo, várias doses divididas podem ser administradas diariamente ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida como indicado pelas exigências da situação terapêutica.
O termo "quantidade profilaticamente eficaz" se refere a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessário, para obter o resultado profilático desejado. Tipicamente, uma vez que uma dose profilática é utilizada em sujeitos antes de ou em um estágio anterior de doença, a quantidade profilaticamente eficaz será menor do que a quantidade terapeuticamente eficaz.
O termo "perfil farmacocinético benéfico" se refere a quantidades ou doses de um composto da fórmula I, II ou III que fornecem níveis do composto em plasma e/ou cérebro ou uma dose exigida resultando em efeitos terapêuticos na prevenção, tratamento ou controle de sintomas de uma doença revelada aqui, em particular uma doença neuroinflamatória, mais particularmente doença de Alzheimer. O termo "perfil farmacocinético controlado", como utilizado aqui, se refere a um período de tempo de níveis eficazes de um composto biologicamente ativo da fórmula I, II ou III está em seu ambiente de uso. Um perfil f armacocinético controlado pode ser tal que uma administração diária individual ou duas vezes adequadamente evita, trata ou controla sintomas de uma doença revelada aqui. Um perfil farmacocinético benéfico pode fornecer quantidades terapeuticamente eficazes do composto da fórmula I, II ou III no plasma e/ou cérebro por aproximadamente 12 a aproximadamente 48 horas, 12 horas a aproximadamente 36 horas, ou 12 horas a aproximadamente 24 horas.
Um "efeito terapêutico" se refere a um efeito de uma composição, em particular uma formulação ou forma de dosagem, ou método revelado aqui, incluindo atividade biológica aperfeiçoada, eficácia, e/ou risco mais baixo de efeitos colaterais (por exemplo, risco mais baixo de efeitos colaterais relacionados ã QT). Um efeito terapêutico pode ser um efeito terapêutico controlado que correlaciona com uma concentração contínua em plasma e/ou cérebro de um composto da fórmula I, II ou III durante um período de dosagem, em particular um período de dosagem controlado. Um efeito terapêutico pode ser um efeito 5 estatisticamente significativo em termos de análise estatística de um efeito de um composto da fórmula I, II ou III versus os efeitos sem o composto.
Efeitos ou níveis "estatisticamente significativos" ou "significativamente diferentes" podem representar níveis que são mais elevados ou mais baixos do que um padrão. Em aspectos da invenção, a diferença pode ser 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 ou 50 vezes mais elevado ou mais baixo em comparação com o efeito obtido sem um composto da fórmula I, II ou III.
Em uma modalidade, onde a doença é doença neuroinflamatória como doença de Alzhemeir, efeitos terapêuticos de um composto ou composição no tratamento da invenção podem se manifestar como um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou todos os seguintes, em particular cinco ou mais, mais particularmente sete ou mais dos seguintes:
a) uma redução em atividade de proteína cinase (por exemplo, DAPK) , em particular pelo menos uma diminuição em atividade de proteína cinase de aproximadamente 0,05%, 0,1%, 0,5%, 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 33%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 99%.
b) uma redução em resposta de ativação glial, em particular, pelo menos uma redução em resposta de ativação glial de aproximadamente 0,05%, 0,1%, 0,5%, 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 33%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% OU 99%.
c) uma redução em atividade glial no cérebro, em relação aos níveis determinados na ausência de um composto da fórmula I, II ou III em sujeitos com sintomas de uma doença neuroinflamatória. Em particular, os compostos induzem pelo menos uma diminuição em atividade glial de aproximadamente 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%.
d) uma redução em resposta de ativação de astrócito, em particular pelo menos uma redução em resposta de ativação de astrócito de aproximadamente 0,05%, 0,1%, 0,5%, 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 33%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 99%.
e) uma redução em atividade de astrócito no cérebro, em relação aos níveis determinados na ausência de um composto ou tratamento de acordo com a invenção. Em particular, os compostos induzem uma diminuição em atividade de astrócito de pelo menos aproximadamente 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% OU 90%.
f) uma redução em ativação microglial, em particular, uma redução em ativação microglial de pelo menos aproximadamente 0,05%, 0,1%, 0,5%, 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 33%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 99%.
g) uma redução em resposta de ativação microglial, em particular, uma redução em resposta de ativação microglial de pelo menos aproximadamente 0,05%, 0,1%, 0,5%, 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 33%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% OU 99%. h) uma redução em perda de sinaptof isina e/ou PSD-95 em particularmente uma redução em perda de sinaptofisina e/ou PSD-95 de pelo menos aproximadamente 0,05%, 0,1%, 0,5%, 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 33%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% OU 99%.
i) uma redução em respostas relacionadas ã tensão oxidativa (por exemplo, produção de sintase de óxido nítrico e/ou acumulação de óxido nitrico), em particularmente uma redução de pelo menos aproximadamente 0,05%, 0,1%, 0,5%, 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 33%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 99% em respostas relacionadas à tensão oxidativa como produção de sintase de óxido nítrico e acumulação de óxido nítrico.
j) uma redução em atividade de proteína cinase associada a apoptose celular e/ou morte em particular uma redução de 0,05%, 0,1%, 0,5%, 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 33%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 99% em atividade de proteína cinase associada a apoptose celular e/ou morte.
k) uma redução em respostas pró-inflamatórias de citocina, em particular uma redução de 0,05%, 0,1%, 0,5%, 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 33%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 99% em respostas pró-inflamatória de citocina.
1) uma redução em produção de interleucina-Ip e/ou fator de necrose de tumor a, em particular uma redução de 0,05%, 0,1%, 0,5%, 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 33%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% OU 99% em produção de interleucina-ΐβ e/ou fator de necrose de tumor cx. m) uma diminuição da taxa de avanço da doença em um sujeito com uma doença neuroinflamatória (por exemplo, doença de Alzheimer).
n) aumento em sobrevivência em um sujeito com sintomas de uma doença neuroinflamatória (por exemplo, doença de Alzheimer).
Em aspectos específicos da invenção efeitos terapêuticos de compostos, composições ou tratamento da invenção podem manifestar como (a) e (b) , (b) e (c) ; (a) até (d) ; (a) até (e) ; (a) até (f) ; (a) até (g) ; (a) até (h) ; (a) até (i), (a) até (h) , e (a) até (k) , (a) até (1), (a) até (m) , ou (a) até (n) .
O termo "portador, excipiente, ou veículo farmaceuticamente aceitável" se refere a um meio que não interfere na eficácia ou atividade de um ingrediente ativo e que não é tóxico para os hospedeiros aos quais é administrado. Um portador, excipiente ou veículo inclui diluentes,aglutinantes,adesivos,lubrificantes, desintegrantes, agentes de volume, agentes de umedecimento ou emulsificação, agentes de tamponamento de pH, e materiais diversos como absorventes que podem ser necessários para preparar uma composição específica. Os exemplos de portadores, etc., incluem, porém não são limitados a solução salina, solução salina tamponada, dextrose, água, glicerol, etanol e combinações dos mesmos. O uso de tais meios e agentes para uma substância ativa é bem conhecido na técnica.
Os compostos da fórmula I, II ou III revelados aqui também incluem "sal(is) farmaceuticamente aceitável(is)". Por sais farmaceuticamente aceitáveis se quer dizer àqueles sais que são apropriados para uso em contato com os tecidos de um sujeito ou paciente sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica e similar, e são comensuráveis com uma razão benefício/risco razoável. Sais farmaceuticamente aceitáveis são descritos, por exemplo, em S.M. Berge, e outros, J., Pharmaceutical Sciences, 1977, 66:1. Sais apropriados incluem sais que podem ser formados onde prótons acídicos nos compostos são capazes de reagir com bases inorgânicas ou orgânicas. Sais inorgânicos apropriados incluem aqueles formados com metais alcalinos, por exemplo, sódio e potássio, magnésio, cálcio e alumínio. Sais orgânicos apropriados incluem aqueles formados com bases orgânicas como as bases de amina, por exemplo, etanol amina, dietanol amina, trietanol amina, trometamina, N-metilglucamina, e similares. Sais apropriados incluem também sais de adição de ácido, formados com ácidos inorgânicos (por exemplo, ácido clorídrico e bromídrico) e sais orgânicos (Por exemplo, ácido acético, ácido cítrico, ácido maléico, e os ácidos alcano- e areno-sulfônicos como ácido metanossulfônico e ácido benzenossulfônico). Quando há dois grupos acídicos presentes, um sal farmaceuticamente aceitável pode ser um mono-ácido-mono-sal ou um di-sal; e similarmente onde há mais de dois grupos acídicos presentes, alguns ou todos esses grupos podem ser salifiçados.
Um composto da fórmula I, II ou III pode conter um ou mais centros assimétricos e pode originar enantiômeros,diastereômeros e outras formas estereoisoméricas que podem ser definidas em termos de estereoquímica absoluta como (R) - ou (S) - .
Desse modo, compostos da fórmula I, II ou III incluem todos os diastereômeros e enantiômeros possíveis bem como suas formas, racêmica e opticamente pura. (R)- e (S)-isômeros opticamente ativos podem ser preparados utilizando sintons quirais ou reagentes quirais, ou decompostos utilizando técnicas convencionais. Quando um composto da fórmula I, II ou III contém centros de assimetria geométrica, e a menos que especificado de outro modo, pretende-se que os compostos incluam isômeros geométricos tanto E como A.
Todas as formas tautoméricas são também incluídas no escopo de um composto da fórmula I, II ou III.
Um composto da fórmula I, II ou III inclui formas cristalinas que podem existir como polimorfos. Solvatos dos compostos formados com água ou solventes orgânicos comuns pretendem também ser abrangidos no termo. Além disso, formas hidratadas dos compostos e seus sais são abrangidos nessa invenção. Pró-medicamentos adicionais de compostos da fórmula I, II ou III são abrangidos no termo.
O termo "solvato" significa uma associação física de um composto com uma ou mais moléculas de solvente ou um complexo de estequiometria variável formada por um soluto (por exemplo, um composto da invenção) e um solvente, por exemplo, água, etanol ou ácido acético. Essa associação física pode envolver graus variáveis de ligação iônica e covalente, incluindo ligação de hidrogênio. Em certos casos, o solvato será capaz de isolamento, por exemplo, quando uma ou mais moléculas de solvente são incorporadas na treliça de cristal do sólido cristalino. Em geral, os solventes selecionados não interferem na atividade biológica do soluto. Solvatos abrangem solvatos tanto de fase de solução como isoláveis. Solvatos representativos incluem hidratos, etanolatos, metanolatos e similares. Formas desidratadas, co-cristais, anidras ou amorfas dos compostos da invenção são também incluídas. O termo "hidrato" significa um solvato onde a(s) molécula(s) de solvente é/são H2O, incluindo, mono-, di- e vários poli-hidratos dos mesmos. Solvatos podem ser formados utilizando vários métodos conhecidos na técnica.
Compostos cristalinos da fórmula I, II ou III podem estar na forma de uma base livre, um sal ou um co-cristal. Compostos de base livre podem ser cristalizados na presença de um solvente apropriado para formar um solvato. Compostos de sal de ácido da fórmula I, II ou III (por exemplo, HCl, HBr, ácido benzóico) também podem ser utilizados na preparação de solvatos. Por exemplo, solvatos podem ser formados pelo uso de ácido acético ou acetato de etila. As moléculas de solvato podem formar estruturas de cristal via ligação por hidrogênio, forças van der Waals, ou forças de dispersão, ou uma combinação de quaisquer duas ou todas as três forças.
A quantidade de solvente utilizado para fazer solvatos pode ser determinada por teste de rotina. Por exemplo, um monoidrato de um composto da fórmula I, II ou III teria aproximadamente 1 equivalente de solvente (H2O)para cada equivalente de um composto da invenção. Entretanto, uma quantidade maior ou menos de solvente pode ser utilizada dependendo da escolha de solvato desejado.
Os compostos da fórmula I, II ou III podem ser amorfos ou podem ter polimorfos cristalinos diferentes, possivelmente existindo em estados de hidratação ou solvação diferentes. Por variar a forma de uma droga, é possível variar as propriedades físicas da mesma. Por exemplo, polimorfos cristalinos têm tipicamente diferentes solubilidades entre si, de tal modo que um polimorfo mais termodinamicamente estável é menos solúvel do que um polimorfo menos termodinamicamente estável. Polimorfos farmacêuticos podem diferir também em propriedades como vida de armazenagem, biodisponibilidade, morfologia, pressão de vapor, densidade, cor e capacidade de compressão.
O termo "pró-medicamento" significa um derivado covalentemente ligado ou portador do composto de origem ou substância de droga ativa que é submetida à pelo menos alguma biotransformação antes de exibir seu(s) efeito(s)farmacológico(s). Em geral, tais pró-medicamentos têm grupos metabolicamente cliváveis e são rapidamente transformados in vivo para fornecer o composto de origem, por exemplo, por hidrólise em sangue, e incluem genericamente ésteres e análogos de amida dos compostos de origem. O pró-medicamento é formulado com os objetivos de estabilidade química aperfeiçoada; aceitação e aderência melhoradas do paciente, biodisponibilidade aperfeiçoada, duração de ação prolongada, seletividade de órgão aperfeiçoada, formulação aperfeiçoada (por exemplo, hidrossolubilidade aumentada) , e/ou efeitos colaterais diminuídos (por exemplo, toxicidade). Em geral, os próprios pró-medicamentos têm atividade fraca ou nenhuma atividade biológica e são estáveis sob condições comuns. Pró-medicamentos podem ser prontamente preparados a partir dos compostos de origem utilizando métodos conhecidos na técnica, como aqueles descritos em A Textbook of Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen e H. Bundgaard (eds.), Gordon & Breach, 1991, particularmente capítulo 5: "Design and application of prodrugs"; Design of Prodrugs, H. Bundgaard (ed.), Elsevier, 1985; Prodrugs: Topical and ocular drug delivery, K. B. Sloan (ed.), Mareei Dekker, 1998; Methods in Enzyroology, K. Widder e outros (eds.), vol. 42, Academic Press, 1985, particularmente pág. 309 396; Burger's Medicinial Chemistry and Drug Discovery, 5a edição, M. Wolff (ed. ) , John Wiley & Sons, 1995, particularmente vol. 1 e pág. 172 178 e pág 949 982; Prodrugs as Novel delivery systems, T. Higuchi e V. Stella (eds.), Am. Chem. Soc., 1975; e Bioreversible Carriers in Drug design, E.B. Roehe (ed.), Elsevier, 1987.
Os exemplos de pró-medicamentos incluem, porém não são limitados a ésteres (por exemplo, derivados de acetato, formato e benzoato), carbamatos (por exemplo, N,N-dimetil aminocarbonila) de grupos funcionais de hidróxi em compostos da fórmula I, II ou III e similares.
Um composto da fórmula I, II ou III pode incluir um co-cristal farmaceuticamente aceitável ou um sal de co-cristal. Um co-cristal farmaceuticamente aceitável inclui um co-cristal que é apropriado para uso em contato com os tecidos de um sujeito ou paciente sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica e tem as propriedades farmacocinéticas desejadas.
O termo "co-cristal", como utilizado aqui significa um material cristalino compreendido de dois ou mais sólidos únicos em temperatura ambiente, cada um contendo características físicas distintas, como estrutura, ponto de fusão e calores de fusão. Co-cristais podem ser formados por um ingrediente farmacêutico ativo (API) e um formador de co-cristal por ligação por hidrogênio ou outras interações não covalentes, como empilhamento pi e interações van der Waals. Um aspecto da invenção provê um co-cristal onde o formador de co-cristal é um segundo API. Em outro aspecto, o formador de co-cristal não é um API. Em outro aspecto, o co-cristal compreende mais de um formador de co-cristal. Por exemplo, dois, três, quatro, cinco ou mais formadores de co-cristal podem ser incorporados em um co-cristal com um API. Co-cristais farmaceuticamente aceitáveis são descritos, por exemplo, em "Pharmaceutical co-crystals", Journal of Pharmaceutical Sciences, volume 95(3) páginas 499-516, 2006. Os métodos que produzem co-cristais são discutidos no pedido de patente norte-americana 20070026078.
Um formador de co-cristal que é genericamente um composto farmaceuticamente aceitável, pode ser, por exemplo,benzoquinona,tereftalaldeido,sacarina,nicotinamida, ácido acético, ácido fórmico, ácido butírico, ácido trimésico, ácido 5-nitroisoftálico, adamantano-1, 3,5,7-ácido tetracarboxilico, formamida, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido malônico, benzamida, ácido mandélico, ácido glicólico, ácido fumárico, ácido maléico, uréia, ácido nicotínico, piperazina, p-ftalaldeido, ácido 2,6-piridinecarboxílico, ácido 5-nitroisoftálico, ácido cítrico, e os ácidos alcano- e areno-sulfônicos como ácido metanossulfônico e ácido benzenossulfônico.
Em geral, todas as formas físicas dos compostos da fórmula I, II ou III pretendem estar compreendidas no escopo da presente invenção.
Um composto da fórmula I, II ou III pode ser puro ou substancialmente puro. Como utilizado aqui, o termo "puro" em geral significa melhor do que 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% puro, e "substancialmente puro" significa um composto sintetizado de tal modo que o composto, como feito ou como disponível para consideração em uma composição ou dosagem terapêutica descrita aqui, tem somente aquelas impurezas que não podem ser pronta ou razoavelmente removidas por processos de purificação convencionais.
"Opcional" ou "opcionalmente" significa que o evento ou circunstância subseqüentemente descrito pode, porém não necessita ocorrer, e que a descrição inclui casos onde o evento ou circunstância ocorre e casos nos quais não ocorre. Por exemplo, "grupo de alquila opcionalmente substituído com um grupo halo" significa que o halo pode, porém não necessita estar presente, e a descrição inclui situações onde o grupo de alquila é substituído com um grupo halo e situações onde o grupo alquila não é substituído com o grupo halo.
Um composto da fórmula I, II ou III inclui derivados. Como utilizado aqui o termo "derivado" de um composto da fórmula I, II ou III se refere a um composto quimicamente modificado onde a modificação química ocorre em um grupo funcional ou anel do composto. Exemplos não limitadores de derivados de compostos da fórmula I, II ou III podem incluir grupos de N-acetila, N-metila, N-hidróxi em qualquer um dos nitrogênios disponíveis no composto. Grupos derivados que podem ser utilizados para modificar os compostos da fórmula I, II ou III podem ser encontrados no pedido de patente dos Estados Unidos 20030176437 (aqui incorporado a título de referência na íntegra para todas as finalidades).
Em aspectos da invenção, um composto da fórmula I, II ou III é um derivado farmaceuticamente funcional. Um "derivado farmaceuticamente funcional" inclui qualquer derivado farmaceuticamente aceitável de um composto da fórmula I, II ou III, por exemplo, um és ter ou uma amida, que após administração em um sujeito é capaz de fornecer (direta ou indiretamente) um composto da fórmula I, II ou III ou um metabólito ativo ou resíduo do mesmo. Tais derivados são reconhecidos por aqueles versados na técnica,sem experimentação indevida (vide, por exemplo, Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery, 5. sup.th edição, vol. 1: Principies and practice, que tem derivados farmaceuticamente funcionais ilustrativos).
Um composto da fórmula I, II ou III pode incluir um portador. Portadores apropriados incluem um polímero, carboidrato ou um peptídeo.
Um "polímero" se refere a moléculas que compreendem duas ou mais subunidades de monômero que podem ser subunidades de repetição idênticas ou subunidades de repetição diferentes. Um monômero compreende genericamente uma molécula de baixo peso molecular, estrutura simples contendo carbono. Polímeros podem ser opcionalmente substituídos. Polímeros que podem ser utilizados na presente invenção incluem sem limitação, vinil, acrila, estireno, polímeros derivados de carboidrato, polietileno glicol (PEG), polioxietileno, polimetileno glicol, poli-trimetileno glicóis, polivinil pirrolidona, polímeros de bloco de polioxietileno-polioxipropileno, e copolímeros, sais e derivados dos mesmos. Em aspectos da invenção, o polímeroépoli(2-acrilamido-2-metil-1-ácido propanossulfônico);poli(2-acrilamido-2-metila-1-ácido propanossulfônico-coacrilonitrila,poli(2-acrilamido-2 -metil-1-ácido propanossulfônico-co-estireno) , poli(ácido vinilsulfônico); poli(ácido 4-estirenosulfônico de sódio); e sulfatos e sulfonatos derivados a partir dos mesmos; ácido poli(ácido acrílico), poli(metil acrilato), poli (metacrilato de metila) e poli(álcool de vinil).
Um "carboidrato" , como utilizado aqui, se refere a um poliidróxi aldeído ou poliidróxi cetona e derivados dos mesmos. 0 termo inclui monossacarídeos como eritrose, arabinose, alose, altrose, glicose, manose, treose, xilose, gulose, idose, galactose, talose, aldoexose, frutose, cetoexose, ribose e aldopentose. O termo também inclui carboidratos compostos de unidades de monossacarídeo, incluindo dissacarídeos, oligossacarídeos ou polissacarídeos. Os exemplos de dissacarídeos são sacarose, lactose e maltose. Oligossacarídeos contêm, genericamente, entre e 9 unidades de monossacarídeo e polissacarídeos contêm mais de 10 unidades de monossacarídeo. Um grupo de carboidrato pode ser substituído em uma, duas, três ou quatro posições, diferentes da posição de ligação a um composto da fórmula I, II ou III. Por exemplo, um carboidrato pode ser substituído com um ou mais grupos de alquila, amino, nitro, halo, tiol, carboxila ou hidroxila, que são opcionalmente substituídos. Carboidratos substituídos ilustrativos são glucosamina, ou galactosamina. Em aspectos da invenção, o carboidrato é um açúcar, em particular uma hexose ou pentose e pode ser uma aldose ou uma cetose. Um açúcar pode ser um membro da série D ou L e pode incluir açúcares de amino, açúcares desóxi, e seus derivados de ácido urônico. Em modalidades da invenção onde o carboidrato é uma hexose, a hexose é glicose, galactose, ou manose, ou resíduos de açúcar de hexose substituído como um resíduo de açúcar amino como hexosamina, galactosamina, glucosamina, em particular D-glucosamina (2-amino-2-deóxi~D-glicose) ou D-galactosamina (2-amino-2-deóxi-D-galactose). Açúcares de pentose ilustrativos incluem arabinose, fucose e ribose.
Um resíduo de açúcar pode ser ligado a um composto da fórmula I, II ou III a partir de uma ligação 1,1, ligação 1,2, ligação 1,3, ligação 1,4, ligação 1,5 ou ligação 1,6. Uma ligação pode ser através de um átomo de oxigênio de um composto da fórmula I, II ou III. Um átomo de oxigênio pode ser substituído uma ou mais vezes por grupos -CH2- ou -S-.
O termo "carboidrato"também inclui glicoproteínas como lectinas (por exemplo, conconavalin A, aglutinina de germe de trigo, aglutinina de amendoim, seromucóide, e orosomucóide) e glicolipídeos como cerebroside e ganglioside.
Um portador de "peptídeo" para uso na prática da presente invenção inclui um, dois, três, quatro ou cinco ou mais aminoácidos covalentemente ligados através de uma ligação de peptídeo. Um peptídeo pode compreender um ou mais aminoácidos de ocorrência natural, e análogos, derivados, e congêneres dos mesmos. Um peptídeo pode ser modificado para aumentar sua estabilidade, biodisponibilidade, solubilidade, etc. "Análogo de peptídeo" e "derivado de peptídeo", como utilizado aqui, incluem moléculas que simulam a estrutura química de um peptídeo e retêm as propriedades funcionais do peptídeo. Um portador para uso na presente invenção pode ser um aminoácido como alamina, glicina, prolina, metionina, serina, treonina, histidina, asparagina, alanil-alanil, prolil-metionila, ou glicil-glicil. Um portador pode ser um polipeptídeo como albumina, antitripsina, macroglobulina, haptoglobina, caeruloplasma, transferrina, a- ou β-lipoproteína, β- ou γ-globulina ou fibrinógeno.
Abordagens ao projeto de análogos de peptídeo; 15 derivados e mimética são conhecidas na técnica. Por exemplo, vide Farmer, P.S. em Drug Design (E.J. Ariens, ed.) Academic Press, Nova York, 1980, vol. 10, pág. 119-143; Bali, J.B. e Alewood, P.F. (1990) J. Mol. Recognition 3:55; Morgan, B. A. e Gainor, J.A. (1989) Ann. Rep. Med.Chem. 24:243; e Freidinger, R. M. (1989) Trends Pharmacol. Sei. 10:270. Vide, também Sawyer, T. K. (1995) "Peptidomimetic Design and chemical approaches to peptide metabolism" em Taylor, M.D. e Amidon, G. L. (eds.) Peptide-based drug design: controlling transport and metabolism, capítulo 17; Smith, A.B. 3rd, e outros (1995) J. Am. Chem. Soe. 117: 11113 - 11123; Smith, A. B. 3rd, e outros (1994) J.Am. Chem. Soe. 116:9947-9962; e Hirschman, R., e outros (1993) J. Am. Chem. Soe. 115:12550-12568.
Um peptídeo pode ser fixado a um composto da 3 0 fórmula I, II ou III através de um grupo funcional na cadeia lateral de certos aminoácidos (por exemplo, serina) ou outros grupos funcionais apropriados. Um portador pode compreender quatro ou mais aminoácidos com grupos fixados a três ou mais dos aminoácidos através de grupos funcionais nas cadeias laterais. Em um aspecto, o portador é um aminoácido, em particular um derivado de sulfonato de um aminoácido, por exemplo, ácido cistéico.
O termo "alquila", individualmente ou nos outros termos como "tioalquila" e "aril alquila", significa um radical de hidrocarboneto monovalente, saturado que pode ser uma cadeia reta (isto é, linear) ou uma cadeia ramificada. Um radical de alquila para uso na presente invenção compreende genericamente de aproximadamente 1 a 20 átomos de carbono, particularmente de aproximadamente 1 a 15 10, 1 a 8 ou 1 a 7, mais particularmente de aproximadamente 1 a 6 átomos de carbono, ou 3 a 6. Radicais de alquila ilustrativos incluem metila, etila, n-propila, n-butila, n-pentila, n-hexila, isopropila, isobutila, isopentila, amila, sec-butila, terc-butila, terc-pentila, n-heptila, n- octila, n-nonila, n-decila, undecila, n-dodecila, n-tetradecila, pentadecila, n-hexadecila, heptadecila, n-octadecila, nonadecila, eicosila, dosila, n-tetracosila, e similares, juntamente com variações ramificadas dos mesmos. Em certos aspectos da invenção um radical de alquila é uma alquila inferior C1-C6 compreendendo ou selecionado do grupo que consiste em metila, etila, n-propila, n-butila, n-pentila, n-hexila, isopropila, isobutila, isopentila, amila, tributila, sec-butila, terc-butila, terc-pentila, e n-hexila. Um radical de alquila pode ser opcionalmente substituído com substituintes como definido aqui nas posições que não interferem significativamente na preparação dos compostos da fórmula I, II ou III e não reduzem significativamente a eficácia dos compostos. Em certos aspectos da invenção, um radical de alquila é substituído com um a cinco substituintes incluindo halo, alcóxi inferior, alifático inferior, um alifático inferior substituído, hidróxi, ciano, nitro, tio, amino, ceto, aldeído, éster, amida, amino substituído, carboxila, sulfonila, sulfinila, sulfenila, sulfato, sulfóxido, carboxila substituída, alquila inferior halogenada (por exemplo, CF3) , alcóxi inferior halogenado,hidroxicarbonila, alcóxi carbonila inferior, alquil carbonilóxi inferior, alquil carbonil amino inferior, cicloalifático, cicloalifático substituído, ou arila (por exemplo, fenil metila (isto é, benzila)), heteroarila (por exemplo, piridila), e heterocíclico (por exemplo, piperidinila, morfolinila). Substituintes em um grupo de alquila podem ser eles próprios substituídos.
Em aspectos da invenção, "alquila substituída" inclui um grupo de alquila substituído, por exemplo, por um a cinco substituintes, e preferivelmente 1 a 3 substituintes, como alquila, alcóxi, oxo, alcanoíla, arila, aralquila, arilóxi, alcanoilóxi, cicloalquila, acila, amino, hidróxi amino, alquilamino, arilamino, alcóxi amino,aralquil amino, ciano, halogênio, hidroxila, carboxila, carbamila, carboxi alquila, ceto, tioceto, tiol, alquiltiol, ariltio, aralquil tio, sulfonamida, tioalcóxi e nitro.
Em relação a certos aspectos da invenção, o termo "alifático substituído" se refere a uma alquila ou um alcano que possui menos de 10 carbonos. O termo "alifático substituído" se refere a uma alquila ou um alcano possuindo menos de 10 carbonos onde pelo menos um dos átomos de hidrogênio alifático foi substituído por um halogênio, um amino, um hidróxi, um nitro, um tio, uma cetona, um aldeído, um éster, uma amida, um alifático inferior, um alifático inferior substituído, ou um anel (arila, arila substituída, cicloalifático, ou cicloalifático substituído, etc.) . Os exemplos de tais grupos incluem, porém não são limitados a, 1-cloroetila e similares.
Como utilizado aqui em relação a certos aspectos da invenção, o termo "amino substituído por alquila inferior" se refere a qualquer unidade de alquila contendo até e incluindo oito átomos de carbono onde um dos átomos de hidrogênio alifático é substituído por um grupo amino. Os exemplos desses incluem, porém não são limitados a, etil amino e similares.
Como utilizado aqui em relação a certos aspectos da invenção, o termo "halogênio substituído por alquila inferior" se refere a qualquer cadeia de alquila contendo até e incluindo oito átomos de carbono onde um dos átomos de hidrogênio alifático é substituído por um halogênio. Os exemplos desses incluem, porém não são limitados a, cloroetila e similares.
Como utilizado aqui, o termo "acetil amino" significará qualquer amino primário ou secundário que é acetilado. Os exemplos desses incluem, porém não são limitados a acetamida e similares.
Como utilizado aqui o termo "alquenila" se refere a um radical de hidrocarboneto insaturado, acíclico ramificado ou de cadeia reta compreendendo pelo menos uma ligação dupla. Um radical de alquenila pode conter de aproximadamente 2 a 24 ou 2 a 10 átomos de carbono, em particular de aproximadamente 3 a 8 átomos de carbono e mais particularmente aproximadamente 3 a 6 ou 2 a 6 átomos de carbono. Radicais de alquenila apropriados incluem sem limitação etenila, propenila (por exemplo, prop-1-en-1-ila, prop-1-en-2 -ila, prop-2-en-1-ila (alila), e prop-2-en-2-ila), buten-1-ila, but-1-en-2-ila, 2-metil-prop-1-en-1-ila, but-2-en-1-ila, but-2-en-2-ila, buta-1,3-dien-1-ila, buta-1,3-dien-2-ila, hexen-1-ila, 3-hidróxi hexen-1-ila, hepteno-1-ila, e octeno-1-ila, e similares. Um radical de alquenila pode ser opcionalmente substituído similar a alquila.
Em aspectos da invenção, "alquenila substituída"inclui um grupo de alquenila substituída por, por exemplo, uns três substituintes, preferivelmente um a dois substituintes, como alquila, alcóxi, haloalcóxi, alquil alcóxi, haloalcóxi alquila, alcanoíla, alcanoilóxi,cicloalquila, cicloalcóxi, acila, acilamino, acilóxi, amino,alquilamino,alcanoilamino,aminoacila,aminoacilóxi, ciano, halogênio, hidroxila, carboxila, carboxil alquila, carbamila, ceto, tioceto, tiol, alquiltio, sulfonila, sulfonamido, tioalcóxi, arila, nitro e similares.
Como utilizado aqui, o termo "alquinila" se refere a um radical de hidrocarboneto de cadeia reta ou ramificada, insaturado compreendendo uma ou mais ligações triplas. Um radical de alquinila pode conter aproximadamente 1 a 20, 1 a 15 ou 2 a 10 átomos de carbono, particularmente aproximadamente 3 a 8 átomos de carbono e mais particularmente aproximadamente 3 a 6 átomos de carbono. Radicais de alquinila apropriados incluem sem limitação, radicais de etinila, como prop-1-in-1-ila e prop-2-in-1-ila, butinilas como but-1-in-1-ila, but-1-in-3-ila e but-3-in-1-ila, pentinilas como pentin-1-ila, pentin-2-ila, 4-metóxi pentin-2-ila, e 3-metil butin-1-ila, hexinilas como hexin-1-ila, hexin-2-ila, hexin-3-ila, e 3,3-dimetil butin-1-ila e similares. Em aspectos da invenção, grupos de alquenila incluem etenila (-CH=CH2), n-propenila (-CH2CH=CH2), iso-propenila (-C(CH3)=CH2) e similares. Uma alquinila pode ser opcionalmente substituída similar a alquila. O termo "cicloalquinila" se refere a grupos de alquinila cíclica.
Em aspectos da invenção, "alquinila substituída"inclui um grupo de alquinila substituído por, por exemplo, um substituinte, como alquila, alcóxi, alcanoíla, alcanoilóxi, cicloalquila, cicloalcóxi, acila, acilamino, acilóxi, amino, alquilamino, alcanoilamino, aminoacila, aminoacilóxi, ciano, halogênio, hidroxila, carboxila, carboxilalquila, carbamila, ceto, tioceto, tiol, alquiltio, sulfonila, sulfonamido, tioalcóxi, arila, nitro e similares.
Como utilizado aqui, o termo "alquileno" se 25 refere a um radical linear ou ramificado tendo de aproximadamente Ia 10, 1 a 8, 1 a 6, ou2a6 átomos de carbono e tendo pontos de fixação para duas ou mais ligações covalentes. Os exemplos de tais radicais são metileno, etileno, propileno, butileno, pentileno, hexileno, etilideno, metiletileno e isopropilideno. Quando um radical de alquenileno está presente como um substituinte em outro radical é tipicamente considerado como sendo um substituinte único em vez de um radical formado por dois substituintes.
Como utilizado aqui, o termo "alquenileno" se refere a um radical linear ou ramificado tendo de aproximadamente 2 a 10, 2 a 8 ou 2 a 6 átomos de carbono, pelo menos uma ligação dupla, e tendo pontos de fixação para duas ou mais ligações covalentes. Os exemplos de radicais de alquenileno incluem 1,1-vinilideno (-CH2=C-), 1, 2-vinilideno (-CH=CH-) e 1,4-butadienila (-CH=CH-CH=CH-).
Como utilizado aqui, o termo "halo" se refere a um halogênio como átomos de flúor, cloro, bromo ou iodo.
Como utilizado aqui, o termo "hidroxila" ou "hidróxi" se refere a um grupo -OH.
Como utilizado aqui o termo "ciano" se refere a um radical de carbono tendo três de quatro ligações covalentes compartilhadas por um átomo de nitrogênio, em particular -C=N. Um grupo ciano pode ser substituído com substituintes descritos aqui.
Como utilizado aqui, o termo "alcóxi" se refere a um radical contendo oxi linear ou ramificado tendo uma porção de alquila de um a aproximadamente dez átomos de carbono, como radical metóxi, que pode ser substituído. Em aspectos da invenção um radical de alcóxi pode compreender aproximadamente 1-10, 1-8, 1-6 ou 1-3 átomos de carbono. Em modalidades da invenção, um radical de alcóxi compreende aproximadamente 1-6 átomos de carbono e inclui um radical de O-alquila C1-C6 onde alquila C1-C6 tem o significado exposto aqui. Os exemplos de radicais de alcóxi incluem, sem limitação, alquilas de metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, isopropóxi e terc-butóxi. Um radical de "alcóxi" pode opcionalmente ser substituído com um ou mais substituintes revelados aqui incluindo átomos de alquila para fornecer radicais de "alquilalcóxi"; átomos halo, como flúor, cloro ou bromo, para fornecer radicais "haloalcóxi" (por exemplo, fluorometóxi, clorometóxi, trifluorometóxi, difluorometõxi, trifluoroetóxi,fluoroetóxi, tetrafluoroetóxi, pentafluoroetóxi e fluoropropoxi) e radicais de "haloalcóxialquila" (por exemplo, fluorometóxi metila, clorometóxi etila, trifluorometóxi metila, difluorometóxi etila e trifluoroetóxi metila).
Como utilizado aqui, o termo "alquenilóxi" se refere a radicais contendo oxi lineares ou ramificados tendo uma porção de alquenila de aproximadamente 2 a 10 átomos de carbono, como um radical de etenilóxi ou propenilóxi. Um radical de alquenilóxi pode ser um radical de "alquenilóxi inferior" tendo aproximadamente 2 a 6 átomos de carbono. Os exemplos de radicais de alquenilóxi incluem sem limitação alquilas de etenilóxi, propenilóxi, butenilóxi e isopropenilóxi. Um radical "alquenilóxi" pode ser substituído com um ou mais substituintes revelados aqui incluindo átomos halo, como flúor, cloro ou bromo, para fornecer radicais de "haloalquenilóxi" (por exemplo, trifluoroetenilóxi, fluoroetenilóxi, difluoroetenilóxi e fluoropropenilóxi).
Um "carbocíclico" inclui radicais derivados de um núcleo orgânico de 5 a 14 membros, saturado ou insaturado, substituído ou não substituído cujos átomos de formação de anel (diferentes de hidrogênio) são exclusivamente carbono. Os exemplos de radicais carbociclicos são cicloalquila, cicloalquenila, arila, em particular fenila, naftila, norbornanila, bicicloeptadienila, tolulila, xilenila, indenila, stibenila, terfenilila, difenil etil enila, fenil cicloexila, acenaftilenila, antracenila, bifenila, bibenzilila, e homólogos de bibenzilila relacionados, octaidronaftila, tetraidronaftila, octaidroquinolinla, dimetóxi tetraidronaftila e similares.
Como utilizado aqui, o termo "ciclcoalquila" se refere a radicais tendo de aproximadamente 3 a 15, 3 a 10, 3 a 8, ou 3 a 6 átomos de carbono e contendo um, dois, três ou quatro anéis onde tais anéis podem ser fixados em um modo pendente ou podem ser fundidos. Em aspectos da invenção, "cicloalquila" se refere a um sistema de anel de hidrocarboneto saturado, opcionalmente substituído contendo 1 a 2 anéis e 3 a 7 carbonos por anel que pode ser adicionalmente fundido com um anel carbocíclico C3-C7 insaturado. Os exemplos de grupos de cicloalquila incluem estruturas de anel único como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, cicloeptila, ciclooctila, ciclononila, ciclodecila, ciclododecila e similares, ou estruturas de anéis múltiplos como adamantanila e similares. Em certos aspectos da invenção os radicais de cicloalquila são radicais de "cicloalquila inferior" tendo de aproximadamente 3 a 10, 3a8, 3a6, ou 3 a 4 átomos de carbono, em particular, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila e cicloeptila. O termo "cicloalquila" também abrange os radicais, onde radicais de cicloalquila são fundidos com radicais de arila ou radicais de heterociclila. Um radical de cicloalquila pode ser opcionalmente substituído com grupos como revelado aqui.
Em aspectos da invenção, "cicloalquila substituída" inclui grupos de cicloalquila tendo 1 a 5 (em particular 1 a 3) substituintes incluindo sem limitação, alquila, alquenila, alcóxi, cicloalquila, cicloalquila substituída, acila, cilamino, acilóxi, amino, aminoacila, aminoacilóxi, oxiacilamino, ciano, halogênio, hidroxila, carboxila, carboxilalquila, ceto, tioceto, tiol, tioalcõxi, arila, arilóxi, heteroarila, heteroarilóxi, hidrõxi amino, alcóxi amino e nitro.
Como utilizado aqui em relação a certos aspectos da invenção, o termo "cicloalifático" se refere a um cicloalcano que possui menos de 8 carbonos ou um sistema de anel fundido consistindo em não mais do que três anéis cicloalifãticos fundidos. Os exemplos de tais grupos incluem, porém não são limitados a, decalina e similares.
Como utilizado aqui em relação a certos aspectos da invenção, o termo "cicloalifático substituído" se refere a um cicloalcano que possui menos de 8 átomos de carbono ou um sistema de anel fundido consistindo em não mais do que três anéis fundidos, e onde pelo menos um dos átomos de hidrogênio alifático foi substituído por um halogênio, um nitro, um tio, um amino, um hidróxi, uma cetona, um aldeído, um éster, uma amida, um alifático inferior, um alifático inferior substituído, ou um anel (arila, arila substituída, cicloalifático, ou cicloalifático substituído). Os exemplos de tais grupos incluem, porém não são limitados a 1-clorodecalila e similares.
Como utilizado aqui, o termo "cicloalquenila" se refere a radicais que compreendem aproximadamente 4 a 16, 2 a 15, 2 a 10, 2 a 8, 4 a 10, 3a8, 3a7, 3a6ou4a6 átomos de carbono, uma ou mais ligações duplas de carbono-carbono, e um, dois, três, ou quatro anéis onde tais anéis podem ser fixados em um modo pendente ou podem ser fundidos. Em certos aspectos da invenção os radicais de cicloalquenila são radicais de "cicloalquenila inferior" tendo três a sete átomos de carbono. Os exemplos de radicais de cicloalquenila incluem, sem limitação ciclobutenila,ciclopentenilacicloexenila e cicloeptenila. Um radical de cicloalquenila pode ser opcionalmente substituído com grupos como revelado aqui, em particular 1, 2 ou 3 substituintes que podem ser iguais ou diferentes.
Como utilizado aqui, o termo "cicloalcóxi" se refere a radicais de cicloalquila (em particular, radicais de cicloalquila tendo 3a 15, 3 a 8 ou 3 a 6 átomos de carbono) fixados em um radical oxi. Os exemplos de radicais de cicloalcóxi incluem cicloexóxi e ciclopentóxi. Um radical de cicloalcóxi pode ser opcionalmente substituído com grupos como revelado aqui.
Como utilizado aqui, o termo "arila", individualmente ou em combinação, se refere a um sistema aromático carbocíclico contendo um, dois ou três anéis onde tais anéis podem ser fixados juntos em um modo pendente ou podem ser fundidos. Em aspectos da invenção um radical de arila compreende 4 a 24 átomos de carbono, em particular 4 a 10, 4 a 8, ou4a6 átomos de carbono. Radicais de "arila" ilustrativos incluem sem limitação, radicais aromáticos como fenila, benzila, naftila, indenila,benzociclooctenila,benzocicloeptenila,pentalenila, azulenila, tetraidronaftila, indanila, bifenila, aceftilenila, fluorenila, fenalenila, fenantrenila e antracenila, preferivelmente fenila.
Um radical de arila pode ser opcionalmente substituído com grupos como revelado aqui, em particular hidroxila, alquila, carbonila, carboxila, tiol, amino e/ou halo, em particular uma arila substituída inclui sem limitação, arilamina e arilalquil amina.
Como utilizado aqui em relação a certos aspectos da invenção, o termo "arila substituída" inclui um anel aromático, ou sistema de anel aromático fundido consistindo em não mais do que três anéis fundidos pelo menos um dos quais é aromático, e onde pelo menos um dos átomos de hidrogênio em um carbono de anel foi substituído por um halogênio, um amino, um hidróxi, um nitro, um tio, uma alquila, uma cetona, um aldeído, um éster, uma amida, um alifático inferior, um alifático inferior substituído, ou um anel (arila, arila substituída, cicloalifático, ou cicloalifático substituído). Os exemplos desses incluem, porém não são limitados a, hidroxifenila, clorofenila e similares.
Em aspectos da invenção, um radical de arila pode ser opcionalmente substituído com um a quatro substituintes como alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, aralquila, halo, trifluorometóxi, trifluorometila, hidróxi, alcóxi, alcanoíla, alcanoilóxi, arilóxi, aralquilóxi, amino, alquilamino, arilamino, aralquilamino, dialquilamino, alcanoilamino, tiol, alquiltio, ureido, nitro, ciano, carboxi, carboxilalquila, carbamila, alcoxicarbonila, alquitiono, ariltiono, aril sulfonil amina, ácido sulfônico, alquisulfonila, sulfonamido, arilóxi e similares. Um substituinte pode ser adicionalmente substituído por hidróxi, halo, alquila, alcóxi, alquenila, alquinila, arila ou aralquila. Em aspectos da invenção um radical de arila é substituído com hidroxila, alquila, carbonila, carboxila, tiol, amino e/ou halo. O termo "aralquila" se refere a um grupo de arila ou arila substituída ligada diretamente através de um grupo de alquila, como benzila. Outros exemplos específicos de radicais de arila substituída incluem clorobenzila e amino benzila.
Como utilizado aqui, o termo "arilóxi" se refere a radicais de arila, como definido acima, fixados em um átomo de oxigênio. Grupos arilóxi exemplares incluem naftilóxi, quinolilóxi, isoquinolizinilóxi e similares.
Como utilizado aqui, o termo "arilalcóxi" se refere a um grupo de arila fixado em um grupo alcóxi. Exemplos representativos de grupos de arilalcóxi incluem, porém não são limitados a 2-feniletóxi, 3-naft-2-ilpropóxi , e 5-fenil pentilóxi.
Como utilizado aqui, o termo "aroíla" se refere a radicais de arila, como definido acima, fixados em um radical de carbonila como definido aqui, incluindo sem limitação benzoíla e toluoíla. Um radical de aroíla pode ser opcionalmente substituído com grupos como revelado aqui.
Como utilizado aqui, o termo "heteroaril" se refere a radicais aromáticos no formato de anel contendo heteroátomo totalmente insaturado tendo pelo menos um heteroátomo selecionado entre carbono, nitrogênio, enxofre e oxigênio. Um radical de heteroarila pode conter um, dois ou três anéis e os anéis podem ser fixados em um modo pendente ou podem ser fundidos. Em aspectos da invenção o termo se refere a radicais aromáticos no formato de anel contendo heteroátomo totalmente insaturados tendo de 3 a 15, 3 a 10, 3 a 8, 5 a 15, 5 a 10 ou 5 a 8 membros de anel selecionados entre carbono, nitrogênio, enxofre e oxigênio, em pelo menos um átomo de anel é um heteroátomo. Os exemplos de radicais de "heteroarila", incluem sem limitação, um grupo de heteromonociclila com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, em particular,pirrolila,pirrolinila,imidazolila,pirazolila, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, piridinila, 15 pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila e similares; um grupo heterociclico condensado insaturado contendo 1 a 5 átomos de nitrogênio, em particular, indolila,isoindolila,indolizinila,benzimidazolila, quinolila, isoquinolila, indazolila, quinazolinila, pteridinila, quinolizidinila, ftalazinila, naftiridinila, quinoxalinila, cinolinila, fenantridinila, acridinila, fenantrolinila, fenazinila, carbazolila, purinila, benzimidazolila, quinolinila, isoquinolinila, genzotriazolila, tetrazolopiridazinila e similares; um grupo heteromonocíclicos com 3 a 6 membros, insaturado, contendo um átomo de oxigênio, em particular, 2-furila, 3-furila, piranila e similares; um grupo heteromonociclico com 5 a 6 membros, insaturado, contendo um átomo de enxofre, em particular, tienila, 2-tienila, 3-tienila, e similares; grupo heteromonociclicos com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 2 átomos de oxigênio e 1 a 3 átomos de nitrogênio, em particular, furazanila, benzofurazanila, oxazolila, isoxazolila, e oxadiazolila; um grupo heterocíclico condensado insaturado contendo 1 a 2 átomos de oxigênio e 1 a 3 átomos de nitrogênio, em particular benzoxazolila, benzoxadiazolila e similares; um grupo heteromonocíclico com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 2 átomos de enxofre e 1 a 3 átomos de nitrogênio, por exemplo, tiazolila, isotiazolila, tiadiazolila e similares; um grupo heterocíclico condensado insaturado contendo 1 a 2 átomos de enxofre e 1 a 3 átomos de nitrogênio como benzotiazolila, benzotiadiazolila e similares. O termo também inclui radicais onde radicais heterocíclicos são fundidos com radicais de arila, em particular radicais bicíclicos como benzofuranila, benzotiofenila, ftalazinila, cromenila, xantenila e similares. Um radical de heteroarila pode ser opcionalmente substituído com grupos como revelado aqui, por exemplo, com uma alquila, amino, halogênio, etc., em particular uma heteroaril amina.
Em aspectos da invenção, o termo se refere a um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, em particular pirrolila, pirrolinila, imidazolila, pirazolila, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila e similares.
Um radical de heteroarila pode ser opcionalmente substituído com grupos revelados aqui, por exemplo, com uma alquila, amino, halogênio, etc., em particular um radical de heteroarila substituído é uma heteroarilamina.
O termo "heterocíclico" se refere aos radicais no formato de anel; contendo heteroátomo saturado, e parcialmente saturado; tendo pelo menos um heteroátomo selecionado entre carbono, nitrogênio, enxofre e oxigênio. Um radical heterocíclico pode conter um, dois ou três anéis onde tais anéis podem ser fixados em um modo pendente ou podem ser fundidos. Em um aspecto, o termo se refere a um radical no formato de anel contendo heteroátomo saturado e parcialmente saturado tendo de aproximadamente 3 a 15, 3a 10, 5 a 15, 5 a 10, ou 3 a 8 membros de anel selecionados entre carbono, nitrogênio, enxofre e oxigênio, onde pelo menos um átomo de anel é um heteroátomo. Radicais heterocíclicos saturados exemplares incluem sem limitação um grupo heteromonocíclico com 3 a 6 membros contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio [por exemplo, pirrolidinila, imidazolidinila, e piperazinila]; um grupo heteromonocíclico com 3 a 6 membros, saturado, contendo 1 a 2 átomos de oxigênio e 1 a 3 átomos de nitrogênio [por exemplo, morfolinila; sidnonila]; e um grupo heteromonocíclico com 3 a 6 membros, saturado, contendo 1 a 2 átomos de enxofre e 1 a 3 átomos de nitrogênio [por exemplo, tiazolidinila], etc. Os exemplos de radicais de heterociclila parcialmente saturados incluem sem limitação diidrotiofeno, diidropiranila, diidrofuranila e diidrotiazolila. Radicais heterocíclicos ilustrativos incluem sem limitação aziridinila, azetidinila, 2-pirrolinila, 3-pirrolinila, pirrolidinila, azepinila, 1,3-dioxolaninla, 2H-piranila, 4H-piranila, piperidinila, 1,4-dioxanila, morfolinila, pirazolinila, 1, 4-ditianila, tiomorfolinila, 1,2,3,6-tetraidropiridinila, oxiranila, oxetanila,tetraidrofuranila,tetraidropiranila, tetraidropiridinila, tetraidrotiopiranila, tioxanila, indolinila, 2H-piranila, 4H-piranila, dioxanila, 1,3-dioxolanila, pirazolinila, diidropiranila, diidrotienila, diidrofuranila,pirazolidinila,imidazolinila, imidazolidinila, 3H-indolila, quinuclidinila, quinolizinila e similares. Em certos compostos da fórmula II, quando R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R12f R13, R14, R15, R16 e R17 é hidrogênio, R11 não pode ser piperidinila.
Como utilizado aqui em relação a certos aspectos da invenção, o termo "heterocíclico" se refere a um cicloalcano e/ou sistema de anel de arila, possuindo menos de 8 carbonos, ou um sistema de anel fundido consistindo em não mais do que três anéis fundidos, onde pelo menos um dos átomos de carbono de anel é substituído por oxigênio, nitrogênio ou enxofre. Os exemplos de tais grupos incluem, porém não são limitados a morfolino e similares.
Como utilizado aqui em relação a certos aspectos da invenção, o termo "heterocíclico substituído" se refere a um cicloalcano e/ou um sistema de anel de arila, possuindo menos de 8 carbonos, possuindo menos de 8 carbonos, ou um sistema de anel fundido consistindo em não mais do que três anéis fundidos, onde pelo menos um dos átomos de carbono de anel é substituído por oxigênio, nitrogênio ou enxofre, e onde pelo menos um dos átomos de hidrogênio alifático foi substituído por um halogênio, hidróxi, um tio, nitro, um amino, uma cetona, um aldeído, um éster, uma amida, um alifático inferior, um alifático inferior substituído, ou um anel (arila, arila substituída, cicloalifático ou cicloalifático substituído). Os exemplos de tais grupos incluem, porém não são limitados a 2-cloropiranila.
Os grupos heterocíclico e heteroarila acima podem ser fixados-C ou fixados-N (onde isso é possível).
Como utilizado aqui o termo "sulfonila", utilizado individualmente ou ligado a outros termos como alquil sulfonila ou aril sulfonila, se refere aos radicais divalentes -SO2. Em aspectos da invenção, o grupo sulfonila pode ser fiado a uma hidroxila substituída ou não substituída, grupo alquila, grupo de éter, grupo de alquenila, grupo de alquinila, grupo de arila, grupo de cicloalquila, grupo de cicloalquenila, grupo de cicloalquinila, grupo heterocíclico, carboidrato, peptídeo ou derivado de peptídeo.
O termo "sulfinila", utilizado individualmente ou ligado a outros termos como alquil sulfinila (isto é, S(0)-alquila) ou aril sulfinila, se refere aos radicais divalentes -S(0)-.
O termo "sulfonato" é reconhecido na técnica e inclui um grupo representado pela fórmula:
<formula>formula see original document page 61</formula>
Onde R18 é um par de elétrons, alquila, cicloalquila, arila, alquenila, cicloalquenila, cicloalquinila, heterocíclico, hidrogênio, alquinila, carboidrato, peptídeo ou derivado de peptídeo.
O termo "sulfato", utilizado individualmente ou ligado a outros termos, é reconhecido na técnica e inclui um grupo que pode ser representado pela fórmula:
<formula>formula see original document page 62</formula>
Onde R19 é um par de elétrons, hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila,cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, arila, heterociclico, carboidrato, peptídeo ou derivado de peptídeo.
O termo "sulfóxido" se refere ao radical -S=O.
Como utilizado aqui o termo "amino", individualmente ou em combinação, se refere a um radical onde um átomo de nitrogênio (N) é ligado a três substituintes sendo qualquer combinação de hidrogênio, hidroxila, alquila, cicloalquila, alquenila, alquinila, arila, silila, heterociclico, ou heteroarila que pode ou não ser substituída. Genericamente um "grupo amino" tem a fórmula química geral -NR20R21 onde R20 e R21 podem ser quaisquer combinações de hidrogênio, hidroxila, alquila, cicloalquila, alcóxi, alquenila, alquinila, arila, carbonil carboxila, amino, silila, heteroarila ou heterociclico que pode ou não ser substituído. Opcionalmente um substituinte no átomo de nitrogênio pode ser um grupo hidroxila (-0H) para fornecer uma amina conhecida como hidroxilamina. Os exemplos ilustrativos de grupos de amino são amino (-NH2) , alquilamino, acilamino, cicloalmino, acicloalquilamino, arilamino, aril alquilamino, e alquil sililamino inferior, em particular metilamino, etilamino, dimetil amino, 2-propil amino, butilamino, isobutilamino, ciclopropil amino, benzilamino, alilamino, hidroxilamino, cicloexil amino, piperidinila, hidrazinila, benzilamino, difenil metilamino, tritil amino, trimetil silil amino, e dimetil-terc-butil sililamino, que pode ou não ser substituído.
Como utilizado aqui o termo "tiol" significa -SH. Um tiol pode ser substituído com um substituinte revelado aqui, em particular alquila (tioalquila), arila (tioarila), alcóxi (tioalcóxi) ou carboxila.
O termo "sulfenila" utilizado individualmente ou ligado a outros termos como alquil sulfenila, se refere ao radical -SR*12 onde R22 não é hidrogênio. Em aspectos da invenção R22 é alquila substituída, ou não substituída, cicloalquila, alquenila, alquinila, arila, silila, sililalquila, heterocíclico, heteroarila, carbonila, carbamoíla, alcóxi ou carboxila.
Como utilizado aqui, o termo "tioalquila", individualmente ou em combinação, se refere a um grupo funcional químico onde um átomo de enxofre (S) é ligado a uma alquila, que pode ser substituída. Os exemplos de grupos de tioalquila são tiometila, tioetila e tiopropila. Uma tioalquila pode ser substituída com uma carboxila substituída ou não substituída, arila, heterocíclico, carbonila ou heterocíclico.
Como utilizado aqui, o termo "tioarila", individualmente ou em combinação, se refere a um grupo funcional químico onde um átomo de enxofre (S) é ligado a um grupo de arila com a fórmula química geral -SR23 onde R23 é arila que pode ser substituída. Os exemplos ilustrativos de grupos de tioarila e grupos de tioarila substituído são tiofenila, clorotiofenila, para-clorotiofenila, tiobenzila, 4-metóxi-tiofenila, 4-nitro-tiofenila e para-nitrotiobenzila.
Como utilizado aqui, o termo "tioalcóxi", individualmente ou em combinação, se refere a um grupo funcional químico onde um átomo de enxofre (S) é ligado a um grupo alcóxi com a fórmula química geral -SR24 onde R24 é um grupo alcóxi que pode ser substituído. Um grupo "tioalcóxi" pode ter 1-6 átomos de carbono, isto é, um grupo de -S- (0) - alquila-C1-C6 onde alquila C1-C6 tem o significado como definido acima. Os exemplos ilustrativos de um grupo de tioalcóxi reto ou ramificado ou radical tendo de 1 a 6 átomos de carbono, também conhecido como um tioalcóxi C1-C6, incluem tiometóxi e tioetóxi.
Um tiol pode ser substituído com um heteroarila, substituída, ou não substituída, ou heterocíclico, em particular um grupo heteromonocíclico de 3 a 6 membros, saturado, substituído ou não substituído contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio [por exemplo, pirrolidinila, imidazolidinila, piperidinila, e piperazinila] ou um grupo heteromonocíclico com 3 a 6 membros, saturado, contendo 1 a 2 átomos de oxigênio e 1 a 3 átomos de nitrogênio [por exemplo, morfolinila; sidnonila], especialmente uma morfolinila ou piperidinila substituída.
Como utilizado aqui, o termo "carbonila" se refere a um radical de carbono tendo duas das quatro ligações covalentes compartilhadas com um átomo de oxigênio.
Como utilizado aqui, o termo "carboxila", individualmente ou em combinação, se refere a -C(O)OR25- ou -C ( = 0) OR25 onde R25 é hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, cicloalquenila, amino, tiol, arila, heteroarila, tioalquila, tioarila, tioalcóxi, uma heteroarila ou um heterociclico, que pode ser opcionalmente substituído. Em aspectos da invenção, os grupos de carboxila estão em uma forma esterificada e podem conter como um grupo de esterificação grupos de alquila inferior. Em aspectos específicos da invenção, -C(O)OR25 provê um éster ou um derivado de aminoácido. Uma forma esterificada é também particularmente mencionada aqui como um "éster carboxílico". Em aspectos da invenção uma "carboxila" pode ser substituída, em particular substituída com alquila que é opcionalmente substituída com um ou mais entre amino, amina, halo, alquil amino, arila, carboxila ou um heterociclico. Os exemplos de grupos de carboxila são metóxi carbonila, butóxi carbonila, terc. Alcóxi carbonila como terc. butóxi carbonila, aril metóxi carbonila tendo um ou dois radicais de arila incluindo sem limitação fenila opcionalmente substituída, por exemplo, por alquila inferior, alcóxi inferior, hidroxila, halo, e/ou nitro, como benzilóxi carbonila, metóxi benzilóxi carbonila, difenil metóxi carbonila, 2-bromoetóxi carbonila, 2-iodoetóxi carbonil terc.butil carbonila, 4-nitrobenzilóxi carbonila, difenil metóxi-carbonila, benzidróxi carbonila, di-(4-metóxi fenil-metóxi carbonila, 2-bromoetóxi carbonila, 2-iodoetóxi carbonila, 2-trimetil sililetóxi carbonila, ou 2-trifenil sililetóxi carbonila. Grupos de carboxila adicionais em forma esterificada são grupos de sililóxi carbonila incluindo sililóxi carbonila orgânico. O substituinte de silício em tais compostos pode ser substituído com alquila inferior (por exemplo, metila) , alcóxi (por exemplo, metóxi), e/ou halo (por exemplo, cloro). Os exemplos de substituintes de silício incluem trimetil silila e dimetil terc.butil silila. Em aspectos da invenção, o grupo carboxila pode ser um alcóxi carbonila, em particular metóxi carbonila, etóxi carbonila, isopropóxi carbonila, t-butóxi carbonila, t-pentilóxi carbonila, ou heptilóxi carbonila, especialmente metóxi carbonila ou etóxi carbonila.
Como utilizado aqui, o termo "carbamoíla", individualmente ou em combinação, se refere a radicais de amino, monoalquil amino, dialquil amino, monocicloalquilamino, alquil cicloalquil amino e dicicloalquilamino, fixados em uma de duas ligações não compartilhadas em um grupo de carbonila.
Como utilizado aqui, o termo "carboxamida" se refere ao grupo -CONH-.
Como utilizado aqui, o termo "nitro" significa - NO2 -.
Como utilizado aqui, o termo "acila", individualmente ou em combinação, significa um grupo de carbonila ou tiocarbonila ligado a um radical selecionado a partir, por exemplo, de hidrido opcionalmente substituído, alquila (por exemplo, haloalquila), alquenila, alquinila, alcóxi ("acilóxi" incluindo acetilóxi, butirilóxi, iso-valerilóxi, fenil acetilóxi, benzoilóxi, p-metóxi benzoilóxi e acilóxi substituído como alcóxi alquila e haloalcóxi), arila, halo, heterociclila, heteroarila, sulfinila (por exemplo, alquil sulfinil alquila), sulfonila (por exemplo, alquil sulfonil alquila), cicloalquila, cicloalquenila, tioalquila, tioarila, amino (por exemplo, alquil amino ou dialquil amino), e aralcóxi. Exemplos ilustrativos de radicais de "acila" são formila, acetila, 2-cloroacetila, 2-bromoacetila, benzoila, trifluoroacetila, ftaloíla, malonila, nicotinila e similares.
Em aspectos da invenção, "acila" se refere a um grupo -C(O)R26, onde R26 é hidrogênio, alquila, cicloalquila, cicloeteroalquila, arila, aril alquila, heteroalquila, heteroarila e heteroaril alquila. Os exemplos incluem, porém não são limitados a formila, acetila, cicloexil carbonila, cicloexil metil carbonila, benzoila, benzil carbonila e similares.
Como utilizado aqui, o termo "fosfonato" se refere a um grupo C-PO(OH)2 ou C-PO(OR27)2 onde R27 é alquila ou arila que pode ser substituída.
Como utilizado aqui, "ureido" se refere ao grupo "-NHCONH-". Um radical de ureido inclui um alquil ureido compreendendo um ureido substituído com uma alquila, em particular uma alquila inferior fixada ao nitrogênio terminal do grupo ureido. Os exemplos de um alquil ureido incluem sem limitação N'-metil ureido, N'-etil ureido, N'-n-propil ureido, N'-i-propil ureido e similares. Um radical de ureido também inclui um grupo N',N'-dialquil ureido contendo um radical -NHCON onde o nitrogênio terminal é fixado em dois radicais opcionalmente substituídos incluindo alquila, arila, heterocíclico e heteroarila.
Os termos utilizados aqui para radicais incluindo "alquila", "alcóxi", "alquenila", "alquinila", "hidroxila", etc. se referem a radicais tanto não substituídos como substituídos. O termo "substituído", como utilizado aqui, significa que qualquer uma ou mais fração em um átomo designado (por exemplo, hidrogênio) é substituído com uma seleção de um grupo revelado aqui, com a condição de que a valência normal do átomo designado não seja excedida, e que a substituição resulta em um composto estável. Combinações de substituintes e/ou radicais são permissíveis somente se tais combinações resultarem em compostos estáveis. "Composto estável" se refere a um composto que é suficientemente robusto para sobreviver isolamento em um grau útil de pureza a partir de uma mistura de reação, e formulação em um agente terapêutico eficaz.
Um grupo funcional ou anel de um composto da fórmula I, II ou III pode ser modificado com, ou um radical em um composto da fórmula I, II ou III pode ser substituído com um ou mais grupos ou substituintes evidentes para uma pessoa versada na técnica incluindo, sem limitação, grupos de alquila, alcóxi, alquenila, alquinila, alcanoíla, alquileno, alquenileno, hidróxi alquila, haloalquila, haloalquileno, haloalquenila, alcóxi, alquenilóxi, alquenilóxi alquila, alcóxi alquila, arila, alquil arila, haloalcóxi, haloalquenilóxi, heterocíclico, heteroarila, alquil sulfonila, sulfinila, sulfonila, sulfenila, alquil sulfinila, aralquila, heteroaralquila, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalcóxi, cicloalquenilóxi, amino, oxi, halo, azido, tio, =0, =S, ciano, hidroxila, fosfonato, fosfinato, tioalquila, alquilamino, arilamino, aril sulfonila, alquil carbonila, aril carbonila, heteroaril carbonila, heteroaril sulfinila, heteroaril sulfonila, heteroaril amino, heteroarilóxi, heteroarilóxi alquila, aril acetamidoíla, arilóxi, aroíla, aralcanoíla, aralcóxi, arilóxi alquila, haloarilóxi alquila, heteroaroíIa, heteroaralcanoíla, heteroaralcóxi, heteroaralcóxi alquila, tioarila, aril tioalquila, alcóxi alquila e acila. Esses grupos ou substituintes podem eles próprios ser substituídos. Grupos derivados que podem ser utilizados para modificar compostos da fórmula I podem ser também encontrados no pedido de patente dos Estados Unidos 2003176437 .
Um substituinte químico é "pendente" a partir de um radical se for ligado a um átomo do radical. Nesse contexto, o substituinte pode ser pendente a partir de um átomo de carbono de um radical, um átomo de carbono conectado a um átomo de carbono do radical por um diluente de cadeia, ou um heteroátomo do radical. O termo "fundido" significa que um segundo anel está presente (isto é, fixado ou formado) por ter dois átomos adjacentes em comum ou compartilhados com o primeiro anel.
Uma "forma de dosagem" se refere a uma composição ou dispositivo que compreende um composto da fórmula I, II ou III e opcionalmente portador(es) , excipiente (s) ou veículo(s) farmaceuticamente aceitáveis. Uma forma de dosagem pode ser uma forma de dosagem de liberação imediata ou uma forma de dosagem de liberação controlada.
Uma "forma de dosagem de liberação imediata" se refere a uma forma de dosagem que não inclui um componente para liberação controlada, isto é, um componente para diminuir desintegração ou dissolução de um composto ativo. Essas formas de dosagem se baseiam genericamente na composição da matriz de droga para efetuar a liberação rápida do agente de ingrediente ativo.
Por "forma de dosagem de liberação controlada" se quer dizer uma forma de dosagem que libera composto ativo por muitas horas. Em um aspecto, uma forma de dosagem controlada inclui um componente para diminuir a desintegração ou dissolução do composto ativo. Uma forma de dosagem pode ser uma formulação de liberação controlada, construída com ou sem um período de retardo inicial. Formas de dosagem de liberação controlada podem liberar continuamente droga por períodos prolongados de pelo menos aproximadamente 4 ou mais horas, aproximadamente 6 ou mais horas, aproximadamente 8 ou mais horas, aproximadamente 12 ou mais horas, aproximadamente ou mais horas, ou aproximadamente 20 a 24 horas. Uma forma de dosagem de 15 liberação controlada pode ser formulada em uma variedade de formas, incluindo tabletes, pastilhas, gelcaps, adesivos bucais, suspensões, soluções, géis, etc. Em aspectos da invenção, a forma de liberação controlada resulta na administração de um número mínimo de doses diárias.
Uma "doença" que pode ser tratada e/ou evitada utilizando um composto, composição ou método da invenção inclui uma condição associada a ou que requer modulação de uma ou mais de inflamação (por exemplo, neuroinflamação); vias de sinalização, envolvidas em inflamação (por exemplo, neuroinflamação); produção de molécula que sinaliza célula; ativação de glia ou vias e respostas de ativação glial; citocinas pró-inflamatórias ou quimiocines (por exemplo, interleucina (IL), em particular IL-1β) ou fator de necrose de tumor (TNF, em particular TNFa); ativação de astrócitos ou vias e respostas de ativação de astrócito; ativação de microglia ou vias e respostas de ativação microglial; respostas relacionadas a stress oxidativo como produção de sintase de óxido nítrico e acumulação de óxido nítricô; proteínas de fase aguda; perda de sinaptofisina e/ou 95; componentes da cascata de complemento; perda ou redução de função sináptica; atividade de proteína cinase (por exemplo, morte associada à atividade de proteína cinase) ; dano à célula (por exemplo, dano à célula neuronal); morte de células (por exemplo, morte de células neuronais) ;
deposição de amilóide β de placas de amilóide; e déficits comportamentais.
Em particular uma doença é uma doença ou condição neurológica incluindo, sem limitação, distúrbio de demência, um distúrbio neurodegenerativo, um distúrbio de desmielinização CNS, um distúrbio de dor, um distúrbio autoimune, ou uma doença inflamatória periférica.
Uma doença pode ser caracterizada por um processo inflamatório devido à presença de macrófagos ativados por um peptídeo ou proteína amiloidogênica. Desse modo, um método da invenção pode envolver inibir ativação de macrófago e/ou inibir um processo inflamatório. Um método pode compreender diminuir, tornar lenta, melhorar ou reverter o curso ou grau de invasão de macrófago ou inflamação em um paciente.
Os exemplos de doenças que podem ser tratadas e/ou evitadas utilizando os compostos, composições e métodos da invenção incluem doença de Alzheimer e distúrbios relacionados, formas pré-senil e senil; angiopatia de amilóide; dano cognitivo brando; demência relacionada à doença de Alzheimer (por exemplo, demência vascular ou demência de Alzheimer); demência relacionada a AIDS,tauopatias (por exemplo, demência de grão argirofílico,degeneração corticobasal, demência pugilistica, entrelaçamentos neurofibrilares difusos com calcificação, demência frontotemporal com parkinsonismo, doença relacionada a priônio, doença de Hallervorden-Spatz, distrofia miotônica, doença de Niemann-Pick tipo C, doença de Neurônio Motor não guamanian com entrelaçamentos neurofibrilares, doença de Pick, parkinsonismo pós-encefalitico, angiopatia amilóide cerebral, gliose subcortical progressiva,paralisia supranuclear progressiva, panencefalite esclerosante subaguda, e tangle ony dementia), alfa-sinucleinopatia (por exemplo, demência com corpos Lewy, atrofia múltipla do sistema com inclusões citoplásmicas gliais), atrofias múltiplas do sistema, síndrome de Shy-Drager, ataxia espinocerebelerar (por exemplo, DRPLA ou Doença de Machado-Joseph); degeneração estriatonigral, atrofia olivopontocerebelar,
neurodegeneração com acumulação de ferro, tipo I, no cérebro; disfunção de olfato, e esclerose lateral amiotrófica); doença de Parkinson (por exemplo familiar ou não familiar); Esclerose lateral amiotrófica; paraplegia espástica (por exemplo, associada à função defeituosa de companheiros e/ou proteínas A triplas); doença de Huntington, ataxia espinocerebelar, ataxia de Freidrich; doenças cerebrovasculares incluindo derrame, hipoxia, isquemia, infarto, hemorragia intracerebral; lesão traumática do cérebro; síndrome de Down; trauma na cabeça com acumulação pós - traumática de peptídeo beta amilóide; Demência britânica familiar; Demência dinamarquesa familiar; Demência pré-senil com ataxia espástica; angiopatia amilóide cerebral, tipo britânica; Demência pré-senil com ataxia espástica angiopatia amilóide cerebral, tipo dinamarquesa; encefalopatia familiar com corpos de inclusão de neuroserpina; polineuropatia de amilóide (por exemplo, polineuropatia de amilóide senil ou amiloidose sistêmica); miosite de corpo de inclusão devido a peptideo beta de amilóide; amiloidose do tipo finlandês e familiar; amiloidose sistêmica associada a mieloma múltiplo; Febre do Mediterrâneo familiar; esclerose múltipla, neurite óptica; sindrome de Guillain-Barre; polineuropatia de desmielinização inflamatória crônica; infecções e inflamações crônicas; encefalomielite disseminada aguda (ADEM); doença de ouvido interno autoimune (AIED); diabetes; isquemia miocardial e outros distúrbios cardiovasculares; pancreatite; gota; doença inflamatória do intestino; colite ulcerativa, doença de Crohn, artrite reumatóide, osteoartrite; aterosclerose, aneurisma aórtico inflamatório; asma; sindrome de angústia respiratória de adulto; restenose; lesão de reperfusão/isquemia; glomerulonefrite; câncer sacoidose; restenose; febre reumática; lúpus eritematoso sistêmico; sindrome de Reiter, artrite psoriática; espondilite ankylosing; coxartrite; doença inflamatória pélvica; osteomielite; capsulite adesiva; oligoartrite; periartrite; poliartrite; psoríase; doença de Still; sinovite; dermatose inflamatória e cicatrização de ferimento.
Em aspectos da invenção, a doença é doença de Alzheimer, demência vascular, demência associada à doença de Parkinson, déficits visuoespaciais, sindrome de Williams, encefalite, meningite, sindrome fetal de álcool, sindrome de Korsakoff, lesão anóxica do cérebro, lesões de ressuscitação cardiopulmonar, diabetes, sindrome de Sjogren, derrames, doenças oculares como catarata e degeneração macular, distúrbios de sono, e danos cognitivos causados por níveis elevados de colesterol.
Em aspectos da invenção, um composto, composição ou método revelado aqui pode ser utilizado para evitar e/ou tratar uma doença envolvendo neuroinflamação (isto é, doença neuroinflamatória). Neuroinflamação é um aspecto característico de patologia de doença e progressão em um conjunto diverso de distúrbios neurodegenerativos que estão aumentando em seu impacto na sociedade (para um exame recente, vide, por exemplo, Prusiner, S.B. (2001) New Engl . J. Med. 344, 1516-1526). Esses distúrbios relacionados a neuroinflamação incluem doença de Alzheimer (AD), esclerose lateral amiotrófica, distúrbios autoimunes, doenças priori, derrame e lesão traumática do cérebro. Neuroinflamação é causada por ativação de célula glial (por exemplo, astrócitos e microglia), que normalmente serve um papel benéfico como parte de uma resposta homeostática de organismo à lesão ou alteração de desenvolvimento. Entretanto, a disregulação desse processo através de ativação crônica ou excessiva de glia contribui para o processo de doença através da produção aumentada de quimiocines e citocinas pró-inflamatórias, enzimas relacionadas a tensão oxidativa, proteínas de fase aguda, e vários componentes das cascatas de complemento (vide, por exemplo, Akiyama e outros (2000) Neurobiol. Aging, 21, 383-421) . A ligação direta de ativação glial à patologia que é um marco de doença ressalta a importância de entender as vias de transdução de sinal que mediam essas respostas celulares gliais críticas e a descoberta de ligandos permeáveis de células que podem modular essas vias relevantes à doença.
Em certos aspectos selecionados da invenção, a doença é uma doença neurodegenerativa ou distúrbio neurodegenerativo incluindo doenças e danos como doença de Alzheimer, demência, MCI, doença de Huntington, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, e outras doenças e distúrbios similares revelados aqui.
Para a doença de Alzheimer (AD) em particular, a deposição de β-amilóide (Αβ) e tangles neurofibrilares são associados à ativação glial, perda neuronal e declínio cognitivo. Em um nível molecular, a doença de Alzheimer é caracterizada por: expressão aumentada de sintase de óxido nítrico (NOS) em células gliais que circundam placas de amilóide; evidência neuropatológica de dano neuronal mediado por peroxinitreto; e superprodução de óxido nítrico (NO) envolvido em disfunção cerebral induzida por Αβ. NOSH (iNOS) é induzido como parte da resposta de ativação glial e é uma enzima relacionada a tensão oxidativa que gera NO. Quando NO está presente em níveis elevados juntamente com superóxido, peroxinitreto de molécula derivada de NO altamente reativo é gerado, levando à morte neuronal da célula. A citocina pró-inflamatória IL-1β também é superexpressa em glia ativada em cérebro AD e polimorfismos em genes de IL-1β são associados a um risco aumentado de AD esporádico de início (vide, por exemplo, Du e outros, (2000), Neurology 55, 480-483). IL-1β pode influenciar também desenvolvimento de placa de amilóide e está envolvido em respostas de disfunção neuronal e inflamatória de glial adicional (vide, por exemplo, Griffin, e outros (1998) Brain Pathol. 8, 65-72; e Sheng, e outros (1996) Neurobiol. Aging 17, 761-766). Portanto, como a ativação glial e produtos gliais específicos são associados a distúrbios neurodegenerativos (por exemplo, doença de Alzheimer), os compostos e composições reveladas aqui que são capazes de modular vias de sinalização de células (por exemplo, vias de ativação glial) terão aplicação específica no tratamento e prevenção de doença inflamatória.
Em aspectos da invenção, um composto, composição, ou método revelado aqui pode ser utilizado para evitar e/ou tratar uma doença que envolve disregulação de sinalização de proteína cinase. A disregulação de sinalização de proteína cinase acompanha, freqüentemente, disregulação de vias de sinalização de células (por exemplo, vias de ativação de célula glial). Proteínas cinases constituem uma grande família de proteínas que desempenham um papel central na regulação de diversas funções celulares incluindo crescimento, diferenciação e morte de células. Pensa-se que haja mais de 500 proteínas cinases e 130 fosfatases de proteína que exercem controle justo sobre a fosforilação de proteína. Cada proteína cinase transfere o γ-fosfato de ATP para um resíduo (s) específico de um substrato de proteína. Proteínas cinases podem ser adicionalmente categorizadas como tirosina, serina/treonina ou dual específico com base em resíduo aceitador. Os exemplos de serina/treonina cinases incluem MAP cinase, MAPK cinase (MEK), Akt/PKB, Jun cinase (INK), CDKs, proteína cinase A (PRA), proteína cinase C (PRC) e cinases dependentes de calmodulin (CaM) (CaMKs). A atividade disregulada de proteína cinase (por exemplo, hiper- ou hipo-ativa) leva à fosforilação anormal de proteína, subordinada a um grande número de doenças incluindo diabetes, artrite reumatóide, inflamação, hipertensão, e doenças proliferativas como câncer. Portanto, como a atividade aberrante de cinase está associada à doença inflamatória (por exemplo, distúrbios neurodegenerativos como doença de Alzheimer) , os compostos e composições que são revelados aqui que são capazes de modular cinases envolvidas em vias de sinalização de células terão aplicação específica para tratamento e prevenção de doença inflamatória.
As doenças que também podem ser tratadas e, ou evitadas; de acordo com a invenção, incluem Doenças de desmielinização. "Doenças de desmielinização" se referem a doenças nas quais mielina é o alvo principal. Essas doenças podem ser divididas em dois grupos: Doenças adquiridas e distúrbios metabólicos hereditários. Doenças de desmielinização adquiridas incluem esclerose múltipla (MS) incluindo suas fases de relapso/remissão alternadas. Distúrbios metabólicos hereditários incluem as leucodistrofias como leucodistrofia metacromática, doença de Refsum, adrenoleucodistrofia, doença de Krabbe, fenilcetonuria, doença Canavan, doença Pelizaeus-Merzbacher e doença de Alexander.
Doenças que também podem ser tratadas e, ou evitadas, de acordo com a invenção, incluem "Condições de desmielinização" . O termo se refere a condições que resultam em mielinização deficiente. Tais condições incluem, porém não são limitadas a, Lesão de cordão espinhal, Lesão traumática do cérebro e Derrame.
O termo "Lesão de cordão espinhal (SCI)" se refere a uma lesão no cordão espinhal que resulta em perda de função como mobilidade ou sensação.
O termo "Lesão traumática do cérebro (TBI)" se refere a uma lesão que resulta em dano ao cérebro. Uma lesão na cabeça pode ser uma lesão fechada na cabeça ou lesão penetrante na cabeça. Uma lesão fechada na cabeça pode ocorrer quando a cabeça é atingida por um objeto sem corte fazendo com que o cérebro interaja com a superfície óssea dura dentro do crânio. Uma lesão fechada na cabeça também pode ocorrer sem trauma externo direto na cabeça se o cérebro for submetido a um movimento rápido para frente ou para trás, (por exemplo, cordel de chicote) . Uma lesão penetrante na cabeça pode ocorrer quando um objeto de movimento rápido como uma bala perfura o crânio. Uma lesão fechada ou penetrante na cabeça pode resultar em dano localizado e difundido, ou difuso ao cérebro que pode se manifestar como perda de memória, distúrbios emocionais, dificuldades motoras, incluindo paralisia, dano aos sentidos e morte. O termo também inclui dano secundário que segue uma lesão incluindo inchaço e acúmulo de fluido e a acumulação de substâncias tóxicas aos neurônios circundantes como o glutamato neurotransmissor.
O termo "Derrame" se refere a uma perda súbita de função do cérebro causada pela interrupção do fluxo de sangue para o cérebro (um derrame isquêmico) ou a ruptura de vasos sangüíneos no cérebro (um derrame hemorrágico). A interrupção do fluxo de sangue ou a ruptura dos vasos sangüíneos faz com que neurônios na área afetada morram. O termo também inclui reabilitação de derrame que se refere ã intervenção que resulta na recuperação total ou parcial de funções que foram perdidas devido ao derrame.
Um distúrbio de dor pode ser também tratado e/ou evitado, de acordo com a invenção. Um "distúrbio de dor" se refere a um distúrbio ou condição envolvendo dor e inclui, sem limitação, dor aguda, dor persistente, dor crônica, dor inflamatória, dor neuropática, dor neurogênica, e dor induzida por quimiocine. Em aspectos da invenção, um distúrbio de dor inclui, sem limitação, dor resultante de tecido mole e dano periférico como trauma agudo; síndrome de dor regional complexa também mencionada como distrofia simpática de reflexo; neuralgia pós-herpética, neuralgia occipital, neuralgia trigeminal, neuralgia segmentar ou intercostal e outras neuralgias; dor associada a osteoartrite e artrite reumatóide; dor musculo-esquelético como dor associada a lesões, entorses e trauma como ossos quebrados; dor na parte inferior das costas, ciática, dor dental, síndromes miofasciais de dor, dor de episiotomia, dor de gota e dor que resulta de queimaduras; dor profunda e visceral, como dor do coração; dor muscular, dor nos olhos, dor inflamatória, dor orofacial, por exemplo, odontalgia; dor abdominal e dor ginecológica, por exemplo, dismenorréia, dor de parto e dor associada a endometriose; dor somatogênica; dor associada a dano ao nervo e raiz, como dor associada a distúrbios de nervo periférico, por exemplo, retenção de nervo, avulsões de plexus braquial, e neuropatias periféricas; dor associada à amputação de membro, tic douloureux, neuroma, ou vasculite; neuropatia diabética, neuropatia induzida por quimioterapia, neuralgia herpética e pós-herpética aguda; dor facial atípica, dor de raiz de nervo, dor neuropática na parte inferior das costas, dor neuropática relacionada a HIV, dor neuropática relacionada a câncer, dor neuropática relacionada a diabetes e aracnoidite, neuralgia trigeminal, neuralgia occipital, neuralgia segmentar ou intercostal, neuralgias relacionadas a HIV e neuralgias relacionadas a AIDS e outras neuralgias; alodinia, hiperalgesia, dor idiopática, dor causada por quimioterapia; neuralgia occipital, dor psicogênica, avulsão de plexus braquial, dor associada a síndrome de pernas inquietas; dor associada a cálculos biliares; dor causada por alcoolismo crônico ou hipotiroidismo ou uremia ou deficiências de vitamina; dor neuropática e não neuropática associada ao carcinoma, freqüentemente mencionada como dor de câncer, dor de membro fantasma, dor abdominal funcional, dor de cabeça, incluindo enxaqueca com aura, enxaqueca sem aura e outras dores de cabeça vasculares, dor de cabeça de tensão aguda ou crônica, cefaléia de seio e cefaléia em cacho; dor temperomandibular e dor de seio maxilar; dor que resulta de espondilite ancilosante e gota; dor causada por contrações aumentadas da bexiga; dor associada a distúrbios gastrointestinais (GI) , distúrbios causados por helicobacter pylori e doenças do trato GI como gastrite, proctite, úlceras gastroduodenais, úlceras pépticas, dispepsia, distúrbios associados a controle neuronal de víscera, colite ulcerativa, pancreatite crônica, doença de Crohn e emese; dor pós- operatória, dor de cicatriz, e dor não neuropática crônica como dor associada a HIV, antralgia e mialgia, vasculite e fibromialgia.
O termo "dor neuropática" se refere a dor iniciada ou causada por uma lesão primária ou disfunção no sistema nervoso. Para fins da presente invenção incluído sob esse título ou a ser tratado como sinônimo é "Dor neurogênica" que é definida como dor iniciada ou causada por uma lesão primária, disfunção ou perturbação transitória no sistema nervoso central ou periférico. Em aspectos, os usos da presente invenção incluem dor neuropática periférica ou central ou dor neurogênica. Em outros aspectos, dor neuropática inclui a dor causada por mononeuropatia ou polineuropatia. Dor neuropática também inclui Dor induzida por quimiocine.
"Dor neuropática periférica" se refere a uma dor iniciada ou causada por uma lesão primária ou disfunção no sistema nervoso periférico e "dor neurogênica periférica" se refere a uma dor iniciada ou causada por uma lesão primária, disfunção ou perturbação transitória no sistema nervoso periférico. Uma dor neuropática periférica pode ser alodinia (isto é, uma dor devido a um estímulo que não provoca normalmente dor); causalgia (isto é, uma síndrome de dor de queimação suportada, alodinia e hiperpatia após uma lesão traumática de nervo, freqüentemente combinada com disfunção sudomotor e vasomotor e alterações tróficas posteriores); hiperalgesia (isto é, uma resposta aumentada a um estímulo que é normalmente doloroso); hiperestesia (isto é, sensibilidade aumentada a estimulação, excluindo os sentidos); hiperpatia (isto é, uma síndrome dolorosa caracterizada por uma reação anormalmente dolorosa a um estímulo, especialmente um estímulo repetitivo, bem como um limite aumentado); neurite (isto é, inflamação de um nervo ou nervos); ou neuropatia (isto é, um distúrbio de função ou alteração patológica em um nervo) . [Vide IASP, Classification of chronic pain, 2a edição, IASP Press (2002), para definições detalhadas dessas categorias de dor neuropática e dor neurogênica].
Tipos exemplares de dor neuropática incluem de infecção (por exemplo, neuralgia pós herpética e neuropatia HIV), metabólica (por exemplo, neuropatia diabética e doença de Fabry), tóxica (por exemplo, de chumbo ou quimioterapia), lesão de estiramento/traumática (por exemplo, pós incisional, trauma, dor de membro fantasma, e causalgia/síndrome de dor regional complexa/distrofia simpática de reflexo) e idiopática (por exemplo, neuralgia trigeminal/tic douloureux).
Exemplos específicos de Dor Neuropática incluem neuralgia pós-herpética, neuropatia diabética dolorosa, dor de membro fantasma, dor pós-derrame central, neuropatia de HIV, doença de Fabry, neuropatia periférica, neuralgia trigeminal, dor neuropática pós incisional, dor de membro fantasma, distrofia simpática de reflexo, causalgia, anestesia dolorosa, neuralgia intercostal, dor localizada pós-traumática, dor de neuralgia facial atípica após extração de dente e similar, síndrome de dor regional complexa, dor neuropática causada por trauma, chumbo ou quimioterapia, dor de câncer resistente a analgésicos narcóticos como morfina.
O tratamento de dor neuropática pode ser definido como administração de uma dose terapêutica de um composto da fórmula I, II ou III para reduzir e pref erivelmente eliminar a dor que resulta de lesão de nervo. O tratamento de lesão de nervo pode ser definido como administração de uma dose terapêutica de um composto da fórmula I, II ou III para melhorar lesão e aumentar a taxa de recuperação. Uma taxa aumentada de recuperação é definida como uma redução de indicações de dor a partir da lesão de nervo periférico, como hiperalgesia térmica e alodinia mecânica, mais rapidamente do que seria realizado sem intervenção farmacológica ou outra intervenção médica.
"Dor induzida por quimiocine" se refere a dor que ocorre em resposta, totalmente ou em parte, a quimiocines, em particular citocinas pró-inflamatórias (por exemplo, fractalkine, CCL2 e CCL5) . Um exemplo de dor induzida por quimiocine é dor artrítica.
Compostos e processos
A invenção considera o uso de compostos isolados e puros, em particular substancialmente puros, da fórmula I onde R1, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, R13 e R14 é independentemente hidrogênio,hidroxila,alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalcóxi, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, sulfato, sulfenila, sulfinila, sulfonila, sulfonato, sulfóxido, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, =S, fosfonato, ureido, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida; e X é opcionalmente pirimidinila ou piridazinila substituída, um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado do mesmo.
A invenção também considera o uso de compostos isolados e puros, em particular, substancialmente puros, da fórmula I onde R1, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, R13 e R14 são 5 independentemente hidrogênio, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcóxi C1-C6, alquenilóxi C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, cicloalcóxi C3-C10, arila C6-C10, arilóxi C6-C10, arila C6-C10 - alcóxi C1-C3, aroíla C6-C10, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10, acila 10 C1-C6, acilóxi C1-C6, -NH2, -NHR28, -NR28R29, =NR28, -S(O)2R28, -SH, -SO3H, nitro, ciano, halo, haloalquila, haloalcóxi, hidróxi alquila, -CO2H, -CO2R28, -NHC(O)R28, -C(O)NH2, C(O)NHR28, -C(O)NR28R29, -NHS(O)2R28, onde R28 e R29 são independentemente selecionados entre alquila C1-C6,5 alquenila C2-C5, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, arila C6-C10, arila C6-C10 - alcóxi C1-C3,heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10 e X é pirimidinila ou piridazinila, um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado do mesmo.
A invenção considera ainda o uso de compostos isolados e puros, em particular substancialmente puros, da fórmula II onde R1, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, R13 e R14 são independentemente hidrogênio,hidroxila,alquila,alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalcóxi, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, sulfóxido, sulfato, sulfonila, sulfenila, sulfinila, sulfonato, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro,ciano, halo, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, = S, fosfonato, ureido, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida; ou um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado do mesmo.
A invenção considera ainda o uso de compostos isolados e puros, em particular, substancialmente puros, da fórmula II onde R1, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, R13 e R14 são independentemente hidrogênio, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcóxi C1-C6, alquenilóxi C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, cicloalcóxi C3-C10, arila C6-C10, arilóxi C6-C10, arila C6-Ci0 - alcóxi C1-C3, aroila C6-C10, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10, acila C1-C6, acilóxi C1-C6, -NH2, -NHR28, -NR28R29, =NR28, -S(O)2R28, -SH, -SO3H, nitro, ciano, halo, haloalquila, haloalcóxi, hidróxi alquila, -CO2H, -CO2R28, -NHC(O)R28, -C(O)NH2, C(O)NHR28, -C (O) NR28R29, -NHS(O)2R28, onde R28 e R29 são independentemente selecionados entre alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, arila C6-C10, arila C6-C10 - alquila C1-C3, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10 ou um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado do mesmo.
Em aspectos da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é alquila, alquenila, alquinila, alcóxi ou cicloalquila. Em certos aspectos da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcóxi C3-C6 ou cicloalquila C3-C10. Em modalidades, R1 é alquila inferior. Em outra modalidade, R1 é cicloexila.
Em aspectos da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é arila, em particular, fenila, benzila, naftila, indenila, benzociclooctenila, benzocicloeptenila, pentaenila, azulenila, tetraidronaftila, indanila, bifenila,aceftilenila, fluorenila, fenalenila, fenantrenila e antracenila. Em aspectos da invenção R1 é 5 arila substituída com um ou mais entre hidroxila, alquila, carbonila, carboxila, tiol, amino, nitro, cetona, aldeído, éster, amida, alifático inferior, arila, cicloalquila e halo. Em aspectos da invenção R1 em um composto da fórmula I ou II compreende dois anéis aromáticos fundidos.
Em aspectos da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é arilóxi, em particular arilóxi C6-C10- Em modalidades da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é naftilõxi, quinolilóxi, isoquinolizinilóxi e similares.
Em aspectos da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é arilalcóxi, em particular arilóxi C6-C10 ou arila C6-C10 - alcóxi Cx-C3. Em modalidades, R1 em um composto da fórmula I ou II é 2-feniletóxi, 3-naft-2-ilpropóxi, e 5-fenil pentilóxi.
Em aspectos da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é aroíla, em particular araoíla C6-C10. Em modalidades da invenção R1 em um composto da fórmula I ou II é benzoíla ou toluoíla.
Em aspectos da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é um heteroarila, em particular heteroarila C6-C10. R1 em um composto da fórmula I ou II compreende um ou dois anéis fixados de forma pendente; ou fundida. Em certos aspectos da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é: (a) um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, mais particularmente, pirrolila, pirrolinila, imidazolila, pirazolila, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila e similares; (b) um grupo heterociclico condensado insaturado contendo 1 a 5 átomos de nitrogênio, em particular, indolila, isoindolila, indolizinila, indazolila, quinazolinila, pteridinila, quinolizidinila, ftalazinila, naftiridinila, quinoxalinila, cinolinila, fenantridinila, acridinila, fenantrolinila, fenazinila, carbazolila, purinila, benzimidazolila, quinolinila, isoquinolinila, quinolinila, isoquinolinila, indazolila, benzotriazolila, tetrazolopiridazinila e similares; (c) um grupo heteromonocíclico com 3 a 6 membros, insaturado, contendo um átomo de oxigênio, em particular, 2-furila, 3-furila, piranila e similares; (d) um grupo heteromonocíclico com 5 a 6 membros, insaturado, contendo um átomo de enxofre, em particular, tienila, 2-tienila, 3-tienila, e similares; (e) um grupo heteromonocíclico com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 2 átomos de oxigênio e 1 a 3 átomos de nitrogênio, em particular, furazanila, benzofurazanila, oxazolila, isoxazolila, e oxadiazolila; (f) um grupo heterociclico condensado insaturado contendo 1 a 2 átomos de oxigênio e 1 a 3 átomos de nitrogênio, em particular benzoxazolila, benzoxadiazolila e similares; (g) um grupo heteromonocíclico com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 2 átomos de enxofre e 1 a 3 átomos de nitrogênio, por exemplo, tiazolila, isotiazolila, tiadiazolila e similares; ou (h) um grupo heterociclico condensado insaturado contendo 1 a 2 átomos de enxofre e 1 a 3 átomos de nitrogênio como benzotiazolila, benzotiadiazolila e similares.
Em certos aspectos da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é um heterocíclico fundido com uma arila, em particular benzofuranila, benzotiofenila, ftalazinila, cromenila, xantenila e similares.
Em aspectos específicos da invenção, R1 em um composto da fórmula I ou II é:
<formula>formula see original document page 88</formula>
Onde R15, R16 e R17 são independentemente hidrogênio, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalcóxi, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, sulfóxido, sulfato, sulfonila, sulfenila, sulfinila, sulfonato, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, =S, fosfonato, ureido, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida.
Em modalidades da invenção, R15, R16 e R17 são independentemente hidrogênio, hidroxila, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcóxi C1-C6, alquenilóxi C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, cicloalcóxi C3-C10, arila C6-C10, arilóxi C6-C10, arila C6-C10 alcóxi C1-C3, aroíla C6-C10, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10, acila C1-C6, acilóxi C1-C6, -NH2, NHR28, -NR28bR29, =NRlie, =0, =S, nitro, ciano, halo, haloalquila, haloalcóxi, hidróxi alquila, -CO2H, -CO2R28, - NHC(O)R28, -C(O)NH2, -C(O)NHR28, -C(O)NR28R29, -NHS(O)2R28, onde R28 e R29 são independentemente selecionados entre alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, arila C6-C10, arila C6-C10 - alquila C1-C3, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10.
Em outros aspectos específicos da invenção um composto da fórmula III é empregado.
<formula>formula see original document page 89</formula>
Onde R4 UI
R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12,R13,R14 R15, R16 e R17 são independentemente hidrogênio, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila,cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalcóxi, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, sulfóxido, sulfato, sulfonila, sulfenila, sulfinila, sulfonato, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, =S, fosfonato, ureido, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida.
Em aspectos da invenção, R4, R5, R6, R7, R8, R9,
R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são independentemente selecionados entre hidrogênio, alquila C1-C6, alquenila C2- C6, alquinila C2-C6, alcóxi C1-C6, alquenilóxi C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, cicloalcóxi C3- C10, arila C6-C10, arilóxi C6-C10, arila C6-C10 - alcóxi Ci-C3, aroíla C6-C10, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-10, acila C1-C6, acilóxi C1-C6, -NH2, -NHR28, -NR28R29, =NR28, -S(O)2R28, -SH, SO3H, nitro, ciano, halo, haloalquila, haloalcóxi, hidróxi alquila, -CO2H, -CO2R28, -NHC(O)R28, -C(O)NH2, - C(O)NHR28, -C (O) NR28R29, -NHS(O)2R28, onde R28 e R29 são independentemente selecionados entre alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, arila C6-C10, arila C6-C10 - alquila C1-C3, heteroarila C6-C10 e heterocíclico C3-C10.
Em geral, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 em um composto da fórmula III não podem ser, todos, hidrogênio. Em aspectos da invenção um composto da fórmula III é fornecido onde tanto R10 como R11 não são hidrogênio. Em outros aspectos da invenção um composto da fórmula II é fornecido onde R11 não é hidrogênio.
Em aspectos adicionais da invenção, compostos puros, em particular substancialmente puros, da fórmula III são empregados onde R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são independentemente hidrogênio, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, =S, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida, e R11 é alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, silila, sililõxi, sililalquila, síliltio, =0, =S, carboxila, carboníla, carbamoíla ou carboxamida; ou um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável, ou derivado do mesmo. Em aspectos da invenção, R11 é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcóxi C1-C6, alquenilóxi C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, cicloalcóxi C3-C10, arila C6-C10, arilõxi C6-C10, arila C6-C10 - alcóxi C1-C3, aroíla C6-C10, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10, acila C1-C6, acilóxi C1-C6, -NH2,
NHR28, -NR28R29, =NR28, -S(O)2R28, -SH, SO3H, nitro, ciano, halo, haloalquila, haloalcóxi, hidróxi alquila, -CO2H, CO2R28, -NHC(O)R28, -C(O)NH2, -C(O)NHR28, -C(O)NR28R29, NHS(O)2R28, onde R28 e R29 são independentemente selecionados entre alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, arila C6-C10, arila C6-C10 - alquila C1-C3, heteroarila C6-C10 e heterocíclico C3-C10.
Em certos aspectos um composto da fórmula III é empregado onde R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são independentemente hidrogênio, hidroxila, alquila, alquenila, e um ou ambos de R10 e R11 são independentemente hidrogênio substituído ou não substituído, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, sulfonila, sulfinila, sulfenila, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ureido, ciano, halo, silila, sililalquila, sililóxi, sililtío, =0, =S, carboxila, carbonila ou carbamoíla ou um isômero ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em aspectos da invenção um ou ambos entre R10 e R11 são independentemente alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcóxi C1-C6, alquenilóxi C2-C6, cicloalquila C3-Ci0, cicloalquenila C4-C10, cicloalcóxi C3-C10, arila C6-C10, arilóxi C6-C10, arila C6-C10 - alcóxi Cx-C3, aroíla C6-C10, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10, acila C1-C6, acilóxi C1-C6, -NH2, -NHR28, -NR28R29, -NR28, -S(O)2R28, -SH, SO3H, nitro, ciano, halo, haloalquila, haloalcóxi, hidróxi alquila, -CO2H, -CO2R28, -NHC(O)R28, -C(O)NH2, -C(O)NHR28, - C(O)NR28R29, -NHS(O)2R28, onde R28 e R29 são independentemente selecionados entre alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, arila C6- C10, arila C6-C10 - alquila C1-C3, heteroarila C6-C10 e heterocíclico C3-C10.
Em certos aspectos um composto da fórmula III é empregado onde R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são hidrogênio; e R10 é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcóxi C1-C6, alquenilóxi C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, cicloalcóxi C3- C10, arila C6-C10, arilóxi C6-Ci0, arila C6-C10 - alcóxi C1-C3, aroila C6-C10, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10, acila C1-C6, acilóxi C1-C6, -NH2, -NHR28, -NR28R29, =NR28, -S(O)2R28, -SH, SO3H, nitro, ciano, halo, haloalquila, haloalcóxi, hidróxi alquila, -CO2H, -CO2R28, -NHC(O)R28, -C(O)NH2, - C(O)NHR28, -C(O)NR28R29, -NHS(O)2R28, onde R28 e R29 são independentemente selecionados entre alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, arila C6-C10, arila C6-C10 - alquila C1-C3, heteroarila C6-C10 e heterocíclico C3-C10. Em certos aspectos um composto da fórmula III é empregado onde R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são hidrogênio; e R10 é hidrogênio, hidroxila, alquila (por exemplo, alquila C1-C5), arila [por exemplo, arila C6- C10, em particular, fenila que é opcionalmente substituído (por exemplo, com haleto)], heterocíclico C3-C10 (por exemplo, piperazinila que pode ser substituída, por exemplo, substituída com uma pirimidinila; ou morfolinila que pode ser substituída), -NR30R31 onde R30 é hidrogênio ou alquila, e R31 é fenila que pode ser substituído ou alquila (por exemplo, alquila C1-C6), que pode ser substituído [por exemplo, com amino, em particular - ch2ch2nh2;
Ch2Ch2NhCOOC(Ch3)3]/ OU -SR32 onde R32 é fenila que pode ser substituído; e R11 é hidrogênio, alquila ou arila (por exemplo, arila C6-C10, em particular, por exemplo fenila) que pode ser substituído.
Em aspectos da invenção R11 é alquila, halo, arila, arila substituída (Por exemplo, alquil arila), ou um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros insaturado contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio. Em uma modalidade, R11 é alquila inferior (por exemplo, alquila cx-c6) ou uma alquila ramificada. Em outra modalidade, R11 é arila c6-ci0, em particular fenila. Em outra modalidade, R11 é halo. Em uma modalidade ainda adicional, R11 é um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, por exemplo, pirrolila, pirrolinila, imidazolinila, pirazolila, 2-piridila, 3- piridila, 4-piridila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila e similares. Em uma modalidade específica, R11 é piridinila. Em certos aspectos da invenção um composto da fórmula III é empregado onde R10 é hidrogênio, halo, hidroxila opcionalmente substituída, alquila, piridinila, fenila, benzila, piperazinila, amino, morfolinila, ou -SR33 onde R33 é alquila ou arila. Em uma modalidade, R10 é - NH [CH2] mNR34R35 onde m é 1 a 6, em particular 2 a 4, R34 é hidrogênio, R35 é um carboxila, em particular -COOC(CH3)3.
Em modalidades específicas da invenção, um entre R10 e R11 em um composto da fórmula III é uma heteroarila em particular um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, mais particularmente piridinila, e o outro entre R10 e R11 é hidrogênio.
Em um aspecto da invenção um composto da fórmula III é empregado onde R11 é hidrogênio, halo, alquila opcionalmente substituída, piridinila, piperidinila, morfolinila, piperazinila ou fenila.
Em certos aspectos um composto da fórmula III é usado onde R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são hidrogênio, alquila, alcóxi, sulfonila, sulfinila, halo, tiol, ou carboxila, e R11 é alquila, alquenila, alcóxi, alquenilóxi, arila, heteroarila, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, silila, =0, =S, carboxila, carbonila, carbamoíla, ou carboxamida; ou um isômero ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em aspectos específicos, R11 é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alcóxi C1-C6, alquenilóxi C2-C6, arila C6-C10, heteroarila C6-C10, acila C1-C6, acilóxi C1-C6, -NH2, -NHR28, -NR28R29, =NR28, - S(O)2R28, -SH, SO3H, nitro, ciano, halo, haloalquila, haloalcóxi, -CO2H, -CO2R28, -NHC(O)R28, -C(O)NH2, -C(O)NHR28, -C(O)NR28R29, -NHS(O)2R28, onde R28 e R29 são independentemente selecionados entre alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, arila C6-C10, arila C6-C10- alquila C1-C3, heteroarila C6-C10 e heterocíclico C3-C10.
Em aspectos da invenção, um composto da fórmula III é empregado onde R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são hidrogênios, e R11 é alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alcóxi, arila, ou um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros insaturado contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio. Em aspectos específicos, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são hidrogênios, e R11 é alquila ou piridinila, mais particularmente R11 é alquila.
Em outros aspectos da invenção, um entre R10 e R11 em um composto da fórmula III é alquila, em particular alquila C1-C6 e o outro entre R10 e R11 é hidrogênio.
Em modalidades específicas da invenção, um entre R10 e R11 em um composto da fórmula III é arila em particular arila C6-C10, mais particularmente fenila ou benzila, e o outro entre R10 e R11 é hidrogênio.
Em modalidades da invenção, o composto da fórmula II é um composto na tabela 1 ou 2.
Em modalidades específicas da invenção, o composto da fórmula III é MWOl-6-189WH, MW01-5-188WH, ou MWO1- 2 -15ISRM, e/ou um sal ou derivados do mesmo.
Em modalidades mais específicas, o composto da fórmula II é 4-metil-6-fenil-3 -(4-pirimidin-2-il piperazin- 1-ila) píridazina (MW01-2-151SRM), e/ou um sal ou derivado do mesmo.
Em modalidades mais específicas, o composto da fórmula II é 4,6-difenil-3-(4-pirimidin-2-il piperazin-1- ila) piridazina (MW01-5-188WH) e/ou um sal ou derivado do mesmo.
Um composto da fórmula I, II ou III pode estar na forma de um pró-medicamento que é convertido in vivo em um composto ativo. Por exemplo, em um composto da fórmula II um ou mais entre R10 e R11 pode compreender um grupo clivável que é clivado após administração a um sujeito para fornecer um composto ativo (por exemplo, terapeuticamente ativo), ou um composto intermediário que subseqüentemente fornece o composto ativo. Um grupo clivável pode ser um éster que é removido quer enzimática ou não enzimaticamente.
Um composto da fórmula I, II ou III pode compreender um portador, como um ou mais entre um polímero, carboidrato, peptídeo ou derivado do mesmo, que pode ser fixado direta ou indiretamente de forma covalente ao composto. Um portador pode ser substituído com substituintes descritos aqui incluindo sem limitação, um ou mais grupos de alquila, amino, nitro, halogênio, tiol, tioalquila, sulfato, sulfonila, sulfinila, sulfóxido, hidroxila. Em aspectos da invenção o portador é um aminoácido incluindo alanina, glicina, pralina, metionina, serina, treonina, asparagina, alanil-alanil, propil- metionila ou glicila-glicila. Um portador também pode incluir uma molécula que alveja um composto da fórmula I, II ou III a um tecido ou órgão específico. Desse modo, um portador pode facilitar ou aumentar transporte de um composto da fórmula I, II ou III para o cérebro.
Os compostos da fórmula I, II ou III podem ser preparados utilizando reações e métodos genericamente conhecidos pela pessoa com conhecimentos comuns na técnica, com relação ao conhecimento e a revelação desse pedido incluindo os exemplos. As reações são executadas em um solvente apropriado para os reagentes e materiais utilizados e adequados para as reações sendo efetuadas. Será entendido por aqueles versados na técnica de síntese orgânica que a funcionalidade presente nos compostos deve ser compatível com as etapas de reação propostas. Isso às vezes exigirá modificação da ordem das etapas sintéticas ou seleção de um esquema de processo específico em relação a outro para obter um composto desejado da invenção. Será também reconhecido que outra grande consideração no desenvolvimento de uma via sintética é a seleção do grupo de proteção utilizado para proteção dos grupos funcionais reativos presentes nos compostos descritos na presente invenção. Uma conta de autoridade que descreve as muitas alternativas para o técnico especializado é Greene e Wuts (Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley and Sons, 1991) .
Os materiais de partida e reagentes utilizados na preparação de compostos ou a invenção são disponíveis a partir de fornecedores comerciais ou são preparados por métodos bem conhecidos por uma pessoa de conhecimentos comuns na técnica, seguindo procedimentos descritos em tais referências como Reagents for organic synthesis de Fieser and Fieser, vols. 1-17, John Wiley and Sons, Nova York, N.Y., 1991; Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, vols. 1 - 5 e supps., Elsevier Science Publishers, 1989; Organic Reactions, vols. 1-40, John Wiley and Sons, Nova York, N.Y., 1991; March J.: Advanced Organic Chemistry, 4a ed., John Wiley and Sons, Nova York, N.Y.; e Larock: Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Nova York, 1989.
Os materiais de partida, intermediários e compostos da fórmula I, II ou III podem ser isolados e purificados utilizando técnicas convencionais, como precipitação, filtração, destilação, cristalização, cromatografia e similares. Os compostos da fórmula I, II ou III podem ser caracterizados utilizando métodos convencionais, incluindo constantes físicas e métodos espectroscópicos, em particular HPLC.
Os compostos da fórmula I, II ou III que são de natureza básica podem formar uma ampla variedade de sais diferentes com vários ácidos inorgânicos e orgânicos. Na prática é desejável primeiramente isolar um composto da fórmula I, II ou III a partir da mistura de reação como um sal farmaceuticamente inaceitável e então converter o último em composto de base livre por tratamento com um reagente alcalino e subseqüentemente converter a base livre em um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável. Os sais de adição de ácido dos compostos de base da fórmula I, II ou III são prontamente preparados por tratamento do composto base com uma quantidade substancialmente equivalente do ácido inorgânico ou orgânico ou mineral escolhido em um meio de solvente aquoso ou em um solvente orgânico apropriado como metanol ou etanol. Após evaporação cuidadosa do solvente, o sal sólido desejado é obtido. Os compostos da fórmula I, II ou III que são de natureza acídica são capazes de formar sais de base com vários cátions farmacologicamente aceitáveis. Esses sais podem ser preparados por técnicas convencionais por tratamento dos compostos acídicos correspondentes com uma solução aquosa contendo os cátions farmacologicamente aceitáveis desejados e então evaporar a solução resultante até secura, preferivelmente sob pressão reduzida. Alternativamente, podem ser preparados por mistura de soluções alcanólicas inferiores dos compostos acídicos e o alcóxido de metal alcalino desejado junto e então evaporar a solução até secura do mesmo modo como anteriormente. Em qualquer caso, as quantidades estequiométricas de reagentes são tipicamente empregadas para assegurar conclusão de reação e rendimentos máximos do produto.
Em aspectos específicos, a presente invenção provê métodos de fazer os compostos revelados aqui, compreendendo as etapas fornecidas (vide, por exemplo, as figuras e exemplos).
Em um aspecto, a invenção provê um processo para preparar um composto da fórmula III onde R11 é hidrogênio e R10 é um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, em particular, pirrolila, pirrolinila, imidazolila, pirazolila, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila, mais particularmente piridinila, que compreende reagir um composto da fórmula III onde R10 é halo, em particular cloro, e R11 é hidrogênio com ácido borônico substituído com um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, em particular, pirrolila, pirrolinila, imidazolila, pirazolila, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila, mais particularmente piridinila, sob condições adequadas para preparar um composto da fórmula III onde R11 é hidrogênio e R10 é um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, em particular, pirrolila, pirrolinila, imidazolila, pirazolila, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila, mais particularmente piridinila.
Em outro aspecto, a invenção provê um processo para preparar um composto da fórmula III onde R11 é hidrogênio e R10 é uma arila substituída que compreende reagir um composto da fórmula III onde R10 é halo, em particular cloro, e R11 é hidrogênio, com um ácido borônico de arila substituído sob condições apropriadas para preparar um composto da fórmula III onde R11 é hidrogênio e R10 é uma arila substituída.
Em outro aspecto, a invenção provê um processo para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é alquila que compreende reagir um composto da fórmula III onde R11 é halo, em particular cloro, e R10 é hidrogênio, com um ácido borônico de alquila sob condições apropriadas para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é alquila. Em uma modalidade, R11 é alquila inferior, em particular metila ou etila, e um composto da fórmula III onde R11 é cloro é reagido com ácido borônico de alquila inferior, em particular ácido borônico de etila ou metila sob condições apropriadas.
Em outro aspecto, a invenção provê um processo para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é arila que compreende reagir um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é halo (por exemplo, cloro), com piridazina substituída na posição C3 com halo (por exemplo, cloro) , na posição C4 com arila, e na posição 6 com fenila, com 2 -(piperidin-4-ilõxi) pirimidina sob condições apropriadas para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é arila. Em uma modalidade, R11 é fenila.
Em outro aspecto, a invenção provê um processo para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, em particular, em particular, pirrolila, pirrolinila, imidazolila, pirazolila, 2-piridila, 3-piridila, 4- piridila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila, mais particularmente piridinila, que compreende reagir um composto da fórmula III onde R11 é halo, em particular cloro, e R10 é hidrogênio com ácido borônico substituído com um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, em particular, pirrolila, pirrolinila, imidazolila, pirazolila, 2-piridila, 3- piridila, 4-piridila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila, mais particularmente piridinila, sob condições adequadas para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, em particular, pirrolila, pirrolinila, imidazolila, pirazolila, 2- piridila, 3-piridila, 4-piridila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila, mais particularmente piridinila.
Em uma modalidade, a invenção provê um processo para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é piridinila que compreende reagir um composto da fórmula III onde R11 é halo, em particular cloro, e R10 é hidrogênio, com um ácido borônico de piridinila sob condições apropriadas para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é piridinila.
Em outro aspecto, a invenção provê um processo para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros insaturado contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, em particular, pirrolila, pirrolinila, imidazolila, pirazolila, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila, mais particularmente piridinila, que compreende reagir uma piridazina substituída na posição C3 com halo,na posição C4 com um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros insaturado contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, em particular, pirrolila, pirrolinila, imidazolila, pirazolila, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila, mais particularmente piridinila, e na posição 6 com fenila, com 2- (piperidin-4-ilóxi) pirimidina sob condições apropriadas para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros insaturado contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, em particular, pirrolila, pirrolinila, imidazolila, pirazolila, 2-piridila, 3-piridila, 4- piridila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, triazolila, tetrazolila, mais particularmente piridinila.
Em uma modalidade, a invenção provê um processo para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é piridinila que compreende reagir uma piridazina substituída na posição C3 com halo, na posição C4 com piridinila, e na posição 6 com fenila, com 2- (piperidin-4-ilóxi) pirimidina sob condições apropriadas para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é piridinila.
Em outro aspecto, a invenção provê um processo para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é piperidinila ou piperidinila substituída que compreende reagir um composto da fórmula II onde R11 é halo, em particular cloro, e R10 é hidrogênio com piperazinila ou piperazinila substituída sob condições apropriadas para preparar um composto da fórmula II onde R10 é hidrogênio e R11 é piperidinila ou piperidinila substituída.
Em outro aspecto, a invenção provê um processo para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é uma alquila que compreende reagir uma piridazina substituída na posição C3 com halo (por exemplo, cloro), na posição C4 com alquila, e na posição 6 com fenila, com 2 -(piperidin-4-ilóxi) pirimidina sob condições apropriadas para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é uma alguila. Em uma modalidade, R11 é metila ou etila.
Em um aspecto especifico, a invenção provê um processo para preparar um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é alquila compreendendo reagir um composto da fórmula IV
<formula>formula see original document page 104</formula>
Onde R1' é halo, em particular cloro ou bromo, mais particularmente cloro e R2' é alquila com 2-(piperazin- 1-il) pirimidina sob condições apropriadas, em particular sob condições de refluxo para produzir um composto da fórmula III onde R10 é hidrogênio e R11 é alquila.
Eficácia terapêutica e toxicidade de compostos, composições e métodos da invenção podem ser determinados por procedimentos farmacêuticos padrão em culturas de células ou com animais experimentais como por cálculo de um parâmetro estatístico como estatísticas ED50 (a dose que é terapeuticamente eficaz em 50% da população) ou LD50 (a dose letal a 50% da população). O índice terapêutico é a razão de dose de terapêutico para efeitos tóxicos e pode ser expresso como a razão ED5o/LD50. Composições farmacêuticas que apresentam índices terapêuticos grandes são preferidas. Como exemplo, um ou mais dos efeitos terapêuticos podem ser demonstrados em um sujeito ou modelo de doença, por exemplo, um camundongo TgCRND8 com sintomas de doença de Alzheimer.
Investigações biológicas foram feitas com compostos revelados aqui que eram >95% homogêneos como determinado por análise HPLC/MS. Como parte de um protocolo de triagem baseado em célula, de hierarquia, os compostos foram classificados em relação a sua capacidade de bloquear a produção de IL-1β e TNFa por células microgliais de camundongo BV-2 estimuladas com LPS.
Composições, métodos e kits
A invenção provê formas de dosagem, formulações e métodos que fornecem vantagens, em particular risco mais baixo de efeitos colaterais (por exemplo, risco mais baixo de efeitos colaterais relacionados a QT) e/ou perfis farmacocinéticos benéficos, mais particularmente perfis farmacocinéticos controlados. Um composto da fórmula I, II ou III pode ser utilizado em formas de dosagem em forma pura ou substancialmente pura, na forma de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, e também em outras formas incluindo formas anidras ou hidratadas.
Um perfil farmacocinético benéfico pode ser obtido por administração de uma forma de formulação ou dosagem apropriada para administração uma vez, duas vezes por dia, ou três vezes ou mais por dia compreendendo um ou mais composto da fórmula I, II ou III presente em uma quantidade suficiente para fornecer a concentração exigida ou dose do composto para um ambiente de uso para tratar uma doença revelada aqui, em particular uma doença neuroinflamatória. Em um aspecto, o ambiente de uso é o cérebro e/ou plasma.
Modalidades da invenção referem-se a uma forma de dosagem compreendendo um ou mais composto da fórmula I, II ou III que fornece concentrações de plasma de pico do composto Cmax, entre aproximadamente 0,001 e 2 mg/ml, 0,001 e 1 mg/ml, 0,002 e 2 mg/ml, 0,005 e 2 mg/ml, 0,01 e 2 mg/ml, 0,05 e 2 mg/ml, 0,1 a 2 mg/ml, 0,001 e 0,5 mg/ml, 0,002 e 1 mg/ml, 0,005 e 1 mg/ml, 0,01 e 1 mg/ml, 0,05 e 1 mg/ml ou 0,1 e 1 mg/ml.
Em aspectos adicionais, a invenção prove uma formulação ou forma de dosagem compreendendo um ou mais composto da fórmula I, II ou III que fornece uma eliminação ti/2 de 0,5 a 20 horas, 0,5 a 15 horas, 0,5 a 10 horas, 0,5 a 6 horas, 1 a 20 horas, 1 a 15 horas, 1 a 10 horas ou 1 a 6 horas.
Aspectos adicionais da invenção referem-se a uma formulação ou forma de dosagem compreendendo um ou mais composto da fórmula I, II ou III que fornece um AUC para plasma de aproximadamente 3 a 2000 ng.h/ml, 3 a 3000 ng.h/ml, 3 a 4000 ng.h/ml, 2 a 2000 ng.h/ml, 2 a 3000 ng.h/ml, 2 a 4000 ng.h/ml, 1 a 2000 ng.h/ml, 1 a 3000 ng.h/ml, 1 a 4000 ng.h/ml, 1, e em particular 3 a 3000 ng.h/ml.
Um sujeito pode ser tratado com um composto da fórmula I, II ou III ou composição ou dosagem unitária do mesmo substancialmente em qualquer programa desejado. Pode ser administrado uma ou mais vezes por dia, em particular 1 ou 2 vezes por dia, uma vez por semana, uma vez por mês ou continuamente. Entretanto, um sujeito pode ser tratado menos freqüentemente, como em dias alterados ou uma vez por semana, ou mais freqüentemente. Um composto ou composição pode ser administrado a um sujeito por aproximadamente ou pelo menos aproximadamente 24 horas, 2 dias, 3 dias, 1 semana, 2 semanas a 4 semanas, 2 semanas a 6 semanas, 2 semanas a 8 semanas, 2 semanas a 10 semanas, 2 semanas a 12 semanas, 2 semanas a 14 semanas, 2 semanas a 16 semanas, 2 semanas a 6 meses, 2 semanas a 12 meses, 2 semanas a 18 meses, 2 semanas a 24 meses, ou por mais de 24 meses, periódica ou continuamente.
Em um aspecto, um perfil farmacocinético benéfico pode ser obtido pela administração de uma formulação ou forma de dosagem apropriada para administração de uma vez, duas vezes, ou três vezes por dia, pref erivelmente administração de duas vezes por dia compreendendo um ou mais composto da fórmula I, II ou III presente em uma quantidade suficiente para fornecer a dose exigida do composto. Em um aspecto, a dose exigida de um composto da fórmula I, II ou III administrada uma vez, duas vezes, três ou mais vezes por dia é aproximadamente 0,01 a 3000 mg/kg, 0,01 a 2000 mg/kg, 0,5 a 2000 mg/kg, aproximadamente 0,5 a 1000 mg/kg, 0,1 a 1000 mg/kg, 0,1 a 500 mg/kg, 0,1 a 400 mg/kg, 0,1 a 300 mg/kg, 0,1 a 200 mg/kg, 0,1 a 100 mg/kg, 0,1 a 50 mg/kg, 0,1 a 20 mg/kg, 0,1 a 10 mg/kg, 0,1 a 6 mg/kg, 0,1 a 5 mg/kg, 0,1 a 3 mg/kg, 0,1 a 2 mg/kg, 0,1 a 1 mg/kg, 1 a 1000 mg/kg, 1 a 500 mg/kg, 1 a 400 mg/kg, 1 a 300 mg/kg, 1 a 200 mg/kg, 1 a 100 mg/kg, 1 a 50 mg/kg, 1 a 20 mg/kg, 1 a 10 mg/kg, 1 a 6 mg/kg, 1 a 5 mg/kg, ou 1 a 3 mg/kg, ou 1 a 2,5 mg/kg, ou menos ou aproximadamente 10 mg/kg, 5 mg/kg, 2,5 mg/kg, 1 mg/kg, ou 0,5 mg/kg duas vezes por dia ou menos.
Certas formas de dosagem e formulações podem minimizar a variação entre níveis de plasma e/ou cérebro de pico e calha, de compostos da fórmula I, II ou III e em particular fornecer uma quantidade terapeuticamente eficaz controlada dos compostos.
A invenção também considera uma formulação ou forma de dosagem compreendendo quantidades de um ou mais composto da fórmula I, II ou III que resulta em quantidades terapeuticamente eficazes do composto durante um período de dosagem, em particular um período de dosagem de 24 horas.
Em aspectos da invenção as quantidades terapeuticamente eficazes de um composto da fórmula I, II ou III estão entre aproximadamente 0,1 a 1000 mg/kg, 0,1 a 500 mg/kg, 0,1 a 400 mg/kg, 0,1 a 300 mg/kg, 0,1 a 200 mg/kg, 0,1 a 100 mg/kg, 0,1 a 75 mg/kg, 0,1 a 50 mg/kg, 0,1 a 25 mg/kg, 0,1 a 20 mg/kg, 0,1 a 15 mg/kg, 0,1 a 10 mg/kg, 0,1 a 9 mg/kg, 0,1 a 8 mg/kg, 0,1 a 7 mg/kg, 0,1 a 6 mg/kg, 0,1 a 5 mg/kg, 0,1 a 4 mg/kg, 0,1 a 3 mg/kg, 0,1 a 2 mg/kg ou 0,1 a 1 mg/kg.
Um medicamento ou tratamento da invenção pode compreender uma dosagem unitária de pelo menos um composto da fórmula I, II ou III para fornecer efeitos terapêuticos. Uma "dosagem unitária" ou unidade de dosagem se refere a uma dose unitária, isto é, uma dose única, que é capaz de ser administrada a um paciente, e que pode ser facilmente manipulada e embalada, permanecendo como uma dose unitária física e quimicamente estável compreendendo os agentes ativos como tal ou uma mistura com um ou mais excipientes, portadores ou veículos farmacêuticos sólidos ou líquidos. Uma formulação ou forma de dosagem da invenção pode ser uma forma de dosagem de liberação imediata ou um sistema de fornecimento de liberação não imediata, incluindo sem limitação uma forma de dosagem de liberação controlada ou liberação retardada.
Em aspectos, a invenção prove uma forma de dosagem de liberação controlada de um composto da fórmula I, II ou III que vantajosamente obtém uma resposta de nível em plasma e/ou cérebro de droga controlada enquanto diminui ou elimina pontas de concentração de droga pela provisão de uma liberação substancialmente constante do composto com o passar do tempo. Uma concentração de plasma substancialmente constante correlaciona preferivelmente com um ou mais efeitos terapêuticos revelados aqui. Em modalidades, a forma de dosagem de liberação controlada é para administração oral.
Uma composição, em particular uma forma ou formulação de dosagem, pode estar em qualquer forma apropriada para administração a um sujeito, incluindo sem limitação, uma forma apropriada para administração oral, parenteral, intravenosa (bolo ou infusão), intraperitoneal, subcutânea, ou intramuscular. Uma forma de dosagem ou formulação pode ser uma pílula, tablete, caplet, cápsula de gelatina mole e dura, pastilha, sachê, cachet, vegicap, gota líquida, elixir, suspensão, emulsão, solução, xarope, aerossol (como um sólido ou em um meio líquido) , supositório, solução injetável estéril, e/ou pó embalado estéril.
Em um aspecto da invenção uma forma de dosagem ou formulação é uma forma ou formulação de dosagem oral como tabletes, caplets, cápsulas de gelatina mole e dura, pílulas, pós, grânulos, elixires, tinturas, suspensões, xaropes, e emulsões. Em outro aspecto a forma ou formulação de dosagem é uma forma de dosagem parenteral como uma substância ativa em um solvente aquoso ou não aquoso estéril, como água, solução salina isotônica, solução de glicose isotônica, solução de tampão, ou outros solventes convenientemente utilizados para administração parenteral.
Um composto da fórmula I, II ou III da invenção pode ser formulado em uma composição farmacêutica para administração a um sujeito por métodos apropriados conhecidos na técnica. Composições farmacêuticas da presente invenção ou frações das mesmas compreendem veículos, excipientes e portadores farmaceuticamente aceitáveis, apropriados selecionados com base na forma de administração pretendida, e compatível com práticas farmacêuticas convencionais. Veículos, excipientes e portadores farmacêuticos apropriados são descritos no texto padrão, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (21a edição, 2005, University of the Sciences in Philadelphia (editor), Mack Publishing Company), e na The United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 24 NFl 9) publicado em 1999. Como exemplo para administração oral na forma de uma cápsula ou tablete, os componentes ativos podem ser combinados com um veículo inerte farmaceuticamente aceitável, não tóxico, oral como lactose, amido, sacarose, metil celulose, estearato de magnésio, glicose, sulfato de cálcio, fosfato de dicálcio, manitol, sorbitol e similares. Para administração oral em uma forma líquida, os componentes de droga podem ser combinados com qualquer veículo inerte farmaceuticamente aceitável, não tóxico oral, como etanol, glicerol, água e similares. Aglutinantes apropriados (por exemplo, gelatina, amido, edulcorantes de milho, açúcares naturais incluindo glicose; gomas naturais e sintéticas, e ceras), lubrificantes (por exemplo, oleato de sódio, estearato de sódio, estearato de magnésio, benzoato de sódio, acetato de sódio, e cloreto de sódio), agentes desintegrantes (por exemplo, amido, metil celulose, agar, bentonita, e goma xantana), agentes aromatizantes, e agentes corantes também podem ser combinados nas composições ou componentes dos mesmos. Composições como descrito aqui podem compreender ainda agentes umectantes ou emulsificantes, ou agentes de tamponamento de pH.
Uma composição da invenção pode ser uma solução líquida, suspensão, emulsão, tablete, pílula, cápsula, formulação de liberação controlada ou pó. As composições podem ser formuladas como um supositório, com aglutinantes tradicionais e veículos como triglicerídeos. Formulações orais podem incluir veículos padrão como tipos farmacêuticos de manitol, lactose, amido, estearato de magnésio, sacarina de sódio, celulose, carbonato de magnésio, etc. Vários sistemas de distribuição são conhecidos e podem ser utilizados para administrar uma composição da invenção, por exemplo, encapsulação em lipossomas, micropartículas, microcápsulas, e similares.
Formulações para administração parenteral podem incluir soluções aquosas, xaropes, suspensões aquosas ou de óleo e emulsões com óleo comestível como óleo de semente de algodão, óleo de coco ou óleo de amendoim. Agentes de suspensão ou dispersão que podem ser utilizados para suspensões aquosas incluem gomas sintéticas ou naturais, como tragacanto, alginato, acácia, dextrano, carbóxi metil celulose de sódio, gelatina, metil celulose e polivinil pirrolidona.
Composições para administração parenteral podem incluir solventes aquosos ou não aquosos estéreis, como água, solução salina isotônica, solução de glicose isotônica, solução de tampão ou outros solventes convenientemente utilizados para administração parenteral de agentes terapeuticamente ativos. Uma composição destinada à administração parenteral também pode incluir aditivos convencionais como estabilizadores, tampões, ou conservantes, por exemplo, antioxidantes como metil hidróxi benzoato ou aditivos similares.
Uma composição da invenção pode ser esterilizada, por exemplo, por filtração através de um filtro de retenção de bactérias, adição de agentes de esterilização à composição, irradiação da composição ou aquecimento da composição. Alternativamente, os compostos ou composições da presente invenção podem ser fornecidos como preparados sólidos estéreis, por exemplo, pó liofilizado que são prontamente dissolvidos em solvente estéril imediatamente antes do uso.
Após preparação das composições farmacêuticas, as mesmas podem ser colocadas em um recipiente apropriado e rotuladas para tratamento de uma condição indicada. Para administração de uma composição da invenção, tal rotulação incluiria quantidade, freqüência e método de administração.
De acordo com a invenção, é fornecido um kit. Em um aspecto, o kit compreende um composto da fórmula I, II ou III ou uma formulação da invenção em forma de kit. O kit pode ser uma embalagem que aloja um recipiente que contém compostos da fórmula I, II ou III ou formulações da invenção e também aloja instruções para administrar os compostos ou formulações a um sujeito. A invenção refere-se ainda a uma embalagem comercial compreendendo compostos da fórmula I, II ou III ou formulações da invenção juntamente com instruções para uso simultâneo, separado ou seqüencial.
Em particular um rótulo pode incluir quantidade, freqüência e método de administração.
A invenção também prove um pacote ou kit farmacêutico compreendendo um ou mais recipientes cheios de um ou mais dos ingredientes de uma composição da invenção para fornecer um efeito terapêutico. Associado a tal (tais) recipiente(s) pode haver vários materiais escritos como instruções para uso, ou um aviso na forma prescrita por um órgão governamental que regula a rotulação, fabricação, uso ou venda de produtos farmacêuticos ou produtos biológicos, cujo aviso reflete aprovação pelo órgão de fabricação, uso ou venda para administração humana.
A invenção também se refere a artigos de manufatura e kits contendo materiais úteis para tratamento de uma doença revelada aqui. Um artigo de manufatura pode compreender um recipiente com um rótulo. Os exemplos de recipientes apropriados incluem garrafas, frascos e tubos de teste que podem ser formados de uma variedade de materiais incluindo vidro e plástico. Um recipiente retém compostos da fórmula I, II ou III ou formulações da invenção que são eficazes para tratar uma doença revelada aqui. O rótulo no recipiente indica que os compostos da fórmula I, II ou III ou formulações da invenção são utilizados para tratar uma doença revelada aqui e também podem indicar orientações para uso. Em aspectos da invenção, um medicamento ou formulação em um recipiente pode compreender quaisquer dos medicamentos ou formulações reveladas aqui.
A invenção também considera kits compreendendo um ou mais dos compostos da fórmula I, II ou III. Em aspectos da invenção, um kit da invenção compreende um recipiente descrito aqui. Em aspectos específicos, um kit da invenção compreende um recipiente descrito aqui e um segundo recipiente compreendendo um tampão. Um kit pode incluir adicionalmente outros materiais desejáveis a partir de um ponto de vista de usuário e comercial, incluindo, sem limitação, tampões, diluentes, filtros, agulhas, seringas, e inserções de pacote com instruções para executar quaisquer métodos revelados aqui (por exemplo, métodos para tratar uma doença revelada aqui). Um medicamento ou formulação em um kit da invenção pode compreender qualquer uma das formulações ou composições reveladas aqui.
Em aspectos da invenção, os kits podem ser úteis para qualquer um dos métodos revelados aqui, incluindo, sem limitação tratar um sujeito que sofre de doença de Alzheimer. Os kits da invenção podem conter instruções para pôr em prática quaisquer dos métodos descritos aqui.
As composições e métodos descritos aqui são indicados como agentes terapêuticos ou métodos quer individualmente ou em combinação com outros agentes terapêuticos ou outras formas de tratamento. Podem ser co- administrados, combinados ou formulados com uma ou mais terapias ou agentes utilizados para tratar uma condição descrita aqui. As composições da invenção podem ser administradas simultaneamente, separadamente ou seqüencialmente com outros agentes terapêuticos ou terapias. Portanto, os compostos da fórmula I, II ou III podem ser co-administrados com um ou mais agentes terapêuticos adicionais para tratar doenças reveladas aqui incluindo sem limitação, inibidores beta-secretase, inibidores alfa-secretase, e inibidores epsilon-secretase, inibidores de acetil colinesterase, agentes que são utilizados para tratamento de complicações resultante de ou associadas a uma doença revelada aqui, ou medicações gerais que tratam ou evitam efeitos colaterais.
A invenção será descrita em maior detalhe por intermédio de exemplos específicos. Os seguintes exemplos são oferecidos para fins ilustrativos, e não pretendem limitar de modo algum a invenção.
Exemplos
EXEMPLO 1
Síntese de compostos de piridazina As estruturas de MWOl-2-151SRM, MWO1-6-189WH, MW 01-7-107WH, MWO1-4-179LKM, WMO1-7- 084WH, MHOl-7-085WH, MWO1- 7 -13 3WH, e MW01-7-057 são mostradas na figura 1 e esquemas sintéticos para produzir os compostos são descritos abaixo.
A . Preparação de 2 - (4 - ( 6 - f enil piridazina-3 - ila) piperazina-1-ila) pirimidina (MW01-3-183WH)
A figura 2 representa um esquema sintético para a preparação de 2-(4 -(6-fenilpiridazina-3-ila) piperazina-1- il) pirimidina (MW01-3-183WH). Reagentes e condições: (a) 1-BuOH, NH4Cl, e 2-(piperazina-1-il) pirimidina. Uma mistura de reação típica compreendendo aproximadamente 0,01 mol de 3-cloro-6-fenil piridazina por 2-(piperazina-1-il) pirimidina, aproximadamente 0,05mol de 2 -(piperazina-1-il) pirimidina e aproximadamente 0,01 mol de cloridrato de amônio foi preparada em aproximadamente 15 ml de 1-BuOH. A mistura foi agitada em aproximadamente 130°C por aproximadamente 48 h, e então o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo restante foi então extraído com acetato de etila, lavado com água e salmoura, seco sobre Na2SO4 anidro. A remoção de solvente seguida por recristalização de 95% de etanol forneceu cristais amarelo claro, rendimento 96,4%; HPLC: 97,4% de pureza; HRMS calculado 318.1587, encontrado 318.1579; 1H NMR (CDCl3): δ 8,356 (d, J = 4,5, 2H), 8,011 (d, J= 7,5, 11,2H), 7,692 (d, J = 9,5, 1H) , 7,468 (t, J = 6,0, 2H) , 7,417 (d, J = 7,5, 1H) , 7,047 (d, J = 9,5, 1H) , 6,546 (t, J = 4,5, 1H), 4,013 (t, J = 5,0, 4H) , 3,826 (t, J = 5,0, 4H) .
B. Preparação de 4-metil-6-fenil-3 -(4-pirimidina- 2-il piperazina-l-ila) piridazina (MW01-2-151SRM)
4-metil-6-fenila-3-(4-pirimidina-2-il piperazina- 1-ila) piridazina (MW01-2-151SRM) foi preparado por vários esquemas sintéticos como representado na figura 3 (esquema 1), figura 4 (esquema 2), figura 5 (esquema 3), e figura 6 (esquema 4), que foram realizados como descrito em detalhe aqui. Os vários esquemas de reação (esquemas 1, 2 e 3) são genericamente aplicáveis aos compostos da presente invenção e não são restritos em utilidade somente ã preparação de MW01-2 -15ISRM. Esquema 1 (figura 3)
4,5-diidro-4-metil-6 -fenil piridazina-3 -(2H)-ona (2)
Um frasco de fundo redondo de três gargalos de 250 mL adaptado com uma sonda de temperatura e condensador é carregado com 7,7 g (40 mmol) de 2-metil-4-oxo-4-ácido fenil butanóico 1 e 20 ml de etanol (95%). A suspensão é resfriada até abaixo de 10°C e 2,2 ml (42 mmol, 1,05 equi.) de monoidrato de hidrazina em 10 mL de etanol é adicionada em gotas a uma taxa que mantém a temperatura da solução abaixo de 20 °C. Após adição, a suspensão muda para uma solução amarela desbotada. Após adição, a mistura de reação é aquecida até refluxo e agitada por 2 h, e após 20 minutos de aquecimento, um sólido é visto na mistura. Após conclusão da reação, o frasco é removido a partir do banho de óleo e resfriado até a temperatura ambiente. Após resfriamento, cristais brancos se formam no frasco, os quais são coletados por filtração. O sólido é lavado primeiramente com 3 0 mL de 2N NaHCO3, seguido por 6 0 ml de água Milli-Q três vezes, e seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer o produto desejado 2 em 96,1 de rendimento. [Vide Hansen, KB e outros. Organic process research & development, 2005, 9, 634-639; Nelson, DA. US 20050137397A1. Coudert, P. e outros Journal of Heterocyclic Chemistry, 1988, 25(3), 799-802.] 4-metil-6-fenilpiridazina-3(2H) -ona (3) 7,0 g (35 mmol) de 2 são colocados em um frasco de fundo redondo com gargalo único de 250 ml, seguido por 30 mL de acetonitrila. A mistura é agitada para permitir que se dissolva. 11,3 g (84 mmol, 2,4 equiv.) de cloreto de cobre anidro (II) são adicionados à solução para fornecer uma suspensão amarelo-esverdeado. Um condensador de refluxo é conectado ao frasco e um tubo seco cheio de CaCl2 anidro é adaptado no topo do condensador. Para controlar o gás HCl que forma durante o curso da reação, uma solução de NaOH é utilizada para absorver o HCl que escapa do tubo seco. A mistura de reação é aquecida até refluxo, e a cor da suspensão de reação muda para verde escuro após aquecimento. Quando a reação é concluída (após refluxo por 2 h), o frasco é removido do banho de óleo e resfriado até a temperatura ambiente. A reação é resfriada em um banho de água gelada e 15 0 mL de água gelada são adicionados para resfriar bruscamente a reação. A mistura é agitada vigorosamente por 10 minutos para fornecer um precipitado cinza e líquido azul contendo cloreto de cobre (I) . O precipitado é coletado por filtração (pH do filtrado é 0 - 1) e lavado com 100 mL de solução IN HCl, então 100 mL de água 5 vezes. Para remover os subprodutos de cobre restantes que são retidos no sólido, a massa de filtro é agitada em 150 mL de solução IN HCl por 0,5 h e filtrada. A massa filtrada é subseqüentemente lavada com água Milli-Q até que o filtrado esteja em pH 7 (aproximadamente 7 lavagens). O sólido é seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer 3 como um pó cinza claro em 93,8% de rendimento. [Vide Eddy, S. e outros Synthetic Communications, 2000, 30(1), 1-7. Csende, F. e outros Synthesis, 1995, 1240-1242.]
3-cloro-4-metil-6-fenil piridazina (4) 6,0 g (32 mmol) de 3 são colocados em um frasco de fundo redondo com gargalo único de 250 mL e 3 0 mL de acetonitrila são adicionados para criar uma pasta amarelo pálido. 6,0 ml (64 mraol, 2 equiv.) de oxicloreto de fósforo é adicionado mudando a pasta para uma cor mais escura. O frasco é adaptado com um condensador de refluxo e um tubo seco cheio de CaCl2 anidro é adaptado ao topo do condensador. A mistura de reação é aquecida em refluxo e se torna um líquido vermelho escuro. Após a reação ser concluída (2,5 h), a mistura é resfriada até a temperatura ambiente e colocada em um banho de água gelada. Água gelada (150 mL) é lentamente derramada na mistura de reação com agitação para decompor o oxicloreto de fósforo em HCl e H3PO4, resultando em formação de um sólido rosa. O sólido é coletado por filtração e lavado três vezes com 50 mL de água Milli-Q. 0 sólido é transferido para um béquer de 250 mL, seguido por adição de 100 mL de água para formar uma suspensão. Subseqüentemente, IN NaOH é adicionado até que a suspensão aquosa esteja em pH = 8, e a mistura é agitada por 5 minutos para remover todo traço de contaminantes de material de partida. O sólido é filtrado e lavado 3 vezes com 100 mL de água para retirar por lavagem a base em excesso. O sólido é seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer 4 como um pó rosa claro em 96% de rendimento. [Vide Contreras, JM e outros Journal of Medicinal Chemistry, 2001, 44(17), 2707- 2718; Nelson, DA. US 20050137397A1. ]
2- (4- (4 -metil-6-fenil-piridazina-3 - ila) piperazina-1-ila) pirimidina (5)
7,5 g (36,6 mmol) de 4 são colocados em um frasco de fundo redondo de gargalo único de 250 mL e suspenso em 125 mL de água. 60,17 g (366,0 mmol, 10 equiv.) de 2- (piperazina-1-ila) pirimidina são adicionados e o frasco adaptado com um condensador. A mistura de reação é aquecida em refluxo com agitação rápida por 6 0 h. , com adição de amina contínua possível para reforçar as taxas de reação.
Quando concluída, a mistura de reação é resfriada até a temperatura ambiente e duas camadas são observadas no frasco consistindo em uma camada aquosa laranja e um óleo marrom que assenta no fundo do frasco. A água é decantada, deixando o óleo, que é o produto 5. O óleo é então dissolvido em volume mínimo de isopropanol e aquecido até refluxo. Após 10 minutos de refluxo, a solução é resfriada até a temperatura ambiente, e resfriada a 0°C para induzir cristalização. Cristais amarelos desbotados são filtrados a partir de isopropanol e enxaguados com éter frio mínimo para fornecer 5. A recuperação dos cristais é de 50%, porém pode ser aumentada por cristalização recursiva de composto. [Contreras, JM e outros Journal of Medicinal Chemistry, 1999, 42(4), 730-741. Chayer, S. e outros Tetrahedron Letters, 1998, 39, 841-844.]
Esquema 2 (figura 4)
3 -cloro-6 -fenil piridazina-4-ol foi sintetizado de acordo com o procedimento descrito por Coudert, Ρ. , e outros, supra.
6-fenil-3-(4-(pirimidina-2-ila) piperazina-1-ila) piridazina-4-ol (MW01-7-121WH).
Esse composto foi preparado de 3-cloro-4-hidróxi- 6-fenil piridazina (14 g, 68 mmol) do mesmo modo como descrito abaixo, fornecendo sólido branco (22,1 g, 6 6 mmol, 97,3%). ESI-MS: m/z 335,2 (M+H+). 1H NMR (DMSO) : 1H NMR (DMSO): d 8,406 (d, J = 6,5, 2H), 7,740 9d, J = 4,0, 2H) , 7,558 (s, 3Η) , 6,686 (t, J = 4,8, J = 4,4, 1Η) , 6,841 (s, 1Η), 3,881 (s, 4Η), 3,620 (s, 4Η), 3,776 (s, 4Η).
4-cloro-6 -fenil- 3 -(4-pirimidina-2-il piperazina- 1-ila) piridazina (MW01-6-127WH)
6-fenil-3-(4-pirimidina-2-il piperazina-1-ila) piridazina-4-ol (22,0 g, 66 mmol) foi suspenso em 75 ml de oxicloreto de fósforo e aquecido com agitação a 100°C por 3 h. Após resfriar até a temperatura ambiente a mistura foi derramada sobre gelo triturado. A mistura foi então neutralizada com solução de NaOH para fornecer suspensão branca. A precipitação foi filtrada, lavada com água, seca sobre funil de filtro para fornecer sólido branco (21,3 g, 60,3 mmol, 91,4%). ESI-MS: m/z 353,4 (M+H+). IH NMR (CDCl3): d 8,377 (d, J = 4,5, 2H) , 8,036 (d, J = 7,5, 2H), 7,833 (s, 1H) , 7,508 (m, 3H) , 6,564 (t, J = 4,5, 1H) , 4,073 (t, J = 4,0, J = 4,5, 4H), 3,672 (t, J = 4,0, J= 4,5, 4H).
4-metil-6-fenil-3-(4-pirimidina-2-il piperazina- 1-ila) piridazina (MW0-1-2-151SRM)
Em um tubo de reação foi adicionados MW01-6-127WH (1,4 g, 4,0 mmol), pó K2CO3 (1,7 g, 12,4 mmol), Pd(dppf) Cl2 (326 mg, 0,4 mmol),óxido de prata (2,3 g, 10 mmol), ácido met ilborônico (324 mg, 5,4 mmol) e 20 ml de THF. Argônio foi então descarregado através do tubo por 3 min. O tubo foi então vedado apertadamente e aquecido com agitação a 80 graus por 12 h. Após resfriar, a mistura foi resfriada bruscamente com solução de NaOH a 10% e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi concentrada a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna eluindo com 1:4, acetato de etila: éter de petróleo. O sólido de pó branco foi obtido (0,60 g, 1,8 mmol, rendimento 45,2%). ESI-MS: m/z 334,2 (M+H+). IH NMR (CDCl3): d 8,380 (d, J = 5,0, 2H), 7,065 (d, J = 7,0, 2H), 7,626 (s, 1H) , 7,473 (m, 3h) , 6,567 (t, J = 4,5, J=5,0, 1H), 4,056 (t, J = 5,0, 4H), 3,475 (t, J = 5,0, 4H), 2,456 (s, 3H).
Esquema 3 (figura 5)
Em um tubo de reação foram adicionados MW01-6- 127MW (1,4 g, 4,0 mmol), pó K2CO3 (1,7 g, 12,4 mmol), Pd(PPh3) 4 (240 mg, 0,2 mmol), óxido de prata (2,3 g, 10 mmol), ácido metil borônico (324 mg, 5,4 mmol) e 20 ml de DME. Argônio foi então descarregado através do tubo por 3 min. O tubo foi então vedado apertadamente e aquecido com agitação a 120°C por 24 h. Após resfriar, a mistura foi filtrada através de terra acelite, o filtrado foi então concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna eluindo com 1:4, acetato de etila: éter de petróleo.
O sólido de pó branco foi obtido (0,64 g, 1,93 mmol, rendimento 48,1%). ESI-MS: m/z 333,4 (M+H+). IH NMR (CDCl3): d 8.380 (d, J = 5,0, 2H), 7,065 (d, J = 7,0, 2H), 7,626 (s, 1H), 7,473 (m, 3H), 6,567 (t, J = 4,5, J = 5,0, 1H), 4,056 (t, J = 5,0, 4H), 3,475 (t, J = 5,0, 4H), 2,456 (s, 3H).
Esquema 4 (figura 6)
4,5-diidro-4-metila-6-fenil piridazina-3(2H)-ona (MWQ1-8-004WH)
7,7 g (40 mmol) de 2-metil-4-oxo-4-ácido fenilbutanóico foram adicionados a um frasco de fundo redondo com um único gargalo de 100 ml, seguido de 3,0 ml (60 mmol) de monoidrato de hidrazina e, então, 20 ml de etanol do tipo reagente (100%, 95% de etanol deve ser também adequado). O frasco foi adaptado com um condensador de refluxo e a mistura de reação foi aquecida até refluxo em um banho de óleo a 110°C (temperatura de banho de óleo) e agitado por 2 h. O frasco foi então removido a partir do banho de óleo e a mistura de reação resfriada à temperatura ambiente. A barra de agitação foi removida e o solvente foi evaporado a vácuo em um banho de água a 45°C. O resíduo foi então tratado com 50 ml de água Milli-Q e agitado por 10 minutos para fornecer uma suspensão. O precipitado foi coletado por filtração, lavado com 100 ml de 2N NaHCO3, então lavado com 60 ml de água Milli-Q três vezes, e seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer 7,15 g de cristais brancos (Syn. ID, WH-8- 004). Rendimento, 95%, confirmado por ESI-MS. ESI-MS: m/z 189,2 (M+H+).
4-metil-6-fenil piridazina-3(2H)-ona (MW01-8-008WH)
7,0 g (35 mmol) de MW01-8-004WH foram colocados em um frasco de fundo redondo com gargalo único de 100 ml seguido por 9,4 g (70 mmol) de cloreto de cobre anidro (II) e então 3 0 ml de acetonitrila para fornecer uma suspensão amarelo marrom. Um condensador de refluxo foi conectado ao frasco e um tubo seco cheio de CaCl2 foi adaptado ao topo do condensador. A mistura de reação foi aquecida até refluxo em um banho de óleo (110°C) por 3 h. A cor da suspensão de reação mudou para amarelo escuro após início do refluxo. Após término da reação (monitorado por HPLC), o frasco foi removido a partir do banho de óleo e resfriado até a temperatura ambiente. A mistura foi derramada em 300 g de gelo triturado e agitada vigorosamente por 10 minutos para fornecer um precipitado cinza e líquido azul. O precipitado foi então coletado por filtração (pH do filtrado foi 1,5 - 2,0), e lavado com 100 ml de uma solução IN HCl para livrar o sólido de quaisquer subprodutos de cobre restantes. Isso é seguido por lavagem com 100 ml de água Milli-Q para se livrar do ácido no sólido, e é monitorado por checagem do valor de pH do filtrado. O sólido foi lavado até que o filtrado mostre um pH de 7, após aproximadamente 5 lavagens. O sólido foi seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer 6,3 g de um sólido cinza azul. O rendimento foi de 96,7% e confirmado por ESI-MS. ESI-MS: m/z 187,3 (M+H+).
3-cloro-4-metil-6 - fenil piridazina (MWQ1-8-012WH)
6,0 g (32 mmol) de MW01-8-008WH e 30 ml (320 mmol) de oxicloreto de fósforo foram colocados em um frasco de fundo redondo com gargalo único de 100 ml. O frasco foi conectado a um condensador de refluxo e um tubo seco cheio de CaCl2 anidro foi adaptado ao topo do condensador. (Gás HCl é formado na reação de modo que uma solução básica como NaOH pode ser necessária para absorver HCl em uma síntese de grande escala) . A mistura de reação foi agitada em um banho de óleo (90°C) por 2 h., a seguir resfriada até a temperatura ambiente e derramada sobre gelo triturado (oxicloreto de fósforo pode ser decomposto por água para fornecer HCl e H3PO4). A mistura foi então agitada vigorosamente por 10 minutos para fornecer uma suspensão branca. A suspensão foi neutralizada com uma solução 2N NaOH até que o pH da suspensão era pH = 7. O precipitado foi filtrado, lavado três vezes com 100 ml de água Milli-Q e seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer 5,9 g de um pó rosa claro (Syn. ID, WH- 8-012). O rendimento foi de 89,4% e confirmado por ESI-MS. ESI-MS: m/z 205,4 (M+H+).
2-(4-(4-metil-6-fenilpiridazina-3-ila) piperazina-1-ila) pirimidina (MW01-2151SRM)
0,82 g (4,0 mmol) de WH-8-012 foi colocado em um recipiente de pressão de 3 0 ml seguido por adição de 2,6 g (16,0 mmol) de 1-(2-pirimidil) piperazina e então 15 ml de 1-BuOH. O recipiente foi vedado hermeticamente e colocado em um banho de óleo e agitado a 130°C (temperatura de banho de óleo) por 2,5 dias. A mistura de reação foi então resfriada até a temperatura ambiente e transferida para um frasco de gargalo único para evaporação sob pressão reduzida. A remoção de solvente originou um resíduo vermelho-marrom que foi tratado com 3 0 ml de água para fornecer um óleo pegajoso marrom. A mistura foi mantida em temperatura ambiente durante a noite enquanto o óleo solidificou gradualmente. O sólido formado foi então dividido em pequenos pedaços com uma espátula de aço. O sólido foi coletado por filtração e lavado com 50 ml de água Milli-Q três vezes e seco sobre um funil de filtro a vácuo para fornecer 1,25 g de sólido amarelo claro. (Syn. ID., WH-8-020). O rendimento foi de 94%. (A separação alternativa é para utilizar um procedimento de precipitação em vez de um processo de solidificação. A solidificação é uma operação simples e barata, ainda assim demorada. A precipitação é eficiente em termos de tempo, ainda assim mais cara do que a anterior. Assim é decisão do químico do processo qual procedimento deve escolher para a fabricação. O processo de precipitação está abaixo: o produto de óleo foi dissolvido totalmente em 10 ml de etanol do tipo reagente ou acetona para formar uma solução. A solução foi então adicionada em gotas a 150 ml de água gelada sob agitação vigorosa. A suspensão amarela clara foi então formada gradualmente. O sólido foi coletado por filtração, lavado com água Milli-Q, seco sobre funil de filtro a vácuo para fornecer o produto desejado.) O composto final foi confirmado por ESI-MS e NMR. ESI-MS: m/z 333,8 (M+H+). 1H NMR (CDCl3): d 8,380 (d, J = 5,0, 2H) , 7,065 (d, J=7,0, 2H), 7,626 (s, 1H), 7,473 (m, 3H), 6,567 (t, J = 4,5, J = 5,0, 1H), 4,056 (t, J = 5,0, 4H), 3,475 (t, J = 5,0, 4H), 2,456 (s, 3H).
C. Preparação de 4,6 -difenil-3- (4-pirimidina-2-il piperazina-1-ila) ρiridazina (MW01 - 5 -18 8WH).
4,6-difenil-3-(4-pirimidina-2 -il piperazina-1- ila) piridazina (MW01-5-188WH) foi preparado por vários esquemas sintéticos como representado na figura 7 (esquema 1), figura 8 (esquema 2) e figura 9 (esquema 3), que foram realizados como descrito em detalhe aqui. Os vários esquemas de reação (esquemas 1, 2 e 3) são genericamente aplicáveis aos compostos da presente invenção e não são limitados em utilidade somente à preparação de MW01-2-188WH.
Esquema 1 (figura 7)
3 - cloro-6-fenil piridazina-4-ol foi sintetizado de acordo com o procedimento descrito por Coudert, P., e outros, acima.
6-fenil-3-(4-(pirimidina-2-il) piperazina-l-ila) piridazina-4-ol (MW01 - 7 - 121WH) O composto foi preparado a partir de 3-cloro-4- hidróxi-6-fenil piridazina (14 g, 68 mmol). Uma mistura de 3 -cloro-4,6-difenil piridazina (267 mg, 1,0 mmol), 1-(2- pirimidil) piperazina (656 mg, 4,0 mmol) em 3 ml de 1-BuOH foi aquecida com agitação a 130°C por 3 dias. 0 solvente foi removido por evaporação a vácuo o resíduo foi tratado com água para fornecer uma suspensão. 0 sólido foi então filtrado, lavado com água, seco sobre funil de filtro a vácuo para fornecer sólido rosa claro, fornecendo sólido branco (22,1 g, 66 mmol, 97,3%). ESI-MS: m/z 335,2 (M+H+). 1H NMR (DMSO) : IH NMR (DMSO) : d 8,406 (d, J = 6,5, 2H) , 7,740 (d, J=4,0, 2H) , 7,558 (s, 3H) , 6,686 (t, J = 4,8, J = 4,4, 1H) , 6,841 (s, 1H) , 3,881 (s, 4H) , 3,620 (s, 4H) , 3,776 (s, 4H).
4 - cloro-6-fenil-3 -(4-pirimidina-2-il piperazina- 1-ila) joiridazina (MW01-6-127WH)
6-fenil-3-(4-pirimidina-2-il piperazina-l-ila) piridazina-4-ol (22,0 g, 66 mmol) foi suspenso em 75 ml de oxicloreto de fósforo e aquecido com agitação a IOO0C por 3h. Após resfriar até a temperatura ambiente a mistura foi derramada sobre gelo triturado. A mistura foi então neutralizada com solução de NaOH para fornecer suspensão branca. A precipitação foi filtrada, lavada com água, seca sobre funil de filtro para fornecer sólido branco (21,3 g, 60,3 mmol, 91,4%). ESI-MS: m/z 353,4 (M+H+). IH NMR (CDCl3): d 8,377 (d, J = 4,5, 2H) , 8,036 (d, J = 7,5, 2H) , 7,833 (s, 1H) , 7,508 (m, 3H) , 6,564 (t, J = 4,5, 1H) , 4,073 (t, J = 4,0, J = 4,5, 4H), 3,672 (t, J=4,0, J=4,5 4H).
4,6-difenil-3- (4-pirimidina-2 - il piperazina- 1 - ila) piridazina (MW01-5-188WH) Uma mistura de 3-cloro-4,6-difenil piridazina (267 mg, 1,0 mmol), 1-(2-pirimidil) piperazina (656 mg, 4,0 mmol) em 3 ml de 1-BuOH foi aquecida com agitação a 130°C por 3 dias. O solvente foi removido por evaporação a vácuo o resíduo foi tratado com água para fornecer uma suspensão.
O sólido foi então filtrado, lavado com água, seco sobre funil de filtro a vácuo para fornecer um sólido rosa claro. (320 mg, 0,81 mmol, rendimento 81,1%). ESI-MS: m/z 395,5 (M+H+). HRMS calcd. 395.1979, encontrado 395.1973; IH NMR (CDCl3): d 8,329 (d, J = 5,0, 2H) , 8,101 (d, J = 7,5, 2H), 7,734 (d, J = 7,5, 2H) , 7,655 (s, 1H), 7,509 (m, 6H), 6,530 (t, J = 4,5, 1H) , 3,836 (t, J = 4,5, J = 5,0, 4H), 3,394 (t, J = 5,0, J = 4,5, 4H).
Esquema 2 (figura 8)
4,5-diidro-6 -fenil-4 -fenil piridazina-3 - (2H) -ona
135 ml (135 mmol) de uma solução de brometo de fenil magnésio (IM) em THF foram adicionados a uma suspensão quente de composto de 6-fenil piridazinona 7,8 g (45 mmol) em tolueno seco (50 ml). A mistura foi submetida a refluxo por 8 h, deixada durante a noite em temperatura ambiente, a seguir decomposta com uma solução saturada de cloreto de amônio. A camada orgânica foi separada, e a camada aquosa foi extraída com 100 ml de acetato de etila.
O solvente foi removido e o resíduo foi cristalizado a partir de etanol. Os cristais foram coletados por filtração e secos sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer 5,6 g de cristais brancos. O rendimento foi de 50%, confirmado por ESI-MS. ESI-MS: m/z 250,1 (M+H+).
6 -fenil-4 -fenil piridazina-3(2H)-ona 4,4 g (17,5 mmol) de 6-piridazinona obtida acima foram colocados em um frasco de fundo redondo com gargalo único de 50 ml, seguido de 4,7 g (35 mmol) de cloreto de cobre anidro (II) e então 20 ml de acetonitrila para fornecer uma suspensão amarelo marrom. Um condensador de refluxo foi conectado ao frasco e um tubo seco cheio de CaCl2 foi adaptado no topo do condensador. A mistura de reação foi aquecida até refluxo em um banho de óleo (110°C) por 3 h. A cor da suspensão de reação mudou para amarelo escuro após início do refluxo. Após o término da reação (monitorado por HPLC), o frasco foi removido do banho de óleo e resfriado até a temperatura ambiente. A mistura foi derramada sobre 200 g de gelo triturado e agitada vigorosamente por 10 minutos para fornecer um precipitado cinza e líquido azul. O precipitado foi então coletado por filtração (pH do filtrado era 1,5 - 2,0) e lavado com 50 ml de uma solução de IN HCL para se livrar do sólido de quaisquer subprodutos de cobre restantes. Isso é seguido por lavagem com 100 ml de água Milli-Q para se livrar do ácido no sólido, e é monitorado por checagem do valor de pH do filtrado. O sólido foi lavado até que o filtrado mostre um pH de 7, após aproximadamente 5 lavagens. O sólido foi seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer 3,9 g de um sólido cinza azul. O rendimento foi de 90% e confirmado por ESI-MS. ESI-MS: m/z 248,1 (M+H+).
3 -cloro-6- fenil piridazina
2,0 g (8 mmol) de 6-fenil piridazinona obtido acima e 10 ml (54 mmol) de oxicloreto de fósforo (tipo reagente, Aldrich) foram colocados em um frasco de fundo redondo com gargalo único de 50 ml. O frasco foi conectado a um condensador de refluxo e um tubo seco cheio de CaCl2 foi adaptado ao topo do condensador. (Gás HCl é formado na reação de modo que uma solução básica como NaOH pode ser necessária para absorver HCl em uma síntese de grande escala) . A mistura de reação foi agitada em um banho de óleo (90 ° C) por 2 h., a seguir resfriada até a temperatura ambiente e derramada sobre gelo triturado (oxicloreto de fósforo pode ser decomposto por água para fornecer HCl e H3PO4) . A mistura foi então agitada vigorosamente por 10 minutos para fornecer uma suspensão branca. A suspensão foi neutralizada com uma solução 2N NaOH até que o pH da suspensão era pH = 7. 0 precipitado foi filtrado, lavado três vezes com 100 ml de água Milli-Q e seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer 1,8 g de um pó rosa claro. 0 rendimento foi de 85% e confirmado por ESI-MS. ESI-MS: m/z 266,4 (M+H+).
2- (4-(6-fenilpiridazina-3-ila) piperazina-1-ila) pirimidina
1,1 g (4,0 mmol) de 3-cloropiridazina obtido acima foi colocado em um recipiente de pressão de 30 ml seguido por adição de 2,6 g (16,0 mmol) de 1-(2-pirimidil) piperazina e então 15 ml de I-BuOH. O recipiente foi vedado hermeticamente e colocado em um banho de óleo e agitado a 130°C (temperatura de banho de óleo) por 3 dias. A mistura de reação foi então resfriada até a temperatura ambiente e transferida para um frasco de gargalo único para evaporação sob pressão reduzida. A remoção de solvente originou um resíduo vermelho-marrom que foi tratado com 30 ml de água para fornecer uma suspensão marrom. O sólido foi coletado por filtração e lavado com 50 mL de água três vezes e seco sobre um funil de filtro a vácuo para fornecer 0,96 g de sólido amarelo claro. O rendimento foi de 90%. ESI-MS: m/z 395,5 (M+H+). HRMS calcd. 395,1979, encontrado 395,1973; 1H NMR (CDCl3): d 8,329 (d, J = 5,0, 2H) , 8,101 (d, J=7,5, 2H), 7,734 (d, J = 7,5, 2H), 7,655 (s, 1H), 7,509 (m, 6H), 6,530 (t, J = 4,5 = 1H) , 3,836 (t, J = 4,5, J = 5,0, 4H), 3,394 (t, J = 5,0, J = 4,5, 4H).
Esquema 3 (figura 9)
3-cloro-6 -fenil piridazina-4-ol foi sintetizado de acordo com o procedimento descrito por Coubert, P., e outros, acima.
4,6-difenil-3-(4-pirimidina-2-il piperazina-1- ila) piridazina (MW01-5-188WH)
Uma mistura de 3-cloro-4,6-difenil piridazina (267 mg, 1,0 mmol), 1-(2-pirimidil) piperazina (656 mg, 4,0 mmol) em 3 ml de 1-BuOH foi aquecida com agitação a 130°C por 3 dias. O solvente foi removido por evaporação a vácuo, o resíduo foi tratado com água para fornecer uma suspensão. O sólido foi então filtrado, lavado com água, seco sobre funil de filtro a vácuo para fornecer sólido rosa claro. (320 mg, 0,81 mmol, rendimento 81,1%). ESI-MS: m/z 395,5 (M+H+). HRMS calcd 395,1979, encontrado 395,1973; 1H NMR (CDCl3): d 8,329 (d,J = 5,0, 2H) , 8,101 (d, J = 7,5, 2H), 7,734 (d, J = 7,5, 2H), 7,655 (s, 1H), 7,509 (m, 6H), 6,530 (t, J = 4,5, 1H) , 3,836 (t, J = 4,5, J = 5,0, 4H), 3,394 (t, J = 5,0, J= 4,5, 4H).
D . Preparação de 4-piridil-6-fenil-3-(4- pirimidina-2-il piperazina-1-il) piridazina (MW01-6-189WH)
4-piridil-6 -fenil-3 -(4-pirimidina-2-il piperazina-1-ila)piridazina (MW01-6-189WH) foi preparado por dois esquemas sintéticos como representado na figura 10A e IOB, que foram realizados como descrito em detalhe aqui. Os vários esquemas de reação (esquemas 1 e 2) são genericamente aplicáveis aos compostos da presente invenção e não são restritos em utilidade somente à preparação de MWO1- 2 -18 9WH.
Esquema 1
3- cloro-6-fenil piridazina-4-ol foi sintetizado de acordo com o procedimento descrito por Coudert, P., e outros, acima.
6-fenil-3-(4-(pirimidina-2-il) piperazina-1-ila) piridazina-4-ol (MW01- 7-121WH)
Esse composto foi preparado a partir de 3-cloro- 4-hidróxi-6-fenil piridazina (14 g, 68 mmol) . Uma mistura de 3-cloro-4,6-difenil piridazina (2,67 mg, 1,0 mmol), 1- (2-pirimidil) piperazina (656 mg, 4,0 mmol) em 3 ml de 1- BuOH foi aquecido com agitação a 130 0C por 3 dias. O solvente foi removido por evaporação a vácuo, o resíduo foi tratado com água para fornecer a suspensão. O sólido foi então filtrado, lavado com água, seco sobre funil de filtro a vácuo para fornecer sólido rosa claro, fornecendo sólido branco (22,1 g, 66 mmol, 97,3%). ESI-MS: m/z 335,2 (M+H+). IH NMR (DMSO) : IH NMR (DMSO) : d, 8,406 (d, J = 6,5, 2H) , 7,740 (d, J - 4,0, 2H), 7,558 (s, 3H), 6,686 (t, J = 4,8, J = 4,4, 1H) , 6,841 (s, 1H) , 3,881 (s, 4H) , 3,620 (s, 4H) , 3,776 (s, 4H).
4- cloro-6-fenil-3 -(4-pirimidina-2-il piperazina- 1-il) piridazina (MWO1-6-127WH)
6-fenil-3-(4-pirimidina-2-il piperazina-1-il) piridazina-4-ol Ih (22,0 g, 66 mmol) foi suspenso em 75 ml de oxicloreto de fósforo e aquecido com agitação a 100°C por 3 h. Após resfriar até a temperatura ambiente a mistura foi derramada sobre gelo triturado. A mistura foi então neutralizada com solução de NaOH para fornecer suspensão branca. A precipitação foi filtrada, lavada com água, seca sobre funil de filtro para fornecer sólido branco (21,3 g, 60,3 mmol, 91,4%). ESI-MS: m/z 353,4 (M+H+). IH NMR (CDCl3): d 8,377 (d, J = 4,5, 2H) , 8,036 (d, J = 7,5, 2h) , 7,833 (s, 1H) , 7,508 (m, 3H) , 6,564 (t, J = 4,5, 1H) , 4,073 (t, J = 4,0, J = 4,5, 4H), 3,672 (t, J = 4,0, J = 4,5, 4H).
4 -piridil-6-fenil-3- (4-pirimidina-2-il piperazi n_a-1-il) piri dazina (MW01-6-189WH)
Em um tubo de reação foram adicionados WH-6-127 (1,4 g, 4,0 mmol), pó K2CO3 (1,7 g, 12,4 mmol), Pd(PPh3)4 (240 mg, 0,2 mmol), ácido 4-piridineborônico (664 mg, 5,4 mmol) e 2 0 ml de DME. Argônio foi então descarregado através do tubo por 3 min. 0 tubo foi então vedado hermeticamente e aquecido com agitação a 120 graus por 24 h. Após resfriar, a mistura foi filtrada através de terra celite, o filtrado foi então concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna eluindo com 1:4, acetato de etila: éter de petróleo. Cristais de agulha, amarelo claro, foram obtidos (0,65 g, 1,65 mmol, rendimento 41,2%). Confirmado por ESI-MS e NMR. ESI-MS: m/z 396,2 (M+H+). IH NMR (CDCl3): d 8,809 (d, J = 6,0, 2H), 8,335 (d, J = 5,0, 2H), 8,090 (d, J = 7,5, 2H), 7,750 (m, 6H), 6,543 (t, J = 4,5, 1H), 3,868 (t, J = 5,0, 4H), 3,404 (t, J = 5,0, 4H) .
Esquema 2 4,5-diidro-6-fenil-4-(piridina-4-il) piridazina- 3(2H)-ona
A um frasco de fundo redondo com três gargalos de 200 ml equipado com uma barra de agitação magnética, funil de adição de igualar pressão de 150 ml, condensador de refluxo e uma rolha de vidro; foram adicionados 21 g (13 5 mmol) de 4-bromopiridina e 70 de THF anidro. O sistema foi seco em forno e descarregado com argônio antes de uso. 13 5 ml (135 mmol) de solução de THF de brometo de fenil magnésio (IM) foram colocados no funil de adição de igualar pressão. A seguir, a solução Grignard foi adicionada em gotas durante um período de 10 minutos. Após a adição, a reação foi agitada por 15 minutos para conclusão. A solução do reagente Grignard foi então obtida. Uma solução de brometo 4-piridil magnésio obtida acima foi adicionada a uma suspensão quente de composto de 6-fenil piridazinona 7,8g (45mmol) em tolueno seco (50 ml) . A mistura foi submetida a refluxo por 8 h, deixada durante a noite em temperatura ambiente, a seguir decomposta com uma solução saturada de cloreto de amônio. A camada orgânica foi separada, e a camada aquosa foi extraída com 100 ml de acetato de etila. O solvente foi removido e o resíduo foi cristalizado a partir de etanol. Os cristais foram coletados por filtração e secos sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer 5,6 g de cristais brancos. 0 rendimento foi de 50%, confirmado por ESI-MS. ESI-MS: m/z 252,1 (M+H+).
6-fenil-4-(piridina-4-ila) piridazina-3(2H)-ona 4,4 g (17,5 mmol) de 6-piridazinona obtida acima foram colocados em um frasco de fundo redondo com gargalo único de 50 ml, seguido de 4,7 g (35 mmol) de cloreto de cobre anidro (II) e então 20 ml de acetonitrila para fornecer uma suspensão amarelo marrom. Um condensador de refluxo foi conectado ao frasco e um tubo seco cheio de CaCl2 foi adaptado no topo do condensador. A mistura de reação foi aquecida até refluxo em um banho de óleo (110°C) por 3 h. A cor da suspensão de reação mudou para amarelo escuro após início do refluxo. Após a conclusão da reação (monitorado por HPLC), o frasco foi removido a partir do banho de óleo e resfriado até a temperatura ambiente. A mistura foi derramada em 200 g de gelo triturado e agitada vigorosamente por 10 minutos para fornecer um precipitado cinza e líquido azul. O precipitado foi então coletado por filtração (pH do filtrado foi 1,5 - 2,0) , e lavado com 50 ml de uma solução IN HCl para livrar o sólido de quaisquer subprodutos de cobre restantes. Isso é seguido por lavagem com 100 ml de água Milli-Q para se livrar do ácido no sólido, e é monitorado por checagem do valor de pH do filtrado. O sólido foi lavado até que o filtrado mostre um pH de 7, após aproximadamente 5 lavagens. O sólido foi seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer 3,9 g de um sólido cinza azul. O rendimento foi de 90% e confirmado por ESI-MS. ESI-MS: m/z 250,1 (M+H+).
3 -cloro-4 -metil-6-_fenil-4- (piridina-4 - il) piridazina
2,0 g (8 mmol) de 6-fenil piridazinona obtido acima e 10 ml (54 mmol) de oxicloreto de fósforo (tipo reagente, Aldrich) foram colocados em um frasco de fundo redondo com gargalo único de 50 ml. 0 frasco foi conectado a um condensador de refluxo e um tubo seco cheio de CaCl2 foi adaptado ao topo do condensador. (Gás HCl é formado na reação de modo que uma solução básica como NaOH pode ser necessária para absorver HCl em uma síntese de grande escala) . A mistura de reação foi agitada em um banho de óleo (90°C) por 2 h., a seguir resfriada até a temperatura ambiente e derramada sobre gelo triturado (oxicloreto de fósforo pode ser decomposto por água para fornecer HCl e H3PO4) . A mistura foi então agitada vigorosamente por 10 minutos para fornecer uma suspensão branca. A suspensão foi neutralizada com uma solução 2N NaOH até que o pH da suspensão era pH =7. 0 precipitado foi filtrado, lavado três vezes com 100 ml de água Milli-Q e seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer 1,8 g de um pó rosa claro. O rendimento foi de 85% e confirmado por ESI-MS. ESI-MS: m/z 268,4 (M+H+).
4-piridil-6-fenil-3-(4-pirimidina-2 -il piperazina-1-ila) piridazina (MW01-6-189WH)
1,1 g (4,0 mmol) de 3-cloropiridazina obtido acima foi colocado em um recipiente de pressão de 3 0 ml seguido por adição de 2,6 g (16,0 mmol) de 1-(2-pirimidil) piperazina e então 15 ml de I-BuOH (tipo reagente). 0 recipiente foi vedado hermeticamente e colocado em um banho de óleo e agitado a 130 °C (temperatura de banho de óleo) por 3 dias. A mistura de reação foi então resfriada até a temperatura ambiente e transferida para um frasco de gargalo único para evaporação sob pressão reduzida. A remoção de solvente originou um resíduo vermelho-marrom que foi tratado com 3 0 ml de água para fornecer uma suspensão marrom. O sólido foi coletado por filtração e lavado com 50 mL de água três vezes e seco sobre um funil de filtro a vácuo para fornecer 0,96 g de sólido amarelo claro. O rendimento foi de 90%, confirmado por ESI-MS e NMR. ESI-MS: m/z 396,2 (M+H+). IH NMR (CDCl3): d 8,809 (d, J = 6,0, 2H) , 8,335 (d, J = 5,0, 2H) , 8,090 (d, J = 7,5, 2H) , 7,750 (m, 6H), 6,543 (t, J = 4,5, 1H), 3,868 (t,J = 5,0, 4H), 3,404 (t, J = 5,0, 4H).
E. Preparação de N-(ciclopropil metil)-6-fenila- 4 -(piridina-4^ila) piridazina-3-amina (MW01-7-084WH) .
Um esquema sintético para a preparação de N- (ciclopropil metil)-6-fenil-4 -(piridina-4-ila) piridazina- 3-amina (MW01-7-084WH) é representado na figura 11, e a síntese foi realizada como descrito aqui.
4 - cloro-6 -fenil piridazina-3(2H)-ona (MW01-6- 093WH)
4 - cloro-6-fenil piridazina-3(2H) -ona foi sintetizado de acordo com o procedimento descrito por Coudert, P. [18].
4-cloro-2-(metóxi metil)-6-fenil piridazina-3 - (2H) -ona. (MWOl-7-053WH)
Uma mistura de cloropiridazinona 1 (25,5 g, 0,12 mol) , 4-N,N-dimetil amino piridina (0,20 g) e i-Pr3Net (26,7 g, 0,21 mol) em CH2Cl2 anidro (300 mL) foi agitada a 0°C (banho de gelo) por 30 min. Cloreto de metóxi metila (25 g, 0,31 mol) foi adicionado e a mistura foi agitada a 0°C por lhe então deixada aquecer até a temperatura ambiente. A reação foi agitada em temperatura ambiente até conclusão. O solvente foi então removido a vácuo, o resíduo foi tratado com água, lavado com solução Na2CO3 diluída e extraído com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e evaporada. O resíduo foi então purificado por recristalização a partir de 95% de etanol para fornecer 20,1 de sólido amarelo claro. Rendimento 66,9%.
6-fenil-4 -(piridina-4-ila) piridazina-3(2H)-ona {MWOl-7-069WH)
A piridazinona protegida MW01-7-053WH (1,0 equiv.) foi misturada com ácido aril borônico (1,37 equiv.), Pd(PPh3)4 (0,05 equiv.) e K2CO3 (3,1 equiv.) e 200 mL de DME em um recipiente de pressão de 3 50 ml, descarregado com argônio por 3 min., e a mistura foi então agitada e submetida a refluxo (banho de óleo, 120°C) até que o material de partida tinha desaparecido. Após resfriar, a solução foi concentrada até secura sob pressão reduzida, o resíduo foi tratado com água e filtrado. A massa de filtro foi lavada com água sobre funil de filtro e então utilizada diretamente para a próxima etapa. O resíduo obtido acima foi dissolvido em 200 ml de EtOH, 6 N HCl (200 mL) foi adicionado e a mistura de reação foi submetida a refluxo (banho de óleo, 120°C) por 6 h. , a seguir foi deixada resfriar até a temperatura ambiente, e concentrada até secura sob pressão reduzida. 0 resíduo foi neutralizado com solução de NaOH diluído. A suspensão foi então filtrada, lavada com água e seca sobre um funil de filtro. A recristalização a partir de 90% de etanol forneceu sólido amarelo marrom. Rendimento 80,4%. ESI-MS: m/z 294,3 (M+H+).
3_-cloro -6- fenil-4 - (piridina-4-ila)_piridazina (MWQ1- 7 - 076WH)
3 - cloro-6-fenil-4-(piridina-4-il)piridazina (MW01-7-076 WH) (66 mmol) foi suspenso em 75 ml de oxicloreto de fósforo e aquecido com agitação a 100°C por 3 h. Após resfriar até a temperatura ambiente a mistura foi derramada sobre gelo triturado. A mistura foi então neutralizada com solução de NaOH para fornecer suspensão branca. A precipitação foi filtrada, lavada com água, seca sobre funil de filtro para fornecer um sólido amarelo claro. ESI-MS: m/z 268,4 (M+H+).
N- (ciclopropil metil) -6-fenil-4- (piridina-4 -ila) piridazina-3-amina (MWOl-7 -0 84WH)
Uma mistura de N-(ciclopropil metil)- 6-fenil-4 -(piridina-4-ila) piridazina-3-amina (MW01-7-084WH) (0,5 mmol), C-ciclopropil-metil amina (2,0 mmol) em 3 ml de 1-BuOH foi aquecida com agitação a 130°C por 7 dias. O solvente foi removido por evaporação a vácuo, o resíduo foi tratado com água para fornecer uma suspensão. O sólido foi então filtrado, lavado com água, a seguir, 1:3, acetato de etila: éter de petróleo, seco sobre funil de filtro a vácuo fornecendo sólido cinza. ESI-MS: m/z 330,4 (M+H+).
F . Preparação de 3-(4-metil piperazina-1-ila)- 6 -fenila -4-(piridina-4-ila) piridazina (MW01-7-085WH).
Uma mistura de 3-cloro-6-fenil-4-(piridina-4-ila) piridazina (MW01-7-076WH) (0,5 mmol), 1-metil-piperazina (2,0 mmol) em 3 ml de I-BuOH foi aquecida com agitação a 130 °C por aproximadamente 3 dias. O solvente foi removido por evaporação a vácuo o resíduo foi tratado com água para fornecer uma suspensão. O sólido foi então filtrado, lavado com água, a seguir 1:3, acetato de etila: éter de petróleo, seco sobre funil de filtro a vácuo para fornecer um sólido marrom. ESI-MS: m/z 332,2 (M+H+) . Um esquema de reação sintético para a preparação de 3-(4-metil piperazina-1- ila)-6-fenil-4-(piridina-4-ila) piridazina (MW01-7-085WH) é representado na figura 12. G. Preparação de 4,6-difenil-3-piperazinil piridazina (MW01-7-133WH)
Um esquema de reação sintético para a preparação de 4,6-difenil-3-piperazinil piridazina (MW01-7-133WH) é representado na figura 13, e a síntese foi realizada como descrito aqui. O composto foi preparado a partir de 3-cloro-4,6-difenil piridazina (533 mg, 20 mmol) do mesmo modo como descrito para MWOl-7-057WH, fornecendo sólido amarelo claro (550 mg, 17,4 mmol, rendimento 86,9%) . ESI-MS: 317,3 (M+H+). IH NMR (CDC13): d 8,086 (d, J = 7,5, 2H), 7,705 (d, J = 7,5, 2H), 7,619 (s, 1H), 7,498 (m, 6H), 3,318 (d, J = 4,0, 4H) , 2,932 (d, J = 4,0, 4H) , 1,896 (s, 1H) .
H. Preparação de 2- (4- (6-fenil-4 - (piperidina-1- ila) piridazina-3-ila) piperazina-l-ila) pirimidina (MW01-7-107WH)
Um esquema de reação sintético para a preparação de 2 -(4-(6-fenil-4-(piperidina-1-ila) piridazina-3-ila) piperazina-l-ila) pirimidina (MW01-7-107WH) é representado na figura 14, e a síntese foi realizada como descrito aqui. O composto foi preparado a partir de MW01-6-127WH (200 mg, 0,57 mmol) do mesmo modo como descrito para MWOl-7-057WH, fornecendo sólido amarelo claro (220 mg, 0,55 mmol, rendimento 96,3%). ESI-MS: m/z 402,5 (M+H+).
I. Preparação de 6-metil-4-fenil-3 -(4-pirimidina-2-il piperazina-l-ila) piridazina (MW01-7-057)
Um esquema de reação sintético para a preparação de 6-metil-4-fenil-3 -(4-pirimidina-2-il piperazina-l-ila) piridazina (MW01-7-057) é representado na figura 15, e a síntese foi realizada como descrito aqui. Uma mistura de 3-cIoro-6-metil-4 -fenil piridazina (100 mg, 0,5 mmol), l-(2-pirimidil) piperazina (400 mg, 2,0 mmol) em 3 ml de I-BuOH foi aquecida com agitação a 130°C por 7 dias. O solvente foi removido por evaporação a vácuo o resíduo foi tratado com água para fornecer uma suspensão. O sólido foi então filtrado, lavado com água, a seguir 1:3 acetato de etila: éter de petróleo, seco sobre funil de filtro a vácuo para fornecer sólido amarelo claro (68 mg, 0,20 mmol, rendimento 41,7%). Pureza >95%; ESI-MS: m/z 333,1 (M+H+). 1H NMR (CDCl3): d 8,310 (d, J = 5,0, 2H) , 7,678 (d, J = 7,5, 2H) , 7,476 (m, 3H), 7,119 (s, Η), 6,509 (t, J = 4,5, 1H) , 3,785 (t, J = 4,5, J - 5,0, 4H), 3,277 (t, J = 4,5, J = 5,0, 4H), 2,669 (S, 3H).
Exemplo 2
Ensaios para confirmar atividade de compostos de piridazina
Os seguintes ensaios podem ser utilizados para confirmar a atividade dos compostos de piridazina.
Ensaios de cultura de célula. Ensaios baseados em célula da atividade dependente de concentração de um composto da invenção serão conduzidos utilizando métodos anteriormente descritos (Mirzoeva e outros, J. Med Chem. 45: 563-566, 2002). Células microgliais de camundongo BV-2 (1,25 χ 10^4 células/cavidade em uma placa de 48 cavidades) serão cultivadas por um dia em meios aMEM contendo 10% de soro bovino fetal (FBS) e, então, tratados em meios isentos de soro por 16 h com tampão de controle ou o lipopolissacarídeo de estímulo de ativação glial padrão (LPS, a partir de Salmonella typhimurium; 100 ng/ml concentração final) na presença de diluente ou composto. Soluções de material (20 mM) dos compostos serão preparadas em sulfóxido de dimetila (DMSO). Soluções para tratamentos de célula serão preparadas por diluição de soluções de material em meios isentos de soro imediatamente antes de adicionar às células. As cavidades de controle conterão a mesma concentração final de DMSO que as cavidades contendo o composto. Foi anteriormente determinado que essa concentração de DMSO não é tóxica para as células (Mirzoeva e outros, Brain Res. 844: 126-134, 1999). A acumulação de nitreto, o metabólito estável de oxido nítrico (NO) , será medida em meios condicionados BV-2 pelo ensaio Griess como anteriormente descrito (Mirzoeva e outros, Brain Res. 844:126-134, 999; Mirzoeva e outros, J. Med. Chem. 45:563-566, 2000) . Níveis de IL-1β em lisados de células e TNFa em meios condicionados serão medidos por ELISA (Biosource international) conforme instruções do fabricante. Lisados de células serão analisadas por Western blots como descrito (Mirzoeva e outros, J. Med. Chem., 2002) para determinar os níveis de sintase de oxido nítrico induzível (iNOS), ciclooxigenase-2 (C0X-2) e apoliproteína E (apoE). Para medições apoE, glia misturada primária de rato será preparada e estimulada com Αβ:_42 oligomérico humano (10 μΜ) como anteriormente descrito (Mirzoeva e outros, 2002, supra). Anticorpos e diluições utilizadas para Western blots serão como a seguir: anti-COX-2 (1:1000, Santa Cruz), anti-iNOS (1:1000, Transduction Laboratories), anti-apoE (1:1000). Anticorpo contra β-actina (1:500.000 diluição, Sigma) serão utilizados para confirmar carregamento igual de proteína entre as amostras. Estudos de eficácia in vivo em camundongos. 0 desenho de estudo e paradigma de tratamento para infusão intracerebroventricular (ICV) de Aβ1-42 oligomérico humano no camundongo será como descrito anteriormente (Craft e outros, neurobiol Aging 25:1283-1292, 2004b) exceto que a administração do composto será pela boca. Camundongos C57B1/6 fêmeas (Harlan) pesando 20-25 g (3-4 meses de idade) serão alojadas em uma instalação isenta de patógeno sob um ciclo aproximado de 12h/12h escuro e claro e terão acesso ad libitum a alimento e água.
Os camundongos serão administrados por gavagem oral com o composto de teste (2,5 mg/kg/dia) ou controle de solvente (10% DMSO) em uma suspensão de carbóxi metil celulose a 0,5% (peso/v) . O tratamento de uma vez por dia terá início no 21° dia após início de infusão ICV de Αβ e continuará por 14 dias. Iniciando no 50° dia após início de infusão ICV de Αβ, o teste Y labirinto de alternação espontânea será utilizado para avaliar aprendizado espacial dependente de hipocampo como descrito anteriormente (Craft e outros, J. Mol . Neurose. 24:115-122, 2004a). Resumidamente, cada camundongo será colocado no braço de "iniciar" e então liberado para escolher um dos outros dois braços. O camundongo será bloqueado de sair do braço escolhido por 30 s a seguir será colocado de volta no braço de iniciar e liberado novamente para escolher um dos dois outros braços. Se a segunda escolha for diferente da primeira, o camundongo será marcado como alternando. Os camundongos serão testados por 10 dias com um experimento por dia, e uma alternação em percentagem média será calculada para cada camundongo. NO 60° dia após o início de infusão ICV Αβ, os camundongos serão anestesiados com pentobarbital (50 mg/kg) e perfundidos com um tampão HEPES (10 mM, pH 7,2) contendo um coquetel inibidor de protease (1 μg/ml de leupeptina, 1 μΜ de dititreitol, 2mM de vanadato de sódio, ΙμΜ de fenil metil sulfonil fluoreto). O cérebro será removido e longitudinalmente dividido como descrito anteriormente (Craft e outros, Neurobiol Aging 25:1283 - 1292, 2004b). A metade direita do cérebro será fixa em 4% (v/v) de paraformaldeído e parafina-incorporada para histologia. O hipocampo será dividido a partir da metade esquerda do cérebro e congelado rapidamente para avaliação bioquímica subseqüente. Os sobrenadantes de extrato de hipocampo serão preparados por dounce e sonicação no tampão HEPES contendo um coquetel de inibidor de protease, seguido por centrifugação como descrito (Craft e outros, 2004b, acima).
Os níveis de IL-Ιβ e TNFa em sobrenadantes de hipocampo serão medidos por ELISAS (Biosource International) de acordo com as instruções do fabricante. Níveis S100B em sobrenadantes de hipocampo serão medidos por um ELISA baseado em európio essencialmente como anteriormente descrito (Van Eldik e Griffin, Biochem Biophys Acta 1223:398-403, 1994). Níveis de sinaptofísina em sobrenadantes de hipocampo serão quantificados por ELISA seguindo o procedimento descrito anteriormente (Craft e outros, 2004b, acima). Os níveis de PSD-95 serão determinados por Western blots utilizando anticorpos anti-PSD-95 (1:100.000 diluição; Upstate Biotechnology) como descrito (Craft e outros, 2004b). A detecção imunoistoquímica de astrócitos ativados e microglia será executada em seções de 10 μm como descrito anteriormente (Craft e outros, 2004b, supra), com anti-GFAP (1:1500; Sigma) e anti-F4/80 (1:100, Serotek) anticorpos, respectivamente, utilizando os kits de imunodetecção ABC Vectastin Universal Elite ou camundongo em camundongo (Vector/Novocastra) e desenvolvimento com substrato de diamonobenzidina (DAB). Corpos de célula serão manualmente contados no hipocampo de três seções rotuladas GFAP e F4/80 posicionadas em -1,8, -2,1 e -2,3 mm a partir de bregma. Imunoistoquímica de Αβ será feita com um anticorpo Αβ anti-humano de coelho como descrito anteriormente (Craft e outros, 2004b, acima). As contagens de células e contagens de placa de amilóide serão determinadas por dois observadores com vendas nos olhos e a área de placa de amilóide será determinada como anteriormente descrito (Craft e outros, 2004b, acima). O dano neuronal mediado por peroxinitreto será medido com um anticorpo anti-nitrotirosina (1:125; Chemicon) , utilizando o kit ABC Elite de Coelho Vectastain. Para contagens de células de nitrotirosina, todos os corpos de células coloridas com DAB nas camadas neuronais do hipocampo e subículo serão contados em três seções aproximadamente adjacentes àquelas utilizadas para análise GFAP e F4/80, como descrito (Craft e outros, 2004b, acima).
Estabilidade in vitro, biodisponibilidade oral e absorção pelo cérebro. A estabilidade dos compostos (1 μΜ) em uma incubação padrão com microssomas de fígado de rato (BD Biosciences) e um sistema de regeneração NADPH será feita a 37°C por e 120 min. Reações serão paradas por acetonitrila, e a mistura de reação será centrifugada a 16 OOO xg por 10 min. 10 μl do sobrenadante serão analisados por HPLC calibrado para quantificar a percentagem da quantidade inicial do composto que resta após a incubação. 0 sistema HPLC (Dionex Corp., Sunnyvale, CA) inclui uma bomba Dionex P480, uma coluna PhenomenexLuna C18 (250 χ 2,0 mm, 5 μm) com uma coluna de proteção (Phenomenex, Torrance, CA) e um detector Dionex UVD340U Ultravioleta (UV). A fase móvel consistirá em 0,1% de ácido fórmico como reagente A e 0,05% de ácido fórmico/água em 80% de acetonitrila como 10 reagente B, em uma taxa de fluxo de 0,2 ml por minuto. O gradiente consistirá nas seguintes alterações de eluição de gradiente linear e isocrática no reagente B: isocrática em 60% a partir de 0 a 5 min., 60% a 90% a partir de 5 a 39 min., isocrática a 90% até 44 min. A quantificação de pico será feita com base em absorção medida a 260 nm em relação a uma curva padrão obtida pelo uso de diluições seriais do composto.
Para estimar a biodisponibilidade oral (concentração do composto no sangue como uma função de tempo após administração oral) e para obter insight na absorção potencial do cérebro, um composto (2,5 mg/kg) será administrado a camundongos por gavagem oral em uma suspensão de carbóxi metil celulose a 0,5% (peso/v). Em 5, 15, 60 e 120 min. após administração do composto, os animais serão anestesiados com pentobarbital (50 mg/kg). O sangue será colhido por punção intracardíaca, coletado em tubos heparinizados, e plasma será obtido por centrifugação. Os camundongos serão perfundidos com um tampão HEPES (10 mM, pH 7,2) contendo um coquetel inibidor de protease (1 Mg/ml de leupeptina, ΙμΜ de dititreitol, 2 mM de vanadato de sódio, 1μΜ de fenil metil sulfonil trifluoreto) e os cérebros serão removidos e pesados. Homogeneizados de cérebro serão preparados por dounce e sonicação no tampão HEPES contendo um coquetel inibidor de protease. Homogeneizados de cérebro serão centrifugados em 12000xg por 10 minutos e o sobrenadante acidificado por diluição 1:3 com 0,1% de ácido fórmico (Fluka). A extração de fase sólida seguida por análise de HPLC será utilizada para quantificar a quantidade de composto em sobrenadantes de cérebro. Resumidamente, cartuchos (Sep-Pak® C18, Waters) serão condicionados com 1 ml de acetonitrila (tipo HPLC, EMD Biosciences) e equilibrados com 1 ml de água. Um análogo estrutural do composto será utilizado como um padrão interno. O sobrenadante acidificado do cérebro será adicionado ao cartucho seguido por uma lavagem de 1 ml com acetonitrila a 30%. O composto será eluído a partir do cartucho utilizando 80% de acetonitrila. 0 eluato será evaporado até secura, reconstituído em 0,08% de ácido fórmico/água em 80% de acetonitrila e analisado por HPLC utilizando o seguinte gradiente no reagente B: 0% a 60% de 2 a 5 min., isocrático a 65% até 7 min., 65% a 80% a partir de 7 a 12 min., isocrático a 80% até 15 min., 89% a 100% de 15 a 18 min. e isocrático a 100% até 23 min. Amostras de plasma serão desproteinizadas em 0.1 M de ácido perclórico e centrifugadas a 12000xg por 10 min. O sobrenadante será neutralizado com IM NaOH a seguir extraído com diclorometano, e as camadas separadas a 3000xg por 5 min. As fases orgânicas a partir de três extrações sucessivas serão agrupadas e então evaporadas até secura sob pressão reduzida. Oresíduo seco será reconstituído em 50 μl de reagente Β, e 10 μl do material reconstituído serão analisados por HPLC utilizando o gradiente descrito acima para sobrenadantes de cérebro.
Supressão de CNS versus inflamação periférica. Os camundongos serão administrados por gavagem oral de composto (2,5 mg/kg/dia) ou diluente (10% DMSO) em uma suspensão de carbóxi metil celulose a 0,5% (peso/v) uma vez por dia durante duas semanas. Após a última administração, os camundongos serão injetados por via intraperitoneal (i.p.) com 10 mg/kg de LPS. Camundongos de controle serão injetados com solução salina. Seis horas após o desafio com LPS, os camundongos serão anestesiados com pentobarbital (50 mg/kg) e o sangue será tirado por punção intracardíaca, deixado coagular, e centrifugado para preparação de soro. Os cérebros serão removidos e processados como descrito acima. Os níveis de IL-1β e TNFa em sobrenadantes de cérebro e soro serão medidos utilizando um ensaio multiplex MSD de acordo com as instruções do fabricante (Meso Scale Discovery, Gaithersburg, MD).
Toxicidade de fígado após administração in vivo crônica do composto. Os camundongos serão administrados por gavagem oral com o composto de teste (2,5 mg/kg/dia) ou diluente (10% DMSO) em uma suspensão de carbóxi metil celulose a 0,5% (peso/v) uma vez por dia durante duas semanas. Os camundongos serão anestesiados e sacrificados como descrito acima. Os fígados serão removidos, fixos em 4% (v/v) de paraformaldeído e parafina incorporada para histologia. Para avaliar a toxicidade histológica, seções de fígado de 4 μm serão coloridas com hematoxilina e eosina. Dois observadores independentes com vendas nos olhos para os grupos de tratamento executarão avaliação microscópica do tecido em relação à lesão.
Labirinto de água Morris. Esse teste se baseia no teste de natação de labirinto para memória espacial (Morris, Learn Mot 12:239-260, 1981; J. Neurosci.methods 11:47-60, 1984) e tira proveito da capacidade natural de natação de roedores e a facilidade de manipular deixas em torno do labirinto. Nessa tarefa, um camundongo é colocado em uma poça de líquido que é tornada opaca pela adição de tinta em pó tempera não tóxica. O camundongo então nada até uma plataforma de escapamento (oculta logo abaixo da superfície da água) ser encontrada. A descoberta da plataforma permite que o camundongo escape da água e, portanto seja positivamente reforçado. Quando a plataforma é mantida na mesma posição, o animal rapidamente aprende a utilizar deixas distais para localizar a posição da plataforma, mesmo se o camundongo for colocado na poça em diferentes posições de partida.O protocolo experimental para o teste de labirinto de Morris é como descrito em Ohno e outros, (Eur. J. Neurosci. 2006, 23(8): 2235-40; Learn Mem 2005, 12(3): 211-5). Resumidamente, a poça tem 1,2 m de diâmetro e é feita de metal branco. A água é mantida a 25 í 1°C e é tornada opaca com tinta branca não tóxica para ocultar a plataforma de escapamento branca, quadrada (10 cm χ 10 cm) . Durante treinamento, a plataforma é submersa (1 cm) abaixo da superfície da água e permanece na mesma posição para evitar propensões de quadrante. Os camundongos recebem seis experimentos por dia por 4 dias (3 blocos de dois experimentos; intervalos interexperimentos de 1 min., intervalos interblocos de 1 hora). O camundongo é colocado na água voltada para a parede da poça e é deixado procurar a plataforma. A posição de partida varia entre quatro locais em um modo pseudoaleatório para cada experimento. O experimento termina quando um animal sobre na plataforma ou quando um máximo de 60 s decorreu. O camundongo é colocado na plataforma por 60 s antes e após cada experimento. Ao término do treinamento, todos os camundongos recebem um teste de sonda com a plataforma removida a partir da poça. O comportamento do camundongo é registrado por uma câmera de vídeo e analisado de forma computacional em relação a vários parâmetros como latência para encontrar a plataforma, distância total percorrida, e percentagem de tempo gasto no quadrante alvo.
No dia pós-operatório 60 camundongos serão anestesiados e perfundidos com um tampão Hepes contendo um coquetel inibidor de protease. Os cérebros são então removidos e longitudinalmente divididos. A metade direita do cérebro é fixa em uma solução de tampão de fosfato/paraformaldeido e embebida em parafina para exame histológico, enquanto o hipocampo é isolado a partir do hemisférico esquerdo e congelado rapidamente para avaliação bioquímica de pontos finais.
Exemplo 3
Eficácia no modelo de camundongo Tg6799 5X FAD
MWO1- 2 -15ISRM será testado no camundongo Tg6799 em 5, 10 e 25 mg/kg. Como acima, pontos finais bioquímicos de disfunção sináptica e neuroinflamação e ponto final comportamental Y-Iabirinto serão determinados. Uma dose mais elevada é proposta com base no início de administração a animais que já está mostrando sinais de patologia com base em caracterização de esforço. Mais animais necessários para significância são comparados com o modelo de infusão e tempo mais longo devido à expansão exigida de colônia via criação.
Exemplo 4
Seleção de composto de droga principal Os oito compostos a seguir foram sintetizados: MWO1-4 -17 9LKM; MWO1-2-15ISRM; MWOl-7-107WH; MWO1-6-189WH; MW01-7-084WH; MWO1-7 - 085WH7 , MW-01-7-133WH; e MW01-7-057WH (vide as figuras 1 a 15 e exemplo 1).
A. Os compostos foram testados em ensaios baseados em célula glial para supressão dependente de concentração de pontos finais de neuroinflamação (óxido nítrico, IL-Ιβ). Todos os oito compostos inibiram produção de IL-1β induzida por LPS em células de microglia BV-2 em um modo dependente de concentração. A maioria dos compostos foi também seletiva, em que não inibiram a produção de óxido nitrico (NO) . A falta de um efeito sobre a produção de NO foi adicionalmente validada por não mostrar efeito sobre os níveis regulados ascendentes de iNOS. Nenhum efeito sobre a mesma faixa de concentração foi visto sobre a regulação-ascendente de COX-2. Os compostos seletivos foram os seguintes: MWOl-2-151SRM; MWOl-4-179LKM; MW01-6-18 9WH; MW 01-7-084 WH; MWO1- 7 - 085WH; MWO1- 7 -133WH; e MW01-7-25 057WH. Um composto, MW01-7-107WH, foi não seletivo em que também inibiu a produção de NO, iNOS e COX-2 nas mesmas faixas de concentração. (Vide as figuras 16 a 23 mostrando os resultados da atividade baseada em célula de MW01-2-151S RM; MWO1-6-189WH; MWO1-4-107WH; MWO1-4-179LKM ; MW01-7- 084 WH; MWO1-7 - 085WH; MW01-7-133WH e MW01-7-057WH em células microgliais BV-2).
Β. Teste de compostos no modelo de camundongo de infusão de Αβ humano para supressão de neuroinflamação e pontos finais bioquímicos de disfunção neuronal (IL-1β, S100B, sinaptofisina). Especificamente, os cinco compostos ativos a seguir foram testados in vivo: MW01-2-151SRM; MW 01-6-189 WH; MW01-7-084WH MWO1-7 - 085WH; e MW01-7 - 057WH. Os melhores compostos in vivo foram MW01-2-151SRM e MW01-6-18 9WH. Esses dois compostos bloquearam a regulação ascendente de IL-Ιβ e S100B, e evitaram a perda de PSD-95. MWO1-2-15ISRM também evitou a perda de sinaptofisina. MW01-6-18 9WH mostrou uma tendência para evitar a perda de sinaptofisina; entretanto, a significância estatística não foi atingida devido a limitações em tamanho de amostra.
MWO1-7 - 084WH e MW01-7-085WH bloquearam a regulação ascendente de IL-Ιβ e S100B, e evitaram a perda de PSD-95. Não foram tão eficazes quanto MWOl-2-15ISRM para prevenir a perda de sinaptofisina. MW01-7-057WH bloqueou a regulação ascendente de S100B e a perda de sinaptofisina, porém não bloqueou a regulação ascendente de IL-Ιβ ou perda de PSD-95. (Vide as figuras 24 a 28 que mostram os resultados de atividade in vivo de MW01-2-151SRM; MW01-6189WH; MW01-7-0 84WH; MWO1- 7-0 85WH; e MW01-7-057WH no modelo de camundongo de infusão Αβ).
C. Os compostos principais foram testados no modelo de camundongo de infusão Αβ utilizando o ensaio de comportamento de Y-Iabirinto em 1,25, 2,5, 5 e 10 mg/kg. Pontos finais bioquímicos de neuroinflamação (níveis de hipocampo de IL-Ια, TNFa) são baseados em mecanismo de ação proposto, e um ponto final bioquímico de disfunção sináptico (níveis de hipocampo de sinaptofisina) é utilizado, bem como um ponto final de comportamento Y-labirinto. MW01-2-151SRM, MWOl-6-189WH, e MW01-7-057WH foram significativamente eficazes na prevenção do déficit de comportamento Y-Iabirinto ocasionado por infusão de Αβ humano. MW01-7-084WH e MW01-7-085WH mostraram uma tendência em direção a evitar o déficit de comportamento Y labirinto.
Exemplo 5
Ensaios de inibição de canal hERG e ensaios de intervalo QT cardíaco
Os compostos foram classificados em relação à inibição e ligação de canal de íon de potássio hERG (human ether-a-go-go) para eliminar no início do processo quaisquer compostos com potencial elevado de induzir prolongamento de intervalo QT cardíaco em estudos posteriores devido a toxicidades fora de alvo. O canal hERG conduz correntes de potássio retificadoras retardadas de ativação rápida que contribuem criticamente para a repolarização cardíaca. Mutações no gene de canal hERG e bloqueio induzido por droga das correntes foram ligados a repolarização retardada de potenciais de ação que resultam em intervalo QT prolongado (Finlayson e outros, 2004; Recanatini e outros, 2005; Roden, 2004). O prolongamento QT é considerado um fator de risco significativo contra segurança cardíaca de novas drogas. Portanto, a consideração de segurança cardíaca no início no processo de desenvolvimento por teste para inibição de canal hERG provê um meio eficiente e previsível para avaliar as responsabilidades de segurança cardíaca de composto em potencial. Além disso, o FDA (USA) está considerando isso como um critério de aprovação no futuro e tem recomendações específicas. Os ensaios feitos até a presente data foram por um serviço comercial (MDS PharmaService).
O ensaio inicial é um ensaio de ligação de radioligando que testa a capacidade do composto de teste de competir com 3H-astemizol (um padrão de referência que liga a canais hERG com afinidade nM) para ligar-se a canais hERG recombinantes estavelmente expressos em células HEK-23 humanas. Essa linhagem de células foi escolhida porque é de origem humana, foi totalmente caracterizada com relação a eletrofisiologia e farmacologia de hERG e exibe as características esperadas de corrente IKr bem como sensibilidades farmacológicas esperadas, e é fácil de manter em cultura (Zhou e outros, J. Gen. Physiol. 1998, 111(6) : 781-94) . Uma única concentração (10 μΜ) de composto de teste é ensaiada, e % de inibição de ligação de 3H-astemizol é calculada. Isso é normal para meio através de triagens, porém não é recomendado no documento da FDA e tende a dar falsos positivos, conforme evidenciado pelos resultados reportados abaixo.
O ensaio de inibição de atividade de canal hERG prove dados eletrofisiológicos de células inteiras sobre os efeitos do composto na função de canal K+ hERG. A metodologia de fita de adesivo de célula inteira é genericamente considerada como sendo a determinação de padrão de ouro de atividade de canal de íon, em vez de simplesmente medir a ligação de canal. O procedimento de teste de padrão é utilizar 3 a 5 concentrações de composto em diluições Iog com cada concentração testada em triplicata (três células). Isso permite um equilíbrio entre a obtenção de uma medição IC50 razoavelmente precisa contra uma faixa de concentração ampla, e reduz atrito de célula que ocorreria em durações de experimento mais prolongadas. Após conclusão dos procedimentos de resposta de dose de composto, um inibidor de canal hERG conhecido, como astemizol, é aplicado como um controle positivo.
Os compostos que apresentam inibição de atividade de canal de hERG são verificados como positivos (o ensaio de atividade de canal de hERG pode fornecer falsos positivos e falsos negativos) por teste in vivo para prolongamento de intervalo QT cardíaco. Os estudos de intervalo QT são executados por avaliar compostos para efeitos sobre intervalo QT em eletrocardiogramas Lead II medidos em cobaias anestesiadas (Hirohashi e outros, 1991, Arzneim-Forsch/Drug Res. 41:9-18), um da espécie recomendada na exposição da FDA. Veículo ou composto é administrado por via oral em 15 mg/kg (volume de dosagem de 10 ml/kg) a grupos de cobaias machos (pesando 330-350 g) , com 5 animais por grupo. Essa dose corresponde aproximadamente a 20 vezes à dose terapêutica levando em conta a área superficial do corpo dos animais. Batimento cardíaco, pressão sangüínea arterial, e intervalos de QT são medidos em linha base; e em 15, 30, 45 e 60 min. após administração do composto. Sotalol administrado i.v. a 0,3 mg/kg serve como o composto de controle positivo. Os intervalos de QT são corrigidos para alterações em batimento cardíaco utilizando as fórmulas tanto de Bazett como Fridericia. Qualquer aumento em valores de intervalo QT em relação a valores de linha base que excedem o limite de confiança de 95% superior das alterações médias no ponto de tempo correspondente no grupo de controle tratado com veículo para dois tempos de observação consecutivos indica prolongamento de intervalo de QT significativo nos animais individualmente tratados. Esse teste funcional em descoberta inicial prove um método eficaz em termos de custo e rápida para melhor antecipar e eliminar compostos que podem ter potencial de prolongamento de QT adverso em seres humanos.
Cálculos de quantidade de composto necessário: Ensaio de ligação de competição: 1-2 mg Ensaio de fita de adesivo·. 1-2 mg Ensaio de intervalo QT: 5 mg/animal/dose = 25 mg por ensaio em 15 mg/kg de dose
Como os ensaios de atividade ex vivo estão sujeitos a falsos positivos e negativos, é considerado melhor concluir os estudos de ensaio de intervalo de QT in vivo seguindo as diretrizes do papel de posição da FDA. Resultados:
Ensaio de inibição de competição:
MWO1-5 -18 8WH, MWO1-2-15ISRM, e MWOl-6-127WH, foram testados em concentração de 10 μΜ.
MWO1- 5 -188WH mostrou 91% de inibição em 10 μΜ. MWO1- 2 -15ISRM e MW01-6-127WH foram negativos, mostrando somente 8% e 19% de inibição, respectivamente.
Ensaio de inibição de fita de adesivo: MWO1- 2 -15ISRM e MW02-6-189WH foram testados em três concentrações (0,1, 1, 10 μΜ). Esses compostos mostraram inibição mínima, com valores IC50 de 4,81 μΜ para MWO1-6-18 9WH e 9,21 μΜ para MW01-2-151SRM.
Ensaio de prolongamento de intervalo QT cardíaco Um sumário dos resultados bem como os materiais e métodos são expostos abaixo.
Sumário
Uma substância de teste (por exemplo, MW01-2-151SRM) foi avaliada em relação a possíveis efeitos sobre o intervalo QT e medição de eletrocardiograma Lead II em cobaias anestesiadas. Os intervalos QT (QTc) foram corrigidos em relação a alterações em batimento cardíaco utilizando fórmulas de Bazett e Fridericia. Qualquer aumento em valores QTC em relação a valores de linha base que excedem o limite de confiança de 95% superior da alteração em ponto de tempo correspondente no grupo de controle tratado com veículo por 2 tempos de observação consecutivos indica prolongamento de QTc significativo nos animais individualmente tratados. A substância de teste em 15 mg/kg PO não causou nenhum prolongamento significativo em intervalo de QTc em todos os 5 animais tratados durante o período de 60 minutos após dosagem (figuras 29 e 31). Por outro lado, administração intravenosa de sotalol em 0,3 mg/kg causou prolongamento significativo em intervalo de QTc em todos os (5,5) animais (figura 30 e 32). Os resultados chegaram a conclusão similar utilizando a fórmula de Bazett ou Fridericia para correção de QT.
MWO1-5-188WH e MWOl-2-15ISRM foram administrados PO em 15 mg/kg a 5 cobaias (330-350 g de peso). Intervalos de QT foram obtidos na linha base e em 15 min., 30 min., 45 min., e 6 0 min. após administração do composto. Nenhum composto aumentou o intervalo de QT cardíaco acima da média + 2SD de valores correspondentes no grupo de controle de veículo. Não houve efeitos significativos também sobre a pressão média de sangue ou batimento cardíaco após administração do composto.
Os dados do exemplo para MW01-5-18 8WH são mostrados na figura 33. O composto de controle positivo, sotalol, induz um aumento significativo em intervalo QTc cardíaco.
Materiais e métodos
A substância de teste foi dissolvida em 2% Tween 80 e administrada por administração oral. A substância foi tratada em 15 mg/kg com um volume de dosagem de 10 ml/kg. cobaias derivadas de Duncan Hartley fornecidas por MDS Pharma Services - Taiwan Ltd. foram utilizadas. Sotalol foi obtido da Sigma, USA.
Grupos de cobaias (pesando 330-350 g) com 5 animais cada foram empregados. Os animais foram anestesiados com uretano (1500 mg/kg, injeção de bolo IV em um volume de 5 ml/kg) e respiraram espontaneamente. ECG Lead II foi obtido com eletrodos de agulha subdérmica e condicionador de sinais de ECG. O batimento cardíaco foi medido com um tacômetro de freqüência de pulso. A artéria carótida foi canulada com um cateter que foi conectado a um transdutor de pressão e um processador de pressão para medições de pressão de sangue arterial (BP) . Cinco parâmetros [HR, Intervalo Q-T, QTc (Bazett), QTc (Fredericia), BP] foram registrados e exibidos em um Digital Acquisition Analysis and archive System (PO-NE-MAH, Inc. USA) . Intervalos de QTC foram obtidos por correção para alterações de batimento cardíaco utilizando fórmulas de Bazett e Fridericia. O aumento em intervalo de QTC em cobaias tratadas individuais que se situa fora do limite superior de limites de confiança de 95% (média ± SD) das alterações para o controle tratado com veiculo em pontos de tempo correspondentes para dois tempos consecutivos é considerado significativo.
Exemplo 6
Ensaios de toxicidade crônica e aguda
A toxicidade de fígado é uma consideração inicial especialmente importante para compostos administrados por via oral, visto que o fígado é o sítio principal de metabolismo inicial de droga e é crítico para metabolismo geral e homeostase de um animal. Lesão do fígado também é um componente de lesão de tecido idiopático vista em certas drogas administradas de forma crônica. Portanto, é importante fazer avaliações iniciais de toxicidade de fígado após administração oral dos compostos em camundongos.
Métodos:
Uma abordagem padrão é testar os compostos em dois ensaios de toxicidade in vivo iniciais: um paradigma de dose que aumenta, agudo e um regime de dose terapêutica, crônico. Para os ensaios de toxicidade aguda, de dose que aumenta (5 por grupo experimental) são administrados o composto ou veículo em 0,5% de carbóxi metil celulose (alternativamente, óleo de rícino ou óleo de gergelim pode ser utilizado) por gavagem oral uma vez por dia durante 3 dias. Doses de composto padrão são 3,1, 12,5, e 50 mg/kg; a dose mais elevada é 20X uma dose terapêutica. No 4o dia, os camundongos são sacrificados e o fígado colhido e fixo para histologia. Seções coloridas com hematoxilina & eosina (HScE) embebidas em parafina de tecido de fígado são analisadas microscopicamente em relação à lesão por dois indivíduos com vendas nos olhos para os grupos de tratamento. Um sistema de marcação histológica semiquantitativo de O (melhor) até 9 (pior) é aplicado que considera características de arquitetura (fibrose normal à extensa), características celulares (edema normal a extenso e necrose espalhada), e grau de infiltrado inflamatório (infiltrado normal a extenso). Para cada ensaio de toxicidade aguda, são necessários 15 mg de composto.
Para a dose terapêutica, ensaios de toxicidade crônica, camundongos (5 por grupo experimental) são administrados o composto ou veículo em 0,5% de carbóxi metil celulose por gavagem oral uma vez por dia durante 2 semanas em uma dose terapêutica de 2,5 mg/kg/dia. Após duas semanas de tratamento, os camundongos são sacrificados e a toxicidade do fígado analisada como descrito acima. Para cada ensaio de toxicidade crônica, são necessários 5 mg de composto.
Resultados:
Os resultados do estudo de toxicidade são mostrados na figura 34.
MW01-5-188WH foi testado no ensaio de dose que aumenta, agudo e ensaio de dose terapêutica, crônico. Não houve evidência histológica de toxicidade de tecido nas doses inferiores, porém um pouco de vacuolização foi observada na dose de 50 mg/kg.
MWO1- 2 -15ISRM foi testado no ensaio de dose terapêutica, crônico. Não houve evidência histológica de toxicidade de tecido; nenhuma diferença foi vista por histologia em fígados a partir de camundongos tratados com veículo ou com composto.
MWO1-6-18 9 WH foi testado no ensaio de dose terapêutica, crônico. Não houve evidência histológica de toxicidade de tecido; nenhuma diferença foi vista por histologia em fígados a partir de camundongos tratados com veículo ou com composto.
MWO1- 5 -18 8WH foi testado no ensaio de dose terapêutica, crônico. Em particular, os camundongos foram administrados por gavagem oral MW01-5-188WH (2,5 mg/kg) ou diluente (10% DMSO) em uma suspensão de carbóxi metil celulose de 0,5% (peso/v) uma vez por dia durante 2 semanas. Os camundongos foram anestesiados e mortos como descrito acima. Os fígados foram removidos, fixos em 4% (v/v) de paraformaldeído, e embebidos em parafina para histologia. Para avaliar a toxicidade histológica, seções de fígado de 4 μπ\ foram coloridas com hematoxilina e eosina. Dois observadores independentes com vendas nos olhos para os grupos de tratamento executaram avaliação microscópica do tecido em relação à lesão. A avaliação histológica de tecido de fígado mostrou que a administração oral de MW01-5-188WH em 2,5 mg/kg diariamente por 2 semanas não induziu nenhum sinal de lesão de tecido hepatotóxico em comparação com camundongos tratados com o diluente.
Exemplo 7
Estabilidade in vitro, biodisponibilidade oral e absorção pelo cérebro. A estabilidade de MW01-5-188 WH (1 μΜμ) em uma incubação padrão com microssomas de fígado de rato (BD Biosciences, Bedf ord, MA) e um sistema de regeneração de NADPH foi feita a 37°C por 30 e 120 min. As reações foram paradas por acetonitrila, e a mistura de reação foi centrifugada a 16.000 μg por 10 min. Dez microlitros do sobrenadante foram analisados por HPLC calibrado para quantificar a percentagem da quantidade inicial de MW01-5-188WH que resta após incubação. O sistema HPLC (Dionex, Sunnyvale, CA) inclui uma bomba Dionex P6 80, uma coluna Phenomenex (Torrance, CA) Luna C18 (250 χ 2,0 mm, 5 μm) com uma coluna de proteção e um detector Dionex UVD340U Ultravioleta. A fase móvel consistiu em 0,1% de ácido fórmico como reagente A e 0,08% de ácido fórmico/água em 80% de acetonitrila como reagente B, em uma taxa de fluxo de 0,2 ml por minuto. O gradiente consistiu nas seguintes alterações de eluição de gradiente linear e isocrática no reagente B: isocrática em 60% a partir de 0 a 5 min., 60% - 90% a partir de 5 a 39 min., isocrática a 90% até 44 min. A quantificação de pico foi feita com base em absorção medida a 260 nm em relação a uma curva padrão obtida pelo uso de diluições seriais de MWO1-5-188WH. Para estimar a biodisponibilidade oral (concentração do composto no sangue como uma função de tempo após administração oral) e para obter insight na absorção potencial do cérebro, MW01-5-188WH (2,5 mg/kg) foi administrado a camundongos por gavagem oral em uma suspensão de carbóxi metil celulose a 0,5% (peso/v). Em 5, 15, 60 e 120 min. após administração do composto, os animais foram anestesiados com pentobarbital (50 mg/kg). O sangue foi colhido por punção intracardíaca, coletado em tubos heparinizados, e plasma obtido por centrifugação. Os camundongos foram perfundidos com PBS. Homogeneizados de cérebro foram centrifugados em 12000xg por 10 minutos e o sobrenadante acidificado por diluição 1:3 com 0,1% de ácido fórmico (Fluka, Sigma- Aldrich, St. Louis, MO). A extração de fase sólida seguida por análise de HPLC foi utilizada para quantificar a quantidade de composto em sobrenadantes de cérebro. Resumidamente, cartuchos (Sep-Pak® C18, Waters Associates, Milford, MA) foram condicionados com 1 ml de acetonitrila (tipo HPLC, EMD Biosciences, San Diego, CA) e equilibrados com 1 ml de água. Um análogo estrutural de MW01-5-188WH foi utilizado como um padrão interno. O sobrenadante acidificado do cérebro foi adicionado ao cartucho seguido por uma lavagem de 1 ml com acetonitrila a 30%. MW01-5-188WH foi eluido a partir do cartucho utilizando 80% de acetonitrila. O eluato foi evaporado até secura, reconstituído em 0,08% de ácido fórmico/água em 80% de acetonitrila e analisado por HPLC utilizando o seguinte gradiente no reagente B: 0% a 60% de 2 a 5 min., isocrático a 65% até 7 min., 65% - 80% a partir de 7 a 12 min., isocrático a 80% até 15 min., 89% - 100% de 15 a 18 min. e isocrático a 100% até 23 min. Amostras de plasma foram desproteinizadas em 0.1 M de ácido perclórico e centrifugadas a 12000 ug por 10 min. O sobrenadante foi neutralizado com IM NaOH a seguir extraído com diclorometano, e as camadas separadas a 3000ug por 5 min. As fases orgânicas a partir de três extrações sucessivas foram agrupadas e então evaporadas até secura sob pressão reduzida. O resíduo seco foi reconstituído em 50 μl de reagente B, e 10 μΐ do material reconstituído foi analisado por HPLC utilizando o gradiente descrito acima para sobrenadantes de cérebro.
Resultados:
Biodisponibilidade oral e absorção de cérebro de MWO1-5 -18 8WH
Ferramentas de biologia química de integração para neurociência e drogas alvejadas a CNS devem apresentar biodisponibilidade apropriada e absorção ou penetração no cérebro da barreira de cérebro-sangue. A administração oral diária é o método de administração preferido para estudos in vivo delimitados por tempo e de duração mais longa utilizando modelos de animais e é o modo preferido em desenvolvimento de droga para uma variedade de motivos, incluindo melhor aderência pelo paciente. A esse respeito, é crítico demonstrar a biodisponibilidade e taxas apropriadas de absorção inicial de cérebro para um inibidor, para interpretar totalmente os resultados de estudos in vivo. Portanto, a taxa de alteração de concentração de MW01-5-188WH no sangue após administração oral (biodisponibilidade oral) e sua taxa de alteração no cérebro foram determinadas. Utilizando os protocolos descritos acima para a análise quantitativa de MW01-5-188WH extraído de amostras biológicas, as taxas de aparecimento em sangue e cérebro após administração oral de dose baixa (2,5 mg/kg) em camundongos foram examinadas. 0 aparecimento de MWO1- 5 -18 8WH no sangue (figura 35A) é prontamente detectado no ponto de tempo mais cedo possível, 5 min., com uma concentração de pico sendo atingida em 15 min. e liberação de volume ocorrendo 120 min. após administração oral. Isso demonstra que MW01-5-188WH tem boas propriedades de biodisponibilidade oral. Um padrão similar de alteração dependente de tempo em concentração é visto para o cérebro (figura 35B), indicativo de absorção inicial no cérebro de MWO1-5-18 8WH refletindo aquela do sangue. Entretanto, a razão de concentração de sangue/cérebro de pico de MW01-5-188WH é > 3,3, em comparação com aquelas de drogas em CNS em uso clínico. Por exemplo, a razão de cérebro/sangue para minaprine, uma droga de CNS de 6-fenil amino piridazina, é 5 aproximadamente 2 (Caccia e outros, 1985 Xenobiotica, 15(12) : 1111-9) . Esses resultados demonstram que MW01-5-188WH atende a critérios que excluem tipicamente muitos compostos que são ativos em cultura de célula de serem utilizados para investigações in vivo e indicam seu potencial de trabalhar in vivo após administração oral e nas limitações experimentais impostas pelo modelo de infusão ICV Αβ humano.
Dosagem de MW01-5-188WH é seletiva para inflamação de CNS
O foco de novo sobre a supressão de vias de ativação de glia selecionadas e as excelentes propriedades de absorção no cérebro de MW01-5-188WH administrado por via oral levantaram a possibilidade de que o composto poderia exibir seletividade para supressão de citocina próinflamatória de CNS versus supressão de produção de citocina pró-inflamatória por tecidos periféricos. Para examinar essa possibilidade, MW01-5-188WH foi administrado diariamente em uma dose terapêutica padrão (2,5 mg/kg) por gavagem oral durante 2 semanas, e então camundongos foram 25 desafiados com uma injeção intraperitoneal de LPS bacteriano. Seis horas após o desafio com LPS, os níveis de soro e cérebro de IL-1β e TNF-a foram medidos. Como previsto, o desafio com LPS induziu um aumento nos níveis de IL-1β e TNF-a no soro (figura 35 C, D) e cérebro (figura 30 35E,F) , em comparação com camundongos de controle injetados com solução salina. A descoberta interessante foi que o tratamento com MW01-05-188WH durante 2 semanas suprimiu a regulação ascendente induzida por LPS de produção de IL-1β e TNF-a no cérebro (figura 35 E,F) porém não suprimiu a resposta de soro (figura 35 C,D). A supressão de respostas de citocina no cérebro por MW01-5-188WH é compatível com a sua capacidade de suprimir produção de citocina pró-inflamatória por glia ativada e sua biodisponibilidade oral e propriedades de absorção no cérebro mostradas acima.
Exemplo 8
Estudos farmacocinéticos
Farmacocinética de plasma e biodisponibilidade absoluta em cão e/ou rato
Dois grupos (3 animais por grupo; animais machos) serão dosados PO e IV. Haverá um nível de dose (2,5 mg/kg), e um desenho de cruzamento serão utilizado com 1 semana de esgotamento entre os períodos de dose. Concentrações de droga de plasma serão medidas em não menos do que oito pontos de tempo não excedendo 24 h pós-dose (por exemplo, 15, 30, 60, 90, 120, 240 e 480 minutos e 24 h após administração de dose única) . Parâmetros PK que serão derivados incluem Cmax, Tmax, ti/2, AUC, CI/F, Vd e MRT. Formulação de dosagem: gavagem oral/solução CMC.
Estudo de equilíbrio de massa em cão e/ou rato Um estudo pode ser executado utilizando minozac rotulado 14C (MW01-2-151SRM) para analisar excreção (urina, fezes) e distribuição de plasma.
Estudo de descoberta de faixa de dose em rato A fase A do estudo será um MTD de dose única (3M/3F para cada nível de dose, n=até MTD ou MFD encontrado). Níveis de dose a serem projetados com base em dados disponíveis caso haja; doses fornecidas abaixo podem ser utilizadas para fins de exemplo somente. A Dosagem será por gavagem oral com solução CMC.
Nível de dose 1: 10 mg/kg; nível de dose 2: 100 mg/kg; nível de dose 3: 500 mg/kg; nível de dose 4: 1000 mg/kg; nível de dose 5: 3000 mg/kg.
Resultado: um MTD/MFD de dose única estimada(sdMTD)
A fase B do estudo pode ser realizada. A fase compreende um estudo de descoberta de faixa de dose de 7 dias (3M/3F em cada grupo, n=24) . Haverá um controle mais um nível de dose (uma fração de sdMTD) ; nível (is) de dose adicional(is) serão incorporados como necessário pelo resultado do estudo de descoberta de faixa de dose de 7 dias inicial.
Resultado: MTD de dose de repetição estimada em ratos
Estudo de descoberta de faixa de dose em cão
Esse estudo utilizará um MTD de dose única (estudo de cruzamento 5M, n=até MTD ou MFD encontrado). Níveis de dose serão projetados com base em dados disponíveis. Os exemplos de doses são fornecidos abaixo. A dosagem será por gavagem oral com uma solução CMC preferida; alternativamente, cápsulas cheias de gelatina serão utilizadas.
Nível de dose oral 1: 30 mg/kg, nível de dose oral 2: 100 mg/kg; nível de dose oral 3: 300 mg/kg.
Dose IV 1: 100 mg/kg; dose IV 2: 300 mg/kg; nível de dose oral 4: 1000 mg/kg; nível de dose oral 5: 3000 mg/kg.
Cada dosagem subseqüente será seguida por um período de esgotamento apropriado (2 dias ou 5 dias após exposição IV). Farmacocinética e biodisponibilidade absoluta serão determinadas para níveis de dose 1 e 2. As concentrações de droga em plasma serão medidas em oito pontos de tempo não excedendo 24 h pós dose (por exemplo, 15, 30, 60, 120, 240 e 480 minutos após administração de doses orais únicas). Parâmetros PK a serem derivados incluem Cmax, Tmax, t1/2, AUC, CI/F, Vd e MRT.
Estudo de toxicologia de dose de repetição de 28 dias em ratos
O Estudo principal envolverá 10M/10F em cada grupo de tratamento, η = 80. A dosagem será por gavagem oral com solução CMC. Haverá um Controle, dose baixa, dose média, e dose elevada. Resultados: PK (níveis de droga CSF e plasma) serão determinados no dia 1 e dia 28. Necropsia será determinada após o término do tratamento. Mortalidade, observações clínicas, pesos corpóreos, consumo de alimento, patologia clínica, oftalmoscopia, patologia bruta, e pesos de órgãos serão determinados. Histopatologia será determinado em grupos de dose elevada e controle.
Um Estudo de recuperação com 5M/5F em cada grupo de tratamento, η = 20 será conduzido. Haverá um Controle e dose elevada. Resultados: a necropsia será determinada após 28 dias de período de acompanhamento adicional. Mortalidade, observações clínicas, pesos corpóreos, consumo de alimento, patologia clínica, oftalmoscopia, patologia bruta, e pesos dos órgãos serão também determinados. A histopatologia será determinada se necessário por observação de efeitos de tratamento.
Estudo de toxicologia de dose de repetição de 28 dias em cães
O Estudo principal utilizando 3M/3F em cada grupo de tratamento, η = 24 será conduzido. A dosagem será por gavagem oral com solução CMC preferida; alternativamente, cápsulas cheias de gelatina serão utilizadas se necessário. Haverá um Controle, dose baixa, dose média, e dose elevada. Resultados: PK (níveis de droga CSF e plasma) serão determinados no dia 1 e dia 28. Necropsia será determinada após o término do tratamento. Mortalidade, observações clínicas, pesos corpóreos, consumo de alimento, patologia clínica, patologia bruta, e pesos de órgãos serão determinados. Histopatologia será feita em todos os grupos de dose.
Um Estudo de recuperação com 3M/3F em cada grupo de tratamento, η = 12 será conduzido também. O estudo utilizará Controle e dose elevada. Resultados: a necropsia será determinada após 28 dias de período de acompanhamento adicional. Mortalidade, observações clínicas, pesos corpóreos, consumo de alimento, patologia clínica, oftalmoscopia, patologia bruta, e pesos dos órgãos serão também determinados. A histopatologia, se necessária, será determinada por observação de efeitos de tratamento.
Exemplo 9:
Métodos gerais
Os produtos químicos foram genericamente adquiridos de Aldrich (Milwaukee, WI) ou através de WR International e utilizado como recebido. Todos os solventes foram utilizados como recebidos a menos que mencionado de outro modo no texto. Todas as soluções orgânicas foram secas com sulfato de magnésio antes da evaporação final. Irradiação de microondas foi realizada utilizando o sistema de síntese de microondas CEM-Discover (Matthews, NC).
Todos os intermediários foram caracterizados por MS (ESI) e HPLC e em alguns casos por 1H-NMR. Os compostos finais foram caracterizados por HRMS, HPLC e 1H-NMR, e em alguns casos, por análise elementar. Espectros de NMR foram adquiridos em um espectrômetro de 500 MHz Varian Inova em temperatura ambiente. Espectros de massa de eletropulverização (EI-MS) foram coletados em um Espectrômetro de Massa Micromass Quattro II Triple Quadrupole HPLC/MS/MS. Espectros de massa de alta resolução (HR-MS) foram obtidos em um espectrômetro de massa VG70-2 5 OSE.
Todas as sínteses foram monitoradas por HPLC analítica. Traços de HPLC foram obtidos em um HPLC Rainin Instruments em uma coluna de fase inversa C18 SUPELCO comercialmente disponível (25 χ 4,6 mm, 5 um). A fase móvel consistiu em 0,1% de ácido fórmico em água Milli-Q como reagente A e 0,08% de ácido fórmico/água Milli-Q em 80% de acetonitrila como reagente Β. A taxa de fluxo de 1,5 ml/min. foi utilizada em um gradiente de 0 a 100% de reagente B durante 22 minutos. Os traços de HPLC foram rastreados por absorção UV em 260 nm.
Um sistema HPLC separado foi utilizado para obter a pureza final do composto. O sistema HPLC (Dionex, Sunnyvale, CA) consistiu nos seguintes componentes: uma bomba Dionex P68 0, um autoamostrador Dionex ASI-100, uma coluna Phenomenex (Torrance, CA) Luna C18 (250 χ 2,0 mm, 5 μm) com uma coluna de proteção e um detector Dionex UVD1700 Ultravioleta. A fase móvel consistiu em 0,1% de ácido fórmico como em água Milli-Q reagente A e 0,08% de ácido fórmico/água Milli-Q em 80% de acetonitrila como reagente Β. A taxa de fluxo de 0,2 ml/min foi utilizada, a menos que mencionado de outro modo no texto. Para determinação de pureza do composto, o gradiente consistiu em uma alteração linear de 0 a 100% de reagente B durante 3 0 minutos. A absorção de UV foi monitorada em quatro comprimentos de onda (215, 230, 260 e 300 nm) com o traço de 260 nm sendo reportado. Os compostos foram injetados em concentrações 100 vezes maiores do que o limite de detecção inferior do instrumento (500 ng, injetado).
A análise elementar foi realizada por Quantitative Technologies Inc. (QTI, Whitehouse, NJ) . Os dados de ponto de fusão para o sal de monoidrato de dicloro 26 (234,1-234,7°C) e do composto 16 (>215°C, decompõe em sólido preto) foram adquiridos em um Ponto de Fusão Buchi B-540 (Flawil, Suíça).
Síntese de análogos R4 (figura 37) 2-benzil-6-fenil-4,5-diidropiridazina-3(2H)-ona (18)
ácido 3 -benzoilpropiônico 17 (17,8 g, 0,1 mol) diidrocloreto de benzil hidrazina (19,5 g, 0,1 mol) e 25 acetato de sódio (74,9 g, 0,55 mol) foram suspensos em 500 mL de etanol (95%) . A suspensão branca foi aquecida sob refluxo por 29 horas. Etanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi tratado com água (300 mL). O pH da camada aquosa foi ajustado com solução concentrada de carbonato de sódio até pH = 8 e extraído com acetato de etila (1 χ 200 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura e concentrada até secura sob pressão reduzida. O produto 18 foi obtido como um óleo amarelo em 78% de rendimento e foi utilizado na seguinte etapa sem purificação adicional. HPLC (tr/pureza); 23,4 min, 80%.
3,4-dicloro-6-fenil piridazina (19)
O composto 18 (26 g, 0,079 mol - estimado em 80% de pureza), oxicloreto de fósforo (59 mL, 0,64 mol, 6,5 equiv.) e pentacloreto de fósforo (133,2 g, 0,64 mol, 6,5 equiv.) foram aquecidos a 120°C por 12 horas. Para controlar a formação de gás Hcl durante o curso de reação, uma solução de NaOH foi utilizada para absorver o ácido. Grande parte do cloreto de fosforila foi destilada sob pressão reduzida, água gelada foi adicionada ao resíduo e agitada por 30 min. O sólido cristalino amarelo que se separou após resfriamento foi filtrado, lavado com água (3 χ 100 mL) e recristalizado a partir de etanol anidro para fornecer o produto desejado 19 como agulhas amarelas em 44% de rendimento. 1H NMR (CDCl3): δ 8,06 (dd, 3J = 6,5 Hz, 4J = 2,5 Hz, 2H), 7,98 (s, 1H), 7,56 (t, 3J = 6,5 Hz, 3H). HPLC (tr/pureza): 23,6 min., >95%.
3-cloro-6-fenil piridazina-4-ol (20)
Uma mistura de 19 (158 g, 0,7 mol) e ácido acético (700 mL) foi aquecida sob refluxo por 5 h. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, o precipitado filtrado e a massa de filtro amarela brilhante lavada com água (5 χ 500 mL). A massa de filtro foi recristalizada a partir de acetato de etila (200 mL) , filtrada e seca sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer o produto desejado 20 em rendimento de 32%. HPLC (tr/pureza); 15,37 min., >95%. ESI 207,3 (MH+). m/z (MeOH): 207,3(MH)+
6-fenil-3 - (4_-(pirimidina-2 -ila) piperazina-1 -ila) piridazina-4-ol (21)
O composto 20 (14 g, 0,068 mol) foi colocado em um tubo de reação com 1-butanol (30 mL) e 4 equiv. De 1-(2-pirimidil) piperazina (45 g, 0,27 mol, 4 equiv.) O frasco foi tampado e aquecido a 130 °C por 41 h. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, e o 1-butanol removido sob pressão reduzida para fornecer um resíduo de óleo escuro. O óleo foi tratado com água para fornecer uma suspensão que é então filtrada e lavada com água. A massa de filtro foi seca sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer o produto desejado 21 em 97% de rendimento. HPLC (tr/pureza); 17,30 min., >99%. ESI m/z (MeOH): 334,38 (MH+).
4 - cloro-6-fenil-3 -(4-(pirimidina-2-ila) piperazina-1-ila) piridazina (6) piperazina-1-ila)piridazina
O composto 21 (22 g, 0,066 mol) foi suspenso em oxicloreto de fósforo (80 mL) . A mistura de reação foi aquecida a IOO0C por 3 h., resfriada até a temperatura ambiente e derramada em gelo triturado (2 kg) . A mistura aquosa foi neutralizada com solução de NaOH para fornecer suspensão branca. O precipitado foi filtrado e seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer o produto desejado 6 em 91% de rendimento (21 g) . 1H NMR (CDCl3): δ 8,35 (d, J = 4,6 Hz, 2H) , 8,01 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,81 (s, 1H), 7,50 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 7,48 (t,J =7,0 Hz, 1H) , 6,54 (t, J = 4,4 Hz, 1H) , 4,05 (t, J = 4,4 Hz, 4H) , 3,65 (t, J = 4,4 Hz, 4H) . HPLC (tr/pureza); 22,4 min., >99%. HRMS calcd para Ci8Hi7ClN6 352,1198, encontrado 352,1201.
4 -benzi1-6-fenil-3-(4-pirimidina-2 -ila) piperazina-1-ila) piridazina (2)
Seguindo o procedimento de Zou e outros (Tet Lett. 2001 42: 7213-7215), o composto 6 (100 mg, 0,28 mmol) foi suspenso em THF com o 1,37 equiv. de ácido borônico benzila (42 mg, 0,31 mmol), 0,2 equiv. de Pd(dppf) Cl2CH2Cl2 (23 mg, 0,02 mmol), 2,5 equiv. de óxido de prata (164 mg, 0,71 mmol) e 3 equiv. de carbonato de potássio (117 mg, 0,85 mmol) . A mistura foi purgada com argônio e foi aquecida a 120 °C por 16 h em um tubo vedado. A mistura de reação foi então resfriada até a temperatura ambiente e resfriada bruscamente com peróxido de hidrogênio a 33% ou hidróxido de sódio a 10%. A camada aquosa foi extraída com éter (3 χ 30 mL) e as camadas etéreas são combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. A mistura bruta é passada em uma coluna de sílica gel e eluída com hexanos:acetato de etila (1:1 v/v) . O produto 2 é obtido como um sólido rosa pálido em 45% de rendimento. 1H NMR (CDCl3): δ 8,36 (d, J = 4,4 Hz, 2H) , 7,94 (d, J - 7,1 Hz, 2H) , 7,46 - 7,42 (m, 3H) , 7,41 (s, 1H) , 7,36 (t, J = 7,3 Hz, 2H) , 7,30 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 6,55 (t, J = 4,4 Hz, 1H) , 4,10 (s, 2H) , 4,01 (s, 4H) , 3,44 (s, 4H) . HPLC (tr/pureza) ; 30,32 min., >95%. HRMS calc. Para C25H24N6 408,2057, encontrado 408,2066.
6-fenil-4-(piridina-4-ila)-3-(4-pirimidina-2-ila) piperazina-1-ila) piridazina (3)
O composto (6) (700 mg, 2,0 mmol) foi colocado em um recipiente de reação com 3,1 equiv. de carbonato de potássio (851 mg, 6,2 mmol), 1,37 equiv (330 mg, 2,7 mmol) de ácido 4-piridinil borônico e 0,05 equiv Pd(PPh3)4 (120 mg, 0,1 mmol). DME (10 mL) foi adicionado e a mistura foi purgada com argônio. A mistura de reação foi vedada e aquecida a 110°C por 20 h. A solução foi resfriada até a temperatura ambiente e filtrada através de celite. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, dissolvido em acetato de etila (30 mL) e lavado com 2N HCl (50 mL). A camada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida e recristalizada com mistura de acetato de etila/éter de petróleo para fornecer o produto 3 como agulhas amarelas claras em 41% de rendimento. 1H NMR (CDCl3): δ 8,79 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 8,32 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 8,07 (d, J = 7,5 Hz, 2H) , 7,68 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 7,63 (s, 1H) , 7,51 (t, J = 7,0 Hz, 2H) , 7,48 (t, J = 7,0 Hz, 1H) , 6,53 (t, J = 4,5 Hz, 1H) , 3,85 (d, J = 4,5 Hz, 4H), 3,39 (t, J = 5,0 Hz, 4H). HPLC (tr/pureza) ; 21,61 min., >95%. HRMS calcd para C23H2iN7 395,1853, encontrado 395,1852.
4 -isobutil-6-fenil-3-(4-pirimidina-2-ila) piperazina-1-ila) piridazina (4)
Seguindo o procedimento de Zou e outros (supra) , o composto 6 (200 mg, 0,56 mmol) foi suspenso em THF com o 1,37 equiv. de (2-metil propil) ácido borônico (79 mg, 0,77 mmol), 0,2 equiv. de Pd(dppf) Cl2CH2Cl2 (92,5 mg, 0,11 mmol), 2,5 equiv. de óxido de prata (328 mg, 1,41 mmol) e 3 equiv. de carbonato de potássio (234 mg, 1,7 mmol). A mistura foi purgada com argônio e foi aquecida a 120°C por 42 h em um tubo vedado. A reação foi resfriada até a temperatura ambiente e a reação foi resfriada bruscamente com solução aquosa de hidróxido de sódio (10%) e extraída com éter (3 χ 50 ml). As camadas etéreas foram combinadas, secas com sulfato de magnésio e evaporadas sob pressão reduzida deixando um sólido pegajoso. A mistura bruta foi purificada com cromatografia de coluna e eluída com acetato de etila a 4 0% em hexanos para fornecer 4 como um pó branco em 52,5% de rendimento. 1H NMR (CDCl3): δ 8,36 (d, J = 4,2 Hz, 2H), 8,06 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 7,60 (s, 1H), 7,51 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 7,47 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 6,55 (t, J = 4,2 Hz, 1H) , 4,03 (S, 4H) , 3,42 (s, 4H) , 2,62 (d, J = 6,7 Hz, 2H) , 2,18 (sp, J = 6,4 Hz, 1H) , 0,97 (d, J = 6,2 Hz, 6H). HPLC (tr/pureza) ; 29,5 min., >95%. HRMS calc. Para C22H26N6 374,2213, encontrado 374,2208.
4-metil-6-fenil-3 -(4-pirimidina-2-ila) piperazina-1-ila) piridazina (5)
Seguindo o procedimento de Z ou e outros (supra), o composto 6 (250 mg, 0,71 mmol) foi suspenso em THF com 1,37 equiv de ácido metil borônico (59 mg, 0,97 mmol), 0,25 equiv. de Pd (dppf) Cl2CH2Cl2 (144 mg, 0,18 mmol), 2,5 equiv. de óxido de prata (410 mg, 1,78 mmol) e 3 equiv. de carbonato de potássio (294 mg, 2,1 mmol). A mistura foi purgada com argônio e foi aquecida a 120°C por 18,5 h em um tubo vedado. Após resfriar a temperatura ambiente a mistura foi resfriada bruscamente com hidróxido de sódio aquoso (10%) e extraída com éter (3 χ 75 ml). O composto foi purificado por cromatografia de coluna e eluído com uma mistura de acetato de etila: hexanos (1:3 v/v). O composto 5 era um sólido cristalino branco obtido em 45,8% de rendimento. 1H NMR (CDCl3): δ 8,36 (d, J = 4,5 Hz, 2H) , 8,05 (d, J = 7,5 Hz, 2H) , 7,61 (s, 1H) , 7,50 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 7,44 (t, J - 7,1 Hz, 1H), 6,55 (t, J = 4,5 Hz, 1Η) , 4,04 (t,J = 4,5 Hz, 4Η) , 3,46 (t, J = 4,5 Hz, 4Η) , 2,45 (s, 3Η) , HPLC (tr/pureza): 24,91 min, >95%; HRMS calcd para Ο19Η20Ν6332,1744, encontrado 332,1740. Anal. Calcd para C19H20N6 C, 68,65; N, 6,06; N, 25,28; encontrado C, 68,73; H, 5,97; N, 25,22.
Síntese de análogos R3 (figura 38) 4-metil-6-fenil-3-(4-praziam-2-il) piperazina-1-il)piridazina (7)
O composto 15 (500 mg, 2,4 mmol) foi colocado em um frasco tampado e suspenso em 2 0 mL de água. 2,5 equiv. (lg, 6 mmol) de 1-(2-pirazinil) piperazina e 5 equiv. (1,69 mL, 12 mmol) de trietil amina foram adicionados e o frasco foi tampado e aquecido a 130°C por 160 h. A reação foi resfriada até a temperatura ambiente para fornecer um óleo marrom escuro no fundo do frasco. A água foi decantada do óleo, o óleo foi dissolvido em isopropanol, mínimo, e aquecido a 70°C. Após resfriamento, um sólido marrom se formou e foi filtrado em um funil de vidro sinterizado e enxaguado com hexanos para fornecer o produto 7 como um pó marrom em 28,8% de rendimento. 1H NMR (CDCl3): δ 8,25 (bs, 1H) , 8,16 (bs, 1H) , 8,08 (d, J = 7,0 Hz, 2H) , 7,93 (bs, 1H) , 7,69 (s, 1H) , 7,54 - 7,48 (m, 3H) , 3,83 (t, J = 5,0 Hz, 4H) , 3,57 (bs, 4H) , 2,48 (s, 3H) . HPLC (tr/pureza); HRMS calcd. Para C19H20Ne, encontrado. Dado em 4/21/06.
4-metil-6-fenil-3-(4-piridina-2 -il)piperazina-1- ila) piridazina (8)
O composto 15 (190 mg, 0,93 mmol) foi colocado em um tubo de reação com 1-butanol e 4 equiv de 1-(piridina-2-ila) piperazina (605 mg, 3,7 mmol), tampado e aquecido a 140 °C por 4 8 h. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e o 1-butanol removido sob pressão reduzida para fornecer um resíduo de óleo escuro. O óleo foi tratado com água para fornecer uma suspensão que é filtrada e lavada primeiramente com água, a seguir com uma mistura de acetato de etila: hexanos (1:6 v/v) para fornecer o produto 8 como um pó amarelo marrom em 54,5% de rendimento. 1H NMR (CDCl3): δ 8,23 (d, J = 3,7 Hz, 1H) , 8,05 (d, J = 7,5 Hz, 2H) , 7,60 (s, 1H) , 7,54 (t, J = 6,8 Hz, 1H) , 7,49 (t, J = 7,1 Hz, 2H) , 7,44 (t, J = 7,3 Hz, 1H) , 6,75 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,68 (t, J = 5,5 Hz, 1H) , 3,76 (s, 4H) , 3,51 (t, J = 4,8 Hz, 4H) , 2,43 (s, 3H) . HPLC (tr/pureza) ; 15,66 min, >95% HRMS calcd. Para C20H2IN5, 331,1791, encontrado 331,1800.
4-metil- 6 -feni1-3 -(4-piridina-4-ila) piperazina-1-ila) piridazina (9)
O composto 15 (190 mg, 0,93 mmol) foi colocado em um tubo de reação com 1-butanol e 4 equiv de 1-piperazina-piridazina (605 mg, 3,7 mmol) . O frasco foi, tampado e aquecido a 140°C por 72 h. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e o 1-butanol removido sob pressão reduzida para fornecer um resíduo de óleo escuro. O óleo foi tratado com 2 0 mL de água, e então extraído com 10 mL de acetato de etila. Uma suspensão marrom foi formada na camada orgânica. O precipitado foi coletado por filtração e lavado com 10 mL de água e então 10 mL de acetato de etila para fornecer o produto 9, como um pó amarelo marrom em 34,1% de rendimento. 1H NMR (CDCl3): δ 8,33 (d, J = 4,9 Hz, 2H) , 8,06 (d, J = 7,1 Hz, 2H) , 7,64 (s, 1H) , 7,52 (t, J = 7,6 Hz, 2H) , 7,48 (t, J = 7,1 Hz, 2H) , 6,79 (d, J = 5,8 Hz, 2H) , 3,58 (s, 4H) , 3,56 (s,4Η) , 2,45 (s, 3Η) . HPLC (tr/pureza); 14,95 min, >95% HRMS calcd. Para C20H21N5, 331,1791, encontrado 331,1799. 3-(4-cicloexilpiperazina-1-ila)-4-metil-6- fenil piridazina (10)
O composto 15 (200 mg, 0,96 mmol) foi suspenso em 5 mL de água com 4 equiv de piperazina de cicloexila (651,5 mg, 3,87 mmol) em um recipiente de vidro de microonda de 10 mL e tampado com um septo. A irradiação de microonda de 75W foi utilizada, a temperatura sendo elevada de temperatura ambiente até 175°C. Após atingir 175°C, a mistura de reação foi retida nessa temperatura por 3 h. A mistura de reação foi deixada resfriar até a temperatura ambiente, a solução marrom escuro foi derramada sobre água para fornecer uma suspensão, que foi filtrada para fornecer um sólido bege. 0 sólido foi lavado com 20 mL de bicarbonato de sódio saturado para fornecer 10 em 95% de rendimento. 1H NMR (CDCl3): δ 7,56 (s, 1H), 7,49 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 7,44 (m, 2H) , 3,41 (s, 4H) , 2,79 (s, 4H) , 2,38 (s, 3H) , 2,34 (m, 1H) , 1,62 (m, 2H) , 1,26 (m, 8H) . HPLC (tr/pureza)/ pendente min., >95%: HRMS calcd. Para C21H28N4, encontrado DADO 4/21/06.
4-metil-3- (4-metilpiperazina-l-ila) -6-fenil piridazina (11)
O composto 15 (500 mg, 2,4 mmol) foi suspenso em 20 mL de água em um frasco tampado com 4 equiv. 1-metil-piperazina (961 mg, 9,6 mmol). O recipiente foi tampado e aquecido a 120°C por 120 h até conclusão. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente para fornecer uma solução amarela desbotada com um precipitado de sólido branco. A reação foi filtrada, e o filtrado aquoso foi lavado com éter para remover os materiais de partida residuais e, então, extraído com acetato de etila (5 χ 10 mL). As lavagens orgânicas são combinadas, secas com sulfato de magnésio e o acetato de etila removido sob pressão reduzida. O óleo restante foi tratado com éter e resfriado, resultando no produto 11 como agulhas amarelas em 38,7% de rendimento. 1H NMR(CDCl3): δ 8,02 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 7,55 (s, 1H) , 7,47 (t, J = 7,0 Hz, 2H) , 7,43 (m, 1H), 3,41 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 2,63 (bs, 4H) , 2,38 (s, 3H), 2,36 (s, 3H) . HPLC (tr/pureza): PENDENTE 95%; HRMS calcd para C16H20N4 dado 4/21/06
Síntese de um análogo de pirazina (figura 39) 3-metila-5-fenil pirazina-2(1H)-ona (24) Esse composto foi preparado seguindo o procedimento de Jones (J. Amerc. Chem. Soe. 194 9, 71, 78-81). Resumidamente, fenil glioxal comercialmente disponível 22 (1,02 g, 7,62 mmol) foi dissolvido em metanol e resfriado a -41°C. Amida de alanina comercialmente disponível 23 (672 mg, 7,62 mmol) foi dissolvido em 25 ml de metanol e adicionada à mistura de reação. Uma solução de 12,5 N NaOH (0,760 mL, 9,53 mmol) foi adicionada em gotas enquanto agita, mantendo a temperatura da reação abaixo de -10°C. Quando a adição foi concluída, a reação foi colocada em -5°C por 2 h. A reação foi então aquecida até a temperatura ambiente e resfriada bruscamente com 12 N HCl solução (0,76 mL), seguido por bicarbonato de sódio para neutralizar a solução. O metanol foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi extraído com clorofórmio e precipitado com acetato de etila. O composto foi isolado como um pó branco para fornecer 24 em 18% de rendimento. HPLC (tr/pureza) : 15,91 min, >97%. ESI m/z (MeOH) : 187,35 (MH+).
2-(4-(3-metil-5-fenil pirazina-2-ila) piperazina-1-ila) pirimidina (25)
Esse composto foi preparado através do triflato de pirazina com 1-(2-pirimidil) piperazina como a amina seguindo o procedimento de Adams e outros (Synlett 2004, 11, 2031-2033) . Piridina foi utilizada como um reagente anidro mantido sob argônio em uma garrafa vedada seguramente (Aldrich). 0 composto 24 (100 mg, 0,52 mmol) e DMAP (65,7, 0,52 mmol) foram dissolvidos em piridina e cloreto de metileno (0,5: 4 ml v/v) e resfriado a OC. 0 ácido sulfônico trif luorometano (0,8 mmol, 135,5 μ]!,) foi adicionado em gotas e agitado por 15 min. a O0C e então 3 h a RT. 0 triflato foi confirmado por ESI (363,7 (MH+)) e HPLC (tR = 25,33 min). A mistura de reação foi diluída com dic lorometano e lavada uma vez cada com 2 0 ml de água, bicarbonato de sódio e salmoura. 0 diclorometano foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo restante foi dissolvido diretamente em DMSO. 1-(2-pirimidil) piperazina (5,3 mmol, 750 μL) foi adicionado e a reação aquecida a 60°C e agitada por 2 h. Quando concluída, a reação foi diluída com acetato de etila e lavada com IN HCl, após lavagens com salmoura e água para remover piridina restante. Os orgânicos foram então secos e evaporados a vácuo para fornecer 25 como um sólido amarelo (63% de rendimento). HPLC (tr/pureza) : 24,74 min, >98%. ESI m/z (CH2Cl2) 333,29 (MH+). 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8,56 (s, 1H); 8,36 (d, J = 4H, 2H); 8,01 (d, J = 7,5 Hz, 2H); 7,48 -7,40 (m, 3H); 6,54 (bs, 1H); 4,03 (bs, 4H), 3,42 (bs, 4H); 2,62 (S, 6Η). HRMS calculado DADO 4/21/06 Síntese de 26
Sal de monoidrato de cloro 4, 6-dif enil-3-(4,6 pirimidina-2-ila piperazina-1-la) piridazina (26)
700 mg (1,77 mmol) de 1 foram suspensos em 10 mL de isopropanol anidro e aquecidos a 70°C 2.5 eq. (0,375 mL, 4, 4mmol) de HCl concentrado foi adicionado de uma vez à solução. A suspensão foi agitada a 70°C por 10 min., resfriada à temperatura ambiente e resfriada em gelo por 1 h. O precipitado foi coletado por filtração e lavado uma vez com isopropanol frio (5 mL) para fornecer o produto 26 como pó amarelo brilhante em 55% de rendimento. 1H NMR (DMSO-d6) : δ 8,55 (s, 2H) ; 8,16 (s, 2H) , 7,86 (s, 1H) , 7,7 (s, 2H) , 7,58 (s, 6H) , 6,84 (s, 1H) , 4,14 (s, 4H) , 3,57 (s, 4H) . HPLC (tr/pureza) ; PENDENTE min, >98%. EA calculado para C24H26Cl2N6O C 59,38, H 5,40, N, 17,31. Encontrado C 59,38, H 5,40, N 17,31.
Esquema de produção para análogos de pirazina 4,5-diidro-4-metil- 6 -fenil piridazina-3(2H)-ona (13) (Hansen, KB e outros Org. Process Res. Dev., 2005, 9, 634-639, Nelson, DA. US 20050137397A1). Um frasco de fundo redondo com três gargalos de 250 ml adaptado com uma sonda de temperatura e condensador foi carregado com 7,7 g (40 mmol) de 2-metil-4-oxo-4-ácido fenil butanóico 12 e 20 ml de etanol (95%) . A suspensão foi resfriada até abaixo de 10°C e 2,2 ml (42 mmol, 1,05 equiv.) de monoidrato de hidrazina em 10 ml de etanol foi adicionado em gotas. Após adição, a mistura de reação foi aquecida até refluxo e agitada por 2h. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e cristais brancos em formação foram coletados por filtração. 0 sólido foi então lavado com 2N NaHCO3 (1x30 mL), água Mili-Q (3 χ 60 mL) e seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer o produto desejado 13 em 96,1% de rendimento. 1H NMR (DMS0-d5: δ 10,84 (s, 1H) , 7,75 (m, 2H) , 7,41 (m, 3H) , 3,12 (m, 1H) , 2,60 (m, 1H) , 2,50 (m, 1H) , 1,13 (d, J = 7 Hz, 3H) . HPLC (tr/pureza: PENDENTE min, >95%; ESI m/z (MeOH) 189,08 (MH+)
4-metil- 6 -fenil piridazina-3(2H)-ona (14) (Csende F. e outros, Synthesi, 1995, 1240-1242)
7,0 g (35 mmol) de 13 foram dissolvidos em 30 ml de acetonitrila em um frasco de fundo redondo de gargalo único de 250 ml. 11,3 g (84 mmol, 2,4 equiv.) de cloreto de cobre (II) anidro foram adicionados à solução e a mistura de reação foi aquecida até refluxo por 2 horas. Para controlar o gás HCL que se formou durante o curso da reação, uma solução de NaOH foi utilizada para absorver o HCl que escapa do tubo seco. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, e colocada em um banho de água gelada. 150 mL de água gelada foram adicionados para resfriar bruscamente a reação. A mistura foi agitada vigorosamente por 10 minutos para fornecer um precipitado cinza e líquido azul contendo cloreto de cobre (I) . O precipitado foi coletado então por filtração (pH do filtrado é 0-1) e lavado primeiramente com IN HCl (100 mL), a seguir com água Milli-Q (5 χ 100 mL) . Para remover subprodutos de cobre restantes, a massa de filtro foi agitada em IN HCl (150 mL) por 0,5 h e então filtrada. A massa de filtro foi lavada com água Milli-Q até que o filtrado está em pH 7 (aproximadamente 7 lavagens) . O sólido foi seco sobre um funil de vidro sinterizado de frita média a vácuo para fornecer 14 como um pó cinza claro em 93,8% de rendimento. 1H NMR (DMSO-d6) : δ 7,95 (s, 1H) , 7,85 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,43 (m, 1H), 2,13 5 (s, 3H). HPLC (tr/pureza) : 21,48 min, >97%; ESI m/z (MeOH) 187,36 (MH+).
3-cloro-4-metil-6-fenil piridazina (15) 6,0 g (32 mmol) de 14 foram colocados em um frasco de fundo redondo de gargalo único de 250 mL e 30 ml de acetonitrila foi adicionado para criar uma pasta amarela pálida. 6,0 ml (64 mmol, 2 equiv) de oxicloreto de fósforo foram adicionados e a mistura de reação foi aquecida em refluxo por 2,5 h. Após término da reação, a mistura foi resfriada à temperatura ambiente e colocada em um banho de água gelada. Água gelada (150 mL) foi lentamente derramada na mistura de reação com agitação para decompor o oxicloreto de fósforo em HCl e H2PO4. O sólido foi então coletado por filtração e lavado com água Milli-Q (3 χ 50 mL). O sólido foi suspenso em 100 mL de água e IN NaOH foi adicionado até que a suspensão aquosa estava em pH =8. A mistura foi agitada por 5 minutos para remover todos os contaminantes de material de partida residuais. 0 sólido foi filtrado e lavado com água Milli-Q (3 χ 100 mL) . O produto foi seco sobre um funil de vidro sinterizado de 25 frita média a vácuo para fornecer 15 como um pó rosa claro em 96% de rendimento. 1H NMR (DMSO-d6) : δ 8,29 (s, 1H) , 8,10 (m, 2H), 7,53 (m, 3H), 2,41 (s, 3H), HPLC (tr/pureza): 2888,98 min., >94$. ESI m/z (MeOH) 205,49 (MH+).
2- (4- (4-metil-6-fenil piridazina -3 -ila) piperazina-1-ila) pirimidina (5) 7,5 g (36,6 mmol) de 15 foram suspensos em 125 mL de água Milli-Q. 60,17 g (366,0 mmol, 10 equiv.) de 1-(2-pirimidil) piperazina foram adicionados e a mistura de reação foi aquecida em refluxo com agitação rápida por 60 h. Quando concluída, a mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e duas camadas foram observadas no frasco consistindo em uma camada aquosa laranja e um óleo marrom que assentou no fundo do frasco. A água foi decantada, o óleo foi dissolvido em volume mínimo de isopropanol e aquecido até refluxo. Após 10 minutos de refluxo, a solução foi lentamente resfriada até 0°C para induzir cristalização. Cristais amarelos pálidos foram filtrados a partir de isopropanol e enxaguados com éter frio mínimo para fornecer 5 em 54% de rendimento. 1H NMR (CDCl3): δ 8,36 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 8,05 (d, J = 7,5 Hz, 2H) , 7,61 (s, 1H) , 7,50 (t, J = 7,1 Hz, 2H) , 7,44 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 6,55 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,04 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,46 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 2,45 (s, 3H). HPLC (tr/pureza) : 24,91 min., >95%; HRMS calcd para H19H20N6 332,1744; encontrado 332,1740. Anal. Calcd para C19H20N6: C, 68,65; H, 6,06; N, 25,28; encontrado C, 68,73; H, 5,97; N, 25,22.
Sal de monoidrato de diidrocloreto de 2-(4-(4-metil-6-fenil piridazina-3-ila) piperazina-1-ila) pirimidina (16) (Wermuth CG, Stahl PH. Selected procedures for the preparation of pharmaceutically acceptable salts, em Stahl PH, WermuthCG. (Ed.) Handbook of Pharmaceutical Salts, Wiley-VCH, pág. 249-264). 6,3g (19,0 mmol) de 5 foram suspensos em 50 mL de isopropanol anidro e aquecidos a 70 ° C. 2,5 eq (4,0 mL) de HCl concentrado foram adicionados de uma vez à solução. A suspensão foi agitada a 70°C por 10 min., resfriada à temperatura ambiente e resfriada em gelo 0,5 h. 0 precipitado é coletado por filtração e lavado uma vez com isopropanol frio (30 mL) para fornecer o produto 16 como um pó amarelo em 93,3% de rendimento. 1H NMR (DMS0-d6) : δ 8,47 (s, 3H), 8,07 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 7,61 (s, 3H) , 6,76 (d, J = 2,7 Hz, 2H), 3,99 (s, 4H), 3,60 (s, 4H) , 2,59 (s, 3H). HPLC (tr/pureza): 25,06 min., 99%. HRMS calcd para C19H20N6 332,1744, encontrado 332,1744. EA calculado para C19H22Cl2N6: C, 53,91; H, 5,71; N, 19,85; Cl, 16,75; 0, 3,78. Encontrado C, 53,66; H, 5,52,- N, 19,67; Cl, 16,86; O, 4,12. Cobre encontrado como sendo 2 ppm.
Exemplo 10
Propriedades farmacocinéticas
Materiais/métodos:
O sistema HPLC (Dionex Corp., Sunnyvale, CA) consistiu dos seguintes componentes: uma bomba P680 Dionex, um autoamostrador Dionex ASI-100, uma coluna Phenomenex (Torrance, CA) Luna C18 (250 χ 2,0 mm; 5uM) com uma coluna de proteção, e um detector Dionex UCD170U. A fase móvel consistiu em 0,1% de ácido fórmico (Fluka) em água Milli-Q como solvente A e 80% de acetonitrila (Burdick & Jackson), com 0,08% de ácido fórmico em água Milli-Q como solvente B. A quantificação de pico foi executada com base em absorção em 254 nm em relação a uma curva padrão obtida por diluições seriais do composto.
Tubos capilares utilizados na determinação de solubilidade aquosa em microescala foram adquiridos de Buchi, Suíça. A pesagem dos compostos foi realizada em uma balança analítica da SartoriusAG (Alemanha) . Água Milli-Q foi obtida utilizando Millipore System (Bedford, MA) . O incubador/agitador orbital foi adquirido da Barnstead International (Melrose Park, IL.)
Determinação de solubilidade aquosa em microescala
Tubos capilares de borossilicato limpos, secos foram pesados utilizando uma balança analítica. Entre 17 - 30 mg de 16 foram pesados e adicionados aos tubos. Água Milli-Q purificada, destilada foi adicionada aos tubos para criar soluções com concentrações que variam de 1 - 2 g/ml. Tubos de amostra foram misturados manualmente para assegurar umedecimento suficiente e foram colocados em um incubador ajustado em 37°C durante a noite. Uma amostra foi coletada de cada tubo, centrifugada em 10.000 rpm por 10 min., e injetada sobre um HPLC de fase inversa.
Determinação de solubilidade aquosa em macro escala
Frascos Erlenmeyer de vidro limpo, secos, foram pesados utilizando uma balança analítica. Até 30 mg de 26 foi adicionado aos frascos. Água purificada, destilada foi adicionada ao frasco para criar uma solução saturada. Os frascos foram colocados em um incubador/agitador orbital a 37°C, 175 rpm por 72 horas. As amostras foram removidas em intervalos de 24 horas, centrifugadas a 10.000 rpm por 10 min. para remover material em partículas e injetadas sobre um sistema HPLC de fase inversa.
Determinação de coeficiente de divisão
Os coeficientes de divisão de 16 e 26 foram determinados utilizando 1-octanol (Sigma) e água. Entre 0,5 - 1 mg/ml de cada composto foi dissolvido em água Milli-Q e deixados dividir em octanol pré-saturado. As amostras foram colocadas horizontalmente em um incubador/agitador orbital a 37°C por 1 hora. Após 1 hora, as amostras foram centrifugadas por 5 min. a 1500 rpm e a fase aquosa separada. A concentração do composto nas fases tanto aquosa como de octanol foi determinada.
Ensaios de atividade
Ensaios de cultura de célula. Ensaios baseados em célula glia da atividade dependente de concentração dos compostos foram feitos como anterior descrito (Hu W., Ralay Ranaivo e outros, Current Alzheimer's Research 2005, 2:197- 205: Mirzoeva S., e outros, J. Med Chem 2002, 45:563-566; Ralay Ranaivo H, e outros, J Neurosci 2006, 26:662-670). Células microgliais de camundongo BV-2 foram cultivadas por um dia em placas de multicavidades e então tratadas em meios isentos de soro por 16 h com tampão de controle ou o lipopolissacarideo de estimulo de ativação glial padrão (LPS, a partir de Salmonella typhimurium; lOOng/ml) na presença de diluente ou concentrações diferentes de compostos. A acumulação de nitreto, o metabólito estável de oxido nitrico (NO) , foi medida em meios condicionados de BV-2 pelo ensaio Griess como anteriormente descrito (Hu W., Ralay Ranaivo e outros, Current Alzheimer's Research 2005, 2:197-205; Mirzoeva S., e outros, J Med Chem 2002, 45:563- 566; Mirzoeva S. e outros, Brain Res. 1999, 844:126-134). Os níveis de IL-Ιβ, TNFa, MCP-I e IL-IO em lisados de células foram medidos pelo sistema Mesoscale Discovery conforme instruções do fabricante. Lisados de célula foram analisados por Western blots como descrito (Mirzoeva S., e outros, J Med. Chem. 2002, 45:563-566; Ralay Ranaivo, H., e outros, J. Neurosci 2006, 26:662-670) para determinar os níveis de sintase de óxido nítrico induzível (iNOS) e ciclooxigenase-2 (COX-2). Os resultados para os compostos da invenção são mostrados na tabela 1.
Biodisponibilidade oral e absorção pelo cérebro
Para estimar a biodisponibilidade oral (concentração do composto no sangue como uma função de tempo após administração oral) e obter insight em absorção potencial pelo cérebro, o composto 5 (2,5 mg/kg) foi administrado a camundongos por gavagem oral em uma suspensão de carbóxi metil celulose de 0,5% (peso/v) (Ralay Ranaivo H., e outros, J. Neurosci. 2006, 26:662-670). Em 5, 15, 30, 60 e 120 min. após administração oral, os camundongos foram sacrificados, perfundidos e seu sangue e cérebro foram colhidos. Os cérebros foram homogeneizados em acetonitrila e então centrifugados a 12000 xg por 10 minutos. A seguir, o sobrenadante do cérebro e o plasma foram acidifiçados por diluição com 0,1% de ácido fórmico (Fluka) 1:1 e 1:3, respectivamente. A extração de fase sólida seguida por análise de HPLC foi utilizada para quantificar a quantidade de composto nos sobrenadantes de cérebro e plasma. Resumidamente, os cartuchos (Sep-Pak® C18, Waters) foram condicionados com 1 ml de acetonitrila (tipo HPLC, EMD Biosciences) e equilibrados com 1 ml de água. Um análogo estrutural, 6-metil-4-fenil-3- (4(pirimidina-2-ila) piperazina-1-ila) piridazina (MW01-7- 057WH) foi utilizado como um padrão de recuperação interna. Amostras acidificadas foram carregadas no cartucho seguido por uma lavagem de 1 ml com acetonitrila a 10%. O composto 5 foi eluído a partir do cartucho utilizando 80% de acetonitrila. O eluato foi evaporado até secura, reconstituído em 0,08% de ácido fórmico/água em 80% de acetonitrila e analisado por HPLC com 0,1% de ácido fórmico em água como reagente A e 0,1% de ácido fórmico em acetonitrila como reagente B utilizando o seguinte gradiente em reagente B: 0% a 50% a 3 min., isocrático a 50% até 6 min., 50% a 70% de 6 a 10 min., isocrático a 70% até 13 min., 70% a 80% de 13 a 18 min., isocrático a 80% até 21 min., 80% a 70% de 21 a 23 min., e finalmente retornando de 70% a 0% a partir de 23 a 28 min.
Estudos de eficácia in vivo em camundongos. O desenho de estudo e paradigma de tratamento para infusão intracerebroventricular (ICV) de Αβ:.42 oligomérico humano no camundongo foram como descrito anteriormente (Craft JM e outros, neurobiol Aging 2004, 25:1283-12 92) exceto que a administração do composto foi pela boca (Ralay Ranaivo H., e outros, J. Neurosci. 2006, 26:662-670). Foi previamente mostrado que neuroinflamação induzida por Ab é um evento inicial associado ao início e progressão de patofisiologia, e pode ser suprimido por um inibidor de ativação glial. Camundongos C57B1/6 fêmeas (Harlan) pesando 20-25 g (3-4 meses de idade) foram alojadas em uma instalação isenta de patógeno sob um ciclo aproximado de 12h/l2h escuro e claro e tiveram acesso ad libitum a alimento e água. Todos os procedimentos de animais foram aprovados pelo Northwestern Animal Care and Use Committe.
Os camundongos foram administrados por gavagem oral com o composto de teste (2,5 mg/kg/dia) ou controle de solvente (10% DMSO) em uma suspensão de carbóxi metil celulose a 0,5% (peso/v) uma vez por dia. O tratamento começou no 21° dia após início de infusão ICV de Αβ e continuou por 14 dias (Ralay Ranaivo, H., e outros, J Neurosci 2006, 26:662-670). Iniciando no 50° dia após início de infusão ICV de Αβ, o teste Y labirinto de alternação espontânea foi utilizado para avaliar aprendizado espacial dependente de hipocampo como descrito anteriormente (Ralay Ranaivo, H., e outros, J. Neurosci. 2006, 26:662-670). No 60° dia após o início de infusão ICV Αβ, os camundongos foram sacrificados, perfundidos com um tampão HEPES (10 mM, pH 7,2) contendo um coquetel inibidor de protease e o cérebro foi colhido e dividido como descrito anteriormente (Ralay Ranaivo H., e outros, J. Neurosci. 2006, 26:662-670). Níveis de IL-IB e TNFa, S100B, sinaptofisina, PSD-95, níveis em sobrenadantes de hipocampo foram medidos como anteriormente descrito (Ralay Ranaivo H., e outros, J. Neurosci. 2006, 26:662-670; Craft JM, e outros, Neurobiol. Aging 2004, 25:1283-1292; Eldik, LJ, 1994).
Detecção imunoistoquímica de astrocitos ativados positivos GFAP e microglia positiva F4/80 foi executada em seções de 10 μπι como descrito anteriormente (Ralay Ranaivo H., e outros, J. Neurosci. 2006, 26:662-670; Craft JM, e outros, Neurobiol. Aging 2004, 25: 1283-1292).
Análises estatísticas. Grupos de controle e experimentais foram comparados utilizando ANOVA de um sentido com análise post-hoc Newman-Keuls utilizando um pacote de software estatístico (GraphPad Prism versão 4.00, GraphPad Software, San Diego, CA). Significância estatística foi assumida quando p < 0,05. A presente invenção não deve ser limitada em escopo pelas modalidades específicas descritas aqui, uma vez que tais modalidades são destinadas apenas como ilustrações únicas de um aspecto da invenção e quaisquer modalidades funcionalmente equivalentes estão compreendidas no escopo da presente invenção. Realmente, várias modificações da invenção além daquelas mostradas e descritas aqui se tornarão evidentes para aqueles versados na técnica a partir da descrição supra e desenhos em anexo.
Tais modificações pretendem estar compreendidas no escopo das reivindicações apensas.
Todas as publicações, patentes e os pedidos de patente, mencionados, são incorporados aqui a título de referência na íntegra até o mesmo ponto como se cada publicação individual, patente ou pedido de patente fosse específica e individualmente indicado como sendo incorporado a título de referência na íntegra. Todas as publicações, patentes e os pedidos de patente mencionados aqui são incorporados a título de referência para fins de descrever e revelar os métodos, etc., que são reportados nas mesmas que poderiam ser utilizados com relação ã invenção. Nada aqui deve ser interpretado como admissão de que a invenção não tem direito de antedata dessa revelação em virtude de invenção anterior. <formula>formula see original document page 193</formula>
Tabela 1. Refinamento de auim ca med cina
<table>table see original document page 193</column></row><table>
*calculado utilizando ACD/solubilidade DB9.03. logS é solubilidade intrínseca de forma neutra de
compostos.
PSA: 1,2,4-7 = 53,04; 3 = 70,93; 8,9 = 45,15; 10,11= 3226.
Concentração (uM) exigida para 50% de inibição. IL1β - interleucina-1β; NO = óxido nítrico.
Tabela 2
Compostos da fórmula II <table>table see original document page 194</column></row><table> <table>table see original document page 195</column></row><table> <table>table see original document page 196</column></row><table> <table>table see original document page 197</column></row><table> <table>table see original document page 198</column></row><table>

Claims (26)

1. Composição eficaz para fornecer risco inferior de efeitos colaterais e/ou perfil farmacocinético benéfico após tratamento de um sujeito que sofre de uma doença neuroinflamatória caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula I: <formula>formula see original document page 199</formula> onde R1, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, R13 e R14 é, independentemente, hidrogênio; hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalcóxi, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterociclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, sulfato, sulfenila, sulfinila, sulfonila, sulfonato, sulfóxido, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, =S, fosfonato, ureido, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida; e X é opcionalmente pirimidinila ou piridazinila substituída, um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado do mesmo.
2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que R1, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, R13 e R14 são independentemente hidrogênio, alquila C1- C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcóxi C1-C6, alquenilóxi C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4- C10, cicloalcóxi C3-C10, arila C6-C10, arilóxi C6-C10, arila C6-C10 - alcóxi C1-C3, aroíla C6-C10, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10, acila C1-C6, acilóxi C1-C6, -NH2, NHR28, -NR28R29, =NR28, -S(O)2R28, -SH, -SO3H, nitro, ciano, halo, haloalquila, haloalcóxi, hidróxi alquila, -CO2H, CO2R28, -NHC(O)R28, -C(O)NH2, -C(O)NHR28, -C(O)NR28R29, NHS(O)2R28, onde R28 e R29 são independentemente selecionados entre alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, arila C6-C10, arila C6-C10 - alcóxi C1-C3, heteroarila C6-C10, e heterocíclico C3-C10.
3. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula II: <formula>formula see original document page 200</formula> onde R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 é independentemente hidrogênio; hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalcóxi, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, sulfóxido, sulfenila, sulfinila, sulfonila, sulfonato, sulfato, silila, sililóxi, silil alquila, sililtio, =0, =S, fosfonato, ureido, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida; ou um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado do mesmo.
4. Composição, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são independentemente selecionados entre hidrogênio, alquila C1-C6, alquenila C2- C6, alquinila C2-C6, alcóxi C1-C6, alquenilóxi C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, cicloalcóxi C3- C10, arila C6-C io, arilóxi C6-C10, arila C6-C10 ~ alcóxi C1-C3, aroíla C6-Ci0, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10, acila C1-C6, acilóxi C1-C6, -NH2, -NHR28, -NR28R29, =NR28, -S(O)2R28, -SH, SO3H, nitro, ciano, halo, haloalquila, haloalcóxi, hidróxi alquila, -CO2H, -CO2R28, -NHC(O)R28, -C(O)NH2, C(O)NHR28, -C(O)NR28R29, -NHS(O)2R28, onde R28 e R29 são independentemente selecionados entre alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, arila C6-C10, arila C6-C10 - alquila C1-C3, heteroarila C6-C10 e heterocí clico C3-C10.
5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que R1 é alquila, cicloalquila ou heteroarila.
6. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que R1 é: onde R15, R16 e R17 são independentemente hidrogênio; hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalcóxi, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, sulfóxido, sulfato, sulfonila, sulfenila, sulfinila, sulfonato, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =O, =S, fosfonato, ureido, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida.
7. Composição, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que R15, R16 e R17 são independentemente selecionados entre hidrogênio, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcóxi C1-C6, alquenilóxi C2-C6, cicloalqu ila C3-C10, cicloalquenila C4- C10, cicloalcóxi C3-C10, arila C6-C10, arilóxi C6-C10/ arila C6-C10 - alcóxi C1-C3, aroíla C6-C10, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10, acila C2-C6, acilóxi C1-C6, -NH2, NHR28, -NR28R29, =NR28, S(O)2R28, -SH, -SO3H, nitro, ciano, halo, haloalquila, haloalcóxi, hidróxi alquila, -CO2H, CO2R28, -NHC(O)R28, -C(O)NH2, -C(O)NHR28, -C(O)NR28R29, NHS(O)2Rii8, onde R28 e R29 são independentemente selecionados entre alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, arila C6-C10, arila C6-C10 - alquila Ci-C3, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10.
8. Composição eficaz para fornecer risco inferior de efeitos colaterais e/ou um perfil farmacocinético benéfico após tratamento em um sujeito que sofre de uma doença neuroinflamatória caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula III: <formula>formula see original document page 203</formula> onde R4, R5, R6, R7, R8, R9i R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 hidrogênio, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalcóxi, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroila, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, sulfóxido, sulfato, sulfonila, sulfenila, sulfinila, sulfonato, silila, sililóxi, sililalquila, sililtio, =0, =S, fosfonato, ureido, carboxila, carbonila, carbamoíla ou carboxamida, com a condição de que R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 não podem ser todos hidrogênio, ou um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável, ou derivado do mesmo, ou um isômero, um sal farmaceuticamente aceitável, ou derivado do mesmo.
9. Composição, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são independentemente selecionados entre hidrogênio, alquila C1-C6, alquenila C2- C6, alquinila C2-C6, alcóxi C1-C6, alquenilóxi C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, cicloalcóxi C3- C10, arila C6-C10, arilóxi C6-C10, arila C6-C10 - alcóxi C1-C3, aroila C6-C10, heteroarila C6-C10, heterocíclico C3-C10, acila C1-C6, acilóxi C1-C6, -NH2, -NHR28, -NR28R29, =NR28, -S (O)2R28, -SH, SO3H, nitro, ciano, halo, haloalquila, haloalcóxi, hidróxi alquila, -CO2H, -CO2R28, -NHC(O)R28, -C(O)NH2, - C(O)NHR28, -C (O) NR28R29, -NHS(O)2R28, onde R28 e R29 são independentemente selecionados entre alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C10, cicloalquenila C4-C10, arila C6-C10, arila C6-C10-alquila C1-C3, heteroarila C6-C10 e heterocíclico C3-C10.
10. Composição, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que no composto da fórmula III R4, R5, R6, R7, R8, R9, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são hidrogênio, hidroxila, alquila, e um ou ambos entre R10 e R11 são independentemente hidrogênio substituído ou não substituído, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, alcóxi, alquenilóxi, cicloalquila, cicloalquenila, arila, arilóxi, arilalcóxi, aroíla, heteroarila, heterocíclico, acila, acilóxi, sulfonila, sulfinila, sulfenila, amino, imino, azido, tiol, tioalquila, tioalcóxi, tioarila, nitro, ciano, halo, silila, sililalquila, sililtio, =O, =S, carboxila, carbonila, ou carbamoíla ou um isômero ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
11. Composição, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que no composto da fórmula III um entre R10 e Rn é alquila, em particular alquila C1-C6 e o outro entre R10 e R11 é hidrogênio.
12. Composição, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que no composto da fórmula III um entre R10 e R11 é arila, e outro entre R10 e R11 é hidrogênio.
13. Composição, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que no composto da fórmula III um entre R10 e R11 é uma heteroarila, em particular um grupo de heteromonociclila com 5 a 6 membros, insaturado, contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio, e outro entre R10 e R11 é hidrogênio.
14. Composição, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que no composto da fórmula III R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são hidrogênios; e R11 é alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alcóxi, arila, ou um grupo heteromonociclila com 5 a 6 membros insaturado contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio.
15. Composição, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que no composto da fórmula III R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são hidrogênios; e Rn é alquila ou piridinila.
16. Composição, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que o composto da fórmula III é 4-metil-6-fenil-3 - (4-pirimidina-2-ilpiperazin-1-ila) piridazina.
17. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, - 14, 15 ou 16, caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto para reduzir seletivamente ou bloquear regulação ascendente de IL-1β e S100B, e/ou reduzir ou evitar a perda de PSD-95 e/ou sinaptofisina.
18. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, - 14, 15, 16 ou 17, caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de composto da fórmula I, II ou III para tratar uma doença neuroinf lamatória enquanto reduz a atividade de inibição de canal de potássio hERG.
19. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, - 14, 15, 16, 17 ou 18, caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula I, II ou III para tratar uma doença neuroinflamatória enquanto reduz inibição de hERG.
20. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, - 14, 15, 16, 17, 18 ou 19, caracterizada pelo fato de que a quantidade terapeuticamente eficaz é eficaz para seletivamente reduzir ou bloquear a regulação ascendente de IL-Ιβ e S100B, reduzir ou evitar perda de PSD-95 e/ou sinaptofisina durante um período de dosagem.
21. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, - 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20, caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula I, II ou III apropriado para administração a um sujeito para fornecer concentrações eficazes do composto em um ambiente de uso ou uma dose eficaz que resulta em efeitos terapêuticos na prevenção, tratamento ou controle de sintomas de uma doença revelada na presente invenção.
22. Composição, de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que a doença é uma doença neuroinflamatória.
23. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, -14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ou 22, caracterizada por compreender uma dose do composto da fórmula I, II ou III de aproximadamente 0,1 a 100 mg/kg, 0,1 a 50 mg/kg, 0,1 a 25 mg/kg, 0,1 a 20 mg/kg, 0,1 a 15 mg/kg, 0,1 a 10 mg/kg, 0,1 a 5 mg/kg, 0,1 a 4 mg/kg, 0,1 a 3 mg/kg, 0,1 a 2 mg/kg ou 0.1a 1 mg/kg.
24. Método de tratar uma doença neuroinflamatória em um sujeito, caracterizado por compreender administrar ao sujeito uma composição de qualquer uma das reivindicações -1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, -18, 19, 20, 21, 22 ou 23.
25. Uso de pelo menos um composto da fórmula I, II ou III de qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, -6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, -2 2 ou 23, caracterizado por ser para a preparação de um medicamento para fornecer riscos inferiores de efeitos colaterais e/ou um perfil farmacocinético benéfico no tratamento de uma doença neuroinflamatória.
26. Kit, caracterizado por compreender uma ou mais composição de qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, -4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, -20, 21, 22 ou 23, um recipiente e instruções para uso.
BRPI0710938-5A 2006-04-28 2007-04-27 formulações contendo compostos de piridazina para o tratamento de doenças neuroinflamatórias BRPI0710938A2 (pt)

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