BRPI0712167A2 - compostos de aziridinil-epotilona - Google Patents
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Abstract
Patente de Invenção: COMPOSTOS DE AZIRIDINIL-EPOTILONA. A presente invenção é direcionado aos compostos de epotilona de aziridinila como também descrito aqui, e/ou sais farmaceuticamente aceitável e/ou solvatos destes tendo a seguinte fórmula: em que K é -O-, -S-, ou -NR~ 7~-; A e -(CR~ 8~R~ 9~)-(CH~ 2~)m-Z- em que Z é -(CHR~ 10~)-, -C(=O)-, -C(=O)-, -OC(=O)-, -N(R~ 11~)C(=O)-, -SO~ 2~-, ou -N(R~ 11~)SO~ 2~-; B~ 1~ é hidroxila ou ciano e R~ 1~ é hidrogênio ou B~ 1~ e R~ 1~ são empregados juntos para formar uma ligação dupla; R~ 2~. R~ 3 ~, e R~ 5~ são, independentemente, hidrogênio, alquila, alquila substituída, arila ou arila substituída; ou R ~2~ e R~ 3~ podem ser empregados juntamente com o carbono ao qual eles são ligados para formar uma cicloalquila opcionalmente substituída; R~ 4~ é hidrogênio, alquila, alquenila, alquila substituída, alquenila substituída, arila, ou arila substituída; R~ 6~ é hidrogênio, alquila substituída; R~ 7~, R~ 8~, R~ 9~, R~ 10~, R~ 11~ e R~ 12~ são independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituída, heterocicloalquila, heterocicloalquila substituída, heteroarila, ou heteroarila substituída; e R~ 13~ é arila, arila substituída, heteroarila ou substituído heteroarila.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOS- TOS DE AZIRIDINIL-EPOTILONA".
Este pedido reivindica prioridade para Pedido de Patente Provi- sório dos Estados Unidos ne 60/808.366, depositado em 25 de maio de 2006, que é pelo presente incorporado por referência aqui em sua totalidade.
Antecedentes da Invenção
Campo da Invenção
A presente invenção refere-se a composições farmacêuticas a- nálogas à aziridinil-epotilona compreendendo análogos de aziridinil- epotilona, e métodos de empregar os mesmos.
Técnica Antecedente Relacionada
Epotilonas AeB são compostos de ocorrência natural que foram descobertos por Hõfle e outro, como isolado de produtos de fermentação do microorganismo, Sorangium cellulosum (veja, por exemplo, WO 93/10121). Hõfle e outro, também descobriram 37 variantes de epotilona naturais e compostos relacionados produzidos por Sorangium cellulosum, incluindo Epotilonas C, D, E, F e outros isômeros e variantes. Veja, por exemplo, Pa- tente dos Estados Unidos ns 6.624.310. Enquanto que em 1993 Hõfle e ou- tro, reportaram sobre efeitos citotóxicos de Epotilonas A e B, em 1995 pes- quisadores com Merck reportaram que a epotilona B exerce efeitos estabili- zantes de microtúbulo similares ao paclitaxel (TAXOL®) (Veja D.M. Bollag, "Epothilones, a New Class of agentes estabilizantes de microtúbulo com a Taxol-like Mechanism of Action," Câncer Research, Vol. 55 (Junho de 1995), nas páginas 2325-2333).
Vários derivados e análogos das Epotilonas de ocorrência natu- ral foram descobertos em Bristol-Myers Squibb Co. Exemplos de análogos de epotilona incluem o análogo de aza-epotilona B conhecido como ixabepi- lona, análogos 21-substituídos de epotilona B incluindo um análogo de 21- amino, análogos 2,3-olefínicos, análogos de C-3 ciano, análogos de ciclo- propila, e análogos heterocíclicos incluindo análogos aziridinil-epotilona. Ve- ja, por exemplo, Patentes dos Estados Unidos n°s 6.605.599; 6.262.094; 6.399.638; 6.498.257; 6.380.395; e 6.800.653, cada das quais é incorporada aqui por referência. Outros reportaram também sobre a descoberta de outros derivados de epotilona e análogos. Veja, por exemplo, Publicações PCT nõs WO 99/65913, WO 98/25929; WO 00/99/07692; WO 99/67252; WO 00/00485; WO 00/37473; WO 01/83800; WO 99/67253, WO 99/07692, WO 00/00485, WO 00/49021, WO 00/66589, WO 03/045324, WO 04/014919, WO 04/056832, WO 03/022844; Patentes dos Estados Unidos nss 6.441.186, 6.284.781, 6.660.758, 6.380.394, 6.242.469, 6.531.497, 6.441.186, 6,489.314, 6.589.968, 6.930.102; Publicações de Pedido de Pa- tente dos Estados Unidos n9s US 2004/0072870 A1; US 2003/0023082 A1; US 2004/0053910 A1; US 2004/0152708 A1, todos os quais são incorpora- dos por referência em sua totalidade.
As epotilonas de ocorrência natural e seus análogos, como ou- tros agentes estabilizantes de microtúbulo, podem ser úteis para tratar doen- ças proliferativas tal como câncer, que tipicamente funcionam matando (ou interrompendo o crescimento de) células de tumor, outras células patogêni- cas, e patógenos estranhos. Freqüentemente, entretanto, fármacos anticân- cer atacam não apenas células de tumor porém também tecido normal, in- duzindo a efeitos colaterais indesejados. Adicionalmente, fármacos anticân- cer tipicamente resultados de solubilidade presentes tal que a formulação e liberação dos agentes podem apresentar desafios, induzindo ao uso de a- gents solubilizantes tal como CREMOFOR®. A citotoxicidade de alguns fár- macos anticâncer e/ou ingredientes de formulação foram mostrados causar neuropatia ou outros efeitos colaterais tal como reações de hipersensibilida- de. Estes efeitos colaterais adversos destacam a necessidade de terapias anticâncer que são seletivas para populações celulares patogênicas e por- tanto, resultam em toxicidade ao hospedeiro reduzida.
Entretanto, como descrito em WO 2004/054622 A1 cientistas tentaram durante muitos anos utilizar anticorpos monoclonais (mAbs) em terapias de fármaco alvejadas para liberação de agentes quimioterápicos aos pacientes, porém encontrou-se desvantagens em termos de, entre ou- tras coisas, a porção clivável, os ligadores, e a forma de fármaco liberado na célula. Foi reportado que terapia bem sucedida de tumores com mAbs está limitada por penetração inadequada do anticorpo no tumor e pela distribui- ção heterogênea de antígeno associado com tumor correspondente no teci- do de tumor. Veja, Klar e outro, WO n° 05/074901 (nomeado por Schering AG).
Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos ns 2005/0002942 descreve conjugados de liberação de fármaco de ligação de receptor de vitamina que são úteis para liberação de fármaco alvo. Existe uma necessidade na técnica de identificar agentes anticâncer que podem ser utilizados para preparar conjuntados tal como aqueles descritos em US 2005/0002942, no interesse de fornecer a liberação de fármaco alvo para tratamento de câncer.
Sumário da Invenção
A presente invenção é direcionada a compostos que têm a se- guinte Fórmula X:
<formula>formula see original document page 4</formula>
ou sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que :
K é -O-, -S-, ou -NR7-;
A é -(CR8R9)-(CH2)m-Z- em que Z é -(CHR10)-, -C(=O)-, -C(=O)- C(=O)-, -OC(=O)-, -N(R11)Ci=O)-, -SO2-, ou -N(R11)SO2-;
B1 é hidroxila ou ciano e R1 é hidrogênio ou B1 e R1 são empre- gados juntos para formar uma ligação dupla;
R2, R3, e R5 são, independentemente, hidrogênio, alquila, alquila substituída, arila ou arila substituída; ou R2 e R3 podem ser empregados jun- tamente com o carbono ao qual eles são ligados para formar uma cicloalqui- la opcionalmente substituída;
R4 é hidrogênio, alquila, alquenila, alquila substituída, alquenila substituída, arila, ou arila substituída;
R6 é hidrogênio, alquila ou alquila substituída;
R7, R8, R9, R10, e R11 são independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituí- da, heterocicloalquila, heterocicloalquila substituída, heteroarila, ou heteroa- rila substituída;
R12 é H, alquila, alquila substituída, ou halogênio;
R13 é arila, arila substituída, heteroarila ou heteroarila substituída; e
m é 0 a 6.
A presente invenção é também direcionada a métodos para tra- tar câncer com o uso de compostos tendo a Fórmula X, bem como a utiliza- ção dos compostos de Fórmula X na preparação de composições farmacêu- ticas com veículos farmaceuticamente aceitáveis para tratar câncer. Com- postos de Fórmula X são especialmente úteis na preparação de composi- ções para terapias de fármaco alvejados.
Breve Descrição dos Desenhos
figura 1 é a estrutura química, afinidade relativa, e valores EC50 (nM) contra células de tumor KB de seis conjugados de folato de análogo de epotilona Composto AA (conjugado número AA.I a AA-VI).
figura 2 é a estrutura química, afinidade relativa, e valores EC50 (nM) contra células de tumor KB de três conjugados de folato de análogo de epotilona Composto BB (conjugado número BB.I a BB.III).
figura 3 demonstra a fração de clores de KB sobreviventes (Fra- ção de sobrevivência; eixo-y) após tratamento com concentrações crescen- tes (Concentração (nM); eixo-x) de Composto G (barras), Composto CC (tri- ângulos), Composto AA (diamantes), ou ixabepilona (quadrados).
figura 4 demonstra a eficácia antitumor in vivo de tratamento de xenoenxertos de carcinoma epidermóides nasofaríngeos KB em camundon- gos nus com Composto J (quadrados cinzas, quadrados brancos, diamantes cinzas) em várias doses ou ixabepilona (barras pretas), comparado a ne- nhum tratamento (controle; círculos pretos), como uma medida de (A) peso de tumor médio (mg; eixo-y) diversos dias após implante de tumor (eixo-x) ou (B) perda de peso (% de mudança de peso corporal; eixo-y) diversos dias pós implante de tumor (eixo-x).
figura 5 demonstra os efeitos antitumor in vivo de Composto J (quadrados cinzas) ou ixabepilona (quadrados brancos), comparado a ne- nhum tratamento (controle; círculos pretos), contra FR (-) M109 murine Iung carcinoma como uma medida de peso de tumor médio (mg; eixo-y) diversos dias após implante de tumor (eixo-x).
figura 6 demonstra os efeitos antitumor in vivo, como uma medi- da de peso de tumor médio (mg; eixo-y) diversos dias após implante de tu- mor (eixo-x), de nenhum tratamento (controle, círculos pretos), tratamento com Composto J sozinho (quadrados cinzas), Composto J na presença de um análogo de folato, barras pretas), ou tratamento com Composto G (dia- mantes cinzas).
Descrição Detalhada da Invenção
Definição de Termos
Os seguintes são definição de termos utilizados na presente es- pecificação. A definição inicial fornecida para um grupo ou termo aqui aplica- se àquele grupo ou termo em toda a presente especificação individualmente ou como parte de outro grupo, a menos que de outro modo indicado.
O termo "porção de ligação de folato ou análogo ou derivado deste" como utilizado aqui significa uma porção que ligar-se-á a uma proteí- na receptora de folato (não um anticorpo monoclonal) que é superexpressa ou preferencialmente expressa em células de câncer. Por exemplo, é sabido que o receptor de folato (FR) é superexpresso em células de câncer ovaria- no e outras células de câncer. Análogos ilustrativos e derivados de folato são descritos na Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos n° 2005/0002942 de Vlahov e outro, (a seguir "Vlahov"), incorporado aqui por referência.
O termo "ligador liberável" como aqui utilizado significa um Iiga- dor bivalente que inclui pelo menos uma ligação clivável que pode ser rom- pida sob condições fisiológicas (por exemplo, uma ligação lábil ao pH, redu- tivamente lábil, lábil ao ácido, oxidativamente lábil, ou lábil à enzima.) Deve ser apreciado que tais condições fisiológicas resultando em rompimento de ligação incluem reações de hidrólise química padrões que ocorrem, por e- xemplo, em pH fisiológico, ou com um resultado de compartmentalização em uma organela celular, tal como uma endossoma tendo um pH menor do que o pH citosólico, ou com um resultado de reação com um agente de redução celular tal como glutationa.
Entende-se que uma ligação clivável pode conectar dois átomos adjacentes dentro do Iigador liberável e/ou conectar outros grupos ao Iigador liberável tal como Q e K1 como aqui descrito, em qualquer das duas ou am- bas as extremidades do ligador.
Os termos "alquila" e "alqu" se sozinhos ou em combinação com algum outro grupo, refere-se a um radical alcano de cadeia linear ou ramifi- cada (hidrocarboneto) ligado a qualquer átomo de carbono disponível, con- tendo de 1 a 10 átomos de carbono, preferivelmente 1 a 6 átomos de carbo- no, mais preferivelmente de 1 a 4 átomos de carbono. Tais grupos exempla- res incluem, porém não estão limitados a metila, etila, propila, isopropila, n- butila, t-butila, isobutila, pentila, hexila, heptila, 4,4-dimetilpentila, octila, 2,2,4-trimetilpentila, e similares. "Alquila inferior" ou "alquileno inferior" signi- fica uma alquila de cadeia linear ou ramificada tendo um a quatro átomos de carbono. Quando um subscrito é utilizado com referência a grupo alquila ou outro, o subscrito refere-se ao número de átomos de carbono que o grupo pode conter. Por exemplo, o termo "Co-4alquila" inclui uma ligação e grupos alquila de 1 a 4 átomos de carbono, e o termo "Ci-4alquila" significa grupos grupos alquila de 1 a 4 átomos de carbono.
O termo "alquileno" refere-se a um radical de hidrocarboneto bivalente, como descrito acima para "alquila" porém com dois pontos de li- gação. Por exemplo, um grupo metileno é um grupo -CH2- e um grupo etile- no é um grupo -CH2-CH2-.
Quando o termo alquila é utilizado em ligação com outro grupo, como na heterocicloalquila ou cicloalquilalquila, isto significa que o outro grupo identificado (primeiro designado) está ligado diretamente por meio de um grupo alquila como definido acima (por exemplo, que pode ser de cadeia ramificada ou linear). Desse modo, o termo "alquila" é utilizado neste caso para referir-se a um alquileno, por exemplo, um grupo alquila divalente, ten- do dois pontos disponíveis de ligação. Por exemplo, ciclopropilCwalquila significa um grupo ciclopropila ligado por meio de um alquileno de cadeia linear ou ramificada tendo um a quatro átomos de carbono, e hidroxialquila significa o grupo OH ligado por meio de um alquileno de cadeia linear ou ramificada tendo um a dez átomos de carbono, preferivelmente 1 a 6 átomos de carbono, mais preferivelmente 1 a 4 átomos de carbono. No caso de substituintes, como em "cicloalquilalquila substituída," a porção de alquileno do grupo, além de ser cadeia ramificada ou linear, pode ser substituída como mencionado abaixo para grupos alquila substituída e/ou o primeiro grupo denominado (por exemplo, cicloalquila) pode ser substituído como mencio- nado aqui para aquele grupo denominado (por exemplo, cicloalquila).
"Alquila substituída" refere-se a um grupo alquila substituído com um ou mais substituintes, preferivelmente 1 a 4 substituintes, em qualquer ponto disponível de ligação. Entretanto, quando um grupo alquila é substituí- do com múltiplos substituintes halo, a alquila pode conter conter, como a valência permite, até 10 substituintes, mais preferivelmente até sete substitu- intes. Os substituintes alquila podem incluir um ou mais dos seguintes gru- pos: halo (por exemplo, um único substituinte halo ou múltiplos substituintes halo formando, no ultimo caso, grupo tal como um grupo perfluoroalquila ou um grupo alquila transportando Cl3 ou CF3), ciano, -ORa, -SRa, -C(=0)Ra, - C(=0)0Ra> -0C(=0)Ra, -0C(=0)0Ra, -NRaRb, -C(=0)NRaRb, -0C(=0)NRaRb, -S(=0)Ra, -S(O)2Ra, -NHS(O)2Ra, -NHS(O)2NHRa, -NHC(=0)NHRa, -NHC(=0)Ra, -NHC(O)2Ra, -NHC(=N-CN)Ra, arila, heterociclo, cicloalquila, e/ou heteroarila, em que os grupos Ra e Rb são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila, alquenila, cicloalquila, heterociclo, arila, e heteroarila, e em que cada Ra e/ou Rb por sua vez é opcionalmente substituído com um a quatro grupos sele- cionados de alquila, alquenila, halogênio, haloalquila, haloalcóxi, ciano, nitro, amino, alquilamino, aminoalquila, hidróxi, hidroxialquila, alcóxi, tiol, alquiltio, fenila, benzila, fenila óxi, benzilóxi, C3-7cicloalquila, heteroarila ou heterociclo de cinco ou seis membros, e/ou uma alquila inferior ou alquenila inferior substituída com um a quatro grupos selecionados de hidróxi, ciano, halogê- nio, haloC1-4alquila, haloC1-4alcóxi, ciano, nitro, amino, C1-4alquilamino, ami- noC1-4alquila, hidroxiCi.4alquila, C1-4alcóxi, tiol, e/ou C1-4alquiltio. Para evitar dúvidas, uma "alquila inferior substituída" significa um grupo alquila tendo um a quatro átomos de carbono e um a quatro substituintes selecionados daqueles mencionados imediatamente acima para grupos alquila substituída. No caso de uma alquila inferior substituída, preferivelmente os grupos Ra e Rb são selecionados de hidrogênio, alquila inferior, alquenila inferior, C3. ycicloalquila, fenila, e heteroarila e/ou heterociclo monocíclico de cinco a seis membros, por sua vez opcionalmente substituído como acima.
O termo "alquenila" refere-se a um radical de hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada contendo de 2 a 12 átomos de carbono e pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono. Tais grupos exemplares incluem etenila ou alila. "Alquenila substituída" refere-se a um grupo alquenila substi- tuído com um ou mais substituintes, preferivelmente 1 a 4 substituintes, em qualquer ponto disponível de ligação. Substituintes exemplares incluem al- quila, alquila substituída, e aqueles grupos mencionados acima como substi- tuintes alquila.
Os termos "alcóxi" e "alquiltio" referem-se a um grupo alquila como descrito acima ligado por meio de uma ligação de oxigênio (-O-) ou uma ligação de enxofre (-S-), respectivamente. Os termos "alcóxi substituí- do" e "alquiltio substituído" refere-se a um grupo alquila substituído como descrito acima ligado por meio de uma ligação de oxigênio ou enxofre, res- pectivamente. Um "alcóxi inferior" ou um C1-4alcóxi é um grupo OR, em que R é alquila inferior (alquila de 1 a 4 átomos de carbono).
"Amino" é NH2. Um alquilamino é -NRcRd em que pelo menos um de Rc e Rd é uma alquila ou alquila substituída, e o outro de Rc e Rd é selecionado de hidrogênio, alquila, e alquila substituída. Uma "aminoalquila" significa um grupo amino ligado por meio de um grupo alquileno (-alquileno- NH2), e uma alquilaminoalquila significa um alquilamino como definido acima ligado por meio de um grupo alquileno (-alquileno-NRcRd).
O termo "arila" refere-se a grupos de hidrocarboneto aromáticos, cíclicos, que têm 1 a 3 anéis aromáticos, especialmente grupos monocíclicos ou bicíclicos tal como fenila a ou naftila. Grupos arila que são bicíclicos ou tricíclicos devem incluir pelo menos um anel carbocíclico totalmente aromáti- co porém o outro anel ou anéis fundidos podem ser aromáticos ou não- aromáticos e podem opcionalmente conter heteroátomos, contanto que em tais casos o ponto de ligação será ao anel carbocíclico aromático. Adicio- nalmente, quando um grupo arila tem fundido a ele um anel heterocíclico ou cicloalquila, o anel heterocíclico e/ou cicloalquila pode ter um ou mais áto- mos de carbono de carbonila, isto é, ligados por meio de uma ligação dupla a um átomo de oxigênio para definir um grupo carbonila. Desse modo, e- xemplos de "arila" podem incluir sem limitação:
<formula>formula see original document page 10</formula>
e similares.
O termo "arileno" refere-se a um radical arila bivalente, isto é, um grupo arila como definido acima tendo dois pontos de ligação a dois ou- tros grupos, em quaisquer pontos disponíveis de ligação do anel arila. Anéis arileno podem também ser substituídos com qualquer dos grupos adequa- dos para substituição nos grupos arila definidos aqui. "Arila substituída" refere-se a um grupo arila ou arileno como definido acima substituído por um ou mais substituintes, preferivelmente 1 a 4 substituintes, em qualquer ponto de ligação. Substituintes incluem alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, bem como aqueles gru- pos mencionados acima como substituintes alquila.
O termo "carbocíclico" significa um anel monocíclico, bicíclico, ou tricíclico saturado ou insaturado (preferivelmente mono- ou bicíclico) em que todos os átomos de todos os anéis são carbono. Desse modo, o termo inclui anéis cicloalquila e arila. O anel carbocíclico pode ser substituído em cujo caso os substituintes são selecionados daqueles mencionados acima para grupos cicloalquila e arila.
O termo "cicloalquila" refere-se a um grupo hidrocarboneto cícli- co totalmente saturado ou parcialmente saturado contendo de 1 a 3 anéis e 3 a 7 átomos de carbono por anel. Grupos cicloalquila totalmente saturados exemplares incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, e cicloexila. Grupos cicloalquila parcialmente saturados exemplares incluem ciclobutenila, ciclo- pentenila, e cicloexenila. O termo "cicloalquila" inclui tais grupos tendo uma ponte de três a quatro átomos de carbono. Adicionalmente, grupos cicloal- quila que são bicíclicos ou tricíclicos devem incluir pelo menos um anel de hidrocarboneto totalmente saturado ou parcialmente saturado porém o outro anel ou anéis fundidos podem ser aromáticos ou não-aromáticos e podem conter heteroátomos, contanto que em tais casos o ponto de ligação seja ao grupo hidrocarboneto não aromático, cíclico. Adicionalmente, um ou mais átomos de carbono do grupo cicloalquila podem formar uma ligação dupla de carbono-a-oxigênio para definir um grupo carbonila. Desse modo, exemplos de grupos "cicloalquila" podem incluir, sem limitação:
<formula>formula see original document page 11</formula> <formula>formula see original document page 12</formula>
e similares.
O termo "cicloalquileno" refere-se a um radical cicloalquila biva- lente, isto é, um grupo cicloalquila como definido acima tendo dois pontos de ligação a dois outros grupos, em quaisquer dois pontos disponíveis de liga- ção do anel cicloalquila.
"Cicloalquila substituída" refere-se a um grupo cicloalquila como definido acima substituído em qualquer ponto disponível de ligação com um ou mais substituintes, preferivelmente 1 a 4 substituintes. Substituintes ciclo- alquila incluem alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, e aqueles grupos mencionados acima como substituintes alquila.
O termo "guanidinila" significa o grupo
<formula>formula see original document page 12</formula>
Desse mo- do, uma guanidinilalquila significa um grupo alquila ligado à guanidinila tal como um grupo tendo a fórmula,
<formula>formula see original document page 12</formula>
O termo "halogênio" ou "halo" refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo.
O termo "heteroátomos" inclui oxigênio, enxofre e nitrogênio.
O termo "haloalquila" significa uma alquila tendo um ou mais substituintes halo, incluindo sem limitação grupos tal como -CH2F, -CHF2 e - CF3.
O termo "haloalcóxi" significa um grupo alcóxi tendo um ou mais substituintes halo. Por exemplo, "haloalcóxi" inclui -OCF3.
Quando o termo "insaturado" é aqui usado para referir-se a um anel ou grupo, o anel ou grupo pode ser totalmente insaturado ou parcial- mente insaturado.
O termo "heteroarila" refere-se a um grupo aromático que é um sistema de anel monocíclico de 4 a 7 membros, bicíclico de 7 a 11 membros, ou tricíclico de 10 a 15 membros, que tem pelo menos um anel contendo pelo menos um heteroátomo. Cada anel do grupo heteroarila contendo um heteroátomo pode conter um ou dois átomos de oxigênio ou enxofre e/ou de um a quatro átomos de nitrogênio, contanto que o número total de heteroá- tomos em cada anel seja quatro ou menos e cada anel tem pelo menos um átomo de carbono. Os anéis fundidos que completam os grupos bicíclicos e tricíclicos podem conter apenas átomos de carbono e podem ser saturados, parcialmente saturados, ou insaturados. Os átomos de nitrogênio e enxofre podem opcionalmente ser oxidados e os átomos de nitrogênio podem opcio- nalmente ser quaternizados. Grupos heteroarila que são bicíclicos ou tricícli- cos devem incluir pelo menos um anel totalmente aromático porém o outro anel ou anéis fundidos podem ser aromáticos ou não-aromáticos e podem ser carbocíclico, contanto que em tais casos o ponto de ligação seja em qualquer átomo de nitrogênio ou carbono disponível de um anel contendo heteroátomo aromático. Adicionalmente, a definição de grupos heteroarila em si inclui anéis em que um ou mais dos átomos de carbono está ligado por meio de uma ligação dupla a um átomo de oxigênio para definir um grupo carbonila (contanto que o grupo heteroarila seja aromático) e também quan- do um grupo heteroarila tem fundido a ele um anel heterocíclico ou cicloal- quila, o anel heterocíclico e/ou cicloalquila pode ter um ou mais grupos car- bonila.
Grupos heteroarila monocíclicos exemplares incluem pirrolila, pirazolila, pirazolinila, imidazolila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila (isto é, V ), tíadiazolila, isotiazolila, furanila, tienila, oxadiazolila, piridila, pirazinila, pirimi- dinila, piridazinila, triazinila e similares. Adicionalmente, visto que a definição de grupos heteroarila em si inclui anéis em que um ou mais dos átomos de carbono define um grupo carbonila, anéis tal como 2,4-diidro-[1,2,4]triazol-3- ona (isto é, <formula>formula see original document page 13</formula>) e similares são incluídos.
Grupos heteroarila bicíclicos exemplares incluem indolila, benzo- tiazolila, benzodioxolila, benzoxaxolila, benzotienila, quinolinila, tetraidroiso- quinolinila, isoquinolinila, benzimidazolila, benzopiranila, indolizinila, benzofu- ranila, cromonila, cumarinila, benzopiranila, cinnolinila, quinoxalinila, indazoli- la, pirrolopiridila, furopiridinila, diidroisoindolila, tetraidroquinolinila e similares. Grupos heteroarila tricíclicos exemplares incluemcarbazolila, benzidolila, fenantrolinila, acridinila, fenantridinila, xantenila e similares.
O termo "heteroalquileno" refere-se a um radical heteroarila biva- lente, isto é, um grupo heteroarila como definido acima tendo dois pontos de ligação a dois outros grupos, em quaisquer dois pontos disponíveis de liga- ção do anel heteroarila.
Grupos "heteroarila substituída" são grupos heteroarila como definido acima substituído com um ou mais substituintes, preferivelmente 1 a 4 substituintes, em qualquer ponto disponível de ligação. Substituintes e- xemplares incluem, porém não estão limitados a alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, bem como aqueles grupos mencionados acima como substituintes alquila.
Os termos "heterociclo", "heterocíclico" e "heterociclo" são utili- zados alternadamente e cada qual refere-se a um grupo cíclico não aromáti- co totalmente saturado ou parcialmente insaturado, que pode ser substituído ou não substituído, por exemplo, que é um sistema de anel monocíclico de 4 a 7 membros, bicíclico de 7 a 11 membros, ou tricíclico de 10 a 15 membros, que tem pelo menos um heteroátomo em pelo menos um anel contendo á- tomo de carbono. Cada anel do grupo heterocíclico contendo um heteroáto- mo pode conter 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de átomos de nitrogê- nio, oxigênio, e enxofre, onde os heteroátomos de nitrogênio e enxofre tam- bém opcionalmente podem ser oxidados e os heteroátomos de nitrogênio também opcionalmente podem ser quaternizados. Preferivelmente dois hete- roátomos adjacentes não são simultaneamente selecionados de oxigênio e nitrogênio. Heterocíclico grupos que são bicíclicos ou tricíclicos devem incluir pelo menos um anel não-carbocíclico não-aromático, porém o outro anel ou anéis fundidos podem ser aromáticos ou não-aromáticos e podem ser car- bocíclico, contanto que em tais casos o ponto de ligação seja em qualquer átomo de nitrogênio ou carbono disponível de um anel contendo heteroáto- mo não-aromático. Adicionalmente, a definição de heterocíclico grupos em si inclui anéis em que um ou mais dos átomos de carbono são ligados por meio de uma ligação dupla a um átomo de oxigênio para definir um grupo carboni- la (contanto que o grupo heterocíclico seja não-aromático) e também quando um grupo heterocíclico tem fundido a ele um outro anel, tal outro anel pode ter um ou mais grupos carbonila.
Grupos heterocíclicos monocíclicos exemplares incluem pirroli- dinila, imidazolidinila, tetraidrofurila, piperidinila, piperazinila, pirazolidinila, imidazolinila, pirrolinila, tetraidropiranila, morfolinila, tiamorfolinila, e similares.
"Heterociclo substituído," "heterocíclico substituído,"e "substituí- do heterociclo" refere-se a grupos heterociclo, heterocíclico, ou heterociclo como definido acima substituído com um ou mais substituintes, preferivel- mente 1 a 4 substituintes, em qualquer ponto disponível de ligação. Substitu- intes exemplares incluem alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, bem como aqueles grupos mencionados acima como substituin- tes alquila exemplares.
"Hidróxi" refere-se a -OH.
"Tiol" significa o grupo -SH.
O termo "nitrogênio quaternário" refere-se a um átomo de nitro- gênio positivamente carregado tetravalente incluindo, por exemplo, o nitro- gênio positivamente carregado em um grupo tetraalquilamônio (por exemplo, tetrametilamônio ou N-metilpiridínio), o nitrogênio positivamente carregado em espécies de amônio protonadas (por exemplo, trimetilhidroamônio ou N- hidropiridínio), o nitrogênio positivamente carregado em N-óxidos de amina (por exemplo, N-metil-morfolina-N-óxido ou piridine-N-óxido), e o nitrogênio positivamente carregado em um grupo N-amino-amônio (por exemplo, N- aminopiridínio).
Quando um grupo funcional é denominado "protegido", isto signi- fica que o grupo está em forma modificada para mitigar, especialmente im- pedir, reações colaterais indesejadas no sítio protegido. Grupos de proteção adequados para os métodos e compostos descritos aqui incluem, sem limi- tação, aqueles descritos em livros didáticos padrão, incluindo Greene, T.W. e outro,Protective grupos in Organic Synthesis, Wiley, N.Y. (1991), incorpo- rado aqui por referência. Modalidades Alternativas da Invenção
A presente invenção compreende compostos tendo a seguinte Fórmula X, como mencionado no Sumário da Invenção.
A presente invenção compreende compostos tendo a forma es- tereoespecífica de acordo com a Fórmula X'
<formula>formula see original document page 16</formula>
incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que,
K é -O-, -S-, ou -NR7-;
A é -(CR8R9)-(CH2)m-Z- em que Z é -(CHRi0)-, -C(=O)-, -C(=O)- C(=O)-, -0C(=O)-, -N(Rii)C(=O)-, -SO2-, ou -N(R11)SO2-;
B1 é hidroxila ou ciano e R1 é hidrogênio ou B1 e R1 são empre- gados juntos para formar uma ligação dupla;
R2, R3, e R5 são, independentemente, hidrogênio, alquila, alquila substituída, arila ou arila substituída; ou R2 e R3 podem ser empregados jun- tamente com o carbono ao qual eles são ligados para formar uma cicloalqui- la opcionalmente substituída;
R4 é hidrogênio, alquila, alquenila, alquila substituída, alquenila substituída, arila, ou arila substituída;
R6 é hidrogênio, alquila ou alquila substituída;
R7, R8, R9, R10, e R11 são independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituí- da, heterocicloalquila, heterocicloalquila substituída, heteroarila, ou heteroa- rila substituída;
R12 é H, alquila, alquila substituída, ou halogênio;
R13 é arila, arila substituída, heteroarila ou heteroarila substituí- da; e m é O a 6.
Em outra modalidade, compostos da invenção têm a Fórmula X
<formula>formula see original document page 17</formula>
ou a Fórmula X' estereoespecífica, acima, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que
K é -O-;
A é C2-4alquileno;
B1 é -OH;
R2, R3, R4 e R5 são, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior;
R6 é hidrogênio ou metila;
R12 é H, alquila, alquila substituída, ou halogênio; e
R13 é uma heteroarila de 5 ou 6 membros opcionalmente substituída.
Em outra modalidade, compostos da invenção têm a Fórmula X ou X', como definido acima, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que
K é -O-;
A é C2-4alquileno;
B1 é -OH;
R2, R3, R4 e R5 são, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior;
R6 é hidrogênio;
R12 é H, alquila, alquila substituída, ou halogênio; e
R13 é uma heteroarila de 5 ou 6 membros opcionalmente substituida. Em outra modalidade, compostos da invenção têm a Fórmula X ou X', como definido acima, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que
K é -O-;
A é C2-4alquileno;
B1 é -OH;
R2, R3, R4 e R5 são, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior;
R6 é hidrogênio ou metila;
R12 é H, alquila, alquila substituída, ou halogênio; e
R13 é uma opcionalmente substituída tiazolila, piridila, ou oxazoli- la.
Em outra modalidade, são fornecidos compostos tendo a fórmula
Xa,
<formula>formula see original document page 18</formula>
incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que,
K é -O-, -S-, ou -NR7-;
A é -(CR8R9)-(CH2)m-Z- em que Z é -(CHR10)-, -C(=O)-, -C(=O)-
C(=O)-, -OC(=O)-, -N(R1i)C(=O)-, -SO2-, ou -N(R11)SO2-;
R6 é hidrogênio ou metila;
R8, R9, R10, e R11 são independentemente hidrogênio, alquila, ou alquila substituída,
R12 é H, alquila, alquila substituída, ou halogênio; e
R13 é arila, arila substituída, heteroarila ou heteroarila substituí- da; e
m é 0 a 6. Em outra modalidade da invenção, são fornecidos Compostos de Fórmula Xa, incluindo Compostos de Fórmula Xa' tendo a forma estereo- específica Xa', correspondendo à estereoquímica mostrada para X'.
Em outra modalidade, são fornecidos compostos tendo a fórmula Xa, ou Xa', imediatamente acima, em que K é -O- e R13 é tiazolila, piridila, ou oxazolila opcionalmente substituída, e os grupos restantes são como a- cima definido.
Em outra modalidade, são fornecidos compostos tendo a fórmula Xa, ou Xa', acima, em que K é -O-; A é C2-4alquileno; R6 é hidrogênio ou metila; R12 é H, alquila inferior, ou halogênio; e R13 é é tiazolila, piridila, ou oxazolila opcionalmente substituída.
Um composto da invenção pode também ter a Fórmula Xb
<formula>formula see original document page 19</formula>
incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que R6 é hidrogênio ou metila.
Em outra modalidade, um composto da invenção tem a fórmula Xb, em que R6 é hidrogênio.
Em outra modalidade, um composto da invenção pode ter a fór- mula estereoespecífica Xb'
<formula>formula see original document page 19</formula> incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que Ffe é hidrogênio ou metila.
Em outra modalidade, um composto da invenção tem a fórmula Xb', em que R6 é hidrogênio.
De acordo com uma modalidade da presente invenção, são for- necidos métodos para tratar câncer, por exemplo, uma condição associada com receptor de folato, compreendendo tratar um paciente com uma quanti- dade terapeuticamente eficaz de um composto tendo a seguinte Fórmula X:
<formula>formula see original document page 20</formula>
ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou solvato deste, em que :
K é-O-,-S-, ou-NR7-;
A é -(CR8R9)-(CH2)m-Z- em que Z é -(CHR10)-, -C(=0)-, -C(=0)- C(=0)-, -0C(=0)-, -N(R11)Ci=O)-, -SO2-, ou -N(R11)SO2-;
B1 é hidroxila ou ciano e R1 é hidrogênio ou B1 e Ri são empre- gados juntos para formar uma ligação dupla;
R2, R3, e R5 são, independentemente, hidrogênio, alquila, alquila substituída, arila ou arila substituída; ou R2 e R3 podem ser empregados jun- tamente com o carbono ao qual eles são ligados para formar uma cicloalqui- la opcionalmente substituída;
R4 é hidrogênio, alquila, alquenila, alquila substituída, alquenila substituída, arila, ou arila substituída;
R6 é hidrogênio, alquila ou alquila substituída;
R7, R8, R9, R10, e R11 são independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituí- da, heterocicloalquila, heterocicloalquila substituída, heteroarila, ou heteroa- rila substituída; R12 é Η, alquila, alquila substituída, ou halogênio;
R13 é arila, arila substituída, heteroarila ou heteroarila substituída; e
m é 0 a 6.
Em uma modalidade, o método compreende tratar um paciente com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto tendo a Fór- mula X' estereoespecífica,
<formula>formula see original document page 21</formula>
incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que, em que K, A, B, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 R12, R13, e m are como definido acima para os compostos de Fórmula X.
Em outra modalidade, o método compreende tratar um paciente com uma quantidade terapeuticamente eficaz de Composto tendo a fórmula X, incluindo formula X', como descrito acima, incluindo sais farmaceutica- mente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que
K é -O-;
A é C2-4alquileno;
B1 é -OH;
R2, R3, R4 e R5 são, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior;
R6 é hidrogênio ou metila;
R7, R8, R9, R10, e R11 são independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituí- da, heterocicloalquila, heterocicloalquila substituída, heteroarila, ou heteroa- rila substituída;
R12 é H, alquila, alquila substituída, ou halogênio; e R13 é uma heteroarila de 5 ou 6 membros opcionalmente substi- tuída.
Em outra modalidade, o método compreende tratar um paciente com uma quantidade terapeuticamente eficaz de Composto tendo a fórmula X, ou X', como descrito acima, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que
K é -O-;
A é C2-4alquileno;
B1é -OH;
R2, R3, R4 e R5 são, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior;
R6 é hidrogênio;
R7, Re, R9, R10, e R11 são independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituí- da, heterocicloalquila, heterocicloalquila substituída, heteroarila, ou heteroa- rila substituída;
R12 é H, alquila, alquila substituída, ou halogênio; e
Ri3 é uma heteroarila de 5 ou 6 membros opcionalmente substi- tuída.
Em outra modalidade, o método compreende tratar um paciente com uma quantidade terapeuticamente eficaz de Composto tendo a fórmula X, ou X', como descrito acima, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que
K é -O-;
A é C2-4alquileno;
B1 é -OH;
R2, R3, R4 e Rs são, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior;
R6 é hidrogênio ou metila;
R7, R8, R9, R10, e Ri1 são independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituí- da, heterocicloalquila, heterocicloalquila substituída, heteroarila, ou heteroa- rila substituída;
R12 é H, alquila, alquila substituída, ou halogêriio; e
R13 é uma opcionalmente substituída tiazolila, piridila, ou oxazolila.
Método da invenção pode também compreender tratar um paci- ente em necessidade de tal tratamento com uma quantidade terapeutica- mente eficaz de Composto tendo a fórmula Xa, acima, ou a forma estereo- específica Xa', incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos destes, em que, K é -O-, -S-, ou -NR7-; A é -(CR8Rg)-(CH2)m-Z- em que Z é -(CHR10)-, -C(=0)-, -C(=0)-C(=0)-, -0C(=0)-, -N(Rn)C(=0)-, -SO2-, ou - N(R11)SO2-; R6 é hidrogênio ou metila; R8 e R9 são independentemente hi- drogênio, alquila, ou alquila substituída, R12 é H, alquila, alquila substituída, ou halogênio; R13 é arila, arila substituída, heteroarila ou heteroarila substitu- ída; e m é O a 6.
Método da invenção pode também compreender tratar um paci- ente em necessidade de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de Composto tendo a fórmula Xb ou Xb', acima, em que R6 é hidrogê- nio ou metila. Em ainda outra modalidade, o método compreende tratar o paciente com um composto de fórmula Xb ou Xb', em que R6 é hidrogênio.
Outra modalidade da invenção compreende o uso de qualquer dos compostos descritos acima (incluindo Compostos de Fórmula X, Xa, Xa', Xb, e/ou Xb', em que os grupos Κ, A, B1R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 R12, e R13 podem ser selecionados como mencionado acima), na prepa- ração de composições farmacêuticas para tratar câncer em pacientes, parti- cularmente, para uso na preparação de composições farmacêuticas conten- do compostos conjugados para liberação de fármaco alvo para tumores que superexpressam ou preferencialmente expressam o receptor de folato.
Outra modalidade da invenção compreende tratar um paciente em necessidade de tal tratamento com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto tendo as fórmulas X, Xa, Xa', Xb, e/ou Xb' (em que os grupos K, A, B1 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, e R13 podem ser selecionados como mencionado acima), em que o tratamento ocorre no sítio de tumor, tendo sido liberado no sítio de tumor. Nesta modalidade, um composto conjugado é liberado para o sítio de tumor, e então o composto de fórmulas X, Xa, Xa', Xb, ou Xb', como definido acima, é liberado no sítio de tumor e trata o paciente no sítio de tumor. É portanto entendido aqui, quando quer que o termo "tratamento" seja usado com referência a tratar um pacien- te, que este abrange o tratamento no sítio de tumor, entretanto liberado, por exemplo, por meio de um composto conjugado.
O uso de um agente para superregular o nível de receptor de folato (FR) pode ser eficaz para aumentar a expressão de FR em certas cé- lulas de câncer ou tipos de tumor para realçar as vantagens obtidas na ad- ministração dos compostos da invenção a pacientes, e/ou para realçar as várias doenças ou tipos de tumor que podem ser tratados com os compostos de ligação de receptor de folato, de acordo com a invenção. A expressão de receptor de folato em certos cânceres pode ser superregulada pela adminis- tração de um indutor de receptor de folato, que seletivamente aumenta o nível de receptor de folato nas células de câncer, desse modo realçando a eficácia de uma terapia alvejada de receptor de folato. Por exemplo, cânce- res de mama positivos de receptor de estrogênio (ER+) expressam baixos níveis de receptores de folato. Tratamento com um indutor de receptor de folato, tal como tamoxifen, um antagonista de estrogênio, é é conhecido su- perregular a expressão de receptores de folato em ER + cânceres de mama, aumentando a suscetibilidade de ER + células de câncer de mama para tra- tamento com uma terapia alvejada por receptor de folato.
Um aspecto da invenção fornece um método de tratar câncer ou uma doença proliferativa em um paciente, compreendendo opcionalmente administrar a um paciente uma quantidade eficaz de pelo menos um indutor de receptor de folato, e tratar o paciente com uma quantidade eficaz de pelo menos um composto de acordo com a fórmula X. O indutor de receptor de folato pode ser administrado antes, durante, ou após o paciente ser tratado com o composto de acordo com a fórmula X. Em uma modalidade, o indutor de receptor de folato é administrado antes do tratamento com o composto de fórmula X. Uma quantidade eficaz do indutor de receptor de folato refere-se a uma quantidade que superregula o receptor de folato nas células deseja- das de modo que o tratamento com o composto seja terapeuticamente efi- caz.
Exemplos de indutores de receptor de folato para a superregula- ção de receptor α de folato (FRa) incluem: antagonistas de receptor de es- trogênio tal como agonistas de receptor de progesterona tal como progesti- na; agonistas de receptor de androgênio tal como testosterona e diidroxites- tosterona, e agonistas de receptor de glicocorticóide tal como dexametaso- na.
Exemplos de indutores de receptor de folato para a superregula- ção de receptor de folato β (FRp) incluem: agonistas de receptor de ácido retinóide tal como ácido retinóide totalmente trans (ATRA), ácido benzóico de tetrametila naftalenil propenila (TTNPB), ácido 9-cis retinóico (9-cis RA), CD33336, LG101093, e CD2781.
Em uma modalidade, é fornecido um método de tratar câncer ou uma doença proliferativa em um paciente em necessidade deste, compreen- dendo administrar uma quantidade eficaz de pelo menos um indutor de re- ceptor de folato e também tratar o paciente com pelo menos um composto de acordo com a fórmula X; em que o referido indutor de receptor de folato superregula o receptor α de folato. Preferivelmente, o referido câncer ou doença proliferative é selecionado de câncer de mama, tal como ER+ câncer de mama, e câncer ovariano.
Em uma modalidade da presente invenção, é fornecido um mé- todo de tratar câncer ou uma doença proliferativa em um paciente em ne- cessidade deste, compreendendo administrar uma quantidade eficaz de pelo menos um indutor de receptor de folato e administrar uma quantidade eficaz de pelo menos um composto de acordo com a fórmula X; em que o referido indutor de receptor de folato superregula o receptor β de folato. Preferivel- mente, referido câncer ou doença proliferativa é selecionado de leucemia, e mais preferivelmente de leucemia mielogenosa aguda (AML) e leucemia mielogenosa crônica (CML).
Em uma outra modalidade, é fornecido um método de tratar cân- cer ou uma doença proliferativa em um paciente em necessidade deste, compreendendo administrar uma quantidade eficaz de pelo menos um indu- tor de receptor de folato, administrando pelo menos um inibidor de histona desacetilase, e tratar o paciente com uma quantidade eficaz de pelo menos um composto de acordo com a fórmula X. Um exemplo de um inibidor de histona desacetilase é tricostatina A (TSA). Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos n2 2003/0170299 A1, WO 2004/082463, Kelly, K. M., B.G. Rowan, e M. Ratnam, Câncer Research 63, 2820-2828 (2003), Wang, Zheng, Behm1 e Ratnam, Blood, 96:3529-3536 (2000).
Os compostos da presente invenção podem formar sasis ou sol- vatos que incluem-se também no escopo desta invenção. Referência a um composto da fórmula (X) aqui é entendido incluir referência a sais e solvatos destes, racematos, diastereômeros, e enantiômeros destes, a menos que de outro modo indicado. O termo "sal(is)", como asqui empregado, denota sais acídicos e/ou básicos formados com bases e ácidos inorgânicos e/ou orgâ- nicos. Além disso, quando um composto de fórmula (X) contém tanto uma porção básica, tal como porém não limitada a uma piridinil imidazolila, amina ou guanidinila quanto uma porção acídica tal como porém não limitada a um ácido carboxílico, zuitérions podem ser formados e são incluídos no termo "sal(is)" como aqui utilizados. Sais farmaceuticamente aceitáveis (isto é, não-tóxicos, fisiologicamente aceitáveis) são preferidos, embora outros sais sejam também úteis, por exemplo, em etapas de isolamento ou purificação que podem ser empregadas durante a preparação. Sais dos compostos da fórmula (X) podem ser formados, por exemplo, reagindo um composto de fórmula (X) com uma quantidade de ácido ou base, tal como uma quantidade equivalente, em um meio tal como aquele em que o sal precipita-se ou em um meio aquoso seguido por liofilização.
Os compostos de Fórmula (X) que contêm uma porção básica, tal como porém não limitada a uma amina, um grupo quanidinila, ou um anel piridila ou imidazolila, podem formar sais com uma variedade de ácidos or- gânicos e inorgânicos. Sais de adição de ácido exemplares incluem acetatos (tal como as aqueles formados com ácido acético ou ácido trihaloacético, por exemplo, ácido trifluoroacético), adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzoatos, benzenossulfonatos, bissulfatos, boratos, butiratos, citratos, can- foratos, canforsulfonatos, ciclopentanopropionatos, digluconatos, dodecilsul- fatos, etanossulfonatos, fumasratos, glucoeptanoastos, glicerofosfatos, he- missulfatos, heptanoatos, hexanoatos, hidrocloretos, hidrobrometos, hidroio- detos, hidroxietanossulfonatos (por exemplo, 2-hidroxietanossulfonatos), lac- tatos, maleatos, metanossulfonatos, naftalenossulfonatos (por exemplo, 2- naftalenossulfonatos), nicotinatos, nitratos, oxalatos, pectinatos, persulfatos, fenila propionatos (por exemplo, 3-fenila propionatos), fosfatos, picratos, pi- valatos, propionatos, salicilatos, sucinatos, sulfatos (tal como aqueles forma- dos com ácido sulfúrico), sulfonatos (tal como aqueles mencionados aqui), tartaratos, tiocianatos, toluenossulfonatos tais como tosilatos, undecanoatos, e similares.
Os compostos de Fórmula (X) que contêm uma porção acídica, tal como porém não limitada a um ácido carboxílico, podem formar sais com uma variedade de bases orgânicas e inorgânicas. Sais básicos exemplares incluem sais de amônio; sais de metal de álcali tais como sais de sódio, lítio, e potássio; sais de metal alcalino terroso tal como sais de cálcio e magnésio; sais com bases orgânicas (Por exemplo, aminas orgânicas) tal como benza- tinas, dicicloexilaminas, hidrabaminas (formados com N,N- bis(desidroabietil)etilenodiamina), N-metil-D-glucaminas, N-metil-D- glicamidas, t-butila aminas; e sais com aminoácidos tais como arginina, lisi- na, e similares. Grupos contendo nitrogênio básico podem ser quaternizados com agentes taiscomo haletos de alquila inferior (por exemplo, cloretos, brometos, e iodetos de metila, etila, propila, e butila), sulfatos de dialquila (por exemplo, sulfatos de dimetila, dietila, dibutila, e diamila), haletos de ca- deia longa (por exemplo, cloretos, brometos, e iodetos de decila, laurila, mi- ristila, e estearila), haletos de aralquila (por exemplo, brometos de benzila e fenetila), e outros.
Solvatos dos compostos da invenção são também contemplados aqui. Solvatos dos compostos de Fórmula (X) incluem, por exemplo, hidra- tos. Todos os estereoisômeros dos presentes compostos (Por exem- plo, aqueles que podem existir devido aos carbonos assimétricos em vários substituintes), incluindo formas enantioméricas e formas diastereoméricas, são contemplados dentro do escopo desta invenção. Desse modo, por e- xemplo, cada referência a compostos de Fórmula X, destina-se a abranger Compostos de Fórmula X'. Estereoisômeros individuais dos compostos da invenção podem, por exemplo, ser substancialmente livres de outros isôme- ros (por exemplo, como um isômero ótico puro ou substancfíalmente puro tendo uma atividade especificada), ou podem ser misturados, por exemplo, como racematos ou com todos os outros, ou outros selecionados, estereoi- sômeros. Os centros quirais da presente invenção podem ter a configuração S ou R como definido pelas IUPAC 1974 Recommendations. As formas ra- cêmicas podem ser resolvidass por métodos físicos, tal como, por exemplo, cristalização fracional, separação ou cristalização de derivados diastereomé- ticos, ou separação por cromatografia de coluna quiral. Isômeros óticos indi- viduais podem ser obtidos de processos estereoespecíficos, em que materi- ais de partida e/ou intermediásrios são selecionados tendo uma estereoquí- mica correspondente àquela desejada para os produtos acabados, e a este- reoquímica é mantida por meio das reações, e/ou os isômeros podem ser obtidos de racematos por qualquer método adequado, incluindo sem limita- ção, métodos convencionais, tais como, por exemplo, formação de sal com um ácido oticamente ativo seguido por cristalização.
Todos os isômeros configuracionais dos compostos da presente invenção são contemplados, ou em mistura, ou em forma pura ou substanci- almente pura. Como pode ser apreciado, a configuração preferidas pode ser uma função do composto particular e a atividade desejada. Isômeros confi- guracionais podem ser preparados pelos processos descritos aqui, que po- dem ser estereosseletivos. Em outras palavras, uma estereoquímica deseja- da para os compostos finasis pode ser obtida utilizando materiais de partida tendo a correspoondente estereoquímica desejada, e em seguida mantendo a estereosseIetividade em todo o processo de preparação. Alternativamente, os compostos podem ser preparados como racematos ou diastereômeros, e então a estereoquímica desejada pode ser obtida por meio de separação de isômeros configuracionais que podem ser obtidos por qualquer método ade- quado conhecido no campo, por exemplo, tal como cromatografia de coluna.
Em toda a especificação, grupos e substituintes destes podem ser escolhidos para fornecer porções estáveis e compostos úteis como com- postos farmaceuticamente aceitáveis e/ou compostos intermediários úteis na preparação de compostos farmaceuticamente aceitáveis. Alguém versado no campo apreciará seleções adequadas para variáveis para obter compostos estáveis.
Modalidades indicadas aqui como exemplares ou preferidas des- tinam-se a ser ilustrativas e não limitantes.
Outras modalidades da invenção serão evidentes para alguém versado no campo tais como, por exemplo, considerando combinações das modalidades referenciadas acima, e são contempladas como abrangidas dentro do escopo da invenção anexa.
Utilidade
Uma das proteínas que é superexpressa ou preferencialmente expressa em certas células de câncer é o receptor de folato. Ácido fólico é requerido para síntese de DNA, e certas células humanas de tumor são co- nhecidas superexpressarem proteínas de ligação de folato. Por exemplo, ambos Campbell e outro,"Folate Binding Protein is a Marker for Ovarian Câncer," Câncer Research, Vol. 51 (Oct. 1, 1991), nas páginas 5329-38, e Coney e outro,"Cloning of a Tumor-Associated Antigen: M0v18 e M0v19 Antibodies Recognize Folate-binding Protein," Câncer Research, Vol. 51 (Nov. 15, 1991), nas páginas 6125-31, reportam que proteínas de ligação de folato são marcadores para câncer ovariano. Superexpressão de receptor de folato é também conhecida para outros cânceres tais como, por exemplo, cânceres de pele, renal, mama, pulmão, cólon, nariz, garganta, glândula mamária, e cérebro, bem como outros cânceres referenciados aqui.
Os compostosda presente invenção são úteis e podem ser libe- rados como agentes estabilizantes de microtúbulo derivado de epotilona pa- ra tumores que expressam um receptor de folatgo. Eles são úteis no trata- mento de uma variedade de cânceres e outras doenças proliferativas, parti- cularmente aqueles cânceres caracterizados por células de câncer ou tumo- res que expressam o receptor de folato. O termo "condição associada ao receptor de folato" como aqui utilizado compreende doenças ou distúrbios caracterizados pela expressão do receptor de folato, ou em outras palavras, aquelas doenças ou distúrbios que podem ser diagnosticados ou tratados com base no nível de expressão do receptor de folato em tecido doente quando comparado com tecido normal. Compostos da presente invenção são úteis para formar conjugados. Por exemplo, compostos da invenção po- dem ser utilizados para formar o seguinte composto conjugado da fórmula I:
<formula>formula see original document page 30</formula>
em que:
V é folato, ou um análogo ou derivado deste;
Q é O, S, ou NR7;
M é a ligador liberável;
K é O, S, ou NR7a;
A é -(CR8R9)-(CH2)m-Z- em que Z é -(CHR10)-, -C(=O)-, -C(=O)- C(=O)-, -OC(=O)-, -N(Ri1)Ci=O)-, -SO2-, ou -N(R11)SO2-;
B1 é hidroxila ou ciano e R1 é hidrogênio ou B1 e R1 são empre- gados juntos para formar uma ligação dupla;
R2, R3, e R5 são, independentemente, hidrogênio, alquila, alquila substituída, arila ou arila substituída; ou R2 e R3 podem ser empregados jun- tamente com o carbono ao qual eles são ligados para formar uma cicloalqui- la opcionalmente substituída;
R4 é hidrogênio, alquila, alquenila, alquila substituída, alquenila substituída, arila, ou arila substituída; R6 é hidrogênio, alquila ou alquila substituída;
R7a, R7, R8, R9, R10, e R11 são independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituída, heterocicloalquila, heterocicloalquila substituída, heteroarila, ou heteroarila substituída;
R12 é H, alquila, alquila substituída, ou halogênio;
R13 é arila, arila substituída, heteroarila ou heteroarila substituída;
mé 0 a 6;
T tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 31</formula>
em que
R14 em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, al- quila, alquila substituída, arila, arila substituída, arilalquila, arilalquila substi- tuída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquilalquila, substituído ciclo- alquilalquila, heteroarila, heteroarilalquila, substituído heteroarilalquila, subs- tituído heteroarila, heterocicloalquila, ou substituído heterocicloalquila;
q é 1 a 10; e
R15, R16 e R17 são independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, ou cicloalquila.
Como outro exemplo não-limitante, compostos da invenção po- dem ser utilizados para formar o seguinte composto conjugado da fórmula Ia:
<formula>formula see original document page 31</formula> em que V é uma porção de ligação de receptor de folato. Por exemplo, V pode ter a seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 32</formula>
em que WeX são independentemente CH ou nitrogênio; R20 é hidrogênio, amino ou alquila inferior;
R21 é hidrogênio, alquila inferior, ou forma um grupo cicloalquila com R23;
R22 é hidrogênio, alquila inferior, alquenila inferior, ou alquinila inferior; e
R23 é hidrogênio ou forma uma cicloalquila com R21. Preferivel- mente, V é
<formula>formula see original document page 32</formula>
Compostos da presente invenção podem ser conjugados para formar compostos tendo a seguinte Fórmula Ib:
<formula>formula see original document page 32</formula>
em que
V é uma porção de ligação de receptor de folato;
R é H ou alquila inferior;
Q é O, S, ou NR7;
M é a ligador liberável tendo a seguinte fórmula: <formula>formula see original document page 33</formula>
preferivelmente
R14 em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, al- quila, alquila substituída, arila, arila substituída, arilalquila, arilalquila substi- tuída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquilalquila, substituído ciclo- alquilalquila, heteroarila, heteroarilalquila, substituído heteroarilalquila, subs- tituído heteroarila, heterocicloalquila, ou substituído heterocicloalquila; e é preferivelmente um grupo selecionado de H, metila, guanidinilpropila, - (CH2)-CO2H,-CH2-SH, -CH2-OH, imidazolil(metil), aminobutila, e - CH(OH)-CH3; e é mais preferivelmente a C1 a C3 alquila substituído com um de -C(=0)-0H ou -NH-C(=NH)-NH2;
q é 1 a 10; preferivelmente 1 a 5;
R15, R16 e R17 são independentemente hidrogênio, alquila inferior ou alquila inferior substituída; e
R18, R19, R31, R32, R33, R24, R25, R26, R27, R28 e R29 são cada qual, independentemente, H, alquila inferior, alquila inferior substituída, ci- cloalquila, ou cicloalquila substituída, ou qualquer de R18 e R19, R31 e R32; R19 e R31; R33 e R24; R25 e R26; R24 e R25; ou R27 e R28 podem ser empregados juntos para formar uma cicloalquila.
Compostos da presente invenção são especialmente úteis para formar compostos conjugados, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos destes, tendo a seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 33</formula>
Para qualquer grupo bivalente listado aqui, tal como -(CR8R9)- (CH2)m-Z-, que é capaz de inserção nos Compostos de Fórmula I, <formula>formula see original document page 34</formula>
a inserção deve ser feita da esquerda para a direita. Por exemplo, na seguin- te situação onde A é definido como -(CR8R9)-(CH2)m-Z-, o grupo metileno é ligado a K, e o grupo Z é ligado ao nitrogênio do anel de aziridinila, como segue:
<formula>formula see original document page 34</formula>
Como um exemplo não-limitante, tal como cânceres associados ao receptor de folato incluem câncer ovariano e cânceres da pele, mama, pulmão, cólon, nariz, garganta, glândula mamária, fígado, rim, baço, e/ou cérebro; mesoteliomas, adenoma pituitário, câncer cervical, carcinoma de célula renal ou outro câncer renal, carcinoma do plexo coróide, e tumores epiteliais (Veja, Asok, Antony, "Receptor de folatos: Reflections on a Perso- nal Odyssey and a Perspective on Unfolding Truth," Advanced Drug Delivery Reviews 56 (2004) a 1059-66).
Adicionalmente, uso de um antiestrogênio (tal como como tamo- xifeno, ICI 182, 780), pode ser eficaz para aumentar a expressão de FR em certas células de câncer ou tipos de tumor para realçar as vantagens obtidas na administração dos compostos da invenção a pacientes, e/ou para realçar as várias doenças ou tipos de tumor que podem ser tratados com os com- postos de acordo com a invenção.
Por exemplo, as doenças que podem ser tratadas com os com- postos desta invenção, e/ou em uma terapia de combinação compreendendo os compostos desta invenção em combinação com um antiestrogênio, po- dem também incluir, sem limitação, os seguintes
-carcinomas incluindo aqueles listados acima e/ou aqueles da bexiga, pân- creas, estômago, tireóide, e próstata;
-tumores hematopoiéticos de linhagem linfóide, incluindo leucemias tal como leucemia linfocítica aguda e leucemia linfoblástica aguda, e linfomas, tal co- mo linfoma de célula B, Linfoma de célula T, Linfoma de Hodgkins, não- linfoma de Hodgkins, linfoma de célula pilosa, e linfoma de Burkitts;
-tumores hematopoiéticos de linhagem mielóide, incluindo leucemia mielo- genosa aguda e crônica e leucemia promielocítica;
-tumores do sistema nervoso central e periférico, incluindo astrocitoma, neu- roblastoma, glioma, e schwanomas;
-tumores de origem mesenquimatosa, incluindo fibrossarcoma, rabdomios- sarcoma, e osteossarcoma; e
- outros tumores, incluindo melanoma, xeroderma pigmentoso, seminoma, ceratoacantoma, câncer folicular de tireóide, e teratocarcinoma.
Os compostos da presente invenção são úteis para tratar paci- entes que foram previamente tratados de câncer, bem como aqueles que não foram previamente tratados de câncer. Os métodos e composições des- ta invenção podem ser utilizados em tratamentos de câncer de primeira linha e segunda linha. Além disso, os compostos de Fórmula (X) podem ser úteis para tratar cânceres refratários ou resistentes.
Os compostos da presente invenção podem também ser úteis no tratamento de outras condições responsivas a agentes estabilizantes de mi- crotúbulo liberados por meio do receptor de folato, incluindo porém não limi- tado a, artrite, especialmente artrite inflamatória e outras condições inflama- tórias mediadas por macrófagos ativados, e distúrbios do sistema nervoso central tal como doença de Alzheimer.
Além disso, pacientes sendo tratados com os compostos da pre- sente invenção podem receber uma combinação de tratamentos, por exem- plo, com outros agentes anticâncer e citotóxicos ou outros tratamentos úteis no tratamento de câncer ou outras doenças proliferativas. Em tratamento de câncer, uma combinação de compostos da presente invenção e um ou mais agentes adicionais e/ou outros tratamentos podem ser vantajosos. O segun- do agente pode ter o mesmo ou diferente mecanismo de ação dos compos- tos de Fórmula (X). Especialmente úteis são as combinações de fármaco anticâncer e citotóxicos em que o segundo fármaco escolhido age de uma maneira diferente ou fase diferente do ciclo celular do que a porção de fár- maco ativa dos presentes compostos da presente invenção.
Exemplos de classes de agentes anticâncer e citotóxicos inclu- em, porém não estão limitados a, agentes de alquilação, tal como mostardas de nitrogênio, sulfonatos de alquila, nitrosouréias, etileniminas, e triazenos; antimetabólitos, tal como antagonistas de folato, análogos de purina, e aná- logos de pirimidina; antibióticos ou anticorpos, tal como anticorpos monoclo- nais; enzimas; inibidores de farnesil-proteína transferase; agentes hormo- nais, tal como glicocorticóides, estrogênios/antiestrogênios, androgê- nios/antiandrogênios, progestinas e antagonistas de liberação de hormônio de luteinização; agentes rompedores de microtúbulo, tal como ecteinascidi- nas ou seus análogos e derivados; agentes estabilizantes de microtúbulo; produtos derivados de planta, tal como alcalóides vinca, epipodofilotoxinas, e taxanos; inibidores de topoisomerase; inibidores de prenil-proteína transfera- se; complexos de coordenação de platina; inibidores de cinase incluindo multi-inibidores de cinase e/ou inibidores de Src cinase ou Src/abl; inibidores de transdução de sinal; e outros agentes utilizados como anticâncer e agen- tes citotóxicos tal como modificadores de resposta biológica, fatores de cres- cimento, e moduladores imunes. Os compostos de Fórmula X podem tam- bém ser utilizados em conjunto com terapia de radiação.
Outros exemplos de agentes anticâncer que podem ser utiliza- dos em combinação com os compostos da invenção incluem inibidores de Src cinase, 'N-(2-cloro-6-metilfenila )-2-[[6-[4-(2-hidroxietil)-1 -piperazinil]-2- metil-4-pirimidinil]amino]-5-tiazolcarboxamida, e outros compostos descritos na Patente dos Estados Unidos ns 6.596.746 e Pedido de Patente dos Esta- dos Unidos ne 11/051,208, depositado em 4 de fevereiro de 2005, incorpora- do aqui por referência; ixabepilona, um análogo de aza-epotilona B, e/ou outros análogos de epotilona descritos nas Patentes dos Estados Unidos nss 6.605.599, 6.262.094, 6.288.237, 6.291.684, 6.359.140, 6.365.749, 6.380.395, 6.399.638, 6.498.257, 6.518.421, 6.576.651, 6.593.115, 6.613.912, 6.624.310, Publicação de Pedido dos Estados Unidos n2 2003/0060623, publicado em março de 2003; Patente Alemã ns 4138042.8; WO 97/19086, WO 98/22461, WO 98/25929, WO 98/38192, WO 99/01124, WO 99/02224, WO 99/02514, WO 99/03848, WO 99/07692, WO 99/27890, WO 99/28324, WO 99/43653, WO 99/54330, WO 99/54318, WO 99/54319, WO 99/65913, WO 99/67252, WO 99/67253, WO 00/00485, Publicações de Pedido de Patente dos Estados Unidos nss 2004/0053910 e 2004/0152708; inibidores de cinase dependente de ciclina encontrados em WO 99/24416 (Veja também a Patente dos Estados Unidos ns 6.040.321); inibidores de prenil-proteína transferase encontrados em WO 97/30992 e WO 98/54966; agentes de farnesil proteína transferase descritos na Patente dos Estados Unidos ne 6.011.029; Anticorpos de CTLA-4 descritos na publicação PCT n2 WO 01/14424, e/ou um anticorpo de CTLA-4 descrito na publicação PCT n° WO 00/37504 tais como, por exemplo, o anticorpo conhecido como CP- 675206 (ticilimunab), ou ORENCIA®; MDX-010; vinflunina (Javlor™), e Erbi- tux (cetuximab).
Outros agentes potencialmente úteis em combinação com com- postos da presente invenção podem incluir paclitaxel (TAXOL®), docetaxel (TAXOTERE®), agentes heterogêneos tais como, hidroxiuréia, procarbazina, mitotano, hexametilmelamina, cisplatina e carboplatina; Avastina; e Herceptina.
As composições farmacêuticas preparadas de acordo com a presente invenção podem também ser formuladas ou co-administradas com outros agentes terapêuticos que são selecionados quanto a sua utilidade particular em terapias de administração associadas com as condições ante- riormente mencionadas. Por exemplo, as composições farmacêuticas podem ser formuladas com agentes para prevenir náusea, hipersensibilidade e irri- tação gástrica, tal como antieméticos, e antihistamínicos H1 e H2. Os outros agentes terapêuticos acima, quando empregados em combinação com os compostos da presente invenção, podem ser utilizados, por exemplo, naquelas quantidades indicadas na Physicians1 Desk Referen- ce (PDR) ou como de outro modo determinado por alguém versado na técnica.
Uma modalidade da invenção compreende o uso de compostos da presente invenção na preparação de composições farmacêuticas para tratamento de câncer, particularmente para uso na preparação de composi- ções farmacêuticas para uso em liberação de fármaco alvo para tumores que superexpressam ou preferencialmente expressam o receptor de folato.
As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser administra- das para qualquer dos usos descritos aqui por quaisquer métodos adequa- dos, por exemplo, parenteralmente, tal como por injeção subcutânea, intra- venosa, intramuscular, ou intrasternal ou técnicas de infusão (por exemplo, como suspensões ou soluções aquosas ou não-aquosas injetáveis estéreis), e/ou em formulações de unidade de dosagem contendo diluentes ou veícu- los farmaceuticamente aceitáveis, não-tóxicos. As composições farmacêuti- cas podem, por exemplo, ser administradas em uma forma adequada para liberação imediata ou liberação prolongada. Liberação imediata ou liberação prolongada pode ser obtida pela utilização de composições farmacêuticas adequadas compreendendo liberação imediata ou liberação prolongada po- de ser obtida pela utilização de composições farmacêuticas adequadas.
Composições exemplasres para administração parenteral inclu- em suspensões ou soluções injetáveis que podem conter, por exemplo, dilu- entes ou solventes parenteralmente aceitáveis, não-tóxicos adequados, tal como manitol, 1,3-butanodiol, água, Solução de Ringer, uma solução de clo- reto de sódio isotônica (0,9% Injeção de Cloreto de Sódio [Salina Normal] ou Injeção de Dextrose a 5%), ou outros agentes de dispersão ou umectação e suspensão adequados, incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos, e ácidos graxos. Composições e/ou métodos farmaceuticamente aceitáveis de admi- nistrar compostos da invenção podem incluir use of cosolvents incluindo, porém não limitados a etanol, N,N dimetilacetamida, propileno glicol, glicerol e polietileno glicóis, por exemplo, polietileno glicol 300 e/ou polietileno glicol 400, podem compreender o uso de tensoativos (agente tensoativo farmaceu- ticamente aceitável que podem ser utilizados para aumentar as propriedades de dispersão ou umectação do composto reduzindo sua tensão de superfí- cie), incluindo sem limitação, CREMOFOR®, SOLUTOL HS 15®, polissorbato 80, polissorbato 20, poloxâmero, pirrolidonas tais como N-alquilpirrolidona (por exemplo, N-metilpirrolidona) e/ou polivinilpirrolidona; podem também compreender o uso de um ou mais "tampões" (por exemplo, um ingrediente que confere uma capacidade de resistir à mudança na acidez eficaz ou alca- linidade de um meio na adição de incrementos de um ácido ou base), inclu- indo, sem limitação, fosfato de sódio, citrato de sódio, dietanolamina, trieta- nolamina, L-arginina, L-lisina, L-histidina, L-alanina, glicina, carbonato de sódio, trometamina (a/k/a tris[hidroximetil]aminometano ou Tris), e/ou mistu- ras destes.
A quantidade eficaz do composto da presente invenção pode ser determinada por alguém versado na técnica, e inclui quantidades de dosa- gem exemplar para um humano adulto de cerca de 0,01 a 10 mg/kg de peso corporal de composto ativo por dia, que pode ser administrado em uma dose única ou na forma de doses divididas individuais, tal como de 1 a 4 vezes por dia. Uma faixa preferida inclui uma dosagem de cerca de 0,02 a 5 mg/kg de peso corporal, com uma faixa de cerca de 0,05 a 0,3, sendo mais preferi- da. Será entendido que o nível de dose e freqüência de dosagem específi- cos para qualquer indivíduo particular podem ser variados e dependerão de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico em- pregado, a estabilidade metabólica e tempo de ação daquele composto, a espécie, idade, peso corporal, saúde geral, sexo e dieta do indivíduo, o mo- do e tempo de administração, taxa de excreção, combinação de fármaco, e severidade da condição particular. Indivíduos preferidos para o tratamento incluem animais, mais preferivelmente espécies mamíferas, tal como huma- nos, e animais dométicos tais como cães, gatos e similares, submetidos à condições associadas com a estabilização de microtúbulo.
Compostos da presente invenção, tal como compostos descritos em um ou mais dos seguintes exemplos, foram testados em um ou mais dos ensaios descritos abaixo e/ou ensaios mostrados no campo, e demonstram um nível mensurável de atividade como agentes de estabilização de micro- túbulo.
Ensaios
Ensaio de Sobrevivência de Célula Clonoqênica
Células de câncer foram semeadas a células 3.0E+05 em um frasco T75 com 10 ml de meios de RPMI1640, livres de ácido fólico, e con- tendo 10% soro bovino fetal e 25 mM de HEPES. Células foram cultivadas em um incubador a 37°C contendo CO2 a 5% durante 2 dias. No dia 2, os sobrenadantes foram removidos dos frascos, e os frascos foram divididos em 2 grupos. Um grupo de células foi incubado com 5 ml de meios contendo 100 M de ácido fólico (Sigma) durante 30 minutos e os outros foram cultiva- dos em 5 ml de meios sem ácido fólico adicionado. As células foram então tratadas com 20 nM da epotilona, análogo de epotilona, epotilona conjugada, ou análogo de epotilona conjugado durante uma hora. Ao término da íncuba- ção, os fármacos foram removidos dos frascos, e as células foram lavadas com tampão de PBS 3x. Após lavagem, 5 ml de meios completos foram adi- cionados em cada frasco, e a célula foi cultivada na incubadora de CO2 du- rante 23 horas. Na manhã seguinte, as células foram removidas dos frascos por tripsinização, Os números celulares foram determinados, e em seguida as células foram semeadas em uma placa de 6 cavidades. Dez dias após a semeadura, as colônias foram manchadas com violeta cristal e contadas. A fração de sobrevivências foi determinada.
Ensaio de Citotoxicidade / Proliferação de MTS In Vitro
A citotoxicidade in vitro foi avaliada em células de tumor utilizan- do um ensaio colorimétrico com base em tetrazólio que tira vantagem da conversão metabólica de MTS (3-(4,5-dimetiltiazol-2-íl)-5-(3- carboximetoxifenila)-2-(4-sulfenila)-2H-tetrazólio, sal interno) em uma forma reduzida que absorve luz a 492 nm. Células foram semeadas 24 horas antes da adição da epotilona, análogo de epotilona, epotilona conjugada, ou aná- logo de epotilona conjugado. Seguindo uma incubação de 72 horas a 37°C com composto serialmente diluído, MTS, em combinação com o agente de acoplamento de elétron metossulfasto de fenazina, foi adicionado às células. A incubação foi continuada durante 3 horas, em seguida a absorvência do meio a 492 nm foi avaliada com um espectrofotômetro para obter o número de células sobreviventes com relação às populações de controle. Os resul- tados são expressos como concentrações citotóxicas médias (valores IC50).
Ensaio de Receptor de Folato
Todos os procedimentos de preparação de amostra utilizados para o ensaio FR foram realizados a 4QC. Amostras de tecido foram homo- geneizadas em tampão de homogenização (10 mM de Tris, pH 8,0, 0,02 mg/ml cada de Ieupeptina e aprotinina; 1 ml de tampão/50 mg de tecido) uti- lizando um homogeneizador PowerGen 125. Resíduos grandes foram remo- vidos por suave centrifugação (3000 X g durante 15 minutos). Péletes de membrana foram então coletadas por centrifugação a 40,000 X g durante 60 minutos e ressuspensas em tampão de solubilização (50 mM de Tris, pH 7,4, 150 mM de NaCI1 25 mM de n-octil-p-D-glucopiranosídeo, 5 mM de EDTA, e 0,02% de azida de sódio). Material insolúve! foi removido por uma segunda centrifugação a 40.000 χ g 60 minutos, e a concentração total de proteína dos sobrenadantes foi determinada pelo método de ácido bicinconínico (BCA) (Pierce Chemical). Cada amostra foi então diluída para 0,25 mg/ml em tampão de solubilização, e 100 μΙ foram colocados dentro de cada dos dois microconcentradores (30,000-MW de corte, Millipore). Amostras foram então centrifugadas a 14.000 X g durante 10 minutos em temperatura ambi- ente para passar todo o líquido através da membrana, bem como para reter as FRs solubilizadas sobre a superfície da membrana do microconcentrador. Todas as etapas de centrifugação subseqüentes foram realizadas utilizando estes mesmos parâmetros. Em seguida 55 μl de 30 mM de tampão de ace- tato (pH 3,0) foram adicionados a cada microconcentrador, seguido por uma etapa de centrifugação. A seguir, 55 μl de salina tamponada por fosfato (PBS) foram distribuídos dentro de cada microconcentrador, seguido por ou- tra centrifugação. Em seguida 50 μl de reagente de ligação de ácido fólico [3H] (120 nM de ácido fólico [3H] (Amersham) em 10 mM de Na2PO4, 1,8 mM de KH2PO4, ρΗ 7,4, contendo 500 mM de NaCI1 2,7 mM de KCI, e 25 mM de n-octil-p-D-glucopiranosídeo) ou 50 μΙ de um reagente de competição (rea- gente de ligação mais 120 μΜ de ácido fólico não rotulado) foram adiciona- dos aos concentradores apropriados. Seguindo uma incubação de 20 minu- tos em temperatura ambiente, os concentradores foram lava- dos/centrifugados três vezes com 75 μΙ de 50 mM de n-octil-p-D- glucopiranosídeo, 0,7 M de NaCI em PBS, pH 7,4. Após a lavagem final, os retentatos contendo as FRs solubilizadas foram recuperados da superfície da membrana dos microconcentradores por duas enxaguadas com 100 μΙ de PBS contendo Triton X-100 a 4%. As amostras foram em seguida contadas em uma registradora de cintilação líquida (Packard Bioscience). Os valores de contagens por minuto (cpm) foram convertidos em picomoles de FR com base no cpm de um padrão conhecido, e os resultados finais foram normali- zados com respeito ao teor de proteína da amostra.
Animais e Tumores
Camundongos CD2F1 machos (Harlan Sprague-Dawley Inc., 20- 22 g) mantidos em um ambiente controlado e providos com água e alimento ad Iibitum foram utilizados nestes estudos. O carcinoma de pulmão FRalfa(-) Madison 109 (M109) de murino (Marks e outro,1977) e a variante (FRa(+)) 98M109 expressando FR foram utilizados para avaliar a eficácia da epotilo- na, análogo de epotilona (por exemplo, derivado de epotilona), conjugado de folato-epotilona, ou conjugado de folato-análogo de epotilona. Além disso, o carcinoma KB epidermóide de cabeça e pescoço humano desenvolvido em camundongos nus fo também utilizado para este propósito.
Avaliação do Tratamento com Fármaco e Eficácia Antitumor
Para administração de epotilona ou análogos de epotilona a ca- mundongos, um excipiente consistindo nos seguintes foi utilizado: CREMO- FOR®/etanol/água (1:1:8, v/v). Os compostos foram primeiro dissolvidos em uma mistura de CREMOFOR®/etanol (50:50). Diluição final para a intensida- de de dosagem requerida foi feita menos do que 1 hora antes da administra- ção do fármaco. Os camundongos foram administrados os agentes por inje- ção IV em bolos através da veia do rabo. Conjugado de folato-epotilonas ou conjugado de folato-análogo de epotilonas foram preparados em salina tam- ponada por fosfato estéril e administrados aos camundongos por injeção em bolos IV através da veia do rabo em um volume de 0,01 mL/g de camundon- gos. O tratamento de cada animal foi com base no peso corporal do indivíduo.
O número requerido de animais necessários para detectar uma resposta significativa foi agrupado no início do experimento e cada um foi administrado uma inoculação subcutânea de um homogeneizado de tumor (2% p/v). Os tumores foram deixados desenvolver durante 4 dias. No quarto dia, os animais foram uniformemente distribuídos para vários grupos de tra- tamento e controle. Os animais tratados foram checados diariamente quanto à toxicidade/mortalidade com relação ao tratamento. Cada grupo de animais foi pesado antes do início do tratamento (Wt1) e em seguida novamente se- guindo a última dose de tratamento (Wt2). A diferença em peso corporal (Wt2-Wt1) fornece uma medida de toxicidade com relação ao tratamento.
A resposta de tumor foi determinada por avaliação dos tumores com um compasso de calibre duas vezes por semana, até os tumores atingi- rem um tamanho "alvo" predeterminado de 1 gm. Os pesos do tumor (mg) foram estimados pela fórmula:
Peso de tumor = (comprimento χ largura2) / 2
A atividade antitumor foi avaliada na dose máxima tolerada (MTD) que é definidas como o nível de dose imediatamente abaixo do qual a toxicidade excessiva (isto é, mais do que uma morte) ocorreu. Quando a morte ocorreu, o dia da morte foi registrado. Os camundongos tratados que morrem antes de ter seus tumores atingido o tamanho alvo foram considera- dos ter morrido de toxicidade ao fármaco. Nenhum camundongo de controle morreu transportando tumores menores do que o tamanho alvo. Os grupos de tratamento com mais do que uma morte causada por toxicidade ao fár- maco foram considerados ter tivo tratamentos excessivamente tóxicos e seus dados não foram incluídos na avaliação de uma eficácia antitumor do composto.
O ponto final da resposta de tumor foi expresso em termos de retardo do crescimento do tumor (valor T-C), definido como a diferença em tempo (dias) requerido para os tumores tratados (T) para atingir um tamanho alvo predeterminado em comparação àqueles do grupo de controle (C).
Para estimar a morte de célula de tumor, o tempo de duplicação de volume de tumor (TVDT) foi primeiro calculado com a fórmula:
TVDT = Tempo médio (dias) para os tumores de controle atingirem o tama- nho alvo - Tempo médio (dias) para os tumores de controle atingirem meta- de do tamanho alvo
e,
Log morte celular = T-C (3.32 χ TVDT)
Avaliações estatísticas de dados foram realizadas utilizando Teste Wilcoxon generalizado de Gehan.
Abreviações
As seguintes abreviações são utilizadas nos esquemas e exem- plos inclusos para facilidade de referência:
CBZ-OSu = N-(Benziloxicarboniloxi)sucinimida
DCM = diclorometano
DEA = dietilamina
DIAD = diisopropil azodicarboxilato
DIPEA = diisopropiletilamina
DMA = dimetilamina
DMF = dimetila formamida
DMSO = dimetilsulfóxido
EDC = cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
EtOH = etanol
EtOAc = acetato de etila
FR = receptor de folato
HOBt = n-hidroxi benzotriazol
HPCL = cromatografia líquida de alto desempenho
iPr-OH ou IPA = álcool isopropílico
LC/MS = cromatografia líquida / espectrometria de massa
LDA = diisopropilamida de lítio MeOH = metanol
OTES = o-trietilsilila;
OMs = mesilato;
Ph = fenila
Pd/C = paládio sobre carbono
PyBOP = benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinofosfônio hexafluorofosfato
Py = piridila
RT = temperatura ambiente
Sat'd = saturado
THF = tetraidrofurano
TFA = ácido trifluoroacético
TLC = cromatografias de camada fina
TESCL = clorotrietilsilano
UV = ultravioleta.
Métodos de Preparação
Compostos da presente invenção podem geralmente ser prepa- rados de acordo com os seguintes esquemas e o conhecimento de alguém versado na técnica, e/ou utilizando métodos mencionados nas Patentes dos Estados Unidos nes 6.605.599, 6.831.090, 6.800.653, 6.291.684, 6.719.540, 7.172.884. Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos ns 2005/0002942 e Organic Letlers, 2001, 3, 2693-2696, as descrições dos quais são aqui incorporadas por referência e/ou nos Exemplos que seguem.
Como mostrado no Esquema 1, um composto de fórmula X pode ser preparado de um composto de fórmula II. Compostos de Fórmula Il po- dem ser obtidos por fermentação (Veja, por exemplo, Gerth e outro,"Studies on the Biosynthesis de epotilona s: The Biosynthetic Origin of the Carbon Skeleton," Journal of Antibiotics, Vol. 53, ns 12 (Dec. 2000), e Hofle e ou- tro,"Epothilone AeB- Novel 16-Membered Macrolides: lsolation, Crystal S- tructure, e Conformation in Solution", Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 35, n° 13/14, 1567-1569 (1996), as descrições dos quais são aqui incorporadas por referência) ou por síntese (Veja, por exemplo, Vite e outro, Patentes dos Estados Unidos nss 6,605,599; 6,242,469; 6,867,333 e Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2006/004065, e Johnson e outro, Organic Letters, 2000, 2:1537-1540) as descrições dos quais são aqui incorporadas por referência em sua totalidade). Por exemplo, um composto de fórmula Il onde R2, R3, R4, R5. e R12 são metila, B1 é hidroxila, Ri e R6 são hidrogênio, e R2 é 2-metiltiazol-4-ila é referido como epotilona A e pode ser obtido de fermentação de Sorangium cellulosum como referenciado acima. Um com- posto de fórmula Il pode ser convertido em um Composto de fórmula III onde P é um grupo de proteção de silila tal como trietilsilila, t-butildimetilsilila, t- butildifenil silila, triisopropilsilila, e similares (veja, por exemplo, Greene e outro,"Protective grupos in Organic Synthesis", John Wiley e Sons, Inc.). Por exemplo, um composto de fórmula III onde P é trietilsilila pode ser preparado por tratamento de um composto de fórmula II com clorotrietilsilano na pre- sença de base de Hunig. No caso onde B1 é hidroxila no composto de fórmu- la II, em seguida B-i também seria convertido no éter de silila corresponden- te. Uma haloidrina de fórmula IV (Y é Cl, Br, ou I) pode ser preparada de um composto de fórmula III por tratamento com um sal de haleto de metal por métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, abertura de epóxido utilizando eterato de brometo de magnésio em baixa temperatura (-20 a -5°C) pode fornecer haloidrinas diastereoméricas, onde Y é bromo. Um composto de fórmula V pode ser preparado de um composto de fórmula IV por desloca- mento do halogênio utilizando, por exemplo, azida de sódio em um solvente polar tal como dimetilformamida. Um técnico versado reconhecerá que a es- tereoquímica a C12 como representado no Esquema I não deve ser construí- da como limitante, porém de preferência exemplar. Se desejado, a inversão da estereoquímica na posição C12 pode ser obtida seguindo o protocolo Mitsunobu que é bem estabelecido na técnica. Por exemplo, tratamento de um composto de fórmula V com ácido p-nitrobenzóico, dietilazodicarboxilato, e trifenil fosfina fornece o correspondente éster de nitrobenzoato, que pode em seguida ser clivado por suave hidrólise de éster utilizando, por exemplo, soluções metanólicas de amônia para fornecer um composto de fórmula VI. Novamente, a estereoquímica para C12 como representado para o Composto VI não é limitante, e é representada como tal como para mostrar que o tra- tamento de Composto V como descrito inverterá a estereoquímica naquela posição. Alternativamente, outros ácidos orgânicos, azodicarboxilatos, e or- ganofosfinas podem ser utilizados para realizar a inversão Mitsonuobu. Um composto de fórmula Vll onde OG é um grupo de saída tal como mesilato, tosilato, nosilato, triflato e similares pode ser preparada de um composto de fórmula Vl por métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, tratamento de Vl com cloreto de metanossulfonila e trietilamina em um solvente orgânico adequado tal como diclorometano fornece um composto de fórmula Vll onde OG é mesilato. Um composto de fórmula Vlll pode ser preparado de um composto de fórmula Vll por redução do grupo azido com um agente de re- dução tal como uma organofosfina (por exemplo, trimetilfosfina). Alternati- vamente, um composto de fórmula Vlll pode ser preparado diretamente de um composto de fórmula Vl utilizando um agente de redução de organofosfi- na tal como trifenila fosfina. Um composto de fórmula IX pode ser preparado de um composto de fórmula Vlll por métodos conhecidos na técnica (veja, por exemplo, Patente dos Estados Unidos n5 6.800.653; e Regueiro-Ren e outro,Organic Letters, 2001, 3, 2693-2696). Por exemplo, um composto de fórmula IX onde H-K-A- é 2-hidroxietila pode ser preparado de um composto de fórmula Vlll por alquilação do anel de aziridina utilizando, por exemplo, excesso de 2-bromoetanol e a base tal como carbonato de potássio. Um composto de fórmula X pode ser preparado de um composto de fórmula IX por remoção dos grupos de proteção de éter silíla utilizando métodos conhe- cidos na técnica (veja, por exemplo, Greene e outro,"Protective grupos in Organic Synthesis", John Wiley e Sons, Inc.). Por exemplo, quando P é trie- tilsilila, tratamento de um composto de fórmula IX com ácido trifluoroacético em diclorometano realiza a desproteção para fornecer um composto de fór- mula X. Esquema 1
<formula>formula see original document page 48</formula>
Esquema 2 mostra um processo para preparar um análogo de folato ou derivado V e Iigador bivalente T-Q tendo a fórmula XI, abaixo, que pode ser utilizada com compostos da invenção para preparar moléculas con- jugadas para liberação de fármaco alvo, por exemplo, como para a fórmula I, previamente descrita. Como mostrado no Esquema 2, um análogo de folato e Iigador bivalente podem ser agrupados utilizando métodos conhecidos na técnica, especialmente no caso onde V é ácido fólico ou um análogo de áci- do fólico, como descrito, por exemplo, por Jackson, e outro,Advanced Drug Delivery Rev. 56(2004) 1111-1125, a descrição do qual é aqui incorporada por referência, e T-Q é um peptídeo. Por exemplo, folato de peptidila Xl pode ser preparado como mostrado no Esquema 2. Acoplamento de peptídeo se- qüencial de uma resina de poliestireno carregada de cisteína com aspartato protegido por Fmoc, arginina, aspartado, e em seguida glutamato pode ser realizado utilizando PyBOP como agente de acoplamento e piperidina como agente de desproteção por Fmoc. Ácido pteróico protegido por N10- trifluoroacetamida pode ser preparado em duas etapas por conversão enzi- mática (carboxipeptidase G) de ácido fólico em ácido pteróico, seguido por proteção por N10 utilizando anidrido trifluoroacético. A seguir, acoplamento do ácido pteróico protegido por N10 ao peptídeo ligado à resina seguido por clivagem da resina com ácido trifluoroacético e remoção do grupo de N10- trifluoroacetila utilizando hidróxido de amônio fornece um fragmento de V-T- Q de um composto de fórmula I onde V é ácido fólico e T-Q é -Asp-Arg-Asp- Cys-OH. Alternativamente, análogos de ácido pteróico podem ser utilizados em lugar de ácido pteróico e outros aminoácidos podem ser utilizados em lugar daqueles ilustrados no Esquema 2.
Esquema 2
<formula>formula see original document page 49</formula>
LeGenda da figura:
1) a 4) em seguidea piperidina; 5) Ácido Pteróico de N10TFA; 6) e 2,5% de etanoditiol; NH4OH aquoso, em seguida HCI aquoso.
Esquema 3, abaixo, mostra um método para utilizar o derivado de epotilonas da presente invenção para preparar uma molécula conjugada de fórmula I, para uso na liberação de fármaco alvo. Como mostrado no Es- quema 3, o agrupamento de Compostos de Fórmula I pode ser obtido por acoplamento dos Compostos de Fórmula X a um fragmento V-T-Q por incor- poração em etapas de um ligador liberável Μ. A título de ilustração, um composto de fórmula X onde -A-K-H é -CH2CH2OH pode ser convertido em um dissulfaniletil carbonato Xlll utilizando um composto de benzotriazol ati- vado de fórmula XII. Um composto de fórmula Xll pode ser preparado de mercaptoetanol, cloreto de metoxicarbonil sulfenila, e an 2-mercaptopiridina opcionalmente substituída para fornecer um 2-(2-piridin-2-il)dissulfanil)etanol intermediário, que pode em seguida ser convertido em um composto de fór- mula Xll por tratamento com difosgeno e um 1-hidroxibenzotriazol opcional- mente substituído. Subseqüente permuta de dissulfito com um folato de pep- tidila tal como Xl fornece um composto de fórmula I onde V é ácido fólico, Τ- Ο é a -Asp-Arg-Asp-Cys-OH, M é -SCH2CH2O(C=O)-, A é -CH2CH2- e K é O.
Esquema 3
<formula>formula see original document page 50</formula>
Esquema 4 ilustra um método alternativo para preparar um com- posto de fórmula X de um composto de fórmula XIV (Veja, Pedido de Paten- te dos Estados Unidos nQ 60/940,088, depositado em 25 de maio de 2006, incorporado aqui em sua totalidade por referência). Compostos de Fórmula XIV podem ser obtidos por métodos bem conhecidos no campo, por exem- plo, por fermentação (Veja, por exemplo, Gerth e outro,"Studies on the Bi- osynthesis de epotilonas: The Biosynthetic Origin of the Carbon Skeleton," Journal of Antibiotics, Vol. 53, ns 12 (Dec. 2000), e Hofle e outro,"Epothilone A e B- Novel 16-Membered Macrolides: lsolation, Crystal Structure, e Con- formation in Solution", Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 35, ns 13/14, 1567- 1569 (1996), as descrições dos quais são aqui incorporadas por referência) ou por síntese total (Veja, por exemplo, Vite e outro, Patentes dos Estados Unidos nes 6.605.599, 6.242.469, 6.867.333 e Publicação de Pedido de Pa- tente dos Estados Unidos 2006/004065, as descrições dos quais são aqui incorporadas por referência em sua totalidade). Por exemplo um composto de fórmulas XIV onde R2, R3, R4, R5, e Ri2 são metila, Bi é hidroxila, Ri e R6 são hidrogênio, e R2 é 2-metiltiazol-4-ila é referido como epotilona C e pode ser obtido de fermentação de Sorangium cellulosum como referenciado aci- ma. Um composto de fórmula XIV pode ser convertido em um composto de fórmula XV onde P é um grupo de proteção de silila tal como trietilsilila, t- butildimetilsilila, t-butildifenila silila, triisopropilsilila, e similares (veja, por e- xemplo, Greene e outro,"Protective grupos in Organic Synthesis", John Wiley e Sons, Inc.). Por exemplo, um composto de fórmula XV onde P é trietilsilila pode ser preparado por tratamento de um composto de fórmula XIV com clorotrietilsilano na presença de base tal como base de Hunig. No caso onde B1 é hidroxila no composto de fórmula XIV, em seguida Bi também seria convertido no éter de silila correspondente. Uma haloidrina de fórmula XVI ou XVII (Y é Cl, Br, ou I) pode ser preparada de um composto de fórmula XV por tratamento com um agente de halogenação tal como Y2. Por exemplo, adição eletrofílica em solventes polares tal como acetonitrilo utilizando iodo pode estereosseletivamente fornecer haloidrinas regioisoméricas de fórmu- las XVI e XVII, onde Y é iodo. Alternativamente N-halo sucinimidas podem também ser utilizadas para a mesma transformação. Um composto de fór- mula XVIII pode ser preparado de compostos de fórmulas XVI e/ou XVII por fechamento de anel de epóxido na presença de bases tal como trietilamina ou base de Hunig em um sistemas solvente polar/aquoso tal como acetonitri- lo/água. Se desejado, o Composto XIV pode ser diretamente transformado em um Composto de Fórmula XVI e/ou XVII (onde P é H ), que poderia em seguida ser convertido no epóxido XVIII (onde P é H). Um composto de fór- mula XVIII pode ser transformado nos álcoois de azido de fórmulas Vl e XIX por deslocamento da azida na presença de sais de azida inorgânica ou azi- das de tetraalquil amônio em solventes alcoólicos. No caso onde P é um grupo de proteção de silila, compostos de fórmulas XX e/ou XXI onde OG é um grupo de saída tal como mesilato, tosilato, nosilato, triflato e similares pode ser preparada de compostos de fórmulas Vl e/ou XIX por métodos co- nhecidos na técnica. Por exemplo, tratamento de Vl e/ou XIX com cloreto de metanossulfonila e trietilamina em um solvente orgânico adequado tal como diclorometano fornece compostos de fórmulas XX e XXI onde OG é mesila- to. Um composto de fórmula Vlll pode ser preparado de compostos de fór- mulas XX e/ou XXI por redução do grupo azido por meio de métodos conhe- cidos na técnica. Por exemplo, Composto Vlll pode ser preparada de com- postos de fórmulas XX e/ou XXI através da reação com um agente de redu- ção tal como uma organofosfina (por exemplo, trimetilfosfina) em solventes polares tal como acetonitrilo. Alternativamente, quando P é Η, o composto de fórmula Vlll pode ser diretamente preparado de compostos de fórmulas Vl e/ou XIX por redução do grupo azido com um agente de redução tal como uma organofosfina (por exemplo, trifenil fosfina) em solventes polares tal como acetonitrilo. Um composto de fórmula IX pode ser preparado de um composto de fórmula Vlll por métodos conhecidos na técnica (veja, por e- xemplo, Patente dos Estados Unidos nQ 6.800.653; e Regueiro-Ren e ou- tro, Organic Letters, 2001, 3, 2693-2696). Por exemplo, um composto de fór- mula IX onde H-K-A- é 2-hidroxietila pode ser preparado de um composto de fórmula Vlll por alquilação do anel de aziridina utilizando, por exemplo, ex- cesso de 2-bromoetanol e a base tal como carbonato de potássio. No caso de P ser uma trialquilsilila, um composto de fórmula X pode ser preparado de um composto de fórmula IX por remoção dos grupos de proteção de éter silila utilizando métodos conhecidos na técnica (veja, por exemplo, Greene e outro, "Protective grupos in Organic Synthesis", John Wiley e Sons, Inc.). Por exemplo, quando P é trietilsilila, tratamento de um composto de fórmula IX com ácido trifluoroacético em diclorometano realiza a desproteção para for- necer um composto de fórmula X.
Esquema 4
<formula>formula see original document page 53</formula> A invenção será agora também descrita com referência aos se- guintes exemplos ilustrativos.
Exemplos
Exemplo 1: Análogos de epotilona conjugados por folato
Como descrito na descrição detalhada acima, análogos e deri- vados de folato são descritos em Vlahov. Na pesquisa e desenvolvimento direcionados para alvejamento de receptor de folato em células de tumor de compostos de análogo de epotilona e epotilona conjugada, vários compostos foram conjugados em folato. Por exemplo, Composto AA e Composto BB foram considerados como candidatos para conjugação em ácido fólico:
<formula>formula see original document page 54</formula>
Composto AA tem atividade nas pesquisas clínicas de Fase II, e seis conjugados de folato de Composto AA (Compostos AA.I a AA.VI; veja figura 1) foram preparados e opcionalmente testados quanto a estabilidade química, ligação de FR, e atividade mediada por FR em cultura celular.
A ligação destes conjugados de folato de Composto AA em FR foi determinado em um ensaio que mede a remoção de ácido fólico radiorro- tulado de FR expresso em células de tumor KB crescidas em confluência. A descoberta dos conjugados de folato de Compostos AA.I e AA.11 em FR foi julgada ceitável [afinidade relativa (RA) >0,25; RA de ácido fólico = 1,0]. En- tretanto, surpreendentemente, nenhum dos seis conjugados de Composto AA mostrados na Fig. 1 exibiu citotoxicidade apreciável contra células de tumor KB em ensaios de antiproliferação que mede a incorporação de 3H- timidina (dados não mostrados).
Visto que os conjugados de Composto AA demonstraram citoto- xicidade desapontante contra células de tumor, estudos foram conduzidos utilizando-se três conjugados de Composto BB (Compostos BB.I a BB.III). Composto BB é da mesma forma conhecido como epotilona F, e é um aná- logo de Composto AA, onde o grupo 21-amino é substituído por um grupo 21-hidroxila. Enquanto o Composto BB.Il (Fig. 2) exibiu citotoxicidade em altas concentrações, a atividade não foi atenuada em estudos de competição utilizando excesso de ácido fólico. Portanto, a citotoxicidade observada foi atribuída à liberação não específica do Composto BB.II.
Outros análogos de epotilona, por exemplo, aziridinil epotilonas, são conhecidos na técnica (veja, por exemplo, Patente U.S. No. 6,399. 638; Regueiro-Ren, A, e outro, (2001) Org. Letters. 3:2693-96) e mostram potente citotoxicidade anti-tumor. Por exemplo, um ensaio de MTS que comparou a potência de citotoxicidade relativa de vários análogos de epotilona contra um par de linhagens celulares de câncer resistentes ao taxano (HCTVM46 e A2790Tax) foi conduzido (Veja Table 1). HCTVM46 é uma linhagem celular de carcinoma de cólon humana derivada da linhagem de origem HCT116 sensível, e é resistente aos taxanos devido à super-expressão do transpor- tador de efluxo de fármaco de p-gliproteína de 170kD. A2780Tax é uma li- nhagem celular de carcinoma ovariano humana derivada da linhagem A2780 de origem, e é resistente ao paclitaxel com um resultado de uma mutação na seqüência de aminoácido de tubulina que concede a capacidade de paclita- xel ligar-se.
Como é mostrado na Tabela 1, vários análogos de aziridinil epo- tilona (Compostos CC-EE) mostram potente atividade anti-tumor contra am- bas as linhagens celulares de carcinoma ovariano A2780 e de cólon HCT116, comparada a outros agentes anti-tumor conhecidos, por exemplo, paclitaxel, Composto AA, e epotilona B.
Tabela 1. Atividade In vitro de 12,13-aziridinil Epotilonas
<formula>formula see original document page 55</formula> <table>table see original document page 56</column></row><table>
1 IC5O ± SD médio calculado de quatro experiências separadas.
2 relação de R/S = IC50 de HCT116 /IC50 de HCT116VM46
3 relação de R/S = IC50 de A2780 /IC50 de A2780Tax
A despeito das atividades anti-tumor de compostos de aziridinil epotilona CC-EE1 os únicos grupos hidroxils nestas moléculas disponíveis para conjugação em folato são aqueles encontrados nos átomos de carbono C3 e C7, Conseqüentemente, tendo pesquisado vários análogos e compostos de epotilona, permaneceu um desafio de descobrir um composto que estaria facilmente disponível para conjugação em folato, e que demonstraria ativi- dade por meio de liberação específica da porção de epotilona ativa nas célu- las de tumor.
O composto de aziridinil epotilona G foi descrito, tendo a fórmula,
<formula>formula see original document page 56</formula>
Composto G
Composto G (Veja Exemplos 2 e 3) mostrou ser surpreendente- mente fácil de conjugar em ácido fólico para formar o Composto J (Veja E- xemplo 2) com afinidade relativa de 0,77 para receptor de folato receptor, quando comparado ao ácido fólico.
Inesperadamente, o grupo hidroxila polar na cadeia lateral de aziridina não afetou adversamente a atividade anti-tumor dos análogos de aziridina epotilona. Isto é importante porque é o análogo de aziridina epotilo- na, por exemplo, Composto G, que media os efeitos anti-tumor na liberação de ácido fólico. A potência do Composto G, e três outros análogos de epoti- lona altamente potentes (ixabepilona, Composto AA, e Composto BB) foram avaliados pelo ensaio de formação de colônia que é descrito acima. A con- centração necessária para exterminar 90% de células cancerígenas KB clo- nogênicas (IC90) foi determinadda após uma duração de exposição de fár- maco de 17 horas. Como mostrado na figura 3, Composto G exibiu uma IC90 de 4,3 nM e foi ~2, 4, e 6 vezes mais potente que o Composto CC, Compos- to AA, e ixabepilona, respectivamente.
Conjugação do Composto G para formar o Composto J não afe- tou a atividade anti-tumor de Composto G. Composto J demonstrou ativida- de citotóxica substancial contra células de tumor in vivo. No modelo de tumor de FRa(+) in vivo de KB, Composto J demonstrou atividade igualmente na dose tolerada máxima (MTD) e em dois níveis inferiores que produziram to- xicidade mínima produzida (Veja figura 4). Em comparação, ixabepilona foi ativa apenas em sua MTD (5 μmol/kg). Quando comparados nas MTDs, Composto J produziram efeitos anti-tumor superiores do que ixabepilona (figura 4).
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Composto J
Em comparação, com o modelo de tumor de origem de FRa(-) M109, Composto J teve atividade inferior em todos os níveis de dose testa- dos, incluindo em sua MTD (2,4 μmol/kg), considerando que ixabepilona foi ativa em seua MTD de 5 μmol/kg. (figura 5). Estes resultados indicam que o FRa (-) M109 é sensível à ixabepilona e a inatividade de Composto J é pro- vavelmente amplamente uma conseqüência da ausência da expressão de FRa por este tumor. Estes resultados da mesma forma fornecem evidência que a atividade anti-tumor do Composto J pode ser mediada através dos receptores de FRa.
Outra evidência do mecanismo de liberação de fármaco mediado por FRa do Composto J é forencida pela observação que a co-administração de um análogo de folato em excesso de 20 vezes da dose de Composto J poderia substancialmente competir com o Composto J para ligação de re- ceptor e proteger tumores de FRa(+) 98M109 dos efeitos anti-tumor do Composto J. (figura 6). Visto que o Composto Geo conjugado (Composto J) têm efeitos anti-tumor surpreendentes ambos in vitro e in vivo, e visto que as atividades anti-tumor do Composto J podem ser atribuídas aos efeitos medi- ados por FRa(+), da mesma forma descrito aqui é a conjugação do Compos- to G de análogo de aziridinil epotilona (Veja Exemplos 2 e 3) para formar o Composto J. (Veja Exemplo 2).
Exemplo 2: Preparação do Composto J
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Ácido (S)-2-(4-((2-amino-4-oxo-3,4-diidropteridin-6-il)metilamino) benzamido)-5-((S)-3-carbóxi-1 -((S)-1 -((S)-3-carboxi-i -((R)-1 -carbóxi-2-(2-(2- ((2-((1 S,3S,7S ,1OR ,11S ,12S ,16R)-7,11 -diidróxi-8,8,10,12-tetrametil-3-((E)-1 - (2-metiltiazol-4-il)prop-1 -en-2-il)-5,9-dioxo-4-oxa-17-aza- biciclo[14,1,0]heptadecan-17-il)ethoxi)carboniloxi)etil)dissulfanil)etilamino)-1-oxo propan-2-ilamino)-5-guanidino-1 -oxopentan-2-ilamino)-1 -oxopropan-2- ilamino)-5-oxopentanóico
A. [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10SM1R*,12RM6S*]]-8,8)10,12- Tetrametil-3-[1-metil-2-(2-metil- 4-tiazolil)etenil]-7,11-bis[(trietilsili)óxi] -4,17- dioxabiciclo[14,1,0]heptadecano-5,9-diona
<formula>formula see original document page 59</formula>
Em uma solução agitada de epotilona A (5,0 g, 10,1 mmol), imi- dazol (3,40 g, 49,9 mmol) e DIPEA (28,5 mL, 163,6 mmol) em DMF anidroso (100 mL) sob atmosfera de N2 foi adicionado cloreto de trietilsilila (15,0 mL, 89,4 mmol). Depois que a adição foi concluída, a solução de reação foi a- quecida a 55 0C (temperatura de banho de óleo) durante 12 hr para produzir uma única mancha (tlc) do produto desejado.
A reação acima foi repetida mais duas vezes. A DMF da solução combinada foi distilada sob alto vácuo. O resíduo espumante foi purificado por cromatografia de coluna (silica gel, E. Merck, 230-400 malhas, 600 g; 5:95, 10:90 e 15:85 EtOAc/hexanos) para produzir 19,4 g (88,6%) do Com- posto A como um sólido branco.
ES Industries FIloroSep RP Phenyl, 4,6 χ 250mm, isocrático, 30 min, 100% de Β, (B = 90% de MeOH/H20 + 0,2% de H3PO4), taxa de fluxo em 1,0ml/min, UV 254, t = 23,15 min. LC/MS (ES+) 722 (M+H).
B. Preparação de [4S-[4R*,7S*,8R*,9RM3SM4S*,16R*(E)]]-14- Bromo-13-hidróxi-5,5,7,9-tetrametil-16-[1 -metil-2-(2-metil- 4-tiazolil)etenil] - 4,8-bis[(trietilsilil)oxi]-1-oxacicloexadecano-2,6-diona
<formula>formula see original document page 59</formula>
Em uma solução agitada de [1S- [1R*,3R*(E),7R*,10S*, 11R*,12R*,16S*]]-8,8,10,12-Tetrametil-3-[1 -metil-2-(2- metil-4-tiazolil)etenil]-7,11 -bis[(trietilsili)óxi]-4,17- dioxabiciclo[14,1,0]heptadecano-5,9-diona (5,0 g, 6,92 mmol) em diclorome- tano anidroso (140 mL) a -20°C sob atmosfera de N2 foi adicionado MgBr2- Et2O (3 χ 2,13 g, 24,78 mmol) em três porções a cada duas horas enquanto mantendo uma temperatura interna abaixo de -5°C. Depois de cerca de 7 hr, a mistura reacional foi diluída com diclorometano e lavada com NaHCOs sat. (2 x), secada em Na2SO4 anidroso e evaporada em vácuo para produzir a espuma. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (silica gel, E. Merck, 230-400 malhas, 180 g; 5:95, 7,5:92,5 e 12,5:87,5 EtOAc/hexanos) para produzir o Composto B (2,5 g, 45% de rendimento) como um análogo de espuma branca com material de partida recuperado (0,9 g, 18%).
HPLC: ES Industries FIuoroSep RP Phenyl, 4,6 χ 250 mm, iso- crático, 30 min, 100% de Β, (B = 90% de MeOH/H20 + 0,2% de H3PO4), taxa de fluxo em 1,0ml/min, UV 254, t =14,37 min.(100% puro) LC/MS (ES+): 802 (M+H).
C. Preparação de [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,13SM4RM6R*(E)]]-14- Azido-13-hidróxi-5,5,7,9-tetrametil-16-[1 -metil-2-(2-metil- 4-tiazolil)etenil]-4,8- bis[(trietilsilil)óxi]-1-oxacicloexadecano-2,6-diona
<formula>formula see original document page 60</formula>
Em uma solução de [4S-[4R*,7S*,8R*,9RM3SM4SM6R*(E)]]- 14-Bromo-13-hidróxi-5,5,7,9-tetrametil-16-[1 -metil-2-(2-metil- 4-tiazolil)etenil] -4,8-bis[(trietilsilil)óxi]-1-oxacicloexadecano-2,6-diona (9.9 g, 12,3 mmol) em 1,2 L de DMF foram adicionados azida de sódio (8,01 g, 123,3 mmol) e 18- coroa-6 (3,26 g, 12,3 mmol) em RT sob atmosfera de N2, A solução clara foi agitada mecanicamente em rt durante 7 dias. A solução foi diluída com EtO- Ac (4 L), e lavada com H2O (6x3 L). A camada orgânica foi secada (Na2SO4), e em seguida evaporada para produzir 9,2 g do produto cru. Cro- matografia de coluna (silica gel 450 g, 5 - 15% de EtOAc/hexano) forneceu 6,7 g (71% de rendimento) do Composto C como uma espuma branca.
HPLC: YMC ODS-A S5, 4,6 χ 50mm, isocrático, 30 min, 100%de Β. (B = 90% de Me0H/H20 + 0,2% de H3PO4), taxa de fluxo em 4,0mL/min, UV 254 nm, t =2,00 min. LC/MS (ES+) 765 (M+H).
D. Preparação de [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,13RM4RM6R*(E)]]-14- Azido-5,5,7,9-tetrametil-16-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-13-[(4- nitrobenzoil)óxi]- 4,8-bis[(trietilsilil)óxi] -1 -oxacicloexadecano-2,6-diona
<formula>formula see original document page 61</formula>
[4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,13S*,14R*,16R*(E)]]-14-Azido-13-hidróxi- 5,5,7,9-tetrametiM 6-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil] -4,8-bis[(trietilsilil)óxi]- 1-oxacicloexadecano-2,6-diona (7,0 g, 9,15 mmol), ácido 4-nitrobenzóico (3,82 g, 22,9 mmol), e trifenilfosfina (6,0 g, 22,9 mmol) foram dissolvidos em THF (100 mL). Dietilazodicarboxilato (9,0 mL of 40% de solução em tolueno, 22,9 mmol) foi adicionado durante um período de 5 minutos. A mistura rea- cional foi mantida em RT durante 4 hr, concentrada e purificada por croma- tografia em sílica gel (gradiente em etapas de 5% de acetato de eti- la/hexanos para 15% de acetato de etila/hexanos) para isolar o éster de ni- trobenzoatocomo uma espuma branca (7,3g, 87%).
LC-MS: Phenomenex C18, 4,6 χ 50 mm, isocrático, 15 min, 100% de Β. (B = 90% de Me0H/H20 + 0,1% de TFA), taxa de fluxo em 4,0 mL/min, UV 220 nm. Tempo de retenção = 8,9 min. MS (ESI) M+H = 886,7
E. Preparação de [4S-[4R*,7S*,8R*,9RM3R*,14R*,16R*(E)]]-14- Azido-13-hidróxi-5,5,7,9-tetrametil-16-[1 -metil-2-(2-metil- 4-tiazolil)etenil]-4,8- bis[(trietilsilil)óxi] -1 -oxacicloexadecano-2,6-diona
<formula>formula see original document page 61</formula>
O éster de nitrobenzoato Composto D (7,3g, 7,98 mmol) foi dis- solvido em acetato de etila (35 mL) e resfriado a 0°C. Amônia em metanol (350 mL de 2M de solução em metanol) foi adicionada, e a mistura reacional agitada em RT durante 4 hr, concentrada e purificada por cromatografia em sílica gel (gradiente em etapas de 10 % de acetato de etila/hexanos para 30% de acetato de etila/hexanos) para isolar [4S- [4R*,7S*,8R*,9R*,13R*,14R*, 16R*(E)]]-14-Azido-13-hidróxi-5,5,7,9- tetrametil-16-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4,8-bis[(trietilsilil)óxi]-1- oxacicloexadecano-2,6-diona como um sólido branco vítreo (5,97g, 98%).
LC-MS: Phenomenex C18, 4,6 χ 50mm, isocrático, 5 min, 100% de Β. (B = 90% de Me0H/H20 + 0,1% de TFA), taxa de fluxo em 4,0 mLVmin, UV 220 nm. Tempo de retenção = 2,25 min. MS (ESI) M+H = 765,66
F. Preparação de [1S-[1R*,3R*(E),7RM0S*,11R*,12R*,16S*]]- 8,8,10,12-Tetrametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-7,11 - bis[(trietilsilil)óxi]-4-oxa-17-azabiciclo[14,1,0]heptadecano-5,9-diona
<formula>formula see original document page 62</formula>
[4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,13R*,14R*, 16R*(E)]]-14-Azido-13-hidróxi- 5,5,7,9-tetrametiM 6-[1-metil-2-(2-metil- 4-tiazolil)etenil]-4,8-bis[(trietilsilil)óxi] -1-oxacicloexadecano-2,6-diona (5,97 g, 7,8 mmol) e trietilamina (4,34 mL, 31,2 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (85 mL) e resfriados a 0°C. Cloreto de metanossulfonilída (1,8 mL, 23,4 mmol) foi adicionado gota a gota durante um período de 5 min. Depois de 10 min, a mistura reacional foi re- movida do banho de gelo, e agitada em RT. Depois de 3 hr, a mistura rea- cional foi apreendida em NaHCO3 saturado (300 mL), extraída com dicloro- metano (3 X 100 mL), secada em Na2SO4, concentrado e empregada na próxima etapa sem outra purificação.
O éster de metanossulfonato cru foi dissolvido em THF/H20 (12:1, 130 mL). Trietilamina (2,2 mL, 16 mmol) e trimetilfosfina (16 mmol, 16 mL of 1,0 M de solução em THF) foram adicionados, e a mistura reacional foi agitada em RT. Depois de 3 hr, a reação foi aquecida a 45°C durante 7 hr, concentrada e purificada por cromatografia em sílica gel (gradiente em eta- pas de 2% metanol/clorofórmio a 5% de metanol/clorofórmio) para isolar o Composto F como um sólido branco (5,08 g, 88% para duas etapas).
LC-MS: Phenomenex C18, 4,6 χ 50 mm, isocrático, 5 min, 100% de Β. (B = 90% de Me0H/H20 + 0,1% de TFA), taxa de fluxo em 4,0 mL/min, UV 220 nm. Tempo de retenção = 0,298 min. MS (ESI) M+H = 721,58
G. Preparação de [1S-[1R*,3R*(E),7RM0S*,11R*,12RM6S*]]- 7,11 -Diidróxi-17-[2-hidroxietil]-8,8,10,12-tetrametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4- tiazolil)etenil]-4-oxa-17-azabíciclo[14,1,0]heptadecano-5,9-diona
<formula>formula see original document page 63</formula>
K2CO3 (1,4g, 10,2 mmol) e 2-bromoetanol (0,52 mL, 7,3 mmol) foram adicionados em [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]- 8,8,10,12-Tetrametil-3-[1 -metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-7,11 - bis[(trietilsilil)óxi]-4-oxa-17-azabiciclo[14,1,0]heptadecano-5,9-diona (1,05 g, 1,46 mmol) em acetonitrilo (20 mL) e aquecidos a 82°C. Depois de 4 hr, 2-bromoetanol adicional (0,52 mL, 7,3 mmol) e K2CO3 (1,4 g, 10,2 mmol) foram adicionados. Depois de 5 hr, 2-bromoetanol adicional (0,21 mL, 2,92 mmol) foi adicionado. Depois de 3 hr, a mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente, filtrada através de Celite, lavada com acetonitrilo (5 X 5 mL), diclorometano (2X5 mL), concentrada e empregada na próxima eta- pa sem outra purificação.
O produto de reação cru foi dissolvido em diclorometano (40 mL), resfriado a 0°C, e ácido trifluoroacético (8,0 mL) foi adicionado. Depois de 1 hr, a mistura reacional foi concentrada, apreendida em NaHCO3 satura- do (200 mL), extraída com diclorometano (3 X 100 mL), secada em Na2SO4, concentrada, e purificada por cromatografia em sílica gel (10% meta- nol/d iclorometano) para isolar [1S-[1R*,3R*(E),7RM0SM1R*,12R*,16S*]]- 7,11-Diidróxi-17-[2-hidroxietil]-8,8,10,12-tetrametil-3-[1-metil-2-(2-metil- 4- tiazolil)etenil]-4-oxa-17-azabiciclo[14,1,0]heptadecano-5,9-diona (Composto G), como uma película clara (0,62g, 79% para duas etapas).
LC-MS: Waters Sunfire C18, 4,6 χ 50mm, gradiente, 0 a100% de B surante 4 min. (A= 10% de Me0H/H20 + 0,1% de TFA; B = 90% de Me- 0H/H20 + 0,1% de TFA), taxa de fluxo em 4,0 mL/min, UV 220 nm. Tempo de retenção = 2,12 min. MS (ESI) M+H = 537,52,
H. Preparação de ácido (S)-2-(4-((2-amino-4-oxo-3,4- diidropteridin-6-il)metilamino)benzamido)-5-((S)-3-carbóxi-1-((S)-1-((S)-3- carbóxi-1-((S)-1 -carbóxi-2-mercaptoetilamino)-1-oxopropan-2-ilamino)-5- guanidino-1-oxopentan-2-ilamino)-1-oxopropan-2-ilamino)-5-oxopentanóico
<formula>formula see original document page 64</formula>
Ácido (S)-2-(4-((2-amino-4-oxo-3,4-diidropteridin-6- il)metilamino)benzamido)-5-((S)-3-carbóxi-1 -((S)-1-((S)-3-carbóxi-1-((S)-1 - carbóxi-2-mercaptoetilamino)-1-oxopropan-2-ilamino)-5-guanidino-1- oxopentan-2-ilamino)-1 -oxopropan-2-ilamino)-5-oxopentanóico foi sintetizado por síntese de peptídeo de fase sólida em cinco etapas começando de H- Cis(4-methoxitritil)-2-clorotritil-resina. A Tabela 2 mostra a quantidade de reagentes utilizados na síntese.
TABELA 2
<table>table see original document page 64</column></row><table> <table>table see original document page 65</column></row><table>
Os seguintes procedimentos foram utilizados:
Etapas de acoplamento:
À resina em um vaso de síntese de peptídeo foram adicionados a solução de aminoácido solution, DIPEA, e PiBOP. A mistura foi borbulhada durante 1 hr e lavada 3X com DMF e álcool isopropílico. A desproteção de FMOC foi realizada por tratamento com 20% de piperidina em DMF, 2X (10min), antes de cada acoplamento de aminoácido. Esta seqüência foi re- petida para cada etapa de acoplamento de aminoácido.
Síntese de ácido pteróico protegido por N10-TFA:
Para 10 L de 0,1 M de solução de base tris (121,1 g de base tris em 10 L de água) em um frasco de base redonda mecanicamente agitado de 22 L, equipado com uma um manto de aquecimento, foram adicionados 200 g (0,453 mol) de ácido fólico. A mistura foi agitada para dissolver o ácido fólico, e em seguida 500 mg (3,67 mmols) de cloreto de zincs foram adicio- nados. Carboxipeptidase G (frasconetes de unidades 13 χ 20 disponíveis de Sigma) foi adicionada e o pH foi ajustado para 7,3 com 1N de HCI e mantida por toda a reação. A mistura foi protegido da luz e aquecida a 30°C durante 8-10 dias (uso de um auto-titulador para manter o pH constante reduziu o tempo de conversão por 4-5 dias). A reação foi monitorada por HPLC analíti- ca até que 80% da conversão fosse obtida (outra conversão é desejável po- rém não foi otimizada). O produto foi precipitado a partir de uma mistura rea- cional ajustando-se a solução em pH=3,0 utilizando 6N de HCI. A suspensão foi transferida para um frasconete de centrífuga e centrifugada em 4000 rpm durante 10 min. O sobrenadante foi decantado. O sólido úmido foi, em se- guida, diretamente purificado como segue (o sólido úmido pode ser congela- do para armazenagem ou primeiro seco por congelamento; entretanto, a ar- mazenagem dos sólidos úmidos no congelador até a dissolução foi mais efi- ciente). Para 40 g do ácido pteróico cru em 700 mL de água foi adicionado 1,0 M de NaOH até pH=11,5. A mistura foi filtrada (Whatman tipo 1) e em seguida cromatografada (coluna: 10 χ 120 cm; fase estacionária: 8 kg de DEAE celulose; fase móvel: 1,0 M de NaCl/0,01 M de NaOH, pH=11,5; taxa de fluxo: 17 ml/min). Um litro de frações de cor amarelo foi coletado e anali- sado por HPLC. Frações contendo ácido pteróico puro foram ajustadas em pH=3 com 6 M de HCI para precipitar ácido pteróico. A mistura foi centrifu- gada em 3000 rpm durante 20 minutos. O sobrenadante foi decantado e la- vado com água (3x). O sólido foi seco por congelamento durante pelo menos 72 hr. O impacto de água residual na próxima reação não é conhecido.
O ácido pteróico foi também secado em P2O5 sob alto vácuo du- rante mais de 24 hr (nota-se que resultados similares na etapa de proteção foram obtidos sem esta etapa de secagem adicional). Em seguida, 100g (0,32 mol) de ácido pteróico foram adicionados a um frasco de base redonda de 5 L, equipado com um agitador mecânico e uma entrada de argônio, e armazenados sob alto vácuo durante a noite. Gás argônio foi adicionado se- guido por 3500 g (2316 mL) de anidrido trifluoroacético. O frasco foi selado com um tampão de borracha ou adaptador de entrada de argônio, e em se- guida agitado vigorosamente. O frasco foi protegido da luz e agitado em temperatura ambiente sob atmosfera de argônio durante 7 dias (a reação foi monitorada por HPLC de alíquotas diluídas 20x cada com água e DMSO). A mistura foi evaporada por movimento giratório até a secura e tratada com 2,5 L de 3% de ácido trifluoroacético em água. A mistura foi agitada durante a noite em temperatura ambiente para hidrolizar sub-produtos de anidrido. E- vaporação giratória produziu um sólido seco. O sólido foi suspenso em 2 L of água e em seguida centrifugado em frascos de centrífuga de 250-mL em 3000 rpm durante 20 minutos. O sobrenadante foi removido e o sólido foi lavado com água e centrifugado (4 vezes). O sólido foi seco por congela- mento durante 3 dias, transferido para frascos ambarinos, e secado sob alto vácuo na presença de P2O5 durante 2 dias (Pureza >95%; TFA residual ava- liado por Análise Elementar).
Etapa de Clivaqem:
O intermediário protegido foi liberado da resina utilizando o rea- gente de clivagem preparado de 92,5% (50mL) de TFA, 2,5% (1,34mL) de H2O, 2,5% (1,34mL) de Triisopropilsilano, e 2,5% (1,34mL) de etanoditiol. O reagente de clivagem foi adicionado a um vaso de reação (25mL). Argônio foi borbulhado através da mistura durante 1,5 hr. O líquido foi drenado do vaso, e a resina foi lavada com reagente restante (3 X 8mL). Os voláteis fo- ram concentrados por evaporação giratória em um volume de 10 mL. Éter dietílico (35,0 mL) foi adicionado para realizar a precipitação. O sólido foi coletado por centrifugação e secado para produzir 1,25 g de produto de cli- vagem.
Etapa de desprotecão:
O grupo protetor N10-trifluoroacetila na porção de ácido pteróico foi removido sob condições básicas. Começando com 250 mg de intermediá- rio protegido em 10 mL de água, o pH foi ajustado em 9,3 e mantido durante 1 hr utilizando 4:1 de H2O: hidróxido de amônio (1-2 mL). Depois de 1 hr, o pH foi ajustado em 5 com 1N de HCl (~1 mL) e o produto foi purificado em HPLC preparativa para produzir 125 mg de Composto H.
Condições de Purificação de HPLC:
Coluna: Waters NovaPak C18 300x19mm
Solvente A: Tampão 10mM de Acetato de Amônio, pH=5
Solvente B: Acetonitrilo
Eluição: 1% de B para 20% de B em 40min em 15mL/min
Rendimento total das reações combinadas: 625 mg
I. Preparação de carbonato de 2-((1S,3S,7S,10R,11S,12S,16R)- 7,11 -diidróxi-8,8,10,12-tetrametil-3-((E)-1-(2-metiltiazol-4-il)prop-1 -en-2-il)- 5,9-dioxo-4-oxa-17-aza-biciclo[14,1,0]heptadecan-17-il)etil 2-(2-(piridin-2- il)dissulfanil)etila
1. Preparação de 2-(2-(Piridin-2-il)dissulfanil)etanol <formula>formula see original document page 68</formula>
A uma solução de cloreto de metoxicarbonil sulfenila (10 mL, 110 mmol), em diclorometano (100 mL), resfriada a 0°C, foi adicionado mer- captoetanol (7,6 mL, 110 mmol), gota a gota. A mistura reacional foi permiti- da agitar a 0 0C durante 30 min. Neste ponto, uma solução de 2- mercaptopiridina (12,2 g, 110 mmol) em diclorometano (160 mL) foi adicio- nada. A solução foi permitida reagir a 0 0C durante 1 hr e em seguida foi permitida aquecer em RT durante mais 1 hr. O produto sólido foi observado cair para fora da solução. TLC (1:1 de Éter de Pet/EtOAc) mostrou que o produto significante foi formado. A mistura reacional foi concentrada em um volume de 125 mL. A mistura foi filtrada através de um funil de Buchner. A massa filtrante foi lavada com diclorometano e em seguida secada sob vá- cuo durante a noite para proporcionar 2-(2-(Piridin-2-il)dissulfanil)etanol (23,6 g), como o sal de HCl.
TLC: Rf = 0,45
Placas - EMD Sílica Gel 60 F254, 5 X 10 cm, 250 M
2. Preparação de Carbonato de Benzo[d][1,2,3]triazol-1-il 2-(2- (piridin-2-il)dissulfanil)etila
<formula>formula see original document page 68</formula>
Legenda:
- difosgênio
- sal
Uma solução de difosgênio (2,28 g, 11,5 mmol) em 15 mL de diclorometano anidroso foi agitada sob argônio em um frasco de base re- donda e resfriada por um banho de gelo/sal. Um funil de adição com uma mistura de 2-(piridin-2-ildissulfanil)etanol (5,01 g, 22,4 mmol) e trietilamina (2,25 g, 22,2 mmol) em 65 mL diclorometano anidroso foi colocado no frasco de base redonda. A mistura foi adicionada gota a gota durante um período de 20 minutos. A mistura reacional foi deixada aquecer em RT e agitada du- rante um adicional de 1 hr. Análise de TLC da mistura reacional mostrou que o material de partida foi consumido e houve a formação de um produto de cloroformato menos polar "listrado", TLC (6:4 EtOAc:Hexanos): Rf do mate- rial de partida 0,4; Rf do produto de cloroformato: 0,8.
A mistura reacional foi agitada em um frasco de base redonda sob argônio e resfriada por um banho de gelo/sal. Uma mistura de 3,02 g, 22,4 mmol de HOBt e 2,23 g, 22,0 mmol de trietilamina em 10 mL de diclo- rometano anidroso foi adicionada a um funil de gotejamento afixado ao fras- co de base redonda. A mistura foi lentamente adicionada ao frasco de base redonda mantendo a temperatura de reação a 2°C. A mistura reacional foi deixada aquecer em RT e agitada durante a noite. Aproximadamente 27 mL de diclorometano foram, em seguida, distilados a partir da mistura reacional em pressão atmosférica. A mistura foi, em seguida, permitida resfriar em RT e agitar durante 2 hr. Os sólidos forma coletados por filtração, e a massa filtrante foi lavada com 20 mL de diclorometano. Os sólidos foram em segui- da secados sob vácuo a 40°C em um evaporador giratório para proporcionar 7,81 g de sólidos quase brancos. Este produto foi analizado por 1H- NMR e determinado ser o produto desejado.
3. Preparação de carbonato de 2-((1S,3S,7S,10R,11S.12S.16R)- 7,11 -diidróxi-8,8,10,12-tetrametil-3-((E)-1 -(2-metiltiazol-4-il)prop-1 -en-2-il)- 5,9-dioxo-4-oxa-17-aza-biciclo[14,1,0]heptadecan-17-il)etil 2-(2-(piridin-2- il)dissulfanil)etila
<formula>formula see original document page 69</formula>
A uma solução de [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*, 11R, 12R*,16S*]]- 7,11-Diidróxi-17-[2-hidroxietil]-8,8,10,12-tetrametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4- tiazolil)etenil]-4-oxa-17-azabiciclo[14,1,0]heptadecano-5,9-diona em dicloro- metano anidroso a O9C foi adicionado DMAP (1,2 eq.) e carbonato de ben- zo[d][1,2,3]triazol-1-il 2-(2-(piridin-2-il)dissulfanil)etil (1,0 eq.) em tandem. A mistura reacional foi agitada a OsC sob argônio e monitorada por TLC a cada 10 min. DMAP adicional (1,2 eq.) e Composto I (2)(1,0 eq.) foram adiciona- dos quando necessário até que todo o Composto G fosse consumido. A rea- ção foi extinguida com MeOH (1 mL) a 0°C, o solvente foi removido sob vá- cuo, e o resíduo foi purificado por cromatografia (silica gel, 2,5-5% de MeOH em DCM) para proporcionar o composto título como um sólido bege. Recu- perações e quantidades de composto são listados abaixo na Tabela 3, Ren- dimento total de 2,95 g do Composto G foi 2,80 g (67,9%) de Composto I.
Tabela 3
<table>table see original document page 70</column></row><table>
* Cada purificação cromatográfica tipicamente produziu o produto puro junto com algum produto impuro (80-90% de pureza). O produto impuro foi combi- nado com o produto cru da próxima batelada para purificação cromatográfi- ca. Para bateladas #2 e 4, duas purificações cromatográficas foram realizadas.
J. Preparação de ácido (S)-2-(4-((2-amino-4-oxo-3,4- diidropteridin-6-il)metilamino)benzamido)-5-((S)-3-carbóxi-1-((S)-1-((S)-3- carbóxi-1 -((R)-1-carbóxi-2-(2-(2-((2-((1 S,3S,7S,10R, 11 S,12S,16R)-7,11 - diidróxi-8,8,10,12-tetrametil-3-((E)-1-(2-metiltiazol-4-il)prop-1-en-2-il)-5,9- dioxo-4-oxa-17-aza-biciclo[14,1,0]heptadecan-17- il)ethoxi)carboniloxi)etil)dissulfanil)etilamino)-1-oxopropan-2-ilamino)-5- guanidino-1-oxopentan-2-ilamino)-1-oxopropan-2-ilamino)-5-oxopentanóico <formula>formula see original document page 71</formula>
Para 15 mL de H2O (borbulhado com argônio durante 10 min antes do uso) foi adicionado ácido (S)-2-(4-((2-amino-4-oxo-3,4- diidropteridin-6-il)metilamino)benzamido)-5-((S)-3-carbóxi-1-((S)-1-((S)-3- carbóxi-1 -((S)-1 -carbóxi-2-mercaptoetilamino)-1 -oxopropan-2-ilamino)-5- guanidino-1 -oxopentan-2-ilamino)-1 -oxopropan-2-ilamino)-5-oxopentanóico (498 mg, 0,534 mmol) em um tubo de centrífuga de medida de 50 mL. A esta suspensão, enquanto borbulhando com argônio, foi adicionado gota a gota solução de NaHCO3 saturada (borbulhada com argônio durante 10 min antes do uso) até que o pH da solução resultante alcançasse 6,9. Carbonato de 2- ((1S,3S,7S,10R,11S,12S,16R)-7,11-diidróxi-8,8,10,12-tetrametil-3-((E)-1-(2- metiltiazol-4-il)prop-1-en-2-il)-5,9-dioxo-4-oxa-17-aza- biciclo[14,1,0]heptadecan-17-il)etil 2-(2-(piridin-2-il)dissulfanil)etila (400 mg, 0,534 mmol) em THF foi adicionado rapidamente e a solução homogênea resultante foi agitada sob argônio durante 30 min. O progresso da reação foi verificado por HPLC analítica em 15 min. O pico do produto desapareceu em ~ 6,4 min sob condições de HPLC analítica. A mistura foi diluída com -15 mL de tampão de fosfato e o THF foi removido sob vácuo. A solução turva foi centrifugada e filtrada. O filtrado amarelo foi dividido em duas porções e purificado por HPLC preparativa. Frações puras (>98% pura) foram agrupa- das e secas por congelamento. Frações de traço (<98% pura) forma coleta- das e re-purificadas para cada 3-6 ciclos de cromatografia para fornecer 700 mg do composto título como um pó branco (contém 11,8% em peso de água e 8,7% em peso de sódio e sais de fosfato de sódio, como determinado por Karl Fischer e análise elementar).
Parâmetros de HPLC Preparativa:
Coluna: Waters Nova-Pak HR C18 6μπι 30x300 mm
Fase móvel A: 7,0 mM de tampão de fosfato de sódio, pH=7,2
Fase móvel B: acetonitrilo
Método: 10% de B-50% de B em 0 min, taxa de fluxo: 40 mL/min
Parâmetros de HPLC analítica:
Coluna: Waters Simmetry C18 3,5μιτι 4,6x75 mm
Fase móvel A: 10 mM de tampão de acetato de trietilamônio (TEAOAc), pH=7,5
Fase móvel B: Acetonitrilo
Método: 20% de B-40% de B em 10 min, taxa de fluxo: 1,0 mL/min
Massa precisa m/z (C67H92N16O22S3):
Calculado: 1570,58907 (M+2H), 785,29454 (M+2H)*+, 523,86563 (M+3H)3+, 393,15118 (M+4H)4+
Encontrado: (M+2H)2+ em 785,29100 (4,5 ppm), (M+3H)3+ em 523,86431 (2,5 ppm), (M+4H)4+ em 393,14996 (3,1 ppm)
Exemplo 3: Preparação alternativa do composto J
<formula>formula see original document page 72</formula>
Ácido (S)-2-(4-((2-amino-4-oxo-3,4-diidropteridin-6-il)metilamino) benzamido)-5-((S)-3-carbóxi-1-((S)-1 -((S)-3-carbóxi-1-((R)-1-carbóxi-2-(2-(2- ((2-((1S,3S,7S,10R,11S,12S,16R)-7,11-diidróxi-8,8,10,12-tetrametil-3-((E)-1- (2-metiltiazol-4-il)prop-1 -en-2-il)-5,9-dioxo-4-oxa-17-aza- biciclo[14,1,0]heptadecan-17-il)ethoxi)carboniloxi)etil)dissulfanil)etilamino)-1- oxopropan-2-ilamino)-5-guanidino-1-oxopentan-2-ilamino)-1-oxopropan-2- ilamino)-5-oxopentanóico
3A. Preparação de [4S,7R,8S,10R,9S,13R,16S]-4,8,13-triidróxi- 14-iodo-5,5,7,9-tetrametil-16-[(E)-1-[2-metiltiazol-4-il]prop-1-en-2-il] oxaciclo- exadecano-2,6-diona.
<formula>formula see original document page 73</formula>
Epotilona C (54,3 g, 113,7 mmol) foi dissolvida em acetonitrilo (480 mL) e água (50 mL). A solução foi resfriada a -5°C a -10°C. lodo (144,3 g, 568,4 mmol) foi adicionado a uma reação e a reação foi mantida pelo menos durante 15 hr.
A reação foi extinguida com 15% de solução de metabissulfito de sódio (900 mL). A mistura foi extraída com acetato de etila (2 χ 1,1 L). As fases orgânicas foram coletadas e lavadas sucessivamente com solução de bicarbonato de sódio saturada (675 mL) e solução de cloreto de sódio satu- rada (675 mL). Os solventes foram evaporados sob pressão reduzida para produzir o composto A cru como óleo amarelo (85,6 g). O Composto A foi utilizado na próxima reação sem outra purificação.
HPLC: Phenomex Luna C8 (2) 3um, 4,6 χ 150mm, isocrático, 18 min, 36% de B, 17 min, 56% de B, (Fase móvel A = 0,01 M de NH40Ac em ACN:Água (5:95), Fase móvel B = 0,01 M de NH40Ac em ACN:Água (95:5)), taxa de fluxo em 1 ,Oml/min, UV 245, Rt = 22,4 min.
3B. Preparação de [1R,3S,7S,10R,11S,12S,16S]-7,11-diidróxi- 8,8,10,12-tetrametil-3-[(E)-1-[2-metiltiazol-4-il]prop-1 -en-2-il]-4,17- dioxabiciclo[14,1,0]heptadecano-5,9-diona.
<formula>formula see original document page 73</formula>
[4S,7R,8S,10R,9S,13R,16S]-4,8,13-triidróxi-14-iodo-5,5,7,9- tetrametil-16-[(E)-1 -[2-metiltiazol-4-il]prop-1-en-2-il] oxacicloexadecano-2,6- diona (85,6 g) foi dissolvido em acetonitrilo (670 mL) e água (130 mL). Trieti- lamina (135 mL, 968,5 mmol) foi adicionada à solução. A reação foi aquecida a 50°C a 60°C durante pelo menos 8 hr.
Depois que foi resfriada em RT, a solução foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com EtOAc (1,2 L) e lavado com so- lução de cloreto de sódio saturada (3 χ 500 mL). Os solventes foram evapo- rados sob pressão reduzida para produzir o produto cru como óleo amarelo. Purificação por filtração de almofada de sílica gel (silica gel 700 g, 66% de EtOAc em heptano, 2 χ 4 L, e 1 χ 3 L) proporcionou o Composto B como es- puma (50,3 g, 90% de rendimento) com HPLC AP 80,
HPLC: Phenomex Luna C8 (2) 3um, 4,6 χ 150mm, isocrático, 18 min, 36% de B, 17 min, 56% de B, (Fase móvel A = 0,01 M de NH40Ac em ACN:Água (5:95), Fase móvel B = 0,01 M de NH40Ac em ACN:Água (95:5)), taxa de fluxo em 1,0ml/min, UV 245, Rt = 15,0 min.
3C/3D. Prepração de (4S,7R,8S,9S,13R,14R,16S)-13-Azido- 4,8,14-triidróxi-5,5,7,9-tetrametil-16-((E)-1 -(2-metiltiazol-4-il)prop-1 -en-2- il)oxacicloexadecano-2,6-diona e (4S,7R,8S,9S, 13S, 14S, 16S)-14-Azido- 4,8,13-triidróxi-5,5,7,9-tetrametil-16-((E)-1-(2-metiltiazol-4-il)prop-1-en-2-
Em uma solução agitada of epi-Epotilona-A (14,35 g, 29,07 mmol) em etanol (240 mL) e água (48 mL) foi adicionado azida de sódio (11,45 g, 174,41 mmol) e cloreto de amônio (3,14g, 58,14 mmol). A mistura foi agitada em 60 0C durante 17-20h. Os voláteis foram evaporados no eva- porador giratório sob pressão reduzida abaixo de 50 °C. O resíduo foi dissol- vido em mistura de acetato de etila (287 mL) e água (50 mL). As fases foram separadas e a fase aquosa da base foi extraída com acetato de etila (115 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com 25% de solução de cloreto de sódio aquosa (salmoura). O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi passado através de uma almofada de sílica gel elu- indo com mistura de acetato de etila/n-heptano (2:1). Evaporação do solven- te sob pressão reduzida forneceu mistura regio-isomérica de azido-álcoois, (4SI7R,8S,9S,13R,14R,16S)-13-Azido-4,8,14-triidróxi-5,5,7,9-tetrametil-16- ((E)-1-(2-metiltiazol-4-il)prop-1-en-2-il)oxacicloexadecano-2,6-diona e (4S,7R,8S,9S,13S,14S,16S)-14-azido-4,8,13-triidróxi-5,5,7,9-tetrametil-16- ((E)-1 -(2-metiltiazol-4-il)prop-1 -en-2-il)oxacicloexadecano-2,6-diona em rela- ção de -6:1 (12,8 g, 82%) como uma espuma branca.
LC-MS: Coluna Phenomenex Luna C8(2): 3 μm, 4,6 χ 50 mm. Gradiente: 15 min, 0% de B para 100% de B em 10 min, em seguida 100% de B durante 5 min. Fase móvel: A = 0,01 M de NH4OAc em CH3CN/H20 5:95; B = 0,01 M de NH4OAc em CH3CN/H20 95:5, Taxa de fluxo: 3,0 5 mL/min. Comprimento de onda: UV 250 nm. Tempo de retenção = 5,52 min. MS (ESI) (M+H)+ = 537,69
Esta reação também funciona em outros solventes como, aceto- na, acetonitrilo, tetraidrofurano, 2-propanol, dimetilformamida, metilsulfóxido e N-metil-pirrolidinona.
Reagente de azida de tetrabutilamônio pode da mesma forma ser utilizado em vez de azida de sódio/cloreto de amônio
3E. Preparação de (1S,3S,7S,10R,11S,12S16R)-7,11-diidróxi- 8,8,10,12-tetrametil-3-((E)-1-(2-metiltiazol-4-il)prop-1-en-2-il)-4-oxa-17- azabiciclo(14,1,0)heptadecano-5,9-diona.
Em uma solução agitada de mistura de (4S,7R,8S,9S,13R,14R,16S)-13-Azido-4,8,14-triidróxi-5,5,7,9-tetrametil-16- ((E)-1 -(2-metiltiazol-4-il)prop-1-en-2-il)oxacicloexadecano-2,6-diona e (4S,7R,8S,9S, 13S, 14S,16S)-14-Azido-4,8,13-triidróxi-5,5,7,9-tetrametil-16- ((E)-1 -(2-metiltiazol-4-il)prop-1 -en-2-il)oxacicloexadecano-2,6-diona (12,8 g, 23,85 mmol) em acetonitrilo anidroso (90 mL) foi adicionado trifenilfosfina (9.48 g, 35,77 mmol) sob atmosfera de nitrogênio. A solução clara foi agitada a 20-40°C durante 19-40h. A mistura reacional foi resfriada a 0-5°C durante 3-4h e o produto filtrado. A massa foi lavada com heptano (64 mL) e secada a 40°C sob pressão reduzida durante 15-18h para produzir (1 S.3S.7S, 10Rf 11S112S16R)-7,11 -diidróxi-8,8,10,12-tetrametil-3-((E)-1-(2- metiltiazol-4-il)prop-1 -en-2-il)-4-oxa-17-azabiciclo(14,1,0)heptadecano-5,9- diona como um sólido branco (5,41 g, 46%).
LC-MS: Coluna Phenomenex Luna C8(2): 3 μηι, 4,6 χ 50 mm. Gradiente: 15 min, 0% de B para 100% de B em 10 min, em seguida 100% de B durante 5 min. Fase móvel: A = 0,01 M de NH4OAc em CH3CN/H20 5:95; B = 0,01 M de NH4OAc em CH3CN/H20 95:5, Taxa de fluxo: 3,0 mUmin. Comprimento de onda: UV 250 nm. Tempo de retenção = 4,43 min. MS (ESI) (M+H)+ = 493,68
Esta reação da mesma forma funciona com outras fosfinas co- mo, tricicloexilfosfina, trimetilfosfina, tributilfosfina e tris(4-methoxifenil)- fosfina e outro solvente tetraidrofurano.
Preparação de [1 S-[1 R*,3R*(E),7R*, 10S*,11 R*,12R*, 16S*]]-7,11 -Diidróxi-17- [2-hidroxietil]-8,8,10,12-tetrametil-3-[1-metil-2-(2-metil- 4-tiazolil)etenil]-4-oxa- 17-azabiciclo[14,1,0]heptadecano-5,9-diona
Molecular Weight: 492.67 Exact Mass: 536.29
Molecular Weight: 536.72
Legenda:
- fórmula química
- massa exata
- peso molecular
Et3N (4,95 mL, 35,52 mmol) e 2-bromoetanol (3,02 mL, 42,62 mmol) foram adicionados em (1 S,3S,7S,10R, 11S,12S, 16R)-7,11-diidróxi- 8,8,10,12-tetrametil-3-((E)-1-(2-metiltiazol-4-il)prop-1-en-2-il)-4-oxa-17- azabiciclo[14,1,0]heptadecano-5,9-diona (3,50 g, 7,10 mmol) em acetonitrilo (35 mL) e aquecidos a 72,5°C. Depois de 20 hr, a mistura reacional foi res- inada em temperatura ambiente, concentrada até a secura através da desti- lação à vácuo giratória. O cru foi dissolvido em acetato de etila (50 mL) e misturado com água desionizada (35 mL). A mistura foi extraída com acetato de etila (3 χ 35 mL), secada em NaaSO4, filtrada, concentrada, cristalizada em acetonitrilo (35 mL), lavada com acetonitrilo (2x5 mL), e secada em for- no à vácuo a 45,5°C durante a noite para isolar (1 S,3S,7S,1 OR, 11S, 12S,16R)-7,11 -diidróxi-17-(2-hidroxietil)-8,8,10,12- tetrametil-3-((E)-1-(2-metiltiazol-4-il)prop-1-en-2-il)-4-oxa-17- azabiciclo[14,1,0]heptadecano-5,9-diona como um pó cristalino branco (2,60g, HPLC AP 97,1, 68,2% de rendimento).
LC-MS: Phenomenex C8, 3 μm, 4,6 χ 150mm, gradiente, 10 a 50% de B durante 10 min, e interromper em 20 minutos. (A= 5% de MeCN/hfeO + 0,01 M de NH4OAc; B = 95% de Me0H/H20 + 0,01 M de NH4OAc), taxa de fluxo em 1,0 mL/min, UV 254 nm. Tempo de retenção = 9,43 min. MS (ESI) M+H = 537,21.
Um técnico ordinariamente versado reconhecerá que o Compos- to 3G como preparado por este Exemplo 3 é idêntico ao Composto G como preparado pelo Exemplo 2, e desse modo, o Composto 3G pode ser utilizado para preparar os Compostos Η, I, e J, os métodos de preparação e compos- tos dos quais são descritos no Exemplo 2,
Claims (11)
1. Composto tendo a fórmula X: <formula>formula see original document page 78</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que: K é -O-, -S-, ou -NR7-; A é -(CR8R9)-(CH2)m-Z- em que Z é -(CHR10)-, -C(=0)-, -C(=0)- C(=0)-, -0C(=0)-, -N(Rn)C(=0)-, -SO2-, ou -N(R11)SO2-; B1 é hidroxila ou ciano e R1 é hidrogênio ou B1 e R1 são empre- gados juntos para formar uma ligação dupla; R2, R3, e R5 são, independentemente, hidrogênio, alquila, alquila substituída, arila ou arila substituída; ou R2 e R3 podem ser empregados jun- tamente com o carbono ao qual eles são ligados para formar uma cicloalqui- la opcionalmente substituída; R4 é hidrogênio, alquila, alquenila, alquila substituída, alquenila substituída, arila, ou arila substituída; R6 é hidrogênio, alquila ou alquila substituída; R7, R8, R9, R10, e R11 R12 são independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituída, heterocicloalquila, heterocicloalquila substituída, heteroarila, ou heteroarila substituída; R12 é H, alquila, alquila substituída, ou halogênio; R13 é arila, arila substituída, heteroarila ou heteroarila substituída; e m é O a 6.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que: K é -O-; A é C2.4 alquileno; 00000 B1 é -OH; R2, R3, R4 e R5 são, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior; R6 é hidrogênio ou metila; e R13 é uma heteroarila de 5 ou 6 membros opcionalmente substi- tuída, ou um sal farmaceuticamente aceitável desta.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que R13 é uma opcionalmente substituída tiazolila, piridila, ou oxazolila.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, 2, ou 3, tendo a fórmula X': ou um sal farmaceuticamente aceitável deste,
5. Composto de acordo com a reivindicação 2, tendo a fórmula <formula>formula see original document page 79</formula>
6. Composto de acordo com a reivindicação 5, tendo a fórmula Xb': <formula>formula see original document page 80</formula> Xb'.
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 5 ou 6, em que R6 é hidrogênio.
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 5 ou 6, em que Rô é metila.
9. Uso de Composto de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ou 8, na preparação de um medicamento para tra- tar cêncer em um paciente.
10. Processo para preparar uma composição farmacêutica para liberação de fármaco alvo compreendendo conjugar um composto como em qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ou 8, para um Iigador Ii- berável para formar um composto conjugado.
11. Processo de acordo com a reivindicação 10, em que o com- posto conjugado compreende uma porção de ligação de folato.
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