ES2736106T3 - Anticuerpos que se pueden conjugar mediante la transglutaminasa y conjugados producidos a partir de ellos - Google Patents

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Abstract

Un anticuerpo de longitud completa, en el que al menos una cadena pesada tiene una extensión en el extremo C que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende EEQYASTY (SEQ ID NO: 1), EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2), EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3), EEQYQS (aminoácidos 1 a 6 de SEQ ID NO: 2), EEQYQST (aminoácidos 1 a 7 de SEQ ID NO: 2), EQYQSTY (aminoácidos 2 a 8 de SEQ ID NO: 2), QYQS (aminoácidos 3 a 6 de SEQ ID NO: 6) o QYQSTY (aminoácidos 3 a 8 de SEQ ID NO: 2).

Description

DESCRIPCIÓN
Anticuerpos que se pueden conjugar mediante la transglutaminasa y conjugados producidos a partir de ellos
Campo técnico
La presente invención se refiere a anticuerpos modificados de manera que se pueden conjugar con un resto farmacológico mediante la enzima transglutaminasa, y conjugados producidos a partir de dichos anticuerpos.
Antecedentes de la invención
Un tipo de agente anticáncer que ha atraído un fuerte interés actualmente es un conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) también conocido como un inmunoconjugado. En un ADC, se une covalentemente un agente terapéutico (fármaco) con un anticuerpo cuyo antígeno es expresado por una célula cancerosa. El anticuerpo, por medio de su unión al antígeno, sirve para suministrar el ADC en el cáncer. Una vez allí, la escisión del enlace covalente o la degradación del anticuerpo da como resultado la liberación del agente terapéutico en el sitio del cáncer. Por el contrario, mientras al ADC está circulando en el sistema sanguíneo, el agente terapéutico se mantiene inactivo debido a su enlace covalente con el anticuerpo. Por lo tanto, el agente terapéutico en un ADC puede ser mucho más potente (es decir, citotóxico) que los agentes quimioterápicos habituales debido a su liberación localizada. Por lo tanto, un ADC comprende tres componentes: (1) el anticuerpo, (2) un fármaco, y (3) un enlazador que une covalentemente el anticuerpo y el fármaco. Para una revisión de los ADN, véase Schrama et al.2006.
Una etapa clave en la preparación de un ADC es la etapa de la unión covalente, a la que también se hace referencia como la etapa de conjugación. Se han desvelado muchos métodos para efectuar la conjugación. Uno que ha suscitado un interés sustancial recientemente es la conjugación mediada por transglutaminasa (TGasa), en particular la transglutaminasa bacteriana (BTG). Véase, por ejemplo, Jeger et al. 2010.
La BTG forma un enlace amida entre la cadena lateral carboxamida de la glutamina (el receptor de amina) y el grupo £-amino de una lisina (el donante de amina). De manera específica, la transglutaminasa en selectiva con respecto al resto de glutamina, por ejemplo, necesitando que se localice en una parte flexible de un bucle proteico y esté flanqueado por aminoácidos particulares, pero es promiscua con respecto al resto de lisina, por ejemplo, aceptando fácilmente el grupo amino de un compuesto alquilenoamino como un equivalente del £-amino de la lisina. Véase, Fontana et al. 2008.
En una conjugación mediada por BTG típica, el resto de glutamina se localiza en el anticuerpo, mientras que el grupo amino se localiza en el resto enlazador del fármaco, como se muestra a continuación:
Figure imgf000002_0001
En este esquema, el anticuerpo actúa como un receptor de amina y el resto H2N-[enlazador]-[fármaco] actúa como un donante de amina.
La localización del resto de glutamina en una cadena polipeptídica tiene un gran efecto sobre su susceptibilidad para la transamidación mediada por BTG. Ninguno de los restos de glutamina de un anticuerpo son sustratos normalmente de BTG y son necesarias algunas modificaciones en el anticuerpo para inducir la susceptibilidad a la BTG. Normalmente, un anticuerpo está glicosilado en la asparagina 297 (N297) de la cadena pesada (glicosilación unida a N). Jeger et al. en 2010 descubrieron que la desglicosilación del anticuerpo, sea eliminando el sitio de glicosilación mediante una sustitución N297A o por desglicosilación enzimática tras la traducción, da lugar a una glutamina 295 (Q295) cercana y susceptible a la BTG. También demostraron que una sustitución N297Q no solo elimina la glicosilación, sino que también introduce un segundo resto de glutamina (en la posición 297) que también es un receptor de amina. Por lo tanto, una simple desglicosilación genera dos restos de glutamina reactivos frente a BTG por anticuerpo (uno por cada cadena pesada, en Q295), mientras que un anticuerpo con una sustitución N297Q tendrá cuatro restos de glutamina reactivos a la BTG (dos por cada cadena pesada, en las posiciones Q295 y Q297).
Las divulgaciones relacionadas con la preparación de ADN mediada por transglutaminasa incluyen: Dennler et al.
2014, Innate Pharma 2013, Jeger et al. 2010, Pons et al. 2013, y Strop et al., 2013.
En particular, Pons et al. 2013 desvelan la modificación de un anticuerpo con un marcador que contiene cuatro aminoácidos de glutamina, que se puede localizar en el extremo C de una de sus cadenas, para hacerlo reactivo a la transglutaminasa (también se ha desvelado la unión de marcadores o extensiones en el extremo C de una cadena de anticuerpo en otros contextos, véase, por ejemplo, Liu et al. 2014).
Otras divulgaciones de transglutaminasa, más relativas en general, al marcado o modificación de proteínas (incluyendo anticuerpos), incluyen: Bregeon 2014, Bregeon et al. 2013 y 2014, Chen et al. 2005, Fischer et al. 2014, Kamiya et al. 2011, Lin et al. 2006, Mero et al. 2009, Mindt et al. 2008, Sato 2002, Sato et al. 2001, y Sugimura et al.
2007. WO 2012/059882 A2 desvela conjugados de polipéptidos que contienen Fc modificado que comprende un marcador que contiene una glutamina donante de acilo.
Todas las citas de documentos citados en el presente documento por su primer autor o inventor y año se enumeran al final de la presente memoria descriptiva.
Sumario de la invención
En una realización, la presente invención proporciona un anticuerpo de longitud completa que se ha modificado introduciendo restos de glutamina que son sustratos para la transglutaminasa, especialmente para la BTG, modificando el extremo C de al menos una de sus cadenas pesadas añadiendo a este una extensión que contiene al menos una glutamina que es un sustrato para la transglutaminasa. La extensión tiene una secuencia de aminoácidos que comprende EEQYASTY (SEQ ID NO: 1), EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2), EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3), EEQYQS (aminoácidos 1 a 6 de SEQ ID NO: 2), EEQYQST (aminoácidos 1 a 7 de SEQ ID NO: 2), EQYQSTY (aminoácidos 2 a 8 de SEQ ID NO: 2), QYQS (aminoácidos 3 a 6 de SEQ ID NO: 6), o QYQSTY (aminoácidos 3 a 8 de SEQ ID NO: 2).
Preferentemente, la extensión tiene una secuencia de aminoácidos que comprende EEQYASTY (SEQ ID NO: 1), EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2), o EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3).
Los inventores también han descubierto que las variantes recortadas o protegidas de algunas extensiones del extremo C también tienen glutaminas reactivas. Dichas variantes recortadas se ejemplifican por EEQYQS (aminoácidos 1 a 6 de SEQ ID NO: 2), EEQYQST (aminoácidos 1 a 7 de SEQ ID NO: 2), Eq Yq STY (aminoácidos 2 a 8 de SEQ ID NO: 2), QYQS (aminoácidos 3 a 6 de SEQ ID NO: 6), o QYQSTY (aminoácidos 3 a 8 de SEQ ID NO: 2). Parece que las secuencias recortadas necesitan presente una serina (aminoácido 6 de la SEQ ID NO: 2) con el fin de que la glutamina sea reactiva.
En otra realización, se proporciona un método de producción de un conjugado anticuerpo-fármaco, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un anticuerpo de longitud completa, en el que al menos una de cuyas cadenas pesadas tiene una extensión del extremo C que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende EEQYASTY (SEQ ID NO: 1), EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2), o EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3);
(b) proporcionar un donante de amina de fórmula
NH2-X-D,
en el que D representa un fármaco y X representa un grupo enlazador bivalente que conecta el fármaco D y el grupo amino NH2.
(c) poner en contacto el anticuerpo y el donante de amina en presencia de transglutaminasa; y
(d) permitir que el anticuerpo y el donante de amina formen el conjugado anticuerpo-fármaco mediante la formación de un enlace amida entre una glutamina de la extensión del extremo C y el grupo amino NH2 del resto donante de amina.
La presente invención proporciona adicionalmente otro método de producción del conjugado anticuerpo-fármaco, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un anticuerpo de longitud completa, en el que el anticuerpo se ha modificado añadiendo al menos a una de sus cadenas pesadas una extensión del extremo C que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende EEQYASTY (SEQ ID NO: 1), EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2), o EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3); (b) proporcionar un donante de amina de fórmula
NH2-X1-R1,
en la que R1 representa un primer grupo funcional reactivo que es un grupo azida, un grupo dibenzoazaciclooctina, un grupo maleimida, un grupo tiol, un grupo hidroxilamina, o un grupo cetona, y X1 representa un enlazador bivalente que conecta el grupo funcional reactivo R1 y un grupo amino NH2.
(c) poner en contacto el anticuerpo y el donante de amina en presencia de transglutaminasa;
(d) permitir que el anticuerpo y el donante de amina formen un anticuerpo modificado que tiene unido al mismo un primer grupo funcional reactivo R1, mediante la formación de un enlace amida entre una glutamina de la extensión del extremo C y el grupo amino NH2 del donante de amina;
(e) poner en contacto el anticuerpo modificado con un fármaco que contenga el resto de fórmula
R2-X-D,
en la que R2 es un segundo grupo funcional reactivo que reacciona covalentemente con el primer grupo funcional reactivo R1, D es un fármaco, y X es un enlazador bivalente que conecta el fármaco D y el segundo grupo funcional reactivo R2; en el que R2 es un grupo dibenzoazaciclooctina cuando R1 es un grupo azida, R2 es un grupo azida cuando R1 es un grupo dibenzoazaciclooctina, R2 es un grupo tiol cuando R1 es un grupo maleimida, R2 es un grupo maleimida cuando R1 es un grupo tiol, R2 es un grupo cetona cuando R1 es un grupo hidroxilamina, o R2 es un grupo hidroxilamina cuando R1 es un grupo cetona; y
(f) permitir que el primer y segundo grupos funcionales reactivos R1 y R2 reaccionen para formar el conjugado anticuerpo-fármaco.
En otra realización, la presente invención proporciona un conjugado anticuerpo-fármaco en el que el anticuerpo está unido covalentemente a un resto del fármaco mediante un enlace amida en la cadena lateral de un resto de glutamina en una extensión del extremo C de una cadena pesada del anticuerpo, teniendo la extensión del extremo C una secuencia de aminoácidos que comprende EEQyAsTY (SEQ ID NO: 1), EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2), o EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3). Preferentemente, el anticuerpo es un anticuerpo anti-CD70 o anti-mesotelina. Preferentemente, el resto del fármaco es un enlazador de agrupamiento menor de ADN (especialmente que también alquile el ADN mediante su unión) o un análogo de tubulisina.
Breve descripción de los dibujos
Las Fig. 1a y 1b muestran, en combinación, un esquema para la síntesis del donante de amina (A).
La Fig. 2 muestra la actividad de un conjugado, producido por el procedimiento de conjugación de una etapa. La Fig. 3 compara las actividades de dos conjugados producidos mediante el procedimiento de conjugación de dos etapas.
Descripción de las reivindicaciones
Los anticuerpos del isotipo IgG1 contienen en su región constante de la cadena pesada, en las posiciones 297-300, la secuencia de aminoácidos EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3, con la numeración EU como en Kabat). Como se ha expuesto anteriormente, el resto de glutamina Q295 no es un sustrato de transglutaminasa a menos de que esté ausente el grupo glicósido unido normalmente en la posición 297, sea por retirada enzimática o produciendo por modificación genética una sustitución de N297 para evitar la formación del enlace de glicósido unido a N.
Los inventores han descubierto que si la secuencia EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3), está unida a un extremo C de una cadena pesada de un anticuerpo como una extensión del mismo, el resto de glutamina es un sustrato para la transglutaminasa, haciendo que el anticuerpo modificado de esta manera sea susceptible de la conjugación mediada por transglutaminasa. Además, los inventores han descubierto que las variantes de esta secuencia EEQYASTY (SEQ ID NO: 1) y EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2) son eficaces de manera similar. En la última, se ha descubierto que ambos restos de glutamina son reactivos a la transglutaminasa.
Se hace referencia al número de restos del fármaco unidos al anticuerpo en un ADC como la relación fármacoanticuerpo, o DAR. En el caso de un anticuerpo en el que cada cadena pesada tiene una extensión en el extremo C que tenga una secuencia de aminoácidos que comprenda EEQYASTY (SEQ ID NO: 1) o EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3), la DAR máxima teórica es 2, con un resto del fármaco unido a cada cadena pesada. En el caso de un anticuerpo en el que cada cadena pesada tiene una extensión del extremo C que tenga una secuencia de aminoácidos que comprenda EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2), la DAR teórica es 4, con un resto del fármaco unido a cada resto de glutamina de cada una de las extensiones. Los expertos en la técnica apreciarán que la reacción de conjugación no siempre es un 100 % eficaz, y que se puede obtener un número menor para una preparación de ADC determinada, por ejemplo, una DAR medida de 1,7 cuando el máximo teórico es 2, o una DAR medida de 3,5 cuando el máximo teórico es 4.
Preferentemente, el anticuerpo que se utiliza en la presente invención es un anticuerpo de longitud completa que tiene dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas ligeras idénticas (kappa o lambda). Preferentemente, ambas cadenas pesadas tienen una extensión del extremo C de acuerdo con la invención Preferentemente, el anticuerpo es del isotipo IgG1. Más preferentemente, el anticuerpo tiene una región constante de cadena pesada que es una variante de la IgG1 que tiene una secuencia de aminoácidos de acuerdo con la SEQ ID NO: 4. Esta variante tiene el alotipo R214/E356/M358 y opcionalmente tiene el extremo C K447 recortado después de la traducción (según la numeración por EU como en Kabat). El anticuerpo preferentemente es un anticuerpo monoclonal, más preferentemente, un anticuerpo monoclonal humano.
Los inventores han descubierto que cuando el anticuerpo tiene una lisina en el extremo C, tal como ocurre en los anticuerpos nativos, la lisina puede actuar como un donante de amina y entrecruzarse con las cadenas pesadas del anticuerpo. Por lo tanto, puede ser deseable escindir la lisina del extremo C. También, cuando se produce un anticuerpo de manera recombinante, algunos de los restos de lisina de la cadena del extremo C de cadena pesada (aminoácido 47 en la FIG. 2) a menudo se retiran durante las etapas de expresión o purificación mediante las enzimas de la célula huésped de producción, dando lugar a un producto heterogéneo (con ambas lisinas presentes, una lisina retirada, o ambas lisinas retiradas). Esta heterogeneidad es indeseable. Para obtener un producto más homogéneo, ambas lisinas se pueden retirar intencionadamente, sea mediante un tratamiento enzimático adicional del producto inicial o eliminando el codón de la lisina del extremo C de la secuencia de nucleótidos utilizada para la expresión recombinante. McDonough et al. 1992. Las variantes de anticuerpo con las sustituciones de cisteína desveladas en el presente documento que carecen de restos de lisina en el extremo C de la cadena pesada también están dentro del alcance de la presente invención. Las variantes de anticuerpo en las que se han eliminado tanto la glicina como la lisina del extremo C también se conocen y se incluyen en el alcance de la presente invención.
Una transglutaminasa preferida para su uso en la presente invención es una BTG de Streptomyces mobaraensis, que está disponible en el mercado y se puede preparar de manera recombinante.
Los anticuerpos que tienen la extensión del extremo C de la presente invención se pueden conjugar mediante un procedimiento en una o dos etapas.
Esquemáticamente, una conjugación en una etapa se puede representar de la siguiente manera, utilizando, a modo de ilustración, un anticuerpo con extensiones del extremo C que tienen una glutamina (es decir, de acuerdo con las SEQ ID NO: 1 o NO: 3).
Figure imgf000005_0001
El donante de amina se puede representar por la fórmula (I)
H2N-X-D (I)
donde D es un fármaco y X es un enlazador bivalente que conecta el fármaco D y el grupo amino H2N reactivo con la transglutaminasa.
El enlazador X puede comprender cadenas de alquileno y cadenas de polietilenglicol solas o en combinación, como se ilustra a continuación:
Figure imgf000005_0002
y combinaciones de las mismas, en el que el subíndice g es 0 o 1 y el subíndice h es de 1 a 24, preferentemente de 2 a 4. Estos segmentos se pueden combinar, tal como se ilustra a continuación:
Figure imgf000006_0001
El enlazador X puede contener también un grupo escindible, para la liberación del fármaco D del conjugado después de alcanzar el sitio diana. Ejemplos de grupos escindibles incluyen disulfuros (escisión mediante intercambio de disulfuros), hidrazonas (escisión a pH bajo), y péptidos (escisión enzimática). De manera alternativa, si no está presente un grupo escindible, la liberación del fármaco D del conjugado puede producirse mediante catabolismo del anticuerpo.
También, el enlazador X contiene un grupo auto-inmolante, como se describe adicionalmente posteriormente en el presente documento.
Las realizaciones preferidas del resto donante de amina (I), que tiene un péptido escindible, se representan por la fórmula (Ia) a (Ic):
Figure imgf000006_0002
en las que
D es un fármaco;
AAay cada uno de AAb se seleccionan independientemente de entre el grupo que consiste en alanina, p-alanina, ácido Y-aminobutírico, arginina, asparagina, ácido aspártico, ácido Y-carboxiglutámico, citrulina, cisteína, ácido glutámico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, norleucina, norvalina, ornitina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, y valina;
p es 1, 2, 3, o 4;
T es un grupo auto-inmolante; y
t es 0 o 1.
En las fórmulas (la), (Ib), y (Ic), -AAa-[AAb]p- representa un polipéptido cuya longitud se determina por el valor de p (dipéptido si p es 1, tetrapéptido si p es 3, etc.). AAa está en el extremo carboxilo del polipéptido. Por el contrario, el último AAb está en el extremo amino del polipéptido. Los polipéptidos -AAa-[AAb]p- preferidos son Val-Cit, Val-Lys, Lys-Val-Ala, Asp-Val-Ala, Val-Ala, Lys-Val-Cit, Ala-Val-Cit, Val-Gly, Val-Gln, y Asp-Val-Cit, escritos en la dirección convencional de N a C, como en H2N-Val-Cit-CO2H). Más preferentemente, el polipéptido es Val-Cit, Val-Lys, o Val-Ala. Preferentemente, un polipéptido -AAa-[AAb]p- es escindible por una enzima que se encuentra dentro de la célula diana (cancerosa), por ejemplo, una catepsina y especialmente la catepsina B.
Como se indica por el subíndice t igual a 0 o 1, un grupo auto-inmolante T está presente opcionalmente en los donantes de amina (la), (Ib) y (Ic). Cuando está presente, un grupo auto-inmolante proporciona una separación especial entre el fármaco D y el polipéptido, para evitar que el fármaco D interfiera de manera estérica con una escisión enzimática del polipéptido para liberar el fármaco. El grupo auto-inmolante T preferentemente es un grupo p-aminobencil oxicarbonilo (PABC), cuya estructura se muestra a continuación, señalando con un asterisco (*) el final del PABC unido a un nitrógeno de amina del fármaco D y una línea ondulante (™ -~ ) que señala el extremo unido al polipéptido -AAa-[AAb]p-.
Figure imgf000007_0001
Esquemáticamente, el procedimiento de dos etapas se puede representar de la siguiente manera, utilizando de nuevo a modo de ilustración un anticuerpo que tiene extensiones en el extremo C que tienen cada una glutamina:
Figure imgf000007_0002
En este esquema, X1 y X son enlazadores, D es el resto del fármaco, y R1 y R2 son grupos funcionales reactivos complementarios que reaccionan covalentemente entre ellos para formar (R1R2), completando la formación del ADC. Los componentes del enlazador X se han descrito anteriormente en el contexto del procedimiento de una etapa. El enlazador X1 puede comprender cadenas de alquileno y poli(etilenglicol), como se ha descrito anteriormente para el enlazador X.
Ejemplos de emparejamientos de los grupos funcionales reactivos R1 y R2 y su producto de reacción (R1R2) se muestran en la Tabla I a continuación.
Figure imgf000008_0001
Por lo tanto, se contemplan los siguientes emparejamientos de los grupos funcionales reactivos R1 y R2 de la Tabla I: (a) el primer grupo funcional reactivo R1 es un grupo azida y el segundo grupo funcional R2 es un grupo dibenzoazaciclooctina;
(b) el primer grupo funcional reactivo R1 es un grupo dibenzoazaciclooctina y el segundo grupo funcional R2 es un grupo azida;
(c) el primer grupo funcional reactivo R1 es un grupo maleimida y el segundo grupo funcional R2 es un grupo tiol; (d) el primer grupo funcional reactivo R1 es un grupo tiol y el segundo grupo funcional R2 es un grupo maleimida; (e) el primer grupo funcional reactivo R1 es un grupo cetona y el segundo grupo funcional R2 es un grupo hidroxilamina;
(f) el primer grupo funcional reactivo R1 es un grupo hidroxilamina y el segundo grupo funcional R2 es un grupo cetona.
Como los ADC se utilizan normalmente en el tratamiento del cáncer, el fármaco es preferentemente un fármaco citotóxico que produce la muerte de la célula direccionada. Los fármacos citotóxicos que se pueden utilizar en ADC incluyen los siguientes tipos de compuestos y sus análogos y derivados:
(a) enedinas tales como caliqueamicina (véase, por ejemplo, Lee et al., J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 3464 y 3466) y uncialamicina (véase, por ejemplo, Davies et al., documento WO 2007/038868 A2 (2007) y Chowdari et al., documento US 8.709.431 B2 (2012));
(b) tubulisinas (véase, por ejemplo, Domling et al., documento US 7.778.814 B2 (2010); Cheng et al., US 8.394.922 B2 (2013); y Cong et al., documento US 2014/0227295 A1 (2014);
(c) unidores/alquilantes de agrupamientos menores de ADN, tales como CC-1065 y duocarmicina (véase, por ejemplo, Boger, US 6.5458.530 B1 (2003); Sufi et al., US 8.461.117 B2 (2013); y Zhang et al., US 2012/0301490 A1 (2012));
(d) epotilones (véase, por ejemplo, Vite et al., documento US 2007/0275904 A1 (2007) y documento US RE42930 E (2011));
(e) auristatina (véase, por ejemplo, Senter et al., US 6.844.869 B2 (2005) y Doronina et al., documento US 7.498.298 B2 (2009));
(f) dímeros de pirrolobenzodiacepina (PBD) (véase, por ejemplo, Howard et al., documento US 2013/0059800 A1(2013); documento US 2013/0028919 A1 (2013); y documento WO 2013/041606 A1 (2013)); y
(g) maitansinoides tales como DM1 y DM4 (véase, por ejemplo, Chari et al., documento US 5.208.020 (1993) y Amphlett et al., documento US 7.374.762 B2 (2008)).
Por lo tanto, el resto del fármaco D puede ser una enedina, una tubulisina, un unidor/alquilante de agrupamientos menores de ADN, una epotilona, una auristatina, una pirrolobenzodiacepina, o un maitansinoide, o un análogo o derivado de los mismos. Un resto de fármaco D preferido es un unidor/alquilante del agrupamiento menor de ADN.
Un donante de amina a modo de ejemplo diseñado para utilizarse en el procedimiento de conjugación de una etapa se muestra a continuación:
Figure imgf000009_0001
En un compuesto (A) el fármaco es un CC-1065/análogo de duocarmicina, que se une al agrupamiento menor de ADN y entonces alquila el ADN. El enlazador contiene un dipéptido valina-citrulina (Val-Cit), que es un sustrato para la enzima lisosómica catepsina B, haciendo posible la escisión del enlazador para liberar el fármaco del ADC.
La práctica de la presente invención se puede entender adicionalmente en referencia a los siguientes ejemplos que se proporcionan a modo de ilustración.
Ejemplo 1 - Anticuerpos con extensiones en el extremo C
Se modificó un vector de expresión para la cadena pesada del anticuerpo anti-CD70 1F4 (Coccia et al. 2010) remplazando la secuencia de nucleótido original que codifica la región constante de la cadena pesada con uno modificado que incluyen una extensión EEQYASTYR en el extremo C (SEC ID NO: 5). El vector de expresión modificado de esta manera se co-transfectó junto con un vector de expresión para la cadena ligera (kappa) 1F4 en células CHO-S. Los clones estables se seleccionaron en cuanto a la producción del anticuerpo 1F4 que tenía la región constante de cadena pesada de acuerdo con la SEQ ID NO: 6, que a su vez da lugar a un anticuerpo 1F4 que tiene una extensión EEQYASTY (SEQ ID NO: 1) en el extremo C después de cortarse la arginina terminal tras la traducción (“anti-CD70-a”).
De manera análoga, se utilizó la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 7 para producir un anticuerpo 1F4 con una región constante de cadena pesada de acuerdo con la SEQ ID NO: 8, que da lugar a un anticuerpo 1F4 con una extensión EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2) después del corte tras la traducción de la arginina terminal (“anti-CD70-b”). Se preparó de manera similar el anticuerpo 6A4 anti-mesotelina (Terret et al. 2012) que tenía o una extensión EeQyAsTY (SEQ ID NO: 1) o EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2) en el extremo C de la cadena pesada, mutatis mutandis.
Ejemplo 2 - Conjugación mediada por transglutaminasa
Los procedimientos representativos para la conjugación mediante métodos de una etapa y dos etapas se describen a continuación.
Método 1 (Procedimiento de una etapa): Se hizo reaccionar el anticuerpo, a ~ 2 mg/ml, en 50 mM de Tris-HCl, pH 8,0, con un exceso de 10 veces molares por sitio de donante de amina en presencia de 3 Unidades de transglutaminasa bacteriana recombinante por mg de anticuerpo. Se permitió que la reacción progresara durante 5 h a 37 °C con un mezclado suave continuo.
El conjugado se filtró en 0,2 mm antes de la purificación cromatográfica por intercambio catiónico. Se regeneró una columna de intercambio catiónico (CEX) SP Sepharose de Altas prestaciones con 5 VC (volúmenes de columna) de 50 mM de HEPES, 5 mM de Glicina, 1 M de NaCl, pH 5,5 (Tampón B). A continuación de la regeneración, la columna se equilibró con 3 VC de tampón de equilibrado, 50 mM de HEPES, 5 mM de Glicina, pH 5,5 (Tampón A). El conjugado se cargó y se lavó la columna una vez con el tampón de equilibrado. El conjugado se eluyó con un gradiente lineal desde 0-100 % de B sobre 6 VC. El eluído se recolectó en fracciones y se analizó por SDS-PAGE y análisis de Western.
Método 2 (Procedimiento de dos etapas): El anticuerpo que tenía una extensión en el extremo C, a ~2 mg/ml, en PBS, pH 7,4, se hizo reaccionar con un exceso de 20 veces molar por glutamina reactiva a transglutaminasa con O-(2-aminoetil-O'-(2-azidoetil))pentaetilenglicol (Sigma Aldrich) en presencia de 3 Unidades de transglutaminasa bacteriana recombinante por mg de anticuerpo, durante una noche a 37 °C con mezclado suave continuo.
El anticuerpo modificado con azido (azido-mAb) se purificó utilizando una columna SuRe mAbSelect (GE Healthcare) y entonces se cargó en una columna pre-equilibrada con 1x PBS, pH 8,0. El azido-mAb se eluyó de la columna con 25 mM de glicina, 10 mM de ácido succínico, pH 5,0. El eluído se recolectó en fracciones y se analizó por SDS-PAGE.
El azido-mAb A se dializó en PBS, pH 7,4 y se concentró a 4 mg/ml. El azido-mAb se hizo reaccionar con un compuesto enlazador de fármaco que tenía un grupo dibenzocilooctina (DIBO) con un exceso de 5x por grupo azida. La reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 4 h. El conjugado se filtró a 0,2 mm y se hizo un intercambio de tampón a un tampón de formulación (con un volumen de 6x) (20 mg/ml de sorbitol, 10 mg/ml de glicina, pH 5,0). El volumen formulado se filtró mediante un filtro PES de 0,2 mm en tubos estériles y se almacenó a -80 °C.
Los expertos en la técnica apreciarán que el procedimiento de dos etapas se ilustró con azida y DIBO como grupos funcionales reactivos complementarios, pero se pueden utilizar otros grupos funcionales reactivos complementarios, mutatis mutandis.
Ejemplo 3 - Síntesis de un donante de amina (A)
Compuesto 3. A una solución de ácido 4-nitrobenzoico 1 (Aldrich, 2,36 g, 14,12 mmol) en acetonitrilo (50 ml) se añadió carbonato potásico (1,952 g, 14,12 mmol) seguido por (bromometil)benceno 2 (Aldrich 1,848 ml, 15,53 mmol) en agua. Después de agitar a 60 °C durante una noche, se enfrió la reacción a temperatura ambiente (TA) y se concentró para retirar el acetonitrilo. El sólido blanco resultante se disolvió en 100 ml de agua y 50 ml de acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro, y se concentró al vacío. El resto se suspendió en tolueno ( 2 x 8 ml) y se concentró al vacío para dar el 4-nitrobenzoato de bencilo bruto 3 (3, 3,86 g, 15,01 mmol, 106% de rendimiento) como un sólido blanco. 1HNMR (CDCh) 8 8.26(m, 4H), 7.44(m, 5H), 5.42(s, 2H).
Compuesto 4. A una solución de 4-nitrobenzoato de bencilo (3, 3,76 g, 14,62 mmol) en acetona (40 ml) a 0 °C se añadió polvo de zinc (4,78 g, 73,1 mmol) seguido por una solución de cloruro amónico (7,82 g, 146 mmol) en agua. Después del agitado a TA durante 1 h, la reacción se filtró a través de un medio de filtro CELITE™ y se concentró al vacío. El resto se suspendió en acetato de etilo, se lavó con agua seguido por salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro, y se concentró al vacío. El resto se purificó por cromatografía flash utilizando una columna Isco de 80 g con un 0-50 % de acetato de etilo/hexanos para dar 4-aminobenzoato de bencilo 4 (2,93 g, 12,89 mmol, 88 % de rendimiento) como un sólido blanco. 1HNMR (CDCla) 87.91(d, 2H), 7.30-7.41(m, 5H), 6.65(d, 2H), 5.33(s, 2H), 4.12(s, 2H); MS(ESI) m/z 228 (M+H)+.
Compuesto 6. Se cargó un matraz de 200 ml con 4-aminobenzoato de bencilo 4 (3,6 g, 15,84 mmol), ácido (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-5-ureidopentanoico 5 (Chem-Impex, 5,25 g, 13,20 mmol), HOBt hidrato (Aldrich, 3,03 g, 19,80 mmol), y EDC (ACT, 3,54 g, 18,48 mmol). El matraz se purgó con nitrógeno y se añadió diclorometano (DCM, 20 ml) seguido por DMF (5 ml). Entonces se añadió cloruro de cobre (II) (Aldrich, 2,130 g, 15,84 mmol) para dar una solución homogénea marrón oscura. Después de agitar a TA durante 4 h, se añadió un lo mismo de HOBt y EDC. Se continuó con el agitado a TA durante una noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el resto se dividió en dos lotes que se purificaron por separado mediante cromatografía de flash utilizando una columna Isco de 120 g eluyéndola con un 0-10 % de metanol/DCM. El producto así obtenido se disolvió en THF mínimo, se diluyó con acetato de etilo, y se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío. El sólido resultante se trituró con acetato de etilo para dar el compuesto 6 (3,34 g, 5,51 mmol, un 41,7 % de rendimiento) como un sólido amarillo. MS(ESI) m/z 607 (M+H)+.
Compuesto 7. A una solución de compuesto 6 (3,34 g, 5,51 mmol) en THF (20 ml) a TA se añadió piperidina (2,73 ml, 27,5 mmol). Después del agitado a TA durante 60 min, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía de flash utilizando una columna Isco de 80 g eluyéndola con un 0-20 % de metanol/DCM para dar el compuesto 7 (2,24 g, 5,83 mmol, un 106% de rendimiento) como un sólido blanco. MS(ESI) m/z 385 (M+H)+.
Compuesto 9. Se cargó un matraz de 50 ml con el compuesto 7 (268 mg, 0,697 mmol), compuesto 8 (TCI, 355 mg, 1,046 mmol), y EDC (ACT, 200 mg, 1,046 mmol). El matraz se purgó con nitrógeno y se añadieron DCM (5 ml) seguido por DMF (1 ml). Después del agitado a TA durante 1 h, la reacción se completó y la mezcla de reacción había solidificado. La mezcla de reacción se concentró para retirar el DCM, se diluyó con acetato de etilo, y se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, un 10 % de solución acuosa de cloruro de litio, y luego con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico de nuevo. La capa orgánica se filtró entonces para dar el compuesto 9 en bruto (443 mg, 0,628 mmol, un 90 % de rendimiento) que había precipitado como un sólido blanco. MS(ESI) m/z 706 (M+H)+.
Compuesto 10. A una solución del compuesto 9 (0,44 g, 0,623 mmol) en THF (5 ml) a TA se añadió piperidina (Aldrich, 0,309 ml, 3,12 mmol). Después de agitarlo a TA durante 60 min, la mezcla de reacción había solidificado y se añadieron otros 5 ml de THF. Después del agitado a TA durante 2 h adicionales, la reacción se concentró al vacío. El resto se suspendió en un 10 % de metanol/DCM y se filtró para dar el compuesto 10 en bruto (245 mg, 0,507 mmol, un 81 % de rendimiento). El filtrado se concentró al vacío y el resto se purificó mediante cromatografía de flash utilizando una columna Isco de 40 g eluyéndola con un 0-20 % de metanol/DCM para dar el compuesto 10 (65 mg, 0,132 mmol, un 21 % de rendimiento) como un sólido blanco. 1HNMR (DMSO) 8 7,7-8,1(m, 5h ), 7,30-7,49(m, 5H), 5,58(s, 1H), 5,34(s, 2H), 4,32(t, 1H), 3,61(s, 1H), 2,98(m, 2H), 1,62-1,93(m, 3H), 1,43(m, 2H), 0,92 (dd, 6H); MS(ESI) m/z 484 (M+H)+.
Compuesto 12. A una solución del compuesto 11 (Aldrich, 1,5 g, 5,41 mmol) en DCM (20 ml) a 0 °C se añadió DIPEA (Aldrich, 1,889 ml, 10,82 mmol) y luego cloruro de 2-bromoacetilo (Aldrich, 0,495 ml, 5,95 mmol). Después del agitado a 0 °C durante 10 min, el baño de enfriamiento se retiró y se agitó continuamente a TA durante 1 h, La mezcla de reacción se inactivó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico y se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron al vacío. El resto se purificó mediante cromatografía de flash utilizando una columna Isco de 40 g eluyéndola con un 0-70 % de acetato de etilo/hexanos para dar el compuesto 12 (1,15 g, 2,89 mmol, un 53,4% de rendimiento) como un aceite naranja.
1HNMR (CDCla) 7,00(b, 1H), 3,91(s, 2H), 3,50-3,71(m, 14H), 2,54(t, 2H), 1,46(s, 9H).
Compuesto 13. Una mezcla del compuesto 10 (300 mg, 0,620 mmol), compuesto 12 (297 mg, 0,744 mmol), yoduro potásico (Aldrich, 103 mg, 0,620 mmol) y DIp Ea (Aldrich, 0,217 ml, 1,241 mmol) en DMF (3 ml) se agitó a 40 °C durante 6 h. Después del enfriamiento a TA, la reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó sucesivamente con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, un 10% de cloruro de litio acuoso, y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El resto se purificó mediante cromatografía de flash utilizando una columna Isco de 40 g eluyéndola con un 0-10 % de metanol/DCM para dar el compuesto 13 (336 mg, 0,420 mmol, un 67,6 % de rendimiento) como un aceite amarillo. MS(ESI) m/z 801 (M+H)+. Compuesto 14. A una solución del compuesto 13 (0,33 g, 0,412 mmol) en dioxano (5 ml) se añadió HCl 4 N en dioxano (10 ml). Después de agitar a Ta durante 1 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío para dar el producto 14 en bruto como un aceite transparente viscoso que se utiliza directamente sin purificación.
Compuesto 15. Se cargó un matraz de 50 ml con el compuesto 14 (307 mg, 0,412 mmol), tert-butil(2-aminopentanil) carbamato (Chem-Impex, 100 mg, 0,494 mmol), y BOP (Chem-Impex, 237 mg, 0,536 mmol). El matraz se purgó con nitrógeno y se añadieron DMF (2 ml) y DIPEA (0,180 ml, 1,030 mmol). Después de agitarlo a TA durante 1 h, se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo, y se lavó sucesivamente con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, un 10 % de solución de cloruro de litio, y solución acuosa saturada de bicarbonato sódico de nuevo. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y concentró al vacío. El resto se purificó mediante cromatografía de flash utilizando una columna Isco de 40 g eluyéndola con un 0-10% de metanol/DCM para dar el compuesto 15 (261 mg, 0,281 mmol, un 68,2 % de rendimiento) como una espuma transparente. MS(ESI) m/z 929 (M+H)+.
Compuesto 16. Una solución del compuesto 15 (261 mg, 0,281 mmol) y un 10 % de Pd/C (Aldrich, 1,495 mg, 0,014 mmol) en MeOH (3 ml) se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno (en un globo) durante 2 h. El vaso de reacción se aclaró con nitrógeno y se añadió medio de filtro CELITE™. La mezcla se filtró a través de una placa fina de medio de filtro CELITE™ y se lavó con metanol. El filtrado se concentró y el producto en bruto se purificó mediante cromatografía de flash utilizando una columna Isco de 40 g eluyéndola con un 0-20 % de metanol/DCM. El aceite resultante se liofilizó a partir de acetonitrilo/agua para dar el compuesto 16 (206 mg, 0,238 mmol, un 85 % de rendimiento) como un sólido blanco. 1HNMR (DMSO) 88,21(t, 1H), 7,92(d, 2H), 7,80(t, 1H), 7,75(d, 2H), 6,75(t, 1H), 6,03(t, 1H), 5,45(s, 2H), 4,51(t, 1H), 2,81-3,65(m, 25H), 2,30(t, 2H), 162-1,89(m, 8H), 1,35(s, 9H), 1,24(t, 2H), 0,92(dd, 6H); MS(ESI) m/z 839 (M+H)+.
Compuesto 18. A una solución del compuesto 16 (35 mg, 0,042 mmol), 2-(3H-[1,2,3]triazol[4,5-b] piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilsouroniohexafluorofosfato (V) (HATU, Oakwood, 12,69 mg, 0,033 mmol) en DMF (1 ml), se añadió DIPEA para ajustar el pH por encima de 8. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 min. A esto se añadió el compuesto 17 (documento US 8.852.599; 19,68 mg, 0,042 mmol). Se añadió DIPEA adicional para ajustar el pH de la mezcla de reacción por encima de 8. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 30 min. El análisis de HPLC mostraba que la reacción estaba completada. La mezcla de reacción se 56 purificó mediante una HPLC de preparación con un 10-65% de acetonitrilo en agua (con un 0,1 % de TFA, 20 ml/min) sobre una columna Phenomenex Gemini 5m, C18 150x21,2 mm. Las fracciones que contenían el producto esperado se combinaron y se secaron por congelación para dar el compuesto 18 (21 mg, 0,016 mmol, un 49,34 %) MS(ESI) m/z 1292 (M+H)+. Donante de amina (A). A una solución del compuesto 18 (21 mg) en DCM (1 ml), se añadió TFA (1 ml). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 30 min, se concentró y purificó mediante HPLC de preparación con un 10-65 % de acetonitrilo en agua (con un 0,1 % de TFA, 20 ml/min) en columna Phenomenex Gemini 5m, C18150x21,2 mm. Las fracciones que contenían el producto esperado se combinaron y se congelaron por congelación para dar el donante de amina (A) (16 mg, 0,013 mmol, un 81,3 %). 1HNMR (DMSO) 811,95(s, 1H), 10,54(s, 1H), 10,18(s, 1H), 8,85(s, 1H), 8,36(s, 1H), 8,31(s, 1H), 7,20-8,31(m, 12H), 6,23(s, 1H), 5,48(s, 1H), 3,99-4,95(m, 7H), 2,10-3,99(m, 28H), 1,28-1,85(m, 8H), 0,92(dd, 6H); MS(ESI) m/z 1192 (M+H)+.
Ejemplo 3 - Actividad del conjugado producido mediante el procedimiento de una etapa
La Fig. 2 muestra la actividad de un conjugado producido por el proceso de conjugación de una etapa. El anticuerpo era el anticuerpo CD70-b (véase el Ejemplo 1 anteriormente), que tiene una extensión EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2) en el extremo C y el fármaco era el donante de amina (A) (véase el Ejemplo 3 anterior). La DAR era 3,9. La actividad se ensayó contra las células 786-O, una línea celular del carcinoma renal humano que expresa CD70, en un modelo tumoral de ratón SCID. Como muestran los trazos, el conjugado era eficaz en la supresión del crecimiento tumoral.
Ejemplo 4 - Actividad de los conjugados producidos por el procedimiento de dos etapas
El anticuerpo CD70-a (véase el Ejemplo 1 anterior), que tiene una extensión EEQYASTY (SEQ ID NO: 1) en el extremo C, se conjugó con un análogo de tubulisina como fármaco, utilizando un procedimiento de dos etapas. Los análogos de tubulisina adecuados se describen en Cheng et al., documento US 8.394.922 B2 (2013); y Cong et al., documento US 2014/0227295 A1 (2014). El par complementario de grupos funcionales reactivos eran una azida como R1 y ciclooctina como R2 La DAR era 1,8.
De manera análoga, se modificó el anticuerpo anti-mesotelina 6A4 (Terrett et al. 2012) con una extensión EEQYASTY (SEQ ID NO: 1) en el extremo C y entonces se conjugó con el mismo análogo de tubulisina del procedimiento de dos etapas, para dar lugar a un conjugado con una DAR de 1,6.
La eficacia de los dos conjugados se ensayaron contra células N87, una línea de cáncer gástrico que expresa mesotelina, pero no CD70. Los resultados se muestran en la Fig. 3. El conjugado CD70 era mucho menos eficaz contra las células N87, como se podía esperar debido a que no expresan CD70.
El alcance de la invención se define por las reivindicaciones adjuntas.
Referencias
Las citas completas de las siguientes referencias citadas de manera abreviada por el primer autor (o inventor) y la fecha anteriormente en la presente memoria descriptiva se proporcionan a continuación.
Bregeon et al., documento US 2013/0189287 A1 (2013).
Bregeon, documento WO 2014/202773 A1 (2014).
Bregeon et al., documento WO 2014/202775 A1 (2014).
Chen et al., documento US 2005/0136491 A1 (2005).
Coccia et al., documento US 2010/0150950 A1 (2010).
Dennler et al., Bioconjug. Chem. 2014, 25, 569-578.
Fischer et al., documento WO 2014/072482 A1 (2014).
Fontana et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 2008, 60, 13-18.
Innate Pharma, "A New Site Specific Antibody Conjugation Using Bacterial Transglutaminase," presentación en el ADC Summit, San Francisco, California, oct. 15, 2013.
Jeger et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 9995.
Kamiya et al., documento US 2011/0184147 A1 (2011).
Lin et al., J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 4542-4543.
Liu et al., documento US 8.865.875 B2 (2014).
Mero et al., Bioconjug. Chem. 2009, 384-389.
Mindt et al., Bioconjug. Chem. 2008, 19, 271-278.
Pons et al., documento US 2013/0230543 A1 (2013).
Sato et al., documento US 6.322.996 B1 (2001).

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un anticuerpo de longitud completa, en el que al menos una cadena pesada tiene una extensión en el extremo C que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende EEQYASTY (SEQ ID NO: 1), EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2), EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3), EEQYQS (aminoácidos 1 a 6 de SEQ ID NO: 2), EEQYQST (aminoácidos 1 a 7 de SEQ ID NO: 2), EQYQSTY (aminoácidos 2 a 8 de SEQ ID NO: 2), QYQS (aminoácidos 3 a 6 de SEQ ID NO: 6) o QYQSTY (aminoácidos 3 a 8 de SEQ ID NO: 2).
2. Un anticuerpo de longitud completa de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la extensión del extremo C tiene una secuencia de aminoácidos que comprende EEQYASTY (SEQ ID NO: 1), EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2) o EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3).
3. Un anticuerpo de longitud completa de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la extensión del extremo C tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en EEQYASTY (SEQ ID NO: 1).
4. Un anticuerpo de longitud completa de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la extensión del extremo C tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2).
5. Un anticuerpo de longitud completa de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la extensión del extremo C tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3).
6. Un anticuerpo de longitud completa de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la extensión del extremo C tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en EEQYQS (aminoácidos 1 a 6 de SEQ ID NO: 2), EEQYQST (aminoácidos 1 a 7 de SEQ ID NO: 2), EQYQSTY (aminoácidos 2 a 8 de SEQ ID NO: 2), QYQS (aminoácidos 3 a 6 de SEQ ID NO: 6) o QYQSTY (aminoácidos 3 a 8 de SEQ ID NO: 2).
7. Un anticuerpo de longitud completa de acuerdo con la reivindicación 1, que es del isotipo IgG1.
8. Un anticuerpo de longitud completa de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene una región constante que tiene una secuencia de aminoácidos de acuerdo con la SEQ ID NO: 4.
9. Un método de producción de un conjugado de anticuerpo-fármaco, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un anticuerpo de longitud completa, al menos una de cuyas cadenas pesadas tiene una extensión del extremo C que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende EEQYASTY (SEQ ID NO: 1), EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2) o EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3);
(b) proporcionar un donante de amina de fórmula
NH2-X-D,
en la que D representa un fármaco y X representa un enlazador bivalente que conecta el fármaco D y el grupo amino NH2;
(c) poner en contacto el anticuerpo y el donante de amina en presencia de una transglutaminasa; y
(d) permitir que el anticuerpo y el donante de amina formen el conjugado anticuerpo-fármaco mediante la formación de un enlace amida entre una glutamina de la extensión del extremo C y el grupo amino NH2 del donante de amina.
10. Un método de producción de un conjugado de anticuerpo-fármaco, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un anticuerpo de longitud completa, al menos una de cuyas cadenas pesadas tiene una extensión del extremo C que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende EEQYASTY (SEQ ID NO: 1), EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2) o EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3);
(b) proporcionar un donante de amina de fórmula
NH2-X1-R1,
en donde R1 representa un primer grupo funcional reactivo que es un grupo azida, un grupo dibenzoazaciclooctina, un grupo maleimida, un grupo tiol, un grupo hidroxilamina o un grupo cetona, y X1 representa un enlazador bivalente que conecta el grupo funcional reactivo R1 y un grupo amino NH2;
(c) poner en contacto el anticuerpo y el donante de amina en presencia de transglutaminasa;
(d) permitir que el anticuerpo y el donante de amina formen un anticuerpo modificado que tiene unido al mismo un primer grupo funcional reactivo R1, mediante la formación de un enlace amida entre una glutamina de la extensión del extremo C y el grupo amino NH2 del donante de amina;
(e) poner en contacto el anticuerpo modificado con un fármaco que contenga el resto de fórmula
R2-X-D,
en el que R2 es un segundo grupo funcional reactivo que reacciona covalentemente con el primer grupo funcional reactivo R1, D es un fármaco y X es un enlazador bivalente que conecta el fármaco D y el segundo grupo funcional reactivo R2; en donde R2 es un grupo dibenzoazaciclooctina cuando R1 es un grupo azida, R2 es un grupo azida cuando R1 es un grupo dibenzoazaciclooctina, R2 es un grupo tiol cuando R1 es un grupo maleimida, R2 es un grupo maleimida cuando R1 es un grupo tiol, R2 es un grupo cetona cuando R1 es un grupo hidroxilamina o R2 es un grupo hidroxilamina cuando R1 es un grupo cetona; y
(f) permitir que el primer y segundo grupos funcionales reactivos R1 y R2 reaccionen para formar el conjugado anticuerpo-fármaco.
11. Un conjugado anticuerpo-fármaco en el que el anticuerpo está unido covalentemente a un resto del fármaco mediante un enlace amida en la cadena lateral de un resto de glutamina en una extensión del extremo C de una cadena pesada del anticuerpo, teniendo la extensión del extremo C, una secuencia de aminoácidos que comprende EEQYASTY (SEQ ID NO: 1), EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2), EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3), EEQYQS (aminoácidos 1 a 6 de SEQ ID NO: 2), EEQYQST (aminoácidos 1 a 7 de SEQ ID NO: 2), EQYQSTY (aminoácidos 2 a 8 de SEQ ID NO: 2), QYQS (aminoácidos 3 a 6 de SEQ ID NO: 6) o QYQSTY (aminoácidos 3 a 8 de SEQ ID NO: 2).
12. Un conjugado anticuerpo-fármaco de acuerdo con la reivindicación 11, en el que la extensión del extremo C tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en EEQYASTY (SEQ ID NO: 1).
13. Un conjugado anticuerpo-fármaco de acuerdo con la reivindicación 11, en el que la extensión del extremo C tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en EEQYQSTY (SEQ ID NO: 2).
14. Un conjugado anticuerpo-fármaco de acuerdo con la reivindicación 11, en el que la extensión del extremo C tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en EEQYNSTY (SEQ ID NO: 3).
15. Un conjugado anticuerpo-fármaco de acuerdo con la reivindicación 11, en el que la extensión del extremo C tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en EEQYQS (aminoácidos 1 a 6 de SEQ ID NO: 2), EEQYQST (aminoácidos 1 a 7 de SEQ ID NO: 2), EQYQSTY (aminoácidos 2 a 8 de SEQ ID NO: 2), QYQS (aminoácidos 3 a 6 de SEQ ID NO: 6), o QYQSTY (aminoácidos 3 a 8 de SEQ ID NO: 2).
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Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3419670A2 (en) * 2016-02-26 2019-01-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Optimized transglutaminase site-specific antibody conjugation
EP3272864A1 (en) 2016-07-20 2018-01-24 Paul Scherrer Institut Solid-phase immobilization of microbial transglutaminase mtg on microbeads for protein conjugation
US10398783B2 (en) 2016-10-20 2019-09-03 Bristol-Myers Squibb Company Antiproliferative compounds and conjugates made therefrom
US10494370B2 (en) 2017-08-16 2019-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a pyridine or pyrazine moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10508115B2 (en) 2017-08-16 2019-12-17 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having heteroatom-linked aromatic moieties, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10472361B2 (en) 2017-08-16 2019-11-12 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a benzotriazole moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10457681B2 (en) 2017-08-16 2019-10-29 Bristol_Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a tricyclic moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10487084B2 (en) 2017-08-16 2019-11-26 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a heterobiaryl moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
NZ762376A (en) 2017-09-19 2022-08-26 Scherrer Inst Paul Transglutaminase conjugation method and linker
WO2019209811A1 (en) 2018-04-24 2019-10-31 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic toll-like receptor 7 (tlr7) agonists
MX2020012674A (es) 2018-05-29 2021-02-09 Bristol Myers Squibb Co Porciones autoinmolantes modificadas para usarse en profarmacos y conjugados y metodos de uso y fabricacion.
US11554120B2 (en) 2018-08-03 2023-01-17 Bristol-Myers Squibb Company 1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine compounds as toll-like receptor 7 (TLR7) agonists and methods and uses therefor
KR102861586B1 (ko) * 2018-11-30 2025-09-17 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 글루타민-함유 경쇄 c-말단 연장부를 포함하는 항체, 그의 접합체, 및 방법 및 용도
US12478686B2 (en) 2018-12-12 2025-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies modified for transglutaminase conjugation, conjugates thereof, and methods and uses
CA3128571A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 Paul Scherrer Institut Transglutaminase conjugation method with a glycine based linker
SI4153242T1 (sl) 2020-05-19 2024-07-31 Les Laboratoires Servier Para-amino-benzilni linkerji, postopek za njihovo pripravo in njihova uporaba v konjugatih
KR20230069211A (ko) * 2020-09-18 2023-05-18 아라리스 바이오테크 아게 아미노산-기반 링커를 사용한 트란스글루타미나제 접합 방법
KR20230096052A (ko) 2020-10-25 2023-06-29 아라리스 바이오테크 아게 항체-링커 접합체를 생성하기 위한 수단 및 방법
CA3234692A1 (en) * 2021-09-30 2023-04-06 Ajinomoto Co., Inc. Conjugate of antibody and functional substance or salt thereof, and antibody derivative and compound used in production of the same or salts thereof
WO2023072934A1 (en) 2021-10-25 2023-05-04 Araris Biotech Ag Methods for producing antibody-linker conjugates
KR20240150807A (ko) 2022-02-22 2024-10-16 아라리스 바이오테크 아게 2개 이상의 페이로드를 포함하는 펩티드 링커
US20230408497A1 (en) 2022-06-20 2023-12-21 Sysmex Corporation Labeled polypeptide, modified polypeptide, production method for these polypeptides, reagent containing these polypeptides, and measurement method for target substance
WO2025082990A1 (en) 2023-10-15 2025-04-24 Araris Biotech Ag Antibody-drug conjugates using two different types of topoisomerase i inhibitors
WO2025188694A1 (en) 2024-03-05 2025-09-12 Bristol-Myers Squibb Company Tricyclic tlr7 agonists and uses thereof
WO2025188693A1 (en) 2024-03-05 2025-09-12 Bristol-Myers Squibb Company Bicyclic tlr7 agonists and uses thereof
WO2026013234A1 (en) 2024-07-10 2026-01-15 Araris Biotech Ag Triple-payload antibody-drug conjugates (adcs)

Family Cites Families (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2155762C (en) 1994-08-23 2000-04-25 Haruya Sato Protein modification method
AU727608B2 (en) 1995-10-03 2000-12-14 Scripps Research Institute, The CBI analogs of CC-1065 and the duocarmycins
WO2000043492A2 (en) 1999-01-22 2000-07-27 Smithkline Beecham Corporation Method of site specific labeling of proteins and uses therefor
JP4118462B2 (ja) 1999-07-19 2008-07-16 株式会社リコー 携帯電子機器
WO2003068821A2 (en) * 2002-02-14 2003-08-21 Immunomedics, Inc. Anti-cd20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
CN1816356A (zh) 2003-05-14 2006-08-09 免疫原公司 药物缀合物组合物
WO2004106939A2 (en) 2003-06-03 2004-12-09 Paul Scherrer Institut Method for the linkage of bifunctional chelating agents and (radioactive) transition metal complexes to proteins and peptides
EP2478912B1 (en) 2003-11-06 2016-08-31 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates with anti-HER2 or anti-CD22 antibodies and their use in therapy
US7778814B2 (en) 2004-03-30 2010-08-17 Siemens Aktiengesellschaft Method and device for simulating an automation system
WO2007038868A2 (en) 2005-10-03 2007-04-12 The University Of British Columbia Novel enediyne compound and uses thereof
AR062448A1 (es) 2006-05-25 2008-11-12 Endocyte Inc Conjugados de analogos de aziridinil-epotilona y composiciones farmaceuticas que comprenden los mismos
PE20080316A1 (es) 2006-05-25 2008-04-10 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de aziridinil-epotilona
MX2009006277A (es) 2006-12-14 2009-07-24 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se enlazan a cd70 y usos de los mismos.
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 梅達雷克斯有限責任公司 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
US8865875B2 (en) 2007-08-22 2014-10-21 Medarex, L.L.C. Site-specific attachment of drugs or other agents to engineered antibodies with C-terminal extensions
ES2526355T3 (es) 2007-10-01 2015-01-09 Bristol-Myers Squibb Company Anticuerpos humanos que se adhieren a mesotelina, y usos de los mismos
WO2010002042A1 (ja) 2008-07-04 2010-01-07 国立大学法人 九州大学 タンパク質ラベル化用酵素基質
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
JP5875083B2 (ja) 2010-04-15 2016-03-02 メディミューン リミテッド 増殖性疾患治療用ピロロベンゾジアゼピン
CA2795349C (en) 2010-04-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Targeted pyrrolobenzodiazepine conjugates
CA2813411C (en) * 2010-11-05 2016-08-02 Rinat Neuroscience Corporation Engineered polypeptide conjugates and methods for making thereof using transglutaminase
US8852599B2 (en) 2011-05-26 2014-10-07 Bristol-Myers Squibb Company Immunoconjugates, compositions for making them, and methods of making and use
SG11201400770SA (en) 2011-09-20 2014-04-28 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric pbd compounds for inclusion in targeted conjugates
RU2014124984A (ru) * 2011-12-05 2016-01-27 Идженика Биотерапьютикс, Инк. Конъюгаты антитело-лекарственное средство и родственные соединения, композиции и способы
EP2793947B1 (en) 2011-12-23 2021-02-03 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
HUE033704T2 (en) 2012-02-13 2017-12-28 Bristol Myers Squibb Co Enediyne compounds, conjugates thereof, and uses and methods therefor
CN104363919A (zh) * 2012-06-01 2015-02-18 Ibc药品公司 具有改进的体内稳定性、药物代谢动力学和功效的多聚体复合物
US9683044B2 (en) * 2012-08-20 2017-06-20 Gliknik Inc. Molecules with antigen binding and polyvalent FC gamma receptor binding activity
CN105121421B (zh) * 2012-11-05 2020-10-02 辉瑞公司 司普力西欧他汀类似物
EP3564259A3 (en) 2012-11-09 2020-02-12 Innate Pharma Recognition tags for tgase-mediated conjugation
LT2956173T (lt) 2013-02-14 2017-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Tubulizino junginiai, gavimo ir panaudojimo būdai
EP3010547B1 (en) 2013-06-20 2021-04-21 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
CN105517577A (zh) 2013-06-21 2016-04-20 先天制药公司 多肽的酶促偶联

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