BRPI0714877A2

BRPI0714877A2 - mastopexia e pràteses de reconstruÇço de mama processo

Info

Publication number: BRPI0714877A2
Application number: BRPI0714877-1A
Authority: BR
Inventors: Dennis C Hammond; Jeanne M Codori-Hurff
Original assignee: Organogenesis Inc
Priority date: 2006-07-31
Filing date: 2007-07-31
Publication date: 2013-07-02
Also published as: EP2068766A2; ES2375875T3; US20080097601A1; ATE529070T1; EP2068766A4; WO2008016919A3; EP2409669A1; WO2008016919A2; US20120158134A1; EP2068766B1

Abstract

MASTOPEXIA E PRàTESES DE RECONSTRUÇçO DE MAMA E PROCESSO. A presente invenção refere-se a mastopexia e próteses de reconstrução de mama e processo de implante que permite formação de imagem radiográfica de tecido de mama. As próteses são arqueadas e alongadas opcionalmente enredada para conformar-se com tecido de mama quando implantadas. Próteses são fabricadas de matriz extracelular ocorrendo naturalmente, principalmente colágeno, que, permite formação de imagem mamográfica sem interferência como é esperado de materiais sintéticos.

Description

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Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MASTOPE- XIA E PRÓTESES DE RECONSTRUÇÃO DE MAMA E PROCESSO".

Referência - Cruzaria a Pedidos Hp Patente Relaninn

Este pedido reivindica o benefício de prioridade para U.S. Provi- sional Application 60/820 905, depositado em 31 de julho de 2006, cujo pe- dido é aqui incorporado por referência em sua totalidade. Campo da Invenção

Esta invenção está no campo de engenharia de tecido. A pre- sente invenção refere-se a próteses de enxerto bioengenheiradas prepara- das a partir de material de tecido limpo derivado de fontes animais. As próte- ses de enxerto bioengenheiradas da invenção são preparadas usando-se processos que preservam biocompatibilidade, compatibilidade de célula, re- sistência e capacidade de biorremodelação da matriz de tecido processado. As próteses de enxerto bioengenheiradas são usadas para implante, reparo, ou para uso em um hospedeiro mamífero.

Breve Descrição dos Antenedentes da Invenção

O campo de engenharia de tecido combina os processos de en- genharia com os princípios de ciência de vida para entender as relações es- truturais e funcionais em tecidos mamíferos patológicos e normais. A meta de engenharia de tecido é o desenvolvimento e última aplicação de substitu- tos biológicos para restaurar, manter, e aperfeiçoar funções de tecido.

Colágeno é a principal proteína estruturai no corpo e constitui aproximadamente um terço da proteína total de corpo. Ele compreende mai- oria da matéria orgânica da pele, tendões, ossos, e dentes e ocorre como inclusões fibrosas na maioria de outras estruturas do corpo. Algumas das propriedades de colágeno são sua alta resistência á tração; sua baixa anti- genicidade, devida em parte a mascaramento de potenciais determinantes antigênicos pela estrutura helicoidal; e sua baixa capacidade de extensão, semipermeabilidade, e solubilidade. Além disso, colágeno é uma substância natural para adesão de célula. Materiais baseados em colágeno são biorre- modeláveis provido que eles são mecânica e quimicamente processados em uma maneira que preserva biorremodelabilidade em contraste a materiais

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sintéticos onde uma falta de capacidade de biorremodelação é uma desvan- tagem. Estas propriedades e outras tornam colágeno um material apropriado para engenharia de tecido e fabricação de substitutos bíocompatíveis im- plantáveis e próteses biorremodeláveis.

Métodos para obtenção de tecido colagenoso e estruturas de

tecido a partir de tecidos mamíferos explantados e processos para constru- ção de próteses a partir de tecido, foram amplamente investigados para re- paro cirúrgico ou para substituição de tecido ou órgão. É uma meta contínua de pesquisadores o desenvolvimento de próteses que possam ser usadas com sucesso para substituição ou reparo de tecido mamífero.

Há uma necessidade de materiais à base de colágeno e próte- ses para uso em procedimentos impactando tecido de mama humano. Em anos recentes, a taxa de procedimentos de cirurgia plástica aumentou e mui- tas mulheres elegem fazer cirurgia para alterar o tamanho, forma, posição de suas mamas. Como uma questão separada mas relacionada, a taxa de ci- rurgias de reconstrução de mama que seguem procedimentos de mastecto- mia aumentou na medida em que processos de detecção de câncer aperfei- çoaram e na medida em que muitas mulheres monitoram saúde da mama mais de perto.

Mastopexia, ou levantamento de mama, é um procedimento de-

senhado para aperfeiçoar a aparência de mamas curvadas ou ptóticas. A meta de cirurgia é aperfeiçoar a forma e posição (isto é, levantar) da mama enquanto minimizando cicatrizes visíveis. Para obter este resultado final, múltiplos procedimentos e incontáveis modificações da mastopexia foram sugeridos.

Embora descrições de mamoplastias de redução possam ser vistas tão cedo como Paulus of Aegina (625-690 AD), não antes do último século 19 foi colocada ênfase sobre correção de ptose da mama. Muito da história de mastopexia é paralela àquela de redução de mama, uma vez que ambas tentam alterar a forma da mama e o envelope de pele. Maior parte destes procedimentos envolveu elevação do monte de mama usando técni- cas de suspensão. • * » Técnicas que transpuseram o complexo auréola - mamilo (NAC) como um pedículo vascular foram descritas por Morestin (1907) e usadas por Lexer (1912). Thorek (1921) foi creditado com o primeiro relato de um enxerto de mamilo livre. Hollander (1924) reportou primeiro a ressecção o- blíqua lateral resultando em uma cicatriz com forma de L. Schwarzmann (1937) descreveu o uso de desepitelização periareolar para preservar o su- primento neurovascular do NAC. Nos anos 30, maior parte dos elementos técnicos essenciais da mastopexia foram desenvolvidos.

Ainda evolução na mastopexia resultou em refinamento de téc- nica e análise. Aufricht (1949) advogou planejamento pré-operativo usando um sistema geométrico e enfatizou o conceito do envelope de pele definindo a forma final de mama. Wise (1956) definiu o sistema de marcação geomé- trica pré-operativo mais comumente usado atualmente. Gonzalez - Ulloa (1960) primeiro advogaram mastopexia com aumento para ptose com hipo- plasia ou atrofia. Gouiian (1970) descreveu o uso da mastopexia dérmica, e Regnault (1976) apresentou um sistema de classificação para ptose de ma- ma e uma descrição da mamoplastia B.

Johnson (1981), entre outros, usou tela Marlex para levantar o parênquima de mama. Beneiii (1990) reportou o uso da mamoplastia de cor- dão de bolsa ou bloco redondo periareolar. Procedimentos para recriar tota- lidade de mama usando tecido autólogo tanto primariamente como após ex- plantação de prótese de mama foram descritos por Weiss and Ship (1995) e Flowers (1998).

Hall - Findiey (1999) usaram uma modificação de pedículo base- ado em mediai da abrodagem de cicatriz vertical primeiro descrita por Las- sus (1970) como pedículo superior e popularizada por Lejour (1994) com o uso de lipossucção de mama.

Mastopexia apresenta um dos maiores desafios para o cirurgião de mama mas técnicas anteriores têm desvantagens. Numerosas técnicas proporcionam aperfeiçoamento na forma da mama. As metas estéticas des- tas técnicas são obtenção de uma aparência mais jovem, projeção aperfei- çoada, e reduzida ptose mas aperfeiçoamento estético surge ao custo de I i cicatrizes. Em adição, embora implantes de mama possam prover projeção de pólo superior que pacientes freqüentemente desejam, eles apresentam específicos riscos e complicações.

Embora a incidência de ptose de mama seja difícil de estimar, a freqüência de mastopexia está claramente aumentando. A American Society of Plastics Surgeons reportou um aumento de 509% em procedimentos de 1997 para 2005.

Etiologia é variada e pode ser devida a vários componentes mas gravidade parece ser um fator comum. Pacientes mais jovens são mais pro- pensos a ptose devido a excessivo tamanho de mama ou pele fina, assim o entrelaçamento de procedimentos de redução de mama e mastopexia. Ptose em pacientes de meia idade usualmente é devido a alterações pós-parto; a pele da mama é estirada durante lactação ou ingurgitamento, e a seguir a glândula mamária atrofia, deixando pele afrouxada. Finalmente, em pacien- tes pós-menopausa, ainda atrofia, gravidade, perda de elasticidade de pele devido a idade, e ganho de peso são fatores na criação de ptose de mama.

Com o tempo, relaxamento de Iigamentos Cooper e frouxidão dérmica causam descida do tecido de mama e NAC. Mudanças involucionais pós-parto exacerbam a frouxidão dos Iigamentos suspensórios e envelope de pele. Para corrigir adequadamente estas mudanças, é necessário a ele- vação de parênquima de mama. Em adição, o envelope de pele redundante tem de ser removido e o NAC tem de ser transposto.

Na maioria dos exemplos, mastopexia de mama não tem verda- deiras indicações médicas e é realizada primariamente por razões estéticas. A principal exceção a isto é a reconstrução pós-mastectomia, quando reali- zando uma mastopexia freqüentemente é essencial obtenção de simetria. Uma outra indicação é seguindo remoção de implante, que pode resultar em ptose de mama e pele relaxada. Entretanto, deve-se ser cuidadoso na avali- ação de quantidade de ptose em pacientes com implantes de mama que são contraídos e de montagem alta.

Existem quatro principais tipos de levantamentos de mama, e os nomes comuns dos mesmos são baseados na forma da incisão e resultante < 5

cicatriz. Quanto mais caimento um paciente tem, mais provável do mesmo necessitar incisões mais extensivas e longas para obtenção de um desejável resultado. Com qualquer uma destas técnicas, o complexo de mamilo e au- réola pode ser deslocado para qualquer lado assim como para cima, se ne- cessário, para a melhor aparência estética. Um levantamento de mama não envolve remoção e substituição do mamilo. O mamilo e auréola permane- cem ligados à mama, e somente pele circundante é removida. Um resumo de técnicas comuns segue-se:

Mastopexia crescente - Para pacientes com caimento suave, excesso de pele de mama na metade superior da mama, e uma quantidade normal de pele na metade inferior, uma incisão semicircular é feita sobre a porção superior da auréola. Uma peça de forma crescente de pele é removi- da, e quando as bordas de pele são costuradas juntas de novo, o mamilo e auréola são levemente elevados (25,4 a 50,8 milímetros (1 a 2 polegadas)). Uma mastopexia crescente é melhor para mulheres com ptose (caimento) de mama somente suave.

Mastopexia em forma de anel ("donut") - Também chamada uma mastopexia Benelli ou mastopexia circumareolar uma vez que a incisão é ao redor de auréola, uma mastopexia donut remove um anel de pele a partir do exterior da auréola. Suturas são então colocadas ao redor de auréola e a pele é apertada como uma corda de bolsa para levantar a mama. Pode ocor- rer enrugamento da pele, e usualmente resolve por si próprio dentro de pou- cos meses. A mastopexia "donut" também é útil para mulheres com um com- plexo mamilo / auréola projetando-se (algumas vezes chamadas de mamas com forma de torpedo ou míssil), e também pode ser usada para reduzir o tamanho da auréola ao mesmo tempo.

Mastopexia vertical ou pirulito - Como o nome implica, a incisão para uma mastopexia pirulito é feita ao redor de auréola e então abaixo do centro da mama para a dobra inframamária. Esta técnica é usada para ptose de mama suave a moderada. Como com o levantamento "donut" ou circuma- reolar, o tamanho da auréola pode ser reduzido ao mesmo tempo.

Mastopexia âncora - Também referida como uma mastopexia padrão Wise (ou algumas vezes padrão Weiss), levantamento de mama in- teira, ou incisão-T invertida, a mastopexia âncora é considerada a técnica tradicional para levantamento de mama. As incisões são feitas ao redor de auréoia, abaixo de centro da porção inferior da mama e então através de mama na dobra inframamária. Como as incisões donut e pirulito, a auréoia ao mesmo tempo pode ser feita menor. A resultante cicatriz está na forma de uma âncora. Embora a mastopexia âncora ou padrão Wise costume ser o padrão, ela é agora usualmente reservada para aqueles com caimento mo- derado a severo.

Reconstrução de mama é a re-criação de uma mama seguindo

mastectomia. Mastectomia é o tratamento mais comum de câncer de mama localizado mas pode impactar negativamente emocionalmente o paciente, deixando-o sentindo-se deformado e mutilado, conduzindo a raiva, depres- são, e ansiedade. Embora reconstrução de mama possa ser realizada no momento de mastectomia, as melhores candidatas são aquelas que confir- maram eliminação do câncer quando algumas vezes materiais de implante e reconstrução interferirão com detecção de recorrência. Reconstrução usual- mente envolve um processo de duas partes, onde na primeira série de cirur- gias, um expansor de tecido é inserido debaixo da pele e o músculo peitoral. O expansor é um balão cheio de solução salina ou ar que é periodicamente injetado em um número de meses com adicional solução salina de modo a gradualmente estirar a pele e músculo. Quando a pele e músculo estão sufi- cientemente alongados, um implante (salino ou silicone) é inserido para re- capitular a estrutura de mama nativa. Entretanto, de modo a reter adequa- damente o implante, uma adicional seção de um tecido de paciente, um au- toenxerto, tem de ser usada ao longo da lateral da mama, usualmente o grande dorsal (latissimus dorsi) ou reto abdominal (abdominus recti). Tecido de autoenxerto transporta um risco de morbidez de tecido e cobertura total e suporte do implante ou expansor com o tecido de músculo na bolsa de mas- tectomia é um desafio. Sem apropriada cobertura, o implante pode tornar-se exposto e reduzir resultado cosmético. Para estes pacientes, uma prótese pronta para uso, fora de prateleira fabricada de um material compatível com célula e tecido é necessária para cobrir e suportar o implante ou o expansor no pólo inferior de mama.

Anteriormente, materiais de reconstrução de mama e mastope- xia e próteses fabricadas de materiais biossintéticos e processos para sua implantação têm desvantagens em que eles interferem com formação de imagem mamográfica que é necessária para detecção de anormalidades de tecido de mama, incluindo tumores cancerosos. A razão para sua interferên- cia está em que estas próteses são fabricadas de materiais que não são en- contrados em tecidos humanos ou animais e assim eles são evidenciados em mamografia e obscurecem formação de imagem do tecido de mama. Devido estes dispositivos de mastopexia cobrem uma porção significante ao redor da mama, prévios processos de implante rompem excessivamente o tecido de mama através de separação de camadas de tecido e causam uma lenta resposta de cura e criam um potencial risco para morbidez de tecido. Materiais derivados de tecido de cadáver humano, usualmente de pele, tam- bém oferecem desvantagens em que seu suprimento é limitado e relatórios demonstraram que sua fonte estava envolvida com desafios éticos e concei- tos de segurança.

Há uma necessidade de materiais e próteses baseados em co- lágeno que sejam finos mas fortes de modo a realizarem uma função de su- porte de tecido com o tempo mas sejam finos de modo a não interferirem com outras estruturas de tecido ou com o resultado cosmético quando im- plantados em tecido macio. Também existe uma necessidade de um materi- al baseado em colágeno biorremodelável que, quando implantado no corpo, sofrerá controlada biodegradação ocorrendo concomitantemente com remo- delação e substituição por uma matriz de células e tecido do próprio pacien- te, enquanto provendo os necessários suporte e forma do tecido que ele es- tá substituindo ou reparando. Existe ainda uma necessidade de materiais baseados em colágeno que sejam buscados de uma fonte traçável e sejam purificados de modo a mitigar conceitos éticos e de segurança que estão presentes em materiais derivados der cadáveres. Existe ainda uma necessi- dade de materiais e próteses em procedimentos de mastopexia e reconstru- > δ

ção de mama que não interfiram com mamografia e monitoração de saúde de mama.

A presente invenção endereça-se a estas desvantagens e ne- cessidades insatisfeitas para avançar os padrões de tratamento para trata- mentos de mastopexia e reconstrução de mama com uma nova prótese de mastopexia e processo de implante e uma prótese de reconstrução de ma- ma.

Sumário da Invenção

Materiais colagenosos biologicamente derivados tal como a submucosa intestinal foram propostos por muitos investigadores para uso em reparo ou substituição de tecido. Métodos para processamento químico e mecânico do jejuno suíno proximal para gerar uma camada acelular, simples de colágeno intestinal (ICL) que pode ser usado para formar laminados para aplicações bioprotéticas são mostrados. O processamento remove células e fragmentos celulares enquanto mantendo a estrutura de colágeno nativa. A resultante folha de matriz de tecido processado é usada para fabricação de construções laminadas multicamadas com desejadas especificações. Nós investigamos a eficácia de emplastros laminados para reparo de tecido ma- cio assim como o uso de ICL entubado como componente de um enxerto vascular. Este material provê o necessário suporte físico, enquanto gerando mínimas adesões e é capaz de integrar-se no tecido nativo circundante e tornar-se infiltrado com células hospedeiras. Remodelagem in vivo não com- promete integridade mecânica. Propriedades intrínsecas e funcionais dos implantes fabricados de ICL, tais como o módulo de elasticidade, retenção de sutura e resistência à tração são importantes parâmetros que podem ser manipulados para específicos requisitos através de variação de número de camadas de ICL e as condições de reticulação.

É um objeto da invenção prover uma prótese para procedimen- tos de reconstrução de mama ou mastopexia compreendendo material de tecido processado que, quando implantado em um paciente mamífero, sofre controlada biodegradação ocorrendo com adequada substituição de célula viva de modo que a prótese implantada original é remodelada pelas células vivas do paciente; onde o material de tecido processado é derivado de intes- tino ou derme; onde a prótese tem uma forma arqueada ou crescente; e on- de a prótese não interfere com formação de imagem radiográfica.

É um outro objeto da invenção prover uma prótese para proce- dimentos de mastopexia e cirurgia de reconstrução de mama compreenden- do duas ou mais camadas quimicamente ligadas, superpostas de material de colágeno que, quando implantada em um paciente mamífero sofre controla- da biodegradação ocorrendo com adequada substituição de célula viva de modo que a prótese implantada original é remodelada pelas células vivas do paciente. O material de colágeno pode ser um material de tecido processado derivado de intestino, derme, fascia lata, pericárdio ou dura mater; entretan- to, quando derivado da submucosa de intestino delgado, o material de colá- geno oferece finura, resistência, e é substancialmente um material colágeno purificado que é facilmente manuseável para preparação de próteses multi- camadas.

Desempenho de dispositivos de reconstrução de mama e mas- topexia é aperfeiçoado quando materiais de colágeno purificados são em- pregados, assim colágeno substancialmente purificado é um material prefe- rido para estes dispositivos. Uma vantagem de uma prótese de reconstrução de mama ou mastopexia fabricada de material de colágeno é que a prótese não interfere com formação de imagem radiográfica, tal como técnicas de mamografia para formar imagem de tecido de mama. Estas próteses são preparadas para terem uma forma crescente ou arqueada alongada e são providas com uma tela, um arranjo de uma pluralidade de fendas correndo em paralelo através de prótese na direção semelhante a comprimento, cujas fendas também estão em um arranjo em ziguezague de modo a permitir que a prótese seja estirada na direção perpendicular à direção de fenda de modo a abrir as fendas da tela mas não na direção das fendas de modo a preser- var a resistência da prótese naquela direção. Descrição das Figuras

A Figura 1 mostra o dispositivo de mastopexia da invenção.

A Figura 2 mostra o dispositivo de mastopexia da invenção com fendas de tela fechadas.

A Figura 3 mostra o dispositivo de mastopexia da invenção com fendas de tela fechadas na região central do dispositivo.

A Figura 4 mostra o dispositivo de mastopexia da invenção com fendas de tela fechadas na região apical, central do dispositivo.

A Figura 5 mostra o dispositivo de mastopexia da invenção com fendas de tela fechadas por todo o dispositivo exceto na borda do dispositi- vo.

A Figura 6 mostra o dispositivo de mastopexia da invenção com fendas de tela fechadas por todo o dispositivo exceto na região de borda e base do dispositivo.

A Figura 7 mostra a prótese de reconstrução de mama da inven- ção.

A Figura 8 mostra a prótese de reconstrução de mama da inven- ção com fendas de tela fechadas por todo o dispositivo.

A Figura 9 mostra a prótese de reconstrução de mama da inven- ção com fendas de tela fechadas por todo o dispositivo exceto na borda do dispositivo.

Descrição Detalhada da Invenção Esta invenção é direcionada a próteses engenheiradas de tecido

fabricadas a partir de matrizes de tecido processado derivadas de tecidos nativos que são biocompatíveis com o paciente ou hospedeiro no qual elas são implantadas. Quando implantadas em um hospedeiro mamífero, estas próteses podem servir como um uma parte funcional de corpo de reparo, aumento ou substituição ou estrutura de tecido.

As próteses da invenção são biorremodeláveis e sofrerão contro- lada biodegradação concomitantemente com remodelação e substituição pelas células de hospedeiro. A prótese desta invenção, quando usada como um tecido de substituição, assim tem propriedades duais: primeiro, ela fun- ciona como uma parte de corpo substituta, e segundo, enquanto ainda fun- cionando como uma parte de corpo substituta, ela funciona como um molde de remodelagem para o inato de células hospedeiras. De modo a assim fa- > 11

zer, o material protético desta invenção é uma matriz de tecido processada desenvolvida de tecido de colágeno derivado de mamífero que é capaz de ser ligado a si próprio ou uma outra matriz de tecido processado para formar uma prótese para enxerto em um paciente. A invenção é direcionada a processos para fabricação de próte-

ses engenheiradas de tecidos a partir de material de tecido limpo onde os processos não requerem adesivos, suturas, ou grampos para ligar as cama- das enquanto mantendo a capacidade de biorremodelagem das próteses. Os termos "matriz de tecido processado" e "material" significam tecido nor- malmente celular, nativo que foi buscado de uma fonte animal, preferivel- mente um mamífero, e mecanicamente limpo de concomitantes tecidos e quimicamente limpo de células, fragmentos celulares, e feito substancial- mente livre de componentes de matriz extracelular não-colágeno. A matriz de tecido processado, embora substancialmente livre de componentes não- < 15 colágeno, mantém muito de sua estrutura, resistência e forma de matriz nati- va. Composições preferidas para preparação de enxertos bioengenheirados da invenção são tecidos animais compreendendo fontes de tecido colageno- so de colágeno incluindo, mas não limitado a: intestino, derme, fascia lata, pericárdio, dura mater, e outros tecidos estruturados planos ou planares que compreendem uma matriz de tecido de colágeno. A estrutura destas matri- zes de tecido torna as mesmas capazes de serem facilmente limpas, mani- puladas, e montadas de uma maneira de preparar as próteses bioenege- nheiradas da invenção. Outras fontes apropriadas com a mesma estrutura plana e composição de matriz podem ser identificadas, procuradas e pro- cessadas por aqueles versados na técnica em outras fontes animais de a-

cordo com a invenção.

Uma composição mais preferida para preparação de enxertos bioengenheirados da invenção é uma camada de colágeno intestinal deriva- da de submucosa túnica de intestino delgado. A submucosa de intestino del- gado é uma fonte preferida na medida em que ela rende um material de co- lágeno substancialmente puro que é fino, forte, e facilmente manuseável pa- ra preparação de próteses multicamadas da invenção. Apropriadas fontes para intestino delgado são organismos mamíferos como humano, vaca, por- co, cabra, cão, ovelha, ou cavalo embora intestino delgado de porco seja a fonte preferida.

A composição mais preferida para preparação de prótese da in- venção é uma camada de colágeno intestinal processada derivada de sub- mucosa túnica de intestino delgado suíno. Para obter o ICL, o intestino del- gado de um porco e concomitantes tecidos mesentéricos são grosseiramen- te dissecados do intestino. A submucosa túnica é preferivelmente separada, ou delaminada, de outras camadas do intestino delgado através de com- pressão mecânica de material de intestino bruto entre rolos opostos para remoção de camadas musculares (túnica muscularis) e a mucosa (mucosa túnica). A submucosa túnica do intestino delgado é mais dura e rija que o tecido circundante, e os rolos comprimem os componentes mais macios da submucosa, resultando em uma matriz de tecido quimicamente limpa. Nos exemplos que se seguem, o intestino delgado suíno foi mecanicamente lim- po usando uma máquina de limpeza de intestino Bitterling e então limpo quimicamente para render uma matriz de tecido processado. Esta camada de colágeno intestinal mecânica e quimicamente limpa é aqui referida como "ICL". ICL é a matriz de tecido processado mais preferida para preparação de próteses da invenção.

ICL é essencialmente colágeno Tipo I telopeptídeo acelular, cer- ca de 93% em peso seco, com menos que cerca de 5% de glicoproteínas em peso seco, glicosaminoglicanos, proteoglicanos, lipídeos, proteínas não- colagenosaséicos tais como ADN e ARN e é substancialmente livre de célu- Ias e fragmentos celulares. A ICL processada retém muito de sua estrutura de matriz e sua resistência. Importantemente, a biocompatibilidade e capaci- dade de biorremodelagem da matriz de tecido são preservadas em parte pelo processo de limpeza na medida em que ela é livre de resíduos de de- tergente ligados que podem afetar adversamente a capacidade de biorremo- delagem do colágeno. Adicionalmente, as moléculas de colágeno retiveram suas regiões de telopeptídeo na medida em que o tecido não sofreu trata- mento com enzimas durante o processo de limpeza. Próteses fabricadas de ICL também retêm estas características.

A matriz de tecido processado é usada como uma prótese de enxerto de camada simples ou é formada em uma prótese ligada, multica- madas. As camadas de matriz de tecido processado do dispositivo de próte- se ligada, multicamadas da invenção podem ser do mesmo material coláge- no, tal como duas ou mais camadas de ICL, ou de diferentes materiais colá- geno, tal como uma ou mais camadas de ICL e uma ou mais camadas de fascia lata.

As matrizes de tecido processado podem ser tratadas ou modifi- cadas, tanto fisicamente como quimicamente, antes de ou após fabricação de uma prótese de enxerto ligada, multicamadas. Modificações físicas como conformação, condicionamento por estiramento e relaxamento, ou perfura- ção de matrizes de tecido limpo podem ser realizadas assim como modifica- ções químicas como ligação de fatores de crescimento, componentes de matriz extracelular selecionados, material genético, e outros agentes que podem afetar biorremodelagem e reparo da parte de corpo sendo tratada, reparada, ou substituída.

Uma modificação física preferida é a adição de perfurações, fe- nestrações, ou orifícios perfurados com laser. O tecido de reparo de tecido pode ser perfurado com laser para criação de poros de tamanho de mícron através da prótese completada para auxiliar em crescimento para dentro de células usando um laser excimer (por exemplo, em comprimentos de onda de KrF ou ArF). O tamanho de poro pode variar de 10 a 500 micra, mas é preferivelmente de cerca de 15 a 50 micra e espaçamento pode variar, mas cerca de 500 micra sobre centro é preferido. O tecido de reparo de tecido pode ser perfurado com laser em qualquer momento durante o processo de fabricação de prótese, mas é preferivelmente realizado antes de desconta- minação ou esterilização. Para algumas indicações é preferido que as perfu- rações ou orifícios perfurados com laser comuniquem-se através de todas as camadas da prótese para auxiliar em passagem de célula ou drenagem de fluido. Para outras indicações, é preferido que elas não passem por todo caminho através das camadas de modo que os orifícios proporcionem aces- 14

so de células ao interior de uma constructo multicamadas ou para auxiliar em neovascularização do constructo.

Uma modificação química preferida é reticulação química usan- do um agente de reticulação. Embora reticulação química seja usada para ligar múltiplas camadas de matriz de tecido processado, o grau de reticula- ção química pode ser variado para modular taxas de biorremodelagem, ou seja as taxas nas quais uma prótese é ambas, ressorvida e substituída por células e tecido de hospedeiro. Em outras palavras, quanto maior o grau de reticulação que é proporcionado às próteses da invenção, mais lenta a taxa de biorremodelagem que as próteses sofrerão; quanto menor o grau de reti- culação, mais rápida a taxa de biorremodelagem. Indicações cirúrgicas ditam a extensão de biorremodelagem requerida pela prótese. Por exemplo, quan- do um constructo de camada simples é usada como um curativo de ferimen- to, nenhuma reticulação química é desejada. Um emplastro de reparo cirúr- gico é uma construção multicamadas que tem um baixo grau de reticulação de modo que a prótese será biorremodelada em uma rápida taxa. Uma tipóia de bexiga para suportar uma bexiga hipermóvel para prevenir incontinência urinária é uma construção multicamadas que tem um alto grau de reticulação de modo que a prótese não seja biorremodelada, ou seja, ela persiste em substancialmente a mesma conformação na qual foi implatada.

Na medida em que ICL é o material de partida preferido para a produção das próteses de enxerto bioengenheiradas da invenção, os pro- cessos descritos abaixo são processos preferidos para produção de próte- ses de enxerto bioengenheirado compreendendo ICL. Na realização mais preferida, a submucosa túnica de intestino

delgado suíno é usada como um material de partida para a prótese de en- xerto bioengenheirada da invenção. O intestino delgado de um porco é co- lhido, seus concomitantes tecidos removidos e então mecanicamente limpos usando uma máquina de limpeza de intestino que remove forçadamente as camadas de gordura, músculo e mucosa da submucosa túnica usando uma combinação de ação mecânica e lavagem usando água. A ação mecânica pode ser descrita como uma série de rolos que comprimem e separam as 15

sucessivas camadas da submucosa túnica quando o intestino intacto é corri- do entre os mesmos. A submucosa túnica do intestino delgado é comparati- vamente mais dura e rija que o tecido circundante, e os rolos comprimem os componentes mais moles da submucosa. O resultado da limpeza em máqui- na foi tal que a camada de submucosa do intestino foi a única restante, um intestino mecanicamente limpo.

Após limpeza mecânica, um tratamento de limpeza química é empregado para remover componentes matriz e células do intestino limpo mecanicamente, preferivelmente realizado sob condições assépticas em temperatura ambiente. O intestino limpo mecanicamente é cortado no com- primento abaixo de lúmen e então cortado em seções de aproximadamente cm de comprimento. O material é pesado e colocado em recipientes em uma razão de cerca de 100:1 v/v de solução para material intestinal. No tra- tamento de limpeza química mais preferido, tal como o método descrito na * 15 patente 5 993 844 para Abraham, a exposição da qual é aqui incorporada, o tecido de colágeno é contatado com uma quantidade efetiva de agente que- lante, tal como sal tetrassódio etileno diamino tetracético (EDTA) sob condi- ções alcalinas, preferivelmente através de adição de hidróxido de sódio (NaOH); seguido por contato com uma quantidade efetiva de ácido onde o ácido contem um sal, preferivelmente ácido clorídrico (HCI) contendo cloreto de sódio (NaCI); seguido por contato com uma quantidade efetiva de solução de sal tamponada tal como cloreto de sódio 1 M (NaCI) / solução salina tam- ponada com fosfato (PBS) 10 mM; finalmente seguido por uma etapa de rin- sagem usando água. Cada etapa de tratamento é preferivelmente realizada usando uma plataforma rotatória ou de agitação para aperfeiçoar as ações das soluções químicas e de rinsagem. O resultados dos processos de limpe- za é ICL, uma matriz de tecido processado limpo mecânica e quimicamente derivada da submucosa túnica de intestino delgado. Após rinsagem, a ICL é então removida de cada recipiente e a ICL é suavemente comprimida de água em excesso. Neste ponto, a ICL pode ser estocada a -80°C, a 4°C em tampão fosfato estéril, ou secada até uso em fabricação de uma prótese. Se estocadas secas, as folhas de ICL são feitas planas sobre uma superfície tal i 16

como uma placa plana, preferivelmente uma placa ou membrana porosa, tal como uma membrana de policarbonato, e quaisquer etiquetas linfáticas do lado abluminal do material são removidas usando um escalpelo, e as folhas de ICL são deixadas secar em uma capela de fluxo laminar em temperatura e umidade ambientes.

A ICL é uma estrutura de folha plana que pode ser usada para fabricar vários tipos de construções para serem usadas como próteses, com a forma das próteses por último dependendo de seu uso pretendido. Para formar próteses da invenção, as folhas são fabricadas usando um processo que continua a biocompatibilidade e biorremodelagem do material de matriz processado mas também é capaz de manter sua resistência e característi- cas estruturais para sua performance como um tecido de substituição. A ma- triz de tecido processado derivada de tecido retém a integridade estrutural da matriz de tecido nativo, ou seja, a estrutura de matriz de colágeno do te- - 15 cido original permanece substancialmente intacta e mantém propriedades físicas de modo que ela exibirá muitas propriedades intrínsecas e funcionais quando implantada. Folhas de matriz de tecido processado são feitas cama- das para contatarem umas às outras, se as camadas são diretamente su- perpostas umas às outras, ou parcialmente em contato ou sobreposição pa- ra a formação de estruturas mais complexas. Em construções completadas, a região de ligação tem de ser capaz de suportar sutura e estiramento en- quanto sendo manuseada na clínica, durante implantação e durante a fase iniciai de cura enquanto funcionando como uma substituição de parte de corpo. A região de ligação também tem de manter suficiente resistência até as células do paciente povoarem e subseqüentemente biorremodelarem a prótese para formar um tecido novo.

A invenção é direcionada a processos para tratamento de um paciente usando uma prótese biocompatível. As próteses da invenção são biocompatíveis. Testes de biocompatibilidade foram realizados sobre próte- ses fabricadas de ICL de acordo com ambas orientações, Tripartite e ISSO- 10993 para avaliação biológica de dispositivos médicos. Biocompatível signi- fica que as próteses da invenção são não-citotóxicas, hemocompatíveis, I 17

não-pirogênicas, isentas de endotoxina, não-genotóxicas, não-antigênicas, e não elicitam uma resposta de sensibilização dérmica, não elicitam uma res- posta de irritação primária de pele, não causam toxidez sistêmica aguda, e não elicitam toxidez subcrônica.

Artigos testes das próteses da invenção não mostraram reativi-

dade biológica (Grau 0) ou citotoxidez observada nas células L929 seguindo o período de exposição de artigo teste quando usando o teste intitulado "L929 Agar Overlay Test for Citotoxicity In Vitro". A resposta celular observa- da para o artigo controle positivo (Grau 3) e o artigo controle negativo (Grau 0) confirmaram a validade do sistema de teste. Testes e avaliações foram conduzidos de acordo com diretrizes de USP. Próteses da invenção são consideradas não-citotóxicas e satisfazem os requisitos do L929 Agar Over- Iay Test for Cytotoxicity In Vitro.

Testes de hemocompatibilidade (hemólise in vitro, usando o tes- te de processo de extração-ASTM modificado, in vitro) de próteses da inven- ção foram conduzidos de acordo com o processo de extração ASTM modifi- cado. Sob as condições do estudo, o índice hemolítico médio para o extrato de dispositivo foi 0% enquanto controles positivos e negativos desempenha- ram como antecipado. Os resultados do estudo indicam que as próteses da invenção são não-hemolíticas e hemocompatíveis.

Próteses da invenção foram submetidas a testes de pirogenici- dade seguindo o corrente protocolo USP para testes de pirogênio em coe- lhos. Sob condições do estudo, a elevação total de temperaturas de coelhos durante o período de observação esteve dentro de limites USP aceitáveis. Resultados confirmaram que as próteses da invenção são não-pirogênicas. As próteses da invenção são livres de endotoxina, preferivelmente em um nível de á 0,06 EU/mL (por cm2 de produto). Endotoxina refere-se a um par- ticular pirogênio que é parte da parede de célula de bactérias gram - negati- vas, que é vertido pelas bactérias e materiais contaminados. Próteses da invenção não elicitam uma resposta de sensibiliza-

ção dérmica. Não existem relatos na literatura que possam indicar que os compostos químicos usados para limpeza de colágeno intestinal suíno elici- I 18

tam uma resposta de sensibilização, ou possam modificar o colágeno para elicitar uma resposta. Os resultados de testes de sensibilização sobre próte- ses da invenção formadas a partir de ICL limpa quimicamente indicam que as próteses não elicitam uma resposta de sensibilização.

Próteses da invenção não elicitam uma resposta de irritação

primária de pele. Os resultados de testes de irritação sobre ICL limpa quimi- camente indicam que próteses da invenção formadas a partir de ICL limpa quimicamente não elicitam uma resposta de irritação primária de pele.

Testes de toxidez sistêmica aguda e toxidez intracutânea foram realizados sobre ICL limpa quimicamente usada para preparar próteses da invenção, os resultados dos quais demonstraram uma falta de toxidez entre as próteses testadas. Adicionalmente, em estudos de implante animal não houve evidência de que colágeno intestinal suíno limpo quimicamente tenha causado toxidez sistêmica aguda. Testes de toxidez subcrônicos das próteses da invenção con-

tendo colágeno intestinal suíno confirmaram falta de toxidez subcrônica.

Não existem relatórios na literatura que possam indicar que os compostos químicos usados para limpeza de colágeno intestinal suíno pos- sam afetar o potencial para genotoxidez, ou possam modificar o colágeno para elicitar uma resposta. Testes de genotoxidez das próteses da invenção contendo colágeno intestinal suíno confirmaram falta de genotoxidez de dis- positivo.

O propósito do processo de limpeza química para o colágeno intestinal suíno usado para preparar as próteses da invenção é minimizar antigenicidade através de remoção de células e restos de células. Próteses da invenção contendo colágeno intestinal suíno confirmaram falta de antige- nicidade de dispositivo, como confirmado por estudos de implantes conduzi- dos com o colágeno intestinal suíno limpo quimicamente.

Os constructos ICL da invenção são preferivelmente tornadas viralmente inativadas. No processo de fabricação, a eficácia de dois proce- dimentos de limpeza química, a solução quelante alcalina NaOH/EDTA (pH 11-12) e a solução de sal ácido HCI/NaCI (pH 0-1), para inativar quatro vírus relevantes e modelo foi testada. Os vírus modelos foram escolhidos basea- dos no material suíno de fonte, e para representarem uma ampla faixa de propriedades físico - químicas (ADN, ARN1 vírus envelopados e não- envelopados). Os vírus incluíram vírus de pseudo-raiva, vírus de diarréia viral bovina, reovírus-3 e parvovírus suíno. Os estudos foram conduzidos baseados em documentos de diretrizes de FDA e ICH1 incluindo: CBER/FDA 11 Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals (1993)"; ICH "Note for Guidance on Quality of Biotechnological Products: Viral safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin" (CPMP/ICH/295/95); e, CPMP Biote- chnology Working Party "Note for Guidance on Virus Validation Studies: The Designf Contribution and Interpretation of Studies Validating the Inativation and Removal of Viruses" (CPMP/BWP/268/95). Os resultados do estudo demonstram que a inativação viral cumulativa das duas etapas de limpeza química é uma depuração de mais que 106 para todos os quatro vírus mode- los. Os dados indicam que os procedimentos de limpeza química são um processo robusto e efetivo que mantém o potencial para inativação de uma grande variedade de agentes virais.

Em uma realização preferida, o dispositivo de prótese da inven- ção é uma camada simples de matriz de tecido processado, preferivelmente ICL que foi mecanicamente e quimicamente limpa, que é biocompatível e biorremodelável para uso como uma prótese de enxerto cirúrgico, ou mais preferivelmente, como um curativo de ferimento. Uma modificação preferida para a construção de camada simples é a adição de perfurações ou fenes- trações que se comunicam entre ambos os lados da construção. Para fabri- car uma construção ICL de camada simples, ICL é espalhada lado de muco- sa para baixo sobre uma folha de policarbonato lisa; assegurando remoção de gorduras, bolhas de ar e etiquetas linfáticas visuais. Espalhamento da ICL sobre a folha de policarbonato é realizado para otimizar as dimensões. O material é adequadamente secado sobre sua inteira superfície. O material é fenestrado e então cortado no tamanho e empacotado e finalmente esterili- zado através de especificações de esterilização. Em uma outra realização preferida, o dispositivo de prótese des- ta invenção tem duas ou mais camadas de colágeno superpostas que são ligadas. Como aqui usado, "camadas de colágeno ligadas" significa compos- ta por duas ou mais camadas do mesmo ou diferente material de colágeno tratado em uma maneira de modo que as camadas sejam superpostas umas às outras e sejam suficientemente mantidas juntas por autolaminação e reti-

culação química.

Em uma realização mais preferida, o dispositivo cirúrgico é uma construção de folha plana consistindo em cinco camadas de ICL, ligadas e reticuladas com cloridrato de 1-etil-3-(3-dimetil amino propila) carbo diimida (EDC) em água. Para formar esta construção, uma primeira folha de ICL é espalhada com o lado de mucosa para baixo sobre uma folha de policarbo- nato lisa; assegurando remoção de gorduras, bolhas de ar e etiquetas linfáti- cas visuais. Espalhamento da ICL é feito para otimizar dimensões. Três fo- lhas de ICL (lado de mucosa para baixo) são feitas camadas sobre a primei- ra, assegurando remoção de gorduras, bolhas de ar e etiquetas linfáticas quando cada folha é feito camada. A quinta folha deve ser feita camada com o lado de mucosa para cima, assegurando remoção de gorduras e bolhas de ar. Etiquetas linfáticas visuais são removidas antes de formação de camada desta quinta folha. As camadas são secadas por 24+/- 8 horas. As camadas são agora secadas juntas e então são reticuladas em EDC 1 mM em água por 18+/-2 horas em 500 mL de solução de reticulação por folha de cinco camadas de 30 cm. Cada produto é rinsado com água estéril e é então cor- tado para especificações de tamanho final enquanto hidratado.

Em uma outra realização mais preferida, o dispositivo prótese é uma tipóia cirúrgica que é pretendida para implante para reforçar e suportar tecidos macios onde existe fraqueza incluindo mas não limitado aos seguin- tes procedimentos: suporte pubouretral, reparo prolapso (uretral, vaginal, retal e cólon), reconstrução do piso pélvico, suporte de bexiga, suspensão sacrocolpo, procedimentos reconstrutivos e reparo de tecido. Em uma outra realização mais preferida, o dispositivo de prótese é uma tipóia cirúrgica compreendida por três a cinco camadas de ICL reticuladas, ligadas. Para fabricar um dispositivo de cinco camadas, ICL é espalhada com o lado de mucosa para baixo sobre uma folha de policarbonato lisa; assegurando re- moção de gorduras, bolhas de ar e etiquetas linfáticas visuais. Espalhamen- to da ICL é feito para otimizar dimensões. Uma segunda, terceira e quarta folhas de ICL (lado de mucosa para baixo) são feitas camadas acima da primeira, assegurando remoção de gorduras, bolhas de ar e etiquetas linfáti- cas visuais quando cada folha é feita camada. A quinta folha é feita camada com o lado de mucosa para cima, assegurando remoção de gorduras e bo- lhas de ar. Etiquetas linfáticas visuais devem ser removidas antes de forma- ção de camada desta quinta folha. (Uma construção de três camadas é fa- bricada por uma primeira folha de ICL espalhada com o lado de mucosa pa- ra baixo sobre uma folha de policarbonato lisa; assegurando remoção de gorduras, bolhas de ar e etiquetas linfáticas visuais; uma segunda folha de ICL (lado de mucosa para baixo) feita camada sobre a primeira, e uma ter- ceira folha feita camada sobre a segunda folha com o lado de mucosa para cima). As camadas são secadas por 24+/-8 horas e uma vez secas, são reti- culadas em EDC 10mM em acetona 90% por 18 +/- 2 horas em 500 mL de solução de reticulação por folha de cinco camadas de 30 cm. Cada constru- ção reticulada, ligada é rinsada com água estéril e é cortada para especifica- ções de tamanho fina enquanto hidratada. Através de provimento de suporte pubouretral, a tipóia pode ser usada para o tratamento de incontinência uri- nária resultante de hipermobilidade de uretra ou deficiência de esfíncter in- trínseca. A tipóia cirúrgica consiste em uma folha laminada de cinco cama- das de colágeno intestinal suíno, de cerca de 0,20 mm a cerca de 0,25 mm de espessura. O dispositivo é reticulado com cloridrato de 1-etil-3-(3-dimetil amino propila) carbo diimida (EDC). O dispositivo consiste primariamente em colágeno suíno Tipo I (cerca de >95%) em sua forma nativa, com menos que cerca de 0,7% de lipídeos e níveis indetectáveis de glicosaminoglicanos (cerca de <0,6%) e ADN (cerca de <0,1 Ng/μί). O colágeno intestinal suíno é livre de células restos de células. A temperatura de desnaturação (DSC) da prótese é maior que cerca de 63°C; sua resistência à tração é maior que cerca de 15 N; sua resistência de retenção de sutura é maior que cerca de 2 N usando uma sutura de seda trançada 2-0; e o nível final de endotoxina é £0,06 EU/mL (por cm3 de produto). Embora os aspectos biorremodeláveis da tipóia possam ser variados e nivelados, a prótese tipóia da invenção não é uma substituição de parte de corpo, mas um dispositivo de suporte de órgão implantado como uma estrutura auxiliar, é preferido que as camadas de ICL da tipóia serem mais altamente reticuladas para reduzir a biorremodelagem da tipóia. A prótese de tipóia é uma estrutura de colágeno, flexível, altamen- te biocompatível, que, quando implantada, mantém requisitados suporte es- trutural e resistência enquanto funcionando como um dispositivo de suporte de órgão.

Uma realização preferida da invenção é direcionada a próteses de folha plana, e processos de fabricação e uso de próteses de folha plana, compreendendo duas ou mais camadas de ICL ligadas e reticuladas para uso como um biomaterial implantável capaz de ser biorremodelado por célu- las do paciente. Devido à estrutura de folha plana de ICL1 a prótese é facil- mente fabricada para compreender qualquer número de camadas, preferi- velmente entre 2 e 10 camadas, mais preferivelmente entre 2 e 6 camadas, com o número de camadas dependendo da resistência e volume necessá- rios para o uso final pretendido do constructo. A ICL tem fibras de matriz es- trutural que correm na mesma direção genérica. Quando em camadas, as orientações de camadas podem ser variadas para influenciar as orientações de fibra de tecido genéricas nas camadas de tecido processado. As folhas podem ser feitas camadas de modo que suas orientações de fibra estejam em paralelo ou em diferentes ângulos. Camadas também podem ser super- postas para formação de uma construção com camadas contínuas através de área da prótese. Alternativamente, quando o tamanho último de um ar- ranjo superposto é limitado pela circunferência do intestino, as camadas po- dem estar em ziguezague, em arranjo de colagem para formar uma constru- ção de folha com uma área de superfície maior que as dimensões do mate- rial de partida mas sem camadas contínuas através da área da prótese. Ca- racterísticas complexas podem ser introduzidas tal como um conduíte ou uma rede de conduítes ou canais correndo entre as camadas ou através- sando as camadas, por exemplo.

Na fabricação de uma construção multicamadas compreendendo ICL1 um ambiente asséptico e ferramentas estéreis são preferivelmente em- pregados para manter esterilidade da construção quando partindo com ma- terial ICL estéril. Para formar uma construção multicamadas de ICL, um pri- meiro membro suporte rígido estéril, tal como uma folha rígida de policarbo- nato, é estirado no campo estéril de um gabinete de fluxo laminar. Se as fo- lhas de ICL ainda não estão em um estado hidratado a partir dos processos de limpeza mecânica e química, elas são hidratadas em solução aquosa, tal como água ou solução salina tamponada com fosfato. Folhas de ICL são manchadas com panos absorventes estéreis para absorção de excesso de água do material. Se ainda não feito, o material ICL é limpo de quaisquer etiquetas linfáticas sobre a superfície serosal, a partir do lado abluminal. Uma primeira folha de ICL cortada é colocada sobre a folha de policarbonato e é alisada manualmente à folha de policarbonato para remoção de quais- quer bolhas de ar, dobras, e gorduras. Uma segunda folha de ICL cortada é colocada sobre a primeira folha, novamente removendo manualmente quaisquer bolhas de ar, dobras, e gorduras. Isto é repetido até o desejado número de camadas para uma específica aplicação ser obtido, preferivel- mente entre 2 e 10 camadas.

A ICL tem uma qualidade lateral de seu estado tubular nativo: uma superfície de mucosa interior que fez face a lúmen intestinal no estado nativo e uma superfície serosal exterior oposta que fez face ao ablúmen. Foi verificado que estas superfícies têm características que podem afetar de- sempenho pós-operativo da prótese mas podem ser influenciadas para aper- feiçoado desempenho de dispositivo. Correntemente com o uso de dispositi- vos sintéticos, formação de adesão pode precisar de necessidade de reope- ração para liberar as adesões do tecido circundante. Na formação de um emplastro pericardial ou prótese de reparo de hérnia tendo duas camadas de ICL1 é preferido que a região de ligação das duas camadas esteja entre as superfícies serosal quando as superfícies de mucosa demonstraram ter uma habilidade de resistir a formação de adesão pós-operatória após implante. Em outras realizações, é preferido que uma superfície da prótese de emplas- tro de ICL seja não-adesiva e a outra superfície tenha uma afinidade para aderir a tecido hospedeiro. Neste caso, a prótese terá uma superfície de mu- cosa e a outra superfície serosal. Ainda em uma outra realização, é preferido que as superfícies opostas sejam capazes de criar adesões para crescerem junto com tecidos que contatam as mesmas em qualquer lado, assim a pró- tese terá superfícies serosal sobre ambos os lados da construção. Devido somente as duas folhas exteriores potencialmente contatarem outras estru- turas de corpo quando implantadas, a orientação das camadas internas, se a construção é compreendida por mais de duas, é de menos importância na medida em que elas provavelmente não contribuirão para formação de ade- são pós-operatória.

Após formação de camadas do número desejado de folhas ICL, elas são então ligadas através de desidratação das mesmas juntas em suas regiões de ligação, ou seja, onde as folhas estão em contato. Embora não desejando ser preso por teoria, desidratação de fibras de colágeno das ca- madas ICL juntas quando água é removida de entre as fibras da matriz de ICL. As camadas podem ser desidratadas tanto face aberta sobre o primeiro membro suporte como, entre o primeiro membro suporte e um segundo membro suporte, tal como uma segunda folha de policarbonato, colocada antes de secagem sobre a camada superior de ICL e fixada ao primeiro membro suporte para manter todas as camadas em arranjo planar plano jun- to com ou sem uma pequena quantidade de pressão. Para facilitar desidra- tação, o membro suporte pode ser poroso para permitir ar e umidade passa- rem através das camadas desidratando. As camadas podem ser secadas em ar, em um vácuo, ou através de meios químicos, tal como através de acetona ou um álcool tal como álcool etílico ou álcool isopropílico. Desidra- tação pode ser feita em umidade ambiente, entre cerca de 10% de UR a cerca de 20% UR, ou menos; ou cerca de 10% a cerca de 20% /peso / peso de umidade ou menos. Desidratação pode ser facilmente realizada pendu- rando a estrutura retendo a folha de policarbonato e as camadas de ICL fa- zendo face a fluxo de ar vindo de frente do gabinete de fluxo laminar por pe- Io menos 1 hora até 24 horas em temperatura ambiente, aproximadamente 20°C, e em umidade ambiente.

Embora não seja necessário, na realização preferida, as cama- das desidratadas são reidratadas antes de reticulação. As camadas desidra- tadas de ICL são descascadas do membro suporte poroso e são reidratadas em um agente de reidratação aquoso, preferivelmente água, através de transferência das mesmas para um recipiente contendo agente de reidrata- ção aquoso por pelo menos cerca de 10 a cerca de 15 minutos em uma temperatura entre cerca de 4°C a cerca de 20°C para reidratar as camadas sem separação ou delaminação das mesmas.

As camadas ligadas desidratadas, ou desidratadas e reidrata- das, são então reticuladas juntas na região de ligação através de contato de ICL em camadas com um agente de reticulação, preferivelmente um agente de reticulação químico que preserva a capacidade de biorremodelagem do material de ICL. Como mencionado acima, a desidratação coloca as fibras de colágeno nas matrizes de camadas de ICL adjacentes juntas e reticula- ção daquelas camadas juntas forma ligações químicas entre os componen- tes para ligar as camadas juntas. Reticulação de dispositivo de prótese liga- do também proporciona resistência e durabilidade para o dispositivo para aperfeiçoar propriedades de manuseio e para controle de taxas de biorre- modelagem. Como uma regra geral, um maior grau de reticulação resulta em um maior tempo para o material biorremodelar. Vários tipos de agentes de reticulação são conhecidos na técnica e podem ser usados tais como carbo- diimidas, genipina, transglutaminase, ribose e outros açúcares, ácido nordii- dro guaiarético (NDGA), agentes oxidantes, luz ultravioleta (UV) e processos desidrotérmico (DHT). Aldeídos, como glutaraldeído, também são emprega- dos como um reagente em reticulação; entretanto, dados de estudos usando glutaraldeído como o agente de reticulação são difíceis de interpretar uma vez que tratamento com glutaraldeído também é conhecido deixar para trás resíduos citotóxicos. Por isso, é possível que a reduzida antigenicidade as- sociada com reticulação com glutaraldeído seja devida a citotoxidez não- específica antes que um efeito específico sobre determinantes antigênicos. Reticulação com glutaraldeído é uma maneira para aumentar durabilidade e reduzir antigenicidade de materiais de colágeno como comparados com a- queles que são não-reticulados mas reticulação de materiais de colágeno com glutaraldeído limita significantemente a habilidade do corpo remodelar a prótese na medida em que os resíduos citotóxicos reduzem compatibilidade de célula com o colágeno. Foi mostrado que folhas pequenas de válvula tra- tadas com glutaraldeído tornam-se calcificadas quando implantadas in vivo. Por isso, reticulação com aldeído não é preferida. Uma reticulação ideal é uma que liga das camadas de matriz de tecido processado juntas enquanto preservando manuseabilidade e capacidade de biorremodelagem.

Um agente de reticulação preferido é cloridrato de 1-etil-3-(3- dimetil amino propila) carbo diimida (EDC). Em um outro método preferido, sulfo-N-hidroxissuccinimida é adicionada ao agente de reticulação EDC co- mo descrito por Staros, J. V., Biochem. 221, 3950-3955, 1982. No processo mais preferido, EDC é solubilizado em água em uma concentração preferi- velmente entre cerca de 0,1 mM a cerca de 100 mM, mais preferivelmente entre cerca de 1,0 mM a cerca de 10 mM, mais preferivelmente em cerca de 1,0 mM. Além de água, solução salina tamponada com fosfato ou tampão ácido (2-[N-morfolino] etano sulfônico) (MÊS) pode ser usado para dissolver o EDC. Outros agentes podem ser adicionados à solução, tais como acetona ou um álcool, até 99% v/v em água, tipicamente 50%, para tornar reticulação mais uniforme e eficiente. Estes agentes removem água das camadas para colocar as fibras de matriz juntas para promover reticulação entre aquelas fibras. A razão destes agentes para água no agente de reticulação pode ser usada para regular reticulação. Solução de reticulação de EDC é preparada imediatamente antes de uso na medida em que EDC perderá sua atividade com o tempo. Para contatar o agente de reticulação à ICL, as camadas de ICL ligadas são transferidas para um recipiente tal como uma caçarola rasa e o agnete de reticulação gentilmente decantado para a caçarola assegu- rando que as camadas de ICL sejam ambas, cobertas e flutuando livres e que nenhuma bolha de ar está presente sob ou dentro de camadas de cons- truções de ICL. O recipiente é coberto e as camadas de ICL são deixadas reticularem por entre cerca de 4 a cerca de 24 horas, mais preferivelmente entre 8 a cerca de 16 horas em uma temperatura entre cerca de 4°C a cerca de 20°C. Reticulação pode ser regulada com temperatura: Em menores temperaturas, reticulação é mais efetiva na medida em que a reação é mais lenta; em maiores temperaturas, reticulação é menos efetiva na medida em

que EDC é menos estável.

Após reticulação, o agente de reticulação é decantado e dispos- to e os constructos são rinsados na caçarola através de contato das mesmas com um agente de rinsagem para remoção de agente de reticulação residu- al. Um agente de rinsagem preferido é água ou outra solução aquosa. Prefe- rivelmente, suficiente rinsagem é obtida através de contato de constructos quimicamente ligado três vezes com volumes iguais de água estéril por cer- ca de cinco minutos para cada rinsagem. Usando um escalpelo régua, cons- truções são cortadas no tamanho desejado; um tamanho utilizável é de cer- ca de 6 polegadas quadradas (aproximadamente 15,2 cm χ 15,2 cm) mas qualquer tamanho pode ser preparado e usado para enxerto para um paci- ente. Construçctos também podem ser cortadas em uma forma e tamanho desejados usando processos conhecidos na técnica para corte de biomateri- ais de colágeno.

Constructos são então terminalmente esterilizados usando pro- cessos conhecidos na técnica de esterilização de dispositivo médico. Um método preferido para esterilização é através de contato de constructos com um tratamento com ácido peracético (PA) 0,1% estéril neutralizado com uma quantidade suficiente de hidróxido de sódio (NaOH) 10 N, de acordo com a patente US 5 460 962, a descrição da qual é aqui incorporada. Descontami- nação é realizada em um recipiente sobre uma plataforma agitadora, tal co- mo recipientes Nalge de 1 L, por cerca de 18 +/- 2 horas. Constructos são então rinsadas através de contato das mesmas com três volumes de água estéril por 10 minutos cada rinsagem. Em um processo mais preferido, cons- truções de ICL são esterilizadas usando radiação gama entre 25-37 kGy. Radiação gama diminui significantemente, mas não prejudicialmente, o mó- dulo de Young1 resistência à tração e temperatura de contração. As proprie- dades mecânicas após irradiação gama ainda são suficientes para uso em uma faixa de aplicações e gama é um meio preferido para esterilização na medida em que é amplamente usada no campo de dispositivos médicos im- plantáveis. Indicadores de dosimetria são incluídos com cada corrida de es- terilização para verificar se a dose está dentro de faixa especificada. Cons- truções são embaladas usando um material e desenho de embalagem que asseguram esterilidade durante estocagem. Um meio de embalagem prefe- rido é uma embalagem descascável de camada dupla onde a embalagem principal é uma embalagem de bolha, termo - selada, compreendida por uma bandeja de tereftalato de polietileno modificado com glicol (PETG) com uma tampa de folha de metal com superfície de papel que está encerrada em uma bolsa termo - selada secundária compreendida por um laminado de po- lietileno / tereftalato de polietileno (PET). Juntas, ambas, a embalagem prin- cipal e secundária e a construção de ICL ali contida são esterilizadas usando radiação gama.

Ainda em uma outra realização preferida, após ICL ser reforma- da em um constructo para reparo ou substituição de tecido, ela pode ser po- voada com células para formar um constructo de tecido celular compreen- dendo camadas ligadas de ICL e células cultivadas. Constructos de tecido celular podem ser formadas para imitar os órgãos que elas são para reparar ou substituir.

Culturas de células são estabelecidas de fontes de tecido mamí- fero através de dissociação de tecido ou através do método de explante. Culturas primárias são estabelecidas e criopreservadas em bancos de célula mestre dos quais porções do banco são descongeladas, semeadas, e sub- cultivadas para expandir números de células. Para povoar uma construção ICL a celular com células, o constructo é colocado em uma placa ou frasco de cultura e contatada por imersão em meios contendo células suspensas. Devido colágeno ser uma substância natural para adesão de célula, células ligam-se ao constructo de ICL e proliferam sobre e na matriz de colágeno da construção.

Tipos de células preferidos para uso nesta invenção são deriva- dos de mesênquima. Tipos de células mais preferidos são fibroblastos, célu- las estromais, e outras células de tecido conjuntivo de suporte, ou fibroblas- tos dérmicos humanos. Linhas de células fibroblastos humanas podem ser derivadas de um número de fontes, incluindo, mas não limitado a, prepúcio de macho recém-nascido, derme, tendão, pulmão, cordões umbilicais, carti- Iagemf uretra, estroma de córnea, mucosa oral, e intestino. As células hu- manas podem incluir mas não precisam ser limitadas a: fibroblastos, células de músculo liso, condrócitos e outras células de tecido conjuntivo de origem mesênquimal. É preferido, mas não requerido, que a origem da célula pro- duzindo matriz usada na produção de um constructo de tecido seja derivado de um tipo de tecido que é para parecer ou imitar após emprego de proces- sos de cultura da invenção. Por exemplo, um constructo de folha multicama- das é cultivada com fibroblastos para formar um constructo de tecido conjun- tivo vivo; ou mioblastos, para um constructo de músculo de esqueleto. Mais : 15 de um tipo de célula pode ser usado para povoar um constructo de ICL, por exemplo, uma construção ICL tubular pode ser primeiro cultivada com célu- las de músculo liso e então o lúmen do constructo povoado com o primeiro tipo de célula é cultivado com células endoteliais vasculares como um se- gundo tipo de célula para formar um dispositivo de substituição vascular ce- Iular Similarmente, uma prótese de placa de parede de bexiga urinária é preparada sobre construções de folha de ICL multicamadas usando células de músculo liso como um primeiro tipo de célula e então células endoteliais urinárias como um segundo tipo de célula. Doadores de células podem vari- ar em desenvolvimento e idade. Células podem ser derivadas de doadores de tecidos de embriões, recém-nascidos, ou indivíduos mais velhos incluindo adultos. Células progenitoras embriônicas tais como células tronco mesen- quimais podem ser usadas na invenção e induzidas a diferenciação para

desenvolvimento no desejado tecido.

Embora células humanas sejam preferidas para uso na inven- ção, as células a serem usadas no processo da invenção não são limitadas a células de fontes humanas. Células de outras espécies mamíferas incluin- do mas não limitado a, fontes eqüina, canina, suína, bovina, ovina, e murina podem ser usadas. Em adição, células que são geneticamente engenheira- das através de transfecção espontânea, química, ou viral também podem ser usadas nesta invenção. Para aquelas realizações que incorporam mais de um tipo de célula, misturas de células normais e geneticamente modificadas ou transfectadas podem ser usadas e misturas de células de duas ou mais espécies ou fontes de tecido podem ser usadas, ou ambas.

Células recombinantes ou geneticamente engenheiradas podem ser usadas na produção do constructo célula - matriz para criar um construc- to de tecido que atua como um enxerto de liberação de fármaco para um paciente precisando níveis aumentados de produtos de célula natural ou tra- tamento com um terapêutico. As células podem produzir e liberar para o pa- ciente via o enxerto produtos de célula recombinante, fatores de crescimen- to, hormônios, peptídeos ou proteínas por uma quantidade contínua de tem- po ou quando necessário quando sinalizado biologicamente, quimicamente, ou termicamente devido às condições presentes no paciente. Células tam- bém podem ser geneticamente engenheiradas para expressarem proteínas ou diferentes tipos de componentes de matriz extracelular que são 'normais' mas expressos em altos níveis ou modificados em alguma maneira para fa- bricar um dispositivo de enxerto compreendendo matriz extracelular e célu- las vivas que é terapeuticamente vantajoso para aperfeiçoada cura de feri- mento, ou facilitada ou direcionada neovascularização. Estes procedimentos são geralmente conhecidos na técnica, e são descritos em Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY (1989), aqui incorporada por referência. Todos os tipos de células mencionados acima podem ser usados nesta invenção para a produ- ção de um constructo de tecido celular formado a partir de um constructo acelular formado de camadas de ICL ligadas.

As próteses da invenção, funcionando como uma parte de corpo substituta, podem ser planas, tubulares, ou de geometria complexa. A forma da prótese formada será decidida pelo seu uso pretendido. Assim, quando formando as camadas de ligação da prótese desta invenção, o membro su- porte de placa ou molde pode ser modelado parra acomodar a forma dese- jada. As próteses multicamadas planas podem ser implantadas para reparo, aumento, ou substituição de órgãos adoentados ou danificados, como pare- de abdominal, pericárdio, hérnias, e vários outros órgãos e estruturas inclu- indo, mas não limitado a, osso, peristoneum, perichondrium, disco interver- tebral, cartilagem articular, derme, intestinos, ligamentos, e tendões. Em adi- ção, as próteses multicamadas planas podem ser usadas como uma placa vascular ou intra-cardíaca, ou como uma substituição de válvula cardíaca.

Folhas planas também podem ser usadas para suporte de ór- gão, por exemplo, para suportar órgãos caídos ou hiper-móveis através do uso de uma folha como uma tipóia para os órgãos, tal como bexiga ou útero. Próteses tubulares podem ser usadas, por exemplo, para substituição de seções transversas de órgãos tubulares como vasculatura, esôfago, traquéi- a, intestino, e tubos de falópio. Estes órgãos têm uma forma tubular básica com uma superfície exterior e uma superfície Iuminal interior. Em adição, folhas planas e estruturas tubulares podem ser formadas juntas para forma- ção de uma estrutura complexa para substituir ou aumentar válvulas cardía- cas ou venosas.

As próteses de enxerto bioengenheiradas da invenção podem ser usadas para reparo ou substituição de estruturas do corpo que tenham sido danificadas ou adoentadas em tecido hospedeiro.

Enquanto funcionando como uma parte substituta de corpo ou suporte, a prótese também funciona como um tablado de matriz biorremode- lável para o crescimento para dentro de células hospedeiras. "Biomodela- gem" é aqui usado para significar a produção de colágeno estrutural, vascu- larização, e repovoamento de células através de crescimento para dentro de células hospedeiras em uma taxa de cerca de igual à taxa de biodegrada- ção, nova formação e substituição dos componentes de matriz das próteses implantadas pelas células hospedeiras e enzimas. A prótese de enxerto re- tém suas características estruturais enquanto ela é remodelada pelo hospe- deiro em todo, ou substancialmente todo, tecido hospedeiro, e como tal, é funcional como um análogo do tecido que repara ou substitui.

Módulo de Young (MPa) é definido como a constante proporcio- nal linear entre tensão e deformação. A resistência à tração (N/mm) é uma medição da resistência através da prótese. Ambas estas propriedades são uma função do número de camadas de ICL na prótese. Quando usada como um dispositivo de suporte ou transporte de carga, ela deve ser capaz de su- portar os rigores de atividade física durante a fase de cura inicial e por toda remodelagem.

Resistência de laminação das regiões de ligação é medida u- sando um teste de descascamento. Imediatamente seguindo implantação cirúrgica, é importante que as camadas não delaminem sob tensões físicas. Em estudos animais, nenhum material explantado mostrou qualquer evidên- cia de deiaminação. Antes de implante, a resistência de adesão entre duas camadas opostas é de cerca de 8,1 +/- 2,1 N/mm para uma construção mul-

ticamadas reticulada com EDC 1 mM.

Temperatura de contração (0C) é um indicador da extensão de reticulação de matriz. Quanto maior a temperatura de contração, mais reticu- Iado o material. ICL irradiada - gama, não-reticulada tem uma temperatura de contração de cerca de 60,5 +/-1,0. Na realização preferida, uma prótese reticulada com EDC preferivelmente terá uma temperatura de contração en- tre cerca de 64,0+/-0,2°C a cerca de 72,5+/-1,1°C para dispositivos que são reticulados em EDC 1 mM a cerca de EDC 100 mM em acetona 50%, res- pectivamente.

As propriedades mecânicas incluem integridade mecânica de modo que a prótese resiste a deslizamento durante biorremodelagem, e adi- cionalmente é flexível e suturável. O termo "flexível" significa boas proprie- dades de manuseio para facilidade em uso na clínica.

O termo "suturável" significa que as propriedades mecânicas da camada incluem retenção de sutura que permite que agulhas e materiais de sutura passem através de material de prótese no momento de sutura da pró- tese a seções de tecido nativo. Durante sutura, tais próteses não devem rasgar como um resultado das forças de tração aplicadas às mesmas pela sutura, nem devem rasgar quando a sutura é unida. Capacidade de sutura das próteses, isto é, a habilidade de próteses resistirem a rasgamento en- quanto sendo suturadas, está relacionada à resistência mecânica intrínseca do material de prótese, a espessura do enxerto, a tensão aplicada à sutura, e a taxa na qual o nó é amarrado. Retenção de sutura uma prótese de 6 ca- madas plana altamente reticulada em EDC 100 mM e acetona 50% é cerca de 6,7 +/-1,6 N. Retenção de sutura para uma prótese de 2 camadas reticu- lada em EDC 1 mM em água é cerca de 3,7 +/- 0,5 Ν. A resistência de re- tenção de sutura inferior preferida é de cerca de 2 N para uma prótese de 2 camadas plana reticulada quando uma força de cirurgião em sutura é de cerca de 1,8 N,

Como aqui usado, o termo "não-deslizante" significa que as pro- priedades biomecânicas da prótese proporcionam durabilidade de modo que a prótese não é estirada, distendida, ou expandida além de limites normais após implantação. Como é descrito abaixo, estiramento total da prótese im- plantada desta invenção está dentro de limites aceitáveis. A prótese desta invenção adquire uma resistência a estiramento como uma função de bior- remodelagem celular pós-implantação através de substituição de colágeno estrutural por células hospedeiras em uma taxa mais rápida que a perda de resistência mecânica dos materiais implantados devido a biodegradação e remodelagem.

O material de tecido processado da presente invenção é "semi- permeável", embora tenha sido feito em camadas e ligado. Semipermeabili- dade permite o crescimento para dentro de células hospedeiras para remo- delagem ou para deposição de agentes e componentes que podem afetar capacidade de biorremodelagem, crescimento para dentro de células, pre- venção ou promoção de adesão, ou fluxo de sangue. A qualidade "não- porosa" da prótese previne a passagem de fluidos pretendidos serem retidos através de implantação da prótese. Ao contrário, poros podem ser formados na prótese se uma qualidade perfurada ou porosa é requerida para uma a-

plicação da prótese.

A integridade mecânica da prótese desta invenção está também em sua habilidade de serem drapeadas ou dobradas, assim como a habili- dade de corte da prótese obtendo uma borda limpa sem delaminação ou esfregação de bordas da constructo.

Uma outra realização preferida da invenção é uma prótese para procedimentos de mastopexia compreendendo duas ou mais camadas qui- micamente ligadas, superpostas de material de colágeno que, quando im- plantada em um paciente mamífero, sofre controlada biodegradação ocor- rendo com adequada substituição de célula viva de modo que a prótese im- plantada original é remodelada pelas células vivas do paciente. Em uma rea- lização mais preferida, o material de tecido processado derivado de intestino, derme, fascia Iata1 pericárdio ou dura mater, mas mais preferivelmente é de- rivado da submucosa de intestino delgado suíno. Deve ser notado que reali- zações compreendendo matriz de tecido processado derivado de derme, incluindo derme de cadáver, pode compreender uma camada simples de derme quando este tecido é colhido com diferentes espessuras e, como tal, o material não precisa ser feito camadas e ligado; entretanto, fontes de teci- 1 15 do mais espessas apresentam desafios quando limpando para purificar a- quelas matrizes de tecido. Performance de dispositivos de mastopexia são aperfeiçoadas quando materiais de colágeno purificados são empregados, assim colágeno purificado é um material preferido para estes dispositivos. Uma vantagem de uma prótese de mastopexia fabricada de material de co- lágeno é que a prótese não interfere com formação de imagem radiográfica, tal como em técnicas de mamografia para formar imagem de tecido de ma- ma.

A prótese de mastopexia da invenção é geralmente plana, alon- gada e suavemente arqueada e parece um crescente com extremidades em ponta, arredondadas ou quadradas. Uma forma de semicírculo ou meia - lua também pode ser usada como a forma para a prótese. A forma do arco pode ser elíptica (similar a uma elipse dividida ao meio no comprimento), parabóli- ca, ferradura, ou de uma forma arqueada geralmente similar. O dispositivo de mastopexia da invenção compreende preferivelmente entre duas e dez, mais preferivelmente três a cinco, mais preferivelmente quatro camadas quimicamente reticuladas de matriz de tecido processado tendo uma forma arqueada ou crescente e está entre cerca de 7 cm a cerca de 12 cm de lar- gura e cerca de 25 cm a cerca de 35 cm de comprimento, mais preferivel- mente cerca de 9 cm a cerca de 10 cm de Iargura e cerca de 28 cm a cerca de 32 cm de comprimento. Por isso, ο dispositivo de mastopexia da invengiao έ uma protese para mastopexia, ou Ievantamento de mama, compreendendo duas camadas quimicamente ligadas, superpostas, de material de colageno que, quando implantada em um paciente mamifero, sofre controlada biode- gradagSo ocorrendo com adequada substituigao de c^lula viva de modo que a pr6tese implantada original ό remodelada pelas c^lulas vivas do paciente. O dispositivo de mastopexia da invengSo preferivelmente compreende entre tr^s a sete camadas de matriz de tecido processado, mais preferivelmente entre quatro a seis camadas de matriz de tecido processado, onde e mesmo mais preferido que nestas realizagoes da invengao que a matriz de tecido processado seja ICL e onde as camadas sao quimicamente ligadas com EDC. O grau de reticulag^o έ um que permite que as camadas de tecido 1 15 processado persistam substancialmente por cerca de seis meses antes das camadas biorremodelarem atraves de infiltra^ao das celulas de paciente nas camadas de matriz para substituirem a matriz implantada com matriz produ- zida pelas celulas do paciente. Qualquer um dos processos de reticulag§o usando EDC, aqui descritos, pode ser usado na preparagao das proteses de

mastopexia da ίηνβηςδο.

Modificagdes e caracterfsticas fisicas tamb6m podem ser adicio- nadas ao desenho. Preferivelmente, a prbtese έ entrela^ada tanto comple- tamente como parciatmente no eixo de comprimento gen^rico da pr6tese. A tela prove aberturas que se comunicam entre as superficies planas opostas da pr6tese para proporcionar mOltiplos beneficios de performance quando a pr0tese e implantada. Um beneficio έ que as aberturas de tela permitem, transporte de fluido e celulas entre as superficies exteriores da protese e podem prover contato de tecido sobre qualquer 丨ado da pr0tese implantada onde a permissao deste transporte e contato prove aperfeigoada integrapao e biorremodelagem da protese. Um outro beneficio das aberturas de tela e que ο cirurgi§o pode ajustar a forma e contorno da pr0tese para afetar a forma e curvatura de mama. A tela έ provida como um arranjo de fendas correndo em paraIelo umas έΐδ outras com deslocamento de fendas adjacen- tes em arranjo em ziguezague de modo que quando ο material e puxado em uma direpao perpendicular a direpao das fendas, ο material ir^ estirar e as fendas abrirSo de modo que a aparencia do material e uma tela. A dire^ao das fendas correm geralmente na diregSo do comprimento da protese. A pro- tese feita tela, quando puxada na dire^o das fendas, ainda ret6m sua resis- tencia e suporte quando ela oferece somente uma quantidade minima de estiramento. Para ο cirurgiao melhor conformar ο material dispositivo ^s ca- racteristicas de um expansor de tecido ou implante, ο arranjo de tela permite certas ^reas do materia丨 estirarem e abrirem as fendas enquanto permitindo outras dreas permanecerem fechadas. Mais especificamente, ο cirurgiao contorna ο tecido de mama atrav合s de extensSo de material de protese no pico da curva da pr6tese a partir de sob a mama e ascendente na diregao de complexo de mamilo - aureola para Ievantar e suportar ο Iado inferior da :15 mama. Assim fazendo pode-se abrir as fendas mais na porpao apical da pro- tese mais que aquelas na porg^o base. O tamanho de arranjo das fendas sSo descritos como uma "razao de tela" que e definida como a diferenga do material expandido comparado a seu tamanho antes de expansao. O eom- primento das incisdes determina ο grau de expansao. A razao de tela provi- da para a pr6tese deve estar preferivelmente entre 1:1 e 3:1, mais preferi- velmente em uma razSo entre 1:1 e 1,5:1. Outras modifica?Ces fisicas que podem ser providas para a pr6tese sao perfuragiees, orificios, ou fenestra- tes ao Iongo de principal superficie da prbtese. Estas modificagoes fisicas podem ser providas manualmente usando um escalpelo ou pungao de bi0p- sia ou atrav6s do uso de uma m^quina de corte - cossinete, uma maquina de corte de jato de Sgual laser, ou outros meios de corte conhecidos na tecnica.

Um outro desenho preferido para a protese de mastopexia da invengao έ uma forma arqueada e alongada, geralmente plana e parecendo com um crescente com extremidades apontadas, arredondadas ou quadra- das onde a regiao de centro da prbtese έ entrela^ada com fendas que po- dem ser abertas para contornar a prbtese e as porg0es de extremidade tem perfurapoes em um arranjo de grade ou em ziguezague de modo a nao per- mitir contorno mas provendo resist§ncia no sitio de Iiga^o da pr6tese a te- cid os de corpo.

Um outro aspecto da inver^ao έ um processo para tratamento de um paciente com um dispositivo de mastopexia colagenoso, biorremode- lavel, tendo uma forma alongada e arqueada. As Figuras 1 a 5 mostram par- ticulares desenhos de dispositivo de mastopexia da invensao.

A Figura 1 mostra um dispositivo de mastopexia da invengao onde ο dispositivo de mastopexia 1 έ alongado e arqueado tendo duas por- g6es de extremidade quadradas 20 com um ^pice 10 e base 30. A Figura 2 mostra ο dispositivo de mastopexia da inver^ao com

fendas de tela fechadas onde ο dispositivo de mastopexia 2 e alongado e arqueado tendo duas porq^es de extremidade quadradas 20 com um ^pice 10’ base 30 e fendas de tela 50 em um arranjo regular atrav^s do dispositivo inteiro.

A Figura 3 mostra ο dispositivo de mastopexia 3 da invengao

com fendas de tela fechadas na regiSo central do dispositivo onde ο disposi- tivo de mastopexia 3 e alongado e arqueado tendo duas porpoes de extre- midade quadradas 20 com um apice 10’ base 30 e fendas de tela 50 em um arranjo regular em uma porgSo central 60 do dispositivo. A Figura 4 mostra ο dispositivo de mastopexia 4 da invenpao

com fendas de tela fechadas na regiao apical (ou ^pice) central do dispositi- vo onde ο dispositivo de mastopexia 3 έ alongado e arqueado tendo duas porgoes de extremidade quadradas 20 com um dipice 10’ base 30 e fendas de tela 50 em um arranjo regular em uma ροι^δο apical, centra丨 70 do dispo- sitivo. Por^es de extremidade 20 e base 30 nao t各m fendas de tela provi- das.

A Figura 5 mostra ο dispositivo de mastopexia 5 da inven^ao com fendas de tela fechadas onde ο dispositivo de mastopexia 5 έ alongado e arqueado tendo duas porgoes de extremidade arredondadas 20 com um ^pice 10’ base 30 e fendas de tela 50 em um arranjo regular atrav^s do dis- positivo inteiro exceto na borda 60 do dispositivo.

A Figura 6 mostra ο dispositivo de mastopexia 5 da invengSo com fendas de tela fechadas onde ο dispositivo de mastopexia 6 έ alongado e arqueado tendo duas porgaes de extremidade arredondadas20 com um ^pice 10 e fendas de tela 50 em um arranjo regular atraves do dispositivo inteiro exceto na borda 60 e regiSo de base 30 do dispositivo. Cirurgias de

mastopexia sao realizadas com redu^o, aumento ou nem redu^So nem aumento. Todas as tres t6cnicas cirOrgicas da inven^o envolvem Ievanta- mento, suporte, e conformagao da mam usando ο dispositivo de mastopexia da presente inven^So. Assim, a presente invengao inclui um processo para tratamento de um paciente com um dispositivo de mastopexia para levantar,

suportar e conformar a mama com um dispositivo de mastopexia de colage- no biorremodel^vel que permite forma^ao de imagem mamogr^fica do tecido de mama.

Mais especificamente, ο processo da presente invengao inclui processos para tratamento de mastopexia usando a protese da ΐηνβης§ο em :15 procedimentos de Ievantamento com ou sem procedimentos de aumento de mama ou redu^ao de mama. Por isso, os processos da invengao incluem: um processo para tratamento de mastopexia com redugao em volume de

mama, compreendendo:

1. marcag§o de quatro pontos sobre a mama ao redor de areola

para determinar a quantidade de pele necess白ria para ambos’ ο forro exter- no de pele da nova mama e ο excesso de pele na regi§o periareolar para ο retalho d6rmico a ser usado para ο forro interno de pele

2. desepitelizagdo de retalho para obter ο pediculo central

3. deslocamento subcutaneo de mama abaixo ntvel da fascia

peitoral

4. dissecagao de pele sobre ο vies no hemisf6rio superior de modo a aumentar progressivamente a espessura do tecido de gordura sub- cutaneo proximo da pele e

5. ressec9ao de uma cunha central de tecido e encurtando ο raio

de hemisf^rio superior

6. dissecagao de pele a partir do tecido parenquimal no hemisfe-

rio inferior da mama 7. opcionalmente ressectando uma segunda cunha central de

tecido no hemisf6rio inferior

8. aplicagSo de uma protese de mastopexia sobre ο retalho d6r- mico no hemisferio inferior para apoiar ο Iado inferior da mama

9. sutura de prdtese de mastopexia para a fascia pectoralis para

promover eleva^do e forma do cone mam^rio

10. suturando fechado ο forro de pele externo enquanto fixando a pele areolar ao forro de pele externo

11. aplicapao de curativo έ mama em uma maneira de suporte

que permita drenagem de exsudados.

O processo da inven^o tambem inclui um tratamento de masto- pexia para Ievantamento de tecido de mama compreendendo

1. marcagSo de quatro pontos sobre a mama ao redor de areola para determinar a quantidade de pele necessaria para ambos, ο forro exter-

：15 no de pele da nova mama e ο excesso de pele na regiao periareolar para ο retalho d6rmico a ser usado para ο forro interno de pele

2. desepitelizagao do retalho para reter ο pediculo central

3. deslocamento subcutdneo de mama abaixo nivel' da fascia

peitoral

4. dissecagao de pele sobre ο vies no hemisferio superior de

modo a aumentar progressivamente a espessura do tecido de gordura sub-

cutaneo proximo da pele e

5. dissecag^o de pele do tecido par^nquimal no hemisferio infe- rior da mama

6. aplica9ao de uma protese de mastopexia sobre ο retalho d6r-

mico no hemisferio inferior para apoiar ο Iado inferior da mama

7. sutura de protese de mastopexia para a fascia peitoral para

promover elevagao e forma do cone mam^rio

8. sutura fechada de forro de pele externo enquanto fixando a

pele aureolar ao forro de pele externo

9. aplica^o de curativo έ mama em uma maneira suporte que

permita drenagem de exsudados. O processo da invengao ainda inclui um processo para tratamen- to de mastopexia com aumento (realizado em uma ou duas operagoes) onde ο processo compreende:

1. insergao de um implante de mama tanto sob ο miisculo em uma bolsa submuscular onde ο implante έ grande e ο grau de arqueamento

έ maior, ou sob a gldndula mamaria em uma bolsa subglandular se ο implan- te έpequeno

2. marcagao de quatro pontos sobre a mama ao redor de ar6ola para determinar a quantidade de pele necess甴ria para ambos, ο forro exter-

no de pele da nova mama e ο excesso de pele na regiSo periareolar para ο retalho d^rmico a ser usado para ο forro interno de pele

3. desepiteliza^ao de retalho para obter ο pediculo central

4. deslocamento subcutaneo de mama abaixo nivel da fascia

peitoral

5. dissecagao de pele sobre ο vi6s no hemisferio superior de

modo a aumentar progressivamente a espessura do tecido de gordura sub- cutaneo proximo da pele e

6. dissecapSo da pele do tecido parenquimal no hemisferio infe- rior da mama

7. aplica^ao de uma protese de mastopexia sobre ο retalho der-

mico no hemisferio inferior para apoiar ο Iado inferior da mama

8. sutura de pr6tese de mastopexia para a fascia pectoralis para

promover elevagdo e forma do cone mam^rio

9. suturando fechado ο forro de pele externo enquanto fixando a

pele areolar ao forro de pele externo

10. aplicagao de curativo έι mama em uma maneira de suporte

que permita drenagem de exsudados

Ainda uma outra realizado preferida da inver^So έ uma pr6tese para reconstrugSo de mama compreendendo duas ou mais camadas quimi- camente Iigadast superpostas de material de col^geno que, quando implan- tada em um paciente mamifero, sofre biodegrada^o controlada ocorrendo com adequada substitui^o de c6lulas vivas de modo que a pr0tese implan- tada original e remodelada pelas c^lulas vivas do paciente. O dispositivo de reconstrugao de mama da invengao preferivelmente compreende entre tres a sete camadas de matriz de tecido processado, mais preferivelmente entre quatro a seis camadas de matriz de tecido processado, onde e mesmo mais preferido que nestas realiza^es da invengao a matriz de tecido processado seja ICL e onde as camadas sao quimicamente Iigadas com EDO. O grau de reticulagao e um que permite as camadas de tecido processado persistirem substancialmente por cerca de seis meses antes das camadas biorremode- Iarem atrav6s de infiltra^o das c^lulas do paciente nas camadas de matriz para substituirem a matriz implantada com matriz produzida pelas c6lulas do paciente. Qualquer um dos processos de reticulagao usando EDC, aqui des- critos, pode ser usado na preparag§o das proteses de reconstrugao de ma- ma da invenpao. Em cirurgias de reconstru^o de mama, usualmente ο ex- pansor de tecido έ removido no ponto de tempo de seis meses e ο implante e colocado em seu lugar. O dispositivo de reconstrugao de mama preferi- velmente e entrelagado atraves de provimento de um arranjo de fendas que se comunicam entre as duas superficies planares do dispositivo.

A tela e provida como um arranjo de fendas correndo em parale- Io com deslocamento de fendas adjacentes em arranjo em ziguezague de modo que quando ο material e puxado em uma direpSo perpendicular a dire- ςδο das fendas, ο material 怕 estirar e as fendas abrir^o de modo que a apa- rencia do material e uma tela. O material de dispositivo, quando puxado na diregao das fendas, ainda ret6m sua resistdncia quando ele oferece somente uma quantidade minima de estiramento. Para ο cirurgiao melhor conformar ο material de dispositivo as caracteristicas do expansor de tecido ou implante, ο arranjo de tela permite que certas ^reas do material sejam estiradas para abrir as fendas enquanto permitindo que outras ^reas permane^am fecha- das. O arranjo de tela permite comunicagao fluida entre as camadas e me- lhor conformidade para ο expansor de tecido ou implante enquanto ainda permitindo ο mesmo prover ο necess^rio suporte e cobertura para ο expan- sor ou implante. AI6m disso, ο dispositivo de reconstrugao de mama da in- vengao έ conformado crescente, geralmente mais largo no centro e estreito nas porgoes de extremidade lateral e έ entre cerca de 12 cm a cerca de 24 cm de comprimento e cerca de 4 cm a cerca de 8 cm de Iargura em seu pon- to mais largo. As poises de extremidade podem ser apontadas, arredonda- das ou quadradas. O cirurgi^o pode selecionar ο dispositivo de tamanho a- propriado a partir de uma s6rie de tamanhos dependendo do tamanho da mama a ser reco门struida.

A Figura 7 mostra uma pr6tese de reconstrugao de mama da ίηνβηφδο onde prdtese de reconstru^So de mama 7 έ alongada e arqueada tendo duas porgoes de extremidade em ponta 70 com um apice 80 e uma base 100.

A Figura 8 mostra uma prbtese de reconstru^So de mama da invengSo onde a pr6tese de reconstrugao de mama 7 e alongada e arqueada tendo duas porgoes de extremidade em ponta 70 com um apice 80, base 100 e fendas de tela 50 em um arranjo regular atraves de pr0tese inteira.

:15 A Figura 9 mostra uma prdtese de reconstrup§o de mama da

invenpao onde protese de reconstru^ao de mama 7 έ alongada e arqueada tendo duas porpoes de extremidade em ponta 70 com um apice 80, base 100 e fendas de tela 50 em um arranjo regular atraves de dispositivo inteiro

exceto na borda 90 da protese. Os exemplos que se seguem sSo providos para melhor explicar

a pr^itica da presente invengao e nSo devem ser interpretados em qualquer maneira para IimitagSo do escopo da preserite inven^So. Ser^ apreciado que ο desenho de dispositivo em sua composi^o, forma, e espessura έ para ser selecionado dependendo da Oltirna indicagSo para a constru?§o. Aqueles versados na t6cnica reconhecerao que v^rias modificagOes podem ser feitas para os processos aqui descritos sem se fugir do espirito e escopo da pre- sente invengao. Exemplos

ExemDlo 1: Limpeza auimica de intestino delaado suino Iimpo mecanica- mente

O intestino delgado de um porco foi colhido e mecanicamente separado, usando uma m^quina de Iimpeza de intestinos Bitterling (Nottin- gham, UK) que remove de maneira forgada as camadas de gordura, miiscu- Io e mucosa da submucosa tunica usando uma combina^ao de agao meca- nica e Iavagem usando ^gua. A a^ao mecanica pode ser descrita como uma serie de rolos que comprimem e separam as sucessivas camadas da sub- mucosa tiinica quando ο lntestino intacto e corrido entre os mesmos. A sub- mucosa tOnica do intestino delgado έ comparativamente mais dura e rija que ο tecido circundante, e os rolos espremem os componentes mais moles da submucosa. O resultado da Iimpeza em maquina foi tal que a camada sub- mucosa do intestino foi a Cinica restante. O restante do procedimento, Iimpeza quimica de acordo com ο

pedido PCT WO 98/49969 para Abraham, et al.’ foi realizado sob con_es ass6pticas e em temperatura ambiente. As so_es quimicas foram todas usadas em temperatura ambiente. O intestino foi entSo cortado no compri- mento abaixo de ICimen e entao cortado em segoes de 15 cm. Material foi pesado e colocado em recipientes em uma raz§o de cerca de 100:1 v/v de solu^ao para material intestinal.

A. A cada recipiente contendo intestino foi adicionado aproxima- damente 1 L de solugSo de sal de tetra sodio etileno diamino tetra ac§tico (EDTA) 100 mM esterilizado em filtro de 0,22 μηι / solu^ao de hidroxido de s0dio (NaOH) 10 mM. Recipientes foram entao colocados sobre uma mesa agitadora por cerca de 18 horas a cerca de 200 rpm. Ap0s agitagao, a solu- 5^0 de EDTA / NaOH foi removida de cada garrafa.

B. A cada recipiente foi entao adicionado aproximadamente 1 L de solu^o de έο\6ο cloridrico (HCI) 1 M esterilizado em filtro de 0,22 pm / solug^o de cloreto de sodio (NaCI) 1 M. Recipientes foram entao colocados sobre uma mesa agitadora por entre cerca de 6 a 8 horas em cerca de 200 rpm. Ap0s agitagao, a solug3o de HCI / NaCI foi removida de cada recipien- te.

C. A cada recipiente foi entao adicionado aproximadamente 1 L de solu^ao de cloreto de s0dio (NaCI) 1 M esterilizado em filtro de 0,22 pm /

solugao salina tamponada com fosfato (PBS) 10 mM. Recipientes foram en- tao colocados sobre uma mesa agitadora por aproximadamente 18 horas em

:15

20 200 rpm. Ap6s agitato, a solugao de NaCI / PBS foi removida de cada reci- piente.

D. A cada recipiente foi entdo adicionado aproximadamente 1 L de solugao de PBS 10 mM esterilizado em filtro de 0,22 μηι. Recipientes fo-

ram entao colocados sobre uma mesa agitadora por cerca de duas horas em 200 rpm. Apos agitagao, a solu9ao salina tamponada com fosfato foi entao removida de cada recipiente.

E. Finalmente, a cada recipiente foi entSo adicionado aproxima- damente 1 L de dgua esterilizada em filtro de 0,22 μηι. Recipientes foram

entao colocados sobre uma mesa agitadora por cerca de uma hora a 200 rpm. Apos agitagao, a agua foi entao removida de cada recipiente.

Amostras de ICL processadas foram cortadas e fixadas para a- nalises histologicas. Manchamento com hematoxilina e eosina (H&E) e tri- cromo de Masson foi realizado sobre ambas amostras de sepSo transversa e :15 seg§o Ionga de ambos tecidos, controle e tratado. Amostras de tecido ICL processado pareceram Iivres de celulas e fragmentos celulares enquanto amostras controles ηδο-tratadas apareceram normalmente e esperadamente muito celular.

Este material de camada simples de ICL pode ser usado como uma camada simples ou usado para formar construgdes multicamadas Iiga- das’ constructos tubulares, ou constructos com aspectos geom6tricos pianos e tubulares complexos.

ExemDlo 2: Processo para fabricacgio de uma construcao ICL multicamadas

ICL processada de acordo com ο processo de Exemplo 1 foi u- sada para formar um constructo multicamadas tendo 2 camadas de ICL. Uma folha est6ril de policarbonato porosa (tamanho de poro, fabricante) foi colocada no campo esteril de um gabinete de fluxo laminar. ICL foi secada com TEXWIPES (LYM-TECH Scientific, Chicopeel MA) est^ril para absorver excesso de ^gua do material. Material ICL foi aaparado de suas etiquetas iinfdticas a partir do 丨ado ablumtnal e ent9o cortado em pepas de cerca de 6 polegadas de comprimento (aproximadamente 15,2 cm). Uma primeira folha de ICL aparada foi colocada sobre a folha de policarbonato,丨ado de mucosa para baixo, removendo manualmente quaisquer bolhas de ar, dobras, e gor- duras. Uma segunda folha de 丨CL aparada foi colocada ο Iado abluminal ou de face superior da primeira folha com ο Iado abluminal da segunda folha contatando ο Iado abluminal da primeira folha, novamente removendo ma- nualmente quaisquer bolhas de ar, dobras, e gorduras. A folha de policarbo- nato com as camadas de ICL pendurada com as camadas de ICL fazendo face a fluxo de ar vindo de frente do gabinete de fluxo laminar. As camadas foram deixadas secar por cerca de 18+/-2 horas no gabinete em temperature ambiente, aproximadamente 20。C. As camadas secadas de ICL foram entSo descascadas da folha de policarbonato juntas sem separagSo ou delamina- gao das mesmas e foram transferidas para um banho de ^gua em tempera- tura ambiente por cerca de 15 minutos para hid rata r as camadas.

Solugao de reticula^ao quimica de EDC 100 mM / acetona 50% foi preparada imediatamente antes de reticulag^o na medida em que EDC :15 perdera sua atividade com ο tempo. As camadas hidratadas foram entao transferidas para uma ca^arola rasa e ο agente de reticulag§o suavemente decantado para a cagarola assegurando que as camadas foram ambas, co- bertas e flutuando Iivremente e que nenhuma bolha de ar estava presente sob ou dentro das construgoes. A caparola foi coberta e deixada em repouso por cerca de 18+/- 2 horas em capela. A solugSo de reticulagao foi decanta- da e disposta. Construgoes foram rinsadas na cagarola tr§s vezes com agua est^ril por cerca de cinco minutos para cada rinsagem. Usando um escalpelo e r^gua, constates foram aparadas para ο desejado tamanho.

Construgoes foram descorttaminadas com tratamento com ^cido peracetico (PA) 0,1% est6ril neutralizado com hidr0xido de s0dio (NaOH) 10 N de acordo com patente US 5 460 962, a exposigao da qual έ aqui incorpo- rada. Construgoes foram descontaminadas em recipientes Nalge de 1 L so- bre uma plataforma de agitagao por cerca de 18+/-2 horas. Constructos fo- ram entao rinsadas com tres volumes de ^gua esteril por 10 minutos cada rinsagem e atividade PA foi monitorada atrav6s de testes de tira Minncare para assegurar sua remogao dos constructos.

Constructos foram entao embaladas em bolsas plasticas usando um selador έι v^cuo as quais foram por sua vez colocadas em bolsas herm6-

ticas para irradiapao gama entre 25,0 e 35,0 kGy.

Exemplo 3: Estudos de implante usando construcoes ICL multicamadas

Coelhos brancos New Zealand foram usados para an^lise in vivo e todos os procedimentos foram realizados de acordo com diretrizes de A- nimal Care and Use Committee (ACUC). Um defeito de espessura inteira de aproximadamente duas polegadas foi criato atrav§s de mOsculo rectus ab- dominis em cada animal e entSo foi reparado com uma protese de placa de 6 camadas. Placas foram removidas em 30’ 66, 99 e 180 dias apos- implante. Tr^s coeihos foram sacrificados em cada ponto de tempo e exami- nados para qualquer evidencia de formagao de hernia, intumescimento, in- fecpSo ou adesoes. Placas expiantadas foram fixadas em formalina e man- chadas com hematoxilina e eosina ou vermelho alizarina para avaliagSo his- tologica de infiltrap§o de c6lulas’ resposta inflamat0ria e ca!cificag§o. Em :15 alguns casos, placas nao-fixadas foram avaliadas para determinar ο efeito de implante sobre as caracteristicas mecanicas usando analise MTS uniaxi- al.

Todos os animais sofreram um curso pos-operatorio calmo sem intumescimento, formag^o de h6rnia ou inflamag^o no sitio de reparo da pa- rede abdominal. No momento do explante, a superficie interior da placa foi coberta com uma camada de tecido cintilante que pareceu ser continua com ο peritoneo parietal. Em um animal explantado ap6s 30 dias, uma adesao grau um para as visceras abdominais expiantadas foi visto e pareceu estar associado com a Iinha de sutura antes que ο prdprio implante. NeovascuIari- za?So da superficie peritoneal das placas foi observada em todos os pontos de tempo.

Dentro de 30 dias, a superficie peritoneal da placa foi coberta com mesotelio. C^lulas inflamat6rias tipicas de uma resposta de corpo es- tranho estavam presentes por todo ο explante mas mais predominantes na periferia da placa. As c6lulas inflamat0rias consistiram principalmente em macrofagos e c6lulas gigantes multinucleadas com menos linfbcitos, hetero- filos e fibroblastos. Ap6s implante por 66 dias, a histologia foi similar mas com menos c^lulas inflamat0rias. Em adi^o, as placas comeparam a incor- pora no tecido de parede abdominal nativo· Em 99 e 180 dias, infiltragao de fibroblastos hospedeiros foi visivel atraves de manchamento com hematoxi- Iina e eosina e atrav6s de manchamento com tricromo Masson. Manchamen- to com vermelho alizarina para c^lcio mostrou que ηδο havia evid色ncia de calcifica?ao no material de placa. Pequenas areas focais de calcifica^ao fo- ram associadas com ο material de sutura.

Testes mec合nicos foram realizados no momento de explante para determinar a resist§ncia έ tra^o (UTS) da construgSo. Em resumo, ο tecido foi excisado deixando aproximadamente 25,4 milimetros (1 polegada) de tecido circundante a partir das bordas da construpao. O tecido circundan- te em extremidades opostas da construgao foi ent§o preso e puxado para falhar em tens§o uniaxial em uma taxa de deformagSo constante de 0,013 s" 1 usando um sistema de teste MTS servo-hidriiulico com software TestStar- :15 SX. A UTS foi ent§o calculada a partir da forga de pico. Todas as falhas o- correram dentro de regido de tecido dos especimes de teste, sugerindo que a constru^ao foi igual a ou mais forte que tecido circundante, foi bem inte- grada em tecido circundante, e manteve suficiente resistencia em sua per- formance como uma placa de reparo de hernia. A combinagao de propriedades mecanicas e potencial para boa

integra^ao no tecido hospedeiro tornam a ICL um material promissor para reparo de tecido macio. Estes estudos mostraram que a formag§o de ade- soes έ minima e n3o hd indicapao de calcificagao nas placas. An^lises pre- Iiminares das caracteristicas mecanicas sugerem que esta construpao de colageno pode manter a necess^ria resistencia enquanto remodelando e incorporando no tecido circundante. Esta habilidade da placa para remodelar prov§ uma vantagem sobre materials prot^ticos que nao se integram bem no tecido circundante.

Exerrmlo 4: Tecnicas de testes mecginicos e propriedades de pr6teses ICL

multicamadas

Realizagoes preferidas de constructos de placas de ICL forma- das atrav6s de processo do Exemplo 3, incluindo irradia^ao gama foram tes- tadas. Constructos de 2, 4 e 6 camadas de ICL reticulada com EDC 100 mM em acetona 50% (100/50) e constructos de 6 camadas reticuladas com EDC 7 mM I acetona 90% v/v em ^gua (7/90) e EDC 1 mM em agua (1/0) foram avaliadas ao Iongo de um niimero de medig6es. Resultados s§o resumidos

na Tabela 1.

Testes de falha de tra9do foram realizados usando um sistema de testes MTS servo-hidr^ulico com software TestStar-SX. Tiras de 1,25 cm em Iargura foram puxadas para falha em tensao uniaxial em uma taxa de deformagao constante de 0,013 s"1. A inclinagao da regiao linear (Ey) e a resist^ncia έ trag§o (UTS) foram calculadas a partir das curvas de tensao deformagao.

A resistencia de adesao entre as camadas foi testada usando um protocol。padrao para testes de adesivos (ASTM D1876-95). A resisten- cia de adesao έ a forga m6dia requerida para descascar duas camadas de ICL Iaminadas em uma velocidade constante de 0,5 cm/s.

Um calorimetro de exploragdo diferencial foi usado para medir ο fluxo de calor para e a partir de uma amostra sob condipoes termicamente controladas. A temperatura de contra^ao foi definida como a temperatura de inicio do pico de desnaturagao no gr^fico de temperatura - energia. Reten- gao de sutura nSo foi realizada sobre constru9oes de 2 ou 4 camadas reticu- ladas em EDC 100 mM e acetona 50% uma vez que a retenQ§o de sutura (3,7 N +/_ 0,5 N) para um constructo de 2 camadas reticulada em EDC 1 mM e sem acetona (muito menos reticulada) estava bem acima de especifi- cagao minima de 2 N. Resistencia de laminag§o entre camadas de ICL e temperatura de contrag§o sao dependentes da concentrag§o de reticulag§o e a adigao de acetona antes que ο nCimero de camadas em um constructo. Tabela 1: Prophedades mecanicas de constructos de ICL multicamcadas Andlise mec^nica 2 camadas EDC 100 mM / ace- tona 50% 4 camadas EDC 100 mM / ace- tona 50% 6 camadas EDC 100 mM / ace- tona 50% 6 camadas EDC 70 mM I ace- tona 90% 6 camadas EDC 1 mM em ^gua (sem ace- tona) Resistencia 白 trag§o (N/mm) 0,6±0,1 3’1±0’2 2’0±0,2 2’7士0’2 1’3±0’4 Modulo de Young (MPa) 38，0±5’8 49,5±4,0 35’9士2,6 43,0±1,2 14,5±7,8 Resist§ncia de Iamina- gao (N/m) 39，7±6’1 63,1 ±24,4 8,1±2,1 Retengao de sutura (N) n§o-testado nao- testado 6,6±1,6 10,6±2,2 10,9±2,8 Temperatu- ra de con- tragao (0C) 72’5±1,1 69,5±0,1 64,0±0,2

Exemplo 5: Processo para tratamento de um individuo com defici§ncia de

esfincter intrinseca usando um constructo de ICL como uma tipoia

Pacientes1 na maioria pacientes mulheres, que tern deficiencia de esfincter intrinseca (incontindncia urinaria) com coexistente hipermobili- dade da bexiga sSo tratadas com uma tip6ia tdm uma aita taxa de cura ou aperfeigoamento dependendo da extens^o de complicates. O procedimen- to de apoio estabiliza ο suporte anatdmico e comprime a uretra,

Um constructo de ICL multicamadas Iigadas entre 2 e 10 cama- das e formada de acordo com ο processo de Exemplo 2e έ usada como

uma tipoia nestes procedimentos.

Sob um piano de anestesia, a operag^o έ realizada atrav6s de uma abordagem abdominal, uma abordagem vaginal, ou uma combina?ao de ambas, dependendo do procedimento de implante escolhido. Procedi- mentos diferem em como a tipoia έ colocada sob a jun^o uretrovesicular e έ ancorada. Pontos de ancoragem incluem estruturas retropObica ou abdo- minal, ou ambas.

Procedimentos de suspensao retropiibica incluem varias t§cni- cas diferentes realizadas atrav^s de uma incis§o abdominal baixa, particu- Iarmente para a abordagem de ancoragem retropiibica. Entretanto, todas as tecnicas t白m em comum elevapao do trato urinario inferior, particularmente a jungiSo uretrovesicular dentro de espago retropiibico. As tecnicas diferem, entretanto, em que estruturas sao usadas para obter a elevagao.

No procedimento de Marshall - Marchetti - Kranz, ο tecido periu- retral έ aproximado ao symphysis piibis. No processo de colposuspensao Burch, a parede lateral vaginal para a uretra e pescopo de bexiga e elevada na diregao de Iigamento de Cooper. O reparo para-vaginal envolve reapro- Ximapao de fascia endopelvica para a parede p6lvica do arcus tendineus. Exemplo 6: Processo para tratamento de um individuo com retocele

Retocele e herniapao do reto na vagina causando interrup9ao de funpSo de intestino e dor. Retocele usualmente ocorre em mulheres enve- Ihecendo atraves de enfraquecimento da parede entre ο reto e a vagina.

Uma construgao de ICL multicamadas Iigadas entre 2 e 10 ca- madas έ formada de acordo com ο processo de Exemplo 2 e έ cirurgicamen- te implantada e suturada no espa?o retrovaginal para prover suporte para ο retocele atrav6s de suspensao do reto em sua posigao natural. Quando a construg^o trabalha com ο tecido natural do corpo para suportar ο reto, ela biorremodela e torna-se parte do tecido existente e assim recria um tecido suporte natural.

ExemDlo 7: Processo para tratamento de um individuo com aueda de ab6- bada

Queda de ab6bada έ quando ο ^pice vaginal desce de sua posi- gao anatdmica natural. A condipao algumas vezes ocorre em mulheres se- guindo histerectomia ou com envelhecimento.

O procedimento para remediar a condigao 6 chamado sacrocol- popexia. No procedimento, uma construg§o ICL multicamadas Iigadas de entre 2 e 10 camadas έ formada de acordo com ο processo de Exemplo 2 e έ Iigada ao sacro e manguito vaginal assim provendo suporte para a aboba- da vaginal. O constructo de ICL estabiliza ο ^pice para manter ο mesmo na correta posigao anatomica. O constructo, enquanto suportando ο tecido, de- sempenha um pape丨 dual. Primeiro, ela cria um suporte para prevenir recor- rencia de queda e segundo, ela biorremodela para integrar-se com ο tecido

natural do corpo.

Exemolo 8: Processo para tratamento de um individuo com cistocele

Uma cistocele έ um tipo de herniagao de tecido que ocorre entre a bexiga urinaria e a vagina onde a parede de tecido permite a bexiga cair na vagina em alguma extensao. A condigao de cistocele ocorre com um en- fraquecimento do tecido de separagao, usualmente com idade. Com esta condipSo, alguns pacientes experimentam uma condigao dolorosa chamada dispareunia.

O procedimento para reparo de cistocele envolve implante de um constructo de ICL multicamadas Iigadas de entre 2 e 10 camadas forma- -15 da de acordo com ο processo de Exemplo 2 usada para suportar e estabili- zar a bexiga urinaria. O constructo e colocado ao Iongo de parede de tecido entre a bexiga e a vagina Iigada de modo seguro usando suturas no arcus tendinus. Uma vez no lugar, a construgSo de ICL prove reforgo para ο tecido entre a vagina e a bexiga enquanto ela biorremodela para integrar com ο tecido natural do corpo.

Exemplo 9: Processo para reparo de dura m^ter

A dura mater έ a membrana fibrosa rija que encerra ο c6rebro e a coluna espinhal. Como uma cobertura exterior das meninges, esta έ a bai- nha fibrosa que circunda ο sistema nervoso central. Ela desempenha duas fungoes, primeiro, para manter ο fluido espinhal dentro’ e, segundo, para interromper infec^ao de penetra^o no sistema nervoso central. Procedimen- tos cimrgicos ou trauma que frature a dura mater pode resultar em um orifi- cio, que devido έ natureza inelastica, fibrosa de dura, pode nao ser possivel fechar atrav6s de fechamento p_rio. Rara selar ο sistema nervoso em uma tal situa馋o, uma construgao ICL multicamadas έ usada para restaurar

e substituir a dura mater.

Animais sSo anestesiados, intubados e apropriadamente posi- cionados para acessar ο cranio. O escalpo έ raspado, e anestesia local (li- docaina 1%) e administrada. Atrav^s de uma incisSo de escalpo de Iinha m^dia e seguindo incisao da fascia na Iinha temporal superior, ο miisculo temporalis e Iateralmente elevado para expor convexidade parietal. Uma craniotomia temproparietal e feita com broca eletrica e trepano. Bordas de osso sangrando s3o enceradas. A dura mater e ressecada nos sitios de cra- niotomia sob aumento de Iupa enquanto tomando cuidado para evitar dano para ο c6rtex cerebral subjacente.

Um constructo ICL multicamadas Iigadas de entre 2 e 10 cama- das e formada de acordo com ο processo de Exemplo 2 e e cortada e colo- cada acima de cortex cerebral e suturada com uma sutura de nylon. O reta- Iho de craniotomia e substituido e ο ferimento e irrigado com solugao salina , e fechado grampeada. Pomada antibibtica e um curativo est6ril sao aplica-

dos e as cabegas dos caes sao protegidas usando um colar Elizabeteano. -* 15 Os animais s§o monitorados e administrados com antibidtico, anestesia e

mudangas de curativo.

Em varios pontos de tempo alternados ap6s a cirurgia, cSes s§o sacrificados, tecido e cortado para incluir todos os tecidos entre ο escalpo e ο c0rtex cerebral sao fixados, seccionados, e manchados sobre Iaminas de vidro.

Embora haja alguma inflamagSo menor observada, ela e prova- velmente devida ao trauma de cirurgia. NeovascuIarizagSo 6 observada mas nenhuma evidencia de rejeigSo de enxerto ou resposta humoral έ notada. Em pontos de tempo posteriores, menos inflamagao e alguma biorremodela-

gem sao observadas.

Exemolo 10: Processo para tratamento de um ferimento

Tanto uma camada de foilha simples de ICL de Exemplo 1 como um constructo de folha multicamadas Iigadas de ICL formada atrav^s do processo de Exemplo 2 έ usada para tratar um ferimento de pele de inteira espessura. A folha έ entrelagada ou fenestrada para criar pequenas abertu- ras para permitir vazamento de exsudado de ferimento.

Ferimentos de pele incluindo queimaduras de segundo grau, Ia- cerates, cortes e abrasdes; ferimentos de excisSo ciriirgica de remogSo de crescimentos cancerosos ou sitios doadores de pele de autoenxerto; e Cilce- ras de pele tais como venosa, diabetica, pressao (Cilcera do leito)’ e outras ulceras cronicas sao gerenciadas usando 丨CL em forma simples ou multica- madas. A matriz ICL de colageno protege ο leito de ferimento enquanto man- tendo umidade e permitindo drenagem a partir do ferimento. Antes de ICL ser aplicada ao ferimento, ο leito de ferimento έ preparado para sua aplica-

9^0.

Pacientes com ferimentos de queimadura requerendo enxerto sao selecionados. ICL 6 colocada tanto diretamente sobre ο leito de ferimen- to excisado como sobre autoenxerto entrela^ado nao-expandido ou expandi- do em uma raz§o de 2:1 ou mais. Os sitios de teste (ICL) e sitios controles (autoenxerto), quando usados, sao da mesma razao de tela. Os sitios de ferimento queimados a serem enxertados sao preparados, tal como atraves de debridamento’ antes de tratamento de acordo com pr^tica padrSo de mo- do que a area de pele queimada foi completamente excisada. Leitos excisa- dos parecem Iimpos e clinicamente nao-infectados.

Pacientes sofrendo excisao ciriirgica sSo anestesiados Iocal- mente. A ^rea pr6-operat0ria e Iimpa com um Iimpador de pele antimicrobia- no/antisseptico (HibicIens) e rinsada com solugao salina normal. Ferimentos de espessura parcial profunda sao feitos na pele e a pele έ em outro local a menos que seja cancerosa. ICL έ aplicada ao leito de ferimento e banda-

gens est^reis sdo aplicadas.

Em qualquer caso de ferimento, apropriados cuidados ρόε- operatorios sdo providos para ο paciente em exame’ limpeza, mudanga de bandagens, etc. dos ferimentos tratados. Uma anota^ao completa da condi- gao dos sitios tratados έ mantida para documentar todos os procedimentos, medica^oes necessdrias, frequ合ncia de trocas de curativos e quaisquer ob- servagoes feitas. Os Ieitos de ferimentos permanecem protegidos do ambi- ente externo e umidade para auxiliar em gerenciamento de ferimento e cura.

O curativo de ferimento foi testado em um modelo animal. O constructo de curativo de ferimento da invengSo έ tanto um constructo de folha simples ou multicamadas fabricada de ICL formada atraves de proces- sos de exemplo 1 e, se um constructo multicamadas, atraves de processos de exemplos 1 e 2. Um modelo de cura de ferimento de inteira expressao em rato (um modelo comumente usado para produtos curativo de ferimento) foi usado para avaliar ο desempenho de um constructo de curativo de ferimento fabricada a partir de um material de camada simples de ICL. Um total de 20 animais, quatro por ponto de tempo de avalia9§o, tiveram dois (2) ferimentos de excisSo de inteira espessura de 2 cm χ 2 cm criados sobre seu dorso. Os artigos de teste e controle foram cortados Ievemente maiores que a periferia de ferimento e aplicados secos a qualquer ferimento seguindo um esquema de aplicagao randomizado. Os curativos foram reidratados pelo fluido de fe- rimento e solupao salina esteril quando necessario. Curativos secundarios de gaze petrolatum foram aplicados sobre cada artigo teste e controle e tro- cados semanalmente ou em cada ponto de tempo de avaliagao. Os ferimen- :15 tos foram avaliados em 3，7，14, 28 e 42 dias apos tratamento. AvaIiagSes incluiram taxa e porcentagem de fechamento de ferimento (baseado em tra- pados de ferimentos), eritema, exsudado e histologia de sitios de ferimentos explantados.

De acordo com os resultados das analises da porcentagem e taxa de fechamento de ferimento, os sitios tratados com construgao de cura- tivo de ferimento demonstraram fechamento de ferimento Ievemente mais rapido, embora nao significante estatisticamente, que os sitios controles. As analises de tempo para completo fechamento de ferimento nSo encontram diferenpa entre os sitios teste e controles tratados. Os resultados das anali- ses de eritema, exsudado e histologia foram equivalentes para os dois pro- dutos. Histologia mostrou que a constru^o de curativo de ferimento fabrica- da de ICL de camada simples exibiu requisitadas caracteristicas de cura com ο tempo, re-印iteliza^o do ferimento, e ressorgao dos materials de co- lageno. Νδο houve evidSncia de uma reagao adversa para a construgao pe-

丨 os sujeitos testes.

Exemplo 11: Processo para reparo de uma h6rnia

Uma hernia έ um rasgo ou orificio na musculatura da parede abdominal atraves do qual os intestinos incham fora, produzindo um carogo no tecido de pele. Hernias inguinais ocorrem atraves de um orificio em uma superficie plana de tecido; hernias femorais sao um tipo incomum de hernia de virilha na qual um intestino de paciente empurra ο abdomen via um tCinel femoral. Cirurgia e realizada sob anestesia local e pode ser realizada Iapa-

roscopicamente.

Para reparar uma h6rnia inguinal, um constructo ICL multicama- das Iigadas de entre 2 e 10 camadas έ formada de acordo com ο processo de exemplo 2 e έ usada para placa sobre a abertura de orificio. A constru^ao e suturada ao Iongo das bordas da inteira area da virilha que e suscetivel a formagao de hernia para prevenir ainda herniapao ou recorrencia.

O reparo de uma hernia femoral envolve tampar um tiinel, a constru^ao de ICL pode ser dobrada para formar uma tampa (similar a rolha de uma garrafa). A tampa de ICL fecha ο tunel e e suturada no local. :-is a ICL έ biorremodelavel e e infiltrada com celulas do paciente

que substituem a matriz ICL com nova matriz endogena a partir das celulas enquanto realizando a funpao fisica de suporte e refor^o de parede de teci- do.

Exemplo 12: Processo para reparo manauito rotador Laceragoes de manguito rotador s§o amplamente classificadas

como Iaceragaes de forma crescente (ou forma de U para conformasao crescente extensa) ou lacerates em forma de L e tais Iaceragdes ocorrem na jun^ao de tendao - osso na parte superior do osso iimero. Usualmente1 ο tendao e suturado de volta para ο osso diretamente ou algumas vezes com ο auxilio de uma ancora sutura (como em lacerates com forma crescente). Uma protese de ICL de folha plana bioengenheirada multicamadas έ usada para aumentar a Iinha de sutura em tais reparos e para reforgar ou substituir tecido de tendao extensivamente danificado no reparo do complexo osso _ musculo. Ap6s ο tendao ser suturado ao osso, a ICL 6 sobreposta e sutura- da ao tendSo para reforgar ο tendSo para prevenir recorrencia de Iacerag^es ou que sutura se solte.

Fxemolo 13: Uso de uma prdtese de ICL de folha Plana bioengenheirada para reparo de fibrose ^nulo apos discectomia

Uma protese de ICL de folha plana bioengenheirada preparada de acordo com ο processo de Exemplos 1 e 2 e implantada em porcos para demonstrar ο uso do material para reparar a fibrose anulo apos discectomia parcial.

Seis porcos jovens de qualquer sexo at6 50 kg sSo alojados in- dividualmente por um minimo de dois dias antes de cirurgia enquanto ali-

mentados com rag^o de porco padr^o.

Animais experimentais sao pre-anestesiados com Telazol e a- tropins e intubados. Os animais sSo colocados em inalagSo de gas isoflura- no e oxigenio e mantidos em piano ciriirgico de anestesia. Eles tambem sao administrados com um antibiotico.

Defeitos nos discos sao criados atraves de fabricagao de uma incisao de 5 χ 10 mm no anulo seguido por uma discotomia padrao com i- gual remogao nuclear em cada espago. Um total de tr^s discos s§o opera- dos por porco. Dois sitios sao tratados com a protese 丨CL de folha plana bio- engenheirada e ο sitio restante serve como um controle. Para aplicar a pro- tese de ICL de folha plana bioengenheirada ela έ primeiro cortada em tres ou quatro pegas menores e entao inseridas na abertura de orificio de inulo. Dois animais sofrem eutandsia em cada uma de semanas 2, 4, e 6 e os si- tios cirOrgicos sao removidos. Os discos sao colocados em formalina e entao etanol 70% antes de processamento histolbgico.

ExemDlo 14: Uso de uma pr6tese de ICL de folha plana bioengenheirada mm um espacador de disco intervertebral para manter ο espaco interverte-

bra!

Para demonstrar ο uso da protese de ICL de folha plana bioen- genheirada com um espagador de disco intervertebral，sao conduzidos expe- rimentos em um modelo porco. Uma folha de ICL de camada simples forma- da de acordo com ο processo de Exemplo 1 ou uma constru^ao de ICL mul- ticamadas Iigadas de entre 2 e 10 camadas formada de acordo com ο pro- cesso de Exemplo 2 e usada neste estudo.

Seis porcos jovens de qualquer sexo de at6 50 kg sao alojados individualmente por um minimo de dois dias antes de cirurgia enquanto ali- mentados com razao padr§o de porco.

Animais experimentais s^o pre-anestesiados com Telazol e a- tropina e intubados. Os animais sao colocados em inalasao de g^s isoflura- noe oxigenio e mantidos em piano cirOrgico de anestesia. Eles tambem sao administrados com um antibidtico.

Defeitos nos discos sao criados atrav6s de fabricag§o de uma incisao de 5x10 mm em fibrose anulo seguido por uma discotomia padrao com igual remogao nuclear em cada espapo. Um total de tres discos sao

operados por porco.

Atrav^s do orificio feito no annulus fibrosis, ο espago intervete- bra丨 e aberto e ο disco e removido, restrito a terceira porpao m6dia e anteri- or. O espagador de disco intervertebral compreendendo tela Dacron e hidro- gel e colocado na cavidade tor^cica atraves de passagem do mesmo atraves -■ 15 de orificio no annulus fibrosis. A boa posigao do implante e verificada usan- do-se procedimentos radiologicos e ent§o ο espagador έ fixado no lugar. A protese de ICL de folha plana bioengenheirada e entao aplicada a abertura anular primeiro cortando a construpao para ο tamanho da abertura de orificio anular e ent§o suturada ao tecido circundando a abertura do espago usando suturas reabsorviveis. Embora todos os tres sitios sejam providos com um espagador de disco intervertebral, dois sitios s§o tratados com prdtese de ICL de folha plana bioengenheirada e ο sitio restante serve como um contro- le.

Dois animais sofrem eutandsia em cada uma de semanas 2’ 4 e 6 e os sitios cirijrgicos sao removidos. Os discos sao colocados em formali- ns e entao etanol 70% antes de processamento histologico. Os discos sao seccionados serialmente e examinados sob microscopio para medir cura e

biorremodelagem.

Em todos os esp6cimes, ο espagador de disco intervertebral

manteve sua colocagao original. Em especimes controles, ο nucleus pulpo- sus mostra uma significante perda de ρroteogIicanos e colageno e um au- mento em outras proteinas nao-col^geno na cavidade. Em especimes expe- rimentais, ο constructo de tecido conjuntivo forma uma completa cicatriz so- bre a abertura feita no annular fibrosis. A constituipao bioquimica da cavida- de mudou um pouco mas foi mais prbxima de composigao dos especimes controles negativos, indicando que fibrose da cavidade foi substancialmente prevenida pelo fechamento do annulus apos dano de disco.

Exemplo 15: Um estudo de curso de tempo usando or6tese de ICL de folha plana bioenaenheirada em reparo de annulus fibrosis de porcos

Discectomia para remover nucleus pulposus rompidos e expul- sos e uma pratica clinica comum para aliviar dor e distiirbio neurologico. O procedimento cria um defeito em annulus fibrosus que e frequentemente en- chido por tecidos fibr0ticos, uma situa^o que eventualmente conduz a co- Iapso do disco intervertebral e requer fusSo dos segmentos vertebrais adja- centes.

Proteses de ICL de folha plana bioengenheirada simples e multi- camadas s§o preparadas de acordo com os processos de Exemplos 1 e 2· O proposito deste estudo foi avaliar a exequibilidade de prdtese de ICL de folha plana bioengenheirada para reparo do annulus fibrosus em um modelo suino e determinar a biocompatibilidade, persistencia e remodelagem das constru- 9oes neste modelo.

Seis porcos de 3 a 4 meses de idade foram usados para ο estu-

do. Tr§s discos vertebrais consecutivos sao posteriormente expostos atraves de uma abordagem de Iaminotomia para cada animal. Um defeito anular ci- rCirgico έ criado em cada disco exposto. Varias pepas de construgao de teci- do conjuntivo, cada uma de cerca de 2 a 5 mm em di§metro, sao implanta- das em dois defeitos de cada animal. O outro defeito de disco έ deixado va- zio como um controle. Os porcos sofrem eutanasia, em grupos de dois, em duas, quatro e seis semanas apbs implante. As colunas vertebrais contendo discos operados s§o removidas e fixadas em formalina tamponade neutra 10%. Microscopia de campo brilhante έ realizada sobre segoes manchadas

com hematoxilina e eosina para avalia?§o generica.

Microscopia revela clara evidencia de restos de protese ICL de folha plana bioengenheirada implantada em vdirios dos annul丨 tratados dos grupos de dois animais que sofreram eutan^sia em duas e quatro semanas. Tambem houve identificiivel remodelagem dos restos de constru^ao de teci- do conjuntivo pelo tecido hospedeiro. Os defeitos implantados mostram me- nos 丨nflama^ao e cura mais avangada que controles em todos os pontos de tempo. As areas de implante t§m tecido cartilaginoso fazendo ponte na aber- tura, enquanto os defeitos controles ainda tem uma quantidade significante de tecido fibrotico. Os resultados deste estudo de exequibilidade indicam que as construgoes de tecido conjuntivo de porco implantadas sao biocom- pativeis para ο tecido de hospedeiro e aperfeipoam as atividades reparado-

ras do annulus.

Exemolo 16: Estudos de reoaro de defeito de tecido macio de coelho

Foi conduzido um estudo para determinar ο desempenho in vivo 、 de const_es ICL multicamadas como um produto tela / placa cirOrgico.

Coelhos brancos New Zealand foram usados para os estudos de implante in r 15 vivo. Um defeito de inteira espessura de aproximadamente 5 cm de compri- merito foi feito na parede abdominal anterior atrav6s do centra dos miisculo rectus abdominis e ο peritanio subjacente. Este e um modelo amplamente aceito para a avaliagSo de produtos de tela I placa ciriirgicos.

Um constructo de ICL de sets camadas reticulada com EDC 100 mM foi testada para periodos de implantes variando de um a seis meses com tres coelhos avaliados em cada ponto de tempo (30, 60, 99, 180 dias). Forma^ao de adesdo minima foi observada nos pontos de tempo seleciona- dos. A tela cirCirgica Iimpa quimicamente tornou-se bem integrada com ο te- cido hospedeiro ao Iongo da Iinha de sutura como mostrado por histologia e a falta de herniagSo de Iinha de sutura. Houve uma moderada resposta in- flamat0ria que subsistiu ap6s viirios meses, e nenhuma evidencia de calcifi- ca^o dos implantes foi detect^vel. Em seis meses houve pequena degrada- ?ao dos implantes. Testes mec合nicos dos constructos de placa explantadas demonstraram que nao houve significante diferenga na resistencia do com- plexo de placa I abdomen em 180 dias ap0s-implante (27,8 +/- 5,6 N/cm) e a parede abdominal de hospedeiro controle (28,1 +/- 14,6 N/cm), indicando que ο material de prbtese retem suas caracteristicas de resistencia quando usado para tratar um hospedeiro. Estes resultados confirmaram a adequa- QQ0 das constru^oes de ICL multicamadas, quimicamente Iimpas para apli-

ca^oes de reparo ciriirgico.

A baixa imunogenicidade do col^geno Tipo 丨 suino quimicamente iimpo foi demonstrada neste estudo atraves de analise de resposta de anti- corpo de coelhos que receberam a tela cirCirgica de colageno intestina suino. Analises ELISA de amostras de soro tomadas de coelhos enxertados mos- traram pequena ou nenhuma produ^o de anticorpos para colageno suino Tipo I em relapao a soro de coelho normal. Esta falta de resposta foi confir- mada por analises de Western blot usando colageno Tipo I suino purificado.

Um segundo estudo in vivo usando ο model。de defeito de teci- do macio de coelho avaliou ο desempenho de construg5es de ICL de quatro camadas reticuladas com EDC 1 mM. Estas placas foram implantadas no modelo coelho por tres meses. O exame grosseiro no explante mostrou re- sultados similares aos estudos previos. As placas foram integradas com ο tecido hospedeiro sem evidencia de seroma ou formag§o de adesSo. Entre- tanto, a menor reticula^So permite remodelagem mais rapida que constru- ^oes de reticulaQ§o superior. Houve uma quantidade substancial de infiltra- g§0 celular e remodelagem do colageno da construpao de ICL ap6s 90 dias. Nao houve herniagao ou outra falha funcional sobre os enxertos por todo ο curso do estudo. Assiml mesmo sob condigaes nas quais constructos de ICL sSo remodeladas e substituidas por tecido hospedeiro, suas fun^Oes de re- paro nao parecem ser comprometidas. Exemplo 17: Estudo de calcificacao Uma caracteristica das construpoes de ICL έ que elas nao elici-

tam calcificagao do material ICL como e comum em alguns tipos de implan- tes de colageno. ICL reticulada com EDC foi comparada a v^lvulas de cora- 9So reticuladas com glutaraldeido, que sofrerSo calcificagSo quando implan- tadas.

Uma folha de colageno intestinal suino de uma camada reticula-

da com EDC 1 mM e irradiada com radiagSo gama (25-35 kGy) foi avaliada em um modelo de calcifica饽ο de rato juvenil. O material colageno foi im- plantado subcutaneamente entre a pele e os musculos rectus abdominis. Valvulas de corapao bovinas fixadas com glutaraldeido foram implantadas subcutaneamente entre a pele e os mCisculos rectus abdominis como um controle positivo. Calcificapao foi avaliada atrav6s de manchamento com vermelho alizarina. Todos os seis ratos que receberam folhas pequenas de v^lvula tratadas com glutaraldeido mostraram extensive calcifica^ao como determinado por manchamento com vermelho ο alizarina. Em contraste, mesmo ap6s 28 dias, nenhuma calcifica^ao foi detect^vel no colageno intes- tinal suino.

Exemplo 18: Estudo comparativo de proteses de ICL com outros orodutos

derivados de tecidos

Este estudo e desenhado, em um modelo canino, para avaliar ο

desempenho de varios materials derivados de tecidos para reparo de defeito de tecido macio sob cargas similares aquelas que podem ser experimenta- das em situa9oes clinicas. Derme cadav^rica e produtos derivados de derme humana descelularizada similares (por exemplo, LifeCeII AHoDerm), assim como produtos derivados de fascia lata sao usados clinicamente para nume- rosas aplicapoes de reparo de tecido macio como tipoias pubovaginais e procedimentos reconstrutivos. Enxertos de cadaver (fascia lata humana) ’ tecido xenogen§ico (pericardio bovino) e tecidos sinteticos foram avaliados como substitutes de tecido macio. Uso de tecidos de cad^veres έ Iimitado por medo e transmissSO de doer^a infecciosa enquanto ο uso de material sirltetico est^ associado com encapsulagao de implante, formagao de ade- sao e reapSes a corpo estranho. Estes materials foram usados em todo ο mundo at6 haver um conceito de transmissao de doen^as fatais como doen- 9a de Creutzfeldt-Jakob (CJD), sindrome de deficiencia autoimune (AIDS) e encefalopatia espongiforme autoimune (doenga da vaca louca). Outras ques- toes como calcificagSo, adesdes, antigenicidade e inabiiidade para integrar com tecido circundante (que pode conduzir a re-herniagao do defeito repara- do conduziram a pesquisa de materials de colageno mais naturais). O pro- posito deste estudo έ avaliar ο uso de material de construgao de ICL para reform de tecido macio com comparagao com materials atualmente usados em aplica9des clinicas.

Materials de reparo de tecido macio ciruirgico foram testados em um modelo de substitui^ao de rectus abdominis de inteira espessura animal (canino) para integragSo no tecido hospedeiro e a exequibilidade dos materi- ais testes tornarem-se um tablado para remodelagem em rectus abdominis funcional. Este estudo estd sendo desenhado para prover dados de compa- ra^So in vivo com relapSo a seguranga e eficacia de um material de placa cirCirgica derivado de um biomaterial de colageno Tipo I fabricado de submu- cosa de intestino delgado suino. Os especificos alvos sao avaliar a diferen^a entre duas diferentes placas cimrgicas de ICL (reticula^ao alta e baixa) e aquela de reforgo de tecido macio comercialmente disponivel e produtos ti- poia como derme cadaverica (Boston Scientific) e fascia lata cadav§rica (Mentor). O modelo de rectus abdominis canino foi selecionado para este estudo porque a anatomia abdominal e tensoes biomecanicas sSo similares aquelas de humanos, e este e um modelo aceito e amplamente usado para

reparo de hernia e tecido macio.

Dois desenhos de constructos de ICL (laminados de 5 camadas, com um nivel alto ou baixo de reticulagao de colageno) foram testados: constru9oes altamente reticuladas foram reticuladas em EDC 10 mM / ace- tona 90% em agua e construgoes de baixa reticula^o foram reticuladas em EDC 1 mM em agua. A ordem de operagao de implante e designagao de grupo de estudo (animais sofreram eutan^sia em 1’ 3, 6 ou 12 meses) foi randomizada. Adicionalmente1 para cada animal a localizagao de implante dos materials de teste e controle foi randomizada. Uma metodologia de ran- domizagao nao-desviada e valida foi empregada.

Cada animal foi pre-medicado com butorphenol (0,2 mg/kg), a- cepromazina (0,1 mg/kg), e atropina (0,02 mg/kg) IM, um cateter intravenoso foi colocado na veia cefalica, e propofol foi administrado 10-15 minutos de- pois em uma dose de 4 mg/kg IV em uma taxa de 1 mL/10 kg / minuto ou para efeito. O animal foi imediatamente intubado e inicialmente mantido sob anestesia com inalapao de anestesico isoflurano em 2,5-4%, e 0,5-2,5% pa- ra manutengao Iiberada atrav6s de um respirador de volume regulado ou aparelhagem de reinalagao Se drogas de emergencia foram necessarias elas foram administradas atrav^s de Iinha IVe a droga, dose, rota, e sitio de administragao serao documentados no arqutvo cirurgico. Fluidos IV (Ringers lactados) foram administrados por todo procedimento cirurgico em 10 mL/kg/h. Cefazolina, um antibiotico, foi dado antes de cirurgia (17 mg/kg IM).

Uma vez anestesiado, os abdomens dos cSes foram raspados. A area de operagSo foi Iimpa com tres esfregagOes alternadas de esfregao de povidona - iodo e ^lcool 70%, uma vez as esfregagoes alternadas terem sido feitas uma aplica^ao final de solupao de povidona - iodo foi aplicada e deixa- da secar e a area foi coberta para cirurgia asseptica. O animal foi colocado na posipao supino e assepticamente preparado e coberto. Uma incisao na pele de aproximadamente 20 cm de comprimento foi realizada, que foi 2,5 cm lateral para a Iinea alba e carreada abaixo para a parede abdominal an- terior. A pele foi cuidadosamente destruida gradualmente para separa^ao da mesma da fascia de parede abdominal, expondo uma ^rea de aproximada- mente 4 cm por 20 cm, adequada exposi^ao para 2 sitios de implantes. Um defeito de inteira espessura medindo aproximadamente 3 cm por 5 cm foi feito na parede abdominal anterior (2,5 cm acima do nivel do umbilicus) atra- ves de rectus abdominis fascia, miisculo e peritonio subjacente. O material de implante (teste ou controle) foi cortado para ο tamanho do defeito e Iigado a borda do defeito com sutura Prolene 3-0 nao-ressorvivel ininterrupta, con-

tin ua.

Em uma manetra similar, tres adicionais defeitos (para um total de quatro defeitos) foram criados e material de implante (teste ou controle) foi suturado no lugar. O segundo defeito foi criado atrav^s de incisao inicial de pele (posicionada 2,5 cm abaixo de nivel do umbilicus), enquanto dois defeitos adicionais foram criados em uma maneira similar atraves de uma segunda incisao de pele contra-lateral，2,5 cm a partir da Iinea alba. O teci- do subjacente foi suturado com 2-0 Vicryl e a pele foi fechada com uma sutu- ra Vicryl 3-0. Cada defeito foi igualmente espagado por 5 cm, centrado ao redor de umbilicus (dois defeitos de 2,5 cm para a esquerda da linea alba, dois defeitos 2,5 cm para a direita da linea alba). Animais foram deixados recuperar de anestesia, e exturbados quando ο reflexo de deglutigSo retornou. Em adipao a administragao pre- operatoria de Butorphenol (0,2 mg/kg, IM), um regime pbs-cirurgia de 3 dias de Buprenorfina @ 0,02 mg/kg Bid SC foi dado. Cefozolina foi dada em uma

dose de (17 mg/kg) IM BID por 3 dias apos cirurgia. Na segunda-feira, quarta -feira e sexta - feira das primeiras duas semanas seguindo cirurgia, e uma vez por semana a seguir, todos os sitios foram palpados para determinar se ocorreu re-herniagao e todos os sitios foram visualizados para determinar se rejei^ao de enxerto ou infecgao ocorreu.

Raios-x de area de implante foram tirados (antes de explante) no

ponto de tempo de 6-meses para avaliar calcifica^ao de implantes. Cada placa foi removida, em bloc, com pelo menos 2 cm de tecido hospedeiro ad- • jacente. O explante foi seccionado em dois segmentos de igual tamanho na diregao anterior / posterior. Um segmento foi colocado em solupao salina fria :15 (para teste mecanico) e ο segundo em formalina 10% (para processamento histologico). Um segmento de parede de corpo foi removido para um contro- Ie para os testes mecanicos. Este segmento foi de 5 cm de Iargura e removi- do do tecido entre a placa e a Iinha media. Duas segoes foram removidas e raspadas e solupao salina fria para testes.

Observacdes arosseiras em necropsia:

Em um m^s, todos os sitios que foram observados em cada a- nima丨 nao mostraram evid台ncia de re-herniagao, infecgao ou hemorragia. Todo material implantado estava presente no explante e facilmente identifi-

c^vel do tecido hospedeiro.

Em tr§s meses, todos os sitios que foram observados em cada

animal nao mostraram eviddncia de re-herniaQao, infec^ao ou hemorragia. Todo material implantado estava presente no explante e facilmente identifi-

cavel de tecido hospedeiro.

Em seis meses, todos os sitios que foram observados em cada

animal nSo mostraram nenhuma evidencia de re-hernia㈣o, infecg^o ou he- morragia. As placas de ICL altamente reticuladas foram facilmente identifica- veis e ainda completamente intactas. As placas de ICL de baixa reticula^ao foram identificaveis, mas foram bem aderidas e incorporadas no tecido hos- pedeiro circundante. A fascia lata cadav6rica ηδο foi facilmente identificavel e ο tecido restante (quando encontrado) pareceu fibroso e necrotico. A der- me cadaverica (quando presente) pareceu esponjosa e necrotica. A derme cadaverica mudou de cor, para um marrom amarelado escuro. Revisao de histoloqia:

As placas testes fabricadas de ICL foram compreendidas por duas morfologias bdsicas: um material eosinofilico denso linear aparente- mente compreendido por um material de colageno, e uma ampla banda Iine- ar de material de colageno diferindo do colageno hospedeiro por sua relativa acelularidade e manchamento tintorial. Artigos de ICL foram facilmente iden- tificados em todas as amostras de placas. As amostras de derme cadaverica 戶 estavam presentes em amostras de um mes e em somente uma de tres a-

mostras de 6 meses. Alguma infiltrapao de celulas hospedeiras dos artigos :15 de teste cadav6ricos foi vista no sacrificio de um mes. No sacrificio de tres meses, como mecionado acima, remodelagem consistiu em aumentada infil- tragao de fibroblasto de maior parte de placas cadavericas com comparavel ou menos misturada lnfiltra^o de celula inflamatoria do que visto no sacrifi- cio de um mes. InfiItragSo de celula inflamatoria mista consistiu em celulas polimorfo nucleadas e macrofagos junto com outros tipos de celulas. Em seis meses somente uma placa de derme cadaverica foi identificada e ela foi Ie- vemente infiItrada ao redor de sua periferia por fibrobtastos e c6lulas inflama-

t6rias mononucleares.

Nenhuma infiltra^o celular dos artigos testes de ICL foi vista em

um ou trds meses, mas houve uma aumentada quantidade de separa^ao Iamelar e infiltragao celular dos artigos testes de ICL de menor reticula?So em tres e seis meses comparados a um m台s. Infiltra^自ο celular consistindo principalmente em fibroblastos foi observada nas placas de ICL de menor reticulagao em seis meses. Todos os sitios de placas, se artigo teste foi es- pecificamente identif丨cado ou nao, foram circundados por uma proeminente resposta de tecido hospedeiro de fibroplasia e/ou fibrose. Em tres meses, fibrose estava sempre presente e fibroplasia foi uniformemente severa. Em 6 meses, fibrose foi geralmente severa e fibroplasia geral- mente variou de Ieve / suave a severa. A diminuigao em severidade de fibro- plasia em 6 meses com total aumento de severidade de fibrose como com- parado a 3 meses foi interpretado como um desvio para uma reagao de teci- do hospedeiro mais madura. Isto foi interpretado como uma resposta de cura normal, isto e, cicatriza$§o, das placas de ICL de maior reticula?§o. Em to- dos os casos, placas de artigos testes desempenharam a fungao esperada de fechamento de um defeito abdominal. Todos os artigos testes pareceram ser compativeis com ο tecido hospedeiro. Houve variagSo na remodelagem dos artigos testes por celulas derivadas de hospedeiro com mais degrada- gao que remodelagem parecendo ser mais avan^ada nas placas cadav^ri- cas. Degradapao dos tecidos cadavericos foi vista como areas de granulosi- dade no material de banda de colageno ampla e ocorreu em somente uma das placas cadavericas em um mds e minimamente em duas de seis (um ion cada tipo de enxerto) em tr合s meses. DegradagSo nSo foi vista na placa de derme cadaverica identific^vel em seis meses. Nenhum dos tipos de placas pareceu estar sofrendo substancial degradagao outra que nao aquela que acompanha remodelagem; em outras palavras, nao houve evidencia de ex- cessiva fagocitose de materials de artigo teste por macr0fagos e/ou celulas gigantes e nenhuma calcificagao das placas observada. Em seis meses a falta de fascia lata cadav6rica identific^vel em 2 de 3 placas de derme cada- verica foi interpretada como avangada remodelagem das placas por tecido hospedeiro. A inflama馋ο granulomatosa de corpo estranho vista em muitas das placas em um, tr^s e seis meses foi considerada um reflexo do procedi- mento cimrgico antes que uma rea^o a uma qualidade inerente dos artigos de teste.

Eyemplo 19: MastoDexia circumareolar usando colageno bioenqenheirado

Uma maca de suspensio inferior foi usada para elevar ο paren- quima e prevenir queda inferior. De modo a diminuir formagao de seroma e aperfeipoar aderencia subcutanea, a pr6tese de mastopexia deve ser perfu- rada ou entrelagada. Isto pode ser realizado maualmente ou atraves de uso de um entrela9ador de enxerto de pele. Uma regiao previamente marcada dentro da incisao foi desepite- lizada. Foi tornado cuidado para remogiao de iguais quantidades de pele pigmentada e nao-pigmentada. Uma dissecagao subcutanea para ο miisculo peitoral e realizada a partir da posigao de duas horas para dez horas. A pro- tese de mastopexia foi entao segura a fascia peitoral usando sutura perma- nente. Uma serie de suturas ininterruptas foi usada para colar as bordas da maca ao tecido de mama ao Iongo do inteiro ρόΙο inferior da mama. Grossei- ramente 1 a 2 cm de parenquima de mama projetou-se da por?§o mais ante- rior da maca. Isto permitiu um fechamento periaureolar, desembara^ado. Para fechar a cicatriz periaureolar, sutura Goretex 3-0 sobre uma agulha Kei- th foi utilizada no piano subdermico e foi segura ao redor de um disco de 43 mm. a pele periaureolar foi ent^o fechada na maneira padrao usando sutura vicryl 4-0 na derme e sutura colchao, half-buried, intestino cromico 5-0 na pele.

Este tratamento mostrou boa manutengao de contorno e proje-

5§o, e nenhuma incid白ncia de infecsao ou extrus^o.

Exemplo 20: Cobertura completa de expansor inferior com uma protese de reconstrucao de mama usando colaaeno bioenaenheirado

A protese de reconstrucao de mama, aqui referida como "BCP", da invengSo e usada para prover completa cobertura de um expansor ou um implante em reconstrugao de mama p0s-mastectomia. A BCP compreende quatro camadas de ICL que s3o quimicamente Iigadas atrav^s de reticula^o com EDC a um grau em que a pr0tese έ pretendida persistir ate seis meses antes de biorremodelagem, onde a BCP e uma forma crescente e provida com um arranjo de fendas que formam uma tela. O seguinte processo para cobertura de um expansor com BCP tambem pode ser aplicado a um im- plante. O deficit de miisculo principal peitoral encontrado inferiormente em reconstrugoes expansoras e suplementado por BCP, pelo que provendo completa cobertura e suporte do ρόΙο inferior de mama. Para determinar ο apropriado tamanho de BCP a ser usado intraoperativamente, ο comprimen- to do arco entre a dobra inframam^ria ("IMF") e a dobra mamaria lateral C1LMF") e medido e marcado, antes de mastectomia, para determinar ο ta- manho da BCP necessario para reconstrugSo p0s-mastectomia. Apos mas- tectomia, ο musculo principal peitoral e elevado ao Iongo de sua borda infe- rior. A IMF e a LMF podem ser reiigadas e estabilizadas neste estagio quan- do a BCP ser^ colocada no sitio de arco e ο ponto de Iiga^ao da BCP recria- ra estes marcos. A recriapao da LMF com a BCP dispensara ο miisculo ser- ratus anterior que έ tradicionalmente usado na recriap§o de LMF. A BCP e colocada no sitio arco fazendo face ao retalho de pele de mastectomia e e temporariamente mantida no Iugar com suturas em cada extremidade para manter a BCP no Iugar enquanto ela esta sendo centrada sobre ο sitio arco. Apos centralizapao de BCP sobre ο arco, na desejada IMF, a BCP e ancora- da inferiormente em varios pontos. O expansor de tecido e inserido sob ο musculo pectoralis major e a BCP e entao manobrada sobre ο expansor e temporariamente grampeada ao musculo principal peitoral. Apos reposicio- namento, a BCP έ suturada ao mOsculo principal peitoral sob apropriada ou minima tensao com remopSo de grampos temporarios. O expansor έ esvazi- ado e infundido com solu^ao salina. Finalmente1 as suturas de ancoragem na IMF sao seguras. Uma vez suturada no lugar, a BCP provera completa cobertura de implante inferior em uma maneira similar a cobertura de expan- sor inferior.

Suporte de implante na parte inferior com a BCP permite ο mo-

vimento relaxado da mama reconstruida, similar ao movimento natural provi- do pelos Iigamentos de suspensSo de Cooper na mama. Devido έ BCP da invengao poder ser fabricada em tamanhos apropriados, nao h甴 excessiva tensao aplicada quando a BCP έ manobrada sobre ο implante a ser sutura- do a borda inferior do mOsculo principal peitoral. Devido a BCP nao ser esti- rada e suturada sob tensao, ο ρόΙο inferior de mama reconstruida έ macio e relaxado mas suporta ο implante na parte inferior sem tensSo para resultar e aperfei9oada simetria de mama, superior resultado cosm6tico, e reduzida taxa de revisao.

Embora a invengao anterior tenha sido descrita em alguns deta-

Ihes por meio de ilustrapao e exemplo para prop6sitos de clareza e entendi- mento, ser甴 0bvio para aqueles versados na t6cnica que certas mudanpas e modificagoes podem ser praticadas dentro do escopo das reivindicagoes apostas.

Claims

1. Protese para mastopexia ou procedimentos de reconstrugao de mama compreendendo material de tecido processado que, quando im- plantado em um paciente mamifero, sofre controlada biodegrada^So ocor- rendo com adequada substituigao de celula viva de modo que a pr0tese ori- ginal implantada έ remodelada pelas c6lulas vivas do paciente; onde ο mate- rial de tecido processado e derivado de intestino ou derme; onde a prbtese tern uma forma arqueada ou crescente; e onde a pr6tese nao interfere com forma^ao de imagem radiografica.

2. Protese para mastopexia ou procedimentos de reconstrugao de mama compreendendo duas ou mais camadas quimicamente ligadas, superpostas, de material de tecido processado derivado de submucosa ΐύηϊ- r ca de intestino delgado que, quando implantado em um paciente mamifero, sofre controlada biodegrada^ao ocorrendo com adequada substitui^ao de celula viva de modo que a protese implantada original e remodelada pelas C6lulas vivas do paciente; e, onde a protese nao interfere com forma^ao de imagem radiografica.

3. Protese para mastopexia ou procedimentos de reconstrugao de mama compreendendo duas ou mais camadas ligadas quimicamente, superpostas, de material de tecido processado derivado de submucosa 咖- ca de intestino delgado que, quando implantado em um paciente mamifero, sofre controlada biodegrada^o ocorrendo com adequada substituigao de celula viva de modo que a pr6tese implantada original έ remodelada pelas C^lulas vivas do paciente; e onde ο material de tecido processado consiste essencialmente em colageno telopeptideo acelular, cerca de 93% em peso seco; com menos de cerca de 5% em peso seco de glicoproteinas, glicosa- minoglicanos, proteoglicanos, Iipideos1 proteinas nao-colagenosas e ^cidos nucl6icos com ADN e ARN e έ substancialmente Iivre de c6lulas e fragmen- tos celulares.

4. Protese para mastopexia ou procedimentos de reconstru?ao de mama compreendendo duas ou mais camadas ligadas quimicamente, superpostas, de material de tecido processado derivado de submucosa Ιύηί- ca de intestino delgado que, quando implantado em um paciente mamifero, sofre controlada biodegradapSo ocorrendo com adequada substituigao de c6lula viva de modo que a protese implantada original 6 remodelada pelas c^lulas vivas do paciente; e onde ο material de tecido processado consiste essencialmente em colageno telopeptideo acelular, cerca de 93% em peso seco; com merios de cerca de 5% em peso seco de glicoproteinas, glicosa- minoglicanos, proteoglicanos, lipideos, proteinas n§o-colagenosas e ^cidos nucl6icos com ADN e ARN e έ substancialmente Iivre de celulas e fragmen- tos celulares; e, onde a protese nao interfere com formagao de imagem ra- diogr^fica.

5. Protese para uso em mastopexia ou procedimentos de re- construgao de mama de acordo com qualquer uma reivindicagSo preceden- te, onde a pr6tese compreende entre 2 e 10 camadas ligadas.

6. Protese para uso em mastopexia ou procedimentos de re- construpao de mama de acordo com qualquer uma reivindicaQ§o preceden- te, onde a protese compreende entre 2 e 10 camadas ligadas.

7. Protese para mastopexia ou procedimentos de reconstrugao de mama de acordo com qualquer uma das reivindica^es precedentes, on- de as camadas ligadas sao reticuladas com uma soli^ao compreendendo cloridrato de 1-(etil-3-(3-dimetil amino propi丨)carbo diimida.

8. Protese para mastopexia ou procedimentos de reconstrugao de mama de acordo com qualquer uma das reivindicapoes precedentes, on- de a pr6tese adicionalmente compreende um arranjo de tela correndo no sentido do comprimento atraves de pelo menos uma porgao da protese.

9. Protese para mastopexia ou procedimentos de reconstrugao de mama de acordo com qualquer uma das reivindicagoes precedentes, on- de a pr0tese adicionalmente compreende um arranjo de fendas em paralelo, arranjo em ziguezague correndo no comprimento atraves de pelo menos uma porgao da protese.

10. Processo para tratamento de mastopexia com redupao em volume de mama, compreendendo: a. marca^ao de quatro pontos sobre a mama ao redor de areola para determinar a quantidade de pele necess白ria para ambos, ο forro exter- no de pele da nova mama e ο excesso de pele na regiao periareolar para ο retalho dermico a ser usado para ο forro interno de pele b, desepitelizapao de retalho para obter ο pediculo central c. deslocamento subcutaneo de mama abaixo nivel da fascia peitoral d. disseca^ao de pele sobre ο vi6s no hemisf^rio superior de modo a aumentar progressivamente a espessura do tecido de gordura sub- cutaneo pr6ximo da pele e e. ressecgao de uma cunha central de tecido e encurtando ο raio de hemisferio superior f. disseca^ao de pele a partir do tecido parenquimal no hemisfe- rio inferior da mama g. opcionalmente ressectando uma segunda cunha central de tecido no hemisf6rio inferior h. aplicagao de uma protese de mastopexia sobre ο retalho der- mico no hemisferio inferior para apoiar ο 丨ado inferior da mama i. sutura de pr6tese de mastopexia para a fascia pectoralis para promover elevagao e forma do cone mamario j. suturando fechado ο forro de pele externo enquanto fixando a pele areolar ao forro de pele externo k. aplicagao de curativo δ mama em uma maneira de suporte que permita drenagem de exsudados.

11. Processo para tratamento de mastopexia para Ievantar teci- do de mama compreendendo a. marcagao de quatro pontos sobre a mama ao redor de areola para determinar a quantidade de pele necessiria para ambos, ο forro exter- no de pele da nova mama e ο excesso de pele na regi§o periareolar para ο retalho dermico a ser usado para ο forro interno de pele b. desepitelizagao de retalho para obter ο pediculo central c. deslocamento subcutaneo de mama abaixo nivel da fascia peitoral d. dissecagao de pele sobre ο vies no hemisferio superior de modo a aumentar progressivamente a espessura do tecido de gordura sub- cutaneo proximo da pele e e. dissecagao da pele do tecido parenquimal no hemisferio infe- rior da mama f. aplicagao de uma pr0tese de mastopexia sobre ο retalho der- mico no hemisferio inferior para apoiar ο Iado inferior da mama g. sutura de pr6tese de mastopexia para a fascia pectoralis para promover elevagSo e forma do cone mamario h. suturando fechado ο forro de pele externo enquanto fixando a pele areolar ao forro de pele externo i. aplicag§o de curativo a mama em uma maneira de suporte que permita drenagem de exsudados.

12. Processo para tratamento de mastopexia com aumento (rea- Iizado em uma ou duas operagoes) onde ο processo compreende: a. inser^ao de um implante de mama tanto sob ο mOsculo em uma bolsa submuscular onde ο implante e grande e ο grau de deformapao έ maior, ou sob a gldndula mamaria em uma bolsa subglandular se ο implante epequeno b. marcagao de quatro pontos sobre a mama ao redor de areola para determinar a quantidade de pele necess^iria para ambos，ο forro exter- no de pele da nova mama e ο excesso de pele na regi^o periareolar para ο retalho d6rmico a ser usado para ο forro interno de pele c. desepitelizagao de retalho para obter ο pediculo central d. deslocamento subcutaneo de mama abaixo nive丨 da fascia peitoral e. dissecap§o de pele sobre ο vi6s no hemisferio superior de modo a aumentar progressivamente a espessura do tecido de gordura sub- cutaneo prbximo da pele e f. disseca9§o da pele do tecido parenquimal no hemisferio inferi- or da mama g. aplicagSo de uma prdtese de mastopexia sobre ο retalho der- mico no hemisf§rio inferior para apoiar ο Iado inferior da mama h. sutura de protese de mastopexia para a fascia pectoralis para promover eleva^ao e forma do cone mam^rio .suturando fechado ο forro de pele externo enquanto fixando a pele areolar ao forro de pele externo j. aplicagSo de curativo 白 mama em uma maneira de suporte que permita drenagem de exsudados