BRPI0714904A2 - composiÇço contendo cdp-colina, e seus mÉtodos de uso - Google Patents

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Abstract

COMPOSIÇÕES CONTENDO CDP-COLINA, E SEUS MÉTODOS DE USO. A presente invenção é direcionada a métodos para melhorar a memória, o aprendizado, a cognição, a transmissão sináptica, síntese e liberação de neurotransmissores e aumento dos níveis de fosfolipídeos no cérebro de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

Description

"COMPOSIÇÕES CONTENDO CDP-COLINA, E SEUS MÉTODOS DE USO"
Campo da Invenção
A presente invenção é direcionada a métodos para melhorar a memória, a aprendizagem, a cognição, a transmissão sináptica, síntese e liberação de neurotransmissores e aumento dos níveis de fosfolipídeos no cérebro de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo, uma CDP-colina (citidina difosfato colina) ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma. FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO.
Uridina é um nucleosídeo de pirimidina e é essencial na síntese de ácidos ribonucléicos e - glicogênicos do tecido, tal como a glicose de UDP e glicose de UTP. Usos médicos anteriores da uridina só incluíam o tratamento de distúrbios genéticos relacionados a deficiências de síntese de pirimidina, tal como a acidúria orótica. Colina, um componente dietético de muitos alimentos, é parte da maioria de vários fosfolipídeos que são essenciais para a estrutura normal da membrana e sua função. A colina é, em alguns casos, incluída em emulsões de lipídios que fornecem calorias extras e ácidos graxos essenciais a pacientes que recebem nutrição parenteral.
Sumário da Invenção
A presente invenção é direcionada a métodos para melhorar a memória, a aprendizagem, a cognição, a transmissão sináptica, síntese e liberação de neurotransmissores e aumento dos níveis de fosfolipídeos, no cérebro de um indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de ,uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.
Em uma forma de caracterização, a presente invenção prove um método para melhorar a memória de um indivíduo, compreendendo administrar ao mencionado indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando, desse modo, a memória de um indivíduo.
Em uma forma de caracterização, a presente invenção provê um método para melhorar a aprendizagem em um indivíduo, compreendendo administrar ao mencionado indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando, desste modo, a aprendizagem de um indivíduo.
Em uma forma de caracterização, a presente invenção provê um método para melhorar a cognição em um indivíduo, compreendendo administrar ao mencionado indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando, desse modo, a cognição de um indivíduo.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para melhorar uma transmissão sináptica em um indivíduo, compreendendo administrar ao mencionado indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando, desse modo, uma transmissão sináptica num indivíduo.
Em uma outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula do cérebro ou célula neural de um indivíduo em sintetizar um neurotransmissor, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição contendo CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, desse modo, a capacidade de uma célula do cérebro ou célula neural de um indivíduo em sintetizar um neurotransmissor.
Em uma outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula do cérebro ou célula neural de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de um neurotransmissor numa sinapse, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou
intensificando, desse modo, a capacidade de uma célula do cérebro ou célula neural de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de um neurotransmissor numa sinapse.
Em uma outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para estimular ou intensificar a produção de uma fosfatidil-colina. através de uma célula do cérebro ou uma célula neural de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, estimulando ou intensificando, desse modo, a produção de uma fosfatidil-colina através de uma célula do cérebro ou uma célula neural de um indivíduo.
Em uma outra forma de caracterização, a presente
invenção prove um método para aumentar, no cérebro de um indivíduo, o nível de um fosfolipídeo, selecionado de fosfatidil- colina (FC), fosfatidil-etanolamina (FE), fosfatidil-serina (FS) , e fosfatidil-inositol (FI), o método compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando, desse modo, no cérebro de um indivíduo, o nível de um fosfolipídeo selecionado de FC, FE, FS, e FI.
Em uma outra forma de caracterização, a presente invenção prove um método para estimular ou intensificar o crescimento de neuritos de uma célula neural de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, estimulando ou
intensificando, dessa forma, o crescimento de neuritos de uma célula neural de um indivíduo.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para estimular ou intensificar uma ramificação de neuritos de uma célula neural de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, estimulando ou
intensificando, dessa forma, a ramificação de neuritos de uma célula neural de um indivíduo.
Em uma outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para promover o reparo de uma célula neural lesada de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo, uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, promovendo assim, o reparo de uma célula neural lesada de um indivíduo.
Breve Descrição dos Desenhos A figura 1 ilustra a coincidência de picos de
citidina e de tirosina (6,59) quando testadas por um método para CLAP padrão (Cromatografia Liquida de Alta Performance - High Performance Liquid Chromatography - HPLC).
A figura 2 ilustra picos distintos de citidina (3,25) e tirosina (2,92) quando testadas por um método para CLAP modificado que utiliza tamponante de eluição com baixo metanol.
Figura 3 - A administração oral de MFU (Monofosfato de Uridina) eleva os níveis de uridina no sangue em humanos. A razão de uridina (ajustada como 100% do valor) é representada para a citidina no plasma, depois da administração oral de 250 miligramas de uridina por kg de peso do corpo (mg/kg) .
Figura 4 - A administração oral de uridina eleva os níveis de uridina no sangue em gerbos (um tipo de roedor) . Estão representados os níveis de uridina no plasma durante 60 minutos, seguidos de uma administração simulada, ou administração de citidina ou uridina. **: ρ < 0,01 versus controle simuladamente suprido; ##: ρ < 0,01 versus citidina.
Figura 5 - A administração oral de uridina eleva os níveis de uridina no cérebro. Estão representados os níveis de uridina no cérebro durante 60 minutos, seguidos de uma administração simulada, ou administração de citidina ou uridina. **: p<0,01 versus simuladamente suprido; ##: ρ < 0,01 versus citidina.
Figura 6 - A administração oral de MFU (Monofosfato de Uridina) eleva os níveis de uridina no cérebro. Estão representados os níveis de uridina no cérebro em vários pontos do tempo depois da administração,ou administração de água, ou de MFU.
Figura 7 - A uridina é convertida em citidina no cérebro. É representada a razão de uridina (100%) para citidina no plasma (A) e no cérebro (B) depois da administração oral de 250 miligramas de uridina por kg de peso do corpo (mg/kg).
Figura 8 - A administração oral de MFU eleva os níveis de CDP-colina no cérebro. Estão representados os níveis de CDP-colina em vários pontos do tempo depois da administração, ou
administração de água, ou de MFU.
Figura 9 - A uridina aumenta os níveis intracelulares de CDP-colina numa linhagem de célula neural. As células foram incubadas por 6 h com as concentrações indicadas de uridina. Estão representadas as médias +/- DPM. (Desvio Padrão da Média) de seis placas, expressas em picomoles (pmol) de CDP- colina/mg de proteína. 0 experimento foi repetido por 3 vezes. *: ρ < 0,05.
Figura 10 - Uma dieta suplementar de MFU aumenta significativamente a liberação de dopaminada estimulada por potássio (DA) no dialisato estriatal. (A) Efeito da dieta suplementar de MFU na liberação de DA estriatal estimulada por K+. Os dados foram calculados a partir de seis a nove medidas em cada ponto (médias ± desvio padrão da medida [DPM] ) . O valor de 100% representou a média das quatro medidas antes que a estimulação por potássio fosse ajustada para 100%. (B) Os dados foram agrupados de acordo com grupos de tratamento com MFU. "*" indica ρ < 0,05 comparado aos controles correspondentes.
Figura 11 - Concentração basal de acetilcolina aumentada com tratamento de MFU. Estão representadas as médias +/- DPM. "*" indica o valor ρ > 0,05.
Figura 12 - Efeito da dieta suplementar de MFU sobre os níveis de neurofilamento de proteína no estriato contralateral. (A): NF-70. (B): NF-M *: ρ < 0,05, **: ρ < 0,01, comparado aos controles correspondentes.
Figura 13-0 tratamento de uridina eleva o crescimento de neuritos. Células APC-12 tratadas durante 4 dias com NGF (50 ng/ml) na presença ou ausência de uridina (50 μΜ) . B - Número de neuritos por célula depois de 2 ou 4 dias de tratamento. C - Número de neuritos por célula depois de 2 ou 4 dias de NGF mais concentrações diferentes de uridina (50, 100 e 200 μΜ) . D - Quantificação do número de pontos ramificados para cada célula. E - Níveis das proteínas estruturais NF-70 e NF-M, conforme determinado usando tingimento Western. N = NGF, U = Uridina. Os valores representam médias + DPM. **: ρ < 0,01, ***: ρ < 0,001 versus tratamento por NGF.
Figura 14-0 tratamento com uridina aumenta os níveis intracelulares de TFU (Trifosfato de Uridina) e TFC (Trifosfato de Citidina) em células tratadas com NGF. O tratamento com uridina (50 μΜ) aumentou significativamente os níveis intracelulares de TFU (A) e os níveis intracelulares de TFC (B) . N = NGF, U = Uridina, C = Citidina. Os valores representam médias + DPM. *: ρ < 0,05 versus tratamento com NGF.
Figura 15-0 tratamento com TFU aumenta o crescimento de neuritos. 0 tratamento de células PC-12 durante 4 dias com NGF e TFU aumentou significativamente o número de neuritos produzidos por célula, comparado ao tratamento com NGF isolado. Os valores representam médias + DPM. **p < 0,01.
Figura 16 - Células diferenciadas por NGF expressam receptores P2 Y sensíveis a pirimidina. A - Níveis de expressão de receptores P2Y2, P2Y4 e P2Y6 após a incubação de células com NGF para comprimentos de tempo variados. B - Depois de 4 dias de tratamento com NGF, as células foram fixadas e as proteínas de receptor P2Y (verde) e NF-70 (vermelho) foram visualizadas usando imunofluorescência. Corte esquerdo: P2Y2. Corte do meio: P2Y4. Corte direito: P2Y6. Os valores representam
médias + DPM. *** ρ < 0,001.
Figura 17 - Os antagonistas de receptores P2Y inibiram o efeito da uridina no crescimento dos neuritos. As células foram tratadas durante 4 dias com NGF, com ou sem uridina (100 μΜ), e com os receptores antagonistas P2Y PPADS, suramina, ou RB-2. Os valores representam médias + DPM. *** ρ < 0,001 versus tratamento com NGF; # ρ < 0,05, ### ρ < 0,001 versus NGF mais tratamento com uridina. Figura 18 - Fosfatidil-inositol (FI) modificada é
estimulada por TFU e uridina. As células foram metabolicamente marcadas com [3H] inositol de um dia para o outro, estimuladas com T FU, uridina, ou TFU mais PPADS na presença de lítio nas concentrações indicadas, e fosfatos de inositol marcados radiotivamnete derivados da quebra ■ de FI foram medidos por contagem de cintilação. Os valores representam médias + DPM. * ρ < 0,05, ** p<0, 01 versus controle; #p < 0,05 versus 100 μΜ de
tratamento com TFU.
Figura 19-0 MFU oral melhora a aprendizagem e a memória espacial em ratos. Ratos com 18 meses de idade em ambientes restritos consumiram uma dieta de controle ou uma dieta de MFU durante 6 semanas e foram a seguir testados, utilizando-se um Labirinto Aquático de Morris (Morris Water Maze) , 4 testes/dia durante 4 dias. 0 tempo médio para localizar a plataforma é dado em segundos.
Figura 20 - 0 MFU oral melhora a aprendizagem e a memória espacial em gerbos. O aprendizado e a memória espacial de gerbos alimentados com uma dieta de controle ou dietas contendo a quantidade indicada de MFU foram testados em um labirinto de braço radial. Os resultados estão representados como a quantidade de tempo remanescente antes do prazo final de 3 minutos. Figura 21-0 MFU oral melhora o funcionamento da
memória e a memória de referência. A memória de gerbos alimentados com controle ou uma dieta de MFU a 0,1% durante quatro semanas foi testada utilizando-se uma modificação do teste representado na Figura 20, que mediu ambos os erros de funcionamento da memória (A) e os erros da memória de referência (B) . Os losângulos representam pontos de dados de gerbos de controle; os triângulos representam pontos de dados de gerbos alimentados com uma dieta de MFU a 0,1%.
Figura 22 - A uridina e a colina aumentam a liberação de neurotransmissores em porções estriatais (corte superior), porções do hipocampo (corte do meio), e porções corticais (corte superior). Os dados são expressos como nanomoles por miligrama de proteína durante duas horas, e representados como média ± DPM. "*" = P < 0,001 relativo a valores obtidos na ausência de colina. A primeira série em cada corte foi executada na ausência de colina; a segunda série foi executada na presença de colina. As barras em cada série representam, da esquerda para a direita, nenhum composto suplementar foi adicionado; citidina adicionada; e uridina adicionada (cada uma em adição à colina, onde for apropriado).
Figura 23 - Efeitos do ambiente e de uma dieta suplementar de MFU, na memória, para uma tarefa de labirinto aquático com plataforma escondida, dependente do hipocampo. Ratos IC não tratados (IC-CONT), comparados com ratos EC (EC-CONT e EC- MFU) ou ratos IC tratados com uma dieta alta em MFU (IC-MFU) , cumpriram a tarefa de labirinto aquático com plataforma escondida em um grau de velocidade taxa mais lento (corte esquerdo) e, durante o teste de prova, gastaram menos tempo no quadrante que originalmente continha a plataforma (corte direito). As barras de erro representam o DPM.
Figura 24 - Efeitos do ambiente e de uma dieta suplementar de MFU na memória para uma tarefa de labirinto aquático com plataforma visível, dependente de estriato. Todos os ratos cumpriram a tarefa de labirinto aquático com plataforma visível, em velocidades iguais.
Figura 25 - Efeitos da CDP-colina e MFU oral nos
níveis de uridina de plasma humano.
Figura 26 - Sinergia de DHA e MFU para aumentar os níveis de fosfolipídeos do cérebro em um estudo animal completo. "*": valor significativamente mais alto do que o grupo de controle por ANOVA de uma-via. A - pmol de fosfolipídeos por miligramas (mg) de proteína. MFU + DHA foi significativamente mais alto do que o controle (p < 0,05) (ANOVA de uma-via [F(3,28)=4,12; ρ = 0,015]). ANOVA de duas-vias revelou efeitos estatisticamente significativos de DHA, bem como em relação ao grupo de controle [ F (1, 28) = 8, 78; ρ = 0, 006]. B - pmol de f os f olipídeos por ug de DNA. MFU + DHA foi significativamente mais alto do que o controle (p = 0,020) (ANOVA de uma-via [F(3,28)=3,215; ρ = 0,038]).
Descrição Detalhada da Invenção
A presente invenção é direcionada a métodos para melhorar a memória, aprendizagem, cognição, transmissão sináptica, síntese e liberação de neurotransmissores e aumento dos níveis de fosfolipídeos no cérebro de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.
Em uma forma de caracterização, a presente invenção prove um método para melhorar a memória de um indivíduo, compreendendo administrar ao mencionado indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando, dessa forma, a memória de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para melhorar ou inibir um declínio na memória cognitiva de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, assim melhorando ou inibindo um declínio na memória cognitiva de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para melhorar ou inibir um declínio na inteligência de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, dessa forma melhorando ou inibindo um declínio na inteligência de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem um distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem um distúrbio de memória não relacionado com a idade. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em uma outra forma de caracterização, a presente
invenção provê um método para melhorar ou intensificar a memória cognitiva de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando ou intensificando, dessa forma, a memória cognitiva de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para melhorar ou intensificar a inteligência de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando ou intensificando, dessa forma, a inteligência de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Conforme aqui contemplado (Exemplo 14), o aumento dos níveis de uridina no plasma impede a diminuição da capacidade causada por condições ambientais depauperadas na memória espacial e/ou cognitiva e na inteligência e melhora a memória espacial e/pou cognitiva e a inteligência em indivíduos saudáveis. Além disto, os dados do Exemplo 13 mostram que a colina aumenta a liberação de neurotransmissores. Portanto, a administração de composições que aumentem os níveis de uridina no plasma, particularmente a CDP-colina, impede a diminuição da capacidade causada por condições ambientais depauperadas na memória espacial e/ou cognitiva e na inteligência, e melhora a memória espacial e/ou cognitiva e inteligência em indivíduos saudáveis.
Em outra forma de caracterização, a CDP-colina, ou o sal farmaceuticamente aceitável da mesma, eleva o nível de uma uridina no indivíduo. Em outra forma de caracterização, a CDP- colina, ou o sal farmaceuticamente aceitável da mesma, eleva o nível de um fosfato de uridina no indivíduo. Em outra forma de caracterização, a CDP-colina, ou o sal farmaceuticamente aceitável da mesma, é capaz de elevar o nível de uma uridina no indivíduo. Em uma outra forma de caracterização, a CDP-colina, ou o sal farmaceuticamente aceitável da mesma, é capaz de elevar o nível de um fosfato de uridina no indivíduo. Em uma outra forma de caracterização, o nível é um nível de plasma. Em uma outra forma de caracterização, o nível é um nível no cérebro. Em uma outra forma de caracterização, o fosfato de uridina é um MFU. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em uma outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para reduzir ou inibir o declínio na memória dependente do hipocampo de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, dessa forma melhorando ou inibindo o declínio na memória dependente do hipocampo de um indivíduo. Em uma outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em uma outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em uma outra forma de caracterização, o indivíduo tem um distúrbio de memória não relacionado com a idade. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em uma outra forma de caracterização, a presente invenção prove um método para melhorar ou intensificar a memória dependente do hipocampo de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando ou intensificando, desse modo, a memória dependente do hipocampo de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização
da presente invenção.
Como aqui contemplado (Exemplo 14), o aumento dos níveis de uridina no plasma impede a diminuição da capacidade da memória dependente do hipocampo, causada por condições ambientais depauperadas, e melhora a memória dependente do hipocampo em indivíduos saudáveis. Os dados do Exemplo 13 mostram ainda que a colina aumenta a liberação de neurotransmissores. Assim, a administração de composições que aumentem os níveis de uridina no plasma, particularmente a CDP-colina, impede a diminuição da capacidade da memória dependente do hipocampo, causada por condições ambientais depauperadas, e melhora a memória dependente do hipocampo em indivíduos saudáveis.
O declínio da memória cognitiva, da memória dependente do hipocampo, ou da inteligência, que são tratadas, reduzidas, ou inibidas por um método da presente invenção, é, em outra forma de caracterização, devido à idade. "Devido à idade" refere-se, em uma outra forma de caracterização, a um declínio observado em um indivíduo, para uma idade acima de 55 anos. Em outra forma de caracterização, o indivíduo possui idade acima de 57 anos. Em uma outra forma de caracterização, o indivíduo tem idade acima de 59 anos. Em uma outra forma de caracterização, o indivíduo possui idade acima de 60 anos. Em uma outra forma de caracterização, o indivíduo tem idade acima de 62 anos. Em uma outra forma de caracterização, o indivíduo possui idade acima de 64 anos. Em uma outra forma de caracterização, o indivíduo tem idade acima de 65 anos. Em outra forma de caracterização, o indivíduo possui idade acima de 67 anos. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem idade acima de 69 anos. Em outra forma de caracterização, o indivíduo possui idade acima de 70 anos. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem idade acima de 72 anos. Em outra forma de caracterização, o indivíduo possui idade acima de 74 anos. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem idade acima de 75 anos. Em outra forma de caracterização, o indivíduo possui idade acima de 76 anos. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem idade acima de 78 anos. Em outra forma de caracterização, o indivíduo possui idade acima de 80 anos. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem idade acima de 82 anos. Em outra forma de caracterização, o indivíduo possui idade acima de 84 anos. Cada possibilidade representa outra forma de caracterização da presente invenção. Em uma outra forma de caracterização, o declínio
que é tratado é devido a uma doença relacionada com a idade ou ao declínio cognitivo relacionado com a idade. Em uma outra forma de caracterização, a doença relacionada com a idade é Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, a doença relacionada com a idade é prejuízo cognitivo moderado. Em outra forma de caracterização, a doença relacionada com a idade é doença de Pick. Em outra forma de caracterização, a doença relacionada com a idade é doença de Lewy Body. Em outra forma de caracterização, a doença relacionada com a idade é uma demência. Em outra forma de caracterização, a doença relacionada com a idade é qualquer outra doença relacionada com a idade ou declínio cognitivo relacionado com a idade, conhecidos do estado da técnica. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em uma outra forma de caracterização, o declínio
que é tratado é devido à inatividade. Em outra forma de caracterização, a inatividade é uma inatividade física. Em outra forma de caracterização, a inatividade é inatividade mental. Em outra forma de caracterização, a inatividade é inatividade social. Em outra forma de caracterização, a inatividade é qualquer outro tipo de inatividade. Cada possibilidade representa outra forma de caracterização da presente invenção. Métodos para determinar a causa do declínio na memória cognitiva, memória dependente do hipocampo, e inteligência são bem conhecidos da técnica, e são descritos, por exemplo, em Robertson R. G. et al. (Geriatric Failure to Thrivef Am. Fam.
Physician., Julho de 2004, 15; 7 0 (2) : 34 3-50) e Van de Port et al. (Susceptibility to deterioration of mobility long-term after stroke: a prospective cohort study. Stroke., Janeiro de 2006, 37 (1) :167-71] . Cada método representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em outra forma de caracterização, "melhorar a" ou
"melhoria de" uma memória cognitiva ou dependente do hipocampo, refere-se ao aumento da capacidade da memória do indivíduo. Em outra forma de caracterização, os termos referem-se a um aumento ou melhoria do nível da linha base da memória do indivíduo. Em outra forma de caracterização, os termos referem-se a um aumento ou melhoria do nível da memória.
Em outra forma de caracterização, "melhorar" a memória cognitiva, a memória dependente do hipocampo e a inteligência refere-se a efetuar uma melhoria de 10% das mesmas. Em outra forma de caracterização, o termo refere-se a efetuar uma melhoria de 20% das mesmas. Em outra forma de caracterização, o termo refere-se a efetuar uma melhoria de 30% das mesmas. Em outra forma de caracterização, o termo refere-se a efetuar uma melhoria de 40% das mesmas. Em outra forma de caracterização, o termo refere-se a efetuar uma melhoria de 50% das mesmas. Em outra forma de caracterização, o termo refere-se a efetuar uma melhoria de 60% das mesmas. Em outra forma de caracterização, o termo refere-se a efetuar uma melhoria de 70% das mesmas. Em outra forma de caracterização, o termo refere-se a efetuar uma melhoria de 80% das mesmas. Em outra forma de caracterização, o termo refere-se a efetuar uma melhoria de 90% das mesmas. Em outra forma de caracterização, o termo refere-se a efetuar uma melhoria de 100% das mesmas. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em outra forma de caracterização, a melhoria de
uma memória cognitiva ou inteligência é avaliada com relação à memória cognitiva ou inteligência antes do início do tratamento. Em outra forma de caracterização, a melhoria de uma memória cognitiva ou inteligência é avaliada com relação a um indivíduo sem tratamento. Em outra forma de caracterização, a melhoria de uma memória cognitiva ou inteligência é avaliada de acordo com um critério padronizado, como por exemplo, um teste ou algo semelhante. Cada tipo de melhoria de atividade cognitiva representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para melhorar uma disfunção do hipocampo de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP- colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando, dessa forma, uma disfunção do hipocampo de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem um distúrbio cognitivo ou de memória, não relacionado com a idade. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em outra forma de caracterização, a presente
invenção provê um método para inibir um declínio na capacidade da memória de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, inibindo, dessa forma, um declínio na capacidade de memória de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem um distúrbio de memória não relacionado com a idade. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para melhorar a aprendizagem de um indivíduo, compreendendo administrar ao dito indivíduo, uma composição contendo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando, dessa forma, a aprendizagem de um indivíduo. A aprendizagem é, em outra forma de caracterização, aprendizagem cognitiva. Em outra forma de caracterização, a aprendizagem é aprendizagem afetiva. Em outra forma de caracterização, a aprendizagem é aprendizagem psicomotora. Em outra forma de caracterização, a aprendizagem é qualquer outro tipo de aprendizagem conhecido da técnica. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem um distúrbio de memória ou cognitivo, não relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Conforme aqui contemplado, os dados das Figuras 17-19 mostram que o aumento dos níveis de uridina no plasma melhoram vários tipos de memória e de aprendizado. A consistência do efeito entre espécies diferentes e em tipos diferentes de avaliações de memória e aprendizado comprova as descobertas da presente invenção. Os dados do Exemplo 13 mostram, além disso, que a colina aumenta a liberação de neurotransmissores. Portanto, a administração de composições que aumentam os níveis de uridina no plasma, particularmente CDP-colina, melhora a memória e as funções neurológicas.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para melhorar a cognição de um indivíduo, compreendendo administrar ao dito indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando, dessa forma, a cognição em um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para restabelecer uma função cognitiva de um indivíduo tendo um prejuízo na dita função cognitiva, compreendendo administrar ao dito indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, restabelecendo, dessa forma, uma função cognitiva de um indivíduo tendo uma diminuição da capacidade da mencionada função cognitiva. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem um distúrbio cognitivo ou de memória, não relacionado com a idade. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para tratar ou reduzir a incidência de um distúrbio cognitivo relacionado com a idade ou Prejuízo da Memória Associado com a Idade (PMAI) em um indivíduo, compreendendo administrar ao dito indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, tratando ou reduzindo, dessa forma, a incidência de um distúrbio cognitivo relacionado com a
idade, ou PMAI, em um indivíduo.
Em outra forma de caracterização, o declínio de memória ou aprendizado, ou disfunção do hipocampo, é o resultado de um distúrbio neurológico. Em outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico é um distúrbio de memória. O distúrbio de memória compreende, em uma outra forma de caracterização, um declínio da memória. Em outra forma de caracterização, o declínio da memória está associado com o envelhecimento do cérebro. Em outra forma de caracterização, o distúrbio de memória é doença de Pick. Em uma outra forma de caracterização, o distúrbio de memória é doença de Lewy Body. Em outra forma de caracterização, o distúrbio de memória é uma demência. Em outra forma de caracterização, a demência está associada com a doença de Huntington. Em outra forma de caracterização, a demência está associada com demência da SIDA (AIDS). Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico está associado com um caminho dopaminérgico. Em outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico não está associado com um caminho dopaminérgico. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em uma outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico é uma disfunção cognitiva. Em outra forma de caracterização, a disfunção cognitiva é dislexia. Em outra forma de caracterização, a disfunção cognitiva compreende um déficit de atenção. Em outra forma de caracterização, a disfunção cognitiva compreende um déficit de atenção. Em outra forma de caracterização, a disfunção cognitiva compreende um déficit de concentração. Em outra forma de caracterização, a disfunção cognitiva compreende uma falta de foco. Em outras formas de caracterização, a disfunção cognitiva está associada a derrame ou à demência de multi-infarto. Em outra forma de caracterização, a disfunção cognitiva compreende prejuízo cognitivo mínimo. Em outra forma de caracterização, a disfunção cognitiva compreende prejuízo de memória relacionado com a idade. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico é um distúrbio emocional. Em outra forma de caracterização, o distúrbio emocional compreende uma mania. Em outra forma de caracterização, o distúrbio emocional compreende depressão. Em outra forma de caracterização, o distúrbio emocional compreende tensão. Em outra forma de caracterização, o distúrbio emocional compreende pânico. Em outra forma de caracterização, o distúrbio emocional compreende ansiedade. Em outra forma de caracterização, o distúrbio emocional compreende distimia. Em outra forma de caracterização, o distúrbio emocional compreende psicose. Em outra forma de caracterização, o distúrbio emocional compreende um distúrbio sazonal efetivo. Em outra forma de caracterização, o distúrbio emocional compreende um distúrbio bipolar.
Em outra forma de caracterização, o distúrbio
neurológico é uma depressão. Em outra forma de caracterização, a depressão é uma depressão endógena. Em outra forma de caracterização, a depressão é um distúrbio depressivo maior. Em outra forma de caracterização, a depressão é depressão com ansiedade. Em outra forma de caracterização, a depressão é depressão bipolar. Cada tipo de depressão representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em uma outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico é uma ataxia. Em outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico é a ataxia de Friedreich. Em outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico da presente invenção exclui epilepsia, ataques de epilepsia, convulsões e assemelhados.
Em outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico é um distúrbio de movimento. 0 distúrbio de movimento compreende, em uma outra forma de caracterização, uma discinesia tardia. Em outra forma de caracterização, o distúrbio de movimento compreende uma distonia. Em outra forma de caracterização, o distúrbio de movimento compreende a sindrome de Tourette. Em outra forma de caracterização, o distúrbio de movimento é qualquer outro distúrbio de movimento conhecido da técnica.
Em outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico é uma doença cérebro-vascular. A doença cérebro- vascular resulta, em uma outra forma de caracterização, de hipoxia. Em outra forma de caracterização, a doença cérebro- vascular resulta de qualquer outra causa capaz de causar uma doença cérebro-vascular. Em outra forma de caracterização, a doença cérebro-vascular é trombose cerebral. Em outra forma de caracterização, a doença cérebro-vascular é isquemia.
Em uma outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico é uma sindrome de comportamento. Em outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico é uma sindrome neurológica. Em outra forma de caracterização, a sindrome de comportamento ou sindrome neurológica ocorre após um trauma do cérebro. Em outra forma de caracterização, a sindrome de comportamento ou sindrome neurológica ocorre após lesão da medula espinhal. Em outra forma de caracterização, a sindrome de comportamento ou sindrome neurológica ocorre após uma anoxia.
Em outra forma de caracterização, o distúrbio neurológico é um distúrbio do sistema nervoso periférico. Em outra forma de caracterização, o distúrbio do sistema nervoso periférico é um distúrbio neuromuscular. Em outra forma de caracterização, o distúrbio do sistema nervoso periférico é qualquer outro distúrbio do sistema nervoso periférico, conhecido da técnica. Em outra forma de caracterização, o distúrbio neuromuscular é miastenia grave. Em outra forma de caracterização, o distúrbio neuromuscular é sindrome pós-pólio. Em outra forma de caracterização, o distúrbio neuromuscular é uma distrofia muscular.
Cada distúrbio neurológico representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em uma outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para melhorar uma transmissão sináptica no cérebro do indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma composição contendo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando, dessa forma, uma transmissão sináptica no cérebro de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para melhorar uma transmissão sináptica do sistema nervoso central (SNC) do indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando, desse modo, uma transmissão sináptica do SNC de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em uma outra forma de caracterização, a presente
invenção provê um método para aumentar ou intensificara capacidade de uma célula do cérebro de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de um neurotransmissor numa sinapse, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a capacidade de uma célula do cérebro de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de um neurotransmissor numa sinapse. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção prove um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula neural de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de um neurotransmissor numa sinapse, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, desse modo, a capacidade de uma célula neural de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de um neurotransmissor em uma sinapse. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula do cérebro de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de dopamina numa sinapse, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a capacidade de uma célula do cérebro de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de dopamina em uma sinapse. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula neural de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de dopamina em uma sinapse, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, desse modo a capacidade de uma célula neural de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de dopamina em uma sinapse. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização
da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula do cérebro de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de acetilcolina numa sinapse, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a capacidade de uma célula do cérebro de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de acetilcolina em uma sinapse. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula neural de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de acetilcolina em uma sinapse, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a capacidade de uma célula neural de um indivíduo em liberar repetidamente uma quantidade eficaz de acetilcolina numa sinapse. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Métodos para determinar as quantidades efetivas de neurotransmissores são bem conhecidos na técnica, e estão descritos, por exemplo, em Huey E. D. et al. (A systematic review of neurotransmítter deficits and treatments in frontotemporal dementia, Neurology, Janeiro de 2006, 10; 66 (1) :17-22) ; Shinoe T. et al. (Modulation of synaptic plasticity by physiological activation of MI muscarinic acetyIcholine receptors in the mouse hippocampus, J. Neurosci., Novembro de 2005, 30;25(48):11194-200) e Lanari A. et al. (Neurotransmítter deficits in behavioural and psychological symptoms of Alzheimer' s disease, Mech. Ageing Dev., Fevereiro de 2006, 127 (2):158-65) . Em outra forma de caracterização, uma quantidade de neurotransmissores é medida diretamente. Em outra forma de caracterização, uma quantidade de neurotransmissores é medida por um efeito conhecido do neurotransmissor. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em outra forma de caracterização, a presente
invenção prové um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula do cérebro de um indivíduo em sintetizar um neurotransmissor, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamene aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a capacidade de uma célula do cérebro de um indivíduo em sintetizar um neurotransmissor. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula neural de um indivíduo em sintetizar um neurotransmissor, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a capacidade de uma célula neural de um indivíduo em sintetizar um neurotransmissor. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula do cérebro de um indivíduo em sintetizar acetilcolina, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a capacidade de uma célula do cérebro de um indivíduo em sintetizar acetilcolina. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula neural de um indivíduo em sintetizar acetilcolina, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a capacidade de uma célula neural de um indivíduo em sintetizar acetilcolina. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em uma outra forma de caracterização, a presente invenção prove um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula do cérebro de um indivíduo em sintetizar dopamina, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a capacidade de uma célula do cérebro de um indivíduo em sintetizar dopamina. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula neural de um indivíduo em sintetizar dopamina, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a capacidade de uma célula neural de um indivíduo em sintetizar dopamina. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em uma outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar um nível de acetilcolina numa sinapse de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando, dessa forma, o nível de acetilcolina em uma sinapse de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar um nivel de dopamina numa sinapse de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando, desse modo, o nível de dopamina na sinapse de um indivíduo. Em uma outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para estimular ou intensificar um crescimento de neuritos de uma célula neural de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, estimulando ou
intensificando, dessa forma, um crescimento de neuritos de uma célula neural de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em uma outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para estimular ou intensificar a ramificação de neuritos de uma célula neural de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, estimulando ou
intensificando, dessa forma, uma ramificação de neuritos de uma célula neural de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para estimular ou intensificar a formação de uma espinha dendritica de uma célula neural de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável, estimulando ou intensificando, dessa forma, uma formação de uma espinha dendritica de uma célula neural de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, estimular ou intensificar uma ramificação de neuritos, ou o crescimento ou a formação de uma espinha dendritica em uma célula neural, promove a formação de novas sinapses. Em outra forma de caracterização, é promovida a formação de sinapses maiores. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar o nível da proteína do neurofilamento-70 (NF-70) ou do neurofilamento-M (NF-M) no cérebro de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP- colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando, dessa forma, o nível da proteína NF-70 ou NF-M no cérebro de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para facilitar ou intensificar o reparo do cérebro, compreendendo administrar ao indivíduo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, facilitando, desse modo, o reparo do cérebro. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem um distúrbio cognitivo ou de memória não relacionado com a idade. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, o reparo do cérebro é facilitado ou aumentado após um derrame. Em uma outra forma de caracterização, o reparo do cérebro é facilitado ou intensificado após uma lesão cerebral. Em outra forma de caracterização, o reparo do cérebro é facilitado ou aumentado após qualquer outro evento, doença ou distúrbio conhecidos na técnica, que necessitem do reparo no cérebro. Cada possibilidade representa outra forma de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para estimular ou intensificar a produção de uma fosfatidil-colina por meio de uma célula do cérebro ou de uma célula neural de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, estimulando ou
intensificando, desse modo, a produção de uma fosfatidil-colina através de uma célula do cérebro ou uma célula neural de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar, no cérebro de um indivíduo, o nível de um fosfolipídeo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando, dessa forma, no cérebro de um indivíduo, o nível de um fosfolipídeo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em uma outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar o nível de uma FC no cérebro de um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando, dessa forma, o nível de FC no cérebro de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para aumentar, no cérebro de um indivíduo, o nível de uma FE, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando, desse modo, no cérebro de um indivíduo, o nível de uma FE. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em outra forma de caracterização, a presente
invenção provê um método para aumentar no cérebro de um indivíduo, um nível de uma FS, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando, desse modo, no cérebro de um indivíduo, o nível de uma FS. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em uma outra forma de caracterização, a presente
invenção prove um método para aumentar, no cérebro de um indivíduo, um nível de um FI, o método compreendendo administrar ao indivíduo, uma composição que inclui uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando, desse modo, no cérebro de um indivíduo o nível de um FI. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização de métodos e composições da presente invenção, o nível do fosfolipídeo desejado é aumentado numa membrana dendrítica da célula do cérebro ou de uma célula neural. Em outra forma de caracterização, o nível do fosfolipídeo desejado é aumentado na membrana axonal da célula do cérebro ou numa célula neural. Em outra forma de caracterização, o nível do fosfolipídeo desejado é aumentado na célula do cérebro ou numa célula neural. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente invenção provê um método para estimular ou intensificar a produção de uma membrana por uma célula do cérebro ou uma célula neural de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, estimulando ou intensificando, dessa forma, a produção de uma membrana por uma célula do cérebro ou uma célula neural de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo não tem nenhum distúrbio de memória conhecido. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, métodos e composições da presente invenção aumentam o nível de FC e/ou outro fosfatídeo (por exemplo fosfatidil-inositol, esfingomielina), o qual, em troca, aumenta os níveis de um primeiro ou segundo mensageiro, mediando, dessa forma, os seus efeitos na memória e/ou cognição. Em outra forma de caracterização, o mensageiro é um eicosanóide. Em outra forma de caracterização, o mensageiro diaciIglicerol. Em outra forma de caracterização, o mensageiro trifosfato de inositol. Em outra forma de caracterização, mensageiro é um fator ativador de plaquetas (FAP). Em outra forma de caracterização, o mensageiro é qualquer outra mensagem derivada de FC e/ou outro fosfatídeo. Cada possibilidade representa outra forma de caracterização da presente invenção.
Métodos para avaliar a produção de uma membrana da célula do cérebro ou membrana de uma célula neural são bem conhecidos na técnica. Em uma outra forma de caracterização, a produção de membrana é avaliada medindo-se o nível de crescimento ou de ramificação de neuritos (Exemplo 8) . Em uma outra forma de caracterização, a produção da membrana é avaliada medindo-se o nível de uma proteína marcadora de membrana (Exemplo 7) . Em uma outra forma de caracterização, a produção de membrana é avaliada medindo-se a síntese de um precursor da membrana. Em uma outra forma de caracterização, a produção de membrana é avaliada medindo-se quantidades de membrana antes e após o tratamento com CDP-colina. Em uma outra forma de caracterização, a produção da membrana é avaliada através da medição de indicadores biológicos da modificação da membrana. Os indicadores ou a modificação de membranas celulares são bem conhecidas na técnica, e são descritas, por exemplo, em Das K.P. et al., Neurotoxicol. Teratol. 26 (3) : 397-406, 2004. Cada método para avaliar a produção de membrana representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a presente
invenção prove um método para melhorar ou restabelecer uma função colinérgica do cérebro de um indivíduo, compreendendo administrar ao dito indivíduo, uma CDP-colina ou um sal f armaceuticamente aceitável da mesma, melhorando ou restabelecendo, dessa forma, uma função colinérgica do cérebro de um indivíduo. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem Mal de Alzheimer. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem outro distúrbio de memória relacionado com a idade. Em outra forma de caracterização, o indivíduo tem um distúrbio cognitivo ou de memória não relacionado com a idade. Cada possibilidade representa uma forma independente
de caracterização da presente invenção. Em outra forma de caracterização, um método ou
composição da presente invenção é usado para tratar uma doença neurológica pediátrica relacionada ao desenvolvimento do cérebro. Em outra forma de caracterização, um método ou composição da presente invenção é usado para estimular o desenvolvimento do cérebro no caso de nascimento prematuro. Em outra forma de caracterização, um método ou composição da presente invenção é usado para tratar a Síndrome de Asperger. Em outra forma de caracterização, o alvo é a Síndrome de Rett. Em outra forma de caracterização, o alvo é a Síndrome de Tourette. Em outra forma de caracterização, o alvo é a Síndrome de Angelman. Em outra forma de caracterização, o alvo é Disautonomia Familiar. Em outra forma de caracterização, o alvo é Dislexia. Em outra forma de caracterização, o alvo é uma neuropatia periférica. Em outra forma de caracterização, o alvo é ataxia. Em outra forma de caracterização, o alvo é Distonia Muscular Deformante.
Em outra forma de caracterização, o alvo é Transtorno do Déficit de Atenção/Hiperatividade (TDAH). Em outra forma de caracterização, o TDAH é resultado de uma falta de dopamina.
Em outra forma de caracterização, os métodos e
composições da presente invenção são usados para tratar lesão cerebral. Em outra forma de caracterização, o dano é induzido por radiação. Em outra forma de caracterização, o dano é devido a hipoxia cerebral perinatal. Em outra forma de caracterização, o dano é devido a isquemia cerebral perinatal. Em outra forma de caracterização, a hipoxia e/ou isquemia cerebral perinatal é secundária ao trauma do nascimento. Em outra forma de caracterização, os métodos e composições da presente invenção são usados para tratar paralisia cerebral resultante de uma das
condições anteriores.
Em outra forma de caracterização, os métodos e composições da presente invenção são usados para tratar Sindrome
de Down ou trissomia do cromossomo 21.
Em uma outra forma de caracterização, os métodos e composições da presente invenção são usados para tratar crescimento ou desenvolvimento prejudicado do cérebro após uma nutrição materna deficiente. Em outra forma de caracterização, o crescimento ou desenvolvimento prejudicado do cérebro é secundário a uma nutrição infantil deficiente. Em outra forma de caracterização, o crescimento ou desenvolvimento prejudicado do cérebro é secundário a uma doença metabólica. Em outra forma de caracterização, os métodos e
composições da presente invenção são usados para tratar autismo. Em outra forma de caracterização, os métodos e composições da presente invenção são usados para tratar uma sindrome relacionada ao autismo. Em outra forma de caracterização, a sindrome é autismo. Em outra forma de caracterização, a sindrome é qualquer outra sindrome relacionada ao autismo conhecida na técnica.
Em outra forma de caracterização, os métodos e composições da presente invenção são usados para tratar qualquer outra doença neurológica pediátrica conhecida na técnica. Cada doença representa uma forma independente de caracterização da
presente invenção.
Em outra forma de caracterização de métodos da presente invenção, a administração de uma composição da presente invenção aumenta o nivel de uridina na circulação sangüínea do indivíduo, mediando, dessa forma, um dos efeitos aqui enumerados (por exemplo, melhorando a memória ou função cognitiva, estimulando uma função neural, a síntese de membrana, a liberação de neurotransmissores, etc.). Em outra forma de caracterização, o efeito é mediado sem aumentar o nível de uridina no plasma. Em outra forma de caracterização, conforme aqui contemplado, o aumento dos níveis de uridina no plasma causa um aumento nos níveis de citidina no cérebro. Assim, a presente invenção demonstra um mecanismo moderno de ação da CDP-colina; isto é, intensificando os níveis de uridina no plasma. Em outra forma de caracterização, os efeitos dos métodos e composições da presente invenção nos níveis de uridina no plasma permitem dosagens terapêuticas mais baixas, que não seriam possíveis de outro modo. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em uma outra forma de caracterização dos métodos da presente invenção, a administração de uma composição da presente invenção aumenta o nível de citidina no cérebro do indivíduo, mediando, dessa forma, um dos efeitos aqui enumerados (por exemplo melhorando a memória ou função cognitiva, estimulando a função neural, a síntese de membrana, a liberação de neurotransmissores, etc.). Em uma outra forma de caracterização, o efeito é mediado pelo aumento do nível de trifosfato de citidina (TFC) no cérebro. Em uma outra forma de caracterização, o efeito é mediado pelo aumento do nível de CDP-colina no cérebro. Em outra forma de caracterização, o efeito é mediado pelo aumento do nível de um derivado de citidina, T FC, CDP-colina no cérebro. Em uma outra forma de caracterização, o efeito é mediado pelo aumento do nível de um metabólito de citidina, TFC, CDP-colina no cérebro. Em outra forma de caracterização, o efeito é mediado sem aumentar o nível de citidina, TFC, CDP-colina, ou um derivado, ou metabólito, da mesma. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Conforme aqui descrito, as Figuras 7-9 mostram que a uridina, administrada oralmente, age rapida e efetivamente para elevar os níveis de citidina no cérebro. Estas descobertas demonstram que o aumento dos níveis de uridina no plasma, por sua vez, eleva os níveis de citidina, TFC, e CDP-colina. Os dados no Exemplo 13 mostram, além disso, que a colina aumenta a liberação de neurotransmissores. Assim, a administração de composições que aumentam os níveis de uridina no plasma, particularmente a CDP- colina, eleva os níveis de citidina no cérebro. Em uma outra forma de caracterização, o aumento
de citidina, TFC, ou CDP-colina, ou um derivado ou metabólito das mesmas, permite que a célula aumente os níveis de um fosfolipídeo, mediando, desse modo, um dos efeitos aqui enumerados (por exemplo melhorando a memória ou função cognitiva, estimulando a função neural, a síntese de membrana, a liberação de neurotransmissores etc.). Em outra forma de caracterização, o fosfolipídeo é FC. Em outra forma de caracterização, o fosfolipídeo é FE. Em outra forma de caracterização, o fosfolipídeo é FS. Em outra forma de caracterização, o fosfolipídeo é FI. Em outra forma de caracterização, o fosfolipídeo é um derivado ou metabolito de FC, FE, ou FS. Cada possibilidade representa uma forma independente de
caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização de métodos da presente invenção, a administração de uma composição da presente invenção melhora uma função neurológica em um indivíduo, mediando, dessa forma, um dos efeitos aqui enumerados (por exemplo, melhorando a memória ou função cognitiva, estimulando a função neural, a síntese de membrana, a liberação de neurotransmissores, etc.).
Em outra forma de caracterização, a função neurológica que é melhorada por um método da presente invenção é uma transmissão sináptica. Em outra forma de caracterização, a transmissão sináptica é adjacente a um neurônio motor. Em outra forma de caracterização, a transmissão sináptica é adjacente a um interneurônio. Em outra forma de caracterização, a transmissão sináptica é adjacente a um neurônio sensorial. Cada tipo de transmissão sináptica representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização de métodos da presente invenção, a administração de uma composição da presente invenção estimula ou intensifica o crescimento de neuritos de células neurais, mediando, desse modo, um dos efeitos aqui enumerados (por exemplo, melhorando a memória ou função cognitiva, estimulando a função neural, a síntese de membrana, a liberação de neurotransmissores, etc.). Em uma outra forma de caracterização de métodos da presente invenção, a administração de uma composição da presente invenção estimula ou intensifica a ramificação de neuritos, mediando, dessa forma, um dos efeitos aqui enumerados. Em uma outra forma de caracterização, um dos efeitos aqui enumerados ocorre sem o aumento do número de neuritos da célula neural. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
"Neurito" refere-se, em uma outra forma de caracterização, a um processo que cresce fora de um neurônio. Em uma outra forma de caracterização, o processo é um dendrito. Em uma outra forma de caracterização, o processo é um axônio. Cada tipo de neurito representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Em outra forma de caracterização de métodos da
presente invenção, a administração de uma composição da presente invenção aumenta o número médio de neuritos de células neurais, mediando, dessa forma, um dos efeitos aqui enumerados (por exemplo, melhorando a memória ou função cognitiva, estimulando a função neural, a síntese de membrana, a liberação de neurotransmissores, etc.). Em uma outra forma de caracterização, um dos efeitos aqui enumerados ocorre sem aumentar o número de neuritos da célula neural. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção. Como aqui contemplado, o que foi encontrado no
Exemplo 8 mostra que o aumento dos níveis da uridina no plasma resulta em um aumento nos níveis de precursores de membrana, fazendo com que os neurônios produzam mais neuritos, com mais ramificações. Aumentando sua área de superfície e seu tamanho, uma célula é capaz, em uma outra forma de caracterização, de formar mais conexões com células vizinhas. Os dados do Exemplo 13 mostram ainda que a colina aumenta a liberação de neurotransmissores. Além disso, um aumento na quantidade ou composição da membrana no plasma altera, em uma outra forma de caracterização, a síntese e liberação de neurotransmissores. Em uma outra forma de caracterização, a formação da memória também é afetada. Assim, a administração de composições que aumentam os níveis da uridina no plasma, particularmente CDP-colina, aumenta o crescimento de
neuritos e suas ramificações. Em uma outra forma de caracterização de métodos
da presente invenção, a administração de uma composição da presente invenção aumenta a quantidade de membranas da célula neural, mediando, dessa forma, um dos efeitos aqui enumerados (por exemplo, melhorando a memória ou função cognitiva, estimulando a função neural, a liberação de neurotransmissores etc.). Em uma outra forma de caracterização, um dos efeitos aqui enumerados, é alcançado pela estimulação da síntese de membranas das células neurais. Em uma outra forma de caracterização, a estimulação ou aumento da quantidade, ou síntese, de uma membrana de uma célula neural, é parcialmente responsável por mediar um dos efeitos aqui enumerados. Em outra forma de caracterização, a composição da presente invenção medeia um dos efeitos aqui enumerados, sem estimular ou intensificar a quantidade ou síntese de membranas de células neurais. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a membrana aumentada por um método da presente invenção, é uma membrana de neuritos. Em outra forma de caracterização, a membrana é uma membrana dendrítica. Em outra forma de caracterização, a membrana é uma membrana axonal. Em outra forma de caracterização, a membrana é qualquer outro tipo de membrana conhecida na técnica. Cada tipo de membrana representa uma forma independente de caracterização da presente invenção.
Em outra forma de caracterização, a síntese de um componente de uma membrana da célula ou sinapse é intensificada por um método da presente invenção. Como aqui contemplado, as descobertas da presente invenção mostram que o aumento dos níveis da uridina no plasma aumenta a síntese dos precursores de FC. Em outra forma de caracterização, o componente cuja síntese é aumentada por um método da presente invenção é uma FC. Em outra forma de caracterização, o componente é um glicerofosfolipídeo. Em outra forma de caracterização, o componente é um ácido fosfatídico. Em outra forma de caracterização, o componente é uma fosfatidil-etanolamina. Em outra forma de caracterização, o componente é uma lecitina. Em outra forma de caracterização, o componente é um fosfatidil-inositol. Em outra forma de caracterização, o componente é uma fosfatidil-serina. Em outra forma de caracterização, o componente é uma 2-lisolecitina. Em outra forma de caracterização, o componente é um plasmalogeno. Em outra forma de caracterizagao, ο componente e um plasmalogeno de colina. Em uma outra forma de caracterizagao, ο componente e um fosfatidilglicerol. Em outra forma de caracterizagao, ο componente e um difosfatidilglicerol de colina. Em outra forma de caracterizagao, ο componente e um esfingolipideo de colina. Em outra forma de caracterizagao, ο componente e uma esfingomielina de colina. Em outra forma de caracterizagao, ο componente e qualquer outro fosfolipideo conhecido na tecnica. Cada tipo de fosfolipideo represents uma forma independente de caracterizagao
da presente invengao.
Em uma outra forma de caracterizagao, a sintese de um precursor de fosfolipideo e aumentada. Em outra forma de caracterizagao, ο precursor de fosfolipideo e TFC. Em uma outra forma de caracterizagao, ο precursor de fosfolipideo e inositol. Em outra forma de caracterizagao, ο precursor de fosfolipideo e glicerol. Em outra forma de caracterizagao, ο precursor de fosfolipideo e acetato. Em outra forma de caracterizagao, ο precursor de fosfolipideo e qualquer outro precursor de fosfolipideo conhecido na tecnica. Cada precursor de fosfolipideo representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao dos metodos da presente invengao, uma composigao ou metodo da presente invengao, melhora ou intensifica uma fungao de um neurotransmissor, mediando, dessa forma, um dos efeitos a qui enumerados (por exemplo melhorando a mem0ria ou fungao cognitiva, estimulando a fungao neural, a liberagao de neurotransmissores, etc.). Em uma outra forma de caracterizagao, a melhora ou a intensificagao da fungao de um neurotransmissor ocorre por meio do aumento do nivel do neurotransmissor em uma sinapse. Em uma outra forma de caracterizagao, a melhora ou a intensificagao da fungao de um neurotransmissor, ocorre por meio da intensificagao da liberagao do neurotransmissor dentro de uma sinapse· Conforme aqui descrito, as descobertas da presente invengao mostram que a elevagao dos niveis de uridina no plasma aumenta a capacidade dos neuronios em sintetizar neurotransmissores e libera-los repetidamente (Exemplo
6) · Os dados do Exemplo 13 mostram, alem disso, que a colina aumenta a liberagao de neurotransmissores. Portanto, a administragao de composigoes que aumentam os niveis de uridine no plasma, particularmente a CDP-colina, melhora a fungao dos neurotransmissores. Cada possibilidade representa outra forma de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao, a IiberagSo que e aumentada ocorre apos uma estimulagao do neuronio. Em outra forma de caracterizagao, a liberagao acontece seguindo uma despolarizagao do neur6nio· Em outra forma de caracterizagao, a liberagao e uma liberagao basal do neurotransmissor. Em outra forma de caracterizagao, a estimulagao do neuronio compreende a exposigao do neuronio a um ion de potassio. Em outra forma de caracterizagao, a estimulagao do neuronio compreende qualquer outro meio de estimulagao neural conhecido na tecnica. Os metodos para avaliar a estimulagao neural e liberagao de neurotransmissores sao bem conhecidos na tecnica, e sao descritos, por exemplo, em Bewick G.S., J. Neurocytol. 32:473-87, 2003. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao. Em outra forma de caracterizagao, a melhora ou aumento de uma fungao de um neurotransmissor ocorre sem mudar ο nivel ou liberagao de neurotransmissores em uma sinapse. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Conforme contemplado aqui, as descobertas representadas na Figura 10 mostram que ο aumento dos niveis da uridina no plasma melhora significativamente a fungao dos neurotransmissores, portanto, melhora a fungao neurol0gica· Os dados representados nas Figuras 11-14 mostram um efeito benefico do aumento dos niveis de uridina no plasma na morfologia dos neuritos, novamente melhorando a fungao neurologica. Os dados do Exemplo 13 mostram ainda que a colina aumenta a liberagao de neurotransmissores. Portanto, a administragao de composigoes que aumentam os niveis de uridina no plasma, particularmente CDP- colina, melhora a fungao neurologica.
Em uma outra forma de caracteriζβςβο, ο neurotransmissor cujos niveis, atividade, ou liberagao, sao afetados pelos metodos da presente invengao, e acetilcolina. Em outra forma de caracterizagao, ο neurotransmissor e dopamina. Em uma outra forma de caracterizagao, ο neurotransmissor e ser〇t〇nina· Em uma outra forma de caracterizagao, 〇 neurotransmissor e 5-hidr0xitriptamina (5-HT)· Em outra forma de caracter土zagao, 〇 neurotransmissor e GABA. Em outra forma de caracterizagao, ο neurotransmissor e qualquer outro
neurotransmissor conhecido na tecnica· Cada tipo de neurotransmissor represents uma forma independente de caracterizacao da presente invengao. Em outra forma de caracterizagao, a estimulagao
de uma quantidade de, ou uma sintese da membrana da celula, e realizada estimulando ou intensificando uma sintese de um fosfolipideo (Exemplo 5)· Em uma outra forma de caracterizagao, a estimulagao ou ο aumento de uma quantidade, ou uma sintese, de uma membrana de uma celula neural, e realizada estimulando ou intensificando uma sintese de um precursor de fosfolipideo (Exemplo 5)· Em uma outra forma de caracterizagao,〇 estimulo ou aumento de uma sintese de um fosfolipideo ou um precursor do mesmo, e parcialmente responsavel pelo estimulo de uma quantidade, ou uma sintese, de uma membrana de uma celula neural. Em uma outra forma de caracterizagao, uma composigao da presente invengao estimula a quantidade, ou uma sintese, de uma membrana, sem estimular ou intensificar uma sintese de um fosfolipideo ou um precursor do mesmo. Cada possibilidade represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em uma outra forma de caracterizagao, a presente invengao prove um metodo para promover ο reparo de uma celula neural lesada de um individuo, compreendendo administrar ao individuo uma composigao contendo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitavel da mesma, promovendo, dessa forma, um reparo de uma celula neural lesada de um individuo · Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo tem Mal de Alzheimer· Em outra forma de caracterizagao, ο individuo tem outro distiirbio de memoria relacionaclo com a idade · Em outra forma de caracterizagao, ο individuo tem um distiirbio cognitivo ou de memoria nao relacionado com a idade. Cada possibilidade represents uma forma
independente de caracterizagao da presente invengao. Em outra forma de caracterizagao, a produgao de uma membrana e estimulada ou intensificada, na celula neural ferida, pelo metodo· Em uma outra forma de caracterizagao, a produgao de uma membrana e estimulada ou intensificada, na produgao de uma mielina olig〇dendr0cita adj acente a celula neural/ pelo metodo· Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao·
Em uma outra forma de caracterizagao, a celula neural lesada tem um axonio danificado· Em outra forma de caracterizagao, ο axdnio danificado e restabelecicio pelo metodo da presente invengao· Cada possibilidade represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao, um metodo da presente invengao e usado para restabelecer um neuronio danificado· Em outra forma de caracterizagao, 〇 neur0ni〇 esta danificado devido a uma doenga ou distiirbio da infancia. Em outra forma de caracterizagao, ο neur0ni〇 esta danificado devido a um acidente de nascimento· Em outra forma de caracterizagao, ο neuronio esta danificado devido a insuficiencia de oxigenio antes ou durante 〇 nascimento. Em outra forma de caracterizagao, 〇 neur6ni〇 esta danificado devido a sindrome de Down. Em outra forma de caracterizagao, ο neuronio esta danificado devido a paralisia cerebral· Em outra forma de caracterizagao, uma das condigoes anteriores resulta em baixos ηύπιθΓοε de sinapse, que sao tratadas por um metodo da presente invengao. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao, um metodo ou composigao da presente invengao e usado para estimular ο desenvoivimento do cerebro no caso de nascimento prematuro. Em outra forma de caracterizagao, um metodo ou composigao da presente invengao e usado para tratar Sindrome de Asperger. Em outra forma de caracterizagao, ο alvo e Sindrome de Rett · Em outra forma de caracterizagao,〇 alvo e Sindrome de Tourette· Em outra forma de caracterizagao, ο alvo e Sindrome de Angelman. Em outra forma de caracterizagao, ο alvo e Disautonomia Familiar· Em outra forma de caracterizagao, ο alvo e Dislexia. Em outra forma de
caracterizagao,
ο alvo e uma neuropatia periferica· Em outra forma de caracterizagao, ο alvo e ataxia. Em outra forma de caracterizagao, ο alvo e Distonia Muscular Deformante.
Em outra forma de caracterizagao, ο alvo e TDAH. Em uma outra forma de caracterizagao, acredita—se que ο TDAH e ο resultado de uma falta de dopamina.
Em outra forma de caracterizagao, os metodos e composigoes da presente invengao sao usados para tratar lesao cerebral. Em outra forma de caracterizagao, a lesao e induzida por radiagao. Em outra forma de caracterizagao, a lesao e devido a hipoxia cerebral perinatal. Em outra forma de caracterizagao, a lesao e devido a isquemia cerebral perinatal· Em outra forma de caracterizagao, a hipoxia e/ou isquemia cerebral perinatal e secundaria a um trauma do nascimento. Em outra forma de caracterizagao, os metodos e composigoes da presente invengao sao usados para tratar paralisia cerebral resultante de uma das
condigoes anteriores.
Em uma outra forma de caracterizagao, os metodos e composig5es da presente invengao sao usados para tratar Sindrome de Down ou trissomia do cromossomo 21. Em outra forma de caracterizagao, os metodos e
composigoes da presente invengao sao usados para tratar crescimento ou desenvolvimento prejudicado do cerebro secundario a nutrigao materna deficiente. Em outra forma de caracterizagao, ο crescimento ou desenvolvimento prejudicado do cerebro e secundario a nutrigao infantil deficiente· Em outra forma de caracterizagao, 〇 crescimento ou desenvolvimento prejudicado do cerebro e secundario a uma doenga metabolica.
Em outra forma de caracterizagao, os metodos e composigoes da presente invengao sao usados para tratar autismo. Em outra forma de caracterizagao, metodos e composigoes da presente invengao sao usados para tratar uma sindrome relacionada ao autismo. Em outra forma de caracterizagao, a sindrome e autismo· Em outra forma de caracterizagao, a sindrome e qualquer outra sindrome relacionada ao autismo conhecida na tecnica. Em outra forma de caracterizagao, os metodos e
composigoes da presente invengao sao usados para tratar qualquer
outra doenga neurologica pediatrica conhecida na tecnica. Cada doenga represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao■
Em outra forma de caracterizagao, um metodo da presente invengao causa um dos efeitos acima por meio da estimulagao de um receptor P2Y de uma celula neural, neuronio, ou celula do cerebro. Em outra forma de caracterizagao, um dos efeitos acima e parcialmente ou totalmente causado como resultado do estimulo de um receptor P2Y de uma celula neural ou neurdnio· Em outra forma de caracterizagao, um dos efeitos anteriores e parcialmente ou completamente causado por meio da estiruulagao de um receptor P2Y de um outro tipo de celula. Em outra forma de caracterizagao, um dos efeitos acima e causado sem a estimulagao de um receptor P2Y. Cada possibilidade represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao. Em outra forma de caracterizagao, a estimulagao
de um receptor P2Y e mediada por CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitavel da mesma, fornecida por uma composϊςβο da presente invengao· Em outra forma de caracterizagao, a CDP- colina ou um sal farmaceuticamente aceitavel da mesma, e convertido em um segundo composto que estimula um receptor P2Y na celula. Em outra forma de caracterizagao, a segunda composigao e uridina-5'-trifosfato (UTF)· Em outra forma de caracterizagao, a segunda composigao e um outro produto metab61ic〇 de CDP-colina que e conhecido na tecnica. Cada combinagao represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao, a CDP-colina, ou um sal farmaceuticamente aceitavel da mesma, e convertido intracelularmente no segundo composto. Em outra forma de caracterizagao, a conversao e extracelular. Em outra forma de caracterizagao, a CDP—colina, ou 〇 sal farmaceuticamente aceitavel da mesma, e convertido no segundo composto dentro de uma celula, entao ο segundo composto e secretado da celula. Em outra forma de caracterizagao,〇 segundo composto, apos ter sicio secretado da celula, contata uma celula diferente, onde estimula um receptor P2Y. Cada possibilidade representa uma forma independente de
caracterizagao da presente invengao· Os receptores P2Y sao, em outra forma de caracterizagao, uma famiIia de receptores conhecidos por estarem envolvidos na ativagao de plaquetas e outras fungoes biologicas. Eles sao revisados em Mahaut-Srnith M. P. et al. , Platelets, 2004, 15:131-44, 2004.
Em outra forma de caracterizagao, ο receptor P2Y da presente invengao e um receptor P2Y2· Em outra forma de caracterizagao,〇 receptor P2Y e um receptor P2Y4. Em outra forma de caracterizagao, ο receptor P2Y e um receptor P2Y6· Em outra forma de caracterizagao,〇 receptor P2Y e qualquer outro receptor P2Y conhecido na tecnica· Cada possibilidacie represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao, ο receptor P2Y estimula um segundo mensageiro· Em outra forma de caracterizagao, ο segundo mensageiro e uma proteina G alfa. Em outra forma de caracterizagao, ο segundo mensageiro e uma proteina G alfa(q)· Em outra forma de caracterizagao, 〇 segundo mensageiro e cAMP. Em outra forma de caracterizagao, ο segundo mensageiro e qualquer outro segundo mensageiro conhecido na tecnica· Os segundos mensageiros, e as suas series de reagoes quimicas associadas sinalizadas, sao bem conhecidos na tecnica, e sao descritos, por exemplo, em Ferguson S · , Pha rm· Rev. 53: 1-2 4, 2001; Huang E. et .al·, Ann. Rev. Biochem. 12: 609-642, 2003; e Blitterswij k W. et al·, Biochem. J. 369:199-211, 2003. Cada segundo mensageiro represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao, ο segundo mensageiro estimula uma enzima de fosfolipase C· Em outra forma de caracterizagao, ο segundo mensageiro modula niveis intraceIulares de calcio. Em outra forma de caracterizagao, ο segundo mensageiro aumenta a atividade de quinase C de proteina. Em outra forma de caracterizagao, um ou mais dos caminhos acima estimulam a produgao de membrane · Em outra forma de caracterizagao, ο segundo mensageiro modula ou estimula outro caminho celular que estimula a produgao de membrana· Cada possibilidade representa uma forma
independente de caracterizagao da presente invenglo· Em outra forma de caracterizagao, a celula que e ο alvo do s metodos da presente invengao, ou e contatada pelos metodos, e uma celula neural· Em outra forma de caracterizagao, a celula e uma celula do cerebro· Em outra forma de caracterizagao, a celula e qualquer outro tipo de celula conhecida na tecnica. Cada p〇ssibilidade represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao·
Em outra forma de caracterizagao, a celula neural, neurito, ou celula cerebral alvo dos metodos da presente invengao, e recentemente diferenciada· Em outra forma de caracterizagao, a celula nao e diferenciada. Em outra forma de caracterizagao, "recentemente diferenciada" refere-se a um neuronio que se diferenciou 2 4 horas antes de comegar a administragao da composigao da presente invengao· Em outra forma de caracterizagao, "recentemente diferenciada" refere-se a um neuronio que se diferenciou 48 horas antes de comegar administragao da composigao da presente invengao· Em outra forma de caracterizagao, "recentemente diferenciada" refere—se a um neur0nio que se diferenciou 72 horas antes de comegar a administragao da composigao da presente invenga〇· Em outra forma de caracterizagao, "recentemente diferenciada" refere-se a um neur0nio que se diferenciou 1 semana antes de comegar a administragao da composigao da presente invengao. Em outra forma de caracterizagao, "recentemente diferenciada" refere-se a um neuronio que completa sua diferenciagao imediatamente apos a administragao da composigao da presente invengao· Cada p〇ssibilidade represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Os metodos para avaliar a diferenciagao neuronal sa〇 bem conhecidos na tecnica, e sao descritos, por exemplo, em Contestabile A. et al · (Neurochem· Int. 45: 903-14, 2004) · Cada metodo represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengSo·
Em outra forma de caracterizagao, um precursor da CDP-colina e administrado pelos metodos da presente invengao· Em
outra forma de caracterizagao, ο precursor da CDP-colina e qualquer precursor da CDP-colina farmaceuticamente aceitavel. conhecido na tecnica.
Em outra forma de caracterizagao, um derivado da CDP-colina e administrado pelos metodos da presente inveng§o·
Em outra forma de caracterizagao, um metabolito da CDP-colina e administrado pelos metodos da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao dos metodos e composigoes da presente invengao, a CDP-colina e administrada na forma de um composto baseado em CDP-colina· Em outra forma de caracterizagao, a CDP-colina e administrada na forma de um precursor da CDP—c〇lina· Em outra forma de caracterizagao, ο composto baseado em CDP-colina e um sal de CDP-colina· Em outra forma de caracterizagao, 〇 composto baseado em CDP-colina 〇u precursor de CDP-colina e qualquer composto baseado em CDP-colina ou precursor da CDP-colina conhecido na tecnica· Cada composto baseado em CDP-colina ou precursor da CDP-colina representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao dos metodos e composigoes da presente invengao, a CDP-colina e administrada na forma de uma fonte de CDP-colina · Em outra forma de caracterizagao, a fonte de CDP-colina e um alimento rico em CDP- colina .Em outra forma de caracterizagao, a fonte de CDP-colina e um produto dietetico rico em CDP-colina.
Em outra forma de caracterizagao, 〇s metodos e composigdes da presente invengao compreendem um sal de CDP-colina. Em uma outra forma de caracterizagao, 〇 sal de CDP-colina e qualquer sal de CDP—c〇lina conhecido na tecnica. Em uma outra forma de caracterizagao, ο sal de CDP-colina e qualquer sal conhecido de um precursor, derivado ou fonte de CDP-colina. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao·
Em uma outra forma de caracterizagao, uma mistura de do is ou mais compostos acima, relacionados a CDP—colina, e administrada· Cada tipo de precursor, derivado, metabolito, ou fonte de CDP-colina, e cada combinagao dos mesmos, representa uma
forma independente de caracterizagao da presente invengao. Em outra forma de caracterizagao dos metodos da presente invengao, a CDP-colina, ou compost〇 relaci〇nad〇, e administrado de tal maneira que um nivel de soro de uridina de pelo menos 9-30 micromolares (mcM) e atingido no cerebro do individuo. Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de soro de uridine de 9-50 mcM. Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de soro de uridina de 9-20 mcM. Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de soro de uridina de 9-15 mcM· Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de soro de uridina de 12-30 mcM. Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de soro de uridina de 12-50 mcM. Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de soro de uridina de 12-20 mcM. Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de soro de uridina de 12-15 mcM. Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de soro de uridina de 14-30 mcM. Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de soro de uridina de 14-50 mcM. Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de soro de uridina de 14-20 mcM· Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de soro de uridina de 14-15 mcM. Cada possibilidade represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao dos metodos da presente invengao, a CDP_c〇lina, ou composto relacionado, e administrado de tal maneira que um nivel de colina de pelo menos 20-30 nanomoles e atingido no cerebro do individuo. Em uma outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de colina de 10-50 nanomoles. Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de colina de 5-75 nanomoles· Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de colina de 25-40 nanomoles. Em outra forma de caracterizagao, e atingido um nivel de colina de 30-35 nanomoles. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracter土zagao da presente invengao·
Em uma outra forma de caracterizagao, CDP—colina, seu derivado, fonte, ou precursor, e administrado ηuma dosagem de 20-500 mg por dia · Em outra forma de caracterizagao, a dosagem di^ria e de aproximadamente 30-500 mg. Em outra forma de
caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 40-500 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 70-500 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 40-500 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 100-500 mg.
Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 150-500 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 200-500 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 300-500 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 20-200 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 30-200 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 40-200 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 70-200 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 100-200 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 20-350 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 30-350 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 40-350 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 70-350 mg. Em outra forma de caracterizagao· a dosagem diaria e de aproximadamente 100-350 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 20-700 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 30-700 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 40-700 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 70-700 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 100-700 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 70-700 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 100-700 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 150-700 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 200-700 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 300-700 mg. Em outra forma de
caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 400-700 mg. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 300 mg-1 g. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 300 mg-1,5 g. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 300 mg-2 g. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 300 mg-3 g. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 300 mg-4 g. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 200 mg-1 g. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 200 mg-1,5 g. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 200 mg-2 g. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 200 mg-3 g. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem diaria e de aproximadamente 200 mg-4 g.
Em outra forma de caracteri zagao, a dose e de aproximadamente 20 mg-50 g por dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 50 mg-30 g por dia· Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 75 mg-20 g por dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 100 mg-20 g por dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 100 mg—10 g por dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 200 mg-8 g por dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 400 mg-6 g por dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 600 mg-4 g por dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 800 mg-3 g por dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1-2,5 g por dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1,5- 2 g por dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 5 mg-5 g por dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 5 mg-50 g por dia· Cada gama de dosagem representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao dos metodos e composigoes da presente invengao, aproximadamente 20 mg de CDP- colina, ou um sal farmaceuticamente aceitavel da mesma, e administrado por dia · Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 10 mg/dia· Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 30 mg/dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 40 mg/dia· Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 60 mg/dia· Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de 80 mg/dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 100 mg/dia· Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 150 mg/dia· Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 200 mg/dia· Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 300 mg/dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 400 mg/dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 600 mg/dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 800 mg/dia· Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1 g/dia· Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1,5 g/dia· Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 2 g/dia· Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 3 g/dia. Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 5 g/dia· Em outra forma de caracterizagao, a dosagem e de mais de 5 g/dia·
Em uma outra forma de caracterizagao, uma das quantidades acima e administrada duas vezes por dia. Em uma outra forma de caracterizagao, uma das quantidades acima e acimiriistrada tres vezes por dia. Em uma outra forma de caracterizagao, uma das quantidades acima e administrada uma vez por semana · Em uma outra forma de caracterizagao, uma das quantidades acima e administrada duas vezes por semana. Em uma outra forma de caracterizagao, uma das quantidades acima e administrada tres vezes por semana. Em uma outra forma de caracteriZagao7 uma das quantidades acima e administrada de acordo com qualquer outro regime de dosagem conhecido na tecnica. Cada possibilidade represents outra forma de caracterizagao da presente invengao·
Em outra forma de caracteri zagao dos metodos e composigoes da presente invengao, aproximadamente 20 mg de CDP- colina ou um sal farmaceuticamente aceitavel da mesma e administrado, aproximadamente, por dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 10 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 30 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 40 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 60 mg/dose· Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de cerca de 80 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 100 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 150 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizaga〇, a dosagem e de aproximadamente 200 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 300 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 400 mg/dose· Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 600 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 800 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1,5 g/dose· Em uma outra forma 、de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 2 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao' a dosagem e de aproximadamente 3 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 5 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de mais de 5 g/dose.
Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 10-20 mg/dose· Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 20-30 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 20-40 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 30-60 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 40-80 mg/dose· Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 50-100 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 50-150 mg/dose· Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 100-200 mg/dose· Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 200-300 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e
de aproximadamente 300-400 mg/dose· Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 400-600 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 500-800 mg/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 400 mg a 1 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 800 mg a 1 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1 a 1,5 g/dose · Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1,5 a 2 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1 a 2 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1 a 3 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1,5 a 3 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 2 a 3 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1 a 4 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 2 a 4 g/dose· Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 1 a 5 g/dose. Em uma outra forma de CaraCterizagao7 a dosagem e de aproximadamente 2 a 5 g/dose. Em uma outra forma de caracterizagao, a dosagem e de aproximadamente 3 a 5 g/dose. Cada possibilidade representa uma outra forma de caracterizagao da presente invengao.
Em uma outra forma de caracterizagao, uma composigao administrada na presente invengao compreende ainda um acido graxo poli-insaturado (AGPI).
"Acido graxo p〇li-insaturaci〇"ou "AGPI" re fere- se, em uma outra forma de caracterizagao, ao acido graxo omega-3. Em uma outra forma de caracterizagao,〇s termos referem-se a um acido graxo omega-6· Em uma outra forma de caracterizagao, os termos referem-se a um acido graxo com 2 ou mais ligagoes duplas. Em uma outra forma de caracterizagao, os termos referem-se a um acido graxo com 2 ligagoes duplas. Em uma outra forma de caracterizagao, os termos referem-se a um acido graxo com 3 ligagoes duplas· Em uma outra forma de caracterizagao, os termos referem-se a um acido graxo com mais de 3 ligagoes duplas. Cada p〇ssibilidade representa uma forma independente de caracterizagao
da presente invengao. Em uma outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-3 dos metodos e composigoes da presente invengao e ο ADH. ADH e uiu acido graxo omega-3, p〇li-insaturad〇, com 22 Carbonos7 tambem referido como um acido 4,7,10,13,16,19-docosa- hexaenoico (ADH).
Em uma outra forma de caracteri zagao, ο acido graxo omega-3 e ο acido α-linolenico (acido 9,12,15- octaclecatrienoico) · Em outra forma de caracterizagao, ο acido graxo Omega-3 e ο acido esteariddnico (acido 6,9,12,15- octadecatetraenoico)· Em outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-3 e ο acido eicosatrienoico (AET; acido 11,14,17- eic〇satrien0ic〇）.Em outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-3 e ο acido eic〇satetraen0ic〇 (acido 8, 11,14, 17 — eicosatetraenoico)· Em outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-3 e ο acido eicosapentaenoico (AEP; acido 5,8,11,14,17-eicosapentaen0ico)· Em uma outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-3 e ο acido eicosa—hexaen6ic〇 (tambem referido como "AEH"； acido 5,7,9,11,14,17-eicosa- hexaenoico)· Em outra forma de caracterizagao, 〇 acido graxo omega-3 e ο acido docosapentaenoico (ADP; acido 7,10,13,16,19— docosapentaenoico) . Em outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-3 e ο acido tetracosa—hexaen0ic〇 （acido 6,9,12,15,18,21—tetracosa—hexaen0ic〇）. Em outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-3 e qualquer outro acido graxo omega-3 conhecido na tecnica· Cada acido graxo omega-3 represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao·
Em uma outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-3 e um AGPI anti —inf lamat0ri〇. Em outra forma de caracterizagao, ο AGPI anti — inf lamat 0ri〇 e ο acido eic〇sapentaen0ic〇 (AEP; acido 5,8,1 1,14,17—eic〇sapentaen0ic〇）· Em outra forma de caracterizagao, ο AGPI anti — inf lamat6ri〇 e ADH · Em uma outra forma de caracterizagao, ο AGPI anti — inf lamat0;ri〇 e qualquer outro AGPI anti-inflamat0ri〇 conhecido na tecnica. Cada possibilidade represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao, ο acido graxo
omega-3 e um precursor metab01ico de ADH · Em outra forma de caracterizagao, ο precursor metab61ic〇 e AEP. Em outra forma de caracterizagao, ο precursor metabolico e ο acido d〇cosapent:aen0ic〇 (ADP; acido 7,10,13,16,19-docosapentaenoico)· Cada possibilidade represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em uma outra forma de caracterizagao, "precursor metabolico'7 refere-se a um compost〇 que aumenta a concentragao do acido graxo na circulagao sangiiinea ou nos tecidos · Em uma outra forma de caracterizagao, "precursor metab01ic〇〃 refere-se a um composto que e metabolizado, por um tecido ou enzima do individuo, em acido graxo. Em uma outra forma de caracterizagao, "precursor metabolico" refere-se a um composto que e metabolizado, pela celula desejada, em acido graxo. Cada possibilidade represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao· Em uma outra forma de caracterizagao d〇s metodos
e composigoes da presente invengao, ο precursor metabolico de um acido graxo omega-3 e um acido alfa — linoleriico que serve como um precursor ao AEP (acid〇 eic〇sapentaen0ic〇） e ADH (acido docosa- hexaen0ic〇）· Em outra forma de caracterizagao, 〇 precursor metabolico e qualquer outro acido graxo precursor 0mega-3 conhecido na tecnica. Cada acido graxo precursor omega-3 represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao, 〇 AGPI d〇s metodos e composigoes da presente invengao e um acido graxo omega- 6. Em outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-6 e acido araquidCnico. Acido araquidonico e um acido graxo omega-6, com 20 carbonos, que tambem e chamado de acido 5,8,11,14- eicosatetraenoico· Em outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-6 e um precursor metab61ic〇 do acido araquid6nic〇· Cacla possibilidade represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em uma outra forma de caracteri zagao, ο ^cido graxo omega-6 e ο acido linoleico (acido 9, 12—〇ctadecadien0ic〇）· Em uma outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-6 e ο acido linoleico conjugado (ALC)· Em outra forma de caracterizagao,
ο acido graxo omega-6 e ο acido γ—linolenico (6,9,12—^cido octadecatrienoico). Em uma outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-β e ο acido eicosadien0ic〇 (acido 11,14- eic〇sadien6ic〇）.Em outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-β e ο acido homo—γ—linolenico (acido 8,11,14- eic〇satrien0ic〇）· Em uma outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-β e ο acido doc〇sadien0ic〇 (acido 13,16- d〇c〇sadien0ic〇）· Em outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-β e ο acido docosatetraenoico (acido 7,10,13,16- docosatetraenoico)· Em uma outra forma de caracterizag^o, ο ^cido graxo omega-6 e ο 4,7, 10,13,16—acido docosapentaenoico. Em uma outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-6 e ο acido di- homogama linolenico (ADGL)· Em uma outra forma de caracterizagao, ο acido graxo omega-6 e qualquer outro acido graxo omega-6 conhecido na tecnica· Cada acido graxo omega-6 represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao·
Em outra forma de caracteri zagao de metodos e composigoes da presente invengao, ο precursor metab61ic〇 de um acido graxo omega-β e ο acido linoleico· Em uma outra forma de caracterizagao, ο precursor metabolico e ο acido trans—vacenico (ATV), uma fonte de acido lin〇leic〇· Em outra forma de caracteri zagao, 〇 precursor metab61ic〇 e qualquer outro acido graxo precursor omega-6 conhecido na tecnica. Cada acido graxo precursor omega-6 representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao. Conforme a qui contemplado, 〇s acidos graxos
omega-3 e acidos graxos omega-6 atuam, cada um, sinergisticamente, com uridine (por exemplo CDP—c〇lina), para aumentar a sintese de fosfolipideos e os niveis de fosfolipideos (Figura 26) · Em uma outra forma de caracterizagao, 〇 f osf ato de uridina e uma CDP- colina.
Em uma outra forma de caracterizagao, a administragao que e executada em um metodo da presente inveng§〇 e a administragao cr0nica· "AdministraGao Habitual" refere-se, em uma outra forma de caracteri zagao, a uma administragao regular indefinidamente· Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao regular durante pelo menos um mes. Em
uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao regular durante pelo menos 6 semanas· Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao regular durante pelo menos d〇is meses· Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao regular durante pelo menos 3 meses. Em uma outra forma de caracterizasao,〇 termo refere-se a administragao regular durante pelo menos 4 meses· Em uma outra forma de caracterizagao, 〇 termo refere-se a administragao regular durante pelo menos 5 meses· Em uma outra forma de caracterizagao,〇 termo refere-se a administ;t:ag:a〇 regular durante pelo menos 6 meses. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao regular durante pelo menos 9 meses· Em uma outra forma de caracterizagao,〇 termo refere-se a administragao regular durante pelo menos 1 ano. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao regular durante pelo menos 1,5 anos. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao regular durante pelo menos 2 anos · Em uma outra forma de caracterizagao,〇 termo refere-se a administragao regular por mais de 2 anos. Em uma outra forma de caracterizagao,〇 termo refere-se a administragao regular ate uma visita de acompanhamento. Em outra forma de caracterizagao, 〇 termo refere-se a administragao regular ate a reavaliagao da doenga ou distiirbio sendo tratado · Em outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao de uma composigao da presente invengao por meio de um tubo de alimentagao. Em uma outra forma de caracterizagao, a admin土stragao e enteral· Em uma outra forma de caracterizagao, 〇 tubo de alimentagao e usado para um paciente ou individuo em coma. Em uma outra forma de caracterizagao, a composigao e usada para restabelecer a fungao cognitiva ao paciente ou individuo· Cada p〇ssibilidade representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao·
Em outra forma de caracterizagao, "intervalos regulares" referem-se a admiriistraGao diaria· Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao semanal· Em uma outra forma de caracterizagao, 〇 termo refere-se a administragao diaria. Em uma outra forma de caracterizagao, ο
termo refere-se a administragao 1-2 vezes por semana. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao 1 — 3 vezes por semana. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao 2-3 vezes por semana· Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao 1-4 vezes por semana. Em uma outra forma de caracterizagao,〇 termo refere-se a administragao 2-4 vezes por semana· Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao 1-5 vezes por semana. Em outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao 2-5 vezes por semana· Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao 3-5 vezes por semana. Em uma outra forma de caracterizagao,〇 termo refere-se a administragao 1-2 vezes por dia. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao 1-3 vezes por dia. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao 1-4 vezes por dia. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a administragao 2-3 vezes por dia· Em uma outra forma de caracterizagao, 〇 termo refere-se a administragao 2-4 vezes por dia· Em uma outra forma de caracterizagao7 ο termo refere-se a administragao 3-4 vezes por dia· Em uma outra forma de caracterizagao, 〇 termo refere-se a administragao 2-5 vezes por dia. Em uma outra forma de caracterizagao, 〇 termo refere-se a administragao 3-5 vezes por dia· Em outra forma de caracterizagao, 〇 termo refere-se a administragao 4-5 vezes por dia. Cada um d〇s tipos de administragao acima
represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em uma outra forma de caracterizagao, uma c〇mp〇sig:a〇 da presente invengao e administracia η uma dose, que procluz um efeito dese j ado em pelo menos 10% de uma populagao de pacientes tratados. Em uma outra forma de caracterizagao, a dose e tal que procluz ο efeito em pelo menos 20% dos pacientes tratados. Em uma outra forma de caracterizagao, ο efeito e produzido em pelo menos 30% dos pacientes tratados · Em uma outra forma de caracterizagao, ο efeito e produzido em pelo menos 40% dos pacientes· Em uma outra forma de caracteriζag^o, ο efeito e produzido em pelo menos 50% dos pacientes. Em uma outra forma de caracterizagao, ο efeito e produzido em pelo menos 60% dos pacientes. Em uma outra forma de caracterizagao, ο efeito e produzido em pelo menos 70% dos pacientes· Em uma outra forma de caracterizagao, ο efeito e produzido em pelo menos 80% dos pacientes· Em uma outra forma de caracterizag:a〇, ο efeito e produzido em pelo menos 90% dos pacientes · Em uma outra forma de caracterizagao,〇 efeito e produzido em mais de 90% dos pacientes. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao· Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo
dos metodos da presente invengao e urn mamifero. Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e um ser humano. Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e um roedor. Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e um animal de laboratorio· Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e uma femea · Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e um macho. Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e uma femea gravida· Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e uma femea lactante. Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e um bebe. Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e uma crianga. Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e uma crianga jovem. Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e um adulto. Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e um adulto idoso. Em uma outra forma de caracterizagao, λ、土 do so11 refere-se a quaisquer das formas de caracterizagao enumeradas acima· Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e um adulto. Em outra forma de caracterizagao, ο individuo e qualquer outro tipo de individuo conhecido na tecnica· Cacla possibilidade representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
"Bebe" refere-se, em uma outra forma de caracterizagao, a um individuo com idade abaixo de 1 ano. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 18 meses· Em uma outra forma de caracterizagSo, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 6 meses· Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um
individuo abaixo da idade de 7 meses. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 8 meses. Em uma outra forma de caracterizagao,〇 termo refere- se a um individuo abaixo da idade de 9 meses. Em uma outra forma de caracterizagao, 〇 termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 10 meses. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo ref ere-se a um individuo abaixo da idade de 11 meses. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 13 meses. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo ref ere-se a um individuo abaixo da idade de 14 meses· Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 16 meses. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 20 meses. Em uma outra forma de caracterizagao, 〇 termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 2 anos. Em uma outra forma de caracterizagao,〇 termo refere-se a um individuo que ainda nao tenha sido desmamado. Em outra forma de caracterizagao, ο termo ref ere-se a um individuo que foi desmamado, mas esta dentro de uma das faixas etarias acima. Cada possibilidade represents uma forma independente de caracterizagao da presente invencao· "Crianga" refere-se, em uma outra forma de
caracterizagao, a um individuo abaixo da idade de 18 anos. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 17 anos. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 16 anos· Em uma outra forma de caracterizagao, 〇 termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 15 anos· Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 14 anos. Em uma outra forma de caracterizaga〇,〇 termo refere- se a um individuo abaixo da idade de 13 anos. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 12 anos. Em uma outra forma de caracterizagSo, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 11 anos · Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 10 anos. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 9 anos · Em uma outra
forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 8 anos. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 7 anos.
"Crianga jovem〃 refere-se, em uma outra forma de caracterizagao, a um individuo abaixo da idade de 7 anos. Em uma outra forma de caracterizagao,〇 termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 6 anos. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo ref ere-se a um individuo abaixo da idade de 5 anos. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 4 anos. Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo ref ere-se a um individuo abaixo da idade de 3 1/2 anos · Em uma outra forma de caracteriZagac^ 〇 termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 3 anos · Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo abaixo da idade de 2 1/2 anos · Cada possibilidade represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao·
"Adulto" refere-se, em outra forma de caracterizagao, a um individuo com mais idade do que as idade s acima listadas, como um limite superior para uma crianga · Em uma outra forma de caracterizagao, ο termo refere-se a um individuo com mais idade do que as acima Iistadas7 como um limite superior para uma crianga j ovem. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao·
Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e uma crianga ou um bebe, e a CDP—c〇 Iina ou ο sal farmaceuticamente aceitavel da mesma, e administrado a mae lactante da crianga ou bebe. Em uma outra forma de caracterizagao, ο individuo e um fet〇,e a CDP-colina ou ο sal farrnaceuticamente aceitavel da mesma e administrado a mae gravida da crianga ou bebe. Cada possibilidade representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao·
Em uma outra forma de caracteri zagao, uma composigao terapeutica adicional e administrada ao individuo como parte de um metodo da presente invengao· Em outra forma de caracterizagao, a CDP-colina ou precursor7 derivado ou uma fonte da mesma, e ο ύηϊοο ingrediente ativo na composig^o utilizada· Cada possibilidade representa uma forma independente de
caracterizagao da presente invengao· Em uma outra forma de caracterizagao, a composigao terapeutica adicional e uma droga que atua como um inibidor da fosforilase da uridina; por exemplo barbiturato de benzila ou derivados do mesmo. Em outra forma de caracterizagao, a composigao terapeutica adicional e uma droga que aumenta a disponibilidade da uridina· Em outra forma de caracterizagao, a composigao terapeutica adicional e um composto inibidor da secregao da uridina, por exemplo, dilazep ou hexobendina· Em uma outra forma de caracterizagao, ο composto terap§utic〇 adicional e um competidor do transporte renal da uridina, por exemplo, L- uridina, L-21,31一dide0x土一uridina, e D-2' , 3 f-dideoxi-uridina · Em uma outra forma de caracterizagao, a composigao terapeutica adicional e uma droga que atua em sinergia com a CDP-colina na geragao de um fosfolipideo· Em uma outra forma de caracterizagao, a composigao terapeutica adicional e um composto que compete com a uridina na liberagao do rim, por exemplo L一uridina, L-2',31— dide6xi—uridina, e D-21,3‘—dide0xi—uridina, ou misturas das mesruas, conforme revelado nas patentes norte-americanas niimeros U.S. 5,723,449 e 5,567,689· Em uma outra forma de caracterizag^o, a composigao terapeutica adicional e qualquer outro composto que e benefico para um individuo.
Em outras formas de caracterizagao, a composigao terapeutica adicional e esfingomielina, uma
acilglicerofosfocolina, uma lecitina, uma lisolecitina, uma glicerofosfatidilcolina, ou uma mistura das mesmas. Cada combinagao terapeutica adicional represents uma forma independente de caracterizagao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao, os metodos da presente invengao compreendem administrar uma composigao farmaceutica que inclui um analogo, derivado, isomero, metab01it〇, sal farmaceuticaruente aceitavel, produto farmaceutico, hidrato, N- 6xid〇, ou qualquer combinagao dos mesmos, de CDP-colina, ou um precursor, derivado ou fonte da mesma·
As composigSes farmaceuticas da presente invengao sa〇, em outras formas de caracterizagSo, administradas a um individuo por meio de qualquer metodo conhecido por qualquer
especialista, tais como pelas vias: parenteral, paracanceralr transmucosa/ transdermica, intramuscular, intravenosa,
intradermica, subcutanea, intraperitonial, intraventricular, intracranial ^ intravaginal ou intratumoral· Cada possibilidade represents uma outra forma de caracterizagao da presente invengao· Em outra forma de caracterizagao d〇s metodos e
composigoes da presente invengao, a composigao compreendendo a CDP-colina ou seu precursor, derivado ou fonte da mesma, compreende ainda uma fragao lipidica.
Em outra forma de caracteri zagao, a fragao lipidica compreende mais de 10% (em peso) de acidos graxos omega-3■
Em outra caracterizagao, a fragao lipidica compreende mais de 10% de acidos graxos omega-3 com um comprimento superior a 18 atomos de carbono.
Em outra caracteri zagao, ο percentual de acidos graxos omega-3, ou de acidos graxos omega-3 com mais de 18 atomos de carbono, e superior a 16%·
Em outra caracterizagao, a percentagem e superior a 20%. Em outra caracterizagao, a percentagem e superior a 25% .
Em outra caracterizagao, a percentagem e superior a 30% · Em outra caracterizasao, a percentagem e superior a 35%. Em outra caracterizagao, a percentagem e superior a 40%. Em outra caracterizagao, a percentagem e superior a 45%.
Em outra caraCterizagao7 a percentagem e de 10- 40% · Em outra caracterizagao, a percentagem e superior a 10-50%· Em outra caracterizagao, a percentagem e de 16-40% . Em outra caracterizagao, a percentagem e superior a 16-50% . Em outra caracterizagao, a percentagem e de 20-40%· Em outra caracterizagao, a percentagem e superior a 20-50%. Em outra caracterizagao, a percentagem e de 30-40%. Em outra caracterizagao, a percentagem e superior a 30-50%. Cada uma represents uma possibilidade distinta de execugao da presente invengao.
Em outra forma de caracterizagao, a fragao lipidica da composigao compreendendo a CDP-colina ou precursor, derivado ou fonte da mesma compreende acido docosa-hexaenoico, acido eicosapentaen0ic〇, acido docosapentaent^ico, ou combinagao
dos mesmos. Em outra caracterizag^o, a soma destes acidos graxos e superior a 50% em peso dos acidos graxos de cadeia longa omega-3 que estao presentes.
Em outra forma de caracterizagao, a soma destes acidos graxos e maior do que 60% dos acidos graxos de cadeia longa omega-3. Em outra caracterizagao, a soma destes acid〇s graxos e maior do que 70% dos acidos graxos de cadeia longa omega-3. Em outra forma de caracterizagao, a soma destes acidos graxos e maior do que 75% dos acidos graxos de cadeia longa omega-3 · Em outra caracterizagao, a soma destes acidos graxos e maior do que 80% dos acidos graxos de cadeia longa omega-3· Em outra caracterizagSo, a soma destes acidos graxos e maior do que 85% dos acidos graxos de cadeia longa omega-3.
Em outra forma de caracterizagao, a razao da soma desses acidos graxos (ADH, ADP e ΆΕΡ) para ο ^cido linoleico e superior a 0,5· Em outra caracterizagao, a razao e superior a 0,6. Em outra caracterizagao, a razao e superior a 0,7. Em outra caracterizagao, a razao e superior a 0,8. Em outra caracterizagao, a razao superior a 1. Em outra caracterizagao, a razao e superior a 1,5. Em outra caracterizagao, a razao e superior a 2. Em outra caracterizagao, a razao e superior a 3. Em outra caracterizagao, a razao e superior a 5· Em outra caracterizagao, a razao e superior a 7. Em outra caracterizagao, a proporgao e maior do que 10 · Em outra caracterizagao7 a proporgao e superior a 12. Em outra caracterizagao, a proporgao e superior a 15. Em outra caracterizagao, a razao e de 1-25. Em outra caracterizacao, a proporgao e de 2-22. Em outra caracterizagao, a razao e de 3-22· Em outra caracterizagao, a razao e de 5-20. Em outra caracterizagao, a razao e de 7-15. Em outra caracterizagao, a razao e de 10—12.
Em outra forma de caracterizagao, a fragao
lipidica da composigao compreendendo a CDP-colina ou seu precursor, derivado ou sua fonte contribui com 20-60% do teor energetico da c〇mp〇siga〇.Em outra caracterizagao, a contribuigao da energia a partir da fragao lipidica e de 25-55%. Em outra forma de caracterizagao, a contribuigao da energia e de 30-50%. Em outra
caracterizagao, a contribuigao da energia e de 32-45%. A razao do peso de ADH para AEP na fragao lipidica da composigao compreendendo a CDP-colina ou seu precursor, derivado ou sua fonte e, em outra forma de caracterizagao, de 1-20. Em outra forma de caracterizagao, a faixa e de 2-18. Em outra caracterizagao, a faixa e de 3-16. Em outra caracterizagao, a escala e de 5-14· Em outra caracterizagao, a faixa e de 7-12·
Em outra forma de caracterizagao, uma composigao do s metodos e composigoes da presente invengao e um suplemento nutricional (em outra forma de caracterizagac^ uma bebida), que contem:
一 CDP-colina 0,5 g -Oleo de peixe 3,7 g -Carboidratos 9,0 g -Proteinas do leite 3 g
Cada um dos tipos de f ragoes lipidicas da composigao, abaixo, compreendendo a CDP-colina ou seu precursor, derivado ou sua fonte, representa uma forma independente de caracterizagao da presente invengao·
Em outra caracterizagao de metodos e composigoes da presente invengao, as composigoes farmaceuticas sao administradas por via oral, e sa〇, portanto, f ormuladas em uma forma adequada para a administragao oral. Em outra forma de caracterizagao, a forma e uma formula nutricional· Em outra caracterizagao, a forma e uma formulagao s01ida· Em outra forma de caracterizagao, a forma e uma preparagao semi-solida· Em outra caracterizagao, a forma e uma preparagao liquida. Em outras formas de caracterizagao, as formulagoes orais s61idas sao comprimidos, capsulas, pi lulas, granulos, pellets' , ou seus as seme lhacios · Em outra caracterizagao, a preparagao semi — s01ida e um gel; em outra forma de caracterizacpao, um gel para esportes. Em outras formas de caracterizagao, as formulagoes Iiquidas orais sao solugoes, suspensoes, dispersoes, emulsoes, oleos, ou assemelhados·
Em outra caracterizagao, 〇(s) ingrediente (s) ativo(s) sao formulados em capsula. Em outra forma de caracterizagao, as composigoes da presente inveng^o compreendem, em adigao aos compostos ativos e carreadores ou diluentes inertes,
uma capsula de gelatine dura. Em outra forma de caracterizagao, as composigoes farmaceuticas sao administradas por via intravenosa, intra- arterial ou intramuscular da preparagao liquida. Formulagoes liquidas adequadas 土ncluem solugoes, suspensoes, dispersoes, emulsoes, oleos e afins. Em outra caracterizagao, as formulagoes farmaceuticas sao administradas por via intravenosa e sao, portanto, formuladas de uma forma adequada para a administragao intravenosa· Em outra forma de caracteri zagao, as composigoes farmaceuticas sao admiriistradas por via intra — arterial e sao, portanto, formuladas de forma adequada para a administragao intra- arterial · Em outra forma de caracterizagao, as compos farmaceuticas sao administradas por via intramuscular e sao, portanto, formuladas de forma adequada para a administragSo intramuscular .
Em outra forma de caracterizagao, as composigoes
farmaceuticas sao administradas topicamente sobre ο corpo e, portanto, sao formuladas adequadamente para a administragao t6pica Formulagoes topicas adequadas incluem geis, pomadas, cremes, logoes, gotas e similares. Para a administragao topica, as composigoes da presente invengao sao aplicadas como solugoes, suspensoes, emulsoes em um diluente fisiologicamente aceitavel, com ou sem um veiculo farmaceutico.
Em outra caracteri ζβςβο, a composigao
f armaceutica e aciministrada como um supositorio, por exemplo, um supositorio retal ou uretral· Em outra forma de caracterizagao, a composigao farmaceutica e administracia por implantagao subcutanea de um 、pellet'· Em outra caracterizagao, ο 'pellet' destina-se a liberagao controlada do(s) agente (s) ativ〇（s) durante um periodo de tempo .
Em outra forma de caracterizagao, 〇 composto
ativo e liberado em uma vesicula, por exemplo, um lipossoma ·
Em outras realizagoes, os carreadores ou diluentes utilizados nos metodos da presente invengao incluem, mas nao estao limitados a, uma goma, um amido (por exemplo, amido de milh〇,amido pre — gelatinizado) , um agiicar (por exemplo, lactose, manitol, sacarose, dextrose), um material celul0sic〇 (por exemplo,
celulose microcristalina) , um acrilato (por
exemplo, polimetilacrilato) , carbonato de calcio, oxido de magnesio, talco, ou suas misturas·
Em outr as realizag:5es, 〇s car re adores
farmaceuticamente aceitaveis para formulagoes liquidas sao solugoes, suspensoes, emulsoes ou oleos, aquosos ou nao-aquosos. Exemplos de solventes nao aquosos sao propilenoglicol, polietilenoglicol, esteres organicos injetaveis, tal como ο etil oleato· Carreadores aquosos incluem agua, solugoes
alcoolicas/aquosas, emulsoes ou suspensoes, incluindo meios salinos e tamponados· Exemplos de oleos sao os de origem animal, vegetal, ou de origem sintetica, por exemplo, oleo de amendoim, oleo de soj a, azeite de oliva, oleo de girassol, oleo de figado de bacalhau, outro oleo de origem marinha, ou um lipideo de leite ou de ovos.
Em outra caracterizagao, veiculos parenterais
(por injegao subcutanea, intravenosa, intra—arterial ou intramuscular) incluem solugao de cloreto de sodio, dextrose de Ringer, dextrose e cloreto de sodio, lactato de Ringer e oleos fixos. Veiculos intravenosos incluem reabastecedores de fluidos e de nutrientes, reabastecedores de eletr01土t〇, tais como, os baseados em dextrose de Ringer e derivados. Exemplos de liquidos estereis sao agua e oleo, com ou sem a adigao de um surfactante e outros adjuvantes farmaceuticamente aceitaveis· Em geral, agua, soro fisi〇10gico, dextrose aquosa e solugoes glicosiladas, e glicois, como propilenoglicol ou polietilenoglicol sao carreadores liquidos preferidos, particularmente para solugoes injetaveis· Exemplos de oleos sao os de origem animal, vegetal, ou de origem sintetica, por exemplo, oleo de amendoim, oleo de Soja7 azeite de oliva, oleo de girassol, oleo de figado de bacalhau, outro oleo de origem marinha, ou um lipideo de leite ou de ovos.
Em outras realizagOes, as composiGdes ainda compreendem ligantes (por exemplo, acacia, amido de milho, gelatina, carb5mero, etiIcelulose, goma de guar,
hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, povidona), agentes de desintegragao (por exemplo, amido de milh〇,fecula de batata, ο acido alginico, dioxido de silicio, croscarmelose sodica,
crospovidona, goma de guar, amido glicolato de sodio), tamponantes (por exemplo, Tris-HCl7 acetato, fosfato) com pH e forga ionica diferentes, aditivos, tais como albumina ou gelatina, para evitar a absorgao de superficies, detergentes (por exemplo, Tween 20, Tween 80, Pluronic F68, sais acidos biliares) , os inibidores de protease, tensoativos (por exemplo, lauril sulfato de sodio)雪 elevadores de permeagao, agentes de solubilizagao (por exemplo, glicerol, polietileno glicerol), anti-oxidantes (por exemplo, acido ascorbico, metabissulfito de sodio, butil—hidr6xi—anisolo), estabilizantes (por exemplo, hidroxipropilcelulose,
hidroxipropilmetiIcelulose) , agentes elevadores de viscosidade (por exemplo, carbomero, dioxido de silicio coloidal, etilcelulose, goma de guar), edulcorantes (por exemplo, aspartame, acido citrico), conservantes (por exemplo, Thimerosal, alcool benzilico, parabenos), lubrificantes (por exemplo, acido estearico, estearato de magnesio, polietilenoglicol, lauril sulfato de sodio), auxiliadores de fIuxo (por exemplo, dioxido de silicio coloidal), plastificantes (ex. dietilftalato, trietilcitrato), emulsificantes (por exemplo, carbomero, hidroxipropi1celulose, lauril sulfato de sodio), revestimentos polimerico [por exemplo, poloxameros (copolimeros d〇s oxidos de etileno e de propileno) ou poloxaminas], revestimentos e agentes formadores de revestimento e filmes (por exemplo, etilcelulose, acrilatos, polimetacrilatos) e/ou adjuvantes. Cada um d〇s excip土entes acima representa uma forma de caracterizagao da presente invengao· Em outra caracterizagao, a composigao
farmaceutica e liberada em um sistema de liberagao controlada. Por exemplo, ο agente pode ser administrado utilizando perfusao intravenosa, uma bomba 〇sru0tica implantavel, um adesivo transdermico, lipossomas, ou outros modos de administragao. Em uma forma de caracterizagao, uma bomba pode ser usada (ver Langer, supra; Sefton, CRC· Crit. Ref. BiomecL Eng · 14:201 (1987); Buchwald et al· , Surgery 88:507 (1980)； Saudek et al·, N· Engl. J· Med. 321:574 (1989). Em uma outra caracterizagao, materiais polimericos sao utilizados, por exemplo, em micro-esferas ou em um implante· Ainda em outra forma de caracterizagao, um sistema de liberagao controlada e c〇locado na proximidade do objetivo
terapeutico, isto e, no cerebro, assim, exigindo apenas uma fragao da dose sistemica (ver, por exemplo, Goodson, em Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984), e Langer R., Science 249:1527-1533 (1990)).
As composicoes tambem incluem, em outra caracteriza?ao, a forma de incorporagao do material ativo de ou para preparagoes particuladas dos compostos polimericos, tais como, acido poli'latico, acido poliglicolico, hidrogeis, etc. , ou inseridos em liposs〇mas, micro-emulsdes, micelas, vesiculas unilamelares ou multilamelares, tragos de eritrocitos, ou esferoplastos. ) Essas composigoes irao influenciar ο estado fisico, a solubilidade, a estabilidade, a taxa de liberagao in vivo e da
purificagao in vivo.
Tambem incluidas na presente invengao estao as composigoes particuladas revestidas com polimeros (ex. poloxameros ou poloxaminas) e 〇s compostos acoplados a anticorpos dirigidos contra os receptores de especificos ao tecido, ligantes ou antigenos ou ligados a ligantes de receptores de especificos ao tecido.
Tambem compreendidos pela invengao, estao os compostos modificados atraves da ligagao covalente de polimeros soliiveis em agua, tais como ο polietilenoglicol, copolimeros de polietilenoglicol e polipropilenoglicol, carboximetilcelulose, dextrano, alcool polivinilico, polivinilpirrolidona ou poliprolina. Os compostos modificados sao conhecidos por exibir uma meia-vida substancialmente mais longa no sangue, apos injegao intravenosa, do que ο correspondente nao-modificado (Abuchowski et al · , 1981; Newmark et al. , 1982; e Katre et al. , 1987) . Tais modificagoes podem tambem aumentar a solubilidade do composto em solugao aquosa, eliminar agregagao, reforgar a estabilidade fisica e quimica do composto e reduzir fortemente a imunogenicidade e reatividade do composto. Como resultado, a atividade biol6gica in vivo desejada e alcangada, em outra forma de caracterizagao, pela administragao de tal composto polimerico que sequestra, com menos frequencia ou em doses mais baixas, do que com ο composto nao-modificado. Um componente ativo e, em outra forma de
caracterizagao, formulado em uma composigao na forma de sal farmaceuticamente aceitavel neutralizado. Sais farmaceuticamente aceitaveis, incluem os sais de adigao de acido (formados com os grupos amino livres da molecula de anticorpo ou de polipeptideo), que sao formados com acidos inorganicos, tais Como7 por exemplo, acido cloridrico ou fosf0rico, ou acidos organicos, tais como acetico, oxalico, tartarico, mandelico, e derivados. Sais formados a partir dos grupos carboxilas livres tambem podem ser derivados de bases inorganicas, tais como, por exemplo, sodio, potassio, arruSnio, calcio, hidroxidos ferricos, e bases organicas, tais como, isopropilamina, trimetilamina, 2-etilamino etanol, histidina, procaina, e similares·
Cada um dos aditivos, excipientes, formulagoes e metodos de administragao, acima referidos, representam uma forma de caracterizagao da presente invengao·
SEgAO DE DETALHE S EXPERIMENTAIS EXEMPLO 1 : MEDigAO DA CITIDINA POR CLAP, SEM
INTERFERENCIA DA TIROSINA
MATERIAIS E METODOS Preparagao da amostra.
l-mililitro (mL) das amostras de plasma heparinizado foram inc〇rp〇rad〇s com 1 μg de flu〇r〇一uridina para ser utilizada como um padrao interno, e, a seguir, desproteinizada pel a adigao de metanol (5 mL) . As amostras foram centrifugadas, liofilizadas, reconstituidas em 5 mL de acetato de amdriia 0,25 N (pH 8,8) e, em seguida, imediatamente purificadas em colunas de afinidade por boronato.
Colunas de Af±n±da.de por Boronato
Todas as etapas foram realizadas a 4 0C. Colunas de afinidade por boronato (Affigel-601, Bio-Rad) foram preparadas com duas lavagens de 5-mL de acetato de amonia, as amostras foram aplicadas, e as colunas foram lavadas novamente com acetato de amonia, apos ο que os nucleosideos foram eluidos com 0, 1 N de acido f0rmic〇(7 ml) . Eluatos foram Iiofilizados e, em seguida, reconstituidos em 100 de agua para analise por CLAP· As colunas de afinidade por boronato ligam muitas m〇leculas biologicas, incluindo nucleotideos a base de adenosina, citidina, guanosina, timidina, e uridina.
CLAP A analise por CLAP foi realizada, utilizando-se um aparelho Beckman System Gold (Beckman Instruments) equipado com um Rainin Dynamax Microsorb C18 coluna (3 μπι de empacotamento; 4,6 X 100 mm) , a temperatura ambiente ·〇 metodo padrao do CLAP e descrito em Coviella—Lopez et al · , (J". Neurochem · 65:889-894, 1995)· Para ο CLAP modificado, um tamponante de eluigao isocratica foi utilizado contendo O,004 N de tamponante de fosfato de potassio (pH 5,8) e 0,1¾ de metanol ao inves de acido formico, fluindo em 1 ml/min e aquecido ate 35°C. RESULTADOS
Um metodo padrao de CLAP para medir nucleosideos obtem pic〇s separados para uridina e citidina,· no entanto, uma coincidencia dos picos de citidina e tirosina impede a medigao exata dos niveis da citidina, conforme mostrado para amostras do plasma humano (Figura 1) · Tirosina esta presente em muitos fluiclos biol0gicos, por exemplo, plasma ou liquido cefalorraquiciiano (LCR) · No presente exemplo, um metodo de CLAP iriodificado foi utilizado' distinguindo os picos de citidina e tirosina e permitindo a medigao exata dos niveis de citidina (Figura 2)· EXEMPLO 2 : ADMINISTRAQAO ORAL DE MFU ELEVA OS
NiVEIS DE URIDINA NO PLASMA EM HUMANOS
MATERIAIS E METODOS EXPERIMENTAIS Estudo do Projeto
Oito individuos saudaveis (5 machos, 3 femeas, 27-67 anos) foram instruidos a jejuar durante a noite por 12 h (fast overnight) e foram—Ihes fornecidas doses crescentes, sequenciais (500, 1.000 e 2 .000 mg) de MFU di-sodio (Numico, Wageningen, NL) as 7 - 8 h da manha em cada um dos tres dias' separados por pelo menos um periodo de tres dias· Todos os individuos foram alimentados. Amostras de sangue foram tiradas durante um periodo de oito horas em tubos heparinizados. O plasma f〇i tratado com metanol para precipitar proteina, extraidos com cloroformio, e uma aliquota da fase aquosa Iiofilizada, dissolvido em agua, e analisados por CLAP, com detecgao no ultravioleta (UV)· Analises estatisticas
As analises estatisticas foram realizadas com
SPSS 12.0. Os dados foram representados como medias 土 DPM· O Teste T nao-pareado (Unpaired Student's t-test) , a analise de variancia (ANOVA) , ANOVA com medig:0es repetidas, e ANOVA com d〇is fatores, f oram utilizados para avaliar os efeitos estatisticos f conforme descrito em detalhes, no texto. Analises post hoc de Tukey (HSD) foram realizadas quando necessario.〇 nivel de significancia f〇i fixacio em ρ < 0,05.
RESULTADOS
Foram administradas doses com 500, 1.000, ou 2.000 mg de MFU oralmente, aos individuos, e a uridina sanguinea f oi medida no ini cio do estudo el, 2, 4 e 8 horas (horas) depois, nas doses seguintes. Os niveis plasmaticos de uridina foram analisados conforme descrito no Exemplo 1. Os niveis plasmaticos de uridina aumentaram em resposta a MFU oral administrada dependentemente da dose e, em seguida, regressaram para niveis basais dentro de 8 h, (Figura 3). Resultados similares foram observados em camunclongos do tipo 、、gerbo〃 （Figura 4).
EXEMPLO 3: ADMINISTRAgAO ORAL DE URIDINA OU MFU ELEVA OS NIVE IS DE URIDINA NO CEREBRO EM CAMUNDONGOS DO TIPO 、、GERBO "
MATERIAIS E METODOS EXPERIMENTAIS
Projeto experlmental
Grupos de 〇it〇 a nove camundongos do tipo 、、gerbo〃 do sexo masculino (60-80 g) em j e j um de 12 horas (fast overnight), receberam uridina (Sigma, St. Louis7 MO; 250 rag/kg de peso corporal) ou MFU di — s0dio (1 mmol/kg do peso corporal, uma dose equivalente a 250 mg/kg de uridina por gavagem) e sacrificados por decapitagao sob efeito de anestesia Telazol uma hora depois. 〇 sangue colhido do pescogo foi coletado em tubos contendo EDTA e foram tratados c〇m〇 descrito acima no Exemplo 2. Preparagao de tecido cerebral de camundongos do
tipo yyGerboff
Os cerebros foram rapidamente retirados do cranio apos decapitagao, congelados em gelo sec〇, homogeneiζados em 80% de metanol, centrifugados, Iiofilizados e analisados como descrito para ο sangue, no Exemplo 2·
RESULTADOS Para certificar—se de que a administragao oral de uridina pode elevar os niveis plasmaticos de uridine, camundongos do tipo "gerbo" for am al 土 mentados por gavagem com 250 mg/kg de citidina ou uridina. Apos 60 minutos (min), os cerebros foram homogeneizados e os niveis de uridina verificados· A administragSo oral de citidina resuit〇u no dobro dos niveis de uridina no cerebro, bem como a administragao oral de uridina resultou em um aumento maior do que tres vezes nos niveis de uridina, em relagao aos animais de controle (Figura 5) · Todas as diferengas entre os grupos foram estatisticamente significativas·
Em um experimento independente, para avaliar a evolugao no tempo do aumento dos niveis plasmaticos da uridina, foram administrados a camundongos do tipo 、、gerbo〃, tanto agua quanto 1 milimole (mmol) de MFU por quilograma (kg) de peso corporal, sendo sacrificados em diferentes momentοs, no decorrer de 60 minutos, e os niveis cerebrais de uridina foram avaliados. Os niveis cerebrals de uridina aumentaram com 10 minutos da administragao de uridina, atingindo niveis maximos a 30 minutos, semelhantes aos resultados observados com os niveis plasmaticos de uridina (Figura 6) · Assim, a uridina adm土nistrada oralmente e eficientemente transportada ate ο cerebro·
EXEMPLO 4: A URIDINA E RAPIDAMENTE CONVERTIDA EM CITIDINA NO CEREBRO
Em um experimento separado, f oi administrado a camundongos do tipo 、〜gerb〇〃, por via oral, 250 mg/kg de peso corporal de uridina e, 60 minutos depois, foram avaliados os niveis no plasma e no cerebro, de citidina e uridina. As curves de crescimento relatives aos animais de controle foram calculadas e estao representadas. na figura 7A (plasma) e 7B (cerebro) . Em cada cas〇,a curva de crescimento da citidina f〇i comparada a curva de crescimento da uridine, esta que foi arbitrariamente definida como 100% . Esses resultados indicam que (A) a uridina na corrente sanguinea e transportada ate ο cerebro e (B) a uridina e me tabolicamente processada de formas diferentes no cerebro e no plasma; especificamente, e convertida mais eficientemente em
citidina do que no plasma. Dessa forma, aumentar niveis de uridina plasmatica, por exemplo, atraves da administragao da CDP-colina, aumenta os niveis de citidina no cerebro.
EXEMPLO 5: AUMENTO DOS NIVEIS DE URIDINA DE CDP- COLINA NA LINHAGEM DE CELULAS NEURAIS ·
MATERIAIS E METODOS EXPERIMENTAIS Proje tο experimental
Os dados foram agrupados a partir de tres experimentos, com tamanhos de grupos variando de 5 a 16 animais. Em camundongos machos do tipo 、、gerb〇"(60-80 g), f〇i administrado MFU (1 mmole/kg de peso corporal) por gavagem, e sacrif icacios nos tempos indicados. Apos homogeneizagao do cerebro, precipitagao da proteina e Iiofilizagao7 como descrito no exemplo 3, as amostras foram analisadas por CLAP-UV. Ava.l±aga.o dos niveis de CDP-Colina
Tecido cerebral ou celulas foram dissolvidos em metanol/cl〇r〇f0rnd_o (1:2 ν/ν) , centrifugados e a fase aquosa foi secada sob vacuo, ressuspensa em 100-200 yL de agua e separada por CLAP em uma coluna de troca i0nica, (Alltech Hypersil APS—2, 5 M7 250 χ 4,6 mm) · CDP-c〇lina foi eluida com um gradiente linear de tamponantes A, NaH2PO4 (1,75 mM de NaH2PO4, pH 2,9) e B (500 mM, pH 4,5), ο que permitiu a resolugao de CDP—colina a partir de substancias rigorosamente c〇一eluentes, tais como MFU, por mais de 40 minutos. O tempo de retengao para a CDP-Colina foi de 9,5 minutos· Picos individuais de nucleotideos foram detectados por absorgao de UV, a 38 0 nm, e f oram identif icados pela comparagao com os padroes, bem como pela adigao de nucleotideos padroes as amostras selecionadas.
Celulas PC12
Celulas PC12 foram mantidas em Meio Essencial
Minim〇 (MEM; Invitrogen, Carlsbad, CA) suplementado com 10% de soro fetal b〇vin〇 （SFB), a 37 0C. Incubagoes experimentais ocorreram por 2 ou 4 dias em um meio contendo 50 ng/ml de 2,5 S (2,5 subunidades) de NGF de rato e FBS a 1%, com ou sem compostos de teste. Os NGF e FBS foram obtidos da Invitrogen·
RESULTADOS A fim de avaliar ο efeito, da uridina administrada oralmente a partir dos niveis de precursores fosfolipidicos no cerebro, os cerebros dos camundongos do tipo 、、gerb〇〃,do segundo experimento do Exemplo 3, foram testados para niveis de CDP-colina, uiu intermediario importante na biossintese fosfolipidica atraves da via de Kennedy. Os niveis de CDP-colina subiram significativamente em uma forma linear (analise de regressao, r=0,98, p<0,02) durante 30 minutos apos a administragao de MFU (Figura 8).
Para demonstrar diretamente a conversao da
uridina em CDP—c〇Iina em celulas neurais, celulas PCl2, uma linhagem celular capaz de diferenciagao em celulas neurais, foram trataclas com uridina e os niveis intrace Iul ares de CDP-colina foram medidos. 〇 tratamento com uridina resultou em um aumento estatisticamente significativo nos niveis de CDP-colina apos 50 minutos (Figura 9) · Estes resultados mostram que, apos ο transporte ate ο Cerebro7 a uridina e convertsda em precursores fosfolipidicos, talvez por meio da TFC intermediaria e, por conseguinte, aumenta a fungao cognitiva e a inteligencia, por meio do aumento da sintese de precursores fosfolipidicos nas celulas cerebrais.
EXEMPLO 6: ADMINI STRAgAO ORAL DE MFU ELEVA A LIBERAgAO DE NEUROTRANSMISSORES NO CEREBROS DE RATOS IDOSOS
MATERIAIS E METODOS EXPERIMENTAIS Animals e suplemeutaga.ο dletetica. de MBvU
Foram obtidos 344 ratos machos do tipo Fischer, entre 22—24 meses no momento em que foram feitas obtidos do National Institute on Aging (Harlan Indianapolis, IN) . Os ratos foram aloj ados em condigoes padroriizadas e expostos a 12 h de ciclos de claro/escuro, com alimentos e agua f〇rnecid〇s a vontade (ad libitum) . Cada rato consumiu cerca de 500 mg/kg/dia de monofosfato dissodico de uridina (MFU-2Na) (a DL50 por i · ρ · de uridina e de cerca de 4,3 g/kg). Os ratos foram aclimatados a instalagao animal
por mais de 7 dias antes de a liment ados com uma diet a de controle
25
de meia idade, inicrodialises, Sprague-Dawley, individualmente
laboratorial (dieta para roedores de proteina a 16%, Teklad Global, TD.00217, Harlan Teklad7 Madison, WI), 〇u com esta dieta fortificada com MFU-2Na+ (2,5¾, TD.03398, MFU-2Na+; Numico Research, Paises Baixos), por 6 semanas.
Os ratos nao for am alimentacl〇s com a dieta de pesquisa ate pelo menos 7 dias apos a sua chegada. Eles f oram pesados no momentο do inicio da alimentagao (t=0) , bem como 1, 2, 4, 6 semanas depois· No moment〇 O,〇s ratos foram aleatoriamente divididos em dois grupos· Nao houve diferenga significativa de peso corporal entre os dois grupos (Fi^n 二 3,03, p>0r 05) ; ο peso medio foi de 455 ±5 (N = 13 ratos) · Medigoes repetidas, com as semanas sendo um fator interno dos individuos, mostraram que ο tempo de alimentagao (O, 1, 2, 4, 6 semanas) alterou signif icativamente ο peso corporal (= 2,65, p<0,05) , embora nem a dieta com MFU (versus controle) , nem a interagao MFU versus tempo, tenham afetaclo 〇 peso corporal (Flill = 0,01, F4i44 = 1,25, respectivamente,· todos com ρ > 0,05) ·
〇 experimento descrito neste Exemplo foi realizado duas vezes, cada vez com 7 ratos de controle e 9 ratos administrados com a dieta de MFU. Os resultados foram consistentes entre os dois experimentos.
Substdnclas qvLxmlcas e solugoes
Dopamina (DA) , acido di—hiciroxifenilac§tic〇 (ADHFAC), acido homovanilico (AHV), a ser〇t〇nina (5-HT), acido 5- hidroxindolacetico (5-AHIA), e acido 3, 4-di-hidroxibenz0ico (ADHB; padrao interno) foram adquiridos da Sigma (St. Louis, MO) e foram dissolvidos em HClO4 (0,1 M) para fazer 1 mM de solugoes de reserve e as aliquotas foram mantidas a -80°C. Hidrocloreto de quetamina (100 mg/ml) foi comprado da Fort Dodge Animal Health (Fort Dodge, IA) · A xilazina (20 mg/ml) e proveniente da Phoenix Scientific, Inc. (St. Joseph, MO)·
A solugao de Ringer consistiu de NaCl a 147, KCl a 2, 7, CaCl2 a Ir 2 e MgCl2 a 0,85 mM. Para a solugao de alto potassio, KCl foi aumentado para 80 mm, com NaCl diminuido para 69,7 mM para manter a osmolalidade. Todas as solugoes foram feitas a partir de agua bidestilada deionizada e filtrada por Steriflip@ (Millipore, Bedford, MA).
Microdlalise in vivo Os ratos foram anestesiados com uma mistura de quetamina e xilazina (80 e 10 rag/kg de peso corporal, respectivamente, intraperitonialmente) e foram colocados em um aparelho estereotaxico de Kopf. Todos os instrumentos cirCirgicos foram esterilizados por um esterilizador a seco "hot bead", ou 7 0% de etanol. Um pequeno orifIcio f〇i perfurado no cranio por uma broca perfuradora 0s sea de 2 mm. Uma sonda Cupr CMA/11 14/04 (diametro externo 0,24 milimetros, membrana de 4 mm, 6.000 Da, da CMA Microdyalisis, Suecia) f〇i implantada no estriato direito (AP = +0,5, ML = -3,0, da empresa Bregma, DV = -7,3 mm da empresa Dura, conforme descrito em Paxinos G. et al., The Rat Brain In Stereotaxic Coordinates, 2a ed., Academic Press, San Dieg〇）,com uma barra incisiva fixada a -5,0 mm. As sondas foram presas permanentemente na posigao utilizando cimento dentario e tres parafusos ancora para 〇 cranio· Apos a cirurgia, os ratos foram injetados intraperitonealmente com soro fisi〇16gic〇 (5 ml/kg) e mantidos η uma bolsa termica, mantendo a temperatura corporal a 37 0C, ate despertarem.
A livre movimentagao do rato f oi perfundida η uma vasilha circular sobre uma plataforma gii:at0ria obviando a necessidade de um liquicio giratorio (ve j a-se Wang L. et al., Neurochem · Int. 42:465-70, 2003) , e foram habituados ao ambiente no primeiro dia apos a cirurgia. Os experimentos foram realizados aproximadamente 48 h apos a cirurgia e foram realizacios entre 10:00 da manha e 4:00 da tarde. A solugao de Ringer f〇i perfundida continuamente utilizando um tubo de resina de fluorinato de detilenopropileno (FEP) e uma seringa de gas comprimido (Exmire tipo I, CMA) , em uma taxa constante de 1,5 μΐ/min por uma bomba de micro-infusao (CMA/100)· Dialisatos foram coletados em intervalos de 15 minutos. 5 μΐ de uma mistura antioxidante, constituida de 0,2 M de HClO4 e 0, 1 mM de EDTA, foi acrescentada ao frasco de amostragem antes da coleta para proteger a dopamine e seus metab01it〇s. As amostras com os primeiros 60 minutos foram descartadas da analise. Posteriormente, 3 sessoes consecutivas de amostras foram coletadas. Exceto para a tltinia sessao (1,5 horas, 6 amostras) , as outras foram coletadas para 1 hora (4 amostras) · A ordem foi a seguinte: sessao 1 (aCSF) , 2 (Alto K+) , 3 (aCSF). Todas as amostras foram coletadas em gelo moido e, instantaneamente congeladas e mantidas a -80 0C ate a analise de CLAP.
Dissecagao do cerebro para. as proteinas e
monoamlnas
Apos os experiment 〇 s de microdialise, os ratos foram anestesiados com quetamina e xilazina (80 e 10 mg/kg, i. ρ.). Uma tinta preta f〇i colocada atraves da sonda para marcar ο tecido em torno da sonda· Os ratos foram decapitados com uma guilhotina· Os cerebros foram rapidamente dissecados e resfriados em uma tabua de dissecgao.〇 estriato esquerdo foi congelado instantaneamente em um tubo de Eppendorf e colocado em nitrogenio liquido para futuras analises de proteina. 0 estr土at〇 direito foi mais tarde dissecado e a p〇siq:a〇 da sonda foi determinada por observagao visual. Os dados nao foram incluidos, caso a sonda nao fosse encontrada dentro do cerebro (estriato) ·
Um grupo adicional de ratos (20 meses de idade, N=6 para ambos controle e MFU) foi alimentado durante 6 semanas· Nenhuma microdialise foi realizada nestes ratos· Estriatos (tanto a esquerda e a direita) foram recolhidos, conforme feito acima, para determinar os niveis de dopamina e seus metabolitos no tecido
Extragao de amostras de dopamlna no tecido 〇 estriato foi pesado e homogeneizado em um tubo de Eppendorf em gelo por 1 minuto, com 1 ml de H2O contendo 0,1 M de HClO4 e 1 μΜ de EDTA. Apos. turbilhonamento durante 10 segundos, uma aliquot a foi utilizada para ο ensaio de proteina com Acido Bicinconinico (Sigma, St · Louis, MO) . Os h〇m〇geneizad〇s foram, entao, filtrados com unidades de filtro centrifugo Ultrafree-MC (Millipore, 14.000 rpm/15 min/4°C) . Uma diluigao de 1: 10 foi realizada antes da fase aquosa ter sid〇 submetida a CLAP. DHBA foi adicionado as amostras antes da homogeneizagao do padrao interno· As concentragoes de dopamina e seus metab61it〇s foram determinadas por CLAP e os valores das tres medigoes repetidas tiveram suas medias calculadas e foram comparados a quantidade de proteina por amostra.
Analise de dopamina. e metabolitos Dopamina (DA) e metab61it〇s, em dialisat〇s e amostras de tecidos, foram determinados utilizando um detector ESA Coulochem 5100A (El 二 -175 mV; E2 = 325 mV; Eguard = 350 mV) , com um ESA Microdialysis Cell (moclelo 5014B, ESA, North Chelmsford, MA) · A fase movel (MD-TM, ESA) consistiu de 75 mM de NaH2PO4, 1,7 mM de acido l-octano-sulfonico, 100 μΐ/trietilamina, 25 μΜ de EDTA, acetonitrila a 10%, pH 3,0· A vazao foi de 0,4 mL/min · Ά coluna .(ESA MD 150, 3x150 mm, 3 μιτι, 120 A) foi mantida em um forno de coluna a 40°C. As amostras foram inj etadas na CLAP por um amostrador aut〇matic〇 Alltech 580 (Alltech, Deerfield, IL) e mantidas a 4 com uma bandeja de resfriamento durante a analise. Os dados foram capturados por um sistema de dados Alltech AllChrom™, e analisados com um so_f 亡 wajre AllChrom plus™. Um planej amento cr〇n〇10gic〇, que poderia alterar ο ganho de detecgao durante a separagao e cletecgao da amostra, foi utilizado para tornar possivel a obtengao de baixas concentragoes de dopamina (DA) e altas concentragoes de metabolitos no dialisato por meio de uma inj ega〇.
Analise dos dados
Os . dados foram representados de acordo com a
amostragem de tempo de seis a nove medigoes de cada ponto (media 土 desvio padrao de medit?a〇 [DPM] ) · Os valores basais de DA e 〇s principals metabolitos foram determinados com base na media das primeiras quatro amostras consecutivas antes da estimulagao por K+ (〇 valor medio no dialisato foi de 10,2 土 0,4 nM, N = 22), aos qua is foi atribuido um valor de 100%. Estatisticas foram realizadas utilizando ANOVA de duas—vias (Tratamento χ tempo) com 〇 teste post hoc Tukey—HSD. ANOVA de duas—vias f〇i usada para comparar as diferengas entre 〇s tres grupos em cada momentο· Um valor de p>0,05 foi usado para avaliar a significancia estatistica· Os niveis basais de dopamina foram homogeneos entre os dois experimentos replicados e, assim, foram c〇locados nos respectivos grupos (Flf20 = 3, 99, p>〇,05) . Os niveis basais de dopamina (DA) nos dialisatos permaneceram estaveis apos 1 hora de estabilizagao, nas quatro amostras consecutivas, antes da estimulagao por K+ (F3i57 =
0,15, p>0,05; ANOVA de uma—via com medigoes repetidas, utilizando tempo de amostragem (O, 15, 30, 45 minutos), como fator interno dos indiviciuos).
Similar aos niveis basais de dopamina (DA), os niveis basais de DOPAC e HVA nos dialisatos for am de 612 土 14 e 369 ± 7 nM (N = 22 ratos) , e foram estaveis (F3/57 = 1, 06, F3f57 二 0,84, respectivamente, em cada caso, ρ > 0,05) . Nao houve efeitos dos tratamentos de MFU nos niveis basais de HVA e DOPAC (Controle versus MFU-I semana versus MFU-6 semanas; F2,19 = 0,27, F2,19 = 0,03, respectivamente, em cada caso, p>0,05). RESULTADOS
A fim de avaliar ο ef eito dos metab01it〇s de uridina administrados oralmente na liberagao do neurotransmissor cerebral, ratos idos〇s mantid〇s em um ambiente restrito consumiram, por 1 ou 6 semanas, tanto a diet a de controle quant 〇 a dieta suplementar com 2,5¾ de MFU. A suplementagao de MFU nao afetou os niveis basais de dopamina (DA) em dialisatos entre os grupos de tratamento (controle versus MFU-I semana versus MFU-6 semanas, F2,19 =0,98). A concentragao de dopamina (DA) no dialisato foi cie 10,2
土 0,4 nM (N = 22 ratos)· 〇 efeito da suplementagao dietetics de MFU na
liberagao de dopamina (DA) estriatal estimulada por K+ (apos perfusao com a solugao de alto K+) e descrito na figura 10A. Uma diferenga estatisticamente significativa (F2,266 = 3,36) foi verificada em niveis de dopamina (DA) nos dialisatos entre os grupos de controle, de MFU-I semana e de MFU-6 semanas. IXhiltiplas comparagoes post hoc revelaram uma diferenga significativa entre os grupos controle e de MFU-6 semanas· Os dados foram subdivididos em tres segoes (antes, estimulados por K+, e dep〇is), ο que tambem revelou um aumento signif土cativo da liberagao de dopamina estimulada por K+ entre os grupos controle e de MFU-6 semanas, a partir de 283 土 9¾ ate 341 士 21% (Figura 10B) · O grupo de MFU-I semana tambem apresentou aumento da liberagao de dopamina (DA) (316 土 15¾) em relagao ao grupo controle, porem este aumento nao foi significativo.
Alem disso, MFU provindo da dieta demonstrou
aumentar a liberagao de neurotransmissores de acetilcolina dos
neuronic»s do corpo estriado (Figura 11) Esses re suit ado s mostram que (a) 〇 aumento d〇s niveis de uridina no plasma, por exemplo, pela administragao da CDP-Colina7 melhora a liberagao de neurotransmissores no cerebro, (b) ο aumento da fungao cerebral e um fenomeno multi—especies, nao se limitando aos camundongos do tipo 、、gerb〇〃,e (c) ο aumento da fungao cerebral ocorre em um modelo animal biologicamente relevante com disfungao cognitiva prejudicada pela idade·
Assim, ο aumento dos niveis de uridina no plasma, por exemplo, pela administragao de CDP-colina, melhora a liberagao de neurotransmissores no cerebro·
EXEMPLO 7: ADMIN IS TRACAO DE TFU AUMENTA OS NIVEIS DE NF-7 O E NF-M EM CEREBROS DE RATOS IDOSOS
MATERIAIS E METODOS EXPERIMENTAIS Analise dos dados
Os dados foram descritos de acordo com 〇
tratamento com MFU de seis a dezesseis medigoes de cada grupo (media 士 DPM) · Testes ANOVA de uma-via com testes post hoc de Tukey-HSD foram usados para comparar a diferenga entre os tratamentos,〇 teste de comparagoes rruiltiplas de Newman-Keuls f〇i utilizado para os dados na figura 13·
Ma.rcagao pel ο Metodo de FTes tezm
Tecidos estriatais foram colocados em tubos de Eppendorf contendo 200 μΐ de tampao de Iise (60 mM de Tris—HCl, SDS a 4%, glicerol a 20¾, ImMde ditiotreitol, ImMde AEBSF, 8 μΜ de aprotinina, 500 μΜ de bestatina, 15 μΜ de E64, 200 μΜ de leupeptina, 10 μΜ de pepstatina A) . As amostras foram sonicadas, f ervidas (10 ruin) e centrifugadas (14.000 g por 1 minuto em temperatura ambiente)·〇 liquido sobrenadante f〇i transferido para um tubo limpo e ο teor de proteina total foi determinado usando ο teste de Acid〇 Bicinc〇ninic〇 (Sigma, St. Louis, M0) ·
Quantidades iguais de proteina (40 mg proteina/ranhura) foram carregadas para eletroforese em gel de poliacrilamida—sulfato de s0dio dodecil (SDS a 4-15%, PAGE； Bio — Rad, Hercules, CA) · Antes da eletroforese em gel, uma solugao de azul de bromofenol (0,07¾) foi adicionada a cada amostra. As proteinas foram separadas, transferidas em membranas de difluoreto
de polivinilideno (DFPV) (Immobilon-P, Millipore) e bloqueadas com 5% de albumina de soro bovino (salina tris-tamponada/Tween 20 a 0, 15%) durante 1 hora. Depois de 3 lavagens de 10 minutos em salina tris-tamponada (TBST),〇s tragos marcados foram incubados em TBST com varios anticorpos contra as proteinas de interesse, incluindo NF-7〇， NF-M (1:2.000, 1:5. 000, respectivamente,· Calbi〇chem, La J〇lla, CA) a 4 0C de um dia para ο outro em um agitador orbital· Complexos de anticorpos de proteina foram detectados e visualizados usando 〇 sistema ECL (Amersham, Piscataway, NJ) e filme Kodak X-AR, respect ivaruente, conf orme sugerido pelo fabricante. Os filmes foram digitalizados usando um scanner Supervista S —12 com um adaptador de transparencia (UMAX Technologies, Freemont, CA) . A analise f〇i feita utilizando-se do programs de dominio piblico NIH Image (NIH V.1.61).
RESULTADOS
A f im de avaliar se a elevagao dos niveis de
uridina pode aumentar a produgao de uma nova membrana no cerebro, os niveis de neurofilamentos—7 0 (NF—70) e neur〇filament〇s-M (NF-M), e os biomarcadores de crescimento de neuritos, foram avaliados nos cerebros dos ratos a partir do experimento descrito no Exemplo 6· A suplementagao dietetica de MFU por 6 semanas aumentou significativamente os niveis de NF-70 (Figura 12A) e NF-M (Figura 12B) , para 182 士 25% (F2.31 二 6,01, p<0,05) e 221 + 34% (F2,21 = 8, 86, p<0,〇1) dos valores de controle, respectivamente·〇 consumo de uma diet a de MFU por 1 semana nao aumentou os niveis dessas duas proteinas em comparagao ao grupo controle em uma forma estatisticamente significativa· Os niveis de NF-70 e NF-M no estriato aumentaram para 204 土 36¾ e 221 士 34¾ dos valores de controle, respectivamente.
EXEMPLO 8 : ADMINISTRAgAO DE URIDINA OU DE UTP AUMENTA A RAMIFICAgAO E O CRESCIMENTO DE NEURITOS E OS NIVEIS DE NF-70 e NF-M EM CELULAS DE NEURITPS
MATERIAIS E METODOS EXPERIMENTAIS Analise dos dados
Os dados sao apresentados como media 土 D.P.M. A analise de variancia (ANOVA) f oi utilizada para determinar as
diferengas entre os grupos (nivel de significancia, p<0,05) Quando foram detectadas diferengas, 〇s meios foram separados utilizando-se ο teste de comparagoes miiltiplas de Newman-Keuls.
Estudo do crescimento de neur*i tos
Celulas PC12 foram dispostas esparsamente em placas de cultura de 60 milimetros recobertas com colageno em MEM contendo 1% de soro fetal bovino· Os grupos experimentais foram os seguintes: uridina, trif〇sfato de uridina, citidina, azul reativo 2, suramina e PPADS (Sigma, St. Louis, MO) · Todos os tratamentos foram realizados 2 4 horas apos a colocagao nas placas. No final do periodo de tratamentO/ as imagens foram obtidas com um micr〇sc0pi〇 de contraste de fase Zeiss Axioplan 2, utilizando software OpenLab. Seis imagens digitals foram capturadas para cada placa, para um total de 18 a 2 4 imagens por grupo de tratamento · Cerca de 300 celulas foram quantificadas para cada grupo de tratamento, para cada experimento. Os experimentos foram realizados em triplicate· A quantificagao dos neuritos, incluindo ramificagao de neuritos e comprimento de neuritos, foi realizada por mais um pesquisador estranho aos grupos experimentais·〇 comprimento de neurito foi medido utilizando-se um software NIH "Image J", em dominio ρύΙοΙίοο· Proj egoes mais longas do que 〇 cliametro do corpo celular foram contadas como neuritos· Apenas as celulas apresentando projegoes foram analisadas.
Detecgao xntracelular de UTP e CTP
Os niveis intracelulares de TFU e TFC foram analisados por CLAP, como descrito no exemplo 5, exceto 5 mM de NaH2PO4, pH 2,65, usado como tamponante A.
RESULTADOS
〇 efeito do tratamento de uridina (10-200 μΜ) no crescimento de neurito induzido por NGF foi testado em seguida· Na ausencia de NGF, das celulas PC12 nao geraiinaram neuritos (menos de 1%) ·〇 tratamento de uridina (50 μΜ, 2 ou 4 dias) , na ausencia de NGF nao resultou na produgao de neuritos· Na presenga de NGF, a uridina (50-200 μΜ) aumentou de forma significativa (p<0,01 ou 0,001) ο ηύιτίθΓΟ de neuritos por celula apos 4 dias de tratamento (Figura 13 A-C) , enquanto no dia 2 do tratamento, ou com baixas
concentragoes de uridina (10, 25 μΜ) , nao houve qualquer efeito.〇 tratamento das celulas expostas a NGF com citidina tambem nao apresentou efeito sobre 〇 crescimento de neuritos·
Uma vez que a uridina aumenta ο niimero de neuritos por celula, ο efeito da uridina na ramif icagao e no comprimento dos neuritos na presenga de NGF tambem foi avaliado. Apos 4 dias de tratamento com uridina (50 μΜ) e NGF,〇 ηύπίθΓΟ de pontos de ramificagao de neuritos por celula aumentou significativamente (p<0,01), em comparagao com as celulas tratadas apenas com NGF (Figura 13D) · A uridina nao afetou significativamente ο comprimento medio dos neuritos em celulas diferenciadas por NGF.
As proteinas de neurofilamentos sao altamente enriquecidas dentro dos neuritos,· portanto, um aumento no niimero de neuritos deveria estar associado ao aumento da expressao de proteinas de neurofilamentos · Os niveis de NF-70 (70 kD) e NF-M (145 kD) depois de 4 dias de tratamento das celulas PC12 com NGF sozinho, ou NGF mais uridina (50 μΜ) , for am a seguir medidos (Figura 13E) · Ambas expressoes. de NF-70 e NF-M aumentaram significativamente (p<0,01, p<0,001, respectivamente) apos ο tratamento com uridina, em comparagao com celulas tratadas apenas com NGF · Na ausencia de NGF, 〇 tratamento com uridina nao apresentou qualquer efeito sobre os niveis de proteina de neurofilamento· Assim, a uridina aumenta ο crescimento de neuritos em celulas PC12.
Na ausencia de NGF, a adigao de uridina exogena
aumenta os niveis intracelulares de TFU e CDP—colina em celulas PC12 (Exemplo 5) · Para determinar se a uridina af eta os niveis de TFU ou TFC na presenga de NGF, os niveis de TFU e TFC foram medidos em celulas PC12 por 2 dias com NGF, tratados sem nucle〇tide〇, (controle), uridina, citidina ou TFU, na presenga de NGF. A uridina (50 μΜ) aumentou de forma significativa (p<0'05) os niveis tanto de TFU quanto de TFC (Figura 14 A-B, respectivamente) em comparagao com as celulas que receberam apenas ο tratamento de NGF. TFU (100 μΜ) ou citidina (50 μΜ) nao afetaram significativamente os niveis intracelulares dos nucleotideos·
A fim de. verificar se TFU pode mediar ο efeito da
uridina no crescimento de neurito, celulas PC12 foram tratadas com NGF e doses variadas de TFU. Apos 4 dias de tratamento, TFU (10 e 50 μιΜ) aumentou de forma significative (p <0,01) ο crescimento de neurito, em comparagao com aquelas celulas tratadas apenas com NGF (f igura 15) · Assim, uridina ou TFU elevaram ο crescimento de neurito.
Concluindo, a suplementagao dietetica de uridina ou TFU aumentou os niveis das duas proteinas principals de neurofilamentos no cerebro de rato e demonstrou induzir diretamente ο crescimento de neurito em celulas PCl2· Assim, ο aumento dos niveis de uridina no plasma, por exemplo, pela administragao de CDP-Colina, induz ο crescimento do neurito.
EXEMPLO 9: CELUIiAS PC12 DIFERENCIADAS POR NGF EXPRESSAM RECEPTORES P2Y2, P2Y4 E P2Y6 SENSIVEIS A PIRIMIDINA
MATERIAIS E METODOS EXPERIMENTAIS DetecgMo de receptores P2Y
A marcagao por "Western blots" utilizou anti-P2Y2, anti—P2Y4 de coelho (ambos do Calbiochem), ou anti-P2Y6 de coelho (Novus Biologicals, Littleton, CO)·
Jmunoci toqxiimica.
Celulas PC12 foram tratadas, conforme descrito
acima, exceto aquelas que foram cultivadas em laminas de vidro de 12 milimetros (A. Daigger & C〇· , Vernon Hills, IL) revestidas com colageno· As proteinas foram visualizadas utilizando iinunofluorescencia. Resumidamente, as celulas foram fixadas com paraformaldeido a 4%, permeabilizado com Triton X-IOO a 0,25%, bloqueadas com 10% de soro de cabra normal, e incubadas de um dia para 〇 outro em anticorpos apropriados (anti-NF-70 de rato, e anti—P2Y2 de coelho, anti—P2Y4 de coelho ou anti-P2Y6 de coelho)· Para visualizagao de P2Y2 e P2Y4, as culturas-controle foram incubadas com um anticorpo primario mais um antigeno de controle, a fim de garantir que a imunomarcagao fosse especifica. O antigeno de controle nao estava disponivel para ο receptor P2Y6. As celulas foram entao incubadas em anticorpos secundarios conjugados com fluorocromo por 1 hora (Alexa 488 anti-coelho de cabra e Alexa 568 anti—rato de cabra; Molecular Probes, Eugene, OR) e montadas em laminas de vidro com um meio de montagem, com ou sem DAPI (Vector
Laboratories, Burlingame, CA) · Antigenos de controle fornecidos com anticorpos primarios foram usados para assegurar que a imunomarcagao fosse especifica. As imagens digitais foram obtidas em um micr〇sc0pi〇 Axioplan Zeiss (Oberkochen, Alemanha) com software OpenLab, usando uma objetiva de imersao em oleo Zeiss Plan-Neofluor 4 0x.
RESULTADOS
TFU e um agonista da class e ativada por pirimidina de receptores P2Y, a saber: receptores P2Y2, P2Y4 e P2Y6. Para determinar se esses receptores participant do mecanismo pelo qual ο TFU extracelular afeta ο crescimento de neurito, foi inicialmente determinado se os receptores sao expressos em celulas PC12, e se a exposigao a NGF altera sua expressao; as celulas PC12 foram tratadas por 0-7 dias com NGF e os niveis dos receptores foram medidos. Apos 3 dias de tratamento com NGF, a expressao do receptor P2Y2 atingiu niveis maximos, os quais foram significativamente (p<0,001) mais elevados do que os observados em menos de 3 dias de tratamento com NGF (Figura 16A) · Para visualizar a expressao e localizaq:a〇 dos P2Y2, bem como os receptores P2Y4 e P2Y6, as celulas foram cultivadas na presenga ou ausencia de NGF durante 4 dias e, em seguida, imuno-tingidas para ο marcador neuritico NF—70, e para P2Y2, P2Y4, ou P2Y6 (Figura 16B, da esquerda para a direita, respectivamente)· Todos os tres receptores foram bem expressados em celulas PC12 diferenciadas por NGF. Alem disso, P2Y2 foi co-ocalizado com ο marcador neuronal MAP-2. Na ausencia de NGF,〇 receptor de proteina foi indetectavel pelo imunomarcagao. Alem do mais, a presenga da uridina nao afetou a expressao dos receptores, em comparagao com as quantidades presentes nas celulas expostas apenas ao NGF. Assim, os receptores P2Y2, P2Y4 e P2Y6 estao presentes em celulas neurais, mas nao em seus precursores·
EXEMPLO 10: ANTAGONISM。DO RECEPTOR P2Y INIBE O EFEITO DA URIDINA NO CRESCIMENTO DE NEURITO INDUZIDO POR NGF
Para verificar se a sinalizagao por receptores P2Y medeia a indugao de crescimento de neurito pel a uridina, celulas PC12 foram incubadas por 4 dias com NGF, uridina (100 μΜ) e 〇 receptor P2Y antagonists de surarrdna (30 μΜ) , acid〇
dissulfonico pirid〇xal_f〇sfato — 6—azofenil — 2‘,4 ’ (ADSPF; 30 μΜ) e azul reativo 2 (RB-2; 10 μΜ) · Cada um dos antagonistas bloqueou significativamente (p<0,05 ou 0,001) ο aumento da uridina no crescimento de neurito estimulado por NGF (Figura 17) . Nenhum dos antagonistas de receptores P2Y inibiu a captagao da uridina nas celulas PC12. Esses resultados mostram que, nas condigoes utilizadas, a sinalizagao atraves de receptores P2Y medeia a indugao da uridina no crescimento de neurito · Assirri, ο aumento dos niveis da uridina no plasma, por exemplo, por administragao de CDP_c〇lina, induz 〇 crescimento de neurito atraves da estimulagao
de receptores P2Y·
EXEMPLO 11: A SINALIZAgAO POR FOSFATIDIL-INOSITOL (FI) E ESTIMULADA POR TFU E URIDINA
MATERIAIS E METODOS EXPERIMENTAIS
ClBssificagao metabol±ca e analise do turnover· de
FX
A analise do turnover de FI foi realizada conforme descrito por Nitsch R.M. et al. , J· Neurochem· 69:704-12, 1997 · Resumidamente, as celulas foram rotuladas metabolicamente por 36 horas, com 1,25 microCurie (μΟί)/placa de mio-[2-3H] inositol (17,0 Curie/mmol; Amersham Biosciences) em MEM livre de soro, lavadas duas vezes com uma solugao de sal balanceada de Hank (SSBH) , e tratadas por 15 minutos com 10 mM de cloreto de litio em SSHB. Drogas foram adicionadas na presenga de 10 mM de litio por 60 minutos a 37 0C, As celulas foram lisadas com metanol congelado, e os lipidios foram rem〇vid〇s por extragao com cloroformio/metanol/agua (2:2:1 em volume)· Fosfatos de inositol soldveis em agua, rotulados, foram separados a partir de [3H] inositol livre, por cromatografia de troca idnica, utilizancio colunas AG 1-X8 (Bio-Rad) , e 1 M de formato de amonio e 0,1 M de acido f6rmic〇 como eluente. A radioatividade foi quantificada por espectrometria de cintilagao liquida·
RESULTADOS
Receptores P2Y2, P2Y4 e P2Y6 ativaram ο caminho de sinalizagao de trifosfato de C/diacilglicerol/inositol (FLC/DAG/FI3) fosfolipase· Para determinar se as concentragoes de uridina ou TFU que promovem ο crescimento de neurito ativam estes
receptores, celulas PC12 diferenciadas por NGF foram marcadas com [3H]-inositol (50 μΜ) ou TFU (10, 100 μΜ) durante 1 hora e a sinalização de FI foi avaliada pela medição do turnover de FI rádio-rotulado (Figura 18) . A formação de FI foi significativamente aumentada pela adição de 100 μΜ de TFU (p<0,05) e por 50 μΜ de uridina (p<0,01). O PPADS antagonista de receptor P2Y (100 μΜ) bloqueou de forma significativa (p<0,05) a estimulação da sinalização de FI por TFU. Estes resultados indicam que TFU promove o crescimento de neurito através da estimulação mediada por receptores P2Y do caminho de sinalização de FI. Os resultados dos exemplos 9-11 fornecem um
mecanismo pelo qual o aumento dos níveis de uridina de soro estimula o crescimento de neurito; a saber, pela ativação de receptores P2Y. Pelo menos parte da ação dos receptores de P2Y é mediada por sinalização de FI. De forma geral, os resultados dos exemplos 6-11 fornecem ainda evidências de que o aumento dos níveis de uridina de soro melhora a função cognitiva e a inteligência através do aumento da neurotransmissão, por múltiplos mecanismos: (1) aumentando a liberação de neurotransmissores; (2), agindo, por meio da T FC, como um precursor para a membrana de fosfatídeos; (3) ativando, por meio da T FU, o caminho de sinalização intracelular acoplado ao receptor P2Y. Em outra forma de caracterização, os mecanismos (2) e (3) agem em conjunto para aumentar a formação de neurito.
EXEMPLO 12: DIETAS SUPLEMENTADAS INTENSIFICAM A APRENDIZAGEM E A MEMÓRIA EM VÁRIAS ESPÉCIES
MATERIAIS E MÉTODOS EXPERIMENTAIS Labirinto aquático de Morris
Ratos idosos (18 meses, 500 g) foram alimentados com dietas de controle ou uma dieta contendo MFU a 2,5% durante seis semanas. Foi-lhes mostrada a seguir uma plataforma escondida em uma piscina de água de seis pés de diâmetro, colocada em algum lugar em cada um dos quatro quadrantes da piscina a cada vez e foram concedidos 90 segundos em cada tentativa para, nadando, localizar novamente a plataforma, tendo sido registrada a latência média de escape do tempo de natação. O conjunto de quatro ensaios foi repetido em cada um dos quatro dias consecutivos. A plataforma ficou no mesmo local todos os dias. Este teste, conhecido como labirinto aquático de Morris, é um indicador da memória espacial.
Ensaio de aprendizagem com pelota de comida
Gerbos machos adultos jovens alimentados com um controle ou ração contendo MFU (O, 0,1, 0,5 ou 2,5%) à vontade (ad libtium) por três semanas foram testados em um labirinto com braço radial, constituído por uma câmara central com quatro braços dotados de um pequeno 'pellet' de comida no final de cada braço. Antes do ensaio, os animais foram colocados em jejum de um dia para o outro (fast overnight) ; cada animal foi então colocado no centro da câmara e foram concedidos até 180 segundos para encontrar todos os 'pellets'. 0 menor tempo necessário para encontrar os 'pellets' é indicativo de uma melhor aprendizagem e memória espacial.
Ensaio de memória funcional e de memória de
referência
Grupos de dez gerbos alimentados com dietas de controle ou de MFU a 0,1% por quatro semanas, e treinados para encontrar com sucesso todos os 'pellets' de comida conforme descrito acima, receberam então um teste modificado, onde apenas dois braços do labirinto (mas sempre os mesmos dois) continham um 'pellet' de comida como recompensa. Neste ensaio, um erro da memória funcional é a revisita do gerbo a um braço do qual ele já havia retirado o ^pellet' naquele dia. Um erro da memória de referência é aquele em que o gerbo entra em um braço que nunca teve xPellets' de comida (durante os testes modificados.)
RESULTADOS
Os exemplos anteriores mostraram que a elevação dos níveis de uridina de soro melhora o aumento da capacidade das células neurais, para funcionarem de várias maneiras. O presente exemplo mostra que a uridina aumenta a função cognitiva e a inteligência. Ratos idosos (18 meses, 500 g) foram alimentados com uma dieta de controle ou uma dieta contendo 2,5% de UMP-2Na+ por seis semanas, e sua memória foi testada utilizando o labirinto aquático de Morris, um indicador da memória espacial. Os ratos administrados com uma dieta fortificada de MFU-2Na+ apresentaram uma redução estatisticamente significativa no tempo necessário para alcançar a localização da plataforma (figura 19) , indicando que a memória espacial é aumentada pela elevação dos níveis de uridina de soro.
0 efeito da elevação dos níveis de uridina de soro na aprendizagem e na memória espacial foi também examinada em gerbos. Gerbos machos adultos jovens foram alimentados com dieta de controle ou ração contendo MFU (O, 0,1, 0,5 ou 2,5%), à vontade ("ad lib") por três semanas, e foram testados em um labirinto com braço radial, constituído por uma câmara central, com quatro braços dotados de um pequeno 'pellet' de alimento no final de cada um. Antes do ensaio, os animais foram colocados em jejum por 12 horas (fast overnight) ; cada animal foi então colocado no centro da câmara e foram concedidos até 180 segundos para encontrarem todos os ^pellets' . A redução do tempo necessário para encontrar os ^pellets' requer aprendizado espacial. As dietas suplementadas com MFU reduzem o tempo necessário para os gerbos encontrarem o 'pellet' de alimento em uma maneira dependente da dose (Figura 20) .
Além disso, o efeito do aumento dos níveis de uridina de soro na memória funcional e na memória de referência foi examinado. Gerbos alimentados com dietas de controle ou com 0,1% de MFU por quatro semanas e treinados para encontrar com sucesso todos os 'pellets' de comida, como descrito acima, foram então colocados em um teste modificado, que mede a memória funcional e a memória de referência. Os gerbos alimentados com a dieta suplementada com MFU exibiram número reduzido tanto de erros da memória funcional (Figura 21A), quanto de erros da memória de referência (B).
Estes resultados mostram que (a) o aumento dos níveis de uridina de soro melhora a aprendizagem e vários tipos de memória (espacial, funcional, e de referência), (b) o efeito não se limita a uma determinada espécie, e (c) o efeito manifesta-se em modelos biologicamente relevantes da função cognitiva e da inteligência prejudicadas pela idade. Assim, as composições que aumentam os níveis plasmáticos de uridina, por exemplo, CDP-colina, melhoram a aprendizagem e a memória.
Em síntese, os resultados aqui apresentados demonstram que o aumento dos níveis de uridina de soro afeta positivamente a sinalização neurológica, a anatomia das células neurais, a memória cognitiva e a inteligência. Os resultados também implicam vários mecanismos pelos quais a uridina exerce seus efeitos.
EXEMPLO 13: COLINA AUMENTA A LIBERAÇÃO DE
NEUROTRANSMISSORES
MATERIAIS E MÉTODOS EXPERIMENTAIS preparação de uma secção do cérebro
Ratos machos do tipo Sprague-Dawley com 9 a 11 meses de idade foram anestesiados com quetamina (85 mg/kg de peso corporal, via intramuscular) e foram decapitados em uma sala resfriada a 4°C. Os cérebros foram rapidamente retirados e colocados em tamponante de Krebs oxigenado e refrigerado (4°C) (119,5 mM de NaCl, 3,3 mM de KCl, 1,3 mM de CaCl2, 1,2 mM de MgSO4, 25 mM de NaHCO3, 1,2 mM de KH2PO4, 11 mM de glicose, e 0,03 mM de EDTA, pH 7,4) contendo 1 mM de quetamina e 15 ug/ml de eserina. Após a remoção das meninges e dos plexos corióides restantes, fatias de 30 um do estriato, hipocampo e córtex foram imediatamente preparadas com um fatiador de tecidos Mclllwain, lavadas 3 vezes, e colocadas em uma câmara de superfusão personalizada (Warner Instrumento, Hamden, CT).
Estimulação elétrica e superfusão
As fatias foram equilibradas por 60 minutos a 370C por superfusão nas câmaras com o tamponante oxigenado de Krebs/quetamina/eserina, acima descrito, a uma taxa de fluxo de 0,8 ml/min. As câmaras de superfusão continham dois eletrodos de fusão de prata opostos que estavam ligados a um estimulador elétrico (modelo S88; Grass Instruments). Um dispositivo de polaridade reversa customizado foi usado para evitar a polarização da câmara e também para monitorar tanto a corrente como a tensão, 50 microssegundos após o inicio de cada pulso, para assegurar uma resistência uniforme da câmara. Após o período de estabilização, as fatias foram despolarizadas por perfusão com uma versão de alto K+ (52 mM) do tamponante de Krebs/quetamina/eserina, na presença ou ausência de 20 μΜ de colina, 25 μΜ de citidina, e/ou 25 μΜ de uridina. Os perfusatos foram coletados durante todo o período de 2 horas e ensaiados para acetilcolina. Os valores foram comparados normalizados com o teor de proteína nas fatias.
RESULTADOS
Para determinar o efeito da colina na liberação de acetilcolina, fatias do estriato, hipocampo e córtex (n = 8) foram incubadas na presença ou ausência da colina e depois despolari zadas, e a liberação de acetilcolina foi medida. Em alguns grupos, também foi adicionada citidina ou uridina. A colina aumentou a liberação da acetilcolina (Figura 22) . Estes resultados mostram que, quando os neurônios
são repetidamente estimulados para a liberação da acetilcolina, a colina aumenta a quantidade de neurotransmissores que são liberados, por reposição do estoque de colina na membrana fosfolipídica (por exemplo, FC). Os exemplos acima mostram que a uridina aumenta a síntese da CDP-colina, que é então utilizada para sintetizar a nova FC. Assim, a capacidade dos neurônios de sintetizar novos fosfolipídeos e, desse modo, repetidamente liberar neurotransmissores, é particularmente aumentada pela CDP- colina .
Dessa forma, a administração da CDP-colina afeta
positivamente a sinalização neurológica, a anatomia das células neurais, a memória cognitiva e a inteligência, através de 2 mecanismos distintos: (a) aumentando os níveis de uridina de soro e (2) agindo como uma fonte de colina. EXEMPLO 14: ADMINISTRAÇÃO DE MFU MELHORA O
PROCESSAMENTO DA MEMÓRIA DEPENDENTE DO HIPOCAMPO EM RATOS EC E IC
Animais
Os animais foram mantidos sob condições ambientais padronizadas (temperatura ambiente, 20-25°C; 55-60% de umidade relativa; programação de claro/escuro, 12/12). Sete ratas grávidas do tipo Sprague Dawley (Charles River Laboratories) foram obtidas 1 semana antes de darem à luz. No dia 23 pós-natal, os filhotes machos foram retirados e separados em pequenos grupos e permitiu-se a aclimatação por 1 semana. Neste momento, trinta e dois ratos foram combinados de acordo com o peso corporal, atribuindo-se tanto as condições IC como EC. Um subgrupo de ratos IC (n = 8) e um subgrupo de ratos EC (n = 8) tiveram acesso a uma dieta de controle laboratorial (dieta de roedores com 16% de proteína, Teklad Global, (Teklad diet 00217), Harlan Teklad, Madison, WI) , enquanto os subgrupos restantes (n = 8 cada) receberam esta dieta suplementada com uridina-5'-monofosfato dissódico (MFU-2Na+ a 0,1%; Teklad diet 03273), correspondendo a 200 mg/kg por dia de MFU-2Na+, ou aproximadamente 132 mg/kg por dia de uridina.
Os ratos foram alojados na mesma prateleira, em gaiolas de plástico (52 χ 32 χ 20 cm de altura), com tampas de arame. A forragem e a água foram trocadas regularmente e os animais foram pesados semanalmente, momento em que foram feitas avaliações gerais de saúde. Os animais tinham acesso ad libitum (à vontade) à ração e água. Os ratos EC foram alojados em grupos de 2-3 animais. Brinquedos de plástico (blocos, bolas, tubos de PVC, etc.) colocados nas gaiolas dos EC tinham um rodízio semanal entre os grupos; novos brinquedos foram introduzidos mensalmente. Os ratos EC foram levados para uma "sala de jogos" (3,66 χ 1,83 m com armários, mesas, cadeiras, caixas, e brinquedos), dia sim, dia não, durante 45 minutos. Os ratos IC foram alojados individualmente, sem os brinquedos, e manuseados três vezes por semana para aclimatar os animais ao manuseio do experimentador, a fim de aliviar o medo e ansiedade em processos posteriores de treinamento comportamental. Para evitar o ganho de peso típico causado por condições depauperadas (em relação aos ratos enriquecidos), foi permitido que os ratos IC se exercitassem três vezes por semana durante 15 minutos, em um quarto de 1,22 χ 1,8 3 m, somente com o experimentador presente.
Os animais foram pesados semanalmente, para garantir que os ratos tratados com MFU e os não tratados comessem quantidades equivalentes de alimento. Não foi encontrada nenhuma diferença significativa na média do peso corporal entre os grupos suplementados com MFU e de controle, mostrando que os ratos estavam comendo quantidades equivalentes da dieta, suplementada ou não com MFU. Além disso, como os ratos IC foram exercitados para evitar o ganho de peso que poderia ocorrer (em relação aos ratos EC), não houve diferença no peso corporal entre os grupos EC e IC.
Dispositivo de labirinto aquático Um tanque galvanizado circular, com 6 pés (185 cm) de diâmetro e 1,5 pés (0,55 cm) de altura, foi preenchido com água (25°C ± 2 °C) até uma profundidade de 20 cm, colocado em um quarto com luminosidade regulável contendo várias pistas extras de labirinto. Quatro posições iniciais (norte, sul, leste, oeste) foram espaçadas em torno do perímetro do tanque, dividindo a piscina em quatro quadrantes iguais. Para a versão de plataforma visível do labirinto aquático, uma bola de borracha branca (8 cm de diâmetro) foi acoplada ao topo da plataforma submersa, ficando acima da superfície da água. A plataforma podia ser usada como um degrau para subir na bola para escapar da água. Uma câmera de vídeo foi montada acima do labirinto de água; esta câmera foi ligada a um computador, com software de monitoramento de vídeo, para registrar automaticamente a latência de escape (tempo para alcançar a plataforma), a distância percorrida (comprimento do caminho para encontrar a plataforma a nado) , e velocidade de nado (HVS Image Ltd; Buckingham, Reino Unido).
Procedimento compor tamental
O treinamento de comportamento foi realizado entre 10:00 h da manhã e 2:00 h da tarde, de forma cega. Os ratos receberam uma sessão de treino de 4 dias constituído de quatro tentativas (ou seja, nados) por dia, para localizar a plataforma escondida (1,5 cm abaixo da superfície da água), que permaneceu na mesma posição em todos os ensaios para cada animal (isto é, dentro de um dos quatro quadrantes) . Em cada tentativa o animal foi colocado dentro do tanque, de frente para a parede do tanque em um dos quatro pontos de início designados (N, S, L, e O) e permitido o escape para a plataforma escondida. Um ponto de partida inicial diferente foi utilizado em cada ensaio, de modo que cada ponto de partida foi utilizado uma vez por dia. Se um animal não escapasse dentro de 90 segundos, ele era manualmente guiado à plataforma de escape pelo experimentador. Após subirem na plataforma, os ratos permaneceram na plataforma por 20 segundos. Após cada ensaio, os animais foram retirados do labirinto e colocados em uma gaiola de contenção durante um tempo de 30 segundos de intervalo entre tentativas (IET). A latência para subir à plataforma de escape foi usada como uma medida da aquisição da tarefa. No quinto dia, os ratos receberam um teste exploratório. Para isso, a plataforma foi removida e o caminho de nado e o tempo gasto na busca pelo quadrante da piscina que continha anteriormente a plataforma foram medidos, durante 60 segundos. Isso fornece uma medida para a retenção da memória espacial e indica se uma estratégia espacial foi utilizada durante o treinamento de plataforma escondida.
Análise estatística (para este e para o Exemplo
seguinte)
Os resultados são expressos como média +/- D.P.M.
Os dados foram analisados por ANOVA seguido por PLSD de Fisher para comparações post-hoc. As diferenças com um valor de p<0,05 foram consideradas significativas.
RESULTADOS
Para determinar o efeito da administração oral de
MFU no processamento da memória cognitiva e/ou dependente do hipocampo, os ratos foram expostos tanto a condições enriquecidas (EC) , quanto depauperadas (IC) durante três meses, e aos ratos expostos a cada condição foi administrada uma dieta de controle ou enriquecida com MFU, e a seguir aplicada a tarefa do labirinto aquático com plataforma escondida. 0 desempenho de todos os ratos melhorou ao longo de quatro dias de treinamento na tarefa do labirinto aquático com plataforma escondida (Figura 23A), conforme evidenciado por um significativo efeito principal dos blocos de tentativas (análise ANOVA, p<0,001). Além disso, um efeito principal de grupo (p<0,01) e uma significativa interação de grupo χ dieta (p<0,05) foram observados. Os ratos IC-MFU e EC tratados com ambas as dietas cumpriram a tarefa em um ritmo mais rápido do que a realizada pelos ratos IC-CONT (ratos IC administrados com uma dieta de controle) (análise post-hoc; p<0,05). Além disso, os ratos EC tratados com MFU cumpriram a tarefa a um ritmo superior do que os ratos EC-CONT (p<0,09) . Assim, o tratamento com uma dieta regular com MFU evita a diminuição da capacidade causada por condições ambientais depauperadas na memória cognitiva e/ou espacial e melhora a memória espacial e/ou cognitiva e a inteligência, em indivíduos saudáveis. Além disso, um teste exoploratório foi administrado aos ratos. Em geral, os ratos passavam mais tempo no quadrante que inicialmente continha a plataforma, o que sugere que todos os animais utilizavam capacidades espaciais, em algum grau, para cumprir a tarefa da plataforma escondida (Figura 23B) . Ratos EC tratados ou não-tratados e ratos IC-MFU gastam muito mais tempo no quadrante correto do que os ratos IC-CONT (ANOVA, p<0,01) durante o teste exploratório de 60 segundos, oferecendo evidências adicionais de que o tratamento com uma dieta regular com MFU evita a diminuição da capacidade causada pelas condições ambientais depauperadas na memória cognitiva e/ou espacial e na inteligência, e melhora a memória espacial e/ou cognitiva e a inteligência em indivíduos saudáveis. Assim, as composições que elevam os níveis de uridina de soro, por exemplo, CDP-colina, melhoram a memória cognitiva e a inteligência e previnem o declínio da memória cognitiva e da inteligência, relacionado com o envelhecimento.
EXEMPLO 15: ADMINISTRAÇÃO DE MFU NÃO MELHORA O PROCESSAMENTO DA MEMÓRIA DEPENDENTE DO ESTRIATO EM RATOS IC E EC
MATERIAIS E MÉTODOS EXPERIMENTAIS Tarefa do labirinto aquático visível
Uma semana após a conclusão do 4o dia/4 ensaios por dia da tarefa de treinamento espacial, os ratos do exemplo acima receberam quatro sessões de treinamento, consistindo de quatro tentativas (ou seja, nados) por dia. Em cada tentativa, o animal foi colocado dentro do tanque, de frente para a parede do tanque em um dos quatro pontos iniciais designados (norte (N), sul (S) , leste (L) , e oeste (0) ) , e foi permitido o escape para a plataforma visível marcada. Um ponto de partida inicial diferente foi utilizado em cada tentativa, de modo que cada ponto inicial de partida foi utilizado uma vez por dia. Além disso, a plataforma de escape visível foi colocada em um quadrante diferente em cada tentativa, de modo que cada um dos quatro quadrantes continha a plataforma de escape uma vez a cada dia. Se um animal não escapasse dentro de 90 segundos, ele era manualmente guiado à plataforma de escape pelo experimentador. Após subirem na plataforma, os ratos permaneceram na plataforma por 20 segundos. Após cada tentativa, os animais foram retirados do labirinto e colocados em uma gaiola de contenção por 30 segundos de intervalo entre as tentativas (IET).
RESULTADOS
Para determinar o efeito da administração oral de MFU no processo de memória dependente do estriato, os ratos foram tratados como no exemplo anterior, sendo-lhes aplicada a tarefa do labirinto aquático de plataforma visível. Conforme mostrado na Figura 24, o desempenho dos ratos melhorou ao longo de 4 dias de treinamento, como evidenciado por um efeito principal significativo dos blocos dos ensaios (análise ANOVA, p<0,001). Nenhum outro efeito principal significativo foi observado, indicando que o ambiente e uma dieta suplementada por MFU têm pouco ou nenhum efeito sobre a memória baseada no estriato
(resposta ao estímulo). EXEMPLO 16: ADMINISTRAÇÃO ORAL DE CPD-COLINA
AUMENTA OS NÍVEIS SANGÜÍNEOS DE URIDINA
Indivíduos receberam por via oral MFU (2.000 mg) ou CDP-colina (4.000 mg), contendo 3,3 mmol (milimoles) de uridina ou 3,2 mmol de citidina, respectivamente. A uridina plasmática apresentou picos em 24 e 14 mcM após MFU e CDP-Colina, respectivamente; os aumentos da área sob a curva foram de 345% e 201%, respectivamente (figura 25).
EXEMPLO 17 : ADMINISTRAÇÃO DE AGPI AUMENTA OS NÍVEIS CEREBRAIS DE FOSFOLIPÍDEOS E A ELEVAÇÃO DOS NÍVEIS DE URIDINA PLASMÁTICA RESULTA EM UM AUMENTO SINERGÍSTICO POSTERIOR
MATERIAIS E MÉTODOS EXPERIMENTAIS
Dietas
Uma dieta de controle padrão (Tabela 4) consistia de uma dieta para roedores com 16% de proteína (Harlan Teklad, Madison, WI), que continha 0,1% de cloreto de colina (CC), correspondendo a uma dose diária de 50 mg/kg/dia. Foi provido MFU a 0,5% de MFU.2Na+ peso/peso, adicionado à dieta de controle, também preparada pela empresa Harlan Teklad, correspondendo a 240 mg/kg/dia de MFU. A ADH foi administrada a 300 mg/kg/dia em 200 microlitros (mcL)/dia em solução de Goma Arábica a 5%, enquanto os grupos que não receberam ADH receberam apenas os veículos (Goma Arábica a 5%). A ADH foi fornecida pela Nu-Chek Prep (Elysian, MN) e a MFU pela Numico (Wagenigen, NL) . Nenhum dos grupos apresentou mudanças significativas no peso corporal durante o curso do experimento.
Tabela 4 - Dieta de controle padrão
Análise aproximada (%) Proteína 16,7% Carboidrato 60, 9% Óleo, Fibra, Cinzas 13,7% Colina 0,1% Ácidos graxos (g/kg) Saturados 7,34 Insaturados C18: ln-9 ácido oléico 8,96 C18: 2n-6 ácido linoléico 23, 12 Cl8: 3n-3 ácido linolênico 1, 53
Colheita, cerebral
Gerbos foram anestesiados com quetamina e xilazina (80 e 10 mg/kg do peso corpóreo, i.p.) e sacrificados por imersão da cabeça em nitrogênio liquido por 2 minutos, seguido por decapitação. Os cérebros foram imediatamente e rapidamente (30 segundos) removidos usando um fórceps ósseo, e armazenados a -80°C.
Medições de fosfolipídeos cerebrais
Os hemisférios cerebrais congelados foram pesados e homogeneizados em 100 volumes de água gelada deionizada, usando um degradador de tecido (Polytron PT 10-35, Kinematica AG, Suíça) e, em seguida, analisados como descrito no exemplo 1.
Ensaios de DNA e proteínas
As proteínas na amostra total de homogenato de cérebro foram medidas usando reagente ácido bicinconínico (Perkin Elmer, Norwalk, CT, E.U.A.). 0 DNA foi medido através da medição das emissões de 460 nm de amostras em um fluorômetro na presença de bisbenzimidizol, um corante fluorescente conhecido como Hoechst 33258 H (American Hoechst Corporation) , o qual tem uma excitação máxima a 356 nm e uma emissão máxima de 458 quando ligado ao DNA.
RESULTADOS
Gerbos machos pesando 80-100 g foram divididos em
4 grupos de 8 gerbos cada e receberam os suplementos representados na Tabela 1:
Tabela 1 - Grupos de tratamento
Suplemento | Quantidade/Método |
Grupo 1 Dieta de controle + veículo (Goma Arábica a 5%) 2 Sódio MFU + veículo (Goma Arábica a 5%) Na-MFU 0,5% de ração 3 ADH 300 mg/kg diariamente por gavagem 4 ADH + Sódio MFU Conforme acima
Após 4 semanas os animais foram sacrificados e 1 hemisfério do cérebro, menos o cerebelo e o tronco cerebral, foi testado para o total de fosfolipídeos e para o teor de FC, fos fatidil-etanolamina (FE), esfingomielina (EM), fosfatidil- inositol (FI) e fosfatidil-serina (FS) . Os ácidos graxos ômega-3 (ADH) aumentaram os níveis de fosfolipídeos totais para níveis significativamente superiores aos do grupo de controle (Figura 26 e Tabelas 2 e 3) . A combinação de ADH com MFU resultou em um maior aumento (26%) que foi sinérgico (ou seja, maior que a soma dos aumentos observados nos grupos ADH (12%) e MFU (5%)). Resultados similares foram observados com cada fosfolipídeo (Tabelas 2 e 3). Uma significância estatística foi observada quanto aos valores fosfolipídicos seja quando comparados às quantidades de proteínas (Figura 2 6A e Tabela 2) seja quando comparados ao DNA (Figura 2 6B
e Tabela 3).
Tabela 2 - Efeitos de ADH, MFU, ou ambos os tratamentos nos níveis de fosfolipídeos no cérebro, comparados aos níveis de proteína. Os dados são apresentados como média +/- desvio padrão da média (DPM). A análise estatística utilizou ANOVA de duas-vias e o teste de Tukey. "*" indica p<0,05; "**" - p<0,01; II***» - p<0,001 em relação ao grupo controle.
Tratamento /Lipídeo PL total FC FE SM FS FI Controle 351 ± 8 152 ± 6 64 ± 4 42 ± 2 33 ± 3 21 ± 2 MFU 367 ± 22 171 ± 8* 84 ± 8* 52 ± 5 35 ± 3 31 ± 2** ADH 392 ± 20 185 ± 12* 78 ± 5* 56 ± 3* 39 ± 3 32 ± 2** MFU + ADH 442 ± 24*** 220 ± 12*** 113 ± 6*** 73 ± 4*** 46 ± 6*** 36 ± 6***
Tabela 3 - Efeitos de ADH, MFU, ou ambos os tratamentos nos níveis de fosfolipídeos no cérebro, comparados aos níveis de DNA. A análise estatística/apresentação dos dados está na Tabela 2.
Tratamento/ Lipídeo PL total FC FE SM FS FI Controle 885 ± 45 332 ± 12 176 ± 13 112 ± 5 79 ± 8 54 ± 5 MFU 878 ± 18 368 ± 10* 195 ± 9 111 ± 4 86 ± 7 79 ± 6** ADH 909 ± 77 366 ± 13* 196 ± 18 126 ± 8 98 ± 7 84 ± 13** MFU + ADH 1058 + 25*** 462 ± 26*** 261 ± 30*** 169 + 11*** 110 ± 5*** 85 ± 10***
Esses resultados demonstram que ambos os ácidos graxos ômega-3 e ácidos graxos ômega-6 aumentam a síntese de fosfolipideos no cérebro e os níveis de fosfolipídeos cerebrais, tanto os níveis totais quanto os níveis individuais de fosfolipídeos. Esses resultados mostram ainda que a combinação de AGPI com MFU, que aumenta os níveis de uridina, resulta ainda em
um aumento do sinergismo.
Os aumentos proporcionais nos 4 fosfolipídios estruturais que compõem a maior parte das membranas celulares no cérebro (os 4 fosfatídeos: FC, FE, FS e esf ingomielina) foram aproximadamente iguais, com os níveis de cada um destes quatro compostos aumentados em cerca de 20%. Assim, as proporções dos 4 fosfolípideos estruturais nas membranas foram mantidas. Assim sendo, a massa da membrana foi aumentada sem romper a estrutura e a função normais da membrana. Esses resultados mostram que as composições da presente invenção melhoram e reforçam a função cerebral.

Claims (39)

1. "MÉTODOS DE USO DE COMPOSIÇÕES CONTENDO CDP- COLINA", compreendendo um método para melhorar a memória, aprendizagem, ou cognição em um indivíduo que tem Mal de Alzheimer ou outro distúrbio de memória relacionado com a idade, caracterizado por compreender a administração ao mencionado indivíduo, de uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando dessa forma a memória, o aprendizado ou cognição em um indivíduo que tem Mal de Alzheimer ou um outro distúrbio de memória relacionado com a idade.
2. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pela mencionada CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma ser capaz de elevar o nível de uma uridina ou de um fosfato de uridina, no mencionado indivíduo.
3. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pela mencionada composição compreender um ácido graxo poli-insaturado.
4. "MÉTODOS DE USO DE COMPOSIÇÕES CONTENDO CDP- COLINA", compreendendo um método para melhorar uma transmissão sináptica em um indivíduo que tem Mal de Alzheimer ou um outro distúrbio de memória relacionado com a idade, caracterizado por compreender a administração ao mencionado indivíduo de uma composição contendo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, melhorando dessa forma, uma transmissão sináptica em um indivíduo que tem Mal de Alzheimer ou um outro distúrbio de memória relacionado com a idade.
5. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 4, caracterizados pela mencionada CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, ser capaz de aumentar o nível de uma uridina ou de um fosfato de uridina no dito indivíduo.
6. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 4, caracterizados pela mencionada composição incluir ainda um ácido graxo poli-insaturado.
7. "MÉTODOS DE USO DE COMPOSIÇÕES CONTENDO CDP- COLINA", compreendendo um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula do cérebro ou célula neural de um indivíduo para sintetizar um neurotransmissor, em que o mencionado indivíduo tem Mal de Alzheimer ou um outro distúrbio de memória relacionado com a idade, caracterizado pelo fato de compreender a administração, ao mencionado indivíduo de uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a capacidade de uma célula do cérebro ou célula neural de um indivíduo, para sintetizar um neurotransmissor.
8. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 7, caracterizados pelo dito neurotransmissor ser uma acetilcolina.
9. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 7, caracterizados pela mencionada CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, ser capaz de elevar o nível de uma uridina ou de um fosfato de uridina, no mencionado indivíduo.
10. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 7, caracterizados pela mencionada composição incluir ainda um ácido graxo poli-insaturado.
11. "MÉTODOS DE USO DE COMPOSIÇÕES CONTENDO CDP- COLINA", compreendendo um método para aumentar ou intensificar a capacidade de uma célula do cérebro ou uma célula neural de um indivíduo para, repetidamente, liberar uma quantidade eficaz de um neurotransmissor em uma sinapse, em que o mencionado indivíduo possui Mal de Alzheimer ou um outro distúrbio de memória relacionado com a idade, caracterizado pelo fato de compreender a administração, ao dito indivíduo, de uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a capacidade de uma célula do cérebro ou célula neural de um indivíduo para repetidamente liberar uma quantidade eficaz de um neurotransmissor em um sinapse.
12. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 11, caracterizados pelo fato de que o mencionado neurotransmissor é uma acetilcolina.
13. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 11, caracterizados pela mencionada CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, ser capaz de elevar o nivel de uma uridina ou de um fosfato de uridina, no mencionado indivíduo.
14. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 11, caracterizados pela mencionada liberação ocorrer após a estimulação de um neurônio.
15. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 11, caracterizados pela mencionada composição incluir ainda um ácido graxo poli-insaturado.
16. "MÉTODOS DE USO DE COMPOSIÇÕES CONTENDO CDP- COLINA", compreendendo um método para estimular ou intensificar a produção de uma fosfatidilcolina por uma célula do cérebro ou uma célula neural de um indivíduo, em que o mencionado indivíduo tem Mal de Alzheimer ou um outro distúrbio de memória relacionado com a idade, caracterizado pelo fato de compreender a administração, ao dito indivíduo, de uma composição que contém uma CDP-colina, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, estimulando ou intensificamdo, dessa forma, a produção de uma fosfatidilcolina por uma célula do cérebro ou uma célula neural de um indivíduo.
17. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 16, caracterizados pela dita célula do cérebro ou célula neural ser recentemente diferenciada.
18. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 16, caracterizados pelo nível da mencionada fosfatidilcolina ser aumentado em uma membrana dendrítica da dita célula do cérebro ou de uma célula neural.
19. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 16, caracterizados pelo nível da dita fosfatidilcolina ser aumentado em uma membrana axonal da dita célula do cérebro ou de uma célula neural.
20. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 16, caracterizados pela mencionada CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, ser capaz de elevar o nível de uma uridina ou de um fosfato de uridina, no mencionado indivíduo.
21. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 16, caracterizados pela dita composição compreender ainda um ácido graxo poli-insaturado.
22. "MÉTODOS DE USO DE COMPOSIÇÕES CONTENDO CDP- COLINA", compreendendo um método para aumentar no cérebro de um indivíduo, o nível de um fosfolipídeo selecionado de fosfatidil- colina (FC), fosfatidil-etanolamina (FE), fosfatidil-serina (FS) , e fosfatidil-inositol (FI) , em que o dito indivíduo tem Mal de Alzheimer ou um outro distúrbio de memória relacionado com a idade, o método caracterizado pelo fato de compreender a administração, ao dito indivíduo, de uma composição contendo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando, dessa forma, no cérebro de um indivíduo, o nível de um fosfolipídeo selecionado de FC, FE, FS, e FI.
23. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 22, caracterizados pela dita CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, ser capaz de elevar o nível de uma uridina ou de um fosfato de uridina, no mencionado indivíduo.
24. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 22, caracterizados pela mencionada composição compreender ainda um ácido graxo poli-insaturado.
25. "MÉTODOS DE USO DE COMPOSIÇÕES CONTENDO CDP- COLINA", compreendendo um método para aumentar ou intensificar a produção de uma membrana no cérebro de um indivíduo, em que o mencionado indivíduo tem Mal de Alzheimer ou um outro distúrbio de memória relacionado com a idade, o método sendo caracterizado pelo fato de compreender a administração, ao dito indivíduo, de uma composição contendo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, aumentando ou intensificando, dessa forma, a produção de uma membrana do cérebro de um indivíduo.
26. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 25, caracterizados pela dita CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, ser capaz de aumentar o nível de uma uridina ou de um fosfato de uridina, no mencionado indivíduo.
27. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pela dita composição compreender ainda um ácido graxo poli-insaturado.
28. "MÉTODOS DE USO DE COMPOSIÇÕES CONTENDO CDP- COLINA", compreendendo um método para estimular ou intensificar um crescimento de neurito de uma célula neural de um indivíduo, em que o mencionado indivíduo tem Mal de Alzheimer ou um outro distúrbio de memória relacionado com a idade, caracterizado pelo fato de compreender a administração, ao dito indivíduo, de uma composição que contém uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, estimulando ou intensificando, desse modo, o crescimento de neurito de uma célula neural de um indivíduo.
29. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 28, caracterizados pela mencionada CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma ser capaz de aumentar o nível de uma uridina ou de um fosfato de uridina, no mencionado indivíduo.
30. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 28, caracterizados pela dita composição compreender ainda ácido graxo poli-insaturado.
31. "MÉTODOS DE USO DE COMPOSIÇÕES CONTENDO CDP- COLINA", compreendendo um método para estimular ou intensificar uma ramificação de neuritos da célula neural de um indivíduo, em que o mencionado indivíduo tem Mal de Alzheimer ou um outro distúrbio de memória relacionado com a idade, o método sendo caracterizado pelo fato de compreender a etapa de administrar ao dito indivíduo, uma composição contendo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, estimulando ou intensificando, dessa forma, a ramificação de neuritos da célula neural de um indivíduo.
32. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 31, caracterizados pela dita CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, ser capaz de aumentar o nível de uma uridina ou de um fosfato de uridina no dito indivíduo.
33. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 31, caracterizados pela dita composição incluir ainda um ácido graxo poli-insaturado.
34. "MÉTODOS DE USO DE COMPOSIÇÕES CONTENDO CDP- COLINA", compreendendo um método para promover a reparação de uma célula neural lesada, de um indivíduo, em que o mencionado indivíduo tem Mal de Alzheimer ou um outro distúrbio de memória relacionado com a idade, o método sendo caracterizado pelo fato de compreender a etapa de administrar ao dito indivíduo uma composição contendo uma CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, promovendo o reparo de uma célula neural lesada de um indivíduo.
35. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 34, caracterizados pela dita CDP-colina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, ser capaz de aumentar o nível de uma uridina ou de um fosfato de uridina no dito indivíduo.
36. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 34, caracterizados pela dita composição incluir ainda um ácido graxo poli-insaturado.
37. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 34, caracterizados pelo fato de que a produção de uma membrana é estimulada ou intensificada na mencionada célula neural.
38. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 34, caracterizados pela dita célula neural lesada ter um axônio danificado, em que o mencionado axônio danificado é curado pelo dito método.
39. "MÉTODOS", de acordo com a reivindicação 34, caracterizados pela produção de uma membrana ser estimulada ou intensificada no oligodendrócito produtor de mielina adjacente à dita célula neural.
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