BRPI0715448A2 - Compostos de ligação heterocíclicos fxr, composição farmacêutica, uso do composto e método para preparar o composto - Google Patents

Compostos de ligação heterocíclicos fxr, composição farmacêutica, uso do composto e método para preparar o composto Download PDF

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BRPI0715448A2
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Ulrich Deuschle
Ulrich Abel
Andreas Schulz
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Description

I / 169 "COMPOSTOS DE LIGAÇÃO HETEROCÍCLICOS FXR , COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, USO DO COMPOSTO E MÉTODO PARA PREPARAR O COMPOSTO"
A presente invenção diz respeito aos compostos que se
ligam ao receptor NR1H4 (FXR) e agem como agonistas ou agonistas parciais do receptor NR1H4 (FXR). A invenção ainda diz respeito ao uso dos compostos para a preparação de um medicamento para o tratamento de doenças e/ou de condições, 10 através da ligação do dito receptor nuclear pelos ditos compostos, e para um processo para a síntese dos ditos compostos.
Organismos multicelulares são dependentes de mecanismos 15 avançados de transferência de informação entre as células e os compartimentos do corpo. A informação que é transmitida pode ser altamente complexa e pode resultar na alteração dos programas genéticos envolvidos na diferenciação celular, proliferação, ou reprodução. Os sinais, ou hormônios, são 20 muitas vezes moléculas de baixo peso molecular, como peptídeos, ácidos graxos, ou derivados de colesterol.
Muitos destes sinais produzem, em último caso, seus efeitos por alteração na transcrição de genes específicos. Um 25 grupo bem-estudado de proteínas que medeiam uma resposta celular para uma variedade de sinais é a família de fatores de transcrição conhecidos como receptores nucleares, designados muitas vezes como "NR". Os membros deste grupo incluem receptores de hormônios esteróides, vitamina D, ecdisona, ácido retinóico cis e trans, hormônio tireoidiano, ácidos biliares, derivados de colesterol, ácidos graxos (e outros proliferadores peroxisomais), bem como os chamados 5 receptores órfãos, proteínas que são estruturalmente semelhantes aos outros membros deste grupo, mas para as quais não há ligantes conhecidos. Receptores órfãos podem ser indicativos de percursos de sinalização desconhecidos na célula ou podem ser receptores nucleares que funcionam sem 10 ativação do ligante. A ativação da transcrição de alguns desses receptores órfãos podem ocorrer na ausência de um ligante exógeno e/ou através de percursos de transdução de sinal, originários da superfície celular (Mangelsdorf D. et al. "The nuclear receptor superfamily: the second decade", 15 Cell 1995, 83 (6), 835-839; R Evans "The nuclear receptor superfamily: a rosetta stone for physiology", Mol. Endocrinol. 2005, 19 (6), 1429-1438).
Em geral, três domínios funcionais têm sido definidos em 20 NRs. Um domínio amino terminal que seja para ter algumas funções reguladoras. Um domínio de ligação de DNA, adiante designado "DBD", geralmente compreende dois elementos zinco e reconhece um determinado Elemento de Resposta Hormonal, adiante designado "HRE" dentro dos promotores de genes 25 responsivos. Resíduos de aminoácidos específicos no "DBD" foram mostrados para conferir especificidade de ligação da seqüência de DNA (M. Schena "Mammalian glucocorticoid receptor derivatives enhance transcription in yeast", Science 1988, 241 (4868), 965-967). Um domínio ligante de ligação, adiante designado "LBD", está na região carboxi-terminal do NRs conhecido.
Na ausência do hormônio, o LBD parece interferir com a
interação do DBD com seu HRE. A ligação hormonal parece resultar em uma mudança conformacional no NR e, assim, abrir esta interferência (A. Brzozowski et al. "Molecular basis of agonism and antagonism in the oestrogen receptor" Nature 10 1997, 389 (6652), 753-758). 0 NR sem o LBD constitutivamente ativa a transcrição, mas a um nivel baixo.
Coativadores ou ativadores transcricionais são propostos como ponte entre os fatores de transcrição de seqüência especifica, o maquinário de transcrição basal, e ainda para influenciar a estrutura da cromatina de uma célula alvo. Várias proteínas como SRC-1, ACTRl e Gripi interagem com NRs em um ligante de forma reforçada (Heery D. et al. "A signature motif in transcriptional co-activators mediates binding to nuclear receptors" Nature 1997, 387 (6634), 733- 6.; Heinzel T. et al. "A complex containing N-CoR, mSin3 and histone deacetylase mediates transcriptional repression" Nature 1997, 387 (6628), 16-17; K. Nettles, G. Greene "Ligand control of coregulator recruitment to nuclear receptors" Annu. Rev. Physiol. 2005, 67, 309-33) .
Moduladores de receptores nucleares como hormônios esteróides afetam o crescimento e a função de células especificas através da ligação aos receptores intracelulares e formando complexos ligantes-receptor nuclear. Complexos hormônio-receptor nuclear então interagem com um elemento de resposta hormonal (HRE) na região de controle de genes 5 específicos e alteram a expressão de genes específicos (A. Aranda, A. Pascual "Nuclear hormone receptors and gene expression" Physiol. Rev. 2001, 81 (3), 1269-1304).
0 Receptor Alfa Farnesoid X (a seguir também frequentemente referido como NR1H4 quando se refere ao receptor humano) é um receptor nuclear protótipo do tipo 2 que ativa genes ligantes sobre a região promotora de genes alvo em um modo heterodimérico com receptor retinóide X (B. Forman et al. "Identification of a nuclear receptor that is activated by farnesol metabolites" Cell 1995, 81 (5), 687- 693). Os ligantes fisiológicos relevantes de NR1H4 são ácidos biliares (D. Parks et al. "Bile acids: natural ligands for an orphan nuclear receptor" Science 1999, 284 (5418), 1365-1368; Makishima M. et al. "Identification of a nuclear receptor for bile acids" Science 1999, 284 (5418), 1362-1365). 0 mais potente é o ácido quenodeoxicólico (CDCA), que regula a expressão de vários genes que participam da homeostase dos ácidos biliares. 0 Famesol e derivados, juntamente chamados farnesoides, são originalmente descritos para ativar o ortólogo em alta concentração em rato, mas eles não ativam o receptor humano ou do camundongo. 0 FXR é expresso no figado, intestino delgado, cólon, ovário, glândula adrenal e no rim. Além do controle da expressão gênica intracelular, o FXR parece estar também envolvido na sinalização parácrina e endócrina (Holt J. et al. "Definition of a novel growth factor-dependent signal cascade for the suppression of bile acid biosynthesis" Genes Dev. 2003, 17 (13), 1581-91; lnagaki 5 T. et al. "Fibroblast growth factor 15 functions as an enterohepatic signal to regulate bile acid homeostasis" Cell Metab. 2005, 2 (4), 217-225).
Existe uma publicação que propõe um impacto direto da ativação de FXR na sobrevivência de microorganismos infecciosos, como bactérias ou parasitas protozóicos através da regulação do destino lisossomal/fator de sobrevivência Taco-2 nos macrófagos (P. Anand et al. "Downregulation of TACO gene transcription restricts mycobacterial entry/survival within human macrophages" FEMS Microbiol. Lett. 2005, 250 (1), 137-144). Isto poderá abrir caminho a novos estudos que avaliem a adequação dos FXR para atuar como droga alvo para o tratamento de infecções bacterianas intracelulares ou parasitárias como a Tuberculose, Lepra, Leishmaniose ou Trypanosomíase, por exemplo, Doença de Chagas.
Compostos moleculares pequenos que agem como moduladores de FXR têm sido divulgados nas seguintes publicações:
WO 2004/048349, WO 2003/015771 e WO 2000/037077. Outras pequenas moléculas de moduladores FXR foram recentemente revistas (RC Buijsman et al. "Non-Steroidal Steroid Receptor Modulators" Curr. Med. Chem. 2005, 12, 1017 - 1075). Muitos dos fracassos dos candidatos a droga em programas de desenvolvimento são atribuídos às suas propriedades farmacocinéticas não desejáveis, como ti/2 demasiadamente longo ou demasiadamente curto, má absorção, e extensivo 5 metabolismo de primeira passagem. Em um estudo, foi relatado que dos 319 candidatos a nova droga investigados em humanos, 77 (40%) dos 198 candidatos foram retirados devido a graves problemas farmacocinéticos (R. Prentis et al. "Pharmaceutical innovation by seven UK-owned pharmaceutical companies (1964- 10 1985)" Br. J. Clin. Pharmacol. 1988, 25, 387-396). Esta alta taxa de reprovação ilustra a importância da farmacocinética na descoberta e no desenvolvimento de drogas. Para garantir o sucesso do desenvolvimento de uma droga, é essencial que um candidato a fármaco tenha uma boa bíodisponibilidade e um 15 desejável ti/2. Portanto, uma estimativa precisa dos dados farmacocinéticos e um bom entendimento dos fatores que afetam a farmacocinética vão guiar a representação da droga (J. Lin, A. Lu "Role of pharmacokinetics and Metabolism in Drug Discovery and Development" Pharmacol. Rev. 1997, 49 (4), 404- 20 449) . Fatores quimicamente modificáveis que influenciam a absorção e a eliminação da droga são discutidos a seguir.
Alguns parâmetros fisicoquimicas e de ADME pertinentes incluem, mas não estão limitados a: solubilidade aquosa, IogD, permeabilidade PAMPA, permeabilidade Caco-2, ligação às proteínas plasmáticas, estabilidade microssomal e estabilidade de hepatócitos. Solubilidade aquosa pobre pode limitar a absorção de compostos nas vias do trato gastrintestinal (GI), resultando numa redução da biodisponibilidade oral. Poderão ser também necessárias estratégias de formulação nova e,
consequentemente, um aumento dos custos e da demora. Além disso, a solubilidade do composto pode afetar outros ensaios in vítro. Solubilidade aquosa pobre é uma característica indesejável, e é o maior problema fisico-quimico que dificulta a atividade de drogas orais (C. A. Lipinski "Drug- 10 Iike properties and the causes of poor solubility and poor permeability", J. Pharmacol. Toxícol. Methods 2000, 44, 235- 249) .
A lipofilia é um fator determinante do comportamento farmacocinético de drogas. Ela pode influenciar na distribuição dos tecidos, absorção e nas características obrigatórias de uma droga, bem como sendo um fator importante na determinação da solubilidade de um composto. 0 IogD (coeficiente de distribuição) é usado como uma medida da lipofilia. Um dos métodos mais comuns para a determinação desse parâmetro é através da medição da partição de um composto entre um solvente orgânico (normalmente octanol) e um tampão aquoso. Uma ótima faixa para lipofilia tende a ser, se o composto tem um valor de IogD entre 0 e 3. Normalmente, estes compostos têm um bom equilíbrio entre a solubilidade e a permeabilidade e este intervalo tende a ser ideal para a absorção oral e a permeação na membrana celular. Compostos hidrofílicos (IogDcO), normalmente são altamente solúveis mas apresentam baixa permeabilidade através do trato gastrintestinal ou barreira hematoencefálica. Compostos altamente lipofilicos (logD>5) apresentam problemas com a instabilidade metabólica, alta ligação com as proteínas 5 plasmáticas e baixa solubilidade que leva a uma má e variável absorção oral (L. Di, E. Kerns "Profiling drug-like properties in discovery research" Curr. Opin. Chem. Biol. 2003, 7, 402-408).
A permeabilidade da droga através de monocamadas
celulares ou membranas artificiais correlaciona bem com a permeabilidade intestinal e a biodisponibilidade oral. Drogas com baixa permeabilidade na membrana, ou seja, baixa lipofilia, geralmente são absorvidas lentamente a partir da 15 solução no estômago e no intestino delgado. Sabe-se que a taxa e a extensão da absorção em todo o trato intestinal é crítica, se uma droga está para ser entregue por via oral. A permeabilidade da droga não pode ser prevista com precisão por fatores físico-químicos sozinhos, porque há muitos 20 percursos de transporte de drogas. Um modelo baseado em célula humana geralmente aceito, a linha celular do adenocarcinoma do cólon humano (Caco-2), ajuda a prever a permeabilidade intestinal (A. M. Marinho et al. "Validation of the 96-well Caco-2 cell culture model for high-throughput 25 permeability and assessment of discovery compounds", Int. J. Pharmaceutics 2005, 297, 235-241). Este ensaio é comumente empregado durante o início da descoberta, em especial nos que levam a optimização. Um novo modelo in vitro, conhecido como ensaio da permeabilidade da membrana artificial paralela (PAMPA) classifica os compostos em taxas únicas de difusão passiva. 0 PAMPA é cada vez mais utilizado como tela de primeira linha de permeabilidade durante a condução do perfil 5 (F. Wohnsland, B. Faller "High-throughput Permeability pH Profile and High-throughput Alkane/Water Log P With Artificial Membranes", J. Med. Chem. 2001 , 44, 923-930).
A ligação às proteínas plasmáticas (PPB) pode afetar significativamente a ação terapêutica de uma droga. Ela determina a extensão e a duração da ação, porque somente droga não limitada é conhecida para estar disponível para a difusão passiva no espaço extravascular ou nos sítios teciduais onde ocorram efeitos terapêuticos. 0 nível de PPB é importante para predizer o perfil farmacocinético de uma droga e determinar a dosagem oral adequada. Níveis de doses in vivo podem ser estimados a partir da fração determinada de uma droga não limitada (fu) ; um aumento da dose pode ser necessário se uma droga é altamente ligada ao plasma (Y. Kwon "Handbook of essencial pharmacokinetics, pharmacodynamics and drug metabolism for industrial scientists" Springer Verlag 2001) .
Modelos in vitro para predizer o metabolismo de compostos se tornaram adjuntos aceitos em experimentação animal. Modelos recentes de metabolismo de drogas ajudam a prever a estabilidade de um composto metabólico e existem várias abordagens para fazê-los. As fontes de enzima nestes estudos são de sistemas derivados de ratos ou humanos que consistem de microssomas hepáticos e hepatócitos. Microssomas contêm todo o complemento das enzimas oxidativas de fase I, mas não têm uma membrana celular intacta. Além disso, 5 microssomas exigem a adição de um co-fator para a incubação. Hepatócitos são mais representativos na situação in vitro, porque eles contêm uma membrana celular e não exigem co- fatores adicionais. Hepatócitos contêm enzimas para ambos metabolismos da fase I (oxidação, redução e/ou hidrólise do 10 composto teste) e da fase II (conjugação de compostos teste ou metabólitos da fase I) . A estabilidade microssomal é frequentemente utilizada como um painel primário do início do processo de descoberta da droga. 0 ensaio de estabilidade dos hepatócitos é utilizado como um painel secundário para 15 compostos mais favoráveis descobertos no primeiro painel (Iwatsubo T. et al. "Prediction of in vivo drug metabolism in the human liver from in vitro metabolism data", Pharm. Ther. 1997, 73, 147-171).
Em resumo, físico-químicos favoráveis e parâmetros ADME
in vitro são pré-requisitos para um perfil farmacocinético (PK) favorável de uma droga. Obter a avaliação de dados de PK em fase inicial de novas entidades químicas é uma condição essencial para o sucesso dos estudos de farmacologia e 25 toxicologia animal. Medidas quantitativas de exposição de drogas são os principais componentes que são necessários para a boa interpretação dos estudos de eficácia pré-clínica. Dados de PK também podem ajudar no projeto ou na seleção de espécies para estudos toxicológicos pré-clinicos. Os estudos farmacocinéticos são parte dos requisitos do desenvolvimento de medicamentos reguladores e também começaram a tornar-se parte integrante do processo de descoberta de novas drogas.
5
É objeto da presente invenção fornecer novos compostos que são agonistas ou agonistas parciais de FXR exibindo propriedades fisico-quimicas superiores, ADME (absorção, distribuição, metabolismo e excreção) in vitro e/ou in vivo 10 de agonistas de FXR conhecidos e/ou farmacocinéticos superiores in vivo. Propriedades fisico-quimicas e ADME afetam a farmacocinética da droga e podem ser avaliadas por métodos in vitro.
Inesperadamente, descobrimos que compostos modulando FXR
descritos a seguir mostram parâmetros fisico e/ou ADME in vitro melhorados, resultando em propriedades farmacocinéticas avançadas, ou seja, uma biodisponibilidade superior e uma meia-vida favorável in vivo, em comparação com os compostos divulgados na arte anterior.
Como resultado, a presente invenção diz respeito aos compostos de acordo com a fórmula geral (I), que se ligam ao receptor NR1H4 (FXR) e agem como agonistas ou agonistas 25 parciais do receptor NR1H4 (FXR). A invenção ainda diz respeito ao uso dos referidos compostos para a preparação de medicamentos para o tratamento de doenças e/ou de condições, através da ligação do dito receptor nuclear pelos ditos 10
compostos. A invenção ainda descreve também um método para a
síntese dos ditos compostos. Os compostos da presente invenção mostram parâmetros físicos e/ou ADME in vitro
melhorados finalmente resultando em propriedades farmacocinéticas avançadas in vivo.
Os compostos da presente invenção são definidos pela fórmula (!) :
Rl r!
(l)
incluindo enantiômeros, diastereômeros, tautômeros, solventes e sais farmaceuticamente aceitáveis,
onde
15
R1 e R2 são independentes de cada um dos outros selecionados a partir do hidrogênio, flúor, ciano, nitro, azido, NR5R6, OR5, SR5, alquila Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6; ou R1 e R2 são juntos =0 ou =S; ou R1 e R2 podem juntos 20 formar um anel carbocíclico ou heterocíclico de 3-6 membros que pode ser saturado ou insaturado, onde cada grupo alquil, alquenyl, alquinil, cicloalquil, anel carbocíclico ou heterocíclico é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11;
25
R5 e R6 são independentes de cada um dos outros selecionados a partir do hidrogênio, alquil Ci-C6 e cicloalquil C3-C6; ou R5 e R6 juntos podem formar um anel heterocíclico saturado de 3-6 membros, onde os grupos alquil, cicloalquil e heterocíclico são não substituídos ou substituídos com um a cinco substituintes R11;
X é
r3VQ. R3viN
(X1) \WQ (χ2)
(CH2)a or (CH2).
Ç) Ç)
(R4)b (R4)b
em cada X1, X2, X4
10 R3 é hidrogênio, halogênio, ciano, nitro, azido, alquila Ci- C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil, aril, heteroaril, -NR19R20, NR19S(O)raR20, NR19C (O) OR20, NR19C(O)R20, NR19C(O)NR19R20, OR19, OC(O)R19, S(O)iR19, SO2NR19C(O)R20, S(O)mNR19R20, C(O)R19, C(O)OR20, 15 C(O)NR19R20, C(NR19)NR19R20 onde cada alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, heterociclil, aril ou heteroaril é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11;
em cada X3
20
R3 é hidrogênio, alquila Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil, aril, heteroaril, SO2R19, C(O)R19, C(O)OR19, C(O)NR19R20, onde cada alquil, alquenil,
or
or
R3v-N
\I >
\ N
' t
(X4)
(CH2)e alquinil, cicloalquil, heterociclil, aril ou heteroaril é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11;
19 20
R e R são independentes de cada um dos outros selecionados 5 a partir do hidrogênio, alquila Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6, ou R19 e R20, juntamente podem formar um anel heterocíclico ou heteroaromático de 3-7 membros, e onde os grupos alquila Ci-C6, alquenil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil e heteroaril são não 10 substituídos ou substituídos com um a cinco substituintes R11;
R4 é independentemente selecionado a partir do hidrogênio, halogênios, ciano, nitro, azido, alquila C1-C6, alquenil C2- C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil, aril, 15 heteroaril, NR15R16, NR15SO2R16, NR15C(O)OR16, NR15C(O)R16, NR15C(O)NR15R16, NR15C (NCN) NR15R16, OR15, OC(O)R15, S(O)iR15, SO2NR15C (O) R16, S(O)mNR15R16, SC(O)R15, C(O)R15, C(O)OR15, C(O)NR15R16, C(O)NHOR15, C(O)SR15, C(NR15)NR15R16 onde cada alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, heterociclil, aril 20 ou heteroaril é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11;
e mais dois substituintes R4 podem ser tomados em conjunto com o átomo para formar um carbocíclico de 4-7 membros, aril, heteroaril ou anel heterocíclico, cada um dos quais é substituído ou não substituído com um a cinco substituintes R11; R15 e R16 são independentes uns dos outros selecionados a partir do hidrogênio, alquila Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6; ou R15 e R16 juntos podem formar um anel heterocíclico ou heteroaromático de 3-7 membros, e onde 5 os grupos alquila Ci-C6, alquenil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil e heteroaril são não substituídos ou substituídos com um a cinco substituintes R11;
R11 é independentemente selecionado de hidrogênio, halogênio, 10 ciano, nitro, azido, =0, =S, alquila Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil, aril, heteroaril, NR12R13, NR12S(O)mR13, NR12C(O)OR13, NR12C(O)R13, NR12C(O)NR12R13, NR12C (NCN)NR12R13, =NOR12, -OR12, OC(O)R12, S(O)R12, SO2NR12C(O)R13, S(O)mNR12R13, SC(O)R12, C(O)R12, C(O)OR12, 15 C(O)SR12, C(O)NR12R13, C(O)NOR12, e C(NR12)NR12R13;
R12 e R13 são independentes uns dos outros selecionados a partir do hidrogênio, alquila C1-C6, ou cicloalquil C3-C6, onde cada alquil ou cicloalquil pode ser não substituído ou 20 substituído com um a cinco fluorinas e/ou um ou dois substituintes selecionados de 0H, OCH3, OCH2F, OCHF2, OCF3, =0, SCF3, NH2, NHCH3 e N(CH3)2; ou R12 and R13 podem ser tomados em conjunto com o átomo para formar um anel carbocíclico de 4 a 6 membros, heteroaril ou heterocíclico, cada um dos quais 25 pode ser não substituído ou substituído com um a cinco fluorinas e/ou um a dois substituintes selecionados de 0H, OCH3, -OCH2F, OCHF2, OCF3, =0, SCF3, NH2, NHCH3 e N(CH3)2; Q é O ou NR7;
R7 é hidrogênio, alquila C1-C3, ou cicloalquil C3-C5, onde cada alquil ou cicloalquil é não substituído ou substituído com átomos com 1-5 fluorinas;
T é -0-, -S-, -N (R14)-, CH2 ou CF2;
R14 é hidrogênio, alquila Ci-C3, ou cicloalquil C3-C5, onde cada alquil ou cicloalquil é não substituído ou substituído com átomos com 1-5 fluorinas;
Y é selecionado de Y1 a Y6
R8 é independentemente selecionado de hidrogênio, halogênio, ciano, nitro, azido, alquila C1-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil, aril, heteroaril,
NR12R13, NR12S (O)mR13, NR12C(O)OR13, NR12C(O)R13, NR12C(O)NR12R13, OR12, OC(O)R12, S(O)iR12, SO2NR12C(O)R13, S(O)mNR12R13, C(O)R12, C(O)OR12, C(O)NR12R13 e C(NR12)NR12R13 onde cada alquil,
15 alquenil, alquinil, cicloalquil, heterociclil, aril ou heteroaril é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11;
L é uma ligação, -C (0) N (R10)-, -S (0) mN (R10)-, -G-N (R10) -, - N(R10)C(O)-, -N(R10)S(O)m-, -N(R10)-G-, -G-S-, -G-0-, -S-G-, ou 0-G; ou L é
10
AC°>\ /'N^y\ or Α^νΛ
N-N N=N N=N
R10 é hidrogênio, alquila C1-C3, ou cicloalquil C3-C5, onde cada alquil ou cicloalquil é não substituído ou substituído com átomos com 1-5 fluorinas;
G é metileno ou etileno o qual é não substituído ou substituído com átomos com 1-5 fluorinas;
Z é fenil-A-R9, piridil-A-R9, pirimidil-A-R9 ou piridazil-A- R9, onde fenil, piridil, pirimidil ou piridazil é não 20 substituído ou substituído com um, dois ou três grupos selecionados de halogênio, alquila Ci-C4, cicloalquil C3-C5, alquenil C2-C4, alquinil C2-C4, ciano, OH, OCH3, OCH2F, OCHF2, OCF3, SCF3, NH2, NHCH3 e N(CH3)2;
A é uma ligação, CH2, CHCH3, C(CH3)2 ou CF2; R9 é hidrogênio, COOR17, CONR17R18, C(O)NHSO2R17, SO2NHC(O)R17, S(O)mR17, C(NR17)NR17R18, ou tetrazol o qual é conectado a via A do átomo C;
R17 e R18 são independentes uns dos outros selecionados a partir do hidrogênio, alquila Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, e cicloalquil C3-C6; ou R17 e R18 juntos podem formar um anel heterocíclico de 3-7 membros ou heteroaromático, onde cada alquil, alquenil, cicloalquil, heterociclil e heteroaril 10 são não substituídos ou substituídos com um a cinco substituintes R11;
a é 0 ou 1; b é 1 , 2, ou 3;
c é 1 ou 2 ;
i é 0, 1 , ou 2; e m é 1 ou 2.
Preferencialmente, R1 e R2 são independentes uns dos outros e 20 selecionados a partir do hidrogênio, flúor e alquila Ci-6 onde o grupo alquílico é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11; ou R1 e R2 são juntos = 0 ou = S. Mais preferivelmente, R1 e R2 são independentes uns dos outros e selecionados a partir de hidrogênio e metil.
25
É preferível que, em cada X1, X2 e X4 R3 é hidrogênio, alquila Ci-C6, NR19R20 ou cicloalquil C3-C6 onde cada alquil ou cicloalquil é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11, de preferência um, dois ou três substituintes R11, e que em cada X3 R3 é hidrogênio, alquila Ci-6 ou cicloalquil C3-C6, onde cada alquil ou cicloalquil é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11, de preferência um, dois ou três substituintes R11.
Além disso, é preferível que R19 e R20 são independentes uns dos outros e selecionados a partir do hidrogênio, alquila Ci- C6 e cicloalquil C3-C6. Em um experimento alternativo, R19 e 10 R20 preferencialmente formam em conjunto um anel heterocíclico ou heteroaromático de 3-7 membros. Os grupos alquil, cicloalquil, heterocíclico ou heteroaromático são não substituídos ou substituídos com um a cinco substituintes R11, de preferência um, dois ou três substituintes R11.
15
Em um experimento preferido, Q é 0 ou NH.
Em cada um dos X1 a X4, R4 é preferencialmente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, alquila Ci_6, alquil O-Ci-C6, 20 e CN, em que cada grupo alquílico é não substituído ou substituído por um a cinco substituintes R11, de preferência um, dois ou três substituintes R11. Mais preferivelmente, R4 é selecionado a partir do hidrogênio, halogênios e alquila Ci-6 onde cada grupo alquílico é não substituído ou substituído 25 por um, dois ou três substituintes R11.
0 índice b preferencialmente é 1 ou 2; mais preferencialmente b é 2. O radical R4 pode estar localizado em qualquer posição do anel fenil. Preferencialmente, R4 está localizado na posição
2- e/ou 4- e/ou 6-fenil do anel. Mais preferencialmente, R4 está localizado na posição 2- e 6-fenil do anel.
5
Em um experimento preferido T é O, CH2 ou NR14 onde R14 é conforme definido acima.
Y é preferencialmente selecionado de Y1, Y2 e Y3 onde R8 e c são definidos como acima.
Preferencialmente, R8 é independentemente selecionado a partir do hidrogênio, halogênios, alquila Ci-C6, OR12, NR12R13, C(O)R12 e C(O)OR12 onde cada alquila é não substituída ou 15 substituída por um a cinco substituintes R11, de preferência um, dois ou três substituintes R11 e onde R12, R13 são definidos como acima. Mais preferivelmente, R12 e R13 são independentemente selecionados a partir do hidrogênio e alquila Ci-C6. Em uma outra concretização preferida R8 é 20 independentemente selecionado a partir do hidrogênio, halogênios, alquila C1-C6, ou alquila O-C1-C3, onde cada grupo alquílico é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11, de preferência um, dois ou três substituintes R11.
25
L é preferencialmente uma ligação, -C(0)N(R10)-, -S (O) iN (R10)-, -G-N (R10)-, ou -N(R10)-G, onde R10 é hidrogênio ou alquila C1-C6 e i é 2. É preferível que Z seja fenil-A-R9, onde fenil é não substituído ou substituído com um a três grupos selecionados de halogênio, ciano, alquila C1-4, OH, OCH3, OCH2F, OCHF2, OCF3, SCF3, NH2, NHCH3 e N(CH3)2.
5
Em uma concretização preferida, R9 é selecionado a partir de COOR17, CONH2 e CONR17R18. Nele, R17 é preferencialmente independentemente selecionado a partir do grupo constituído de alquila Ci-6 e cicloalquil C3-6 e R18 é selecionado 10 preferencialmente a partir do grupo composto de hidrogênio, alquila Ci_6 e cicloalquil C3-6 ou R17 e R18 juntos formam um anel heterocíclico de 5-6 membros. Além disso, é preferível que o grupo alquila Ci-C6 na dita concretização seja não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11 em 15 que R11 é selecionado do grupo constituído por OH, NH2,
NH (alquila Ci-C6) e N (alquila Ci-C6)2.
Em uma concretização alternativa preferida, R9 é selecionado do grupo consistindo de hidrogênio, COOH e tetrazol o qual está ligado a via A do átomo C. Mais preferivelmente, R9 é selecionado do grupo constituído por COOH e tetrazol o qual está ligado a via A do átomo C.
Compostos preferidos de fórmula (I) são os compostos em que um ou mais resíduos contidos neles têm os significados acima indicados. Entende-se, que os compostos reivindicados abrangem qualquer composto obtido através da combinação de qualquer das definições divulgadas dentro desta descrição para os diversos substituintes. No que diz respeito a todos os compostos de fórmula (I), a presente invenção inclui também todas as formas tautoméricas e esteroisoméricas, solvatos e suas misturas em todas as proporções, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Acima e a seguir, os termos empregados são, independentemente do significado, como descrito abaixo:
Aril é um grupamento aromático mono- ou policíclico com preferencialmente 6 a 20 átomos de carbono que são selecionadas a partir de fenil, bifenil, naftil, tetrahidronaftil, fluorenil, indenil e fenantrenil, mais preferencialmente fenil e naftil.
15
Heteroaril é um grupamento aromático monocíclico ou policíclico com 5 a 20 átomos de carbono com pelo menos um anel com um heteroátomo selecionado de 0, N e/ou S, ou heteroaril é um anel aromático que contém pelo menos um 20 heteroátomo selecionado de 0, N e/ou S e 1 a 6 átomos de carbono. Preferencialmente, heteroaril contém 1 a 4, mais de preferência 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de 0 e/ou N, sendo selecionados a partir de piridinil, imidazolil, pirimidinil, pirazolil, triazolil, pyrazinil, tetrazolil, 25 furil, tienil, isoxazolil, tiazolil, oxazolil, isotiazolil, pirrolil, quinolinil, isoquinolinil, indolil, benzimidazolil, benzofuranil, cinolinil, indazolil, indolizinil, ftalazinil, piridazinil, triazinil, isoindolil, pteridinil, purinil, oxadiazolil, triazolil, tiadiazolil, tiadiazolil, furazanil, benzofurazanil, benzotiopenil, benzotiazolil, benzoxazolil, quinazolinil, quinoxalinil, naftiridinil e furopiridinil. Moléculas espiro estão também incluídas no âmbito desta 5 definição. Heteroaril preferidos incluem piridinil, imidazolil, pirimidinil, pirazolil, triazolil, pirazinil, tetrazolil, isoxazolil, oxazolil, isotiazolil, oxadiazolil e triazolil.
Heterociclil é um anel saturado ou insaturado com 3-10 membros que contém pelo menos um heteroátomo selecionado a partir de 0, N e/ou S e 1 a 6 átomos de carbono. Preferencialmente, heterociclil contém 1 a 4, mais de preferência 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de 0 e/ou N. 15 Heterociclil inclui sistemas de anéis mono- e bicíclicos e é preferencialmente selecionado a partir de pirrolidinil, tetrahidrofuranil, dihidrofuranil, tetrahidrotienil,
tetrahidropiranil, dihidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioxanil, piperazinil, homopiperazinil, azetidinil, oxetanil, tietanil,
homopiperidinil, oxepanil, tiepanil, oxazepinil, diazepinil, tiazepinil, 1, 2, 3, 6-tetrahidropiridinil, 2-pirrolinil, 3-pirrolinil, indolinil, piranil-2H, piranil-4H, dioxanil, 1, 3-dioxolanil, pirazolinil, ditianil, ditiolanil,
dihidropiranil, dihidrotienil, dihidrofuranil,
pirazolidinilimidazolinil, imidazolidinil, azetidin-2-ona-l-il, pirrolidin-2-ona-l-il,
piperid-2-ona-l-il, azepan-2-ona-l-il, 3-azabicico [3.1.0] hexanil, 3-azabiciclo [4.1.0] heptanil, azabiciclo [2.2.2] hexanil, 3H-indolil e quinolizinil. Moléculas espiro estão também incluídas no âmbito desta definição.
Alquil Ci-C6 é uma fração de hidrocarbonetos saturados, ou seja, de cadeia ramificada ou alquil com 1 a 6 átomos de carbono, de preferência 1 a 4 átomos de carbono, como metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, isobutil, terc-butil, n-pentil, isopentil, neopentil ou hexil.
10
Cicloalquil C3-C6 é um anel alquil com 3-6 carbonos, tais como ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil ou ciclohexil.
Carbociclil é um sistema de anéis monocíclicos ou 15 policíclicos de 3 a 20 átomos de carbono que podem ser saturados ou insaturados. Assim, o termo "carbociclil" inclui cicloalquilas tal como acima definidas, bem como grupos carbocíclicos parcialmente insaturados, tais como ciclopentano, ciclopentadíeno ou cicloexeno.
20
Alquenil C2-C6é uma fração de hidrocarbonetos insaturados com uma ou mais ligações duplas, de preferência uma ligação dupla, ou seja, de cadeia ramificada ou alquenil com 2-6 átomos de carbono, como o vinil, alil, metalil, buten-2-il, buten-3-il, penteno-2-il, penteno-3-il, penteno-4-il,
3-metil-but-3-enil, 2-metil-but-3-enil, l-metil-but-3-enil ou hexenil. Alquinil C2-C6 é uma fração de hidrocarbonetos insaturados com uma ou mais triplas ligações, de preferência uma tripla ligação, ou seja, alquinil de cadeia reta ou ramificada com 2-6 átomos de carbono, tais como etinil, propinil, butil-2-il, butin-3-il, pentin-2-il, pentin-3-il, pentin-4-il, 2-metil-but-3-inil, l-metil-but-3-inil ou hexinil.
Halo ou halogênio é um átomo de halogênio selecionado a partir de F, Cl, Br e I, de preferência F, Cl e Br.
Formas preferidas dos compostos de acordo com a presente invenção são mostradas abaixo.
O
HC
C
O
Os compostos da presente invenção podem estar na forma de um composto pró-droga. "Composto pró-droga" significa um derivado que é convertido em um composto de acordo com a presente invenção por uma reação com uma enzima ácido gástrica ou sob uma condição fisiológica no organismo vivo, por exemplo, por oxidação, redução, hidrólise ou coisas do 5 gênero, cada uma das quais é realizada enzimaticamente. Exemplos de pró-droga são compostos, em que o grupo amino em um composto da presente invenção é acilado, alquilado ou fosforilado para formar, por exemplo, eicosanoilamino, alanilamino, pivaloiloxymetilamino ou onde o grupo hidroxila 10 é acilado, alquilado, fosforilado ou convertido para o borato, por exemplo, acetiloxi, palmitoiloxi, pivaloiloxi, succiniloxi, fumariloxi, alaniloxi ou onde o grupo carboxil é esterificado ou amidado. Estes compostos podem ser produzidos a partir de compostos da presente invenção, de acordo com 15 métodos bem conhecidos. Outros exemplos da pró-droga são compostos, em que o carboxilato de um composto da presente invenção, por exemplo, é convertido em um alquil-, aril-, colina-, amino, aciloximetilester, linolenoil-éster.
Metabólitos de compostos da presente invenção também
estão dentro do âmbito da presente invenção.
Onde há tautomerismo, como por exemplo, tautomerismo ceto-enol, dos compostos da presente invenção ou pró-drogas 25 suas podem ocorrer, de formas individuais, como por exemplo, a forma ceto e enol, estão cada uma dentro do escopo de aplicação da invenção, bem como as suas misturas em qualquer proporção. O mesmo se aplica para estereoisômeros, como por exemplo enantiômeros, isômeros cis/trans, conformes e similares.
Se desejar, isômeros podem ser separados por métodos bem 5 conhecidos na arte, por exemplo, por cromatografia líquida. 0 mesmo se aplica aos enantiômeros usando, por exemplo, fases estacionárias quirais. Adicionalmente, enantiômeros podem ser isolados, convertendo-os em diastereômeros, ou seja, acoplando com um composto auxiliar enantiomericamente puro, 10 com posterior separação dos diastereômeros resultantes e clivagem de resíduos auxiliares. Alternativamente, qualquer enantiômero de um composto da presente invenção pode ser obtido a partir da síntese estereoseletiva utilizando matérias-primas opticamente puras.
15
Os compostos da presente invenção podm estar na forma de um sal farmaceuticamente aceitável ou um solvente. O termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se aos sais preparados a partir de bases ou ácidos farmaceuticamente 20 aceitáveis não tóxicas, incluindo bases ou ácidos inorgânicos e bases ou ácidos orgânicos. No caso, os compostos da presente invenção contêm um ou mais grupos acídicos ou basídicos, a invenção também compreende seus sais toxicologicamente aceitáveis ou farmaceuticamente
correspondentes, em particular sais farmaceuticamente utilizáveis. Assim, os compostos da presente invenção que contenham grupos acídicos podem estar presentes sobre estes grupos e podem ser utilizados de acordo com a invenção, por exemplo, como sais de metais alcalinos, sais metálicos alcalinos terrosos ou sais de amônio. Exemplos mais precisos de tais sais incluem sais de sódio, sais de potássio, sais de cálcio, sais de magnésio ou sais com amônia ou aminas 5 orgânicas como, por exemplo, etilamina, etanolamina, trietanolamina ou aminoácidos. Os compostos da presente invenção que contenham um ou mais grupos básicos, isto é, grupos que podem ser protonados, podem estar presentes e podem ser utilizados de acordo com a invenção na forma de 10 seus sais adicionais com ácidos inorgânicos ou orgânicos. Exemplos de ácidos adequados incluem cloreto, brometo de hidrogênio, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido metanossulfônico, ácido p-toluenosulfônico, ácidos naftalenodisulfônico, ácido oxálico, ácido acético, ácido 15 tartárico, ácido lático, ácido salicilico, ácido benzóico, ácido fórmico, ácido propiônico, ácido piválico, ácido dietilacético, ácido malônico, ácido succínico, ácido pimélico, ácido fumárico, ácido maléico, ácido málico, ácido sulfamínico, ácido fenilpropiônico, ácido glucônico, ácido 20 ascórbico, ácido isonicotínico, ácido cítrico, ácido adípico, e outros ácidos conhecidos por um técnico no assunto. Se os compostos da presente invenção simultaneamente contêm grupos ácidos e básicos na molécula, a invenção também inclui, além das formas de sal mencionadas, sais do interior ou betaínas 25 (zwitterions). Os respectivos sais podem ser obtidos pelos métodos usuais, que são conhecidos do indivíduo competente na arte, como, por exemplo, contatando um desses ácidos ou bases orgânicos ou inorgânicos com um solvente ou dispersante, ou pela troca de ânion ou intercâmbio de cátion com outras sais. A presente invenção também inclui todos os sais dos compostos da presente invenção que, devido à baixa compatibilidade fisiológica, não são diretamente apropriados para uso em 5 produtos farmacêuticos, mas que podem ser utilizados, por exemplo, como intermediários de reações químicas ou para a preparação de sais farmaceuticamente aceitáveis.
Além disso, a presente invenção fornece composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um composto da presente invenção, ou um composto pró-droga, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvente, tal como substância ativa, juntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável.
"Composição farmacêutica" significa um ou mais
ingredientes ativos, e um ou mais ingredientes inertes que compõem o veículo, bem como qualquer produto que resulte, direta ou indiretamente, da combinação, complexação ou agregação de dois ou mais ingredientes, ou da dissociação de 20 um ou mais ingredientes, ou de outros tipos de reações ou interações de um ou mais ingredientes. Assim, a composições farmacêuticas da presente invenção abrangem qualquer composição feita pela mistura, de pelo menos, um composto da presente invenção e um veículo farmaceuticamente aceitável.
25
A composição farmacêutica da presente invenção pode também incluir um ou mais outros compostos como ingredientes ativos como um composto pró-droga ou outro modulador de receptor nuclear.
As composições são adequadas para administração oral,
retal, tópica, parenteral (inclusive por via subcutânea, intramuscular e intravenosa) , ocular (oftálmica) , pulmonar (inalação nasal ou bucal) ou nasal, embora a via mais adequada em qualquer caso dependerá da natureza e da severidade das condições a serem tratadas e da natureza da 10 substância ativa. Elas podem ser convenientemente apresentadas na forma de dosagem única e preparadas por qualquer dos métodos bem conhecidos na arte da farmácia.
Os compostos da presente invenção ligam ao receptor NR1H4 (FXR) e agem como agonistas ou agonistas parciais do receptor NR1H4 (FXR).
FXR é proposto para ser um sensor dos ácidos biliares nucleares. Como um resultado, ele modula a ambas, a produção 20 sintética de ácidos biliares no fígado e sua reciclagem no intestino (através da regulação dos ácidos biliares ligados à proteínas). Mas, além da fisiologia dos ácidos biliares, FXR parece estar envolvido na regulação de diversos processos fisiológicos que são relevantes na etiologia e no tratamento 25 de doenças tão diversas como cálculos biliares de colesterol, distúrbios metabólicos, tais como Diabetes tipo II, obesidade e dislipidemias, doenças inflamatórias crônicas, tais como doenças inflamatórias intestinais ou formas intrahepáticas crônicas de colestase e muitas outras doenças (Claudel T. et al. "The Farnesoid X receptor: a molecular link between bile acid and lipid and glucose metabolism" Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2005, 25 (10), 2020-2030; Westin S. et al. "FXR,
a therapeutic target for bile acid and lipid disorders" Mini Rev. Med. Chem. 2005, 5 (8), 719-727).
FXR regula um complexo padrão de genes de resposta no fígado. Os produtos do gene têm impacto em diversos processos 10 fisiológicos. No decurso da análise funcional dos FXR, a primeira rede reguladora que foi analisada foi a regulação da síntese dos ácidos biliares. Embora os LXRs induzam a enzima chave da conversão do colesterol em ácidos biliares, Cyp7Al, via indução do receptor nuclear regulador LRH-1, FXR reprime 15 a indução de Cyp7Al através da regulação do mRNA codificando SHP, mais um receptor nuclear que é dominante repressivo sobre LRH-1. Desde FXR liga os produtos finais dessa via, ácidos biliares primários, tais como ácido cólico (CA) ou ácido quenodeoxicólico (CDCA), pode ser considerado como um 20 exemplo de inibição de resposta do nível de expressão gênica (B. Goodwin et al. "A regulatory cascade of the nuclear receptors FXR, SHP-1, and LRH-1 represses bile acid biosynthesis" Mol. Cell 2000, 6 (3), 517-526; T. Lu et al. "Molecular basis for feedback regulation of bile acid 25 synthesis by nuclear receptors" Mol. Cell 2000, 6 (3), 507- 515). Paralelamente à repressão da síntese dos ácidos biliares através de SHP, FXR induz a uma série dos chamados transportadores ABC (para cassete de ligação de ATP) que são responsáveis pela exportação de ácidos biliares tóxicos a partir do citosol de hepatócitos para os canalículos, pequenas ramificações do dueto biliar de onde provém a bile. Esta função hepatoprotetora de FXR primeiro tornou-se 5 evidente com a análise de FXR em nocaute de camundongos (Sinai C. et al. "Targeted disruption of the nuclear receptor FXR/BAR impairs bile acid and lipid homeostasis" Cell 2000, 102 (6), 731-744), onde a sub ou superexpressão de vários transportadores ABC no fígado foram mostradas. Uma análise 10 mais detalhada revelou que a bomba de maior excreção de sal biliar é BSEP ou ABCBll (M. Ananthanarayanan et al. "Human bile salt export pump promoter is transactivated by the farnesoid X receptor/bile acid receptor" J. Biol. Chem. 2001, 276 (31), 28857-28865; Plass J. et al., "Farnesoid X receptor 15 and bile salts are involved in transcriptional regulation of the gene encoding the human bile salt export pump", Hepatology 2002, 35 (3), 589-96), bem como a principal enzima que medeia a transferência lipídica de lipoproteínas a fosfolípides, PLTP (N. Urizar et al. "The farnesoid X- 20 activated receptor mediates bile acid activation of phospholipid transfer protein gene expression" J. Biol. Chem. 2000, 275 (50), 39313-39317), e as duas principais transportadores da membrana canalicular para fosfolípideos, MRP-2 (ABCC4) (Kast H. et al. "Regulation of multidrug 25 resistance-associated protein 2 (ABCC2) by the nuclear receptors pregnane X receptor, farnesoid X-activated receptor, and constitutive androstane receptor" J. Biol. Chem. 2002, 277 (4), 2908-2915) e MDR-3 (ABCB4); L. Huang et al. "Farnesoid X receptor activates transcription of the phospholipid pump MDR3" J. Biol. Chem. 2003, 278 (51), 51085- 51090) são alvos diretos para ativação transcricional dirigida pelo ligante pela FXR (resumidos em: M. Miyata "Role 5 of farnesoid X receptor in the enhancement of canalicular bile acid output and excretion of unconjugated bile acids: a mechanism for protection against cholic acid-induced liver toxicity", J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005, 312 (2), 759-766; G. Rizzo et al. "Role of FXR in regulating bile acid 10 homeostasis and relevance for human diseases" Curr. Drug Targets Immune Endocr. Metabol. Disord. 2005, 5 (3), 289- 303) .
0 fato de FXR parecer ser o principal sensor metabólito e regulador para a síntese, a exportação e a re-circulação de ácidos biliares, sugere a utilização de ligantes FXR para induzir o fluxo de bílis e a mudança da composição de ácidos biliares para composições mais hidrofílicas. Com o desenvolvimento do primeiro ligante sintético FXR GW4064 (P. Maloney et al. "Identification of a chemical tool for the orphan nuclear receptor FXR" J. Med. Chem. 2000, 43 (16), 2971-2974; T. Willson et al. "Chemical genomics: functional analysis of orphan nuclear receptors in the regulation of bile acid metabolism" Med. Res. Rev. 2001, 21 (6) 513-22) como um instrumento complexo e ligante semi-sintético artificial de ácidos biliares alfa-6-etil-CDCA, os efeitos da superestimulação de FXR por agonistas potentes poderiam ser analisados. Foi demonstrado que ambos os ligantes induzem o fluxo biliar nos animais com dueto biliar ligado. Além disso, em adição aos efeitos coleréticos, efeitos hepatoprotetores também poderiam ser demonstrados (Pellicciari R. et al.
"6alpha-ethyl-chenodeoxycholic acid (6-ECDCA), a potent and selective FXR agonist endowed with anticholestatic activity" J. Med. Chem. 2002, 45 (17), 3569-3572; Y. Liu et al. "Hepatoprotection by the farnesoid X receptor agonist GW4064 in rat models of intra- and extrahepatic cholestasis" J. Clin. Invest. 2003, 112 (11), 1678-1687). Este efeito hepatoprotetor foi mais estreitado para um efeito anti- fibrótico que resulta da repressão de Inibidores Teciduais da Matriz-Metaloproteinase, TIMP-I e 2, na indução de depósito de colágeno determinando a Matriz Metaloproteinase-2 (MMP-2) nas células estreladas do fígado e na redução conseqüente de alfa-colágeno de mRNA e fator de crescimento transformante beta (TGF-beta) de mRNA que são ambos fatores pró-fibróticos por agonistas FXR (Fiorucci S. et al. "The nuclear receptor SHP mediates inhibition of hepatic stellate cells by FXR and protects against liver fibrosis", Gastroenterology 2004, 127 (5), 1497-1512; Fiorucci S. et al. "A farnesoid x receptor- small heterodimer partner regulatory cascade modulates tissue metalloproteinase inhibitor-1 and matrix metalloprotease expression in hepatic stellate cells and promotes resolution of liver fibrosis" Pharmacol. Exp. Ther. 2005, 314 (2), 584- 595) . A atividade anti-fibrótica de FXR é pelo menos parcialmente mediada pela indução de PPARgamma, um novo receptor nuclear, com o qual a atividade anti-fibrótica está associada (Fiorucci S. et al. "Cross-talk between farnesoid- X-receptor (FXR) and peroxisome proliferator-activated receptor gamma contributes to the antifibrotic activity of FXR ligands in rodent models of liver cirrhosis" J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005, 315 (1), 58-68; A. Galli et al.
"Antidiabetic thiazolidinediones inhibit collagen synthesis and hepatic stellate cell activation in vivo and in vitro" Gastroenterology 2002, 122 (7), 1924-1940; I.Pineda Torra et al., "Bile acids induce the expression of the human peroxisome proliferator-activated receptor alpha gene via 10 activation of the farnesoid X receptor" Mol. Endocrinol. 2003, 17 (2), 259-272). Além disso, a atividade anti- colestática foi demonstrada em modelos animais com dueto biliar ligado, bem como em modelos animais de colestase induzida por estrogênio (Fiorucci S. et al. "Protective 15 effects of 6-ethyl chenodeoxycholic acid, a farnesoid X receptor ligand, in estrogen-induced cholestasis" J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005, 313 (2), 604-612).
Estudos genéticos demonstraram que, em formas 20 hereditárias de colestase (Colestase Intrahepática Progressiva Familiar =PFIC, Tipo I-IV), a localização nuclear de FXR por de si mesmo é reduzida em conseqüência de uma mutação no gene FICl (em PFIC tipo I, também chamado Doença de Byler) (F. Chen et al. "Progressive familial intrahepatic 25 cholestasis, type 1, is associated with decreased farnesoid X receptor activity" Gastroenterology. 2004, 126 (3), 756-64; Alvarez L. et al. "Reduced hepatic expression of farnesoid X receptor in hereditary cholestasis associated to mutation in ΑΤΡ8Β1" Hum. Mol. Genet. 2004; 13 (20), 2451-60) ou os níveis do gene alvo de FXR que codificam a bomba de exportação de fosfolipídeo MDR-3 são reduzidos (em PFIC Tipo III). Tomados em conjunto, há um crescimento de evidências que compostos 5 ligantes FXR irão demonstrar utilidade clínica substancial no regime terapêutico de condições colestáticas crônicas, como Cirrose Biliar Primária (PBC) ou Colangite Esclerosante Primária (PSC) (revisto em: G. Rizzo et al. Curr. Drug Targets Immune Endocr. Metabol. Disord. 2005, 5 (3), 289-303; 10 G. Zõllner "Role of nuclear receptors in the adaptive response to bile acids and cholestasis: pathogenetic and therapeutic considerations" Mol. Pharm. 2006, 3 (3), 231-51, S. Cai et al. "FXR: a target for cholestatic syndromes?" Expert Opin. Ther. Targets2006, 10 (3), 409-421).
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0 profundo impacto que a ativação de FXR tem sobre o metabolismo dos ácidos biliares e a excreção não é apenas relevante para síndromes colestáticas, mas ainda mais diretamente para uma terapia contra a constituição de litíase 20 biliar. Litíase biliar de colesterol se formam devido a baixa solubilidade do colesterol que é ativamente bombeado para fora da célula hepática para dentro da luz dos canalículos. É
o percentual relativo do conteúdo dos três principais componentes, ácidos biliares, fosfolipídios e colesterol 25 livre que determina a formação de micelas misturadas e a solubilidade aparente do colesterol livre na bile. Os polimorfismos de FXR mapeiam como local de trato quantitativo como um fator que contribui para a doença de litíase biliar (H. Wittenburg "FXR and ABCG5/ABCG8 as determinants of cholesterol gallstone formation from quantitative trait locus mapping in mice", Gastroenterology 2003, 125 (3), 868-881). Usando a ferramenta FXR sintética de compostos GW4064, 5 poderia ser demonstrado que a ativação do FXR leva a uma melhoria do índice de Saturação de Colesterol (=CSI), e diretamente a uma eliminação de cálculos biliares em formação
I em camundongos suscetíveis a cálculos C57L onde o tratamento
medicamentoso em camundongos nocauteados com FXR não mostra 10 efeito na formação de litíase biliar (A. Moschetta et al. "Prevention of cholesterol gallstone disease by FXR agonists in a mouse model" Nature Medicine 2004 de 10 (12), 1352- 1358) .
Estes resultados qualificam FXR como um bom alvo para o
desenvolvimento de pequenas moléculas agonistas que podem ser usadas para prevenir a formação de cálculos biliares de colesterol ou para evitar a re-formação de cálculos biliares após a remoção cirúrgica ou litotripsia tipo Shockwave 20 (discutido em: S. Doggrell "New targets in and potential treatments for cholesterol gallstone disease" Curr. Opin. Investig. Drugs 2006, 7 (4), 344-348).
Desde a descoberta dos primeiros agonistas sintéticos de 25 FXR e sua administração para os roedores tornou-se evidente que FXR é um regulador chave de triglicérides do soro (P. Maloney et al. J. Med. Chem. 2000, 43 (16), 2971-2974; T. Willson et al. Med. Res. Rev. 2001, 21 (6), 513-22). Ao longo dos últimos seis anos acumulando provas, foi publicado que a ativação de FXR por agonistas sintéticos leva a uma redução significativa dos níveis séricos de triglicérides, principalmente na forma de VLDL reduzido, mas também para 5 reduzir o colesterol plasmático total (Kast H. et al. "Farnesoid X-activated receptor induces apolipoprotein C-Il transcription: a molecular mechanism linking plasma triglyceride leveis to bile acids" Mol. Endocrinol. 2001, 15 (10), 1720-1728; Urizar N. et al. "A natural product that 10 lowers cholesterol as an antagonist ligand for FXR" Science 2002, 296 (5573), 1703-1706; G. Lambert et al "The farnesoid X-receptor is an essential regulator of cholesterol homeostasis" J. Biol. Chem. 2003, 278, 2563-2570; Watanabe M. et al. "Bile acids lower triglyceride leveis via a pathway 15 involving FXR, SHP, and SREBP- lc" J. Clin. Invest. 2004, 113 (10), 1408-1418; A. Figge et al. "Hepatic overexpression of murine Abcbll increases hepatobiliary lipid secretion and reduces hepatic steatosis" J. Biol. Chem. 2004, 279 (4), 2790-2799; Bilz S. et al. "Activation of the farnesoid X 20 receptor improves lipid metabolism in combined hyperlipidemic hamsters" Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2006, 290 (4), E716-22) .
Mas a redução dos níveis séricos de triglicérides não é um efeito autônomo. 0 tratamento de camundongos db/db ou ob/ob com agonista sintético de FXR GW4064 resultou em redução marcada e combinada dos níveis séricos de triglicérides, colesterol total, ácidos graxos livres, corpos cetônicos, assim como 3-OH butirato. Além disso, a ativação de FXR acopla com o percurso de sinalização de insulina intracelulares em hepatócitos, resultando em redução da produção de glicose da neoglicogênese hepática mas com 5 aumento concomitante do glicogênio hepático. Sensibilidade a insulina, bem como tolerância à glicose foram positivamente afetadas pelo tratamento com FXR (Stayrook K. et al. "Regulation of carbohydrate metabolism by the farnesoid X receptor" Endocrinology 2005, 146 (3), 984-91; Y. Zhang et 10 al. "Activation of the nuclear receptor FXR improves hyperglycemia and hyperlipidemia in diabetic mice" Proc. Natl. Acad. USA 2006, 103 (4), 1006-1011; Cariou B. et al. "The farnesoid X receptor modulates adiposity and peripheral insulin sensitivity in mice" J. Biol. Chem. 2006, 281, 11039- 15 11049; Ma K. et al. "Farnesoid X receptor is essential for normal glucose homeostasis" J. Clin. Invest. 2006, 116 (4), 1102-1109; D. Duran-Sandoval et al. "Potential regulatory role of the farnesoid X receptor in the metabolic syndrome" Biochimie 2005, 87 (1), 93-98). Um efeito sobre a redução do 20 peso corporal também foi observado em camundongos alimentados com uma dieta alta de lipidio (Lihong C. et al. "TXR Agonist, GW4064, Reverses Metabolic Defects in High-Fat Diet Fed Mice" American Diabetes Association (ADA) anual 66. scientific sessions, June 2006, Abstract Number 856-P). Este efeito de 25 perda de peso pode resultar na indução de FXR de FGF-19, um fator de crescimento de fibroblasto que é conhecido por levar à perda de peso e fenótipo atlético (J. Holt et al. Genes Dev. 2003, 17 (13), 1581-1591; E. Tomlinson et al. "Transgenic mice expressing human fibroblast growth factor-19 display increased metabolic rate and decreased adiposity" Endocrinology 2002, 143 (5), 1741-1747). Nos recentes pedidos de patentes, o efeito do agonista FXR sobre a redução do peso 5 corporal foi demonstrado (Stoffel W. et al. "Methods for inhibiting Adipogenesis and for treating Type 2 Diabetes" Depósito de Patente Internacional WO 2004/087076; S. Jones et al "Methods of using FXR Agonists" Depósito de Patente Internacional WO 2003/080803).
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Em conjunto, estes efeitos farmacológicos dos agonistas FXR podem ser explorados em diferentes formas terapêuticas: compostos de ligação de FXR são conhecidos para serem bons candidatos para o tratamento da Diabetes Tipo II por causa de 15 seus efeitos de sensibilização a insulina, glicogenogênicos, e hipolipemiantes.
Em uma concretização, os compostos de acordo com a invenção e composições farmacêuticas compreendendo os ditos 20 compostos são utilizados no tratamento da Diabetes Tipo II, que pode ser superada por regulação mediada por FXR de sensibilidade a insulina sistêmica e sinalização de insulina intracelular no figado, aumento da glicose periférica e metabolisação, aumento do armazenamento de glicogênio 25 hepático, diminuição da produção de glicose no figado de neoglicogênese de soro de fígado. Numa outra concretização, os ditos compostos e composições farmacêuticas são usados para a preparação de um medicamento para o tratamento de condições intrahepáticas crônicas intra e algumas formas de condições colestáticas 5 extrahepáticas, tais como cirrose biliar primária (PBC), colangite esclerosante primária (PSC), colestase progressiva familiar (PFIC), cirrose álcool-induzida e colestase associada, ou fibrose hepática resultante das condições colestáticas crônicas ou condições colestáticas
intrahepáticas agudas, tais como estrógeno ou colestase induzida por droga.
A invenção também diz respeito a um composto de fórmula (I) ou uma composição farmacêutica compreendendo os ditos 15 compostos para o tratamento das condições gastrintestinais com um reduzido nível de utilização da gordura dietética e vitaminas dietéticas solúveis em gordura que podem ser ultrapassadas pelo aumento dos níveis de ácidos biliares intestinais e fosfolipídeos.
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Numa outra concretização, os ditos compostos ou composição farmacêutica são utilizados para tratar uma doença selecionada a partir do grupo composto de desordens de lipídios e de lipoproteínas como hipercolesterolemia, 25 hipertrigliceridemia, e aterosclerose como uma condição manifestada clinicamente que pode ser por melhora pelo efeito benéfico de FXR no aumento do colesterol HDL, reduzindo os triglicérides séricos, aumentando a conversão hepática de colesterol em ácidos biliares e aumentando a depuração e a conversão metabólica de VLDL e outras lipoproteinas no fígado.
Em mais uma concretização, os ditos compostos e
composição farmacêutica são utilizados para a preparação de um medicamento onde o hipolipemiante combinado, anti- colestático e os efeitos anti-fibróticos dos medicamentos alvo com FXR podem ser aproveitados para o tratamento da 10 esteatose hepática e síndromes associadas, tais como esteatose hepática não-alcoólica ("NASH"), ou para o tratamento dos efeitos colestáticos e fibróticos que estão associados a cirrose hepática induzida por álcool, ou com formas de hepatite de origem viral.
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Em conjunto com os efeitos hipolipidêmicos também foi mostrado que a perda de FXR funcionais leva ao aumento da aterosclerose em camundongos nocauteados com ApoE (E. Hanniman et al. "Loss of functional farnesoid X receptor 20 increases atherosclerotic lesions in apolipoprotein E- deficient mice" J. Lipid Res. 2005, 46 (12), 2595-2604). Portanto, agonistas FXR podem ter utilidade clínica como drogas anti-ateroscleróticas e cardioprotetoras. A regulação da Endotelina-I em células musculares lisas vasculares também 25 poderia contribuir para esses efeitos terapêuticos benéficos (F.He et al. "Downregulation of endothelin-1 by farnesoid X receptor in vascular endothelial cells" Circ. Res. 2006, 98 (2 ), 192-9) . A invenção também diz respeito a um composto de acordo com a fórmula (I) ou a uma composição farmacêutica compreendendo os ditos compostos para prevenção e tratamento pós-traumático de distúrbios cardiovasculares, como infarto 5 agudo do miocárdio, acidente vascular cerebral agudo, ou trombose que ocorre como um parâmetro de aterosclerose obstrutiva crônica.
Em algumas publicações selecionadas os efeitos de FXR e agonistas FXR na proliferação do câncer e de células não- malignas e apoptose foram avaliados. A partir destes resultados preliminares, parece como se agonistas FXR pudessem também influenciar a apoptose em linhas celulares de câncer (Niesor E. et al. "The nuclear receptors FXR and LXRalpha: potential targets for the development of drugs affecting lipid metabolism and neoplastic diseases" Curr. Pharm. Des. 2001, 7 (4), 231-59) e em células vasculares musculares lisas (VSMCs) (D. Bishop-Bailey et al. "Expression and activation of the farnesoid X receptor in the vasculature" Proc. Natl. Acad . Sei. USA 2004, 101 (10), 3668-3673). Além disso, FXR parece ser expresso em células de câncer de mama metastaseadas e em câncer de cólon (J. Silva "Lipids isolated from bone induce the migration of human breast cancer cells" J. Lipid Res. 2006, 47 (4), 724-733; G. De Gottardi et al. "The bile acid nuclear receptor FXR and the bile acid binding protein IBABP are differently expressed in colon cancer" Dig. Dis. Sei. 2004, 49 (6), 982-989) . Outras publicações que se concentram principalmente nos efeitos de FXR sobre o metabolismo traçam uma linha a partir da sinalização intracelular de FXR através da família Forkhead/Wingless(FOXO) de moduladores transcricionais para o fosfatidilinositol-trísfosfato (Pb)-quinase/percurso de sinal 5 de transdução Akt (Duran-Sandoval D. et al. J. Biol. Chem. 2005, 280 (33), 29971-29979; Y. Zhang et al. Proc. Natl.. Acad. USA 2006, 103 (4), 1006 -1011), que é também empregado pela sinalização de insulina intracelular, bem como pelas células transformadas neoplasticamente.
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Isso permitiria considerar FXR também como um alvo potencial para o tratamento de doenças proliferativas, especialmente formas metastaseadas de câncer que superexpressam FXR ou aqueles onde os FOXO/PL3- 15 quinase/Percurso Akt são responsáveis pela condução da proliferação.
Portanto, os compostos de acordo com a fórmula (I) ou composição farmacêutica compreendendo os ditos compostos são 20 adequados para o tratamento de desordens hiperproliferativas não-malignas, tais como o aumento da formação neoíntima após a vasodilatação por balão e a aplicação de stent, devido ao aumento da proliferação de células musculares lisas vasculares (VSMCs) ou Hiperplasia Benigna da Próstata (BPH), 25 uma forma de hiperproliferação pré-neoplásica, outras formas de formação de tecido cicatricial e fibrotisação que pode ser superada, por exemplo, por intervenção mediada por FXR na PI- 3 quinase/AKT/ percurso de sinalização intracelular de mTOR, redução na atividade da Matriz Metaloproteinase e deposição de alfa-Colágeno.
Numa outra concretização, os ditos compostos e
composições farmacêuticas são utilizados para o tratamento de
doenças hiperproliferativas malignas tais como todas as
formas de câncer (por exemplo, certas formas de câncer de mama ou de próstata), onde as interferências com ΡΙ-3-quinase/AKT/sinalização mTOR e/ou indução de p27kip e/ou indução de apoptose terá um impacto benéfico.
Finalmente, FXR parece também estar envolvido no controle de defesa antibacteriana no intestino (Inagaki T. et al. "Regulation of antíbacterial defense in the small 15 intestine by the nuclear bile acid receptor" Proc. Natl. Acad. USA 2006, 103 (10), 3920-3905) embora um mecanismo exato não seja fornecido. A partir destes dados publicados, no entanto, pode-se concluir que o tratamento com agonistas FXR poderia ter um impacto benéfico no tratamento de Doenças 20 Inflamatórias Intestinais (DII) , em particular as formas em que a parte superior do intestino (íleo) é afetada (por exemplo, Doença de Crohn Iliaca) , pois esta parece ser o local de ação do controle de FXR sobre o crescimento bacteriano. Em IBD a dessensibilização da resposta imune 25 adaptativa é de alguma forma prejudicada no sistema imunológico intestinal. 0 super crescimento bacteriano poderia então ser o causador de um estabelecimento para desencadear uma resposta inflamatória crônica. Assim, umedecer o crescimento bacteriano por mecanismos de origem de FXR poderia ser um mecanismo essencial para prevenir episódios inflamatórios agudos.
Assim, a invenção também diz respeito a um composto de
acordo com a fórmula (I) ou a uma composição farmacêutica compreendendo os ditos compostos para o tratamento de uma doença relacionada com doenças inflamatórias intestinais, como doença de Crohn ou colite ulcerosa. A restauração 10 mediada por FXR da função de barreira intestinal e redução da carga bacter.iana não comensal acredita-se ser útil para reduzir a exposição de antígenos bacterianos no sistema imune intestinal e pode, portanto, reduzir as respostas inflamatórias.
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A invenção ainda diz respeito a um composto ou composição farmacêutica para o tratamento da obesidade e doenças associadas, como a síndrome metabólica (condições combinadas de dislipidemias, diabetes e indice de massa 20 corporal anormalmente elevada), que podem ser superadas por redução dos niveis séricos de triglicérides mediada por FXR, glicemia e aumento da sensibilidade insulínica e perda de peso mediada por FXR.
Em uma concretização, os ditos compostos ou composição
farmacêutica são para tratar infecções persistentes por bactérias intracelulares ou parasitas protozoários tais como Mycobacterium sp. (Tratamento de Tuberculose ou Lepra), Listeria monocytogenes (Tratamento de Listeriose), Leishmania sp. (Leishmaniose) , Trypanosoma sp. (Doença de Chagas; Trypanossomíase; doença do sono).
Numa nova concretização, os compostos ou composição
farmacêutica da presente invenção são úteis na preparação de um medicamento para tratamento de complicações clínicas de Diabetes Tipo I e Tipo II. Exemplos dessas complicações incluem a Nefropatia Diabética, Retinopatia Diabética, 10 Neuropatias Diabéticas, Doença Arterial Oclusiva Periférica (PAOD). Outras complicações clínicas do Diabetes também são abrangidas pela presente invenção.
Além disso, as condições e doenças que resultam da gordura crônica e degeneração fibrótica de órgãos devido ao lipídeo e especificamente ao acúmulo de triglicerídeos e subsequente ativação dos percursos profibróticos também podem ser tratadas mediante a aplicação dos compostos ou composição farmacêutica da presente invenção. Essas condições e doenças englobam Esteatose Hepática Não-Alcoólica (NASH) e condições colestáticas crônicas no fígado, Glomerulosclerose e Nefropatia Diabética no rim, Degeneração Macular e Retinopatia Diabética no olho e doenças neurodegenerativas, como Doença de Alzheimer no cérebro ou Neuropatias Diabéticas no sistema nervoso periférico.
No uso prático, os compostos da presente invenção podem ser combinados como o ingrediente ativo em mistura íntima com um veículo farmacêutico de acordo com as técnicas convencionais de composição farmacêutica. 0 veículo pode assumir uma grande variedade de formas, dependendo da forma de preparação pretendida pela administração, por exemplo, por 5 via oral ou parenteral (incluindo intravenosa). Ao preparar as composições para forma de dosagem oral, qualquer um dos meios habituais farmacêuticos pode ser empregado, como, por exemplo, água, glicóis, óleos, alcoóis, agentes flavorizantes, conservantes, e agentes corantes, como no caso 10 das preparações líquidas orais como, por exemplo, suspensões, elixires e soluções; ou veículos, tais como amidos, açúcares, celulose microcristalina, diluentes, agentes de granulação, lubrificantes, classificadores, e agentes desintegrantes, como no caso das preparações sólidas orais, como por exemplo, 15 pós, cápsulas moles e duras; e comprimidos, com preparações sólidas orais sendo preferidas ao longo das preparações líquidas.
Devido à sua facilidade de administração, comprimidos e 20 cápsulas representam as mais vantajosas formas de dosagem oral unitária no caso em que veículos farmacêuticos sólidos, são obviamente empregados. Se desejar, comprimidos podem ser revestidos por técnicas aquosas ou não aquosas padrão. Essas composições e preparações devem conter pelo menos 0,1 por 25 cento dos compostos ativos. A porcentagem de compostos ativos nessas composições terapeuticamente úteis pode, obviamente, ser variada e pode ser convenientemente entre cerca de 2 por cento e cerca de 60 por cento do peso da unidade. A quantidade de composto ativo nessas composições terapeuticamente úteis é tal que uma dose eficaz será obtida. Os compostos ativos também podem ser administrados por via intranasal como, por exemplo, em gotas líquidas ou spray.
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Os tabletes, comprimidos, cápsulas, e similares também podem conter um aglutinante, como a goma adragante, acácia, amido de milho ou gelatina; excipientes, como fosfato bícálcico; um agente desintegrante, como amido de milho, 10 fécula de batata, ácido algíníco; um lubrificante tal como magnésio, e um agente edulcorante, como sacarose, lactose ou sacarina. Quando uma forma de dosagem unitária é uma cápsula, pode conter, além de materiais do tipo acima, um veículo líquido, tal como óleos de gordura.
15
Vários outros materiais podem estar presentes como revestimentos ou para modificar a forma física da dose unitária. Por exemplo, comprimidos podem ser revestidos com goma laca, açúcar ou ambos. Um xarope ou elixir pode conter, 20 além do ingrediente ativo, sacarose como agente edulcorante, metil e propilparabenos como conservantes, um corante e um condimento, como sabor cereja ou laranja.
Os compostos da presente invenção também podem ser administrados por via parenteral. Soluções ou suspensões destes compostos ativos podem ser preparadas em água devidamente misturada com um surfactante como o hidroxi- propilcelulose. Dispersões também podem ser preparadas em glicerol, polietileno glicol liquido e suas misturas em óleos. Sob condições normais de armazenagem e de utilização, essas preparações contêm um conservante para evitar o crescimento de microorganismos.
5
As formas farmacêuticas adequadas para uso injetável incluem soluções aquosas estéreis ou dispersões e pó estéril para a preparação extemporânea das soluções estéreis injetáveis ou dispersões. Em todos os casos, a forma deve ser 10 estéril e deve ser fluida para facilitar a fácil seringabilidade existente. Deve ser estável nas condições de produção e armazenamento e deve ser preservada contra a ação contaminante de microorganismos, como bactérias e fungos. O veículo pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, 15 por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol e polietileno glicol líquido), misturas adequadas destes, e óleos vegetais.
Qualquer via de administração adequada pode ser 20 empregada para a prestação a um mamífero, especialmente um ser humano, de uma dose eficaz de um composto da presente invenção. Por exemplo, via oral, retal, tópica, parenteral, ocular, pulmonar, nasal, e coisas do gênero podem ser empregadas. Formas de dosagem incluem comprimidos, troches, 25 dispersões, suspensões, soluções, cápsulas, cremes, pomadas, aerossóis, etc. Compostos preferíveis da presente invenção são administrados oralmente. A dosagem eficaz de ingrediente ativo empregada pode variar dependendo do composto particular empregado, o modo de administração, a condição de tratamento e a gravidade da patologia a ser tratada. Essa dose pode ser facilmente verificada por uma pessoa competente na arte.
Ao tratar ou prevenir condições mediadas por FXR para os quais os compostos da presente invenção são indicados, geralmente, resultados satisfatórios são obtidos quando os compostos da presente invenção são administrados em uma dose diária de cerca de 0,1 miligrama a cerca de 100 miligramas por quilo de peso corporal dos animais, de preferência dada em dose única diária ou em doses divididas duas a seis vezes por dia, ou na forma de liberação sustentada. Para a maioria dos grandes mamíferos, a dose diária total é de cerca de 1,0 miligrama a cerca de 1000 mg, de preferência cerca de 1 miligrama a cerca de 50 miligramas. No caso de um homem adulto de 70 kg, a dose diária total será geralmente de cerca de 7 miligramas a cerca de 350 miligramas. Esta posologia pode ser ajustada para proporcionar a melhor resposta terapêutica.
Algumas abreviações que aparecem no presente pedido são as seguintes.
25
Abreviações Abreviação Designação
ADME
Absorção, distribuição, metabolismo, excreção
Cl MS
Expectrometria Dupla de Massa por Inonização Quimica
dipolo
DCC
Diciclohexilcarbodiimida
DEAD
Dietil 1 ,2,-diazenodiearboxilato
15
DIAD
DIPEA
Diisopropil 1 ,2-diazenodiearboxilato
Diisopropiletilamina
DMF; DMFA N,N-Dimetil formamida
DMSO
Dimetil sufóxido
EDC
1-[3-(Dimetilamino)propil]-3-etilearbodiimida
FRET
25
Ressonância Fluorescente de transferência de energia
LC
Cromatografia Liquida HPLC
Cromatografia Líquida de Alta Performance em Multiplet
m
Multiplet
M. p,
Ponto de fusão
10
MS
NMR
Espectrometria de Massa
Ressonância Magnética Nuclear
15
PAMPA
PyBop
Ensaio de permeabilidade da membrane artificial paralela
(Benzotriazol-i-iIoxi)tripirrolidinofosfônio hexafluorofosfato
20
Rf
Quartett
Fator de Retenção
rt
Tempo de Retenção
s
Singlett
Triplett TBTU (O) -(Benzotriazol-i-yl)-Ν,Ν,Ν', N' -
tetrametiluronio tetrafluorborato
Tetrahidrofurano
Cromatografia de camada fina
Os compostos da presente invenção podem ser preparados de acordo com os procedimentos dos seguintes esquemas e exemplos, utilizando materiais adequados e mais exemplificados pelos seguintes exemplos específicos. Além disso, utilizando os procedimentos descritos neste documento, em conjugação com habilidades ordinárias na arte, outros compostos da presente invenção reivindicados neste documento podem ser facilmente preparados. Os compostos ilustrados nos exemplos não são, no entanto, para ser construídos constituindo o único gênero que é considerado na invenção. Os exemplos ilustram mais pormenores para a preparação dos compostos da presente invenção. Aqueles com habilidade na arte irão facilmente compreender que variações conhecidas das condições e dos processos de preparação dos seguintes procedimentos podem ser utilizadas para preparar estes compostos. Os compostos instantâneos são geralmente isolados sob a forma de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, tais como os descritos acima.
As bases livres de amina correspondentes aos sais isolados podem ser geradas por neutralização com uma base
THF
TLC adequada, como hidrogenocarbonato de sódio aquoso, carbonato de sódio, hidróxido de sódio e hidróxido de potássio e extração da base livre de amina liberada em um solvente orgânico, seguido por evaporação. A base livre de amina,
isolada desta forma, pode ainda ser convertida em outro sal farmaceuticamente aceitável por dissolução em um solvente orgânico, seguido pela adição do ácido adequado e posterior evaporação, precipitação ou cristalização. Os ácidos carboxílicos livres correspondentes aos sais isolados podem 10 ser gerados por uma neutralização com ácido adequado, como ácido clorídrico aquoso, sulfato de hidrogênio de sódio, dihidrogenofosfato de sódio, e extração de ácido carboxílico livre liberado em um solvente orgânico, seguido por evaporação. 0 ácido carboxílico, isolado desta forma, pode 15 ainda ser convertido em outro sal farmaceuticamente aceitável por dissolução em um solvente orgânico, seguido pela adição da base adequada e posterior evaporação, precipitação ou cristalização.
Uma ilustração da preparação dos compostos da presente
invenção é mostrada abaixo. Salvo indicação nos esquemas, as variáveis têm o mesmo significado, como descrito acima. Os exemplos apresentados a seguir se destinam a ilustrar experimentos particulares da invenção. Matérias-primas 25 adequadas, blocos e reagentes utilizados na síntese, como descritos abaixo estão disponíveis comercialmente de Sigma- Aldrich Chemie GmbH, em Munique, Alemanha, de Acros Organics, Bélgica ou de Fisher Scientific GmbH, 58239 Schwerte, Alemanha, por exemplo, ou pode rotineiramente serem preparados por procedimentos descritos na literatura, por exemplo, em "March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure", 5a Edição, John Wiley & Sons ou 5 Theophil Eicher, Siegfried Hauptmann "The Chemistry of Heterocycles; Structures, Reactions, Synthesis and Application", 2a edição, Wiley-VCH 2003; Fieser et al. "Fiesers' Reagents for organic Synthesis" John Wiley & Sons
2000.
10
Em fórmulas de esquemas de síntese geral descritas abaixo
15
El é halogênio, OH, OC(O)alquil, 0C(0)aril, aril-0, 0-pentafluorofenil, O-sulfonilalquil,
0-sulfonilaril, 0-succinilimido, 0-benzotriazolil,
nitro, azido, S-alquil, S02alquil, S02aril,
SC(O)alquil, SC(0)aril ou ciano;
20
En-H é um grupo que atua como um nucleófilo, como OH SH, NH2, N(R14)H, NH (CO) 0-alquil, NH(C0)0-aril
NH (SO) 2aril, NH ( S0) 2alquil, CH3 ou CF2H;
La é halogênio, NH2, N(R10)H, nitro, azido, NC, CF3, C0CI,
25
COF, CHOr CH2OH, COOH, C(O)NHNH2, C(O) 0-alquil C(O)0-aril, C(0)0-hetaril, SH, SMe, SO2CI, SO3H, G-NH2, GN(R10)H, OH, 0-alquil, G-SH, G-OH, G-halogênio, B(OMe)2, B(OH)2, BF3-, 4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il ou
etinil;
Lb é halogênio, NH2, N(R10)H, COCI, COF, CHO, CH2OH, COOH, C(O)NHNH2, C(O)0-alquil, C(0)0-aril, C(O)O-hetaril,
SH, SO2Cl, SO3H, G-NH2, GN(P10)H, OH, G-SH, G-OH, G-halogênio, B(OH)2, B(OMe)2, BF3-,
4.4.5.5-tetrametil-l, 3,2-dioxaborolan-2-il ou etinil;
Lc é halogênio, NH2, N(R10)H, C0C1, COF, CHO, CH2OH, COOH,
C(O)NHNH2, C(0)0-alquil, C(0)0-aril, C(O)O-hetaril, SH, SO2CI, SO3H, G-NH2, G-N(R10)H, OH, G-SH, G-OH, G-halogênio, B(OMe)2, B(OH)2, BF3',
4.4.5.5-tetrametil-l, 3,2-dioxaborolan-2-il ou etinil.
15
R10, R14 e G são como definidos nas reivindicações.
20
Em concretizações preferidas do método de síntese El é halogênio, OH, 0S02-alquil ou 0S02-aril;
En-H é OH, SH, NH2, ou CH3;
La é halogênio, nitro, azido, NC, CF3, C(0)0-alquil, C(0)0-aril, C(0)O-hetaril, SH, SMe, SO3H, G-NH2,
G-N(P10)H, OH, 0-alquil, G-SH, G-OH, G- halogênio,
B(OH)2, B(OMe)2, BF3-,
4,4,5,5-tetrametil-l, 3,2-dioxaborolan-2-il ou etinil; Lb é NH2, C0C1, COOH, C(O)NHNH2, SO2Cl, B(OMe)2, B(OH)2, BF3", 4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il ou etinil;
Lc é NH2, CHO, C0C1, COOH, C(O)NHNH2, SO2CI, B(OH)2, B(OMe)2, BF3", 4 , 4 , 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxaborolan- 2-il ou etinil;
Em um método de síntese preferido ainda mais
El é cloro ou OH;
En-H é OH ou NH2;
La é halogênio, nitro, NC, C(O)0-alquil, SH, SO3H, B(OMe)2, B(OH)2, BF3" ou 4,4,5,5-tetrametil-l,3,2- dioxaborolan-2-il ;
Lb é NH2, C0C1, COOH ou SO2Cl;
Lc é NH2, CHO, C0C1, COOH ou SO2Cl.
Compostos pirazol de fórmula geral IVa são conhecidos na arte e, na medida em que não estejam comercialmente disponíveis, são facilmente sintetizados por procedimentos padrão comumente empregados na arte como ilustrado no Esquema I. No caso em que R1 e R2 são juntos carbonil, compostos pirazol de fórmula geral IVa podem ser preparados por uma combinação de compostos acetileno de fórmula geral VIIIa com uma hidrazona de fórmula geral IIa em ácido acético e na presença de ar para obter compostos t-butilatato pirazol de fórmula geral IIIa. A posterior de-butilação finalmente leva 5 a um composto de fórmula geral IVa, como descrito na literatura (Kamitori et al. Heterocycles 1994, 38, 21-25; Kamitori et al. J. Heterocycl. Chem. 1993, 30, 389-391) . Outro método de preparação dos compostos de fórmula IVa envolve o tratamento de um aldeído de fórmula Va com 10 tricloroacetilhidrazina para obter tricloroacetilhidrazona Via, que é posteriormente combinada com compostos 1,3 dicetonas de fórmula geral VIIa para gerar produtos de fórmula geral IVa, como exemplificado na literatura (Kaim et al. Synlett 2000, 353-355).
15
(R4)b
Esquema 1
No Esquema 1 mostrado acima, as variantes R1 a R3, a e b
são, tal como definidas nas reivindicações. A variante E inclui as variantes En-H e El com o sentido acima definido. Compostos isoxazol de fórmula geral IVb são conhecidos na arte e, na medida em que não estejam comercialmente disponíveis, são facilmente sintetizados por procedimentos 5 padrão comumente empregados na arte (Esquema 2), por exemplo, combinando compostos acetileno de fórmula geral VIIIa com compostos alfa-clorooxima de fórmula IIb como descrito por Quilio et al. Gazz. Chim. Ital. 1937, 67, 589. Alternativamente, se R1 e R2 são juntos carbonil, compostos 10 IVb são acessíveis por reação de alfa-clorooxima de fórmula IIb com compostos 1,3-dicarbonil Vb, tal como descrito, por exemplo, em Maloney et al., J. Med. Chem. 2000, 43 (16), 2971-2974 e em Doley et al, J. Chem. Soc. 1963, 5838-5845. Outro método de preparação dos compostos de fórmula IVb é 15 especialmente adequado se R3 é alquilamino e envolve uma combinação de compostos acetileno de fórmula VIIIa com óxidos de nitrila de fórmula geral VIb como exemplificado por Himbert et al. Liebigs Ann. Chem, 1990, 4, 403-407 e por Beyer et al., Justus Liebigs Ann Chem 1970, 45-54.
20 no,
R3 j*
11 ♦
E Ill (CH2)1
R’R>
(VIiia) (iib)
(R4)b
HO'
R3 ,N
*0 CI-(
E J ^h*).
0 (Vb) (IIb)V (R4Jb
R3
R1 R2 (VIIIa)
-q
t
(CH2),
/ \\
Esquema 2
Compostos de fórmula IVc (Esquema 3) são conhecidos na arte e, na medida em que não estejam comercialmente 5 disponíveis, são facilmente sintetizados por procedimentos padrão comumente empregados na arte, por exemplo, os procedimentos descritos por Y. Chen et al, Heterocycles 1995, 41, 175 e Chantegral B. et al., J. Org. Chem. 1984, 49, 4419- 4424 . Compostos de fórmula IVd são conhecidos na arte e, na 10 medida em que não estejam comercialmente disponíveis, são facilmente sintetizados por procedimentos padrão comumente empregados na arte, por exemplo, os procedimentos descritos por Piet J. et al., Buli. Soc. Chim. Belg., 1996, 105 (1), 33-44 e por Cwiklicki A. et al., Arch. Pharm. 2004, 337 (3), 15 156-163. Compostos de fórmula IVe são conhecidos na arte e, na medida em que não estejam comercialmente disponíveis, são facilmente sintetizados por procedimentos padrão comumente empregados na arte, por exemplo, os procedimentos descritos por G. Mitchell et al, J. Chem. Soc. Perkin Trans 1, 1987, 413-422 e Piterskaya Y. et al., Russ. J. Gen. Chem. 1996, 66 (7), 1150-1157.
Esquema 3
As variantes dos compostos de fórmula IVa-IVe podem opcionalmente ser transformadas em outras variantes de compostos de fórmula IVa-IVe utilizando reações de derivatização conhecidas da pessoa competente na arte, que 10 são descritas na literatura, por exemplo, em: T. Eicher, S. Hauptmann "The Chemistry of Heterocycles; Structures, Reactions, Synthesis and Application", 2a edição, Wiley-VCH 2003 (adiante referida como Eicher); "March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure", 5a 15 Edição, John Wiley & Sons (adiante designado March); Larock "Comprehensíve Organic Transformations", VCH Publishers, New York, NY 1989 (adiante referido como Larock) ; Fieser et al. "Fiesers' Reagents for organic Synthesis" John Wiley & Sons 2000 (adiante referido como Fieser).
20
Compostos de fórmula geral IXa e IXb conforme descrito no Esquema 4, são conhecidos na arte e, na medida em que não estejam comercialmente disponíveis, são facilmente sintetizados por procedimentos padrão comumente empregados na arte, por exemplo, os procedimentos descritos pela literatura citados acima. Para preparações específicas ver exemplos 1- 21.
5
Compostos de fórmula geral IVa-IVe, IXa, IXb, XII, XIII e XIV podem ser opcionalmente equipados com um grupo temporariamente anexado protegendo remanescentes nos compostos após a sua conversão. No decurso da síntese da 10 seqüência o grupo protegido é removido como nos explicou: T. Greene, P. Wuts "Protective groups in organic synthesis" 3a ed. Wiley & Sons 1999 (adiante referido como Greene).
Uma síntese típica para os compostos de fórmula geral 15 (I) envolve uma síntese de seqüência multipassos como retratada no Esquema 4 e no Esquema 5. Partindo de intermediários heterocíclicos de fórmula geral IVa-IVe, duas rotas sintéticas estão previstas para o primeiro passo, resultando em um intermediário de fórmula geral XII.
20
Na etapa Al, compostos adequados de fórmula geral IXa, equipados com um grupo nucleofílico escolhido de En-H, é dissolvido ou suspenso num solvente adequado, de preferência, mas não se limitando a dimetilformamida, tetrahidrofurano, 25 benzeno, tolueno, diclorometano ou éter e, se vantajosa, uma base adequada é opcionalmente adicionada, incluindo mas não limitada a metóxido de sódio, metóxido de potássio, carbonato de potássio, hexametildisilazano sódio, diisopropilamido de litio, n-butillitio ou uma base, como a amina diisopropiletilamina, seguido pela adição de um composto de fórmula geral IVa-IVe, equipado com um grupo El adequado. Se a base é necessária, é normalmente empregada em uma relação 5 de um para um. No entanto, como um artesão qualificado iria apreciar, um excesso molar, geralmente de cerca de 1-3 vezes de excesso molar é aceitável. Os reagentes são tipicamente combinados a uma temperatura de cerca de O0C a cerca de 100°C, de preferência, à temperatura ambiente e a mistura 10 resultante é tipicamente agitada a partir de cerca de 5 minutos a cerca de 48 horas. No caso de EL ser um grupo pobre (OH, por exemplo) , ele precisa ser ativado pela adição de reagentes de ativação para a mistura da reação, como a mistura MeSO2Cl, CF3(SO2)2O ou reagentes de Mitsunobu 15 diisopropildiazenodicarboxilato trifenilfosfina, por exemplo, como mostrado no exemplo 1.
De preferência, na etapa Al o grupo El é cloro ou OH. Mais preferivelmente, o grupo nucleofílico En-H em compostos 20 de fórmula geral IXa é OH. No caso onde En-H é OH e El é cloro, os reagentes de fórmula geral IXa são dissolvidos ou suspensos em um solvente adequado, de preferência tetrahidrofurano, DMF ou metanol e tipicamente 1 a 2 equivalentes de uma base adequada, como hidreto de sódio ou 25 metanolato de sódio são adicionados. Posteriormente, um composto de fórmula geral IVa-IVe é adicionado e a mistura resultante é tipicamente agitada a partir de cerca de 5 minutos a cerca de 48 horas. Temperaturas de reação podem variar de -IO0C a 60°C, tipicamente de -IO0C a 10°C. No caso onde EN-H é OH e EL também é OH, os reagentes de fórmula geral IVa-IVe e IXa são dissolvidos ou suspensos em um solvente adequado, de preferência benzeno ou tolueno, e 1 a 2 equivalentes trifenilfosfina e diisopropil-diazeno-
dicarboxilato (DIAD) são acrescentados, sem adição de uma base. Os reagentes são tipicamente combinados a uma temperatura de cerca de 0°C a cerca de 50°C, de preferência, à temperatura ambiente. Os tempos são tipicamente Ih a 12h.
Os solventes são normalmente removidos por destilação a temperaturas normalmente variando de 10 a 50°C. O produto bruto é opcionalmente purificado por cromatografia de coluna e outros métodos de purificação conhecidos na arte.
Na etapa A2, um composto adequado de fórmula geral IXb,
equipado com um grupo adequado EL, é combinado com um composto de fórmula geral IVa-IVe, equipado com um grupo nucleofílico escolhido de En-H sob condições similares às aplicadas na etapa Al .
20
Mais preferivelmente, na etapa A2 o grupo El em compostos de fórmula geral IXb é cloro e o grupo nucleofílico En-H em compostos de fórmula geral IVa-IVe é OH ou NH2. Nesses casos, os reagentes de fórmula geral IVa-IVe são dissolvidos
ou suspensos em um solvente adequado, de preferência tetrahidrofurano, DMF ou metanol e tipicamente 1 a 2 equivalentes de uma base adequada, como hidreto de sódio ou metanolato de sódio são adicionados. Posteriormente, um composto de fórmula geral IXb é adicionado e a mistura resultante é tipicamente agitada por cerca de Ih a 12h. Temperaturas de reação podem variar entre -IO0C a 60°C, tipicamente de -IO0C a IO0C.
5
As matérias-primas e os produtos da etapa Al da etapa A2 podem opcionalmente ser equipados com um grupo protetor permanecendo no composto, que precisa ser removido em uma etapa adicional conforme nos ensinou Greene.
10
Em uma etapa B opcional, as variantes dos compostos de fórmula XII podem opcionalmente ser transformadas em outras variantes dos compostos de fórmula XIV utilizando reações de derivatização conhecidas pela pessoa qualificada na arte, que 15 são descritas em Greene, Eicher e Larock. Essas reações de derivatização são concebidas para transformar um grupo funcional La em fórmula XII em um grupo funcional do agrupamento Lb na fórmula XIV, que é capaz de sofrer uma reação com o agrupamento Lc em compostos de fórmula XIII 20 conforme representado na Etapa C (Esquema 5). Métodos gerais para interconversões do grupo funcional são descritos em Larock. Em um exemplo da etapa B, La é um grupo nitro, que é reduzido em um grupo Lb amino. Em outro exemplo, La é um grupo nitro, que é convertido em um bromo por redução, subsequente 25 diazotação e posterior substituição por um brometo. Em um outro exemplo, La é um grupo SH, que é interconvertido por oxidação em um grupo SO3H e tratado com POCl3 para ceder um grupo Lb SO2CI. Em outro exemplo, La é um grupo COOalquil éster, que é saponificado em um grupo Lb COOH.
As matérias-primas e produtos da Etapa B podem ser opcionalmente equipados com um grupo protetor permanecendo no composto, que precisa ser removido em uma etapa adicional conforme nos ensinou Greene.
Esquema 4
Na etapa C, um composto de fórmula geral adequada XIII tendo um grupo funcional Lc é dissolvido ou suspenso em um solvente adequado, de preferência, mas não limitados a dimetilformamida, acetonitrila, tetrahidrofurano, benzeno, tolueno, diclorometano ou éter e, se for vantajoso, uma base adequada é opcionalmente adicionada, incluindo, mas não limitada a metóxido de sódio, metóxido de potássio, carbonato de potássio, sódio hexametildisilazano, litio
diisopropilamida, n-butillitio ou uma base, como a amina diisopropiletilamina, trietilamina ou N-metilmorfolina. Um composto da fórmula geral XIV, equipado com um grupo funcional Lb é adicionado. É contemplado que as variantes dos compostos de fórmula geral XIII e variantes dos compostos de
Y HeVx /
La^ "El + R1*R2 Step A2
(IXb) (IVaHIVe) fórmula geral XIV são selecionadas de uma forma que a combinação sintética de grupo funcional Lc com grupo funcional Lb resulta em uma fração L, tal como definido na descrição acima. Se a base é necessária, é normalmente 5 empregada em uma relação de um para um. No entanto, como um técnico com habilidade na arte iria apreciar, um excesso molar, geralmente em cerca de 1-3 vezes de excesso molar é aceitável. Os reagentes são tipicamente combinados a uma temperatura de cerca de O0C a cerca de 100°C, de preferência 10 em temperatura ambiente e a mistura resultante é tipicamente agitada a partir de cerca de 5 minutos a cerca de 48 horas. No caso onde Lb e Lc são grupos de baixa reatividade, que não combinam nas condições acima descritas, a utilização de um agente de ativação pode ser necessário. Em uma incorporação 15 Lb é COOH e La é NH2 ou vice-versa e agentes de ligação como PyBOP; EDC ou DCC possam ser necessários para facilitar a reação. Alternativamente, o grupo COOH poderá ser convertido em um grupo COCl ativado, tal como descrito em Larock. Em outra incorporação onde Lb é etinil e La é azido ou vice- 20 versa, um catalisador, como CuSOí/ácido ascórbico poderiam ser necessários, como descrito em K.B. Sharpless et al. Angew. Chem. 2002, 114, 2708-2711. Na outra incorporação onde Lb é B(OH)2 e La é halogênio ou vice-versa, um catalisador, Pd como PdCl2(PPh3)2 é necessário, como descrito em A. Suzuki 25 "palladium-Catalyzed Cross-Coupling Reactions of Organoboron Compounds" Chem. Rev. 1995, 95, 2457-2483. Os produtos da etapa C podem ser opcionalmente equipados com um grupo protetor permanecendo no composto, que precisa ser removido em uma etapa adicional conforme nos ensinou Greene. As variantes de compostos de fórmula geral I podem 5 opcionalmente ser posteriormente transformadas em compostos de outras variantes da fórmula geral I utilizando reações de derivatização conhecidas pela pessoa competente na arte, que são descritos em Greene, Eicher e Larock. Exemplos específicos dessas interconversões de grupo funcional podem 10 ser encontrados na seção de exemplos.
podem ser transformadas em outras variantes de compostos de fórmula geral I, usando métodos de interconversões de grupo funcional de uma etapa ou de múltiplas etapas conforme descrito no Larock.
O especialista na técnica irá apreciar que as etapas de síntese descritas acima podem ser opcionalmente realizadas em uma seqüência alternativa de síntese, isto é, um composto de fórmula geral XIII pode ser combinado com um composto de 25 fórmula geral IX pelas técnicas acima mencionadas e o intermediário resultante é posteriormente combinado com um
2Lc * l/SXX
(XIII) c B (XIV)
R^R2 step C
Esquema 5
15
Opcionalmente, as variantes de compostos de fórmula I
20 composto de fórmula geral IVa-IVe para dar produtos de fórmula geral (I). Essa ordem invertida de etapas sintéticas é exemplificada no exemplo 19 na seção de exemplos. A ordem particular de etapas necessárias para produzir os compostos 5 de fórmula I é dependente do composto particular a ser sintetizado, o composto de início, e a relativa labilidade de moléculas substituídas.
Os exemplos preferíveis de procedimentos de síntese estão descritos no esquema 6 em que
R3 é alquil ou dialquilamino;
R4 é halogênio;
15
b = 2;
El é cloro ou OH;
La é nitro;
Lb é NH2 ·
Lc é COCl or SO2Cl;
25
Y é Y1, Y3 ou Y5;
R8 é OMe, CH3 ou CF3; L é 5 R10 m = G é
10
Z é A é R9 é
71 / 169
1;
-C (O) N (R10)-S (O)mN (R10)-, -G-N (R10) é hidrogênio ou metil;
2;
-CH2-;
fenil-A-R9 ou piridil-A-R9; uma ligação ou -CH2-;
> COOH ou COOMe.
20 La^OH
(IXa)
step Al
(XIH) Z step C
Esquema 6
Na etapa Al de concretizações preferidas da invenção, um composto adequado de fórmula geral (IVb) é dissolvido ou suspenso em um solvente adequado, de preferência tetrahidrofurano, metanol, benzeno ou tolueno. Se El é cloro, uma base é adicionada, por exemplo, hidreto de sódio ou metanolato de sódio ou similares. No caso onde El é OH, 1 a 2 equivalentes trifenilfosfina e dietildiazenodicarboxilato (DEAD) são adicionados ao invés de uma base. Um composto de fórmula geral IXa é adicionado e os reagentes são tipicamente combinados a uma temperatura variando de cerca de O0C a cerca de 50°C, de preferência em temperatura ambiente. Os tempos são, tipicamente 1 a 24h. Os solventes são usualmente removidos por destilação a temperaturas tipicamente variando de 10°C a 50°C. 0 produto bruto de fórmula geral XII é opcionalmente purificado por métodos de extração e/ou cromatografia de coluna e outros métodos de purificação conhecidos na arte.
Na etapa B dos experimentos preferidos da invenção, um grupo nitro em um composto de fórmula geral XII é reduzido para gerar um grupo amino que faz parte de um composto da fórmula geral XIV. Vários métodos de redução são adequados, como descrito em Larock, por exemplo, de hidrogenação na presença de um catalisador de hidrogenação, como paládio sobre carvão vegetal ou similares, ou redução utilizando boro hidreto de sódio em metanol e cloreto de niquel como catalisador. A redução com zinco pode ser realizada, como segue: um composto adequado de fórmula geral XII é dissolvido ou suspenso, juntamente com zinco em pó, em um solvente adequado, de preferência um álcool como o metanol e um ácido, de preferência ácido acético é adicionado. Os reagentes são tipicamente combinados a uma temperatura de cerca de O0C a cerca de 50°C, de preferência em temperatura ambiente, até suficiente conversão ser detectada através de métodos conhecidos na arte, como o TLC ou HPLC. 0 tempo de reação normalmente varia de 1 a 24h. Opcionalmente, derivados sólidos podem então ser removidos por filtração. Voláteis são removidos através de métodos conhecidos na arte, como a destilação, por exemplo. 0 produto bruto de fórmula geral XIV é opcionalmente purificado por métodos de extração e/ou cromatografia de coluna e outros métodos de purificação conhecidos na arte. Na etapa C dos experimentos preferidos da invenção, o grupo amino em compostos de fórmula geral XIV é combinado com ácido sulfônico ou um ácido carboxílico ou cloreto sulfonil correspondente carboxílico ou cloreto de ácido carboxílico em compostos de fórmula geral XIII. Vários métodos são adequados para esta transformação, tais como os descritos em Larock, incluindo a ativação de um grupo ácido carboxílico de compostos de fórmula XIII usando DCC, EDC, PyBroP ou outro agente de acoplamento adequado conhecido na arte e combinar o IO ácido ativado com a função amina de compostos de fórmula geral XIV. No caso de cloretos de ácido carboxílico ou cloretos de ácido sulfônico de fórmula XIII serem empregados, um procedimento típico é o seguinte: composto amina de fórmula XIV é dissolvido ou suspenso em um solvente apropriado, como diclorometano, acetonitrila ou
tetrahidrofurano ou coisas do gênero, normalmente diclorometano ou acetonitrila, juntamente com uma base, de preferência uma base amina, tais como DIPEA, trietilamina ou N-metilmorfolina, e os compostos de ácido clorídrico de 20 fórmula XIII. Os reagentes são tipicamente combinados a uma temperatura de cerca de O0C a cerca de 50°C, de preferência em temperatura ambiente, até suficiente conversão ser detectada através de métodos conhecidos na arte, como o TLC ou HPLC. 0 tempo de reação normalmente varia de 1 a 24h. O 25 produto bruto de fórmula geral I é opcionalmente purificado por métodos de extração e/ou de cromatografia de coluna e outros métodos de purificação conhecidos na arte. Como mencionado acima, compostos de estrutura geral I podem ainda ser convertidos em outras variantes da mesma estrutura geral por interconversões de múltiplas etapas ou de uma única etapa como descrito em Larock.
5
Nos experimentos preferidos, um grupo L amida ou sulfonamida é N-alquilado por um halogênio alquila, de preferência iodeto de metila. Em um procedimento tipico, o composto da fórmula geral I é dissolvido ou suspenso em um solvente adequado, por exemplo, THF, a uma temperatura variando entre -10 a + 30°C, normalmente a O0C e uma base, normalmente NaH é adicionado e a mistura é opcionalmente agitada até a desprotonação ter avançado suficientemente. Um halogênio alquila é adicionado e a agitação é continuada, a uma temperatura variando de -IO0C a 80°C, tipicamente temperatura ambiente até a conversão em produto de alquilação ser suficiente. Os voláteis são eliminados através de métodos conhecidos na arte e o produto bruto é opcionalmente mais purificado por métodos geralmente aceitos, tais como extração e/ou cromatografia.
Em outros experimentos mais preferidos, um grupo éster carboxílico em compostos de fórmula I é saponificado para gerar um ácido carboxílico correspondente de fórmula I. Em um 25 procedimento típico, o composto de fórmula I é dissolvido em um solvente adequado, tal como um álcool ou um éter, de preferência metanol, opcionalmente contendo 0-50% de água, juntamente com 1 a 10 equivalentes, de preferência 1 a 2 equivalentes de uma base, de preferência NaOH ou LiOH. Os reagentes são tipicamente combinados a uma temperatura de cerca de O0C a cerca de 80°C, de preferência a partir de temperatura ambiente a 60°C, até conversão suficiente ser 5 detectada através de métodos conhecidos na arte, como a TLC ou HPLC. 0 tempo de reação normalmente varia de 1 a 24h. 0 produto bruto de fórmula geral I é opcionalmente purificado por métodos de extração e/ou cromatografia de coluna e outros métodos de purificação conhecidos na arte.
10
Salvo quando notar, todas as reações não-aquosas foram realizadas sob uma atmosfera de argônio ou nitrogênio utilizando solventes secos comerciais. Compostos foram purificados por cromatografia rápida de coluna utilizando 15 sílica gel 60 (malha de 230-400), ou HPLC preparativo de fase reversa usando condições como as descritas no procedimento de sintese. A análise LC/MS foi feita utilizando um MSQ Surveyor (Thermo Finnigan, E.U.A.) com ionização APCI, coluna: Água XTerra MS C18 3,5μιη 2,1x30 mm, volume de injeção de Ιμΐ, 20 vazão de 1,0 mL/min, fase móvel: A: H2O - 0,1% de ácido fórmico, B: acetonitrila.
Painel de Gradiente:
tempo, min. A% B%
0,0 100 0
0,1 100 0
3,0 5 95
3, 8 5 95
3,9 100 0
6,5 100 0 Detecção: diodo (PDA), 190-800 nm; masspec (APCI + ou -). 1H-RMN: espectros 400 MHz foram registrados em um espectrômetro Varian MERCÚRIO plus 400 MHz, espectros de 300 MHz foram registrados em um espectrômetro Bruker 300 MHz.
Espectros 200 MHz foram registrados em um espectrômetro Varian. Valores químicos são dados em ppm em relação a tetrametilsilano (TMS), com a ressonância de próton de solvente residual como padrão interno. Pontos de fusão foram efetuados em um aparelho de ponto de fusão Sanyo Gallenkamp 10 (MPD350.BM3.5). TLCs foram feitas através de chapas e solventes Merck (gel de sílica Si-60 F254, 0,25 mm) como indicado.
Exemplo 1
Ácido N- (6-[3- (2, 6-dxcloro-fBnil) -5-isoprop±l-isox&zol-4-
ylmatoxi] -2-metil-piridina-3-il) -toreftalâmico
O
Etapa 1
Metal de sódio (0,119 g, 5,1 mmol) foi dissolvido em
metanol (6ml) em 0°C (banho de gelo), 6-cloro-2-metil-3- nitro-piridina (0,30 g, 1,7 mmol) foi adicionada e a mistura foi agitada a 0°C até o consumo total de 6-cloro-2-metil-3- nitro-piridina (4h). Ácido acético (0,306 g, 5,1 mmol) foi adicionado e a solução foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila (20 ml), lavado com água (10 ml), seco ao longo do Na2SO4 anidro, filtrado e o solvente foi removido sob pressão reduzida, para dar 0,28 g (97%) de 6-metoxi-2-metil-3-nitro-piridina como pó incolor.
Etapa 2
O produto derivado do passo 1 (0,796 g, 4,7 mmol) foi adicionado a uma solução HBr (33%) em ácido acético (5 ml), a mistura foi agitada a 60°C por 2 h, e concentrada em pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em dietil éter (5 ml), lavado com solução aquosa de 5% de amônia (3 ml) e água (3 ml) e a fase orgânica foi evaporada para dar 0,63 g (87%) de 6-metil-5-nitro-piridina-2-ol como pó incolor.
Etapa 3
Para uma suspensão de 6-metil-5-nitro-piridin-2-ol (0, 625 g, 4,1 mmol), [ 3- (2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil- isoxazol-4-il]-metanol (1,51 g, 5,3 mmol) (para preparação referir-se a: P. Maloney et al. "Identification of a chemical tool for the orphan nuclear receptor FXR" J. Med.. Chem. 2000, 43 (16), 2971-2974) e trifenilfosfina (1,91 g, 7,4 mmol) em benzeno (12 ml) foram adicionadas gotas de diisopropildiazenodicarboxilato (1,57 g, 7,8 mmol) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 12 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e purificada por HPLC de fase reversa (coluna Reprosil-Pur C18- Α9, 250x20 mm, gradiente de eluição de acetonitrila: água (2:1) - acetonitrila pura) para fornecer 1,53 g (88%) de 6- [3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ylmetoxi]-2- metil-3-nitro-piridina como pó incolor.
5
ETAPA 4
Zinco em pó (0,156 g, 2,4 mmol) foi adicionado a uma suspensão mexida vigorosamente do produto derivado da etapa 3 (0,100 g, 0,240 mmol) em metanol (4 ml), seguido pela adição 10 de ácido acético (0,065 g, 1,1 mmol). A mistura da reação foi agitada por 2 h em temperatura ambiente e passaram por uma camada de 2 centímetros de sílica que foi posteriormente lavada com metanol. 0 eluente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em acetato de etila (20 ml) e filtrado. O filtrado 15 foi lavado com 10% de K2CO3 aquoso (5 ml), água (5 ml), seco e o anidro Na2SO4 e o solvente foram removidos sob pressão reduzida, para dar 0,088 g (93%) de 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-
5-isopropil-isoxazol-4-ylmetoxi]-2-metil-piridina-3-ilamina como óleo amarelado.
20
Etapa 6
Para uma solução de 6-[3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropil- isoxazol-4-ylmetoxi]-2-metil-piridina-3-ilamina (0,137 g, 0,350 mmol) em CH2Cl2 (5 ml) Foram adicionados trietilamina 25 (0,106 g, 1,05 mmol) e ácido 4-clorocarbonilbenzoico metil éster (0,104 g, 0,530 mmol). A mistura da reação foi agitada por 2h em temperatura ambiente, lavada com K2CO3 aquoso a 10% (5 ml), água (5 ml), e seca em anidro Na2SO4. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida, para dar um resíduo que foi posteriormente purificado por HPLC de fase reversa (coluna Reprosil Pur-C18-A9, 250x20 mm, gradiente de eluição de acetonitrila: água (2:1)-acetonitrila pura) para dar 5 0, 126 g (65%) de ácido metil éster N-(6-[3-(2, 6-dicloro- fenil) -5-isopropil-4-isoxazol-ylmetoxi]-2-metil-piridina-3- yl)-tereftalâmico como óleo incolor.
Etapa 7
Para uma solução de ácido metil éster N-(6-[3-(2,6-
dicloro-fenil)-5-isopropil-4-isoxazol-ylmetoxi]-2-meti1- piridina-3-yl)-tereftalâmico (0,055 g, 0,1 mmol) em metanol (5 ml) foram adicionados NaOH (0, 076 g, 1,9 mmol) em água (0,15 ml) e a mistura da reação foi agitada à temperatura 15 ambiente por 22 h. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi retomado com a água (1,0 ml) . A mistura resultante foi acidificada a pH 6 com ácido acético, levando à formação de um precipitado. 0 precipitado foi filtrado, lavado com água (3 ml), e seco ao ar para dar ácido N-(6-[ 3-(2, 6-dicloro- 20 fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ylmetoxi]-2-metil-piridina-3- il)-tereftalâmico como pó incolor. Rendimento: 0,033 g (61%).
1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ; δ (ppm) 1,37 (6H, d), 2,26 (3H, s),
3,40 (1H, br. S), 3,59 (1H, set.), 5,13 (2H, s), 6,43 (1H, d), 7, 50-7, 62 (4H, m) , 7,96 (4H, q) , 9,85 (1H, s).
LC-MS: rt 3,41 min, m/z [M+H]+ 539,8 (calculado: 539,1). Exemplo 2
Ácido 4- ( (6- ( (3- (2, 6-Diclorofenil) -5-isopropilisoxa.zol-4-il) metoxi)-2-matilpiridina-3-il) (metil)carbamoil) benzóico
NaH (60% em óleo mineral, 0,011 g, 0,28 mmol) foi adicionado a 0°C a uma solução de ácido metil éster N-(6-[3- (2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-4-isoxazol-ylmetoxi]-2-metil- 10 piridina-3-il)-tereftalâmico do exemplo 1, etapa 6 (0,126 g, 0,23 mmol) em THF anidro (5 ml, recentemente destilado), e a mistura da reação foi agitada por Ih em 0°C. Iodeto de metil (0,039 g, 0,28 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada em temperatura ambiente por 17 h. 0 solvente foi 15 removido sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em metanol (5 ml), seguido pela adição de NaOH (0,012 g, 0,3 mmol) e água (0,15 ml) . A mistura resultante foi agitada a 50 0C por 3 h, o solvente removido sob pressão reduzida. Água (1 ml) foi adicionada e a mistura foi acidificada a pH 6 com 20 ácido acético levando à formação de um precipitado. Os sólidos foram filtrados, lavados com água (3 ml) e secos para gerar ácido N-(6-[3-(2, 6-dicloro-fenil)-5-isopropil-4- isoxazo1-ylmetoxi]-2-metil-piridina-3-il)-N-metil- tereftalâmico como pó incolor. Rendimento: 0,072 g (56%). 1H-NMR (400 MHz, DMSO-dg) ; δ (ppm) 1,30 (6H, d), 2,08 (3H, s), 3,20 (3H, s), 3,25 (1H, br. s) , 3,44 (1H, set), 5,06 (2H, s), 6,30 (1H, d), 7,22 (2H, d), 7,44-7,65 (4H, m), 7,70 (2H, d), 9,85 (1H, s).
LC-MS: rt 3.38 min; m/z [M+H]+ 553.9 (calculado: 554.1). Exemplo 3
Ácido 4- (6- [3- (2, 6-dicloro-fenil) -5-iaopropil-isoxazol-4-
ylmatoxi] -2-metil-piridina-3-ylsulfsuaoil) -benzóico
O
Etapa 1
Para uma solução de 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-
isopropil-isoxazol-4-ylmetoxi]-2-metil-piridina-3-ilamina (do exemplo 3 etapa 5, 0,130 g, 0,330 mmol) em CH2Cl2 (5 ml) foi adicionado ácido metil éster 4-clorosulfonil-benzóico (0,113 g, 0,48 mmol) e piridina (0,026 g, 0,330 mmol). A mistura da
reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi posteriormente purificado por TLC preparativo em sílica (hexanos eluentes: acetato de etila 3:1) para dar 0,096 g (43%) de ácido metil éster 4-( 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5- isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]2-meti1-piridina-3- ilsulfamoil)-benzóico como óleo incolor.
Etapa 2
Ácido metil éster 4-( 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5- isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-metil-piridina-3- ilsulfamoil)-benzóico (0,059 g, 0,10 mmol) foi dissolvido em metanol (5 ml), seguido pela adição de NaOH (0, 076 g, 1,9 mmol) e água (0,15 ml) e a mistura foi agitada a 50°C por
3 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o residuo dissolvido em água (1,0 ml) e acidificado a pH 6 com ácido acético. 0 precipitado foi filtrado, lavado com água (3 ml) e seco para gerar ácido 4-( 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5- isopropil-isoxazol, 4-ilmetoxi]-2-metil-piridina-3-
ilsulfamoil)-benzóico como pó incolor. Rendimento: 0,045 g (78%) .
1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ; δ (ppm) 1,32 (6H, d), 1,95 (3H, s), 3,30 (1H, br. S) , 3,50 (1H, set.), 5,08 (2H, s), 6,31 (1H, d), 7,12 (1H, d), 7, 45-7, 58 (3H, m) , 7,64 (2H, d), 8,20 (2H, d) .
LC-MS: rt 3,45 min, m/z [M + H]+ 575,8 (calculado: 575,1).
25
30 Exemplo 4
Ácido 4- (N- (6- ( (3- (2, 6-diclorofenil) -5-isopropilisoxazol-4- il)metoxi) -2-metilpiridin-3-il) -N-metilaulfamoil) benzóico
Ácido metil éster 4-(6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5- isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-metil-piridina-3- ilsulfamoil)-benzóico do exemplo 3 etapa 1 (0,096 g, 0,16 10 mmol) foi dissolvido em THF anidro (3 ml) em 0°C, NaH (60% de dispersão em óleo mineral, 0,008 g, 0,192 mmol) foi adicionado e a agitação foi mantida por 1 h em 0°C. Iodeto de metila (0,030 g, 0,192 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 17 h. Os voláteis foram 15 removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em metanol (5 ml). NaOH sólido (0,010 g, 0,25 mmol) e água (0,15 ml) foram adicionados e a mistura foi agitada em 50°C por
3 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em água (1,0 ml) e o pH foi ajustado para 6 pela adição de ácido acético. 0 precipitado resultante foi filtrado, lavado com água (3 ml) e seco para gerar ácido 4-(( 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil- isoxazol-4-ilmetoxi]-2-metil-piridina-3-il)-metil-sulfamoil)- benzóico como pó incolor. Rendimento: 0,068 g (72%).
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ; δ (ppm) 1,35 (6H, d), 2,21 (3H, s), 3,08 (3H, s), 3,30 (1H, br. s), 3.54 (1H, set), 5,16 (2H, s),
6,31 (1H, d), 6,90 (1H, d), 7,47-7,59 (3H, m), 7,72 (2H, d),
8, 12 (2H, d) .
LC-MS: rt 3,65 min, m/z [M + H]+ 589,8 (calculado: 590,1).
10
Exemplo 5
Ácido metil éster N- (6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil- isoxazol-4-ilmetoxi] -2-trifluorometil-piridina-3-il) - tereftalâmico
Etapa 1
2-Cloro-6-metoxi-3-nitro-piridina (3 g, 15,9 mmol), Cul (3, 63 g, 36,7 mmol), KF anidro (1,8 g, 31 mmol) e DMF seco (20 ml) foram colocados em um reação seguida pela adição de ácido metil ésteres de cloro-difluoro-acético (5,61 g, 38,8 mmol) . A mistura foi agitada em 127-130°C por 8 h sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura foi esfriada a temperatura ambiente, derramando na mistura uma solução aquosa de NH4OH (25 ml), e NH4Cl (40 g), agitada por 0,5 horas e extraído com acetato de etila. 0 extrato foi seco em Na2SO4 anidro, 5 filtrado e o solvente foi removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica (hexanos eluentes: clorofórmio 10:9), para gerar 1,5 g (42,5%) de 6-metoxi-2-trifluorometil-3-nitro-piridina como óleo incolor.
10
Etapa 2
6-metoxi-2-trifluorometil-3-nitro-piridina (0,50 g,
2,3 mmol) foi adicionada a uma solução de HBr em ácido acético (33% HBR p/p, 5 ml) e a mistura foi agitada para a 15 80°C durante 16 h. A mistura da reação foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica (hexanos eluentes: acetato de etila 10:1) para gerar 0,396 g (83%) de 6-trifluorometil-5-nitro-piridina-2-ol como óleo amarelado.
20
Etapa 3
6-Trifluorometil-5-nitro-piridina-2-propanol (0,396 g, 1,9 mmol), [3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-il]- metanol (0,653 g, 2,3 mmol), trifenilfosfina (0,898 g,
3, 4 mmol) e benzeno (15 ml) foram colocados em uma reação seguida pela adição de diisopropildiazenodicarboxilato (0,74 g, 3,7 mmol). A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por 3 h, o solvente foi removido sob pressão reduzida, que fornecendo um produto bruto que foi posteriormente purificado por cromatografia em coluna de sílica (hexanos eluente: acetato de etila 10:1) para fornecer 0,66 g (73%) de 6-[3-(2, 6-dicloro-fenil)-5-isopropil- 5 isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-3-nitro-piridina como pó amarelo claro.
Etapa 4
Zinco em pó (0,21 g, 3,1 mmol) foi adicionado a uma suspensão vigorosamente mexida de 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5- isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-3-nitro- piridina (0,150 g, 0,310 mmol) em metanol (4ml), seguido pela adição de ácido acético (0,084 g, 1,4 mmol). A mistura resultante foi agitada por 2 h a 50°C e filtrada através de uma camada de 2 centímetros de sílica (eluente metanol) . O eluente foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido em acetato de etila (20 ml) . Esta solução foi filtrada em papel filtro, lavada com K2CO3 aquoso a 10% (5 ml), água (5 ml), seca em Na2SO4 anidro e evaporada para gerar 0,124 g (rendimento 90%) de 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5- isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometi1-piridina-3- ilamina como óleo amarelado.
Etapa 5
6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-
ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridina-3-ilamina da etapa 4 (0,125 g, 0,280 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (5 ml), seguido pela adição de trietilamina (0,085 g, 0,84 mmol) e 4-clorocarbonil éster metil-benzóico (0,139 g, 0,70 mmol). A mistura da reação foi agitada por 12 h em temperatura ambiente, lavada com K2CO3 aquosa a 10% (5 ml), água (5 ml), seca em anidro Na2SO4 e os voláteis foram evaporados para 5 gerar um produto bruto, que foi posteriormente purificado por coluna cromatográfica em sílica (hexanos eluentes: acetato de etila 3:1) para gerar 0,053 g (31%) de ácido metil éster N-(6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi ] - 2-trifluorometil-piridina-3-il)-tereftalâmico como pó
incolor.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) ; δ (ppm) 1,42 (6H, d), 3,44 (1H, set), 3,92 (3H, s), 5,20 (2H, s) , 6,81 (1H, d), 7,24-7,40 (6H, m), 8,03 (1H, bs), 8,18 (1H, d), 8,43 (1H, d).
15
LC-MS: rt 3,66 min, m/z [M + H]+ 608,0 (calculado: 608,1). Exemplo 6
Ácido N- (6- [3- (2, 6-dicloro-fenil) -5-iaopropil-4-isoxazol — ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridina-3-il) -teref talâmico Ácido metil éster N-(6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5- isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridina-3- il)-tereftalâmico do exemplo 5 (0,035 g, 0,058 mmol) foi dissolvido em metanol (3 ml), uma solução de NaOH (0,046 g, 5 1,2 mmol) em água (0,15 ml) foi adicionada e a mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por 50h. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido em água (1,5 ml). A solução resultante foi acídificada com ácido acético a pH 6 levando à formação de um precipitado que foi 10 filtrado, lavado com água (3 ml) e seco para gerar ácido
N-(6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi] -
2-trifluorometil-piridina-3-il)-tereftalâmico como pó
incolor. Rendimento 0,030 g (87%).
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ; δ (ppm) 1,37 (6H, d), 3,40 (1H, br. s), 3,53 (1H, set), 5,23 (2H, s), 6,90 (1H, d), 7,48-7,61 (3H, m), 7,83 (1H, d), 7,96 (4H, q), 10,09 (1H, s).
LC-MS: rt 3.56min; m/z [M + H]+ 594,1 (calculado: 594,1).
20
Exemplo 7
Ácido N- (6- [3- (2, 6-dicloro-£enil) -5-iaopxopil-iaoxazol-4- ilmetoxi] -2-trifluoroaMtil-piridina-3-il) -N-matil- tereftalâmico
25 O
Ácido metil éster N-( 6-[ 3-(2,6-dicloro-fenil)-5- isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridina-3- il)-tereftalâmico do exemplo 5 (0,046 g, 0,080 mmol) foi 5 dissolvido em THF anidro (6 ml) em 0°C (banho de gelo), NaH (60% de dispersão em óleo mineral, 0, 004 g, 0,10 mmol) foi adicionado e a mistura da reação foi agitada por 30 min em 0°C. Iodeto de metil (0,0142 g, 0,10 mmol) foi adicionado e a mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por 15h.
0 solvente foi removido sob pressão reduzida, o residuo resultante foi dissolvido em metanol (5 ml), NaOH (0,066 g, 1,7 mmol) em água (0,2 ml) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 8 h. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida, dissolvida em água (1,0 ml), e
acidificados com ácido acético a pH 6. 0 precipitado foi filtrado, lavado com água (3 ml), e seco para gerar ácido N- {6—[3—(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropi1-4-isoxazol-ilmetoxi]-2- trifluorometil-piridina-3-il}-N-metil-tereftalâmico como pó incolor. Rendimento: 0,036 g (74%).
20
IH-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ; δ (ppm) 1,30 (6H, d), 3,20 (4H, m) , 3.43 (1H, m), 5,15 (2H, s), 6,82 (1H, m), 7,05 (1H, m),
7, 30-7, 60 (4H, m) , 7,65 (1H, m) , 7,94 (2H, d). LC-MS: rt 3,52 min, m/z [M + Hj+ 607, 8 (calculado: 608,1) . Exemplo 8
Ácido 4- (6- [3- (2, 6-dicloro-fenil) -5-isopropil-isoxazol-4-
ilmetoxi] -2-trifluorometil-piridina-3-ilsulfamoil) -benzóico
Etapa 1
6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4- ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridina-3-ilamina do exemplo 5, etapa (0,132 g, 0,30 mmol) foi dissolvida em acetonitrilo seco (5 ml), seguido pela adição de 4-clorosulfonil éster metil-benzóico (0,070 g, 0,33 mmol) e piridina (0,071 g,
0,90 mmol) . A mistura da reação foi agitada por 12 horas a 50°C, N-metilmorfolina (0,03 g, 0,3 mmol) foi adicionado e a agitação foi mantida por 8h. A mistura da reação foi concentrada sob pressão reduzida e purificada por HPLC de 20 fase reversa (coluna Reprosil Pur-C18-A9, 250x20 mm, gradiente de eluição acetonitrila: água (2:1)-acetonitrila pura), seguido por cromatografia em coluna de sílica (hexanos eluentes: acetato de etila 3:1) para gerar 0,060 g (31%) de ácido metil éster 4-( 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-4- isoxazol-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridina-3-ilsulfamoil)- benzóico como óleo incolor.
Etapa 2
Ácido metil éster 4-(6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-
isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridina-3- ilsulfamoil)-benzóico (0,060 g, 0,10 mmol ) foi dissolvido em metanol (5 ml), NaOH (0,076 g, 1,9 mmol) em água (0,15 ml) foi adicionado e a mistura da reação foi agitada na 50°C por 10 3h. Os voláteis foram evaporados e o resíduo foi dissolvido em água (1,0 ml), acidificado com ácido acético a pH 6 e extraídos com acetato de etila (2X10 ml). Os extratos combinados foram lavados com água (3 ml), secos em Na2SO4 anidro, filtrado e concentrado sob pressão reduzida para 15 gerar ácido 4-( 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol- 4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridina-3-ilsulfamoil)- benzóico como óleo incolor. Rendimento: 0,020 g (32%).
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ; δ (ppm) 1,38 (6H, d), 3,48 (1H, set), 5,23 (2H, s), 6,74 (1H, d), 7, 35-7, 46 (3H, m) , 7,62 (1H, d), 7,77 (2H, d), 8,12 (2H, d).
LC-MS: 3/30 rt min, m/z [M + H]+ 630,2 (calculado: 629,0).
Exemplo 9
Ácido 4- ( (6- [3- (2, 6-dicloro-fenil) -5-iaopropil-isoxazol-4- ilmetoxi] -2-trifluorometil-piridina-3-il) -metil-sul famoil) - benzóico Ácido metil éster 4-(6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5- isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridina-3- ilsulfamoil)-benzóico do exemplo 8, etapa 1 (0,035 g,
0,050 mmol) foi dissolvido em THF anidro (3 ml) em 0°C (banho de gelo), NaH (60% de dispersão em óleo mineral, 0, 0026 g, 0,065 mmol) foi adicionado e a mistura da reação foi agitada 10 por Ih em 0°C. Iodeto ed metil (0, 028 g, 0,20 mmol) foi adicionado e a agitação foi mantida por 20 h. Os voláteis foram evaporados e o resíduo foi dissolvido em metanol (5 ml) . NaOH (0,010 g, 0,25 mmol) e água (0,15 ml) foram adicionados e a solução resultante foi agitada a 50°C por 15 3 h. 0 solvente foi evaporado, água (1,0 ml) foi adicionada e ácido acético até pH 6. Os voláteis foram evaporados rendendo um produto bruto, que foi purificado por HPLC de fase reversa (coluna Reprosil Pur-C18-A9, 250x20 mm, gradiente de eluição acetonitrila: água (2:1) - acetonitrila pura) para gerar 20 ácido 4-((6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4- ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridina-3-il)-metil-sulfamoil)- benzóico como óleo incolor. Rendimento: 0.010 g (31%). 1H-NMR (400 MHz, DMSO-dg) ; δ (ppm) 1,42 (6Η, d), 3.12 (3H, s),
3,53 (1H, set), 5,32 (2H, s), 6,73 (1H, d), 7,22 (1H, d), 7,38-7,48 (3H, m), 7,86 (2H, d), 8,24 (2H, d).
LC-MS: rt 2,34 min, m/z [M + H]+ 644,2 (calculado: 644,1).
Exemplo 10
SinteeB de ácido N- (6-[3-(2, 6-dicloro-fenil)-5-iaopropil- isoxazol-4-ilmetoxi] -2-metoxi-piridina-3-il) -teref talâmico
O
Etapa 1
2,6-Dicloro-3-nitro-piridina (2,0 g, 10 mmol) foi dissolvido em THF seco (10 ml) em 0°C seguido pela adição de metanol (0,30 g, 9,0 mmol), e NaH (60% de óleo mineral,
0,40 g, 10 mmol) em porções. A mistura foi agitada por Ih e derramada sobre gelo (50 g). Cristais amarelos precipitados de 6-cloro-2-metoxi-3-nitro-piridina foram filtrados e secos em ar. Rendimento: 1,8 g (92%). Etapa 2
6-Cloro-2-metoxi-3-nitro-piridina (0,30 g, 1,0 mmol) foi dissolvido em THF anidro (5 ml) em 0°C, NaH (60% em óleo mineral, 0,050 g, 1/2 mmol) foi adicionado e a mistura foi 5 agitada a essa temperatura durante lh, seguido pela adição de [3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-il]-metanol (0,20 g, 1,0 mmol). A reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 h. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida, a água (10 ml) foi adicionada e a mistura foi 10 extraída com acetato de etila (2X10 ml) . Os extratos combinados foram secos em NaaSO4 anidro, filtrados e o solvente foi removido sob pressão reduzida. 0 produto bruto foi submetido a HPLC de fase reversa (coluna Reprosil Pur- C18-A9, 250*20 mm, gradiente de eluição acetonitrila: água 15 (2: 1)-acetonitrila pura) para gerar 0,15 g (33%) de 6 — [ 3 — (2, 6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2- metoxi-3-nitro-piridina.
Etapa 3
O produto sintetizado na etapa 2 (0,23 g, 0,50 mmol) foi
dissolvido em metanol (5 ml), zinco em pó (0,32 g, 5,0 mmol) foi adicionado, seguido pelo ácido acético (0,12 g, 2,0 mmol) e a mistura da reação foi agitada por 30 min a 50°C. A mistura foi filtrada, lavada com metanol (2x10 ml) e os 25 filtrados foram evaporados. O resíduo foi dissolvido em CH2CI2 (20 ml), lavado com K2CO3 aquoso a 10% (10 ml) e água (10 ml), seco em Na2SO4 anidro e filtrado. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida, rendendo 0,20 g (96%) de 6-[3-(2,6-dicloro- fenil)-isoxazol-5-isopropil-4-ilmetoxi]-2-metoxi-piridin-3- ilamina.
Etapa 4
6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-
ilmetoxi]-2-metoxi-piridin-3-ilamina (0,150 g, 0,360 mmol) a partir da etapa 3 foi dissolvido em CH2Cl2 (5 ml), seguido pela adição de diisopropiletilamina (0,14 g, 1,1 mmol) e ácido metil éster 4-clorocarbonil-benzóico (0,090 g,
0,44 mmol). A mistura foi fornecida para reagir durante 6 horas e concentrada sob pressão reduzida. Cromatografia de coluna de resíduos em sílica (hexanos eluentes: acetato de etila 1: 2) deu 0,12 g (57%) de ácido metil éster N-(6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi] - 15 2-metoxi-piridin-3-il)-tereftalâmico.
Etapa 5
0 produto derivado da etapa 4 (0,030 g, 0,05 mmol) em metanol (2 ml) foi tratado com NaOH (0,002 g, 0,05 mmol) e água (0,2 ml) e a mistura de reação foi agitada em 50°C durante 2h. 0 solvente foi evaporado, água (10 ml) foi adicionada e a mistura foi acidificada com ácido acético a pH
6, levando à formação de um precipitado que foi filtrado, lavado com água (3 ml) e seco ao ar para dar ácido N-(6-[3- (2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-
metoxi-piridin-3-il)-tereftalâmico. Rendimento: 0,020 g (67%) . 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ; δ (ppm) 1,37 (6Η, d), 3,49 (1H, set), 3,80 (3H, s), 5,16 (2H, s), 6,16 (1H, d), 7,41-7,62 (3H, m), 7,80 (1H, d), 8,01 (4H, q), 9,42 (1H, s).
5
LC-MS: rt 3,40 min, m/z [M + H]+ 555,8 (calculado: 555,1). Exemplo 11
Ácido N-(6-[3- (2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxãzol-4- ilmetoxi] -2-metoxi-piridin-3-il) -N-metil-teref talâmico
O
Etapa 1
Ácido metil éster N-(6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-
isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-metoxi-piridin-3-il)- tereftalâmico do exemplo 9, atapa 4 (0,070 g, 0,12 mmol) foi dissolvido em THF anidro (5 ml) e arrefecido a 0°C. NaH (60% de dispersão em óleo mineral, 0,006 g, 0,15 mmol) foi 20 adicionado e a mistura da reação foi agitada por 30min. Iodeto de metila (0,021 g, 0,15 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada em temperatura ambiente por 12 h. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido em água (10 ml) e neutralizado com ácido acético. O precipitado resultante foi filtrado e seco para gerar 0,050 g (71%) de ácido metil éster N-( 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)- isoxazol-5-isopropil-4-ilmetoxi]-2-metoxi-piridin-3-il)-N- metil-tereftalâmico.
Etapa 2
O produto derivado da etapa 1 (0,030 g, 0,05 mmol) em metanol (2 ml) foi tratado com água (0,2 ml) e NaOH (0,002 g, 10 0, 05 mmol) e a mistura foi agitada em 50°C por 2 h . Os voláteis foram evaporados, dissolvidos em água (10 ml) e neutralizados com ácido acidico. O precipitado resultante foi filtrado, lavado com água e seco para dar o composto título. Rendimento: 0,025 g (85%).
15
1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ; δ (ppm) 1,30 (6H, d), 3,10 (3H, s),
3,40 (1H, set), 3,61 (3H, s), 5,10 (2H, s), 5,96 (1H, d),
7,04 (2H, d), 7,39 (1H, d), 7,41-7,49 (3H, m), 7,62 (2H, d).
LC-MS: rt 3,29 min, m/z [M + H]+ 569,9 (calculado: 570,1).
Exemplo 12
SintesB d» ácido 4-(6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil- isoxa.zol-4-ilmetoxi] -2-mBtoxi-piridin-3-ilsulfamoil) -benzóico
25 O
Etapa I
6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4- 5 ilmetoxi]-2-metoxi-piridin-3-ilamina (exemplo 12, etapa 2, 0,190 g, 0,46 mmol) em CH2Cl2 (5 ml) foi tratado com ácido metil éster 4-clorosulfonil-benzóico (0,130 g, 0,55 mmol) e diisopropiletilamina (0,12 g, 0,92 mmol). A mistura da reação foi agitada por IOh e concentrada no vácuo. O produto bruto 10 foi purificado por cromatografia em coluna de sílica (hexanos eluentes: acetato de etila 1: 2) para gerar 0,070 g (25%) de ácido metil éster 4-( 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil- isoxazol-4-ilmetoxi]-2-metoxi-piridin-3-ilsulfamoil)- benzóico.
15
Etapa 2
O produto da etapa 1 (0,030 g, 0,05 mmol) em metanol (2 ml) foi tratado com NaOH (0,002 g, 0,05 mmol) e água (0,2 ml) e a mistura da reação foi agitada em 50°C por 2h . 0 solvente 20 foi re-evaporado, dissolvido em água (10 ml) e acidificado com ácido acético a pH 6, levando à formação de um precipitado que foi filtrado, lavado com água (3 ml) e seco fornecendo o composto título. Rendimento: 0,023 g (77%). 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ; δ (ppm) 1,32 (6Η, d), 3,31 (3H, s), 3,43 (1H, set), 5,11 (2H, s), 6,07 (1H, d), 7,36 (1H, d), 7,42-7,58 (3H, m), 7,73 (2H, d), 8,05 (2H, d).
LC-MS: rt 3,34 min, m/z [M + H]+ 591,9 (calculado: 591,1).
Exemplo 13
Ácido 4- ( (6-[3- (2, 6-dicloro-fenil) -5-isopropil-iaoxazol-4-
1 lmetoxi] -2-metoxi-piridin-3-il) -metil-sulfamoil) -benzóico
O
Etapa 1
Os produtos derivados do exemplo 12, etapa 1 ácido éster metílico (4-{6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4- ilmetoxi]-2-metoxi-piridin-3-ilsulfamoil}-benzóico, 0,030 g, 0,05 mmol) em THF anidro (3 ml) foram resfriados a 0°C, NaH (60% de dispersão em óleo mineral, 0,0024 g, 0,06 mmol) foi adicionado e a mistura da reação foi agitada por 30 min a 0°C. Iodeto de metila (0,009 g, 0,06 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada em temperatura ambiente por 12 h. Os IOl / 169 voláteis foram evaporados, metanol (5 ml), NaOH (0,010 g, 0,25 mmol) e água (0,15 ml) foram adicionados e a mistura foi agitada a 50°C durante 3h. O solvente foi removido sob vácuo, a água (10 ml) foi adicionada e a mistura foi acidificada com 5 ácido acético a pH 6. O precipitado resultante foi filtrado, lavado com água (3 ml) e seco para gerar 0,029 g (98%) de ácido metil éster 4-(( 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil- isoxazol-4-ilmetoxi]-2-metoxi-piridin-3-il)-metil-sulfamoil)- benzóico.
10
Etapa 2
O produto, proveniente da Etapa 1 (0.030 g, 0,05 mmol) em metanol (2 ml) foi tratado com NaOH (0,002 g, 0,05 mmol) e água (0,2 ml) e aquecido a 50°C por 2h. 0 solvente foi
evaporado, re-dissolvido em água (10 ml) e acidificado com ácido acético para pH6. 0 precipitado resultante foi filtrado, lavado com água (3 ml) e seco para dar o composto título. Rendimento: 0,025 g (83%).
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ; δ (ppm) 1,32 (6H, d), 3,06 (3H, s),
3,31 (3H, s), 3,43 (1H, set), 5,15 (2H, s), 6,09 (1H, d), 7,38 (1H, d), 7,42-7,61 (3H, m), 7,68 (2H, d), 8,08 (2H, d).
LC-MS: rt 3,37 min, m/z [M + H]+ 606,2 (calculado: 606,1).
25 Exemplo 14
Ácido N- (6- [3- (2, 6-dicloro-fenil) -5-iaopropil-iaoxazol-4-
ilmetoxi] -4-metil-piridina-3-il) - teref talâmico
Etapa 1
Metal de sódio (0,106 g, 4,6 mmol) foi dissolvido em metanol (5 ml) em 0°C, 2-cloro-4-metil-5-nitro-piridina 10 (0,2 g, 1,0 mmol) foi adicionado e a mistura da reação foi agitada a 0°C por lh, e em temperatura ambiente por I h. O solvente foi removido sob vácuo, a água (5 ml) foi adicionada, o precipitado cristalino foi filtrado, lavado com água e seco para gerar 0,13 g (68%) de 2-metoxi-4-metil-5- 15 nitro-piridina.
Etapa 2
O produto da etapa 1 (0,13 g, 0,77 mmol) foi dissolvido em 0°C em solução de HBr em ácido acético (33% p/p, 5 ml) e 20 em seguida agitado a 60°C por 2h, resfriado à temperatura ambiente e vertido em éter etílico (10 ml). 0 precipitado cristalino foi filtrado, lavado com éter e seco para gerar 155 g (86%) de 4-metil-5-nitro-piridina-2-ol. Etapa 3
O produto derivado da etapa 2 (0,15 g, 1,0 mmol),
[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-il]-metanol (0,28 g, 1,0 mmol) e trifenilfosfina (0,29 g, 1,1 mmol) em 5 benzeno (10 ml) foram tratados com diisopropil- diazenedicarboxilato (0,024 g, 1,2 mmol) e a mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por 12h. Os compostos voláteis foram evaporados e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica (hexanos 10 eluentes: acetato de etila 3:1) para fornecer 0,15 g (56%), de 2-[3-(2,6-dicloro-fenil) -5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi] - 4-metil-5-nitro-piridina.
Etapa 4
O produto derivado da etapa 3 (0,15 g, 0,35 mmol) em
metanol (5 ml) foi tratado com zinco em pó (0,23 g, 3,5 mmol) e ácido acético (0,10 g, 1,7 mmol) e a mistura da reação foi agitada a 50°C por 30 min. Os sólidos foram filtrados e lavados com metanol (2x10 ml) e o filtrado foi evaporado. O 20 resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 (20 ml) , lavado com K2CO3 aquoso a 10% (10 ml) e água (10 ml), seco em Na2SO4 anidro e concentrado para gerar 0,147 g (98%) de 6-[3-(2,6-dicloro- fenil ) -5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi J -4-metil-piridina-3- ilamina.
25 Etapa 5
O produto proveniente da etapa 4 (0,150 g, 0,380 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (5 ml), diisopropiletilamina 5 (0,073 g, 0,57 mmol) e ácido metil éster 4-clorocarbonil- benzóico (0,090 g, 0,45 mmol) foram adicionados e a mistura da reação foi agitada por 6h em temperatura ambiente. Os voláteis foram evaporados e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica (hexanos eluentes: 10 acetato de etila 1:2) para gerar 0,085 g (40%) de ácido metil éster N—{6—[3—(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-
ilmetoxi]-4-metil-piridina-3-il}-tereftalâmico.
Etapa 6
O produto resultante da etapa anterior (0,040 g,
0,072 mmol) foi dissolvido em metanol (2ml), tratado com NaOH (0,003 g, 0,072 mmol) e água (0,2 ml) e a mistura da reação foi agitada em 50°C por 2h. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo re-dissolvido na água (10 ml) e 20 acidificado com ácido acético a pH 6. O precipitado resultante foi filtrado, lavado com água (3 ml) e seco para gerar ácido N-{6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol- 4-ilmetoxi]-4-metil-piridin-3-il}-tereftalâmico. Rendimento: 0,030 g (75%) .
25
IH-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ; δ (ppm) 1,37 (6H, d), 2,15 (3H, s), 3,53 (1H, set), 5,07 (2H, s) , 6,53 (1H, s), 7,50-7,65 (3H, m), 7,89 (1H, s), 8,04 (4H, s), 9,92 (1H, s). LC-MS: rt 3,14 min, m/z [M + H]+ 540,3 (calculado: 539,1). Exemplo 15
Ácido 3- (6- ( (3- (2, 6-diclorofenil) -5-metilisoxa.zol-4-il)
matoxi) piridia-3-ilcarbaaoil) benzóico
Exemplo 15 foi preparado por um processo semelhante ao empregado para a preparação do exemplo 1 utilizando as matérias-primas.
1H-NMR (400 MHz, MeOH-d4); δ (ppm) 2,57 (3H, s), 5,08 (2H, s),
6,53 (1H, d), 7, 33-7, 45 (3H, m) , 7,54 (1H, t), 7,84 (1H, d), 8,05 (1H, d), 8,14 (1H, d), 8,26 (1H, s), 8,50 (1H, s).
LC-MS: rt 3,38 min, m/z [M + H]+ 497,8 (calculado: 498,1).
Exemplo 16
Ácido 4- (6- ( (3- (2, 6-diclorofenil) -5-metilisoxazol-4-il)
metoxi) pixidin-3-ilcarbamoil) benzóico Exemplo 16 foi preparado por um processo semelhante ao empregado para a preparação do exemplo 1 utilizando as matérias-primas.
IH-NMR (400 MHz, MeOH-d4) ; δ (ppm) 2,56 (3H, s), 5,08 (2H, s), 6,53 (1H, d), 7, 32-7, 46 (3H, m) , 7,84 (1H, t), 7,93 (2H, d) , 8,07 (2H, d), 8,25 (1H, s) .
10
LC-MS: rt 3,43 min, m/z [M + H]+ 497,8 (calculado: 498,1). Exemplo 17
Ácido 3- (N- (6- ( (3- (2, 6-diclorofenil) -5-metilisoxazol-4-il) metoxi)piridin-3-il) sulfamoil) benzóico
Exemplo 17 foi preparado por um processo semelhante ao empregado para a preparação de exemplo 3 utilizando as matérias-primas. 1H-NMR (400 MHz, MeOH-d4) ; δ (ppm) 2,72 (3Η, s), 5,22 (2H, s), 6,62 (1H, d), 7,50 (1H, d) , 7,55-7,65 (3H, m), 7,76 (2H, t),
8,05 (1H, d), 8,38 (1H, d), 8,50 (1H, s).
LC-MS: rt 3,52 min, m/z [M + H]+ 533, 8 (calculada: 534, 0) .
Exemplo 18
Ácido 4- (N- (6- ( (3- (2, 6-diclorofenil) -5-metilisoxazol-4-il) metoxi)piridin-3-il) sulf amoil)benzóico
IO
Exemplo 18 foi preparado por um processo semelhante ao empregado para a preparação de exemplo 3 utilizando as matérias-primas.
1H-NMR (400 MHz, MeOH-d4) ; δ (ppm) 2,49 (3H, s), 5,00 (2H, s),
6,40 (1H, d), 7,25 (1H, d), 7,32-7,39 (3H, m) , 7,52 (1H, s),
7, 64 (2H, d), 8,02 (2H, d) .
20
LC-MS: rt 3,42 min, m/z [M + H]+ 533,8 (calculado: 534,0).
25 Exemplo 19 Ácido N-{5- [3- (2, 6-dicloro-foa.il) -5-isopropil-isoxazol-4-
ilmotoxi] -3-metil-piridina-2-il) - tora f talâmico
O
Etapa 1
3-metil-piridina-2-ilamina (5,0 g, 46,2 mmol) foi dissolvido em ácido sulfúrico concentrado (24ml), a mistura foi refrigerada a 0°C e uma mistura de ácido nítrico fumante (d =1,5, 3,5 ml ) e ácido sulfúrico concentrado (3,5 ml) foi adicionado em gotas para a mistura da reação enquanto a temperatura foi mantida abaixo de 20°C. A mistura foi agitada a quente a 20°C e transferida em porções de 3-5 ml para um segundo balão, que foi aquecido a 35-40°C (a temperatura não foi autorizada a subir ao longo de 40°C - controlando cuidadosamente a temperatura após cada adição de uma nova porção). A mistura da reação resultante foi posteriormente agitada por mais 30 min a 50°C, resfriada a temperatura ambiente e neutralizada com solução aquosa concentrada de amônia. Isto levou à formação de um precipitado que foi filtrado, lavado com água e DMFA aquoso (50%, 6 ml), e recristalizado em DMFA para render 3-metil-5-nitro-piridina- 2-ilamina (2,52 g, 35%). Etapa 2
O produto da etapa 1 (0,96 g, 6,27 mmol), ácido metil éster 4-clorocarbonil-benzóico (2,49 g, 12,5 mmol) e trietilamina (1,27 g, 12,5 mmol) foram dissolvidos em 5 diclorometano anidro (20 ml) e a mistura foi agitada por 96h em temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida, e os resíduos resultantes foram posteriormente purificados por cromatografia em coluna de gel de sílica (eluente clorofórmio e, em seguida, clorofórmio-metanol 95:5) 10 gerando um produto bis acetilado metil 4-[[4-(metoxi- carbonil)benzoil](3-metil-5-nitro-2-
piridinil)amino]carbonilbenzeno carboxilato (1,1 g, 37%).
Etapa 3
O produto derivado da etapa 2 (0,5 g, 2,1 mmol) foi
dissolvido em metanol seco (20 ml) e hidrogenado a pressão de
4 bar de H2 e níquel Raney como catalisador (5% w/w) . O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica utilizando clorofórmio-metanol (40:1) como eluente para gerar 0,189 g (20%) de ácido éster metil N-(5-amino-3- metil-piridina-2-il)-tereftalâmico.
Etapa 4
O produto resultante da etapa anterior (0,189 g, 0,66
mmol) foi suspenso em 50 % de ácido sulfúrico aquoso (2,3 g) e resfriado a 0°C. Uma solução de nitrito de sódio (0,047 g, 0,68 mmol) em água (0,5 ml) foi adicionado em gotas na HO/ 169 mistura resultante mantendo a temperatura a 3-5°C e agitada por mais 30 min a 3°C e por 2h em 50°C. Após arrefecimento à temperatura ambiente foi formado um precipitado que foi filtrado, seco, lavado e seco com diclorometano para gerar 5 ácido metil éster N-(5-hidroxi-3-metil-piridina-2-il)- tereftalâmico (0,13 g, 58%).
Etapa 5
Uma mistura de ácido metil éster N-(5-hidroxi-3-metil- piridina-2-il)-tereftalâmico a partir da etapa 4 (0,135 g, 0,47 mmol), [3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4 - il]-metanol (0,124 g, 0,43 mmol) e trifenilfosfina (0,203 g, 0,77 mmol) em benzeno (6 ml) foi tratada com diisopropildiazenodicarboxilato (0,165 g, 0,82 mmol) e a mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por 3 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado por HPLC de fase reversa (coluna Reprosil Pur-C18-A9, 250x20 mm, gradiente de eluição acetonitrila: água (2:1) - acetonitrila), para gerar ácido metil éster N-{5-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol- 4-ilmetoxi]-3-metil-piridina-2-il)-tereftalâmico como óleo amarelo (0,025 g, 10%).
Etapa 6
A solução do produto a partir da etapa 5 (0,025 g, 0,045
mmol) em dioxano (1,5 ml) foi tratada com LÍOH.H2O (0,004 g, 0,09 mmol) em água (0,1 ml) e a mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por 3 dias. A mistura foi tratada com ácido acético (até pH 6) , o solvente foi evaporado seguido pela adição de água (1 ml) . 0 precipitado resultante foi filtrado, lavado com água (2x1 ml) e seco para gerar ácido N-{5-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]- 5 3 -metil-piridina-2-il)-tereftalâmico como pó incolor, m.p. 218°C. Rendimento: 0,016 g (66%).
1H-NMR (400 MHz, CHCl3); δ (ppm) 1,44 (6H, d), 2,30 (3H, s),
3,32 (1H, set), 4,81 (2H, s), 7,15 (1H, s), 7, 30-7,45 (4H, m), 7,77 (1H, br.s), 8,18 (4H, q), 10,40 (1H, br.s).
LC-MS: rt 2,02 min, m/z [M + H]+ 540,0 (calculado: 539,1) .
Exemplo 20
Ácido metil éster N- {6- [3- (2, 6-dicloro-fenil) -5-isopropil- isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3-il)- isoftalâmico
Uma solução de 6-[3-(2, 6-dicloro-fenil)-5-isopropil- isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3-ilamina (0,128 g, 0,290 mmol) (sintetizado como descrito para o
.Cl
F
20 exemplo 5, etapa 4), em CH2Cl2 (5 ml) foi tratada com trietilamina (0,029 g, 0,29 mmol) e ácido metil éster 3- clorocarbonil-benzóico (0,063 g, 0,32 mmol). A mistura da reação foi agitada por 16 h em temperatura ambiente, lavada 5 com K2CO3 aquoso a 10% (5 ml) e água (5 ml), seca (anidro Na2S04) e evaporada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (hexanos eluentes: acetato de etila 3:1) para gerar ácido metil éster N-{6-[3- (2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2- 10 trifluorometil-piridin-3-il)-isoftalâmico (0,13 g, 74%) como óleo incolor.
1H-NMR (400 MHz, CHCl3); δ (ppm) 1,40 (6H, d), 3,45 (1H, set) , 3,96 (3H, s), 5,19 (2H, s), 6,80 (1H, d), 7, 20-7,40 (3H, m) , 7, 60 (1H, t), 8,03 (1H, br.s), 8,05 (1H, d), 8,25 (1H, d), 8,41 (1H , d), 8,50 (1H, s).
LC-MS: rt 2,38 min, m/z [M + H]+ 608, 3 (calculado: 608,1).
Exemplo 21
Ácido N- {6- [3- (2, 6-dicloxo-£enil) -5-isopropil-isoxazol-4-
ilmetoxi]-2-trifluoxomBtil-pixidin-3-il} -isof talâmico Uma solução de ácido metil éster N-{6-[3-(2, 6-dicloro- fenil) -5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil- piridin-3-il}-isoftalâmico do exemplo 20 (0,037 g,
0,061 mmol) em metanol (5 ml) foi tratada com NaOH (0, 044 g, 5 1,1 mmol) em água (0,15 ml), e a mistura da reação foi agitada á temperatura ambiente por 50 h. Os voláteis foram evaporados, dissolvidos em água (1,0 ml) e acidificados com ácido acético a pH 6, levando ã formação de um precipitado branco que foi filtrado, lavado com água (2X1 ml) e seco para 10 gerar ácido N-{6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-
4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3-il)-isoftalâmico como um pó incolor. Rendimento: 0,032 g (88%).
1H-NMR (400 MHz, CHCl3); δ (ppm) 1,38 (6H, d), 3,40 (1H, m) , 5,15 (2H, s), 6,65 (1H, m) , 7.15-7,40 (4H, m) , 7,50-8,50 (6H, m) .
LC-MS: rt 2,22 min, m/z [M + H]+ 594, 1 (calculado: 594,1) . m.p. 153,8-154,8°C.
20
Exemplo 22
Ácido 3- ( (6- ( (3- (2, 6-diclorofenil) -5-iaopropiliaoxazol-4-il) metoxi) -2- (trifluorometil)piridina-3-il) (metil) carbamoil) benzóico
25 O composto titulo foi sintetizado a partir do produto da etapa 4 de exemplo 5(6-[3-(2 , 6-dicloro-fenil)-5-isopropil- 5 isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3-ilamina) por acoplamento com ácido metil éster clorocarbonil-3-benzóico, de acordo com o procedimento para a etapa 5 do exemplo 5 e posterior N-metilação e hidrólise de éster seguidas do procedimento descrito no exemplo 7.
0
1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ; δ (ppm) 1,30 (6H, d), 3,20 (3H, m) ,
3,43 (3H, m) , 5,15 (2H, s), 7, 20-7,80 (7H, m) , 7,95 (2H, d).
15
LC-MS: rt 2,20 min, m/z [M + H]+ 608,2 (calculado: 608,1). Exemplo 23
N1- (6- ( (3- (2, 6-diclorofenil) -5-isopropilisoxazol-4-il) metoxi) -2- (trifluorometil)piridin-3-il) -N1 -metilteref talami ria
H9N
20
Cl Para uma solução a O0C de ácido N-{6-[3-(2,6-dicloro- fenil ) -5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil- piridin-3-il)-N-metil-tereftalâmico (exemplo 7) (0,05 g, 0,082 mmol) em diclorometano (3 ml) foi adicionado cloreto de
oxalil (0,021 g, 0,164 mmol) e uma gota de dimetilformamida e a mistura da reação foi agitada a 0°C por Ih e então em temperatura ambiente por 2h. A mistura da reação foi evaporada, o resíduo foi dissolvido em diclorometano (3 ml), evaporado e redissolvido em dioxano (3 ml). Esta solução foi 10 adicionada a uma solução saturada de amoníaco em dioxano (3 ml) em 0°C e a mistura da reação foi agitada a 0°C por 1 h, e em temperatura ambiente por 2 h. A mistura da reação foi evaporada, o resíduo foi triturado com hexanos e filtrado. O precipitado foi lavado com hexanos (2X5 ml) e seco para gerar 15 N1-(6-((3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropilisoxazol-4- il)metoxi)-2-(trifluorometil)piridina-3-il)-N1- metiltereftalamida (0,044 g, 88% de rendimento) como pó amarelo claro. m.p. 229°C (decomposição).
1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ; δ (ppm) 1,30 (6H, m) , 3,30 (3H, s),
3,40 (1H, m) , 5,15 (2H, s), 7,10-8,10 (11H, m) .
LC-MS: rt 2,01 min, m/z [M + H]+ 607,2 (calculado: 607,1).
Exemplo 24
N1-(6- ((3-(2, 6-diclorofenil) -5-isopropilisoxazol-4-il) metoxi) -2- (trifluorometil)piridina-3-il) -N1 ,N4,Ui- trimetilteref talamida α
Para uma solução a O0C de ácido N-{6-[3-(2,6-dicloro- fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-
piridin-3-il}-N-metil-tereftalâmico (exemplo 7) (0,050 g,
0,082 mmol) em diclorometano (3 ml) foi adicionado cloreto de oxalil (0,021 g, 0,164 mmol) e uma gota de dimetilformamida e a mistura da reação foi agitada a O0C por lhe em 10 temperatura ambiente por 2 h. A mistura da reação foi evaporada, redissolvida em diclorometano (3 ml), e novamente evaporada, redissolvida em dioxano (3 ml). Esta solução foi refrigerada a O0C e, em seguida, adicionada a um 0°C em solução 20% de dimetilamina tetrahidrofurano (3 ml) e a 15 mistura da reação foi agitada a O0C por 1 h, e em temperatura ambiente por 2 h. A reação foi evaporada e o material bruto foi purificado por TLC preparativo sobre sílica para dar o composto titulo como pó branco. Rendimento: 0,036 g (69%).
M.p. 166,8-167,8°C.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6); δ (ppm) 1,35 (6H, m), 2,84 (3H, s), 3,05 (3H, s), 3,35 (3H, s), 3,45 (1H, m) , 5,20 (2H, s) , 6,70-
7,00 (1H, m), 7,20-7,90 (9H, m). LC-MS: rt 2,09 min, m/z [M + H]+ 635,3 (calculado: 635,1). Exemplo 25
N-(6-((3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropillsoxazol-4-±l)metoxi) -2- (trifluorometil)piridiaa-3-il) -N-metil-4- (lH-tetrazol-5- il) benzam i da
isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3- ilamina (0,30 g, 0,67 mmol) obtida a partir da etapa 4 do 15 exemplo 5 e trietilamina (0, 082 g, 0,81 mmol) em diclorometano (7 ml) foram adicionados a uma suspensão de cloreto de 4-ciano-benzoil (0,133 g, 0,810 mmol) em diclorometano (10 ml). A mistura da reação foi agitada por 1 h em temperatura ambiente e refluída por 9 horas e os 20 voláteis foram evaporados. 0 material bruto foi separado por cromatografia em coluna de sílica (eluente: diclorometano) para fornecer 0,12 g de 4-ciano-N-{6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-
N
10
Etapa 1
Para uma solução de 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5- 5-sopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3- il}benzamida em 31% de rendimento.
5
Etapa 2
Uma suspensão de 60% de hidreto de sódio em óleo mineral (0,025 g, 0,50 mmol) foi adicionada ao produto da etapa 1 (0,17 g, 0,29 mmol) em THF seco (10 ml), sob o argônio e a 10 mistura foi agitada por 20 minutos. Uma solução de iodometano (0,085 g, 0,60 mmol) em THF seco (1 ml) foi adicionada em gotas e a mistura foi agitada por 16 h em temperatura ambiente. A mistura da reação foi diluída em água (5 ml), extraída com diclorometano (3x10 ml), seca em MgSO4 e 15 evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida em sílica para gerar 4-ciano-N-{6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5- isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3- il)-N-metilbenzamida (0,11 g, 63%).
Etapa 3
A azida sódica (0,018 g, 0,27 mmol) e NH4Cl sólido (0,018 g, 0,33 mmol) foram adicionados a uma solução do produto derivado da etapa 2 (0,052 g, 0,088 mmol) em DMF (0,6 ml). A mistura da reação foi intensamente agitada por 10 25 ha 75°C por 8 h em IOO0C. Após arrefecimento à temperatura ambiente a mistura da reação foi diluída com água (2 ml), acidificada a pH 5 utilizando HCl aquoso a 10% e extraída com diclorometano (3X5 ml). Esse extrato orgânico foi seco (MgSO4) e evaporado. 0 residuo foi purificado por cromatografia rápida em sílica (eluente diclorometano-metanol 1:3) para fornecer 0,02 g (36%) do composto título.
1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ; δ (ppm) 1,15-1,45 (6H, m) , 3,30 (3H, s), 3,45 (1H, m), 5,20 (2H, s), 6,75-6,95 (1H, m) , 7,10-
7,30 (1H, m), 7,30-7,60 (4H, m), 7,75-7,90 (1H, m), 7,90-8,15 (2H, m).
LC-MS: rt 2,13 min, m/z [M + H]+ 631,8 (calculado: 632,1).
10
Exemplo 2 6
Ácido 4- ( (5- ( (3- (2, 6-diclorofenil) -5-iaopxopilxsoxazol-4-il) metoxi) -3-matllpirldina-2-±l) (metil) carbamoil)benzóico
Para uma solução de ácido metil éster N-{5-[3-(2,6- dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-3-meti1- piridina-2-il)-tereftalâmico (sintetizada como descrito na etapa 5 do exemplo 19, 0,096 g, 0,176 mmol) em THF seco
(5 ml) a 0°C foi adicionada uma suspensão de 60% de hidreto de sódio em óleo mineral (0,01 g, 0,26 mmol). A agitação foi mantida por mais 30 minutos e, em seguida, iodeto de metila (0,037 g, 0,26 mmol) foi adicionado à mistura da reação. Após 5 h, hidróxido de sódio (0,035 g, 0,87 mmol) e água (0,2 ml) foram adicionados e a agitação foi mantida por 4 h. A mistura foi evaporada, o resíduo foi tratado com água (1 ml), a solução foi acidificada com ácido acético a pH 6, extraída 5 com clorofórmio (3X20 ml), os extratos foram combinados e secos em NaaSO4, o solvente foi removido em vácuo. 0 resíduo foi purificado por eluição por cromatografia HPLC preparativa com acetonitrila-água para fornecer ácido N-{5-[3-(2,6- dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-3-metil- 10 piridin-2-il)-N-metil-tereftalâmico como óleo amarelo. Rendimento: 0,016 g (17%).
1H-NMR (400 MHz, CDCl3); δ (ppm) 1,41 (6H, d), 2,00 (3H, s), 3,25-3,40 (1H, m), 3,40 (3H, s), 4,72 (2H, s), 6,62 (1H, s), 7,29-7,50 (5H, m), 7,78-7,92 (3H, m).
Cl MS m/z 554 (MH+).
Exemplo 27
Ácido 4-((6-((3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropilisoxazol-4-il) metoxi) -2- (trifluorometil)p±ridin-3-ilamino)mstil) benzóico Etapa I
O produto sintetizado pelo método descrito para o exemplo 5, etapa 4, {6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil- isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3-ilamina}
(0,579 g, 1,3 mmol) e ácido metil éster 4-formil-benzóico (0,639 g, 3,9 mmol) foram dissolvidos em 1,2-dicloroetano (20 ml) e ácido acético glacial (0,468 g, 7,8 mmol) foi adicionado. A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 h, então triacetoxi-borohidreto de sódio 10 (1,24 g, 5,9 mmol) foi adicionado e a agitação foi mantida por 24 h. Uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (15 ml) foi adicionada e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila (3 * 20 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos em sulfato de 15 sódio e concentrados a pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por HPLC (fase reversa, eluente: acetonitrila- água), para fornecer 0,38 g (49%) de ácido metil éster 4 —( (6 — [3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2- trifluorometil-piridin-3-ilamino)-metil)-benzóico como um pó 20 branco.
Etapa 2
0 produto derivado da etapa 1 (0,026 g, 0,044 mmol) foi dissolvido em metanol (5 ml) e uma solução de hidróxido de 25 sódio (0,018 g, 0,44 mmol) em água (0,2 ml) foi adicionada. A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por 8 h. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi tratado com água (1 ml) . A solução resultante foi acidificada com ácido acético a pH 6. 0 precipitado formado foi filtrado, lavado com água (3x1 ml) e seco ao ar para fornecer ácido 4— ({6— [3 — (2, 6-dicloro-fenil)-isoxazol-5-isopropil-4-ilmetoxi}-2- trifluorometil-piridin-3-ilamino)-metil)-benzóico como um pó branco. Rendimento: 0,017 g (68%).
M.p. 259,1-260,1°C.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ; δ (ppm) 1,27 (6H, d), 3,35-3,55 (1H, m) , 4,44 (2H, s), 5,02 (2H, s) , 6,06 (1H, br.s), 6,54 (1H, d), 7,06 (1H, d), 7,38 (2H, d), 7, 40-7,50 (3H, m) , 7,87 (2H, d).
LC-MS: rt 2,12 min, m/z [M + H]+ 580,1 (calculado: 580,1).
15
Exemplo 28
Ácido 4-(((6-((3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropiliaoxazol-4-il) matoxi) -2- (trifluorometil)piridina-3- il)(metil)amino)metil)benzóico
20
Cl
Etapa 1
Os produtos derivados do exemplo 27, etapa 1, ácido metil éster 4-({6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil- isoxazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3-ilamino)- metil)-benzóico (0,076 g, 0,128 mmol) foram dissolvidos em
1, 2-dicloroetano (5 ml) e paraformaldeido (0, 023 g,
0,77 mmol), ácido acético (0,046 g, 0,77 mmol) de sódio e triacetoxiborohidreto (0,163 g, 0,77 mmol) foram adicionados. A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por
24 h. A mistura foi diluida com solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio e extraída com três porções de acetato de etila. Os extratos combinados foram secos em 10 sulfato de sódio e concentrados a pressão reduzida. O resíduo foi purificado por TLC preparativo em sílica (hexano eluente- acetato de etila 5:1) para obter 0,046 g (59%) de ácido metil éster 4—[{{6—[3—(2,6-dicloro-fenil)-5-isoxazol-isopropil-4- ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3-il}-metil-amino}-metil]- 15 benzóico como um óleo incolor.
LC-MS m/z 608 (MH+).
Etapa 2
A suspensão do produto derivado da etapa 1 (0,046 g,
0,076 mmol) em metanol (5 ml) foi tratada com hidróxido de sódio (0,03 g, 0,76 mmol) e água (0,3 ml) e a mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente durante 7 h. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi diluído com 25 água (1 ml). A solução resultante foi acidificada com ácido acético a pH 6 e o precipitado formado foi filtrado, lavado com água (3X5 ml) e seco ao ar para obter o produto título como um pó branco. Rendimento: 0,030 g (66%). Μ.p. 96,1-97,1°C.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-dg) ; δ (ppm) 1,31 (6Η, d), 2,48 (3H, s), 3,41-3,57 (1H, m), 4,00 (2H, s), 5,19 (2H, s), 6,81 (1 H, d), 7,33 (2H, d), 7,40-7,52 (3H, m), 7,84 (2H, d), 7,96 (1 H, d).
LC-MS: rt 2,21 min, m/z [M-H]" 592,2 (calculado: 592,1).
Exemplo 29
Ácido 4-((6-( (1-(2,6-Diclorofenil)-4-isopropil-lH-l,2,3- triazol-5-il)matoxi)-2- (tzifluorametil)piridina-3-il) (metil) carbamoil)benzóico
O
15
Etapa 1
Uma mistura de 2, 6-diclorofenil azida (25 g, 0,13 mol) em tolueno (500 ml) e 4-metilpent-2-in-l-ol (52,1 g,
0,53 mol) foi refluído sob argônio por 35 horas. Tolueno foi removido sob vácuo e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia utilizando coluna de sílica gel (malha 100-200) e eluído com 14% de hexanos acetato de etila para gerar o (I-(2,6-diclorofenil)-4-isopropil-lH-l,2,3-triazole-5-il) metanol desejado (4,5 g, 23% de rendimento) próximo ao regioisomérico (1- (2,6-diclorofenil)-5-isopropil-lH-l,2,3- triazol-4-il)metanol como subproduto.
5
IH-NMR (200 MHz, CDCl3) δ: 1,4 (d, 6H) , 3,15-3,25 (m, 1H), 4,57 (s, 2H) e 7,4-7,6 (m, 3H).
Etapa 2
O produto sintetizado na etapa 2 do exemplo 5,
(5-nitro-6-trifluorometil-piridina-2-ol) (0,080 g, 0,38 mmol) e (l-(2,6-diclorofenil)-4-isopropil-lH-l,2,3-triazol-5-
il)metanol (0,100 g, 0,35 mmol) derivado da etapa anterior deste exemplo e trifenilfosfina (0,165 g, 0,63 mmol) foram 15 dissolvidos em benzeno (10 ml) e 1,2-diisopropil diazenodicarboxilato (DIAD) (0,134 g, 0,67 mmol) foi adicionado em gotas. A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por 8 h, e evaporada e o material bruto foi purificado por HPLC preparativo (eluente acetonitrilo- 20 água), para gerar 0,150 g (90%) de 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-
5-isopropil-3H-[l,2,3] triazol-4-ilmetoxi]-3-nitro-2-
trifluorometil-piridina como pó amarelo.
LC-MS m/z 476 (MH+).
25
Etapa 3
6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-3H-[l,2,3]triazol- 4-ilmetoxi]-3-nitro-2-trifluorometil-piridina (0,159 g, 0,33 mmol ) a partir da etapa anterior e zinco em pó (0,217 g, 3,3 mmol) foram dissolvidos em metanol (10 ml) e ácido acético glacial (0,089 g, 1,49 mmol) em gotas e a mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 7 h. A mistura da reação foi passada através de uma pequena coluna com silica e o eluato foi evaporado. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila (20 ml), lavado com a solução aquosa de carbonato de potássio a 10% (5 ml) e salmoura (2x10 ml) , seco em sulfato de sódio e evaporado para obter 10 0,138 g (94%) de 6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-3H-
[1,2,3]triazol-4-ilmetoxi] trifluorometil-2-piridina-3-
ilamina como óleo amarelo que foi utilizado na próxima etapa sem purificação suplementar.
Cl MS m/z 446 (MH+).
Etapa 4
O produto resultante da etapa anterior (0,138 g,
0,31 mmol) foi dissolvido em diclorometano (5 ml) e trietilamina (0,031 g, 0,31 mmol) e ácido éster metil
4-clorocarbonil-benzóico (0,062 g, 0,31 mmol) foram adicionados e a mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por 8 h. Diclorometano (20 ml) foi adicionado e a mistura foi lavada com carbonato de potássio aquoso a 10%
(5 ml) e salmoura (2X5 ml) e seca em sulfato de sódio e evaporada. O resíduo foi purificado por HPLC preparativo (fase reversa, eluente acetonitrila-água), para gerar 0,050 g (27%) de ácido metil éster N-{6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5- isopropil-3H-[1,2,3]triazol-4-ilmetoxi]-2-trifluorometil- piridin-3-il)-tereftalâmico como pó branco.
Cl MS m/z 608 (MH+).
5
Etapa 5
O produto resultante da etapa anterior (0,050 g,
0,082 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano (5 ml) e uma suspensão de 60% de hidreto de sódio em óleo mineral 10 (0,005 g, 0,123 mmol) foi adicionado a O0C durante 15 min. Iodometano (0,018 g, 0,123 mmol) foi adicionado e a mistura da reação foi agitada a O0C por lhe para outra 11 h em temperatura ambiente. Hidróxido de sódio (0,062 g, 1,6 mmol) e água (0,5 ml) foram adicionados e a mistura da reação foi 15 agitada a 50°C durante 16 h, e evaporada. 0 resíduo foi misturado com água (1 ml) e neutralizado com ácido acético a pH~6. 0 precipitado formado foi filtrado, lavado com água (2X3 ml), hexanos (2X3 ml) e seco para gerar 0,038 g (76%) do composto.
20
M. p. 218-219°C.
1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ; δ (ppm) 1,10-1,45 (6H,
(3H, br.S), 3,40 (1H, m) , 5,40 (2H, s), 6,80-6,95 7,15-7,32 (1H, m) , 7,42-7,70 (4H, m) , 7,70-7,85 7,90-8,15 (2H, m) .
LC-MS: rt 1,86 min, m/z [M + H]+ 608,2 (calculado: 608,1).
m) , 3,22 (1H, m), (1H, m), Exemplo 30
Ácido 4- (N- (6- ( (1- (2, 6-diclorofenil) -4-isopropil-lH-l, 2,3-
tria.zol-5-il)metoxi) -2-metilpiridina.-3-il) -N-aetilsulfamoil) benzóico
5
Etapa 1
Para uma mistura de 6-metil-5-nitro-piridina-2-ol (0, 055 g, 0,36 mmol) e [3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-3H- 10 [1,2,3] triazol-4-il]-metanol (0,100 g, 0,35 mmol), preparada como descrito para o exemplo 29, etapa 1, e trifenilfosfina (0,159 g, 0,61 mmol) em benzeno (10 ml) foram adicionadas gotas de diisopropil 1,2-diazenodicarboxilato (DIAD)
(0,128 g, 0,63 mmol). A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente durante 7 h. A mistura da reação foi evaporada e o resíduo foi purificado por HPLC para gerar 0,122 g (83%) de 6- [ 3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-3H-
[1,2,3]triazol-4-ilmetoxi]-2-metil-3-nitro-piridina como pó bege.
20
O
Cl MS m/z 422 (MH+) Etapa 2
Para uma mistura do produto derivado da etapa 1 (0,124 g, 0,30 mmol) e zinco em pó (0,195 g, 3,0 mmol) em metanol (6 ml) foram adicionadas gotas de ácido acético 5 glacial (0,081 g, 1,35 mmol). A mistura da reação foi agitada a 60°C durante 16 h, e passou por uma pequena coluna com sílica, o eluato foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etila (30 ml), lavado com carbonato de potássio aquoso a 10% (10 ml), salmoura (10 ml), seco em sulfato de 10 sódio e evaporado para obter 0,107 g (91%) de 6—[3—(2,6— dicloro-fenil)-5-isopropil-3H-[l,2,3]triazol-4-ilmetoxi]-2- metil-piridina-3-ilamina como óleo amarelo.
15
Cl MS m/z 392 (MH+).
Etapa 3
6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-3H-[1,2,3]triazol-
4-ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3-ilamina (0,107 g,
0,27 mmol) sintetizado na etapa anterior foi dissolvido em 20 acetonitrila (6 ml), piridina (0,021 g, 0,27 mmol) e ácido metil éster 4-clorosulfonil-benzóico (0,076 g, 0,32 mmol) foi adicionado. A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas e os voláteis foram evaporados. O material bruto foi purificado por HPLC preparativo para gerar 25 0,038 g (18%) de ácido metil éster 4-{6-[3-(2,6-dicloro- fenil ) -5-isopropil-3H-[1,2,3]triazol-4-ilmetoxi]-2-metil- piridina-3-ilsulfamoil)-benzóico como óleo amarelo. Cl MS m/z 590 (ΜΗ+).
Etapa 4
O produto sintetizado na etapa anterior (0,033 g,
0,056 mmol) foi dissolvido em benzeno (5 ml), metanol
(0,04 g, 1,3 mmol) e trif enilfosf ina (0, 047 g, 0,18 mmol) foram adicionados seguido por adição de diisopropil
1,2-diazenodicarboxilato (DIAD) (0,044 g, 0,22 mmol). A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente por 10 24 h, e os compostos voláteis foram evaporados. O material bruto foi purificado por HPLC preparativo (eluente acetonitrila-água), para gerar 0,022 g (65%) de ácido metil éster 4—({6—[3—(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-3H-
[1,2,3]triazol-4-ilmetoxi]-2-metil-piridina-3-il)-metil- sulfamoil)benzóico como um óleo incolor.
Cl MS m/z 604 (MH+).
Etapa 5
Os compostos sintetizados na etapa anterior, ácido metil
éster 4-({6-[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-3H-[l,2,3]
triazol-4-ilmetoxi]-2-metil-piridin-3-il)-metil-sulfamoil)- benzóico, (0,022 g, 0,036 mmol) foram dissolvidos em metanol (2 ml) e hidróxido de sódio (0,014 g, 0,36 mmol) e água 25 (0, 25 ml) foram acrescentada e a mistura da reação foi agitada em 50°C por 8 h. Voláteis foram evaporados, água (1 ml) foi adicionada e a mistura foi neutralizada com ácido acético a pH 7. 0 precipitado formado foi filtrado e seco para gerar o composto titulo, rendimento: 0,015 g (71%).
M.p. 127,8-128,8°C.
5
1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ; δ (ppm) 1,45 (6H, d), 2,30 (3H, s), 3,12 (3H, s), 3, 25-3, 40 (1H, m) , 4,30 (1H, br.s), 5,34 (2H, s), 6,27 (1H, d), 6,81 (1H, d), 7,35-7,48 (3H, m), 7,71 (2H, d) , 8,18 (2H, d) .
10
LC-MS: rt 1,94 min, m/z [M + H]+ 590,2 (calculado: 590,1). Exemplo 31
Ácido 4- ( ( (3-cloro-5-((3-(2,6-diclorofenil)-5-
isopropilisoxazol-4-il) metoxi) piridina-2- il) (metil) amino)metil)benzóico
HO 1'
N
Etapa 1
Para uma suspensão de 2,3-dicloro-5-nitropiridina (1,01 g, 5,22 mmol) e cloridrato de 4-(aminometil)-benzoato (1,58 g, 7,83 mmol, 1,5 equiv.) em 2-propanol (15ml) foi adicionado DIPEA (2,7 ml, 15,7 mmol, 3 equiv.) à temperatura ambiente, bem como a mistura foi aquecida a 60°C durante 1,25 h. Após arrefecimento à temperatura ambiente, o solvente foi removido sob vácuo, e o residuo foi suspenso em água (40 ml). O sólido foi filtrado e lavado com várias porções de 5 água até que o filtrado permaneceu incolor (aprox. 100 ml), e o sólido restante foi lavado com uma pequena quantidade de hexano. O produto obtido foi seco sob alto vácuo para gerar 1,54 g (4,79 mmol, 92%) de 4-( (3-cloro-5-nitropiridin-2- ilamino) metil)benzoato como um sólido amarelo.
10
TLC (hexano/EtOAc 4:1) Rf: 0,15.
1H-NMR (DMS0-d6) : 8,87 (d, J = 2,4, 1H) , 8,62 (t, J = 6,2, 1H), 8,42 (d, J = 2,4, 1H) , 7,91 (d , J = 8,4, 2H), 7,44 (d, J = 8,5, 2H) , 4,79 (d, J = 6,0, 2H) , 3,83 (s, 3H) .
Etapa 2
Uma suspensão de hidreto de sódio (60%) (230 mg,
5,74 mmol, 1,2 equiv.) em DMF (5 ml) foi resfriada a 0°C, e 20 uma solução do produto amina a partir da etapa 1 (1,54 g, 4,79 mmol) em DMF (20 ml) foi adicionada em gotas. A mistura marrom-escura foi agitada a 0°C por 40 min, e iodeto de metila (0,42 ml, 6,70 mmol, 1,4 equiv.) foi adicionada a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C por 1 h, e em temperatura 25 ambiente por 45 minutos e, em seguida, foi derramada em uma mistura de água salgada, água e EtOAc (80 ml cada) . A fase aquosa foi extraída com EtOAc (2x30 ml) , a camada orgânica combinada foi lavada com solução NaCl ^ saturada (2x40 ml) e salmoura (20 ml), seca (Na2SO4) e o solvente foi removido sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (hexano/EtOAc 6:1 a 4:1) a fim de fornecer metil 4- (((3-cloro-5-nitropiridin-2-il)(metil)amino)metil)benzoato 5 (1,25 g, 3,73 mmol, 78%) como um sólido amarelo. Ci5Hi4ClN3O4, MW 335,8.
TLC (hexano/EtOAc 4:1) Rf: 0,23.
1H-NMR (DMS0-d6): 8,95 (d, J = 2,4, 1H) , 8,44 1H), 7,91 (d, J = 8,4, 2H), 7,44 (d , J = 8,5,
2H), 3,85 (s, 3H), 3,23 (s, 3H).
Etapa 3
Para uma suspensão dos compostos sintetizados na etapa 2
(572 mg, 1,70 mmol) em metanol (20 ml) e água (4 ml) foi adicionado ditionito de sódio (1,48 g, 8,52 mmol, 5 equiv.), a mistura foi agitada em 90°C por 50 min. Após arrefecimento à temperatura ambiente, o metanol foi evaporado, e o resíduo 20 foi retomado com solução de NaCl ^ saturada (50 ml) e EtOAc (40 ml). As fases foram separadas, a fase aquosa foi extraída com EtOAc (3x50 ml), e a camada orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca (Na2SO4) e concentrada. 0 produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (hexano/EtOAc 1:1), 25 obtendo-se 205 mg (0,67 mmol, 39%) de 4-( ((5-amino-3- cloropiridin-2-il)(metil)amino)metil)benzoato como um sólido marrom brilhante. Ci5Hi6ClN3O2, MW 305, 8.
(d, J = 2,4, 2H), 5,01 (s, TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf: 0,16.
Cl-MS: 306, 308 ( [Μ + H ]+) .
5
1H-NMR (DMSO-Cl6) : 7,90 (d, J = 8,3, 2H) , 7,61 (d, J = 2,5, 1H), 7,48 (d, J = 8,6, 2H) , 7,07 (d, J = 2,5, 1H) , 5,17 (s, 2H), 4,24 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 2,60 (s, 3H).
Etapa 4
Para uma suspensão de 4-( ( (5-amino-3-cloropiridin-2-i 1) (metil)amino)metil)benzoato da etapa anterior (76 mg,
0,25 mmol) em diiodometano (1,3 ml) foi adicionado isoamilnitrito (0,67 ml, 4,97 mmol, 5 equiv.) à temperatura ambiente. A mistura castanho-escura formada foi agitada à temperatura ambiente por 15 minutos, e duas gotas de ácido hidroiodico aquoso a 50% foram adicionadas (evolução gasosa!). A mistura negra foi agitada, à temperatura ambiente por 1,75 h, conq. amônia aq. (5 ml) foi adicionada, e a mistura foi vigorosamente agitada por mais 15 min. Extração com CH2Cl2 (três vezes), secagem da camada orgânica combinada (Na2S04) e evaporação do solvente deu um líquido preto, que foi co-evaporado com metanol/acetona (10:1, 3x20 ml) . O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (hexano para hexano/EtOAc 6:1) para gerar metil 4-( ((3-cloro-5 — iodopiridin-2-il) (metil)amino)metil)benzoato (49 mg,
0,12 mmol, 47%), como uma resina amarelo pálido. C15H14CI IN2C>2, MW 416,6. TLC (hexano/EtOAc 4:1) Rf: 0,40.
1H-NMR (DMSO-d6) : 8,34 (d, J = 2,1, 1H) , 8,11 (d, J = 2,0,
1H), 7,93 (d, J = 8,4, 2H) , 7,45 (d , J = 8,5, 2H) , 4,62 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 2,88 (s, 3H).
Etapa 5
Lodopiridina sintetizado na etapa anterior (46 mg,
0,11 mmol, 1 equiv.), (3-(2,6-diclorofenil)-5-
isopropilisoxazol-4-il) metanol (158 mg, 0,55 mmol, 5 equiv.) como descrito na etapa 3 do exemplo 1, (l)-iodeto de cobre (8,4 mg, 0,044 mmol, 0,4 equiv.), 1,10-fenantrolina (16 mg, 0,088 mmol, 0,8 equiv.) e Cs2CO3 (72 mg, 0,22 mmol , 2 equiv.) 15 foram colocados em um tubo em parafuso em argônio, suspensos em tolueno anidro (0,5 ml), a mistura foi lavada com o argônio, e o tubo em parafuso foi fechado. A mistura foi agitada em 120°C por 14,5 h. Após arrefecimento à temperatura ambiente, a suspensão castanho escura foi diluída com CH2Cl2 20 (cerca de 1 ml) e diretamente submetida à cromatografia rápida (hexano a hexano/EtOAc 6:1 a 2:1) . 67 mg (0,081 mmol, 73%) do produto (3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropilisoxazol-4- il)metil 4 — ( ( (3-cloro-5-((3-(2,6-diclorofenil)-5-
isopropilisoxazol-4-il)metoxi)piridina-2- il)(metil)amino)metil)benzoato foram obtidos como uma resina amarelo-esverdeada. C40H35CI5N4O5, MW: 829,0.
TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf: 0,56. Cl-MS: 576, 574 [~M+MeOH]\ 546, 544, 286, 270.
1H-NMR (DMSO-d6): 7,73 (d, J = 2,7, 1H) , 7,66 (d, J = 8,3, 2H), 7, 63-7, 48 (m, 6H) , 7,42 (d, J = 2.7, 1H), 7,39 (d, J = 8,4, 2H), 5,09 (s, 2H) , 4,89 (s, 2H) , 4,35 (s, 2H) , 3,53 (pseudo-quint, J = 7,0, 1H) , 3,44 (pseudo-quint, J = 6,8, 1H), 2,69 (s, 3H), 1,36 (d, J = 7,0, 6H),
1,31 (d, J = 7,0, 6H).
Etapa 6
O produto acoplado sintetizado na etapa anterior (65 mg, 0, 078 mmol) foi dissolvido em uma mistura de THF (2,1 ml), metanol (0,7 ml) e água (0,7 ml), e LiOH-H2O (33 mg,
0,78 mmol, 10 equiv.) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 5,5 h. THF e metanol foram removidos sob pressão reduzida, a solução remanescente foi diluída com água (0,5 ml), arrefecida a 0°C, e IN de HCl foi adicionado até pH 5 ser atingido (cerca de 0,72 ml) . Os sólidos foram dissolvidos com EtOAc, as camadas foram separadas, e a fase aquosa foi extraída por duas vezes com pequenas quantidades de EtOAc. A camada orgânica combinada (Na2SO4) foi seca, o solvente foi evaporado, e o resíduo foi purificado por cromatografia rápida (EtOAc a ETOH com EtOAc/gradientes ETOH) . 32 mg (0,058 mmol, 73%) do produto final, 4 — ( ( (3 — cloro-5-((3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropilisoxazol-4-il)
metoxi)piridina-2-il) (metil)amino)metil)benzóico foram
obtidos como sólidos ligeiramente amarelados. C27H24Cl3N3O4, MW: 5 60,9. TLC (EtOAc) Rf: 0,16
APCI-MS: 560, 562 ([M + H ]+).
5
1H-NMR (DMSO-d6) : 7,77 (d, J = 7,9, 2H), 7,75 (d, J = 2,7, 1H), 7, 64-7, 52 (m, 3H) , 7,40 (d, J = 2.7, 1H), 7,19 (d, J = 8,0, 2H), 4,90 (s, 2H), 4,28 (s, 2H), 3,52-3,36 (m, 1H), 2,66 (s, 3H), 1,33 ( d, J = 7,0, 6H).
10
Exemplo 32
Ácido 3- ( ((3-Cloro-5-((3-(2,6-diclorofenil)-5-
isopropilisoxazol-4-il)metoxi)piridina-2-
il) (metil)amino)metil) benzóico
15
Etapa 1
Após o procedimento para a etapa 1 do exemplo 31, 1,41 g (7,31 mmol) 2,3-dicloro-5-nitro-piridina e cloridrato de metil 3-(aminometil)-benzoato (1,77 g, 8,78 mmol, 1,2 equiv.) foram reagidos com 3,0 ml (17,6 mmol, 2,4 equiv.) de DIPEA em
2-propanol (15 ml) a 60°C por 1,5 h. A remoção do solvente, a adição de água, filtragem e re-extração do filtrados geraram metil 3-( (3-cloro-5-nitropiridin-2-ilamino)metil)benzoato
(2,27 g, 7,04 mmol, 96%) como um sólido amarelo-castanho. C14Hi2CIN3O4, MW: 321,7.
TLC (hexano/EtOAc 4:1) Rf: 0,20.
1H-NMR (DMSO-d6) : 8,88 (d, J = 2,4, 1H) ,
1H), 8,41 (d, J = 2,4, 1H), 7,94 (s, 1H),
7,7, 1H), 7,61 (d, J = 8,0, 1H), 7,47 (t,
(d, J = 6,2, 2H), 3,84 (s, 3H).
Etapa 2
Semelhante ao procedimento descrito na etapa 2 do exemplo 31, 2,27 g (7,04 mmol) de metil 3-((3-cloro-5- nitropiridin-2-ilamino)metil)benzoato da etapa anterior foi deprotonado com hidreto de sódio (60%) (310 mg, 7,74 mmol,
1,1 equiv.) em DMF (35 ml) por 1 h, e, em seguida, a mistura foi reagida com iodeto de metila (0,57 ml, 9,15 mmol,
1,3 equiv.) em O0C por 0,5 h em temperatura ambiente por 1 h. Processado como indicado a seguir por cromatografia rápida do produto bruto para fornecer metil 3-( ( (3-cloro-5- nitropiridin-2-il)(metil) amino)metil)benzoato (2,26 g,
6,74 mmol, 96%) como um óleo amarelo escuro. Ci5Hi4CIN3O4 (MW 335,8).
25
8,63 (t, J = 6,1, 7,84 (dt, J = 1,4, J = 7,7, 1H), 4,77
TLC (hexano/EtOAc 4:1) Rf: 0,24. 1H-NMR (DMSO-Cl6) : 8,96 (d, J = 2,4, IH) , 8,45 (d, J = 2,4, 1H) , 7,92 (s, 1H), 7,88 (d, J = 7,5; 1H) , 7,61 (d, J = 7,8, 1H), 7,55 (dd, J = 7,6, 1H), 5,00 (s, 2H) , 3,85 (s, 3H), 3,20 (s, 3H) .
5
Etapa 3
O procedimento descrito na etapa 3 do exemplo 31 foi aplicado. Metil 3-( ((3-cloro-5-nitropiridin-2-
il) (metil)amino)metil) benzoato da etapa anterior (2,25 g, 6,71 mmol) foi reagido com ditionito de sódio (3,51 g,
20,1 mmol, 3 equiv.) em uma mistura de metanol (80 ml) e água (16 ml) (5:1) em 90°C por I h. 0 processamento e purificação por cromatografia rápida gerou 745 mg (2,44 mmol, 36%) de metil 3-(((5-amino-3-cloropiridin-2-
il)(metil)amino)metil)benzoato como um óleo viscoso castanho escuro. C15Hi6CIN3O2, MW: 305, 8.
TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf: 0,15. APCI-MS: 306, 308 ([M+H]+).
1H-NMR (DMS0-d6) : 7,97 (s, 1H) , 7,83 (dt, J = 1,4, 7,7, 1H), 7,64-7, 58 (m, 2H) , 7,46 (dd, J = 7,7; 1H) , 7,07 (d, J = 2,5, 1H), 5,16 (s, 2H), 4,23 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 2,59 (s, 3H).
Etapa 4
De acordo com o procedimento descrito na etapa 4 do
exemplo 31, 399 mg (1,31 mmol) de metil 3-(((5-amino-3- cloropiridin-2-il)(metil)amino)metil)benzoato da etapa 3 do exemplo 32, e 3,5 ml (26,1 mmol, 20 equiv.) de isoamilnitrito em diiodometano (7 ml) foram reagidos por 40 minutos em temperatura ambiente. Ácido hidroiodico (25 μΐ) foi adicionado a 0°C, e após a evolução do gás já ter cessado, a mistura foi agitada por mais 2 h em temperatura ambiente.
Processamento e purificação como descrito gerou 239 mg
(0,57 mmol, 44%) de metil 3-(((3-cloro-5-iodopiridin-2- il)(metil)amino)metil)benzoato como óleo amarelo pálido. Ci5Hi4CIIN2O2, MW: 416,6.
TLC (hexano/EtOAc 4:1) Rf: 0,46. APCI-MS: 417, 419 ([M+H]+).
1H-NMR (DMSO-d6) : 8,35 (d, J = 2,0, 1H) , 8,12 (d, J = 2,0,
1H), 7,93 (s, 1 H), 7,86 (d, J = 7,7; 1H) 1 7,59 (d, J = 7,9,
1H), 7,50 (dd, J = 7,6, 1H) , 4,61 (s, 2H) , 3,85 (s, 3H), 2,86 (s, 3H) .
Etapa 5
Após o procedimento de acoplamento descrito na etapa 5 do exemplo 31, uma suspensão de metil 3-(((3-cloro-5- iodopiridin-2-il)(metil)amino)metil)benzoato de metila a partir da etapa 4 (233 mg, 0,56 mmol , 1 equiv.),
(3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropilisoxazol-4-il)metanol (561 mg, 1,96 mmol, 3,5 equiv.), (l)-iodeto de cobre (43 mg,
0,22 mmol , 0,4 equiv.), 1,10-fenantrolina (81 mg, 0,45 mmol, 0, 8 equiv.) e Cs2CO3 (365 mg, 1,12 mmol, 2 equiv.) anidro em tolueno (1 ml), sob argônio foi aquecido a 120°C por 14.5h. Cromatografia rápida direta da mistura de reação forneceu o produto (3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropilisoxazol-4-il) metil 3-(((3-cloro-5-((3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropilisoxazol-4- il)metoxi)piridina-2-il)(metil)amino)metil)benzoato (303 mg,
0.37 mmol, 65%), como resina amarelo-esverdeada. C40H35Cl5N4O5, MW: 829,0.
5
TLC (hexano/EtOAc 1:1) Rf: 0,56. APCI-MS: 576, 574 [M+MeOH]+, 286, 270.
1H-NMR (DMSO-de) : 7,77 (s, 1H) , 7,73 (d, J = 2,6, 1H) , 7,64- 7,47 (m, 8H) , 7, 44-7, 37 (m, 2H) , 5,09 (s, 2H) , 4,90 (s, 2H),
4,31 (s, 2H) , 3,52 (pseudo-quint, J = 7,0, 1H) , 3,44 (pseudo- quint, J = 7,0, 1H) , 2,66 (s , 3H) , 1,35 (d, J = 7,0, 6H),
1, 32 (d, J = 7,0, 6H) .
Etapa 6
Para uma solução do produto acoplado sintetizado na etapa anterior (298 mg, 0,36 mmol), em uma mistura de 3:1: I-THF (7,5 ml), metanol (2,5 ml) e água (2,5 ml) foram adicionados LiOH-H2O (151 mg, 3,60 mmol, 10 equiv.). A 20 mistura foi agitada à temperatura ambiente por 4,5 h. O THF e metanol foram evaporados, água (2-3 ml) foi adicionada, e a mistura foi neutralizada com HCl IN (3,2 ml) em 0°C. 0 pH foi então ajustado para pH 5 por cuidadosa adição de HCl IN e solução saturada de NaHCO3. O precipitado foi dissolvido em 25 EtOAc, as camadas foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (2x10 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com solução de NaCl H saturada e salmoura (10 ml cada), seca (Na2SO4) e concentrada. 0 produto bruto foi purificado por cromatograf ia rápida (EtOAc, então EtOAc/ETOH 4:1 a 1:4) a fim de fornecer o composto título 3-(((3-cloro-
5-((3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropilisoxazol-4- il)metoxi)piridina-2-il)(metil)amino)metil)benzóico (159 mg, 0,28 mmol, 79%) como sólido branco. C27H24CI3N3O4 (MW 560, 9).
TLC (EtOAc) Rf: 0,22. APCI-MS: 560, 562 ([M+H]+).
1H-NMR (DMSO-de) : 7,92 (s, 1H), 7,81 (d, J = 7,4, 1H) , 7,74
(d, J = 2,7, 1H), 7,65, 7,52 (m, 3H) , 7,40 (d, J = 2,7, 1H) ,
7,36 (d, J = 7,5, 1H), 7,30 (dd, J = 7,5, 1H) , 4,90 (s, 2H),
4,31 (s, 2H) , 3,31 (set, J = 7,0, 1H) , 2,66 (s, 3H) , 1,32 (d, J = 7, 0, 6H) .
Exemplo 33
2-hidroxietil 4-(((6-((3-(2,6-diclorofenil)-5-
isopropiliaoxazol-4-il)metoxi) -2- (trifluorometil)piridina-3- il)(metil)amino)metil)benzoato
TBTU (0,177 g, 0,55 mmol) e trietilamina (0,056 g,
0,55 mmol) foram adicionados a uma solução de 4—[({6—[3—(2,6— dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ylmetoxi]-2- trifluorometil-piridin-3-il}-metiI-amino)-metil]-benzóico (exemplo 28) (0,20 g, 0,34 mmol) em acetonitrila seca (6 ml). Após Ih de agitação, a temperatura ambiente ethan-1,2-diol 11 (0,633 g, 10,2 mmol) foi adicionado à mistura da reação e a 5 agitação foi mantida por 7 h a 50°C. Os voláteis foram removidos no vácuo, o resíduo foi diluído com água (6 ml) e extraído com clorofórmio, o extrato foi seco em sulfato de sódio e evaporado. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativo para dar o composto título como um óleo incolor. 10 Rendimento: 0,040 g (18%).
1H-NMR (400 MHz, CDCl3); δ (ppm) 1,39 (6H, d), 2,05
(1H, br. S), 2,53 (3H, s), 3,47 (1H, set.), 3,94 (2H, t),
4,01 (2H, s), 4,46 (2H, q) , 5,18 (2H, s), 6,71 (1H, d),
7,23-7, 30 (1H, m) , 7, 32-7, 38 (2H, m), 7,43 (2H, d), 7,60 (1H, d), 8,01 (2H, d).
LC-MS: rt 2,22 min, m/z [M + H]+ 638,3 (calculado: 638,1).
Exemplo 34
2,3-dibidroxipropil 4-(((6-((3-(2,6-diclorofenil)-5-
isopropilisoxazol-4-il)metoxi) -2- (trifluorometil)piridina-3- il) (metil) amino)metil)benzoato
25 10
TBTU (0,177 g, 0,55 mmol) e trietilamina (0,056 g,
0,55 mmol) foram adicionados a uma solução de 4—[({6—[3—(2,6— dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-ilmetoxi]-2- trifluorometil-piridin-3-il)-metil-amino)-metil]-benzóico (exemplo 28) (0,20 g, 0,34 mmol) em acetonitrila seca (6 ml) e agitados em temperatura ambiente por Ih . Glicerol (1,55 g, 16,8 mmol) foi adicionado à mistura da reação, que foi agitada por 24 h em 70°C. A mistura da reação foi evaporada, o resíduo foi retomado em clorofórmio, a mistura foi lavada com água, seca sobre sulfato de sódio e evaporada. O resíduo foi purificado por HPLC preparativo para dar o composto título em 0,039 g (17%) de rendimento como um óleo incolor.
1H-NMRN (400 MHz, CDCl3); õ(ppm) 1,39 (6H, d), 2,53 (3H, s),
3,47 (1H, set), 3,63-3,72 (1H, m) , 3, 72-3, 80 (1H, m) , 4,00
(2H, s), 4,01-4,10 (1H, m) , 4,41 (2H, t), 5,18 (2H, s), 6,71
(1H, d), 7,23-7,31 (1H, m), 7,32-7, 38 (2H, m) , 7,44 (2H, d), 7, 60 (1H, d) , 7, 99 (2H, d) .
LC-MS: rt 2,11 min, m/z [M + H]+ 668,3 (calculado: 668,2) Exemplo 35
4-(((6-((3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropilisoxazol-4-il)
metoxi) -2- (trifluorometil)piridina-3-il) (metil) amino)metil) - N-(2,3-dihidroxipropil)benzamida
Etapa 1
TBTU (0,177 g, 0,55 mmol) e trietilamina (0,056 g, 0,55 mmol) foram adicionados sob agitação a uma solução de 4 —[({6— [3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-il-metoxi]-2- trifluorometil-piridin-3-il}-metil-amino)-metil]-benzóico 15 (exemplo 28) (0,20 g, 0,34 mmol) em acetonitrila seca (6 ml) e agitados durante 1 h em temperatura ambiente. (2,2-dimetil-
[1,3]dioxolano-4-il)-metilamina (0,054 g, 0,41 mmol) foi adicionado e a mistura da reação foi agitada por 5 h em temperatura ambiente. Os voláteis foram evaporados, o resíduo 20 foi redissolvido em clorofórmio, lavado com água e salmoura, seco em sulfato de sódio e evaporado. 0 material bruto foi purificado por HPLC preparativo para gerar 0,112 g (47%) de 4-[({6—[3 —(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4- ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3-il}-metil-amino)-metil]- N-(2,3-dihidroxi-propil)-benzamida como um óleo incolor.
Etapa 2
Ácido trifluoracético (0,03 ml) foi adicionado a uma
solução do produto sintetizado na etapa 1 (0,112 g, 0,16 mmol), em uma mistura 4:1 de THF-água (0,742 ml) em O0C e a mistura da reação foi agitada por 8h em temperatura ambiente, neutralizada com solução aquosa de amônia e 25% evaporada. 0 10 resíduo foi diluído com água, extraído com diclorometano, o extrato foi seco em sulfato de sódio e evaporado para a obtenção do composto título em 0,076 g (71%) de rendimento como um óleo incolor.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3); 5(ppm) 1,39 (6H, d), 2,53 (3H, s),
3,47 (1H, set), 3,54 (2H, t), 3,72 (2H, t), 3,88 (1H, quint),
4,00 (2H, s), 5,18 (2H, s), 6,66 (1H, br.s), 6,71 (1H, d), 7, 23-7, 30 (1H , m) , 7, 32-7,38 (2H, m) , 7,42 (2H, d), 7,60 (1H, d), 7,73 (2H, d).
20
LC-MS: rt 1,99 min, m/z [M + H]+ 667,3 (calculado: 667,2). Exemplo 36
4- (((6-((3-(2,6-diclorofenil)-5-isopropilisoxazol-4-il)
metoxi) -2- (trifluorometil)piridina-3-il) (metil) amino)metil) - N- (2-hidroxietil) benzamida TBTU (0,088 g, 0,273 mmol) e trietilamina (0,028 g, 0,273 mmol) foram adicionados a agitados a uma solução de 4—[({6—[3—(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-
ilmetoxi]-2-trifluorometil-piridin-3-il)-metil-amino)-metil] - benzóico (exemplo 28) (0,10 g, 0,168 mmol) em acetonitrila seca (6 ml). Após 1 h de agitação, a temperatura ambiente 2-aminoetanol (0,012 g, 0,20 mmol) foi adicionado e a mistura 10 da reação foi agitada à temperatura ambiente por 12 h. A mistura da reação foi diluída com água (6 ml) e acetonitrila foi removida sob vácuo. O resíduo foi extraído com acetato de etila, os extratos foram lavados com água e salmoura, secos em sulfato de sódio e evaporados. O resíduo foi purificado 15 por HPLC preparativo para dar o composto título em 0, 065 g (61%) de rendimento como um óleo incolor.
IH-NMR (400 MHz, CDCl3); δ (ppm) 1,40 (6H, d), 1,80 (1H, br.
S), 2,53 (3H, s), 3,40, 3,54 (1H, m ), 3,62 (2H, q) , 3,83
(2H, t), 4,00 (2H, s), 5,19 (2H, s), 6,57 (1H, s), 6,71 (1H, d), 7,23-7,31 (1H, m) , 7, 32-7, 38 (2H, m) , 7,41 (2H, d), 7,60 (1H, d), 7,73 (2H, d) . LC-MS: rt 2,05 min, m/z [M + H]+ 637,6 (calculado: 637,2). Exemplo 37
4-(((6-((3-(2,6-diclorofenil)-5-iaopropiliaoxazol~4-il)
metoxi)-2- (trifluorometil)piridina-3-il) (metil) amino)metil) - N-(2-(dimetilamino)etil) benzamida
TBTU (0,088 g, 0,273 mmol) e trietilamina (0,028 g,
0,273 mmol) foram adicionados sob agitação a uma solução de
4 —[({6 -[3-(2,6-dicloro-fenil)-5-isopropil-isoxazol-4-il-
metoxi]-2-trifluorometil-piridin-3-il}-metil-amino)-metil]- benzóico (exemplo 28) (0,10 g, 0,168 mmol) em acetonitrila 15 seca (6 ml). Após Ih N1, N1-dimetil-etano-l, 2-diamina (0,018 g, 0,20 mmol) foi adicionado e a agitação foi mantida por 12 h. A mistura da reação foi diluída com água (6 ml), acetonitrila foi removido sob vácuo, o resíduo foi extraído com acetato de etila, o extrato foi lavado com água e salmoura, seco em 20 sulfato de sódio e evaporado. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativo para gerar o composto título em 0,035 g (31%) de rendimento como um óleo incolor. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3); δ (ppm) 1,42 (6Η, d), 2,32 (6Η, s),
2, 50-2, 63 (5 H, m) , 3,42-3,61 (3Η, m) , 4,01 (2Η, s), 5,21 (2Η, s), 6,73 (1H, d), 6,84 (1H, s), 7,23-7,32 (1H, m), 7,33- 7,40 (2H, m), 7,43 (2H, d), 7,61 (1H, d), 7,77 (d 2H1).
5
LC-MS: rt 2,05 min, m/z [M + H]+ 664, 6 (calculado: 664,2) .
Ensaio de atividade FFET
Determinação da interação de um peptideo co-fator mediado por um ligante para quantificar o ligante acoplando ao receptor nuclear Receptor Farnesoid X (FXR) foi realizada como se segue:
Preparação do domínio vinculativo ligante alfa do Receptor Farnesoid X (FXR) humano: domínio vinculativo ligante FXR alfa humano (LBD) foi expresso em E. coli estirpe BL21 (DE3), como uma proteína de fusão alvo
glutationa-S-transferase (GST) N-terminal. 0 DNA codificando o domínio vinculativo ligante FXR foi clonado no vetor 20 pDEST15 (Invitrogen). Expressão estava sob controle de um promotor IPTG T7 induzíveis. Os limites de aminoácidos do domínio vinculativo ligante foram aminoácidos 187-472 da base de dados NM_005123 (RefSeq). Expressão e purificação de FXR-LBD: Uma pré-cultura cultivada por toda a noite de uma 25 estirpe de E. coli transformada foi diluída a 1:20 em meio LB-Ampicilina e cultivada em 30°C a uma densidade óptica de ODôOO = 0,4-0,6. Expressão gênica, em seguida, foi induzida pela adição de 0,5 mM de IPTG. As células foram incubadas em m adicional por 6h em 30°C, 180 rpm. As células foram coletadas por centrifugação (7000 x g, 7 min, temperatura ambiente). Por litro de cultura celular original, as células foram re-suspendidas em 10 ml de tampão de Iise (50 mM de 5 glicose, 50 mM Tris pH 7,9, I mM EDTA e 4 mg/ml de lisozima) e deixados no gelo por 30 min. As células foram então submetidas a sonicação e os restos celulares foram removidos através de centrifugação (22.000 x g, 30 min, 4°C). Por 10 ml de sobrenadante 0,5 ml de Glutationa sefarose 4B pré-lavada 10 (Qiagen) foi adicionada e a suspensão foi mantida sob agitação lenta por 1 h em 4°C. Esferas de Glutationa sefarose 4B foram peletizadas por centrifugação (2000 g, 15 seg, 4°C) e lavadas duas vezes em tampão de lavagem (25 mM Tris, 50mM KCI, 4mM de MgCl2 e I M de NaCl) . 0 sedimento foi ressuspenso 15 em 3 ml de tampão de eluição por litro de cultura original (tampão de eluição: 20 mM Tris, 60 mM de KCl, 5 mM de MgCl2 e 80 mM de glutationa adicionados imediatamente antes da sua utilização na forma de pó) . A suspensão foi deixada em rotação por 15 min a 4°C, as esferas peletizadas e eluidas 20 novamente com metade do volume do tampão de eluição do que no primeiro tempo. Os eluatos foram agrupados e dialisados por toda a noite em 20 mM de tampão Hepes (pH 7,5) contendo 60 mM de KCl, 5 mM de MgCl2 bem como 1 mM de ditiotreitol e 10% (v/v) de glicerol. A proteína foi analisada por SDS-Page.
25
0 método mede a capacidade de ligantes putativos para modular a interação entre as bactérias purificadas que expressam o domínio vinculativo ligante FXR (LBD) e um peptideo sintético biotinilado baseado em resíduos 676-700 da SRC-I (LCD2, 676-700). A seqüência do peptideo utilizado foi B-CPSSHSSLTERHKILHRLLQEGSPS-COOH onde O N-terminal foi biotinilado (B) . 0 domínio vinculativo ligante (LBD) de FXR 5 foi expresso como uma proteína de fusão com GST em células BL-21 usando o vetor pDEST15. As células foram lisadas por sonicação, e as proteínas de fusão purificadas em glutationa sefarose (Pharmacia), de acordo com as instruções do fabricante. Para a análise de compostos pela sua influência 10 sobre a interação FXR-peptídeo, a tecnologia LANCE da Perkin Elmer foi aplicada. Este método baseia-se no caráter vinculativo dependente da energia de transferência de um doador para um receptor fluoroforo vinculativo anexo ao parceiro de interesse. Para facilidade de manuseio e redução 15 de resíduos de compostos da tecnologia LANCE de fluorescência pode-se fazer uso de rótulos fluoroforos genéricos e tempo de detecção resolvido ensaios foram realizados em um volume final de 2 de 5μ1 em uma placa de 384, em um tampão de base Tris (20 mM de Tris-HCl pH 7,5; 60 mM de KCl, 5 mM de MgCl2/ 20 35 ng /μΐ de BSA) , contendo 20-60 ng/FXR LBD recombinantemente bem expressos e fundidos a GST, 200-600 nM de peptideo biotinilado N-terminal, representando aminoácidos 676-700 de SRC1, 200 ng/conjugado xIAPC-estreptavidina (Prozyme) e 6-10 ng/Eu W1024-antiGST (Perkin Elmer). Conteúdo 25 DMSO das amostras foi mantido em 1%. Após a geração do mix do ensaio e diluição dos ligantes modulando potencialmente FXR,
o ensaio foi equilibrado para uma hora, no escuro, à temperatura ambiente em placas FIA-384 pretas (Greiner) . O sinal LANCE foi detectado por um aparelho Perkin Elmer VICT0R2VTM Multilabel Counter. Os resultados foram visualizados por traçar a relação entre a luz emitida a 665 nm e 615 nm. Um nível basal de formação de peptideo FXR é 5 observado na ausência de ligante adicionado. Ligantes que promovem a formação do complexo induzem um aumento dependente da concentração no tempo do sinal fluorescente apontado. Compostos que vinculam igualmente bem a ambos FXR monoméricos e complexo peptídeo-FXR seria de esperar não darem nenhuma 10 alteração no sinal, onde ligantes que ligam preferencialmente ao receptor monomérico seria esperado induzirem a uma diminuição dependente da concentração observada no sinal.
Para avaliar o potencial inibitório dos compostos, valores IC50 foram determinados. Os seguintes componentes da Tabela 1 exemplificam essa atividade com "+" significando
1 μΜ < IC50 ^ ΙΟμΜ e "+ +" significando CI50 ^ ΙμΜ
Tabela 1
20
EXEMPLO N0 Atividade FRET
Exemplo 1 + + Exemplo 2 + + Exemplo 3 ++ Exemplo 4 ++ Exemplo 5 + Exemplo 6 + + Exemplo 7 ++ Exemplo 8 + Exemplo 9 + + Exemplo 10 + + Exemplo 11 + Exemplo 12 ++ EXEMPLO N0 Atividade Exemplo 13 ++ Exemplo 14 ++ Exemplo 15 + Exemplo 16 + Exemplo 17 + Exemplo 18 + Exemplo 19 + + Exemplo 20 + Exemplo 21 + + Exemplo 22 ++ Exemplo 23 + + Exemplo 24 + + Exemplo 25 ++ Exemplo 26 + Exemplo 27 ++ Exemplo 28 + + Exemplo 29 + + Exemplo 30 + + Exemplo 31 + + Exemplo 32 ++ Exemplo 33 ++ Exemplo 34 ++ Exemplo 35
+ +
Exemplo 36
Exemplo 37
Eaaaioa Fisicoquimicos & ADME
Parâmetros fisico-quimicos e ADME de exemplos da presente invenção foram determinados e comparados com aqueles determinados para compostos modulando FXR A-D mostrados abaixo que são estado da arte e não fazem parte da presente invenção.
W00315771 e US7.034.046B2
Composto A exemplificado em
W00037077
Composto B exemplificado em
Composto C reivindicado em
.d
W02004048349 Composto D reivindicado em W02004 04 83 4 9
Ensaio de Solubilidade Aqaosa
A solubilidade aquosa dos compostos foi determinada por nefelometria ou pelo método shake-flask como segue:
10
Protocolo A, método de nefelometria:
A solubilidade dos compostos foi avaliada em PBS (pH 7,4), 5% DMSO a 23°C. Nefelômetro Nepheloskan Ascent 15 (Thermo Electron Corporation) foi utilizado para a medição da luz. Compostos testados foram dissolvidos em DMSO a 10 mm. Antes da medição os compostos foram ainda mais diluídos com PBS nos poços das concentrações finais dos compostos 100, 70, 50, 35, 25, 17, 12 e <10μς/πι1.
As placas foram incubadas à temperatura ambiente por
24 horas para atingir o equilíbrio e a luz espalhada foi medida. Validação do Ensaio: a solubilidade aquosa do ácido acetilsalicíIico foi determinada para validar o teste. Era 25 para ser > 100μg/ml no dia do experimento, o que corresponde ao valor relatado na literatura de pelo menos 2,17 mg/ml (The Merck Index, 10a edição).
20 Os seguintes compostos da Tabela 2 exemplificam essa solubilidade com significando solubilidade <2μΜ, "+"
significando 2μΜ ^ solubilidade ^ ΙΟΟμΜ e "+ +" significando solubilidade > ΙΟΟμΜ.
Tabela 2
Composto
Exemplo 4 Exemplo 6 Exemplo 7 Exemplo 21 Exemplo 2 3 Composto A Composto B
Solubilidade aquosa pH 7, 4 ++
+ +
+ +
+ +
+
+
Protocolo B, método shake-flask:
IO
Preparação da amostra: preparação da amostra e da solução padrão é feita através da mistura de volumes iguais de acetonitrila contendo o padrão interno (ΙμΜ de concentração final) com a amostra e as soluções padrão de 15 calibração (ΙΟΟμΙ). Após agitação vigorosa (10 segundos) as amostras são centrifugadas (6000g) por 5 minutos a 20°C. Alíquotas dos sobrenadantes livres de partículas são transferidos para 200μ1 de amostras em frascos e posteriormente submetidos a LC-MS/MS. Procedimento do Ensaio: Teste de concentração era de ΙΟΟμΜ em 10 mM de tampão PBS em pH 7,4 com uma concentração final de MeOH de 1%. 0 volume de solução de incubação foi de 500μ1. Dependendo da solubilidade de cada composto em MeOH, a concentração estoque e a 5 concentração de incubação foram adaptadas. A solução teste em quadruplicatas foram sacudidas a 300 rpm durante um período de 20 horas em temperatura ambiente, seguida por centrifugação a 20000g durante 30 minutos para separar a fase sólida. 100μ1 de amostra livre de partículas são adicionados 10 a 100μ1 de acetonitrila contendo o padrão interno. A solubilidade aquosa dos compostos foi determinada pela medição da concentração do sobrenadante do tampão PBS por HPLC-MS/MS. Solubilidade aquosa de exemplos e compostos referência estão listados na Tabela 3 abaixo.
15
Tabela 3
Composto Solubilidade Aquosa pH7,4 (μΜ)
(± desvio padrão), Método Shake-flask Composto A 72,4 (±2,6)
Composto B 17,7 (±2,7)
Exemplo 32 129 (±7,7)
20 Ensaio de Permeabilidade PAMPA
A permeabilidade da membrana artificial foi determinada como segue: compostos testados foram dissolvidos a 10 mm em DMSO a 100%. A permeabilidade dos compostos foi avaliada em 5 PBS (pH 7,4), DMSO a 5% a 23°C. Leitor de placa SAFIRE (Tecan) foi utilizado para a medição da absorção UV/Vis. Protocolo: Estoques diluídos de compostos testados e controles com PBS com 1, 67 mM e misturas por pipetagem, adicionar 280μ1 de PBS, 5% de DMSO na placa receptora, 10 adicionar 5μ1 de 2% de L-[alfa] dodecano-fosfatidilcolina em suspensão para a membrana de placas doadoras. Imediatamente adicionar 98μ1 de PBS da chapa doadora e fazer o sanduíche com a placa receptora. Adicionar 42μ1 de compostos testados e diluições controles para placa receptora, cobrir a placa, 15 colocar em câmera e incubar durante 16 horas. Fazer a placa de equilíbrio, adicionar 225μ1 de PBS, 3,7% de DMSO e 25μ1 de compostos testados e diluições controles na placa UV. Após
16 horas puxar a placa doadora para fora e transferir 250μ1 da placa receptora da chapa de UV. A placa de Scan UV sobre o 20 leitor de placa SAFIRE (Tecan) de 245 a 450 nm com 5 nM da etapa. A permeabilidade é relatada em % de compostos encontrados no compartimento receptor após o período de incubação. A aplicação deste protocolo, permeabilidades PAMPA de exemplos e compostos referência foram determinados
conforme demonstrado na Tabela 4: Tabela 4
Compostos
Exemplo 4 Composto A Composto B
Permeabilidade
PAMPA
50%
32%
7%
Determinação da permeabilidade Caco-2
Células Caco-2 são amplamente utilizadas como um modelo
in vitro para a previsão da absorção humana da droga. A linha celular humana Caco-2 é derivada de um carcinoma colo retal, e quando cultivadas, as células se diferenciam espontaneamente em monocamadas de enterócitos polarizados. As 10 células são semeadas em placas TranswellTM, e formam uma monocamada confluente em até 20 dias antes do experimento. No dia 20, o composto teste é adicionado ao lado apical da membrana e o transporte dos compostos através da monocamada é monitorado durante um periodo de tempo de 2 horas. Para 15 estudar o efluxo da droga, também é necessário investigar o transporte de compostos a partir do compartimento basolateral para o compartimento apical. O coeficiente de permeabilidade (Papp) é calculado a partir da seguinte equação:
Papp = (dQ/dt)/(COxA)
Onde dQ/dt é a taxa de permeabilidade da droga em todas as células, o CO é a concentração do compartimento doador no tempo zero e A é a área da monocamada celular. A aplicação deste protocolo, a permeabilidade de Caco-2 de exemplos e compostos referência foram determinados conforme mostrado na Tabela 5.
Tabela 5
Composto
Composto C Exemplo 4 Exemplo 6 Exemplo 7 Exemplo 2 4
Permeabilidade Caco-2 A-B Papp [10‘6cm/s]
0, 6
30
34
32
46
Ensaio de Ligação da Proteína Plasmática
Diálise de equilíbrio é utilizada para determinar o grau
de ligação de um composto a proteínas plasmáticas. Uma membrana semi-permeável separa um compartimento contendo uma proteína de um compartimento livre de proteína. O sistema é possibilitado a equilibrar a 37°C. O composto teste presente 15 em cada compartimento é quantificado por LC-MS/MS. A extensão da ligação é relatada como uma fração não vinculada (fu) valor que é calculado como fu = 1 - (PC-PF)/PC.
PC = Concentração do composto teste em compartimento contendo proteína. PF = Teste compostos concentração em proteínas livres de compartimento. Além de utilizar todo plasma, a ligação às proteínas plasmáticas analisadas pode ser realizada utilizando duas outras proporções de plasma (10% ou 50% de plasma em tampão v/v) . As seguintes equações são utilizadas para converter a partir de uma fração não vinculada em 10% ou 50% para uma fração não vinculada a 100%:
fuioo% = fuio%/ (10-9fuio%)
fUi00% = fU50%/ (2-fU50%) ·
Aplicando este protocolo, a ligação da proteína plasmática de exemplos e compostos referência foi determinada conforme mostrado na Tabela 6:
Tabela 6
Composto Ligação da proteína
plasmática (% da fração não vinculada extrapolada)
Compostc > C 0, 01 Exemplo 15 0, 03 Exemplo 7 0, 5 Exemplo 6 0, 05 Exemplo 4 0, 03 Exemplo 19 0, 3 Exemplo 24 0, 09 Exemplo 25 0, 04 15
Ensaio de Estabilidade Microssomal Humana Estabilidade de compostos para microssomas hepáticos humanos foi determinada como segue: suspensão microssomal hepática humana (1 ml), preparada em tampão de reação a uma concentração de 0,5 mg de proteína microssomal/ml foi 5 pré-incubada por 3 min a 37°C, com um sistema gerador de NADPH (10 mM de glicose-6-fosfato, ImM NADP+, e 1 unidade/ml de levedura com glicose-6-fosfato desidrogenase) . A concentração dos compostos finais é de ΙΟμΜ. Microssomas fervidos(5 min) serviram como controle. Amostras (50μ1), 10 foram então tomadas após 0, 5, 15, 30, 45, 120 min, em 200μ1 de acetonitrila, centrifugadas por 15 minutos a 8.000 x g para remover o sedimento da proteína. As amostras foram analisadas de compostos parentais por HPLC. Método de desenvolvimento: Todas as amostras para a estabilidade 15 metabólica de experimentos foram analisadas por HPLC. Apenas compostos parentais foram analisados. Análise dos dados: As porcentagens dos compostos parentais restantes foram definidas como a relação entre compostos parentais da área de pico em um ponto específico e da área de pico no primeiro 20 tempo do ponto multiplicado por 100%. A estabilidade metabólica foi avaliada pela plotação do logaritmo natural da percentagem remanescente de compostos parentais versus tempo e realização de regressão linear e, finalmente relatada como apuramento [μΐ/min/mg de proteína], que é inversamente
proporcional a estabilidade do composto. Aplicando este protocolo, a estabilidade microsomal dos exemplos e compostos referência foram determinados. (Tabela 7) Tabela 7
Composto
Exemplo 4 Exemplo 7 Composto B
Microssoma hepático humano 62 14 100
Ensaio de Estabilidade Microssomal em Ratos
Estabilidade de compostos para microssomas hepáticos de
ratos foi determinada como segue: Os microssomas são incubados com o composto teste a 37°C na presença do co- fator, NADPH, que inicia a reação. A reação foi terminada por meio da adição de metanol. Após a centrifugação, o sobrenadante é analisado sobre o LC-MS/MS. 0 desaparecimento do composto teste é monitorado ao longo de um período de tempo de 45 minutos. A proporção na área de pico (área de pico do composto/área de pico do padrão interno) é plotada contra o tempo, e o gradiente da linha é determinado. Finalmente, a contagem intrínseco de CLint é calculada pelas seguintes equações: Constante de proporção de eliminação (k) = -gradiente; ti/2 (min) = 0, 693/k; V (μΐ/mg) = volume de incubação (μΐ)/proteína em incubação (mg); CLint (μΐ/min/mg de proteína) = V*0, 693/ti/2· Contagem do composto dos exemplos e compostos referência está listada abaixo na Tabela 8. Tabela 8
Composto Contagem de microssoma hepático de ratos (μΐ/min/mg de proteína)
Exemplo 7 45
Exemplo 15 149
Exemplo 19 57
Exemplo 25 169
Exemplo 26 55
Composto B 310
Ensaio de EstabilidAdB Microssomal em Camxmdongos
Ensaios in vitro foram realizados para avaliar a
estabilidade metabólica dos itens teste em microssomas hepáticos originários de camundongos. Preparação do padrão do ensaio dos itens trabalhados: soluções de trabalho foram preparadas para cada nível de calibração por diluição adequada da solução estoque correspondente, dependendo de cada solubilidade do composto em acetonitrila ou acetonitrila/água. Padrões de calibração foram preparadas por culminação de 196μ1 de matriz padrão com 4μ1 da solução de trabalho correspondente. A matriz padrão consiste de 0,15 mg/ml de proteína microssomal em tampão fosfato (100 mM pH 7,4), as soluções padrão finais contêm 2% de acetonitrila. As amostras e as soluções padrão foram extraídas com acetato de etila, o isolamento dos compostos foi realizado através da adição de 600μ1 de acetato de etila contendo o padrão interno (Ο.ΙμΜ) a 200μ1 de amostra e do padrão de calibração. Após agitação vigorosa (10 minutos) e centrifugação (5000 g) a fase aquosa foi separada por congelamento em acetona/banho de gelo seco e a fase orgânica foi evaporada a seco utilizando uma centrifuga a vácuo. As amostras foram reconstituídas em 5 um mix de 200μ1 de acetonitrila/água (1:1 v/v) e posteriormente submetidas a LC-MS/MS. A solução de incubação (180μ1) consistiu de 90μ1 de uma suspensão microssomal de 0,33 mg/ml de proteína em 100 mM de tampão fosfato em pH 7,4 e 90μ1 de sistema de regeneração NADP. A reação foi iniciada 10 pela adição de 20μ1 de composto teste (em 20% de acetonitrila) a microssomas pré-incubados/mistura tampão a 37°C. 200μ1 de amostras foram retiradas a partir da incubação após 0, 5, 10 e 30 minutos e processadas para extração do acetato como descrito acima. Controles negativos utilizando 15 microssomas fervidos (banho de água fervente, 25 minutos), sem sistema de regeneração foram executados em paralelo. A quantidade de compostos nas amostras é expressa como percentagem do composto restante em comparação com o tempo no ponto zero (= 100%). Estas percentagens foram plotadas contra 20 os pontos de tempo correspondentes. A contagem intrínseca (CLint) e uma meia-vida (11/2) estimadas foram determinadas utilizando a taxa de desaparecimento e as seguintes fórmulas (1) e (2). (I) CLint = (-k)x V x fu. (2) ti/2 = In2/-k. Quando CLint = contagem intrínseca [μΐ/min/mg de proteína],
11/2 = meia vida [min] , k = inclinação da regressão linear de Iog [compostos teste] versus tempo [l/min] . V = 6666,7; fu = fração não vnculativa no sangue. Aplicando este protocolo gerou estabilidades microssomais para exemplos e compostos referência como a seguir enumeradas na Tabela 9:
Table 9
5
Compostos 11 /2 (min) CLint (μΐ/min/mg de
proteína)
Composto A 22 207
Exemplo 28 38 120
Enaaio de Estabilidade H&patócita em Ratos
Estabilidade do composto para hepatócitos de ratos foi determinada como segue: Os hepatócitos são incubados com o 10 composto teste a 37°C. As amostras são retiradas no momento oportuno em metanol para encerrar a reação. Após a centrifugação, o sobrenadante é analisado por LC-MS/MS. O desaparecimento do composto teste é monitorado ao longo de um período de tempo de 60 minutos. A proporção na área de pico 15 (área de pico do composto/área de pico do padrão interno) é plotada contra o tempo, e o gradiente da linha é determinado. Finalmente, a meia vida ti/2 e a contagem intrínseca CLint é calculada pelas seguintes equações: Constante de proporção de eliminação (k) = -gradiente; ti/2 (min) = 0, 693/k; V 20 ^L/número de células (106) = volume de incubação (μΐ)/número de células (*106); CLint (μΙ/min/lO6 proteínas celulares) = V*0, 693/ti/2. Aplicando este protocolo, a estabilidade microssomal dos exemplos e compostos referência foi determinada conforme mostrado na Tabela 10. Tabela 10
Compostos
Composto B Exemplo 7 Exemplo 4 Exemplo 25
Contagem de hepatócitos
ratos (μΐ/min/células IO6)
45,0
0,7
7,1
2,5
de
Determinação doa parâmetros farmacocinéticos em camundongos
Informação sobre a taxa e a extensão da absorção dos
compostos teste foram geradas usando dois diferentes modelos animais, camundongos C57/BI/6J e C57/BLKS/J (mLeprdb/db) . Compostos foram aplicados por via oral a 10 mg/kg a cada macho de 8 semanas de idade de camundongos C57BL/6 e as 10 concentrações plasmáticas dos itens teste foram determinadas por LC-MS/MS (Tabela 11). Alternativamente, compostos foram aplicados por via oral a 25 mg / kg a cada macho de 16 semanas de idade de camundongos C57/BLKS/J (mLeprdb/clb) e as concentrações plasmáticas dos itens teste foram determinadas 15 120 min após a gavagem por LC-MS/MS (Tabela 12).
Uma solução de 20 mg/ml de cada ensaio foi produzida por diluição deles no veículo, 30% de HPBCD (hidroxipropil-beta- ciclodextrina) em 20 mM de tampão fosfato pH7.0 (v/w). Estas 20 soluções foram mexidas por toda a noite, à temperatura ambiente e aquecidas a 60°C durante 10 minutos, resultando em uma completa solubilização. A aplicação foi realizada por administração da solução por via oral para os camundongos, com um volume de aplicação de 10 ml/kg. Para cada momento cinco camundongos foram utilizados. Amostras de sangue foram obtidas sacrificando animais para cada ponto de tempo seguido 5 por punção cardíaca. Amostras de sangue foram tratadas com Li-heparina durante o procedimento de coleta e armazenadas em gelo até centrifugação a 645 g (5 min, 4°C). 0 plasma foi colhido e mantido a -20°C até ser analisado. Para 50μ1 de amostra de plasma de camundongo βμΐ de acetonitrila contendo 10 um padrão interno foi adicionado. As amostras foram vigorosamente agitadas e centrifugadas durante 10 minutos a 6000 g e 20°C. Uma alíquota de sobrenadante livre de partícula foi transferida para 200μ1 de frascos de amostras e posteriormente submetida a LC MS/MS para quantificação. As 15 concentrações plasmáticas em vários pontos de tempo são apresentadas na Tabela 11 e Tabela 12 abaixo.
Tabela 11
Compostos
Tempo de amostragem
Concentração de plasma significativa
Composto B Composto B Exemplo 28 Exemplo 28
[min]
15
45
15
45
[ng/ml] 1599 1646 1783 2227
20 Tabela 12 Compostos
Composto B Exemplo 28
169/ 169
Tempo de Concentração de
amostragem plasma significativa
[min] [ng/ml]
120 164
120 287
5

Claims (42)

1. Um composto de fórmula (I <formula>formula see original document page 171</formula> e um enantiômero, diastereômero, tautômero, solvente ou sal farmaceuticamente aceitável deste, onde R1 e R2 são independentes uns dos outros selecionados a partir de hidrogênio, flúor, ciano, nitro, azido, NR5R6, OR5, SR5, alquil Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6 e cicloalquil C3-C6; ou R1 e R2 são juntos = 0 ou = S; ou R1 e R2 podem juntos formar um anel heterocíclico ou carbociclico de 3-6 membros o qual cada um pode ser saturado ou insaturado, onde cada grupo alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, anel carbociclico ou heterocíclico é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11; R5 e R6 são independentes uns dos outros selecionados a partir de hidrogênio, alquil Ci-C6 e cicloalquil C3-C6; ou R5 e R6 juntos podem formar um anel heterocíclico saturado de 3-6 membros, onde o alquil, cicloalquil e o grupo heterocíclico é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11; X é <formula>formula see original document page 172</formula> em cada fórmula (X1) , (X2) , (X4) R3 é hidrogênio, halogênio, ciano, nitro, azido, alquil Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil, aril, heteroaril, -NR19R20, NR19S (O)mR20, NR19C(O)OR20, NR19C(O)R20, NR19C(O)NR19R20, OR19, OC(O)R19, S(O)iR19, SO2NR19C(O)R20, S(O)mNR19R20, C(O)R19, C(O)OR20, C(O)NR19R20, C(NR19)NR19R20 onde cada alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, heterociclil, aril, ou heteroaril é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11; em cada fórmula (X3) R3 é hidrogênio, alquil Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil, aril, heteroaril, SO2R19, C(O)R19, C(O)OR19, C(O)NR19R20, em que cada alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, heterociclil, aril, ou heteroaril é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11; R19 e R20 são independentes uns dos outros selecionados a partir de hidrogênio, alquil Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6, ou R19 e R20, juntos podem formar um anel heterocíclico ou heteroaromático de 3-7 membros, onde o alquil Ci-C6, alquenil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil e grupo heteroaril é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11; R4 é independentemente selecionado de hidrogênio, halogênio, ciano, nitro, azido, alquil Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil, aril, heteroaril, NR15R16, NR15SO2R16, NR15C (O)OR16, NR15C(O)R16, NR15C(O)NR15R16, NR15C (NCN)NR15R16, OR15, OC(O)R15, S(O)iR15, SO2NR15C(O)R16, S(O)mNR15R16, SC(O)R15, C(O)R15, C(O)OR15, C(O)NR15R16, C(O)NHOR15, C(O)SR15 e C(NR15)NR15R16 onde cada alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, heterociclil, aril, ou heteroaril é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11; e mais dois substituintes R4 podem estar juntos com o átomo ao qual eles se ligam para formar um anel carbociclico, aril, heteroaril ou heterocíclico de4-7 membros, cada um dos quais é substituído ou não substituído com um a cinco substituintes R11; R16 são independentes uns dos outros selecionados a partir de hidrogênio, alquil Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6; ou R15 e R16 juntos podem formar um anel heterocíclico ou heteroaromático de 3-7 membros, onde os grupos alquil, alquenil, cicloalquil, heterociclil e heteroaril são não substituídos ou substituídos com um a cinco substituintes R11; é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, ciano, nitro, azido, = O, = S, alquil Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil, aril, heteroaril, NR12R13, NR12S(O)mR13, NR12C(O)OR13, NR12C(O)R13, NR12C(O)NR12R13, NR12C (NCN)NR12R13, =NOR12, -OR12, OC(O)R12, S(O)iR12, SO2NR12C(O)R13, S(O)mNR12R13, SC(O)R12, C(O)R12, C(O)OR12, C(O)SR12, C(O)NR12R13, C(O)NOR12, e C(NR12)NR12R13; R13 são independentes uns dos outros selecionados a partir de hidrogênio, alquil C1-C6, e cicloalquil C3-C6, onde cada alquil ou cicloalquil pode ser substituído ou não substituído com um a cinco átomos de flúor e/ou um ou dois substituintes selecionados a partir de OH, OCH3, OCH2F, OCHF2, OCF3, = 0, SCF3, NH2, NHCH3 e N(CH3)2; OU R12 e R13 podem estar juntos com o átomo a que estão ligados de modo para formar um anel carbociclico, heteroaril ou heterocíclico de 4-6 membros, cada um dos quais podem ser não substituídos ou substituídos com um a cinco átomos de flúor e/ou um ou dois substituintes selecionados a partir de OH, OCH3i-OCH2F, OCHF2, OCF3, = 0, SCF3, NH2 , NHCH3 e N(CH3)2; Q é 0 OU NR7; R7 é hidrogênio, alquil Ci-C3 ou cicloalquil C3-C5, onde cada alquil ou cicloalquil é não substituído ou substituído com 1-5 átomos de flúor; T é -0-, -S-, -N (R14) -, CH2 OU CF2; R14 é hidrogênio, alquil Ci-C3 ou cicloalquil C3-C5, onde cada alquil ou cicloalquil é não substituído ou substituído com 1-5 átomos de flúor; Y é selecionado a partir de <formula>formula see original document page 176</formula> é independentemente selecionado a partir do hidrogênio, halogênio, ciano, nitro, azido, alquil Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil aril, heteroaril, NR12R13, NR12S (O)mR13, NR12C (O)OR13, NR12C(O)R13, NR12C(O)NR12R13, OR12, OC(O)R12, S(O)1R12, SO2NR12C(O)R13, S(O)mNR12R13, C(O)R12, C(O)OR12, C(O)NR12R13 e C(NR12)NR12R13, onde cada alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, heterociclil, aril ou heteroaril é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11; uma ligação, -C (0)N(R10) - , -S (0)mN(R10) - , -G-N(R10) - , -N(R10)C(O)-, -N(R10)S(O)m-, -N(R10)-G-, -G-S-, -G-O, -S-G-, ou O-G , ou L é <formula>formula see original document page 176</formula> é hidrogênio, alquil Ci-C3, ou cicloalquil C3-C5, onde cada alquil ou cicloalquil é não substituído ou substituído com 1-5 átomos de flúor; é metileno ou etileno que é não substituído ou substituído com 1-5 átomos de flúor; é fenil-A-R9, piridil-A-R9, pirimidil-A-R9 ou piridazil-A-R9, onde fenil, piridil, pirimidil ou piridazil é não substituído ou substituído com um a três grupos selecionados a partir de halogênio, alquil Ci-C4, ou cicloalquil C3-C5, alquenil C2-C4, alquinil C2-C4, ciano, OH, OCH3, OCH2F, OCHF2, OCF3, SCF3, NH2, NHCH3 e N(CH3)2; uma ligação, CH2, CHCH3, C(CH3)2 ou CF2; é hidrogênio, COOR17, CONR17R18, C(O)NHSO2R17, SO2NHC(O)R17, S(O)mR17, C(NR17)NR17R18, ou tetrazol que está ligado a A, através do átomo C; e R18 são independentes uns dos outros selecionados a partir de hidrogênio, alquil Ci-C6, alquenil C2-C6, alquinil C2-C6 e cicloalquil C3-C6; ou R17 e R18 juntos podem formar um anel heterocíclico ou heteroaromático de 3-7 membros ou, onde os grupos alquil Ci-C6, alquenil C2-C6, cicloalquil C3-C6, heterociclil e heteroaril são não substituídos ou substituídos com um a cinco substituintes R11; a é 0 ou 1; b é 1, 2 ou 3; C é 1 ou 2; i é O, 1 ou 2; e m é 1 ou 2.
2.Os compostos de acordo com a reivindicação 1, onde R1 e R2 são independentemente selecionados a partir do hidrogênio, flúor e alquil Ci-6, onde o grupo alquílico é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11; ou R1 e R2 são juntos = O ou = S.
3.O composto de acordo com as reivindicações 1 ou 2, onde Q é O ou NH.
4.O composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, onde em cada fórmula (X1), (X2) e (X4) R3 é hidrogênio, alquil Ci-C6, NR19R20 ou cicloalquil C3-C6, onde cada alquil ou cicloalquil é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11 e em cada fórmula (X3) R3 é hidrogênio, alquila Ci_6 ou cicloalquil C3-C6, onde cada alquil ou cicloalquil é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11.
5.0 composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, onde R4 é hidrogênio, halogênio, alquil Ci_6, alquil O-Ci-C6 ou CN, em que cada grupo alquílico é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11.
6. 0 composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5, onde T é 0, CH2 ou NR14.
7. 0 composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, onde Y é selecionado da fórmula (Y1) , (Y2) e (Y3) .
8. 0 composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, onde R8 é hidrogênio, halogênio, alquil Ci-C6 ou alquil O-Ci-C3, onde cada grupo alquílico é não substituído ou substituído com um a cinco substituintes R11.
9. O composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8, onde L é uma ligação, -C (O) N(R10) - , -S (0) iN(R10) - , -G-N(R10) - ou -N(R10)-G; R10 é hidrogênio ou alquil Ci-C6; e i é 2.
10. O composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, onde Z é fenil-A-R9, onde fenil é não substituído ou substituído com um a três grupos selecionados de halogênio, ciano, alquil Ci-4, OH, OCH3, OCH2F, OCHF2, OCF3, SCF3, NH2, NHCH3 e N(CH3)2.
11. 0 composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, onde R9 é COOR17 ou CONR17R18.
12. 0 composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de I a 11 como um medicamento.
13 . Uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de I a 11 e pelo menos um excipiente e/ou veículo farmaceuticamente aceitável.
14. Uso de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de I a 11 para a preparação de um medicamento para a profilaxia e/ou tratamento de doenças mediadas por FXR.
15. Uso de acordo com a reivindicação 14 para condições intrahepáticas crônicas ou algumas formas de condições extrahepáticas colestáticas, ou fibrose hepática resultante de condições colestáticas crônicas ou condições colestática intrahepáticas agudas.
16. Uso de acordo com a reivindicação 15, onde as condições colestáticas intrahepáticas crônicas são cirrose biliar primária (PBC), colangite esclerosante primária (PSC) , colestase familiar progressiva (PFIC), cirrose álcool- induzida e colestase associada, e a fibrose hepática é estrogênio ou colestase induzida por droga.
17. Uso de acordo com a reivindicação 14 para desordens inflamatórias obstrutivas ou crônicas ou que decorrem da composição bilial inadequada.
18. Uso de acordo com a reivindicação 17, onde as desordens inflamatórias obstrutivas ou crônicas são colelitíase (cálculos biliares de colesterol).
19.Uso de acordo com a reivindicação 14 para condições gastrointestinais com uma reduzida absorção de gordura dietética e vitaminas dietéticas solúveis em gordura.
20.Uso de acordo com a reivindicação 14 para Doenças Inflamatórias Intestinais.
21.Uso de acordo com a reivindicação 20, onde as doenças inflamatórias intestinais são a doença de Crohn e Colite Ulcerosa.
22.Uso de acordo com a reivindicação 14 para desordens de lipídeos e lipoproteínas.
23.Uso de acordo com a reivindicação 22, onde as desordens de lipídeos e lipoproteínas são hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, e aterosclerose como uma condição manifestada clinicamente.
24.Uso de acordo com a reivindicação 14 para Diabetes Tipo II.
25.Uso de acordo com a reivindicação 14, para complicações clínicas de Diabetes Tipo I e Tipo II.
26. Uso de acordo com a reivindicação 25 onde as complicações clínicas de Diabetes Tipo I e Tipo II são a nefropatia diabética, retinopatia diabética, neuropatias diabéticas ou Doença Arterial Oclusiva Periférica (PAOD).
27. Uso de acordo com a reivindicação 14, para condições e doenças que resultam de gordura crônica e degeneração fibrótica de órgãos devido ao acúmulo de lipídeo e especificamente do acúmulo de triglicerídeo e subsequente ativação dos percursos pró-fibróticos.
28. Uso de acordo com a reivindicação 27, onde as condições e as doenças são Esteatohepatite não-alcoólica (NASH) e condições colestáticas crônicas no fígado, Degeneração Macular e Retinopatia Diabética no olho e doenças neurodegenerativas no cérebro ou Neuropatias Diabéticas no sistema nervoso periférico.
29. Uso de acordo com a reivindicação 14 para obesidade e síndrome metabólica (condições combinadas de dislipidemia, diabetes e índice de massa corporal anormalmente elevado).
30. Uso de acordo com a reivindicação 14 para infarto agudo do miocárdio, acidente vascular cerebral agudo, ou trombose que ocorre como um parâmetro da aterosclerose obstrutiva crônica.
31. Uso de acordo com a reivindicação 14 para infecções persistentes por bactérias intracelulares ou protozoários parasitas.
32. Uso de acordo com a reivindicação 31, onde as bactérias ou protozoários parasitas são selecionados a partir de Mycobacterium sp. (Tratamento de Tuberculose e Lepra) , Listeria monocytogenes (Tratamento de Listeriose) , Leishmania sp. (Leishmaniose), Trypanosoma sp. (Doença de Chagas; Tripanossomíase; doença do sono).
33. Uso de acordo com a reivindicação 14 para desordens hiperproliferativas não-malignas.
34. Uso de acordo com a reivindicação 33, onde desordens hiperproliferativas não-malignas têm formação neoíntima aumentada após dilatação do vaso por balão e aplicação de stent, devido ao aumento da proliferação de células musculares lisas vasculares (VSMCs) de Hiperplasia Benigna da Próstata (BPH), ou outras formas de formação de tecido cicatricial e fibrosação.
35. Uso de acordo com a reivindicação 14 para desordens hiperproliferativas malignas.
36. Uso de acordo com a reivindicação 35, onde desordens hiperproliferativas malignas são câncer.
37. Uso de acordo com a reivindicação 14 para esteatose hepática e síndromes associadas, efeitos colestáticos e fibróticos que estão associadas com cirrose hepática induzida por álcool ou com formas de hepatite de origem viral.
38. Uso de acordo com a reivindicação 37, onde a síndrome associada a esteatose hepática é esteatohepatite não- alcoólica ("NASH").
39. Um método para preparar um composto de fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações I a 11 compreendendo a etapa de reagir um composto de fórmula (XIII) Z-Lc (XIII) Onde Z é, tal como definido na reivindicação 1 e Lb é halogênio, NH2, N(R10)H, COCl, COF, CHO, CH2OH, COOH, C(O)NHNH2, C(O)0-alquil, C(0)0-aril, C(0)0-hetaril , SH, SO2Cl, SO3H, G-NH2, G-N(R10)H, OH, G-SH, G-OH, G-halogênio, B(OMe)2, B(OH)2, BF3', 4, 4 , 5 , 5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il ou etinil;
40. 0 método de acordo com a reivindicação 39, onde Z, LeY são como definidos na reivindicação 1, T é 0 R1 e R2 são hidrogênio e X é X1 com Q sendo Oea sendo 0.
41. O método de acordo com a reivindicação 39 ou 40, compreendendo incluir os novos passos de reagir um composto da fórmula (IXa) ou fórmula (IXb) La^EnH (IXa)j la/YEL ('Xb) onde La é halogênio, nitro, azido, CN, CF3, C(O)0-alquil, C(O)0-aril, C(0)0-hetaril, SH, SMe, SO3H, G-NH2, G-N(R10)H, 0H, 0-alquil , G-SH, G-0H, G-halogênio, B(OH)2, B(Oalquil)2 ou etinil;. En-H é 0H, SH, NH2, N(R14)H, NH (CO) 0-alquil, NH (CO) 0-aril, NH (SO) 2aril, NH(SO) 2alquil, CH3 ou CF2H; El é halogênio, OH, OC(O)alquil, OC(O)aril, 0-aril,0-pentafluorofenil,0-sulfonilalquil, 0-sulfonilaril, O-succinilimido,O-benzotriazolil, nitro, azido, S-alquil, S02alquil, S02aril, SC(O)alquil, SC(O)aril ou ciano; com um composto de fórmula (IVa) ou (IVb) , respectivamente <formula>formula see original document page 187</formula> R1, R2 e X são como definidos na reivindicação 1 e El e En-H são como acima definidos; a fim de obter um composto de fórmula (XII) <formula>formula see original document page 187</formula> onde Y, T, R1i R2 e X são como definidos na reivindicação 1; que ainda reagem com um composto da fórmula (XIV) por substituição do agrupamento La com um agrupamento Lb.
42. 0 método de acordo com a reivindicação 41, onde Y, R4i b e R3 são como definidos na reivindicação 1, T é 0, R1 e R2 são hidrogênio e X é X1 com Q sendo Oea sendo 0.
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