BRPI0718061A2 - Inibidores de vegfr3 - Google Patents

Description

ι Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIDORES DE VEGFR3". CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se à constatação que alguns dos derivados de quinazolina macrocíclicos descritos na publicação PCT W02004/105765 são úteis como inibidores de atividades biológicas media- das por VEGFR3, especialmente aquelas atividades que são mediadas por Iigantes de VEGFR3 VEGF-C e/ou VEGF-D. ANTECEDENTES DA INVENÇÃO Câncer é ainda uma causa principal de morte no mundo no co-

meço do século 21 e permanece um foco principal para pesquisa e desen- volvimento contínuo.

Nos recentes anos, uma abordagem promissora para a interven- ção terapêutica do câncer focalizou-se em terapias antiangiogênese. Esta abordagem para intervir na progressão de câncer tem a vantagem da idéia que inibir ou de outra maneira limitar o fornecimento de sangue aos tumores esvaziará o tumor de oxigênio e nutrientes e causará a interrupção da proli- feração e crescimento da célula de tumor. Esta abordagem foi constatada ser eficaz e há agora mais de 20 fármacos antiangiogênicos que sofrem vá- rios estágios de avaliação nas tentativas clínicas de fase I1 Il ou Ill e nume- rosos outros no desenvolvimento pré-clínico.

Enquanto há muitas formas diferentes de câncer exibindo uma ampla variedade de propriedades, um fator que muitas partes de cânceres é que, para ser fatal, eles devem metastizar. Até tal tempo quando a metásta- se ocorre, um tumor, embora possa ser maligno, é limitado a uma área do corpo. Isto pode causar desconforto e/ou dor, ou ainda levar a problemas mais sérios, não obstante pode ser localizado antes da metástase, o câncer pode ser administrado ou ainda removido por intervenção cirúrgica. Contanto que as células cancerígenas residuais sejam mantidas em verificação, um tal câncer discreto se for controlado sem problemas significantes. Entretanto, metástase fará as células cancerígenas invadirem o corpo e enquanto res- secção cirúrgica puder remover o tumor primário, a expansão metastática do câncer aos sítios discrepantes é muito difícil de controlar.

Metástase para Iinfonodos regionais por meio de vasos linfáticos é uma etapa comum no progresso do câncer. Metástase é um fator prognós- tico importante em muitos tipos de câncer e forma a base para o tratamento cirúrgico e de radiação de Iinfonodos locais. O processo de metástase de tumor é um evento de múltiplos estágios envolvendo a invasão local e des- truição da matriz intercelular, intravasão nos vasos sangüíneos, linfáticos ou outros canais de transporte, sobrevivência na circulação, extravasão dos vasos no sítio secundário e crescimento no local novo (Idler, et al., Adv. Câncer Res. 28,149-250 (1978), Liotta, et al., Câncer Treatment Res. 40.223-238 (1988), Nicolson, Biochim. Biophy. Acta 948, 175-224(1988) e Zetter, N. Eng. J. Med. 322,605-612 (1990)). Sucesso no estabelecimento de depósitos metastáticos exige que células de tumor sejam capazes de reali- zar estas etapas seqüencialmente. Recentemente, várias linhas de evidência indicaram que Iinfan-

giogênese, a formação de vasos linfáticos, promove metástase linfática (Stacker et al., Nature Med. 7(2), 186-191 (2001); Skobe et al., Nature Med. 7(2), 192-8 (2001); Makinen et al., Nature Med. 7(2), 199-205 (2001)). O con- trole de linfangiogênese pode fornecer uma nova estratégia para prevenir metástase de Iinfonodo na terapia de câncer.

Recentes estudos mostraram que um membro da família de fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), VEGF-C, estimula a linfangiogê- nese e crescimento de célula endotelial linfática e migração ao ligar-se a seu receptor, VEGFR3 (Karkkainen MJ, et al., Semin Cell Dev Biol. 13:9-18 (2002)). VEGF-C foi da mesma forma mostrado promover metástase media- da linfática por meio de indução de linfangiogênese associada ao tumor em numerosos cânceres sólidos, tais como câncer gástrico, câncer de próstata, câncer colorretal humano, câncer cervical invasivo, metástase de câncer de mama e metástase de melanoma humano. Em defesa destes são os dados pré-clínicos demonstrando que superexpressão de VEGF-C em células can- cerígenas significativamente aumenta a linfangiogênese associada ao tumor, resultando na metástase aumentada em Iinfonodos regionais (Stacker SA., et al., FASEB J 16:922-34 (2002)). Além disso, o bloqueio de sinalização mediado por VEGF-C/D mostrou suprimir a linfangiogênese de tumor e me- tástase de Iinfonodo em camundongos (He Y., et al., J Natl Câncer Inst. 94:819-25 (2002)).

VEGFR3, um receptor de tirosina cinase de transmembrana é

expresso amplamente em células endoteliais durante a embriogênese pre- coce (Pajusola K., et al., Câncer Res. 53(16):3845 (1992)). Durante os últi- mos estágios de desenvolvimento, a expressão de VEGFR-3 torna-se res- tringida a desenvolver vasos linfáticos [Kaipainen, A., et al.s., Proc. Natl. A- cad. Sei. USA, 92: 3566-3570 (1995)]. Em adultos, o endotélio linfático e al- gumas vênulas endoteliais altas expressam VEGFR-3, e a expressão au- mentada ocorre nos seios linfáticos em Iinfonodos metastáticos e em Iinfan- gioma. VEGFR-3 é da mesma forma expressado em um subconjunto de cé- lulas hematopoiéticas CD34+ que podem mediar a atividade mielopoiética de VEGF-C demonstrada por estudos de superexpressão. Rompimento alve- jado do gene de VEGFR-3 em embriões de camundongo leva ao fracasso da remodelagem da rede vascular primária, e morte depois do dia embrionário 9.5 [Dumont et al., Science, 282: 946-949 (1998)]. Estes estudos sugerem um papel essencial para VEGFR-3 no desenvolvimento da vasculatura em- brionária, e da mesma forma durante linfangiogênese.

A partir do anterior, será aparente que inibidores de VEGFR3, tenham tremendo potencial como terapêuticos, e novos agentes deste tipo representam uma necessidade contínua na técnica para inibir crescimento e/ou dispersão de uma variedade de distúrbios neoplásicos ou distúrbios proliferativos de célula. Inibição da atividade de VEGFR3, incluindo a inibi- ção de Iigante ao VEGFR3 é útil no tratamento de indivíduos mamíferos que foram diagnosticados com uma doença caracterizada por proliferação de células endoteliais que expressam VEGFR-3. Por exemplo, muitos tumores são caracterizados por neovascularização de vaso sangüíneo ou vaso linfá- tico, em que a neovascularização compreende células endoteliais que ex- pressam VEGFR-3. Em alguns cânceres, as próprias células cancerígenas expressam VEGFR3, e representa as células-alvo. Em outro, possivelmente conjunto de sobreposição de cânceres, as células cancerígenas expressam um Iigante de VEGFR-3 selecionado a partir de VEGF-C e VEGF-D. O Iigan- te é acreditado estar envolvido no recrutamento de células endoteliais e es- timulando seu crescimento, desse modo facilitando a nutrição e/ou dispersão do câncer.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A invenção é direcionada em parte aos métodos de tratar ou prevenir atividades biológicas mediadas por VEGFR3 utilizando certos com- postos descritos em W02004/105765, a descrição da qual está aqui incorpo- rada por referência em sua totalidade.

Em uma modalidade relacionada, a invenção fornece um método de inibir dispersão metastática de um câncer em um indivíduo mamífero compreendendo administrar a um indivíduo mamífero suspeito de ter câncer um composto da invenção, em uma quantidade eficaz para inibir dispersão metastática do câncer; e um método para tratar câncer compreendendo ad- ministrar a um indivíduo mamífero diagnosticado com um câncer uma com- posição compreendendo um composto da invenção, em um efeito de quanti- dade para reduzir crescimento ou dispersão neoplásica do câncer. Será a- preciado que qualquer redução na taxa de crescimento de câncer ou disper- são (que pode prolongar a vida e qualidade de vida) é indicativa de trata- mento bem-sucedido. Em modalidades preferidas, o crescimento de câncer é interrompido completamente. Em ainda modalidades mais preferidas, cân- ceres diminuem ou são erradicados completamente. Indivíduos preferidos para tratamento são indivíduos humanos, porém outros animais, especial- mente murino, rato, canino, bovino, porcino, primata, et al.s sistemas de mo- delo para tratamento de câncer são considerados.

Em alguns cânceres que expressam VEGFR-3, inibição direta de crescimento de câncer ou morte de câncer pode ser o mecanismo. Trata- mento de todos os cânceres que expressam VEGFR-3 e todos os cânceres caracterizados por angiogênese ou linfangiogênese e ao redor de um tumor crescente é considerado. Por exemplo, tratamento é considerado a partir de cânceres de um tecido, órgão, ou célula selecionados do grupo que consiste em cérebro, pulmão, fígado, baço, rim, linfonodo, intestino delgado, células sangüíneas, pâncreas, cólon, estômago, mama, endométrio, próstata, testí- culo, ovário, pele, cabeça e pescoço, esôfago, medula óssea e sangue. Em uma modalidade particular da presente invenção, tratamento é considerado a partir de cânceres de um tecido, órgão ou célula selecionados a partir do grupo que consiste em Mama, Pulmão, Próstata e Cólon.

Em uma variação dos métodos anteriores de tratamento, os compostos são administrados juntamente com um segundo agente terapêu- tico de câncer. O segundo agente pode ser qualquer agente quimioterapêu- tico, agente radioativo, radiação, ácido nucléico codificando um agente tera- pêutico de câncer, anticorpo, proteína, e/ou outro agente antilinfangiogênico ou um agente antiangiogênico. O segundo agente pode ser administrado antes, depois, ou simultaneamente com os compostos da invenção.

Em uma variação, o indivíduo a ser tratado foi diagnosticado com um tumor operável, e a etapa de administração é realizada antes, du- rante, ou depois que o tumor é ressecado do indivíduo. Tratamento de com- posto em combinação com ressecção de tumor é pretendido reduzir ou eli- minar o recrescimento de tumores de células cancerígenas que não são res- secados.

Declarado mais geralmente, a invenção fornece um método de

tratar uma patologia caracterizada por VEGFR-3 ligando a um ligante natural que liga-se ao VEGFR-3, compreendendo a etapa de administrar a um indi- víduo em necessidade deste um composto da invenção. BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS Figura 1: Efeito de 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5-b][6,1,12]ben-

zoxadiazaciclopentadecina, 17-bromo-8,9,10,1 1,12,13,14,19-octa-hidro-20- metóxi-13-metil- (Composto 2) em VEGF-C induziu atividade de VEGFR3. Estrutura de topo fornece os resultados de imunoprecipitados de VEGFR-3 transferidos em uma membrana de nitrocelulose, manchados com anticorpos de fosfo-tirosina. Estruturas inferiores fornece os resultados de imunoprecipi- tados de VEGFR-3 transferidos em uma membrana de nitrocelulose, man- chado com anticorpos de VEGFR-3. Faixas esquerdas 1 e 2 fornecem os 10

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controles negativos e positivos, isto é Tratamento com DMSO na ausência e presença de VEGF-C.

Figura 2: Estimulação de VEGF e VEGF-C de fosforilação de Erk1/2 em células HMVECd na presença de 5uM do Composto 2. Faixas de topo fornecem manchamento de Erk 1/2 fosforilado (P-Erk 1/2) utilizando anticorpo monoclonal de camundongo Thr202/Tir204 como anticorpo primá- rio e anti-camundongo de cabra conjugado a IRDye 800nm como anticorpo secundário. Faixas de base fornecem manchamento de Erk 1/2 total utilizan- do anticorpo policlonal de coelho específico Erk 1/2 como anticorpo primário e anti-coelho de cabra conjugado a Alexa 680 nm como anticorpo secundá- rio. Painel esquerdo fornece os resultados para fosforilação induzida por VEGF de Erk-1/2 em células HMVECd. Painel direito fornece os resultados para fosforilação induzida por VEGF-C de Erk 1/2 em células HMVECd. DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

W0-2004/105765 descreve a preparação, formulação e proprie- dades farmacêuticas de uma classe de derivados de quinazolina macrocícli- cos da fórmula (I) como inibidores de cinase multialvejados.

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Foi agora constatado que um grupo particular de compostos dentro da classe anteriormente mencionada tem atividade inibidora de VEG- FR3, que os torna útil no tratamento ou prevenção de atividades biológicas mediadas por VEGFR3, em particular para o tratamento ou prevenção de dispersão metastática de um câncer em um indivíduo mamífero.

Desta maneira, em um aspecto a presente invenção fornece o uso dos compostos da fórmula (I) em que;

Z representa NH; Y representa -C3-9alquila-, -Ci-SalquiI-NR13-Cl-SaIquiIa-, -C1. SalquiI-NR14-CO-Cl-SaIquiIa-, -C1-SaIquiI-NH-CO-Het20-, ou -Het22-CH2-CO- NH-C-|.3alquila-;

X1 representa O, ou -O-C1^aIquiIa-;

X2 representa uma ligação direta, -C1^aIquiIa-, O, -O-C1^aIquiIa-,

NR12 ou NR12-C1^aIquiIa-;

R1 representa hidrogênio, ciano, halo ou hidróxi, preferivelmente

halo;

R2 representa hidrogênio, ciano, halo, ou hidróxi; R3 representa hidrogênio;

R4 representa C1^alquiloxi-;

R12 representa hidrogênio, ou C1^alquila-;

R13 representa hidrogênio ou C1^alquila;

R14 representa hidrogênio ou C1^alquila; Het20 representa pirrolidinila, piperazinila ou piperidinila; e

Het22 representa pirrolidinila, piperazinila ou piperidinila;

o ácido farmaceuticamente aceitável ou sais de adição de base e as formas estereoquimicamente isoméricas destes, na fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de atividades biológicas me- diadas por VEGFR3, tal como por exemplo no tratamento ou prevenção de dispersão metastática de um câncer em um indivíduo mamífero.

Um outro aspecto da presente invenção é dirigido a um método para o tratamento ou prevenção de uma atividade biológica mediada por VEGFR3, tal como por exemplo no tratamento ou prevenção de dispersão metastática de um câncer em um indivíduo mamífero, compreendendo ad- ministrar quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula I em que; 7VAy2

8 nI

Z representa NH;

Y representa -C3-9alquila-, -Ci.5alquil-NR13-Ci.5alquila-, -C1. SalquiI-NR14-CO-Cl-SaIquiIa-, -C1-SaIquiI-NH-CO-Het20-, ou -Het22-CH2-CO- NH-C1^aIquiIa-; X1 representa O, ou -O-C1^aIquiIa-;

X2 representa uma ligação direta, -C1^aIquiIa-, O, -O-C-i^alquila-, NR12 ou NR12-C1^aIquiIa-;

R1 representa hidrogênio, ciano, halo ou hidróxi, preferivelmente

halo;

R2 representa hidrogênio, ciano, halo, ou hidróxi;

R3 representa hidrogênio; R4 representa Ci.4alquilóxi-; R12 representa hidrogênio, ou C1^alquila-; R13 representa hidrogênio ou R14 representa hidrogênio ou Ci-4alquila;

Het20 representa pirrolidinila, piperazinila ou piperidinila; Het22 representa pirrolidinila, piperazinila ou piperidinila; e o ácido farmaceuticamente aceitável ou sais de adição de base e as formas estereoquimicamente isoméricas destes; a um indivíduo mamífero em necessidade de tal tratamento.

Outras atividades biológicas mediadas por VEGFR3 são preten- didas incluir;

- dispersão metastática de um câncer em um indivíduo mamífe- ro. Indivíduos preferidos para tratamento são indivíduos humanos, porém outros animais, especialmente murino, rato, canino, bovino, porcino, primata et al.s sistemas de modelo para tratamento de câncer são considerados.

- Metástase para Iinfonodos regionais por meio de vasos linfáti- cos. Desta maneira fornece o uso dos compostos de acordo com a invenção no tratamento ou prevenção de metástase de linfonodo;

- linfangiogênese associada ao tumor em cânceres, tal como por

exemplo em câncer gástrico, câncer de próstata, câncer colorretal humano, câncer cervical invasivo, câncer de mama, sarcoma de Kaposi e melanoma. Desta maneira fornece o uso dos compostos de acordo com a invenção no tratamento ou prevenção de linfangiogênese associada ao tumor em cânce- res, tal como por exemplo em câncer gástrico, câncer de próstata, câncer colorretal humano, câncer cervical invasivo, câncer de mama, sarcoma de Kaposi e melanoma;

- recrutamento e proliferação de células endoteliais que expres- sam VEGFR3 em neovascularização de células cancerígenas que expres-

sam um Iigante de VEGFR3 selecionado a partir de VEGF-C ou VEGF-D. Desta maneira fornece o uso dos compostos de acordo com a invenção no tratamento de cânceres caracterizados por angiogênese ou linfangiogênese dentro e ao redor de um tumor crescente.

Em outra modalidade, a presente invenção fornece o uso de um composto anteriormente mencionado da fórmula (I) para a preparação de uma composição farmacêutica para tratamento de cânceres de um tecido, órgão ou célula selecionado a partir do grupo consistindo em Mama, Pulmão (incluindo o tratamento de ambos, câncer de pulmão de célula não-pequena e célula pequena), Cólon e Próstata. A presente invenção da mesma forma diz respeito a um método

de tratar câncer de mama, câncer de pulmão, câncer de cólon e/ou câncer de próstata em um mamífero, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto anteriormente mencio- nado da fórmula (I) ao referido mamífero. Em ainda outra modalidade, a presente invenção fornece o uso

de um composto anteriormente mencionado da fórmula (I) para a preparação de uma composição farmacêutica para tratar câncer de mama avançado. O termo "câncer de mama avançado" é aqui utilizado para denotar câncer de mama que não respondeu a tratamento prévio, ou que recorreu seguindo tal tratamento, e da mesma forma câncer de mama em pacientes que se apre- sentam com doença metastática no diagnóstico.

A presente invenção da mesma forma diz respeito a um método

de tratar câncer de mama avançado em um mamífero, particularmente uma mulher, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuti- camente eficaz de um composto anteriormente mencionado da fórmula (I) ao referido mamífero.

Em particular, a presente invenção diz respeito ao uso daqueles

compostos da fórmula (I) em que uma ou mais das seguintes restrições apli- cam-se;

Z representa NH;

Y representa -C3.9alquila-, -Ci.5alquil-NR14-CO-Ci.5alquila-, ou -

C1-SaIquiI-NH-CO-Het20-;

X1 representa O;

X2 representa -Ci-2alquila-, O, ou NR12-Ci_2alquila-;

R1 representa hidrogênio ou halo; em particular R1 representa hidrogênio ou cloro; mais em particular R1 representa hidrogênio;

R2 representa hidrogênio ou halo; em particular R2 representa

hidrogênio, cloro ou bromo; mais em particular R2 representa cloro ou bro-

mo;

R3 representa hidrogênio;

R4 representa Ci.4alcóxi; em particular R4 representa metóxi; R12 representa Ci^alquila-; em particular R12 representa metila;

R14 representa hidrogênio ou Ci-4alquila; em particular R14 repre- senta hidrogênio ou metila; mais em particularmente R14 representa hidrogê- nio;

Het20 representa pirrolidinila, piperazinila ou piperidinila; em par- ticular Het20 representa piperidinila.

Da mesma forma de interesse nos usos anteriormente mencio- nados, são aqueles compostos da fórmula (I) em que R1 está na posição 3', R2 está na posição 5', R4 está na posição 7 e X2 está na posição 2', utilizan- do a numeração como apresentado na Fórmula (I) acima.

Compostos mais preferidos são aqueles compostos seleciona- dos a partir do grupo que consiste em; 4,6-etanodilideno-19H-pirimido[4,5-6] [6,13,1 ]benzodioxa-azaciclo-pentadecina,

15-cloro-8,9,10,11,12,13-hexa-hidro-20-metóxi-; 12H-4,6-etanodi-ilideno-13,17-metanopirimido[4,5-b] [6,1,10,16]benzoxatriazaciclononadecin-12-ona,

21-cloro- 8,9,10,11,13,14,15,16,18,23-deca-hidro-25-metóxi-; 4,6-etanodi-ilideno-12H-pirimido[4,5-b] [6,1,10,13]benzoxatriazaciclo-hexadecin-12-ona,

18-cloro-8,9,10,11,13,14,15,20-octa-hidro-21 -metóxi-13,14-

dimetil-; e

4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5- b][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecina,

17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octa-hidro-20-metóxi-13-metil-; ou um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável destes. O último composto é especialmente preferido.

Compostos mais preferidos para uso de acordo com a presente invenção são aqueles selecionados a partir do grupo que consiste em com- ou um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável destes. O seguinte composto é especialmente preferido:

ou um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável destes.

Como utilizado nas definições anteriores e em seguida, - halo é genérico a flúor, cloro, bromo e iodo;

- Ci_2alquila define metila ou etila;

- Ci-3alquila define radicais de hidrocarboneto saturados de ca- deia linear ou ramificada tendo de 1 a 3 átomos de carbono tal como, por exemplo, metila, etila, propila e similares;

- Ci.4alquila define radicais de hidrocarboneto saturados de ca-

deia linear ou ramificada tendo de 1 a 4 átomos de carbono tal como, por exemplo, metila, etila, propila, butila, 1-metiletila, 2-metilpropila, 2,2- dimetiletila e similares;

- Ci.5alquila define radicais de hidrocarboneto saturados de ca-

deia linear ou ramificada tendo de 1 a 5 átomos de carbono tal como, por

exemplo, metila, etila, propila, butila, pentila, 1-metilbutila, 2,2-dimetilpropila, 2,2-dimetiletila e similares;

- C3.galquila define radicais de hidrocarboneto saturados de ca- deia linear ou ramificada tendo de 3 a 9 átomos de carbono tal como propila,

butila, pentila, hexila, heptila, octila, nonila e similares;

- Ci.4alquilóxi define radicais de hidrocarboneto saturados Iinea- res ou ramificados tais como metóxi, etóxi, propilóxi, butilóxi, 1-metiletilóxi, 2- metilpropilóxi e similares;

- o termo "CO" se refere a um grupo carbonila.

Os sais de adição de base ou ácido farmaceuticamente aceitá- veis como mencionado aqui acima são pretendidos compreender o ácido não-tóxico terapeuticamente ativo e formas de sais de adição de base não- tóxicos que os compostos da fórmula (I) são capazes de formar. Os compos- tos da fórmula (I) que têm propriedades básicas podem ser convertidos em seus sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitável tratando-se a re- ferida forma básica com um ácido apropriado. Ácidos apropriados compre- endem, por exemplo, ácidos inorgânicos tais como ácidos hidroálicos, por exemplo ácido clorídrico ou bromídrico; sulfúrico; nítrico; fosfórico e ácidos similares; ou ácidos orgânicos tais como, por exemplo, acético, propanoico, hidroxiacético, lático, pirúvico, oxálico, malônico, succínico (isto é ácido bu- tanodioico), maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, metanossulfônico, etanossulfônico, benzenossulfônico, p-toluenossulfônico, ciclâmico, salicílico, p-aminossalicílico, pamoico e ácidos similares.

Os compostos da fórmula (I) que têm propriedades ácidas po- dem ser convertidos e seus sais de adição de base farmaceuticamente acei- táveis tratando-se a referida forma de ácido com uma base orgânica ou inor- gânica adequada. Formas de sal de base apropriadas compreendem, por exemplo, os sais de amônio, os sais de metal de álcali e alcalinos terrosos, por exemplo os sais de lítio, sódio, potássio, magnésio, cálcio e similares, sais com bases orgânicas, por exemplo, os sais de benzatina, N-metil-D- glicamina, hidrabamina, e sais com aminoácidos tais como, por exemplo, arginina, Iisina e similares.

O termos sal de adição de ácido ou base da mesma forma com- preendem os hidratos e as formas de adição de solvente que os compostos da fórmula (I) podem formar. Exemplos de tais formas são, por exemplo, hi- dratos, alcoolatos e similares.

O termo formas estereoquimicamente isoméricas de compostos da fórmula (I), como aqui acima utilizado, define todos os possíveis compos- tos preparados a partir dos mesmos átomos ligados pela mesma seqüência de ligações porém, tendo estruturas tridimensionais diferentes que não são trocáveis, em que os compostos da fórmula (I) podem possuir. A menos que de outra maneira mencionado ou indicado, a designação química de um composto abrange a mistura de todas as possíveis formas estereoquimica- mente isoméricas cujo referido composto pode possuir. A referida mistura pode conter todos os diastereômeros e/ou enantiômeros da estrutura mole- cular básica do referido composto. Todas as formas estereoquimicamente isoméricas dos compostos da fórmula (I) ambas em forma pura ou em mistu- ra entre si são pretendidas abranger dentro do escopo da presente invenção.

Alguns dos compostos da fórmula (I) podem da mesma forma existir em suas formas tautoméricas. Tais formas embora não explicitamente indicadas na fórmula acima são pretendidas estar incluídas dentro do esco- po da presente invenção. Sempre que utilizou em seguida, o termo "compostos da fórmula

(I)" ou "compostos de acordo com a invenção" são pretendidos incluir da mesma forma os sais de adição de base ou ácido farmaceuticamente aceitá- veis e todas as formas estereoisoméricas.

Os compostos de acordo com a invenção podem ser preparados e formulados em composições farmacêuticas por métodos conhecidos na técnica e em particular de acordo com os métodos descritos na especifica- ção da patente publicada mencionada aqui e incorporada por referência; aos compostos da fórmula (I) exemplos adequados podem ser encontrados na publicação PCT W0-2004/105765. Para preparar as composições farmacêu- ticas anteriormente mencionadas, uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto particular, opcionalmente, além disso, forma de sal, como o ingrediente ativo é combinada em mistura íntima com um veículo farmaceu- ticamente aceitável, que pode tomar uma ampla variedade de formas de- pendendo da forma de preparação desejada para administração. Estas composições farmacêuticas estão desejavelmente na forma de dosagem unitária adequada, preferivelmente, para administração sistêmica tal como oral, percutânea, ou administração parenteral; ou administração tópica tal como por meio de inalação, um spray nasal, colírios ou por meio de um cre- me, gel, xampu ou similar. Por exemplo, preparando-se as composições na forma de dosagem oral, qualquer um dos meios farmacêuticos habituais po- de ser empregados, tal como, por exemplo, água, glicóis, óleos, álcoois e similares no caso de preparações líquidas orais tal como suspensões (inclu- indo nanossuspensões), xaropes, elixires e soluções; ou veículos sólidos tais como amidos, açúcares, caulim, lubrificantes, aglutinantes, agentes desinte- grantes e similares no caso de pós, pílulas, cápsulas e comprimidos. Por causa de sua facilidade em administração, comprimidos e cápsulas repre- sentam a forma de unidade de dosagem oral vantajosa, caso no qual veícu- los farmacêuticos sólidos são obviamente empregados. Para composições parenterais, o veículo normalmente compreenderá água estéril, pelo menos em grande parte, entretanto outros ingredientes, por exemplo, para ajudar solubilidade, pode ser incluído. Soluções injetáveis, por exemplo, podem ser preparadas em que o veículo compreende solução salina, solução de glicose ou uma mistura de solução salina e solução de glicose. Soluções injetáveis contendo compostos da fórmula (I) podem ser formuladas em um óleo para ação prolongada. Óleos apropriados para este propósito são, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de gergelim, óleo de caroço de algodão, óleo de milho, óleo de feijão de soja, ésteres de glicerol sintéticos de ácidos graxos de cadeia longa e misturas destes et al.s óleos. Suspensões injetáveis po- dem da mesma forma ser preparadas caso no qual veículos líquidos apro- priados, agentes de suspensão e similares podem ser empregados. Nas composições adequadas para administração percutânea, o veículo opcio- nalmente compreende uma agente de realce de penetração e/ou um agente umectável adequado, opcionalmente combinado com aditivos adequados de qualquer natureza em proporções menores, cujos aditivos não causam qual- quer efeito danoso significante na pele. Os referidos aditivos podem facilitar a administração à pele e/ou podem ser úteis para preparar as composições desejadas. Estas composições podem ser administradas de várias maneiras, por exemplo, como emplastro transdérmico, como um manchamento ou co- mo um unguento. Como composições apropriadas para aplicação tópica po- dem ser citadas todas as composições normalmente empregadas para topi- camente administrar fármacos por exemplo cremes, géis, curativos, xampus, tinturas, pastas, unguentos, pomadas, pós e similares. Aplicação das referi- das composições pode ser por aerossol, por exemplo, com um propelente tal como nitrogênio, dióxido de carbono, um fréon, ou sem um propelente tal como uma bomba de spray, gotas, loções, ou um semissólido tal como uma composição espessa que pode ser aplicada por um esfregão. Em particular, composições semissólidas tais como pomadas, cremes, géis, unguentos e similares serão utilizadas convenientemente. É especialmente vantajoso formular as composições farmacêuti-

cas anteriormente mencionadas na forma de unidade de dosagem para faci- lidade de administração e uniformidade de dosagem. Forma de unidade de dosagem como utilizado na especificação e reivindicações aqui se referem a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de ingrediente ativo cal- culado para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o ve- ículo farmacêutico requerido. Exemplos de tais formas de unidade de dosa- gem são comprimidos (incluindo comprimidos marcados ou revestidos), cáp- sulas, pílulas, pacotes em pó, pastilhas, suspensões ou soluções injetáveis, colheres de chá cheias, colheres de sopa cheias e similares, e segregados múltiplos destes.

Preferivelmente, uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com a invenção, é administrada oralmente ou parenteralmente. A referida quanti- dade terapeuticamente eficaz é a quantidade que eficazmente previne me- tástase e/ou crescimento ou reduz o tamanho de uma variedade de distúr- bios neoplásicos ou distúrbios proliferativos celulares (supra) em pacientes. Na base dos dados atuais, parece que uma composição farmacêutica com- preendendo um composto da presente invenção, e em particular 4,6-etanodi- ilidenopirimido [4,5-6][6,1,12]benzoxadiazaciclo-pentadecina, 17-bromo- 8,9,10,11,12,13,14,19-octa-hidro-20-metóxi-13-metil- como o ingrediente ativo pode ser oralmente administrada em uma quantidade dentre 10 mg a vários (1 a 5) gramas diariamente, como uma única dose ou subdividida em mais do que uma dose, incluindo, por exemplo dois, três ou ainda quatro vezes por dia. Uma quantidade preferida varia de 500 a 4.000 mg diariamen- te. Uma dosagem particularmente preferida para um tal composto está na faixa de 750 mg a 3.000 mg por dia. Será apreciado que a quantidade de um composto de acordo com a presente invenção, da mesma forma se refere aqui como o ingrediente ativo, que é requerido para obter um efeito terapêu- tico, claro que, variará com, a rotina de administração, a idade e condição do recipiente, e o distúrbio particular ou doença a ser tratada. As quantidades de dosagem ideais e regime podem ser determinadas facilmente por aqueles versados na técnica utilizando métodos convencionais e devido à informação mencionada aqui. Este tratamento pode ser produzido continuamente ou com intermitência, incluindo, por exemplo, porém não limitado a, ciclos de 3- 4 semanas com tratamento determinado durante 1-21 dais por ciclo ou ou- tros horários mostrados ser eficazes e seguros.

Os inibidores de VEGFR3 acima podem ser utilizados em com- binação com um ou mais outros tratamentos de câncer. Tais combinações poderiam abranger qualquer terapia antitumor estabelecida, tal como, porém não limitada a, quimioterapias, irradiação, e alvo com base em terapias tais como anticorpos e moléculas pequenas. Estas terapias podem ser combina- das em terapia sistêmica, ou instilação / administração local (por exemplo intratecalmente), dependendo das exigências de eficácia / segurança.

Em certas modalidades preferidas, um ou mais outros tratamen- tos de câncer adequados em combinação com os inibidores de VEGFR3 da presente invenção, com respeito aos tipos de tumor diferentes, incluem, po- rém não são limitados a;

mama: herceptina, docetaxel, antraciclina, capecitabina próstata: docetaxel, mitoxantrona

cólon: oxaliplatina, 5-FU, avastina, irinotecana, cetuximabe pulmão: taxotere, carboplatina, gemicitabina

O inibidor de VEGFR3 da invenção e o outro agente anticâncer pode ser administrado simultaneamente (por exemplo, em composições se- paradas ou unitárias) ou seqüencialmente em qualquer caso. No último ca- so, os dois compostos serão administrados dentro de um período e de uma quantidade e maneira que são suficientes para garantir que um efeito vanta- joso ou sinergístico é obtido. Será apreciado que o método preferido e or- dem de administração e as quantidades de dosagem respectivas e regimes para cada componente da combinação dependerão do inibidor de VEGFR3 particular et al.s agentes anticâncer a ser administrados, sua rotina de admi- nistração, o tumor particular a ser tratado e o hospedeiro particular tratado. O método ideal e ordem de administração e as quantidades de dosagem e regime podem ser facilmente determinados por aqueles versados na técnica utilizando métodos convencionais e devido à informação mencionada aqui. PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS E FORMULAÇÕES: Preparação do Composto 95. 12H-4,6-etanodi-ilideno-13.17- metanopirimidor4.5-b16.1,10,161benzoxatriazaciclononadecin-12-ona. 21- cloro-8,9,10.11.13,14.15.16,18.23-deca-hidro-25-metóxi- Etapa 1

Titânio, tetracis(2-propanolato) (0,005 mol) foi adicionado a uma solução de etil éster de ácido 3-piperidinacarboxílico (0,54 g, 0,005 mol) e 4- cloro-2-nitrobenzaldeído (0,93 g, 0,005 mol) em CH2CI2 (40 ml). A mistura foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente e NaBH(OAc)3 (0,0055 mol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada durante 1 hora em tempe- ratura ambiente e NaBH(OAc)3 extra (0,00275 mol) foi adicionado e a mistu- ra foi agitada durante 2 horas em temperatura ambiente e em seguida NaH- CO3 (saturado em H2O) foi adicionado. A camada orgânica foi separada, se- cada (K2CO3), filtrada e o solvente foi evaporado e coevaporado com tolueno para remover o CH2CI2 residual. O ácido 3-piperidinacarboxílico, 1-[(4-cloro-

2-nitrofenil)metil]-, etil éster como resíduo bruto foi utilizado como tal na pró- xima etapa de reação.

Etapa 2

Uma mistura de 1-[(4-cloro-2-nitrofenil)metil]-, etil éster de ácido

3-piperidinacarboxílico, (1,69 g, 0,005 mol) em etanol (150 ml) foi hidrogena- da com Pt/C 5% (0,5 g) como um catalisador na presença de uma solução de tiofeno (1 ml). Depois da captação de H2 (3 equiv.), o catalisador foi fil- trado e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi redissolvido em EtOAc e esta solução foi filtrada em Extrelute. Heptano foi adicionado porém nenhum cris- tal apareceu. O solvente foi evaporado e o resíduo foi redissolvido em CH3OH e filtrado em um filtro de papel para remover graxa de sílica. O sol- vente foi evaporado para produzir 1,35 g de etil éster de ácido 3- piperidinacarboxílico, 1-[(2-amino-4-clorofenil)metil]-, como um óleo marrom. Etapa 3

6-acetato de 4-Cloro-7-metóxi-6-quinazolinol (0,273 g, 0,00108 mol) foi adicionado a uma solução de 1-[(2-amino-4-clorofenil)metil]-, etil és- ter de ácido 3-piperidinacarboxílico (0,0011) em 2-propanol (q.s.) e em se- guida a mistura reacional foi agitada durante a noite a 80°C. Em seguida a mistura foi também agitada durante 6,5 horas a 80°C e o solvente foi evapo- rado. Rendimento: 1 -[[2-[[6-(acetilóxi)-7-metóxi-4-quinazolinil]amino]-4- clorofeniljmetil]-, etil éster de ácido 3-piperidinacarboxílico (bruto; utilizado como tal na próxima etapa reacional). Etapa 4

NH3/CH30H a 7N (aprox. 10 ml) foi adicionado a 1-[[2-[[6- (acetilóxi)-7-metóxi-4-quinazolinil]amino]-4-clorofenil]metil]-, etil éster de áci- do 3-piperidinacarboxílico (0,00114 mol) e a mistura reacional foi agitada durante 1 hora a 35°C e em seguida o solvente foi evaporado. Rendimento: 1 -[[4-cloro-2-[(6-hidróxi-7-metóxi-4-quinazolinil)amino]fenil]metil]-, etil éster de ácido 3-piperidinacarboxílico (utilizado como tal na próxima etapa reacio- nal). Etapa 5

Uma mistura de 1-[[4-cloro-2-[(6-hidróxi-7-metóxi-4- quinazolinil)amino]fenil]metil]-, etil éster de ácido 3-piperidinacarboxílico (0,00114 mol), 1,1-dimetiletil éster de ácido A/-(3-bromopropil)carbâmico (1 eq) e Cs2CO3 (1,8582 g) foi agitada durante a noite em temperatura ambien- te e em seguida a mistura reacional foi agitada durante 30 minutos a 50°C. Quando necessário mais 1,1-dimetiletil éster de ácido N-(3- bromopropil)carbâmico foi adicionado e a mistura foi agitada durante 4 horas em temperatura ambiente durante outros 15 minutos a 50°C. O solvente foi evaporado (Genevac) e o resíduo foi dissolvido em CH2CI2. Esta solução foi filtrada em dicalito e o filtrado foi evaporado. Rendimento: 1-[[4-cloro-2-[[6-[3- [[(1,1-dimetiletóxi)carbonil]amino]propóxi]-7-metóxi-4- quinazolinil]amino]fenil]metil]-, etil éster de ácido 3-piperidinacarboxílico. Etapa 6

Uma solução de 1-[[4-cloro-2-[[6-[3-[[(1,1-

dimetiletóxi)carbonil]amino]propóxi]-7-metóxi-4-quinazolinil]amino]fenil]metil]- , etil éster de ácido 3-piperidinacarboxílico (resíduo; aprox. 0,00114 mol) em TFA/CH2CI2/TIS (90/8/2) (11,4 ml) foi agitada durante 7-8 horas, em seguida o solvente foi evaporado e o resíduo obtido foi secado durante a noite em um forno. Rendimento: 1-[[2-[[6-(3-aminopropóxi)-7-metóxi-4- quinazolinil]amino]-4-clorofenil]metil]- de ácido 3-piperidinacarboxílico. CF3COOH. Etapa 7

Uma solução de 1-[[2-[[6-(3-aminopropóxi)-7-metóxi-4- quinazolinil]amino]-4-clorofenil]metil]- de ácido 3-piperidinacarboxílico. CF3COOH (0,00114 mol) e DIPEA (0,00684 mol) foi adicionado a uma solu- ção de HBTU (0,00342 mol) e HOBt (0,00228 mol) em DMF seco (285 ml) e em seguida a mistura reacional foi reagida durante 1 hora. O solvente foi evaporado e o resíduo seco foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho de fase reversa. As frações de produto foram coletadas, Na2C03 foi adicionado e o solvente orgânico foi evaporado. CH2CI2 foi adi- cionado ao concentrado aquoso e a mistura resultante foi extraída 3 vezes com CH2CI2, em seguida o extrato orgânico foi secado e coletado. Rendi- mento: 0,0007 mol de 12H-4,6-etanodi-ilideno-13,17-metanopirimido[4,5-b] [6,1,10,16]benzoxatriazaciclononadecina-12-ona, 21 -cloro-

8,9,10,11,13,14,15,16,18,23-deca-hidro-25-metóxi- (62% de rendimento). Preparação de Composto 96, 4.6-etanodi-ilideno-12H-pirimidor4,5-

b1f6.1.10,131benzoxatriazaciclo-hexadecin-12-ona,_18-cloro-

8.9.10.11,12,13,14.15.20-octa-hidro-21 -metóxi-13.14-dimetik (13S)- Etapa 1 Uma mistura de cloridrato de metil éster de N-metil-L-alanina (1,4 g, 0,010 mol), 4-cloro-2-nitrobenzaldeído (0,010 mol) e tetracis(2- propanolato) de Titânio (0,010 mol) em CH2CI2 (q.s.) foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. Em seguida NaBH(OAc)3 (0,022 mol) foi adicionado e a mistura foi agitada durante 3 horas em temperatura ambiente. Mais NaBH(OAc)3 (0,011 mol) foi adicionado e a mistura foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. Em seguida NaHC03 (saturado) foi adi- cionado ainda básico e a mistura foi filtrada em um filtro de P3. A camada orgânica foi separada e a camada de água foi extraída 3 vezes com CH2CI2. As camadas orgânicas combinadas foram secadas (K2C03) e o solvente foi evaporado até a secura. O resíduo bruto, L-alanina, A/-[(4-cloro-2- nitrofenil)metil]-A/-metil-, metil éster, foi utilizado como tal na próxima etapa reacional. Etapa 2

Uma mistura de L-alanina, A/-[(4-cloro-2-nitrofenil)metil]-/V-metil-,

metil éster (1,03 g, 0,0036 mol) em CH30H (50 ml) foi hidrogenada com Pt/C 5% (0,5 g) como um catalisador na presença de uma solução de tiofeno a 4% em DIPE (0,5 ml). Depois da captação de H2 (3 equiv.), o catalisador foi filtrado e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi purificado em sílica-gel (com cartucho) (eluente: 4% de Et3N / CH2CI2). As frações desejadas foram cole- tadas. Heptano foi adicionado à fração desejada (forma de 2 fases). A ca- mada de heptano foi separada para remover graxa de sílica. Depois da re- moção do solvente e secagem 0,5674 g de L-alanina, A/-[(2-amino-4- clorofenil)metil]-A/-metil-, metil éster foi obtido (22%; óleo amarelo). O produ- to bruto foi utilizado como tal na próxima etapa reacional. Etapa 3

6-Acetato de 4-cloro-7-metóxi-6-quinazolinol (0,00055 mol) foi adicionado a uma solução de L-alanina, /V-[(2-amino-4-clorofenil)metil]-A/- metil-, metil éster (0,00055 mol) em 2-propanol (5 ml) e em seguida a mistu- ra reacional foi agitada durante a noite a 80°C e o solvente foi evaporado. Rendimento: L-alanina, /V-[[2-[[6-(acetilóxi)-7-metóxi-4-quinazolinil]amino]-4- clorofenil]metil]-N-metil, metil éster (bruto, utilizado como tal na próxima eta- pa reacional). Etapa 4

NH3/CH30H a 7N (10 ml) foi adicionado a L-alanina, Λ/-[[2-[[6- (acetilóxi)-7-metóxi- 4-quinazolinil]amino]-4-clorofenil]metil]-N-metil-, metil éster (0,00055 mol) e a mistura reacionai foi agitada durante 1 -2 horas e em seguida o solvente foi evaporado. Rendimento: L-alanina, /V-[[4-cloro-2-[(6- hidróxi-7-metóxi-4-quinazolinil)amino]fenil]metil]-/\/-metil-, metil éster (utiliza- do como tal na próxima etapa reacional). Etapa 5

Uma mistura de L-alanina, A/-[[4-cloro-2-[(6-hidróxi-7-metóxi-4-

quinazolinil)amino]fenil]metil]-/\/-metil-, metil éster (0,00055 mol), 1,1- dimetiletil éster de ácido N-(3-bromopropil)carbâmico (1 eq) e Cs2C03 (0,8965 g) foi agitada durante a noite em temperatura ambiente e em segui- da a mistura reacional foi agitada durante 30 minutos a 50°C. Quando ne- cessário, mais CAS 1,1-dimetiletil éster de ácido A/-(3-bromopropil)carbâmico foi adicionado e a mistura foi agitada durante 4 horas em temperatura ambi- ente e durante outros 15 minutos a 50°C. O solvente foi evaporado (Gene- vac) e o resíduo foi dissolvido em CH2CI2. Esta solução foi filtrada em dicali- to e o filtrado foi evaporado. Rendimento: L-alanina, A/-[[4-cloro-2-[[6-[3- [[(1,1-dimetiletóxi)carbonil]amino]propóxi]-7-metóxi-4- quinazolinil]amino]fenil]metil]-A/-metil-, metil éster. Etapa 6

Uma solução de L-alanina, N-[[4-cloro-2-[[6-[3-[[(1,1- dimetiletóxi)carbonil]amino]propóxi]-7-metóxi-4-quinazolinil]amino]fenil]metil]- N-metil-, metil éster (resíduo bruto; 0,00055 mol) em TFA/CH2CI2/TIS (90/8/2) (5,5 ml) foi agitada durante 7-8 horas, em seguida o solvente foi e- vaporado e o resíduo obtido foi secado durante a noite em um forno. Rendi- mento: L-alanina, N-[[2-[[6-(3-aminopropóxi)-7-metóxi-4-quinazolinil]amino]- 4-clorofenil]metil]-/V-metil-. CF3COOH. Etapa 7

Uma solução de L-alanina, A/-[[2-[[6-(3-aminopropóxi)-7-metóxi- 4-quinazolinil]amino]-4-clorofenil]metil]-N-metil- .CF3COOH (0,00055 mol) e DIPEA (0,0033 mol) foi adicionada a uma solução de uma HBTU (0,00165 mol) e HOBt (0,0011 mol) em DMF seco (137 ml) e em seguida um mistura reacional foi reagida durante 1 hora. O solvente foi evaporado e o resíduo seco foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho de fase reversa. As frações de produto foram coletadas, Na2C03 foi adicionado e o solvente orgânico foi evaporado. CH2CI2 foi adicionado ao concentrado a- quoso e a mistura resultante foi extraída 3 vezes com CH2CI2, em seguida o extrato orgânico foi secado e coletado. Rendimento: 0,049 g de 4,6-etanodi- ilideno-12/-/-pirimido[4,5-b][6,1,10,13]benzoxatriazaciclo-hexadecina-12-ona, 18-cloro-8,9,10,11,13,14,15,20-octa-hidro-21 -metóxi-13,14-dimetil-, (13S)-.

Quando utilizado nos exemplos, 'CH3OH' significa metanol, 'Et3N' significa trietilamina, 'CH2CI2' significa diclorometano, 'HBTU' significa 1 -[bis(dimetilamino)metileno]-1 H-Benzotriazolium-hexafluorofosfato(1 -)3- óxido, 'DMF' significa /V,/\/-dimetilformamida, 'NaBH(OAc)3' significa triaceto- xiboro-hidreto de sódio, 'DIPEA' significa N-etil-N-(1-metiletil)-2- propanamina, 'HOBt' significa 1-hidróxi-1H-benzotriazol, 'TFA' significa ácido trifluoroacético, 'TIS' significa tris(l-metiletil)silano, 'K2C03' significa carbona- to de potássio, 'Cs2C03' significa carbonato de césio, 'Na2C03' significa sal dissódico de ácido carbônico, 'NaHC03' significa sal monossódico de ácido carbônico.

Preparação do Composto 22. MTK11

Uma preparação adequada do composto preferido utilizado nes- ta invenção, tomada a partir de WO-2004/105765, segue: Exemplo A

a) Preparação de 1-pentanol. 5-fr(4-bromo-2-nitrofeninmetinamino1- (intermediário 1)

Uma solução de 4-bromo-2-nitro-benzaldeído, (0,013 mol), 5- amino-1-pentanol (0,013 mol) e tetracis (2-propanolato) de titânio, (0,014 mol) em EtOH (15 ml) foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora, em seguida a mistura reacional foi aquecida a 50°C e agitada durante 30 minutos. A mistura foi resfriada em temperatura ambiente e NaBH4 (0,013 mol) foi adicionado porção a porção. A mistura reacional foi agitada durante a noite e em seguida vertida em água gelada (50 ml). A mistura resultante foi agitada durante 20 minutos, o precipitado formado foi filtrado (produzindo Filtrado (I)), lavado com H2O e agitado em DCM (para dissolver o produto e remover a partir do sal de Ti). A mistura foi filtrada e em seguida o filtrado foi secado (MgSO4) e filtrado, finalmente o solvente foi evaporado. Filtrado (I) foi evaporado até que EtOH fosse removido e o concentrado aquoso foi ex- traído 2 vezes com DCM. A camada orgânica foi separada, secada (MgSO4), filtrada e o solvente foi evaporado, produzindo 3,8 g (93%) do intermediário 1.

Exemplo B

a) Preparação de 1-pentanol, 5-ír(4-bromo-2-nitrofeninmetinmetilamino1- (in- termediário 2)

Uma solução do intermediário 50 (0,0047 mol), formaldeído (0,025 mol) e titânio, tetracis (2-propanolato) (0,0051 mol) em EtOH (150 ml) foi aquecida a 50°C e agitada durante 1 hora, em seguida NaBH4 (0,026 mol) foi adicionado porção a porção em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada durante a noite e em seguida extinguida com água (100 ml). A mistura resultante foi agitada durante 1 hora; o precipitado formado foi filtrado e lavado. O filtrado orgânico foi concentrado, em seguida o concen- trado aquoso foi extraído com DCM e secado. O solvente foi evaporado e o resíduo foi filtrado em sílica-gel (eluente: DCM/CH3OH de 98/2 a 95/5). As frações de produto foram coletadas e o solvente foi evaporado, produzindo 0,5 g do intermediário 2.

b) Preparação de 1-pentanol, 5-rí(4-bromo-2-nitrofeni0metillmetilamino1-, acetato (éster) (intermediário 3)

Uma solução do intermediário 2 (0,0015 mol) e piridina (0,015 mol) em anidrido acético (8 ml) foi agitada durante a noite em temperatura ambiente, em seguida o solvente foi evaporado e coevaporado com tolueno, produzindo intermediário 3. c) Preparação de 1-pentanol. 5-fr(2-amino-4-bromofeninmetillmetilamino1-, acetato (éster) (intermediário 4)

Uma mistura do intermediário 3 (0,0015 mol) em THF (50 ml) foi hidrogenada com Pt/C 5% (0,5 g) como um catalisador na presença de solu- ção de tiofeno (0,5 ml) [H179-034], Depois da captação de H2 (3 equiv.), o catalisador foi filtrado e o filtrado foi evaporado, produzindo 0,5 g do inter- mediário 4.

d) Preparação de 6-quinazolinol. 4-rf2-fff5-(acetilóxi)pentinmetilamino1metil1- 5-bromofenil1amino1-7-metóxi-, acetato (éster) (intermediário 5)

Uma mistura do intermediário 4 (0,0015 mol) e acetato de 4- cloro-7-metóxi-6-quinazolinol (éster) (0,0015 mol) em 2-propanol (30 ml) foi aquecida a 80°C e a mistura reacional durante 1 dia. O solvente foi evapora- do sob pressão reduzida e o resíduo foi utilizado como tal na próxima etapa reacional, produzindo 0,83 g do intermediário 5.

e)_Preparação_de_6-quinazolinol,_4-ff5-bromo-2-[r(5-

hidroxipentil)metilamino1metinfeninamino1-7-metóxi- (intermediário 6)

Uma solução do intermediário 5 (0,0015 mol) em metanol (25 ml) foi agitada em temperatura ambiente e uma solução de K2CO3 (0,003 mol) em H2O (2,5 ml) foi adicionada, em seguida a mistura reacional foi aquecida a 60°C e agitada durante 18 horas. O solvente foi evaporado e H2O (20 ml) foi adicionado, em seguida a mistura foi neutralizada com ácido acético e o precipitado formado foi filtrado. O filtrado foi concentrado sob pressão redu- zida e o concentrado foi extraído com DCM, filtrado, em seguida secado (MgSO4) e a mistura foi concentrada sob pressão reduzida, produzindo 0,5 g (70%) do intermediário 6. Exemplo C

a) Preparação de 4,6-etanodi-ilidenopirimidof4.5-òir6.1.121benzoxa- diazaciclo-pentadecina, 17-bromo-8.9,10,11.12.13.14.19-octa-hidro-20- metóxi-13-metil- (composto MTK11)

Uma solução do intermediário 6 (0,0011 mol) em THF (50 ml) foi agitada em temperatura ambiente e tributilfosfina (0,0016 mol) foi adiciona- da, em seguida 1,1'-(azodicarbonil)bis-piperidina (0,0016 mol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada durante 2 horas. O solvente foi evaporado até 1/3 do volume inicial. O precipitado resultante foi filtrado e lavado. O fil- trado foi evaporado e o resíduo foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho de fase reversa. As frações de produto foram coletadas e o solvente orgânico foi evaporado. O concentrado aquoso foi extraído 2 vezes com DCM e a camada orgânica foi secada (MgSO4)1 em seguida filtrada. O solvente foi evaporado e o resíduo foi secado (vac.) a 50°C, produzindo 0,004 g (0,8%) do composto MTKI1.

Preparação do Composto 2. 4.6-etanodi-ilideno-19/-/-pirimidor4,5- b1f6.3,11benzodioxa-azaciclo-pentadecina, 15-cloro-8,9,10,11,12,13-hexa- hidro-20-metóxi-; Exemplo D

Preparação de 4.6-etanodi-ilideno-19H-pirimidof4,5-ò1í6,13,1Ibenzodioxa- azaciclo-pentadecina. 15-cloro-8.9,10.11.12.13-hexa-hidro-20-metóxi- (com- posto 2)

Uma solução do intermediário 9 (0,0024 mol) e trifenilfosfina (0,0036 mol) em THF, seco (100 ml) foi agitada em temperatura ambiente e em seguida uma solução de bis(1-metiletil)diazenodicarboxilato (0,0036 mol) em THF (10 ml) foi adicionada gota a gota. A mistura reacional foi agitada durante 6 horas e bis(1-metiletil)diazenodicarboxilato extra (0,35 ml) em THF (10 ml) foi adicionado. A mistura foi agitada durante a noite e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (eluente: DCM/CH3OH/THF 90/5/5). As frações de produto foram coletadas e também purificadas por cromatografia líquida de alto desempenho de fase reversa. As frações de produto foram coletadas e concentradas. O concentrado a- quoso foi filtrado, e o sólido retido lavado e secado (vac.) a 65°C, produzindo 0,065 g do composto 2, ponto de fusão 255,5-260,2°C. Exemplo E

a) Preparação de ácido hexanoico, 6-(2-cloro-6-nitrofenóxi)-. metil éster (in- termediário 6)

Uma solução de 2-cloro-6-nitro-fenol (0,046 mol) em N1N- dimetilformamida (150 ml) foi aquecida a 50°C, em seguida K2CO3 (0,069 mol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada durante 15 minutos. 6- Bromo-, metil éster, ácido hexanoico (0,069 mol) foi adicionado e a mistura foi agitada durante a noite. A mistura reacional foi filtrada e o filtrado foi con- centrado e o resíduo foi utilizado como tal na próxima etapa, produzindo 13,88 g do intermediário 6.

b) Preparação de ácido hexanoico, 6-(2-amino-6-clorofenóxi)-, metil éster (intermediário 7)

Uma mistura do intermediário 6 (0,046 mol) e etanima (2 g) em

THF (ml) foi hidrogenada com Pt/C 5% (3 g) como um catalisador na pre- sença de DIPE (2 ml). Depois da captação de H2 (3 equiv.), a mistura rea- cional foi filtrada em tampão pequeno a partir de Dicalito o filtrado foi con- centrado, produzindo intermediário 7. c) Preparação de ácido hexanoico, 6-r2-f[6-(acetilóxi)-7-metóxi-4- quinazolinillaminol-6-clorofenóxil-, metil éster (intermediário 8)

Uma mistura de 4-cloro-6-metilcarbonilóxi-7-metoxiquinazolina (0,022 mol) e intermediário 7 (0,022 mol) em 2-propanol (170 ml) foi agitada e aquecida a 80°C durante 2 horas, concentrada e o resíduo foi cromatogra- fado em sílica-gel (eluente: DCM/CH3OH 97/3). As frações de produto foram coletadas e o solvente foi evaporado, produzindo 5,1 g de intermediário 8 (utilizado como tal na próxima etapa reacional).

d) Preparação de 6-quinazolinol, 4-fr3-cloro-2-í(6-hidróxi- hexil)óxi1fenillamino1-7-metóxi-(intermediário 9) Uma mistura de LAH (0,0246 mol) em THF (40 ml) foi agitada

em temperatura ambiente. Uma solução do intermediário 8 (0,006 mol) em THF (60 ml) foi adicionada gota a gota. A mistura reacional foi agitada duran- te 1 dia, em seguida LAH extra (0,0123 mol) foi adicionado gota a gota. A mistura foi agitada também durante o fim de semana em seguida, H2O (2 ml) foi adicionada gota a gota, seguido pela adição gota a gota de uma solução de NaOH a 15% (2 ml) e H2O (6 ml). Esta mistura foi agitada durante 15 mi- nutos filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi agitado em CH3CN fervente, filtrado e o sólido retido foi secado (vac.) a 60°C. Os sólidos foram redissolvidos em CH3OH/DCM (10/90) e esta mistura foi neutralizada com HCI (1 Ν). A camada orgânica foi separada, secada (MgSO4), filtrada e con- centrada, produzindo 1 g do intermediário 9.

Um exemplo de formulação ilustrativa para o composto mais pre- ferido, MYKI1, é como segue: Exemplo F: Formulação:

O produto MTKI1 pode estar preparado como uma solução oral a 10-mg/mL, pH 2. Contém um excipiente, Captisol® (nome químico: sulfo- butil éter-p-ciclodextrina, SBE^-CD), ácido cítrico, Tween® 20, HCI1 e NaOH em água purificada. A formulação pode ser armazenada refrigerada (2-8°C (36-46°F)) e permitida aquecer em temperatura ambiente durante maxima- mente 1 hora antes da preparação de dose.

O produto MTKI1 pode da mesma forma ser preparado como cápsulas de liberação imediata orais de 50-mg, 100-mg e 300-mg, contendo a entidade química ativa MTKI1, mono-hidrato de Iactose (malha 200), Iauril sulfato de sódio e estearato de magnésio em cápsulas de gelatina duras, tamanhos 3, 4 e 00, respectivamente. As cápsulas podem da mesma forma conter qualquer ou todos os seguintes ingredientes: gelatina, oxido de ferro vermelho e óxido de titânio. DADOS EXPERIMENTAIS Inibição de VEGFR3

Envolvimento de Iinfonodo é um fator prognóstico inferior em vários tipos de câncer. Estudos recentes demonstraram que a formação de vaso linfático desempenha um papel importante no progresso do tumor e fatores de crescimento endotelial vascular (VEGF) CeD foram identificados como fatores linfangiogênicos específicos que agem por meio de ativação do receptor de cognato VEGFR3. 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5-ò][6,1,12]ben- zoxadiazaciclo-pentadecina, 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octa-hidro-20- metóxi-13-metil-, em seguida da mesma forma referido como Composto 2, é um inibidor de cinase multialvejada que foi mostrada ter um perfil de inibição de cinase único (pan família Her e Src) bem como um perfil de distribuição de tecido favorável resultando na atividade antitumor potente em vários mo- delos experimentais.

Em ensaios de cinase in vitro mostrou que os compostos da pre-

sente invenção têm inibição potente da atividade da família de EGFR1 Her2, Her4 e Src cinases (Src, Fyn, Lck, Yes, Lyn). A inibição de cinase in vitro foi validada aqui em ensaios com base em célula utilizando células endoteliais vasculares humanas (HM- VECd), em que Composto 2 preveniu estímulo de VEGF-C dependente de VEGFR3 de Erkl/2, visto que não afetou a sinalização de VEGF mediada por VEGFRI. Composto 2 foi da mesma forma mostrado aqui inibir fosforilação induzida por VEGF-C de VEGFR3 utilizando uma linhagem celular dirigida a superexpressão de VEGFR3 humano.

Estes resultados foram também validados aqui em um modelo de girino Xenopus recentemente desenvolvido onde o Composto 2 foi cons- tatado fenocopiar os efeitos de nocaute de VEGF-C. (Ny et al., Nat. Med. 2005 Sep; 11 :998-1004). Métodos

Ensaios de cinase in vitro

A reação de VEGFR3 cinase foi realizada a 30°C durante 10 minutos em uma placa de microtítulo de 96 cavidades. O volume de reação de 25 μΙ conteve MOPS a 8 mM pH 7, EDTA a 200 μΜ, MgAc a 10 mM, ATP a 10 μΜ não rotulado, 0,5 mCi de AT33P, JAK3-tide de 500 μΜ (Ac- GGEEEEYFELVKKKK-NH2), 25 ng de VEGFR3 e 2% de composto em 100% de DMSO.

A reação foi interrompida adicionando-se 5 μΙ de uma solução de

ácido fosfórico a 3%. 10 μΙ da mistura reacional foi em seguida manchado em um filtro Filtermat P30 (WaIIac) e lavada 3 vezes durante 5 minutos em 0,75% de ácido fosfórico e 1 vez durante 2 minutos em metanol antes de transferir em uma sacola plástica selável contendo 4 ml de líquido de cintila- ção e leitura em uma contadora de cintilação. Ensaios celulares de VEGFR3

Inibicão de atividade de VEGFR3 induzida por VEGF-C

Para este ensaio, células endoteliais aórticas de porcino (PAE) estavelmente expressando VEGFR-3 humano foram desenvolvidas em con- fluência em pratos de 10 cm. As células foram privadas de alimento durante a noite e o meio substituído com meios livres de soro frescos. Quantidades predeterminadas do Composto 2 ou veículo de controle foram adicionadas às células, e em seguida incubadas a 37°C durante 15 minutos. Isto foi se- guido pela adição de VEGF-C em uma concentração final de 100 ng/ml e as células incubadas durante 10 minutos a 37°C, depois de que elas foram la- vadas com PBS gelado e em seguida lisadas. Lisados celulares contendo inibidores de protease foram submetidos à imunoprecipitação com um anti- corpo específico para VEGFR-3 e os imunoprecipitados separados por SDS- PAGE. Proteínas foram transferidas em uma membrana de nitrocelulose, e em seguida experimentadas primeiro com um anticorpo de fosfotirosina e em seguida um anticorpo de VEGFR-3. Inibição de ativação de Erk induzida por VEGF-C em Células dérmicas En- doteliais de Micro Vaso Humano (HMVEC-d)

Células HMVEC-d (Cambrex) foram cultivadas a 37°C em C02 a 5% em meio contendo soro apropriado (Cambrex) em placas de 12 cavida- des revestidas por fibronectina (BD Biocoat, Becton Dickinson) durante 4 dias. As células foram, em seguida, privadas de alimento durante 16 horas no mesmo meio como acima, porém necessitando de soro e contendo Sl- TE+3 (Invitrogen) no lugar. As células foram, em seguida, pré-incubadas com DMSO a 0,2% (o solvente) ou Composto 2 a 5uM durante 60 minutos e, em seguida, 10 ng/ml VEGF ou 100 ng/ml VEGF-C (sistemas de R&D) foram adicionados às células. Antes de, ou 10 e 30 minutos depois do estímulo, o meio foi removido, as células foram enxaguadas com PBS frio contendo or- tovanadato a 0,1 mM de sódio e lisadas em tampão de M-PER (PIERCE) contendo SDS a 0,1%, e 1x fosfatase e inibidores de protease (HALT, Pl- ERCE). Células foram raspadas das placas e incubadas em tampão de Iise durante 30 minutos em gelo e em seguida centrifugadas a 4°C durante 10 minutos a 16000xg. Lisados foram quantificados utilizando o reagente de BCA de acordo com as instruções do fabricante (PIERCE), e 5 mg de proteí- na total foram carregados em géis de SDS-poliacrilamida (NUPAGE, Invitro- gen). Eletroforese e manchamento em membranas de PVDF foram todos realizados utilizando reagentes do sistema de NUPAGE, de acordo com as instruções do fabricante. Manchas foram bloqueadas durante 1 hora com tampão de bloqueio de Odyssey (LICOR) e em seguida anticorpos primários (veja abaixo) foram diluídos 1:1000 em uma mistura de 1:1 de tampão de bloqueio de Odyssey e PBS contendo Tween-20 a 0,1%, e aplicados durante a noite a 4°C: P-Erkl/2 (Thr202/Tir204, clone E10, camundongo monoclonal N0 9106, Erk1/2 (coelho policlonal N0 9102) (todos a partir de Cell Signaling Technologies, lnc). As manchas foram lavadas três vezes em PBS contendo Tween a 0,1% durante 5 minutos e em seguida incubadas durante 1 hora com anticorpos secundários (diluído 1:1000 em PBS contendo Tween-20 a 0,1%): anti-camundongo de cabra conjugado por IRDye 800nm (Rockland, Inc) ou anti-coelho de cabra conjugado por Alexa 680nm (Molecular Probes, Inc).

As manchas foram lavadas três vezes em PBS contendo Tween a 0,1%durante 5 minutos e uma vez em PBS e avaliadas utilizando o siste- ma de LICOR em 700nm e 800nm utilizando intensidade 5 e todas as colo- cações apropriadas para a varredura de membranas. Ensaio de Xenopus in vivo de VEGFR3

Girinos Xenopus foram utilizados como um modelo (Ny et al.s Nature Medicine 11: 998-1004 (2005)) para analisar os efeitos do Composto 2 em linfangiogênese. O composto foi administrado diariamente de uma ma- neira dependente de dose, com controles de veículo, ao meio dos girinos Xenopus começando no estágio 26-28, isto é, antes da formação de igual- mente vasos sangüíneos e linfáticos. Os efeitos do composto foram monito- rados por "análise viva", isto é, embriões vivos foram examinados 4 dias de- pois da evidência de defeitos linfa-vasculares por observadores treinados. Como meios adicionais de confirmar os resultados, em um número limitado de experiências, girinos foram fixos em estágio 35-36 e hibridações in situ para Proxl foram realizados para avaliar migração de células endoteliais linfáticas (LECs) da veia cardeal posterior (PCV) para seu ponto final dorsal, isto refletindo uma etapa essencial na linfangiogênese. Sob circunstâncias normais, LECs surgem a partir da região do PCV1 acumulado, e durante o período de estudo, eles migram dorsalmente para "áreas definidas" (Área 1 a Área 2 e Área 3), onde eles em seguida também migram rostralmente e caudalmente para formar a vasculatura linfática na cauda e tronco. Defeitos na migração dos LECs a partir do PCV foi quantificada determinando-se a migração máxima das células, e contando-se o número de células nestas regiões diferentes na cauda. Resultados

Ensaios de cinase in vitro

A seguinte tabela fornece os valores de plC50 obtidos para os compostos da presente invenção utilizando o ensaio de VEGFR3 cinase mencionado acima.

Estrutura Nome Pic50 ι—ι Cl 4,6-etanodi-ilideno-19 H- pirimido[4,5-ò][6,13,1 ]benzodioxa- azaciclopentadecina, 15-cloro- 8,9,10,1 1,12,13-hexa-hidro-20- metóxi- 6 /^fYsI N HN^^^Br Nr O ^^ N 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5- b][6,1,12]benzoxadiazaciclopenta decina, 17-bromo-8,9,10,1 1,12,13,14,19-octa-hidro-20- metóxi-13-metil- 7,74 O V N 12H-4,6-etanodi-ilideno-13,17- metanopirimido[4,5- b][6,1,10,16]benzoxatriazaciclono nadecin-12-ona, 21-cloro- 8,9,10,11,13,14,15,16,18,23-deca- hidro-25-metóxi-; 6 H CYsOCX \ HN ^^ Cl \ Jl ,A 4,6-etanodi-ilideno-12H- pirimido[4,5-b] [6,1,10,13]benzoxatriazaciclo- hexadecin-12-ona, 18-cloro- 8,9,10,11,13,14,15,20-octa-hidro- 21 -metóxi-13,14-dimetil- 6

Inibição de Fosforilação de VEGFR-3 induzida por VEGF-C Induziu em VEGFR-3 Expressando Células Endoteliais Aórticas de Porcino

O efeito de 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5-b][6,1,12]- benzoxadiazaciclo-pentadecina, 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octa-hidro- 20-metóxi-13-metil- (Composto 2) em atividade de VEGFR3 induzida por VEGF-C é evidente da redução dependente de dose na fosforilação de VEGFR-3 (Estrutura de Topo da Figura 1). Presença de VEGFR-3 à concen- tração diferente é confirmada sob remanchamento das manchas do Oeste com anticorpos de VEGFR-3 (Estrutura da base da Figura 1). Ensaios de fosforilação de Erk em células HMVEC-d Como ilustrado na Figura 2, Composto 2 a 5 μΜ, fosforilação

prevenida de Erk1/2 por VEGF-C porém não interferiu com estímulo de VEGF de Erk1/2. Estes dados são consistentes com uma inibição seletiva de VEGFR-3 através do Composto 2. Resultados de estudo de Xenopus Os efeitos do Composto 2 foram avaliados utilizando avaliação

viva, concentrações do Composto 2 de > 50 uM induziram hemorragias em 30% dos girinos. A 20 uM, 10% dos girinos desenvolveram edema, que não foi visto em girinos tratados apenas com veículo. Dose do composto 2 de- pendentemente inibe Migração de Célula Endotelial Linfática (LEC) em giri- nos (Tabela 1). Migração de LEC em estágio 35-36 foi particularmente dimi- nuída, ainda nas concentrações mais baixas do composto testado (0,31 uM), e isto foi mais do que observado com veículo apenas. Estes dados suportam a conclusão que este composto interfere com linfangiogênese normal. Tabela 1

Quantificação de migração de células endoteliais linfáticas (detectadas por hibridização in situ de Proxl) da veia cardeal posterior para dorso depois da exposição de girinos aos estágios 35-36 para compostos (n=10-15 embriões por condição) Exp. 08.08.06 Concentração do Composto 2 em μΜ 80 20 5 1,25 0,3125 DMSO % de embriões com 80 60 40 63 57 21 migração reduzida % de Área relativa 56±15 19±8 123±32 20±8 37±20 % de Migração Má- 67±21 35±1 121 ±3 47±5 73±22 xima Reduzida

Nota: As avaliações acima de migração de LEC de células positivas de Proxl foram primeiro realizadas microscopicamente de uma maneira semi- quantitativa por um observador treinado ('% de embriões com migração re- duzida'). Análise quantitativa gerada por computador foi em seguida realiza- da. A "Área Relativa 2-3" é o número de LECs que migrou-se para área rela- tiva 2-3 ao controle (veículo apenas). "Migração máxima relativa" é a migra- ção de LEC mais afastada de PCV sob tratamento, relativo ao máximo ob- servado nos controles apenas de veículo.

Enquanto a especificação anterior ensina os princípios da pre- sente invenção, com exemplos fornecidos para o propósito de ilustração, será entendido que a prática da invenção abrange todas as variações habi- tuais, adaptações e/ou modificações visto que incluem-se no escopo das seguintes reivindicações e seus equivalentes.

Claims (20)

1. Método para o tratamento ou prevenção de uma atividade bio- lógica mediada por VEGFR3 em um indivíduo mamífero compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula (I) <formula>formula see original document page 36</formula> o ácido farmaceuticamente aceitável ou sais de adição de base e as formas estereoquimicamente isoméricas destes, em que Z representa NH; Y representa -C3-9alquila-, -Ci.5alquil-NR13-Ci-5alquila-, -Ci_ 5alquil-NR14-CO-Ci.5alquila-, -C^alquil-NH-CO-Het20-, ou -Het22-CH2-CO- NH-Ci.3alquila-; X1 representa O, ou -0-Ci.2alquila-; X2 representa uma ligação direta, -Ci.2alquila-, O, -0-Ci.2alquila-, φ NR12 ou NR12-Ci.2alquila-; R1 representa hidrogênio, ciano, halo ou hidróxi, preferivelmente halo; R2 representa hidrogênio, ciano, halo, ou hidróxi; R3 representa hidrogênio; R4 representa Ci-4alquilóxi-; R12 representa hidrogênio, ou Ci_4alquila-; R13 representa hidrogênio ou Ci^alquila; R14 representa hidrogênio ou Ci_4alquila; Het20 representa pirrolidinila, piperazinila ou piperidinila; e Het22 representa pirrolidinila, piperazinila ou piperidinila, em um indivíduo mamífero em necessidade de tal tratamento.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que no compos- to da fórmula (I); Z representa NH; Y representa -C3.9alquila-, -Ci.5alquil-NR14-CO-Ci.5alquila-, ou -C1^aIquiI-NH-CO-Het20-; X1 representa O; X2 representa -C1^aIquiIa-, O, ou NR12-Ci.2alquila-; R1 representa hidrogênio ou halo; R2 representa hidrogênio ou halo; R3 representa hidrogênio; R4 representa C-|.4alcóxi; R12 representa Ci_4alquila-; R14 representa hidrogênio ou Ci.4alquila; e Het20 representa pirrolidinila, piperazinila ou piperidinila.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em 4,6-etanodi- ilideno-19/-/-pirimido[4,5-ib][6,13,1]benzodioxa-azaciclo- pentadecina, 15- cloro-8,9,10,11,12,13-hexa-hidro-20-metóxi-; 12H-4,6-etanodi- ilideno-13,17- metanopirimido[4,5-b] [6,1,10,16]benzoxatriazaciclononadecin-12-ona, 21 - cloro-8,9,10,11,13,14,15,16,18,23-deca-hidro-25-metóxi-; 4,6-etanodi-ilideno-12H-pirimido[4,5-b][6,1,10,13]benzoxatriazaciclohexadecin-12-ona, 18-cloro- 8,9,10,11,13,14,15,20-octa-hidro-21 -metóxi-13,14-dimetil-; e 4,6-etanodi- ilidenopirimido[4,5-b][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecina, 17- bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octa-h id ro-20-metóxi-13-meti I-; ou um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável destes.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3, em que o composto é 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5-b][6,1,12]benzoxadiazaciclo-pentadecina, 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octa-hidro-20-metóxi-13-metil-; ou um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável destes.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que uma quan- tidade terapeuticamente eficaz do composto é administrada oralmente ou parenteralmente.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o composto da fórmula (I) é administrado em combinação com um outro agente anticân- cer.

7. Método, de acordo com a reivindicação 6, em que o outro a- gente anticâncer é selecionado a partir do grupo que consiste em herceptina, docetaxel, antraciclina e capecitabina no caso de câncer de mama; doceta- xel e mitoxantrona no caso de câncer de próstata; oxaliplatina, 5-FU, avasti- na, irinotecano e cetuximabe no caso de câncer de cólon; e taxotere, carbo- platina e gemicitabina no caso de câncer do pulmão.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que a atividade biológica mediada por VEGFR3 é selecionada a partir do grupo que consiste na dispersão metastática de um câncer em um indivíduo mamífero; metásta- se para Iinfonodos regionais por meio de vasos linfáticos; linfangiogênese associada ao tumor em cânceres; recrutamento e proliferação de células endoteliais que expressam VEGFR3 na neovascularização de células cance- rígenas que expressam um Iigante de VEGFR3; e combinações destes.

9. Método, de acordo com a reivindicação 8, em que o referido Iigante de VEGFR3 é VEGF-C, VEGF-D, ou combinação destes.

10. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que a ativida- de biológica mediada por VEGFR3 é câncer de mama avançado em um mamífero compreendendo as etapas de administrar uma quantidade tera- peuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma dentre as reivindicações 1 a 4 ao referido mamífero.

11. Uso de um composto da fórmula (I) <formula>formula see original document page 38</formula> o ácido farmaceuticamente aceitável ou sais de adição de base e as formas estereoquimicamente isoméricas destes, em que Z representa NH; Y representa -C3-9alquila-, -Ci-5alquil-NR13-Ci.5alquila-, -C1.5alquil-NR14-CO-Ci-5alquila-, -C^alquil-NH-CO-Het20-, ou -Het22-CH2-CO- NH-Ci.3alquila-; X1 representa O, ou -O-C1 _2alquila-; X2 representa uma ligação direta, -Ci.2alquila-, O, -0-Ci.2alquila-, NR12 ou NR12-C1^aIquiIa-; R1 representa hidrogênio, ciano, halo ou hidróxi, preferivelmente halo; R2 representa hidrogênio, ciano, halo, ou hidróxi; R3 representa hidrogênio; R4 representa Ci-4alquilóxi-; R12 representa hidrogênio, ou Ci.4alquila-; R13 representa hidrogênio ou C-i_4alquila; R14 representa hidrogênio ou C1^alquila; Het20 representa pirrolidinila, piperazinila ou piperidinila; e Het22 representa pirrolidinila, piperazinila ou piperidinila; e na fabricação de um medicamento para o tratamento de ativida- des biológicas mediadas por VEGFR3.

12. Uso, de acordo com a reivindicação 10, em que no composto da fórmula (I); Z representa NH; Y representa -C3-9alquila-, -Cl-Salquil-NR14-CO-Ci-SaIquiIa-, ou - C1-SaIquiI-NH-CO-Het20-; X1 representa O; X2 representa -C1^aIquiIa-, O, ou NR12-C1.2alquila-; R1 representa hidrogênio ou halo; em particular R1 representa hidrogênio ou cloro; mais em particular R1 representa hidrogênio; R2 representa hidrogênio ou halo; em particular R2 representa hidrogênio, cloro ou bromo; mais em particular R2 representa cloro ou bro- mo; R3 representa hidrogênio; R4 representa Ci.4alcóxi; em particular R4 representa metóxi; R12 representa C1^alquila-; em particular R12 representa metila; R14 representa hidrogênio ou C1^alquila; em particular R14 repre- senta hidrogênio ou metila; mais em particular R14 representa hidrogênio; Het20 representa pirrolidinila, piperazinila ou piperidinila; em par- ticular Het20 representa piperidinila; em particular Het20 representa piperidini- la.

13. Uso, de acordo com a reivindicação 11, em que no composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em; 4,6-etanodi-ilideno-19H-pirimido[4,5-b][6,13,1 ]benzodioxa- azaciclo-pentadecina, 15-cloro-8,9,10,11,12,13-hexa-hidro-20-metóxi- ; 12H- 4,6-etanodi-ilideno-13,17-metanopirimido[4,5- b][6,1,10,16]benzoxatriazaciclononadecin-12-ona, 21 - cloro- 8,9,10,11,13,14,15,16,18,23-deca-hidro-25-metóxi-; 4,6-etanodi-ilideno-12H- pirimido[4,5-b][6,1,10,13]benzoxatriazaciclo-hexadecin-12-ona, 18- cloro-8,9,10,11,13,14,15,20-octa-hidro-21 -metóxi-13,14-dimetil-; e 4,6-etanodi- ilidenopirimido[4,5-b][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecina, 17- bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octa-hidro-20-metóxi-13-metil-; ou um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável destes.

14. Uso, de acordo com a reivindicação 11, em que o composto da fórmula (I) é 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5-/)][6,1,12]benzoxadiazaciclo- pentadecina, 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octa-hidro-20-metóxi-13-metil; ou um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável destes.

15. Uso, de acordo com qualquer uma dentre as reivindicações 11 a 14, em que o medicamento é para administração oral ou parenteral.

16. Uso, de acordo com a reivindicação 15, em que o composto da fórmula (I) é administrado em combinação com um outro agente anticân- cer.

17. Uso, de acordo com a reivindicação 16, em que o outro a- gente anticâncer é selecionado a partir do grupo que consiste em herceptina, docetaxel, antraciclina e capecitabina no caso de câncer de mama; doceta- xel e mitoxantrona no caso de câncer de próstata; oxaliplatina, 5-FU, avasti- na, irinotecano e cetuximabe no caso de câncer de cólon; e taxotere, carbo- platina e gemicitabina no caso de câncer do pulmão.

18. Uso, de acordo com qualquer um dentre as reivindicações 11 a 14, em que a atividade biológica mediada por VEGFR3 é selecionada a partir do grupo que consiste em: - dispersão metastática de um câncer em um indivíduo mamífe- ro; - metástase em Iinfonodos regionais por vasos linfáticos; - linfangiogênese associada ao tumor em cânceres, tal como por exemplo em câncer gástrico, câncer de próstata, câncer colorretal humano, câncer cervical invasivo, câncer de mama, sarcoma de Kaposi e melanoma; e - recrutamento e proliferação de células endoteliais que expres- sam VEGFR3 em neovascularização de células cancerígenas que expres- sam um Iigante de VEGFR3.

19. Uso, de acordo com a reivindicação 8, em que o referido Ii- gante de VEGF3 é VEGF-C, VEGF-D ou uma combinação destes.

20. Uso, de acordo com qualquer uma dentre as reivindicações 1 a 4, em que a atividade biológica mediada por VEGFR3 é câncer de mama avançado.