BRPI0718310A2

BRPI0718310A2 - Metabólitos de talarozol

Info

Publication number: BRPI0718310A2
Application number: BRPI0718310-0A
Authority: BR
Inventors: Debra Barrett
Original assignee: Stiefel Laboratories
Priority date: 2006-10-17
Filing date: 2007-10-17
Publication date: 2013-11-19
Also published as: AU2007311026B2; JP2010506953A; CA2667053C; US8188124B2; EP2114895A1; CN101611016A; US8399495B2; CA2667053A1; AU2007311026A1; CN101611016B; MX2009004096A; US20100292284A1; KR101419965B1; JP5343267B2; US20120283204A1; KR20090068286A; WO2008049027A1; EP2114895A4

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “METABÓLITOS DE TALAROZOL”.

Campo da Invenção

O presente pedido se relaciona a novos metabólitos de talarozol (antigamente chamado de rambazol). Além disso, o presente pedido está relacionado ao uso desses metabólitos para o tratamento de várias doenças associadas à pele, ao cabelo e às unhas.

Antecedentes da Invenção

O talarozol ((R)-N- [4- [2-etil-1 -(IH-1,2,4- triazol-1 il)butil] fenil] -2-benzotiazolamina) (anteriormente

chamado de rambazol) é um novo agente de bloqueio do metabolismo do ácido retinóico enantiomericamente puro (RAMBA). Em estudos pré-clínicos in vitro e em animais, o talarozol tópico demonstrou eficácia potencial no tratamento da psoríase, da acne e de danos causados pela exposição solar. O talarozol oral está sendo desenvolvido para o tratamento da psoríase moderada à grave, e possivelmente da acne. Consulte, por exemplo, a Patente U.S. N- 6,833,375; 6,486,187 e 6,124,330, cada uma das quais é incorporada por referência em sua totalidade. Em virtude do potencial do talarozol como um potente agente terapêutico, seu metabolismo em espécies de animais selecionadas foi investigado e novos metabólitos de talarozol foram isolados e caracterizados. Os metabólitos selecionados foram avaliados como agentes terapêuticos, especialmente no tratamento de doenças associadas à queratinização. I 2

Sumário da Invenção

Um aspecto da invenção é um novo metabólito isolado de talarozol, conforme representado pela Fórmula I.

Fórmula I

em que R = H, OH, OSO3H ou O-gli; Rj = H, OH, OSO3H, O-gli ou =0; e gli = um glucuronato, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, com a condição de que quando R = H, Rj também não possa ser H.

Outro aspecto da invenção é um composto

selecionado dentre o grupo consistindo de

Outro aspecto da invenção é o tratamento de doenças associadas à queratinização (por exemplo, várias doenças associadas à pele, ao cabelo e à unha) em um mamífero de sangue quente que dele necessita, compreendendo administrar ao mamífero uma quantidade eficaz de um metabólito de talarozol da Fórmula I.

Outro aspecto da invenção é uma composição farmacêutica compreendendo um novo metabólito de talarozol e um diluente ou veículo.

Breve Descrição dos Desenhos

A Figura 1 mostra uma comparação dos vários metabólitos de talarozol em espécies de animais selecionadas.

Descrição Detalhada Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos

metabólitos da invenção incluem os sais atóxicos convencionais que são conhecidos na técnica e que são formados pela adição de ácidos ou bases inorgânicas ou orgânicas. Exemplos de sais de adição de ácido incluem, sem a isto se limitar, acetato, adipato, 15 benzoato, benzenossulfonato, citrato, canforato, dodecilsulfato, cloridrato, bromidrato, lactato, maleato, metanosulfonato, nitrato, oxalato, pivalato, propionato, succinato, sulfato e tartrato. Sais de base incluem sais de amônio, sais de metais alcalinos, tais como sais de sódio e potássio, sais de metais alcalinos terrosos, tais 20 como sais de cálcio e magnésio, sais com bases orgânicas, tais como sais de diciclohexilamina e sais com aminoácidos, tal como arginina. Além disso, os grupos contendo nitrogênio básico podem ser quaternizados, por exemplo, com haletos de alquila.

E bem conhecido na técnica que os grupos hidroxila nos compostos químicos estão sujeitos à glicosilação in vivo. Metabólitos isolados selecionados de talarozol que contêm um ou mais grupos hidroxila são evidências desse processo que ocorre nos mamíferos estudos, inclusive em humanos Em um exemplo de concretização, o glicosídeo é um glucurónido formado pela reação entre o ácido glucurônico e um ou mais grupos hidroxila presentes no metabólito.

Além dos veículos, as composições farmacêuticas da invenção também podem incluir estabilizantes e conservantes. Para exemplos de veículos, estabilizantes e adjuvantes típicos conhecidos pelos versados na técnica, consulte iiRemington: The Science and Practice of Pharmacy, 21a ed.” (Lippincott, Williams & Wilkins (2005)).

Os novos metabólitos da presente invenção podem ser administrados sozinhos, ou, de preferência, como uma formulação farmacêutica compreendendo o metabólito junto com pelo menos um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico. Como opção, outras terapias conhecidas pelos versados na técnica podem ser combinadas com a administração dos metabólitos da invenção. Mais de um metabólito pode estar presente em uma única composição.

Os metabólitos da invenção são moduladores de processo biológico que provavelmente afetam a proliferação e a diferenciação celular (por exemplo, ceratinócitos, fibroblastos, células endoteliais, sebócitos), a função imunológica (por exemplo, células hematopoéticas) e podem ser usados no tratamento de doenças da pele, do cabelo e das unhas, como por exemplo, mas sem a isto se restringir, psoríase, acne, ceratose actínica, eczema, rosácea, ictiose, alopecia e pele danificada pela exposição solar. Além disso, os metabólitos da invenção podem ser usados no tratamento do câncer, tal como o câncer de próstata, carcinomas de células escamosas e basais, e melanoma. A 5 presente invenção inclui métodos para o tratamento de doenças de queratinização em um mamífero, inclusive um humano, compreendendo administrar, ao referido mamífero, uma quantidade do composto da invenção ou uma composição farmacêutica compreendendo ou consistindo do composto da 10 invenção, que seja eficaz em inibir ou deter o crescimento dependente do IP-IO das células epidérmicas proliferando-se anormalmente, tais como ceratinócitos, sem a adição de outros agentes terapêuticos. Em uma concretização desse método, o crescimento celular anormal é um tipo de carcinoma, incluindo, 15 mas sem a isto se restringir, carcinoma de células basais, carcinoma de células escamosas. Em outra concretização, o crescimento celular anormal é um tipo de melanoma.

Uma “quantidade eficaz” é uma quantidade suficiente para atingir resultados benéficos ou desejados. Por 20 exemplo, uma quantidade terapêutica é aquela que obtém o efeito terapêutico desejado. Em um exemplo de concretização, a dose diária pode variar de cerca de 0,005 a cerca de 5 mg/kg. Essa quantidade pode ser igual ou diferente de uma quantidade profilaticamente eficaz, que é uma quantidade necessária para 25 impedir o princípio de uma doença ou dos sintomas da doença. Uma quantidade eficaz pode ser administrada em uma ou mais administrações, aplicações ou dosagens.

Métodos para determinar o meio mais eficaz e a dosagem da administração são bem conhecidos pelos versados na 5 técnica e irão variar com a composição usada para terapia, com a finalidade da terapia, com a célula alvo sendo tratada e com o sujeito sendo tratado. Administrações únicas ou múltiplas podem ser realizadas com o nível e padrão da dose sendo escolhidos pelo médico responsável pelo tratamento.

Em um exemplo de concretização, o receptor

dos metabólitos da invenção é um mamífero de sangue quente, de preferência um humano.

Composições farmacêuticas contendo os metabólitos da invenção podem ser administradas por qualquer 15 via apropriada, inclusive a oral, reta, intranasal, tópica (inclusive transdérmica, aerossol, bucal e sublingual), parenteral (inclusive subcutânea, intramuscular, intravenosa), intraperitonial e pulmonar. Será apreciado que a via preferida irá variar com a condição e a idade do receptor, e com a doença sendo tratada.

Experimental

Camundongos, ratos, cães e humanos foram as espécies utilizadas para as avaliações de segurança do talarozol. Mais especificamente, a disposição do talarozol marcado com 14C foi examinada em camundongos, ratos, cães e humanos após a 25 administração oral para obter informações relativas à absorção, ao metabolismo e à exceção do talarozol. Exemplo I: Análise dos Metabólitos de Talarozol

Camundongos CD-I machos e fêmeas (19-29 g, n = 3/sexo/ponto de tempo para amostragem do sangue, n = 3/sexo para equilíbrio de massa), ratos Sprague Dawley (0,205-

0,237 kg, n = 3/sexo/ponto de tempo para amostragem do sangue, n = 3/sexo for equilíbrio de massa) e cães beagle (7-12 kg, n = 3) receberam uma dose oral única de talarozol marcado com 14C em hidroxil propil B-ciclodextrina 20% a 5 mg/kg. Voluntários io humanos saudáveis do sexo masculino (76,6-107,9 kg, n = 5) receberam uma única dose oral de 4 mg de rambazol marcado com 14C em etanol. As amostras de sangue foram coletadas em pontos de tempo selecionados após a dosagem e o plasma serem preparados. A urina e as fezes foram coletadas por 2, 7 e 8 dias. 15 Para o estudo humano, até 288 horas após a dose e amostras de sêmen foram obtidas 2 e 4 horas após a dose. A radioatividade em várias matrizes foi medidas por contagem de cintilações líquidas (LSC). Amostras de plasma, urina e fecais selecionadas foram submetidas ao radioperfilamento e à caracterização dos 20 metabólitos, e no estudo humano, amostras de sêmen. O radioprofiling dos metabólitos foi realizado usando HPLC com coleta de fração seguido da contagem de cintilações sólidas (Packard TopCount - vide os dados representativos de execução da HPLC abaixo). Os picos de radioatividade foram integrados e a 25 distribuição percentual dos metabólitos individuais em cada amostra foi determinado. A caracterização e identificação dos metabólitos foram realizadas por LC/MS (Finnigan MAT LCQ no modo ESI positivo ou negativo) em conjunto com um monitor radioativo apropriado (RAM). Para todas as espécies, amostras de plasma, urina e fezes foram colhidas dos animais e analisadas. O 5 plasma foi analisado em vários pontos de tempo de até 24 horas. A urina foi analisada em um intervalo de um tempo (0 a 24 horas para camundongos, 0 a 48 horas para ratos, 0 a 72 horas para cães, e para o estudo humano, 0 a 12, 12 a 24, 24 a 48, 0 a 48 horas). As fezes foram analisadas em intervalos de 2-3 tempos (0 10 a 24 e 24 a 48 horas para camundongos e ratos; 0 a 24, 24 a 48, e 48 a 72 horas para cães machos; e 24 a 48, 48 a 72 e 72 a 96 horas para cães fêmeas). No estudo humano, as fezes foram analisadas por 0-48, 48-96, 96-144, 144-192, 192-288, 0-144, 144-288 e 0- 288 horas. Os parâmetros PJ para a radioatividade do talarozol 15 marcado com 14C foram determinados a partir da concentração plasmática média (camundongo e rato) ou individual (cão e humano) versus os dados de tempo. Os valores de parâmetros PK foram determinados por métodos não compartimentais usando o WinNonlin™.

Dados da HPLC para as separações descritas no

Exemplo 1:

sistema LC: Módulo de Separações Waters

2695

Coluna analítica: coluna Cl8, 4,6 x 150 mm, 3

μηι

Taxa de fluxo: 1,0 mL/min Fase móvel A: 2% HCOOH em H2O (pH 3,2)

Fase móvel B: CH3CN

Gradiente:

(min) (mL/min) A (%) B (%) 0 0,7 100 0 3 0,7 100 0 28 0,7 75 25 48 0,7 65 35 78 0,7 30 70 83 0,7 0 100 88 0,7 0 100 90 0,7 100 0 105 0,7 100 0 Exemplo 2: Efeitos sobre a Diferenciação Epitelial na Vagina de Ratos: Inibição da Queratinização Vaginal Induzida pelo Tratamento Estrogênico em Ratos Ovariectomizados pela Administração Oral do Metabólito de Talarozol M4

Este modelo animal se baseia na observação de 10 que o ácido retinóico (RA) suprime o processo de queratinização no epitélio escamoso estratificado da vagina induzido pelo tratamento estrogênico em ratos ovariectomizados (Sietsema & DeLuca, 1982; Geiger & Weiser, 1989). O valor de ED50 para supressão completa (pontuação de queratinização = 0) foi de 1,0 15 mg/~kg/dia para o talarozol, ao passo que o valor de ED50 para RA foi de 5,1 mg/kg/dia. A administração oral de M4 durante 3 dias inibiu a queratinização vaginal induzida pelo tratamento estrogênico em ratos ovariectomiados de maneira dependente da I 10

dose. O valor de ED50 para supressão completa (grau de queratinização = 0) por M4 foi de 1,2 mg/kg/dia.

Exemplo 3: Metabólitos de Talarozol para Supressão da Produção de IP-IO por Ceratinócitos Epidérmicos Humanos Ativados por IFNy

O IP-10, membro da subfamília CXC das quimiocinas, atrai T-linfócitos e células exterminadoras naturais. O IP-IO encontra-se supraregulado, por exemplo, na psoríase. Em particular, os ceratinócitos epidérmicos de lesões psoríaticas 10 expressam níveis elevados de IP-10. A supressão da expressão de IP-10 pelos ceratinócitos ativados pode representar um novo alvo para a intervenção terapêutica das doenças de pele inflamatórias. O talarozol, seu enantiômero e metabólito M4 foram observados para infraregular de forma dependente da dose a expressão de IP- 15 10, como mostra a Figura 1.

Resultados e Discussão Farmacocinética da Radioatividade Os parâmetros PK para o talarozol marcado com 14C são ilustrados na Tabela 1.

Tabela 1: Parâmetros Farmacocinéticos Médios

dos Equivalentes de Talarozol marcado com 14C no Plasma

Espécies Sexo Cmax Tmax Tl/2 AUCot AUCo-oo (0-t) (ng (horas) (horas) (hr-ng (hr-ng equiv/g) equiv/g) equiv/g) Camundo Macho 2633 3,0 7,6 10215 10276 ngo Fêmea 1839 1,0 12,4 6632 6767 (0-48 h) Rato Macho 1130 2,0 17,4 6720 6960 (0-48 h) Fêmea 838 4,0 14,8 7670 7810 Cão Macho 2533 0,67 55,7 19555 19970 (0-168 h) Fêmea 2719 0,67 49,0 21388 21902 Humano Macho 20.7 3,00 19,4 269 301 (0-48 h) As concentrações são equivalentes de ng do talarozol marcado com 14C

Excreção da Radioatividade No camundongo, rato e cão, atingiu-se cerca de 90% de recuperação da dose radioativa após a dosagem oral (Tabela 2). A dose radioativa excretada em fezes variou de 78- 89% e 78-92% em animais machos e fêmeas, respectivamente.

Tabela 2: Percentual da Dose Recuperada na

Excreção

Espécies Sexo % na % nas % em Enxágüe % Total (intervalo) Urina Fezes de Caixa Recuperado Camundongo Macho 4,3 82,7 4,4 91,4 (0-48 h) Fêmea 3,0 91,6 0,8 95,4 Rato Macho 6,3 77,5 4,01 95,2 (0-168 h) Fêmea 10,1 77,5 3,88 95,4 Cão Macho 4,1 88,7 0,8 93,6 (0-192 h) Fêmea 2,9 89,0 0,5 92,4 Humano Macho 7,3 72,2 87,7 (0-288) Foi descoberto que o talarozol foi

extensivamente metabolizado, com a maioria dos metabólitos excretada nas fezes. Além do fármaco não carregado, 17, 26 e 19 componentes radioativos foram observados no plasma, na urina e nas fezes de camundongos, ratos e cães, respectivamente. Talarozol marcado com 14C inalterado, M3, M4, M9 e Ml3 foram os componentes radioativos proeminentes no plasma de camundongo. Os ratos tiveram o maior número de metabólitos 5 circulantes no plasma. Além dos metabólitos observados nos camundongos, Mll,M12eM16 foram observados no plasma de ratos. No cão, apenas o talarozol marcado com 14C inalterado e M4 foram caracterizados. O talarozol marcado com 14C inalterado e M4 foram os metabólitos proeminentes nas fezes de 10 camundongo, totalizando 6,11 e 10,56% da dose em fezes de camundongos machos e 7,04 e 15,16% da dose em fezes de camundongos fêmea. O talarozol marcado com 14C inalterado, M4, M14 e Ml 5 foram os principais metabólitos nas fezes de ratos, e totalizaram 5,34, 4,95, 5,05 e 6,42% da dose em fezes de 15 ratos machos e 4,60, 7,76, 4,82 e 2,38% da dose em fezes de ratos fêmeas. M8 e M4 foram os principais metabólitos nas fezes de cães, e totalizaram 11,73 e 19,88% da dose em fezes de cães machos e 8,86 e 17,01% da dose em fezes de cães fêmeas. Nenhum talarozol marcado com 14C inalterado foi detectado na 20 urina de camundongo. O talarozol marcado com 14C inalterado e M4 foram observados como radiocomponentes menores na urina de rato, totalizando 0,07-1,90% da dose. Dois metabólitos menores, M9 e M10, foram identificados na urina de cão, totalizando 0,45-1,34% da dose. No humano, o talarozol foi 25 metabolizado extensivamente. Além do talarozol inalterado, um total de sete metabólitos foi caracterizado ou identificado. M3 e Μ4 foram identificados como talarozol monoidroxilado. M 14a e M14b foram propostos como talarozol diidroxilado. Ml 8 e Ml 9 foram caracterizados como glucurónidos de talarozol diidroxilado. O íon molecular protonado foi determinado para 5 Ml 7, mas nenhuma estrutura poderia ser proposta baseando-se nos dados disponíveis. As principais vias metabólicas para talarozol marcado com (14C) em humanos foram a oxidação em múltiplos sítios, seguido da glucuronidação. Baseado em AUC0. 24h, o talarozol inalterado totalizou 6,03% da radioatividade total 10 do plasma. Três metabólitos principais circulantes, M4, Ml4a e Ml 8 totalizaram 27,8%, 12,8% e 10,7% da radioatividade total do plasma, respectivamente. Ml9 totalizou 5,60% da radioatividade total do plasma. O talarozol inalterado, M4, Ml4a, M18 e M19 totalizaram 62,9% da radioatividade total do plasma com base nos 15 valores de AUC0-24h· O metabólito M4 foi um metabólito fecal de maior peso, totalizando 16% da dose nas fezes humanas. O talarozol inalterado e todos os outros metabólitos fecais tiveram menos peso, totalizando menos de 5% da dose. O talarozol inalterado não foi encontrado nas amostras de urina humana de 0 20 a 48 horas e todos os metabólitos de urina totalizaram <1% da dose. O talarozol inalterado e M4 foram componentes radioativos menores nas amostras de sêmen e M 14a foi um metabólito de sêmen maior.

Caracterização e Identificação dos Metabólitos A Tabela 3 lista os metabólitos de talarozol

caracterizados e/ou identificados por LC/MS/MS. Observou-se que o talarozol marcado com 14C metaboliza para M4 via a oxidação do anel de benztiazol, e para M3 e Ml3 via a oxidação da cadeia lateral da alquila. A dioxidação tanto do anel de benztiazol quanto da cadeia lateral produziu M14 e M15. A 5 conjugação de M4 com um grupamento glucuronil ou sulfato resultou em M9 e Ml6, respectivamente. A conjugação de Ml4 e Ml 5 com um grupamento sulfato produziu Mll e Ml2, respectivamente. Outra via de metabólitos encontrada apenas em cães produziu a adição de 162 unidades de massa atômica 10 (provavelmente um monossacarídeo) a M4 ou M9 para obter M8 e M10, respectivamente.

Exemplos de vias metabólicas do talarozol são propostos na representação esquemática abaixo.

(A* H SOjH. gliKuromito)

* indica a posição da marca 14C

A via metabólica proposta do talarozol em humanos é apresentada abaixo: ΜΙ»»(!·,IKMt UttttW Μ» (Ρ U.KBit* U(OilMM)

Rl 15866 = talarazol

* indica a posição da marca 14C

P: plasma (%AUC0-24h); U: urina (%dose), e F:

fezes (%dose).

A descrição acima não tem a intenção de limitar a invenção reivindicada de maneira alguma. Além do mais, a combinação dos aspectos revelados pode não ser absolutamente necessária para a solução inventiva. As revelações de todas as 10 publicações, patentes ou pedidos publicados citadas aqui são incorporadas por referência em sua totalidade.

Tabela 3: Metabolismo do Talarozol - Comparação entre as Espécies Tabela 3 (Continuação): Metabolismo do Talarozol - Comparação entre as Espécies Faixa de Código do Estrutura Proposta MW Ri Rato (5 mg/kg)° Cão (5 mg/kg)d Plasma 0-24h AUC (% da Urina Fezes Plasma 0-24hc Urina Fezes Amostra) % Dose % Dose AUC (% da % Dose % Dose Amostra) Radioatividade total 14C-Talarozol (Conjunto 7045.6 ng*hr/g M 6,33 M 77,53 M 17047 ng*hr/g M 4,13 M 88,66 M Total) 8995.6 ng*hr/g F 10,07 F 77,57 F 18225 ng*hr/g F 2,89 F 89,00 F Metabólitos Não-identificados dos 14 picos 11 picos 22 picos 16 picos 13 picos 16 picos Radiocromatogramas 2505,2 ng*hr/g (35,56%) M 3,47 M 48,90 M 9781,7 ng*hr/g 1,80 M 48,95 M 2649,7 ng*hr/g (29,45%) F 5,61 F 52,18 F (57,39%) M 1,68 F 43,94 F 7739,4 ng*hr/g (42,47%) F 33 Talarozol QvOnO· 377 -74 778,38 ng*hr/g (11,05%) M O1IOM 5,34 M 4132,9 ng*hr/g ND 1,22 M * H 3523,2 ng*hr/g (39,17%) F 1,90 F 4,60 F (24,24%) M 1,59 F 4228,0 ng*hr/g (23,20%) F 28 M3 * a 393 -60 429,53 ng*hr/g (6,10%) M ND DN 402,48 ng*hr/g (4,47%) F Tabela 3 (Continuação): Metabolismo do Talarozol - Comparação entre as Espécies Tabela 3 (Continuação): Metabolismo do Talarozol - Comparação entre as Espécies κ> O

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. - Composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: Fórmula I caracterizado pelo fato de que R = H, OH, OSO3H ou O-gli; R1 = H, OH, OSO3H, O-gli ou =0; e gli = glucuronato, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, com a condição de que quando R = H, R1 também não pode ser H.

2. - Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser selecionado dentre o grupo consistindo de <formula>formula see original document page 23</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

3. - Composição farmacêutica, caracterizada por compreender um composto de acordo com a reivindicação 1 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

4. - Composição farmacêutica, caracterizada por compreender um composto de acordo com a reivindicação 2 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

5. - Método de tratamento de uma doença associada à queratinização, caracterizado por compreender administrar, a um mamífero que dele necessita, uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1.

6. - Método de tratamento de uma doença associada à queratinização, caracterizado por compreender administrar, a um mamífero que dele necessita, uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 2.

7. - Método, de acordo com a reivindicação 5 ou 6, caracterizado pelo fato de que a doença associada à queratinização é uma doença de pele, dos cabelos ou das unhas.

8. - Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a doença é psoríase, acne, ceratose actínica, eczema, rosácea, ictiose, alopecia ou pele danificada pela exposição solar.

9. - Método de tratamento do carcinoma de células basais ou do carcinoma de células escamosas, caracterizado por compreender administrar, a um mamífero que dele necessita, uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1.

10. - Método de tratamento do carcinoma de células basais ou do carcinoma de células escamosas, caracterizado por compreender administrar, a um mamífero que dele necessita, uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 2.