BRPI0718460A2 - Inibidores da renina - Google Patents

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BRPI0718460A2
BRPI0718460A2 BRPI0718460-3A BRPI0718460A BRPI0718460A2 BR PI0718460 A2 BRPI0718460 A2 BR PI0718460A2 BR PI0718460 A BRPI0718460 A BR PI0718460A BR PI0718460 A2 BRPI0718460 A2 BR PI0718460A2
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methyl
butyl
carboxylate
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John J Baldwin
Zhenrong Xu
Gerard Mcgeehan
Wei Zhao
Robert D Simpson
Suresh B Singh
Lanqi Jia
Patrick T Flaherty
David A Claremon
Colin M Tice
Salvacion Cacatian
Lawrence W Dillard
Alexey V Ishchenko
Jing Yuan
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Vitae Pharmaceuticals Inc
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Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIDORES DA RENINA".
PEDIDO RELACIONADO
Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório U.S. no.
5 60/845.291, depositado em 18 de setembro de 2006. Os ensinamentos completos do pedido acima são aqui incorporados por referência. ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Proteases aspárticas, incluindo renina, β-secretase (BACE)1 pro- tease de HIV1 protease de HTLV e plasmepsinas I e II, são implicadas em 10 vários estados doentios. Na hipertensão, níveis elevados de angiotensina I, o produto da clivagem catalisada de renina do angiotensinogênio, estão pre- sentes. Níveis elevados de β amilóide, o produto da atividade de BACE na proteína precursora de amilóide, são amplamente supostos de serem res- ponsáveis pelas placas de amilóide presentes nos cérebros de pacientes 15 com a doença de Alzheimer. Os vírus HIV e HTLV dependem de suas res- pectivas proteases aspárticas para a maturação viral. Plasmodium falcipa- rum utiliza plasmepsinas I e Il para degradar a hemoglobina.
No sistema de renina-angiotensina-aldosterona (RAAS), o peptí- deo angiotensina Il biologicamente ativa (Ang II) é gerado por um mecanis- 20 mo de duas etapas. A protease renina aspártica altamente específica cliva o angiotensinogênio em angiotensina I (Ang I), que é depois ainda processada em Ang Il pela enzima de conversão da angiotensina menos específica (A- CE). A Ang Il é conhecida de operar em pelo menos dois subtipos de recep- tor chamados AT1 e AT2. Enquanto o ATi parece transmitir a maioria das 25 funções conhecidas da Ang II, o papel do AT2 ainda é desconhecido.
A modulação do RAAS representa um avanço principal no tra- tamento de doenças cardiovasculares (Zaman, M. A. et al Nature Reviews Drug Discovery 2002, 1, 621-636). Os inibidores de ACE e os bloqueadores de ATi têm sido aceitos como tratamentos para a hipertensão (Waeber B. et 30 al, "The renin-angiotensin system: role in experimental and human hyperten- sion," in Berkenhager W. H., Reid J. L. (eds): Hypertension, Amsterdam, El- sevier Science Publishing Co, 1996, 489-519; Weber M. A., Am. J. Hyper- tens., 1992, 5, 247S). Além disso, os inibidores da ACEC são usados para a proteção renal (Rosenberg Μ. E. et al., Kidney International, 1994, 45, 403; Breyer J. A. et al, Kidney International, 1994, 45, S 156), na prevenção da insuficiência cardíaca congestiva (Vaughan D. E. et al, Cardiovasc. Res., 5 1994, 28, 159; Fouad-Tarazi F. et al, Am. J. Med., 1988, 84 (SuppI. 3A), 83) e infartação miocárdíca (Pfeffer M. A. et al, N Engl. J: Med, 1992, 327, 669).
Interesse no desenvolvimento de inibidores da renina se origina da especificidade da renina (Kleinert H. D., Cardiovasc. Drugs1 1995, 9, 645). O único substrato conhecido para renina é o angiotensinogênio, que pode 10 apenas ser processado (sob condições fisiológicas) pela renina. Ao contrá- rio, a ACE também pode clivar a bradicinina além da Ang I e pode ser desvi- ada pela quimase, a serina protease (Husain A., J. Hypertens., 1993, 11, 1155). Nos pacientes, a inibição da ACE desta maneira leva ao acúmulo de bradicinina causando tosse (5 a 20 %) e edema angioneurótico potencial- 15 mente ameaçador da vida (0,1 a 0,2 %) (Israili Z. H. et al, Annals of Internai Medicine, 1992, 117, 234). A quimase não é inibida pelos inibidores da ACE. Portanto, a formação de Ang Il ainda é possível em pacientes tratados com inibidores de ACE. O bloqueio do receptor de AT1 (por exemplo, por Iosar- tan) por outro lado expõe demais outros subtipos do receptor de AT à Ang II, 20 cuja concentração é dramaticamente aumentada pelo bloqueio de recepto- res de AT1. Em resumo, os inibidores de renina não são apenas esperados de serem superiores aos inibidores de ACE e aos bloqueadores de ATi com referência ao RAAS.
Apenas experiência clínica limitada (Azizi M. et al, J. Hypertens., 25 1994, 12, 419; Neutel J. M. et al, Am. Heart, 1991, 122, 1094) foi gerada com os inibidores de renina porque seu caráter peptidomimético transmite ativi- dade oral insuficiente (Kleinert H. D., Cardiovasc. Drugs, 1995, 9, 645). O desenvolvimento clínico de vários compostos tem sido interrompido por cau- sa deste problema juntamente com o custo elevado das mercadorias. Pare- 30 ce como se apenas um composto tenha entrado nos testes clínicos (Rahuel J. et al, Chem. Biol, 2000, 7, 493; Mealy N. E., Drugs of the Future, 2001, 26, 1139). Assim, inibidores de renina metabolicamente estáveis, oralmente bio- disponíveis e suficientemente solúveis que podem ser preparados em uma grande escala não estão disponíveis. Recentemente, os primeiros inibidores de renina não peptídeo foram descritos os quais mostram atividade in vitro elevada (Oefner C. et al, Chem. Biol, 1999, 6, 127; Patent Application WO 5 97/09311; Maerki H. P. et al, Il Farmaco, 2001, 56, 21). A presente invenção refere-se à identificação inesperada de inibidores de renina de uma natureza não peptídica e de peso molecular baixo. Inibidores de renina oralmente ati- vos que são ativos em indicações além da regulação da pressão sanguínea onde o sistema renina-quimase tissular pode ser ativado levando a funções 10 locais patofisiologiamente alteradas tais como remodelagem renal, cardíaca e vascular, aterosclerose e restenose, são descritos.
Todos os documentos aqui citados são incorporados por refe- rência.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO Uma modalidade da invenção é um inibidor da protease aspárti-
ca, que é um composto representado pela Fórmula Estrutural (I):
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que:
R1 é alquila, cicloalquila ou cicloalquilalquila;
R2 é H ou alquila;
R3 é F, Cl, Br, ciano, nitro, alquila, haloalquila, alcóxi, haloalcóxi,
ou alcanossulfonila; e
n é 0, 1, 2, ou 3.
Uma outra modalidade da invenção é um inibidor da protease aspártica, que é um composto representado pela Fórmula Estrutural (II): ο
HN
(H)
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
Uma outra modalidade da invenção é um inibidor da protease aspártica, que é um composto representado pela Fórmula Estrutural (lia):
o
(Ha),
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que o composto é pelo menos 90% oticamente puro.
Uma outra modalidade da invenção é uma composição farma- cêutica que compreende um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável e um inibidor da protease aspártica aqui descrito (por exemplo, um composto representado pelas Fórmulas Estruturais (I), (II), (IIa) ou um sal farmaceuti- 10 camente aceitável deste). A composição farmacêutica é usada em terapia, por exemplo, para a inibição de um distúrbio mediado pela protease aspárti- ca em um indivíduo.
Uma outra modalidade da invenção é um método de antagonizar uma ou mais proteases aspárticas em um indivíduo com necessidade de tal 15 tratamento. O método compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um inibidor da protease aspártica aqui descrito (por exemplo, um composto representado pelas Fórmulas Estruturais (I), (II), (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste).
Uma outra modalidade da invenção é um método de tratamento 20 de um distúrbio mediado pela protease aspártica em um indivíduo. O método compreende a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um inibidor da protease aspártica aqui descrito (por exemplo, um composto re- presentado pelas Fórmulas Estruturais (I), (II), (IIa) ou um sal farmaceutica- mente aceitável deste). Outra modalidade da invenção é o uso de um inibidor da protea- se aspártica aqui descrito (por exemplo, um composto representado pelas Fórmulas Estruturais (I), (II), (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste) para a fabricação de um fármaco para a antagonização de uma ou 5 mais proteases em um indivíduo com necessidade de tal tratamento.
Uma outra modalidade da invenção é o uso de um inibidor da protease aspártica aqui descrito (por exemplo, um composto representado pelas Fórmulas Estruturais (I), (II), (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel deste) para a fabricação de um fármaco para o tratamento de um distúr- bio mediado pela protease aspártica em um indivíduo.
Outra modalidade da invenção é o uso de um inibidor da protea- se aspártica aqui descrito (por exemplo, um composto representado pelas Fórmulas Estruturais (I), (II), (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste) para terapia, tal como o tratamento de um distúrbio mediado pela pro- 15 tease aspártica em um indivíduo. Os valores para as variáveis das Fórmulas Estruturais (I) são como descritos acima.
Uma outra modalidade da invenção é o uso de um inibidor da protease aspártica aqui descrito (por exemplo, um composto representado pelas Fórmulas Estruturais (I), (II), (IIa) ou um sal farmaceuticamente aceitá- 20 vel deste) para o tratamento de um indivíduo tendo hipertensão, insuficiência cardíaca congestiva, hipertrofia cardíaca, fibrose cardíaca, cardiomiopatia pós-infarto, nefropatia, vasculopatia e neuropatia, uma doença dos vasos coronários, hipertensão pós-cirurgia, restenose seguinte a angioplastia, pressão intra-ocular elevada, glaucoma, crescimento vascular anormal, hipe- 25 raldoesteronismo, um estado de ansiedade, ou um distúrbio cognitivo, em que os valores para as variáveis de Fórmula Estrutural (I) são como descri- tos acima.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
A figura 1 mostra um padrão de difração em pó de raio X do sal de pamoato do composto 7.
A figura 2 é um gráfico que mostras as mudanças nas pressões sanguíneas arteriais médias de ratos transgênicos tratados com 1 mg/kg, 3 mg/kg ou 10 mg/kg de composto 7.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
A invenção é direcionada a um inibidor da protease aspártica representado pela Fórmula Estrutural (I), ou um sal farmaceuticamente acei- tável deste.
Em uma outra modalidade, o inibidor da protease aspártica da presente invenção é representado pela Fórmula Estrutural (Ia):
.,-P
NYN---^NHR2
« O )
(R3)H (Ia),
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
Os valores e valores específicos para as variáveis nas Fórmulas Estruturais (I) e (Ia) são definidos como se segue:
R1 é alquila, cicloalquila (por exemplo, ciclopropila) ou cicloalqui- Ialquila (por exemplo, ciclopropil(CrC3) alquila); mais especificamente, R1 é (CrC3) alquila; ainda mais especificamente, R1 é metila;
R2 é H ou alquila; mais especificamente, R2 é H ou (Ci-C3) alqui- Ia; ainda mais especificamente, R2 é H ou metila;
R3 é F, Cl, Br, ciano, nitro, alquila, haloalquila, alcóxi, haloalcóxi ou alcanossulfonila; mais especificamente, R3 é F, Cl, Br, ciano, nitro, (C1- C3) alquila, halo (Ci-C3) alquila, (CrC3) alcóxi, halo (C1-C3) alcóxi, ou (C1-C3) alcanossulfonila; ainda mais especificamente, R3 é F, Cl ou metila; e n é 0, 1, 2 ou 3; mais especificamente, n é 0, 1 ou 2; ainda mais
especificamente, n é 1 ou 2.
Em uma modalidade específica, o inibidor da protease aspártica é representado pela Fórmula Estrutural (I) ou (Ia), em que R1 é (C1-C3) alqui- la; R2 é H ou (CrCs) alquila; R3 é F, Cl, Br, ciano, nitro, (C1-Cs) alquila, halo (C1-Cs) alquila, (C1-Cs) alcóxi, halo (C1-Cs) alcóxi, ou (C1-Cs) alcanossulfoni- la; e n é 0, 1, 2 ou 3.
Em uma outra modalidade específica, o inibidor da protease as- pártica é representado pela Fórmula Estrutural (I) ou (Ia), em que R1 é metila e R2 é H ou metila; os valores e valores específicos para outras variáveis são como definidos acima para as Fórmulas (I) e (Ia). Em outra modalidade específica, R1 é metila; R2 é H ou metila; e R3 é F, Cl ou metila; os valores e 5 valores específicos para outras variáveis são como definidos acima para as Fórmulas (I) e (Ia).
Em uma outra modalidade específica, o inibidor da protease as- pártica da presente invenção é um dos seguintes compostos ou seus enanti- ômeros ou diastereômeros. Também incluídos são os sais e solvatos farma- ceuticamente aceitáveis (por exemplo, hidratos) de todos os seguintes e
seus enantiômeros e diastereômeros:
N0 comp. Estrutura Nome 1 O NH2 2-((R)-((R)-1-((S)-2-amino-3-((R)-te- 'v VJ-.. /N._.n___-L traidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil) ° K "Ph Y piperidin-3-il)(3-clorofenil)metóxi) etil- O-a Ò carbamato de metila 2 Ck o 2-((R)-((R)-1-((S)-2-amino-3-((R)-te- traidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil) piperidin-3-il)(3-fluorofenil)metóxi) etilcarbamato de metila 3 o f" u NH2 2-((R)-((R)-1-((S)-2-amino-3-((R)-te- U H I H I traidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil) Xl O piperidin-3-il)(3-cloro-5-fluorofenil) F'^n/xCI metóxi)etilcarbamato de metila 4 O *, NH2 2-((R)-((R)-1-((S)-2-amino-3-((R)-te- Il HlHj traidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil) " ' V'c '0, piperidin-3-il)(3-difluorofenil)metóxi) faX O etilcarbamato de metila O LJ NH2 2-((R)-((R)-1-((S)-2-amino-3-((R)-te- UL O traidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil) piperidin-3-il)(5-cloro-2-metilfenil) me- tóxi) etilcarbamato de metila 6 ?> H H Γ* 2-((R)-((R)-1-((S)-2-amino-3-((R)-te- Xxt O traidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil) piperidin-3-il)(5-flúor-2-metilfenil) me- tóxi)etilcarbamato de metila 7 ff H O H Hf 2-((R)-(3-clorofenil)((R)-1-((S)-2-(me- ^ i --['I 'p tilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3- il)propilcarbamoil)piperidin-3-il)me- tóxi)-etilcarbamato de metila 8 Xiq ■ a 2-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)((R)-1-((S)- 2-( meti Ia m ino)-3-(( R)-tetra id ro-2 H- piran-3-il)propilcarbamoil)-piperidin-3- il)metóxi)-etilcarbamato de metila 9 F Cl 2-((R)-(5-fluorofenil)((R)-1-((S)-2-(me- tilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3- il)propilcarbamoíl)-piperidin-3-il)me- tóxi)-etilcarbamato de metila fl f ] H hiJ1 2-((R)-(3,5-difluorofenil)((R)-1-((S)-2- o B Ύ T ^i.. (metilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran- 3-il)propilcarbamoil)-piperidin-3-il) metóxi)-etilcarbamato de metila 11 H o 2-((S)-(5-cloro-2-metilfenil)((R)-1-((S)- 2-(metilamino)-3-((R)-tetraidro-2H- piran-3-il)propilcarbamoil)-piperidin-3- il)metóxi)-etilcarbamato de metila 12 O r I HN 2-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)((R)-1-((S)- XX Q 2-(etilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran- v Cl 3-il)propilcarbamoil)-piperidin-3-il) metóxi)-etilcarbamato de metila 13 ,NH 2-((R)-(3-clorofenil)((R)-1-((S)-2-(me- y~\ ? tilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3- / J-1 IWiH il)propilcarbamoil)-piperidin-3-il) metó- XBfUSBv I xi)-etilcarbamato de metila l^vS r0^ 0 Uma outra modalidade da invenção é direcionada a um interme- diário para a sintetização dos inibidores da protease aspártica aqui descritos, representados pelas Fórmulas Estruturais (III), (IIIa)1 (lllb), (IIIc) ou (IIId) e sais destes (preferivelmente os saus farmaceuticamente aceitáveis):
R2 (IIl),
R2 (IIIb)1
R2 (IIlc), e Nas Fórmulas Estruturais (III), (IIIa)1 (IIIb)1 (IIIc) e (llld), E é H ou um grupo de proteção de amina. Os grupos de proteção de amina incluem grupos de proteção de carbamato, amida e sulfonamida conhecidos na téc- nica (T. W. Greene and P. G. M. Wuts "Protective Groups in Organic Syn- 5 thesis" John Wiley & Sons, Inc., New York 1999) e cujo ensinamento com- pleto é aqui incorporado por referência. Os grupos de proteção de amina incluem terc-butoxicarbonila (Boc), benziloxicarbonila (Cbz) e 1-[2- (trimetilsilil)etoxicarbonil] (Teoc). Mais especificamente, o grupo de proteção de amina é terc-butoxicarbonila (Boc). Os valores e valores específicos para 10 R2 são como descritos para a Fórmula Estrutural (I).
Em uma modalidade específica, o intermediário é cada um dos seguintes compostos ou seus enantiômeros ou diastereômeros. Os sais far- maceuticamente aceitáveis de todos os que seguem também são incluídos:
n°. Comp. Nome do cpd llla-1 (S)-1-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-ilcarbamato de -tecr.hi itila- _ llla-2 (S)-1-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(metil)carba- mato de terc-butila 111-1 terc-butil-1-amino-3-(tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-ilcarbamato III-2 terc-butil-1-amino-3-(tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(metil)carba- mato Quando qualquer variável (por exemplo, R3) ocorre mais do que uma vez em um composto, sua definição em cada ocorrência é independen- te de qualquer outra ocorrência. Por exemplo, R3, para cada ocorrência, é independentemente selecionado do grupo consistindo em F, Cl, Br, ciano, nitro, alquila, haloalquila, alcóxi, haloalcóxi e alcanossulfonila.
Quando o "inibidor da protease aspártica" da presente invenção for designado ou descrito pela estrutura, também inclui os seus sais farma- ceuticamente aceitáveis.
"Alquila", isoladamente ou parte de um outro componente (tal como cicloalquilalquila, alcóxi, haloalcóxi, haloalquila ou alcóxi), significa um radical de hidrocarboneto mono ou divalente de cadeia ramificada ou reta alifático saturado. As alquilas comumente possuem de um a seis átomos de carbono, tipicamente de uma a três átomos de carbono. Assim, "(C1-C3) al- quila" significa um radical tendo de 1 a 3 átomos de carbono em um disposi- ção linear ou ramificada. "(CrC3)alquila" inclui metila, etila, propila e isopro- pila.
"Cicloalquila", isoladamente ou como parte de uma outra porção 5 (tal como cicloalquilalquila) significa um radical de hidrocarboneto monova- Iente cíclico alifático saturado. Tipicamente, as cicloalquilas possuem de três a dez átomos de carbono e são mono, bi ou tricíclicas. As cicloalquilas tricí- clicas podem ser fundidas ou ligadas com ponte. Tipicamente, as cicloalqui- las são C3-C8 monocíclicas e são mais comumente ciclopropila.
"Cicloalquilalquila" significa um radical de alquila substituído com
um grupo de cicloalquila.
"Haloalquila" inclui grupos de mono, poli e peraloalquila onde os halogêneos são independentemente selecionados de flúor, cloro e bromo.
"Alcóxi" significa um radical de alquila ligado através de um áto- mo de ligação de oxigênio. "(CrC3)-alcóxi" inclui o metóxi, etóxi e propóxi.
"Haloalcóxi" é um grupo de haloalquila que é ligado a um outro componente através de um articulador de oxigênio.
"Alcanossulfonila" é um radical de alquila ligado através de um grupo de ligação
"(Ci-C3) alcanossulfonila" inclui metanossulfonila, etanossulfonila e propa- nossulfonila.
Alguns dos inibidores da protease aspártica descritos podem existir em várias formas tautoméricas. A invenção abrange todas tais formas, incluindo aquelas formas não descritas estruturalmente.
Alguns dos inibidores da protease aspártica descritos podem
existir em várias formas estereoisoméricas. Os estereoisômeros são com- postos que diferem apenas de sua disposição espacial. Os enantiômeros são pares de estereoisômeros cujas imagens especulares não são sobre- postas, mais comumente porque eles contêm um átomo de carbono assime- tricamente substituído que atua como um centro de quiral. O "enantiômero" significa um de um par de moléculas que são imagens especulares um do outro e não são sobrepostas. Os diastereômeros são estereoisômeros que não são relacionados com as imagens especulares, mais comumente por- que eles contêm dois ou mais átomos de carbono assimetricamente substítu- 5 idos. "R" e "S" representam a configuração de substituintes ao redor de um ou mais átomos de carbono de quiral. Quando um centro de quiral não for definido como R ou S e a configuração no centro de quiral não for definido por outros meios, a configuração pode estar presente ou uma mistura de ambas as configurações está presente.
"Racemato" ou "mistura racêmica" significa um composto de
quantidades equimolares de dois enantiômeros, em que tais misturas não apresentam nenhuma atividade ótica; isto é, elas não giram o plano de Iuz polarizada.
"R" e "S" indicam configurações em relação à molécula de nú-
cleo.
" sajw " representa.....m,m* ", " ~m " ou " ", em que o
enantiômero descrito (por exemplo, ” -""W " ou " ") é pelo menos 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 99 % ou 99,9 % oticamente puro.
Os inibidores da protease aspártica descritos podem ser prepa- rados como isômeros individuais pela síntese específica do isômero ou deci- didos a partir de uma mistura isomérica. As técnicas de resolução conven- cionais incluem a formação do sal de uma base livre de cada isômero de um par isomérico usando um ácido oticamente ativo (seguindo pela cristalização fracionária e regeneração da base livre), formação do sal da forma ácida de cada isômero de um par de isômero usando uma amina oticamente ativa (seguido pela cristalização fracionária e regeneração do ácido livre), forma- ção de um éster ou amida de cada um dos isômeros de um par isomérico usando um ácido, amina ou álcool oticamente puro (seguido pela separação e remoção cromatográfica do suplemento de quiral), ou resolução de uma mistura isomérica de um material de partida ou um produto final usando vá- rios métodos cromatográficos bem-conhecidos.
Quando a estereoquímica de um inibidor da protease aspártica descrito for designada ou descrita pela estrutura, o estereoisômero designa- do ou descrito é pelo menos 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 99 % ou 99,9 % em peso puro em relação aos outros estereoisômeros. Quando um enantiômero isolado for designado ou descrito pela estrutura, o enantiômero descrito ou 5 designado é pelo menos 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 99 % ou 99,9 % oticamen- te puro. O percentual de pureza ótica em peso é a relação do peso do enan- tiômero sobre o peso do enantiômero acrescido do peso de seu isômero óti- co.
Quando um inibidor da protease aspártica descrito for designado 10 ou descrito pela estrutura sem indicação da estereoquímica, e o inibidor tiver pelo menos um centro de quiral, deve ficar entendido que o nome ou estrutu- ra abrange um enantiômero de inibidor livre do isômero ótico corresponden- te, uma mistura racêmica do inibidor e misturas enriquecidas em um enanti- ômero em relação ao seu isômero ótico correspondente.
Quando um inibidor da protease aspártica descrito for designado
ou descrito pela estrutura sem a indicação da estereoquímica e tiver pelo menos dois centros de quiral, deve ficar entendido que o nome ou a estrutu- ra abrange um diastereômero livre de outros diastereômeros, um par de di- astereômeros livre de outros pares diastereoméricos, misturas de diasterô- 20 meros, misturas de pares diastereoméricos, misturas de diastereômeros em que um diastereômero é enriquecido em relação ao(s) outro(s) diastereôme- ro(s) e misturas de pares diastereoméricos em que um par diastereomérico é enriquecido em relação ao(s) outro(s) par(es) diastereomérico(s).
Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos dos inibi- 25 dores da protease aspártica são incluídos na presente invenção. Por exem- plo, um sal de ácido de um inibidor da protease aspártica contendo uma a- mina ou outro grupo básico pode ser obtido pela reação do composto com um ácido orgânico ou inorgânico adequado, resultando nas formas de sal aniônico farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos de sais aniônicos incluem 30 os sais de acetato, benzenossulfonato, benzoato, bicarbonato, bitartrato, brometo, edetato de cálcio, cansilato, carbonato, cloreto, citrato, dicloridrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gliceptato, gluconato, glutama- to, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, bromidrato, cloridrato, hidroxinaftoato, iodeto, isetionato, lactato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, mesila- to, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, pamoato, pantotenato, fosfa- to/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, 5 sulfato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato e trietiodeto.
Os sais dos compostos de inibidores da protease aspártica con- tendo um ácido carboxílico ou outro grupo funcional acídico podem ser pre- parados mediante a reação com uma base adequada. Tal sal farmaceutica- mente aceitável pode ser produzido com uma base que proporciona um cá- 10 tion farmaceuticamente aceitável, que inclui sais de metal alcalino (especi- almente sódio e potássio), sais de metal alcalino terroso (especialmente cál- cio e magnésio), sais de alumínio e sais de amônio, assim como sais produ- zidos a partir de bases orgânicas fisiologicamente aceitáveis tais como trime- tilamina, trietilamina, morfolino, piridina, piperidina, picolino, dicicloexilamina, 15 Ν,Ν'-dibenziletilenodiamina, 2-hidroxietilamina, bis-(2-hidroxietil)amina, tri-(2- hidroxietil)amina, procaína, dibenzilpiperidina, deidroabietilamina, N,N’-bis- deidroabietilamina, glucamina, N-metilglucamina, colidina, quinino, quinolina, e aminoácidos básicos tais como Iisina e arginina.
De acordo com a presente invenção, os sais não farmaceutica- 20 mente aceitáveis dos compostos dos inibidores da protease aspártica e seus intermediários sintéticos também são incluídos. Estes sais (por exemplo, sal de TFA) podem ser usados, por exemplo, para a purificação e isolamento dos compostos dos inibidores da protease aspártica e seus intermediários sintéticos.
Quando inibidor da protease aspártica descrito for designado ou
descrito pela estrutura, deve ficar entendido que os solvatos (por exemplo, hidratos) do inibidor da protease aspártica também são incluídos. "Solvatos" se referem às formas cristalinas em que as moléculas de solvente são incor- poradas na treliça cristalina durante a cristalização. Os solvatos podem inclu- 30 ir água ou solventes não aquosos tais como etanol, isopropanol, DMSO, áci- do acético, etanolamina e EtOAc. Os solvatos, em que a água é a molécula solvente incorporada na treliça cristalina, são tipicamente referidos como "hidratos". Os hidratos incluem hidratos estequiométricos assim como com- posições contendo quantidades variáveis de água.
Quando um inibidor da protease aspártica descrito for designado ou descrito pela estrutura, deve ficar entendido que o composto ou seu sal 5 farmaceuticamente aceitável, incluindo seus solvatos, pode existir nas for- mas cristalinas, formas não cristalinas ou uma mistura destas. O inibidor da protease aspártica ou os solvatos também podem apresentar polimorfismo (isto é, a capacidade de ocorrer em diferentes formas cristalinas). Estas dife- rentes formas cristalinas são tipicamente conhecidas como "polimorfos". De- 10 ve ficar entendido que quando designados ou descritos pela estrutura, os inibidores da protease aspártica descritos e seus solvatos (por exemplo, hi- dratos) também incluem todos os seus polimorfos. Os polimorfos possuem a mesma composição química, mas diferem no acondicionamento, disposição geométrica, e outras propriedades descritivas do estado sólido cristalino. Os 15 polimorfos, portanto, podem ter diferentes propriedades físicas tais como forma, densidade, solidez, capacidade de deformação, estabilidade, e pro- priedades de dissolução. Os polimorfos tipicamente apresentam diferentes pontos de fusão, espectros de IR, e padrões de difração em pó de raio X, que podem ser usados para identificação. Uma pessoa versada na técnica 20 observará que diferentes polimorfos podem ser produzidos, por exemplo, mediante a mudança ou ajuste das condições usadas na solidificação do composto. Por exemplo, as mudanças na temperatura, pressão ou solvente podem resultar em diferentes polimorfos. Além disso, um polimorfo pode es- pontaneamente converter em um outro polimorfo sob certas condições.
Pode ser necessário e/ou desejável durante a síntese proteger
os grupos sensíveis ou reativos em qualquer uma das moléculas envolvidas. Os grupos de proteção convencionais representativos são descritos em T.W. Greene and P. G. M. Wuts "Protective Groups in Organic Synthesis" John Wiley & Sons, Inc., New York 1999, e cujo ensinamento completo é aqui in- 30 corporado por referência. Os grupos de proteção podem ser adicionados e removidos usando os métodos bem-conhecidos na técnica.
Os compostos da invenção são úteis para a melhora ou trata- mento de distúrbios ou doenças em que a diminuição dos níveis de produtos da protease aspártica é eficaz no tratamento do estado doentio ou no trata- mento de infecções em que o agente infeccioso depende da atividade de uma protease aspática. Em níveis elevados de hipertensão os níveis de an- giotensina I, o produto da clivagem catalisada de renina de angiotensinogê- nio, estão presentes. Assim, o compostos da invenção podem ser usados no tratamento de hipertensão, insuficiência cardíaca tal como insuficiência car- díaca congestiva (aguda e crônica); disfunção ventricular esquerda; hipertro- fia cardíaca; fibrose cardíaca; cardiomiopatia (por exemplo, miopatia cardía- ca diabética e miopatia cardíaca pós-infarto); arritmias supraventriculares e ventriculares; fibrilação arial; palpitação atrial; remodelamento vascular pre- judicial; infarto do miocárdio e suas seqüelas; aterosclerose, angina ( quer estável quer instável), condições de insuficiência renal, tais como nefropatia diabética; glomerulonefríte; fibrose renais; esclerodermia; esclerose glomeru- lar; complicações microvasculares, por exemplo, retinopatia diabética; hiper- tensão vascular renal; vasculopatia; neuropatia; complicações resultantes da diabetes, incluindo nefropatia, vasculopatia, retinopatia e neuropatia, doen- ças dos vasos coronários, proteinúria, albumenúria, hipertensão pós- cirúrgica, síndrome metabólica, obesidade, reestenose após angioplastia, doenças oculares e anormalidades associadas incluindo pressão intra-ocular aumentada, glaucoma, retinopatia, crescimento e remodelação vasculares anormais, transtornos relacionados com a angiogênese, tais como a degene- ração macular relacionada com idade neovascular; hiperaldosteronismo, es- tados de ansiedade e distúrbios cognitivos (Fisher ND; Hollenberg NK Expert Opin. Investig. Drugs. 2001, 10, 417-26).
Níveis elevados de β amilóide, o produto da atividade da protea- se β-secretase (BACE) aspártica bem caracterizada na proteína precursora amilóide, são amplamente considerados como sendo o responsável pelo desenvolvimento e progresso de placas amilóides no cérebro dos pacientes 30 com doença de Alzheimer. As proteases aspárticas secretadas de Candida albicans são associadas com a sua virulência patogênica (Naglik, JR; Chal- lacombe, S.J.; Hube, B. Microbiology and Molecular Biology Reviews 2003, 67, 400-428). Os vírus HIV e HTLV dependem de suas respectivas protea- ses aspárticas para a maturação viral. Plasmodium falciparum utiliza plas- mepsinas I e Il para degradar a hemoglobina.
Uma composição farmacêutica da invenção pode, alternativa- 5 mente ou além de um inibidor da protease aspártica descrito, compreende um pro-fármaco ou metabólito farmaceuticamente ativo de um tal composto ou sal e um ou mais veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis pa- ra estes.
A invenção inclui um método terapêutico para o tratamento ou melhora de um distúrbio mediado pela protease aspártica em um indivíduo com sua necessidade compreendendo a administração em um indivíduo com sua necessidade de uma quantidade eficaz de um inibidor da protease aspártica aqui descrito.
Os métodos de administração incluem a administração de uma quantidade eficaz de um composto ou composição da invenção em diferen- tes momentos durante o curso da terapia ou concorrentemente em uma for- ma de combinação. Os métodos da invenção incluem todos os regimes de tratamento terapêutico conhecidos.
"Quantidade eficaz" significa que a quantidade de substâncias 20 medicamentosas (isto é, inibidores da protease aspártica da presente inven- ção) que extrai a resposta biológica desejada em um indivíduo. Tal resposta inclui alívio dos sintomas da doença ou distúrbio sendo tratados. A quantida- de eficaz de um inibidor da protease aspártica descrito em um tal método terapêutico é de cerca de 0,01 mg/kg/dia a cerca de 10 mg/kg/dia, preferi- 25 velmente de cerca de 0,5 mg/kg/dia a 5 mg/kg/dia.
A invenção inclui o uso de um inibidor da protease aspártica descrito para a preparação de uma composição para o tratamento ou melho- ra de um distúrbio ou doença ou infecção crônica mediada pela protease aspártica em um indivíduo com sua necessidade, em que a composição 30 compreende uma mistura de um ou mais dos inibidores da protease aspárti- ca descritos e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional.
"Veículo farmaceuticamente aceitável" significa compostos e composições que são de pureza e qualidade suficientes para uso na formu- lação de uma composição da invenção que, quando apropriadamente admi- nistrados a um animal ou ser humano, não produzem uma reação adversa, e que são usados como um veículo para uma substância medicamentosa (isto 5 é, inibidores da protease aspártica da presente invenção).
"Diluente farmaceuticamente aceitável" significa compostos e composições que são de pureza e qualidade suficientes para uso na formu- lação de uma composição da invenção que, quando apropriadamente admi- nistrados a um animal ou ser humano, não produzem uma reação adversa, e 10 que são usados como um agente diluente para uma substância medicamen- tosa (isto é, inibidores da protease aspártica da presente invenção).
"Distúrbio ou doença mediada pela protease aspártica" inclui os distúrbios ou as doenças associadas com a expressão ou superexpressão elevada de proteases aspárticas e as condições que acompanham tais do- enças.
Uma modalidade da invenção inclui a administração de um inibi- dor da protease aspártica aqui descrito em uma terapia de combinação (ver USP 5.821.232, USP 6.716.875, USP 5.663.188, Fossa, A. A.; DePasquaIe, M. J.; Ringer, L. J.; Winslow, R. L. "Synergistic effect on reduction in blood 20 pressure with coadministration of a renin inhibitor or a angiotensin-converting enzyme inhibitor with a angiotensin Il receptor antagonist" Drug Development Research 1994, 33(4), 422-8, o artigo e as patentes anteriormente mencio- nadas são por meio desta incorporadas por referência) com um ou mais a- gentes adicionais para o tratamento de hipertensão incluindo a-bloquea- 25 dores, β-bloqueadores, bloqueadores do canal de cálcio, diuréticos, natriuré- ticos, saluréticos, anti-hipertensivos de atuação central, inibidores da enzima de conversão da angiotensina (ACE), inibidores da endopeptidase ACE e neutra dual (NEP), bloqueadores do receptor da angiotensina (ARBs), inibi- dor da aldosterona sintase, antagonistas do receptor da aldosterona, ou an- 30 tagonistas do receptor de endotelina. Os α-bloqueadores incluem doxazosin, prazosin, tamsulosin e terazosin.
Os β-bloqueadores para a terapia de combinação são selecio- nados de atenolol, bisoprol, metoprolol, acetutolol, esmolol, celiprolol, talipro- Iol1 acebutolol, oxprenolol, pindolol, propanolol, bupranolol, penbutolol, me- pindolol, carteolol, nadolol, carvedilol, e seus sais farmaceuticamente aceitá- veis.
Os bloqueadores do canal de cálcio incluem diidropiridinas
(DHPs) e não DHPs. As DHPs preferidas são selecionadas do grupo consis- tindo em anlodipina, felodipina, riosidina, isradipina, lacidipina, nicardipina, nifedipina, nigulpidina, niludipina, nimodifina, nisoldipina, nitrendipina e nival- dipina e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. As não DHPs são selecio- 10 nadas de flunarizina, prenilamina, diltiazem, fendilina, galopamil, mibefradil, anipamil, tiapamil e verampimil e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Um diurético é, por exemplo, um derivado de tiazida selecionado de amilorida, clorotiazida, hidroclorotiazida, metilclorotiazida, e clorotalidon.
Os anti-hipertensivos de atuação central incluem clonidina, gua- nabenz, guanfacine e metildopa.
Os inibidores da ACE incluem alacepril, benazepril, benazaprilat, captopril, ceronapril, cilazapril, delapril, enalapril, enalaprilat, fosinopril, Iisi- nopril, moexipiril, moveltopril, perindopril, quinapril, quinaprilat, ramipril, rami- prilat, espirapril, temocapril, trandolapril e zofenopril. Os inibidores da ACE preferidos são benazepril, enalpril, Iisinopril e ramipril.
Os inibidores de ACE/NEP dual são, por exemplo, omapatrilat, fasidotril, e fasidotrilat.
Os ARBs preferidos incluem candesartan, eprosartan, irbesar- tan, losartan, olmesartan, tasosartan, telmisartan e valsartan.
Os inibidores da aldosterona sintase são anastrozol, fadrozol e
exemestano.
Os antagonistas do receptor de aldosterona são espironolactona e eplerenona.
Um antagonista da endotelina preferido é, por exemplo, bosen- tan, enrasentan, atrasentan, darrusentan, sitaxentan e tezosentan e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Uma modalidade da invenção inclui a administração de um inibi- dor da protease aspártica aqui descrito ou sua composição em uma terapia de combinação com um ou mais agentes adicionais para o tratamento de inibidores da transcriptase reversa da AIDS, inibidores da transcriptase re- versa não nucleosídeo, outros inibidores da protease do HIV, inibidores da integrase do HIV, inibidores de ingresso (incluindo inibidores de ligação, co- receptor e fusão), fármacos anti-sentido, e estimuladores imunológicos.
Os inibidores da transcriptase reversa preferidos são zidovudina, didanosina, zalcitabina, estavudina, lamivudina, abacavir, tenofovir e entrici- tabina.
Os inibidores da transcriptase reversa não nucleosídeos preferi- dos são nevirapina, delaviridina e efavirenz.
Os inibidores da protease do HIV preferidos são saquinavir, rito- navir, indinavir, nelfinavir, amprenavir, lopinavir, atazanavir e fosamprenavir.
Os inibidores da integrase do HIV são L-870,810 e S-1360.
Os inibidores de ingresso incluem compostos que se ligam ao receptor de CD4, o receptor de CCR5 ou o receptor de CXCR4. Exemplos específicos de inibidores de ingresso incluem enfuvirtide (um peptidomiméti- co do domínio de HR2 em gp41) e sifurvitide.
Um inibidor de ligação e fusão preferido é enfuvirtide.
Uma modalidade da invenção inclui a administração de um inibi- dor da protease aspártica aqui descrito ou composição deste em uma terapia de combinação com um ou mais agentes adicionais para o tratamento de doença de Alzheimer incluindo tacrina, donepezil, rivastigmina, galantamina e memantina.
Uma modalidade da invenção inclui a administração de um inibi- dor da protease aspártica aqui descrito ou composição deste em uma terapia de combinação com um ou mais agentes adicionais para o tratamento de malária incluindo artemisinina, cloroquina, halofantrina, hidroxicloroquina, mefloquina, primaquina, pirimetamina, quinino, sulfadoxina.
A terapia de combinação inclui a co-administração de um inibidor da protease aspártica aqui descrito e dito outro agente, a administração do inibidor da protease aspártica descrito e o outro agente, a administração de uma composição contendo o inibidor da protease aspártica e o outro agente, ou a administração simultânea de composições separadas contendo o inibi- dor da protease aspártica e o outro agente.
A invenção ainda inclui o processo para a preparação da com- posição que compreende a mistura de um ou mais dos inibidores da protea- se aspártica descritos e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional; e inclui aquelas composições resultantes de um tal processo, cujo processo inclui técnicas farmacêuticas convencionais. Por exemplo, um inibidor da protease aspártica aqui descrito pode ser nanotriturado antes da formulação. Um inibidor da protease aspártica aqui descrito também pode ser preparado por trituração, micronização ou outros métodos de redução do tamanho de partícula conhecidos na técnica. Tais métodos incluem, mas não são limita- dos a eles, aqueles descritos nas Patentes U.S. nos 4.826.689, 5.145.684, 5.298.262, 5.302.401, 5.336.507, 5.340.564, 5.346.702, 5.352.459, 5.354.560, 5.384.124, 5.429.824, 5.503.723, 5.510.118, 5.518.187, 5.518.738, 5.534.270, 5.536.508, 5.552.160, 5.560.931, 5.560.932, 5.565.188, 5.569.448, 5.571.536, 5.573.783, 5.580.579, 5.585.108, 5.587.143, 5.591.456, 5.622.938, 5.662.883, 5.665.331, 5.718.919, 5.747.001, pedidos PCT WO 93/25190, WO 96/24336 e WO 98/35666, cada uma das quais é aqui incorporada por referência. As composições farmacêu- ticas da invenção podem ser preparadas usando técnica e métodos conhe- cidos por aqueles versados na técnica. Alguns dos métodos comumente uti- lizados na técnica são descritos em Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), cujos ensinamentos completos são aqui incor- porados por referência.
As composições da invenção incluem oculares, orais, nasais, transdérmicas, tópicas com ou sem oclusão, intravenosas (tanto bolo quanto infusão) e injeção (intraperitônea, subcutânea, intramuscul, intratumoral ou parenteralmente). A composição pode estar em uma unidade de dosagem 30 tal como um comprimido, pílula, cápsula, pó, grânulo, lipossoma, resina de troca de íon, solução ocular estéril, ou dispositivo de liberação ocular (tal como uma lente de contato e outros mais, facilitando a liberação imediata, liberação cronometrada ou liberação controlada), solução ou suspensão pa- renteral, aerossol de dose medida ou pulverização líquida, gotas medicinais, ampola, dispositivo auto-injetor, ou supositório; para a administração ocular, oral, intranasal, sublingual, parenteral ou retalmente, ou mediante inalação 5 ou insuflação.
As composições da invenção adequadas para a administração oral incluem formas sólidas tais como pílulas, comprimidos, capselas, cápsu- las (cada um incluindo formulações de liberação imediata, liberação crono- metrada e liberação controlada), grânulos e pós; e, formas líquidas tais como 10 soluções, xaropes, elixires, emulsões e suspensões. As formas úteis para a administração ocular incluem soluções estéreis ou dispositivos de liberação ocular. A formas úteis para a administração parenteral incluem soluções, emulsões e suspensões estéreis.
A forma de dosagem contendo a composição da invenção con- 15 tém uma quantidade eficaz da substância farmacológica (isto é, inibidores da protease aspártica da presente invenção) necessária para fornecer um efeito terapêutico e/ou profilático. A composição pode conter de cerca de 5.000mg a cerca de 0,5 mg (preferivelmente, de 1.000 mg a cerca de 0,5 mg) de um inibidor da protease aspártica descrito ou sua forma de sal e pode ser consti- 20 tuída em qualquer adequada para o modo selecionado de administração. As composições da invenção podem ser administradas em uma forma adequa- da para a administração de uma vez por semana ou uma vez por mês. Por exemplo, um sal insolúvel da substância medicamentosa (isto é, inibidores da protease aspártica da presente invenção) pode ser adaptado para forne- 25 cer uma preparação de depósito para injeção intramuscular (por exemplo, um sal de decanoato) ou para fornecer uma solução para a administração oftálmica. A administração diária ou dosagem pós-periódica também pode ser empregada, em que a composição pode ser administrada em cerca de 1 a cerca de 5 vezes per dia.
Para a administração oral, a composição está preferivelmente na
forma de um comprimido ou cápsula contendo, por exemplo, de 1000 a 0,5 miligramas da substância medicamentosa (isto é, inibidores da protease as- pártica da presente invenção), mais especificamente de 500 mg a 5 mg. As dosagem variarão dependendo dos fatores associados com o paciente parti- cular sendo tratado (por exemplo, idade, peso, dieta, e tempo de administra- ção), a gravidade da condição sendo tratada, o composto sendo empregado, 5 o modo de administração, e a intensidade da preparação.
A composição oral é preferivelmente formulada como uma com- posição homogênea, em que a substância medicamentosa (isto é, inibidores da protease aspártica da presente invenção) é dispersa uniformemente em toda mistura, que pode ser facilmente subdividida nas unidades de dosagem 10 contendo quantidades iguais de um inibidor da protease aspártica descrito. Preferivelmente, as composições são preparadas pela mistura de um inibidor da protease aspártica descrito com um ou mais veículos farmacêuticos op- cionalmente presentes (tais como um amido, açúcar, diluente, agente de granulação, lubrificante, deslizante, agente de ligação e agente de desinte- 15 gração), um ou mais excipientes farmacêuticos inertes opcionalmente pre- sentes (tais como água, glicóis, óleos, álcoois, agentes flavorizantes, con- servantes, agentes colorantes e xaropes), um ou mais ingredientes de for- mação de comprimido convencionais (tais como com amido, lactose, saca- rose, sorbitol, talco, ácido esteárico, estearato de magnésio, fosfato de dicál- 20 cio, e qualquer de uma variedade de gomas), e um diluente opcional (tal co- mo água).
Os agentes de ligação incluem amido, gelatina, açúcares natu- rais (por exemplo, glicose e beta-lactose), adoçantes de milho e gomas natu- rais e sintéticas (por exemplo, acácia e tragacanto). Os agentes desintegran- tes incluem amido, metil celulose, ágar e bentonita.
Os comprimidos e cápsulas representam uma forma de unidade de dosagem oral vantajosa. Os comprimidos podem ser cobertos com açú- car ou cobertos com película usando as técnicas padrão. Os comprimidos também podem ser cobertos ou de outra maneira compostos para fornecer 30 um efeito terapêutico prolongado de liberação controlada. A forma de dosa- gem pode compreender um componente interno de dosagem e externo de dosagem, em que o componente externo está na forma de um envelope so- bre o componente interno. Os dois componentes podem ainda ser separa- dos por uma camada que resista a desintegração no estômago (tal como uma camada entérica) e permita o componente interno passar intacto no duodeno ou uma camada que retarde ou sustente a liberação. Uma varieda- 5 de de materiais de camada entérica e não entérica ou de revestimento (tais como ácidos poliméricos, goma-laca, álcool acetílico e acetato de celulose ou combinações destes) pode ser usada.
Os inibidores da protease aspártica descritos também podem ser administrados através de uma composição de liberação lenta, em que a 10 composição inclui um inibidor da protease aspártica descrito e um veículo de liberação lenta biodegradável (por exemplo, um veículo polímérico) ou um veículo de liberação lenta não biodegradável farmaceuticamente aceitável (por exemplo, um veículo de troca de íon).
Os veículos de liberação lenta biodegradáveis e não biodegra- dáveis são bem-conhecidos na técnica. Os veículos biodegradáveis são u- sados para formar partículas ou matrizes que retêm uma substância medi- camentosa (isto é, inibidores da protease aspártica da presente invenção) e que lentamente se degradam/dissolvem em um meio ambiente adequado (por exemplo, aquoso, acídico, básico e outros mais) para liberar a(s) subs- tância(s) medicamentosa(s). Tais partículas se degradam/dissolvem nos flui- dos corporais par liberar a(s) substância(s) medicamentosa(s) (isto é, inibi- dores da protease aspártica da presente invenção) nesse particular. As par- tículas são preferivelmente nanopartículas (por exemplo, na faixa de cerca de 1 a 500 nm de diâmetro, preferivelmente cerca de 50 a 200 nm de diâme- tro, e mais preferivelmente cerca de 100 nm de diâmetro). Em um processo para a preparação de uma composição de liberação lenta, um veículo de liberação lenta e um inibidor da protease aspártica descrito são em primeiro lugar dissolvidos ou dispersos em um solvente orgânico. A mistura resultante é adicionada em uma solução aquosa contendo um agente tensoativo op- cional para produzir uma emulsão. O solvente orgânico é depois evaporado da emulsão para fornecer uma suspensão coloidal de partículas contendo o veículo de liberação lenta e o inibidor da protease aspártica descrito. Os inibidores da protease aspártica descritos podem ser incorpo- rados para a administração oral ou por injeção em uma forma líquida, tal como soluções aquosas, xaropes adequadamente flavorizados, suspensões aquosas ou oleosas, emulsões flavorizadas com óleos comestíveis tais co- 5 mo óleo de algodão, óleo de gergelim, óleo de coco ou óleo de amendoim e outros mais, ou em elixires ou veículos farmacêuticos similares. Os agentes dispersantes ou de suspensão adequados par suspensões aquosas, incluem gomas sintéticas e naturais tais como tragacanto, acácia, alginato, dextrano, carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, polivinil-pirrolidona e gelatina. 10 As formas líquidas nos agentes de suspensão ou dispersantes adequada- mente flavorizadas também podem incluir gomas sintéticas e naturais. Para a administração parenteral, suspensões e soluções estéreis são desejadas. As preparações isotônicas, que geralmente contêm conservantes adequa- dos, são empregadas quando a administração intravenosa for desejada.
Os inibidores da protease aspártica descritos podem ser admi-
nistrados parenteralmente através de injeção. Uma formulação parenteral pode consistir na substância medicamentosa (isto é, inibidores da protease aspártica da presente invenção) dissolvida ou misturada com um veículo líquido inerte apropriado. Os veículos líquidos aceitáveis geralmente com- 20 preendem solventes aquosas e outros ingredientes opcionais para ajudar na solubilidade ou conservação. Tais solventes aquosos incluem água estéril, solução de Ringer, ou uma solução salina aquosa isotônica. Outros ingredi- entes opcionais incluem óleos vegetais (tais como óleo de amendoim, óleo de algodão e óleo de gergelim), e solventes orgânicos (tais como solcetal, 25 glicerol e formila). Um óleo não volátil estéril pode ser empregado como um solvente ou agente de suspensão. A formulação parenteral é preparada pela dissolução ou suspensão da substância medicamentosa (isto é, inibidores da protease aspártica da presente invenção) no veículo líquido por meio do qual a unidade de dosagem final contém de 0,005 a 10 % em peso da substância 30 medicamentosa (isto é, inibidores da protease aspártica da presente inven- ção). Outros aditivos incluem conservantes, isotonificadores, solubilizantes, estabilizantes e agentes de suavização da dor. Suspensões injetáveis tam- bém podem ser preparadas, em cujo caso, veículos líquidos apropriados, agentes de suspensão e outros mais podem ser empregados.
Os inibidores da protease aspártica descritos podem ser admi- nistrados intranasalmente usando um veículo intranasal adequado.
5 Os inibidores da protease aspártica descritos também podem ser
administrados topicamente usando um veículo transdérmico tópico adequa- do ou um emplastro transdérmico.
Para a administração ocular, a composição está preferivelmente na forma de uma composição oftálmica. As composições oftálmicas são pre- ferivelmente formuladas como formulações de colírio e suprimidas em reci- pientes apropriados para facilitar a administração nos olhos, por exemplo, um conta-gotas adaptado com uma pipeta adequada. Preferivelmente, as composições são estéreis e com base aquosa, usando água purificada. A- lém do inibidor da protease aspártica descrito, uma composição oftálmica pode conter um ou mais de: a) um tensoativo tal como um éster de ácido graxo de polioxietileno; b) um agente espessante tal como celulose, derivado de celulose, polímeros de carboxivinila, polímeros de polivinila e polivinilpir- rolidonas, tipicamente em uma concentração na faixa de cerca de 0,05 a cerca de 5,0 % (p/vol); c) (como um alternativa ou além da armazenagem da composição em um recipiente contendo nitrogênio e opcionalmente incluindo um absorvente livre de oxigênio tal como Fe), um antioxidante tal como hi- droxianisol butilado, ácido ascórbico, tiossulfato de sódio, ou hidroxitolueno butilado em uma concentração de cerca de 0,00005 a cerca de 0,1 % (p/vol); d) etanol em uma concentração de cerca de 0,01 a 0,5 % (p/vol); e e) outros excipientes tais como um agente isotônico, tampão, conservante e/ou agente de controle do pH. O pH da composição oftálmica está desejavelmente den- tro da faixa de 4 a 8.
A invenção é ainda definida por referência aos exemplos, que são destinados a serem ilustrativos e não limitativos.
Os compostos representativos da invenção podem ser sintetiza-
dos de acordo com os esquemas sintéticos gerais descritos acima e são ilus- trados nos exemplos que seguem. Os métodos para a preparação dos vários materiais de partida usados nos esquemas e exemplos estão bem dentro do conhecimento das pessoas versadas na técnica.
As seguintes abreviações possuem os significados indicados:
Abreviação Significado Aq Aquoso Boc terc-butóxi carbonila ou t-butóxi carbonila (Boc)2O dicarbonato de di-terc-butila Salmoura NaCI aquoso saturado Cbz Benziloxicarbonila CbzCI Cloroformiato de benzila CDI Carbonil diimidazol CH2CI2 Cloreto de metileno CH3CN ou MeCN Acetonitrila Cpd Composto D Dia DAMP Acetato de 4,4'-(2-piridinilmetileno)difenol DAST Trifluoreto de dietilaminoenxofre DBU 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno DCC Ν,Ν'-dicicloexilearbodiimida DCM Diclorometano DCU N,N'-dicicloexiluréia DIAD Azodicarboxilato de diisopropila DÍBA1H Hidrato de diisobutilalumínio DIEA N,N-diisopropiletilamina DMAP 4-(dimetilamino)piridina DMF N,N-dimetilformamida DMPU 1,3-dimeti1-3,4,5,6-tetraidro-2(1H)-pirimidinona 2,4-DNP 2,4-dinitrofenilidrazina DPPA Difenilfosforil azida EDCI.HCI Cloridrato de 1[3-(dimetilamino)propi1]-3-etilearbo- diimida hidroclorido Equiv Equivalentes Et Etila Et2O Eter etílico EtOAc Acetato de etila Fmoc 1-[[(9H-fluoren-9-ilmetóxi)earbonil]óxij- Fmoc-OSu 1-[[(9H-fluoren-9-ilmetóxi)earbonil]óxi]-2,5-pirroli- dinadiona h, hr Hora HOBt 1-hidroxibenzotriazol HATU Hexafluorofosfato de 2-(7-Aza-1 H-benzotriazol-1-il)- 1,1, 3,3-tetrametilurônio HBTU lexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-i1)-1,1, 3,3-tetrametilurônio KHMDS Hexametildissilazano de potássio LiHMDS Hexametildissilazano de lítio LAB Amidotriidroborato de lítio LAH ou LiAIH4 Hidrato de lítio alumínio LC-MS Cromatografia líquida-espectroscopia de massa LHMDS Hexametildissilazano Me Metila MeCN Acetonitrila MeOH Metanol MsC1 Cloreto de metanossulfonila min Minuto MS Espectro de massa NaH Hidrato de sódio NaHCO3 Biearbonato de sódio NaN3 Azido de sódio NaOH Hidróxido de sódio Na2SO4 Sulfato de sódio NMM N-metilmorfolina NMP N-metilpirrolidinona Pd2(dba)3 tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0) PE Eter de petróleo Ph Fenila PTSA Aeido p-tolueno sulfônico R-CBS (R)-CB S-oxazaborolidina Quant Rendimento quantitativo rt Temperatura ambiente Satd Saturado SOCI2 Cloreto de tionila SPE Extração da fase sólida TBDPSC1 Cloreto de terc-butil difenil silila TBME Eter terc-butil metílico TBS t-butildimetilsilila TBSC1 Cloreto de t-butildimetilsilila TEA trietilamina ou Et3N TEAF Fluoreto de tetraetilamônio TEMPO Radical livre de 2,2,6,6-tetrametil-1 -piperidinilóxi Teoc 1-[2-(trimetilsilil)etoxicarbonil] Teoc-OSu 1-[2-(trímetilsilil)etoxicarboniloxi]pirrolidin-2,5-diona TFA Aeido trifluoroacético THE Tetraidrofurano tic Cromatografia de camada fina TMS Trimetilsilila TMSC1 clorotrimetilsilano ou cloreto de trimetilsilila tR Tempo de retenção TsOH Acido p-toluenossulfônico TsC1 Cloreto de p-toluenossulfonila IRed-AI Diidrato de bis(2-metoxietoxi)alumínio de sódico | EXEMPLO 1
ESQUEMAS SINTÉTICOS GERAIS
Os compostos da presente invenção podem ser sintetizados mediante o acoplamento de um intermediário de pirano representado pela seguinte estrutura:
NH2
NBoc
O
com um intermediário de piperidina representado pela seguinte estrutura:
descrito no seguinte esquema:
^-NOjlCeH4OCOCi
CTTv
O ,NBoc W
NH2
NBoc
R2
NOa
NH
R-I
■<Λ
10
Preparação do Intermediário de Pirano a partir de Éster Glutâmico
O intermediário de pirano pode ser preparado a partir do éster glutâmico usando o seguinte esquema sintético: Oh (boc^q I _ £ NaSHt
NHj
(MeO)1C(CHj)2
BF5 Et2O
^coot8u X nbhiV Tsa. VN^- /-OT8
___T yjy-p> )ÇT J V T
80 COOtBu COCXBu
OOfflU
Boc Boc
DIBAL-H \/N'vT''^Ç'^OT8 ^"η Ύ V r- Ύ' Ύ' "OH
XTXJ-QO^
^ xVj Sr NHBoc
CH2OH
^γΎΥ^τ* rW^N* (—— ίΤΛ)
NHBoe NH8oc y R9UnotH LJ ^NBoc /
R2
^ptyc-
Preparação do Intermediário de Pirano a partir de Éster Piroqlutâmico
O intermediário de pirano também pode ser preparado a partir do éster piroglutâmico usando o seguinte esquema sintético:
NaBH4
! LHMOS u" 'N' COOEt
b^k Boc
HO
(MeO)2C(CH1)2 V/iy^v--S0 Tbsci BH3tH3Ch
,J BocN--/ ~
96%
OH
Tc- ™sS bmjX
TEAF
Ηο^/γν^ο j X o -- r y T >
J e*cu~~£ BocN-yC^
TBSO ' TBSO /
Lv ^ NHBoc Uv ^ NHBoe NHBoc
R2 não é H L0J NBoc / k0^- ^nboc
R* Preparação do Intermediário de Piperidina
O intermediário de piperidina pode ser preparado mediante o uso do seguinte esquema sintético:
Oa
N'°"·
N
Boc Br.
H2, Pd(OH)i
R1
rO Cl
Alternativamente, o intermediário de piperidina pode ser prepa- rado usando o seguinte esquema sintético: Ν'°^
I
O
r^oaQ R\ Õ3N
NBOC
As condições específicas para a sintetização dos inibidores da protease aspártica descritos de acordo com os esquemas acima são forne- cidas nos Exemplos de 2 a 11.
EXEMPLO 2
3-((R)-(3-clorofenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi)metil)piperidina-1-carboxi- lato de (R)-terc-butila
O^oa
(BOC)2O. TtEA r^y^OE» UOH r 'OH
CH2Cl2 N ~
.teitaric bcW **tt
Boc
N
Boc
H.HCI
CDI
Oa'
Br
,-O,.
Cl
N
Boc
IvBuU
&
NBoc R-CBS-oxazaborolidina HO>V^|x^MBoc Bf-^CN
BHjTHF
N*H, DMF
NC^O
NH
Etapa 1. Piperidina-1.3-dicarboxilato de (R)-terc-butil 3-etila
A um frasco de fundo redondo de 20 I foi colocado sal de ácido (R)-etil piperidina-3-carboxilato tartárico (2,6 kg, 8,47 mois, 1 eq) e CH2CI2 (14 L). À solução acima, a O0C foi adicionado TEA (2,137 kg, 21,17 rnols, 2,5 eq), seguido pela adição por gotejamento de (Boc)2O (2,132 kg, 9,74 rnols, 1,15 eq). A mistura foi deixada se agitar durante a noite em temperatura am- biente. A mistura foi lavada com solução de ácido cítrico saturada (3 x 2,5 L), 5 solução saturada de NaHCO3 (3 x 2,5 L) e salmoura (2x2 L). A fase orgâni- ca foi secada por Na2SO4, filtrada e o filtrado foi evaporado para fornecer óleo incolor (2,2 kg, rendimento 100 %).
Etapa 2. ácido (R)-1-(terc-butoxicarbonil)piperidina-3-carboxílico
A uma solução de piperidina-1,3-dicarboxilato de (R)-1-terc-butil 10 3-etila (2,2 kg, 8,469 rnols, 1 eq) em 5 L de MeOH foi adicionado uma solu- ção de LiOH (629,6 g, 15 rnols, 1,77 eq) em 7,5 L de água em O a 5°C. Após a adição, a mistura foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. TLC mostrou que o material de partida foi consumido. O pH do sistema foi ajustado para 7 mediante a adição de solução de ácido cítrico saturada. A 15 maior parte do metanol foi removido. O pH foi ajustado para 4 a 5 com ácido cítrico. A mistura foi extraída 3 vezes com 5 L de CH2CI2, as camadas orgâ- nicas foram combinadas e secadas por Na2SO4 e evaporadas para propor- cionar um sólido branco (1,775 kg, 92 %).
Etapa 3. 3-(metóxi(metil)carbamoiOpiperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila A uma solução agitada de ácido (R)-l-(terc-butoxicarbonil) pipe- ridina-3-carboxílico (233 g, 1,2 mol) em THF (1,2 L) foi adicionado carbonildi- imidazol (230 g, 1,42 mol). A mistura foi agitada durante 1 h sob banho de água gelada. Uma suspensão de trietilamina (207 ml, 1,41 mol) e cloridrato de Ν,Ο-dimetilidroxilamina (138 g, 1,42 mol) em THF (900 mL) foi adiciona- do. A mistura de reação foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e agitada durante a noite. TLC mostrou que a reação estava completa. O sol- vente foi evaporado, e o resíduo foi dissolvido em CH2CI2 (1,2 L) e lavado sucessivamente com 0,5 N solução de cloridrato, solução saturada de car- bonato de sódio e salmoura, secado por sulfato de sódio anidro e evaporado para fornecer o composto bruto de 3-(metóxi(metil)carbamoil)piperidina-1- carboxilato de (R)-terc-butila (250 g, 91 %), que foi usado na próxima etapa diretamente sem purificação. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 4,05 - 4,19 (m, 2H),
20
25
30 3,72 (s, 3Η), 3,17 (s, 3Η), 2,75 - 2,85 (m, 2Η), 2,65 (t, 1Η), 1,90 (d, 1H), 1,60 -1,78 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).
Etapa 4. 3-(3-clorobenzoil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila
A uma solução de 1-bromo-3-clorobenzeno (54,3 g, 0,286 mol) em THF anidro (500 ml) em -78°C sob nitrogênio foi adicionadA por goteja- mento uma solução de 2,5 M n-BuLi em hexano (114 ml, 0,286 mol). Após agitação durante 1 h em -78°C, uma solução de 3-(metóxi(metil)carbamoil) piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila (65,8 g, 0,242 mol) em THF anidro (300 ml) foi adicionada por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e agitada durante 2 h. TLC indicou que a reação estava completa. A mistura foi extinta com solução sa- turada de NH4CI (300 ml) e extraída com acetato de etila (3 χ 200 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas por Na2SC>4 e concentradas in vácuo para fornecer o produto bruto 3-(3- clorobenzoil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (92 g, 100 %), que foi usado imediatamente na próxima etapa sem purificação. Etapa 5. 3-((RH3-clorofenil)(hidróxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc- butila
A uma solução de 3-(3-clorobenzoil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (92 g, 0,286 mol) em THF anidro (300 ml) a -15°C sob nitro- gênio foi adicionado por gotejamento uma solução de 1 M R-CBS-oxaza- borolidina em tolueno (45 ml, 45 mmols, 0,15 eq). Após agitação durante 1 h a -15°C, uma solução de 10 M BH3 em THF (33 ml, 0,33 mol, 1,1 eq) foi adi- cionada por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi agitada du- rante 2 h em -15°C. TLC indicou que o material de partida foi consumido. Metanol (200 ml) foi adicionado por gotejamento cuidadosamente a -15°C. O solvente foi removido sob pressão reduzida, o resíduo foi purificado por cro- matografia de coluna em sílica-gel eluindo com AcOEt/hexano (1:30 1:15) para fornecer um óleo amarelo claro (82 g, HPLC > 70%, relação > 3:1). A mistura foi dissolvida em acetato de etila até que o álcool fosse realmente dissolvido (ao redor de 5 ml/1 g), o solvente foi removido no evaporador rota- tivo até que alguns dos cristais apareceram. A solução foi esfriada para a temperatura ambiente lentamente e representou 1 a 2 h. À solução acima foi adicionada a hexano (ao redor de 300 ml) e depois filtrada, os cristais foram lavados com hexano gelado e recristalizados mais duas vezes para propor- cionar 3-((R)-(3-clorofenil)(hidróxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc- butila como o isômero puro (32,5 g, ee> 99 %, rendimento 35 % para duas etapas).
Etapa 6. 3-((RH3-clorofenil)(cianometóxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila
A uma solução de 3-((R)-(3-clorofenil)(hidróxi)metil)piperidina-1- carboxilato de (R)-terc-butila (32,5 g, 0,1 mol), NaH (12 g, 0,3 mol) foi adicio- nado em 0°C. A mistura foi agitada durante 1 h em temperatura ambiente. A mistura foi esfriada para -40°C, depois bromoacetonitrila (35,7 g, 0,3 mol) foi adicionada por gotejamento. A mistura foi agitada um adicional de 0,5 h a - 20°C. HPLC indicou que a reação estava -30% completa. A adição de NaH e bromoacetonitrila foi repetida mais duas vezes. HPLC indicou que a reação estava -60% completa. A reação foi extinta com NH4CI sat. A mistura foi ex- traída com CH2CI2. A camada orgânica foi secada por Na2SO4, concentrada para fornecer o produto bruto como óleo marrom (36,8 g), que foi usado para a próxima etapa sem purificação. Etapa 7. 3-((RH2-aminoetóxi)(3-clorofeni0metil)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila
3-((R)-(3-clorofenil)(cianometóxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (36,8 g, 0,10 mol) foi dissolvido em THF anidro (350 ml), e a solução foi aquecida sob refluxo sob um atmosfera de nitrogênio. Uma solu- ção de BH3-Me2S (30 ml, 0,30 mol) em THF foi adicionada por gotejamento, e a agitação continuou sob refluxo durante a noite. A solução resultante foi esfriada para a temperatura ambiente. A reação foi extinta pela adição por gotejamento cuidadosa de MeOH até que o borbulhamento cessou. Após a evaporação da solução, o produto bruto foi obtido (70 g), o qual foi usado para a próxima etapa sem purificação.
Etapa 8. 3-((RH3-clorofenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi)metil) piperidina- 1-carboxilato de (R)-terc-butila A uma solução de 3-((R)-(2-aminoetóxi)(3-clorofenil) metil) pipe- ridina-l-carboxilato de (R)-terc-butila (70 g, bruto, 0,1 mol) e DMAP (1,83 g, mmols, 0,15 eq) em CH2CI2 seco (150 ml), Et3N (12,1 g, 15,8 ml, 120 mmols) foi adicionado. A mistura resultante foi esfriada para 0~5°C utilizando um banho de água gelada, uma solução de cloroformiato de metila (11,28 g, 120 mmoIS, 1,2 eq) em CH2CI2 seco (100 ml) foi adicionada por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi agitada durante 3 h em 0~5°C. TLC mostrou que o material de partida tinha desaparecido. Água (80 ml) foi adi- cionada. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 χ 100 ml), as cama- das orgânicas combinadas foram lavadas com ácido cítrico a 10 % (2 χ 150 ml) e salmoura (100 ml), depois secadas por Na2SO4, filtradas e concentra- das no produto bruto, que foi purificado por HPLC preparativa para propor- cionar 3-((R)-(3-clorofenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi)-metil)piperidina-1- carboxilato de (R)-terc-butila (10,7 g, o rendimento total durante três etapas é 25%). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 1,12-1,40 (m, 4H), 1,43 (s, 9H), 1,64 (m, 2H), 2,82 (m, 2H), 3,25 (m, 2H), 3,61 (s, 3H), 3,74 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 4,16 (m, 1H), 7,22 (m, 1H), 7,32 (m, 3H).
Etapa 9. 2-((RW3-clorofenil)((R)-piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila 3-((R)-(3-clorofenil)(2-(metoxicarbonilamino)-etóxi)metil) piperidi- na-1-carboxilato de (R)-terc-butila (10,7 g, 25 mmol) foi dissolvido em uma solução de 20% (VA/) TFA/CH2C12 (150 ml). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h. TLC mostrou que a reação estava completa. Uma solução de bicarbonato de sódio saturado foi adicionada por gotejamento para ajustar o pH 8-9. A mistura resultante foi extraída com CH2CI2 (3 χ 200 ml), lavada com salmoura, secada por Na2SO4, concentrada in vácuo para proporcionar 2-((R)-(3-clorofenil)((R)-piperidin-3-il)metóxi) etil- carbamato de metila (11,2 g, 100 %), que foi usado para a próxima etapa diretamente sem purificação.
Alternativamente, 3-((R)-(3-clorofenil)(2-(metoxicarbonilamíno) etóxi) metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila pode ser preparado pelos seguintes procedimentos:
20
25
30 ο
N
Boe
EDCI.HCI doridrato de N,0- dimetilidroxilamina
O
N1 Soe
Br
n-8uLi
NBoc R-CBS-oxazaborolidina
SH3-TMF
Cl
Etapa 1. 3-(metóxi(metincarbamoil)DÍDeridina-1-carboxilato de (RHerc-butila
Ácido (R)-1-(terc-butoxicarbonil)piperidina-3-carboxílico (25 g, 0,11 mol, 1,0 equiv), cloridrato de Ν,Ο-dimetilidroxilamina (10,5 g, 0,14 mol, 1,25 equiv) e EDCI.HCI (26,3 g, 0,14 mol, 1,25 equiv) e diisopropiletilamina (48 ml, 0,28 mol, 2,5 equiv) foram dissolvidos em diclorometano (400 ml) e agitados durante a noite em tr. A mistura de reação foi diluída com EtOAc, lavada com 5% HCI aq (2 X 150mL), NaHCO3 aq sat (150 ml), salmoura (100 ml), e secada por Na2SO4. A concentração proporcionou 3-(metóxi (me- til)carbamoil) piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (24,42 g, 82%) como um óleo transparente. O produto bruto foi usado para a próxima etapa sem outra purificação. MS ESI +ve m/z 295 (M + Na). 1H RMN (CDCI3) δ 4,19 - 4,00 (m, 2H), 3,77 (m, 3H), 3,12 (s, 3H), 2,79 (m, 2H), 2,64 (m, 1H), 1,89 (m, 1H), 1,71-1,52 (m, 2H), 1,51-1,33 (m, 10H).
Etaoa 2. 3-(3-clorobenzoinpiperidina-1-carboxilato de (RHerc-butila a uma solução de 1-bromo-3-clorobenzeno (100 g, 0,52 mol) em
THF anidro (550 ml) a -78°C sob nitrogênio foi adicionado por gotejamento uma solução de 2,5 M n-BuLi em hexano (210 ml, 0,52 mol). Após agitação durante 1 h a -78°C, uma solução de 3-(metóxi(metil)carbamoil)piperidina-1- carboxilato de (R)-terc-butila (120 g, 0,44 mol) em THF anidro (500 ml) foi adicionada por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi deixada aquecer para tr e agitada durante 2 h. A mistura foi extinta com solução satu- rada de NH4CI (500 ml) e extraída com EtOAc (3 χ 400 ml). As camadas or- gânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas por NaaSO4 e concentradas in vácuo para fornecer o 3-(3-clorobenzoil)piperidina-1-car- boxilato de (R)-terc-butila bruto (178 g), que foi usado imediatamente na pró- xima etapa sem purificação.
Etapa 3. 3-((RH3-clorofenil)(hidróxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)- terc-butila
A uma solução de 3-(3-clorobenzoil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (178 g, 0,55 mol) em THF anidro (600 ml) a -15°C sob nitro- gênio foi adicionado por gotejamento uma solução de 1 M R-CBS- oxazaborolidina em tolueno (82 ml, 82 mmols, 0,15 eq). Após agitação du- rante 1 h a -15°C, uma solução de 10 M BH3 em THF (60 ml, 0,60 mol, 1,1 eq) foi adicionada por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi agitada durante 2 h a -15°C. Metanol (400 ml) foi adicionado por gotejamen- to cuidadosamente em -15°C. O solvente foi removido sob pressão reduzida, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel eluindo com AcOEt/hexano (1:30 1:15) para fornecer o óleo amarelo claro (95 g, HPLC pureza >70%, relação de isômero >3:l). A mistura foi dissolvida em EtOAc até que o álcool tenha sido realmente dissolvido (ao redor de 5 ml/1 g), o solvente foi removido no evaporador rotativo até que alguns cristais apare- ceram. A solução foi esfriada para a tr lentamente e significou 1 a 2 h. À so- lução acima foi adicionado hexano (ao redor de 300 ml) e depois filtrada, os cristais foram lavados com hexano gelado e recristalizados a partir de AcO- Et-hexano duas vezes para proporcionar o isômero puro 3-((R)-(3- clorofenil)(hidróxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (20 g, e- e>99 %).
Etapa 4. 3-((R)-(3-clorofenil)(2-etóxi-2-oxoetóxi)metil)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila
A uma suspensão de NaH (7,44 g, 161 mmols) em DMF anidro (50 ml) a 0 a 5°C foi adicionado por gotejamento uma solução de 3-((R)-(3- clorofenil)(hidróxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (17,45 g, 54 mmols) em DMF anidro (100 ml), a mistura de reação foi agitada durante 1 h em tr. Uma solução de bromoacetato de etila (17,82 g, 11,87 ml, 107 mmols) em DMF anidro (100 ml) foi adicionada por gotejamento à mistura acima em 0 a 5°C. Após a adição, a mistura de reação foi agitada durante 2 a 3 h em tr. A mistura de reação foi despejada em NH4CI aquoso saturado e EtOAc (1000 ml) foi adicionado. A camada orgânica foi lavada com água (3 χ 200 ml) e salmoura, secada por Na2SO4, filtrada e concentrada in vácuo. O resí- duo foi purificado em cromatografia em sílica-gel para proporcionar 3-((R)-(3- clorofenil)(2-etóxi-2-oxoetóxi)metil)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila (14 g, 64 % rendimento).
Etapa 5. 3-((RH3-clorofenil)(2-hidroxietóxi)metinDÍDeridina-1-carboxilato de (R)-terc-butila
A uma solução de 3-((R)-(3-clorofenil)(2-etóxi-2-oxoetóxi) me-
til)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (14 g, 34 mmols) em MeOH (200 ml) foi adicionado NaBH4 (10,35 g, 272 mmol) em partes enquanto a tempe- ratura estava mais baixa do que 40°C. Após a adição, a mistura foi agitada em tr durante 2 a 3 h. O solvente foi removido in vácuo para fornecer um resíduo que foi dividido entre água e EtOAc. A camada orgânica foi lavada com H2O e salmoura, secada por Na2SO4 e evaporada para fornecer o 3- ((R)-(3-clorofenil)(2-hidroxietóxi)metil)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-bu- tila bruto (12,50 g), que foi usado na próxima etapa sem purificação. Etapa 6. 3-aRH3-clorofenin(2-(metilsulfonilóxi)etóxi)metinpiperidina-1-carbo- xilato de (R)-terc-butila
A uma solução de 3-((R)-(3-clorofenil)(2-hidroxietóxi) metil) pipe- ridina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (12,50 g, 34 mmols) em CH2CI2 seco (150 ml) foi adicionado Et3N (13,74 g, 18,3 ml, 136 mmols, 4 eq) em -5 a O0C. Depois uma solução de MsCI (7,75 g, 5,16 ml, 68 mmols, 2 eq) em CH2CI2 seco (50 ml) foi adicionada por gotejamento na mesma temperatura. Após a adição, foi deixada aquecer para a tr gradualmente. Após a conclu- são da reação, água (100 ml) foi adicionada. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 χ 80 ml), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 10% ácido cítrico, NaHCO3 sat. e salmoura, depois secadas por Na2SO4, filtradas e concentradas para fornecer 3-((R)-(3-clorofenil)(2- (metilsulfonilóxi)etóxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (15 g), que foi usado na próxima etapa sem purificação.
Etapa 7. 3-((RH2-azidoetóxi)(3-clorofenil)metil)pÍDeridina-1- carboxilato de (RHerc-butila
3-((R)-(3-clorofenil)(2-(metilsulfonilóxi)etóxi)metil) piperidina-1- carboxilato de (R)-terc-butila (15 g, 34 mmols) foi dissolvido em DMF anidro (150 ml), NaN3 sólido (6,7 g, 102 mmols, 3 eq) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida para 80°C durante a noite. A mistura de reação foi esfri- ada para a tr e depois foi adicionada com EtOAc (500 ml), a fase orgânica foi lavada com água (3 χ 100 ml) e salmoura (2 χ 80 ml), secada por Na2SO4 e concentrada in vácuo para fornecer 3-((R)-(2-azidoetóxi)(3-clorofenil) me- til)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila bruto (13,3 g), que foi usado pa- ra a próxima etapa sem purificação.
Etapa 8. 3-((RH2-aminoetóxi)(3-clorofenil)metil)piperidina-1- carboxilato de (RHerc-butila
3-((R)-(2-azidoetóxi)(3-clorofenil)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (13,3 g, 33,8 mmols) foi dissolvido em THF/H20 (20:1, 180 ml / 9 ml), trifenilfosfina (36,0 g, 135 mmols) foi adicionada em porções. A mis- tura de reação foi agitada durante a noite em tr. O solvente foi removido sob pressão reduzida no resíduo, que foi purificado em cromatografia em sílica- gel para proporcionar 3-((RH2-aminoetóxi)(3-clorofenil)metil)piperidina-1- carboxilato de (R)-terc-butila (10,4 g, pureza: HPLC = 75 %).
Etapa 9. 3-((RH3-clorofenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi)metin piperidina- 1-carboxilato de (RHerc-butila
A uma solução 3-((R)-(2-aminoetóxi)(3-clorofenil)metil)piperidina- 1-carboxilato de (R)-terc-butila (7,7 g, 21 mmols, HPLC = 75%) e DMAP (1,27 g, 10 mmols, 0,5 eq) em CH2CI2 seco (120 ml), Et3N (6,38 g, 8,45 ml, 63 mmols) foi adicionado. A mistura resultante foi esfriada para 0 a 5°C sob banho de água gelada, uma solução de cloroformiato de metila (8,1 ml, 104,5 mmols, 5 eq) em CH2CI2 seco (50 ml) foi adicionada por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi agitada durante 1 a 2 h em 0 a 5°C. A reação foi extinta com água (80 ml). A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 χ 50 ml), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 10 % ácido cítrico (2 χ 80 ml) e salmoura, depois secadas por Na2SO4, filtra- das e concentradas no produto bruto, que foi purificado por HPLC preparati- va para proporcionar 3-((R)-(3-clorofenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi) me- til)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila (4,4 g, HPLC >98%, o rendimen- to total para as cinco etapas é 41 %).
Os seguintes compostos foram preparados seguindo os proce-
dimentos análogos a aqueles descritos acima:
1) 3-((R)-(3,5-difluorofenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi)metil) piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila utilizando (3,5- difluorofenil)lítio na Etapa 2.
Alternativamente, 3-((R)-(2-aminoetóxi)(3-clorofenil)metil) piperi-
dina-1-carboxilato de (R)-terc-butila pode ser preparado pelos seguintes pro- cedimentos:
Etapa 1: Preparação de 3-((RH2-amino-2-oxoetóxi)(3-clorofeninmetil)-pipe- ridina-1-carboxilato de (R)-terc-butila 3-((R)-(3-clorofenil)(2-etóxi-2-oxoetóxi)metil)-piperidina-1 -carbo-
xilato de (R)-terc-butila (0,971 g, 2,36 mmols) foi dissolvido em 7 M NH3ZMeOH (20 ml), e agitado durante a noite em temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer 3-((R)-(2-amino-2-oxoetóxi)(3- clorofenil)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (902 mg, 100%), que foi usado para a próxima etapa sem outra purificação. MS ESI +ve m/z 383 (M + H)+.
Etapa 2: Preparação de 3-((RH2-aminoetóxi)(3-clorofenil)metilVpiperidina-1- carboxilato de (R)-terc-butila
A uma solução de 3-((R)-(2-amino-2-oxoetóxi)(3-clorofenil) me- til)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila (902 mg, 2,36 mmols) em tolue- no anidro (30 ml) a O0C foi adicionado Red-AI® (65 % solução em tolueno, 1,4 ml, 7,07 mmols) lentamente durante 10 min. Após a adição, a solução foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. A reação foi esfriada para 0°C e extinta com Na2SO4 "10 H2O. A mistura resultante foi agitada durante 2 a 3 h, filtrada através de Celite®, e lavada com THF (200 ml). O filtrado foi secado e concentrado para fornecer o produto bruto 3-((R)-(2-aminoetóxi)(3- clorofenil)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (776 mg, 89 %). MS ESI +ve m/z 369 (M + H)+.
Alternativamente, 3-((R)-(2-aminoetóxi)(3-clorofenil)metil)-piperi-
dina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila também pode ser preparado pelos se- guintes procedimentos:
dróxi)metil)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila (relação diastereoméri- ca de 98:2) em 10 ml (10 vol) de PhCF3 foi adicionado, seqüencialmente, 8,1 ml (50 eq) de uma solução de NaOH a 50% em peso em água, hidrogenos- sulfato de tetrabutilamônio (0,261 g, 0,25 eq), e cloroetilamina HCI (1,068g, 3 eq), e agitada a 50°C durante um período de 20 h. A análise de HPLC apre- sentou 88% de conversão com impurezas secundárias assim como aprox. 9% álcool de partida. A reação foi deixada esfriar para a tr e as camadas separadas. A adição de 10 vol. de água foi necessária para garantir a sepa- ração limpa das camadas. A camada orgânica foi retida e enxaguada com vol de salmoura. A camada orgânica foi retida e concentrada sob vácuo. O óleo residual resultantes foi dissolvido em 10 vol de éter terc-butil metílico (TBME) em cujo ponto 10 vol de uma solução de ácido cítrico a 20 % em peso em água foram adicionados. (Observação: o ácido tartárico funciona igualmente enquanto HCI, ácido oxálico, TsOH resultam na desproteção do NBoc). A análise de HPLC mostrou que a extração limpa da amina desejada
HCl
A uma solução de (1,00 g, 3,07 mmols) 3-((R)-(3-clorofenil) (hi- 10
15
na camada aq. foi alcançada e o álcool de partida indesejado estava na ca- mada orgânica; a camada de TBME foi descartada. A camada aq. Foi enxa- guada uma vez mais com 5 vol de TBME de modo a garantir a remoção do álcool de partida indesejado. A camada de TBME orgânica foi descartada. A camada aq. foi levada a um pH de aprox. 13 mediante a adição de 2 vol de NaOH a 50 % em peso em água em cujo ponto 10 vol de DCM (diclorometa- no) foi adicionado. A extração limpa do produto desejado no DCM foi alcan- çada. O extrato orgânico foi enxaguado com 10 vol de salmoura (nenhuma purificação observada por HPLC), secado por NaSO4, e concentrado para proporcionar 750 mg (66 % de rendimento, 97 % de pureza) do produto de- sejado (confirmado por HPLC/MS e RMN).
Alternativamente, 3-((R)-(3-clorofenil)(2-(metoxicarbonilamino) etóxi) metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila da mesma forma pode ser preparado pelo seguinte processo:
ΜΜ,ΟΗ
BOH
- 25°C, 6h
HjH
DCM, 20 -25°C, 5h
(X
EXEMPLO 3
3_((R)_(5-flúor-2-metilfenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi)metil) piperidina-1- carboxilato de (R)-terc-butila
1^1As I I R-CBS-oxazaborolidina HOJU-K^NI
IAr O^K-NBOC___ JA
XX
ζ/ν
Boc
Λ-BULÍ
,NBoc
CN
BH3THF
NaH
NBoC BH3DMS MjN
NBoc
NBOC Etapa 1. 3-(5-flúor-2-metilbenzoil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila
A uma solução de 2-bromo-4-flúor-1-metilbenzeno (10,6 g, 0,056 mol) em THF anidro (150 ml) a -78°C sob nitrogênio foi adicionado por gote- jamento uma solução de 2,5 M n-BuLi em hexano (22 ml, 0,056 mol). Após agitação durante 1 h a -78°C, uma solução de 3-(metóxi(metil) carbamo- il)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (10 g, 0,037 mol) em THF anidro (120 ml) foi adicionada por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi deixada aquecer para a tr e agitada durante 2 h. A mistura foi extinta com solução saturada de NH4CI (100 ml) e extraída com EtOAc (3 χ 80 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas por Na2SO4 e concentradas in vácuo para fornecer 3-(5-flúor-2-metil- benzoil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila bruto (10,5 g, rendimento 88%), que foi usado na próxima etapa sem purificação.
Etapa 2. 3-((RV(5-flúor-2-metilfenil)(hidróxi)metinpiperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila
A uma solução de 3-(5-flúor-2-metilbenzoil)piperidina-1-car- boxilato de (R)-terc-butila (10,5 g, 0,0336 mol) em THF anidro (150 ml) em - 15°C sob nitrogênio foi adicionado por gotejamento uma solução de 1 M R- CBS-oxazaborolidina em tolueno (3 ml, 3 mmols, 0,09 eq). Após agitação durante 1 h a -15°C, uma solução de 10 M BH3 em THF (17 ml, 0,0336 mol, 1 eq) foi adicionada por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi agitada durante 2 h em -15°C. Metanol (80 ml) foi adicionado por gotejamen- to cuidadosamente em -15°C. O solvente foi removido sob pressão reduzida, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel eluindo com AcOEt/hexano (1:30—>1:15) para fornecer o óleo amarelo claro (95 g, HPLC >70%, relação >3:1). A mistura foi dissolvido em um volume mínimo de EtOAc, o solvente foi removido no evaporador rotativo até que os cristais apareceram. A solução foi esfriada para a tr e significou 1 - 2 h. À solução foi adicionado hexano e depois filtrada, os cristais foram lavados com hexano gelado e re-cristalizados um adicional de duas vezes para proporcionar o isômero puro 3-((R)-(5-flúor-2-metilfenil)(hidróxi)metil)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila (3,2 g, ee>99 %). 1H RMN (CDCI3) δ 7,1 (m, 2H), 6,85 (m, 1 Η), 4,7 (m, 1 Η), 2,3 (s, 3Η), 1,45 (s, 9Η), 1,25 (m, 4Η).
Etapa 3. 3-((R)-(cianometóxi)(5-flúor-2-metilfeninmetil)piperidina-1 -carboxila- to de (RHerc-butila
A uma solução 3-((R)-(5-flúor-2-metilfenil)(hidróxi)metil) piperidi- na-1-carboxilato de (R)-terc-butila (1,2 g ,0,0037 mol) em MeCN (20 ml), NaH (0,27 g, 0,011 mol) foi adicionado a 0°C. A mistura foi agitada durante 1 h seguido por esfriamento para -40°C e adição de bromoacetonitrila (1,3 g, 0,011 mol) em porções. A mistura foi agitada durante 0,5 hora a -20°C. A reação foi extinta com H2O. A mistura foi extraída com CH2CI2. A camada orgânica foi secada por Na2SO4, concentrada para obter a molécula alvo 3- ((R)-(cianometóxi)(5-flúor-2-metilfenil)metil)piperidina-1 -carboxilato de (R)- terc-butila (1,2 g, 90 %).
Etapa 4. 3-((RH2-aminoetóxi)(5-flúor-2-metilfeninmetil)piperidina-1 -carboxi- lato de (RHerc-butila Uma solução de 3-((R)-(cianometóxi)(5-flúor-2-metilfenil)metil)
piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (1,8 g, 0,005 mol) em THF anidro (20 ml) foi aquecida em refluxo sob nitrogênio. Uma solução de BH3-Me2S em THF foi adicionada por gotejamento e a agitação continuou sob refluxo durante a noite. Quando a solução resultante foi esfriada para tr, MeOH foi adicionado por gotejamento para extinguir a reação. Após a evaporação da solução, o produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna para pro- porcionar 3-((R)-(2-aminoetóxi)(5-flúor-2-metilfenil)metil)piperidina-1-carboxi- lato de (R)-terc-butila (1,2 g, rendimento 66 %).
Etapa 5. 3-((RH5-flúor-2-metilfenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi)metil) pipe- ridina-1-carboxilato de (R)-terc-butila
A uma solução de 3-((R)-(2-aminoetóxi)(5-flúor-2-metilfenil)metil) piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (3,1 g, 8,5 mmols) e DMAP (0,54 g) em CH2CI2 seco (45 ml), Et3N (2,58 g,3,6 ml) foi adicionado. A mistura resul- tante foi esfriada para 0 a 5°C sob banho de água gelada, uma solução de cloroformiato de metila (4,0 g, 43 mmols, 5 eq) em CH2CI2 seco (50 ml) foi adicionada por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi agitada durante 1 a 2 h em 0 a 5°C. A reação foi extinta com água (50 ml). A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 χ 30 ml), as camadas orgânicas combi- nadas foram lavadas com 10 % ácido cítrico (2 χ 50 ml) e salmoura, depois secadas por Na2SO4, filtradas e concentradas no produto bruto, que foi puri- ficado por HPLC preparativa para proporcionar 3-((R)-(5-flúor-2-metilfenil)(2- (metoxicarbonilamino)etóxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (400 mg, HPLC > 98 %). 1H RMN (CDCI3) δ 7,2 (m, 1H), 7,1 (m, 1H), 6,9 (m, 1H), 4,4 (m, 1H), 4,1 (m, 1H), 3,7 (m, 1H), 3,6 (s, 3H), 3,2 (m, 2H), 2,9 (m, 2H), 2,3 (s, 3H), 1,75 (m, 1H), 1,6 (m, 1H), 1,4 (s, 9H), 1,25 (m, 2H). EXEMPLO 4
3-((R)-(3-cloro-5-fluorofenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi)metil) piperidina-1 - carboxilato de (R)-terc-butila
Etapa 1. 3-(3-cloro-5-fluorobenzoil)piperidina-1-carboxilato de (RVterc-butila
(26,5 g, 1,1 mol) foi aquecido para 50°C, solução de 1-bromo-3-cloro-5- fluorobenzeno (157 g, 0,75 mol) em THF anidro (1 L) foi adicionada por gote- jamento, depois a mistura foi agitada em r.t. durante 2 h. A uma solução de 3-(metóxi(metil)carbamoil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (120 g, 0,441 mol) em THF anidro (1,1 L) a -78°C sob nitrogênio foi adicionado por gotejamento o reagente de Grignard acima. A mistura de reação foi deixada aquecer para a tr e agitada durante 2 h. A mistura foi extinta com solução saturada de NH4CI (500 ml) e extraída com EtOAc (3 χ 400 ml). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura, secada por Na2SO4 e concen- trada in vácuo para fornecer 3-(3-cloro-5-fluorobenzoil)piperidina-1-carbo- xilato de (R)-terc-butila (163 g), que foi usado imediatamente se outra purifi- cação.
Etapa 2. 3-((RH3-cloro-5-fluorofenil)(hidróxi)metil)piperidina-1-carboxilato de
Em um frasco de três gargalos de 2 L esguichado com N2, Mg (R)-terc-butila
Uma mistura de 10 M H3B-S2Me em THF (47,7 ml, 0,477 mol) e 1M R-CBS-oxazaborolidina em tolueno (72 ml, 0,072 mol) foram dissolvidos em 100 ml de THF anidro e esfriados para -15°C. 3-(3-cloro-5-fluorobenzoil) piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila em 400 ml de THF anidro foi adi- cionado por gotejamento à solução acima e agitado em -15°C durante 2 h. A reação foi extinta com metanol (500 ml). O solvente foi removido sob pres- são reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna. O produ- to foi recristalizado três vezes com EtOAc/Hexanos para fornecer 3-((R)-(3- cloro-5-fluorofenil)(hidróxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (55 g, 0,156 mol). 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 7,10 (s, 1H)5 7,04 - 6,90 (dd, 2H), 4,46 - 4,30 (d, 1H), 4,05 - 2,40 (m, 5H), 1,74 (s, 1H), 1,60 (s, 1H), 1,53 - 1,31 (m, 11H), 1,30-1,14 (m, 1H).
Etapa 3. 3-((R)-(3-cloro-5-fluorofenil)(cianometóxi)metihDÍDeridina-1-carbo-
xilato de (R)-terc-butila
Uma solução de 3-((R)-(3-cloro-5-fluorofenil) (hidróxi) metil) pipe-
ridina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (55 g, 0,156 mol) em acetonitrila (1,2 L) foi esfriada para 0°C, NaH (19,2 g, 0,48 mol, 60% em óleo) foi adicionado em porções, depois a mistura foi agitada em tr durante 1 h. A mistura foi es- friada para -20°C e bromoacetonitrila (57,7 g, 0,48 mol) foi adicionada por gotejamento. Após 0,5 hr, NaH adicional (19,2 g, 0,48 mol, 60 % em óleo) e bromoacetonitrila (57,7 g, 0,48 mol) foram adicionados. A TLC mostrou que 80% do material de partida foram reagidos. A reação foi extinta com solução saturada de NH4CI (200 ml), água (1 L) foi adicionada. Acetonitrila foi remo- vida por pressão reduzida, CH2CI2 (1 L) foi adicionado, a camada aquosa foi extraída outra vez com CH2CI2 (3 χ 500 ml), secada por Na2SO4 e concen- trada in vácuo para fornecer o 3-((R)-(3-cloro-5-fluorofenil)(cianometóxi) me- til)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila bruto (90 g), que foi usado para a próxima etapa sem outra purificação.
Etapa 4. 3-((RW2-aminoetóxi)(3-cloro-5-fluorofeninmetinpiperidina-1 -carbo- xilato de (RVterc-butila
Uma solução de 3-((R)-(3-cloro-5-fluorofenil)(cianometóxi) me- til)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila (90 g) em THF anidro (1,3 L), sob proteção de N2, foi aquecida em refluxo seguido pela adição por goteja- mento de 10 M H3B-SMe2 em THF (70 ml, 0,7 mol). A mistura foi agitada em refluxo durante a noite. A reação foi extinta com MeOH (500 ml) e o solvente removido in vácuo, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna para fornecer 3-((R)-(2-aminoetóxi)(3-cloro-5-fluorofenil)metil)piperidina-1-carboxi- lato de (R)-terc-butila (24 g, 0,062 mol).
Etapa 5. 3-((R)-(3-cloro-5-fluorofenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi)metin Pi- peridina-1-carboxilato de (R)-terc-butila Uma solução de 3-((R)-(2-aminoetóxi)(3-cloro-5-fluorofenil)metil)
piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (24 g, 0,062 mol) em CH2CI2 seco (300 ml) e Et3N (31,4 g, 43 ml) foi esfriada para 0°C em banho de água ge- lada, uma solução de cloroformiato de metila (11,8 g, 0,124 mol) em CH2CI2 seco (100 ml) foi adicionada por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi agitada durante 1 a 2 h em 0 a 5°C. Água (200 ml) foi adicionada para extinguir a reação. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 χ 100 ml), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 10 % ácido cítri- co (2 χ 80 ml) e salmoura, depois secadas por Na2SO4, filtradas e concen- tradas para fornecer o produto bruto, que foi purificado por cromatografia de coluna para fornecer 3-((R)-(3-cloro-5-fluorofenil)(2-(metoxicarbonilamino) etóxi) metil)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila (19 g, 0,043 mol). 1H RMN (CD3OD) δ 7,17(s, 1H), 7,16 - 7,08 (m, 1H), 7,07 - 7,00 (m, 1H), 4,20 - 4,00 (m, 2H), 3,90 - 3,78 (d, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,28 - 3,20 (m, 2H), 2,92 - 2,68 (dd, 2H), 1,52 - 1,74 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,35 -1,10 (m, 3H). EXEMPLO 5
3-((R)-(3-fluorofenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi)metil)piperidina-1-carboxi- lato de (R)-terc-butila Etapa 1. 3-(3-fluorobenzoil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila
Uma solução de 1-bromo-3-flúor-benzeno (57,7 g, 0,33 mol) em THF anidro (480 ml) foi adicionado por gotejamento a Mg (10,6 g, 0,44 mol) em tr sob nitrogênio. A mistura foi agitada em 50 a 60°C durante 1 h. O rea- gente de Grignard resultante foi usado para a próxima etapa. O reagente de Grignard foi adicionado por gotejamento a uma solução de 3-(metóxi (metil) carbamoil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (60 g, 0,22 mol) em THF anidro (600 ml) a -78°C sob nitrogênio. Após a adição, a mistura foi deixada se agitar em tr durante 1,5 h. A mistura foi extinta com solução saturada de NH4CI (300 ml) e extraída com EtOAc (3 χ 200 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas por NaaSO4 e concen- tradas in vácuo para fornecer 3-(3-fluorobenzoil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila bruto (67,5 g, 100 %), que foi usado imediatamente na próxi- ma etapa sem purificação. Etapa 2. 3-((RH3-fluorofenin(hidróxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)- terc-butila
A uma solução de 1 M R-CBS-oxazaborolidina em tolueno (33 ml, 33 mmols, 0,15 eq) e 10 M BH3 em THF (22 ml, 0,22 mol, 1,0 eq) a -15°C sob nitrogênio foi adicionado por gotejamento uma solução de 3-(3- fluorobenzoil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (67,5 g, 0,22 mol) em THF anidro (300 ml). Após a adição, a mistura de reação foi agitada durante 1 h em tr. Metanol (200 ml) foi adicionado por gotejamento cuidadosamente a 0°C. O solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi dissolvido em EtOAc até que o álcool foi realmente dissolvido (ao redor de 5 ml/1 g), o solvente foi removido no evaporador rota- tivo até que alguns cristais apareceram. À solução acima foi adicionado éter de petróleo (cerca de 300 ml) sob agitação, que foi deixada se agitar em tr durante 2 h e depois filtrada, os cristais foram lavados com éter de petróleo e recristalizados para proporcionar o 3-((R)-(3-fluorofenil)(hidróxi)metil) piperi- dina-1-carboxilato de (R)-terc-butila puro (26 g, 39 %).
Etapa 3. 3-((RH2-etóxi-2-oxoetóxi)(3-fluorofenil)metinpiperidina-1-carboxila- to de (RHerc-butila
A uma suspensão de NaH (4,8 g, 120 mmols) em THF (400 ml) em 0 a 5°C foi adicionado por gotejamento uma solução de 3-((R)-(2-etóxi-2- oxoetóxi)(3-fluorofenil)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (30,9 g, 100 mmols) em THF anidro (100 ml), a mistura de reação foi agitada durante 1 h em tr. Uma solução de bromoacetato de etila (20,04 g, 13,40 ml, 120 mmols) em THF anidro (100 ml) foi adicionada por gotejamento na mistura acima, e a reação foi aquecida em refluxo durante 3 a 5 h. A mistura de rea- ção foi despejada em NH4CI aquoso saturado, depois extraída com EtOAc (3 χ 100 ml). A camada orgânica foi lavada com água (3 χ 100 ml) e salmoura, secada por Na2S04, filtrada e concentrada in vácuo para proporcionar 3- ((R)-(2-etóxi-2-oxoetóxi)(3-fluorofenil)metil)piperidina-1 -carboxilato de (R)- terc-butila bruto (29,88g 76 %), que foi usado para a próxima etapa sem purificação.
Etapa 4. 3-((R)-(3-fluorofenil)(2-hidroxietóxi)metiDpiperidina-1 -carboxilato de (RHerc-butila
A uma solução de 3-((R)-(2-etóxi-2-oxoetóxi)(3-fluorofenil)metil) piperidina-1-carboxilato (29,88 g, 75,9 mmols) em MeOH (300 ml) foi adicio- nado NaBH4 (23 g, 605,2 mmols) em porções enquanto a temperatura esta- va mais baixa do que 40°C. Após a adição, a mistura foi agitada em tr duran- te 2 a 3 h. O solvente foi removido in vácuo para fornecer um resíduo que foi dividido entre água e EtOAc. A camada orgânica foi lavada com H2O e sal- moura, secada por Na2SO4, filtrada e concentrada in vácuo. O resíduo foi purificado em cromatografia em sílica-gel para proporcionar 3-((R)-(3- fluorofenil)(2-hidroxietóxi)metil) piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (11 g, 41%).
Etapa 5. 3-((RH3-fluorofenil)(2-(metilsulfonilóxi)etóxi)metinpÍDeridina-1-car- boxilato e (R)-terc-butila
A uma solução de 3-((R)-(3-fluorofenil)(2-hidroxietóxi)metil) pipe- ridina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (11 g, 31,16 mmols) em CH2CI2 seco (140 ml) foi adicionado Et3N (12,60 g, 16,68 ml, 124,65 mmols, 4 eq) em -5 a O0C. Depois uma solução de MsCI (7,1 g, 4,72 ml, 62,32 mmols, 2 eq) em CH2CI2 seco (40 ml) foi adicionada por gotejamento na mesma temperatura. Após a adição, foi deixada aquecer para a tr gradualmente. Água (100 ml) foi adicionada. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 χ 80 ml), as cama- das orgânicas combinadas foram lavadas com 10 % ácido cítrico, NaHCO3 sat. e salmoura, depois secadas por Na2SO4, filtradas e concentradas para fornecer 3-((R)-(3-fluorofenil)(2-(metilsulfonilóxi)etóxi)metil)piperidina-1 -car- boxilato de (R)-terc-butila (13,8 g), que foi usado na próxima etapa sem puri- ficação.
Etapa 6. 3-((R)-(2-azidoetóxn(3-fluorofeninmetil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila
3-((R)-(3-fluorofenil)(2-(metilsulfonilóxi)etóxi)metil) piperidina-1 -
carboxilato de (R)-terc-butila (13,8 g, 32 mmols) foi dissolvido em DMF ani- dro (150 ml), NaN3 sólido (6,1 g, 96 mmols, 3 eq) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida para 80 ° durante a noite. A mistura de reação foi esfriada à tr e depois foi adicionada com EtOAc (500 ml), a fase orgânica foi lavada com água (3 χ 100 ml) e salmoura (2 χ 80 ml), secada por Na2SO4 e concentrada in vácuo para fornecer 3-((R)-(2-azidoetóxi)(3-fluorofenil) me- til)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila bruto (12 g), que foi usado na próxima etapa sem outra purificação.
Etapa 7. 3-((RH2-aminoetóxi)(3-fluorofenil)metinpiDeridina-1-carboxilato de (R)-terc-butila
Uma suspensão de 3-((R)-(2-azidoetóxi)(3-fluorofenil)metil) pipe- ridina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (12 g, 31,75 mmols) e Pd(OH)2/C (1,2 g) em MeOH (240 ml) foi agitada sob H2 durante 1 h. A mistura foi filtrada e e- vaporada sob pressão reduzida para fornecer o 3-((R)-(2- aminoetóxi)(3- fluorofenil)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila desejado (10 g). Etapa 8. 3-((RV(3-fluorofenin(2-(metoxicarbonilamino)etóxi)metil^ piperidina- 1-carboxilato de (RHerc-butila
ridina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (10 g, 28,41 mmols) e DMAP (1,8 g, 14,21 mmols, 0,5 eq) em CH2CI2 seco (150 ml), Et3N (8,62 g, 11,42 ml, 85,23 mmols) foi adicionado. A mistura resultante foi esfriada para 0 a 5°C sob ba- nho de água gelada, uma solução de cloroformiato de metila (10,95 ml, 142,05 mmols, 5 eq) em CH2CI2 seco (60 ml) foi adicionado por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi agitada durante 1 a 2 h em 0 a 5°C. Água (80 ml) foi adicionada para extinguir a reação. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 χ 50 ml), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 10 % ácido cítrico (2 χ 80 ml) e salmoura, depois secadas por Na2SO4, filtradas e concentradas no produto bruto, que foi purificado por síli- ca-gel para proporcionar 3-((R)-(3-fluorofenil)(2-(metoxicarbonilamino) etó- xi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (11,3 g, 97%). EXEMPLO 6
3-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi)metil) piperidina-1 - carboxilato de (R)-terc-butila
A uma solução de 3-((R)-(2-aminoetóxi)(3-fluorofenil)metil) pipe-
Μ*α. VtoO-"*^
NUoo Hi ^ H2M Pd(OH)2 -H Etapa 1. 5-cloro-2-metilbenzenamina
Um frasco de 2 L foi carregado com a solução de 4-cloro-1 -metil- 2-nitrobenzeno (60 g, 0,35 mol) em MeOH (1 L), Ni Raney foi adicionado, o ar no frasco foi substituído três vezes com H2, a mistura foi agitada durante 3 h em tr. A solução foi filtrada e concentrada. O resíduo foi dissolvido em CH2CI2 (500 ml), e a solução foi lavada com salmoura, secada por Na2SO4. A remoção do solvente forneceu 5-cloro-2-metilbenzenamina (50 g, 0,35 mol). 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 7,02 - 6,93 (d, 2H), 6,70 - 6,60 (d, 2H), 3,67 (s, 2H), 2,14 (s, 3H). Etapa 2. 2-bromo-4-cloro-1-metilbenzeno
5-cloro-2-metilbenzenamina (50 g, 0,355 mol) foi dissolvido em solução de HBr (1,5 M, 100 ml) e esfriado para 0°C, uma solução de NaNO2 (27,6 g, 0,4 mol) em água (200 ml) foi adicionada por gotejamento. Após a adição, a mistura foi agitada durante 1 h. Em um outro frasco CuBr (30 g, 0,21 mol) foi adicionado à solução de HBr (1,5 M, 30 ml) e aquecido para 60°C, depois a mistura foi adicionada à solução acima. A mistura foi aqueci- da em refluxo durante 1 h depois esfriada para a tr. A reação foi extinta com água (500 ml), a camada aquosa foi extraída 3 vezes com CH2CI2, secada por Na2SO4, remoção do solvente e purificação por cromatografia de coluna proporcionou 2-bromo-4-cloro-1-metilbenzeno (53 g, 0,26 mol). 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 7,53 (s, 1H), 7,20 - 7,10 (m, 2H), 2,36 (s, 3H). Etapa 3. 3-(5-cloro-2-metilbenzoil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila
A uma solução de 2-bromo-4-cloro-1-metilbenzeno (53 g, 0,26 mol) em THF anidro (600 ml) a -78°C sob nitrogênio foi adicionado por gote- jamento uma solução de 2,5 M n-BuLi em hexano (103 ml, 0,26 mol). Após agitação durante 1 h a -78°C, uma solução do 3-(metóxi(metil) carbamo- il)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (67 g, 0,246 mol) em THF anidro (300 ml) foi adicionada por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi deixada aquecer para a tr e agitada durante 2 h. A mistura foi extinta com solução saturada de NH4CI (500 ml) e extraída com EtOAc (3 χ 400 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas por Na2S04 e concentradas in vácuo para fornecer 3-(5-cloro-2-metilbenzoil) pi- peridina-1-carboxilato de (R)-terc-butila bruto (86 g), que foi usado imedia- tamente na próxima etapa sem purificação.
Etapa 4. 3-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)(hidróxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (RHerc-butila
Uma mistura de 10 M BH3-Me2S em THF (25,4 ml, 0,254 mol) e 1 M R-CBS-oxazaborolidina em tolueno (38 ml, 0,038 mol) foram dissolvidos em 100 ml de THF anidro e esfriados para -15°C. 3-(5-cloro-2-metilbenzoil) piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila em 200 ml de THF anidro foi adi- cionado por gotejamento à solução acima e agitado em -15°C durante 2 h. A reação foi extinta com metanol (300 ml). O solvente foi removido sob pres- são reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna para fornecer 3-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)(hidróxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (32 g), que continha isômero a 30 %.
Etapa 5. 3-((RH5-cloro-2-metilfenil)(2-etóxi-2-oxoetóxi)metil)piperidina-1 -car- boxilato de (RHerc-butila
A uma suspensão de NaH (5,64 g, 0,141 mol) no solvente mistu- rado de DMF (70 ml) e THF (70 ml) a -25°C foi adicionado por gotejamento uma solução de 3-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)(hidróxi)metil)piperidina-1-carbo- xilato de (R)-terc-butila (16 g, 47 mmols) em THF anidro (100 ml), a mistura de reação foi agitada durante 1 h em tr. Uma solução de bromoacetato de etila (15,6 g, 94 mmols) em THF anidro (70 ml) foi adicionada por gotejamen- to à mistura acima em -10 a -5 °C. Após a adição, a mistura de reação foi agitada durante 2 a 3 h em tr. A reação foi extinta com solução saturada de NH4CI (100 ml) e EtOAc (500 ml) foi adicionado. A camada orgânica foi la- vada com água (5 χ 50 ml) e salmoura, secada por Na2SO4, filtrada e con- centrada in vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna para proporcionar 3-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)(2-etóxi-2-oxoetóxi)metil)piperidina- 1-carboxilato de (R)-terc-butila (8 g, 18,8 mmols).
Etapa 6. 3-((R)-(5-cloro-2-metilfenilK2-hidroxietóxi)metinpiperidina-1 -carbo- xilato de (R)-terc-butila
A uma solução 3-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)(2-etóxi-2-oxoetóxi) metil)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila (8g, 18,8 mmols) em MeOH (300 ml) foi adicionado NaBH4 (5,6 g, 0,15 mol) em porções enquanto a temperatura estava mais baixa do que 40°C. Após a adição, a mistura foi agitada durante a noite. O solvente foi removido in vácuo no resíduo, que foi dividido entre água e EtOAc. A camada orgânica foi lavada com H2O e sal- moura, secada por Na2SO4 e evaporada para fornecer 3-((R)-(5-cloro-2- metilfenil)(2-hidroxietóxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila bruto (7 g), que foi usado na próxima etapa sem purificação.
Etapa 7. 3-((R)-(5-cloro-2-metilfenilK2-(metilsulfonilóxi)etóxi)metil) piperidina- 1-carboxilato de (R)-terc-butila
A uma solução de 3-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)(2-hidroxietóxi) me- til)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (7 g, 18,3 mmols) em CH2CI2 seco (100 ml) foi adicionado Et3N (54 g, 10 ml, 0,73 mmol) em -5 a 0°C. De- pois uma solução de MsCI (4,2 g, 36,5 mmols) em CH2CI2 seco (50 ml) foi adicionada por gotejamento na mesma temperatura. Após a adição, foi dei- xada aquecer para tr gradualmente. A mistura de reação foi lavada com so- lução a 10% de ácido cítrico (30 ml), NaHCO3 e salmoura, depois secada por Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer 3-((R)-(5-cloro-2-metilfenil) (2-(metilsulfonilóxi)etóxi)metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (8,4 g), que foi usado na próxima etapa sem purificação.
Etapa 8. 3-((R)-(2-azidoetóxi)(5-cloro-2-metilfenil)metil)piperidina-1 -carboxi- lato de (R)-terc-butila 3-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)(2-(metilsulfonilóxi)etóxi)metil) piperi-
dina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (8,4 g, 18,3 mmols) foi dissolvido em DMF anidro (150 ml), NaN3 sólido (3,56 g, 54,8 mmols) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida para 60°C durante a noite. A mistura de rea- ção foi esfriada para a tr e diluída com EtOAc (500 ml), a fase orgânica foi lavada com água (5 χ 50 ml) e salmoura (100 ml), secada por Na2SO4 e concentrada in vácuo para fornecer 3-((R)-(2-azidoetóxi)(5-cloro-2-metilfenil) metil)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila (7 g). Etapa 9. 3-((RH2-aminoetóxi)(5-cloro-2-metilfenil^metil)piperidina-1 -carboxi- Iato de (R)-terc-butila
3-((R)-(2-azidoetóxi)(5-cloro-2-metilfenil)metil)piperidina-1-carbo- xilato de (R)-terc-butila (7 g, 17,1 mmols) foi dissolvido em EtOAc (300 ml), 0,8 g de Pd(OH)2 foi adicionado e o ar no frasco foi substituído 3 vezes com H2, a reação foi agitada em tr durante 3 h. A solução foi filtrada e concentra- da para fornecer 3-((RH2-aminoetóxi)(5-cloro-2-metilfenil)metil)piperidina-1- carboxilato de (R)-terc-butila (6,2 g), que foi usado na próxima etapa sem outra purificação.
Etapa 10. 3-((RH5-cloro-2-metilfenin(2-(metoxicarbonilamino)etóxi) metil) piperidina-1-carboxilato de (RVterc-butila
A uma solução de 3-((R)-(2-aminoetóxi)(5-cloro-2-metilfenil) me- til)piperidina-1 -carboxilato de (R)-terc-butila (6,2 g, 16,2 mmols) e DMAP (0,2 g, 1,62 mmols) em CH2CI2 seco (70 ml), Et3N (8 g, 81 mmols) foi adicionado.
A mistura resultante foi esfriada para 0 a 5°C em banho de água gelada, uma solução de cloroformiato de metila (3,1 g, 32,4 mmols) em CH2CI2 seco (30 ml) foi adicionada por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi agitada durante 1 a 2 h em 0 a 5°C. A reação foi extinta com água. A ca- mada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 χ 30 ml), as camadas orgânicas
combinadas foram lavadas com salmoura, depois secadas por Na2SO4, fil- tradas e concentradas para fornecer o produto bruto, que foi em primeiro lugar purificado por cromatografia de coluna e depois por HPLC preparativa para fornecer 3-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi) me- til)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (1,5g). 1H RMN (CD3OD, 400
MHz) δ 7,30 (s, 1H), 7,20 - 7,10 (d, 2H), 4,81 (s, 1H), 4,46 - 4,30 (d, 1H), 4,29 - 4,15 (d, 1H), 3,95 - 3,83 (d, 1H), 3,62 (s, 3H), 3,30 (s, 4H), 2,90 - 2,65 (dd, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,70 (s, 1H), 1,59 (s, 1H), 1,41 (s, 9H), 1,35 - 1,20 (m, 3H).
EXEMPLO 7
2,2-dimetil-4-(((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)metil)oxazolidina H U ffiocVO í? 9 NaBH4 S (MeO)aC(CHi)a
NH2 Nhffloc NHBOC
O
O ° HNaO d O O
Az^0 -OH «Λ^-γ^ N/Y^VS» -^bu
— boX~£- X0J ^
vO-
Tsa \ n^^-^ots
— XoJ ϊ " ^xçr
Γ Bn COOIBu
COOtBu
Boc
N^-^-^oxs NaH
r
CHaOH
Etapa 1. ácido (S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-5-metóxi-5-oxopentanóico
A um frasco de fundo redondo, Et3N (303 g, 3 mol) foi adiciona- do por gotejamento uma solução agitada de Boc2O (261,6 g, 1,2 mol) e éster 5-metílico de ácido 2-amino-pentanodióico (161 g, 1 mol) em água (800 ml) e dioxano (800 ml). Após 18 h a solução foi extraída com éter de petróleo (2 χ 1000 ml) e a fase aquosa foi esfriada em gelo e cuidadosamente acidificada para pH 3 mediante a adição lenta de solução a 10 % de ácido cítrico. O ure- tano foi depois extraído em EtOAc (3 χ 1000 ml) e os extratos combinados foram lavados com salmoura, depois secados (Na2SO4), filtrados e concen- trados sob pressão reduzida para fornecer ácido (S)-2-(terc-buto- xicarbonilamino)-5-metóxi-5-oxopentanóico (238 g, 91,2 %), que foi usado sem mais purificação.
Etapa 2. 4-(terc-butoxicarboni)amino)-5-hidroxipentanoato de (S)-metila
A uma solução agitada de ácido (S)-2-(terc-butoxicar- bonilamino)-5-metóxi-5-oxopentanóico (35,2 g,0,135 mol) em THF (500 ml) a -10°C foi adicionado N-metilmorfolino (15 ml, 0,135 mol) seguido por cloro- formiato de etila (14,72 g, 0,135 mol). Após 10 min, NaBH4 (15,37 g, 0,405 mol) foi adicionado de uma vez. MeOH (1200 ml) foi depois adicionado por gotejamento à mistura durante um período de 20 min a 0°C. A solução foi agitada durante um adicionai de 20 min e depois neutralizada com IM KH- SO4. 0 solvente orgânico foi removido e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 χ 500 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas consecu- tivamente com 1M KHSO4 (300 ml), H2O (300 ml), 5% NaHCO3 aquoso (300 ml), e secadas (Na2SO4). O solvente foi evaporado para fornecer um resíduo, que foi purificado por cromatografia de coluna para fornecer o 4-(terc- butoxicarbonilamino)-5-hidroxipentanoato de (S)-metila desejado (24 g, 72%).
Etapa 3. 4-(3-metóxi-3-oxopropil)-2.2-dimetiloxazolidina-3- carboxilato de (S)-terc-butila
4-(terc-butoxicarbonilamino)-5-hidroxipentanoato de (S)-metila
(24 g, 97,2 mmols) e éter isopropenil metílico (88,8 g, 854,6 mmols) foram dissolvidos em acetona (2000 ml) e BF3-Et2O (0,82 ml, 5,84 mmols) foi adi- cionado em tr. A mistura foi agitada durante 1 h em tr. A reação foi extinta mediante a adição de Et3N (11,6 ml). A solução de reação foi lavada com
NaHCO3 saturado aquoso (200 ml ) e evaporado, e 4-(3-metóxi-3-oxopropil)- 2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (25,1 g, 90 %) foi obti- do como um óleo, que foi usado na próxima etapa sem mais purificação. Etapa 4. ácido (S)-3-(3-terc-butoxicarbonil)-2.2-dimetiloxazolidin-4-il) propa- nóico
Uma solução aquosa de hidróxido de sódio (195 ml, 4,0 M em
H2O, 0,261 mol, 3,0 eq) foi adicionada a uma solução de 4-(3-metóxi-3- oxopropil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (25,1 g, 0,087 mol), e a mistura de reação turva resultante foi agitada em 23°C du- rante 3,5 h. A mistura foi concentradas sob pressão reduzida em -50 ml de
volume e depois foi dividida entre 0,5 M HCI (360 ml) e EtOAc (2 χ 360 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secadas por Na2SO4 e foram fil- tradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer ácido (S)-3-(3-(terc-butoxicarbonil)-2,2-dimetiloxazolidin-4-il)propanóico (21,6 g, 91%), que foi usado sem mais purificação.
Etapa 5. 2.2-dimetil-4-(3-((RV4-metil-2-oxooxazolidin-3-il)-3-oxopropil) oxa- zolidina-3-carboxilato de (SHerc-butila
Um frasco de 2000 ml foi carregado com ácido (S)-3-(3-(terc- butoxicarbonil)-2,2-dimetiloxazolidin-4-il)propanóico (21,6 g, 79 mmols) e 750 ml de THF seco. A solução foi esfriada para 0°C, depois trietilamina (23,94 g, 237 mmols, 3,0 equiv) e cloreto de pivaloíla (9,76 ml, 79 mmols, 1,0 equiv) foram seqüencialmente adicionados. A solução foi agitada durante 4 h a 0°C. Após este tempo (R)-4-benzil-2-oxalozolidinona (13,26 g, 75,2 mmols, 0,95 equiv) e LiCI seco (3,68 g, 86,4 mmols, 1,1 equiv) foram adicionados e a reação foi deixada se agitar durante 13 h com aquecimento concomitante na temperatura ambiente. Após este tempo 560 ml de 0,5 M HCI foram adi- cionados, a mistura foi transferida para um funil separador e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 χ 370 ml), e as camadas orgânicas combinadas lavadas com 10 % K2CO3 (2 χ 370 ml ), e salmoura (2 χ 370 ml ), depois secadas por Na2SO4, e evaporadas. O ma- terial bruto foi purificado por cromatografia cintilante, eluindo com 0 a 29 % EtOAc em hexanos. Isto proporcionou 26,3g (81 %) de 2,2-dimetil-4-(3-((R)- 4-metil-2-oxooxazolidin-3-il)-3-oxopropil) oxazolidina-3-carboxilato de (S)- terc-butila como um xarope transparente.
Etapa 6. 4-((R)-5-terc-butóxi-2-((R)-4-metil-2-oxooxazolidina-3-carbonil)-5- oxopentil)-2.2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila
Em O0C, 1,0 M TiCI4 em solução de CH2CI2 (8,55 ml, 0,7 eq) foi adicionado ao CH2CI2 (100 ml) seguido pela adição de 1,0 M TiCI(Oi-Pr)3 em solução de hexanos (4,28 ml, 0,35 eq) e agitado 5 min, DIPEA (2,87 ml, 1,35 eq) foi adicionado e agitado 15 min. Uma solução de 2,2-dimetil-4-(3-((R)-4- metil-2-oxooxazolidin-3-il)-3-oxopropil)oxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc- butila (5,28 g, 12,22 mmols) em CH2CI2 (50 ml) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada 1 h em 0°C. À solução, t-butilacrilato (2,22 ml, 1,25 eq) foi adicionado e a mistura foi deixada agitar durante 48 h com aquecimento concomitante para a tr. A mistura foi concentrada, dividida entre EtOAc (300 ml) e 1% solução de HCI (100 ml). A camada orgânica foi lavada com solu- ção de NaHCO3 sat. (60 ml), salmoura (60 ml), secada por Na2SO4. Após filtração e concentração, o resíduo foi purificado por ISCO (120 g coluna, gradiente 0-35% EtOAc em Hexanos) para proporcionar 4,12 g (60 %) de 4- ((R)-5-terc-butóxi-2-((R)-4-metil-2-oxooxazolidina-3-carbonil)-5-oxopentil)-
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30 2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila como um sólido amare- lado. MS ESI +ve m/z 583 (M + Na).
Etapa 7. 4-((R)-5-terc-butóxi-2-(hidroximetil)-5-oxopentil)-2.2-dimetiloxazoli- dina-3-carboxilato de (SVterc-butila 4-((R)-5-terc-butóxi-2-((R)-4-metil-2-oxooxazolidina-3-carbonil)-5-
oxopentil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (4,12 g, 7,36 mmols) foi dissolvido em 4:1 THF e metanol (200 ml) e esfriado para 0°C. Boroidrato de sódio (557 mg, 2 eq) foi adicionado lentamente. Após 10 min., a mistura foi aquecida para a tr lentamente. A mistura foi agitada 2 h em tr. A mistura foi concentrada, dissolvida novamente em EtOAc (300 ml), lavada com 1 % solução de HCI (100 ml), salmoura (60 ml), e secada por Na2SO4. Após filtração e concentração, o resíduo foi purificado por ISCO (40 g colu- na, gradiente 10-65 % EtOAc em Hexanos, controle de TLC com cepa de Ninhydrin) para proporcionar 2,86 g de 4-((R)-5-terc-butóxi-2-(hidroximetil)-5- oxopentil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila como um sólido branco. MS ESI +m/v 410 (M + Na).
Etapa 8. 4-((R)-5-terc-butóxi-5-oxo-2-(tosiloximetinpentil)-2,2-dimetiloxazoli- dina-3-carboxilato de (SVterc-butila
A uma solução de 4-((R)-5-terc-butóxi-2-(hidroximetil)-5- oxopentil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (244 mg, 0,63 mmol) em DCM anidro (6 ml) foi adicionado piridina (2 ml) e quantidade catalítica de DMAP, a solução foi esfriada para 0°C. Cloreto tósico (360 mg, 1,88 mmol) foi adicionado e agitado em tr durante a noite. A mistura de rea- ção foi diluída com EtOAc (40 ml) e lavada com 1 N HCI (2x, 50 ml + 20 ml), seguido por H2O, NaHCO3 aq., salmoura, secada por Na2SO4, e filtrada. A- pós a evaporação do solvente, o resíduo foi purificado em coluna de sílica- gel, eluído com 0 a 20 % EtOAc em hexano para proporcionar 4-((R)-5-terc- butóxi-5-oxo-2-(tosiloximetil)pentil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (317 mg, rendimento 93 %). Etapa 9. 4-((R)-5-hidróxi-2-(tosiloximetil)pentil)-2.2-dimetiloxazolidina-3-car- boxilato de (SHerc-butila
A uma solução de 4-((R)-5-terc-butóxi-5-oxo-2-(tosiloximetil) pentil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (317 mg, 0,58 mmol) em DCM anidro (8 ml) a -78°C sob N2 foi adicionado DiBAIH (1 M em hexano, 1,75 ml, 1,75 mmol) por gotejamento. Após a adição, a mistura de reação foi agitada durante mais 30 min. A reação foi extinta com MeOH (2 ml), seguido por 50 % solução aq de sal de Rochelle e agitada 2 h. A solu- ção resultante foi extraída com DCM (3 χ 20 ml), as fases orgânicas combi- nadas foram concentradas e dissolvidas em THF/MeOH (10 ml, 4/1, v/v), e esfriadas para O0C, NaBH4 (11 mg, 0,29 mmol) foi adicionado e agitado nes- ta temperatura durante 30 min. A reação foi extinta por NH4CI aquoso, de- pois extraída com EtOAc (3 χ 20 ml), as fases orgânicas combinadas foram lavadas com H2O, salmoura, e secadas por Na2SO4, e filtradas, e concentra- das para fornecer o produto bruto 4-((R)-5-hidróxi-2-(tosiloximetil)pentil)-2,2- dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (255 mg, 92 %). Foi utiliza- do sem outra purificação. Etapa 10. 2,2-dimetil-4-(((RHetraidro-2H-piran-3-inmetinoxazolidina-3- carboxilato de (S)-terc-butila
A uma solução de 4-((R)-5-hidróxi-2-(tosiloximetil)pentil)-2,2- dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (254 mg, 0,54 mmol) em DMF anidro (8 ml) a O0C sob N2 foi adicionado NaH (43 mg, 1,08 mmol). A- pós agitar nesta temperatura durante 1 hr, a reação foi extinta com NH4CI aq. e depois evaporada para secura. O resíduo foi dissolvido em EtOAc e H2O, a fase aquosa separada foi extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com H2O, salmoura, e secadas por Na2SO4, fil- tradas, e evaporadas. O resíduo foi purificado em coluna de sílica-gel para proporcionar 2,2-dimetil-4-(((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)metil)oxazolidina-3- carboxilato de (S)-terc-butila (136 mg, 84 %). EXEMPLO 8
2,2-dimetil-4-(((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)metil)oxazolidina OssO-
N
Boc
COOB
LHMDS
iA„Acooa ——— -v
(MeO)2C(CH3)a
N
Boc
HO
xOH NHBoc
HO'
P tesa
TBSO
O BH3DMS- HO-
TBSOj ^^ Sr" 8ocnTC
Etapa 1. 2-etil 4-alil-5-oxopirrolidina-1.2-dicarboxilato de (2S,4R)-1-terc-butila A uma solução de HMDS em THF anidro (200 ml) foi adicionado por gotejamento 2,5 M M-BuLi em hexano (130 ml) e a mistura foi agitada em -78°C durante 1 h. A uma solução de 5-oxopirrolidina-1,2-dicarboxilato de (S)-l-terc-butil 2-etila (80 g, 0,311 mol) em THF anidro (1600 ml) agitada em -78°C foi adicionado hexametildisilazido de lítio em THF. Após a mistura de reação ter sido agitada em -78°C durante 1 hr, 3-bromopropeno (38,47 g, 0,318 mol) em THF (200 ml) foi adicionado e a agitação continuou durante 2 h. A mistura de reação foi extinta com solução saturada de cloreto de amô- nio (600 ml) em -78°C e extraída com EtOAc (3 χ 500 ml) . As camadas or- gânicas combinadas foram secadas por Na2SO4, filtradas e evaporadas para secura. O produto bruto foi separado por cromatografia de coluna para pro- porcionar 4-alil-5-oxopirrolidina-1,2-dicarboxilato de (25,4R)-1-terc-butil 2- etila (15 g, 16 %).
Etapa 2. (2S.4R)-1-hidróxi-4-(hidroximetil)hept-6-en-2-ilcarbamato de terc- butila
A uma solução de 4-alil-5-oxopirrolidina-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-1 -terc-butil 2-etila (30 g, 0,1 mol) em Me0H/H20 (700/70 ml) foi adi- cionado NaBH4 (25 g, 0,66 mol), a mistura resultante foi agitada 1 h em tr e extinta com NH4CI aq. sat. (300 ml). O solvente orgânico foi removido sob vácuo e extraído com EtOAc (3 χ 250 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (250 ml) e secadas por Na2SO4 anidro, filtradas e evaporadas para proporcionar (2S,4R)-1-hidróxi-4-(hidroximetil)hept-6-en- 2-ilcarbamato de terc-butila (22 g, 85 %). Foi utilizado na próxima etapa sem outra purificação.
Etapa 3. 4-((R)-2-(hidroximetil)pent-4-enil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carbo- xilato de (S)-terc-butila A uma solução de (2S,4R)-1-hidróxi-4-(hidroximetil)hept-6-en-2-
ilcarbamato de terc-butila (6,8 g, 26,2 mmols) em acetona (150 ml), PTSA (0,45 g, 2,62 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi esfriada para - 20°C seguido pela adição de 2,2-dimetoxipropano (4,1 g, 39,4 mmols). A mistura resultante foi agitada e deixada aquecer para a tr durante 1 h. TEA (0,5 ml) foi depois adicionado e agitado durante mais 5 min. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em Et2O (300 ml), lavado com 1 N HCI (80 ml), NaHCO3 sat. aq. (80 ml), salmoura (80 ml) su- cessivamente, e secado, filtrado e concentrado sob vácuo para fornecer 4- ((R)-2-(hidroximetil)pent-4-enil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)- terc-butila bruto (7,5 g, 96 %). Foi usado sem mais purificação.
Etapa 4. 4-((R)-2-((terc-butildimetilsililóxi)metil)pent-4-enil)-2,2-dimetiloxazo- lidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila
A uma solução de 4-((R)-2-(hidroximetil)pent-4-enil)-2,2- dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (11,5 g, 38,4 mmols), imi- d azo I (7,84 g, 115,2 mmols) e DMAP (234 mg, 1,92 mmol) em CH2CI2 (200 ml) foi adicionado uma solução de TBSCI (8,68 g, 57,6 mmols) em CH2CI2 (100 ml) por gotejamento. A mistura de reação foi agitada em tr durante a noite. A reação foi lavada com água (100 ml) e a camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 χ 100 ml), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (70 ml), depois secadas por Na2SO4, filtradas e concentradas para fornecer o produto bruto, que foi purificado por cromatografia de coluna para proporcionar 4-((R)-2-((terc-butildimetilsililóxi)metil)pent-4-enil)-2,2- dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (9 g, 57 %). Etapa 5. 4-((R)-2-((terc-butildimetilsililóxi)metin-5-hidroxipentil)-2,2-dimetilo- xazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila
Uma solução de 4-((R)-2-((terc-butildimetilsililóxi)metil)pent-4- enil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (26 g, 63 mmols) em THF (200 ml) foi esfriada em um banho de gelo, seguido pela adição por gotejamento de 10 M BH3-SMe2 (6,3 ml). Após agitação durante 5 hr, 10 % solução de NaOH (32 ml) seguido por 30 % H2O2 (32 ml) foram adicionados cuidadosamente. A mistura de reação foi agitada em tr durante 16 h. A mis- tura de reação foi diluída com éter dietílico (500 ml) e a camada aquosa foi extraída com éter dietílico (3 χ 250 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas por Na2SO4, filtradas e concentradas para fornecer o produto bruto, que foi purificado por cromatografia de coluna para proporcionar 4-((R)-2-((terc-butildimetilsililóxi)metil)-5-hidroxipentil)-2,2- dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (19,6 g, 72 %).
Etapa 6. 4-((R)-2-((terc-butildimetilsililóxi)metin-5-(metilsulfonilóxi)pentil)-2,2- dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila
A uma solução de 4-((R)-2-((terc-butildimetilsililóxi)metil)-5- hidroxipentil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (32 g, 74,2 mmols) e Et3N (22,5 g, 226 mmols) em CH2CI2 (400 ml) foi adicionado uma solução de MsCI (10TTgT89 mmoís) em CH2CI2 (50~ml) em 0 a 5°C. Após a adição, a mistura de reação foi deixada aquecer para a tr e agitar durante 1 h. A reação foi lavada com água (200 ml) e a camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 χ 150 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 10 % ácido cítrico (60 ml), NaHCO3 sat. (60 ml) e salmoura (100 ml), depois secadas por Na2SO4, filtradas e concentradas para fornecer 4-((R)-2-((terc-butildimetilsililóxi)metil)-5-(metilsulfonilóxi)pentil)-2,2-dimetilo- xazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (37,7 g, 100 %), que foi usado na próxima etapa sem purificação.
Etapa 7. 2.2-dimetil-4-(((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)metil)oxazolidina-3-carbo- xilato de (S)-terc-butila
A uma solução de 4-((R)-2-((terc-butildimetilsililóxi)metil)-5- (metilsulfonilóxi)pentil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (37,7 g, 74,2 mmols) em THF (1000 ml) foi adicionado fluoreto hidrato de tetraetilamônio (41 g, 185,5 mmols) em porções. A mistura de reação foi agi- tada sob refluxo durante a noite. A mistura foi diluída com EtOAc (1000 ml), lavada com água (300 ml) e salmoura (500 ml). A fase orgânica foi secada
20
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30 por Na2SO4, filtrada e concentrada in vácuo para fornecer o produto bruto, que foi purificado por cromatografia de coluna para proporcionar 2,2-dimetil- 4-(((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)metil)oxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-buti- Ia (12,0 g, 54%). EXEMPLO 9
(S)-1 -amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-ilcarbamato de terc-butila
r^V^Y^o P-TSA f^r^y^OH TsCI, pyr. {—V^j^OTs 1^H3 ^Oj ^-yC Me0H " S/ NHBOC OCM NHBO° OMF, 80%
r-r-τ^Ν, H2lPdK.
NH80C MeOH NHBOC
Etapa 1. Preparação de (SM-hidróxi-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-iQpropan-2- ilcarbamato de terc-butila
A uma solução de 2,2-dimetil-4-(((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) me- til)oxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (643 mg, 2,15 mmols) em MeOH (10 ml) foi adicionado p-TSA (37 mg, 0,22 mmol), depois a solução foi agitada em tr durante 12 h. TEA (2 ml) foi adicionado, seguido por Boc2O (46 mg, 0,21 mmol). Após a adição a solução de reação foi agitada durante mais min. O solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto (S)-1-hidróxi-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-ilcarba- mato de terc-butila. Foi usado na próxima etapa sem mais purificação. MS ESI +ve m/z 260 (M + 1).
Etapa 2. Preparação de 4-metilbenzenossulfonato de (S)-2-(terc-buto- xicarbonilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-iQpropila O produto bruto acima (S)-1-hidróxi-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)
propan-2-ilcarbamato de terc-butila foi dissolvido em DCM anidro (22 ml). A esta solução foi adicionado piridina (2 ml) e TsCI (1,230 g, 6,45 mmols). A- pós agitar em tr durante 4 hr, uma outra batelada de piridina (3 ml) e TsCI (0,700 g, 3,67 mmols) foi adicionada e agitada durante mais 12 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc (80 ml), lavada com 1 N HCI (75 ml), segui- do por H2O (2 χ 30 ml), NaHCO3 aq. saturado, salmoura, e secada por Na2SO4 anidro, e filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. A pasta flui- da resultante foi purificada através de cromatografia cintilante em sílica-gel (eluída com sistema gradiente: 0-35 % EtOAc em hexano) para proporcionar 4-metilbenzenossulfonato de (S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-((R)-tetrai- dro-2H-piran-3-il)propila, 670 mg, rendimento 75 % para duas etapas. MS ESI +ve m/z 436 (M + Na).
Etapa 3. (S)-1-azido-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-ilcarbamato de terc-butila
A solução de 4-metilbenzenossulfonato de (S)-2-(terc-buto- xicarbonilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propila (132 mg, 0,32 mmol) e NaN3 (62 mg, 0,95 mmol) em DMF anidro foi aquecida para 80°C sob atmos- fera de N2 durante 1,5 hr, esfriada à tr e diluída com EtOAc, e lavada com H2O (3 χ 20 ml), seguido por salmoura, e secada por Na2SO4 anidro e filtra- da, e concentrada sob pressão reduzida. A pasta fluida resultante foi purifi- cada através de cromatografia cintilante em sílica-gel (eluída com sistema gradiente: 0-30 % EtOAc em hexano) para proporcionar (S)-1-azido-3-((R)- tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-ilcarbamato de terc-butila 58 mg, rendimento 64%. MS ESI +ve m/z 307 (M + Na).
Etapa 4: (S)-1-amino-3-((RHetraidro-2H-piran-3-iQpropan-2- ilcarbamato de terc-butila
A hidrogenação de (S)-1-azido-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)
propan-2-ilcarbamato de terc-butila (146 mg, 0,51 mmol) foi realizada em MeOH (10 ml), 10% Pd/C (25 mg) sob 276 KPa (40 psi) de H2 durante 2 h. Após filtração 114 mg de (S)-1-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2- ilcarbamato de terc-butila foram obtidos, rendimento 86%. MS ESI +ve m/z 259 (Μ + H). EXEMPLO 10
(S)-1-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(metil)carbamato de terc-butila
LHMDS. Mel Ha , Pd/C, MeOH
,NBoc
^ / Mrraoc O
O
Etapa 1. (S)-1-azido-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(metil) carbama- to de terc-butila A uma solução de (S)-1-azido-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) pro- pan-2-ilcarbamato de terc-butila (30 mg, 0,11 mmol) em THF anidro (4 ml) em -78°C foi adicionada 1,0 M solução de LHMDS em THF (253 μΙ_, 0,25 mmol), depois agitado nesta temperatura durante 30 min. A esta mistura foi adicionado Mel (125 μί_, 0,22 mmol), depois a temperatura foi deixada aque- cer para 0°C, e descansar durante 12 h no refrigerador. A mistura de reação foi extinta com. NH4CI saturada aq, extraída com EtOAc (30 ml), a fase or- gânica separada foi lavada com H2O (2 χ 10 ml), salmoura, e secada (Na2SO4), e filtrada. O filtrado foi concentrado, a pasta fluida resultante foi purificada através de cromatografia cintilante em sílica-gel (eluída com sis- tema gradiente, 0-30% EtOAc em hexano) para proporcionar (S)-1-azido-3- ((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(metil)carbamato de terc-butila 31 mg, rendimento 100%. MS ESI +ve m/z 321 (M + Na).
Etapa 2. (S)-1-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-inpropan-2-il(metil) carba- mato de terc-butila
A hidrogenação de (S)-1-azido-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) pro- pan-2-il(metil)carbamato (62 mg, 0,51 mmol) foi realizada em EtOAc (20 ml), 10% Pd/C (15 mg) sob 40 psi de H2 durante 2 h. Após filtração 52 mg de (S)- 1-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-ilcarbamato de terc-butila fo- ram obtidos, rendimento 91 %. MS ESI +ve m/z 273 (Μ + H). Procedimento Alternativo I:
Alternativamente, (S)-1 -amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) pro- pan-2-il(metil)carbamato de terc-butila pode ser preparado pelos seguintes procedimentos:
(1S,2S)-pseudo- efedrina
THF, O 'C
OH
i) LDA, LiCl II) brometo de alila
THF, -78 *C >85% ee
LAB
THF1 0 *C to ft
Cl
OH
NIaH DMF, rt MeNH2 em THF
i) TMSCN, OPA1 2% molar de catalisador, tolueno, 78°C
h) Boc2O
NatO4ZRuCIj
4A MS
^N. >4:1 d.r
Ό'
Ni Raney
BOC
Nnw 4N NH3 in CH3OH1
HCube1 20 bar, 1 mt/miri
N
CHsOH, 25 'C
OH2N
Etapa 1. 5-Cloro-N-((1S,2S)-1-hidróxi-1-fenilpropan-2-il)-N-metilpentanamida
efedrina (60 g, 363,1 mmols) em THF (600 ml) em temperatura ambiente foi adicionado trietilamina (65,4 ml, 472 mmols) de uma vez. A suspensão bran- ca resultantes foi esfriada para 0°C. Uma solução de cloreto de 5-cloro- pentanoíla (49 ml, 381 mmols) em THF (130 ml) foi adicionada por goteja- mento à mistura durante 45 min utilizando um funil de adição. A mistura foi depois deixada se agitar em O0C durante 30 min. H2O (40 ml) foi adicionado e a mistura resultante foi concentrada em -10% do volume original. A solu- ção resultante foi dividida entre H20/Et0Ac e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (600 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCO3 aquoso saturado, salmoura, seca- das por MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto como óleo amarelo claro. A amida bruta foi purificada por cromatografia cintilante (ISCO; 3 χ 330 g coluna; CH2CI2 em 5 % MeOH / CH2CI2) para fornecer o produto como um óleo viscoso transparente. O Me- OH residual foi removido através de submeter a azeótropo com tolueno (3 χ 100 ml) para fornecer 5-cloro-N-((1S,2S)-1-hidróxi-1-fenilpropan-2-il)-N- metilpentanamida (96,2 g, 339 mmols, 93%). LCMS (m/z = 266,0). Etapa 2. (R)-2-(3-Cloropropil)-N-((1S,2S)-1-hidróxi-1-fenilpropan-2-il)-N- me- tilpent-4-enamida
OH
A uma solução magneticamente agitada de (1S,2S)-pseudo- Cl
A uma suspensão magneticamente agitada de LiCI (83 g, 1,96
mol) em THF (700 ml) em temperatura ambiente foi adicionado diisopropila- mina (104 ml, 736 mmols) de uma vez. nBuLi (2,5M em hexano, 281 ml, 703 mmols) foi adicionado por gotejamento durante 30 min utilizando um funil de adição. A mistura amarela-clara agitada em -78°C durante 20 min e depois foi aquecida para 0°C durante 15 min. A mistura foi depois esfriada para -78°C e 5-cloro-N-((1 S,2S)-1 -hidróxi-1 -fenilpropan-2-il)-N-metilpentanamida (92,8 g, 327 mmols) em THF (330 ml) foi adicionada por gotejamento duran- te 30 min utilizando um funil de adição. A mistura foi agitada em -78°C du- rante 1 h e depois foi aquecida para 0°C durante 25 min. Brometo de alila (41,5 ml, 490 mmols) foi depois adicionado lentamente durante 2 min através de seringa e depois a reação foi aquecida para a temperatura ambiente. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 50 min e foi julgada completa por LC/MS. A mistura foi esfriada para 0°C e NaHCO3 aquoso sa- turado (400 ml) e H2O (200 ml) foram adicionados. EtOAc foi adicionado, as fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (1500 ml total). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1N HCI (4 χ 150 ml), salmoura, secadas por MgSO4, filtradas, e concentradas sob pres- são reduzida para fornecer (R)-2-(3-cloropropil)-N-((1S,2S)-1-hidróxi-1 - fenilpropan-2-il)-N-metilpent-4-enamida como um óleo laranja (101,2 g, 312 mmols, 95 %). O material bruto foi levado adiante sem outra purificação. LC/MS (m/z = 306,0).
Etapa 3. (R)-2-(3-Cloropropil)pent-4-en-1-ol
Uma solução magneticamente agitada de diisopropilamina (184 ml, 1,29 mol) em THF (600 mL) foi esfriada para -78°C. nBuLi (2,5M em he- xano, 482 ml, 1,21 mol) foi adicionado por gotejamento durante 35 min utili- zando um funil de adição. A mistura turva foi agitada em -78°C durante 15 min e depois foi aquecida para O0C durante 15 min durante cujo tempo a so- lução se tornou transparente e amarela-clara. Borano-amônia (90%, 42 g, 1,24 mol) foi adicionado em quatro partes iguais, um minuto por parte. (Avi- so: evolução vigorosa de gás). A mistura turva foi aquecida para a tempera- tura ambiente durante 20 min e depois foi esfriada novamente para 0°C. (R)- 2-(3-cloropropil)-N-((1 S,2S)-1 -hidróxi-1 -fenilpropan-2-il)-N-metilpent-4-ena- mida (100,2 g, 309 mmols) em THF (300 ml) foi adicionada por gotejamento durante 10 min utilizando um funil de adição. A reação foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 2,5 h. A reação foi esfriada para -10°C e foi extinta com HCI (3M, 1500 ml). As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com Et2O (2000 ml total). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 3N HCI, salmoura, secadas por MgSO4, fil- tradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto como um óleo amarelo. O material bruto foi purificado por cromatografia cin- tilante (ISCO; 330 g coluna; Hexano para 30 % EtOAc/Hexano) para forne- cer (R)-2-(3-cloropropil)pent-4-en-1-ol como um óleo viscoso transparente (32,6 g, 200 mmols, 65 %); 1H RMN (400 MHz. CDCI3) δ 5,82 (m, 1H), 5,07 (m, 2H), 3,78 (m, 1H), 3,58 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,54 (t, J = 8 Hz, 2H), 2,14 (m, 2H), 1,85 (m, 2H), 1,64 (m, 1H), 1,49 (m, 1H). Etapa 4. (R)-3-Alil-tetraidro-2H-pirano
tendo NaH (60% p/p, 15 g, 0,376 mmol) e uma barra agitadora magnética. A suspensão foi esfriada para 5 a 10°C em um banho de gelo e agitada duran- te 5 min. Uma solução de (R)-2-(3-cloropropil)pent-4-en-1-ol (30,6 g, 188 mmols) em DMF (350 ml) foi adicionada através de funil de adição durante min. Aviso: evolução e exotérmico de Gás. A suspensão cremosa resul- tante foi agitada durante 30 min. A reação foi aquecida para a temperatura ambiente e a suspensão bege resultante foi agitada durante 2 h, em cujo
DMF (350 ml) foi adicionado a um frasco de fundo redondo con- tempo foi julgada completa por TLC. A mistura de reação foi esfriada para O0C e extinta mediante a adição de H2O (250 ml) e HCI (3N, 250 ml). As fa- ses foram separadas e a fase aquosa foi extraída com éter de petróleo (4 χ 250 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com H2O, sal- moura, secadas por MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto como um óleo amarelo. O material bruto foi purificado por cromatografia cintilante (ISCO; 120 g coluna; Hexano para 30% EtOAc/Hexano) para fornecer (R)-3-alil-tetraidro-2H-piranp como um óleo transparente (19,8 g, 157 mmols, 83 %); 1H RMN (400 MHz. CDCI3) δ 5,72 - 5,82 (m, 1H)5 5,00 - 5,06 (m, 2H), 3,86 - 3,91 (m, 2H), 3,37 (m, 1H), 3,08 (t, J = 12 Hz, 1H), 1,85 - 1,98 (m, 3H), 1,59 - 1,69 (m, 3H), 1,15 - 1,21 (m, 1H).
Etapa 5. (R)-2-(Tetraidro-2H-piran-3-il)acetaldeído
A uma solução magneticamente agitada de (R)-3-alil-tetraidro- 2H-pirano (18,7 g, 148 mmols) em acetonitrila (740 ml) em temperatura am- biente foi adicionado RuCI3.2H20 (1,43 g, 5,92 mmols) de uma vez. A solu- ção marrom escura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante min e depois NaIO4 (69 g, 326 mmols) foi adicionado de uma vez. H2O foi adicionado em pequenas porções (10x8 ml_) em intervalos de 5 min. A rea- ção foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min, em cujo tempo foi julgada completa por TLC. A mistura de reação foi extinta mediante a adição de Na2S2O3 aquoso saturado (250 ml) e H2O (1000 ml). As fases foram se- paradas e a fase aquosa foi extraída com Et2O (4 χ 400 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com H2O, salmoura, secadas por Mg- SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto como um óleo amarelo. O material bruto foi purificado por cromatogra- fia cintilante (ISCO; 120 g coluna; Hexano para 40% EtOAc/Hexano) para fornecer (R)-2-(tetraidro-2H-piran-3-il)acetaldeído como um óleo amarelo (14,3 g, 111 mmols, 60 %); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 9,78 (t, J = 2, 1H), 3,84 - 3,88 (m, 2Η), 3,40 - 3,47 (m, 1Η), 3,17 (dd, J = 11,2, 8,8 Hz, 1Η), 2,31 - 2,41 (m, 2Η), 2,21 - 2,28 (m, 1Η), 1,88 - 1,93 (m, 1 Η), 1,61 - 1,72 (m, 2Η), 1,29- 1,33 (m, 1Η).
Etapa 6. (R,E)-N-(2-(Tetraidro-2H-piran-3-il)etilideno)metanamina
A uma solução magneticamente agitada de (R)-2-(tetraidro-2H-
piran-3-il)acetaldeído (11 g, 85,8 mmols) em Et2O (215 ml) em temperatura ambiente foi adicionado MeNH2 (2M em THF, 215 ml, 429,2 mmols) e penei- ras moleculares (4 A em pó, ativadas, 21,5 g). A reação foi agitada em tem- peratura ambiente durante 1 h. A mistura resultante foi depois filtrada e con- centrada sob pressão reduzida para fornecer (R,E)-N-(2-(tetraidro-2H-piran- 3-il)etilideno)metanamina como um óleo amarelo (11,3 g, 80 mmols, 93 %). O material bruto foi levado adiante sem mais purificação. 1H RMN (400 MHz1 CDCI3) δ 7,67 (m, 1H), 3,86 - 3,91 (m, 2H), 3,36 - 3,43 (m, 1H), 3,29 (s, 3H), 3,13 (dd, J = 11,0, 9,8 Hz, 1H), 1,95 - 2,14 (m, 2H), 1,86 - 1,91 (m, 2H), 1,62 - 1,68 (m, 2H), 1,21 -1,30 (m, 1H).
Etapa 7. (S)-1-ciano-2-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)etil(metil)-carbamato de terc-butila
^oj IfI
N
Um frasco de fundo redondo de 2 I foi carregado com tolueno (400 ml), uma barra agitadora magnética, (R,E)-N-(2-(Tetraidro-2H-piran-3- il)etilideno)metanamina (11,3 g, 80,1 mmols) e 2,2-dimetilpropanoato de 3- {(E)-[((1 R,2R)-2-{[({(1S)-1-[(dimetilamino)carbonil]-2,2-dimetilpropil} amino) car- bonotioil]amino}cicloexil)imino]metil}-5-(1,1-dimetiletil)-4-hidroxifenila (J. Am.
Chem. Soe, 2002, 124, 10012-10014) (0,9 g, 1,6 mmol). A mistura foi esfria- da para -78 0C e trimetilsilanocarbonitrila (21,4 ml, 160,2 mmols) foi adicio- nada por gotejamento durante 15 min utilizando um funil de adição. Álcool isopropílico (12,3 ml, 160,2 mmols) foi depois adicionado por gotejamento durante 10 min. A reação agitada em -78 0C durante 3 h e depois foi aqueci- da para a temperatura ambiente e agitada durante 1 h. Dicarbonato de bis(1,1 -dimetiletilo) (35,0 g, 160,2 mmols) foi depois adicionado e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi extinta pela adição de NaHCO3 aquoso saturado (400 ml) e EtOAc (300 ml).
As camadas foram separadas e a camada aquosa foi lavada com EtOAc (100 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secadas por Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto. O material bruto foi dividido em duas partes e cada uma foi purificada por cromatografia flash (ISCO; 120 g coluna; 0% a 10% EtOAc/Hexano durante 30 min, depois 10% EtOAc/Hexano 47 min, depois 10% a 20% EtOAc/ He- xano durante 2 min, depois 20 % EtOAc/Hexano durante 11 min). As duas bateladas purificadas foram combinadas para fornecer (S)-1-ciano-2-((R)- tetraidro-2H-piran-3-il)etil(metil)carbamato de terc-butila (18,9 g, 70 mmols, 86 %) como um óleo laranja. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 5,00 (brs, 1H), 3,83 - 3,90 (m, 2H), 3,42 - 3,48 (m, 1H), 3,19 (dd, J = 11,3, 8,6, 1H), 2,92 (s, 3H), 1,85 - 1,95 (m, 1H), 1,60 - 1,82 (m, 5H), 1,50 (s, 9H), 1,28 - 1,33 (m, 1H).
Etapa 8. (S)-1-amino-3-((RHetraidro-2H-Diran-3-inproDan-2-il(metin carba- mato de terc-butila
terc-butila (397 mg, 4: 1 mistura de diastereômeros no estereocentro alfa- amino) foi dissolvido em uma solução de 4M NH3 em MeOH (15 ml) e pas- sado através de um cartucho de níquel Raney (CatCart®, 50 mm) em um mecanismo de hidrogenação alinhado (H-Cube) com as seguintes coloca- ções: temperatura ambiente (14°C), taxa de fluxo 1,0 ml/min, pressão de H2 atm. A solução foi circulada novamente de modo que a solução do produ- to fosse alimentada de volta ao mecanismo. Após trinta minutos, análise de TLC (1:9 MeOH/CH2CI2, cepa de KMnO4) mostrou conversão completa do material de partida. Após o tempo de reação total de 60 min, a solução foi
20
(S)-1-ciano-2-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)etil(metil)carbamato de evaporada para produzir 371 mg (92 %) de (S)-1-amino-3-((R)-tetraidro-2H- piran-3-il)propan-2-il(metil)carbamato de terc-butila como um óleo de cor ro- sa transparente. LC-MS (ELSD) m/e 273,6 (M + H)+. Procedimento Alternativo II:
Alternativamente, (S)-1 -amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) pro- pan-2-il(metil)carbamato de terc-butila também pode ser preparado pelos seguintes procedimentos:
C6H5CHO TsOH
r^V^ ». NaNTMS2 D \ O «■ CICO2Me W Hi. Ci(CH2)3Br
H OH
Cl.
1. LiOH
2, 120 *C
m ci.
HCO2H
° H
.OH
PO2NCeH4SO2CI
o H
.NO2
1. NaN3 Cl.
O
O
2. Boc2O
NaBH4
Cl
S
HO
N3
i, NaNTMS2 //. CH3I
Boc
^N-íg*·-"^
N3
H2iPdC
T(RHS)
cr
Boc
O"
NHBoc
Etaoa 1. 6-(3-cloropropin-5-oxo-3-fenil-hexaidropirroloM .2-c1oxazol-6-carbo-
xilato de (3R.7aS)-metila 1 o A (3R,7aS)-3-fenil-diidropirrolo[1,2-c]oxazol-5(1 H,3H,6H)-ona
aminal (35,77 g, 0,176 mol, 1,0 equiv, bruto, [J. Org. Chem. 1986, 51, 3140]) foi dissolvida em 100 ml de THF e a mistura esfriada para -10°C (banho de gelo/acetona) em um frasco de 3 gargalos de 1 L equipado com par térmico, agitador superior, condensador de refluxo e entrada de nitrogênio. Uma so- lução de NaNTMS2 (2,0 M, 193,6 ml, 0,387 mol, 2,2 equiv) foi adicionada através do funil de gotejamento durante um período de 1 h enquanto man- tém a temperatura interna entre -5 e O0C. A mistura de reação marrom ala- ranjado escuro foi agitada durante 30 min. Uma solução de cloroformiato de metila (17,5 g, 14,3 ml, 0,185 mol, 1,05 equiv) em 9 ml de THFfoi adicionada através de bomba de seringa durante um período de 1 h. Assim que a adi- ção estava completa, a mistura foi agitada em 0°C durante 1 h, depois tirada amostra por LC/MS. Esta mostrou -90 % de conversão do amida de partida η intermediário de β-dicarbonila em 1,28 min. Uma segunda porção de solu- ção de cloroformiato de metila (1,75 g, 1,43 ml, 0,0185 mol, em 1,8 ml de THF) foi adicionada durante -10 min e a mistura agitada uma hora adicional em 0°C. Após este tempo a amida de partida foi consumida. 1-Bromo-3- cloropropano (69,3 ml, 111 g, 0,704 mol, 4,0 equiv) foi adicionado e a mistu- ra aquecida em refluxo durante 17 h. Após este tempo LC/MS mostrou a formação do composto alquilado desejado. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e extinta mediante a adição de 0,5 M HCI. Um exo- térmico de -5°C foi observado. A mistura foi transferida para um funil sepa- rador contendo 100 ml de EtOAc e as camadas separadas. A camada orgâ- nica foi lavada com salmoura, e evaporada. O 6-(3-cloropropil)-5-oxo-3-fenil- hexaidropirrolo[1,2-c]oxazol-6-carboxilato de (3R,7aS)-metila (62,05 g, con- taminado com CI(CH2)3Br) foi usado na próxima etapa sem outra purificação. Etapa 2. ácido (3RJaS)-6-(3-cloropropil)-5-oxo-3-fenil-hexaidropirroloí1,2- cloxazo l-6-ca rbox í Iico
O 6-(3-cloropropil)-5-oxo-3-fenil-hexaidropirrolo[1,2-c]oxazol-6- carboxilato de (3R,7aS)-metil (36,90 g) foi dissolvido em 300 ml de THF e a mistura esfriada para 0°C. Uma solução de LiOH-H2O (22,97 g, 0,548 mol, 5,0 equiv) em água (273 ml, 2,0 M) foi esfriada para ~5°C e adicionada à solução de THF. A mistura foi agitada em 10°C e o progresso da hidrólise monitorado por LC/MS. Após 3h o éster metílico foi completamente consu- mido. EtOAc (100 ml) foi adicionado e HCI concentrado adicionado até que o pH < 2. A mistura foi transferida a um funil separador e as camadas separa- das. A camada aquosa foi extraída com 100 ml de EtOAc, as camadas orgâ- nicas combinadas lavadas com salmoura, secadas por Na2SO.), filtradas e evaporadas. O ácido (3R,7aS)-6-(3-cloropropil)-5-oxo-3-fenil-hexaidropirrolo [1,2-c]oxazol-6-carboxílico foi isolado como um sólido castanho (32,65 g, 92% rendimento) após remoção do solvente residual in vácuo. Etapa 3. (3R.6R JaS)-6-(3-CloropropilV3-fenil-diidropirrolori .2-cloxazol- 5(1H,3H,6H)-ona
O ácido (3R,7aS)-6-(3-cloropropil)-5-oxo-3-fenil-hexaidropirrolo [1,2-c]oxazol-6-carboxílico (32,65 g, 0,101 mol) foi transformado em pasta fluida em 300 ml de tolueno anidro. A temperatura da mistura foi elevada para 120°C durante um período de ~1 h, e mantida em 120°C durante 2 h. Após este tempo a análise de LC/MS mostrou a formação da amida deseja- da. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e transferida para um funil separador. A mistura foi lavada com 100 ml de solução meia-saturada de NaHCO3 e salmoura. Durante este processo um pouco de material inso- lúvel se formou na interface. Este material foi descartado. A solução de tolu- eno foi agitada com 5 g de carvão ativado (Norit, neutral) durante 1 h, depois filtrada através de um tampão de Celite e evaporada. O xarope âmbar foi colocado na linha de vácuo durante a noite. Isto proporcionou 26,7 g (94% de rendimento) de (3R,6R,7aS)-6-(3-cloropropil)-3-fenil-diidropirrolo[1,2-c] oxazol-5(1 H,3H,6H)-ona. Etapa 4. (3R.5S)-3-(3-Cloropropil)-5-(hidroximetinDÍrrolidin-2-ona
A (3R,6R,7aS)-6-(3-cloropropil)-3-fenil-diidropirrolo[1,2-c]oxazol- 5(1H,3H,6H)-ona (13,6 g, 47,9 mmols, 1,0 equiv) foi dissolvida em uma mis- tura de THF (100 ml):ácido fórmico (85%, 62,5 ml): H2O (31 ml) e a solução aquecida para 40°C durante 3,5 h. Após este tempo o bruto foi consumido e o álcool desejado foi contaminado com quantidades variáveis do éster de formiato. A solução foi evaporada utilizando um evaporador rotativo, man- tendo a temperatura de banho abaixo de 25°C. Uma solução de 1,9 M LiOH foi adicionada ao resíduo até que um pH > 12 fosse alcançado e a mistura agitada durante 20 min. Após este tempo nenhum éster de formiato foi ob- servado. EtOAc (250 ml) foi adicionado e a mistura transferida para um funil separador. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com 4 χ 50 ml de EtOAc. Os extratos combinados foram secados por Na2SO4, filtrados e evaporados. Hexanos (-200 ml) foram adicionados ao resíduo e a mistura bifásica aquecida para ~40°C. Os hexanos foram extraí- dos por decantação e o procedimento repetido duas vezes. O xarope resul- tante foi colocado em uma linha de vácuo onde se solidificou para produzir (3R,5S)-3-(3-cloropropil)-5-(hidroximetil)pirrolidin-2-on como um sólido es- branquiçado (7,51 g 82% de rendimento). Um adicional de 0,80 g de material pode ser obtido mediante a saturação da solução aquosa acima com NaCI e extração com 4 χ 50 ml de CH2Cb-
Etapa 5. 4-nitrobenzenossulfonato de ((2S.4R)-4-(3-Cloropropil)-5-oxopir- rolidin-2-il)metila
A (3R,5S)-3-(3-cloropropil)-5-(hidroximetil)pirrolidin-2-ona (8,31 g, 43,4 mmols, 1,0 equiv), p-nitrobenzenossulfonilcloreto (10,57 g, 47,7 mmols, 1,1 equiv) e DMAP (0,53 g, 4,4 mmols, 0,1 equiv) foram adicionados a um frasco de fundo redondo de 500 ml e dissolvidos em THF (100 ml) sob nitro- gênio. Trietilamina (8,77g, 12,1 ml, 86,7 mmols, 2,0 equiv) foi adicionada através de seringa e a solução resultante agitada durante 17 h em tempera- tura ambiente. Após este tempo a formação completa do nosilato desejado foi observada por análise de LC/MS. A mistura foi diluída com 50 ml de EtO- Ac e as aminas extintas mediante a adição de 100 ml de 1,0 M HCI. As ca- madas foram separadas e a camada orgânica lavada com salmoura, secada por Na2SO4, filtrada e evaporada. O sólido amarelo claro foi lavado com éter e o solvente residual removido in vácuo. Isto proporcionou 14,02 g (86 % de rendimento) de 4-nitrobenzenossulfonato de ((2S,4R)-4-(3-cloropropil)-5- oxopirrolidin-2-il)metila. Etapa 6. (3R.5S)-5-(AzidometilV3-(3-cloropropil)pirrolidin-2-ona
O 4-nitrobenzenossulfonato de ((2S,4R)-4-(3-cloropropil)-5- oxopirrolidin-2-il)metila (18,05 g, 45,2 mmols) e NaN3 (3,23 g, 49,7 mmols, 1,1 equiv) foram agitados em 100 ml de DMF durante 19 h. Após este tempo um sólido branco se formou e a análise de LC/MS mostrou a formação do azido desejado. O DMF foi removido in vácuo e o resíduo dividido entre E- t0Ac/H20 (100 +100 ml). A mistura foi transferida para um funil separador e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com 100 ml de EtOAc adicional e os extratos orgânicos combinados lavados com salmoura, seca- dos por Na2SO4, filtrados e evaporados. O (3R,5S)-5-(azidometil)-3-(3- cloropropil)pirrolidin-2-ona foi isolado como um xarope amarelo-claro (9,08 g, 94% de rendimento).
Etapa 7. 5-(azidometil)-3-(3-cloropropil)-2-oxopirrolidina-1-carboxilato de (3R.5S)-terc-butila
A (3R,5S)-5-(azidometil)-3-(3-cloropropil)pirrolidin-2-ona (9,08 g, 41,9 mmols, 1,0 equiv), Boc-anidrido (11,43 g, 52,4 mmols, 1,25 equiv) e DMAP (1,28 g, 10,4 mmols, 0,25 equiv) foram dissolvidos em acetonitrila (100 ml) e a mistura agitada durante 3 h em temperatura ambiente. Após este tempo o carbamato desejado foi formado. A solução foi evaporada e o produto purificado por cromatografia cintilante em sílica, eluindo com 0-27 % EtOAc em hexanos. Isto forneceu 10,1 g (67% de rendimento) de 5-(azi- dometil)-3-(3-cloropropil)-2-oxopirrolidina-1 -carboxilato de (3R,5S)-terc-butila como um xarope incolor.
Etapa 8. (2S.4R)-1-azido-7-cloro-4-(hidroximetinheptan-2-ilcarbamato de terc-butila
O 5-(azidometil)-3-(3-cloropropil)-2-oxopirrolidina-1-carboxilato de (3R,5S)-terc-butila (10,11 g, 31,9 mmols, 10. equiv) foi dissolvido em 200 ml de MeOH. NaBH4 sólido foi adicionado em porções de ~1 g em uma taxa para manter a temperatura de reação em ~27°C. Porções subsequentes de NaBH4 foram adicionadas somente após a carga anterior ter sido completa- mente dissolvida. Após a adição de ~3 g de NaBH4 (-80 mmols, 2,5 equiv) durante um período de 3 h, a análise de LC/MS mostrou >95 % de conver- são no álcool desejado. O reagente de hidrato residual foi extinto mediante o esfriamento da mistura para 0°C e a adição cuidadosa de 1,0 M HCI até que a evolução de H2 cessou. O metanol foi removido in vácuo e a mistura diluí- da com -200 ml de EtOAc. A mistura foi transferida para um funil separador e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc adicio- nal e as camadas orgânicas combinadas lavadas com salmoura, secadas por Na2SO4, filtradas através de um tampão de sílica e evaporadas. Isto pro- duziu -10 g de (2S,4R)-1-azido-7-cloro-4-(hidroximetil)heptan-2-ilcarbamato de terc-butila que possuía pureza suficiente para empregar na etapa subse- quente sem outra purificação.
Etapa 9. (SV1-azido-3-((RHetraidro-2H-piran-3-i0propan-2-il(meti0 carbama- to de terc-butila
O (2S,4R)-1 -azido-7-cloro-4-(hidroximetil)heptan-2-ilcarbamato
de terc-butila (1,59 g, 4,97 mmols, 1,0 equiv) foi dissolvido em 15 ml de DMF e a solução esfriada para 0°C. Uma solução de NaNTMS2 (1,0 M, 14,9 mmols, 3,0 equiv) foi adicionada através de seringa em uma tal taxa que a temperatura de reação interna permanece abaixo de 5°C. Após agitação du- rante 2 h análise de LC/MS mostrou a formação do produto ciclizado. Dime- tilsulfato (940 mg, 0,71 ml, 7,5 mmols, 1,5 equiv) foi adicionado e a mistura de reação agitada durante a noite com aquecimento concomitante para a temperatura ambiente. A análise de LC/MS mostrou a formação do carbama- to metilado desejado. A reação foi extinta mediante a adição de 10 % solu- ção de K2CO3 (-30 ml) e a mistura agitada durante 0,5 h. Os materiais volá- teis foram removidos in vácuo e o resíduo dividido entre EtOAc/água. As camadas foram separadas e a camada orgânica lavada com salmoura, se- cada por Na2SO4, filtrada e evaporada. O produto foi purificado por cromato- grafia cintilante em sílica (40 g), eluindo com 0-7 % EtOAc em hexanos. Isto proporcionou 1,21 g (82 % de rendimento) do (S)-1-azido-3-((R)-tetraidro- 2H-piran-3-il)propan-2-il(metil)carbamato de terc-butila desejado como um líquido incolor.
Etapa 10. (S)-1-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-inpropan-2-il(metil) carba- mato de terc-butila
O (S)-1-azido-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(metil) car-
bamato de terc-butila (2,1 g, 7,04 mmols, 1,0 equiv) e Pd/C (10 %, -200 mg) foram adicionados a um frasco. O THF (30 ml) foi adicionado e o frasco a- daptado com uma entrada de gás conectada a um balão de gás de hidrogê- nio. O frasco foi evacuado e enchido de outra vez com H2 do balão. Isto foi repetido duas vezes e a mistura de reação agitada durante 17 h em tempe- ratura ambiente. Análise por LC/MS mostrou conversão completa à amina desejada. O catalisador foi removido por filtração através de um tampão de 10
Celite e a mistura evaporada. Isto forneceu 1,82 g (94 %) de (S)-1-amino-3- ((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(metil)carbamato de terc-butila. Procedimento Alternativo III:
Alternativamente, (S)-1 -amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) pro- pan-2-il(metil)carbamato de terc-butila pode ser preparado pelos seguintes procedimentos:
/ \ HClfpBng / \
O-^^^-COOH WX. O-wVn-^CI B Lh
H 12 h
OOMt
NaBH4
IMOH O1 0-S<C
1 h
CMiOJ 10-1B»C
sólido
1 h
(8«bO CjRMMDAMf
CHjOJ c
10-11 h
ΤββΟ'
L
TBOM
IHF
ITBDPS HHIKe ImI^
16 h
1 h
BMl1HpJ HO'
V-
L
BOPS HmBH,
IMO HiMyO 0-7VC.
1 h
YT^
y NMta
OTBOrS
«A
O-WC
126 h
Tfiso'
TBOPS ,
NMMfc W
0-1«
1 h
' V^Y^OTTOPV^ MHBM M.
M-MaC
12 h
24 h
12 h
12 h
Procedimento Alternativo IV:
Alternativamente, (S)-1 -amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) pro- pan-2-il(metil)carbamato de terc-butila também pode ser preparado pelo se- guinte processo onde catalisadores de hidrogenação de quiral podem ser usados em uma série de etapas de hidrogenação para fornecer intermediá- rios enantiomericamente enriquecidos:
O
,CO1Me \ 11tHMOS
,NBOC
ZKOWtl1N
3JUOH.HIO
4JHCI
OH
NBoc
HjcM.
OH
NSoc
15
H1Acal.
BHjTHF
Vi Zieoc
Por exemplo, a hidrogenação da diidropiran-eno-amina para formar a diidropiran-amina pode ser realizada em metanol, a 25°C, utilizando cerca de 606 a 758 Kpa (88 a 110 psi) de pressão de hidrogênio, utilizando 1 a 2% molar de um catalisador gerado de [Rh(nbd)2]BF4 e SL-M004-I (SL- 10
Μ004-1: (aR, aR)-2,2'-bis(a-N,N-dimetil-aminofenilmetil)-(S,S)-1,1'-bis[di(3,5- dimetil-4-metoxifenil) fosfino]ferroceno, disponível da Solvias, Inc. Fort Lee, NJ). A hidrogenação da diidropiran-amina para formar a tetraidropiran-amina pode ser realizada em 50°C, utilizando cerca de 80 bar de pressão de hidro- gênio e 4 % molar de carga de catalisador de um catalisador gerado de [Rh(COD)2IO3SCF3 e SL-A109-2 (solvente: THF) ou [Rh(nbd)2]BF4 e SL- A109-2 (solvente: metanol) (SL-A109-2: (S)-(6,6'-dimetoxibifenil-2,2,-diil)- bis[bis(3,5-di-terc-butil-4-metoxifenil)fosfina], disponível da Solvias, Inc. Fort Lee, NJ). Exemplo 11
(S)-2-(3-Cloropropil)pent-4-en-1-ol
Cl
Cl
(IR, 2R)-pseudo- efedrina. TEA
THF, 0 *C
1)LDA, LiCl I1Ihrometo de alila
THT1 -78 "C >95% ee
LAB
' OH
í f Etapa 1. 5-Cloro-N-((IR.2RV 1 -hidróxi-1 -fenilpropan-2-in-N-metilpentanamida
THF, O *C to rt
OH
5-Cloro-N-((1 R,2R)-1 -hidróxi-1 -fenilpropan-2-il)-N-metilpentana- mida foi preparada de cloreto de 5-cloropentanoíla (7,8 ml, 60,4 mmols) e (1 R,2R)-pseudoefedrina (9,9 g, 60,4 mmols) de acordo com o método descri- to no Exemplo 10a, Etapa 1.
Etaoa 2. (S)-2-(3-Cloropropin-N-((1R.2R)-1-hidróxi-1-fenilpropan-2-il)-N-me- tilpent-4-enamida
o
Cl^---^N'
Sj
(S)-2-(3-Cloropropil)-N-((1R,2R)-1-hidróxi-1-fenilpropan-2-il)-N-me- tilpent-4-enamida foi preparada de 5-cloro-N-((1R,2R)-1-hidróxi-1-fenilpro-
OH pan-2-il)-N-metilpentanamida (17,7 g, 60,2 mmols) de acordo com o método
descrito no Exemplo 10a, Etapa 2.
Etapa 3. (S)-2-(3-Cloropropil)pent-4-en-1-ol
{
(S)-2-(3-Cloropropil)pent-4-en-1-ol foi preparado de (S)-2-(3- cloropropil)-N-((IR,2R)-1 -hidróxi-1 -fenilpropan-2-il)-N-metilpent-4-enamida (18,2 g, 56,2 mmols) de acordo com o método descrito no Exemplo 10a, E- tapa 3. Exemplo 12
(S)-1 -amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(etil)carbamato de terc-
butila
NaH, DMF -----^N3 f-^V^Y^NHj
iõWR«r men NEtSOC Vr.^ NEtBoc
NHBoc Etl. DMF O O
Etapa 1. (S)-1-azido-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(etil)carbamato
de terc-butila
A uma solução em O0C de (2S,4R)-1-azido-7-cloro-4-(hi- droximetil)heptan-2-ilcarbamato de terc-butila bruto (3,20 g, 10,0 mmols) em DMF anidro (50 ml) foi adicionado NaH (60 % em óleo mineral, 2,0 g, 50,0 mmols), 5 min depois a temperatura foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e agitada mais 1,5 h. Iodeto de etila (4,68 g, 2,4 ml, 30,0 mmols) foi adicionado e agitado durante a noite em temperatura ambiente. A reação foi extinta com NH4CI aq. sat. a 0°C, e extraída com EA (70 ml), a fase orgâ- nica separada foi lavada com H2O (2 χ 50 ml), salmoura (50 ml) sucessiva- mente, e secada por Na2SO4 e concentrada para proporcionar um óleo, que foi purificado por cromatografia cintilante em sílica-gel e eluído com acetato de etila/hexano (0-20 %) para proporcionar 1,8 g de (S)-1-azido-3-((R)- tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(etil)carbamato de terc-butila. MS ESI +ve m/z: 313 (M + H)+.
Etapa 2. (S)-1 -amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(etil)carbamato de terc-butila (S)-1-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(etil) carba-
mato de terc-butila foi preparado utilizando os procedimentos análogos a- queles descritos no Exemplo 10e, Etapa 10, utilizando (S)-1-azido-3-((R)- tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(etil)carbamato de terc-butila.
EXEMPLO 13
2-((R)-((R)-1-((S)-2-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil) pipe- ridin-3-il)(3-clorofenil)metóxi)etilcarbamato de metila (composto 1)
Etapa 1. 2-((R)-(3-clorofenil)((R)-piperidin-3-iQmetóxi)etilcarbamato de metila. Sal de TFA
metil)piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (2,247 g, 5,26 mmols) em solvente misturado de DCM/TFA (24 ml, 3:1, v/v) foi agitada em tr durante 30 min. Os solventes foram removidos in vacuo para produzir sal de 2-((R)-(3- clorofenil)((R)-piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato TFA com rendimento quan- titativo. MS ESI +ve m/z 327 (Μ + H).
Etapa 2. (S)-2-(N-(terc-butoxicarbonil)amino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) propilcarbamato de (4-nitrofenil)
propan-2-ilcarbamato de terc-butila (20,8 mg, 0,081 mmol) em DCM anidro (9 ml) foi adicionado cloroformiato de 4-nitrofenila (17,1 mg, 0,085 mmol), seguido por TEA (12,2 mg, 17 μί, 0,12 mmol). A solução resultante foi agi- tada em tr durante 5 min (monitorada por LC-MS) e diluída em 12 ml. Um
10
A solução de 3-((R)-(3-clorofenil)(2-(metoxicarbonilamino) etóxi)
A uma solução de (S)-1-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) alíquota da solução de mistura de carbamato (2 ml) foi usada para a próxima etapa sem purificação.
Etapa 3. 2-((RH(R)-1-((S)-2-(Boc-amino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) pro- pilcarbamoiDpiperidin-3-il)(3-clorofenil)metóxi)etilcarbamato À solução de (4-nitrofenil) (S)-2-(N-(terc-butoxicarbonil)amino)-3-
((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamato (2 ml, 0,013 mmol) foi adicionado sal de ((R)-píperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de 2-((R)-(3-clorofenil)TFA (7,0 mg, 0,016 mmol), seguido por excesso de TEA (0,3 ml). A mistura foi agitada durante 30 min, depois o solvente foi removido in vacuo. O óleo resultante foi 10 purificado em HPLC preparativa para fornecer 2-((R)-((R)-1-((S)-2-(Boc- amino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il)(3-clorofe- nil)metóxi)etilcarbamato de metila 5 mg, rendimento 63 %. MS ESI +ve m/z 611 (Μ + H).
Etapa 4. Sal de 2-((R)-((R)-1-((S)-2-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-iO pro- pilcarbamoi0piperidin-3-il)(3-clorofenil)metóxi)etilcarbamato de metila TFA
O 2-((R)-((R)-1-((S)-2-(Boc-amino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) propilcarbamoil)piperidin-3-il)(3-clorofenil)metóxi)etilcarbamato (5 mg, 0,008 mmol) foi dissolvido em DCM/TFA (3/1 ml). A solução foi agitada durante 30 min e concentrada. A mistura bruta foi purificada em HPLC preparativa para 20 proporcionar sal de 2-((R)-((R)-1-((S)-2-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) propilcarbamoil)piperidin-3-il)(3-clorofenil)metóxi)etilcarbamato TFA 2,8 mg, rendimento 54%. 1H RMN (CD3OD) δ 7,36 - 7,32 (m, 3H), 7,23 (d, J = 7,6 Hz,
1H), 4,20 (br d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,04 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,89 - 3,78 (m, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,48 - 3,42 (m, 2H), 3,37 (m, 1H), 3,28 - 3,24 (m, 5H), 3,15 (dd, J = 10,8, 9,2 Hz, 1 H), 2,92 (m, 2H), 1,97 (m, 1H), 1,78 (m, 2H), 1,68 - 1,54 (m, 4H), 1,45 - 1,07 (m, 5H). MS ESI +ve m/z 511 (Μ + H).
Os seguintes compostos foram preparados seguindo os proce- dimentos análogos a aqueles descritos acima e isolados como seus sais de TFA:
1) 2-((R)-((R)-1-((S)-2-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) pro-
pilcarbamoil)piperidin-3-il)(3-fluorofenil)metóxi)etilcarbamato de metila (com- posto 2) utilizando sal de ácido trifluoroacético de 2-((R)-(3-fluorofenil)((R)- piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila na Etapa 2.
2) 2-((R)-((R)-1-((S)-2-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) propilcarbamoil)piperidin-3-il)(3-cloro-5-fluorofenil)metóxi) etilcarbamato de metila (composto 3) utilizando sal de ácido trifluoroacético de 2-((R)-(3-cloro-
5-fluorofenil)((R)-piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila na Etapa 2.
3) 2-((R)-((R)-1-((S)-2-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il) propilcarbamoil)piperidin-3-il)(3,5-difluorofenil)metóxi)etilcarbamato de metila (composto 4) utilizando sal de ácido trifluoroacético de 2-((R)-(3,5- difluorofenil)((R)-piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila na Etapa 2.
4) 2-((R)-((R)-1 -((S)-2-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)
propilcarbamoil)piperidin-3-il)(5-cloro-2-metilfenil)metóxi)etilcarbamato de metila (composto 5) utilizando sal de ácido trifluoroacético de 2-((R)-(5-cloro-
2-metilfenil)((R)-piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila na Etapa 2.
5) 2-((R)-((R)-1 -((S)-2-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)
propilcarbamoil)piperidin-3-il)(5-flúor-2-metilfenil)metóxi)etilcarbamato de metila (composto 6) utilizando sal de ácido trifluoroacético de 2-((R)-(5-flúor-
2-metilfenil)((R)-piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila na Etapa 2.
6) 2-((R)-(3-clorofenil)((R)-1-((S)-2-(metilamino)-3-((R)-tetrai- dro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila
(composto 7) utilizando (S)-1-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2- il(metil)carbamato de terc-butila na Etapa 1.
7) 2-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)((R)-1 -((S)-2-(metilamino)-3- ((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila (composto 8) utilizando (S)-1-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-
il)propan-2-il(metil)carbamato de terc-butila na Etapa 1 e sal de ácido trifluo- roacético de 2-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)((R)-piperidin-3-il)metóxi) etilcarba- mato de metila na Etapa 2.
8) 2-((R)-(3-cloro-5-fluorofenil)((R)-1 -((S)-2-(metilamino)-3- ((R)-tetrahidro-2H-piran-3-il)propilcarbarnoil)piperidin-3-il)metóxi)etilcarbama-
to de metila (composto 9)
9) 2-((R)-(3,5-difluorofenil)((R)-1-((S)-2-(metilamino)-3-((R)- tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de 10
metila (composto 10)
10) 2-((R)-(3-clorofenil)((R)-1 -((S)-2-(etilamino)-3-((R)-tetraidro- 2H-piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila (composto 13)
11) 2-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)((R)-1 -((S)-2-(etilamino)-3-((R)- tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila (composto 12)
Alternativamente, 2-((R)-(3-clorofenil)((R)-1-((S)-2-(metilamino)-
3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3- il)metóxi)etilcarbamato de metila (composto 7) também pode ser preparado pelo seguinte processo (utilizando os procedimentos análogos a aqueles descritos no Exemplo 14) e isolado como seu sal de TFA:
XH » 4,ON1 HCl em MEOH ?
-------------^NBOC
EXEMPLO 14
2-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)((R)-1-((S)-2-(metilamino)-3-((R)-tetraidro-2H- piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila (com- posto 11)
Bocn^ r^i
JJv-O
O
CDt 1 μ8~Γ O t ηΠ η f O
CHjOls
Etapa 1. 2-((RH5-cloro-2-metilfeniO((R)-piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila
3-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)(2-(metoxicarbonilamino)etóxi) metil) piperidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (1,0 g, 2,27 mmols) foi dissolvido 5 em uma solução de 20 % (VA/) TFA/CH2CI2 (20 ml). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 2 h, TLC mostrou que o material de partida desapareceu, uma solução de bicarbonato de sódio saturado foi adicionada por gotejamento para ajustar pH = 7-8. A mistura resultante foi extraída com CH2Cb (3 x 30 ml), lavada com salmoura, secada por Na2SO4, 10 concentrada in vacuo para proporcionar 2-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)((R)- piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila (780 mg, 100 %).
Etapa 2. ((R)-1-((S)-2-(Boc-metilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-iQpropil- carbamoil)piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de 2-((R)-(5-cloro-2-metilfenila) Um frasco de 50 ml foi carregado com (S)-1-amino-3-((R)- tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(metii)carbamato de metil terc-butila (60 mg,
0,22 mmol) dissolvido em CH2CI2 seco. À solução foi adicionado CDI (36 mg,
0,22 mmol) e DIEA (142 mg, 1,1 mmol) em 0°C e agitada durante 1 h. Sal de ácido metil 2-((R)-(5-cloro-2-metilfenil)((R)-piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato trifluoroacético (75 mg, 0,22 mmol) foi adicionado e agitado durante a noite. A mistura foi concentrada para fornecer o produto bruto. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia para fornecer o produto (60 mg, 43 %).
Etapa 3. 2-((RH5-cloro-2-rnetilfenil)((R)-1-((S)-2-(rnetilamino)-3-((R)-tetrai- dro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-i0metóxi)etilcarbamato de metila Um frasco de 25 ml foi carregado com 2-((R)-(5-cloro-2-metil- 25 fenil)((R)-1-((S)-2-(Boc-metilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarba- moil) piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila (60 mg, 0,094 mmol). So- lução a 20 % de TFA/CH2CI2 (8 ml) foi adicionada e agitada durante 0,5 h a 0°C. A mistura foi concentrada para fornecer o resíduo, que foi purificado por HPLC preparativa para fornecer 0 produto desejado 2-((R)-(5-cloro-2- metilfenil)((R)-1-((S)-2-(metilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarba- moil) piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato de metila (4,35 mg, 9 %) como seu sal de TFA. 1H-RMN (MeOD): 1,25 (m, 2H), 1,35 - 1,50 (m, 4H), 1,60 - 1,80 (m, 3H), 1,95 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,75 (s, 3H), 3,65 (s, 3H), 3,85 (m, 4H), 4,45 (d, 1H), 7,15 (m, 2H), 7,30 (s, 1H).
O que segue são exemplos de inibidores da protease aspártica da invenção. Quando a estereoquímica em um centro de quiral não for defi- nida no nome do composto, esta indica que a amostra preparada continha uma mistura de isômeros em seu centro.
10
N0 Nome do Comp. LC-MSa Massa 1H RMN0 Comp. (3 min) Observada tR (min) 1 2-{(RH(R)-1 -((S)-2-amino-3-{(R)- 1,29 511 (M+) 7,36 - 7,32 (m, 3H), 7,23 (d, tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil) J = 7,6 Hz, 1H), 4,20 (br d, J = piperídin-3-il)(3-clomfenil)metóxi) 13,6 Hz1 1H), 4,04 (d, J = 8,8 etilcarbamato de metila Hz, 1H), 3,89 - 3,78 (m, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,48 - 3,42 (m, 2H), 3,37 (m, 1H), 3,28 - 3,24 (m, 5H), 3,15 (dd, J = 10,8, 9,2 Hz, 1 H), 2,92 (m, 2H), 1,97 (m, 1 H), 1,78 (m, 2H), 1,68 - 1,54 (m, 4H), 1,45- 1,07 (m, 5H) 2 2-((RM(R)-1-((S)-2-amino-3-((R}- 1,22 495 (M+1) 7,39 (m, 1H), 7,12 (d, J = 7,6 tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil) Hz, 1H), 7,09 - 7,04 (m, 2H), piperidin-3-il)(3-fluorofenil)metóxi) 7,23 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,21 etilcarbamato de metila (br d, J = 14,0 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 8,8 Hz1 1H), 3,90-3,79 (m, 3H), 3,65 (s, 3H), 3,49 - 3,43 (m, 214), 3,39 - 3,37 (m, 214), 3,28 - 3,25 (m, 4H), 3,16 (dd, J = 10,8, 10,0 Hz1 1 H), 2,94 (m, 2H), 1,98 (m, 1H), 1,79 (m, 2H), 1,68-1,5,3 (m, 4H), 1,46-1,07 (m, 5H) 3 2-((RH(R)-1-((S)-2-amino-3-((R)- 1,32 529 (M+) 7,19 (s, 1H), 7,16 (m, 1H), 7,23 tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil) (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 4,19 (br d, piperidin-3-ilX3-cloro-5-fluonofenil) J = 14,4 Hz, 1H), 4,07 (d, J = metóxi)etilcarbamato de metila 8,8 Hz, 1H), 3,89 - 3,79 (m, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,48 - 3,42 (m, 2H), 3,40 - 3,34 (m, 2H), 3,30 - 3,24 (m, 4H), 3,19 (dd, J = 11,2, 9,2 Hz1 1 H), 2,91 (m, 2H), 1,97 (m, 1H), 1,75 (m, 2H), 1,70 - 1,52 (m, 4H), 1,45 - 1,17 (m, 5H) 4 2-<(RH(RH-{(S)-2-amino-3-{(R)- 1,25 513 (M + 1) 6,96 - 6,91 (m, 3H), 4,19 (br d, J tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil) = 13,6 Hz, 1H), 4,09 (d, J = 8,8 piperidin-3-il)(3,5-difluorofenil)metóxi) Hz, 1H), 3,89 - 3,79 (m, 3H), 3,65 etilcarbamato de metila (s, 3H), 3,49 - 3,43 (m, 2H), 3,39 - 3,37 (m, 2H), 3,30 - 3,25 (m, 4H), 3,16 (dd, J = 10,8, 10,0 Hz1 1 H), 2,92 (m, 2H), 1,97 (m, 1H), 1,77 (m, 2H), 1,68 - 1,53 (m, 4H), 1,45 -1,09 (m, 5H) 2-<(R)-((R)-1 -((S)-2-amino-3-((R)- 1,34 525 (NO . 7,32 (s, 1H), 7,21 - 7,15 (m, tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil 2H), 4,34 (d, J = 8,8 Hz, 1H), piperidin-3-il)(5-cloro-2-metilfenil)me- 4,29 (br d, J - 14,4 Hz1 111), tóxi) etilcarbamato de metila 3,87 (m, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,48 - 3,42 (m, 2H), 3,38-3,34 (m,211), 3,30- 3,24 (m, 4H), 3,19 (dd, J = 10,8, 9,6 Hz, 1 H), 2,87 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 1,98 (m, 1H), 1,79 (m, 2H), 1,71 - 1,53 (m, 4H), 1,45-1,24 (m, 5H) 6 2-((RH(R)-1-((S)-2-amino-3-{(R)- 1,28 509 (M + 1). 7,20 (dd, J = 6,8, 2,4 Hz, 1H), tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoii; 7,14 (m, 1H), 6,97 (dd, J = piperidin-3-il)(5-flúor-2-metilfenil)metó- 10,0, 8,4Hz, 1H), 4,41 (d, J = xi) etilcarbamato de metila 8,8 Hz1 1H), 4,16 (br d, J = 12,4 Hz1 1H), 3,87 (m, 2H), 3,77 (br d, J = 12,8 Hz, 1 H), 3,45 (m, 2H), 3,35 (m, 1H), 3,48 - 3,42 (m, 2H), 3,38 - 3,34 (m, 2H), 3,29 - 3,26 (m, 4H), 3,16 (dd, J = 11,2, 9,6 Hz, 1 H), 3,00 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 1,97 (m, 1H), 1,86 (m, 1H), 1,71 (m, 1H), 1,66 (m, 3H), 1,56 (m, 1H), 1,45-1,21 (m,5H) 7 2-{(RH3-clorofenilX(R)-1-((S)-2- 1,3 525(1 ‘4“) 7,37 - 7,29 (m, 3H), 7,21 (d, J = (metilamino)-3-{(R)-tetraidro-2H-piran- 6,8 Hz1 1 H), 4,20 (br d, J = 12,4 3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il) Hz1 1H), 4,02 (d, J = 9,2 Hz, 1H), metóxijetilcarbamato de metila 3,87 - 3,78 (m, 311), 3,62 (s, 3H), 3,57 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 3,44 (dd, J = 11,2, 3,6 Hz1 1H), 3,28 - 3,22 (m, 6H), 3,15 (td, J = 10,8, 9,6 Hz11 H), 2,89 (m, 2H), 2,75 (s, 3H), 1,97 (m, 1H), 1,77 (m, 2H), 1,65-1,17 (m,9H) 8 2-((RH5-cloro-2-metilfenilX(R)-1 -((S)- 1,34 539 (M4) 7,30 (d, J = 2,4 Hz1 1H), 7,19 - 2-{ metilamino)-3-(( R)-tetraidro-2 H- 7,13 (m, 2H), 4,33 - 4,27 (m, piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3- 2H), 3,87 - 3,84 (m, 3H), 3,62 l)metóxi)etilcarbamato de metila (s, 3H), 3,57 (d, J = 13,2 Hz, 11-1), 3,44 (td, J = 10,8, 3,2 Hz, 1H), 3,29 - 3,21 (m, 6H), 3,15 (dd, J = 11,2, 9,6 Hz, 1 H), 2,85 (m, 2H), 2,74 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 1,98 (m, 1H), 1,76 (m, 2H), 1,65-1,21 (m, 9H) 9 2-((R)-(3-cloro-5-fluorofenilX(R)-1 - 1,35 543 7,17 - 7,14 (m, 2 H), 7,03 (d, J (S)-2-(metilamino)-3-((R)-tetraidro- (Μ + H) = 8,8 Hz, 1 H), 4,19 (br d, J = 2H-piran-3-il)propilcarbamoil) piperi- 12,0 Hz1 1H), 4,05 (d, J = 8,4 din-3-il)metóxí)etilcarbamato de metila Hz, 1 H), 3,87 - 3,78 (m, 3 H), 3,62 (s, 3 H), 3,57 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 3,44 (td, J = 10,8, 3,6 Hz1 1H), 3,32 - 3,26 (m, 6 H), 3,15 (dd, J = 11,2, 9,6 Hz, 1 H), 2,88 (m, 2 H), 2,74 (s, 3H), 1,97 (m, 1 H), 1,78-1,19 (m, 11 H) 2-((RH3,5-difluorofenilX(R)-1-((S>-2- 1,26 527 6,93-6,86 (m, 3 H), 4,19 (br d, J metilamino}-3-((R)-tetraidro-2H-piran- (Μ + H) = 13,2 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 8,4 3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il) Hz, 1 H), 3,85 (br d, J = 11,6 Hz, rietóxi)etilcarbamato de metila 2H), 3,79 (br d, J = 14,0 Hz, 1 H), 3,62 (s, 3 H), 3,56 (d, J = 13,2 Hz, H), 3,43 (td, J = 11,2, 3,2 Hz, 1 H), 3,34-3,23 (m, 6 H), 3,15 (dd, J = 11,2, 9,6 Hz, 1 H), 2.88 (m, 2 4), 2,74 (s, 3 H), 1,97 (m, 1 H), 1,78- 1,17 (m, 11 H) 11 2-((S)-(5-cloro-2-metilfenilX(R)-1-((S}- 1,795 539,1, 1,93 (m, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,72 2-(metilamino)-3-((R)-tetraidrc>-2H- 561,0 (s, 3H), 2,85(m, 2H), 3,66 (s, piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3- 3H), 3,85 (m, 4H), 4,43 (d, 1H), il)metóxi)etilcait>amato de metila 7,16 (m, 2H),7,32 (s, 1H) 12 2-((R)-(5-cloro-2-metilfenilX(R)-1-((S)- 1,4 552 7,30 (d, J = 2,0, 1 H), 7,19 - 2-(etilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran- (Μ + H) 7,14 (m, 2 H), 4,33-4,28 (m, 2 3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il) H), 3,88 - 384 (m, 3 H), 3,62 (s, metóxijetilcarbamato de metila 3 H), 3,58 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 3,44 (td, J = 10,8, 3,2 Hz, 1 H), 3,35-3,10(m, 9 H), 2,86 (m, 2 H), 2,32 (s, 3 H), 1,97 (m, 1 H), 1,79- 1,22 (m, 8 H), 1,32 (t, J = 7,2 Hz, 3 H). 13 2-{(R)-(3-clorofenilX(R)-1-((S)-2-(etila- 1,36 539 7,37 - 7,30 (m, 3 H), 7,22 (d, J mino)-3-((RHetraidro-2H~piran-3-il) (Μ + H) = 7,2 Hz, 1 H), 4,21 (br d, J = propilcarbamoil)piperidin-3-il)metóxi) 12,4 Hz, 1H), 4,02 (d, J = 9,2 etilcarbamato de metila Hz1 1 H), 3,87 - 3,79 (m, 3 H), 3,62 (s, 3 H), 3,58 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 3,44 (td, J = 10,8, 3,2 Hz, 1H), 3,34 - 3,11 (m, 9 H), 2,90 (m, 2 H), 1,98 (m, 1H), 1,78 -1,15 (m, 8 H), 1,33 (t, J = 7,2 Hz1 3 H). a. método LC-MS (3 min)
Coluna: Chromolith SpeedRod1 RP-18e, 50 x 4,6 mm; fase Mo- bil: A: 0,01%TFA/água, B: 0,01%TFA/CH3CN; Taxa de fluxo: 1 ml/min; Gra-
diente:
Tempo (min) A% B% 0,0 90 10 2,0 10 90 2,4 10 90 2,5 90 10 3,0 90 10 b. d4-MeOH foi usado como 1H RMN solvente.
c. MeOD foi usado como 1H RMN solvente.
EXEMPLO 15
2:1 Sal de 2-((R)-(3-clorofenil)((R)-1-((S)-2-(metilamino)-3-((R)-tetraidro-2H- piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il)metóxi)-etilcarbamato pamoato de me- tila
Etapa 1.
A uma solução de 2-((R)-(3-clorofenil)((R)-1-((S)-2-(metilamino)-
3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il)metóxi)-etilcarba- mato de metila (8,27 g, 15,7 mmols), em IPA (50 ml), ácido pamóico (3,12 g, 7,85 mmols) foi adicionado. A mistura resultante foi aquecida em 40 C du- rante a noite, esfriada para a temperatura ambiente e agitada durante 10 horas, que forneceu uma suspensão amarela. O sólido foi filtrado, lavado com IPA (100 ml), e secado sob vácuo para fornecer 2:1 sal de 2-((R)-(3- clorofenil)((R)-1-((S)-2-(metilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarba- moil)piperidin-3-il)metóxi)etilcarbamato pamoato de metila (10,9 g, 96%).
Etapa 2.
O sal de pamoato acima (7,44 g) foi submetido a refluxo em eta- nol (74 ml) até que dissolvido. A solução resultante foi filtrada quente e esfri- ada lentamente para a temperatura ambiente, e agitada durante a noite. O sólido foi filtrado e lavado com etanol (25 ml) para fornecer 0,5 eq de sal de 10 pamoato como um cristal amarelo-claro (5,52 g, 74 %); p.f.: 155,5 - 156,5 C. Etapa 3.
O cristal de sal de pamoato recristalizado (7,85 g) foi submetido a refluxo em etanol (70 ml) até que dissolvido, filtrado quente, esfriado para a temperatura ambiente e agitado durante a noite. O sólido foi filtrado e Ia- vado com etanol (20 ml) para fornecer um cristal fino amarelo-claro (6,99 g, 89 %).
EXEMPLO 16
2:1 Sal de 2-((R)-(3-clorofenil)((R)-1-((S)-2-(metilamino)-3-((R)-tetraidro- 2H-piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il)metóxi)-etilcarbamato pamoato de metila
O cristal de sal de pamoato recristalizado (0,19 g), obtido do E- xemplo 15, Etapa 3, foi aquecido em metanol (5 ml) a 60°C até que total- mente dissolvido. A solução foi depois esfriada para a temperatura ambiente e semeada com 2:1 cristais de sal de 2-((R-(3-clorofenil)((R)-1-((S)-2- 25 (metilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarbamoil)piperidin-3-il)metó- xi)-etilcarbamato pamoato de metila (~5 mg). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 48 hs. O sólido foi filtrado e secado sob vácuo para fornecer um cristal fino amarelo claro (53,0 mg, 28%).
Difracão em pó de raio X Os padrões de difração em pó de raio X de 2:1 sal de 2-((R)-(3-
clorofenil)((R)-1-((S)-2-(metilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propilcarba- moil)piperidin-3-il)metóxi)-etilcarbamato pamoato de metila que foi obtido pelo procedimento descrito no Exemplo 15, foram determinados utilizando o seguinte método:
A amostra é examinada usando os seguintes parâmetros:
Faixa de varredura: 2-40 graus dois-teta
Força do gerador: 40kV, 40mA
Fonte de Radiação: Cu Ka
Tipo de varredura: Contínua
Tempo per etapa: 10 segundos
Tamanho da etapa: 0,017 grau dois-teta per etapa
Rotação da Amostra: tempo de revolução 1 s
Feixes óticos incidentes: cortes soller de 0,04 radiano, 0,25
grau de corte divergente, capa de fei- xes de 10 mm, corte antidispersão de
0,5 grau
Feixes óticos submetidos a difração: cortes fixos (módulo X'celerator), cor- tes soller de 0,04 radiano Tipo de Detector. Philips X1CeIerator RTMS (Real Time
Multi Strip)
A difração em pó de raio X de uma batelada de 2:1 sal de 2-((R)- (3-clorofenil)((R)-1-((S)-2-(metilamino)-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propilcar- bamoil)piperidin-3-il)metóxi)-etilcarbamato de metila é mostrada na figura 1. EXEMPLO 17
ESTUDOS DA ATIVIDADE IN VITRO
Os inibidores da protease aspártica descritos possuem proprie- 25 dades inibidoras da enzima. Em particular, eles inibem a ação da enzima renina natural. Esta última passa dos rins para o sangue onde efetua a cliva- gem do angiotensinogênio, liberando a decapeptídeo angiotensina I que é depois clivada no sangue, pulmões, os rins e outros órgãos pela enzima conversora de angiotensina para formar a octapeptídeo angiotensina II. O 30 octapeptídeo aumenta a pressão arterial tanto diretamente pela ligação ao seu receptor, causando vasoconstrição arterial, quanto indirectamente medi- ante a liberação das glândulas adrenais do hormônio aldosterona conserva- dor do íon de sódio, acompanhado por um aumento do volume de fluido ex- tracelular. Este aumento pode ser atribuído à ação da angiotensina II. Os inibidores da atividade enzimática da renina efetuam uma redução na forma- ção de angiotensina I. Como resultado, uma menor quantidade de angioten- 5 sina Il é produzida. A concentração reduzida deste hormônio de peptídeo ativo é a causa direta do efeito hipotensor dos inibidores da renina.
A ação dos inibidores de renina in vitro pode ser demonstrada experimentalmente por meio de um teste que mede o aumento da fluores- cência de um substrato de peptídeo internamente extinto. A seqüência deste 10 peptídeo corresponde à seqüência do angiotensinogênio humano. O seguin- te protocolo de teste foi utilizado. Todas as reações foram realizadas em uma placa de microtítulo opaca branca de fundo plano. Uma alíquota de 4 μΙ de 400 μΜ de substrato de renina (DABCYL-y-Abu-lle-His-Pro-Phe-His-Leu- Val-lle-His-Thr-EDANS) em 192 μΙ de tampão de ensaio (50 mM BES1 150 15 mM NaCI, 0,25 mg/ml de albumina sérica bovina, pH 7,0) foi adicionada em
4 μΙ de composto de teste em DMSO em várias concentrações variando de 10 μΜ a 1 nM de concentrações finais. Em seguida, 100 μΙ de renina huma- na recombinante ativada por tripsina (concentração de enzima final de 0,2 a 2 nM) em tampão ensaio foram adicionados, e a solução foi misturada por 20 pipetagem. O aumento na fluorescência em 495 nm (excitação em 340 nm) foi medido durante 60 a 360 minutos em tr usando uma leitora de microplaca Perkin-Elmer Fusion. O declive de uma parte linear do gráfico de aumento da fluorescência como uma função do tempo foi então determinado, e a taxa é utilizada para calcular a inibição percentual em relação ao controle não 25 inibido. Os valores de inibição percentual foram depois traçados em gráfico como uma função da concentração de inibidor, e a IC50 foi determinada a partir de um ajuste destes dados para uma equação de quatro parâmetros. A IC5O foi definida como a concentração de um inibidor particular que reduz a formação de produto em 50 % em relação a uma amostra de controle que 30 não contém nenhum inibidor. Nos sistemas in vitro, os inibidores da protease aspártica descritos apresentam atividades inibidoras nas concentrações mí- nimas de aproximadamente 5 x IO 5 M a aproximadamente 10'12 M. Os inibi- dores da protease aspártica específicos apresentam atividades de inibição em concentrações mínimas de aproximadamente 10'7 M a aproximadamente 10"12 M. (Wang G. T. et al. Anal. Biochem. 1993, 210, 351; Nakamura, N. et al. J. Biochem. (Tokyo) 1991, 109, 741; Murakami, K. et al. Anal Biochem.
5 1981,110,232).
A ação dos inibidores de renina in vitro no plasma humano tam- bém pode ser demonstrada experimentalmente pela diminuição dos níveis de atividade de renina no plasma (PRA) observados na presença dos com- postos. As misturas de incubação contidas no volume final de 250 μΙ_ 95,5 10 mM de ácido N,N-bis(2-hidroxietil)-2-aminoetanossulfônico, pH 7,0, 8 mM EDTA, 0,1 mM sulfato de neomicina de 1 mg/ml de azido de sódio, 1 mM fluoreto de fenilmetanossulfonila, 2% de DMSO e 87,3% de plasma humano de gêneros misturados estabilizado com EDTA. Para as bateladas de plas- ma com PRA baixo (menos de 1 ng/ml/h) -2 pM de renina humana recombi- 15 nante foram adicionados para alcançar o PRA de 3 a 4 ng/ml/hora. A cliva- gem do angiotensinogênio endógeno no plasma foi realizada em 37°C du- rante 90 min e o produto angiotensina I foi medido por radíoimunoensaio competitivo utilizando o kit DiaSorin PRA. As incubações não inibidas con- tendo 2% DMSO e controles totalmente inibidos com 2 M de isovaleril-Phe- 20 NIe-Sta-AIa-Sta-OH foram então usados para obter o percentual de inibição para cada concentração de inibidores e ajustar os dados de dose-resposta em um modelo de quatro parâmetros a partir do qual os valores de IC50, de- finidos como concentrações de inibidores em que 50 % de inibição ocorre, são determinados.
Os estudos de atividade enzimática in vitro foram realizados pa-
ra os compostos de 1 a 12 e os dados são apresentados na Tabela 1.
N0 de Comp. IC50 PRA 1 *** *** 2 *** 3 *** 4 *** 5 **** CO *** ★ 7 ★ ★★ Continuação
N0 de Comp. IC50 PRA 8 ★ ★★ 9 10 ★★★ *** 11 ★ ★★ **★ 12 ★★★ nt Tabela 1. Dados in vitro de IC50 e PRA para os inibidores da protease aspártica. * representa menos do que 50 nM; ** representa menos do que 20 nM; *** representa me- nos do que 10 nM; **** representa menos do que 1 nM; NT: não testado.
EXEMPLO 18
ESTUDOS DA ATIVIDADE IN VIVO
A eficácia hemodinâmica cardíaca e sistêmica dos inibidores da 5 renina pode ser avaliada in vivo em macacos cinomolgos normotensos redu- zidos de sódio. A pressão sanguínea arterial é monitorada por telemetria em animais conscientes com movimento livre.
O Macaco Cinomolgos (exemplo profético): Seis macacos cino- molgos simples machos pesando entre 2,5 e 3,5 kg devem ser usados nos 10 estudos. Pelo menos 4 semanas antes da experiência, os macacos são a- nestesiados com cloridrato de cetamina (15 mg/kg, i.m.) e cloridrato de xila- zina (0,7 mg/kg, i.m.), e são implantados na cavidade abdominal com um transmissor (Model #TL1 1M2-D70-PCT, Data Sciences, St. Paul, MN). O cateter de pressão é inserido na parte inferior da aorta abdominal através da 15 artéria femoral. Os condutores bipotenciais são colocados na configuração Lead II. Os animais são mantidos sob temperatura constante (19 a 25°C), umidade (> 40%) e condições iluminação (ciclo de 12 h Iuz e escuro), são alimentados uma vez por dia, e são permitidos livre acesso à água. Os ani- mais são exauridos de sódio mediante a sua colocação em uma dieta com 20 baixo teor de sódio (0,026 %, Expanded Primate Diet 829552 MP-VENaCI (P), Special Diet Services, Ltd., UK) 7 dias antes da experiência e furosemi- da (3 mg/kg, intramuscularmente i.m., Aventis Pharmaceuticals) é adminis- trada em -40 h e ~16 h antes da administração do compostos de teste.
Para dosagem oral, os inibidores da renina são formulados em 0,5% metilcelulose em níveis de dose de 10 e 30 mg/kg (5 ml/kg) por tubos de alimentação infantil. Para a liberação intravenosa, um cateter silástico é implantado na veia cava posterior através de uma veia femoral. O cateter é ligado à bomba de liberação através de um sistema amarrado e uma articu- lação giratória. O composto de teste (doses de 0,1 a 10 mg/kg, formulado em 5% dextrose) é administrado por infusão contínua (1,67 ml/kg/h) ou por 5 injeção em bolo (3,33 ml/kg em 2 min).
As pressões arteriais (sistólica, diastólica e média) e a tempera- tura corporal são registradas de forma contínua em 500 Hz e 50 Hz, respec- tivamente, utilizando o software Dataquest™ A.R.T. (Advanced of Research Technology). A frequência cardíaca é proveniente do traço da pressão san- 10 guínea fásica. Durante o período de registro, os macacos são mantidos em um ambiente separado sem a presença humana para evitar alterações na pressão secundárias ao estresse. Todos os dados são expressos como a média ± SEM. Os efeitos dos inibidores da renina sobre a pressão arterial são avaliados por ANOVA, levando em conta os fatores dose e tempo em 15 comparação com o grupo de veículo.
Ratos Transgênicos Duplos: A eficácia dos inibidores da renina também pode ser avaliada in vivo em ratos transgênicos duplos planejados para expressar a renina humana e angiotensinogênio humano (Bohlender J, Fukamizu A, Lippoldt A, Nomura T, Dietz R, Menard J, Murakami K, Luft FC, 20 Ganten D. High human renin hypertension in transgenic rats. Hypertension 1997, 29, 428-434). A atividade in vivo para o composto 7 foi conduzido de acordo com os seguintes procedimentos.
As experiências foram conduzidas em ratos transgênicos duplos com 6 semanas de idade (dTGRs). O modelo foi descrito em detalhes ante- 25 riormente. Resumidamente, a construção de renina humana usada para ge- rar animais transgênicos prepararam o gene da renina humana genômico inteiro (10 exons e 9 introns), com 3,0 kB da região promotora 5’ e 1,2 kB de seqüências adicionais 3'. A construção de angiotensinogênio humano prepa- rou o gene angiotensinogênio humano inteiro (5 exons e 4 introns), com 1,3 30 kB de seqüências de flanco 5' e 2,4 kB de seqüências de flanco 3’. Os ratos foram adquiridos da RCC Ltd (Fullinsdorf, Suíça). Os transmissores de radio- telemetria foram cirurgicamente implantados em 4 semanas de idade. O sis- tema de telemetria fornecida registros de 24 horas da pressão arterial sistóli- ca, média, diastólica (SAP, MAP, DAP, respectivamente) e frequência cardí- aca (HR). Começando no dia 42, os animais foram transferidos para gaiolas de telemetria. Uma leitura de telemetria em 24 h foi obtida. Os ratos foram 5 dosados por via oral nos seguintes 4 dias consecutivos (dias 43 a 46). Os ratos foram monitorados continuamente e deixados com livre acesso a ração de rato com 0,3% de sódio padrão e água potável.
A atividade de rato transgênico in vivo para o composto 7 é mos- trada na figura 2. Como mostrado na figura 2, o composto 7 apresentou um efeito significativo na diminuição das pressões sanguíneas de ratos transgê- nicos em uma dosagem de 3 a 10 mg/kg.
Embora esta invenção tenha sido particularmente apresentada e descrita com referências às suas modalidades específicas, ficará entendido por aqueles versados na técnica que várias mudanças na forma e detalhes podem ser feitas a esse respeito sem divergir do escopo da invenção incluí- do pelas reivindicações anexas.

Claims (27)

1. Composto representado pela seguinte fórmula estrutural: <formula>formula see original document page 98</formula> (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que: R1 é alquila, cicloalquila ou cicloalquilalquila; R2 é H ou alquila; R3 é F, Cl, Br, ciano, nitro, alquila, haloalquila, alcóxi, haloalcó- xi ou alcanossulfonila; e n é 0, 1, 2 ou 3.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que: R1 é (C1-C3) alquila; R2 é H ou (C1-C3) alquila; R3 é F, Cl, Br, ciano, nitro, (C1-C3) alquila, IiaIo(C1-C3) alquila, (Ci-C3) alcóxi, IiaIo(C1-Cs) alcóxi ou (C1-C3) alcanossulfonila; e n é 0, 1, 2 ou 3.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto é representado pela seguinte fórmula estrutural: H<formula>formula see original document page 98</formula> (Ia) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que: R1 é (C1-C3) alquila; R2 é H ou (C1-C3) alquila; R3 é F, Cl, Br, ciano, nitro, (C1-C3) alquila, IiaIo(C1-C3) alquila, (C1-C3) alcóxi, IiaIo(C1-C3) alcóxi ou (CrC3) alcanossulfonila; e n é 0, 1, 2 ou 3.
4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que R1 é metila.
5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que R2 é H ou metila.
6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que R3 é F, Cl ou metila.
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que n é 1 ou 2.
8. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto é representado por uma fórmula estrutural selecionada de: <formula>formula see original document page 99</formula> <formula>formula see original document page 100</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
9. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o com- posto é representado por uma fórmula estrutural selecionada de: <formula>formula see original document page 101</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
10. Composto representado pela seguinte fórmula estrutural: 5<formula>formula see original document page 102</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
11. Composto representado pela seguinte fórmula estrutural: ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que o composto é pelo menos 90% opticamente puro.
12. Composição farmacêutica compreendendo um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável e o composto como definido em qual- quer uma das reivindicações 1 a 11.
13. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 12, ainda compreendendo um bloqueador a, bloqueador β, bloqueador do canal de cálcio, diurético, natriurético, salurético, antihipertensivo de atuação cen- tral, inibidor da enzima conversora da angiotensina, enzima conversora da angiotensina dual e inibidor da endopeptidase neutra, um bloqueador do re- ceptor da angiotensina, bloqueador do receptor da angiotensina dual e anta- gonista do receptor da endotelina, inibidor da aldosterona sintase, antagonis- ta do receptor da aldosterona ou antagonista do receptor da endotelina.
14. Método de antagonizar uma ou mais proteases aspárticas em um indivíduo com sua necessidade, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11.
15. Método de acordo com a reivindicação 14, em que a protea- se aspártica é renina.
16. Método para o tratamento de um distúrbio mediado pela pro- tease aspártica em um indivíduo que compreende a administração ao indiví- duo de uma quantidade eficaz do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11.
17. Método de acordo com a reivindicação 16, em que dito dis- túrbio é hipertensão, insuficiência cardíaca congestiva, hipertrofia cardíaca, fibrose cardíaca, cardiomiopatia pós-infarto, nefropatia, vasculopatia e neu- ropatia, uma doença dos vasos coronários, hipertensão pós-cirúrgica, reste- nose seguinte a angioplastia, pressão intra-ocular elevada, glaucoma, cres- cimento vascular anormal, hiperaldosteronismo, um estado de ansiedade, ou um distúrbio cognitivo.
18. Método de acordo com a reivindicação 16, ainda compreen- dendo a administração de um ou mais agentes adicionais do grupo consis- tindo de um bloqueador a, um bloqueador β, um bloqueador do canal de cál- cio, um diurético, um inibidor da enzima conversora da angiotensina, uma enzima conversora da angiotensina dual e inibidor da endopeptidase neutra, um bloqueador do receptor da angiotensina, bloqueador do receptor da an- giotensina dual e antagonista do receptor da endotelina, um inibidor da al- dosterona sintase, um antagonista do receptor da aldosterona ou um anta- gonista do receptor da endotelina.
19. Método de acordo com a reivindicação 16, em que a protea- se aspártica é β-secretase.
20. Método de acordo com a reivindicação 16, em que a protea- se aspártica é plasmepsina.
21. Método de acordo com a reivindicação 16, em que a protea- se aspártica é protease do HIV.
22. Composto representado por uma fórmula estrutural selecio- nada de: <formula>formula see original document page 104</formula> ou um sal deste, em que R2 é H ou alquila; e E é H ou um grupo de proteção de amina.
23. Composto de acordo com a reivindicação 22, em que R2 é H ou (C1-C3) alquila.
24. Composto de acordo com a reivindicação 23, em que R2 é H ou metila.
25. Composto de acordo com a reivindicação 22, em que o com- posto é selecionado do grupo consistindo de: (S)-1 -amino-3-((R)-tetraídro-2H-piran-3-il)propan-2-ilcarbamato de terc-butila; (S)-1-amino-3-((R)-tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(metil)carbamato de terc- butila; terc-butil-1-amino-3-(tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-ilcarbamato; e terc-butil-1 -amino-3-(tetraidro-2H-piran-3-il)propan-2-il(metil)carbamato.
26. Uso do composto como definido em qualquer uma das rei- vindicações 1 a 11, para a preparação de uma composição farmacêutica para antagonizar uma ou mais proteases aspárticas em um indivíduo com sua necessidade.
27. Uso do composto como definido em qualquer uma das rei- vindicações 1 a 11, para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de um distúrbio mediado pela protease aspártica em um indivíduo com sua necessidade.
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