BRPI0721477A2

BRPI0721477A2 - derivados de Ácido indolizina acÉtico como antagonistas de crth2

Info

Publication number: BRPI0721477A2
Application number: BRPI0721477-4A
Authority: BR
Inventors: George Hynd; Yann Griffon; David Middlemiss; Nicholas Charles Ray; Harry Finch; John Gary Montana; Michael Colin Cramp; Trevor Keith Harrison; Rosa Arienzo; Paul Blaney
Original assignee: Argenta Discovery Ltd
Priority date: 2007-03-21
Filing date: 2007-03-21
Publication date: 2013-01-15
Also published as: WO2008113965A1; EP2136804A1; AU2007349641A1; EA200970875A1; IL201090A0; CA2681409A1; JP2010522149A; NO20093039L; MX2009010068A; CN101678009A; US20100137300A1

Abstract

DERIVADOS DE ÁCIDO INDOLIZINA ACÉTICO COMO ANTAGONISTAS DE CRTH2. Os compostos específicos dessa lista: ácido {7-ciano-2-metil-1- [4-(morfolina-4-sulfonil] indolizin-3-il}acético, ácido [1-(3-cloro-4-etanossulfonilbenzil)-7-ciano- 2-metilindolizin-3-il] acético, ácido{1- [3-cloro-4-(morfolina-4-sulfonil) benzil]-7-ciano-2-metilindolizin-3-il} acético, ácido [1- (3-cloro-4-etanossulfonilfenilsulfanil)-7-ciano-2-metilindolizin-3-il] acético, ácido {l- [3-cloro-4- (morfolina-4-sulfonil} fenilsulfanil]-7-ciano-2-metilindolizin-3-il} acético, ácido [7-ciano-l-(6- fluoroquinolin-2-ilmetil) -2-metilindolizin-3-il] acético são ligandos do receptor CRTH2 e são úteis no tratamento de doenças respiratórias.

Description

DERIVADOS DE ÁCIDO INDOLIZINA ACÉTICO COMO ANTAGONISTAS DE CRTH2

A presente invenção refere-se a compostos de indolizina específicos que são ligandos do receptor CRTH2 (Molécula homóloga de receptor quimioatraente expressa em células auxiliares T tipo 2), e seu uso no tratamento de doenças responsivas à modulação de atividade de receptor de CRTH2, principalmente doenças com um componente inflamatório significativo.

Antecedentes da invenção

Mastócitos são conhecidos por desempenharem um papel importante em respostas alérgicas e imunes através da liberação de diversos mediadores, como histamina, leucotrienos, citocinas, prostaglandina D2, etc. (Boyce; Allergy Asthma Proc., 2004, 25, 27-30). Prostaglandina D2 (PGD2) é o principal metabólito produzido pela ação de ciclooxigenase em ácido aracadônico por mastócitos em resposta ao desafio de alérgeno (Lewis e outros; J. Immunol., 1982, 129, 1627-1631). Foi mostrado que a produção de PGD2 é aumentada em pacientes com mastocitose sistêmica (Roberts; N. Engl. J.Med., 1980, 303, 1400-1404), rinite alérgica (Naclerio e outros; Am. Ver. Respir. Dis., 1983, 128, 597-602; Brown e outros; Arch. Otolarynol. Head Neck Surg., 1987, 113, 179-183; Lebel e outros; J. Allergy Clin. Immunol., 1988, 82, 869-877), asma bronquial (Murray e outros; N. Engl. J. Med., 1986, 315, 800-804; Liu e outros; Am. Ver. Respir. Dis., 1990, 142, 126-132; Wenzel e outros; J. Allergy Clin. Immunol., 1991, 87, 540-548), e urticária (Heavey e outros; J. Allergy Clin. Immunol., 1986, 78, 458-461) . PGD2 media seus efeitos através de dois receptores, o receptor PGD2 (ou DP) (Boie e outros; J. Biol. Chem., 1995, 270, 18910-18916) e a molécula homóloga de receptor quimioatraente expressa em Th2 (ou CRTH2) (Nagata e outros; J. Immunol., 1999, 162, 1278-1289; Powell; Prostaglandins Luekot. Essent. Fatty Acids, 2003, 69, 179-185). Portanto, foi postulado que agentes que antagonizam os efeitos de PGD2 em seus receptores podem ter efeitos benéficos em diversos estados de doença.

0 receptor CRTH2 foi mostrado como sendo expresso em tipos de células associados à inflamação alérgica, como basófilos, eosinófilos e as células auxiliares imunes tipo Th2 (Hirai e outros; J. Exp. Med., 2001, 193, 255-261). 0 receptor CRTH2 foi mostrado como mediando migração de

células mediadas por PGD2 nesses tipos de células (Hirai e outros; J. Exp. Med., 2001, 193, 255-263), e também desempenhando um papel principal em recrutamento de células de neutrófilo e eosinófilo em um modelo de dermatite de contato (Takeshita e outros; Int. Immunol., 2004, 16, 947-

959). Ramatroban {ácido (3R)-3-[(4-fluorofenil)sulfonil- amino]-1,2,3,4-tetrahidro-9H-carbazol-9-propanóico}, um

antagonista receptor A2 tromboxano e CRTH2 dual, foi mostrado como atenuando essas respostas (Sugimoto e outros; J. Pharmacol. Exp. Ther., 2003, 305, 347-352; Takeshita e

outros; op. cit.). 0 potencial de PGD2 tanto para aumentar inflamação alérgica como induzir uma resposta inflamatória foi demonstrado em camundongos e ratos. Camundongos transgênicos que superexpressam sintase de PGD2 apresentam eosinofilia pulmonar aumentada e niveis aumentados de

citocinas Th2 em resposta ao desafio alérgeno (Fujitani e outros; J. Immunol., 2002, 168, 443-449). Além disso, agonistas CRTH2 exogenamente administrados intensificam a resposta alérgica em camundongos sensibilizados (Spik e outros; J. Immunol., 2005, 174, 3703-3708). Em ratos

agonistas CRTH2 exogenamente aplicados causam eosinofilia pulmonar, porém um agonista DP (BW 245C) ou um agonista TP (I-BOP) não mostraram efeito (Shirashi e outros; J. Pharmacol. Exp. Ther., 2005, 312, 954-960). Essas observações sugerem que antagonistas de CRTH2 podem ter propriedades valiosas para o tratamento de doenças mediadas por PGD2.

0 pedido copendente dos requerentes, PCT/GB200 6/003394 refere-se a compostos antagonistas de CRTH2 da fórmula (I) e sais, N-óxidos, hidratos e solvatos dos mesmos:

em que

Ri/ R2, R3 e R4 são cada um independentemente hidrogênio, alquila Ci-C6, alquila Ci-C6 total ' ou parcialmente fluorada, halo, -S(O)nR10, -SO2N(Ri0)2, -N(Ri0)2, -C(O)N(Ri0)2, -NRi0C(O)R9, -CO2Ri0, -C(O)R9, -NO2, -CN ou -OR11;

em que cada R9 é independentemente alquila Ci-C6, arila, heteroarila;

Ri0 é independentemente hidrogênio, alquila C1-C6, arila ou heteroarila;

Rii é hidrogênio, alquila C1-C6, alquila Ci-C6 total ou parcialmente fluorada ou um grupo -SO2R10;

η é 0, 1 ou 2;

R5 é alquila C1-C6, alquila C1-C6 totalmente ou parcialmente fluorada, alquenila Ci-C6, alquinila C1-C6, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída; R6 é hidrogênio, alquila Ci-C6 ou alquila Ci-C6 total ou parcialmente fluorada;

R7 e R8 são independentemente hidrogênio ou alquila C1-C6, ou R7 e R8 juntamente com o átomo ao qual são ligados formam um grupo de cicloalquila; e

X é -CHR6-, -S(O)n, -C(O)-, -NR6SO2- ou -SO2NR6- onde η é 0, 1 ou 2.

Descrição detalhada da invenção

A presente invenção provê um grupo de compostos específicos compreendidos no escopo de, porém não

especificamente revelados no pedido copendente dos requerentes PCT/GB2006/003394 mencionado acima.

A invenção provê um composto selecionado do grupo que consiste em

Ácido {7-ciano-2-metil-l-[4-(morfolina-4-

sulfonil]indolizin-3-il} acético,

Ácido [1-(3-cloro-4-etanossulfonilbenzil)-7-

ciano-2- metilindolizin-3-il] acético,

Ácido {1-[3-cloro-4-(morfolina-4-

sulfonil)benzil]-7-ciano-2-metilindolizin-3-il} acético,

Ácido [1- (3-cloro-4-etanossulfonilfenilsulfanil)- 7-ciano-2-metilindolizin-3-il] acético,

Ácido {1-[3-cloro-4-(morfolina-4-sulfonil)fenil sulfanila]-7-ciano-2-metilindolizin-3-il} acético, Ácido [7-ciano-l-(6-fluoroquinolin-2-ilmetil)-2-

metilindolizin-3-il] acético,

e sais, N-óxidos, hidratos e solvatos dos mesmos. Os compostos aos quais a invenção se refere são antagonistas de receptor CRTH2. Um segundo aspecto da invenção é uma composição

farmacêutica que compreende um composto da invenção em mistura com um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Um terceiro aspecto da invenção é um composto da invenção para uso em terapia.

Um quarto aspecto da invenção é o uso de um composto da invenção na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença na qual um antagonista de CRTH2

pode evitar, inibir ou melhorar a patologia e/ou sintomatologia da doença.

Um quinto aspecto da invenção é um método para tratar uma doença em um paciente no qual um antagonista de CRTH2 pode evitar, inibir ou melhorar a patologia e/ou

sintomatologia da doença, cujo método compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção.

Em particular, compostos aos quais a invenção se refere são úteis no tratamento de doença associada a níveis

elevados de prostaglandina D2 (PGD2) ou um ou mais metabólitos ativos da mesma.

Os exemplos de tais doenças incluem asma, rinite, síndrome de via aérea alérgica, rinobronquite alérgica, bronquite, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) ,

polipose nasal, sarcoidose, doença do feno mofado (farmer's lung), pulmão fibróide, fibrose cística, tosse crônica, conjuntivite, dermatite atópica, doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica, complexo de demência AIDS, doença de Huntington, demência frontotemporal, demência de

corpo de Lewy, demência vascular, síndrome de Guillain- Barre, polirradiculo-neuropatia de desmielinização crônica, neuropatia de motor multifocal, plexopatia, esclerose múltipla, encefalomielite, panencefalite, degeneração cerebelar e encefalomietile, trauma de SNC, enxaqueca,

derrame, artrite reumatóide, espondilite anquilosante, doença de Behcet, bursite, síndrome do túnel de carpo, doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, colite β/30 ulcerativa, dermatomiosite, Síndrome Ehlers-Danlos (EDS), fibromialgia, dor miofacial, osteoartrite (OA) , osteonecrose, artrite psoriática, síndrome de Reiter (artrite reativa), sarcoidose, escleroderma, Síndrome de Sjogren, doença de tecido mole, Doença de Still, tendinite,

poliarterite nodosa, Granulomatose de Wegener, miosite (dermatomiosite polimiosite), gota, aterosclerose, lupus eritematoso, lupus eritematoso sistêmico (SLE), diabetes tipo I, síndrome nefrítica, glomerulonefrite, insuficiência renal aguda e crônica, fascite eosinofilia, síndrome hiper

IgE, sepse, choque séptico, lesão de reperfusão isquêmica no coração, rejeição de aloenxerto após transplantes e doença de enxerto versus hospedeiro.

Entretanto, os compostos aos quais a invenção se refere são principalmente de valor para o tratamento de

asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, rinite, síndrome de via aérea alérgica ou rinobronquite alérgica. Psoríase, dermatite atópica e não atópica, doença de Crohn, colite ulcerativa e doença do intestino irritável são outras condições específicas onde ós presentes compostos podem ter

utilidade específica.

Como utilizado aqui, o termo "sal" inclui adição de base, adição de ácido e sais quaternários. Os compostos da invenção que são acídicos podem formar sais, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, com bases como

hidróxidos de metal alcalino, por exemplo, hidróxidos de sódio e potássio; hidróxidos de metal alcalino terroso, por exemplo, hidróxidos de cálcio, bârio e magnésio; com bases orgânicas, por exemplo, N-metil-D-glucamina, colina tri(hidroximetil)amino-metano, L-arginina, L-lisina, N-etil

piperidina, dibenzil amina e similares. Sais específicos com bases incluem os sais de benzatina, cálcio, diolamina, meglumina, olamina, potássio, procaína, sódio, trometamina e zinco. Aqueles compostos da invenção que são básicos podem formar sais, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis com ácidos inorgânicos, por exemplo, com ácidos hidrohálicos como ácidos clorídricos ou bromídricos, ácido sulfúrico, ácido nítrico ou ácido fosfórico e similares, e com ácidos orgânicos, por exemplo, com ácidos acético, tartárico, succínico, fumárico, maléico, málico, salicílico, cítrico, metanossulfônico, p-toluenossulfônico, benzóico, benzenossulfônico, glutâmico, láctico e mandélico e simila res. Onde um composto contém um grupo de amônio quaternário, contra-íons aceitáveis podem ser, por exemplo, cloretos, brometos, sulfatos, metanossulfonatos,

benzenossulfonatos, toluenossulfonatos (tosilatos),

napadisilatos (naftaleno-1,5-dissulfonatos ou naftaleno-1- (ácido sulfônico)-5-sulfonatos), edisilatos (etano-1,2- dissulfonatos ou etano-1-(ácido sulfônico)-2-sulfonatos), isetionatos (2-hidroxietilsulfonatos), fosfatos, acetatos, citratos, lactatos, tartratos, mesilatos, maleatos, malatos, fumaratos, succinatos, xinafoatos, p- acetamidobenzoatos e similares; em que o número de espécies de amônio quaternário equilibra o sal farmaceuticamente aceitável de tal modo que o composto não tem carga líquida.

O uso de pró-drogas, como ésteres, de compostos aos quais a invenção se refere também faz parte da invenção. "Pró-droga" significa um composto que é convertível in vivo por meio metabólico (por exemplo, por hidrólise, redução ou oxidação) em um composto da fórmula (I) . Por exemplo, uma pró-droga de éster de um composto da fórmula (I) pode ser convertível por hidrólise in vivo na molécula de origem. Ésteres apropriados de compostos da fórmula (I) são, por exemplo, acetatos, citratos, lactatos, tartratos, malonatos, oxalatos, salicilatos, propionatos, succinatos, fumaratos, maleatos, metileno-bis-p-hidróxi 10

naftoatos, gentisatos, isetionatos, di-p-toluoil tartratos, metanossulfonatos, etanossulfonatos, benzenossulfonatos, p- tolueno-sulfonatos, ciclohexil sulfamatos e quinatos. Os exemplos de pró-drogas de éster são aqueles descritos por F.J. Leinweber, Drug Metab. Res., 1987, 18, 379. Como utilizado na presente invenção, referências aos compostos da fórmula (I) pretendem incluir também as formas de pró- droga.

Composições

Como mencionado acima, os compostos aos quais a invenção diz respeito são antagonistas de receptor CRTH2, e são úteis no tratamento de doenças que se beneficiam dessa modulação. Os exemplos de tais doenças são mencionados acima, e incluem asma, rinite, sindrome de via aérea alérgica e rinobronquite alérgica.

Será entendido que o nivel de dose especifica para qualquer paciente em particular dependerá de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto especifico empregado, idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, via de administração,

taxa de excreção, combinação de droga e a gravidade da doença especifica sendo submetida ao tratamento. Niveis ótimos de dose e freqüência de dosagem serão determinados por experimento clinico, como exigido na técnica farmacêutica. Em geral, a faixa de dose diária estará

situada na faixa de aproximadamente 0,001 mg a aproximadamente 100 mg por kg de peso corporal de um mamífero, freqüentemente 0,01 mg a aproximadamente 50 mg por kg, por exemplo, 0,1 a 10 mg por kg, em dose única ou do ses divididas. Por outro lado, pode ser necessário

utilizar dosagens fora desses limites em alguns casos.

Os compostos aos quais a invenção se refere podem ser preparados para administração por qualquer via compatível com suas propriedades farmacocinéticas. Composições administradas por via oral podem estar na forma de tabletes, cápsulas, pós, grânulos, pastilhas, preparados líquido ou gel, como soluções ou suspensões parenterais oral, tópica ou estéril. Tabletes e cápsulas para

administração oral podem estar em forma de apresentação de dose unitária, e podem conter excipientes convencionais como agentes aglutinantes, por exemplo, xarope, acácia, gelat ina, sorbitol, tragacanto ou polivinil—pirrolidona; cargas, por exemplo, lactose, açúcar, amido de milho,

fosfato de cálcio, sorbitol ou glicina; lubrificante de formação de tablete, por exemplo, estearato de magnésio, talco, polietileno glicol ou sílica; desintegrantes, por exemplo, amido de batata, ou agentes umectantes aceitáveis como lauril sulfato de sódio. Os tabletes podem ser

revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na prática farmacêutica normal. Preparados líquidos orais podem estar na forma, por exemplo, de suspensões, soluções, emulsões, xaropes ou elixires oleosos ou aquosos ou podem ser apresentados como um produto seco para reconstituição com

água ou outro veículo apropriado antes do uso. Tais preparados líquidos podem conter aditivos convencionais como agentes de suspensão, por exemplo, sorbitol, xarope, metil celulose, xarope de glicose, gorduras comestíveis hidrogenadas de gelatina; agentes emulsificantes, por

exemplo, lecitina, monooleato de sorbitano ou acácia; veículos não aquosos (que podem incluir óleos comestíveis), por exemplo, óleo de amêndoa, óleo de coco fracionado, ésteres oleosos como glicerina, propileno glicol ou álcool de etila; conservantes, por exemplo, metil ou propil p-

hidróxi benzoato ou ácido sórbico, e se desejado, agentes corantes ou aromatizantes convencionais. Para aplicação tópica na pele, a droga pode ser feita em um creme, loção ou unguento. Formulações de creme ou unguento que podem ser utilizadas para a droga são formulações convencionais bem conhecidas na técnica, por exemplo, como descrito em livros de farmacêutica padrão

como British Pharmacopoeia.

A droga também pode ser formulada para inalação, por exemplo, como uma pulverização nasal, ou inaladores de aerossol ou pó seco. Para distribuição por inalação, o composto ativo tem preferivelmente a forma de

microparticulas. Podem ser preparadas por uma variedade de técnicas, incluindo, secagem por pulverização, liofilização e micronização. A geração de aerossol pode ser realizada utilizando, por exemplo, atomizadores a jato acionados por pressão ou atomizadores ultrassônicos, preferivelmente

utilizando aerossóis dosados acionados por propelente ou administração isenta de propelente de compostos ativos micronizados, por exemplo, de cápsulas de inalação ou outros sistemas de distribuição de "pó seco". 0 ingrediente ativo pode ser também administrado

por via parenteral em um meio estéril. Dependendo do veiculo e concentração utilizada, a droga pode ser suspensa ou dissolvida no veiculo. Vantajosamente, adjuvantes como um anestésico local, conservante e agentes de tamponamento podem ser dissolvidos no veiculo.

Outros compostos podem ser combinados com compostos da presente invenção para prevenção e tratamento de doenças mediadas por prostaglandina. Desse modo, a presente invenção também se refere a composições farmacêuticas para evitar e tratar doenças mediadas por

PGD2 compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção e um ou mais outros agentes terapêuticos. Agentes terapêuticos apropriados para uma terapia de combinação com compostos da invenção incluem, porém não são limitados a: (1) corticosteróides, como fluticasona, budesonida ou ciclesonida; (2) agonistas de adrenoreceptor~P2, como salmeterol, formeterol ou indacaterol; (3) moduladores de leucotrieno, por exemplo,

antagonistas de leucotrieno como montelukast ou pranlukast ou inibidores de biossintese de leucotrieno como Zileuton ou BAY-xl005; (4) agentes anticolinérgicos, por exemplo, antagonistas de receptor muscarinic-3 (M3) como brometo de tiotrópio; (5) inibidores de fosfodiesterease-IV (PDE-IV),

como roflumilast ou cilomilast; (6) anti-histaminas, por exemplo, antagonistas de receptor de histamina-1 (Hl) seletivos, como loratidina ou astemizol; (7) agentes antitussivos, como codeina ou dextramorfano; (8) inibidores de C0X-1/C0X-2 não seletivos, como ibuprofeno ou

cetoprofeno; (9) inibidores de COX-2, como celecoxib e rofecoxib; (10) antagonistas de VLA-4, como aqueles descritos em WO 97/03094 e WO 97/02289; (11) inibidores de TNF-α, por exemplo, anticorpos monoclonais anti-TNF, como Remicade e CDP-870 e moléculas de imunoglobulina de

receptor de TNF, como Enbrel; (12) inibidores de metaloprotease de matriz (MMP) , por exemplo, MMP8, 9 e 12; (13) inibidores de elastase de neutrófilo humano, como aqueles descritos em WO 2005/026124 e WO 2003/053930; (14) agonistas de Adenosina A2a como aqueles descritos em

EP 1052264 e EP 1241176; (15) antagonistas de Adenosina A2b como aqueles descritos em WO 2002/42298; (16) moduladores de função de receptor de quimiocina, por exemplo, antagonistas de CCR3 e CCR8; (17) compostos que. modulam a ação de outros receptores de prostanoide, por exemplo, um

antagonista de receptor de PGD2 (DP) ou um antagonista de tromboxano A2; e (18) compostos que modulam a função Th2, por exemplo, agonistas de PPAR. A razão em peso do composto da invenção para o segundo ingrediente ativo pode ser variada e dependerá da dose efetiva de cada ingrediente. Geralmente, uma dose efetiva de cada será utilizada.

Os exemplos a seguir descrevem a preparação de

compostos da invenção:

Exemplos

Espectros de NMR 1H foram registrados em temperatura ambiente utilizando um espectrômetro Varian Unity Inova (400 MHz) com um espectrômetro de sonda de 5 mm

de ressonância tripla. Deslocamentos químicos são expressos em ppm em relação a tetrametilsilano. As seguintes abreviaturas foram utilizadas: br s = singleto amplo, s = singleto, d = dupleto, dd = dupleto duplo, t = tripleto, q = quarteto, m = multipleto.

Experimentos de Espectrometria de massa (LCMS) para determinar tempos de retenção e íons de massa associados foram realizados utilizando os seguintes métodos:

Método A: experimentos foram realizados em um

espectrômetro Micromass Platform LCT com eletropulverização de íon positivo e detecção de 254 nm UV de comprimento de onda único utilizando uma coluna de 100 χ 3,0 mm 5 μπι C18 Higgins Clipeus e uma taxa de fluxo de 2 mL/minuto. 0 sistema de solvente inicial foi de 95% de água contendo

0,1% de ácido fórmico (solvente A) e 5% de acetonitrila contendo 0,1% de ácido fórmico (solvente B) para o primeiro minuto seguido por um gradiente até 5% de solvente A e 95% de solvente B durante os próximos 14 minutos. 0 sistema de solvente final foi mantido constante por um período

adicional de 2 minutos.

Método B: os experimentos foram realizados em um espectrômetro Micromass Platform LC com eletropulverização de íons positivos e negativos e detecção de conjunto de diodo/ELS utilizando uma coluna 30 χ 4,6 mm Phenomenex Luna C18(2) e uma taxa de fluxo de 2 mL/minuto. 0 sistema de solvente era de 95% de solvente A e 5% de solvente B para o primeiro 0,50 minuto seguido por um gradiente até 5% de

solvente A e 95% de solvente B durante os 4 minutos seguintes. 0 sistema de solvente final foi mantido constante por um período adicional de 0,50 minuto.

Método C: os experimentos foram realizados em uma coluna Agilent Scalar C18, 5 μηι (4,6 χ 50 mm, taxa de fluxo

2,5 mL/minuto) eluindo com um gradiente de H20/MeCN contendo 0,1% v/v de ácido fórmico durante 7 minutos com detecção de UV a 215 e 254 nm. Informações de gradiente: 0,0 - 0,1 minuto: 95% de H20/5% de MeCN; 0,1 - 5,0 minutos; elevar de 95% H20/5% MeCN para 5% H20/95% MeCN; 5,0 - 5,5

minutos; manter em 5% H20/95% de MeCN; 5,5 - 5,6 minutos: manter em 5% H20/95% de MeCN, taxa de fluxo aumentada para 3,5 mL/minuto; 5,6 - 6,6 minutos; manter em 5% de H20/95% de MeCN, taxa de fluxo 3,5 mL/minuto, 6, 6 - 6,75. minutos; retornar para 95% de H20/5% de MeCN, taxa de fluxo 3,5

mL/minuto; 6,75 - 6,9 minutos; reter em 95% H20/5% de MeCN, taxa de fluxo de 3,5 mL/minuto, 6,9 - 7,0 minutos; manter em 95% de H2O minuto 5% de MeCN, taxa de fluxo reduzida para 2,5 mL/minuto. Espectros de massa foram obtidos utilizando uma fonte de ionização de eletropulverização no

modo positivo ou negativo.

Método D: os experimentos foram realizados em uma coluna Agilent Scalar C18, 5 μπι (4,6 χ 50 mm, taxa de fluxo 2,5 mL/minuto) eluindo com um gradiente de H20/MeCN contendo 0,1% v/v de NH4OH durante 7 minutos com detecção

de UV a 215 e 254 nm. Informações de gradiente: 0,0 - 0,1 minuto: 95% de H20/5% de MeCN; 0,1 - 5,0 minutos; elevar de 95% H20/5% MeCN para 5% H20/95% MeCN; 5,0 - 5,5 minutos; manter em 5% H20/95% de MeCN; 5,5 - 5,6 minutos: manter em 5% H20/95% de MeCN, taxa de fluxo aumentada para 3,5 mL/ minuto; 5,6 - 6,6 minutos; manter em 5% de H20/95% de MeCN, taxa de fluxo 3,5 mL/minuto; 6, 6 - 6,75 minutos; retornar para 95% de H20/5% de MeCN, taxa de fluxo 3,5 mL/ minuto; 6,75 - 6,9 minutos; reter em 95% H20/5% de MeCN, taxa de fluxo de 3,5 mL/minuto; 6,9 - 7,0 minutos; manter em 95% de H20/5% de MeCN, taxa de fluxo reduzida para 2,5 mL/minuto. Espectros de massa foram obtidos utilizando uma fonte de ionização de eletropulverização no modo positivo ou negativo.

Exemplo 1: ácido {7-ciano-2-metil-l-[4-morfolina- 4-sulfonil)benzil]indolizin-3-il} acético

Preparação la: 2-metilisonicotinonitrila Uma mistura de 2-cloroisonicotinonitrila (28 g) , tetraquis(trifenilfosfina) paládio (0) (5,0 g), trimetil alumínio (2,0 M em hexanos, 110 mL) e 1,4-dioxano (400 mL) foi aquecida em refluxo por 2 horas. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com ácido clorídrico aquoso 1,0 M e a fase orgânica extraída com ácido clorídrico aquoso 1,0 M. As fases aquosas combinadas foram lavadas com éter de dietila, basificadas pela adição de solução de hidróxido de sódio aquosa concentrada e então extraídas com éter de dietila. Os extratos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o composto título, 24 g. NMR 1H (CDCl3): δ 2,65 (s, 3Η) , 7,35 (m, 1Η) , 7,40 (br s, 1Η), 8,70 (d, J = 5,0 Hz, 1Η).

Preparação lb: 2-metilindolizin-7-carbonitrila

Uma mistura de 2-metilisonicotinonitrila (4,0 g) , l-bromopropan-2-ona (9,3 g), carbonato de hidrogênio de

sódio (6,8 g) e acetonitrila (40 mL) foi aquecida em refluxo por 14 horas. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com água e extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram lavados com solução de cloreto de sódio aquosa saturada, secos sobre

sulfato de magnésio e o solvente removido sob pressão reduzida. A purificação do resíduo por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de ciclohexano e acetato de etila forneceu o composto título como um sólido amarelo, 1,5 g.

NMR 1H (CDCl3): δ 2,35 (s, 3H) , 6,50 (dd, J = 1,6, 7,2 Hz, 1H), 6,55 (br s, 1H) , 7,25 (br s, 1H), 7,70 (br s, 1H), 7,80 (m, 1H).

Preparação lc: éster etílico de ácido (7-ciano-2- metilindolizin-3-ila) acético

Uma solução de diazoacetato de etila (5,4 mL) em tolueno (40 mL) foi adicionada em porções a uma mistura de 2-metilindolizin-7-carbonitrila (8,1 g), bronze de cobre (3,3 g) e tolueno (200 mL) em refluxo. A mistura resultante foi aquecida em refluxo por 2 horas,. resfriada à

temperatura ambiente e então filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de pentano e diclorometano (9:1 a 0:1 por volume) para fornecer o composto título, 5,7 g.

NMR 1H (CDCl3): δ 1,25 (t, J = 7,1 Hz, 3H) , 2,35 (s, 3H) , 3,90 (s, 2H), 4,15 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 6,55 (m, 1Η) , 6,60 (d, J = 1,7 Hz, 1Η), 7,70 (br s, 1H), 7,85 (d, J =7,1 Hz, 1H).

Preparação ld: éster metílico de ácido acetóxi (4-clorosulfonilfenil) acético Ácido sulfúrico (56 g) foi adicionado em gotas a

uma mistura de cloreto de 4-metilbenzenossulfonila (45 g) , ácido acético (375 mL) e anidrido acético (375 mL) a 0°C e a mistura resultante foi tratada em porções com óxido de cromo (VI) (66 g) . A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos, derramada em água/gelo e o sólido

coletado por filtração. O sólido foi dissolvido em diclorometano, seco sobre sulfato de magnésio e concentrado sob pressão reduzida. 0 resíduo foi cristalizado de uma mistura de acetona e hexano para fornecer o composto título.

NMR 1H (CDCl3): δ 2,15 (s, 6H) , 7,75 (s, 1H) , 7,80 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 8,10 (d, J = 8,6 Hz, 2H) .

Preparação Ie: éster metílico de ácido acetóxi [4-(morfolina-4-sulfonil)fenil] acético Uma solução de morfolina (0,85 mL) em

diclorometano (5,0 mL) foi adicionada em gotas a uma mistura de éster de metila de ácido acetóxi(4- clorossulfonilfenil) acético (1,0 g) e diclorometano (25 mL) a 0 0C e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi

concentrada sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de ciclohexano e acetato de etila (8:1 por volume) para fornecer o composto título, 0,70 g.

NMR 1H (CDCl3): δ 2,15 (s, 6H) , 3,05 (m, 4H) , 3,75

(m, 4H), 7,80 (s, 1H), 7,95 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 8,05 (d, J = 8,6 Hz, 2H) . Preparação If: 4-(morfolina-4-sulfonil)

benzaldeído

Uma mistura de éster de metila de ácido acetóxi [4-(morfolina-4-sulfonil)fenil] acético (0,70 g) , água (25 mL), liquido industrial metilado (25 mL) e carbonato de

sódio (0,83 g) foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo tratado com ácido acético glacial. O precipitado resultante foi coletado por filtração e seco para fornecer o composto título, 0,48 g.

NMR 1H (CDCl3): δ 3,05 (m, 4H) , 3,75 (m, 4H) , 7,90 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 8,10 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 10,15 (s, 1H) .

Preparação lg: éster etílico de ácido {7-ciano-2- metil-1-[4-(morfolina-4-sulfonil)benzil]indolizin-3-il}

acético

Uma mistura de éster etílico de ácido (7-ciano-2- metilindolizin-3-il) acético 0,46 g), 4-(morfolina-4- sulfonil) benzaldeído (0,48 g) e 1,2-dicloroetano (15 mL) a 0 cC foi tratada em gotas com trietilsilano (1,5 mL)

seguido por ácido trifluoroacético (4,2 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, seca sobre sulfato de sódio e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo

foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel para fornecer o composto título, 0,18 g.

NMR 1H (CDCl3): δ 1,25 (t, J = 7,3 Hz, 3H) , 2,20 (s, 3H), 2,95 (m, 4H) , 3,70 (m, 4H) , 3,90 (s, 2H), 4,15 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 4,20 (s, 2H) , 6,60 (dd, J = 1,7, 7,3 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 7,70 (dd, J = 0,9, 1,7 Hz, 1H) , 7,85 (dd, J = 0,9, 7,3 Hz, 1H) .

30 Preparação lh: ácido {7-ciano-2-metil-l-[4- (morfolina-4-sulfonil)benzil]indolizin-3-il} acético

Uma solução de éster etilico de ácido {7-ciano-2- metil-1-[4-(morfolina-4-sulfonil)benzil]indolizin-3-il} acético (0,18 g) em tetrahidrofurano (10 mL) foi tratada

com uma solução de hidróxido de litio (0, 050 g) em água (10 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura foi acidifiçada pela adição de ácido clorídrico aquoso 1,0 M, extraída com acetato de etila e os extratos combinados secos sobre sulfato de

sódio. O solvente foi removido sob pressão reduzida para proporcionar composto título como um sólido amarelo, 0,059 g.

NMR 1H (CD3OD): δ 2,15 (s, 3H) , 2,85 (m, 4H) , 3,60 (m, 4H) , 3,95 (s, 2H) , 4,25 (s, 2H) , 6,60 (dd, J= 1,6, 7,0

Hz, 1H) , 7,35 (d, J = 8,4 Hz, 2H) , 7,60 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,90 (dd, J = 0,7, 1,6 Hz, 1H) , 8,00 (dd, J = 0,7, 7,0 Hz, 1H).

MS: ESI (+ve) (método A); 454 (M+H)+, tempo de retenção 9,7 min.

Exemplo 2: ácido [1-(3-cloro-4-etanossulfonil benzil)-7-ciano-2-metilindolizin-03-il] acético

Preparação 2a: 3-cloro-4-etilsulfanil benzaldeído Uma solução de 3-cloro-4-fluorobenzaldeído (5,0 g) em Ν,Ν-dimetil formamida (10 mL) foi tratada com etanotiolato de sódio (2,7 g) e a mistura resultante foi agitada a 70 0C por 7 horas e então em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi dividida entre água (30 mL) e éter dietilico (30 mL) e a fase aquosa extraída com éter dietili co (20 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução de cloreto de sódio aquosa saturada,

secas sobre sulfato de magnésio e o solvente removido sob pressão reduzida. A purificação do resíduo por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de iso-hexano e acetato de etila (1:9 por volume) forneceu o composto título como um óleo amarelo, 5,0 g.

Preparação 2b: 3-cloro-4-etanossulfonil

benzaldeído

Uma solução de 3-cloro4-etilsulfanil benzaldeído (5,0 g) em diclorometano (25 mL) a 0 0C foi tratada com ácido 3-cloroperoxibenzóico (8,6 g) e a mistura resultante

foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi diluída com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada e a fase orgânica foi lavada com solução de sulfito de sódio aquosa saturada e água. 0 pH das fases aquosas combinadas foi ajustado para 6 e então extraído com

diclorometano, acetato de etila e clorofórmio. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio e o solvente removido sob pressão reduzida. A purificação do resíduo por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de acetato de etila e iso-hexano

(1:9 a 3:7 por volume) forneceu o composto título, 0,60 g.

NMR 1H (CDCl3): δ 1,30 (t, 3H) , 3,50 (q, 2H) , 8,0 (dd, 1H), 8,05 (d, 1H), 8,30 (d, 1H) , 10,10 (s, 1H) .

Preparação 2c: éster etílico de ácido [l-(3- cloro-4-etanossulfonilbenzil)-7-ciano-2-metilindolizin-3-

il] acético

O composto título foi preparado pelo método de preparação Ig utilizando éster etílico de ácido (7-ciano-2- metilindolizin-3-il) acético e 3-cloro-4-etanossulfonil benzaldeido.

NMR 1H (DMSO-d6) : δ 1,10 (t, 3H) , 1,15 (t, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 3,45 (q, 2H) , 4,05 (q, 2H) , 4,10 (s, 2H) , 4,30 (s, 1H) , 6,75 (dd, 1H) , 7,35 (dd, 1H) , 7,50 (d, 1H) , 7,90 (d, 1H), 8,15 (d, 1H), 8,30 (s, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método D): 459 (M+H)tempo de retenção 4,2 min.

Preparação 2d: ácido [1-(3-cloro-4-etanossulfonil benzil)-7-ciano-2-metilindolizin-3-il] acético

Uma mistura de éster etilico de ácido [1—(3— cloro-4-etanossulfonilbenzila)-7-ciano-2-metilindolizin-3- il] acético (0, 025 q) , etanol (0,5 mL) e tetrahidrofurano (0,3 mL) foi tratada com 1,0 M de solução de hidróxido de litio aquosa (0,14 mL) e a mistura resultante foi aqitada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, diluída com áqua e o pH ajustado para 4 pela adição de ácido acético glacial. A mistura foi extraída com diclorometano e os extratos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio e então concentrados sob pressão reduzida para fornecer o composto título como um sólido verde, 0,020 g.

NMR 1H (DMS0-d6) : δ 1,10 (t, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 3,45 (q, 2H), 4,00 (s, 2H) , 4,25 (s, 1H) , 6,75 (dd, 1H) , 7,35 (dd, 1H), 7,55 (d, 1H) , 7,90 (d, 1H) , 8,10 (d, 1H) , 8,30 (s, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método C) : 431 (M+H)+, tempo de retenção 3,1 min. Exemplo 3: ácido {1-[3-cloro-4-(morfolina-4- sulfonil)benzil]-7-ciano-2-metilindolizin-3-il} acético

Preparação 3a: 3-cloro-4-(morfolina-4-sulfonil) benzonitrila.

Uma solução de cloreto de 2-cloro-4-cianobenzeno sulfonila (5,0 g) em diclorometano (20 mL) a 0 0C foi tratada com morfolina (3,7 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura foi diluída com diclorometano, lavada com 10% de ácido

clorídrico aquoso, solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa diluída e água e então seca sobre sulfato de magnésio. O solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer o composto título, 5,5 g.

NMR 1H (CDCl3): δ 3,35 (dd, 4H) , 3,75 (dd, 4H) ,

7,70 (dd, 1H), 7,85 (d, 1H), 8,15 (d, 1H).

Preparação 3b: 3-cloro-4-(morfolina-4-sulfonila) benzaldeído

Uma solução de 3-cloro-4-(morfolina-4-sulfonila) benzonitrila (5,5 g) em diclorometano (20 mL) a -75 0C foi

tratada com hidreto de diisobutilalumínio (solução 1,0 M em diclorometano, 19 ml) e a mistura resultante foi agitada a -78 0C por 1 hora. A mistura foi tratada com ácido clorídrico aquoso 1,0 M e extraída com diclorometano. Os extratos combinados foram lavados com solução de cloreto de

sódio aquosa saturada, secos sobre sulfato de magnésio e concentrados sob pressão reduzida. A purificação do resíduo por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de acetato de etila e iso-hexano (1:9 a 1:2 por volume) forneceu o composto título, 1,3 g.

NMR 1H (DMSO-d6) : δ 3, 20-3, 25 (m, 4H) , 3,60-3,65 (m, 4H), 8,05 (dd, 1H), 8,15 - 8,20 (m, 2H), 10,10 (s, 1H) .

MS: ESI (+ve) (Método D): 290 (M+H)+, tempo de

retenção 4,0 min.

Preparação 3c: éster etílico de ácido {1— [ 3 — cloro-4-(morfolina-4-sulfonil)benzil]-7-ciano-2- metilindolizin-3-il} acético O composto título foi preparado pelo método de

Preparação Ig utilizando éster etílico de ácido (7-ciano-2- metilindolizin-3-il) acético e 3-cloro-4-(morfolina-4- sulfonil)benzaldeído.

NMR 1H (DMSO-d6) : δ 1,10 (t, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 3,10 - 3,15 (m, 4H) , 3, 55 - 3, 60 (m, 4H) , 4,05 (q, 2H) ,

4,10 (s, 2H) , 4,25 (s, 1H) , 6,75 (dd, 1H) , 7,30 (dd, 1H) , 7,50 (d, 1H), 7,85 (d, 1H), 8,15 (dd, 1H) , 8,30 (s, 1H) .

MS: ESI (+ve) (Método D): 516 (M+H)+, tempo de retenção 4,3 min.

Preparação 3d: ácido {1-[3-cloro-4-(morfolina-4-

sulfonil)benzil]-7-ciano-2-metilindolizin-3-il} acético

O composto título foi preparado pelo método de Preparação 2d utilizando éster etílico de ácido {1— [ 3- cloro-4-(morfolina-4-sulfonil)benzil]-7-ciano-2- metilindolizin-3-il} acético.

NMR 1H (DMSO-d6) : δ 2,10 (s, 3H) , 3,10 - 3,15 (m, 4H) , 3, 55 - 3, 60 (m, 4H) , 4,00 (s, 2H), 4,25 (s, 2H), 6,75 (dd, 1H), 7,30 (dd, 1H) , 7,50 (d, 1H) , 7,85 (d, 1H) , 8,15 (d, 1H) , 8,30 (s, 1H) . MS: ESI (+ve) (Método C) : 488 (M+H)+, tempo de

retenção 3,2 min. Exemplo 4: ácido [I-(3-cloro-4-etanossulfonil fenilsulfanil)-7-ciano-2-metilindolizin-3-il] acético

Preparação 4a: 2-cloro-l-etanossulfonil-4-

fluorobenzeno

Cloreto de 2-cloro-4-fluorobenzenossulfonila (3,8 g) foi adicionado em porções durante um período de 1 hora a uma solução de bicarbonato de sódio (2,8 g) e sulfito de sódio (4,0 g) em água (80 mL) a 75 0C e a mistura resultante foi aquecida a 7 5 0C por 1 hora. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi tratado com N,N-dimetil formamida (30 mL) , bicarbonato de sódio (2,8 g) e iodeto de etila (1,3 mL) e a mistura resultante aquecida a 75 0C por 2 horas e então resfriada à temperatura ambiente e diluída com água (250 mL) e acetato de etila (200 mL) . A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio e o solvente removido sob pressão reduzida. A purificação do resíduo por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de acetato de etila e iso-hexano (1:4 por volume) forneceu o composto título, 2,1 g.

NMR 1H (CDCl3): δ 1,25 (t, 3H) , 3,40 (q, 2H) , 7,20 (ddd, 1H), 7,30 (dd, 1H), 8,15 (dd, 1H).

Preparação 4b: bis(3-cloro-4-etanossulfonil benzeno)dissulfeto.

Uma mistura de 2-cloro-l-etanossulfonil-4- fluorobenzeno (1,8 g) , sulfeto de hidrogênio de sódio (4,1 g) e l-metilpirrolidin-2-ona (5,0 mL) foi agitada a 80 0C por 1 hora e então em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura foi diluida com água, filtrada e o pH do filtrado ajustado para 1 pela adição de ácido clorídrico concentrado. A mistura foi decantada e goma residual lavada

e decantada adicionalmente 3 vezes com água. O resíduo foi dividido entre diclorometano e água e a fase orgânica foi lavada com água, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o composto título, 1,4 g.

MS: ESI (+ve) (método C) : 471 (M+H)+, tempo de retenção 4,2 min.

Preparação 4c: éster etílico de ácido [ 1- (3- cloro-4-etanossulfonilfenilsulfanil)-7-ciano-2- metilindolizin-3-il] acético

Cloreto de sulfurila (0,036 mL) foi adicionado a uma solução de bis(3-cloro-4-etanossulfonilbenzeno) dissulfeto (0,30 g) em diclorometano (5,0 mL) a 0 0C e a mistura resultante foi agitada nessa temperatura por 15 minutos e então em temperatura ambiente por 1,5 horas. Essa

mistura foi então adicionada em gotas a uma solução de éster etílico de ácido (7-ciano-2-metilindolizin-3-il) acético (0,15 g) em diclorometano (2,0 mL) em temperatura ambiente e a mistura resultante foi agitada nessa temperatura por 2 horas. A mistura foi diluída com

diclorometano, lavada com água e seca sobre sulfato de magnésio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de acetato de etila, éter dietílico e iso-hexano (1:4:12 por volume) para fornecer o

composto título, 0,060 g.

NMR 1H (DMSO-d6) : δ 1,10 (t, 3H) , 1,20 (t, 3H) , 2,20 (s, 3H), 3,40 (q, 2H) , 4,10 (q, 2H) , 4,25 (s, 2H) , 7,05 (dd, 1Η), 7,20 (d, 1H), 7,80 (d, 1H) , 8,10 (s, 1H) , 8,45 (dd, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método C) : 477 (M+H)+, tempo de retenção 4,2 min.

Preparação 4d: ácido [1-(3-cloro-4-etanossulfonil fenilsulfanil)-7-ciano-2-metil indolizin-3-il] acético

O composto titulo foi preparado pelo método de Preparação 2d utilizando éster etilico de ácido [ 1- (3- cloro-4-etanosulfonilfenilsulfanil)-7-ciano-2- metilindolizin-3-il] acético.

NMR 1H (DMS0-d6) : δ 1,10 (t, 3H) , 2,20 (s, 3H) , 3,40 (q, 2H), 4,15 (s, 2H) , 7, 00 - 7, 05 (m, 2H) , 7,20 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 8,10 (br s, 1H) , 8,40 (d, 1H) , 8,45 (dd, 1H), 12,70 (br s, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método C) : 449 (M+H)+, tempo de retenção 3,4 min.

Exemplo 5: ácido {1-[3-cloro-4-(morfolina-4- sulfonil)fenilsulfanil]-7-ciano-2-metilindolizin-3-il} acético

Preparação 5a: 4-(2-cloro-4-

fluorobenzenosulfonil) morfolina

Uma solução de cloreto de 2-cloro-4- fluorobenzenossulfoniIa (2,0 g) em diclorometano (20 mL) a 0 0C foi tratada com morfolina (1,3 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura foi diluída com diclorometano, lavada com 10% de ácido clorídrico aquoso, solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa diluída e água e então seca sobre sulfato de magnésio. O solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer o composto título, 2,3 g.

MS: ESI (+ve) (Método D): 280 (M+H)+, tempo de retenção 5,2 min.

Preparação 5b: bis(3-cloro-4-morfolinossulfonil benzeno) dissulfeto

O composto título foi preparado pelo método da Preparação 4b utilizando 4-(2-cloro-4-fluorobenzeno sulfonil) morfolina.

Preparação 5c: éster etílico de ácido {1— [ 3 — cloro-4-(morfolina-4-sulfonil)fenilsulfanil]-7-ciano-2- metilindolizin-3-il} acético

0 composto título foi preparado pelo método da preparação 4c utilizando éster etílico de ácido (7-ciano-2- metilindolizin-3-il) acético e bis(3-cloro-4-morfolino sulfonilbenzeno)dissulfeto.

NMR 1H (DMS0-d6) : δ 1,20 (t, 3H) , 2,20 (s, 3H) , 3,05 - 3,10 (m, 4H), 3,55- 3,60 (m, 4H), 4,10 (q, 2H), 4,25 (s, 2H), 7,00 (dd, 1H), 7,05 (dd, 1H) , 7,15 (d, 1H) , 7,75 (d, 1H), 8,10 (br s, 1H), 8,40 (dd, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método C) : 534 (M+H)+, tempo de retenção 4,3 min.

Preparação 5d: ácido {1-[3-cloro-4-(morfolina-4- sulfonil)fenilsulfanil]-7-ciano-2-metilindolizin-3-il} acético

O composto título foi preparado pelo método da Preparação 2d éster etílico de ácido {1-[3-cloro-4- (morfolina-4-sulfonil)fenilsulfanil]-7-ciano-2-metil indolizin-3-il} acético.

NMR 1H (DMS0-d6) : δ 2,20 (s, 3H) , 3,05 - 3,10 (m, 4H), 3, 55 - 3, 60 (m, 4H) , 4,15 (s, 2H) , 7,00 (dd, 1H), 7,05 (dd, 1Η), 7,20 (d, 1H) , 7,75 (d, 1H) , 8,10 (m, 1H) , 8,40 (dd, 1H) .

MS: ESI (+ve) (Método C) : 506 (M+H)+, tempo de retenção 3,5 min.

Exemplo 6: ácido [7-ciano-l-(6-fluoroquinolin-2- ilmetila)-2-metilindolizin-3-il] acético

Preparação 6a: éster etilico de ácido [7-ciano-l- (6-fluoroquinolin-2-ilmetil)-2-metilindolizin-3-il] acético O composto titulo foi preparado pelo método de preparação Ig utilizando éster etilico de ácido (7-ciano-2- metilindolizin-3-il) acético e 6-fluoroquinolin-2- carbaldeido.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 402 (M+H)+, tempo de retenção 3,7 min.

Preparação 6b: ácido [7-ciano-l-(6-

fluoroquinolin-2-ilmetil)-2-metilindolizin-3-il] acético

Uma solução de éster etilico de ácido [7-ciano-l- (6-fluoroquinolin-2-ilmetil)-2-metilindolizin-3-il] acético (0,13 g) em tetrahidrofurano (10 mL) foi tratada com solução de hidróxido de litio aquosa 1,0 M (1,0 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, acidificada pela adição de ácido clorídrico aquoso 1,0 M e então extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o composto título como um sólido amarelo brilhante, 0,064 g.

NMR 1H (DMSO-d6) : δ 2,15 (s, 3H) , 3,95 (s, 2H) , 4,45 (s, 2H), 6,70 (dd, J = 1,6, 7,4 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,65 (dt, J = 2,8, 8,8 Hz, 1H) , 7,70 (dd, J = 2,8, 9,4 Hz, 1H) , 8,00 (dd, J = 5,5, 9,4 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 8,35 (s, 1H) .

MS: ESI (+ve) (Método A): 374 (M+H)tempo de retenção 9,0 min.

Métodos biológicos

Os compostos da invenção foram testados utilizando os seguintes métodos de teste biológico para determinar sua capacidade em deslocar PGD2 a partir do receptor CRTH2 e sua capacidade em antagonizar os efeitos funcionais de PGD2 no receptor CRTH2.

Ensaio de ligação de radioligando

O ensaio de ligação de receptor é executado em um volume final de 200 μΐ, de tampão de ligação [10 mM BES (pH 7,4), 1 mM EDTA, 10 mM de cloreto de manganês, 0,01% de BSA] e 1 nM [3HJ-PGD2 (Amersham Biosciences UK Ltd.). Os ligandos são adicionados no tampão de ensaio contendo uma quantidade constante de DMSO (1% por volume) . A ligação total é determinada utilizando 1% por volume de DMSO no tampão de ensaio e a ligação não especifica é determinada utilizando 10 μΜ de PGD2 não rotulado (Sigma) . Membranas de células de rim embriônico humano (HEK) (3,5 μς) expressando o receptor CRTH2 são incubadas com 1,6 mg de glóbulos de SPA de aglutinina de germe de trigo e 1 nM [3H] -PGD2 (Amersham Biosciences UK Ltd.) e a mistura incubada por 3 horas em temperatura ambiente. [3HJ-PGD2 ligado é detectado utilizando um contador de cintilação liquida TRILUX Microbeta (Perkin Elmer). 0 valor IC50 do composto é determinado utilizando uma curva de resposta de dose de 6 pontos em duplicata com uma série de diluição de composto semi-log. Cálculos de IC50 são executados utilizando Excel e XLfit (Microsoft), e esse valor é utilizado para determinar um valor Ki para o composto de teste utilizando a equação Cheng-Prusoff.

Ensaio funcional

Ensaio GTPyS

0 ensaio GTPyS é executado em um volume final de 200 mL de tampão de ensaio (20 mM HEPES pH 7,4, 10 mM MgCl2, 100 mM NaCl, 10 μg/mL de saponina). Concentrações de

DMSO são mantidas constantes a 1% por volume. Membranas de células de rim embriônico humano (HEK) (3,5 μg) expressando o receptor CRTH2 são incubadas com os compostos por 15 min. a 30 0C antes da adição de PGD2 (concentração final 30 nM) e GTP (concentração final de 10 μΜ) . As soluções de ensaio

são então incubadas por 30 minutos a 30 °C, seguido pela adição de [35S]-GTPyS (0,1 nM concentração final). A placa de ensaio é então agitada e incubada por 5 minutos a 30 °C. Finalmente, glóbulos de SPA (Amersham Biosciences, UK) são adicionadas a uma concentração final de 1,5 mg/cavidade e a

placa agitada e incubada por 30 minutos a 30 °C. A placa vedada é centrifugada a 1000 g por 10 minutos a 30 0C e o [35SJ-GTPyS ligado é detectado no contador de cintilação Microbeta (Perkin Elmer). O valor IC50 do composto é determinado utilizando uma curva de resposta de dose de 6

pontos em duplicata com uma série de diluição de composto semi-log. Cálculos IC50 são executados utilizando Excel e XLfit (Microsoft), e esse valor é utilizado para determinar um valor Ki para o composto de teste utilizando a equação Cheng-Prusoff. Resultados biológicos:

Os compostos dos Exemplos acima foram testados nos ensaios funcionais de GTPyS e ligação de radioligando CRTH2 descritos acima; os compostos têm todos os valores IC50 menores do que 1 μΜ nos dois ensaios. Por exemplo, o composto do Exemplo 1 tinha um valor IC50 de 58 nM no ensaio de ligação de radioligando CRTH2, e o composto do exemplo 6 tinha um valor IC50 de 19 nM nesse ensaio.

Claims

1. Composto selecionado do grupo que consiste em: Ácido {7-ciano-2-metil-l-[4-(morfolina-4- sulfonil]indolizin-3-il} acético, Ácido [1-(3-cloro-4-etanossulfonilbenzil)-7- ciano-2- metilindolizin-3-il] acético, Ácido {1-[3-cloro-4-(morfolina-4- sulfonil)benzi1]-7-ciano-2-metilindolizin-3-il} acético, Ácido [1-(3-cloro-4-etanossulfonilfenil sulfanil)-7-ciano-2-metilindolizin-3-il] acético, Ácido {1-[3-cloro-4-(morfolina-4-sulfonil)fenil sulfanila]-7-ciano-2-metilindolizin-3-il} acético, Ácido [7-ciano-l-(6-fluoroquinolin-2-ilmetil)-2- metilindolizin-3-il] acético, e sais, N-óxidos, hidratos e solvatos dos mesmos.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, para uso em terapia.

3. Composição farmacêutica compreendendo um composto conforme a reivindicação 1, e um veiculo farmaceuticamente aceitável.

4. Uso de um composto conforme a reivindicação 1 para a fabricação de uma composição para o tratamento de asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, rinite, sindrome de via aérea alérgica ou rinobronquite alérgica.

5. Uso de um composto conforme a reivindicação 1 para a fabricação de uma composição para o tratamento de psoriase, dermatite atópica e não atópica, doença de Crohn, colite ulcerativa ou doença de intestino irritável.

6. Método de tratamento de asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, rinite, sindrome de via aérea alérgica ou rinobronquite alérgica, compreendendo administrar a um paciente que sofre de tal doença uma quantidade eficaz de um composto conforme a reivindicação 1.

7. Método de tratamento de psoríase, dermatite atópica ou não atópica, doença de Crohn, colite ulcerativa ou doença de intestino irritável, compreendendo administrar a um paciente que sofre de tal doença uma quantidade eficaz de um composto de conforme a reivindicação 1.