BRPI0801514A2 - method and apparatus for detection of magnetic nanoparticles - Google Patents

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BRPI0801514A2
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Antonio Carlos Oliveira Bruno
Helio Ricardo Carvalho
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Faculdades Catolicas Sociedade Civil Mantenedora Da Pontificia Universidade Catolica Do Rio De Janei
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Abstract

MéTODO E APARATO PARA DETECçãO DE NANOPARTiCULAS MAGNéTICAS A presente invenção trata de um método e aparato para detecção de nanopartículas magnéticas em solução. Em especial, o método da presente invenção é capaz de medir o fluxo magnético causado pelo campo magnético remanente gerado durante o resfriamento das nanopartículas após processo de magnetização. A presente invenção se situa principalmente no campo da física e da medicina.METHOD AND APPARATUS FOR THE DETECTION OF MAGNETIC NANOPARTICLES The present invention deals with a method and apparatus for detecting magnetic nanoparticles in solution. In particular, the method of the present invention is capable of measuring the magnetic flux caused by the remaining magnetic field generated during the cooling of the nanoparticles after the magnetization process. The present invention is mainly located in the field of physics and medicine.

Description

Relatório Descritivo de Patente de InvençãoPatent Invention Descriptive Report

Método ε Aparato para Detecção de Nanopartículas MagnéticasΕ Method Apparatus for Detection of Magnetic Nanoparticles

Campo da InvençãoField of the Invention

A presente invenção trata de um método e aparato para detecção denanopartículas magnéticas em solução. Em especial, o método da presenteinvenção permite a medição do fluxo magnético causado pelo campomagnético remanente gerado durante o resfriamento das nanopartículas apósprocesso de magnetização, assim como um aparato para realização de talmedição. A presente invenção se situa principalmente no campo da física e damedicina.The present invention is a method and apparatus for detecting magnetic particles in solution. In particular, the method of the present invention allows the measurement of the magnetic flux caused by the remaining magnetic field generated during cooling of the nanoparticles after the magnetization process, as well as an apparatus for performing such measurement. The present invention is primarily in the field of physics and medicine.

Antecedentes da InvençãoBackground of the Invention

Nanopartículas MagnéticasMagnetic Nanoparticles

Nanopartículas magnéticas são importantes ferramentas para odiagnóstico em biologia e medicina. Seus tamanhos podem ser controladosvariando de dezenas até centenas de nanômetros, tornando-as menores oucomparáveis às dimensões de células (5-100 μηι), bactérias (200 nm - 6 μΓη),vírus (20 - 500 nm) e proteínas (5 - 50 nm). Por terem seu tamanho reduzido,elas chegam muito perto e podem interagir com estas estruturas. Asnanopartículas possuem um núcleo de material magnético, na maioria dasvezes, coberto por sílica, um polímero, ou algum tipo de açúcar, como odextran. Esta cobertura é funcionalizada através da adição de moléculasbiológicas, permitindo que a nanopartícula se ligue aos vírus, bactérias oucélulas de interesse. Desta forma eles poderão ser acessados, marcadosmagneticamente, contados e imobilizados, por exemplo.Magnetic nanoparticles are important diagnostic tools in biology and medicine. Their sizes can be controlled from tens to hundreds of nanometers, making them smaller or comparable to cell size (5-100 μηι), bacteria (200 nm - 6 μΓη), viruses (20 - 500 nm) and proteins (5 - 50 nm). Because of their small size, they come very close and can interact with these structures. The nanoparticles have a core of magnetic material, mostly covered with silica, a polymer, or some kind of sugar, such as odextran. This cover is functionalized by the addition of biological molecules, allowing the nanoparticle to bind to viruses, bacteria or cells of interest. This way they can be accessed, tagged, counted and immobilized, for example.

Nanopartículas magnéticas podem ser utilizadas in vivo e in vitro. Acapacidade das nanopartículas de transporte e manipulação à distância, devidoao seu núcleo magnético, permite várias aplicações in vivo. Elas podemtransportar drogas como quimioterápicos, diretamente para a região específicade um tumor no corpo humano, diminuindo os efeitos colaterais domedicamento. As nanopartículas podem também ser aquecidas através decampos magnéticos variantes no tempo, tornando-se um agente efetivo emtratamentos baseados em hipertermia, eficazes no combate às célulasmalignas, sem falar no seu uso como agente de contraste para medidas deressonância magnética.Magnetic nanoparticles can be used in vivo and in vitro. The ability of the transport and handling nanoparticles at a distance, due to their magnetic core, allows various applications in vivo. They can carry drugs such as chemotherapy drugs directly to the specific region of a tumor in the human body, reducing the side effects of medication. Nanoparticles can also be heated through time-varying magnetic fields, becoming an effective agent in hyperthermia-based treatments that are effective in combating malignant cells, not to mention their use as a contrast agent for magnetic resonance measurements.

Cobertas com anticorpos apropriados, elas também podem ser utilizadaspara procedimentos in-vitro como imunoensaios, onde funcionam comobiosensores para marcar vírus, moléculas específicas ou bactérias com oobjetivo de detectá-las e quantificá-las. O procedimento consiste em introduzirnanopartículas cobertas com os anticorpos da célula ou vírus que se desejadetectar em uma amostra. Se estes estiverem presentes na amostra, eles seligarão por afinidade às nanopartículas através da ligação antígeno-anticorpo.Covered with appropriate antibodies, they may also be used for in vitro procedures such as immunoassays, where they function as microbiosensors to label viruses, specific molecules or bacteria for the purpose of detecting and quantifying them. The procedure consists of introducing nanoparticles covered with the desired cell or virus antibodies to be detected in a sample. If they are present in the sample, they will affinity-seal to the nanoparticles via antigen-antibody binding.

As partículas tradicionalmente usadas em imunoensaios contêm uma camadaextra com enzimas, materiais fluorescentes ou radioisótopos. A detecção étradicionalmente realizada através das propriedades desta última camada, porexemplo, medindo a fluorescência da amostra.Particles traditionally used in immunoassays contain an extra layer containing enzymes, fluorescent materials or radioisotopes. Detection is traditionally performed by the properties of the latter layer, for example by measuring the fluorescence of the sample.

Recentemente, com o objetivo de aumentar sua sensibilidade,imunoensaios magnéticos têm sido propostos, onde a detecção e quantificaçãosão feitas através do campo magnético, gerado ou induzido no núcleo dananopartícula magnética ligada à célula de interesse. Para isto ummagnetômetro sensível é utilizado.Recently, aiming to increase its sensitivity, magnetic immunoassays have been proposed, where detection and quantification are done through the magnetic field, generated or induced in the nucleus of the magnetic particle linked to the cell of interest. For this a sensitive magnetometer is used.

A utilização de magnetômetros como os baseados nos dispositivossupercondutores de interferência quântica (SQUIDs), nos sensores baseadosna magnetoresistência gigante (GMR) e na magnetoimpedância gigante (GMI),para detecção e quantificação das nanopartículas, abre novas perspectivaspara a realização deste tipo de imunoensaio. Sua aplicação permitirá adeterminação de um número reduzido de células procuradas quandocomparado às técnicas tradicionais. O diagnóstico precoce de várias patologiasserá possível.The use of magnetometers such as those based on quantum interference superconducting devices (SQUIDs), giant magnetoresistance (GMR) based sensors and giant magnetoimpedance (GMI) sensors for the detection and quantification of nanoparticles opens new perspectives for this type of immunoassay. Its application will allow the determination of a small number of cells sought when compared to traditional techniques. Early diagnosis of various pathologies will be possible.

Na maioria dos casos, o núcleo das nanopartículas é constituído demagnetita (Fe3O4) o que implicará, dependendo do tamanho do núcleo, que asnanopartículas apresentem propriedades ferromagnéticas ousuperparamagnéticas. Isto afetará sua forma de excitação e detecção, quepoderá ser: (i) através do campo remanente adquirido após magnetizaçãoprévia; (ii) através da aplicação de um campo e da medida simultânea dasusceptibilidade magnética a este campo e (iii) da medida do tempo derelaxação da magnetização após a aplicação de um pulso de campomagnético. Dos três, o melhor sistema de excitação seria o primeiro já queevita contribuições paramagnéticas ou diamagnéticas do recipiente onde asolução de partículas está contida e evita a aplicação de um campo externo napresença de um magnetômetro sensível.In most cases, the nanoparticle core is made up of demagnetite (Fe3O4) which will imply, depending on the core size, that the nanoparticles have ferromagnetic or superparamagnetic properties. This will affect its form of excitation and detection, which may be: (i) through the remaining field acquired after previous magnetization; (ii) by applying a field and simultaneously measuring the magnetic susceptibility to this field and (iii) by measuring the time of magnetization freezing after the application of a magnetic field pulse. Of the three, the best excitation system would be the first since it avoids paramagnetic or diamagnetic contributions from the container where particle resolution is contained and avoids the application of an external field in the presence of a sensitive magnetometer.

A presente invenção trata de um método e aparato para detecção denanopartículas magnéticas em solução. Em especial, o método da presenteinvenção é capaz de medir o fluxo magnético causado pelo campo magnéticoremanente gerado durante o resfriamento das nanopartículas após processo demagnetização.The present invention is a method and apparatus for detecting magnetic particles in solution. In particular, the method of the present invention is capable of measuring the magnetic flux caused by the magnetic field remaining generated during the cooling of nanoparticles after demagnetization process.

No âmbito patentário, alguns documentos descrevem métodos dedetecção de nanopartículas magnéticas.In the patent area, some documents describe magnetic nanoparticle detection methods.

O documento WO 05/47864 descreve nanopartículas magnéticas,métodos de detecção dessas nanopartículas e também a detecção demoléculas biológicas. Esse método consiste em ter uma moléculacovalentemente ligada à pelo menos uma nanopartícula magnetizável e umasegunda molécula ligada à um substrato, no qual a primeira molécula irá seligar, sendo assim selecionada. O método necessita de canais microfluídicospara sua realização e magnetiza as partículas durante a realização dasmedidas. A presente invenção difere desse documento por não necessitar decanais microfluídicos para a detecção e por utilizar um processo demagnetização da nanopartícula distinto, realizado durante uma variação datemperatura desde a temperatura ambiente até a temperatura do hélio líquido.WO 05/47864 describes magnetic nanoparticles, methods for detecting such nanoparticles and also detecting biological demolecules. This method consists of having a molecule covalently bound to at least one magnetizable nanoparticle and a second molecule bound to a substrate on which the first molecule will seal, and is thus selected. The method requires microfluidic channels for its realization and magnetizes the particles during the measurements. The present invention differs from that document in that it does not require microfluidic channels for detection and for utilizing a distinct nanoparticle demagnetization process performed during a temperature range from room temperature to liquid helium temperature.

Além disso, na presente invenção o campo de magnetização é desligadodurante a realização da medida.O documento US 2006/0292555 descreve nanopartículas magnéticaspara a detecção de patógenos. Essas nanopartículas são submetidas à umcampo magnético a fim de agregar nanopartículas e patógenos e a detecção érealizada através de microscopia óptica ou eletrônica. A presente invençãodifere desse documento por não se destinar a agregação de complexospatógeno-nanopartícula e por utilizar detecção magnética que relaciona o fluxomagnético medido com o número de marcadores magnéticos da amostra.Furthermore, in the present invention the magnetization field is switched off during the measurement. US 2006/0292555 describes magnetic nanoparticles for the detection of pathogens. These nanoparticles are subjected to a magnetic field in order to aggregate nanoparticles and pathogens and detection is performed by optical or electron microscopy. The present invention differs from this document in that it is not intended for complex-pathogen-nanoparticle aggregation and for utilizing magnetic detection that relates the measured magnetic flux to the number of magnetic markers in the sample.

O documento WO 07/027843 descreve um dispositivo de NMR paradetecção de nanopartículas magnéticas. Esse dispositivo compreende umsuporte contendo uma amostra líquida com as partículas magnéticas e analitosonde as partículas magnéticas se ligam. Logo após, a amostra é exposta à umcampo magnético. A presente invenção difere desse documento pelodispositivo de medição ser um sensor de fluxo magnético e, não, um NMR.WO 07/027843 describes a magnetic nanoparticle NMR detection device. Such a device comprises a holder containing a liquid sample with the magnetic particles and analytes where the magnetic particles bind together. Soon after, the sample is exposed to a magnetic field. The present invention differs from the fact that the measuring device is a magnetic flux sensor and not an NMR.

O documento WO 07/089564 descreve um imunoensaio magnético paradeterminar a concentração de analitos. Esse ensaio consiste no contato deuma amostra do analito com uma partícula magnética Iuminescente e nocalculo da quantidade do analito através de sua marcação luminescente. Apresente invenção difere desse documento por não necessitar denanopartículas magnéticas Iuminescentes para a detecção.WO 07/089564 describes a magnetic immunoassay to determine the concentration of analytes. This assay consists of contacting an analyte sample with an luminescent magnetic particle and calculating the amount of the analyte through its luminescent labeling. The present invention differs from that document in that it does not require luminescent magnetic nanoparticles for detection.

O documento US 6,825,655 descreve um método para detectarmudanças na resposta magnética de partículas em uma camada externa de umfluido através da medição da rotação da partícula utilizando o relaxamentoBrowniano e, consequentemente, a modificação do volume hidrodinâmico. Apresente invenção difere desse documento por não utilizar o relaxamentoBrowniano para detecção da mesma em uma solução, mas sim, a relação entreo fluxo magnético remanente com o número de marcadores magnéticos daamostra na temperatura de hélio líquido.US 6,825,655 describes a method for detecting changes in the magnetic response of particles in an outer fluid layer by measuring particle rotation using Brownian relaxation and, consequently, modifying hydrodynamic volume. The present invention differs from this document in that it does not use Brownian relaxation to detect it in a solution, but rather, the relationship between the remaining magnetic flux and the number of magnetic markers in the sample at liquid helium temperature.

O documento US 6,770,489 descreve um método para detectar analitosutilizando nanopartículas magnéticas e um dispositivo SQUID através daaplicação de um campo de magnetização perpendicular à direção do fluxodetectado pelo SQUID estando o analito e as partículas à temperaturaambiente. A presente invenção difere desse documento por magnetizar osanalitos enquanto a temperatura nas partículas ligadas é diminuída, por fazer adetecção a uma temperatura de hélio líquido e por não aplicar o campo demagnetização enquanto a medição é realizada.US 6,770,489 describes a method for detecting analytes using magnetic nanoparticles and a SQUID device by applying a magnetization field perpendicular to the direction of the flux detected by the SQUID with the analyte and particles at ambient temperature. The present invention differs from that document by magnetising the analytes while decreasing the temperature of the bound particles, by sensing at a liquid helium temperature and by not applying the demagnetization field while the measurement is being performed.

O documento US 6,123,902 descreve um dispositivo magnético paradetecção de analitos de alta sensibilidade. Esse aparato compreende aprodução de um campo magnético no local em que se encontra a amostra emeios para reduzir a força do campo magnético na amostra por um fator depelo menos 10 durante o tempo de medição. A presente invenção difere dessedocumento por compreender um resfriamento da amostra durante amagnetização das mesmas, sendo que a medição do fluxo somente ocorreapós esse resfriamento, o que não é citado pelo referido documento.US 6,123,902 describes a high sensitivity analyte detection magnetic device. This apparatus comprises the production of a magnetic field at the sample site and means to reduce the force of the magnetic field in the sample by a factor of minus 10 during the measurement time. The present invention differs from this document in that it comprises a cooling of the sample during their magnetization, and the flow measurement only occurs after such cooling, which is not cited by said document.

Portanto, não foi encontrado nenhum documento antecipando e/ousugerindo os objetos da presente invenção.Therefore, no document was found anticipating and / or suggesting the objects of the present invention.

Sumário da InvençãoSummary of the Invention

É um dos objetos da presente invenção um método para detecção denanopartículas magnéticas. Em uma concretização preferencial, o método dainvenção compreende:One object of the present invention is a method for detecting magnetic particle particles. In a preferred embodiment, the invention method comprises:

a) magnetizar as nanopartículas enquanto são resfriadas;a) magnetize the nanoparticles as they are cooled;

b) medir o fluxo magnético remanente após o resfriamento de a) pormeio de um sensor magnético.b) measure the magnetic flux remaining after cooling a) by means of a magnetic sensor.

Em uma realização preferencial, o resfriamento das nanopartículas de a)ocorre preferencialmente entre a temperatura ambiente e -270° C.In a preferred embodiment, cooling of the nanoparticles of a) preferably occurs between room temperature and -270 ° C.

Em uma realização preferencial, a medição do fluxomagnéticoremanente de b) é realizada utilizando sensores magnéticos que compreendemimersão em hélio líquido.In a preferred embodiment, the measurement of the permanent magnetic flux of b) is carried out using magnetic sensors comprising immersion in liquid helium.

Em uma realização preferencial, o sistema permite a medição deamostras de 1 μΙ a 20 μΙ.In a preferred embodiment, the system allows measurement of samples from 1 μΙ to 20 μΙ.

E um objeto adicional da presente invenção um aparatocompreendendo:a) meios para magnetização de nanopartículas magnéticasdesmagnetizadas;A further object of the present invention is an apparatus comprising: a) means for magnetizing demagnetized magnetic nanoparticles;

b) meios para resfriamento das nanopartículas magnéticas; eb) means for cooling magnetic nanoparticles; and

c) meios para medição do fluxo magnético remanente após oresfriamento.c) means for measuring the magnetic flux remaining after cooling.

Esses e outros objetos da invenção serão valorizados e melhorcompreendidos a partir da descrição detalhada da invenção.These and other objects of the invention will be appreciated and better understood from the detailed description of the invention.

Breve Descrição das FigurasBrief Description of the Figures

A figura 1 mostra um microtubo contendo partículas sendo inseridasdentro de um dos furos do SQUID.Figure 1 shows a microtube containing particles being inserted into one of the holes of the SQUID.

A figura 2 exemplifica a técnica da presente invenção através darepresentação dos sinais magnéticos gerados pela mesma quantidade departículas (Nanomag-D-spio fabricada pela Micromod). Utilizando a medida docampo remanente após o resfriamento das nanopartículas previamentemagnetizadas (curva em formato de sino — resfriada com campo) e sem autilização da mesma (linha reta - resfriada sem campo). Um aumento de 100vezes na sensibilidade é alcançado utilizando a metodologia da presenteinvenção.Figure 2 exemplifies the technique of the present invention by showing the magnetic signals generated by the same amount of particles (Nanomag-D-spio manufactured by Micromod). Using the measurement of the remaining field after cooling of the previouslymagnetized nanoparticles (bell - cooled curve with field) and without autilization of it (straight - cooled line without field). A 100-fold increase in sensitivity is achieved using the methodology of the present invention.

A figura 3 exemplifica a bobina de magnetização utilizada paramagnetizar as partículas enquanto elas são resfriadas e finalmentemergulhadas no hélio líquido.Figure 3 exemplifies the magnetization coil used to magnetize the particles as they are cooled and finally dipped into liquid helium.

Descrição Detalhada da InvençãoDetailed Description of the Invention

Os exemplos aqui mostrados têm o intuito somente de exemplificar umadas inúmeras maneiras de se realizar a invenção, contudo sem limitar, oescopo da mesma.The examples shown herein are intended solely to exemplify one of the numerous ways of carrying out the invention, but without limitation, the scope thereof.

Método Para Detecção de NanopartículasNanoparticle Detection Method

O método para detecção de nanopartículas magnéticas da presenteinvenção compreende as etapas de:a) magnetizar as nanopartículas desmagnetizadas enquanto sãoresfriadas;The method for detecting magnetic nanoparticles of the present invention comprises the steps of: a) magnetizing demagnetized nanoparticles as they are cooled;

b) medir o fluxo magnético remanente após o resfriamento de a) pormeio de um sensor magnético;b) measuring the magnetic flux remaining after cooling a) by means of a magnetic sensor;

Em uma realização preferencial, as nanopartículas de a) sãomagnetizadas, preferencialmente à 10 mT de campo magnético através deuma bobina de 770 voltas, e o campo magnético é desligado logo após oresfriamento das nanopartículas.In a preferred embodiment, the nanoparticles of a) are magnetized, preferably at 10 mT of magnetic field through a 770-spindle coil, and the magnetic field is turned off shortly after cooling of the nanoparticles.

O método da presente invenção pode ser utilizado para detectarnanopartículas ligadas a vírus, bactérias, moléculas e/ou células de interesse,permitindo assim uma medida indireta de tal objeto ligado.The method of the present invention may be used to detect virus-bound particles, bacteria, molecules and / or cells of interest, thereby allowing an indirect measurement of such bound object.

Nanopartículas magnéticasMagnetic nanoparticles

A presente invenção utiliza nanopartículas disponíveis comercialmenteque apresentam características superparamagnéticas, o que implica naausência de remanência à temperatura ambiente, prejudicando sua detecçãomagnética através do campo remanente nessa temperatura. Em umarealização preferencial, a presente invenção utiliza nanopartículas magnéticascomerciais, comumente utilizadas em imunoensaios. Em uma realizaçãopreferencial, a presente invenção utiliza nanopartículas magnéticas cobertascom sílica e/ou dextran.The present invention uses commercially available nanoparticles that have superparamagnetic characteristics, which implies the absence of remnant at room temperature, impairing their magnetic detection through the remnant field at that temperature. In a preferred embodiment, the present invention utilizes commercial magnetic nanoparticles commonly used in immunoassays. In a preferred embodiment, the present invention utilizes magnetic nanoparticles coated with silica and / or dextran.

Sensores magnéticos contendo imersão em hélio IiguirinHelium Immersion Magnetic Sensors Iiguirin

A presente invenção utiliza sensores magnéticos contendo dispositivoscontendo imersão em hélio líquido. Em uma realização preferencial é utilizadoum dispositivo supercondutor de interferência quântica (SQUID) maciço. Apresente invenção utilizou um SQUID simétrico de dois furos feito de nióbiocom design tradicional Zimmerman (2,4 mm de diâmetro de furo, profundidadede 10 mm e com junção Josephson do tipo ponto de contacto). Ainda, o SQUIDutiliza uma bobina de calibração com momento magnético detectável mínimode 6,6x10"16 Am2.The present invention utilizes magnetic sensors containing devices containing immersion in liquid helium. In a preferred embodiment a massive quantum interference superconducting device (SQUID) is used. The present invention utilized a symmetrical two-hole SQUID made of traditional Zimmerman design niobium (2.4 mm bore diameter, 10 mm depth and with contact point Josephson junction). In addition, the SQUID utilizes a 6.6x10 "16 Am2 minimum detectable magnetic moment calibration coil.

Aparato de Detecção de NanopartículasO aparato de detecção de nanopartículas da presente invençãocompreende:Nanoparticle Detection Apparatus The nanoparticle detection apparatus of the present invention comprises:

a) meios para magnetização de nanopartículas magnéticasdesmagnetizadas;a) means for magnetizing demagnetized magnetic nanoparticles;

b) meios para resfriamento das nanopartículas magnéticas; eb) means for cooling magnetic nanoparticles; and

c) meios para medição do fluxo magnético remanente após oresfriamento.c) means for measuring the magnetic flux remaining after cooling.

Em especial, os meios para magnetização das nanopartículas inclui,sem contudo limitar-se a bobinas. Já os meios para resfriamento incluem, semcontudo limitar-se a hélio líquido.In particular, the means for magnetizing nanoparticles includes, but is not limited to coils. Already the means for cooling include, but not limited to liquid helium.

Exemplo 1 - Método de detecçãoExample 1 - Detection Method

Exemplo 1.1 - Calibracão do sistemaExample 1.1 - System Calibration

Utilizando o SHE SQUID 330X, o sistema da presente invençãoapresentou um ruído de 50μΦ0/Ηζ1/2 na faixa de 0,1 Hz- 100 Hz. Entretanto, asmedidas aqui apresentadas foram realizadas de 0,1 Hz à 10 Hz1 o que levou aum ruído de fluxo com amplitude de 20μΦ0 à 5 Hz. O O0 eqüivale a2,05 χ 10"15Tm2.Using the SHE SQUID 330X, the system of the present invention presented a noise of 50μΦ0 / Ηζ1 / 2 in the 0.1 Hz-100 Hz range. However, the measurements presented here were performed from 0.1 Hz to 10 Hz1 which led to a noise. with amplitude of 20μΦ0 at 5 Hz. O0 is equivalent to 2.05 χ 10 "15Tm2.

Utilizando uma bobina de calibração introduzida no SQUID, tem-se ummomento magnético detectável mínimo de 6,6 χ 10"16 Am2.Using a calibration coil introduced into the SQUID, you have a minimum detectable magnetic time of 6.6 χ 10 "16 Am2.

Exemplo 1.2 Preparação da AmostraExample 1.2 Sample Preparation

Na presente invenção, foram utilizadas partículas magnéticas recobertascom sílica e/ou dextran. Cuidados especiais devem ser tomados com partículasque tenham seu núcleo na faixa das centenas de nanômetros, a fim de evitarprecipitação e/ou agregação. Para este caso as partículas devem serinicialmente desmagnetizadas. A fim de dispersar uniformemente estaspartículas, um meio viscoso de PEG (polietileno glicol) em água miliQ (1:2 w/w)foi feito. Cerca de 10 μΙ das suspensões de partículas foram transferidas paraos microtubos a fim de realizar as medidas com o SQUID. Se o núcleo daspartículas for menor, não há necessidade dos cuidados mencionadosanteriormente.Exemplo 1.3 Medidas com SQUIDIn the present invention, silica and / or dextran-coated magnetic particles were used. Particular care should be taken with particles that have their nucleus in the hundreds of nanometers to avoid precipitation and / or aggregation. For this case the particles must be initially demagnetized. In order to uniformly disperse these particles, a viscous medium of PEG (polyethylene glycol) in milliQ water (1: 2 w / w) was made. About 10 μΙ of the particle suspensions were transferred to the microtubes to perform SQUID measurements. If the particle nucleus is smaller, there is no need for the aforementioned precautions. Example 1.3 SQUID Measures

A suspensão de partículas dentro dos microtubos é magnetizada aolongo do microtubo com 10 mT de campo magnético através de uma bobinacom 770 voltas com diâmetro interno de 14,7 mm e diâmetro externo de27 mm. Este conjunto (microtubo e bobina) é resfriado até a temperatura dohélio líquido com o campo magnético ligado. Depois de imerso no banho dehélio o campo magnético é desligado e o microtubo é introduzido no furo doSQUID.The particle suspension within the microtubes is magnetized along the 10 mT magnetic field microtube through a 770-spindle coil with an inner diameter of 14.7 mm and an outer diameter of 27 mm. This set (microtube and coil) is cooled to liquid helium temperature with the magnetic field on. Once immersed in the helium bath the magnetic field is turned off and the microtube is introduced into the hole of the SQUID.

Um dos resultados demonstrou que o fluxo dentro do SQUID para amesma massa de nanopartículas tem um aumento de 100 vezes em relação aofluxo que seria detectado utilizando um processo de magnetização semresfriamento.One of the results demonstrated that the flux within the SQUID for the same nanoparticle mass has a 100-fold increase over the flux that would be detected using a non-cooling magnetization process.

O técnico no assunto saberá avaliar que a presente invenção pode serrealizada de diferentes maneiras à luz das informações aqui descritas.The person skilled in the art will appreciate that the present invention may be embodied in different ways in light of the information described herein.

Claims (16)

Método E Aparato para Detecção de Nanopartículas MagnéticasMethod And Apparatus For Detecting Magnetic Nanoparticles 1. Método para detecção de nanopartículas magnéticas caracterizadopor compreender as etapas de:a) magnetizar as nanopartículas enquanto são resfriadas;b) medir o fluxo magnético remanente após o resfriamento de a) pormeio de um sensor magnético.1. Method for detecting magnetic nanoparticles comprising the steps of: a) magnetizing the nanoparticles while they are cooling b) measuring the magnetic flux remaining after cooling a) by means of a magnetic sensor. 2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado peloresfriamento das nanopartículas magnetizadas de a) ocorrerempreferencialmente em uma faixa de temperatura que vai de 25°C a -270° C.Method according to claim 1, characterized in that cooling of the magnetized nanoparticles of a) preferably occurs in a temperature range from 25 ° C to -270 ° C. 3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelasnanopartículas magnéticas de a) estarem ligadas a vírus, bactérias, células,proteínas, macromoléculas e mistura dos mesmos.Method according to claim 1, characterized in that the magnetic particles of a) are linked to viruses, bacteria, cells, proteins, macromolecules and mixtures thereof. 4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelasnanopartículas de a) serem previamente magnetizadas através de uma bobina.Method according to claim 1, characterized in that the particles of a) are previously magnetized through a coil. 5. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelamagnetização prévia das nanopartículas ocorrer preferencialmente à 10 mT decampo magnético através de uma bobina de 770 voltas.Method according to Claim 4, characterized in that the prior magnetization of the nanoparticles occurs preferably at 10 mT magnetic field through a 770-spindle coil. 6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo campomagnético ser desligado logo após o resfriamento das nanopartículas.Method according to claim 1, characterized in that the magnetic field is switched off shortly after cooling of the nanoparticles. 7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela mediçãodo fluxo magnético remanente de b) ser realizada utilizando sensoresmagnéticos que compreendem imersão em hélio líquido.Method according to claim 1, characterized in that the remnant magnetic flux measurement of b) is performed using magnetic sensors comprising immersion in liquid helium. 8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo sensormagnético ser preferencialmente o dispositivo supercondutor de interferênciaquântica maciço (SQUID).Method according to claim 7, characterized in that the magnetic sensor is preferably the massive quantum interference superconducting device (SQUID). 9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo SQUIDutilizar uma bobina de calibração com momento magnético detectável mínimode 6,6 XlO-16Am2.Method according to claim 8, characterized in that SQUID uses a calibration coil with a minimum detectable magnetic moment of 6.6 X10 -16Am2. 10. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelasnanopartículas estarem cobertas com sílica e/ou dextran.Method according to claim 1, characterized in that the nanoparticles are covered with silica and / or dextran. 11. Aparato para detecção de nanopartículas magnéticas caracterizadopor compreender:a) meios para magnetização de nanopartículas magnéticasdesmagnetizadas;b) meios para resfriamento das nanopartículas magnéticas; ec) meios para medição do fluxo magnético remanente após oresfriamento.Apparatus for detection of magnetic nanoparticles, characterized in that it comprises: (a) magnetic demagnetized magnetic nanoparticle magnetising means, (b) magnetic nanoparticle cooling means; and c) means for measuring the magnetic flux remaining after cooling. 12. Aparato, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo meiode magnetização ser uma bobina.Apparatus according to claim 11, characterized in that the magnetization means is a coil. 13. Aparato, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelamagnetização ocorrer preferencialmente à 10 mT de campo magnético atravésde uma bobina de 770 voltas.Apparatus according to claim 12, characterized in that the magnetization occurs preferably at 10 mT of magnetic field through a 770-loop coil. 14. Aparato, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo meiode medição utilizar sensores magnéticos que compreendem imersão em héliolíquido.Apparatus according to claim 11, characterized in that the measuring method employs magnetic sensors comprising immersion in helioliquid. 15. Aparato, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelosensor magnético ser preferencialmente o dispositivo supercondutor deinterferência quântica maciço (SQUID).Apparatus according to claim 14, characterized in that the magnetic sensor is preferably the massive quantum interference superconducting device (SQUID). 16. Aparato, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado peloSQUID utilizar uma bobina de calibração com momento magnético detectávelmínimo de 6,6 x10"16 Am2.Apparatus according to claim 15, characterized in that the SQUID utilizes a minimum detectable magnetic moment calibration coil of 6.6 x 10-16 Am2.
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