BRPI0806469A2

BRPI0806469A2 - tratamento de prdc em porcos

Info

Publication number: BRPI0806469A2
Application number: BRPI0806469-5A
Authority: BR
Inventors: Vicky Fachinger; Knut Elbers; Marion Kixmoeller; Francois-Xavier Orveillon; Richthofen Isabelle Freiin Von; Axel Lischewski
Original assignee: Boehringer Ingelheim Vetmed
Priority date: 2007-01-03
Filing date: 2008-01-02
Publication date: 2011-09-27
Also published as: US20110129495A1; CL2008000008A1; US20130115236A1; US7914992B2; ZA200903860B; RU2522849C2; US10010604B2; AU2008203710A1; EP3017829A1; UA100502C2; MX2009006541A; CA2674188A1; TW200848073A; EP2099484A1; AU2008203710B2; EP3017829B1; CN101578110A; WO2008081015A1; KR20090099005A; US20150273046A1

Abstract

TRATAMENTO DE PRDC EM PORCOS. A presente invenção refere-se ao uso de uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de circovírus porcino tipo 2 (PCV2) para a prevenção e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) em animais, preferivelmente em porcos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "TRATAMEN- TO DE PRDC EM PORCOS".

Este pedido de patente contém uma listagem de seqüência em formato de papel e em formato legível por computador, os ensinamentos e conteúdo deste são por este meio incorporados por referência. A listagem de seqüência é idêntica à incorporada no W006/072065.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se ao uso de uma composição imu- nogênica compreendendo um antígeno de circovírus porcino tipo 2 (PCV2) para a prevenção e tratamento de doença do complexo das doenças respira- tórias dos suínos (PRDC) em animais, preferivelmente em porcos.

DESCRIÇÃO DA TÉCNICA ANTERIOR

Circovírus porcino tipo 2 (PCV2) é um vírus de DNA pequeno (17 - 22 nm em diâmetro), icosaédrico, não-envelopado contendo um geno- ma circular unifilamentar. PCV2 compartilha aproximadamente 80 % da iden- tidade de seqüência com circovírus porcino tipo 1 (PCV1). Porém, em con- traste com PCV1, que é em geral não-virulento, a infecção de suínos com PCV2 tem recentemente associado às várias síndromes de doença têm sido coletivamente nomeadas Doenças de Circovírus Porcinas (PCVD) (também conhecidas como Doenças associadas a Circovírus Porcino (PCVAD)) (Allan et al, 2006, IPVS Congress). Síndrome Multissistêmica do Definhamento de Suínos Desmamados (PMWS) é em geral considerada ser a manifestação clínica principal de PCVD. (Harding et al., 1997, Swine Health Prod; 5: 201- 203; Kennedy et al., 2000, J Comp Pathol; 122: 9-24). PMWS afeta porcos entre 5-18 semanas de idade. PMWS é clinicamente caracterizada por defi- nhamento, palidez da pele, enfraquecimento, angústia respiratória, diarréia, icterícia, e amarelamento da pele. Em alguns suínos afetados, uma combi- nação de todos os sintomas será evidente enquanto outros suínos afetados apenas terão um ou dois destes sintomas. (Muirhead, 2002, Vet. Rec; 150: 456). Durante necropsia, as lesões microscópicas e macroscópicas também aparecem em múltiplos tecidos e órgãos, com órgãos linfóides sendo o sítio mais comum para as lesões. Allan e Ellis, 2000; J Vet. Diagn. Invest., 12: 3- 14). Uma correlação forte foi observada entre a quantidade de ácido nucleico de PCV2 ou antígeno e a severidade das lesões linfóides microscópicas. As taxas de mortalidade para suínos infetados com PCV2 podem chegar a 80 %.

A extensão do envolvimento de PCV2 em doenças suínas dife- rentes de PMWS é correntemente pouca entendida (Chae, Veterinary J., 2005; 169: 326-336). Há várias condições potencialmente relacionadas rela- tadas na literatura incluindo complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC), dermatopatia porcina e síndrome de nefropatia (PDNS), insuficiên- cia reprodutiva, enterite granulomatosa e potencialmente, tremores congêni- tos (CT-AII) e miocardite perinatal (Chae, Veterinary J., 2005; 169: 326-336). Entre estas, PRDC é considerado ter o maior impacto econômico na Europa devido a sua prevalência alta geral, taxa de morbidez alta (30-70 % em fa- zendas afetadas) e taxa de mortalidade (4-6 % em fazendas afetadas) (Kim et al, Veterinary J., 2003; 166: 251-256).

Pneumonia em porcos que sofrem de PRDC é devido a uma combinação de agentes virais e bacterianos tais como PRRSV, vírus da in- fluenza suína (SIV), Mycoplasma hyopneumoniae, Actinobacillus pleeurop- neumoniae e Pasteurella multocida. Embora a etiologia envolva múltiplos patógenos e varie de fazenda para fazenda PRRSV e Mycoplasma hyop- neumoniae são os dois patógenos mais comuns isolados de porcos PCV2- positivos apresentando PRDC (Kim et al., Veterinary J., 2003; 166: 251-256). Se PCV2 representa qualquer papel na causa de PRDC ou na manifestação, severidade, ou prolongação dos sinais clínicos de PRDC ainda não é conhe- cido.

Comparado a outros patógenos virais, PCV2 foi consistente- mente diagnosticado em lesões pulmonares de porcos que sofrem de PRDC. Estudos prospectivos têm documentado que pneumonia e frequen- temente enfermidade sistêmica, resultante de coinfecção com PCV2 e PR- RSV, são mais severas que às associadas à infecção por qualquer agente sozinho. Pode ser assumido, portanto, que há uma sinergia evidente entre PCV2 e similares patógenos que foram observados em casos de doença das vias respiratórias no campo (Ellis et al., Veterinary Microbiol., 2004; 98: 159- 163). Porém, ainda não é conhecido se PCV2, se presente em porcos que sofrem de PRDC, tem qualquer influência nos sinais clínicos de PRDC em porcos. Devido à ubiquidade de PCV2 com até 100 % de animais soropositi- vos ao término da engorda, pode ser similarmente possível que PCV2 não tenha nenhuma influência na expressão da doença de PRDC mas seja ape- nas um agente coinfectante não-relacionado.

Embora PMWS afete principalmente porcos jovens, tipicamente entre 5 e 12 semanas de idade, PRDC é predominantemente visto em por- cos na fase de crescimento e engorda, tipicamente por volta de 16 a 22 se- manas de idade. A morbidez varia de 30-70 % com uma mortalidade média de 4-6 % (Kim et al., Veterinary J., 2003; 166: 251-256). Clinicamente, sinais de PRDC são tosse extraordinariamente prolongada e severa e dispnéia que são refratárias à terapia de antibióticos, crescimento lento, eficiência alimen- tar diminuída, letargia, anorexia, e um aumento notável na mortalidade na fase intermediária a tardia de engorda.

Uma conspicuidade das lesões microscópicas PRDC é pneu- monia broncointersticial com fibrose peribronquial e peribronquiolar. Septos alveolares são notavelmente engrossados por infiltrados de macrófagos (Chae, VeterinaryJ., 2005; 169: 326-336).

Métodos para tratar infecções de PCV2 com base em uma vaci- na de DNA são descritos na patente U. S. 6.703.023. Em WO 03/049703, a produção de uma vacina quimérica viva é descrita, compreendendo uma cadeia principal de PCV-1 em que um gene imunogênico de umas cepas patogênicas de PCV2 substitui um gene da cadeia principal de PCV-1. W099/18214 forneceu várias cepas de PCV2 e procedimentos para a prepa- ração de uma vacina morta de PVC2. Porém, nenhum dado da eficácia foi relatado. Uma vacina de subunidade com base em ORF-2 eficaz foi relatada em W006/072065. Quaisquer de tais vacinas são intencionadas ser usadas para a(o) vacinação/tratamento de suínos ou porcos mais velhos que 3 se- manas de idade. Nenhuma destas vacinas foi descrita para a profilaxia ou tratamento de porcos que sofrem de PRDC, em particular em porcos PCV2- positivos, sofrendo de PRDC.

Além disso, tais vacinas não foram descritas para conferir imu- nidade protetora contra infecção de PCV2 ou reduzir, minorar a severidade de, ou curar qualquer sintoma clínico associado a esta em porcos que já têm anticorpos antiPCV2, preferivelmente tendo anticorpos antiPC2 maternos.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Figura 1: grupo da diferença de ganho de peso corporal por se- mana.

Figura 2: desenvolvimento da diferença no peso do corpo (IVP- CP) e carga média de vírus (log 10) no curso do estudo.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

PRDC é caracterizado por uns sinais clínicos múltiplos, incluindo tosse prolongada e extraordinariamente severa e dispnéia que são refratá- rias à terapia de antibióticos, crescimento lento, eficiência alimentar diminuí- da, letargia, anorexia, e um aumento notável na mortalidade na fase inter- mediária a tardia de engorda. Aqueles sinais clínicos estão associados ao número grande de vários patógenos. Envolvimento e, se houver, a extensão do envolvimento de PCV2 em PRDC não foi conhecida até agora. Desco- briu-se surpreendentemente que entre vários patógenos, PCV2 também re- presenta um papel importante na manifestação, severidade e prolongação dos sinais clínicos de PRDC. Desse modo, entre similares, PCV2 é um dos agentes causativos de PRDC em porcos.

Em geral, o impacto de um agente causativo em uma doença múltiplacausada (= doença multifatorial) como PRDC não é previsível. Um agente causativo pode não ter nenhum efeito mas também desloca, reprime, substitui, suplanta ou fortalece o efeito dos outros na manifestação, severi- dade e prolongação dos sinais clínicos de uma doença multifatorial como PRDC. Por exemplo, redução ou eliminação de um agente causativo de uma doença multifatorial como PRDC pode não ter nenhum efeito na aparência clínica desta doença se pelo menos um outro agente causativo estiver pre- sente, mas pode também significativamente reduzir os sintomas clínicos da- quela doença, até mesmo na presença de qualquer outro agente causativo.

Quanto maior o número de agentes causativos que estão envolvidos, menor a expectativa que uma redução ou eliminação de apenas um agente causa- tivo tenha uma influência positiva na duração da manifestação, severidade ou prolongação da doença. Descobriu-se surpreendentemente agora que manifestação, severidade e prolongação dos sinais clínicos de PRDC em porcos podem ser minoradas ou reduzidas pela profilaxia ou tratamento de animais ameaçados ou afetados com antígeno de PCV2. Em particular, a severidade e prolongação dos sinais clínicos de ou associados a PRDC po- dem ser fortemente minoradas e reduzidas em porcos infetados com PCV2 em combinação com patógenos conhecidos causar ou estar associados a PRDC em porcos, tal como PRRSV, Mycoplasma hyopneumoniae, Bordetel- la bronchiseptica, vírus da influenza suína, Mycoplasma hyorhinis e/ou Pas- teurella multocida. Em outras palavras, profilaxia e tratamento de porcos que sofrem de PRDC com antígeno de PCV2 têm um impacto positivo na saúde geral dos porcos, ganho de peso durante a engorda, e mortalidade fase in- termediária a tardia da engorda de porcos, em particular como estes fatores saúde geral, ganho de peso, mortalidade - são conhecidos ser negativa- mente afetados por PRRSV, Mycoplasma hyopneumoniae, Bordetella bron- chiseptica, vírus da influenza suína, Mycoplasma hyorhinis e/ou Pasteurella multocida.

Portanto, de acordo com um aspecto, a presente invenção provê um método para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respira- tórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeu- ticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal tratamento.

Os sinais clínicos associados a PRDC são selecionados do gru- po que consiste em tosse e dispnéia, crescimento lento, eficiência alimentar diminuída, letargia, anorexia, e/ou um aumento notável em mortalidade na fase intermediária a tardia de engorda. Desse modo, de acordo com um ou- tro aspecto, a presente invenção refere-se a um método para a profilaxia e tratamento de tosse e dispnéia, crescimento lento, eficiência alimentar dimi- nuída, letargia, anorexia, e/ou um aumento notável em mortalidade associa- da a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composi- ção imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal tratamento. Preferivelmente, a tosse e dispnéia são refra- tárias à terapia de antibióticos.

Os termos "antígeno" como aqui usado referem-se a uma se- quência de aminoácido que suscita uma resposta imune em um hospedeiro. Um antígeno, como aqui usado, inclui a seqüência de comprimento total de qualquer proteína de PCV2, análogos da mesma, ou fragmentos imunogêni- cos da mesma. O termo "fragmento imunogênico" refere-se a um fragmento de uma proteína que inclui um ou mais epítopos e desse modo suscita a resposta imune em um hospedeiro. Tais fragmentos podem ser identificados usando qualquer número de técnicas de mapeamento de epítopo bem co- nhecidas na técnica. Vide, por exemplo, Epitope Mapping Protocols in Me- thods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E. Morris, Ed., 1996) Human Press, Totowa1 Nova Jersey. Por exemplo, epítopos lineares podem ser de- terminados, por exemplo, simultaneamente sintetizando vários peptídeos em suportes sólidos, os peptídeos correspondendo às porções da molécula de proteína, e reagindo os peptídeos com anticorpos enquanto os peptídeos ainda estão prendidos aos suportes. Tais técnicas são conhecidas na técni- ca e descritas, por exemplo, na Patente U. S. 4.708.871; Geysen et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 81:3998 - 4002; Geysen et al. (1986) Mo- lec. Immunol. 23:709-715. Similarmente, epítopos conformacionais são fa- cilmente identificados determinando a conformação espacial dos aminoáci- dos tal como, por exemplo, por cristalografia de raio X e ressonância magné- tica nuclear 2-dimensional. Vide, por exemplo, Epitope Mapping Protocols, supra.

Antígenos sintéticos são também inclusos dentro da definição, por exemplo, poliepítopos, epítopos de flanqueamento, e similares antígenos recombinantes ou sinteticamente derivados. Vide, por exemplo, Bergmann et al. (1993) Eur. J. Immunol. 23:2777-2781; Bergmann et al. (1996), J. Immu- nol. 157:3242 - 3249; Suhrbier, A., (1997), Immunol, e Cell Biol. 75:402-408; Gardner et al, (1998) 12th World AIDS Conference, Genebra, Suíça, 28 de junho - 3 de julho de 1998.

Uma "resposta imune" significa, mas não é limitada ao desen- volvimento em um hospedeiro de uma resposta celular e/ou imune mediada por anticorpo para um antígeno, uma composição imunogênica ou vacina de interesse. Usualmente, uma "resposta imune" inclui mas não é limitada a um ou mais dos efeitos a seguir: a produção ou ativação de anticorpos, células B, células de T auxiliares, células T supressoras, e/ou células T citotóxicas, especificamente direcionados a um antígeno ou antígenos incluídos na com- posição ou vacina de interesse. Preferivelmente, o hospedeiro exibirá ou uma resposta terapêutica ou uma protetora imunológica (memória) de modo que a resistência à nova infecção seja intensificada e/ou a severidade clínica da doença reduzida. Tal proteção será demonstrada ou por uma redução em número ou severidade, ou falta de um ou mais dos sintomas associados a infecções de PCV2, na demora do princípio da viremia, em uma persistência viral reduzida, em uma redução da carga viral geral e/ou uma redução da excreção viral.

Os termos "composição imunogênica" ou "vacina" (ambos os termos são sinonimamente usados) como aqui usados refere-se a qualquer composição farmacêutica contendo um antígeno de PCV2 cuja composição pode ser usada para impedir ou tratar uma doença de PCV2 ou condição associada à infecção em um sujeito. Uma composição imunogênica preferi- da pode induzir, estimular ou intensificar a resposta imune contra PCV2. O termo, desse modo, abrange ambas composições imunogênicas de subuni- dade, como descritas abaixo, como também composições contendo PCV2 inteiramente morta, ou atenuada e/ou inativada. Desse modo, de acordo com outro aspecto, a presente invenção refere-se a um método para a profilaxia e tratamento do complexo das doen- ças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quanti- dade eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica com- preendendo um antígeno de PCV2 àquele animal em necessidade de tal tratamento, em que a composição imunogênica é composição imunogênica de subunidade, umas composições contendo PCV2 inteiramente morta, ou atenuada e/ou inativada.

O termo "composição imunogênica de subunidade", como aqui usado, refere-se a uma composição contendo pelo menos um polipeptídeo imunogênico ou antígeno, mas nem todos os antígenos, derivado ou homó- logo a um antígeno de PCV2. Uma tal composição é substancialmente livre de PCV2 intacto. Desse modo, uma "composição imunogênica de subunida- de" é preparado de polipeptídeos imunogênicos de PCV2 pelo menos parci- almente purificados ou fracionados (de preferência substancialmente purifi- cados), ou análogos recombinantes dos mesmos. Uma composição imuno- gênica de subunidade pode compreender o antígeno de subunidade ou antí- genos de interesse substancialmente livres de similares antígenos ou poli- peptídeos de PCV2, ou na forma fracionada. Uma composição de subunida- de imunogênica preferida compreende a proteína de ORF-2 de PCV2, como descrita abaixo. Mais preferidas são composições de subunidade imunogê- nicas compreendendo quaisquer dos antígenos de PCV2 fornecidos em W006/072065, que são todos incorporados aqui por referência em sua tota- lidade.

De acordo com outro aspecto, a composição imunogênica, co- mo aqui usada, mais preferível mente compreende o polipeptídeo, ou um fragmento do mesmo, expresso por ORF-2 de PCV2. Proteína de DNA de ORF-2 de PCV2, aqui usada para a preparação das composições e dentro dos processos fornecidos aqui é um domínio altamente conservado dentro do isolado de PCV2 e assim, qualquer ORF-2 de PCV2 seria eficaz como a fonte do DNA de ORF-2 de PCV e/ou polipeptídeo como aqui usado. Uma proteína de ORF-2 de PCV2 preferida é a da SEQ ID NO: 11 de W006/072065. Um outro polipeptídeo de ORF-2PCV preferido é fornecido como SEQ ID NO: 5 de W006/072065. Porém, é entendido por aqueles de versados na técnica que esta seqüência poderia variar em seqüência em até 6-10 % de homologia e ainda poderia manter as características antigênicas que a torna útil nas composições imunogênicas. As características antigêni- cas de uma composição imunológica podem ser, por exemplo, estimadas pelo experimento de desafio como fornecido pelo Exemplo 4 de W006/072065. Além disso, a característica antigênica de um antígeno modi- ficado ainda é mantida quando o antígeno modificado confere pelo menos 70 %, preferivelmente 80 %, mais preferivelmente 90 % da imunidade protetora quando comparado à proteína de ORF-2 de PCV2, codificada pela sequên- cia de polinucleotídeo da SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4, como fornecidas em W006/072065.

Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente in- venção provê um método para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associ- ado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 àquele animal em necessidade de tal tratamento, em que o antígeno de PCV2 é um antígeno de proteína de ORF- 2 de PCV2 tendo pelo menos 70 %, preferivelmente 80 %, até mesmo mais preferivelmente 90 % da imunidade protetora quando comparada à proteína de ORF-2 de PCV2, codificada pela seqüência de polinucleotídeo da SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4 como fornecidas em W006/072065. Preferivelmente a dita ORF-2 de PCV2 têm a seqüência da SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 5 de W006/072065.

Em algumas formas, as porções imunogênicas da proteína de ORF-2 de PCV2 são usadas como o componente antigênico na composição imunogênica, compreendendo antígeno de PCV2. O termo "porção imuno- gênica", como aqui usado, refere-se às formas truncadas e/ou substituídas, ou fragmentos da proteína e/ou polinucleotídeo de ORF-2 de PCV2, respec- tivamente. Preferivelmente, tais formas truncadas e/ou substituídas, ou fragmentos, compreenderão pelo menos 6 aminoácidos contíguos do poli- peptídeo de ORF-2 de comprimento total. Mais preferivelmente, as formas truncadas ou substituídas, ou fragmentos, terão pelo menos 10, mais prefe- rivelmente pelo menos 15, e ainda mais preferivelmente pelo menos 19 ami- noácidos contíguos do polipeptídeo de ORF-2 de PCV de comprimento total. Duas seqüências preferidas neste respeito são fornecidas como SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 10 de W006/072065. É também entendido que tais seqüên- cias podem ser uma parte de fragmentos maiores ou formas truncadas.

Como mencionado acima, um outro polipeptídeo de ORF-2 de PCV2 preferido é qualquer um codificado pelas seqüências de nucleotídeo da SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4. Porém, é entendido por aqueles de ver- sados na técnica que esta seqüência poderia variar em seqüência em até 6- 20 % de homologia e ainda poderia manter as características antigênicas que a tornam útil nas composições imunogênicas. Em algumas formas, uma forma truncada ou substituída, ou fragmento deste polipeptídeo de ORF-2 de PCV2 é usado como o componente antigênico na composição. Preferivel- mente, tais formas truncadas ou substituídas, ou fragmentos, compreende- rão pelo menos 18 nucleotídeos contíguos da seqüência de nucleotídeo de ORF-2 de PCV2 de comprimento total, por exemplo da SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4. Mais preferivelmente, as formas truncadas ou substituídas, ou fragmentos, terão pelo menos 30, mais preferivelmente pelo menos 45, e ainda mais preferivelmente pelo menos 57 nucleotídeos contíguos da se- qüência de nucleotídeo de ORF-2 de PCV2 de comprimento total, por exem- plo, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4.

"Identidade de seqüência", como é conhecido na técnica, refere- se a uma relação entre duas ou mais seqüências de polipeptídeo ou duas ou mais seqüências de polinucleotídeo, a saber, uma seqüência de referência e uma seqüência dada a ser comparada com a seqüência de referência. Iden- tidade de seqüência é determinada comparando a seqüência dada à se- qüência de referência após as seqüências terem sido otimamente alinhadas para produzir o grau mais alto de similaridade de seqüência, como determi- nado pelo pareamento entre as cadeias de tais seqüências. Em tal alinha- mento, a identidade de seqüência é apurada em uma base de posição-por- posição, por exemplo, as seqüências são "idênticas" a uma posição particu- lar se naquela posição os nucleotídeos ou resíduos de aminoácido forem idênticos. O número total de tais identidades de posição é depois dividido pelo número total de nucleotídeos ou resíduos na seqüência de referência para resultar % de identidade de seqüência. Identidade de seqüência pode ser facilmente calculada através de métodos conhecidos, incluindo, mas não limitados àqueles descrito em Computational Molecular Biology, Lesk, A. N., ed., Oxford University Press, Nova Iorque (1988), Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, Nova Iorque (1993); ComputerAnaIysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., e Griffin, H. G., eds., Humana Press, Nova Jersey (1994); Sequence Analysis in Mo- lecular Biology, von Heinge, G., Academic Press (1987); Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. e Devereux, J., eds., M. Stockton Press, Nova lorque (1991); e Carillo, H., e Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988), os ensinamentos destes são aqui incorporados por referência. Métodos pre- feridos são projetados para determinar a identidade de seqüência para resul- tar o pareamento maior entre as seqüências testadas. Os métodos são clas- sificados para determinar a identidade de seqüência em programas de com- putação publicamente disponíveis que determinam a identidade de seqüên- cia entre as seqüências dadas. Exemplos de tais programas incluem, mas não são limitados ao pacote de programa GCG (Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1):387 (1984)), BLASTP, BLASTN e FASTA (Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol1 215:403-410 (1990). O programa BLASTX está publi- camente disponível de NCBI e outras fontes (BLAST Manual, Altschul, S. et al, NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol, 215:403-410 (1990), os ensinamentos destes são aqui incorporados por re- ferência). Estes programas otimamente alinham as seqüências usando pe- sos de intervalo predefinidos para produzir o nível mais alto de identidade de seqüência entre as seqüências dadas e de referência. Como uma ilustração, por um polinucleotídeo tendo uma seqüência de nucleotídeo tendo pelo me- nos, por exemplo, 85 %, preferivelmente 90 %, até mesmo mais preferivel- mente 95 % de "identidade de seqüência" a uma seqüência de nucleotídeo de referência, é intencionado que a seqüência de nucleotídeo do polinucleo- tídeo dado seja idêntica à seqüência de referência exceto que a seqüência de polinucleotídeo dada pode incluir até 15, preferivelmente até 10, até mesmo mais preferivelmente até 5 mutações de ponto por cada 100 nucleo- tídeos da seqüência de nucleotídeo de referência. Em outras palavras, em um polinucleotídeo tendo uma seqüência de nucleotídeo tendo pelo menos 85 %, preferivelmente 90 %, até mesmo mais preferivelmente 95 % de iden- tidade com relação à seqüência de nucleotídeo de referência, até 15 %, pre- ferivelmente 10 %, até mesmo mais preferivelmente 5 % dos nucleotídeos podem ser deletados na seqüência de referência ou substituídos com outro nucleotídeo, ou vários nucleotídeos até 15 %, preferivelmente 10 %, até mesmo mais preferivelmente 5 % dos nucleotídeos totais na seqüência de referência podem ser inseridos na seqüência de referência. Estas mutações da seqüência de referência podem ocorrer nas posições terminais 5' ou 3' da seqüência de nucleotídeo de referência ou em qualquer lugar entre aquelas posições terminais, interpostas ou individualmente entre os nucleotídeos na seqüência de referência ou em um ou mais grupos contíguos dentro da se- qüência de referência. Analogamente, por um polipeptídeo tendo uma se- qüência de aminoácido dado tendo pelo menos, por exemplo, 85 %, preferi- velmente 90 %, até mesmo mais preferivelmente 95 % de identidade de se- quência a uma seqüência de aminoácido de referência, é intencionado que a seqüência de aminoácido dada do polipeptídeo seja idêntica à seqüência de referência exceto que a seqüência de polipeptídeo dada pode incluir até 15, preferivelmente até 10, até mesmo mais preferivelmente até 5 alterações de aminoácido por cada 100 aminoácidos da seqüência de aminoácido de refe- rência. Em outras palavras, para obter-se uma seqüência de polipeptídeo dada tendo pelo menos 85 %, preferivelmente 90 %, até mesmo mais prefe- rivelmente 95 % de identidade de seqüência com uma seqüência de amino- ácido de referência, até 15 %, preferivelmente até 10 %, até mesmo mais preferivelmente até 5 % dos resíduos de aminoácido na seqüência de refe- rência podem ser deletados ou substituídos com outro aminoácido, ou vários aminoácidos até 15 %, preferivelmente até 10 %, até mesmo mais preferi- velmente até 5 % do número total de resíduos de aminoácido na seqüência de referência podem ser inseridos na seqüência de referência. Estas altera- ções da seqüência de referência podem ocorrer nas posições terminais de amino ou carbóxi da seqüência de aminoácido de referência ou em qualquer lugar entre aquelas posições terminais, interpostas ou individualmente entre os resíduos na seqüência de referência ou no um ou mais grupos contíguos dentro da seqüência de referência. Preferivelmente1 as posições do resíduo que não são idênticas diferem pelas substituições conservadoras de amino- ácido. Porém, substituições conservadoras não são incluídas como um pa- reamento ao determinar a identidade de seqüência.

"Homologia de seqüência", como aqui usado, refere-se a um método de determinar a relação de duas seqüências. Para determinar a ho- mologia de seqüência, duas ou mais seqüências estão otimamente alinha- das, e intervalos são introduzidos, se necessário. Porém, em contraste com a "identidade de seqüência", substituições conservadoras de aminoácido são contadas como um pareamento ao determinar a homologia da seqüência. Em outras palavras, para obter-se um polipeptídeo ou polinucleotídeo tendo 95 % de homologia de seqüência com uma seqüência de referência, 85 %, preferivelmente 90 %, até mesmo mais preferivelmente 95 % dos resíduos de aminoácido ou nucleotídeos na seqüência de referência têm que parear ou compreender uma substituição conservadora com outro aminoácido ou nucleotídeo, ou vários aminoácidos ou nucleotídeos até 15 %, preferivelmen- te até 10%, até mesmo mais preferivelmente até 5 % dos resíduos de ami- noácido totais ou nucleotídeos, não incluindo substituições conservadoras, na seqüência de referência podem ser inseridos na seqüência de referência. Preferivelmente a seqüência homóloga compreende pelo menos uma exten- são de 50, até mesmo mais preferivelmente pelo menos 100, até mesmo mais preferivelmente pelo menos 250, e até mesmo mais preferivelmente pelo menos 500 nucleotídeos.

Uma "substituição conservadora" refere-se à substituição de um resíduo de aminoácido ou nucleotídeo com outro resíduo de aminoácido ou nucleotídeo tendo características ou propriedades similares incluindo tama- nho, hidrofobicidade, etc., de modo que a funcionalidade geral não altere significativamente.

"Isolado" significa alterado "pela mão do homem" de seu estado natural, isto é, se ocorrer na natureza, foi alterado ou removido de seu ambi- ente original, ou ambos. Por exemplo, um polinucleotídeo ou polipeptídeo naturalmente presente em um organismo vivo não é "isolado", mas o mesmo polinucleotídeo ou polipeptídeo separado dos materiais coexistentes de seu estado natural é "isolado", como é empregado o termo aqui.

Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente in- venção prove um método para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associ- ado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 àquele animal em necessidade de tal tratamento, em que a dita proteína de ORF-2 de PCV2 é qualquer uma da- quelas descritas acima. Preferivelmente, a dita proteína de ORF-2 de PCV2 é:

i) um polipeptídeo compreendendo a seqüência de SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 11 de W006/07065;

ii) qualquer polipeptídeo que é pelo menos 80 % homólogo ao polipeptídeo de i);

iii) qualquer porção imunogênica dos polipeptídeos de i) e/ou ii);

iv) a porção imunogênica de iii), compreendendo pelo menos 10 aminoácidos contíguos incluídos nas seqüências da SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 11 de W006/072065;

v) um polipeptídeo que é codificado por um DNA compreenden- do a seqüência de SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4 de W006/072065;

vi) qualquer polipeptídeo que é codificado por um polinucleotí- deo que é pelo menos 80 % homólogo ao polinucleotídeo de v);

vii) qualquer porção imunogênica dos polipeptídeos codificados pelo polinucleotídeo de v) e/ou vi);

viii) a porção imunogênica de vii), em que os polinucleotídeo que codificam para a dita porção imunogênica compreendem pelo menos 30 nu- cleotideos contíguos incluídos nas seqüências da SEQ ID NO: 3, ou SEQ ID NO: 4 de W006/072065.

Preferivelmente quaisquer daquelas porções imunogênicas têm as características imunogênicas da proteína de ORF-2 de PCV2 que é codi- ficada pela seqüência SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4 de W006/07065.

De acordo com um outro aspecto, proteína de ORF-2 de PCV2 é provida na composição imunogênica a um nível de inclusão de antígeno eficaz para induzir a resposta imune desejada, a saber, reduzir a incidência, minorar a severidade, ou impedir ou reduzir qualquer sintoma clínico associ- ado a PRDC e/ou PRDC. Preferivelmente, o nível de inclusão da proteína de ORF-2 de PCV2 é pelo menos 0,2 pg de antígeno / ml da composição imu- nogênica final (pg/ml), mais preferivelmente de cerca de 0,2 a cerca de 400 pg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,3 a cerca de 200 pg/ml, até mesmo mais preferivelmente de cerca de 0,35 a cerca de 100 pg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,4 a cerca de 50 pg/ml, ainda mais prefe- rivelmente de cerca de 0,45 a cerca de 30 pg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,6 a cerca de 15 pg / ml, até mesmo mais preferivelmente de cerca de 0,75 a cerca de 8 pg/ml, até mesmo mais preferivelmente de cerca de 1,0 a cerca de 6 pg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,3 a cer- ca de 3,0 pg/ml, até mesmo mais preferivelmente de cerca de 1,4 a cerca de 2,5 pg/ml, até mesmo mais preferivelmente de cerca de 1,5 a cerca de 2,0 pg/ml, e o mais preferivelmente cerca de 1,6 pg/ml.

De acordo com um outro aspecto, o nível de inclusão do antíge- no de -2 de PCV é pelo menos 0,2 pg / proteína de ORF-2 de PCV2 como descrito acima por dose da composição antigênica final (pg/dose), mais pre- ferivelmente de cerca de 0,2 a cerca de 400 pg/dose, ainda mais preferivel- mente de cerca de 0,3 a cerca de 200 pg/dose, até mesmo mais preferivel- mente de cerca de 0,35 a cerca de 100 pg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,4 a cerca de 50 pg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,45 a cerca de 30 pg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,6 a cerca de 15 pg/dose, até mesmo mais preferivelmente de cerca de 0,75 a cerca de 8 pg/dose, até mesmo mais preferivelmente de cerca de 1,0 a cer- ca de 6 pg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,3 a cerca de 3,0 pg/dose, até mesmo mais preferivelmente de cerca de 1,4 a cerca de 2,5 pg/dose, até mesmo mais preferivelmente de cerca de 1,5 a cerca de 2,0 pg/dose, e o mais preferivelmente cerca de 1,6 pg/dose.

O polipeptídeo de ORF-2 de PCV2 usado na composição imu- nogênica de acordo com a presente invenção pode ser derivado em qual- quer maneira incluindo isolamento e purificação de ORF2 de PCV2, síntese de proteína-padrão, e metodologia recombinante. Métodos preferidos para obter-se polipeptídeo de ORF-2 de PCV2 são fornecidos em W006/072065, os ensinamentos e conteúdo dos mesmos são por este meio incorporados por referência em sua totalidade. Brevemente, as células suscetíveis são infetadas com um vetor viral recombinante contendo seqüências de codifica- ção de DNA de ORF-2 de PCV2, polipeptídeo de ORF-2 de PCV2 é expres- sado pelo vírus recombinante, e o polipeptídeo de ORF-2 de PCV2 expresso restabelece do sobrenadante através de filtração e inativado por qualquer método convencional, preferivelmente usando etilenimina binária que é de- pois neutralizada para parar o processo de inativação.

A composição imunogênica, como aqui usada, também refere- se a uma composição compreendendo i) qualquer uma da proteína de ORF- 2 de PCV2 descrita acima, preferivelmente nas concentrações descritas a - cima, e ii) pelo menos uma porção do vetor viral expressando a dita proteína de ORF-2 de PCV2, preferivelmente de um baculovírus recombinante. Além disso, a composição imunogênica pode compreender i) qualquer uma das proteínas de ORF-2 de PCV2 descritas acima, preferivelmente nas concen- trações descritas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral expres- sando a dita proteína de ORF-2 de PCV2, preferivelmente de um baculovírus recombinante, e iii) uma porção do sobrenadante da cultura celular.

Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente in- venção provê um método para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associ- ado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 àquele animal em necessidade de tal tratamento, em que o antígeno de PCV2 é ORF-2 de PCV2 recombinante, preferível mente uma ORF-2 de PCV2 expresso em baculovírus. Preferivel- mente aquelas ORF-2 de PCV2 recombinante ou expresso em baculovírus tendo a seqüência como descrita acima.

A composição imunogênica, como aqui usada, também refere- se a uma composição compreendendo i) qualquer uma das proteínas de ORF-2 de PCV2 descritas acima, preferivelmente nas concentrações descri- tas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral expressando a dita prote- ína de ORF-2 de PCV2, preferivelmente de um baculovírus recombinante, e iii) uma porção da cultura celular; em que cerca de 90 % dos componentes têm um tamanho menor que 1 μιη.

A composição imunogênica, como aqui usada, também refere- se a uma composição compreendendo i) qualquer uma das proteínas de ORF-2 de PCV2 descritas acima, preferivelmente nas concentrações descri- tas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral expressando a dita prote- ína de ORF-2 de PCV2, iii) uma porção da cultura celular, iv) e agente de inativação para inativar o vetor viral recombinante preferivelmente BEI, em que cerca de 90 % dos componentes i) a iii) têm um tamanho menor que 1 μm. Preferivelmente, BEI está presente em concentrações eficazes para ina- tivar o baculovírus, preferivelmente em uma quantidade de 2 a cerca de 8 mM de BEI, preferivelmente de cerca de 5 mM de BEI. A composição imunogênica, como aqui usada, também refere- se a uma composição compreendendo i) qualquer uma das proteínas de ORF-2 de PCV2 descritas acima, preferivelmente nas concentrações descri- tas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral expressando a dita prote- ína de ORF-2 de PCV2, iii) uma porção da cultura celular, iv) um agente de inativação para inativar o vetor viral recombinante preferivelmente BEI, e v) um agente de neutralização para parar a inativação mediada pelo agente de inativação, em que cerca de 90 % dos componentes i) a iii) têm um tamanho menor que 1 pm. Preferivelmente, se o agente de inativação for BEI, a dita composição compreende tiossulfato de sódio em quantidades equivalentes a BEI.

O polipeptídeo está incorporado em uma composição que pode ser administrada a um animal suscetível à infecção de PCV2. Em formas preferidas, a composição pode também incluir componentes adicionais co- nhecidos àqueles versados na técnica (vide também Remington's Pharma- ceutical Sciences. (1990). 18a ed. Mack Publ., Easton). Adicionalmente, a composição pode incluir um ou mais veículos veterinários aceitáveis. Como aqui usado, "veículo veterinário aceitável" inclui quaisquer e todos os solven- tes, meios de dispersão, revestimentos, adjuvantes, agentes estabilizantes, diluentes, conservantes, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos, agentes retardantes de adsorção, e similares. Em uma modalida- de preferida, a composição imunogênica compreende proteína de ORF-2 de PCV2 como fornecida, preferível mente nas concentrações descritas acima, que é misturada com um adjuvante, preferivelmente Carbopol, e solução salina fisiológica.

Aqueles de versados na técnica entenderão que a composição aqui usada pode incorporar soluções injetáveis, estéreis, fisiologicamente aceitáveis, conhecidas. Para preparar uma solução pronta-para-uso para injeção ou infusão parenteral, as soluções isotônicas aquosas, tais como, por exemplo, soluções salinas de proteína plasmática ou correspondentes, estão facilmente disponíveis. Além disso, as composições imunogênicas e de vacina da presente invenção podem incluir diluentes, agentes isotônicos, estabilizantes, ou adjuvantes. Diluentes podem incluir água, solução salina, dextrose, etanol, glicerol, e similares. Agentes isotônicos podem incluir clore- to de sódio, dextrose, manitol, sorbitol, e lactose, entre similares. Estabilizan- tes incluem albumina e sais alcalinos de ácido etilenodiaminotetracético, en- tre similares.

"Adjuvantes", como aqui usado, podem incluir hidróxido de alu- mínio e fosfato de alumínio, saponinas, por exemplo, Quil A, QS-21 (Cam- bridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL), emulsão de água-em-óleo, emulsão de óleo-em-água, emulsão de água-em-óleo-em-água. A emulsão pode ser com base em par- ticular em óleo de parafina leve (tipo de Farmacopeia europeia); óleo de iso- prenoide tal como esqualano ou óleo de esqualeno, resultante da teoligome- rização de alquenos, em particular de isobuteno ou deceno; ésteres de áci- dos ou de alcoóis contendo um grupo alquila linear, mais particularmente óleos vegetais, oleato de etila, di-(caprilato/caprato de propileno glicol), tri- (caprilato/caprato de glicerila) ou dioleato de propileno glicol; ésteres de áci- dos graxos ramificados ou alcoóis, em particular ésteres de ácido isoesteári- co. O óleo é usado em combinação com emulsificantes para formar a emul- são. Os emulsificantes são preferivelmente tensoativos não-iônicos, em par- ticular ésteres de sorbitan, de manida (por exemplo oleato de anidromanitol), de glicol, de poliglicerol, de propileno glicol e de ácido oleico, isoesteárico, ricinoleico ou hidroxiesteárico que são opcionalmente etoxilados e copolíme- ro de bloco de polioxipropileno-polioxietileno, em particular os produtos Plu- ronic, especialmente L121. Vide Hunter et al., The Theory and Practical ap- pliction of Adjuvants (Ed. Stewart-Tull, D. E. S.). John Wiley and Sons, NY, págs. 51-94 (1995) e Todd et al., Vaccine 15:564-570 (1997).

Por exemplo, é possível usar a emulsão de SPT descrita na pá- gina 147 do "Vaccine Design, The Subunit and Advjuvant Approach" editado por M. Powell e M. Newman, Plenum Press, 1995, e a emulsão MF59 descri- ta na página 183 deste mesmo livro.

Uma outra circunstância de um adjuvante é um composto sele- cionado dos polímeros de ácido acrílico ou metacrílico e os copolímeros de anidrido maleico e derivado de alquenila. Compostos adjuvantes vantajosos são os polímeros de ácido acrílico ou metacrílico que são reticulados, espe- cialmente com éteres de polialquenila de açúcares ou polialcoóis. Estes compostos são conhecidos pelo termo carbômero (Phameuropa Vol. 8, No. 2, junho de 1996). Pessoas versadas na técnica podem também referir-se à Patente U. S. 2.909.462 que descrevem tais polímeros acrílicos reticulados com um composto poli-hidroxilado tendo pelo menos 3 grupos hidroxila, pre- ferivelmente não mais que 8, os átomos de hidrogênio de pelo menos três hidroxilas sendo substituídos por radicais alifáticos insaturados tendo pelo menos 2 átomos de carbono. Os radicais preferidos são aqueles contendo de 2 a 4 átomos de carbono, por exemplo vinilas, alilas e similares grupos etilenicamente insaturados. Os radicais insaturados podem por eles mesmos conter outros substituintes, tais como metila. Os produtos vendidos sob o nome Carbopol; (BF Goodrich, Ohio, USA) são particularmente apropriados. Eles são reticulados com uma sucrose de alila ou com pentaeritritol de alila. Entre eles, podem ser mencionados Carbopol 974P, 934P e 971 Ρ. O mais é o uso de Carbopol, em particular o uso de Carbopol 971P1 preferivelmente em quantidades de cerca de 500 pg a cerca de 5 mg por dose, até mesmo mais preferido em uma quantidade de cerca de 750 pg a cerca de 2,5 mg por dose e o mais preferido em uma quantidade de cerca de 1 mg por dose.

Outros adjuvantes adequados incluem, mas não são limitados a, sistema de adjuvante de RIBI (Ribi Inc.), copolímero de bloco (CytRx, Atlanta GA), SAF-M (Chiron, Emeryville CA), lipídio de monofosforila A, adjuvante de lipídio-amina de Avridine, enterotoxina instável sob calor de E. coli (recombi- nante ou não), toxina de cólera, IMS 1314, ou dipeptídeo de muramila entre muitos outros.

Preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 100 pg a cerca de 10 mg por dose. Até mesmo mais preferivel- mente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 100 pg a cerca de 10 mg por dose. Até mesmo mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 500 pg a cerca de 5 mg por do- se. Até mesmo mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 750 pg a cerca de 2,5 mg por dose. O mais preferi- velmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 1 mg por dose.

Adicionalmente, a composição pode incluir um ou mais veículos farmacêuticos aceitáveis. Como aqui usado, "veículo farmacêutico aceitável" inclui quaisquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes estabilizantes, diluentes, conservantes, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos, agentes retardantes de adsorção, e simila- res. O mais preferivelmente, a composição fornecida, contém proteína de ORF-2 de PCV2 restabelecida do sobrenadante de células cultivadas in vi- tro, em que as ditas células foram infetadas com um vetor viral recombinante contendo DNA de ORF-2 de PCV2 e expressando proteína de ORF-2 de PCV2, e em que a dita cultura de célula foi tratada com cerca de 2 a cerca de 8 mM de BEI1 preferivelmente com cerca de 5 mM de BEI para inativar o vetor viral, e uma concentração equivalente de um agente de neutralização, preferivelmente solução de tiossulfato de sódio para uma concentração final de cerca de 2 a cerca de 8 mM, preferivelmente de cerca de 5 mm.

A presente invenção também refere-se ao uso de uma composi- ção imunogênica para a profilaxia ou tratamento de PRDC ou a redução de qualquer sinal clínico associado a PRDC compreendendo i) qualquer uma das proteínas de ORF-2 de PCV2 descritas acima, preferivelmente nas con- centrações descritas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral expres- sando a dita proteína de ORF-2 de PCV2, iii) uma porção da cultura celular, iv) um agente de ínativação para inativar o vetor viral recombinante preferi- velmente BEI, e v) um agente de neutralização para parar a inativação me- diada pelo agente de inativação, preferivelmente tiossulfato de sódio em quantidades equivalentes a BEI; e vi) um adjuvante adequado, preferivel- mente Carbopol 971 nas quantidades descritas acima; em que cerca de 90 % dos componentes i) a iii) têm um tamanho menor que 1 pm.

De acordo com um outro aspecto, esta composição imunogêni- ca também compreende um sal aceitável farmacêutico, preferivelmente um sal de fosfato em fisiologicamente concentrações aceitáveis. Preferivelmen- te, o pH da dita composição imunogênica é ajustado em um pH fisiológico, significando entre cerca de 6,5 e 7,5.

A composição imunogênica, como aqui usada, também refere- se a uma composição compreendendo por um ml i) pelo menos 1,6 pg de proteína de ORF-2 de PCV2 descrita acima, ii) pelo menos uma porção de baculovírus expressando a dita proteína de ORF-2 de PCV2, iii) uma porção da cultura celular, iv) cerca de 2 a 8 mM de BEI, v) tiossulfato de sódio em quantidades equivalentes a BEI; e vi) cerca de 1 mg de Carbopol 971, e vii) sal de fosfato em uma concentração fisiologicamente aceitável; em que cer- ca de 90 % dos componentes i) a iii) têm um tamanho menor que 1 μm e o pH da dita composição imunogênica é ajustado em cerca de 6,5 a 7,5.

As composições imunogênicas podem também incluir um ou mais outros agentes imunomoduladores tais como, por exemplo, interleuci- nas, interferonas, ou outras citocinas. As composições imunogênicas podem também incluir Gentamicina e Mertiolato. Embora as quantidades e concen- trações dos adjuvantes e aditivos úteis no contexto da presente invenção possam ser facilmente determinadas pelo versado, a presente invenção con- templa composições compreendendo de cerca de 50 pg a cerca de 2000 pg de adjuvante e preferivelmente cerca de 250 μg / ml dose da composição de vacina. Desse modo, a composição imunogênica, como aqui usada, também refere-se a uma composição compreendendo de cerca de 1 μg/ml a cerca de 60 μg/ml de antibióticos, e mais preferivelmente menos que cerca de 30 μg/ml de antibióticos.

A composição imunogênica, como aqui usada, também refere- se a uma composição compreendendo i) qualquer uma das proteínas de ORF-2 de PCV2 descritas acima, preferivelmente nas concentrações descri- tas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral expressando a dita prote- ína de ORF-2 de PCV2, iii) uma porção da cultura celular, iv) um agente de inativação para inativar o vetor viral recombinante preferivelmente BEI, e v) um agente de neutralização para parar a inativação mediada pelo agente de inativação, preferivelmente tiossulfato de sódio em quantidades equivalentes a BEI; vi) um adjuvante adequado, preferivelmente Carbopol 971, em quan- tidades descritas acima; vii) uma concentração farmacêutica aceitável de uma solução salina tamponada, preferivelmente de um sal de fosfato, e vi ii) um agente antimicrobiológico ativo; em que cerca de 90 % dos componentes i) a iii) têm um tamanho menor que 1 pm.

A composição imunogênica, como aqui usada, também refere- se a Ingelvac® CircoFLEX®, (Boehringer Ingelheim Vetmedica Inc, St Jose- ph, MO, USA), CircoVac® (Merial SAS, Lyon, França), Porcilis PCV (Intervet Inc., Millsboro, DE, USA), ou Suvaxyn PCV-2 A Dose® (Fort Dodge Animal Health, Cidade de Kansas, KA, USA). Desse modo, a presente invenção também provê um método para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associ- ado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composi- ção imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal tratamento, em que em que a dita composição imunogê- nica compreendendo um antígeno de PCV2 é Ingelvac® CircoFLEX®, Cir- coVac®, Porcilis PCV e/ou Suvaxyn PCV-2 A Dose®, preferivelmente é In- gelvac® CircoFLEX®.

Como descrito acima, PCV2 foi identificado ser um agente cau- sativo relevante de PRDC. A maioria dos porcos que sofrem de PRDC são positivos para PCV2 (por exemplo Kim et al., Veterinary Journal (2003) 166: 251-256). O tratamento de porcos com antígeno de PCV2 resulta na redução dos sintomas respiratórios de PRDC (vide Exemplo 3). Desse modo, de a- cordo com um outro aspecto, a presente invenção provê um método para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um animal, com- preendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal tratamento, em que o PRDC ou os sinais clínicos associados com PRDC é/são associado(s) ou causado(s) por PCV2. Além disso, a presente invenção também provê um método para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respirató- rias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeu- ticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal tratamento, em que o PRDC ou os sinais clínicos associados com PRDC é/são associado(s) ou causado(s) por PCV2 e PRRSV, Actinobacillus pleu- ropneumoniae, Mycoplasma hyopneumoniae, Bordetella bronchiseptica, ví- rus da influenza suína, Mycoplasma hyorhinis, Streptococcus suis e/ou Pas- teurella multoeida. Como PCV2 é um dos agentes causativos de PRDC1 rebanhos que são positivos para PCV2 carregam um risco mais alto para desenvolver PRDC ou desenvolver uma duração mais séria de PRDC com sintomas clí- nicos sérios que rebanhos livres de PCV2. O termo "rebanho que é positivo para PCV2" como aqui usado significa que pelo menos 1 %, preferivelmente 10 %, mais preferivelmente 30 %, até mesmo mais preferivelmente 50 %, o mais preferivelmente 70 % dos animais de um rebanho são infetados ou tor- nam-se infetados em qualquer momento com PCV2. Isto não necessaria- mente significa que qualquer animal do rebanho desenvolva sintomas clíni- cos conhecidos ser causados por PCV2, tais como PMWS ou PRDC. Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção também provê um método para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respira- tórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeu- ticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal tratamento, em que o animal pertencendo a um rebanho que é positivo para PCV2. Preferivelmente, o PRDC e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC são causados por PCV2.

Como PRDC e os sintomas clínicos de PRDC podem também ser minorados ou reduzidos nos animais que são coinfetados com outros patógenos causativos de PRDC, a presente invenção também provê um mé- todo para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuti- camente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal tratamento, em que o animal pertencendo a um rebanho que é positivo para PCV2 e um ou mais outros patógenos selecionados do grupo que consiste em PRRSV, Mycoplasma hyopneumoniae, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordetella bronehiseptiea, vírus da influenza suína, Myeoplasma hyorhinis, Streptococcus suis e/ou Pasteurella multoeida. Preferivelmente, o PRDC e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC são causados por PCV2 e pe- lo menos um outro patógeno causativo de PRDC. O termo "um rebanho que é positivo para PCV2 e um ou mais outros patógenos selecionados do grupo que consiste em PRRSV1 Mycoplasma hyopneumoniae, Actinobacillus pleu- ropneumoniae, Bordetella bronchiseptica, vírus da influenza suína, Myco- plasma hyorhinis, Streptoeoceus suis e/ou Pasteurella multoeida", como aqui usado significa que pelo menos 10 %, preferível mente 30 %, mais preferi- velmente 50 %, até mesmo mais preferivelmente 70 % dos animais de um rebanho são infetados ou tornam-se infetados em qualquer momento com PCV2 e pelo menos um dos patógenos também listados abaixo. Isto não necessariamente significa que qualquer animal do rebanho desenvolva sin- tomas clínicos conhecidos ser causados por PCV2 e pelo menos um dos patógenos listados acima, por exemplo PRDC. Preferivelmente, o PRDC e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC são causados pelo menos por PC V2.

PRDC não só afeta um número definido de animais, ele nor- malmente afeta todos os animais de rebanho (o rebanho inteiro). Em outras palavras, se pelo menos um animal de uma fazenda desenvolve PRDC, os agentes causativos de PRDC estão persistentemente presentes dentro dos animais daquela fazenda. Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção também provê um método para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal tratamento, em que o animal pertencendo a um rebanho que é positivo para PCV2. Preferivelmente, o PRDC e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC são causados por PCV2. O termo "um rebanho que é positivo para PCV2" como aqui usado significa que pelo menos 1 %, preferivelmente 10 %, mais preferivelmente 30 %, até mesmo mais preferivelmente 50 %, o mais preferivelmente 70 % dos animais de um rebanho são infetados ou tornam-se infetados em qualquer momento com PCV2. Isto não necessariamente significa que qualquer animal da fazenda desenvolva sinais clínicos conhecidos ser causados por PCV2, tais como PMWS ou PRDC. Preferivelmente, o PRDC e/ou qualquer sinal clínico asso- ciado a PRDC são causados por PCV2.

Como PRDC e os sintomas clínicos de PRDC podem também ser minorados ou reduzidos nos animais que são coinfetados com outros patógenos causativos de PRDC, a presente invenção também provê um mé- todo para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuti- camente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal tratamento, em que o animal pertencendo a uma fazenda que é positivo para PCV2 e um ou mais outros patógenos selecionados do grupo que consiste em PRRSV, Mycoplasma hyopneumoniae, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica, vírus influenza símia, Mycoplasma hyorhinis, S- treptococcus suis e/ou Pasteurella multocida. Preferivelmente, o PRDC e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC são causados por PCV2 e pelo menos um outro patógeno causativo de PRDC. O termo "um rebanho que é positivo para PCV2 e um ou mais outros patógenos selecionados do grupo que consiste em PRRSV, Mycoplasma hyopneumoniae, Actinobacillus pleu- ropneumoniae, Bordetella bronchiseptica, vírus da influenza suína, Myco- plasma hyorhinis e/ou Pasteurella multocida", como aqui usado, significa que pelo menos 10 %, preferivelmente 30 %, mais preferivelmente 50 %, até mesmo mais preferivelmente 70 % dos animais de um rebanho são infetados ou tornam-se infetados em qualquer momento com PCV2 e pelo menos um dos outros patógenos listados abaixo. Isto não necessariamente significa que qualquer animal do rebanho desenvolva sintomas clínicos conhecidos ser causados por PCV2 e pelo menos um dos patógenos listados acima, por exemplo PRDC.

Imunidade maternalmente derivada foi mostrada conferir um certo grau de proteção contra infecção de PCV2 e doenças clínicas associa- das às infecções de PCV2. Esta proteção foi mostrada ser dependente da titulação: titulações mais altas são em geral protetoras enquanto que titula- ções mais baixas não são (McKeown et al., 2005; Clin. Diagn. Lab. Immu- nol.; 12: 1347-1351). A meia-vida média do anticorpo em suínos desmama- dos foi estimada ser 19,0 dias e a janela para queda de anticorpo passivo de PCV2 dentro de uma população é relativamente ampla (Opriessnig et al. 2004, J., Swine Health Prod. 12:186-191). A presença de anticorpos deriva- dos maternos não só pode conferir um certo grau de proteção contra infec- ções virais, que porém, não são previsíveis, mas podem também ser conhe- cido prejudicar a eficácia da imunização. Descobriu-se surpreendentemente que a presença de anticorpos de antiPCV2, em particular de titulações de anticorpo de antiPCV2 de até 1:20480, não afeta a eficácia do tratamento de PCV2. Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção provê um método para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quanti- dade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição i- munogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em neces- sidade de tal tratamento tendo anticorpos de antiPCV2, preferivelmente em que o dito animal tem uma titulação de anticorpo de antiPCV2 detectável de até 1:100, preferivelmente de mais que 1:100, até mesmo mais preferivel- mente de mais que 1:250, até mesmo mais preferivelmente de mais que 1:500, até mesmo mais preferivelmente de 1:640; até mesmo mais preferi- velmente de mais que 1:750, o mais preferivelmente de mais que 1:1000. Preferivelmente, aquela titulação de anticorpo de antiPCV2 é detectável e quantificável em um ensaio imune de antiPCV2 específico, preferivelmente no ensaio como descrito no exemplo 2.

Métodos para detecção e quantificação de anticorpos de an- tiPCV2 são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, detecção e quantifica- ção de anticorpos de PCV2 podem ser executadas através de imunofluores- cência indireta como descrita em Magar et al., 2000, Can. J. Vet Res.; 64: 184-186 ou Magar et al., 2000, J. Comp. Pathol; 123: 258-269. Outros en- saios para quantificação de anticorpos de antiPCV2 são descritos em Opri- essnig et al., 2006, 37th Annual Meeting of the American Association of Swi- ne Veterinarians. Além disso, o exemplo 2 também descreve um ensaio de imunofluorescência indireto que pode ser usado por uma pessoa versada na técnica. Em casos de resultados controversos e em qualquer questão de dúvida, titulações de antiPCV2 como mencionadas aqui, se referem às que são/podem ser estimadas pelo ensaio como descrito no exemplo 2.

De acordo com um outro aspecto, mais geral, a presente inven- ção provê um método para a profilaxia de PRDC, preferivelmente associado ou causado por PCV2, ou para redução dos sintomas clínicos causados ou associados a PRDC em animais jovens, compreendendo a etapa de admi- nistrar uma quantidade eficaz de um antígeno de PCV2 àquele animal jovem em necessidade de tal tratamento.

O termo "animal jovem" como aqui usado refere-se a um animal de 1 a 22 dias de idade. Preferivelmente, pelo termo animal jovem, um ani- mal de 1 a 20 dias de idade é significado. Mais preferivelmente, o termo a- nimal jovem refere-se a um animal de 1 a 15 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 dia de idade a 14 dias de idade, até mesmo mais prefe- rivelmente de 1 a 12 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 10 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 8 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 7 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 6 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 5 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 4 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 3 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 ou 2 dias de idade, o mais preferivelmente a um animal de 1 dia de idade. Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presen- te invenção provê um método para a profilaxia de PRDC, preferivelmente associado ou causado por PCV2, ou para redução dos sintomas clínicos causados ou associados a PRDC em animais jovens, compreendendo a e- tapa de administrar uma quantidade eficaz de um antígeno de PCV2 a um animal de 1 a 22 dias de idade, preferivelmente de 1 a 20 dias de idade, mais preferivelmente de 1 a 15 dias de idade, até mesmo mais preferível- mente de 1 a 14 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 12 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 10 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 8 dias de idade, até mesmo mais prefe- rivelmente de 1 a 7 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 6 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 5 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 4 dias de idade, até mesmo mais prefe- rivelmente de 1 a 3 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 ou 2 dias de idade, o mais preferivelmente em 1 dia de idade em necessidade de tal tratamento. Por exemplo, evidência é dada que vacinação/tratamento em 19 a 22 dias de idade mostra eficácia alta de vacinação. Além disso, vacina- ção/tratamento em dias 12 a 18 de idade também foi mostrada ser muito eficaz na redução dos sintomas clínicos associados ou causados por PRDC, redução da carga viral geral, redução da duração de viremia, retardo no princípio da viremia, ganho de peso.

Devido à ubiquidade de PCV2 no campo, a maioria dos porqui- nhos jovens são soropositivos a respeito de PCV2. Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção provê um método para a profila- xia de PRDC, preferivelmente associado ou causado por PCV2, ou para re- dução dos sintomas clínicos causados ou associados a PRDC em animais jovens tendo anticorpos de antiPCV2, preferivelmente no dia da vacinação, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade eficaz de um antí- geno de PCV2 a um animal de 1 a 22 dias de idade, preferivelmente de 1 a 20 dias de idade, mais preferivelmente de 1 a 15 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 14 dias de idade, até mesmo mais preferivel- mente de 1 a 12 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 10 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 8 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 7 dias de idade, até mesmo mais prefe- rivelmente de 1 a 6 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 5 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 4 dias de idade, até mesmo mais preferivelmente de 1 a 3 dias de idade, até mesmo mais prefe- rivelmente a 1 ou 2 dias de idade, o mais preferivelmente em 1 dia de idade em necessidade de tal tratamento. Preferivelmente, os ditos animais jovens, no dia da(o) vacinação/tratamento, têm uma titulação de anticorpo de an- tiPCV2 detectável de até 1:100, preferivelmente de mais que 1:100, até mesmo mais preferivelmente de mais que 1:250, até mesmo mais preferi- velmente de mais que 1:500, até mesmo mais preferivelmente de 1:640, até mesmo mais preferivelmente de mais que 1:750, o mais preferivelmente de mais que 1:1000 no dia da(o) vacinação/tratamento.

Como descrito acima, vacinação/tratamento de animais que so- frem de PRDC com antígeno de PCV2 resultou no encurtamento da fase virêmica quando comparado aos animais de controle não-vacinados. O tem- po médio de redução foi 15,4 dias quando comparado aos animais de con- trole não-vacinados das mesmas espécies. Portanto, de acordo com um ou- tro aspecto, a presente invenção também provê um método para o tratamen- to ou profilaxia de PRDC, preferivelmente associado ou causado por PCV2, ou para redução dos sintomas clínicos causados por ou associados a um PRDC em animais, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade eficaz de um antígeno de PCV2 àquele animal em necessidade de tal trata- mento, em que o tratamento ou profilaxia resulta no encurtamento da fase de viremia de 5 ou mais dias, preferivelmente 6 ou mais dias, até mesmo mais preferivelmente de 7 ou mais dias, até mesmo mais preferivelmente de 8 ou mais dias, até mesmo mais preferivelmente de 9, até mesmo mais preferi- velmente de 10, até mesmo mais preferivelmente de 12, até mesmo mais preferivelmente de 14, o mais preferivelmente de mais de 15 dias quando comparados aos animais de um grupo de controle não-tratado das mesmas espécies.

Em geral, a vacinação de porcos que sofrem de PRDC resultou em uma redução na perda de ganho de peso, redução nos sinais respirató- rios clínicos tais como tosse e dispnéia, uma duração mais curta da viremia, uma terminação mais prematura para viremia, e uma carga de vírus mais baixa. Portanto, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção provê um método para o tratamento ou profilaxia de PRDC, preferivelmente asso- ciado ou causado por PCV2, ou para redução dos sintomas clínicos associ- ados ou causados por PRDC em animais, compreendendo a etapa de admi- nistrar uma quantidade eficaz de antígeno de PCV2 a um animal em neces- sidade de tal tratamento, em que o dito tratamento ou profilaxia resulta em uma melhoria em comparação aos animais de um grupo de controle não- tratado das mesmas espécies em um parâmetro da eficácia da vacina sele- cionado do grupo que consiste em uma redução na perda de ganho de peso, redução nos sinais respiratórios clínicos tais como tosse e dispnéia, uma duração mais curta da viremia, uma terminação mais prematura para a vire- mia, uma carga de vírus mais baixa, ou combinações dos mesmos.

O termo "uma quantidade eficaz", como aqui usado, significa, mas não é limitado a, uma quantidade de antígeno que suscita ou é capaz de suscitar uma resposta imune em um animal ao qual a dita dose eficaz de antígeno de PCV2 é administrada.

A quantidade que é eficaz depende dos ingredientes da vacina e do programa de administração. Tipicamente, quando um vírus inativado ou uma preparação de vírus modificado vivo é usada(o) na vacina de combina- ção, uma quantidade da vacina contendo cerca de 102,0 a cerca de 109° TCID5O por dose, preferivelmente cerca de 103,0 a cerca de 108,0 TCID50 por dose, mais preferivelmente, cerca de 104,0 a cerca de 108,0 TCID50 por dose.

Em particular, quando PCV2 modificado vivo é usado nas vacinas, a dose recomendada a ser administrada ao animal suscetível é preferivelmente cer- ca de 103,0 TCID50 (dose infecciosa de cultura de tecido 50 % ponto fi- nal)/dose a cerca de 106,0 TCID50/dose e mais preferivelmente cerca de 104,0 TCID50/dose a cerca de 105,0 TCID50/dose. Em geral, a quantidade de antí- geno estará entre 0,2 e 5000 microgramas, e entre 102,0 e 109,0 TCID50, pre- ferivelmente entre 103,0 e 106,0 TCID50, mais preferivelmente entre 104,0 e 105,0 TCID50, quando o antígeno purificado for usado.

Vacinas de subunidade são normalmente administradas com um nível de inclusão de antígeno de pelo menos 0,2 pg de antígeno por dose, preferivelmente com cerca de 0,2 a cerca de 400 pg/dose, ainda mais prefe- rivelmente com cerca de 0,3 a cerca de 200 pg/dose, até mesmo mais prefe- rivelmente com cerca de 0,35 a cerca de 100 pg/dose, ainda mais preferi- velmente com cerca de 0,4 a cerca de 50 pg/dose, ainda mais preferível- mente com cerca de 0,45 a cerca de 30 pg/dose, ainda mais preferivelmente com cerca de 0,6 a cerca de 16 pg/dose, até mesmo mais preferivelmente com cerca de 0,75 a cerca de 8 pg/dose, até mesmo mais preferivelmente com cerca de 1,0 a cerca de 6 pg/dose, ainda mais preferivelmente com cer- ca de 1,3 a cerca de 3,0 pg/dose.

Inesperadamente, descobriu-se que o uso profiláctico das com- posições imunogênicas descritas acima é eficaz para a redução dos sinto- mas clínicos causados ou associados a PRDC, preferivelmente causados por pelo menos PCV2 em animais. Além disso, a composição antigênica descrita aqui reduz a carga de circovírus geral incluindo um princípio poste- rior, uma duração mais curta, uma terminação mais prematura da viremia, e uma carga viral reduzida e seu impacto imunossupressor em animais que sofrem de PRDC, e assim resultando em um nível mais alto de resistência geral da doença e uma incidência reduzida de PRDC.

A composição de acordo com a invenção pode ser aplicada in- tradérmica, intratraqueal, ou intravaginalmente. A composição preferivelmen- te pode ser aplicada intramuscular ou intranasalmente, o mais preferivelmen- te intramuscularmente. Pode provar vantajoso aplicar as composições far- macêuticas em um corpo animal, como descrito acima, por meio de uma in- jeção intravenosa ou direta nos tecidos alvos. Para aplicação sistêmica, as rotas intravenosas, intravasculares, intramusculares, intranasais, intra- arteriais, intraperitoneais, orais, ou intratecais são preferidas. Uma aplicação mais local pode ser realizada subcutânea, intradérmica, intracutânea, intra- cardial, intralobal, intramedular, intrapulmonar ou diretamente no ou próximo do tecido a ser tratado (tecido conetivo, ósseo, muscular, nervoso, epitelial). Dependendo da duração desejada e eficácia do tratamento, as composições de acordo com a invenção podem ser administradas uma vez ou várias ve- zes, também com intermitência, por exemplo diariamente durante vários di- as, semanas ou meses e em dosagens diferentes.

Preferivelmente, pelo menos uma dose da composição imuno- gênica como descrita acima é intramuscularmente administrada ao sujeito em necessidade da mesma. De acordo com um outro aspecto, o antígeno de PCV2 ou a composição imunogênica compreendendo qualquer tal antígeno de PCV2, como descrito aqui, é colocada em frascos e administrada em um (1) ml por dose. Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção também fornece uma composição imunogênica de 1 ml, compre- endendo antígeno de PCV-2, como descrito aqui, para o tratamento ou profi- laxia do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qual- quer sinal clínico associado a PRDC, preferivelmente causado por PCV2, em animais, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade eficaz de um antígeno de PCV2 àquele animal em necessidade de tal tratamento.

De acordo com um outro aspecto, pelo menos uma outra admi- nistração de pelo menos uma dose da composição imunogênica, como des- crito acima, é dada a um sujeito em necessidade da mesma, em que a se- gunda ou qualquer outra administração é dada pelo menos 14 dias além da administração inicial ou qualquer anterior. Preferivelmente, a composição imunogênica é administrada com um estimulante imune. Preferivelmente, o dito estimulante imune é dado pelo menos duas vezes, preferivelmente pelo menos 3 dias, mais preferivelmente pelo menos 5 dias, até mesmo mais pre- ferivelmente pelo menos 7 dias entre a primeira e a segunda ou qualquer outra administração do estimulante imune. Preferivelmente, o estimulante imune é dado pelo menos 10 dias, preferivelmente 15 dias, até mesmo mais preferivelmente 20, até mesmo mais preferivelmente pelo menos 22 dias além da administração inicial da composição imunogênica fornecida aqui. Um estimulante imune preferido é, por exemplo, hemocianina de lapa (KLH), preferivelmente emulsificada com o adjuvante de Freund incompleto (K- LH/ICFA). Porém, é com isto entendido, que qualquer outro estimulante imu- ne conhecido a uma pessoa versada na técnica pode também ser usado. O termo "estimulante imune" como aqui usado, significa qualquer agente ou composição que pode desencadear a resposta imune, preferivelmente sem iniciar ou aumentar uma resposta imune específica, por exemplo a resposta imune contra um patógeno específico. É também instruído administrar o es- timulante imune em uma dose adequada. A presente invenção também refere-se ao uso de um antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo antígeno de PCV2 para a preparação de um medicamento para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um animal. Preferivelmente, o PRDC ou os sinais clínicos associados a PRDC são causados por pelo menos PCV2, mais preferivelmente em combinação com um ou mais outros patógenos selecionados do grupo que consistem em PRRSV, Mycoplasma hyopneu- moniae, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica, vírus influenza símia, Myeoplasma hyorhinis, Streptococcus suis e/ou Pasteurella multoeida. Mais preferivelmente, o antígeno de PCV2 é um antígeno recom- binante, preferivelmente ORF-2 de PCV2, até mesmo mais preferivelmente Ingelvac® CircoFLEX®.

O "animal", como aqui usado, significa suíno, porco ou porqui- nho. Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção provê um método para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um porco, compreendendo a etapa de administrar uma quantida- de terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imu- nogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um porco em necessida- de de tal tratamento. Preferivelmente, o PRDC é causado pelo menos por PCV2, preferivelmente em combinação com pelo menos um outro agente etiológico conhecido causar PRDC, por exemplo PRRSV, Myeoplasma hyopneumoniae, Aetinobaeillus pleuropneumoniae, Bordetella bronehisepti- ca, vírus da influenza suína, Myeoplasma hyorhinis, Streptoeoeeus suis e/ou Pasteurella multoeida. Preferivelmente, o antígeno de PCV2 ou composição imunogênica compreendendo antígeno de PCV2 é qualquer um daqueles descritos supra, o mais preferivelmente o antígeno de PCV2 é Ingelvac® CircoFLEX®.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERIDAS

Os exemplos a seguir expõem materiais e procedimentos prefe- ridos de acordo com a presente invenção. Embora quaisquer métodos e ma- teriais similares ou equivalentes aos descritos aqui possam ser usados na prática ou testagem da presente invenção, os métodos, dispositivos, e mate- riais preferidos são agora descritos. Porém, é para ser entendido que estes exemplos são fornecidos por via de ilustração apenas, e não deveriam ser julgados como uma limitação no escopo geral da invenção.

EXEMPLO 1

PREPARAÇÃO DO ANTÍGENO DE ORF-2 DE PCV2

Culturas iniciais de célula SF+ de armazenamento de nitrogênio líquido foram crescidas em meios Excell 420 (JRH Biosciences, Inc., Lenexa, KS) em suspensão em frascos giratórios estéreis com agitação constante. As culturas foram crescidas em frascos giratórios de 100 ml a 250 ml_ com 25 a 150 ml de meios Excell 420 livres de soro. Quando as células tinham se multiplicado a uma densidade de célula de 1,0 - 8,0 χ 106 células/mL, elas foram divididas em vasos novos com uma densidade de plantação de 0,5 - 1,5 χ 106 células/mL. Culturas de expansão subsequentes foram crescidas em frascos giratórios até 36 litros em tamanho ou em biorreatores de aço inoxidável de até 300 litros durante um período de 2-7 dias a 25 - 29° C.

Após semear, os frascos foram incubados a 27° C durante qua- tro horas. Subseqüentemente, cada frasco foi semeado com um baculovírus recombinante contendo o gene de ORF-2 de PCV2 (SEQ ID NO: 4). O bacu- lovírus recombinante contendo o gene de ORF-2 de PCV2 foi gerado como descrito em W006/072065. Após serem semeados com o baculovírus, os frascos foram depois incubados a 27 ± 2o C durante 7 dias e também agita- dos a 100 rpm durante aquele tempo. Os frascos usaram tampas ventiladas para permitir fluxo de ar.

Após incubação, o sobrenadante resultante foi colhido, filtrado para remover restos celulares e inativado. O sobrenadante foi inativado tra- zendo sua temperatura para 37 ± 2o C e etilenimina binária (BEI) é acrescen- tado ao sobrenadante a uma concentração final de 5 mM. As amostras fo- ram depois agitadas continuamente por 72 a 96 h. Uma solução de tiossulfa- to de sódio a 1,0 M para resultar uma concentração mínima final de 5 mM foi adicionada para neutralizar qualquer BEI residual. Após inativação, ORF-2 de PCV2 tamponado com tampão de fosfato e Carpopol foi adicionado para cerca de 0,5 a 2,5 mg/dose. A dose final compreende cerca de 16 pg de an- tígeno de ORF-2 de PCV2.

EXEMPLO 2

IMUNOENSAIO DE ANTIPCV-2

Células PK15 (por exemplo ATCC CCL-33) ou VIDO R1 descri- tas em WO 02/07721 são semeadas sobre uma placa de 96 poços (cerca de 20.000 a 60.000 células por poços). As células são infetadas com um isolado de PCV2, quando monocamadas são aproximadamente 65 a 85 % confluen- tes. As células infetadas são incubadas durante 48 horas. O meio é removi- do e os poços são lavados 2 vezes com PBS. O tampão de lavagem é des- cartado e as células tratadas com fixador de metanol/acetona 50/50 frio (-100 μl/poço) durante cerca de 15 min a cerca de -20°C. O fixador é des- cartado e as placas são secadas ao ar. Diluições seriais das amostras de soro porcino são preparadas em PBS, adicionadas às placas e incubadas para permitir os anticorpos ligarem, se presente, nas amostras de soro du- rante cerca de 1 h a 36,5 ± 1o C. Além disso, as diluições seriais de uma amostra de controle positivo e negativo de antiPCV2 (Amostras de Controle Positivo e de Controle Negativo) são operadas em paralelo. As placas são depois lavadas três vezes com PBS. O PBS é descartado. As placas são depois tingidas com um conjugado de FITC Antissuíno de Cabra Comercial diluído 1:100 em PBS e incubado durante cerca de 1 h a 36,5 + 1o C, que permite a detecção dos anticorpos ligados às células infetadas. Após incu- bação estar concluída, as microplacas são removidas da incubadora, o con- jugado é descartado e as placas são lavadas 2 vezes com PBS. As placas foram lidas usando microscopia UV e os poços individuais relatados como positivos ou negativos. As amostras de Controle Positivo e de Controle Ne- gativo são usadas para monitorar o sistema de teste. Se os controles estive- rem dentro das faixas esperadas, os resultados de teste são aceitáveis com respeito aos parâmetros do método de teste. As titulações do anticorpo de soro foram calculadas usando a diluição mais alta mostrando a reatividade de IFA específica e o número de poços positivos por diluição, ou um ponto terminal de 50 % é calculado usando a fórmula de Reed-Muench apropriada.

EXEMPLO 3

EFICÁCIA DE ORF-2 DE PCV2 (Ingelvac® CircoFLEX®) NO TRATAMENTO DE PRDC

OBJETIVO

O propósito deste estudo foi a demonstração da eficácia de In- gelvac® CircoFLEX no controle de PRDC associado a PCV2.

DESEMPENHO DO ESTUDO

1542 porcos convencionais pertencendo a três grupos de sema- nas sucessivas, cada compreendendo cerca de 500 animais, foram incluídos no estudo. Os animais do estudo foram bloqueados em peso e tarefa de lixo e fortuitamente atribuídos a um grupo de vacina (n=769) e um grupo de con- trole (n=773).

- Grupo 1: No dia de estudo 0 os porcos foram vacinados intra- muscularmente na idade de cerca de 20 dias por uma dose única de Ingel- vac® CircoFLEX® contendo proteína de ORF-2 de PCV2 como substância ativa com um RP de 1 (por dose de 1 ml) e Carbopol® como adjuvante.

- Grupo 2: O grupo de controle recebeu 1 ml de artigo de contro- le que continha sobrenadante de cultura celular livre de proteína de ORF-2 de PCV2 e Carbopol® como adjuvante.

- Grupo 3: Porcos não-tratados.

O estudo foi concluído no término da engorda (semana de estu- do 22).

Parâmetros registrados

Parâmetros registrados foram como segue:

- Peso do corpo individual (todos os animais)

- Freqüência de 'porcos raquíticos' (todos os animais)

- Sinais clínicos (todos os animais)

- Mortalidade (todos os animais)

- Viremia de PCV2 em soro: princípio, fim, duração da viremia, carga de vírus (17 % dos animais do estudo)

- Necropsia (todo animal morto ou eutanizado, se possível) Situação da Doença na Fazenda

De acordo com a história de doença da fazenda de criação e engorda, os animais experimentaram sintomas respiratórios relacionados ao complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) do meio da engorda em diante. Estes sintomas foram acompanhados por um ganho de peso re- duzido (ADWG 750-780 g) e uma taxa de mortalidade aumentada (5,5-6,6 %) durante o período de engorda. Patógenos que foram considerados estar envolvidos em PRDC naquele momento foram PCV2, PRRSV, Pasteurella multocida, Bordetella bronchiseptica e ocasionalmente SIV. Para o curso deste estudo, Mycoplasma hyopneumoniae e Mycoplasma hyorhinis foram adicionalmente encontrados estar envolvidos neste complexo de doença. De forma interessante, os resultados deste estudo dão evidência para o fato que a infecção por PRRSV e Mycoplasma hyopneumoniae ocorreram cerca de 4- 6 semanas antes do princípio da viremia de PCV2. Porém, como o número de animais mortos no curso do estudo e a freqüência dos sintomas respirató- rios antes e após o princípio da viremia de PCV2 revelam, os animais não permaneceram muito afetados destes dois patógenos infecciosos.

RESULTADOS

Peso do Corpo, Ganho de Peso, Ganho de Peso Diário Médio

Peso do corpo dos dois grupos de tratamento foi comparável na hora da iniciação do estudo. Nas semanas de estudo 17 e 22, o peso do corpo do grupo vacinado era significativamente mais alto que o peso do cor- po do grupo tratado com placebo (p = 0,0007 e ρ < 0,0001, respectivamen- te).

Da iniciação do estudo até semana de estudo 22, os animais va- cinados tinham ganhado 2,8 kg mais peso que os animais tratados com pla- cebo. Isto corresponde a um ADWG de 13 g/d mais alto nos animais vacina- dos da iniciação do estudo até a semana de estudo 17 e um ADWG de 18 g/d mais alto nos animais vacinados até a semana de estudo 22. Durante o período de engorda inteiro (semana de estudo 7-22), o ADWG pôde ser, desse modo, aumentado de 777 g/d em animais tratados com placebo (comparável ao ADWG de 750-780 g/d histórico) para 803 g/d em animais vacinados (Tabela 1 e Figura 1).

Tabela 1: Comparação do peso do corpo, Ganho de Peso e ADWG (dados agrupados de todos os três grupos da semana)

<table>table see original document page 40</column></row><table>

1) valor ρ do teste-t para comparação entre os grupos, ns: não significativo, *** significativo, ρ <0,001

Viremia no Sangue

Animais vacinados mostraram um princípio ligeiramente posterior de viremia (1,5 dia depois), um término mais prematuro significativo de viremia (p < 0,0001), uma duração mais curta significativa de viremia (p < 0,0001), um número inferior significativo dos dias de amostragem positivos por animal (p < 0,0001) e uma redução geral significativa na carga de vírus (p < 0,0001). A proporção mais alta de animais virêmicos foi observada na sema- na de estudo 17 com 75 % dos animais virêmicos no grupo de placebo e 28 % dos animais virêmicos no grupo vacinado. Tabela 2: Comparação de Viremia no Sangue (dados agrupados de todos os três grupos da semana)

<table>table see original document page 41</column></row><table>

υ gE: equivalentes genômicos por ml

2) valor ρ (do teste de Wilcoxon Mann-whitney para comparação entre os grupos), ns: não significativo, *** significativo, ρ < 0,001

Correlação da Viremia no Sangue com Peso do Corpo Figura 2 ilustra a carga de vírus em animais de amostra de am- bos os grupos de tratamento no curso do estudo comparado à diferença no peso do corpo vivo (CP-IVP) de todos os animais de ambos os grupos de tratamento nos respectivos pontos de tempo de pesagem. Ao comparar as curvas para diferença de peso do corpo com as barras representando a car- ga de vírus, fica óbvio que as diferenças observadas no peso do corpo entre ambos grupos de tratamento (semanas de estudo 17 e 22) ocorrem após o princípio da viremia (semana de estudo 14-16). Enquanto a carga de vírus está diminuindo após um pico na semana de estudo 17, a diferença no peso do corpo entre grupos está aumentando também até o término da engorda. Juntos estes dados dão evidência para uma correlação entre o desenvolvi- mento do ganho de peso corporal mais alto observado nas semanas de es- tudo 17 e 22 no grupo vacinado e o princípio, duração e nível de viremia.

Cálculo do coeficiente de classificação de Spearman confirmou a existência de uma correlação significativa estatística entre a viremia e a dife- rença no desenvolvimento do ganho de peso em animais tratados com pla- cebo nas semanas de estudo 17 e 22. Um peso baixo do corpo em animais tratados com plaoebo foi correlatado com um princípio prematuro, uma dura- ção longa de viremia e uma carga de vírus alta. Para animais vacinados ne- nhuma tal correlação pôde ser encontrada indicando que o peso do corpo mais alto nos animais vacinados é o resultado de um princípio atrasado e duração mais curta da viremia como também de uma carga de vírus mais baixa no sangue. Freqüência de Porcos Raquíticos

Nenhuma diferença significativa na freqüência de 'porcos raquíti- cos' pôde ser observada entre o grupo vacinado e tratado com placebo em qualquer um dos respectivos pontos de tempo de pesagem. Após o princípio da viremia de PCV2 (semana de estudo 14-16), a freqüência de 'porcos ra- quíticos' foi em geral baixa em ambos os grupos de tratamento (2,2-3,9 %).

Tabela 3: Comparação da freqüência de 'porcos raquíticos' (dados agrupa- dos de todos os três grupos de semana)

<table>table see original document page 42</column></row><table>

P: valor ρ de teste-t para comparação entre os grupos; ρ > 0,05 não significativo Sinais clínicos

Antes do princípio de viremia, os sinais clínicos predominantes foram fraqueza, tosse e diarréia (em 8-12 % dos animais). Eles ocorreram com freqüência igual em ambos os grupos de tratamento. Sob necropsia dos animais mortos e exame microbiológico subsequente, Streptococcus suis foi identificado como possível patógeno infeccioso para fraqueza, Haemophilus parasuis e Bordetella bronchiseptica foram identificados como possíveis pa- tógenos infecciosos para tosse e E. coli hemolítico foi identificado como pos- sível razão para diarréia.

Após o princípio da viremia, os sintomas clínicos predominantes observados em animais de ambos os grupos de tratamento foram tosse e fraqueza. Análises sorológicas periódicas para outros patógenos infecciosos e descobertas microbiológicas sob necropsia revelaram que a viremia de PCV2 foi acompanhada por uma infecção de PRRSV (precedente) e Myco- plasma hyopneumoniae. Junto com PCV2, estes patógenos infecciosos fa- zem parte de PRDC que é considerado ser a causa para a freqüência au- mentada dos animais tossindo após o princípio da viremia. Comparado aos animais tratados com placebo, a freqüência de tosse e dispnéia em animais vacinados foi reduzida em 12,2 % e 17,5 %, respectivamente. Estes achados são, porém, sem qualquer significação estatística. A freqüência aumentada de fraqueza após o princípio de viremia comparada ao tempo antes do prin- cípio de viremia é mais provavelmente causada por formas crônicas de artri- te de Streptococcus suis ou por fraquezas do aparelho articular e ambos os grupos de tratamento afetados da mesma maneira (p = 0,8321). Similarmen- te, a freqüência de similares achados clínicos (diarréia, anormalidades da pele, comportamento) após o princípio da viremia foi quase igual entre os dois grupos de tratamento.

Mortalidade

Antes do princípio da viremia, a taxa de mortalidade foi compa- rável em ambos os grupos de tratamento (animais vacinados: 5,20 %, ani- mais tratados com placebo: 5,17 %). Após o princípio da viremia, os animais tratados com placebo tiveram uma taxa de mortalidade mais alta significativa que os animais vacinados (animais vacinados: 1,51 %, animais tratados com placebo: 3,68 %, ρ = 0,0127). Comparado aos animais tratados com place- bo, a taxa de mortalidade nos animais vacinados foi reduzida em 59 %.

CONCLUSÃO

O estudo foi conduzido em uma fazenda que mostrou sintomas típicos de PRDC na fase tardia de engorda. Na idade de 17 a 19 semanas, os porcos desenvolveram sintomas respiratórios, uma taxa de mortalidade aumentada e uma perda de ganho de peso. Em triagens sorológicas e mi- crobiológicas, PCV2, PRRSV, Mycoplasma hyopneumoniae, Myeoplasma hyorhinis e Pasteurella multoeida foram identificados como possíveis pató- genos estando envolvidos neste complexo de doença.

Comparado ao grupo de controle tratado com placebo, os se- guintes achados significativas estatísticos foram observados para o grupo vacinado:

- redução da perda do ganho de peso

- redução da mortalidade

- redução da duração da viremia e término mais prematuro da viremia

- redução da carga de vírus

- redução de tosse e dispnéia

Como esperado, nenhuma diferença significativa estatística pô- de ser observada com respeito à freqüência de 'porcos raquíticos' uma vez que a ocorrência de 'porcos raquíticos' não é um achado típico para PRDC.

Juntos estes achados permitem as seguintes conclusões:

1. O estudo foi conduzido em um rebanho que foi afetado com PRDC na fase intermediária a tardia de engorda. PCV2 estava claramente envolvido neste complexo de doença uma vez que sintomas respiratórios, perda de ganho de peso e um aumento na mortalidade foram apenas obser- vados após o princípio da viremia.

2. Vacinação dos animais com Ingelvac® CircoFLEX® pôde re- duzir ou mesmo impedir os parâmetros clinicamente relevantes que estão relacionados a PRDC associado com PCV2. Listagem de Seqüência

<110> BOEHRINGER INGELHEIM VETMEDICA INC <120> PROFILAXIA E TRATAMENTO DE PRDC <130> P01-2174 <160> 11 <170> Patentln versão 3.3 <210> 1 <211> 8 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Esta é uma sequencia modificada de Kozak. <400> 1 ccgccatg <210> 2 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Esta é uma sequencia de Eco Rl recombiante <400> 2 gaattc <210> 3 <211> 713 <212> DNA <213> Circovirus porcino <400> 3

cagctatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60

ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120

gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtggaga 180

aggaaaaatg gcatcttcaa cacccgcctc tcccgcacct tcggatatac tgtgacgact 240 ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 300 gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360 gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420 acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480 gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540 aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600 gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660 tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttaa accctaaatg aat 713

<210> 4

<211> 713

<212> DNA

<213> circovírus porcino

<400> 4

ccgccatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60 ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120 gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtcaagg 180 ctaccacagt cacaacgccc tcctgggcgg tggacatgat gagatttaat attgacgact 240 ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 300 gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360 gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420 acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480 gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540 aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600 gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660 tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttga accctaagaa ttc 713

<210> 5 <211> 233 <212> PRT

<213> circovírus porcino <400> 5

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 15 10 15

Ser His Leu Gly Gln lie Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro

20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg

35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr

50 55 60

Pro ser Trp Ala vai Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val 65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr

85 90 95

Arg lie Arg Lys Val Lys vai Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr

100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn

115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr

130 135 140

Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr lie Asp Tyr Phe Gln Pro

165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn

180 185 190

Val Asp His vai Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp

195 200 205

Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe

210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro 225 230

<210> 6 <211> 233 <212> PRT

<213> Circovirus porcino <400> 6

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 15 10 15

Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro

20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg

35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr vai Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr

50 55 60

Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val 65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr

85 90 95

Arg Ile Arg Lys vai Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr

100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly vai Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn

115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr

130 135 140

Ser ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro

165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn

180 185 190

vai Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp

195 200 205

Gln Asp Tyr Asn lie Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe 210 215 220 Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Glu Pro

225 230

<210> 7

<211> 756

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> Esta sequencia é do circovirus porcino tipo 2, estrutura de leitura aberta 2, jutamente com uma porção do vetor pGEM T-easy. <400> 7

gcggccgcgg gaattcgatc cgccatgacg tatccaagga ggcgttaccg cagaagaaga 60 caccgccccc gcagccatct tggccagatc ctccgccgcc gcccctggct cgtccacccc 120 cgccaccgct accgttggag aaggaaaaat ggcatcttca acacccgcct ctcccgcacc 180 ttcggatata ctgtcaaggc taccacagtc acaacgccct cctgggcggt ggacatgatg 240 agatttaata ttgacgactt tgttcccccg ggagggggga ccaacaaaat ctctataccc 300 tttgaatact acagaataag aaaggttaag gttgaattct ggccctgctc ccccatcacc 360 cagggtgata ggggagtggg ctccactgct gttattctag atgataactt tgtaacaaag 420 gccacagccc taacctatga cccatatgta aactactcct cccgccatac aatcccccaa 480 cccttctcct accactcccg ttacttcaca cccaaacctg ttcttgactc cactattgat 540 tacttccaac caaataacaa aaggaatcag ctttggctga ggctacaaac ctctagaaat 600 gtggaccacg taggcctcgg cactgcgttc gaaaacagta aatacgacca ggactacaat 660 atccgtgtaa ccatgtatgt acaattcaga gaatttaatc ttaaagaccc cccacttgaa 720 ccctaagaat tctatcacta gtgaattcgc ggccgc 756

<210> 8

<211> 10387

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Esta sequencia é do circovirus porcino tipo 2, construção ORF-2, que inclui as sequencias de codificação de baculovirus e pGEM T-easy.

<400> 8 aagctttact cgtaaagcga gttgaaggat : catatttagt tgcgtttatg agataagatt 60 gaaagcacgt gtaaaatgtt : tcccgcgcgt tggcacaact atttacaatg cggccaagtt 120 ataaaagatt ctaatctgat : atgttttaaa acacctttgc ggcccgagtt gtttgcgtac 180 gtgactagcg aagaagatgt gtggaccgca gaacagatag taaaacaaaa ccctagtatt 240 ggagcaataa tcgatttaac caacacgtct aaatattatg atggtgtgca ttttttgcgg 300 gcgggcctgt tatacaaaaa aattcaagta cctggccaga ctttgccgcc tgaaagcata 360 gttcaagaat ttattgacac ggtaaaagaa tttacagaaa agtgtcccgg catgttggtg 420 ggcgtgcact gcacacacgg tattaatcgc accggttaca tggtgtgcag atatttaatg 480 cacaccctgg gtattgcgcc gcaggaagcc atagatagat tcgaaaaagc cagaggtcac 540 aaaattgaaa gacaaaatta cgttcaagat ttattaattt aattaatatt atttgcattc 600 tttaacaaat actttatcct attttcaaat tgttgcgctt cttccagcga accaaaacta 660 tgcttcgctt gctccgttta gcttgtagcc gatcagtggc gttgttccaa tcgacggtag 720 gattaggccg gatattctcc accacaatgt tggcaacgtt gatgttacgt ttatgctttt 780 ggttttccac gtacgtcttt tggccggtaa tagccgtaaa cgtagtgccg tcgcgcgtca 840 cgcacaacac cggatgtttg cgcttgtccg cggggtattg aaccgcgcga tccgacaaat 900 ccaccacttt ggcaactaaa tcggtgacct gcgcgtcttt tttctgcatt atttcgtctt 960 tcttttgcat ggtttcctgg aagccggtgt acatgcggtt tagatcagtc atgacgcgcg 1020 tgacctgcaa atctttggcc tcgatctgct tgtccttgat ggcaacgatg cgttcaataa 1080 actcttgttt tttaacaagt tcctcggttt tttgcgccac caccgcttgc agcgcgtttg 1140 tgtgctcggt gaatgtcgca atcagcttag tcaccaactg tttgctctcc tcctcccgtt 1200 gtttgatcgc gggatcgtac ttgccggtgc agagcacttg aggaattact tcttctaaaa 1260 gccattcttg taattctatg gcgtaaggca atttggactt cataatcagc tgaatcacgc 1320 cggatttagt aatgagcact gtatgcggct gcaaatacag cgggtcgccc cttttcacga 1380 cgctgttaga ggtagggccc ccattttgga tggtctgctc aaataacgat ttgtatttat 1440 tgtctacatg aacacgtata gctttatcac aaactgtata ttttaaactg ttagcgacgt 1500 ccttggccac gaaccggacc tgttggtcgc gctctagcac gtaccgcagg ttgaacgtat 1560 cttctccaaa tttaaattct ccaattttaa cgcgagccat tttgatacac gtgtgtcgat 1620 tttgcaacaa ctattgtttt ttaacgcaaa ctaaacttat tgtggtaagc aataattaaa 1680 tatgggggaa catgcgccgc tacaacactc gtcgttatga acgcagacgg cgccggtctc 1740 ggcgcaagcg gctaaaacgt gttgcgcgtt caacgcggca aacatcgcaa aagccaatag 1800 tacagttttg atttgcatat taacggcgat tttttaaatt atcttattta ataaatagtt 1860 atgacgccta caactccccg I cccgcgttga L ctcgctgcac ctcgagcagt tcgttgacgc 1920 cttcctccgt gtggccgaac acgtcgagcg ι ggtggtcgat gaccagcggc gtgccgcacg 1980 cgacgcacaa gtatctgtac accgaatgat cgtcgggcga aggcacgtcg gcctccaagt 2040 ggcaatattg gcaaattcga aaatatatac agttgggttg tttgcgcata tctatcgtgg 2100 cgttgggcat gtacgtccga acgttgattt gcatgcaagc cgaaattaaa tcattgcgat 2160 tagtgcgatt aaaacgttgt acatcctcgc ttttaatcat gccgtcgatt aaatcgcgca 2220 atcgagtcaa gtgatcaaag tgtggaataa tgttttcttt gtattcccga gtcaagcgca 2280 gcgcgtattt taacaaacta gccatcttgt aagttagttt catttaatgc aactttatcc 2340 aataatatat tatgtatcgc acgtcaagaa ttaacaatgc gcccgttgtc gcatctcaac 2400 acgactatga tagagatcaa ataaagcgcg aattaaatag cttgcgacgc aacgtgcacg 2460 atctgtgcac gcgttccggc acgagctttg attgtaataa gtttttacga agcgatgaca 2520 tgacccccgt agtgacaacg atcacgccca aaagaactgc cgactacaaa attaccgagt 2580 atgtcggtga cgttaaaact attaagccat ccaatcgacc gttagtcgaa tcaggaccgc 2640 tggtgcgaga agccgcgaag tatggcgaat gcatcgtata acgtgtggag tccgctcatt 2700 agagcgtcat gtttagacaa gaaagctaca tatttaattg atcccgatga ttttattgat 2760 aaattgaccc taactccata cacggtattc tacaatggcg gggttttggt caaaatttcc 2820 ggactgcgat tgtacatgct gttaacggct ccgcccacta ttaatgaaat taaaaattcc 2880 aattttaaaa aacgcagcaa gagaaacatt tgtatgaaag aatgcgtaga aggaaagaaa 2940 aatgtcgtcg acatgctgaa caacaagatt aatatgcctc cgtgtataaa aaaaatattg 3000 aacgatttga aagaaaacaa tgtaccgcgc ggcggtatgt acaggaagag gtttatacta 3060 aactgttaca ttgcaaacgt ggtttcgtgt gccaagtgtg aaaaccgatg tttaatcaag 3120 gctctgacgc atttctacaa ccacgactcc aagtgtgtgg gtgaagtcat gcatctttta 3180 atcaaatccc aagatgtgta taaaccacca aactgccaaa aaatgaaaac tgtcgacaag 3240 ctctgtccgt ttgctggcaa ctgcaagggt ctcaatccta tttgtaatta ttgaataata 3300 aaacaattat aaatgctaaa tttgtttttt attaacgata caaaccaaac gcaacaagaa 3360 catttgtagt attatctata attgaaaacg cgtagttata atcgctgagg taatatttaa 3420 aatcattttc aaatgattca cagttaattt gcgacaatat aattttattt tcacataaac 3480 tagacgcctt gtcgtcttct tcttcgtatt CCttCtCttt ttcatttttc tcctcataaa 3540 aattaacata gttattatcg tatccatata tgtatctatc gtatagagta aattttttgt 3600 tgtcataaat atatatgtct tttttaatgg ggtgtatagt accgctgcgc atagtttttc 3660 tgtaatttac aacagtgcta ttttctggta gttcttcgga gtgtgttgct ttaattatta 3720 aatttatata atcaatgaat : ttgggatcgt : cggttttgta caatatgttg ccggcatagt 3780 acgcagcttc : ttctagttca ι attacaccat : tttttagcag caccggatta acataacttt 3840 ccaaaatgtt : gtacgaaccg ι ttaaacaaaa acagttcacc tcccttttct atactattgt 3900 ctgcgagcag ι ttgtttgttg ttaaaaataa cagccattgt aatgagacgc acaaactaat 3960 atcacaaact ggaaatgtct atcaatatat agttgctgat atcatggaga taattaaaat 4020 gataaccatc tcgcaaataa ataagtattt tactgttttc gtaacagttt tgtaataaaa 4080 aaacctataa atattccgga ttattcatac cgtcccacca tcgggcgcgg atcagatctg 4140 cagcggccgc gggaattcga tccgccatga cgtatccaag gaggcgttac cgcagaagaa 4200 gacaccgccc ccgcagccat cttggccaga tcctccgccg ccgcccctgg ctcgtccacc 4260 cccgccaccg ctaccgttgg agaaggaaaa atggcatctt caacacccgc ctctcccgca 4320 ccttcggata tactgtcaag gctaccacag tcacaacgcc ctcctgggcg gtggacatga 4380 tgagatttaa tattgacgac tttgttcccc cgggaggggg gaccaacaaa atctctatac 4440 cctttgaata ctacagaata agaaaggtta aggttgaatt ctggccctgc tcccccatca 4500 cccagggtga taggggagtg ggctccactg ctgttattct agatgataac tttgtaacaa 4560 aggccacagc cctaacctat gacccatatg taaactactc ctcccgccat acaatccccc 4620 aacccttctc ctaccactcc cgttacttca cacccaaacc tgttcttgac tccactattg 4680 attacttcca accaaataac aaaaggaatc agctttggct gaggctacaa acctctagaa 4740 atgtggacca cgtaggcctc ggcactgcgt tcgaaaacag taaatacgac caggactaca 4800 atatccgtgt aaccatgtat gtacaattca gagaatttaa tcttaaagac cccccacttg 4860 aaccctaaga attctatcac tagtgaattc gcggccgccg gccgctccag aattctagaa 4920 ggtacccggg atcctttcct gggacccggc aagaaccaaa aactcactct cttcaaggaa 4980 atccgtaatg ttaaacccga cacgatgaag cttgtcgttg gatggaaagg aaaagagttc 5040 tacagggaaa cttggacccg cttcatggaa gacagcttcc ccattgttaa cgaccaagaa 5100 gtgatggatg ttttccttgt tgtcaacatg cgtcccacta gacccaaccg ttgttacaaa 5160 ttcctggccc aacacgctct gcgttgcgac cccgactatg tacctcatga cgtgattagg 5220 atcgtcgagc cttcatgggt gggcagcaac aacgagtacc gcatcagcct ggctaagaag 5280 ggcggcggct gcccaataat gaaccttcac tctgagtaca ccaactcgtt cgaacagttc 5340 atcgatcgtg tcatctggga gaacttctac aagcccatcg tttacatcgg taccgactct 5400 gctgaagagg aggaaattct ccttgaagtt tccctggtgt tcaaagtaaa ggagtttgca 5460 ccagacgcac ctctgttcac tggtccggcg tattaaaaca cgatacattg ttattagtac 5520 atttattaag cgctagattc tgtgcgttgt tgatttacag acaattgttg tacgtatttt 5580 aataattcat taaatttata atctttaggg tggtatgtta gagcgaaaat caaatgattt 5640

tcagcgtctt tatatctgaa tttaaatatt aaatcctcaa tagatttgta aaataggttt 5700

cgattagttt caaacaaggg ttgtttttcc gaaccgatgg ctggactatc taatggattt 5760

tcgctcaacg ccacaaaact tgccaaatct tgtagcagca atctagcttt gtcgatattc 5820

gtttgtgttt tgttttgtaa taaaggttcg acgtcgttca aaatattatg cgcttttgta 5880

tttctttcat cactgtcgtt agtgtacaat tgactcgacg taaacacgtt aaataaagct 5940

tggacatatt taacatcggg cgtgttagct ttattaggcc gattatcgtc gtcgtcccaa 6000

ccctcgtcgt tagaagttgc ttccgaagac gattttgcca tagccacacg acgcctatta 6060

attgtgtcgg ctaacacgtc cgcgatcaaa tttgtagttg agctttttgg aattatttct 6120

gattgcgggc gtttttgggc gggtttcaat ctaactgtgc ccgattttaa ttcagacaac 6180

acgttagaaa gcgatggtgc aggcggtggt aacatttcag acggcaaatc tactaatggc 6240

ggcggtggtg gagctgatga taaatctacc atcggtggag gcgcaggcgg ggctggcggc 6300

ggaggcggag gcggaggtgg tggcggtgat gcagacggcg gtttaggctc aaatgtctct 6360

ttaggcaaca cagtcggcac ctcaactatt gtactggttt cgggcgccgt ttttggtttg 6420

accggtctga gacgagtgcg atttttttcg tttctaatag cttccaacaa ttgttgtctg 6480

tcgtctaaag gtgcagcggg ttgaggttcc gtcggcattg gtggagcggg cggcaattca 6540

gacatcgatg gtggtggtgg tggtggaggc gctggaatgt taggcacggg agaaggtggt 6600

ggcggcggtg ccgccggtat aatttgttct ggtttagttt gttcgcgcac gattgtgggc 6660

accggcgcag gcgccgctgg ctgcacaacg gaaggtcgtc tgcttcgagg cagcgcttgg 6720

ggtggtggca attcaatatt ataattggaa tacaaatcgt aaaaatctgc tataagcatt 6780

gtaatttcgc tatcgtttac cgtgccgata tttaacaacc gctcaatgta agcaattgta 6840

ttgtaaagag attgtctcaa gctcgccgca cgccgataac aagccttttc atttttacta 6900

cagcattgta gtggcgagac acttcgctgt cgtcgacgta catgtatgct ttgttgtcaa 6960

aaacgtcgtt ggcaagcttt aaaatattta aaagaacatc tctgttcagc accactgtgt 7020

tgtcgtaaat gttgtttttg ataatttgcg cttccgcagt atcgacacgt tcaaaaaatt 7080

gatgcgcatc aattttgttg ttcctattat tgaataaata agattgtaca gattcatatc 7140

tacgattcgt catggccacc acaaatgcta cgctgcaaac gctggtacaa ttttacgaaa 7200

actgcaaaaa cgtcaaaact cggtataaaa taatcaacgg gcgctttggc aaaatatcta 7260

ttttatcgca caagcccact agcaaattgt atttgcagaa aacaatttcg gcgcacaatt 7320

ttaacgctga cgaaataaaa gttcaccagt taatgagcga ccacccaaat tttataaaaa 7380

tctattttaa tcacggttcc atcaacaacc aagtgatcgt gatggactac attgactgtc 7440 ccgatttatt : tgaaacacta ι caaattaaag I gcgagctttc gtaccaactt gttagcaata 7500 ttattagaca gctgtgtgaa . gcgctcaacg ι atttgcacaa gcacaatttc atacacaacg 7560 acataaaact cgaaaatgtc ttatatttcg aagcacttga tcgcgtgtat gtttgcgatt 7620 acggattgtg caaacacgaa aactcactta gcgtgcacga cggcacgttg gagtatttta 7680 gtccggaaaa aattcgacac acaactatgc acgtttcgtt tgactggtac gcggcgtgtt 7740 aacatacaag ttgctaacgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc 7800 gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta 7860 atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa 7920 cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat 7980 tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg 8040 agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc 8100 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt 8160 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag 8220 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc 8280 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc 8340 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt 8400 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt 8460 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc 8520 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa 8580 gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa 8640 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg 8700 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga 8760 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg 8820 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg 8880 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt 8940 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact 9000 ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat 9060 gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg 9120 aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg 9180 ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat 9240 tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc 9300 ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt 9360 cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc 9420 agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga 9480 gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc 9540 gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa 9600 acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta 9660 acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg 9720 agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg 9780 aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat 9840 gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt 9900 tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa 9960 aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct 10020 ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag 10080 acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc 10140 ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatgcgg tgtgaaatac cgcacagatg 10200 cgtaaggaga aaataccgca tcaggcgcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga 10260 agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc 10320 aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc 10380 cagtgcc 10387

<210> 9 <211> 20 <212> PRT

<213> Circovirus porcino <400> 9

Ser Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His His Pro Pro Ser 15 10 15

His Leu Gly Gln 20

<210> 10 <211> 19 <212> PRT <213> Circovirus porcino <400> 10

Pro Arg His His Tyr Arg Pro Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr 15 10 15

Thr Leu ser

<210> 11 <211> 233 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Esta é uma sequencia de aminoácidos para circovirus porcino tipo 2,

estrutura de leitura aberta 2. <400> 11

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 15 10 15

Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro

20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg

35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Arg Thr

50 55 60

Pro Ser Trp Ala vai Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val 65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser lie Pro Phe Glu Tyr Tyr

85 90 95

Arg Ile Lys Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr

100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly vai Gly Ser Thr Ala vai Ile Leu Asp Asp Asn

115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr 130 135 140

Ser Ser Arg His Thr lie Pro Gln Pro Phe ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp ser Thr lie Asp Tyr Phe Gln Pro

165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn

180 185 190

Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Ile Tyr Asp

195 200 205

Gln Asp Tyr Asn Ile Arg vai Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe

210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro 225 230

Claims

1. Uso de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo antígeno de PCV2 para a preparação de um medicamento para a profilaxia e tratamento do complexo das doenças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um animal.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, em que o medicamento é administrado a um animal em necessidade de tal tratamento em uma quantidade terapeuticamente eficaz.

3. Uso de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o sinal clí- nico associado com PRDC é selecionado do grupo que consiste em tosse e dispnéia, crescimento lento, eficiência alimentar diminuída, letargia, anorexi- a, e/ou um aumento notável em mortalidade na fase intermediária a tardia de engorda.

4. Uso de acordo com a reivindicação 3, em que a tosse e disp- néia são refratárias à terapia de antibióticos.

5. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que o PRDC é associado a uma infecção de PCV2.

6. Uso de acordo com a reivindicação 5, em que o PRDC é cau- sado por PCV2.

7. Uso de acordo com a reivindicação 6, em que o PRDC é tam- bém associado e/ou causado por uma infecção com PRRSV, Mycoplasma hyopneumoniae, Bordetella bronchiseptica, vírus da influenza suína, Actino- bacillus pleuropneumoniae, Mycoplasma hyorhinis, Streptoeoceus suis e/ou Pasteurella multoeida.

8. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, em que o animal pertencendo a um rebanho que é positivo para PCV2.

9. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, em que o animal pertencendo a um rebanho que é positivo para PCV2 e um ou mais outros patógenos selecionados do grupo que consiste em PRRSV, Myeoplasma hyopneumoniae, Bordetella bronchiseptica, vírus da influenza suína, Mycoplasma hyorhinis, Streptoeoceus suis e/ou Pasteurella multoeida.

10. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que o animal pertencendo a uma fazenda que é positivo para PCV2.

11. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, em que o animal pertencendo a uma fazenda que é positivo para PCV2 e um ou mais outros patógenos selecionados do grupo que consiste em PRRSV, Mycoplasma hyopneumoniae, Bordetella bronchiseptica, vírus da influenza suína, Mycoplasma hyorhinis, Streptococcus suis e/ou Pasteurella multoeida.

12. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, em que o antígeno de PCV2 é um polipeptídeo tendo pelo menos 80 % de homologia com ORF-2 de PCV2.

13. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, em que o dito antígeno de PCV-2 é que uma ORF-2 de PCV2 expresso de baculovírus recombinante.

14. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, em que o antígeno de PCV2 é Ingelvac® CircoFLEX®.

15. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, em que o animal é suíno.

16. Método para a profilaxia e tratamento do complexo das do- enças respiratórias dos suínos (PRDC) e/ou qualquer sinal clínico associado a PRDC em um animal, compreendendo a etapa de administrar uma quanti- dade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição i- munogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em neces- sidade de tal tratamento.

17. Método de acordo com a reivindicação 16, em que o sinal clínico associado a PRDC é selecionado do grupo que consiste em tosse e dispnéia, crescimento lento, eficiência alimentar diminuída, letargia, anorexi- a, e/ou um aumento notável em mortalidade na fase intermediária a tardia de engorda.

18. Método de acordo com a reivindicação 17, em que a tosse e dispnéia são refratárias à terapia de antibióticos.

19. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 18, em que o PRDC é associado com uma infecção de PCV2.

20. Método de acordo com a reivindicação 19, em que o PRDC é causado por PCV2.

21. Método de acordo com a reivindicação 20, em que o PRDC é também associado e/ou causado por uma infecção com PRRSV, Myco- plasma hyopneumoniae, Bordetella bronchiseptica, vírus da influenza suína, Actinobacillus pleuropneumoniae, Mycoplasma hyorhinis, Streptococcus suis e/ou Pasteurella multocida.

22. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 21, em que o animal pertencendo a um rebanho que é positivo para PCV2.

23. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 22, em que o animal pertencendo a um rebanho que é positivo para PCV2 e um ou mais outros patógenos selecionados do grupo que consiste em PRRSV, Myeoplasma hyopneumoniae, Bordetella bronchiseptica, vírus da influenza suína, Mycoplasma hyorhinis, Streptococcus suis e/ou Pasteurella multocida.

24. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 23, em que o animal pertencendo a uma fazenda que é positivo para PCV2.

25. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 24, em que o animal pertencendo a uma fazenda que é positivo para PCV2 e um ou mais outros patógenos selecionados do grupo que consiste em PRRSV, Mycoplasma hyopneumoniae, Bordetella bronchiseptica, vírus da influenza suína, Mycoplasma hyorhinis, Streptococcus suis e/ou Pasteurella multocida.

26. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 25, em que o antígeno de PCV2 é um polipeptídeo tendo pelo menos 80 % de homologia com ORF-2 de PCV2.

27. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 26, em que o dito antígeno de PCV-2 é uma ORF-2 de PCV2 expressada de baculovírus recombinante.

28. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 27, em que o antígeno de PCV2 é Ingelvac® CircoFLEX®.

29. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 28, em que o animal é suíno..