BRPI0807326A2

BRPI0807326A2 - "composição para melhorar uma condição da pele, composição antioxidação e composição antiobesidade"

Info

Publication number: BRPI0807326A2
Application number: BRPI0807326-0A
Authority: BR
Inventors: Park Deok Hoon; Kim Sae Bom; Lee Jong Sung
Original assignee: Biospectrum Inc
Priority date: 2007-02-27
Filing date: 2008-02-27
Publication date: 2014-07-01
Also published as: JP2009526870A; EP2124872A1; EP2124872A4; WO2008105632A1; CN101677925B; JP4482060B2; CN101677925A; KR100823533B1; EP2124872B1; US20100015071A1

Description

COMPOSIÇÃO PARA MELHORAR UMA CONDIÇÃO DA PELE, COMPOSIÇÃO ANTIOXIDAÇÃO E COMPOSIÇÃO ANTIOBESIDADE Campo da invenção

A presente invenção refere-se a uma composição que compreende o alfa-bisabolol como ingrediente ativo, exibindo um efeito excelente de melhoria nas condições da pele, efeito imunomodulador e efeito antiobesidade com estabilidade e segurança.

Descrição de técnica correlata A cor da pele humana é atribuída principalmente à

concentração e à distribuição da melanina. A melanina é uma das bio-substâncias com elevado peso molecular à base de fenol e desempenha um papel importante na prevenção de danos à pele provocados pelos raios UV. A atividade da 15 tirosinase presente nos melanócitos foi relatada como um fator essencial à biossíntese da melanina, sendo que a tirosinase desempenha papel preponderante no processo de escurecimento da pele ao converter a tirosina em DOPA e em DOPA-quinona, que são produtos intermediários da geração do 20 polímero de melanina.

Geralmente, dentre diversas causas intricadas tais como o teor de umidade da pele, o teor de colágeno e o imunoresposta a ambientes externos, o fator principal da formação de rugas envolve a expressão e a atividade da 25 colagenase, uma enzima de degradação do colágeno para reduzir a síntese e o teor de colágeno.

0 desequilíbrio hormonal tem piorado cada vez mais à poluição ambiental e à exaustão de automóveis. Por causa disso, a taxa de incidência da perda de cabelo tem 30 aumentado, a idade de incidência foi diminuída e uma variedade de doenças de pele tais como a atopia e a psoríase tem ocorrido devido à indução da desarmonia do sistema imunológico da pele. Além disso, o número de pacientes jovens com obesidade tem aumentado rapidamente por causa de mudanças dos hábitos alimentares tais como carnes e alimentos de preparo instantâneo.

Conseqüentemente, estudos têm sido intensivamente 5 realizados para desenvolver substâncias capazes de solucionar eficazmente diversos fenômenos (isto é, melasma ou sardas, incidência de rugas por UV, obesidade, desequilíbrio imunológico ou perda de cabelo) que se tornaram graves problemas sociais.

Por todo o presente pedido, diversas patentes e

publicações são citadas, e as citações são fornecidas entre parênteses. A descrição destas patentes e publicações é aqui incorporada a fim de descrever mais integralmente a presente invenção e o estado da técnica ao qual pertence a presente invenção.

Descrição detalhada da presente invenção

Os autores da presente invenção fizeram pesquisas intensivas para desenvolver substâncias ativas que tenham atividades de melhoria no clareamento da pele, nas rugas, 20 nos danos à pele induzidos por UV e na prevenção da perda de cabelo, na oxidação e na obesidade com elevada estabilidade e segurança, sem efeitos colaterais à pele. Em conseqüência disto, os autores da presente invenção verificaram que as composições que compreendem a-bisabolol 25 como ingrediente ativo permitem a obtenção de composições para melhorar as condições da pele, antioxidação e antiobesidade, com excelentes efeitos e segurança.

Conseqüentemente, um objetivo da presente invenção consiste na provisão de uma composição para a melhoria das condições da pele, em que a condição da pele refere-se ao clareamento, rugas, danos à pele induzidos por UV ou crescimento de cabelo.

Um outro objetivo da presente invenção consiste na provisão de uma composição antioxidação.

Ainda um outro objetivo da presente invenção consiste na provisão de uma composição antiobesidade.

Um outro objetivo da presente invenção consiste na provisão de um método para melhorar as condições da pele.

Ainda um outro objetivo da presente invenção consiste na provisão de um método para a prevenção da oxidação.

Um outro objetivo da presente invenção consiste

na provisão de um método para a supressão da obesidade.

Outros objetivos e vantagens da presente invenção tornar-se-ão evidentes a partir da descrição detalhada a seguir levada em consideração conjuntamente com as reivindicações em anexo.

Em um aspecto da presente invenção, é apresentada uma composição para a melhoria das condições da pele, a qual compreende o α-bisabolol como ingrediente ativo, em que a condição da pele refere-se a rugas, clareamento, danos à pele induzidos por UV ou crescimento de cabelo.

Em outro aspecto da presente invenção, é apresentado um método para a melhoria das condições da pele, o qual compreende a administração a um indivíduo de uma composição que compreende o α-bisabolol como ingrediente ativo.

Contudo, em outro aspecto da presente invenção, é apresentado o uso do α-bisabolol para a manufatura de uma aposição para a melhoria das condições da pele.

Em outro aspecto da presente invenção, é apresentada uma composição para a antioxidação, a qual compreende o α-bisabolol como ingrediente ativo.

Contudo, em outro aspecto da presente invenção, é apresentado um método para a prevenção da oxidação, o qual compreende a administração a um indivíduo de uma composição que compreende o α-bisabolol como ingrediente ativo.

Em outro aspecto da presente invenção, é apresentado um uso do α-bisabolol para a manufatura de uma composição antioxidação.

Contudo, em outro aspecto da presente invenção, é apresentada uma composição antiobesidade que compreende o α-bisabolol como ingrediente ativo.

Em outro aspecto da presente invenção, é apresentado um método para a supressão da obesidade, o qual compreende a administração a um indivíduo de uma composição que compreende o α-bisabolol como ingrediente ativo.

Contudo, em outro aspecto da presente invenção, é apresentado o uso de α-bisabolol para a manufatura de uma composição antiobesidade.

Os autores da presente invenção fizeram pesquisas intensivas para desenvolver substâncias ativas que tenham atividades de melhoria no clareamento da pele, nas rugas, nos danos à pele induzidos por UV e na prevenção da perda 20 de cabelo, na oxidação e na obesidade com elevada estabilidade e com segurança, sem efeitos colaterais à pele. Em conseqüência disto, os autores da presente invenção verificaram que as composições que compreendem o α-bisabolol como ingrediente ativo permitem a obtenção de 25 composições que melhoram as condições da pele, antioxidação e antiobesidade, com excelentes efeitos e segurança.

O α-bisabolol utilizado como ingrediente ativo na presente invenção é um ingrediente ativo principal do óleo essencial de camomila e do álcool de sesquiterpeno 30 monocíclico. O nome IUPAC do α-bisabolol é (2S)-6-metil-2- [(IR)-4-metil-l-cicloex-3-enil]hept-5-en-2ol, e um composto derivado de plantas, representado pela seguinte Fórmula I.

A camomila é geralmente conhecida pelo seu efeito antiinflamatório, pela sua atividade sedativa e pelo seu efeito no alívio da dor. Além disso, o bisabolol como seu componente principal é um líquido incolor e transparente que tem efeito antiinflamatório, cicatrizante de feridas e 5 antimicrobiano em uma formulação cosmética e tem sido utilizado em vários produtos para os cuidados com a pele.

0 α-bisabolol utilizado como ingrediente ativo nas composições da presente invenção pode ser extraído de 10 uma fonte natural, a camomila, tal como Satureja punctata L, ou pode ser sintetizado quimicamente. Em particular, o α-bisabolol pode ser obtido ao utilizar vários métodos de extração convencionais. Preferivelmente, o α-bisabolol pode ser obtido ao utilizar vários solventes de extração, por exemplo, a uma temperatura de extração de 0°C a 50°C, (a) água, (b) álcool absoluto ou inferior hidroso contendo um a quatro átomos de carbono (metanol, etanol, propanol, butanol, etc.), (c) mistura de um álcool inferior e água, (d) acetona, (e) acetato de etila, (f) clorofórmio ou (g) 20 1,3-butileno glicol.

Caso necessário, o α-bisabolol utilizado na presente invenção pode ser submetido à purificação adicional pelos métodos bem conhecidos no estado da técnica bem como aqueles obtidos por meio de extração. Por exemplo, 25 deve ser apreciado que o α-bisabolol obtido ao utilizar uma variedade de métodos de purificação adicionais tais como a ultrafiltração com valor de corte de peso molecular definido e várias cromatografias (projetadas para a purificação dependente do tamanho, da carga, da hidrofobicidade e da afinidade) pode ser utilizado na presente invenção.

As composições da presente invenção têm uma nova utilização no clareamento' da pele. 0 termo "clareamento" utilizado na presente invenção refere-se à melhoria dos problemas de pele que impedem o melanismo da pele induzido pela pigmentação pela melanina.

Na composição para o clareamento da pele da presente invenção, o α-bisabolol exibe um efeito de inibição na produção de melanina ao inibir a atividade intracelular da tirosinase em comparação à arbutina 15 utilizada como um agente para o clareamento da pele existente e, em conseqüência disto, uma excelente eficácia no clareamento da pele. O α-bisabolol exibe uma elevada estabilidade e nenhum ou pouco efeito colateral, tal como a indução da irritabilidade da pele. Além disso, o teor de a20 bisabolol é constantemente mantido na composição. Tais efeitos e eficácias são demonstrados nos Exemplos descritos abaixo.

Além disso, as composições para a melhoria das condições da pele da presente invenção têm uma nova 25 utilização para amenizar as rugas da pele. As composições da presente invenção exibem um efeito de inibição da atividade da colagenase e um efeito de promoção da biossíntese do colágeno em um nivel molecular e, em conseqüência disto, uma excelente eficácia na melhoria das 30 rugas da pele. Tais efeitos e eficácias são demonstrados nos Exemplos descritos abaixo. Deve ser apreciado que a melhoria das rugas da pele engloba as utilizações gerais de proteção da pele (por exemplo, a prevenção das rugas na pele, a remoção de rugas da pele e a prevenção do envelhecimento da pele).

Além disso, as composições para a melhoria das condições da pele da presente invenção têm efeitos de alívio, melhoria, prevenção ou tratamentos dos danos à pele induzidos por UV.

As composições para melhorar as condições da pele da presente invenção contribuem muito eficazmente para a prevenção da perda de cabelo ou a promoção do crescimento 10 do cabelo. Os termos "prevenção da perda de cabelo" e "promoção do crescimento do cabelo" utilizados na presente invenção têm o mesmo significado.

O α-bisabolol como ingrediente ativo das presentes composições exibe um efeito de antioxidação ao eliminar os radicais livres eficazmente.

A composição antioxidação da presente invenção pode ser aplicada a uma variedade de doenças, distúrbios ou condições anormais para a prevenção ou o tratamento ao inibir ou eliminar as condições de oxidação. As doenças 20 associadas com a antioxidação a serem tratadas pela presente composição incluem distúrbios neurodegenerativos tais como aterosclerose, doença coronariana, restenose, lesão de reperfusão, mal de Parkinson ou mal de Alzheimer, acidente vascular cerebral, câncer, envelhecimento, 25 distúrbio cardiovascular, osteoporose, distúrbio do sistema nervoso central, doença vascular periférica e dispnéia, mas não fica limitado às mesmas. Com a máxima preferência, a composição antioxidação da presente invenção é utilizada na prevenção ou como remédio contra o envelhecimento. A 30 correlação entre vários distúrbios e danos causados pelos radicais livres foi geralmente relatada e o componente de várias células que compreendem as enzimas, os canais de íons, a proteína estrutural e o lipídeo da membrana é um alvo potencial contra a espécie de radicais livres reativa (Ríce-Evans C, Mol Aspects of Med 13(1):1-111(1992)). A reação do alvo potencial e dos radicais livres danifica a função da célula de faixas específicas, induz mudanças 5 patológicas e causa, finalmente, a morte da célula. Uma variedade de doenças causadas pela oxidação fisiológica é descrita nas Patentes norte-americanas n°. 5750351, 3209, 5773231 e 5846959.

A composição antioxidação da presente invenção IU protege o DNA, a proteína (incluindo a lipoproteína) e o lipídeo da membrana contra os danos oxidantes pelos excelentes efeitos na eliminação dos radicais livres.

Além disso, o α-bisabolol como ingrediente ativo da presente invenção tem um excelente efeito antiobesidade. Fica óbvio ao elemento versado na técnica que o

α-bisabolol representado pela Fórmula I inclui os derivados obtidos pelos processos químicos com os substituintes convencionalmente praticados por um elemento versado na técnica. Os derivados mostram os efeitos no clareamento da 20 pele pela inibição da síntese de melanina e/ou pela atividade de tirosinase, ou pela melhoria nas rugas e nos danos induzidos por UV, pela promoção do crescimento do cabelo ou pela prevenção de perda de cabelo, pela antioxidação e pelos efeitos antiobesidade. Mais 25 particularmente, o α-bisabolol utilizado como ingrediente ativo da presente invenção inclui os derivados da Fórmula I bem como os compostos da Fórmula I. Os derivados com a estrutura da Fórmula I como núcleo podem ser obtidos por processos químicos ao utilizar vários substituintes bem 30 conhecidos no estado da técnica. Por exemplo, é sugerido que os derivados formados pela ligação ao grupo hidroxila, halo, nitro ou alquila C1-3 à Fórmula I estão propensos a exercer efeitos idênticos ou similares ao a-bisabolol. Estes derivados substituídos também estão dentro do âmbito da presente invenção.

De acordo com uma realização preferida, o ingrediente ativo do α-bisabolol na composição está 5 presente na quantidade de 0,00001-15,0% em peso, com mais preferência, 0,0001-10% · em peso, e com a máxima preferência, 0,0001-5% em peso com base no peso total da composição. Se a quantidade do ingrediente ativo do abisabolol for mais baixa do que 0,00001% em peso, o efeito 10 da composição pode ser insignificante; no caso de exceder 15,0% em peso, alguns efeitos adversos tais como a irritação na pele e a instabilidade na formulação irão provavelmente ocorrer.

De acordo com a realização preferida, a composição da presente invenção é uma composição cosmética.

As composições cosméticas da presente invenção podem conter auxiliares bem como um veículo, além do abisabolol como ingrediente ativo. Os exemplos não limitadores de auxiliares incluem antioxidantes, 20 estabilizantes, solubilizantes, vitaminas, corantes, melhoradores de odor, ou as misturas destes ingredientes. Além disso, as composições cosméticas também podem compreender materiais promotores da absorção na pele para intensificação dos efeitos.

As composições cosméticas da presente invenção

podem ser' formuladas em uma ampla variedade de formas incluindo, como exemplos não limitadores, uma solução, uma suspensão, uma emulsão, uma pasta, um gel, um creme, uma loção, um pó, um sabão, um limpador contendo surfactante, 30 um óleo, uma base de pó, uma base de emulsão, uma base de cera e um spray. Em particular, a composição cosmética da presente invenção pode ser provida em uma forma de amaciante da pele (loção para a pele), emulsão nutriente (loção de leite), creme nutriente, creme de massagem, essência, creme para os olhos, creme de limpeza, espuma de limpeza, água de limpeza, máscara facial, spray ou pó.

O veículo cosmeticamente aceitável contido na 5 presente composição cosmética pode variar, dependendo do tipo de formulação. Por exemplo, a formulação de pastas, cremes ou géis pode compreender gorduras animais e vegetais, ceras, parafinas, amido, tragacanto, derivados de celulose, polietileno glicóis, silicones, bentonitas, 10 sílica, talco, óxido de zinco, ou as misturas destes ingredientes.

A formulação em pó ou em spray pode compreender lactose, talco, hidróxido de alumínio, sílica, silicato de cálcio, pó de poliamida, ou as misturas destes ingredientes. 0 spray pode adicionalmente compreender os propelentes habituais, por exemplo,

clorofluoroidrocarbonos, propano/butano ou o éter dimetíIico.

A formulação em solução e em emulsão pode 20 compreender solvente, solubilizante ou emulsificante, por exemplo, água, etanol, isopropanol, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propileno glicol, óleos de 1,3-butileno glicol, ésteres graxos de glicerol, polietileno glicol, ésteres de ácido 25 graxo de sorbitan, ou as misturas destes ingredientes.

A formulação em suspensão pode compreender diluentes líquidos, por exemplo, água, etanol ou propileno glicol, agentes de suspensão, alcoóis isosteáricos etoxilados, por exemplo, ésteres de sorbitol de 30 polioxietileno e ésteres de sorbitan de polioxietileno, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonita, ágar e tragacanto, ou as misturas destes ingredientes. A formulação das composições de limpeza com surfactante pode compreender sulfato de álcool alifático, sulfato de éter de álcool alifático, monoéster de sulfosucinnato, isotinato, derivados de imidazólio, taurato 5 de metila, sarcocinato, sulfato de éter de amida de ácido graxo, alquil amido betaína, álcool alifático, glicerídeo de ácido graxo, dietanolamida de ácido graxo, óleo vegetal, derivados de lanolina, éster de ácido graxo de glicerol etoxilado, ou as misturas destes ingredientes.

A composição da presente invenção pode ser

preparada como uma composição farmacêutica e o veículo farmaceuticamente aceitável bem como o ingrediente ativo contido na composição farmacêutica. O veículo farmaceuticamente aceitável, que é utilizado geralmente em 15 formulações farmacêuticas, mas não é limitado a estas, inclui lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amido, borracha lavrável, fosfato de potássio, arginato, gelatina, silicato de potássio, celulose microcristalina, polivinil pirrolidona, celulose, água, xaropes, metil 20 celulose, hidróxi benzoato de metila, hidróxi benzoato de propila, talco, estearato de magnésio e óleos minerais. A composição farmacêutica de acordo com a presente invenção pode incluir adicionalmente um lubrificante, um umectante, um adoçante, um agente flavorizante, um emulsificante, um 25 agente de suspensão e um conservante. Detalhes sobre veículos e formulações farmaceuticamente aceitáveis apropriados podem ser encontrados em Remington's Pharmaceutical Sciences (19a ed., 1995).

A composição farmacêutica da presente invenção pode ser administrada a mamíferos tais como ratos, camundongos, animais domésticos e seres humanos através de várias vias, por exemplo, pela administração oral, administração retal ou injeção intravenosa, injeção intramuscular, injeção subcutânea, injeção intra-uterina ou injeção íntracerebroventrícular, preferivelmente a injeção subcutânea, e com mais preferência a aplicação tópica.

Uma quantidade de dosagem apropriada da composição farmacêutica da presente invenção pode variar dependendo dos métodos de formulação farmacêutica, dos métodos de administração, da idade do paciente, do peso corpóreo, do sexo, do estado patogênico, da dieta, do tempo de administração, da via de administração, da taxa de excreção e da sensibilidade a uma composição farmacêutica utilizada, e os médicos versados na técnica podem determinar uma quantidade eficaz da composição farmacêutica para o tratamento desejado. No caso de formulação oral, uma unidade de dosagem apropriada pode ser administrada de uma vez a diversas vezes ao dia com 0,001-100 mg/kg com base em um adulto. No caso de preparação para uso externo, uma unidade de dosagem apropriada pode ser administrada pela aplicação de uma a cinco vezes ao dia nas quantidades de

1,0 a 3,0 ml com base em um adulto e é mais bem utilizada por mais de um mês. No entanto, a unidade de dosagem não limita o âmbito da presente invenção.

De acordo com as técnicas convencionais conhecidas pelos elementos versados na técnica, a composição farmacêutica da presente invenção pode ser 25 formulada com o carreador e/ou o veículo farmaceuticamente aceitável tal como descrito acima, ao prover finalmente diversas formas entre uma forma de dose unitária e uma forma de múltiplas doses. Os exemplos não limitadores de formulações incluem, mas sem ficar a eles limitados, uma 30 formulação oral tal como um pó, um grânulo, um comprimido, uma cápsula, uma suspensão, uma emulsão, um xarope e um aerossol, um preparado para uso externo tal como uma pomada e um creme, um supositório e uma solução de injeção estéril, e pode compreender adicionalmente um agente de dispersão ou um estabilizante.

A composição da presente invenção pode ser preparada como uma composição alimentícia. A composição 5 alimentícia da presente invenção pode compreender aditivos convencionais para a preparação de composições alimentícias, por exemplo, proteínas, carboidratos, lipídeos, substâncias nutritivas e sabores.

Os exemplos não limitadores dos carboidratos 10 descritos acima incluem, mas sem ficar a eles limitados, monossacarídeos (por exemplo, glicose e frutose); dissacarídeos (por exemplo, maltose, sacarose e oligossacarídeo) e polissacarídeos (por exemplo, dextrina e ciclodextrina) e álcool de açúcar (por exemplo, xilitol, 15 sorbitol e eritritol). Os exemplos não limitadores de sabores incluem, mas sem ficar a eles limitados, aromas naturais [taumatina e extrato de stévía (por exemplo, rebaudiosídeo A e glicirrizina)] e sabores sintéticos (por exemplo, sacarina e aspartame).

Por exemplo, onde a composição de alimento da

presente invenção é provida como uma bebida, ela pode compreender adicionalmente ácido cítrico, frutose líquida, açúcar, glicose, ácido acético, ácido málico, suco de fruta, extrato de eucommia ulmoides olív, extrato de jujuba ou extrato de Glicirrhiza Uralensis.

Entretanto, os resultados de experiências de uma irritação de pele cumulativa elucidaram que o a-bisabolol como uma substância natural era inofensivo ao corpo humano no exemplo específico da presente invenção. Portanto, o a30 bisabolol da presente invenção pode ser utilizado de maneira confiável por um longo período devido ao fato de ter pouca ou nenhuma toxicidade e efeitos colaterais; ele pode ser particularmente aplicado à composição cosmética, farmacêutica e alimentícia com segurança, tal como descrito acima.

As características e as vantagens da presente invenção são resumidas tal como segue:

(i) A composição da presente invenção compreende

o α-bisabolol como ingrediente ativo.

(ii) 0 α-bisabolol tem um efeito de clareamento da pele maior ao inibir a síntese de melanina pela inibição das atividades intracelulares de tirosinase em comparação à 10 arbutina utilizada como um agente de clareamento da pele existente. Além disso, o α-bisabolol exibe um efeito de inibição na atividade da colagenase e um efeito de promoção da biossíntese do colágeno em um nível molecular, contribuindo para uma excelente eficácia na melhoria das 15 rugas da pele. Além disso, o α-bisabolol exibe os efeitos de melhoria nos danos à pele induzidos por UV e na promoção do crescimento da pele ou na prevenção da perda de cabelo. Portanto, o α-bisabolol tem excelentes efeitos de melhoria das condições da pele.

(iii) Além disso, o α-bisabolol tem excelentes

efeitos antiobesidade e antioxidação.

(iv) A composição da presente invenção pode ser aplicada a composições cosméticas, farmacêuticas e alimentícias sem nenhuma citotoxicidade e efeitos colaterais, com segurança.

A presente invenção será descrita agora em mais detalhes por meio de exemplos. Fica óbvio aos versados na técnica que estes exemplos se prestam a ser mais concretamente ilustrativos, e o âmbito da presente 30 invenção, tal como determinado nas reivindicações em anexo, não se limita a isso ou aos exemplos.

Exemplos

Exemplo 1: Medição dos efeitos do α-bisabolol na inibição da produção de melanina

Depois de ter medido a inibição da produção de melanina pelo α-bisabolol ao utilizar células de melanoma de camundongo B16 (Korean Cell Line Bank) , a medição foi 5 comparada com aquela para a inibição da produção de melanina pela arbutina, conhecida como um inibidor da produção de melanina.

As células FlO de melanoma de camundongo Bl 6 (Korean Cell Line Bank) foram semeadas em cada cavidade de 10 uma placa de seis cavidades (1 x IO5 células/cavidade) em DMEM (meios Eagle's modificado da Dulbecco) contendo 10% de FBS (soro bovino fetal) e as células foram cultivadas até aproximadamente mais de 80% de aderência pela incubação em uma incubadora de CO2 sob condições de 37°C e 5,0% de CO2. 15 Após o cultivo, o meio foi removido e as amostras foram substituídas no meio e diluídas na concentração apropriada, seguido pela incubação por três dias sob condições de 37°C e 5,0% de CO2. A concentração de α-bisabolol foi determinada com 1 ppm, 5 ppm e 10 ppm, as quais não 20 mostraram citotoxicidade. As células removidas do meio foram lavadas com PBS (solução salina tamponada com fosfato) e tratadas com tripsina para coletar as células. O número de células coletadas foi calculado ao utilizar um hematocitômetro (Tiefe Depth Profondeur 0,100 mm, Paul 25 Marienfeld GmbH & Co. KG, Alemanha), e as células foram centrifugadas de 5.000 a 10.000 rpm por dez minutos, e o sobrenadante foi eliminado, obtendo desse modo as pelotas. Estas pelotas de células foram secadas a 60°C, 100 μΐ de NaOH IM contendo 10% de DMSO foram adicionados a elas, e a 30 melanina intracelular foi obtida na incubadora a 60°C. Em seguida, a solução de células foi medida quanto à absorbância a 490 nm ao utilizar o leitor de microplaca (Bio-Tek ELx8081U, EUA) e a quantidade de melanina por número constante de célula foi estimada. Os resultados da experiência foram resumidos na Tabela 1.

Tabela 1

Amostras Concentração de Taxa inibidora da produção de tratamento (ppm) melanina (%) Arbutina 5 22 a- 1 24 5 36 10 49 Conforme indicado na Tabela 1, mesmo onde a

concentração de tratamento com α-bisabolol era mais baixa do que aquela da arbutina, o α-bisabolol teve uma taxa inibidora de produção de melanina mais elevada. Além disso, foi verificado que a taxa inibidora da produção de melanina continuou aumentando à medida que a concentração de 10 tratamento com α-bisabolol aumentava.

Exemplo 2: Efeito inibidor na atividade de tirosinase pelo a-bisabolol

Depois de ter medido a inibição da produção de melanina pelo α-bisabolol ao utilizar células de melanoma de camundongo B16 (Korean Cell Line Bank), a medição foi comparada com aquela para a inibição das atividades intracelulares de tirosinase pela arbutina, conhecida como um inibidor da produção de melanina.

As células de melanoma murinas (B-16 Fl) foram 20 semeadas em cada cavidade de uma placa de seis cavidades (1 x IO5 células/cavidade) em DMEM contendo 10% de FBS (soro bovino fetal) e as células foram cultivadas até aproximadamente mais de 80% de aderência pela incubação em uma incubadora de CO2 sob condições de 37°C e 5,0% de CO2. 25 Após o cultivo, o meio foi removido e as amostras foram substituídas no meio e diluídas na concentração apropriada, seguido pela incubação por três dias sob condições de 37°C e 5,0% de CO2. A concentração de α-bisabolol foi determinada com 1 ppm, 5 ppm e 10 ppm, as quais não mostraram citotoxicidade. As células removidas do meio 5 foram lavadas com PBS (solução salina tamponada com fosfato) e tratadas com tripsina para coletar as células. O número de células coletadas foi calculado ao utilizar um hematocitômetro, as células foram centrifugadas de 5.000 a

10.000 rpm por dez minutos, e o sobrenadante foi eliminado, 1.0 obtendo desse modo as pelotas. Estas pelotas de células

foram lisadas ao utilizar o tampão de lise, centrifugadas a

12.000 rpm por dez minutos, e o sobrenadante foi coletado. Em seguida, a solução de células foi medida quanto á absorbância em 492 nm ao utilizar o leitor de microplaca, e

a atividade de tirosinase por número constante de células foi estimada. Os resultados foram resumidos na Tabela 2.

Tabela 2

Amostra Concentração de Taxa inibidora da atividade tratamento (ppm) de tirosinase intracelular (%) Arbutina 5 45 α - 1 13 5 38 10 58 Conforme mostrado na Tabela 2, os resultados

demonstram que o α-bisabolol inibiu significativamente os maiores efeitos na inibição das atividades intracelulares de tirosinase do que a arbutina. Além disso, o a-bisabolol exibiu efeitos de inibição nas atividades de tirosinase de uma maneira dependente de concentração.

Exemplo 3: Avaliação do efeito de clareamento da pele em animais

Um efeito de clareamento da pele com a-bisabolol foi medido ao utilizar porquinhos-da-índia marrons (Charles River Laboratories, Inc.), cujo aumento da pigmentação é conhecido quando da exposição à luz ultravioleta tal como o ser humano.

Para induzir a pigmentação no porquinho-da-índia

marrom por ultravioleta (UV), uma folha de alumínio com janelas quadradas de 3 x 3 cm2 foi aderida à pele abdominal removida do pêlo do porquinho-da-índia marrom e então uma luz UV foi irradiada sobre a mesma com uma lâmpada SE 10 (comprimento de onda de 290-320 nm, Toshiba) (energia total de irradiação = 1350 raJ/cm2) . Após a irradiação UV, a folha de alumínio foi removida e as amostras (α-bisabolol ou arbutina) foram aplicadas tal como o método seguinte. Uma pigmentação aumentada foi observada em dois a três dias 15 após a irradiação UV e atingiu um máximo depois de aproximadamente duas semanas. Após o período de tempo que mostra a pigmentação máxima, as amostras foram aplicadas.

A aplicação das amostras foi executada uma ou duas vezes ao dia por 50 dias. As amostras foram dissolvidas ou diluídas em um solvente (propileno glicol:etanol:água = 5:3:2) e aplicadas por um cotonete. O controle com somente o solvente foi aplicado a outro sítio.

A ocorrência de irritação cumulativa também foi

examinada.

O grau de pigmentação da pele foi determinado ao

utilizar um cromâmetro (CR2002, MINOLTA, JP) para estimar os efeitos das amostras aplicadas. Os resultados são mostrados na Tabela 3 abaixo. O sistema colorimétrico L*a*b* foi utilizado para classificar a cor e o valor de L* 30 foi utilizado como o padrão no Exemplo. O valor de L* foi corrigido ao utilizar uma placa branca padrão e medido mais de cinco vezes em um sítio. A pigmentação foi distribuída uniformemente. As diferenças da cor de pele (AL*) entre o ponto inicial da aplicação e o ponto final da aplicação foram obtidas e utilizadas para avaliar os efeitos das amostras. Os resultados foram resumidos na Tabela 3.

Equação 1

àL * = valor de L* em 00 dias após a aplicação - o valor de L* no dia inicial da aplicação

Os valores de AL* foram obtidos para o controle e a aplicação da amostra pra avaliar os efeitos de clareamento da pele.

TABELA 3

Amostras Concentração de Efeitos de tratamento(%) clareamento (AL) a- 0,2 0, 42 Bisabolol 1,0 0, 67 Arbutina 1,0 0, 54 Controle - 0, 35 Conforme descrito na Tabela 3, o a-bisabolol exibiu efeitos de clareamento de uma maneira dependente de concentração. Além disso, foi revelado que o a-bisabolol teve efeitos de clareamento mais favoráveis do que a 15 arbutina, bem como uma segurança considerável, a qual foi verificada por nenhuma observação de irritação cumulativa. Exemplo 4: Teste de segurança do α-bisabolol na pele humana Exemplo 4-1: Preparação de uma composição externa à pele contendo a-bisabolol 20 Uma composição externa à pele contendo a

bisabolol e arbutina foi preparada e o seu teste de segurança na pele humana foi realizado para determinar se o α-bisabolol é seguro à pele.

A composição externa à pele contendo a-bisabolol e arbutina foi preparada tal como indicado na Tabela 4. 0 grupo de controle na Tabela 4 é uma composição externa à pele que não contém o inibidor de tirosinase, e os grupos de teste 1 e 2 são uma composição externa à pele que contêm α-bisabolol e arbutina, respectivamente.

Para preparar uma composição externa à pele, água destilada, serina e butilenoglicol foram misturados e dissolvidos a 70°C (fase da água) e os componentes restantes foram dissolvidos a 70°C (fase do óleo). A fase do óleo foi adicionada á fase da água e agitada ao utilizar um homomisturador (Tokushu Kika, Japão) para a primeira emulsificação, seguida pela adição de trimetanolamina. A. bolha de ar formada na solução misturada foi eliminada e resfriada até a temperatura ambiente para preparar a composição externa à pele.

Tabela 4

Componentes Teores (% em peso) Controle Teste 1 Teste 2 Água purificada 72 72 72 Glicerina O 8,0 0 CO OO 1____ Butileno glicol 4,0 4,0 4,0 Alfa-bisabolol 0 1,0 0 Arbutina 0 0 1,0 Triglicerídeo cáprico caprílico 8,0 O OO 00 > O Esqualeno 5,0 O 5,0 LO Glucosideo de cetearila 1,5 1,5 1,5 Estearato de sorbitan 0,4 0,4 0,4 Alcool cetearilico 1,0 1,0 1,0 Trimetanolamina 0,1 0,1 0,1 Total 100 100 100 Exemplo 4-2: Teste de irritação na pele cumulativo Cada composição externa à pele preparada no Exemplo 4-1 foi aplicada em emplastros nove vezes à parte superior do braço de trinta adultos saudáveis a cada dois dias por um periodo de tempo total de 24 horas. Este teste 5 do emplastro cumulativo de 24 horas foi realizado para determinar se o α-bisabolol irrita a pele ou não.

A câmara de Finn (Epitest Ltd, Finlândia) foi escolhida para o método do emplastro. 0 preparado acima para o uso externo na pele foi despejado em cada câmara em 10 uma quantidade de 15 μΐ e um emplastro foi aplicado. O nivel de resposta na pele para cada teste foi pontuado ao utilizar a Equação 2, e o resultado foi mostrado na Tabela 5.

Equação 2

Nível médio de resposta = [{ (teor de resposta x nível de resposta)/N0. de indivíduos do teste x pontos máximos (4 pontos) } x 100] n° do teste (9 vezes)

Os pontos foram pontuados de acordo com o nível de resposta, por exemplo, ± para 1 ponto, + para 2 pontos e ++ para quatro pontos. A composição poderá ser considerada segura se o nível médio de resposta for menor do que 3.

Tabela 5

N0. de testados com resposta Nível de Ia Semana 2a Semana 3a Semana Materiais Ia 2a 3a 4a 5a 6a 7a 8a 9a ± + ± + ± + ± + i + ± + ± + + + ± + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Controle 2 0, 18 Grupo de 3 1 0, 37 teste 1 Grupo de 3 1 0, 37 teste 2 N0 . de 30 30 30 30 30 30 30 30 30 testados Na Tabela 5, o número de testados é 3, zero e 1, respectivamente, para ±, + e ++ nos Grupos de teste 1 e 2 e nenhuma resposta adicional foi mostrada. 0 nível médio de resposta foi calculado como sendo não mais do que 3 (isto 5 é, 0,37) de acordo com a Equação 2, demonstrando que as composições são seguras.

Conforme mostrado na Tabela 5, a composição que compreende α-bisabolol (Grupo de teste 1) não mostrou nenhuma irritação cumulativa significativa para o grupo de 10 controle ou a composição contendo arbutina. Portanto, pode ser apreciado que o α-bisabolol é uma substância segura para a pele humana.

Exemplo 5: Efeito antioxidação

A dismutase de superóxido (SOD) é conhecida como uma enzima de catalisação antioxidação que converte o ânion do superóxido em H2O2 e O2. Esta experiência avalia a atividade de antioxidação das amostras pela observação da remoção do ânion do superóxido gerada pela oxidase de xantina. A experiência foi executada ao utilizar o kit (SOD 20 Assay Kit-WST) adquirido junto à Dojindo (JP) de acordo com

o protocolo de manufatura. Os resultados da experiência foram resumidos na Tabela 6.

Tabela 6

Amostras Concentração de Taxa de remoção do ânion tratamento (ppm) ' do superóxido (%) 1 8 aBisabolol 5 18 10 34 Conforme mostrado na Tabela 6, o α-bisabolol da presente invenção exerceu efeitos de antioxidação de uma maneira dependente de concentração.

Exemplo 6: Avaliação dos efeitos antiinflamatórios b Para determinar se o α-bisabolol teve efeitos

antiinflamatórios, a experiência da capacidade inibidora da COX (ciclooxigenase) foi realizada ao utilizar células monocíticas humanas, células THP-I (Korean Cell Line Bank) de acordo com o método convencional. A atividade da COX foi 10 medida de acordo com Methods in Enzymology 43:9 (1994) publicado por F. J. Van de Ouderaaa e Muytenhek. A linhagem de células THP-I foi cultivada e separada em alíquotas na placa de 24 cavidades. 0 volume de incubação por cavidade foi ajustado a 500 μΐ, 2 μΐ do composto da amostra, que se 15 dissolveu no lipopolissacarídeo (^g/ml, Sigma) e nos solventes descritos na Tabela seguinte, respectivamente, foi adicionado e cultivado por 24-48 horas sob as mesmas condições. Após 24-48 horas, o ionóforo de cálcio (Sigma) e

1 μΐ de [1-14C] ácido araquidônico (em EtOH, 0,1 μΟί/πιΙ, Sigma) foram adicionados a cada cavidade e cultivados por dez minutos sob as mesmas condições. Após o cultivo, ácido cítrico foi adicionado a cada cavidade pelo ajuste do pH para 3,5, agitado, cada 500 μΐ da solução de cultivo tirados da placa foram separados em alíquotas no tubo do microcentrifugador, 700 μΐ de acetato de etila foram adicionados a isso, e a solução foi extraída por agitação por dez minutos. 500 μΐ da camada de acetato de etila foram concentrados ao utilizar o secador a vácuo rápido por vinte minutos, 20 μΐ do resíduo foram dissolvidos em acetato de etila, e o que resultou foi empregado com padrão autêntico na placa de TLC. A faixa radioativa foi identificada por padrões autênticos de eicosanóide, a radioatividade da faixa identificada foi medida ao utilizar o analisador de geração de bio-imagem BAS 2000 (Fuji, JP) (Tabela 7).

Tabela 7

Amostras Atividades de COX (%) LPS (1 [ig/ml) 100 LPS (1 ng/ml) + α-bisabolol (1 ppm) 95 LPS (1 ng/ml) + α-bisabolol (5 ppm) 75 LPS (1 ng/ml) + a-bisabolol (10 ppm) 67 Conforme descrito na Tabela 7, os resultados atestam que o α-bisabolol inibe eficazmente as atividades de COX à medida que as concentrações de tratamento aumentaram. A partir destes resultados, foi verificado que o α-bisabolol teve efeitos inibidores de inflamação.

Exemplo 7: Avaliação dos efeitos imunossupressores

Para examinar se as amostras utilizadas neste exemplo suprimiram a imunoresposta relacionada à inflamação, a experiência da atividade relatora de luciferase de interleucina-2 foi executada. Foi relatado que o promotor de interleucina-2 desempenha um papel importante na geração de citoquinas relacionadas à inflamação. A atividade da luciferase de interleucina-2 foi medida ao utilizar o seguinte método: A linhagem de células 20 de linfócitos T humanas, 1 x IO6 de células de Jurkat (Korean Cell Line Bank) foi separada em alíquotas em cada placa de seis cavidades, o DNA de plasmídeo relator da luciferase de IL-2 (Stratagene) foi transfectado ao utilizar o reagente de transfecção de 'superfect' 25 (Invitrogen). Vinte e quatro horas após a transfecção, a PHA (Fitoemaglutinina, Sigma) (100 ng/ml) foi tratada para ativar a célula de Jurkat e cada amostra foi tratada com uma concentração variável. Depois de 24 horas, a célula foi coletada e a atividade de luciferase foi medida ao utilizar um luminômetro (Berthold Technologies GmbH&Co.KG, Alemanha). Os resultados foram resumidos na Tabela 8.

Tabela 8

Amostras Atividades de luciferase de IL-2 PHA (100 ng/ml) 100 PHA(100 ng/ml)+ α-bisabolol (1 92 ppm) PHA(100 ng/ml)+ a-bisabolol (5 72 ppm) PHA(100 ng/ml)+ a-bisabolol (10 58 ppm) Conforme mostrado na Tabela 8, os resultados

demonstram que o α-bisabolol tem atividades imunorregulatórias ao inibir a expressão de IL-2 à medida que as concentrações de tratamento aumentaram.

Exemplo 8: Medição do efeito do α-bisabolol na melhoria das rugas

O efeito de melhoria das rugas pode ser geralmente avaliado ao medir a capacidade de biossintese do colágeno e a capacidade inibidora de degradação da colagenase e ao realizar o teste clínico com um ser humano.

Os fibroblastos humanos (comercialmente disponíveis junto à Pacific) foram semeados em uma placa de seis cavidades (2 x IO5 células/cavidade) e a placa de 20 cavidades foi incubada em uma incubadora de CO2 a 5% por 24 horas a 37°C. Após 24 horas, o meio em cada cavidade foi removido e as células foram incubadas com várias concentrações de amostras por 24 horas. Posteriormente, o meio de células foi coletado e utilizado como amostras. O potencial de sintese do colágeno foi determinado ao medir a quantidade de peptídeo c do tipo I de pró-colágeno (PICP) no meio de células ao utilizar um kit Procollagen Type I C-peptide EIA (MK101, Takara, Kyoto, Japão) de acordo com o protocolo do fabricante.

Para medir a atividade da colagenase, os anticorpos contra a colagenase foram utilizados. A atividade da colagenase foi medida ao utilizar um kit de ensaio de colagenase do tipo I (Amersham Biosciences, 10 RPN2629) e os valores de absorbância foram obtidos ao utilizar um leitor de ELISA (Bio-Tek ELx808™ Series Ultra Microplate Reader, Reino Unido). Os valores médios medidos foram representados como a média ± desvio padrão. Um teste T com SPSS/PC+ foi realizado para determinar uma 15 significância estatística, e o resultado é mostrado na Tabela 9.

Tabela 9

Itens de teste a- a- a-bisabolol bisabolol bisabolol (10 ppm) (1 ppm) (5 ppm) Aumento da síntese de 23 43 76 colágeno (%) Inibição da colagenase (%) 12 28 43 Conforme mostrac o na Tabela 9, o a-bisabolol intensificou a síntese do colágeno e inibiu a atividade da colagenase de uma maneira dependente de concentração. Portanto, estes resultados demonstram que o α-bisabolol tem um efeito significativo de melhoria nas rugas.

Exemplo 9: Efeito antiobesidade

Um teste de inibição da obesidade foi realizado pelo seguinte método ao utilizar animais de laboratório bem conhecidos. Os resultados são resumidos na Tabela 10.

0 processo para determinar a atividade inibidora da obesidade era tal como segue:

Crj: camundongos machos ICR com sete semanas (obtidos junto à Charles River Japan Ltd.) foram preliminarmente alimentados por uma semana, a seguir foram classificados em grupos, cada um contendo sete animais, e foram submetidos ao teste. Os animais foram alimentados sob condições controladas a uma temperatura de 23±1°C e umidade de 55±5% sob iluminação doze horas por dia. Eles foram alimentados com um Feed Labo MR (manufaturado pela Nippon Nosan) e beberam água ad libitum. 0 α-bisabolol estava presente na forma de lipossomo (preparado com 5% de lecitina) a uma concentração final de 0,1% ou 1%. A concentração de cada solução da amostra foi ajustada de modo que 0,1 ml da solução fosse aplicado por 10 g de peso corpóreo dos camundongos. As doses empregadas foram de 1,5 g/kg e 1 g/kg. A um grupo de controle, uma emulsão de 5% de lecitina foi administrada. Após o jejum dos camundongos, a amostra foi administrada uma vez à força no dia seguinte. Durante o periodo do teste de duas semanas, o peso corpóreo e as condições gerais foram monitorados.

Tabela 10

Solventes Dias Peso corpóreo(g) Grupo não- a-bisabolol a-bisabolol tratado (0,1%) (1%) Lipossomo 5 24 24 23 10 28 24 24 15 34 26 26 Conforme mostrado na Tabela 10, o ganho de peso

corpóreo foi inibido no α-bisabolol. A excelência dos efeitos foi observada à medida que a concentração administrada aumentou.

Exemplo 10: Efeito de prevenção da perda de cabelo e de promoção do crescimento do cabelo Para medir o efeito de prevenção da perda de cabelo e de promoção do crescimento do cabelo, as amostras foram preparadas na forma de hidrogel base contendo somente o agente para o aumento da viscosidade e o conservante, e o 5 teste foi realizado. Cada 3 cc de líquidos para o uso externo para promover o crescimento do cabelo preparados foram aplicados aos sítios com perda de cabelo de dez pacientes calvos duas vezes ao dia por três meses. Em conseqüência disto, os líquidos contendo as amostras 10 mostraram um excelente efeito, tal como a geração de raiz de cabelo de oito pacientes calvos. Os resultados da experiência eram tal como segue. O grupo de controle usou o moxidil comercialmente disponível junto à Hanmi. Pharmaceutical Co.Ltd.

Tabela 11

Grupo não-tratado Moxidil a-bisabolol - ++ ++ Conforme indicado na Tabela 11, os resultados demonstram que o α-bisabolol da presente invenção exerceu um efeito de crescimento de cabelo similar ao moxidil comercialmente disponível como formulações para o crescimento do cabelo.

Tal como descrito acima, a presente invenção apresenta uma composição para a melhoria das condições da pele que compreende o α-bisabolol como ingrediente ativo. O α-bisabolol utilizado como ingrediente ativo tem um efeito 25 de clareamento da pele maior ao inibir a síntese de melanina ao inibir as atividades de tirosinase intracelulares em comparação à arbutina utilizada como um agente de clareamento da pele existente. Além disso, o abisabolol exibe um efeito de inibição da atividade de 30 colagenase e um efeito de promoção da biossíntese de colágeno em um nível molecular, contribuindo para uma excelente eficácia na melhoria das rugas da pele. Dessa maneira, o α-bisabolol indica efeitos de melhoria nos danos à pele induzidos por UV e de promoção do crescimento da pele ou de prevenção da perda de cabelo. Portanto, o a5 bisabolol tem excelentes efeitos de melhoria nas condições da pele. Além disso, o α-bisabolol tem excelentes efeitos antiobesidade e antioxidação. A composição da presente invenção pode ser aplicada a uma composição cosmética, farmacêutica e alimentícia, não tendo nenhuma 10 citotoxicidade e efeitos colaterais, com segurança.

Após a descrição de uma realização preferida da presente invenção, deve ficar compreendido que variantes e modificações que estão dentro do caráter da invenção podem ficar evidentes aos elementos versados na técnica, e o 15 âmbito da presente invenção deve ser determinado pelas reivindicações em anexo e seus equivalentes.

Claims

1. COMPOSIÇÃO PARA MELHORAR UMA CONDIÇÃO DA PELE, caracterizada pelo fato de compreender o α-bisabolol como ingrediente ativo, em que a condição da pele refere-se a clareamento, rugas, danos à pele induzidos por UV ou crescimento do cabelo.

2. COMPOSIÇÃO ANTIOXIDAÇÃO, caracterizada pelo fato de compreender o α-bisabolol como ingrediente ativo.

3. COMPOSIÇÃO ANTIOBESIDADE, caracterizada pelo fato de compreender o α-bisabolol como ingrediente ativo.

4. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que abisabolol está presente na quantidade de 0,0001-10% em peso com base no peso total da composição.

5. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma qualquer das reivindicações Ia 4, caracterizada pelo fato de que a composição é uma composição cosmética.

6. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que a composição é selecionada de uma forma do grupo que consiste em uma solução, uma suspensão, uma emulsão, uma pasta, um gel, um creme, uma loção, um pó, um sabão, um limpador contendo surfactante, um óleo, uma base em pó, uma base em emulsão, uma base em cera e um spray.

7. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a composição é uma composição farmacêutica.

8. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a composição é uma composição alimentícia.