BRPI0807493A2

BRPI0807493A2 - Prevenção e tratamento de pcvd subclínica

Info

Publication number: BRPI0807493A2
Application number: BRPI0807493-3A
Authority: BR
Inventors: Vicky Fachinger; Knut Elbers; Marion Kixmoeller; Francois-Xavier Orveillon; Isabelle Freiin Von Richthofen; Axel Lischewski
Original assignee: Boehringer Ingelheim Vetmed
Priority date: 2007-02-13
Filing date: 2008-02-11
Publication date: 2014-05-27
Also published as: US7943298B2; AU2008214639B2; DK2481421T3; EP2114447B1; EP2481421B1; KR101521465B1; DK2114447T3; EP2114447A1; KR20090109584A; US20090010954A1; CL2008000445A1; TW200902057A; PT2114447E; US20110182935A1; CA2676568A1; ES2434117T3; CY1114577T1; ES2555132T3; AU2008214639A1; SI2114447T1

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "PREVENÇÃO E TRATAMENTO DE PCVD SUBCLÍNICA".

LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

Este pedido contém uma listagem de seqüência em formato de papel e em formato legível de computador, os ensinamentos e conteúdo da qual são, desse modo, aqui incorporados por referência. A listagem de se- qüência é idêntica àquela incorporada em W006/072065.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO Campo da Invenção

A presente invenção refere-se ao uso de uma composição imu-

nogênica compreendendo um antígeno de circuvírus suíno tipo 2 (PCV2) para a prevenção e tratamento de infecções de PCV2 subclínicas (crônicas) em animais, preferivelmente em porcos.

Descrição da Técnica Relacionada O circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é um vírus de DNA pequeno

(17-22 nm de diâmetro), icosa-hedral, não-envelopado, que contém um ge- noma circular de fita simples. O PCV2 compartilha aproximadamente 80% de identidade de seqüência com circovírus suíno tipo 1 (PCV1). Contudo, em contraste com PCV1, que é geralmente não-virulento, a infecção de suíno 20 com PCV2 foi recentemente associada com um número de síndromes de doença que foram coletivamente denominadas Doenças de Circovírus Suíno (PCVD) (também conhecida como Doenças Associadas a Circovírus Porcino (PCVAD)) (Allan et al, 2006, IPVS Congress). A Síndrome Debilitante Multis- sistêmica de Pós-Desmame (PMWS) está geralmente relacionada para ser a 25 maior manifestação clínica de PCVD (Harding et al., 1997, Swine Health Prod; 5: 201-203; Kennedy et al., 2000, J Comp Pathol; 122; 9-24). Outras condições potencialmente relacionadas reportadas na literatura incluem complexo de doença respiratória suína (PRDC)1 dermatopatia suína e sín- drome de nefropatia (PDNS), falha reprodutiva, enterite granulomatosa e 30 tremores potencialmente congênitos (CT-AII) e miocardite perinatal (Chae, Veterinary J., 2005; 169: 326-336).

A PCVD afeta porcos entre 5-22 semanas de idade. A PCVD é clinicamente caracterizada por debilitação, palidez da pele, prodigalidade, aflição respiratória, diarréia, icterícia, e amarelamento. Em alguns suínos afetados, uma combinação de todos os sintomas será aparente, enquanto outros suínos afetados somente terão um ou dois destes sintomas (Muirhe- ad, 2002, Vet. Rec.; 150: 456). A taxa de mortalidade para suíno infectado com PCV2 pode se aproximar de 50%. Durante a necropsia, lesões micros- cópicas e macroscópicas também aparecem em tecidos múltiplos e órgãos, com órgãos Iinfoides sendo o local mais comum para lesões (Allan e Ellis, 2000; J Vet. Diagn. Invest., 12: 3-14). Uma forte correlação foi observada entre a quantidade de ácido nucleico ou antígeno de PCV2 e a severidade de lesões Iinfoides microscópicas (Brunborg, 2004). Em adição, a correlação foi também verificada para a quantidade de ácido nucleico ou antígeno no sangue e a severidade dos sintomas clínicos (Brunborg, 2004; Liu, 2000; Olvera, 2004). Os porcos que sofrem de PCVD mostraram ter cargas virais que são mais altas do que 106 equivalentes genômicos por ml.

Em contraste às manifestações de doença clinicamente aparen- te de infecção de PCV2, infecções subclínicas de PCV2 são verificadas esta- rem presentes naqueles animais que são infectados com PCV2, mas são clinicamente assintomáticos. Em geral, existe um relacionamento entre estas 20 formas de infecção de PCV2, visto que infecções subclínicas podem facil- mente transitar em PCVD, e visto que animais covalescentes podem ficar persistentemente (cronicamente) infectados (ver figura 1).

As observações recentes demonstraram que infecções subclíni- cas de PCV2 são eventos freqüentes. A existência de infecções subclínicas 25 foram demonstradas por ambos os estudos experimentais e de campo. Nos estudos de laboratório, pode ser mostrado que infecção de PCV2 em porcos individuais não é sempre associada com sinais clínicos ou lesões (Harms et al., 2001, Vet. Pathol., 38:528-539). Em adição, vários estudos de campo têm mostrado que a incidência de rebanhos soropositivos infectados de 30 PCV2 é mais alta do que a incidência de rebanhos afetados com PCVD (Olvera et al., 2004, J. Virol. Métodos, 117: 75-80). Frequentemente, reba- nhos que experimentaram uma deflagração aguda de PCVD permanecem infectados de PCV2 sem mostrar quaisquer sinais clínicos aparentes. De acordo com a literatura, esta forma de infecção subclínica (persistente) den- tro de um rebanho é também denominada infecção "crônica" (Burch D., 2006, Pig International).

O impacto econômico de PCV2 em rebanhos clinicamente infec-

tados, se houver, é desconhecido e nunca foi descrito. Em particular, ele não foi conhecido e nenhuma indicação foi sempre dada se casos subclínicos de infecções de PCV2 têm qualquer impacto no desempenho de crescimento de amimais, ou, em geral, na saúde total dos animais infectados.

Aproximações para tratar as infecções de PCV2 baseadas em

uma vacina de DNA são descritas na Patente dos Estados Unidos No. 6.703.023. Em WO 03/049703, a produção de uma vacina quimérica viva é descrita, compreendendo um suporte de PCV1 no qual um gene imunogêni- co de cepas de PCV2 patogênicas substitui um gene do suporte de PCV-1. 15 W099/18214 tem proporcionado várias cepas de PCV2 e procedimentos para a preparação de uma vacina de PVC2 morto. Contudo, nenhum dado de eficiência foi reportado. Uma vacina de subunidade baseada em ORF-2 eficaz foi reportada em W006/072065. Quaisquer de tais vacinas são pre- tendidas para serem usadas para a vacinação/tratamento de suíno ou por- 20 cos mais velhos do que 3 semanas de idade. Nenhuma destas vacinas foi sempre descrita para a profilaxia ou tratamento de animais subclinicamente infectados com PCV2. Além disso, tais vacinas não foram descritas para conferir imunidade contra infecção de PCV2 em grupos subclinicamente in- fectados de animais, e para aperfeiçoar seu desempenho de crescimento.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Figura 1: Formas diferentes de infecções de PCV2.

Figura 2: Taxa de mortalidade e ganho de peso diário médio na engorda na fazenda de estudo antes e após inibição do estudo.

Figura 3: Desenvolvimento da diferença de peso corpóreo relati- vo (IVP-CP) e da carga de vírus média (IogIO) sobre o curso do estudo.

Figura 4: Comparação da percentagem de animais com uma carga de vírus de > 10® equivalentes genômicos/ml de soro em ambos os grupos de tratamento.

Figura 5: Comparação da percentagem de animais com uma carga de vírus de IO4-IOE6 equivalentes genômicos/ml de soro em ambos os grupos de tratamento.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

As infecções aparentes clínicas de PCV2 estão associadas com síndromes de doença diferentes. Dependendo da forma de expressão rela- cionada a PCV2, sinais clínicos de uma infecção aguda de PCV2 podem ser uma ou mais das seguintes descobertas: a) uma taxa de mortalidade au- 10 mentada significante (4-20% mais alta), b) um aumento significante na fre- quência de animais nanicos (5-50% mais) e c) outros sinais clínicos aparen- tes, tais como sintomas respiratórios, diarréia, palidez da pele, icterícia, pro- digalidade (taxa de morbidez 4-60%). Em adição, titulações virais altas de mais do que 106 ou 107 por ml de soro ou tecido são uma descoberta carac- 15 terística em muitos dos animais com sinais agudos de PCVD. Além desta infecção de PCV2 aguda, infecções subclínicas de PCV2 caracterizadas por nenhuma ou uma taxa de morbidez baixa tornam-se mais e mais visíveis. Em alguns casos, a situação de uma infecção de PCV2 aguda pode se alte- rar em uma infecção subclínica de PCV2. Contudo, infecções subclínicas 20 podem também ocorrer sem qualquer sinal prévio de uma infecção de PCV2 aguda.

Verificou-se surpreendentemente que uma infecção subclínica de PCV2 tem um impacto significante no parâmetro de desempenho de por- cos aparentemente saudáveis, em particular o desempenho de crescimento 25 de porcos. Mesmo se os animais subclinicamente infectados não desenvol- vam sintomas clínicos típicos que permitem a identificação de PCVD, ou mostrem somente uma baixa morbidez, aqueles animais são significante- mente afetados pela infecção subclínica de PCV2. As infecções subclínicas de porcos com PCV2 resultam em uma perda significante em ganho de peso 30 (por exemplo, ver exemplo 3). Conforme já mencionado, nenhuma evidência é dada na técnica anterior que as infecções subclínicas de PCV2 têm qual- quer impacto na saúde, em particular no desempenho de crescimento de porcos.

Além disso, também verificou-se surpreendentemente que redu- ção no ganho de peso causada por uma infecção subclínica de PCV2 pode ser reduzida pelo tratamento/vacinação de animais que tornam-se infectados 5 subclínicos com antígeno de PCV2 (por exemplo, ver exemplo 3). Desse modo, não foi verificado que as infecção subclínicas de PCV2 afetam o de- sempenho de crescimento de porcos, evidência sendo também dada que tal impacto negativo pode ser significantemente reduzido por tratamento/va- cinação de animais com antígeno de PCV2. Em outras palavras, mesmo se 10 o fenômeno de infecções subclínicas foi descrito na técnica anterior, evidên- cia é dada agora à primeira vez que

- a infecção subclínica de PCV2, ocasionalmente observada no campo, tem um impacto significante no desempenho de crescimento de porcos;

- vacinação de porcos ou rebanhos subclinicamente afetados

com antígeno de PCV2 pode reduzir significantemente o impacto negativo desta infecção subclínica de PCV2.

Portanto, de acordo com um aspecto, a presente invenção pro- porciona um método para a profilaxia e tratamento de uma infecção subclíni- 20 ca de PCV2 em um animal ou um grupo de animais, compreendendo a eta- pa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal administração.

Uma "infecção subclínica de PCV2", conforme aqui usado, é ca- 25 racterizada por i) uma carga viral em um animal individual que permanece durante a vida toda abaixo de 106 cópias genômicas de PCV2 por ml de so- ro, ii) uma baixa proporção de animais positivos de PCV2 dentro de um gru- po ou rebanho com titulações virais de mais do que 106 cópias genômicas por ml de soro, iii) uma persistência de vírus em um grupo ou rebanho de 30 pelo menos 6 semanas, preferivelmente de pelo menos 8 semanas, mais preferido de pelo menos 10 semanas, mais preferido de pelo menos 12 se- manas, iv) a ausência de sintomas clínicos típicos em um animal positivo de PCV2, v) nenhuma ou somente uma baixa taxa de morbidez dentro de um grupo de animais ou rebanho de animais positivos de PCV2 e/ou vi) uma baixa taxa de mortalidade dentro de um grupo de animais positivos ou reba- nho de PCV2.

O termo "baixa proporção de animais positivos de PCV2", con-

forme usado no critério ii) acima, significa que menos do que 20%, preferi- velmente menos do que 15%, ainda mais preferido menos do que 10%, ain- da mais preferido menos do que 8%, ainda mais preferido menos do que 6%, ainda mais preferido menos do que 4%, mais preferido menos do que 3% dos animais positivos de PCV-2 dentro de um grupo de animais ou um rebanho tendo titulações virais de mais do que 106 cópias genômicas por ml de soro. Em outras palavras, o termo uma "baixa proporção de animais posi- tivos de PCV2 dentro de um grupo ou rebanho com titulações virais de mais do que 106 cópias genômicas por ml de soro" também significa que mais do que 80%, preferivelmente mais do que 85%, ainda mais preferido mais do que 90%, ainda mais preferido mais do que 92%, ainda mais preferido mais do que 94%, ainda mais preferido mais do que 96%, mais preferido mais do que 97% dos animais positivos de PCV2 de um grupo de animais ou reba- nho têm titulações virais de menos do que 106 cópias genômicas de PCV2 por ml de soro.

O termo "PCV2 positivo", conforme aqui usado, significa, mas não é limitado a, um animal que compreende uma quantidade detectável de equivalentes de genoma de PCV2(= cópias virais) em uma amostra (1 ml de soro ou 1 mg de tecido). Uma quantidade detectável de equivalentes de ge- 25 noma de PCV2 significa que equivalentes de genoma de PCV2 podem ser detectados por um ensaio de reação de cadeia de polimerase (PCR). Uma amostra é considerada positiva de PCR se duas amostras independentes devido a uma PCR positiva resulta em tal ensaio.

Métodos para quantificação de PCV2, via um ensaio de PCR, são bem-conhecidos na técnica. Atualmente, a quantificação de equivalentes de genoma de PCV2 foilé feita pelo método descrito em Brunborg et al., 2004; J. Virol Methods 122: 171-178. Para amplificação de PCV2, iniciadores PCV2-84-1265U21 e PCV2-84-1319L21 foram/são usados. Tal método pode funcionar como ensaio de referência em qualquer caso de dúvida.

O termo "persistência de vírus", conforme aqui usado, significa que o animal infectado tem uma carga viral de pelo menos 104 cópias virais de PCV2 por ml de soro para tal período de tempo, isto é, por pelo menos 6 semanas ou mais longo, conforme definido acima.

O termo "a ausência de sintomas clínicos típicos em animal posi- tivo de PCV2", conforme aqui usado, significa a ausência de quaisquer sin- tomas clínicos aparentes normalmente associados com uma infecção de 10 PCV2 aparente clínica, que permite uma identificação precisa e indubitável de uma infecção de PCV2 somente por sua aparência clínica típica. Tais sintomas clínicos são aqueles conhecidos como PCVD, em particular palidez da pele, prodigabilidade, aflição respiratória, diarréia, icterícia, ou amarela- mento.

O termo "baixa taxa de morbidez", conforme aqui usado, é um

indicador para a ausência de sinais clínicos que permitem a identificação de uma infecção de PCV2 aguda por sua aparência clínica. É, portanto, um in- dicador para a existência de uma infecção subclínica de PCV2. O termo "baixa taxa de morbidez", conforme aqui usado, se refere a percentagem de 20 animais com saúde geral alterada. Saúde geral alterada, conforme aqui usa- do, é definida como a presença de um ou mais sinais clínicos relacionados a PCVD tal como a ocorrência de animais nanicos (definido aqui como animais com um peso corpóreo 25% menos do que o peso médio de seu grupo de animal da mesma idade), palidez da pele, prodigabilidade, aflição respirató- 25 ria, diarréia, icterícia, ou amarelamento. Desse modo, uma "baixa morbidez", conforme aqui usado, significa que menos do que 25%, preferivelmente me- nos do que 20%, mais preferido menos do que 15%, ainda mais preferido menos do que 12%, ainda mais preferido menos do que 10%, ainda mais preferido menos do que 8%, ainda mais preferido menos do que 6%, mais 30 preferido menos do que 4% dos animais de um grupo de animais ou rebanho mostram um ou mais sintomas clínicos de PCVD, preferivelmente mostram a ocorrência de animais nanicos conforme definido acima, palidez da pele, prodigabilidade, aflição respiratória, diarréia, icterícia, ou amarelamento.

O termo "nenhuma taxa de morbidez", conforme aqui usado, significa menos do que 1% dos animais positivos de PCV2 de um grupo de animais ou rebanho mostra um ou mais sintomas clínicos de PCVD, preferi- 5 velmente mostra a ocorrência de animais nanicos conforme definido acima, palidez da pele, prodigabilidade, aflição respiratória, diarréia, icterícia, ou amarelamento.

O termo "baixa taxa de mortalidade", conforme aqui usado, signi- fica, mas não é limitado a, uma taxa de mortalidade de menos do que 20%, 10 preferivelmente de menos do que 15%, mais preferido de menos do que 12%, ainda mais preferido de menos do que 10%, ainda mais preferido de menos do que 8%, ainda mais preferido de menos do que 6%, mais preferi- do de menos do que 4% dos animais positivos de PCV2 dentro de um grupo de animais ou de um rebanho.

O termo "em necessidade de tal administração", ou "em neces-

sidade de tal administração de tratamento", conforme aqui usado, significa que a administração/tratamento está associada com prevenção de saúde ou qualquer outro efeito medicinal positivo na saúde dos animais que recebem o antígeno de PCV2.

De acordo com uma concretização preferida, um caso subclínico

de uma infecção de PCV2 é dado, quando pelo menos critério i) "uma carga viral em um animal individual que permanece durante a vida toda abaixo de 106 cópias genômicas de PCV2 por ml de soro", critério ii) "uma baixa pro- porção de animais positivos de PCV-2 dentro de um grupo ou rebanho com 25 titulações virais de mais do que 106 cópias genômicas por ml de soro", ou critério iii) "uma persistência de vírus em um grupo ou rebanho de pelo me- nos 6 semanas, preferivelmente de pelo menos 8 semanas, mais preferido de pelo menos 10 semanas, mais preferido de pelo menos 12 semanas" a- cima mencionada, são aplicáveis. Mais preferivelmente, um caso subclínico 30 de infecção de PCV2 é dado, quando os critérios i) e ii), conforme mencio- nado acima, são aplicáveis.

Em casos onde o critério i) e/ou critério ii) é combinado com o critério iii) "uma persistência de vírus em um grupo ou rebanho de pelo me- nos 6 semanas, preferivelmente de pelo menos 8 semanas, mais preferido de pelo menos 10 semanas, mais preferido de pelo menos 12 semanas", ou em quaisquer outros casos compreendendo critério iii), conforme definido 5 acima, a infecção subclínica é considerada ser uma infecção "crônica sub- clínica de PCV2".

De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica de PCV2, no qual a infecção subclínica de PCV2 é caracterizada por uma carga viral em um animal individual de abaixo de 106 cópias genômicas de PCV2 por ml de soro, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuti- camente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 àquele animal em necessidade de tal administração. Preferivelmente, esta infecção subclínica de PCV2 é adicio- nalmente caracterizada pela presença de menos do que 20% dos animais com mais do que 106, preferivelmente mais do que 107 cópias virais de PCV2 por ml de soro dentro de um grupo de animais ou de um rebanho e/ou uma persistência de vírus em tal grupo ou rebanho de pelo menos 6 sema- nas, preferivelmente de pelo menos 8 semanas, mais preferido de pelo me- nos 10 semanas, mais preferido de pelo menos 12 semanas. Mais preferi- velmente, esta infecção subclínica é adicionalmente caracterizada pela au- sência de quaisquer sinais clínicos em um animal positivo de PCV2 individu- al, conforme definido acima, nenhuma ou uma baixa taxa de morbidez, con- forme definida acima, e/ou uma baixa taxa de mortalidade, conforme definida acima.

De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica de PCV2, no qual a infecção subclínica de PCV2 é caracterizada por uma carga viral em um animal individual que permaneceria durante a vida toda abaixo de 30 106 cópias genômicas de PCV2 por ml de soro na ausência de qualquer ad- ministração de antígeno de PCV2, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 àquele a- nimal em necessidade de tal administração. Preferivelmente, esta infecção subclínica de PCV2 é ainda caracterizada pela presença de menos do que 20% dos animais com mais do que 106, preferivelmente mais do que 107có- 5 pias virais de PCV2 por ml de soro dentro de um grupo de animais ou de um rebanho e/ou uma persistência de vírus em tal grupo ou rebanho de pelo menos 6 semanas, preferivelmente de pelo menos 8 semanas, mais preferi- do de pelo menos 10 semanas, mais preferido de pelo menos 12 semanas. Mais preferivelmente, esta infecção subclínica é ainda caracterizada pela 10 ausência de quaisquer sinais clínicos em um animal positivo de PCV2 indivi- dual, conforme definido acima, nenhuma ou uma baixa taxa de morbidez, conforme definido acima, e/ou uma baixa taxa de mortalidade, conforme de- finido acima.

De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica de PCV2, no qual a infecção subclínica de PCV2 é caracterizada pela presença de menos do que 20% dos animais com mais do que 106, preferivelmente mais do que 107 cópias virais de PCV2 por ml de soro dentro de um grupo de a- nimais ou de um rebanho, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composi- ção imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 àquele animal em necessidade de tal administração. Preferivelmente, esta infecção subclínica de PCV2 é ainda caracterizada por uma persistência de vírus em tal grupo ou rebanho de pelo menos 6 semanas, preferivelmente de pelo menos 8 semanas, mais preferido de pelo menos 10 semanas, mais preferido de pelo menos 12 semanas. Mais preferivelmente, esta infecção subclínica é ainda caracterizada pela ausência de quaisquer sinais clínicos em um animal posi- tivo de PCV2 individual, conforme definido acima, nenhuma ou uma baixa taxa de morbidez, conforme definido acima, e/ou uma baixa taxa de mortali- dade, conforme definido acima.

De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica de PCV2, no qual a infecção subclínica de PCV2 é caracterizada por uma persistência de vírus em um grupo de animais positivos de PCV2 ou rebanho de pelo menos 6 semanas, preferivelmente de pelo menos 8 semanas, mais preferi- do de pelo menos 10 semanas, mais preferido de pelo menos 12 semanas.

5 Preferivelmente, esta infecção de PCV2 subclínica é ainda caracterizada pela ausência de quaisquer sinais clínicos em animal positivo de PCV2 indi- vidual, conforme definido acima, nenhuma ou uma baixa taxa de morbidez, conforme definido acima, e/ou uma baixa taxa de mortalidade, conforme de- finido acima.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção também

proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica de PCV2, no qual a infecção subclínica de PCV2 é caracterizada pela au- sência de quaisquer sinais clínicos em um animal positivo de PCV2 individu- al, conforme definido acima, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composi- ção imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal administração. Preferivelmente, esta infecção subclínica de PCV2 é ainda caracterizada por nenhuma ou uma baixa taxa de morbi- dez, conforme definido acima, e/ou uma baixa taxa de mortalidade, conforme definido acima. Mais preferivelmente, tal infecção subclínica de PCV2 é ain- da caracterizada por uma carga viral em um animal individual que permane- ce durante a vida toda abaixo de 106 cópias genômicas de PCV2 por ml de soro, e/ou uma baixa proporção de animais positivos de PCV-2 dentro de um grupo ou rebanho com titulações virais de mais do que 106 cópias genômi- cas por ml de soro.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção também proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica de PCV2, no qual a infecção subclínica de PCV2 é caracterizada por ne- nhuma ou baixa morbidez em um grupo de animais ou de um rebanho, pre- 30 ferivelmente de menos do que 25% ou inferior, conforme definido acima, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreen- dendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal adminis- tração. Preferivelmente, tal infecção subclínica de PCV2 é ainda caracteriza- da por uma carga viral em um animal individual que permanece durante toda vida abaixo de 106 cópias genômicas de PCV2 por ml de soro, e/ou uma 5 baixa proporção de animais positivos de PCV2 dentro de um grupo ou reba- nho com titulações virais de mais do que 106 cópias genômicas por ml de soro.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção também proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica de PCV2, no qual a infecção subclínica de PCV2 é caracterizada por baixa taxa de mortalidade, conforme aqui definido, preferivelmente de menos do que 20% ou inferior, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imuno- gênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal administração. Preferivelmente, tal infecção subclínica de PCV2 é ain- da caracterizada por uma carga viral em um animal individual que permane- ce durante a vida toda abaixo de 106 cópias genômicas de PCV2 por ml de soro, e/ou uma baixa proporção de animais positivos de PCV2 dentro de um grupo ou rebanho com titulações virais de mais do que 106 cópias genômi- cas por ml de soro.

A administração de quantidade eficaz de antígeno de PCV2 a animais ou a um grupo de animais que são subclinicamente infectados com PCV2 resulta em um ganho de peso aumentado daqueles animais em en- gorda, em redução do número de animais com carga viral compreendida 25 entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, na redução de depósito de vírus nasal e/ou na redução de duração de viremia.

Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente in- venção também proporciona um método para redução de perda de ganho de peso em animais subclinicamente infectados com PCV2, compreendendo a 30 etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal administração. Preferivelmente, o ganho de peso médio é aumentado nas semanas 10 a 22 de idade por mais do que 1,5 kg conforme comparado a animais não-vacinados. O termo "du- rante engorda", conforme aqui usado, significa, mas não é limitado a, sema- nas 1 a 36 de idade, preferivelmente a semanas 10 a 28 de idade destes animais.

O termo "em animais subclinicamente infectados com PCV2", conforme aqui usado, significa o animal individual que torna-se subclinica- mente infectado com PCV2, mas também se refere a um grupo de animais no qual muitos dos animais do grupo tornam-se subclinicamente infectados 10 com PCV2. Desse modo, o termo "em animais subclinicamente infectados com PCV2" tem que ser lido como i) "em animais subclinicamente infectados com PCV2", e ii) como "em animais de um rebanho, no qual referido rebanho é subclinicamente infectado com PCV2".

De acordo com um aspecto adicional, a presente invenção tam- bém proporciona um método para redução do número de animais com carga viral compreendida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro em um grupo de animais (rebanho) subclinicamente infectado com PCV2, compre- endendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal administração. Prefe- rivelmente, o número de animais com 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro pode ser reduzido devido à vacinação com antígeno de PCV2 a menos do que 30%, preferivelmente menos do que 20%, ainda mais preferivelmente a menos do que 10%, mais preferivelmente a menos do que 5%, pelo que no grupo de controle não-vacinado dos animais subclinicamente infectados (com carga viral compreendida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro), mais do que 40% desenvolvem titulações de PCV2 com 104 a 106 có- pias de genoma por ml de soro.

De acordo com um aspecto adicional, a presente invenção tam- bém proporciona um método para redução do número de animais com uma carga viral clinicamente relevante (acima de 106 cópias de genoma por ml de soro) em um grupo de animais (rebanho) subclinicamente infectado com PCV2, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeutica- mente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica com- preendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal ad- ministração. Preferivelmente, o número de animais com uma carga viral aci- 5 ma de 106 cópias de genoma por ml de soro pode ser reduzido devido à va- cinação com antígeno de PCV2 a menos do que 10%, preferivelmente me- nos do que 5%, ainda mais preferivelmente a menos do que 4%, ainda mais preferivelmente a menos do que 3%, ainda mais preferivelmente a menos do que 2%, mais preferivelmente a menos do que 0,5%.

De acordo com um aspecto adicional, a presente invenção tam-

bém proporciona um método para redução de depósito de vírus nasal, redu- ção da duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeutica- mente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica com- 15 preendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal ad- ministração. Conforme descrito acima, vacinação/tratamento de animais subclinicamente infectados com PCV2 resultou no encurtamento de fase virêmica conforme comparado a animais de controle não-vacinados. O tem- po de encurtamento médio da duração da viremia foi 17 dias, conforme 20 comparado a animais de controle não-vacinados da mesma espécie. Desse modo, de acordo com um aspecto adicional, a presente invenção também proporciona um método para redução da duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, compreendendo a etapa de adminis- trar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma 25 composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um ani- mal em necessidade de tal administração, no qual o tratamento ou profilaxia resulta no encurtamento da fase de viremia de 5 ou mais dias, preferivel- mente 6 ou mais dias, ainda mais preferivelmente de 7 ou mais dias, ainda mais preferivelmente de 8 ou mais dias, ainda mais preferivelmente de 9, 30 ainda mais preferivelmente de 10, ainda mais preferivelmente de 12, ainda mais preferivelmente de 14, mais preferivelmente de mais do que 16 dias, conforme comparado a animais de um grupo de controle não-tratado da mesma espécie.

O termo "antígeno", conforme aqui usado, se refere a uma se- qüência de aminoácido que induz uma resposta imune em um hospedeiro. Um antígeno, conforme aqui usado, inclui seqüência de comprimento total 5 de quaisquer proteínas de PCV2, análogos desta, ou fragmentos imunogêni- cos desta. O termo "fragmento imunogênico" se refere a um fragmento de uma proteína que inclui um ou mais epitopos e, desse modo, induz a respos- ta imune em um hospedeiro. Tais fragmentos podem ser identificados usan- do-se qualquer número de técnicas de mapeamento de epitopo bem- 10 conhecidas na técnica. Ver, por exemplo, Epitope Mapping Protocols in Me- thods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E. Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, New Jersey. Por exemplo, epitopos lineares podem ser de- terminados por, por exemplo, sintetização concorrentemente de grandes números de peptídeos em suportes sólidos, os peptídeos correspondendo a 15 porções da molécula de proteína, e reagindo os peptídeos com anticorpos enquanto os peptídeos estão ainda fixados aos suportes. Tais técnicas são conhecidas na técnica e descritas em, por exemplo, Patente dos Estados Unidos No. 4.708.871; Geysen et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 81:3998-4002; Geysen et al. (1986) Molec. Immunol. 23:709-715. Similar- 20 mente, epitopos conformacionais são prontamente identificados pela deter- minação da conformação espacial de aminoácidos tais como por, por exem- plo, cristalografia de raios-X e ressonância magnética nuclear bidimensional. Ver, por exemplo, Epitope Mapping Protocols, supra.

Antígenos sintéticos estão também incluídos dentro da definição, 25 for exemplo, poliepitopos, epitopos de flanqueamento, e outros antígenos recombinantes ou sinteticamente derivados. Ver, por exemplo, Bergmann et al. (1993) Eur. J. Immunol. 23:2777-2781; Bergmann et al. (1996), J. Immu- nol. 157:3242-3249; Suhrbier, A. (1997), Immunol. e Cell Biol. 75:402-408; Gardner et al., (1998) 12th World AIDS Conference, Geneva, Switzerland, 28 30 de junho, 3 de julho, 1998.

Uma "resposta imune" significa, mas não é limitada, ao desen- volvimento em um hospedeiro de uma resposta imune celular e/ou mediada por anticorpo para um antígeno, uma composição imunogênica ou vacina de interesse. Usualmente, uma "resposta imune" inclui, mas não é limitada a, um ou mais dos seguintes efeitos: a produção ou ativação de anticorpos, células B, células T auxiliadoras, células T supressoras, e/ou células T cito- 5 tóxicas, dirigidas especificamente a um antígeno ou antígenos incluídos na composição ou vacina de interesse. Preferivelmente, o hospedeiro revelará, ou uma resposta imunológica terapêutica, ou protetora (memória), tal que resistência a novas infecções será aumentada, e/ou a severidade clínica da doença reduzida. Tal proteção será demonstrada por, ou uma redução no 10 número ou severidade de, ou falta de um ou mais dos sintomas associados com infecção de PCV2s, no retardo do começo de viremia, em uma persis- tência viral reduzida, em uma redução da carga viral total, e/ou uma redução de excreção viral.

Os termos "composição imunogênica" ou "vacina" (ambos os 15 termos são usados sinonimamente), conforme aqui usados, se referem a qualquer composição farmacêutica contendo um antígeno de PCV2, cuja composição pode ser usada para prevenir ou tratar uma infecção de doença associada a PCV2, ou condição em um indivíduo. Uma composição imuno- gênica preferida pode induzir, estimular ou aumentar a resposta imune con- 20 tra PCV2. O termo, desse modo, envolve ambas composições imunogênicas de subunidade, conforme descrito abaixo, bem como composições contendo PCV2 total morto, ou atenuado e/ou inativado.

Desse modo, de acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica 25 de PCV2, um método para aumentar o ganho de peso médio em um animal ou um grupo de animais (rebanho) subclinicamente infectados com PCV2, um método para redução do número de animais com carga viral compreen- dida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, um método para re- dução do número de animais com carga viral acima de 106 genomas por ml 30 de soro dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método para redução de depósito de vírus nasal, um método para redução da duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, um método para redução da taxa de morbidez dentro de um rebanho subclinicamente infec- tado, um método para a redução da taxa de mortalidade dentro de um reba- nho subclinicamente infectado, todos compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma 5 composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um ani- mal em necessidade de tal tratamento, no qual a composição imunogênica é composição imunogênica de subunidade, composições contendo PCV2 total morto, ou atenuado e/ou inativado.

O termo "composição imunogênica de subunidade", conforme aqui usado, se refere a uma composição contendo pelo menos polipeptídeo imunogênico ou antígeno, mas não todos os antígenos, derivados de, ou homólogos a um antígeno de PCV2. Tal composição é substancialmente livre de PCV2 intacto. Desse modo, "composição imunogênica de subunida- de" é preparada de pelo menos polipeptídeos imunogênicos parcialmente purificados ou fracionados (preferivelmente substancialmente purificados) de PCV2, ou análogos recombinantes destes. Uma composição imunogênica de subunidade pode compreender o antígeno de subunidade ou antígenos de interesse substancialmente livres de outros antígenos ou polipeptídeos de PCV2, ou na forma fracionada. Uma composição de subunidade imunogêni- ca preferida compreende a proteína de PCV2 ORF-2, conforme descrito a- baixo. Mais preferidas são composições de subunidade imunogênica, que compreendem qualquer dos antígenos de PCV2 providos em W006/072065, que são todos incorporados aqui por referência em sua totalidade.

De acordo com outro aspecto, a composição imunogênica, con- 25 forme aqui usada, mais preferivelmente compreende o polipeptídeo, ou um fragmento deste, expresso por ORF-2 de PCV2. PCV2 ORF-2DNA e proteí- na, usados aqui para a preparação das composições e dentro dos processos providos aqui, é um domínio altamente conservado dentro de isolados de PCV2 e, desse modo, qualquer PCV2 ORF-2 seria efetivo como a fonte do 30 PCV2 ORF-2 DNA e/ou polipeptídeo, conforme aqui usado. Uma proteína de PCV2 ORF-2 preferida é aquela de SEQ ID NO: 11 de W006/072065. Um polipeptídeo de PCV ORF-2 preferido é provido como SEQ ID NO: 5 de W006/072065. Contudo, é compreendido por aqueles técnicos no assunto que esta seqüência pode variar por mais do que 6-10% na homologia de seqüência, e ainda retém as características antigenoicas que a torna útil em composições imunogênicas. As características antigenoicas de uma compo- 5 sição imunológica podem ser, por exemplo, estimadas pelo experimento de desafio, conforme provido pelo Exemplo 4 de W006/072065. Além disso, a característica antigenoica de um antígeno modificado é ainda retida, quando o antígeno modificado confere pelo menos 70%, preferivelmente 80%, mais preferivelmente 90% da imunidade protetora conforme comparada à proteína 10 de PCV2 ORF-2, codificada pela seqüência de polinucleotídeo de SEQ ID NO:3 ou SEQ ID NO:4, conforme provido em W006/072065.

Desse modo, de acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica de PCV2, um método para aumentar ganho de peso médio em um animal ou 15 um grupo de animais (rebanho) subclinicamente infectados com PCV2, um método para redução do número de animais com carga viral compreendida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, um método para redução do número de animais com carga viral acima de 106 genomas por ml de soro dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método para redução 20 de depósito de vírus nasal, um método para redução da duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, um método para a redu- ção da taxa de morbidez dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método para a redução da taxa de mortalidade dentro de um rebanho subclinicamente infectado, todos compreendendo a etapa de administrar 25 uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um ani- mal em necessidade de tal administração, no qual o antígeno de PCV2 é um antígeno proteína de PCV2 ORF-2 que tem pelo menos 70%, preferivelmen- te 80%, ainda mais preferivelmente 90% da imunidade protetora conforme 30 comparada à proteína de PCV2 ORF-2, codificada pela seqüência de polinu- cleotídeo de SEQ ID NO:3 ou SEQ ID NO:4, conforme provido em W006/072065. Preferivelmente referido PCV2 ORF-2 tem a seqüência de SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 5 de W006/072065.

Em algumas formas, porções imunogênicas de proteína de PCV2 ORF-2 são usadas como o componente antigenoico na composição imunogênica, compreendendo antígeno de PCV2. O termo "porção imuno- gênica", conforme aqui usado, se refere a formas truncadas e/ou substituí- das, ou fragmentos de proteína de PCV2 ORF-2 e/ou polinucleotídeo, res- pectivamente. Preferivelmente, tais formas truncadas e/ou substituídas, ou fragmentos, compreenderão pelo menos 6 aminoácidos contíguos a partir do polipeptídeo ORF-2 de comprimento total. Mais preferivelmente, as formas truncadas ou substituídas, ou fragmentos, terão pelo menos 5, preferivel- mente 8, mais preferivelmente 10, mais preferivelmente pelo menos 15, e ainda mais preferivelmente pelo menos 19 aminoácidos contíguos de poli- peptídeo PCV ORF-2 de comprimento total. Duas seqüências preferidas neste particular são providas como SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 10 de W006/072065. É adicionalmente compreendido que tais seqüências podem ser uma parte de fragmentos maiores, ou formas truncadas.

Conforme mencionado acima, um polipeptídeo de PCV2 ORF-2 adicional preferido é qualquer um codificado pelas seqüências de nucleotí- deo de SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4. Contudo, é compreendido por aque- 20 Ies técnicos no assunto que esta seqüência pode variar por mais de 6-20% em homologia de seqüência e ainda reter as características antigenoicas que a torna útil em composições imunogênicas. Em algumas formas, uma forma truncada ou substituída, ou fragmento deste polipeptídeo de PVC2 ORF-2 é usada como o componente antigenoico na composição. Preferivel- 25 mente, tais formas truncadas ou substituídas, ou fragmentos, compreende- rão pelo menos 18 nucleotídeos contíguos a partir da seqüência de nucleotí- deo de PCV2 ORF-2 de comprimento total, por exemplo, de SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4. Mais preferivelmente, as formas truncadas ou substituí- das, ou fragmentos, terão pelo menos 30, mais preferivelmente pelo menos 30 45, e ainda mais preferivelmente pelo menos 57 nucleotídeos contíguos da seqüência de nucleotídeo de PCV2 ORF-2 de comprimento total, por exem- plo, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4. "Identidade de Seqüência", conforme é conhecido na técnica, se refere a um relacionamento entre duas ou mais seqüências de polipeptídeo, ou duas ou mais seqüências de polinucleotídeo, a saber, uma seqüência de referência e uma dada seqüência a ser comparada com a seqüência de refe- 5 rência. A identidade de seqüência é determinada pela comparação da dada seqüência à seqüência de referência após as seqüências tiverem sido oti- mamente alinhadas para produzir o grau mais alto de similaridade de se- qüência, conforme determinado pela equiparação entre hastes de tais se- qüências. Sob tal alinhamento, a identidade de seqüência é determinada em 10 uma base de posição por posição, por exemplo, as seqüências são "idênti- cas" a uma posição particular se naquela posição, os nucleotídeos ou resí- duos de aminoácido são idênticos. O número total de tais identidades de posição é então dividido pelo número total de nucleotídeos ou resíduos na seqüência de referência para dar % de identidade de seqüência. A identida- 15 de de seqüência pode ser prontamente calculada por métodos conhecidos, incluindo, mas não limitada a, aquelas descritas em Computational Molecular Biology, Lesk, A. N., ed., Oxford University Press, NewYork (1988), Biocom- puting: Informatics e Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York (1993); Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., 20 e Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey (1994); Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinge, G., Academic Press (1987); Sequence A- nalysis Primer, Gribskov, M. e Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York (1991); e Carillo, H., e Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988), os ensinamentos dos quais sendo aqui incorporados por referência. 25 Métodos preferidos para determinar a identidade de seqüência são designa- dos para dar a maior equiparação entre as seqüências testadas. Métodos para determinar identidade de seqüência são codificados em programas de computador publicamente disponíveis que determinam a identidade de se- qüência entre dadas seqüências. Exemplos de tais programas incluem, mas 30 não estão limitados a, o pacote de programa GCG (Devereux, J., et al., Acid nucleics Research, 12(1):387 (1984)), BLASTP, BLASTN e FASTA (Altschul,

S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990). O programa BLASTX é pu- blicamente disponível de NCBI e outras fontes (BLAST Manual, Altschul, S. et al., NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990), os ensinamentos dos quais sendo aqui incorpora- dos por referência). Estes programas opcionalmente alinham seqüências 5 usando pesos de folga de defeito de modo a produzir o nível mais alto de identidade de seqüência entre a dada e seqüências de referência. Como uma ilustração, por um polinucleotídeo tendo uma seqüência de nucleotídeo tendo pelo menos, por exemplo, 85%, preferivelmente 90%, ainda mais pre- ferivelmente 95% de "identidade de seqüência" para uma seqüência de nu- 10 cleotídeo de referência, é pretendido que à seqüência de nucleotídeo do da- do polinucleotídeo seja idêntica à seqüência de referência, exceto que a da- da seqüência de polinucleotídeo pode incluir até 15, preferivelmente até 10, ainda mais preferivelmente até 5 mutações de ponto por cada 100 nucleotí- deos da seqüência de nucleotídeo de referência. Em outras palavras, em um 15 polinucleotídeo tendo uma seqüência de nucleotídeo tendo pelo menos 85%, preferivelmente 90%, ainda mais preferivelmente 95% de identidade relativa a seqüência de nucleotídeo de referência, até 15%, preferivelmente 10%, ainda mais preferivelmente 5% dos nucleotídeos na seqüência de referência pode ser anulada ou substituída com outro nucleotídeo, ou um número de 20 nucleotídeos até 15%, preferivelmente 10%, ainda mais preferivelmente 5% dos nucleotídeos totais na seqüência de referência pode ser inserido na se- qüência de referência. Estas mutações da seqüência de referência podem ocorrer nas posições terminais 5' ou 3' da seqüência de nucleotídeo de refe- rência, ou em qualquer lugar entre aquelas posições terminais, interespersa- 25 das ou individualmente entre nucleotídeos na seqüência de referência, ou em um ou mais grupos contíguos dentro da seqüência de referência. Analo- gamente, por um polipeptídeo tendo uma dada seqüência de aminoácido tendo pelo menos, por exemplo, 85%, preferivelmente 90%, ainda mais pre- ferivelmente 95% da identidade de seqüência para uma seqüência de ami- 30 noácido de referência, é pretendido que a dada seqüência de aminoácido do polipeptídeo seja idêntica à seqüência de referência, exceto que a dada se- qüência de polipeptídeo possa incluir até 15, preferivelmente até 10, ainda mais preferivelmente até 5 alterações de aminoácido por cada 100 aminoá- cidos da seqüência de aminoácido de referência. Em outras palavras, para obter uma dada seqüência de polipeptídeo tendo pelo menos 85%, preferi- velmente 90%, ainda mais preferivelmente 95% de seqüência de identidade 5 com uma seqüência de aminoácido de referência, até 15%, preferivelmente até 10%, ainda mais preferivelmente até 5% dos resíduos de aminoácido na seqüência de referência pode ser anulado ou substituído com outro aminoá- cido, ou um número de aminoácidos até 15%, preferivelmente até 10%, ain- da mais preferivelmente até 5% do número total de resíduos de aminoácido 10 na seqüência de referência pode ser inserido na seqüência de referência. Estas alterações da seqüência de referência podem ocorrer nas posições amino ou carbóxi terminais da seqüência de aminoácido de referência, ou em qualquer lugar entre aquelas posições terminais, interespersadas ou in- dividualmente entre os resíduos na seqüência de referência, ou no um ou 15 mais grupos contíguos dentro da seqüência de referência. Preferivelmente, as posições de resíduo que não são idênticas diferem por substituições de aminoácido conservativas. Contudo, substituições conservativas não estão incluídas como uma equiparação que determina identidade de seqüência.

"Homologia de seqüência", conforme aqui usado, se refere a um método de determinar a ligação de duas seqüências. Para determinar a ho- mologia de seqüência, duas ou mais seqüências são otimamente alinhadas, e folgas são introduzidas se necessário. Contudo, em contraste à "identida- de de seqüência", substituições de aminoácido conservativas são contadas como uma equiparação quando se determina homologia de seqüência. Em outras palavras, para obter um polipeptídeo ou polinucleotídeo tendo 95% de homologia de seqüência com uma seqüência de referência, 85%, preferivel- mente 90%, ainda mais preferivelmente 95% dos resíduos de aminoácido ou nucleotídeos na seqüência de referência devem se equiparar ou compreen- der uma substituição conservativa com outro aminoácido ou nucleotídeo, ou um número de aminoácidos ou nucleotídeos até 15%, preferivelmente até 10%, ainda mais preferivelmente até 5% dos resíduos totais de aminoácido ou nucleotídeos, não incluindo substituições conservativas, na seqüência de referência pode ser inserido na seqüência de referência. Preferivelmente a seqüência homóloga compreende pelo menos um extensão de 50, ainda mais preferivelmente pelo menos 100, ainda mais preferivelmente pelo me- nos 250, e, ainda mais preferivelmente, pelo menos 500 nucleotídeos.

5 Uma "substituição conservativa" se refere à substituição de um

resíduo de aminoácido ou nucleotídeo com outro resíduo de aminoácido ou nucleotídeo tendo características similares ou propriedades incluindo tama- nho, hidrofobicidade, etc., tal que a funcionalidade total não muda significan- temente.

"Isolado" significa alterado "pela mão do homem" de seu estado

natural, isto é, se ele ocorre na natureza, ele foi mudado ou removido de seu ambiente original, ou ambos. Por exemplo, um polinucleotídeo ou polipeptí- deo naturalmente presente em um organismo vivo não é "isolado," mas o mesmo polinucleotídeo ou polipeptídeo separado a partir dos materiais coe- 15 xistentes de seu estado natural é "isolado", conforme o termo é empregado aqui.

Desse modo, de acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica de PCV2, um método para aumentar ganho de peso médio em um animal ou 20 um grupo de animais (rebanho) subclinicamente infectados com PCV2, um método para redução do número de animais com carga viral compreendida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, um método para redução do número de animais com carga viral acima de 106 genomas por ml de soro dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método para redução 25 de depósito de vírus nasal, um método para redução da duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, um método para a redu- ção da taxa de morbidez dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método para a redução da taxa de mortalidade dentro de um rebanho subclinicamente infectado, todos compreendendo a etapa de administrar 30 uma quantidade terapeuticamente eficaz de proteína de PCV2 ORF-2 a um animal em necessidade de tal administração, no qual referida proteína de PCV2 ORF-2 é qualquer uma daquelas acima descritas. Preferivelmente, referida proteína de PCV2 ORF-2 é

i) um polipeptídeo compreendendo a seqüência de SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 11 de W006/07065;

ii) qualquer polipeptídeo que é pelo menos 80% homólogo ao

polipeptídeo de i),

iii) qualquer porção imunogênica dos polipeptídeos de i) e/ou ü)

iv) a porção imunogênica de iii), compreendendo pelo menos 5, preferivelmente 8, mais preferivelmente, ainda mais pre- ferivelmente 10 aminoácidos contíguos incluídos nas se- qüências de SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 11 de W006/072065,

v) um polipeptídeo que é codificado por um DNA compreen- dendo uma seqüência de SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4

de W006/072065.

vi) qualquer polipeptídeo que é codificado por um polinucleotí- deo que é pelo menos 80% homólogo ao polinucleotídeo de v),

vii) qualquer porção imunogênica dos polipeptídeos codificados

pelo polinucleotídeo de v) e/ou vi)

viii) a porção imunogênica de vii), no qual o polinucleotídeo que codifica para referida porção imunogênica compreende pelo menos 30 nucleotídeos contíguos incluídos nas seqüências de SEQ ID NO: 3, ou SEQ ID NO: 4 de W006/072065.

Preferivelmente quaisquer daquelas porções imunogênicas têm as mesmas características imunogênicas de proteína de PCV2 ORF-2 que é codificada pela seqüência de SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4 de W006/07065.

De acordo com um aspecto adicional, a proteína de PCV2 ORF- 2 é provida na composição imunogênica em um nível de inclusão de antíge- no efetivo para o tratamento de animais subclinicamente infectados com PCV2. Preferivelmente, o nível de inclusão da proteína de PCV2 ORF-2 é pelo menos 0,2 μ9 de antígeno/ml da composição imunogênica final ^g/ml), mais preferivelmente de cerca de 0,2 a cerca de 400 μg/ml, ainda mais preferi- velmente de cerca de 0,3 a cerca de 200 μg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,35 a cerca de 100 μg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,4 5 a cerca de 50 μg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,45 a cerca de 30 μg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,6 a cerca de 15 μg /ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,75 a cerca de 8 μg/ml, ainda mais preferi- velmente de cerca de 1,0 a cerca de 6 μg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,3 a cerca de 3,0 μg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 10 1,4 a cerca de 2,5 μg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,5 a cerca de 2,0 μg/ml, e, mais preferivelmente, cerca de 1,6 μg/ml.

De acordo com um aspecto adicional, o nível de inclusão de an- tígeno de PCV ORF-2 é pelo menos 0,2 μg/ proteína de PCV2 ORF-2, con- forme descrito acima por dose da composição antigenoica final ^g/dose), mais preferivelmente de cerca de 0,2 a cerca de 400 μg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,3 a cerca de 200 μg/dose, ainda mais preferi- velmente de cerca de 0,35 a cerca de 100 μg/dose, ainda mais preferivel- mente de cerca de 0,4 a cerca de 50 μg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,45 a cerca de 30 μg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,6 a cerca de 15 μg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,75 a cerca de 8 μg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,0 a cerca de 6 μg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,3 a cerca de 3,0 μg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,4 a cerca de 2,5 μg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,5 a cerca de 2,0 μg/dose, e, mais prefe- rivelmente, cerca de 1,6 μg/dose.

O polipeptídeo de PCV2 ORF-2 usado na composição imunogê- nica de acordo com a presente invenção pode ser derivado de qualquer mo- do incluindo isolamento e purificação de PCV2 ORF2, síntese de proteína padrão, e metodologia recombinante. Métodos preferidos para obtenção de 30 polipeptídeo de PCV2 ORF-2 são providos em W006/072065, os ensina- mentos e conteúdo do qual sendo aqui, desse modo, incorporados por refe- rência em sua totalidade. Brevemente, células susceptíveis são infectadas com um vetor viral recombinante contendo seqüências de codificação de DNA de PCV2 ORF-2, popipeptídeo de PCV2 ORF-2 é expresso pelo vírus recombinante, e o polipeptídeo de PCV2 ORF-2 expresso é recuperado a partir do sobrenadante por filtração, e inativado por qualquer método con- 5 vencional, preferivelmente usando etilenimina binária, que é então neutrali- zada para cessar o processo de inativação.

A composição imunogênica, conforme aqui usada, também se refere a uma composição que compreende i) qualquer da proteína de PCV2 ORF-2 descrita acima, preferivelmente em concentrações descritas acima, e 10 ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida proteína de PCV2 ORF-2, preferivelmente de um baculovírus recombinante. Além disso, a composição imunogênica pode compreender i) qualquer das proteínas de PCV2 ORF-2s acima descritas, preferivelmente em concentrações acima descritas, ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida 15 proteína de PCV2 ORF-2, preferivelmente de um baculovírus recombinante, e iii) uma porção do sobrenadante de cultura de célula.

Desse modo, de acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica de PCV2, um método para aumentar o ganho de peso médio em um animal 20 ou um grupo de animais (rebanho) subclinicamente infectados com PCV2, um método para redução do número de animais com carga viral compreen- dida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, um método para re- dução do número de animais com carga viral acima de 106 genomas por ml de soro dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método para 25 redução de depósito de vírus nasal, um método para redução da duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, um método para a redução da taxa de morbidez dentro de um rebanho subclinicamente infec- tado, um método para a redução da taxa de mortalidade dentro de um reba- nho subclinicamente infectado, todos compreendendo a etapa de administrar 30 uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um ani- mal em necessidade de tal tratamento, no qual o antígeno de PCV2 é PCV2 ORF-2 recombinante, preferivelmente um baculovírus expresso de PCV2 ORF-2. Preferivelmente, estes PCV2 ORF-2 recombinantes ou expressos por baculovírus tendo a seqüência conforme descrita acima.

A composição imunogênica, conforme aqui usada, também se refere a uma composição que compreende i) qualquer da proteína de PCV2 ORF-2s descrita acima, preferivelmente em concentrações descritas acima,

ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida proteína de PCV2 ORF-2, preferivelmente de um baculovírus recombinante, e iii) uma porção da cultura de célula; no qual cerca de 90% dos componentes têm um tamanho menor do que 1 μηι.

A composição imunogênica, conforme aqui usada, também se refere a uma composição que compreende i) qualquer das proteínas de PCV2 ORF-2 descritas acima, preferivelmente em concentrações descritas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida prote- 15 ína de PCV2 ORF-2, iii) uma porção da cultura de célula, iv) e agente de inati- vação para inativar o vetor viral recombinante, preferivelmente BEI, no qual cer- ca de 90% dos componentes i) a iii) têm um tamanho menor do que 1 μιτι. Pre- ferivelmente, BEI está presente em concentrações eficazes para inativar o ba- culovírus, preferivelmente em uma quantidade de 2 a cerca de 8 mM de BEI, 20 preferivelmente de cerca de 5 mM de BEI.

A composição imunogênica, conforme aqui usada, também se refere a uma composição que compreende i) quaisquer das proteínas de PCV2 ORF-2 descritas acima, preferivelmente em concentrações descritas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida prote- 25 ína de PCV2 ORF-2, iii) uma porção da cultura de célula, iv) um agente de inativação para inativar o vetor viral recombinante, preferivelmente BEI, e v) um agente de neutralização para cessar a inativação mediada pelo agente de inativação, no qual cerca de 90% dos componentes i) a iii) têm um tama- nho menor do que 1 μιτι. Preferivelmente, se o agente de inativação é BEI, 30 referida composição compreende tiossulfato de sódio em quantidades equi- valentes a BEI.

O polipeptídeo é incorporado em uma composição que pode ser administrada a um animal susceptível à infecção de PCV2. Em formas prefe- ridas, a composição pode também incluir componentes adicionais conheci- dos àqueles técnicos no assunto (ver também Remington's Pharmaceutical Sciences. (1990). 18th ed. Mack Publ., Easton). Adicionalmente, a composi- 5 ção pode incluir um ou mais veículos aceitáveis veterinários. Conforme aqui usado, "um veículo aceitável veterinário" inclui qualquer e todos os solven- tes, meio de dispersão, revestimentos, adjuvantes, agentes de estabilização, diluentes, conservantes, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos, agentes de retardamento de adsorção, e similares. Em uma con- 10 cretização preferida, a composição imunogênica compreende proteína de PCV2 ORF-2 conforme provido aqui, preferivelmente em concentrações descritas acima, que é misturada com um adjuvante, preferivelmente Carbo- pol, e solução salina fisiológica.

Aqueles técnicos no assunto compreenderão que a composição aqui usada pode incorporar soluções estéreis fisiologicamente aceitáveis injetáveis conhecidas. Para preparação de uma solução pronta para uso pa- ra injeção parenteral ou infusão, soluções isotônicas aquosas, tais como, por exemplo, soluções de proteína salina ou de plasma correspondentes, são prontamente disponíveis. Em adição, as composições imunogênicas e vaci- na da presente invenção podem incluir diluentes, agentes isotônicos, estabi- lizadores, ou adjuvantes. Diluentes podem incluir água, solução salina, dex- trose, etanol, glicerol, e similares. Agentes isotônicos podem incluir cloreto de sódio, dextrose, manitol, sorbitol, e lactose, entre outros. Estabilizadores incluem albumina e sais de álcali de ácido etilendiamintetracético, entre ou- tros.

"Adjuvantes" conforme aqui usado, podem incluir hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio, saponinas, por exemplo, Quil A, QS-21 (Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuti- cals, Inc., Birmingham, AL), emulsão de água-em-óleo, emulsão de óleo-em- 30 água, emulsão de água-em-óleo-em-água. A emulsão pode ser baseada em particular em óleo de parafina líquida leve (tipo European Pharmacopea); óleo isoprenoide, tais como esqualeno ou óleo de esqualeno resultante de teoligomerização de alquenos, em particular de isobuteno ou deceno; éste- res de ácidos ou de álcoois contendo um grupo alquila linear, mais particu- larmente óleos de planta, oleato de etila, propileno glicol di-(caprilato/ capra- to), gliceril tri-(caprilato/caprato) ou dioleato de propileno glicol; ésteres de 5 ácidos graxos ramificados ou álcoois, em particular, ésteres de ácido isoes- teárico. O óleo é usado em combinação com emulsificantes para formar a emulsão. Os emulsificantes são preferivelmente surfactantes não-iônicos, em particular ésteres de sorbitano, de manide (por exemplo, oleato de ani- dromanitol), de glicol, de poliglicerol, de propileno glicol e de ácido oleico, 10 isoesteárico, ricinoleico ou hidroxiesteárico, que são opcionalmente etoxila- tados, e blocos de copolímero de polioxipropileno-polioxietileno, em particu- lar os produtos Pluronic, especialmente L121. Ver Hunter et al., The Theory e Practical Application of Adjuvants (Ed.Stewart-Tull, D. E. S.). John Wiley e Sons, NY, pp51-94 (1995) e Todd et al., Vaccine 15:564-570 (1997).

Por exemplo, é possível usar a emulsão de SPT descrita na pá-

gina 147 de "Vaccine Design, The Subunit e Adjuvant Approach" edited by M. Powell e M. Newman, Plenum Press, 1995, e a emulsão MF59 descrita na página 183 deste mesmo livro.

Um exemplo adicional de adjuvante é um composto escolhido a partir de polímeros de ácido acrílico ou metacrílico, e os copolímeros de ani- drido maleico e derivado de alquenila. Compostos adjuvantes vantajosos são os polímeros de ácido acrílico ou metacrílico que são reticulados, especial- mente com ésteres de polialquenila de açúcares ou poliálcoois. Estes com- postos são conhecidos pelo termo carbômero (Phameuropa Vol. 8, No. 2, June 1996). Os técnicos no assunto podem também se referir à Patente dos Estados Unidos No. 2.909.462 que descreve tais polímeros acrílicos reticu- lados com um composto poli-hidroxilatado tendo pelo menos 3 grupos hidro- xila, preferivelmente não mais do que 8, os átomos de hidrogênio de pelo menos três hidroxilas sendo substituídos por radicais alifáticos insaturados tendo pelo menos 2 átomos de carbono. Os radicais preferidos são aqueles contendo de 2 a 4 átomos de carbono, por exemplo, vinilas, alilas e outros grupos etiIenicamente insaturados. Os radicais insaturados podem conter outros substituintes, tal como metila. Os produtos vendidos sob o nome Car- bopol; (BF Goodrich, Ohio, USA) são particularmente apropriados. Eles são reticulados com uma alil sucarose ou com alil pentaeritritol. Entre eles, po- dem ser mencionados Carbopol 974P, 934P e 971 P. Mais preferido é o uso 5 de Carbopol, em particular o uso de Carbopol 971P, preferivelmente em quantidades de cerca de 500 pg a cerca de 5 mg por dose, ainda mais prefe- rido em uma quantidade de cerca de 750 pg a cerca de 2,5 mg por dose, e mais preferido uma quantidade de cerca de 1 mg por dose.

Adjuvantes adicionalmente adequados incluem, mas não Iimita- 10 dos a, o sistema de adjuvante RIBI (Ribi Inc.), Copolímero de bloco (CytRx, Atlanta GA), SAF-M (Chiron, Emeryville CA), monofosforil lipídio A, adjuvan- te lipídio-amina Avridine, enterotoxina instável a calor de E. coli (recombinan- te ou, de outro modo), toxina de cólera, IMS 1314, ou muramil dipeptídeo, entre muitos outros.

Preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade

de cerca de 100 μg a cerca de 10 mg por dose. Ainda mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 100 μg a cerca de 10 mg por dose. Ainda mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 500 μg a cerca de 5 mg por dose. Ainda mais 20 preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 750 μg a cerca de 2,5 mg por dose. Mais preferivelmente, o adjuvante é adi- cionado em uma quantidade de cerca de 1 mg por dose.

Adicionalmente, a composição pode incluir um ou mais veículos farmacêuticos aceitáveis. Conforme aqui usado, "um veículo farmacêutico 25 aceitável" inclui qualquer e todos os solventes, meio de dispersão, revesti- mentos, agentes de estabilização, diluentes, conservantes, agentes antibac- terianos e antifúngicos, agentes isotônicos, agentes de retardamento de ad- sorção, e similares. Mais preferivelmente, a composição provida aqui contém proteína de PCV2 ORF-2 recuperada a partir do sobrenadante de células 30 cultivadas in vitro, no qual referidas células foram infectadas com um vetor viral recombinante contendo DNA de PCV2 ORF-2DNA e que expressa pro- teína de PCV2 ORF-2, e no qual referida cultura de célula foi tratada com cerca de 2 a cerca de 8 mM de BEI, preferivelmente com cerca de 5 mM de BEI para inativar o vetor viral, e uma concentração equivalente de um agente de neutralização, preferivelmente solução de tiossulfato de sódio a uma con- centração final de cerca de 2 a cerca de 8 mM, preferivelmente de cerca de 5 mM.

A presente invenção também se refere ao uso de uma composi- ção imunogênica para aumentar ganho de peso médio em um animal ou um grupo de animais (rebanho) subclinicamente infectados com PCV2, redução do número de animais com carga viral compreendida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, redução do número de animais com carga viral acima de 106 genomas por ml de soro dentro de um rebanho subclinicamen- te infectado, redução de depósito de vírus nasal, redução da duração de vi- remia em animais subclinicamente infectados com PCV2, uma redução da taxa de morbidez dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um mé- todo para a redução da taxa de mortalidade dentro de um rebanho subclini- camente infectado, no qual referida composição imunogênica compreende i) qualquer das proteínas de PCV2 ORF-2 descritas acima, preferivelmente em concentrações descritas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida proteína de PCV2 ORF-2, iii) uma porção da cultura de célula, iv) um agente de inativação para inativar o vetor viral recombinante preferivelmente BEI, e v) um agente de neutralização para cessar a inativa- ção mediada pelo agente de inativação, preferivelmente tiossulfato de sódio em quantidades equivalentes a BEI; e vi) um adjuvante adequado, preferi- velmente Carbopol 971 em quantidades descritas acima; no qual cerca de 90% dos componentes i) a iii) têm um tamanho menor do que 1 μιτι.

De acordo com um aspecto adicional, esta composição imuno- gênica compreende adicionalmente um sal farmacêutico aceitável, preferi- velmente um sal de fosfato em concentrações fisiologicamente aceitáveis. Preferivelmente, o pH de referida composição imunogênica é ajustado a um pH fisiológico, significando entre cerca de 6,5 e 7,5.

A composição imunogênica, conforme aqui usada, também se refere a uma composição que compreende por um ml i) pelo menos 1,6 μg de proteína de PCV2 ORF-2 descrita acima, ii) pelo menos uma porção de baculovírus que expressa referida proteína de PCV2 ORF-2 iii) uma porção da cultura de célula, iv) cerca de 2 a 8 mM de BEI, v) tiossulfato de sódio em quantidades equivalentes a BEI; e vi) cerca de 1 mg de Carbopol 971, e vii) 5 sal de fosfato em uma concentração fisiologicamente aceitável; no qual cer- ca de 90% dos componentes i) a iii) têm um tamanho menor do que 1 pme o pH de referida composição imunogênica é ajustado para cerca de 6,5 a 7,5.

As composições imunogênicas podem incluir adicionalmente um ou mais outros agentes imuno-modulatórios, tais como, por exemplo, inter- leucinas, interferonas, ou outras citoquinas. As composições imunogênicas podem também incluir Gentamicina e Mertiolate. Enquanto as quantidades e concentrações de adjuvantes e aditivos úteis no contexto da presente inven- ção podem prontamente serem determinadas pelo técnico no assunto, a presente invenção contempla composições compreendendo de cerca de 50 μg a cerca de 2000 μg de adjuvante, e, preferivelmente, cerca de 250 μg/ml de dose da composição de vacina. Desse modo, a composição imunogênica conforme aqui usada também se refere a uma composição que compreende de cerca de 1 ug/ml a cerca de 60 μg/ml de antibióticos, e, mais preferivel- mente, menos do que cerca de 30 μg/ml de antibióticos.

A composição imunogênica conforme aqui usada também se refere a uma composição que compreende i) qualquer das proteínas de PCV2 ORF-2 descritas acima, preferivelmente nas concentrações descritas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida prote- 25 ína de PCV2 ORF-2, iii) uma porção da cultura de célula, iv) um agente de inativação para inativar o vetor viral recombinante, preferivelmente BEI, e v) um agente de neutralização para cessar a inativação mediada pelo agente de inativação, preferivelmente tiossulfato de sódio em quantidades equiva- lentes a BEI; vi) um adjuvante adequado, preferivelmente Carbopol 971 em 30 quantidades descritas acima; vii) uma concentração farmacêutica aceitável de um tampão de salina, preferivelmente de um sal de fosfato, e viii) um a- gente ativo anti-microbiológico; no qual cerca de 90% dos componentes i) a iii) têm um tamanho menor do que 1 μιτι.

A composição imunogênica conforme aqui usada também se refere a Ingelvac® CircoFLEX®, (Boehringer Ingelheim Vetmedica lnc, St Jo- seph, MO1 USA), CircoVac® (Merial SAS, Lyon, France), CircoVent (Intervet 5 Inc., Millsboro, DE, USA), ou Suvaxyn PCV-2 One Dose® (Fort Dodge Ani- mal Health, Kansas City, KA, USA). Desse modo, de acordo com outro as- pecto, a presente invenção proporciona um método para a profilaxia e trata- mento de infecção subclínica de PCV2, um método para aumentar ganho de peso médio em um animal ou um grupo de animais (rebanho) subclinica- 10 mente infectado com PCV2, um método para redução do número de animais com carga viral compreendida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, um método para redução do número de animais com carga viral acima de 106 genomas por ml de soro dentro de um rebanho subclinicamente infec- tado, um método para redução de depósito de vírus nasal, um método para 15 redução da duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, um método para a redução da taxa de morbidez dentro de um reba- nho subclinicamente infectado, um método para a redução da taxa de morta- lidade dentro de um rebanho subclinicamente infectado compreendendo a etapa de administrar uma quantidade eficaz de antígeno de PCV2 a um ani- 20 mal em necessidade de tal administração, no qual referida composição imu- nogênica compreendendo um antígeno de PCV2 é Ingelvac® CircoFLEX®, CircoVac®, CircoVent e/ou Suvaxyn PCV-2 One Dose®, preferivelmente ela é Ingelvac® CircoFLEX®.

O termo "uma quantidade eficaz de antígeno de PCV2", confor- 25 me aqui usado, significa, mas não é limitada a, uma quantidade de antígeno de PCV2, que induz ou é capaz de induzir uma resposta imune em um ani- mal, ao qual referida quantidade eficaz de antígeno de PCV2 é administrada. A quantidade que é eficaz depende dos ingredientes da vacina e da tabela de administração. Tipicamente, quando um vírus inativado ou uma prepara- 30 ção de vírus vivo modificada é usada na vacina de combinação, uma quanti- dade da vacina contendo cerca de 102,0 a cerca de 109,0 de TCID50 por dose, preferivelmente cerca de 103,0 a cerca de 108,0 de TCID50 por dose, mais pre- ferivelmente, cerca de 104,0 a cerca de 108,0 de TCID50por dose. Em particu- lar, quando PCV2 vivo modificado é usado nas vacinas, a dose recomenda- da a ser administrada ao animal susceptível é preferivelmente cerca de 103,0 de TCID50 (ponto final de 50% de dose infectiva de cultura)/dose a cerca de 5 106 0 de TCID50/dose e, mais preferivelmente, cerca de 104,0 de TCID50/dose a cerca de 105,0 de TCID50/dose. Em geral, a quantidade de antígeno será entre 0,2 e 5000 microgramas, e entre 102,0 e 109,0 de TCID50, preferivelmen- te entre 103,0 e 106,0 de TCID50, mais preferivelmente entre 104,0 e 105,0 de TCID50, quando antígeno purificado é usado.

Vacinas de subunidade são normalmente administradas com um

nível de inclusão de antígeno de pelo menos 0,2 μg de antígeno por dose, preferivelmente com cerca de 0,2 a cerca de 400 μg/dose, ainda mais prefe- rivelmente com cerca de 0,3 a cerca de 200 μg/dose, ainda mais preferivel- mente com cerca de 0,35 a cerca de 100 μg/dose, ainda mais preferivelmen- 15 te com cerca de 0,4 a cerca de 50 μg/dose, ainda mais preferivelmente com cerca de 0,45 a cerca de 30 μg/dose, ainda mais preferivelmente com cerca de 0,6 a cerca de 16 μg/dose, ainda mais preferivelmente com cerca de 0,75 a cerca de 8 μg/dose, ainda mais preferivelmente com cerca de 1,0 a cerca de 6 μg/dose, ainda mais preferivelmente com cerca de 1,3 a cerca de 3,0 20 μg/dose.

Imunidade maternalmente derivada foi mostrada conferir um cer- to grau de proteção contra infecção de PCV2 e doenças clínicas associadas com infecção de PCV2s. Esta proteção foi mostrada ser titulação dependen- te de: titulações mais altas são geralmente protetoras, pelo que titulações 25 mais baixas não são (McKeown et al., 2005; Clin. Diagn. Lab. Immunol.; 12: 1347-1351). A meia-vida média de anticorpo em recém-desmamados foi es- timada ser 19,0 dias, e a janela para queda de anticorpo passivo de PCV2 dentro de uma população é relativamente ampla (Opriessnig et al. 2004, J. Swine Health Prod. 12:186-191). A presença de anticorpo derivado maternal 30 não somente pode conferir um certo grau de proteção contra infecções vi- rais, que, contudo, não é prognosticável, mas também é conhecido prejudi- car a eficácia de imunização. Foi surpreendentemente verificado que a pre- sença de anticorpos anti-PCV2, em particular de titulações de anticorpo anti- PCV2 de até 1:1000, não afeta a eficácia do tratamento de PCV2.

Desse modo, de acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica de PCV2, um método para aumentar ganho de peso médio em um animal ou um grupo de animais (rebanho) subclinicamente infectado com PCV2, um método para redução do número de animais com carga viral compreendida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, um método para redução do número de animais com carga viral acima de 106 genomas por ml de soro dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método para redução de depósito de vírus nasal, um método para redução da duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, um método para a redu- ção da taxa de morbidez dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método para a redução da taxa de mortalidade dentro de um rebanho subclinicamente infectado, todos compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um ani- mal em necessidade de tal administração, no qual os animais no momento da vacinação têm anticorpos anti-PCV2, preferivelmente no qual referidos animais têm no momento da vacinação uma titulação de anticorpo anti-PCV2 detectável de até 1:100, preferivelmente de mais do que 1:100, ainda mais preferivelmente de mais do que 1:250, ainda mais preferivelmente de mais do que 1:500, ainda mais preferivelmente de 1:640; ainda mais preferivel- mente de mais do que 1:750, mais preferivelmente de mais do que 1:1000. Preferivelmente, a titulação de anticorpo anti-PCV2 é detectável e quantifi- cável em um ensaio imune de anti-PCV2 específico, preferivelmente no en- saio conforme descrito no Exemplo 2.

Métodos para detecção e quantificação de anticorpos de anti- PCV2 são bem-conhecidos na técnica. Por exemplo, detecção e quantifica- ção de anticorpos de PCV2 podem ser realizadas por imunofluorescência indireta conforme descrito em Magar et al., 2000, Can. J. Vet Res. ; 64: 184- 186 ou Magar et al., 2000, J. Comp. Pathol.; 123: 258-269. Ensaios adicio- nais para quantificação de anticorpos anti-PCV2 são descritos em Opriess- nig et al., 2006, 37th Annual Meeting of the American Association of Swine Veterinarians. Além disso, o exemplo 2 também descreve um ensaio de i- munofluorescência indireta, que pode ser usado por um técnico no assunto.

Em casos de resultados controversos e em qualquer questão de dúvida, titu- lações de anti-PCV2 conforme mencionadas aqui, se referem àquelas que são/podem ser estimadas pelo ensaio conforme descrito no Exemplo 2.

Desse modo, de acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica 10 de PCV2, um método para aumentar ganho de peso médio em um animal ou um grupo de animais (rebanho) subclinicamente infectados com PCV2, um método para redução do número de animais com carga viral compreendida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, um método para redução do número de animais com carga viral acima de 106 genomas por ml de soro 15 dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método para redução de depósito de vírus nasal, um método para redução da duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, um método para a redu- ção da taxa de morbidez dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método para a redução da taxa de mortalidade dentro de um rebanho 20 subclinicamente infectado, todos compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um ani- mal jovem em necessidade de tal administração.

O termo "animal jovem", conforme aqui usado, se refere a um 25 animal de 1 a 22 dias de idade. Preferivelmente, pelo termo animal jovem, um animal de 1 a 20 dias de idade é significativo. Mais preferivelmente, o termo animal jovem se refere a um animal de 1 a 15 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 dia de idade a 14 dias de idade, ainda mais prefe- rivelmente de 1 a 12 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 10 30 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 8 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 7 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 6 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 5 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 4 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 3 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 ou 2 dia(s) de idade, mais preferivelmente a um animal de 1 dia de idade.

Devido à ubiquidade de PCV2 no campo, muitos dos leitões jo- 5 vens são soropositivo em relação a PCV2. Desse modo, de acordo com um aspecto adicional, referidos animais jovens, no dia de vacinação/tratamento, têm uma titulação de anticorpo anti-PCV2 detectável de até 1:100, preferi- velmente de mais do que 1:100, ainda mais preferivelmente de mais do que 1:250, ainda mais preferivelmente de mais do que 1:500, ainda mais preferi- 10 velmente de 1:640, ainda mais preferivelmente de mais do que 1:750, mais preferivelmente de mais do que 1:1000 no dia de vacinação/tratamento.

A composição, de acordo com a invenção, pode ser aplicada intradermalmente, intratraquealmente, ou intravaginamente. A composição preferivelmente pode ser aplicada intramuscularmente ou intranasalmente, 15 mais preferivelmente intramuscularmente. Em um corpo do animal, isto pode se comprovar vantajoso suprir as composições farmacêuticas conforme des- critas acima, via uma injeção intravenosa ou por injeção direta nos tecidos- alvo. Para aplicação sistêmica, as vias intravenosa, intravascular, intramus- cular, intranasal, intra-arterial, intraperitoneal, oral, ou intratecal são preferi- 20 das. Uma aplicação mais local pode ser efetuada subcutaneamente, intra- dermalmente, intracutaneamente, intracardialmente, intralobalmente, intra- medularmente, intrapulmonarmente ou diretamente em ou perto do tecido a ser tratado (tecido conectivo-, ósseo-, muscular-, nervoso-, epitelial). Depen- dendo da duração desejada e eficiência do tratamento, as composições, de 25 acordo com a invenção, podem ser administradas uma vez ou várias vezes, também intermitentemente, por exemplo, em uma base diária por vários di- as, semanas ou meses e em dosagens diferentes.

Preferivelmente, pelo menos uma dose da composição imuno- gênica conforme descrita acima é intramuscularmente administrada ao indi- víduo em necessidade desta. De acordo com um outro aspecto, o antígeno de PCV2, ou a composição imunogênica compreendendo qualquer tal antí- geno de PCV2, conforme descrito aqui, é engarrafada em e administrada em um (1) mL a cinco (5) ml por dose, preferivelmente a 1 ml por dose. Desse modo, de acordo com outro aspecto, a presente invenção também propor- ciona 1 ml a 5 ml, preferivelmente 1 ml de composição imunogênica, com- preendendo antígeno de PCV-2 conforme descrito aqui, para a profilaxia e 5 tratamento de infecção subclínica de PCV2 em um animal ou grupo de ani- mais (rebanhos), para aumentar o ganho de peso médio em um animal ou um grupo de animais (rebanho) subclinicamente infectado com PCV2, redu- ção do número de animais com carga viral compreendida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, redução do número de animais com carga 10 viral acima de 106 genomas por ml de soro dentro de um rebanho subclini- camente infectado, redução de depósito de vírus nasal e redução da dura- ção de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, um méto- do para a redução de taxa de morbidez dentro de um rebanho subclinica- mente infectado, um método para a redução da taxa de mortalidade dentro 15 de um rebanho subclinicamente infectado, todos compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal administração. A presente invenção tam- bém se refere a um método para a profilaxia e tratamento de infecção sub- 20 clínica de PCV2 em um animal ou grupo de animais (rebanhos), um método para aumentar ganho de peso médio em um animal ou um grupo de animais (rebanho) subclinicamente infectados com PCV2, um método para redução do número de animais com carga viral compreendida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, um método para a redução do número de ani- 25 mais com carga viral acima de 106 genomas por ml de soro dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método para redução de depósito de vírus nasal, um método para redução da duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, um método para a redução da taxa de morbidez dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método 30 para a redução da taxa de mortalidade dentro de um rebanho subclinicamen- te infectado, todos compreendendo a etapa de administrar 1 a 5 ml, preferi- velmente 1 ml de uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal administração.

De acordo com um aspecto adicional, pelo menos uma adminis- tração adicional de pelo menos uma dose da composição imunogênica, con- forme descrita acima, é dada a um indivíduo em necessidade desta, no qual a segunda ou qualquer outra administração é dada pelo menos 14 dias além da administração inicial ou quaisquer primeiras administrações. Preferivel- mente, a composição imunogênica é administrada com um estimulante imu- ne. Preferivelmente, referido estimulante imune é dado pelo menos duas vezes. Preferivelmente, pelo menos 3 dias, mais preferivelmente pelo menos dias, ainda mais preferivelmente pelo menos 7 dias estão entre a primeira e a segunda ou qualquer administração adicional do estimulante imune. Pre- ferivelmente, o estimulante imune é dado pelo menos 10 dias, preferivelmen- te 15 dias, ainda mais preferivelmente 20, ainda mais preferivelmente pelo menos 22 dias além da administração inicial da composição imunogênica provida aqui. Um estimulante imune preferido é, por exemplo, hemocianina de lapa de buraco de fechadura (KLH), preferivelmente emulsificada com adjuvante incompleto de Freund (KLH/ICFA). Contudo, é compreendido aqui que qualquer outro estimulante imune conhecido a um técnico no assunto pode também ser usado. O termo "estimulante imune" conforme aqui usado, significa qualquer agente ou composição que pode disparar a resposta imu- ne, preferivelmente sem iniciar ou aumentar uma resposta imune específica, por exemplo, a resposta imune contra uma patogenia específica. É adicio- nalmente instruído administrar o estimulante imune em uma dose adequada. A presente invenção também se refere ao uso de um antígeno

de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo antígeno de PCV2 para a preparação de um remédio para a profilaxia e tratamento de infecção de PCV2 crônica em um animal ou grupo de animais (rebanhos), para aumentar ganho de peso médio em um animal ou um grupo de animais 30 (rebanho) subclinicamente infectados com PCV2, redução do número de animais com carga viral compreendida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, redução do número de animais com carga viral acima de 106 ge- nomas por ml de soro dentro de um rebanho subclinicamente infectado, re- dução de depósito de vírus nasal, redução da duração de viremia em ani- mais subclinicamente infectados com PCV2, método para redução da taxa de morbidez dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método 5 de redução da taxa de mortalidade dentro de um rebanho subclinicamente infectado. Preferivelmente, o antígeno de PCV2 é um antígeno recombinan- te, preferivelmente PCV2 ORF-2, ainda mais preferivelmente Ingelvac® Cir- coFLEX®.

O "animal", conforme aqui usado, significa suíno, porco ou leitão. Desse modo, de acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a profilaxia e tratamento de infecção subclínica de PCV2 em porcos, um método para aumentar ganho de peso médio em um animal ou um grupo de animais (rebanho) subclinicamente infectados com PCV2, um método para redução do número de animais com carga viral compreen- dida entre 104 a 106 cópias de genoma por ml de soro, um método para a redução do número de animais com carga viral acima de 106 genomas por ml de soro dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método pa- ra redução de depósito de vírus nasal, um método para redução da duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, um método para a redução da taxa de morbidez dentro de um rebanho subclinicamente infectado, um método para a redução da taxa de mortalidade dentro de um rebanho subclinicamente infectado, todos compreendendo a etapa de admi- nistrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a por- cos em necessidade de tal administração. Preferivelmente, o antígeno de PCV2 ou composição imunogênica compreendendo antígeno de PCV2 é qualquer um daqueles descritos supra, mais preferivelmente o antígeno de PCV2 é Ingelvac® CircoFLEX®.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS CONCRETIZAÇÕES PREFERIDAS Os seguintes exemplos mostram os materiais preferidos e pro-

cedimentos de acordo com a presente invenção. Embora quaisquer métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles aqui descritos possam ser u- sados na prática ou teste da presente invenção, os métodos preferidos, dis- positivos, e materiais são agora descritos. É para ser compreendido, contu- do, que estes exemplos são providos por meio de ilustração somente, e na- da aqui deve ser considerado uma limitação sob o escopo total da invenção.

EXEMPLO 1

Preparação de antígeno de PCV2 ORF-2

Culturas de célula SF+ iniciais de armazenamento de nitrogênio líquido foram crescidas em meio Excell 420 (JRH Biosciences, Inc., Lenexa, KS) em suspensão em frascos rotativos estéreis com agitação constante. As 10 culturas foram crescidas em frascos rotativos de 100 mL a 250mL com 25 a 150 mL de meio livre de soro Excell 420. Quando as células se multiplicam a uma densidade de célula de 1,0 - 8,0 x 106 células/mL, elas foram divididas em novos vasos com uma densidade de plantio de 0,5 - 1,5 x 106 célu- las/mL. As culturas de expansão subsequentes foram crescidas em frascos 15 rotativos até 36 litros em tamanho, ou em biorreatores de aço inoxidável de até 300 litros por um período de 2-7 dias a 25 - 29°C.

Após semeadura, os frascos foram incubados a 27°C por quatro horas. Subsequentemente, cada frasco foi semeado com um baculovírus recombinante contendo o gene de PCV2 ORF-2 (SEQ ID NO: 4). O baculoví- 20 rus recombinante contendo o gene de PCV2 ORF-2 foi gerado conforme descrito em W006/072065. Após serem semeados com o baculovírus, os frascos foram, em seguida, incubados a 27 ± 2°C por 7 dias, e foram tam- bém agitados a 100 rpm durante este tempo. Os frascos usam tampas venti- ladas para permitir fluxo de ar.

Após incubação, os sobrenadantes resultantes foram colhidos,

filtrados de modo a remover fragmentos de célula, e inativados. O sobrena- dante foi inativado trazendo-se sua temperatura para 37 ± 2°C e etililenimina binária (BEI) é adicionada ao sobrenadante a uma concentração final de 5 mM. As amostras foram, em seguida, agitadas continuamente por 72 a 96 30 horas. Uma solução de tiossulfato de sódio a 1,0 M para dar uma concentra- ção mínima final de 5 mM foi adicionada para neutralizar qualquer BEI resi- dual. Após inativação, PCV2 ORF-2 tamponado com tampão de fosfato e Carpopol foi adicionado a cerca de 0,5 a 2,5 mg/dose. A dose final compre- ende cerca de 16 μg de antígeno de PCV2 ORF-2.

EXEMPLO 2

Imunoensaio de Anti PCV-2 5 Células PK15 (por exemplo ATCC CCL-33) ou VIDO R1 descri-

tas em WO 02/07721 são semeadas em uma placa de 96 poços (cerca de 20.000 a 60.000 células por poços). As células são infectadas com um isola- do de PCV2, quando monocamadas são aproximadamente 65 a 85% con- fluentes. As células infectadas são incubadas por 48 horas. O meio é remo- 10 vido, e os poços são lavados 2 vezes com PBS. O tampão lavado é descar- tado, e as células são tratadas com fixador frio 50/50 de metanol/acetona (~100 μΙ/poço) por cerca de 15 minutos a cerca de -20°C. O fixador é des- cartado, e as placas são secadas a ar. Diluições em série de amostras de soro de suíno são preparadas em PBS, adicionadas às placas, e incubadas 15 para permitir que os anticorpos se liguem se presentes nas amostras de soro por cerca de 1 hora a 36,5±1°C. Em adição, diluições em série de uma a- mostra de controle de anti-PCV2 positiva e negativa (Amostras de Controle Positivas e Amostras de Controle Negativas) são operadas em paralelo. As placas são, em seguida, lavadas três vezes com PBS. O PBS é descartado. 20 As placas são, em seguida, manchadas com conjugado comercial Goat anti- Swine FITC diluído 1:100 em PBS, e incubadas por cerca de 1 hora a 36,5±1°C, que permite detecção de anticorpos ligados às células infectadas. Após incubação ser completada, as microplacas são removidas do incuba- dor, o conjugado é descartado, e as placas são lavadas duas vezes com 25 PBS. As placas foram lidas usando-se microscopia de UV, e os poços indivi- duais reportados como positivo ou negativo. As amostras de Controle Positi- vas e Negativas são usadas para monitorar o sistema de teste. Se os contro- les estão dentro das faixas esperadas, os resultados dos testes são aceitá- veis em relação aos parâmetros de método de teste. As titulações de anti- 30 corpo de soro foram calculadas usando-se a diluição mais alta mostrando reatividade IFA específica e o número de poços positivos por diluição, ou um ponto final de 50% é calculado usando-se a fórmula de Reed-Muench apro- priada.

EXEMPLO 3

Eficácia de PCV2 ORF-2 (Ingelvac® CircoFLEX®) no tratamento de Infecção de PCV2 crônica ESTUDO OBJETIVO E PROJETO

Leitões convencionais de grupos consecutivos de cinco sema- nas, cada grupo compreendendo aproximadamente 300 animais, foram in- cluídos neste estudo. Os animais foram igualmente distribuídos entre dois grupos de tratamento com relação ao peso corpóreo inicial e indicação em 10 litro. No dia de desmame, um grupo (n=775) foi vacinado com Ingelvac® Cir- coFLEX, contendo o teor de antígeno de liberação mínimo, e o outro grupo de leitões (n=773) recebeu produto de controle (solução salina fisiológica). A vacina e o produto de controle (CP) foram dados como uma dose simples de

1 ml intramuscularmente na região direita do pescoço quando os leitões ti- nham aproximadamente 21 dias de idade.

Pesos corpóreos vivos individuais de todos os animais de estudo foram cole- tados. Observações clínicas com relação a sintomas associados a PCV2 foram realizadas e desvios de forma normal de saúde geral foram registra- dos em uma base de animal individual.

Amostras de soro e secreções nasais foram analisadas quantita-

tivamente por Reação de Cadeia de Polimerase (PCR) para a presença de PCV2. Em adição, as titulações de anticorpo de PCV2 de todos os animais de estudo no momento de vacinação e a partir dos mesmos 5% dos animais de estudo pré-selecionados foram analisadas por um teste de Titulação de 25 Anticorpo Fluorescente Indireta (IFAT) conforme descrito no Exemplo 2. Confirmação do estado crônico (subclínico) do local de estudo:

O primeiro diagnóstico de PCVD na fazenda foi feito 4 meses antes da performance do estudo. A taxa de mortalidade de 14,1 % e a pre- sença de animais nanicos na unidade de engorda foram identificadas. O de- 30 sempenho de crescimento foi preferivelmente baixo (644 g/d). A presença de uma infecção de PCV2 foi confirmada por exame histológico. A amostra do pulmão mostrou pneumonia intersticial, e PCV-2 foi identificado por IHC en- tre as lesões.

Quando se observa na figura 1, pode ser visto que a taxa de mortalidade na engorda diminuiu consideravelmente de 14,1% a 8,1% suge- rindo uma alteração de uma infecção aguda de PCVD para infecção subclí- nica.

Confirmação da infecção subclínica dos animais de estudo

A alteração para infecção subclínica na fazenda foi confirmada pelos resultados obtidos durante o estudo. Os animais de estudo foram ca- racterizados por uma carga viral subclínica predominante, uma taxa de mor- talidade baixa (abaixo de 10%) e uma taxa de morbidez baixa (abaixo de 10%).

RESULTADOS

Viremia

A proporção mais alta de animais virêmicos foi observada na 15 semana de estudo 14 com 55,5% de animais virêmicos no grupo tratado com CP e aproximadamente 10% de animais virêmicos no grupo vacinado. Conforme mostrado nas figuras 4 e 5, a maioria dos animais em ambos gru- pos de tratamento tinha somente cargas virais subclínicas (definidas como IO4-IO6 equivalentes genômicos por ml). A proporção mais alta de animais 20 com cargas de PCV2 clinicamente relevantes (> 106 equivalentes genômicos por ml) foi 2,52% para animais tratados CP e 0,87% para animais vacinados. Mortalidade

A taxa de mortalidade antes e após começo de viremia foi prefe- rivelmente baixa. Antes do começo da viremia, a taxa de mortalidade foi 25 1,55% nos animais vacinados, e 2,19% nos animais tratados por CP. Após o começo de viremia, um aumento na taxa de mortalidade foi observado em animais tratados por CP (de 1,55% a 3,02%), pelo que a taxa de mortalidade em animais vacinados foi levemente diminuída comparada ao tempo antes do começo de viremia (de 2,19% a 1,98%). As diferenças na taxa de morta- 30 Iidade entre ambos os grupos de tratamento antes e após o começo de vi- remia não alcançaram significância estatística.

Sinais Clínicos Antes do começo de viremia, somente poucos sinais clínicos foram detectados em ambos os grupos de tratamento com incidências abai- xo de 1% para cada um dos parâmetros analisados. O começo de viremia foi acompanhado por uma coinfecção com PRRSV e Mycoplasma hyopneumo- 5 niae. Contudo, nem PCV2 nem qualquer outra patogenia co-infecciosa cau- saram sinais clínicos severos. Consequentemente, a proporção de animais com sintomas respiratórios, tais como tosse e/ou dispnéia, foi somente 3,9% e 0,7% no grupo tratado por CP, e 3,0% e 0,4% no grupo vacinado. A fre- quência de outras descobertas clínicas foi sempre abaixo de 1%, e não dife- 10 rente entre os grupos de tratamento.

Frequência de Animais Nanicos

Nenhuma diferença significante na frequência de ‘animais nani- cos’ pode ser observada entre o grupo vacinado e o grupo tratado com pla- cebo em qualquer dos respectivos pontos de tempo de pesagem. Após o começo total de viremia de PCV2, a frequência de ‘animais nanicos’ foi ge- ralmente baixa em ambos os grupos de tratamento (3,3-4,7%).

Tabela 1: Comparação da frequência de ‘animais nanicos’ (dados reunidos de todos os grupos de três semanas)

Antes do Começo de viremia Após começo de viremia Semana 0 7 12 17 22 de estudo CP 11,51% 11,94% 5,68% 4,72% 4,53% IVP 10,84% 10,46% 4,78% 3,36% 3,27% P 0,6874 0,3728 0,4884 0,1898 0,2259 P: valor p de teste t para comparação entre grupos; p>0,05 não significante Impacto de infecção subclínica nos desempenhos de crescimento O ganho de peso corpóreo até a semana de estudo 17 foi 2,36

kg mais alto, e até a semana de estudo 19 foi 2,39 kg mais alto no grupo vacinado do que no grupo tratado por CP. Conforme mostrado na figura 3, a diferença de peso corpóreo começou a se elevar levemente no momento do começo de viremia (semana de estudo 12). Na semana de estudo 17, a dife- 25 rença alcançou já 2,36 kg. Devido ao ganho de peso mais alto, o tempo mé- dio de desmame para matança foi 1,9 dias mais curto para os animais vaci- nados do que para os animais tratados por CP. Tabela 2: Comparação de Ganho de peso e ADWG (dados reunidos para todos os grupos de cinco semanas) Semana de estudo Grupo tratado por Grupo Vacinado Diferença Valor 11) CP (LS Médio) (LS Médio) (IVP menos CP) Ganho de peso 0-7 20,3 kg 20,71 kg 0,8 kg 0,7166 ns 0-17 76,73 kg 79,09 2,36 kg <0,0001*** 0-19 86,75 kg 89,14 kg 2,39 kg <0,0001*** 12-17 29,05 kg 30,73 kg 1,68 kg <0,0001*** 7-19 66,07 kg 68,38 2,31 kg <0,0001*** 1) valor p de teste t para comparação entre grupos, ns: não significante; * significante, p < 0,05; ***significante, p < 0,001 Duração de viremia no sangue

Quando se compara a média total e duração média de viremia nos dois grupos de tratamento, uma duração mais longa significante (p =

0,0003) de viremia foi detectada nos animais tratados por CP. O grupo IVP tinha uma duração média de viremia de 5,8 dias, enquanto o grupo CP mos- trou uma duração média de 21,8 dias. Isto corresponde a uma duração re- duzida de viremia por 73% no grupo IVP.

Tabela 3: Média e duração média de viremia

Grupo de Número Média Média Valor p Tratamento de porcos (dias) (dias) Total CP 76 21,8 14,0 0,0003 IVP 18 5,8 0,0 IVP menos CP -16,0 -14,0 valor p de teste t para comparação entre grupos, ns: não significante, p > 0,05; ‘significante, p < 0,05 CONCLUSÃO

O estudo foi conduzido em uma fazenda que mudou de um es-

tado agudo para um estudo crônico com infecção subclínica curtamente an- tes da implementação do estudo. A carga viral dos animais de estudo duran- te o estudo confirmou esta suposição. Muitos poucos animais de estudo (<2,19 %) tinham carga viral no soro acima do "corte clínico" de 106/ml de cópias genômicas.

A vacinação se sucedeu abaixando tremendamente a percenta- gem de animais infectados no grupo vacinado. Portanto, a vacinação capaci- tou a comparação de animais não infectados (grupo vacinado) com animais subclinicamente infectados (grupo de placebo). Os animais vacinados 20 demonstraram melhores desempenhos de crescimento do que animais subclinicamente infectados. Na semana de estudo 17, a diferença alcan- çou já 2,36 kg. Os animais vacinados tinham uma duração mais curta de 16 dias de viremia conforme comparado ao grupo não-vacinado.

Pode ser concluído que embora os animais infectados permane- çam aparentemente saudáveis, a infecção subclínica de PCV2 pode ter um impacto negativo relevante nos desempenhos de crescimento. LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

<110> BOEHRINGER INGELHEIM VETMEDICA INC.

<120> PREVENÇÃO E TRATAMENTO DE PCVD SUBCLÍNICA

<130> P01-2179

<160> 11

<170> PatentIn versão 3.3

<210> 1

<211> 8

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> Esta é um seqüência de Kozak modificada.

<4 00> 1

ccgccatg 8

<210> 2

<211> 6

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> Esta é uma seqüência Eco Rl recombinante.

<400> 2

gaattc 6

<210> 3 <211> 713 <212> DNA <213> Circovirus suino <4 00> 3 cagctatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60 ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120 gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtggaga 180 aggaaaaatg gcatcttcaa cacccgcctc tcccgcacct tcggatatac tgtgacgact 240 ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 300 gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360 gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420 acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480 gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540 aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600 gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660 tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttaa accctaaatg aat 713 <210> 4 <211> 713 <212> DNA <213> Circovirus suíno <400> 4 ccgccatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60 ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120 gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc ctaccacagt cacaacgccc tcctgggcgg ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct gctccactgc tgttattcta gatgataact acccatatgt aaactactcc tcccgccata gttacttcac acccaaacct gttcttgact aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc tacaattcag agaatttaat cttaaagacc

tctcccgcac cttcggatat actgtcaagg tggacatgat gagatttaat attgacgact tctctatacc ctttgaatac tacagaataa cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg caatccccca acccttctcc taccactccc ccactattga ttacttccaa ccaaataaca cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg aggactacaa tatccgtgta accatgtatg ccccacttga accctaagaa ttc

<210> 5 <211> 233 <212> PRT

<213> Circovírus suíno <400> 5

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 10 15

Ser His Leu Gly Gln He Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro 20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly He Phe Asn Thr Arg 35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr 50 55 60

Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn He Asp Asp Phe Val 65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys He Ser He Pro Phe Glu Tyr Tyr 85 90 95

Arg He Arg Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro He Thr 100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val He Leu Asp Asp Asn 115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr 130 135 140

Ser Ser Arg His Thr He Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr He Asp Tyr Phe Gln Pro 165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn 180 185 190

Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp 195 200 205

Gln Asp Tyr Asn He Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe 210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro 225 230

180

240

300

360

420

480

540

600

660

713

<210> 6 <211> 233 <212> PRT

<213> Circovírus suíno <400> 6

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 10 15

Ser His Leu Gly Gln He Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro 20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly He Phe Asn Thr Arg 35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr 50 55 60

Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn He Asp Asp Phe Val 65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys He Ser He Pro Phe Glu Tyr Tyr 85 90 95

Arg He Arg Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro He Thr 100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val He Leu Asp Asp Asn 115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr 130 135 140

Ser Ser Arg His Thr He Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr He Asp Tyr Phe Gln Pro 165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn 180 185 190

Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp 195 200 205

Gln Asp Tyr Asn He Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe 210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Glu Pro 225 230

<210> 7

<211> 756

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> Esta seqüência é de circovírus suíno tipo 2, estrutura de leitura aberta 2, junto com uma porção a partir do vetor pGEM T-fácil.

<400> 7

gcggccgcgg gaattcgatc cgccatgacg tatccaagga ggcgttaccg cagaagaaga caccgccccc gcagccatct tggccagatc ctccgccgcc gcccctggct cgtccacccc cgccaccgct accgttggag aaggaaaaat ggcatcttca acacccgcct ctcccgcacc

60

120

180 ttcggatata ctgtcaaggc taccacagtc acaacgccct cctgggcggt ggacatgatg 240

agatttaata ttgacgactt tgttcccccg ggagggggga ccaacaaaat ctctataccc 300

tttgaatact acagaataag aaaggttaag gttgaattct ggccctgctc ccccatcacc 360

cagggtgata ggggagtggg ctccactgct gttattctag atgataactt tgtaacaaag 420

gccacagccc taacctatga cccatatgta aactactcct cccgccatac aatcccccaa 480

cccttctcct accactcccg ttacttcaca cccaaacctg ttcttgactc cactattgat 540

tacttccaac caaataacaa aaggaatcag ctttggctga ggctacaaac ctctagaaat 600

gtggaccacg taggcctcgg cactgcgttc gaaaacagta aatacgacca ggactacaat 660

atccgtgtaa ccatgtatgt acaattcaga gaatttaatc ttaaagaccc cccacttgaa 720

ccctaagaat tctatcacta gtgaattcgc ggccgc 756

<210> 8 <211> 10387 <212> DNA <213> Artificial

<220>

<223> Esta é ο circovírus suíno tipo 2, construção ORF-2, que inclui baculovírus e seqüências de codificação pGEM T-fácil.

<400> 8

aagctttact cgtaaagcga gttgaaggat catatttagt tgcgtttatg agataagatt 60

gaaagcacgt gtaaaatgtt tcccgcgcgt tggcacaact atttacaatg cggccaagtt 120

ataaaagatt ctaatctgat atgttttaaa acacctttgc ggcccgagtt gtttgcgtac 180

gtgactagcg aagaagatgt gtggaccgca gaacagatag taaaacaaaa ccctagtatt 240

ggagcaataa tcgatttaac caacacgtct aaatattatg atggtgtgca ttttttgcgg 300

gcgggcctgt tatacaaaaa aattcaagta cctggccaga ctttgccgcc tgaaagcata 360

gttcaagaat ttattgacac ggtaaaagaa tttacagaaa agtgtcccgg catgttggtg 420

ggcgtgcact gcacacacgg tattaatcgc accggttaca tggtgtgcag atatttaatg 480

cacaccctgg gtattgcgcc gcaggaagcc atagatagat tcgaaaaagc cagaggtcac 540

aaaattgaaa gacaaaatta cgttcaagat ttattaattt aattaatatt atttgcattc 600

tttaacaaat actttatcct attttcaaat tgttgcgctt cttccagcga accaaaacta 660

tgcttcgctt gctccgttta gcttgtagcc gatcagtggc gttgttccaa tcgacggtag 720

gattaggccg gatattctcc accacaatgt tggcaacgtt gatgttacgt ttatgctttt 780

ggttttccac gtacgtcttt tggccggtaa tagccgtaaa cgtagtgccg tcgcgcgtca 840

cgcacaacac cggatgtttg cgcttgtccg cggggtattg aaccgcgcga tccgacaaat 900

ccaccacttt ggcaactaaa tcggtgacct gcgcgtcttt tttctgcatt atttcgtctt 960

tcttttgcat ggtttcctgg aagccggtgt acatgcggtt tagatcagtc atgacgcgcg 1020

tgacctgcaa atctttggcc tcgatctgct tgtccttgat ggcaacgatg cgttcaataa 1080

actcttgttt tttaacaagt tcctcggttt tttgcgccac caccgcttgc agcgcgtttg 1140

tgtgctcggt gaatgtcgca atcagcttag tcaccaactg tttgctctcc tcctcccgtt 1200

gtttgatcgc gggatcgtac ttgccggtgc agagcacttg aggaattact tcttctaaaa 1260

gccattcttg taattctatg gcgtaaggca atttggactt cataatcagc tgaatcacgc 1320

cggatttagt aatgagcact gtatgcggct gcaaatacag cgggtcgccc cttttcacga 1380

cgctgttaga ggtagggccc ccattttgga tggtctgctc aaataacgat ttgtatttat 1440

tgtctacatg aacacgtata gctttatcac aaactgtata ttttaaactg ttagcgacgt 1500

ccttggccac gaaccggacc tgttggtcgc gctctagcac gtaccgcagg ttgaacgtat 1560

cttctccaaa tttaaattct ccaattttaa cgcgagccat tttgatacac gtgtgtcgat 1620

tttgcaacaa ctattgtttt ttaacgcaaa ctaaacttat tgtggtaagc aataattaaa 1680

tatgggggaa catgcgccgc tacaacactc gtcgttatga acgcagacgg cgccggtctc 1740

ggcgcaagcg gctaaaacgt gttgcgcgtt caacgcggca aacatcgcaa aagccaatag 1800

tacagttttg atttgcatat taacggcgat tttttaaatt atcttattta ataaatagtt 1860

atgacgccta caactccccg cccgcgttga ctcgctgcac ctcgagcagt tcgttgacgc 1920

cttcctccgt gtggccgaac acgtcgagcg ggtggtcgat gaccagcggc gtgccgcacg 1980

cgacgcacaa gtatctgtac accgaatgat cgtcgggcga aggcacgtcg gcctccaagt 2040

ggcaatattg gcaaattcga aaatatatac agttgggttg tttgcgcata tctatcgtgg 2100

cgttgggcat gtacgtccga acgttgattt gcatgcaagc cgaaattaaa tcattgcgat 2160

tagtgcgatt aaaacgttgt acatcctcgc ttttaatcat gccgtcgatt aaatcgcgca 2220

atcgagtcaa gtgatcaaag tgtggaataa tgttttcttt gtattcccga gtcaagcgca 2280

gcgcgtattt taacaaacta gccatcttgt aagttagttt catttaatgc aactttatcc 2340

aataatatat tatgtatcgc acgtcaagaa ttaacaatgc gcccgttgtc gcatctcaac 2400

acgactatga tagagatcaa ataaagcgcg aattaaatag cttgcgacgc aacgtgcacg 2460

atctgtgcac gcgttccggc acgagctttg attgtaataa gtttttacga agcgatgaca 2520

tgacccccgt agtgacaacg atcacgccca aaagaactgc cgactacaaa attaccgagt 2580

atgtcggtga cgttaaaact attaagccat ccaatcgacc gttagtcgaa tcaggaccgc 2640 tggtgcgaga agccgcgaag tatggcgaat gcatcgtata acgtgtggag tccgctcatt 2700

agagcgtcat gtttagacaa gaaagctaca tatttaattg atcccgatga ttttattgat 2760

aaattgaccc taactccata cacggtattc tacaatggcg gggttttggt caaaatttcc 2820

ggactgcgat tgtacatgct gttaacggct ccgcccacta ttaatgaaat taaaaattcc 2880

aattttaaaa aacgcagcaa gagaaacatt tgtatgaaag aatgcgtaga aggaaagaaa 2940

aatgtcgtcg acatgctgaa caacaagatt aatatgcctc cgtgtataaa aaaaatattg 3000

aacgatttga aagaaaacaa tgtaccgcgc ggcggtatgt acaggaagag gtttatacta 3060

aactgttaca ttgcaaacgt ggtttcgtgt gccaagtgtg aaaaccgatg tttaatcaag 3120

gctctgacgc atttctacaa ccacgactcc aagtgtgtgg gtgaagtcat gcatctttta 3180

atcaaatccc aagatgtgta taaaccacca aactgccaaa aaatgaaaac tgtcgacaag 3240

ctctgtccgt ttgctggcaa ctgcaagggt ctcaatccta tttgtaatta ttgaataata 3300

aaacaattat aaatgctaaa tttgtttttt attaacgata caaaccaaac gcaacaagaa 3360

catttgtagt attatctata attgaaaacg cgtagttata atcgctgagg taatatttaa 3420

aatcattttc aaatgattca cagttaattt gcgacaatat aattttattt tcacataaac 3480

tagacgcctt gtcgtcttct tcttcgtatt ccttctcttt ttcatttttc tcctcataaa 3540

aattaacata gttattatcg tatccatata tgtatctatc gtatagagta aattttttgt 3600

tgtcataaat atatatgtct tttttaatgg ggtgtatagt accgctgcgc atagtttttc 3660

tgtaatttac aacagtgcta ttttctggta gttcttcgga gtgtgttgct ttaattatta 3720

aatttatata atcaatgaat ttgggatcgt cggttttgta caatatgttg ccggcatagt 3780

acgcagcttc ttctagttca attacaccat tttttagcag caccggatta acataacttt 3840

ccaaaatgtt gtacgaaccg ttaaacaaaa acagttcacc tcccttttct atactattgt 3900

ctgcgagcag ttgtttgttg ttaaaaataa cagccattgt aatgagacgc acaaactaat 3960

atcacaaact ggaaatgtct atcaatatat agttgctgat atcatggaga taattaaaat 4020

gataaccatc tcgcaaataa ataagtattt tactgttttc gtaacagttt tgtaataaaa 4080

aaacctataa atattccgga ttattcatac cgtcccacca tcgggcgcgg atcagatctg 4140

cagcggccgc gggaattcga tccgccatga cgtatccaag gaggcgttac cgcagaagaa 4200

gacaccgccc ccgcagccat cttggccaga tcctccgccg ccgcccctgg ctcgtccacc 4260

cccgccaccg ctaccgttgg agaaggaaaa atggcatctt caacacccgc ctctcccgca 4320

ccttcggata tactgtcaag gctaccacag tcacaacgcc ctcctgggcg gtggacatga 4380

tgagatttaa tattgacgac tttgttcccc cgggaggggg gaccaacaaa atctctatac 4440

cctttgaata ctacagaata agaaaggtta aggttgaatt ctggccctgc tcccccatca 4500

cccagggtga taggggagtg ggctccactg ctgttattct agatgataac tttgtaacaa 4560

aggccacagc cctaacctat gacccatatg taaactactc ctcccgccat acaatccccc 4 620

aacccttctc ctaccactcc cgttacttca cacccaaacc tgttcttgac tccactattg 4 680

attacttcca accaaataac aaaaggaatc agctttggct gaggctacaa acctctagaa 4740

atgtggacca cgtaggcctc ggcactgcgt tcgaaaacag taaatacgac caggactaca 4800

atatccgtgt aaccatgtat gtacaattca gagaatttaa tcttaaagac cccccacttg 4860

aaccctaaga attctatcac tagtgaattc gcggccgccg gccgctccag aattctagaa 4 920

ggtacccggg atcctttcct gggacccggc aagaaccaaa aactcactct cttcaaggaa 4 980

atccgtaatg ttaaacccga cacgatgaag cttgtcgttg gatggaaagg aaaagagttc 5040

tacagggaaa cttggacccg cttcatggaa gacagcttcc ccattgttaa cgaccaagaa 5100

gtgatggatg ttttccttgt tgtcaacatg cgtcccacta gacccaaccg ttgttacaaa 5160

ttcctggccc aacacgctct gcgttgcgac cccgactatg tacctcatga cgtgattagg 5220

atcgtcgagc cttcatgggt gggcagcaac aacgagtacc gcatcagcct ggctaagaag 5280

ggcggcggct gcccaataat gaaccttcac tctgagtaca ccaactcgtt cgaacagttc 5340

atcgatcgtg tcatctggga gaacttctac aagcccatcg tttacatcgg taccgactct 5400

gctgaagagg aggaaattct ccttgaagtt tccctggtgt tcaaagtaaa ggagtttgca 5460

ccagacgcac ctctgttcac tggtccggcg tattaaaaca cgatacattg ttattagtac 5520

atttattaag cgctagattc tgtgcgttgt tgatttacag acaattgttg tacgtatttt 5580

aataattcat taaatttata atctttaggg tggtatgtta gagcgaaaat caaatgattt 5640

tcagcgtctt tatatctgaa tttaaatatt aaatcctcaa tagatttgta aaataggttt 5700

cgattagttt caaacaaggg ttgtttttcc gaaccgatgg ctggactatc taatggattt 57 60

tcgctcaacg ccacaaaact tgccaaatct tgtagcagca atctagcttt gtcgatattc 5820

gtttgtgttt tgttttgtaa taaaggttcg acgtcgttca aaatattatg cgcttttgta 5880

tttctttcat cactgtcgtt agtgtacaat tgactcgacg taaacacgtt aaataaagct 5940

tggacatatt taacatcggg cgtgttagct ttattaggcc gattatcgtc gtcgtcccaa 6000

ccctcgtcgt tagaagttgc ttccgaagac gattttgcca tagccacacg acgcctatta 6060

attgtgtcgg ctaacacgtc cgcgatcaaa tttgtagttg agctttttgg aattatttct 6120

gattgcgggc gtttttgggc gggtttcaat ctaactgtgc ccgattttaa ttcagacaac 6180

acgttagaaa gcgatggtgc aggcggtggt aacatttcag acggcaaatc tactaatggc 6240

ggcggtggtg gagctgatga taaatctacc atcggtggag gcgcaggcgg ggctggcggc 6300

ggaggcggag gcggaggtgg tggcggtgat gcagacggcg gtttaggctc aaatgtctct 6360

ttaggcaaca cagtcggcac ctcaactatt gtactggttt cgggcgccgt ttttggtttg 6420

accggtctga gacgagtgcg atttttttcg tttctaatag cttccaacaa ttgttgtctg 64 80

tcgtctaaag gtgcagcggg ttgaggttcc gtcggcattg gtggagcggg cggcaattca 6540

gacatcgatg gtggtggtgg tggtggaggc gctggaatgt taggcacggg agaaggtggt 6600 ggcggcggtg

accggcgcag

ggtggtggca

gtaatttcgc

ttgtaaagag

cagcattgta

aaacgtcgtt

tgtcgtaaat

gatgcgcatc

tacgattcgt

actgcaaaaa

ttttatcgca

ttaacgctga

tctattttaa

ccgatttatt

ttattagaca

acataaaact

acggattgtg

gtccggaaaa

aacatacaag

gctcacaatt

atgagtgagc

cctgtcgtgc

tgggcgctct

agcggtatca

aggaaagaac

gctggcgttt

tcagaggtgg

cctcgtgcgc

ttcgggaagc

cgttcgctcc

atccggtaac

agccactggt

gtggtggcct

gccagttacc

tagcggtggt

agatcctttg

gattttggtc

aagttttaaa

aatcagtgag

ccccgtcgtg

gataccgcga

aagggccgag

ttgccgggaa

tgctacaggc

ccaacgatca

cggtcctccg

agcactgcat

gtactcaacc

gtcaatacgg

acgttcttcg

acccactcgt

agcaaaaaca

aatactcata

gagcggatac

tccccgaaaa

aaataggcgt

ctgacacatg

acaagcccgt

ggcatcagag

cgtaaggaga

agggcgatcg

aaggcgatta

cagtgcc

ccgccggtat

gcgccgctgg

attcaatatt

tatcgtttac

attgtctcaa

gtggcgagac

ggcaagcttt

gttgtttttg

aattttgttg

catggccacc

cgtcaaaact

caagcccact

cgaaataaaa

tcacggttcc

tgaaacacta

gctgtgtgaa

cgaaaatgtc

caaacacgaa

aattcgacac

ttgctaacgt

ccacacaaca

taactcacat

cagctgcatt

tccgcttcct

gctcactcaa

atgtgagcaa

ttccataggc

cgaaacccga

tctcctgttc

gtggcgcttt

aagctgggct

tatcgtcttg

aacaggatta

aactacggct

ttcggaaaaa

ttttttgttt

atcttttcta

atgagattat

tcaatctaaa

gcacctatct

tagataacta

gacccacgct

cgcagaagtg

gctagagtaa

atcgtggtgt

aggcgagtta

atcgttgtca

aattctctta

aagtcattct

gataataccg

gggcgaaaac

gcacccaact

ggaaggcaaa

ctcttccttt

atatttgaat

gtgccacctg

atcacgaggc

cagctcccgg

cagggcgcgt

cagattgtac

aaataccgca

gtgcgggcct

agttgggtaa

aatttgttct

ctgcacaacg

ataattggaa

cgtgccgata

gctcgccgca

acttcgctgt

aaaatattta

ataatttgcg

ttcctattat

acaaatgcta

cggtataaaa

agcaaattgt

gttcaccagt

atcaacaacc

caaattaaag

gcgctcaacg

ttatatttcg

aactcactta

acaactatgc

aatcatggtc

tacgagccgg

taattgcgtt

aatgaatcgg

cgctcactga

aggcggtaat

aaggccagca

tccgcccccc

caggactata

cgaccctgcc

ctcatagctc

gtgtgcacga

agtccaaccc

gcagagcgag

acactagaag

gagttggtag

gcaagcagca

cggggtctga

caaaaaggat

gtatatatga

cagcgatctg

cgatacggga

caccggctcc

gtcctgcaac

gtagttcgcc

cacgctcgtc

catgatcccc

gaagtaagtt

ctgtcatgcc

gagaatagtg

cgccacatag

tctcaaggat

gatcttcagc

atgccgcaaa

ttcaatatta

gtatttagaa

acgtctaaga

cctttcgtct

agacggtcac

cagcgggtgt

tgagagtgca

tcaggcgcca

cttcgctatt

cgccagggtt

ggtttagttt

gaaggtcgtc

tacaaatcgt

tttaacaacc

cgccgataac

cgtcgacgta

aaagaacatc

cttccgcagt

tgaataaata

cgctgcaaac

taatcaacgg

atttgcagaa

taatgagcga

aagtgatcgt

gcgagctttc

atttgcacaa

aagcacttga

gcgtgcacga

acgtttcgtt

atagctgttt

aagcataaag

gcgctcactg

ccaacgcgcg

ctcgctgcgc

acggttatcc

aaaggccagg

tgacgagcat

aagataccag

gcttaccgga

acgctgtagg

accccccgtt

ggtaagacac

gtatgtaggc

gacagtattt

ctcttgatcc

gattacgcgc

cgctcagtgg

cttcacctag

gtaaacttgg

tctatttcgt

gggcttacca

agatttatca

tttatccgcc

agttaatagt

gtttggtatg

catgttgtgc

ggccgcagtg

atccgtaaga

tatgcggcga

cagaacttta

cttaccgctg

atcttttact

aaagggaata

ttgaagcatt

aaataaacaa

aaccattatt

cgcgcgtttc

agcttgtctg

tggcgggtgt

ccatatgcgg

ttcgccattc

acgccagctg

ttcccagtca

gttcgcgcac

tgcttcgagg

aaaaatctgc

gctcaatgta

aagccttttc

catgtatgct

tctgttcagc

atcgacacgt

agattgtaca

gctggtacaa

gcgctttggc

aacaatttcg

ccacccaaat

gatggactac

gtaccaactt

gcacaatttc

tcgcgtgtat

cggcacgttg

tgactggtac

cctgtgtgaa

tgtaaagcct

cccgctttcc

gggagaggcg

tcggtcgttc

acagaatcag

aaccgtaaaa

cacaaaaatc

gcgtttcccc

tacctgtccg

tatctcagtt

cagcccgacc

gacttatcgc

ggtgctacag

ggtatctgcg

ggcaaacaaa

agaaaaaaag

aacgaaaact

atccttttaa

tctgacagtt

tcatccatag

tctggcccca

gcaataaacc

tccatccagt

ttgcgcaacg

gcttcattca

aaaaaagcgg

ttatcactca

tgcttttctg

ccgagttgct

aaagtgctca

ttgagatcca

ttcaccagcg

agggcgacac

tatcagggtt

ataggggttc

atcatgacat

ggtgatgacg

taagcggatg

cggggctggc

tgtgaaatac

aggctgcgca

gcgaaagggg

cgacgttgta

gattgtgggc

cagcgcttgg

tataagcatt

agcaattgta

atttttacta

ttgttgtcaa

accactgtgt

tcaaaaaatt

gattcatatc

ttttacgaaa

aaaatatcta

gcgcacaatt

tttataaaaa

attgactgtc

gttagcaata

atacacaacg

gtttgcgatt

gagtatttta

gcggcgtgtt

attgttatcc

ggggtgccta

agtcgggaaa

gtttgcgtat

ggctgcggcg

gggataacgc

aggccgcgtt

gacgctcaag

ctggaagctc

cctttctccc

cggtgtaggt

gctgcgcctt

cactggcagc

agttcttgaa

ctctgctgaa

ccaccgctgg

gatctcaaga

cacgttaagg

attaaaaatg

accaatgctt

ttgcctgact

gtgctgcaat

agccagccgg

ctattaattg

ttgttgccat

gctccggttc

ttagctcctt

tggttatggc

tgactggtga

cttgcccggc

tcattggaaa

gttcgatgta

tttctgggtg

ggaaatgttg

attgtctcat

cgcgcacatt

taacctataa

gtgaaaacct

ccgggagcag

ttaactatgc

cgcacagatg

actgttggga

gatgtgctgc

aaacgacggc

6660

6720

6780

6840

6900

6960

7020

7080

7140

7200

7260

7320

7380

7440

7500

7560

7620

7680

7740

7800

7860

7920

7980

8040

8100

8160

8220

8280

8340

8400

8460

8520

8580

8640

8700

8760

8820

8880

8940

9000

9060

9120

9180

9240

9300

9360

9420

9480

9540

9600

9660

9720

9780

9840

9900

9960

10020

10080

10140

10200

10260

10320

10380

10387 <210> 9 <211> 20 <212> PRT

<213> Circovírus suíno <4 00> 9

Ser Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His His Pro Pro Ser 10 15

His Leu Gly Gln 20

<210> 10 <211> 19 <212> PRT

<213> Circovírus suíno <4 00> 10

Pro Arg His His Tyr Arg Pro Arg Arg Lys Asn Gly He Phe Asn Thr 10 15

Thr Leu Ser

<210> 11 <211> 233 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Esta é uma estrutura ι <400> 11 Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 10 15

Ser His Leu Gly Gln He Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro 20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly He Phe Asn Thr Arg 35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Arg Thr 50 55 60

Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn He Asp Asp Phe Val 65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys He Ser He Pro Phe Glu Tyr Tyr 85 90 95

Arg He Lys Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro He Thr 100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val He Leu Asp Asp Asn 115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr 130 135 140 Ser Ser Arg His Thr He Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro 165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn 180 185 190

Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Ile Tyr Asp 195 200 205

Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe 210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro 225 230

Claims

1. Método para a profilaxia e tratamento de uma infecção subclí- nica de PCV2 em um animal individual ou um grupo de animais, caracteriza- do pelo fato de que compreende a etapa de administrar uma quantidade te- rapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogêni- ca compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal administração.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a infecção subclínica de PCV2 é caracterizada por um máximo de 20% de animais dentro de um rebanho com titulações virais acima de 106 cópias genômicas por ml de soro.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a infecção subclínica de PCV2 é caracterizada por uma carga viral em animais individuais abaixo de 106 cópias genômicas.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a3, caracterizado pelo fato de que a infecção subclínica de PCV2 é caracteri- zada por uma persistência de vírus no rebanho de pelo menos 6 semanas.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 4, caracterizado pelo fato de que a infecção subclínica de PCV2 é caracteri- zada por nenhuma morbidez ou uma baixa taxa de morbidez de menos do que 25% dos animais de PCV2 positivo dentro de um rebanho.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 5, caracterizado pelo fato de que a infecção subclínica de PCV2 é caracteri- zada adicionalmente por baixa taxa de mortalidade de menos do que 20% dos animais de PCV2 positivo dentro de um rebanho.

7. Método para redução de redução da capacidade de cresci- mento devido à infecção subclínica de PCV2, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal administração.

8. Método para redução do número de animais com carga viral acima de 106 cópias genômicas por ml de soro em um grupo de animais (re- banhos) subclinicamente infectados com PCV2, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreen- dendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal adminis- tração.

9. Método para redução de depósito de vírus nasal e/ou duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de administrar uma quantidade tera- peuticamente eficaz de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a um animal em necessidade de tal administração.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o antígeno de PCV2 é um polipeptídeo tendo pelo menos 80% de homologia com ORF-2 de PCV2.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o referido antígeno de PCV-2 é um bacu- lovírus recombinante expresso ORF-2 de PCV2.

12. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o Antígeno de PCV2 é Ingelvac® Circo- FLEX®.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o animal é suíno.

14. Uso de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo antígeno de PCV2, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para a profilaxia e tratamento de uma infec- ção subclínica de PCV2 em um animal individual ou um grupo de animais, em que uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido medicamento é administrada a um animal em necessidade de tal administração.

15. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a infecção subclínica de PCV2 é caracterizada por um máximo de 20% de animais dentro de um rebanho com titulações virais acima de 106 cópias genômicas por ml de soro.

16. Uso, de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que a infecção subclínica de PCV2 é caracterizada por uma carga viral em animais individuais abaixo de 106 cópias genômicas.

17. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a16, caracterizado pelo fato de que a infecção subclínica de PCV2 é caracte- rizada por uma persistência de vírus no rebanho de pelo menos 6 semanas.

18. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 17, caracterizado pelo fato de que a infecção subclínica de PCV2 é caracte- rizada por nenhuma morbidez ou uma baixa taxa de morbidez de menos do que 25% dos animais de PCV2 positivo dentro de um rebanho.

19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 18, caracterizado pelo fato de que a infecção subclínica de PCV2 é adicio- nalmente caracterizada por baixa taxa de mortalidade de menos do que 20% dos animais de PCV2 positivo dentro de um rebanho.

20. Uso de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo antígeno de PCV2, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para redução de redução da capacidade de crescimento devido à infecção subclínica de PCV2, em que uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido medicamento é administrada a um ani- mal em necessidade de tal administração.

21. Uso de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo antígeno de PCV2, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para redução do número de animais com carga viral acima de 106 cópias genômicas por ml de soro em um grupo de animais (rebanhos) subclinicamente infectados com PCV2, em que uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido medicamento é administrada a um animal em necessidade de tal administração.

22. Uso de antígeno de PCV2 ou uma composição imunogênica compreendendo antígeno de PCV2, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para redução de depósito de vírus nasal e/ou duração de viremia em animais subclinicamente infectados com PCV2, em que uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido medicamento é administrada a um animal em necessidade de tal administração.

23. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 22, caracterizado pelo fato de que o antígeno de PCV2 é um polipeptídeo tendo pelo menos 80% de homologia com ORF-2 de PCV2.

24. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 23, caracterizado pelo fato de que o referido antígeno de PCV-2 é um bacu- lovírus recombinante expresso ORF-2 de PCV2.

25. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 24, caracterizado pelo fato de que o antígeno de PCV2 é Ingelvac® Circo- FLEX®.

26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 25, caracterizado pelo fato de que o animal é suíno.