BRPI0808820A2 - Formulação líquida farmacêutica, método para o tratamento de uma doença, uso de um composto, composto, e, recipiente equipado com um acessório para gotejamento - Google Patents

Description

I “FORMULAÇÃO LÍQUIDA FARMACÊUTICA, MÉTODO PARA O TRATAMENTO DE UMA DOENÇA, USO DE UM COMPOSTO, COMPOSTO, E, RECIPIENTE EQUIPADO COM UM ACESSÓRIO PARA GOTEJAMENTO”

Campo da invenção

A presente invenção refere-se à composição farmacêutica

líquida.

Fundamentos da invenção

O pedido de patente internacional publicado como WO 10 2003/029232 revela e.g. o composto 4-[2-(4-metil-fenil-sulfanil)-fenil]piperidina (composto I) como uma base livre e o sal de adição de HCl correspondente. É relatado que o composto é um inibidor do transportador de serotonina e do receptor 2C de serotonina (5-HT2c), e é dito que é usado para o tratamento de distúrbios afetivos, e.g. depressão e ansiedade.

Tem sido verificado que o composto I também é um

antagonista potente do receptor 3 de serotonina (5-HT3) e do receptor 2A de serotonina (5-HT2A) razão do que o composto I pode ser usado para o tratamento de uma mais ampla variedade de indicações incluindo dor e enfraquecimento cognitivo. Este perfil farmacológico também foi revelado em WO 2007/144006.

Para muitos compostos farmacêuticos administração oral de um tablete, uma cápsula, uma pílula ou similar intencionado(a) para engolir é a forma de administração preferida.For Contudo, alguns pacientes, e.g. pacientes de idade avançada podem ter dificuldades para engolir, e soluções 25 líquidas podem ser uma alternativa adequada evitando-se a necessidade de engolir tabletes, cápsulas, pílulas, etc. Uma solução líquida adicionalmente proporciona uma possibilidade de um regime de dosagem flexível. Com o propósito de limitar o volume de uma solução líquida é necessário ter uma concentração alta do ingrediente ativo na solução, o que de novo exige uma solubilidade alta do ingrediente ativo.

A presente invenção está relacionada com formulações líquidas de composto I.

Sumário da invenção Os presentes inventores têm surpreendentemente verificado

que o sal de adição de ácido DL-lático (=DL-Iactato), o sal de adição de ácido glutárico (= glutarato), o sal de adição de ácido L-aspártico (=L-aspartato), e o sal de adição de ácido glutâmico (= glutamato) de 4-[2-(4-metil-fenilsulfanil)-fenil]-piperidina são excepcionalmente solúveis. Conformemente, a 10 presente invenção refere-se a uma formulação líquida compreendendo o sal de adição de ácido DL-lático, o sal de adição de ácido glutárico, o sal de adição de ácido L-aspártico ou o sal de adição de ácido glutâmico de 4-[2-(4-metilfenil-sulfanil)-fenil]-piperidina.

Em uma modalidade, a invenção refere-se a um método de tratamento, dito método compreendendo a administração de uma formulação líquida da presente invenção a um paciente em necessidade da mesma.

Em uma modalidade, a invenção refere-se ao uso de sais da presente invenção na manufatura de uma composição farmacêutica líquida para o tratamento de certas doenças.

Em uma modalidade, a invenção refere-se aos sais da presente

invenção para uso no tratamento de certas doenças, sendo que ditos sais estão em uma formulação líquida.

Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um recipiente compreendendo uma formulação líquida da presente invenção, sendo que dito recipiente está equipado com um acessório para gotejamento.

Figuras

Figura 1: Níveis de acetil-colina no córtex pré-frontal e no hipocampo ventral sob administração de composto I.

Figura 2: Níveis de dopamina no córtex pré-frontal sob administração de composto I Descrição detalhada da invenção

A formulação à qual a presente invenção se refere é todas as formulações farmacêuticas.

Tabela 2 nos exemplos mostra a solubilidade de vários sais de 4-[2-(4-metil-fenil-sulfanil)-fenil]-piperidina. Como evidenciado pelos dados, os sais de adição de ácido DL-lático, de adição de ácido L-aspártico, de adição de ácido glutâmico, e de adição de ácido glutárico têm solubilidade excepcionalmente alta. Por conveniência, estes sais são chamados de sais da presente invenção.

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Acido DL-lático também é conhecido como ácido DL-2- hidróxi-propiônico, e forma sal de adição de ácido 1:1 com 4-[2-(4-metilfenil-sulfanil)-fenil]-piperidina que é usado na presente invenção.

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Acido glutárico também é conhecido como ácido 1,5- pentanodióico, e forma um sal de adição de ácido 1:1 com 4-[2-(4-metil-fenilsulfanil)-fenil]-piperidina que é usado na presente invenção.

Ácido L-aspártico forma um sal de adição de ácido 1:1 com 4- [2-(4-metil-fenil-sulfanil)-fenil]-piperidina que é usado na presente invenção.

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Acido glutâmico forma um sal de adição de ácido 1:1 com 4- [2-(4-metil-fenil-sulfanil)-fenil]-piperidina que é usado na presente invenção.

4-[2-(4-metil-fenil-sulfanil)-fenil]-piperidina pode ser preparada como revelado em WO 2003/029232. Alternativamente, 4-[2-(4- metil-fenil-sulfanil)-fenil]-piperidina pode ser preparada como descrito nos exemplos. Os sais da presente invenção podem ser preparados pela adição do ácido apropriado seguida por precipitação, cuja precipitação pode ser causada e.g. por esfriamento, remoção de solvente, adição de outro solvente ou de uma mistura dos mesmos. Os exemplos revelam rotas específicas para obter os sais.

Formulações líquidas podem ser intencionadas para administração oral ou parenteral. Formulações líquidas para administração parenteral, que incluem soluções de infusão, são em muitos aspectos similares às outras formulações líquidas, mas são adicionalmente caracterizadas por serem estéreis e isotônicas.

5 A formulação líquida oral da presente invenção pode ser

apresentada como um xarope, um elixir, uma solução oral, uma suspensão, ou como uma formulação oral concentrada. Uma vantagem destas formas de administração é que o paciente não tem que engolir uma forma sólida, que pode ser difícil, em particular para pacientes de idade avançada ou para pacientes com traumas na boca ou na garganta.

Xaropes e elixires são tipicamente líquidos aromatizados, adoçados, contendo um ingrediente ativo farmacêutico. Xaropes tipicamente têm um teor de açúcar mais alto, e elixires freqüentemente contêm também álcool. Um solução oral é uma solução do ingrediente ativo. Uma suspensão é 15 um sistema de duas fases compreendendo partículas sólidas dispersadas em um líquido. Administração de xaropes, elixires, soluções orais e suspensões tipicamente envolve a ingestão de quantidades relativamente grandes de líquido, i.e. 10-50 ml.

Em contraste com os mesmo, as formulações orais 20 concentradas da presente invenção são administradas ao paciente por medição de um volume predeterminado de dita formulação a partir de um dispensador adequado, adição do volume resultante em um copo de líquido (bebida, e.g. água, suco ou similar) depois do qual o paciente bebe o líquido. Por conveniência, o volume medido é pequeno, e.g. menor do que 2 ml, tal como 25 menor do que 1 ml, tal como menor do que 0,5 ml. Em uma modalidade particular, as formulações orais concentradas da presente invenção são administradas ao paciente por medição de um número predeterminado de gotas de dita formulação a partir de um dispersador adequado, e.g. um recipiente com um acessório para gotejamento, adição das gotas em um copo de líquido (água, suco ou similar) depois do qual o paciente bebe o líquido. Neste contexto, um acessório para gotejamento é um acessório equipado em um recipiente que faz com que um líquido dentro de dito recipiente possa ser dispensado de dito recipiente em gotas discretas.

A concentração dos sais da presente invenção em formulações

orais concentradas é determinada pelo número de gotas (ou o volume) que é desejado para se colher e a quantidade dos sais que é desejada para

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administrar. E geralmente julgado que a medição de cerca de 10-20 gotas é um compromisso ótimo entre segurança/eficácia do tratamento por um lado e 10 conveniência por outro lado. Se a concentração dos sais da presente invenção é muito alta, i.e. se apenas um número pequeno de gotas é para ser medido, ela pode por em perigo a segurança ou eficácia do tratamento. Com um número baixo de gotas, uma ou duas gotas mais ou menos do que o desejado significativamente aumentará a incerteza na dose fornecida. Por outro lado, se 15 a concentração dos sais da presente invenção é muito baixa, o número de gotas a ser medido é alto, o que é inconveniente para o paciente ou o tratador.

Com dosagens diárias de sais da presente invenção de 5 mg, uma formulação concentrada oral com uma concentração de 5 mg de ingrediente ativo por ml poderia ser apropriada. Uma concentração de 5 mg por ml e um número de gotas de 20 gotas/ml tomaria possível administrar 20 gotas para uma dose de 5 mg.

Com dosagens diárias de sais da presente invenção de 5 mg, uma formulação concentrada oral com uma concentração de 10 mg de ingrediente ativo por ml poderia ser apropriada. Uma concentração de 10 mg por ml e um número de gotas de 20 gotas/ml tomaria possível administrar 10 gotas para uma dose de 5 mg.

Com dosagens diárias de compostos da presente invenção de 10 mg, uma formulação concentrada oral com uma concentração de 20 mg de ingrediente ativo por ml poderia ser apropriada. Uma concentração de 20 mg por ml e um número de gotas de 20 gotas/ml tomaria possível administrar 10 gotas para uma dose de 10 mg.

Com dosagens diárias de compostos da presente invenção de 20 mg, uma formulação concentrada oral com uma concentração de 40 mg de 5 ingrediente ativo por ml poderia ser apropriada. Uma concentração de 40 mg por ml e um número de gotas de 20 gotas/ml tomaria possível administrar 10 gotas para uma dose de 20 mg.

Com dosagens diárias de compostos da presente invenção de mg, uma formulação concentrada oral com uma concentração de 60 mg de ingrediente ativo por ml poderia ser apropriada. Uma concentração de 60 mg por ml e um número de gotas de 20 gotas/ml tomaria possível administrar 10 gotas para uma dose de 30 mg.

Com dosagens diárias de compostos da presente invenção de 40 mg, uma formulação concentrada oral com uma concentração de 80 mg de ingrediente ativo por ml poderia ser apropriada. Uma concentração de 80 mg por ml e um número de gotas de 20 gotas/ml tomaria possível administrar 10 gotas para uma dose de 40 mg.

Com dosagens diárias de compostos da presente invenção de 50 mg, uma formulação concentrada oral com uma concentração de 100 mg de ingrediente ativo por ml poderia ser apropriada. Uma concentração de 100 mg por ml e um número de gotas de 20 gotas/ml tomaria possível administrar gotas para uma dose de 50 mg.

Em uma modalidade, a formulação concentrada de gotas oral é administrada de um aparelho com um dispositivo de dosagem semelhante a 25 seringa ou caneta. Exemplos de tal aparelho de administrar são fornecidos em e.g. WO 03/061508, US 2004/0186431, US 2003-089743. Estes aparelhos contêm a formulação concentrada oral da presente invenção em uma câmara vedada, e.g. um cartucho e têm um meio para fornecer uma quantidade medida da solução concentrada oral. Com o propósito de limitar o tamanho do dispositivo, o volume da solução concentrada oral é pequeno (0,01-1 ml) o que de novo exige que os sais sejam elevadamente solúveis. Estes dispositivos de dosagem semelhantes a seringa ou caneta são convenientes para o paciente pelo fato de que podem ser transportados e.g. em um bolso interno de paletó, 5 e um design adequado do dispositivo pode servir para esconder que ele é um dispensador de uma droga.

Com dosagens diárias de sais da presente invenção de 5 a 10 mg, uma formulação concentrada oral com uma concentração de 100 mg de ingrediente ativo por ml seria apropriada. Isto significaria que 0,05 ml é liberado para uma dose de 5 mg e que 0,1 ml é liberado para uma dose de mg.

Com dosagens diárias de compostos da presente invenção de 20-50 mg, uma formulação concentrada oral com uma concentração de 200 mg de ingrediente ativo por ml seria apropriada. Isto significaria que 0,1 ml é liberado para uma dose de 20 mg e que 0,25 ml é liberado para uma dose de 50 mg.

Conformemente, formulações concentradas orais da presente invenção compreendem aproximadamente 5-250 mg/ml de sais da presente invenção. Exemplos particulares incluem aproximadamente 10-100 mg/ml, 20 aproximadamente 20-200 mg/ml, aproximadamente 150-200 mg/ml, aproximadamente 20-80 mg/ml, aproximadamente 30-70 mg/ml, e aproximadamente 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ou 100 mg/ml. Em uma modalidade, a formulação de gotas oral da presente invenção compreende pelo menos 5 mg/ml de sais da presente invenção. Em uma modalidade, a 25 formulação de gotas oral da presente invenção compreende pelo menos 10 mg/ml de sais da presente invenção. Em uma modalidade, a formulação de gotas oral da presente invenção compreende pelo menos 20 mg/ml de um sal da presente invenção. Em uma modalidade, a formulação de gotas oral da presente invenção compreende pelo menos 30 mg/ml de um sal da presente invenção. Em uma modalidade, a formulação de gotas oral da presente invenção compreende pelo menos 50 mg/ml de um sal da presente invenção. Em uma modalidade, a formulação de gotas oral da presente invenção compreende pelo menos 80 mg/ml de um sal da presente invenção. Em adição 5 aos sais do presente pedido, as soluções orais do presente pedido, e em particular as formulações orais concentradas podem compreender solventes, tampões, tensoativos, modificadores de tensão superficial, modificadores de viscosidade, conservantes, antioxidantes, colorantes, modificadores de gosto, aromatizantes etc.

Exemplos de solventes incluem água e outros solventes, que

são miscíveis com água ou agentes de solubilização, e são adequados para propósitos orais. Exemplos de solventes adequados são etanol, propilenoglicol, glicerol, poli(etileno-glicóis), poloxâmeros, sorbitol, benzil-álcool. A solubilidade aquosa do ingrediente ativo pode ser adicionalmente aumentada 15 pela adição na solução de um co-solvente farmaceuticamente aceitável, uma ciclo-dextrina ou um seu derivado.

Um sistema tampão pode ser usado para manter o pH da formulação em uma faixa de pH ótima. Um sistema tampão é uma mistura de quantidades apropriadas de um ácido fraco tal como ácido acético, ácido 20 fosfórico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido lático ou ácido cítrico e sua base conjugada. Idealmente, o sistema tampão tem capacidade suficiente para permanecer na faixa de pH intencionada sob diluição com uma bebida neutra, uma bebida ligeiramente ácida ou uma bebida ligeiramente alcalina.

Tensoativos são substâncias, que solubilizam compostos 25 ativos, que são insuficientemente solúveis em um meio aquoso, costumeiramente com a formação de micelas. Preferivelmente o tensoativo usado deve ser não-iônico devido à toxicidade baixa. Concentrações altas de tensoativos podem ser usadas para permitir diluição durante administração sem precipitação. Exemplos de tensoativos incluem tweens, spans e mono- e diglicerídeos. Modificadores de tensão superficial podem ser incluídos para ajustar o número de gotas para as formulações de gotas orais. Um exemplo de modificador de tensão superficial é etanol, que diminui a tensão superficial e aumenta o número de gotas.

Modificadores de viscosidade podem ser incluídos para ajustar

a velocidade de gota para uma formulação concentrada oral. A velocidade de gota para uma formulação a ser medida em gotas discretas de um recipiente equipado com um acessório para gotejamento deve ser conveniente para não ultrapassar 2 gotas por segundo. Exemplos de modificadores de viscosidade 10 incluem etanol, hidróxi-etil-celulose, sódio-cabóxi-metil-celulose, metilcelulose, poli(vinil-álcool), poli(vinil-pirrolidona), poli(etileno-glicol) e glicerina.

Agentes conservantes podem ser adicionados para prevenir o crescimento de microorganismos tais como bactérias, leveduras e fungos em 15 formulações líquidas, que são para serem provavelmente usadas repetidamente. Conservantes adequados devem ser farmaceuticamente aceitáveis, físico-quimicamente estáveis e eficazes dentro da faixa de pH desejada. Exemplos de agentes conservantes incluem etanol, ácido benzóico, ácido sórbico, metil-parabeno, propil-parabeno e benzil-álcool.

Visto que uma substância de droga é mais sensível à

degradação química na forma dissolvida do que na forma sólida, pode ser necessário incluir um antioxidante na formulação líquida. Exemplos de antioxidantes incluem gaiato de propila, palmitato de ascorbila, ácido ascórbico, sulfito de sódio, ácido cítrico e EDTA.

Agentes colorantes podem ser usados em algumas formulações

para dar uma uniformidade de aparência ao produto. Alguns ingredientes ativos podem ser adicionalmente muito sensíveis à luz e pode tem se mostrado necessária a adição de agentes colorantes nas formulações de gotas para protegê-los da luz e para o propósito de estabilização. Agentes colorantes adequados incluem por exemplo tartrazina e amarelo pôr-do-sol. Agentes edulcorantes podem mascarar o gosto desagradável associado com algumas formulações ou para obter um gosto desejado. Exemplos de agentes edulcorantes são sacarina, sal de sódio de sacarina, glicose, acessulfame de potássio e neohesperidina di-hidro-calcona. O gosto pode ser otimizado ainda mais pela adição de uma ou mais substâncias aromatizantes. Substâncias aromatizantes adequadas são aromatizantes de fruta tais como aromatizante de cereja, framboesa, groselha, limão ou morango ou outros aromatizantes tais como alcoólico, anis, hortelã-pimenta, caramelo etc.

Exemplos particulares de uma formulação concentrada oral de 4-[2-(4-metil-fenil-sulfanil)-fenol]-piperidina (= Composto I) que podem ser administrados com um acessório para gotejamento são:

0,73% de glutarato de Composto I correspondendo a 0,5% de base livre de Composto I

Água q.s. ad 100%

1,58% de glutamado de Composto I correspondendo a 1% de base livre de Composto I

0,08% de para-hidróxi-benzoato de metila 0,02% de para-hidróxi-benzoato de propila Água q.s. ad 100%

2,94% de L-aspartato de Composto I correspondendo a 2% de base livre de Composto I

0,08% de para-hidróxi-benzoato de metila 0,02% de para-hidróxi-benzoato de propila 7% de etanol Água q.s. ad 100%

10,54% de DL-Iactato de Composto I correspondendo a 8% de base livre de Composto I 0,08% de para-hidróxi-benzoato de metila 0,02% de para-hidróxi-benzoato de propila Água q.s. ad 100%

Em exemplo particular de uma formulação concentrada oral, que pode ser administrada com um dispositivo semelhante a seringa ou caneta, é

26,36% de DL-Iactato de Composto I correspondendo a 20% de base livre de Composto I

0,.08% de para-hidróxi-benzoato de metila 0,02% de para-hidróxi-benzoato de propila

Água q.s. ad 100%

O perfil farmacêutico dos sais da presente invenção é revelado nos exemplos. Em sumário, os sais da presente invenção são inibidores do transportador de serotonina e do receptor 2C de serotonina (5-HT2C) e 15 antagonistas do receptor 3 de serotonina (5-HT3), do receptor 2A de serotonina (5-HT2a) e do receptor adrenérgico a! e parece que causam um aumento no nível extracelular de acetil-colina no córtex pré-frontal e no hipocampo ventral e no nível de dopamina no córtex pré-frontal. Adicionalmente, os sais da presente invenção são eficazes no tratamento de

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dor como mostrado nos exemplos. E esperado que o perfil farmacológico em combinação com os dados pré-clínicos seja refletido na utilidade clínica dos sais da presente invenção. Disso, acredita-se que os sais da presente invenção são úteis no tratamento de doenças incluindo distúrbios de humor, distúrbio depressivo maior, distúrbio de ansiedade geral, depressão atípica, depressão 25 bipolar, distúrbio de ansiedade social, distúrbio compulsivo obsessivo, distúrbio de pânico, distúrbio de estresse pós-traumático, abuso, distúrbio de comer, distúrbio de sono, mal de Alzheimer, demência, dor crônica, depressão associada com enfraquecimento cognitivo, depressão associada com psicose, enfraquecimento cognitivo em esquizofrenia, depressão ou ansiedade com dor, distúrbios comportamentais na idade avançada, ADHD, melancolia, depressão resistente a tratamento, depressão com sintomas residuais.

Receptores de 5-HT2c estão localizados e.g. em neurônios dopaminérgicos onde ativação exerce uma influência inibitória tônica sobre a liberação de dopamina, e antagonistas de 5-HT2C causarão um aumento no nível de dopamina. Dados apresentados nos exemplos mostram que o composto I causa, na realidade, um aumento nos níveis extracelulares de dopamina no cérebro. Baseando-se nisto pode-se sugerir como hipótese que antagonistas de 5-HT2C são particularmente bem adequados para o tratamento de depressão que é refratária ao tratamento com inibidores da recaptação de serotonina. Esta hipótese encontra confirmação em vários estudos clínicos mostrando que uma combinação de mirtazipina e SSRI é superior a SSRI sozinho para o tratamento de pacientes deprimidos com uma resposta clínica inadequada (depressão resistente a tratamento, TRD, ou depressão refratária) [.Psychother. Psychosom., 75, 139-153, 2006]. Mirtazapina também é um antagonista de 5-HT2 e de 5-HT3, o que indica que os compostos exercendo inibição de recaptação de serotonina em combinação com antagonismo de 5- HT2 e 5-HT3, tal como o composto I, são úteis para o tratamento de TRD, i.e. aumentarão a taxa de remissão para pacientes sofrendo de depressão resistente a tratamento.

Dados apresentados nos exemplos mostram que o composto I causa um aumento no nível extracelular de acetil-colina no cérebro. Há uma evidência clínica antiga de que o aumento dos níveis de acetil-colina no cérebro é um modo de tratar mal de Alzheimer e enfraquecimento cognitivo 25 em geral, cf. o uso de inibidores de acetil-colina esterase no tratamento de mal de Alzheimer. Baseando-se nisto, acredita-se que o composto I é útil no tratamento de mal de Alzheimer e enfraquecimento cognitivo, e também distúrbios de humor, tal como depressão associada com mal de Alzheimer e enfraquecimento cognitivo. Um segmento de pacientes deprimidos responderá ao tratamento com e.g. SSRI no sentido de que melhorarão em escalas de depressão clinicamente relevantes, tais como MADRD e HAMD, mas onde permanecem outros sintomas, tais como distúrbios de sono e enfraquecimento 5 cognitivo. No presente contexto, estes pacientes são chamados de respondedores parciais e como sofredores de depressão com sintomas residuais. Devido aos efeitos discutidos acima sobre os níveis de acetil-colina, é esperado que o composto I seja útil no tratamento do enfraquecimento cognitivo em adição à depressão. Estudos clínicos têm mostrado que o 10 composto prazosina, que é um antagonista de receptor adrenérgico α-l reduz distúrbios de sono [Raskind, Biol. Psychiatry, 2006 no prelo]. Além disso, também acredita-se que o antagonismo de 5-HT2a e 5-HT2c dos compostos da presente invenção tem um efeito sedativo, melhorador do sono [.Neuropharmacol33, 467-471, 1994] pelo que os compostos da presente 15 invenção são úteis para o tratamento de respondedores parciais (depressão com sintomas residuais), ou dito de outro modo que o tratamento de pacientes deprimidos com o composto I reduzirá a fração de respondedores parciais.

Em uma modalidade, a invenção refere-se a um método de tratamento de um distúrbio selecionado de distúrbios de humor, distúrbio 20 depressivo maior, distúrbio de ansiedade geral, depressão atípica, depressão bipolar, distúrbio de ansiedade social, distúrbio compulsivo obsessivo, distúrbio de pânico, distúrbio de estresse pós-traumático, abuso, distúrbio de comer, distúrbio de sono, mal de Alzheimer, demência, dor crônica, depressão associada com enfraquecimento cognitivo, depressão associada com psicose, 25 enfraquecimento cognitivo em esquizofrenia, depressão ou ansiedade com dor, distúrbios comportamentais na idade avançada, ADHD, melancolia, depressão resistente a tratamento, ou depressão com sintomas residuais, dito método compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma formulação líquida da presente invenção a um paciente em necessidade da mesma. Em uma modalidade, dita formulação líquida é uma formulação concentrada oral.

Em uma modalidade, o paciente a ser tratado tem sido diagnosticado com a doença, dito paciente sendo tratado para a mesma.

Em uma modalidade, o composto da invenção é administrado

em uma quantidade de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia.

Uma dosagem oral típica está dentro da faixa de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia, preferivelmente de cerca 10 de 0,01 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal por dia, administrada em uma ou mais dosagens tais como 1 a 3 dosagens. A dosagem exata dependerá da freqüência e do modo de administração, do sexo, da idade, do peso e da condição geral do sujeito tratado, da natureza e da severidade da condição tratada e de quaisquer doenças concomitantes a serem tratadas e de outros 15 fatores evidentes para aquelas pessoas experientes na arte.

Uma dosagem oral típica para adultos está dentro da faixa de 1-100 mg/dia de um composto da presente invenção, tal como 1-30 mg/dia, ou 5-25 mg/dia. Esta pode ser tipicamente alcançada pela administração de 0,1-50 mg, tal como de 1-25 mg, tal como de 1,5, 10, 15, 20 25, 30, 40, 50 ou 60 mg do composto da presente invenção uma ou duas vezes por dia.

Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto como aqui usada significa uma quantidade suficiente para curar, aliviar ou parcialmente deter as manifestações clínicas de uma dada doença e suas complicações em uma intervenção terapêutica compreendendo a 25 administração de dito composto. Uma quantidade adequada para realizar isto é definida como "quantidade terapeuticamente eficaz". O termo também inclui quantidades suficientes para curar, aliviar ou parcialmente deter as manifestações clínicas de uma dada doença e suas complicações em um tratamento compreendendo a administração de dito composto. Quantidades eficazes para cada propósito dependerão da severidade da doença ou lesão bem como do peso e do estado geral do sujeito. Será entendido que determinação de uma dosagem apropriada pode ser realizada usando experimentação rotineira, por construção de uma matriz de valores e teste de 5 pontos diferentes na matriz, que está toda dentro das capacidades ordinárias de um médico treinado.

Os termos "tratamento" e "tratar" como aqui usados significam o manejo e o cuidado de um paciente para o propósito de combater uma condição, tal como uma doença ou um distúrbio. Os termos são intencionados para incluírem o espectro total de tratamentos para uma dada condição da qual o paciente está sofrendo, tal como administração do composto ativo para aliviar os sintomas ou as complicações, para atrasar a progressão da doença, do distúrbio ou da condição, para aliviar ou atenuar os sintomas e as complicações, e/ou para curar ou eliminar a doença, o distúrbio ou a condição bem como para prevenir a condição, sendo que a prevenção é para ser entendida como o manejo e o cuidado de um paciente para o propósito de combater a doença, a condição, ou o distúrbio e inclui a administração dos compostos ativos para prevenir o início dos sintomas ou das complicações. Contudo, tratamento profilático (preventivo) ou terapêutico (curativo) são dois aspectos separados da invenção. O paciente a ser tratado é preferivelmente um mamífero, em particular um ser humano.

Em uma modalidade, a invenção refere-se ao uso de um sal da presente invenção para a manufatura de uma formulação líquida para o tratamento de uma doença selecionada de distúrbios de humor, distúrbio 25 depressivo maior, distúrbio de ansiedade geral, depressão atípica, depressão bipolar, distúrbio de ansiedade social, distúrbio compulsivo obsessivo, distúrbio de pânico, distúrbio de estresse pós-traumático, abuso, distúrbio de comer, distúrbio de sono, mal de Alzheimer, demência, dor crônica, depressão associada com enfraquecimento cognitivo, depressão associada com psicose, enfraquecimento cognitivo em esquizofrenia, depressão ou ansiedade com dor, distúrbios comportamentais na idade avançada, ADHD, melancolia, depressão resistente a tratamento ou depressão com sintomas residuais. Em uma modalidade, dita formulação líquida é uma formulação concentrada oral.

5 Em uma modalidade, a presente invenção refere-se aos sais da

presente invenção para uso no tratamento de uma doença selecionada de distúrbios de humor, distúrbio depressivo maior, distúrbio de ansiedade geral, depressão atípica, depressão bipolar, distúrbio de ansiedade social, distúrbio compulsivo obsessivo, distúrbio de pânico, distúrbio de estresse pós10 traumático, abuso, distúrbio de comer, distúrbio de sono, mal de Alzheimer, demência, dor crônica, depressão associada com enfraquecimento cognitivo, depressão associada com psicose, enfraquecimento cognitivo em esquizofrenia, depressão ou ansiedade com dor, distúrbios comportamentais na idade avançada, ADHD, melancolia, depressão resistente a tratamento ou 15 depressão com sintomas residuais, sendo que dito sal está em uma formulação líquida. Em uma modalidade, dita formulação líquida é uma formulação concentrada oral em gotas.

Os sais da presente invenção podem ser quer administrados sozinhos quer em combinação com outro composto terapeuticamente ativo, 20 sendo que os dois compostos podem ser administrados quer simultaneamente quer seqüencialmente. Exemplos de compostos terapeuticamente ativos que podem ser vantajosamente combinados com o composto I incluem sedativos ou hipnóticos, tais como benzodiazepinas; anticonvulsivos tais como lamotrigina, ácido valpróico, topiramata, gabapentina, carbamazepina; 25 estabilizadores de humor tal como lítio; drogas dopaminérgicas, tais como agonistas de dopamina e L-Dopa; drogas para tratar ADHD, tal como atomoxetina; psicoestimulantes, tais como modafinil, cetamina, metilfenidato e anfetamina; outros antidepressivos, tais como mirtazapina, mianserina e buproprion; hormônios, tais como T3, estrogênio, DHEA e testosterona; antipsicóticos atípicos, tais como olanzapina e aripiprazol; antipsicóticos típicos tal como haloperidol; drogas para tratar mal de Alzheimer, tais como memantina, folato e inibidores de colinesterase; S-Adenosil-Metionina; imunomoduladores, tais como interferons; opiatos, tal como buprenorfinas;

antagonistas de receptor I de angiotensina II (antagonistas ATI); inibidores de ACE; estatinas; e agonista adrenérgico alfa-1, tal como prazosina.

Todas as referências, incluindo publicações, pedidos de patente, e patentes, aqui citadas são aqui incorporadas como referências em sua totalidade e na mesma extensão como se cada referência fosse individual 10 e especificamente indicada para ser incorporada como referência e fosse mostrada aqui em sua totalidade (na extensão máxima permitida por lei), independente de qualquer incorporação separadamente fornecida de documentos particulares feita aqui alhures.

O uso dos termos "um", "uma", "o" e "a" e referentes similares 15 no contexto da descrição da invenção é para ser entendido para cobrir tanto o singular quando o plural, a não ser que seja indicado de outro modo ou claramente contradito pelo contexto. For exemplo, a frase "o composto" é para ser entendida como se referindo a vários "compostos" da invenção ou aspecto particular descrito, a não ser se indicado de outra maneira.

A não ser que indicado de outro modo, todos os valores exatos

aqui fornecidos são representativos de valores aproximados correspondentes (e.g., todos os valores exemplares exatos fornecidos com respeito a um fator particular ou uma medição particular podem ser considerados para também fornecerem uma medição aproximada correspondente, modificada por "cerca de", onde apropriado).

A descrição aqui de qualquer aspecto ou aspecto da invenção usando termos tais como "compreendendo", "tendo", "incluindo" ou "contendo" com referência a um elemento ou a elementos é intencionada para fornecer confirmação para um aspecto similar ou aspecto da invenção que "consiste de, "consiste essencialmente de, ou "substancialmente compreende" aquele elemento particular ou aqueles elementos particulares, a não ser que seja indicado de outro modo ou claramente contradito pelo contexto (e.g., uma composição aqui descrita como compreendendo um elemento particular 5 deve ser entendida como também descrevendo uma composição consistindo daquele elemento, a não ser que seja indicado de outro modo ou claramente contradito pelo contexto).

Exemplos

Exemplo 1 Perfil farmacológico Exemplo IA Inibição da recaptação de serotonina (5-HT) e

norepinefrina (NE)

Alíquotas de composto de teste e preparação de sinaptossomo de cortical de rato foram pré-incubadas por 10 min/37°C, e então adicionada

3 3

[ H]NE ou [ H]5-HT (concentração final de 10 nM). Captação não-específica foi determinada na presença de 10 μΜ de talsupram ou citalopram e a captação total foi determinada na presença de tampão. Alíquotas foram

■3 O

incubadas por 15 minutos a 37°C. Após a incubação [ H]NE ou [ H]5-HT captada pelos sinaptossomos foi separada por filtração através de Unifilter GF/C, pré-embebido em PEI 0,1% por 30 minutos, usando um programa Tomtec Cell Harvester. Filtros foram lavados e contados em um contador Wallac MicroBeta.

Em NET composto I exibe um valor de IC50 de 23 nM. Em SERT composto I exibe um valor de IC5o de 8 nM.

Exemplo IB Antagonismo de 5-HTta Composto I foi testado para afinidades por receptores de

serotonina e foi verificado que exibe um perfil antagonístico com afinidade por receptores de 5-HT2a (K, 54 nM). A afinidade é calculada de Y = 100/(1+ IQÍX-togic^)) on(je Y denota % de ligação e X denota a concentração de composto. 5 Concentrações de composto (1, 10, 30, 100, 1000 nM) foram usadas para calcular o valor de IC5o- K foi calculado da equação de ChengPrusoff: Ki = (IC5o/(l+ ([L]/Kd)) Afinidade foi determinada em MDL Pharmaservices número de catálogo 271650.

Em células de mamífero expressando receptores de 5-HT2A de 5 humano o composto I exibe propriedades antagonísticas competitivas. O composto se liga em receptores de 5-HT2A com uma Ki de < 100 nM e em um ensaio funcional os compostos antagonizam liberação de Ca2+ evocada por 5- HT dos depósitos intracelulares com um Kb de 67 nM. Uma análise de Schild revelou antagonismo competitivo com um Kb de 100 nM.

O experimento foi realizado como segue. 2 ou 3 dias antes do

experimento células CHO expressando 250 fmol/mg de receptores de 5-HT2A de humano são plaqueadas em uma densidade suficiente para dar uma camada

mono-confluente no dia do experimento. As células são carregadas com

2_|_ m

corante (Ca -kit de Molecular Devices) por 60 minutos a 37°C em uma incubadora contendo 5% de CO2 em umidade de 95%. Fluorescência basal foi monitorada em uma leitora de placa de imagem fluorométrica ou FLIPR384 de Molecular Devices (Sunnyvale, CA) com um comprimento de onda de excitação de 488 nm e uma faixa de emissão de 500 a 560 nm. Intensidade laser foi ajustada para um nível adequado para obter valores basais de aproximadamente 8.000-10.000 unidades de fluorescência. A variação em fluorescência basal deve ser menor do que 10%. Valores de EC5O são avaliados usando concentrações crescentes de composto de teste cobrindo pelo menos 3 décadas. Valores de pA2 são avaliados desafiando curvas de resposta à dose total de 5-HT com quatro concentrações diferentes de composto (150, 400, 1.500 e 4.000 nM). Valores de Kb também foram avaliados desafiando 2 décadas de substâncias de teste com EC85 de 5-HT. Substâncias de teste são adicionadas nas células 5 minutos antes de 5-HT. Valores de Ki foram calculados usando a equação de Cheng-Prusoff.

Exemplo IC Antagonismo de receptor de 5-HT^a Em oócitos expressando receptores de 5-HT3A homoméricos de humano 5-HT ativa correntes com uma EC50 de 2.600 nM. Esta corrente pode ser antagonizada com antagonistas de 5-HT3 clássicos tal como ondansetron. Ondansetron exibe um valor de Ki abaixo de 1 nM neste 5 sistema. Composto I exibe antagonismo potente em concentrações baixas (0,1 nM - 100 nM) (IC50 -10 nM/ Kb ~ 2 nM) e propriedades agonísticas quando aplicado em concentrações mais altas (100 - 100.000 nM) (EC50 ~ 2.600 nM) alcançando uma corrente máxima de aproximadamente 70-80 % da corrente máxima induzida pela própria 5-HT. Em oócitos expressando receptores de 5- 10 HT3a homoméricos de rato 5-HT ativa correntes com uma EC5O de 3,3 μΜ. Os experimentos foram realizados como segue. Oócitos foram cirurgicamente removidos de Xenepus laevis fêmea madura anestesiada em MS-222 0,4% por 10-15 min. Os oócitos foram então digeridos na temperatura ambiente por 2- 3 horas com colagenase 0,5 mg/ml (tipo IA Sigma-Aldrich) em tampão OR2 15 (NaCl 82,5 mN, KCl 2,0 mM, MgCl2 1,0 mM e HEPES 5,0 mM, pH 7,6). Oócitos esquivados da camada de folículo foram selecionados e incubados por 24 horas em Tampão Salino de Barth Modificado [NaCl 88 mM, KCl 1 mM, HEPES 15 mM, NaHCO3 2,4 mM, CaCl2 0,41 mM, MgSO4 0,82 mM, Ca(NO3)2 0,3 mM] suplementado com piruvato de sódio 2 mM, penicilina 0,1 20 U/l e estreptomicina 0,1 μg/l. Oócitos de estágio IV-IV foram identificados e injetados com 12-48 nl de água livre de nuclease contendo 14 - 50 pg de cRNA codificador de receptores de 5-HT3A de humano e incubados a 18°C até serem usados em registros eletrofisiológicos (1-7 dias após injeção). Oócitos com expressão de receptores de 5-HT3 de humano foram deixados em 25 1 ml de banho e perfimdidos com tampão de Ringer (NaCl 115 mM, KCl 2,5 mM, HEPES 10 mM, CaCl21,8 mM, MgCl2OjI mM, pH 7,5). Células foram empaladas com eletrodos de 0,5-1 ΜΩ inseridos em ágar contendo KCl 3 M e voltagem fixada a -90 mV por um amplificador GeneClamp 500B. Os oócitos foram continuamente perfundidos com tampão de Ringer e as drogas foram aplicadas no perfundido. Soluções de agonista de 5-HT foram aplicadas por 10 - 30 s. As potências dos antagonistas de receptor de 5-HT3 foram examinadas por medição de resposta à concentração contra estimulação de 5- HT 10 μΜ.

Exemplo ID Antagonismo de receptor o^a

Composto I foi testado para afinidades por receptor a1A e foi verificado que exibe um perfil antagonístico com afinidade média por receptores aiA (Ki = 34 nM).

No dia dos experimentos membranas (veja abaixo para descrição da preparação de membrana) são descongeladas e homogeneizadas em tampão usando um ultra turrax e diluídas para a concentração desejada (5 μg/cavidade ~ 5 μg/900 μΐ, armazenar sobre gelo até o uso).

O experimento é iniciado por misturação de 50 μΐ de composto

Λ

de teste, 50 μΐ de [ Hj-Prazosin e 900 μΐ de membranas, e a mistura é incubada por 20 minutos a 25°C. Ligação não-específica é determinada na presença de WB-4101 10 μΜ e a ligação total é determinada na presença de tampão. Após a incubação, ligante ligado é separado do não ligado por filtração através de Unifilter GF/B, pré-embebido em PEI 0.1% por 30 minutos, usando um programa Tomtec Cell Harvester (D4.2..4). 96 cavidades. Filtros são lavados 3 vezes com 1 ml de tampão gelado, secos a 50°C e 35 μΐ de líquido de cintilação /cavidade são adicionados nos filtros. Radioatividade ligada é contada em um Wallac OY 1450 MicroBeta. A afinidade é calculada de Y = 100/(1+ I Oi5wogic50*) onde Y denota ligação % e X denota a concentração de composto. Concentrações de composto cobrindo 2 décadas foram usadas para calcular o valor de IC5o. Ki foi calculado da equação de Cheng Prusoff: Ki = (IC50/(1+ ([L]/Kd))

Em um ensaio funcional os compostos da presente invenção antagonizam a liberação de Ca evocada por adrenalina dos depósitos intracelulares e um ensaio funcional revelou que os compostos foram antagonistas.

Estes experimentos foram realizados essencialmente como descrito abaixo.

Todas as células foram cultivadas em meio DMEM 5 suplementado com BCS 10%, L-glutamina 4 mM (ou 2 mM no caso de COS7), e 100 unidades /ml de penicilina mais 100 μg/ml de estreptomicina, a 37°C, em CO2 5%.

Vinte e quatro horas antes dos ensaios, células CHO expressando os receptores alfa-1A_7 de humano foram semeadas em placas de 10 microtítulo de parede preta de 384 cavidades revestidas com poli-D-lisina. Meio de cultura foi aspirado e as células foram carregadas de corante com Fluo-4 1,5 μΜ em tampão de ensaio composto de Solução Salina Equilibrada de Hank (NaCl 138 mM, KCl 5 mM, CaCl21,3 mM, MgCl2 0,5 mM, MgSO4 0,4 mM, KH2PO4 0,3 mM, Na2HPO4 0,3 mM, glicose 5,6 mM) mais HEPES 15 20 mM pH 7,4, BSA 0,05% e probenicid 2,5 mM (50 μΐ/cavidade) por 1 hora em CO2 5% a 37°C. Após remoção de excesso de corante, as células foram lavadas em tampão de ensaio e dispostas em camadas com um volume final igual a 45 μΐ/cavidade (ou 30 μΐ/cavidade para ensaio de antagonista). No caso de avaliação de antagonista, antagonista ou veículo foi adicionado neste 20 ponto como uma alíquota de 15 μΐ em tampão contendo 4% de DMSO a 4x a concentração final (DMSO final = 1%), seguido por uma incubação de 20 min. Fluorescência basal foi monitorada em uma leitora de placa de imagem fluorométrica ou FLIPR™ de Molecular Devices (Sunnyvale, CA) com um comprimento de onda de excitação de 488 nm e uma faixa de emissão de 500 25 a 560 nm. Energia de emissão de laser foi ajustada de modo que as leituras de fluorescência basal fossem aproximadamente 8.000 unidades fluorescentes relativas (RFU). Células foram então estimuladas na temperatura ambiente com agonistas diluídos em tampão de ensaio (15 μΐ), e RFU foram medidas em intervalos de 1,5 segundos durante um período de 2,5 min. Mudança máxima em fluorescência foi calculada para cada cavidade. Curvas de resposta à concentração derivadas da mudança máxima em fluorescência foram analisadas por regressão não-linear (equação de Hill). Para determinações antagonísticas, após 20 min incubação de composto (como 5 acima), concentrações fixadas de serotonina agonista padrão foram adicionadas.

Exemplo 2A 4-r2-('4-metil-fenil-sulfanilVfenill-piperidina, sal

de HBr

Brometo de 2-(4-tolil-sulfanil)-fenila Em um reator agitado com atmosfera de nitrogênio N-metil

pirrolidona, NMP (4,5 L) foi jateada com nitrogênio por 20 minutos. 4-Metilbenzeno-tiol (900 g, 7,25 moles) foi adicionado e então 1,2-dibromo-benzeno (1.709 g, 7,25 moles). Terc-butóxido de potássio (813 g, 7,25 moles) foi finalmente adicionado como o último reagente. A reação foi exotérmica 15 devido a uma elevação de temperatura da mistura reacional para 70°C. A mistura reacional foi então aquecida para 120°C por 2-3 horas. A mistura reacional foi esfriada para a temperatura ambiente. Acetato de etila (4 L) foi adicionado e solução aquosa de cloreto de sódio (15%, 2,5 L). A mistura foi agitada por 20 minutos. A fase aquosa foi separada e extraída com outra 20 porção de acetato de etila (2 L). A fase aquosa foi separada e as fases orgânicas foram combinadas e lavadas com solução de cloreto de sódio (15%, 2,5 L). A fase orgânica foi separada, seca com sulfato de sódio e evaporada em pressão reduzida para dar um óleo vermelho que contém 20 - 30% de NMP. O óleo foi diluído para duas vezes o volume com metanol e a mistura 25 foi refluxada. Mais metanol foi adicionado até ser obtida uma solução vermelha clara. A solução foi esfriada lentamente para a temperatura ambiente enquanto semeada. O produto cristaliza como cristais quase brancos, eles foram isolados por filtração e lavados com metanol e secos a 40°C em um forno a vácuo até peso constante. 4-Hidròxi-4-(2-(4-tolil-sulfanil)-fenil)-piperidin-l-carboxilato

de etila

Em um reator agitado sob atmosfera de nitrogênio brometo de 2-(4-tolil-sulfanil)-fenila (600 g, 2,15 moles) foi suspenso em heptano (4,5 L).

5 Na temperatura ambiente BuLi 10 M em hexano (235 mL, 2,36 moles) foi adicionado durante 10 minutos. Apenas uma exoterma pequena foi observada. A suspensão foi agitada por 1 hora na temperatura ambiente e então esfriada para -40°C. l-Carbetóxi-4-piperidona (368 g, 2,15 moles) dissolvida em THF (1,5 L) foi adicionada em uma vazão lenta para que a temperatura de reação 10 fosse mantida abaixo de -40°C. Quando a reação alcançou a completitude, ela foi aquecida para 0°C e HCl IM (1 L) foi adicionado mantendo a temperatura abaixo de IO0C. A fase aquosa ácida foi separada e extraída com acetato de etila (1 L). As fases orgânicas foram combinadas e extraídas com solução de cloreto de sódio (15%, I L). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e 15 evaporada para uma massa semi-cristalina. Ela foi transformada em lama com acetato de etila (250 mL) e filtrada. Seca em um forno a vácuo a 40°C até peso constante.

4-(2-(4-Tolil-sulfanil)-fenil)-piperidin-l-carboxilato de etila

r

Acido trifluoro-acético (2,8 kg, 24,9 moles) e trietil-silano 20 (362 g, 3,1 moles) foram carregados em um reator com um agitador eficiente. 4-Hidróxi-4-(2-(4-tolil-sulfanil)-fenil)-piperidin-l-carboxilato de etila (462 g, 1,24 moles) foi adicionado via um funil de pó em porções. A reação foi ligeiramente exotérmica. A Temperatura subiu para 50°C. Após o término da adição a mistura reacional foi aquecida para 60°C por 18 horas. A mistura 25 reacional foi esfriada para a temperatura ambiente. Tolueno (750 mL) e água (750 mL) foram adicionados. A fase orgânica foi isolada e a fase aquosa foi extraída com outra porção de tolueno (750mL). As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com solução de cloreto de sódio (15%, 500 mL) e secas sobre sulfato de sódio. O sulfato de sódio foi filtrado, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para um óleo vermelho que foi processado mais adiante nas etapas seguintes.

Bromidrato de 4-(2-(4-tolil-sulfanil)-feníl)-píperidina O 4-(2-(4-tolil-sulfanil)-fenil)-piperidin-1 -carboxilato de etila bruto como um óleo vermelho do exemplo 3 foi misturado em um reator agitado com ácido bromídrico em ácido acético (40%, 545 mL, 3,11 moles). A mistura foi aquecida a 80°C por 18 horas. A mistura reacional foi esfriada para a temperatura ambiente. Durante o esfriamento o produto cristalizou. Após 1 hora na temperatura ambiente etil-éter (800 mL) foi adicionado na mistura reacional, e a mistura foi agitada por outra hora. O produto foi filtrado, lavado com etil-éter e seco em um forno a vácuo a 50°C até peso constante.

Exemplo 2B 4-r2-f4-metil-fenil-sulfanilVfenill-piperidina. sal

de HBr

Em 442 gramas de etil-éster de ácido 4-(2-p-tolil-sulfanilfenil)-piperidina-l-carboxílico agitado e ligeiramente aquecido (aprox. 45°C) como um óleo foram adicionados 545 ml de HBr 33% em peso em AcOH (5,7 M, 2,5 eqv.). Esta mistura dá uma exoterma de 10°C. Após adição final a mistura reacional é aquecida para 80°C e deixada por 18 horas. Uma amostra é retirada e analisada por HPLC e se não completada mais Hbr 33% em peso em AcOH precisa ser adicionado. Caso contrário a mistura é esfriada para 25°C causando a precipitação do produto bromidrato de 4-(2-p-tolil-sulfanilfenil)-piperidina. Após uma hora a 25°C na suspensão espessa são adicionados 800 ml de dietil-éter. Agitação é continuada por outra hora antes de o produto ser isolado por filtração, lavado com 400 ml de dietil-éter e seco em vácuo a 40°C durante a noite. O bromidrato de composto I foi isolado como sólido branco.

Exemplo 2C Recristalização de 4-F2-(4-mmetil-fenil-sulfaniQfenill-piperidina, sal de HBr

Uma mistura de 10,0 gramas de sal de HBr5 e.g. preparado como acima, foi aquecida para refluxar em 100 ml deH20. A mistura tomouse límpida e totalmente dissolvida a 80-90°C. Na solução límpida foi adicionado 1 grama de carvão e refluxo foi continuado por 15 minutos antes de ser filtrado e deixado esfriar espontaneamente para a temperatura 5 ambiente. Durante o esfriamento ocorreu precipitação de sólido branco e a suspensão foi agitada por 1 hora na temperatura ambiente. Filtração e secagem em vácuo a 40°C durante a noite produziram 6,9 gramas (69%) do sal de adição de ácido HBr de 4-[2-(4-metil-fenil-sulfanil)-fenil]-piperidina.

Exemplo 3 4-r2-('4-metil-fenil-sulfanil)-fenill-piperidina,

outros sais

Preparação de soluções de estoque de base livre

Em uma mistura de 500 ml de acetato de etila e 200 ml de H2O foram adicionados 50 gramas do sal de HBr produzindo uma lama de duas fases. Nesta lama foram adicionados aproximadamente 25 ml de NaOH 15 concentrado que causaram a formação de uma solução de duas fase clara (pH medido foi 13-14). A solução foi agitada vigorosamente por 15 minutos e a fase orgânica foi separada. A fase orgânica foi lavada com 200 ml H2O, seca sobre Na2SO^ filtrada e evaporada em vácuo a 60°C produzindo a base livre em rendimento de 38 gramas (99%) como um óleo quase incolor.

Dissolução de 10 gramas do óleo e ajuste do volume para 150

ml usando acetato de etila produziram uma solução de estoque 0,235 M em acetato de etila da qual foram usadas alíquotas de 1,5 ml (100 mg d base livre).

Dissolução de 10 gramas do óleo e ajuste do volume para 100 ml usando EtOH 96% em vol. produziram uma solução de estoque 0,353 M em EtOH da qual foram usadas alíquotas de 1,0 ml (100 mg de base livre).

Formação de sais usando soluções de estoque da base livre

As alíquotas dadas foram adicionadas em tubos de ensaio e enquanto agitadas a quantidade apropriada de ácido foi adicionada como indicada em Tabela I. Se o ácido fosse um líquido ele foi adicionado puro caso contrário ele foi dissolvido no solvente dado antes da adição. Após misturação e precipitação agitação foi continuada durante a noite e o precipitado foi colhido por filtração. Tabela 2 mostra a solubilidade de sais de 4-[2-(4-metil-feml-sulfanil)-fenil]-piperidina.

Tabela 1

Ácido PM Quantidade Solvente CHN (exp.) CHN (teoria) (Base:Ácido) (g/mol) de ácido (mg ou μΐ) Acido palmítico, 256,42 90,5 EtOAc 75,36 9,77 2,46 75,64 9,9 2,6 ácido hexadecanóico 1:1 Ácido DL-lático, 90,1 31,8 EtOAc 66,88 7,26 3,52 67,53 7,29 3,75 ácido DL-2- hidróxi-propiônico 1:1 Ácido adípico, 146,14 51,6 EtOAc 66,08 7,23 2,98 67,1 7,27 3,26 ácido 1,6- hexanodióico 1:1 Acido adípico, 146,14 25,8 EtOAc 70,66 7,32 3,82 70,75 7,35 3,93 ácido 1,6- hexanodióico 2:1 Acido fumárieo 1:1 116,01 40,9 EtOH 65,71 6,41 3,35 66,14 6,31 3,51 Acido glutárico, 132,12 46,6 EtOAc 66,09 6,97 3,2 66,48 7,03 3,37 ácido 1,5- pentanodióico 1:1 Aeido malônico 104,1 36,7 EtOAe 65,04 6,53 3,54 65,09 6,5 3,62 1:1 Aeido oxálico 1:1 90,1 31,8 EtOH 64,28 6,41 3,61 64,32 6,21 3,75 Aeido sebacoínico, 202,02 35,6 EtOAc 71,79 7,86 3,58 71,83 7,86 3,64 ácido 1,8- octanodióico 2:1 Acido succínico, 118,1 20,8 EtOAc 65,65 6,86 3,4 65,80 6,78 3,49 (formado sal 1:1) Acido L-málico, 134,1 47,3 EtOAc 62,87 6,20 3,22 63,29 6,52 3,36 ácido L-2-hidróxibutanodióico, 1:1, a Aeido L-málico, 134,1 47,3 EtOH 62,99 6,66 3,13 63,29 6,52 3,36 ácido L-2-hidróxibutanodióico, 1:1, β Acido D-tartárico, 150,1 53,0 EtOH 60,67 6,4 3,07 60,95 6,28 3,23 ácido D-2,3-dihidróxibutanodióico 1:1 Ácido L-aspártico 133,1 47,0 EtOH 59,31 6,7 7,1 63,43 6,78 6,73 (contém excesso de ácido) Ácido glutâmieo 165,15 58,3 EtOH 56,38 I 6,88 | 7,35 56,46 6,94 7,06 (contém excesso de (para sal 1:1 e ácidoácido) mono-hidrato 1:1) Aeido cítrico 2:1 192,13 33,9 EtOAc 65,93 6,72 3,44 66,46 6,64 3,69 HClZEt2O 1:1 2 M 176,4 EtOH Acido fosfórico 1:1 14,7 M 24,0 EtOAe 55,79 6,47 3,43 56,68 6,34 3,67 Tabela 2

--- f f ......... .11. - ..... Solubilidade (mg/ml) Acido (BaserAcido) Acido palmítico, ácido hexadecanóico 1:1 0,4 Acido DL-lático, ácido DL-2-hidróxi-propiônico 1:1 >150 Acido adípico, ácido 1,6-hexanodióico 1:1 2,5 Acido adípico, ácido 1,6-hexanodióico 2:1 1,0 Acido fumárieo 1:1 0,2 Acido glutárico, ácido 1,5-pentanodióico 1:1 13 Acido malônico 1:1 (a) 5,2 Acido oxálico 1:1 1,1 Aeido sebacoínico, ácido 1,8-octanodióico 2:1 0,7 Acido succínico, ácido 1,4-butanodióico 2:1 2,0 Acido L-málico, ácido L-2-hidróxi-butanodióico, 1:1, β 2,8 Acido D-tartárico, ácido D-2,3-di-hidróxi-butanodióico 1:1 1,8 Acido L-aspártico 1:1 39 Acido glutâmico 1:1 >35 Acido cítrico 2:1 0,5 Aeido fosfórico 1:1 6,0 HCl 4,5 HBr 2,4 Exemplo 4 Efeito sobre níveis de acetil-colina

O experimento foi planejado para avaliar os efeitos de composto I sobre níveis extracelulares de acetil-colina no córtex pré-frontal e no hipocampo ventral de ratos livremente móveis.

Ratos machos Sprague-Dawley, inicialmente pesando 275-300 g, foram usados. Os animais foram alojados sob um ciclo de luz/escuro de 12 h sob condições controladas para temperatura interna regular (21±2°C) e umidade interna regular (55±5%) com alimento e água de torneira disponíveis ad libitum.

Experimentos de cirurgia e microdiálise

Ratos foram anestesiados com hipnorm/dormicum (2 ml/kg) e cânulas guia intracerebrais (CMA/12) foram estereotaxicamente implantadas no hipocampo, almejando posicionar a ponta da sonda de diálise no 15 hipocampo ventral (coordenadas: 5,6 mm posterior ao bregma, lateral -5,0 mm, 7,0 mm ventral à dura ou no córtex frontal (coordenadas: 3,2 mm anterior ao bregma; lateral, 0,8 mm; 4,0 mm ventral à dura). Parafusos de ancoragem e cimento acrílico foram usados para fixação das cânulas guia. A temperatura corporal dos animais foi monitorada por sonda retal e mantida a 37°C. Os ratos foram permitidos se recuperarem da cirurgia por 2 dias, alojados individualmente em gaiolas. No dia do experimento uma sonda de microdiálise (CMA/12, diâmetro de 0,5 mm, comprimento de 3 mm) foi 5 inserida na cânula guia.

As sondas foram conectadas via um eixo de dois canais em uma bomba de microinjeção. Perfusão da sonda de microdiálise com solução de Ringer filtrada (NaCl 145 mM, KCl 3 mM, MgCl2 I mM, CaCl2 1,2 mM contendo neostigmina 0,5 μΜ) foi iniciada lentamente antes da inserção da 10 sonda no cérebro e continuada durante o experimento em uma vazão de fluxo constante de 1 μΐ/min. Após 180 min de estabilização, os experimentos foram iniciados. Dialisados foram colhidos a cada 20 min. Após os experimentos os animais foram mortos, seus cérebros removidos, congelados e fatiados para verificação de posicionamento de sonda.

Análise de acetil-colina em dialisado

Concentração de acetil-colina (ACh) nos dialisados foi analisada por meio de HPLC com detecção eletroquímica usando uma fase móvel consistindo de hidrogeno-fosfato de dissódio 100 mM, ácido octanosulfônico 2,0 mM, cloreto de tetrametil-amônio 0,5 mM e MB (ESA) 0,005%, 20 pH 8,0. Um reator de enzima de pré-coluna (ESA) contendo colina oxidase imobilizada eliminou colina da amostra injetada (10 μΐ) antes da separação de ACh na coluna analítica (ESA ACH-250); vazão de fluxo 0,35 ml/min, temperatura: 3 5°C. Após a coluna analítica a amostra passou através de um reator de fase sólida de pós-coluna (ESA) contendo acetil-colina-esterase e 25 colina oxidase imobilizadas. O último reator converteu ACh em colina e subseqüentemente colina em betaína e H2O2. A última foi detectada eletroquimicamente pelo uso de um eletrodo de platina (Célula analítica: ESA, modelo 5040). Apresentação de dados

Em experimentos de injeção única o valor médio de 3 amostras consecutivas de ACh imediatamente precedendo a administração de composto serviu como o nível basal para cada experimento e dados foram convertidos em percentagem de basal (valores de pré-injeção basais médios normalizados para 100%). Os dados são apresentados em Figuras Iae lb.

Os dados apresentados em figuras Ia e Ib mostram um aumento dependente de dose nos níveis de acetil-colina extracelular no

r

cérebro. E esperado que esta descoberta pré-clínica se traduza em uma melhoria em cognição em um ambiente clínico útil e.g. no tratamento de enfraquecimento cognitivo e doenças caracterizadas por um enfraquecimento cognitivo.

Exemplo 5 Efeito sobre níveis de dopamina

Uma injeção única de dose de composto I dependentemente 15 aumentou os níveis de dopamina (DA) extracelular no córtex frontal de rato. O composto da presente invenção a 8,9 mg/kg e 18mg/kg s.c, aumentou os níveis de DA em aproximadamente 100% e 150%, respectivamente, acima dos níveis de linha base como mostrado em figura 2. Quantidades são calculadas como a base livre.

Método

Ratos machos Sprague-Dawley, inicialmente pesando 275-300 g, foram usados. Os animais foram alojados sob um ciclo de luz/escuro de 12 h sob condições controladas para temperatura interna regular (21±2°C) e umidade interna regular (55±5%) com alimento e água de torneira disponíveis 25 ad libitum. Nos experimentos de tratamento de três dias foram usadas minibombas osmóticas (Alzet, 2ML1). As bombas foram cheias sob condições assépticas e implantadas subcutaneamente sob anestesia de sevoflurance. Os experimentos foram realizados com as minibombas a bordo. Amostras de sangue para medição de níveis plásmicos de composto de teste após tratamento de 3 dias foram colhidas no final dos experimentos.

Experimentos de cirurgia e microdiálise

Animais foram anestesiados com hipnorm/dormicum (2 ml/kg) e cânulas guia intracerebrais (CMA/12) foram estereotaxicamente implantadas no hipocampo, posicionando a ponta da sonda de diálise no hipocampo ventral (coordenadas: 5,6 mm anterior ao bregma, lateral -5,0 mm, 7,0 mm ventral à dura ou no córtex frontal (coordenadas: 3,2 mm anterior ao bregma; lateral, 0,8 mm; 4,0 mm ventral à dura). Parafusos de ancoragem e cimento acrílico foram usados para fixação das cânulas guia. A temperatura corporal dos animais foi monitorada por sonda retal e mantida a 37°C. Os ratos foram permitidos se recuperaram da cirurgia por 2 dias, alojados individualmente em gaiolas. No dia do experimento uma sonda de microdiálise (CMA/12, diâmetro de 0,5 mm, comprimento de 3 mm) foi inserida na cânula guia. As sondas foram conectadas via um eixo de dois canais em uma bomba de microinjeção. Perfusão da sonda de microdiálise com solução de Ringer filtrada (NaCl 145 mM, KCl 3 mM, MgCl2 I mM, CaCl2 1,2 mM) foi iniciada lentamente antes da inserção da sonda no cérebro e continuada durante o experimento em uma vazão de fluxo constante de 1 (1,3) μί/ππη. Após 180 min de estabilização, os experimentos foram iniciados. Dialisados foram colhidos a cada 20 (30) min. Após os experimentos os ratos foram mortos por decapitação, seus cérebros removidos, congelados e fatiados para verificação de posicionamento de sonda.

Análise de dialisados

Concentração de dopamina nos dialisados foi analisada por meio de HPLC com detecção eletroquímica. As monoaminas foram separadas 25 por cromatografia líquida em fase reversa (ODS 150 mm x 3 mm, 3 μΜ). Dopamina: fase móvel consistindo de NaH2PO4 90 mM, citrato de sódio 50 mM, 1-octano-sulfonato de sódio 367 mg/l, EDTA 50 μΜ e acetonitrila 8% (pH 4,0) em uma vazão de fluxo de 0,5 ml/min. Detecção eletroquímica foi realizada usando um detector coulométrico, potencial ajustado em 250 mV (célula guarda em 350 mV) (Coulochem II, ESA).

Exemplo 6 Efeito sobre dor neuropática

Para demonstrar uma eficácia contra dor neuropática, composto I foi testado no modelo de formalina de dor neuropática [Neuropharm., 48, 252-263, 2005; Pain, 51, 5-17, 1992]. Neste modelo, camundongos receberam uma injeção de formalina (4,5 %, 20 μΐ) na superfície plantar da pata traseira esquerda e depois foram deixados em bécheres de vidro individuais (2/capacidade) para observação. A irritação causada pela injeção de formalina causa uma resposta comportamental bifásica característica, quantificada pela quantidade de tempo lambendo a para lesionada. A primeira fase (-0-10 minutos) representa irritação química direta e nocicepção, enquanto que é considerado que a segunda (—20-30 minutos) representa dor de origem neurótica. As duas fases são separadas por um período quiescente no qual o comportamento retoma para normal. Medição da quantidade de tempo consumida lambendo a pata lesionada nas duas fases avalia a efetividade dos compostos de teste em reduzir os estímulos dolorosos.

Oito camundongos C57/B6 (ca. 25g) foram testados por grupo. Tabela 3 abaixo mostra a quantidade de tempo consumida lambendo a para lesionada nas duas fases, i.e. 0-5 minutos e 20-30 minutos após injeção de formalina. A quantidade de composto administrada é calculada como a base livre.

Tabela 3

Veículo 1,0 mg/kg 2,5 mg/kg 10 mg/kg 0-5 minutos (s) 42 37 30 37 20-30 minutos (s) 41 43 26 6 Os dados em tabela 3 mostram que o composto I tem pouco

efeito na primeira fase representando irritação química direta e nocicepção. Mais notavelmente, os dados também mostram um decréscimo claro e dependente de dose no tempo consumido lambendo as patas na segunda fase indicando um efeito de composto I no tratamento de dor neuropática.

Claims (21)

1. Formulação líquida farmacêutica, caracterizada pelo fato de compreender um sal de 4-[2-(4-metil-fenil-sulfanil)-fenil]-piperidina selecionado de o sal de adição de ácido DL-lático, o sal de adição de ácido glutárico, o sal de adição de ácido L-aspártico e o sal de adição de ácido glutâmico.

2. Formulação líquida de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que dito sal é o sal de adição de ácido DL-lático.

3. Formulação líquida de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que dito sal é o sal de adição de ácido glutárico.

4. Formulação líquida de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que dito sal é o sal de adição de ácido L-aspártico.

5. Formulação líquida de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que dito sal é o sal de adição de ácido glutâmico.

6. Formulação líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a concentração de dito sal está acima de 5 mg/ml.

7. Método para o tratamento de uma doença selecionada de distúrbios de humor, distúrbio depressivo maior, distúrbio de ansiedade geral, depressão atípica, depressão bipolar, distúrbio de ansiedade social, distúrbio compulsivo obsessivo, distúrbio de pânico, distúrbio de estresse póstraumático, abuso, distúrbio de comer, distúrbio de sono, mal de Alzheimer, demência, dor crônica, depressão associada com enfraquecimento cognitivo, depressão associada com psicose, enfraquecimento cognitivo em esquizofrenia, depressão ou ansiedade com dor, distúrbios comportamentais na idade avançada, ADHD, melancolia, depressão resistente a tratamento ou depressão com sintomas residuais, caracterizado pelo fato de compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma formulação líquida como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6 a um paciente em necessidade da mesma.

8. Método de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que um volume predeterminado de dita formulação líquida é medido e o volume resultante é adicionado em um líquido, e o líquido é administrado ao paciente.

9. Uso de um composto sendo sal de 4-[2-(4-metil-fenilsulfanil)-fenil]-piperidina selecionado de o sal de adição de ácido DL-lático, o sal de adição de ácido glutárico, o sal de adição de ácido L-aspártico e o sal de adição de ácido glutâmico, caracterizado pelo fato de ser na manufatura de um medicamento líquido para o tratamento de uma doença selecionada de distúrbios de humor, distúrbio depressivo maior, distúrbio de ansiedade geral, depressão atípica, depressão bipolar, distúrbio de ansiedade social, distúrbio compulsivo obsessivo, distúrbio de pânico, distúrbio de estresse póstraumático, abuso, distúrbio de comer, distúrbio de sono, mal de Alzheimer, demência, dor crônica, depressão associada com enfraquecimento cognitivo, depressão associada com psicose, enfraquecimento cognitivo em esquizofrenia, depressão ou ansiedade com dor, distúrbios comportamentais na idade avançada, ADHD, melancolia, depressão resistente a tratamento ou depressão com sintomas residuais.

10. Uso de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que dito sal é sal de adição de ácido DL-lático.

11. Uso de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que dito sal é o sal de adição de ácido glutárico.

12. Uso de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que dito sal é o sal de adição de ácido L-aspártico.

13. Uso de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que dito sal é o sal de adição de ácido glutâmico.

14. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a14, caracterizado pelo fato de que dito medicamento compreende mais do que mg/ml de ditos sais.

15. Composto, caracterizado pelo fato de ser sal de 4-[2-(4- metil-fenil-sulfanil)-fenil]-piperidina, sendo selecionado de o sal de adição de ácido DL-lático, o sal de adição de ácido glutárico, o sal de adição de ácido Laspártico e o sal de adição de ácido glutâmico para uso no tratamento de uma doença selecionada de distúrbios de humor, distúrbio depressivo maior, distúrbio de ansiedade geral, depressão atípica, depressão bipolar, distúrbio de ansiedade social, distúrbio compulsivo obsessivo, distúrbio de pânico, distúrbio de estresse pós-traumático, abuso, distúrbio de comer, distúrbio de sono, mal de Alzheimer, demência, dor crônica, depressão associada com enfraquecimento cognitivo, depressão associada com psicose, enfraquecimento cognitivo em esquizofrenia, depressão ou ansiedade com dor, distúrbios comportamentais na idade avançada, ADHD, melancolia, depressão resistente a tratamento ou depressão com sintomas residuais, sendo que dito sal está em uma formulação líquida farmacêutica.

16. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que é o sal de adição de ácido DL-lático de 4-[2-(4-metil-fenilsulfanil)-fenil] -piperidina.

17. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que é o sal de adição de ácido glutárico de 4-[2-(4-metil-fenilsulfanil)-fenil] -piperidina.

18. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que é o sal de adição de ácido L-aspártico de 4-[2-(4-metil-fenilsulfanil)-fenil]-piperidina.

19. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que é o sal de adição de ácido glutâmico de 4-[2-(4-metil-fenilsulfanil)-fenil] -piperidina.

20. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 19, caracterizado pelo fato de que dita formulação líquida compreende mais do que 5 mg/ml de dito sal.

21. Recipiente equipado com um acessório para gotejamento, caracterizado pelo fato de compreender uma formulação líquida como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6.