BRPI0919753B1

BRPI0919753B1 - forma polimórfica de palmitoiletanolamida, composição farmacêutica para uso humano ou veterinário, método para a micronização da palmitoiletanolamida e palmitoiletanolamida ultramicronizada

Info

Publication number: BRPI0919753B1
Application number: BRPI0919753-2A
Authority: BR
Inventors: Francesco Della Valle; Gabriele Marcolongo; Maria Federica Della Valle
Original assignee: Epitech Group S.R.L
Priority date: 2009-09-07
Filing date: 2009-09-07
Publication date: 2020-12-29
Also published as: US20130280333A1; ES2547133T5; US8663701B2; CY1116698T1; KR101662871B1; EP2796129B1; CN106138022A; PL2475352T5; CY1116695T1; CA2738117C; WO2011027373A1; PT2475352E; PT2796129E; ES2548190T3; AU2009352080A1; CA2738117A1; AR115939A2; BRPI0919753A2; PL2796129T3; BRPI0919753B8

Abstract

composição contendo palmitoil - etano-lamida ultramicronizada. a presente invenção refere-se a uma composição para uso farmacêutico ou veterinário, compreendendo a palmitoiletanolamida. em particular, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica para uso humano ou veterinário, contendo uma quantidade terapeuticamente eficiente de palmitoiletanolamida na forma ultramicronizada, em que mais do que 90% em peso da palmitoiletanolamida têm tamanhos de partícula menores do que 6 mícrons, juntamente com excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

Description

Campo da Invenção

[0001] A presente invenção refere-se a uma composição para usofarmacêutico ou veterinário, compreendendo a palmitoiletanolamida. Descrição do Estado da Técnica

[0002] Nos anos recentes, o conceito de "inflamação neuroimuno-gênica" tem sido amplamente desenvolvido, e têm sido feitos importantes progressos no entendimento dos mecanismos biológicos por detrás deste tipo comum de inflamação do tecido, que é principalmente induzida pela liberação de dadas substâncias pelas terminações dos neurônios sensórios primários. Ademais, mostrou-se que as fibras sensíveis de pequenos diâmetros participam no fenômeno de inflamação neuroimunogênica, fibras estas que são sensíveis à capsaicina o vaniloide de planta que está presente na pimenta-malagueta vermelha -, e que dados neuropeptídeos, os quais são liberados pelas fibras nervosas acima mencionadas particularmente, a Substância P (SP) e o Peptídeo Relacionado ao Gene de Calcitonina (CGRP) representam os peptídeos principais responsáveis pela ocorrência de inflamação neuroimunogênica perifericamente.

[0003] A possibilidade de regular a excitabilidade dos neurôniossensórios tanto nociceptivos quanto pruriceptivos tem uma importância terapêutica relevante e crescente em um amplo número de doenças que afetam os tecidos dos órgãos periféricos, tanto no homem quanto nos animais.

[0004] Então, as pesquisas mais recentes têm colocado em foco opapel que uma família específica de receptores, chamada TRPV, e em particular o receptor TRPV1 inicialmente conhecido como receptor para capsaicina VR1 -desempenha no processo de inflamação neurogênica, e em particular nos fenômenos hiperalgésicos associados a ela.

[0005] A partir do ponto de vista clínico, os resultados do novo en-tendimento sobre os mecanismos da inflamação neuroimunogênica resultam ser de grande interesse na Síndrome do Intestino Irritável, na cistite intersticial, nas vulvodinias e vestibulodinias, na vestibulite vulvar, e na prostatite não bacteriana crônica, nas lesões endometriais, na miastenia grave, nas artropatias de origem traumática ou degenerativa ou imunológica, afetando as articulações, nas doenças dolorosas dos discos intervertebrais devidas à neoinervação e à neovascularização do tecido cartilaginoso e das estruturas ligamentosas anexadas, nas síndromes cefalálgicas devidas à inflamação do tecido meníngeo, nos estados inflamatórios dos tecidos mucosos e mucocutâneos da cavidade oral e da polpa dentária, nas febres recorrentes com base autoinflamatória do tipo PFAPA, particularmente, mesmo se não exclusivamente, na idade pediátrica, na neuralgia pós-herpética, nas síndromes aderenciais devidas à peritonite e/ou eventos cirúrgicos laparotômicos e/ou laparoscópicos. As perspectivas dadas pela pesquisa biomédica nos anos recentes são de grande interesse, em relação à inflamação neuroimunogênica, tanto aguda quanto crônica, no nível da pele, bem como a implicações entre a inflamação cutânea neuroimunogênica aos estímulos psicogênicos, tais como o estresse, que configuram mais e mais claramente uma firme conexão entre o cérebro e a pele. Isto é de grande importância no planejamento de abordagens farmacológicas inovadoras em uma série de dermatites de uma natureza eritematosa-escamosa, no campo humano e veterinário (dermatiteatópica, dermatite de contato irritativa, dermatite de contato alérgica) caracterizadas por coceira, queimação, irritação local, erupção cutânea, etc., bem como em doenças inflamatórios crônicas do tipo granulomatoso no nível do dermo-epidérmico, e mais geralmente, dos tecidos conjuntivos.

[0006] A neuroinflamação no nível das estruturas nervosas do cor-dão espinhal é caracterizada pela ativação e proliferação das células microgliais, as quais estão normalmente presentes no nível espinhal em um estado inerte; tal ativação, principalmente induzida pela dor crônica e/ou neuropática, contribui em um modo relevante para a ampliação dos estímulos de dor que derivam cronicamente do Sistema Nervoso Periférico, ou devidos a danos localizados no cérebro, bem como para o desenvolvimento de neurodegeneração através da liberação microglial dos mediadores inflamatórios, e particularmente da citocina pró-inflamatória TNF-alfa, da interleucina IL-1 beta, e do NGF. O processo de ativação e proliferação da micróglia no nível do cordão espinhal adicionalmente desempenha uma função extraordinariamente importante na determinação da dor neuropática consequente aos danos nas mesmas estruturas nervosas do cordão espinhal: na realidade, a micróglia ativada mantém uma comunicação de citocina intensa com os neurônios do cordão espinhal. Tudo isto é muito importante em doenças que originam-se de dores, principalmente do cordão espinhal, tais como as estenoses dos canais medulares e as lesões traumáticas a partir da flexo-extensão da espinha (lesão em chicotada), e em doenças que, embora dependendo de danos neuronais encefálicos, devidos ao efeito de ativação das células que estão presentes no cordão espinhal (em particular, a micróglia), induzem a sintomatologia característica da dor hiperalgésica (Síndrome da Dor Central) e, em dadas situações, da espasticidade; em particular, estes são fenômenos que estão relacionados a doenças tais como a Esclerose Lateral Amiotrófica (ALS), a Esclerose Múltipla, as situações após acidente vascular cerebral, a doença de Parkinson, e a síndrome fibromiálgica.

[0007] A neuroinflamação no nível das estruturas neuronais do cérebro, hoje melhor definidas como gliose reativa, atualmente representa um dos tópicos mais interessantes para as Neurociências: em particular, a relação de causa e efeito entre a presença de processos neuroinflamatórios e dano degenerativo neuronal (neurodegeneração) está cada vez mais claramente definida, com a observação que a neuroinflamação devida à ativação e à proliferação das células não neuronais, tais como a micróglia e os astrócitos que estão presentes no cérebro, representa a causa real para o dano degenerativo que afeta o neurônio. Além disso, é evidente como a ativação da micróglia e dos astrócitos é induzida e ampliada por sinais pró-inflamatórios, também de proveniência autócrina, tais como o TNFα e a IL1 β. A neuroinflamação tem sido reconhecida como sendo um fator causal importante em muitas doenças degenerativas e traumáticas que afetam o CNS, tais como a doença de Parkinson, a doença de Alzheimer, o acidente vascular cerebral, o trauma craniano.

[0008] Uma abordagem altamente inovadora para interferir farma-cologicamente sobre as doenças suportadas por inflamação neuroimunogênica do tecido, ou neuroinflamação espinhal, ou neuroinflamação das estruturas nervosas encefálicas pode consistir na modulação, por meio de diversos mecanismos, da ativação das células não neuronais que controlam a sensibilização periférica e central das células neuronais, sem, com isso, ter de necessariamente atuar diretamente sobre o neurônio.

[0009] Além disso, tem de ser considerado, em particular, que di-versas células não neuronais, que pertencem ao sistema imune, tais como, por exemplo, a micróglia, são capazes de expressar o receptor canabinoide CB2 quando adequadamente ativadas. O endocanabinoide 2-araquidonoilglicerol (2-AG) foi reconhecido nos anos recentes como o ligante do receptor canabinoide CB2 endógeno real e, portanto, como uma substância endógena que é capaz de modular a resposta ativadora e proliferativa das células progenitoras imunes estritamente relacionadas aos processos de sensibilização dos neurônios periféricos e espinhais.

[00010] Portanto, o objetivo da presente invenção é proporcionar uma composição farmacêutica para o tratamento de doenças relacionadasà inflamação neurogênica ou neuroinflamação, tanto no nível dos órgãos periféricos quanto centralmente.

[00011] Tal objetivo é atingido por uma composição contendo palmitoiletanolamida como definida nas reivindicações em anexo, cujas definições formam uma parte integral da descrição presente.

Breve descrição das figuras

[00012] A figura 1 mostra um gráfico ilustrando a concentração de PEA no soro em animais tratados com PEA ou PEA ultramicronizada de acordo com a invenção, como uma função do tempo; a figura 2 mostra um gráfico ilustrando a concentração de 2-AG (2-araquidonoilglicerol) no soro em animais tratados com PEA ou com PEA ultramicronizada de acordo com a invenção, como uma função do tempo; a figura 3 mostra um gráfico de MDSC (Calorimetria de Varredura Diferencial Modulada) da PEA original; a figura 4 mostra um gráfico de MDSC (Calorimetria de Varredura Diferencial Modulada) da PEA ultramicronizada de acordo com a invenção; a figura 5 mostra um gráfico de XRD (Difração de Raios X) da PEA original; a figura 6 mostra um gráfico de XRD (Difração de Raios X) da PEA ultramicronizada de acordo com a invenção.

Descrição da invenção

[00013] A composição farmacêutica da invenção contém palmitoiletanolamida (PEA) na forma ultramicronizada, em que mais do que 90% em peso da palmitoiletanolamida têm tamanhos de partículas menores do que 6 mícrons.

[00014] Foi surpreendentemente observado que tal composição, comparada com as composições conhecidas contendo PEA na forma micronizada, é provida com uma alta capacidade de atuar periférica e centralmente sobre as doenças inflamatórias do tipo neurogênico ou neuroinflamatório.

[00015] A palmitoiletanolamida, uma substância de natureza lipídica, é severamente submetida a métodos de micronização, devido à facilidade com a qual ela tende a formar agregados; além disso, a micronização em moinhos mecânicos de energia tende a aquecer as partículas a serem moídas e, portanto, ela promove tal fenômeno de agregação, na prática estando em contraste com o objetivo desejado de diminuir o tamanho de partícula do composto até um nível de micrômetro.

[00016] Anteriormente, obteve-se uma micronização da palmitoiletanolamida, conforme descrita na EP 1 207 870 B1. Embora a PEA micronizada tenha, no tratamento de algumas doenças específicas, características aperfeiçoadas comparada com a não micronizada, não havia nenhuma expectativa que pudesse ser obtido um efeito também em doenças neuroinflamatórias do tipo que é tratado na presente invenção, nem havia uma motivação para expandir a micronização além do limite do tamanho de partícula obtido, tanto porque não havia nenhuma justificativa particular, quanto porque, considerada a natureza lipídica da substância submetida ao processo de micronização, a expectativa para um sucesso com as tecnologias convencionais era incrivelmente baixa. Nos testes que foram inicialmente realizados, na realidade, observou-se uma tendência do produto de gerar aglomeradosceráceos, também devida à elevação de temperatura por tempos de residência prolongados das partículas do produto na câmara de micronização, os quais são necessários para obter uma micronização mais eficiente.

[00017] Portanto, apesar dos preconceitos existentes no campo, os presentes inventores surpreendentemente verificaram que, operandose com um processo de micronização por jato de fluido (que será doravante referido como "ultramicronização"), e modificando-se adequadamente os parâmetros de tal processo, é possível obter uma micronização ainda mais eficiente, isto é, uma distribuição de partícula da PEA com tamanhos de partículas que são estatisticamente menores do que aqueles obteníveis com os métodos de micronização convencionais.

[00018] O produto obtido após a ultramicronização foi adicionalmente caracterizado, em comparação com o produto original, por a) MDSC (Calorimetria de Varredura Diferencial Modulada), e b) XRD (Difração de Raios X) com o objetivo de detectar possíveis modificações estruturais induzidas pelo processo de ultramicronização. Surpreendentemente, os inventores verificaram que o produto ultramicronizado mostra um perfil de MDSC e XRD que é completamente diferente do produto original, assim demonstrando o surgimento, após a ultramicronização, de uma estrutura cristalina diferente com um maior teor de energia.

[00019] Ainda mais surpreendentemente, os inventores verificaram que tal novo perfil de tamanho de partícula da PEA, e tal estrutura cristalina diferente caracterizada por um teor de energia maior correspondem a uma atividade farmacológica exponencialmente aumentada comparada à PEA micronizada descrita na EP 1 207 870 B1, em doenças relacionadas à inflamação neurogênica ou neuroinflamação, portanto tanto periférica quanto centralmente.

[00020] O processo de ultramicronização da presente invenção é realizado em uma planta de jato de fluido (por exemplo, o modelo de planta Jetmill®) operando com uma "tecnologia espiral" de jato de ar pressurizado que é capaz de explorar a energia cinética no lugar da energia mecânica para moer a palmitoiletanolamida. Tais peças do equipamento são convencionais, portanto, elas não serão adicionalmente descritas.

[00021] Na planta descrita não há nenhuma peça móvel, e o produto permanece dentro do disco de moagem por um tempo muito curto; os fios de fluido que são gerados dentro da câmara de micronização permitem acelerar as partículas de modo que elas possam atingir velocidades particularmente altas, tal como para gerar uma energia suficiente de modo que elas sejam moídas através de um número muito alto de colisões uma com a outra e, conforme os presentes inventores verificaram no caso do processo de ultramicronização, induzir as modificações da estrutura cristalina com o surgimento de cristais caracterizados por um teor de energia maior; quanto maior for a velocidade das partículas, maior será a energia gerada.

[00022] No processo de ultramicronização, tal tecnologia foi adicionalmente modificada, e proporciona: um aumento do diâmetro interno da câmara de micronização de 200 para 300 mm; um aumento da pressão do jato de fluido (ar) de 700+800 kPa (7+8 Bars) para 1000+1200 kPa (10+12 Bars); uma redução da alimentação de produto de 20+25 kg/h para 9+12 kg/h.

[00023] Em uma modalidade, a palmitoiletanolamida é cristalizada na presença de um polímero de vinila, antes da etapa de ultramicronização. Em tal modalidade, o polímero de vinila preferido é a polivinilpirrolidona. A cristalização pode ocorrer a partir de diversos solventes, porém o solvente de escolha é o etanol. Em um aspecto preferido, a razão de PEA e polivinilpirrolidona é cerca de 30:1.

[00024] A tabela I a seguir mostra o perfil do tamanho de partícula da PEA ultramicronizada comparado ao perfil do tamanho de partícula obtido com a micronização de acordo com a EP 1 207 870 B1. Tabela I

[00025] Para medir o tamanho da partícula, emprega-se um analisador de tamanho de partícula a laser (Malvern Mastersizer) com técnica de LALLS (Difusão de Luz de Laser de Ângulo Baixo) usando a teoria de computação de Fraunhofer.

[00026] Os testes de Calorimetria de Varredura Diferencial Modulada (MDSC) e XRD (Difração de Raios X) foram realizados sobre o produto assim obtido.

[00027] A técnica de MDSC é uma conhecida, cujos princípios e aplicações são descritos, por exemplo, em S.R. Rabel et al., Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 21 (1999) 339-345. Os testes descritos no presente pedido de patente foram realizados com um equipamento TA DSC Q200.

[00028] Tal medição da calorimetria diferencial efetuada com a técnica de MDSC mostrou uma diferença notável entre o produto inicial e o produto ultramicronizado, diferença esta que consiste no surgimento, no produto submetido à ultramicronização, de um pico positivo de transição exotérmica em uma temperatura entre 101°C e 103°C, que é diferente das estruturas com um alto teor de energia; no produto original, tal pico resulta, ao contrário, ser negativo (vide as figuras 3 e 4). O pico positivo de transição exotérmica tem de ser interpretado como o sinal do calor desenvolvido pela transformação da forma do teor de energia maior (formada durante o processo de ultramicronização) na forma cristalina nativa com teor de energia menor.

[00029] A análise do espectro de MDSC da PEA ultramicronizada parece sugerir que a forma cristalina de alta energia, obtida por meio do processo de ultramicronização da presente invenção, é substancialmenteestável na temperatura ambiente, visto que ela é convertida novamente na forma de energia baixa original somente em temperaturas que forem próximas ao ponto de fusão do produto. A transição de energia líquida que caracteriza o pico positivo em 101-103°C da figura 4 é sintomático de tal estabilidade. Diferentemente, as transições progressivas em temperaturas menores terão de ser observadas.

[00030] As medições de difração de raios X efetuadas com a técnica de XRD (foi utilizado um equipamento XPERT-PRO), com o objetivo de investigar o estado sólido dos produtos, mostram uma diferença particularmente significativa entre os espectros de difração que foram obtidos; o espectro do produto submetido à ultramicronização confirma a presença de uma estrutura cristalina diferente em comparação com o produto original (vide as figuras 5 e 6).

[00031] As posições e a intensidade dos picos individuais nos dois produtos são descritas neste documento, abaixo.

SEÇÃO BIOLÓGICA Testes bioquímicos

[00032] As medições das doses no sangue foram realizadas de 2araquidonoil-glicerol (2-AG), um endocanabinoide de grande importância na modulação da ativação das células capazes de expressar o receptor canabinoide CB2; este é o caso de muitas células que pertencem ao sistema imune, como a micróglia.

[00033] Os testes foram realizados em cães Beagle por administração, sob condições de jejum, de uma suspensão aquosa de palmitoiletanolamida em 0,5% de carboximetil celulose; o animal foi administrado, em uma única administração, com 15 mg/kg de palmitoiletanolamida micronizada e palmitoiletanolamida ultramicronizada, respectivamente. As amostras de sangue no tempo 0 (imediatamente antes da administração da palmitoiletanolamida) e nos tempos 1h, 2h, 3h foram retiradas; o sangue foi centrifugado e imediatamente congelado a -80° C.

[00034] As medições das doses de palmitoiletanolamida (PEA) e 2araquidonoilglicerol (2-AG) foram efetuadas com o método de espectrometria de massa como descrito em Darmani et al., Neuropharmacology (2005); 48: 1154-1163.

[00035] Os dados são descritos na tabela II. Tabela II

[00036] Surpreendentemente, os presentes inventores verificaram que a administração per os da palmitoiletanolamida na forma ultramicronizada determina um aumento rápido e considerável do 2-AG no sangue (aumento este que é maior do que 400% comparado aos níveis basais). Tal aumento resulta ser vastamente maior comparado àquele obtido, sob condições idênticas, com a administração da palmitoiletanolamida micronizada (aumento de cerca de 70%). Sem estar ligado a qualquer teoria, a observação que a cinética de passagem da palmitoiletanolamida no sangue, após administração, resulta ser substancialmente idêntica entre a forma micronizada e a ultramicronizada pode induzir a pensar que o aumento considerável do 2-AG, após a administração da palmitoiletanolamida ultramicronizada, depende da síntese aumentada de 2-AG no nível das estruturas nervosas protegidas pela barreira hematoencefálica e/ou pela barreira sangue-cordão espinhal, induzida pelo produto administrado. Na realidade, sabe-se que a biossíntese do 2-AG ocorre por necessidade principalmente no nível das estruturas nervosas centrais, tais como o cordão espinhal e o cérebro.

[00037] Os inventores formularam uma hipótese que tal aumento pode ser responsável ou corresponsável pelos efeitos farmacológicos então observados no nível do cordão espinhal, após a administração da palmitoiletanolamida ultramicronizada, conforme será detalhado no que segue-se da presente descrição.

Atividade farmacológica Inflamação crônica do nervo periférico com ocorrência de dor neuropática

[00038] Após o ligamento do nervo ciático CCI (realizado conforme descrito por Costa et al., Pain 2008;139:541-550), uma série de parâmetros espinhais alterados foi avaliada no camundongo, após o dano periférico, e relacionada à ativação das células microgliais induzida pela dor crônica periférica. Em particular, mediram-se o TNF-alfa, o NGF, o NF-kB de acordo com o método descrito por Costa et al. (videsupra), e a IL-1 alfa de acordo com o método descrito por Florentino et al., 2008; 58(10):3100-3109.

[00039] Os tratamentos per os foram realizados por meio de tubo, usando tanto a palmitoiletanolamida micronizada suspensa em veículo, quanto a palmitoiletanolamida ultramicronizada suspensa em veículo; os resultados foram comparados com os animais de controle tratados com veículo sozinho e com os animais com ligamento do nervo ciático tratados com veículo sozinho. Uma solução a 0,5% em carboximetil celulose foi usada como um veículo.

[00040] A administração do veículo e das duas suspensões diferentes contendo a palmitoiletanolamida foi efetuada uma vez ao dia, começando a partir do dia do ligamento do nervo ciático.

[00041] As medições dos parâmetros indicados acima foram realizadas no dia 10 a partir do ligamento do nervo ciático, após o sacrifício do animal de teste e amostragem da área espinhal.

[00042] Os resultados são descritos na tabela III. Tabela III

[00043] Os dados mostram que a administração da PEA ultramicronizada, ao contrário da PEA micronizada, causa uma normalização substancial de todos os parâmetros bioquímicos sob investigação.

Inflamação aguda do tecido dermoepidérmico devida a estímulos imunogênicos no cão

[00044] Utilizou-se cão Beagle espontaneamente sensibilizado aoAscaris suum. Os animais foram deixados sob condições de jejum durante a noite, antes da administração oral da palmitoiletanolamida.

[00045] Os animais foram divididos em 2 grupos de 6 animais cada; o primeiro grupo (grupo A) foi administrado, na forma de suspensão viscosa oral de 0,5% de carboximetil celulose, com 10 mg/kg de palmitoiletanolamida micronizada; o segundo grupo (grupo B) foi administrado com 10 mg/kg de palmitoiletanolamida ultramicronizada suspensa no mesmo veículo.

[00046] Antes e depois da administração da palmitoiletanolamida, induziu-se uma reação cutânea por injeção intradérmica na região torácica lateral de antígeno Asc S1 (100 μg/mL). Administrou-se endovenosamente uma solução a 2% de Azul de Evans em solução salina (0,4 mL/kg) 30 minutos antes da injeção intradérmica do antígeno Asc S1, de modo a ser capaz de visualizar a área da reação dérmica.

[00047] A reação dérmica com o antígeno Asc S1 foi induzida nos animais em ambos os grupos, antes (tempo 0), em 1, 2, 4, 8, e 24 horas, respectivamente, após a administração da palmitoiletanolamida. A área de reação dérmica foi medida 10 minutos após a injeção do antígeno Asc S1.

[00048] Os dados são descritos na tabela IV. Tabela IV

[00049] Os dados mostram que a PEA ultramicronizada causa uma inibição da reação cutânea acima de 20%, nos períodos de tempo variando entre 1 e 4 horas após o tratamento, comparada a uma inibição quase nula obtida com a PEA micronizada.

Efeito da palmitoiletanolamida sobre a inflamação crônica do tecido conjuntivo devida à ocorrência de granuloma induzido por carragenina no rato

[00050] Utilizou-se o modelo farmacológico de granuloma induzido, no rato, pela introdução no tecido subcutâneo de esponja impregnada com carragenina. O modelo é descrito em De Filippis et al., J Cell Mol Med. 2009; 13(6) :1086-1095.

[00051] A palmitoiletanolamida, na forma micronizada e ultramicronizada, foi administrada a dois grupos diferentes de animais, por rota oral e uma solução de 0,5% de carboximetil celulose (veículo) como um veículo, por meio do tubo gástrico; o terceiro grupo de animais foi administrado, com modos similares, com o veículo sozinho. As administrações foram realizadas no tempo 0 (imediatamente antes da introdução das esponjas), e de 12 em 12 horas por 3 dias consecutivos. As doses das unidades administradas foram 10 mg/kg.

[00052] Detectaram-se os parâmetros bioquímicos relativos aos mediadores pró-algesiogênicos, após o sacrifício do animal ocorrido depois de 96 horas a partir da introdução das esponjas, tanto no tecido granulomatoso (expressão da proteína NGF), quanto no nível dos gânglios da raiz dorsal (RDG) (expressão da proteína TNF-alfa e da proteína NGF).

[00053] Os dados são descritos na tabela V. Tabela V

[00054] Neste caso, também a PEA ultramicronizada causa uma diminuição muito mais acentuada nos níveis de NGF comparada à PEA micronizada.

Efeito da palmitoiletanolamida sobre a inflamação intestinal aguda e crônica no camundongo

[00055] Mostrou-se recentemente que as anormalidades do sistema nervoso entérico, tais como a degeneração neuronal e a diminuição no número de neurônios entéricos, representam elementos críticos no mecanismo patogenético dos distúrbios gastrointestinais, tais como a Síndrome do Intestino Irritável.

[00056] Induziu-se uma inflamação aguda no animal por meio de injeção intraperitoneal de LPS (lipopolissacarídeo): os animais foram sacrificados após 18 horas a partir da administração do LPS. Ao contrário, induziu-se uma inflamação crônica no nível do cólon por administração ao animal de DNBS (ácido 2,4-dinitrobenzeno sulfônico): neste caso, os animais foram sacrificados após 96 horas a partir da administração do DNBS.

[00057] No modelo agudo, a palmitoiletanolamida foi administrada 15 minutos antes e 2 horas depois da administração do LPS. No modelo crônico, em vez disso, a palmitoiletanolamida foi administrada diariamente, por 96 horas, após a administração do DNBS.

[00058] O nível do TNF-alfa e a porcentagem de variação no número de mastócitos foram avaliados no tecido intestinal.

[00059] Os resultados são descritos na tabela VI. Tabela VI

[00060] Também este modelo destaca uma atividade que é muito mais acentuada para a PEA ultramicronizada do que para a PEA micronizada.

Efeito in vivo da palmitoiletanolamida sobre a neuroinflamação induzida por beta-amiloide em camundongo

[00061] Mostrou-se como a administração in vivo de beta-amiloide no camundongo induz uma gliose reativa com manifestações que correspondem às que são observadas na doença de Alzheimer.

[00062] Utilizaram-se camundongos C57BL/6 com idade variando entre 3 e 5 meses, divididos em 3 grupos diferentes (20 animais por grupo). Dois grupos foram administrados, per os, por meio de um tubo, com a palmitoiletanolamida micronizada e ultramicronizada, respectivamente, com uma solução a 0,5% de carboximetil celulose como um veículo. As administrações foram efetuadas diariamente, por 8 dias sucessivos à inoculação do beta-amiloide. O terceiro grupo foi administrado com o veículo sozinho. Após o sacrifício do animal, mediu-se o nível de dose de IL-1 beta e NO2 no homogeneizado hipocampal por meio de um método de imunofluorescência.

[00063] Utilizou-se o método experimental descrito por Esposito et al., Br J Pharmacol. 2007;151:1272-1279.

[00064] Os dados são descritos na tabela VII. Tabela VII

[00065] A PEA ultramicronizada realça, neste caso também, uma alta diminuição dos níveis dos parâmetros biológicos considerados, enquanto a PEA micronizada mostra somente uma atividade.

Resultados clínicos Efeito da Palmitoiletanolamida sobre o controle da dor neuropática periférica em pacientes afetados por Esclerose Múltipla

[00066] Para avaliar o efeito da palmitoiletanolamida sobre o controle da dor neuropática na Esclerose Múltipla, administrou-se a palmitoiletanolamida micronizada e ultramicronizada, respectivamente, na forma de comprimidos tendo composição idêntica nos excipientes, a dois grupos de pacientes, adequadamente escolhidos a esmo (10 pacientes por grupo), todos estando afetados pela Esclerose Múltipla, tendo dor neuropática nos membros inferiores (Síndrome da Dor Central), caracterizada por disestesia, alodinia, parestesias, dores do tipo câimbra, e sensação de queimação nos pés; a dosagem usada foi 600 mg por dia, por 60 dias. A intensidade da dor foi medida com uma escala VAS (Escala Visual Analógica) tanto antes quanto no final do tratamento com a palmitoiletanolamida.

[00067] Uma diminuição acentuada da dor é evidenciada nos pacientes tratados com a PEA ultramicronizada. Uma análise estatística foi realizada com o teste de Wilcoxon para dados emparelhados; os resultados obtidos mostram um alto significado estatístico (p = 0,001).

[00068] Os dados são descritos na tabela VIII. Tabela VIII

[00069] Portanto, é um objeto da presente invenção uma formulação farmacêutica para uso humano ou veterinário, contendo a palmitoiletanolamida ultramicronizada, como definida acima, juntamente com um excipiente farmaceuticamente aceitável.

[00070] Em uma modalidade, mais do que 99% em peso, ou cerca de 99,9% em peso, da palmitoiletanolamida tem tamanhos de partícula menores do que 6 mícrons.

[00071] Em uma modalidade, entre 55% e 65% em peso, ou entre 59% e 60% em peso, da palmitoiletanolamida tem tamanhos de partícula menores do que 2 mícrons.

[00072] Em uma modalidade, entre 13% e 17% em peso, ou entre 14% e 15% em peso, da palmitoiletanolamida tem tamanhos de partícula menores do que 1 mícron.

[00073] Em uma modalidade, entre 1% e 3% em peso, ou cerca de 2% em peso, da palmitoiletanolamida tem tamanhos de partícula menores do que 0,6 mícron.

[00074] A formulação de acordo com a presente invenção pode seradequada para uma administração oral, bucal, parenteral, retal ou transdérmica, ou ela pode existir em uma forma que seja adequada para a administração por inalação ou insuflação (tanto per os quanto por meio de rota nasal).

[00075] Para a administração oral, as composições farmacêuticas podem estar, por exemplo, na forma de comprimidos ou cápsulas que são preparadas no modo convencional, com excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como agentes aglutinantes (por exemplo, amido de milho pré-gelatinizado, polivinilpirrolidona ou hidroxipropil metil celulose); agentes de enchimento (por exemplo, lactose, celulose microcristalina ou hidrogeno fosfato de cálcio); lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, talco, ou sílica); agentes desagregantes (por exemplo, amido de batata, ou amido glicolato de sódio); ou agentes absorventes (por exemplo, lauril sulfato de sódio). Os comprimidos podem ser revestidos com os métodos bastante conhecidos na técnica. As preparações líquidas para a administração oral podem estar, por exemplo, nas formas de soluções, xaropes, ou suspensões, ou eles podem estar na forma de produtos liofilizados a serem reconstituídos, antes do uso, com água ou outros veículos adequados. Tais preparações líquidas podem ser preparadas através dos métodos convencionais com os aditivos farmaceuticamente aceitáveis, tais como agentes de suspensão (por exemplo, xarope de sorbitol, derivados de celulose ou gorduras hidrogenadas comestíveis); agentes para emulsionar (por exemplo, lecitina ou acácia); veículos não aquosos (por exemplo, óleo de amêndoas, ésteres oleosos, álcool etílico ou óleos vegetais fracionados); e conservantes (por exemplo, phidroxibenzoatos de metila ou propila ou ácido sórbico). A preparação pode também adequadamente conter fragrâncias, corantes e agentes adoçantes.

[00076] As preparações para a administração oral podem ser formuladas em um modo adequado para permitir a liberação controlada do princípio ativo.

[00077] Para a administração bucal, as composições podem estar na forma de comprimidos que são formulados no modo convencional, adequados para uma absorção no nível da mucosa bucal. As formulações bucais típicas são os comprimidos para a administração sublingual.

[00078] As formulações da presente invenção podem ser adaptadas para a administração parenteral por injeção. As formulações para as injeções podem ser apresentadas na forma de uma única dose, por exemplo, em ampolas, com a adição de um conservante. As composições podem estar em tal forma como suspensões, soluções, ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, e podem conter agentes prescritos, tais como agentes de suspensão, estabilizantes, e/ou dispersantes. Alternativamente, o princípio ativo pode estar na forma de pó a ser reconstituído, antes do uso, com um veículo adequado, por exemplo, com água estéril.

[00079] De acordo com a presente invenção, o composto pode também ser formulado de acordo com composições retais, tais como supositórios ou enema de retenção, por exemplo, contendo os componentes de base dos supositórios típicos, tais como a manteiga de cacau ou outros glicerídeos.

[00080] Além das composições descritas antes, a PEA pode também ser formulada como uma preparação prolongada. Tais formulações de atuação longa podem ser administradas por meio de implante (por exemplo, de modo subcutâneo, transcutâneo ou intramuscular), ou por injeção intramuscular. Portanto, por exemplo, ela pode conter materiais poliméricos ou hidrofóbicos (por exemplo, na forma de uma emulsão em um óleo adequado) ou resinas trocadoras de íons apropriadas, ou como derivados minimamente solúveis, por exemplo, como um sal minimamente solúvel.

[00081] De acordo com a presente invenção, a dose de palmitoiletanolamida proposta para a administração a um homem (tendo um peso de corpo de cerca de 70 kg) varia de 0,1 mg a 2 g, e preferivelmente de 50 mg a 1000 mg do princípio ativo por unidade de dose. A unidade de dose pode ser administrada, por exemplo, de 1 a 4 vezes por dia. A dose dependerá da rota de administração selecionada. Será considerado que pode ser necessário efetuar variações contínuas da dosagem de acordo com a idade e o peso do paciente, e também com a gravidade da condição clínica a ser tratada. A dose exata e a rota de administração estarão, em última análise, a critério do médico ou do veterinário que trata.

[00082] Em uma modalidade, a PEA ultramicronizada é usada em combinação com substâncias antioxidantes, preferivelmente selecionadas a partir do grupo que consiste em Quercetina, Resveratrol, Polidatina, Luteolina, Tocoferol, e Ácido Tióctico, em uma quantidade terapeuticamente efetiva.

[00083] Os exemplos de formulações contendo PEA ultramicronizda (PEA UM) de acordo com a invenção são descritos neste documento, abaixo.

EXEMPLOS DE FORMULAÇÃO Exemplo 1

[00084] Cada comprimido contém:

Exemplo 2

[00085] Cada comprimido contém:

Exemplo 3

[00086] Cada comprimido de bicamada contém: Camada a

Exemplo 4

[00087] Cada comprimido de bicamada contém:Camada a

Exemplo 5

[00088] Cada comprimido de três camadas contém:Camada a

Camada b

Camada c

Exemplo 6

[00089] Uma dose de 5 g de microgrânulos que desintegram-seoralmente, para uso pediátrico, contém:

Exemplo 7

[00090] Uma dose de 5 mL de suspensão estéril, para uso pediátrico, contém:

Exemplo 8

[00091] Uma dose de 5 g de microgrânulos que desintegram-se oralmente contém:

Exemplo 9

[00092] Cada recipiente de bicamada de monodose estéril de 5 mL contém:

Exemplo 10

[00093] Cada frasco estéril de 100 mL para aplicação intraperitoneal contém:

Exemplo 11

[00094] Cada cápsula gelatinosa macia, para uso veterinário (cão e gato), contém:

[00095] As formulações acima descritas podem ser preparadas de acordo com métodos que são bastante conhecidos para aqueles versados na técnica, tais como aqueles descritos no Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, Mack Pub. Co., N.Y., USA, 17a edição, 1985.

[00096] A PEA é um composto comercial, ou ela pode ser de qualquer forma preparada de acordo com métodos que são bastante conhecidos para aqueles versados na técnica.

[00097] As formulações da presente invenção podem ser usadas para o tratamento ou a profilaxia de doenças inflamatórias neuroimunogênicas no nível de órgãos periféricos e/ou doenças neuroinflamatórias, também associadas à neurodegeneração no nível do cordão espinhal e/ou do cérebro.

[00098] Em particular, a presente invenção refere-se às formulações acima descritas para o tratamento de: 1 processos inflamatórios neuroimunogênicos no nível de órgãos periféricos e aparelhos do corpo, suportando doenças tais como a) a Síndrome do Intestino Irritável; b) a cistite intersticial e as cistites recorrentes; c) as vulvodinias e as vestibulodinias; d) a vestibulite vulvar; e) as lesões endometriais; f) a miastenia grave; g) a prostatite não bacteriana crônica do tipo IIIA e IIIB; h) as artropatias de origem traumática ou degenerativa ou imunológica afetando as articulações móveis e/ou semimóveis; i) as doenças dolorosas dos discos intervertebrais devidas à neoinervação e à neovascularização do tecido cartilaginoso e das estruturas ligamentosas anexadas núcleo pulposo (nucleus pulposus) e/ou anéis fibrosos (anulus fibrosus), ligamentos longitudinais anteriores e posteriores, ligamento supraespinhoso -; l) as síndromes cefalálgicas devidas à inflamação do tecido meníngeo; m) as inflamações dos tecidos mucosos e mucocutâneos da cavidade oral e da polpa dentária; n) as febres recorrentes em base autoinflamatória do tipo PFAPA na idade pediátrica; o) as neuralgias dermoepidérmicas das fibras pequenas, nociceptivas e/ou pruriceptivas, com uma base neuropática, como a neuralgia pós-herpética, as neuralgias associadas à diabetes, a neuralgia devida à infecção por HIV, as coceiras neuropáticas e/ou psicogênicas; p) os granulomas que afetam o tecido dermoepidérmico; q) as síndromes aderenciais devidas à peritonite e/ou eventos cirúrgicos laparotômicos e/ou laparoscópicos; r) as doenças dermatológicas, também com origem imunológica, caracterizadas por processos neuroinflamatórios, tanto agudas quanto crônicas; 2 Processos neuroinflamatórios, também associados à neurodegeneração, que ocorrem e afetam as estruturas nervosas do cordão espinhal após: a) lesões traumáticas, dismetabólicas, ou degenerativas, tais como as estenoses dos canais medulares, tais como a espondilose e a espondilolistese ou as lesões traumáticas a partir da flexoextensão da espinha; b) dores inflamatórias que afetam as estruturas nervosas encefálicas (acidente vascular cerebral, esclerose múltipla, doença de Parkinson, síndrome fibromiálgica) com ocorrência consequente de dores periféricas, atualmente classificadas como "Síndromes das Dores Centrais"; c) dores inflamatórias crônicas do Sistema Osteoarticular e do Sistema Nervoso Periférico, principalmente caracterizadas por dor crônica e/ou neuropática; 3 processos neuroinflamatórios, também associados à neurodegeneração, que ocorrem e afetam as estruturas nervosas de dadas áreas encefálicas após lesões traumáticas, neurotóxicas, dismetabólicas ou degenerativas, tais como os estados hipóxicos de dores (acidente vascular cerebral, Ataque Isquêmico Trans TIA), as demências senis e pré-senis também do tipo Alzheimer, os traumas cranioencefálicos, a doença de Parkinson, a Esclerose Múltipla, a Esclerose Lateral Amiotrófica.

[00099] Conforme descrito antes, sem estar ligado a uma teoria particular, parece que tal efeito farmacológico é mediado pela capacidade da PEA ultramicronizada de aumentar significativamente a liberação do endocanabinoide 2-araquidonoilglicerol (2-AG).

[000100] Portanto, é um objeto adicional da invenção uma formulação contendo a PEA ultramicronizada, como definida acima, para o tratamento ou a profilaxia de doenças inflamatórias neuroimunogênicas no nível dos órgãos periféricos, e/ou doenças neuroinflamatórias, também associadas à neurodegeneração no nível do cordão espinhal e/ou do cérebro, de modo a obter no soro do paciente tratado, em um período de tempo entre 1 e 3 horas após o dito tratamento, concentrações de 2-araquidonoilglicerol que sejam maiores, preferivelmente de 3 a 5 vezes maiores, do que as concentrações antes do tratamento.

[000101] Será aparente que, na presente invenção, algum de habilidade na técnica, com o objetivo de atender necessidades contingentes e específicas, será capaz de fazer modificações e variações adicionais, todas as quais estão dentro do escopo de proteção da invenção, como definida pelas reivindicações a seguir.

Claims

1. Forma polimórfica de palmitoiletanolamida, caracterizada pelo fato de que possui um espectro de MDSC com transição exotérmica em temperaturas variando entre 101°C e 103°C, e um espectro de XRD como descrito a seguir: Pico [2-Teta(°)]: 6,155 8,194 12,271 18,438 20,844 21,780 22,532 24,003 25,256 31,289 36,770 38,759.

2. Forma polimórfica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que mais do que 90% em peso da palmitoiletanolamida têm tamanhos de partícula menores do que 6 mícrons, e entre 13% e 17% em peso, ou entre 14% e 15% em peso, têm tamanhos de partícula menores do que 1 mícron.

3. Composição farmacêutica para uso humano ou veterinário, caracterizada pelo fato de que contém uma quantidade terapeuticamente efetiva de palmitoiletanolamida, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, na forma ultramicronizada, em que mais do que 90% em peso da palmitoiletanolamida têm tamanhos de partícula menores do que 6 mícrons, juntamente com excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

4. Composição de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que mais do que 99% em peso, ou cerca de 99,9% em peso, da palmitoiletanolamida têm tamanhos de partícula menores do que 6 mícrons.

5. Composição de acordo com a reivindicação 3 ou 4, caracterizada pelo fato de que entre 55% e 65% em peso, ou entre 59% e 60% em peso, da palmitoiletanolamida têm tamanhos de partícula menores do que 2 mícrons.

6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 5, caracterizada pelo fato de que entre 13% e 17% em peso, ou entre 14% e 15% em peso, da palmitoiletanolamida têm tamanhos de partícula menores do que 1 mícron.

7. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 6, caracterizada pelo fato de que entre 1% e 3% em peso, ou cerca de 2% em peso, da palmitoiletanolamida têm tamanhos de partícula menores do que 0,6 mícron.

8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 7, caracterizada pelo fato de que a dita palmitoiletanolamida tem um espectro de MDSC com transição exotérmica em temperaturas variando entre 101°C e 103°C.

9. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 8, caracterizada pelo fato de que a dita palmitoiletanolamida tem um espectro de XRD como descrito a seguir: Pico [2-Teta(°)]: 6,155 8,194 12,271 18,438 20,844 21,780 22,532 24,003 Pico [2-Teta(°)]: 25,256 31,289 36,770 38,759.

10. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 9, caracterizada pelo fato de que a dita palmitoiletanolamida está em combinação com um composto antioxidante.

11. Composição de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que o dito antioxidante é selecionado a partir de Quercetina, Resveratrol, Polidatina, Luteolina, Tocoferol e Ácido Tióctico.

12. Método para a micronização da palmitoiletanolamida conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o dito método é realizado em planta de jato de fluido, em que a dita planta de jato de fluido: opera com "tecnologia espiral" com jato de ar pressurizado; opera em uma pressão de 1000-1200 kPa (10-12 bars) do jato de fluido, e com uma alimentação de produto de 9-12 kg/h; e compreende uma câmara de micronização de diâmetro de cerca de 300 mm, em que a palmitoiletanolamida é cristalizada na presença de um polímero de vinila antes da etapa de ultramicronização, e dita cristalização é realizada em etanol.

13. Método de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que o dito polímero de vinila é a polivinilpirrolidona.

14. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 13, caracterizada pelo fato de que a razão entre a Npalmitoiletanolamida e a polivinilpirrolidona é cerca de 30:1.

15. Palmitoiletanolamida ultramicronizada, caracterizada pelo fato de que pode ser obtida com o método de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 14.