JPH04159225A - アセチルコリンエステラーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害作用を有し
、脳機能改善剤等の医薬として有用なアルカロイドに関
するものである。

［従来の技術および課題］ アセチルコリンは、コリンとアセチル補酵素Ａ（以下、
アセチルＣｏＡと称する。）からコリン・アセチル転移
酵素により合成されるコリン作動性神経繊維の伝達物質
であり、種々の生体反応に関与している極めて重要な生
体内物質である。このアセチルコリンは、諸疾患の発症
に関与している。例えば、自己免疫疾患である重症筋無
力症は、骨格筋のアセチルコリン受容体が減少しており
、シナプス間隙アセチルコリン量を増加することにより
症状が緩解する。

また、アルツハイマー病およびアルツハイマー型痴呆症
の患者においては、大脳皮質中のアセチルコリンの減少
が認められており、脳内のアセチルコリン量を増加させ
ることにより、症状が改善するといわれている。

さらにアセチルコリンは、胃酸の分泌を刺激し、胃腸管
の運動を先進するため、消化管でのアセチフルコリン量
を増加させれば、低下した胃腸機能は緩解する。

従って、生体組織でのアセチルコリン濃度を高める方法
が諸疾患の治療法として有望視されており、その開発が
求められていた。

なお、アセチルコリンは生体内のあらゆる組織中で合成
されるものであり、現在、組織中のアセチルコリン濃度
を高めるために、以下に示す方法が用いられている。

■アセチルコリンの原料となるコリンの前駆物質を与え
、アセチルコリンの生合成を促進する。

■コリン・アセチル転移酵素活性を賦活し、アセチルコ
リンの生合成を促進する。

■アセチルコリンの分解酵素であるアセチルコリンエス
テラーゼの活性を阻害して分解を抑制する。

［課題を解決するための手段］ 本発明者らは、上記の課題を解決すべくアセチルコリン
エステラーゼ阻害作用を有する物質に焦点をあて、鋭意
検討を行った結果、下記式で表されるアルカロイドにそ
の作用があることを見いだし、本発明を完成するに至っ
た。

すなわち本発明は、下記式Ｉ （ただし、式Ｉ中、Ｒは水酸基またはメトキシル基を示
す。） で表されるアルカロイドを有効成分とするアセチルコリ
ンエステラーゼ阻害剤である。

以下、式Ｉで表される化合物を式の化合物という。

式の化合物を得るには例えば次のような方法が挙げられ
る。

粉防己を水、アルコール類または水とアルコール類の混
合溶媒で抽出し、該抽出液から溶媒を除去した残渣をそ
のまま、または必要に応じて水または水とアルコール類
の混合溶媒に溶解した後、ｎ−ヘキサン、石油エーテル
等の有機溶媒により分配し、該有機溶媒に移行する脂溶
性成分を除去した後、ｐＨ９のアンモニア水に溶解し、
さらにクロロホルムで抽出し、アンモニア水抽出エキス
とクロロホルム抽出エキスを得る。次いで、クロロホル
ム抽出エキスを水、メタノール、クロロホルム、エーテ
ル、ヘキサン、ベンゼン、酢酸エチル、アンモニア水、
ジエチルアミンより選ばれる少なくとも一つを溶出溶媒
として、セファデックスＬＨ２０等のセファデックス、
ダイアイオンＨＰ２０等のポーラスポリマー、アルミナ
またはシリカゲル等を担体に用いたカラムクロマトグラ
フィーに数回付し、薄層クロマトグラフィーで目的成分
を確認しながら分画することにより得ることができる。

場合によってはエタノール、水、アセトン等の適当な溶
媒を用いて再結晶することにより精製してもよい。

次に式の化合物の製造の具体例を示す。

具体例１ 粉防己１５ｋｇを３０ρのメタノールで抽出し、抽出液
よりメタノールを除去してメタノールエキス７９０ｓ＋
を得た。このメタノールエキスを９０％メタノール−水
混合液３Ｑに溶解し、ｎ−ヘキサン３Ｑで３回抽出して
脂溶性成分を除去し、次いで９０％メタノール−水画分
を、減圧下濃縮して得た残渣にｐＨ９，０のアンモニア
水２ｇを加えて溶解し、クロロホルム２ρて３回抽出し
、クロロホルム層を減圧下濃縮してクロロホルム抽出エ
キス３３Ｉ９を得た。次いでクロロホルム抽出エキスを
アルミナ（アルミニウムオキシド９０．メルク社製）カ
ラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルムおよびク
ロロホルム−メタノールで溶出して、フラクションＡ２
５５ｇおよびフラクションＢ５４９の２つのフラクショ
ンに分け、フラクションＡをシリカゲル（キーセルゲル
６０．メル２社製）カラムクロマトグラフィーに付し、
クロロホルム−メタノール（４０：ｌ）で溶出して、フ
ラクションＡ−■ｔ６＋９およびフラクション八−■８
１ｇの２つのフラクションに分けた。

フラクションＡ−■から溶媒を除去し、アセトンで再結
晶することにより、無色針状晶５６ｇを得た。この無色
針状晶はその理化学的性質より、文献［Ｐｅｔｅｒ　Ｐ
ａｃｈａｌｙ　ｕｎｄ　Ｍａｒｉａ　Ｐｒａｅｓｔ、Ａ
ｒｃｈ。

Ｐｈａｒｍ、　（Ｗｅｉｎｈｅｉｍ）３１５．５８９−
５９７（１９８２）］記載の、式Ｉ中Ｒがメトキシル基
であるファンチノリンと決定した。

具体例２ 具体例１で得たフラクション８３６９を１０％酢酸水溶
液１００−に溶解させ、クロロホルム１００−で３回分
配し、ｌＯ％酢酸層をとり、アンモニア水を加えた後、
クロロホルム１００−で３回抽出して、クロロホルム層
を減圧下濃縮してクロロホルム抽出エキス１９．２ｇを
得た。次いでクロロホルム抽出エキスをシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム−メタノー
ルで溶出させ、フラクションＢ−■〜Ｂ−■の７つのフ
ラクションに分けた。

フラクションＢ−■２．６ｇをさらにシリカゲルカラム
クロマトグラフィーに付し、酢酸エチル−エタノール−
アンモニア水（５０：１０：ｌ）で溶出さ仕て、フラク
ションＢ−■−１〜Ｂ−■−３の３つのフラクションに
分けた。

フラクションＢ−■−２（２０４３！９）から溶媒を除
去し、アセトンで再結晶して無色針状晶１１５Ｑを得た
。この無色針状晶はその理化学的性質より、文献ＪＰｅ
ｔｅｒ　Ｐａｃｈａｌｙ　ｕｎｄ　Ｍａｒｉａ　Ｐｒａ
ｅｓｔ、Ａｒｃｈ。

Ｐｈａｒｍ、（Ｗｅｉｎｈｅｉｍ）３１５，５８９−５
９７（１９８２）］記載の、式Ｉ中Ｒが水酸基であるア
テロスベルモリンと決定した。

次に式の化合物が、アセチルコリンエステラーゼ阻害活
性を有することについて実験例を示して説明する。

実験例 ８週齢のウィスター系ラットをエーテル麻酔下に致死さ
せ、直ちに脳を摘出し線条体を取り出した。線条体は２
５ｘＭナトリウムーリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）にて、
テフロンホモジナイザーでホモジナイズした。このホモ
ジネートを１０倍に希釈し、アセチルコリンエステラー
ゼ活性測定の検体とした。

アセチルコリンエステラーゼの活性の測定は、金円、永
津らの方法［Ｊ、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ、　、３４４
．９３−１００゜（１９８５）］により行った。

すなわち、１０ｘＭアセチルコリン１００Ｉｉｌ。

０．３Ｍ塩化ナトリウムを含むナトリウム−リン酸緩衝
液（ｐＨ７，０）２５０ｕｎに、上記の検体１００度お
よび上記具体例で得た化合物をジメチルスルフオキシド
（ＤＭＳＯ）に種々の濃度となるように溶解させた薬物
溶解液５０ｄをそれぞれ加えて、３７℃にて１５分間反
応させた。

次に、水中にて６％メタリン酸５０ｄを加えて反応を停
止させ、１０分後１０．Ｍエチルホモコリン５０ｄを加
えて、３．００Ｏｒｐｍで１０分間遠心した。この上清
のコリン含量を高速液体クロマトグラフィー（）（ＰＬ
Ｏ）にて測定した。

ＨＰＬＣは、以下の条件で行った。移動相としてρ−デ
カンスルホン酸ソーダ３００１１９／およびテトラメチ
ルアンモニウムクロライド６５”９／Ｑを含む０．１Ｍ
カリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ８，０）、流速は１１ｄ
／分、温度は３５℃とした。カラムは逆相系カラムおよ
び酵素カラムを用いた。検出器は電気化学検出器を用い
た。また、具体例で得た化合物の溶解液を加えないかわ
りに、ＤＭＳＯを加える以外は上記と同様に反応させて
、コントロールとした。その結果を５０％阻害濃度（Ｉ
Ｃ，。）として第１表に示した。

第１表 第１表から式の化合物の優れたアセチルコリンエステラ
ーゼ阻害活性が確認された。

従って式の化合物は、アセチルコリン濃度を高めること
によって治療が期待される脳機能改善剤や重症筋無力症
、低下した胃腸機能の緩解等に利用することができる。

次に、式の化合物の投与量および製剤化について説明す
る。

式の化合物はそのまま、あるいは慣用の製剤担。

体と共に動物および人に投与することができる。

投与形態としては、特に限定がなく、必要に応じ適宜選
択して使用され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、
散剤等の経口剤、注射剤、坐剤等の非経口剤が挙げられ
る。

経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の年
令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で式の
化合物の重量として３０〜４５０Ｒ９を、１日数回に分
けての服用が適当と思われる。

本発明において錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の経口剤は
、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキ
シメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等を用
いて常法に従って製造される。

この種の製剤には、適宜前記賦形剤の他に、結合剤、崩
壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着
色剤、香料等を使用することができる。それぞれの具体
例は以下に示すごとくである。

［結合剤］ デンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、
ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、カル
ボキンメチルセルロースナトリウム、ヒドロキノプロピ
ルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポ
リヒニルピロリトン、マクロゴール。

［崩壊剤］ デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメ
チルセルロースナトリウム、カルボキンメチルセルロー
スカルシウム、カルボキンメチルセルロース、低置換ヒ
ドロキンプロピルセルロース。

［界面活性剤］ ラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン・ショ糖脂肪酸
エステル、ポリソルベート　８０゜［滑沢剤］ タルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステ
ル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウ
ム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコー
ル。

［流動性促進剤］ 軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケ
イ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム。

また、式の化合物は、懸濁液、エマルジョン剤、シロッ
プ剤、エリキシル剤としても投与することができ、これ
らの各種剤形には、矯味矯臭剤、着色剤を含有してもよ
い。

非経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の
年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で式
の化合物の重量として１日０．１〜５０１１９までの静
注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射が適当と思われる。

この非経口剤は常法に従って製造され、希釈剤として一
般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射
用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモロ
コシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコー
ル等を用いることができる。さらに必要に応じて、殺菌
剤、防腐剤、安定剤を加えてもよい。また、この非経口
剤は安定性の点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常
の凍結乾燥技術により水分を除去し、使用直面に凍結乾
燥物から液剤を再調製することもできる。更に、必要に
応じて適宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を
加えても良い。

その他の非経口剤としては、外用液剤、軟膏等の塗布剤
、直腸内投与のための坐剤等が挙げられ、常法に従って
製造される。

以下に、実施例を示して本発明をさらに詳しく説明する
が本発明はこれにより同等制限されるものではない。

実施例１ ■コーンスターチ　　　　　　　４４９■結晶セルロー
ス　　　　　　４０９ ■カルボキシメチル　　゛ セルロースカルシウム　　　５９ ■軽質無水ケイ酸　　　　　　０．５ｇ゛■ステアリン
酸マグネシウム　０．５９■具体例１で得た化合物　　
　１（Ｍ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、打錠機にて
圧縮成型して一部２００　ｍ９の錠剤を得た。

この錠剤−錠には、具体例１で得た化合物２０１１９が
含有されており、成人１日５〜１５錠を数回にわけて服
用する。

実施例２ ■結晶セルロース　　　　　８４．５９■ステアリン酸
マグ不ンウム　０．５９■カルボキンメチル セルロースカルシウム　　　　５９ ■具体例２で得た化合物　　　１０ｇ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■、■および■の一部を均一に混合
し、圧縮成型した後、粉砕し、■および■の残量を加え
て混合し、打錠機にて圧縮成型して一部２００　Ｑの錠
剤を得た。

この錠剤−錠には、具体例２で得た化合物２０！９が含
有されており、成人１日５〜１５錠を数回にわけて服用
する。

実施例３ ■結晶セルロース　　　　　４９５ｇ ■１０％ヒドロキシプロピル セルロースエタノール溶液　３５９ ■カルボキシメチル セルロースカルシウム　　　５ｇ ■ステアリン酸マグネシウム　０５９ ■具体例１で得た化合物　　　１０ｇ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■、■および■を均一に混合し、常
法によりねつ和し、押し出し造粒機により造粒し、乾燥
・解砕した後、■および■を混合し、打錠機にて圧縮成
型して一部２００１１９の錠剤を得た。

この錠剤−錠には、具体例１で得た化合物２０１９が含
有されており、成人１日５〜１５錠を数回にわけて服用
する。

実施例４ ■コーンスターチ　　　　　３４．５９■ステアリン酸
マグネンウム　５０９ ■カルポキシメチル セルロース力ルンウム　　　５９ ■軽質無水ケイ酸　　　　　　０５９ ■具体例２で得た化合物　　　１０９ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、圧縮成型機
にて圧縮成型後、破砕機により粉砕し、篩別して顆粒剤
を得た。

この顆粒剤１９には、具体例２で得た化合物１００　ｍ
９が含有されており、成人１日ｉ〜３ｇを数回にわけて
服用する。

実施例５ ■結晶セルロース　　　　　　５５ｇ ■１０％ヒドロキシプロピル セルロースエタノール溶液３５ｇ ■具体例１で得た化合物　　　１０ｇ 計　　　　　　１００９ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、ねつ和した
。押し出し造粒機に上り造粒後、乾燥し、篩別して顆粒
剤を得た。

この顆粒剤１ｇには、具体例１で得た化合物１００１９
が含有されており、成人１日１〜３ｇを数回にわけて服
用する。

実施例６ ■コーンスターチ　　　　　８９．５９■軽質無水ケイ
酸　　　　　　０．５９■具体例２で得た化合物　　　
１０９ 計　　　　　１００９ 上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、２００１１
９を２号カプセルに充填した。

このカプセル剤ｌカプセルには、具体例２で得た化合物
２０■が含有されており、成人１日５〜１５カプセルを
数回にわけて服用する。

実施例７ ■注射用蒸留水　　　　　　　　適量 ■ブドウ糖　　　　　　　　　２００　ｔｔｔｑ■具体
例１で得た化合物　　２００句 全量　　　　　　　１０〇− 注射用蒸留水に■および■を溶解させた後、５−のアン
プルに注入し、１２１℃で１５分間加圧滅菌を行って注
射剤を得た。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ （ただし、式 I 中、Ｒは水酸基またはメトキシル基を
   示す。） で表されるアルカロイドを有効成分とするアセチルコリ
   ンエステラーゼ阻害剤。