BRPI1011994B1

BRPI1011994B1 - derivados de naftaleno carboxamida como inibidores de proteína quinase e histona desacetilase, métodos de preparação e usos

Info

Publication number: BRPI1011994B1
Application number: BRPI1011994A
Authority: BR
Inventors: Yu Jindi; Shan Song; Lu Xianping; Ning Zhiqiang; Li Zhibin
Original assignee: Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd
Priority date: 2009-06-04
Filing date: 2010-03-05
Publication date: 2020-04-07
Also published as: PL2439195T3; MX2011012752A; HRP20140717T1; UA103092C2; DK2439195T3; ZA201109030B; EP2439195A1; RU2497809C2; BRPI1011994A2; AU2010256246A1; ES2509615T3; KR20120016659A; CN101906076A; SI2439195T1; AU2010256246B9; BRPI1011994B8; CN101906076B; WO2010139180A8; EP2439195A4; CA2763822C

Abstract

derivados de naftaleno carboxamida como inibidores de proteína quinase e histona desacetilase, métodos de preparação e usos são fornecidos derivados de naftaleno carboxamida, métodos de preparação e usos dos mesmos. a estrutura dos mesmos é mostrada como a fórmula (1), quando as definições de r1 , r, r3 , d4 e z são as mesmas descritas na descrição. os compostos têm atividades de inibição de proteína quinase e atividades de inibição de histona desacetilase simultaneamente, e podem ser usados para para tratar doenças associadas com atividade de proteína quinase anormal ou atividade de histona desacetilase anormal, incluindo inflamação, doenças autoimunes, câncer, doenças do sistema nervoso e doenças neurodegenerativas, doenças cardiovasculares e doenças metabólicas, asma alérgica e doenças relacionadas a hormônios. (fig. 1)

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para: “DERIVADOS DE NAFTALENO CARBOXAMIDA COMO INIBIDORES DE PROTEÍNA QUINASE E HISTONA DESACETILASE, MÉTODOS DE PREPARAÇÃO E USOS”.

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção se refere aos derivados de naftaleno carboxamida (naftamida) que têm atividades de inibição de proteínas quinases e atividades de inibição de histonas desacetilases, o método de preparação dos mesmos e uso clínico dos mesmos em tratar doenças associadas com as atividades anormais de proteína quinase e atividades anormais de histona desacetilase.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

As proteínas quinases são uma família de enzimas que catalisam a fosforilação das proteínas, em particular o grupo hidroxila de resíduos específicos de tirosina, serina e treonina nas proteínas. As proteínas quinases desempenham um papel crítico na regulação de uma grande variedade de processos celulares, incluindo metabolismo, proliferação celular, diferenciação celular, sobrevivência celular, reação ambiente-hospedeiro, resposta imune, e angiogênese. Muitas doenças são associadas com respostas celulares anormais provocadas pela regulação da proteína quinase. Estas doenças incluem doenças inflamatórias, doenças auto-imunes, câncer, doenças do sistema nervoso e doenças neurodegenerativas, doenças cardiovasculares, doenças metabólicas, alergias, asma e doenças relacionadas a hormônio (Tan, S-L, 2006, J. Immunol., 176: 2872-2879; Healy, A. et al., 2006, J. Immunol., 177: 1886-1893; Salek-Ardakani, S. et al., 2005, J. Immunol., 175: 7635-7641; Kim, J. et al., 2004, J. Clin. Invest., 114: 823-827). Portanto, um esforço considerável foi feito para identificar inibidores de proteína quinase que são eficazes como agentes terapêuticos contra estas doenças.

As proteínas quinases podem convencionalmente ser divididas em duas classes, as proteínas de tirosinas quinases (PTKs) e as serinas-treoninas quinases (STKs).

As proteínas de tirosinas quinases (PTKs) podem ser divididas em duas classes: as tirosinas quinases não-transmembranas e tirosinas quinases do receptor do fator de crescimento transmembrana (RTKs). Presentemente, pelo menos dezenove subfamílias distintas de RTKs foram identificadas, tais como o receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), o receptor do fator de crescimento endotelial vascular (VEGFR), o receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGFR), e o receptor do fator de crescimento fibroblástico (FGFR).

A família do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) compreende quatro receptores do fator de crescimento de tirosina quinase transmembrana: HER1, HER2, HER3 e HER4. A ligação de um conjunto específico de ligantes ao receptor promove a dimerização de EGFR e resulta na autofosforilação de receptores em resíduos de tirosina

2/48 (Arteaga, C-L, 2001, Curr. Opin. Oncol., 6: 491-498). Após a autofosforilação do receptor, diversas vias de transdução de sinal a jusante de EGFR tornam-se ativadas. As vias de transdução de sinal de EGFR foram implicadas nos processos neoplásicos, incluindo a progressão do ciclo celular, inibição de apoptose, metástase , invasão e motilidade de célula tumoral. A ativação de EGFR também estimula o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), que é o indutor primário da angiogênese (Petit, A-M. et al., 1997, Am. J. Pathol., 151: 1523-1530). Em modelos experimentais, a desregulação das vias de transdução de sinal mediadas por EGFR é associada com a oncogênese (Wikstrand, C-J. et al., 1998, J Natl Cancer Inst., 90: 799-800). As mutações que levam à ativação contínua da amplificação e a sobre-expressão de proteínas de EGFR são vistas em muitos tumores humanos, incluindo tumores de mama, pulmão, ovários e rim. Estas mutações são uma causa determinante da agressividade do tumor (Wikstrand, C-J. et al., 1998, J Natl Cancer Inst., 90: 799-800). A sobre-expressão de EGFR é vista frequentemente no câncer pulmonar de célula não-pequena (NSCLC). A atividade de EGFR pode ser inibida pelo bloqueio do domínio de ligação do ligante extracelular com o uso de anticorpos anti-EGFR ou pelo uso de moléculas pequenas que inibem a tirosina quinase de EGFR, assim tendo por resultado a inibição de componentes a jusante da via de EGFR (Mendelsohn, J., 1997, Clin. Can. Res., 3: 2707-2707).

O fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) é secretado por quase todos os tumores sólidos e estroma associado ao tumor em resposta à hipóxia. É altamente específico para o endotélio vascular e regula ambas a proliferação vascular e a permeabilidade. A expressão excessiva de níveis de VEGF é correlacionada com a densidade microvascular aumentada, a recorrência do câncer e a sobrevivência diminuída (Parikh, A-A., 2004;, Hematol. Oncol. Clin. N. Am., 18:951-971). Existem 6 ligantes diferentes para o receptor de VEGF, o VEGF-A até -E e o fator de crescimento placentário. Os ligantes se ligam a receptores específicos nas células endoteliais, na maior parte VEGFR-2. A ligação de VEGF-A a VEGFR-1 induz a migração celular endotelial. Ao se ligar a VEGFR-2 induz a proliferação, permeabilidade e sobrevivência celular endotelial. Acreditase que VEGFR-3 medeie a linfangiogênese. A ligação de VEGF aos receptores VEGFR-2 resulta na ativação e autofosforilação dos domínios de tirosina quinase intracelular o que ainda desencadeia outras cascatas de sinalização intracelular (Parikh, A-A., 2004, Hematol. Oncol. Clin. N. Am., 18:951-971).

As serinas-treoninas quinases (STKs) são predominantemente intracelulares embora haja algumas quinases de receptor do tipo STK. STKs são as formas mais comuns das quinases citosólicas que executam sua função na parte do citoplasma à exceção das organelas citoplasmáticas e do citoesqueleto.

Glicogênio sintase quinase-3 (GSK-3) é uma proteína serina-treonina quinase

3/48 compreendida das isoformas α e β que são codificadas cada uma por genes distintos. Foi descoberto que GSK-3 fosforila e modula a atividade de um número de proteínas reguladoras. GSK-3 tem sido implicada em várias doenças que incluem diabetes, doença de Alzheimer, transtornos do SNC tais como a transtorno maníaco-depressivo e doenças neurodegenerativas, e hipertrofia do cardiomiócito (Haq, et al., 2000, J. Cell Biol., 151: 117).

Aurora-2 é uma proteína serina-treonina quinase que tem sido implicada no câncer humano, tal como o câncer de cólon, câncer de mama, e outros tumores sólidos. Acredita-se que esta quinase esteja envolvida na fosforilação da proteína que regula o ciclo celular. Especificamente, Aurora-2 pode desempenhar um papel em controlar a segregação exata dos cromossomos durante a mitose.

A desregulação do ciclo celular pode levar à proliferação celular e a outras anomalias. No tecido do câncer de cólon humano, foi descoberto que a proteína Aurora-2 é sobre-expressa (Schumacher, et al., 1998, J. Cell Biol., 143: 1635-1646; Kimura et al., 1997, J. Biol. Chem., 272: 13766-13771).

As quinases dependentes de ciclina (CDKs) são proteínas serinas-treoninas quinases que regulam a divisão de células de mamíferos. Até agora, nove subunidades de quinase (CDK 1-9) foram identificadas. Cada quinase se associa com um parceiro regulador específico e junto constituem a fração catalítica ativa. A proliferação descontrolada é uma característica das células cancerosas, e a desregulação da função de CDK ocorre com alta frequência em muitos tumores sólidos importantes. CDK2 e CDK4 são de interesse particular porque suas atividades são frequentemente desreguladas em uma grande variedade de cânceres humanos.

A quinase raf, um efetor a jusante da oncoproteína ras, é um mediador chave das vias de transdução de sinal da superfície da célula ao núcleo celular. A inibição da quinase raf foi correlacionada in vitro e in vivo com a inibição do crescimento de uma variedade de tipos de tumores humanos (Monia et al., 1996, Nat. Med., 2: 668-675).

Outras proteínas serinas-treoninas quinases incluem a proteína quinase A, B e C. Estas quinases, conhecidas como PKA, PKB e PKC, desempenham papéis chaves nas vias de transdução de sinal.

Muitas tentativas foram feitas para identificar moléculas pequenas que atuam como inibidores de proteína quinase úteis no tratamento das doenças associadas às atividades anormais de proteína quinase. Por exemplo, compostos cíclicos (Pat. US N° 7.151.096), compostos bicíclicos (Pat. US N° 7.189.721), compostos tricíclicos (Pat. US N° 7.132.533), (2-oxindol-3-metilideno) derivados do ácido acético (Pat. US N° 7.214.700), derivados de 3(4-amidopirrol-2-ilmetilideno)-2-indolinona (Pat. US N° 7.179.910), derivados de pirazol funsionados (Pat. US N° 7.166.597), compostos de aminofurazan (Pat. US N° 7.157.476), compostos de 2-indolinona substituída com pirrol (Pat. US N° 7.125.905), compostos de

4/48 triazol (Pat. US N° 7.115.739), compostos de quinazolina substituída com pirazolilamina (Pat. US N° 7.098.330) e compostos de indazol (Pat. US N° 7.041.687) foram todos descritos como inibidores de proteína quinase. Diversos inibidores de proteína quinase tais como Glivec, Suten, e Sorafenib foram aprovados com sucesso pelo FDA para a terapia anticâncer. Seu uso clínico demonstrou vantagens claras sobre os tratamentos quimioterapêuticos existentes, abastecendo interesses de continuação na inovação de tratamentos com base no mecanismo e na melhoria das estruturas químicas para descobrir novos compostos com biodisponibilidade oral excelente, melhor atividade antitumoral, e toxicidade mais baixa.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Uma finalidade da presente invenção é fornecer determinados derivados de naftamida que são capazes de inibir seletivamente proteínas quinase e histonas desacetilases. Outro propósito da presente invenção é fornecer métodos de preparação dos referidos compostos.

Um propósito adicional da presente invenção é fornecer o uso clínico dos referidos compostos em tratar as doenças relacionadas às atividades anormais de proteína quinase e às atividades anormais de histona desacetilase.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A Figura 1 ilustra graficamente a atividade antitumoral do composto 31 no tumor em camundongo atímico transplantado do câncer de pulmão humano A549, em que o Veículo representa o carreador, Sutent representa fármaco sunitinib existente, e comp 31 representa o composto 31.

A Figura 2 ilustra graficamente a atividade antitumoral do composto 31 no tumor em camundongo atímico transplantado do câncer de cólon humano HCT-8, em que o Veículo representa o carreador, Sutent representa fármaco sunitinib existente, e comp 31 representa o composto 31.

A Figura 3 ilustra graficamente a atividade antitumoral do composto 31 no tumor em camundongo atímico transplantado do câncer de fígado humano SSMC7721, em que o Veículo representa o carreador, Sutent representa fármaco sunitinib existente, e comp 31 representa o composto 31.

A Figura 4 ilustra graficamente a atividade antitumoral do composto 33 e o composto 34 no tumor em camundongo atímico transplantado do câncer de cólon humano HCT-8, em que o Veículo representa o carreador, Sutent representa fármaco sunitinib existente, comp 33 representa o composto 33, e comp 34 representa o composto 34.

A Figura 5 ilustra graficamente a atividade antitumoral do composto 33 e o composto 37 no tumor em camundongo atímico transplantado do câncer de cólon humano HCT-8, em que o Veículo representa o carreador, Sutent representa fármaco sunitinib

5/48 existente, comp 33 representa o composto 33, e comp 37 representa o composto 37.

A Figura 6 ilustra graficamente a atividade antitumoral do composto 33 e o composto 37 no tumor em camundongo atímico transplantado do câncer de fígado humano SSMC7721, em que o Veículo representa o carreador, Sutent representa fármaco sunitinib existente, comp 33 representa o composto 33, e comp 37 representa o composto 37. DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

As proteínas de histona desacetilase (HDAC) desempenham um papel crítico na regulação de expressão de gene in vivo pela alteração da acessibilidade de fatores da transcrição ao DNA genômico. Especificamente, as proteínas de HDAC removem o grupo acetila de resíduos de acetil-lisina em histonas, que podem te como resultado a remodelação nucleossomal (Grunstein, M., 1997, Nature, 389: 349-352). Devido a seu papel de governo na expressão de gene, as proteínas de HDAC são associadas com uma variedade de eventos celulares, incluindo a regulação do ciclo celular, a proliferação celular, a diferenciação, reprogramação da expressão de gene, e o desenvolvimento do câncer (Ruijter, A-J-M., 2003, Biochem. J., 370: 737-749; Grignani, F., 1998, Nature, 391: 815-818; Lin, R-J.,1998, 391: 811-814; Marks, P-A., 2001, Nature Reviews Cancer, 1: 194). A desacetilação anormal causada pela desregulação da desacetilação de histona foi implicada em várias doenças, tais como a síndrome de Rubinstein-Taybi, a síndrome do X frágil, doenças neurodegenerativas, doença cardiovascular e metabólica, doença reumatóide, leucemia e outros tipos de câncer (Langley B et ai., 2005, Current Drug Targets-CNS & Neurological Disorders, 4: 41-50). Os inibidores de HDAC demonstraram através de experiências que reduzem o crescimento do tumor no ser humano e nos animais, incluindo o câncer de pulmão, câncer de estômago, câncer de mama, câncer de próstata, linfoma e semelhantes (Dokmanovic, M.,2005, J. Cell Biochenm., 96: 293-304).

HDACs de mamíferos podem ser divididas em três classes de acordo com a homologia de sequência. Classe I consiste nas proteínas de levedura do tipo Rpd3 (HDAC 1, 2, 3, 8 e 11). A classe II consiste nas proteínas de levedura do tipo HAD1 (HDAC 4, 5, 6, 7, 9 e 10). A classe III consiste nas proteínas de levedura do tipo SIR2 (SIRT 1, 2, 3, 4, 5, 6 e7).

A atividade de HDAC1 foi ligada à proliferação celular, uma característica do câncer. Particularmente, as células de mamíferos com depressão da expressão de HDAC1 utilizando siRNA eram antiproliferativas (Glaser, K-B., 2003, Biochem. Biophys. Res. Comm., 310:529 - 536). Apesar da depressão de HDAC1 no camundongo ser letal para o embrião, as células estaminais resultantes apresentaram um crescimento celular alterado (Lagger, G., 2002, EMBO J., 21:2672 - 2681). As células do camundongo que sobreexpressam HDAC1 demonstraram um prolongamento das fases de G2 e de M e uma taxa de crescimento reduzida (Bartl. S., 1997, Mol. Cell Biol., 17: 5033-5043).

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Consequentemente, os dados relatados implicam que HDAC1 está envolvido na regulação do ciclo celular e na proliferação celular.

HDAC2 regula a expressão de muitas isoformas de proteína miocárdica fetal. A deficiência de HDAC2 ou a inibição química de histona desacetilase pode impedir a reexpressão de genes fetais e atenuar a hipertrofia cardíaca. A resistência à hipertrofia foi associada à expressão aumentada do gene que codifica inositol polifosfato-5-fosfatase f (Inpp5f) tendo por resultado a ativação da glicogênio sintase quinase 3β (Gsk3P) através da inativação do proto-oncogene detimomas (Akt) e da proteína quinase-1 (Pdk1) dependente da 3-fosfoinositida. Ao contrário, os camundongos transgênicos HDAC2 apresentavam hipertrofia aumentada associada com a Gsk33 inativada. A inibição química de Gsk3P ativada permitiu que os adultos com deficiência em HDAC2 se tornassem sensíveis à estimulação hipertrófica. Estes resultados sugerem que HDAC2 é um alvo molecular importante de inibidores de HDAC no coração e que HDAC2 e Gsk3p são ambos componentes de uma via reguladora que proporciona um alvo terapêutico atrativo para o tratamento da hipertrofia cardíaca e da insuficiência cardíaca (Trivedi, C-M., 2007, Nat. MED. 13:324-331).

HDAC3 são expressas maximamente na proliferação de células da cripta no intestino normal. O silenciamento da expressão de HDAC3 em linhagens celulares de câncer de cólon conduziu à inibição do crescimento celular, uma diminuição na sobrevivência das células, e aumentou a apoptose. Resultados semelhantes foram observados para HDAC2 e, a um grau inferior, para HDAC1. O silenciamento do gene de HDAC3 também induziu seletivamente a expressão da fosfatase alcalina, um marcador da maturação das células de cólon. A sobre-expressão do HDAC3 inibiu a transcrição de p21 basal e induzida por butirato, enquanto que o silenciamento de HDAC3 estimulou a atividade e a expressão do promotor de p21. Estes resultados identificam HDAC3 como um gene desregulado no câncer de cólon humano e como um regulador novo da maturação das células de cólon e da expressão de p21 (Wilson, A-J., 2006, J. Biol. Chem., 281: 1354813558).

HDAC6 é um subtipo da família de HDAC que desacetila alfa-tubulina e aumenta a motilidade celular. Usando a reação de transcrição reversa quantitativa em tempo real em cadeia da polimerase e Western Blotting em nove linhagens de células derivadas de carcinoma escamoso celular oral (OSCC) e queratinócitos orais normais (NOKs), expressão da proteína e mRNA de HDAC6 foram regulados para cima geralmente em todas as linhagens celulares comparadas com os NOKs. A análise da imunofluorescência detectou a proteína de HDAC6 no citoplasma de linhagens celulares de OSCC. Similar às linhagens celulares de OSCC, a regulação para cima de HDAC6 foi evidente tanto em níveis de mRNA (74%) como de proteína (51%) de tumores primários de OSCC humano. Entre as variáveis

7/48 clínicas analisadas, foi encontrado que o estágio clínico do tumor estava associado aos estados de expressão de HDAC6. A análise indicou uma diferença significativa no nível da expressão de HDAC6 entre os tumores de estágio precoce (estágio I e II) e de estágio avançado (estágio III e IV) (P=0,014). Estes resultados sugerem que a expressão de HDAC6 pode ser correlacionada com a agressividade do tumor e oferece indícios ao planeamento de novos tratamentos (Sakuma, T., 2006, Int. J. Oncol., 29:117 - 124).

O silenciamento epigenético de cromossomas funcionais por HDAC é um dos mecanismos principais ocorridos em muitos processos patológicos, em que os genes relacionados com função são reprimidos ou reprogramados pelas atividades de HDAC que conduzem à perda de fenótipos no controle do crescimento, maturação e diferenciação terminal, e à perda de funcionalidade dos tecidos. Por exemplo, os genes supressores de tumor são silenciados frequentemente durante o desenvolvimento do câncer e o inibidor de HDAC pode deprimir a expressão destes genes supressores de tumor, conduzindo à inibição de diferenciação e crescimento celular (Glaros S et al., 2007, Oncogene 4 de junho Epub antes da impressa; Mai, A, ef al., 2007, Int J. Biochem Cell Bio., 4 de abril, Epub antes da impressa; Vincent A. et al., 2007, Oncogene, 30 de abril, Epub antes da impressa; nossos resultados não-publicados). A repressão de genes estruturais tais como FXN na ataxia de Friedreich e SMN na atrofia muscular espinhal pode ser revertida por inibidores de HDAC o que conduz à re-expressão de genes de FXN e de SMN e recomeça as funções nos tecidos (Herman D et al., 2006, Nature Chemical Biology, 2(10):551 -8; Avila AM et al., 2007, J Clinic Investigation, 117(3)659-71; de Bore J, 2006, Tissue Eng. 12(10):2927-37). A indução da expressão de gene da família de MHC II inteira através da reprogramação de “ponto quente” de HDAC no cromossoma 6p21-22 pelo inibidor de HDAC estende mais a modulação epigenética do reconhecimento imune e da resposta imune (Gialitakis M et al., 2007, Nucleic Acids Res., 34(1);765-72).

Diversas classes de inibidores de HDAC foram identificadas, incluindo (1) ácidos graxos de cadeia curta, por exemplo, butirato e fenilbutirato; (2) ácidos hidroxâmicos orgânicos, por exemplo, ácido hidroxâmico suberoilanilida (SAHA) e tricostatina A (TSA); (3) tetrapeptídeos cíclicos que contêm uma fração de 2 amino-8-oxo-9,10-epoxidecanoila (AOE), por exemplo, trapoxina e HC-toxina; (4) tetrapeptídeos cíclicos sem a fração de AOE, por exemplo, apicidina e FK228; e (5) benzamidas, por exemplo, MS-275 (EP0847992A1, US2002/0103192A1, WO02/26696A1, WC01/70675A2, WO01/18171A2). Embora, HDAC herde papéis biológicos muito prometedores como um alvo de fármaco, o sucesso de SAHA de Merck é limitado atualmente somente ao tratamento do linfoma cutâneo de células T enquanto que nenhum tumor sólido principal foi ainda relatado como sendo altamente eficaz por este tratamento. Portanto, existe ainda uma necessidade de descobrir compostos novos com atividade inibitória de HDAC e atividade anticâncer mais fortes, uma inibição mais

8/48 seletiva em subtipo diferente de HDAC, e toxicidade mais baixa.

A metáfora favorita para desenvolvedores de fármacos contra o câncer tem sido por muito tempo a terapia alvo. Esperava-se que alguém desenhasse um fármaco que podería atingir células tumorais em um alvo específico, matar células tumorais ao mesmo tempo em que deixasse as células normais não danificadas. As células cancerosas, entretanto, podem usar vias e desencadeadores biológicos múltiplos para crescer e se espalhar ao longo de todo o corpo. Atingir as mesmas em um alvo também fazem com que se reagrupem e se transfiram ao longo de novas vias de crescimento. Essa realização conduziu ao desenvolvimento das terapias alvo de combinação, que estão se tornando o novo paradigma para o tratamento contra o câncer. Diversos inibidores de quinase de múltiplos alvos estão agora em desenvolvimento, dois deles, Sorafenib e Suten, já estão aprovados nos Estados Unidos. Por exemplo, Sorafenib, desenvolvido por Bayer Pharmaceuticals, é o primeiro fármaco direcionado tanto à via de RAF/MEK/ERK (envolvida na proliferação celular) como na cascata de sinalização de VEGFR2/PDGFR3 (envolvida na angiogênese). Este fármaco foi aprovado primeiramente em dezembro de 2005 para câncer avançado de rim. Entretanto, estas terapias alvo, embora sejam eficazes contra alguns tumores sólidos, estão longe de satisfazer em termos de alcançar uma eficácia melhor e manter ao mesmo tempo efeitos colaterais aceitáveis associados aos tratamentos contra outros tumores sólidos.

São fornecidos novos compostos químicos que combinam atividades de antiangiogênese e de anti-proliferação de inibidores de RTK junto com as atividades de indução de diferenciação, modulação imune, contenção do ciclo celular e de indução de apoptose de inibidores de HDAC, para alcançar uma eficácia melhor contra os tumores sólidos ao superar efeitos secundários tais como a hipertensão, prolongamento do intervalo QT, a regressão da glândula de tiróide, o prurido e a descoloração de pele, e as dores associadas aos inibidores de RTK atualmente introduzidos no mercado.

Particularmente, a presente invenção fornece um composto que tem a estrutura representada pela fórmula (I):

(I) incluindo sua forma livre, forma de sal, enantiômero, diastereoisômero ou hidrato, em que

Z é CH ou N;

9/48

R¹, R² e R³ são cada um hidrogênio, halogênio, alquila, alcoxi ou trifluormetila; R⁴ é

R⁵

X são um anel benzeno ou um anel piridina;

R⁵ é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, no halogênio, na alquila, em alcoxi e trifluormetila.

Na modalidade preferida, os compostos desta invenção são aqueles da fórmula (I), onde:

ZéCH;

R¹, R² e R³ são cada um hidrogênio, halogênio, alquila, alcoxi ou trifluormetila;

R⁴ é

X são um anel benzeno ou um anel piridina;

R⁵ é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, alquila, alcoxi e trifluormetila.

E ou ia outra modalidade preferida, os compostos desta invenção são aqueles da fórmula (I), onde:

ZéCH;

R¹, R² e R³ são cada um hidrogênio ou alcoxi;

R⁴ é

X é um anel benzeno ou um anel piridina;

Em uma outra modalidade mais preferida, os compostos desta invenção são aqueles da fórmula (I), onde:

ZéCH;

R¹ e R² são cada hidrogênio ou metoxi;

10/48

R³ é Η;

R⁴é

X são um anel benzeno ou um anel piridina;

R⁵ é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, alquila, alcoxi e trifluormetíla.

Em uma outra modalidade preferida, os compostos desta invenção são aqueles da fórmula (I), onde:

ZéCH;

R¹ e R² são cada um hidrogênio ou metoxi;

R³ é H;

R⁴ é

ou , or

X é um anel benzeno ou um anel piridina;

R⁵ é H ou F.

O termo “halogênio” como usado aqui significa o flúor, o cloro, o bromo ou o iodo. O termo alquila” como usado aqui inclui alquilas lineares, e semelhante ramificadas ou cíclicas, por exemplo, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, iso-butila, tert-butila, npentila, iso-pentila, n-hexila, iso-hexila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila.

O termo “alcoxi” como usado aqui significa um grupo formado pela ligação de um radical alquila a um átomo de oxigênio, onde o átomo de oxigênio tem a habilidade da ligação livre. Exemplos dos mesmos incluem metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi, isopropoxi, tert-butoxi, ciclopropoxi, ciclohexiloxi e semelhantes.

Os compostos desta invenção podem ser preparados como segue:

(ii) (mi

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O composto da fórmula (II) é condensado com um composto da fórmula (III) para dar o composto do título (I). A reação de condensação é conduzida usando um agente de condensação do peptídeo como catalisador, tal como 1 carbodiimida de etil-3- (3dimetilaminopropila) (EDO), Ν,Ν’-diciclohexilcarbodiimida (DCC), N,N’-carbonildiimidazol (GDI), etc. A reação pode ser conduzida em 0 a 80 °C por 4 a 72 horas. Os solventes que podem ser usados são solventes normais tais como benzeno, tolueno, tetrahidrofurano, dioxano, diclorometano, clorofórmio, Ν,Ν-dimetilformamida, etc. Caso necessário, uma base tal como hidróxido de sódio, trietilamina ou piridina podem ser adicionados ao sistema de reação.

Os compostos da fórmula (II) podem ser preparados como segue:

Ácido 6-hidroxinaftóico disponível no mercado é aquecido na presença do carbonato do césio e a 4-cloroquinolina apropriadamente substituída (IV) em DMSO para fornecer os ácidos naftóicos (II). A reação pode ser conduzida em 130 a 140 °C por 3 a 24 horas.

Os compostos da fórmula (III) são disponíveis no mercado ou preparados como segue:

O composto (V) disponível no mercado é condensado com um composto (VI) disponível no mercado para fornecer o composto (VII). A reação de condensação é conduzida usando um agente de condensação do peptídeo como um catalisador, tal como 1 carbodiimida de etil-3- (3-dimetilaminopropila) (EDC), Ν,Ν’-diciclohexilcarbodiimida (DCC), Ν,Ν’-carbonildiimidazol (CDI), etc. A reação pode ser conduzida em 0 a 60 °C por 2 a 72 horas. Os solventes que podem ser usados são solventes normais tais como o benzeno, o

12/48 tolueno, o tetrahidrofurano, o dioxano, o diclorometano, o clorofórmio, ο Ν,Νdimetilformamida, etc. caso necessário, uma base tal como o hidróxido de sódio, a trietilamina ou a piridina podem ser adicionados ao sistema de reação.

Ο (VII) composto é dissolvido no metanol e hidrogenado usando paládio a 5% em carvão vegetal como um catalisador para render o composto (Illa). A reação pode ser conduzida na temperatura ambiente. Caso necessário, um ácido tal como o ácido sulfúrico pode ser adicionado ao sistema de reação.

Os compostos representados pela fórmula (I) podem purificados pelos métodos de separação convencionais tais como a extração, recristalização, cromatografia em coluna e semelhantes.

Os compostos representados pela fórmula (I) são capazes de inibir proteínas quinases e histonas desacetilases simultaneamente e são ,portanto úteis em tratar doenças associadas às atividades anormais da proteína quinase e as atividades anormais da histona desacetilase. Em particular, são altamente eficazes contra malignidade hematológica e tumores sólidos.

Os compostos representados pela fórmula (I) podem ser formulados em preparações farmacêuticas comuns, tais como comprimidos, cápsulas, pós, xaropes, soluções, suspensões, injeções, pomadas, e semelhantes. As preparações podem conter um composto da fórmula (I) como um ingrediente ativo, junto com carreadores, excipientes e diluentes farmaceuticamente aceitáveis. Tal preparação contém tipicamente 0,5 a 70%, preferivelmente 1 a 20% por peso de ingrediente ativo. Os carreadores, os excipientes e os diluentes farmaceuticamente aceitáveis no presente documento incluem, mas não limitados àqueles listados em ((Handbook of Pharmaceutical Excipients)) (American Pharmaceutical Association, outubro, 1986).

Os compostos representados pela fórmula (I) no presente documento podem ser clinicamente administrados aos mamíferos, incluindo o homem, por via oral ou injeção. A administração pela via oral é preferida. A dosagem administrada está na faixa de 0,0001 a 200 mg/kg de peso corporal por dia, preferivelmente na faixa de 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal por dia, e melhor na faixa de 0,1 a 50 mg/kg de peso corporal por dia. Entretanto, a dosagem ótima varia com o indivíduo que está sendo tratado, a dose geralmente menor é administrada inicialmente e os incrementos são feitos depois da mesma.

Os compostos representativos da presente invenção são mostrados na Tabela 1 abaixo. Os números de compostos correspondem aos “Números do exemplo” na seção dos Exemplos. Isto é, a síntese do composto 1 como mostrado na Tabela 1 é descrita no “Exemplo Tea síntese do composto 44 como mostrado na Tabela 1 é descrita no “Exemplo 44”.

Tabela 1 compostos representativos da presente invenção

13/48

Exemplo

Estrutura

Nome

N-(2-aminofenil)-6-(6,7dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1 naftamida

14/48

N-(2-amino-4-bromofenil)-6(6,7-dimetoxiquinazolin-4iloxi)-1-naftamida

N-(2-amino-4-trifluormetilfenil)-6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1naftamida

N-(4-((2aminofenil)carbamoil)benzil)-6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1 naftamida

N-(4-((2-amino-4-fluorfenil)carbamoil)benzil)-6-(6,7dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1 naftamida

N-(2-aminofenil)-6-((2-(6,7dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1 naftamido)metil)nicotinamida

15/48

N-(2-amino-4-fluorfenil)-6((2-(6,7-dimetoxiquinazolin4iloxi)-1 -naftamido)metil)nicotinamida

N-(3-((2aminofenil)carbamoil)benzil)-6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1naftamida

N-(4-((2-amino-4-metilfenil)carbamoil)benzil)-6-(6,7dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1naftamida

N-(4-((2-amino-4metoxifenil)carbamoil) benzil) -6-(6,7dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1 naftamida

N-(4-((2-amino-4trifluormetilfenil)carbamoil)benzil)-6(6,7dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1 naftamida

16/48

N-(2-aminofenil)-6-(7metoxiquinolin-4-iloxi)-1 naftamida

N-(2-amino-4-fluorfenil)-6-(7metoxiquinolin-4-iloxi)-1 naftamida

N-(4-((2aminofenil)carbamoil)benzil)-6-(7-metoxiquinolin4-iloxi)-1-naftamida

N-(2-aminofenil)-6-((2-(7metoxiquinolin-4-iloxi)-1 naftamido)metil)nicotinamida

N-(2-aminofenil)-6-(6,7dimetoxiquinolin-4-iloxi)-1 naftamida

17/48

N-(2-amino-4-fluorfenil)-6(6,7-dimetoxiquinolin-4-iloxi)1-naftamida

N-(4-((2aminofenil)carbamoil)benzi I) -6- (6,7-dim etoxiquinolin-4-iloxi)-1 -naftamida

N-(2-aminofenil)-6-((2-(6,7dimetoxiquinolin-4-iloxi)-1 naftamido)metil)nicotinamida

N-(2-aminofenil)-6-(quinolin4-iloxi)-1-naftamida

N-(2-aminofenil)-6-(8-metilquinolin-4-iloxi) -1 -naftamida

18/48

N-(2-aminofenil)-6-(7-cloroquinolin-4-iloxi)-1 -naftamida

N-(2-aminofenil)-6-(8(trifluormetil)quinolin-4-iloxi)1-naftamida

N-(4-((2aminofenil)carbamoil)benzil)-6-(7-cloroquinolin4-iloxi) -1 -naftamida

N-(4-((2aminofenil)carbãmoil)benzi I)-6-(8-(trif I uorm eti I)quinolin-4-iloxi) -1 -naftamida

A presente invenção será adicionalmente ilustrada em combinação com exemplos abaixo, entretanto, o escopo de proteção da presente invenção não é limitado a estes exemplos. Além disso, as porcentagens descritas aqui são em peso a menos que especificado de outra maneira. Qualquer faixa de números relatados no relatório descritivo, 5 tais como unidades de medida, condições da reação, estados físicos de um composto ou as porcentagens, é pretendida que forneça referência literalmente e expressamente. Aqueles técnicos no assunto, ao realizar a presente invenção, usando temperaturas, concentrações, quantidades, números de carbono, e semelhantes que estão fora da faixa ou que diferem de

19/48 um único valor, conseguirão o resultado desejado.

Exemplo 1

Preparação de ácido 6- (6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico

COOH '0 .0

Ácido 6-Hidroxi-1-naftóico (1,43 g, 7,6 mmol) foi dissolvido em 38 m! de DMSO, a seguir carbonato do césio (7,5 g, 22,9 mmol) e 4-cloro-6,7-dimetoxi-quinazolina (2,05 g, 9,14 mmol) foram adicionados. A mistura foi aquecida a 140 °C por 3 horas. Quando a reação foi terminada a mistura foi refrigerada à temperatura ambiente e diluída com 40 ml de H₂O. A mistura foi neutralizada com HCI a 2 N a pH=6,5. Os sólidos depositados foram filtrados, lavados com H₂O, secos e recristalizados a partir de metanol para dar o composto do título (1,68 g, rendimento de 59%) como um sólido marrom. LC-MS (m/z) 377 (M+1).

Exemplo 2

Preparação de ácido 6- (7-metoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftóico

COOH

O composto do título (1,73 g, rendimento de 66%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-hidroxi-1-naftóico (1,43 g, 7,6 mmol) e 4-cloro-7-metoxiquinolina (1,77 g, 9,14 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 1. LC-MS (m/z) 346 (M+1).

Exemplo 3

Preparação de ácido 6- (6,7-dimetoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftóico

COOH

O composto do título (1,95 g, rendimento de 68%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-hidroxi-1-naftóico (1,43 g, 7,6 mmol) e 4-cloro-6,7dimetoxiquinolina (2,04 g, 9,14 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 1. LC-MS (m/z) 376 (M+1).

Exemplo 4

20/48

Preparação de ácido 6- (quinolin-4-iloxi)-1-naftóico

COOH

O composto do título (1,24 g, rendimento de 52%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-hidroxi-1-naftóico (1,43 g, 7,6 mmol) e 4-cloroquinolina (1,49 g, 9,14 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 1. LC-MS (m/z) 316 (M+1).

Exemplo 5

Preparação de ácido 6- (8-metilquinolin-4-iloxi)-1-naftóico

O composto do título (1,25 g, rendimento de 55%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-hidroxi-1 naftóico (1,43 g, 7,6 mmol) e 4-cloro-8-metilquinolina (1,62 g, 9,14 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 1. LC-MS (m/z) 330 (M+1).

Exemplo 6

Preparação de ácido 6-(7-cloroquinolin-4-iloxi)-1 -naftóico

O composto do título (1,57 g, rendimento de 59%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-hidroxi-1 naftóico (1,43 g, 7,6 mmol) e 4,7-dicloroquinolina (1,81 g, 9,14 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 1. LC-MS (m/z) 350 (M+1).

Exemplo 7

Preparação de ácido 6-(8-(trifluormetil)quinolin-4-iloxi)-1 -naftóico

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COOH

CF;

O composto do título (1,43 g, rendimento de 49%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6hidroxi-1 naftóico (2,12 g, 9,14 mmol) e 4-cloro-8(trifluormetil)quinolina (1,43 g, 7,6 mmol) e por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 1. LC-MS (m/z) 384 (M+1).

Exemplo 8

Preparação de 4-(aminometil)-N-(2-aminofenil)benzamida

NH_;

O ácido 4-cianobenzóico (294 mg, 2 mmol) foi dissolvido em 8 ml de DMF, a seguir cloridrato de 1-etil-3-(3-dimetillaminopropil)carbodiimida (768 mg, 4 mmol), 1hidroxibenzotriazol (324 mg, 2,4 mmol), trietilamina (808 mg, 8 mmol) e o-fenilenodiamina (432 mg, 4 mmol) foram adicionados. A mistura foi agitada por 20 horas na temperatura ambiente. A mistura foi diluída com 400 ml da salmoura. Os sólidos foram coletados por filtração a vácuo, lavados com água e secos sob vácuo para dar N-(2-aminofenil)-4cianobenzamida (364 mg, 77%) como um sólido cinzento. LC-MS (m/z) 238 (M+1).

A N-(2-aminofenil)-4-cianobenzamida (237 mg, 1 mmol) foi dissolvida em metanol (40 ml), a seguir ácido sulfúrico (196 mg, 1 mmol) e paládio a 5% em carvão vegetal (0,20 g) foram adicionados. A mistura foi agitada sob uma atmosfera do hidrogênio até que a reação fosse terminada. A mistura foi filtrada através de celite, e o filtrado foi neutralizado com solução de NaOH a 1 N-(2 ml). A mistura resultante foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob vácuo para dar o composto do título (232 mg, rendimento de 96%) como um sólido cinzento. LC-MS (m/z) 242 (M+1).

Exemplo 9

Preparação de 4-(aminometil)-N-(2-amino-4-fluorfenil) benzam ida

NH;

O composto do título (186 mg, rendimento de 72%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 4-ciano-benzóico (294 mg, 2 mmol) e 4-fluoro-o-fenilenodiamina (302 mg, 2,4 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 8. LC-MS (m/z) 260 (M+1).

22/48

Exemplo 10

Preparação de 4-(aminometil)-N-(2-amino-4-metilfenil)benzamida

O composto do título (173 mg, rendimento de 68%) foi preparado como um sólido cinzento a partir de ácido 4-ciano-benzóico (294 mg, 2 mmol) e 4-metil-o-fenilenodiamina (293 mg, 2,4 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 8. LC-MS (m/z) 256 (M+1).

Exemplo 11

Preparação de 4-(aminometil)-N-(2-amino-4-metoxifenil)benzamida

O composto do título (192 mg, rendimento de 71%) foi preparado como um sólido cinzento a partir de ácido 4-ciano-benzóico (294 mg, 2 mmol) e 4-metoxi-o-fenilenodiamina (331 mg, 2,4 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 8. LC-MS (m/z) 272 (M+1).

Exemplo 12

Preparação de 4-(aminometil)-N-(2-amino-4-trifluormetilfenil)benzamida

O composto do título (195 mg, rendimento de 63%) foi preparado como um sólido cinzento a partir de ácido 4-ciano-benzóico (294 mg, 2 mmol) e 4-trifluormetil-ofenilenodiamina (422 mg, 2,4 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 8. LC-MS (m/z) 310 (M+1).

Exemplo 13

Preparação de 3-(aminometil)-N-(2-aminofenil)benzamida

O composto do título (140 mg, rendimento de 58%) foi preparado como um sólido cinzento a partir de ácido 3-ciano-benzóico (294 mg, 2 mmol) e o-fenilenodiamina (432 mg, 4 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 8. LC-MS (m/z) 242 (M+1).

Exemplo 14

Preparação de 6-(aminometil)-N-(2-aminofenil)nicotinamida

23/48

O composto do título (157 mg, rendimento de 65%) foi preparado como um sólido cinzento a partir de ácido 6-ciano-nicotínico (296 mg, 2 mmol) e o-fenilenodiamina (864 mg, 8 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 8. LC-MS (m/z) 243 (M+1).

Exemplo 15

Preparação de 6-(aminometil)-N-(2-amino-4-fluorfenil)nicotinamida

O composto do título (mg 135, rendimento de 52%) foi preparado como um sólido cinzento ácido 6-ciano-nicotínico (296 mg, 2 mmol) e 4-fluoro-o-fenilenodiamina (302 mg, 2,4 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 8. LC-MS (m/z) 261 (M+1).

Exemplo 16

Preparação de N-(2-aminofenil)-6- (6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftamida

O ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) foi dissolvido em 4 ml de DMF, a seguir cloridrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (38,4 mg, 0,2 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (16,2 mg, 0,12 mmol), trietilamina (40,4 mg, 0,4 mmol) e o-fenilenodiamina (43,2 mg, 0,4 mmol) foram adicionados. A mistura foi agitada por 20 horas na temperatura ambiente. A mistura foi diluída com 200 ml de salmoura. Os sólidos foram coletados por filtração a vácuo, lavados com água e secos sob vácuo para dar o composto do título (39,1 mg, 84%) como um sólido marrom. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 4,01 (s, 6H, 2 x OCH3), 4,97 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,65 (t, J= 7,2 hertz, 1H, Ar-H), 6,82 (d, J= 7,0 hertz, 1H, Ar-H), 7,00 (t, J= 7,1 hertz, 1H, Ar-H), 7,38 (d, J= 7,1 hertz, 1H, Ar-H), 7,42 (s, 1H, Ar-H), 7,60 (dd, J= 2,4 e 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 7,64-7,68 (m, 2H, Ar-H), 7,87 (d, J= 6,7 hertz, 1H, Ar-H), 7,97 (d, J= 2,3 hertz, 1H, Ar-H), 8,09 (d, J= 8,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,38 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,54 (s, 1H, Ar-H), 9,85 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 467 (M+1).

Exemplo 17

Preparação de N-(2-amino-4-fluorfenil)-6- (6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1naftamida

24/48

O composto do título (43,1 mg, rendimento de 89%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e de fluor-o-fenilenodiamina 4 (15,1 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16.¹H RMN (DMSO-d₆) δ 4,01 (s, 6H, 2 x OCH₃), 5,28 (s, 2H, benzenoNH₂), 6,41 (TD, J= 2,6 e 8,5 hertz, 1H, Ar-H), 6,59 (dd, J= 2,6 e 11,2 hertz, 1H, Ar-H), 7,35 (TD, J= 1,8 e 7,5 hertz, 1H, Ar-H), 7,41 (s, 1H, Ar-H), 7,59 (dd, J= 2,2 e 8,4 hertz, 1H, Ar-H), 7,63-7,67 (m, 2H, Ar-H), 7,89 (d, J= 6,9 hertz, 1H, Ar-H), 7,96 (d, J= 1,9 hertz, 1H, Ar-H), 8,08 (d, J= 8,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,38 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,54 (s, 1H, Ar-H), 9,77 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 485 (M+1).

Exemplo 18

Preparação de N-(2-amino-4-metilfenil)-6- (6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1naftamida

O composto do título (39,4 mg, rendimento de 82%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e de 4-metil-o-fenilenodiamina (14,6 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) (razão de isômero 0,77/0,23) δ 2,21 (s, 1H, ArCH₃), 4,01 (s, 6H, 2 x OCH₃), 4,77 (s, 0,23x2H, benzeno-NH₂), 4,89 (s, 0,77x2H, benzenoNH₂), 6,46 (d, J= 7,6 hertz, 0,77x1 H, Ar-H), 6,64 (s, 0,77x1 H, Ar-H), 6,73 (d, J= 7,9 hertz, 0,23x1 H, Ar-H), 6,81 (s, 0,23x1 H, Ar-H), 7,24 (d, J= 8,1 hertz, 1H, Ar-H), 7,41 (s, 1H, Ar-H), 7,58-7,66 (m, 3H, Ar-H), 7,85 (d, J= 6,7 hertz, 1H, Ar-H), 7,97 (s, 1H, Ar-H), 8,08 (d, J= 7,9 hertz, 1H, Ar-H), 8,38 (d, J= 9,0 hertz, 1H, Ar-H), 8,54 (s, 1H, Ar-H), 9,77 (s, 1H, benzenoNH). LC-MS (m/z) 481 (M+1).

Exemplo 19

Preparação de N-(2-amino-4-metoxifenil)-6- (6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-125/48 naftamida

O composto do título (43,2 mg, rendimento de 87%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e de 4-metoxi-o-fenilenodiamina (16,5 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 3,70 (s, 3H, -OCH₃), 4,01 (s, 6H, 2 x OCH₃), 5,00 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,23 (dd, Ar-H de J= 2,6 e 8,6 hertz, 1H,), 6,40 (d, J= 2,6 hertz, 1H, Ar-H), 7,22 (d, J= 8,6 hertz, 1H, Ar-H), 7,41 (s, 1H, Ar-H), 7,59 (dd, Ar-H de J= 2,2 e 9,1 hertz, 1H,), 7,62-7,66 (m, 2H, Ar-H), 7,86 (d, J= 6,9 hertz, 1H, Ar-H), 7,96 (d, J= 2,0 hertz, 1H, Ar-H), 8,07 (d, J= 8,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,38 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,54 (s, 1H, ArH), 9,70 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 497 (M+1).

Exemplo 20

Preparação de N-(2-amino-4-clorofenil)-6- (6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1naftamida

O composto do título (42,9 mg, rendimento de 83%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e de 4-cloro-o-fenilenodiamina (17,1 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16.¹H RMN (DMSO-d₆) δ 4,01 (s, 6H, 2 x OCH₃), 5,31 (s, 2H, benzenoNH₂), 6,65 (d, J= 8,3 hertz, 1H, Ar-H), 6,86 (d, J= 1,9 hertz, 1H, Ar-H), 7,41 (s, 1H, Ar-H), 7,58-7,67 (m, 4H, Ar-H), 7,89 (d, J= 6,8 hertz, 1H, Ar-H), 8,01 (s, 1H, Ar-H), 8,09 (d, J= 8,1 hertz, 1H, Ar-H), 8,37 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,55 (s, 1H, Ar-H), 9,84 (s, 1H, benzenoNH). LC-MS (m/z) 501 (M+1).

Exemplo 21

Preparação de N-(2-amino-4-bromofenil)-6- (6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1naftamida

26/48

O composto do título (42,0 mg, rendimento de 77%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1 -naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e 4-bromo-o-fenilenodiamina (22,4 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16.¹H RMN (DMSO-d₆) δ 4,01 (s, 6H, 2 x OCH₃), 5,31 (s, 2H, benzenoNH₂), 6,77 (d, J= 8,3 hertz, 1H, Ar-H), 7,01 (s, 1H, Ar-H), 7,41 (s, 1H, Ar-H), 7,58-7,65 (m, 5H, Ar-H), 7,89 (d, J= 7,0 hertz, 1H, Ar-H), 8,00 (s, 1H, Ar-H), 8,14 (d, J= 10,2 hertz, 1H, ArH), 8,37 (d, J= 9,1 hertz, 1H, Ar-H), 8,54 (s, 1H, Ar-H), 9,84 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 545 (M+1).

Exemplo 22

Preparação de N-(2-amino-4-trifluormetilfenil)-6- (6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1naftamida

O composto do título (42,3 mg, rendimento de 79%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1 -naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e 4-trifluormetil-o-fenilenodiamina (21,1 mg, de 0,12 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 4,01 (s, 6H, 2 x OCH₃), 5,72 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,92 (d, J= 8,5 hertz, 1H, Ar-H), 7,42 (s, 1H, Ar-H), 7,59-7,65 (m, 3H, Ar-H), 7,90-7,96 (m, 2H, Ar-H), 7,98 (s, 1H, Ar-H), 8,10 (d, J= 8,3 hertz, 1H, Ar-H), 8,17 (d, J= 7,3 hertz, 1H, Ar-H), 8,39 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,54 (s, 1H, Ar-H), 9,90 (s, 1H, benzenoNH). LC-MS (m/z) 535 (M 1).

Exemplo 23

Preparação de N-(4 (carbamoil (2-aminofenil)) benzil)-6- (6,7-dimetoxiquinazolin-4iloxi)-1-naftamida

27/48

O composto do título (43,1 mg, rendimento de 72%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e de 4-(aminometil)-N-(2-aminofenil)benzamida (28,9 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16. LC-MS (m/z) 600 (M+1).

Exemplo 24

Preparação de N-(4 (carbamoil (2-amino-4-fluorfenil)) benzil)-6- (6,7dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftamida

O composto do título (46,3 mg, rendimento de 75%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e 4-(aminometil)-N-(2-amino-4-fluorfenil)benzamida (31,1 mg, os 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16. LC-MS (m/z) 618 (M+1).

Exemplo 25

Preparação de N-(2-aminofenil)-6- ((2 (6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1naftamido)metil)nicotinamida

O composto do título (41,4 mg, rendimento de 69%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e 6-(aminometil)-N-(2-aminofenil)nicotinamida (29,0 mg, 0,12 mmol) por um procedimento

28/48 análogo ao descrito no exemplo 16. LC-MS (m/z) 601 (M+1).

Exemplo 26

Preparação de N-(2-amino-4-fluorfenil)-6- ((2 (6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1naftamido)metil)nicotinamida

O composto do título (43,3 mg, rendimento de 77%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e 6-(aminometil)-N-(2-amino-4-fluorfenil)nicotinamida (31,2 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16. LC-MS (m/z) 619 (M+1).

Exemplo 27

Preparação de N-(3 (carbamoil (2-aminofenil)) benzil)-6- (6,7-dimetoxiquinazolin-4iloxi)-1-naftamida

O composto do título (48,5 mg, rendimento de 81%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e 3-(aminometil)-N-(2-aminofenil)benzamida (28,9 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16. LC-MS (m/z) 600 (M+1).

Exemplo 28

Preparação de N-(4 (carbamoil (2-amino-4-metilfenil)) benzil)-6- (6,7dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftamida

29/48

O composto do título (52,7 mg, rendimento de 86%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e 4-(aminometil)-N-(2-amino-4-metilfenil)benzamida (30,6 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16. LC-MS (m/z) 614 (M+1).

Exemplo 29

Preparação de N-(4 (carbamoil (2-amino-4-metoxifenil)) benzil)-6- (6,7dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftamida

O composto do título (51,6 mg, rendimento de 82%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e 4-(aminometil)-N-(2-amino-4-metoxifenil)benzamida (32,5 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16. LC-MS (m/z) 630 (M+1).

Exemplo 30

Preparação de N-(4 (carbamoil (2-amino-4-trifluormetilfenil)) benzil)-6- (6,7dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftamida

O composto do título (46,7 mg, rendimento de 70%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinazolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,6 mg, 0,1 mmol) e 4-(aminometil)-N-(2-amino-4-trifluormetilfenil)benzamida (37,1 mg, os 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16. LC-MS (m/z) 668 (M+1).

Exemplo 31

Preparação de N-(2-aminofenil)-6- (7-metoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftamida

30/48

O composto do título (39,6 mg, rendimento de 91%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6- (7-metoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftóico (34,5 mg, 0,1 mmol) e ofenilenodiamina (43,2 mg, 0,4 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 3,95 (s, 3H, -OCH₃), 4,97 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,60 (d, J= 5,2 hertz, 1H, Ar-H), 6,64 (t, J= 7,6 hertz, 1H, Ar-H), 6,82 (d, J= 7,8 hertz, 1H, Ar-H), 6,99 (t, J= 7,4 hertz, 1H, Ar-H), 7,31 (dd, Ar-H de J= 2,5 e 9,1 hertz, 1H,), 7,38 (d, J= 7,6 hertz, 1H, Ar-H), 7,45 (d, J= 2,4 hertz, 1H, Ar-H), 7,57 (dd, Ar-H de J= 2,4 e 9,2 hertz, 1H,), 7,65 (t, J= 7,8 hertz, 1H, Ar-H), 7,87-7,88 (m, 2H, Ar-H), 8,07 (d, J= 8,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,25 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,43 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,65 (d, J= 5,2 hertz, 1H, Ar-H), 9,84 (s, 1H, benzeno-NH). 436 (M+1).

Exemplo 32

Preparação de N-(2-amino-4-fluorfenil)-6- (7-metoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftamida

O composto do título (33,1 mg, rendimento de 73%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6- (7-metoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftóico (34,5 mg, 0,1 mmol) e de 4fluor-o-fenilenodiamina (15,1 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16.¹H RMN (DMSO-d₆) δ 3,95 (s, 3H, -OCH₃), 5,27 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,41 (TD, Ar-H de J= 2,5 e 8,4 hertz, 1H,), 6,57-6,61 (m, 2H, Ar-H), 7,30-7,36 (m, 2H, Ar-H), 7,45 (d, J= 2,2 hertz, 1H, Ar-H), 7,56 (dd, Ar-H de J= 2,2 e 9,2 hertz, 1H,), 7,65 (t, J= 7,6 hertz, 1H, Ar-H), 7,87-7,91 (m, 2H, Ar-H), 8,07 (d, J= 8,3 hertz, 1H, Ar-H), 8,24 (d, J= 9,1 hertz, 1H, Ar-H), 8,43 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,65 (d, J= 5,1 hertz, 1H, Ar-H), 9,75 (s, 1H, benzenoNH). LC-MS (m/z) 454 (M+1).

Exemplo 33

Preparação de N-(4 (carbamoil (2-aminofenil)) benzil)-6- (7-metoxiquinolin-4-iloxi)-1naftamida

31/48

O composto do título (48,3 mg, rendimento de 85%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(7-metoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftóico (34,5 mg, 0,1 mmol) e 4(aminometil)-N-(2-aminofenil)benzamida (28,9 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 3,95 (s, 3H, -OCH₃), 4,64 (d, J=

5,6 hertz, 2H, - CH₂), 4,87 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,58-6,62 (m, 2H, Ar-H), 6,78 (dd, Ar-H de J= 1,2 e 7,8 hertz, 1H,), 6,97 (TD, Ar-H de J= 1,4 e 8,1 hertz, 1H,), 7,18 (d, J= 7,0 hertz, 1H, Ar-H), 7,31 (dd, Ar-H de J= 2,5 e 9,2 hertz, 1H,), 7,44 (d, J= 2,4 hertz, 1H, Ar-H), 7,53-7,56 (m, 3H, Ar-H), 7,62 (t, J= 8,0 hertz, 1H, Ar-H), 7,72 (d, J= 6,1 hertz, 1H, Ar-H), 7,86 (d, J= 2,5 hertz, 1H, Ar-H), 7,98-8,06 (m, 3H, Ar-H), 8,24 (d, J= 9,1 hertz, 1H, Ar-H), 8,39 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,64 (d, J= 5,2 hertz, 1H, Ar-H), 9,21 (t, J= 6,0 hertz, 1H, - CONH), 9,61 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 569 (M+1).

Exemplo 34

Preparação de N-(2-aminofenil)-6- ((2 (7-metoxiquinolin-4-iloxi)-1naftamido)metil)nicotinamida

O composto do título (46,6 mg, rendimento de 82%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(7-metoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftóico (34,5 mg, 0,1 mmol) e 6(aminometil)-N-(2-aminofenil)nicotinamida (29,0 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 3,95 (s, 3H, -OCH₃), 4,74 (s, 2H, CH₂), 4,95 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,60 (m, 2H, Ar-H), 6,79 (s, 1H, Ar-H), 6,98 (s, 1H, Ar-H), 7,17 (s, 1H, Ar-H), 7,31 (d, J= 8,6 hertz, 1H, Ar-H), 7,44 (s, 1H, Ar-H), 7,58-7,63 (m, 3H, ArH), 7,77 (s, 1H, Ar-H), 7,87 (s, 1H, Ar-H), 8,05 (d, J= 5,6 hertz, 1H, Ar-H), 8,24 (d, J= 8,3 hertz, 1H, Ar-H), 8,33 (s, 1H, Ar-H), 8,47 (d, J= 7,5 hertz, 1H, Ar-H), 9,13 (s, 1H, Ar-H), 9,25 (s, 1H, - CONH), 9,77 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 570 (M+1).

Exemplo 35

32/48

Preparação de N-(2-aminofenil)-6- (6,7-dimetoxiquinoiin-4-iloxi)-1-naftamida

Ό

Ό IN

O composto do título (40,0 mg, rendimento de 86%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,5 mg, 0,1 mmol) e ofenilenodiamina (43,2 mg, 0,4 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 3,93 (s, 3H, -OCH₃), 3,95 (s, 3H, -OCH₃), 4,99 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,56 (d, J= 5,2 hertz, 1H, Ar-H), 6,63 (t, J= 7,6 hertz, 1H, Ar-H), 6,81 (d, J=

7,6 hertz, 1H, Ar-H), 6,98 (t, J= 7,2 hertz, 1H, Ar-H), 7,36 (d, J= 7,6 hertz, 1H, Ar-H), 7,43 (s, 1H, Ar-H), 7,56-7,58 (m, 2H, Ar-H), 7,65 (t, J= 7,6 hertz, 1H, Ar-H), 7,87-7,90 (m, 2H, Ar-H), 8,08 (d, J= 8,0 hertz, 1H, Ar-H), 8,43 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,49 (d, J= 5,2 hertz, 1H, ArH), 9,87 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 466 (M+1).

Exemplo 36

Preparação de N-(2-amino-4-fluorfenil)-6- (6,7-dimetoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftamida

NHO composto do título (39,1 mg, rendimento de 81%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,5 mg, 0,1 mmol) e 4fluor-o-fenilenodiamina (15,1 mg, de 0,12 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 3,93 (s, 3H, -OCH₃), 3,95 (s, 3H, -OCH₃), 5,31 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,40 (s, 1H, Ar-H), 6,55-6,59 (m, 2H, Ar-H), 7,30 (d, J= 7,6 hertz, 1H, Ar-H), 7,42 (s, 1H, Ar-H), 7,54-7,57 (m, 2H, Ar-H), 7,64 (t, J= 8,0 hertz, 1H, Ar-H), 7,897,91 (m, 2H, Ar-H), 8,07 (d, J= 8,0 hertz, 1H, Ar-H), 8,42 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,49 (d, J= 5,2 hertz, 1H, Ar-H), 9,79 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 484 (M+1).

Exemplo 37

Preparação de N-(4 (carbamoil (2-aminofenil)) benzil)-6- (6,7-dimetoxiquinolin-4iloxi)-1-naftamida

33/48

O composto do título (49,0 mg, rendimento de 82%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,5 mg, 0,1 mmol) e 4(aminometil)-N-(2-aminofenil)benzamida (28,9 mg, os 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16.¹H RMN (DMSO-d₆) δ 3,93 (s, 3H, -OCH₃), 3,95 (s, 3H, OCH₃), 4,63 (d, J= 5,6 hertz, 2H, - CH₂), 4,90 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,56-6,59 (m, 2H, Ar-H), 6,78 (d, J= 7,6 hertz, 1H, Ar-H), 6,96 (t, J= 8,1 hertz, 1H, Ar-H), 7,17 (d, J= 7,6 hertz, 1H, ArH), 7,42 (s, 1H, Ar-H), 7,53-7,55 (m, 4H, Ar-H), 7,62 (t, J= 8,0 hertz, 1H, Ar-H), 7,71 (d, J= 6,8 hertz, 1H, Ar-H), 7,87 (s, 1H, Ar-H), 7,98-8,06 (m, 3H, Ar-H), 8,39 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,49 (d, J= 5,2 hertz, 1H, Ar-H), 9,26 (t, J= 6,0 hertz, 1H, - CONH), 9,66 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 599 (M+1).

Exemplo 38

Preparação de N-(2-aminofenil)-6- ((2 (6,7-dimetoxiquinolin-4-iloxi)-1naftamido)metil)nicotinamida

O composto do título (47,9 mg, rendimento de 80%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(6,7-dimetoxiquinolin-4-iloxi)-1-naftóico (37,5 mg, 0,1 mmol) e 6(aminometil)-N-(2-aminofenil)nicotinamida (29,0 mg, os 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 3,93 (s, 3H, -OCH₃), 3,95 (s, 3H, OCH₃), 4,73 (d, J= 5,6 hertz, 2H, - CH₂), 4,97 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,57 (m, 2H, Ar-H), 6,77 (d, J= 6,4 hertz, 1H, Ar-H), 6,98 (t, J= 8,1 hertz, 1H, Ar-H), 7,16 (d, J= 5,6 hertz, 1H, Ar-H), 7,42 (s, 1H, Ar-H), 7,55-7,63 (m, 4H, Ar-H), 7,62 (t, J= 8,0 hertz, 1H, Ar-H), 7,76 (d, J= 6,8 hertz, 1H, Ar-H), 7,88 (s, 1H, Ar-H), 8,06 (s, 1H, Ar-H), 8,33 (s, 1H, Ar-H), 8,45-8,48 (m, 2H, Ar-H), 9,12 (s, 1H, Ar-H), 9,30 (t, J= 6,0 hertz, 1H, - CONH), 9,80 (s, 1H, benzeno-NH). LCMS (m/z) 600 (M+1).

Exemplo 39

34/48

Preparação de N-(2-aminofenil)-6- (quinolin-4-iloxi)-Tnaftamida

O composto do título (35,6 mg, rendimento de 88%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(quinolin-4-iloxi)-1-naftóico (31,5 mg, 0,1 mmol) e ofenilenodiamina (43,2 mg, 0,4 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 4,97 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,65 (t, J= 7,3 hertz, 1H, Αγη), 6,75 (d, J= 5,1 hertz, 1H, Ar-H), 6,82 (d, J= 7,8 hertz, 1H, Ar-H), 7,00 (t, J= 7,1 hertz, 1H, Ar-H), 7,38 (d, J= 7,5 hertz, 1H, Ar-H), 7,59 (dd, Ar-H de J= 2,3 e 9,2 hertz, 1H,), 7,64-7,71 (m, 2H, Ar-H), 7,83-7,92 (m, 3H, Ar-H), 8,08 (d, J= 8,4 hertz, 2H, Ar-H), 8,37 (d, J= 7,9 hertz, 1H, Ar-H), 8,45 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,73 (d, J= 5,1 hertz, 1H, Ar-H), 9,85 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 406 (M+1).

Exemplo 40

Preparação de N-(2-aminofenil)-6- (8-metilquinolin-4-iloxi)-1-naftamida

O composto do título (37,7 mg, rendimento de 90%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(8-metilquinolin-4-iloxi)-1-naftóico (32,9 mg, 0,1 mmol) e ofenilenodiamina (43,2 mg, 0,4 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 2,76 (s, 3H, Ar-CH₃), 4,97 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,64 (t, J= 7,1 hertz, 1H, Ar-H), 6,78 (d, J= 5,0 hertz, 1H, Ar-H), 6,82 (d, J= 7,8 hertz, 1H, Ar-H), 6,99 (t, J= 7,3 hertz, 1H, Ar-H), 7,38 (d, J= 7,5 hertz, 1H, Ar-H), 7,55-7,58 (m, 2H, Ar-H), 7,65 (t, J= 7,6 hertz, 1H, Ar-H), 7,71 (d, J= 7,0 hertz, 1H, Ar-H), 7,87-7,89 (m, 2H, Ar-H), 8,07 (d, J= 8,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,20 (d, J= 7,9 hertz, 1H, Ar-H), 8,44 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,76 (d, J= 5,0 hertz, 1H, Ar-H), 9,84 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 420 (M+1).

Exemplo 41

Preparação de N-(2-aminofenil)-6- (7-cloroquinolin-4-iloxi)-1-naftamida

35/48

O composto do título (33,2 mg, rendimento de 83%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(7-cloroquinolin-4-iloxi)-1-naftóico (35,0 mg, 0,1 mmol) e ofenilenodiamina (43,2 mg, 0,4 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 4,97 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,65 (t, J= 7,4 hertz, Ar-H), 6,77 (d, J= 5,5 hertz, 1H, Ar-H), 6,82 (d, J= 7,2 hertz, 1H, Ar-H), 7,00 (t, J= 7,0 hertz, 1H, ArH), 7,38 (d, J= 7,2 hertz, 1H, Ar-H), 7,60 (dd, Ar-H de J= 2,6 e 9,2 hertz, 1H,), 7,67-7,74 (m, 2H, Ar-H), 7,89 (d, J= 7,4 hertz, 1H, Ar-H), 7,94 (d, J= 2,4 hertz, 1H, Ar-H), 8,09 (d, J= 8,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,13 (d, J= 2,1 hertz, 1H, Ar-H), 8,41 (d, J= 9,0 hertz, 1H, Ar-H), 8,46 (d, J=

9,6 hertz, 1H, Ar-H), 8,76 (d, J= 5,2 hertz, 1H, Ar-H), 9,85 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 440 (M+1).

Exemplo 42

Preparação de N-(2-aminofenil)-6- (8-trifluormetilquinolin-4-iloxi)-1-naftamida

O composto do título (38,3 mg, rendimento de 81%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(8-trifluormetilquinolin-4-iloxi)-1 -naftóico (39,8 mg, 0,1 mmol) e ofenilenodiamina (43,2 mg, 0,4 mmol) por um procedimento análogo àquele descrito no exemplo 16.¹H RMN (DMSO-d₆) δ 4,98 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,65 (t, J= 7,3 hertz, 1H, ArH), 6,83 (d, J= 7,6 hertz, 1H, Ar-H), 6,89 (d, J= 5,2 hertz, 1H, Ar-H), 7,00 (t, J= 7,2 hertz, 1H, Ar-H), 7,38 (d, J= 7,5 hertz, 1H, Ar-H), 7,62 (dd, Ar-H de J= 2,4 e 9,2 hertz, 1H,), 7,68 (t, J=

7,7 hertz, 1H, Ar-H), 7,83 (t, J= 7,9 hertz, 1H, Ar-H), 7,90 (d, J= 7,0 hertz, 1H, Ar-H), 7,97 (d, J= 2,3 hertz, 1H, Ar-H), 8,10 (d, J= 8,3 hertz, 1H, Ar-H), 8,29 (d, J= 7,1 hertz, 1H, Ar-H), 8,47 (d, J= 9,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,70 (d, J= 7,8 hertz, 1H, Ar-H), 8,87 (d, J= 5,2 hertz, 1H, Ar-H),

9,86 (s, 1H, benzeno-NH). LC-MS (m/z) 474 (M+1).

Exemplo 43

Preparação de N-(4 (carbamoil (2-aminofenil)) benzil)-6- (7-cloroquinolin-4-iloxi)-1naftamida

36/48

O composto do título (42,4 mg, rendimento de 74%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(7-cloroquinolin-4-iloxi)-1-naftóico (35,0 mg, 0,1 mmol) e 4(aminometil)-N-(2-aminofenil)benzamida (28,9 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 4,64 (d, J= 5,8 hertz, 2H, - CH₂),

4,87 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,60 (t, J= 7,0 hertz, 1H, Ar-H), 6,75-6,79 (m, 2H, Ar-H), 6,97 (t, J= 7,5 hertz, 1H, Ar-H), 7,18 (d, J= 7,7 hertz, 1H, Ar-H), 7,53-7,59 (m, 3H, Ar-H), 7,66 (t, J= 8,0 hertz, 1H, Ar-H), 7,70-7,74 (m, 2H, Ar-H), 7,92 (d, J= 2,0 hertz, 1H, Ar-H), 7,99 (d, J= 7,9 hertz, 2H, Ar-H), 8,06 (d, J= 8,2 hertz, 1H, Ar-H), 8,13 (s, 1H, Ar-H), 8,39-8,42 (m, 2H, Ar-H), 8,75 (d, J= 5,1 hertz, 1H, Ar-H), 9,22 (t, J= 5,6 hertz, 1H, - CONH), 9,62 (s, 1H, benzenoNH). LC-MS (m/z) 573 (M+1).

Exemplo 44

Preparação de N-(4 ((carbamoil (2-aminofenil)) benzil)-6- (8-trifluormetilquinolin-4iloxi)-1-naftamida

O composto do título (47,3 mg, rendimento de 78%) foi preparado como um sólido marrom a partir de ácido 6-(8-trifluormetilquinolin-4-iloxi)-1-naftóico (38,3 mg, 0,1 mmol) e 6(aminometil)-N-(2-aminofenil)nicotinamida (29,0 mg, 0,12 mmol) por um procedimento análogo ao descrito no exemplo 16. ¹H RMN (DMSO-d₆) δ 4,64 (d, J= 5,6 hertz, 2H, - CH₂),

4,87 (s, 2H, benzeno-NH₂), 6,60 (t, J= 7,2 hertz, 1H, Ar-H), 6,78 (d, J= 7,8 hertz, 1H, Ar-H), 6,89 (d, J= 5,1 hertz, 1H, Ar-H), 6,97 (t, J= 7,2 hertz, 1H, Ar-H), 7,18 (d, J= 7,9 hertz, 1H, Arfo, 7,53-7,66 (m, 4H, Ar-H), 7,74 (d, J= 6,9 hertz, 1H, Ar-H), 7,83 (t, J= 7,9 hertz, 1H, Ar-H), 7,95-8,08 (m, 4H, Ar-H), 8,29 (d, J= 7,0 hertz, 1H, Ar-H), 8,42 (d, J= 9,1 hertz, 1H, Ar-H), 8,69 (d, J= 8,3 hertz, 1H, Ar-H), 8,86 (d, J= 5,0 hertz, 1H, Ar-H), 9,22 (t, J= 5,5 hertz, 1H, CONH), 9,61 (s, 1H, benzeno-NH) .LC-MS (m/z) 607 (M+1).

37/48

Exemplo 45

Preparação dos comprimidos

Fórmula (1000 comprimidos):

Composto 315g

Celulose Microcristalina90g

Carboximetil amido de sódio5g

Solução de 4% Polividona (K30) em etanol absoluto50g

Pó de talco0,5g

O composto 31 foi peneirado através de uma peneira de 100 mesh. A celulose microcristalina, carboximetil amido de sódio e pó de talco foram peneirados através de uma peneira de 80 mesh respectivamente. A celulose microcristalina carboximetil e amido de sódio foram pesados em quantidade formulada e misturados com o composto 31 uniformemente no método de incremento cumulativo. Uma quantidade apropriada de solução de 4% Polividona (K30) em etanol absoluto foi adicionada para produzir grânulos úmidos. Os grânulos foram secos e pó de talco em quantidade formulada foi adicionado. A compressão do comprimido foi executada então para obter comprimidos.

Exemplo 46

Preparação de cápsulas

Fórmula (1000 cápsulas):

Composto 31 Celulose Microcristalina	5g 55g
Lactose	35g
Carboximetil amido de sódio	5g
Estearato de magnésio	0,5g

O composto 31 foi peneirado através de uma peneira de 100 mesh. A celulose microcristalina, latose, carboximetil amido de sódio e estearato de magnésio foram peneirados através de uma peneira de 80 mesh respectivamente. A celulose microcristalina, lactose e carboximetil amido de sódio foram pesados em quantidade formulada e misturados com o composto 31 uniformemente no método de incremento cumulativo . Então o estearato de magnésio foi adicionado em quantidade formulada e misturado uniformemente. O preenchimento da cápsula foi executado então para obter cápsulas.

Exemplo 47

Preparação de injeção

Fórmula:

Composto 31

DMSO

1,00mg

0,10ml

Etanol

1,00ml

38/48

O composto 31 foi dissolvido em DMSO, e o etanol foi adicionado então para obter a injeção.

Exemplo 48

Ensaio de proliferação celular dependente de ligando de PDGF e VEGF por compostos da fórmula (I)

Medição da inibição in vivo na proliferação celular dependente de ligando de receptor:

1. Proliferação celular dependente de PDGF:

A linhagem celular de fibroblastos de camundongo NIH-3T3 engenheirada para expressar estavelmente PDGFRp humano foi construída e usada para avaliar a proliferação celular dependente de PDGF. As células de PDGFRp NIH-3T3 foram colocadas em placas de 96 poços em 5.000 por poço e incubadas durante a noite com meio livre de soro após 24 horas. Os compostos a serem testados e PDGF BB (50ng/ml) foram adicionados e incubados por 72 horas em meio livre de soro. Os efeitos na proliferação foram determinados pelo método de MTS (Promega) de acordo com a instrução. A incubação foi executada por 2 horas a 37°C em incubadora de CO₂, e a absorvância em 490nm foi medida usando um leitor de placas de ELISA.

2. Proliferação celular dependente de VEGF:

As células HUVEC foram colocadas em placas de 96 poços em 6.000 por poço e após 24 horas incubadas com o meio livre de soro por 2 horas. Os compostos a serem testados e VEGF 165 (50ng/ml) foram adicionados e incubados por 72 horas em meio livre de soro. Os efeitos na proliferação celular foram determinados pelo método de MTS (Promega) de acordo com a instrução. A incubação foi executada por 2 horas em 37 °C em incubadora de CO₂, e a absorvância em 490nm foi determinada usando um leitor de placas de ELISA. Os resultados experimentais são mostrados na Tabela 2.

Tabela 2

GI₅₀ nM GI₅₀ nM

Exemplo Proliferação celular dependente Proliferação celular (composto) de ligando de PDGF) dependente de ligando de

VEGF)

16	48	3
17	40	3
18	15	7
19	11	23
20	23	6
21	19	5

39/48

22	372	3
23	148	18
25	69	13
31	46	5
32	20	2
33	300	8
34	248	90
35	5	1
36	3	2
37	159	4
38	74	25
39	32	107
40	1000	1000
41	479	105
42	48	1000
43	1000	288
44	1000	1000

Exemplo 49

Inibição in vitro de atividade de enzima HDAC total e inibição in vivo de atividade do subtipo de HDAC por compostos da fórmula (I)

Ensaio de atividade de enzima HDAC total in vitro:

A atividade de enzima HDAC total in vitro foi determinada pelo Ensaio Fluorimétrico de HDAC/Kit de descoberta de Fármaco (BIOMOL) de acordo com a instrução do fabricante.

O princípio da experiência é como segue: sob a ação de histona desacetilase (na experiência, o extrato nuclear de célula HeLa, que era rico em uma variedade de subtipos de HDAC, foi usado), um grupo acetila é removido de um substrato especial Fluor de Lys, 10 assim o amino livre é exposto. Após o Desenvolvedor ser adicionado, o substrato produzirá fluorescência. Para a fluorescência, o comprimento de onda de excitação é 360nm, e o comprimento de onda de emissão é 460nm. Quanto mais inteiramente o substrato for desacetilado, mais alta será a fluorescência induzida. Na ausência de inibidores, o valor de fluorescência é tomado como o controle; quando há inibidor, o valor de fluorescência 15 induzida será reduzido, enquanto que no caso em que não há nenhuma enzima (correspondendo à inibição completa de atividade de enzima) o valor de fluorescência for o branco. Geralmente, após a supressão, os valores de fluorescência estarão entre o controle

40/48 e o branco. Quando a análise é feita, o branco será usado como 0, e o controle será usado como 1. O menor valor significa atividade inibitória mais elevada.

1. Adicionar o tampão de ensaio, tricostatina diluída A e inibidor de teste para poços apropriados da placa de microtitulação. A seguinte tabela lista as quantidades usadas para cada reagente de vários tipos de ensaio.

Reagente	Tampão de Ensaio	Extrato HeLa (Diluição)	Inibidor (5x)	Substrato Fluor de Lys™ (2x)
Branco	25 pl	0	0	25 μΙ
Controle	10 μΙ	15 μΙ	0	25 μΙ
Tricostatina A	0	15 μΙ	10 μΙ	25 μΙ
Amostra de Teste	0	15 μΙ	10 μΙ	25 μΙ

1. Adicionar o extrato de nucleoproteína de HeLa diluído a todos os poços exceto aqueles que são marcados como o “branco”.

2. Permitir que Substrato Fluor de Lys™ diluído e as amostras na placa de microtitulação se equilibrem a 25°C.

3. Iniciar reações de HDAC adicionando o substrato diluído (25 pl) a cada poço e misturando completamente.

4. Permitir que as reações prossigam por 30 minutos e interromper então pela adição de Desenvolvedor Fluor de Lys™ (50 pl). Incubar a placa na temperatura ambiente (25°C) por 10-15 min.

5. Ler a fluorescência das amostras em um fluorímetro de leitura de placa de microtitulação em um comprimento de onda de excitação de 369 nm e em um comprimento de onda de emissão de 451 nm.

Ensaio de seletividade dos inibidores no subtipo de HDAC usando o gene repórter:

Os subtipos diferentes de HDAC podem ser ligados com fatores transcricionais diferentes e estão envolvidos na regulação da expressão de vários genes. Elementos de regulação apropriados para os fatores transcricionais são selecionados para construir os genes repórteres, que podem ser usados para avaliar a inibição seletiva de inibidores em subtipos de HDAC. Momentaneamente, as células HeLa foram semeadas em placas de 96 poços no dia antes da transfecção para dar uma confluência de 50-80% ao transfectar. As células transfectadas com um dos plasmídeos de gene repórter que contém um elemento de resposta ou sequência de promotor de p21 a jusante de uma construção de gene de luciferase usando o reagente do transfecção FuGene6 de acordo com a instrução do

41/48 fabricante (Roche). Para normalizar a eficiência de transfecçáo, um plasmídeo de expressão de GFP foi cotransfectado. Após 24 horas, os compostos ou o veículo controle (DMSO) foram adicionados. 24 horas mais tarde as células foram colhidas e lisadas, e a quantidade de luciferase foi avaliada usando kits de ensaio de luciferase (Promega) de acordo com as 5 instruções do fabricante. Os resultados experimentais são mostrados na Tabela 3.

Tabela 3

Exemplo (composto)	de inibição de atividade de enzima HDAC total a 30μΜ	Classe I HDAC (Ensaio de repórter de P21) Indução de duplicação a 10μΜ
CS055	50,4	33
16	8,6	1,3
17	22,5	1,1
18	17,1	1,1
19	21,9	1,4
20	21,9	1,5
21	18,6	1,1
22	17	1,1
23	49,4	11,3
25	47,9	12,1
31	10,1	1,6
32	21,7	1,8
33	39,1	2,8
34	38,8	5,0
35	19,3	1,2
36	14,4	1,2
37	35,9	3,0
38	39,3	3,1
39	15,9	1,2
40	22,2	1,3
41	19,3	1,1
42	6,2	1,3
43	38,7	6,1

42/48

35,1 3,2

CS055: Chidamida, um inibidor de HDAC desenvolvido por Chipscreen Biosciences, tem atividades antitumorais excelentes e está atualmente em fase clínica II.

Exemplo 50

Inibição de compostos da fórmula (I) na proliferação de célula tumoral.

As células tumorais foram tripsinizadas e colocadas em placas de 96 poços em

3.000 por poço e incubadas em meio completo com 10% de FBS por 24 horas. Os compostos a serem testados e o veículo controle foram adicionados, e a concentração final de composto está na faixa de 100 nmol/L a 100 pmol/L Os compostos foram incubados por 72 horas em meio completo. O reagente de MTS (Promega) foi adicionado de acordo com a 10 instrução, incubado por 2 horas a 37°C em incubadora de CO₂. A absorvância em 490nm é lida então usando um leitor de placas de ELISA.

Os resultados experimentais são mostrados na tabela 4.

Tabela 4

Exemplo (composto)	GI₅₀ μΜ em A-498	GI₅o μΜ em A549	Gl_so μΜ em Bel-7402	ΟΙ₅₀μΜ em HCT-8	ΟΙ₅₀μΜ em MCF-7
CS055	12,08	11,15	18,93	7,711	3,865
16	30,0	30,0	30,0	12,3	30,0
17	30,0	30,0	30,0	3,0	30,0
18	nd	nd	nd	nd	nd
19	nd	nd	nd	nd	nd
20	nd	nd	nd	nd	nd
21	nd	nd	nd	nd	nd
22	nd	nd	nd	nd	nd
23	14,7	30,0	30,0	5,7	4,3
25	14,7	30,0	30,0	4,9	6,1
31	9,5	17,3	30,0	6,6	10,2
32	7,5	8,3	17,3	6,6	15,9
33	1,9	2,1	2,8	1,5	2,0
34	7,9	11,2	17,7	5,5	5,2
35	9,1	7,7	19,5	8,9	13,3
36	4,2	7,4	12,1	4,1	8,9
37	30,0	30,0	30,0	30,0	30,0

43/48

38	6,9	30,0	30,0	8,0	9,4
39	nd	nd	nd	nd	nd
40	nd	nd	nd	nd	nd
41	nd	nd	nd	nd	nd
42	nd	nd	nd	nd	nd
43	nd	nd	nd	nd	nd
44	nd	nd	nd	nd	nd

nd*: não determinado

CS055: Chidamida, um inibidor de HDAC desenvolvido por Chipscreen Biosciences, tem atividades antitumorais excelentes e está atualmente na fase clínica II.

Exemplo 51

Inibição do composto 31 no tumor em camundongos atímicos transplantado do câncer de pulmão humano A549.

Camundongos nu/nu fêmeas de 14—16g foram alimentados com dieta normal por 3 dias. As células de câncer de pulmão humano A549 cultivadas foram implantadas então na axila de 50 camundongos. Quando os tumores alcançaram mais de 6 milímetros de diâmetro, os camundongos foram divididos em 6 grupos aleatoriamente. Cada grupo tinha 8 camundongos. Um grupo foi tratado com o veículo. Um grupo foi tratado com o Sutent, o fármaco de controle positivo. Os outros quatro grupos foram tratados com o composto 31 em doses de 5, 10, 20 e 40 mg/kg de peso corporal. Cada grupo foi tratado por via orai uma vez por dia por 24 dias. Os volumes do tumor junto com pesos corporais foram gravados duas vezes por semana. No dia seguinte após 24 doses, os camundongos foram mortos, e os tumores foram pesados. A inibição do crescimento do tumor de cada grupo foi calculada usando a seguinte fórmula:

{[(o peso médio do tumor do grupo de controle)-(o peso médio do tumor do grupo de teste)]/(o peso médio do tumor do grupo de controle)}x100%.

Os resultados experimentais são mostrados na tabela 5 e na figura 1.

Tabela 5

Grupo^a	Dose (mg/kg)	Peso corporal (g)	Peso do Tumor (g)	TGI (%) b	P
começo	firn
veículo	-	20,3+0,9	25,4+2,3	4,20±0,75	-	-
Sutent	40	20,3±1,4	24,4±2,3	2,06±0,71	50,9	<0,001

Composto

20,0+0,9 22,6±2,4 1,06±0,54 74,8 <0,001

44/48

Composto 31	20	20,6±1,1	24,2+0,7	1,50±0,41	64,3	<0,001
Composto 31	10	19,9±1,3	25,1±1,3	2,13±0,51	49,4	<0,001
Composto 31	5	21,1±0,6	24,6±1,3	2,20±0,57	47,6	<0,001

^an = 8 animais por grupo. ^binibição do crescimento do tumor.

Exemplo 52

Inibição do composto 31 no tumor em camundongos atímicos transplantado do câncer de cólon humano HCT-8.

Camundongos nu/nu fêmeas de 18~20g foram alimentados com dieta normal por 3 dias. As células de câncer de cólon humano HCT-8 cultivadas foram implantadas então na axila de 50 camundongos. Quando os tumores alcançaram um volume de· não menos de 100 mm³, os camundongos foram divididos em 6 grupos aleatoriamente. Cada grupo tinha 8 camundongos. Um grupo foi tratado com o veículo. Um grupo foi tratado com o Sutent, o fármaco de controle positivo. Os outros quatro grupos foram tratados com o composto 31 em doses de 2,5, 5,10 e 20 mg/kg de peso corporal. Cada grupo foi tratado por via oral uma vez por dia por 24 dias. Os volumes do tumor junto com pesos de corpo foram gravados duas vezes por semana. No dia seguinte após 20 doses, os camundongos foram mortos, e os tumores foram pesados. A inibição do crescimento do tumor de cada grupo foi calculada usando a seguinte fórmula:

Os resultados experimentais são mostrados na tabela 6 e na figura 2.

Tabela 6

Grupo ^a	Dose (mg/kg)	Peso corporal (g)	Peso do Tumor (g)	TGI (%) b	P
começo	fim
Veículo	-	20,8±1,0	22,1±2,1	4,78±1,99	-	-
Sutent	40	21,5±0,7	22,4±1,1	0,23±0,07	95,3	<0,001
Composto 31	20	20,5±1,3	22,5+1,6	0,19±0,06	96,1	<0,001
Composto 31	10	20,7±1,1	23,7±0,8	0,46±0,15	90,3	<0,001
Composto 31	5	21,6+1,4	24,8±1,5	0,78±0,25	83,8	<0,001

45/48

Composto 31

2,5 20,3±0,8 24,5±1,1 2,18±1,28 54,5 <0,001

^an = 8 animais por grupo. ^binibição do crescimento do tumor.

Exemplo 53

Inibição do composto 31 no tumor em camundongos atímicos transplantado do câncer de cólon humano SSMC7721

Camundongos nu/nu fêmeas de 18~20g foram alimentados com dieta normal por 3 dias. As células de câncer de fígado humano SSMC7721 cultivadas foram implantadas então na axila de 50 camundongos. Quando os tumores alcançaram um volume de não menos de 100 mm³, os camundongos foram divididos em 6 grupos aleatoriamente. Cada grupo tinha 8 camundongos. Um grupo foi tratado com o veículo. Um grupo foi tratado com o Sutent, o fármaco de controle positivo. Os outros quatro grupos foram tratados com o composto 31 em doses de 2,5, 5,10 e 20 mg/kg. Cada grupo foi tratado por via oral uma vez por dia por 24 dias. Os volumes do tumor junto com pesos corporais foram gravados duas vezes por semana. No dia seguinte após 24 doses, os camundongos foram mortos, e os tumores foram pesados. A inibição do crescimento do tumor de cada grupo foi calculada usando a seguinte fórmula:

Os resultados experimentais são mostrados na tabela 7 e na figura 3.

Tabela 7

Grupo ^a	Dose (mg/kg)	Peso corporal (g)	Peso do Tumor (g)	TGI (%) b	P
começo	fim
Veículo	-	20,8±0,8	25,1+1,5	4,78±1,99	-	-
Sutent	40	21,0+0,8	24,8+1,2	1,00±0,68	70,3	<0,001
Composto 31	20	20,2±1,7	21,0±2,2	0,53±0,28	84,4	<0,001
Composto 31	10	20,4±1,6	23,6±1,5	0,70+0,45	79,2	<0,001
Composto 31	5	20,8+1,2	24,8±1,5	1,16±0,55	65,4	<0,001
Composto 31	2,5	20,1 ±0,9	23,2+2,1	1,63±0,70	51,7	<0,001

^an = 8 animais por grupo. ^binibição do crescimento do tumor.

Exemplo 54

46/48

Inibição do composto 33 e do composto 34 no tumor em camundongos atímicos transplantado do câncer de cólon humano HCT-8

Camundongos nu/nu fêmeas de 18~20g foram alimentados com dieta normal por 3 dias. As células do câncer de cólon humano HCT-8 cultivadas foram implantadas então na axila de 50 camundongos. Quando os tumores alcançaram um volume de não menos de 100 mm³, os camundongos foram divididos em 6 grupos aleatoriamente. Cada grupo tinha 8 camundongos. Um grupo foi tratado com o veículo. Um grupo foi tratado com o Sutent, o fármaco de controle positivo. Dois grupos foram tratados com o composto 33 em concentrações diferentes. Os outros dois grupos foram tratados com o composto 34 em concentrações diferentes. Cada grupo foi tratado por via oral uma vez por dia por 20 dias. Os volumes do tumor junto com pesos corporais foram gravados duas vezes por semana. No dia seguinte após 20 doses, os camundongos foram mortos, e os tumores foram pesados. A inibição do crescimento do tumor de cada grupo foi calculada usando a seguinte fórmula:

Os resultados experimentais são mostrados na tabela 8 e na figura 4.

Tabela 8

Grupo ^a	Dose (mg/kg)	Peso do corpo (g)	Peso do Tumor (g)	TGI (%) b	P
começo	fim
Veículo	-	19,4±1,6	21,2±2,4	4,08±0,95	-	-
Sutent	40	20,6+1,2	22,1 ±1,5	0,44±0,15	89,1	<0,001
Composto 33	60	19,4±0,8	21,4+1,5	1,98±0,61	51,5	<0,001
Composto 33	30	19,0+1,3	21,1±2,2	2,31 ±0,43	43,3	<0,001
Composto 34	60	19,6±1,1	21,6±2,3	2,74±0,77	32,7	<0,001
Composto 34	30	19,7±1,2	21,2±1,9	3,95±0,73	3,07	>0,05

^an = 8 animais por grupo. ^binibição do crescimento do tumor.

Exemplo 55

Inibição do composto 33 e do composto 37 no tumor em camundongos atímicos transplantado de câncer de cólon humano HCT-8.

Camundongos nu/nu fêmeas de 18~20g foram alimentados com dieta normal por 3 dias. As células de câncer de cólon humano HCT-8 cultivadas foram implantadas então na

47/48 axila de 50 camundongos. Quando os tumores alcançaram um volume de não menos de 100 mm³, os camundongos foram divididos em 6 grupos aleatoriamente. Cada grupo tinha 8 camundongos. Um grupo foi tratado com o veículo. Um grupo foi tratado com o Sutent, o fármaco de controle positivo. Dois grupos foram tratados com o composto 33 em concentrações diferentes. Os outros dois grupos foram tratados com o composto 37 em concentrações diferentes. O composto 33 foi administrado duas vezes por dia com um intervalo de 6 horas. Para outros grupos, a administração foi executada uma vez por dia. Cada grupo foi tratado por via oral por 20 dias. Os volumes do tumor junto com pesos corporais foram gravados duas vezes por semana. No dia seguinte após 20 doses, os camundongos foram mortos, e os tumores foram pesados. A inibição do crescimento do tumor de cada grupo foi calculada usando a seguinte fórmula:

Os resultados experimentais são mostrados na tabela 9 e na figura 5.

Tabela 9

Grupo ^a	Dose (mg/kg)	Peso corporal (g)	Peso do Tumor (g)	TGI (%) b	P
começo	fim
Veículo	-	21,1+0,7	23,4±1,5	6,13±0,28	-	-
Sutent	40	21,3+0,6	23,7±0,8	0,29±0,08	95,3	<0,001
Composto 33	60x2	20,1+0,9	19,0±1,8	0,45±0,05	92,6	<0,001
Composto 33	30x2	21,1±1,2	22,6±1,6	0,73±0,36	88,1	<0,001
Composto 37	60	20,8±0,8	24,1±2,1	3,36±0,80	45,1	<0,001
Composto 37	30	20,6+0,8	23,6±2,2	3,89±1,19	36,5	<0,001

^an = 8 animais por grupo. ^binibição do crescimento do tumor.

Exemplo 56

Inibição do composto 33 e do composto 37 no tumor em camundongos atímicos transplantado do câncer de fígado humano SSMC7721

Camundongos nu/nu fêmeas de 18~20g foram alimentados com dieta normal por 3 dias. As células de câncer de fígado humano SSMC7721 cultivadas foram implantadas então na axila de 50 camundongos. Quando os tumores alcançaram um volume de não menos de 100 mm³, os camundongos foram divididos em 6 grupos aleatoriamente. Cada grupo tinha 8 camundongos. Um grupo foi tratado com o veículo. Um grupo foi tratado com o

48/48

	Sutent, o fármaco de controle positivo. Dois grupos foram tratados com o composto 33 em concentrações diferentes. Os outros dois grupos foram tratados com o composto 37 em concentrações diferentes. Cada grupo foi tratado por via oral uma vez por dia por 30 dias. Os volumes do tumor junto com pesos corporais foram gravados duas vezes por semana.
5	No dia seguinte após 30 doses, os camundongos foram mortos, e os tumores foram pesados. A inibição do crescimento do tumor de cada grupo foi calculada usando a seguinte fórmula: {[(o peso médio do tumor do grupo de controle)-(o peso médio do tumor do grupo de teste)]/(o peso médio do tumor do grupo de controle)}x100%.
10	Os resultados experimentais são mostrados na tabela 10 e na figura 6. Tabela 10 Dose Peso corporal (g) Peso do _{TQ\| (%)} Grupo^a Tumor P (mg/kg) começo fim (g) Veículo - 21,1 ±0,4 24,5±1,6 2,25±0,85 Sutent 40 21,2+1,1 24,0±0,6 0,88±0,39 61,1 <0,001 Composto 60 21,4±1,3 25,4±2,8 1,48±0,89 34,4 >0,05 33 Composto 30 20,8+0,5 24,0±1,7 1,63±0,47 27,8 >0,05 33 Composto 60 21,4±0,6 24,3+1,1 1,28±0,51 43,3 <0,05 37 Composto 30 20,7±1,2 25,3+0,9 1,45±0,58 35,6 <0,05 37 ^an = 8 animais por grupo. ^binibição do crescimento do tumor.

1/4

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto de Fórmula I:

O

(I) incluindo sua forma livre, forma de sal ou enantiômero caracterizado pelo fato de que:

Z é CH ou N;

R¹, R2 e R3 são cada um hidrogênio, halogênio, alquila, alcoxi ou trifluormetila;

R⁴ é

ou

X é um anel benzeno ou um anel piridina;

R5 é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio, halogênio, alquila, alcoxi, e trifluormetila;

em que a alquila é selecionada do grupo consistindo em metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, iso-butila, tert-butila, n-pentila, iso-pentila, n-hexila, iso-hexila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e ciclohexila; e o alcoxi é selecionado do grupo consistindo em metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi, isopropoxi, tert-butoxi, ciclopropoxi e ciclohexiloxi.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: Z é CH;

R¹, R² e R³ são cada um hidrogênio, halogênio, alquila, alcoxi, ou trifluormetila;

R⁴ é

Petição 870190122172, de 24/11/2019, pág. 9/12

2/4

X é um anel benzeno ou um anel piridina;

R⁵ é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo de hidrogênio, halogênio, alquila, alcoxi e trifluormetila.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Z é CH;

R¹, R² e R³ são cada um hidrogênio ou alcoxi;

R⁴ é

ou

X é um anel benzeno ou um anel piridina;

R⁵ é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo de hidrogênio, halogênio, alquila, alcoxi, e trifluormetila.
4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Z é CH;

R¹ e R² são cada um hidrogênio ou metoxi;

R³ é H;

R⁴ é

X é um anel benzeno ou um anel piridina;

R⁵ é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo de hidrogênio, halogênio, alquila, alcoxi, e trifluormetila.
5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Z é CH;

R¹ e R² são cada um hidrogênio ou metoxi;

R³ é H;

R⁴ é

ou

X é um anel benzeno ou um anel piridina;

Petição 870190122172, de 24/11/2019, pág. 10/12

3/4

R⁵ é H ou F.
6. Método para preparar um composto de Fórmula (I)

O

(I) caracterizado pelo fato de que

Z é CH ou N;

R¹, R2 e R³ são cada um hidrogênio, halogênio, alquila, alcoxi, ou trifluormetila;

R⁴ é

X é um anel benzeno ou um anel piridina;

R⁵ é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo de hidrogênio, halogênio, alquila, alcoxi, e trifluormetila;

compreendendo reagir um composto de Fórmula (II)

(II) com um composto de Fórmula (III)

H2N-R⁴ (III) na presença de um solvente orgânico e um agente de condensação de peptídeo, para formar um composto de Fórmula (I).
7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o

Petição 870190122172, de 24/11/2019, pág. 11/12

4/4 referido agente de condensação de peptídeo é selecionado a partir do grupo consistindo de 1-etil-3-(3-dimetil-aminopropil)carbodiimida (EDC), N,N’-diciclohexilcarbodiimida (DCC) e N,N’-carbonildiimidazola (CDI).
8. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o referido solvente orgânico é selecionado a partir do grupo consistindo de benzeno, tolueno, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, diclorometano, clorofórmio e N,N-dimetilformamida.
9. Preparação farmacêutica para tratar doenças associadas com atividades de proteína quinase anormais ou atividades de histona desacetilase anormais caracterizada pelo fato de compreender um composto de Fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1 e um carreador, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável.
10. Preparação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de ser na forma de um comprimido, cápsula, pó, xarope, solução, suspensão, injeção ou pomada.
11. Uso do composto, de acordo com a reivindicação 1 caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para tratar câncer, alergias ou asma.
12. Uso da preparação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para tratar câncer, alergias ou asma.
13. Preparação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de compreender uma quantidade dentro da faixa de 0,001 a 200 mg do referido composto de Fórmula (I).