BRPI1013680B1

BRPI1013680B1 - Agente para conferir melhor paladar, alimento, bebida ou um intermediário usado para preparar um alimento ou uma bebida, e, método para intensificar o paladar de um alimento ou uma bebida

Info

Publication number: BRPI1013680B1
Application number: BRPI1013680-0A
Authority: BR
Inventors: Fumie Futaki; Reiko Yasuda; Seiichi Sato; Takashi Miyaki; Naohiro Miyamura; Yuzuro ETO
Original assignee: Ajinomoto Co., Inc.
Priority date: 2009-04-01
Filing date: 2010-03-31
Publication date: 2019-05-28
Also published as: JPWO2010114022A1; KR101402639B1; AU2010232296A1; RU2011144143A; TW201100021A; TWI399180B; EP2415359A1; CA2756888A1; EP2415359A4; RU2536934C2; WO2010114022A1; AU2010232296A2; BRPI1013680A2; KR20110132474A; SG175000A1; CN102481006B; CN102481006A; US20120034364A1; CA2756888C; MY158503A

Abstract

"elemento de diamante policristalino, método para fabricar um elemento de diamante policristalino, inserto de diamante policristalino para uma ferramenta, ferramenta, e, broca de perfuração rotativa" uma forma de realização de um inserto de diamante policristalino (pcd) compreende uma forma de realização de um elemento de pcd unido a um substrato de carbeto cimentado em uma interface. o elemento de pcd tem superficies de diamante internas que definem interstícios entre elas. o elemento de pcd compreende uma região mascarada ou passivada e uma região não mascarada ou não passivada, a região não mascarada ou não passivada que definem um limite com o substrato, o limite sendo a interface. pelo menos um pouco das superficies de diamante internas da região mascarada ou passivada contatam uma meio de mascaramento ou passivação, e um pouco ou todos dos interstícios da região mascarada ou passivada e da região não mascarada ou não passivada são pelo menos parcialmente enchidos com um material infiltrante.

Description

“AGENTE PARA CONFERIR MELHOR PALADAR, ALIMENTO, BEBIDA OU UM INTERMEDIÁRIO USADO PARA PREPARAR UM ALIMENTO OU UMA BEBIDA, E, MÉTODO PARA INTENSIFICAR O PALADAR DE UM ALIMENTO OU UMA BEBIDA”

Campo Técnico:

A presente invenção refere-se a um agente para conferir melhor paladar e a um complexo de agente para conferir melhor paladar, que consiste de um peptídeo, que apresenta uma atividade de agonista de CaSR. Além disso, a presente invenção também refere-se a uma composição de tempero, que compreende uma atividade de agonista de CaSR, em uma concentração de não menos do que um nível predeterminado.

Fundamentos da técnica

As exigências dos consumidores acerca do paladar e da palatabilidade de alimentos tem sido recentemente aumentada devido, por exemplo, à diversidade dos hábitos alimentares humanos. Em conexão com isto, o paladar e a palatabilidade de um alimento têm sido expressados, de um modo convencional, pelos cinco paladares básicos, em outras palavras, um paladar doce, um paladar salgado, um paladar ácido, um paladar amargo e umami (paladar delicioso), mas tem havido, de um modo correspondente, um aumento das necessidades quanto ao desenvolvimento de um agente que confira melhor paladar excelente, capaz de conferir, a um alimento, um melhor paladar que possa conferir, a um alimento, outros paladares aperfeiçoados, até mesmo intensificados, por exemplo, na espessura, no crescimento (ou plenitude na boca), na continuidade e na harmonia como paladares marginais dos cinco paladares básicos precedentes, que não podem ser expressados apenas pelos cinco paladares básicos.

Petição 870180140159, de 10/10/2018, pág. 8/11

Por um outro lado, o receptor sensor de cálcio (CaSR) é também referido como o receptor de cálcio, os sinais emitidos a partir dor receptor podendo controlar uma variedade de funções biológicas dentro dos corpos vivos e as substâncias possuindo uma tal atividade de agonista de CaSR podendo ser usadas como um agente para conferir melhor paladar (vide os Documentos de Patente 1, 3 e o Documento Não-patente 4, como será especificado abaixo).

Existiría uma variedade de padrões que desenvolvem paladar no melhor paladar. A este respeito, tem havido um requerimento intensivo, de um modo particular quanto ao desenvolvimento de um agente que confira melhor paladar, capaz de conferir melhor paladar a um alimento, e que possua um tal padrão de desenvolvimento de paladar, de um modo tal que ele possa desenvolver ou apresentar o melhor paladar do tipo de paladar inicial. Além disso, a substância para conferir melhor paladar seria usada, de um modo geral, em, por exemplo, alimentos, e deste modo, apresentaria uma excelente estabilidade. De um modo adicional, a substância para conferir melhor paladar deveria ser capaz de ser facilmente produzida, a um baixo custo, a partir de um ponto de vista industrial.

Deste modo, tem havido um desejo quanto à busca quanto a uma variedade de compostos, que possuam a atividade agonista de CaSR desejada, para, deste modo, encontrar uma substância capaz de conferir um melhor paladar a uma outra substância (alimentos ou bebidas), que apresente um efeito ainda mais excelente de confeir melhor paladar, de um modo particular, um efeito que confira melhor paladar do tipo que confere um paladar inicial, que apresente uma excelente estabilidade e que possa ser facialmente produzida, a um baixo custo, e que possa, deste modo, prover um agente que confira melhor paladar, que consista de uma tal substância, assim como um agente que confira melhor paladar complexo, que compreenda a substância e outras substâncias que possuem atividades de agonista de CaSR, em combinação.

Por um outro lado, com referência a alguns dos peptídeos γglutamila, cada qual portanto um resíduo γ- glutamina no N-terminal do mesmo, que são conhecidos como tendo sido sintetizados como substratos, por exemplo, nos estudos das atividades enzimáticas (vide Documento de Patente 2 e Documentos Não- patente 1 a 3, especificados posteriormente), mas que não são ainda conhecidos em qualquer caso em que γ-Glu-Abu seja usado como um agente para conferir melhor paladar ou como um tempero, ou ainda como um ingrediente de um alimento. A este respeito, a totalidade dos conteúdos dos Documentos de Patente 1 e 3 são incorporados a este, a título referencial, como se eles tivessem, de fato, sido expostos neste relatório.

Literatura Antecedente

Documento de Patente

Documento de Patente 1: Patente Internacional Exposta a Exame N° 2007/ 055393, Panfleto;

Documento de Patente 2: Patente Internacional Exposta a Exame N° 2007/006430, Panfleto;

Documento de Patente 3: Patente Internacional Exposta Exame N° 2008/ 139945, Panfleto;

Documentos Não-Patente:

Documentos Não- Patente 1: Molecular Pharmacology (1982), 21 (3), 629-36;

Documento Não-Patente 2: Agricultural and Biological Chemistry (1981), 45(12) 2839-45;

Documento Não-Patente 3: Joumal of Biological Chemistry ( 1979), 254(12), 5184-90;

Documento Não-Patente 4; Joumal of Biological Chemistruy, (2010), 285 (2), 1016-22.

Sumário da Invenção

Problemas que a invenção se propõe a solucionar

Constitui um objeto da presente invenção a busca quanto a uma variedade de compostos, que possuem a atividade de agonista de CaSR desejada, para, deste modo, encontrar uma substância capaz de conferir um melhor paladar, que apresente um efeito de conferir melhor paladar ainda mais excelente, de um modo particular, um efeito que confira melhor paladar do tipo que confira um paladar inicial, que apresenta uma excelente estabilidade, e que possa ser facilmente produzida, a um baixo custo, para, deste modo, prover um agente que confira melhor paladar, que compreenda a substância e outras substâncias, que possuam atividades de agonista de CaSR, de um modo combinado. Constitui ainda um outro objeto da presente invenção prover uma composição de tempero, que compreenda a substância precedente, em uma concentração de não menos do que o nível predeterminado.

Meio para a Solução dos Problemas

Como um resultado quanto à busca de uma variedade de compostos, os inventores desta invenção verificaram, de um modo surpreendente, que γ- Glu-Abu ( ácido L-Y-glutamil-L-2-aminoláctico) possui uma alta atividade de agonista de CaSR e um efeito que confira um melhor paladar bastante excelente e, de um modo particular, o padrão de desenvolvimento de paladar do mesmo iria permitir conferir um melhor paladar do tipo que confere um paladar inicial a um indivíduo. Além disso, os inventores verificaram que o γ-Glu-Abu assim descoberto possui uma excelente estabilidade, e possui, deste modo, um padrão de desenvolvimento de paladar favorável, de um modo a que possua uma capacidade de conferir um paladar inicial mais forte, quando comparado com aquelas observados para γ- Glu-Cys como um dipeptídeo similar ao primeiro. Além disso, ο γGlu-Abu assim descoberto pode servir, em si mesmo, como um agente que confira melhor paladar útil, e como um agente que confira melhor paladar complexo, através da combinação da substância com outras substâncias, cada qual apresentando uma atividade de agonista de CaSR, e tendo, deste modo completado a presente invenção.

De um modo mais específico, a apresente invenção, neste caso, provê um agente que confira melhor paladar, que consista de γ-GluAbu. De acordo com a presente invenção, é ainda provido um agente que confira melhor paladar complexo, que compreende, de um modo combinado, (a) γ-Glu-Abu e (b) um ou pelo menos dois aminoácidos ou peptídeos, selecionados a partir do grupo, que consiste de γ-Glu-X-Gly, em que X representa um aminoácido ou um derivado de aminoácido, γ-Glu-Val-Y, em que Y representa um aminoácido ou um derivado de aminoácido, γ-Glu-ValAla, γ-Glu-Gly, γ-Glu-Cys, γ-Glu-Met, γ-Glu-Thr, γ-Glu-Val, γ-Glu-Om, Asp-Gly, Cys-Gly, Cys-Met, Glu-Cys, Gly-Cys, Leu-Asp, D-Cys, γ-Glu-Met (O), y-Glu-y-Glu-Val, y-Glu-Val-NH₂, γ-Glu-Val-ol, γ-Glu-Ser, γ-Glu-Tau, γGlu-Cys (S-Me) (O), γ-Glu-Leu, γ-Glu-Ile, γ-Glu-t-Leu e γ-Glu-Cys (S-Me).

De acordo com a presente invenção, é provido um agente para conferir melhor paladar complexo, que compreende, em combinação (1) γGlu-Abu e (b) um ou pelo menos dois peptídeos selecionados a partir do grupo, que consiste daqueles representados pelas seguintes fórmulas gerais : y-Glu-X-PCH-(Z)-CO₂H (em que X representa um aminoácido ou um derivado de aminoácido e Z representa H (um átomo de hidrogênio) ou um grupo CH₃ ( um grupo metila)); e aqueles representados pela fórmula geral : y-Glu-Val-Y( em que Y representa GlyA ou LacA).

Além disso, a presente invenção provê, neste caso, uma composição de tempero (a seguir também referido como a “ composição de tempero da presente invenção”) que compreende γ-Glu-Abu em uma quantidade de não menos do que 1.000 ppm em massa, de um modo preferido de não menos do que 2.000 ppm em massa, e de um modo preferido de não menos do que 2.500, em massa.

De acordo com um outro aspecto da invenção, é também provido um método para a preparação de um alimento e uma bebida, que compreende os estágios de adicionar um ingrediente, ao alimento ou à bebida, que contém γ-Glu-Abu em uma quantidade de não menos do que 1.000 ppm, em massa, de um modo preferido de não menos do que 2.000, ppm, em massa, e de um modo mais preferido de não menos do que 2.500 ppm, em massa, a um ingrediente para outros alimentos e bebidas e, de um modo opcional, tratar ou cozer a mistura destes ingredientes. A presente invenção também forneceu o alimento ou a bebida,ou um produto intermediário usado para a produção de um alimento ou de uma bebida, preparado de acordo com a método de preparação.

Em adição, a presente invenção provê ainda um alimento ou uma bebida ou um produto intermediário para a preparação de um alimento ou de uma bebida, que compreende o γ-Glu-Abu em uma quantidade na faixa de 20 a 200 ppm, em massa; pelo menos um ácido orgânico ou um sal do mesmo, selecionado a partir do grupo, que consiste de ácido láctico, ácido cítrico, ácido málico e ácido succínico e sais dos mesmos, em uma quantidade em uma faixa de 0,01 a 0,5%, em massa; assim como um veículo aceitável para alimentos e bebidas, e/ ou pelo menos dois ingredientes para o tempero.

De acordo com um outro aspecto da presente invenção, é também provido um método para aumentar o aroma e/ou o paladar de um alimento ou de uma bebida, que compreende o estágio de incorporar em um alimento ou uma bebida, uma composição contendo γ-Glu-Abu em uma quantidade de não menos do que 400 ppm, em massa, de um modo preferido de não menos do que 1.000 ppm em massa, e de um modo mais preferido de não menos do que 2.000 ppm, em massa, e de um modo ainda mais preferido, de não menos do que 2.500, em massa.

Efeitos da Invenção

A presente invenção seria capaz de prover um agente que confira melhor paladar, que seja bastante excelente em seu efeito de conferir melhor paladar e, de um modo particular, que possua um efeito de conferir melhor paladar excelente e único, do tipo que confere um paladar inicial, aquele representado por, por exemplo, um tal padrão de desenvolvimento de paladar, que mostre um perfil, tal como mostrado, por exemplo, na Figura 1, que apresente ainda uma excelente estabilidade e que possa ser facilmente preparado a um baixo custo, assim como um agente que confira melhor paladar complexo contendo o mesmo. De um modo adicional, a presente invenção pode igualmente prover uma excelente composição de tempero, que compreende uma substância, que possui um excelente efeito de conferir melhor paladar, em uma concentração de não menos do que um nível predeterminado.

O agente para conferir melhor paladar de acordo com a presente invenção apresenta um padrão de desenvolvimento de paladar e/ ou aroma bastante similar àquele observado para o sal comum e, portanto, quando do uso do agente para conferir melhor paladar, o último pode conferir a um alimento com baixo teor de sal ou o similar, uma impressão espessa, similar a um paladar salgado, e um toque de paladar inicial (ou impacto) ao alimento com um baixo teor de sal. Deste modo, o alimento resultante contendo o agente da presente invenção, pode manter a sua impressão de paladar salgado, similar àquela antes da redução do conteúdo de sal, mesmo quando o conteúdo de sal do alimento tenha sido reduzido,e portanto, o agente de acordo com a presente invenção permite a produção de um alimento altamente benéfico para a saúde. Exemplos de tais alimentos incluem uma variedade de sopas e de vários tipos de molhos. De um modo especial, quando da ingestão de um alimento contendo o agente para conferir melhor paladar de acordo com a presente invenção, o consumidor pode sentir uma impressão espessa, tal que um paladar salgado, e um toque de paladar inicial (ou impacto) imediatamente após a ingestão do mesmo.

Breve Descrição dos Desenhos

A Figura 1 mostra um perfil de paladar e de palatabilidade (padrão de desenvolvimento de paladar) observado para um agente para conferir melhor paladar do tipo de paladar inicial.

Modo para Executar a Invenção

O agente para conferir melhor paladar da presente invenção consiste de γ-Glu-Abu e é suficiente que o agente consista de γ-Glu-Abu a partir do ponto de vista do paladar e, deste modo, o agente pode ainda compreender outros componentes, em uma extensão tal que eles não exerçam qualquer influência substancial sobre o agente da invenção com relação ao paladar do mesmo.

O agente para conferir melhor paladar da presente invenção ou γ-Glu-Abu pode ser também usado em combinação com pelo menos um ingrediente adicional para temperos selecionados a partir do grupo, que consiste de aminoácidos, tais que o glutamato de sódio (MSG), ácidos nucléicos, tais que o monofosfato de inosina (IMP), sais inorgânicos, tais que o cloreto de sódio, ácidos orgânicos, tais que o ácido cítrico, e vários tipos de extratos de levedura para, deste modo, prover uma composição de tempero favorável, que é aperfeiçoado em seu melhor paladar, quando comparados com aqueles obtidos através do uso de tais ingredientes para temperos individualmente. Quando do uso de γ-Glu-Abu em combinação com os ingredientes adicionais precedentes para temperos, a concentração dos últimos pode ser facilmente ou apropriadamente determinada ou estabelecida por aquele versado na arte, após a condução de investigações através de, por exemplo, um teste sensório.

A composição de tempero da presente invenção ou um contendo menos do que 1.000 ppm, em massa, de γ-Glu-Abu pode ser igualmente combinado com outros ingredientes para temperos, de um modo a assim prover temperos separados mais favoráveis.

Na presente invenção, o termo melhor paladar significa o paladar que não pode ser expressado pelos cinco paladares básicos, ou o paladar doce, o paladar salgado, o paladar ácido, o paladar amargo e o umami e, de um modo mais específico, significa o paladar, no qual os paladares marginais daqueles básicos, tais que a espessura, o crescimento (plenitude na boca), a continuidade e a harmonia são aumentados, em adição aos paladares básicos. De um modo adicional, o termo “que confere melhor paladar” aqui usado significa que os cinco paladares básicos expressados pelo paladar doce, paladar salgado, paladar ácido, paladar amargo e o umami são aumentados, enquanto que os paladares marginais dos paladares básicos, tais que a espessura, o crescimento (plenitude na boca), a continuidade e a harmonia associados com os primeiros são simultaneamente conferidos a um indivíduo. Além disso, este pode também se referir à ação de aumento do paladar. Portanto, γ- Glu-Abu, que serve como o agente para conferir melhor paladar da presente invenção, pode ser igualmente referido como a um “agente de aumento do paladar”. O agente para conferir melhor paladar de acordo com a presente invenção ou γ- Glu-Abu pode ser também usado como um agente de aumento de paladar doce, um agente de aumento de paladar salgado, um agente de aumento de paladar ácido, um agente de aumento de paladar amargo ou um agente de aumento de paladar umami. Além disso, o paladar de um alimento pode variar com o decorrer do tempo, após o mesmo ser ingerido, e o paladar de um alimento após ser ingerido é, de um modo geral, referido como o paladar inicial, o paladar médio e o pós- paladar, em ordem, imediatamente após o alimento ser ingerido. Embora eles sejam, de fato, um conceito relativo, o paladar inicial, o paladar médio e o pós- paladar de um indivíduo são, como um todo, definidos para que sejam o paladar observado dentro do termo que se estende de 0 a 2 segundos, 2 a 5 segundos e não menos do que 5 segundos após a ingestão dos mesmos, respectivamente. O paladar observado durante o termo que se estende de 0 a 5 segundos é aqui referido como o “paladar inicial/ médio” e aquele que é observado durante o termo que se estende de 2 a cerca de 30 segundos é referido como o “paladar médio/ pós-paladar” (vide os dados plotados na Figura 10). Com referência à avaliação do paladar no caso em que o paladar é dividido em três subdivisões, é difícil que os membros do júri (pessoas que ingerem o alimento a ser examinado) concentrem a sua atenção sobre a avaliação, e o teste habitualmente usado compreende a avaliação do paladar, ao mesmo tempo em que o divide em duas subdivisões.

Os efeitos de uma substância, que apresenta uma atividade de CaSR sobre o melhor paladar e o padrão de desenvolvimento de paladar podem ser confirmados através de um método, por exemplo, um teste sensório humano para a avaliação do paladar. Um exemplo de um tal teste sensório humano para a avaliação do paladar é um ilustrado nos Exemplos deste pedido de patente, mas o teste sensório para a avaliação do paladar que pode ser aqui usado não está restrito a este teste específico.

O termo “CaSR” usado neste relatório compreende que o receptor sensor de cálcio, que pertence à classe C do receptor de transmenbrana 7-vezes e que é aqui portanto referido como o “ receptor de cálcio”. O termo “agonista de CaSR” usado neste relatório compreende uma substância, que está ligada ao CaSR precedente para, deste modo, ativar o receptor. De um modo adicional, o termo “ ativar CaSR”, neste caso, significa que um ligante é ligado com CaSR para, deste modo, ativar uma proteína ligada com o nucleotídeo guanina e para transmitir os sinais emitidos a partir do mesmo. Além disso, a capacidade de uma substância para formar uma ligação com CaSR para, deste modo, ativar o mesmo, é referido como a “atividade agonista de CaSR”.

Agora, um método para varrer um composto tendo uma atividade agonista de CaSR irá, de um modo específico, ser apresentado a seguir, mas os estágios para a triagem do composto não estão limitados a estes especificados abaixo.

1) Um estágio para a adição de uma substância de teste a um sistema de medição de atividade de CaSR, usado para determinar a atividade de CaSR, e um estágio para a determinação da atividade de CaSR;

2) Um estágio para comparar a atividade de CaSR observada quando da adição da substância de teste ao sistema de medição de atividade, que foi observada antes da adição da substância; e

3) Um estágio para selecionar uma substância, que apresenta uma atividade de agonista de CaSR, quando ela é adicionada ao sistema que mede a atividade de CaSR.

A determinação da atividade de CaSR pode ser igualmente executada enquanto do uso, por exemplo, de um sistema de medição, que utiliza células tendo uma capacidade de expressar CaSR. As células precedentes podem ser aqueles que expressam endogenamente CaSR ou células geneticamente recombinantes, ao interior da quais um gene de expressão de CaSR é introduzido, de um modo exógeno. O sistema de mediação de atividade de CaSR antes mencionado não está restrito a nenhum específico, desde que ele permita a detecção da ligação (ou de uma reação) entre a substância de ativação de CaSR e CaSR, ou ele pode emitir ou produzir um sinal detectável, em resposta à formação da ligação (ou de uma reação) entre a substância de ativação de CaSR e CaSR no interior das células, quando da adição de um ligante extracelular (substância de ativação) específico para CaSR às células precedentes, tendo uma capacidade para expressar CaSR. Se a atividade de CaST for detectada através da reação com uma substância de teste, seria julgado que a substância de teste apresenta a atividade de estimulação de CaSR desejada.

Um exemplo do CaSR precedente, preferivelmente aqui usado, é o CaSR humano codificado pelo gene CaSR humano, registrado sob o Número de Acesso do GenBank de NM- 000388. A este respeito, no entanto, o CaSR não está restrito à proteína codificada pelo gene tendo a sequência precedente do CaSR registrado e ela pode ser qualquer proteína capaz de ser codificada por um gene não tendo menos do que 60%, preferivelmente não menos do que 80%, e de um modo mais preferido não menos do que 90% de homologia de sequência com a sequência de gene precedente, apesar de que a proteína codificada por um tal gene possua a função de CaSR. Em conexão com isto, a função de CaSR pode ser examinada fazendo com que as células expressem estes genes, e então determinando qualquer alteração de uma corrente elétrica e/ ou de qualquer carga na concentração de íon de cálcio no interior das células, observada quando o cálcio é adicionado ao sistema contendo as células.

No que se refere ao CaSR precedente, a fonte do mesmo não está restrita a qualquer uma particular e pode ser derivada a partir de todos os tipos de animais, incluindo camundongos, ratos e cães, em adição ao CaSR humano precedente.

Como foi discutido acima, a atividade de CaSR pode ser confirmada através do uso de células vivas, capazes de expressar CaSR ou um fragmento do mesmo, das membranas celulares que expressam CaSR ou um fragmento do mesmo, ou de um sistema in vitro, que inclui CaSR ou uma proteína como um fragmento do mesmo.

Um exemplo, que utiliza as células vivas, será fornecido abaixo, mas a presente invenção não está limitada, de modo algum, a este exemplo.

O CaSR é expressado em células cultivadas, tais que oócitos de xenopus, células ovarianas derivadas de cricetos, e células renais fetais humanas. Esta expressão de CaSR pode ser executada através da introdução, no interior de um plasmideo que possua um gene exógeno, do gene de CaSR, que foi submetido a um tratamento de clonagem sob a forma de um plasmideo, ou de um cRNA obtido usando o mesmo como um gabarito. Para a detecção de uma tal reação, pode ser usado um meio eletrofisiológico ou um indicador fluorescente para a detecção de qualquer aumento da concentração de cálcio no interior das células.

A expressão de CaSR é inicialmente confirmada pela presença de qualquer resposta observada quando da adição de cálcio ou de um ativador tendo a especificada para isto. De um modo mais específico, podem ser aqui usadas como as células desejadas, aquelas, nas quais uma corrente elétrica intracelular é detectada quando da adição de cálcio em uma concentração de cerca de 5 mM, ou aquelas, nas quais a emissão de raios fluorescentes é observada mediante a adição de um indicador fluorescente. Em conexão com isto, a concentração de cálcio adicionado às células é alterada, de um modo variável, para determinar qualquer dependência de concentração de cálcio da intensidade da corrente elétrica intracelular. Então, uma substância de teste é diluída em uma concentração em uma faixa de cerca de 1 μΜ a 1 mM, a dispersão resultante é adicionada a oócitos ou a células cultivadas, e subsequentemente a atividade de CaSR na presença da substância de teste precedente, é medida para, deste modo, determinar a atividade agonista de CaSR da substância de teste.

De um modo mais específico, pode ser aqui usado como um teste para a determinação da atividade de agonista de CaSR, por exemplo, o teste ilustrado nos Exemplos de Teste expostos neste relatório, mas o teste que determina atividade não está limitado especificamente a estes, de nenhum modo.

Os aminoácidos ou peptídeos, usados no agente para conferir melhor paladar de acordo com a presente invenção, em combinação com γGlu-Abu incluem, por exemplo, um ou pelo menos dois aminoácidos ou peptídeos, selecionados a partir do grupo, que consiste de γ-Glu-Abu e γ-GluXGly (em que X representa um aminoácido ou um derivado de aminoácido), γ-Glu-Val-Y (em que Y representa um aminoácido ou um derivado de aminoácido), γ-Glu-Ala, γ-Glu-Gly, γ-Glu-Cys, γ-Glu-Met, γ-Glu- Thr, γGlu-Val, γ-Glu-Om, Asp-Gly, Cys- Gly, Cys-Met, Glu-Cys, Gly-Cys, LeuAsp, D-Cys, y-Glu-Met(O), γ-Glu-Leu, γ-Glu-Ile, γ-Glu-t-Leu e γ-Glu-Cys (S-Me). A este respeito, os aminoácidos podem igualmente incluir, por exemplo, aminoácidos neutros, tais que Gly, Ala, Vai, Lei, Ile, Ser, Thr, Cys, Met, Asn, Gin, Pro, Hyp, t-Leu; aminoácidos ácidos, tais que Asp, Glu; aminoácidos básicos, tais que Lys, Arg, His; aminoácidos aromáticos, tais que Phe, Tyr, Trp; assim como homoserina, citrulina, ornitina, ácido aaminobutírico, norvalina, norleucina, e taurina. Além disso, os aminoácidos usados neste caso podem ser também aminoácidos artificiais (tendo construção não-proteinácea), tais que terc-leucina, ciclo-leucina, ácido aaminoisobutírico, L-penicilamina, alotreonina, e alo-isoleucina. Em conexão com isto, no peptídeo: γ-Glu-X-Gly, X pode ser o aminoácido antes mencionado ou o derivado do mesmo, mas são aqui preferivelmente usados aminoácidos ou derivados dos mesmos, outros que Cys.

Em adição, os aminoácidos ou peptídeos suados em combinação com γ-Glu-Abu no agente para conferir melhor paladar da presente invenção podem ser os derivados de peptídeo, cada qual tendo uma estrutura representada pela fórmula y-Glu-X-OCEI-(Z)CO2H, em que X representa um aminoácido ou um derivado de aminoácido e Z representa H (átomo de hidrogênio) ou CH ₃ ( grupo metila). Além disso, os aminoácidos ou peptídeos aqui usados podem ser igualmente os compostos representados pela fórmula geral precedente: γ-Glu-Val-Y, na qual Y representa GlyA ou LacA. Exemplos específicos dos mesmos aqui preferivelmente usados são γGlu-Val-GlyA, γ-Glu-tLeu-GlyA, γ-Glu-Abu-GlyA; γ-Glu-Val-LacA, γ-GlutLeu-LacA e γ-Glu-Abu-LacA. A este respeito, o termo “GlyA” aqui usado significa o ácido glicólico e LacA significa o ácido butílico. O ácido butílico pode ser ou o seu isômero S ou o seu isômero R, mas é, de um modo preferido, o isômero S do mesmo. As seguintes são as fórmulas estruturais destes compostos:

[Fórmula Química 1]

[Fórmula Química 2]

[Fórmula Química 4]

[Fórmula Química 5]

[Fórmula Química 6]

De um modo particular, o agente para conferir melhor paladar de acordo com a presente invenção consiste de γ-Glu-Abu e este agente possui um efeito para conferir melhor paladar de tipo de paladar inicial único e excelente e o perfil de desenvolvimento de paladar, tal como mostrado na Figura 1. Deste modo, é preferido que γ-Glu-Abu seja usado em combinação com um peptídeo, tal que γ-Glu-Val-Gly, que apresenta um perfil de desenvolvimento de paladar diferente daquele do precedente.

No relatório deste pedido de patente, cada aminoácido (resíduo) é expressado em termos da forma abreviada que se segue:

(1) Gly: glicina;

(2) Ala: alanina;

(3) Vai: valina;

(4) Leu: leucina;

(5) Ile: isoleucina;

(6) Met: metionina;

(7) Phe: fenilalanina;

(8) Tyr: tirosina;

(9) Trp: triptofano;

(10) His: histidina;

(11) Lys: lisina;

(12) Arg: arginina;

(13) Ser: serina;

(14) Thr: treonina;

(15) Asp: ácido aspártico;

(16) Glu: ácido glutâmico;

(17) Asn: asparagina;

(18) Gin: glutamina;

(19) Cys: cisteína;

(20) Pro: prolina;

(21) Om: omitina;

(22) Sar: sarcosina;

(23) Cit: citrulina;

(24) N-Val: ou (Nva): norvalina ( ácido 2-aminovalérico) ;

(25) N-Leu (ou Nle) : norleucina;

(26) Abu: ácido α-amino butírico;

(27) Tau : taurina (29) Hyp: hidroxiprolina (29) t-Leu: terc-leucina;

(30) Cie: ciclo-leucina;

(31) Aib: ácido α-amino isobutírico;

(32) Pen: L-penililamina;

(33) alo-Thr: alotreonina;

(34) alo-Ile: alo- isoleucina.

Além disso, o termo “derivado de aminoácido” aqui usado compreende uma variedade de derivados dos aminoácidos precedentes e exemplos específicos dos mesmos incluem aminoácidos especiais e aminoácidos artificiais, amino alcoóis, ou aminoácidos cujas cadeias laterais, tais que grupos carboxila terminais, grupos amino e/ ou grupo tiol de cisteína são substituídos por uma variedade de substituintes. Exemplos de tais substituintes incluem um grupo alquila, um grupo acila, um grupo hidroxila, um grupo amino, um grupo alquil amino, um grupo nitro, um grupo sulfonila ou uma variedade de grupos de proteção. Deste modo, exemplos de tais derivados de aminoácido incluem Arg (NO₂): Ν-γ-nitro- alginina, Cys (SNO): S-nitro-cisteína, Cys (S-Me): S-metil cisteína, Cys (S-alila): S- alil cisteína, Val-NH₂: valina- amida, e Val-ol: valinol ( 2-amino-3-metil-l-butanol). No entanto, o peptídeo: γ- Glu-Cys()SNO)-Gly, aqui usado, é um representado pela fórmula estrutural que se segue e o símbolo : “O” que aparece nas fórmulas precedentes: γ-Glu-Met (O) e γ-Glu-Cys (S-Me) (O) significa que estes peptídeos podem, cada qual, ter uma estrutura sulfóxido. O símbolo “(γ)” de γ- Gly significa que outro aminoácido está ligado com o ácido glutâmico através do grupo carboxila que está situado na posição γ do último.

[Fórmula Química 7]

S-Nitrisoglutationa (GNSO)

O γ-Glu-Abu usado neste relatório significa o ácido L-γglutamil-L-2- amino butírico. O γ-Glu-Abu e os aminoácidos e peptídeos usados em combinação na presente invenção podem ser aqueles comercialmente disponíveis, se eles puderem ser adquiridos no mercado, ou eles podem ser obtidos de acordo com qualquer técnica conhecida, tais que (1) métodos sintéticos químicos ou (2) um método que utiliza uma reação de enzima, mas seria mais conveniente usar uma técnica sintética química. O γ-Glu-Abu usado na presente invenção possui um comprimento muito curto, pois ele inclui apenas dois resíduos de aminoácido e, portanto, é mais convincente adotar uma técnica sintética química. De um modo mais específico, ele pode ser produzido de um modo simples e a baixo custo, quando comparado com qualquer tripeptídeo, que compreende três resíduos de aminoácido e, deste modo, o uso deste dipeptídeo é bastante vantajoso a partir de um ponto de vista industrial. De um modo adicional, quando da sintetização química de γ-Glu-Abu usado na presente invenção e dos aminoácidos e peptídeos usados em combinação com este, a preparação dos mesmos pode ser executada através de sintetização ou de semi-sintetização destes oligopeptídeos, ao mesmo tempo em que é usado um dispositivo de síntese de peptídeo. Como um tal método para sintetizar quimicamente estes peptídeos, que pode ser aqui usado, pode ser usada, por exemplo, a técnica de síntese de peptídeo de fase sólida. O peptídeo assim produzido pode ser subsequentemente purificado de acordo com as técnicas usuais, tais que a técnica de cromatografia de troca iônica, a técnica de cromatografia líquida de alto desempenho de fase reversa, ou a técnica de cromatografia por afinidade. Uma tal técnica de síntese de peptídeo de fase sólida e a técnica de purificação de peptídeo subsequentemente usada são bem conhecidas no campo desta arte.

De um modo alternativo, quando da produção do γ-Glu-Abu usado na presente invenção e dos aminoácidos e peptídeos usados em combinação com este, ao mesmo tempo em que utilizando uma reação de enzima, a preparação dos mesmos pode ser efetuada através do uso do método exposto no panfleto da Patente Internacional Exposta a Exame WO 2004/ 011653. De um modo mais específico, eles podem ser preparados através da reação de um aminoácido ou de um peptídeo, no qual um dos grupos carboxila terminais do mesmo é esterificado ou aminado, com um outro aminoácido, cujo grupo amino está em estado livre ( por exemplo, um aminoácido cujo grupo carboxila é protegido) na presença de uma enzima que forma peptídeo, e então purificando o dipeptídeo ou tripeptídeo resultante. Exemplos de tais enzimas formadoras de peptídeos são culturas de microorganismos, que mostram a capacidade de produzir um peptídeo: os corpos celulares de microorganismos isolados a partir da cultura; ou um produto obtido através do processamento dos corpos celulares dos microorganismos, ou de uma enzima que forma peptídeo, originada a partir dos microorganismos. No entanto, é aqui construído que a exposição da WO 2004/ 011653 está incluída na descrição deste relatório.

Em adição aos métodos de produção enzimática precedentes e aos métodos de síntese química, os peptídeos usados na presente invenção são frequentemente incluídos em produtos de ocorrência natural, por exemplo, plantas, tais que vegetais e frutas, microorganismos, tais que a levedura e outras fontes naturais. Quando eles estão presentes em substâncias de ocorrência natural, eles podem ser isolados a partir das mesmas e os produtos isolados resultantes podem ser igualmente usados na presente invenção.

O agente para conferir melhor paladar ou o agente para conferir melhor paladar complexo de acordo com a presente invenção pode ser usado como um tempero sem qualquer pós- tratamento particular, ou ele pode ser misturado com veículos aceitáveis para alimentos e bebidas, ou ingredientes para outros temperos, de um modo a fornecer vários temperos. Exemplos de tais outros ingredientes para temperos incluem condimentos,sacarídeos, adoçantes, fibras comestíveis, vitaminas, aminoácidos, tais que o glutamato de sódio (MSG), ácidos nucleicos, tais que o monofosfato de inosina (IMP), sais inorgânicos, tais que o cloreto de sódio, e ácidos orgânicos, tais que o ácido cítrico ou sais do mesmo, assim como vários tipos de extratos de levedura.

De um modo incidental, alimentos com um baixo teor de sal, preferidos como composições alimentícias, cada qual compreendendo o agente para conferir melhor paladar de acordo com a presente invenção são, por natureza, aqueles contendo o sal comum e, de um modo particular, os alimentos cujo teor de sal é reduzido. Os alimentos com um baixo teor de sal incluem não apenas aqueles em forma sólida, mas também aqueles em forma líquida, e o termo “ baixo teor de sal “ é sinônimo do termo “alimento e bebida com baixo teor de sal”.

Exemplos de tais alimentos com um baixo teor de sal incluem os produtos lácteos, tais que manteiga e o queijo; óleos animais e óleos contendo gordura e/ou vegetais e alimentos contendo gordura, tais que margarinas, molhos e caldos; alimentos emulsificados, tais que coberturas e maionese; vários tipos de curry e de molhos cozidos; vários tipos de petiscos; e uma variedade de sopas contendo extratos de carne ou essências de carne e/ou creme. Além disso, tais alimentos de baixo teor de sal incluem, por exemplo, alimentos fermentados ou fervidos; alimentos vegetais processados, tais que vegetais salgados ou picles; produtos de carne processados, tais que presuntos e salsichas; produtos marinhos processados, tais que pasta de peixe fervida, produtos marinhos secos e alimentos fervidos em soja; esferas de carne cozidas, bife de hambúrguer; alimentos fritos; e frango frito. Dentre estes, os alimentos com um baixo teor de sal preferidos são aqueles tendo uma concentração de sal comum, quando da ingestão da mesma, em uma faixa de 0,01 a 0,5%, em massa. Além disso, é também preferido o uso de pelo menos um membro, selecionado a partir do grupo, que consiste de um ácido orgânico, tal que o ácido láctico, ácido cítrico, ácido málico, e o ácido succínico, e os sais dos mesmos em combinação com o sal comum, em uma quantidade em uma faixa de 0,05 a 0,1 %, em massa. O uso destes ingredientes de um modo combinado iria permitir um aperfeiçoamento adicional do efeito de aumento do paladar salgado do agente para conferir melhor paladar ou γ- Glu-Abu da presente invenção.

De acordo com a presente invenção, é também provido um alimento ou bebida, que compreende de 20 a 200 ppm, em massa, de γ- GluAb e de 0,01 a 0,5%, em massa, de sal comum. A este respeito, é preferido que o alimento ou a bebida compreenda ainda pelo menos um membro selecionado a partir do grupo, que consiste de ácido orgânico, tal que o ácido láctico, ácido cítrico, ácido málico e ácido succínico, e os sais dos mesmos, em uma concentração em uma faixa de 0,005 a 0, 1 %, em massa.

Se o agente para conferir melhor paladar da presente invenção for incorporado nos alimentos de baixo teor de sal precedentes, os alimentos estariam aptos a fornecer, ao consumidor, uma impressão espessa do tipo paladar salgado, e um toque de paladar inicial (ou impacto ) no estágio inicial, quando este ingerir estes alimentos com um baixo teor de sal.

O γ-Glu-Abu usado na presente invenção e os aminoácidos e peptídeos usados em combinação com este podem igualmente incluir aqueles em usual forma de sal. Se o γ-Glu-Abu usado na presente invenção e os aminoácidos e peptídeos suados em combinação com o mesmo estiverem presentes em sua forma de sal, ou sais não estão restritos àqueles específicos, desde que eles sejam farmacologicamente aceitáveis e exemplos específicos dos mesmos incluem os sais de amônio, sais como metais alcalinos, tais que o sódio e o potássio, sais com metais alcalino terrosos, tais que o cálcio e o magnésio, sais de alumínio, sais de zinco, sais com aminas orgânicas, tais que trietil amina, etanol amina, morfolina, pirrolidina, piperidina, piperazina, e diciclo-hexilamina, e sais com aminoácidos básicos, tais que arginina e lisina, para os grupos ácidos, tais que os grupos carboxila. Além disso, exemplos dos compostos precedentes incluem igualmente os sais com ácidos inorgânicos, tais que o ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico e o ácido bromídrico; sais com ácidos orgânicos, tais que o ácido acético, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido tânico, ácido butírico, ácido hibenzóico, ácido pamóico, ácido enântico, ácido decanóico, ácido teóclico, ácido salicílico, ácido láctico, ácido oxálico, ácido mandélico e ácido málico; e sais com ácidos sulfônicos orgânicos, tais que o ácido metano sulfônico, ácido benzeno sulfônico e o ácido p- tolueno sulfônico, para os grupos básicos dos compostos.

O agente para conferir melhor paladar ou o agente para conferir melhor paladar complexo de acordo com a presente invenção podem ser usados em qualquer forma, tais que pós secos, pastas, e soluções, em qualquer restrição quanto às propriedades físicas dos mesmos.

O agente para conferir melhor paladar ou o agente para conferir melhor paladar complexo de acordo com a presente invenção pode ser usado para a incorporação em, por exemplo, alimentos, bebidas e temperos.

Se o agente para conferir melhor paladar ou o agente para conferir melhor paladar complexo de acordo com a presente invenção for usado para a incorporação em, por exemplo, alimentos, bebidas e temperos, a quantidade última de γ-Glu-Abu e aquela do aminoácido ou peptídeo usado em combinação com o mesmo não está restrita a qualquer uma específica, desde que seja possível assegurar que os efeitos desejados da presente invenção sejam alcançados, mas a quantidade de γ-Glu-Abu e/ ou aquela do aminoácido ou peptídeo deve recair dentro da faixa de cerca de lppb, em massa, a 99,9%, em massa, e de um modo preferido em de cerca de 10 ppb, em massa, a 10 %, em massa, e de um modo ainda mais preferido em de cerca de 1 ppm, em massa a 1 %, em massa, com base na massa total de cada alimento, bebida, tempero ou o similar correspondente.

De acordo com um outro aspecto da invenção, é também provido um método para a preparação de um tempero, que compreende o estágio de misturar o agente para conferir melhor paladar da presente invenção com um veículo aceitável para os ingredientes para outras composições de temperos ou alimentos e bebidas. A concentração de γ-GluAbu na composição de tempero assim preferido, está, de um modo particularmente preferido, em uma faixa de 400 a 500.00 ppm, em massa. De um modo particular, o método para a preparação de uma composição de tempero de acordo com a invenção compreende, de um modo preferido, os estágios de misturar o agente para conferir melhor paladar com os ingredientes de um outra composição de tempero e controlar a concentração de γ-Glu-Abu no tempero preparado deste modo a um nível em uma faixa de a partir de 400 a 500.000 ppm, em massa.

A presente invenção provê ainda um método para a preparação de um alimento ou bebida, que compreende incorporar o agente para conferir melhor paladar de acordo com a presente invenção em um ingrediente para outros alimentos ou bebidas. A concentração de γ-Glu-Abu no alimento ou bebida assim preparado está em uma faixa, de um modo particularmente preferido, de 20 a 200 ppm, em massa. Deste modo, é aqui preferido que o estágio para a incorporação do agente para conferir melhor paladar da presente invenção em um alimento ou bebida compreenda o estágio de ajustar a concentração de γ-Glu-Abu no alimento ou bebida assim preparado a um nível em uma faixa de 20 a 200 ppm, em massa.

O alimento, bebida, tempero ou o similar, que compreende o agente para conferir melhor paladar ou o agente para conferir melhor paladar complexo de acordo com a invenção, pode ainda compreender, por exemplo, qualquer veículo sólido ou líquido e/ ou ingredientes de tempero apropriados, que sejam aceitáveis para alimentos e bebidas.

Como veículos precedentes, podem ser relacionados, por exemplo, glicose, lactose, sacarose, amido, manitol, dextrina, glicerídeos de ácido graxo, polietileno glicol, hidroxietil amido, etileno glicol, ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitano, gelatina, albumina, aminoácidos, água, e solução salina fisiológica.

Os ingredientes antes mencionados para o tempero não estão restritos a qualquer um em particular e podem ser quaisquer correntemente usados neste campo, mas exemplos específicos dos mesmos são aqueles já descritos acima.

Os conteúdos dos veículos precedentes, de outros ingredientes de tempero, ou os similares, não estão restritos àqueles específicos.

A composição de tempero da presente invenção compreende o γ-Glu-Abu em uma quantidade de não menos do que 1.000 ppm, em massa, de um modo preferido de 2.000 ppm, em massa, e de um modo ainda mais preferido de 2.500 ppm, em massa. Estes temperos mostram, de um modo particularmente adequado, o efeito de conferir paladar de γ-Glu-Abu. A taxa de γ-Glu-Abu, que ocupa a composição de tempero da presente invenção, não é, de um modo preferido, de menos do que 3.000 ppm, em massa, de um modo particularmente preferido de não menos do que 3%, em massa. Além disso, é preferido também incluir aqueles tendo um conteúdo de γ-Glu-Abu. De não mais do que 99,9%, em massa. Os componentes da composição de tempero de acordo com a presente invenção, outros que o γ-Glu-Abu, não estão restritos àqueles específicos exemplos específicos dos mesmos incluem veículos de ingredientes de tempero, que são aceitáveis para alimentos e bebidas.

Exemplos mais específicos dos temperos da presente invenção são extratos de levedura, cada qual contendo o γ-Glu-Abu em uma quantidade de não menos do que 2.500, em massa. O extrato de levedura não está particularmente restrito quanto a qualquer dos corpos celulares de microorganismos, a partir dos quais o extrato é originado, quanto às condições de cultivo dos microorganismos e quanto aos métodos para a extração dos mesmos, e deste modo, qualquer extrato de levedura pode ser usado na composição de tempero da presente invenção. Além disso, estes extratos de levedura podem ser aqueles que foram submetidos, por exemplo, a um tratamento térmico, a um tratamento com uma enzima, a um tratamento de concentração e/ ou a um tratamento para que os mesmos sejam convertidos em pó. O método para a preparação de um tal extrato de levedura contendo não menos do que 2.500, em massa, de γ-Glu-Abu não está limitado a qualquer um de um modo particular, mas um tal produto dextrato de levedura pode ser obtido, por exemplo, através da adição de γ-Glu-Abu a um extrato de levedura, de um modo tal que a concentração do precedente recaia dentro da faixa acima especificada.

A composição de tempero da presente invenção pode ser usado sob qualquer forma e pode estar sob a forma de, por exemplo, um pó seco, uma pasta e uma solução, sem qualquer restrição quanto às propriedades físicas dos mesmos.

A composição de tempero da presente invenção pode ser usado para a incorporação do mesmo em, por exemplo, alimentos e bebidas.

A presente invenção provê ainda um método para a preparação de um outro tipo de composição de tempero, que compreende o estágio de adicionar o tempero da presente invenção a outros ingredientes de tempero ou a um veículo aceitável para alimentos e bebidas. A concentração de γ-GluAbu na composição de tempero preparado de acordo com este método está, de um modo preferido, em de 400 a 500. 000 ppm, em massa. De um modo particular, o método para a preparação deste tipo de composição de tempero de acordo com a presente invenção compreende, de um modo preferido, os estágios de misturar a composição de tempero da presente invenção com os outros ingredientes de tempero, e então controlar a concentração de γ-GluAbu neste tipo de uma composição de temperos assim preparados a um nível em uma faixa de a partir de 400 a 500.000, em massa.

A presente invenção provê ainda um método para a preparação de um alimento ou bebida, que compreende o estágio de incorporar a composição de tempero da presente invenção em outros ingredientes usados para preparar um alimento ou uma bebida. A concentração de γ-Glu-Abu no alimento ou bebida assim preparado está situada, de um modo particularmente preferido, em de 20 a 200 ppm, em massa. De um modo particular, é aqui preferido que o estágio para a incorporação da composição de tempero da presente invenção em outros ingredientes usados para a preparação de um alimento ou bebida compreenda o estágio de ajustar a concentração de γ-GluAbu no alimento ou bebida assim preparado a um nível, que esteja situado em uma faixa de 20 a 200 ppm, em massa.

De acordo com a presente invenção, é também provido um método para a preparação de, por exemplo, um alimento, uma bebida ou um tempero, que compreende o estágio de adicionar, a um intermediário usado para a produção de, por exemplo, um alimento, uma bebida, ou um tempero, o γ-Glu-Abu, de um modo tal que o alimento resultante, bebida ou tempero contenha ο γ-Glu-Abu em uma quantidade em uma faixa de a partir de 1 ppb, em massa a 99,9 %, em massa. A este respeito, o alimento, bebida, tempero ou o similar é, de um modo preferido, um alimento com um baixo teor de sal.

A presente invenção também provê um método para a preparação de um alimento ou de uma bebida, que compreende o estágio de incorporar a composição de tempero da presente invenção em um intermediário usado para a preparação de um tal alimento ou bebida. Em conexão com isto, o alimento ou a bebida é, de um modo preferido, um alimento com um baixo teor de sal.

No método para a preparação de um alimento ou bebida, ou de um intermediário usado para a preparação de um alimento ou bebida de acordo com a presente invenção, é também possível usar, por exemplo, o extrato de levedura antes mencionado contendo o γ-Glu-Abu em uma alta concentração, como um ingrediente de extrato de levedura usado para preparar um alimento ou bebida, que compreende não menos do que 1.000 ppm, em massa, do γ-Glu-Abu e é usado para a preparação de um outro alimento ou bebida. Além disso, como tais ingredientes, podem ser aqui usados, por exemplo, os produtos de γ-Glu-Abu preparados de acordo com um método sintético químico ou enzimático, e então isolados; ou o produto diluído e/ ou dispersado dos produtos de γ-Glu-Abu assim isolados. Exemplos de tais produtos diluídos e/ ou dispersados contendo o γ-Glu-Abu incluem aqueles obtidos através da diluição do produto pulverizado de γ-Glu-Abu com quaisquer veículos sólidos ou líquidos, aceitáveis para alimentos e bebidas, que já foram relacioandos acima.

Na presente invenção, a frase “ingredientes para preparar outros alimentos e bebidas” tem aqui a intenção de incluir todos os tipos de ingredientes para alimentos e bebidas correntemente usados como matérias primas para alimentos e bebidas, exceto quando aos “ ingredientes para alimentos e bebidas contendo não menos do que 1.000 ppm, em massa, de γ

Glu-Abu “ e exemplos específicos dos mesmos incluem aqueles relacionados abaixo como alimentos e bebidas e intermediários para a sua preparação, em adição aos veículos e ingredientes antes mencionados para o tempero, que são aceitáveis para alimentos e bebidas.

O método para preparar um alimento ou uma bebida ou um intermediário usado para a preparação dos mesmos de acordo com a presente invenção pode compreender o estágio de processamento adicional ou de cozimento da mistura de ingredientes para alimentos e bebidas, o que é obtido através do estágio de incorporação de um ingrediente para alimentos e bebidas contendo não menos do que 1.000 ppm, em massa, de γ-Glu-Abu em outros ingredientes para alimentos e bebidas. A este respeito, o termo “ processamento ou cozimento” aqui usado inclui qualquer estágio de cozimento comumente usado neste campo. Exemplos de tais estágios de cozimento incluem grelhar, assar ou cozer, ferver, fritar, cozer a vapor, cortar, triturar ou esmagar, gratinar, esfregar e ralar, amassar, moer e picar, fatiar, misturar, peneirar e triturar com pilão, mas a presente invenção não está restrita a estes estágios de cozimento específicos.

Exemplos de alimentos e bebidas ou de intermediários usados para a sua preparação, que podem ser preparados de acordo com um método da presente invenção, incluem aqueles já relacionados acima, isto é produtos lácteos, tais que manteiga e queijo; óleos animais e óleos contendo gordura e/ ou vegetais e alimentos contendo gordura, tais que margarina, molhos e caldos; alimentos emulsificados, tais que coberturas e maionese; vários tipos de curry e de molhos cozidos; vários tipos de petiscos; e uma variedade de sopas contendo extratos de carne ou essências de carne e/ou creme. Além disso, tais alimentos de baixo teor de sal incluem, por exemplo, os alimentos fermentados ou fervidos; os alimentos vegetais processados, tais que vegetais salgados ou picles; os produtos de carne processados, tais que presuntos e salsichas; os produtos marinhos processados, tais que pasta de peixe fervida, produtos marinhos secos e alimentos fervidos em soja; esferas de carne cozidas, bife de hambúrguer; alimentos fritos; e frango frito.

Os alimentos e as bebidas da presente invenção também incluem alimentos ou bebidas como os alimentos completados, em formas tais que eles sejam correntemente colocados no mercado e que possam ser ingeridos e o termo “intermediários suados para preparar alimentos e bebidas” tem aqui a intenção de compreender todos aqueles tendo qualquer forma anteriormente ao processo dos mesmos sob a forma de produtos completados. Quando do uso de intermediários usados para a preparação de um alimento ou de uma bebida como um ingrediente de tempero contendo γ-Glu-Abu, é preferido que o intermediário compreenda o γ-Glu-Abu em uma quantidade de a partir de 400 a 500.000 ppm, em massa, e de um modo preferido cerca de 4.000 a 40.000 ppm, em massa, e um tal intermediário pode ser preparado através da adição de um ingrediente para alimentos e bebidas contendo, por exemplo, não menos do que 1.000 ppm, em massa de γ-Glu-Abu, de um modo tal que o intermediário resultante possua uma concentração do mesmo, que recaia dentro da faixa acima especificada. De um modo alternativo, o produto final ou completado compreende, de um modo preferido de cerca de 20 a 200 ppm, em massa, de γ-Glu-Abu, conforme expressado em termos da concentração no momento da ingestão do mesmo ou aquela do mesmo no alimento ou bebida como o produto final, e um tal produto final pode ser preparado através da adição de ingrediente para alimentos e bebidas contendo, por exemplo, não menos do que 1.000 ppm, em massa de γ-Glu-Abu, de um modo tal que o produto final resultante possua uma concentração do mesmo que recaia dentro da faixa acima especificada.

No método de preparação de um alimento ou de uma bebida ou de um produto intermediário usado para a preparação dos mesmos, de acordo com a presente invenção, o estágio de adicionar a um ingrediente para a preparação de outros alimentos ou bebidas, o ingrediente usado para a preparação de um alimento ou bebida, que compreende o γ-Glu-Abu, compreende, de um modo preferido, o estágio de controlar a concentração de γ-Glu-Abu no intermediário resultante, a um nível de a partir de 400 a 500.000 ppm, em massa, e o método da presente invenção compreende, de um modo mais preferido, um estágio adicional de adição do intermediário usado para a preparação de alimentos ou bebidas a um ingrediente usado para a preparação de outros alimentos e bebidas para, deste modo, ajustar a concentração de γ-Glu-Abu no alimento ou bebida resultante, a um nível que esteja situado em uma faixa de a partir de 20 a 200 ppm, em massa.

No método para preparar um alimento ou uma bebida de acordo com a presente invenção, o estágio para a adição de um ingrediente usado para a preparação de um alimento ou bebida, que compreende o γ-GluAbu, a um ingrediente para a preparação de outros alimentos ou bebidas, compreende, de um modo preferido, o estágio de controlar a concentração de γ-Glu-Abu no alimento ou bebida resultante, a um nível que esteja situado em de 20 a 200 ppm, em massa.

O método para preparar um alimento ou uma bebida de acordo com a presente invenção é adequado para os casos, nos quais o alimento ou a bebida é um com um baixo teor de sal. Neste caso, é preferido que o método compreenda um estágio adicional de adicionar, a um ingrediente para alimentos ou bebidas, pelo menos um membro selecionado a partir do grupo que consiste de ácidos orgânicos, tais que o ácido láctico, ácido cítrico, ácido málico e ácido succínico, e sais dos mesmos e de um modo preferido o ácido láctico e o ácido málico, de um modo tal que a concentração dos mesmos no alimento ou bebida resultante recaia dentro da faixa de 0,005 a 0,1 em massa, e é igualmente preferido que o método inclua ainda o estágio de adicionar sal comum ao ingrediente para alimentos ou bebida, em uma quantidade menor do que aquela observada quando da preparação do alimento ou bebida correspondente e existente. A este respeito, o termo “ pequena quantidade de sal comum em um alimento com um baixo teor de sal” aqui usado significa, por exemplo, a concentração de sal comum, no alimento com um baixo teor de sal, de pelo menos 5%, e de um modo preferido pelo menos 10% menor do que aquela observada para o alimento ou bebida existente e correspondente.

O alimento e a bebida de acordo com a presente invenção podem ser apresentados ou providos em qualquer forma usualmente usada no campo de alimentos e bebidas, por exemplo, produtos armazenados em recipientes para retorta, formas enlatadas e engarrafadas, ou sob a forma de produtos secos.

A presente invenção será a seguir descrita em maiores detalhes com referência aos Exemplos que se seguem, mas a presente invenção não está restrita, de modo algum, a estes exemplos específicos.

Exemplo

Preparação de Várias Amostras:

As quatro substâncias que se seguem foram adquiridas no mercado: γ-LGlu-L-Abu (Abu: ácido α-aminobutírico disponível de Bachem Feinchemikalien AG); γ- Glu-L-Ala ( disponível de Bachem Feinchemikalien AG); γ-L-GLu-L-Cys ( disponível de Sigma Aldrich Japan Co., Ltd.); e γGlu-L-Thr (disponível de KOKUSAN Chemical Co., Ltd.).

Síntese de L-Glu-L-Val:

(Estágio 1): Foram dissolvidos, em cloreto de metileno (100 ml), Z-L-Glu-OBzl (éster α-benzílico do ácido N-a-carbobenzóxi-Lglutâmico, 7, 619 g, 20, 51 mM) e Vai- Obzl.HCl ( hidrocloreto do éster benzílico de L-valina, 5 g, 20, 61 mM) e a solução resultante foi mantida a 0°C. Foram então adicionados, à solução, trietilamina (3,2 ml, 22, 57 mM), HOBt (1-hidroxibenzo-triazol, 3,053 g, 22, 57 mM) e WSC. HC1 hidrocloreto de (l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida, 4, 326 g, 22, 57 mM) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O líquido da reação foi então concentrado sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etila ( 220 ml). A solução foi fracionada com uma solução aquosa de 5% de ácido cítrico (100 ml) e a fase aquosa assim obtida foi adicionalmente extraída com acetato de etila ( 60 ml). As fases orgânicas forma combinadas e então lavadas, em ordem, com uma solução de sal comum saturada (80 ml), uma solução aquosa a 5% de hidrogeno carbonato de sódio (80 ml) e uma solução de sal comum saturada (80 ml). A fase orgânica assim obtida foi secada com sulfato de magnésio anidro, a última foi então removida através de filtração, e o filtrado obtido foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi lavado com uma mistura de acetato de etila/n-hexano (1:1), enquanto o primeiro foi mantido em um estado de suspensão e foi então filtrado para fornecer Z-L-Glu-L-Val-OBzl (10, 0273 g). Além disso, os cristais precipitados a partir da fração de acetato de etila/ n-hexano através da adição de n- hexano foram coletados e então recristalizados a partir de acetato de etila/ n- hexano para, deste modo recuperar Z-L-Glu-L-Val-OBzl (1,0399 g).

Rendimento: 94, 25%.

(Estágio 2) A etanol, (160 ml), foi adicionado Z- L-Glu-L-ValOBzl (11, 71 g, 20, 86 mM), e subsequentemente foram então adicionados, à mistura, 10% de paládio sobre carbono (2,3 g) e então água (10 mL) e o sistema de reação resultante foi agitado em temperatura ambiente durante a noite, em uma atmosfera de gás de hidrogênio. Agua (100 ml) foi adicionada ao sistema, em pequenas porções, durante a reação. O paládio sobre carbono foi removido através de filtração, o filtrado resultante foi concentrado sob pressão reduzida, o resíduo assim obtido foi recristalizado a partir de uma pequena quantidade de água e etanol, de um modo a assim fornecer γ-L-GluL-Val (5,0 g).

Rendimento: 97,23%.

As propriedades características do produto resultante são as que se seguem:

ESI-MS: m/z 247,2 (M + H)⁺

RMN Ή (400 MHz, D₂O): δ (ppm): 0,86 (3H, d, J = 6,8 Hz), 0,88 (3 H, d, J = 6,8 Hz), 2,04 - 2,13 (3 H, m), 2,42 - 2,46 (2H, m), 3, 74 ( 1 H, t, J = 6,3 Hz), 4, 13 (1 H, d J = 5, 8 Hz).

Preparação de γ-L-Glu-L-Ser:

De acordo com o mesmo procedimento usado na preparação precedente de γ-L-Glu-L-Val, γ-L-Glu-L-Ser foi sintetizado, ao mesmo tempo em que Z-L-Glu-OBzl e L-Ser- Obzl eram suados como materiais de partida. As propriedades características do produto resultante são as que se seguem:

ESI-MS: m/z 235,1 (M+H)⁺

RMN Ή (400 MHz, D₂O): δ (ppm): 1,98-2,09 (2 H, m), 2,40 (2H, t, J = 8,0 Hz), 3,71-3,81( 3H, m), 4,33 ( 1 H, t, J = 8,0 Hz).

Preparação de γ-Glu-L-t-Leu:

De acordo com os mesmos procedimentos que usados na preparação precedente de γ-L-Glu-L-Val, γ-L-Glu-L-t-Leu foi sintetizado, ao mesmo tempo em que Z-L-Glu-OBzl e L-t-Leu-OBzl foram usados como materiais de partida. As propriedades características do produto resultante são as que se seguem:

ESI-MS: m/z 261, 3 (M+ H)⁺

Preparação de γ-L-Glu-Aib:

De acordo com os mesmos procedimentos que usados na preparação precedente de γ-L-Glu-L-Val, γ-L-Glu-Aib foi sintetizado, ao mesmo tempo em que Z-L-Glu-OBzl e Aib-Ot-Bu foram usados como materiais de partida. As propriedades características do produto resultante são as que se seguem:

ESI-MS: m;z 233, 3 (M+H)⁺

RMN Ή (400 MHz, D₂O): δ (ppm): 1, 36 (6H, s), 2,00 -2,06 (2H, m), 2,30 - 2,34 ( 2H, m), 3, 69 (1 H, t, J = 6, 2 Hz).

(Exemplo de Teste 1): Preparação do Plasmideo de Expressão de CaSR

Um plasmideo de expressão de CaSR foi preparado de acordo com os procedimentos que se seguem:

Foram sintetizados oligoDNA sintéticos usados para os procedimentos de PCR (isto é, primeiramente o iniciador (Sequência N° 3: ACTAATACGACTCACTATAGGGACCATGGCATTTTATAGCT GCTGG) e o iniciador reverso (Sequência N° 4: TTATGAATTCACTAC GTTTTCTGTAACAG) com base na sequência de DNA registrada no NCBI (CaSR (receptor de cálcio): NM-000388, Sequências N°s 1 e 2).

Os procedimentos de PCR foram executados sob as condições abaixo especificadas usando cDNA (disponível de Clontech Company) derivado de rim humano como um material, ao mesmo tempo em que foram usados os iniciadores precedentes e Pfu Ultra DNA Polimerase (disponível de Stratagene Company): O sistema de reação foi processado a 94°C durante 3 minutos e então a 94°C durante 30 segundos, a 55°C durante 30 segundos e a 72°C durante 2 minutos, em que estes estágios foram repetidos cerca de 35 vezes e o sistema foi finalmente reagido a 72°C durante 7 minutos. O sistema de reação foi então submetido a um tratamento de eletroforese através de agarose como um suporte, a agarose foi manchada com um agente de manchamento de DNA e foi então irradiado com raios de luz UV, de um modo a detectar se o cDNA foi aplicado, com segurança, através de procedimentos de PCR, ou não. Ao mesmo tempo, o padrão de eletroforese foi comparado com o marcador de DNA, cujo tamanho eletroforético era conhecido, para, deste modo, confirmar os comprimentos de cadeia dos produtos de PCR.

O vetor de plasmideo pBR322 foi clivado com uma enzima de restrição EcoRV (disponível de Takara Co., Ltd.) e o fragmento do gene amplificado através de procedimentos de PCR foi ligado com o vetor de plasmideo no sítio clivado, usando o Ligation Kit (disponível de Promega

Company). As células da cepa Escherichia coli DH5 α foram transformadas com esta solução de reação, seguido pela seleção dos transformantes contendo o plasmídeo, no qual o produto amplificado por PCR havia sido clonado, e adicionalmente o produto amplificado por PCR foi confirmado pela análise de sequência de base de DNA.

Este plasmídeo recombinante foi usado para o estabelecimento de um plasmídeo de expressão de CaSR humano hCaSR/pcDNA3.1.

(Exemplo de Teste 2): Avaliação da Atividade de Agonista de CaSR

Células 293E(células HEK293 de expressão de EBNA1, ATXX N° CRL-10852) foram cultivadas em DMEN/ Ham's-F12 (3, 15/ml de meio Eagle modificado com Dulbecco contendo glicose, disponível de Nakaraitesk Company), suplementado com 10% de soro de novilho fetal, na presença de 200 pg/ ml de G418 (disponível de Genetisin). As células cultivadas foram inoculadas em um frasco F25, em uma densidade de 3 x 10⁶/ células/ml, e o frasco foi deixado em repouso durante 24 horas em um incubador de CO₂ (5% de CO₂, 37°C) e então o plasmídeo de expressão de CaSR humano hCaSR/pcDNA 3.1 foi transformado ou transfectado com um reagente para a transfecção de Fugene 6 (disponível de Roche Company). O plamídeo transfectado foi mantido em um incubador de CO₂ durante 6 a 7 horas, e então as células foram recuperadas usando DMEM/ Ham's-F12 contendo 10% de soro de novilho fetal e as células foram inoculadas em cada reservatório de uma placa de 96 reservatórios revestidos com poli-D-lisina, em uma densidade de 70.000 células/ reservatório.

A placa de 96 reservatórios foi deixada em repouso durante 24 horas em um incubador de CO₂, e então o meio de cultura foi removido a partir de cada reservatório da placa de 96 reservatórios, nos quais as células foram inoculadas, seguido pela adição, a cada reservatório, de um Kit de Ensaio de Cálcio 4 com indicador fluorescente de Ca (disponível de

Molecular Devices Company), dissolvido em um Tampão de Ensaio (contendo 146 mM de NaCl, 5 mM de KC1, 1 mM de MgSO₄, 1 mg/ ml de glicose, 20 mM de HEPES (pH de 7,2) e de 0, 75 a 1, 25 mM de CaCl₂) em uma quantidade de 200 μΐ/ reservatório, e subsequentemente deixando a placa 5 de 96 reservatórios em repouso a 37°C, durante uma hora, e então em temperatura ambiente durante 10 minutos, de um modo a que o indicador fosse incorporado nas células.

A cada reservatório da placa de 96 reservatórios, foi adicionado cada composto de teste dissolvido em 0,1 % de Tampão de Ensaio 10 contendo BS A, em uma quantidade de 50 μΐ/ reservatório, e então qualquer alteração da intensidade da fluorescência foi monitorada, durante 3 minutos, usando uma estação FLEX (disponível de Molecular Devices Company).

(Método para a Determinação de ECso)

A diferença (RFU (Max-Min)) entre as intensidades de 15 fluorescência máxima e mínima observadas para cada reservatório, antes e após a adição de cada composto de teste específico, foi determinada através de cálculo automático usando uma Estação FLEX. A taxa de atividade foi calculada, enquanto que o valor de RFU (Max- Min) observado quando da adição do composto na concentração máxima foi definida como sendo de 20 100% e o valor de RFY (Max-Min) observado quando do uso de Tampão de

Ensaio contendo 0,1 % de BSA, livre de qualquer composto de teste, foi definido como sendo de 0%, submetendo-se a seguir os dados resultantes aos procedimentos de ajuste de curva usando o software Xfit ou Graph-PadPrism, de um modo a determinar a EC₅o, que foi a concentração do composto 25 em uma taxa de atividade de 50%. Os resultados assim obtidos estão sumariados na Tabela 1 que se segue.

[Tabela 1]

Composto	EC50, μ. M
y -Glu-Abu	0,21
y -Glu-Ala	1,24
y -Glu-Val	1,03

γ -Glu-tLeu	3,06
7 -Glu-Cys	0,16
γ -Glu-Ser	11
7 -Glu-Thr	6,97
7 -Glu-Aib	15,4

Quando comparado com outros dipeptídeos, o γ-Glu-Abu foi verificado como apresentando uma forte atividade de agonista de CaSR, comparável àquela observada para γ-Glu-Cys. E conhecido que um peptídeo de baixo peso molecular, que possui uma atividade de agonista de CaSR, é útil como um agente para conferir melhor paladar (vide Documento de Patente 1, acima especificado) e, deste modo, é sugerido que o γ-Glu-Abu seria capaz de servir como um agente para conferir melhor paladar particularmente excelente.

Exemplo 1: Avaliação da Atividade que Confere Melhor paladar

Neste exemplo, o γ-Glu-Abu foi inspecionado quanto à intensidade de sua atividade para conferir melhor paladar de acordo com um teste de avaliação sensório quantitativo.

Este teste de avaliação quantitativa foi executado de acordo com os procedimentos que se seguem: A intensidade da atividade para conferir melhor paladar observada para o composto de teste, oi determinada como um valor observado quando da mistura de 0,001 a 0,5 g/dL do composto de teste correspondente à água destilada contendo flutamato de sódio (0,05 g/dl), monofosfato de inosina (0,05 g/dL) e cloreto de sódio (0,5 g/dL). Em conexão com isto, quando uma amostra apresentou uma natureza ácida mediante a dissolução do composto de teste, quando comparada com o controle isento de composto de teste, o valor do pH da amostra foi ajustado, usando NaOH, a um nível do valor do pH (observado para o controle) ± 0, 2 antes do uso prático da amostra na avaliação. Os critérios de avaliação são assumidos como sendo os que se seguem: controle : 0 pontos; forte: 3 pontos; muito forte: 5 pontos, enquanto o teste foi executado usando um júri de n (número de membros do júri) = 4. Além disso, para que os critérios se tomassem mais claros, o paladar inicial e o paladar médio/ pós- paladar de γGlu-Val-Gly, em uma concentração de 0,001 g/dL foi ajustado em 3,0 pontos, respectivamente. A este respeito, o termo “paladar médio/pós-paladar” significa o paladar detectado durante o período de tempo combinado, que se estende a partir do período de detecção do paladar médio e o período de detecção de pós-paladar. A graduação ou classificação foi executada usando o método de escala de linha e, de um modo mais específico, ele foi executado escrevendo-se cada graduação correspondente em uma linha reta, sobre a qual pontos correspondendo a -5 ~0 ~5 haviam sido indicados. Os membros do júri que usaram este teste foram definidos como pessoas, que haviam sido engajadas no desenvolvimento de temperaturas para alimentos durante não menos do que um ano do período de tempo cumulativo, e que poderíam julgar que a diferença na titulação entre γ-Glu-Cys-Gly e γ-Glu-Val-Gly, adicionados a uma solução tendo um paladar salgado umami, é de cerca de 10 vezes ( ao mesmo tempo em que a capacidade destas pessoas é confirmada em intervalos regulares). O agente para conferir melhor paladar da presente invenção apresentou a atividade para conferir melhor paladar ao longo da faixa de concentração dos mesmos adicionada precedente. Os resultados assim observados para concentrações típicas dos mesmos estão sumariados na Tabela 2, que se segue.

Em adição, γ-Glu-Ala foi igualmente inspecionado quanto a seu efeito de conferir melhor paladar de acordo com os mesmos procedimentos usados acima, e os resultados estão também relacionados na Tabela 2. Ambos estes agentes que conferem melhor paladar são aqueles do tipo de paladar inicial, que apresentam altas classificações para o paladar inicial, mas o γ-Glu-Abu foi verificado como sendo um dipeptídeo que possui uma titulação extremamente alta, dentre outros.

[Tabela 2]

Comp.	Cone. (g/dL)	Força para conferir melhor paladar	Perfil de Avaliação Sensória
Sabor Inicial	Sabor Médio/ Pós- Sabor
y -GluAbu	0,005	3,8	3,2	A espessura foi aumentada a partir do estágio de paladar inicial (fornecendo uma impressão harmonizada com o paladar total)
y -GluAla	0,2	4,5	4,3	Principalmente, os paladares ácido e doce são aumentados a partir do estágio de paladar inicial

De um modo alternativo, o γ-Glu-Cys e outros dipeptídeos foram também inspecionados quanto à intensidade da atividade que confere melhor paladar, de acordo com os mesmos testes de avaliação sensória 5 quantitativa que aqueles acima usados. Os resultados assim obtidos foram sumariados na Tabela 3.

[Tabela 3]

Comp.	Cone. (g/dL)	Força para conferir melhor paladar	Perfil de Avaliação Sensória
Sabor Inicial	Sabor Médio/ Pós- Sabor
γ-Glu- Cys	0,01	3,1	3,1	Este mostra principalmente o paladar médio e póspaladar e emite um leve odor sulíuroso
γ-GluSer	0,2	3,6	3,0	Este mostra um forte paladar inicial, mas emite alguns paladares estranhos
γ-GluVal	0,01	3,1	2,4	Este mostra um pós-paladar bastante fraco

Deste modo, foi verificado que o γ-Glu-Abu possui uma excelente atividade para conferir melhor paladar e é também excelente no 10 aumento do paladar inicial no que se refere ao desenvolvimento de paladar ou ao padrão de tempero. Este aumento excelente do paladar inicial observado para o γ-Glu-Abu é um dos pontos extremamente vantajosos do mesmo, quando comparado com aquele observado para γ-Glu-Cys. Além disso, ο γGlu-Abu é também excelente em sua estabilidade e é também um ponto 15 vantajoso, quando comparado com o γ-Glu-Cys. De um modo adicional, ο γGlu-Abu possui um comprimento de cadeia curto, pois ele compreende apenas dois resíduos de aminoácido. Deste modo, ele pode ser facilmente preparado, a baixo custo, quando comparado com a preparação de qualquer tripeptídeo que compreenda 3 resíduos de aminoácido e, deste modo, o agente 20 da presente invenção é igualmente bastante vantajoso a partir de um ponto de vista industrial.

Exemplo 2: Determinação da Intensidade da Atividade que confere Melhor paladar

A intensidade de γ-Glu-Abu foi examinada usando um método de teste para a determinação do Ponto de Igualdade Subjetiva (PSE) de acordo com a técnica de determinação de limite (“Statistical Sensory Examination Techniques”, escrita por SATO Shin, publicada pela Japan Federation of Science and Technology).

Neste exemplo, a avaliação sensória foi executada como se segue: Foi usada, como a solução para a avaliação sensória, água destilada contendo glutamato de sódio (0,05 d/gL), monofosfato inosína (0,05 g/dL) e cloreto de sódio (0,5 g/ dL). Como um dipeptídeo existente, que possui um efeito de conferir melhor paladar, foi usado o γ-Glu-Val. O mesmo nível de um tal efeito pode ser também observado para o γ-Glu-Cys e para o γ-GluVal, mas eles não apresentaram qualquer paladar inicial particularmente intenso e apresentam a qualidade de paladar diferente daquela de γ-Glu-Abu. O γ-Glu-Ala mostra a intensidade do efeito de conferir melhor paladar mais fraca do que aquela de γ-Glu-Val, possui um paladar ácido forte e é de difícil manipulação, pois ele requer o controle do valor de pH do mesmo. De um modo similar, o γ-Glu-Ser mostra a intensidade do efeito de conferir melhor paladar mais fraca do que aquela de γ-Glu-Val, e ele emite igualmente paladares estranhos e, deste modo é difícil de manipulá-lo.

De um modo a determinar a concentração de γ-Glu-Val, mostrando o efeito de desenvolvimento de paladar ou de tempero, cuja intensidade é idêntica àquela da solução precedente usada para o teste de avaliação sensória, ao qual 0,005 g/ dL de γ-Glu-Abu foram adicionados, foram preparadas soluções de γ-Glu-Val, cuja concentração foi variada em uma escala logarítmica de 50%, ao mesmo tempo que usando, como padrão, a solução usada para o teste de avaliação sensória, ao qual foi adicionado 0,01 g/dL de γ-Glu-Val. A concentração de γ-Glu-Val foi alterada em 7 estágio dentro da faixa de a partir de 0,0030 a 0,0337 g/dl. Quando uma amostra apresentou uma natureza ácido após cada composto de teste ter sido dissolvido na solução para o teste sensório, quando comparada com o valor do pH do controle livre de qualquer composto de teste, o valor do pH da amostra foi ajustado, usando NaOH, a um nível do valor do pH (observado para o controle) de ± 2, antes do uso prático da amostra na avaliação. Foram então apresentadas a dezoito membros do júri, estas soluções em ordem ascendente da concentração de γ-Glu-Val, e os testes de avaliação foram continuados, até que cada membro do júri julgasse que a solução de teste, tendo uma concentração específica, apresentasse o efeito de conferir melhor paladar mais forte do que aquele observado para a solução contendo 0,005 g/ dl de γ-GluAbu. Após efetuar uma certa pausa, foram apresentadas, aos mesmos dezoito membros do júri, as soluções precedentes na ordem descente da concentração de γ-Glu-Val e os testes de avaliação foram continuados, até que cada membro do júri julgasse que a solução de teste, tendo uma concentração específica, apresentasse um efeito de conferir melhor paladar mais fraco do que aquele observado para a solução contendo 0,005 g/dl de γ-Glu-Abu.

Nestes testes de avaliação sensória, pessoas que haviam experimentado suficientemente o desenvolvimento de produtos alimentícios foram usadas como membros do júri. Os resultados assim obtidos nestes testes de avaliação estão sumariados na Tabela 4, que se segue.

[Tabela 4]: Número de Membros do Júri Usados para Cada Concentração de γ-Glu-Val Examinada:

Alteração em Estímulo.	N° de Membros do Júri que julgaram que o efeito de γGlu-Val é mais alto do que aquele observado para γGlu-Abu (0,00050 d/ dl) ( N° de Membros do Júri)	N° de Membros do Júri que julgaram que a diferença no efeito entre γ-Glu-Val e de γ-Glu-Abu (0,00050 d/ dl) é incerto (N° de Membros do Júri)	N° de Membros do Júri que julgaram que o efeito de γGlu-Val é mais fraco do que aquele observado para γ-Glu-Abu (0,00050 d/ dl) (N° de Membros do Júri)
Cone, of y - Glu-Val (g/dL)
0.0030	0	0	36
0.0044	1	0	35
0.0067	3	13	20
0.0100	11	13	12
0.0150	25	6	5

0.0225	28	7	1
0.0337	36	0	0

[Tabela 5] Limiar inferior e limiar superior, em que cada membro do júri julgou que as amostras, uma comparada com a outra, apresentavam concentrações idênticas entre si

N° do membro do Júri	Método de Apresentação *	Liminar Inferior (ppm)	Limiar Superior (ppm)
1	T	55,5	55,5
2	ΐ	83,5	83,5
3	ΐ	55,5	125,0
4	?	55,5	125,0
5	ΐ	55,5	125,0
6	ΐ	125,0	187,5
7	ΐ	37,0	37,0
8	ΐ	55,5	125,0
9	ΐ	55,5	125,0
10	ΐ	125,0	281,0
11	ΐ	55,5	55,5
12	ΐ	55,5	83,5
13	ΐ	83,5	125,0
14	ΐ	83,5	83,5
15	ΐ	125,0	125,0
16	ΐ	187,5	281,0
17	ΐ	55,5	281,0
18	ΐ	83,5	83,5
19		125,0	125,0
20		83,5	125,0
21		187,5	281,0
22		83,5	187,5
23		83,5	83,5
24		55,5	83,5
25		83,5	125,0
26	1	55,5	281,0
27	1	55,5	125,0
28		187,5	281,0
29	1	187,5	187,5
30		55,5	125,0
31		125,0	125,0
32		83,5	125,0
33		56,0	83,5
34		281,0	281,0
35		55,5	83,5
36		125,0	281,0
Região de Segurança (média)	—	94,5	149,3
PSE	121.9

*: No que se refere ao método de apresentação, f significa a ordem ascendente de concentração, e f significa a ordem descendente de concentração.

1) Os casos, nos quais os valores dos limiares superior e inferior são idênticos um ao outro, correspondem aos casos, nos quais foi julgado que a diferença entre os julgamentos de “mais forte” e “mais fraco” não era determinável ou na qual a concentração de γ-Glu-Val não era claramente especificada. Por exemplo, o membro do júri N° 1 julgou que o efeito intencionado de γ-Glu-Val era mais fraco do que aquele observado para γ-Glu-Abu na concentração de γ-Glu-Val de 44 ppm (0,0044 g/ dl), ao mesmo tempo em que ele julgou que o efeito foi mais forte do que aquele observado para γ-Glu-Abu na concentração de γ-Glu-Val de 67 ppm (0,0067 g/ dl) e, deste modo, o valor do limiar inferior (55, 5 ppm) e o valor do limiar superior (55, 5 ppm) são idênticos um ao outro.

2) A “região (ou valor) de segurança)” é aqui definida como sendo a média do valor do limiar inferior e do valor do limiar superior.

O ponto de igualdade subjetiva (PSE) de γ-Glu-Val em relação a 50 ppm (0,0050 g/dl) de γ-Glu-Abu é definido como se segue: (Soma do valor de segurança do valor do limiar inferior e aquele do valor do limiar superior ) : 2.

A concentração de γ-Glu-Val (PSE) que mostra o efeito desejado, cuja intensidade é idêntica àquela observada para 0,0050 g/dl de γGlu-Abu poderia ser assumida como sendo de 0,0100g/dl, considerando o número de membros do júri mostrados na Tabela 4. Se o PSE for calculado com base nos valores do limiar superior e inferior de γ-Glu-Val, no qual cada membro do júri individual julga que os efeitos observados para estes dois dipeptídeos são equivalentes um ao outro, é verificado como sendo de 0,0122 g/dl. Em conexão com isto, a intensidade do feito que confere melhor paladar de γ-Glu-Abu foi considerada como sendo de 2,4 vezes aquela observada para o γ-Glu-Val, e, deste modo, poderia ser concluído que o primeiro é um dipeptídeo tendo uma intensidade de efeito extremamente elevada. Deste modo, o γ-Glu-Abu pode ser tido como sendo um dipeptídeo valioso, que pode ser facilmente preparado quando comparado às substâncias convencionalmente conhecidas, e que pode mostrar o melhor paladar, mesmo em um estágio inicial, quando aplicado a uma variedade de alimentos.

Exemplo 3: Avaliação do Efeito de γ-Glu-Abu sobre o Aumento do Sabor Salgado

Neste exemplo, o γ-Glu-Abu pode ser inspecionado quanto a seu efeito de aumento do paladar salgado de acordo com os testes de avaliação sensória quantitativos.

Os testes de avaliação sensória foram executados de acordo com o método que se segue. Um composto de teste, em uma quantidade, que foi considerada como sendo ótima, foi adicionado à água destilada contendo cloreto de sódio (0,5 g/dl) e a intensidade do aumento do paladar salgado do mesmo foi determinada. Quando uma amostra apresentou uma natureza ácida após cada composto de teste ter sido dissolvido na solução para o teste sensório, quando comparado com o valor do pH do controle isento de qualquer composto de teste, o valor do pH da amostra foi ajustado, usando NaOH, a um nível de valor de pH (observado para o controle ) de ± 2, antes do uso prático da amostra na avaliação.

No que se refere à classificação da avaliação sensória, o efeito foi avaliado dentro de uma faixa que se estende de -5 a 0 a 5, assumindo-se que o controle isento de qualquer composto ou a solução aquosa de cloreto de sódio tendo uma concentração de 0,5 g/dl, foi avaliado como tendo uma graduação de 0 e que a solução de cloreto de sódio tendo uma concentração de 0,75 g/ dl foi avaliada como tendo uma graduação de 5, enquanto que o número de membros do júri (n) que constituía cada júri foi estabelecido em 5. O termo “paladar inicial” significa, neste caso, que a impressão de paladar, detectada por cada membro do júri durante o termo que se estende a partir do momento de ingestão a amostra a 2 segundos depois disso, enquanto que o termo “paladar médio/ pós -paladar “ significa aquele detectado por cada membro do júri durante o termo de 2 segundos em diante, após a ingestão do mesmo, ou durante o termo que combina o período de detecção do paladar médio e o período de detecção do pós-paladar. A graduação ou classificação foi executada usando a técnica padrão linear, e de um modo mais específico, ela foi executada escrevendo-se cada graduação correspondente em uma linha 5 reta, sobre a qual pontos correspondendo a -5 ~ 0 ~ 5 haviam sido indicados.

Os membros do júri usados neste teste foram definidos como pessoas, que haviam sido engajadas no desenvolvimento de temperos para alimentos durante não menos do que um ano do período de tempo cumulativo, e que poderíam julga a diferença na titulação entre γ-Glu-Cys-Gly e γ-Glu-Val-Gly 10 é de cerca de 10 vezes (ao mesmo tempo em que é confirmada a capacidade destas pessoas em intervalos regulares). Os resultados assim obtidos estão sumariados na Tabela 6, que se segue.

[Tabela 6]

Comp.	Cone. (g/dL)	Força para Conferir Sabor Salgado	Perfil de Avaliação Sensória
Sabor Inicial	Sabor Médio/ Pós-Sabor
y -GluAbu	0.004	1.6	1.5	O paladar salgado foi aumentado, mesmo após o período do paladar inicial, e a agudez do paladar salgado foi também conferida
y -Glu- Val-GIy	0.002	0.8	1.8	A amostra perde as características como aquele do tipo de um paladar inicial

Neste exemplo, γ-Glu-Val-Gly como um tripeptídeo tendo uma alta titulação com relação à capacidade de conferir melhor paladar foi comparado com γ-Glu-Abu como um dipeptídeo de acordo com a presente invenção. Como um resultado, pode ser concluído que o γ-Glu-Val-Gly mostra uma intensidade de paladar que confere uma atividade mais alta do que aquela observada para o γ-Glu-Abu, ao mesmo tempo em que é levada 20 em consideração a concentração usada para a avaliação e as graduações resultantes. Como também mostrado no perfil de avaliação sensório, no entanto, e o equilíbrio do paladar salgado é considerado reduzido no caso de γ-Glu-Val-Gly. Por um outro lado, o γ-Glu-Abu pode aumentar o paladar salgado em um modo consideravelmente bem balanceado e, deste modo, ο γ25 Glu-Abu pode ser particularmente adequado como um peptídeo para o aumento do paladar salgado.

Exemplo 4: Avaliação do Efeito do Ácido Orgânico Usado em Combinação

Neste exemplo, o efeito do uso de um ácido orgânico em 5 combinação com o efeito de aumento do paladar salgado de γ-Glu-Abu pode ser investido de acordo com o teste de avaliação sensória quantitativa.

Os testes de avaliação sensória foram executados de acordo com os procedimentos que se seguem. “Whole Chicken Stock” com baixo teor de sal, comercialmente disponível de Ajinomoto Co., Ltd., foi dissolvido 10 em água quente, de um modo tal que a solução resultante tivesse uma concentração de sal comum de 0,48 g/ dl, e então uma quantidade apropriada de cada composto de teste foi dissolvida na solução e a intensidade do paladar salgado foi determinada. O valor do pH da solução da amostra, obtido após a dissolução de cada composto de teste, não foi diferente daquele do controle 15 isento de qualquer composto adicionado, e deste modo, o controle do pH não foi requerido. Na avaliação sensória, não foi reconhecida qualquer influência, por exemplo, de um paladar ácido. Com referência à graduação da avaliação sensória, para tomar mais claros os critérios para a avaliação, os critérios de avaliação para o paladar salgado são assumidos como se segue: o controle: 3 20 pontos; o paladar salgado observado para uma sopa preparada pelo aumento da concentração de sal a 1, 25 vezes aquele do controle: 4 pontos; e o paladar salgado observado para uma sopa preparada pelo aumento da concentração de sal para 1,5 vezes aquele do controle: 5 pontos, enquanto que o teste foi executado usando um júri de n (o número de membros do júri) = 6. A 25 graduação ou a classificação foi executada suando a técnica padrão linear, e de um modo mais específico, ela foi executada escrevendo-se cada graduação correspondente sobre uma linha reta, sobre a qual pontos correspondendo a 1 ~3 ~ 5 haviam sido especificados. Os membros do júri usados neste teste foram definidos como sendo pessoas, que haviam sido engajadas no desenvolvimento de temperos para alimentos durante não menos do que um ano de período de tempo cumulativo, e que poderiam julgar que a diferença na titulação entre γ-Glu-Cys- Gly e γ-Glu-Val-Gly é de cerca de 10 vezes ( ao mesmo tempo em que é confirmada a capacidade destas pessoas em intervalos 5 regulares). Os resultados obtidos deste modo são sumariados na Tabela 7, que se segue.

[Tabela 7]

Composto	Cone. (g/dL)	Força do Sabor Salgado (graduação)	Perfil de Avaliação Sensória
γ -Glu-Abu	0,0040	3,56	O paladar salgado como o paladar inicial foi aumentado
Uso Combinado 1	γ -Glu-Abu	0,0040	3,92	A impressão de paladar salgado como o paladar inicial foi aumentada e a espessura total da sopa foi melhorada
Ácido Láctico	0,0300
Uso Combinado 2	γ -Glu-Abu	0,0040	3,76	O paladar salgado observado durante o termo que se estende a partir do estágio de paladar inicial ao estágio de pós-paladar foi aumentado e a espessura total da sopa foi melhorada
Ácido Málico	0,0300

Foi assim verificado que o ácido láctico e o ácido málico como ácidos orgânicos eram bastante apropriados para γ-Glu-Abu e que o efeito de 10 aumento do paladar salgado de γ-Glu-Abu foi adicionalmente aperfeiçoado através do uso de ácido láctico e de ácido málico, como ácidos orgânicos, em combinação com o primeiro.

Em outras palavras, um tal efeito de γ-Glu-Abu de que o paladar salgado é aumentado, de um modo bem balanceado pode ser 15 adicionalmente aperfeiçoado através do uso de um ácido orgânico, em combinação com o dipeptídeo. Deste modo, o γ-Glu-Abu pode ser preparado a partir de materiais baratos e correntemente e amplamente usados e é um composto que podem aperfeiçoar, de um modo adicional, os efeitos que conferem paladar das substâncias convencionalmente conhecidas.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Agente para conferir melhor paladar complexo, caracterizado pelo fato de compreender, em combinação, (a) ácido L-y-glutamil-L-2-aminobutírico (γ-Glu-Abu); e (b) um ou pelo menos dois aminoácidos ou peptídeos selecionados a partir do grupo que consiste de γ-Glu-X-Gly, em que X representa um aminoácido ou um derivado de aminoácido, γ-Glu-Val Y, em que Y representa um aminoácido ou um derivado de aminoácido, γ-Glu-Ala, γ-Glu-Gly, γ-Glu-Cys, γ-Glu-Met, γ-Glu-Thr, γ-Glu-Val, γ-Glu-Orn, AspGly, Cys- Gly, Cys-Met, Glu- Cys, Gly-Cys, Leu-Asp, D-Cys, y-Glu-Met(O), γ-Glu-y-Glu-Val, y-Glu-Val-NH2, yGlu-Val-ol, γ-Glu-Ser, γ-Glu-Tau, γ-GluCys (S-Me)(O), γ-Glu-leu, γ-Glu-Ile, γ-Glu-t-Leu e γ-Glu-Cys (s-Me).
2. Agente para conferir melhor paladar de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende 1.000 a 500.000 ppm, em massa de ácido L-y-glutamil-L-2-aminobutírico (γ-Glu-Abu).
3. Agente para conferir melhor paladar de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende de 2.500 a 500.000 ppm em massa de ácido L-y-glutamil-L-2-aminobutírico (γ-GluAbu).
4. Alimento, bebida ou um intermediário usado para preparar um alimento ou uma bebida, caracterizado pelo fato de compreender, com base na massa total do alimento, bebida ou intermediário para os alimentos e bebidas, de 20 a 200 ppm, em massa de ácido L-y-glutamil-L-2-aminobutírico (γ-Glu-Abu); de 0,005 a 0,1 %, em massa, de pelo menos um ácido orgânico ou um sal do mesmo, selecionado a partir do grupo, que consiste de ácido láctico, ácido cítrico, ácido málico e ácido succínico, e de 0,01 a 0,5%, em massa, de um sal comum, assim como um veículo aceitável para alimentos e/ ou bebidas e/ ou um ou pelo menos dois ingredientes de tempero.

Petição 870180140159, de 10/10/2018, pág. 9/11
5. Método para intensificar o paladar de um alimento ou uma bebida, caracterizado pelo fato de compreender o estágio de incorporar, em um alimento ou uma bebida, uma composição que compreende de 400 a 500.000 ppm em massa de ácido L-Y-glutamil-L-2-aminobutírico (γ-Glu5 Abu).