BRPI9610977A2 - agonistas receptores hematopoiéticos multi-funcionais - Google Patents

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M Baum Charles
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G Giri Judith
L Zurfluh Linda
H Caparon Maire
L Summers Neema
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c bauer S
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Feng Yiqing
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Abstract

"agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais". são mostradas novas proteínas agonistas de receptor hemato- 5 poiético multifuncional, dnas que codificam as proteínas agonistas de re- ceptor hematopoiético multifuncional, processos para fabricação de proteí-nas agonistas de receptor hematopoiético multifuncional e processos de uti-lização de proteínas agonistas de receptor hematopoiético multifuncional.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para AGONISTAS
RECEPTORES HEMATOPOIÉTICOS MULTIFUNCIONAIS0,
O presente pedido de patente reivindica prioridade sob 35 USC parágrafo 119(e) da pedida de patente USS N°. de série 60/004.834 depo5 sitado ern 5 de outubro de 1995.
Campo da Invenção
A presente invenção refere-se a agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais.
Fundamentos da Invenção iq Fatores estimulantes de colônia (CSFs) que estimulam a diferenciação e/ou a proliferação de células da medula óssea geraram muito interesse por causa de seu potencial terapêutico para restaurar os níveis mais baixos de células hematopoiéticas derivadas de célula embrionária. Os CSFs tanto em sistemas humanos como murínos foram identificados e dís15 tinguídos de acordo com suas atividades. Por exemplo, o granulócito-CSF (G-CSF) e o macrófago-CSF (M-CSF) estimulam a formação in vitro de granulócíto neutrofíhco e colônias de macrófago, respectívamente, enquanto GM-CSF e interleucina-3 (1L-3) têm atividades mais amplas e estimulam a formação de colônias de granuíócito macrófagas, neutrofilicas e eosinofíli20 cas. IL-3 também estimula a formação de colônias mast megacariócítas e puras e eritróides mistas.
A U.S. 4.877.729 e a U,S, 4.959.455 divulgam IL-3 humana e cDNAs gibbon IL-3 e as sequências de proteína para as quais elas codificam. A hlL~3 divulgada tem serina em vez de prolina na posição 8 na se25 qüència de proteína.
O Pedido de Patente Internacional (PCT) WO 88/00598 divulga IL-3 semelhante a gibbon e humano. A hlL-3 contém uma substituição Ser8 -> Pro8. São feitas sugestões para substituir Cys por Ser, rompendo assim a ponte dissulfeto e para substituir um ou mais aminoácidos nos sítios de glicosilação.
A U.S. 4.810.643 divulga a sequência de DNA que codifica GCSF humano.
A WO 91/02754 divulga uma proteína de fusão compreendida de GM-CSF e IL-3 que tem maior atividade biológica comparada a GM-CSF ou IL-3 apenas. Também são divulgadas proteínas análogas IL-3 e GM-CSF não-glicosiladas como componentes do agonists receptor hematopoiético 5 multifuncional.
A WO 92/04455 divulga proteínas de fusão compostas de IL-3 fundidas a uma linfoquina selecionada do grupo que consista de IL-3, IL-6, IL-7. IL-9, IL-11, EPO e G-CSF.
A WO 95/21197 e a WO 95/21254 divulgam proteínas de fusão 10 capazes de propriedades hematopoiéticas multifuncionais.
GB 2 285,446 refere-se ac hgante c-mpl (trombopoietina) e várias formas de trombopoietina das quais se demonstra, a influência sobre a replicaçâo, a diferenciação e a maturação de megacariõcitos e progenitores de megacariõcitos que podem ser usados para o tratamento de trombocíto15 penia.
A EP 675.201 A1 refere-se ao hgante c-mpl (fator de crescimento de Megakacariõcito e de desenvolvimento (MGDFj, variações alélícas de Hgante c-mpl e hgante c-mpl ligado a polímeros solúveis em água tal como políetileno glicol.
A WO 95/21920 fornece o Hgante c-mpl murino e humano e fragmentos de polipeptídeo dos mesmos As proteínas são úteis para terapia in vivo e ex vivo para estimular a produção de plaqueta.
Rearrange de Sequências.de.Prgte.ína
Em evolução, os rearranjos de sequências de DNA servem para 25 um papel importante na geração de uma diversidade de estrutura e função de proteína. A duplicação de gene e embaralhamento de exon fornecem um importante mecanismo para gerar rapidamente diversidade e assim fornecer organismos com uma vantagem competitiva, especíalmente desde que a taxa de mutação basal seja baixa (Doolittle, Protein Science 1:191-200, 30 1992).
O desenvolvimento de métodos de DNA recombinante tornou possível estudar os efeitos de transposição de sequência sobre o dobramento, estrutura e função de proteína A abordagem usada na criação da novas sequências se parece com aquela de pares de proteínas que ocorrem naturalmente que estão relacionados por reorganização linear de suas sequências de aminoácido (Cunningham e outros, Proc. Naff Acad. Scí. U.S.A, 5 76 3218-3222, 1979, leather & Erfle, J. SactenoZ 172. 3837-3841, 1990;
Schimming e outros. Eor. J. Bloche/n. 204: 13-19, 1992; Yamiuchi e Minamikawa. FESS Lett. 260: 127-130, 1991, MacGregor e outros. FEES Left 378: 263-266), Λ primeira aplicação in vitro deste tipo de rearranjo a proteínas foi descrito por Goldenberg e Creighton (J. Mo/. B/of. 165: 407-413, 10 1983). Um novo terminai-N é selecionado em um sítio interno (ponto de ruptura) da sequência original, a nova sequência tendo a mesma ordem de amínoácídos que a original proveniente do ponto de ruptura até que alcance um aminoácido que esteja na ou próximo ao terminal C original. Neste ponto a nova sequência é associada, seja diretamente ou por meio de uma porção 15 adicional de sequência (ügante), a um aminoácido que esteja no eu próximo ao terminal N original e a nova sequência contínua com a mesma sequência que a original até que alcance um ponto que esteja no ou próximo ao aminoácido que era terminal N original ao sítio do ponto de ruptura da sequência original, este resíduo formando o novo terminal C da cadeia,
Esta abordagem foi aplicada a proteínas que ficam na faixa de tamanho de 58 a 462 aminoácidos (Goldenberg e Creighton, J. Mal. Bibl, 165. 407-413, 1983; Li a Coffino, Mo/. Cell. Biol. 13: 2377-2383). As proteínas examinadas representavam uma ampla faixa de ciasses estruturais, inclusive proteínas que contêm predominantemente alfa-hélice (interleucina25 4; Kreitman e outros, Cytokine 7: 311-318, 1995), beta-folha (interleueina-1;
Horlick e outros, Protein Eng. 5: 427-431, 1992) ou misturas das duas (fosforibosíl antranilato isomerase de levedura; Luger e outros. Science 243. 206-210, 1989). Amplas categorias de função de proteína são representadas nestes estudos de reorganização de sequência:
Enzimas
T4 lisozíma dihidrofolato redutase ribonuclease T1
Bacillus beta-giucanase aspartato transcarbamoilase antranilato de fosforibosila isomerase pepsina/ pepsinogenic ghceraldeido-34osfaio desidrogenase omitina descarboxilase fosfoglicerato
Zhang e outros, ffiochemisYy 32: 12311-12318, 1993, Zhang e outros, Λ/ature Struct. Biot. 1: 434438(1995)
Buchwalder e outros, Biochemistry 31: 16211630, 1994; Protasova e outros, Prof. Eng, 7: 1373-1377. 1995)
Mullins e outros, J, Am. Chem. Soo. 116. 55295533. 1994; Garret e outros.. Profem Science 5: 204-211, 1996)
Hahn e outros, Proc. Natl. Acad Sei U.S.A. 91; 1()417-1()421, 1994)
Yang & Schachman, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A.. 90: 11980-11984. 1993)
Luger e outros, Science 243; 206-210 (1989; Luger e outros, Prof. Eng, 3; 249-258, 1990)
Lin e outros, Protein Science 4 159-166, 1995)
Vignaís e outros, Protein Science 4: 994-1000,
1995)
Li & Coffino, Mo/. Ce//. Biof 13: 2377-2383) desidrogenase de levedura Ritco-Vonsovici e outros, B/ochemisdy 34:
16543-16551, 1995)
Inibidor de Enzima inibidor de tripsina pancreàtiCã básica
Cítocinas
Goldenberg e Creighton, J. Mo/.. Bto/. 165: 407413, 1983) interleuGina1beta Horlick e outros. Protein Eng. 5; 427-431, 1992) ínterleucina-4 Kreitman e outros, Citokine 7: 311-318, 1995)
Domínio de Reconhecimento de Tirosina Quinase domínio de alfaespectrina SH3 Viguera e outros, J. Mot 8ioi. 247: 6704581,
1995)
Proteína de Transmembrana ompA Koebnik a Kramer, J. Mo/. Bioí. 250 617-626,
1995)
Proteína Quimérica interleucina-4Pseudo/nons-exotoxina Kreitman e outros, Proc. Nati. Acnd. Sei. U.S.A. 91: 6889-6893, 1994)
Os resultados destes estudos têm sido altamente variáveis. Em muitos casos foram observadas atividade, solubílidade ou estabilidade substanciaimente mais baixas (dihidrofoíato redutase de E. co/ι, aspartato transcarbamoilase, antranilato de fostonbosila isomerase, gliceraldeído-3fosfata dasidrogenase, ornitina descarboxilase, omp A, fosfogiicerato desi25 drogenase de levedura). Em outros casos, a proieina rearranjada em sequência parecia ter muitas propriedades quase idênticas quanto a sua contraparte natural (inibidor pancroático base de tnpsina. T4 lisozima, ribonuclease TI, Bacillus beta-glucanase, mierleucina-IBeta, domínio da alfaespectrina SH3, pepsinogênio. interíeucina-4). Em casos excepcionais, foi observado um melhoramento inesperado em relação a algumas propnedades naturais, por exemplo, a solubílidade e a taxa de redobramento para sequências de domínio alfa-espectrin SH3 rearranjadas e a afinidade de re ceptor e atividade anti-tumor de molécula de fusão de exotoxina interleucina-4-Pseudomonas transposta (Kreitman e outros, Proc. /Vat/. Acad Set. U.S.A. 91: 6889-6893., 1994: Kreitman e outros, Cancer Res. 55. 3357-3363, 1995),
S A motivação primária para estes tipos de estudos tem sido estudar o papel de interações de curta faixa e de longa faixa em dobramento e estabilidade de proteína. Os rearranjos de sequência deste tipo convertem um subconjunto de interações que são de longa faixa na sequência original em interações de curta faixa na nova sequência e vice versa. O fato de que 10 muitos destes rearranjos de sequência são capazes de alcançar uma conformação com peio menos alguma atividade é prova convincente que o dobramento de proteína ocorre por múltiplos caminhos de dobramento (Viguera e outros, J. Mqí Bid. 247: 670-681, 1995). No caso do domínio SH3 de alfa-espectrina, o fato de escolher novos términos em locações que 15 correspondem a voltas beta-'grampo resultou em proteínas com estabilidade ligeíramente menor, mas que não obstante eram capazes de se dobrar.
As posições dos pontos de ruptura internos usados nos estudos aqui citados são encontradas exclusivamente sobre a superfície de proteínas e são distribuídas por toda a sequência linear sem qualquer desvio ób20 vio em direção às extremidades ou ao meio (a variação na distância relativa desde o terminal N original até o ponto de ruptura ê de cerca de 10 a 80% do comprimento total da sequência). Os ligantes que ligam os términos N e C originais nestes estudos estavam na faixa de 0 a 9 resíduos. Em um caso (Yang & Schachman. Proc. Natí. Acad. Sci. U.S.A. 90. 11986-11984, 1993), 25 uma porção da sequência foi eliminada do segmento original C-terminal e a ligação feita do terminal C truncado para o terminai N original. Resíduos hidrofilicos flexíveis tais como Gly e Ser são frequentemente usados nos ligantes. Viguera e outros (J. MoA Bid. 247:, 670-681, 1995) compararam a junção dos términos N- e G- originais com os ligantes de 3- ou de 4-resíduo;
o ligante de 3-resíduo era menos termodínamlcamente estável. Protasova e outros, (Prot. Eng. 7 1373-1377, 1994) usaram ligantes de 3- ou de 4residuo na associação dos N-tèrminos originais de dihidrotolato redutase de
E. co/Z apenas o liganie de 3-resídua produziu proteína com bom rendimento.
Sumário da Invenção
Novas proteínas homatopoiéticas desta invenção são repre5 sentadas pelas fórmulas:
Ri 4.1¾ Rg-Li-Ri. Ri-R2 ou R2-R1 em que R e R2 são indapencentemente selecionadas do grupa que consiste de, (l) Um potipeptidea que compreende; orna sequência de amino1Ô ácido modificada de G-CSF humano de fórmula:
X&S xaa xaa G xy Pro Ala Ser S ei- Léu 10 Pro Gin Ser Xaa
Leu teu Xaa Xxiíà xaa G lu 2C Gin vai Xaa Lys Xaa Gin Gly Xaa Gly
Ala 30 Xaa Leu Gin G ,L u xaa Leu Xaa Àl«i Τ:τχ· Tyr 40 Lys Leu
XaK Glu Xaa XH-â Vai xaa xaa dly HÍ& Ser Gly Xie S^XO Trp
Aza 60 Pro Leu Ser X<aa Pre Ser Xaa A.i.a. 70 Xaa Leu Ale Gly
Xaa Leu Sei Gin Leu His 80 Ser Gly Leu Leu ^yr Gin Gly Leu
Leu 90 Gin 4Axa Lsu Qlu Oly 11 e Ser Pro GaL Leu too Gly Fra Thr Leu
Xaa x* Leu «Λ Xaa Asp 110 Vai Ala Asp Fhe Ala Xaa Thr Xie Trp
Gin Glt-Tl Met r* Ί» L2 3.U Xaa Xaa Gly Met Ala Pro Ala 130 Leu Gin Pre Thr
^#2.44 Clv Ala Pru Ala 140 Phe Ala Ser X&a Gin X>aa Xaa Ala
Oxy 150 Gxy Vai Leu vai Ala Ser Xaa .«4&U.-. Gin Xaa 160 Phe .ueu X.aa X.&S
Ser Tyr Arg Vai Leu Xaa Xaa Leu Ala Gin Pro (SEQ ID N0:1) on de
Xaa «is porção Xaa ns posição Xaa η a posição Xaa. p.3. posição Xaa m posição Xaa m posição Xaa ns posição Xü&a no posição. Xaa na posição Xaa no posição Xaa na posição Xaa na posição Xaa na posição Xaa ns posição Xaa na posição
Arg, Cys,
Xaa os posição Trp, Glu
Xaa na pOSiçãO
Xaa na posição
Xaa. na posição
Xaa na posição
Xaa na posição
Xaa n» posição
Xaa ns posição
xaa na pççiçãs
Xaa «s posição
Xaa na pos-ção
Xaa os posição
Xaa nâ posição
Xaa ns posição
Xaa no posição
Xaa no posição
Xaa na posição
Xaa no posição
Xaa na posição
Xaa na posição
Xaa na posição
Xaa na posição
Xaa na posição
Xaa na posição
é Thr, Ser, Arg, Tyr Sly;
« Pro ou Leu;
é Leu, Arg. Tyr »« Ser;
é Phe, ser. His, Thr Pro;
0 Lys, Pro. Ser, Thr co His;
-a Cys, Ser, Gly, Ala, Xie, Tyr ou Arg;
® Leu, Thr, Pro, His. Xie au ’ Cys;
® Arg, Tyr, Ser . Thr ou Ala;
4 Xie, Pro, Tyr eu Leu;
® Asp, * Gly;
. 3Q ® Ara, Xie, Leu ou Gly·.;
« Lys $er;
® Cys «ο Ser;
è Cys ου sex-
4 His, Thr, Gly, Vai, Lys, Trp. Ala, ou Leu;
4 Pro. Gly. Arg, Asp, Vai. Ala, His, Thr;
e Glu, Arg, Phe, Arg, He ou Ala;
0 Leu eo Thr;
« Leu, Phe. Arg ΰυ Ser?
SQ 4 Leu. He, His, Pro Tyr;
0 Leu °u HiS;
4 Cys GU Ser ;
é Gin, Lys, Leu ou Cys;
s Gin, Pro, Leu, Arg Ser;
® Cys ou Ser;
104 é Asp, Gly ou Vai;
108 ® Leu, Ala. Vai, Arg, Trp, Gin Gly;
115 4 Thr. His. ^su ou Ala;
120 ® Gin, Gly, Arg, Lys His
123 θ Glu, Arg. Phe «« Thr
144 4 phe. His, Arg, Pro, Leu, Gin ou Glu;
146 4 Arg ou Gin;
147 0 Arg ou Gin;
156 0 His, Gly au Ser;
15.9. é Ser. Arg. Thr. Tyr. Vai 0« Gly;
162 « Glu. leu. Gly ou Trp;
163 4 yaxx □xyj Arg Ala;
169 4 Arg, Ser, Leu. Arg »u Cys;
170 4 His, Arg ©u Ser;
em que opcionalmente 1-11 aminoácidos provenientes do terminal N e1-5 do terminal C podem ser eliminados; e em que o terminal N está associado ao terminal C diretamente ou por meio de um ligante capaz de associar o terminal N ao terminal C e tendo novos términos G e N nos aminoáctdos;
38-39 59-60 99-100
39-40 60-61 123-124
40-41 61-62 124-125
41-42 62-63 125-126
42-43 63-64 126-127
43-44 64-65 127-128
44-45 6t>-66 128-129
45-48 66-67 129-130
46-47 67-68 130-131
47-48 68-69 131-132
48-49 69-70 132-133
49-50 70-71 133-134
50-51 71-72 134-135
51-52 91-92 135-136
52-53 92-93 136-137
53-54 93-94 137-138
54-55 94-95 138-139
55-58 95-96 139-140
56-57 96-97 140-141
57-58 97-98 141-142
58-59 98-99 ou 142-143
(H) Um polipaptídeo que compreende: uma sequência de amu noácido NL-3 modificada da fórmula:
<1:77777 Meo Thr Gin S Thr Thr Ser Leu Lys 10 Thr Ser Trp Vai Asm 15
Cy$ Xaa xaa Λ V Xaa Xaa Xaa Xaa xaa 25 Xaa XaaT Xaa Xaa Xaa 30
xaa X&a X&& 3S Xaa Xaa Xaa Asa Xaa 40 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 45
X-ta
Xââ x&« xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xas Xas
Xae
X&e xaa
Xaa xaa
Xaa
Xaa
Xaa x&a xaa
Xaa
Xás Xaa
Xaa bs
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
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Xaa
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Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa xaa §5
Xaa
100
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa xaa
10S xaa toe
Xaa
Xaa xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Xaa
Sl.n
Gin
Thr
Thr
Leu.
Ser
Leu 13 0
Ala
Fhe
Xie tSEQ U> NO:2);
wherein x«a na posição
I?
Xan na pasíção U ú Asn, Kis, Leu,
Xaa na p&síçâo XS á Mat, Pha, 21«,
Xaa na posição 2$ é 11«, Cys, Gin.
Xaa na posição 21 <· Asp, Pha. Ly®,
Thr, S®r ou Vai 7
Xaa na posição . 22 & Giii, Trp, ?ro,
Leu, Vai OiJ Giy ·.
Xaa .na posição 23 é 11*, Vai, Ala,
L*u, Sar, pu Ar<
Xaa ns posição a4 ê XX®, Giy, Vai,
5U& ,ns pn&içâ» 25 ê Thr, Mi.*, Cly,
Xaa na posição 2$ é 8.1«, Thr, Ph®
Xaa ns posição 27 é L«ü, Q1 y, Arg,
Xaa ns posição 23 é Lys > Arg, Lesu,
Xaa na posição 25 é Cl», Asn, L«ü,
Xaa os posição 30 é Pre, Mia, Thr,
Xaa na posição 3i é Pr», Asp, wiy,
Xaa na posição 32 è L«u, Val< Arg,
é Sar, Ly®, Gly, Asp, Met
Arg
Ala
11«, Phe , Arg, Gly, * <*iu, Arg, > Ar^x Ala,
Ser Ala
Gly, Trp
Arg. Ssr. Gin, Arg, Gly, Arg, Thr, &«
QX»
Pr©..
Cly,
Xrg,
Ala
A®p,
Arg,
Gin
Asa <*lli,<JU· AX'g;
Gin;
Cj'S;
Ala;
Qly, Glu, Glzi, Astn
Pre
Mis
Ly®,
Fh®, ou
Asp< As», Qla,
PX«.
ou
L»u,
Pr*, ou
A.U, ou ou Ala
AU,
Pr», Vai ou β« Vai;
Gin $«r, Leu, ou Ly»;
Lw,
Gly,
Ala, ou qxU;
1'1
Xaa π a posição 3 3 é Pr®. Leu, Gin, Ala, Th-,OU’ G1U;
Xaa n3 posição 34 ώ, Leu, Vai, Gly, Ser, Lys, Giu, Gin. Thr,
Arg, Ale, Ph®, lie o U Met ;
Xaa ns posição 3 5 e Leu, Ala, Gly,. Asn. Fm, Gin, ou Vai;
Xaa na posição 3 5 ώ Asp, Vau , pu Vai;
Xaa posição 37 é Ph®, Ser, Fm, Trp, 0« Ile:
Xaa ns possção 38 é Asn, 0« Ala;
Xaa*ta posição 40 è Leu. Trp<ç}iJ Arg;
Xaa ss po-síçâft 41 ê A.en, Cys, Arg, Leu, His, Her, βυ p.ro;
Xaana posição 42 é Gj.y, Asp, Ser, Cys, Asn, Lys, Thr, Lay,
Vai, Glu. Phe, Tyr, 11®, Met py Ala?
Xaa.-,Ã posição 43 é Glu í Asn, Tyr, Leu, Fh®, Asp, Ala, Cys,
Gin, Arg, 3k. Gly o: s.i Ser $
Xaa na posição 44 é Àsp, Ser, Lau, Àrg, Lys, Tht, Met, Tip,
Glu, Am, Gin, Ala ou Pr®;
Xaa;>3 posição 45 é Gin, Pro, Fh®, Vai, Met, Lav, Thr, Lys,
Trp, Asp, Asa, Arg, 5®r, Ala, Ile, GluOU His,-
Xsjs. posição 48 é Asp, Phe, Ser, Thr, Cy®, Glu, Asn, Gin,
Lys. His, Ala, •ryr. 11«, Vaiou Gly γ
Xaa oa posição 47 ê 11®, Gj.y y lai, Sar, Arg, Fro, 0« His;
Xaana posição 45 é Leu, Ser, Cys, Arg, Ila, His, Fha, Gin,
Lys, Vhr, Ala, Mat, Vai qç Asn;
Xaa posição 43 ό Met, Arg, Ala, Gly, Pro, Asn, Kis,0!.( Asp
Χλλ at position SO s Gin, Leu, Thr. Asp, Tyt, Lys., A«h, ser.
Ala, lie. Vai His, Phe, Met o u Gin;
Xaana posição 51 é Aan. Arg, M®t, Pm, Ser, Thx, ou xis;
Xftfins posíçãc 52 é As rs. Hi.s, Arg, Leu, Gly, Sei-, qç Thr;
Xaa Ha posição 53 é .Leu, Thr, Ala, Gly, Glu, Pm, Lys, Ser, cu Mat;
Xaa posição 54 é Arg, Asp, Ile, Ser, Vai, Thr,. GIn, Asn,
Lys, Kis, Ala otí Lev Ϊ
X&j& Π-3 posição 5S Arg, Thr, Vai, Ser, Lau, Gly ,-
Xa.es n a posição 58 é Pro, Gly, Cys, Ser, Gin, Glu, Arg, His,
Thx, Ala, Tyr, FH®, Leu, VaiOU Lys;
Xaana ps&içào 57 ê Qjy,
Xaa ns posição
Sá õ
Leu, S«r, Asp, Arg, Gin, Vai,OU Cys;
Xaa n« çosíçsp »% à Glu Tyr, Mis. Leu, Pro. <; i a Arg;
Xaa na posnçâo 6C é Ala. S®í, Pre Tyr, Asr.. Oli η·ψ.~.
Xaa na posição 61 ê Phe , Asn , du Pr*, Lyr. Arg, OU Ser;
Xaa na posição fia é Asn,. His, Val, ÀT5. Pr*. Thr, Asp. oy llo;
Xaa os posição S3 v Arg. Tyr, Trpt Ly«> Ser. Hrs. Pro,ou Vai;
Xaa r>a posição S4é Ala. Asn, m. Ser, OU Lys.'
Xaa fí» PosfÇà» £S é Vai., Thr. Pro. His, Leu. Phe, Ql! Ser;
Xaa rta posição Sã ê Lys, Lie. Arg. Vai. Asn, Stu. ou Ser;
Xaa. na posição S7 ό Ser, Ala, phe. Vai. Gly, Asn, 11«, Pro. ou His
Xaa !':S pa&Mo δ»®5 Leu, Vai, Trp. Ser, 11«, Phe, Thr.OU Hrs;
Xaa na posição fiS « Gin, Ala, ti7£· :φ Thr. J Arg, Trp, dy, βίί À0& ¢3.
Xea na posição 7ôè Asn, Leu,. Vai. Trp. Pro, ÇU Aia;
Xa& na posição 71 Ô Ala. Ket. Leu, Pr«, Arg, Glu, Thr, Qin,
Trp. OU As π ;
Xaa fia posição 72 é S«r, Glu, Met, Ala. His. Asn, Arg,ou Asp;
Xxa f-S posição 7 3 é Ala, Glu, Aep. Leu. Ser, Gl>. Thr. <ju Arg;
Xaa ns posição 74 è 11». Met. Thr.< Pro, Arg, Gly; , Ala:
Xaa ns postção 7¾ é Glu, Lys, Qly, Aap. Pro, ‘Prp, Arg. Ser,
Gin., * u
Xaa na posição 7S $ Ser, Vai. Ala. Asn. Trp, Glu. Pro. sly, OU Asp;
Xaa Πά posição 77 ê XI», Ser. Arg. Thr, 0 u Leu;
Xaa ns posição 7P é Leu. Ala, Ser. 51«. Phe. Gly, ou Arg;
Xaa SB posição 79 é Lys. Thx. Asn, fciet..· Arg, He. Gly, ou Asp,
Xaa fia posição SO ê Asn. Trp. Vai, Gly. Thr. Leu > Giu.uu Arg;
Xaa no posição 81 è Leu, Gin, Gly. Al*. Trp, Arg, Vai.ou Lye;
Xaaoa posição 82 ê Leu, Gin, Lys, Trp. Arg Asp, Slu. Asn.
His. Thr, Ser, Ala, lyr, Ph®, lie. Μβ«
Si é Pro, Ala, Thr, Trp, Arg. gg Met;
84 è Cys, Glu. Gly, Arg. Met. »u Vai;
85 è Leu, Asn, Vai, oo Gin;
Pro. Cye. Arg. Ala. ou Cys?
Xea ne paaiçâe
X«iw posição
Xaa*a posição
Xaa «a Psasçao
Xsa na posição 87 £ Leu, Ser.- T’rp, oo Gly;
Xaans posição «8 è Ala, Lys, Arg, Vai. o u Trp ;
Xaaoa pfSiçàn S9 & ’Thr, Asp, Cys, Leu, Vai, Glu. His. Asn.ou Ser
Xa.a na posição PÔ è Ala. Pro. Ser, Thr. Gly, A&p, lie. oy Met;
Xoa ΐΊ3 CCí&tÇ^O 91 é Ai a, Pro, Ser Thx, Phe, Usu. Àsp. Oli His;
Xaa f>Ã ttosJçào $2 é Pro, Phe. Ar®, Ser, i»ys. His j A1&, Gly, Xle
üftU ;
Xãã na ^ÍÇ3Q . S3 é . Thr, Astp, Asv. Pro. ΑΙλ^ Leu, ou Arç;
Xsss. na í>£&(Ç BÍ3 .. 94 é Axg, lie. Ser, G1 u, Leu, Vai, Gl.n, Lys, H1&.
AU, od Pro;
Xaa n.$ posjçào s His, Gin, Pro, Val. £xfô& .>. Gly. Thr, Asn,
lys, Ser, Ala, . Trp, Phe, XX®, ou Tyr;
Xa& r>a posição 9á s - Pro, Lys, Tyr, Gly, X.X &«, OG -t-h
Aaa rss prsíçss 97 é XI®, Vai, Lys, Ala, OG Astj;
Xaa to posição $S á > H.1S, Ile, Asn, A«p, Ά1&, Thr.
Glu, Gin, Ser. Phe, Mar., Vai, Lys, Arg, Tyr o« Pro;
Xaa na pa&tçâo $c ê Xie, Lew, Arg, Asp, Vai, Pro, * 31 n.
Giy, Ser, Ph®. OU' Hís;
Xaa na posição IGÍí é Lys, Tyr, Leu , His , ÀX®, 11®,, Ser < Gin, 3® Pro
Xátâ to posição 191 é Asp,. Pro, Meç Lys > Pis. Thr, Vai,
Tyr. ôlu. Asn, Ser, Ala, Gly,. lie. Leu, o v Gin *
Xaa na pastçâo 192 υ Gly, Leu, Giu , Lys , Ser, iyr. ou Pr»;
Xaa na posição 103 4 Asp, o® Ser,·
Xaa na posição 194 è Trp, Vai, Cys < Tyr , Thr, Met, Pro, Leu.
Gin, Lys, Ala. Phs, õu Gly;
Xaa -na posição 105 é Asn, Pro, Ala , Phe , Sar, Trp, Gin, Tyt,.
Leu, Lys, 118., Asp, ou His;
Xaa na posição é Glu, Ser, Ala , Lys , Thx Ile, Sly, ou Pro;
Xaa to posição 103 X Arg, Lys, Asp . Thr, 11®, Glr, &Í.&, ί3·όΓΐ
Ai* Pro;
Xaa Xaa na posição 10$ na posição 11C Ser, ou Trp; é Arg, é Ly», Thr. Ai.a, Pro, Asrs, Cílti. { Thr, Tyr, Leu, Leu, Arg, Ser, Gin, or Gly; His, Glu,
Xaa to pos-çâo UI á Leu, 11«% &rg, Asp. o® Met;
Xaa na posição :<í Thr, Vai, Gin, Τ'/χ ( Glu. His, Ser. ou Pha;
Xae na posição 113 ê Phs, Ser, Cys, ais, Gly, Trp, Tyx, Asp,
Lye, Leu, lie. Val. «u Asn;
Xaa na posiçèc ^14 é Tyr, Cys, His, X‘rp, Ax®, ου L®u;
Xaa na PQ£:CBO é L«u, Asri, Vai, Pro, Axg, Ala, H1S, Thr,
OU Men;
Its is Lye, Leu, Pre. Thr, ®t. Asp, V«l, Olu,
Ser . Asn< Ki*, Ala, Tyr, Phe, Gi In, ou lie;
na posição 117 è Thr, S*r, Asn, lie, Trp, Lys, OU Pr»;
Xa.a na posição 11S é Leu, Ser, Pro, Ala, Glu, Oys, Asp, OU Tyr;
Xaa na posição 119 é Glu, Ser, Lys, ?ΐχ>< !λ«< Tyr, OU Arg ;
na posição 120 e Àen, Ala, Pro,. Leu, His. Vai, ou Gin;
na posição 121 é Ale, Ser, Xie, Asn, Pre, Lys, Ass*f OU Cly;
X*.a na posição ->-2^ é Gin, Ser, Met, Trçs, Arg< Phe, Pr*, His,
rie,- Tyr, OU Cys.
na posção 123 & A1&, Mst, Glu, Pis, Ssr, Pr*» Tyr, OU L®u;
em que opcionalmente de 1 a '14 aminoácidos podem ser eliminados do terminal N e/ou de 1 a 15 aminoácidos podem ser eliminados do terminal C; e em que de 0 a 44 dos aminoácidos designados por Xaa são diferentes dos 5 aminoácidos nativas correspondentes (1-133) de interleucina~3 humana; e em que o terminai N está associado ao terminal C diretamente ou através de um ligante (L2) capaz de associar 0 terminal N ao terminal C e de ter novos términos C e N nos aminoácidos;
26-27 50-51 85-86
27-28 51-52 86-87
28-29 52-53 87-88
29-30 53-54 88-89
30-31 54-55 89-90
31-32 64-65 90-91
32-33 65-66 91-92
33-34 66-67 92-93
34-35 67-68 97-98
35-36 68-69 98-99
36-37 69-70 99-100
37-38 70-71 100-101
od-39 71-72 101-102
39-40 72-73 102-103
40-41 82-83 eu 103-104;
41 -42 83-84
49-50 84-85
b (Hi) Um poüpeptídeo que compreende; uma sequência de aminoácido de ligando c-mpl humana modificada da fórmula:
Ser Prm^aPrc/?roA.ra Cyra AspLeuArgV&lLeuSerLycLeuLeuArgAspS er
5 1015
HxsV&lL&ultiessrArgLsuSerGlcCysProGluyalRispruLeuPraThrmrc:
2D 25 3035
V alX»euL.euPraAl aValAspPheSerXd&uG lyGluTrpLys ThrGl nMetGluGlu
45 5055
T hr Ly s A1 a G j,nAsp I x eLeu 01 y A1 aV a 1 Th r LeuL euLeuG 1 uG lyv a iJKe t. A1 á €0 S5 7075
AlaArgGlyGlnLeuGlyProThrCysLeuSerSerLeuLeuGiyGlnLeuSerGly
S0 85 93§5
GlmvalArgLeuLeuLeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeuGlyThrGlnXaaXaa>tes •100 105no
XaaGlyArgThrThrAlaHisLysAspProÀ.
aPheLeuGer PheGlnH i.s
130
LeuLeuAr g-G lyLysva I ArgPheLeuMet Leu 'Va 1G lyGlySezThrLeuCy s Va.l 135 140 145150
Ar gArg A á a Pro Pr cT hr T hrAl a V a .1 Pr o S er Ar gThr S er Leu v & iLeuThr 1 eu
160 lês17φ
AsaGluLeuProAsuArgThrSerGlyLeuLeuGiuThrAsilPheThrAlaSerAls *75 18Q IB5190
ArgThxThxGiy SexGiyLeuLeuLysTrpGlftGloGlyPhgArgAla.LysjX lePxo IS 5 2GO205
G lyLeaL euA sn Q1 nThrSerArg» exLe uAspGlnx 1 e PxoG lyiy r LeuAsnArg 21G -215 220225 .w vt. eH j. t u **uL eu Le uAs tic u. yOtxr Ax gu ly t eti P x,e p r oG 2. vP x os e r A x g Ax g3? q x 230 235 240245
L®uG IvAlaProAsplX e S e rSer GlyThr SerAspThrGly SerLeuProPro Asn
250 2SS 2602§g
LeuGlnProGlyTyrSerPrcjSerPraThrHlsPrcProThrGlyGlnTxírOhrLeu
270 275 250285
PheProLeuProProThrLeuProThrProValValG IxiLeuM isPr oLeuLeuPr o
290 295300
AspProSexAl-aPrc’rhrPreThxProZhrserPrayeuLeuAixnThrseriyrThx 305 310 315320
HisSerGlnAsnLeuSerGInGluGly i£EQ ra NO;3}
325 33033'2
153 em que
Xaa na posição Phe, Trp, 112 é deietada ou ; Met; Leu, Ala, Vai, XI e, Pro.
xaa na posição 113 é daletadQ ou ' Pro, Phe, Ala, Vai, Leu,
Xie, Trp, Met.;
Xaa na posição 11^ édetetadoou Pro, Phe, Ala, Vai, Leu,
lie, Trp, Met;
Xaa ns posição 115 Gin, Gly, Ser, Thr, Tyr,
ÃSH, em que α terminai N está associado ao terminal C díretamente ou através de um ligante (L2) capaz de associar o terminai N ao terminai C e de ter novas términos C e N nos aminoácidos;
26- 27 28-29 30-31
27- 28 29-30 32-33
26-27 51-52 109-110
27-28 52-53 110-111
28-29 53-54 111-112
29-30 54-55 112-113
30-31 55-56 113-114
32-33 56-57 114-115
33-34 57-58 115-116
34-35 58-59 116-117
36-37 59-60 117-118
37-38 78-79 118-119
38-39 79-80 119-120
39-40 80-81 120-121
40-41 81-82 121-122
41-42 82-83 122-123
42-43 83-84 123-124
43-44 84-85 124-125
44-45 85-86 125-126
46-47 86-87 126-127
47-48 87-88 ou 127-128:
48-49 88-89
50-51 108-409
(IV) Um poiipeptídeo que compreende: uma sequência de aminoácido hlL-3 modificada de fórmula:
Ala 1 Fru Met Thr Gin 5 Thr Thr Sei’ Leu Lys 10 Th.r Ser Trp Vai Asn 15
Cys Xaa Xaa Xaa Aa? *> «6 .M. Xaa Xaa Xaa Xaa xaa 25 Xaa Xaa xaa xaa Xaa 30
Xa& Xaa Xaa. Xaa 35 Xaa Xaa Xaa Asn Xaa 40 Xaa Xaa xaa Xaa 45
Ϊ8
Χ&& Xae Xsi& Xaa xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 55 Xaa Xsa xaa Xaa £0
Xaa ,xaa xaa X A.a xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 70 Xaa X&& Xaa Xaa 75
Xaa Xãã X&e X&A xaa. S3 xaa Xaa Xaa xaa Xaa 85 Xaa Xaa xaa Xaa 90
xaa X3.& Xaa Xaa xaa &5 Xaa Xaa Xaa xaa Xaa 100 Xaa X&sSt Xaa Xa*i Xaa 105
Xaa Phs Xact Xaa Xaa 110 Xaa Xaa Xaa xaa Xaa 115 Xaa Xaa Xaa Xaxâ Xaa 120
Xaa X&& Xaa ΚΪΙΠ Gin 125 Thr Leu Ser Leu 130 Ala (S£Q Ila ' áD Hie »0:2 5
ίμϊ« ‘ Xaa ns JSOSiOBü 17 is s«y, Lyss, C :ly, Ajsp, Hex, «In, O>J Arg
Xa« pOStÇBÍJ 1δ é Ítóís, Hís, Leu, 11«, FM, Arjj, o Li win;
Xsa 83 pO-Siçáô 19 é Meo < Pr.», He, Asg. djL Ala, OU Cys;
Xaa 83 posição 2δ è li®. Cy«, Clnx Oiu, Arp, Pr», QU A.U;
Aaa na posição 21 è Aap, Ph«< Lys, Arç, Ala, «ly, clu, «In , A®n,
rhr, Ser 0 ü Vai;
Xns na pssíçào 21 è I** > Ίΐρ, ?£<>,, g«r, Ala, Pis, Assp, Asn , win.
Leu, Vai Qçi Gly;
Xaa 83 posição 23 é 31« > Vai,· Ala, Sly, Txp. Lyss, PM.
Lí©Lí x ,
Xaar.a posiçáe i 24 £ n«. «iy. Vai, Arg, S«r„ FM, Leu ;
Xaa na posição 25 é Thr, Hi a. Sly, Cln, Arp, Pí o, oü Ale
Xaa na posição 1'6 s HU, Thr, Phe, «Ay, Asg, Ala, ou ΊΧρ;
Xa& na posição 2 é L®u, Cly< ÂX·^^ Thr, Ser, or Ala?
Xan na posição 2S â Lys, Gin, Gly, Pro, Vai OU
Xaa na posição 2S è Gift, Asn, Leu, Pro. Arg, OU Vai;
posição
Xaa è
ΠΒ δ
Thy
Giy,
8i«
Asp, Gin, Ser, Leu, oii I,ys,·
Xaa 03 pOSiÇâO 31 é ?**, A$P, Gry, A1&, Arg, Leu, py <51r>.-
Xaa na posição 32 έ Leu, Vai, Arg, Gin, Àsn, Cxy. Ale, ou Glu
Xea na posição 3.3 é Fro. Iau, Gin, Ala, Thr,ou Glu;
Xaa rss possçâo 34 è Leu, Vai, Gly, Ser, Lys, Qlu, Gin, Thr,
Arg, Ala, Pm, XI* OLÍ -:M«t-í
Xaa na pn&içãa 35 é Leu, Ala, Gly, Asn, Pro, G.ln, Vai;
Xaa na posição 3g ê Asp, Leu, W vai;
Ass na posição 3? é Fm, Ser. Pro, Trp,^^ lie;
Xaa na posição 38 ê As.tX, Ala;
X«i na posição 4S é Leu, Trp, ou Arg;
Xaa pa posição 41 é Asrs, Cys. Arg, Leu, His, Met, qi.i Pre;
Xaa na posição 42 « Gly, Asp, Ser, Cys, Asn, Ly», Thr. Leu,
Vai, <51 u, Fh®, lyr, 11«, Píer Ala;
Aaa na posição 43 @ Glu, Asn, lyr. Leu, Fhê, Asp, Ala, Cys,
Gin, Arg, Thr, Sly eu Ser1
Asa ns posição 44 s Asp, Ser, Leu, Arg, Lys, Thr, Mer, Trp,
Glu, Aar*, Cl», Ale ou Pre;
Xaa, na posição 45 é Gift, Pr», Phe, Vai, Mar, Leu, Thr, Lys,
Txp, Arp,
Asfc «
na posição
Arg- Set, Ale, Xie
Uys>
Hi. a.
A»p, Phe, Ser, Thr, Cy®;
Tyr, Tie, Vai ou Sly;
Xaa r>a posição 4T <ã XX», Gly, Vai, sex. Arg, Pre, ou Hi.s;
Xaa rus posicâo 4 S © Leu, Ser, Cys. Arg, XX®, Hie, Fh®, Glu,
uy s, VAr, Ada, Met, Vai ou Asn;
X&a na posição 4S è Met, Arg, Ala, G-y, Pre, A»n, His, oy As;
Xee oa posição Sfi é Glu, Leu, Thr, Asp., Tyr, Lye, Asn, Ser,
A-*.a, are.. vai, Hrs, Phe, Met ou Gin;
Xaa na posição si 4 Asp. Arg·, Met, Pro, set, Thr, ou H£Sj!
Xae P3 posição 52 é Asn, His, Arg, Leu, Gly, Ser, oil Tltr*
Xaa 03 posição S3 ã Leu, Thr, A;a, Gly, Glu, Pre, Lyss, Ser,o:
Xaa na posição 54 é Arg, Asp. XI®, Sex, Vai, l^r, Gin, As»,
Lys, His, Ala Oíi La»;
Asa na posiçSa 55 P Arg, Thr. Vai, Sex, Leu, ou sxy?
Xea na po&içào 55 ê i’TOrf i*Xy> Cys, ííltVf <j!u. Hi#,
Thr. Ala. Tyx, <3V Lys;
Met ,20
Xaa ns posição 5? é Asr» nu Gly;
Xaa na posição 58 <ã Leu, Ser, As», Arg, 01«, Vai,ou Cya;
Xaa os posição 5$ è Glu lyr, His, Loti, Pr», ou Arg;
Kaa na posição 60 Ã Al», Ser, Pro, Tyr, Asrs. ou 'Thr;
Kaa oa posição 81 é Ph®, Asn, Giu, Pr®, Lys, Àrg, <w S®r;
Xaa oa posição é Asn, Bi®, Vai, Arg, Fr=>, Thr, Asp, ou He;
>iaa na posição §3 é Arg, Tyr, Trp, Ly®, s»r, g£&í Ργ®, ou Va1 ,
Xaa os posição í-i è Ala, Asn, Pro, Ssr, ou Lys;
Xaa na pos-çâs 6ò é V.A1, Ifer, Fro, His, Leu, Pho, C1j Set;
Xaa ns posição SS è Lys, 1'le, Arg, Vai, Asn, Giu, or Ser;
Xaa na posição 67 e Ser, Ala, Fha. Vai, Gly, As», ü®, PrO( 0{j aii?
Xaa na posição €8 é Lau, Vai, Trp, Ser, n«, Ph®, Thr, ou Hxs;
Χαλ na posição δ* * Gin, Ala, Pro, Thx, Giu, Arv, Trp, Gly, ííu Leu
X«a na posição 70 é Asn, Leu, Vai, Trp, prs>. οι,ι Ala;
Xaa na posição 71 é Ala, Mar, Lau, Pr», Arç, Glu, Thr, Gin,
Trp, ou As»;
Xaa naposiçes 72 é Ser, Glu, Het, Alã. Sis, Asn, Arg, ÔL| Asp;
Xaa na posição 71 é Ala, Glu, Asg>, Leu, Ser, Sly, Thx, «u Axg;
Xaat na posiçàs ?4 é Jl»t, 'Thr, Pr», Arg, Gly, Ala;
Xa» na posição 7$ è «1», Lys, Gly, Asp, Pro, ττρ^
S1A, OU Leu;.
Xa» na posição 7$ è Ser, Vai, Ala, Asn, Trp, .Glu.x Pros, ciy, PU Asp
Xaa no posição 7^ è Ile, Ser, Axs Thr, 0 U L«u;
Xaa na posição 7§ ά Leu Ala, Ser. Glu, Phs, y t Arg;
Xaa na posição £ Lys, Thr, As» Mar, Arg. Xl^x «ly. 00 Asp;
Xaa na posição 8P è Asn, Trp, Vai, Gly. Thr, L>eu 01», 0U Arg;
Xaa ns posição 81 é Leu, Gin, Giy, Ala, Trp, Arg, v«i.. 00 Lys;
Xaa na posição S2 Leu, Gin, Lya, Trp, Axg, Asp, GXu, Asn,
His, Thr, Ser, Ala, Tyr, Ph®, Ile, H«t o u Vai;
Xaa na posição S3 é £r<3.< Ala, Thr Trp, Ary, CU Met;
Xa® na posição 84 15 Cys. Giu, eiy. Arg Met, OU Vai;
X»3t ns posição SS é Leu Asn, Vai, <3^ Q 1»;
Xaa na posição 8$ é Pr», Cys, Arg, Ala o u Lys;
Xa» na posição 87 é L ®U4 Ser, Trpf OU 01y;
Xaa na posição 8S é Ala, Lys, Axg, Vai OU 'Prp;
Xaa na posição §9 é Thr, Asp, Oys, Leu, Vai, G2u. Hi®, Asa
Xai na posição 30 è Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Asp, He, Met;
Xa< na posição 81 è Ala, Pro, Ser, Thr, Fhe, Leu, Àsp, ' 2ίί&;
Xa* no posição §2 é Pre, Pha, Ara, Ser, Lys, His, Ala, Giy, ιι®
Seu 1
Xaa na posição S3 é Thr, Asp, ser, Asn, Pr®, A&a, Leu, Arg?
Xaa na posição 94 è Arg, Ile, Ser, Glu, Leu, Vai, Gin, tys. Mis
Ala. Frm,
Xaa na posição 95 é His, Gin, Pro, Ara, Vai, Leu, Gly, Thr, Asn,
Ly®:, Sar , Ala, Trp, Fh®, 11®, Tyx;
Xaa na posição 96 é Fro, Lya, Tyr, aiy, iu, ' fti;
Xaa na posição 97 é lie, Vai, Lys, Ala, A»n?
Xaa na posição 98 è Hís, He, Asn, Leu, Asp, Ala, Thr,
Glu, Gin , Ser, She, Met, Vai, Lys, Arg, Tyr Pro;
Xaa na posição 99 é X1 <£ ♦ Vi®..1 > Frc, Gin,
Gly, Ser . Fhe, Hi®;
Xaa na posição 13C á ky». Tyr, Leu, Híe, Arg, IIe. Ser, Gin,
Xaa na posição 1QI é Asp Fro, Hat, Ly®, Mis, Thr, Vai,
Pro,
Tyr, Glu
Gin,
A»n, Ser, Ala, Gly, 12«, Leu
Xaa ng posição 292 è Gly, Leuf Glu, Lys, Ser. Tyr, Pro?
xaa ns posição 193 Ò Asp, Ser;
Xaa na posição 1S4 é Trp, Vai, cye. Tyr. Thr, Met, Pro, Leu,
Gin, Lys, Ala, Ph®, Glyj
Xaa na posição 105 é Àsn, Fro, Ala, Phe, Ser, Trp, Gin, Tyr,
Leu, Lys·, lie, Asp, His;
Xaa PG pOSiÇâO m é Glu, Ser, Aia, Lys, Thr, lie, Cly, p£-o;
Xaa na posição 108 ê Arg, Lys, Asp, Uu, Thr, 11®, Gl®, His, ser,
Ala or Pro;
xaa na posição .199 ό Arg, Thr, Pro, Qlu, Tyr< . Leu, Ser, ciy?
X&a ns posição lie é Lys, Ala, Aen, Thr, Leü, Arg, Gin. Hi®, Qlu,
Ser, or Trp?
xaa na posição 121 é . L®u, Ile t Arg, ÂSp, er Met;
Xaa na posição 312 é Thr, Vai, Gin. Tyr, Glu, His, Ser, Phe?
xaa na posição 115 «é Phe. Ser, Cys, Mis, «ay. Trp, Tyr, Asp,
Lys, Leu, Ils, Vai A®n?
X&3 na posição é lyr, cys. Hrs, S®r, Trp, Ar§, OU LfiU;
na posição 115 & Leu As n Vai. Pro, Arg, Ala, His. Thr,
Trp, Met;
Xaâ na posição 11« Ò Lys. Leu. Pr», Thr, Met, Asp, Vai, Glu,
Arg, ’Lrp. Ser , Asn, His, Ala, Tyr, Phe, Gin, ou lie;
na posição 117 é thx. Ser, Asn, He, Trp, Lys, OU Pro;
Xes na posição 118 e Leu. Ser, Pro, Ala, olu, eye, Asp, OU Tyr;
Xa« na posição 119 é . Olu, Ser. Uys, Pro, Leu, Thr, Tyr. OU Arg;
Xaa na posição 12 S è Asn, Ala, Pro. Leu, His, Vai, ou Gin;
x*a na posição 121 é Ala. Ser, Xie, Asn, Pro, Uys, Asp, <ju Gly;
Xaa na posição 122 è Gin, Ser > Met, Txps Arg, Phe, Pro, His,
ii«, Tyr, OU < íys
at position 123 è AX& > Het. GlU; Ser, Pro. Tyr, OU Leu;
em que opcionalmente de 1 a 14 aminoácidos podem ser eliminados do terminal N e/ou de 1 a 15 aminoácidos podem ser eliminados do terminal C; e em que de 1 a 44 dos aminoácidos designados por Xaa são diferentes dos aminoácidos correspondentes de mtedeucína-3 humana nativa (1-133);
ou (V) um fator estimulador de colônia; e em que L-j é um ligante capaz de ligar R-| a Rg;
com a condição de que pelo menos ou R^ é selecionado entre o polipeptídeo de fórmula (I), (H) ou (111); e a dita proteína hematopoíética pode opcíonalmente ser imedlatamente precedida por (metionína^). (alanina'·) ou (metionina‘^< alaruna 'I):
Os pontos de ruptura mais preferidos nos quais podem ser obtidos o novo terminal Ceo novo término N no polipeptídeo (I) acima são; 38-39, 39-40. 40-41, 41-42, 48-49, 53-54, 54-55, 55-56, 56-57, 57-58, 58-59, 59-60, 60-61. 61-62, 62-63, 64-65, 65-66, 66-67, 67-68, 68-69, 69-70, 96-97, 125-126, 126-127. 127-128, 128-129, 129-130, 130-131, 131-132, 132-133. 133-134, 134-135, 135-136, 136-137, 137-138. 138-139, 139-140, 140-141 e 141 -142.
Os pontos de ruptura mais preferidos nos quais podem ser obtidos os novos terminai Ceo novo término N no poiipeptídeo (1) acima são;
38- 39, 48-49, 96-97, 125-126, 132-133 δ 141-142.
Os pontos de ruptura mais preferidos nos quais podem ser obtidos os novos término C e término N no poiipeptídeo (II) acima são;
28-29, 29-30, 30-31, 31-32, 32-33, 33-34, 34-35, 35-36, 36-37, 37-38. 38-39,
39- 40, 66-67, 67-68, 68-69, 69-70, 70-71, 84-85, 85-86, 86-87, 87-88, 88-89, 89-90, 90-91, 98-99, 99-100, 100-101, e 101-102.
Os pontos de ruptura mais preferidos nos quais podem ser obtidos os novos término C e término N no poiipeptídeo (H) acima são; 34-35, 69-70 e 90-81.
Os pontos de ruptura mais preferidos nos quais podem ser obtidos os novos término C e término N no poiipeptídeo (III) acima ou a sequência de amínoácido de (SEQ. ID N°. 256) são;
80- 81, 81-82, 82-83, 83-84, 84-85, 85-86, 86-87, 108-109, 109-110, 110111, 111-112, 112-113, 113-114, 114-115, 115-116, 116-117, 117-118, 1181.19, 119-120, 120-121, 121-122, 122-123, 123-124, 124-125, 125-126, e 126-127.
Os pontos de ruptura mais preferidos nos quais podem ser obtidos os novos término C e término N no poiipeptídeo (III) acima ou a sequência de aminoácido de (SEQ. ID N°. 256) são;
81- 82, 108-109, 115-116, 119,120, 1.22,123 e 125,126.
O agonista receptor multifuncional da presente invenção também pode ser representado pela seguinte fórmula:
(T’),-(L')b-X'-(L'fc-XJ-ÍL2)a-(T2)e XMLVX2-a.)-Y’-(L)e-Y2 em que:
χ1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácido que corresponde à sequência de resíduos n+1 a J da proteína original dp • 20 que tem resíduos de aminoácidos numerados seqüencialmente 1 a J com um término amino no resíduo 1:
L é um ligante opcional;
X2 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoacido de resíduos 1 a n da proteína original;
Y^ é um peptídeo que compreende uma sequência de arnínoácido que corresponde á sequência de resíduos n+1 a K da proteína original que tem resíduos de aminoáctdos numerados seqüencialmente 1 a K com um término amine no resíduo 1;
é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácído que corresponde à sequência de resíduos 1 a n da proteína original;
dei2 são espaçadores de peptídeo opcionais:
n é um número inteiro na faixa de 1 a J--1;
b, c e d são cada um independentemente 0 ou 1, aes são 0 ou 1, contanto que tanto a como e não podem ambos ser 0; e
Τ'* e são proteínas.
Adicionalmente, a presente invenção refere-se a vetores de expressão recombínantes que compreendem sequências de nucleotídeo que codificam os agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais, sistemas microbíanos de experssão relacionados e processos para a obtenção dos agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais. A invenção também se refere a composições farmacêuticas que contêm os agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais e a métodos para usar os agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais.
Além do uso dos agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais da presente invenção in vivo, è considerado que os usos in vivo incluiríam a capacidade de estimular a ativação e o crescimento da medula óssea e da célula sanguínea antes da infusão nos pacientes.
Breve Descrição das Figuras
A Figura 1 ilustra esquematicamente o rearranjo de sequência de uma proteína O término N (N) e o término C (C) da proteína nativa são • 20 associados através de um ligante ou associados diretamente. A proteína é aberta a um ponto de ruptura que cria um novo término N (novo N) e um novo término C (novo C) que resulta em uma proteína com uma nova sequência linear de aminoácido. Uma molécula rearranjada pode ser sintetizada de novo como molécula linear e não através das etapas de associação do término N e do término C originais e de abertura da proteína no ponto de ruptura.
A Figura 2 apresenta um esquema do Método I, para criar novas proteínas em que o término N e o término C originais da proteína nativa são associados com um ligante e são criados um término N e término C diferentes da proteína. No exemplo apresentado o rearranjo de sequência resulta em um novo gene que codifica uma proteína com um novo término N criado no aminoácido 97 da proteína original o término C original (a.a. 174) associado ao aminoácido 11 (a.a. 1 -10 são eliminados) através de uma região de ligante e um novo término C criado no aminoácido 98 da sequência original.
A Figura 3 apresenta um esquema do Método II, para criar novas proteínas em que o término N e o término C originais da proteína nativa são associados com um ligante e são criados um término N e término C diferentes da proteína. No exemplo apresentado o rearranjo de sequência resulta em um novo gene que codifica uma proteína com um novo término N criado no aminoácido 97 da proteína original o término C original (a.a. 174) associado ao término N original e um novo término C criado no aminoácido 96 da sequência original.
A Figura 4 apresenta um esquema do Método III, para criar novas proteínas em que o término N e o término C originais da proteína nativa são associadas com um ligante e são criados um término N e término C diferentes da proteína. No exemplo apresentado o rearranjo de sequência resulta em um novo gene que codifica, uma proteína com um novo término N criado no aminoácido 97 da proteína original o término C original (a.a. 174) associado ao aminoácido 1 através de uma região de ligante e um novo término C criado no aminoácido 96 da sequência original.
Descrição Detalhada da Invenção
A presente invenção abrange agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais formados a partir de polipeptideos ligados covatentemente. cada um dos quais pode agir através de um receptor de célula dife5 rente e específico para iniciar atividades biológicas complementares. A hematopoiese requer uma série complexa de eventos celulares em que as células embrionárias geram continuamente grandes populações de células de maturação em todas as linhagens principais. Há normaimente pele menos 20 reguladores conhecidos com atividade hematopoiética proliferativa. A 10 maior partes destes proliferai!vos pode estimular apenas um ou outrc tipo de formação de colônia in vitro, o padrão preciso de formação de colônia estimulado por cada regulador é bastante característico. Dois reguladores não estimulam exatamente o mesmo padrão de formação de colônia, como avaliado por números de colônia ou. mais notavelmente, pelo padrão de línha15 gem e de maturação das células que constiíutem as colônias em desenvolvimento. As respostas proliférativas podem mais facilmente ser analisadas em sistemas de cultura in vitro simplificados. Três parâmetros bastante diferentes podem ser distinguidos: alteração no tamanho da colônia, alteração em número de colônias e linhagem da célula. Dois ou mais fatores podem 20 agir sobre a célula progenitora, induzindo a formação de maior número de progénie aumentando desse modo o tamanho da colônia. Dois ou mais fatores podem permitir a proliferação de um maior número de células progenitors seja por causa dos distintos subconjuntos de células progenitors existentes que respondem exclusivamente a um fator ou porque alguns proge25 nitores requerem estímulo por dois ou mais fatores antes de ser capaz de responder. É provável que a ativação de receptores adicionais em uma célula pelo uso de dois ou mais fatores melhore o sinal mítótico por causa da coalescência de percursos de sinal ínicialmente diferentes em um percurso final comum que alcança o núcleo (Metcalf, Nature 339: 27, 1989). Outros 30 mecanismos podiam explicar sinergia. Por exemplo, se um percurso de sinalização for limitado por uma ativação intermediária de um percurso de sinalização adicional que é causado por um segundo fator, então isso pode resultar em uma super resposta aditiva. Em alguns casos, a ativação de um tipo de receptor pode induzir uma expressão melhorada de outros receptores (Metcalf, B/ood 82; 3515-3523. 1993). Dois ou mais fatores podem resultar em um padrão diferente de linhagens de célula do que a partir de um S simples fator. 0 uso de agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais poda ter uma vantagem clinica potencial que resulta de uma resposta proliferative que não é possível por qualquer fator isolado.
Os receptores de fatores de crescimento hematopoiéticos e outros podem ser agrupados em duas famílias distintas de proteínas reíacío10 nadas; (1) receptores da iirosina quinase, incluindo aqueles para fator de crescimento epidermal, M-CSF (Shern Blood 75:1. 1990} e SCF (Yarden e outros, EMBO J. 6: 3341. 1987); e (2) receptores hematopoíéticos, que não contêm um domínio de iirosina quinase. mas que exibem homologia óbvia em seu domínio extraceiular (Bazan, PNAS USA 87: 6934-6938, 1990). In15 cluídos neste último grupo estão entropoíetina (EPO) (D'Andrea e outros, Ce// 57: 277, 1989), GM-CSF (Gearing e outros, M) J. & 3667, 1989), IL-3 Kitamura e outros, Ce// 86: 1165, 1991), G-CSF (Fukunaga e outros, J. Bto. Ctiem. 285 : 14008-15, 1990), IL-4 (Harada e outros, PUAS USA 87 857,1990), IL-5 (Takaki e outros, EMBO J. 9: 4367, 1990), IL-6 (Yamasaki e 20 outros. Science 241: 825, 1988). IL-7 (Goodwin e outros, Ce// 60: 941-51, 1990), LIF (Gearing e outros, EMBQ J. 10: 2839, 1991) e IL-2 (Cosman e outros, MoMmmunol. .23: 935-94, 1986). A maioria deste último grupo de receptores existe em uma forma com aita afinidade como heterodimeros. Após ligação com Hgante, as alfa-cadeias especificas se tornam associadas oom 25 pelo menos uma outra cadeia receptora (beta-cadeia, gama-cadeia). Muitos destes fatores compartilham uma subunidade receptora comum. As alfacadeias para GM-CSF, IL-3 e IL-5 compartilham a mesma beta-cadeia (Kitamura e outros, Ce// 66; 1165. 1991). Takaki e outros, O4B0 J. 10: 2833-8, 1991) e complexos receptores para IL-6, LlF e IL-11 compartilham 30 uma beta-cadeia comum (gp130) (Taga. e outros, Ce// 58: 573-81, 1989; Gearing e outros. Science 255: 1434-7, 1992). Os complexos receptores de II2. IL-4, IL-7, IL-9 e ÍL-15 compartilham uma gama-cadeia comum (Kondo e outros, Science 262. 1874, 1993: Russell e outros, Science 266: 1042-1045, 1993; Noguchi θ outros, Sc/ence 262: 1877. 1993; Giri e outros. EA4BO J. 13: 2822-2830, 1994).
uso de um fator hematopoiético de múltipla ação pode tam5 bém ter uma vantagem potencial para reduzir as demandas colocadas sobre as células de produção de fator e seus sistemas de indução. Se houver limitações na capacidade de uma tóiula produzir um fator, então a diminuição das concentrações necessárias de cada um dos fatores e o uso dos mesmos em combinação pode reduzir de maneira útil as demandas de cé10 lulas produtoras de fator. O uso de um fator hematopoiético de múltipla ação pode diminuir a quantidade dos fatores que seriam necessários, provavelmente reduzindo a probabilidade de efeitos colaterais adversos.
Os novos compostos desta invenção são representados por uma fórmula selecionada do grupo que consiste de:
R-lq -Rg. 1 ^1 “^2 θ 1
Em que Rq e R2 são como definidos acima.
Rg é de preferência um fator estimulador de colônia com uma atividade diferente porém complementar de Rj. Por atividade complementar entende-se atividade que melhore ou varie a resposta a um outro modulador de célula.
O polipeptídeo está associado diretaments ou através de um segmento ligante ao polipeptídeo Rç θ termo diretamente define agonistas receptores hematopoi éticos multifuncionais em que cs polipeptídeos estão associados sem um ligante de peptídeo. Assim lq representa uma ligação quimica ou segmento de polipeptídeo ao qual tanto Rj como R2 estão associados em armação, mais comumente Lq é um peptídeo linear ao qual Rq e Rg estão associados por ligações amida ligando o término carbòxi de Rq ao término amino de Li e o término carbòxi da Lq ao término amíno de Rg.. Por associados em armação entende-se que não há terminação de translação ou interrupção entre as armações de leitura do DNA que codifica R-i e Rg30 Uma lista não-exclusiva de outros fatores de crescimento, isto é, fatores estímuladores de colônia (CSFs), é a das cilocinas, linfocinas, interleucinas, fatores de crescimento hematopoiéticos que pode estar associa dos a (I), (II) ou (III) incluem GM-CSF, G-CSF, ligando c-mpl (também conhecido como TPO ou MGDF), M-CSF, eritropoietina (EPO), IL-1. IL-4. 9L-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, 11-10, IL-11, IL-12. IL-13, 11.-15, LIF. hgando flt3/flk2, hormônio de crescimento humano, fator de crescimento de cêlula-B, 5 fator de diferenciação de eosinófilo e fator de célula embrionária (SCF) também conhecida como fator de aço ou ligando c-kii. Adícionalmente, esta invenção abrange o uso de moléculas de R^ ou de Rg modificadas ou muiadas ou sequências de DNA modificadas que codificam estas moléculas de ou de Rg. A presente invenção também inclui agonistas receptores he10 matopoiéticos multifuncionais em que R·^ ou Rg é uma variante de hll-3, uma variante de ligando c-mpl ou uma variante de G-CSF. Uma “variante de hlL-3 ê definida como uma molécula de hlL-3 que tem substituições de aminoácido e/ou porções de hlL-3 eliminadas como divulgado em WO 94/12638, WO 94/12639 e WO 95/00646, assim como outras variantes co~ 15 nhecidas na técnica. Uma variante de ligando c-mpl*’ é definida como uma molécula de ligando c-mpl que tem substituições de aminoácido e/ou porções de ligando c-mpl eliminadas, divulgado no Pedido de Patente USS Número 08/383.035 assim como outras variantes conhecidas na técnica. Uma variante de G-CSF é definida como uma molécula de G-CSF que tem 20 substituições de aminoácido e/ou porções de G-CSF eliminadas, como divulgado aqui, assim como outras variantes conhecidas na técnica.
O grupo de ligação (Ly) é geralmente um polipeptídeo com um comprimento entre 1 e 500 aminoácidos. Os ligantes que associam as duas moléculas são de preferência projetadas para (1) permitir que as duas mo25 léculas se dobrem e ajam independentemente uma da outra, (2) não tenham uma propensão a revelar uma estrutura secundária ordenada que podia interferir com os domínios funcionais das duas proteínas, (3) ter características hidrôfobas mínimas que podiam interagir com os domínios funcionais de proteína e (4) fornecer separação esférica de R^ e Rg tal que R^ e Rg pedi30 am interagir simultaneamente com seus receptores correspondentes em uma célula isolada. Tipicamente os aminoácidos de superfície em regiões flexíveis de proteína incluem Gly„ Asn e Ser. Virtualmente seria de se espe rar que qualquer permutação de sequências de aminoácido que contenham Gly; Asn e Ser satisfaçam os critérios acima para uma sequência de lígante. Outros aminoácidos neutros, tais como Thr e Ala: também podem ser usados na sequência de lígante. Os aminoácidos adicionais também podem 5 estar incluídos nos ligantes em virtude da adição de sítios únicos de restrição na sequência de lígante para facilitar a construção dos agonistas receptores hematcpdèticos multifuncionais.
Os ligantes L-j preferidos da presente invenção incluem as sequências selecionadas do grupo de fórmulas:
(Giy'Serf (SEQ ID NQ4), (Gl/Serf (SEQ ID NO:5)i {Gl/Serf (SEQ ID NO:6). (Gíy4Ser)p (SEQ ID NO.7): (AlaGlySerf (SEQ ID NO.8).
Um exemplo de ligante aitameníe flexível é a região espaçadora rica em gíicma e em senna presente dentro da proteína plll dos bacteriófa15 gus filamentosos, por exemplo, os bacteriófagos MT3 ou id (Schaller e outros, PA/AS USA 72: 737-741. 1975). Esta região fornece uma região espaçadora longa, flexível entre dois domínios da proteína superficial pill, A região espaçadora consiste da sequência de aminoácido:
GíyGiyGiySerGiyGiyGlySerGIyGlyGlySerGIuGlyGlyGlySerGIuGtyGlyGlySer 20 GiuGlyGlyGíySerGiuGiyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID N0.9)
A presente invenção também incluí ligantes em que está incluída uma sequência de reconhecimento de endopeptidase. Um tal sítio de divagem pode ser valioso para separar os componentes individuais do ago25 nista receptor hematopoiético multifuncional para determinar se eles estão dobrados e ativos apropriadamente in vitro. Exemplos de várias endopeptidases incluem, mas não estão limitados a, plasmina, enteroquinase. kalicreína, uroquinase. atívador de plasmínogênio de tecido, clostripaína, quimosina, coiagenase, protease do veneno de víbora de Russell, enzima de 30 divagem de põs-prolina,; protease V8. Trombina e fator Xa.
Os segmentos de ligante de paptídeo proveniente da região dobradiça de imunoglubolinas de cadeia pesada IgG, IgA, IgM IgD ou IgE for necem uma relação angular entre os polipeptídeos ligados. Especialmente úteis são aquelas regiões dobradiças onde as cisteínas são substituídas corn sari nas. Os ligantes preferidos da presente invenção incluem sequências derivadas de região dobradiça IgG gama 1 b murina em que as cisteínas foram mudadas para serinas. Estes ligantes também incluem um sitio de divagem de endopeptidase. Exemplos de tais ligantes incluem as seguintes sequências:
IleSerGluProSerGIyProlleSefThrlIeAsnProSerProProSerlysGluSerHísUyusS erPro(SEQIDNO:10)e
IteGiuGiyArglleSerGlyProSerGiyProlleSerThrlleAsnProSerProProSerLysGlu SerHisLysSerPro(SEQIDNO:11)
A presente invenção, entretanto, não é limitada peia forma, pelo tamanho ou pelo número de sequências de hgante empregadas e o único requisito do ligante é que a funcionalidade não interfira na dobragem e na função das moléculas individuais do agonists receptor hematopoiébco multifuncional·
Determinação do lioante Lp
O compnmento da sequência de aminoácido do hgante Lg a ser usado em R-j e/ou Rg pode ser selecionado empiricamente ou com direcionamento a partir de informação estrutural ou pelo uso de uma combinação das duas abordagens.
Quando não estiver disponível informação estrutural· pode ser preparada uma pequena série de ligantes para testagem usando um projeto cujo comprimento é variado de maneira a investigar uma faixa de 0 a 50 À e cuja sequência é escolhida de maneira a ser coerente com exposição superficial (hidrafilicídade. Hopp & Woods, Mo/. Immunoí 2Q: 483-489, 1983), Kyte & Doolittle, J. Mo/. S/o/. 157: 105-132; área superficial exposta a solvente, Lee & Richards, J. Mo/. Biot 55: 379-400, 1981) e a capacidade de adotar a necessária conformação sem desarrumar a conformação de R^ ou R2 (conformacionalmente flexive; Karplus & Schulz, A/atorvvfosenscòaffen 72: 212-213, 1985}. Supondo uma média de translação de 2,0 a 3,8 A por resíduo, isto significaria que o conformação a ser testado estava entre 0 e resíduos, com 0 a 15 resíduos sendo e feixe preferida. Exemplos do uma íal série empírica seria construir ligantes usando uma sequência cassete tal como Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ. ID NE 12) repetida n vezes, onde n é 1, 2, 3 ou
4. Os versados na técnica irão reconhecer que há muitas sequências que 5 variam de comprimento ou de composição que podem servir como ligantes com a consideração primária sendo que eles não são excessívamenfe longos nem curtos (cf., Sandhu. Cnfica/ Rev. Bfotech. 12: 437-462, 1992); se eles forem demasiadamente longos, os efeitos da entropia provavelmente irão desestabílizar a dobra tridimensional e também podem tornar a dobra10 gem cineticamente impraticável e se eles forem demasiadamente curtos, eles provavelmente irão desestabílizar a molécula por causa de tensão torsional ou esférica
Os versados na análise de informação estrutural de proteína irão reconhecer que o uso da distância entre os términos da cadeia, defíni15 dos como a distância entre os carbonos c-atfa. pode ser usado para definir o comprimento da sequência a ser usada ou peto menos para limitar o número de possibilidades que devem ser testadas em uma seleção empírica de ligantes, Eles também irão reconhecer que às vezes é o caso que as posições das extremidades da cadeia de polipeptídeo sejam mal definidas em 20 modelos estruturais derivados de dadas de difração de raios X. ou de espetroscopia de ressonância magnética nuclear, e que quando verdadeira, esta situação precisará portanto ser levada em conta de forma a avaliar apropriadamente o comprimento do ligante necessário. A partir daqueles resíduos cujas posições são bem definidas são selecionados dois resíduos que estão 25 próximos na sequência à extremidades da cadeia e a distância entre seus carbonds c-alfa é usada para calcular um comprimento aproximado para um ligante entre os mesmos. Usando um comprimento calculado como um guia, são então selecionados ligantes com uma faixa de número de resíduos (calculada usando 2 a 3,8 A por residue). Estes ligantes podem ser com30 postos da sequência original, abreviados ou emcomprídados se necessários e quando emcompridados os resíduos adicionais podem ser escolhidos como sendo flexíveis e hidrofílicos como descrito acima; ou opcionalmente a sequência original pode ser substituída usando uma série de ligantes, um exemplo sendo a abordagem do cassete Gly-Giy-Gly-Ser (SEQ. ID N° 12) mencionada acima: ou opcionalmente pode ser usada uma combinação da sequência originai e nova sequência que tem um comprimento total apropn5 ado.
Determinação.dos Términos Amino e Carboxila de Ri e Rq
As sequências de Ri e Rq capazes de dobrar a estados biologicamente ativos podem ser preparadas por seleção apropriada das posições iniciai (terminal amino) e finai (terminal carboxila) provenientes de dentro da 10 cadeia original de polipeptídeo enquanto usa a sequência de ligante Lq como deserdo antes. Os términos amino e carboxila são selecionados de dentro de um esticamento comum de sequência, citado como região de ponto de ruptura, usando as linhas de direcionamento descritas abatxo. Uma nova sequência de aminoácido è assim gerada selecionando términos 15 amino e carboxila de dentro da mesma região de ponto de ruptura. Em muitos casos a seleção dos novos términos será tal que a posição original do término carboxila imedíatamente anterior à do término amino. No entanto, os versadas na técnica irão reconhecer que as seleções de términos em qualquer locai dentro da região podem funcionar e que estes levarão efetiva20 mente a eliminações ou adições às porções amíno ou carboxila da nova sequência/
É um dogma da biologia molecular que a sequência primaria de aminoácido de uma proteína dita a dobra à estrutura td-dimensional necessária para expressão de sua função biológica. Os versados na técnica co25 nhecem métodos para obter e interpretar informação estrutural tridimensional usando difraçâo de raios X de cristais isolados de proteína ou espetroscopia em ressonância magnética nuclear de soluções de proteína. Exemplos de informação estrutural que são pertinentes à identificação de regiões de ponto de ruptura incluem a locação e o tipo de estrutura secun3Q dáría de proteína (alfa e 3-10 hélices, foihas beta paralelas e anti-paralelas, reversões e voltas de cadeia e circuitos fechados; Kabsch & Sander, Biopofymers 22: 2577-2637, 1983), o grau de exposição a solvente de resíduos de amínoácido, a extensão e o tipo de interações de resíduos uns com os outros (Chothia. Ann Rev: Siochem. 53: 537-572, 1984) e a distribuição estática e dinâmica de conformações ao longo da cadeia de poüpeptídeo (Aider & Mathews, Methods Enzyme/. 154: 511-533, 1987). Em alguns casos é conhecida informação adicional a respeito de exposição de resíduos a solvente; um exemplo é um sítio de ligação pôs-translacional de carboidrato que está necessariamente sobre a superfície da proteína. Quando a informação estrutural experimental não está disponível ou não é possível de se obter, são também disponíveis métodos para a anlisar a sequência primária de amínoácido de forma a fazer previsões de estrutura terciária e secundária de proteína, acessibilidade de solvente e a ocorrência de viradas e de circuitos fechados. Os métodos bioquímicos são também ás vezes aplicáveis para determinar empiricamente a exposição da superfície quando os métodos estruturais diretos não são possíveis; por exemplo, usando a identificação de sítios de cisão de cadeia após proteólíse limitada de forma a indicar a exposição da superfície (Gentile & Salvatore, Eur. J, Siochem 218. 603-621, 1993) Assim usando informação estrutural derivada experimentalmente ou métodos proféticos (por exemplo, Snnivisan & Rose Profe/ns: Sfrucri. Funct & Genetics, 22: 81-89, 1995) a sequência de aminoácído parental é inspecionada para classificar as regiões quer elas sejam ou não integrais para a manutenção de estrutura secundária e terciária. A ocorrência de sequências dentro das regiões que se sabe estarem envolvidas em estrutura secundária periódica (folhas alfa e beta 3-10 hélices, paralelas e aníiparalelas) são regiões que deviam ser evitadas. Similarmonte, é mais provável que as regiões de sequência de amínoácido a respeito das quais se observa ou se prevê que tenham um baixo grau de exposição a solvente sejam parte do chamado núcleo hidrófobo da proteína e também deviam ser evitadas para seleção de términos amino e carboxila, Em contraste, aquelas regiões das quais se sabe ou prevê-se que estejam em voltas de superfície ou circuitos fechados e especialmente aquelas regiões das quais se sabe que não são necessárias para atividade biológica, são os sítios preferidos para localização dos extremos da cadeia de polípeplídeo, Os esticamentos contínuos de sequência de aminoácido que são preferidos com base nos critérios acima são citados como uma região de ponto de ruptura.
Fatores de crescimento hematopoiéticos multifuncionais não covalentes
Um método alternativo para ligar dois fatores de crescimento 5 hematopoiétícos é por meio de uma interação nâo-covalente. Tais proteínas complexadas podem ser descritas por uma das fórmulas R-j-Ci 4 R2^2; ou Cq~Rl * ^2~^2i C'f-R’j + Rg-Cg: C1-R1 + + ^2*&2·
R-Ι e Rg como definidos acima. Os domínios Cq e Cg são estruturas químicas idênticas ou nâo-idênticas, tipicamente proteináceas, 1Q que podem formar uma associação específica não-covalente. Os complexos entre C1 e Cg resultam em uma relação estequiométrica um para um entre R-s e Rg para cada complexo. Exemplos de domínios que se associam são domínios ’'fecho de leucina ou fatores de transcrição, domínios de dimerização de repressores baclerianos de transcrição e domínios constante de 15 ímunoglobulina. As ligações covalentes ligam R-| e C-j e Rg θ Cg, respectivamente. Como indicado nas fórmulas, os domínios C-j e Cg podem estar presentes no término N ou no término C de seu fator de crescimento hematopoiético (R) correspondente. Estes domínios de muítimenzação (C-j e Cg) incluem aqueles derivados da família bZíP de proteínas (Abela e outros, 20 Nature 341: 24-25, 1989, Landshulz e outros, Sc/ence 240: 1759-1764, 1988: Pu e outros, Nuc. Add Res. 21. 4348-4355, 1993: Kozarides e outros,
Nature 336. 646-651,. 1988), assim como domínios de multimerização da família hélice-circuito fechado-hélice de proteínas (Abel e outros, Nature 341: 24-25, 1989: Murre e outros, Ce/f 56; 777-783, 1989; Tapscott e outros, 25 Science 242: 405-411, 1988; Fisher e outros, Genes & Dev. 5: 2342-2352,
1991). Os agonistas receptores hematopoiétícos multifuncionais preferidos da presente invenção incluem fatores estimuladores de colônia dimerizados em virtude de sua incorporação como agonistas receptores hematopoiétícos multifuncionais translacionais com os domínios de dimerização de fecho de 30 leucina das proteínas da família bZIP Fos e Jun. O domínio de fecho de leucina de Jun è capaz de interagir com os domínios idênticos. Por euf.ro lado, 0 domínio de fecho de leucina de Fos interage com o domínio de fecho de leucina de Jun, mas não interage coni outros domínios de fecho de leucina de Fos. Misturas de Fos e Jun predominantemente resultam na formação de heterodimeros Fos-Jun. Consequentemente, quando associado a fatores de estímulo de colônia, o domínio de Jun pode ser usado para dirigir a forma5 ção de homo- ou heterodímeros. A formação preferencial de heterodímeros pode ser conseguida se um dos parceiros do fator estimulador de colônia for engenheirado para possuir o domínio de fecho de teucína de Jun enquanto o outro é engenheirado para possuir o fecho Fos.
Também podem ser adicionadas sequências de peptideo adiei10 onais para facilitar a purificação ou a identificação de proteínas agonistas receptoras hematopoíéticas multifuncionais (por exemplo, poly-His). Também pode ser adicionada um peptideo altamente antígênico que permita dosagem rápida e fácil purificação da proteína agonista receptora hematopoiética multifuncional por um anticorpo monoclonal específico.
Sequência de aminoácido mutante/* “proteína mutante, proteína variante, muteína ou polipeptídeo mutante refere-se a um polipeptideo que tem uma sequência de aminoácido que varia de uma sequência nativa em consequência de eliminações, substituições de aminoácido ou ambas ou è codificado por uma sequência de nucleotideo obtida intencio20 nalmene variante de uma sequência nativa, Sequência nativa refere-se a uma sequência de aminoácido ou de ácido nucléico que é idêntica a uma forma do tipo selvagem ou nativa de um gene ou de uma proteína.
Os fatores de crescimento hematopoiéticos podem ser caracterizados por sua capacidade de estimular a formação de colônia por células 25 progenitoras hematopoíéticas humanas, As colônias formadas inciuem eritróide, granulócilo, megacariôcíto, macrófagos granulocítícos misturas e dos mesmos. Muitos dos fatores de crescimento hematopoiéticos demonstraram a capacidade de restaurar a função da meduia óssea e as populações da céluia periférica do sangue até níveis terapeuticamente vantajosos em estu30 dos realizados inícíalmente em primatas e subsequentemente em seres humanos. Muitos ou todas estas atividades biológicas de fatores de crescimento hematopoiéticos envolvem transdução de sinal e ligação de receptor de alta afinidade. Os agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais da presente invenção podem exibir propriedades úteis tais como ter atividade biológica similar ou maior quando comparada a um fator isolado ou tendo semi-vida melhorada ou efeitos colaterais adversos diminuídos ou uma combinação destas propriedades.
Os agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais que têm pequena ou nenhuma atividade agonísta podem ser úteis como antagonistas, como antigenos para a produção de anticorpos para uso em imuneiogia ou em imunoterapia, como sondas genéticas ou como intermediários usados para construir outras muteinas hlL-3 úteis.
A atividade biológica das proteínas agonistas receptoras hematopoiéticas multifuncionais da presente invenção pode ser determinada por síntese de DNA em linhagens de célula faton-dependentes ou por contagem das unidades de formação de colônia em uma dosagem de medula óssea in vitro.
Os agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais da presente invenção podem ter um perfil terapêutico melhorado comparado a agonistas hematopoiéticos de ação simples Por exempio, alguns agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais da presente invenção podem ter uma atividade de fator de crescimento similar ou mais potente relativa a outros agonistas hematopoiéticos sem ter um aumento similar ou correspondente nos efeitos colaterais,
A presente invenção também inclui as sequências de DNA que codificam para as proteínas agonistas receptoras hematopoiètlcas multifuncionais, sequências de DNA que são substancial mente similares e funcionam substancialmente da mesma forma e sequências de DNA que diferem dos DNAs que codificam os agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais da invenção somente em virtude da degenerescência do código genético. Também estão incluídos na presente invenção os intermediários de oíigonucleotídeo usados para construir os ÜNAs mutantes dos polipeptideos codificados por estes oligonucleotídeos.
As técnicas de engenharia genética agora padronizadas na técnica (Pat U.S. 4.935.233 e Sambrook e outros. Molecular Cloning A Laboratory Manual”, Cold Spring Harbor Laboratory, 1989) podem ser usadas na construção das sequências de DNA da presente invenção. Um tal método é 5 a mutagênese de cassete (Wells e outros. Gene 34: 315-323, 1985) em que uma porção da sequência de codificação em um plasm ideo é substituída com olígonucleotideos sintéticos que codificam as desejadas substituições de aminoàcído em uma parte do gene entre dois sítios de restrição,
Pares de olígonucleotideos sintéticos complementares que co10 dificam o gene desejado podem ser obtidos e recozidos um com o outro, A sequência de UNA do oíigonucleotídeo codificaria a sequência para aminoácidos de gene desejado com a exceção daqueles substituído e/ou eliminados da sequência.
O DNA do plasmideo pode ser tratado com as endonucleases 15 de restrição escolhidas então ligado aos olígonucleotideos recozidos. As misturas ligadas podem ser usadas para transformar células JM101 compentes para resistência a um antibiótico apropriado. Colônias isoladas podem ser escolhidas e o DNA do plasmídeo examinado por análise de restrição e/ou seqüènciamento da DNA para identificar plasmídeos com os genes 20 desejados.
A clonagem das sequências de DNA dos novos agonistas hematopoieticos multifuncionais em que pelo menos um dos quais pode ser realizada a sequência de DNA do outro fator esíimulador de oolònia pelo uso de vetores intermediários. Alternativamente um gene pode ser cíonado 25 diretamente em um vetor que contém o outro gene. Podem ser usados ligantes e adaptadores para associar as sequências de DNA, assim como para substituir as sequências perdidas, quando um sítio de restrição era interno á região de interesse. Assim o material genético (DNA) que codifica um polipeptideo, ligante de peptídeo e o outro polipeptídeo é inserido em 30 um vetor de expressão adequado que é usado para transformar bactérias, levedura, células de insetos ou células de mamíferos. O organismo transformado é cultivado e a proteína isolada par técnicas padronizadas. O pro duto resultante é portanto uma nova proteína que tem um fator estimulador de colônia associado por uma região de ligante a um segundo fator estimulador de colônia.
Um outro aspecto da presente invenção fornece vetores de DNA de plasmídeo para uso na expressão destes novos agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais, Estes vetores contêm as novas sequências de DNA descritas acima que codificam para os novos pohpeptídeos da invenção. Os vetores apropriados que podem transformar microorganismos capazes de expressar os agonistas receptores hematopoiéticos muitifuncio10 nais incluem vetores de expressão que compreendem sequências de nucieotídeo que codificam para os agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais associados a sequências reguladoras transcripcíonais e transiacíonais que são selecionadas de acordo com as células hospedeiras usadas.
Os vetores que incorporam sequências modificadas como descrito acima estão incluídos na presente invenção e são úteis na produção dos polipeptídeos agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais. O vetor empregado no método também contém sequências reguladoras selecionadas em associação operativa com as sequências que codificam DNA da invenção e que são capazes de dirigir a repíicação e a expressão do mesmo em células hospedeiras selecionadas.
Como um outro aspecto da presente invenção é fornecido um processo para a produção dos novos agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais, O método da presente invenção envolve cultivar células ou 25 linhagens de célula adequadas, que foram transformadas com um vetor que contém uma sequência de DNA que codifica para a expressão de um novo agonista receptor hematopoiético multifuncional. As células ou linhagens de célula adequadas podem ser células bacterianas. Por exemplo, as várias cepas de E co/í são bem conhecidas como células hospedeiras no campo 30 da biotecnologia. Exemplos de tais cepas incluem E, co/i cepas JM101 (Yanish-Perron e outros, Gene 33: 103-119,1985) e MON105 (Obukowicz e outros, Applied Environmental Microbiology 58 1511-1523, 1992). Também moluída na presente invenção está a expressão da proteína agonists receptor hematopoiética multifuncional que utiliza um vetor de expressão oromossomai para E, coí com base no bacieriõfago Mu (Weinberg e outros, Gene 126: 25-33, 1993). Várias cepas de 8. sabã/ís também podem ser em5 pregadas neste método. Muitas cepas de células de levedura conhecidas dos versados na técnica também estão disponíveis como células hospedeiras para expressão dos polipeptídeos da presente invenção. Guando expressado no citoplasma de E.. ooE o gene que codifica os agonistas receptores hematopoíéticos multifuncionais da presente invenção também podem 10 ser construídos de tal modo que na extremidade 5 do gene são adicionados códons para codificar Mef-^-AísH- ou Met'5 no término N da proteína. Os términos N de proteínas obtidas no citoplasma de E. co/f são afetados pelo processamento pòs-transiacíonal por metionína aminopeptidase (Ben Basset e outros. J. Bac. 169: 751-757, 1987) e possivelmente por outras peptl15 dases de modo que após a expressão a metionína é separada por divagem do término N. Os agonistas receptores hematopoíéticos multifuncionais da presente invenção podem incluir pohpeptídeos agonistas receptores hematopoiéãcos multifuncionais que têm MeH, Alar1 ou Met^-Ala1- no termino N. Estes agonistas receptores hematopoíéticos multifuncionais mutantes 20 também podem ser expressados em E coé por fusão de um peptideo de sinal de secreção ao término N. Este peptideo de sinal ê clívado do polipeptideo como parte do processo de secreção..
Também adequadas para uso na presente invenção sâo as células de mamíferos, tais como células de ovário de hamster Chinês (CHO).
Os métodos gerais para expressão de genes estrangeiros em células de mamíferos são revistos em Kaufman, R. J., 1987) Genetic Engineering.
Principles and Methods, Vol. 9, J. K. Setlow, editor. Plenum Press, Nova York. É construído um vetor de expressão em qua urn forte promotor capaz de funcionar em células de mamíferos aciona a transcrição de uma região 30 de codificação de peptideo de sinal de secreção eucariótica. que está translacionalmente associada à região de codificação para o agonísta receptor hematopoiêtico multifuncional. Por exemplo, podem ser usados pias
4'1 mídeos tais como pcDNA, l/Neo, pRc/RSV e pRc/CMV (obtidos por Invdrogen Corp,, San Diego, California). A região de codificação de peptídeo de sinal de secreção eucaríótíca pode ser proveniente do próprio gene ou pode ser proveniente de uma outra proteína de mamífero secretada (Bayne, M. L.
e outros, Proc. W Acad. Sei. U.S.A. 84 2638-2642, 1987). Após a construção do vetor que contém o gene, o DNA vetor é transfectado em células de mamíferos. Tais células podem ser, por exemplo, as hnhagens COS7. HeLa, BHK, CHO ou L de camundongo. As células podem ser cultivadas, por exemplo, em meios DMEM (JRH Scientific). O polipeptídeo secretado 10 nos meios pode ser recuperado por abordagens bioquímicas padronizadas após expressão transients durante 24 - 72 horas após transfecção das células ou apôs estabelecimento de linhagens de célula estáveis após seleção para resistência a antibiótico. A seleção de células hospedeiras de mamíferos adequadas e dos métodos para a transformação, cultura, amplificação, 15 seleção e produção do produto e purificação são conhecidas na técnica.
Ver, por exemplo, Gethíng e Sambrook, Nature, 293 620-625, 1981) ou alternativamente, Kaufman e outros, MoL Cell, Bioí, 5(7); 1750-1759, 1985) ou Howley e outros, Pat U.S. N°. 4.419.446. Uma outra linhagem de célula de mamífero adequada é a linhagem de célula CQS-1 de macaco. Uma lí20 nhagem de célula de mamífero similarmente útil é a linhagem de célula CV1
Quando desejado, podem ser utilizadas células de inseto como células hospedeiras no método da presente invenção. Ver, por exemplo, Milter e outros, Geneéc Engineering, 8. 277-298 (Plenum Press 1986) e refe25 rências aii citadas. Além disso, são descritos métodos gerais para expressão de genes estrangeiros em células de insetos usando vetores Baculovirus em:. Summers, M. D, e Smith,. E., 1987) - A manual of methods for Baculovírus vectors and insect cell culture procedures, Texas Agricultural. Experiment Station Bulletin N0 1555. É construído um vetor de expressão 30 que compreende um vetor de transferência de Baculovírus, em que um forte promotor de Baculovirus (tal como o promotor poliedro) aciona a transcrição de uma região de codificação de peptídeo de sinal de secreção eucaríótíca, que está translacíonaímente associada à região de codificação para o polipeptídeo agonistas receptor hematopoiètico multifuncional. Por exemplo, pode ser usado o plasmídeo pVL1392 (obtido por Invitrogen Corp., San Diego, Califórnia). Após a construção do vetor que contém o gene que codifica 5 o polipeptídeo agonists receptor hematopoiètico multifuncional, dois microgramas deste DNA são co-transfectados com um micrograms de DNA do Baoulovirus (ver Summers & Smith, 1987) em células de inseto, oepa SF9. O Baoulovirus recombinants puro que contém o agonists receptor hematopoiético multifuncional é usado para infectar as células cultivadas, por 10 exemplo, em meio Excell 401, isento de soro (JRH Bioscíenoes, Lenexa, Kansas). O agonista receptor hematopoiético multifuncional secretado para o meio pode ser recuperado por abordagens bioquímicas padronizadas. Os sobrenadantes provenientes de células de mamíferos ou de insetos que expressam a proteína agonista receptora hematopoiética multifuncional podem 15 ser primeiro concentrados usando qualquer uma de algumas unidades de concentração comerciais.
Os agonistas receptores hematopoíéticos multifuncionais da presente invenção podem ser úteis no tratamento de doenças caracterizadas por níveis cada vez mais baixos de células míeloides, eritróides, linfói20 des ou de megacaríócito do sistema hematopoiètico ou de combinações das mesmas. Além disso, eles podem ser usados para ativar células mielóides e/ou linfóides maduras. Entre as condições suscetíveis para o tratamento com os polipeptídeos da presente invenção está a leucopenia, uma redução no número de leucòcitos em circulação (células brancas) no sangue perifè25 rico. A leucopenia pode ser induzida por exposição a certos vírus ou á radiação. Ba é frequentemente um efeito colateral de várias formas de terapia de câncer, por exemplo, exposição a drogas quimioterapêutícas. à radiação e proveniente de infecção ou hemorragia. O tratamento terapêutico da leucopenia com estes agonistas receptores hematopoíéticos multifuncionais da 30 presente invenção pode evitar efeitos colaterais indesejáveis causados pelo tratamento com drogas presentemente disponíveis.
Os agonlstas receptores hematopoíétícos multifuncionais da presente invenção podem ser úteis no tratamento da neutropenia e, por exemplo, no tratamento de tais condições como anemia aplasica, neutropenia cíclica, neutropenia idiopàtica. sindrome de Chédiak-Higashi, lupus eri5 tomatoso sistêmico (SLE), leucemia, sindrome míelodisplásica e mielofibrose.
O agonista receptor hematopoiético multifuncional da presente invenção pode ser úteil no tratamento ou na prevenção de trombocitopenia. Normalmente a única terapia para a trombocitopenia é a transfusão de pia10 queta que é onerosa e carrega os significativos nscos de infecção (HIV.
H8V) e aloimunização. Os agonista receptor hemaíopoíético multifuncional pode aliviar ou diminuir a necessidade de transfusão de plaqueta. A trombocitopenia grave pode resultar de defeitos genéticos tais como Anemia de Fanconi, síndromes de Wiscott-Aldrich ou de May Hegglin. A trombocitope15 nia adquirida pode resultar de auto- ou alo-anticorpos como na Trombocitopenia Imune Púrpura, Lupus Eritematoso Sistêmico, anemia hemoíítica ou incompatibilidade maternal fetal Além disso, espíenomegaüa, coagulação intravascular disseminada, trombocitopenia trombótica púrpura.. infecção ou válvulas proféticas para o coração podem resultar em trombocitopenia. 20 Trombocitopenia grave também pode resultar de quimioterapia e/ou de terapia por radiação ou câncer. A trombocitopenia também pode resultar de invasão da medula por carcinoma, linfoma, leucemia ou fibrose.
Os agonistas receptores hematopoiélicos multifuncionais da presente invenção podem ser úteis na mobilização de progenitores hemafo25 poiéticos e de células embrionárias em sangue periférico. Foi demonstrado que os progenitores derivados de sangue periférico eram eficazes para a reconstituição de pacientes no ajuste da transplante de medula autóloga. Foi demonstrado que os fatores de crescimento hematoporético que incluem G-CSF e GM-CSF melhoram o número de progenitores em circulação e das 30 células embrionárias no sangue periférico. Isto simplificou o procedimento para a coleta de célula embrionária periférica e dimmuiu drasticamente o custo do procedimento por diminuição do número de ferese necessário. O agonists receptor hematopoiético multifuncional pode ser útii na mobilização de células embrionárias e para melhorar ainda mais a eficácia da transplante de células embrionárias periféricas.
Os agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais da presente invenção também podem ser úteis na expansão ex vivo de progenitores hematopoiéticos e de células embrionárias. Os fatores estimuladores de colônia (CSFs), tal como htL-3, foram administrados sozinhos, administrados com outros CSFs ou em combinação com transplantes de medula óssea subsequentes á quimioterapia de alta dose para tratar a neutropenia e a 10 trombocitopenía que são frequentemente o resultado de tal tratamento. No entanto o período de neutropenia grave e de trombocitopenía pode não ser totalmente eliminado, a linhagem mielótde, que é compreendida de monócitos (macrófagos), granulócitos (inclusive neutrófiios) e megacariócitos, é fundamental na prevenção de infecções e de hemorragia que pode se tornar 15 um perigo de vida. A neutropenia e a trombocitopenía também podem ser o resultado de doença, perturbações genéticas, drogas, toxinas, radiação e de muitos tratamentos terapêuticos tal como terapia convencional contra oncologia.
Foram usados transplantes de medula óssea para tratar esta população de paciente. No entanto, diversos problemas estão associados ao uso de medula óssea para reconstituir um sistema hematopoiético comprometido inclusive; 1) o número de células embrionárias na medula óssea, no baço ou no sangue periférico é limitado, 2) Enxerto Versus Doença do Hospedeiro. 3) rejeição de enxerto e 4) possível contaminação oom células de tumor. As células embrionárias constituem uma percentagem muito pequena das células nucleadas na medula óssea, no baço ou no sangue periférico. É evidente que existe uma resposta à dose tal que um número maior de células embrionárias irá melhorar a recuperação hematopoiética. Portanto, a expansão in vitro de células embrionárias melhoraria a recupe30 ração hematopoiética e a sobrevivência do paciente. Foi usada medula óssea proveniente de um doador alogenêico para fornecer medula óssea para transplante. No entanto, Enxerto Versus Doença do Hospedeiro e rejeição
4ο do enxerto limitam o transplante de medula óssea até mesmo em pessoas que recebem o transplante com doadores aparentados HLA-combínados. Uma alternativa aos transplantes alogenêicos de medula óssea é a de transplantes autólogos de medula óssea. Em transplantes autólogos da me~ 5 dula óssea, parte da medula do próprio paciente é colhida antes da terapia mieloblativa, por exemplo, quimioterapia de alta dose e é transplantada de volta para o paciente mais tarde. Os transplantes autólogos eliminam o risço de Enxerto Versus Doença do Hospedeiro e de rejeição de enxerto. No entanto, os transplantes autólogos de medula óssea ainda apresentam pro10 blemas em termos do numero limitado de células embrionárias na medula e possível contaminação com células de tumor. O número limitado de células embrionárias pode ser evitado pela expansão ex-vivo das células embrionárias Além disso, as células embrionárias podem ser especificamente isoladas. com base na presença de antígenos superficiais específicos tal como 15 CD34+ de forma a diminuir a contaminação da célula do tumor do enxerto da medula;
As patentes a seguir contêm outras detalhes sobre a separação de células embrionárias, células CD34*, cultura das céluias com fatores hematopoiéticos, o uso das células para 0 tratamento de pacientes com 20 perturbações hematopoiéticas e o uso de fatores hematopoiéticos para expansão da célula e terapia de gene.
5.061.620 refere-se a composições que compreendem células embrionárias hematopoiéticas humanas fornecidas por separação das células embrionárias de células dedicadas
5.199.942 descreve um método para transplante de célula he~ matópoiètíca autóloga que compreende: (1) a obtenção de células progenitors hematopoiéticas a partir de um paciente; (2) expansão ex-vivo de células com um fator de crescimento selecionado do grupo que consiste de íl3, lígante flt3, lígante c~kit. GM-CSF. IL-1, proteína de fusão GM-CSF/IL-3 e 30 combinações dos mesmos; (3) administração da preparação celular a um paciente.
5,240.856 refere-se a urn separador de célula que inclui urna aparelhagem para controlar automaticamente o processo de separação de célula,
WO 91/16116 descreve dispositivos e métodos para seletiva5 mente, isolando e separando células alvo a partir de uma mistura de células.
A WO 91/18972 descreve processos para a cultura in vitro de medula óssea, por suspensão incubadora de células da medula óssea, empregando um biorreator de fibra oco,
A WO 92/18615 refere-se a um processo para manutenção e 10 expansão de células de medula óssea, em um meio de cultura contendo misturas específicas de citocinas, para uso em transplantes,
A WO/08266 descreve um método para expandir seletivamente células embrionárias, compreendendo as etapas de (a) separação de células embrionárias CD34+ de outras células e (b) incubação das células sepa15 radas em um meio seletivo, tal que as células embrionárias sejam seletivamente expandidas.
A WO 93/18136 descreve um processo para suporte in vd.ro de células mamíferas derivadas de sangue periférico,
A WO 93/18648 refere-se a uma composição compreendendo 20 células precursoras humanas neutrõfilas com um alto teor de mieloblastos e promielócitos para tratamento de neutropenia genética ou adquirida.
A WO 94/08039 descreve um método de enriquecimento de células hematopoiéticas humanas embrionárias por seleção de células que expressam a proteína do kit-c.
A WO 94/11493 descreve uma população de células embrionárias que são CD34+ de tamanho pequeno, que são isoladas usando um método de elutriação por contra-fluxo.
A WO 94/27698 refere-se a um método que combina separação por imunoafinidads e separação centrifuga de fluxo contínuo para a separa30 ção seletiva de uma população de células heterogêneas de uma mistura de células heterogêneas.
A WO 94/25848 descreve um aparelha de separação da células para a acumulação e manipulação de células alvo.
A cultura de longo prazo de precursores CD34+ enriquecidos de células progenitoras hematopoiéíicas de medula óssea humana em culturas contende IL-la, IL-3, IL-6, ou GM-CSF é discutida em Brandt e outros J. Clin. Invest. 86. 932-941, 1990).
Um outro aspecto de presente invenção fornece um método para expansão seletiva ex-vivo de células embrionárias. 0 termo “células embrionárias” refere-se a células embrionárias hematopoiéíicas tcüpoteníes bem como a precursores primitivos e células progenitoras que podem ser isoladas do sangue da medula óssea, do baço ou sangue periférico. O termo “expansão” refere-se à diferenciação e à proliferação das células A presente invenção fornece um método para expansão seletiva ex-vivo de células embrionárias, compreendendo as etapas de: (a) separação das células embrionárias de outras células, (b) cultura das referidas células embrionárias separadas com um meio seletivo que contém proteína(s) agonisla receptora hematopoiétíca multifuncional, e (c) colheita das referidas células embrionárias. Células embrionárias, bem como células progenitoras comprometidas destinadas a tornarem-se neutrófílos, eritrócitos, plaquetas, etc podem ser distinguidas da maioria das outras células pela presença ou ausência de antígenos marcadores particulares progenitores. tais como CD34, que estão presentes na superfície dessas células e/ou por características morfolôgicas. O fenóiipo para uma fração celular embrionária humana altamente enriquecido é reportado como CD34+, Thy-1: e lin- mas deve-se compreender que a presente invenção não está limitada à expansão desta população celular embrionária. A fração de célula humana embrionária enriquecida CD34+ pode ser separada por um número de métodos reportados, incluindo colunas de afinidade ou contas, contas magnéticas, ou citometria de fluxo usando anticorpos direcionados aos antígenos de superfície tais como o CD34+, Além disso métodos de separação física tais como elutríação por contra-fíuxo podem ser empregados para enriquecer progenitores hematopoiètícos, Os progenitores CD34* sãe heterogêneos e podem ser divididas em diversas subpopuiações caracterizadas pela presença ou ausência de co-expressão de moléculas associadas à superfície da célula assoa ada a diferente linhagem. As células progenitoras mais imaturas não expressam quaisquer marcadores associados a linhagem conhecidos, tais 5 como HLA-DR ou CD38, mas elas podem expressar CD90(lhy-1). Outros antigenos de superfície tais como CD33, CO38, CD41, CD71, HLA-DR ou kit-c também podem ser empregados para isolar selelivamente progenitoras hematopoiéticos. As células separadas podem ser incubadas em meio selecionado em um frasco de cultura, bolsa estéril ou em fibras ocas.
Vários fatores estimulantes de colônia podem ser empregados para seletivamente expandir as células. Fatores representativos que têm sido utilizados para expansão ex-vivo de medula óssea incluem |h gante do kit-c, lígantes IL-3, G-CSF, GM-CSF, IL-1, IL-6, IL-11, flt-3 ou suas combinações. A proliferação das células embrionárias pode 15 ser monitorada por enumeração do número de células embrionárias e outras células, por técnicas padrão (por exemplo hemaciíôrnetro, CFU, LTCIC) ou por citometria de fluxo antes e subsequentemente à incubação.
Diversos processos para a expansão ex-vivo de células embrio20 nárias têm sido reportadas utilizando um número de métodos de seleção e expansão empregando vários fatores estimuladores de colônia incluindo o kit c de ligante (Brandt e outros, Blood 83: 1507-1514 [1994], McKenna e outros, Blood 86. 3413-3420 [1995]). IL-3 (Brandt e outros, Blood 83. 15071514, Sato e outros, Blood 82: 3600-3609 [1993]), G-CSF (Sato e outros, 25 Blood 82: 3600-3609 [1993], GM-CSF (Sato e outros, Blood 2. 3600-3609 [1993]),IL-6 (Sato e outros, Blood 82: 3600-3609 [19931, IL-11 (Lemoli e outros, Exp. Hem. 21: 1668-1672 [1993], Sato e outros, Blood 82: 3600-3609 [1993], ligante flt-3 (McKenna e outros, Blood 86: 3413 3420 [1995])e/ou suas combinações (Brandt e outros, Blood 83: 1507 1514 [1994], Haylock e 30 outros, B/oodSO 1405-1412 [1992], Koller e outros, Biotechnology 11: 358363 [1993], (Lemoli e outros, Exp, Hem. 21:1668-1672 [1993]_, Mackenna e outros, Blood 81: 3463-3420 [1995], Muench et outros, Blood 81, 3483-3473 [1993], Patehen e outras, Btedwapy 7 : 13-26 [ 1994], Sato e outros, Eteoo'
82:3600-3609 [1993),. Smith a outros, [19931. Exp. Hem 21 870-877 [1993], Steen e outros. Stem Ce//s 12 214-224 [ 1994], Tsuiino e outras, Exp. Hem.21: 1379-1386 [1993]). Entre os fatores estimuladores da colòni5 as individuais, NL-3 tern steo mostrado como o mais potente em expandir células 0034+ de sangue periférico (Sedo e outros, Blood 82: 3600-3609 [1993], Kobayashi e outros, Blood 73: 1836-1841 [1989]). Entretanto, nenhum fator único tem sido mostrado como sendo tão eficaz que s combinação de múltiplos fatores A presente invenção fornece métodos para a expansão ex vivo que utiliza agomstas receptores hematopoiéticos multifuncionais que são mais eficazes do que um único fator sozinho.
Um outro aspecto da invenção fornece métodos ds sustentação e/ou expansão de- células precursoras hematopoiéticas que inclui moeda15 ção das células em um recipiente de cultura que contém um meio de cultura que foi condicionado por exposição a uma linha celular stromal tal como HS5 (WO 96/02662. Roeoklem e Torok-Strob, 8/ood 85: 997-1105, 1995) que foi suplementado com um agonista receptor hematopciético multifuncional da presente invenção.
Outra uso clinico projetado de fatores d® crescimento tem sido a ativação in vitro de progeniteres hematopoiéticos e células embrionárias para terapia de gene. Devido à longa vida útil das células progenitoras hematopoíéticas e a distribuição de suas células filhas por tudo o corpo, células progenitoras hematopoiéticas são boas candidatas para transfecção de 25 gene ex vivo. Para ter o gene de interesse incorporado no genoma do progenitor hematopoiético ou célula embrionária necessita-se estimular a divisão celular a replicação de DNA. Células embrionárias hematopoiétícas ciciam a uma frequência muito baixa, o qua significa que cs fatores de crescimento podem ser úteis para promover a transducção de gene e assim au~ 3G mentar a perspectiva clinica para terapia genética. Aplicações potenciais de terapia genética (revista Crystal, Science 270 404-410 [1095]) incluem, 1) o tratamento de muitas desordens e imunodefscièncias metabòlicas congèni50 tas (Kay e Woo, Trends Genef. 10 253-257 [1994]), 2) desordens neurológicas (Friedmann, Trends Genet. 10: 210-214 (1994]), 3) câncer (Culver e Blaese, Trends Genet 10: 174-178 [1994]) e4) doenças infecciosas (Gilboa e Smith, Trends Genet. 10: 139-144 [1994]).
Hã uma variedade de métodos,, conhecidos daqueles versados no assunto, para introdução de material genético em uma célula hospedeira, Um número de vetores, tanto viróticos quanto nâoviróticos, tem sido desenvolvidos para transferir genes terapêuticos em células primárias. Vetores com base em vírus incluem; 1) replicação de retrovirus recombinant© defici10 ente (Boris-Lawrie e Temin, Cun'. Opin. Genet Dev. 3- 102-109 [1993], Boris-Laurie e Temin, Anars da Acadern/a de Crénc/as de /Vova torque 716: 5971 [1994], Miller, Current Top. Microbiol. Immunol 158 1-24 (1992]) e adenovirus recombinant© dificiente em replicação (Berkner, BioTechniques 6:616-629 [1988], Berkner, Current. Top. Microbiol Immunol. 158 15 : 39-66 [1922], Brody e Crystal, Anais da Academia de Ciências de
Nova torque 716: 90-103 [1994]). Vetores não com base em virus incluem complexos de protelna/DNA (Cristiano e outros, PNAS USA 90: 2122-2126 [1993], Curiel e outros, PNA.S USA 88; 8850-8854 [1991]., Curiel, Anais da Academia de Ciências de Nova torque 716: 36-58 20 [1994]), eletroporação e entrega mediada por liposomas tais como liposomas Abatiônicos (Farhood e outros Anais da Academia de Ciências de Nova Iorque 716; 23-35 [1994]).
A presente invenção fornece um aperfeiçoamento aos métodos existentes para expandir células hematopoíéticas, no qual novo material ge25 cético foi introduzido, pelo fato de que ela fornece métodos utilizando proteínas agonístas receptoras hematopoíéticas multifuncionais que têm atividade biológica aperfeiçoada incluindo uma atividade não vista por qualquer fator de estimulação de colônia.
Muitas drogas podem causar a supressão de medula óssea ou deficiências hematopoíéticas. Exemplos de tais drogas são AZT, DDI, agentes de alquilação e antímetabôlitos empregados em quimioterapia, antibióticos tais como cloranfenícol, penicilina, ganciclovir, daunomícina e dro gas cam sulfa, fenotiazonas, tranquilizantes tais coma meprobamate, analgésicos tais como aminopirina a dipirona, anticonvulsivos tais como fenitolna ou carbamazepine, antitiróides tais como propiltiouracila e metimazola e diuretioos. Os agonistas receptores hematopoléticos multifuncionais da pre5 sente invenção podem ser úteis na prevenção ou tratamento da supressão da medula óssea ou deficiências hematopoiéticas que ocorrem frequentemente em pacientes tratados com essas drogas.
Deficiências hematopoiéíicas também podem ocorrer como um resultado de infecções viróticas, microbianas ou parasíticas e como um re10 suitado de tratamento para doença renal ou falha renal, por exemplo, díáiíse. Os agonistas receptores hematopoièticos multifuncionais da presente invenção podem ser úteis no tratamento de tais deficiências hematopoiéticas.
O tratamento de deficiência hematopoiética pode incluir a apli15 cação de composição farmacêutica contendo os agonistas receptores he~ matepoiêticos multifuncionais a um paciente. Os agonistas receptores hematopoiéiicos multifuncionais da presente invenção também podem ser úteis para a ativação e amplificação do células precursoras hematopoiéíicas tratando essas células in vitro com as proteínas agonistas receptoras he20 matopoiéticas multifuncionais da presente invenção antes de injetar as células em um paciente.
Várias imunodeficiências, por exemplo nos linfóoitos T e/ou B, ou imunodesordens. por exemplo, artrites reumatóide, também podem ser beneficamente afetadas por tratamento com os agonistas receptores hema25 topoièticos multifuncionais da presente invenção. Imunodificièncías podem ser o resultado de infecções viróticas, por exemplo HTLVI, HTLVI1, HTLVIU, exposição severa à radiação, terapia de câncer ou o resultado de outro tratamento médico. Os receptores agonistas hematopoiêticos multifuncionais da presente invenção podem também ser empregados sozinhos ou em 30 combinação com outros fatores estimuiadores de colônia, no tratamento de outras deficiências de célula sanguínea, incluindo trombocitopenía (deficiência de plaquetas), ou anemia. Outros usos para esses novos polí peptídeos são tratamento in vivo e ex vivo de pacientes recuperando-se de transplantes de medula óssea, e no desenvolvimento de anticorpos monocionais e policlonais geradas por métodos padrão para diagnóstico ou uso terapêutico
Outros aspectos da presente invenção são métodos e composições terapêuticas para tratamento das condições referidas acima. Tais composições compreendem uma quantidade terapeubcamente mais eficaz de um ou mais dos agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais em uma mistura com um veículo farmaceuticamente aceitável. Esta compo10 sição pode ser ministrada tanto parenteralmente, intra-venosamente ou subcuteneamente. Quando ministrada, a composição terapêutica para uso nesta invenção está de preferência na forma de uma solução aquosa livre de pirogênio, parenteral mente aceitável. A preparação de uma solução de proteína parenteral mente aceitável, com devida atenção a pH, isotonicida15 de, estabilidade e semelhantes, esta dentro da prática e da capacidade da técnica.
O regime de dosagem envolvido em um método para tratamento das condições acima descritas será determinado pelo clínico que atende considerando os vários fatores que modificam a ação de drogas, por exem20 pio, a condição, peso corpóreo, sexo e dieta do paciente, a gravidade de qualquer infecção, tempo de aplicação e outros fatores clínicos. Geralmente, um regime diário pode estar na faixa de 0,2 -150 pg/kg de proteína agonista receptora hematopoiética multifuncional por quilograma de peso corpõreo. Dosagens seriam ajustadas relativas à atividade de uma proteína ago25 nista receptora hematopoiética multifuncional dada e não seria razoável notar que o regime de dosagem pode incluir doses tão baixas como 0,1 micrograms e tão altas como 1 miligrama por quilograma de peso corpóreo por dia. Além disso, podem existir circunstâncias especificas onde dosagens de agonista receptor hematopoiético multifuncional seriam ajustadas para cima 30 ou para baixo da faixa de 0,2 - 150 micrograrnas por quilograma de peso corpóreo. Essas incluem a co-aplicação com outros fatores de estimulação de colônia ou variantes IL-3 ou fatores de crescimento; a co-aplicação de drogas quimioterapêuticas e/ou radiação: o uso de proteína agonista receptora hematopoiética multifuncional glicosilada: e várias notificações relativas a pacientes mencionadas antenormente nesta seção. Como indicado acima, o método terapêutico e composições podem também incluir a co5 aplicação com outros fatores humanos. Uma lista não exclusiva de outros fatores de estimulação de colônia apropriados (CSFs), citocinas, limfoquinas, fatores de crescimento hemaiopoiéticos e Interleucinas para coaplicação simultânea ou em série com os polipeptídeos da presente invenção inclui ligante GM-CSF, G-CSF, c-mpl (também conhecido como TPO ou 10 MGDF), M-CSF, entropoietina (EPO), IL-1. IL-4, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6,
IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13. IL-15, IL-16, LÍF, ligante flt3/flk2( fator de crescimento de célula B, fator de diferenciação de célula B, e fator de diferenciação de eosinófilo, fator de célula embrionária (SCF) também conhecida como fator de aço ou ligante de kit c, 15 ou suas combinações. A dosagem receitada acima seria ajustada para compensar tais componentes adicionais na composição terapêutica. O progresso do paciente tratado poderia ser monitorado por avaliação periódica do perfil hematológico, por exemplo contagem diferencial de células e semelhantes,
2ó Materiais e Métodos
A menos que observado de outra forma, todos os produtos químicos foram obtidos na Sigma Co. (St Louis, MO). Endonucleases de restrição e DNA-ligase T4 foram obtidos na New England Bíolabs (Beverly, MA) ou Boehringer Mannheim (Indianapolis, IN).
Transformação de cepas E. coll
Cepas E call, tais come DH5ar' (Life Technologies, Gaisthersburg, MO) e TG1 (Amersham Corp., Arlington Heights, IL) são empregadas para transformação de reações de ligação e são fonte de DNA de plasmídeo para transfectar células mamíferas. Cepas E. coll tais como 30 JM101 (Yanisch-Perron e outros, Gene, 33: 103-119, 1985) e MON 105 (Obukowicz e outros, Appt And Envir. Mier., 58: 1511-1523, 199.2) podem ser usadas para expressar o agonists receptor hematopciético multifuncional da presente invenção no cdoplasma ou no espaço periplasmico.
MON105 ATCC#55204: F-. lambda-, IhlÇrrnD, rrE)1, rpoDt-, rpoH358
DH5o'$:F-, phi80dlacZdeítaM15, delta (lacZ¥A-argF)U169, deoR, recA1, endA1, hsdR17(rk-, mk-fo, phoA, supE44lambda-, ihi-1( gyr96, relA1
TG1: delta(lac-pro), supE, thi-1, hsdD5/F'(traD36, proA+B-E lacíq. lacZdeltaMT5)
JM101 ATCC&33876: delta (prolac), supE, thi, F^aD36'(porA-H3* fecíq, ZacZdeltaMIõ)
Células de eficiência de subdonagem DH5a'l> são adquiridas como células competentes e estão prontas para transformação empregando o protocolo do fabricante, enquanto ambas as cepas E, colí TG1 e MON1Q5 15 são tornadas competentes para pegar o DNA usando um método de CaCI2.
Tipicamente, .20 até 50 mi de células estão crescendo no meio LB (1% de bacto-tríptona, 0,5% de extrata de bacto-levedura, 150 mM de NaCI) a uma densidade de aproximadamente 1,0 unidade de densidade ótica em 600 nanómetros (OD600) conforme medido por um espectrofotômetro Spectronic 20 da Bausch & Lomb (Rochester, N Iorque). As células são coletadas por oentrifugação e ressuspensas em um volume de cultura de um-quinto de solução de CaCb (50 mM de CaCh. 10 mM de tris-CI, pH7,4) e são mantidas a 4°C por 30 minutos. As células são novamente coletadas por centrifugação e ressuspensas em um volume de cultura de um-dècimo de solução de 25 CaCú DNA ligado é adicionado a 0,2 ml dessas células, e as amostras são mantidas a 4°C por 30-60 minutos. As amostras são levadas para 42* C por dais minutos e 1,0 mi de LB è adicionado antes de agitar as amostras a 37SC por uma hora.. Células dessas amostras são espalhadas em placas (meio L8 mais 1,5% de bacto-agar) contendo tanto ampicilina (100 micro30 gramas/mi, ug/ml) quando seleciona-se transformantes resistentes a ampicilína, ou espectinomicina (75 ug/ml) quando seleciona-se transformantes re55 • 20 sistentes a espectinomicina. As placas são incubadas durante a noite a 37aC.
Colônias são selecionadas e inoculadas em antibiótico apropriado LB plus (100 ug/ml de ampicilina ou 75 ug/ml da espectinomicina) e florescem a 37*0 enquanto agitadas.
Métodos para criação de genes com o nevo término-N/término C
Método t Criação de genes com terminação N/terminaçâo C que contêm uma região de ligação (L?).
Genes com novos términos N/ término C que contêm uma região de ligação (l2) separando o término C e término N originais podem ser feitos essencialmente seguíndo-se o método descrito em L. S. Mullins, e outros J. Am. Chem Soc 116, 5529-5533, 1994). Múltiplas etapas de amplificação de cadeias de reação (PCR) polimerase são empregadas para rearrumar a sequência de DNA codificando a sequência de aminoácido da proteína. As etapas são ilustradas na figura 2.
Na primeira etapa, o primeiro conjunto primer (“novo inicio” e ” ligação de início ) è usado para enar e amplificar, a partir da sequência de gene original, o fragmento de DNA (fragmento de início”) que contém a sequência codificando a nova porção N término da neva proteína seguido pelo ligante (l2) que conecta as terminações C-término e N-térmíno da proteína original. Na segunda etapa, o segundo conjunto primer (“novo fim e “ligação de parada”) é usado para criar e amplificar, a partir da sequência de gene original, o fragmento de DNA (“Parada do fragmento”) que codifica o mesmo ligante que usado acima, seguido pela porção término C da nova proteína. Os primers novo inicio” e “novo fim” são designados para incluir os locais de restrição apropriados que permitem a clonagem do novo gene em plasmídeos de expressão. Condições PCR típicas são um ciclo de fusão a 95a C por dois minutos; 25 ciclos de desnaturação a 94C por um minuto, aneiamento por um minuto e extensão a 72*0 por um minuto; mais um ciclo de extensão a 72° C por sete minutos. Um kit de reagentes Core Perkin Elmer GeneAmp PCR é empregado, Uma reação de 100 ul contém 100 pmoles de cada primer e um ug de matriz de DNA; a 1 x tampão PCR, 200 uM dGTP, 200 uM dATP, 200 uM dTTP, 200 uM dCTP, 2,5 unidades de polimerase de DNA AmpliTag e 2 mM de MgC12. As reações PCR são executadas em um ciclador térmico de DNA modelo 480 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT).
'Inicio de fragmento e fim de fragmento que têm sequência complementar na região de ligação e a sequência codificadora para os dois aminoácidos em ambos os lados do ligante, são unidos em uma terceira etapa PCR para fazer o gene de comprimento total codificar a nova proteína. Os fragmentos de DNA fragmento da inicio e fragmento de parada são resolvidos em gel TAE 134, manchado com brometo de etidio e isolado empregando-se um kit de extração de gel Qiaex (Qiagen). Esses fragmentos são combinados em quantidades eqüímotéres, aquecidos a 70” C por dez minutos e lentamente resfriados para permitir o andamento através de sua sequência dividida no inicio de ligador e fim de ligador Na terceira etapa PCR, primers novo início e novo fim são adicionados aos fragmentos anotados para criar e amplificar o comprimento total do novo gene N término e C término. Condições típicas são um ciclo de fusão a 95” C por dois minutos; 2.5 ciclos de desnaturação a 94ÔC por um minuto, 60ftC de anelamento por um minuto e 72oC da extensão por um minuto; mais um cicio de 72oC de extensão por sete minutos. Um kit de reagentes Core Perkin Elmer GeneArnp PCR é usado. Uma reação de 100 ul contém 100 pmoles de cada primer e aproximadamente 0,5 ug de DNA; e 1 x PCR tampão, 200 uM dGTP, 200 uM dATP, 200 uM dTTP, 200 uM dCTP, 2,5 unidades de polimerase de DNA AmpliTaq e 2 mM de MgCi2. Reações PCR são purificadas empregando-se um kit de preparação Wizard PCR (Promega),
Método Ü. Criação de genes com nova término N/ término C sem uma região de ligação.
Novos genes de término N/ término C sem um ligador unindo a terminação N original e a terminação C podem ser feitos empregando duas etapas de amplificação PCR e uma ligação com extremidade inativada. As etapas são ilustradas na figura 3. Na primeira etapa, o conjunto primer (“novo inicio” e inicio de P-b? é usado para criar e amplificar, a partir da sequência de genes originais, o fragmento de DNA (início da fragmentação1') que contém a sequência codificando a nova porção N-término da nova proteína. Na segunda etapa, o conjunto pnmer (novo início” e fim de P-bl) 5 ê empregado para criar e amplificar, da sequência genética, o fragmento de
DNA (Fragmenta de parada) que contém a sequência codificando a nova porção com terminação C da nova proteína. Os primers novo início” e ’‘nova fim são projetadas para incluir locais de restrição apropriados que permitem a cionagem do novo gene nos vetores de expressão. Condições PCR típicas 10 são um cicio de fusão a 95° C por 2 minutos; 25 cicias de desnaturação a
94ÔC por um minuto, anelamenta a 50 C por 45 segundos e extensão a 72°C por 45 segundos. Polimerase Deep Vent (New England Siolabs) é empregada para reduzir a ocorrência de saliências nas condições recomendadas peío fabricante. Os primers ” início P-bl e parada P-bl” são fosforílados 15 um ao outra na extremidade 51 para auxiliar a subsequente ligação do extremidade inativada de fragmento de inicio e fragmento de parada. Uma reação de 100 ul continha 150 pmoies de cada primer e um ug de matriz de DNA; e 1 x tampão Vent (New England Biolabs), 300 uM dGTP, 300 uM dATP, 300 uMdTTP, 300 uM dCTP, e uma unidade de 20 polimerase Deep Vent. Reações PCR são executadas em um cictador térmico de DNA modeio 480 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT).
Produtos de reação PCR são purificados usando-se um kit de preparação PCR Wizard (Promega),
Os primers são projetados para incluir locais de restrição apro25 priados que permitem a clonagem do novo gene em vetores de expressão.
Tipicamente ’’início do fragmento é projetado para criar locais de restrição Ncol, e parada do fragmento è projetado para criar um local de restrição Hindlll. Reações de digestão de restrição são purificadas usando um kit sistema de limpeza de DNA mágico (Promega). Fragmentos de início e pa30 rada são dissolvidos em um gel a 1% de TAE, manchados com brometo de etidio e isolados usando um kit de extração de gel Qiaex (Qiagen). Esses fragmentos são combinados com as extremidades e ansiados a fragmento de vetar 3800 pares básico Ncol/Hindlll de p MON 3934 per aquecimento a 50°C por dez minutes e permite-se resfriar lentamente. Os três fragmentos são fígados empregando DNA-ligase T4 (Boehringer Mannheim). O resultado é um plasmídeo contendo o gene de comprimento total com término N e término C novos. Uma porção da reação de ligação é usada para transformar células DH5a (Life Technologies, Gaithersburg. MD) de sepas E. coli. DNA de plasmídeo é purificada e a sequência é confirmada como abaixo.
Método III. Criação de novos genes com término N/término C por método de duplicação em tandem.
Genes novos com término N/término C podem ser preparados com base no método desonto em R. A. Horlick e outros Protein Eng. 5.427431, 1992). A amplificação da reação em cadeia de polimerase (PCR) dos genes novos com término N/término C è realizada usando uma matriz de DNA duplicada duas a duas. As etapas são ilustradas na figura 3.
A matriz de DNA duplicada em tandem è criada por clonagem e contém duas cópias do gene separado por sequência de DNA codificando um primer conectando as extremidades com término C e término N originais das duas cópias do gene. Conjuntos de primers específicos são usados para criar e amplificar um gene com término N/término C da matriz de DNA duplicada em tandem. Esses primers são projetados para incluir tocais de restrição apropriados que permitem a clonagem do novo gene em vetores de expressão. Condições de PCR típicas são fusão a 95°C em um ciclo por dois minutos; desnaturação em 25 ciclos a 94QC por um minuto, anelamento a 50°C por um minuto e 72% de extensão por um minuto; mais um ciclo a 72*0 de extensão a 72°C por sete minutos. É usado um kit de reagentes Core Perkin Elmer GenAnp PCR (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT), Uma reação de 100 ul contém 100 pmoles de cada primer e um ug de matriz da DNA; e um tampão PCR 1x, 200 uM dGTP, 200 uM dATP, 200 uM dTTP, 200 uM dCTP, 2,5 umdades de DNA-polimerase AmpliTaq e 2 mM MgCL Reações de PCR são realizadas em um cidader térmico de DNA modelo
480 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT). Reações PCR são purificadas usando um kit de preparação Wizard PCR (Promega).
Clonagem de novos genes com término N/término C ern vetores de expressão agonistas receptores multifuncionais
O novo gene com término N/término Ç é agrupado com endonucleases de restrição para criar extremidades que são compatíveis com a inserção em um vetor de expressão contendo outro gene com fator de estimulação de colônia. Este vetor de expressão é igualmente agrupado com endonucleases de restrição para formar extremidades compatíveis. Após a 10 purificação, o gene e os DNAs vetores são combinadas e ligados usando
DNA-lígase T4. Uma porção da reação de ligação é usada para trasnformar E. coli UNA de plasmídeo é purificado e seqüenciado para confirmar a inserção correta. Os clones carretos são cultivados para expressão de proteína.
Isolamento de DNA e caracterização
DNO plasmídeo pode ser isolado por um número de diferentes métodos e usando kits comercialmente disponíveis conhecidos daqueles versados no assunte. Alguns tais métodos são mostrados aqui, DNA de plasmídeo é isolado usando o kit de minipreparação Promega Wizard 20 (Madison, Wl), os kits de isolamento de Plasmídeo Qiagen QJAwell (Chatsworth, CA) nu mídí kit de plasmídeo Qiagen. Esses kits seguem o mesmo procedimento geral para isolamento de DNO plasmídeo. Resumidamente, células são pelletizadas por centrifugação (5000 x g), DNA de plasmídeo è desprendido com tratamento seqüênctel de NaOH/ãcido, e o frag25 mento celular é removido por centrifugação (10 000 x g), O sobrenadante (contendo o DNA de plasmídeo) é carregado em uma coluna contando uma resina lígante de DNA, a coluna é lavada, e DNA de plasmídeo diluido com TE, Apôs monitoramento das colônias com o plasmídeo de interesse, as céfu/as de E. cair são ínoculadas em 50-100 ml de antibiótico apropriado LB 30 plus para crescimento durante a noite a 37^0 em um incubador de ar com agitação. 0 DNA de plasmídeo purificado é usado para seqüènciamento de DNA, além de digestão de enzima de restrição, adícíonalmenle subclona gem de fragmentos de DNA. e transfecção em células mamíferas, E co/f e outras células.
Confirmação da sequência
DNA de piasmídeo purificado é ressuspenso em dH3O e quanti5 ficado per medição da absorbância em 260/280 nm em urn espectrômetro Spectromc 601 UV da Bausch and Lomb. Amostras de ONA são seqüenciadas usando kits terminadores de seqüênciação química ABI PRISM*' DyeDeoxy* (Applied Biosystems Division of Perkin Elmer Corporation, Lincoln City, CA) (Número da peça 401388 ou 402078) de acordo com o protocolo 10 sugerido pelos fabneantes comumente modificados pela adição de 5% de DMSO à mistura de seqüènciamento. Reações de seqüènciamento são executadas em um ciclador modelo 480 DNA térmico (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT) seguindo as condições de amplificação recomendadas. Amostras são purificadas para remover excesso de terminadores de corante 15 com colunas de spin Centri-Sep*' (Princeton Separations, Adeíphia. NJ) e liofilizados. Reações de seqüènciamento marcadas com corante fluorescente são resuspensas em formamides desionizadas, e seqüencíadas em géis de uréia poliacrilamida 8M 4,75% desnaturados empregando um seqüencíador de DNA automatizado ABI modelo 373A. Fragmentos de se20 qüência de DNA sobrepostos são analisados e agrupados em master DNA contigs usando um software de análise de DNA Sequenoher v2.1 (Genes Codes Corporation, Ann Arbor, Mt).
Expressão de aqonistas receptores multifuncionais em células mamíferas
Transfecção de Célula mamífera/produção de meios condicionados
A linha celular BHK-21 pode ser obtida a partir da ATCFC (Rockville, MD). As células sâo cultivadas no meio Eagle modificado da Dubelcco (DMEM/glucose alta), suplementado com 2 mM (mM) de L-gíutamina 30 e 10% de soro bovino fetal (FBS). Esta fórmula é designada meio de cres cimento BHK. Meios seletivos sâo meio de crescimento BHK suplementado com 453 unidades/ml de higramicina B( Calbiochem, San Diego, CA). .A li nha celular BHK-21 fol previamente transfeciada estavelmente cem a proteína de transativaçâo HSV VP16. que transatíva o promotor IE110 observado no plasm ideo p MON3359 (ver Híppenmeyer e outros, Bia/Technology, pégs. 1037-1041, 1993). A proteína VP16 causa a expressão de genes inse5 ridos atrás do promotor ÍE110. Células BHK-21 expressando a proteína de transativaçâo VP16 são designadas BHK-VP16. O plasmídeo p M0N1118 (Ver Highkin e outros, Poufáy Sei, 70: 970-981, 1991) expressa o gene de resistência a higromioina do promotor SV40. Um plasmídeo similar está disponível na ATCC, pSV2-hph.
Células BHK-VP16 são semeadas em um prato de tecido de cultura de 60 milímetros (mm) em células de 3 x 10s por prato 24 horas antes da transfecção. Células são transferidas por 16 horas em 3 ml de ΌΡΤΙΜΕΜ'* (Gibco-BRL, Gaithersburg, MD) contendo 10 ug de DMA de plasmídeo contendo os genes de interesse, 3 ug de plasmídeo resistente a higromícina, p M0N1118, e 80 ug de Gibco-BRL TIPOFECTAMINE’'* por prato. O meio é subsequentemente aspirado e substituído com 3 ml de meio de crescimento. 48 horas apôs a transfecção, é coletado meio de cada prato e testado em relação à atividade (meio transiente condicionado). As células são removidas do prato por trípsina EDTA, diluídas 1:10 e transferidas a 100 2Q mm de pratos de cultura de tecido contendo 10 ml de meio seletivo. Células resistentes crescem para formar colônias com muitos milímetros de diâmetro, após aproximadamente 7 dias em meio seletivo. As colônias são removidas do prato com filtro de papel (cortado em aproximadamente o mesmo tamanho que as colônias e embebidos em tripsina/EDTA) e transferidas para cavidades individuais de 24 placas de cavidades contendo 1 ml de meio seletivo. Após os clones crescerem até a confluência, o meio condicionado é retestado, e clones positivos são expandidos em um meio de crescimento.
Expressão de agonistas receptores multifuncionais em E. co//
Cepas E. Coê MON105 ou JMiO1 abrigando o plasmídeo que interessa são cultivadas a 37aC em meio ácido casamino M9 plus com agitação em um incubador de ar Modelo G25 de New Brunswick Scientific (Edison, New Jersey).. O crescimento é monitorado a OD600 até que ele atinja o valer de 1:0. tempo em que ácido naüdíxico (10 miligramas/ml) em NaOH 0,1 N é adicionada até uma concentração final de 50 pg/ml, As culturas são então agitadas a 375C por três ou quatro horas adicionais, Um alto.
grau de aeração é mantido através do período de cultura para adquirir a produção máxima do produto gene desejado. As células são examinadas sob um microscópio com luz para a presença de corpos de inclusão (IB).. Uma aliquota em ml da cultura é removida para análise do teor de proteína por ebulição de células pelletizadas, tratando-as com tamponador reduzido 10 e eletroforese via SDS-PaGE (ver Maniatis e outros, Mo/ecu/ar C/on/ng, A laboratory Manual, 1982). A cultura é centrifugada (5000 x g) para pelotízar as células
Preparação de çofpcsdejnci^^^^ lise, cromaiografía DEAE, e caracterização jjps. agonistasreceptores he15 matopoièticos multifuncionais que acumulam como corpos de inclusão em E aoii
Isolamento dos corpos de inclusão.
O pellet de células de uma cultura de E. coli de 330 ml é resuspenso em 15 ml de solução tampão com irradiação sônica de cloridrato (trís20 HCI) de(W mM 2-amíno-2-(hidróximetil)-1,3-propanodiol, pH 8,0 + 1 mM ácidc etilenodiaminotetracétíco (EDTA). Essas células resuspensas são expostas a irradiações sônicas usando-se a amostra microtipo de Separador Celular irradiador Sônico (modelo W--375, Heat Systems-Ultrasonis, Inc., Farmingdale, Nova Iorque). Três etapas de irradiação sônica em 25 solução tampão sônica seguido por centrifugaçâo são empregadas para separar as células e lavar os corpos de inclusão (IB). A primeira etapa de irradiação sônica é um rompimento de 3 minutos seguido por 1 minuto de rompimento, e as duas etapas finais de irradiação sônica são de 1 minuto cada.
Extração e redobramento de proteínas das pellets do corpo de inclusão
X03
Seguindo a etapa de centrifugação finai., a pellet IB ê resuspensa em 10 ml de 50 mM de trís-HCI, pH 9,5, uréia 8M e 5 mM de ditiotreitol (DTT) e agíta-se à temperatura ambiente por aproximadamente 45 minutos para permitir a desnaturaçào da proteína expressa,
A solução de extração é transferida a um béquer contendo 70 ml de Tris-HCI 5 mM, pH 9,5 e uréia 2,3 M e agíta-se gentilmente enquanto expõe-se ao ar a 4°C por 18 até 48 horas para permitir que as proteínas se dobrem, O dobramento é monitorado per análise em uma coluna (0,46 x 25cm) cromatográfica (RP-HPLC) líquida de alta pressão com fase reversa 10 C18 Vysdac (Hesperl, Ca). Um gradiente linear de 40% até 65% de acetonitrile, contendo 0,1% de ácido trifluoracético (TFA). é empregado para monitorar o dobramento. Este gradiente é desenvolvido por 30 minutos a uma taxa de fluxo de 1,5 ml por minuto. Proteínas desnaturadas geralmente diluem mais tarde no gradiente do que as proteínas dobradas.
Purificação.·
Seguindo o dobramento, proteínas E. co/í contaminadas são removidas por precipitação ácida. O pH da solução dobrada é titrado entre pH 5.0 e pH 5,2 usando 15% (v/v) de ácido acético (HOAc). Esta solução é agitada a 4rt C por 2 horas e depois centrifugada por 20 minutos a 12.000 x g 20 para pelletizer qualquer proteína insolúvel.
O sobrenadante da etapa de precipitação ácida é diallsado empregando-se uma membrana Spectra/Por 3 com um peso molecular (MWCO) de 3,500 daltons. A diálise é contra duas mudanças de 4 litros (um excesso de 50 vezes) de 10 mM Tris-HCI, pH 8,0 por um total de 18 horas.
A diálise diminui a condutlvldade da amostra e remove uréia antes da cromatografia OEAE. A amostra é então centrifugada (20 minutos a 12.000 x g) em pellets de qualquer proteína insolúvel em seguida à diálise.
Uma coluna bio-rad Bio-scala OEAE2 (7 x 52 mm) é empregada para cromatografia de troca de ions. A coluna è equilibrada em uma solução 30 tampão contendo 10 mM de Tris-HCI., pH 8.0, e um gradiente de cloreto de sódio de, 0 a 500 mM (NaCI), em tamponador em equilíbrio, e acima de 45 volumes de coluna são empregados para diluir a proteína
Um fluxo de escoamento de 1,0 mL por minuto ê empregada através do processo, Frações de coluna (2,0 ml por fração) são coletadas através de gradiente e analisadas por RP HPLC em uma oolunaVydec (hesperia, Ca. ) Cl 8 (0,46 x 25 cm). É empregado um gradiente linear de 40% atè 65'% de acetonitrile, contendo 0,1% de ácido triflúoracético (TFA). Este gradiente é desenvolvido por 30 minutos a uma taxa de fluxo de 1,5 ml por minuto. Frações acumuladas são então dialisadas com 2 mudanças de 4 litros (excesso de 50 a 500 vezes) de 10 mM de acetato de amõnio (NH4Ac), pH 4,0 por um total de 18 heras. A diálise é executada usando uma membrana Spectra/Por 3 com um peso molecular (MWCO) de 3500 daltons. Fmalmente, a amostra ê estérílmente filtrada empregando um filtro com seringa de 0,22 pm (filtro de seringa pSíar LB, Costar, Cambridge, Ma.), e armazenada a 4*C.
Em alguns cases as proteínas multiplicadas podem ser purificadas per afinidade empregando reagentes de afinidade tais como mAbs ou subunidades receptoras ligadas a uma matriz apropriada. Alternativamente, (ou em adição) a purificação pode ser realizada usando qualquer um de uma variedade de métodos de cromatografia tais como: troca de íon. flltração por gel ou cromatografia hidrofóbica ou HPLC de fase reversa.
Esses e outros métodos de purificação de proteína são descritos em detalhe em Methods in Enzymology, Volume 182, Guide to Protein Purification editado por Murray Deutscher, Academic Press., San Diego, CA (1990).
Caracterização da Proteína:
A proteína, purificada è analisada por RP-HPLC, espectroscopía de massa per eletroborrifo, e SDS-PAGE. A quantificação da proteína é feita por composição de aminoácido, RP-HPLC, e determine de proteína Bradford. Em alguns casos o mapeamento de peptideo tríptico é realizado juntamente com espectroscopia de massa por eletrobornfo para confirmar a identidade da proteína.
Ensaio de Proliferação AML para lnterleucina-3 humana hjoatxm A linha celular AML 193 dependente do fator foi obtida da American Type Culture Collection (ATCC. Rockville, MD). Esta linha celular estabelecida de um paciente com leucemia mielogenosa aguda, é uma linha 5 celular dependente de fator crescimento que mostrou crescimento elevado no meio adicionado corn GM-CSF (Lange, B.: e outros, 8/ood 70:192, 1987; Valtíeri, M., e outros, J Zmmuno/. 138: 4042, 1987). A capacidade das células AML 193 proliferarem na presença de IL-3 humano também fm documentada. (Santob, D., e outros, J. /mmunof. 139: 348, 1987) Uma variante 10 de linha celular foi usada, AML 193 1.3 posteriormente por meie de cultura d® tecido suplementar (ver abaixe) com IL-3 humano.
Células AML 193 1.3 são lavadas 6 vezes em solução salina balanceada fria de Hanks (HBSS. Gibco, Grand Island, Nova Iorque) por centrifugação de suspensões celulares a 250 x g por 10 minutos seguido 15 por decantação do sobrenadante. Células em pellets são resuspensas em HBSS e o procedimento é repetido até seis ciclos de lavagem serem completados. Células lavadas seis vezes por este procedimento são ressuspensas em meio de cultura de tecido a uma densidade variando de 2 x 105 até 5 x 10δ células viáveis/ml. Este meio é preparado por suplementação de meio 20 Dulbecco modificado por Iscove (IMDM, Hazelton, Lenexa, KS) com albumins, transferrina, lipídeos, e 2-mercaptoetanol. Albumins bovina (BoehringerMannheim, Indianapolis. IN) é adicionada em 500 pgfmí; transferina humana (Boehringer-Mannheim, Indianapolis, IN) é adicionada em 100 ug/ml, hpidio de soja (Boehnnger-Mannheim, Indianapolis, IN) é adicionado em 50 ug/ml; 25 e 2-mercaptoet.anol (Sigma, S. Louis, MO) é adicionado a 5 x 10’5 M.
Diluições em série de inierleucina - 3 humana ou proteínas agonistas receptoras hematopoiêtícas multifuncionais são feitas em sénes triplicadas em meio de cultura de tecido suplementados conforme citado acima em 95 placas de cultura de tecida em cavidade 3596 Costar, Cada qual 30 continha 50 ug de meio contendo inferleucina-3 eu proteínas agonistas receptoras hematopoiéticas multifuncionais uma vez que as diluições em série esteiam completas. Cavidades de controle só continham meio de cultura de tecido (controle negativo) Suspensões celulares AML 193 1,3 preparadas conforme acima são adicionadas a cada cavidade pipetando-se 50 pg (2,5 x 104 células) em cada cavidade. Placas de cultura de tecido são incubadas a 37°C com CO2 5% em ar umidificado por 3 dias.
No dia 3, adicionou-se 0,5 pCi de Ή-timidina (2 Ci/mM, New England Nuclear, Boston, MA) em 50 μ! de meio de cultura de tecido. Culturas são incubadas a 37*0 com CO2 5% em ar umidificado por 18-24 horas. DNA celular é colhido em almofadas de filtro de vidro (Pharmacia LKB, Gaithersburg, MD) empregando-se uma máquina recoihedora celular TOMTEC (TOMTE.C, Orange, CT) que utilizou um ciclo de lavagem com égua seguido por um ciclo de lavagem com etanol 70%. Permite-se que almofadas de filtro sequem ao ar seco e depois são colocadas em sacos de amostra aos quais adiciona-se fluido de cintilação (Scintiverse II, Fisher Scientific. St. Louis. MO ou BetaPlate Scintillation Fluid, Pharmacia LKB, Gaithersburg, MD). Emissões beta de amostras de cavidades para cultura de tecido individuais sac contadas em um contador de cintilação LKB BetaPlate modelo 1205 (Pharmacia LKB, Gaitherburg, MD) e os dados são expressos como contagens por minuto de Ή-tiamidina incorporada em células de cada cavidade para cultura de tecido. Atividade de cada preparação de interleucina 3 humana ou preparação de proteína agonista receptora hematopoiétíca multifuncional é quantificada por mensuração de proliferação celular (incorporação de Ή-tiamidina) induzida por concentrações graduadas de interleucina-3 ou de agonista receptor hematopoiético multifuncional. Tipicamente, faixas de concentração variando de 0,05 pM - 105 pM são quantificadas nesses ensaios. A atividade é determinada por medição da dose de interleucina 3 ou proteína agonista receptora hematopoiética multifuncional que fornece 50% da proliferação máxima (ECkj ™ 0,5 x (contagem média máxima por minuto de Ή timidina incorporada por cavidade entre culturas triplicadas de todas as concentrações de interleucina 3 testadas proliferação de base medida por incorporação de ’ H timidina observada em culturas triplicadas sem interleucina 3).
Este valor ECSo também é equivalente a 1 unidade de bioatividade.
Cada ensaio é executado com interleucina-3 como um padrão de referencia de modo que níveis de atividade relativa poderíam ser designados.
Tipicamente, as proteínas agonistas receptoras hematopoiéticas multifuncionais foram testadas em uma faixa de concentração de 2000 pM até 0,06 pM titradas em diluições dobradas em série.
Atividade para cada amostra foi determinada pela concentração que produziu 50% da resposta máxima ajustando um modelo logístico de quatro parâmetros para os dados. Observou-se que o platõ superior (resposta máxima) para a amostra e o padrão com o qual ela foi comparada não diferiram. Portanto o cálculo da potência relativa para cada amostra foi determinado a partir de estimativas EC5G para a amostra e o padrão conforme indicado acima. Células AML 193.1.3 proliferaram em resposta a hlL3, hGM-CSF e bG-CSF. Portanto, os seguintes ensaios adicionais foram executados para algumas amostras para demonstrar que a porção de agonists receptor G-CSF das proteínas agonistas receptoras hematopoiéticas multifuncionais estava ativa. O ensaio de proliferação foi realizado com o agonists receptor hematopoiético multifuncional neutralizando mais e menos os anticorpos monoclonais para a porção agonists receptora hlL-3, Em adição, uma molécula de fusão com o local de divagem fator Xa foi clivada então purificada e as metades da molécula foram testadas em relação â atividade proliferative. Esses experimentos mostraram que ambos os componentes das proteínas agonistas receptoras hematopoiéticas multifuncionais estavam ativos.
Ensaio de Proliferação dependente do ligante TF1 c-mpl
A atividade proliferative ligante c-mpl pode ser testada usando um subclone da ünha celular humana pluripotencial TF1 (Kitamura e outros, J, Cell Physio! 140.323-334.(1989)). Células TF1 são mantidas em um h-IL3 (100 U/ml). Para estabelecer um subclone sensível ao ligante c-mpl, células são mantidas em meio de passagem contendo 10% de sobrenadante das células BHK transfectadas com o gane expressando a forma 1-153 do Hgante c-mpl (p M0N26448). A maioria das células morre, mas um subconjunto da células sobrevive. Após a diluição da clonagem, um clone sensível a ligante c~mpi é selecionado, e essas células são rompidas em meio de passagem até uma densidade de 0.3 x 10 celulas/ml no dia anterior a organização do ensaio. Meio de passagem para essas células é o seguinte'. RPM! 1640 (Gibco), 10% PBS (Harlan, Lot #91206), 10% de sobrenadante ligante c-mpl de células transfectadas BHK. 1 mM de piruvato de sódio (Gibco), 2. mM de glutamine (Gibco), e 100 ug/ml de penicüinaestreptomicína (Gibco). No dia seguinte, células são colhidas e lavadas duas vezes em meio RPMI ou ÍMDM com uma lavagem final no meio ATL ou meio de ensaio.. Meio ATL consiste dos seguintes: IMDM (Gibco), 500 ug/ml de soro albumins bovine, 100 ug/ml de transferrins humana, 50 ug/ml de IIpídeos de soja, 4 x 10-8M beta-mercaptoeíanol e 2 ml de A9909 (Sigma, solução de antibiótico) por 1000 ml de ATL. Células são diluídas em meio de ensaio até uma densidade final de 0,25 x 10“' céluías/ml em um prato de evaporação baixa com 96 cavidades (Costar) a um volume final de 50 ul, Sobrenadantes transientes (meios condicionados) de clones transfectados são adicionados a um volume de 50 ul como amostras duplicadas a uma concentração final de 50% e diluídos três vezes a uma diluição final de 1,8%. Amostras triplicadas de uma dose curva de p MON13288 variante IL-3 iniciando em 1 ng/ml e diluídas empregando diluições triplas para 0.0014ng/ml estão incluídas como um controle positivo. Placas são incubadas a COS5% e 37*0. No sexto dia de cultura, a placa é pulsada com 0.5 Ci de 3H/cavidade (NEN) em um volume de 20 ul/cavidade e permíte-se incubar a CO2 5% e 37’C por quatro horas. A placa é colhida e contada em um cantador Betaplate.
Outras ensaios de proliferação com base em células in vitro
Outros ensaios com base em células in vitro, conhecidos por aqueles versados na técnica, podem também ser úteis para determinar a atividade dos agonístas receptores hematopoiéticos multifuncionais dependendo dos fatores que compreendem a molécula de uma maneira similar conforme descrito no ensaio AML 193.1.3 de proliferação celular. O que segue sâo exemplos de outros ensaios úteis.
Ensaio TF1 de proliferação: TF1 è uma linha celular humana pluripotencial (Kitamura e outros, J Cell Physiol 140:323-334. ([1989]) que 5 responde a hlL-3;
Ensaio da proliferação 32D: 32D é um linha celular dependente de um murino IL-3 que nâo responde a IL-3 humana mas responde a G-CSF humano que não ê restrito a espécies.
Ensaio de proliferação Baf/3: Baf/3 é uma linha celular depen10 dente de murino IL-3 que não responde a IL-3 humano ou c-mpl humano mas responde a G-CSF humano que não é restrito a espécies.
Ensaio de proliferação T1165: células T1165 são uma linha celular de murino dependente de IL-6. (Nordan e outros, 1986) que responde a IL-6 e IL-11.
Ensaio meg-CSF humano de plasma coagulado: Usado para testar atividade de formação de colônia de megacariôcito (Mazur e outros, 1981)
Linhas celulares transfectadas;
Linhas celulares tais como linha celular 8af/3 de murino podem ser transfectadas com um receptor de fator estimulador de colônia, tal como o receptor G-CSF humana ou o receptor c~mpl humano, que a linha celular não tem. Essas linhas celulares transfectadas podem ser usadas para determinar a atividade do ligante para o qual o receptor foi transfectado na linha celular
Uma tal linha celular Baf/3 transfectada foi feita por clonagem de cDNA codificando c-mpl de uma biblioteca feita de uma linha celular sensível e clonada no local de clonagem múltiplo do plasmídeo pcDNA3 (Invitrogen, San Díego, Ca.}. Células Baf/3 foram transfectadas com o plasmídeo via eietroporaçâo. As células foram criadas sob seleção G418 na presença de rato IL-3 em meros Wehi condicionados Clones foram estabelecidos por diluição limitada.
De uma maneira similar o receptor humano g-CSF pode ser trasnfectado em uma linha celular Baf/3 e usado para determinar a bioatividade dos agonistas receptores hemapoiétícos multifuncionais.
Análise de atividade proliferattva hgante c-mpl
Métodos
1. Teste de proliferação de medula óssea
a. Purificação de célula CD34 +:
Aspirados de medula óssea (15-20 ml) foram obtidos de doadores de medula alogênics normal após consentimento informado. Células fo10 ram diluídas 1:3 em solução salina tampão de fosfato (PBS, Gibco-BRL.), colocou-se 30 ml em camadas sobre 15 ml de Hístopaque-1077 (Sigma) e centrifugou-se por 30 minutos a 300 RCF. A camada de interface mononuclear foi coletada e lavada em PBS. Células CD34+ foram enriquecidas a partir da preparação de células mononucleares usando uma coluna de afiní15 dada conforme instruções do fabricante (CelIPro, Inc. Brothel! WA). Após enriquecimento, a pureza das células CD34+ estava 70% em média conforme determinado empregando análise citométrioa de fluxo usando anticorpo monoclonal antiCD34 conjugado a fluorescina e antiCD38 conjugado a ficoentrina (Becton Dickinson, San Jose CA).
Células foram resuspensas em 40 000 célulasfml em 10 meios ex-vivo (8io-Whittaker, Walkersville. MD) e 1 ml foi aplicado em 12 cavidades com placas de cultura de tecido (Costar), O fator de crescimento rhlL-3 foi adicionado a 100 ng/ml, (p MON5873) foi adicionado a algumas cavidades. Variantes hlL3 foram usadas a 10 ng/ml até 100 ng/ml. Meios condido25 nados das células BHK transfectadas com plasmídeo codificando o Hgante c-mpl ou agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais foram testados por adição de 100 μΙ de sobrenadante adicionado a 1 ml de culturas (aproximadamente uma diluição de 10%). Células foram incubadas a 37 C por 8-14 dias em CO2 5% em um mcubador umidificado a 37X.
b. Colheita celular e análise:
Ao final do período de cultura uma contagem total de células foi obtida para cada condição. Para análise fluorescente e determino ploidy.
células foram lavadas em tampão megacariócito (solução tampão MK, citrato de sódio 13,6 mM, teofilina 1 mM, 2,2 p.m PGE1, 11 mM de glucose, 3 % em pesofvol, BSA em PBS, pH 7,4) (Tomer e outros, Blood 70. 17351742, 1987) ressuspensos em 500 μΙ de solução tampão MK contendo anti5 corpo FITC antiCD41a (1:200, AMAC, Westbrook, ME) e lavadas em solução tampão MK. Para anáhse de DNA células foram permeabilizadas em solução tampão MK contendo 0,5% de Tween 20 (Fisher, Fair Lawn NJ) por 20 minutos em gelo seguido por fixação em 0.5% de Tween-20 e 1% de paraformaldeído (Fisher Chemical) por 30 minutos seguido por incubação em 10 iodeto de propídio (Calbiochem. La Jolía Ca) (50 pg/ml) com RNA-ase (400 U/ml) em 55% v/v de solução tampão MK (200 mOsm) por 1-2 horas em gelo. Células foram analízadas em um citómetro de fluxo F AC Scan ou Vantage (Becton Dickinson, San Jose, CA). Fluorescência verde (CD41a-FITC) foi coletado juntamente com sinais lineares e de log para fluorescência ver15 melha (PI) para determinar DNA ploidy. Todas as células foram coletadas para determinar a porcentagem de células que eram CD41+, Análise dos dados foi realizada usando software de LYSIS (Becton Dickinson, San Jose, CA). A porcentagem de células expressando o antígeno CD41 foi obtida a partir de análise de citometria de fluxo (Porcentagem). O número absoluto 20 (Abs) de çélulas/CD41 + ml foi calculado por (Abs) - (Contagem de células) *(porcentagem)/100.
2. Teste de coagulaçâo de fibrina megacariócita
População enriquecida em CD34* fos isolada conforme descrito acima. Células foram suspensas em 25,000 células/ml com ou sem citocl· 25 na(s) em um meio consistindo de um meio de base Iscoves IMDM suplementado com 0,3% de BSA, 0,4 mg/ml de apo-transferrina. 6?67 μΜ de FeCla, 25 pg/ml de CaCh, 25pg/ml de L-aspargína, 500 pg/ml de ácido εamino-n-capróico e penicilina/estreptomícina. Antes da aplicação em placas de 35 mm, trombina foi adicionada (0,25 unidade/ml) para iniciar a formação 30 de coagulaçâo. Células foram incubadas a 37eC por 13 dias a CO^ 5% em um mcubador umidificado a 37aC.
No ftnai do período de cultura, placas foram fixadas com metanol: acetone (1 : 3). secadas a ar, e armazenadas a -200°C até mancharem. Foi usado um procedimento de manchar com peroxidase por ímunociloquimica (Zymed, Histostaín-SP. São Francisco. CA) usando um coquetel de anticorpos monoclonais primários consistindo de antiCÜ41a, CD42 e CD61. Colônias foram contadas após mancharem e classificadas como negativas, CFU-MK (colônias pequenas,, com 1-2 focos e menores do que aprox. 25 células), BFU-MK (colônias grandes, multi-focos com >25 células) ou colônias misturadas (mistura de ambas as células positivas e negativas).
Ensaio..de.Metiloeiulpse
Este ensaio reflete a capacidade de fatores de estimulação de colônia para estimular células de medula óssea normais para produzir diterentes tipos de colônias hematopoíétícas in vitro (Bradley e outros, Aust Exp. Biol Scí 44: 287-300, 1966), Pluznik e outros, J. Cell Comp. Physio 66: 319-324,1965).
Métodos
Aproximadamente 30 ml de aspirados de medula óssea saudável, fresca, normal são obtidas de indivíduos após seu consentimento informado. Sob condições estéreis amostras são diluídas 1:5 com solução 1X PBS (#14040.059 Life Technologies, Gaithersburg, MD) em um tubo cônico de 50 ml (#25339-50 Corning, Cornig MD). Ficoll (Hístopaque 1077 Sigma H-8889) é colocado em camadas sob a amostra diluída e centrifugado, 300 x g por 30 minutos. A faixa de célula mononuclear è removida e lavada duas vezes em 1 x PBS e uma vez com 1% de BSA PBS (CelíPro Co., Bothel, WA). Células mononucleates são contadas e células CD34·*· são selecionadas empregando-se o kit de coluna Ceprate LC (CD 34) (CellPro Co., Bothel, WA). Este fracíonamento é realizado já que iodas as células embrionárias e progenítoras dentro da medula óssea mostram o antígeno de superfície GD34.
Culturas são estabelecidas três a três com um volume final de 1,0 ml em um prato petri de 35 x 10 mm (Nunc#174926). Meio de cultura é adquirido da Terry Fox Labs, (meio HCC-4230) (Terry Fox Labs, Vancouver.
B. C., Canada) e eritropoietina (Amgen, Thousand Oaks, CA.) é adicionada ao meio de cultura, 3 000-10 000 células CD34+ são adicionadas por prato.
IL-3 racambinante purificado a partir das células de mamíferas ou E. co/í, e proteínas agonistas receptoras hematopoíéticas multifuncionais, em meio 5 condicionado de células mamíferas transfectadas ou purificadas de meios condicionados de células mamíferas transfectadas ou E. cati, são adicionadas para produzir concentrações finais variando de 0.001 nM até 10 nM. Ligante HIL-3 reoombinante, GM-CSF, c~mpl e agonísta receptor hematopoiéfico multifuncional são fornecidos na casa. G-CSF (Neupogen) é da Amgen 10 (Thousand Oaks Calf. ). Culturas são resuspensas empregando-se unia seringa de 3 cc e 1,0 ml é distribuído por prato. Culturas de controle (resposta de referência básica) não receberam nenhum fator estimulador de colônia. Culturas de controle positivo receberam meios condicionados (células humanas estimuladas por PHA): Terry fox Labs. H24Q0). Culturas saa incuba15 das a 37ÔC, 5% de COS em ar umidificado. Colônias hematopoíéticas que são definidas como sendo maiores do que 50 células sào contadas no dia da resposta de pico (dias 10-11) usando um microscópio de fase invertida Nikon com uma combinação de objetiva 40x. Grupos de células contendo menos do que 50 células são referidas aqui como clusters (aglomerados). 20 Alternatívamente colônias podem ser identificadas por espalhamento das colônias em uma lâmina e manchadas ou elas podem ser separadas, resuspensas e repuxadas em lâminas de citospína para mancharem.
Ensaios de Fator de..Crescimento hemopoético de Sangue de cordão umbilical humano,
Células de medula óssea são tradícíonalmente usadas para ensaios in vitro de fator de estimulação de colônia hemaiopotética (CSF). Entretanto, medula óssea nem sempre está disponível, e há uma variedade considerável entre doadores. Cordão umbilical é comparável a medula óssea como uma fonte de células embrionárias hematopoíéticas e progenito·· 30 ras (Broxmeyer e outros,. PA/AS USA 89:4 109-113, 1992; Mayani e outros, B/ood 81 > 3252- 3258, 1993). Em contraste com medula óssea, sangue de cordão está mais prontamente disponível em uma base regular. Há portanto
um potencial para reduzir a variabilidade do ensaio por células de cavidades obtidas frescas de diversos doadores, ou para criar um banco de células cnopreservadas para este propósito. Modificando as condições de cultura, e/ou anaiisando marcadores específicos de cepa, é possível ensaiar es-
5 pecificamente colônias de granulócitos/macrófagas (CFU-GMj, para atividade megacariòcita, ou para atividade ceiuiar (HPP-CFC) formando colônia com aiio potencial proiiferante. Métodos
• 10 16 Células mononucleares (MNC) são isoladas de cordão umbilical dentro de 24 horas de coleta, empregando um gradiente de densidade padrão (1.077 g/ml Histopaque). MNC de cordão umbilical foram ainda mais enriquecidas por células embrionárias e progenitoras por diversos procedimentos, incluindo seleção imunomagnétíca para células CD14, CD34+; bateia de fração S8A-, GD34+ usando frascos revestidos da Applied immuno Science (Santa Clara, CA); e seleção CD34+ usando uma coluna de avidina da CellPro(Boihell· WA) Frações enriquecidas com célula CD34+ enriquecidas tanto recentemente isoladas ou criopreservadas, são usadas para o ensaio. Culturas duplicadas para cada diluição em série de amostra (faixa de concentração de 1 pM até 1204 pM) são preparadas com células 1x1204
φ 20 em 1 ml de 0,9% de metilcelulose contendo meio sem fatores de crescimento adicional (Methocuít H4230 da Stem Cell Technologies, Vancouver. BC.) Em alguns experimentos, Methocuít H4330 contendo eritrcpoietina (EPO) foi usado ao invés de Methocuít H4230, ou adícionou-se fator de célula embrionária (SCF), 50 ng (Biosource International· Camarillo, CA).Apôs
25 cultura por 7-9 dias, as colônias contendo >30 células são contadas. Para excluir inclinações subjetivas nas avaliações, os ensaios são avaliados cegamente. Detalhes adicionais acerca de métodos recombínantes de DMA, que podem ser usados para criar as variantes, expressá-las em bactérias.
30 células mamíferas, ou células de insetos, purificação e redobramento das proteínas desejadas e ensaios para detérmlno da bioatividade das proteínas podem ser encontradas em aplicações co-arquivadas WO 95/00646, WO
94/12639, WO 94/12638, WO 95/20976, WO 95/21197, WO 95/2097?.. WO 95/21254 e US 08/383 035 que são incorporadas inteiramente aqui como referência.
Outros detalhes conhecidos daqueles versados na técnica po~ dem ser encontrados em T. Maníatis. e outros, Molecular Cloning., A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory. 1982) e referências aqui citadas, incorporados aqus como referência: e em J. Sambrook e outros, Molecular Cloning. A Laboratory Manual, segunda edição, Cold Spring Harbor Laboratory, 1989) e referências citadas aí, incorporadas aqui como referén10 cia.
Tabela 1
Oliqonuc leofc ídeos ,WWIWW»MiWlWWWW*WM*!11 ί ? I1 »<wwAwwwwwwwrt*AA^wft*·*·» c-ft^lNcaZ
ÃCGTC I ATGG 0?TXCN0CNGG?4CCN’C0TGCTTGTGC AC ^CGA <SEC XD NO:13?
zA. > \j OIT Ί
atgcacgaattzcctgacgcagagggtgga tSEO XD NO : 14)
ο -Πφΐ HcndXX X TGACAAGCZTACOTGACGCAGAGGGTGGACCC (SEC ID NO:15;
Figure BRPI9610977A2_D0001
SL-3 '
81~q ’
SL-3'
- 5'
5 - c '
3’
Figure BRPI9610977A2_D0002
39-3'
43-3'
43-3'
45-5'
45-3 r
9-5' f - 3 ’
AATTOGGCAA ÍSEQ ZD NO:16)
CAOGTTGCCG (SEQ ZD NO;17)
AATTCGGCGGCÀA (EEQ ZO NO: 18)
CATGTTGCCGCCG (SEQ XO NO; 19)
AATTCGGCGGCAACGGCGGCAA (SEQ XD NO;2Q) CATGTTGCCGCCGTTGCCGCCG ÍSEQ XD NO;21) CGATCCATGGAGGTTCACCCTTTGCOT (SEQ I3> NO :22 ^ GATCAÃGCTTATGGGCACTGGCTCAGTCT ÍS^n T-x CGATACATGTTGCCTACACCTGTCCTG (SEQ XD NO-24) GATOAÀGOTAAGGGTGAACCTCTGGGCA (EEQ XO NO:25, CGATCCATGGTCCTGCTGCCTGCTGTG (5E0 ID NO:25) GA*u,^AGCTTAAGGTGTAGGCAAAGGGTG (SEQ NO» 7) CGATCCATGGCTGTGGACTTTAGCTTGGGA (SEQ ID NO: 28)
GA- ^AAGCTTAAoGCAGCAGGACAGGTGT (SEQ ID NO '29) u^AT^^ATGGACTTIAGCTrGGGAGAA (SEQ XD NO: 3 0) gat->^agcztacacagcaggcagcaggac (SEQ ZD NO*3^ ) CwATC^ATGGGAGAATGGAAAACCCAG {SEQ ID NO:32; GATCAÀGOTACAAGCIAAAOTCCACAGC (SEQ ID NO;33)
Figure BRPI9610977A2_D0003
GATCAAGCTTACTTGTGAGCTGTGGTCCT (EEQ
CGATCCATGGCCATCTTCOTGAGCTTCCAA (SEQ ID NO :44}
ΟΑΤΟΑΑΟΟΤΤΑΆΤΤΟΟΟΑΤΟΟ^'^Ο'Τ'ΓϊΆΟ^^;''^·
ÍSEQ XD ND;45)
Figure BRPI9610977A2_D0004
Figure BRPI9610977A2_D0005
Figure BRPI9610977A2_D0006
L3syn,tor
13gyn.rev
AATTCCGTCG TAAACTGACC GAACGCGCAG GCTCAACAGT TOC iSEQ ZD NO:46}
COGGGGAGCC TCCACCGCCC CGCGTTCTCG AAGGTTTT^a CGG (SEQ ZD NO^47}
GTTACCCTTG AGCAAGCGCA
CTÀACTGCTC XATAATGAT
CGATCATTAT AGAGCAGTTA
CTGCGOTTGC TCAAGG (SE(
GOTACCCTTG ÀGCAAGCGCA CTGGCGGTGG OAGCQGCGGC GAT {SEQ tD kojSQ)
CGATCATTAT AGAGCAGTTA
GCCAGAGCCA CCAOCCTG4^
ÍSEQ XD NO:51) ttctatctga AAADCTTGGA
TCTACGTACT GTTGAGCCXG
GATAGAAGGT CAGTTTACGA
GGAACAACAG GGTGGTGGCT (SEQ ZD NO:48)
GAGCCACCAO OCTGTTG’T',T’Z~ ? ZD NO:4$)
GGAÃCAACAG GGTGGTGGCT GGTTCTAACT GCTCTATAAT
GAACCGCCGC CGCTGCCACr
GTTCCTGCGC TTGCTCAAGG
Figure BRPI9610977A2_D0007
Figure BRPI9610977A2_D0008
:í* «
Tabela2
Seqdências de Genes gciaactgctctataatgaccgatgaaattatacatcacttaaagagac^a—c-A’-ttgctggacccgaacaacctcaatgacgaagàcgcctctatcctgatggaccga^CGACTTCCAAACCTGGAGAGGTTCGTAAGGGCTGTCAAGAACTTAGAAÀA^G^A^rA^^ ATTGAGGCAATTCTTCGTAATCTCCAACCATGTCTGCCCTCTGCCACGGCCGCAC^'**'^ Cua^Aj. C^AATCAí CA* CAAGulAGGTGAC TGGCÀAGAATTCCGGGAÀAAACTGArrGmw,r TATCTGGTTACCCTTGAGCAAGCGCAGGAACAACÀGTACGTAGAGGGCGGTGGAGGC^C~ CCGGGTGAACCGTCTGGTCCAATCTCTACTATCAACCCGTir'CCr'^i'GT^aa Ar a CATÀÀATCTCCAAACATGT (SEO ID NO-78) ‘ ~
PMOK26458
ÍXx2SÍ2^?SACSTGCW^GACCTCCGACTCCTCagtaãac^sct^CGTGACTCCCAT
- a '~^'»,ALiCAGACTGAGCCÀGTGCCCAGAGGTTCACCr,mT''i,GP(2,T>AíW'Aí^C'T'''*T''*',r**r'i'' ^S^2^“SG3^«=^=™TGGMSAG^a^X X^^^A'''èHCTG^GAGU^GTGACCCTTCTGCTS^A^G«AGTGATGGCAGCACGGGGACAA J^í2í^^AS^G^?r^CATCCCTCOTí^í^CTT^CTGGACAGGTCCGTCTCCTC - —^«--'-TGCAGAGCCTCCTTGGAACCCAGCTTCCTCCACAGGGCAGGAC^ACAGtor ;£Y!25Ü(Í-ÍT2Í:ÍATCTTC!::-sagcttccaacacctgctccgaggaaaggtgcS TTCCT^ATGCTTGTAGGAGGGTeCACCCTCTGCOTCAGGGAATTC (SEQ 1^ NO· 79
PMOK28548 ;CCCCAGCTCCACCTGCTTGTGACCTCCGAGTCCTCAGTAAACTGCTTCGTGAC^C-r^ ^TC^TTCAQAGCAGACTGAGCCAGTGCCCAGAGGTTCACCCTT^GCm^A^A^^r^rr* ^S:^SS2A^AGOTG^^^AAAACCCAGAÍGGÍGGÍÈ2êAÂ55rí ™“™X2^GCCTCT^TCCCTC^^»5CTTTCTS3ACAGGT'-CGTC^CeC:‘ CTTGGGGCCCTGCAGAGCCTCOTSGAACCCAGCTTCCTCCA^AGcíriAíírAl-»^
CÍ~~Sí x TGTAGGAGGGTCCACCCTCt^G,^C3GGAATTCGGCGGCAACATGG^*:’ g?^aSg'™Í— ^;^.^^A^X^?^^A^^^CCCAGAGaTTCACCCTTTGCC^ACÃCCTGTCCTG
A ^4.^SC^^A^C^'aG^AGAATGGAAàACCCAGA,r^s^AGGAGACCAAGG^A í^í--i^S?S^ÍSêTCCC?CCTG^CMC':í,^t^GACAGGTCCGTCTCCTC x^3^^x^ÍXT^x'Aí3Aw“^'í“,r^GGAAÍ*C‘í ASÍ33CAGGACCACAGCrCACÀAGGATr'^^ AATGCCATCTTCCTGAGC^CCAA'” ac rww#»r» „mx* *vs-AA’“A'”'“*í»CTCv.GAüfGAAAGGTGCGTTTCCTGATGi*^r ü*A««À^GTC>-ACCCTCTGCGTCAGG 15EQ m NO-80'
PMON28500 iS^SS5SJCOTSOT0TSACCT!:=SASrcCTCAGTAAACTGC-rTCCTGACT-C-AT ^IxX^^^^^^^^^^^^^CCAGAGGTTCACCCTTTGCCr’A^'A^^^GTrrTr i^“'-^^CTGTGGACTTTAGCTTGGGAGAATGGAAAACCCAGATGGAGGAGACCAAGGCA pM ‘TGTGí
8ι
ΓΛ''
NO :8 agtaaaV' u u AçxAtTGG AGG AG AQ’PA An 1 J.GTGACCC”'TCTGC’TGGX>n^r'a1 m'f'^* λλ^^·~λ ^ΑΤΧ,ΧΧΧΧΧ A GAT^GCAGGACGGGGAGas.
. ^_λα k-uu x v.GTGGGGCAGCTTTCTGGACAGGTCCGTr”T’r»X^X ^CCTTGGAACCCAGCTrCCTCCACAGGGCAGSÍGaA^;^^ .ATuTTCCTGAGCTTCGAACACCTGCTCCGAGGAAAGG^·”^'* SGGTCCACCTOTGGGTCAGGGAATTCGGCGGCAA-A-S--tgtgacct^^stcctcagtaaactgctcgt^Í-^ XXA^i;AGAOTGAGC^G^S;“^CAGAS^TCACCCrTTGCr*a'ACA^'*r^':'’::'iT'--CTGTGGA^TJ’TACr^r’^ra^^XXX —a G * uuTu ggaaaaccca^tggaggagaccaaggga :pATp4P?rP™í™I±íí“G5CASCACGSGGACA?. a a uUííkACCCAGCTTCC^CnA^AC^^^a λ «**> s >-» > X.XT „ Z‘^-^-~A^A^^Aw«ACCACAQeT>
r^^Q^^.^-^iZXXX^XZ^Z^Xx^^-^CTCCGAGGAAAGGTGCG^ *vA.y.i iGaa«^^^TuCACCCTOTGCGTCAGG íSEQ τη -hrn, g;
X~ rx: XX: ^CCTCC^^-^AGTAAACTGOTTCGTGAC^r^.-a^-->^I™X^2I2J2CAGAGGTTCACCCTTTGXCTACACCTG^o::tg «««AuTTI AuuTTGl»GAGAATGGAAAACCCAGATGG Am Λ x »«ZZx PGGGAGCAGTGACCCTTCTGCTGGAGGGAGTG^Trmí^^zS'^^'^ ^TTGOrTr’i'r'a'nr·'-’'^*'*''^^^*.^ , ^u.isGGGACAA :TTGGGGCCCTGCAGAGCC^e*FTGr a ^XLZZ^ZZZXXT^ u’OCGTCTCCTG ^_n?huATC<.CAATGCCATCTTCCTGAGC^r A * ~ a G <-»AC^ Au Av^T ’tcctgatgcttgtaggaggg-t'ccacc^^ m^--T^^S^AGGAAAGGTGCGT iACA^GCGTm^^^m^^^^-r-mX^XZXZ u’vw7'“AwwwtAATTCGGCGGCAACGGr'GG^ «\as_xs A ‘-''-'-«OuViUuGCCTGCTTGTGSre^rrr' irmn^mn X Λ. ~ •’W s 4. <~L\?Ãka « CC^CAG^AAAC^’T'rJ^’T*^^»**»^» ,Ai- a uu^aI ^TwCTTCACAGCAGACTGAGrrar^rr'^'-’»,__- i a a
LAG*. GCv^ALxAtxyG,TwPCÃC*CC'íT>^wT>P^i**<^'7 r* * .CCAAGGCACAGGACA^T^r’ AX C
XXXC * L ~ ^SAGCAGTGAuCCTT^TG^Tor XAXX uuuuACAAC'TGGaACCCACTTGCCTCT^AT''^?'T^^Tr’--~’rríííS^T^AT^''',^AGCÂ GTCTGCTrr'**T»r:nn^r'r'^r.1- ------ΣΧΧΧ. „ ^ν*™^''ΛΚϊ^ι-Αί39^ΤΤΟΤθθΑ·ΟΑ3ηΤΓ
AOCACAGCTCACAAGGATCCCAATGCCATCT’ ^GT3CamcCTSATGCTTGTAGGAGGGTi isEQ ED NO:83)
TGCGTCAGG
CATGGCTAAC TGGTCTATAA GACCA.22TCC ACCTTTGCTG
TCTATZGTGA TGGACGGAAA AAGGGCTGTC AAGAACTTAG GTAATCTCGA ACCATGTCTG ~Λ* Λ “* aaggcagg GTGCTATCTG GTTACCCTTG GTAACTGCTC CATAATGATC CCTGCACZTT TGCTGGACCC CCTGATGGAC CGAAACCTTC ZTGTCAAGAA CTTAGAAAAT TCCAAGCAT GTCTGCCCTC CATCATCAAG GCAGGTGACT A7CTGSTTAC CCTTGAGCAA ID :^Ο:ϊ·:84 f
-U^-ZGATGA ATACAI GACCZGAACA ACCTCAATG.~ CDTTCGAGTT CGAAAICTGI ÀAAATGGATC AGGTATTGAG CCCTGTGCCA GGGCGGCAZ2 TGAGTGGCAA GAATTCCGGG
AGCAAGGGCA GATGAAATTA GAACAACCTC GACTTCCAAA GGATCAGGTA TGCCACGGCC G'G C AAG AATC GCGCAGGAAC aA GAA G AG TAGATZACGT AATGACGAAG CCTGGAGAGI TTGAGGCAAT GCACCZTCTC CCGG GAAAAA AACAGTAC <- λ - T I λΑΑ G A
Figure BRPI9610977A2_D0009
Figure BRPI9610977A2_D0010
Figure BRPI9610977A2_D0011
aggtztzzag
Figure BRPI9610977A2_D0012
Figure BRPI9610977A2_D0013
GACATCCAAT
CTGAGGTTGT
SynzarJ .iii
201
3G1
401 £ c n
501 ill
651 lii
C A.T GG GT AAG
GAGCAGGTGC
TZTATCCTGA AAGGGCTGTC GTAATGTCCA CCAATCATCÀ GTTCTATCTG gtggcggtgg ATTATACAGG OCTZAATGAC
GGTATTGAGG GGCCGCACCC AATTCCGGGA GAACAACAGT
TGGACCGAAA aagaacttag ACCATGTCTG TCAAGGCAGG
GTTACCCTTG
CAGCGGCGGC ACTTAAAGAG gaagacgtct gaggttcgta CAATTCTTCG tctcgagatc AÀAACTGACG AC (SEQ ID
TGATCGATGA GACCCGAACA CCTTCGACTT AÀAATGCATC CCCTCTGCCA TGACTGGCAA AGCAAGCGCA GGTTCTAACT accacctgga CTATCCTGAT AGGGCTGTCA TAATCTCCAÀ ciaatcatcat TTCTATCTGG NQ;85;
AATTATACAT CACTTAAAG* ACCTCAATGA CGAAGACGTG CGAAACCTGG AGAGCTTCGT AGGTATTGA.G GCAATTCTTC '—GGCGGCAOC ctctcgacat GAATTCCGGG AAAAACTGAC GGAACAACAG GGTGGGGGCT gctctataat gatcgatgaa CCTTTGCTGG AGCCGAACAA ggaccgaaac cgtcgacttc agaacttaga aaatgcatca CCATGTCTGC CCTCTGCCAC CAAGGCAGGT GAGTGGCAAG G-A^lXTTGA gcaagggcag
PBOA-3U.03
101
151
201
251
3GI
411
451
ATGGCTCTGG GGACCGAAAC AGAACTTAGA CCATGTCTGC CAAGGCAGGT TTACCCTTGA ATAÀTGATCG GTACGTAGAG CTACTATCAÀ ATGGCTACCC
ACCC GAACAA CTTCGACTTC aaatgcatca gctctgccac gactggcaag gcaagcgcag atgaaattat GGCGGTGGAG CCCGTCTCCT AGGGTGCCAT
CCTCAATGAC
CAAAC CTGG A
GGTATTGAGG GGCCGCACCC AATTCCGGGX GAACAACAGG
ACATCACTTA GOTCCCCGGG
CCGTCTAAAG
GCCGGCCTTC
GAAGA0GTG7 GAGCTTCGTA CAATTCTTCG TCTCGACATC AAAACTGACG GTGGTGGCTC AAGAGACQAC TGAACCGTCT AATCTCATAA GCCTCTGC’’T’''Y'
CTATCCTGAT agggctgtca TAATCTCCAA CAATCATCAT TTGTATCTGG TAACTGCTCT CTGCACCTTT ggtccaatct ATCTCCAAAC TCCAGCGCCG
Sito GT:—:^.TGGTT·^ CTAaGClATCT GC AGAGC*'’'”' CTGG^GG^Cm
5SI CGTACCGCG7 TCTACGCCAC CTTGCGCAGO' CCTOTGGCGG CTCTGGCGGC - l — ·*·'~~ ~λ«γΑ«?~Τ TwCTLvTwftíi G a uGTTAGAG CAAGTGAGAA AGATCCA3GG
551 CGATGGCGCA GCGCTOCAGG AGAAGCTGCG TGGCaAGGTA'’' AAG^G’^G'” 701 ACCCCGAGGA GCTGGTGCTG CTCGGACACT CTCTGGGCAT CGCGTG^'’* 751 ' CCCCTGAGCT CCTGCCCCAG CCAGGCCCTG CAGGTGGCAG C<TG™GAG 802 CCAACTCCAT AGCGGCCTTT TCCTCTACCA GGGGCTCCTG CAGGCCCTGG tíL-í j^As.sGá.sA,TAT1 CCCCGAGTTG GGTCCCAGCT TGGACAOACT GCA3CTGGA~ 901 GTCGCCGACT TTGCCACCAC GATCTGGOAG CAGATGGAÀG AACTGGGAAC 951 GGCCCCTGCC CTGCAGCCCT AATAA -ISSO 1G Νζ?:δβ.· pMQNl 11.05
ATGGCTAATG CATCAGGTAT
TCTGOCCTCT GCCACGGCCG
1.01 CAGGTGACTG GCAAGAATTC
151 CTTGAGCAAG CGCAGGAACA
0'1 GATCGATGAA ATTATACATC
251 AC C CGAAC AA C CTCAATGAC
301 CTTCGACTTC CAAACCTGGA
152 ATACGTAGAG G3CGGTGGAG
401 CTACTATCAA CCCGTCTCCT
451 aATGGCTACCC AGGGTGCCAT
501 GGCAGGAGGG GTCCTGGTTG
551 CGTACCGCGT TCTACGCCAC
601 TCTCAGAGCT TCCTGCTCAA €51 CGATGGCGCA GCGCTCCAGG
702 ACCCCGAGGA GCTGGTGCTG
751 CCCCTGAGCT CCTGCCCCAG
SC1 CCAACTCCAT AGCGGCCTTT
852 AAGGGATATC CCCCGAGTTG
901 GTCGCCGACT TTGCCACCAC
951 GGCCCCTGCC CTGCAGCCCT
TGAGGCAATT CTTCGTAATC TCCAACCATG CACCCTCTCG ACATCCAATC ATCATCAAGG CGGGAAAÀAC tgacgttcta. tctggttacc ACAGGGTGGT GGCTCTAACT GCCCCATaAAC ACTTAAAGAG ACCACCTGCA CCTTTGCTG^ GAAGACGTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA AGAACTTAGA GCTCCCCGGG TGAACCGTCT GGTCCAATC^ CCGTGTAAAG AATOTCATAA ATCTCCAAAC GCCGGCCTTC GCCTCTGCTT TCCAGCGCCG CTAGCCATCT GCAGAGCTTC CTGGAGGTGT CTTGCGCAGC CCTCTGGCGG CTCTGGCGGC GTCTTTAGAG CAAGTGAGAA AGATCCAGGG AGAAGCTGTG TGCCACCTAC AAGCTGTGCC CTCGGACACT CTCTGGGCAT CCCCTGGGCT CCAGGCCCTG CAGCTGGCAG GCTGCTTGAG TCCTCTACGA GGGGCTCCTG CAGGCCCTGG GGTCCCACCT TGGACACACT GCAGCTGGAC CATCTGGCAG CAGATGGAAG AACTGGGAAT AATAA ISHO CD NO: 87;
PMON311Qê
101
152
201
251
331
251
02
452
501
551
6C1
651
ATGGCTGCAC AGAATTCCGG AGGAACAACA ATACATCACT CAATGACGAA ACCTGGAGAG ATTGAGGCAA CTACGTAGAG CTACTATCAA ATGGCTAGCC wajcUAGGAGGG CGTACOGCGT TCTCAGAGCT CGATGGCGCA
CCTCTCGACA GàAAAACTGA GGGTGGTGGC TAAAGAGACC GaACGTCTCTA CTTCGTAAGG TTCTTCGTAA GGCGGTGGAG CCCGTCTCCT AGGGTGCCAT GTCCTGGTTG TCTACGCCAC TCCTGCTCAA GCGCTCCAGG
TCCAATCATC CGTTCTATCT TCTAACTGCT ACCTGCACCT TCCTGATGGA GCTGTCAAGA TCTCCAACCA GCTCCCCGGG CCGTCTAAAG GCCGGCCTTC CTAGCCATCT CTTGCGCAGC GTCTTTAGAG AGAAGCTGTG
ATCAAGGCAG GGTTACCCTT CTATAATGAT TTGCTGGACC CCGAAACCTT ACTTAGAAAA TGTCTGCCCT TGÀACCGTCT AATCTCATAA gcctctgctt GCAGAGCTTC CCTCTGGCGG CAAGTGAGAA TGCCACCTAC
GTGACTGGCA GAGCAAGCGC CGATGAAATT CGAACAACCT CGACTTCCAA TGCATCAGGT CTGCCACGGC GGTCCAATCT ATCTCCAAAC TCCAGCGCCG CTGGAGGTGT CTCTGGCGGC AGATCCAGGG AAGCTGTGCC
Figure BRPI9610977A2_D0014
Figure BRPI9610977A2_D0015
'wA. u à AAGTGGGAAT
AATAA (SEQ ID DO:89)
Ί Ί AC w V 0
ATGGCTCTGG ACCCGAACAA
GGACCGÀAAC CTTCGACTTC 101 AGAÀCTTAGA AAATGGATCA 151 CCATGTCTGC CCTGTGCOAC
- uAAGGCAGGT GACTGGCAAG
251 TTACCCTTGA GCAAGCGCAG 301 AGGGGCGGCG GTTCTAAGTG 351 CTTAAAGAGA CCACCTGCAC 401 CGGGTGAACC GTCTGGTCCA 451 AAAGAATCTC ATAAATCTCC .551 ATCTGCAGAG CTTCCTGGAG 6Cl CAGCCCTCTG GCGGCTCTGG 651 AGA.GCAAGTG AGAAAGATCO
701 TGTGTGCCAC CTACAAGCTG
Figure BRPI9610977A2_D0016
CCTCAATGAC GAAGACGTCT CTATC2TGAT CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA GGTATTGAGG CAATTCTTCG TAATCTCCAA GGCCGCACCC TCTCGACATC CAATCATCAT AATTCCGGGA AAAACTGACG TTCTATCTGG GAACAACAGG GTGGTGGCTC TGGCGGTGGC CTGTATAATG ATCGATGAAA TTATACATCA CTTTGTACGT AGAGGGCGGT GGAGGCTCCC ATGTCTACTA TCAACCCGTC TCCTCCG^T AAACATGGCT ACCCAGGGTG CCATGCCGGC GCCGGGCAGG AGGGGTCCTG GTTGCTAGCC GTGTCGTACC GCGTTCTACG CCACCTTGCG CGGCTCTCAG AGCTTCCTGC TCAAGTCTT^ AGGGCGATGG CGCAGCGCTC CAGGAGAAGC TGCCACCCOG AGGAGCTGGT GCTG^T^GGA GGCTCCCCTG AGCTCCTGCC CCAGCCAGGC TGAGCCAACT CCATAGCGGC CTTTTCCTCT CTGGAAGGGA TATCCCCCGA GTTGGGTCCC 'CGA
GGGTGAACi
ATCTGCAGAG CAGCCCTCTG AGAGCAAGTG
ACCCAGGGT
AGGGGTCCT
AQCTTCCTG·
K3»5
CACTGCAGCT GAAGAACTGG »0121110
AAAGAATCTC
ATCTGCAGAG
GTCTQGTCCA
CTTCCTGGAG
GCGGCTCTGG
AGAAAGATCC ft
ACCTTGGACA
AGC AG ATG (SEQ ID ND:
CCTGCAGGCC
CACTGCAGCT
GAAGAACTGG
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551 GGAGCTGGTG CTGCTCGGAC
701 GCTOGTGCGC CAGCCAGGCC 31 OATAGCGGCC TTTTCCTCTA »02 ATIXCCCGAG TTGGGTC02A
851 ACTTTGCCAO CACCATOTGG
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ATGGCTAACT GCTCTATAAT
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GATCGATGAÀ ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCCGAACAA CCTOAATGAO GAAGACGTCT CTTCGAOTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AAATGCATCA GGTATTGAGG CAATTCTTCG CCTCTGCCAC GGCCGCACCO TCTGGACA.TC GACTGGCAÀG AATTCCGGGA AAAACTGACG GCAAGCGCAG GAACAACAGT AGGTAGAGGG AACCGTCTGG TCCAATCTCT ACTATCAACC TCTCATAAAT CTCCAAACAT GGCTACCCAG CTCTGCTTTC CAGCGCCGGG CAGGAGGGGT AGAGOTTCCT GGAGGTGTCG TACCGCGTTC TCTGGCGGCT CTGGCGGCTC TCAGAGCTTC agtgagaaag atccagggcg atggcgcagc ccacctacaa gctgtgccac cccgaggagc CTGGGCATCC CCTGGGCTCC CCTGAGCTCC GCTGGCAGGC TGCTTGAGCC AACTCCATAG GGCTCCTGCA GGCCCTGGAA GGGATATCCC GACACACTGC AGCTGGACGT CGCCGACTTT
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PMON28527
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GCTAACTGCTCTATÀATGATCGATGAAATTATACATCACTTAAAGAGACCACCTGCACCT TTGCTGGACCCGAACAACCTCAATGACGAAGACGTCTCTATCCTGATGGACCGAAACCTT CGACTTCeAAAGCTGGAGAGCTTCGTAÀGGGCTGTCAAGAACTTAGAAAATGCATCAGGT ATTGAGGCAATTCTTCGTAATCTCCAACCATGTCTGCCCTCTGCCACGGCCGCACCCTCT CGACATCCAATCATCATCAAGGCAGGTGACTGGCAAGAATTCCGGGAAAAACTGACGTTC TATCTGGTTACCCTTGAGCAAGCGCAGGAACAACAGTACGTAGAGGGCGGTGGAGGCTCC CCGGGTGAACCGTCTGGTCCAATCTCTACTATCAACCCGTCTCCTCGGTCTAAAGAATCT CATAAATCT-GCAAACATGGCCATCTTCCTGAGCTTCCAACACCTGCTCCGAGGAAAGGTG CGTTTCCTGATGCTTGTAGGAGGGTCCACCCTCTGCGTCAGGGAATTOGGCAACATGGCG TCTCCCGCTCCGCCTGCTTGTGACCTCCGAGTCCTCAGTAAACTGCTTCGTGACTCCCAT GTC2TTCACAGCAGACTGAGCCAGTGCCCAGAGGTTCACCCTTTGCCTACACCTGTCCTG CTGCCTGCTGTGGACTTTAGCTTGGGAGAATGGAAAACCCAGATGGAGGAGACCAAGGCA 7** X rxy-rft/·'* ’j*. r*f -x, :-,
106
Figure BRPI9610977A2_D0036
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Figure BRPI9610977A2_D0037
ρ^ΟΝ28534
G^AAC^GC*!^ TATAATGATCGATGAAATTATACAJTCACTTAAAGAGACCACCTGCACCX --GGTGGA00CGAACAACCTCAATGÀCGAAGACGTC7CTATCCTGATGGACCGAAA0GTT CGA^^CGAAACCTGGAGAGCTTCGTAAGGGGTGTCAAGAACTTAGAAAATGCATCAGGT A«'’rGAGGGAA77C7TCG7AATC7CCAACCATGTCTGCCCTCTGCCACGGCCGCACC0TCT ogacatcgaatcatcatcaaggcaggtgactggcaagaattccgggaaaaactgacgtgc ^tctggttacccgtgagcaagcgcaggaacaacagtacgtagagggcggtggaggctcc C^^GnTGÂÃcCGTCTGGTCCAATCTCTACTATCAACOCGTCTCCTCCGTCTAAAGAATCG cataÃa7C7CCaaacatgttgcc7ACacctgtcctgctgcctggtgtggactttagcttg GGAGAATGGAAAACCCAGATGGAGGAGACCAAGGCACAGGACATTCTGGGAGuAksTGAs-íGTTC7GCTGGAGGGAGTGA7GGCAGCACGGGGACAACTGGGACCCAG77GCCTCTCATCC rTO^TGGGGCAG0T7TCTGGACAGGTCCG7CTCCTaC7TGGGGCCCTGCAGAGCGTCOTT GGAACCCAGCTTCCTCCAGAGGGCAGGACCACAGCTCACAAGGATCCCAATGCCATCTTC CTGAGCTTCCAACACCTGCTCCGAGGÀAAGGTGCGTTTCCTGATGCTrGTAGGAGGGTCC àccctctgcgtcagggaattcggcggcaacggcggcaacatggcgtccccagcgccgcgt gcÍJgggacctccgagtcctcagtaaactgcttcgtgactcccatgtccttcacagcaga CGGAGCCAGTGCCCAGAGGTTCACCCT (SEQ XD NO:143} pMON2B525
GCTAACTGCTOTATAATGA.TCGAZrGAAATTATACATCACTTÃÀAGAGACCACCTGCACCT 'rrGCTGGACCCGAAGAACCTCAATGACGAAGACGTCTCTATCCTGATGGACCGAAACCTT CGAOTTCCAAACCTGGAGAGCTTCGTAAGGGCTGTCAAGAACTTAGAAAATGCATCAGGT ATTGAGGCAATTCTTCGTAATCTCCAACCATGTCTGCCCTCTGCCAOGGCCGCACCCTCT CGAOATCCAATCATCATCAAGGCAGGTGACTGGCAAGAATTCCGGGAAAAACTGACGTTC TATCTGGTTACCCTTGAGCAAGCGCAGGAACAACAGTACGTAGAGGGCGGTGGAGGCTCC CCGGGTGAACCGTCrGGTCCAATCTCTAGTATCAACCCGTCTCCTCCGTCTAAAGÀATCT caxaaatctcgaaacatggtcctgctgcctgctgtggactttagcttgggagaatggaaa
107
AICCAG ATGGAGGAGÀCC AAGGCACAGGAC ATTOTGGGAGCAGTGAGC CTTCTGCTG GÀG GGAGTGATGGCAGCACGGGGAGAACTGGGAGCCACTTGCGTOTCATCGGCC wIGGGwIAv ctttctgg AOAGGTCCGTCT CCTCCTTGGGGOCCTGC AGAGC CTCOTTGGAAC CCAG CTT ICTCv AC -» Aw>wrAw\- A™ -í ν-Λ. J. v * » - - «Λ\! ~ - - s-^.*7-*·; OACCTGCT CCGAGGAAAGGTGCGTTTCCTGATGCTTGTAGGAGGGTCCAGC~TGTGCGTO AGGGAítT -í CGGuGGCAACGGCGG O AACATGGCGTCCCC AGCGGCGCCTG OTTGTGAC CT C CGAGTC CT CAGTàAACTGCTTCGTGACT CC CATGTCCTTCACAG GAG A.CTG AG O C AGTG OOAGAGGTTCACCCTTTGCCTACACCT iSEC 2D NO:144;
:ρϊθα·8:53^:
GCTAACTGCTCTATAATGATCGATGAAATTATACATCAOTTAAAGAGACCAGCTGCACCC ΤΤΟΟΤΟΟΑΌΟΟηΑΑΟΑΑ'ΟΟΤΊΑΑΤ^ΑΟΟΆΑΟΑΟΟΤΟΤΟΤΑΤΟΟΤδΑ’ΤΟΌΑ^,ΟυϊΑΑΑΟΟΤΟ CGACTTOCAAAC CT GGAGÀG CTTC GT AAGGGCTGTCAAG AACTTAGAAAAT GCATCÀGGT attgaggcaattcttcgtaatctccaaccatgtctgccctctgccacggccgcacoctot CGACATCCAATCATC,4TC'AAGGCAGGTGACTGGGAAGAATTCOGGGAAAAACTGAO'GTTO TàTCTGGTTACCCTTGAGCAAGCGCAGGAACAACAGTACGTAGAGGGCGGTGGAGGCTCC aCGGGTGAACCGTCTGGTCCAATCTCTACTATCAACCCGTCTCCTCCGTCTAAAGAATCT CATAAATCTCCAAAGATGGCTGTGGACTTTAGCTTGGGAGAATGGAAAACCCAGATGGAG GAGACCAAGGCACAGGACATTCTGGGAGCAGTGACCCTTCTGCTGGAGGGAGTGATGGCA GCACGGGGACAACTGGGACCCACTTGCCTCTCATCCCTCCTGGGGGAGCTTTCTGGA.OAG GTCCGTCTCCTCCTTGGGGCCOTGCAGAGCCTCCTTGGxAACCCAGCTTCCTCCACAGGGC aggacgagagctcacaaggatcccaatgccatcttcctgagcttgcaacacctgctccga GGAAAGGTGCGTTTCCTGATGCTTGTAGGAGGGTCCACCCTCTGCGTCAGGGAATTOGGC GGCAACGGCGGCAACATGGCGTCCCCAGCGCCGCCTGCTTGTGACCTCCGAGTCCTCAGT AAACTG CTTCGT GACT C 0 CAT GTC OTTCAC ASCAG AGTGAGCCAGTGCCC AG AGGTTC AC CCTTTGCCTACACCTGTCCTGGTGCCT ÍSEQ CD £0:145} pMGN’2853“ gotaactggtgtataatgàtcgatgaaattatacatcacttaaagagaccacctgcacct TTGCTGGACCCGAACAACCTCAÀTGACGÀAGACGTCTCTATCCTGATGGACCGAAACCTT CGACTTCCAAACCTGGAGAGGTTCGTAAGGGCTGTCAAGAACTTAGAAÂATGCATCAGGT ATTGAGGCAATTCTTCGTAATCTCGAACCATGTCTGCCCTCTGCCACGGCCGCACCCTCT CGACATCCAÀTCATCATCAAGGCAGGTGACTGGCAAGAATTCCGGGAAAAACTGACGTTC TATCTGGTTACCCTTGAGGAAGCGCAGGAACAACAGTACGTAGAGGGCGGTGGAGGCTCC CCGGGTGAACCGTCTGGTCCAATCTCTACTATCAACCCGTCTCCTCCGTCTAAAGAATCT CATAAATCTCCAAACATG’XAOTTTAGCTTGGGAGAATGGAAAACCCAGATGGAGGAGACC aaggcacaggacattctgggagcàgtgacccttctgctggagggagtgatggcagcacgg ggacaactgggacccacttgcctctcatccctoctggggcagctttctggacaggtccgt ctcctccttggggccctgcagagcctccttggaacccagcttcctccacagggcaggacc ACAGCTCACAAGGATCCCAATGCCATCTTCCTGAGCTTCOAACACCTGCTCCGAGGAAAG GTGCGTTTCCTGATGCTTGTAGGAGGGTGCACCCTCTGCGTCAGGGAATTCGGCGGCAAC GGCGGCAACATGGCGTCCCCAGCGCCGCCTGCTTGTGAOOTCCGAGTCCTCAGTAAAOTG CTTCGTGACTCCCATGTCCTTCACAGCAGACTGAGCCAGTGCCCAGAGGTTCAOCCTTTG CCTACACCTGTCCTGCTGCCTGGTGTG (SSQ TD £0:146}
PMON28S38
GCTAACTGCTCTATAATGATCGATGAAATTATACATCACTTAAAGAGACCACCTGCACCT TTGCTGGACCGGAACAAOCTCAATGACGAAGACGTCTCTATCCTGATGGACCGAAACCTT ^oA'_ Tj. C-_ λλλ\_>„ .l ^üta<sA\suTT'*.a» à AAwmsG^TG í uAAGAACTTAGAAAATGCATCAGGT
108 λ* iwhuu^/v.i 1--- — νίήΛ.__a -vftft>-»AiWi-Xu'-vki„;v)s,vAwW'J»'»«vh„ww. — .· — * “«- —·. ». ». jt'/- j. <*t/* j. ?'*f*>i*'f* ϊ λ«·λ»*?. a ;Τ χ &ί*»·”.·—,· * » j. a a ”** » *»— . ΛΛ-. 1\- -?i. -Λ.. ν,ΛΑ^ννΖ»ΙΛ'-?-«Λ-άχΛ>Λ-ΛΛ«ΛΛ*--- ^Ά»«»ΖΐΛΛ«Λ—- ν'Λ^. - - —' - — . .—<--»- .— -- —-< -κ ---*Λ·* **·?< X «Λ»»» . λη^ΛΛΛ/Μ»'Λ»1\ — — — — Λ Λ1 — Λ '-J\; - - »*l·— S. — - - - ΛΛ-J-Ara — -Γ^— X Ms„\S - Λ.«ΤΛ.\Λ\β-AS » xaxSiVAf AS — — — ~
Figure BRPI9610977A2_D0038
ATTCTGGGAGCAGTGACCCTTCTGCTGGAGGGASTGATGGCAGCACGGGGA.CAAC TGG'GA CCCACTTGCZTCTCATOeCTCCTGGGGCÀGCTTTCTaGACAGGTCuGTCTOCTXOTOGGG gccctgcagagcctccttggaacccagcttcctccacagggcaggaccacagcocacaacGATCCCAATGOCATCTTGZTGAGGTrCCAACACGTGCTCCGAGGAAAGGTGGGTTTOCGG atgcttgtaggagggtccaccctctgcgtcagggaattcggcggcaacggggggaacagg GCGTOCOCAG-GCCGZOTGCrrGTGACCTOGGAGTCOTOAGTAAACTGCTTGGTGACTGO CÀTGTOCTTCACAGCAGACTGAGCCAGTGGCGAGAGGTTCACCCTTTGGCTACÀCETGTÍ' OTGCTGOCTGC?TGTGSACTTTAGGTTG i£EQ IE NO: 147) pM0N2853£
GCTAACTGCOOTATAATGATCGATGAAATTATACATCACTTAAÀGAGACCAOCTGuACOT TTGCTGGACOCGAACAACCTGAATGACGAAGACGTCTCTATCGTGATGGACCGAAACCTT CGACTTCCAAAeCTGGAGAGCTTCGTAAGGGCTGTCAAGAACTTAGAAAATGCATCAGGT ?.TTGAGGOAATTCTrCGTAATCTCCAACCATGTCTGCCCTCTGCCACGGCCGCACGCTCT CGACATCCAATCATCATCAAGGCAGGTGACTGGOAAGAATTCCGGGAAAAACTGAOGTTC TATeTGGTrACrCTTGAGCAAGCGCAGGAACAAGAGTACGTAGAGGGCGGTGGAGGCTCC OCGGGTGAACCGTCTGGTCGAATCTCTACTATCAACCCGTCTCCTCCGTGTXAAGAATCT OATAAATOTCCAAAaATGGGACCCACTTGCCTCTCATCCCTCCTGGGGCAGCTTTCTGGA CAGGTCCGTCTCCTCOTTGGGGCCCTGCAGAGCCTCCTTGGAACCCAGeTtCCTCCACAG GGCAGGACCACAGCTGACAAGGATCCCAATGeeATCTTCCTGAGCTTCCAACACCTGCTG CGAGGAAAGGTGCGTTTCOTGATGCTTGTAGGAGGGTCCACeCTCTGCGTGAGGGAATTC GGCGGCAACGGGGGCAACATGGCGTCCCCAGCGCCGCCTGCTTGTGACOTCCGAGTCCTC AGTAAACTGCTTCGTGACTCeCATGTCOTCACAGCAGACTGAGCCAGTGCCCAGAGGTT CACCGI^TGCCTACACCTGTCCTGCTGCCTGCTGTGGACTTTAGCTTGGGAGAATGGAAA ACCCAGATGGAGGAGACCAAGGCACAGGACATTCTGGGAGCAGTGACCCTTCTGOTGGAG GGAGTGATGGCAGCACGGGGACAAOTG (SEQ XD NG :1.4 8)
PMON28548
GCTAACTGCTOTATAATGATCGATGAAATTATACATCACTTAAAGAGACCAOTGCACCT TrGCTGGACCCGAACAACCTCAATGAeGAAGACGTCTCTATCCTGATGGACCGAAACCTT CGACTrCCAfcACOTGGAGAGCTTCGTAAGGGGTGTCAAGAACTTAGAAAATGCATCAGGT ATTGAGGCAATTCTTCGTAATCTCCAACCATGTCrGCCCTeTGCCACGGCnGn^nrrxr'^ CGACATCCAAT'OATCATOAAGGCAGGTGACTGGCAAGAATTCCGGGAAAAACTGACGTTC TATOTGGTTACCCTrGAGCAAQCGCAGGAACAACAG’XACGTAGAGGGCGGTGGAGGrTC^ ccgggtgaaccgtctggtccaatctctactatcaacccgtctcctccgtctaaagaÍ^ cataaatctccaaacatgggaacccagcttcctcgacagggcaggaccacagctcacaag GATCCCAATGCCATCTTCCTGAGCTTCCAACACCTGCTCCGAGGAAAGGTGCff^TCC^G ATGOTTGTAGGAGGGTCCACCCTCTGCGTCAGGGAATTCGGCGGCAACGGCGGCAACATG GCGTCCCCAGCGCCGCCTGOTGTGACCTGCGAGTCCTCAGTAAACTGCTTCGTGACTCC catgtccttcacagcagactgagccagtgcccagàggttcaccctttgcctacacctgtc ctgctgcctgctgtggactttagcttgggagàatggàaaacccagatggaggagaccàag SCACAGGACATTCTGGGAGCAGTGACCCTTCTGCTGGAGGGAGTGATGGCAGCACGGGGA OAACTGGGACCCACTTGeCTCTCATCCCTCCTGGGGCAGCTTTCTGGACAGGTCCGTCTG CTCCTTGGGGCCCTGCAGAGCCTCCrr ISEQ ID 180:144>
109
Figure BRPI9610977A2_D0039
pMON'38542
GCTAACTGCTGTA.TAATGATCGATGAAATTA.TACATCACTTAAAGAGACCACCTGCACC7 TTGCTGGACCCSÃÃCAACCTCAATGACGAAGACGTCTCTATCCTGATGGACCGAAACCTT CGACTTCCAAACCTGGAGAGCTTCGTAAGGGCTGTCAAGAACTTAGAAAATGCA7CAGGT ATTGAGGCAATTCTTCGTAATaTCCAACGATGTCTGCCCTCTGCCACGGCCGCACCCTCT CGACATCCAATCATCATCAAGGCAGGTGACTGGCAAGAATTCCGGGAAAAACTGACGTTC TATCTGGTTACCCTTGAGCAAGCGCAGGAACAACAGTACGTAGAGGGCGGTGGAGGCTCC CCGGGTGAACCGTCTGGTCGAATCTCTACTATCAACCCGTCTCCTCCGTCTAAAGAATCT cataaatctccaaacatggctcacaagga.tcccaatgccatcttcctgagcttccaacac CTGCTCCGAGGAAAGGTGCGTTTCCTGATGCTrGTAGGAGGGTCCACCCTCTGCGTCAGG λ» » -j. <»<»<<«* J, f· * f* ςιΛΛΧ i i —w-L λ « ís AwALí»w — υΑ
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CAGCTTCCTOCACAGGGCAGGACCaCA (£E0 XD NO:151)
PHON28543
GCTAACTGCTCTATAATGATCGATGAAATTATACATCACTTAAAGAGACCACCTGCACG7 TTGCTGGACCCGAACAACCTCAATGACGAAGACGTCTCTATCCTGATGGACCGAAACCTT
CGACTTCCAAACCTGGAGAGCTTCGTAAGGGCTGTCAAGAACTTAGAAAATGCATCAGGT
ATTGAGGCAATTCTTCGTAATCTCCAACCATGTCTGOCCTCTGCCACGGCCGCACCCT0T cgacatccaatcatcatcaaggcaggtgactggcaagaattccgggaaaaactgacgttc TATCTGGTTACCCTTGAGCAAGCGCAGGAACAACACTACGTAGAGGGCGGTGGAGGCTCC CCGGGTGAACCGTCTGG7CCAATCTCTACTATCAACCCGTCTCCTCCGTCTAAAGAATCT CATAAÀTCTCCAAACATGGATCCCAATGCCATCTTCCTGAGCTTCCAACACCTGCTCCGA GGAAAGG7GCGTTTCCTGATGCTTGTAGGAGGGTCCACCCTCTGCGTCAGGGAATTCGGC GGCAACGGCGGCAACATGGCGTCCCCAGCGCCGCCTGCTTGTGACCTCCGAGTCCTCAGT AAACTGCTrCGTGACTCCCATGTCCTTCACAGCAGACTGAGCCAGTGCCCAGAGGTTCAC CCTTTGCCTACACCTGTCCTGCTGCCTGCTGTGGACTTrAGCTTGGGAGAATGGAAAACC
110 ” AGATGGAGGA.GA1 1 AA30 T .dAGGAixATO ^DGuisAG «* AGTGACCCTTdGCTGGAGGG A GTGATGGOAGCACGGGGACAACTGGGACCCA£TTGGCTCTCATCCCTCGTGGGGCAGGTT TCTGG ACAGGTCCGTCT2 CTCCTTGGGG DC CTGCAGAGCCTC CTTGGAACCCAGCTTCGT 2CACAGGGCAGGA0CACAGCTCA0AAG (SEC ID DO :152) pK0D2£544
GCTAACTGCTCTATAnTGATCGATGAAA.TTATACATCACTTAAAGAGA-CCACDDGCACCT TTGCTG GAG D C GAAC AAC CT CAATGACGAAGACGTCT CTATC CTGATGGAC C GAAAC OCT CGACTTCCSGVvCCTGGAGAGCTTOGTAAGGGCTGTCAAGAACTTAGAAAATGCATCAGGT ATTGAGGCAATTCTTCGTAATCTCCAACCATGTCTGCCCTCTGCCACGGCCGCACCCTCT cgacatccaatcatcatcaaggcaggtgactggcaagaattccgggaaaaactgacgttc tatctggttacccttgagcaagcgcaggaacaacagtacgtagagggcggtggaggct-cc ccgggtgaaccgtctggtccaatctctactatcaacccgtctcctcggtctaaagaatct CATAAATCTGCAAACATGGCCATCTTCCTGAGCTTCCAACACCTGCTCCGAGGAAAGGTG CGTTTCCTGATGCTTGTAGGAGGGTCCACCCTCTGCGTCAGGGAATTCGGCGGCAACGGC ggcaaoatgg-cgtccccagcgccggctgcttgtgacctccgagtcctcagtaaactgctt CGTGACTCCCATGTCCTTCACAGCAGACTGAGCCAGTGCCCAGAGQTTCACCCTTTGCCT AC ACCTGTCCTGCTG cctgct gtggactttag cttggg agaatggaaaacc c AG atggag gagaccaaggcacaggacattctgggagcagtgacccttctgctggagggagtgatggca GCACGGGGAGAACTGGGACCCACTTGCGTCTCATCCCTCCTGGGGCAGCTTTCTGGACAG gtccgtctcctccttggggccctgcagagcctccttggaacccagcttcctccacagggc AGGACCACAGCTCACAAGGATCCCAAT (SEC ID NO;153;
PMQN28545
GCTAACTGCTCTATAATGATCGATGAAATTATACATCACTTAAAGAGACCACCTGCACC^ TTGCTGGACCCGAACAACCTCAATGACGAAGACGTCTCTATCCTGATGGACCGAAACCTT C GACTT C C AAACCTGGAG AGCTTC GTAAGGGCTGTC AAGAACTTAGAAAATGCATCAGGT ATTGAGGCAATTCTTCGTAATCTCCAAXCATGTCTGCCCTCTGCCACGGCCGCACCCTer cgacatccaatcatcatcaaggcaggtgactggcaagaattccgggaaaaactgacgttc datctggttacccttgagcaagcgcaggaacaacagtacgtagagggcggtggaggctcc ccgggtgaaccgtgtggtccaatctctactatcaacgcgtctcctccgtctaaagaatct cataaatctccaaacatggatcccaatgccatcttcctgagcttccaacacctgctccga GGAAAGGTGCGTTTCCTGATGCTTGTAGGAGGGTCCACCCTCTGCGTCAGGGAATTCGGC GGCAACATGGCGTCTCCCGCTCCGCCTGCTTGTGACCTGCGAGTCCTCAGTAAACTGCTT CGTGACTCCCATGTCCTTCACAGCAGACTGAGCCAGTGCCCAGAGGTTCACCeTTTGC^T ACACCTGTCCTGGTGCCTGCTGTGGACTTTAGCTTGGGAGAATGGAAAACCCAGATGGAG GAGACCÀAGGCACAGGACATTCTGGGAGCAGTGACCCTTCTGCTGGAGGGAGTGATGGCA gcacggggacaactgggacccacttgcctctcatccctcctggggcagctttctggacag gtccgtctcctccttggggccctgcagagcctccttggaacgcagggcaggaccacagct CACAAG (SEC DD DC :154)
PMON15981
ATG3CTAACT GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG
ACCACCTGCA CCTTTGCTGG ACCCGÀACAA CCTCAATGAC GAAGACGT^T 101 CTATCCTGAT GGATCGAAAC CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA ill AxGGGCTGTCA AGAACTTAGA AAATGCATCA GGTATTGAGG CAATT^TTCG 201 TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCACCC TCTCGACATC 211 CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAG AATTCCGGGA AAAACTGACC ui λΰΟ TTCTATCTGG TTACdTTGA GCAAGCGCAG GAACAACAGO ACGTAGAGGG
250 CGGTGGAGGO TOCGCGGGTG ÂACCGTCTGG TCCAATCTCT ACTATOAAOC 401 OGTOTOOTCO GTCTAAAGAA TCTCATAAA7 OTCCAAACAT GTCOTAOAAG 451 CTGTGuCACC CCGAGGAGC7 GGTGCTGCTO GGAGACTCTO TGGGOATCCO 501 CTGGGCTCCC CTGAGCTCCT GCCCCAGCOA GGCCGTGCAG 2CGG1AGGOT 551 GCTTGAGCCA ACTCCATAGC GGCCTTTTCC TCTAGOAGGG GCTGCTGCAG 651 GCOCTGGAAG GGATATCCCC CGAGTTGGGT CCCACCTTGG AOACACTGCA 6 51 GCTGGACGTC GCCGAdTTG CGACCACCAT CTGGCAGCAG ATGGAAGAAO
701 TGGGAATGGO CCCTGCCCTG CAGCCCACCO AGGGTGCCAT GCCGGCOTTO 5.1 GOOTDDGGTO TGCAGCGCCG GGCAGGAGGG GTCCTGGTTG CTAGCCATCT §01 GOAGAGCTTC CTGGAGGTGT CGTACCGCGT TOTACGCCAC CTTGCGCASC 551 OGGGCGGCGG CTCTGACATG GCTACACCAZ TAGGCCCTGC CAGCTCCCTG 511 CCCCAGAGCT TCCTGOTCAA GTCTTTAGAG CAAGTGAGGA AGATC uAGGG 951 CGATGGCGCA GCGCTCCAGG AGAAGCTGTG TGCCACCTAA TAAr
ÍSEQ I» NO:155) pNONlSSSl
ATGGGTAAGT GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG
ACCACCTGCA CCTTTGCTGG AGCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT 101 CTATCCTGAT GGATCGAAAC CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTDCGTA .151 AGGGCTGTCA AGAACTTAGA AAATGCATOA GGTATTGAGG CAATTCTTCG 201 TAATCTCGAA GCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCACCC TCTCGACATC
251 CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGOAAG AATTCCGGGA AAAACTGACG 301 TTCTATCTGG TTACCCTTGA GCAAGCGCAG GAACAACAGT ACGTAGAGGG 3SI CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCOAATCTCT ACTATCAACC 401 CGTCT1XTCC GTCTAAAGAA TCTCATAAAT CTCCAAACAT GTCTCCCGAG 451 TTGGGTCCCA CCTIGGACAC AGTGCAGGTG GACGTCGCCG A2TTTGCCAC 501. CACCATCTGG CAGCAGATGG AAGAACTGGG AATGGCCCCT GCCCTGCAGC 551 CCACGCAGGG TGCCATGCCG GCCTTCGCCT CTGCTTTCCA GCGCCGGGCA 601 GGAGGGGTCC TGGTTGCTAG CCATCTGCAG AGCTTCCTGG AGGTGTCGTA 551 CCGCGTTCTA CGCCACGTTG CGCAGCCOGG CGGCGGCTGT GACATGGCTA
702 CAOCATTAGG CCCTGCCAGC TCCCTGCCCC AGAGCTTCCT GCTCAAGTCT 751 TTAGAGCAAG TGAGGAAGAT CCAGGGCGAT GGCGCAGCGC TCCAGGAGAA 801 GCTGTGTGCC ACCTACAAGC TGTGCCACCC CGAGGAGCTG GTGCTGCTCG 851 GACACTCTCT GGGCATCCCC TGGGCTCCCC TGAGCTCCTG CCCCAGCCAG 901 GCCCTGCAGG TGGCAGGCTG CTTGAGCCAA CTCCATAGCG GCCTTTTCCT 951 CTACCAGGGG CTOCTGCAGG CCCTGGAAGG GATATCCTAA TAA:
ÍS“Q ID NO:156)
PMON15965
ATGGCTAAGT GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG
ACCACCTGCA CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT 101 CTATOCTGAT GGATCGAAAC CTTCGACTTC CÀAACCTGGA GAGCTTCGTA 151 AGGGCTQTCA AGAACTTAGA AAATGCATCA GGTATTGAGG CÀATTCTTCG 201 TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCACCC TCTCGACA^ 251 CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAG AATTCCGGGA AAAACTGACG 301 TTCTATCTGG TTACCCTTGA GCAAGCGCAG GAACAACAGT ACGTAGAGGG 351 CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG ÀACCGTCTGG TCCAATCTCT ACTATCAACC 401 CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA TCTCATAAAT CTCCAAACAT GTCTTCTGCT 45* TTCCAGCGOG GGGCAGGAGG GGTCCTGGTT GCTAGCCATC TGCAQAGOTT
112
Figure BRPI9610977A2_D0040
Q £? c
Figure BRPI9610977A2_D0041
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Figure BRPI9610977A2_D0043
DM01115 967
ATGGCTAACT GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG 51 ACCACCTGCA CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT 101 CTATCCTGAT GGATCGAAAC CTTCGACTTC CAAAOCTGGA GAGCTTCGTA 151 AGGGCTGTCA AGAAOTAGA AAATGCATCA GGTATTGAGG CAATTCTTCG 201. TAATCTCCAA COATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCACCC TCTCGACATC 251 OAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAG AATTCCGGGA AAAACTGACG
UsAACAaCAGT acgtagaggg 251 CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCCAATCTCT ACTATCAACC 401 CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA TCTCATAAAT CTCCAAACAT GTCTACCCAG 451 GGTGCCATGC CGGCCTTCGC CTCTGCTTTC CAGCGCCGGG CAGGAGGGG'r 501 CCTGGTTGCT AGCCATCTGC AGAGCTTCCT GGAGGTGTCG TACCGCGTTC 551 TACGOCACCT TGCGCAGCCC GGCGGCGGCT CTGACATGGC TACACCATTA 5C1 GGCCCTGCCA GCTCCCTGCC CCAGAGCTTC CTGCTCAAGT CTTTAGAGCA t-5x AGTGAGGAAG ATCCAGGGCG ATGGCGCAGC GCTCCAGGAG AÀGCTGTGTG
113
702 dACCTACAA GCTGTGCXAC CdGAGGAGO TGSTGCTGCD
752 CTGGGCATd CCTGGGCTCC CCTGAGCTCC TGOCCCAGCC AGGCCdGC*
802 GCTGGCAGGG IGCTTGAGd AACTOGATAG 2GG22TTTTC CTCTAdAGG •sc -í GGCTCCTGOA GGCICTGGAA GGGATATCCC CCGA.GTTGGG GCdACCTTfe 9G2 GACACA7TG7 AGITGGACGT CGGCGACTT7 GCCACCACGA TdGGCAGCA 952 GATGGAAGAA CTGGGAATGG CCCCTGCCd GCAGCCGTAA TAA (SEQ IS NO:25& í pMON15960
2. ATGGCTAOAC GATTGGGdC TGdAGdd CTGCGCGAGA GCTTCCTGd -' XAAGTCTTTA GAGCAAGTGA GGAAGATCCA GGGCGATGGC GGAGCGCTG». 1Õ* aggagaagct GTGGGCCAd tagaagctgt gecacgccga ggagctggtg 252 CTGdCGGAl ACTCTGTGGG CATCGCCTGG GCTCCCCTGA GCTCdGCd 2C2 CAGCCAGGd CTGCAGCTGG CAGGGTGCTT GAGCCAACTG CATAGCGGC7 >ci TTTTCCT0TA CCAGGGGCTG CTGCAGGCCC TGGAAGGGAT ATCdCCGAG 301 TTGGGTCCCA C2TTGGACAC ACTGCAGCTG GACGTCGCCG ACTTTGCCAC ? CACCATCTGG CAGCAGATGG AAGAACTGGG AATGGCCCCT GCCGTGCAGC 401 CCACCCAGGG TGCCATGCCG GCCTTCGCCT CTGCTTTCCA GCGCCGGGCA 452 GGAGGGGTCC tggttgctag ccatctgcag aggttcctgg aggtgtcgta 501 CCGCGdCTA CGCCACCTGG CGCAGCCCGG CGGCGGETCE GAGATGGCTA 551 CACCATTGGG CCCTGCCAGC TCCCTGCCCC AGAGGTTCCG GGTCAAGTC7 6C2 TTAGAGCAAG TGAGGAAGAG CCAGGGCGAT GGCGGAGCGC TCCAGGAGAA 551 GCTGTGTGCC ACOTACAAGC TGTGCCACCC CGAGGAGCTG GTGCTGCTCG 7 01 GACACTCTCT GGGCATCCCC TGGGCTCOCC TGAGCTCCTG CCCCAGCCAG 751 GCCCTGCAGC TGGCAGGCTG CTTGAGCCAA CTCCATAGCG GCCTTTTCCT 8Q1 CTACCAGGGG dCCTGCAGG CCGTGGAAGG GATA.TGCCCC GAGTTGGGTC 851 CCACCTTGGA CACACTGCAG CTGGACGTCG CCGACTTTGC CAGCACCATC 901 TGGCAGCAGA TGGAAGAACT GGGAATGGCC CCTGCCCTGC AGCCCACCCA 1001 XCGTGGTTGC TAGCGATCTG CAGAGCTTCC TGGAGGTGTC GTACCGCGTT 1052. CTACGCOACC TTGCGGAGCC CTGAEAA (SEC ID NO: 160)
PMON32132
TCTCCCGCTCCGCCTGCTIGTGA-CdCCGAGTCCTCAGTAAACTGCTTCGTGACTCCCAC GTCCTTCACAGCAGACTGAGCCAGTGCCCAGAGGTTCACCCTTTGCCTACACCTGTCGTG CTGCCTGCTGTGGACTTTAGCTTGGGAGAATGGAAAACCCAGATGGAGGAGACCAAGGCA CAGGACATTCTGGGAGCAGTGACCCTTCTGCTGGAGGGAGTGATGGCAGCACGGGGACAA CTGGGACCGACTTGCdCTCATCCCTCCTGGGGCAGCTTTCTGGACAGGTCCGTCTCCTC CTTGGGGCCCTGCAGAGCCTCCTTGGAACCCAGOTCCTCCACAGGGexAGGACCACAGCT CACAAGGATCCCAATGCCATCTTCCTGAGCTTCCAACACCTGCTCCGAGGAAAGGTGCGT TTCCTGATGCTTGTAGGAGGGTCCACCCTCTGCdCAGG (SEQ ID NO;249}
PMON32133
TCTCCCGCTCCGCCTGCTTGTGACCTCCGAGTCCTCAGTAAACTGCTTCGTGACTCCCAT GTCCTTCACAGCAGACTGAGCCAGTGCCCAGAGGTTCACCCTTTGCCTACACCTGTGCTG CTGCCTGdGTGGACTTTAGCTTGGGAGAATGQAAAACGCAGATGGAGGAGACCAAGGCA CAGGAC ATTCTGGGAGCAGTGACC CTTC7G CTGG AGGGAGTGATGG CAG 2 ACGGGGACAA CTGGGACCCACTTGCCTCTCATCCCTCCrGGGGCAGCTTTCTGGACAGGTCCGTCTCCTC dTGGGGCCCTGCAGAGCCTCCTTGGAACCCAGGGCAGGACCACAGCTCACAAGGATCCC
114
Figure BRPI9610977A2_D0044
OOATGGCTAA CTGOTCTATA ATGATCGATG AAATTATACA TCACTTAAAG AGACCACCTG CACCTTTGQT GGACCCGAAC AACCTCAATG ACGAAGACGT CTGTATCQTG ATGGA.TCGAA ACCTTCGACT TCCAAACCTG GAGAGCTTCG TAAGGGCDG7 CAAGAACTTA GAAAATGCAT CAGGTATTGA GGCAATTCT7
GGTÀATCTCC AACCATGTCT GCCCTCTGGC ACGGCCGCAC CCTCTCGACA TCCAATCATC ATCAAGGCAG GTGACTGGCA AGAATTCCGG GAAAAACTGA CGTTCTATST GGTTACCCTT GAGCAAGCGC AGGAACAACA GTACGTAgag ggcggtggag gccaCCCGGG TGAÀCCGTCT GGTCCAATGT CTACTATCAA CCCGTCTCCT CCGTCTAAAG AATCTCATAA ATCTCCAAAC ATGTAAGGTA
CGCATGCAA GCTT (SEQ ID NO:257)
Pmar.13130.Seg
OCATGGCTAA CTGCTCTATÀ ATGATCGATG AAATTATACA TCACTTÀÀAG
AGACCACCTG CACQTTTGCG GGACCCGAAC AACCTCAATG ACGAAGACGT
101 CTCTATCCTG ATGGATCGAA ACCTTCGACT TCCAÀAOCTG GAGAGCTTCG
151 TAAGGGCTGT CAAGAACTTA GAAAATGCAT CAGGTATTGA GGCAATTCTT
X.· \*7 A Χα· «1 Sm ΛΛ.λΜν-.Λ A \3 X Xm a \3Xm1om* w X χ^χμ Ίμ \m'^í
251 TCCAATCATC atcaaggcag GTGACTGGCA AGAATTCCGG GAAAAACTGA
102 Γ·(3Τ’Τ,αΤΑ’Τ’Γ*1 GG’TrACC''’'’’*' G^GCAAG^’G' AGGAACAADA GTAGG^fcfra- .·.< X. xv.'m'X «v. «μ . X. X λμ . a>. vwí «m. à vJ.Sm.àwVaw ·χ SX jCàk\7 vú5 íJXjiXa ίΤΟψ’ΛΧ^.ψϊ. χ3ϊ 4* X? ·Χ» vA ‘-.A
151 ggoggtggag gatececGGG tggtggttct ggcggcggct ccaacatgtã 401 AGGTÃCCGCA TGCAAGCTT (SEQ ID NO;25S)
115)
Tabela 3
Seqftêrícias de Proteínas p?Oü26458pep
Se^P^oA1 a^eProAíaCy sAsp^euArgValLeuSerLysLeuLeuArgAspS erHi s VaÍLÍuHx5SerArqLeuS“erGlnCysProGluVaIHisProLeuProThrProValLev ’.gx^proAlaValAspPheSer^euGlyGiuTrpLysThrG^nMetGluGxuThrLysAia G InAsp XI eLeuG lyAlaWl Tnr LeuLeuLeuG luG lyValMe c AlaAxaAr gu i y !-> LeuG: v^cThrCysLeuSerSa~X!euLeuGlyGxriLeuSarGlyGXnVarAx“gIjeuX<eu LeuGlvÃlaLeuGlnSerLeuLeüGlyThrGlnieuProProGlnGlyArgThrThr.Ala »^,gl,YsA5PProAsxiAlaXlôPhel»eu.SerPHeGlnHxs£jeuX;euArgu>Ayl<ysV â~A» g PheLeuPletõeuValGlyGlySerThrLeuCysValArgGluPhe (SEQ XO NO :161) pMON28548pap
3er?roAlaProProAlacysAspLeuArgVall.euS erkysteulauArgAspSerHi s ValLeuHxsSerArgLeuSerG InCy s ProG luValHi s ProLeuPrcThr Pr oVa ll*eu LeuProAlaValAspPheSfirLeuGlyGluTTpLysThTGlnMetGluGluThrLysAla GlnAspXleLeuGlyAlaValThrI»exxLeuLeuGluGlyValMetAlaAlaArgGlyGlu LeuGlvProThrCysLeuSerSerbexibeuGiyGiriLeuGerGlyGlnvalArgLeuCeu LeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeuGlyThrGlnLeuProProGlnGlyArgThrThrAla HislysAspProAsnAlallePheLeuSerPheGlnHisLeuLeuArgGlyLysValArg PheLeuHetbeuValGlyGlySerThrL.euCysValArgGluPheGlyGlyA2nHetAla serProAlaProProAlaCysAspbetiArgVallíeuSerLysLeuLeuArgAspSerHis vãlGeuEisSerArgLeuSerGlnCysProGluValHisPro^euProThrProvalLeu leuPr oAl avalAspPhe S er l*euG lyG luTrpLysThrG InMe tG luG luThr Ly s Al a GlnAspXlôLeuGlyAlaValThrLeWGeuLeuGluGlyValMetAlaAlaArgGlyGln LeuG lyProThr CysLeuS er ser LeuLeuG lyGlnLeuSerG iy Glnv alAr aleuLev LeuGlvAlaLeuGlnSerLeuLeuGlyThrGlnGlyArgThrThxAlaHisLysAspPro AsnAlaXlePheLeuSerPheGlnHisbeuLeuArgGlyLysValArgPheLetiMetLeu valGlyGlySerThrieuÇysValArg (SEQ XD NO: 162)
PMON28500
S er Pr o Al aPr o ProAlaCy s AspLeuArgValLeuS erLy sbeuLeuAr g AspS erHi s ValLeuHisSerArgLeuSerG InCy sProGluValHisProLeuProThr ProVa ILeu LeuProAlaValAspPheSerLauGlyGluTrpLysTbxGlPMetGluGluThrLysAla G InAspX 1 eLeuG XyAlaValThrLeuLeubauG luG lyValMe t AlaAlaArgG lyGlxi LeuG ly ProThrOysLeuS er S er LeuLeuG ly GlnLeuS erG lyG InV al ArgLeuLeu LeuG ly AlaLeuG InS er LeuLeuGlyThr G InLeuPra Pr oG XnGlyAr gThrThr Al a HisLysAspPTeAsnAlallePheLeuSerPheGinHisLeuXieuArgGlyLysVaiArg PheLeuHetLeuValG lyGly SerThrleuOy sValArgG luPheGlyAsnMet AlaSer PraAlaProProAlaCysAspLeuArgVaXLepSerLysGeuLeuArgAspSerHisVal beuHisSerArgLeuSerGlnCyfsProGluValHi£ProLeuProThrProValLeu.Lev PrQMaValAspPheSerLeuGlyGluTrpLysThrGlnMecGluGl'uThrLysAlaGln AsplleLeuGlyAlaValThrLeuLeubepGluGlyValMetAlaAlaArgGlyGlnheu GlyProThrCysLeuSarSerLeuLeuGlyGlr^euSerGlyGlnValArgLeuLeuLeu GlyAlaLeuGlnSerLeuLeuGiyThrGlnLeuProProGlnGlyArgThrThrAlaHis
116
- v^ASOProAenAial lePAeLeuSerPheGxnHiSueuLeuArgulyLysν’&j,^~.rgΟΉe LeÜHeLLêuValGlyGlySerTnrLeu^sValArç ;SE2 π/νο~:Γο3 : pMÔKzSTOl
Ser ProA laPrc ProAlaOysAspLeuàr gValLeuS erLy sLeuLeuAr g AspSer His ValLéüEiáSerArgLeuSerGlnCysProGiuValHisProLeuProThrProValLeu LeuProAlaValAspPheSerLeuGlyGluTrpLysT&rGlnMezGluGluThrLysAla Glr^spXiaLeuGlyAlav&lThrLeuLeuLeuGluGlyValMetAlaAiaArgGlyGln LeuGlyProTurC>'sLeuSerSerLeuLeuGlyGlnLeuSerGlyGXnValArcLeuLeu LeuGlyAlaheuGlnSerLeuLeuGlyThrGlnLeuProProGlnGlyArgThrThrAla HxsLysA^pPrcAsnAlaxlePheLeuSerPheGlnHisLeuLeuArgGlyLysValArg PheLeuMeuLeuValG lyG ly SerThrLeuO/sVal ArgGl uPheGly G lyAsnM er Al a S er Pr oAl aProProAlaCy sAspLeuAr gValLeuSerLy sLeuLeuArgAspSer Hi s valLeuHrsSerArgLeuSerGlr.CysProGluValHisProLeuPraThrProValLeu LeuProAlaValAspPheSerLeuGlyGluTrpLysThrGlmeuGluGluThrLysAla G XnAspG leLeuGIyAlaValThrLeuLeuleuGluGly ValMeoAlaAlaArgGly G In LeuGly ProT.hr Gy sLeuSerSerLeuLeuGlyGlxlLeuSerGlyGlnValArgLeuLeu Leu G ly Al aL euG InSerLeuLeuG ly Thr GlnLeuProPr oG InGlyAr gThrThr Al a HmLvsAsDProAsnAlaXlePheLeuSerPheGlnHisLeuLeuArgGlyLvsValAra PheLeUMetLeuValGivGlySerThrLeuCysValArg (SEQ XL ND:164 >
PHON185C2
SerProAlaProProAlaCysAspLeuArgValLeuSerLysLeuLeuArgAspSerHis vs 11 euHisS er Arg! euS erG .1 nDysProGl u ValRi s ProLeuProThrProValLeu LeuPrcAlaValAspPheSerLeuGlyGluTrpLysThrGlnMeuGluGluThrLysAia GmAspr ieueuGlyfAlaVaiThrÍjeuLeuLeuuluGlyValMe uAiaAlaArgG lyGln LeuGlyProThrCysLeuSerSerLeuLeuGlyGlnLeuSerGlyGlnValArgLeuLeu LeuG lyAl aLsuGlnSer LeuLeuGlyThrGlnLeuProProGlnG XyArgThrThr Al a HisLysAspProAsnAlallePheLeuSerPheGlnHisLauLeuArgGlyLysValArg PheLeuMexLeuValGlyGlySerThrLeuCysValArgGluPheGlyGlyAsnGlyGly AshMet AiaSer.pTQAlaPrGProAlaOysAspLeuArgVaXLeuSerLysLeuLeuArg AspSerHxsValLeuHisSerArgLeuSerGlnCysProGluValHisPrcLeuProT.hr ProValLeuLeuProAlaValAspPheSerLeuGlyGluTrpLysThrGlnMetGluGlu GhrLysAlaGlnAspIleleuGlyAlaValThrLeuLeuLeuGluGlyValMetAlaAla ArgGlyGlnLeuGlyProThrCysLeuSerSerLeuLeuGlyGlnLeuSerGlyGlnVal Ar gLeuLeuLeuG lyAlaLeuGlnS erLeuLeuG lyThrG InLeuProProGlnGly Arg TnrThrAl aH xsLy s AspPr oAsnAl al 1 e Ph eleuS er Ph eG InHi sLeuLeuArgGly Ly sVal ArgPheLeuMetLeuV al GiyGly SerThrLeuCy sValAra iSEQ ZD NG:165)
13162,Pep
Asn Cys
Pro Pro
Vai Ser
Ser Phe ίΧ· aL. ki. íâ
X * AS * A,
Ch ?ÍaL Ch
Gin GIu uscLn tíà
Ser He Hex lie Asp Glu He Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn lie Leu Meo Asp Arg Asn Leu Vai Arg Ala Vai Lys Asm Leu lie Leu Arg Asm Leu Gin Pre· Pro Ser Arg His Pro Xie Xie Phe Arg Glu Lys Leu Tor Phe Glr. Giu Gm Gin Tyr Vai Gm lie His His Leu Lys Arg Asn Leu Asp Asp Glu Asp Arg Leu Pro Asn Leu Glu Glu Asm Ala Ser Gly Xie Cys Leu Pro Ser A.la Thr Xie Lys Ala Gly Asp Trp Tyr Leu Vai Thr Leu Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
117
Figure BRPI9610977A2_D0045
Thr Gin Gly Ala Met. λ.la Gly Giy Vat Leu Val Ser Tyr Arg Vai Ser Gly Gly Ser Gin Art Lye lie Gin Gly Ala Thr (SSQ XD NO:
Goy Goy Ser Asn
Ser cys Pro Ser Gin Lou His Ser Gly' Leu Glu Gly Xis Ser ProLeu ASp Va* AlS Asp Glu Leu Gly Met Ale Pro Ala Ph& Ala Ser Vai Ala Ser Hrs Leu Leu Arg His Leu Ala Ser Phe Leu Leu Lys Asp Giy Ala Ala Leu 16 6 i
Tie Asp Glu Tie Xie Leu Asp Pro Asn Asn asp Arg Asn Leu Arg Val Lys Asn Leu Glu Asn Leu Gin Pro Cys His Pre Tie He Xie Lys Leu Thr Phe Tyr Gin Tyr Vai Glu Gly Pro Xie Ser Thr lie Lys Ser Pro Asn Met Vai Leu Leu Gly His Ser Cys Pre Ser Gin LiSu h.^* s......Se* .Giy. Heu Glu Gly Xie Ser Pro Leu Asp Vai Ala Asp Gxu ueu. Gly Meo Ala Pro Ala Phe Ala Ser Vai Ala Ser Bis Leu Leu Arg Hrs Leu Ala Ser Phe Leu Leu Lys Asp Gly Ala Ala Leu 167)
Figure BRPI9610977A2_D0046
His His Leu Lys Arc Leu Asn Asp Giu Asp Leu Pro Asr. Leu Giu asp Ala Ser Gly Xie Leu Pro- Ser Ax a Thr Lys Ala Gly Asp Trp .mêu Vai Thr i^eu Glu Gly Gly Gly Ser Pro t^XO
Ala Tyr Lys Leu Cys Ser Leu Gly Xie Pro Ala Leu Gin Leu Ala Phe Leu Tyr Gin Gly Giu Leu Gly Pro Thr Phe Ala Thr Thr Xie Pro Ala Leu Gin Pro Am Phe u~n Arg Arg Gun Ser Phe Leu Glu Gin Pro Ser Gly Gly Ser Leu Glu Gin Vai Gin Glu Lys Leu Cys
13184.Pept
Asn Cys Ser Xie Met Pro Pro Ala Pro Leu val Ser Xie Leu Met Sex' Phe val Arg Ala Glu Ala Xue Leu Arg Ala Ala Pro Ser Arg Gin Glu Phe Arg Glu Gm Ala Gm Giu Gin Gj.y Giy Gly Ser Giy
Xie Asp Glu Xie Xie Leu Asp Pro Asn Asn Asp Arg Asn Leu Arg Vai Lys Asn Leu Giu Asn Leu Gin Pro Cys His Pro Xie Xie Xie Lys Leu Thr Phe Tyr Gm Tyr vai Glu Gly Gly Gly Ser Asn Met
His His Lev Lys Arg Leu Asn Asp Glu Asp Leu Pro Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly Xie Leu Pro Ser Ala Thr Lys Ala Gly Asp Trp Leu Val Thr Leu Glu Gly Gly Gly Ser Pro Aia Pro Giu Leu Gly
118
PiilOyfLil; jAFFlBhr^
Gin Pre Tnr Gin. Gly Arg., Arg ....Al a· .Sly. .'Gly LiilBiL:lvll: O' SW' Gly Guy Ser Gly Gly Gin val Arg Lys lie |euiOBliAlai;|||:|:Xy:r: Leu Gly His Ser Leu
Pre Ser Gin Are Leu
Ser Gly Leu Phe Leu Tyr l.a s«L :SH'l rp NO: 16%
Leu Gin Leu Asp Met Glu Gin Leu Au a Mei Pre A.la val Leu Vai Ale Ger Arc Val Leu Arg His Ser Gin Ser Phe Leu Gir, Gly Asp Gly Ala Lys Leu Sys His Pro Gly Xie Pro Grp- Ale Gin Leu Ala Gly Cys
Gin Gly Leu Leu
Vai Ala Asp Ala Till Gly Met Ala Pre Ala Leu Phe Ala Ser Ala Poe Gin
His Leu Gin Ser Phe Leu Ala Gin Pro Ger u>eu .Uys Ser w£!j G„u Ala Leu Gin. Glu l..ys Glu Glu Leu Vai Leu Pre Leu Ser Ser Cys Leu Ser Gin. Leu His Gun A^a ^eu g~u Gj.v
12181.Pept
Asr. Oys Ser lie Met Xie Asp Giu Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Vai Ser lie Leu Met Asp Arg Asn Ser Phe Val Arg Ala V®1 Lys Asn Glu Ala lie Leu Arg Asn Leu Gin Ala Ala Pro Ser Arg Hrs Pro 11® Gi.r. Glu Phe Arg Glu Lye Leu Thr Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Vai Gly Glu Pro Ser Gly Pro lie Ser Ser Lys Glu Ser His Lye Ser Pro Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Tnr lie Trp Gin Gin Met Giu Glu Gin Pre Thr Gin Gly Ala Met Pro Arg Arg Ala Gly Gly Vai Leu Vai Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin Ser Gin. Vai Arg Lys lie Gin Gly Asp Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys Leu Gly His Ser Leu Gly Xie Pro Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly lie Ser ÍSEQ XL NO:159;
Xie lie Hxs Hrs Leu Lys Arg Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Leu Glu Asn Ale Ser Gly Xie Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Xie lie Lys Ala Gly Asp Trp Phe Tyr Leu Vai Tnr Leu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Thr Xie Asn Pro Ser Pro Pro Asn Met Ala Pro Glu Leu Gly Asp Vai Ala Asp Phe Ala Thr Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lys Hrs Pro Glu Glu Leu Vai Leu Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly
13186*Pept
Asn Cys Ser lie Men Xie Asp Glu XI® Xie His His Leu Lys Arg
Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asts Glu Asp
Vai er Xie Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu
Ser Phe val Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly Xie
Glu Ala Xie Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr
Ala Ala Pro Ser Arg Hrs Pre· Xie Xie Xie Lys Ala Gly Asp j ΤΤΊ
Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tvr Leu Val Thr Leu Glu
Gin Ala Gin Glu Gin Gin Τντ Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Met Ala Met Ala Pro Ala
Leu Gin Pro Tnr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Ph®
Figure BRPI9610977A2_D0047
Figure BRPI9610977A2_D0048
Lite . pepo
Asn. Cys Ser lie Mor lie Asp Pro Pre Ala Pro leu Leu Asp val Ser lie- Leu Mer. Asp Axg Ser Phe Vai Arc Ala Vai Lys Glu Ala Xie Lev Arg Asn Leu Ala Ala Pro Ser Arg Hrs Pro Gin Glu Phe Arg Giu Lys Leu u x.n Aza <^m Giu Gin Gan Tyr Giy Glu Pro Ser Gly Pro lie Ser Lye Glu Ser His Lys Ser ίίδΌ Gm Pro Tor Gin Gay Aza Gin .Arg Arg Aia Gly Gly Va_ Poe Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Ser Giy Gly Ser Gly Gly Ser Glu Gin Vai Arg Lys Xie Gin lye Leo Cys Ala Thr Tyr Lys i»eu _·'βν Gly Hrs Ser j^eu Gly Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin His Ser Gly Lev Phe Leu Tyr uiy He Ser Pro' Gou Leu Gly .Asp Vai Am Asp Phe Ai.a. Thr Leu Gly ÍSXQ ID NGi171;
Glu Xie Xie Hrs His Leu Lys Arg Pro Asn Asn Leu Asn Asp; Glu Asp Asn lieu Arg Leu Pro Asn Leu Gau Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly Xie Gin Pro Oys Leu Pro Ser Ala Thr Xie Xie Xie Lys Ala Giv Asn Trp Thr Phe Tyr Leu vai Thr Leu Glu Vai ulu oly Gly uiy Giy Ser Pro Ser Thr lie Asn Pro Ser Pro Pm Pro Asn Men Ala Met. Ala Pro Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Leu. Vai Aia Sex Has Leu Gin Ser Vai Leu Arg His Leu Ala Gm Pro Gin Ser Phe Leu Leu Lye Ser Leu Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Vai He Pro Tip Ala Pro Leu Ser Ser Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu Gin Giy Leu Leu Gin Ala Leu Glu Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Thr Xie Trp Gin Gin Met Glu Glu
13188,Pent
Asn Cys Ser He Met Xie Asp Pre· Pro Ala Pro Leu Leu Asp Vai Ser Xie Leu Men Asp Arg Ser Phe Vai Arg Ala Vai Lys Glu Ala ale Leu Arg Asn Leu Ala Ala Pro Ser Arg His Pro Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Men Pm Ale Phe Aia Ser Ala Leu Vai .Ala Ser Has Leu Gin
Glu Xie Xie His His Leu Lys Arg Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu ^%sn ueu Glu Asn Axa Ser Giv Xie Gin Pm Cys Leu Pro Ser Ala Thr Xie Xie Xie Lys Ala Gly Asp Trp Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu Vai Glu Gly Giy Giy Gly Ser Pro Ser Asn Met Ala Thr Gin Gly Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Giy Vai Ser Phe Leu Glu Vai Ser Tyr Ara
120
Vãl Leu Arc HrS A-.a G-*Gln 0©r pne leu Leu Lys Ser Glv asp Giy Al® Al® Leu Gin Leu Cys Hüs Pre Glu Glu Leu 1.1 e Pre TTP Ale Pre- Leu Ser Leu Ala Giy Cys Leu Ser Gin Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Pro Ter Leu Asp Tr.r Leu Gin Thr lie Trp Gin Gin Meu Glu Gin Pm íSHl ZD NCu u7u .·
Pro Ser Gly Gly Ser Gly Guy Ser Leu Glu Gin val Arg Lys Gin Glu Lys Leu Cys Ala T.nr Tyr Lys Val Leu Lea Gly His. Ser Leu Gly Ser Cys Pre Ser Gin Ala Leu Gin Leu Hus Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Giu Gly Lie Ser Pro Glu Leu Gly Leu Asp Val Ala Asp Pne Ala Tnr Glu Leu Gly Met. A.ua Pro Ala ^eu
2.Σ.189. PeptAen Cys Ser lie Met Xie ASp Pro Pre Alè Pro Leu Leu Asp v®2 Ser Xie Leu Neu Asp Arg Ser Phe Vai Arg Ala Vai Lys Glu Ale ZD- Leu Arg Asn Leu Ala Ala Pro Ser Arg His Pro Gin Glu Pine Arg Glu Lys Leu Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Gly Glu Pro Ser Gly Pro Xie Ser Lys Glu Ser Hrs Lys Ser Met Pro Ala Phe Ale Ser Ala Leu Vai Ala Ser His Leu Gin Vai Leu Arg His Leu Ala Gin Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Gly Asp Guy aj,® ala Leu Gun Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Lie Pre Trp Ala Pro Leu Ser Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Thr Xie Trp Gin Gin Met Glu Gin Pro (SSQ ZD NO:173)
Glu Xie Xie His Hus Leu Lys Arc Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Asn Leu Glu Asn Ala a ex uly ~ue Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Xie He Xie Lys Ala Gly Asp Trp Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ser Thr Xie Asn Pro Ser Pro Pro Pro Asn Met Ala Thr Gin Gly Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly Val Ser Phe Leu Giu Val Ser Tyr Arg Pro Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Giu Gin Val Arg Lys lie Gin Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Dys Val Leu Leu Gly His Ser Leu Gly Sei Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Glu Gly Xie Ser Pro Glu Leu Gly Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu
13190 4Peps
Asn Cys Ser Xie Met Xie Asp Glu Pro- Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Val Ser Xie Leu Met Asp Arg Asn Sei- Phe Val Arg Ala Val Lys Asn Glu Ala lie Leu Arg Asn Leu Gin Ala Ala Pro Ser Arg His Pro Xie Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Val Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Arg Arg Ala Gly Gly val Leu val Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin Ser
Zle lie His His Leu Lys Arg Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Leu Glu Asn Ala Ser Gly Xie Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Xie Xie Lys Ala Gly Asp Trp Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Asn Met Ala Ser Ala Phe Gin Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu
121
Figure BRPI9610977A2_D0049
Figure BRPI9610977A2_D0050
Asn Cys Ser cis Met Tie Asp Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Vsl Ser lie Leu Met Asp Arg Ser Phe Vai Arg Ala Vai Lys Oil /ii-β* ueu .ur.o asp iueu Ala Ala Pre Ser Arg His Pro Gin Glu Phe Arg Glu Lye Leu Sir Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Gly Glu Pro Ser Gly Pro lie Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Arg Ar$ Ara Gly Giy Vai Leu Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin Gin Vai Arg Lys lie Gin Gly Leu Cys Ala Thr Tyr Lye Leu Leu Gly His Ser Leu Gly lie Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Xie Ser Pro Glu Leu Gly Pro vai Ala Asp Phe Ala Thr Tnr Guy Met Aza Pro Ala Leu Gm Phe Ala ISSQ ”0 NO:175)
Glu Xie Xie His His Leu Lye .Arg Pre Asn Asn Leu Asn. Asp Glu Asp Asn jjeu Arg ijeu pro Asn rev Suu Asn ueu. Giu Asn Aj.a Ser Gly X.i.e Gin Pro Cys Leu Pre Ser Ala Thr Xie Xie Xie Lys Ala Gly Asp Trp Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu Vai Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ser Thr Xie Asn Pro Ser Pro- Pro Pro Asn Met Ala Ser Ala Phe Gin Vai Ala Ser His Leu Gm Ser Phe Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lys Cys His Pro Glu Glu Leu Vai Leu Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Gly Leu ^eu Gin Aaa Leu Glu Gly Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp lie Trp Gin. Gin Met Glu Glu. Leu Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala
13192.Pept
Asn Cys Ser He Het Xie Asp Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp val Ser Xie Leu Met Asp Arg Ser Phe Vai Arg Ala Vai Lys Glu Ala lie Leu Arg Asn Leu Ala Ala Pro Ser Arg His Pro Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly His Pro Glu Glu Leu. Vai Leu Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Gly Cys Leu Ser Gin Leu His i^eu Leu oln Ala ueu Glu Glu
Glu Xie Xie His His Leu Lys Arg Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Asn Leu Arg Leu. Pre Asn Leu Glu Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly Xie Gin Pro Cys Leu Pre Ser Ala Thr Xie Xie Xie Lys Ala Gly Asp Trp Thr Phe Tyr Leu. Vai Thr Leu Glu Vai Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ser Asn Met Ala Tyr Lys Leu Cys Leu Gly His Ser Leu Gly Xie Pro Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Ser Gly Leu Phe Leu Thur Gin Gly Xie Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr
122
Figure BRPI9610977A2_D0051
13192. Peer
Asr. Cys Ser lie Mee Xie Asp Glu Xie Xie His His leu lys Arc Pro Pro Ala Pro leu leu Asp Pre Asa Asn Leu Asn Asp Glu Asp Vai Ser le Leu Met Asp Arg Asa Leu Arc Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe Vai Arg Ala Vai Lys Asn Leu Glu Asn Ale Ser Gly He Xlu Ala Ils Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg His Pre He He lie Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pro Ser Gly Pro Xie Ser Thr He Asn Pro Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro Asn Met Ala Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Vai Leu Leu Gly His Ser Leu Gly He Pro Crp -Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Sly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly Xie Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Vai Ala Asp Phe Ala Thr Thr He Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Alô Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly Vai Leu Vai Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Thr Pro Leu Gly pro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Gáu Gin vau. Arg Lys He Gm uty Asp Giy Ala Ala x^eu Gin Glu Lys Leu Cys Ala Thr ÍSEQ X.D NO; 177;
rtSTQfl Pj&Ty**
Asn Cys Ser He Met Xie Asp Glu Xie Xie His His Leu Lys Arg Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Vai Ser He Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe Vai Arg Ala Vai Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Glu Ala He Leu Arg Asn Leu Gin Pro cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg His Pro Xie Xie He Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Vai Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Met Ala Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Vai Ala Asp phe Ala Thr Thr He Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gm Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg- Arc Ala Giy Gly Vai Leu Vax Ara Ser Hrs Leu Gun Ser Phe Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Thr
Figure BRPI9610977A2_D0052
leu Pro Gin Ser Phe Leu LevLys
Xie Git Ή asu Gey Ara rus^eu ^yr LA^Sx lu^li Ov^ p‘X*CGlV
Leu Gly He Pro Trp Ala ProLeu
Leu Gin Lev Ara G-iy Cys LeuSer
Leu Tyr Gm Giy Leu Leu G-.r.Au®
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132
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MetAlaAsnCysSerAsT^stlleAspGluIlelleThrHisLeuLysGlnProproLeu ProLeuLeuAspPheAsnAsnLeuAsnGiyGiuAspGlnAspXleLeuMetAspAsnAsr; LeuArgArgProMnLeuGluAlaPheAsnArgAlaValLysSerleuGlnAsnAlaSer AlaXleGluSerlleLeuLysAsnLeuleuProCysLieuPrQLeuAlaThrAlaAlaPro Thr Ar gH i s Pr ο X1 eHi s X1 ely sAspG XyAspTrpAsnG 1 uPhe Ar gAr gLy sheuThr PheTyrLe'ulyEThrLeuGluAsnAlaGlnAlaGlnGlnTyrValGluGlyGlyGlyGly SarProGlyGluPrDSerGlyProXleSerThrlleAsnProSerProProSsrLysGlu SerHisLysSerProAsnMetAlaThrGlnGlyAlaMebPrQAlaPheAlaSerAÍaPhe GlnArgArgAlaGlyGlyValLeuValAlaSerHisLeuGlnSerPheLeuGluValSer TyrArgValLeuArgHisLeuAlaGlnProSerGlyGlySerGlyGlySerGlnSerPhe LeuLeuU'sSerLeuGluGlnValArgLysXleGlnGlyAspGlyAlaAlaLeuGlnGlu LysLeuOysAlaThrTyrLysLeuCizsHisProGluGluLeuVaiLeuLeuGlyHísSer LeuG ly X1 eProTrpAlaProLeuSerSer Cy sProS erGlnAlaLeuG InLeuAlaGly CysLeuSerGlnLeuHisSerGlyLeuPheLeuTyrGlnGlyLexiLeuGlnAlaLeuGlu Gly XleSer ProGl uheuGly ProThrLeuAsoThrLeuGlnLeuAspValAlaAsp^he AlaThrThrXleTrpGlnGlnMetGluGluLeuGlyMetAlaProAlaLevGlnPro •SEQ Z.0 NO: 199)
133
OM0N31113 . cap
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MecAlaAsn^sSerAsnMetlleAspGluIlelleT.hrHisL-eulysGlnProProLeu Pr o^euLeuAspPh&AsnAsnLseuAsnGlyGluAspG IxiAsp I leLeuMe PGluAsnAsn LeuArgArgProAsnl>euGluAlaPheAsnArgAlaValLysSerL.euGlrxAsnAlaSer AlalleGiuSerlleLeuLysAsuLeuLeuProCysLeuProLeuAlaThrAlaAlaPro ThrArgHrsPi l 11 elieX1 eArgAspGlyAspTrpAsnGluPheArgArgly©LeuThr PhelyrLeulysThrLeuGluAsnAlaGlr^XaGlnGlnTyrValGluGlyGlyGlyGly SerProGlyGluProSerGlyProlleSerThrlleAsnProSerPrQProSerbysGlu SerHislysSerProAsnMetAlaThrGlrJSlyAla&etProAlaPheAlaSerAlaPhe <aj.nArgArgAd.aG lyG xy V a^x^euv a lAlaSerHislieuGinE er P*iel#evG 1 uValSer Tyr ArgValLeuArgHisLeuAlaGlaProSerGiyG ly Ser GlyGlyS erG InSerPh e LeuLeulysSerLeuGluGlnValArgLyslleGlnGlyAspGlyAlaAlaleuGlnGlu Ly sLeuC ysAlaThrTyrLy sLeuCysHis ProGluG luleuValleuDeuGlvEi sS er LeuGlylleProTrpAlaProleuSerSerCysProSerGlnAlaLeuGlnLeuAlaGly CysLeuSerGlnLeuHisSerGlyLeuPheLeuTyrGlnGlyLeuLeuGlnAlaLeuGiu 01νΙ1©36ΓΡ^ο11ηΝ«η01νΡΓθΤ0τ1βυΑ3ρΤητΕΑπδ1η1«ιιΑκρ·'^1Α1ΒΑ2θΡπβ AlaThrTtir I leTrpG InGlmecG luGiuLeuGlvMetAl aPr PAlaLeuG InPr^
Í.SEÇ ID NG:2QI)
PMGN31115.pep
MetAlaAsnOysSerAsnMetlleAspGluIlelleThrHãsLeuLysGlnProProLeu
Pr oLeule'aAspPheAsnAsnLeuAenGlyGluAspGlnAspI 1 ©LeuMet AspAsnAsn LeuArgArgProAsnijeuGxuAlaPheAsnArgAlaV alLysS erleuG InAsnAlaSer AlalleGluSerlleLeuLysAsnLeuLeuPraCysLeuProLetiAlaThrAlaAlaPro ThrArgHi a Pre 11 eHisI leLysAspGlyAspTrpAsnGluPheAr q ArgLy sbeuThr PheTyrLeuLysThrLeuGluAsnAlaGlaAlaGlnGlnTyrValGluGlyGlyGlyGiy SerProGlyGluProSerGlyProlleSerTnrlleAsnProSerPrQProSerLysGlu -ϊ®* £^e~ D.-. CAsnMe walaTi*r«i,nv5.1yAxat‘íeOProA.d.aPb&AlaSerAlaPh.e
134
GlnArgArgAlaGlvGly'». „>euValAlaSerHi;»LeuGinSerPneleuGiuVaiSer TyrArqVaÍLeuArgHxsLeuAlaGlnPrcTnrProLeuGlyProÀiaS erSerLeuPre G „ nSsr Ph eieuLeuLysSerLeuG 1 uGxnV aXArgLy s X i eG xnGlyAspG ayA*®Ara yãuGlnGluLy sLeuOys Al aTnrTyr LysLeuOysHxsProG luG luLeuVa iLeule u GlvHisSerLenGlyXieProTrpAlaProLeuSerSerCysProSerGlnAlaLeuGir, XeuAI-aGlyCys LeuS erGlnLeuHi sSerG ly LeuPheLeuTyrG InG ly LeuLeuGlr. AlaLeuGiuGiy xleSerProGluLevGlyProThrLeuAspThrLeuGlhLeuAspval. Al aAspPhaAlaThrThr X1 eTrpGlnGlnMet GluGl uLeuG lyMe cAl aPr oAlaLeu GInPr0 í SEI XD NO1202:
pMDN28S2õ
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PMON28506
Al&AsnOy s Ser HeMet 11 eAspGluI lell eEi sHi sLeuLysArgProPr oAlaPro LeuLeuPiSp?roAsnAsriLeuAsnAspGluAspValserIleL>euMetAspArgAsnLeu ArgleuProAsnLeuGluâerPheValArgAlaValLysA*£nLeuGluAsnAla.S erGly X leG 1 u Al a 2 leLeuAr aAsnLeuGinPr o-Oy sLeuProSer AlaTrwAl aAl aPr o Ser ArgHxsProIleXlelleLysAlaGlyAspTrpGlnGluPheArgGluLysLeuThrPhe TyrLeuVslThrLeuGluGlnAlaGlnGluGlnGlnTyrValGluGlyGlyGlyGlyser ProG lyGluProSerGlyProI leSerThrlleAsnProSerProProSerLysGluSer HisLysserProAsnMetLeuProThrProValLeuLeuPraAlaValAspPheSerLeu GlyGluTrpLysThrGlnMePGluGluThrLysAlaGlnAsplleLeuGlyAlaValThr Le-xLeuLeuGluGlyValMePAlaAlaArgGlyGlnLeuGlyProThrCysLeuserSer LeuLeuGlyGlnLeuSerGlyGlnValArgLeuLeuLeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeu GlyThrGlnLeuProPrQGlnGlyArgThrlhrAlaHisLysAspProAsnAlallePhe Denser PheGinHisLeuLeuArgGlyLysValArgPheLeüMetLeuValGlyGlyser Thr LeuOy sval ArgGi uPheGly GlyAsnNe t Al aS er Pro A1 aPro Pr oAl aCy sAsp LeuArgvalLeuSerLysLeuLeuArgAspserfíisValLeuEisSerArgLeuSerGln oysPraGluValHisPrc (SEQ ID NO:204)
PMQN28S07
AiaAsnCysSerXleMetxxeAspGluXlelleHisHisLeuLysArgProProAlaPro
135
Argx;eu.Pr gAíb nxiSUxa xus er PheValAr gxA aVaxx^y s AsnLeuG xuAsnAx.as εγ G 2 v ~ leSiu Al aZ 1 eLeuArg AsnLauGlnPr oCysLeuProSerAlaThr AlaAl a ProGer Ar gHi s Pr oils. lie XleLysAlaG ly AspTrpG InGl u PheAr aGluLvsL euThr Pne TyrLeuV&lTnrLeuGluG InAl a GlnGluGlnG ÃnTyr VaiG luGiyG ly G ly G1 y s er ProGlyG 1 u ProSerG ly Pr oi XeSerThrXleAsnProSe r Pro ProserLysG luSer HisLysSerProAsnMetValLeuLeuProAlaValAspPheSerLeuGlyGluTmLvs Tnr GlnJía tGluGluThrLysAla G inAsp ZleLeuG iyAl aValTnrLeuLeuLeuGlu GlyVaiMepAlaA.laArgGlyGlnLeuGiyproThrCysLeuSerSerLeuLeuGiyGln LauSerGiyGlnValArgLeuLeuLeuGiyAiaLeuGlnSerLeuLeuGiyThrGlnLeu PruProGlnGiyArçThrThrAlaHisLysÀspProAsnAlalisPheLeuSerPheGln HisLeuLeuÀrgGlyLysValArgPhelíeuMetLeuValGiyGlySerThrLeuGvsVal ArgGluPheGJyGiyAsnMecAlaEerProAlaProProAiaCysAspbauArcrValLeu S erLy sLeuLauAr gAspSerHx s .ValLeuHisSerArgLeuS erG Incy s ProGlu vãl SIxsSrcLauProThrP.ro {SEÇ XL NO :2051
PMON2S508 λ saAsnC\’*sx>er*leMet.xxeAspGxuxx eXieHlsHisLeuLysAmProProAZaPm LeuLeu AspPr oAsnAsnLeuAsnAspGluAspVaiS er X1 eLsuMe ÕAsuÃrcAsnLeü ArgLeuProAsnLeuGluSarPheValArgAlaValLysAsnLeuGlxxAsnAlãserGÍv X1 eGluAlaXleLeuArgAsnLeuGlnPr oCysheu ProSar AlaThrAiaAxaProSer ArgErs Pr oX 1 e X iexiehy sAlaGlyAspTrpGinGluPheArgGl uLvsLeuThr Phè Tyr LeuValTnr LeuG luGlnAlaG IhGluG InGlnTyrValG luGiyGlyGiyG lys er ProGiyGluPinSerGlyProlleSerThrlleAsnProSerProProSerLvsGlu^ê’H x sLy s S er ProAsnMet AlaValAspPheS srLeuGly GluTrpLy sThrGlnMetG 1 u GluThr Lys AiaGlnAspIleLeuGlyAlaValThrLeuLauLeuGluG IvVa iMe cAla AlaArgGlyGir^enGlyProThrCysLeuSerSerLexiLeuGlyGlnLeuserGIyGln v ai Ar gLeuLeuLeuG ly Al aLeuGlnS er LeuLeuG 1 yThr G InLeu Pro Pr c G inG iv ArgThrThrAiaHisLysAspProAsnAlaXlePheLeuSerPheGlnHisLeuLeuArg '-’tyLysVaiArgP.ne.LeuMecLauVaiGlyGlySarThrLauOysVal.AroGluPhsGlv GlyAsnMetAiaSerProAlaProProAlaeysAspLeuArgVaiLeuSerLysLeuLeu ArgAspSerEisvalLôuHisSerAroLeuSerGlnCvsProGiuValF4 ThrProVaiLauLeuPrc (SEQ Xd”nd:206)
PMON235D?
rtia^sn^y sSer x x eMat XleAspGluX le II eHisH x sLeuLysArg ProProAl aPro íjSu.™ etLfiSpPr oAsnAsnLauAsnAspGxuAspVals er X1 eL-euMecAspAr gAsnLau AysLeuProAsnLe-iGluSerPhevalArgAlãvalLysAsnLauGluAsnAlaSarGlv XieGluA*xaXleLeuArgAsnLeuGinProCysLeuPr0SerAlaThrAlaAlaProsêr ^gHxsProXxeXleXleLysAlaGlyAspTrpGlnGiuPheArgGluLysLeuThrPhe LeuGluGlnAl aGinGiuGlnGlnTyrValGluG lyGlyG 1 vGl vSer PraGlyGluProSerGlyPrQXleSerThrlleAsnPraSerProPrcSarLvsGlusar HxsxíysSeryroAsnMet.AspPn.eSerLeuGlyGluTrpLysThrGlnMec.GluGluThr * A j. a íjí InAs p x x eL eu G xy Al a V a 1T hr L euL sul euG lu G ly V alMe t Al a A1 aAr g 2?-i-luxnijeuGiyyroTnrCysLeuSerSerLeuL>eu.GlyGlnLeuSerGlyGl.riValArg —'SuLau-LeuL· ly’ Al aL euG xnS er LeuLeuG lyTnrG InL euPr o ProG InG IvArg^hr <irAÍaHí sLy SASpProAsnAl aX 1 ePheLeuSer PheGlAHisLeuLeuArgG1 vLv^ V&xArgPneLeikMetLeuValGlyGlySerThrLauCysVaiAroGiu?heGlvG'vAs^ Mer.ÀxaSerPrc-AlaProProAla^sA.spLeuArgValLeuSerLysLeuLeíxAÍaAsp bsrxis v a. x-euRi s Ser Ar g L eu S erG x nCy s Pr oGluVa iHÍ s Pr cLeuPruThr Pr e
135
Va—,2>euDsuProAla •‘•G NO; zu / .
pMON28510
AlaAsnOy sSer OleMe tlleAspGluIlelleHi sH isLeuLysArgPraProAl &?ro DeuleuAspProAsnAsnLeuAsnAspGluAspValSer IleLeuMerAspArgAsnleu Argle'uProAsnl.-euGluSei'Prie'valíArgAlaValLysAsmÍeuG2'úA*3nAlaSerGly IleGluAlalleLeuArgAsnLeuGlnProCysLeuProSerAlaThrAlaAlaPrQSer ArgHxsPrrllellelleLysAlaGlyAspTrpGlnGluPheArgGluLyaleuThrPhe TyrLeuValTnrLeuGluGlnAlaGlnGluGlnGlnTyrValGluGlyGlyGlyGlySer ProGlyGluProSerGiyProlleSerThrllaAsnProSerProProSerLysGluSer HxsLysSerProAsnMstGlyGluTrplysThrGlnMetGluGluThrLysAlaGlnAsp ^le^euGzyAlaValTnrDeul&uLeuGAuGzyVaXMePAlaAlaArgGlyGlnlfeuGly ProThrC-ysLeuSerSerLeuLeuGlyGlnDeuSerGlyGlnValArgLeuLeuLeuGly AlaLeuGlnSerLeuLeuGxyThrGlnl^uProPrDGlnGlyArgThrThrAlaHxslys ..M£pProAsnAxallePneLeuSerPheGlnHlslsuDeuArgGlyLy:svalA.rqPnaL>ei: M£cLeuValGlyGlySerThu7LeuCy5ValArgGluPheGiyG.iyAsnMepAlaSerPro Al aPr oPr oAlaCysAspLeuArgVa iDeuS erLy sLeuLeuAr gAspS erHi sValLau HzsSerArgLeuSerGlnCysProGluValHisProLeuProThrProValLeuLeupro AlaValAspPheSerLeu (SEC XD NO:208)
PMON2Ê511
Al aAsnCy sS aril eMe til eAspG 1 ul 1 el 1 eHl s Hl sl> euLys Ar g Pro ProAlaPra 1 euL euA spPr a AsriAsnL euAsnAspGluAspValS er 11 eLeuMe tAspAr gAsiiêu ArglsuProAsrOueuGluSerPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAl aSerGly lleGluAlslleLeuArgAsnLeuGlnProCysLeuProSerAlaThrA^laAlaProSer ArgHisPrcIlelleileLysAlaGlyAspTrpGlnGluPheArgGlxiLysLeuThrphe TyrLeuValThrLeuGluGlnAlaGlnGluGlnGlnTyrValGluGlyGlvGlvGlvSer ProGly G luPrcSerGlyProl leSerThr IleAsnProSerProProSerLy sG luSer HislysSerProAsuMetGlyProThrCysbeuSerSerLeuLeuGlyGlnLeuSerGlv GloValZ^gLeuLeuLeuGlyAlaLeuGlrxSerOeuLeiiGlyThrGlriLeuProPx-OGlr G lyAr gThrlhr AlaHi sLysAspProAsnAlal 1 ePhaLeus er PheGlnHi sbeuheu Ar gG ly Ly sVa lArgPheDeuMet beuVal GlyGlyS erThrheuCy sValArgG luPhe G4yGlyA£nNecAlaSerPreA*laPraPrcAJ.aCysAspLeuArgValLeuSerLysLeu LeuArgAspSerHisValLeuHisSerArgLeuSerGlnCysProGluValHisProbeu ProThr Pr oValleuLeu PrcAlaValAspPheSerLeuG lyG luTrpLy sThrGlnMe t w á uGiul nr ly sAlaGlnAspIleleuGly AlaValThrLeuLe'uLeuG luGlvValMe t AxaAiaArgGlyGlnLeu ÍSEQ ID NO :209)
PMON28512
Al aAsnCy s S er 11 eMe t II eAspG lul 1 el leHi sH IsLeuLy sArgPr oPr a A1 aPr o Áj s uL e u^spPr o asâias nLe «AsnAspG xuAst?V a 1 Ser 21 el sum e t Asr> & r g a stiL eu ArgLeuPr oAsnLeuGluSer PheValArgAlaValLy s AsnLeuG luAsnAlas erGly X^GlüAlalleDeuArgAsnbeuGlnProCysLeuProSerAlaThrAlaAlaProSer ArgHisPr ollelxelleLy sAlaGlyAsplrpG InGluPheArgGlulysLeuTtxrPhe Tyu ueuVal * hz^weuGxuGlnAlaGznGluGAnGlnlyrValGluGlvGlvGlvGlv^e'** ProGIyGluProSerGlyProIleSerThrlleAanPreSerProProSerLysGluSer íiis^y s SerProAssMet Glyi nr G InLeuProFroGlnGlyArgThrThrAl a.Hi sLvs AspPrGAsnAlallePheDeuSerPheGlxiHisLeuDeuArgGlyLvsValArgPheljêu Me tLeuValG ly GlyS erThrLeuCy sValArgGluPheG lyG lyÁsnMe t Al a.Ser Pro
AlaProProAlaCysAspLeuArgValLeuSerLysLeuLeoArgAspSerHisValLeu HisSerArgLeuSerGlnCys ProGluval Hi s ProLeuProThrPr oVa LleuLeuPr o Al aVa 1 AspPheSexLeuGly GluTrpLy sThr GlnMetG LuG 1 uThr Gy s AL aG InAsp X1 eLeuGlyAl aVa IThrLeuLeuLeuGluGly V alMeuAlaAlaArgGlyGlnLeuGly ProTnrGysLeuSerSerLeuLeuGlyG IhLeuS er G ly G LnV al Ar gL euLeuL euG 3 y .AiaLeuG x nGer^»ieuuSu (ώ>χ>Ό ΚνίιώχΟ $ dHDNG8513
Al aAsnCy sSer 1 leMeh 11 eAspG 1ul1e11 eHi sHisLeuLysArgProProA™ aPra LsuLeu..AspProAsn>AsnLeuAsnAspGluP»spVal S er 11 eLeuMet. AspAr g AshLeu ArgLeuProAsnLeuGiuSerPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAiaSerGiy 12. eG 1 uA^alleLeuArgAsnLeuG InProCysLeuProS er AlaThr AlaAl aPr oS er Ar gHr s Pro He XlelieLysAl aGly AspTrpGlnGluPheArgGluLy sLeuThr Phe Tyr ueuV a rThmeuGluG InAlaG inG InG jliíTv rVaiG luGiyGryG j.yG i vSer ProGlyGluProSerGlyProIleSerThrlleAsnProSerProProSerLysGluSer Hi s Ly s S er Pr oAsnMe t G1 yArgThrThrAl aH.i sLy s AspPr o AsnAl all® PheL eu S er PheG InHxsLeuLeuArgG lyLysValArgPheLeuMe tLeuValG lyG lySerThr LeuCysValArgGluPheGlyGlyAsnMetAlaSerProAlaProProAlaCysAspLeu ArgValLeuSerLysLeuLeuArgAspSerHisValLeuHisSerArgLeuSerGlncys Pr oG Lu v alHi s Pr oLeuPr uThr Prova LLeuLeuPr oAl a v al AspPheS erLeuGiy G luTrpLy sThr GlnMe tGluG luThrLy s AlaG InAspIleLeuG ly Al aval Thr Leu LeuLeuGluG lyvalMe oAl aAlaArgG lyG InLeuG ly ProThrCy sLeuS er S erLeu LeuGlvGlnLeuSerGlyGlnvalArqLeuLeuLeuGlvAlaLeuGlnSerLeuLeuGlv ThrGlnLeuProProGln (5EQ ID NO :211)
PMON28514
Al&AsnCysSerXieMetlleAspGluTlelleHisHisLeuLysArgProProAlaPro LeuLeuAspProAsnAsnLeuAsnAspGluAspValSerTleLeuMetAspArgAsnLeu ArgLeuProAsnLeuGluSerPheVaÍArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAlaSerGly 1 leGluAl aXleLeuArgAsnLeuGlnPr oCysLeu Pr eS er AlaThrAl aAlaProS er Ar gHis Pro X1 e 11 e X leLy sAlaGlyAspTrpGlnG luPheArgGluLy sLeuThr Phe Tyr L eu V alThr LeuG 1 uG InAl aG InG luG InG InTyrVa 1G iuG ly G ly G1 y G lyS e r ProGlyGluProSerGlyProXleSerThrlle.AsnProSerProProSerLysGluSer HisLysSerProAsnMePAlaHisLysAspProAsnAlaXlePheLeuSerPheGlnHis LeuLeuArgGlyLysValArgPheLeuMeuLeuValGlyGlySerThrLeuCysValArg GluPheGlyGlyAsnMetAlaserProAlaProProAlaCysAspLeuArgvllLeuSer LysLeuLeuArgAspSerHisvalLeuHisSerArgLeuSerGlnCysProGluValHis ProLeuPrcThrProValLeuLeuProAlaValAspPheSerLeuGlyGluTrpLysThr G IhHetGluG luThr Lys AlaG InAspIl eLeuGlyAlaValThrLeuLeuLeuG luGly ValMecAlaAlaArgGlyGlxiLeuGlyProThrCysLeuSerSerLeuLeuGlyGlnLeu SerGlyGlnvalArgLeuLeuLeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeuGlyThrGlnLeuPro ProGlnGlyArgThrT.hr (SEQ ID NO :212:PMON28515
AlaAsnCysSerneMet *leAspGlu±ielj.eHisHosLeuLy shr gProProAlaPro LeuLeuAspProAsnAsnLeuAsnAspGluAspValSerlleLeuMehAspArgAsnLeu Ax'gLeuProAsnLeuGluSerPhaValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAlaSerGly HeGluAlaTLeDeuArgAsnLeuGlnProChfsLeuProSerAlaThrAlaA.laProSer ArgHnsyroIiellelleLysAlaGlyAspTrpGlnGluPheArgGluLysLeuThrPhe
138
Tv’rLeuValThr LeuGluGlnAl a GlnGzuG InG InTyrV alG zuGlyG lyGiyGzyS e r ?r qG 1 vG 1 u?r oSerGly PrcXl e SerThrXzeAsnProSerProProS erLysGluS a r HisLvs SerProAsxiMet.AspProAsrjÀxaX» aPneLeuSer PheGxnHxsLeuueuArg Gly Lv s v a 1 Ar g Ph ep euMe nLeu V a 1G ly G ly S erThrLeuCy s V a 1 Ar g G1 u Ph e G; x G IvAsnMenAlaSar proAxaProProAzaCy sAsp^euArgv alLeti^erLy sra etiuen Ar crAsrS er Hi5· Va- LeuH z a S er Ar gLeuSer GznCy s ProG mVsxr.- s Pr ozeiiPr t Thr ProV&lLeuLeuProAzaValAspPheSerLeuGlyGluTrpLysThrG Inner Glu G1 uTnr Ly s A1 a G1 nA s ρ X1 sL eu G zy Az a V a 1Thr L e uL e uL suG z uGiy V a zn e a A« a AlaArgGzvGlnLeuGlyPrnTnrCy sLeuSerSerLeuLeuG lyGxnL euSer GzyGzr. yalArgLeuLeuLeuGlyAzaLeuGlnSerLeuLeuGlyThrGlnLeuPrQProGlnGly ArcTnrThrAla.HisLvs (SEC IL NO:2:13:
pM0N28 5 z 6
AzaAsnOysSerlleMetXleAspGluIlelzeHisHisLeuLysArgProProAlaPro LeuLeuAspProAsnAsnDeuAsnAspGluAspValSerlleLeuMetAspArgAsnLeu Ar gL eu Pr o As ra e u G z «. S e r Ph a v a z Ar g Az a Va x Ly a AsnL e u.G z uA a nA z a S er G z y XleGluAlaXleLeuArgAsnLeuGlnProCysLeu ProSer AlaThrAl aAxaProSer Ar g Hi. s Pr oX z a X1 ex 1 eLysAz a G ly AspTrpG InG lu PheAr gG 1 uLy sLeuThr Phe tyrLeuValThxLeuGluGlnAlaGznGluGznGznXyrValGluGlyGlyGlyGlySer ProGzyGzuPrcSerGIyProXieSerThrXleAsnProSerProProSerLysGluSer HisLysSerPruAsnMetAl&XzePheLeuSerPheGznHisLeuLeuArgGzyLysvai Ar gPheLeuMe tLeuV alGlyGly serThr LeuCysV alAr gG luPheG ly GzyAsnMe t ZLaSerPmAlaProProAlaCysAspLeuArgValLeuSerLYsLeuLeuArgAspPez HisVelLeuHisSerArgLeuSerGlnCysProGluValHisProLeuProThrProval LeuLeu ProAl aV alAspPheSerLeuGlyGluTrpLy sThrGznHetG XuGluThrLy s Al aGlnAspX laLeuGly AlaValThrLeuLeuLeuG luG lyValMet Al aAlaArgGly G InLeuG ly P_ oThrCysLeuSer S erLeubeuGlyGlnLeuSerGlyG znVal ArgLeu LeuLeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeuGlyThrGlriLeuProProGlnGiyAraThrThr AlaHisLysAspProAsn (SEQ XD NO:214;
PMON28519
ÀlaAsnCysSerXleMetXleAspGluãzezleHisHisLeuLysArgPrc-ProAlaPro LeuLeuAspPr o AsnAsnLeuAsnAspG luAspval S er XzeLeuMatAspAr gAsnLeu ArgLeuProAsnLeuGluSerPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAzaSerGly IleGluAlaXleLeuArgAsnLeuGlnProCysLeuProSerAlaThrAlaAlaProSer ArgExsProXlezleXleLysAlaGlyAspTrpGlnGlnPheArgGluLysLeuThrPhe TyrLeuVelThr LeuGl uG InAlaGlnGlu GlnGlnTyrValG zuGiyGlyGly G lySer ProGlyGluProSerGlyProXleSerThrXleAsnProSerProFroSerLysGiuSer HisLysSerProAsnMetGluValHisProLeuProThrProValLeuLeuPrcAlaVax AspPheSerLeuGlyGluTrpLysThrGlnMetGluGluThrLysAlaGlnAspXleLeu Gly Al av alThr LeuLeuLeuG luGlyValMe t Al aAl aAr gG lyG InL euG ly Pr oThr GysLeuSerSerLeuLeuGlyGlnLeuSerGlyGlnvalArgLeuLeuLeuGlyAlaLeu G1 ns er LeuLeuG lyThr G InLeuPr oPr oG InG ly ArgThr Thr Al aHi sLy sAspPr o AsnAl a x 1 ePheLeuSer PheGlnHisLeuLeuArgGlyLy sValArgPheLeuMe tLeu ValGzyGlySerThxLeuCysValArgGluPheGlyAsnMetAzaSerProAlaProPro AzaCysAspLeuArgvalLeuSerLysLeuLeuArgAspSerHxsValLeuHisSerAra LeuSerGlnCysPro ÍSEQ ID NO:215) nM0N2 8 S 2 0
139
ÀlaAsnXysSerTl oMer r - =A£pG luX le~ 1 eHxsHisLeuLysArg PreProAlaPrc LeuL6uAspProAsnA.snLeuAsnAspGluAspValSer XleLeuMe tAsnArgAsnLeu ArgLeuProAsnLeuGluSerPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAlaSerG-r' XleGluAAaXleLeuArgAsnLeuGlnProCysLeuPrcSerAlaThrAlaAlaPruSer ArgHisPr c· 11 all ε XleLy s AlaGlyAspTrpG InGluPheArgGl uLy sLeuThr Pne Tyr Leu Val ThrleuGluG InAlaGl nGluGlnGlr.TyrValG luGl yGlyG lyG lySer ProGlyG lu Pr cSerG ly ?r olleSerThr X1 eAsnPrcS erProPraS erLysGluSer HrsLysSerPrc-AsnMet LeuProTUr ProV alLeuLeuProAl aValAspPheSerLeu GlyG luTrpLysTnrG InMe tGluGluThr Ly sAlaGlnAspIl eleuG ly Al aVa iThr LeuLeuLeuG luGlyvalM.ee Al aAlaArgG lyGlnleuGlyProThrCy sLeuS er Ser LeuLeu G ly GlnLeuSer Gly G InVa lArgLeuLeuLeuGlyAl aLsuG InSexL euLeu G lyThr GlnLeuPr oProGlnG ly Ar gThrThr AlaHi sLy sAspProAsnAlal 1 ePhe L euS er PheG InHx sLeuLeuArg G lyLy s V a 1 ArgPh eLeuMe t Leu v a 1G ly G lv Ser ThrLeuCysValArgGluPheGlyAsnMetAlaSerProAlaProProAlaCysAsuLeu ArgValLeuSerLysLeuLeuArgAspSerHxsValLeuHisSerAraLeuSerG' ü;”V^ ProGluValHisPro (SEO XD NCÜ216) ~ —-cPMON2SS21
AlaAsnCysSerXleMetxleAspGluXlaXleHlsEisLeuLysArgPraProAlaPrG LeuLeuAspProAs.nAsnLeuA.mAspGlu.AspValSerXlaLeuMet.A.spxAro'AsnLau ArgLeuProAsnLeuGluSerPheValArgA.laValLysAsnLeuGluAsnAlas'erGlv Xx &G1 uAl aXleLeu.ArgAsnLeuGlriPro!XysLeuProSerAlaThrAlaAlaPraSc>r ArgHisPraXleX±eXi.eLysAlaGlyAspTrpGlnGluPheArgGluLysLeuThrPhe TyrLeuValThrLeuGluGlnAlaGlnGluGlnGlnTyrvalGluGlyGlyGlyGlvSer ProG ly G1 uProSerGly Pr o TleSerT.hr X1 eAsnProSerProPr OS erLy sGlu S er HisLy s S er Pr o AsnMet ValLeuLeuPr o Ala ValAsuPheS erLeuG 1 vG Iut^cLvs TnrGlnMer GluGl uThr LysAlaGlnAspI leLeuG lyAl avalThrLeuLeuLeuGlu slyVaaMetAxaAlaArgGxyGlnLeuGlyPrnThrCysLeuSerSerLeuLeuGlyGlr· LeuSerGlyGlnValArgLeuLeuLeuGlyAlaLeuGinSerLeuEeuGlyThrGlnLeu Pr PProGlnGlyArgThr Thr AlaHisLy sAspPr oAsnAl aX 1 ePheLeuSer PheGln d-is^euueuArg^iyLysVaaArgPheLeuMetLeuValG.iyGiySerThrLeuCViSVa.l ArgGluPheGlyAstMetAlaSerPraA.laProProAlaCysAspLeuArgValLeuSer LysLeuueuArgAspSerHisValLeuHisSerArqLeuSerGlnCvsProGluValH' s ProLeuPrcThrPro (SEQ Tp nQ:217)
PMON28522
AxaAsnOysSexXleMetlleAspGluIleXieHisHisLeuLysArgProProAlaPro LeubeuAspPr oAsnAsnLeuAsnAspGluAspVal Ser X1 eLeuMet AspArgksnLeu Ax-gaeuProAsnLeuGluSerPhevalArgAlaValLysA.snLeuGluAsnAlaGerGlv X leGluAlaX 1 eteuAr gAsnLeuGlnPr oCysLeuPrcSer AlaThrAlaAlaProS er ArgtixsPr Oc.c,eX xeXceLysAlaGlyAspTrpGlnG luPheAruGluLysLeuThrPhe Ty-^uValThrLeuGluGlnAlaGlnGluGlnGlriTyrValGluGlyGlyGlyGlySer Pr og ay GiuPr os er G ly Pr ο X1 a S er Thr X leAsnProS er Pr oPr aS er Lys G lu Ser HxsLysSerPruAsnM.euAlaValAspPheSerLeuGlyGluTrpLysThrGlnMetGlu xuThr Ly s ^1 aG InAs pXleLauG ly Al a Va iThr Leu I., py},. eu G luG 1 yV ρ ’μ®/« AlaAr gG ly GlnLeuGlypr oThrCysLeuS erSerLeuLeuGlyG InLeuS erG~lyG In VacArgLeuLeuLeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeuGlyThrGlnLeuProProGlnGlv Ar gTnrTnrAl aHa sLy s AspPr a AsnAl a X1 e PheL euSer PheG InHi sLeuL euAru CcyLysValArgPheLeuMehLeuValGlyGlySerThrLeuCysValArgGluPheGlv AsnMetAl a s er ProAlaPr upro AlaCysAspLeuAr gValLeuSerL’/sLeuLeuArΰ
140
AspSer Η1 s va XLeuEi sS er Ar gLeuS er GlnCys ProGluValHigpr c LeuPr proV&XLeuLeuPre iSEQ ID ND:218;
AlaAsnly sSer I leMe t IleAspGluIl e I leHi sHisLeuLysArgPr oPrcAlaPr c LeuLeuAspPr 0A£nAsnLeuAsr*AspGlu AspVaiS er Xi eLeuMetAspAr g AsnLeu ArgLeu Pr oAsnLeuG lu SerPheValArgAl aValby sAsnLeuG luAsrAlaS erG iy 11 eGiuAI al 1 eLeuAr g AsnLeuG InProCy sLeuPrcS er Al aThr AlaAlaProSer Ar gHi e Pro!leilei 1 sLy sAlaGly AspTrpGlnG luPheArgG luLy sLeuThr Phe Tyr Leu v arTurLeuG luGmAx aGlnGzu GlnG InTyrV a 1G luGzyG iy g zy G zy Ser PruGlyGluPruSerGlyPreXleSerThr XleAsnProSerProProSerLysGluSer Hi sLys S er Pr c· AsnMe t AspPheS erLeuGlyG1 uTrpLy sThr G InM et G1 uG 1 uTr.r LysAlaGXnAspXleLeuGlyAiaValThrLeuLeuLeuGluGlyValMecAlaAlaArg G1 y G1 nL euG ly Pr oThr cy sLeuS er S er LeuLeuG lyG 1 nLeuSe rG lyG XnV a 1 Ar g LeuLeuLeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeuGlyThrGlhLeuProProGlnGlyArgTnr GhrAlaHisLysAspPruAsnAlaHePheLeuSerPheGlnHisLeuLeuArgGlyLys ValArgPheLeuMetLeuValGlyGlySerThrLeuCysValArgGlu.PheGlyAsnMet AlaSer ProAlaProProAlaCysAspLeuArgValLeuSerLysLeuLeuArgAspSer HisValLeuHisserArgLeuSerGlnCi^ProGluValHiePrcLeuProThrProVal LéULeuPróAlaVaX f SSQ ID ND ϊ 219 ) pMON2 8524
AlaAsnCysSerXleMetXleAspGluXlelleHisHisLeuLysArgProProAlaPro LeuLeuAspProAsrAsnLeuAsnAspGluAspValSerlleLeuMetAspArgAsnLeu ArgLeu Pr oAsnLeuGluSer PheValArg AlaValhy sAsnLeuGluAsnAl aSerGly 21 eGluAlall aLeuArg AsnLeuG InPr oey sLeuProSer AiaThrAlaAlaProS er ArgHisPrpXielleXleLysAlaGiyAspTrpGlnGluPheArgGluLysLeuThrPhe TyrLeuValThrLeuGluGlnAlaGlnGluGInGlxiTyrValGluGlyGlyGlyGlySer ProGlyGluProserGlyProlleSerThrXleAsnPrcSerProProSerLysGluSer HxsLysSerPrGAanMetGlyGluTrpLysThrGlnMetGluGluThrLysAiaGlnASip HeLeuGlyAlaValThrLeuLeuLeuGluGlyvalMeuAlaAlaArgGlyGlnLeuGly Pr cThr Cy sL eu S er S er LeuL eu G lyG InLeuSer G lyG 1 nVa 1 Ar gLeuLeuLeuG iy AlaLeuGlnSerLeuLeuG15zThrGinLeu.PraProGinGlyArgThrThrAlaHxsLy£ AspProAsnAlallePheLeuSerPheGlnHisLeuLeuArgGlyLysValArgPheLeu Me tLeuVaXGlyGlySerThrLeuCysValArgGluPheGlyAsnMetAlaSer ProAla ProPrcAlaCysAspLeuArgValLeuSerLysLeuLeuArgAspSerHisValLeuHis S er Ar gL euS er G InCy s Pr oG 1 υ Vai Hi s Pr aLeuPr cThr Pr oVa ILeuLeu Pro Al a ValAspPheSerLeu (SEQ ID NO:220;
PMON28525
AlaAsnCysSer XleMetXleAspGlullelleHisHisLeuLysArgProProAlaPro xjeuLeuAspyr oAsnAstiZfeuAsnAspGiuAspvalS er HeLsuMetAspArgAsixLeu ArgLeuProAsnLeuGluSerPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAlaserGlv zleGIuAlalieLeuArgAsnLeuGlnProCysLeuProSerAlaThrAlaAlaProSer ArgHisProIlelleXleLysAlaGlyAspTrpGlnGluPheArgGluLysLeuThrPhe Xi^rLeuValThrLeuGluGlnAlaGlnGluGlnGlnTyrValGluGlyGlyGlyGlySer ProGlyGiuProSerGlyProXleSerThrXleAsnProSerProProSerLvsGluSer Hz sLys SerProAsnMetGly Pr cThr CysLeuSer SerLeuLeuQlyG InLeuSerG ly ArgueuneuLeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeuGlyTrirGlnLeuPraProGlr;
141
GlyArgThrTxnr-Ala«i£LyeAspProA.snAlaIlePheDeu.SerPheGl:h-:isLeuDeu ArgGlybysVaiP.rgPheLeuMeobeuValGiyGlySerThrbeuCysValArgGluPhe G lyAsnMe t A-a S er Pr o AlaPr a Pr oAl a Cy s AspL euAr g V alb euS £ r by s I eubeu Arg ASpS £ r - i sValbeuHr s S ar Ar gbe u S erG InCysProGluValH 1 s Pr ob ®u Pr:
Figure BRPI9610977A2_D0070
AlaAsnCy sSer 11 eMet I1 eAspGluIleXleHisH xsLeuLysAr g PraProAlaPr c LauLeuAspPro AsnAsnbeuAsnAspG 1 u AspVal Ser XlebeuMeoAspAr g Asnbeu Ar gLeuPr oAsnbeuGluSer PheValAr g AlaValby a AsnbeuG luAsnAl aSerGly IieGluAlaIleLeuAjrgAsnLeuGlnProCysLeuProSerA.laThrAlaA.laProSer AxgHo s Pro Hell elleby sA-laG lyAspTrpGlnG luPhe ArgG luby sbeuThr Phe lyrbeuValThrbeuGluGlnAlaGlnGluGlnGlnTyrValGluGlyGlyGlyGlySer ProGlyGluPrcSerGlyProIieSerThrlleAsnProSerProProSerbysGluSer HxsbysSer ProAsnMet GlyThr GlhbeuPr oProGlnGiy ArgThrThr Ala?: i sLy s AspPr oAsnAla 11 aPheLeuSer PheGlnHisbeuLeuArgGlyLysValAroPneLeu MehLeuVaiGlyGlyserThrLeuCysvalArgGluPheGlyAsnMeoAlaSerPraAla Pro Pr oAl aCy s AspbeuAr g v a IbeuS er by sbeub euAr g Asps er Hi sValbeuHi s serArgbeuSerGlnCysProGluValHisPrQLeuProThrProValLeuLeuProAl® ValAspPheSerbeuGlyGluTrpLysThrGlnMerGluGluThrLysAlaGlnAspXle L eu G ly Al a v a 1T nr L s uL euL e uG r u G uy V a oM a p. A ύ a Al aAr g G ly G mb eu G ly Pr o ThrCysLeuSerSerLeuLeuGlyGlhLeuserGlyGlnValArgLeuLeuLsuGlyAia beuGlnSerbauLeu (SEQ ID £0:222) pMON2S520
AlaAsnCysSerlleMetXleAspGluXleXleHisHisLeuLysArgProProAlaPro beubeuAspProAsnAsnbeuAsnAspGluAspValS er X1 eb euMer AspArgAsnbeu ArgLeuProAsr&euGluSerPheValArgAlaValbysAsnbeuGluAsnAlaSerGly XleGluAiaXleLeuArgAsriLeuGlnProCysbeuProSerAlaThrAlaAlaProSer Ar gHi s Pro 11 a X1 ell eby pAlaG lyAspTrpGinG luPheAr gGluLy sbeuThr Phe TyrbeuvalThrbeuGluGlnAlaGlnGluGlnGljriTyrValGluGlyGlyGlyGlySer Pr oGlyGiuPro S erGly Pr oil eSerThr 11 eAsnProSerPr oProSerLysGluSer Hr sby s S er ProAsnMe t G lyArgThrThr AlaHi sLys AspPr oAsnAlax 1 ePhebeu SerPheGlnHisLeuLeuArgGlyL-ysvalArgPhebeuMeoLeuValGlyGlySerThr LeuCysValArgGluPheGlyAsmetAlaSerProAlaProProAlaCy&AspLeuArg ValbeuSerLysbeuLeuArgAspSerHisValLeuHisserArgLeuSerGlnCvsPro GluValHisProbeuPraThrProValbeubeuProAlaValAspPheSerLeuGlyGlo TrpLysThrGlnMetGluGluThrLysAlaGlnAspXleLeuGlyAlaValThrLeubeu LeuGluGlyValMetAlaAlaArgGlyGlribeuGlyPraThrGysLeuSerSerLeuLeu G lyGlrxLeuSer GlyGlnValArgbeubeubeuGlyA 1 aLeuGlnSerLeuLeuG IvThr GlnbeuProProGir. íseq id NO:223;
PMOK2852S
AuaAsnCysSerXleMet. XbeAspGluXlelleHisHisLeuLysArgproProAlaPro LeubeuAspPro AsnAsnbeuAsnAspGluAspVal S er 11 ebeuMe t AspArgAsnbeu ArgbeuProAsnLeuGluSerPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAlaSerGlv 11 eG 1 uAl all e LeuAr gAsnbeuG InPr oCys beuPr oSer AlaThrA1 a Al aPr o S er
142
ArgHxsProI 1 eõ 1 ell eLys Al aGlyAspTrpGlnG luPheArgGluLy sLeuThr Phe ^rLeuValThrLeuGluGinAlaGlnGluGlnGlr.TyOValG XuG lyG lyGlyG lySer PraGlyGluProSerG ly Pro 11 eS erThr XleAsnProS er Pr OPr oSer Ly aGluS e r
Figure BRPI9610977A2_D0071
GluPneG lyAsnMe t-AiaS sr Pr o AiaProProAiaCy s AspLéuAr gV al^euS erLy s LeuLeuArgAspSerHtsValLeuHxsSerArgLeuEerGinCysProGmV&lHmPrc LeuPr c-Thr ProvalLeuLeuProAlaValAspPhaSerLeuG lyG luTrpLy sTnr G In MetGluGluTnrLysAlaGlnAspXIeLeuGlyAlaValThrLeuLeuLeuGluGlyVal MetAlaAiaPjrgGlyGlnLeuGiyProThrCysLeuSerSerLeuLeuGiyGinLeuSer G.1 vG In V alArgLeuLeuLeuGlvAlaLeuG InSerLeuLeuGiy Thr GlnL eu ProPrc GlnGlyArgThrThr ÍSEQ ID NC:224)
PMGN28529
Al aAsnCysSer x 1 «Met 11 eAspGlullel leEisHisLeuLy sAr gProPraAlaPr c LeuLeuAepProAshAsnLeuAsnAspGluAgpValserlleLeuMenAspArgAshLeu ArgLeuProAsnLeuGiuSerPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAiaS erGly XleGluAlaXleLeuArgAsnLeuGlnProCysLeuProSerAlaThrAlaAlaProSer ArgHis Pr oils I lei leLy sAlaGlyAspTrpGlnG luPheArgGluLysDeuThr Phe TyrLeuVaiThrLeuGluGlnAlaGlnGluGlnGlnTyrValGltiGlyGlyGIyGlySer ProGlyGluProSerGlyProXleSerThrXleAsnProSerProPrQSerLysGluSsr HisLysSerPrnAsnMstAspProAsnAlallePheLeuSerPheGlnHisLeuLeuArg GiyLysValArgPhebeuMetLeuValGlyGlySerThrLeuCysValArgGluPheGly AsnMetAlaSerProAlaPraProAlaCysAspLeuArgValLeuSerLysIieuLeuArg AspSeiv-XsvalLauHlsSerArgLeuSerGXrmysProGluvalHisPrcLeuProThr ProValLeuLeuProAlaValAspPheSerLeuGlyGluTrpXjysThrGlnMetGluGlu ThrLysAlaGlnAspIleLeuGIyAlaValThrLeuLeuLeuGluGlyValMet;A.laAla ArgQlyGlnLeuGlyPrcTnrDo^sLeuSerSerLeuLeuGlyGlnLnuSerGlyGlnVal ArgLeuLeuLeuGlyAlaLeuG InS erleuleuGlyThrG InLeuProProG InGlvArg ThrThrAlaFasLys (SEQ ID NO:225}
PMGN28530
AiaAsnCysSerXleMetXleAspGluXleXleHisHisLeuLysArgProProAlaPro 1 suLeuAspProAsnAsnLeuAsnAspGluAspVals er 11 eLeuMet AspArgAsnLeu ArgLeuProAenlieuGIuSerPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAlaSerGly x leGluAlal leLeuArgAsnLeuGlnPr oOy sLeuProS er Al aThrAl aAlaProser Ar gHxs Pre I Is 11 el. leLy s AlaGlyAspTrpGlnG luPheAr gGluLysLeuThr Phe TomLeuValThrLeuGluGlnAlaGlnGluGlriGlnTyrValGluGlyGlyGlyGlySer ProGlyGluProSerGlyprolleSerThrlleAsnProSerProProSerLvsGluSer HisLy ss er ProAshMetAlal 1 ePheLeuSerPheGlnHisLeuLeuArgGlvLvsVal ArgPheLeuMeoLeuValGlyGlySerThrLeuCysvalArgGluPheGlyAsnMepAla SerProAlaProProAiaCysAspLeuArgValLeuSerLveLetiLeuArgAsnS^rr > a yalLetHiisserArgLeuSerGlnOysPrÕGluValHisProLeuProThrProvãlLeu LeuPr o Al aV alAspPheSerLeuG ly GluTrpLy sThrGlnMet G luG luThrly sAla k? xX*Asp v~ x eLeuu xy/ixa v axThrLeuLeuLeuG luG IvV alMe t AiaAlaArgGly Glr psuGlyPrpThrCysLeuSerSerLeuLeuGlyGlnLeuSerGlyGlnValArgLeuLeu LeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeuGlvThrGlnLeuProPra'GlnGlvArcThr^hrA ’> a HisLysAspProAsn (SEQ ID NO:225) ~
PMON28533
AxaAsn ly s S er Xzeiieo — 1 eAspGlu^. 1 e ~ x e.Ha. sH u sxieixLy sAr cs proProAx aPr c LeuLeuAspProAsnAsnLeuA£nAspGluA£pValSerXleLeuMeo.AspArgAsriIi£uArgbeuProAsnLeuGluSerPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAlaSerGly XleGluAlaZleLeuArgAsnLeuGinProCysLeuProSerAiaThrAlaAlaProSer ArgHis Pr oZx e Σ1 e X leLy s AlaG ly AspTrpGlnG 1 u PheAr gG luLy sLeuThr Phe TyrLeu v a IThrLeuGluGlnAlaGlnGl uGlnGxnZyrValG luG lyG lyGlyG ly Ser Pr oG ly G1 uPr oSe r G ly Pre lie S erThr XleAsnProSerProProS er ly sGluSer HisLysSerProAsnMetGluValHisProLeuProThrProValLeuLeuProAlaVax AspPheSerLeuGlyGluTrpLysThrGlnMetGluGluThrLysAiaGlnAEplleLeu G lyAla Va IThrLeuLeuLeuG luGly Va IMetAlaAlaAr gGlyG 1 nLeuG ly Pr oTnr CysLeuSerSsrLeuLeuGlyGlrJjeuSerGxyGlnValArgLeuLeuLeuGxyAlaleu GlnSerLeuLeuGlyThrGlnLeuProProGxnGlyArgThrThrAlaHisLysAspPrc AsnAlaXxePheLeuSerPheGlnHisLeuLeuArgGxyLygvalArgPhsLeuMetLeu VaxGlyGlySerThrLeucysvaxAjrgGluPheGxyGlyAsnGlyGlyAsnMetAlaSer ?rGAlaProPruAlaCysAspLexArgValLeuSerLy£LeuLeuArgAspGerH.xsVal ^euHxsSerArgxieuSerGxnCysPr© (SEQ XL NO:32?j
PHON28Õ34
Al aAsnCy s S er XIeMet X1 eAspG lull a 11 eH..rsHi sLeuLysArg Pro Pro Al a Pro Le^euÀSpProAsnAsnLeuAsnAspGluAspValSerZleLeuMeÕAspArgAsnleu ArgLeuProAsnLeuGluSerPheValArgAlaValLysAsnLeuGxwAsnAlaSexGlv XleGluAlaZlaLeuArgAsnLeuGlnProCysLeuProSerAlaThrAlaAiaProSer ArgHisProZlelleXleLysAlaGlyAspTrpGlnGluPheArgGluLysLeuThrPhe MyrLeuValThrLeuGluGlnAlaGlnGluGlnGlnTyrValGluGlyGlyGxyGlySer ProGlyGIuProSerGxyProileSerThrXleAsnProSerProProSerlysGluSer HislysSerProAsnMetLeuProThrProValLeuLeuProAlaValAspPheSerLeu G lyGluTrpLy sTlirGlnMecG luG xuThrLysAiaGlnAspl leLeuG lyAl aValThr I a eul euG j u G ly V a Hie o Al a Al aAr gG 1 y G1 η! euG ly Pr oThr Oy s Leu s er S e r LeuLeuGlyGlrALeuSerGlyGlnValArgLeuLeuLeuGlyAlaLeuGlnSerLsuLeu G iyThr Glnleu ProProGlnG lyArgThrThr AlaHi sLy sAspPr oAsnAlal lePhe L-euS er PheG InHisLeuLeuArgGiy LysVa lAr gPheLeuMe t LeuVal G ly Glv s er ThrueuCysVaiArgGxuPneGlyGlyAsnGlyGlyAsnMeo.A,xaSerProAiaProPro AlacysAspLeuArgValLeuSerLysLeuleuArgAspSerHisValLeuHisSerAra LeuS.erGlnCysProGluvalHisPro (SEC ID NO:228}
PMDN28535
AlaAsnGy sSer XleMeoX 1 eAspGlul 1 ell eHisHisLeuLy s.Ar gPraProAl aPro ^edeuAxspPr DAsriAsnlfeuAsnAspG luAspVals er xl eLeuMerAspArcAsTílieu ArgLeuProAsnLeuGluSer PheV a lArg AlaVa iLy sAsALeuGluAsnAlaS* erGly lieGxuAlalleLeuArgAsnLeuGlnProcysLeuProSerAxlaThrAlaAlaProSer .ArgHisPrQXleXleXleLysAlaGlyAspTrpGlnGluPheArgGluLysLeuThrPhe : / *,LeuV eu. j. hr ‘'^vGmGlnAlaGj.ndu.GlnGmxyrValGluGlvGlvGlyG Ivs^r PruGlyGluPrQSerGxyPrcZleSerThrXleAsnProSerProProSerLysGluSer HxsLysSerProAsnMetValLeuLeuProAlaValAspPheserLeuGlyGluTrpLye * y* lyMehwilu w 1 uThr Ly s Al aG InAsp X leLeuG lyAl aV alThr L euLeuLeuG 2 « SlyValMetAlaAlaArgGlyGlnLeuGlyProThrCysLeuSerSerLeuLeuGlvGln heuSerGzyGmValArgDeuLeuLeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeuGIyThrGlrlLeu Pr oPr oG 1 nGlyAr gThrThr Al aHi sly s AspProAsnAl al 1 ePheL euSer PheGln Hi sleuLeuAr gGly Ly sVal Arg PheLeuMe tLeuV a 1G lyG ly S erThr LeuCv SVal
144
ArgGluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMetAlaSerProAlaProPrpAlaCysAspLeu AròvalLeuSer Ly sLeuLeuArg AspSer Hxs ValLeuHi s Ser Ar gL euS erG _r,Cy s ProGluValHrsProLeuPrcThrPro (SEQ -L NO;229}
AlaAsnCvsSer XleMetXleAspGluTleXleHisHisLeuLysArgProPruA^aPr:: LeuLeuAspProAsnAsnLeuAsnAspGluAspValSerXleLeuMetAspãrgAsnLeu AroLeuProAsnLeuGluSerPheValAr gAlaVa iLy sAsnLeuG i uAsnAi aS erGly 11 ãsl uAi&XleLeuArg AsnLeu G InProCysLeuPraS er AlaThr Al aAlaProSer Ar q Η - ε Pr ο 2 ò all e 11 e Ly s Ai. a G ly Asp TrpG i n G z u P tie A r gGx uuy s u eu τ nr sn e T\’xLsuValThrLeuGluGlnAlaGlnGluGlnGlnTyrValGluGlyGiyGlyGlySer ProGlyGiuPrGSerGlyProIleSsrThrlleAsnProSerProPrQSerLysGluSer HisLysSerProAsnMetAlaValAspPheSerLeuGlyGluTrpLysThrGlriMetGlu GluThr Lys AlaGlnAspl 1 eLeuG lyAlaValThrLeuLeuLeuGluGiy V alMe t.Ala AlaArgGlyGlnLeuGlyProThrCysLeuSerSerLeuLeuGlyGlnLeuSerGiyGln ualArgLeuLeuLeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeuGlyThrGlnLsu.ProProGln.Gly ArgThrThrAlaHisLysAspProAsnAlaXlePheLeuSerPheGlnHxsLeuLeuArg G lyLysV alArg PheLeuMetLeuValGly GlySerThrLeuCy sValAr gGluPheG ly GlyAsuGlyGlyAanMetAXaSerPrcA-laProPraAlaCysAspLeuArgValLeuSer LvsLeuLeuAx'g.AspSerIHisValLeuHisSerArgLeuSerGlr*'2jzs?roGlu'Va.2Has ProLeuProThrProValLeuLeuPro ÍSEÇ· XO NO:230;
£ r vÚ *?
AlaAsr.CysSarllêMetXleAspGlullaXleHisHisLeuLysArgProProAlaPro LeuLeuArpProAsnAsnLeuAsnAspGluAspValSerXleLeuMatAspArgAsnLau Ar g O eu ProAsnLeuGiuSer PneValArgAiaVaxLysAsnLeuGluAsnAi.aS erG-iy X1 eG luAlalieLeuAr gAsnLeuGlnPr oCy sLeuPr cS er AlaThr Al aAla Pr oS e r ArgHisPraXleTlelleLysAlaGlyAspTrpGlnGluPheArgGluLysLeuThrPhe Ty rLeuVal Thr LeuG luG InAl aGl nG luG InG InTyrV alGluG lyG ly G ly G ly Ser ProGlyGluProSerGlyPralleSerThrXleAsnPrcSerProPruSerLysGluSer HisLy s S ar ProAsnMe t AspPheSerLeuGlyGluTrpLysThrG InMe tGluGl uThr LysAlaGlnAsplleLeuGlyA.laValThrLetiLeuLeuGluGlyValMetAlaAlaArg GlyGlnLeuGlyProThrCysLeuSerSerLeuLôuGlyGlnLeuSerGlyGlnValArg LeuLeuLeuGlyAlaLeuGlnS er LeuLeuGlyThrGlnLeu Pr oProG InG lyArgrhr ThrAlaHisLysAspProAsnAlallePheLeuSerPheGlnHísLeuLeuArgGlyLys ValAr gPheLeuMetLeuValGlyGly SerThrLeuCy sVal ArgG luPheG lyG lyAsn GlyGlyAsnMetAlaSerProAlaProProAlaCysAspLeuArgValLeuSerLysLeu LeuArgAspSerHisvalLeuHãsSerArgLeuSerGlnCysProGluValHisProLeu ProThrProValLeuLeuProAlaVal (SEQ xo NCt231)
PMON2853S
AlaAsnCysSerXleMatXleAspGluIlelleHisHisLeuLysArgProProAlaPro LeuLeuAspProAsnAsr;LeuAsrxAspGluAspyalSerXleLeuMetAspArgAsnLeu ArgLeuProAsiiLeuGluSerPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsriAlaSerGly XleGluA.iaXleLeuArgAsnLeuGlnProCysLeuProSerAlaThrAlaAlaProSer ArgHlsProll&XleXleLysAlaGlyAspTrpGlnGluPhaArgGluLysLeuThrPhe TyrLeuValThrLeuGluGlnAl aG InG luGlnGlnTyrValG luGlyG lyG lyG lySer ProGlyGluProSerGlyPraXleSarThrlleAsnProSerProPrOSerLysGluSer HisLysSerProAsnMetGlyGluTrpLysThrGlnMetGluGluThrLysAlaGlnAsp eLeuG 1 v AlaVal Thr LeuLeuLeuGluGàyV aàMecAlaAl aArgG ay G ax t>v nT^^^/^LevSerSerLeuLexiGxyG anLeu^eruiy GlnV aa Argxie'aLeu—;&«.%*— x AlaLeiSlnSerLeubeuG lyThrGlnLeu Pro ProG InGly Ar gThrTnr Al aHa sLy £ j. s-,^T--,Aef.jLi£i22sphaL>suSaa'PheGanHisLeuLeuArgGlyLysva--ArgP~aLeu MetLeuVaiGlyGlySerThrLeuTysVelArgGluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMez 'Ί& -er i a Pro ProAlaOvsAspLeuArgX^aàxíeuSerLy eaeuLeuAr gAspSer
Hi^valLiuHisSerArgLeuSerGlnCysProGluValHisProLeuPrcThrProVal LeuL-euProAlaValAspPheSerLeu íSBG XL KO :232} pMON28529 Ai0Asne\’£SerXleMet21eAspGluIleXleHisHxsLeuLysArgProProAlaPrc LeuLeuAscPr o AsnAsnLeuAsnAspGl uAspValS er XaeLeuMe a Asp Ar gAsruieu AroLeuPrÔAsnLeuGluSerPheValArgAlaVa.lLysAsnLeuG.IuÀsnÀiaSerG-.y - 1 e-G iuAl ax leLeuArg AsnLeuGlnPr oCysLeuProS er AlaThxAl.aAlaProSer ÃrgHxsPr gX 1 e 11 elleLysAlaG lyAspTrpGlnGluPheArgG luLysLeuThrPhe TvrLeuValThrLeuG luGinAlaG InG luGlnG InTyrValG luGlyG lyG lyG lys er ProGlyGluProSerGlyPrQXleSerThrXaeAsnProSerProPrPSerLysGiuSer Hi sLvsS er ProAsnMe rGlyProThrCy sl euSerS erLeuLeuGlyQ InLeuS er G ay
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pMON2.8-540
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PMON28541
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Ar gHis Pre : le Ilex 1 a l<y sAl aGly AspTrpG InG luPheArgG luX.y sLeuTnrPne XyrXeuValThr GwGluGlnAiaGlnGluGlnGlnTyrValGluG lyG lyG lyG iySer ProGlyGluProserG ly Pre Σ. les »r?ér ~1 eAjsnPreSer ProPras erLyaGlus er HisbysS er prcAsimet GlyArgThrTnr AlaHxsLysAspProAsnAl axlePhebeu SerPneGlrlHxaLeuLeuArgGlylysValAX'gPheLeuMegLeuValGlyGiySerThr LeuCy a val ArgG 1 uPneGly G lyAsnGlyGly AsnMetAlaS ar Pr gAI aProPr oAla GysAspleuArgvalieu s arLy sleuleuArgAspSer HxsVa Ibeu-Haeser Ar gl-eu S erGlniy s?r oGluvalH xsProLe'aProchrPrpValLa'aLauPr oAlaVa lAsoPhe SerXeuGlyGluTrpLysTnrGlnMecGluGluThrLysAlaGinAspIleLeuGlyAla ValTnrLaüLeuLeuGluGlyvalKetAlaAlaArgGlyGlnlíeuGlyPreThrCvsLieu Gar .s axle aux« xy G x m eu S a r u ly G xnV a 1 Ar gl euL. a uG euG 1 y A .1 aCe uG 1 nS a r LeuLauGlyl’hrGlnLeuProProGln iS&Q Σ0 NO:235)
PNON28542
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AlaAsnCy eSer XleMet X1 eAspGluIl eXi eHi sHisLeuLysArgProProAlaPro ^«LeuAspPrpAsnAsnLeuAsnAspGluAspvalSerXl&LauMetAspArgAsnLeu êl Ft oAsnLeuGxuS ar PbeValArg AlavalLy SAsnLeuG luAsnAlaSerGlv 21eGluAiaxleLieuArgAsnl.euGlnProCysLeuPr0SerAlaThrAlaAlaProSer ArgHi eProXx&XleXxeLysAlaGlyAepTrTGlrJGluPheArgGluXysLetrrhrPhc TyrLeuValThr^euGluGlnAlaGlnGluGlnGlnxynrValGlÜGlvGlyGlvGlyS^r ProGlyGl^roSerGlyPrpxieSarThrXieAsnPrQSerProProSarLysGluSer HisLysSerProAsnMetAspProAsnAlaXlePheLeuSerPheGlnHisLeuLsuArã GxyLyaValArgPheLeuHecLeuValGlyGXySerTnrLeuCysvalAraGluPheGly GxyAsnGlyGlyAsnMet AlaS er ProAlaProPrpAl aCysAspLeuArgValLeuSer OysLeuLeuArgAspSerHisValLeuHxsSerArgLewSerGlncysProGluValHds ircLe'dProThrProValXeuLeuPrQAlaValAspPheSerLauGlyGluTrpLvsX’hr G «.nN e t ka xuG 1 uTtir ly s A a a<» IrAs px 1 ePeuG xy Ax a V a IT hr Ge uX euLsu G1 uG Iv ^‘Í^^^^^^^^^^^^^P^oThr^sLeuSerSerLeu^euGlyGlnLeê SerGlyGlnValArgLeuLeuLeuGlyAlaLsuGlnSerLeuLeuGlvThrGlnLeuPrc ProGxnGlyArgThrThrAlaEisLys {SEQ IE NO:237)
147
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pMQKl2132
S er Pr oAl aPro Pr oAlaCy sAspLeuArgValLauS erLy sLeuLeuArgAspS erHis ValLeuHisSerArgLeuSerGlnCysProGluValHisProLeuProThrProValLeu LeuPraAlavalAspPheSerLeuGlyGluTrpLysThrGlnMetGluGluThrLysAla GlrAsplieLeuGlyAlâValThrLeuLeuLeuGluGlyValMetAlaAlaArgGlyGln LeuGiyProThrCysLeuSerSerLeuLeuGlyGXnLeuSerGlyGlnValArgLeuLeu LeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeuGlyThrGlnLeuProProGinGlyArgThrThrAla dx s^ysAspProAsnAlaXlePheLeuSer PheGlnHisLeuLeuArgGlyLysValArg PheLexsMetLeuValGlyGlySerThrLeuCysValArg {SEQ 00 ^0^252)
PMÍ
148
Os seguintes exemplos ilustrarão a invenção em maior detalhe apesar de que será compreendido que a invenção não está limitada a esses exemplos específicos.
Exemplo 1
Construção de vetor de expressão BHK parenteral
A. Remoção de local Afllil de plasmida de expressão mamífera.
Um novo vetor de expressão mamífero foi construído para aceitar fragmentos de gen Ncol-Hinlll ou AflHÍ-HindIII enquadrados e 3‘ ao gen agonista receptor hll-3 pMONl3146 ( WO 94/12638) e um fragmento de ligante igG2b de rato.. Primeiro, o local Afllil único foi removido de pMON3934, que é um derivado de pMON3359, PMON3359 é um vetor baseado em pUC18 contendo um cassete de expressão mamífera. O cassette inclui um promotor viral de herpes simplex IE110 (-800 até +120) seguido por uma sequência de peptídeo de sinal IL-3 humana modificada e um sinal de polifadanilação (poli-A) tardio SV-40 foi subcíonado no poliligante pUC18 (Ver Hippenmeyer e outros, Bio/Technoiogy, 1993, págs. 10371041). A sequência de sinal IL-3 humana modificada, que facilita a secreção de produtos genéticos fora da célula, é flanqueado por um local BamHl na extremidade 5' e um único tocai Ncol na extremidade 3‘. Um local HinlH único está s 3’ do local Ncol e 5' da sequência poli-A. A sequência de DNA codificando o peptídeo de sinal é mostrada abaixo (locais de enzima de restrição são indicados acima). O códon ATG (metíonína) com o local Ncol é ín-frame com o iniciador ATG do peptídeo de sinal (sublinhado):
BamHl Ncol
5OGAAATCCACCATGAGCCGCCTGCCCGTCCCTGCTCCTGF CTCCAACTCCTGGTTCCGCCCCGCCATGG (SEQ ID N°:255)
O locai único Afllil foi removido de pMON3934 por digestão com Afllil seguido por preenchimento das saliências por adição de um DNApolimerase e nucieotídeos, O fragmento de DNA digerido foi purificado via o kit de limpeza Magic PCR (Promega) e ligado com DNA-ligase T4. A reação de ligação foi transformada em DH5a™ e as células foram aplicadas em
149 ampicilina LB-agar plus. Colônias individuals foram monitoradas em relação à perda do local Alftll através de análise da restrição com Afllll e Hidlll que resulta em um fragmento único se o local Afllll foi removido O plasmideo resultante foi designada p MON30275.
8. Transferência de cassete p MON134l6/lgG2b agonists receptor hít-3 em p MON3Ô275.
O fragmento Ncol-Hindlll (cerca da 425 bp) de p MON30245 foi ligado ao fragmento Ncol-Hindlli (cerca de 3800 bp) do p MON30245, p MON30245 (WO 94/12638) contém o gene codificando o receptor hiL-3 10 agonists ρ M0N13416 ligado a um fragmento de junta lgG2b de rato, Imediatamente 3' para a junta lgG2b e 5’ para o local Hindlli é um local Afllll. Genes podem ser clonados nos locais Afllll Hindlli como fragmentos NcoíHindlli ou AflIlí-HindíB na moldara com a variante hlL-3 p MONl34l6/junta igG2b para criar novas quimeras. O local Ncol e o local Afllll têm saliências 15 compatíveis e se ligarão, mas ambos os locais de reconhecimento estão perdidos. O plasmídec, ρ MON30304 contendo a sequência de DNA de (SEQ ID N°:78); codificando a variante hlL-3 ρ MON13416, ligou-se a uma região de junta de rato lgG2b: foi um resultado desta clonagem.
Exemplo 2
Construção de um plasm ideo intermediária contendo uma cópia do gene ligante c-mpl (1-153) da matriz do dímero.
Para gerar um DNA de plasmídeo com a sequência de codificação de ligante c-mpl (1-15'3) seguido por um local de restrição único EcoRI, o gene é isolado via transcriptase re versa/reação em cadeia polimerase 25 (RT/PCR). RNA A+ de feto humano (lote #38130) e fígado adulto (lote #46018) são obtidos na Clontech (Paio Alto, CA) para fonte de ligante c-mpl mensageira de RNA (mRNA). As primeiras reações de elementos cDNA são realizadas empregando-se um kit cDNA Cycle* obtido na Invitrogen (San Diego, CA), Na reação RT, pnmers randômícos e primers oligo dT são usa30 dos para gerar cDNA de uma combinação de mRNA de fígado humano e fígado fetal, Para amplificação de fragmento de gene ligante c-mpl codificando aminoácidos 1-153, o produto RT serve como a matriz para PCR com
150 uma combinação dos primers, primer dianteiro: c-mopINcol (SEQ ID ΝΛ: 13) e primer reverso: Ecompl. O pnmer c-mpINcol anela ao gene ligante c-mpl (bases #279-311 com base na sequência de ligante c-mpl do acesso #1.33410 do banco genético ou de Sauvage e outros, Nature 369 533-538 (1934)) e codifica um local de enzima de restrição Ncol imediatamente 5’ do primeiro códon (Ser+1) do ligante c-mpl, O local da enzima de restrição Ncol codifica codons de metionina e aianina antes de Ser+1 a inclui a degeneração de códon para códon Ala e os primeiras quatro códons (Ser, Pro, Ala, & Pro) do ligante c-mpl. O primar Ecompl anela-se a bases #720-737 de lí10 gante c-mpl e codifica uma m-frame local EcoRI (GAATTC) seguindo imediatamente Arg-153. Os local EcoRI cria códons Glu e Phe seguidos de Arg153. O produto PCR. cerca de 480 bp foi purificado, digerido com Ncoí e EcoRI e hgado ao fragmento da vetor Ncol-EcoRI de p MON3993 (cerca de 4550 bp). p MON foi um derivado de p MQN3353 (descrito no exemplo 1). A 15 sequência de peptídeo signa! humano IL-3, que foi subclonado como um fragmento de BamHI e poli-A, contém um local Ncol na sua extemidade 3’ e é seguido por um único loca! EcoRI. O plasm ideo, p MON26458 contendo uma sequência de DNA de (SEQ ID N* · 73), codificando ligantes c-mpl aminoácídos 1-153 (SEQ ID 161). fui o resultado desta clonagem.
Exemplo 3
Construção de plasm ideas parenterais contendo o segundo gene das matrizes de dímero.
Para amplificação dos fragmentos de gene ligante c-mpl iniciando com aminoácido 1 (Ser) com um códon de término seguido por aminoá25 cido 153 (Arg), a reação RT DO Exemplo 2 serve como a matriz para PCR com uma combinação dos seguintes primers, c-mpíNcoil (SEQ IS No: 13) (primer dianteiro) e c-mplHindlll (SEQ ID: 15) (primer reverso). O primer (SEQ ID:13) é descrrto no exemplo 2. O primer c-mpí Hindlll (SEQ ID N°;15): que anela a bases #716-737 de ligante c-mpl, adiciona a ambos um códon 30 de término e um local de enzima de restrição HindiII imediatamente seguindo o códon finai, Arg1í:2
151
Dois tipos de produtos PCR sâo gerados das amostras RT cDNA, um com uma supressão dos códons para aminoácidos 112-115 e uma sem a supressão desses codons. Os produtos PCR ligantes c-mpl (cerca de 480 bp) são digeridos com Ncol e enzimas de restrição Ncol e 5 HlndlH para transferir uma expressão de vetor mamífero, p MON3934. P MON 3934 é digerido com Ncol e Hindlll (cerca de 3800 bp) e aceitará os produtos PCR.
Plasmideo, ρ MON32132 (SEQ ID N*: 249), codificando em relação a ligantes c-mpo de aminoácidos 1-153 (SEQ 10 N* 252) foi um resulta10 do de desta clonagem. Plasmideo, ρ MON32134 (SEQ IO Nô: 251), codificando ligante c-mpl de aminoácidos 1-153 com uma supressão de códons (Δ112-115) foi também um resultado desta clonagem.
Exemplo 4
Geração de matriz 5L de dírnero PCR com uma supressão de 15 (Δ112-115) no segunde gene ligante c-mpl
Uma matriz PCR para geração de novas formas de ligante c-mpl é construída por ligação do fragmento 3,7 Kbp BstXI/EcoRI da ρ MON26458 ao fragmento Kbp Ncol/BstXI de ρ MON32133 (contendo uma supressão de aminoácidos 112-115) juntamente com o ligante 5L de oligonucleotide© 20 sintético EcoRI/AflHI, 51-5’ (SEQ ID hf: 18) e 51-3' (SEQ ID N*: 19).
A extremidade EcoRI do ligante se ligará à extremidade EcoRl de ρ MON26458. A extremidade AlflH do ligante se ligará ao local NgoI de p MON32133, e nem o local de restrição será mantido com a ligação. Os locais SstXI de ρ MON26458 e ρ MON 32133 também se ligarão. Plasmideo, 25 ρ MON28548, é um resultado da clonagem e contém a seqüéncía de DNA de (SEQ ID N°: 80) que codifica os ligantes c-mpl de aminoácidos 1-153 fundido via um ligante GluPheGlyGlyAsnMetAla (SEQ ID N°: 222) a ligante c-mpl de aminoácidos 1-153 que contém uma supressão de aminoácidos 112-115 (SEQ ID N°: 162).
152
Exemplo 5
Geração de matriz 41 de dímero PCR
Uma matriz PCR para gerar novas formas de ligante c-mpl é construída ligando o fragmento 3,7 Kbp BstXl/EcoRl de ρ MON26458 ao fragmento 1 Kbp Ncol/BstXI de ρ MON32132 juntamente com o ligante 4L de oligonucleotídeo sintético EcoRI/AfHII 4L-5‘ (SEQ ID 16) e 4L-3’(SEQ ID Nô : 17)
A extremidade Econ do ligante se ligará à extremidade EcoRí de ρ MON2658. A extremidade Afllll do ligante se ligará ao locai Ncol de p MON32132, e nem o íocal de restrição será mantido com a ligação. Os locais BsfXI de ρ MON26458 e ρ MON 32132 também se ligarão. 0 plasmídeo, ρ MON28500. é um resultado da clonagem e contém a sequência de DNA de (SEQ ID Νσ; 82) que codifica aminoácidos 1-153 lígante c-mpl fundido via um ligante (41) de (SEQ ID N*: 223) GluPheGlyAsnMetAla a ligante c-mpl de aminoácidos 1-153 (SEQ ID N°: 163).
Exemplo 6
Geração de matriz 51 de dímero PCR
Uma matriz PCR para geração de novas formas de ligante c-mpl é construída por ligação de fragmentos 3,7 Kbp BstXl/EcoRl de p MON26458 ao fragmento 1 Kbp Ncol/BstXI de ρ MON32132 juntamente com o oligonucleotídeo sintético EcoRI/AfilH 5L, ligante 5L.-5' (SEQ ID Na : 18) e 5L.-3' (SEQ ID : 19).
A extremidade EcoRI do ligante ligar-se-á à extremidade EcoRI de ρ MON26458. A extremidade Afllll do ligante ligar-se-á ac local Ncol de p MON32132, e nenhum local de restrição será mantido com a ligação, Plasmídeo, ρ MON28501 é um resultado da clonagem e contém a seqüência da DNA (SEQ ID N°: 82) que codifica ligante c-mpl de aminoácidos 1-153 fundidos via um ligante (5L) GiuPheGlyGlyAsnMetAia (SEQ ID N° : 22.2) a ligante c-mpl de aminoácidos 1-153 (SEQ ID N*: 164).
153
Exemplo 7
Geração de matrizes 8L de dímero PCR
Uma matriz PCR para gerar novas formas de ligante c-mpl é construída ligando-se o fragmento 37 Kbp BstXI/EcoRI de p MON2658 ao 5 fragmento 1 Kbp Ncol/BstXI de p MON32134 juntamente com o ligante de olígonucleotídeo Sintético EcoRI/AflIH 81, 81-5' (SEQ ID Ν°: 20) e 81-3' (SEQ ID Nft: 21).
A extremidade EooRI do ligante se ligará à extremidade EcoRI de p MON 26458. A extremidade Afllll do ligante se ligará ao local Ncol de p 10 MON32134, e nenhum local de restrição será mantido com a ligação. Os locais BsíXI de p MON26458 e p MON32134 também se ligarão. Piasmídeo p MON28502 é um resultado da clonagem que contêm a sequência de DNA de (SEQ ÍD N°: 83) e codifica ligantes o-mpl (8L) de aminoácidos 1-153 fundidos via um GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMetAla (SEQ ID N° : 224 ) a li15 gante o-mpl de aminoácidos 1-153 (SEQ ID Nc: 165).
Exemplos 8-44
Geração de novos genes ligantes c-mpl com nova término N e termino C
A. Geração de genes PCR codificando novos agonistas recepto20 res ligantes c-mpl.
Genes codificando novos agonistas receptores ligantes c-mpl foram gerados usando-se o método III (Horlick e outros, Pro, Eng. 5: 427-433, 1992). As reações PCR foram executadas utilizando matrizes de dimero, p MONs 28500, 28501. 28502, ou 28548 e um dos ajustes de primers slntétl25 cos indicados abaixo (O primeiro número refere-se à posição do primeiro aminoácido na sequência originai. Por exemplo, 31-5' e 31-3' refere-se aos primers 5' e 3' oligo, receptivamente, para o início da sequência no códon correspondente ao resíduo 31 da sequência original.).
31-5’ (SEQ ID Ν'5 : 22) e 31-3' (SEQ ID Νβ: 23), 35-5' (SEQ ID N:
24) e 35-3’ (SEQ ID 25). 39-5' (SEQ ID N°: 26) e 39-3’ (SEQ ID Ν’: 27),
43-5’ (SEQ ID N°: 28) e 43-3’ (SEQ ID Ν'5: 29), 45-5' (SEQ ID Ν'5: 30) e 45-3' (SEQ ID Ν’: 31), 49-5' (SEQ ID Ν’: 32) e 49-3’ (SEQ ID N°: 33), 82-5' (SEQ iw
Ns: 34) e 82-3’ (SEQ ID N°: 35), 109-5' (SEQ ID hT 36} & 109-3' (SEQ ID bf: 37), 115-5' (SEQ ID N°: 38) e 115-3' (SEQ ID Ν’: 39), 120-5' (SEQ ID N*:40) e 120-3 (SEQ ID Na: 41). 123-5* (SEQ ID N*: 42) e 123-3' (SEQ ID N143), 126-5’ (SEQ ID Ν’: 44) e 126-3' (SEQ ID Nc: 45).
b As matrixes e conjuntos oligonucleotídeos usados nas reações
PCR são mostrados na tabela 4. Qs produtos que foram gerados foram cerca de 480 bp e foram purificados via kits Magic PCR. Clean up (Promega).
8. Subclonagem de novas produtos de genes agonistas receptores c-mpl em vetor de expressão mamífera para geração de quimeras.
Os produtos PCR de genes agonistas receptores c-mpl foram digeridos com enzimas de restrição Ncol e HindllI ou Afilll e Hindlll (cerca de 470bp) para transferir para um vetor de expressão mamífera. O vetor de expressão, p MON30304, foi digerido com Ncol e Hindlll (cerca de 4200 bp) e aceita os produtos PCR como fragmentos Ncol-Hindlll ou Afllll-Híndllt A digestão de restrição do produto PCR e as píasmídeos resultantes são mostradas na tabela 4,
Tabela 4
Exesrspo# Mate PCR PsM^PCR corçuf&ide primer l^esástefe resteãoife pKxWPCR Pasn> dareatoe RxTtíiífe to Sganfeompl
• ExempbS PMON28501 31 Ncol/Hindllí 51... 28505 3031
Exemplo 9 pMQN28501 35 AHIII/Hindíll 51, 28506 34-35
Exemplo 10 pMON28501 39 Nco^HindlU SL 28507 3839
ExemploU PMON28501 43 Nocl/Hindlll 51 28508 42-43
Exemplo 12 PMON28501 45 Ncol/Hnálll 5L 28509 4445
Exempb13 PMON28501 49 Nooí/Hhdlll 5L 28510 4849
Exerrplo14 pMON285Ü1 82 NoolHndlH 5L 28511 8132
Bsmplo15 PMQN28501 109 NcoVHindlll 5L 28512 108-109
Exemplo 16 pMON28501 116 NcoVHindlll 5L .28513 115416
155
Tabda 4 (oor^rwcâo)
EwrW# Ma&tePCR Produto PCR Oigeslãocte LkjíTíte Pasmto POrta de
corp-fete resto;ã>te a reste reptoreno
pnmer produto PCR taíXe ligantoíxnpf
Exemplo 17 pMON285D1 120 NcoVHndIH 5L 38514 119-W
Exemplo 18 pMQN28501 123 NaoDHindlll 5L 28515 122-123
Exemplo 19 PMON28501 126 Nool/Hhdlll 51 28516 125-126
Exemplo 20 P&O12850Q 31 NooVHindl!l 41 28519 30-31
Exemplo 21 pMON2850Cí 85 AW-Ml 4L 28520 34-35
Exemplo 22 pWN28500 39 NooLWlII 41 28521 38-39
PMON28SOO 43 Nosl/Hindlll 41 28S22 42-43
Exenpto24 PMON28500 45 Nrxl/EMI 4L 28523 44-45
Exemplo 25 pMON285DO 49 Noc^-Ml 4L 28524 4849
Exempk>26 p MON28500 82 htoVHndlll 41 28525 81-82
Exemplo 27 p MON285ÜO 109 btol/Hindlll 41. 28526 108-109
Exemplo 28 pMON285QO 116 NoolHndill 4L 28527 118116
Exemplo 29 PMON28500 120 Ncoí/HM 41 28528 119-W
Exemplo 30 PMQN28500 123 Hod/TMI 4L 28529 122-123
Exemplo 31 pMON285ÜO 126 NcüífrMI 41 28530 125-126
Exemplo 32 p MON285Q2 31 NcolHhdlll 81 28533 3031
Exemplo 33 pMON28502 35 a 28534 3485
Exemplo 34 PMON28502 39 Nool/Hindlll 8!.. Z8535 38-39
Exemplo 35 PNOM28502 43 NooVHndlll 8L 28536 42-43
Exemplo 36 PMON28502 45 NcoVHÍndiH 8L 28537 44-45
Eempto37 PMON285Q2 49 Ncd/Hiodlll 8L 28538 4849
Exemplo 38 PMON2&502 32 rtoVHbdlll 8L 28539 81-82
156
Tabela.4 (continuação)
Exempfo# MafnzPCR Ro&tePCR Digestão <fe LJgarfe Pasmd Potode
ax^ocufe afessi- iUptiXBΠΟ
fwi tarte Sganteíxnpl
Exemplo 39 pMQH285O2 109 NcoVHndlll 8L 28540 108-109
Exemplo 40 P&OI28Õ02 116 Nool/HndlH 81 28541 115-116
ExmpE41 PMON28502 120 Ncd/Hindlll 8L 28S42 119-120
Exemplo 42 PMON28502 123 Ncolâ-ltólll 8L 28643 122-123
Eorplo43 pbO42S5G2 126 NooVHindlll 8L 28544 125-126
Exemplo 44 pM0N28548 NooVHhdlll 5L 28545 122-123
Exempto.45
Construção do p MON15960
Construção de p MON 15960, um plasmídeo intermediária usada para construção de plasmídeos contendo sequências de DNA codificando G-CSF Ser17 com uma nova finalização N e C. O DNA de plasmideos pACY177 (Chang Α.0Ύ. e Cohen, S,N. v. fíacteno/. 134: 1141-1156, 1978) foi digerido com enzimas de restrição Hindllí e BamHI resultando em um par de base de 3092 Hindíll, fragmento BamHI. DNA de plasmídeo, p MON13037 (WO/21254), foi digerido com Bglll e Fspl, resultando em um par de base 616 Bglll, fragmento Fspl. Uma segunda amostra de DNA de plasmídeo,. p MON13037, foi digerida com Ncol e Hindlll, resultando em um par básico 556 fragmento Ncol, Hindlll. Os oligonucleotídeos de DNA sintéticos iGGGSfor (SEQ ID Ne: 76) e IGGGSrev (SEQ ID N°: 77} foram anelados um ao outro, e depois digeridos com AfHII e Fspl. resultando em um par básico 21 fragmento AfHII, Fspl Os fragmentos de restrição foram ligados, e a mistura de reação foi usada para transformar E. colí K-12 cepa JM101. Bactérias transformant.es foram selecionadas em placas contendo ampicihna. DNA de plasmídeo foi isolado e analisado por análise de restrição para confirmar a inserção correta.
157
Exemplo 46
Construção de o MO N15981
A construção de ρ MON15981, um plasm ideo contendo sequências de DNA codificando um agonista receptor hematopoiético multifuncto5 nal. Plasmideo, ρ MON15960 foi digerida com enzima de restrição Smal e usado como matriz em uma reação PCR usando-se DNA de oligonicleotídecs sintéticos terminador 38 (SEQ ID N°: 65) e inicíador 39 (SEQ ID N° :
64) como primers, resultando na ampliação de um fragmento de DNA de
576 pares de base. O fragmento ampliada foi digerida com enzimas de res10 trição Hindlli e Ncol, resultando em um fragmento Hindlli, Ncol de 558 pares de base. DNA de plasmídeo, ρ MON13181, foi digerido com Hindlli e Afllll. resultando em um fragmento de 4068 pares de base. Os fragmentos de restrição foram ligados, e a mistura de reação de ligação foi usada para transformar E cqH L-12 cepa JM101. Bactérias transformaníes foram selecionais das em placas contendo ampicilina. DNA de plasmídeo foi isolado, analisado por analise de restrição e seqüenciado para confirmar inserção carreta, O plasmídeo, ρ MON15981, contém a sequência de DNA (SEQ ID N°: 155) que codifica a seguinte sequência de aminoácido:
MetAiaAsnCysSeríleMetlleAspGlullelleHisHisLeul.ysArgProProAla
ProLeuLeuAspProAsnAsnLeuAsnAspGluAspValSerlieLeuMetAspArgAsn
LeuArgLeuProAsnLeuGluSefPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAlaSer
GlylleGluAlalieLeuArgAsnLeuGlnProCysLeuProSerAlaThrAlaAlaPro SerArgHisProliellelleLysAlaGlyAspTrpGInGIuPheArgGluLysleuThr PheTyrLeuValThrLeuGluGInAlaGInGluGInGInTyrValGIuGlyGiyGlyGly
SerProGlyGluProSerGIyProlleSerThrIleAsnProSerProProSerLysGlu
SerHisLysSerProAsaMetAiaTyrLysLeuCysHisProGluGluLeuValLeuLeu
GlyHisSerleuGlylleProTrpAlaProLeuSerSerCysProSerGlnAlaLeuGIn leuAlaGiyCysLeuSerGInLeuHisSerGlyLeuPheleuTyrGinGlyLeuLeuGIn AlaLeuGluGlylleSerProGluLeuGlyProThrLeuAspThrLeuGInLeuAspVal
AlaAspPheAlaThrThdleTfpGlnGInMetGluGluLeuGlyMeiAlaProAíaleu
GlnProThrGInGlyAlaMetProAlaPheAlaSerAlaPheGInArggArgAlaGlyGly
ValLeuValAlaSerHisleuGInSerPheLeuGluValSerTyrArgValLeuArgHis
158
LeuAlaGInProGlyGlyGlySerAspMetAlaTbrProLeuGlyProAlaSerSerLeu ProGInSerPheLeuLeuLysSerLeuGluGínVaíArgLysIleGínGlyAspGiyAia AlaLeuGInGlutysLeuCysAlaThr (SEQ ID NO:195):
Exempla 47
Construção de ρ M0N15982
Construção de ρ MON15982, um plasmideo contendo sequência de DNA codificando um agonisla receptor hematopoiético multifuncional.. Plasmideo, ρ ΜΟΝΊ5960, DNA foi digerido com enzima de restrição Smal e usada como matriz em uma reação PCR. usando-se DNA de oligonucieoti10 deos sintéticos 96 de parada (SEQ ID N*: 67) e 97 de inicio (SEQ ID N°: 68) como primers, resultando na amplificação de um fragmento de DNA de 576 pares de base. O fragmento ampliado foi digerido com enzimas de restrição Hindlll e Ncol, resultando em um Hind III, fragmento Ncol de 558 pares de base. DNA de Plasmideo, ρ MON13181, foi digerido com Hindlll e Afllll, re15 sultartoo em um Hindlll, fragmento AflIH de 4068 partes básicos. Os fragmentos de restrição foram ligados, e a mistura de reação de ligação foi usada para trasnformar E. cofí K-12 cepa JM101. Bactérias transformantes foram selecionadas em placas contendo ampicilina. DNA de plasmideo foi isolado, analisado por análise de restrição, e seqüenciado para confirmar a 20 inserção correta. O plasmideo ρ MON15982, contém a sequência de DNA de (SEQ ID rf : 157) que codifica a seguinte sequência de aminoácido: M@tAlaAsnCysSerlleMeilleAspGlullelleHísHisL.euLysArgProProAía ProLeuLeuAspProAsnAsnLeuAsnAspGluAspValSerlIeLeuMetAspArgAsn LeuArgLeuProAsnLeuGluSerPheValArgAlaVaiLysAsnLeuGluAsnAlaSer
2.5 GlylleGíuAlalleLeuArgAsnLeuGInProCysLeuProSerAlaThrAlaAlaPro
SerArgHisProllellelleLysAlaGlyAspTrpGInGluPheArgGluLysLeuThr PheTyrLeuValThrLeuGluGInAlaGlnGluGInGInTyrValGIuGlyGlyGlyGly SefProGlyGluProSerGIyProlleSerThrlleAsnProSerProProSerLysGlu SerHislysSerProAsnMetAlaProGluLeuGlyProThrLeuAspThrLeuGInLeu
AspValAlaAspPheAlaThrThrlIeTrpGInGInMetGluGluteuGlyMetAlaPro AlaleuGInProThrGInGlyAlaMetProAlaPheAlaSerAlaPheGInArgArgAla GlyGlyValleuValAiaSerHisLeuGlnSerPheLeuGiuValSerTyrArgValLeu
159
ArgHísLeuAlaGInProGlyGlyGlySerAspMetAlaThrProLeuGlyProAlaSer
SerLeuProGlnSerPheLeuLeuLysSerLeuGluGInValArgLyslleGlnGlyAsp
GlyAlaAlaLeuGInGluLysLeuCysAlaThrTyrLysLeuCysHisProGiuGiuLeu
ValLeuleuGlyHisSerLeuGlyHeProTrpAlaProLeuSerSerCysProSerGIn
AlaLeuGInLeuAlaGlyCysLeuSerGInLeuHisSerGlyLeuPheLeuTyrGInGly
LeuleuGInAlaleuGluGlylieSer (SEQ ZD NO; 196)
Exemplo 48
Construção de p MON15965
Construção de ρ MON15965. um plasmídeo contendo seqüèn10 cias de DNA codificando um agonista receptor hematopoíético multifuncional. DNA de plasmídeo, p MON15960, foi digendo com enzima de restrição Smal e usado como matriz em uma reação PCR usando-se DNA de olígonucleotídeos sintéticos terminador 142 (SEQ ID Nô: 73) e iniciador 141 (SEQ ID N°: 72) como primers, resultando na ampliação de um fragmento de DNA 15 de 576 pares de base. O fragmento ampliado foi digerido com enzimas de restrição Híndlll e Ncol, resultando em um fragmento Híndlll, Ncol de 558 pares de base. DNA de plasmídeo, ρ MON13181., foi digerido com Híndlll e Afllll, resultando em um fragmento Hindi!!, Afllll de 4058 pares de base. Os fragmentos de restrição foram ligados, e a mistura de reação foi usada para 20 transformar £ coti K-12 cepa JM101. Bactérias transformantes foram selecionadas em placas contendo ampicilina. DNA de plasmídeo foi Isolado, analisado por análise de restrição e seqüencíado para confirmar a inserção correta. O plasmídeo, ρ MON15965, contém a sequência de DNA de (SEQ IO N“·. 157) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
MetAlaAsnCysSerlIeMetlleAspGlulleileHisHisLeuLysArgProProAla
ProteuLeuAspProAsnAsnLeuAsnAspGluAspValSerlIeLeuMetAspArgAsn
LeuArgLeuProAsnLeuGluSerPheValArg.AlaValLysAsnLeuGluAsnAlaSer
GlylíeGluAlaZIeLeuArgAsnLeuGInProCysLeuProSerAlaThrAlaAlaPra
SerArgHisProZIellelleLysAlaGlyAspTrpGinGiuPheArgGluLysLeuThr
PheTyrLeuVal FhrLeuGluGInAlaGInGluGInGInTyrValGIuGlyGlyGlyGly
SerProGiyGluProSerGIyProlleSerThrlIeAsnProSerProProSerLysGlu
SerHisLysSerProAsnMetAlaSerAlaPheGInArgArgAlaGlyGlyValLeuVal
160
AlaSerHísLeuGlnSerPheLeuGfoValSerTyrArgValLeuArgHisLeuAlaGln ProGlyGlyGlySerAspMetAlaThrProLeuGiyProAlaSerSerleuProGInSer PheLeuLeulysSerLeuGluGInValArgLysileGInGlyAspGlyAlaAlaLeuGIn GluLysleuCysAlaThrTyrLysLeuCysHisProGluGluLeuValLeuLeuGlyHis 5 SerleuGlylieProTrpAlaProLeuSerSerCysProSerGInAlaLeuGInLeuAla
GlyCysleuSerGlnLeuHisSerGlyLeuPheLeuTyrGInGlyLauLeuGlnAlaleu GluGlylleSerProGluleuGlyProThrLeuAspThrLeuGInteuAspValAlaAsp PheAiaThrThrlleTrpGInGlnMetGluGluLeuGlyMetAlaProAlaLeuGlnPro ThrGInGlyAlaMetProAiaPheAla (SEQ ID NO. 196)
Exemplo 49
Construção de p MON 15966
A construção de ρ MON15966, um plasm ideo contendo sequências de DNA oodifioando um agonists receptor hematopoiético multifuncional. DNA de plasmidea, ρ MON15960, foi digerido com uma enzima de res15 trição Smal e usado como matriz em uma reação PCR usando-se DNA de oligonucleotideos sintéticos 126 de parada (SEQ ID N: 68) e 125 de Início (SEQ ID N*' 69) como primers, resultando na ampliação de um fragmento de DNA de 576 pares de base. O fragmento amplificado foi digerido com enzimas de restrição Hindlll e Ncol, resultando em um fragmento Hindlll, Ncol 20 de 558 pares de base. DNA de plasmideo, ρ MON13181, foi digerido com Hindlll e Afllll, resultando em um fragmento Hindlll. Afllll de 4068 pares de base. Os fragmentas de restrição furam ligados, e a mistura de reação de ligação foi usada para trasnformar E. ca/i K-12 cepa JM101.
Bactérias transformantes foram selecionadas, analisadas por 25 análise de restrição e, seqüenciadas para confirmar a inserção correta. O plasmideo, p MON159S6, contém a sequência de DNA de (SEQ ID N°: 158) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos: MefAiaAsnCysSerlIeMetlleAspGlullelieHisHisLeuLysArgProProAla ProLeuLeuAspProAsnAsnleuAsnAspGluAspValSsrlIeLeuMetAspArgAsn
LeuArgLsuProAsnLeuGluSerPheValArgAlaVaiLysAsnLeuGluAsnAlaSer GlylleGluAialleLeuArgAsnLeuGInProCysleuProSerAlaThrAlaAlaPro SerArgHisProUellelletysAlaGlyAspTrpGlnGluPheArgGluLysLeuThr
ΊΟ i
PheTyrleuValThrleuGluGInAlaGInGluGInGInTyrValGluGlyGiyGlyGly SerProGlyGluProSerGíyProlleSerThdíeAsnProSerProProSerLysGlu SerHisLysSerProAsnMetAlaMetAlaProAlaLeuGInProThrGInGlyAlaMet ProAlaPheAlaSerAlaPheGInArgArgAlaGlyGlyValleuValAlaSerHisLeu GlnSerPheleuGluValSerTyrArgValleuArgHísLeuAlaGInProGlyGlyGly
SerAspMetAlaThrProLeuGíyProAlaSerSerLeuProGInSefPheLeuLeuLys SerLeuGluGInValArgLysIleGInGiyAspGlyAiaAlaLeuGInGluLysLeuCys AlaThrTyrLysLeuCysHisProGluGluLeuValLeuLeuGlyHisSerLeuGlylle ProTrpAlaProLeuSerSerCysProSerGInAlaLeuGInLeuAlaGíyCysLeuSer GlnLeuHisSerGlyleuPheLeuTyrGInGlyLeuLeuGlnAlaLeuGíuGlyileSer ProGluLeuGíyProThrleuAspThrLeuGínLeuAspValAlaAspPheAlaThrThr IleTrpGInGInMetGluGluleuGly (SEQ ZD NO: 198)
Exempla 50
Construção de p MON15967
A construção de p MON15967, um plasmídeo contendo sequências de ONA codificando um agonists receptor hematopoiético multifuncional. DNA de plasmídeo, p MON15960 foi digerido com enzima de restrição Smal e usado como matriz em uma reação de PCR usando-se DNA de oligonucleotídeos sintéticos terminador 132 (SEQ ID N°: 71) e iniciador 133 (SE.Q 1D N°70) como primers, resultando na ampliação de um fragmento de DNA de 576 pares de base. Q fragmento ampliado foi digerido com enzimas de restrição Hindi II e Ncol, resultando em um fragmento Hid III, Ncol de 558 pares de base. DNA de plasmídeo, p M0N13181, foi digerido com Hindlll e Afllll, resultando em um fragmento Hindlll, Afllll de 4068 pares de base. Os fragmentos de restrição foram ligados, e a mistura de reação de ligação foi usada para transformar E. co/í k-12 cepa JM101. Bactérias transformantes foram selecionadas em placas contendo ampiciiina DNA de plasmídeo foi isolado, analisado por análise de restrição, e seqúenciado para confirmar a inserção correta. O piasmídeo, p MQN15976, contém a sequência de DNA (SEQ ID N°; 159) que engloba as seguintes sequências de aminoácido:
MetAlaAsnCysSerlIeMetlleAspGlullelleHisHisLeuLysArgProProAla ProLeuLeuAspProAsnAsnLeuAsnAspGluAspVaiSerllel.euMetAspArgAsn
162
LeuAfgLeuProAsnLeuGluSerPheValArgAlaVallysAsnLeuGluAsnAlaSer
GlylleGluAlaíleleuArgAsnleuGlnProCysLeuProSerAlaThrAlaAlaPro
SerArgHísProllelielleLysAlaGlyAspTrpGInGluPheArgGiuLysLeuThr PheTyrleuValThrLeuGluGinAlaGInGluGinGInTyrValGluGlyGlyGlyGly
SerProGlyGluProSerGIyProlleSerThrlteAsnProSerProProSerLysGlu
SerHisLysSerProAsnMetAlaThrGInGlyAlaMetProAlaPheAlaSerAlaPhe
GlnArgArgAlaGlyGh/ValLeuValAlaSerHisleuGInSerPheLeuGluValSer
TyrArgValLeuArgHisLeuAlaGinProGlyGlyGlySerAspMetAlaThrProLeu GlyProAlaSerSerLeuProGInSerPheLeuLeuLysSerleuGluGInVaíArgLys
IleGInGlyAspGlyAlaAlaLeuGInGluLysLeuCysAlaThrTyrLysteuCysHis
ProGluGluLeuValleuLeuGlyHisSerleuGlylleProTrpAlaProLeuSerSer
CysProSerGInAlaLeuGInLeuAlaGlyCysLeuSerGInLeuHisSerGIyLeuPhe
LeuTyrGInGlyLeuLeuGInAlaLeuGluGlylleSerProGluLeuGlyProThrleu
AspThrLeuGInleuAspValAlaAspPheAiaThrThrlIeTrpGinGInMetGiuGlu
LeuGlyMetAlaProAlaieuGtn
Exemplo 51
Construção de p MON 13180, um plasmídeo Intermediária usada para a construção de plasmídeos que contêm sequência de DNA codificando agonistas receptores hematopoiéticos multifuncionais.
DNA de plasmideo, p MON 13046 (WO 95/21254), foi digerido com endonucleases de restrição Xmal e SnaBI, resultando em um fragmento de vetor de 4018 pares de base. O fragmento dos 4018 pares de base foi purificado usando um kit Magic ONA Clean-up System (Promega, Madison, Wl) no qual o fragmento inserido XmabSnaBI de 25 pares de base não ê mantido. O par complementar de oligonucleotídeos sintéticos, glyxal (SEQ ID NG: 74) e glyxa2 (SEQ ID Ν’:75) foi designado para remover a sequência de codificação de um local de divagem fator Xa. Quando propriamente reunidos esses oligonucleotídeos também resultam em extremidades Xmal e SnaBI. Os primers, Glyxat e glyxa2, foram anelados em solução tampão de anelamento (20 mM de tris-HCI a pH7,5, 10 mM de MgCfo 50 mM de NaCI) por aquecimento a 70GC por dez minutos e permitiu-se que resinassem lentamente. O fragmento Xmal -SnaBI de 4018 pares de base de p MON13046
163 foi ligado com os pligonucleotídeos reunidos usando-se DNA-ligase T4 (Boehringer Mannheim, Indianapolis.. IN). Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células embrionárias DH5a de E co/í (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram seleciona5 das em placas contendo ampicilina. DNA de plasmídeo foi isolado dos transformantes e analisado usando um teste com base em PCR. 0 DNA da plasmídeo de transformantes selecionados foi seqüenciado para confirmar a inserção correta dos oligonucleotídeos. O plasmídeo resultante foi designada p MO NI 3180 e contém a sequência de DNA de (SEQ ID Nl **).
Exemplo 52
Construção de p MON13181, um plasmídeo intermediária usada para construção de plasmideos que contém sequências de DNA codificadores de agonistas receptores hematopoíéticos multifuncionais
DNA de plasmídeo, p MON13047 (WO 95/21254), foi digerido 15 com endonucleases de restrição Xmal e SnaBL resultando em um fragmento vetor de 4063 pares de base. O fragmento Xmal -SnaSI de 4063 pares de base foi purificado usando um kit Magic DNA Clean-up System (Promega. Madison, Wl) no qual o fragmento inserido nos 25 pares de base XmaLSnabl não è mantido. O par complementar de oligonucleotideos sintéticos, glyxal 20 (SEQ ID N°: 74) e glyxa2 (SEQ ID Nc: 75), foram designados para remover a sequência codificando o local de divagem do fator Xa. Quando propriamente reunidos esses oligonucleotideos também resultam em extremidades Xmal e SnaBL Glyxal e glyxa2 foram anelados em solução tampão de anelamento por aquecimento a 70’C por 10 minutos e permitiu-se que esfriassem lenta25 mente. O fragmento Xmal-SnaBI dos 4063 pares de base de p M0N13047 foi ligado com os oligonucleotideos reunidos usando-se DNA-íigase T4 (Boehringer Mannheim. Indianapolis, IN). Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células de E co/t cepa DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas em placas 30 contendo ampicilina. DNA de plasmídeo foi isolado dos transformantes e analisado usando um teste com base em PCR. DNA de plasmídeo dos transformantes selecionados foi seqüenciado para confirmar a inserção cor
IM reta de olígonucleotídios. O plasmídio resultante foi designado p MON13181 e contém a sequência de DNA de (SEQ ID NO:**).
Exempla 53
Construção de p MON 13182
O novo gene tèrmino-N/término-C em ρ MON 13182 foi criado usando-se Processa I coma descrita em Materiais e Métodos. Fragmento Iniciador foi criada e amplificado de sequência G-CSF Ser1' em p MON13037 usando o canjunto primer, 39 iniciador (SEQ ID NO.64) e L-11 iniciador (SEQ ID NO. 60). Fragmento termiaador foi criado e amplificado de 10 sequência G-CSF Ser em p MON 13037 usando o conjunto primer, 36 terminador (SEQ ID NO: 65) e L-11 terminador (SEQ ID NO:61). O novo gene G-CSF Ser17 término-N/término-C foi criado e amplificado a partir de Início e fim de fragmentos anelados usando-se primers 39 iniciador e 38 terminador:.
O fragmento de ADN resultante que contém o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindlll e purificado usandose um Magic DNA Clean-up System kit ( Promega, Madison, Wl). O plasm i~ dio intermediária, p MON 13180, foi digerido com endonucleases de restríção Hindlll e Afllll, resultando em um fragmento vetor de 4023 pares de ba20 ses, e purificada usando-se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega,
Madison. Wl). Os fragmentas de restrição purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). Uma porção da reação de ligação foi usada, para transformar células de E. colí linhagem DH5o (life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias 25 transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicilina.. DNA de plasmídio foi isolado e seqüenaíado para confirmar a correta inserção. O plasmídio resultante foi designado ρ MON13182.
E. coli linhagem 101 foi transformada com ρ MON13182 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão,
O plasmídio.p MON13182. contém a sequência de DNA de (SEQ ID NO: 94) que codifica a seguinte sequência de amínoãcido:
165
Asu Cys Ser Xie Met Zle Asp Glu Hs Xl® tils His Leu Lys Axg
Pre» Pro AX a Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu asm Asp Glu Asp
Vai Ser lie Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu
Ser Phe Vai Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly Zle
Glu Ala Xie Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr
Ala Ax* pro Set Arg Hrs Pre Xie xxe Xie Lys Aza Gly Asp Trp
Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu
Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
Gly Gly Gly s®r Gly Gly Gly Ser Asn Met Ala Tyr Lys Leu Cys
His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly His Ser Leu Gly lie Pro
Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala
Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly
Leu Leu. Gin Ala Leu Glu Gly Xie Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr
Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr xle
Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro
Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ax a Phe Gin Arg Arg
A*a wiy Gxy Val Leu Val Ala Ser ills Leu Gin Ser Phe Leu Glu
Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Gly Gly
Ser Gly Gly Ser Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin val
Aruys 1.1® Gin wly Asp Gly Ala Axe Leu Gxn Glu Lys Leu Cys
Ala Thr {SEQ ID NO:166.)
ΕοπιρΙρ.,Μ
Construção p MON 13183 novo gene término-N/término-C em ρ MON13183 foi criado usando-se α Método I camo descrito em Materiais e Métodos, Fragmento Iniciadar foi criado e amplificado de sequência G-CSF Ser1'’ em p MON13037 usando-se o conjunto primer, 39 iniciador (SEQ ID NO:64) e L11 iniciador (SEQ ID NO:60) Fragmenta Terminador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Ser1' em ρ MON13037 usando-se o conjunto primer, 38 terminador SEQ ID NO65) e 1.-11 terminador (SEQ ID N0:61). 0 novo gene G-CSF SerÍZ térmíno-N/término-C de inteiro comprimento foi criado e amplificado dos Início e fim de fragmentos anelados usando-se 39 imeiador e 38 terminador
O resultante fragmento de AND que contém o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindlll e purificado usandose um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). O plasmídio intermediário, ρ MON13181, foi digerido com endonucleases de restrição Hindlll e Aflül, resultando em um fragmento vetor de 4068 pares de bases, e purificado usando-se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligadas usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN).
166
Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células de E, colí linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD), Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contenda ampícüina, DNA as plasmidio foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção O 5 plasmídío resultante foi designado p MON 13183,
E, coli linhagem JM1D1 foi transformado com ρ MON13183 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão,
Q plasmidio., p MON 13183, contém a sequência de DNA de (SEQ ID NO: 95) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
Asr. Cys Ser lie Her lie Asp Glu lie lie His His Leu Lys Arg
Pro Al® Pro Leu Leu ASp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp
val Ser 11® Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu
Ser Phe Val Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly lie
Glu Aiâ lie Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr
Ala Ala Pro Ser Arg His Pro lie Tie Tie Lys Ala Gly Asp Trp
Gin Glu Phe. Arg Glu Lys Leu Thr Phe Leu Val Thr Leu Glu
G Ala Gin Glu Gin Gin Tyr val Glu Giy Gly Gly Gly Ser Pro
Gly Glu Pro Ser Gly Pre lie Ser Thr Xie Asn Pro Ser Pro Pro
Lys Glu Ser His Lys Ser Pro Asn Met Ala Tyr Lys Leu cys
Hxs Pro G Jax Glu Leu Vai Leu Leu Gly His Ser Leu Giy Tie Pro
Trr; Ala Pro Leu Ser Ser cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala
Giy cys Leu Ser Gin Leu HiS Ser Gly Leu Phe Leu Gin Giy
Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly lie Ser Pro Glu Leu Giy Pro Thr
Asp Thr Leu : Lev Asp val Ala Asp Phe Ai a Thr Thr Xie
Trp Gfo Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala PmTQ Ala Leu Gin
·*£* •H·’·*· Glr Gly A_>. a Met ?TO Ala Pne Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg
Giy Gly Val Leu val Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Leu Glu
VãI Ser Tvi Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Gly Gly
Ser \&ly Gly Ser Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin Val
Ax'S Lys Xis Gin Gly Asp Giy Ala Ala Leu Gin Glu Lys Leu cys
Ala Thr (STQ XO NO:157)
Exemplo 55
Construção de p MON 13184
O novo gene térmíno-N/térmíno-C em ρ MON13184 foi criado usando-se Método I como descrito em Materiais e Métodos. Fragmento Iniciador foi criado e amplificado de sequência O-CSF Ser1? em ρ MON13037 15 usando-se o conjunto primer, 97 iniciador (SEQ ID NO:66) e L-11 íniciador (SEQ ID NO, 60). Fragmento Terminador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Serv em p MON 13037 usando-se o conjunto primer, 96 terminador (SEQ ID NO;67) a L-11 terminador (SEQ ID NO:61). O novo gene G-CSF Serv término-N/término-C de inteiro comprimento foi criado e amplificado de Início e fim de fragmentos anelados usando-se 97 iniciador e farminador.
O resultante fragmento de DNA que contém o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Ncol a HlndiH e purificado usando5 se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega. Madison, Wl). O piasmidic mtermedíáfio, ρ MON13180, foi digerido com endonucleases de restrição Hindlll e Afllll. resultando em um fragmento vetor de 4Q23 pares de bases, e purificado usando-se um Magic Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e liga10 dos usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN).
Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células E, coli linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformamos foram selecionadas sobre placas contendo ampieilina. DNA de plasmidio foi isolado e seqüenciado para confirmar correta inserção O 5 plasmidio resultante foi designado ρ MON13184.
E. coíi linhagem JM101 foi transformada com ρ MON13184 para expressão de proteína s isolamento de proteína de corpos de inclusão,
Q piasnfidio, ρ MON13184, contém a sequência de DNA de (SEQ ID NO:96) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
Asn cys Ser He Met Xie Asp Pro Pro Ma Pro Leu Leu Asp Par Ser Lie Leu Met Asp Arg Ser Phe vai Arg Ala vai Lys Giu Aia 11« Leu Arg Asn Leu Aia Ala Pro Ser Arg His Pro Cia Glu Phe Arg Glu Lys Leu Gin Ala Gin Glu Gin Glr, Tyr Gly Gly Gly Ser Giy Gly Gly Pro Thr Luu Asp Thr Leu Gin Tfo· He Trp Glr. Glr: Mera Glu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Arg Arg Ala Gly Gly Vai Leu Leu Giu vai Ser Tyr Arg vai Giy Gly Ser Gly Gly Ser Gin Gin Vai Arg Lys Xie Gin Giy Leu -Cys Ale Thr Tyr Lys Leu Leu Gly Mis Ser Leu Gly Xie Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin He Ser ISEQ IP NO:1681
Glu He lie His His Leu Lys Αχ-g Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ass Leu Glu Asn Aia Sex Gly Xie Gin Pre Cys Leu Pro Ser Aia Thr lie Ils Xie Lys Ala Gly Asp Trp Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu Vai Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ser Asn Met Ala Pro Glu Leu Gly Leu Asp Vai Aia Asp Phe Ala Thr Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Vai Ala Ser Mis Leu Gin Ser Phe Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Ser phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Asp Gly Ala Ala Leu Giri Glu Lys Cys His Pre Glu Glu Leu vai Leu Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Giy
Exemplo 56
Construção de p M0N13185
O novo gene térmíno-N/término-C em p MON13185 foi criado usando-se Método I como descrito em Materiais e Métodos. Fragmento lni~ ciador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Ser1' em p MON13D37 5 usando-se o conjunto primer. 97 iniciador (SEQ ID NO: 66 ) e L-11 iniciador (SEQ ID NO: 60). Framento Terrninador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Ser1’ em p MON13037 usando-se o conjunto primer, 96 terminador (SEQ ID NO: 67) e L-11 terrninador (SEQ ID NO: 61). O novo gene GCSF Ser,? término-N/têrmino-C de inteiro comprimento foi criado e amplífi10 cada a partir de Início e fim de fragmentos anelados usando-se 97 inícíador e 96 terrninador.
O fragmento de ADN resultante que contém o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindi!! e purificado usandose um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wí). O plasmi15 dio intermediário, p MON13181, foi digerido com endonucleases de restrição Híndlll e AM III, resultando em um fragmento vetor de 4068 pares de bases, e purificada usando-se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligadas usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN).
Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células E. coli linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicüina. DNA de plasm ídio foi isolado e sequenciado para confirmar a correta inserção. O plasmidío resultante foi designado p MON13185.
E. coli linhagem JM101 foi transformada com p MON13185 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
□ plasmídio, ρ MON13185, contém a sequência de DNA de (SEQ ID NO: 67) que codifica a seguinte sequência de amínoácidos
169
He Asp Glu Leu Asp Pro Asp Arg Asn Val Lys Asn Asn Leu Gin His Pro He Lys Leu Thr Gin Tyr Val Pro He Ser Lys Sex* Pro Leu Gin Leu
Ase Cys Ser Xie Met Pre Pro Al Pro Leu Val Ser Xie Leu Met. Ser Phe val Arg Ala Glu Ale 11« Leu Arg Ale Ala Pro Sex* Arg Gin Glu Phe Arg Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gly Glu Pro Ser Gly Ser Lys Glu Ser His Pro Thr Leu Asp Thr
Thr Xie Trp Gin Gin Meo Glu Glu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Gly sly Ser Gly Gly Ser Gin Ser Gin Val Arg Lys lie Gin Gly Asp Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys Leu Gly His Ser Leu Gly He Pro Pro Ser Gin Ala Leu Gin.Leu Ala Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly He Ser iSEQ XL HO;1691
Xie Xie His His Leu Lys Arg Asn Asn Leu Αδη Asp Glu Asp Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr lie Xie Lys Ala Gly Asp Trp phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Thr He Ann Pro Ser Pro Pro Asn Met Ala Pro Glu Leu Gly Asp val Ala Asp Fhe Ala Th.r
Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Phe Leu Leu Lys Sex' Leu Glu Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Trp Ala Fro Leu Ser Ser Cys Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Leu Leu Gin Ala. Leu Glu Gly
Exempla 57
Construção de p MON 13186
O novo gene término-N/término-C em p MON13186 fol criado usando-se Método I como descrita em Materiais e Métodos. Fragmento Ini5 ciador foi criado e amplificado do sequência G-CSF Ser:' em p MON 13037 usando-se o conjunto primar, 126 iniciador (SEQ ID NO: 68) e L-11 iniciador (SEO ID NO: 60). Fragmento termínador foi criado s amplificado de sequência G-CSF Ser7 em p MON13037 usando-se α conjunto primar, 125 terminador (SEQ ID NO: 69) e L-11 termínador (SEQ ID NO: 61), O novo gene G10 CSF Ser” término-N/término-C foi criado e amplificado de Inicio e fim de fragmentos andados usando-se 126 iniciador e 125 termínador
G fragmento de DNA resultante que contém o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindlll e purificado usandose um Magic DNA Clean-up System kit (FTomega, Madison, Wl). O plasml· 15 dio intermediário, p MON13180, foi digerido com endonucleases de restrição Hindlll e AH III, resultando em um fragmento vetor de 4023 pares de bases, e purificado usando-se um Magic Ciean-up System kit (Promega, Madison, Wl), Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN).
170
Uma porção da reação do ligação foi usada para transformar células de E. coli hnhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampícilina. DNA de plasmídio foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção, O 5 piasmidio resultante foi designado p MON13186.
E. coli hnhagem JM101 foi transformada com p MON13186 para expressão da proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmidio, p MON13186, contêm a sequência de DNA de
SEQ ID NO.98 que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
Asn Cys Ser Ixs Met- Xue Asp Glu Xle Xle Mis His Leu Lys Arg
Pro Pro Ala Pre Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp
Val Ser lie Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu
Ser Pne Var Arg Ala val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He
Glu Ala tie Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Ttur
Als Ala Pro Ser Arg His Pro lie He He Lys Ala Gly Asp Trp
Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu
Gin Ale Glu Glu Gin Gin Tyr Val Glu Gly Gly Gly Gly ser Pro
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Mat Ala Met Ala Pro Ala
Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Al® Ser Ale Phe
Gin Arg Arg Ala Giy Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu GlrS»r
Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala GinPro
Ser Gly Gly ser Giy Gly Ser Gin Ser Phe Leu Leu LysSer
Giu Gin val. Arg Lys He Gin Gly Asp Gly Ala a.U Leí g£Íu uys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Giu LeuVal «eu Leu Gly Hrs Ser Leu Gly He Pro Trp Ala Pro Leu SerSe
Cys Pro Ser Gin Ma Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu
His ^er Gly ^eu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu
Gly He Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu
Asp Vai Ala Asp Phe Ala Thr Thr lie Trp Gin Gin Met Glu Glu
Leu Gly (S£Q XL NO:170)
Exemplo 58
Construção de p MON 13187 novo gene término-N/término-C em p MON13187 foi cnado usando-se o Método I como descrito em Materiais e Métodos, Fragmento Iniciador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Ser!i em p 15 MON 13037 usando-se o conjunto primer, 126 iniciador (SEQ ID NO: 68) e L11 iniciador (SEQ ID NO: 60), Fragmento Terminador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Ser!' em p MON13037 usando-se o conjunto primer, 125 terminador (SEQ ID NO.69) e L-11 terminador (SEQ ID N0:61). 0 novo gene G-QSF Ser'? término-N/término-C foi criado e amplificado dos
171
Inicio e fim de fragmentos anelados usando-se 126 iniciador e 125 terminador.
O resultante fragmento de DNA que contêm o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Nco! e Hindlll e purificado usandose Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). O plasmídio intermediário, p MON13181, foi digerido com endonucleases de restrição Hindlll e Afllll, resultando em um fragmento vetor de 4068 pares de bases, e purificado usando-se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células de E. ooli linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicihna. DNA de plasmídio foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção. O plasmídio resultante foi designado p MON13187.
E. coli linhagem JM101 foi transformada oom p MON13187 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, p MON13187, contém a sequência de DNA de (SEQ ID NO: 99) que codifica a seguinte sequência de amínoácídos:
Asn cys Ser T'i λ riw Mk· iL Mee lie Asp Glu He He His His Leu Lys Arg
Pim Pro Ala Pro Leu Leu ASp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp
Vai Ser lie Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn La .Ji Gru
Sbt Phe Vai Arg Ala Vai Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly Tie
Glu Ala lie Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr
Ara Ala Pro Ser Arg His Pro Xie He He Lys Ala Gly ASP Trp
Gin Glu Phe Arp Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu
Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Vai Gxu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
Cxy Glu Pro Ser Gly Pro lie Ser Thr He Asn Pro Ser Pro Pro
Ser Lys Ser Hie Lys Ser Pro Asn Met Ala Men Ala Pro
Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met. Pro Ara Phe Ala Ser Ala Phe
Gin Arg Arg Ala Gly Gly val Leu Vai Ala Ser His jL&U Gin Ser
Phe Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His Leu Ala Gin Pro
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Qin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu
Glu Glr Vai Arg Lys lie Gin Gly Asp Gly Ala Ara Leu Gin Glu
Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys HXS Pro Glu Gru Leu Vai
Leu Leu Gly His Ser Leu Gly He Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser
Cys Pre Ser Gin Ala Leu •Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu
Hi 5 Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin. Ala Leu Glu
Gly Xle. Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu ASp Thr Leu Gin Leu
Asp vai Ara ASp Phe Ala Thr Thr lie Trp Gin Gin Met Glu Glu
Leu Gly (sec x 0 NO v 1 )
Exemplo 59
Contração dep MON13188
O novo gene térmíno-N/término-C em p MON13188 foi criado usando-se o Método I como descrito em Materiais e Métodos. Fragmento 5 Iniciador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Ser1? em p MON 13037 usando-se o conjunto primer, 133 iniciador (SEQ ID NO:70) e L11 iniciador (SEQ ID NO: 60). Fragmento Terminador foi criada e amplificado de sequência G-CSF Serv em p MON13037 usando-se o conjunto primer, 132 terminador (SEQ ID NO71) e L-11 terminador (SEQ ID NO: 61). O 10 novo gene G--CSF Ser1' térmíno-N/término C de inteiro comprimento foi criado e amplificado dos Início e fim de fragmentos anelados usando-se 133 iniciador e 132 terminador,
O fragmento de ADN resultante que contém o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindlll e purificados usando15 se um Magic Clean-up System kit (Protnega, Madison, Wl). O plasmídio intermedíáõo, p MON13180V foi digerido com endonucleases de restrição Hindlll e Af1 III. resultando em um fragmento vetor de 4023 pares de bases, e purificado usando-se um Magic Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligados 20 usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células de E. coh linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transfermantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicilina. DNA de plasmídio foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção. O 25 plasmídio resultante foi designado p MON13188.
E, coíi linhagem JM101 foi transformada com p MON 13188 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, p MON13188, contém a sequência de DNA de (SEQ ID NO. 100) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
Asn Cys Ser xie Het He Asp Glu
Pre Pro Ala Pre Leu Leu Asp Pro
Val Ser Tie Leu Met Asp Arg Asn
Ser Phe Val Arg Ale val Lys Asn
Glu Asa He Leu Arg Asn Leu Gin
Ala Ala Pro Ser Arg His Pro-He
Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr
Gin Ala Gin Glu Gin Gin val
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe
Leu val Ala Ser His Leu Gin Ser
Val Leu Arg .His Leu Ala Gin Pro
Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu
Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu
Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val lie Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser
Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu
Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu
Pro TAr 1.612 Asp Thr Leu Gin Leu
Thr lie Trp Gin Gin Met Glu Glu
Gin Pro ÍSHQ IP NQ:172)
Exemplo 60
Construção de ρ MON13189
O novo gens término-N/tén
^.í$ His Hrs Leu Lys Arc, Asn Asn Leu Asp Asp Glu Asp x^eu Arg Leu Pro Asn Leu Glu o^eu Glu Asn Ala Ser Glv He Pro Cyâ Leu Pro Ser Ala Thr He He Lys Ala Gly Asp Trp. Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu ulu Gly Gly Gly Glv Ser Pro Asn Met Ala Thr Gin Gly Ala Gin Arg Arg Ala Gly Gly val Phe osu Gru Val Ser Tyr Arc Ser Gly Gly Ser Gly G^y SeÇ Glu Gin Val Arg Lys He Gin Lys Leu Cys Ala Thr TVr Lvs Leu Leu Gly His Ser Leu Gly Cys Pro Ser Cm Ala Leu Gin
H.Á.S Ser Gly ueu Pne Leu Tyr Gly He Ser Pro Glu Leu Glv Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu lino-C em ρ MON13189 foi chado usando-se Método I como descrito em Materiais e Processos. Fragmento
Iniciador foi criado e amplificada de sequência G-CSF Ser!i em p
MON13037 usando-se o conjunto primer, 133 iniciador (SEQ ID NO: 70) e L11 Iniciador (SEQ ID NG: 60). Fragmento Terminador fui criado e amplificado de sequência G-CSF Ser'7 em ρ MON13037 usando-se o conjunto primer, 132 terminador (SEQ ID N0.71) e L-11 terminador (SEQ ID N0:61), 0 novo gene G-CSF Ser’7 término-N/término-C de inteiro comprimento fol criado e amplificado dos Inicio e fim de fragmentos anelados usandc-se 133 iniciador e 132 terminador.
O fragmento de ADN resultante que contém o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Híndlll e purificado usando15 se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). 0 plasmsdie intermediário, p MON 13181, foi digerido com endonucleases de restrição Hindlll e AfUIL resultando em um fragmento vetor de 4068 pares de bases, e purificado usando-se um Magic DNA Cleaning-up System kit (Promega, Madison, Wl). Os fragmentos de restrição purificadas foram 20 combinados e ligados usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Ιπ
174 dianapolis, IN).. Uma porção da reação de ligação fol usada para transformar células de E, coli linhagem DH6a (Life Technologies. Gaithersburg. MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas de ampicilina,
ADN de plasmidio foi isolado e seqüenoiado para confirmar a correta inser ção. O plasmidio resultante foi designado p MON13189.
E. coli linhagem JM101 foi transforamda com p MON13189 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inausao.
O plasmidio, p MON13189, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO: 101) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos;
Asn Cys Ser lie Met Pre Pro Ale Pro Leu Vai Ser lie Leu Met Ser Phe Vai Arg Ala Glu Ala He Leu Arg Ala Ala pro Ser .Arg Gin Glu Phe Arg Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gly Glu Pro Ser Gly
Ser Lys Glu Ser His Met Pre Ala phe Ala Leu Vat Ala Ser His Vai Leu Arg His Leu Gin Ser Phe Leu Leu Gly Asp Gly Ala Ala Leu Cys His Pro Glu He Pro Trp Ala Pro Leu Ala Gly Cys Leu Gin Gly Leu Leu Gin Pro Thr Leu Asp Thr Thr He Trp Gin Gin Gin Pro (SPQ H> HO:
lie Asp Glu He He Leu Asp Pro Asn Asn Asp Arg Asn Leu Arg Vai Lys Asn Leu Glu Asn Leu Gin Pro Cys His Pro Tie He He Lys Leu Thr Phe Tyr Gin Tyr Vai Glu Gly Pro Xie Ser Thr He
-ys Ser pro Asn Met Ser Ala Phe Gin Arg Leu Gin Ser ?he Leu Ala Gin Pro Ser Gly Lys Ser Leu Glu Gin Leu Gin Glu Lys Leu Glu Leu Vai Leu Leu Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Leu His Ser Ala Leu Glu Gly He Leu Gin Leu Asp Vai Met Glu Glu Leu Gly
His His Leu Lys Arg Leu Asn Asp Glu Asp Leu Pro Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Leu Pro Ser Ala Thr Lys Ala Gly Asp Trp Leu Vai Thr Leu Glu Gly Gly Gly Ser Pro Asn Pro Ser Pro Pro
Ala Thr Gin Gly Ala Arg Ala Gly Gly Vai Glu Vax Ser Tyr Arg Gly Ser Gly Gly Ser Vai Arg Lys He Gin Cys Ala Thr Tyr Lys Gly His Ser Leu Gly Ser Gin Ala Leu Gin Gly Leu Phe Leu Tyr Ser Pro Glu Leu Gly Ala Asp Phe Ala Thr Met Ala Pro Ala Leu
Exemplo 61
Construção de p MON 13190
O novo gene término-N/término-C em p MON13190 foi chado usando~se Método I como descrito em Materiais e Métodos. Fragmento Iniciador foi criado e amplificado a partir de sequência G-CSF Serv em p 15 MON13037 usando-se o conjunto primer. 142 iniciador (SEQ ID NO:72) e L~ iniciador (SEQ IO NOiÔOj. Fragmento Terminadorfoi criado e amplificado de sequência G-CSF Seriz em p MON 13037 usando-se o conjunto primer.
141 terminador (SEQ ID NO: 73) e L-11 terminador (SEQ ID NO:61). O novo gene G-CSF Ser17 término-N/término-C de inteiro comprimento fol criado e
175 • 10 amplificado de Inicio e fim de fragmentos anelados usando-se 142 iniciador e 141 terminador
G fragmento de ADN resultante que contém o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindlll e purificado usandose um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl) O piasmidio intermediário, p MON 13180, foi digerido com endonucleases de restrição Hindlll e Af1 III, resultante em um fragmento vetor de 4023 pares de bases, e purificado usando-se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células E. coli DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicilina. ADN de plasmídio foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção D plasmídio resultante foi designado ρ MON13190.
E. coli linhagem JMW1 foi transformada com ρ MON13190 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, ρ MON13190, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO: 102) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
Asn cys Ser He Hex He Asp Pre Pro Ala Pro Leu Leu Asp Val Ser Ire Leu Met. Asp Arg Ser Phe Val Arg Ala Vai Lys C.iu Ala lie Leu Arg Asn Leu Ala Ala Pro ser Arg His Pro Gin Giu Phe Arg Giu Lys Leu Gin Ala Gin Giu Gin Gin Tyr Gly Gly Gly Ser Gly Giy Glv Arg Arg Ala Gly Giy Val Leu Lsu Giu Val Ser Tyr Arg Val Sly Gly Ser Gly Gly ser sin Gin val Arg Lys He Gin Gly Leu cys Ala Thr Tyr Lys Leu Leu Gly His Ser Leu Giy He Pro Ser Gm Ala Leu Gin Lev Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin He Ser Pro Giu Leu Gly Pro val Ala Asp phe Ala Thr· Thr Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Phs Ala (SEQ ID NO:174) olu He He His Has Leu Lvs Arg Pro Asn Asn Leu Asn Asp Giu Asp Asn Leu Arg Leu pro Asn Leu Giu Asn Leu Giu Asn Ala Ser Gly He Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr jkle He Tie Lys Ala Gly Asp T^n Thr Phe Tyr Leu val Thr Leu Giu Val Giu wily Gly Gly Gly Ser Pre ser Asn Met Ala ser Ala Phe Gin Val Ala Ser His Leu Gin Ser Phe *j>eu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Giu Asp Gly Ala Ala Leu Qin Giu Lvs Cys His Pro Giu G.lu Leu Val Leu Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu Hi« Gly Leu Leu Gin Ala Leu Giu SÍ Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Ire Trp Gin Gin Met Giu Giu Leu Pm Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala
176
Exemplo 62
Construção de p MON13191
O novo gene têrmino-N/término-C em p MON 13191 foi criado usando-se Método I como descrito em Materiais e Métodos. Fragmento Iniciador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Sei7 em p MON13037 usando o conjunto primer, 142 iniciador (SEQ IO NO: 720 e L-11 iniciador (SEQ ID NO: 60). Fragmento Termínador foi criado e amplificada de sequência G-CSF Ser'7 em p MON 13037 usando o conjunto primer, 141 terminador (SEQ ID NO:73) e L-11 terminador (SEQ ID NO:61). Q novo gene GCSF Sei7 íérmino-N/término-C de inteiro comprimento foi criado e amplificado dos Inicio e fim de fragmentos anelados usando-se 142 iniciador e 141 termínador,
O fragmento de ADN resultante que contém o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindill e purificada usandose um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). O plasmídio intermediário, p MON13181, foi digerido com endonucleases de restrição Hindill e Afllll, resultando em um fragmento vetor de 4068 pares de bases, e purificado usando~se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wí),. Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN), Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células de E. coll linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampoilina. ADN de plasmidio foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção. Q plasmídio resultante foi designado p MON13191.
E. ooli linhagem JM101 fui transformada corn p MON13191 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, p MON13191, contêm a sequência de ADN de (SEQ ID N0:103) que codifica a seguinte sequência de aminoáoidos:
177
Asn Cys Ser xle Nez He Asp Glu He lie His His leu Lys Arg
Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp
Vai Ser He Leu Meo Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu
Ser Phe Vai Arg Ala Vai Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He
Glu Ala He Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr
Ala Ala Pro Ser Arg His Pro He Xle He Lys Ala Gly Asp Trp
Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu
Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Vai Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
Gly Glu Pro Ser Gly pro xle Ser Thr He Asn Pro Ser Pro pro
Ser Lys Glu Ser Hus Lys Ser Pro Asn Met Ala ser Ala PheSir.
Arg Arg Ala Gly Gly Vai Leu Vai Ala Set* His Leu Gin SerPhe
Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His Leu Ala Gin ProSer
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser LeuGlu
Gin Vai Arg Lys He Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin GluLys
Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu cys His Pro Glu Glu Leu VaiLeu
Leu Gly His Ser Leu Gly He Pro Trp Ala Pro Leu Ser SerCvs
Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin LeuHis
Ser Sly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly
He Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Lev Asp Thr Leu Gin Leu Asp
Vai Ala Asp Phe Ala Thr Thr Xle Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu
Gly Het Ala Pro Ala Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala phe Ala (SEQ w NO:175)
Exemplo 63
Construção de p MON 13192 novo gene término-N/término-C em p MON 13192 foi criado usando-se Método II como descrito em Materiais e Métodos. Fragmento Ini5 ciadorfoi criado e amplificado de sequência G-CSF em p MON 13037 usando o conjunto primer, 39 iniciadcr (SEQ ID NO:64) e P~bl iniciador (SEQ ID
NO.S2). Fragmento Terminador foi criado e amplificado de sequência GCSF Ser1,T em p MON13037 usando o conjunto primer, 38 terminador (SEQ
ID NO:65) e P-bl terminador (SEQ ID NO:63). Fragmento Iniciador foi digeri10 do com endonuclease de restrição Ncol, e Fragmento Terminador foi digerido com endonuclease de restrição Hindllt Após purificação, os Início e firn de fragmentos digeridos foram combinados e ligados ao fragmento vetor Ncol-Hindllt de aproximadamente 3800 pares de bases de p M0N3934.
O piasmídio intermediário descrito acima conteve o novo gene
G-CSF SerÍZ término-N/término-C de inteiro comprimento e foi digerido oom endonucleases de restrição Ncol e Hindllt 0 ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE a 1%, manchado com brometo de etídio, e o novo gene GCSF Ser1' término-N/término-C de inteiro comprimento foi isolado usando-se
Geneclean (Bio101, Vista, CA). O plasmidio intermediário, p MON13180, foi
178 digerido com endonucleases de restrição Hindlll s Ag1 III, resultando em urn fragmento vetor de 4023 pares de Oases, e purificado usando~se urn Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl), Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DNA ligase 5 (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células de E. colí linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg. MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicílína. ADN de plasmidios foi isolado e seqüenciado para confirmar a. correta inserção do novo gene, O plasmidio resultante foi 10 designado ρ MON13192.
E. coii linhagem JM101 foi transformada com ρ MON13192 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, ρ MON13192, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO'. 104) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
13192, Pepc
Asn Cys Ser 11 e Met lie ASp Glu He He His His Leu Lys Arg
Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu
val He Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu
Ser Phe val Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly Tie
Glu Ala He Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr
Ala Ala Pro Ser Arg Bis Pro He He He Lys Ala Gly Asp *·*·
Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu val Thr Leu Glu
Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Met Ala Tyr Lys Leu Cys
Hxs Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly Hih Ser Leu Gly He
Trp Ala Pro Leu Ser ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala
Gly Cys Leu. Ser Gin Leu Hxs Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly
Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly Tie Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr
Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr He
Trp Gin Gln Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro
Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg
Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser HÍS Leu Gin Ser Phe Leu Glu
Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Thr Pro Leu
Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu
Glu Gin Val Arg Lys Xle Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu
Lys Leu Cys Ala Thr (SEl 2 TI> MO;17F)
Exemplo 64
Construção de ρ M0N13193
O novo gene término-N/término-C em ρ MON13193 foi criado usando-se o Método II como descrito em Materiais e Métodos. Fragmento Iniciador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Ser15 * 17 em p
179
MON 13037 usando-se o conjunto primer, 39 iniciador (SEQ ID NO:64) a Pb1 iniciador (SEQ ID NO:62).
Fragmento Terrninador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Ser1? em ρ MON13037 usando o conjunto primer. 38 terrninador (SEQ ID NO: 65) S e P-bl terrninador (SEQ ID N0:63). Fragmento Iniciador foi digerido com endonuclease de restrição Ncol, e Fragmento Terrninador foi digerido com endonuclease de restrição Hindlll.. Após purificação, os Inicio e fim de fragmentos digeridos foram combinados com e ligados ao fragmento vetor NcolHindlll de aproximadamente 3800 pares de bases de ρ MON3934.
IP O plasmídio intermediário descrito acima conteve o novo gene
G-CSF Ser'7 término-N/término-C de inteiro comprimento e foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindlll. O ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE 1%, manchado com brometo de etidio e o novo gene G-CSF Ser'7 término-N/térmíno-C foi isolado usando-se Geneclean (Bio101, Vista, 15 CA). O plasmídio intermediário, ρ MON13181, foi digendo com endonucleases de restrição Hindi!! e Af1 III, resultando em um fragmento vetor de 4068 pares de bases, e purificado usando-se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim. In20 dianapolis, IN). Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células de E. coli linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicilina. ADN de plasmídio foi isolado e sequenciado para confirmar a correta inserção do novo gene. O plasmídio resultante foi designado ρ MON13193.
E. coh linhagem JM101 foi transformada com ρ MON13193 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, ρ MON13193, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO: 105) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos.
180
Asr. Cys Sex He Met lie Asp Glu Pre Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Vai Ser Xie Leo Met Asp Arg Asm. Ser Fhe val Arg Ala Vai Lys Asm Glu Ala Ils Leu Arg Asn Leu Gin Ala Ala Pro Ser Arg His Pro lie Gin Gin Phe Arg Glu Lys Leu Thr Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Vai Gly Glu Pro Ser Gly Pro Xie Ser Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly Xie Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Vai Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Thr Gin Gly Ala Met. Pro Ala Phe Ala Gly Gly val Leu val Ala Ser Val ser Tyr Arg Val Leu Arg His Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Glu Gin Val Arg Lys Xie Gin Gly Lys Leu Gys Ala Thr ÍSEQ XL HO:1 lie He His His Leu Lys Arg Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Leu Arg Leu pro ash Leu Glu Leu Glu Asn Ala Ser Gly Xie Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Xie He Lys Ala Gly Asp Trp Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Thr He Asn Pro Ser pro Fro Asn Met Ala Tyr Lys Leu Cys Gly His Ser Leu Gly He Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Ala Asp Phe Ala Thr Thr He Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg His Leu Gin Ser Phe Leu Glu Leu Ala Gin Pro Thr Pro Leu .Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu 77}
Exemplo 65
Construção de p MON.25190
O novo gene tèrmino-N/término-C em p MON25190 criado usando-se Método II como descrito em Matarieis e Métodos. Fragmento Ini5 ciador foi criado e amplificado de sequência G-CSF’ em p MON13037 usando o conjunto primer, 97 iniciador (SEQ ID NO:66) e P-b1 iniciador (SEQ ID NO;62), Fragmento Terminador foi criado e amplificado de sequência GCSF Serí7 em p MON 13037 usando-se o conjunto primer, 96 terminador (SEQ ÍD NO:67) e P-b1 terminador (SEQ ID NO:63). Fragmento Iniciador foi digerido com endonuclease de restrição Ncol, e Fragmento Terminador foi digerido com endonuclease de restrição Hindlll. Após purificação, os Inicio e fim de fragmentos digeridos foram combinados com e ligados ao fragmento vetor Ncol-Hindlll de aproximadamente 3800 pares de bases de p
MON3S34.
O plasmídio intermediário descrito acima conteve o inteiro comprimento de novo gene G-CSF Ser!,? término-N/têrmino-C e foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindlll. O ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE a 1%, manchado com brometo de etídio e o novo gene GCSF Ser'7 térmiac-N/término-C de inteiro comprimento foi isolado usando-se 20 Geneclean (Bío10l Vista, CA). O plasmídio intermediário, p MON13180, foi digerido com endonucleases da restrição Hindi H e Aft Hi. resultando em urn fragmento vetor de 4023 pares de bases, e purificado usando-se urn Magic DNA Cfoan-up System kit (Promega. Madison, Wl). Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DNA hgase 5 (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). Ume porção da reação de ligação fci usada para transformar células de E. coii linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicilina. ADN de plasmídio foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção do novo gene. O plasmídio resultante foi 10 designado p MON25190.
E. coíi linhagem JM101 foi transformada com p MON25190 para expressão de proteína e isolamento de proteína da corpos de inclusão,
O plasmídio, p MON25190, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO: 106) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
ASO ero Cys Ser érc Ala Xie Men xie ASp Asp Glu He Xie Asn. Hrs Leu His ASA Leu Lys Arg Asp
Pro L^U Leu Pro Asn Asp Glu
% a 1 Ser lie leu Met Asp Arg As η Leu Arg Leu Pro Ass Leu
Ser Fhe vai Asg Ala vai Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly lie
Glu Ala Tie Leu Axg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Tbr
Al« Ala Pro Ser Arg His Pro lie lie Xie Lys Ala Gly Asp T3Tp
:||11 )Í1Í: Phe Ara Glu Lys Leu Thr The Tyr Leu Vai Thr Leu Giu
Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr val Glu Gly Gly Gly Qiy Ssr Pro
Ciy Gly Gly Ser Gly Gly Gly &er Ass Met Ala Pro Glu Leu Gly
erc Thr Leu ASp Thr Leu Gin Leu Asp Vai Ala Asp Phe Ala Thr
Λ Thr lie Txrp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu
Gin Pro Thr Gin GiY Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Aia Phe Gin
Are Αχ «J Ala Gly Ciy Vai Leu Vai Ala Ser His Leu Gin Ser Phe
deu Glu V&i Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His Leu Al. a Gin Pro Thr
Pro Leu oiy Pre Ala Ser Ser Leu Pro Gin Ser The Leu Leu Lys
Ser Leu Glu Gin Vai Arg Lys Xie Gin Gly Asp Giy Ala Ala Leu
Gin Glu Lys Leu Cys Ala Thr Ty~ Lys Leu Cys His Pro Glu Glu
Sen Va 1 Leu Leu Gly HiS Ser Leu Gly Xie Pro- Grp Ala Pro Leu
Sen Ser Qys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser
Gin Leu His Ser Gly Leu The Leu Tyr Gin Glu Leu Leu Glu Ala
LAU Glu Gly Ser {££$ XO NO :178)
Exempjo56
Construção de p MON25191
O novo gene iérmino-N/térmíno-C em p MON25191 foi criado usando-se Método II como descrito em Materiais e Métodos. Fragmento Iniciador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Ser'' em p MON 13037 20 usando-se o conjunto primer, 97 iniciador (SEQ ID NO:66) e P-bí iniciador
182 (SEQ ID NO:62). Fragmento Terminador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Ser1? em ρ MON13037 usando-se o conjunto primer 96 terminador (SEQ ID NO: 98) e P-b1 terminador (SEQ ID NO:63). Fragmento Iniciador foi digerido cam endonuclease de restrição Neo I, e Fragmento Terminador foi digerido com endonuclease de restrição Hindlll· Após purificação, os Início a fim de fragmentos digeridos foram combinados com e ligados ao fragmento vetor Ncol-HindllI de aproximadamente 3800 pares de bases de p MON3934.
O plasmídio intermediário descrito acima conteve o novo gene G-CSF Ser!? término-N/término-C de inteiro comprimento e foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindlll. O ADN digerido foi resolido sabre um gel TAE A 1%, manchada com brometo de etídio, e o novo gene GCSF Ser57 término-N/término-C de inteira comprimento foi isolado usando-se Geneclean (Bío'101, Vista, CA) O plasmídio intermediário, ρ MON13181, foi digerido com endonucleases de restrição Hindlll e Afllll, resultando em um fragmento vetor de 4068 pares de bases, e purificado usando-se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DNA ligase (Boehnnger Mannheim, Indianapolis, IN). Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células de E. coli linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD).Bactérias transformant.es foram selecionadas sobra placas contendo ampícílma. ADN de plasmídio foi isolado e seqüencíado para confirmar a correta inserção do novo gene. O plasmídio resultante foi designado ρ MON25131.
E. coli linhagem JM101 foi transformada com ρ MON25191 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, ρ MON25191, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO. 107) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
183
Asn cys Ser .Xle Met
Pro Pro Ala Pro Leu
Vai Ser Xle Leu Met
Ser Phe Vai Ar g Ala
Glu Ala Xle Leu Arg
Ala Ala Pro Ser Arg
Gin Glu Phe Arg Glu
Gin AÍã· Glu Gin
Gly Glu Pro Ser Gly
Ser Lys Glu Ser His
-fo Thr Leu Asp Thr
’T+isf X le * / -ib* Gin Gin
Gin Pro Gin Gly
Arg Arg Ala Gly Gly
Leu Glu vai Ser Tyr
Pro LSU Gly Pro Ala
Ser Leu Glu Gin vai
Glr. Gr u Lys Leu Cys
Leu Vai Leu Leu Gly
Ser Ser Cys Pro Ser
Γ3 VA Ui 44 Leu EiS Ser Gly
ulu Gly Xle Ser
lie Asp Glu lie Xie Leu Asp Pro Asn Asn Asp Arg Asn Leu Arg Vai Lys Asn Leu Glu Asn Leu Gin Pre Cys His Pro lie Xie Xie Lys Leu Thr Phe Tyr Gin Tyr Vai Glu Gly Pro Xie Ser Thr Xie Lys Ser Pro Asn Met Leu Gin Leu Asp Vai Met Glu Glu Leu Gly Ala Met Pro Ala Phe Vai Leu Vai Ala Ser Arg val Leu Arg His Ser Ser Leu Pro Gin Ara Lvs Xie Gin Gly
Ala Thr Tyr Lys Leu His Ser Leu Gly Xie Gin Ala Leu Gin Leu Leu Phe Leu Tyr Gin {SHQ XL NO:179)
His His Leu Lys Arg Lev Asn Asp Glu Asp Leu Pro Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Leu Pro Ser Ala Thr Lys Ala Gly Asp Trp Leu Vai Thr Leu Glu Gly Gly Gly Ser Pro Asn Pro Ser Pro Pro Ala Pro Glu Leu Gly Ala Asp Phe Ala Thr Met Ala Pro Ala Leu Ala Ser Ala Phe Gin His Leu Gin Ser Phe Leu Ala Gin Pro Thr Ser Phe Leu Leu Lys Asp Gly Ala Ala Leu
Cys His Pro Glu Glu Pro Trp Ala Pro Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gly Leu Leu Gin Ala
Exemplo 67
Construção de p MON 13194
O novo gene térmíno-N/têrmino-C am ρ MON13194 foi criado usando-se Método U como descrito em Materiais e Métodos. Fragmento Ini5 ciador foi criado e amplificado de seqüència G-CSF Ser1' em p MON 13037 usando-se o conjunto primer, 126 iniciador (SEQ ID NO:68) e P-b1 iniciador (SEQ ÍD N0:62). Fragmento Terrninador foi criado & amplificado de sequência G-CSF Ser17 em ρ MON13037 usando o sonjunto primer, 125 terrninador (SEQ ID NO.67) e P-b1 terrninador (SEQ ID NQ:63). Fragmento Iniciador foi 10 digerido com endonuclease de restrição Ncol, e Fragmento Terrninador foi digerido com endonuclease de restrição Hindlll. Após purificação, os Início e fim de fragmentos digeridos foram combinados com e ligados ao fragmento vetor Ncol-Hindlll de aproximadamente 3600 pares de bases de p MON3934.
O plasmídio intermediário descrito acima conteve o novo gene
G-CSF Ser17 término-N/término-C e foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindlll, 0 ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE A 1%, manchado com brometo de etídio e o novo gene G-CSF Ser” términoN/término-C de inteiro comprimento foi isolado usando-se Geneclean (ΒΐαίΟΙ. Vista, CA), O plasmídio intermediário, p MON1318Q, foi digerido com endonucleases de restrição Híndllí e Afilll, resultando em um fragmento vetor de 4023 pares de bases, e purificado usando-se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). Os fragmentos de restrição 5 purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DNA ligase {Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células da E. coii linhagem DH5«. (Life Technologies, Gaithersburg, MD), Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicilina. AQN de plasmídio foi isolado e sequeciado para 10 confirmar a correta inserção do nevo gene. O plasmídio resultante foi designado p M0N13194.
E. coli linhagem JM101 foi transformada com p ΜΟΝ13Ί94 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, p MON13194, contêm a sequência de ADN de (SEQ. ID NO: 108) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
ASO Cys Ser He Met Xle Asp Glu Ile Xle Ris rís Leu Lys Ara
Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asa Asp Glu Asp
1“' Ser lue Leu Met. Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pre· Asn Leu Glu
Ser Phe yal Arg Al® Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He
Giu Ala XI® Leu Arg Asn Leu Gin Pro cys Leu Fro Ser Al® s*hr
Aàs Ala Pro Set Arg His pro Xle Xle 11® Lys Al® Gly Asp Trp
Gin Glu. Ph® Arg Glu. Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu
G_n Ale Gin Glu Gin Gin Tyr Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
C-y Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Met. Ala Met All Pro Ale
Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ale Met Pro Ale Phe Al® Ser Al® Phe
G.ih Arg Arg Ale Gly Gly Val Leu Val Ala Ser Hi® Leu Gin Ser
Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro
Thr Pro Leu Gly Pre Ala Ser Ser Leu Pro Gin Ser Ph® Leu Leu
Lys Ser Leu Glu Gin Val Arg Lys Xle Gin Gly Asp Gly Ale Ala
Leu Gin Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His torn Gd’
Glu Leu v®l Leu Leu Gly His Ser Leu Gly II® Fro Trn Al® Pro
Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cvs Leu *er ueu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin A*a «®u Glu Gly rue Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr ueu Gun Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr Xle Tro Gin GlMet Glu Glu Leu Gly ÍSE0 ID HO:180)
Example 68
Construção de p M0N13195
O novo gano iérmino-N/término-C em p MQN13195 foi criado usando-se Método II como descrito em Materiais e Métodos Fragmento Ini2.0 ciadorfoi criado e amplificado de seqüència G -CSF Ser5í em p MON13937
185 usando o conjunto primer, 126 iniciador (SEQ ID NQ: 58) e P-bl iniciador (SEQ ID NO:62). Fragmento Terminador foi criado e amplificado de seqüênaa G-CSF Ser17 em p MON13037 usando o conjunto pnmer, 125 terminador (SEQ ID Nô:69) e P-b1 terminador (SEQ ID NO:63). Fragmento Iniciador foi 5 digerido com nedonuclease de restrição Ncol, e Fragmente Terminador foi digerido com endonuclease de restrição Hindlll. Após purificação, os Início e fim de fragmentos digeridos foram combinadas cam e ligados ao fragmento vetor Ncol-Hindlll de aproximadamente 3800 pares de base de p MQN3934.
O plasmídio intermediário descrito acima conteve o novo gene 10 G-CSF Ser'7 iérmino-N/térmíno-C de inteiro comprimento e foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindlll. O ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE A 1%, manchado com brometo de etidio e novo gene GCSF Ser·7 término-N/térmíno-C de inteira comprimento foi isolado usando-se Geneclean (BíolOI, Vista, CA), O plasmídio intermediário, p ΜΌΝ13181, foi 15 digerido com endonucleases de restrição Hindlll e Afllll, resultando em um fragmento vetor de 4068 pares de bases, e purificado usando-se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl), Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligadas usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). Uma porção da reação de ligação 20 foi usada para transformar células de E. colí linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contenda ampicílina. ADN de plasmídio foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção do novo gene. O plasmídio resultante foi designado p MON13195.
E. coli hnhagem JM101 foi transformada com p MON13195 para expressão de proteína e isolamento de proteína a partir de corpos da inclusão
O plasmídio. p MON13195, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO:. 109) que codifica a seguinte sequência de aminoácídos:
136
Asn Cys Ser He Met Xie Asp Glu Xie Tie His His Leu Lys Arg
Pro Pre Ale Pro L«u Leu Asp Pre Asa Asn Leu Asn Asp Glu Asp
Val Ser 11« Lsu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu
Ser Phe val Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He
Glu Ala He Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr
Ala Ala Pre Ser Arg His Pro He Xie He Lys Ala Gly Asp Trp
Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu
Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
Gly Glu Pro Ser Gly Pro He Ser Thr Xie Asn Pro Ser Pro Pro
Ser Lys Glu. Ser His Lys Ser Pro Asn Met Ala Met Ala Pro .Ala
Leu Qin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala phe Ala Ser Ala Phe
Gin Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gin Ser
Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro
Thr Pro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Ser Phe Leu Leu
Lys Ser Leu Glu Gin Val Arg Lys He Gin Gly Asp Gly Ala Ala
Leu Gin Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu
Glu Leu Val Leu Leu Gly His Ser Leu Gly He Pro Trp Ala Pro
Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu
Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin
Ala Leu Glu Gly Xie Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr
Leu Gin Leu Asn Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr He Trp Gin Gin
Met Glu Glu Leu Gly I SEQ IO NOx181)
Exemplo 60
Construção de p MON 13196 novo gene término-N/término-C am p MON 13196 foi criado usando-se Método li como deserdo em Materiais e Métodos. Fragmento Iniciador foi criado e amplificado de sequência G-CSF em p MON13037 usando o conjunto primer. 133 iniciador (SEQ ID NO:7Q) e P-bl iniciador (SEO. ID NO:62). Fragmento Termínador foi enado e amplificado de sequência GCSF Ser'? em p MON13037 usando o conjunto primer, 132 termínador (SEQ ID NO:71) e P-b1 termínador (SEQ ID NO:63). Fragmento iniciador foi digerido com endonuclease de restrição Ncol, e Fragmento Termínador foi digerido com endonuclease de restrição Hindlll. Após purificação, os Início e fim de fragmentos digeridos foram combinados com e ligados ao fragmento vetor Ncol-Hindlil de aproximadamente 3800 pares de bases de p MON3934.
O plasmídio intermediário descrito acima conteve o novo gene G-CSF Ser17 térmmo-N/térmíno-C de inteiro comprimento e foi digerido com endonucíeases de restrição Ncol e Hindlll, 0 ADN digerido foi resolvida sobre um gel TAE A 1%, manchado com brometo de etídio e o novo gene GCSF Serv término-N/término-C de inteiro comprimento foi isolado usando-se Genedean (Bio101, Vista, CA). 0 plasmídio intermediário, p MON13180, foi digerido com endonucíeases de restrição Hindlll e Af1 III, resultando em um fragmento vetor de 4023 pares de bases, e purificado usando um Magic DNA Clean-up System kit (Prornega Madison, Wl). Os fragmentos do restrição purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DMA ligase (Boehnngar Mannheim, Indianapolis, IN).. Uma porção da reação de ligação 5 fos usada para transformar células E. coll linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transfcrmantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicilina. ADN de plasmidio foi isolado e seqüencíado para confirmar a correta inserção do novo gene. O plasmidio resultante foi designado p MON13196.
E coil linhagem JM101 foi transformada com p MON13196 para expressão de proteína a isolamento da proteína de corpos de inclusão.
O plasmidio, p MON13195, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO: 110) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos·.
Asn Cys Ser Xle Met. Âle Asp Glu Xl» Xle His His Leu Lys Are
Pro Pre Ale Pre Leu Leu Asp Pre Asn Asn Leu Ask Asp Glu Asp
Vai Ser xle Leu Mee Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asm Leu Glu
Ser Phe Vai Arg Ala Vai Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly Xle
Glu Ala. Xle Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr
Ala Ala Pro Ser Arg Hxs Pro He He He Lys Ala Gly Asp Trp
Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu V&l Thr Leu Glu
Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Vai Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
Gly Glu Pro Ser Gly Pres He Ser Thr Xle Asn Pro Ser Pro Pro
Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro Asn Mec Ala Met >Ala Pre Ale
Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pre Ala Phe Ala Ser Ala Phe
Glu Arg Arg Ala Gly Gly Vai Leu Vai Ala Ser His Leu Gin ser
Phe Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His Leu Ala Gin Pro
Thr Pro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gin. Ser Phe Leu Leu
Lys Ser Leu Glu Gin Vai Arg Lys He Gin Gly Asp Gly Ala Ala
Leu Gin Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys Hrs Pro Glu
Glu Leu Vai Leu Leu Gly His Her Leu Gly He Pro Trp Ala Pro
Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu
Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin
Ala Leu Glu Gly He Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr
Leu Gin Leu. As». Vai Ala Asp Phe Ala Thr Thr Xle Trp Gin Gin
Het Glu Glu Leu Gly (SSQ ZD ML 181J
Exbmolq 70
C on strução depMON13197
O novo gons término-N/término-C em p MON13197 foi criado usando-se Método II como descrito em Materials e Métodos. Fragmento iniciador foi criado e amphficado de sequência G-CSF Ser:: em p MON13Q37 usando-se o conjunto primer, 133 iniciador (SEQ 10 NO:70) e P-b1 iniciador 20 (SEQ ID NO:62). Fragmento Terminador foi criado e amplificado de seqüèn
188 cia G-CSF Serí? em ρ MON13037 usando o conjunto primer. 132 terminador (SEQ ID N0:71 ) e P-b1 terminador (SEQ IO NO?63). Fragmento Iniciador foi digerido com endonulceases de restrição Ncol e Fragmento Terminador foi digerido com endínuclease de restrição Hindlll.Após purificação, os Inicio e 5 fim de fragmentos digeridos foram combinados com e ligados ao fragmento vetor Ncol-Híndlll de aproximadamente 3800 pares de bases de p
MON3934.
O plasmídio intermediário descrito acima conteve o novo gene G-CSF Ser17 término-N/término C de inteiro comprimento e foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindlll. O ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE A 1%, manchado com brometo de etídio e o novo gene GCSF Ser'7 término-N/térmíno-C de inteiro comprimento foi isolado usando-se Geneclean (Bio101, Vista. CA). O plasmídio intermediário, ρ MON13181, foi digerido com endonucleases de restrição Hindlll e AfUII, resultando em um fragmento vetor de 4068 pares de bases, e purificado usando-se um Magic DNA Clean-up System kit (Promega, Madison, Wl). Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células de E. coli linhagem DHfxx (Life Technolo20 gíes, Gaithersburg, MD). Bactérias transformamos foram selecionadas sobre placas contendo ampicilina. ADN de plasmídio foi isolado e seqüenctado para confirmar a correção inserção do novo gene. O plasmídio resultante foi designado p MON 13197.
E. coli linhagem JM101 foi transformada com ρ MON13197 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio. ρ M0N13197, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO:111) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
189
Asn Cys Ser lie Met He Asp Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Val Ser lie Leu Met Asp Arg Ser Phe Val Arg Ala Val Lys Glu Ala He Leu Arg Asn Leu Ala Ala Pro Ser Arg His Pro Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly His Pro Glu Glu Leu Val Leu Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Leu Leu Gin Ala Lev Glu Gly Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Glu Gin Val Arg Lys lie Gin Lys Leu Cys Ala Thr (SEQ ID
Glu He He His His Leu Lys Arg
Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp
Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu
Asn Leu Giu Asn Ala Ser Gly He
Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr
He He Xie Lys Ala Gly Asp Trp
Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Giu
Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
Ser Asn Met Ala Tyr Lys LeuCys
Leu Gly His Ser Leu Gly HePro
Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leua
Ser Gly Leu Phe Leu Tyr GinGly
Xie Ser Pro Glu Leu Gly proThr
Val Ala Asp Phe Ala Thr ThrXie
Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro
Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg
Ser His Leu Gin Ser Phe Leu Giu
His Leu Aia Gin Pro Thr Pro Leu
Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu
Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu
NO:1S3)
Exemplo 71
Construção de p MON 13198
O novo gene término-N/térmíno-C em ρ MON13198 foi criado usando-se Método II como descrito em Materiais e Métodos, Fragmento Iniciador foi criado e amplificado de sequência G-CSF em p MON 13037 usando-se o conjunto primer. 142 iniciador (SEQ ID NO:72) e P~b1 iniciador (SEQ 10 NO:62). Fragmento Terminador foi criado e amplificado de sequência G-CSF SeP7 em ρ MON13037 usando o conjunto primer, 141 terminador (SEQ ID NO:73) e P-b1 terminador (SEQ ID NO.63). Fragmento iniciador foi digerido com endonuclease de restrição Ncol, e Fragmento Terminador foi digerido com endonuclease de restrição Híndlll. Após purificação, os Inicio e fim de fragmentos digeridos foram combinados com e ligados ao fragmento vetor Ncol-Hindlll de aproximadamente 3800 pares de bases de p MQN3934.
O plasmidio intermediário descrito acima conteve o novo gene G-CSF Ser57 térmíno-N/término-C de inteiro comprimento e foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Híndlll. O ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE A 1%, manchado com brometo de etídío e o novo gene GCSF Ser17 término-N/término-C de inteiro comprimento foi isolado usando-se Geneclean (δίο101, Vista, CA), O plasmidio intermediário, ρ MON13180, foi digerido com endonuoteases de restrição Hindíll e Af1 III, resultando em um fragmento vetor de 4023 pares de bases, e purificado usando-se um Magic ONA Clean-up System kit (Promega. Madison. VVI). Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligados usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). Urna porção da reação de ligação foi usada para transformar células de E. coli linhagem DH5». (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampícihna. ADN de plasmidio foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção do novo gene, O plasmidio resultante foi designado p MON 13198.
E, coli linhagem JM101 foi transformada com p MON13198 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmidio, p MON13198, contém a sequência de ADN de (SE.Q ID NO: 112) que codifica a seguinte sequência de aminoacidos:
Asn Cys Ser lie Met lie Asp Glu He He Hls Bis Leu Lvs Arg
Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp
Vai Ser He Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Giti
Ser Pne Va.·. Arg Ala Vai Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He
Glu Ala Xie Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr
Ala Ala Pro Ser Arg His Pro He He lie Lys Ala Gly Asp Trp
Gin Glu Ph* Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu
Gift ΑΛ& Gin. Glu Gin Gin Tyr Va.1 Glu Gly Gly Gly Gly S&r ?ro
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Met Ala Ser Ala Phe Gin
Arg Arg Axa Gly Gly val Leu Vai Ala Ser His Leu Gin Ser Phe
Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His Leu Ala Gin .Pro Thr
Pro Leu Gj.y Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Sex’ Phe Leu Leo Lys
Ser Leu Glu Gin Vai Arg Lys Xie Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu
Gin Hu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu
Leu Vai Leu Leu Gly Hrs Ser Leu Gly He pro Trp Ala Pro Leu
Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser
Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala
Leu Glu Gly lie Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu
Gin Leu Asp Vai Ala Asp Phe Ala Thr Thr He Trp Gin Gin Met
Gm Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala
Met Pro Ala Phe Ala iSEQ XL NO:184)
Exemplo 72
Construção do p MON 13199
O novo gone termino-N/têrmino-C em p MON 13199 foi criado usando-se Método It como descrito em Materials e Métodos. Fragmento Iniciador foi criado e amplificado de sequência G-CSF Ser57 em p MON 13037 osando-se o conjunto primer, 14.2 iniciador (SEQ ID NO.72) e P-bl iniciador
191 (SEQ ID NO.62). Fragmento Terminadorfoi criada e ampiíficado de sequência G-CSF Servem ρ MON13037 usando-se o conjunto primer, 141 terminadar (SEQ ID NO:73) e P-b1 terminador (SEQ ID NO:63). Fragmento Iniciadar foi digerida cem endonuclease de restrição Ncol. e fragmenta Termina5 dor foi digerido com endonuclease de restrição Hindlil Após purificação, os
Início e fim de fragmentos digeridos foram combinados com e ligados ao fragmento vetor Ncol-Hindlli de aproximadamente 3800 pares de bases de p MON3934.
O plasmídio intermediário descrito acima conteve o novo gene 10 G-CSF Serv término-N/término-C de inteiro comprimento e foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e Hindlil. O ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE A 1%, manchado com bromete de etídio e o novo gene GCSF Ser17 término-N/término-C de inteiro comprimento foi isolado usando-se Geneclean (Bla101, Vista, CA). O plasmídio intermediário, ρ M0N13181, foi 15 digerido com endonucleases de restrição Hindlil e Afllll, resultando em um fragmento vetor de 4068 pares de bases, e purificado usando-se um Magic DNA Clean-up System kit (promega, Madison, Wl). Os fragmentos de restrição purificados foram combinados e ligadas usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim.. Indianapolis, IN). Uma porção da reação de ligação 20 fol usada para transformar células E. coli linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformardes foram selecionadas sobre placas contendo ampicilina. ADN de plasmídio foi isolada e seqüenciado para confirmar a carreta inserção do novo gene. O plasmídio resultante foi designado ρ MON13199
E. coli hnhaagem JM101 foi transformada com ρ MON13199 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, ρ MON13199, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO: 113) que codifica a seguinte sequência de amínoácidos:
192
Asn Cys Ser lie Met He Asp Glu He He His His Leu Lys Arg ?ro Pro Ale Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp
Vai Ser He Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu pro Asn Leu Glu
Ser Phe Vai Arg Ale Vai Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He
Glu Ala He Leu Arg Asn Leu Gin pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr
Ala Ala Pro Ser Arg His Pro He lie He Lys Ala Gly Asp Trp
Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu
Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Vai Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
Gly Glu Pro Ser Gly Pro He Ser Thr He Asn Pro Ser Pro Pre
Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro Asn Met Aia Ser Ala phe Gin
Arg Arg Aia Gly Gly Vai Leu Vai Ala Ser His Leu Gin Ser Phe
Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Thr
Pro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Ser Phe Leu Leu Lys
Ser Leu Gxu Gia Vaz Arg Lys me Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu
Gin Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu
Leu Vai Leu Leu Gly His Ser Leu Gly He Pro Trp Ala Pro Leu
Ser Ser- Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Glv Cvs Leu Se^
Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Giy Leu Leu Gin Ala
Leu Glu Gly He Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu
Gm Leu Agf Vai Ala Asp Phe Ala Thr Thr He Trp Gin Gin Met
Gm Glu Leu Gly Het Ala Pro Ala Leu Gin Pro Thr Gin Glv Ala
Met Pro Ala Phe Ala (SEQ ID HQ:185)
Exemplo 73
Construção de molde plasmídio duplicado em tandem, Syntanl
Para criar o molde de ρ MON13416 agonista de receptor hlL-3 duplicado em tandem, Syntanl, três DNAs foram ligados por meio de liga5 ção usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim). Os três DNAs são: 1) ρ MON13046, contendo ρ MON13416 agonista de receptor hlt-3, digerido com BstEII e SnaBI; 2) o par complementar ansiado de oligonucleotídios sintéticos, Llsyn.for (SEQ ID NO:48) e Llsyn.rev (SEQ ÍD NO:49), que contém sequência codificando o ligador que conecta as extremidades térmi10 no-C e térmíno-N da proteína original e uma pequena quantidade de sequência ρ MON13416 circundante e que quando propriamente montados resultam em extremidades BstEII e Ciai; e 3) uma porção de p MON13416 agonists de receptor hlL-3 digerido de ρ MON13046 com Ciai (ADN foi desenolvido em células dam, DM1 (Life Technologies)) e SnaBI. Os DNAs dn geridos foram resolvidos sobre um gel TAE a 0,9%, manchado com brometo de etídio e isolado usando-se Geneclean (Bid01).
Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células de E. coli linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). DNA miníprep foi isolado das transformantes, e os transpformantes foram 20 selecionados usando-se um ensaio com base em PCR. ADN de plasmídio
193 de transformantes selecionados foi seqüenciado para obter-se o molde correio. O plasmídio resultante foi designado syntanl e contém a sequência d© ADN de (SEQ ID NO:84).
Exemplo 74
Construção de molde duplicado em tandem, syntan3
Para criar o molde de p MON13416 agonista de receptor hlL-3 duplicado em tandem, suntan30, três DNAs foram ligados por meio de ligação usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim). Os três DNAs são: 1) p MON13046, contendo p MON 13416 agonista de receptor hlL-3. digerido 10 com BstEil e SnaBI: 2) o par complementar aneíado de oíigonucleotldíos sintéticos.. L3syn.for (SEQ ID N0.50) e L3syn.rev (SEQ ID NO:51), que contêm sequência codificando o ligador que conecta as extremidades térmiπο-C e têrmino-N da proteína original e uma pequena quantidade de sequência p MON 13416 circundante e que quando montados propriamente 15 resultam em extremidades BstEil e SnaBI; e 3) uma porção de p MON13416 agonista de receptor híL~3 digerido de p MON13046 com Clal (ADN foi desenvolvido de células-dam, DM1 (Life Technologies)) e SnaBI. Os DNAs digeridos foram resolvidos sobre um gel TAE 0,9%, manchados com brometo de etidio e isolados usando-se Genclean (Bio101).
Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células E. coli linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). DNA míniprep foi isolado dos transformantes, e os transformardes foram peneirados usando-se um ensaio com base em PCR. ADN de plasmídio de transformantes selecionados foi seqüenciado para obter-se o molde correto. O plasmídio resultante foi designado syntan3 e contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO:85).
194
Exemplo 75
Construção de ρ M0N31104
O novo gene término-N/térmíno-C ern ρ MON31104 foi criado usando-se Método 111 como descrito em Materiais e Métodos. O novo gene 5 térmíno-N/tèrmino-C de inteiro comprimento de p MON 13416 agonists de receptor hlL-3 foi criado e amplificado do plasmídio intermediário, Syntanl, usando-se o conjunto primer 35 iniciador (SEQ ID NO:52) e 34 rev (SEQ ID NO:53) fragmento de ADN resultante que contém o novo gene foi di10 gerido com endonucleases de restriçãoNcol e SnaBI. O fragmento de ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE A 1%, manchado com brometo de etídio e isolado usando-se Geneclean (Boi01, Vista, CA). O fragmento de ADN digerido purificado foi ligado no vetor de expressão, ρ MON13189, usando-se T4 DNA ligase (Poehringer Mannheim, Indianapolis, IN). O ADN de ρ MON13189 foi previamente digerido com Ncol e SnaBI para remoção de ρ MON13416 agonista de receptor hlL3 codificando sequência e o fragmento vetor de 4254 pares de bases foi isolado usando-se Geneclean (8io101, Vista, CA) apôs resolução sobre um gel TAE a 0,8% e manchamento com brometo de etídio. Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células, de E. colí linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampícilína. ADN de plamídio foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção. O plasmídio resultante foi designado p MQN31104.
E. coli linhagem JM101 foi transformado com ρ MON31104 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, ρ MON31104, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO:86) que codifica a seguinte sequência de amínoàcídos:
195
Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Giu Asp V*! ger He Leu Met
Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pre Asn Lev Giu ner The Veil Ãrg Ala
Val Lys Asn Leu Giu Asn Ale Ser Gly lie Giu Ale He Leu Arg
Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pre Ser Arg
His Pro He He He Lys Ala Gly Asp Trp Qin Giu Phe Arg Giu
Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Giu Glr Ala Gin Glü Gin
Gin Gly Gly Gly Ser Asn Cys Ser lie Her He Asp Giu He He
His His Leu Lys Arg Pro Pro Ale Pro Leu Tyr val Giu Glv Giy
Gly Gly ser pro Gly Giu Pro Ser Gly Pro He Ser Thr He Asn
Pro Ser Pro Pro ser Lys Giu Ser His Lys Ser Pro Asn Met Ala
Thr Gxn Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg
Ara Guy uly Val Leu Val Ala Ser Hrs Leu Gin Ser Phe Leu Giu
Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser GlyGlv
Ser Gly Gly Ser Gin Ser phe Leu Leu Lys Ser Leu Giu GinVal
Arg Lys He Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Giu Lys Leuevs
Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Giu Giu Leu Val Leu LeuGly
Hrs Ser Leu Gly He Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys ProSer
Gin. Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu His SerGlv
Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Giu Glv He sejPro Giu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val Ala
Asp Phe Ala Thr Thr He Trp Gin Gin Met Giu Giu Leu Glv Met
A4.a pro Ala Leu Gin Pro (SEQ ns «0:186}
Exemplo 76
Construção de ρ M0N31105 novo gene término-N/término~C em ρ MON31105 foi criado usando-se Método III coma desento em Moten a is e Métodos. O novo gene 5 término-N/térmíno-C de inteiro comprimento de ρ MON13416 agonista de receptor hlL-3 foi criado e amplificado de plasmídio intermediário, Syntanl. usando-se conjunto primer 70 iniciador (SEQ ID N0:54) e 69 rev (SEQ ID NOW
O fragmento de ADN resultante que contém o novo gene foi di10 gerido com endonucleases de restrição Ncol e SnaBI, O fragmento de AND digerida foi resolvido sabre urn gel TAE A 1 %, manchado com brometo de etídio e isolado usando-se Geneclean (Bio101, Vista, CA). O fragmento de
ADN digerido purificado foi ligada no vetor de expressão ρ MON13189, usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). O ADN de ρ MON13189 foi prevíamente digerido com Neal e SnaBI para remoção de ρ MON13416 agonists de receptor hll.3 codificando sequência e o fragmento vetor de 4254 pares de bases fai isolado usando-se Geneclean (Bio101, Vista, CA) apòs resolução sobre am gelTAE A 0,8% e manchando com brometo de etídio. Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células E. coli linhagem DH5a (Life Technologies,. Gaithersburg.
MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicilina. ADN de plasmídio foi Isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção. O plasmídio resultante foi designado ρ MON31105.
E. ooli linhagem JM101 foi transformada com ρ MON31105 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, ρ MON31105, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO:87) que codifica a proteins com a seguinte sequência de armnoácidQs:
Asn Ala Ser Gly Xie Glu Ala lie Lea Arg Asn Leu Gin Pro Cys
Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pre Ser Arg His Pro Tie TI© Tie
Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr
Leu Val Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin Giy Gly Gly Ser
Asn Cys Ser lie Met Tie Asp Glu lie Xie His His Leu Lys Arg
Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp
Val Ser Tie Leu Meo Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu
Ser Phe Val Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Tyr Val Glu Giy Gly
Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pre- Ser Gly Pro Tie Ser Thr Tie Asn
Pro Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser pro Asn Met Ala
Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg
Ala Gly Gly Val Lev Val Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Leu Glu
Val Ser Tyr Arg val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser 'Gly Gly
Ser Gly Gly Ser Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin Val
Arg Lys lie Gin Gly Asp Gly Aia Ala Leu Gin Glu Lys Leu Cys
Ala Thr Tyr Lys Leu cys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly
His Ser Leu Gly 11© Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cvs Pro Ser uln Ala Lev Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Glv
Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Glv Tie Ser
Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Va' Alã
Asp Phe Ala Thr Thr Tie Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Glv Men
Ala Pro Ala Leu Gin Pro l SEQ ID NO:187}
Exemplo 77
Construção de ρ M0N31106 novo gene término-N/término-C em ρ MON31106 foi criado usando-se Método III como descrito em Materials e Métodos 0 novo gene término-N/término-C d© inteiro comprimento do ρ MON13416 agonists do
IS receptor hll-3 for criado e amplificado do plasmídio intermediário, Syntanl, usando o conjunto primer 91 iniciador (SEQ ID NO.56) e 90 rev (SEQ ID
NO'.57).
O fragmento de ADN resultante que contém o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Ncot e SnaBI, O fragmento de ADN 20 digerido foi resolvido sobre um gel TAE A 1%, manchado com brometo de
197 etídio e isolado usando-se Geneelean (Bid 01, Vista, CA). O fragmento de ADN digerido purificado foi ligado no vetor de expressão p MON13189, usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim,. Indianapolis, IN). 0 ANO p MON13189 foi previamente digerido com Ncole SnaBI para remover o p
MON13416 agonists receptor hlL3 codificando sequência e o fragmento vetor de 4254 pares de bases foi isolado usando-se Geneclean (Bio!01,
Vista.. CA) após resolução sobre um gel TAE A 0,8%, e manchando com brometo de etídio. Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células E coli linhagem 0Η5α (Life Technologies, Gaithersburg, 10 MD).. Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicilína. ADN de plasmídio foi isolada e seqüenciado para confirmar a correta inserção. O plasmídio resultante foi designado p MON31106.
E. coli linhagem JM101 foi transformada com ρ MON31106 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, p MON31106, contêm a sequência de ADN de (SEQ ID NO:80) que codifica a proteína com a seguinte sequência de aminoácidos:
Ala Pro Sex Arg His Fro lie He lie Lys Ala Gly Asp Try Gio
Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Gin
Ala Gin Glu Gin Gin Gly Gly Gly Ser Asn Cys Ser He Met. He
Asp Glu He He His His Leu Lys Arg Pro Pro Ala Pro Leu Leu
Asp Pro As π Asn Leu Asn Asp Glu Asp Val Ser He Leu Met. Asp
Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe Val Arg Ala val
Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Glu Ala lie Leu Arg Asn
Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Tyr Val Glu Gly Gly
Gly Gly Sex* Piro Gly Glu Pro Ser Gly Pro He Ser Thr He Asn
Pro Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro Ann Met Ala
Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg
Ala Gly Gly Val Leu val Ala Ser His Leu Gin ser Phe Leu Glu
Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Gly Gly
Ser Gly Gly Ser Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin Val
Arg Lys 'He Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leo Gin Glu Lys Leu Cys
Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly
His Ser Leu Gly Xie Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser
Gin Ale Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly
Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly lie Ser
Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Asp Val Ala
Asp Phe Ala Thr Thr He Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met
Ala Pro Ala Leu Gin Pro (SEQ IQ NO:188)
Exemplo 78
Construção de ρ M0N31107
O novo gene término-N/término-C em ρ MON31107 foi criado usando-se Método III como descrito em Materiais e Métodos. O novo gene término-N/término-C de inteiro comprimento de ρ MON13416 agonísta de receptor hlL-3 foi criado e amplificado a partir do plasmídio intermediário, Syntanl, usando o canjunto primer 101 iniciador (SEQ ID NO:58) e 100 rev (SEQ ID NO: 59).
O fragmento de DNA resultante que contém o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e SnaBL O fragmento de ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE A1%, manchado com brometo de etídie e isolado usando-se Geneclean (Bio101, Vista, CA). O fragmento de ADN digerido purificado foi ligado no vetor de expressão p MON13189, usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). O DNA p MON 13189 foi previamente digerido com Ncol e SnaBI para remover p MON13416 agonists de receptor hlL3 codificando sequência e o fragmento vetor de 4254 pares de bases foi isolado usando-se Geneclean (BioW1, Vista, CA) após resolução sobre um gel TAE A 0.8% e mancha de brometo de etídie. Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar células E, coii linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicilina. ADN de plasmídio foi isolado e seqüenciado para confirmar a cometa inserção. O plasmidio resultante foi designado ρ M0N31107.
E. colí linhagem 3M101 foi transformada com ρ MON31107 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão
O plasmídio, ρ MQN3H07, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NG: 89) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Val Thr Lsu Glu Gin Al® Gin cys Ger He Mat lie Asp Glu Fro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Ser He Leu Met. Asp Arg Asn Phe Val Arg Ala Val Lys Asn Ala Xie Leu Arg Asn Leu Gin Ala Pre- Ser Arg His Pro Xie Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pro Pre Ser Pro Pro Ser Lys Glu Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg Ser Gly Gly Ser Gin Ser Phe Arg Lys Xie Gin Gly Asp Gly Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His His Ser Leu Gly He Pro T.rp Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Lac Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Fhe Ala Thr Th,r Xie Trp Ala Pro Ala Leu Gin Pro (SE<
Arg Gru Lys Leu Thr Phe Tyr Leu
Glu Gin Gin Gly Gly Gly Ser Ash
He He His His Leu Lys Arg Pro
Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Val
Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser
Leu Glu Asn Ala Ser Gly ns Glu Fro Lys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ils He Lys Tyr Val Glu Gly Gly Ser Gly Pro lie Ser Thr He Asn Ser His Lys Ser Pro Asn Met Ala Fhe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ser His Leu Gin Ser Phe Leu Glu His Leu Ala Gin pro Ser Gly Gly Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin Val Ala Ala. Leu Gin Glu Lys Leu Cys Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Lin Ala Leu Glu Gly Hg Ser Asp Thx 13eu Gin Leu Asn Vs.1 Ala Sin Gin Met Glu Glu Lei G1J mI ID MO:189}
Exemplo 79
Construção de p MON31108 novo gene término-N/término-C em p MON31108 foi criado usando-se Método líí como descrito em Materiais e Métodos, O novo gene
S têrmino-N/térmíno-C de inteiro comprimento de p MON13416 agonista de erceptor hlL~3 fol criado e amplificado do plasmídio intermediário, Syntan3, usando o conjunto primer 35 iniciador (SEQ ID NO:52) e 34 rev (SEQ ID NO: 53).
O fragmento de DNA resultante que contém o novo gene foi d?10 gerido com endonucleases de restrição Ncol e SnaBI, O fragmento de ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE A 1 %, manchado com brometo de etidio e isolado usando-se Geneclean (Bid 01, Vista, CA), O fragmento de ADN digerido purificado foi ligado no vetor de expressão p MON 13189, usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). O DNA 15 p MON13189 foi previamente digerido com Ncol e SnaBI para remover o p
MON13416 agonista receptor hlL3 codificando sequência e o fragmento vetor de 4254 pares de bases foi isolado usando-se Genedean (Biol 01, Vista, CA) após resolução sobre urn gel TAE A 0,8% e mancha de brometo de etidto. Uma porção da reação de ügação foi usada para transformar cé200 lulas de E. coli linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD) Bactérias transformant.es foram selecionadas sobre placas contendo ampicilína. ADN de plasmidio foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção. O plasmidio resultante foi designado p M0N31108.
E, coli linhagem JM101 foi transformada com p MON31108 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmidio, ρ M0N31108, contém a sequência de ADN de (SEQ IO NO 90) que codifica a seguinte sequência de aminoácídos:
Leu Asp Pro Asn Asn Leu
flB Asp Arg Asn Leu Arg Leu
W Vai Lys Asn Leu Asn
Asn Leu Glh' Pro cys Xt&V
Hrs Pre He lie He Lys
Lys Leu Thr Phe Tyr Leu
Gin Gly Gly Gly Ser Gly
Ser He Met He Asp OXti
Ala Pro Leu Tyr Vai Glu
Ser Gly ϊ*το He Ser Thr
Ser ΗΛ2 Lys Ser Pr© Asn
Phe Ala ser Ala Phe Gin
Ser His Leu Gin Ser Phe
H1S Ií eu Ala Gin Pro Ser
Leu Leu Lys Ser Juí Glu
Ala Ala Leu. Glíi Glu Lys
Pre Glu Glu Leu val Leu
Axa Pro Leu Ser Ser Cys
cya Leu Ser Gin Leu Mrs
Leu: GÀn Ala Glu Gly
A.Sp Thr Leu Gin Leu Asp
Gin Gin Met Glu Glu Leu
Asn Asp Glu Asp Vai Ser lie Leu Met
Pr© Asn Leu Glu Ser Phe Vai Arg Ala
Ala ser Gly He Glu Ala He Leu Arg
Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg
Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu
Vai Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin
Gly Gly Ser Gly Gly Gly çyS
He He Hrs His Leu Lys Arg Pro Pro
Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pro
Le Asn Pro Ser Pr© Pro Ser Lys Glu
Met Ala Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala
Arg Arg Ala Gly Gly Vai Leu Vai Ala
Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Va.l Leu Arg
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin Ser Phe
Gin Vai Arg Lys He Gin Gly Asp Gly
Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys Hrs ueu Gly Hrs Ser Leu Gly Xie Pro Trp
Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu. Ala Gly
Ser Gly Leu phe Leu Tyr Gin Gly Leu
He Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu
Vai Ala Asp phe Ala Thr· Thr He Trp
Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro (SEQ
Exemplo 80
Construção de ρ M0N31109
O novo gene término-N/término-C em ρ MON31109 foi criado usando-se Método III como descrito em Materiais e Métodos. 0 novo gene término-N/término-C de inteiro comprimento de ρ MON13416 agonists de receptor hlL-3 foi criado e amplificado do plasmidio intermediário, Syntan3; usando o conjunto primer 70 iniciador (SEQ ID NO:54) e 69 rev (SEQ ID
NOiSS).
fragmento de DNA resultante que contém o novo gene foi digenda com endonucleases de restrição Ncol e SnaBI. O fragmento de ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE A 1%, manchado com brometo de eOdio e isolado usando-se Geneclean (Biol 01, Vista, CA), O fragmento de ADN digerido purificado foi ligado na vetor de expressão ρ MON13189, usando-se T4 DMA iigase (Boehringer Mannheim.. Indianapolis, IN). O DNA ρ MON 13189 fol prevíamente digerido com Ncol e SnaBl para remover o p MON13416 agonista receptor hh..3 codificando sequência e o fragmento vetor de 4254 pares de bases foi isolado usando-se Genedean (Bio101, Vista, CA) após resolução sobre um gel TAE A 0,8% e mancha de brometo de afídio Uma porção da reação de bgação foi usada para transformar células de E. coli linhagem DH5a (Life Technologies, Gaithersburg. MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicihna. ADN da plasmídio foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção. O plasmídio resultante foi designado ρ MDN31109,
E. coli hnhagem JM101 foi transformada com p MON31W9 para expressão de proteína e isolamento da proteína de corpos de inclusão.
O plasmídio, ρ MON31109, contém a sequência da ADN de (SEQ ID NO:91) que codifica a seguinte
Asn Ala Ser Gly Xle Glu Ala 11« Leu Fro Ser Ala Thr Al® Ala Pro Lys Ale Gly Asp Trp Gin Glu Phe Leu Vai Thr Leu Glu Gin Ala Gin Gly Gly Gly ser Gly Gly Gly Ser Glu lie He His His Leu Lys Arg Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Asn Leu Glu Tyr Vai Glu Gly Gly Sex Gly Pro lie Ser Thr Xle Asn Ser His Lys Ser Pro Asn Man Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ser Ris Leu Gin Ser Phe Leu Glu His Leu Ala Gin Pro Ser Gly Gly Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin Vai Ala Ala Leu Gin Glu Lys Leu Cys Pre Glu Glu Leu Vai Leu Leu Gly Ale Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Cys Leu ser Gin Leu His Ser Gly Leu Gin Ala Leu Glu Gly Xle Ser Asp Thr Leu Gin Leu Asp Vai Ala Gin Gin Met Glu Glu Leu Glv Meu Xb NQ:lâl|
Exemplo 81
Construção de ρ M0N3110 seqúencia de aminoácidos;
Leu Arg Asn Leu Gin Pre Cys Ser Arg His Pro He Lie Xle Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Glu Gin Gin Gly Gly Gly Asn Cys Ser Xle Met XÍe Asp Pro Pre Ara Pro Leu Leu Asp Vai Ser He Leu Met Asp Arg Ser Phe Vai Arg Ala vai Lys Gly Gly ser Pro Gly Glu Pro Pro Ser Pro Pro Ser Lys Glu Thr Gin Gly Ala Men pro Ala Ala Gly Gly Vai Leu Vai Ale Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg Ser Gly Gly par Gin Ser Phe Arg Lys Xie Gin Gly Asp Gly Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His His Ser Leu Gly xle pro Tro Gin A^a Leu uln Leu Ala Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Phe Ala Thr Thr He Trp Ala Pro Ala Leu Gin Pro 1S£Q
202
O novo gene término-N/término-C em ρ MON31110 foi criado usando-se Método III como descrito em Materiais e Métodos. O novo gene tèrmino-N/tèrmino-C de inteiro comprimento de ρ MON13416 agonists de receptor hlL-3 foi criado e amplificado do plasmidío intermediário. Syntan3, 5 usando o conjunto primer 91 iniciador (SEQ ID N0:56) e 90 rev (SEQ ID NQ.57).
O fragmento de DNA resultante que contém o novo gene foi digerido com endonucleases de restrição Ncol e SnaBL O fragmento de ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE A 1%,. manchado com brometo de 10 etídio e isolado usando-se Geneclean (Bío101, Vista, CA). O fragmento de ADN digerido purificado foi ligado no vetor de expressão ρ MON13189, usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). O DNA ρ MON13189 fol previamente digendo com Ncol e SnaBI para remover ο p MON 13416 agonists receptor hlL3 codificando sequência e o fragmento 15 vetor de 4254 pares de bases foi isolado usando-se Geneclean (Bio10i;
Vista, CA) apôs resolução sobre um gel TAE A 0,8% e mancha de brometo de etídio, Uma porção da reação de hgação foi usada para transformar células de E. coli linhagem DH5a (Life Technologies. Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampíci20 line. ADN de piasmicho foi isolado e seqüenciado para confirmar a correta inserção. O piasmicho resultante foi designado ρ MON31110.
E, coli linhagem JM101 foi transformada com p MQN31110 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão
O píasmídio, ρ MON31110, contém a sequência de ADN de 25 (SEQ ID NO;92) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos'
203
Ala Pro Ser Glu Phe Arg Ala Gio Glu Gly Ser Asn Lys Arg Pro Glu Asp Vai Leu Glu Ser Gly He Glu Ala Thr Ala Ser Gly Pro Ser His Lys Phe Ala Ser Ser His Leu His Leu Ala Leu Leu Lys Ala Ala Leu Pro Glu Glu Ala Pro Leu Cys Leu Ser Leu Gin Ala Asp Thr Leu Gin Gin Met Xh N0.-1S2}
Arg His Pro Glu Lys Leu Gin Gin Gly Cys Ser He Pro Ala Pro Ser He Leu Phe Vai Arg Ala lie Leu Tyr Vai Glu He Ser Thr Ser Pro Asn Ala Phe Gin Gin Ser Phe Gin Pro Ser Ser Leu Glu Gin Glu Lys Leu val Leu Ser Ser Cys Gin Leu His Leu Glu Gly Gin Leu Asp Glu Glu Leu
Tyr Ser
Asp
Asp
Arg
Lys
Leu
Gly Gly
He lie Tie Thr Phe Gly Gly Met He Leu. Leu
Met Asp Ala Val
Arg Asn Gly Gly
He Asn Pro Met Ala Thr Arg Arg Ala Leu Glu Val Gly Gly Ser Gin Val Arg Leu Cys Ala Leu Gly His Pro Ser Gin Ser Gly Leu He Ser Pro Val Ala Asp Gly Het Ala
Lys Ala Gzy Leu Val Thr Gly Gly Gly Glu He He Pro Asn Asn Asn Leu Arg Asn Leu Glu Gin Pro Cys
Ser Pro
Ser Pro Pro Gin Gly Ala Gly Gly Val Ser Tyr Arg Gly Gly Ser Lys Tie Gin Thr Tyr Lys Ser Leu Gly Ala Leu Gin Phe Leu Tyr Glu Leu Gly Phe Ala Thr Pro Ala Leu
Asp Trp Gan Leu. Glu Gin Ser Gly Gly His His Leu Leu Asn Asp Leu Pro Asn Asn Ala Ser Leu Pro Ser Gly Glu Pro Ser Lys Glu Met Pro Ala Leu Val Ala Val Leu Arg Gin Ser Phe Gly Asp Gly Leu Cys His He Pro Trp Leu Al® Gly Gin Gly Leu Pro Thr Leu Thr He Trp Gin Pro (SEQ
Exemplo 62
Construção de p MON31111 novo gene término-N/tèrmino-C em ρ MON31111 foi criado usando~se Método UI como descrito em Materiais e Métodos. O nova gene S término-N/término-C de inteiro comprimento de p MON13416 agonista de receptor hlL~3 foi criado e amplificado do plasmídio intermediário, Syntan3, usando o conjunto primer 101 iniciador (SEQ ID NO.58) e 100 rev (SEQ ID NOW fragmento de DNA resultante que contém o novo gene foi di10 gerido com endonucleases de restrição Ncol e SnaBI. O fragmento de ADN digerido foi resolvido sobre um gel TAE A 1%, manchado com brometo de eti-dio e isolado usando-se Geneclean (8io101, Vista, CA). O fragmento de
ADN digerido purificado foi ligado no vetor de expressão p MON13189, usando-se T4 DNA ligase (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). O DNA 15 p MON 13189 foi previamente digerido com Ncol e SnaBI para remover o p
MON13416 agonists receptor hIL3 codificando sequência e o fragmento vetor de 4254 pares de bases fot isolade usando-se Genedean (8io101t Vista, CA) após resolução sobre um gel TAE A 0,8% e mancha de brometo de etídio. Uma porção da reação de ligação foi usada para transformar cé
204 lulas de E. coii linhagem DH5a. (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Bactérias transformantes foram selecionadas sobra placas contendo ampicilína, ADN de plasmidio foi isolado e seqúenciado para confirmar a correta inserção. O plasmidio resultante foi designado ρ MON31111.
E coli linhagem JM101 foi transformada com ρ MON31111 para expressão de proteína e isolamento de proteína de corpos de inclusão.
O plasmidio, ρ MON31111, contém a sequência de ADN de (SEQ ID N0:93) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
Ale Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu
Val Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin Gly Gly Gly Ser Gly
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Cys Ser He Mei He Asp Glu
He He Hrs His Leu Lys Arg Pro Pr© Ala Pro Leu Leu Asp Pro
Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Vai Ser He Leu Met Asp Arg Asn
Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe Vai Arg Ala Vai Lys Asn
Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Glu Ala He Leu Arg Asn Leu Gin
Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg His Pro He lie He Lys Tyr Vai Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Glu pro
Ser Gly Pro He Ser Thr He Asn Pro Ser Pre? Pro Ser Lys Glu
Ser His Lys Ser Pro Asn Met Ala Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala
Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly Vai Leu Vai Ala
Ser His Leu Gin Ser Phe Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg
Hrs Leu Ala Gin Pro Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin Ser Phe
Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin Vai Arg. Lys lie Gin Gly Asp Gly
Ala Ala Leu Gin Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His
Pro Glu Glu Leu Vai Leu Leu Gly His Ser Leu Gly He Pro Trp
Ala Pro Leu Ser Ser cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly
Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu
Leu Gin Ala Leu Glu Gly He Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu
Asp Thr Leu Gin Leu Asp Vai Ala Asp Phe Ala Thr Thr He Trp
Qin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro (SEO
ZD NO:193J
Exemplo 83
Construção de ρ MON 31112
Construção de ρ MON31112, um plasmidio contendo sequência de ADN codificando urn agonists de receptor hematopoiético multifuncional que ativa o receptor hlL-3 e receptor G-CSF. Plasmidio,
DNA ρ MON13189 foi digerido com enzimas de restrição Ncol e Xmal resultando em um fragmento vetor Ncol. Xmal que foi isolado e purificado de urn gel agarose a 0,8%. O ADN de um segundo plasmidio, p
MON13222 (WQ94/12639), US Serial # 08/411 796) foi digerido com Ncol e EcoRl resultando em um fragmento Ncol, EcoRI de 281 pares de bases. Este fragmento foi isolado e purificado de um gel agarose
205
1,0%. Dois oiigonucteotídios SYNNQXA1.REQ (SEQ ED N0;240) e SYNNOXA2.REQ (SEQ IO NO:241) foram anelados a ligados oom o fragmento de ADN de 281 pares de bases de ρ MON13222 ao fragmento vetor ADN de ρ M0N13189. Uma porção da mistura de ligação 5 foi então transformada em E. coli K-12 linhagem JM101. Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampicilina.
ADN de plasmídio foi isolado, analisado por análise de restrição para mostrar a presença de um fragmento EcoRV, e seqüenciado para co nf i rm a r as co r re t a s í n se rçõ e s.
O plasmídio; ρ MON31112, contém a sequência de ADN de (SEQ ID ΝΟΊ14) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
MetAlaAsnCysEerAsnMetXleAspGlxàllelleThrHisbeuLysGlnProProLeu Probe ubeuAspPheAsxiAsnLeuAsnGlyGluAspGlnAsplleLeuMetAspAsnAsn LeuArgArgProAsnLeuGluAlaPheAsnArgAlaVaXLysSerLeuGlnAsnAlaSer AlaXleGluSerlleLeubysAsnLeuLeuProCysLeuFroLeuAlaThrÀlaAlaPro TrmAx'gKj.sP^cIleHisIleLysAspGlyAspTrpAsnGluPhaArgArgLysLeuTb’' Phely^rLeuL.ysThrLeuGluAsnAlaGlnAlaGlnGlnTyrValGluG lyGlyGlyG Ç SerProGlyGluProSerGXyProXleSerThrlleAsnProSerProProSerLvsGlu SerHxsLysSerProAsnMevAlaThrGlnGlyAlaMetProAlaPheAlaSerAiaPhe GlnArgArgAlaGlyGlyValLeuVaXAlaSerHisLeuGlnSerPheLeuGiuValSe·*· TyrArgValLeuArgHisLeuAlaGlnProSerGlyGlySerGlyGlySerGXnSerPhi LeuDeuLysSerLeuGluGlnValArgLysXleGlnGlyAspGlyAlaAlaLeuGlnGlu lysLeu^sAlaThrlyrLyaLeuCysHisProGluGluLeuValLeuLeuGlyHisSe^ LeuGlyXleProTrpAlaProLeuSerSerCysProSerGlnAlaLeuGlnLeuAlaGlv CysLeuSetGLnLeuHisSerGlyLeuPheLeuiyrGlnGlyLeuLeuGlnAlaLeuGlü GlylleSerProGluLeuGlyProThrLeuAspThrLeuGlnLauAspValAlaAspPhe AlaThrThrlleTrpGlnGlnMetGluGl-uLeuGlylSetAlaProAlaLeuGlnPrD (SEQ ID NO:199)
Construção de ρ MON3113
Construção de ρ M0N31113, um plasmídio contendo sequência de ADN codificando um agonista de receptor hematopoiético multifuncional 15 que ativa o receptor hlL-3 e receptor G-CSF. Plasmídio, DNA ρ MON13197 foi digerido com enzimas de restrição Ncol e Xmal resultando em um fragmento vetor Ncol, Xmal que foi isolado e purificado de um gal agarose a 0,8%. O ADN de um segundo plasmídio, ρ MON13239 (WO94/12639), US Serial # 08/411 796) foi digerido com Ncol e EcoRÍ resultando em um frag20 mento Ncol EcoRI de 281 pares de bases. Este fragmento foi isolado e purificado de um gel agarose 1.0%. Dois oligonucleotídíos SYNNOXA1.REQ (SEQ ED NO:240) e SYNNOXA2 REQ (SEQ ID NO.241) foram anelados e
206 ligados com o fragmento de ADN de 281 pares de bases de p MON13239 ao fragmento vetor ADN de p MON13197. Uma porção da mistura de ligação foi então transformada em E. coli K-12 linhagem JM101. Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contenda ampicilina. ADN 5 de ptasmídto foi isolado, analisado por análise de restrição para mostrar a presença de um fragmento EcoRV, e seqüenciado para confirmar as corretas inserções.
plasmídio, p MON31113, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO: 115) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
MetAlaAsnCysSerAsnMstXXeAspGluXlelXeThrHisLeuIíysGlnProproLeu ProLeulieuAspPheAsnAsnLeuAsnGlyGluAs-pGlnA^pXleLeuMetGIuAsnAsr. LeuArgArgProAsaLeuGluAXaPheAsnArgAlaValLysSerl»euGXnAsnAlaSer AlalleGluSerlleLeuLysAsnLeuLeuProCysLeuProLeuAlaThrAlaAlaPro ThrArgHisProIlelielleArgAspGXyAspTrpAsnGluPheArgArgLysLeuThr PheTyrLeuLy sThrLeuGXuAsnAXaGlnAlaGlnGlnTyrValGXuGly G lyd XyG ly SerPraGlyGluProSerGlyProIleSerThrXleAsnproSerPraFroSerLysGlu SerHi s Ly sSer PrcAsnMet AlaThrGlndlyAlaMexProAlaPheAl aSer AlaPhe G XnArgArgAlaGlyGlyVaXLeuV alAlaSerHisLeuGlnS er PheLeuGluVa X s er TyrArgvalLeuArgHisLeuAXaGlnProThTProLsuGlyProAlaSerSerDeuPro GlíiSerPheLeuLeuLysSerLeuGXuGXnVaXArgLysIXeGinGlyAspGlyAl&Ala LeuGlnGXuLyaLeuCysAlaThrTyrLysLeuCysHxsProGluGluLeuValLeuLeu G lyHx sSerLeuG Xy X Xe Pr oxrp AXaProLeuSerS erCy sProSerG InAlai» euG In LeuAlaGlycysLeuSerGXuLeuHisSerGlyLeuPheLeuTyrGlnGlyLeuLeuGXn Al aLeuG XuG ly Σ1 eSerProGluLeuGXy ProThrL euAspThrLeuG InLeuA spVa 1 AlaAspPheAlaThrThrlleTrpGlnGlnMetGluGXuLeuGXyMetAlaPrQAlaLeu Glnpro (SEQ ID 0:200)
Exemplo 85
Construção de p M0N31114
Construção de p MON31114, um plasmídio contendo sequência de ADN codificando um agonista de receptor hematopoiético multifuncional que ativa o receptor hlL-3 e receptor G-CSE Plasmídio, DNA p MON13189 foi digerido com enzimas de restrição Ncol e Xmal resultando em um fragmento vetor Ncol, Xmal que foi isolado e purificado de um gel agarose a 0,8%. O ADN de um segundo plasmídio, p MON13239 (WO94/12639), US Serial # 08/411 '796) foi digerido com Ncol e EcoRI resultando em um fragmento Ncol, EcoRI de 281 pares de bases, Este fragmento foi isolado e pu25 rificado de um gel agarose 1.0%. Dois olígonucleotídios SYNNOXA1.REQ (SEQ ED NO.-240) e SYNNOXA2.REQ (SEQ ID NO.241) foram anelados e
207 hgados com o fragmento do ADN de 281 pares de bases de p MON 13239 ae fragmento vetor ADN de ρ MON13189. Uma porção da mistura de ligação foi então transformada em E. coli K-12 linhagem JM101. Bactérias transformastes foram selecionadas sobre placas contendo ampícílina. ADN 5 de plasmídio foi isolado, analisado por análise de restrição para mostrar a presença de um fragmento EcoRV, e seqüenciado para confirmar as corretas inserções.
O plasmídio, ρ MON31114, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO:116) que codifica a seguinte sequência de aminoácidos:
MecAlaAsnCy sSerAsnMet I leAspGluIlelleThrHisLeuLy sG InProProLeu ProLeuLeuAspPheAsoAsnLeuAsnGlyGluAspG InAspI leLeuMetGluAsnAsn LeuArgArgProAsnLeuGluAlaPheAsxiArgAXavallysSerLeuGlnAsnAlaser Alai leGluSer 11 eLeuhys AsnLeuLeuProCy sLeuPr oLeuAlaThrAl aAlaPro ThrArgHísProIlellelleArgAspGlyAspTrpAsnGluPheArgArgLysLeuThr PheTyrLeuLy sThrLeuGluAsnAlaGlnAlaGlnG InTyrValGluGlyGlyG lyGly SerProGlyGluProSerGlyProllôSerThrlleAsnProSerProProSerLysGlu SerHisLysSerProAsnMetAlaThrGlnGlyAlaMetProAlaPheAlaSerAlaPhe GlnArgArgAlaGlyGlyValLeuValÀlaSerHisLeuGlnSerPhfôLeuGluValSer' Tyr ArgValLeuArgHisLeuAlaGlnProSerGlyGlySerGlyGly S erG InSerPhe LeuLeuLysSerLeuGluGlnValAi^LysIleGlnGlyAspGlyAlaAlabeuGlnGlu Ly sLeuCy sAl aThrTyrly sLeuCysHx s Pr oG luG iuLeuV alLeuLeuGly Hi s Se r LeuGly I lePr oTrpAla ProLeuSerS erCys Pros erGlnAlaLeuG InLeuAl aG ly CysLeuSerGlnLeuHisSerGlyLeuPheLauTyrGlnGlyLeuLeuGlnAlaLeuGlu GlylleSerProGluLeuGlyProThrLeuAspThrLeuGlnLeuAspValAlaAspPhe AlaThrThr X1 eTrpG InG InMe t GluG 1 uLeuGlyMe t Al a Pr oAl abexiG InPro {SEQ ID NG:201) .Exemplp.86
Construção de ρ M0N31115
Construção de ρ MON311145, um plasmídio contendo sequência de ADN codificando um agonísta de receptor hematopoiático multifuncional que ativa o receptor hlL~3 e receptor G-CSF. Plasmídio, 15 DNA ρ MON13197 foi digerido com enzimas de restrição Ncol e Xmal resultando em um fragmento vetor Ncol, Xmal que foi isolado e purificado de um gel agarose a 0,8% 0 ADN de um segundo plasmídio. p MON13222, foi digerido com Ncol e EcoRI resultando em um fragmento Ncol, EcoRI de 281 pares de bases. Este fragmento foi isolado 20 s purificado de um gel agarose 1,0%. Dois oligonucleotidios SYNNOXA1.REQ (SEQ ED NCY240) e SYNNOXA2.REQ (SEQ ID NO:241) foram
208 anelados e ligados com o fragmento de ADN de 281 pares de bases de p MON 13222 ao fragmento vetor ADN de p MON 13197. Uma porção da mistura de ligação foi então transformada em E. coli K-12 linhagem JM101. Bactérias transformantes foram selecionadas sobre placas contendo ampícílina.
ADN de plasmídio foi isolado, analisado por análise de restrição para mostrar a presença de um fragmento EcoRV, e seqüenciado para confirmar as corretas inserções.
O plasmídio, ρ MON31115, contém a sequência de ADN de (SEQ ID NO:117) que codifica a seguinte sequência de amínoácidos:
Met AlaAsnCysSerAsnMeClleAspGluXlôXlaThxHisLeuXíysGXnProProLeu ProLeuLeuAspPheAsnAstiLeuAsnGlyGluAspGlnAspXleLeuMetAspAsnAsn LeuAr g ArgPr*o AscLeuGluAl aPheAsnAcgAl aValLy sS ecLeuG xoAsnAl aSe^ AlaX leGluSer HeLôuLysAsnLeuLeuProCysLeuProLeuAl aThtAlaAlaPro Thx ArgHis ProX leHi s X XeLysAspGly MpTrpAsnGluPheArgArgLysLeuThr PheTyrLeuLysThrL euG luAsnAl aG InAlaG InG InTyrV a 1G xuG xyG xyG lyG ly SerProGlyGluProSerGlyProTleSerThrXleAsnProSerProProSexLysGlu SerHisLysSerProAshMecAlaTixcGlhGlyAlaMet.ProAlaPheAlaSerAiaPhe GlnArgArgAlaGlyGlyValLeuValAlaSerHisLeuGlnSerPheLeuGluvalser Ty Ar gVa ÍLsuArgHisLeuAl aG InProThr Pro LeuGly ProAlaSerS erLeu Pr o GlnSer PheLeuLeuLy sSerLeuGluGlnValArgLys X leG InG lyAspGlyAlaAla LeuGlnGluLvsLeuCysAlaThrTyxLysLeuCy sHi sProG XuGluLeuVaXLeuLeu GlyHxsSerLe.uGlyIleProTrpAlaProLeu£erSereysProSerGlnAlaLeuGln LeuAlaGlyCysLeuSerGlnLeuHisSerGlyLeuPheLeUTyrGlnGlyLeuLeuGln AlaLeuGluGlyXleSerProGluLeuGlyProThrLeuAspThrLeuGlnLeuAspVal AlaAspPheAlaThrThr 11 eTrpGlnGlnMe cG luGluLeuGlyMe cAlaProAlaLeu Glnpro (SEQ IP NO:2 02)
Exemplo 87
Determino da atividade in-vifro de proteínas agonistas de receptor hematopoíétíco mult-funcionais
A concentração de proteína da proteína agosnista de receptor hematopoiètico multifuncional pode ser determinada usando-se 15 um ELISA sanduíche com base em uma afinidade de anticorpo policlonal purificado. Alternativamente a concentração de proteína pode ser determinada por análise de composição de aminoácido. A bioativldade do agonista de receptor hematopoiètico multifuncional pode ser determinada em um número de ensaios in vitro. Por exemplo um 20 agonista de receptor hematopoiètico multifuncional que liga-se a receptor hlL-3 e receptor G-CSF pode ser ensaiado em ensaios de proliferação de célula usando-se linhas de células expressando os re
209 captores hlL~3 e/ou G-CSF. Um tal ensaio é o ensaio de proliferação de célula AML-193, Células AML-193 respondem a IL-3 e G-CSF o que permite a combinada bioatividade do agonista de receptor hematopoiético multifuncional IL-3/G-CSF ser determinada, Um outro tal ensaio é o ensaio de proliferação de célula TF 1.
Em adição, outro fator dependente de linhas de células, tais como M-NFS-60 (ATCC. CRL 1838) ou 32D que são linha de célula dependente de IL-3 murino, podem ser usadas. A atividade de IL-3 é espécie especifica enquanto G-CSF não, por isso a bioatividade do componente G10 CSF do agonísta receptor hematopoiético multifuncional lt-3/G-CSF pode ser determinada independentemente. Linhas de células, tais como BHK ou murina Baf/3, que não expressam o receptor para um dado ligante podem ser transfectadas com um plasmídio contendo um gene codificando o desejado receptor. Um exemplo de uma tal linha de célula é BaF3 transfectada 15 com o receptor hG-CSF (BaF3/hG-CSF), A atividade do agonista de receptor hematopoiético multifuncional nestas linhas de células pode ser comparada com hll-3 ou G-CSF sozinhos ou juntos. A bioatividade de exemplos de agonístas de receptor hematopoiético multifuncional da presente invenção ensaiados nos ensaios de proliferação de célula TF1 e proliferação de 20 célula. BaF3/hG-CSF é mostrada na Tabela 5 e Tabela 6. A bioatividade do agonista de receptor hematopoiético multifuncional é expressa como atividade relativa comparada com uma proteína padrão ρ MON13056 (WO95/212.54). A bioatividade de exemplos de agonistas receptores hematopoiétícos multifuncionais da presente invenção ensaiados nos ensaios de 25 proliferação de célula BaF3/c-mpl e proliferação de célula TF1 é mostrada na Tabela 7 e Tabela 8.
210
Tabela 5.
Figure BRPI9610977A2_D0072
Tabela 5 (continuação)
Atividade Prolifetaríva de célula de Agonistas de Receptor IL-3ZG-CSF Dupla
Figure BRPI9610977A2_D0073
nd ~ não determinado ’ A biatividads do agonists de receptor hematopoíétíco multifuncional é ex5 pressa como atividade relativa comparada corn uma proteína padrão p
MON13056. N - 3 ou maior
Tabela 6
Figure BRPI9610977A2_D0074
212
Iabela.6 (continuação)
Atividade Prolifetatíva de Célula de Agonistas de Receptor IL-3/G-CSF Doais
pMON Ensaio de proliferação de célula receptor BaF3foGCSF atividade relativa* Ensab de proliferação de céiula TF 1 atividade relativa
31113 + A'
31114 a-
31115 ........VO
31116 nd rid
31117 nd nd
nd - não determinado * A bioatividade (n ~ 1 ou 2) do agonista de receptor hematopoiético multifuncional é expressa corno atividade comparada com uma proteína padrão p M0N13056.
’V‘ indica que a molécula foi comparável a ρ MON13056.
lLâ.bOfe,Z.
Atividade de Proliferação de Célula
Figure BRPI9610977A2_D0075
213
Tabela. 7 (continuação)
Atividade de Proliferação de Célula ρΜΟΝ ΐ Ensaio de prdifecação de célula re- i Ensaio cfepi^íf^ação de célula cept<rBaF3fompl ^vídade relativa* l TF1 atividade relativa
285Í2: 1- +
Figure BRPI9610977A2_D0076
214
Tabela ./...(continuação)
Atividade de Proliferação de Célula
Figure BRPI9610977A2_D0077
’ Atividade medida na linha de célula Baf3 transfectada com o receptor c5 mpl, relativa a ligante c-mpl (1-153).
+ atividade medida em relação a p MON 13056.
Em uma maneira similar outros fatores dependentes de linhas de células conhecidos por aqueles versados na técnica podem ser usados para medir a bioatividade do desejado agonists de receptor hematopoiético 10 multifuncional. O ensaio de metil celulose pode ser usado para determinar o efeito dos agonístas de receptor hematopoiético multifuncionais sobre a expansão das células progenitoras hematopoiéticas e o padrão dos diferentes tipos de colonias hematopoiéticas in vitro. O ensaio de metil celulose pode prover uma estimativa de frequência precursora desde que alguém meça a 15 frequência de progenitores por 100 000 células de entrada. Culturas dependentes de estromal foram usadas para delinear progenitores hematopoiéticos primitivos e células hsste. Este ensaio pode ser usado para determinar se o agonists receptor hematopoiético multifuncional estimula a expansão de progenitores muito primitivos e/ou células haste. Em adição, limitação de 20 culturas de diluição pode ser realizada o que indicara a frequência de progenitores primitivos estimulados pelo agonista de receptor hematopoiético multifuncional·
215
Tabela 8
Figure BRPI9610977A2_D0078
28514 i * i +
Figure BRPI9610977A2_D0079
216
Figure BRPI9610977A2_D0080
Exemplo 88
Variantes G-CSF que contêm substituições de amínoácido sim5 pies ou múltiplas foram fabricadas usando-se técnicas de mutagenese de
PCR como descrito em WO94/12639 e WO94/12638. Estas e outras variantes (isto é, substituições de aminoácidos, inserções ou supressões e extensões N-térmínos ou C-iérminos) também podem ser realizadas, por alguém versado na técnica, usando-se uma variedade de outros processos 10 incluindo montagem de gene sintético ou mutagenese direcionada - sitio (ver Taylor et al., Nucí. Acid.Res. 13:7864-8785 [1985]; Kunkel et al., Proc.
Natl. Acad.. Sei, USA, 82:488-492 (1985); Sambrook et al., Molecular Cioning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory' Press, Cold Spring Harbor, NY, [1989], (WO94/12639) e (WO94/12638)). Estas 15 substituições podem ser feitas por alguém em um momento ou em combinação com outras substituições, e/ou supressões, e/ou inserções e/ou extensões de amínoácídos. Apôs vericação em sequência das mudanças, o ADN
217 de plasmídio pode ser transfectado em uma célula de mamífero apropriada, célula de inseto ou linhagem bacterial tal como E. coli para produção. Variantes conhecidas de G-CSF, que são ativas, incluem substituições em posições 1 (Thr para Ser, Arg ou ou Gly, 2 (Pro para Leu), 3 (Leu para Arg ou 5 Ser) e 17 (Cys para Ser) e supressões de aminoácidos 1-11 (Kuga et al..
Biochemical and Biophysical Research Comm. 159:103-111 (1989)), Estes variantes de substituição de aminoácido G-CSF pedem ser usadas como o molde para criação de agonistas de receptor G-CSF onde um novo términoN e novos termínys-C são criados. Exemplos de variantes de substituição de 10 aminoácido G-CSF são mostrados na Tabela 9.
Exemplo 89
Determino de Bioatividade de Variantes de Substituição de aminoácido GCSF
As variantes de substituição de aminoácido G-CSF podem ser ensaiadas para atividade de proliferação de célula usando-se linha de célula Baf/3 transfectada com o receptor G-CSF humano, A bioatividade de amostras de variantes de substituição de aminoácido G-CSF é mostrada na Tabela 9 em relação a G-CSF humana nativa. Um indica uma atividade comparável a nativa e um indica atividade significantemente reduzida ou 20 nenhuma mensurável.
Tabela 9
Atividade Proliferação de Célula de Variantes G-CSF em Linha de Célula
BAF3 Transfectada com o Receptor G-CSF Humano
aa Posição Nafevaaa Mutante &a Aimdade
13 Phe Ser .......*
13 Phe His
13 Phe Thr li··
13 Phe Pm .....i:
16 Lys Pro •f
16 Lys Ser 4-
218
Tabela 9 (continuação)
Atividade Proliferação de Célula de Variantes G-CSF em Linha de Célula
BAF3 Transfectada com o Receptor G-CSF Humano aaPosção Nativa aa MUarteaa Atividade*
16 Lys Thr
16 Lys His +:
18 Leu Pro *4
18 Leu Thr +
18 Leu His 4-
18 Leu Cys 4
18 Leu lie -4
19 Glu Aia
19 Glu Thr
19 Ghu Arg
19 Glu Pro
19 Glu Leu -
19 Glu Ser
22 Arg Tyr
22 Arg Ser •4
OO íd· Ala 4-
22 Atq Thr 4
24 tie Pm 4-
24 lie Leu 4
24 Ife Tyr 4
27 Asp GV 4
219
Tabela 9 (continuação)
Atividade Proliferação de Célula de Variantes G-CSF em Linha de Célula
BAF3 Transfectada com o Receptor G-CSF Humano
aaFdÇâc Nativa aa Mutante aa Atividade
.....,................ ~~~~......................—-------------------- .......................................................
30 Ala tie +
30 Ala Leu
34 Lys Ser +
43 His Gly
43 Hg Thr •f
43 His Val •1·
43 His Lys
43 His Trp •l·
43 His Ala -i-
43 His Ary «+·
His Cys +
43 His Li^j +
44 Pro Ay 4a
44 Pm Asp -¼
44 Pm Val 47
44 Pro Ala 4·
44 Pro His +
44 Pro Gin
44 Pm Trp +
44 Pro Gly
44 Pro W +
220
Tabela 9 (continuação)
Atividade Proliferação da Célula de Variantes G-CSF em Linha de Célula
8AF3 Transfectada com o Receptor G-CSF Humano
f^OístíÇíSíO' Nabva aa Mutante aa Atividade
46 Glu Aía 4~
46 Glu Ml 4
47 Leu Πτ 4
49 L,OJ· Phe 4
49 Leu Arg 4-
49 Leu Ser +
S0 Leu His 4τ
54 Leu Hís 4
67 Gh Lys 4*
67 Gh Leu -¼
67 Gin Cys 4
70 Gin Pro
70 Gin Leu *
70 Gin Arp
70 Gn Ser
104 Asp Gly
104 Asp Vai +
108 Leu Ala +
108 leu Vai
108 Leu Arg 4·
108 Leu Gly 4~
221
Tabela 9 f çontinuaaâp)
Atividade Proliferação de Célula de Variantes G-CSF em Unha de Célula
BAF3 Transfectada com o Receptor G-CSF Humano aa Posição Nativa aa Mutante aa Atividade*
108 Leu
108 Leu
115 Thr
· 115 Ibr
115 Thr
144 Phe
144 Phe
144 Phe
144 Phe
144 Phe
146 Arg
147
• : 156 His
| 156 His
I 156 His
I 159 Ser
I 159 Ser
159 Ser
159 Ser
I 159 Ser
[ 162 i______________ GU
Trp
Gh
His +
Leu
Ala 4·
His
Ag 4-
Pro
Leu +
Glu .....4·
Gh 4- :L
Gin 4·
Asp
Asp
Gly .4:........ !<<:<<<< I
Arg 4·........
Thr 4
Tyr 4- ...........
Vai 4
Giy +.....
Gly-
222
Tabeía 9 (continuação)
Atividade Pro!iteração de Célula de Variantes G-CSF em Linha de Célula
8AF3 Transfectada com o Receptor G-CSF Humano
Figure BRPI9610977A2_D0081
atividade relativa a hG-CSF nativa nd - não determinada
Ainda sem elaboração, é. acreditado que alguém versado na técnica, usando a descrição anterior, utilize a presente invneçào em sua Inteira extensão. As seguintes realizações preferidas são, por isso, para ser construídas meramente como ilustrativas, e não íimitativas do restante da exposição em qualquer maneira.
Mais detalhes com relação a técnicas de biologia molecular, purificação de proteína e bioensaios podem ser encontrados em WO94/12639, WO94/12638, W095/20976, WO95/21197, WO95/20977, WO95/21254, aqui incorporadas por referência em sua totalidade.
Todas as referências, patentes ou pedidos de patentes aqui citados são aqui incorporados por referência em sua totalidade como se aqui escritos.
Vários outros exemplos serão visíveis para a pessoa versada na técnica após leitura da presente descrição sem se fugir do espírito e escopo da invenção. É pretendido que todos tais outros exemplos sejam incluídos dentro do escopo das reivindicações apostas
223
Traduçâo de termos, mdicados nas listagens de sequências se guintes
Name = Nome
General information ™ Informação Geral
Applicants ~ Requerente
Street - Rua
City ~ cidade
State ~ Stado
Country -- Pais
Postal Coda ~ Código postai
Telephone ~ Telefone
Title of invention ~ Titulo da Invenção
Number of sequences ~ Número das sequências
Computer Readabel form ~ forma legível por computador medium type/floppy disc ~ Tipo de meio disco flexível
Operating system - sistema operacional
Current Application data ~ Dados do presente pedido prior aplicatlon date ~ dados do pedido anterior filling date - data do deposito length ~ comprimento
Type ~ tipo
Strandedness filamento topology ~ topologia
Molecule type ~ tipo de molécula
Feature ~ características amino acids - amino ácidos unknown - desconhecido protein == proteína name/kay: Modified-site ~ nome/chave: sítio modificado location ~ localização other information : note outra informação', nota position, is, or - posição, é, ou
224 bstagem d.e sequências (1) Informação Geral (í) Requerente (A) NOME : G. D. Searle & Co.
(B)Rua: P; o. box 5110 (C) Cidade: Cidade (D) Estado . Illinois (E) País.: Estados Unidos da América (F) Codígo postal (ZIP): 60680 (G) Telefone : (708)470-6501 (H) Telefax: (708)470-6501 (ή) Titulo da invenção: Agonistas REceptores Hematopoiéticos
Multí-Funcíonais (iii) Numero de sequência 258 (iv) Forma legível por computados (A) Tipo de meio: Disco flexível (8) Computador: IBM PC compatíveç (C) Sistema operacional: PC-DOS/MS-DOS (D) Software: Patentin Release #1.0 Vers (v) Dados do presente pedido:
Número do pedido: US 2910 (A) Número do pedido: US 60/004,834 (8) Data do depósito: 05/10/1995 (2) Informação para SEQ ID NO.1 (i) Características da sequência (a) comprimento: 174 aminoácidos (b) Tipo: aminoácido (c) Filamento: desconhecido (d) Topologia: desconhecida (h) tipo de molécula: Proteína (ix) Característica:
225 (A? NAME/KEY ·. Modi £ ied-site (B> LOCATION:!
ÍD; OTHER INFORMATION;/note* ’Kaa at position 1 is Thr. Ser, Arp. Tyr or Gly:* > / y, ; ; (1X5 FEATURE:
(A? NAME? KEY; Modified-site (B? LOCATIONS
CD) OTHER INFORMATION', /note- *Kaa at position 2 is Pro o Leu;
i IX · FEATURE:
{Al NAME/KEY: Modified-site (B? LOCATION-.3
CD) OTHER INFORMATION:/nope® *Xaa at position 3 is Leu. ......Arg, Tyr-or Ser; ‘
ÜX) FEATURE:
(A) NAME/KEY; Modified-site (Si LOCATION:13
Φ5 OTHER INFORMATION·./note® Xaa Ser, His, Th~ or Pro;’ at position 13 is Phe
Ux) FEATURE:
{A; NAME/KEY: Modified-site
(St LOCATION:1δ
ID} OTHER INFORMATION:/note* *Xaa at position IS is Lys
Pro, Ser, thr or Hxs;*
(1x5 FEATURE:
(A) NAME/KEYr Modified-site
(35 LOCATIONcl?
(05 OTHER INFORMATION:/note® ’Xaa at position 17 is Cys
Ser, Gly. Ala, Ils, Tyr or Arg;*
(ix) FEATURE;
(A) NAME/KEY: Modified-site
(B) LOCATION:18
(OS OTHER INFORMATION·./note® KXna at position IS is Leu
Thr, Pio, His, Xie or Cys;* iix) FEATURE:
(A) NAME/KEY: Modified-site
ÍB) LOCATION:22 (O) OTHER INFORMATION:/note® *Xaa at position .22 is Arg, Tyr, Sat, Thr or Ala,- * (ix) FEATURE:
(A) NAME/KEY; Modified-site (E) LOCATION124 (D) OTHER INFORMATION:/note* “Kaa at position 24 is lie, Pro, Tyr or Leu;
iix) FEATURE:
22t (A) MAME/KEY: Modstied-site (SI LOCATION-. 2“ (Di OTHER INFORMATION;/note» ’Xaa at position 2^ xs Asp, (ixi FEATURE' (A) NAME/KEY: Modified-site (B) LOCATION:30 (D) OTHER INFORMATION:/note- ’Xaa at position 30 is Ala, He, Leu or Gly ; ” fix) FEATURE ;
(Ai NAME/KEY: Modified-site (Bl LOCATION:34 (D5 OTHER INFORMATION: /note® ’Xaa at position 34 is Lys ........c: Ber .·A..... ....................
(ix) FEATURE:.
(A? NAKE/KEY: Modifred-site (31 LOCATION:36 fD) OTHER INFORMATION;/note- ’Xaa at position 3 δ is Cys or Ser;’ (ix) FEATURE:
(Al NAME/KEY: Modxfxed-sxte (B) LOCATION:42 (EC OTHER INFORMATION:/note® “Xaa at position 42 is Cys or Ser;’ fix) FEATURE:
(A) NAME/KEY: Modified-site (B) LOCATION:43 (B) OTHER INFORMATION:/note® ’Xaa at position 43 is His, Thru Gly.- Val, Lys, Trp, Ala, Arg, Cys, or Leu;’ fix) FEATURE:
(A) NAME/REY: Mcdified-site (Bl LOCATION:44 (El OTHEF; INFORMATION;/note® ’Xaa at position 44 is Pre, Gly, Arg, Asp, Val, Ala, His, Trp, Gin, or Thr;’ fix) FEATURE;
(A) NAME/KEYr Hadified-site (S'; LOCATION :46 (0) OTHER INFORMATION;/note® “Xaa at position 46 is Glu,. Arg, Rhe, Arg, He ox Ala;’ fix) FEATURE:
(A) NAME/KEY: Modified-site (B) LOCATION:47 (DI OTHER INFORMATION:/note® ’Xaa at position 47 is Leu ......or Thr ; ’ ........ ...... ......
FEATURE;
(A' ΝΑΜΕ/ΧΕΪ; Mcd„:ied-site
Á .«.•Lt AT/10L- ' 4 ~ (Ο· OTHER INFORMATION;/note® ‘Xaa at position 4$ is Leu.
Phe. Arg or Ser ,· ”
U.x; FEATURE:
ÍAÍ ΝΑΜΕ/ΚΞΥ; Modifleõ^site fpj LOCATION:eg
ÍD; OTHER INFORMATION:/note® Xaa ar, position SO is Leu.
HÍS < PXO OX* TVS; *
Hx):. FEATURE;
(A; NAME/KEY: Modified-site ;’S. LOCATIQN;:S4.........................
{D; OTHER INFORMATION:/note® ‘Xaa at position S4 is Leu or Has;'· (lx· EEATUREi
LA) NAMEZEEY; Modifiedsite («} LOCATION;¢4
Oj OTHER INFORMATION: /note® 'Xaa at position 64 is Cys or Ser ; “ (ixl FEATURE:
(A) NAME/KEY: Mcsdif ied-site (Si LOCATION;e7 (Oi OTHER INFORMATION:/note® Xaa at position £7 is Qin. .................Lys. Lsa or Cys;' ........ ...... ......
ux; FEATURE:
ÍA) NAME/KEY: Ktadified~slte {Bi LOCATION;7C (D; OTHER INFORMATION:/note® “Xaa at position 70 is Gin, Pro, Leu, Arg or Ser;K iix; FEATURE:
ÍAi NAMS/KEY: Modifieo-site (B) LOCATIONs74
ID? OTHER INFORMATION:/note® 'Xaa at positron 74 is Cys or Ser;” (lx) FEATURE:
LA) NAME /KEY: Modi f ied·’ sit e
IB; LOCATION:104 (DJ OTHER INFORMATION;/note® “Xaa at position 104 is Asp, Gly or Wlrfix) FEATURE:
tA- ΝΑΜΕ/ΕΕΎ: Modif·;r» (B; LOCATION :1.56 (D? QTHEP, INFORMATION:/note® 'Xaa at· position IOS is Let, Ala, Vai. Arg, Trp, Gin or Gly,iix) FEATURE;
225 í A; NAME / 'KEY t Hoci i i - s i £ &
/ κ * wt?*>v x 1 “ \ Art / Λννι<>«ΑΛ Vi <> <X> »*
>D> OTHER INFORMATION:/not®= His, I»»u or Ala,'* Kaa at; posttton US xs Thr,
i ix > FEATURE; (λ! NAME,'KEY: Modifxeh-sita CB} LOCATION.!20 (Hi OTHER INFORMATION:/note® Gly. Arg, Lys or Hi«K ’Xaa a: position 120 xs Gin,
< ÍX J FEATURE : (A; NAME/KEY: Modified-Sit.® (B- LOCATION;123 ÍXH OTHER INFORMATION;/note® Arg, Ph® or Thr ‘Xaa at position 123 xs Glu,
(ix) FEATURE; (AS NAME/KEY; Modified-site (B? LOCATION:144 (LU OTHER INFORMATION:/not®® Xaa His, Arg, Pro, Lev,. Gin or at pcsiricn Glu;” 144 xs Phe,
{ ix) FEATURE; (A) NAME/KEY: Modi*i®d-sit® {B} LOCATION;Ϊ46 (5} OTHER IJÍFORMÜiTION:/note« or Gin; *Xaa ar position.146 xs 1 trg
(ix} FEATURE; W NAME/KEY: Modifled-sit® (B> LOCATION :147 io: OTHER INFORMATIONx/net®» or Gin; ‘Xaa at position 147 is Arp
Í ixl FEATURE: (A) NAME/KEY: Modified-siv® (3! LOCATION;156 (D) OTHER INFORMATION:/not®» Gly or Ser;’ Xas at position 156 is His,
(XX) FEATURE: (A! NAME/KEY: Modifiec-site (3- LOCATION :155 iOS OTHER INFORMATION;/note® Arg., Thr , Tyr, Vai cr *Xaa Gly; * at position 15.9 is Ser,
iix} FEATURE: (A) NAME/KEY: Modified-site (B) LOCATION;1§2 {D; OTHER INFORMATIONi/note® Xaa at position 162 is Glu.,
Leu, Gly or Trp;’ (1%) FEATURE:
229
ÍA· NAME/KEy. Bcâiíieà-siLe («; LOCATION;183 {D· CTREE ItfFORMATIO??;/note® Xaa position 163 is '?al <®ly, Arg ox: Aza;
Í2.X; FEATURE :<
ξΑί NAME/KEY: Modif ied-Site
CB> LOCATION :169 (R? OTHER INFORMATION; /note* “Xaa ax. position 16? is Arg. Ser, Leu,· Arg or Cys.- iix: FEATURE;
a; NAME/KEY'. Modified-site >fE· LOCATION;17C (D; OTHER INFORMATION: /nats?- ’Xaa at position 170 is His, Arg az Ser;
{xi; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO.- 1,-
Xaa Xaa Xaa \>Λ V Pro 5 Ala Ser Ser LrôHl Pro 10 Gin Ser Xaa Leu Leu 1 Xaa
Xaa Xaa Glu Gin Val Xaa Lys Xaa Gin Gly Xaa Gly Ala Xaa Leu Gin
2 0 25 30
Glu Xaa m'GIX Xaa Ala Thr Tyr Lys Leu Xaa Xaa .Xaa Glu Xaa Xaa Val
.4·:$ 40 45
Xaa Xaa ' ίΛ’ ·'·'ϊ » v wiy Hrs Ser Xaa Gly lie Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Xaa
50 55 60
Pro Se- Xaa Ala Leu Xaa Leu Ala u I v Xaa Ser VíIaÍ **su His Eer
65 7 0 75 80
Gly Leu Phe ueu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly lie Ser
§5 90 95
Fra Glu Leu Gly Pro Thr Leu Xaa Thr Leu Gin Xaa Asp Val Ala Asp
100 105 110
Ros Ala Xaa Thr lie Tsrp Gin. Gin Met Glu Xaa Xaa Gly Met Als Pro
115 120 125
Ala Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Al® Xaa
130 135 140
Gin Xaa Xaa Ala Gly Gly Val Val Ala Ser Xaa Leu Gin Xaa Phe
145 Á 0 1S5 160
Leu Xaa Xaa Ser Tyr Arg Val Leu Xaa Xa^ Leu Ala Gin Pro
165 170
INFORMATION FOR SEQ ID NG: 2:
30
SEQUENCE CHARACTERISTICS: u:· LENGTH; L33 asuna acids ί >ήξ > ç· p*1 * ^ζΧ^,Ο í C ;· STRAiroLD’iESS; S ipgi fe (Dj TOPOLOGY: 1 infear
MOLECULE TYPE; pretext iix; FEATURE:
f-A-» NAME/KEY; Mcdified-Site (B? LOCATION-.17 {»? OTHER INFORMATION: ?ROC«« Xaa at position 17 is Ser.
Lys.. Gly. Asp. Met, Sir*, or Arg;·
u.X; FEATURE.s
LA) NAME/KEY? Modified-site iB> LOCATION;18
O; OTHER INFORMATION: ‘Xaa at position 18 is Asn,
His. Leu, Xis. Phe, Arg, or Tin; * !ix. > FEATUREj
ÍA} NAME/KEY: Modified-site (B; LOCATION <0; OTHER INFORMATION: /nciie= ‘Xaa at position 19 tS Met,
Phe, Xie, Arg, Gly. Ala, csr Cys; ’ iix! FEATURE;
(A) NAME/KEYx Modifted-Site {Bi LOCATION;20
ÍO; OTHER INFORMATION:/notes *Xaa at position 20 is lie,
Cys, Gin, Glu, Arc, Pro, or Ala;,: í XX; FEATURE:
I A) ΚΑΜΕ/ΚΕΪ: Modif ifed-SXtfe (B) LOCATION:21 (E) OTHER INFORMATION: /note- 'Xm at position 21. is Asp, Phe, Lys, Arg, Ala, Gly, Gl«, Gin, Asn, Thr, Ser or iixi FEATURE;
ÍA} KAME/KEY: Modified-site
IBj LOCATION:22 (D) OTHER INFORMATION;/note- *Xaa at position 22 is Glu, Trp, Pro, Ser. Ala, His. Asp. Asn, Gin, Leu, Val or iix; FEATURE;
ÍA) NAME/KEY'. Modifxed-site (B) LOCATION:23 (0) OTHER INFORMATIONx/note® Xas at position 23 is Xia. Val, Ala, Trp, Lys, Phe, lieu, Ser, cr Arg:‘
23.1 fix FEATURE:
(A? FAMS'.CV.' Moditieò-Slte (g: LOCATION;24 {pj OTHER INFORMATION;/note* Xaa an position 24 .ix Il->, Gly, Visi. Arg, Ser, Rhe, Leu;’ fix? FEATURE;
(A· KAME/KEY: Modi*ied-site (Si LOCATION125 (D: OTHER INFORMATION: /note® ‘Xaa at positron 25 is Thr, His.. G»y.- Gxr*. Axe, Fuc·.ex Axá.;
!ίχ: FEATURE:
{A} NAME/KEY ·. Modi £ i eõ-site
B? LOCATION:25
O) OTHER INFORMATION; /note® KXa« «t position 2€ is Mrs.. Thr, Paef Gly, Arg, Ala, Try;
Ux> FEATURE ;
(A; NAME/KEY- Modified-site •B: LOCATION:27 ru; OTHER INFORMATION:/note* “Xaa at position 2” xs Leu, Gly, Arg. Thr, Ser, or Ala;’ iix; FEATURE:
(A; NAME/KEY: Modified-site (B: LOCATION:28
ÍO; OTHER INFORMATION;/note* 'Maa at position 28 is Lys. Arg.. Leu, Gin, Gly, Tro, Vai or Trp;* iix.i FEATURE ;
(A; NAME/KEY; Modified-Site (St LOCATION:28
ÍD) OTHER INFORMATION:/note* “Maa at position 25 is Gin, Asn, Leu, Fro, Arg, or Vai;’ iix) FEATURE:
(A> NAME/KEY: Modified-site (B> LOCATION:3C <D) OTHER INFORMATION;/note* ”Xaa at position 3B is Bro, His, Thr, Gly, Asp, Gin, Ser, Leu, or L,..“ iix J FEATURE.:.
(A) NAME/KEY: Modi*ied-site >:E; LOCATION;:?!
(OJ OTHER INFORMATION:/note* “Maa at position 31 xs Pro, Asp, Gly, Ala, Arg, Leu, or Gin;’ (ix> FEATURE;
(A; ΝΑΜΕ/ΚΕΎ: Modified-site (Bi LOCATION;32 (0} OTHER INFORMATION:/note® ’Xaa at position 32 is Leu.
Vai, Arg, Gin, Ast, Gly? Ala, cr Gh:;“
232
IX: FEATURE:
(A ; NAME/KEY : Hodi::ied-site
S: 7;OCATION:?3
-0· OTHFR .INFORMATION; /nocg= kXsa at position 33 is Pro.
Leu, Gin, Ala, Thr, ox Siu;* :txi FEATURE·:··· ...... ......
(A· NAME /KEY: Nodlfieã~«xce ?Ε· LQCATIC>N;34 (Di OTHER INFORMATION: /note® «Xaa at position 34 is Leu,
Val, Gly, Sex. Lys, Glu, Gin, Tax, Arg.. Ala. Pbe, He iist} FEATURE·.
(A- NAME/KEY: Modified-site
ÍS)......LOCATION s 3 5 {£} OTHER INFORMATION:/note- «Xaa at position 35 is Leu, .......Ala., ...dy·:,. .Asn,Pre, Gin, crVal;
(χ,χ; FEATURE;
i. A) NAME / KEY .- Modi f i ed~ s i to {Si LOCATION-.36 iO) OTHER INFORMATION:/note® Xaa at position 3£ xs Asp.
Leu, or Val :« iix: FEATURE:
(A) N/iME/KEi '. Moâirieâ-sxte (Bl LOCATION:37 (H OTHER INFORMATION:/note» «Xaa at position 37 is Rhe, Ser, Pro, Trp, or Ils;* íix) FEATURE:
{Aj NAME /KEY: Modified'-sit® (B) LEGATION:38 to) OTHER INFORMATION; /note- «Xaa ar position 38 is Asm, or Ala;
(ix: FEATURE:
(A- NAME/KEY: Modified-site
ÍB; LOCATION:40 (Di OTHER INFORMATION;/note» «Xaa at position 40 is Leu, Trp, or Arg;iix} FEATURE:
ÍA) NAME/KEY: Modified-site {R) LOCATION:41 (D.) OTHER INFORMATION:/note® Xaa at position 41 is Asn Cys, Arg, Leu, His, Mat, or pro;· {XX) FEATURE:
ÍA; NAME/KEY: Modified-site (B) LOCATION;42 ip} OTHER INFORMATION:/note» ’Xaa at position 42 is Gly,
233
Asr: . ser. ..ys. Asn, Cys, Thr, Leu. Vai., Giu. Fhe, Tyr. Cie, Met
....... .....cr Ala, r: FEATURE:
<A; ΠΑΚΕ/ΚΕΥ: Modified-site
ÍHJ LOCATION:42 íDi OTHER IRFGRHATIUN:/nste= ‘Xaa ar position 43 is Glu, Asn. Tyr. Leu, Phe. Asp. Ala, Uys. Gin, Arg, Thr. Gly, or Ser V' irx; FEATURE:
LAí NAMEZKSY: Modified-sire
TB) U5CATX©Mi44· :D; OTHER INFORMATION: ./nona» xXaa ar. position 44 is Asp.
Ser, Leu, Arg, Lys, Thr, Het, Try, Glu. Asn, Gin, Ala er Pro;
ίίκ; FEATURE·· íA? NAMEXKEX·. Modified-site
JB; LOCATION:4§
P; OTHER INFORMATION:/note» ’Xaa ar position 4S is Gin, Pre·, Phe, Vai, Her. Leu, Thr, Lys, Trp, Asp, Asn. Arg, Sas , Ala ,
Xie, Glu or Hisr“
Ux) FEATURE:
(A) NAME/KEY: Modified-site (B? LOCATION:4S (0} OTHER INFORMATION:/note·» *Xaa st position 46 is Asp.
Phe, Ser, Thr, Cys, Glu, Asn, Gin, Lys, His. Ala, Tyr, íiA^;)'ísVhU:í or Gly;Λ (rxj FEATURE:.
ÍÀ} KAME/KEY: Hodified-site {Bl LDCATT0H:4S
ÍD) OTHER 1NF0RMATXCR: /note” Xaa at position 4? is XIsj,
Gly, Vai, Ser, Arg, Fro, or His;« ilxl FEAOjRR·.
{Al NAME/REYt ModifXsd-site i'B) L0CATX0H:4S (TH QTKEP, TEFC'RMATXOH-./note^ Maa at position 46 is Lau,
Ser, Cys, Arg, Xie, His, Rhe. Glu, Lys, Thr, Ala. Met Vai or
As n :
tix} FEATURE:
|A) Ϊ4ΆΜΕ/ΚΕΪ·. Modified-site (Bi LOCATION:45
S'U; OTHER INFORMATION:/note» Xaa. at position 4S is Met.
Arg, Ala, Gly, Fro, Asn, His, or Asp;
• ,ι X FEATCHE ίλ. ’CAÍEE -xCEi ; ModlfÍed~£itS ;s.· LECA’-'XON: 5Π (ΐ>; OTHÃR I/íFORMATION;/note» “Xaa at pomiGX SC i* Glu,
Leu, Thi , Asp, Tyr, Ly*. Asr;, Ser. Ala, IàS. Vai, Hxs, Phe. Met cr G,l.n; ~ il.xj FEATURE:
(A.J NAME/KEY: Modifisd-site i'B) LOCATIONí51 (D; OTHER INFORMATION; Znôte» *Xa& at position 51 is Asn.
Arg. Met. Pro.· Set, Thr., cr his;
iix> ~ΕΛΤΟΡ“' (A? NAME/KEY; Modòfied-sire (BJ LOCATION-.52 (Xh OTHER INFORMATION;/note» *Xaa at. position 51 is Asn,
Hiâ< Arg. Leu.. Gly, Ser, or Thr;· ( x v t 'ff’ti 'ft urtttrjtí' » $ *v<V>’ a- VÍ\w» v (A? NAME/KEY; Modified-site {B# LOCATION;S3 (hi OTHER INFORMATION;/note® ’Xaa at position 53 5$ Leu,
Thr, Ala, Gly, Giu, Pro, Lys, Ser, or' N...” i;x; FEATURE:
(A) NAME/KEY: Mndified-site
ÍR} LOCATION;54 {£·} OTHER INFORMATION: /note» Xaa at position 54 is Arg, Asp, Ila, Ser, Val, Thr, Gin, Asn, Lys, His, Ala or Leu; *'
41*} FEATURE;..........................
(A) NAMEZ KEY; Modi f ied-site (Bl LOCATION:55 (Ο) OTHER INFORMATION;/nene» ’Xaa at position 55 is Arg,
Thr, Val, Ser, Leu, or Gly;“ iixl FEATURE;
{A? NAME./KEY; Modi*ieo-site
ÍS) LOCATION:56 !D) OTHER INFORMATION-./note» 'Xaa at position 56 is Pro, Gly, Cys, Ser, Qin, Giu, Arg, His, Thr, Ala, Tyr, Phe, Leu,.....Val ............ ...... ....................
or Lys- ϋκ} FEATURE;
(AS NAME/KEY: Modified-site (B) LOCATION:57 {0! OTHER. INFORMATION;/note· ’Xas at position 57 is Asn
........:ervGiy.r“·..............
iixJ FEATURE;
235
Figure BRPI9610977A2_D0082
i'~>; OTHER INFORMATION /πο£β« ’Xaa 8i pcs it.* on 52 is Leu. Ser. Asp, Arg, die, Va_ , or uy.í;:
UsO FEATURE·:
{A} NAME/KEY; Modiiied~site <S * LOCATION:5 P
Ç.D; OTHER INFORMATION; /note» Xaa at posit!ar» 5§ xs Glu. Tyr. Hrs.. Leu, Pre·, er Arg; * u:: FEATURE:
ί’Α; ΝΑΜΕ/ΚΞΎ: Modified-sxte (:B:·; LOCATION: 6 £· 'D< OTHER INFORMATIONi/note® ”Xaa ar position SO is Ala, Ser, Pro. Tyr, Asn, or Thr; ’
FEATURE;
iA; NAME/KEY: Modified-site (BJ LOCATION:61 (□) OTHER INFORMATION:/note® ’Xaa at position 51 is Phe,
Asn, Glu, Pro, Lys, Arg, or Ser;* {XX· FEATURE:
(A· NAME/KEY: Modified-sxte {B; LOCATION;52 (D) OTHER INFORMATION:/note® ’Xaa at positron 52 is Asn, His, Vai, Arg, Pro, Thr, Asp, or He;* r XX i FEATURE: · (A) NAME/KEY; Modifled-site (E> LOCATION:63
CD? OTHER INFORMATION:/note® ’Xaa at position 53 is Arg, Tyr, Trp, Lys, Ser,. His, Pro, or Vai;* iXX; FEATURE:
{A} NAME/KEY; Modifiad-site
CBS LOCATION:64 (Dj OTHER INFORMATION; /note»· *‘.Xa& at position E4 is Ala, Asn, Pro, Ser, or Lys;* :ix; FEATURE:
(A? ΝΑΜΕ/ΕΕΎ: Modified-site
ÍS) LOCATION:65
ÍD) OTHER INFORMATION: /note- ’Xaa at position 65 is Vai, Thr, Pro, His, Leu, Phe, or Ser;’
Cix? FEATURE:
fA) NAME/KEY : Modxf ied-site
ÍE? LOCATION:56 (D) OTHER INFORMATION:/note® Xaa at position 65 is Lys, Tie, Arg, Vai, Asn, Glu, or Ser;
ÍXX! FEATURE:
23δ (Α; NAME/KEY; Modifxed-site í 31 LOC AT CON :.· 67 (0} OTHER INFORMATION: /uote® Xaa at postion 6? is Ser.
Ala, Pna, Val, Gly. Asn. XXe, Pro, cr His;
írx; FEATURE;
(Aí NAME/REY: Moõlfied-site (Si LOCATION:68 fOi OTHER INFORMATION:/note* Maa ac position 68 :s Ler,
Val. Trp, Ser, Ile, Phe, Thr, cr His;* ílx} FEATURE·.· (A) NAME/KEY: Modiiieü-Site (B; LOCATION:69 {O- OTHER INFORMATION:/note® 'Xaa ar position 6$ is Gin, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg, Trp. Gly, or L.».1·
Í.1MÍ FEATURE* (A; NAME/KEY: Modxfied-sita (Bi LOCATION;70 (0; OTHER INFORMATION:/note* ’Maa at position 70 is Asn,
Leu, Val, Trp, pro, or Aia;“ iix} FEATURE:
(A) NAME/KEY: Modiflad-site (B) LOCATION:?!
(D} OTHER INFORMATION:/note* Xaa at position. 71 is Ala. Mat, Leu, Pro, Arg, Glu, Thr, Gin, Ττρ, or Asn; H (ix) FEATURE:
(AS NAME/KEY: Modiflad-site (B} LOCATION:71
Sb} OTHER. INFORMATION: /note* BXaa at position 72 is Ser,
Glu, Met, Ala, His, Asn. Arg, or Asp; *
(XX? FEATURE:
(A) NAME/KEY: Modified-site
{E} LOCATION:73
(D) OTHER INFORMATION:/note® ‘Maa at position 73 is Ala,
Glu, Asp, Leu, Ser, Gly, Thr, or Arg;
(XXJ FEATURE:
!A} NAME/KEY: Modilied-site (B) LOCATION:?^ (O) OTHER INFORMATION:/note- ’&» at position 74 is Tie, Mat, Thr, Pro, Arg, Gly, Ala;’ (ix? FEATURE:
(A} NAME/KEY; Modifiec-site
ÍB) LOCATION:75 (0} OTHER INFORMATION: /note* 'Maa at posi tion 75 is Glu, Lys, Gly, Asp, Pro, Trp, Arg, Ser, Gin. or Leu;
ÍXX) FEATURE:
237
Αί NAME/LET: Hadi fifâà-Slta {O OTHER INFQEMAIION - /note® Xsa at peal :io> £· is Yer,
Vai, Ala, Asr,, Trp, Glu, Pio. GJ?-'. or A. ,' :{ix; FEATURE i íA.j NAME/KEY; Modi fled-site {«} LOCATION:77 to OTHER INFORMATION; /note- ‘Xaa at positicr. ~~ is He. .......Ser. Arg. Thr, or .Leu,;’ t'ixl FEATURE;
ça; nami/KEY-. Modified-site (E) location.-7&
(to OTHER INFORMATION:/note® 'Xaa at position 78 is Leu,
Ala, Ear, Glu, Phe. Gly, or Arg?’
ÍÍX; FEATURE:
(A; KAME/KEY' -. Modii.ied-site iE; LOCATION .-75 (to OTHER INFORMATION:/note* *Xa& at. position ~5 us Lys, Thr, Asn, Met, Arg, He, Gly, or Asp;’ iix) FEATURE;
(A: NAME/KEY: Modifred-site (E) LOCATION;80 (to OTHER INFORMATION-. /note* ‘Xaa position at 80 is Asn,
Trp, Val, Gly, Thr. Leu, Glu. or Arg; ” iix) FEATURE;
(A) NAME/KEY; Modifled-site (E) LOCATION:81
CO) OTHER INFORMATION-./note®· ‘Xaa at. position 31 xs Leu, Gin, Gly, Ala, Trp. Arg, Val, or Lys;* (ix) FEATURE:
(A) HAME/KEY; Moditred-stte (B'i LOCATION; 82 (0) OTHER INFORMATION:/note* *Xaa at position 82 is Leu, Gin, Lys, Trp, Arg, Asp., Glu, Asn, His, Thr, Ser, Ala, Phe, ......
Ila, Met or val;
•ix) FEATURE:
{A) KAME/KEY; Modiiied-site (B) LOCATION;83
50) OTHER INFORMATION: /note® *Xaa at position 83 is Pro, Ala. Thr, Trp, Arg, or Met;
(ix) FEATURE;
(A) NAME/KEY; Modified-site
ÍB} LOCATION:84 (L; OTHar. uNrORMATXON:/note* *Xa& at position 84 is Cys. Glu. Gly, Arg, Met, or Val;*
238 {AisAI-Ol 'KRY ·, Mcdixred-sxte
ÍS: .'X.CATTMLSB (D) OTHER INFORMATION:/note» «Xaa at position 85 is Let
Asn.. val.. or Gin; “ (ix:> FEATURE:
iA.j NAME/KEY: Modified-sits
IB? LOCATION;88 (O.· OTHER INFORMATION:/note* ’Xas at positron 88 is PreCys,. Arg,. Ala < or Lys .· * \ .y' ç*·»*» x * {Λ} NAME/KEYx Modiried~sxte
ÍB? LOCATION:87 (D? OTHER INFORMATION-./note» *Xaa at position 87 is Leu. Ser, Trp, or Gly;
iix; FEATURE;
íAi NAME/KEY; Modi £ i fed-s it®
IS) LOCATION:8$
Ιΐί: OTHER INFORMATION: /note® ’Xaa as. position SB is Ala. Lys,, Arg , Val , or Trp ; * :(XX) FEATURE t (A- NAME/KEY: Modified~site (El LOCATION:B§ (Di OTHER INFORMATION.-/note» “Xaa at position SS j,s Asp, Cys, Leu. Val, Glu, His, Asn, or (ix j FEATURE:
íà) NAME/KEY; Modified-site (B) LOCATION;$G
ÍD) OTHER INFORMATION:/note» Xaa at positron 90 is Ala. Rro, Ser, Thr. Gly, Asp, lie, or ,Met;
Crx) FEATURE;
(A? NAME/KEY; Modified-sits
ÍS) LOCATION:91 {D; OTHER INFORMATION:/not®ss Xae at position 91 is Ala, Pro. $er< Thr, Phe, Leu, Asp, or His;·
Íix) FEATURE:
íA) NAME/KEY: Modi;*ied-sxte (8} LOCATION;91 (OJ OTHER INFORMATION;/note® Asa at position 92 is Pro, Rhe, Arg, Sex, Lys, Hrs. Ala, Gly, lie or Leu;
(ix) FEAIWE:
(A· NAMEZKEY: Modified-site (8; LOCATION; 9 3 (O) OTHER INFORMATIONX/note® *2£aa at position 93 is Thr, Asp, Se~, Asn, Fro, Ala, Leu, or Arg;’’
FEATURE::
(A; NAME.-'KEY: Modifled-site
ÍSÍ LOCATIOK:94 (D· OTHER INFORMATION:/note* Xaa at position 84 is Arg, lie, Ser. Gm. ijeu, Vai, Um, Lys , His, Aia. or Pro;
lx.) FEATURE:
(A; NAME/KEY : Modified-sitfi <E} LOCATION :85 (0: OTHER INFORMATION;/note» *Xaa at position 85 is His,
Gin. Pre, Arg, Vai, Leu, Gly, Thr, Asn, Lys, Ser.
Ph.e. .... ........ ......
Xie, or Tyr;'·
Í xx.;· FEATURE :
iA) NAMEZKEY: Modiiied-site {B? LOCATION :86
D) OTHER INFORMATION:/note» *χ<& at position 96 is Pro, Lys, Tyr, Sly, He, or Thr;* (mi FEATURE:
(A). NAME/KEY: Modified-site (B; LOCATION:87 (!>.; OTHER INFORMATION: /note* “X&a at position 97 is lie.
Vai, Lys, Ala, or Asn; ’ :'ix; FEATURE:
{A- KAME/KEY : Modified-sits
ÍB) LOCATION:9δ
S'Oi OTHER INFORMATION:/note* Xaa at position 9E iS His, Xie, Asn, Leu, Asp, Ala,- Thr, Glu. Sxa, Ser, Pho, Met, Lys,
Arg, Tyr,: or Pro;
f 1 v y \ / 1 JL Milii w (A) NÂMEZKEY: Modified-site (25 LOCATION:88
ÍO) OTHER INFORMATION:/note* ’Xaa at position 88 is ne.
w*&. Arg, Asp> Vai> Pro, Gin., Gly, Ser, Ph®, or His:
(ix:· FEATURE:
{Aj NAME/KEY: Modified-site
ÍB) LOCATION;IDO (D; OTHER INFORMATION:/note» Kaa at position 100 is Lys.
Tyr, Leu, His, Arg.. Ils, Ser, Gin, or .,.
<ix; FEATURE:
(A; NAME/REY; Modified-site (B; LOCATION:101 {P; OTHER INFORMATION; /note® Maa at position Is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr, Vai. Tyr, Glu, Asn, Ear, Ala, Gly. lie.
Leu, or Gm; “
240 (Α; NAííE/KEY: -«odxfied-site
Í.8: LOCATION:102 (ΣΗ OTHER INFORMATION:/note® ’Xaa at position 1CC zs Gly,
Leu, Gin, Lys. Ser, Tyr, nr ?ro;‘
Í ,1.x i .FEATURE:
(A λ NAME/KEY: Modified-site {£; LOCATION:103 m OTHER INFORMATION; /note» ’Xaa at. position 103 xs Asp, .............or Ser; ·· .
tíx) FEATURE:
4A; NAME/KEY: Modified~S3.ce (S; LOCATION:104 (D) OTHER INFORMATION; /note® «Xaa at position 104 is Trp, Val, Cys, Tyr, Thr, Met, Pro, Les, Gin. Lys. Ala, Phe, ly>
iXX; FEATURE:
ÍA· NAME/KEY; Modifled-sxt® (B) LOCATION:10S (D) OTHER INFORMATION:/note® ’Xaa at position 105 is Asn, Pro, Ala, Phe, Ser, Trp, Gin, Tyr, Leu, Lys, He, Asp, fix) FEATURE:
fA; NAME/KEY; Moditied-site (B) LOCATION :106 (E? OTHER. INFORMATION;/note® ’Xaa at position IOS is Glu.
Ser, Ala. Lys, Thr, He,· Gly, or Pro;’ fix? FEATURE;
ÍA) NAME/KEY; Modified-site (B) LOCATION:108 iOi OTHER INFORMATION:/note* *Xaa at position 108 is Arg, Lys, Asp, Leu, Thr, He, Gin, His, Ser, Ala or Pro;” ixx; FEATURE:
(A; NAME/KEY; Modified-site (3 5 LOCATION;102 (D) OTHER; INFORMATION:/note® ’Xaa at position 100 is Arg, Thr, Pro. Glu, Tyr. Leu, Ser., or Gly;
fix? FEATURE;
(A} NAME/KEY; Modified-site (B; LOCATION;110 (D) OTHER INFORMATION;/note®· KXaa at positisn 11C is Lys, Ala, Asn, Thr, Lap, Arg, Gin, His, Glu, Ser, or Trp;’’ fix) FEATURE:
(A) MAME/KEF; Modified-sits
IB} LOCATION;111
241 (1-- OTHER irJFORMATIGN;/note» Aaa st position 111 ts Leu, lie, Arg. Asp. or Met:;· ./ix} FEATURE .!Α· NAME/KEY; Modifled-site {B> LOCATION'.112
ÍO) OTHER INFORMATION:/nota® 'Xaa at position 112 is Th-, Val, Qin, Tyr, Glu, His,. Ser,, or Phe:'
1.x j FEATURE t (A; NAME/KEY; Modified-site
CBs LOCATION;113
50i OTHER INFORMATION: /note- *Xaa at position 113 is Phe, Ser, Cys;. His. Gly, Trp. Tyr, Asp, Lys. Leu, lie Va ΟΪ As».- i,lx! FEATURE;
i A · NAME / KEY -. Modi f tec - s i te i' E): LOCATION ill 4 (Di OTHER INFORMATION;/note» Xaa at position 114 is Tyr, Cys, His , Ser, Trp, Arg. or Leu ,* (lx; FEATURE;
(A? NAME/KEY: Modifieô-sits
ÍS; LOCATION;115 mi OTHER INFORMATION:/dote® *xaa at position 115 is Leu, Asn, Val. Pro, Arg, Ala, His, Thr, Trp, or Met;
íi-χϊ FEATURE:
A'i NAME/KEY: Modi£ied-site (B) LOCATION:115
ÍE5 OTHER INFORMATION:/note® xXaa at position 118 is Lys. Leu, Pro, Thr, Met, Asp, Val, Git, Art, Trp, Set- As His. Ala,
Tyr, Phe, Gin, or Ils:' itxj FEATURE;
{AJ NAME/KEY: Modified-srte
ÍB)· LOCATION-.117 vD} OTHER INFORMATION:/note- la® at position 117 is Thr, Ser, Asn, He, Trp, Lys, or Pro;* {ÍM:: FEATURE:
ΪΑ) NAME/KEY; Modi died—site (Bl LOCATION:.118
ÍD)- OTHER INFORMATION:/note® 'Xaa at positron 118 i$ Leu. Ser, PmAla, Glu, Cys, Asp, csr Tyr ; ’ iixl FEATURE:
(A) NAME/KEY: Modifred-site (B) LOCATION:119 (E; OTHER INFORMATION:/note» ”Xaa at position 119 rs Qlu, Sex, Lys, Pro, leu. Thr, Tyr., or Arq;“
242 tux: FEATURE, η • A. mHE / KEY. Mt di:: xed-sx r® {£: L0CAT2ON;12<
(D; OTHER INFORMATION; /note* ‘Xae ar. pcsxtxon 120 is Ast , Ala, Pre, Leu, His, Vai, or Gin;* : xx: FEATURE:;
UV NAME/KEY·. Modified-site
ÍE.? LOCATION :121 !D: OTHER INFORMATION;/note® Xaa at position 121 is Ala. Ser, lie. Asm. Pro, Lys, Asp, or Gly; “ {XX· FEATURE ·.
(A) NAME/KEY; Modified-site
ÍH; LOCATION-122 (0; OTHER INFORMATION:/note® ‘Xas at positron 122 Gin, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, Hrs. Ils. Tyr, or Cys;
(dm FEATURE;
(As NAME/KEY: Modified-sita (E; LOCATION;123 (*>j OTHER INFORMATION; /note® Xaa at position 123 is Ala, Met, Glu, Hrs, Ser, Fro, Tyr, or Leu:
ixi} SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ IP NO; 2:
Ala ...... Pro Met Thr Gin 5 Thr: Tnr Ser Leu Lys 10 Thr Ser Trp Vai Asn Cys
Xaa Xaa Xaa Xaa .22 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 25 Xaa Xaa Xaa Xaa Xsa 30 Xaa Xaa
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Xaa 40 :laa Xaa Xaa Xaa Xaa 4 5 Xaa Xaa Xaa
Xaa Xaa 50 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 55 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa so Xaa Xaa Xa® Xaa
Xaa S3 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 70 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 75 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 60
Xs a Xaa Xaa Xaa Xaa 65 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 90 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 95 Xaa
Xaa Xaa Xaa Xaa 100 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 105 Xaa Ph® Xaa Xaa Xaa 110 Xaa Xaa
Xaa Xaa Xaa 115 Xaa Xaa Xaa Xaa X&H Xaa Xaa Xaa Glu Cln 0:5 Thr Thr Lt&u
Ser Leu Ala lie Phe
130
243 {1 : SEQUENCE CHARACTERISTICS ;
(A? LENGTH; 332 asinc acids (B; TYPE: ajrd.no acid (C; GTRANGEDNESI: unkfiOWn
Γδ! TOPOLOGY; unknown ill) MOLECULE TYPE; protein {XX; FEATUREr (A) NAME/KEY; Modirlad-site (B> LOCATION:1X2
ÍD) OTHER INFORMATION;/note- “position 122 is deleted or Leu, Ala, Vai, lie. Pro, Phe, Trp, cr M... * iix;· FEATURE;
i'Ai NAME/KEY: Modi fled-site fS) LOCATION :113
ÍD; OTHER INFORMATION; /note* “position 113 1.5 deleted or Pro.F‘Oe, Ala, Leu. He , Trp, or Met “ six) FEATURE:
(A) NAME/KEY: Modifiedsite <)E) LOCATION;114 (D; OTHER INFORMATION:/note® “position 114 is deleted or Fro, Phe, Ala, Vai, Leu, He, Trp or Met” (ix) FEATURE:
(A) NAME/KEY; Modified-site (B? LOCATION:115
ÍU· OTHER INFORMATION;/note® 'position 115 is delated or Gin, Gly, Sex, Thr, Tyr or Asn ixii SEQUENCE DESCRIPTION· SEQ IL NO: 3:
Ser Fro Ala Pro Pro 5 .Ala Cys Asp Leu Arg 10 Vai Leu Ser Lys «eu 15 Leu
Arg Asp Ser His Vai Le^ His Ser Arg Leu Ser Gin Cys Pro Glu Vai
20 2S’ ó 0
His Pro Leu Pro Thr Pro Vai Leu Leu Pro Ala Vai Asp Phe Ser Leu
3S 40 45
Gly Glu Lys Thr Gin Met Glu du Thr Lys Ala Gin Asp lie Leu
SO 60
Gly Ala Vai Thr Leu Líôxí Leu Glu Gly Vai Met Ala Ala Arg Sly Qin
65 ”0 75 80
Leu Gly Pro Thr Oyx Leu Ser Ser Leu Leu Gly G_n Leu Ser Gly Gin
Xa?
Xaa
Xaa
Ser
Leu
Ser
Arg
Ser
Leu ex
Leu
Leu
244
Xaa
Alva.
Mis ueu pha
Her
Arg
Thr
Lek.
Pne
Figure BRPI9610977A2_D0083
18C
Ser
Ala
IPG
Thr ueu
Pne ueu
G^.n
Ser
Le
215
Asp
Pro $^eu
As
Leu
Gl>
235 «eu
Pne
Gly
Arg
245
Asp
Ser
Gly
Ser
Asp
Gly
Leu
As.n
Pro
Ser
Pro
His
Pro
28C
255
Glr
Leu
Phe
Se ueu
Figure BRPI9610977A2_D0084
Pro
290
Leu
Pro
Pro
-2S5
Vai
His
Pro
Lex
Pro
Pro
Ser
Pro
Thr
310
Th:
Pro
Leu
Leu
Asn
Ser
Thr Hie
Asn
Leu
Ser
ORMATIOK FOR SEQ ID JJO: 4:
{A)
SEQUENCE CHARACTERISTICS;
LENGTH: 1 amino acids TYPE: amino acid STRANDESNESS: single TOPOLOGY: linear ih)
MOLECULE TYPE; pictftir.
ί à.x FEATURE.·.
ÍÀ'· NAME/KEY; Protein.
{Si LOCATION:!
ÍD) OTHER. INFORMATION: /note» “where x«(giyglyglyser;n and where· n. is as mt.eger* ixx; SEQUENCE DESCRIPTION·. SEQ 10 NO: 4-.
Xaa
1) INFORMATION FOB SEC· ID NO: 5-.
SEQUENCE CHARACTERISTICS t i x s&uro adda (SO TYPE: ajaino acid (Cj 5TRANDESNESS; single (D? TOPOLOGY .- linear
MOLECULE TYPE: protein iixj FEATURE:
(A; NAME/KEY: Peptise {«· LOCATION :1 (D; OTHER INFORMATION:/note® “where (glyglyglyglyser jn and where n is an integer'· ixi- SEQUENCE DESCRIPTION·; SEQ ID ND: 5:
•Xea {2} INFORMATION FOR SEQ ID NO: 6:
(ii SEQUENCE CHARACTERISTICS:
{A} LEI^CTH: 1 SMino acids {&; TYPE; aru.no acid iCi- STRANDEDNESS: single {D> TOPOLOGY: linear iii) MOLECULE TYPE: protein (ixj FEATURE:
(A) NAME/KEY; Protein ;B) LOCATION: 3.
<01 OTHER INFORMATION:/note® “where k* igiyglygiyglyg_yser)n aná where n js an integer xi j Si:!t‘3;CS DESCRIPTION; SEQ ID NG:
Xaa ...... ......
(2 ) INFORMATION FOR EEQ ID NO: 7 :
i; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A; LENGTH: i ajsino acids
ÍB? TYPE: amino acid (C) STRANDEDNESS; single (D; TOPOLOGY; linear :ii> MOLECULE TYPE: protein [ix.i FEATURE;
(A? NAME/KEY; Protein (B) LOCATION:1 (Dj OTHER INFORMATION:/note® ’'where x~ (gly n serin end where n is an integer* ixi) SEQUENCE DESCRIPTION: EEQ ID NO: 7:
Xaa
INFORMATION PGR EEQ ID NO: 8:
ii) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 1 amino acids (B) TYPE- amino acid (C) STRANDEDNEES: single (D; TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: protein íix; FEATURE:
DA) NAME/KEY; Protein (B) LOCATION;!
{D.Í OTHER INFORMATION:/note« “where x® (alaglyser} n and where n is an integer (%i) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 6;
Xaa
247
INFORMATION FOR SEQ· II· ND- 9·.
rl SEQUENCE CHARACTERISTICS· (A> LENGTH; 3 5 amino acids (B· TYPE: amino acid {C· STRAKDEDNESS: single (Di topology.· linear i 11 ! MOLECULE TYPE: protein (XI; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 9;
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Gly Glv Ser
I: s 10 15*
Glu Gly Gly Gly Ser Giu Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Bar Giy
25 3 0
Gly Gly Bar ill INFORMATION FOR SEQ ID NO: 10:
:i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A; LENGTH;. 24 extent acids (Bi TYPE; aainc acid ?e> STRANDEDNESS: single {D? TOPOLOGY: lineaxr ill! MOLECULE TYPE; protein (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 10;
lie Ser Glu Pre Ser Gly Pre lie Ser Thr lie Asn Pre Ser Pro Thr ..* - 10 15
Ser Lys Glu Ser Hrs Lys Ser Pre (2 ) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 11;
(1; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 28 amino acids (B) TYPE; amino acid (C) STRANDEZSSESS: single
ÍD; TOPOLOGY,· linear
ÍÜ; MOLECULE TYPE; protein
Xi· SEQUEKCE DE5CF;*PTXDK-. SEO ID tlG: 11;
lie Glu Gly Ara lie Ser Glu Pro Ser Gly Pre- lie Ser Thr He Asr
Pre- Ser I^ro Pro Ser Lys Glu Ser Els Lys Ser Pro 7C os
INFORMATION FOR SEQ ID NO: 12:
ú; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
ÍA; LENGTH; 4 «mino acids
ÍS; TYPE; asaino acid (C; STRANDEDNESS.; sxngle (0! TOPOLOGY; linear
MOLECULE TEPE: protein izl; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ IE NO: 12;
Giy G.iy Gly Ser
INFORMATION FUR SEQ ID NO: 13:
iij SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 45 base pairs (B; TYPE: nucleic acid
ÍC; STRANDEmESS: single.
iDj TOPOLOGY: linear (it} MOLECULE TEPE; other nucleic acid (A) DESCRIPTION; /desc = *DNA {synthetic)K (xi j SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 13 -,
GTCCATGG CNTCNCCNGC NCCNCCTGCT TGTGCACTCC GAGTC (2; INFORMATION FOR SEQ ID NO: 14;
ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(Ai LENGTH: 30 base pairs
58) TYPE: nucleic acid
249 i C Ç ETRATJDEDNES E . si ng 1 a ;D: TC-PCLOGY· linear 'ii; MOLECULE TYPE; other nucleic acid (A) DESCRIPTION-. /desc = DMA (synchetxc! ’
SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NG: 14;
ATGCAOGAAT TCCCTGACGC AGAGGGTGGA
0 (3) INFORMATION FOR .SEQ ID NO: 15;
(:) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 33 .base pairs j3; TYPE: nucleic acid •:o STRANDEDNESS', single (D Í TOPOLOGY; 1ineax <ii· MOLECULE TYPE; other nucleic acid (Al DESCRIPTION; /ôésc « ’DNA (synthetic)* (Ml} SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ rp NG: 15:
TGACAAGCTT ACCTGACGCA GASGGTGGAC CCT <2- INFORMATION FOR SEQ ID NO: 1£:
(is SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A) LENGTH·; 10 base pairs (Bi TYPE: nucleic acid !C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY'; linear (ii) MOLECULE TYPE; ocher nucleic acid (A? DESCRIPTION: /desc ® ’DNA (synthetic) ’ (xi> SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NQ; IS:
AATTCGGCAA
IQ.....................
(I) INFORMATION FOR SEQ ID NO; 1”;
250 ii? SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A.< LENGTH: 10 ossa parrs ;E? TYPE- nuclerc acid i·. ijrw. c ϊ>ν*χ*·( λ χ·«»Λ* v> „ _ __ _ ·>·.
-. X-. ? Λ:ΧΛ^ΐ:>Λ«ΒΜώ: hif»Ç*e (D; TOPOLOGY: linear (11? MOLECULE TYPE: other nuclexc acid.
(A? DESCRIPTION: /desc » ΈΝΑ (synthetic) ” (xr J SEQUENCE DESCRIPTION.- SEQ ID NO:
V;: a a (2) INFORMATION FOE SEQ ID NO: IS:
Figure BRPI9610977A2_D0085
SEQUENCE CHARACTERISTICS:
{A· LENGTH: 13 base pairs (B; TYPE: nutlate acid (CJ STRAKDEDNESS; single (Di TOPOLOGY: linear (11; MOLECULE TYPE; other nucleic acid (A) DESCRIPTION; /desc = ΈΝΑ. (synthetic)”
5x1} SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ IE NO; IS;
AATTCGGCGG CAA
13................... ............ ..........
(2) INFOBMATION FOR SEQ IO NO: IS;
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 13 base parrs {B) TYPE: nucleic acid (C) STEANDEWESS: single
ÍD) TOPOLOGY; linear
Uil MOLECULE TYPE: other nucleic acid (Ai DESCRIPTION: Zdesc » ’DNA (synthetic)* txi? SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: IS:
ΛλίΏ* A \»t ,a. ^M.x? Va'>w«‘-XCÍ
2S1
Figure BRPI9610977A2_D0086
Figure BRPI9610977A2_D0087
INFORMATION FOR SEQ ID NO: 21:
it) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A.; LENGTH; 22 base pairs iB> TYPE: nucleic acid fCi STRANDEDNESS; single iC? TOPOLOGY.· linear liii MOLECULE TYPE; other nucleic acid
Li; DESCRIPTION; /desc » “DNA (synthetic) * (xij SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ IO NO; 21;
ATGTTGCCG CCGTTGCCGC CG
INFORMATION FOR SEQ IO NO: 22r (1) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A; LENGTH: 27 baste pairs {B; TYPE? nucleic acre (C) STRANDEENESS; single
CD) TOPOLOGY; linear iil) MOLECULE TYPE; other nncieic acid {λ? DrSuRIPTlC'K; /aesc = ‘SNA (synthetic) * ixc; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 22;
252
Figure BRPI9610977A2_D0088
SEQUENCE CHARACTERISTICS , (A; LENGTH ; 29 base pairs
IE' TYPE: nucleic acid
ÍC· STRANDEDNESS; single ίθ· TOPOLOGY; linear
MOLECULE TYPE; s^e: nucleic acid % a, .· >^'<->χ+**·Λ.νκ *. *. -i. Kv*V '. .' CX&S^ £ DwA > £ VXltCXllSs ' *
Figure BRPI9610977A2_D0089
(I.? INFORMATION FOR SEO ID MO: 14;
(i; SEQUENCE CHARACTERISTICS'.
(As LENGTH; 27 base pairs
ÍB1 TYPE: n-ttclfixc acxd (C) SIRANDEBNESS: single
ÍE; TOPOLOGY': linear (li) MOLEOÜLE TYPE; ocher nucleic acid (A; DESCRIPTION; {synthetic) ;xi > SEQUENCE DESCRIPTION: EEQ ID NO: 24:
CGATACATGT TGCCTACAQC TGTCCTG (2! INFORMATION FOR SEQ ID NO. 25:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS; (AI LENGTH: 29 Dasa pairs (Bl TYPE: nucleic acid ÍC) STRANDEDNESS; single {D? TOPOLOGY: linear ill} MOLECULE TYPE: other nucleic acid
DESCRIPTION.* /dare « DNA isynthetic}
253
1X1: SEQUEKCI DESCRIPTION-. SEQ ID NO; 3=·.
xsATuAAuCTT AAGGGTGAAU CTCTGGGCA
INFORMATION FOR SEO ID NO-. 26;
i11 SEQUENCE CHARACTERISTICS· >A; LENGTH·. 2? base pairs
ÍB; TYPE: nucleic acid >C; STRANSEDNESS·. single (E: TOPOLOGY. linear ,*..,, ;ί-ι, otner nucxexc acro <λ; DESCRIPTION: /desc » DNA (svTíthetie:^;xi; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ IÉ NO: 36:
CGATCCATGG TCCTGCTGCC TGCTGTG (21 INFORMATION FOR SEQ τη NO; 27 ; ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(Aj LENGTH- 2S base pairs sxs? ViPx.: nucleic acid
ÍCi STRANDEDNESSt single
CD) TOPOLOGY: linear ί'ιι,ί MOLECULE TYPE: other nucleic acid (A). DESCRIPTION; /desc # *DNA (syntheticr ixi.; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 27;
GATCAAGCTT AAGGTGTAGG CAAAGGGTG
Í2; INrORMATION FOR SEQ ID 80: 28;
ill SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A? LENGTH: 30 base pairs fS? TYPE: nucleic acid (C3 ETRANDEONESS: single {D| TOPOLOGY - linear
Ui! MOLECULE TYPE: other nucleic acid
254
DNA ísytttiçtic:
NO;
CGATCCATGG CTGTGGACTT· TAGCTTGGGA
W í - ........· ........oá <<............AliiLla........
;:a information for seq id no: 2?.
ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
ÍA; length: 2« aes« paxrs •:si TYPE; nucleic acid
ÍC; STRANDEDNESS; single ;C; TDPDLOGS.' Imear í;i> KÔLÊTJLE TYPE.· ether nucleic acid
ÍAi DESCRIPTION: /desc « DNA < synthetic ixi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 29;
GATCAAGCTT AAGGCAGCAG GACAGGTGT (2} INFORMATION FOR SEQ ID NO: 90:
<i) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A) LENGTH: 27 base parrs {£· TYPE; nucleic acid (0) STWmWNESS: single (D) TOPOLOGY: linear
MDuECQLE TYPE: ether nudscc acid (A: DESCRIPTION: /dear = “ONA (synthetic) (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 30:
CGATCCATGO ACTTTAGCTT GGGAGAA (2) INFORMATION FOP SEQ ID NQ; 31;
iii SEQUENCE CHARACTERISTICS:
iA} LENGTH; 29 baee pairs (B) TYPE: nucleic, acid
ÍC5 STRANDEDNESS; single ο εκ ·;-Γ ν.' ;C' TOPOLOGY; kMar
MOLECULE TYPE: Giner nuclsuc acid
ÍA.; DESCRIPTION: Zdesc» DNA (synthetic}'· (xi} SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 31;
GATCAAGCTT ACACAGCAGG CAGCAGGAC
INFORMATION FOR SEQ ID NO; 32:
ÍÜ SEQUENCE CHARACTERISTICS ·.
iAs LENGTH; 2? base pairs (E? TYPE; nucleic acid (C5 STRAIÍDEDNESS: single
ÍDI TOPOLOGY: linear
Ui; MOLECULE TYPE, other nucleic acid kA; 5*ô'»ÍU PT * ON; /dasc ~ DMA (synthetic)* txij SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 32;
CGATCCATGG gagaatggaa AACCCAG
Í2; INFORMATION FOR SEQ ID NO; 33:
Íi i SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A> LENGTH; 29 base pairs ÍBJ TYPE; nucleic acid (Ci STRANDEDNESS; single (D) TOPOLOGY; linear in} MOLECULE TYPE: other nucleic acid :a( DaSCF.iPT^ON; /d&SC ® ΌΝΑ {Sl^nnhetic l· ” <xi5 SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 33:
GATCAÀGCTT ACAAGCTAAA CTCCACAGC (2) INFORMATION FOR SEQ ID «0: 34;
<1; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
56
Ϊ'Α LENGTH; I' base pairs ;B: TYPE: m:claic acic ?C) STRANDEDNESS . single ?3; TOPOLOGY; linear (ii; MOLECULE TYPE: other nucleic acid < A) LLS0RI PT I ON: ,·' date ® Σ3ΝΆ (s yn the c i c; ” (xi? SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 34;
CGATCCATGG GACCCAOTTG CCTCTCA
INFORMATION FOR SEQ ID NO: 35 :
ii) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
iA? LENGTH: IS nase pairs
IE? TYPE: nucleic acid
ÍI? STRANDEDNESS; Single iD? TOPOLOGY; linear lie; MOLECULE TYPE; other nucleic acid
ÍA) DESCRIPTION: /desc ® “DMA (synthetic) ” txi; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID ND; IS-.
GATCAAGCTT ACAGTTGTCC CCGTGCTGC
QS......................
<2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 36(1Ϊ SEQUENCE CHARACTERISTICS:
{AJ LENGTH: 17 base cairs i'Bs TYPE: nucleic acid (C) STRANDEDNESS: single
ÍD) TOPOLOGY: linear ill) MOLECULE TYPE; ether nucleic acid {λ; description.· /dee© « “DMA (synthetic)*
ÍX1.Í SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 36;
CAGTCCA.TGG GAACCCAGCT TCCTCCÀ <A; LENGTH; 3$ base paars íB: TYPE ·. nucleic acid !C> STRANDEDNESS; single -: D· TOPOLOGY·, linear '11' MOLECULE TYPE, other nuclei
ÍA; DESCRIPTION.· /desc a tie ’DNA {synthet;
{Xi· SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ- ID
GATCAAGCTT AAAGGAGGCT CTGCAGGG
INFORMATION FOE SEQ ID NO; 38;
(if> SEQUENCE CHARACTERISTICS:
iAi LENGTH; 2 base parrs ¢3) TYPE; nucleic acid {C) STRANDEDNESS; single (D? TOPOLOGY- linear ill; MOLECULE TYPE; ether nucleic (A; DESCRIPTION: /desc » acid
DNA (synnhebi ixi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID
CGATCCATGG GCAGGACCAC ÂGCTCAC
NO- 38.
{! INFORMATION FOR SEQ ID NO: 38:
iiJ SEQUENCE CHARACTERISTICS:
ÍA; LENGTH: 30 base pairs (S) TYPE: nucleic acid {C; 5TFANDEDNESS; single (D) TOPOLOGY: linear ire; MOLECULE TYPE; ocher nucleic {A} DESCRIPTION; /deSC ® acid
DNA (syntheci (XI? SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID
ND: 39 :
INFORMAHQN FOF SEQ ID NG; 40:
í i ? SEQUENCE CHARACTERISTICS :
A) LENGTH: 3C base parts (S3 TYPE; nuclei, c acid < C} STRÂNDEDNESS: sxng1a v — , a Qr'uwCLs£, .. λ mear ii.i) MOLECULE TYPE· ocher nucleic acid iA) DESCRIPTION: /desc « “UNA ;synthetic;
;xi} SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ Ip NO; 4G:
Figure BRPI9610977A2_D0090
INFORMATION FOP. SEQ ID NG; 41;
!D SEQUENCE CHARACTERISTICS.;
(A) LENGTH; 29 base parrs (RS TYPE: nucleic a-cid (C) STRANDEDNESS: sragle fO; TOPOLOGY; linear iii; MOLECULE TYPE; ocher nucleic acxd ^4rSCr.^.Pi^Mix:;. ,/dasc •'•'OKA (synthetic} ’ (Xi- SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 41;
GATCAAGCTT ATGTGGTCCT CCGCTGTGG (3} INFORMATION FOR SEQ ID NO; 42r (ii SEQUENCE CHARACTERISTICS;
•A) LENGTH; 30 base pairs (B) TYPE: nuclsrc acid (C) STRANDEDNESS; single (DJ TOPOLOGY: linear in) .MOLECULE TYPE: other nucleic acid vfti DEi5U£»uFTION : / dear ® ^DNA (synthetic) ’ «; 9 ; kl SEQUENCE ΕΈΕΙΡ.ΙΡΤΙΟΧ. SEÇ H NI. 42 .
ÜGAT:CãT53 atcccaxtgc catcttcctg (1; INFORMATION FOR SEQ IE NQ; 43:
{:.; SEQUENCE CHARACTERISTICS · <Ά·· LENGTH; 29 isase parrs (Bi TYPE.· nucleic acid id STRAKDEDNESS; single m; topology.· linear (XL · MOLECULE TYPE; Otter Hiiclei acid (A; DESCRIPTION. /d«SC ~ UNA (synthetic:
IXL ? SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 43 .
GATCAAGOTT ACTTGTGAGC TGTGGTCOT
2?
Í3! INFORMATION FOR SEQ ID ND; 44;
i i? SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A· LENGTH: 3P base pairs (B; TYPE; nucleic scid (GJ STRANDEDNESS; single (Di TOPOLOGY· linear ;ll! MOLECULE TYPE: ocher nucleic acid
ÍA? DESCRIPTION; /ciesc “ DKA {synthetic}
ÍXL; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO-. 44:
CGATCCÂTGG CQATCTTCCT GAGCTTCCAA on..........
ill INFORMATION FOR SEQ ID NO: 4S:
ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A’; LENGTH; 32 base pairs (H; TYPE: nucleic acid (C) STRANOEDNEES: s ing1a {D· TOPOLOGY;, linear >ii} MOLECULE TYPE; other nucleic acid (A; DESCRIPTION: /desc * *UNA (synthe ή 0
Figure BRPI9610977A2_D0091
(I: INFORMATION FOR SEQ ID NO: 4έ:
7.x y 'í**Wff'S*í2‘'’:?>' y.»*·£ .
V ;·'..... λ Μ λ: è aS Χλ&& {$: S>
(.«) TYPE; nucleic acid i’Ci STRAKDEDNES5: sxngle :D5 TOPOLOGY: 1xnear <„c; MO**K,CViiE TYPE: other nucleic acid (A) DESCRIPTION; /desc » *DNA (syntheti.
Figure BRPI9610977A2_D0092
(Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 45:
ÀATTCCGTCG TAAACTGACC TTCTATCTGA ÀAAICTTGGA GAACGCGCAG GCTGAATAOT
AOGTAGAGGG CGGTGGAGGC TCI •S3..............................................
L3) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 47:
ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 83 has® pairs
5B) TYPE: nucleic acid (C? STRANTHDNRSS; single (D) TOPOLOGY: linear iiii MOLECULE TYPE·, other nucleic acid (A; DESCRIPTION; Xdesc ® ’DNA (synthetic)’ (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 47:
coggggagcc tccaccgccc tctacgtact sttgagcctg cgcottctcc aagotttca gatagaaggt cagtttacga ugg ***} INFORMATION FOR SEQ ID KG: 48;
<C.; STRANDEDNESS; single í'm TOPOLOGY: linear {ii? MOLECULE TYPE; other nucleic attd i A) DESCRIPTION : .' des; c ® DNA ( syn th® t1 (Xi? SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 4S ·.
r'frtffiA V λννν,Λ,Λίί /VW** V M4 V Mb A
-- UxacAA^AXCAG CTAACTGCTC T-^TKA (2? INFORMATION FOP SEQ ID NO: 49.-.
<1; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
>A, LENGTH.·, 5£ has® patr® (S? TYPE·, nucleic acid
ÍC· STRANDEDNESS·. single (D; TOPOLOGY·, linear iit; MOLECULE TYPE: other nuclexc acid
ÍA) DESCRIPTION; /dear « ’DNA (synchet.
:xt; SEQUENCE DESCRIPTION; EEQ ID RO: 49;
ATCA7TAT AGAÍSCAGTTA GAGCCACQAC CCTGTTGTTC CTGCGQTTCC TCAAG
Í1: INFORMATION FOR SEQ ID NO; SO;
i ~J SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A) uENGTH; SC has® pairs (δ; TYPE: nucleic acid (0; STRANDEDNESS; Single (DJ TOPOLOGY: linear {er.; MOLECULE TYPE·, other nucleic acid (A; DESCRIPTION: Zdesc « ΈΝΑ ísynthetic) (Xi; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 50:
Figure BRPI9610977A2_D0093
,**·' v+w+wz+w*::+ ς+ζ·1* •e+x·’·: «+> +: tV »· λ « s i >. 1 A > i k . s i Z 4. FU-iill INFORMATION FOR SEQ CD NO: El:
U) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A? LENGTH; SO base pairs (Si TYPE; nucleic acid (C: STRANDEDNESS: sing1a
O? TOPOLOGY: linear •in? MOLECULE TYPE; other nucleic acid iA; DESCRIPTION; zdssc « DNA (synthetic?v txij SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; Si:
CGATCATTAT AGAGCAGTTA GAACCGCCGC
CGCTGCCACC GCCAGAGCCA CCACCCTGTT’
TTGCTCAAGG •2> INFORMATION FQ.K SEQ· ID NO: SI:
iii SEQUENCE CHARACTERISTICS:
{A; LENGTH? 3Q base pairs fB) TYPE·, nucleic acid <C) STRANDEDNESS; single (Dj TOPOLOGY; linear i~xi MCuECGLE TYPE; other nucleic acid (A) DESCRIPTION: /base ® ‘DNA (syncheti i’xi? SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 52;
GATCQACCAT GGCTCTGGAC ÕCGAACAACC (2) INFORMATION FOE SEQ ID ND; S3;
ÍÍ) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
ÍÀ) LENGTH: 2S base pairs (S) TYPE; nucleic acid <C: STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear “ : ciiàPxAí
EKGTE; 32 base pair •£F£; nuclei:- acis FRAKDEDNESS: single GEOLOGY; linear
Figure BRPI9610977A2_D0094
nucleic acid /desc = ’’DNà (synthet
Figure BRPI9610977A2_D0095
Ui SEQUENCE CHARACTERISTICS;
ÍA) LENGTH: 28 base pairs (Bi TYPE: nucleic acid (C) STRANDEDNESS; single (»; TOPOLOGY ·.- linear ill) MOLECULE TYPE: other nucleic acid ;Ai DESCRIPTION: /dale « DMA (synthe ixi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 5.¾ -.
CTCQATTACG TATTCTAAGT TCTTGACA il· INFORMATION FOR SEQ ID NO: 5c:
{1} SEQUENCE CHARACTERISTICS:
>A) LENGTH; 32 base pairs ie
254
PO.
OLE TYPE: cth-s:
DESCRIPTION:
/aesc
UEQUENCE CHARACTERISTICS : i'A; LENGTH: 26 base pairs sE? TYPE; nucleic acic •Xi STRANDEDNESS; single ÍD) TOPOLOGY: linear
1; MuLECULE TYPE: other nucleic add
ÍA; DESCRIPTION: /desc » ’DMA {synthetic fxi? SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:
JAGAQGGí
SEQUENCE CHARACTERISTICS:
LENGTH: 32 base pairs
TYPE: nuêleic. acid
STRANDEDNESSτ single
TOPOLOGY; 1inesr nucleic acid /desc ss ΈΝΑ {synnheti fxi} SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: S§ .
INFORMATION FD:
8 (A; LENGTH·. 2 8 base pairs (E; TYPE·, nucleic acid (C)· STRANDEDNESE: single (D: TOPOLOGY; linear •;ii; MOLECULE TYPE: other nucleic acid {A? DESCRIPTION; /ciesc » DNA (synthetic) (Xi' SEQUENCE DESCRIPTION: EEQ IO NO: SB;
CTCGATTACG TACTTGATGA TGATTGGA *>£ ΪΪΪ / / 92 ........
(2) INFORMATION FOR SEQ IO NO: EG;
Í i .; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 54 base paars
ÍB; TYPE; nucleic acid (C) STRANDEDNESS: single
CDi TOPOLOGY·. linear (iij MOLECULE TYPE; other nucleic acid (As DESCRIPTION: /desc * “UNA (eynthetici“ iXi: SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ; ID NO: 60-. GCTCTGAGAG CCGCGAGAGC CGCCAGAGGG CTGCGCAAGG TGGUGTAGAA CGCG
Si .. .... ................................ ...............................
Í2) INFORMATION FOR SEQ IO NO: $1;
;i; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A· LENGTH: 54 base pairs (Bi TYPE: nucleic acid (Ci STRANLEUNESS: single (Di TOPOLOGY; linear (ill MOLECULE TYPE: other nucleic acid íA} DESCRIPTION: /desc * “UNA (synthetic} ’ (Xi; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 61·.
6
Figure BRPI9610977A2_D0096
(Xi) SEQUENCE DESCRIPTION ·. SEQ ID NO: 62:
Figure BRPI9610977A2_D0097
» 2 INFORMATION FOR SEQ IO NO .· 63 :
ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A· LENGTH·. If base pairs (S; TYPE: nucleic acid iC; STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY ·. 1 inear iii) MOLECULE TYPE: other nucleic arid
Dx-UxR^PTIOis: Zciesc ® *DNA (synthetic! * (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 63 :
ACACCATTGG GCCCTGCCAG C (I: INFORMATION FOR SEQ ID NO·. 64.U) SEQUENCE CHARACTERISTICS .(A: LENGTH: is base pairs
ÍB) TYPE: nucleic acid (O) ETRANDEDNERS: single (D) TOPOLOGY: linear
'.~i> MOLECULE TYPE; other nucleic acid (A) DESCRIPTION: /dear * DNA (synthetic) ·
267 v‘ · RD: <54 :
:GACCAT GGCTTACAAG CTGTGCCACC u~
INFORMATION FOR SEQ ID NO: 65r í 1 · SEQUENCE CHARACTERISTICS:
íA? LENGTH: 36 base pairs •ÍEi ΤΥΡΙ’· nucleic acid
50' STRAKDEDNESS: single ίΤ; TOPOLOGY.' linear iiii MOLECULE TYPE: ether nucleic aciê (A; DESCRIPTION: Zdesc - “DNA {svntheti ixi: SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID *$G: 55.-.
CQATOGAAQC TTATTAGGTG GCACACAGCT ICT CO'
6 {I? INFORMATION FOR SEQ ID NO; 6S:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A; LENGTH: 32 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (Ci STRANOEDNESE: single i'D: topology; linear (ii) MOLECULE TYPE; other nucleic acid (A- DESCRIPTION; /desc ® DNA (synthetic)* (XI; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ IR NO; 66:
GATCGACCAT GGCTCCCGAG TTGGGTCCCA CC i 2) INFORMATION FOR SEQ EQ NO; 57 ; (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 36 base pairs (B) TYPE; nucleic acic (Tj STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY; linear (ii) MOLECULE TYPE; ocher nucleic acid (A) DESCRIPTION: /deac = DNA (synthetic) ’
X5 SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: £7.CGATCGAAGC TTATTAGGAT ÀTCCCTTCCA GGGCCT
Figure BRPI9610977A2_D0098
{2} INFORMATION FOR SEQ ID NGt £8;
(I; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
íA· LE3ÍK5TH: 31 base parrs ;b; TYPE; nucleic acid íCSTRANDEDNESS; single {D; TOPOLOGY: linear ~ (ex)' MOLECULE TYPE; ocher nucleic acid {AS DESCRIPTION: /desc » “DNA {sjmchenc (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NG; 6£;
GATCGACCAT GGCTATGGCC OCTGCCCTGC AG <1? INFORMATION FOE SEQ ID NO: S9:
(i> SEQUENCE CHARACTERISTICS:
ÍA) LENGTH; 36 base pairs (Si TYPE; nucleic acid iC) STRANDEDNESS; single (Di TOPOLOGY; linear (iii MOLECULE TYPE; other nucleic acid (A) DESCRIPTION: /base ® 'DNA {synthetic}'’ (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; S9;
CGATCGAAOC TTATTATCCC ASTTCTTCCA TCTGC^'
......................... ' *
Í2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 7Q; (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A.< LENGTH; 32 base pairs {R} TYPE; nucleic acid (Ci STRANDEDNESS: single (Di TOPOLOGY; linear
Μ· ner nut /des rhe
EQUENC:
PTION.' SEQ àSíUEMA’
EQUEKCE CHARACTERISTICS: (A; LENGTH; 36 base pairs ίE> TYPE: mcleic acid (T; STRANDEDNESS; single »D) TOPOLOGY: linear . ether nuc
ION; / des
Dka. < synth© i xi; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 71 ;
ATCGAAQC TTATTAQGGC TGCACGGCAG GGGQCA
P; INFORMATION FOR SEQ ID NO; 72:
;ii SEQUENCE CHARACTERISTICS ;
vA? LENGTH; 36 base pairs .·>. a z 7).nmiem asm (Ci STRANDEDNESS; single
ÍO; TOPOLOGY; Imear in; MOLECULE TYPE: ether nucleic acxã ;λ; uES\.n~PTIUN; /desc ~ DNA ίsynthetic' * ίχ1) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 72 ;
cuATc^AAOC TTATTAOGSC TGCAGGGCAG GGGCCA •2; INFORMATION FOR SEQ ID NO; 73;
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS.;
(A) LENGTH: 3 6 base pairs
-.'.rt..· nucjeir acid
λ.. w ; ·..
TOPOLOGY; 11 near < :..3 > íÍOlEGJLE TYPE·. ether nuclear acic (A; DESCRIPTION; /desc = *DNA >synthetx?
Figure BRPI9610977A2_D0099
2; INFORMATION FOR SEQ ID ND: 74·.
SEQUENCE CHARACTERISTICS·.
ί.Α: LENGTH,· 21 .base pairs (E> TYRE: nucleic acic (0? STRANDEDNESS.- single ÍD> TOPOLOGY.· linear id; MOLECULE TYPE; other nucleic acid ,λ< DESua^PT-ON; /desc ® *’ΠΝΑ (synthetic (xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID ND; 74;
QTAGAGGGCG GTGGAGGCTC 0
Í2; INFORMATION FOR SEQ ID NO: 75;
Figure BRPI9610977A2_D0100
SEQUENCE CHARACTERISTICS;
vA' LENGTH; 25 base pairs {B; TYPE: nucleic acid <C; STRAMDEDNESS-. single {D) TOPOLOGY; linear iii; MOLECULE TYPE; other nucleic acid (A? DESCRIPTION; /desc ® ΌΝΑ (synthetic) id ( SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 75;
CCGGGQAGOC TCCACCGCCC TOTAC :2} INFORMATION FOR EEQ ID NO; 75:
íK* ·»* ÍL £’<.· A · <í* *»> X* C·'· · í«; LENGTH; 53 base parrs iillllÇt ................: ........ ..............
ili STRANDEDNESS: single i,n.> TOPOLOGY : iinsâ*
MCÍICUüS TYPE: other nutletc acic (A: DESCRIPTION: /dest ~ DNA i synthetic · '
SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 76:
- a * .. K.^xauvWvu ^.^iímílAa <χίΊ s^TACACCA TTG
INFORMATION FOR SEQ ID NO; 77;
SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A! LENGTH; S3 base pairs (B; TYPE.·, nucierc acrd !C· STRMÍDEDNESS; single CD) TOPOLOGY; linear >*ii MOLECULE TYPE.- other nucleic acid (A) DESCRIPTION.; /dest » “DNA synthetic 1 {Xi; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 77;
CAnTuGTQTA GACJxTGTCAG AGCCGCCQQC GGGOTGCQCA AGGTGGCGTA GAA (2; INFORMATION FOR SEQ ID NO: 76:
li; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
{ A; LENGTH; 43.9 base pairs ίΡ· TYPE: nucleic acid (C· STRAÍ03EDNESS: Single (Di TOPOLOGY·, linear {li} MOLECULE TYPE: ether nucleic acid (A) DESCRIPTION: /desc » ΈΝΑ {syntheti r
xij SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: ?fe:
Figure BRPI9610977A2_D0101
>χ«τ»λ· > .<*χ χ· ν>χν· ;Ow Λ N3CL k-
Figure BRPI9610977A2_D0102
«»·ϊ *. » .4 /* Λ „ \3ΧΧ ~ a Λ
360
CECuGTGAAO
Ililllfi
CATAAÀTCTI
AIÇ
CGAACÀACEI
ACOTOGAGAE
Figure BRPI9610977A2_D0103
\*xa> 4 k- x<4>\£
OAAACATGT •μ. ζ$λ 1 uaC G Az·.
Figure BRPI9610977A2_D0104
TGG GAAGAXT
GAAEAGTACG
ATCAAOCCGT χΤ; à * χ-Λ
Figure BRPI9610977A2_D0105
Figure BRPI9610977A2_D0106
TAGAGGGCGG
Figure BRPI9610977A2_D0107
•2; XMFORMATION FOR SEQ W NO: 7$ i ii} SEQUENCE CHARACTERISTICS?
U\; LENGTH: 4SS base pairs iS; TYPE; nucleic acid (CJ STRANDEDKESS; single
ÍD5 TOPOLOGY; linear
Hi) MOLECULE TYPE; ether nucleic acid (A? DESCRIPTION: /dear » ’DNA (syntheti ?XL} SEQUENCE OESCEXPTICN: SEQ γη ,
ÃUutuAGCTC CACCTGCTTG TGACCTOCGA GTCCTCAGTA AACTGCTTCG
GTCOTTCACA GCAGACTGAO
CCAGTGCCCA GAGGTTOACC
ÍT? y»> <νχ·Μη «rx * Αν λ*.
• « Χνλ~ .« vJíí^ã:
T C OGGGAAAa
Figure BRPI9610977A2_D0108
TQGAGGTTCC'
TAAAG&ATCT
TOA'OTCOQAT
CTTTGCCTAC ACCTGTCCTG crcccraciG terras ctksggmm. tcgwaccc mwtowcs* «*A C CAAGQQ A cAGwACRTTO TGGGAGQAGT GACC^T^CTG
S
CTGGAGGGAG TGATGGCAG acggggacaa
ITGGGACCCA CTTGCCT’C'’’^' ' J** * ***· *** Ai»u,L <* L-λ* i \s
J GO gggcagcttt ctggacaggt ccgtctccto
Figure BRPI9610977A2_D0109
SEQUENCE CHARACTERISTICS;
;A.; LENGTH; S3? base pairs ;B: TYPE: nucleic acid <C; STRANDEDNESS; tingle (D; TOPOLOGY: Linear iii) MOLECULE TYPE; ether nucleic acid !,Λ: DEcsCal FTION; /desc ® DNA (synthetic^ ’ ixis SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 80;
TCCCCAGCTC CACCTGCTTG
TGACCTCCGA OTCCTCAQTA AACTGCTTCG
TGACTTCCAT
TCCTTCACA GCAQAOTGAG CCAGTGCCCA GAGGTTCACC CTTTGCCTAC ACCTGTCCTG
TGCCTGCTG TGGÀCTTTAG CTTGGGAGAA TGGAAAACCC AGATGGAGGA GAOCAAGGCA
CAGGACATTC TGGGAGCAGT GACCCTTCTG CTGGAGGGAG TGATGGCAGC ACGGGGACAA
CTGGGACCCA CTTGCCTCTC ATCCCTCCTG GGGCAGCTTT CTGGACAGGT rCGT^’'^·^' »·3
CTTGGGGCCC TGCÀGÃGCCT CCTTGGAACC CAGCTTCCTC CACAGGGCÃG GACCACAGCT
352
CàOÀAGGATC CCAATGCCAT CTTCTOAGC TTCCAACACC TGCTCCGÀGG AAAGGTGCGT
................. ...... ...... ..........................................
TTCCTGATGC TTGTAGGAGG GTCCACCCTC TGCGTCAGGG AATTCQGCGQ OAACATGGCG *C CwCuTGCTTG tgaoctccga gtcctcagta aactgcttco toactcccat
274
GIAGACTGAO CCACTGCCCA GAGGTTCACC .'^• r' w x ν?Μγ\*»^η* ·χ v\ * <5 -λ* λ ... i » õ G /“>.5K :<*<>»'-i<· VS·». Í«*SS*<^ v L.
l^v'....................
CTGGGACCCA
OTTOGGG C 0 C
840
ÀATGCCATCT >0........
GTAGGAGGGT
Figure BRPI9610977A2_D0110
V*>**<*«·.**.<* <?* X Ζ-> ·Λ S
GAC CCTTCTG
GCTTGGAACC
OCAACACCTG
CGTCAGG «'ft,'**·*-. X -X X ·> .ΛΓ»·. À L. <
GGGCAGCTTT fs »<τχ**»ΛΧ*» » ;««
CTCCGAGGAA
y. ·** y. J’YV’”' >» » x
4- v^^^xJtkSA-\
Ai-X» * i ·« x? 4..
iww*.^ Λ :*x » \** l ^-Aii-ííktóiC^TCA
AGGTGCGTTT
Figure BRPI9610977A2_D0111
AUGGGGACAA
Figure BRPI9610977A2_D0112
C C
INFOSUÜVIXOK FDR SEQ ID NO: 81:
i i; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A! LENGTH: 936 base pairs (2) TYPE: nucleic acid (Ci STRAKDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (iii MOLECULE TYRE; other nucleic acid (A) DESCRIPTION; /desc « DNA (synthetic)
Sxt) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NQ; 81TCCCCAGQTO CACCTGCTTS 6C
GTCCTTCACA GCAGACTGAU
120
CTGCCTGCTG TGGACTTTAG
IS δ
CAGGACATTC TGGGAGCAGT ctgggaccca cttgcctctc
300
ΛΜ·ΡΗ»»Χ* yx _ λ i x, w TGCAGAOCCT
SO
TQACCTCCGA GTCCTCAGTA
CCAGTGCCCA GAGGTTCACC
CTTGGGAGAA TGGAAAACCC
GACC-CTTCTG CTGGAGGGAG
ATCCCTCCTG GGSCAGCTTT
CCTTGGAACC CAGQTTCCTC
AACTGCTTCG TGACTCCCAT
CTTTGCCTAC ACCTGTCCTG
AGATGGAGGA GACQAAGGCA tgatggcagc acggggacaa
CTGGACAGGT CCGTCTCCTC
CACAGGGCAG GACCACAGCT
Figure BRPI9610977A2_D0113
CTT2ACAGCA GACTGAGCCA. GTGCCCAGAG GTTCACCCTT TGCCTACACC TGTCCTG^Tn
A... ;.;Λ·.Λχ_i .. AAAACCCAGA TGGAGGAGAC CAAGGCACAG
Figure BRPI9610977A2_D0114
Figure BRPI9610977A2_D0115
aaggatccca atgccatctt cctgagcttc caacacctgc TCCGAGGAAA GGTGCGTTT*
925
CIGATQCTTG taggagggtc caccctutgc GTCAGG
93S il: INFORMATION FOE SEQ ID ND; 82;
(i? SEQUENCE CHARACTERISTICS'.
(A; LENGTH'. 939 Ja&se pairs (A; TYPE; fiucleic acid (C) STRAND EDNESE; single ÍD} TC’PCLCGY; linear
MD,u£»»,u.»:£. Tth; other nucleic acid
ÍA) DESCRIPTION: /âesc ® «DNA {synthetic) (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: ..SEQ ID NG; 82;
TCCCCAGCTC CACCTGCTTG TGACCTCCGA GTCCTCAGTA AACTGCTTCQ TGACTCCCAT uTCcTTCACA GCAGACTGAG CCAGTGCCCA GAGGTTCACC CTTTGCCTAC ACCTGTCCTG
27b
Figure BRPI9610977A2_D0116
540
GTCCTTCACA GCAGACTGag OCAGTGCCCA
500 ........
CTGGCTGCTG TGGACTTTAG CTTGGGAGAA
660 :: .... ..........
OAGGACATTC TGGGAGCAGT GACICTTOTG 72C
CTGGGACOGA CTTGCCTCTC ATCCCTCmTG
CTTGGGGCC2 TGCAGAGOCT CGTTGGAACO 840 \~ACAAGGATC CCAATGCCAT CTYCCTGAG'·'
900
TTCGTGATGC TTGTAGGAGG GTCCACCCTC
Φ Ct
TGGAAAACCG AGATGGAGGA GACCAAGGCA
CTGGAGGGAG TGATGGOAGI ACQGGGACAA
GGGCAGCTTT CTGGACAGST CCGTCTCCTC CAGCTTCCTC CACAGGGCAG GAC2A0AG27
- tgctccgagg aaaggtgogt
TGCGTCAGGG AATTCGGCQG CAACATSGCG GTCCTCAGTA AACTGCTTCG TGACTCCCAT GAGGTTCACC CTTTGCCTAC AOCTGTCCTG TGGAÀAACCC AGATGGAGGA GAOCAAGGCA CTGGAGGGAG TGATGGGAGC ACGGGGACAA gggcagcttt ctggacaggt ccgtctcctc
CACAGGGCAG GACCACAGO''1 TTCQAACACC TGCTCCGAGQ AAAGGTGCGT TGCGTCAGG ί2ί INFORMATION FOR SEQ ID NO·. S3;
(i) GSQDSNCS CHARACTERISTICS; {A) LENGTH; 948 base pairs JB} TYPE: nucleic acid <C) STRANDEONEES.' single (D) TOPOLOGY: linear
MOLECULE TYPE; other nucleic acid (A) DESCRIPTION ~ DMA (synthetic)
Figure BRPI9610977A2_D0117
Figure BRPI9610977A2_D0118
CAGGACATTC GGGGAGGAGT GAOCCTTCTG
240
CTGGGACOQA CTTGCUTCTC ATCCCTCCTS
0
OTTGGGGCDC TGCAGAGCST CCTTSGAACC
36C
CAOAAGGATC CCAATGCCAT CTTCCTGAGC ,4li:
TTCCTGATGC TTGTAGGAGG GTCCACCCTC
C
AACATGGCGT CCCCAGCGCC QCCTGCTTGT
540
GACTCCCATG TCCTTCACAG CAGACTGAGC
CÇTGTCCTGC TGCCTGCTGT GGAGTTTAGC §60
ACCAAGGCAC AGG^CATTOT GGGAGGAGTG
Figure BRPI9610977A2_D0119
CGTCTCCTCC TTGGGGCCCT GCAGAGCCTC
840
ACCACASCTC ACAAGGATCO CAATGGCATG
SCO
AAGGTGCGTT TCCTGATGCT TGTAGGAGGG
S
Í2) TATGR24ATION FOR SEQ ID NO: 8
Ξ'χ· ΣΣ) NO; £3 *
GTCCTCAGTA AACTGCTTCG TGAC7CCCA1 GAGGTTCACC CTTTGCDTAC ACCTGTOCTG - KsGAAAfsu—C AuATGGAGGA GAQUAAGGOA Λ GG^x?lík>^Q T^ATSGUAGl acggggacaa GGGCAGim CTGGACAGGT CCGTCTCCTC •CAGCTTCCTC CAGAGGGCAG GACCACÀGCT TTOCAACACC TGCTCCGAGG AAAGGTGCGT TGCGTCAGGG AATWGGCGG CAACGGCGGC GACCTOCGAG TCCTCAGTAA ACTGCTTGGT CAGTGCCCAG AGSTTCACCC TTTGCCTACA TTGGGAGAAT GGAAAACCCA GATGGAGUAG ACCCTTCIGC TGGAGGGAGT GATGGCAGCA TCCCTUCTGG GGCAGCTTTC TQGACAGGTC CTTGQAACCC AGCTTCCTCC ACAGGGCAGG TTCCTGAGCT TCCAACACCT GCTCCGAGGA TCQACCCTCT QCGTCAGG in?·.'
ATTER1
8 8 da acid
DNA
Figure BRPI9610977A2_D0120
auAGCTT
TGACTGGCAA
AAAAACTGAC
AGCAAGCG
GGAACARCAG
GGTGGTGGCT
482
AAAGAGA
TGATGGAC
Figure BRPI9610977A2_D0121
G 'CAAGAA
CTTAGAAAAT
AGGTA
TTGAGGCAAT
CATCATCAAG
G
GCAGG7GACT
ICAAGAATT
ATCTGGTTAC
CCTTGAGCAA
688
SB;
2Τ3 iKi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEC ID NO; 85:
CATGGCTAAC TGCTCTATAA TGATCGATGÀ acccttgctg gacccgaaca acctcaatga
CDTTCGACTD CCÀAACCTGG AGAGCTTCGT
S......
Figure BRPI9610977A2_D0122
300
GTTUTATCTQ GTTACCCTTG AGCAAGCGCA
CAGOGGCQGD GGTTCTAACT GCTCTATAAT
ACCACCTGCA CCTTTGCTGG ACCCGAACAA
80
GGACOGAAAC CTTCGACTTC CAAACCTGGA
S4C
AAATGCATCA GQTATTGAGG CAATTCTTCG
800
GGCCGCACCC TGTCGACATC CAATCATCAT
680
AAAACTGACG TTCTATCTGG TTACCCTTGA
AATTATACAT CACTTAAAGA GACCACCTGC
CGAAGACGTC TCTATCGTGA TGGACGGAAA
AAGGGCTGTC AAGAACTTAG AAAATGCATC
ACGATGTCTG CCCTCTGCCA CGGCCGCAOT
TGACTGGCAA GAÀTTCCGGG AAAAACTGAC
GGAACAACAG GGTGGTGGCT CTGGGGGTGG
GATCQATGAA ATTATACATC AOTTAAAGAG
CCTCAATGAD GAAGAGGTOT DTATCOTGAT
GAGCTTC2TA AGGGCTGTCA AGAACTTAGA
TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTGT3CCAC
OAAGGCAGGT GACTGGCAAw AATTCCGGCa gCLí*usuGCAG GAAGAACAwT AC (2; FORMATION FOB SEQ ID NO; 86 .·
U; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A) LENGTH; 975 base pairs (Bj TYPE; nucleic acid (C) STRAKPEDNESS ·. single
28Γ i,*zj TuPQ-mCSI ·. linear
ÍOLECULE TYPE. other nucleic asud iA: DESCRIPTION- /«««- « *DNA (synthetic) jxd ! SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ· ID NO: 66:
ATGGCTOTGG ACOCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT CTÀTCCTGAT GGACCGARAC CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGOTTCGTA AGGGCTGTCA AGÂACTTAGA AAATGCATCA j. 2 C?
GGTATTGAGG CAA7T0TT0G TAATCTCCAA CCATGTCTGC COTCTGQCAC GGf’CG^AC^''
Igo
T„. x uwAi./ki x. X.AATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGOAAG AATTCCGGGA. AAAACTQACG v
TTCTATCTGG TTACCCTTGA GCAAGCGCAQ GAACAACAGG GTGGTGGCTC 3QC ’ '“
ATAATGATCG ATGAAATTAT ACATCAQTTA AAQAGACCAC CTGCACCm GTAQPTAGAG
360 i*Gx,'jix*TGu.AG GCTCCCCQGG TQAACCGTCT GGTCCAATCT CTACTATQAA CCCGTCTCCT 430 * · - . «Λ
CCGTCTAAAG AATCTCATAA ATCTOCAAAO ATGGCTACCC AGGGTGCCAT GCCGGCCTTC
U «-X-*xu.vAGx.vfk.Cw ^uAG'^AGGG CTCCTQGTTG CTAGCCATCT GGAGAGTT<'
40-* s.
CTÕGASGTGT CGTACCGCGT TCTACGCCAC CTTGCGCAGC CCTCTGGCGG CTCTGGCQGC
600
TCTCAGAGCT TCOTCCTCAA GTCTTTAGAG CAAGTQAGAA AGATCCAGGG CGATGGCGCA 660 ..........
^iCCAseG agaagctgtg tgccacctac aaqctgtgcc accccgagga qctggtgctg CTCGGACAOT CTCTQGGCAT COCCTGGGCT CCCCTGAGCT CCTGCCCCAG CCAGGCCCTG CAGCTGGCAG GCTGCTTGAG C-CAACTCCAT AGCGGCCTTT TCCTCTACCA GGGGCTCCTG CAGGCCCTGG AAGGGATATO COCCGAGTTG GGTCCCACCT TQGACACACT GCAGCTGGAC
Ci
281
Figure BRPI9610977A2_D0123
ί 1 SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A)· LENGTH ·. 97 base pairs
ÍB; TYPE; nucleic acid (Ci ETRAI-OHDNESS; single (0! TOPOLOGY; linear in; MOLECULE TYPE; other nucleic acid
A) DESCRIPTION; /desc * ‘DNA (synthetic)· (xi j SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 87?
ATGGCTCTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT CTATCCTGAT GGACCGÀÀAC CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AGGGCTQTCA AGAACTTAGA AAATGQATCA QGTATTGAGG CAATTCTTCG TÀATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCSCACCC *^vs»As.Ad yJ^ivnTuAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAG AATTCCGGGA AAAACTQACG ~ij.TA.uTGv> TTAUCCTTGA GCAAGCGCAG GAACAACAGG GTGGTSGCTC TAACTGCTCT ATAATGATCG ATGAÀATTAT ACATCAUTTA AAGAGACCAG CTGCACCTTT GTACGTAGAG GGCGGTGGAG GCTCCCCGGG TGAACCGTUT GGTCCAATCT CTACTATCAA CCCGTCTCCT *!fr ί' V ^TCTCATAA ÃTCTCCÃAAC ATGGCTACCC AGGGTGCCAT GCCGGCCTTG SCUTCTGCTT TCCAGCGCCG GGCAQGAGGG GTCCTGGTTG CTAGCCATCT GCAGAGC^^ ,31.¼ * 4· V· GTGGAGGTGT CGTACCGCGT '’OT'ar’Grr'ir· soc . orTucwuAGC CCTCTGGCGG CTCTGGCGGC
282 •NÍX***»*’»* .** X »***·**♦>: V ». X Ζ- \ ,-* Χν-χ χ ί, Ζ-» X ν » .ν^Λ V * ·* %Μ - A Ww ,. v*/Vi Dit Λ ν * Akwv^ ι.Α(χυ .: v£»*UaèU>V ^C^AT^C^VsiJjkj CxsATx^ &SQ
CCIOTCCACG AGAAGOTGTG TGCCACOTAC AAGCTGTGCT ACCCCGAGGA GCTGQTGCT
CTCGGACACT CTCTGGGCAT CCCCTGGGCT COCCTGAGCT CCTGCCCCAG CCAGGCCCT·
7SS
CAGCTGGCAO GCTGCTTGAv CCÂACTCCAT AGCGGCCTTT TCCTCTACCA GGGGCTCCTi
840
CAGGCCCTGG AAGGGATATC CCCCGAGTTG GGTCCCACCT TGGACACACT GCAGCTGGAi
S δ :·0· ir csaUcwAcT TTOCCACCAC CATCTGGCAG CAGATGGAAG AACTGGGAAT GGOCCCTGCÍ 95C
CTGCAGCCCT AATAX
S7.S •2; XNFORMATXOK FOP, SEQ ID NQ: 88;
ii) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A> LENGTH; $75 base pairs (8; TYPE; nucleic acid {C)· STRANDEDNESS: s ingle (D) TOPOLOGY; linear ;~i> MOuECULa, TYPE: other nucleic acid $A) DESCRIPTION: /<âesc ® DNA (synthetic) (XX) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 88;
ATGGCTGCAC CCTOTCGACA TCCAATCATC ATCAAGGCAG GTGACTGGCA AGAATTCCQG £0:
GAAAA.ACTGA CGTTCTATCT GCTTACCCTT GAGCAAGCGC AGGAACAACA >GGGTGGTGGC TCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTOCACCT - a'Jv.TGcAcC CuAACAACCT caatgacgaa gacgtctcta tcctgatgga ccgaaacctt CGACTTCCAA ACCTGGAGAO CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT aitgaggcaa ttcttcgtaa tctccaacca tgtctgccct ctgccacggc ctacgtagag
283
GCT3283GS0 TGAACCGTCT GGTQUAATCT CTACTATCAA
422 - . ~ CCGTCTAAAG ÀATCTCATAA ATCTCCAAAC ATGGCTACCC AGGGTGCUAT GCCGGCOT^
4&0
GC'_ i ι_Τι»·_Τ; TCCAGCGCCG GGCAGGAGGG GTCCTGGTTG CTAGCCATCT GCAGAG'*w*t’ 540: ·· ...................*.....”......“ '.......
OTGGAGGTGT CGTACCGCG7 TITACGCCAI CTTGCGCAGC CCTCTGGCGG DTCTGGCGGC 6G0 ~
TCTCAGAQCD TCCTGCTUAA GTCTTTAGAG OAAGTGAGAA AGATCCAGGG CGATGGCGCA
GCGCTCCAQG AGAAGCTGTG TGCQACCTAC AAGCTGTGCC ACCCCGAGGA GCTGSTGCTG CTCGGACACT CTUTGGGCAT CCCCTGGGCT OXCTGAGCT CCTSCCCCAG CCAGGCCCTG CAGOTGGCAG GOTGCTTQAG CUAAOTUCAT AGCGGGCTTT TCCTCTACCA GGGGCTCUTG CAGGCUCTGG AAGGGATATC CCGCGAOTTG GGTGCCACCT TGGACACAe? GCAGCTGGAC GTCGCCGACT TTGCGACCAC CATCTGGGAG CAGATGGÀAG AAOTGGGAAT GGCCCCTGCC CTGCAGCCOT AATAA.
S75
Í2? INFORMATION FOR REQ ID NO; §5;
ii) SEQUENCE CHARACTERISTICSiA) xmENGTH: 975 fes.se pairs (3) TYPE; nucleic acid (Cl STRANDEDNESS: single iD! TOPOLOGY: linear i-i; MDuECuDE TYPE; other nucleic acid (A; DESCRIPTION.· /desc ~ *DNA {synthetic.!’ (d; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 89;
ATGGCTGCÀG GTGACTGGCA AGAATTCCGG GAÀAAACTGA CGTTCTATOT GGTTAQCCTT ?84 ·Χ>\^Λ%’ ,·* A-.«á-SJw. A ·» A Mw*\v^ Λ Xa<.m . -M x *-Λ^ΤχχΑΎ \.U>A. A. \X&jA\Zx'T^ ATACATCaÍ T Ί AAAGAGACC AC2TGCAC2I TTGCTGGACT CGAACAÀCCT CAATGACGAA
ISO
GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT OGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG
L 4 0
GCTGTCAàSâ ACTTAGAAAA TGCATCAGCT
3GÜ ^<**ϊ^<*χ<γ5,'·>ζ’*ί>>>;·τ*»τϊί ,ίΎη^ρ’ίΓ'νΛΧ»: />κ<<χ/«τ..**. ^,«*^7^/**^ . ,Λ·.W .* :W ^ «^Sv'w x· ’aa .* s^^ 'wA./rV'^tKky.k. χ.Λ^χ.Λ**· \a· <m i U i
A<*·
Λ» .MV.
ggcgstggag gctucccggg TGAACCGTCT
420
CCGTCTAAAG AATCTCATÀA ATCTCOAAAC
4SC . W . \»W » * * «Í UUk.AijfsJ'ik'jfkavf
S40..............
CTGGAGSTGT CGTACCGCGT TCTACGCCAC
600
TCTCAGAGCT tcctgctcaa GTCTTTAGAG £65.............
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA ««ΑνATv. 2Αλ TCATCATCAA GTACGTAGAG
GGT2GAATCT OTACTATCAA CCCGTCTCCT ÀTGGCTACCC AGGGTGCCAT GCCGGCCTTÇ GTCCTGGTTG CTAGCCATCT GCAGAGCTTC CTTGCGCAGC CCTCTGGCGG CTCTGGCGQC CAAGTGAGAÀ AGATCCAQGG CGATGGCGCA
GCGCTCGAGG AGAAGCTGTG
TGCCACCTAC AAGCTGTGCC
ACCCCGAGGA GCTGGTGUTG
CTCGGACACT CTCTGGGOAT CGCCTGGGCT
782
CAQCTQGCAG GQTGCTTQAG CCAACTCCKT
8,40
CAGGCCCTGG AAGGGATATC CCCCGAGTTG
POO
GTCGCCGAOT TTGCCACCAC CATCTGGCAG
98Õ
CCCCTGAGCT CCTGGCCCAG CCAGGCCCTG
AGCGGCCTO TCCTCTACCA GGGGCTCCTG
GGTCCCACCT TGGACACAGT GCAGCTGGAC
CAGATGQAAG AAQTGGGAAT GGCQCCTGCC
CTGCAGCCCT AATAA
975
Í2- INFORMATXDN FOR ESQ ID NO; §0x (i) SEOUEÜKÍE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 99.8 base pairs (8} TYPE-, nucleic acid ÍC) STRANDEDNESS: single 1 w.\h-Wavw.' .. ÍÍXm. Q-xlltx... ί * <Λ x.. Λ.. >μ Λ* ·»
DESCRIPTION. /desc « SNA fr/ntnerii.} ' ίχί) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: SQ:
ÀTGGCTCTGG AUCOGAACAÀ OCTUAATGAC GAAGACGTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC .«flVVXAjrMtV^A ys V -A 7 X Λ λ Α,.’Χ^,’ΤΧΛΧν/ν. > X vHx>. v ΛΜ,ΑΧΧ
.... ,,.. awxsxs'-iu,u. AvAauTTAuA AAATGDACCA
GGTATTGAGG CAATTCTTCG TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCAC·
TCTCGACATC CAATCAICAC CAAGGCAGGT SACTGQCAAG AATTCGGGGA AAAACTGACG
340
TTCTATCTC-G TTACCCTTGA GCAAGCGCAG GÃACAÀCAGG GTGGTGGCTC TGGCGGTGG^
30C .............................................
AGCCGCGGCO GTTCTAACTQ CTCTATÀATG ATCGATGAAA TTATACATQA CTTAAAGAGA
360 >_x.jxuí_Tts-™A'„. CTTTGTACd AGAGGQCGGT GGAGGCTCCC CGGGTGAACD
420
A7CTCTACTA TCAACCCGTC TCCTCCGTCT AÀAGAATCTC ATAAATCTCC AAAGATQGCT
ACCCAGGGTG CCATGCCGGC CTTCGCCTCT GCTTTCCAGC GCCGGGCAGG AGGGGTCCTG
540
GT7GCTAGCC ATCTGCAGAG CTTCCTGGAG GTGTCGTACC GCGTTCTACG CACCTTGCG »00
CAGCCCTCTG GCGGCTCTGG CGGCTCTCAG AGCTTCCTGQ TCAAGTCTTT AGAGCAAGT3
AGAAÀGATCC AGGGCGATGG CGCAGCGCTC
G
TGCCACCCCG AGGAGCTGGT GCTGCTCGGA
780
CAGGAGAAGC TGTSTGCCAC CTACAAGCTG
CACTCTCTGG GCATCCCCTG GGCTCCCCTG
AGCTCCTGCC CCAGCCASGC
SAD
CCTGCAGCTG GCAGGCTGCT TGAGQCAACT
CCATAGCGGC
CTTTTCCTCT ACCAGGGGCT CCTGCAGGCC
90C
CTGGAAGGGA TATCCCCCGA GTTGGGTCCC ύ
Figure BRPI9610977A2_D0124
>'* ,Ν ν. I · ΪΙ >''·>*? .Λ:· y >. *W-> Χ fX MV» f'*·: λ .<«* ·Χ «».*.·.« {2? INFORMATION FOE SEQ ED NO; ?1:
(i:· SEQUENCE CHARACTERISTICS :
(A.; LENGTH: 898 base pairs
ÍE) TYPE: nucleic acid
ÍOS STRANDEDNESS·. single (D? TOPOLOGY: linear iii' MOLECULE TYPE: other nucleic acid {A) DESCRIPTION: Zdesc « ’DNA {synthetic!’ ixi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 81:
ATGGCTAATG CATCAGGTAT TGAGGCAATT CTTCGTAATC TCCAACCATG TCTQCCC^C^
6G .....--GCCACGGCCG CACCCTCTCG ACATCCAAT* ATCATCAAGG CAGGTGACTG GCAAGAA.m
Ix2C .....
CGGGAAAAAC TGACQTTCTA TCTGGTTACC CTTGAGCAAG CGQAGGAACA ACAGGGTGG®180
QGCTCTGGCG GTGQCAGCGG CGGCGGTTCT AACDGTTCTA TAATGATCGA TGAAATTATA 24C
CATCACTTÀA AGAGACCACÇ TGCACCTTTG CTSGACCCGA ACAACCTCAA TGACGAAGAC ΐΑΓ: '
GTCTCTATCC TGATGGACCG ÀAACCTTCGA CTTCCAAACC TGGAGAGCTT CGTAAGGG^
SO
QTCAAGAAUT TAGAATACGT AGAGGGCGGT GGAGGCTCCC CGGGTGAACC GTCTGGTCCA 43C ~
ATCTCTACTA TCAACCCGTC TCCTCCGTCT AAAQAATCTC ATAAATCTCC AAACATGGCT
4S0 acccagggtg ccatgccggc cttcgcctct GCTTTCCAGC GCCGGGCAGG aggggtcctg
GTTGCTAGCC ATCTGCAGAG CTTCCTGGAG GTGTCQTACC GCGTTCTACG CCACCTTGCG
Figure BRPI9610977A2_D0125
ij> SEQUENCE CHARACTERISTICS:
IA? LENGTH: 9S9 base pairs {Si TYPE: nucleia acid
ÍC; STRANDEDNESS; Singl®
ID? TOPOLOGY; linear iii? MOLECULE TYPE; other nucleic acid (A? DESCRIPTION; /desc ® OKA (synthetic) ixi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ
ATGGCTGCAC CCTCTCGACA 6G
GAAAAACTGA CGTTCTATC7
C
ISC
CAdTAAAGA
Figure BRPI9610977A2_D0126
:·30ΐ:
AAGAACTTAG
GCAGCGGCGG gaccacctgc
TGGAC x~<$tAAA
AAAATGCATC
36Q
ID NO: 93;
TCCAATCATC ATCAAGGCAG
GGTTACCCTT GAGCAAGCGC
CGGTTCTAAC TCCTCTATAA
ÀCOTTTGCTG GACCCSAACA
CCTTCGACTT CCAAACCTGG
AGGTATTGAG GCAATTCTTC
QTGACTGGCA AGAATTCCGG
AGGAACAACA QGGTGGTGGC
TGATCQATGA AATTATACAT
ACCTCAATGA CGAAGACGTC
AGAGCTTCGT AAGGGCTGTC
GTAATCTCCA ACCATGTCTG
288
Figure BRPI9610977A2_D0127
ACCCAGGSTG CCATGCCGGC CTTCGCUTCT &40
Figure BRPI9610977A2_D0128
AGCTCCTGCC CCAGCCA2GC CCTGCAGCTG
S ~*>àxv\»<sv 1 C t- Pkx^x^GCC ^00
ACCTTGGACA CACTGCAGCT QGACGTCGCC
SSCi
GAAGAACTOG gaatogcccc tgocctgcaq qOCt
Figure BRPI9610977A2_D0129
CAGGAGAAGC tgtgtgccac ctacaagctg
CACTCTCTGG GCATCCCCTG GGCTCCCCTG
GCÂGGCTGCT TGAGCCAACT CCATAGCGGC
CTQGAAGGGA TATCCCCCQA GTTGQGTCCC
GACTTTGCCA CCACCATCTG GCAGCAGATG
CCCTAATAA »23 INFORMATION FOR SEQ IQ NO: 93;
(i· SEQUENCE CHARACTERISTICS;
íA) LENGTH: 959 base pairs (E? TYPE: nuclsie acid (C; STRANDEDNESS: Single (D) TOPOLOGY: linear iii! MOLECULE TYPE: other nucleic acid (A.) .DESCRIPTION: /desc » DNA í synthetic) ” (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION·. SEQ ID NO: S3;
ATGGCTGCAG GTQACTGGCA AGAATTCCGG GAAAAACTGA CGTTCTATCT GGTTACCCTT
289
CiAGIAAGCGI AGGAAGAACA GG KJTGGG TTPGGCGGTG GCASCGGCGG CGGTTCTAAC
TGCTCTATAA TGATCGATGA AATTATACAT CACTTAAAGA GACCACCTGG ACC','f^G’'TS 182
GACCCGAACA AOCTCAATGÀ CGAAGACGTO TCTATCCTGA TGGACCGAAÀ CCTTCGACTT
240
CCAAACCTGQ AGAGCTTCGT AAGGGCTGTC AAGAACTTAG AAAATGCATC AGGTA^GAG
300 ......
GCAATTCTTC GTAATCTDCA ACCATGTCTG COCTCTGCCA CGGCCGCACC CTCTCGACAT
SO r*-AATCATiA TCAAGTACGT AGAGGGCGGT GGAGGCTCCC CGGGTGAACC GTCTGGTCGA 420 *
ATCTCTACTA TCAACCCGTC TCCTCCGTCT AAAGAATCTG ATAAATCTCC AAACATGGCT·
480 ...................................................................................
ACCCÀGGGTG CCATGCCGGO OTCGCCTCT GCTTTCCAGC GCCGGGCAGG AGGGGTCCTG 542...... ....................
GTTGCTAGCG ATCTGCAGAG CTTCCTGGAG GTGTCGTACU GCGTTCTACG CGACCTTGCG
CAGCGCTCTG GCGGCTCTGG CGGCTCTCÃG AOCTTCCTGC TCAAGTCTTT AGAGCAAGTG
..:6. ft'D.... ...... ........ ................................................................
A^«AAGATCG AGGGCGATGG CGCAGCGCTC CAGGAGAASC TGTGTGCCAC CTAUAAGCTG
Tuix.rtC-CCG AGGAGCTGGT GCTGCTCGGA CAUTCTCIGG GCATCQCeTG GGTQCCUTG ** *
AGCTCCTGCC CCAGCCAGGC CCTGCAGCTG GCAGGCTGCT TGAGCCAAÇT CCATAGCGGC
CTTTT^.CTCT ACCAGGGGCT CCTGQAGQCC CTGGÂÀGGGA TATGCCCCGA GTTGGGTCCC
ACDTTGGACA CACTGCAGCT GGACGTCGCO GACTTTGCCA CCACCATCTG GCAGCAGATG SOv
GAAGAACTGG GAATGGCCCQ TGCGGTGCAG ^CCTAATAA
9SS
Í25 INFORMATION FDR SEQ ID NO: 94:
Ui SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A) LENGTH: 918 base pairs (B) TYPE: nuelerc acid (C> SmNDEDNESS: Single
Figure BRPI9610977A2_D0130
Figure BRPI9610977A2_D0131
Figure BRPI9610977A2_D0132
{Xi; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID ND: 94;
ATGGOTAACT GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCACCTGO SO
CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTGAATGAC GAAGACGTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA AGAACTTAGA ÀAATGCATCA CCATGTCTGe CCTCTGCCAT GGCCGCACCC GACTSGCAAG AATTCCGGGA AAAACTGACG GAACAÀCAGT ACGTAGAGGG CGGTGGAGGQ AACATSGCTT ACAAGCTGTG CCACCCCGAG ATCCCCTGGG CTCCCCTGAG GTCCTGCCCC AGCCAACTCC ATAGCGGCCT TTTCCTCTAC TCCCCCGAGT TGGGTCCCAC CTTG-GACACA Au>_ATCTGGC AGCA-GATGGA AGAACTGGGA GCGATGCCGG CCTTCGCCTC TGCTTTCCAG CATCTGCAGA GCTTCCTGGA GGTGTCGTAC GGCGGCTCTG GCGGCTCTQA GAGCTTCCTG CASGGCGATG GCGCAGCGCT CCAGGAGAAG
GGTATTGAG
CAATCATCAT
TAATCTCCAA
TTCTATCTGG
GAGCTGGTGC
CGCCGGGGAG
CGCGTTCTA·
840 ‘AAGTC’^^
TGCTCGGACA
GGAAGGGATA
CCTGCAGÍ
GAGGGGTCCT
GCCACCTTGC
CACCGAGGCT
GGTTGCTAGC
GCAGCCCTCT
GAGAAAGAT
Figure BRPI9610977A2_D0133
i'i! SEQUENCE CHARACTERISTICS:
ÍA? LENGTH; 9S3 base pairs ÍB· TYPE: nuclerc acid (Ci STRANDEDNESS; single fD? TOPOLOGY: linear iri..> MOLECULE TYPE; ocher nucleic acid (A; DESCRIPTION. /desc * ’DNA (synthetic} ίκϋ SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID ND: 95:
ATGGCTAACT· GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCA^^ SC
CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC
CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA AGAAOT.AQA AAATGCATCA 2.8Ό
GGTATTGAGG QAATTCTTCG TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCA^CC
0 *
TCTCSAÜATC CMTOVTCAT CMSCCAGST SACTOTCAAÍS ΑΛΤΚΧίΜΟΛ AAAACTSACC
TTCTATCT·® TTACCCTTGA «AtóCGCM GAACAACAGT ACGTAGAWS COTTOGAGSC 4-QU.
TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCQAATCTCT ACTATCAACC CGTCTGCTCC GTCTAAAGAA 42 0
TCTCATAAAT CTCCAAACAT GGCTTACAAG CTGTGCCACC CCGAGGAGCT GGTGCTGCTC
GGÀCACTCTC TGGGCATCCC CTGGGUTCCC CTGAGCTCCT GCCCCAGCCA GGCCCTGCAG
CTGGCAGGCT GCTTGAGCCA ACTCCATAGC GGCCTTTTCC TCTÀCCAGGG GCTCCTGCAG
CUV
GCCCTGGAAG GGATATCCCC CGAGTTGGST CCCACCTTGG ACACACTGCA GCTGGACGTC r ,λΛχ. -si ά m? v wxS . <3 ·^ A
GTCCTGGTTG QTAGCCATCT GCAGAGCTTC CTGGAQGTGT CGTACQGCG* ’T'^Af
S40
TCAGAGCT
AG·
INFORMA*
DQ
96;
EQuENCE CHARACTERISTICS; tA; LENGTH.· .919 case pairs (Bi TYPE: nucleic acid (C! STRANDEENESS: single ID.! TOPQXiUGY; linear nuclei·:
acid /d»sc ® ’DMA (synthetic) txi; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ IO NO; 94ATGGCTAACT GCTCTATAAT GATCGATSAA
C?
attatacatc acttaaagag accacctgca
CTTCGACTTC CÀÀACCTGGA
GGTATTGAGG CAATTCTTCG .240
TCTCGACATC CAATCATCAT
392
TTCTATCTGG TTÀCCCTTGA .360
CCTCAATGAC GAAGACGTCT
QAGCTTCGTA AGGGCTGTCA
TAATCTCCAA CCATGTCTGC
CAAGGCAGGT Q.ACTGGCAAG
GCAAGCGCAQ GAACAACAGT
CTATCCTGAT GGACCGAAAC
AGÀACTTAGA AAATGCatca
CCTCTGCCAC GGCCGCACCC aattccggga aaaactgacg ÀCGTAGAGGG CGGTGGAGGC
TCCCCGGGTG GTGGTTCTGG CGGCGGCTCC AACATGGCTC
CCGAGTTGGQ TCCCACCTTG
Figure BRPI9610977A2_D0134
TGGGAATSG .'OCT GCAQCCCÀCC CAGGGTGCCA TGCCCGCCTT UGCQTCTGCT
TTcCAuCGCI GGGCAGGAGS GQTCCTGGTT GCTAGCCATC TGCAGAGCTT CCTGGAGOTG
65Í ........ ...... ’* ·ν»ν .. ^^TTuv-^nui uuLT-wTGGCG GCTCTGGCGG OTCTCAi is β 0
Figure BRPI9610977A2_D0135
Figure BRPI9610977A2_D0136
Figure BRPI9610977A2_D0137
GG^íGCTTGA GCCAACTCCA TAGCGGCCTT TTCUTCTACC AGGGGCTCCT GCAGGCCCTi
GAAGGGATAT CQTAATAA
918 il; INFORMATION FOR SEQ ID NO: 97;
Í1) SEQUENCE CHARACTERISTICS.·.
(Al LENGTH; 963 base pairs (Hi TFFE: nucleic acid (U j STRAHDEDNESS; single (D; TOPOLOGY; linear (ti) MOLECULE TYPE: other nucleic acid !«.> DjiSi-RzP i xON; /desc « *X3NA i Synthetic i ”
ÍKÜ SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 97-.
AIGGCTAACT GQTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATQ ACTTAAAGAG ACCACQTGCA
CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT CTATCQTGAT GGACCQAAAC
CTTCuaCTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AGGUCTGTCA AGAACTTAGA AAATGCATOA
294
GGTATTGÀGG CAATTCTTCO TAATGTCCAA CCATGT0TG2 CCTCTGCCAC GGOCGCACGC x r·.
ZfcL
TCTCGACATC CAA7CATCÀT CÀAGGCAGU? GACTGGCAAG AATTCCQGGA AAAACTGACG
TTCTATCTGG TTACCCTTGA GCAAGOGCAQ GAACAACAGT ACGTAGAGGG CGGTGGAGGC 3È0
TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCCAATCTCT ACTATCAACO CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA
-4·2 <·
TCTCATAAAT GTCCAAACAT GGCTCCCGAG TTGGGTCDCA CCTTGGAOAC ACTSCAGCTG
8 C'
GAUGTvGCDG ΑΟΤΤτκ.'ΌΑ*' , _
-'-w-w ,.·... «Λ^>_Λ.ι~*νιχ» AAGAACTGG’G AATGGCCCC^
540
u.ívTGííG·. u«í\uCuAGGG TGCOATGCCG GCTTTCGCCT CTGCT^mCA )3?Όί***ϊ*'*“;Λ’**· GGAGGGGTCO TGGCTGCTAG CCATCTGCAG AGCTTCCTGG AGGTGTCGTA CCGCdTCTA CGCCACCTTG CGCAGCCCTC TGGCGGCTGT GSCGGCTCTC AGASC-TCCT GCTCAAGTUT TTAGAGCAAG TGAGAAAGAT CCAGGGCGAT GGCGCAGCGC TOCAGGAGÀA SCTSTGTGCC AGCTACAAGC TGTGCCACCC CGAGGAGCTG GTGCTGCTCG GACACTCTCT GGGCATOCCQ β w
TGGGCTCCCC TGAGCTCCTG CCCCAGCCAG GCC'CTGCAGC TGGGAGGQTG CTTGAQCCAA CKCATAGOG GCCTTTTCCT CTACCAMOT OTCTGCASS CCCTGSMÍK OATATCCTMl
TAA
963 (2) INFORMATION For sEq xr> K0. $s ; íií SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 928 base pairs {R} TYPE: nucleic acid
ÍC) STRAMDmiESS: single
ÍD) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE; other nucleic acid (A) DESCRIPTION: /desc * DNA (synthetic) ’
CCTCAATGAí
GAAGACGTOT
ΤΑ'
AAACOTGGA
AGAACTTAGA
Figure BRPI9610977A2_D0138
ΛΛ,
GTGGTTCTGG
TGGCCCCTGC
AC L '^UAsíTt»
80
CATGCCGGí
CTTCGCCTCd'
C<*< >**/** z* « x* Λ AAk3\«9
AGGGGTCCTQ
GTTGGTAGCv
ATCTGCAGAG
CCTGGAG
GTGTOGTACC
GCGTTCTACG :GGCTCTCAG
AGAGCAAGTG
AGAAAGATCC όδδ
AGGGCGATGG
CAGGAGAAG’
TGTGTG;
TACAAGCTG
GCATCCCCTG
Figure BRPI9610977A2_D0139
xr>.bh
CCAGCCAG® :CAGC
TGAGCCAACT
CATAGCGGí
CTGCAGGC·;
CTGGAAGGGA
ACCTTGGACA
900
CCACCA.TCTG
GCAGCAGATG
GAAGAACTGG c; c.....
GÀTAATAA
2} INFORMATION FOR SEQ ID NO: 99:
29€ ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
fA: LENGTH; 999 base parrs {»: TYPE: nucleic sole (c; PTBANDESNESS; single fDi TOPOLOGY; linear in) MOLECULE TYPE; other nucleic acid duCRIPTIQN ; /desc * “SNA isynthetic!
sxi: SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 9$;
ATGGCTAACT gctctataat gatcgatgaa ATTATACATO ACTTAAAGAG accacctgca CCTTTgCTGu ACCCOAACAA CCTCAATGAC GAAGACSTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC v..v«A..;·. CnAACvTwGA GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA AGAACTTAGA AAATGCA^A I ’ftV * *
SGTATTGAGG CAATTCTTCG TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCACCC TUTCGACRTC CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAG AATTCCGGGA AAAACTGACG TTCTATCTGG TTACCCTTGA gcaagcgcag GAACAACAGT ACGTAGAGGG cggtggaggq TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCCAATCTOT ACTATCAACC CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA TCTCATAAAT CTCCAAACAT GGCTATGGCC CCTGCCCTGC AGCCCACCCA GGGTGCCATG CCGGCCTTCG CCTCTGCTTT CCAGCGCCGG GCAGGAGGGG TCCTGGTTGC I’AGCCATCTG CAGAGCTTCC TGGAGGTGTC GTACCGCGTT CTACGCCACC TTGCGCAGCC CTCTGGCGGC TCTGGCGGCT CTCAGAGCTT CCTGCTCAAG TOTTAGAGC AAGTGAGAAA GATCCAGGGC gatggcgcag cgctcgagga gaagctgtgt gccacctaca agctgtgcca ccccgaggag CTGGTGCTGC TCGGACACTC TCTGGGCATC CCCTGGGCTC CCCTGAGCTC CTGCCCCAGC
297 s· V V X·' ZX Z+ Z*/ V <**+ Λ^.Λ /VZX X Λ·Α A’MW ZV.ZJkZMZ^V»^· *X **X ,W Λ** νχ χ XAWlAy ·Ά'·Χ w> χ. -- ..>- -- . —- — ___ . _·. .·.. .· ·. .·. , .· . ·.·_ ~-ui V. IkíDvAuL» \.*ς.'χ. . Ο.^λ/~Τ~<*ΑΤΑ COTCTACCA3 δ 41GGGCTCCTGC AGGCCCTGGA AGGGATAICC CQCGAGTTGG GTCCCACCir OGADxOAUTO
S S
CAGCTGGACG TCGCCGACTT TGCCACCACC ATQTGG2AGC AGATGGAAGA ACTGGGATAA
960 i'2; INFORMATION FOR SEQ ID KO; IOC:
(1Í SEQUENCE CHARACTERISTICS (A) LENGTH; 916 base pairs tB? TYPE: nucleic acid
IC) STRANDEDNESS;. single (D> TOPOLOGY; Imear ii.) MOLECULE TYPE.·, other nucleic acid (A; DESCRIPTION: /desc » *DNA (syntnetic (Xii SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; ISO;
ATGGCTAACT GQTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACÀTC ACTTAAAGAG ACCACCTGCA 60
CQTTTGGTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC lie
CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA AGAACTTAGA AÀATGCÀTCA
180
GGTÀTFSAGG CAAITCTTCQ TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCA^C^
C
TQTOGAQATC caatcatcac caaggcaggt gactogcaag aattccggga aaaactgacg 3QC
TTCTATCTGG TTACCCTTGA GCAAGCGCAG GAACAACAGT ACGTAGAGGG CSGTGGAGGG
360 ................................ ........ ............ ...... ........ ...............................
TCCCCGGGTG GTGGTTUTGG CSGC>SGCTCC AAGATGGCTA CCCAGGGTGC CATGCCGGCC • 420.......... .......... .......................................................
TTCGCCTCTG CTTTCCAGCG CCGGGCAGGA GGGGTCCTGG TTGCTAGCCA TCTGCAGAGC 4&δ
TTCCTGGAGG TGTCGTACCQ CGTTCTACGC CACCTTGCGC AGCCCTCTGG CGGCTCTGGC
C.A ·>?)· .....
298
Figure BRPI9610977A2_D0140
,** S·. /·»/* “X V ZV.fX\ .X Jv Ά *; <. ΛΧ ,^χ. v c „ Λ Α* A _ r wftuwrtnviw·, υηπΛϋΛ;cc?- GGGCGATGG:
TACAAGOm GCUACOCUQi GGAGCTGGTC
Figure BRPI9610977A2_D0141
Figure BRPI9610977A2_D0142
CTGCAGCTGG CAGGCTGCTT GAGCCAACTC ?Χ· M f\......... ................ ..........................................
:> »u
CTGCAGG·
840
GACGTCGUCG ACTTTGOCAC CAOCATCTGG $80
TGGAAGGGAT atcccccgag ttgggtccca
CATAGQGGCC TTTTCCTCTA CCAGGGGCTC
COTGGACAC ACTGCAGCTG
CAGCAGATGG AAGAACTGGG AATGGCCOCT
GCUCTGCAGC CCTAATAA
818 (2; INFORMATION FOR SEQ ID NG: 101:
ii.) SEQUENCE CHARACTERISTICS; (A; LENGTH.· §63 base pairs {£} TYPE.· nucleic acid (Os STRANDEDNESS; single {D· TOPOLOGY;, linear
MOLECULE TYPE: other nucleic acid .A: OxiECRIFTlON; /desc ® 'DNA (synthetic) (xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 101.
ATGGCTAACT GCTCTATAAI GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCACCTOCA ^CTTTG^TQ^ ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTOT CTATCCTGAT GGACCGAAAC ISc^'” VrtAACCTG{SA UAGCTTCGTA AGGGCTGTCA AGAACTTAGA AAATGCATCA ggtattgagg caattcttcg taatgtccaa ccatotctgc cctctgcqac ggccgcaccc a-^A^*·,. CAATCATCAT CAAGGGAGGT GACTGGCAAG AATTCCGGGP. AAAACTGACG
299
Figure BRPI9610977A2_D0143
TCTCATAAAT CTCCAAACAT GGCTACCCAG
4SC .........
Figure BRPI9610977A2_D0144
TACCGCGTTC TACGCCACCT TGCGCAGCCC
5SÇ.........
CTGCTCÀAGT CTTTAGAGCA AGTGAGAAAG
AAGCTGTGTG CCACCTACAA GCTGTGCCAC
CTGGGCATCC CCTGGGCTCO CCTGAGCTCC
780
TGCTTGAGCC AACTCCATAG CGGCCTTTTC
845
GGGATATCCC CCGAGTTGGG TCCCACCTTG
900
GCCACCACCA TCTGGCAGCA GATGGÂAGAÀ
960................. ................
TAP.
C>:C~<.....
.·> V? w?
u; A’CdA^jAx-zGG CGdGGAGGC AUTATCAAd CGTCTCT 'QC GTd.VJkGAA GSTGCCATGC CGGCCTTCÇC CTCTGCTTTC AGCCATCTGC AGAGCTTCCT GGAGGTGTCG TCTGGCGGCT CTGGCG-GCTC TCAGAGCTTD ATCCAGSGCG ATÇGCGCAGC GdOCAGGAG CCCGAGGAGC TGGTGCTGCT CGGACACTCT TGCCCCAGCC AGGCCCTGCA GCTGGCAGGC CTCTACCAGG GGCTCCTGCA GGCCCTGGAA GACACACTGC AGCTGGACGT CGCCGÂCTTG CTGGGAATGG CCCCTGCCCT GCAGCCCTAA
U? INFORMATION FOR SEQ IO NO; 132;
> 11 SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) length.' 918 base pairs TYPE: nucleic acxd
ÍC) STRANDEDNESS; single (D) TOPOLOGY: linear iii) MOLECULE TYPE; ether nucleic acid (A) DESCRIPTION; /dess » ’UNA (synthetic)* {Ki} SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 102;
ATGGCTAACT GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCACCTGC
300
CCTCAATGAC GÀAGACGTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC
L'TVCGACGTC CAAACiFTGGA GAGCTTCGTA ISO
GGTATTGAGG CAATTCTTCQ TÀATCTCCAA
340
TCTOSÃOTQ CAATCATCAT CAAGGCAGG7
ÀGGGCTGTCA AGAACTTAGA AAATGCATCA
CCATGTCTGC CTTCTGCGAC GGCCGCACCC
UAtiUwuAAG AATTCCGGGA AAAACTGACG
Figure BRPI9610977A2_D0145
GAACAACAGC ACGTAGAGGG CGGTGGAGGC
TCCCOGGGTG GTGGTTCTGG CGGCGGTTCC
420
AACATGGCTT GTGCTTTCCA GCGCCGGGCA
GGAGGGGTCC TGGTTGCTAG CCATCTGCAG
4S0
AGçttcctgg aggtgtcgta ccgcgttcta
CGCTAC'TTTG CGCAGCCCTC TGGCGGGTCT
540
GGCGGCTCTC AGAGCTTCCT GCTCAAGTCT
-: axaAGvAats TGAGAAAGAT CCAGGGCGAT »0C
ACCTACAAGT TGTQCCADCC CGAGGAGCTG $60
TGGG'GTGCCe 'TGAGCTCCTG CCCOAGCCAG
720
GGCGCAGCGC TCCAGGAGAÀ GCTGTGTGCC
GTGCTGQTCG GAQACTCTGT GGGCATCGÇÇ
GCCeTGCAGC TGGCAGGCTG OTGAGCCAA mCATAGTG GCcmrUCT ^Ax.x„T\»uA\»w> C'-^TvG.AAGG GATATCCCCÇ
GAGTTGGGTC CCACGTTGGA CACACTGCAG CTGSACGTCG CCGACTOGC CAC'CACQATC • 34„ *
TGGCAQCAQA TGGAAGAACT GGGAATGGCC CCTGCCCTGC AGCQGACCG4 GGGTGCCATG
CCGGCCTTCG CCTAATAA
918 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO.-. 103·
ÍÍ) SEQUENCE CHARACTERISTICS: LENGTH: 5S3 base pairs TYRE: nuclexc acid.
STRANDEDNESS; single TOPOLOGY; linear
301 íic · MOLECULE TYPE. other nuciexc acid
ÍA; DESCRIPTION; /dese ~ *DNA (synthetic) ’ ixii SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 103:
ATGGCTAACT GCTCTATAAT GATCGATGAA
.... ........
CCTTTGCTGS ACCCGAACAA CCTCAATGAC
CTTCGAGTTO CAAACCTGGA GAGCTTCGTA
ISO
GGTATTGAGG CAATTCTTCO TAATCTCCAA
0.....
TCTCGACATC CAATCATQAT CAAQGCAGGT
300
TTOTATCTGG TTACCCTTGA GCAAGCGCAG
360
TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCCAATCTCT
42C
TCTCATAAAT CTCCAAACAT GGCTTCTGCT
480
GCTAGCCATC TGCAGAGCTT CCTGGAGGTG
540
CCCTCTGGCG GCTCTGGCGG CTCTCAGAGC
600
AAGATCCAGG GCGATGGCGC AGCGCTCCAG
660
CACCCCGAGG AGCTGGTGCT GCTCGGACAC
720..........
TCCTGCCCCA GCCAGGCCCT GCAGCTGGCA
780
TTCCTCTACC AGGGGCTCCT GCAGGCCCTG
Ü
ATTATACATC ACTTAAAGAG ÀCCACCTGCA
GAAGACGTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC AGGGCTGTCA AGAACTTAGA AAATGCATCA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCACCC QACTQGCAAG AATTCCGGGA AAAACTGACG GAACAACAUT ACGTAGAGGG CGGTGGAGGC ACTATCAACC CGTCTCCTCC GTCTAAÀGAA TTCCAGCGCC GGGCAGGAGG GGTCCTGGTT TCGTACCGCG TTCTACGCCA CCTTGCGCAÔ TTCCTGCTCA AGTCTTTAGA GCAAGTGAGA GÀGAÃGCTGT GTGCCACCTA CAAGCTGTGC TCTCTGGGCA TCCCCTGGGC TCCCCTGAGC GGCTGCTTGA GCCAACTCCA TAGCGGOCTT GAAGGGATAT CCCCCGAGTT GGGTCCCACC
TTGGACACAC TGCAGCTGGA CGTCGCCGAC TTTGCCACCA CCATCTGGCA GCAGA™GGAA
800
302
TGGCCCCTGC CCTGCAGCCC AOCCAGGGTG CCATGCCGGO CTTCGCCTAA
50
INFORMATION FOR SEQ ID NO: 104:
ii) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
ÍAJ LENGTH: §2 base pairs (B) TYPE; nucleic acid íC; STRANDEDNESS: single (D; TOPOLOGY; linear [ii) MOLECULE TYPE: -ether nucleic acid iA, DESCRIPTION; /desc * 'DNA {.synthetic;1' (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 104:
ATGGCTAACT GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAQ ACCACCTGCA
EC
CCTTTGÇTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GXAGACGTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC
CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA AGAACTTAGX AAATGCATCA 180'...... .... ..........................
GGTATTGAGG CAATTCTTCG TAATCTCCAA CCATGTCTGC OCTCTGCCAC GGCCGCACCC 240
TCTCGACATC CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAG AATTCCQGGA AAAACTGAOG
300
TTCTATCTGG TTACCCTTGA GCAAGCGCAQ GAACAACAGT ACGTAGAGGQ CGGTGGAGGC
3$0 ................................
TCQCCGGGTG GTGGTTCTSG CGGCGGCTCC AACATGGCTT ACAAGCTGTG CCACCCCGAG
420
GAGCTGGTGC TGCTCGGACA CTCTCTGGGC ATCCCQTGGG CTCCCCTGAG CTCCTGCCCC 480
AGCCAGGCCC TGCAGCTOGC AGGCTGCTTG AGCCAACTCC ATAGCGGCCT TTTCCTCTAC
540
CAGGGGCTCC TGCAGGCCCT GGAAGGGATA TCCCCCGAGT TGGGTCCCAC CTTGGACACA Εδΰ
CTGCAGCTGG ACGTCGCCGA CTTTGCCACC ACCATCTGGC AGCAGATGGA AGAA^GGGA
660 ..........
303
ATGGCCCCTG CCOTGCAGCC CACCCAGGGT GCCATGCCGG CCTTCGCCTC
720
CG2CGGÜCAG GAGGGGTCCT GGTTGCTAGC CATCTGCAGA GCTTCCTGGA
780
CGCGTTCTAC GCCACCTTGC GCAGCCCACA CCATTGGGCC CTGCCAGCTC
840 agottcctgc tcaagtctti agagcaagtg AGAAAGATCC AGGGCGATGO
900
CAGGAGAAGL TGTGTGCCAC' CTAATAA
927 (2· INFORMATION FOE SEQ ID NO: 105:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A; LENGTH: $72 ha.se pairs (B; TYPE: rsucleit acid (0; STRANDEUNESSt single (D> TOPOLOGY; linear
Ui) MOLECULE TYPE: other nucleic acid (A; DESCRIPTION: /desc « *DNA <synthetic) · (Xi? SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: IOS;
ATGGCTAACT GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG 60
CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT CTATCCTGAT ISO
CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA AGAACTTAGA ISO
GGTATTGAGG CAATTCTTCG TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC
240
TCTCGACATC CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAÀG AATTCCGGGA SCO
TTCTATCTGG TTACCCTTGA GCAAGCGCAG GAACAACAGT ACGTAGAGGG
360
TGCTTTCCAG Q3X5 A V» 1 i-xa x Ax.
CCTGCCCCAG
CGCAGCGCTC
ACCACCTGCA
GGACCGAAAC
AAATGOATCA
GGCCGCACCC
AAAACTGACG
CGGTGGAGGC
TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCCAATCTCT ACTATCAACC CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA
420
2G4
T0TCATAÀA7 CTCCAAACAT GGCCTACAAG CTGTGCCACC CCGAGGAGCT GGTGCTGCTD
480
GGAMAUTCTC TGGGOATCCG CTGGGCTCCG CTGAGCTCCT GCCUGAGCCA GGCCTTGCAG 540
CTGGCAGGCT GCTTGAGCCA ACTCCATAGC GÜCCTTTTCC TCTACCAGGG GCTCCTGCAG
630 gccctggaag ggatatccco ggagttgggt cccaccttgg acacactgca GCTGGACGTC
660 gccgactttg ccaccaccat ctggcagcag atqgaagaac tgggaatggc ccctgccctg
23
CAGCCCAGCC AGGGTGCCAT GCCGGCCTTC GCGTCTGCTT TCCAGCGCCG GGCAGGAGGG
S0
GTCCTS3TTG CTAGCCATCT GCAGAGCTTC CTGGAGGTGT CGTACCGCGT TCTACGCCAC
840
CTTGCGCAGC CCACACCATT GGGCCCTGCC AGCTCCCIGU CCCAGAGCTT CCTGUTUAAG
9CC
TCTTTAGAGC AAGTGAGAAA GATCGAGGGC GATGGCGCAG CGCTCCAGGA GAAGCTGTGT
863
GCCACCTAAT AA
572 ........................
{2) INFORMATION FOR SEQ XD NO: 206:
{<· SEQUENCE CHARACTERISTICS:
tAj LENGTH: 927 base pairs
ÍB5 TYPE: nucleic acid (C) STRANDEDNESS; single (D) TOPOLOGY; linear (iij MOLECULE TYPE: ocher nucleic acid (A) DESCRIPTION; /desc » *DNA (synthetic) “ {Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 106:
ATGGCTÀACT GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACAT0
CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT
120
ACTTAAAGAG ACCACCTGCA
CTATCCTGAT GGACCGAAAC “TTL^A'w* ;C uAAAuCTuGA gagcttcgta agg^sctgtca agaacttaga aaatgcatca
18C........ ............................................ .................. :··*.....:.....
305 iU*SL>V WWX <- A a> a a «V?
:w
TOTCGACATC CAATOATOAT
00
Figure BRPI9610977A2_D0146
GACACACTOC AGCTSQACG7: 4 80
CTGGGAATGG CCCCTGCCCT
546
T7CCAGCGOC GGGCAGGAGG 600
TCGTACCGCG TTCTACGCCA
68.6
CDCCAGAGCT TCCTGOTCAA
72C
GIGCTCCAGG AGAAGCTGTG
780
CTCGGACACT CTCTGGGCAT
CAGCTGGCAG GCTGCTTGAG 9C-0
CAGGCCCTGG AAGGQATATC
9Ϋ7
TAATCTCCAA CCATGTCTQC CAAGGCAGGT GACTGGCAAG GCAAGCSCAG GAACAACACT CGGCGGCTCC AACATGGCTC CGCCGACTTT GCCACCACCA GCAGCCCAOC CAGGGTGCCA ggtcctggtt GCTAGCCATC CCTTGCGCAG CCCACACCAT QTCTTTAGAG CAAGTGAGAA A * Aks i μ,Ίμ CCCCTGGGCT CCCCTGA.GCT CCAACTCGAT AGCGGCUTTY CTAATAA
CCTQTGCCAO GGCCGCACCG .AÂ-. * Λ
ACGTAGAGGG CGGTGGAGGC CCGAGTT'GGG TCCUACOTTG TCTGGQAGCA GATQGAAGAA TGCUGGCCTT CGCCTCTGCT TGCAGAGCTT GCTGGAGGTG TGGGCCCTGC CAGCTCCCTG AGATCCAGGG CGATGGCGOA ACCCCGAGGA GCTGGTGCTG CCTGCCCCAG CCAGGCCCTG TCCTCTACCA GGGGCTCCTG i'2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 107;
U) SE0ÜS4CE CHARACTERISTICS;
SA; LENGTH; §72 base pairs !B? TYPE; nucleic acid
ÍC; STRANDEDNESS: single (D> TOPOLOGY; linear iicj MOLECULE TYPE; ether nucleic acid tAj DESCRIPTION; /àese « ‘DNA {synthetic)
306 ixi.' SEQUENCE DESCRIPTION. SEQ ID NO; 107;
AYUGITAãCT ΟΓΤίΜΑΤΑΑΤ GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCACCTGCA 6v
CCTTTGCTGG KCCCGAADAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT CTATCCTGAC GGACCGAAAC ISC·
CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA AGAACTTAGA AAATÇQATCA 1W....................... ..........
ggtattgagg caattcttcg TAATCTCCAA ccatgtctgc CCTCTGCCAC GGCCGCACCC 24 E
TCTCGACATS AATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAG AATTCQGGGA AAAACTGACG ........oof
TTCTATCTGG TTACCCTTGA GCAAGCGCAG GAACAACAGT ACGTAQAGGG CGGTGGAGGC 36C...... .... ......
TCCCCGQGTG AACCGTCTGG TCQAATCTCT ACTATCAACC CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA 42C
TCTCATAAAT CTCCAAACAT GGCTCCCGAG TTSGGTCCCA CCTTGGACAC ACTGCAGCTG
48C................................. .......................... ..........
GACGTCGCCG ACTTTGCCAC CACCATCTGG CAGCAGATGG AAGAACTGGG AATGGCCCCT
S4C................... .... .... ..............
GCCCTGCAGC CCACCCAGGG TGCCATGCCG GCCTTCGCTT CTGCTTTCCA GCGCCGGGCA
SCO
GGAGGGGTÜC TGGTTGCTAG CCATCTGCAG AGCTTCCTGG AGGTGTCGTA CCGCGTTCTA »50
CGCCACCTTG CGCAGGCCAC ACCATTGGGC CCTGCCAGCT CCCTGCCCCA GAGCTTCCTG
720
CTCAACTCTT TAGAGCAAGT GAGAAAGATC CAGGGCGATG GCGCAGCGOT CCAGGAGAAG
780
CTGTGTGCCA CCTACAAGCT GTGCCACCCC GAGGAGCTGG TGCTGCTCGG ACACTCTCTG
84C
GGCATCCCCT QGGCTCCCCT GAQCTCCTGC CCCAGCCAGG CCCTGCASCT GGCAGGCTGC
500
TTGAGCTAAC TCCATAGCGG CCTTTTCCTC TACCAGGGGC TCCTGCAGGC CCTGGAAGGG
950
ATATCCTAAT AÀ
Wi<s ................. s ........
<2) I.NFDRMATXCN FOE SEQ ID ND: XOg:
3Q7 ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
{Ai LENGTH·. $27 base parrs (B) TYPE-, nucleic acic . {C} STRANDEDNESS: SUSjle (Di TOPOLOGY; linear ii) MOLECULE TYPE: ether nucleic acid (A? DESCRIPTION:. /desc = “DNA (synthetic) txl) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID ND: 10 £:
atggctaact gctctataat GATCGATGAA attatacatc acttaaagag ACCACCTGCA
CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC' GMK3ACGTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC 1:2 0
CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA ASGGCTGTCA AGAACTTAGA AAATGCATCA :181
GGTATTGAGG CAATTCTTCG TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCACCC
0
TCTCGACATC CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAG AATTCCQGGA AAAACTGACG ice ..............
TTCTATCTGG TTACCCTTGA GCAASCGCAG GAACAACAGT ACGTAGAGGG CGGTGGAGGC
360
TCCCCGGGTG GTGGTTCTGG CGGCSGCTCC AACATGGGTA TGGCCCCTGC CCTGCAGCCC
420
ACCCAGGGTG CCATGCCGGC CTTCGCCTCT GCTTTCCAGC GCCGGGCAGG AGGGGTCCTG
480
GTTGCTAGCO ATCTGCAGAG CTTCCTGGAG GTGTCGTACC GCGTTCTACG CCACCTTGCG
540 .... .. ..
CAGCCCACAC CATTGGGCCC TGCCAGCTCC CTGCCCCAGA GCTTCCTGCT CAAGTCTTTA
600
GAGCAAGTGA GAAAGATCCA GGGCGATGGC GCAGCGCTCC AGGAGAAGCT GTGTGCCACC
660
TACAAGCTGT GCCACCCCGA GGAGCTGGTG CTGCTCGGAC ACTCTCTGGG CATCCCCTGG 720
GCTCCCCTGÂ GCTCCTGCCC CAGCCAGGCC CTGCAGCTGG CAGGCTGCTT GAGCCÀACTC ?3C
3Q8
CATAGCGGC2 TTTTCCTCTA CCAGGGGCTC CTGCAGGCCU TGGAAGGGAT ATCCCCCGAG
840
TTGGGTCCCS CGTTGG4CAC AOTGGAGCTG GACGTCGCCG ACTTTGCCAC CACCATCTSG
900........... ...............................
CAGCAGATGG AAGAACTGGG ATÀATAA
927 (2j INFORMATION FOR SEQ ID NO·. 109;
(I; SEQUENCE CHARACTERISTICS ;
(A; LENGTH: 972 base pairs {D- TYPE; nucleic ecid
ÍC; STRANDEDNEDS : single iD: TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE; ether nucleic acid (A? DESCRIPTION; /desc » «DNA {synthetic} * (Xi; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 109:
ATGGCTAACT GGTCTATÀAT GATCGATGAA ATTATACATU ACTTAAAGAG ACCACCTGCA SO
CCTTTGCTGG AGCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT UTATCGTGAT GGACCGAAAC 13 0
CTTCGACTTC CÀAACCTGGA GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA AGAACTTAGA AAATGCATCA
18BÍ............ ............................ .... ...... ......
GGTATTGAGG CAATTCTTCS TAATÜTÕCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCACCC
240:
TCTCGACATC CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTQGCAAG AATTCCGGGA AAAAQTGACG
300
TTCTATCTGG TTACCCTTGA GQAAGCGCAG GAACAACAGT ACGTAGAQGG CGGTGGAGGC
SO
TCCGCGGGTQ AACCGTCTGG TCCAATCTCT ACTATCAAQÇ CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA
20
TCTCATAAAT CTCCAAACAT GSCTATGGCC CCTGCCCTGC AGCCCACCCA GGGTGCCATG
4BÕ....... ............................................................
CCGGCCTTCG CCTCTGCTTT CCAGCGCCGG GGAGGAGQGG TCCTGGTTGC TAG^CA^CTG
540
CAGAGCTTCC TGGAGGTGTC GTACCGCGTT CTACGCCACC TTGCGQAGCO CA^ACCATTG SOO
309
TG 77' C ΑΑ &Τ CT'CTTAG AGTGA\» AAA*^
AÂGCTGTGTG CGACOTACAA G27GTGCCAC \s· w XíÂtMXSjfXta X* sc «wmwivwíMíw*'
Vvr -wL iiyrss’wi-w U x~ vi xszxoa
TGCTT3AGCC AAC7CCÀTAG CGGCCTTTTC
GGGATATCCC CCGAGTTGGG TCCQACGTT=
507
AGCTGGACGT
GCCACCACCA TCTGGCAGCA GATGGAAGAA
CTSOGATAA' > * (2) INFORMATION FOE SEQ ID KO; 11C;
(i} SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A) LENGTH: 927 base pairs (S< TYPE: nucleic aexd fC; STRANDEDNESS: single
CD) TOPOLOGY: linear (ii! MOLECULE TYPE: other nucleic acid {A; DESCRIPTION: /ãesc * *DNA {synthetic J“ (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 110;
ATSGCTAACT GCTTTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCACCTGCA
CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGAUGTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC
7 .............................. ..............
CTTCGACTTC CAAACCTSGA GASCTTCGTA AGGGCTGTCA AGÀACTTAGA AAATGCATCA
ISO
GGTATTQAGG CAÃTTOTTCG TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTÔCCAC GGCCSCACCC
240
TCTCGACATC CAATCATCAT CAAGGCAGGT GAOTGGCAAG AATTCCGGGA AAAACTGACO
300
310
TTCTATOTGG TTACDCTTGA GCAAGCGCAG
3ÔC ..........
TCCCCGGGTG GTGGTTCTGG CGGUGGCTCC
420
TTCGCCTCTG CTTTCCAGCG OCGGGCAGGA
480........
TTCCTGGAGG TGTCGTACGG CGTTCTACGC
54.0.............. ......
gcqagctccc tgccccagag cttcctgctc
600
GGCGATGGCG CAGCGCTCCA GGAQAAGCTG
660
QAGCTGGTGC TGCTCGGACA CTCTCTGGGC 720
AGCCAGGCCC TGCAGQTGGC AGGCTGCTTG
780
CAGGGGCTCC TGCASGCCCT GGAAGG-3ATA 840
Cii^vaCCxsA CTTTGCiw^ACC $00
ATGGCCCCTG CCCTGCAGCC CTAATAA $27
GAACAACAGT ACGTAGAGGG CGGTGGAGGI AACATGGCTA CCCAGGGTGC CATGCCGGCC QGGGTCCTGG TTGCTAGCCA TGTGCAGAG
CACCTTGCGC AGUCCACAC” ATTGGGGC2T
AAGTUTTTAG AGCAAGTGÀG AAAGATUCAG
TGTGCCACOT ACAAGCTGTG CCACCCCGAG
ATCCCCTGGG CTCCCCTGAG CTCCTGCCCO AGCCAACTCC ATAGCGGCUT TTTUCTCTAC TCCCCCGAGT TGGGTCCCAC CTTGGACACA
ACCATCTGGC AGCAGATGGA AGAA.CTGGGA (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: Ill:
{if SEQUENCE CStóRACTERISTXCS:
ÍA; LENGTH: $72 base pairs ?B) TYPE: nucleic acid (0) STRARDNDNESS; single (Dj TOPOLOGY; linear iii) MOLECULE TYPE: other nucleic acid (A) DESCRIPTION; /desc =: *DNA (synthetic} (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 111;
ATGGCTAACT GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCACCTGCÀ «0
CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC
311 ; , '._ Χ5Λ ftf:
GGí
480
FCCAGGAGA
840
GCCCTGGAAG
900
LzA.v£\1v.v,
972
CTCCAAACAT
CCTGGTTGCT
AQAGCTTCCT
GCCCTGCCAG
TGCTCAAGT
AGCTGTGTG
GCTTGAGCCA
GGATATCCC
ACCÀCCAT
AP
TTTAGAGCAA
TGGGCTCCC
CGAGTTGGG” atggaagaa:
TCCAGGGCGA
CCGAGGAGCT
GCCCCAGOCA
ACACACTGCA
GGTG gctggacgtc
CC5***
INFORMATION FOR SãQ ID NO;
(A?
ÍB)
Si) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
LENGTH-. 927 ba.se pairs TYPE: nucleic acid singre .312
Ui; MOLECULE TYPE, other nucleic arid iAi DESCRIPTION ·. /deSC ~ DNA Í synthetic) ” (XI) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ XU NO; 112:
atggctaact cctctataat gatcgatgaa attatacatc acttaaagag accacctgca sc
CCTTTGCTGC· ACCCGAACAA. CCTCAATGAC GAAGÀCGTCT CTATCCTGAT GGACCGAAAC ilof :K ........ ........ ........ ........ .....·· ........
CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AGGGOTGTCÀ AGAACTTAGA AAATGCATCA ::180/ :::< .....
GGTATTGAGG CAATTCTTCG TAATCTCCAA CCATGTCTGO CCTCTGCCAC GGCCGCAGCG '240: ................
TCTCGACATC CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAG AATTCCGGG.A AAAACTGACG
330
TTCTATCTGG TTACSXTTGA GCAAGCGCAG GAACAACAGT ACGTAGAGGC CGGTQGAGGC
340 .... ............ ............
TCCOCGGGTG GTGGTTCTGQ CGGCGGCTCC AACATGGCTT CTGCTTTCCA GCGCCGGGQA
420 ..........
GGAGGGgrCC TGGTTGCTAG CCATCTGCAG ÀGCTTCCTGG AGOTGTCGTA CCGCGTTCTA
480'
CGCCACCTTG CGCAGCCCAC ACCAT7GGGC CCTGCCAGCT CCCTGCCCCA GAGCTTCCTG
542
CTCAAGT CTT TAGAGC.AAGT GAGAAAGATC CAGQGCGATG GCGCAGCGCT CCAGGAGAAG 8CC
CTGTGTGCCA CCTACAAGCT GTCCCAQCCC GAGGASCTGG T3CTGCTCGG ACAGTCTCTG
850
GGCATCCOCT GGGCTCCCCT GAGCTCCTSC CCCAGCGAGG CCCTGCAjSCT GGCAGGCTGC
720
TTGAGCCAAC TCCATAQCGG CCTTTTCCTC TACCAGGGGC TÇÇTGCAGGC CCTGGAAGGG
780
ATATCCCCCG AGTTGGGTCC CACCTTGGAC ACACTGCAGC TGGRCGTCGC CGACTTTGCC
84C
ACCACCATCT GGCAGCAGAT GGAAGAACTG GGAATGGCCC ctgccctgca GCCCACCCAG
900
313 ,d 1 y^-Ky U- ΑΛ ;O INFORMATION FOR SEQ ID NO: 113:
i; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 972 base pairs
ÍE} TYPE; nucleic acid tO STRANDEDNESS: axngle (D) TOPOLOGY: linear
Ui; MOLECULE TYPE; ether nucleic acid {A? DESCRIPTION: /date * DMA (synthetic) ’ (XX) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 113:
ATGGCTAACT GCTCTATAAT 62
CCTTTGCTGG ACCCGAACAA .126
CTTCGACTTC CAAACCTGGA
IRQ
GGTATTGAGG CAATTCTTCG
240
TCTCGACATC CAATCATCAT
300
TTCTATCTGG TTACCCTTGA
360
TCCCCGGGTG AACCGTCTSG
420
TCTCATAAAT CTCCAAACAT
480
GCTAGCCATC TSCAGAGCTT
540
CCCACACCAT TGGGCCCTGC
00
CAAGTGAQAA AGATCCAGGG
660
AAGCTSTGCC ACCCCGAGGA
720
GATCGATGAÀ ATTATACATC CCTCAÀTGAC GAAGÂCGTCT GASCTTCSTA AGGGCTGTCA TAATCTCCAA CCATGTCTGC CAAGGCAGGT GACTGGCAAG GCAAGCGCAG GAACAÀCAGT TCCAATCTCT ACTATCAACC GGCTTCTGCT TTCCAGCGCC CCTGQAGQTG TCGTACCGCG CAGCTCCCTG COCCAGAGCT CGATGGCGCA GCGCTCCASG GCTGGTGCTG CTCGGACACT
ACTTAAAGAG ACCACCTGCA
CTATCCTGAT GGACCGAAAC
AGAACTTAGA AAATGCATCA
CCTCTGCCAC GGCCGCACCC
AATTCCGGGA AAAACTGACG
ACGTAGAGGG CGGTGGAGGC
CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA
GGGCAQGAGG QGTCCTGGTT
TTCTACGCCA CCTTGCGCAG
TCCTGCTCAA GTCTTTAGAG
AGAAOCTGTG TGCCACCTAC
CTCTQGGCAT CCCCTGGGCT .314
CCCCTGAGCT DCTGCCCCAG CCAGGCCCTG CAGCTGGOAS GCTGCTTSAG CCAACTCCAT
780
AGCGGCCTTT TCOTCTACCA GGGGCTCCTG CAGGCCCTGG AAGGGATATC CCCCGAGTTG
840.............................................. ...... ........
GGTCOCAOCT TGGACACACT GCAGGTGGAC GTCGCCGACT TTGCCACCAC CATOTGGCAG ajjg ...... ......
CAGATGQAAG AACTGGGAAT GGCCCCTGCC CTGCAGCCCA CCCAGGGTGC CATGCCGGCC
960 .............. .. ..
TTCGCCTAAT AA «72 (2? INFORMATION FOR SEQ ID NO: 114:
fi> SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 953 base pairs
CB) TYPE: nucleia acid (C) STRANDEDNESS: single (D> TOPOLOGY: linear •ill) MOLECULE TUBE: other nucleic acid (A) DESCRIPTION: /desc « *DNA {synthetic?
(XX) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 114;
ATGGCTAACT GCTCTAACAT GATCGATGAA ATCATCACCC ACCTGAAGOA GCCAUCGCTG SO
CCGCTGCTGG ACTTCAACAA CCTCAATGGT GAAGACCAAG ATATCCTAAT GGA-DAATAAC
120
CTTCGTCGTC CAAACCTCGA GGCATTCÂAC CGTGCTGTCA AGTCTCTGCA GAATGCATCA
180
GOAATTGAGA GCATTCTTAA AAATCTÜDTG CCATGTCTGC CGCTÀGCCAC GGCCGQACCr
240
ACGCGACATC CAATCCATAT CAAGGAGGGT GACTGGAATG AATTCCGTQG TAAACTGACO
C
TTCTATCTGA AAACCTTGGA GAACGCGQAG GCTCAACAGT ACGTAGAGQG CGGTGGAGGC
350
TCCCCGGGTG AACCGTOTGG TCCAATCTCT ACTATGAACC CGTCTCÕTC” GTCTAAAGAA
420
315
TCTCATAÀAY CTECAAACAT GGCTACCCAG GGTGCCATGC CGGQCTTOGC CTCTGCTTTC
4FC
CAGCGCCGGG caggaggggt cctggttgct agccatctgc AGAGCTTCd' ggaggtgtcg
540............... ........ ..............
TACCGCGTTC TACGCCACCT TGCGCAGCCC TCTvsG^uttóU.i t λ1 u , , ri
6QC.............. ...... ...........................
CTGCTCàAGT CTTTAGAGCA AGTGAGAAAG ATCCAGGGCG ATGGOGCAGC GCTCCAGGAG 6δ 0
AAGCTGTGTG CCA.CCT/m.V. GCTGTGCCAC cccgaggagc tggtgctgct cggacactct :?w··
CTGGGCATCC CCTGGGCTCC CCTGAGCTCC TGCCCCAGCC AGGCCCTGCA GCTGGCAGGC 7g0
TGCTTGAGCC AACTCCATAG CGGCCTTTTC CTCTACCAGG GGCTCCTGCA GGCCCTGGAA. S4C
GGGATATCCC CCGAGTTGSG TCCCACCTTG GACACÂCTGC AGCTGGACGT CGCCGACTTT
906
GCCACCACCA TCTGGCAGCA GATGGAAGAA CTGGGAATGG CCCCTGCCCT GCAGCCCTAA
9SC;
TAA
96.3 {Qi INFORMATION FOR SEQ IO NO; 115:
Í.1) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 972 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRANDEDNESS: single
ÍDI TOPOLOGY: linear ill} MOLECULE TYPE: other nucleic acid (A) DESCRIPTION: /desc ® ‘DMA (synthetic)’' (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 115:
ATGGCTAACT GCTCTAACÀT GATCGATGAA ATCATCACCC ACCTGAAGCA GCCACCGCTG
ÍQs|3| ........... ..... s....... .....
CCGCTGCTGG acttcaaoaa cctcaatggt gaagaccaag atatcctgat ggaaaataac 120
CTTCGTCGTC CAAACCTCGA GGCATTCAAC CGTGCTGTCA AGTCTCTGCA GAATGCATCA
180
GCAATTGÂGA GCATTCTTÀA AAATCTCCTG CCATGTCTGC CCCTGGCCAC GGCCGCACCC
24u
ACQCGACATC CAATCATCAT CCGTGACGGT GACTGGAATG AATTCCGTCG TAAACTGACC
300
TTCTATCTGA AAACCTTGGA GAACGCGCAG GCTCAAGAGT ACGTAGAGGG CGGTGGAGGC
60
TCCCCGSGTG aaccgtctgg tcoâatctct ACTATCÀACC CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA.
TCTCATAAAT CTCCAAACAT GGCTACCCAG GGTGCCATGC CSGCCTTCGC CTCTGCTTTC
480
CAGCGCCGGG CAGGAGGGGT CCTGGTTGCT AGCCATCTGC AGAGOTTCCD GGAQGTGTCG
540
TACCGCGTTC TACGCCACCT TGCGCAGCCC ACACCATTGG GCCCTGCCAG CTCCCTGCCC sco.............. ..............................................................
CÀGAGOTTC2 TGCTCAAGTC TTTAGAGCAA GTGAGÀAAGA TCUAGGGCGA TGGCGCÀGCG SSO
CTCGAGGAGA AGCTGTGTGC CACCTACAAG CTGTGCUACC CCGAGGAGGT GGTGUTGCTC
GGACACTCTC TGGGCÀTCOC CTGGGGTCCC CTGAGCTCOT GCCCCAGCCA GGCCCTGCÀG
780............. .... ................................................
GTGGCAGGer GCTTGAGCCA ACTCCATAGC GGCCTTTTCC TCTACCAGGG GCTCCTGCÀO
B4ÍÍ
GCCGTGGAAG GGATATCCGC GGAGTTOGGT CCOACCTTGG ACACACTGCA GCTGGAGGTO
900
GCCGACTTTG CCACCACCAT CTGGCAGCkG ATGGAÀGAAC TGGGAATGGC CCCTGCCCTG
9$0
CAGCCCTAAT AA
972 (2} INFORMATION FOR SEQ ID ND: 116:
(í) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A) LENGTH; 963 base pairs
ÍB) TYPE: nucleic acid (C) STRANDEXJNESE Σ single (D) TOPOLOGY; linear iiii MOLECULE TYPE; cth®” nucleic acid (A) DESCRIPTION: /deSC * ’DNA {synthetic)*
317 (κί· SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; .it;
ATGGCTAAOT GCTCTAACAT GATÜGATGAA
CCGCTGGTGG ACTTCAACAA CCTCAATGGT
CTTCGTCGTC CAAACCTCGA GGCATTCAAC
0
GQAATTGAGA GCATTCTTAA AAATCTCCTG
240 acgcgacato caatcatcat CCGTGACGGT
300
TTCTATCTGA AÂACCTTGGA GAACGCGOAG
60............
TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCCAATCTCT
4W.............
TCTCATAAAT CTCCAAAOAT GGCTACCCAG
480
Z*:* W*:**»**-»:
viU * J\j w £
S40
TACCGGGTTO TACGCCACCT TGCGCAGCCC
600
CTGCTCAAGT CTTTAGAGCA AGTGAGAAAG
660
AAGCTGTGTG CCACCTACAA GCTGTGCCAC
720
OTGGGCATDC CCTGGGCTCO CCTGAG'OTCC
780
TGCTTGAGCC AACTCCATAG CGGCCTTTTC
840
GGGATATCOC CCGAGTTGGG TCCCACCTTG
900
GCOACCACCA TCTGGCAGCA GATGGAAGAA
960
ATOATCACCC ACOTGAAGCA SCCACCGCTG GAAGACCAAG ATATGCTGAT GGAAAATAAO CGTGCTGTCA AGTCTCTGCA QAATGOATCA CCATQTCTGC CCCTGGCCAC GGCCGCACGC GAGTGGAATG AATTCCGTCG TAAACTGACO GCTCAACAGT ACGTAGAGGG CGGTGGAGGC ÀCTATCAACC CGTCTCCTDO GTCTAAAGAA GGTGCCATGC CGGCCTTCGC CTCTGOTTTC AGCCATOTGO AGAGCTTCCT GGAGGTGTCG TCTGGCGGCT CTGGCGGCTC TCAGAGCTTC ATCGAGGGGG ATGGCGCAGC GCTCOAGGAG CCCGAGGACC TGGTGCTGCT CGGACACTCT TGCCCCAGCC AGGCCCTGCA GCTGGCAGGC CTOTACUAGG GGCTCCTGCA GGCCCTGGAA GAQACACTGC AGCTGGACGT CGCCGACTTT CTGGGAATGG CCCCTGCCCT GCAGCCCTAA
Figure BRPI9610977A2_D0147
ύ) SEQUENCE CHARACTERISTICS.· (A; LENGTH; 972 base pairs (E; TYPE: nucleic acid (Ci STRANDEDNESS: single (D? TOPOLOGY·· linear iii) MOLECULE TYPE; other nucleic acid {A) DESCRIPTION.; /best » “DNA isynthetic? * (XX? SEQUENCE DESCRIPTION; SEC CD ND; 117-.
ATGGCTAACT SCTCTAACAT GATCGATGAA
SC
CCGCTGCTGG ACTTCAACAA CCTCAATGGT
CTTCGTCGTC CAAACCTCGA GGCATTCAAC 180
GCAATTGAGA GCATTCTTAA AAÀTCTCCTG 240.
ACGCGACATC CAATCCATAT CAAGGACGGT
302
TTCTATCTGA ÀAACCTTGGA GAACGC3CAG
360 ....................
TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCCAATCTCT
420 tctcataaat ctccaaacat ggctacccag
480
CAGCGCCGGG CAGGAGGGGT CCTGGTTGCT
S40
TACCGCGTTC TACGCCACCT TGOGCAGCCC 6C0
CAGAGÇTTCC TGCTCAAGTC TTTAGAGCAA SOO
CTCCAGGAGA AGOTGTGTGC CAÇCTACAAG
ATCATCACCC ACCTGAAGCA GCCACCGCTG
GAAGACCAAG ATATCCTAAT GGACAATAAC
CGTGCTGTCA AGTCTCTGCA G.AATGC.ATCA
CCATGTCTGC CGCTAGCQAC GGCCGCACCC
GACTGGAATG AATTCGGTCG TAAACTGACC
SCTCAACAGT ACGTAGÀGGG CGGTGGAGGC
ACTATCAACC CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA
GGTGCCATGC CGGCCTTCGC CTCTGCTTTC
AGCCATCTGC AGAGCTTCCT GGAGGTGTCG
ACACCATTGG GCCCTGCCAG CTCCCTGCCC
GTGAGAAAGÁ TCCAGGGCGA TGGCGCAGCG
CTGTGCCACC CCGAGGAGCT GGTGCTGCTC
319
TCTACCAGGG
GCCCTGGAAG
908
GGATATi
ATGGAAGAAC i'2j INFORMATION FOR SEQ TO NO; US;
Figure BRPI9610977A2_D0148
¢1
SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A;
(E;
<C;
(Di
LENGTH: 818 base pairs TYPE: nucleic acid STRANDEDNESS; s ing1© TOPOLOGY; linear
MOLECULE TYPE: other nucleic acid (A· DESCRIPTION: /desc « fsynthetic)
SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 118:
GCTAACTGOT
CTATAATGAT
CGATGAAATT
ATACATCACT
TAAAQAGAC·
CGAACAACCT
CAATGACGAA
TCCTGATGGA
CCGAAACCTT
Figure BRPI9610977A2_D0149
CGACTTCCAA
180
ACCTGGAGAG
GCTGTCAAGA
ÀCTTAGAAAA
TGCATCAGGT
ATTGAGGCAÀ
240
TCTCCAACCA
TGTCTGCCCT
CTGCCACGGC
CGCACCCTCT
CGACATCCAA
300
TCATCATCAA
SGCAGGTGAC
TGGCAAGAAT
TCCGGGAAAA
ACTGACGCTC
TATOTGGTTA
CCCTTGAGCA
ACCGCAGGAA
CAACAGTACG
TAGAOGGCGG
TGGÀGGCTCC
CCGGGTGAAC
420
CGTCTGGTCC
AATCTCTACT
ATCAACCCGT
TAAAGAATCT
320
CATAAATCTC CPUACATGGA GGTTQACCCT TTGCCTACAC CTGTCCTGCT GCCTGCTGTG
480
SACmJC-'.' jOCSAGAATG gaaaacccag atggaggaga cgaagggaca ggacattcig
540.....
GGAGCAGTGi dTTTCTGOT GGAGGGAGTG ATGGCAuCAC GGu^sACAAH :6:80::
TGCCTCTCA* C—CTCCTGGG GCAGCTTTCT GGACAGGTCC GTCTCCTCCT TGGGGCCGTG
660 ................
cagagdcto; ttsgaaccca gcttcctcca cacggcagga ccacagctca caaggatccc
AATGGCATC7 T^TTGAGCTT CCAACATCTG CTCCGAGGAA ÀGGTGCGTTT CCTGATGCTT 780........................................................
gtaggagggt cczaccctctg cgtcagggaa ttcggcggca acatggcgtc TCCCGCICOG
840
CXTGCTTGTC ACXTCCGACT CCTQAGTAAA CTGCTTCGTG ACTCCCATGT CCTTCAOAGC soo
AGACIGAGC? A3TGCCCÂ
S18 (2) INFGROSX&iS FDR SEQ XD ND: 119:
ii ? SEyEJDJCE CHARACTERISTICS:
iRQ LENGTH: 918 base pairs tSQ TYRE: nucleic acid
ÍX2 STRANDEDHESS; single ;D3 TOPOLOGY·, linear •ii) SOUSEULE TYPE: other nucleic acid {A.) DESCRIPTION: /desc * «DNA (synthetic)·
Figure BRPI9610977A2_D0150
(xi) SlSXJmCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 119:
GCTAACTGCr CTATAATGAT CGATGAAATT ATAQATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT 66
TIGCTGGAOe CKSAACAAGCT caatgacgaa GACGTCTCTA tcctgatgga CCGAAACCTT
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT 180
A.TTGAGGCRA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA TSTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT
0
321
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTSAC TGGCAAGAAT TCCGGG.AAAA ACTQACGTTC
3C0
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAQGàA CAACAGTACG TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC llil................
CCGGGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTXCT ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
0:
CATAAATCTG CAAACATGTT GCCTACAGCT GTCCTGCTGC CTGCTGTGGA CTTTAGCTTG
480
GGAGAATGGA AAACCCAGAT GGAGGAG&OC àAGGCATAGG ACATTCTGGG AGCAGTGACC
540
CTTCTGCTGG AGGGAGTGAT GGCAGCAC4G GGACAACTGG GACCCACTIG CCTCTCATCC
600
CTCCTGGGGC AGCTTTGTGG ACAGGTCD1T' CTCCTCOTTG GGGCCCTGGA GAGCCTCCTT 66C ..... ...... ........
GGÀACCOftGC TTCCTCCACA GGGCAGGAOC ACAGCTOACA AGGATCUQAA TGCOATCTTC
723
CTGAGCTTCC AACACCTGCT CCGAGGÃAAG· GTGCGTTTCC TGATGCTTGT AGGAGGGTCC ?δ·3
ACCOTCTGCG TCAGGGAATT CGGCGGCAAT ATGGCGTCTC CCGUTUCGGC TGCTTGTGAC
840
CTUCGAGTCC TCAGTAAACT GCTTCOTGAC FCCCATGTCC TTCACAGCAG ACTGAGCCAG
900
TGCCCAGAGG TTCACCOT
918 í2) INFORMATION FDR SEQ ID NC ; L20;
íi) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
{A} LENGTH: 918 Jtaxrs (8) TYPE: nucleic acid
ÍC) STRANDEDNESS; sas&lê {D; TOPOLOGY; lines™ (11} MOLECULE TYPE: ether fiutclelc acid (A) DESCRIPTION: ZcesC ® «DNA (synthetic}· (Xi J SEQUENCE DE^IPTIOJ?: EEQ ID NO: 120:
322
GOTAACCGOY ΙΤΑΤΑΑΤίΑΤ
TTGTYQGACG CGAAOAAOCT
120
CGACTTCCAA ACCTGGA&AO
ISO
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA
240
CGAOATCCAA TCATCATC^A
00
TATSTGG7TA OOCTTSAGCA
360
CCGGGTGAAC CGTCTGCTCC
420
CATAAATCTC CAAACAIGOT
480
ACCCAGATGG ASGAGACGAA
540
GGAGTGsATGG CAGCAGG3C3G
60S
CTTTCTGGAC AGCTCCGTC1
60
CCTCCACAGG GCAGGA'XAC
720
CACCTGCTCC GAGGAAAG<3T
80
AGGGAATTCG QCGQCAACAT
840
AGTAAACTGC TTCGTSAC TO
900 ogatgaaatt atacatcact CAATQACGAA GACGTCTCTA 2TTCGTAAGG GCTGTEAAGA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT GGCAGGTGAC tggcaagaat AGCGCAGQAA CAACAGTACG AATCTCTACT ATCAACCCGT CCTGCTGCCT GOTGTGGACT GGCACAGGAC ATTCTGGGAQ ACAACTG'GGA CCCACTTGCC CCTCCTTGGG GCCCTGCAGA AGCTCACAAG QATCCCAATG GeGTTTCeTG ATGOTTGTAG GGCGTCTCCC GCTCCGCCTG CCATGTCUTT CACAGCAGAC
TAAAGAGACG ACdOCACCO
TCCTGATGGA CCGAAACCTT
AÇTTAGAAAA TGCATCAGd
CTGCCACGGC CGCACCCTCT TCCGGGAAAA ACTGACGTTG TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC CTOCTCCGTC TAAAGAATCT
TTAGCTTGGG ÀGAATGG.ÀAA
CAGTGACCUT TCTGCTGGAG
TCTCATCCCT CCTCGGGCAG
GCCTCCTTGG AACCCAGCTT
CCATCTTCCT GAGCTTCQAA
GAGGGTCCAC CCTCTGCGTC
CTTGTGACCT CCQAGTGCTC
TGAGCCAGTG CCCAGAGGTT
CACCCTTTGC CTACACXT
SI 8
Í2) INFORMATION FOE, SEQ ID NO: 122;
i > SEQUENCE CMRACTERISTXCS :
(A) LES33TH; 918 base pairs {&} TYPE; nucleic acid
ÍC) S7RA2rOEDNES£: single i D: TOPOLOGY; - mear fll) MOLECULE TYPE·. ether'ntóeic acid (A.· DESCRIPTION- /dasc » *D«A isynthat xc· ' (Xi; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 121:
GCTAACTGCT CTATAATGAT CSATSAAATT ATACATCACT TAAAGAGAC ACCTGCACCT
TTGOTGGACO CGAACAACCT CAATGACGAA GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTI
CGACTTCCAA ÀTCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT 2.80
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCGTCT
240
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC TGGGAAGAAT TCCGGGAÀAA ACTGACGTTC
300
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA CAÀCAGTACG TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC
360
CCGGGTGAAC COTCTGGTCC AATCTCTACT ATCAACCCST CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
420
CATAÀATCTC CAAACATGGC TGTGGACTTT AGCTTGGGAG AATGGAAAAC CCAGATGGAÇ
48-C ........ ............
GAGACCAAGG CACAGGACAT TCTGGGÂGCA GTGACCCTTC TGCTGGAGGG AGTGATGGCA S4C ......
GCACGGGGAC AACTGGGACC CACTTGCCTC TCATCCCTCC TGGGGCAGCT TTCTGGACAG
600
GTCCGTCTCC TCCTTGGGGC CCTGCAGAGC CTCCTTGGAA CCCAGCTTCC TCCACAGGQC
660
AGGACCACAG CTCACAAGGA TCCCAATGCC ATCTTCCTGA GCTCOVO CCTGCTCCGA
720
GGAAAGGTGC GTTTCCTQAT GCTTGTAGGA GGGTCCACCC TCTGCGTCAG GGAATTCGGC 780
GGCAACATGG CGTCTCCCGC TCCGGGTGCT TGTGACCTCC GAGTCCTCAG TAAACTQCTT
840
CGTGACTCCC ATGTCCTTCA CÀGCAGACTG AGCCAGTGCC CAGAGGTTCA CCCTTTGCOT'
900 ..................
324 ;i; INFORMATION FDR SEQ ID NO: 122:
(í? SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: SIS base pairs (B? TYPE: nucleic, acid fC; ETRANDEDNESS: single
ÍD) TOPOLOGY: linear (ii'; MOLECULE TYPE: ocher nucleic acid (A) DESCRIPTION·. /õesc = ΈΝΑ {synthetic)
5Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: REQ ID NO: 112;
CGATGAAATT ATACATCACT
UCTAACTGCT CTATAATOAT SC
TTGCTGGACC CGAACAACCT 12 C
CGAUTTCCAA ACCTGGAGAG ISO
ATTGAGGCAA TTÇTTÇGTAA 240
CGACATCCAA TCATCATCAA
300
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA
SO
CCGGSTGAAC CGTCTGGTCC
420
CATAAATCTC CAAACATGGA
480
ÂAGCCÀCAGG ACATTCTGGG 540
GGACAACTGG GACCCACTTC áoc
CAATGACGAA GACGTCTCTA CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT GGCASGTGAC TGGCAAGAAT AGCGCAGGAA CAA.CAGTACG AATCTCTACT ATCAACCCGT CTTTAGCTTG GUAGAATGGA ASCAGTGACC CTTCTGCTGG CCTCTCATCC CTCCTGGGGC
TAAAGAGACC ACCTGCACCT TCCTGATGGA CCGAAACCTT ACTTAGAAAA TGCATCAGGT CTGCCACGGC CGCACCCTCT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC TAGAGGGCGG TGQAGGCTCC CTCCTCCGTC TAAAGAATCT AAACCCÀGAT GGAGGAGACC AGGGAGTGAT GGCAGCACGG AGCTTTCTGG ACAGGTCCGT
CTCCTCCTTG GGGCCCTGCA GAGCCTCCTT GGAÀCCCAGC TTCCTCCACA GGGCAGGA^C
660
325
ACAGCTOAOA AGGACCCCA?·. TGCCATuTTC CTGAGCTTCC ÀACACCTGCT CCGAGGAAAG
720
GTGCGTTTCO TOATGCTTGT AGGAGGGTCC ACCC7CR5CG TCAGGGAACT CCGCG3CAAC 780
ATGGCGTCTC CCGCTCCGCC TGCTTGTGAC CTCCGAGTCC TCAGTAAACT GCTTCOTGAC
MO.......... ................ ..........
TCCCATGTCC TTCACAGCAG ACTGAGCCAG TGCCCAGAGG TTCACCCTTT GCCTACACCT §0i
CTCTTGCTGC CTGCTGTQ ili INFORMATION FOR SEQ ID NO: 123:
(1} SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 807 base pairs ip; TYPE: nucleic acid £C} STRANDEDNESS; single (D) TOPOLOGY: linear iti} MOLECULE TYPE: other nucleic acid (A) DESCRIPTION:. /dear * “DMA (synthetic) · (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 123:
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TAAAGAGACQ ACCTGCACCT so
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT
120
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT
ISO ........ ........
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA. TCTCCAACCA TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CUCACCCTCT .240
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACQTTC
300
TATCGGTTAC UCTTGAGCAA GCGCAGGAAC AACAGTACGT AGAffiSGCGGT GGAGGCTCCC
3:50
CGGGGAACCG TCTGGTCCAA TCTCTACTAT CAACCCGTCT CCTCCGTCTA AAGAATCTCA 42®
TAAACTCCAA ACATGGQAGA ATGGAAAACC CAGATGGAGG AGACCAAGGC ÀCAGGACATT
480
326
CIGGAGCAGT gacccttctg ctggagggag tgatggcagc acggggacaa ctsggaccca >40 ···· .......... ........
CTTGCTCTCA TCCCTCCTGG GGCAQCTTTC TGGACAGGTO CGTCTCCTCC TTGGGGCCCT $oc
GCAGGCCTCC TTGGAACCCA GCTTCCTCCA CAGGGCAGGA CGACAGCTCA CAAGGATCCC
660 aatgcatctt CCTGAGCTTC CAACACCTGC tccgaggaaa gotgcgtttc ctgatgcttg
TAGGGGGTCC ACCCTCTGCG TCAGGGAATT CGGCGGCAAC ATGGCGTCTI CCGCTCCGCC
78C
TGCTGTGAOT TCCGAGTCCT CAGTAAACTG CTTCGTGACT CCCATGTCCT TCACAGCAGA
840
CTGACCAGTG CCCAGAGGTT CACCCTTTGC CTACACCTGT CCTGCTGCCT GCTGTGGACT
93C............... ........ ...... ..........
’’tW'* Fr*****T*íTí:
X 4. * Ά Am?
907 {2· INFORMATION FOE SEQ ID NO: 124:
Í1) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A) LENGTH: §18 base pairs (Bl TEPE: nucleic acid (CJ STRANDEDNESS: single {D) TOPOLOGYr linear (ii) MOLECULE TYPE; other nucleic acid (As DESCRIPTION: .Meat ® DNA (synthetic)* (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ IE NO: 124;
G2TAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAAdT ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT 120
CGACTTGCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTCTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT 186
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT
240........
327
CGACÀTCCAA TOATCATCAA GGCAGGTGAC TGGCAAGAAT TCOGGGAAAA ACTGACGTTC
7'^: ........ ^-7 : 7:.........
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA CAACAGTACG TAGAGCGCGS TGGAGGCTC2
360.................. ........
CCGGGTSAAC CGTCTGGTCC ÂATCTCTACT ATCAACCCGT CTCCTGCGTC TAAAGAATGX
420
CATAAATOTC CAAACATGGG ACCCACTTGC CTCTCATCCC TCCTGGGGCA GCTTTCTGGA
460
CAGGTCCGTC TCCTCCTTGG GGCCCTGCAG AGCCTCCTTG GAACCCAGCT TCCTCCACAG
640
GGCAGGACCA CAGCTCACAA GGATCCCAAT GCCATCTTCC TGAGCTTCCA ACACCTGCTC
6C0
CGAGGAAAGG TGCGTTTCCT GATGCTTGTA GGAGGGTCCA CCCTCTGCGT CAGGGAATTC
660
GGCGGCAACA TQGCGTCTCC CGCTCCGCCT GOTGTGACC TCCGAGTCCT CAGTAAACTG
720
CTTCGTGACT CCCATGTCCT TCACAGCAGA CTGAGCCAGT GCCCAGAGGT TCACGCTTTG
SC
CCTACACGTC TCCTGCTGCC TGCTGTGGAC TTTAGCTTGG QAGAATGGAA AACQQAGATG
840
GAGGAGACCA AGGOACAGGA CATTCTGGGA GCAGT8ACCC TTCTGCTGGA GGGAGTGATG
900
GCAGCACGGG GAGAACTG
9X8 (2! XNFORMATION FDR SEQ ID NO: 125;
U) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 848 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (ill MOLECULE TYPE: ether nucleic acid {A} DESCRIPTION: /desc * ’DNA (synthetic) (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 125:
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATQAAATT ATACATCACT TAAAQAGACC ACCTGCACC^
328
TTGOTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA GACGTCTCTA TCCTGATGGÀ CCGAAACCTT .:.«£·.w
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT ISO
ATTGAGGCAA TTCTTCGTÀA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT 240
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC ..... ............................................ ..... ............. .....
tatctggtta cccttgagca AGCGCAGGAA caacagtacg TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC 360 (XGGGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTACT ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TÀAAGAATCT λ r? Γ*
Τί·4> Si»·
CATAAATCTC CAAACATGGG AACCCAGCTT CCTCCACAGG GCAGGACCAC AGTTIAIAAG
80
GATCCCAATG CCATCTTCCT GAGCTTCCAA CACUTGCTCC GAGGAAAGGT GCGTTTCCTG 545
ATGCTTGTAG gagggtccac cctgtgcgtc agggaattcg ggggcaacat ggggtctccu S0&
GCTCCQCCTG CTTGTGACGT ccgagtcctc agtaaactgc ttcgtgactc ccatgtcctt
660
CACAGCAGAC TGAGCUAGTG COGAGAGGTT CACCCTTTGe GTACACeiGT GCTGCTGCGT
7:20
GCTGTGGACT TTAGCT7GGG AGAATGGAAA ACCCAGATGG AGGAGACCAA GGCACAGGAC
SO
ATTCTGGGAG CAGTGACCCT TCTGCTGGAG GGAGTGATGG CAGCACGGGG ACAACTGGGA
840
CCCACTTG
848.................
(2> INFORMATION FOR. SEQ ID NO: 126;
ÍÍ} SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: SIS bats® pairs (B) TYPE: nucleic acid
ÍC) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear fii) MOLECULE TEPE: ocher nucleic acid (A) DESCRIPTION: /desc ® *ISiA (synthetic) *
329 íxj ? SEQUENCE DESCRIPTION ·. SEQ EE KO; 12€;
GCTAAOTGÓ7 GTATAATGAT CGATGAAAT? ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT
TTCCTGGACC CGAACAACCT oaatgaggaa gacgtctcta tcctgatgga CCGAAACCTY
OGACTTCCXA ACOTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT 180
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT
2|0| Is 7 ·:» S 77
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC
300 .... .... .... .. .. .. ......
TATCTSGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA CAACAGTACG TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC
60
CCGGGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTACT ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
CATAAATCTC CAAACATGGG QAGGACCACA GCTCACAAGG ATCCCAATGC CATCTTCCTG
UC..... ...... ............ ..........
AGCTTCCAAC ACCTQCTCCC AGGAAÃGGTG UGTPTCCTQA TGCTTGTAGG AGGGTCCACC
540
CTCTGCGTCA GGGAATTCGG CGGOAACATG GCGTCTQCCG CTCCGCCTGC TTGTGACCTC
600
CGAGTCCTCA GTAAACTGCT TCGTGA.CTCC CATGTC-CTTC ACAGCAGACT GAGCCAGTGC
680
CCAGAGGTTC ACCCTTTGCC TACACCTGTC CTGCTGCCTG CTC3TGGACTT TAGCTTGGQA
720
QAATQGAAAA CCQAGATGGA GGAGACCAAS GCACAGGACA TTCTGGGAGC AGTGACCCTT
780
CTGCTGGAGG GAGTGATGGC AGCACGGGGA CAA.CTGGGAC CCACTTGGCT CTCATC^CTC
840
CTGGGGCAGC TTTCTGGACA GGTCCGTCTC CTCCTTGGGG CCCTGCAGAG CCTCCTTGGA
900
ACCCAGCTTC CTCCACAG
918 {2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 127:
330 ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
ΐΛ; LENGTH·. 918 base pairs its? TYPO; nucleic acic
MD STRAMDEDNESS : single
ÍD) TOPOLOGY·· linear ill) MOLECULE TYPE; ocher nucleic acid (A) DESCRIPTION; /dear « ”DNA (synthetic? ’ ;xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 127·.
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACC TAAAGAGACC
SC............. .......................................
ACCTGCACCT
TTGd GGAO C
CGAACAACCT CAATGÀCGAA
GACGTCTCTA TCCTGATGGA
CCGAAAQOTT
CGACTTCCAA ACCTGGASAC CTTCGTAASG IL
GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA
TCTCCAACCA TGTCTGCCOT CTGCCACGGC
CGCACCOTOT
CGACATCCAA TuATCATCAA GGCAGGTGAC .0'3:0·
TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC
TATOTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGOAA CAACAGTACG TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC
360
CCGGGTGAAO CGTCTGGTCC
420
CATAAATCTC CAAACATGGC
480
OTGCTCCGAG GAAAGGTGCG
GAATTCGGCG SCAACATGGC
SOD
AAACTGCTTC GTGACTCCCA
660
CCTTTGCCTA CACCTGTOCT
720
AATCTCTACT ATCAACCCGT TCACAAGGAT CCCAATGCCA TTTOCTGATG OTTGTAGGAG GTCTCCCGCT CCGCCTGQTT TGTOCTTCAC AGCAGACTGA
GCTGCCTGCT GTGGACTTTA
CTGCTCCGTC TAAAGAATGT
TCTTCCTGAG CTTOCAACAC
GGTQCACCCT CTOCGTCAGG
GTGAÇCTCCG AGTCCTCAGT
GCQAGTGCCC AGAGGTTCAC
GCTTGGGAGA ATGGAAAACG
CAGATGGAGG AGACCAAGGC ACAGGÀCATT CTGGGAGCAG TGACCCTTCT GCTGGAGGGA
7W ...... ................ .................... .................
331
GTGATGGIAG CACQGGGACA ACTG3GACCC AUTTGCCTCT CATCCCT'CCT GGGGCAGCTT &4 k·
TCTGGACAGG TCCGTCTCTT CCTTGGGGCC CTSCAGAGCC TCCTJiiGft^ /lASOTICTT
908....... ........................
CCAQAGGGCA GGACCACA
918 ?2: INFORMATION FOR SEQ ID NO: 128:
(if SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: $18 base pairs (B; TYPE: nucleic acid (Cl STRAJOEDNESS: single (Di TOPOLOGY: linear fiii MOLECULE TYPE; ether nucleic acid (A) DESCRIPTION; /desc « ’DNA (synthetic) *
Uli SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 123;
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT 6C
TTGCTGCACC CGAACAACCT CAATGACQAA GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT 120
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTCTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT
ISC
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA TGTQTGCCCT CTGCCACGSC CGCACCCTCT 240
CGACATCCÀA TCATCATCAA GGCAGGTGAC TGSCAAGAAT TQCGGGAAAA. ACTGA COTTI
380
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA CAACAGTACG TAGAGGGCGG TGGÂGGCTCC
380......... ...... ...........................................
CCGGGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTACT ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
430
CATAAATCTC CAAACATGQA TCCCAATGCC ATCTTCCTGA GCTTCCAACA QCTGCTCCGA
480
GGAAAGGTGC GTTTCCTGAT GCTTGTAGGA GGGTCCACCC TCTGCGTCAG GGAATTCGGC
540............................. ...... ..........
GGCAACATGG CGTCTCCCGC TCCGCCTGCT TGTGACCTOC GAGTCCTCAG TAAACTGCCT
800 .....................
CGTGACTCCO ATGTOCTTCA OAGCAGACT-O AGCCAGTGCC CAGAGGTTCA CCCTTTGCCT is Q
ACAGCTGTCO TGCTGCCTGC TGTGGACTTT AGCTTGGGAG AATGGAAAAC OCAGATGGAG
720
GAGACCAAGG CACAGGACAT TCTGGGAGCA GTGACCCTTC TGCTGGAGGG AGTGATGGCA
780
GCACGGGGAC AACTGGGACC CACTTGCCTC TCATCCCTCC TGGGGCAGCT TTCTGGACAG
840:
4-x. 1 vu 1 wL - i uxxvS'^y. i Síix-^sisJwav. V a icrciftA
90S
AGGA.GCAGAG CTCAGAAG o^i5· ..........
(2) XNFCaRMATXON FOR SEQ XD NO: 129:
id.? SEQUENCE CHARACTERISTICS.(A> LENGTH: 818 base pairs (8) TYRE: nucleic acid
ÍC;- STEANTEDNESS: sxngle (D? TOPOLOGY: 1inear <: ÜJ MOLECULE TYPE: ether nucleic acid (ΑΪ DESCRIPTION; /desc » ’DMA (synthetic) * (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO·. 129:
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TÀAAGAGACC ACCTGCACCT
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAATGACGÀA GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT 12C·
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT
180
ATTGAGGCAA TTCTTCSTAA TCTCQAACCA TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT
240
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC
300
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGQAA CAACAGTACG TAGAGGGÇGG TGGAGSCTÇC
359 ...... .... .................... .......
333
CCSGGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTACT ATCAACCCGT CTOGTCCGTC TAAAGAATd
CATAAATCTC CAAACATGGC CATGTTCCTG AGCTTCCAAC ACCTGCT<’CG AGGAd-GGTG
480............................................. ........
CGTTTCCTGA TGCTTGTAGG AGGGTCCACC CTCTGCGTCA GGGAATTCGG CGGCAACATG
0.......................... ...................... ..............
GCGTCTCCCG CTCCGCCTGC TTGTGACCTC CGAGTCCTCA GTAAACTGCT TCGTGACTCO SCO
CATGTCCTTO ACAGCAGACT GAGCCAGTGC CCAGAGGTTC ACCCTTTGCC TACACUTGTD
S50.............. .......................... ................
CTGCT^CCTG CTGTGGACTT TAGCTTGGGA GAATGGAAAA CCCAGATGGA GGAGACCAAG
72.0 ........ ...... ......
GCACAGGACA TTCTGGQAGC AGTGACCCTT CTGCTGGAGG QAGTG.ATGGC AGCACGGGGA
SO
CAACTGGGAC CCACTTGCCT CTGATCCCTC CTSGGGCAGC TTTCTGGACA GGTCCGTCTC
840
CTCCTTGGGG CCCTGCAGAG CCTCCTTGGA ACCCAGCTTC CTCCACAGGG CAGGACCACA
90'0
GCTCACAAGG ATCCCAAT
918
2; INFORMATION FOR SEQ ID NO; 130;
ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 515 base pairs (B) TEPE: nucleic acid {0) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE; other nucleic acid (A) DESCRIPTION: /de»c ® ’Dna (synthetic)’ {Ki) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 1301
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT T.AAAGAGACC ACCTGCACC^ 50
TTGCTGGACC CGÃACAACCT CAATGACGAA GACGTCTCTA TCUTGATGGA COGAAACCT^
120.............. ................ ..........
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGG*f ISO
334
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAO TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC
300
TATGTGSTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA CAACAGTAOG TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC Γ Κ|Ιζ ................... ..........id! .....
CCGGGTGÀAC CGTCTGGTCC AATCTCTACT ATCAACCCQT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
OU .......... ........
CATAAATCTC CAAACATGGA GGTTCACGCT TTGCCTACAC CTGTCCTGCT GCCTGCTGTG
480........... ...... ........
GACTTTAGCT TGQGAGAATG GAAAACCCAG ATGGAGGAGA CCAAGGCACA GGACATTCTG
540
GGAGUAGTGA CCCTTCTGCT GGAGGGAGTG ATGGCAGCAC GGGGACAACT GGGACCCAOT
600
TGCCTCTCAT eCCTCGTGGG GCAGCTTTCT GGACAGGTQC GTCTGCTCCT TGGGGCCCTS
6S0
GAGAGCCTCO TJGQÀACUCA GCT7CCTCGA CAGGGCAGGA. CCACAGGTCA CXAGGATCCC
AATGUCATCT TCCTGAGCTT CCAACACCTG CTCCGAGGAA AGGTGCGTTT CCTGATGCTT
780 .................. **'
CTAGGAGGGT CCACCCTCTG CGTCAGGGAA TTCGGCAAQA TGGCGTCTCC CGGTCCGCC^ 840
GCTTGTGACC TCCGAGTCCT CAGTAAACTG CTTCGTGACT CCCATGTCCT TCACAGCAGA
900
CTGAGCCAGT GCCCA
915 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO; 131:
íi} SEQVSNCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTHr 915 base pairs (B) TYPE; nucleic acid (C) STRANDDDNESS; single {D) TOPOLOGY: linear (ri) NULECtFLE TYPE: other nucleic acid (A) DESCRIPTION: /desc ~ “DMA (synthetic) “
335
SEQUENCE DESCRIPTΙΟΙ ·. SEQ ID NO: iji;
GCIAACTSCT ctataatgat cgacgaaatt atacatcact taaagagacc acctgcacci
........ .....·<<<<<<<........ ........ < ............
TTGOTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT
120
CGACTTCCAA ACOTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ÂCTTAGAAAA TGCATCAGGT
ISO attgaggcaa ttcttcgtaa tctccaacca tgtctgccct ctgccacggc cgcaccctct •240...... .................... ............ ............
CGACATCCAA TCATCATCAA ggcaggtgac tggcaagaat tccgggaaaa actgacgttc
3C-0
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA CAACAGTACG TAGAGGGCGG TGGAGGCTC
350<
CCGGGTGAÂC CGTCTGGTCC AATCTCTACT ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
420
CATAAATCT'C CAAACATGTT GCCTACACCT GTCCTGCTGC CTGCTGTGGA CTTTAGCTTG
480
GGAGAATGGA AAACCCAGAT GGAGGAGACC AAGGCACAGG ACATOCTGGG AGCAGTGACC
542:
CTTCTGCTGG AGGGAGTGÀT GGCAGCACGG GGACAACTGG GACCCACTTG CCTCTCATCC
6δδ
CTCCTGGGGC AGCTTTCTGG ACAGGTCCGT CTCCTCCTTC GGGCCCTGCA GAGCCTCCTT β
GGAACCCAGC TTCCTCCACA GGGCAGGACC ACAGCTCACA AGGATCCCAA TGCCATCTTC
720
CTGAGCTICC AACACCTGCT CCGAGGAAAG GTGCGTTTCC TGATGCTTGT AGGAGGGTCC
78C......
ACCCTCTGCG TCAGGGAATT CGGCAÀCATG GCGTCTCCCG CTCCGCCTGC TTGTGACCTC
542
CGAGTCCTCA GTAAACTGCT TCGTGACTCC CATGTCCTTC ACAGCAGÁCT GAGCCAGTGC
90S..... ............. ........ ........
CCAGAGGTTC ACCCT §15 ......
U; INFORMATION FOR SEQ ID NO: 132:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 915 base pairs
336
ÍH; TYPE; nucleic acid iC) STRANDEDNESS · Single {□j TOCOLOGY: linear ill} MOLECULE TYPE: ether nucleic acid (A? DESCRIPTION; /dess = DNA (synthetic’s (κι j SEQUENCE DESCRIPTION.- SEQ ID NO; 132:
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGÂAATT ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT
60..... .......... ............
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAATGAOGAA GACGTCTCTÀ TCCTGATGGA CCGAAACCTT
CGAUTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT
186
ATTSAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCÂACCÂ TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTTT
240
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC TGGCAAOAAT TCOGGGAAAÍ^ ACTGACGTTC
302
TPiT'CTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA CAÂCAGTACG TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC
360
CCGGGTGAAC CGTCTGGTCO AATCTCTACT ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
420
CATAÀATCTC CAAACATGGT CCTGCTGCCT GCTGTGGACT TTAGCTTGGG AGAATGGAAA
460
ACCCAGATGG AGGAGACCAA GGCACAGGAC ATTCTGGGAG CAGTGACCCT TCTGCTGGAG
540
GGAGTGATGG CAGCACGGGG ACAACTGGGA CCCACTTGCC TCTCATCCCT CCTGGGGCAG
600 .....
CTTTCTGGAC AGGTCCGTCT CCTCCTTGGG GCCCTGCAQA GCCTCCTTGG AACCCAGÚTT
680
CCTCCACAGG GCAGGACCAC AGCTCACAAG GATCCCAATG CCATCTTCCT GAGCTTCCAA
0
CACCTGCTCC GAGGAAAGGT GCGTTTCCTG ATGCTTGTAG GAGGGTCCAC CCTCTGCG'K'
780 ...... .................. ..............................
AGGGAATTCG GCAACATGGC GTCTCCCGCT CCGCCTGCTT GTGACCTCCG AGTCCTCAGT
840
337 aaaotgctti gtgactccca tgtcottcac AGOAGACTGA gccagtgccc AGAGGTTCAC (2: INFORMATION FOR SEQ IT NO'. 133'· (ij SEQUENCE CHARACTERISTICS:
{A; LENGTH: 815 base pairs (Si TYPE: nueisic acid iC· STRANDEDNESS: single (Di TOPOLOGY; linear (11; MOLECULE TYPE: ether nucleic acid (A! DESCRIPTION: /âesrc « “ONA (Synthetici ’ (χχϊ SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ IE NO; 133:
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA
120
CGACSTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG
180 attgaggcaa ttcttcgtaa tctccaacca
240 cgacatccaa tcatcatcaa ggcaggtgac
300
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA
350
OCGGGTGAAÇ CGTCTGGTCC AATCTCTACT
420
CATAAATCTC CAAACATGGC TGTGGACTTT
4S6
GAGACCAAGG CACAGGACAT TCTGGGAGCA
540
GCACGGGGAC AACTGGGACC CACTTGCCTC
600
GTCCGTCTCC TCCTTGGGGO CCTGCAGASC
660
ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT GCTGTCAAQA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT TGTGTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT TOGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC CAACAGTACG TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC ATGAACCCG'T CTCCTCCGTC TAAAGAATCT AGCTTGGGAG AATGGAAAAC CCAGATGGAG GTGMICCTTC TGGTGGAGGG AGTGATGGCA TCATCCCTCC TGGGGCAGCT TTCTGGACAG CTCCTTGGAA CCCAGCTTCC TCCACAGGGC
338
AGGACCACAG CTCACAAGGA TCCCAATGCC ATCTTCCTGA SCTTCCAACA CCTGCTCCGA
726
GGAAAGGTGC GITTCCTGAT GCTTGTAGGA GGGTCCACCC TCTGCGTCAG GGAA.TTCGGC
78C....................................... ........
AACATGGCGT CTCCCGCTCC GCCTGCTTGT GACCTCCGAG TCCTCAGTAA ACTGCTTCGT .· .· ................
GACTCCCATG TCCTTCACAG CAGACTGAGC CAGTGCCCAG AGGTTCACCC TTTGCCTACA .903
CCTGTCCTGC TGCCT
915
Í2) INFORMATION FUR SEQ ID NO; 134;
iij SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A; LENGTH: SIS base pairs (E· TYPE; nucleic acid (C) STRANDEDNESS: single (0) TOPOLOGY; linear ill/ MOLECULE TYPE·: other nucleic acid (A) DESCRIPTION: /desc « «DNA (synthetic) *
IxiJ SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 134;
gctaactgct ctataatgat cgatgaaatt
6δ ttgctggacc cgaacaacct caatgacgaa
126
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG
ISO
ATTGAGGCAA TT'CTTCGTAA TCTCCAACCA
246
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC 300
TATCT6GTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA
360
CCGGGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTACT
420
ATACATCACT T.AAAGAGACC ACCTGCACCT
GÀCGTCTCTA TCCTQATGSA CCGAAACCTT
GOTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT
TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT
TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC
CÀACAÔTACG TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC
ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
CATAAATCTQ CAAACATGGA CTTTAGCTTC- GGAGAATGGA AAACCCAGAT GGAGGAGACC
80
ArtO\ídhvA\?V k\*AVs#V ΑννΛν’Λ Lwa . ζ^ν
540 ggagaactgg gacccacttg CCTOTCATCD ctcctggggg agctttctgg ACAGGTCCGT
SCO
CTCCTCCTTG GGGCCCTGCA GAGCCTCCTT GGAACCCASC TTOCTCCACA GGGGAGGACC
665
ACAGCTCACA AGGATCCCAA TGCCATCTTO CTGAGCTTCQ AACAUCTGCT CTGAGGAAAG
GTGCOTTTCC TGATGGTTGT AGGAGGGTCC ACCCTCTGCG TCAGGGAATT CGGOAACATG 780
GCGTCTCCCG CTCCGCCTGQ TTGTGACCTC CGAGTCCTCA GTAAACTGCT TUGTGACTCQ S4Ô'
CATGTCCTTC AQAGCAGACT GAGCCAGTGC CUAGAGGTTC ACCCTTTGCC TACACCTGTC
900
CTGdGCCTG CTGTQ
Figure BRPI9610977A2_D0151
A INFORMATION FOR SEQ ID NO: 238:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(Al· LENGTH: 9X5 base pairs íR> TYPE; nucleic acid (C> STRANDEDNEES: single (D; TOPOLOGYc linear (ii) MOLECULE TYPE; ocher nucleic acid (A,· DESCRIPTION.- /ãesc ® ’DNA (synthetic) ‘
Figure BRPI9610977A2_D0152
txx) SEQUENCE DESCRIPTION:. EEQ ID NO: 135:
GQTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAÂATT ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT EC
TTGCTGGACC CGAACAACCT
120
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG
280
ATTGAGGCAA TTOTTCGTAA
240
CAATGACGAA GACGTCTCTA
CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA
TCTCCAACCA TGTCTGCCCT
TCCTGATGGA CCGAAACCTT
ACTTAGAAAA TGCATCA.GGT
CTGCCACGGC CGCACCCTCT
340
TCATCATCAA C'CjCA^GTGAx.
ft·*' wvvii'T.^K y k y r w«^·* * U’frss ^.>hz<'h5Z^5 Λ * x-k. VXUSXX.iXfV^ À .4 -À Xs
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA
360 caaqagtacg tagagggcgg tggaggctcc
CCGGGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTAOT ÂTCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
420.......... ......
CATAAATCTC CAAACATGGG AGAATGGAAA ACCCAGATGG AGGAGACCAA GGCACAGGAC
OU
ATTCTGGGAG CAGTGACCCT TCTGCTGGAG GGAGTGATGG CAGCACGGGG ACAACTGGGA
540.......... ...... ........ ................
CCCACTTGCC TCTCATCCCT CCTGGGGCAG CTTTCTGGAC AGGTCCGTCT CCTCCTTGGG soo............... ............ ............ ........
GCCCTGCAGA GCCTCCTTGG AACCCAGCTT
560 ........ ........
GATCCCAATG CCATCTTCCT QAGCTTCCAA
720
A.TGCTTGTAG GAGGGTCCAC C2TCTGCGTC
80
CCQCCTGCTY GTGACCTCCG AGTCCTCAGT
840
CCTCCACAGG GQAGGACCAC AGCTCACAAG
CACCTGCTCC GAGQAAAGGT GCGTTTCCTG
AGGGAATTCG GCAACATGGC GTCTCCCGCT
AAACTGCTTC QTGACTCCCA TGTCCmAC
AGCAGACTGA GCCAGTGCCC AGAGGTTCAC CCTTTGGCTA CACCTGTCCT GCTGCCTGC^ sou
GTGGACTTTA GCTTG
815 (21 INFORMATION FOR SEQ ID NO: 136:
SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 915 base pairs
ÍB} TYRE: nucleic acid
ÍC} ETRANDEDNESS: single
CD) TOPOLOGY; linear iii) MOLECULE TYPE; other nucleic acid.
ÍA) DESCRIPTION: /desc » ΈΝΑ. ! synthetic} ’ (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID MO; 136-.
341
TATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA GACGTCTCTA TCCTGA7LGA CCGAAACCTI
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATGAGGT
380 ...... ......
ATTGAGGCAA TTCTTOGTAA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT CTGCCAGGGC CGGACCCTCT
240 ........ ......
cgacatccaa tcatcatcaa ggcaggtgac tggcaagaat tccgggaaaa actgacgtto k: ........ ......::: ........ ...........
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA CAACASTACG TASAGGGCGG TGGAGGCTCO _ CCGSGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTACT ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
CATAAATCTC CAAACATGGG ACCCACTTGC CTCTCATCCC TCCTGGGGCA GCTTTCTGGA
48G
CAGGTCCGTC TOTTCCTTGG GGCCCTCCAG AGCCTCCTTS GAACCCÀGCT TCCTCCACAG
S Β41ΝΓ2.....S ( ........ ........ ........I..... K lí
GGCAGGACGA CAGCTCACAA GGATCCCAAT GCCATOTTCC TGAGCTTCCA AGACOTGGTC
630
CGAGGAAAGG TGCGTTTCCT GATGCTTGTA GGAGGGTCCA UCOTCTGCGT CAGGGAATTC
8:50
GGCAACATGG
CGTCTCCCGC TCCGCCTGCT TGTGACCTOT GAGTCCTCAG
TÀAATTGCTT
CGTGACTCee ATGICCTTCA CAGCAGAOTG AGOCAGTGCC GAQAGGTTOA CCCTTTGÍXT
7:80
ACACCTGTCC TGCTGOTTGC TGTGGACTTr AGOTTGGGAG AATGGAAAAC CCAGRTGGAG
840
GAGACCAAGG QACAGGAQAT TCTGGGAGCA GTGACCOTTC TGCTGGAGGG AGTGATGGCA $60 ............ ....... ........................
GCACGSGGAC AACTG
S' 15 (2; INFORMATION FOR SEQ ID NO: 137;
ί1> SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(Aj LENGTH: 9IS baae pairs
ÍE? TYPE: nucleic acid
ÍC) STRANDEDNESS: single
342 í D . TC· POLOGY; X irwa:r
MOLECULE TYPE: ether ntcieir acid (Λ) DESCRIPTION: /dear ~ *DNA ísyr.chestic;
ixi; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 137;
CCTAACTGGT CTATAATGAT CGATGAAATT
60........
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG ISO
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA
240
CGACATCCAA TCATCATÇAA GGCAGGTGAC
300
TATCTGGTTA CCCTTQAGCA AGCGCAGGAA
380
CCGGGTGAAÇ CGTCTGGTCC AATCTCTACT 420
CATAAATOTC CAAACATGGG AACCCAGCTT
480
GATCCCAATG CCATCTTCCT GAGCTTCCAA ........
ATGCTTGTAS GAGSGTCCAC CCTCTGCQTC
600
CCGCCTGCTT GTGACCTCCG AGTCCTCAGT
660
AGCAGACTGA GCCAGTGCCC AGAGGTTCAC
GTGGACTTTA GCTTGGGAQA ATGGAAAACU
780
CTGGGAGCAG TGACCCTTCT GCTGQAGGGA
84C ........ .... ..................
ACTTGCCTCT CATCCCTUCT GGGGCAGCTT
900
ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACUT
GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACUTT
GCTÇTCAAGA ÀCTTAGAAAA TGCATCAGGT
TGTCTGCCCT CTGCCÀCGGC CQCATC2TCT
TGGUAAGAAT TCCGGGAAAA ATTGACGTTC
CAACAGTACG TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC
ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
CCTCCACAGG GCAGGACCAC AGCTCACAAC
CACCTQCTCC GAGGAAAGGT GCGTTTCCTG
AGGGAATTCG GCAACATGGC GTCTCCCGCT
AAACTGCTTC GTGACTCCGA TGTCCTTCAC
CCTTTGCCTA CACCTGTCCT GCTGCCTGCT
CA.GATGGAGG AGACCAAGGC ACAGGACATT
GTGATGGCAG CACGGGGACA ACTGGGACCC
TCTGGACAGG TCCGTCTCCT CCTTGGGGCC
343
- *
Q^ jv s·* «· ··’ (2) INFORMATION FOR SEQ ID ND: X3B:
ii? SEQUENCE CHARACTERISTICS:
,'A.i LENGTH; 815 bass pairs (Bs TYPE; nucleic acid
ÍC) STRANDESNESS: single
ID? TOPOLOGY: linear >li) MOLECULE TYPE: other nucleic acid (A; DESCRIPTION; /desc » *DNA isynthetic) ’
ÍX1? SEQUENCE DESCRIPTION'. SEQ ID NO; 138;
gctaagtgct ctataatgat cgatgaaatt
TTGCTGGACC CGiAOAACCT CAATQACGAA ο :::::::: :
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG OTTCGTAAGG ISO
ATTGAGSCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCÀ
240 uwv>-nT£X.AA TCJiTCATCAA GGCAGGTGAC
30v
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA
368
CCGGGTGAAC CGTCTGGTCC AATOTCTACT
428
CATAAATCTC CAAACATGGG CAGGACCACA
80
AGCTTCCAAC ACCTGGTCCG AGGÂAAGGTG
54δ
CTCTGCGTeA GGGAATTCGG CAACATGGCG
680
GTCCTCAGTA AACTGCTTCG TGACTCCCAT
660
ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT
GACGTOTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT
GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT
TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT
TGGCAÀGAÀT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC
C»A'._AGTAC£S TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC
ATCAACCOGT CTCCTCCGTC TAÀAGAATCT
GCTCACAAGG ATCCCAATGC CATCTTCCTG
CGTTTCCTGA TGCTTGTAGG AGGGTCCACC
TCTCCCQCTC CGCCTGCTTG TGACCTCCGA
GTCCTTCACA GCAGACTGAG CCAGTGCCCA
344
GAGSTTCACC CTTTGCCT'AC ACCTGTCCTG CTGCCTGCTG TGGÃCKTXG CTTGGGAGAA
720
TGGAAAACUC AGxTGiiAGGA GACCAAGGCA CAGiaAuATTL Tutr^As^^AGT t»%CCCT*vTG
760................ ......
CTGGAGGGAG TGATGGCAGC ACGGGGACÂA CTGGGACCCA CTTGCCTCTC ATUCCTCCTu $40...... .......... ......
'-'iC^’GGA''AGG*** ’CQ’*'1**χ- CT^^GGGG^H TGCAGAGC'***^ $00..............................
9X5.............. ..................
(2; INFORMATION FOE SEQ ID NO: 13$:
(ii SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 31$ base pairs (EG TYPE: nucleic acid
Mi STRANDEDNESS t single (D) TOPOLOGY.: linear (iii MOLECULE TYPE: other nucleic acid (A) DESCRIPTION: /desc = ’DU A (synthetic) (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 133:
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TAAAGAGACO ACCTGCACCT
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT
C.......... ........
CGACTTCCAA ACCTGGAQAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAQAAAA TGCATCAGGT
ISO
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCAC-c^’H’
240
CGACATUCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA AUTGACGTTC
300
TP.TCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA CAÀCAGTACQ TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC 360
CCGGGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTACT ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAAT^ 42D
CATAAATCTC CAAACATGGC TCACAAGGAT CCCAATGCCA TCTTCCTGAG CTTCCAACAC 430
345
QTQSTCCGAC- GÂAAGGTGCG TTTOCTGATG CTTC-TAGGAQ GGTCCACCCT CTGCGTCAGG
SO: ......
GAATTCGGCA ACATGGCGTC TCCCGCTCCG CCTGCTTGTG ACOTCCGAGT CCTCAGTAAA
500
CTGCTTCGTG ACTCCCATGT CCTTCACAGC AGACTGAGCC AGTSCCCAGA GGTTCACCC7
860
TTGCCTACAC CTGTCCTGCT GCCTGCTGTG GACTTTAGCT TGGGAGAATG GAAAACCCAG
720
ATGGAGGAGA CCAAGGCACA GGACATTCTla GGAGCAGTGíí. CCCTTuTGCT GGAGGGAGTG
780
ATGGCAGCAC GGGGACAACT GGGACCCACT TGCCTCTCAT CCCTCCTGGG GCAGCTTTCT
840
GGACAGGTCC GTCTCCTCCT TGGGGCCCTG CAGAGCCTCC TTGGAACCCA GCTTCCTCCA
900
CAGGGCAGGA CCACA
915
Í2) INFORMATION FOR SEQ 1D NOr 140;
(X) SEQUENCE CHARACTERISTICSo {A} LENGTH; 815 base pairs
CBj TYPE; nucleic acid (C) ETRANDEDÍÍESS: single (0} TOPOLOGY; linear
511} MOLECULE TYPE; other nucleic acid iA} DESCRIPTION: /desc = *DNA (synthetic)‘ {xi} SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 140:
GCTAACTGCT CTATAATQAT CCATGAAATT ATACATCACT TAAAGÂGACC ACCTGCACCT 60
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA GACSTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT
120
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT ISC·
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT
240
346
CATAAA'
TCCTTCACAG cagactgag:
TGGCAAGART
GACCTCCGAG
CAGTGCCCAG
TTGGGAGAAT
-GGGAAAA
GGAATTCGG
TCCTCAGTAA
AGGTTCACCC
ACCAAGGCAC
730
AGÔACA'
GGGAGCAGTG
846
ACAGGGCAGG
ACCACAGCTC
915
ACAAG (2? INFORMATION FOR SEQ ID NO: 141:
(1) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A· LENGTH: 915 base pairs {B} TYPE: nucleic acid (CJ STRANDEDNESS: single {D$ TOPOLOGY: linear {ii) MOLECTLE TYPE: ether nucleic acid {A) DESCRIPTION; /dear « ’DNA Ísynthetic) ’ (xl) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 141:
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TAAAQAGACC ACCTGCACCT
SC
347
TTGCTGGAOO CGAACAACOT CAATGACGAÀ GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGQATCAGGT
180
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT CT'GCCACGGC CGCACCCTCT
240
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC
300
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCA3GAA CÀACAGTACG TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC
350
CCGGGTGAAC CGTCT5GTCC AATCTCTACT ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
420
CATAAATCTC CAAACATGGC CATCTTCCTG AGCTTCCAAC ACCTGCTCCG AGGÀAAGGTG
SO
CUTTTCCTGA TGCTTGTAGG AGGGTCCACC CTCTGCGTCA GGGAATTCGG CAACATGGCG
540
TCTCCCGCTC CGCCTSCTTG TGACCTCCGA GTCCTCAGTA AACTGCTTCG TGACTCCCAT
500
GCTGTTCACA GCAGACTGAG CCAGTGCCCA GAGGTTGACC CUIGCCTÀC ACCTGTCCTG
S50
CTGCCT3CTG TGGACTTTAG CTTGGGAGAA TGGAAAACCC AGATGGAGGA GACCAAGGCA
720
CAGGACATTC TGGGAGCAGT GACCCTTCTG CTGGAGGGAG TGATGGCAGC ACGGGGACAA
80
CTGGGACCCA CTTG2CTCTQ ATCCCTCCTG GGGCÀGCTTT CTGGACAGGT CCGTCTCCTC »40: ..
CTTGGGGCCC TGCAGAGCCT CCTTGGAACC CAGCTTCCTC CACAGGGÇAG GACCACAGCT
800
CACAAGGATC CCAAT
915 (25 INFORMATION FOR SEQ ID NO: 142:
(1) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 921 base pairs (δ) TYPE: nucleic acid (Ci STRANDEDNESS; single (D) TOPOLOGY: Linear
348 a nucleic &cíg (A; DESCRIPTION; /'desc ~ ΌΝΑ (synthetic) * (xl) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ XS NO: 142;
GCTAACTGCC CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGQACCT ............. s
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT
GACTTCCAAA CCTGGAGAGC TTCGTAAGGG CTGTCAAGAA CTTAGAAAAT GCATCAGGTA isc...... ............ ...................................
TGAGGCAATT C7TCGTAATC TCCAACCATG TCTGCCCTCT GCCACGGCCG CACCCTCTCG 240
CATCCAATCA TCATCAAGGC AGGTGACTGG CAAGAATTCC GGGAAAAACT GACGTTCTAT
305
TGUTTACCCT TGAGCAAGCG CAGGAACAAC AGTACGTAGA GGSCGGTGGA GGCTCCCCGG
........ ..........................
TAACCSTCTG GTCCAATCTC TA^TATCAAC CCGTCTCCTC CQTCTAAAGA ATCTCATAAA 4j*5 v·
TCTCCAAACA TGGAGGTTCA CCCTTTGCCT ACACCTGTCC TGCTGCCTGC TGTGGACTTT 482
AQCTTGGGAC AATGGAAÀAQ CCAGATGGAG GAGACCAAGG CACAGGACAT TCTGGGAGCA
546
GTGACCCTTC TGCTGGAGGG AGTGÀTGGCA GCACGGGGAC AACTGGGACC CACTTGC^ 60C>
TCATCCCTCC IGGGGCAGCT TTCTGGACAG GTCCGTCTCC TCCTTGGGGC CCTGCAGAG 6W
CTCCTTGGAA CCCAGCTTCC TCCACAGGGC AGGACCACAG CTCACAAGGA TCCCAATGCC
720
ATCTTCCTGA gcttccaaca CUTGCTCCGA GGAAAGGTGC CTTTCCTGAT GCTTGTAQGA
780 viG^iCuACCC TCTGCGTQAG GGAATTCGGC GGCAACGGCG GCAACATGGC GTCCCCAGQQ S40
CCGCCTGCTT GTGACCTCCG AG'TCCTCAGT AAACTGCTTC GTGACTCCCA TGTCCTTCAC
800
349
Í2? INFORMATION FOR SEQ ID NO: 143:
D ? SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A; LENGTH: 927 base pairs
ÍB} TYPE: nucleic acid iC; STRANDEDNESS: single (0.: TOPOLOGY: linear ;ϋ) MOLECULE TYPE.· other nucleic acid (A: description: /desc = ‘DMA (synthetic i
Ixl SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 143;
gctaaotgct ctataatgat cgatgaaatt 6C
TTGOTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA
125
CGACTTCCAA ACCTQGAGAG CTTCGTAAGG
Sft
A QW
Z\<i .4, W\iWWY l Afeil
240
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC
0C
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA 360
CCGGGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTACT 42 B;
CATAAATCTC CAAACATGTT OCCTACACCT 48C
GGAGAATGGA AAACCCAGAT GGAGGAGACC 540
CTTCTGCTGG AGGGAGTGAT GGCAGCACGG
600
CTCCTGGGGC AGCTTTCTGG AUAGGTCCGT ,gw„
GSAACCCAGC TTCDTCCACA GGSCAGGACC
720
ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT GACG7UTCTA TCCTGATCKSA CCGAAACCTT GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGST TQTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC CAACAGTACG TAGAGGGCGG TGGAGOCTCC ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT GTCCTGCTGC CTGCTGTGGA CTTTAG-CTTG AAGGCACAGG ACATTCTGGG AGCAGTGACC GGACAACTGG GACCCACTTG CCTCTCATGC CTCCTCCTTG GGGCCGTGCA GAGCCTCCTT ACAGCTCACA AGGATCCCAA TGCCATCTTC
350
0T3AGCTTCC AACACCTGGT CCGAGGAAAG GTGCGTCTCO TGÀTG2TTGT AGGAGGGTCC 7EL· ..........
ACCCTCTGCG TCAGGGAAT7 CGGCGGCAAC GGCGGCAACA TGGCGTCCCC AGCGCCGCCT
840
GCTTGTGACC TCCGAGTCCT CAGTAAACTG CTTOGTGACT CCCATGTCCT TCACAGCAGA
90S
CTGAUCCAGT GCCCAGAGGT TCACCCT
927 (2} ZNFDRMATIQN FOR SEQ ID NO: 144;
(1; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A· LENGTH: 927 base pairs {g) TYPE: nucleic acid (Ci STRANDEDNESS: single {Di TOPOLOGY; linear {iij MOLECULE TYPE: other nucleic acid (A) DESCRIPTION; /desse ® CHA {syntheticj (Xii SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 144;
GCTAACTSCT CTATAATGAT CGATGAAATT
6C
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG
18Õ
ATTGAGGCAÀ TTCTTCGTAA TCTCCAACCA
240
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC
300
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA
380
CCGGGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTACT
420
ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT
GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT
GCTGTCAAÔA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT TGGCAAGAAT TCCGGGAAAÀ ACTGACGTTC ÇAACAGTACG TAGAGGGCGG TGGAGÔCTCC ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
CATAAATCTC CAAACATGGT CCTGCTGCCT GCTGTGGACT TTAGCTTGGG AGAATGGAAA
4SC
Figure BRPI9610977A2_D0153
ixi} SEQUENCE DESCRIPTIONx SEQ IQ NO; 145;
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT
CÀATGACGAA GACGTCTCTA TCTTGATGGA TCCAA^C^'^
CGAOTTCCAA ACCTGQAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT
ATTuAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA TGTCTGUCOT CTGCCACGGC CGCA·''^!^^
U^^CAA TCATCÀTCAA GGCAGGTGAC TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC
352
CCGGGTGAAO CGTCTGGTCC
420
CATAAATTTC CÀAACATGGC
480 ü ΑκχΑλ». uvívi k> C Au As^GA C AT 540
GCACGGGGAC AACTGGGACC
600
Figure BRPI9610977A2_D0154
Figure BRPI9610977A2_D0155
k» l Ajjxa^Xw λ ~ à j&k>VÁ ~ * MXXíxsA W
TCTGGGAGCA GTGACCCTTC <νΛ< Λ A^X.«Av, Λ S^*Q.'vmL <MXv
CCTGCAGAGC CTCCTTGGAA
TCCCAATGCC ATCTTCCTGA
GGAAAGQTG GTTTCCTGAT
780
GCTTGTAGGA GGGTCCACCC
GGCAACGQCG GCAACATGG 84 í?
AAACTGCTT'C GTGACTCCCA 900
92?
Figure BRPI9610977A2_D0156
TGTCCTTGAC AGGAGACTGA
CTC-CTCCSTC TAAÀGAÀTCT
AAIXAaAAAAC CCAGATGGAQ
TGGTGGAGGG AGTGATGGCA
TGGGGCAGCT TTCTGGACAG
CCCAGCTTCC TCCACAGGGC
GCTTCCAACA CCTGUTCCGÀ
TCTGCGTCAG GGAATTCGGC
GTGACCTCCG AQTCCTCAGT
GCCAGTGCCC ÀGAGGTTCAC
Í2! INFORMATION FOR SEQ 10 Nó: 146;
íi? SEQUENCE CHARACTERISTICS c ?À) LENGTH: 927 base pairs (Bí TYPE·, nucleic acid (C· STRANDEDNESS; Single (EM TOPOLOGY; linear tri) MOLECULE TYPE; other nucleic acid $A) DaSCRIFTION; /dear » DNA (synthetic1 (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NG; 145:
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GTTG7CÀAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT lif'f s........ l-: Z \ ........
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCH TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT
CGACATCCAA TCATOATQAA GGCAGGTGAC TGGCAAGART TCC-GGGAAAA ACTGACGTTC >*\X >*«**Ζ*.***?Γ^ R X* »**·>. ».,ΛΛν^«·ήΛ,·Λν^·χ V. ,-V* X /Τ,Λ JMrtA. « w aay< la a *<·-. ml λ /íc^l^lw; laAlaAl·1 Αχ.ς» TAkíAGGGCGú TGGA.GGCTCC
6 £
CCGGGTGAAC CQTQTGGTCC AATGTCTACT ATCAAOCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCC
C......... ..............................................................
CATAÂÀTCTC CAAAOATGGA CTTTAGCTTG GGAGAATGGA AAACCCAGAT GGAGGAGAOC
Figure BRPI9610977A2_D0157
AAGGCACAGG ACATTOTGGG AGCAGTGACC CTTCTGCTGG AGGGAGTSA’’’ GGCAGfW^
540 ...... .................... ...................'.....
GGACAACTGG GACCCACTTG CCTCTCATCC CTCCTGGGGC AGCTTTCTGG ACAGGTCCGT
5Ü0
CTCCTCCTTG QGGCCOGCA GAGCCTCCTT
GGAACCGAGC TTCCTCCACA
LsGGC Â.GG AC C
AQAGCTUACA AGGATCCCÃA TGGCATCTTC CTGAGCTTCC AACACCTGCT CGGAGGAAAG
Figure BRPI9610977A2_D0158
TGAGGGAATT CGGCGGCAAC
GGCGGCAACA TGGGGTCCC
840
Ρ r* λ .x* A .·Ύ· Υ*Γ y^.·*· 'WV'a· ά . . . 'w.'rtAiviXt’X «> X* K» .* §0δ
AGCGGCGCCT GCTTGTGAGC
TCAOAGCAGA CTGAGCCAGT
TQCGAGTCCT CAGTAAACTG
GCCTAGAGGT TCACCCTTTG
COTACACTTG TÇCTGCTGCC TGCTGTG
S27 (2) INFORMATION FOR SEQ NU: 147;
{£; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(Ai LENGTH: S27 base pairs (S; TYPE: nucleic acid (Cj STRANDEDNESS: single (Di TOPOLOGY: linear ill; MOLECULE TYPE: other nucleic acid
354 / «esDESIRSPTIOS
CTATAATGÀ1
4 4.
ACTTAGAAAA
Figure BRPI9610977A2_D0159
TGGCAAGAAT
TATCTGGTTA
36-C
CAACAGTACG
TAGAGGGCGG
TGGAGGCTí
AATCTCTACT
ATCAACCCGT
TAAAGAATCT uAAACATGGG
AGAATGGAAA
ACCCAGATGG
AGGAGACCAK
GGCACAGQAO
CA.GCACGGGÇ
SOO ‘CCGTCT
CCTCCTTGGQ
Figure BRPI9610977A2_D0160
GCCCTGCAGA
S6C
AACCC.
CCTCCACAGG
AGCTCACAAG
CACCTGCTCC
GGCAACATG
GCGTCCeCAG
840
GTAAACTQCT
ACAGCAGACT
900 ’CAGTG:
CCAGAGGTTi
TACACCTGTÍ
CTGTSGACTT
355
INFORMATION FOP. SEQ ID NO: 14 8:
il? SEQUENCE CHARACTERISTICS:
i A· LENGTH 927 bas e paire i'E; TEPE; nucleic acid ;C; ETRAIUJEDfJESE: tingle (D? TOPOLOGY; linear {ii: MOLECULE TYPE: ether nucleic acid (A· DESCRIPTION; Zdesc - DNA (synthetic;
(Xi; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 148;
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT
TTGCTGGACC CGAACAACOT CAATGACGAA
CGACTTCCAA ÀCCTGGAGAG CTTCGTAAGG
180
ATTGAGGCAA TTCCTCGTAA TCTCCAACCA
340
CGACATCCAA TCATCATOAA GGCAGGTGAC
00
TATCTGGTTÀ CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA
CCGGGTGAAC CGTCTGSTCC AATOTCTACT
420
CATAAATCTC CAAACATGGG ACCCACTTGC
480
CAOGTCCGTÇ TOCTCCTTGG· GGCOCTGCAG
540
GGCAGGACCA CAGCTCACAA GGATCCCAAT δ 00
CGAGGAAAGG TGCGTTTCCT GATGCTIGTA
6§Q
GGOGSCAACG GCGGCAACAT QGCGTCCCCA
720
ATACATCACT TAAAGAGACC AUCTGCACCT GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT TGTCTGOCCT CTGCCACGQC CGCACCCTCT TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACGTTC CAÀCAGTACG TAGAGGGTGG TGGAGGCTCC ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT CTCTCATCCC TCCTGGGGCA GCTTTCTGGA AGCCTCCTTG GAACCCAGCT TCCTCCACAG GCCATCTTCC TGAGCTTCCA ACACCTGCTC GGAGGGTCOA CCCTCTGCGT CAGGGAATTC GCGCCGCCTG CTTGTGAUCT CCGAGTCCTC
Figure BRPI9610977A2_D0161
ACCCAGATGG AGGAGACCAA QGUACAGGAC ATTCTGGGAG CAGTGACCCT TCTGCTGGAG seeGGAGTGATGG CAGCAQGGGG ACAACTG 92
INFORMATION FOR SEQ ID NO: 14S.
SEQUENCE CHARACTERISTICS :
•A? LENGTH: 92 has® parrs
ÍS) TYPE: nucleic acid (C· STRANDEDNESS: single
ÍD; TOPOLOGY: linear
MOLECULE TYPE; other nucleic acid (A) DESCRIPTION; /desc ® DMA (synthetic) ”
ÍX1) SEQUENCE DESCRIPTION; EEQ ID NO; 149;
GCTAACTGCT UTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACGT
..6.0·
TTGCTGGACC CGAACAACCT GAATGACGAA GACGTCTCTA TCCTGATGQA CCGAAACCTT x a 0
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG OTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT
ISO
ATTGAGGCAA TTCTICGTAA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT 240 ..........
C-wauATCCAA tcatcatcaa ggcaggtgac tggcaagaat tccgggaaaa ACTGACGTTC
..'^CTGGTTA cqgttgagca agcgcaggaa caacagtacg tagagggcgg tggaggctco 366
CCGGGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTACT ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT
ÇXTAtóTCTC CMACATO® MCCCMCTT CCTCCACAGS SOWOiCCAC «CTCACAAS •s«s6
GATCCCAATG CCATCTTCCT GAGCTTCCAA CACCTGCTCC GAGGAAAGGT GCGTTTCCTQ r>46
+. W<Ai· A*. A* X v. A» ·Λ A> jw*.*·* .*. ·χ Alí’!'* A****· A *N A A* + X /**·*% Λ- Λν As A» Ai ♦ V ΑΧ + *+ΐζν· ;ν;;Λ^ '...... χ „ * ,j... ..-: * .. /MVJnAl.·--S 'J X, A’.'v
Γ\ ;GCGTCCeCAG
660 χ-ςΛΧ. x.sk>V\-, 1 ’ον f*.** +, .+ A».|MSi:*:-fc *: aí .4. x*. « k v^Jvl I* X /ΐ4*χΛ.·ν..
OGT 6? A
CATGTCCTTC ACAGCAGAC7 GAGCCAGTGO CCAGAGGTTC ACCCTTTGCC TACACCTGTC
CTGCTGCCTG CTGTGGACTT TAGCTTGGGA GAATGGAAAA CGCAGATOGA GGÀGÀCCAAG
780
GCACAGGACA TTCTGGGAGC AGTGACCSTT CTGÍTTGGAGG GAGTGATGGC
S 4 0 * R }*>***/*< +>
ΛΙ»Χ...«\,'Χ>Χ¥ωί\3Λ
CAACTQGGAC CCACTTGCCT CTCATCOCT CTGGGGCAGC
900...... ........................ .........
7T7TGGACA
Í^.^WftWAAAA Aí.OAXW^Ai-V+ A>
£$<*?
i2) INFORMATION POR SEQ ID NG: 15C;
SEQUENCE CHARACTERISTICS r (A; LENGTH; 92? base pairs
ÍB? TYPE·, nucleic acid (Ci STRANDEONESS: single fD) TOPOLOGY; linear til? MOLECULE TYPE; ether nucleic acid
ÍA· DESCRIPTION: /desc « ’DNA {synthetic}’’ {Xi? SEQUENCE DESCRIPTION'. SEQ ID ND: 15G:
OCTAACTGCT
TTGCTGGACC
CTATAATGAT
CGAACAACCT
CGATGAAATT
CAATGACGAA
ATACATCACT
GACGTCTCTA
TAAAGAGACC
TCCTGATGGA
ACCTGCACCT
CCGÀAACCTT •GACTTCCAA ACCTGGAGAG
CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA
ACTTAGAAAA TGCATCAGGT
ATTGAGGCAA
TTCTTCGTAA
TCTCCAACCA
CTGCCACGGC CGCACCCTCT
CGACATCCAA
3SC
TCATCATCAA GGCAGGTGAC TGGCAAGAA.T TCCGGGAAAA ACTGACGTTC x>4 £<£ :AA.
AG G AAA<
Jib
AT***' v»K>
vk.A^
CGTGACTCX
Figure BRPI9610977A2_D0162
ACAGGACAT
A· \»’fcax3tf*<xy L /Tj.
Vo
AGTGATGGCA
GCACGGGGA'
AACTGGÇAO C
TGCAGAGC i /λ-ιλΑ
INFORMATION FOR EEC
Figure BRPI9610977A2_D0163
SEQUENCE CHARACTERISTICS;
U· LENGTH; §27 base pairs (S) TYFEr nucleic acid (C) STRANDEDNESS; single (D} TOPOLOGY; Iinear nucleic cast ~ (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION;
e;
GCTAAOTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TAAAGAGACC
6C
ACCTGCACCT ’GATGGA 'GAAACCTT
V· .* χ· k. SÀT ,* «JíVshH. χ> ks ν ά Χϊ ·α X· ^'WW^ZX ΛΧχ, λ .4 ίΧχΛ/ΙΛΛί'Χ <4S2TLa?v1 Xv^wx5 L
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA
24C
CGACATCCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC
300
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA
50
CCQGGTGAAC CGTCTGGTCC AATCTCTACT
0'
CATAAATCTC CAAACATGGC TCACAAGGAT
8C.......... ......
CTGCTCCGAG GAAAGGTGCG ITTCOTGATG δ
GAÀTTCGGCG GCAACGGCGG CAÀCA.TGGCG
SOS
GTCCTCAGTA AACTGCTTCG TGACTCCCAT
650
GAGGTTCACC CTTTGCCTAC ACCTGTCCTG
720
TGGAAAACCC AGATGGAGGA GACCAAGGCA
CTGGAGGGAG TGATGGCAGC ACGGGGACAA
840
TQGCAAGAAT TCCGGQAAAA. ACTGACGTTC
CAACAGTACG TAGAGGGCGG TGQAGQCTCC
ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGÀATCT
CDCAATGCCA TCTTCCTGAG CTTCCAACAC
CTTGTAGGÂG GQTCCACCCT CTGCGTCAGG
TCCCCAGCGC CGCCTGCTT3 TGACCTCCGA
GTCCTTCACA GCAGACTGAG CCAGTGCCCA
CTGCCTGCT^ TGGACTTTAG CTTGGGAGAÀ
CAGGACATTC TGGGAGCAGT GACCCTTCTG
CTGGGACCCA CTTGCCTCTC ATCCCTCCTG
GGGCAGCTTT CTGGACAGGT CCGTCTCCTC CTTGGGGCCC 90C......
TGCAGAGCCT ccttggaacc
CAGCTTCCTC CACAGGGCAG GACCACA §27 {2i INFORMATION FOR SEQ ID NO: 152:
(i> SEQUENCE CHARACTERISTICSr {A? LENGTH: 927 base pairs (δ) ΤΥΡΕ: nucleic acid (Ο ETRA^EDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: ether nucleic acid {A} DESCRIPTION: /desc = ΈΝΑ (synthetic
360
-χ·.; FEOüTiCF DESCRIPTION: SRQ ID NO: 1E2 ·.
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT TAAAGAGACC ACCTGCACCT
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAATGACGAA GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCASGT
180
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA TGTCTGCCCT CTCCCACGGC CGCACCCTCT 040 ........ ................
CGACA7CCAA TCATCATCAA GGCAGGTGAC TGGCAÀGAAT TCCGGGÀAAA ACTGACGTTC 300
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA CAACAGTACG TAGAGGGCGG TGGAGGCTCC
350.................. ........ ............................................
CCGGGTGAAC CGTCTGGTCO ÂATCTCTACT ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAATCT .0.0......... ........ ..............
CATAAATCTC CAAACÂTGGA TCCCAATGCC ATCTTCCTGA GCTTCCAACA CCTGCTCCGA
488
GGAAAGGTSC GTTTCCTGAT GCTTGTAGGA QGQTCCACCC TCTGCGTCAG GGAATTCGG* 540 u-GiAACGGCu QCAACATGGC GTCOCCAGCG CCGCCTGCTT GTGAC'CTCCG AGTCCTCAGT
AA^CTGCTTC GTGAOTCCCA TGTCCTTCAC AGCAGACTGA GCCAGTGCCC AGAGG^TFCAC
668
CCTTTGCCTA CACCTGTCCT GCTGCCTGCT GTGGACTTTÀ GCTTQGGAGA ATGGAAAACC ?2C
CAGATGGAGG AGACCAAGGC ACAGGACATT CTGGGAGCAG TGACCCTTCT GCTGGAGGGA
780
GTGATGGCAG CACGGGGACA ACTGGGACCC A'CTTCCGTCT CATCCCTCCT GGGGCAGCT’t
TCTGGACXGG TCCGTCTCCT CCTTGGGGCC CTGCAGAGCC TCCTTGGAAC CCAQCTTCCT
980
CCACAGGGCA GGACCACAGC TCACAAG
937 m INFORMATION FOR EEQ ID NG: 153:
SEQUENCE CHARACTERISTICS.
5A: LENGTH· 92“ ease pairs ;£; type.· nucleic arid .{Cj STRANDEDNESI : sing1e ?D) TOPOLOGY: linear (ii; MOLECULE TYPE; other nucleic acid {A) DESCRIPTION; /desc = DMA {synthetic) !Xi: SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID ND: 153;
GCTAACTGCT CTATAATGAT CGATGAAATT ATACATCACT
TAAAGAGACC ACCTGCACCT
TTGCTGGACT CGAACAACCT CAATGACGAA GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT
Figure BRPI9610977A2_D0164
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAAAA TGCATCAGGT is·::
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCAACCA 'TGTCTOCCCT CTGCCACGQC iiis.......................................... ................s............ ......
CGCACCCTCT
CGACATCCAA TCATCA7CAA GGCAGGTGAC TGGCAAGAAT TCCGGGAAAA ACTGACQTTC
300
TATCTGGTTA CCCTTGAGCA AGCGCAGGAA CAACASTACG TAQAGGGCGG TGGAGGC^C^
360
CCGGCTGAAC
420
CGTCTGGTCC
AATCTCTA
ATCAACCCGT
CTCCTCCGTC T.AAAGAATCT
CATAAATCTC CÀAACATGGC CATCTTCCTG AGCTTCCAÀC
480
ACCTGCTCCG AGGAAAGGTG
CGTTTCCTGA TGCTTGTAGI AGGGTCCACC CTCTGCGTCA GGGAATTCGG ε
CGGCAACGGC
GGCAACATGG CGTCCCCAGC GCCGCCTGCT TGTGACCTCC GAGTCCTCAG
600
TAAACTGCTT
CGTGACTCCC ATGTCCTTCA CAGCAGACTG AGCCAGTGCC
650
CAGAGGTTCA CCCTTTGCCT
ACÀCCTGTCC TGCTGCUTGC TGTGGACT7T AGCTTGGGAG AATGGAAAAC '720 ............
CCAGATGGAG
GAGACCAAGG CACAGGACAT TCTGGGAGCA GTGACCCTTC TGCTGGAGGC AG^igjx760
362
.. -.4:1,4.:4.- Α-'^νΛ\3ΐαΐ|άν k,· * « 4-: .4 4.3ΛKXFWSy 4 1 v· 4 w^-AXvAxs^KSsm * z*x>*x x-w„*x st -·χ:^*' wmw** w'*: * *»x“x^ wmmx<* * w A^xxA'» k-. Ut/kw.^iM.vasjrA * ν..χ^Α*Ά,.
INFORMATIQF FDR SEQ ID NO; 1S4 :
ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS :
(A) LENGTH: 80c base pairs ÍB: TYPE·, nuclexc acid ;C) STRAMDESNESS; single !D? TOPOLOGY; linear
Figure BRPI9610977A2_D0165
iii? molecule TYPE; other nucleic acid (A? DESCRIPTION; /desc * ΌΝΑ {synthetic?
(Xi? SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 154;
GCTAACTGCT CTATAATGAT CQATGAAATT ATACATCAOT TAAAGAGACC ACCTGCÂCCT ec
TTGCTGGACC CGAACAACCT CAADOACGAA GACGTCTCTA TCCTGATGGA CCGAAACCTT
-* 'n vy
CGACTTCCAA ACCTGGAGAG CTTCGTAAGG GCTGTCAAGA ACTTAGAÀÀA TGCATQAGGT ss:: : :: .............
ATTGAGGCAA TTCTTCGTAA TCTCCÃACCA TGTCTGCCCT CTGCCACGGC CGCACCCTCT
CGACATCCAA TGATCATCAA GGCAGGTGAC TGGCAAGAAT TCCGGQÀAÀA ACTGACUTTC *v »*. »X...................................................................................... .............................
Figure BRPI9610977A2_D0166
TATCTGGTTA CCCTTGAQCA AGCQCAGQAA CAACASTACQ TAGAGGGCGG TSGAGG’^TCC 260
CCGG-GTGAAC CGTCTGGTUC AUiTCTCTACT ATCAACCCGT CTCCTCCGTC TAAAGAA^CT 4 20
CATAAATCTC CAAACATGGA TCCCAATGCC ATCTTCCTGA GCTTCCAACA CCTGCTCCGA 4SG
GGAAAGGTGC GTTTCCTGAT GCTTGTAGGA GGGTCCACCC TCTGCGTCAG GGAATTCGGC
540...... ......
GGCAACATGG CGTCTCCCGÜ TCCGCCTGCT TGTGACCTCC GAGTCCTCAG TAAACTG^T
60C
2
CGTGACTCCC ATSTCCTTDA CAGCAGÀCTC ÀGCCAGTGCC CAGAGGTTCA CCCTTTÇCCI ♦ ,**X <*Ί Χ^ΓΧΧ<*·Τ·Χ!ίχ*Ν Λ» «VXiCÍI Λ.<*\ > X .*/-» X Ζ·> V fc *ίΛ.·ι·* >ν μ. < <* * AW Λ/·» » ή* * W*/*/*< * #» Λ VS * iv'iwAw* u 1 L-r,,>N*Ax> C*?Αν?Αλ x>vsA\?
GÂGACCAAGG CACAGGACAT TCTGGGAGCA GTGACCOTTC TGCTGGAGGG AGTGATGGCA gcacggggac aactgggacc CACTTGCCTC TCATCCCTCC TGQGGCAGCT ttctggacag
840
GTCCGTCTCC TCCTTGGGGO CCTGCAGAGI CTCCTTGGAÂ CCCAGGGCAG GACCACAGCT
CACAAG $St
Í2.· INFORMATION FOR SEQ ID ND: 155:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(AJ LENGTH; 993 base paars ;B) TYPE: nucleic acid (C; STRANE'EDNESS:. single (D) TOPOLOGY: linear (ÜÍ MOLECULE TYRE: other nucleic acid
ÍA) DESCRIPTION: /dasc « *DNA (synthetic)’ (xij SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 155;
ATGGCTAACT GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCACCTGCA
CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTCÀATGAC
HB; ................................ ........ ............ .....................................................................
CTTCGACTTC CAAACCTGQR GAGCTTCQTA 180
QGTATTGAGG CAATTCTTCG TAATCTCCAA δ
GAAGACGTCT CTATCCTGAT GGATCGAAAC
AGSGCTGTCA AGAACTTAGA AAATGCATCA
CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCACCC
TCTCGACATC
306
CAATuATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAG AATTCCGGGA AAAACTGACG
TTCTATCTGG TTACCCTTGA GCAAGCGCAC GAACAACAGT ACGTAGAGGG CGGTGGAGQ''
360
Figure BRPI9610977A2_D0167
9} INFORMATION FDR SEQ ID NO: 156:
{i; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 993 base pairs (Bi TYPE.- nuelexc acid (C) STRANDEDNESS: single íD} TOPOLOGY: 1inear iii; MOLECULE TYPE: ether nucleic scid ;A; Dr,S<_ni.PT^ON; Zde.sc ~ *DNA (synthetic) fxif SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ XD NO: 158;
ATGGu TRACT GCTCTATAAT GATCGRTGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCACCTGCA $? M
PTOn-lGG ACCCGAACAA ÇCTCRATGAC GAAGACGTCT CTATCCTGAT GGATCGAAA
365
GGTATCGAGG
ACGTAGAGto i USksAksvs
GTCTAAAGAA
CTCCAAACA'
GTOTCCCGAi
Figure BRPI9610977A2_D0168
ACTTTGCCA
CAGCAGATGG
AAGAACTGGG
CTGCITTCCA
VFWAhWVixJ Λ κ. >w
660
AGGTGTCGTA cggcgttcta at.
84C>
CGGCGGCTCT
CACCATTAGG
CCCTGCCAGi
TTAGAGCAAG
ACCTACAAGC
C GAGGAG CTC
TGAGCTCCK
Figure BRPI9610977A2_D0169
GOCCTGCAG;
962
TGGCAGGCI
CTTGAGCCAA
ATAGGG
CTACQAGGQG
CCCTGGAA.GG
983
GATATC
TAÀ
INFORMATION FOR SEQ ID NO;
(is SEQUENCE CHARACTERISTICSi (A; LENGTH: 993 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRANDWNESS: single >D) TOPOLOGY: linear
366 b Ύ* «* ’ Λ ,Α Ji ίί. . Qk.**<S.w * ivl is .1 S Λ W O^AW i A i DE S C ΰχ Ρ Tx ON: / des c = * DNA · syti t h e t x c} (xi; SEQUENCE DESCEIFTXON: SEQ ID ND: 157:
ATGGCTAÀCT GCTCTATAAT GATCGATGAA
CCTTTGUTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC
GTTCGACTT2 CAAACCTGGA
X8Q
GGTATTGAG3 CAÀTTCTTCG TAATCTCCAA
240
TCTCGACATC CAATCATCAT CAAGGGAGGT
300
TTCTATCTGG TTACCCTGA GCAAGCGCAG
3S0
TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCOAXTCTCT
422
TCTCATAAAT CTCCAAACÀT GTCTTCTGCT
480..... ........ ........
GCTAGICATC TGCAGAGCTT CCTGGAGGTG
0 ....................
CCCGGCGGCG GCTCTGACAT GGCTACACCA $20.....
GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA
TTCGTGCTCA AGTCTTTAGA GCAAGTGAGG $80
GAGAAGCTGT GTGCCACCTA CAASCTGTGC
720
TCTCTGGGCA TCCCCTGGGC TCCCCTGAGC
780
GSCTGCTTGA GCCAACTCCA TAGCGGCCTT
846
GAAGGGATAT CCCCCGAGTT GSGTCCCACC
90Ç ...... ........
ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCACCTGCA GAAGACGTCT CTATCCTGAT GGATCGAAAC AGAACTTAGA AAATGGATCA CCATGTCTG2 CCTCTGCCÀG GGCCGCACCC GACTGGCAAG AATTCCGGGA AAAACTGACG CGGTGGAGGC GTCTAAAGAA GGTCCTGGTT
GCCCCAGAGC
AGUGCTCCAG GCTCGGACAC GCAGCTGGCA GCAGGCCCTG
GAACAÃCAGT ACGTAGAGGG
ACTATCAACC CGTCTCCTCC
TTCCAGCGCC GGGCAGGAGG
TCGTACCGCG TTCTACGCCA
TTAGGCCCTG CCAGCTCQQT
AAGATCCAGG GCGATGGCGC
CACCCCGAGG AGCTGGTGCT
TCCTGCCCCA GCCAGGCCCT
TTCCTCTACC AGGGGCTCCT
TTGGACACAC TGCAGCTGGA
367
Figure BRPI9610977A2_D0170
x /Vkyvx^. 7 ίγ' Λτ,^ ΛΊΧτ,Λ' Λ* Z*r*X>VtZ+:>*+: .·*+ ZXW +. X ·.*«.♦ > .
A\wv~T~Z\W\?sU â V ’^Xx-A + <i\XWOv,
ÇC·;
INFORMATION FOR SEQ ID NO: 158?
id) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A; LENGTH: 993 bass pan's (Dj TYPE: nucleic acid (C; STRANDEDNEES; single !D: TOPOLOGY; linear ill: MOLECULE TYPE; other nucleic aciss (A? DESCRIPTION: /best ~ *DNA {synthetic)'· ixi! SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 158;
A 1 J. ZiZSV x.
GCTCTATAAT GATCGATGÃA. ATTATACATC
ACTTAAAGAG ACCACCTGGA
CCTTTGCTGG ACCCGAACÀA CCTCAATGAC
GAAGACGTCT
CTATCCTGAT GGATCGAAAC
CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTÇGTA AGGGOTGTCA AGAACTTAGA AAATGCATCA
ISO
GGTATTGAGG
240
CAATTCTTCG TAATCTCCAA CCATGTCTGC f> .** X .»*· ** y* -J-x z* -X
V <AA >1 vw. i \3X. V. A\- VavatUw ·<ν w.
TCTCGACATC CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGQCAAO
300
AATTCCGGGA. AAAACTQACG
TTCTATCTGG TTACCCTTCA GCAAGCGCAQ ISO
TCCCCGGGTG AACCSTCTGG TCCAATCTCT 420
TCTCÀTAÀAT CTCCAAACA'T GTCTATGGCC
480
GAACAACAGT ACGTAGAGGG CGGTGGAGGC
ACTATCAACC CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA
CCTGCCCTGC AGCCCA.CCCÀ GGGTGCCATG
CCGQCQTTCG CCTCTGCTTT GCAGCGCCGG GCAGGASGGG TCCTGGTTGC TAGQcg^ç^g 54 C ' '
CAGAGCTTCC TGGAGGTGTC GTACCGCOT -CTACGCQACC TTGCGCAGCC CGGCGGCGGC 600
TCTGACATGQ CTACACCATT AGGCCCTGCC AGCTCCCTQC
50
CCCAGAGCTT CCTGCTCAAG
68
TOTCTAuaU',. AAGTGAGGAA GATCCAGGGC GATGGCGCAG CGCTCCAGGA GAAGCTGTG <*>;» x.y*· X ,*».· **« * ·>**-X T. .»» v
X» sxXx-Λχ* ΛΛΛ'χ. * -2 ÃsáXxXvA g Q x**’·'Αλ<.λχ#\λ\ ιλα^μχαχ kxV^X xsAsj^TC
84C *>: * * 6» >: <**w*nm«·*
•.Arwx-.s « \. \rtix *λ 1 x J.
9SG
CCCGAGTTGG GTCCCACCTT
988 atctggcagc agatqgaaga
CCCCGAGGAG CTGGTGOTGC
CTGCCGCAGC CAGGCCETGC <**.***<7 .'**GO^C^
GGACACACTG CAGOTGGACG
ÀCTGGGATAA TAA
TO2GACACTC TCTGGGCAT:
AGCTGGCAGG CTGCTTGAG!
AGGCGCTGGA AGGGATATCÍ
TCGCCGAUTT TGCCACCACÍ
IfiFORMATCGK PDF. £EQ. χρ κ0; χ.5§; (Í; SEQUENCE CHARACTERXETXCS;
ÍA; LENGTH: 983 base pairs (B)· TYPE: nucleic acid >C) STRANDEDNES5; single (D; TOPOLOGY: linear iiij MOuECxíiíi, TYPE: other nucleic acid (A.) DESCRIPTION: /desc ® *WA laynthsticj *
i.xi> SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID KO: 158:
Αχ^ιΤλΑΤΤ GCTCTATAAT GÀTCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCACCTQCA CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAO GAAGACSTCT CTATCCTGAT GGATCGAAAC vTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA AGAÀCTTAGA AAATGCATCA ggtattgagg caattottcg taatctccaa gcatgtctgc cctctgccac ggccgcaccc ^v.^rtCATC CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAO AATTCCGGGA AAAACTGACG TTCTATOTCG TTACCCTTGA GCAAGCGCAG GAACAACAGT ACGTAGAGGG CGGTGGAGGC
9
TCCCCGGGTG AÂCCGTCTGG TCCAATCTOT ACTATCAACD CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA
42:6: :: / :: ........ ........:: .................... ................
TCCQATAAAT CTCCAAACAT GTCTACCCAG *8S
CAGCGCCGGQ CAGGAGGGGT CCTQGTTGGT s-ic
TACCGCGTTC TACGCCACCT TGCGCAGCCC sec
GGCCCTGCCA GCTDCOTGCC CCAGAGCTTC
662 ............
ATCCAGGGCG ATGGCGCAGC GCTCCAGGAG 72C
CCCGAGGAGC TGGTGCTGCT CGQACACTCT 80.........
TSCCCCAGCC AGGCCCTGCA GCTGGCAGGC S40
CTdACCAGG GGCTUCTCCA GGCCCTGGAA
.....Os------------------------------------------------ :: ::“O0:........0:000<:;:
GACACACTGC AGCTGGACGT CGCCGÀCTIT
966
CTGGGAATGG CCCCTGCCCT GCAGCCCTAA »9.0
GGTGCCATCC CGGCCTICGI CTOTGOT:??
AGCCATCTGC AGAGCTTCGT GGAGGTGTCG GGCGGCGGCT CTGACATGGQ TACACCATTA CTGCTCAAGT CTTTAGAGCÀ AGTGAGGAAG AAGCTGTGTC CCACCTACAA GCTGTGCGAC CTGGGCATCG CGTGGGCTCC: CCTGAGCTCG TGCTTGAGCC AAGTCCATAG CGGCCmTC GGGATATCCC dGAGTTGGG TOCGACCTTG ux-vACuACuA TUTGGCAGQA GATGGAAGAA TAA (2; INFORMATION FOR SSQ ID NO; 160;
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS·.
(Ai LENGTH: 1027 base pairs (5) TYPE; nucleic acid (C.Í STRANDEDNESS.: single (D)· TOPOLOGY; linear
Lix) MOLECULE TYRE: ether nucleic acid (A; DESCRIPTION; Zdesc = ’DMA (synthe (Xi) SEQUENCE DESCRIPTIONr SEQ ID ND; 160.ATGGCTACAC CATTGGGCCC TGCCAGCTCC CTGCCUCAGA GCTTCCTGCT CAAGTCTTTA
GAGCAAGTGA GGAAGATCCA GGGCGATGGC GCAGCGCTCC AGGAGAAGCT GTGTGCCACC
70
TAúAAGCTvl GCCà/CCCGA GGAGCTGGTG
185
CTGCTCGGAC ACTCTCTGGG CATTCCCTGG
GCTCCCCTÜ2. GCTCCTCCCC CAGCCAGGCC CTGCA3CTGG
2.0
u.a.GQCTGCT7 GAGCCAACTC
CATAGCGGCC TTTTCCTCTA CCAGGGGCTC
300
TTGGGTCCCA CCTTGGACAC ACTGCAGCTG
36C
CÂGCAGATGG AASAACTGGG AATGGCCCCT í ............
GCCTTCGCCT CTGCTTTCCA GCGCCGGGCA 480
CTGCAGGCCG TGGAAGGGAT ATCCCCCGAG
GACGTCQCCG ACTTTGCGAC CACCATCTGG
GCCCTGCAGC CCACCCAGGG TGCCATGCCG
GGAGGGGTCC TGGTTGCTAG CCATCTGCAG
AGCCTCCTGG AGGTGTCGTA CCGCGTTCTA
540
GACATGGCTA CACCATTGGG CCCTGCCAGC ÓSÜ.......
TTAGAGCAAG TGAGGAAGAT CCAGGGCGAT 66G
ACCTAGÀAGC TGTGCCACCC CGAGGAGCTG
73C
TGGGCTCCCO TGAGCTCCTG CCCCAGCCAG
780............
ÇTCCATAGCG GCCTTTTCCT CTACCAGGGG
840
GAGTTGGGTC CCACCTTGGA CACACTGCAG
90C
QGCCACCTTG CGCAGCCCGG CGGCGGCTCT
TCCCTGCCCC AGAGCTTCCT GCTCAAGTCT
GGCGCAGGGC TCCAGGAGAA GCTGTGTGCC
GTGCTGGTCG GACACTCTUT GGGCATCCCC
GCCCTGCAGC TGGCAGGCTG CTTGAGCCAA
CTCCTGCAGG CCCTGGAAGG GATATCCGCC
CTGGACGTCG CCGACTTTGC CACCACCATC
TGGCAGCAGA TGGAAGAACT GGGAATGÇCC CCTGCCCTGC AGCCCACCCA
968
TAGCQATCTG CAGAGCTTUC TGGAGGTGTu GTACCGUGTT CTACGCCACC
1034
TCCTGGTTGC
TTGCGCAGCC
CTGATAA
1027 (2) INFOHMATiraS POR SEQ τ$ J?O: 1δΣ; (1) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
ÍA> LENGTH; 155 arci.nu acids (2) TYPE; asúno acid
371 íC; STRANDEDNE51 single (D) TOPOLOGY: linear in; MOLECULE TYPE: prntain 'xi· SEQUENCE DESCRIPTION'. SEQ ID NO: 1S1:
Set' Pro Ala Pre- Pro Aia Qys Asp Leu Arg 10 Vai Leu Ser Lys Leu 15 •ueu
Arg. Asp Ser Hl 3 20 Vai Jjeu Ria Set- Arg 25 Leu Ser Gin Uys Pro 30 Glu Vai
His Pro Leu Pre- Thr Pro Vai Leu 4 0 Le« Pro Ala Vai Asp 45 Phe Ser Leu
Giy Glu 50 Trp Lys Tax Gin Met 55 Giu Glu Thr Lys Ala 60 Gin Asp Ils Leu
Giy 65 Ala Vai Thr Leu Leu uc Leu Giu Gly Vai Men 75 Ala Ala Arg Qiy Gin 80
Leu Gly Pre Thr Cys 85 Leu Ser Ser Leu Leu RD Gly Gin Leu Ser Gly 95 Gin
Vai Arg Leu Leu 100 Leu Gly Ala Leu Gin 105 Ser Leu Leu Gly Thr 110 Gin Leu
Pro Pro Gin 115 Gly Arg Tax Thr Ala 120 His Lys Asp Pro Ran Xyh lie Phe
Ser 130 Phe Gin His Leu Leu 135 Arg Gly Lys Vai Arg 14 0 Phe Leu Met Le>_
Vai 14E Gly Gly Ser Thr Leu 150 Cys Vai Arg Phe 155
(2) INFORMATION FOR SEQ ID ND: 152;
iii SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 309 amine acids (B; TYPE: amrno acid {0) STRANDEDNESS: single
ÍD.3 TOPOLOGY: linear iii) MOLECULE TYPE: protein (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 162;
Ser Pr& Ale Pre Pro Ala Cys Asp Leu Arg V&I
Leu Ear Lys Leu Leu bis Val
Hrs Pro Leu Pre Thr
Gly Glu Trp Lys Thr
SO
Gly Ala Val Thr Leu
6.5
Leu Gly Pro Thr Cys 85
Val Arg Leu Leu Leu
100
Prr Pro Gin Gly Arg
115
Leu Ser Phe Gin His
150
Val Gly Gly Ser Thr
S
Ser Pro Ala pro Pro
165
Arg Asp Ser His Val
180
His Pro Leu Pro Thr
5
Gly Glu Trp Lys Thr 210
Gly Ala Val Thr Leu
225
Leu Gly Pro Thr Cys
245
Val Arg Leu Leu Leu
260
Arg Thr Thr Ala Hrs
275
Leu His Ser Arg Leu Sex
Pro Val Leu Leu Pro Ala
Gin Met Giu Glu Thr Lys 8S
Leu Leu Giu Gly Val Met
75
Leu Ser Ser Leu Leu Gly
Gj.y Ara Leu Gin Ser Leu :1QS
Thr Thr Ala His Lys Asp 120
Leu Leu Arg Gly Lys Vai .135
Leu Cys Val Arg Glu Phe uSC IS5
Ala Cys Asp Leu Arg Val
170
Leu His Ser Arg Leu Ser
185
Pro Val Leu Leu Pro Ala
200
Gin Met Glu Glu Thr Lys 215
Leu Leu Giu Gly Val Met
235
Leu Ser Ser Leu Leu Gly
25Q
Gly Ala Leu Gin Ser Leu
............................ a :6:0 ......
Lys Asp Pro Asn Ala lie
280
Gin Cys Pro Glu Val
V<a„ Asp Pne Sex' Leu
Ala Gin Asp He Leu
Ale A*a Arg Gay Glx;
Gin Leu Ser Gly sir
Leu Gly Thr Gin Leu
Pro Asn Ala He Phe .128
Arg Phe Leu Met Leu 14 0
Gly Gly Aen Met Ala
160
Leu Ser Lys Leu Leu
175
Gin Cys Pro Glu Val
190
Val Asp Rhe Ser Leu
205
Ala Gin Asp He Leu
220
Ala Ala Arg Gly Qin
248
Gin Leu Ser Gly Gin
255
Leu Gly Thr Gin Gly
270
Phe Leu Ser Phe Gin
285
373 ri~s x>eu Ls:: Arg Giy Lys: Vai Arg Pne Leu Met Leu Val Gly Gly Ser 29f 2»5 -'OC
Thr Leu Cys Val Arg
Í2; ZNFORMATIUN FOR SEQ XD NO: 162:
f s > CíJ^i.TTÍT^Y***' Γ* ti * Ώ ft Τ Γ*>τ \ . .·, Λ . i‘. . . Χ^ ΨΧ^ς” ♦ ,U>wv. S* Xvitítew^jT^v· Arax«^x\\X-k«> .4* .*>· Xw.ua*. » .
ÍAs LENGTH; 312 assino aoiòs (Η) ΤΥΡΕ-, assine arid
X· STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear iii: MOLECULE TYPE; pretexts txis SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ XD NO: 163:
Ser *1 Pro Ala 5ro Pro 5 A^a Cys Asp Leu Arg 10 Val Leu Ser Lye Leu. IS Leu
Arg Asp Ser His Vai. Leu His Ser Arg Leu Ser Glr Cys Pro Glu Val
ge 36
Prg Leu Pro Thl Pro Val Leu Leu Pro Ala Val Asp Phe Ser Leu
35 40 45
Gxy Glu Trp Lys .....AaXA, Gin Met Glu Glu Thr Lys Ala Gin Arp lie Leu
56 55 66
Gly Ala Val Thr Lêu Leu Leu Glu Gly Val Met Ala Ala Arg Giy Gin
65 70 75 SO
Gly Pin ♦mi-r Ά Awvt· Cys Leu Ser Ser Leu Leu Gly Gin Leu Ser Gly Gin
85 96 95
Val Arg Leu Leu Leu Gly Ala Leu Gin Ser Leu Leu uly Thr Gin Leu
106 105 .110
Pre Pre Gin Gly Arg Thr Thr Ala His Lys Asp Pro Asn Ala Ila Phe
115 120 ά> 2 a
Leu Ser Phe G-.n His Leu Arg Gly Lys Val Arg Phe Met Leu
130 135 140
Val Gly Gly Ser Thr ueu Cys Val Arg Glu Phe Gly Asn Met Ala Ser
145 .150 155 ISO
ho Ala Pro Pro Ala Cys Asp Arg Val Leu Ser Lys Leu Leu Arg
156 l?o
374
Asp Set Hiss Vai Leu His Ser Arg Leu Ser Gin Cys Pro Glu Vai Hus ISC· IS .: IK;
Γ& Leu Pre Thr Pre.· Vai Leu Leu Pro Ala Vai Asp Ph® Ser Leu Glv 195 209 * pgs ihi Trp uys Tnr Gin Met Glu Glu Thr Lys Ale Gin Asp lie Leu Gly ^e·..: Aja*., Vaj. het Ax.a .Ala Am Glv Qin Lev 221 239 .238 “ *
Gly Pre Thr Cys Leu Ser Ser Leu Leu Gly Qin Leu Ser Glv Gin γ:&2
24S .25:0.” pgg
Arg ueu Leu ueu Gly Ate Leu Gin Ser Leu Leu Glv Thr Gin Leu p~-r.
269 2Ô5?7C
Pro Gin Gly Arg Thr Thr Ala Hie Lys Asp Pre Asn Ala lie Phe Leu 275 280ips
Ser .“‘hi: Qm ace Leu Leu Arg Gly Lys Vai Arp Ph® Leu Met Leu Va' 2$C 295390
Gly Guy Ser: Thr Leu Cys V&l Arg
30?310
Í1) INFORMATION FOR SEO ID NO; 164:
ÍÍÍ SEQUENCE CHARACTERISTICSc {A; LENGTH’. 313 amino acids
OB) TYPE.·, aninc acid
ÍC· STRANDEDNES* : single
CDS TOPOLOGY: linear (m; MGLECVLE TYPE: protein
IKi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 154:
Ser Pre Ala Pm Pre Ala Cys Asp Leu Arg Vai Leu Ser Lys Leu Leu * ^ ......................ΊΌ ........t et
Arg Asp Ser His Vai Leu His Ser Arg Leu Ser Gin Cys Pro Giava^ 20 2530
Hus Pro ueu Pro Thr Pro Vai Leu Leu Pro Ala Vai Asp Phe Ser Leu 3S 40
Gly Glu Trp Lys Thr Gin Met Glu Glu Thr Lys Ala Gin Asp Ila Leu 55 fie·
375
Gly Ala Val Thr Leu Leu Leu Glu Gly Val Met. Ala Ala Arg aiy Gin
S5 72 7580
Leu Gly Pro Thr Cys Leu Ser Sez Dec Leu Gly Gin Leu Ser GlyGin
SC91
Vai Arg Leu Leu Leu Gly Ala Leu Gin Sex Leu Leu Gly Thr Gin Leu 105 105115
Pre Pro Gin Gly Arg Thr Thr Ala Hrs Lys Asp Pre? Asn Ala lie Phe 1X5 125125
Leu Ser Phe Gin His Leu Leu Arg Giy Lys Val Arg phe Leu Met Leu 1R 13514 Õ
Val Gly Gly Ser Thr Leu Cys Val Arg Glu Phe Gly Gly Asn MetAla
145 152 155160
Ser Pro Ala Pre· Pro Ala Cys Asp Leu Arg Vai Leu Ser Lys LeuLeu
185 170-gr .«Arg Asp Ser His Val Leu Bis Ser Arg Leu Ser Gin Cys Pro Glu Val 180 185ISO
His Pro Leu Pro Thr Pro Val Leu Leu Pro Ala Val Asp Phe «Ser Leu 155 .200·:205
Gly Qlu Trp Lys Thr Gin Met Glu Glu Thr Lys Ala Gin Asp lie Leu 210 215220 GiX AÀ® ...V*.l Thr Leu Leu Leu Glu Gly Val Met Ala Ala Arg GlyGin
225 230 155 '
Leu Gly Pro Thr Cys Leu Ser Ser Leu Leu Gly Gin Leu Ser GlyGin
245 250255
Val Arg Leu Let Leu Gly Ala Leu Gin Ser· Leu Leu Gly Thr Gin Leu 250 285no
Pro Pre Gin Gly Arg Thr Thr Ala His Lys Asp Pro Asn Ala lie Phe 275: 285285
Leu Ser Phe Gin His Lau Leu Arg Gly Lys Val Ara Phe Leu Mat Leu 290 295300
Val Gly Gly sex Thr Leu Cys Val Arg
...MS .... .............310...... ...... ........
ill· INFORMATION FOR SEQ ID NO: 185t ii) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
iA) LENGTH: 318 amino acids (5} TYPE·, anino acid ίχι· SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 165:
Ser
Arg
His ss :)slO:
Vai
Leu
Vai
...... .. 14 5
Asn
Lys
Phe
Asp
228
Pre- Ala Pre Pre Ala
Asn Ser Mis Vai Leu
Pre Leu Pre Thr Prn
Glu Trp Lys Tur Gin
Ara Vai Thr Leu Leu
Gly Pm Thr Uys Leu
S:5
Arg Leu ueu uet Gay
100
Pro Gin Gly Arg Thr
Ser Phe Gin His Leu
130
Gly Gly Ser Thr Leu
150
Mat Ala Ser Pro Ala
165
Leu Leu Arg .Asp Ser
180
Glu Vai His Fro Leu 195
Ser Leu Gly Glu Trp lie Leu Gly Ala Vai
230
Ser Arg ueu Ser Ti S’.
Var Leu Leu Pro Ala 40
Met Glu Glu Thr Lys 55
Leu Glu Gly Vai Met ge.
Ser Ser Leu Leu Gly
Ala Leu Gin. Ser Leu
105
Thr Ala Hi® Lys Asp to o
Leu Arg Gly Lys Vai
1.35
Uys V&l Arg Glu Phe
155
Pro Pro Ala Cys Asp
170
His Vai Leu His Ser
185
Pro Thr Pro Vai Leu
200
Lys Thr Gin Men Glu
215
Thr Leu Leu Leu Glu
235
CVs Asp Leu Arg Vai
Leu Ser Lys Leu Leu >í SÍ
Gin Cys Pre- Glu Vai
Vai Asp Phe Ser Leu 45
Ala Gin Asp lie Leu ·,6δ
Ala Ala Arg Gly Gin
Gin Leu Ser Gly Gin
Leu Gly Thr Gin Leu
110
Pro Asn Ala lie- Phe
125
Arg Phe Leu Met Leu
140
Gly Gly Asn Gly Gly
160
Leu Arg Vai Leu Ser
175
Arg Leu Ser Gin Cys ISO
Leu Pre Ala Vai Asp 2Φ5
Glu Thr Lys Ala Gin
220
Gly Vai Met Ala Ala
240
Arg Gly Gun ueu Giy Pro Tpr Cys Leu Ser Ser Leu Leu Gly .Gin Let *ί λ s' ·χ r x ** z'*-‘.......... 3·.^. 2&>
Ser or’y Gx.n Ve. Arg Leu uau «tu Guy Aua Leu Gin Ser Leu Leu Glv
2« aes;-t
Thr Sir. Itt Tro M-o sir. sly teg Thr Thr Ala ax» Xys Asp Pro Asn
275ISO
Ala Xie Phe Leu Ser Phe Gin His Leu Leu Arg Gly Lys Val Arc Phe
2S0 39Í3oc
Leu Met Leu Val Gly Guy Ser Thr Dea Cys Val Arc?
305 310 ·; t« ·*· ,·*· ,* · .» >.·
INFORMATION FOR SEQ ID ND; lob;
{i; SEQUENCE CHARACTERISTICS - (A) LENGTH: 302 aausc; acids <S; TYPE; «nuno acid
ÍC; STRANDEDNESS; single (D) TOPOLOGY; linear ¢11 j MOLECULE TYPE; protein
Figure BRPI9610977A2_D0171
SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 166.;
Asn cys Ser He Met Asp . λαΙ.Ο He He 10 His Leu Lys Arg 15
Pre Ala Pro 20 Leu Asp Pre Asn Asn 2S Leu As i: Asp Giu Asp 30 Val iSer
He Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg 40 Leu Pro Asn Leu Giu 45 Ser Phe Val
Arg Ala SO Val Lys Asn Leu Giu . . £-. ,Ί^. . Asn A„« Ser Gly lie SO Giu Ala He Leu
Arg 65 ώ, Crx Leu Gin Pro cys 70 Leu Pro Ser Ala Thr 75 Ala Ala Pro Ser Arg 80
His Pro He He He 85 Lys Ala Gly Asp Trp 90 Gin Giu Phe Arg Giu 95 Lys
Xj&L Phe Tyr ύ r< n dx M X .“ Leu Val Thr Leu Giu 105 Gin Ala Gin Giu Gin 110 Gin Tvr
Val Giu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Guy Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
Se
Aaa Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser
365
Gars Leu Has Ser Sly Leu pne seu tyr is^n uty
180
Giy Pro Thr Leu
T>^-r *‘J Λ. ,·ή^ * χλλ sv A55f A .4.- . :<y -Λ.-Χ3 •á Xw //. .
Fro Thr Gin Gly
Ala Gly Gly Val
Ser Tyr Arc Val
260 way &erGan Set
Gin Gly Asp Gly
W. . . V>. . . . Jvi. 'Λή Λ .
Asp· Thr ueu
Ata Leu Git
185
Gin Leu Asp
Glr: Met Glu
Ala Met Pro
G
Leu Vai Aaa
245
Leu Arg His
Pne Leu Leu
Ala Ala Leu «U Gly
Aiks Phe Au a
Ser His Leu
2<vf$ peu Ala Gan
265
Lys Ser Leu
286
Sin Glu Lye
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Val Ala Asp n s;
Met Ala Pre
Ser Ala Phe
235
Gin Ser Phe
Pro Ser Gly
Ga U' u?an Vaa
28S
Leu Cys Ala
300
Pre Gau Leu
190
Rhe Ala Thr
Ala Leu Gin
Gin Arg Arg
24:0
Leu Giu Val
255
Gly Ser Gly
Arg Lys lie /ί'£>.·ΛΧ· (2: INFORMATION FDR SEQ ID NO: 167:
(i· SEQUENCE CHARACTERISTICS:
ÍA) LENGTH: 217 assino acids {EJ TYPE; asu.no acid (C) STRANDEDNESS: single (0? TOPOLOGY: Imear ~ di; MOLECULE TYPE; protein
UU SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 16:
Asn Oys Ser ale Met He Asp Glu He He His His Leu Lys Arg Pro 16 i£
Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Val Sa
2Q ........^'C........................
379
Arg Ala
Arg Asn £5
Hrs Pro .lx
Vai Qlu
Thr Cl®
0
Met A is
145
Sex' Leu
Leu Gin
Tyr Gin
Pro Thr
210
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225 *r<\ ~ f i „
Gly Gly
Iff Arg
Ser Gin
290
Gly Asp
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Phe Tyr
100
Qty Gj.y
125
Asn Pro
Gly L«
Vai Leu
260
Vai Leu
275
Ser Phe &*y Ale
Met Asp
Va1 Lys
Leu Ala
ISO
Gly Leu s»
Leu Asp
Gin Gin
Gly Ala
Arg Asr;
Asn Leu
Pre Cys
He Lys
Leu Vs1
Gly Gly
Ser Pro
Leu Cys
150
Pro Trp
165
Gly Cys
Leu Gin
Thr Leu
Met Glu
230
Met Pro
245
Vai Ala
Arg His ueu Leu
A<1 a Leu
310
G lu Asr:
Leu Pro
A:.a G2y
Thr Leu
Ser Pro ;vÁÍ( 0/
Pro Ser
His Pro
Ala Pro
Leu Ser
Ala Leu
200
Gin Leu
Glu Leu
Ala Phe
Ser His
Leu Ala
280
Lys Sex
295
Gin Glu
Leu Pro
Ala Ser
Ser Ala
Asp Trp
Gau Qin
1:06
Gly Glu
Lys Glu
Gj.u Glu
Leu Ser
170
Gin Leu
185
Gjlu Gly
Asp Vai
Gly Met
Ala Ser
250
Leu Qin
265
Gin Pro
Leu Glu
Lys Leu
Asn Leu
Guy Ire
Thr Ala Gan Gau Ai« Gin Pro Ser Ser His
140
Leu Vai
155
Ser Cys
His Ser He Ser Ala Asp
220
Ala Pro
235
Ala Phe
Ser Phe
Ser Gly
Gin Vai
300
Cys Ala
315
Oj<« Ser
Glu LI·Ale Fro
Phe Arc
Glu Gin
Gly Pro
12.5
Lys Sez
Pro Ser **♦·> , , r M, v ^-h.y
19Q
Pro Glu
205
Phe Ala
A.xa Leu
Gin Arg
Leu Glu
7Ti
Gly Ser '285
Arg Lys
Thr
Pne Va..
le net
Ser Arc
SC
Glu Lys
Ils Ser
Pro Asn
Gly His
160
Gin Ala
Phe Leu
Leu Gly <τ^
.....Α*αλ'
Gin Pro 240
Arg Ala
255
Val Ser
Gly Gly
He Gin
SO *M?,7I0N FC·?. SEQ ID NG: i6c;
SF‘ 5 'EM:? E CHARACTERISTICS ·.
(a.: LESSTH,.· 332 amino acxás ;E: TYPE·, amino acid (C; STRANDEENES5: single
CO; TOPOLOGY; linear
MOLECULE TYPE; protean :xil SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ IE NO: ISS:
Asn Cys Ser He Met He Asp Glu
He He Hrs
His Leu Lys Arg Pm t-'re Ale Pro Leu Leu Asp lie Leu Met Asp Arg Asn
Arg Ala Val Lys Asn Leu 5(;
Arg Asn Leu Qin ProCys
6570 hrs Pro lie He lieLys
................85
Leu Thr Phe Tyr LeuVal
IOC
Val Glu Gly Gly g^y
Pro Asn Asn Leu Asn
Leu Arg Leu Pre Asn 4 δ
Gru Asn Ala Ser Gly
S5
Leu Pro Ser Ala Thr .................. 75
Ala Gly Asp Trp Gin
Thr Leu Glu Gin Ala
105
Ser Pro Gly Gly Gly
120
Asp Glu Asp Val Ser
Leu Giu Ser Phe Val
He Giu Ala He Leu
Ala Ala Pro Ser Arg' 80
Glu Ph® Arg Glu Lys
Gin Glu Gin Gl.n Tyr HO
Ser Gly Gly Gly Ser
125
Asn Met Ala Pro Glu
130
Val Ala Asp Phe Ale
145........
Met Ala Pro Ala Leu
165
Ser Ala Phe Gin Arg
ISO
Gin Ser Phe Leu Glu
195
Leu Gly Pro Thr Leu Asp 135
Thr Thr He Trp Gin Gin
150 lag
Gin Pro Thr Gin Gly Ala
170
Arg Ala Gly Gly Val Leu
Val Ser Tyr Arg Val Leu
200
Thr Leu Gin Leu Asp
140
Met Glu Glu Leu Gly
160
Met Pro Ala Phe Ala
175
Val Ala Ser His Leu
ISO
Arg His ;jsu Ala Gin,
205
Phe Leu
Leu
Leu.
Ser
Leu ,ne
AJ.si >ys
L>ei
Leu
Lfeu
Ser
Lt?i
Se.
4x£&U
285 le
Figure BRPI9610977A2_D0172
SEQ XD NO; 169.·
As:
(D;
mole:
Figure BRPI9610977A2_D0173
u-eu
LENGTH: 327 ajoino acids TYPE: anino acid STHAES3EXJNESS; single TOPOLOGY; linear
DE TYPE.· protein descr:
“ONSe:
Me
Val
Leu i-le
Phe
Xh lie
G1 lie re »15
Leu
Lex
Asp
Fro
Asn
Lev
Asp
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Asp
Arg
Leu
JuX&U fcro ’Leu
G.
G.
Se.
lie
Leu
Ser
A^a
Ala
Ala
Ila
Ala
Glu
Ala
105
Asp
Ser
Pro
Val
Phe ner
Phe Arg Glu «re.
Ser
Val
Leu
Met ilil Al & Pro Glu Gly
Ala Asn Pne Aia 15 S ..........
<A Pre Ala Leu GLr; Pre
Phe Gin Arg 195 Arg Ala
S«sr Phe 212 Leu G»« Vai Ser
Per 'JI Guy Gly Ser Gxy Gly 23 v
Gin Vai Arg Lys lie 245 Gin
Ala Thr Ty* 260 Lys Let
His Ser Leu Gly lie ^3^·»*χ
Ala Leu 290 Ax.a &Ây
Leu γ ns. »* w -w Tyr Gin Gly Leu 11.2..
ai . wk'. .%¼ - - . ΛίΛ'.Λ Qk' A .^k* Xs
Tnr l.U Asx* Fu. Ser Pro
130
Ser ' ' Sf: -J f'; ' «> A < XffXkt Pro Ser x X X Pre lie Sex·
Lr & Ser Lys .. \S.w.'M·. Ser Hrs x.4: Ο Lys Ser Pro Ait
Pro Thr Leu Asp The Leu 156 Gin Asp Vai
Xie Try Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Me::
1^0 *
Th-' Gin Gly 185 Ala Met Phe 190 Ala
Gly Gly Vai Leu Vai Ala 205 Ha s Leu <xXo
,*!yv Arg Vai Leu Arc His 220 Leu Ala Pro
Ssr GLr. Ser Phe Leu 235 Leu Lys Ser Leu Sxu 240
Gly Asp Gly Ala 250 Ala Leu τ\ Glu Lys 255 Xa>^?\Ú
Cys His Pro 2S5 Glu Glu Leu val Leu ÀÍ: / v? Lev Gly
Trp Ala 280 Pre Leu Ser Ser Cys 285 Pro Ser xy JLJi
Cys Leu Ser Glix Leu His Ser Gxy V&u Rhe
2S5 3 0,o
QXXa A,l& I^&u Gjlu G.ly XXis S<s.r
3X5 il) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 170:
Ú} SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) XiENGTH: 322 asarnc acids ÍS) TYPE: andnc acid (Cj STRANDEDNESS·. single ÍD) TOPOLOGY: linear iii· MOLECULE TYPE: protein
ÍXií SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 170:
383
As
Met
His
Asn
Leu
Asn Asp
Ser
Arc
His eu
Met
Aar.
ueu
Asn ueu
-¾
Gl
Se
Ph®
Asn
Pre
Pre
Ser
Ala
AXh
Ala
Arg
Pre
Asp
Phe
Arg
Figure BRPI9610977A2_D0174
Leu
Phe
Leu
Va.
Th:
Le
100
Ala
OS
Gru
Gin
110
Gist
Ser
Pro
Gly
Gly
Ser
Gly
125
Asn
Met
Ο
Ala
Met
Ala
135
Leu
Gin
Thr
Gin
0
Gly
Ala
Met
Pro
Ala
Ph®
Ala
Se
Ala
Phe
ISO
Gin
Arg
Ala
Vai ueu
Vai
Ara
160
Ser
Leu
Ser
Phe
Va
Ser
Vai
His
Leu
Ala
Glr
Prc<
ISO
Se.
Gly
Ser
Gl:
185
Ser
Phe
ISO
Leu tys
Ser
Figure BRPI9610977A2_D0175
i/eu
IS 5
Vai
Arg
Lys
200 iiS
Asp
Gly
Ala
Ala
Leu
Vai
Cys set
Glu
210
Lys
Leu
Gly
Gin
Cys
His
245
Ala
Ser
Leu
Leu
Gly
Lys
Leu
Hrs
Pro
Glu
Gru
Leu lie
Ala
Gly
250
Cys
Ala
Pro
Ser
Ser
240 ueu
Ser
Gin
Leu
255
His
Gl)
Leu
Phe
260
Leu
U
26S
Leu
Gin
Leu
Gl’.
Gly lie
Leu
Gly
Pro
Leu
280
Asp
Leu
Gl.
Leu
285
Asp
Vai
Ala
384
Asp Pne Ala Thr Thr lie Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly
OS, w *· V* '·>' lfc> Λ* Μ,· V> V V,·
INFORMATION FOR SEQ ID NO: 171:
id; SEQUENCE CHARACTERISTICSt {Aj LENGTH: 317 amino acids (S> TYPE: amino acid
ÍC> STRANDEDNESE t single
ÍD- TOPOLOGY: linear iiii MOLECULE TYPE·. protein (xi} SEQUENCE DESCRIPTION: SEO- ED ND; .17
• Asn Pro Cys Axa Ger Pro Lêii 20 Met S Leu He Asp
He Leu Mat 3 S Asp Arg Asn
Arg Ale 50 Val Lys Asn Leu
»\rg 65 Asn Leu Gin Pro Cys 70
His Pre· lie He lie 85 Lys
• Thr Phe Tyr ISO Leu Val
Vai Glu Giy 115 Gly Gly Gly
Thr ru Ί 3 ft Ά- «Λ' V- Asn Pro Ser Pro
Met 145 Ala Met Pro Ala 150
Phe Ala Ser Phe 165 Gin
His Leu Gin Ser 180 Phe Leu
Asp Glu Ila He His Hrs Leu Lys Arg Pro
Fro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Val Ser 25sc
Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe Val M45
Giu Asn Αψ& Ser Gly He Glu Ala He Leu 556Q
Leu Pro Rar Ara Thr Ala Ala Pre Ser· Arg
7580
Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Lys
Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Qin Gin Tyr 105HO
Ser Pro Gly Glu Pro $er Gly Pm He Ser *25 125.................
Pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro Asn 135140
Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala
155Igo
Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser 170175
G«u Vau Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu
190
385
Ara Gzi’; Pro sax' Gay G*y —Si' Gly Gty Sex· Gir. Ser Poe Lou L®u LY-’?
191 2002 35
Ser. Leu Glu Gin Val Arg Lys He Gin Gly Asp Gly Ala Aa Leu Gin '2X0 215......... 22c
Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His pre Glu Glu Leu Val 225 230 ’235
Leu Leu Gly Hxs Ser Leu Gly lie Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Qys 245 250255
Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser
350 26527Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly Π® Ser 275 2®02SS
Pro Glu Leu Gly Pre· Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Aar Val Ala Asp 250 295300
Phe Ala Thr Thr lie Trp Gin Gin Mat Glu Glu Leu Gly
395 310315
Ϊ2; INFORMATION FOR SEQ ID NO; 172;
(i; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A) LENGTH: 302 axaino acids {Bi TYPE; axainc arid (Ci STRANDEDNESS; single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: protein <x.i) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 172;
Asn Bill Cys Ser lie Met: 5 He Asp Glu He He 10 Mis His Leu Lys Arg Pro
Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Val Ser
20 **ȣ 30
lie Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu. Ser Phe Val
35 40 45
Arg Ala Val Lys As.n Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Glu Ala He Leu
50 55 60
Arg Asn Leu Pro cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg
§5 70 75 80
386
Pre Ils Lie Ils Lye Ala Gly ??................................ 111-1 ..................'
Leu Th:.·' Pte Tyt Lea Val Thr Leu IOC.........
Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro * M ¢, <A ΛΧ ft
Asn Met Ara Tnx Gin Gly Aaa. Met 1:3 2 13 £
Art Ax g ax a G.».y Guy Vat ueu Vax .............. ........' :|g|L............
Glu Val Sex' Tyr Arc Val I<eu Arg
Ser Guy Gly Ser Gin Ser Phe Leu
182
Lys Xie Gin Gly Asp Gly Ala Ala
195202
Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu
2101X5
Gly lie Pre Trp Ala pro Leu Ser 235230
Leu Ala Gly cys Leu Ser Gin Leu
245
Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly
.......262
Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val
27c 280
Gin Gin Met Glu Glu 250 Leu Gly Met 2 55
Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Lys SO §5
Gru Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr 195 2X0
Guy Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Glr.
S :: 11ÍE ' .....
Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Leu
LSI:1'60
Hxs Ar-a Gin r.m Ser G,xv Gly
HO27£
Leu Lys Ser Leu Glu Gin Val Arc 185
Leu Gin Glu Lys Leu Gys Ala Thr
205
Leu Val Leu Leu Gly His Ser Leu
0
Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin
235240
His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Glr252255 lid Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr 255270
Ala Asp Phe Ala Thr trr xie Trp
285
Ala Pro Ala Leu Gin Pre
300 <2; INFORMATION FOP, SEQ ID NO; 173:
11? SEQUENCE CHARACTERISTICS r (A; LENGTH: 317 amino acids
ÍH; TYPE: amino acid
ÍC) STRANDEDNESS; single
ÍD) TOPOLOGY; linear (in MOLECULE TYPE; protein
Gy'S
Xà& Asp GXu Xis XXí?! Hxs
h..Xk 4rf<?«ο x^ys Pi*
Pre Ala Pre· Leu Leu Asp Pro
Asa Asn Leu Asn Asp Glu Asp Vai Sex lie Leu Met Asp Arc Asn Leu
Arg Ale Ve.l Lys Asn Leu Giu.
S p; : 55
Arg Asn .u-eu Gin Pro Cys Leu
Hrs Pro He He n€ Lys Ala Gly
Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu
X v c '/as Glu Gly Giy Qiy QXy Ser Pro
Thr Ila Asn prcs e^r pro pro Ser
130 135
Met Ara Thr Gin Gly Ala Met Pro 145 ISC
Aurg Ala Gly Gly Vai Leu Vai Ala
165
Vai Ser Tyr Arg yai Leu Arg His
ISO
Uiy Guy Ser Gin Ser Phe Leu Leg
200 xus uiU Shy’ Asp Gly Ala Ala Leu 210 215
Lys Leu Cys His Pro giu g.1u Leu 22s 230 lie Pre- Trp Ala Pro Leu Sex Ser 24s aj.a uly Cys Leu Ser Gin Leu His
260
Arg «eu Pro Asn Leu Giu Ser Pne Vai 45
Asn Snr Giy lie Glu Ara He Leu SO > Ser Ala Tnr Ala Ala Pro Ser Arg <5 80
Asp Trp Gio Glu Ph® Arg Glu Lys 90 gg
G*.u Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tvr 105 no
Gly Glu Pro Ser Gly Pro Ih Ser 125
Lys Glu Ser His Lys Ser Pro Asn 14:0
Ala Phe Ala Ger Ala Phe Gin Arg 155 160
Ser Hrs Leu Gin Ser Phe Leu Giu
170 175
Leu Ala Glr> Pre Ser Gly GIv Ser 185 χ«Α
Lys Ser Leu Glu Gin Vai Arg Lvs 2 05
Qin Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr
2.20
Vai Leu Leu Gly His Ser Leu Gly 23s240
Cys Pro Gar Gin Ala Leu Gin Leu 250
Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Glv ·> « k
388
Lsu Leu Ala Leu .· Sb »L x< Sb — He Ser /·£<>. sb—U Gly Pro Tnr La 285
Asp Thr 4J*SU 0 m Leu Asp Vai ΑΙΑ: Asp Fh& Ala ThT· Thr lie Ire Gl.
290 295 *A Λ
* *»*<
Gin Met Gxu Gru Leu Gly Me:: *· V. Λ <L& Pro Als Leu Gin Pro
3C5 32 0
INFORMATION FOR SEC ID NG: 174·.
it; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(As LENGTH·. 3C2 amino acids (R) TYPE; amine acis (C) STRAKX3EDNESS: Single {»; TOPOLOGY: linear (ii· MOLECULE TYPE; protein
Figure BRPI9610977A2_D0176
(xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 174:
Asn Cys Ser He Met lie Asp Glu lie He 10 His His Leu Lys Arg * ÍÇ Pre
Pro Ala Pro . i<eu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp £lu Asp 30 Vai Ser
lie Leu Met 35 .Asp A^g Asr Leu Arg 40 Leu Fro Asn Leu Gj.u 45 Ser Phe Val
Arg Ala SQ Vai Lys Asn Leu Glu 55 Asn Ala Ser Giy He 68 GxlU Ala He Leu
Arg 65 Asn Leu Gin Pro Cys 70 Leu Pro ** *er Al 3 Thr Ala Ala Pro Ser Arg SO
His Pro lie lie He 85 Lys Ala Gly Asp Trp 90 Gin Gut· Phe Arg z·» y»< M1U 95 Lys
Leu Thr Phe Tyr 200 Leu Vai Thr Leu Glu 105 Gin .Ala Gin Glu Gin Gin
Vai Glu Gly 115- Gly Gl^ Gly Ser Pro 120 Gly Gly Gly Ser Gly 125 Gly Gly Ser
Asn Met 130 Ser Aiâ Phe Gin 13 5 Arg Arg Ala Gly Gly 140 Vai Leu Val Ala
Ser 145 His Leu Gin Ser Phe 180 Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His 160
38$
Se:
Se:
Phe
Leu
Leu
Ser
Glu ύβ· rc
1.8
Le
Pro
200
Leu
Leu
Ser
Trp
Ala net
Ser
5er
Ala
Leu
Leu net .ueu
Phe
Leu
Leu
Le
Ala
Leu
Figure BRPI9610977A2_D0177
Sex
Pre g:
^eu
260
Gly ueu
Asp
Asp
Ala xe
Trp
Gin
280
Men
Leu
285
Met
Ala
PreAla
390
Leu
Thr
Ala
Met
255
Phe Ala
INFORMATION FOR SEQ ID NOr 175:
SEQUENCE CHARACTERISTICS;
LENGTH
TYPE.· amine acid
ETOANDEDNESS: single
TOPOLOGY: linear (A·
ÍE;
(D) amine acids
MOLECULE TYPE; protein
Figure BRPI9610977A2_D0178
ixD
SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:
Asn Cys Ser He Met He 5 Asp Gru lie He 10 His His Lys Arg 15 Pre
Pre Ala Pre Leu 20 Leu Asp Pro Asn Asp 25 Leu Asn Asp Glu Asp 30 Vai Ser
He Leu Men 35 Asp Arg Asn ueu . . . 40 Leu Pro Asn Leu Glu 45 Ser Phe Vai
Arg Ala Vai Lys Asn. Leu <**x „> KS4rU Asn Ala Ser Gly He GXu Ala He Leu
to /ή).«. χί
A;
Si
Met
Leu
Glu
Leu
Pte
As;
Sex
Axa
Se
182
Pro
Se
Phe
Ala
2S0
Leu
G1 i 9
Leu
Cvs
His *au £· « £> O Ò
Thr
Pro lie
Leu .9
Tv
Ser
Phe &he
Gly
Ala »e.
Leu
Pre re
Thr
Se.
Ser
Ser i?
P.
Ala
Gly 15»;
Leu
Se
As:
160
Glu
Tyr
215
Vai
Gly
185
Se:
Lys
Leu
Cya
Vai
Ser
Pr
Le
Pise
Ala
Al®
Leu
Leu
Xie
Ser
Ser
Leu *ua
Gly <--ys
Leu
Qin ueu
His
G1
Leu
Leu
A&a
Leu
Git lie:
Thr izfòtl
Asp
Thr
Met
Glu
Gin
Gly
Ala
Met
Gin
Vai
Ala
G.
BO
Sly ueu
Vai
240
Se.
Ser
Asp
Pro
Ala
Phe
Ala
FORMATION FOR SEQ XL NO
EQUENCE CHARACTERISTICS~ (A) LENGTH; 305 amino acids (E? TYPE; antino. acxd .391
L?:· STRÀKDEDNESS ·. sm
TOPOLOGY, linear
MOLECULE TYPE; protein ixli SEQUENCE DESCRIPTION: SEO ID NG-. 176.
Art Cys
Pro Am
He Leu
Arg A*.a
Arg Asn
His Pro
Leu Thr
Val Glu
Asn Met
C
His Ser
145
Ala
Leu Tyr
Gly Pro
Thr He
210
Pro Thr
225
Ear He
Pro Leu
Ret Asp
Val Lys
Leu Gin.
He lie
Phe Tyr
100
Gly Gly
115
Ala Tyr
Leu Gly
Gin Leu
Gin Gly
ISO
Thr Leu
IPS
Trp Qin
Gin Gly
Her He
Leu Asp
Arg Asn
Asn Leu
Pro Cys
He Lys
Leu Val Gly Gly Lys Leu He Pro
150
Ala Gly
165
Leu Leu
Asp Thr
Gin Met
Ala Met
230
Asp Glu
Pro Asn
Leu Arg 4G
Glu Asn
Leu Pro
Am Gly
Thr Leu
Ser Pro
120
Cys His
135
Trp Ala
Cys Leu
Gin Ala ueu Gin
200
Glu Glu
215
Pro Ala
Ire He .25
Leu Pro
His His
Ale Ser
Her Am
Asp Trp
Glu Gin
105
Gly Gly
Pro Glu
Pro Leu
Ser Gin
170
Leu Glu
185
Leu Asp
Leu Gly
Phe Ala
Asn Leu
Gly He
Ths Ala
Gin Glu Ala Gin Gly Eer Glu Leu
140
Ser Eer
155
Leu His
Gly He
Val Ala
Met Ala
220
Ser Al. a
235
Leu Lys
Glu Asp <3 ’V*
Glu Ear
Glu Ala
Ala Pro
Phe Arg
Glu Gin
HO
Gly Gly
Val Leu
Cys Pro
Ser Gly
Sex Pro
190
Asp Phe
205
Pre Ala
Phe Gin
Arg Pro
Val Ser
Phe Val
He Leu
Ser Arc
Glu Lys
Gin Tyr
Guy Sex
Leu Gly ne r Gm
ISO
Leu Phe
175
Glu Leu
Ala Thr
Leu Gin
Arg Arg
240
Λ,Χέί Giy V&~ *mu Vai. Ala Ser 25C Glr. Ser Phe Leu Glu Va
$w Tyr A:g Val Leu Arg His Leu ........ 261..... ............. AX& Pro Τήχ· Ρ*ό •Goky . X C \.· . Ã’ X
Ax cã Ser Ser Leu Pro Gin Ser Phe 2 it 280 Leu Lys Ser Leu 285 GxL GLr; 1 a.
Arg Lys lie Gin Gly Asp Gly Ala 29-0 Ala Gin x?l>* Ly*:; 300 Leu Uys;
r3GS
INFORMATION FOR SEQ ID NO; 177;
ii< SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 320 amino acids ίΒ· TYPE; antnc acid iCi STRANDEDNESS: single (D> TOPOLOGY; linear dii MOLECULE TYPE: protein (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 177:
Asn Uys Ser He Met He Asp Glu lie He Mis His Leu Lys Arg Pro
5. 10' 4
Pre Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Ann Leu As π Asn Glu Asp Val He20 2.E' -d
He Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Ph® Va· M 40
Arg Am Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Glu Ala H« Leu 30 5560
Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg /C 75
Has Pro lie He He Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Ph® Arg Glu Lys 8is 90gg
Leu Thr a. Tyr U» Val Thr Leu Siu Sih Ala Glu Glu am qm Tvr 1051.10 ,V&1 ...,®lu....?J.y....9*y..G1X.G1y Ser pro Giy Glu Pro Ser Gly Pro He Ser
...............**”......... .............. ......................................
393
Thr Tie Asr. Pro
Ser Pr
Met Ala Tyr Lys
145
S&r Leu Gly He ύ€ΐ Gir» «eu. Ai a
0
Tyr Gin Gly Leu
195
Pre Thr Leu Asp u
Tie Trp Gin Gin
Leu Cys Hie Pro
150
Pro Trp Ala Pro
165
Gly Cys: «eu Ser «eu uur Ala «eu
Thr Leu Gm Leu
Thr Gin Gly Ala
Gly Gly Val Leu
26C
Tyr Arg Val Leu
275
Ser Ser Leu Pre
Met Glu Glu Leu
230
Met Pro Ala Phe
245
Val Ala Sei' His uys· rie Gm Gly
Arg His Leu Als
280
Gin Ser Phe Leu '295
Asp Gly Ala Ala
310
Figure BRPI9610977A2_D0179
Gm Leu H,xs Ser
Glu Giy He Ser
Asp Val AM a Asp
Gly Met Ala Pro
Ala Ser Ala Ph®
250 «eu Gin Ser Phe
265
Gin Pro Thr Pro
Leu Lye Ser Leu
00
Leu Gin Glu Lys
Lya Ser Pro Asr
Lou Leu Glv Has
ISC
Pre Ser Gin Ala
Guy ueu Pae Leu u
Pro Glu Leu Gly
Phe Ala Thr Thr
Ala Leu Gin Pre·
Q
Gin Arg Arg Ala
Leu Glu Val Ser
Leu Gly Pro Ala
285
Glu Gin Vai Arg
Leu Cys Ala Thr
320 {2· INFORMATION FOR ESQ IL NO·.· 178;
(1) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(Ai LENGTH; 305 amino acids >H) TYPE; amino acid ?C·; STRAKDEDNESS; single (D) TOPOLOGY: linear iii) MOLECULE TYPE.- protein ixi? SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NOt 178:
Asn Cys Ser He Met Ila Asp Glu lie He Hrs His Leu 1
394
Leu As:
Be.
A:
Leu
Asp
Asr. Leu Am
Leu
Ser ‘he Va
Ala Vai
Am
Asn
Ala
Ser •a i»6
8r
Pro
Sa:
Auk&
Ph a
Ph® ueu
Va.
101
Figure BRPI9610977A2_D0180
al ae.
Pro
Gly
Ser
Met
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Pro
Thr w<&Ll eu vai
Phe
Ala her
Glu
Gly
160
Het
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Pro
Ala
Leu
Gin
Pro
Ala
Pro
Phe
Ala
Ser
Ph®
180
Arg
Gl
Vai
Va.
Ala
Leu
Gin
Ser
Phe
195
Glu
Vai
Se.
Arg
Vai ueu $0
200
His ueu
Gin
Figure BRPI9610977A2_D0181
Thr
210
PTi x>eu
Pro
Ala
Ser
Ser
Gin
Phe
Leu
Leu
Lys
Sex'
Leu
Glu
Vai
Lys lie
Gin
Asp
Gly
Leu
246
Gl
Glu
Lys
Leu
Cys
245
Ala uys
Leu
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Gly
250
Se
Leu
Gly
Pro uet
270
Ser
Ser
Pty Ser
Gin
Leu
Leu
280
Ala
Gly
Cys
Laser
Leu
His
Ph®
Gly
Leu
Leu
Gin
Ala
Leu
395
Ser
305 (2? INFORMATION FOR EEQ ID ND: 1?S:
T13 SEQUENCE CHARACTERISTICS : (A; LENGTH: 32C amthc aSids ,rã: TYRE, amino sole FC: STRANDEDNESS : single (D; TOPOLOGY; Imear
Till·/ MOLECULE TYPE; pretetn
ixi.; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID ND: 179-.
Asn 1 Cys Ser He Met Ila Asp Glu He He Hxs His Leu Lys; Am Pro - is ‘' is
Pro Aia Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Am. Asp Glu Asp Val Ser 10 25 30
He Leu Met Asp Arg Ann Leu Arg Leu Pre Asn Leu Glu Ser Phe Val 35 40 4S
Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Am Ala Ser Giv He Glu Ala Ils Leu 5C 55 60
Arg 65 Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg 70 ”5
His Fro Ils lie lie Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Lys 85 gg gS
Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tv* 100 105 ÚÜ
Val Glu Gly Ely Gly Gly Ser Fro Gly Glu Pro Ser Gly Pro Ils Ser 115 120 125
Thr He Asn Pro Ser Pro Pro Ser Lye Gin Ser His Lys Ser pro Asn 130 US 24Q
Met 145 Ala Rm Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val 15u 155 jgQ
Ala Asp Phe Ala Thr Thr lie Trp Gin Gin Met. Giu Glu Leu Gly Met 170 17^
Ala Pro Ala Leu Gin Pro Thr Sin Gly Ala Mat Fro Ala Phe Ala Ser
396
Sei’ Phe Leu. Glu
21(Thr Pro Leu Giy
Ser Leu Glu Gin
Giu Lys? Leu Cys
2L0 ueu Leu Giy Hrs
Pro Ser Gin Ale
292
Gly Leu Phe Leu
305
Arg AL®» Giy Gly
Vau Ser Tyr Arg
Pre Ara Ger Ser
Vai Arg Lys He
S
Aia Thr Tyr Lys
Ser Leu Gly He
280
Leu uíuís A»eu Ala
295
Tyr Gin Gly Leu
3X0
V&x Lt&v AX&
Vai Leu x^rg His
I><u £ro Clr S&r
X3 £ kyXX'i CíXv
250
Leu Cys His Pro
Pro Trp Alss Pre
Gly Cys Leu Ser
300
Leu Gin Ala Leu
315
191?
Ser Has Leu Gl~
Leu Aia Gin Pre
Ph s? Leu Leu Lys
C
Au, a Ana Leu G«r
Giu Glu Leu Vai
Leu Ser .Ser Cvs δ S
Gin Leu Hrs Ser
Glu Gly He Ser
320 í2· INFORMATION FOR REQ ID NO; 180?
(ii SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 305 amino arias (S; TYPE; assino acih (C; STRAKDEDNESS; single (LU TOPOLOGY: linear (it; MOLECULE TTPS: protein
Figure BRPI9610977A2_D0182
(Xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ CD KQ. ,gA.
Asn Cys Ser T Met He Asp CaU Ils He Hrs His Leu Lys Arg Pro
: -»1 J 10 —< £·
Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Ask Asn Leu Asn Asp Giu Asp .·*· <A·' Vai Ser
20 25 30
lie Leu Met 35 Asp Arg Asn Arg 40 Leu Pro Asn Leu Gw V 45 ner Phe Vai
Arg Ala Vai Lys Asn Leu tflU Ast. Aia Ser Gly lie Giu Ala He Leu
50 55 «η
7
At Asn Leu Gin Pr- cys Le_ Set Ala Thr A la Al a Pro Ser Arg 65 70 75 SO «is Pre He He He Lys Ala Giy Asp Trp Gin Glu Pue ,rç G/„; Lys
90 Ç
Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tvr
Val Glu Gly Gly Gly Gly Ear Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Sex
...... ...... ...... Ί.2Ό i 7 <1
Asn Met Ala Met Als Pro Ala Leu Gin Pre Thr Gin GJy Ala Met Fro
—...·..· r·14 C
Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly Val Lar ValAla
14O 150 155ISO
Ser His Leu Gin Ser Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu ArgHis .165 170iaLsu Ala Gin Pro Thr Fro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Ser iao issiso
Ph® Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin Val Arg Lys He Gin Glv Ast Glv
195 200“ QOS
Ala Als Leu Gin Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His P^o
219 215 ‘220 ulu G*.u Leu Val Leu Leu Gly Has Ser Leu Gly He Pro Tro AlaPro225 230 235 ‘ -240
Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys LeuSr
245 250255
Gin Leu Hrs Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu &0 265270
Hi Gly He Ser Pre- Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Le'1 275 280285
Asp Vai Ala Asp Phe Ala Thr Thr lie Trp- Gin Gin Met Glu Glu Leu 250 29Õ300
Gly
OS (2} INFORMATION FOR SEQ ID NO; 181: <i) SEQUENCE CHARACTERISTICS.;
(A# LENGTH; 320 aaino acids (B< TYPE: aninc acid (C) STRANDEDNESS; single
39?
(x.ii SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 181;
&sn Cy« .;*· ‘4· *-*· X7j>«A.&v
Arg Ala
C. Λ '
Arg Asn
È 5Hit Pro
Leu Thr
Val Glu
Tnr lie
130
Met Ala
145
She Ala
His Leu
Ala Gin
Leu Leu
210
Ala Leu
7-55
Ser lie
Pr0 Leu
Met Asp>
Val Lys
Leu Gin lie He
Ph® Tyr
150
Gly Gly
Asn Pro
Met Ala aer ala
Gin Ser
180
Pre Thr
195
Lys Ser
Gin Glu
Meu 11®
Leu Asp
Arg Asn
Asn Leu
Pro Cys
He Lys
Leu Vai
Gly Gly
Ser Pro
Pro Ala
150
Phe Gin
155
Phe Leu
Pro Leu
Leu Glu
Lys Leu
230
Asp Gxu
Pro Asn
Leu Arg
Glu. Asn
ÇK
Leu Fro
Ax a Gly'
Thr Leu
Ser Pro
126
Pro Ser
133
Leu Gin
Arg Arg
Glu Val
Gly Pro
20C
Gin Val
215
Cys Ala
Ha XI® > Γ
Leu Pro
Ala Ser
Ser Ala
Asp Trp
Glu Gin
105
Gly Glu
Lys Glu
Pro Thr
Axa Glv
170
Ser Tyr
185
Ala Ser
Arg Lys
Thr Tyr
Hla His
Asn Asp
Asn Leu
Gly He
SO
Thr Ala
Gin Glu
Ala Gin
Pro Ser
Ser His
140
Gin Gly IS
Gly Val
Arg Vai
Ser
He Gin
220
Lys Leu
771 ♦X L«' W
Leu Lys
Glu Asp
...................
Glu Ser
Glu A1&
Al a Pro
Phe Arg
Glu Gin
HO
Gly Pro
125
Lys Ser
Ala Met
Leu Val
Leu Arg ί an *K vk' V'
Pro Gin
205
Gly Asp
Cys His
Vg1 Ser “‘he Va „
He Leu
Ser Arg 80
Glu Lys
α.·:Κ.
Z -Λλ?
He Ser
Pro Asn
Pro Ala
ISO
Ala Ser
175
His Leu
Ser Phe
Sly Ala
Pro Glu
240
399
Leu
Figure BRPI9610977A2_D0183
Figure BRPI9610977A2_D0184
INFORMATION FOR SEQ IE ND: 1B2 :
ii j SEQUENCE CHARACTERISTICS.·.
(A! LENGTH: 305 axnino acids <Si TYPE: atru.ro acxd (Ci STRANDEDNESS: sxngle (D) TOPOLOGY: linear iit) MOLECULE TYPE: protein (Xi; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 182:
Asn Cys Ser Xle Met X* He Asp Glu lite Xle 10 His Mis Leu Lys Arg Pro
Pro ίίΑΙΑ Pro 3.Í&U 20 Leu Am Pre· Asn Asn ·>Χ·.«*· zo nSSU Asn Asp G.x u Asp 10 Vai Ser
II® Leu Met SL Asp Arg Asn X4BU Arg 40 Leu Pro Asn Leu Qiu 45 Ser Phe Vai
Arg Ala 50 Vai Lys Asn Leu Glu S3 Asn Ala Ser Gly lie 60 Glu Ala He Leu
Arc Asn Leu Gin Pro Cys 70 Leu Pro Ser Ala Tnr 7*3 Ala A», a Pro Ser Arg SO
His Pro lie lie He 85 Lys Ala Gxy Asp Trp §0 Gin Glu Phe Arg Glu 95 Lys
Leu Thx Pne Tyr ISO Leu Lax Thr Leu Gru 105 Gin Ala Glu Qin 110 Gin Tyr
Vai Glu Gly '1 Gly Gly v*,y Ser Pro 130 Gly Gly Gly Sex' Gly uly Gly Ser
400
Asn Met Ala Thr Gin s_y Ala Met
130135
Arg Arg A) a Gly Gly Val Leu Val
1« '150
Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg xss
Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro GH *jfir
ISOX8S
Gin Val Arg Lys He Gin Gly Asp Gly
IPS200
Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro HO21«
Hrs Ser Leu Gly Ila Pro Trp Ala Pro Π5236
Ala Leu Gin Leu Ala Gly Uys Leu Ser 24S u>eu Tyr Gm Gly Leu Leu Gin Ala Leu
HO2g5
Gly Pro Thr Leu Asp Thr leu Gin Leu .275:
Thr He Trp Ghs Gin Met Glu Glu Leu 290295
Pro
65
Pro Ala Phe Ale. Ser Ala Phe Gin
........14 C...... ...........
Ala Ser Has Leu Gin Ser Phe Leu 156 '
Leu Ala Gin Pro Thr Pre Leu licii....................<nl|ir.................s........7“ Igf :::
Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu
0'
4>aa ^xaa ueu ulr> Gau Lys Leu
205 uilu ulu a>su Vaa Lex; Lao Glv
220
Leu Ser Ser Cys Pro Seo Glr; 235 240
Gin Leu His Ser Gly Leu Ph® 25C 25.5
Glu Gly He Ser Pro Glu Leu
270............
Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr
285
Gly Met Ala. Pro Ala Leu Gin
C2) INFORMATION FOR SEQ ID NOx 183;
(1? SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A# LENGTH; 320 ammo acids· ÇB) TYPE; amino acid
ÍC) STRANDEDNESS: single
ÍD) TOPOLOGY; imear iii) MOLECULE TYPE; protein (xi I SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ CD NO: 183;
Asr, Cys Sto 11. Met Xie Asp clu U. lie al. His Leu Lvs 5 10 ' xc
401 ueu Asp
Asp
Val
He Leu
Arg Ala ::ÍÍS:OS
Arc Ast
Hxs X'xo
Leu Thr
Val Grr
Thr lie
130
Het Ala
X. 4 t?
Arp Ala
Val Ser
Pro Ala
Ai Arg
210
Ala Thr
223
Ser Leu atsu Qin
Tyr Gin
Pro Thr
29C
Met Asp
Val Lys
Leu Gin
Ire He
Phe Tvr
100
Gly Gly
V 5 $*
Asn Pro
Thr Gin
Gly Gly
Tvx A.y$
182
Ser Ser
195
Lys lie
Tyr Lys
Gly He
Leu Ala
260
Gly Leu
275
Leu Asp
Arg Asn
Ast· ^eu
Pro Cys
He Lys
Leu Val
Gly Gly
Ser Pro
Gly Ala
150
Val Leu
1S5
Vai Leu
Leu Pre·
Glu Gly
Leu Cys
230
Pro Trp
245
Gly Cys
Leu Gin
Thr Leu
Leu Arc ’
Glu Asn
SB
Leu Pro
Ala Gly
Thr Leu
Ser Pro
120
Pro Ser
5
Met Pro
Val Ala
Arg His
Gin Ser
20D
Asp Gly
215
Hi s Pro
Ala Pro
Leu Ser
Ala Leu
280
Gin Leu
295
Leu Pro
Ala Ser
Ser Ala
Asp Trp
Gru Gin
105
Gly Glu
Lys Ciu
Ala Phe
Ser His
170
Leu Ala
185
Phe Leu
Ala Ala
Glu Glu
Leu Ser
250
Gin Leu
265
Glu Gly
Asp Val
Asn Leu
Gly He
Tnr Ala
Gin Glu
Ala Gin
Γ to Ser
Ser His
140
Ada Ser
155
Leu Qin
Gin Pro
Leu Lys
Leu Qin
220
Leu Val
235
Ser Cys
His Seine Ser
4wx>a Asp
300
Glu Ser
Glu Ala
Ala Pro
Phe Arg r- 1 x . <— X ...
X9Í.U uii:
110
Qly Pro
125
Lys Ser
Ala Phe
Ser Phe
Thr Pro
190
Ser Leu
205
Glu Lys
Leu Leu
Pro Ser
Gly Leu
270
Pro Glu
2S5
Phe Ala
Phe Val
-1e Leu
Ser Arg
SO
Glu Lys
Gin Tyr
He Ser
Pro Asn
Gin Arg
160
Leu Glu ΐ 75
Leu Gly
Glu Gin
Leu Qys
Gly Hrs
240
Gin Ala
255
Phe Leu
Leu Gly
Thr Thr
4Ô2
Xie Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pre Ala Leu Gin Pr:
305 310 315 32(
INFORMATION FOR SEQ XD NO: 184:
(if SEQUENCE CHARACTERISTICS'.
(A) LENGTH; 305 amino acids ι άίπΐ3.τιο aoisi
ÍC·· STHANDED^ESS: single
D! TOPOLOGY·, linear (ii} MOLECULE TYPEi pratein (Xi; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NG: 184:
Asn Cys Gar He Met Tie Asp Glu lie He His Hus Leu Lys Arg lc- Pro
Pro Ala Pre Leu .20 JwSítw Asp Pro Asn Asn 25 Leu A®n Asp Glu Asp 30 Val Ser
1.1a Les Met 3 5 Asp Arg Asn Leu Arg 40 Leu Pro Asn Leu Glu 45 Ser Phe Val
Arg Awi. S9> 50 Val. Lys Asn Leu Glu 55 Asn Ala Ser Gly He 60 Glu Ala He Leu
Arg 65 Asn Leu Gin Pro Cys 70 Leu Pro aer Ara 7 5 Ala 9*270 Ser. Arg 80
AA^ S Pro Xie lie 85 Ly® Aus Gly Asp Trp 90 Gin Phe Axg Glu $5 Lys
Leu Thr Phe Tyr 100 Leu Val Thr Leu Glu 105 Gin Ala Gin Glu Gin HO Gm Tyr
Val Glu Gly 115 Gly Gly Gly Ser Pro 120 Gly Gly Gly Ser Gly 125 Gly Gly Ser
Asn Met 130 Ala Ser Ala Phe Gin 135 Arg Arg Ala Gly Gly 140 Val Leu Val Ala
Ser 145 His Leu Gin Ser Phe 150 Leu Glu Vai Ser Tyr 155 Arg Vax Leu Arg Mis 160
Leu Ala Gin Pro Thr 165 Pro Leu Gly ”ro Ala 170 Ser Ser Leu Pro Gin 175 Ser
Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin V&1 Arg Lys He Gin Gly Asp Gly
403
ISO 185 19v
Ala A.>e\- Gàh : Ç > ¢. Lys Lev Cys Ale Thr Tyr LV3 Lev 1533 Ηχδ'- • * iL *»'
Ο íX 7· O*
. .**. •V· χ<
S>LU Gru Lea Val Leu Leu xxi.y His Sat Leu Giy lie P^STx* Aàk XJ· ve/v..
210 225 220
bet Ser Ser θ'/s Pre Ser Gin Αα·ΐΐ Leu Gin Leu Ala Gly Cys L«ív Sei
230 235 240
Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Lev Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu
241 250 255
Glu Gly He Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu
280 26 S 270
Asp Vai Ara Asp Phe :A1<: Thr Thr Xie ί^ΐΛ ·»>. *Λ A jyí . Gin Met Glu Glu Leu
275 2 80 285
Sly Met Ala Pre Ala Leu Gin Pro Thr Glu Gly Ala Met Pro Ala Phe
2.00 235 300
Ala
305 (2) INFORMATION FOR. SEQ ID NO; 185'.
fl} SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH.: 320 amino acids (B> TYPE: amino acid fCj STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY; linear iii) MOLECULE TYRE: protein (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 185:
Asn 1-'» Cys Ser Ils Met o He Asp Glu He He 10 His His Leu Ly® Arc 15 Pro
Pro Ala Pro :Leu 20 Leu Asp Pre Asn Ahti 25 Leu Asn Asp Glu Asp 20 Val Ser
Tie Leu Met 35 Asp Arg Asm Leu Arg 40 Leu Pro Asn Leu Glu 45 Ser Phe Val
Arg Ala 50 Val Lys Asn. Leu Guu 55 Asn. *25·. Ser Gly He 60 Glu Ala lie Leu
Arg Asn Lev Gin Pro Cys Leu Pre Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg
*? D 583
Hxs Pro Tie XI» He Lyss Ala Gly Asp Trp Qin Giu Phe Arg Giu Lye
509S
Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Giu Qin Ala Gin Giu Gin Gin Tyr 10U 105HC
Val Giu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Giu Pre Ser Gly Pro lie Sac
1*s\ “7Λ 7 r>jr ervfcv· -.«es·>1á>L
Thr He Asn Pro Ser Pro Pro Ser Lys Giu Ser Hie Lys Ser· Pro Asn 130 .135140
Met Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val AleSer
145 150 155ISC
His Leu Gin Ser Phe Leu Giu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg HisLeu
165 170175
Ala Gin Pro Thr Pro Lay Giy Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Ser Phe
180 .135190
La*x x^eu Lys Ser ueu Giu Gm Vai Arg Ly.a uae Gin: Gly Asg Guy Ala: 195· 200:2C5
Ala ueu Gin Giu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Giu 210 215220
Giu Leu Val Leu Leu Gly His Ser Leu Gly Tie Pro Trp Ala ProLeu
225 230 .135240
Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu SerGin
245 250255
Leu Hus Ser Gly Leu Phe Lêu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Giu 250 265270
Gly He Ser Pro Giu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp 275 250285
Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr lie Trp Gin Qin Het Giu Giu Leu Gly 2^0 295300
Met Ala Pro Ala Leu Qin Pro Thr Gin Gly Ala Met. Pro Ala Phe Ala 205 310 315320 {2} INFORMATION PGR SEQ IT Nd 186;
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
{A} LENGTH: .421 anu.no adds (SI TYPE: atnino acid
ÍC) STRANDEDNESS; single
05 i D; TOPOLOGY ; 1 mea r (ii! MOLECULE TYPE: protein (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 186;
Leix Asp Pre Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Vai Ser lie Leu Mec
Arg Asn Leu Axg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe Vai Arg Ala Vai
XÍ‘Âs· +►W V.'
Asn Leu Glu Asr. Ala Ser Gly lie Glu Ala lie Leu Arg Asn Leu 35 404S’
Fro Cys Leu Pro Sex Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg His Pre Ila
S360
He Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe
7C75
Leu Vai Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Glu Gin Gly Gl?/ Gly Sex'
90§5
Cys Ser II® Met He Asp Glu Ils lie His His Leu Lys Arg Pro
10C 105110
Ale Pro Leu Tyr Vai Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pre Gly Glu Pro
115 ISO125
Gly Pro II® Ser Thr lie Asn Prc< Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser
130 135140
Lys Ser Pre- Asa Met Ala Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala
145 150155
Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly Vai Leu Vai Ala Ser His Leu
165 170tvs
Ser Phe Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His Leu Ala Gin
ISO 165Igo
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu
195 200205
Gin Vai Arg Lys He Gin Gly Asp Gly Ala Ala
210215
Lys
Gin
He
Asn
Pro
Ser
Hrs
Ser
160
Gin
Pro
Glu
Leu
Leu Gin Glu Lys
22C
Cys Ala Thr Tyr Lvs Leu Cvs Hie
225230
Pro Glu Glu Leu Vai
235
Leu Leu Gly
240 v 6* ueu Gly 1.1 a Pro Ti^..· Ala
Pro Leu
Ger Ser Cys
Pre; Ser Gin
Aim η©;, Qm .'.-ex; Ala Giy
Λ <3 V
L-su Tyr Glr: Gly ^eu L®u
Gly Fxo üsu Asp T&x*·
FJYm. V T « jAV ifYvwA /v }· *S F* V S^, IlXcv V* *;ΛΛ Llv v i. p >ιϊαΠ \5άχ^ν rS^Si.
205 310
Uys Leu Ssr Gin
255
Gin Ala Leu Glu '280
Leu Gin Leu. Asp
85
Gru Glu ueu Gly
Leu Hi.x Ser Glv Leu Poe
Gly He Ser Pro Glu Leu .285
Vai Ale Asp Ph® Alt Thr 3 00
Met Ala Pro Ala Leu Gin
3X5 sin
Pre· ili INFORMATION EOF. SEQ ID ND: 187:
SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A} LENGTH: 321 amino acids (S? TYPE; amino acxd (Ci STRANDEDNESS : single (D) TOPOLOGY: linear iii) MOLECULE TYPE: protein txi? SEQUENCE DESCRIPTION-. SEQ ID NG: 1.87;
Pre Ser Ala
• Gly Asp Trp 3 5
lf®U GaU 50 Gin
Me t SS Xie Asp
L-au Asp Pro
Arg Asr Leu
Asn Ala Ser
S X > ^xy He r Glu Ala lie Leu
v A AMv 20 Ala Ala Pro Ser Arg
Gin Glu Phe Arg Glu 4 δ Lys
Ala Gin Glu Gin 55 15 .Ul Glu
Glu He He *3 Q HiS His Leu
Ann Asn 85 Asn Asp Glu
Arg .100 Leu Pro Asn Leu Glu 105
Arg 10 Asn Leu Gin Pro Cys oeu
His Pro XI® Ή®. He 30 Lys A1&
iXâií Tar Rhe Tyr 45 Leu Vai Thr
Gly Gly Ser 6.0 Asn Dy® Ser XI®
Lys Arg 7 c. Pir Pro Ala Pro Leu 80
Asp 90 Vai Ser He ivíãkl Met 95 Asp
Ser Phe Vai Arg Ala 110 Vai Lys
07
Asa Leu Giu Tyr Vai Sxy Giy G*y Giy Ser Pro Giy Gm Pre Sec
Gly i-',r« lie Ser Ire He Asn Pre Ser Pre Pre Ser Lyu Gru Ser Hrs
133 13514C leys Ser Pro Asn Met. .Ala Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe AlaSer
145: 153 155lEc
Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser Hrs; LeuGin
165 170i?*
Ser Phe Leu Glu val ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu. Ala Gin Pro
ISO 18519C
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin Ser Phe Leu Lev Lys Ser Leu Glu IPS 230205
Gin Val Arc Lys He Gin Gly xAap Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lys Leu 210 2.15220:
Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Glv
Hrs Ser Leu Gly He Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin
Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe ISO 26:5270
Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly Tie Ser Pro Glu Leu 275 280285
Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr 290 295300
Thr He Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin
305 310215
Pro
INFORMATION PGR SEQ CD NG: 188:
(1} SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 321 amino acids (B) TYPE; amino acid (C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear ill; MOLECULE TYPE: protein
Pro I*.<s Ixi: Ils Lyss Ala
Asp. Try νχπ -u.x-U
Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu Gin Ala Gin
2530
Glu Gin Gin Gly Giy Gly Ser Asn Cys Ser Xle Mat Xle Asp Glu lie .3..7.. 494 5
He 1US Hxs Leu Lys Arg Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp pre Ash Asn SC 5£5C
Leix Asn Αερ Gru Asp Vai Ser H® «su Met Asp Arg Asst Leu AroLeu
H go ?5 - Pro Asn Leu Glu Ser Phe Vai Arg Ala Vai Ly® Asn Leu Glu AsnAla >85 .9'09$
Ser Giy 11® Gly Ala Xie Leu Arg Asn Leu Gin Pre Cys Leu Pro Ser 209 ICS' no
Ara Thr Ala. Tyr Vat Giu Giy Gly Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pro Ser 115 129-^2 5
Gly Pro 2.1® Sex Thr He Asn Fro Ser Pro Pro Ser Lys Giu Ser »is 130 135140 ^ys Ser Pro Asn Met Ala Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Ph® AlaSer 145 ISO 155160 *la Phe Gin Arg Axg Ala Gly Gly Vai Leu Vai Ala Ser His LeuGin
185 170175
Ser Phe Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His Leu Ala Gin Pro ISO 1852.90
Ser Gly Gly Ser Gly Guy Ser Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu 1SS 200205
Gin Vai Arg Lys Xle Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lys Leu 210 215220 uys Ala Tnx Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Vai Leu LeuG’y 22s 230 2352<
Hrs Ser Leu Gly lie pro Try Ala Pro Leu Ser Ser Çys Pro SerGin 2ii5 250255 nla ^eu Gin Leu Ara Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe u6C 265 οτπ
409
: v Leu Leu Glu At a Leu 2 8 0 Glu Gly TXe Ser 285 Pro Glu Leu
Gly Frc T^ir Asp- Thr Leu Gur ueu Asp Vai Aa & Asp Pne Alt Tap
29C 295 3 0 C
TJixr 1X«- Trp Gin Gin Met Gin G1u Leu Gly Net AX?? Pro Ala Leu Gin
305 HO 315 3 C<
Pro (2} INFORMATION FOR SEQ ID NO; 189:
<1: SEQUENCE CHARACTERISTICS:
JA.J LENGTH: 321 ffstnc· acids {£) TYPE: amino aoxc (C> STHANDEDNESS: single !D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TEPE: protein ixi; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 189:
Ala Gly Asp Trp Gin Glu Ph® Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val
Thr u&u Glu Gun Ala Gin Gun Gin Gun Gly Giy Gly Ser Asn Cvs Ser
2S *30 ux®' Met Le Asp Gin xle lie His Hrs· Leu Lys Arg Pro Pro AlaPro
3540
Leu Leu Asp Pre Asn Asn Leu Asn Art Glu Asp Val Ser He Leu He* 5C 55¢0
Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe Val Arg Ala Val «vs Asn Leu Glu Asn Aua Sex· Gly He Glu Ala He Leu Arg Asn Leu S5 9C §s
Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg His pro He 100 iQS no
He He Lys Tyr Val Giu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Qly Giu ProSe115 120 “125
Oxy pro He Ser Thr He Asn Pro Ser Pro Pro Ser Lys Glu SerHis
13° 115140
410
Lys Ser Pro Asn Met Ala Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser ,-,50- Ito160
A'a Phe Gin Are Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gin 165 270·:?ε
ΛΚ- f *»'
Ser Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro 180 18519c
Set' Giy Gly Ser Gly Gly «Ser Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu G”:u 195 200205
Gin Vai Arc Lys He Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lvs Leu HO 215220
Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Leu LeuGlv
225 23δ 235240
His Ger Leu Gly He Pro Trp Ala pro Leu Ser Ser Cys Pro SerGin
245 250255
Alw- x»ea xsln lsu Ara Gly 0y& Leu Ser Gin Leu His Ser Glv Leu Phe 200 265270 ajsu Pyr Git Giy Leu Leu Gm Az© Leu Glu Gly He Ser Pro Giu Leu 275 280285
G~y rro Thr Leu Asp Thr Leu Gm Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala ’’’hr 299 295308
Tnr ale Trp Gin Gm Met Glu Glu Leu Gly Het Ala Pro Ala Leu Gin ^2 310 325220 (2) INFORMATION FDR SEQ IQ NO;. ISO;
£ i) SEQUENCE CHARACTERISTICS :
ÍA) LENGTH: 329 amine ««ids (B) TYPE: anmo acid (C; STRANDEDNESS-, single (Di TOPOLOGY·. linear
Íii.’ MOLECULE TYPE; protein (xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 190·.
ueu Asp Pre Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Val Ser lie Leu Met Asp 1 5 2 0 is
Arg Asp Let Arg
Asn Leu Glu Asn s·.
Pro Cys Leu Pro
He Lys Ala Gly φ 5
Leu Vai Thr Leu
Gly G*y Sex- Gly
LOG
Xie His His Leu.
Gly Gly Ser Pro
Leu Pro Asn Leu
Ala Ser Gly Xia
Ser Ala Thr Ala
Asp Trp Gin Glu
Glu Gm λχδ Gin
Gly Gly Ser Asn
Lys Arg Pro Pro
120
Gly Glu Pre· Ser
Glu Ser Phe Vai
Ui.lu j^la kkie net
Ala Pre Ser Arg
Phe Arg Glu Lys
75'
G*u Gin Gin Gly so
Cys Ser lie Met
105
Ala Pre· Leu Tyr
Gly Pre He Ser
140
Arg Ala Vai Lys
0·
Arg As: Leu Qin
His Pre He He
Leu Thr Phe Tyr
Gly Gly Ser Gly eg
Xie Asp Glu He HO
Vai Glu Gly Gly
125
Thr He Asn Pre?
Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro Asn Met Ala Thr Gin
145 1.30 135 igg
Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly
155 1.70X75
Vai Leu Vai Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Leu Glu Vai Ser Tyr Arg ISO 185190
Pal Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin 195 200205
Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin Vai Arg Lys lie Gin Gly Asp 210 2152GQ uil1' Ala Ala Leu Gin Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu evsHis
2u5 230 235240
Pro Glu Glu Leu Vai Leu Leu Gly His Ser Leu Gly He Pro TrcsAla
243 2502.55
Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu
260 265270
Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala 280
Leu Glu Gly Ha Ser Pro Glu Leu Gly Pre Thr Leu Asp Thr Leu Gin 290 295300
Lsu Asp V&r Aáa Asp Pt»e Ala Tar
Thr He Trp Gin Gin Met sm
Leu Gly her Ala Pro Ala Leu Gin Pro
325
INFORMATION FOR SEQ ID ND; 191:
ίί; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
Í A; LENGTH: 329 amino ani ds >Bj ΤΥΡΕ·, ammo acid (C· STRANDEDNESS.· single (D; TOPOLOGY; linear •ii) MOLECULE TYPE; protein ixi: SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 191;
Asn Ala Ser Gly Π®
Giu Ala Ila Leu Arg
Pro Ser Aia Thr Ala δ
Gly Asp Trp Gin Glu àz&u Gm Gm Ala Gin ED
Gly Gly Gly Ser Asn
Leu Lys Arg Pro Pro
Glu Asp Vai Ser lie.
Glu Ser Phe Vai Arg
115
Gly Gly Ser Pro Gly
0
Ser Pro Pro Ser Lys
145
Gly Ala Met Pro Ala
W.
Ala Pro Ser Arg His .44
Phe Arg Glu Lys Leu
Glu Gin Gin Gly Gly 55
Cys Ser He Met He 70
Ala Pro Leu Leu Asp
.. 90
Leu Met. Asp Arg Asn
105
Ala Vai Lys Asn Leu
120
Glu Pro Ser Gly Pro
135
Glu §er Hrs Lys Ser
ISO:
Phe Ala Sex Ala Phe
170
Asn Leu Gin Pro Cys
Ί G V·*. -s**
Pro He He He Lys
Thr Phe Tyr Leu Vai
Gly Ser Gly Gly Gly
Asp Glu He He His
Pro Asn Asn Leu Asn
Leu Arg .Leu Pro Asn
HO
Glu Tyr Vai Glu Gly
He Ser Thr He Asn
140
Pro Asn Met. Ala Thr
155
Gin Arg Arg Ala Gly
175
Leu
Ala
Thr
Ser
Has
Asp
Leu
Gxy
Pro
Gin
160 ciy
413
Val Leu Val Ha Sac Hxs Leu Gin Ear Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg
180 18S19C val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Gly Gly Ser Gay Gly SerGin
155 2CC :: 205
Ser Phe Leu Leu Lyss Ser Leu Glu Gin Val Arg Lys He Gin GlyAsp
210 21.5220
Gly AX« Ala Leu Gin Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyx Lys Leu CysHis
225 23S 23524?
Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly HA®· Ser Leu Gly lie Pro TrpAla
245 252255
Pre Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu 280 2652~0
Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala 275 2802S5
Leu Glu Gly He Ser Pre Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin 250 295300
Leu Asn Val Ala Asp Phe Alb Thr Thr Xie Trp Gin Gin Met Glu Glu 305 310 315220
Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro
325 ^FORMATION FOR SEQ XD RO: 192:
>i; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 329 amino acids
ÍE) TYPE: amino acid í C: STRANDEDNES S .·. s ing 1 e
CD) TOPOLOGY: linear ii; MOLECULE TYPE: protein
XÍ: SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ XL RO: 192:
Ala Pro Ser Arg
His Pro He
Xie lie
Lys
Aaa
Gly
Asp
Gin *;ft
Glu
Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val
25
Thr Leu Glu Gin Ala Gin
Giu Gin Gin Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
40
Gly Gly Gly Ser Asn
414
Oys Ser lie Maa II® Asp Glu He 11« His His Leu Lys Arg Pro Pre 56 £560
AH ·;'Χ':· Leu jeu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Val SerXie
70 75SC
Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe ValArg
S5 9095
Ala Val Lys Asn Leu Gau Asn Ala Ser Gly II® Glu Ala lie Leu Arg 100 105110
Ann Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Tyr Val Glu Gly Gly 11-' 120125
Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pro Ser Gly Pro He Sat Thr He Asn Pro 13 0 .135140
Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro Asn Mei Ala ThrGin
5 156 155160
Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Glr· Arg Arg Ala GlyGly
165 170175
Leu Val Ara Ser Hrs Leu Gin Ser Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg 180 105190
Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin 1B5 2602 OS
Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin Val Arg Lys He Gin Gly Asn 210 3X5220 u-*y A-i.a Ala Lau um Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu OyoHis
225 230 235240
Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly His Ser Leu Gly He Pro TrpAla
245 2502.55
Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Lev Qin Leu Ala Gly Cys Leu
250 26527Q ^>er Gin n&u His Ser uay ueu Phe ueu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin A^ 275 280285
Leu Glu Gly Xie Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin 290 295300
Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr He Trp Gin Gin Het G'u Glu 305 31Q 315 ~ 320
Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro
325
415 ί2·; INFORMATION FOR w*YK *x:« »w»:t\txv:ww:TW C· >
w4b K> WXbWÍ^A «tt». A* jC^aAvA. — A — K> ώ s (A? LENGTH; 299 aisino acids (H) TYPE.· amino acid {<?} STRANDEDNESS; single r D; TOPOLOGY : 1inear
JU; MOLECULE TYPE, protein
Figure BRPI9610977A2_D0185
;xi? SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ IT
Li.y -- i’ Gly vs — y Gly SB’ Asn
*k His Leu 23 Lys Pro Pro
Leu A&rs Asp 38 GiU Asp Vai Ser Ila 4C
Pxc Asri Leu GiU Ser Pee Vai Arg
Sei 5“ Gly lie Ala He 73 Arg
Aa a /***.*> Ala Ala Pro S3 Ser Arg His
Gly Gly Gly Gly IOC Ear Pro Gly Uflu
Asn Pro Ser Pro Pro Ser Lys Glu
Thr Gin 1». Gly A^. a Met Pro Ax a 135 Phe
148 Gly Vai Leu Vai Ala 150 Ser Hrs
Tyr Arg Vai Leu Arg 165 Ms .<M^w Ala
£»<»22 Gin Ser Phe ISO Lreu Leu Lvs Ser
Cly Asp Gly 1S5 Ax a Ala Leu Gin Glu 200
) ND: 193;
Cys Ser ' 0 He Met He Asp Glu Ire
Al a 2 i; Pro Leu Leu Asp Pro 3 0 Asn Asm
Leu Met Asp Arg Asn 45 Leu Arg Leu
Ala Vai Lys Asn SC Leu Glu Asn Ala
Asn Leu GvA*4* ΐ w Pro Cys Leu Pro Ser 80
Pro He 90 He lie LvSc Tyr val Glu
Pro Ί 05 Ser Gly Pro lie Ser 3.10 Thr He
Ser His Lys Ser Pro 125 Asn Mat Ala
Ala Ser Ala Phe 148 Gin Arg Arg Ale
Leu Gin Ser 158 Phe Leu d.U Vai Ser ISO
Gin Pro 173 Ser Gly Gly Ser Gly 175 Gly
Leu 185 Glu Gin Vai Arg .uys 130 He Gin
Lys Leu cys Ala Thr 205 Tvr Lys Leu
416
Çys. ,^ικ, 9ro wwü Glu. x^eu Va·; x^eu
Ήρ Ala Pr s i+u Ser Ser Cys Pro I*...· jsju
Cys Deu Ser Gin Lsu His Ser Gly
41
Gin Ala Leu Glu Gly lie Ser Pro :'2s0l·......
Leu Gin Leu Asp Val Ala Asp Phe
OH ::::280
G*.u Glu Leu Gly Met. Ara Pro Ala
290295
Leu Gly His Sar Leu Gly He Pre
Ser Glr: Ais Leu Gin Leu Ala Qlv
235240
Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu 250255
Giu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Td
Ala Thr Thr He Trp Gin Gin Met
285
Leu Gin Pro
Figure BRPI9610977A2_D0186
Í2; INFORMATION FOR SEQ ID NO: 194:
íi; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
ÍA) LENGTH: 329 aru.no acids (ES TYPE·, sure add (C; STRANDEDNESS: single
ÍD< TOPOLOGY: Xmear (ii) MOLECULE TYPE; protein id SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 194:
Met Ala Asn Cys Ser Ila Met He Asp Giu 10 Xie Xie His His Leu <S: C. Lys
Arg Pro Pro Ara Pre- Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp
20 25 30
Val Ser He Leu Men Asp Arg Asn u&U Arg Leu Pro Asn Leu Giu Ser
„ „ 40 45
Phe Val Arg Ala Val Lys Asn Glu Asn Ala Ser Gly He Gw'w a
50 55 60
He Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Pro Ser Ala Thr Ala Pro
65 < V 75 80
Ser Arg Hrs Pro lie lie lie Lys Ala Gly Asp Trp Gib Giu Phe Arg
85 90 95
GwmU Lys Leu Thr Phe Tyx Val * *4u4x Giu Gin Ala *Ά S-'-uvl· Giu Gin
100 105 X . Λ
417 m Tyr Gíu Gly w—y Q-y Gly1 Ser
Pro Gly Gau Pro Ser Gly Pro lie Ser The lie Asr Pro Sex Pro Pro Ser Lye Gau Sex his Lyr Ser 130 13514C
Pro Asn Met Ala Tyr Lys Leu. Cys His Pro Glu Glu Leu Val LeuLeu
145 150 1SSISO
Gly His Ser Leu Gly He Pro Try Ala Pro Leu Ser Ser Cys ProSex'
165 17017S bit Ala Leu Άπ ueu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu Has Ser Glv Leu
180 1..85190
Phe Leu Tyr Sir, Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly He Ser Pro Glu
Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val Ala Aw Phe Ala HO 315220
Thr Tar He Trp Gap Gah Her Glu Glu Lev Gly Mei Ala Pro AlaLeu
Â25 :23:Q 235240:
Gin Pro Thr Glu Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ear Ala Phe GinArg
245 256255
Arg Ala Gly Gly Vai Leu Val Ala Ear Els Leu Gin Ser Phe Leu Glu 250 255270
Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Gly Gly Qlv Ser 275 280285
Asp Met Ala Thr Pro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Ser Phe 296 25Ô300
Leu Leu Lys Ser Lav Glu Gin Val Arg Lys He Gin Gly Asp Gly Ala Tk TV FT . wa *
Ala Leu Gin Glu Lys Leu Cys Ala Thr
325 (2) INFORMATION FOR SEQ Hi NO: 195:
(1} SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 329 amino acids
ÍB} TYRE: amino acid
ÍC} STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY > linear (ii} MOLECULE TYPE: protein
418
Met Ala Hr Cys Ser le Met Ha Asp Giu lie lie His Hl a Leu
Arg Pre
Ρχ<
Let
Let Asp ·*> £
Asn
Leu Ast. Asp Glu Asp
Vai Ser He Leu Mat Asp Arg Ast Leu Arg Leu
Pne Vai Arg Ala Vai Lys Asn Leu Glu Asn Ala
SO '55
Ila Leu Arg Ast Leu Gin Pro Cys Leu Pre Ser «5 70VS
Ser Arg His Pre He He He Lys Ala Gly Asp
8590:
Giu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu .«Ou105
Gin Tyr Vai Giu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly
He Gar Thr Xie Ass Pro Ser Pro Pro Ser Lys 130135
Pro Ann Met Ala Pro Glu Leu. Gly Pro Thr Leu
145 ISO25«
Asp Vai Ala Asp Phe Ala Thr Thr He Txp- Gin 165170
Gly Het Ala Pro Ala Leu Gin Pro Thr Gin Gly XaO185
Ha Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly Vai 195200
Leu Gin Sex Phe Lay Giu Vai Ser Tyr Arg Ual ............ ............ .......... .....->«<·...........
**·*· ^ <$χ·3· ................ ............ .......
Gin Pro Giy Gly Gly Ser Asp Met Ala Thr Pro 335 230235
Ser Leu Pro Gin Ser Phe Leu Leu Lvs Ser Leu
245258
Gin Gly Asp Gly Ala
260
Ala Leu Gin Glu Lys
265
Pro Asn Leu Glu Ser
Sar Gly He Giu Ale v
Ala Thr Ala Ala Pro
Trp Gm Giu She Arg «5 uln Aia> Gm Qm Gm
Glu Fro Ser Gly Pro 3 2 5
Glu Ser Hit Lys Ser
24G........ ..............
Asp Thr Leu Gin Leu
160
Qin Met Glu Glu Leu
175
Ala Met Pro Ala Phe
X90
Leu Vai Ala Ser His 205
Leu. Arg His Lsu Ala
Leu Gly pro Ala Ser
240 %suu ·«·<«*<. var .Arg Lys .255
Leu Cys Ala Thr Tyr gyn
419
Pr
Val eu
Se
Le
Ria /s Leu Ser
Leu ueu .7 3 5
Phe uet «xa
Ser ”< o
Figure BRPI9610977A2_D0187
SEQUENCE CHARACTERISTICS;
LENGTH.· 328 amino at TYPE; asuno acis STPAKDEDKES5: single TOPOLOGY: linear (S
CD} ‘RIPTIQNc SEQ ID NO
196;
Met *UA
Asn
Cys
Se.
Xle
M®
Asp
Glu
ID
Xie
Hxs
Leu
Lys
Se
He
Phe
Val
Ala
Fruit® u
Asc
Àsn
Leu
Asn
Asp
Asp
Leu
Asp
Arg
Asn
Asn
4?
Leu
Ala
Val
Lys
Asn
Le;
Glu
Asn
Ser
Gly rxe
Glu
Ala
Figure BRPI9610977A2_D0188
*le
Leu neu
Pro
Cys
Leu
Ser
Ala
Ala
Ala
Pro
Se.
Pro lie
He
Ala
Gly
Gin
Phe
Leu
Thr
IOC
Phe
Leu
Val
Leu
Glu
Ala
Gin
110
Gin
Gin
Glu
Sa:
TO
G1
Ser
120
Gly
Pro
125
He
Ser
Thr
Pro
Ser
135
Pro
Pro
Ser x>y$
Glu
140
Se.
His uys
Ser
Pre Asn Mee Ata Set Ata Pae Gm Arg Axrg Axe Guy'· Guy Val LeuVal
U5 IS 8 XS5 ~180
Αχ» Ser Hxs Leu Gin Ser Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val LeuArg
.................. !>y .. --7.^5.. .......
His Leu Asa Gm Pro Guy Guy Gly Ser Asp Met Ala Ttr Fro Leu Glv .180 M5190
Pre Ale Ser Ser Leu Pro Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser L«u GluGlr
Val Arg Lys He Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lvs LeuOys
215 ' HE 220
Aua Thr Tyr Lys Leu Cys Hus Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu GlvHis
225 230 235 242
Ser Leu Gly He Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Set GinAla
245 256 255 * x>su Gin ueu Aus Gly Cys Lev Ser Gxn Leu Mis Ser Gly Leu Phe Leu
2S0 365* 276
Tyr Gun Leu ueu Gin Ala Leu Gxu Gly He Ser Pm Glu Leu Gly 275 280285
Pro Tar ueu Arp Thr xeu Gin Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr 290 295SOQ
He Trp Gin Gin Het Glu Glu Leu Gly Met Ala Pm Ala Leu Gin Pro 310 315320
Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala
325 {2} INFORMATION FOP SEQ XL NG: 197;
(i? SEQUENCE CHARACTERISTICS-.
(A· LENGTH: 329 autino aci&s •E; TYPE: amine atad (CJ STRANDEDNESS; single w· TOPOLOGY: linear (ii> MOLECULE TYPE: protein
ÍKÍ· SEQUENCE DESCRIPTION:· SEQ XD NOr 197,-.
Ax a axsn Cys Ser xue Met Xue Asp Glu He He Els His Leu Lys 1 s 10 1«
421.
.eu
L>®u
Asn
Vai
Ser
Me
Leu
Leu
Phe
Ala
Vai
Leu
Ala
Se
Sex'
Leu
Pro
Ser
Ala
Ala
Pr>
He
A. À.-δ
Phe q 5
Arc
Phe
Leu
Vai
Leu
Gl:
Figure BRPI9610977A2_D0189
Vai
Gly
Ser
145
Asn
Ala
Phe .Ser
Á1®.
195 ,e
Asn
Pro
Ser * ς
Pro
Ser
Lys
Glu
140
Ser
H1.S
Lys
Me:
150
Pro
Leu
1S5
Ala
Ser
Phe
Arg
Arg
170
Ala
Leu
Gin
Glv
Th
Gin
Gly
Met
160
Vai
Leu
Vai
Phe
Xj&U
Vai
Vai
190
Leu
He
Asp
Met
Ala
Th
Figure BRPI9610977A2_D0190
Ala
HC
Ser
Xie
Leu
Pro
215
Ser
Phe
Leu
Leu
Lys
120
Ser
Leu
Gin
Gly
Asp
Ala x«
Glr
Glu
Lys
Leu
240
Ala Tin Tyr Lys Leu 245 Cys Hrs Pro Gru GXu 250 Vai Leu Leu Gly 255 His
Ser Leu Gly He 260 Pro Trp Ala Pro Leu 265 Ser Ser Cvs Pro Ser 270 Gin Ala
Leu Leu 275 Ala Gly Cys Leu Ser 280 Gin Leu His Ser Gly 285 Leu Phe Leu
Tvr * «Κ «ly Leu Leu Qin Ala Leu Glu Gly He Ser Pro Glu Leu Gly
290
295
300
Pro Ών Leu Asp Thr Leu Gin Leu
Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr
215 320
He Trp Gin Six: Max. Glu Glu Leu Gly (2; INFORMATION FOR SEQ ID KO: 198:
(i? SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A; LENGTH: 329 amino acids ;B} TYPE: ammo acid i'C; STRANDEDNESS: Single !D: TOPOLOGY; .linear ii? MOLECULE THE-. protein (Xij SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: ISE:
h........ uA Ala Asn Cys Ser 5 Met lie Asp Glu 10 •Í* * X*. He .33m Has Lys
Arg Pre Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn .Asn Leu Asn Asp Glu Asp
25 30
’Val He »eu Met Asn Arg Asn Leu Arg Lc&V Pres Asn Leu Guu. Ser
35 40 45
Phe Val Are Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He GUU Ala
50 55 66
lie À^fèvi Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro
65 T Q 75 80
Ser Arg His Pre He lie lie Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg
8.5 90 95
Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Gin Ala Gin Gm Gin
100 106 HO
Gin Tvt Val Glu Sly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pro Ser Gly Pro
115 12.0 125
II® Ser Thr i* ϊΧΧ He Asn Pro Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser
130 135 140
^Χ:Ο Asn Met Au. a Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe
145 ISO 155 160
Gin Arg Arg Ala Gly Gly Val Val Ala Ser His Leu Gin Ser Phe
155 170 175
423
Leo
Gly
Ser-'
Giy
225
Pro
Pro
Ser
Lt&u
Leu
305
Leu
Glu Vai Ser Tyr Ary
180
Ser Asp Met Ale Thr
195
Phe Leu Leu Lys Ser
210
Ala Ala Leu Gin Glu
230
Gru Glu Leu Vai Leu
245
Leu Ser Ser Cys Pro
260
Gin Leu His Ser Gly 275
Glu Gly He Ser Pro
230
Asp Vai Ala Asp Phe
310
Gly Met Ala Pro Ala
325
Vai Leu. Arg Ht«, Leu
5
Pro Leu Gly pro Ala s J
Leu Glu Gin Vai Arg
215
Lys Leu Cys Ala Thr
235
Leu Gly His
350
Ser Gin Ala Leu Gin
265
Leu Phe Leu Tyr Gin
280
Glu Leu Gly Pro Thr
235
Ala Thr Thr He Trp
315
Leu Gin Pro
Pro Gly Gly
190
Ser Ser Leu Pro Glu
205
Lys He Gin Gly Asp
220
Tyr Lys Leu Cys His
240
Gly Xie Pro Trp Ala
255
Leu Ala Gly Cys Leu
270
Gly Leu Leu Gin Ala
285
Leu Asp Thr Leu Gin
300
Gin. Glu Her Glu Glu
320 (2; INFORMATION FOR SEQ ID NO; 199:
:i> SEQUENCE CHARACTERISTICS :
(A; LENGTH: 318 amino acids (B; TYPE; asuno acid fC) STRANDEDNESS: single (D; TOPOLOGYr linear ire! MOLECULE TYPE; protein
(Xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NG : IPS:
Met Ala Asn Cys Ser Asn Met Xie Asp Glu Xle lie Thr His Leu Lys
1 5 m 15
Giu Pro Pro Leu Pro Leu Leu Asp Phe Asn Asn Leu Asn Gly Glu .Asp
20 25 30
Gin Asp» lie Leu Met Asp Asn Asn Leu Arg Arg Pro Asn Leu Glu Ala
35 40 45
424
Phe Asn Arg A,la Val Lys Ser Leu Gin Asn Ala Ser Ale He Glu Ser SO: ss gr lie Leu Ly* Art Leu Leu Pre Cys Leu Pro Leu Ala Thr Ala Ala Pro
70 75go
Thr Arg His Pro lie His He Lys Asp Gly Asp T'rp Asn Glu PheArg
90~95
Arg Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Lys Thr Leu Glu Asn Ala Gin Ala Gin 10.0 205HO
Grp Tyr Val Glu Giy Gly Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pro Ser Gly Pro 115 12C125
He Ser Thr He Asn Pro Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser HO 135140
Fro Asn Met Ala Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ale Ser AlaPhe
145 ISO 155ISO
Gun Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gin SerPhe
165 17017«
Leu Glu Val Ser Tyr Arg Vai Leu Arg Hi® Lev Ala Gin Pre Ser Gly 180 185iso
Gly Ser Gly Gly Ser Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin Val Í95............. ..........................................................
Arg Lys lie Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lys Leu Cys Ala 210 215220
*.hr Tyr rys veu Cys His Pre Glu Glu Leu Val Lav Leu Gly His Se^ 22S 230 235 ’ '24Q
Leu Gly lie Pro Try- Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Qin Ala Leu
..2.45.. 250255
Gm Leu Aaa Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr
260 265270
G*n Gly Leu Leu Gan Ala Leu Glu Gly He Ser Pro Giu Leu Glv Pro 275 280285
Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr He 29D 29330Q xtp Gin Gin Her Glu x^ru Leu G*y Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro
305 Jigy 4 {2? INFORMATION FOR SEQ I© NO; 200:
fi) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
425 (A? LENGTH: 322 anino acids
ÍB? TYPE; amino acid (C)· STRANDEDNESS: single ?D; TOPOLOGY -. linear (ii; MOLECULE TYPE: protein (Síií SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO-. 200;
Het &Â& Ast Cys Set Asn Met lie Asp G-ix He He His Leu Lys
·* * C .....*
.;. Xi Pre Pro Leu Pro Leu Leu Asp Phe Asn Am Le« Asn Sly Glu Asp
2u 25 30
Gin Asp Xie ueu Met Glu Asn Asn Leu Arg Arg Pro Asn Leu Glu Ala
** !.·?. 40 45
Phe Asn Arg Aa© Val Lys Ser Lieu Gin Asn Ala Ser A1& lie G »u Ser
50 S3 60
He Leu Lys Asn Leu Leu Pro Cys Leu Piro Leu Ala Λ <K4u4v Aj.a Pro
¢5 20 7 &; 80
Tnt Arg His Pro Xie lie He Arg Asp Gly Asp Trp Asn Glu Phe Arg
85 90 95
Arg Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Lys Thr Leu GXu Asn. Ala Gin Ala Gin
100 105 110
Gin Tyr Val Glu Gly Giy Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pro Ser Gly Pro
HS 120 125
lie Ser Thr He Asn Pro Her Pro Pro Ser Lys Glu Ser Hrs Lys Her
13 C 13 5 140
Fro Asn Met Ara Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe
.X4z> 150 155 160
Gin Arg Arg Ala Gay Gly Val Leu Val Ala Ser Hrs Leu **?··*· Ser Phe
155 X?0 1.75
Leu Glu Val Her Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Thr Pro
ISO 185 190
Leu Gly Pre* Ala Ser Ser Leu Pro GJLn Ser Phe I»eu Leu Lys Ser Leu
195 200 205
Gzu Gin Val Arg Lys He Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lys
210 215 220
426
Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu '7 7 *> 0 3:7:
C,ly Hi® Per uau C-ly lie Pre Trp Ala Pre Lau Sar Ser Cyg ProSex245 250255
Sirs Ale Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser Sir Leu Hus Ser Civ Leu
265 2S5270
Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly lie Ser Pro Glu
275 2SO285
Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala
290 295300
Thr Thr Xle Trp Glx: Gin Mat Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu
305 310 315320
Gin Pro ...... .... ......
•2? INFORMATION FOR SEQ W NO·· 201·.
(ij SEQUENCE CHARACTERISTICS :
(As LENGTH; 319 amino acids
ÍB: TYPE: amino acid (C! STRANDEDNESS; single >Ds TOPOLOGY: linear iiii MOLECULE TYPE; protein ixi) SEQUENCE DESCRIPTION t SEQ ID NO: 201:
Met .«k: Ala Asn Cys Ser 5 Asr Met He Asp Glu 10 He He *>h*· His Leu Ί ff. Lys
Pro Pro Lr&u Λ. Λ *u Pxc Leu Leu Asp Phe 25 Asn Asn Leu Asn Giy 30 Glu Asp
Gin Asp lie 35 3X^14 Met GvixU. Asn Asn 40 Leu Arg Arg Pro Asn 45 Leu Giu. Ala
Phe Asn 50 Arg Ala Val Lys Ser 55 Leu Gin Asn Ala Ser 60 Ala He Glu Ser
He 65 Leu Lys ASTi Leu Leu 70 Pro Cys Pre Leu 75 AL a Thr Ala Ala Pro 80
Thr Arg His Pro Ila 85 Xie He Arg Asp Gly 90 Asp Asn Glu Phe OR Arg
42?
Arg Lyu ^eu Thr Phe Tyx x^eu uys Tnr ul.u Am Ala Qtn Ata Qin
100 105lie
Gin Tyr Vai Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pre Ser Gly Pro
115 125.„29 lie Ser Thr He Asn Pro Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser ã»v .<. u 5 .λ 4 v‘
Pro Asn Met Ala Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser AlaPhe
14.5 150 - 155160
Gin Arg Arg Ala Gly Gly V&À Leu Vai .Ala Ser Hrs Lew Gin SerPhe
165 170175
Leu Glu Va.1 Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His Leu Ala Gin Pre Ser Gly
180 185190
Gly Sar Gly Gly Ser Gin Ser Phe Leu Leu Ly» Ser Leu Glu Gin Vai IPS 200205
Arg Lys lie Gin. Gly Asp Gly Ala Ala Leu Glrs Glu Lys Leu Cys Ala 210 215220
Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Vai Leu Leu Gly HisSer
225 210 235 “240
Leu Gly He Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin AlaLeu
245 250255
Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr
260 285270 xsun Gxy Leu Leu Qtn Ala Leu Glu Gly He Ser Pro Glu Leu Glv Pro 275 280 285......
Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Vai Ala Asp Phe Ala Thr Thr He 290 295300
Trp Gin Qin Mat Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro
305 310315 *2) INFORMATION FOR EEQ ID ND; 202:
: i ; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A; LENGTH: 322 aaaino acids (Bi TYPE: amno arid (G) STRANDEDNE.SS; single (Π TOPOLOGY': linear (ii; MOLECULE TYPE: protein
428
Leu
Leu
Phe
As
Lys
Ass er
Pre
Met
Leu
Figure BRPI9610977A2_D0191
Hit
Pre is
His
Arg
Lys
Thr
100
Phe
Tyr
Giy
Pro
145
Leu
Figure BRPI9610977A2_D0192
Leu
Leu
Gly
Gin
Ser
110
Asn
Pro
Asn
Met hr
150 '0
Ala
Gly
Glu
Gly
Gin
210
Vai
Sex
Ala
Vai
Ala
Ser
Leu
Arg
Ils
Lys
245
Ala
Leu
Pro
Leu
Gly
Se:
Vai
Vai
Leu
Gly
D NO 7 δ u c
Xle Asp Glv f!. lie lie Thr Hi.® L&u
Asp Phe 25 Asn Asn Leu Asn Gly 3 0
Asr 40 Leu Arg Arg Pro Asn 4S j G
Lxf&U Gin Asn Ara Ser 6G a Λ ~ Xle Xi <U !<>
cyr Leu Pro Leu 75 A j. a Th.** Ala Ala
Lys Asp Gly «0 Asp Trp Asn Glu Phe 9 5
LT® Thr 105 Leu G a. Asn Ala Gan 1X0 Ala
Gly .120: Ser Pre Gly Glu Pro Sex Gly
Pre Pro Ser Lys Glu 140 Ser Mrs Lys
Ala: Met Pro Am 155 Phe Ala Ser A«.a
Leu Vai Ala 170 Ser His Leu Gin Ser 175
Leu Arg 105 His Leu Ala Gin Pro 190 Thr
Pre 200 Gin Ser Phe Leu Leu 205 Lys Ser
Gly Asp Gly Ala Ala 22 Q Leu Gin G.»u
Cys His Pro Glu 235 Glu Leu Vai Leu
Txp Ala Pro 250 Ser Ser Cys Pro 255
Cys 265 Ser Gin L-eu His Ser 270 Gly
Lys
Arc
Pro
Ser
Phe
Leu
Lys
So:
Leu
Phe l§v
Leu
24Ü
2«
Ph® Leu Tyr Qin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly Ha Ser Pro Glu
375 280285
Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Va.‘ Ala Asp Phe
290 295360
Thr Thr :1a Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu
395 31C 315320
Gin Pro
2; INFORMATION FDR EEQ ID ND: 203:
(tj SEQUENCE CHARACTERISTICS;
ÍA) LENGTH: 306 amino aeida (B) TYPE.- astino acid (C: STRANDEDNEES: single
ÍD; TUPGLOGY: linear iiiJ MOLECULE TYPE; protein (xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID ND: 203:
Ai& Asn Cys Ser Ixe Met He Asp Glu He He Hxs His Leu Lys Am ::1 ........ :::5:: .......... 1CTC
Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Am Asn Leu Asn Asp Glu Asp Val
257·:·
Ser He Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Prc< Asn Leu Glu Ser Phe
35.............. 40 45
Vat Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Sex Gly H® Glu Ala He
SO 55SO*
Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Ot 7075
Arg Kia Pro Ila He He Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu
.......... ..........85........ ........ ........... ............ 9C· α ς
Lys Leu Thr Phe iyr Leu Val Thr Leu Glu Gin Ala Gln Glu Gin Gin
100 105 ng
Tyr Vax glu G*y Gty Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pm Ser Glv Pro He
115 120 125
Ser Thr He Asn Pre» Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro $ W - ·» c « ........... ............ ........
430
Aar; Met Glu Val His Pre Leu Pro
i.sp Phe Let Leu Gly Glu Tx~- Lys
Thr Pro Val Leu Leu Pro Ala Val
........................................................ <yg|
Thr' Git Met Gm Gm Tnr Lys Ala
Gin Asp lie Leu Gly Ala Val Thr 180
Ala Arg Gly Gin Lsu Gly Pro Thr 195208'
Leu Ser Gly Gin Vs I Arg Leu Lex: q 28 5
Gly Thr Gin Leu Pro Pre Gin Gly 225230 • Asn Ala He Phe Leu Ser Phe Gin _ ..
Phe Leu Met Leu Val Gly Gly Ser
260
Gly Asn Met Al® Ser Pro Ala Pro
275 280
Ser Lys Leu Leu Arg Asp Ser His 29C 295
Cys Pro
305
Leu Leu Leu Gru Gly Val Met. At. a
185 190
Cys Leu Ser Ser Leu Leu Gly Gin ->fre .<&· V
Leu Gly Ala Leu Gin Ser Leu Leu
220
Arp Thr Thr Ala His Lys Asp Pro
23524G
His Leu Leu Arg Gly Lys Val Arg
250255
Thr Leu Cys Val Arg Glu Ph® Gly
26527Q
Pre Ala Cys Asp Leu Arg Val Leu
285
Val Leu His Ser Arg Leu Ser Gin
300 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO; .204.-.
i; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
{A) LENGTH; 306 amino acids (E) TEPE; amino acid (C) STRANDEDNESS; single (Di TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: protein
ÍXÍ) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NG; 204:
Ala Asn Cys Ser lie Met lie Asp Glu He He His Hás Leu Lys Arg
Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Ann Asp Glu Asp Val
25 30
31
Ser He Leu Met /Sy /
Vai Arg Ala V&l
Cl· rh
M
Leu Arg Asn Leu
Arg His Pro lie
Asn «.rg .Asn· ueu
Asn Leu G.a u
Gin Pro Cys Lev
Arg Leu pm Asn
Asn Ala Sex Gly
Leu Glu Sex· Ph®
He Glu Ala HeLys Leu Thr Phe
100
Tyr Vax Glu Gly
113
Ser Thr He Asn
0
Asn Met Leu Pro
145
Gly Glu Trp Lys
11½ He Lys Ala
........
Tyr Leu Vai Thr
Gly Ala Vai Thr
ISO
Leu Gly Pro Thr
195
Vai Arg Leu Leu
Gly Gly Gly Ser
120
Pro Ser Pro Pro
Thr Pro Vai Leu
ISO
Thr Gin Met Glu
165
Leu Leu Leu Glu
Pro Ser Ala Thr
Gly Asp Trp Glr
x.eu ulu Gm aua
105
Pro Gly Glu Pro
Ala Ala Pre SaOO
Glu Pne Arg Glu
Gin usuu Gin
Pro Pro Gin Gly
225
Leu Ser Phe Gin
Vai Gly Gly Ser
260
Ser Pro Ala Fro
275
Arg Asp Sex Sis
290
Cy& Leu Ser Ser
200
Leu Gly Ala Leu
215
Arg Thr Thr Ala
230
His Leu Leu Arg
245
Thr Leu Cys val
Ser Lys Glu Ser
140
Leu Pro Ala Vai igs.
Glu Thr Lys Ala
170
Gly Vai Met Ala
185
Leu Leu Giy Gin
Ser Git' Pro He .1.25
His Lys Sex Pro
Pro Ala Cys Asp
280
Vai Leu His Ser
...... .......
Gin Ser Leu Leu
220
His Lys Asp Pro
235
Giy Lys Vai Arg
250
Arg Glu Phe Gly
285
Leu Arg Vai Leu
Asp Phe Ser Leu
160
Gin Asp He Leu
175
Ala Arg Gly Gin
190
Leu Ser Gly Gin
205
Gly Thr Gin Leu
Arg Leu Ser Gin
300
Asn Ale He Ph®
240
Phe Leu Met Leu
25.%
Gly Asn Met Ala
270
Sex Lys Leu Leu
285
Cys Pro Glu Vai
His Pro
305
432 (2; XNFDRKZ.TXON FOR SEQ ID NG; 205;
t i; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A; LENGTH: 3C£ ammo acids <!>· TYPE: amine acid {C} STRAtW-EDNESSL single (D.j TOPOLOGY: linear (it > MOLECULE TYPE; protein
(Xi) SEQUENCE DESCRIPTION : SEQ ID NO : 205 ;
Ala |1!........· Asir: Cys Ser Ils Met He Asp Glu He 10 He His His Leu Lys Arg
Pro Pit Ala Fra 2G Leu L&U Asp Pro Asn 25 Asn Leu Ann Asp Glu 3 0 Asp Val
Ser Ila Leu 35 Met Asp Arg Asn Leu 40 Arg Leu Pro Asn Lau 45 Glu Sex- Phe
Vai Arg SC Ala Vai Lys Asn Leu 55 Glu Asn Ala Ser Gly 60 lie Glu Ala He
Leu 65 Arg Asn Leu Gin Pro 70 Cys Leu Pro Ser Ala 75 Thr Ala Ala Pro Sex* SO
Arg His Pro He lie 85 He Lys Ala Gly Asp 90 Trp Gin Glu Phe Arg $5 Glu
Lys Leu Thr Phe 103 Tyr Leu Val Thr Leu 105 Glu Gin Ala Gin Glu 110 liB Gin
Wyj, Val Glu Xii Gly Gly Gly Gly Ser 120 Pro Gly Glu Pro Ser 125 Gly Pro He
Ser Thr ISC- He Asn Pro Set Fro 135 Pro Ser Lys Glu Ser 140 His Lys Ser Pro
Asa 145 Met. Val Leu Leu Pro 150 Ala Val Asp Phe Ser 155 Leu Gly Glu Trp Lys ISO
Thr Gin Met Glu Glu 165 Thr Lye Ala Gin Arp 170 He Leu sly Ala Val 175 Thr
Leu Leu Leu Glu 180 Gly Val Met Ala Ala 165 Arg Gly Gin Leu Gly 190 Pro Thr
Cys Leu Ser- 135 Ser Leu Leu Gly Gin 200 Leu Ser Gly Gin Val 205 Arg Leu
433
Ala Leu Gin Ser Leu Leu Gly Thr Gin Leu Pro Pro Gin Gly
............ 210 215 23c
Arg Thr -?2C. Thr Ala Hxs Lys Asp Pro Aar Ala He Phe ucu Ser Phe Sir. 330 235 240
Hrs Leu Leu Arg Gly Lys Vai Arg Phe Leu Met Leu Vai Gly Gly Ser 245. 25Ô 285
Thr Leu Cys Val Arg Glu Phe Gly Gly Asn Met Ala Ser Fro Ala Pro 360 265 .27 g
Pro Ala Cys Asp Leu Arg Val Leu Ser Lys Leu Leu Arg Asp Ser Hie 375 286 285
Vai Leu 2 SC His Ser Arg Leu Ser Gin Uys Pro Glu Val His Pro Leu Pro 295 30Q
Thr Pro
305
INFORMATION FOR SEQ· ID NO: 206:
(1) SEQUENCE CHARACTERISTICS :
(A) LENGTH; 306 amino acids (E; ΉΡΕ: amino acid
f ;*K J STRANDEDNESS; single
<D) TOPOLOGY; linear
(il) MOLECULE TYPE: protein (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEO ID NG: 206:
Ala Asn Cys Ser He Met. lie
• S 71.................................................... :::: 5 Leu Leu Asp
Pre Pro Ala Pro 20
Ser lie Leu 35 Met. Asp Arg Asn
Val Arg 50 Ala Val lys Asn Leu 55
Leu 65 Arg Asn Leu Gin Pro 70 Cl’S
Asp Glu He He His His Leu Lvs Arg
1015
Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Vai
30
Leu Arg Leu Pre Asn Leu Glu Ser Phe 4045
Glu Asn Ala Ser Gly lie Glu Ala He
Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser gg
Arg His Pro lie He He Lys Ala Gly Asp so
Gin Glu Phe Arg Glu
434 uys Lex: Tnr pne Tyr Leu v&_ Thr nex; Gm Gm àxa Gin Glu Gin Glr K >0 .............. ............liii...................
T-'r Va?' 71u G;\ Gly Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pro Ser Gly Pro Xie 115 ' 120 2,25
Ser Thr Ire Asn Pro Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser Hie Lys Ser Pro
Asn Me” Ala Vai Asp Phe Ser Leu Gly Glu Trp Lys Thr Gl~ Meo Gin 145 ISC ISE
Glu Thr Lys AU Gin
155 v&sL
ΚΑ»χ·Ψ*ϊ' «γ.χ λ,
Hrs Lys
225
Gly Lys
Arg Glu
Leu Arg Vai Leu Ser
Her
Ara
Gly Gio Leu
.............. ::
Asp Xie l-<uu Gly Ala V&.1 Thr Leu Leu Leu Glu
170 HE
Ser
Goy
Gin
20C
Leu
185
Vai
Leu Leu Gly Thr Gin Leu Pro
....................................2*5.......................
Asp Pro Asn Ala Xie Phe Leu
230
Vai Arg Phe Leu Mat Leu Vai
245
Phe Gly Gly Asn Mat Ala Ser
Gly
Thr
190 >ser
Arg Leu Leu
Leu Gly Ala
OS
Leu
Pro Gin Gly Arg Thr Thr Ala
Ser Phe Gin His Leu Leu Arg
235 240
Sly Gly Ser Thr Leu Cys Vai 25C....... 2sa:........
Pro Ala Pro Pro Ala Cys Asp
Lys Leu Leu Arg Asp Ser
280
Hrs ‘Vai Leu His S&z
288
Arg Leu Ser Gon Cys Pro Glu Vai His Pro Leu Pro Thr Pro Va'1 Le*' 250 295 300
Leu Pro
OS (2) INFORMATION FOP; SEQ XL NO: 207:
U) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A) LENGTH: 3S6 amino acids (S) TYPE: ardao acid í C) STRANDEDNESS: s ing1e
CD) TOPOLOGY: linear iii) MOLECULE TYPE·, pro is in
435 (Xi) SEQUENCE DESCRIPTIONSEQ ID KC
Ala Asn Cys Ser He Her. He Asp Glu He He ,-’xs Hrs Set Lyr Ary
5 1015
Pro Pro Ale Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu AspVal
2Q 2530
Ser He. Lea Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Pue 35 .4045
Val Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Glu Ala lie SO 5560
Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Fro Ser 65 7 07 5
Arg His Pro He lie Ila Lys Ala Gly Asp Try Gin Glu Phe Arg Glu 85 90§5
Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin 100 105T10
Tyr Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Fro Gly Glu Pro Ser Gly Pro He 115 120125
Ser Thr He Asn Pro Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro 130 135140
Asn Met Asp Phe Ser Leu Gly Glu Trp Lys Thr Gin Met Glu GluThr
145 150 155150
Lys Ala Gin Asp He Leu Gly Ala Val Thr Leu Leu Leu Glu GlyVal
165 37Q175
Met Ala Ala Arg Gly Gin Leu Gly Pro Thr Cys Leu Ser Ser Leu Leu 180 185190
Gly Gin Leu Ser Gly Gin Val Arg Leu Leu. Leu Gly Ala Leu Gin Ser 195 200205
Leu Leu Gly Thr Gin Leu Pro Pro Gin Gly Arg Thr Thr Ala His Lys 210' 215.220
Asp Pro Asn Ala He Phe Leu Ser Phe Gin His Leu Leu Arg Gly Lys 226 230235
Val Arg Phe Leu Met Leu Val Gly Gly Ser Thr Leu Cys Val Arg Glu 245 250255
Phe Gly Giy Asn Met Ala Ser Pre Ala Pro Pro Ala Cys Asp Leu Arg
260 265270
43€
Vâi Leu Ser Ly® Leu Leu Arg Arp Set’ Hrs Vau Leu Hrs Ser Arg Leu
271 272 285
Ser Gl« Cys Pre Glu Val His Pre Leu Pre Thr Pro Vai Leu Leu Pre
296 .295 300
Ala Val..................
305 (2; INFORMATION FOR SEQ ID NO; 208;
{i} SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 396 ammo arid® (Bi TYPE·, aaàno arid (C· STRANDEDNESS; single (D· TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE.; protein (X.X.) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 205:
Ala Asn Cys Ser He Mat
5
Pre Pre Ala Pre Leu Leu 20
Ser Ils Leu Met Asp Arg .........................Bil....... .....
Val Arg Ala Val Lys Asn 50
Leu Arg Asm Leu Sin Pro
70
Arg His Pre He lie lie
S5
Lys Leu Thr Phe Tyr Leu
103
Tyr Val Glu Gly Gly Gly
115
Ser Thr He Asn Pro Ser 130
Asn Met Gly Glu Trp Lys
145 ISO
He Asp Glu He 10 He His Has Leu Li's Arg
Asp Pro 'ί ε X X Asn Lev Asn Asp Gxu 30 Asp Val
Asr Leu 40 Arg Leu Pro Asn Leu 4S Glu Ser Phe
Leu 55 Glu Asn Ala Ser Gly 60 He Glu Ala lie
Cys Leu Pro Ser Ala 75 Thr Ala Ala Pro Ser 80
Lys Ala Gly Asp 90 Trp Gin Glu Phe Arg 95 Glu
Val Thr Leu 305 Glu Gin Ala Gin Glu 110 Gin Gin
Gly Ser 12 C Pm Sly GxU Pro Ser 125 Gly Pm He
Pro 135 Pro Ser Lys sst Ser 1¼ x> His Lys Ser Pro
Thr Gin Met Gru Glu jL5 5 Thr Lys Ala Gin Asp 153
437 lie Leu Gly Ala Vai Tor Leu Leu Leu Glu Gly Vai «et Ala Ala Arg
Gly Gin Leu Gly Pro Thr Cys Leu Ser Ser Leu Leu Gly Gin ueu Snr
180 18-5 190
Gly Gin Vai Arg Leu Leu Leu Gly Ala Leu Gin Sas: Leu Leu Gly Thr
195 200 205
Gin Leu Pro Pro Gin Gly Arg Thr Thr Ala Hrs Lys Asp Pro Asn Ala
Figure BRPI9610977A2_D0193
Pne Leu Ser Phe Gin His Leu Leu Arg Gly Lys Vai Arg Phe Leu
2'7« 730 /V ·λ.··.
Met Leu Sal Gly Gly Ser Thr Leu Cys Vai Arg Glu Phe Gly Gly Asn
245 250 255
Met Ala Ser Pro Ala Pro Pro Ala Cys Asp Leu Arg Vai Leu SerLys
Leu Leu Arg Asp Ser His Vai Leu His Ser Arg Leu Ser Gin Cys Pro
275 .3502SS
Glu Vai His Pro Leu Pre Thr Pro Vai Leu Leu. Pro Ala Vai Asp Phe
280 295300
Ser Leu
305.................... ........
(2 i INFORMATION FOR. SEQ IP NO: 209:
ilj SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 30$ ax&ino aciüs (Hi TYPE: amino acre (C? STRANDEDNESS: Single fD) TOPOLOGY: linear ixj.) SEQUENCE DESCRIPTION; EEQ ID ND: 209:
A*a Asn Cys Ser He Met He Asp
Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro
Ser lie Leu Mat Asp Arg Asn Leu
40
Glu lie He His His Leu Lys Arg
IS
Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Vai 25 30
Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe
Leu
Thr
Me *hv
Figure BRPI9610977A2_D0194
.•eu
Pha jw®:U
Phe
195
168
Gin
Leu val
Se:
Leu
P:
Pro
Ala
His
Vai
Figure BRPI9610977A2_D0195
Val
Pro
Leu Gxy Gx?<i 275 T**r> τ Tnr ΓΠ *> Wt-k.AÀ Net 290
Leu Gly Ala Val Thr Ifeu Leu
290 295
Lea
Fr
Sss
Ala
Th:
Val
60 He ^Ά·Χ<·. A.JL& He
Pro Sax’ A..L& THr /kw- A Ala Pro Ge*' 80
Gj.y Asp 90 Trp GU*-> Glu Phe Arg Glu
Leu 103 Glu Gin >4*·ίλ·*ψ GXv Gin -5 £ f> ΛΛ ,^Γί
Pro Gj.v Glu Pro Ser 12 <' Gly Pro He
Sar Lys .ki¥ *Λ· fcul. Ss r 140 His Lys Ser Pro
Ser Leu Leu 155 Gly Gin. Àyc&U Gly 26 0
Leu Gin 170 Sax Leu Leu Guy Tar
3 ©5 His Lys Asp Pro Aan Ala ISC He
Gly Lys Val Ax?g 205 Phe Le.u Met
Val Arg G1 Phe 220 Gly Gly Asn Met
At'p Leu Arg t? Val Ser Lys Leu 240
Ser Arg 250 Leu Ser AM usln Cys Fro 255 Clu
deu 285 irf^Ü Pro Ala Val Asp Phe 270 Ser
Glu GvA\4 TJir Lys Ala 285 Gin Asp He
Glu Gly Val Met Ala Ala Arg Gly
2? information for
J NO;
HARACTERISTI
439 íAi LENGTH. 3 06 jaaino acids !B; TYPE; amino acid
ÍC5 STPANDEDKESS; single (Di TOPOLOGY; linear
Uii MOLECULE TYPE; protein
ÍXX5 SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID ND; 210;
Ala Asn Cys Ser lie Met He Asp Glu He He His His Leu Lys Arg
Pre Pro Ala Pro Lsu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Val .......... 20 25 ..30
Ser He Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe 35 4045
Val Arg Ala Val Lys Ann Leu Glu Asn Ala Ser Gly XI· Glu Ala lie SO 556θ
Leu Arg Asn Leu Gia Pro Cys Leu Pre Ser Ala Thr Ala Ala ProSer áã 70 75go
Arg Hi® pro He He He Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe ArgGlu
9095'
Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Qin Ala Gin Glu Gin Gin OO 195no
Tyr Vau Glu Gly Gly Gly Gly Sei Pro Gly Glu Pro Ser Gly Pro He H5 129125
Ser Thr He Asn Pro Ser Pro pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro 230 135140
Ass Met Gly Thr Gin Lsu Pro Pro Gin Gly Arg Thr Thr Ala HisLys
145 150 1.55ygg
Asg Pre Asn Ala He Phe Leu Ser Phe Gin His Leu Leu Arg GlyLys
165 ............... ......... ............. 170 175
Va: Arg Phe Leu Met Leu Val Gly Gly Ser Thr Leu Cys Val Arg Glu 180 185
Phe Gly Gly Asn Met Ala Ser Pro Ala Pro Pro Ala Cys Asp Leu Arg 195 2002Q5
Val Leu Ser Lys Leu Leu Arg Asp Ser His Val Leu His Ser Arg Leu 210 215229
440
A®'
He;
Pr
Pre uet
Le ueu weu mu
Ser
85 mu
Vai
Se
Figure BRPI9610977A2_D0196
INFORMATION FOR SEQ «sra.no acios
LENGTH: 30
TYPE: amin
STRANDEDNESS: single
TOPOLOGY; linear (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NQ; 211;
Ala Asn Cys Ser He Met lie Asp Glu He He H15 Ria Leu Lys Arg 5 1815
Pre Pro Ala Pre Leu Leu Asp Pre Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Val 20 253Q
Ser He Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe 35 4045 \a.; Arg Ala Val Lys Asn Leu Giu Asn Ala Ser Glv Hs Glu Ala He SO 556o
Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser 70 7580
Arg His pro He He He Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu 85 $0g
Lys Leu Thr Ph® Tyr Leu Val Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin IOC· 10511$
441
Tyr Va- Gau Gay Gly Guy Giy Ser Pro Gly Glu Pro Ser Gly Prs li© (< v ' Iflfillfl :K ' ................ .............iliif'............ ................................
Ser Thr He Asn Pro Ser Pro Pro Ser Lys Giu Ser His Lys Ss:-.v Pro Ί a Γ. â *· a A * *>· ·Λ .V *,· Λ <* ,U
Aen Met Gly Arg Thr Thr Ala His Lys Asp Pro Asn Ala He Phe Leu
145 150 155ISO
Ser Phe Gin His Leu Leu Arg Gly Lys Val Arg Phe Leu Met LeuVal
IAS: 170175
Gly Gly Ser Thr Leu Cys Val Arg Glu Phe Gly Gly Asn Met Ala Ser
180 185150
Pro Αχκ,ίι Pro 195 Prt. ills Cys Asp Leu 200 & ν'-ιΓΎ :ιΠμ»: $“[·? Val Leu Ser Lys 205 Leu Leu Arg
Asp Ser His Val His Ser Arg Alrêíiw. Ser Gin Cys Pro Giu v His
*? t r 216
A* x·
Pro Leu Pro Thr Pre V®1 Leu Leu Pro Val. Asp Phe Ser Leu Giy
23 0 235 240
Glu Lys Thr Gin Met Glu Glu Thr Lys Gin Asp Tie Leu Glv
245 250 a2hba
Ala Val Leu Leu Leu Glu Gly Val Met Ala Ala Arg Giy Gin Leu
260 265 270
Gly Pro Thr Cys Leu Ser Ser Leu Leu Gly Gin Leu Ser Gly Gin Vai
2H 2&0 285-
Arg Leu Leu Gly Ala Leu Gin Ser Law Leu Gly Thr Leu Pro
230 <5 0« Ws·1 D 300
Pro Gin
305 (2} INFORMATION FOR SEQ XL NG; 212:
(!) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A; LENGTH: 306 asiino acids (3; TYPE: amino add ÍC) STRANDEDNESSt single (Df TOPOLOGY: linear iic) MOLECULE TYPE: protein {Xi} SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 212:
2
Ala Asr. Cys Ser He Met He Asp
Glu He He His His Leu Lys Arg
Pre Pro Ria Pm Leu Leu Asp Pro .................20 ........
Ser Xle Leu Met Asp Arg Asn Leu 3540
Val Arg Ala Val Lys Asm. Leu Glu SO«5
Leu Arg Asm Leu Gin Pro Cys Leu 6570
Arg Hie Pre lie He lie Lys Ala 85
Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr .......... 100 .......
Tyr Val Gru Gxy Gly Gly Gly Ser
H5120
Ser Thr He Asn Pro Ser Pro Pro '130135
Asn Met Ala Hie Lys Asp Pro Asn 145ISO
Leu Leu Arg Gly Lys Val Arg Phe .................... 165.......
ueu Cys Val Arg Glu Phe Gly Gly 180
Ala Cys Asp Leu Arg Val Leu Ser
185200
Leu His Ser Arg Leu Ser Gin Cys
210215
Pro Val Leu Leu Pre Ala Val Asp 225230
Gin Met Glu Glu Thr Lys Ala Gin 245
Leu Leu Glu Gly Val Met Ala Ala
260
Leu Ser Ser Leu Leu Sly Gin Leu
275 280
Asn Asn Leu Asm Asp Glu Asp Val
3 0·......
Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe
Asn Αλ.& Ser Gly He Glu Ala lie
Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser
80
Gly Asp Try· Gin Glu Phe Arg Glu 90
Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin 3 05 ho
Pre Gly Glu Pro Ser Gly Pro He
125
Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro
140
Ala He phe Leu Ser Phe Gin His
155iso
Leu Met Leu Val Gly Gly Ser Thr 170175
Asn Met Ala Ser Pro Ala Pro Pro 185igo
Lys Leu Leu Arg Asp Ser His Val
205
Pre Glu Val His Pro Leu Pro Thr
220
Phe Ser Leu Gly Glu Trp Lys Thr ................. «fc ’Mi *·
240
Asp He Leu Gly Ala Val Thr Leu 250 255
Arg Gly Gin Leu Glv Pro Thr Cvs
265 ’ 270
Ser Gly Gin Val Arg Leu Leu Leu
285
443
Gly All Leu Gin Gar La- Leu Gly The Gin Leu Pre Pro Gin Gly Arg 290 295 300
The Thr
305 {I'j INFORMATION PGR SEQ IQ ND; 313:
Í1Í SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A· LENGTH; 301 ammo acids (Bi TYPE: amino acid
ÍC; STRANDEDNESS: Single iD} TOPOLOGY: linear
Ul) MOLECULE TYPE; protein txi; SEQUENCE DESCRIPTIONi SEQ ID NG: 213:
Ala 1 Asn cys Ser ..He. Met Xle Asp Glu lie 10 He His Hrs Lys 15 Arg
Pro Ere Ara Pre 28 Leu ::LeU': Asp Pro Asn 25 Asn Leu Asr Asp Glu 30 Asp Vai
Ser lie Leu 35 Mat Asp Arg Asn Le- 4.0 Arg Leu Pro Asn ueu 45 Glu Ser Phe
Vai Arcs 50 Ala Vai Lys Asn Leu k;.r Glu Asn Ala Ser Gly 60 Giu Ala He
Leu 65 Arg Asn Let QXrs Pre Cys Leu Pro Ser Ala 75 Thr Ala Ala Pro 80
Arg Hrs Pro « «Ê 11« 85 He Lys Ala Gly Asp 90 Trp Gin Glu Phe Arg 95 Glu
Lys Leu Thr Phe 100 Tyr Leu Vai Tnr Leu 105 Glu Gin Ala Gin Glu 110 Gin Gin
Tyr Vai X^ Gly Gly Gly Gi y Ser 126 Pro Gly Glu Pro Ser 125 Gly Pro lie
Ser Thr 130 11« Asn Pro Ser Pro 135 Fro Ser Lys Glu Ser 140 His Lys Ear Pro
Asn 145 Met Asp Pro Asn Ala ISO He Phe Leu Ser Phe 155 Gin His Leu Leu Arg 16Ό
Gly Lys Vai Arg Phe 165 Leu Met Leu Vai Gly 170 Gly Ser Thr Le: Cys 175 Vai
Arg Glu Phe Giy 180 Giy Asn Met. Ser Pre Ala Pro Pre Ala 190 Cys Asp·
Xy'ijV- Arp Val lí&U Ser Lys Leu Leu Aro Asp Ser W 4:-<t Val Leu His Sex-
_c M 200 205
Arg wSu sS-êjr Gin Cys Pro Glu Val His. Leu Pro Pro Val Leu
c*X S-: 215. 2.20
Kv Pro Ala Val Asn Phe Sex' Leu Gly Trp Lys •Uk Glx: Met Guu
·<&>·Χ ·.**·· 23 0 235 240
Glu Thr Lys Ala Gin Asp He Leu G1Y Ala Val Leu Leu Leu Glu
245 250 2
Gly Val Met Ale Ara Arg Gly GuTi Leu G^y Pro .’P'fct-y» &·*>·&·& Cys Leu Ser
260 265 270
Leu Leu Gly .Girt Leu Ser Gly Gin Val Arg Leu Leu Gly A.I& Leu
'y-tj :5^ 290 285
αλ1Χ1·. Ser Lau Leu Gly Thr Gin Leu Pro Gin Gly Arg Thr Tnr Ala
293 295 300
Hus Lya
305 (2} INFORMATION FOR SEQ ID NG: 214:
¢1} SEQUENCE CHARACTERISTICSt {A· LENGTH: 308 amino acids !E; TYPE: aau.no acid {C; STRANDEDNESS; single (DJ TOPOLOGY: linear tii: MOLECULE TYPE: protein ixi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 214:
AX& 1 Am Cys Ser 7>gWi:Í Met He Asp Glu He 19 He Hrs K.1& Leu Lys 15 Arg
Pro Pro Ala Pro 20 Leu Leu Asp Pro Asn 25 Asn Leu Asn Asp Glu 30 Asp Val
Ser He Leu 35 Met Ast? Arg Asn uea 40 Arg Lau Pro Asn Leu 45 Glu Ser Phe
Val Arg Ala Val Asn Leu GxU Asn Ala Ser Gly lie Glu Ala He
arg aaa vaa Lys Asn ueu Giu Asn Ara Ser G1 SC 55
445
Cv
Pr ^vla rhr
Ala
Se
Ar·
His
Pro
SS aer
Glv
Asn:
145
Me
Ala
Phe
Leu
Leu
Ser
Lvs /s
Vax
Asp
Phe
Asp
Ala
Figure BRPI9610977A2_D0197
Sin .«eu
Ser
Sly
290
Pro
305
Phe
100
Gly
Ser
He
Phe
Met
Met
ISC
Leu
Ser
260
Gin val
Sex
S&3
Phe
Leu
10ft
Pre
Ser
Gin
Gly
Ser
Pre
Ser
Let
Gly
Lys
Leu
185
Val
Gly
Ser
Leu cys
Val
Arg
Glu
175
Pne
Ala
Leu
Val
Leu
Lev
Se.
Ala
Pro
185
Pro
Cys
Asp
ISO
Val
Arg
Asp
Pro
215
Ser
His
Val
Leu
Se
Sê.
Pro
Lys
Gly
Leu
Gly a j.
Pro
Thr
Val
Leu
Leu
Met
Glu
Glu
Lys
Val
Pro
Thr
Arg
Leu
28C
Leu
G1
295 «2? INFORMATION FOR SEQ ID NO; 215:
ii) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 305 amine acids
5E} TYPE: amino acid (C? STRANDEDNESS: single
Leu
250
Cys ueu
Lew
Leu
Thr
Leu
Glu
Gly
Val
Het
Ser
Ala
Thr
300
Se:
Leu
285
Ala
Leu
270 jLriSU.
Ser
Leu
446
ÍD) WPÇiQGY; itnear íú! MOLECULE TYPE: protein ixii SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO.· 215;
Ala Asn Cys Ser
Ils Met He Asp Glu He
He His Hie Leu Lys Arg
Pro Pro Ala Pro
Leu Leu Asp Pro Asn Asn
Ser Ils Leu Met
Vai Arg Ala Vai
Leu Arg Asn Leu
Arg Bis Pro He
Lys Leu Tar Phe
100
Tyr V&l Gru Gly
Ser Thr Ils Asn
130
Asa Ker Glu Vai
145
Asp Ph® Ser Leu
Gin Asp lie Leu
ISO
Ala Arg Gly Gin
195
Leu Ser Gly Gin
210
Gly Thr Gin Leu
225
Asp Arg Asn Leu Arg Leu
Lys Asn Leu Glu Asn Ala 55
Gin Pro Oys Leu Pro Ser 70 lie He Lys Ala Gly Asp
90
Tyr Leu Vai Thr Leu Glu
105
Gly Gly Gly Ser Pro Gly
120
Pro Ser Pre Pre· Ser Lys
135
His Pro Leu Pro Thr Pre·
150
Gly Glu Trp Lys Thr Gin
165 170
Gly Ala Vai Thr Leu Leu
155
Leu Gly Pro Thr Cys Leu
200
Vai Arg Leu Leu Leu Gly 79 K.
Pro Pro Gin Gly Arg Thr23 0
Leu Asn Asp Glu Asp Vai
0
Pro Asn. Leu Glu Ear Ph® 45
Ser Gly II® Glu Ala lie SO
AL® Thr Ala Ala Pro Ser
80
Trp Gin Glu Phe Arg Glu
S5
Gin Ala Gin Glu Gin Gin
110
Glu Pro Ser Gly Pro He
.........................·κ .♦*·.·**......................................
Glu Ser His Lys Sex' Pm 140
Vai Leu Leu Pro Ala Vai
155 160
Met Glu Glu Thr Lys Ala
175
Leu Glu Gly Vai Met Ala
190
Ser Ser Leu Leu Gly Gin
205
Ala Leu Gin Ser Leu Leu 220
Thr Ala His Lys Asp Pro 235 24Q
7
Asn A— & ——& Phe Leu Ear 4$ & Σ2 Pnu Gb. x; Leu Leu Arg Gl„, Lys Vai 255 Ara
Phe L&u M<s~ Leu 260 V ci l G—y Gly S&X Thr 265 Lsu Cys Zi* Arg Gà.U Pile G—5
Asn Met Ser Pro Ala Pro Pro 280 Ala Cys Asp Leu Arg 285 Vai Leu Ser
Lys Leu 2 S Ο Leu Ara A&p. Sn&ST· 23 V&l Leu Hls Ser Arg 300 Leu Ser Gin CA-'.S;
Pro
305 (2; INFORMATION FOR SEQ ID NO: 2X6:
Ji) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A· LENGTH; 305 asLi.no acids
ÍS) TYPE: aisino acid (C; STRANDEDNESE; single (D; TOPOLOGY: linear (ii· MOLECULE TYPE.; protein txi} SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 215;
Asa Asn cys Ser He 5 Met Tie Asp Glu He 3.0 Ha His His Leu Lys 15 Arg·
Pro Pro Ala Pre Let Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Vai
20 >4 ax·*.·' .10
Ser lie àb^vlnl Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe
35 40 45
Vai Arg Ala Vai Lys Asn Glu Asn X Λ w Ala Ser Gly He Glu Ala lie
50 60
«eu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser
75 SC
Arg W * . .<£· XXmK jO Pro He He He Lys Ala Gly Asp Gin Glu Phe Arg Glu
85 SO 95
Lys Leu Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu. Gin A,xa Gin Glu Gin Gin
100 105 110
Vai Gl^ Gly Gly Gli Gly Ser Pro Gly Gm-. Li Pro Ser Gly Pro He
15 120 125
448
Ser Thr He Asn Pre Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser Sis Lys Ser Pre
130 135 140
Asr. J-4 £ Met Leu Pre. Thr Pro Val Leu Leu Pro Ala Val Asp Phe Ser Leu ISO 155 ' ~ 160
Gly Glu Trp Lys Thr Gin Met Glu Glu Thr Lys Ala Gin Asp lie Leu Its 170 175
Gly Aia Val Thr Leu Leu Leu Glu Gly Val Met Ala Ala Arg Glv Gin 180 185 19Õ
Leu Gly Pro Thr Cys Leu Ser Ser Leu Leu Gly Gin Leu Ser Gly Gin 195 310 205
Pal Arg Leu Leu Leu Gly Ala Leu Gin Ser Leu Leu Glv Thr Glr Leu 220 215 220
Pro ~ c. • Pro Gin Gly Arg Thr Thr Ala His Lys Arp Pro Asn Ala He Phe 230 05 240
Leu Ser Phe Gin His Leu Leu Arg Gly Lys Val Arg Phe Leu Met Lsu 245 250 255
Val Gly Gly Ser Thr Leu Cys Val Arg Glu Phe Gly Asn Met Ala Ear 260 255 270
Ala Pro Pro Ala Cys Asp Leu Arg Val Leu Ser Lys Leu Leu Arg .275 2S0 285
A&p Ser His Val Leu His Ser Arg Leu Ser Gin Cys Pro Glu Va7 290 295 309
Pro
305 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 217:
• SEQUENCE CHARACTERISTICS; (A) LENGTH; 305 amino acids (8) TOE: mtw acid (C; STRAMDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear
(hi; MOLECULE TOE; protein
(xi} SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 217;
Ala Asn Cys Ser Ila Met He Asp Glu He He His His Leu Lys Arg £v Λ 15
449
Pro Pro Ala Pro Leu
Le- Asp Pro Push Asn Leu
Set lie Leu Met Asp f\
Val Arg Ala Val Lys
Arg Asn Leu Arg Leu Pro
Lav Arc Am Leu Gin
Arg His Pro He He .... 85
Lys Leu Thr Phe Tyr
ISO
Tyr Val Glu Gly Gly 11B
Ser Thr 1.1® Asn Pro
1.3.0.
Asn Met Val Leu Leu
145
Thr Gin Met Glu Glu
165
Leu Leu Leu Glu Gly
180
Cys Leu Ser Ser Leu
195
Leu Gly Ala Leu Gin
21Q
Arg Thr Thr Ala His
225
Hrs Leu Leu Arg Gly
245
Thr Leu Cys Val Arg
260
Ala Cys Asp Leu Arg
275
Leu His Ser Arg Leu
290
Asn Leu Glu Asn Ala Ser 5 5
Pro Cys Leu Pre- Ser Ala 7(5 75
Xie Lys Ala Gly Asp Trp
Leu Val Tnr Leu Glu Gin
105
Gly Gly Ser Pre Gly Glu 12G
Ser Pro Pro Ser Lys Glu.
Pro Ala Val Asp Phe Ser
150 165
Thr Lys Ala Gin Asp He
170
Val Met Ala Ala Arg Gly
185
Leu Gly Gin Leu Ser Gly
200
Ser Leu Leu Gly Thr Gin
215
Lys Asp Pro Asn Ala Xie
230 235
Lys Val Arg Phe Leu Met
25Ü
Glu Phe Gly Asn Met. Ala
265
Val Leu Ser Lys Leu Leu
280
Ser Gin Cys Pro Glu Val
295
Asn Asp Glu Asp Val
Asn Leu Glu Ss; Ph~ 45
Gly He Glu Ala Xie
Thr Ala Ala Pro Ser
Gin Glu Phe Arg Glu 95
Asa ksin Glu Gin Gm HO
Fro Ser Gly Pro Xie ’ 16
Ser Hxs Lys Ser Pro
L4Ü
Leu Gly Glu Trp Lys
160
Leu Gly Ala Val Thr
Gin Leu Gly Pro Thr
190
Gin Val Arg Leu Leu
205
Leu Pro Pro Gin Gly
220
Phe Leu Ser Phe Gin
240
Leu Val Gly Gly Ser
255
Sex Pro Ala Pro Prc270
Arg Asp Sex His Val
285
His Pro Leu Pro Thr
300
450
INFORMATION FOP. SEQ ID NO; 21S :
ti) SEQUENCE CHARACTERISTICS·.
ÍAÍ LENGTH: 305 amino aexds ÍB) TYPE: amino aris
ÍC; STRANDSDNESS: single (D? TOPOLOGY; linear < < < $. ρ* ’τντ^? - ****** < * > ΛΑΡ Ί v IW'Wm'-w VwL 1 J V L s· A*·*· tv «LaL.va txii SEQUENCE DESCRIPTION: EEQ ID ND; 218:
Ala Asn Uys Ser Ila Met. He Asp Glu He Ils His His Leu Lys Arg
5 1019
Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Ast. Asn Leu Asn Asp Glu AspVai
2530
Ser He Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Lsu Glu Ser Phe 33 4045
Vai Arg Ala Vai Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Glu Ala He SO 55eo
Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala ProSer
S5 70 75so
Arg His Pro He He He Lys Ala Giy Asp Trp Gin Glu Phe ArgGlu
9095
Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin 100 105
Tyr Vai Glu Gly Gly Gly Gly Her Pro Gly Glu Pro Ser Gly y-rr,He
115 128 125
Set Tax Ire Asn Pro Ser Pro Pro Her Lys Gru Ear His Lys Ser Pro *30 135 HQ
Asn. Met Ala Vai Asp Phe Her Leu Gly Glu Trp Lys Thr Gin Met. Glu 145 150 155 igg
Hu Thr Lys Ata Gin Asp lie Leu Gly Ala Vai Thr Leu Leu Leu Glu
................ ......165 17Q........................175.........
Gly Vat Neu Ala Ala Arg Gly Gin Leu Gly Pro Thr Cys Leu Ser Ser
W ISE 190
451
Leu Leu Gly Gin Leu .-..
1Á5
G.iy uxr. Va« Arg **eu Leu
Leu Guy Ale Leu
205
Gin Ser Leu Leu G.ly Thr
210
Hrs Lys Asp Pro Asn Ala
225 230
Gly Lys Vai Arg Phe Leu
245
Arg Glu Phe Gly Asn Met
360
Arg Vai Leu Ser Lys Leu
Leu Ger Gin Cys Pro Glu
S C
Gin Leu Pro Pro Gin
He Phe Leu Ser Phe
Ί «Λ
Λ· »<. *>'
Met Lev Vai Gly Gly
25C
Ale Ser Pro Ala Pro
285
Leu Arg Asp Ser Has
280
Vai His pro Leu Pro
295
Gly Arg The Thr Als .χ<ο·η·
Gin Hus Leu Leu Ar
Ser Thr Leu Cys Vai
Pro Ala Cys Asp Leu )i< ί V
Vai Leu His Ser Arg 38 x
Thr Pro Vai Leu Leu
300
Pro
305 (2} INFORMATION FOR SEQ ID NO: 219:
U; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A? LENGTH: 305 asu.no acids
ÍBJ TYPE: amino acid (C) STRANDEDNESS: single
ÍD} TOPOLOGY: linear
Hi; MOLECULE TYPE; protein ixii SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NG: 219·.
Ala Asn Cys Ser He Met He Asp Glu rue 10 11a His His Leu Lys H Arg
Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp G *.u Asp Vai
20 25 30
Ser He Xrôfcü Met Asp Arg Asn Leu * Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe
35 40 45
Vai Arg Ala Vai Lys Asn Leu GH Asn Ala ver Gly He Gau Ala He
SO S5 60
Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ear
£5 70 7$ 80
Asn
Met ue
Asp va
Η:
.ue
Se.:
Ser
Pro
Pre
Sex
Met
Ser «,
Axe
Arg
Se:
ueu
Val xeu
Le*
Phe vax
Gly
200
Leu
Leu
Leu
Leu
Ala
Li Λ>ν^ί
Ser
Leu
A»e’
Pro
Thr
As.
Phe
Ser
Phe
Gin
Leu
Leu
240
Phe
Me va
Gly
Let
Asn
Ms
Se
Cys
Asp
Val i*eu
Ahp
Se:
Leu
His
Ser
Ser
Val ueu
Pre
Thr
Fro
Val
Leu ueu
300
V&l
305 •(li INFORMATION PGR SEQ ID NO: 220;
(i} SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(AJ LENGTH; 305 aaiino'wids (B; ΉΡΕ: amino acid
ÍC) STRANDEDNESS; single í D} TCPCLOGY; 1 inear {XX? SEQUENCE CESCF.XPTTON ·. EEQ n NO: 22 5;
«j.â Asn Cys Sec ale Met Xue Asp Gib lis He Hxa His Leu Lvs Arc
-5 xq1s
Pro Pre Ale. Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu AstVal
*.V 2c>3£
Ser Xie Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe
Val Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn 50.5.5
Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pre
6;570
Arg His Pro Xie 11® He Lys Ala Gly .......... 85
Ly* Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu
108105
Tyr Var Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro XIS120
Ser Thr He Asn Pro Ser Pro Pre Ser
130135
Ala Ser Gly Xie Glu Ala Xie 65
Ser Ala Thr Aaa Ala Pro Ser 7 5 gc
Asp Trp Gin Glu Phe Arc Glu
95 iKT.w hí , Gan Ala Gin Gin Gin Gin
110
Gly Glu pre Ser Gly Pro Xie ιος............
........ aíwíLLC uys Glu Ear His Lys Ser .Pro
140
Asn Met Gly Glu Trp Lys Thr Gin Met Glu Glu Thr Lvs
145 150155
Au a
X6G
He Leu Gly Ala Val Thr Leu Leu
Gly Gin Leu Gly Pro Thr Cys Leu
ISO uly Gin Va* Arg Leu Leu Leu Gly IOS, ~< Λ A *vu
Gin Leu Pro pro Gin Gly Arg Thr
218215
XI® Phe Leu Ser Phe Gin His Leu
225230
Met Leu Val Gly Gly Ser Thr Leu
45
Leu Glu Gly Vai Met Ala Ala Arg
170
Her Sex Leu Leu Gly Gin Leu Se^ 185iso
Ala Leu Gan Ser Leu Leu Glv Thr *1
Thr Ala His Lys Asp Pro Asn Ala
220
Leu Arg Gly Ly® Val Arg Phe Leu *3$ -US
Cys Val Arg Glu Phe Gly Asn Mat
2SO JkJ
454
rvl-S. Lii/i Ata Pre Pro jbii <t> K··1 Asp .2 6 5 Leu Arg Vai Leu Ser 270 Lys Leu
Luu Arg À-sp Eaj Hrs Vai Len His 220 Ser Arg Lar Ser Glr. Cys 288 'Pm Ό G r a
Vai His 290 Pro Lau Pro Thr Pro 295 Vai L··^ u Leu Pro Ala 300 Vai Asp Phe Ser
Leu
305
INFORMATION FOR SEQ ID NQ; 221;
ii) SEQUENCE CHARACTERISTICS ;
fAi LENGTH: 305 ssunc acids tB) TYPE: amino acid (Cj STRANDEDNESS; single (d; topology; linear
Hi: MOLECULE TYPE; protect fxii SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 221:
Ala Asr Cy® Ser He 5 Met He Asp Glu He 10 He Hrs His Leu Lys 15 Arg
Pro Pro Ala Pro 20 Leu Leu Asp Pro Asn 25 Asn Leu Asn Asp Glu 30 ASP: Val
Ser He Leu 35 Met Asp Arg Asn Leu 40 Arg Leu Pro Asn Leu 45 Glu Ser Phe
Vai Arg 50 Ala Vai Ly® Asn Leu « 7 Glu Asn Ala Ser Gly 60 lie G1U Ala He
Leu 65 Arg A®n Gin Pro 70 Cys Pro Ser Ala 75 Thr Ala Ala Pro Ser SO
Arg His Pro lie He 85 He Lys A Ài & Gly Asp 90 Trp Gin Gikc Phe Arg 95 Glu
Lys Leu Thr Phe 100 Tyr Leu Vai Thr Leu 105 Glu Gin Ala Gin Glu 110 Gin Gin
Tyr Vai Glu 115 Gly Gly Gly” Gly Ser 120 Pro Gly Glu Pro Ser L.a» Σ* Gly Pro He
Ser Thr 130 He Asn Pro Ser Pro 135 Pro Ser Lys Glu Ser 140 HÍS Lys Ser Pro
455
Asr. Met G.ly Pre Thr Cys Leu Ser 145 ISO
Gm Vax. Arg xueau oeu Leu Gxy Asa 1.65.
Lsu Pro Pro Gin. Gly Arg Thr Thr .180
Phe Leu Ser Ph® Gin Hi® Leu Lev
195 200
Leo Va~ Gly Gly Sex: Thr Let Cys
8®-* ο-Όλ* Gly ox.n Ger ^xy IS 5 ιό;’;
Leo Glr; Ser Leu Leo Glv T
Aus His Lys Asp Pro Am Ala 21® 1^5 290
Arg Gly Lys Val Arg Phe Leu Mat
Val Arg Glu Phe Gly Asn Met Ala
Ser Pro Ale Pro Pro Ala Cys Asp
Arg Asp Ser Hus Val Leu His Ser
245
His Pro Leu Pro Thr Pro Val Leu
260
Gly Glu Trp Lys Thr Gin Men Glu
275260
Gly Ala Val Thr Leu Leu Lsu Glu
290295
Leu
305
Leu Arg Val Leu Ser Lys Leu Leu
235 '24Arg Leu Ser Qin Cys Pro Glu Val
250255
Leu Pro Ala Val Arp Phe Ser Leu t* **/ 0
Uti.fi Tar Lys Ala Gin Asp lie Leu
285
Gly Val Met Ala Ala Arg Gly Gin
300 information for seq id no.- 222.· ii) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 305 amino acids iS) TYPE: asaino acid
ÍC) STRANDEDNESS: single !D) TOPOLOGY: linear lx) MOLECULE TYPE: protein xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID ND: 222:
AU Am Cys Ser He Met He Asp Glu lie He His His Leu Lvs Arg 1 5 10 15
Pso Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Am Va’
456
Ser He Leu Men Asp Arp Asn Leu Arg Leu Pre Asn Leu Glu Se
i.v 4 C 4:5:
Ly?
Am Leu
Glu Asn
Ala Ser Gly He Glu Ala He
Leu Arg Ass Leu Gin Pre Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala 65 70 75
Fro Ser
Arg His Fro He
Figure BRPI9610977A2_D0198
lie He Lys Ala
Tyr Leu Val Thr
Figure BRPI9610977A2_D0199
Figure BRPI9610977A2_D0200
Asn Met Gly Thr
145
Asp Fro Asn Ala
Val Arg Phe Leu
ISO
Phe Gly Asn Met .195
Leu Ser Lys Leu
218.....
Gin Cys Pre Glu
225
Val Asp Phe Ser
Pro Ser Pro Pro i 7 ss
Gin Leu Pro Pro
150
He Phe Leu Ear
155................
Met Leu Val Gly
Ser Lys Glu Ser
140
Glu Phe Arg Glu
Gun Gau. Gm Gin
Ser Gly Pro He
Hrs Lys Ser Pro
Ala Gin Asp lie
26Ό
Ala Ala Arg Gly
275
Gin Leu Ser Glv
290
Ala Ser Pro Ala
200
Leu Arg Asp Ser
215
Val His Pre- Lav
230
Leu Gly Glu Trp
245
Leu Gly Ala Val
Gin Gly Arg Thr
155
Phe Gin Has Leu
170
Gly Ser Thr Leu
185
Pro Pro Ala Cys
Gin Leu Gly Pro
280
Gin Val Arg Leu
295
Mrs Val Leu His . U-ΖΌ
Pro Thr Pro Val
235
Lys Thr Gin Met
250
Thr Leu Leu Leu
265
Thr Cys Leu Ser
Thr Ala His Lys
160
Leu Arg Giy Lys
175
Cys Val Arg Glu
190
Asp Leu Arg Val
205
Ser Arg Leu Ser
Leu Leu Gly Ala
300
Leu Lieu Pro Ala
240
Glu Glu Thr Lys
255
Glu Gly Val Met
270
Ser Leu Leu Gly
285
Leu Gin Ser Leu
Leu
305
SEQUENCE CHARACTERISTICS · (A: LENGTH.- 305 am no acids (S' TYPE; asrj.no acid ?C) STRANDEENESS: Single (D? TOPOLOGY; linear
KOLECULE TYPE; protein (Ki J SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ CD NO; 223:
Ata Asn ς-ys ser lie Het. lie Asp Glu 11« He His Has Leu Lys Arg * i' ...... 10j5
Pro Pm Am Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asr. Leu Asn Arp Glu. AspVal
2C-................ 'PA .........................57..........~.......
Ser na Leu Met Asp Arg Asm Leu. Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe Ά “4 Q *’ai Arg Aa Vat Lys Asn Leu Glu Asn Ala. Ser Gly Be Glu Ala lie 30 5:5g.
Leu Arg Asn Leu Gin Pm Cys Leu Pro Eer Ala Thr Ala Ala ProSer »5 70 7«,„ ~ '* ΛΡgo
Arg His Pro Ire He He Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe ArgGlu
90»c ays veu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin QH 100 105
Tyr Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pm sly GIu Pro Sfôr C1 * χι^ *25 12C-12 A uec Thr He Asn Pro Ser Pro Pm Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro 130 235140
Asn Met Gly Arg Thr Thr Ala His Lys Asp pro Asn Ala He phe Leu iSC 255
Ser Phe Gin His Leu Leu At G-Xv v»' ?».
^yS #urg Rhe Met Leu Val 1S& 270
Gly Gly Ser Thr Leu Cys Val Arg Glu Phe Gly Asn Mei Ala Ee- Pm 180 US190
AU Oro Pro Λ1. Cys top toe Val l«u s<k: ?ftr,
458
Figure BRPI9610977A2_D0201
Trp.· Lys Thr Gin Met
Va~ Τ'Ώ.:.· iieu Leu Leu
Cys Leu Ser
Leu Leu Leu Gly Ala
2&0 $&.??
Leu Leu Prc230
Glu Glu Thr
Glu Gly Val
Ser Leu Leu
SO ueu Gar: Ser
Ser Glu Cys Pro
C
Ai. a Vaa Asg Ph®
235
Lys Ala Gin Asp
Met Ala Ala Arg
2£E
Gly Glu Leu Ser
Leu Leu Gly Thr
300
GXU. V:®X Has Pm uex ueu Gly Gau
0
He Leu Gy Ala
Gay Gm Leu Gly
Gly Gin Val Arg 285
Gin Leu Pro Pro
Figure BRPI9610977A2_D0202
f2s INFORMATION FDR SEQ ID NG: 224:
EQUENCE CHARACTERISTIC. ía:
{SB {D>
LENGTH: 305 amino acids
TYPE: amino acid STRANDEDNESS; sangle
TOPOLOGY; lanear
MOLECULE TYPE:
<xi? SEQUENCE DESCRIPTION:
Ala Asn Cys Ser He i s
Pro Pro Ala Pro Leu
Ser lie Leu Met Asp -¾ 8
V&.1 Arg Ala Val Lys 50
Leu Arg Asn Leu Gan
Arg His Pre Ha He
SEQ ID NO: 224
Met He Asp Glu He
Leu Asp Pro Asn Asn
Arg Asn Leu Arg Leu
Asn Leu Glu Asn Ala
Pro Cys Leu Pro Ear
He Lys Ala Gly Asp rie His Has Leu Lys Arg
Leu Asn Asp Glu Asp Val
..36...
Pm Asn Leu Glu Ser Phe
Ser Gly He uiu Ala He SO
Ala Thr Ala Ala Pro Ser 75 80
Trp Gin Glu Phe Arg Glu 95*
459 it Pre Tyr Va
χ. * s'X ·' Λ«.* V * Vv’< v .χ -v ** ‘ ««·>« -ei» uaU «—η λ— a >j«r, Uiiu «:!>
Ser
As a er
Ser 'n:
Asp
Rm aS:
*er i&U
Let
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Vai uys
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Las
Leu
Leu
Leu
9?
Cys
Sly
Aà&
Leu
Ser
Leu
Sa
Leu
Leu
SIS if»
Gs. u uau
Vai
Phe
Arg
Ala
Vai
Th «ye
Ala
Vai
Led
SO
Ser
Me
Leu
INFORMATION FOR SEQ ID ND; 325:
(X) SRQUENQZ CHARACTERISTICS'.
íA; LENGTH: 305 attánís acids (H; TYPE; asaino acid (C; STRANDEDfiESS; single
CD: TOPOLOGY; linear (ii; MOLECULE TYPE: protein
Arc
Asp
Ala
Ph®
Asn
Ph®
Asp
Arg
Set
Thr
300
Ή®
Pr «:
Vai Pre & ΛΜ-ν-ϊ Pre·
Ser Gly Lo
A A . ··.
-xivL-S' ÍaX^ÍEí
Ala He Phe
Leu Met Leu
Met Ala Ser
196 u®u «eu Arg
Glu Vai His
Ser Lau Gly Glu
240
—.—.e ueu xy—.y A.^.a
25^
Gly Gin Leu Gly
Gly. k>—«<· Va.«. Arg
28S
Gin Leu Pro Pro
60
ÍXX? SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 225:
fua A'sn uys S3- ue Met He Asp Glu He He Hus Sts Leu Lys Arc
..............: I, 171 ..........
Pro Pro Ale Pro Leu Leu Asp Pro
Ser He Leu Met Asp Arg Asm Leu
3540
Val .Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu
50H
Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu
657-3
Arg Hrs Pro lie He He Lys Ale
Lys La xx Phe Tyr Leu Val Thr
10c
Tyr Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser
115120
Ser Thr He Asn Pro Ser Pro Pro
730135
Asn Met Asp Pro Asn Ala He Ph® •745;,5Q
Gly Lys Val Arg Phe Leu Het Leu
165
Arg Glu Phe Gly Asn Met Ala Ser
180
Arg Val Leu Ser Lys Leu Leu Arg
795
Leu Ser Gin Cys Pro Glu. Val His
210215
Pre Ala Val Asp Phe Ser Leu Glv
225230
Thr Lys Ala Gin Asp He Leu Gly
245
Val Met Ala. Ala Arg Gly Gin Leu ao 0 , ,:10,. „ IQ........
Asn Asn Leu Ann Asp Glu Asn Val 22 30
Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe
..... 45..............
Asa Ala Ser Gly He Glu Ala He
......60.........
Pro Ser Aaa Thr Ara Axa Pro Ser
7580
Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu 9095' sjlu Ala Gík Glu Gin Glr.
105iic
Pro Gly Glu Pro Ser Gly Pro He
125
Ser Lys Glu Ser Hrs Lys Ser Pro
140
Leu Ser Phe Gin His Leu Leu Arg
155loc
Val Gly Gly Ser Thr Leu Cvs Val
770175
Fro Ala Pro Pro Ala Cys Asp Leu
185190
Asp Ser His Val Leu His Ser Arg
205
Pro Leu Fro Thr Pro Val Leu Leu
220
Glu Trp Lys Thr Gin Met Glu Glu 235240
Ala Val Thr Leu Leu Leu Glu Gly .....2 SO......... 2go
Gly Pro Thr Cys Leu Ser Ser Leu 265270
461
LSI,. *ut; v’au Arc ueu Leu oeu Gly Ala Leu G1
Ser Leu Leu Gly Thr Gin Leu Pre- Pro· Gin Gly Arg Tnx TÁr Ala Hi 390 195 joe l/V S
305
INFORMATION FOR SEQ ID NO; 226 x ix; SEQUENCE CHARACTERISTICS ;
(A?· LENGTH; 305 amine acids (S: TYPE; iffiinc acid
ÍC· STRANDEDNESS; single
ÍD) TOPOLOGY: linear ilii MOLECULE TYPE; protetn (Xi; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 226:
Al® Asn Cys Ser He 5 Met He Asp Glu Tie 10 lie His His uSk. Lys Arg
Pr» Pro Pro Leu Leu Asp Pro Asn 25 Asn Leu Asn Asp Glu 30 Asp Vai
Ser lllh;: Leu 35 Met Asp Arg Asn Leu 40 Arg jUíSU Fro Asn Leu 45 Glu Ser Phe
V&i Arg 50 Ala Val Lys Asn Leu 55 SXu Asn Ala Ser Gly 60 He Glu Ala
Leu 65 Asn Leu Gin Pro 70 Cys Leu Pro Ser Ax& 75 Thr Ala Ala Pro Ser 80
Arg Hus Pre lie He 85 lie Lys Ala Gly Asp 90 Trp Gin Glu Phe Arg 05 Glu
Lys Leu Thx Phe Tyr 100 Val It&v 105 Glu Gin Gin Glu HO Gin. Gin
Tyr Val Glv 115 Gly Gly Gly Gly Ser 120 Pro Gly' Glu Pro Ser 125 Gly Pro lift
Ser : : * -X-Â*S-' :: 130 He Asn Pro Ser Pro 135 Pro Ser Lys Glu Ser 140 His Lys Ser Pro
Asr 145 Meg Ala lie Phe a 150 Ser Phe Gin His Leu 1 see Lftu Arg Gly Lys Val 160
62
Figure BRPI9610977A2_D0203
Figure BRPI9610977A2_D0204
Phe Leu Met i S + fiiw Gly Sly Sen *n>r «. Leu 13^·* Arg Gl'j Phe
ciy .As r. Met Ala ÍSJ**Í’ Pro Ala Pm pro . . . x, X . . Asp Lifêu Arg V^.£ Leu
ISC IPS ISC
Ser Lys Leu Leu Asp Ser Hrs Vai Leu Hrs Ser Arg Leu Ser Gin
198 200 2Q5
Cys Pro· Ole Vai -.?$ 5«· S’ Pm Leu Pre Thr Pro Vai x#eu Leu Pro Va„
< ·.*} -¾ zy 215 220
ASp PLe Ser bet Gly Glu Trp Lys ’T'Ht- 0λ2α· Met Glu Glu ir*. 1-. Lys Ala
ν' 230 235 240
> *V ΤφύίΆΆ'Χ·: Asp He Leu Gly Ala Va * *Γ*···~ Leu Leu Glu Gly Vai Me τ íkÀ <Λ
245 Χύ’ν
Á&á· Arc Gly Gin Leu Gly Pro Thr Cys Leu Ser Ser Leu Leu Giy GÃr>
280 7 £ K W W A? 4 0
Líêsu Ser Gi.y Gin 'Vai Arg Lt€?V iz&V Gly Ala Leu Gin Ser L-STd L&'J.
275 200 285
G dy Thr GIn Leu Pro Pro Gin Gly Arg Thr Thr Axa His Lys Asp Pro
23 0 295 3Ü0
Asn
INFORMATION FOR SEQ
ND.
I Al (B;
ÍD*
NCR CHARACTERISTICS:
LENGTH: 309 amino acids
STRANDEDNESS: sxnglg
TOPOLOGY; iinear prote.
(Xi5 SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID ND: 227·.
Ala. Asn Cys Ser He Met He Asp Glu He He His Mis Leu Lys Arg
X 10 15
Pro Pro tt»a Pro Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Vai
2C 25 30
Ser He Leu Mat Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Ann Leu Glu Ser Phe
4S
x.yí λϊγ, «eu Giu Asn Ala Ser * 1 y x. 1 e Gx·„. Ala XÍe O «a ** Ax /χΛ,»· «eu
65.....:
Arg His Pro He
«VS Thr Pne 100
Tyr Glu Guy
Ser HO He Aan
Asn 145 Met Leu Pro
Gly Glu Try Lys
Gl;-. Pro Cys Leu
Ise ula Lys Aia
Tyr· Leu Val Thr
Gly Asp Trp Gin
90'
Leu utlu Gin Ara
Ala ,ΐχέ Pro Ser
SC
Glu Phe Arg Glu §5
Gm Glu Glr; gin
Gly Ala val Thr 180
Leu Gly Pro 195 Thr
Val Arg 210 Lav «eu
Pre ·?; c. Pro Gin Gly
Leu Ser Phe Gin
val Gly G.ty Ser 250
Asn Lys ’ro Met Leu 296 Glu Ala 275 Leu Val Ser Arg His
3C5
Gly Gly Gly Ser
12C
Pres Ser Pro Pro
1.3 5
Thr pre Val Leu
ISO
Thr Gin Met Gig
165
Leu Leu Leu Glu
Cys Leu Ser Ser
2CD
Leu Gly Ala Leu
215
Arg Thr Thr Ala
230
His Leu Leu Arg
245
Thr Leu Cys Val
P«o .-.-a Pro Pre
280
Asp Ser His Val
295
Pro
Pro Gly Giu Pro
Ser Gly Pro ’k
Ser Lys Glu Ser
146
Leu Pro Ale Val i§<
Glu Thr Lys Ala
170
Giy Val Met Ala
185 «au Leu Gly Gin
Gin Ser Leu Leu
226
His Lys Asp pro
235
Gly Lys Val Arg
250
Arg Glu Phe Gly
265
Ala Gy.® Asp Leu
Leu His Ser Arg
300
His Lys Ser Pro
Asp Phe Ser Lao
160
Gin Asp He Leu t 7«
Ala Arg Gly Gin
190
Leu Ser Gly Gin
2G5
Gly Thr Gin Leu
Asn Ala He Phe
240
Phe Leu Met Leu
25^
Gly Asn Gly Gly
270
Arg Val Leu Ser
285
Leu Ser Gin Cys
12; INEOEMATIQN FOR SEQ X© NO: 2281 ί 1; SEQUENCE CHARACTERISTICS ·.
64
Figure BRPI9610977A2_D0205
TvPCLOGY. linear di} MOLECULE TYPE; protetn
Figure BRPI9610977A2_D0206
. DESCRIPTION: SEQ ID NQ: 22
Set lie Met lie Asp Glu He
Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn
Tyr Va*. Gru
115
Ser Thr He
130
Asn Met Leu
145
Gly Glu Trp
Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu
4G
Val Lys Asn Leu Glu Asm Ala
S;'™|:gg¥·................
Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser
7G
Xie Lie lie Lys Ala Gly Asp
90
Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu
100 in.«
Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly
Gly Ala Val
Leu Gly Pro
195
Val Arg Lav ·#; I· 6
Asm Pro Ser Pro Pro Ser Lys
135
Pro Thr Pro Val Leu Leu Pro
150
Lys Thr Gin Met Glu Glu Thr no
Thr Leu Leu Leu Glu Gly Val
ISO i§5
Thr Cys Leu Ser Ser Leu Leu
200 ueu mu Gly Ala Leu Gin Ser
215
He His His Leu Lys Arg
Leu Asn Asp Glu Asp Val
Pro Asn Leu Glu Ser Phe
Ser Gly He Glu Ala Ila SO
Ala Thr Ala Ala Pro Ser 75 go
Trp Gin glu Phe Arg Glu
.................. ....................
x>ln A.* a ^un uXu Gin Gin
............. 118
Glu Pro Ser Gly pro Xie
Glu Ser Bis Lys Ser Pro 140
Ala Val Asp Phs Ser Leu
3-55 160
Lys Ala Gin Asp He Leu
17.5
Met Ala Ala Arg Gly Gin
IPO
Gly Gin Leu Ear Gly Gin
205
Leu Leu Gly The Gin Leu
228
465
Pre Pro Gin Gly Arg Thr Thr Alô fHh· ::s'::: ......................
Leu Ser Phe Gin His Leu Leu Arg
245
Val Gly Gly Ser Thr Leu Cys Vai
SC
Asn Met Ala Ser Pro Ala Pro Pro
375285
Lys Leu Leu Arc Asp Ser Hrs Val
290295
Pro Glu Val His Pro
05
His Lys Asp Pro Asn Ala lie Phe
23-5240
Gly Lys Vai Arg Pae Leu Met Leu
SC-Q55
Arg Glu Phe Gly Glv Asn Glv Glv 265270
Ala Cys Asp Leu Arg Val Leu Ser
285
Leu Hxs Ser Arg Leu Ser Gin cvs
306
INFORMATION FOR SEQ ID NO; 225:
•i! SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A; LENGTH: 309 anu.no acids (£>} TYPE.- anino acxd {C) STRANDEDNESS: single (D> TOPOLOGY: linear {ri- MOLECULE TYPE: pratein (Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NG: 229:
Ala Λ Asn Cys Ser He 5 Met Xie Asp Giu He ||·| lie His His Leu Lys 15 Arg
Pro Pro Ala Pro 20 Leu Leu Asp Fro Asn 25 Asn Leu Asn. Asp Glu 30 Asp Val
Ser He 35 Met Asp Arg Asn Leu 40 Arg Leu Pro Asn Leu 45 Giu Ser Phe
Val Arg 50 Ala Val Lys Asn Leu 55 Glu Asn Ala Ser Gly SO He Glu Ala He
Leu 85 Arg Asn Leu Gin Pro 70 Cys Leu Pro Ser Ala 75 Thr Ala Ala Pro Ger SO
Arg His Pro He He £5 He Lys Ala Gly Asp 90 Trp Gin Glu Phe Arg 95 Glu
Lys Leu Ths Phe io Tyr Leu Vai Thr Leu 105 Glu Gin Ala Gin Glu 110 Gin Gin
466
Ser
Ser His Ly.
Figure BRPI9610977A2_D0207
AS-
Asr; Met Val Leu 145 Leu Pro A-hiK Val Asp Phe Ser 158 Leu Gly Glu
Met Glu TΛ *<w. Lys Aia Gin Asp He Leu Gly Ara Val
1 έ 3 170 7 *7 CL.
Leu Lr&li Leu Glu G^y v&i Met Ala Ala Arg. Gly Gin Leu Giy Pro
180 185 190
cys Leu Ser Ser Gly Gm Leu Ser Giy Gin Val Arg
195 200 2 Co
Leu Gly Ala Leu Gin Ser *»eu Leu Gly Thr Sim Leu Pro Pro Gin
<L À 0 220
Arg Thjr Thr Ala Hm Lys Asp Pro Asn Ala He Phe Leu Ser Pne
<sL :: 230 235
Íllíáz Leu Leu Arg Giy Lys Val Arg Phe Leu Met Leu Val Gly Gly
245 250 255
Leu Cys Val .Arg Glu Phe Gly Gil' Asn Gly Gly Ann Met Ala
ISO 265 270
IA'S
Leu
240
Set*
Asp
Va
Leu
Ser £
Let
Leu
280
Lys
285
Asp
Ser
His
Val
Leu
Ser
05
Arg wen
Gin
Cvs
300
Val
Pro
05
Leu
Pro
Figure BRPI9610977A2_D0208
SEQUENCE CHARACTERISTICS:
LENGTH; 3Q5 amino acxds TYPE: aaxso acid STRAHDEDMESS: single TOPOLOGY; linear (A, (D (ix
SEQ
467
Ala Asn Cys Ser He Mot H® .Asp Glu Ha Tl« His His Uu Lye Arg
1Λ ........13 ........ .H ............ sgAs
Pre Pro Ala Pro Leu Leu Asp r x u Asa Asn Lav Asr2 *5
Asp Glu Asp Vgl
Ss-x. Aw® úSü Met Asp- Arg Asn Lae Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe 35 4 045
Vai Arg Ala Vai Lys Asn Leu Glu Ann Ala Ear Gly lie Glu Ale Lie 2C 35SO
Leu Arp Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Sex· *7Λ $v. ,χ ? Λ· >.C5&V
Arg Hxs Pro lie He He Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu âjà & oS
Lys Leu Thr Ph® lyr Leu Vai Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin W 103lie
Tyr Vai Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pre Gly Glu pro S®^· Gly Pre- He
115 123ns '
Gar Thr He Asn Pre Ser Pre Pro Ser Lys Glu Ser His Lys «er Pro HO 135Kg
Asn Mat Ala Vai Asp Phe Ser Leu Gly Glu Trp Lys Thr Gin MatGlu 145 Í5C .15.6iso xjIu Thr uys Ala Gin Asp He Leu Gly Ala Vai Thr Leu Leu LeuGlu
165 17017«
CL\- Va* Het «la Ala Arg Gly Gin Leu Gly Pro Thr Cys Leu Ser Ear HO 185 igg
Leu
Leu
Leu
Ser
Qlv
Vai
Leu
Leu
OS
Ala
Leu
Figure BRPI9610977A2_D0209
cser
Le
Leu
Leu
Pro
Pre?
Gin
Pro
216
Arg
Thr
Ala i,ae
Phe
Leu
Se
Phe
233
Gl:
Leu
Leu
Aro
240
Arg
Glu
Ala
Vai
Arg
Pae
245
Leu
Met
Lex
Vai
Gly
Ser
Leu
Vai
Phe
Gly
230
Asn
Gly
Asn
265
Me
Ala
Ear
Pro
Ala
270
Leu l?ai
Leu
Ser
280
Leu
Leu
Asp
2SS
Pro
Hxs
Pro
Vai
468 «au Hls Ser Aro Leu Ser Sin cys Pro Siu Val Hxs 2SG 293 300
Fro Leu Pre Thr
Pro Ví. Leu .l:’ru
05 ' : ...
Í2J INFORMATION FOR SEQ XD NO: 231;
{i ; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
ÍA; LENGTH; 3G8 amine, acids
CE; TYPE: amine acid
ÍC; STRANDEDNESS: Single Dj topology; linear '11? MOLECULE TYPE; protein ixij SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 231Aia Asn cys Ser n8 Met He Asp Glu 11« ne His Kis Leu * “ -1:04 e
Pre Pro Ala Pre Leu Leu Asp Pro Asm Asp Leu Asn Asp Glu AspVa20 2530
Ser Ise Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Phe 35 4-G
Val Arg Aia V&1 Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly Ue Glu Ala IIe 55go
Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cv® Leu c^av δ ; mu *x » x „„ u ->s **-Q Ser Asa Thr Ala Ala Pro Ser w- 7C-?s < Sgo
Arg Hrs Pro He He lie Lys Ala Gly Asp Trp Gin Giu ph* Arg Glu 85 9035
Lys Leu The· phe lyr Leu Val Thr Leu Glu Gin Ala Gm Glu Gin Gin 290 105
13¾ Val Glu Gly Gly Gly Sly Ser Pro Gly Glu Pro Ser Qlv r XiS 229125
Ser Thr lie Asn. Pro Ser Pre Pro £»* ϊν«·«
-m Glu Ser Hrs Lys Ser Rro 23u
Asn Met Asp Phe Ser Leu Gly Glu Tm-->
.rft y ixp ^ys ihr Gin Met Glu Glu Thr âC 1SS160 to Al. Gin >xp n. teu «y Ma VaJ Tte
163 *i TA
Me;
Pro
Phe
Asp «®u
Figure BRPI9610977A2_D0210
Sex
AT!
as
Arg
Leu
Arg 180 * «eu Gly Pro Thr Cys 185 Leu Ser Ser ISC- Leu Leu
Sex Giy Gin Vai Art IOC Leu Leu Leu Gly Pls ueu Gia Set
Thr Gin Leu Pro 213 Pro Gin Gly Arg Thr 2x* « Thr a Has Lys
Aus lie Phe 230 Leu Ser Phe Gin His 235 Leu Leu Arg Gxy Lys 240
Leu Met 24 5 Vai Gly Gly Ser Thr 230 Leu Cys Vai Arg 253 Glu
Asn 250 Gly Gly Asn Met Ala Ser Pre· 265 Ala Pro Pro 270 Ala Cvs
Vai Leu Ser Lys Leu 280 Leu Arg Asp Ser His 2S5 Vai Leu His
Ser Gin Cys Pre Glu Vai Mis Pro Leu Pro A ML. Pro Vai
295
300
Pro
Ala
Vai
INFORMATION FOR SEQ JQ nqx 232:
{A}
ÍB)
ÍDJ
LENGTH; 309 amine» acids
TYPE; amino acid
STRANDEDNESS: Single
TOPOLOGY; linear
MOLECULE TYPE: protein
Figure BRPI9610977A2_D0211
SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NG:
Ala Asn Cys Ser He 5 Met He Asp Glu He 10 lie His His Leu Lys 15 Arg
Pro Pro Ala Pro 20 Leu Leu Asp Pre 2S Asn Leu Asn Asp Glu 30 Asp Vai
Ser He Leu 35 Met Asp Arg Asn Leu 40 Arg Leu Pro Asn Leu 45 Glu Ser Phe
Vai Arc «CA Ala Vai Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Glu Ala He
470
Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ale Tnr Ala Ala Fro Ser tO *7 Λ **·*
Arg Hi 4 Pro lie Xie He Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Gl<> S5 90
Lys Leu Thr Phe lyr Leu Val Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin X0 0 XOSt
Tyr Val Gau Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Glu pre Ser Glv Pre He
Ser Thr He Asn Pro Ser Pre Pro Ser Lys Glu Sex His Lvs Ser x>r« 13 140 ”—' ~
Asn Met Gly cm -p Lys Thr Gin Met Glu Glu Thr Lys Ala Gin Asp
ISO 155 me Leu Gay Ala Val Thr Leu Leu Leu Glu Gly Val Met Ala Ala Arg
ItS 170i?«;
* vC
Gly Gin Leu Gly Pro Thr Uys Leu Ser Ser Leu Leu Gly Gin Leu se~ 180 185
Gly Gin Vai Arg Leu Leu Leu Gly Ala Leu Gin Ser Leu Leu Gly Thr 1S£ 20C
Gin Leu Pro Pro Gin Gly Are Th»· The rm sn - « κ ^-0 «xs pys Asp Pro Asn Ala
220
XI. Fba to sex Fhe air. His to toB siy Va, 2M 235 - 2„
Met to Val Gly Gly Ser Thr to cys Val ArS Glu Fh« Gly Gly to
245 ΐίΛ * J?** ^5515
255
Sly Gly to Mt Ma Ser Fro Ma Fro Fro *1» Cy® Asp to tea Val
270 to to Ly, Leu to tag Aap to Hi. Val to Ser
2S0 285
Sin Cys Fro Siu VM His Fro to Fro ftr Fro Val to to Fro Ala
300
Val Asp Phe Ser Leu
305
Í2) XmWATIGN FOR SEQ ID NO: 233:
¢1) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 309 artxno acids
ÍB) TYPE; amino acid íul STRAISfDEDNESE > single
Λ Ο ‘5
Irne-sr <xi· SEQUENCE DE
Ale Asn Cys Ser
SCRIFTIDN: SEQ I
He Met He Asp £ NO: 233:
Glu He He His
His Leu Lys Arg
Pre· Pro Ala Pro
Asn Asn Leu Asn
Λδρ Ajiu asp Va<j.
Ser Π® Leu Met
Val Arg Ala Val
Leu Arg Ast; Leu
Arg His Pro He
Lys Leu Thr Phe
Tyr Val Glu Gly
115
Ser Thr He Asn .130
Asn Met Gly Pro
145
Gin Val Arg Leu
Leu Pro Pro Gin
180
Phe Leu Ser Phe
195
Leu Val Gly Gly 21C
Gly Asn Met Ala
225
AjTC? AS-Γ*
4ΰ i^ys Α&Π GLu
Gin Pro Cys Leu lie He Lys Ala
Tyr Leu Val Thr
Gly Gly Gly Ser
120
Pro Ser Pro Pro
5
Thr Cys Leu Ser
150
Leu Leu Gly Ala
165
Gly Arg Thr Thr
Gin His Leu Leu
200
Ser Thr Leu Cys
215
Ser Pro Ala Pro
3:4 V
Arg Leu Pro Ann
Asn Ala Ser Gly
SO
Pro Ser Ala Thr
Sly Asp Trp Gin 90
Leu Glu Gin Ala
105
Pro Gly Glu Pro
Ser Lys Glu Ser
140
Ser Leu Leu Gly
155
Leu Gin Ser Leu
170
Ala His Lye Asp
185
Arg Gly Lys Val
Val Arg Glu Phe
220
Pro Ala Cys Asp
235
Leu Glu Ser Phs
He Glu Ala He
Ala Am Pro Ser
Glu Phe Arg Glu
Gin Glu Gin Gin
Ser Gly Pro lie 125
His Lys Ser Pro
Gin Leu Ser Gly
ISC
Leu Gly Thr- gin
175
Pro Asn Ala lie
190
Arg Phe Leu Met
205
Gly Gly Asn Gly
Leu Arg Vai Leu
240
472
Se
Eer .oe
Phe
Se
Lys
Gin
Asp
4-Í-Ô
Ala
Leu
He
INFORMATION FOR £EQ {A} LENGT-
Figure BRPI9610977A2_D0212
STRANDEDNEES: si
TOPOLOGY; linear
MOLECULE TYPE', protein
Figure BRPI9610977A2_D0213
234;
Ala Asa cys Ser He 51 Met He Asp Glu He 10 He Hrs Hrs Leu Lys • t ,Ax*g
Pro Pro Ala Pro 20 Leu Leu Asp Pro Asn 25 Asn Leu Asn Asp Glu 30 Asp val
Ser Ils ajÍSU %Ê: Met Asp Arg Asn Leu 40 Leu Pro Asn Leu 45 Glu Ser Phe
Val Arg S3 AX& Vax Lys Asn ueu Glu Asn Ala Ser Gly 50 He Glu Ala Ire
Leu 65 Arg Asn Leu <*** «.. 'uSlTí Pro Gy$; 70 Leu Pro Sex Ala 7 s Thr Ala Ala Pro Ser 80
Arg His Ila He 85 lie Lys Ala Gly Asp 90 Trp Gin Glu Phe Arg 95 Glu
hys Leu Phe IOC- Leu Val Thr Leu lv5 Gru Gin Als Gin Glu *? y λ. Gin Gin
Tyr val Glu 115 Gly Sly Gly Gly Ser 120 Pro Gly Glu Pro Ser •α^άΙ w 1 Gly Pro He
473
Ser Thr Xie Asr. Pro Se:
Asn Mot Qly Thr Gm Leu
34* 150
Asp Pro Asn Ala He Ph®
15'5
Va„ Arg Phe Leu. Met Leu
180
Pii® uly viy Asm Gly Gly
.........................
Asp Lifei Arg Va χ Leu Ser aer Arg Leu Ser Gin Cys 225 230
Leu Leu Pro Ala Vai Asp
245
Glu Glu Thr Ly® Ala Gin
280
Gru Gly Val Met Ala Ala
7C
Ser Leu Leu Gly Gin Leu 290
Lav Gin Ser Leu Leu
0 5
Pik.' Pro Gar ^ys Gau. Ser Hrs Lys Ser Pr·: Ú3Ô
Pro Pro Gin Gly Arg Thr Tnr Ala EraLys ~S“!IS;
Lav Ser Phe oln Has Leu Leu ArgLv*
170my
Val Gly Gly Thr Leu Cys Val Arc Glu ISoISO
Asn Met Ala Ser Pro Ala Pro Pro Ala Cvs 200205
Lys Leu Leu Arg Asp Ser His Val Leu Has ^•5220
Pro Gau Val His Pro Leu Pro Thr Pro Val
Hu
Phe Ser Leu Gly Glu Trp Lys Thr Gin Mar 250
Asp H® Leu Gly Ala Val Thr Leu Leu Leu .......265270
Arg Gly Gm Leu Gly Pro Thr Cys Leu Ser 280285Ser Gly Gin Val Arg Leu Leu Leu Gly Ala 2S5300 <2; INFORMATION FOR SEQ ID NO; 235;
d; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
{A} LENGTH; 309 amino acids (B.! TYPE; amino acid (C) STRANDEDNESS; single (D) TOPOLOGY: linear di! MOLECULE TYPE; protein (Xi; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 235u« ten Cys S«r 11« Met :11 *«p elu Ile Ile Bis 5 10 ·> e
4’’4 fro >~r. Ala Pro Leu Leu
As:
Asp Gi
Nst Àup Arg
Ase Leu Arg Leu Pro Asr Leu Glu p® 4C 45
Vai Arg Ala Val Lys Asn Leu
55
Glu Asn Ala
Ser Gly He ksUt
II®
Leu ueu
Pro
Ala
Thr
Ala
Arg hxs Pro He He Ha
k.ys
Ala
Asg gn
Trp
Phe Arg Glu
Lys Leu Thr Pne Tyr Leu Val
108
Tyr V&l Glu Gly Gly Gly Glv
Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Qir a η, A „
Ser Pro Gly Glu p~o Ser Gly Pre He
120........ 125..........
Ser Thr Xle Asr. Pro Ser Pro Pro 12 0 735
Asn Met Gly Arg Thr Thr Ala Hus 1*2 150
Ser Phe Gin Mis Leu Leu Arg Gly
Ser uys Glu Ser His Lys Ser Pro
140
Lys Asp Pro Asn Ala Ile Phe Leu i55 ~ isc
Lys Val Arg Phe Leu Met Leu Val
170
Gly Gly Ser Thr Leu Ca
0 ϊϋ r -í hex. Ala Ser Pro Ala Pro
195
Leu Leu Arg Asp Ser Ris 2X0 iu Val His Pro Leu Pro 25 230
Ser Leu Gly Glu Trp Lys
245
He Leu Giy Ala Val Thr
260
Gly Gin Leu Gly Pro Thr
275
G*y Gin Vau Arg Leu Leu
290
Val Arg Glu Phe Gly
185
Pro Ala Cys Asp Leu
200
Vau Leu Bis Ser Arq
215
Thr Pro Val Leu. Leu
235
Thr Gin Mag Glu Glu
250
Leu Leu Leu Glu Gly
265
Cys Leu Ser Ser Leu
280
Leu Gly Ala Leu Gin
295
Gly Asn Gly Gly Àsn
0
Arg Vau Leu Ser Lys 205
Leu Ser Gin Cys Pro
220
Pro Ala Val Asp Phe
240
Thr Lys Ala Gin Asn
255
Vài Met Ala Ala Arg
270
Leu Gly Gin Leu Ser
285
Ser Leu Leu Gly Thr
300
Figure BRPI9610977A2_D0214
SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A; LENGTH; 3 08 «»flC atxds iB; TYPE; amine acid
C> STRANDEDNESS.’ single
ÍD; TOPOLOGY.· ixnear
MOLECULE TYPE; protein
Xi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ XL NO. 23 £Ala Asn Cys Ser lie
Met lie Asp Glu lie He
Has Hrs Leu Lys Arg
Pro r‘m Ata Pro Leu .:: :2:6: ......
Ser He Leu Met Asp
Vai Arg Axe Vai Lya SC
Leu Arg Asn Leu Gin
Arg His pro ,H© xíj»
Lys «eu Thr Phe Tyr
108
Tyr Vai Glu Gly Gly
Ser Thr Ila Asa Pro
130
Asn Met Ala His Lvs
145
Leu Leu Arg Gly Lys
155
Leu Cys Va.1 Arg Glu
ISO
Arg Asn. Leu Arg Leu Pro
4C·
Asn Leu Glu Asn. Ala Ser s:sj:g::: 2
Pro Cys Leu Pro Ser Ala
He Lys Ala Gly Asp Trp .90*
Leu Vai Thr Leu Glu Gin
105
Gly Gly Ser Pre Gly Glu
120
Ser Fro Pro Sex Lys Glu . 135
Asp Pm Asp Ala lie Phe 1S0 155 »ax Arg Phe Leu Met Leu
170
Phe Gly Gly Asn Gly dy
185
Leu Asp Pro Asn Asn Leu
Asn Asp Glu Asp Vai
Asn Leu Glu Sei phe
45.............
Gly He Glu Ala He SO
Thr Ala Ala Pro Ser
Gin Glu Phe Arg Glu
CCCC:::1::::C............7::1 ........ ί|§§·'|·:·7'.............
Ala Gin Glu Gin Gin
110
Pre Ser Gly pre· He
Ser His Lys ser pro
140
Leu Ser Phe Gin His
160
Vai Gly Gly Thr
175
Asn Het A.xa Ser Pro
190
476
ΛΑά rxo 'ίτε Ai# Cys Asp Lew Arg
Val Leu Ser Lys Leu Leu Arg Asp
Γ-er Hus -=1 Lag hls Ser Arg Leu
Figure BRPI9610977A2_D0215
Leu Pre Thr Pro Val Lev Leu Pro 22? 23 C
Trp .Lys Thr Gin Met Glv Glu Thr
245
Val Thr Leu Leu Leu Gig Giy Val
6 C
Pro Thr Cys Leu Ser Ser Leu Leu ·*' < - .2SO
Lev Leu Leu G.i.y Ala Leu Gin Ser
290 2^5
Gin Gly Arg Thr Thr
305 i2> INFORMATION FOR SEQ r© NO; 237;
(i? SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A? LENGTH: 30§ amino acids ΐΒ> TYPE; amino acid (C; STRANDEDNESS; single
ÍD} TOPOLOGY; linear sii; MOLECULE TYPE; protein
Ala Val Asp Phe Ser Leu Git1· Glu
335240 «ys ..ala osm Asp Lie Leu Glv Ala
250255
Met Ala Ala Arg Gly Qin Leu Gly
265270
Gm «eu Ser Gly Gm Val Arg
285
Leu Leu Gly Thr Gin Leu Pro Pro
300
5Xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 237;
φ Ala Asn Cys Ser lie Met He Asp Glu lie He His His Leu Lys Arg ~ 102A
Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Am Glu Asp Val 50 2S30 Ser Met keu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe
Val Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He SXu Ala Xle
55s «so Arg Asn Leu Gin. Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pre de70scT
Glu Phe
7,d ί
Hi
Let
Ger it
Se.
t>r
Sex
Sa: 1<SÍ.
Me
Asp
Lex:
Se:
Phe
Ph® íz3?h
Me” «®X1
Poe
As”4
Met
Figure BRPI9610977A2_D0216
Ala
Ser
X9C
Cvs
Leu «V®
Leu
Arg
Ser
Se.
ueu
Cys
Vai
Hie
Pro
Leu »
Thr ueu
La
Va.
Asp
Phe
So
Leu
Guy
Thr
240
Gin
Lex
Gly
Ala
Vai neu
Ala
Figure BRPI9610977A2_D0217
Met
Guy
Gin
UÊU
Thr
2δ
Leu Ser Ser 275 Leu Leu Gly Gin Leu S&x Giy G-XH Val Arg 285 Leu L®u. Lsu
Gly Ala 29G Lsu Gin Ser 295 Gly Gin Leu Pro 300 Pro Gin Gly Arg
Ala (2) INFORMATION FOR SEQ XL NO; 238;
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
iA; LENGTH; 308 assino acids
ÍE; TYPE; amts acid {0; STRANDEDNESS: single CD? TOPOLOGY: linear ’ ill; MOLECTLE TYPE: protein
478
Asn ae:
lie Met
Met Asp
Arc lie ASF
Ast
Leu wSk
Asn Ale
His
Asn
Asn
Gly
Let
Asp
He
Au. a
Vahe
Leu »®r
Ala
Thr:
Ala
Ala
Pro
Ser
Lys
Leu
Phe
Ger
Va
Gru
Thr
Asn
-ie
Phe
Met
Arc
Leu
210
Ann
Val
ÀzfôU.
aer
Gin
Val
Lys
Ala iae
Lys
Gly
Asp
Glu
Phe
Arg
Phe «eu
165 •ser
Asp
24t
Leu
Leu
ISO
Val
Lys
Pro
Ph*
230
Asp
Val
Gly
Pro
135
Ser
Met
Leu
T* p% V «eu
105
Gin
Ala
Gin
Glu
Sa.
Pro
Ph®
Giy
200
Val
Leu
Leu
Ser
Ser
Ser
Gly
Glu
Ser
125
Gly
He
Lys aer
140
Lys
Ser
His
155
Leu
Val
160
Thr
Leu
Cys
Val
Arg
Glu
Phe
Pro
Asp
Pro
Ala
2S0
Se.
Leu
Val
His
Val
205
Pro
Lys
Th:
Th
Let
Ax a
193
Asp
His
Se:;
Pro
Val
Leu
Gin
Leu
Me
240
Leu
1®
Ly
INFOHMA
Ser
N:
479 íAí LENGTH: 302 SEi&C acids {B} TYPE: amino acic (C· STRANDEDNESS: single (E; TOPOLOGY,· linear
Pr mu
Aua
Figure BRPI9610977A2_D0218
MOLECULE TYPE: protein
Figure BRPI9610977A2_D0219
NO:
239:
SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ IE
Ala >> X· >> Asn cys Ser He 5 Mat He Asp Glu He He His His Leu
Pro Pro Ala PX‘Q Leu La>_ Asp Pro Asn 25 Asn Leu Asn Asp Glu 30
Sex lX<s Leu 35 Met .Asp Arg Asn Leu 40 Arg ueu Pro Asn Leu 45 Glu
Val Arg Al® 50 Val Lys Asn Xa>^$>A 5$ Glu Asn Ala Ser Gly SO He Glu
Leu Arp Asn Leu Gin Pro 70 Cys Leu Pro Ser Ala *? Thr Al® Ala
Arg His Pro He He 85 He Lys Ala Gly Asp PC Trp Gin GsiU Phe
Lys Leu Thr Phe ISO Tyr Leu Val Thr Lav 105 Glu Gin AsAkál Gin Glu W
Tyr Val Glu MS Gly Sly Gly Gly Ser 120 Pro Gly GIl. Pro Ser 125 Gly
Ser Thr Xie Asn Pre Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser His Lys
Ser
Arg
Ser
140
Arg
Val
Phe
Ser
SO
Gin
80
Asn Sfe:; Asp λ<Λ*: Pre Aar; Ala He Phe:
L>yx: Vã . Arg Phe Leu Met Leu
Arg Q_.u Phe Gly Gly Asn Met: Ala 18·;
Ser Phe Gin Hie Lee Leu Arg
15 5 150
Vai Gly Gly Ser Thr Leu Cys Vai
170 • :»iL'· I '«5
Ser Pre Ala Pre Pre·· Ala. Oys Asp
185 on.
Leu Arg Vai 195 Ser Lys Leu 280
sArp Lau Ser Cys Pre· Qx v Vai
Let·· pry Ala Vai Asg Phe 23 0 Ser Leu
Glu The Lys Ala Gin 245 Asp lie Leu
Gly Vai Met A1& 280 Ata Arg Gly Gin
Leu Leu .χϊ 1 y 275 Gin Leu Ser Gly Gin
Rar 298 Leu Leu Qly Thr Gin EPS Gly
Arg Asp Ser Hrs Vai Leu Has Sex
2V£:
His Pro Leu Pro Thr Pro Vai Leu
Gly Glu Trp Lys Thr Gin Met Glu
335240
Ut«y ^-x.a Vax. Thr Leu Leu Leu Glu
2582 § 5
Leu Gly Pro Thr Cys Leu Ser Ser
255->?r
V&j. Arg Leu Leu Leu Gly Ala Leu
85
Arg Thr T.hr Ala His Lys
300
Í2 í INFORMATION FOR seq is w. 240:
ili SEQUENCE CHARACTERISTICS:
£A; LENGTH: §1 Hase pairs
ÍE) TYPE; nucleic acid (Ci SWtfJDEmESS: single (D) TOPOLOCT:
vii: MO^SCUuE TYPE; ether nucleic acid <Ai DESCRIPTION: Zdes* ® *DNA (synthetic)’ ixi) SEQUENCE DESCRIPTION; REQ ID NO: 240:
TTu-LTCG ,AAAv«GAC- ttctatgtga aaaccttgga gaacgcgcag gctcaacagt
ACGTAQAGGG CGGTGGAGGC T^· (2) INFORMATION FOR SEQ NO: 241
481 ('ll ''DRARACTCTÍST~23;
(A: LENGTH- Si nase parrs
ÍB} TYPE: nuclerc sere (C; STRANDEDNESS; single
CD: TOPOLOGY-, linear iix: MOLECULE TYPE: other nucleic acid (A? DESCRIPTION; /dasc « *DNA (synthetic;
(Xi; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID «> Π
CGGGGAGCC TCCACCGCCC TCTACGTACT GTTGAGCCTG CGCGTTCTCC AAGTTTTCAG
ATAGAAGGTO AGTTTACGAC GG (2:· INFORMATION FOR SEQ ID NO; 142;
{i i SEQUENCE CHARACTERISTICS; (A,i LENGTH: 8 amino acids ÍB) TYPE; ajainc acid (C) STRA1WEDNESS.: single (D) TOPOLOGY-, linear (ii; MOLECULE TYPE; prqaeir.
(Xi; SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 242;
Giy uly Gly Ear Gly Gly Gly Ger
5 (2; INFORMATION FQR .SEQ ID NO: 243;
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A) LENGTH: 12 anino acids {E; TYPE; amino acid (C; STRANDEDNESS; single (DI TOPOLOGY: linear ’ (ii) MOLECULE TYPE; protein (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 243;
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
482
INFORMATION F0?; -r, KC; .
ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; ? wno ©cads (B) TYPE; anu.no acid
ÍU; STRANDEDNES'S; single {R; TOPOLOGY': linear (ii? MOLECULE TYPE; prctsit ixi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ jq NO; 244-.
Ser Gly Gly ger Gly Gly S®r (2/ INFORMATION FOR SEQ ID ND: 245.·.
(ij SEQUENCE CHARACTERISTICS; (Rs LENGTH: £ attino acids (B) TYPE: amino acid (C) STRANDEDNESS; single ÍD} TOPOLOGY; linear (xâ.> MuL&CULE TYPE: protein
ÍXX) SEQUENCE DESCRIPTION: EEQ ID NO: 245·;
Glu Phe Gly Asn Met Ala (2.J INFORMATION FOR SEQ ID NO; 246:
ii) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH; 7 amxnu acids (B) TYPE: amino acid (C) STRANDEDNESS: single (0} TOPOLOGY; linear !ii) MOLECULE TYPE; protein iXl) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO; 246;
Glu Phe Gly Gly Asn Asn Ala :nforma
LENGTH; 10 arunc acid TYPE . amino actd STRANDEDNESS: single topology: : linear (xi? SEQUENCE DESCRIPTION
Asn Gly Gly Asr. Met.
Ala
Figure BRPI9610977A2_D0220
INFORMATION FOR SEQ ID ND: 248;
SEQUENCE CHARACTER! STX (A;
(B?
LENGTH: 30$ amino ac
TYPE: amino acid £: single ineax
TDPDLCC
MOLECULE TYPE: protein ids
Figure BRPI9610977A2_D0221
SEQ W NO:
245 :
AaS Asn Cys Ser He 5 Met He Glu He 10 Xie His His Leu Lys Arg
Pro Pro Ala Pro e* a Leu Asp P^ÍJ Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Val
uw 25 30
Ser He Leu Met .35 Asp Arg Asn 40 Arg Leu Pro Asn Leu 45 Glu Ser Phe
Vai Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly 11« Glu Ala Xie
sC 55 50
Leu 65 Arg Asn Leu Gin Pro 70 Cys Pro Ser Ala *? a; Thr Ala Ata Pro Ser
80
Arg His Pro He He 85 Leu Lys Ala Gly Asp 90 Trp Gin Glu Phe Arg 95 Glu
Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin
484
Gly Ser Pro Gly
Pro Ser Gly prc χχ
Ser Thr Ila Asm Pro Ser Pr» Pro Ser Lys Glu Ser Hi 13 C 13£ X4C
Asm Meo Leu Pro
Thr Pro Val Leu
Gly Glu Trp Lys
Gly Ala Val Thr
Thr Gin Met Glu
165
Leu Leu Lao Glu
Leu Pro Ala Val
138
Glu Thr Lys Ala
Asp Pne Ser Let
Asn Asp He Leu
Leu Gly Pro Thr .195
Val Arg Leu Leu
........Ill|l........a
Pro Pro Gin Glv
225
Leu Ser Ph® Gin
Val Gly Gly £er
260
Asn Meo. Ala Ser
Cys ueu Ser aer
200
Leu Gly Ala Leu
215
Arg Thr Thr Ala
230
Mos Leu Leu Arg
245
Thr Leu Cys Val
Gly Val Met. Ala
185
Leu Leu Gly Gin
Ala Arg Gly uys Leu leu Lys
290
Fro Ala Pro Pro
280
Asp Ser His Val
255
Gin Ser Leu Leu
220
Hrs Lys Asp Pro
......235.........
Gly Lys Val Arg
250
Arg Glu Phe Gly
265
Ala Ser Asp Leu
Leu Ser Glu Gin
205
Gly Thr Qin Leu
Leu His Ser Arg
300
Asn Ala Ixe Phe
240
Ph® Leu Het Leu
255
Gly Asn Gly Gly
270
Arg Var Leu. Ser
285
Leu Ser Gin Cys
Pro Glu Val His Pro ·*? V V»
U) XfcrDRMATXON FOR SEQ ID NO: 249-.
ii? SEQUENCE CHARACTERISTICS :
(A) LENGTH: 458 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) GTRANDEXWSS: single
ÍD) TOPOLOGY·: linear
i.*,· MOLECULE TYPE: ocher nuclei c acid (A; DESCRIPTION: /òesc » DNA (synthetic
4SS iXl; SEQUENCE DESCRIPTION. SEQ “I NO: 24 9:
Figure BRPI9610977A2_D0222
GTCCTTCACA GCAGÀCTGAG CCAGTGCCCA. GAQGTTCACC CTTIOCCTA^'
CTGCCTGCTG TGGACTTTAG CTTGGGAGAA
18C
CAGQACATTC TGGSAGCAST GACCCTTCTG
240
CTGGGACCCA CTTGCCTCTC HTHC^C'1''*?!· 3C0
CTTGGGGCCC TGCASAGCCT CCTTGGAACC
360
CACAAGGATC CCARTS SCAT CTTCCTGAGC
420
TTCCTGATGC TTGTAGGAGG GTCCACCCTQ
459 iG^«AAAuCC AGATGGAGGA GACCAAGGCA u.iG\»Asjx3<aAG TGAIUGCAGC ACGGGGACAA GGGQAGCTTT CTGGACAGGT CCGTCTCCTC CAGCTTCCTC CACAGGGCAG GACCACAGCT TTCCAACACC TGCTCCGAGG AAÀGGTGCGT TGCGTCAGG
Í2- INFORMATION FOR SEQ ID NO; 250:
Í1? SEQUENCE CHARACTERISTICS:
vA.í LENGTH; 447 has® paxr®
ÍE} TYPE; nucleic aois (C) STRANDEDNESS ·. single (D) TOPOLOGY; linear ui; MOLEC1AE TYPE; ether nucleic acid (A? u?£SCR»PTIOK; /desc » ’DNA {synthetic}
SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 250;
TuTuCCGCTC CGCCTGCTTG TGACCTCCGA QTCCTCAGTA. AACTGCTTCG TGACTCCCAT
CTCCTTCACA GCAGACTGAG CCACTQCQCA GAGGTTCACC CTTTGCCTAC ÀCCTGTCCTG Á. J&- U
ΙβΓ”^'” CTTSGSAGfiA *^SGMAACCC: ASATGGAÜOA GACCAAGGCA
CASGACAMC tGSGAKAST CWCCCTTOT, CTOGAOms TCATOSCAGC ATOSSGAC»
81
CTGGGACCCR CTTGCCTCTC ATCCCTCCTG GGQCAGCTTT CTGGACAGGT v; .......C.Tjjww-v'. Tw.ÀwAuCOT CCTTGGAACC CAGGGCAGGA CCACAGCTC1· CAAG”
360 “ '“* “^·
AATGCCATCT TCCTGAGCTT CCAACACCTG CTCCGAGGAA AGGTGCGTTT CCWG'’’'
420
GTAGGAGGGT CCACCCTCTG CGTCAGG •2? :mromiATrok= foe sec io no; 2si?
Í1 > SEQUENCE CHARACTERISTICS :
(A} LENGTH: 45$ base pairs (3) TYPE; nucleic acid (C; STRANDEDNESS: single
Figure BRPI9610977A2_D0223
:â1; KOuECCLi TYPE; other nucleic acid
ÍA; DESCRIPTION; /desc ® “DNA (synthetic) “ (xii SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 251;
TCCCCAGCGC CGCCTGCTTG TQACCTCCCA
GTCCTTCACA GCAGACTGAG CCAGTGCCCA
120
CTGCCTGCTG TGGACTTTAG CTTGGQAQAA 18G
CAGGACATTC TGGGAGCAGT GACCCTTCTG
240
CTGGGACCCA CTTGCCTCTC ATCCCT^CTG 3GC
CTTQQGQCCC TGCAGAGCCT CCTTGGAA^C
360
CACAAGGATC CCAATGCCRT CTTCCTGAGÇ
420
GTCCTCAGTA AACTGCTTCG TGACTCCCAT
GAGGTTCACC CdTGCCTAC ACCTQTCCTG
TGGAAAACCC AGATGGAGGA GACCAAGGCA
CTQGAGGGAG TGATGGCAGC ACGGGGACAA &AAAJSCTTT CTGGACAGGT CCGTCTCTTG CaGCTTuCTC CACAGGGCAG GACCACAGCT TTCvAAuAtC TGCTCCGAGG ÀAAGGTGCGT
TTCCTGATGC TTGTAGGAGG GTCCACC»*^
45.S
TGCCTCAGG ;2) INFORMATION FOR SEQ ID NO; 2S246 7 ii.· sequence iA; LENGTH; 2.-3 amino acids; is; TEPE: amnc aciu (C? STRANDEDNESS ·. single >D; TOPOLOGY; linear ill; MOLECULE TYPE; proteir.
(XX! SEQUENCE DESCRIPTION·, SEQ ED NO; 252:
Ser Pro Ala Pro
Arg Asp Ser Hrs <*t 0
His Pro Let; Pre 35
Gly Glu Trp Lys
Gly Ala Vai Thr g 5
Leu Gly Pro Thr
Vai Arg Leu Leu IOC
Pro Pro Gin Gly
Leu Ser Phe Gin
Pro Ala Cys Asp
Val Leu His Ser
Thr Pro Val Leu
Thr Gin Met Glu «eu «eu «eu Gru
Cys Leu Ser Ser
Leu Gly Ala Leu
Arg Thr Thr Ala
120
Hrs Leu Leu Arp
135
Leu Arg Val Let;
arg «eu Ser dn
Leu Pro Ala Val
Glu The Lys Ala
Gly Val Met. Ala
Leu Leu Gly Gin ......90
Gin Ser Leu Leu
105
His Lys Asp Pro
Gly Lys Val Arg
140
Ser Lys Leu Leu
Cys Pro Glu Val
Asp Pne Ser Leu
Gin Asp II® «eu
Ala Arg Gly Gin
Leu Ser Gly Qin $5
Gly Thr Qin Leu
Asn Ala Tie phe
125
Phe Leu Met Leu
Val Gly Gly ger Thr
145
Leu Cys Val Arg
ISO (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: .353;
i i; SEQUENCE CHARACTERISTICS ; (A; LENGTH: 149 amino acids ÍB} TYPE; amino acid <CJ STRANDEDNESS: single (D; TOPOLOGY: linear (ii; MOLECULE TYPE: protel
4B8
Ser Pi';- Ala
Pro Pro Ala Cys Asp .Leu Arg Vai
Leu Ser Lys Leu Leu
Arg Asp Ser Ms Vai
Leu Ha s.
Ser
Leu
Glu
H*s .ro Leu Pro Thr Pro Vai Leu Leu Pro Ala VM Asp Phe Ser Lev <045 uiy «it Trp Lys Thr Gin Met Glu Glu Thr Lys Ala Gin Asr- He Lesv 55
Gly Ala VM Thr Leu Leu Leu Glu Gly Vai Met Ala Ala Arg Gly Gln 75SC
Gly Pro tte Cys L«u Ser s<r ely G.R ser Ss sc Leu **eu Gin Ser Leu Leu Gly Thr Gl- q->v
IOC 10£ - u„ ~->
«rg Thr Thr Ala His Lys Asp Pro Asn Ala Xle Phe Leu Ser Phe Gin «eu «eu Arg Gxy Lys Vai Arg Phe Leu Met Leu Vai Glv g^' g®
Thr Leu C'ys Vai Arg
145
ÍH INFORMATION FOB SEQ XL NO; 254:
U) SEQUENCE CHARACTERISTICS;
ÊA3 LENGTH; 153 amino acids ÍB? TYPE; asnmo acid (CS STRANDEDNESS; single ί > TOPDLDGy; 1 inear iiii MOLECULE TYPE: protein (xi) SEQUENCE INSCRIPTION; SEQ ID NG; 254;
Sa
Pro Al® Pro Pro Aia Cys Asp Leu Arg Vai
.......... ft.
Leu Ser
Lys Leu
15...
«<eu
Arg Asp Ser Hia Vai Leu H
Ser Arg Leu Ser Gin Cys
Mo Glu Vai
489
Hit Pro Leu Pro Thr Pro Val Leu
Phe
4.3
Gly Glu Trp Lys Thr Gin Met Glu
Lys
Αλ£
Asn le Leu
Thr Leu Leu Leu Glu
Ala
Aua
Figure BRPI9610977A2_D0224
Lex:
SiPhe
Val e t
Lex
Ser
Leu
Gin
Leu
Se;
Lex?
Thr Cys Leu Ser Ser 6 5 &>eu Leu Gly Ala Leu
IOC u»ly Arg Thr Thr Ala Hrs Lys Asp Pro Asn Ala 11« Phe 120 125
Gin Hrs Leu Leu Arg Gly Lye Val Arg Phe Leu Met Leu 13S 14Q
Ser Thr Leu Cys Val Arg
150...................
i'l.; INFORMATION FUR SEQ ID NO: 283.>i? SEQUENCE CHARACTERISTICS:
{A) LENGTH c 64 base pairs (S) TOE: nucleic acid (C) STRANDEDNEES: single (D? TOPOLOGY: linear ;i.; MOLECULE TYPE: other nuclexc acid (A) DESCRIPTION: /dese ® “DNA {synthetic**
ÍXt) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: 255:
GGATCCÀCCÀ TGAGCCGCCT GCCOG^CC^G ~ wv«A».u..w UvshXLvw ^ACTCCTGGT CCGCCCCGCi
ATGG (2? INFORMATION FOR SEQ ID NO; 25 S: ii) SEQUENCE CHARACTERISTICS: ί&Σ LENGTH; 153 amine acids ÍB) TYPE: «mino acid {C) ETRANDEDNES $ ,· unhnown
490 iix) FEATURE:
»As NAME/KEY: Modified-site (Si LOCATION:112
ÍC5 OTHER INFORMATIONr/note» «position 112 is delete
Axa.VA—. u,rs,: Pre. Phe, Tm o— Me— (xxl FEATURE· (A? NAME / KEY: Mt>dirisd~si te (B? LOCATION;. 113
OTHER
Pre
INFORMATION:
, Phe. Ala..
mute» ’posmom 113 is deleted or
Vat. Leu. He. Trp or Met* ;ix.i FEATURE;
(A) NAME/KEY; Modified-si us (Si LOCATION;114
IB) OMSK IWoraATXON./t.o^. •ixwiUen 114 ia eelettó „
Phe4 M.ta, Vat, Lau> lie. Trp or Met’ (XX) FEATURE;.
(A) NAME/KEY; Modxfied-sxt® (Bi LOCATION:115 iL; OTHER INFORMATION;/note= “positop 115 is deleted cr
Gin, Gly, Ser, Thr, Tyxf or Asm’ (xi! SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 256:
Ser Pro Ala Pro Ara Cys Asp Leu Arg xo Val Leu Ser Lys Leu 15 . Leu
Arg Asp Ser His 20 Val Leu His Ser Arg Leu Ser Gin Cys Fro V Val
3C
Hus Pro Leu 3 5 Pro Tin Pre Val 40 Pro Ala Val Asp 45 Phe Eer Leu
Gly Glu Trp 50 Lys Thr Gin Mat 55 \3«A.xí> ΤαχΓ Lys Ala 60 Gin Asp lie
Gly Ala Val 65 .. ·μΆ· . . Leu Leu Leu L.JL:^T Val Met 75 Ala Ala Arg Gly Glh 80
Leu Gly Pro :< ψ eew-:: Cys 85 Leu Ser Ser Leu Leu 90 Gly Gin Leu Ser Gly 95 Gin
Val Arg Leu Leu 100 «eu Gly Ala jw>eu Oxxi 105 Ser Leu Leu Gly Thr no Gin Xaa
Xaa Has Xaa Gly Arg Thr Tjfir Ala Lys Asp Pro Ann Ala X:'-L : ii e Phe
91 já. j-’n-s Gii, His Leu Are Qty Lys Vai “Γ Phe Iox Me· Le .1.3;·..
w·» v ,λ **<: v
Vai Gly uly &er Thr Leu Cys Val Arg
-4S iso
INFORMATION FOR SCO ID NO; 257;
;ii SEQUENCE CHARACTERISTICS;
íA) LENGTH; 454 hs.St paira ;S·; TYPE.· nucleic acjc (¢,- STRANDEDNESS; Single (0? TOPOLOGY·, linear in, MOmEuJLE TYPE; ether nucleic acid <:A; DESCRIPTION.- /desc - ·» (synthetic) ’ ixi; SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO; 257;
CCATGGCTAA CTGCTCTATA ATGATCGATG AAATTATACA TCACTTAAAG AGACCACCTG uA^CTTTGCT LGACCCGAAC AACCTCAATG ACGAAGACGT CTCTATCCTG ATGGATCGAA a».,.í.uA, jm^AAAuCTG GA5AGCTTCG TAAGGGCTGT CAAGAACTTA gaaaatgcat CAGGTATTGA GGCAATTCTT CGTAATCTOC AACGATGTCT GCCCTGTGCC ACGGCCGCAC a> 4$ V ^^κ.0Α·.„Α TCCAATQATC ATCAAGGCAG GTGACTGGCA AGÀATTCCGG GAAAAACTGA Um-v^A.s.. GGTTACCCTT GAGCAAGCGC AGGAACAACA. GTACGTAGAG GGCGGTGGAG QCTCCCCGGG TGAACCGTCT GGTCCAATCT CTACTATOAA GCCGTCTCCT CCGTCTAAAG
AATCTCAT/sA ATGTCCAAAC ATGTAAGGTA CCGCATGCAA GCT^
464 .............................................. * (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO; 258;
ii; SEQUENCE CHARACTERISTICS;
(A) LENGTH: 419 base pairs (E) TYPE; nucleic acid (C; STRANDEDNESSrsingle
492 fD. TOPOLOGY: Linear ill; MOLECULE TYPE; other nucaexc acid {A- v~ECFIFTION, /dese = DNA {synthetic: ' ixi) SEQUENCE DESCRIPTION; SEQ ID NO: OSS;
CCATGGCTAA CTGCTCTATA ATGATCGATG
.......................................................................................
CACCTTTGCT GGACCCGAAQ AACCTCAATG
ACCTTCGACT TOCAAACCTG GAGAGCTTCC·
ISO
CAGGTATTGA GGCAATTCTT CGTAATCTCC
24C
CCTCTCGACÀ TCCAATCATC ATCAAfflSCAG
300
COTTOTATOT GGTTACCCTT QAGQAAGCGC
360
GCTCGCCGGG TGGTGGTTCT GGCGGCGGCT
419
AAATTATACA TCACTTAAAG AGACCACCTG
ACGAAGACGT CTCTATCCTG ATGGATCGAA
TAAGGGCTGT CAA.GAACTTA GAAAATGGAT
AACCATGTCT GCCCTCTGCC ACGGCCGCAC
GTGACTGGCA AGAATTCCGG GAAAAACTGA
AGGAACAACA GTACTTAGAG GGCGGTGGAG
CCAAUATGTA AGGTACCGCA TGCAAGCTT

Claims (41)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Proteína hematopoiéticâ compreendendo; uma seqüenciade aminoácidos da fórmula:
    RuL:“R2> Ra-Li-Rt R-Ri·. OU Rz-Rt
    5 onde R5 e Ra são independentemente selecionados do grupo consistindo em:
    (I) um polipeptídio compreendendo; uma sequência de amínoá·· cidos G-CSF humano modificada da fórmula·.
    Xaa Xaa Xaa Gly Pro Ala Ser Ser Leu 10 Fro Gin Ser Xaa Leu Leu Xaa Xaa Xaa Glu 20 Gin Val Xaa Lys Xaa Gin Gly Xaa Gly Ala 30 Xaa Leu Gin Glu Xaa Leu Xaa Ala Thr Tyx 40 Lys Leu Xaa Xaa Xaa Giu Xaa Xaa Val Xaa 50 Xaa Gly His Ser Xaa Gly Ile Pro Trp Ala 60 Pro Leu Ser Ser Xaa Pre Ser Xaa Ala Leu 70 Xaa Leu Ala Gly Xaa Leu Ser Gin Leu His 80 Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu 90 Gin Ala Leu Glu Gly He ser Pro Glu Leu 100 Gly Pro Thr Leu Xaa Thr Leu Gin Xaa Asp 110 Val Ala Asp Phe Ala Xaa Thr He Trp Gin 120 Gin Met Glu Xaa Xaa Gly Met Ala Pro Ala 130 Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala 140 Phe Ara Ser Ala Xaa Gin Xaa Xaa Aia Gly 150 Gly Val Leu Val Ala Ser Xaa Leu Gin xaa 160 Phe Leu Xaa Xaa
    Ser Tyr Arg Val Leu Xaa Xaa Leu Ala Gin Pro {SEQ XD KQtl) onde
    Xaa na posição
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Figure BRPI9610977A2_C0001
    Xaa Xaa Xaa Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Figure BRPI9610977A2_C0002
    Thr,
    Pro
    VI. >
    Phe,
    Lys,
    Ser, Arg, Tyr ou L®U;
    Arg, Tyr ou Ser
    Ser,
    Pro ,
    Ser,
    Thr,
    Tyr,
    Pro, ' Gly;
    e, Leu
    Ser;
    Ser;
    posição po&tçàíj posição posição posição posição posição posição possção posição posição possçào posição posição xg, Cys na posição
    Trp, GÍFa n 3 na na na
    Xaa í Xaa ' Xaa í Xaa | Xaa i Xaa i Xaa t Xaa i Xaa i Xaa t Xaa f Xaa i Xaa i Xaa | Aiâktà ... j Xaa ; Xaa Xaa Xaa ' Xaa Xaa Xaa Xaa ou é
    é
    Leu,
    Arg,
    He,
    Asp,
    Ala,
    Lys
    Cys ou
    Cys $er His, Thr,
    Eis, Ser, Gly, Pro, Ser,
    Thr pro; Thr ou His;
    Ala, Ile, Tyr ( i x e ou Cy a ,* Thr o» Ala ;
    j Leu;
    Vai, Lys, Trp è
    è è é Leu;
    â4 é Pro,
    OU «M.-..
    Í15J posição 46 ã Glu, Arg, Phe, Arg, i le ou Ala; posição 47 ã Leu ou Thr? na posição 49 ê Leu, Phe, Arg Ser: na posição 50 ã Leu, lie, His, Pro ou Tyr; na posição 54 è Leu Oü Hia,- na posição 64 ó Cys ou Ser; ns posição 67 é Gin, Lys, Leu ou Cys; na posição 70 ò Gin, Pro, Leu, Arg ou Ser; na posição 74 é Cys ou Ser; na posição 104 é Asp, Gly Vai; ns posição 108 ê Leu, Ala, Vai, Arg, Trp, G ln oíj na posição 115 & Thr, His, Leu «« Ala rss posição 120 & Gin, Gly, Arg, Lysou His Híí posição 123 é Glu, Arg, Phe «« Thr na possção 144 Φ Phe, Hia. Arg, Pro, Leu, G ln cü na posição 146 &: Arg Oü Gln; na posição 147 é Arg «« Gin; nat posição 156 & His, Gly ou Ser; nsà posição 159 e Ser, Arg, Thr, Tyr, Vai oü Gly; na posição 162 é Glu, Leu, Gly ou Trp na posição 163 é Vai, Gly, Arg ou al& ría posição 169 <? Arg, Ser, Leu, Arg ou Cys; na posição 170 His, Arg Oü Ser:
    onde opcionalmente 1-11 aminoácidos do término-N e 1-5 da término-C podem ser opcionalmente suprimidos da dita sequência aminoácído G-CSF humana modificada; e onde o término-N está ligado ao término-C diretamente ou através de um ligante capaz de unir o término-N ao término-C e tendo novos términos-C e N em aminoácidos;
    38-39 59-80 99-100 39-40 60-61 123-124 40-41 61 -62 124-125 41-42 62-63 125-126 42-43 63-64 26~127 4 44 64-65 128-129 44-45 65-66 129-130 45-46 66-67 130-131 46-47 67-68 131-132 47-48 68-69 132-133 48-49 69-70 133-134 49-50 70-71 134-135 50-51 71-72 135-136 51-52 91-92 136-137 52-53 92-03 137-138 53-54 93-94 138-139 54-55 94-95 139-140 55-56 95-96 140-141 56-57 96-97 141-142 57-58 97-98 ou 142-143 58-59 98-99
    (H) um paíipeptídíe compreendendo; uma sequência de aminoácidos IL-3 humana modificada da fórmula:
    •Ma Pro Met Thr Gin 5 Thr Thr Ser Leu Lys 10 Thr Ser Trp Val Asn 15 • Cys Xaa Xaa Xãa Xa& 20 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 25 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 30 Xaa xaa Xaa Xaa Xaa 35 Xaa Xaa Xaa Asn Xaa 40 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 45
    aX §£$ v<id Aria x-?a Xaa Xaa Xaa Xaa .Xaa Xaa Λ Lisi Xaa Xaa Xaa Xaa <S ¢^. 60 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xa.a Xaa Xaa xaa xaa Xaa Xaa Xaa »S 70 Xaa x>a a Xaa Xaa X»a Xaa Xaa Xaa Xaa. Xaa Xaa Xhe Xaa Xaa Xaa 80 85 90 Xaa Xaa Xas Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa X>as Xaa Xaa 53 1ÔÜ xos Xaa Ph® Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa xaa Xaa Xaa Ί(>Αΐ.^. 110 115 120 Xaa Xaa Xaa Gin sin Thr 7J-W 4-ΛΑΛ. Leu Rar Leu Ala Ils Phe 12S 130 ' REQ XL 1 NO: 2) :
    n é Sap, Ly>r
    Xaa napwçee 18 è tes, His, Lee, iUj Pha, <H,
    Xa« Aa p<>'$ 19 è Met, phe. Xl«, Xa<a na posíçâc 34 0 He, Cys, Gl», Xaa na pe&íçáa 21 6 Asp, Phe, Lys, Thr, s«r ^alf Xaa na pasfçâa • 4-2 A Glu, Trp, Fra, Lay, Vai 0Ü í Sly; Xaa ,na posição 23 è lie, Vaj, A1& > Lae, s*r, »U Arg? Xaa A3 pGS-táa 24 é Xle, Gly, Vai* Xaa os posigàs 2S » Thr, His, Gly, Xaa Γίδ posição 26 6 Ris, Thr, Phe. Xaa: fia posíçáo 27 ® Leu, Gly, AXS, Xaa AS pSS.iç4<> 3« 6 Lys, Arg, Leu, Xaa as paaiçàu 29 é Sln, Asg, Leu, Xaa A3 pasiç^A 36 s pye, His, Thr, Xaa na posiçãtí 31 é Pro, Asp, Giy, Xaa A3 passçào 32 é Lep, Vai, Arg,
    Arg. Gly, Ala, ou tys;
    Glu, Arg, Fro, on Ala;
    Arg, Ala, g>y, Glu, Gln,
    S«i·., Ala. His, Asp, Asn, Cln,
    Oly, Tip, Lys, Fhe,
    Arg, Ser, Fhe. ou Leu?
    Glii< Arg, pro, »u Ala;
    Gly, Arg, Ala, ou Txp;
    Star, Ser, ou AU;
    Qla, Gly, Prss, Vai ou Trp·
    Fra, Arg, ou yai;
    Gly, Asp, Gin, Ser, Leu, ou Ala, Arg, Leu, Oü si»;
    ^Ifi, Asp, Gly, Ala, OU Glu5
    Xas na posição 33 8 Pre. Leu. Gin,. Ala. Thr, Xae na pasiçà» 34 é Leu , Vai. Gly, Ser, Lys. Glu. Gin, Thr. Arg, Ale,, Fhe, 11« ou Met; Xaa ft* posição 35 4 Leu, Aj^a., Gly, Am, Pro. ίχ.Ϊ Γΐ , <Jy Val; Xaa n» posição 3 δ φ Asp, Leu, OU Vai; Xaa posição 3? é Phe, Ser. Pro, Trp, OU He; Xaa na posição 38 é Asr.f GÜ Ala; Xaa ft* Pããição 4S θ Leu, ^P'Oli Arg; Xaa na posíçãe 41 é Asn. £ys f λχ£&,. e H.às f Mat, βϋ Fro; Xaar.a porção 42 è Gly. A$pf Serz Cys, Asr:x Lys, Thr, Leu, Vai. Glu.. Phe.. Tyr, lie. Met δίι Ala; X^Ana posição 43 é Glu, Asn, Tyr. Leu, Phe, Asp.· Ala, Dy a, Gin.. Arg, Thr, Gly ou Ser; Xaa ft* posição 44 8 Asp, Ser, Lev, Arg. Lys, Thr, Met, Trp, Glu, Asn, Gin. Ala ou Pre; Xaan3 pasíçâo 45 é Gin, Fro, Phe, Vai< Met. Leu, Thr, Lys,
    Trp, Asp, Ma, Arg, Ser, AU, XI®, GluOU His;
    Xaa o» pesuçaa 46 4 Asp, Phe, Ser, Thr, Cys, Qiu, Asn, Gln< Lys, Xis, Ala, Tyr, He. Vai q ií Gly; Xaa rta posição 4? è He, Gly, Val, Ser, Arg, Pro., ou xiS; Xaana posição 48 é Leu, Ser, Cys, Arg, Ila, His, Phe, Glu. Ly®. Thr, Ala Met, Vai Oij Asn- Xa»na posição 49 è Met, Arg, Ala Gly, Pre, Asn, His,ou Asp; Xaa at position Se r G*.u, Leis , Thr, Asp, Tyr, Lys, Asn, Ser. Ala. He, Vai, His, Phe, Met ou Gin; posição 51 é Asn, Arg, Met, Pro, S&r, Thr, OU Mi§; Xaasa posição 52 8 Asn, Ris, Arg, Law, illy, Ser, ou Thr; Xaa os possção 53 ê Leu, Thr, Ala, Gly, Glu, pro, Lys, S«r,Qll Met Xaa os posição 54 é Arg, Asp. He, Sex, Vai, Thr, Gin, A«n, Ly«, His, Ala 0 U Leu; Xaa ns posição 55 é Arg. Thr, Vai, Ser, Leu,ou Gly; Xaa oa posição 56 é Pio. Gly, Cys, Ser, Gin, Glu. Ara, ííi.s< Thr, Ala, Tyr, Phe, Leu, Vai ou «ys; Xaans posição S? 4 AenGM g|yf Xaa roa posição 58 $ Leu < Ser, Asp, Arg, Gin, Val,oii Cys;
    Figure BRPI9610977A2_C0003
    Xaa ns posição »9 é G1V Tyr, Hi®, L®u, Pre, eu Arg; Xaa na posição 6£* õ Ala, Sex, Fro, Tvr > Asn, ® ü Thr; Xaa na posição SI é Phe, Asn Glu. < Lys. Arg, Oü Ser; Xaa na posição 53 õ ÀS», HLS, Val, Arg, Pr», Tht, Asp,nu lie; Xaa na posição «2 é Arg, Tyr Trp, Lys, Ser, Xis, Pro,ou Val; Xaa os posição 64 é Ala, Asn, Pro, Ser, OX Ly®; Xaa ns posição €5 é Val, Thr, Pro, Uis, Leu, Phe, ftíJ Ser; Xaa na posição 66 é Lys, He, Arg, Val, Asn, Glu, osj Ser? Xaa ns posição 67 é Ser, Ala. Phe. val. Gly, Asn, lis, Pr», os; Xaa ns posição a® Leu Val, Txp, S®r < 11®, Phe, Thr,ou His? Xaa ns posição 68 é Gin, Ala, Thr, Glu, Arg, Trp, Gly, o® Xaa na posição 70 Asn, Leu, V&l Trp.jí Pro., ou Ala; Xaa nà posição 71® Ala, Mat. Leu, Pr», Arg, Glu, Thr, Gin,
    Sis :
    Leu ,
    Figure BRPI9610977A2_C0004
    Trp. ou
    Asn;
    Xaa na pssnção 4 Sos, Glu, Met, Ala. His. Asn, Arg,. s (J Asp; Xaa na posição ’n è Ala, Glu. Asp, Leu, Ser. Gly < Thr, oo Arg; Xaa na posição 7ã e TI® , Mat, Thr , Pro, Arg, Gly. . Ala; Xaa na posição 7S é G1U, Lys, Gly, Asp, Pro, Trp, Arg < Ses Gl&ir .0·^ Leu; Xaa na posição 7ó ò Ser, Val, Ala, Asn, Trp, Glu.,: Pra, Gly, ou Xaa na posição 77 é 11®, Ser, Arg, Thr, on Leu; Xaa fia posição 79 é Leu. Ala, Ser, Glu, Phe. Gly, OU Arg; Xaa™ f'osí?âo 79 ó Lys, Thr, .Asn, Met, Axg, Ile, Gly,Oü Asp, Xaa na posição ao é Asn, Trp. Val, Gly, Thr, Leu Glu.ou Arg, Xaa na posição 81 é Leu, Gin, Gly, Ala. Trp, Arg, Vai, ou' lys,- Xaa «a possçãa S2 é L«u, Gin, Ly®, Trp, Arg. Asp, Glu, Asn, Hi®, Thr, Ser, Ala, Tyr, Phe, II®. Met í5iJ t Val 't' Xaa pa posição S3 ê Pr», Ala, Thr, Trp, Arg, oo Met; Xaa na posição 84 ó Cy*f Glh, Gly, Arg, Met, Gü Val.- Xaa n« posição as é , Asn, Val, Í>U £ In; Xaa ™ posição 86 á Pr», Cys, Arg, Ala, αο Lys; Xaa na posição 87 é Leu ,· Ser, Trp.. Oi.1 G. ly; Xaana posição 68 e Ala, Lys, Arg, Val, OU Trp; Xaa®« posição 89 e Thr, Asp, Cys, Leu, Val, Glu Hi®, Asn,OU
    è
    Xaa na posição . 80
    Ala
    Fro
    Ser,
    Sly, ASSp, Ils, 0y Met;
    Asp;
    Ser;
    Xaa r>3 posição 514 A1&, Pro, Ser , Thr, Phe, Leu, Asp, ou His; Xas na posiçàs . 83 é Pr», Ph®, Arg , Ser, Ly&, His, Ala, Gly, He Lew; Xaa os posição S3 è i Thr, Asp, Ser, Asn, Pro, Ala, Leu, OU Arg; ixa ns posição , §4 Á Arg, lie. Ser, Glu, Leu, V<1. Gin. Lys, His, A* a, uu Pro> Xaa na posição 9ã é Η1§> Gin, Pro, Arg, V<1, , ΌΧν>· Thr, Asn, Lys. Sox , Ala, Trp. Phe, He, çu Tyr; Xaa 03 posiçáe Sã 6 Pro < Lys, Tyr, Gly, lie. OU Thr- Xaa m posição 97 é lie, Val, Lys, Ale, ou Asn;· X&a na posição SB è Hrs, He, Asn, Leu, Asp, Ala, Thr, Gio, Qin > Ser, Phe, Met, Vai, Lys, Arg, Tyr oil Pro; Xaa na posição $9 ê He, Leu, Arg, Asp, Val, Pro, GXn,
    Gly, Fh«. ou- His.*** rm posição χΟβ é Lys, Tyx, Uu, ai<< Arg, n<<
    Xaa ns paaição 301 B Asp. Pro, Het, Lys, His, Thx4 V<1,
    Tyr< Glu, Asn, Ser, Ala, Sly, lie, Leu, m; Gin.;
    Xea na posição 1P2 é Gly, Leu, Ly®. Ser, Tyr, gü Pro; Xisa na posição 103 ê Asp, Pü S«r; Xaa n» posição 104 0 Trp, Val, Oys, Tzr< Thr, Met, Pro, Leu. Gin, Lys, Ala, Phe, eu Gly; Xaa ,-na possçáo ics & Aam, Pre, Ala Pne, &®r Trp, Gin, Tyr, Leu, Lys, Xis, Asp, ou His; Xaa na posição , 13£ é G.1U e Ser, Ale, Lys, Thr, lie, Gly. OU Fro; Xaa ns posição l3g é Arg, Lyss, Asp, Leu, Thr,, Xie, Gin, His, Ser
    Ala Oü Pro;
    Xaa m3 peaição Xaa:n$ posição Ser, nu 109 é . lie ê Trp; Arg, Lys, Thr, Ala, Pro. Asn, Glu .· Thr, Tyr, Leu, Leu, Arg, Ser.. Gin, or Giy; His, Glu, Xaa ns posição 111 è Leu, He, Arg Asp □ u Her.; Xaa a posição . 112 .é Thr, Val, Gin, Tyr, Glu, His, Ger, ou Phe; Xaa na posição 113 ή Phe, Sex, Cys, His, Gly, Trp, Tyr, Asp, Lys, Leu < He, Val OU Ακη.' Xaa.:f;e posição 114 é Tyt. cys. His, Ser, Trp, Arg, ou Leu; Xae na posição 115 ê Leu, Asn, Val, Pro Arg, His, Thr,
    Pm, OU Met:
    Xaa H£ is Lys, Lay, Pr©, Thr, Met, Asp, Vel> Glu, Axg, T-p, Ser - Asn, Eis, Ala, Tyt, Phe, S In. OU Ha; xaa na posição 0 Thr, Ser, Asn, lie < Trp, Lys, OU Pro; xaa na posição 118 ó Leu, Ser, Pr&< Ale, Gj.U , Cys, Asp, OU Tyr ; Xaa na posição 119 é Glu, Ser, Lys, Pro, Leu, Thr, iyr,OU· Arg; Xa& na posição 12G 0 Asn, Ala, Pr», Leu, kís, Vai. OU Gin; Xa& na pOSiÇãO *2· * é Ala, Ser, He, Asn, Frc-, Lys. Asp, OU’ Gly,; Xa.a na posição 122 é Gin, Sar, Met, Trp, Arg, Pne, Frr-, Mis, ’1«, Tyr, OU Cys; Xaa na posção 123 é A1&, Mat, Glu, Mis. Ser, Pr«, Tyr, OU' Lau :
    onde de 1 a 14 amineâcidcs podem opcionalmente ser suprimidos do térmíno-N e/ou de 1 a 15 aminoácidos podem ser opcionalmente supnmidos do térm<nO’C da dita sequência de aminoácidos IL-3 humana modificada; onde de 0 a 44 dos aminoácidos designados por Xaa são diferentes dos corres 5 pendentes aminoásidos de intedeucina-3 humana nativa (1-133; e onde o término-N está ligado ao término-C diretamente ou através de um ligador (L2), capaz de unir o tèrmino-N ao tármino-C e tendo novos términos C e N em aminoácidos
    26- 27 27- 28 50- 51 51- 52 85- 86 86- 87 28-29 52-53 87-88 29-30 53-54 88-89 30-31 54-55 89-90 31-32 64-65 90-91 w4Í. 65-86 9V92 33-34 66-67 92-93 34-35 67-88 97-98 35-36 88-69 98-99 36-37 69-70 99-100 37-38 76-71 100-101 38-39 71-72 101-102 39-40 72-73 102-103 40-41 82-83 eu 103-104 41-42 83-84 49-50 84-85
    (Hi) uni polipeptídío compreendendo; uma sequência de aminoácidos iiganta c-mpl humana modificada da fórmulaAfc g.*hrTh.rGi.y x&rulyX*euXíevLy sTrpGrnG.inGlyPheAxxf AlaLygi ~ ePr o •1'35 2GG2Q5
    GlyLeiiL&uAs nu loThrSer ArgSerLsuAspG 1 nil ©proG lyiyrLe'uAsnArg
  2. 2X0 2X5 225225
    j.ieHissjlu.ueuLeuAsnGlyThrArgGlyLeu.phePrpG.lyProSerArgArgThr 230 235 240245
    LeuG ly AlaProAspXleSerSerG 1 yThrSerAspThrGlys erLeuProProAs n 2SC 255 260255
    LeuGi nProGlyTyrEer ProSerProThrHisProProThrG lyG XaiyrThrtsu 270 2?5 280 rheProLsuProProThrLeuProThrí>TovaXValGlnx.euHisProLsuLeuPrí3
    298300
    AspProSerAXaProThrPrcThrProThrSerProLeuLeuAsnThrSerTyrThr «Ή 3X0 3*5320
    K i sSeru j.nAstu,eiis&rQlnGluG.*y (SEQ XD NO:3}
    325 330333
    153 onde
    Xaa na posição Phe, Trp, 112 è detetado ou : Met; Ala, val, lie, Pro, xaa na posição lie, Trp, 113 He è deletado ou ’ Pro, Phe, Ale, Val, Leu, Xaa na posição lie, Trp, 114 MS é delatado on Fro, Phe, Ala, Val, Leu, X&& na posição . 115 Gin, sly, Ser, Thr, Tyr,
    Asn, ou Asn: o onde o térmíno-N está ligado ao término-C díreíamente ou através de um ligante (U) capaz de unir o término--N ao término-C a tendo novos términos C e N em amínoàoidos;
    26- 27 27- 28 28’29 29-30 30’31 32- 33 33- 34 34- 35 ML· 36-37 W 37-38 38-39 40-41 41’42 42- 43 43- 44 44- 45 46- 47 47- 48 48- 49 50-51 5 51- 52 108-109 52- 53 109-110 53- 54 110-111 54- 55 111-112 55- 56 112-113 56- 57 113-114 57- 58 114-115 58- 59 115-116 59- 60 116-117 78- 79 117-118 79- 80 118-119 80- 81 119-120 81- 82 120-121 82- 83 121-1'22 83- 84 122-123 84- 85 123-124 85- 86 124Ί.25 86- 87 125-126 87- 88 126-127 88- 89 ou 127-128; (IV) um polipeptídio compreendendo, uma sequência de amino-
    ácidos IL-3 humana modificada da fórmula'
    Ala • Pro Met Thr Gin Thr Thr Ser Leu Lys Thr Ser Trp Val Asn 5 10 15 Xaa x&a Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 2.0 ’ 25 30 Xa& xaa xaa Xaa Xaa Xaa xaa Xaa Asn Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45
    Xa a Xaa Xaa X&át Xsa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa xaa Xaa Xaa 50 55 &S xaa .Xaa Xaa y ·\ & Xaa Xaa Xaa Xaa xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa €5 70 75 Xaa Xâe Xaa X&& Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa X.aa 30 gç 90 Xaa Xaa Xas Xaa xa.a Xaa Xaa Xaa Xâá Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 95 100 105 Xaa Phe Xac> X&& Xaa xaa Xaa Xaa Xaa Xas Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa .110 115 12Ü Xaa Xaa Xaa GIxí Gift Thr Thr Leu Ser Leu Ala He phe 12 5 130 ÍSEQ ID NO: 2)
    em q^i? xaa ne pOSi çâe 1? Xaa na posição lã é Xaa, Xâô na po&içáo 19 8 Met, X&& na posição è 11a, Xa« na posição 21 l? Aap Tbr. s«r OÜ Val; Xaa f?a posição 22 è Giu. Leu. Val su Gly; Xaa na posição 23 è 11®, Leu. §er. - ÔU At£ r; Xaans ppsição 1 24 é 11«, Xaa na posiçàc 2S è Thr, Xaa os pssiçâo 2«! e Mia, Xaa na posição 27 8 L««, Xaa na posição 28 é Lys, Xaa na posição 29 & Gin. Xaa na po&içèa 34 e ?:r>,
    ia Ser, Lys. Sly, Aap, SI», ou αγ§. His. Leo, Ils, Phe, Arg, su -Tin; 9ha, 11«, Arg, Gly, A.U, £j<i Cys? Gys.· Gin, Glu, Arg, Fro, ^5.3.. Phe, Lys. Arg, Ala, Gly, Glu, Gift, Asn, Trp. P.te, S»x\ Ala. Ki.&, Asrjs. &sj&, Gln> Val. sia, Gly, Trp. lys, yfe», £*ly< V<'i' v Arg, Asr, Fh«, Gy l«su; His. Gly. Gin, Arg. Pro, ou Ala.- Thr, Fhss, ^.ly < Axçj y Gly, Ar§. Thr, s*r, or au; Xrjj. Leu, Gm, Gly, Pro, v&j go Trj>; Asa. Lssu, Pro, Arg, *8 Val; His. Thr, Giy. Asp. Gin, Ser, Leu, m lys
    X** na posição 31 é Fro, ÃJ5P( AU> cln.
    ΚΛΒ na posição 32 é Leu. Val, Arg, Gin, Asn, ciy< Ma, QU Giu
    Xaa naposíÇB» 33 e Pro, Leu. Gin, χι&, W.ou Glu;
    Xaa ns posição 34 § Leu., Val, Gly, Ser, Lys. Giu„ «in.
    AFg< Ala, Fh®< lie çsy Met.;
    Xaa rsa posição 35 é Leu. Ala. Gly, Asa, Pro. Gin. ΛΜ Val; Xaa ns posição J$ è Asp, Leu, üu Val; Xaa na posição 3? é Phe. Ser. Pro, Trp.ou Χ1βί Xaa na posição 38 é ΛλμΓι, φ tj àía, í Xaa na posição 40 ê L«U, Τ?ρΛ oíj Xaa oa posição 41 é Asn. Cys. Arg, Leu. His, Met. çy p*o Xaa bss posição 42 é Gly, Asp, Ser. Cys,. Asn, Lys, Thr. Leu, Val. Glu( Phe, Tyr, Tia. Met. Ala; Xaa ns pos-çâo «3 é Glu, Asn, Tyr, Leu, Phe. Asp. Ala, Oys, Sip, Arg. Thr. Gly !)« Ser; Xaa oa posição 44 Ó Àsp, Ser, Leu, Arg. Lys, Thr. Met. Trp, Glu, Asn, Gin, Ala ou Pre; Xaa na possção 45 é Gin. Pro, Ph®, v»l. Met, Leu. Thr, Lys, Trp, Arp, Asr Arg. Ser. Ala, XXe. Gluoil His; Xaa na posição 46 é Asp, Phe, ger. Thr, Cys, Glu, ^sr>. Gin, Ly s, Hrs, Ala, Tyr, lie, Val Gly; Xaa na posição 4? é 11«, Gly, Vai, g^r, Arg. Pro.ou His,- Xaa na posição 40 § Leu, Xar. Cys, Arg. He, His,. ?he. Glu,
    Lys. Thr, Ala, m«*. Val OU Asn;
    X.« posição „ é MM, teB, Ale 01y ffC‘ fc. ,» P»W» M ♦<.„.
    Ala, Ils, Val, His, Phe, Met oíj Gin;
    Xaa na posição 51 è Asn, Arg. Met, Pro,, ger, Thr, atíHisX** ns posição 52 é Asn. His, Arg, Gly< Serj ou ......
    nap^çào S3 è Lou. Thr, Ala, Gly, Glu, Fro. Lys. S«r,ou
    Xaa nspos^o S4é *»ys, Al& ç?ií X#<&U7
    n. pomsso 55 d Μβ> „.ti Vali s<r,
    IB „· poslçíp M 4 I». Oly. cys. s.x, clu,
    Thr, Ala. Tyr, phe, L®y< Val py Lys;
    Xae r-a pPSiÇ.80 57 Λ Α&Γ, OU G1 yr aaa ns P0S-Í0O ss ê Leu, Sssç·, Asp, Arg,· Git;, Val, ou Cys; Xa« f$a BUSiÇào 5$ & Giu Tyr, Sits, Leu, Pro, ot; Arg; Xaa na pOSiÇãO 60 7èj Ala, Ser, Pre, Tyr, Asn, ou Thr,; Xaa na posição £1 è Phe, Asn. GÍU, Pro, Lys, Arg, ou Ser; Xaa na pOSiÇâ» 82 & Asn, His, Vai, Arg, Pro, Thr, Asp, CJÍJ ne; Xaa ns posição uã è Arg, Tyr. Trp, Lys, Ser, Sí.is, Pro, ou Val; Xsa POS:ÇÃO 64 £í Ala, Asn,, Pro, S«.r, nu Lys; Xaa ns potíçâo 65 é Val, Thr, Pro, His, Leu. Phe, ou Ser; Xaa na pOSíção o6 e Lys, lie. **»< Val, Asn, Glu, or Ser; Xas posição 67 <è Ser, Ala, Phe, Val, Gly, Asn, lie, Pr», ou Hus Xaa na pOSiÇãO 68 c Leu, Vaí, Trp, Sex, He, Ph», Thr, nu Has; Xaa na posição £6 Λ Gin, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg, Trp, Gly, cy Leu Xaa ns posição 76 £ Asr., t,«u, vai. Trp, Pr», ou Ala ; Xaa P3 posição 61 5¾ Ala, Hot, Law, Fro, Arg, Glu, Thr, Gin,
    Trp< OU Asn;
    Xaa i·^ POSiÇlP 72 é Ser, Glu, Met, Ala, His, Asn, Arq, üil Asp: Xaa na possçâo 71 é AjvS Giu, Asp, Leu, Ser, Gly, Thx, o6 Arq: Xaa na posição 74 é XI®, Mat, Thr, Pr», Ar§, Giy, Ala; Xaa Π3 posição 75 è Glu, Lvs, Gly, Asp, Pro, Trp, Arg, Ser,
    Gift, <3U Lets;
    Xaa o® posição 76 é Ser, Val, Ale, Asn, Trp, Glu, Pr», Gly. <íU Asp; Xaa na posição ?; € lie, S®r, Arg, Thr, <su Leu; Xsa na posição 78 Ò Leu, Ala, Ser, Giu, phe, Gly, As s; Xaa .«a posição 7$ é Lys, Thr, Asn, Met, Arg, 11«, «ly. OU Asp; Xaa sa posição RS è Asn, Trp, Val, ciy, Thr, Leu, ou Arg; X&& na posição 61 é L>&u j. Gin, Gly, Ai*, Try, Argíí Val, ou Lys; Xaa posição 82 é w&Vl * Gin, Lys, Trp, Axg, Asp, GiU, Asa , Hi®, Thr, ser y. Ala, Tyr, Phe, Ha, Met õü Val; Xa* o® posição 61 é Pro, Ala, Thr, Trp, Arg, ou Met; Xaa h3 posição 84 é Cys, slu, Gly, Arg, Met, Vai; Xaa λβ posição 8S é G&u, Asn, Val, nu Glftí Xa* na posição 85 é Pro Cys, Arg, Ala, ou Ly»; 2a® na posição 87 é Leu, Ser, Trp, gç Uly- Xaa na posição 88 é Ala, Lys, Axg, Val, ou Trp;
    Xaa ΠΟ posiçáo 89 é Thr, Asp, Cys, Leu, Vai, 01u. Mis, Asn, Xas na posição 90 é Ala. Pr®, Ser, Ttir, Gly, Asp, He, Met; Xa< na posição 91 ó Ala, Pro, Sex, Thr, Phe, Leu, Asp. Hxs, Xaa na posição §2 é Pro, Phe, Arg, Ser, Lys, Mis, Ala, G -l y, H
    Leu;
    Xaa
    Xaa na posição na posição
    Ala, na posição
    Lys. Ser,
    Thr, Arg, Asp, Ser, He, Ser, Asn, Glu, Pxc, Ala, Leu, Vai, Leu, Arg? Hiss Gin, Lys Mrs, Gin, Ρχα, Arg, Vai, Leu, Gly, Thr , Asn
    13»
    Ala
    Xaa na posição ss i i Pr®, Lys, Tyr, Gly, Xaa na posição 9? < 5 He, Vai, Lys, Ala, Xaa na posição $ 5 Pis, Xle, Asp, Leu, Glu, Gin, Ser, Phe, Met, Vai, Lys, Xaa na posição 99 ( 3 11«, Arg, Asp, Gly, ser. Phe, Hi» z Xaa na posição 100 é Lys, Tyr, Leu, Pis Kaa na posição 191 è Asp, Pre, Met, Lys Giu, ÀSÍ, Sax, Ala, Gly, He, Xaa na posição 182 0 G ly, Leu, Glu, Lys Xaa na posição 103 á Aep, Ser; Xaa na posição 104 á Trp., Vai, Cys, Tyr Gia, Lys, Ala, Phe, Gly e Xaa na posição 195 é Asn, Pr®, Ala, Phe Leu, Lys, He, Asp, His í Xaa na posição 106 ò Glu, S»x, Ala, Lys. Xaa. na posição 308 é Arg, Lys, Asp, Leu, Ale ox pro; Xaa na posição 189 é Arg, Thr, Pro, Glu, Xaa na posição HC ê Ala, Asn, Thr,
    He
    Asp, Ala
    Arg, Tyr
    Thr
    Vai
    Pro
    Pro?
    Gin.
    Arg,
    His
    Leu
    Sei, .· Thr,
    Ser,
    Th.
    Thr
    Xle, Sex, Gin,
    Thr, Vai,
    Gift;
    Met*.
    rp,
    He
    He
    Tyt, Leu,
    Leu, Arg,
    Fro;
    Fro
    Gin,
    Ser
    Gin,
    Frc,
    Leu,
    Fro
    His, Ser
    Ser, or na posição Xsa na posição Xaa ΠΟ pOSiçâO
    Gly;
    His > Glu.
    Xs.a é Leu
    He
    Vai
    Lye, Leu,
    Π.3 é The lie Vai
    Ser
    Arg, Asp, din, Tyr, cys , His, or Met;
    Glu, KU,
    Gly, Trp, Tyr, top
    Ser
    Phe;
    Asn;
    Xaa Π9 posição 114 è Tyr, Cys, Bis, ser Trp, Arg, OU Leu; Xaa na posição 115 e Leu, Asa, Val, Prcu Arg ,· Ala. His . Th Trp, Met; Xaa na posição 116 é Lys, Lau, Pro, Thr, Met, Asp, Val, Glu, Arg, Trp, Ser, As tft, R is. Ala, Tyx, Phe, Gin, ou Ii®; XãA na posição 117 é Thr, Ser, ASii, 11®, Trp Lys, os Pro; Xaa na posição 118 é Leu, Ser, Pro, Ala, Glu, cys, Asp, OU Tyr.· Xaa na posição 119 é Glu, Ser, Lys, Pro, Leu, Thr, Tyr, OU Arg; Xaa na posição 12 0 é Asn, Ala, Pro, L®u, Mis, Val, OU da; Xaa na posição 121 e Ala, Ser. 11®, Asn. Pro, Lys, Asp, OU Giy; Xaa na posição 123 é Gin, Ser, Met, Trp. Arg, Phe, Pro, Hi Sy XI®, Tyr, OU Cys, Xaa at position 123 é Ala. Met, Glu, Xis, Sex , Pre Tyr. GU Uu;
    onde de 1 a 14 aminoácidos podem opcionalmente ser suprimidos do término~N e/ou de 1 a 15 aminoácidos podem ser opcicnalmente suprimidos do tèrmino-C da dita sequência de aminoácidos IL-3 humana modificada; e onde de 1 a 44 dos aminoácidos designados por Xaa são diferentes dos correspondentes aminoácidos de interleucina-S gumana nativa {1-133); e (V) um fator de estimulação de colonia;
    a onde L? é um ligante capaz de ligação de R^ a Ry com a condição de que pelo menos um Rs ou R? seja selecionado do polípeptídio de fórmula (l); II) ou III); e a dita proteína hematopoiélica possa ser ímediatamente precedida por (metionina^). (alanine1), ou (metionína'*, alanina’1).
    2.. Proteína hematopoiética compreendendo; uma sequência de aminoácidos da fórmula
    RrLrRa, Rrfó-Ru RrR3, ou RrR:
    onde R, s R2 sâo independentemente selecionados do grupo consistindo em;
    (I) um polipeptídio compreendendo, uma sequência de aminoácidos G-CSF humana modificada da fórmula:
    Xaa Xaa Xaa Giy Pro
    Leu Xaa Xaa Xaa
    Ata Xaa Leu Gin Giu
    Ala Ser Ser Leu Pro Gin
    Glu Gin Val xaa Lys Xaa
    Xaa Giu Xaa Xaa Val
    Ala Pro Leu Ser Ser
    Xaa Leu Xaa Ala Thr Tyr
    Xaa Xaa. Giy H.is Ser Xaa
    Xaa Leu Ser Gin Leu
    Leu Gin Ala Leu Glu
    Xaa Pro Ser Xaa Ala Leu
    His Ser Gly Leu Phe Leu
    Xaa Thr Leu Gin Xaa
    120
    Gin Gin Met Giu xaa
    Gly Xle Ser Pro Glu Leu
    110
    Asp Val Ala Asp Phe A*la
    Gin Gly Ala Met Pro
    150
    Gty Gly Val Leu Val
    Xaa Gly Met. Ala Pro Ala
    140
    Ala Phe Ala Ser Ala Xaa
    Ser Tyr Arg Vai Leu
    Ala Ser Xaa Leu Gin Xaa
    170
    Xaa Xaa Leu Aia Gin Pro
    Ser Xaa
    Gin Giy xaa Giy
    Lys Leu Xaa Xaa
    Gly Xie Pro Trp
    Xaa Leu Ala Gly
    Tyr Gin Gly Leu
    100
    Gly Pro Thr Leu
    Xaa Thr Xie Trp
    130
    Leu Gin Pro Thr
    Gin Xaa Xaa Aia
    160
    Phe Leu Xaa Xaa (SEQ XL NO:1;
    Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
    Thr, Ser, , Pro ou Leu
    08 pOSiçãO na posição
    na posição 3 è Leu, Arg, Tyr c u Ser; na posição 13 é Phe, Ser, His, Thr Pro; posição 16 « Lys, Pro, Ser, Thr ot His; na p 0 ν' Ϊ ç â 1? é Cys. Ser, Gly, Ala, Ile, Ty posição 3^ θ φ Leu, Thr, Pro, HÍS, lie ou ns posição 22 « Arg, Tyr, Ser, Thr ou Ala; Π8 posição 24 4 Ile, Pro, «TH» wXfXΟ λ ou Leu;
    posição
    Arg ,na na na posição posição ã è ©
    ò
    Leu
    OU
    Asp, Ala >
    Ile
    Lys oü
    Cys o«
    Cys mí
    Leu
    Ser;
    Ser; Ser';
    r, Gly,
    Val,
    Lys
    Trp, Ala, posição na
    Arg, cys
    Xaa na posiç-âc 44 é Pro, Trp, Gin, 0Íi Thr Xaa na poçsção 45 s Glu, Xaa na posição 47 ò Léu í Xaa na pos-ç&p 49 « JLrfêtl:? Xaa na posição 50 é Leu Xaa na POSÍÇSO 54 è Leu 1 Xaa ns posição 64 ® Cys < Xaa na P0SÍÇ30 67 é Glu, Xaa na posição ?0 © Gin, xaa na posição 74 e Cys < Xaa na posição 104 o Asp Xaa na posição 105 » Leu Xaa na posição 11.5 è Thr Xaa na posição 120 ã Gin Xaa na posição 123 * Glu Xaa na posição 144 è Phe Xaa na posição 146 » Arg Xaa na posição 147 ê Arg Xaa na posição 156 õ Hís Xaa ns pOS íÇã O 159 8 Ser Xaa Π3 posição 162 ò Glu Xaa na posição 163 é Val Xaa na posição 169 é Arg Xaa na posição 17 G é Hís onde opcionalmente 1
    Gly , Arg,
    Asp,
    Arg, val
    Ala, His
    Arg, Phe, ou Thr;
    Phe, Arg Ser:
    Ile, His, pro ow HÍS;
    uu Ser:
    Lys, Leu
    Pro, Leu lie Ala;
    Cys;
    Ser;
    Gly
    Ala,
    His<
    Gly,
    Arg, His, val;
    Val, Arg, T
    Leu 0« Ala;
    Arg, Lys ou hís
    Phe «tí Thr
    Arg, pro, Leu, Gin
    Gin;
    ΊΡ
    Gly ou Arg, ' Leu, < Gly, > Ser, : Arg «u ; Ser;
    Thr, Tyr, Val Gly ou Trp;
    Arg 9u. Ala;
    Leu, ArgCys; Ser;
    Gly;
    ou Glu;
    -11 aminoácidos do térmíno-N e 1-5 do término-C podem ser deletados da dita sequência de aminoácidos G-CSF humana modificada; e onde o térmíno-N está ligado ao término-C diretamente ou através de um ligador capaz de unir o térmíno-N ao término-C e tendo novos términos C e Nem aminoácidos;
    IS
    38^39 62-63 123-124 39-40 63-64 124-125 40-41 64-65 125-126 41-42 65-66 126-127 42-43 66-67 128-129 43-44 67-68 129-130 45-46 68-69 130-131 48-49 69-70 131-132 49-50 70-71 132-133 52-53 71-72 133-134 53-54 91-92 134-135 54-55 92-93 135-136 55-56 93-94 136-137 56-57 94-95 137-138 57-58 95-96 138-139 58-59 96-97 139-140 59-60 97-98 140-141 60-61 98-99 141-142 61-62 99-100 ou 142-143
    (II) um poíipeptídio compreendendo; uma sequência de aminoácidos IL-3 humana modificada da form ula.
    Ala Pre Met Thr Gm Thr Thr Ser Leu Lys Thr Ser Trp Val Asn 1 5 10 15 Cys Xaa Xaa xaa Xaa Xaa Xaa Maa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Aan Xaa Xaa Xaa xaa Xaa Xaa 35 40 4S
    IS)
    X«sa Xaa Xaa Xaa Xaa 50 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa OC- Xaa .Xaa Xaa X ’ a Xa« Xa a Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xs 3 Λ * 70 Xaa Xaa Xaa Xaa X&9& x«a xaa Xaa Xaa Xaa Xaa xaa Xaa Xaa Xaa 80 85 '3D Xss Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa. Xaa Xaa S5 100 105 X&a Phe Xa<j Xaa xaa Xaa xaa Xaa xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Χ-άίϋ 110 .115 120 Xaa Xaa Xaa Gia Cln Thr Thr *j8U 5&Γ Leu Ala Xis Phe 125 130 ÍSEQ XL ND: 2 ......
    ê<r qua xaa ns posição 17 ia Ser, * >ys. sly, &sp, Met, Sin, 0L; Arg; Xaa ns posiçàs i8 è Asa, Ks.s. Lau, 13«, Pha. Arg, ou Cln; Xaa na posição 13 á Het. Ph«. 11®, Αχ-g.· Gly, Aia, qjj Cys; Xaa na posição 2ϋ ΰ 11», Cys, sin. Glu, Arg, Pr®, 0;} Ala; Xaa na pcisiçào 21 é Asj? Ph«, tys, Arg. Ala, Gi.y, Glu, sin, ASK, Thr. g«r OU Vai; Xãã n« posição 22é Glu, Tsgs, hs. Gar. Ala, His, Asp, Asn.. Gin, Lsu, Vai PU Qiy;. Xaa ns posição 23 é 7 t» vai, Ai», Gly, Trp, Lys, Ph«,
    Ser, Arg;
    X*«»aposi0s i 24 £ IU< aiyi Val sar, «». oy Leu;
    Xaana posição 25 è Thr, κΑδ( aXy> Gin, Arg. Pre, u»:
    X^aa^çSo 2β è Kia, phe> Ciy>
    JUa naposíçào 27 è l«u, Giy, Arg, «Jfcg.. Ser< or Ai<{
    Xaa na psis^So 28 é Lys, Arg, l#u, Qin, sly. Pr«, Val ou
    Xaa nspcsiçàc 2§ é Gin, s.sn.. Lau, pt«, Arg. ôu Vfti·
    Xaa «3 posição 33 a M<_ — „ * e .ro. Kia, Thr, Giy, cijS/ Ser Uu, ou Ly
    Xaa na posição 31 é Pro; Asp; Cty; Ala; Arg; Leu; ou Gin;
    Xaa na posição 32 é Leu; Val; Arg; gio; Acn; Gly; Ala; ou Glu;
    Xaa na pc&içâo 3 3 X-' Pro. Leu Cln,» ou x«« n« posição Γϊ Lsu ,· Vai. Gly. Lys,. Qlu Arg, AH, lie ti í Met; Xaa ns ps&içse S0 4 Leu, Ala. Gly. ÀSÍTi ,. Pro, Gin Xaa as posição 36 £ Asp. ou v«l; Xaa p<js<çâi3 I? 4 Phe, S«sr. Pro, Trp, Xle; Xaa ns posiçàts 3S ώ Asr. , Oü Ala,: Xaa a a pasigio 4S 4: Leu, Trp, ou Arg; Xaa na pn&içâs 41 Ç1 Asn, Cys. Arg. Leu, His, Met, Xaans pesiçào 42 é Gly, Àsp, S4?X‘ y cys. Xsr>. Lys, va *. u i u. She t Tyr, 11®, Kat Oi j Ala Xaa η;ΐ posição 43 Glu.. Asn */* < Leu, Phe, Asp, Gin, Arg, Thr < Gly ou Ser; Xaa ns postoSe 44 4 Asp. Sex. Leu, Arg, Lys, Thr,
    Τη
    Met, .·<
    Xaa
    Qin, Pro. Phe
    Vai
    Met,
    Trp, Asp,
    Xas as positSo
    Asr
    Arg
    Ger, Ala, He
    Lys, âô è
    Asp,
    Phe
    Thr, cys
    As
    Ala,
    He, Vaio·;
    ly;
    He
    Vai
    Pro.
    Xaana pcsiçâo 48 é Leu, Ser, Cys, Arg, lie. His. Fhe, Gly, «ya . Th*. Ala, Met, Vai ou As Xi; Xa»AB posição 49 § Met. Arg, Ala, «ly. Pro, Asn, His,on Asp; Xaa at. posit inn 5'3 é Glu. Leu, Thr, Asp, Tyr, Lys, Asa, per, Ala, lie, Vai. His, Phe, Het on Gin XAe.<$j posição Si Asn. Arg, Met, Pre, Ret, Thr, »« His; Xaaas posição 52 4 Asr,. His, Arg, Leu, Qly, Ser, OU Thr; Xaats ps&içâo 5.3 é Leu, Thr, Ala, Gly, Glu, Pro, Lys, Ser, ou Xaa pçríçãe 54 $ AX£L Asp, lie, Ser, V»l< Thr, Gin, Asn,
    Lys.. Sis <
    Ala Gi
    Met,
    Leu;
    Xaa ns pssiçâí
    Vai,
    Ser.
    Xea ns posição
    54 «
    Leu. ou Gly,Ala ly <
    Y»
    Ser, th.n, Glu, AX'S, His,
    Phe < Leu, Va.l õ u
    Lys,:
    Xaana p
    Xaa us pas χ So
    Ser, Asp.
    Cln, Vai, <j u ;
    Xaa na posição è G1U Tyr. His, Leu, Fro, o u Arg; Xaa es posição SO é Ala, ser. PXP, Tyr, Asm, Thr,· Xaa 03 pOSIÇ 3'3 61 ê Phe, Asn, Glu, Pre·, Lys, Arg, 0« Ser; Xaa na posição 82 é Asn, Kia, Val, Arg, Fro, Thr , Asp. <s u 11a; Xaa na posição 61 é Arg, Tyr, Trp, Lys, Ser, his, pro,ομ Val; Xaa nss posição 64 è Ala, Asn, Pre, Ser, QU Lys; Xaa ria posição 65 é Val, Thr, Pr», His, Leu, Phe. ou Ser;
    Lys, lie. Arg, Vai, Asn, Glu, ou Ser;
    Xaa ns posição Sé è
    Xaa na posição 87 és
    Xaa os posição 680 Xaa na posição SS è Xaa ng posição 70® Xaa na posição 71 ê
    Trp, ou Asa; Xaa os posição 72 a Xaa na posição 73 é Xaa na posição 74 é Xaa na posição •SC ’ W è Gin, OU Leu; Xaa ns posiçáís : < 5*· : é Xaa na posição w .......7 < é Xaa na posição 78 è XaaM posição 78 é Xaa na poãiçàô 85 è Xaa na posição 81 é Xaa na poauçâo 62 è
    Ser, Ala, Phe, Val, Gly, Asn, 11®, Pro, ou His,·
    Leu, Val, Trp, Ser, Ile, Phe. Thr, αιι His; Sln, Ala, Pro, Thr, ulu Arg, Trp, Gly, olí Leu Asn, Leu, Val, Trp, ?r<s. 0 U A. A.Ã * Ala, Met, Leu, Pre, Arg, Glu, Thr, Gin, Ser, Glu. Met Ala, His, Asn, Arg,ou Asp; Ala Glu, Asp, .Meu, Ser, Gly. Thr, ou Arg;
    11«, Met, Thr., Pro, Arg, Gly, Ala:
    Glu, Lys, Gly, Asp, Pro, Trp, Arg, Ser, Ser, Val, Ala, Asn, Trp, Glu, Pro, Gly, çií A«p lie. Ser, Arg, Thr, o u Le u; Leu. Ala, Ser, Glu, Phe, Gly- Oil Arg; Lys Thr, Asn Met, Arg. Gly,OU Asp; Asn, Trp, Val, Gly, Thr, Leu. Glu,ou Arg; Leu, Gin, Gly, Ara, Trp, Arg, Val,ou Lys; Leu Qln, Lys, 1Tx*p# Arg, Asp, Glu, Asn,
    His, Thr, Ser, Ala, Tyr, Phe, lie, Met 0LÍ Val;
    Xaa na posição S3 ú Pre, Ala, Xaa na posição 84 é Cys, Glu, Xaa «s posição 85 e Leu, Asn, Xaa *« posição 86 é Pro, Cys, Xaa na posição 87 ,ά Leu, Ser, Xaa na posição 88 é Ala, Lys. Xaana pasiçâo S9 ê Thr, Asp, Xaa na pasiçâc . 80 é Ala, Pro,
    Thr, Trp, Ar», ou Met?
    Giy, Arg., «et. ou v<l;
    Val, Gin;
    Arg, Ala, oç Lys:
    Trp, ou Gly;
    Arg, Val, ou Trp;
    Cys, Leu, Val, Glu, His, Asn,00 Ser;
    Ser, Thr, Gly, Asp, lie, 0Li Met;
    Xaa na pe^içâs 91 4 Ala, Pro. Set, Thr, Phe, Leu, Asp, 0 U His; Xaa ns posição Is au; $2 4 Pro, Phe, . Arg, Ser, Lys, ds, Ala, Gly.. Xie na S j 4 < Thr, Asp. Ser, Asn Fro. Ale. wfiU, OU Arg; Xaa na posição 94 Ala, OU Pro; 4 Arg, He, Ser, Glu. Vai, Qin, Lys , His, Xaa ns posição Lys, Set, 95 ê &I& v His, Gin, Trp. Phe. Pre, Arg, Xie, eg Ty Val. Leu. r · Gly, Thr. Asn,
    Xaa na 9ó ® Pr», Lys, Tyr, Gly, Ils. FU Thr; Xaa pOSiÇãO S3 4 Xie, Vai ,. Lys, Ala. (St; Asn ; Xaa na posição 98 4 Ηχβ, Xia, Ash. Leu. Asp, Ala, Thr
    Glu. Gin. Ser. Phe, Met, Vai, Lys, Arg, Tyr no Pro;
    Xaa ns posição 99 4 IX». Leu. Arg, Asp, Vai, Pro, Gin, Gly. Ser. Ph e , t>v His;
    Xaa na posição 104 4 Lys. Tyr, Leu, His, Arg, He Ser, Gin, ou Pro Xaa ns posição ΐδΐ 4 A&P, Fro, Met, Lys. Mis. Thr. Vai, Tyr. Glu, Am < Gr l y ,> s O< 1 Qin z Xaa na posição 142 « Gly. JL&u > Lys. Ser. Tyr, ου Pro; Xaa ,~i8 pos-çào 103 é Asp. GV Ser; Xaa na posição XÔ4 6 Trp, Vai, Cys, Tyr, Thr. Net. Pro, Lx€8U < Gin, Lys, Ala, Fhe,. ou Gly:; Xaa ins posição ICS ® Asn, Pro, Ala, Fhe, Ser, Trp, Gin. Tyr. l>®üí Lys, He Asp, ου His; Πδ ICS é Glu. £er, Ala, Lys, Thr, He, Gly, p U Pro; Xaa ** posição 14& 4 Arg, Lys. Asp, Leu, Thr, Tie, Glu. !hs. Ser,
    Ala i)U Pro;
    X&a ns X&â posíçÃís 349 114 Trp; £ e Arg, Lys. Thx, Pro* A. A < J?ViS Xi , Glu. Tyr, Thr, Leu < Leu, Arg, Ser, Gin. or Gly; His, Glu Ser, OU xV&â. na posição 111 4 Leu. H«< Arg, Asp. g y Met; Xaa ns PO5ÍÇ3G . 112 . Sf Thr, Vai, sir,. Tyr, Glu. His. Set, Phe; Xaa ria pnsiÇãs 133 & Phe. Ser. Cys, KU, Gly, Trp, Tyr. Asp. Lys, Leu, 11®, Vai OU Asn; Xaa r·® pCSiçào HA è Tyr, Cys, His, Ser, Trp. Arg, Oh Leu; Xaa na posição 115 2> Leu. Ahn. Vai, Pro. Arg, Ala, Sts, Thr,
    Figure BRPI9610977A2_C0005
    Figure BRPI9610977A2_C0006
    >;««- Arg, Trpt 116 is Lys, Leu, Pro. Thr, Met, Asp, Vai, Glu, Ser , Asn, KU. Ala. Tyr, Rhe, Gin. OS 11® i na posição 1Π è Thr, s®;·, Asr„ He, Trp, Lys, OU Pro; na posição 118 á Leu, Ser, Aro, Ala., Glu.< Cys, Asp, OU lyr; X*a na posição 119 e Glu< Ser. Lys, Pro, Leu, .«T^v ** ** 7 Tyr, OU Arg xaa na posição 120 e Asn, Ala, Pro, Ley, His, Vai. OU Gin; na posição . ,γ. r· é Ala, Ser, Tie, Às», Pro, IjVSfr f Asp, ou- Gly; Xaa na posição He, Tyr, 122 ê OU Çys; Gin, Ser, Met, Trp. Arg, Phe, Pro, Ris, na posção 123 Al*, West, Glu, His, Ser, Pre, Tyr, OU· Leu;
    onde de 1 a 14 aminoácidos podem ser opcionalmente suprimidos do térme no~N e/ou de 1 a 15 aminoácidos podem ser opcionalmente suprimidos do término-C da dita sequência de aminoácidos H..-3 humana modificada; e onde de 0 a 44 dos aminoácidos designados por Xaa. são diferentes dos correspondnetes aminoácidos de interleucina-3 humana nativa (1-133); e onde o término-N está ligado ao tèrmino-C diretamente ou através de um lígante (U) capaz de umr c término-N ao término--C e tendo novos términos C e N em aminoácidos;
    26-27 50-51 85-86 27-28 51-52 86-87 28-29 52-53 87-88 29-30 53-54 88-89 30-31 54-55 89-90 31-32 64-85 90-91 3,2-33 65-66 91-92 33-34 66-67 92-93 34-35 67-68 97-98 35-36 68-69 98-99 36-37 69-70 99-100 37-38 70-71 100-101 38-39 71-72 101-102 39-40 72-73 102-103 40-41 82-83 ou 103-104; 41-42 83-84 49-50 84-85
    (III) um polipepddio compreendendo: uma sequência de amínoácidos ligante c-mpl modificada da fórmula:
    ArgThrThrGlySerGlyLeuLeuLysTrpGlnGÂnGlyPheArgAlaLysiiePro
    195 200205
    Glyt^LeuAsnGlr*rhrSerArgSerLeuÀspGinXleProGlyTyrLeuAsnAr$f
    215 215 220225
    XleHí sG luLeuleuAsnGlyrhr ArgGlyLsuPheProGlyPrcSarAr gArgTfcr
    230 235 £40245
    LeuGlyAlaPrQAspxieSerSerGlyThrSerAspThrGlySerLeuProProAsn
    250 255 260255
    LeuGlnProClyT’yrSerProSérProTh.rHisP!roProThrGlyGlnTyfrThrLeu AíU *··'> 2»0285 rhePrcLeuP'r OProThrLeuProThr'ProValValGinijeuHisPz'QLe'ULeu.Px'o
    290 295300
    XspProSerAlaPrcThxProThrProThrSerProLeuLeuAsnThrSerTyrThr
    305 310 315 320 .HisSerGLnAsnLeuSerGlnGlu.Gly {SEQ TD NO :3) 1 <· ·>$** 330 332 15 3 em que Xaa na posição 112 é delatado ou Ala, Val, lie, Pro, Phs< Trp, r Met; Xaa na posição 113 é delatado ou Pro, Phe, Ala, val, Leu, He, Trp, Met; xaa na posição 114 4 detetado ou Pro, Phe, AXsl + Val, Leu, Xle, Trp, Met; Xaa na posição 115 Gin, Gly. Ser, ΤΉϊΓ, Tvr
    Asn;
    ou Asn, e ande o término N está ligado ao término-C diretamente ou através de um iigante (U) capaz d® união de térmmo-N ao término-C o tendo novos términos C e N em amínoàcidos;
    52-53
    53-54
    54-55
    55-56
    56-57
    57-58
    58-59
    59-80
    78-79
    79-80
    80-81
    81-82
    82-83
    83-84
    84-85
    85-86
    86-87
    87-88
    88-89
    108-109
    109-110
    110-111
    111-112
    112-113
    113-114
    114-115
    115-116
    118-117
    117-118
    118-119
    119-120
    120-121
    121-122
    122-123
    123-124
    124-125
    125-126
    126-127 ou 127-128;
    (IV) um polipeptídío compreendendo; uma sequência de amino- àcidos IL-3 humana modificada da fórmula:
    Ala 1 Pro Met X Gin 5 Thr Thr Sêr Leu Cys Xaa Xaa Xaa X&& 20 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Aââl Xaa Xaa 35 Xaa Xaa Asn
    Lys Thr Ser Trp Val Asn
    1015
    Xaa Xaa Xaa xaa xaa xaa
    2530
    Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
    4045
    Xaa Xaa xaa Xaa xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 55 Xaa Xaa Xaa xaa Xaa 60 Xaa .Xaa Xa«» v *a Xa« ÚS xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 70 Xaa Xaa Xaa xaa Xaa 75 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa a>3 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa ES Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 93 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 95 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 2ÕC Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 105 Xaa Phe Xas» xaa Xaa lie Xaa Xaa Xaa Xaa xaa 115 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 120 Xaa Xaa Xaa Din Gin 125 Thr Thr Leu Ser Leu 13D Ala (SEQ 11® |Bi; Phe ND: 2)
    em <iijs x&& na porção 1? s<t>/ Lys, Gly, Asp, Het sljif Xaa «a posição Xasí ?osi0o IS é Asn, Sts. L*8, XI®, Phe, Arg, <su Gin; IS 8 Met, Phe, 11«. Arg. Qly, A1<i ou £ys. Xaa ns posição 20 ê Π«( ays. Gift, Siu, Arg, ?χο, ου Ma,- Xa.a na posição 23 è Asp, Phe. uy®, Arg, Ala, Gly, «Ju, Gin, Asm, Tnr. Shsx 0 L Val; .......................................................................... Xaa na posição 22'· <3Li, Trp. i?ro, Ser, AU His, Asn,
    Let. Vai QU Q.ly;
    Xaa na posição 23 á lie, Val, Al*, giy. Trip, Lys, Phe,
    . Ser , (j y Arg;
    Xaana posição ‘ 2« $ Ils, Gly, Val, Arg, Ser, Pho, otJ Leu; Xaa na posição Xaa na posição Xaa ns posição 25 e Thr, Sia, cly( alnj Frs>f oi_ a.r; * Hxa. Thr, Pn®, Gly. Arg, Ala. Οί. <ϊυΡ; 27 e L«u., Gly, Arg, Thr, Ser. or Ala; Xaa ns posição 2o é Lys, Arg, Leu, Gin, Gly. pro, ou ^,rp. Xaa na posição 29 e Gan, Asn, Leu, Pr», Arg, ots Val; Xaa ns pssição è Pre, His, Thr, Gly, Asp, G1„.
    Xaa na posição 31 é Pro; Asp; Cly; Ala; Arg; Leu; ou Gin;
    Xaa na posição 32 é Leu; Vat; Arg; gio; Acn; Gly; Ala; ou Glu;
    Xaa ne peg-can 33 6 Pro, Leu, Gin, Ala, Thr. <s u.< GlU; X»o n3 posição 34 é Leu, Vai, Gly, Ser, Lys, Glu, Gin. Thr Arg, Ala, Fh®, He ou Met; Xaa n s POSÍÇBO 35 ò Leu, Ara, Gly, Asn, Era, Gin, GU Vai; Xaa r,a posição 3S é Asp, Las, Vai,* Xaa ,, g. ps&ição 3*? o Fh©} Ser< Fro, Trp,ou I 1«; Xaa na posição .35 R A® i; í ·Μ Αχ Λ ί Xaa r>3 posição 40 .£ L&uí χ Ajtçí ψ Xaa m posição 41 ã Asn.- Cys, Arg, Leu, Hxs, Met, ou Fro; Xaa os posição 42 é Gly, Asp, Ser, Cys, Asn, Lys, Thx , Le u Vai,. Glu, Phe, Tyr, He, Met qu Ata; Xaa po&içào 43 ès Glu, Aso. Tyr, Leu. Phe, Asp, Ala . Cys. Gin, Arg, Thr, Gly o.u Ser; Xaa na posição 44 ó Asp, Ser, Leu, Arg, Lys, Thr, Mat > Trp.
    Pro;
    Ala qq
    X.aang posição 4Sé Gia, Pro, Phe, Met, Leu Thr, Lys, Trp < Asp, Asn, Arg, Ser, Ais, He, GluOú SUs í Xaa oa posição 4£ é Asp, Phe. Ser, Thr. cys, Glu, Asn, Gin, Lys, His, Al< s. Tyr, He. Velou Gly; Xaa na posição 4T é X.X&*.. V&X x Ser, Arg, Pro, His; Xaane posição 48 è Lati, Ser, Cys, Arg. 11®, Hrs, Ph®, Glu, Lys, Thr, Ala. Met, Vai au Asn t Xaan» posição 43 é Met, Arg, Ala, Gly, Pro, Asn, His, ou A Xaa at position 50 è GLu. Leu, Thr, Asp, Tyr, Lys, Asn, Ser, A-X& >,: Χ1.;&ζ Va Hxs, Phe, fístou GlA; X*Mí posjçâo 51 & Asa. Arg, Met, Pro, SfôXH Thx CU Xi$; Xaafsa po$;çào 52 ά Asn. Hrs, Arg, Leu, Cx Λ,^.χ Ser, ou Thr; Xaa na posição S3 ê Leu, Thr, Ala, Gly, Glu, Pro, Ly®, Ser, Xáana posição S4 é Arg, Asp, li®, Ser, Vai, Thr, Gin, A«h,
    Ala OU
    OU
    Lys, His.
    Met,
    Ley;
    Xaa na pos-çâa 8S é Arg, Thr, Vai, Xaa os posição SC è Pro, Gly, CyS, Thr. Ala. *by; Phe, Leu, Vaiou Xaans posição 5” ÀK&0V Gly? Xaa na posição 58 e Leu, Ser. Asp,
    Ser
    Lys;
    Arg, Gin, Va.j,,:OU Gys;
    L®U, Q(J Gly;
    □in, Glu, Arg
    His
    Glu Ty
    Xaa a
    posiçã
    Mis, Lev, Pro, OU Arg;
    X*« ns posição 6C é Ala, Ser, Pro, Tyr. Asn, su Thr; Xaa n a posição 81 é Phe, Asn, Glu, Pre, Lys, Arg, 0V Ser; Xaa na posição »2 é Asn, Ens, Val, Arg. Pro, Thr, Asp,. cy 11»; Xaa na posição S3 é Arg, Tyr, Trp, Lys, Ser, Hrs, Pro, eu Val; Xaa posição 44 á Ala, Asn. Pre, Ser, su Lys; Xaa «a OOSsÇãc 85 é Val, Thr, Pro, His, Leu, Phe, oy Ser.; Xaa na posição 46 é Lys» Ile, Arg, Val, Asn, Glu.ou Ser; Xaa 0 3 posição ãl é Ser, Ala, Phe, Val, Gly, Asn. He, Pr», ou Xaa 33 poàiçâo 68 é Leu, Val, Trp, Ser, He, Phe, Thr, ou Xis; Xaa ná posição ã? é Gin, Ala. Pro. Thr, Glu, Arg, Trp, Gly, ou Xaa fjg posição 70 έ Asn, Lsu. Val, Trp, Pro, <jg Ala; Xaa pa posição 71 θ Ale. Jtet, Leu, pre, Arg, Glu. Thr, Gin, Trp, ou Asn; Xaa o« posição 72 & Ser. Glu, Man, Ala, His. Asn. Arg,0)J Asp; Xaa na posição 73 é Ala, Glu, Asp, Leu, Ser, Gly, T.hr, gu Arg; Xaa na posição 74 é He, M«t, . Thr, Pro. Arg, Gly. Ala; Xaa f>a poâição 75 4 Giu, .Lys, Gly. Asp. Pro, Trp, Arg, Ser, Gin, ou Leu; Xaa na posição Ser, Val, Ala, Asn, Trp, Glu, Pro, Gly. gy Xaa os posição 77 é He, Ser, Arg, Thr, 08 Leu; Xaa «* posição 78 é Leu, Ala, Ser, Glu. Phe, Giy, OU Arg; Xaa^4 posição 7? & Lys, Thr» Asn, Met. Arg, He. Gly, oü Asp; Xaa na posição SO é Asn, Trp, Val. Gly, Thr, Leu, Glu.gy Arg; Xaa na posição 81 é Leu, Gin, Gly, Ala. Trp, Arg. Val, OU' Lys; Xaa ns posição 82 ê Leu, Gin, Lys, Trp, Arg, Ακρ, Glu, Asn,
    Leu.
    Asp;
    Kia, Thr,
    Ser
    Ala, Tyr, Ph®,
    8a
    11«, Mat ou Val
    Xaa na posição
    Pro, Ala,
    Xaass posição 64 ê cys. Glu, Gly, Arg. Met, <?u Val:
    Xaa o» posição 85 Leu, Asn, Val, ’:>υ Glu; Xaa na posição 86 é Pro, Cya, Ala, ou L ys; Xaanã posição 87 e Leu, Ser, Trp. 0U Gly; Xaana posição 88 è Ala, Lys, Arg, Val, ou Trp; Xaa!·3 posição 89 6 Thr, Asp, cys, Leu, Val, Glu, Xis, Asm,oü sar; Xaa na 46 è Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Asp. H®. 0U Met;
    Xaa na possçã!» Xaa na posição 91 é Sã ê Ala, Pro,. Pro f Phe, Thr, Phe* Uu, Àjgp, cu Ris; Xrçj·* :X*v®; íki&.t CSày* XClís ;bau; Xaa na posição 9.3 è . Thr, Àsp, Ser, Asn, Pro, Ala, Leu, ç.;, Argr Xxjíà na posição §4 è Arg, lis. Ser, Glu, úeu. Val, Gin. Lys, Eis, Ala, eu Pro; XSS. na posição 95 é H* s, Gin, Pro, Arg, Vai, Leu, «ly, Th.rf Asn, Lys. Ser, Ala, Trp, Phe, 1 !♦> ou Tyr; Xaa na oos-çâo §5 é Pro, Lys, Tyr. «ly, lie, tu Thr; Xaa nâ posição 97 è lie, Val, Lys , Ala, í;>.í Aan; Xaa na posição Sã é Mis, He, Asn, Uu, Asp, Ala, Thr, Glu, Gin, Ser, Phe, Hat, Val, Lys, Arg, Tyr ou Pro; X&.& na posição é He, Leu, Arg, Aap, v*l, Pr©, Gin, Gly, Ser, Phe, en Hís; iaa na posição iôô ã Lys, Tyr, Leu, Hls, Arg, Ile, Ser, Qin, ou prcs. Xaa na posição 181 é Asp, Pro, Met. Lya, His, Thr, Val, Tyr, Glu, Asn, Ser, Ala, S ly, 11®, Leu, OU «In; Xaa na posição 103 é Gly, Leu, Glu, Lya, Ser, Tyr, nü Pros; X.&.& na pcj&içàa 103 è Asp, su Ser; Xaa na posição 174 é Trp, Val, Cys, Tyr, Thr, Met, Pro, Leu, Sin, Lys, Ala, Phe, ou Gly ? Xaa jo® posição 175 è Asa, Pro, Ala, Phe, Sar, Trp, Clu, Tyr, L«u, Lys, Ils, Asp, ou His f Xaa na posição 155 è Qlu, Ser. Ala, Lys, Thr, H«, Gly, Pro; Xaa n<3 posicâü 108 é Arg, Ly», Asp, Leu, Thr, lie, «.'.a, Pis, s«y, ÂU OU Pro; Xaa ns posição 179 é Arg, Thr, Pro, Glu. Tyr, Leu, Ser, »r Gly; Xaa na posição no é Lys, Al», Aan, Thr, Leu, Arg, «ln, Xis, gi.u. Ser, tu *$?ypr Xaa Π3 posição ui é Leu, 11«, Arg, Âsp, ou Met- Xaa na posição .112 ,ê : Thr, Val, GLn, Tyr, Glu, His, Ser, ou Ph®? Xaa. na posição 113 ê Phe, Ser, tys, Sis, Gly, Trp, Tyr, Asp, Lys, Leu, lie, Val ot! àsiü; Xaa na posição 114 è Tyr, Cys, Xis, Sér, Trp, Arg, nu ,l»u; Xaa na posição 115 é Leu, Asn, Vai, Pro, Arg, Ala, H1í, Thr,
    '30
    Figure BRPI9610977A2_C0007
    Trp, QU Met;
    Xaa H€ is Lys, Leu, Pre, Thr, Mst, Asp, Vai, Siu, Arg.< Trp, Ser, Asn, His, Ala, Tyr, Phe, Clr·, ou He,* Xaa na posição ti? è Thr, Ser, Asn He, Trp, Lys. OU Pro, Xaa na posição 118 Ó Leu, S®r, Fro, Ala, Glu,· Cys, Asp, OU Tyr; Λ&* na posição lis é Glu, Ser, Lys, Pro, Leu, Thx, Tyr, OU Arg; Xaa na posição 120 é Àsr», Ala. Pro, Leu, His, Vai, OU Cln; Xaa na posição 121 ã Ala, S®t. Ils, Asr,, Pro, Lys, Asp, OU' Oly; Xaa na posição Gin, Ser, Met, Trp, Arg.. Ph®, Pro, His. 11®, Tyr, OÍJ Cys Xaa na posção 121 é Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr. ou Leu,*
    ande 1 a 14 aminoácidos podem ser opcionalmente suprimidos do términoN e/ou 1 a 15 aminoácidos podem ser opcionalmente suprimidos do término-C da dita sequência de aminoácidos IL-3 humana modificada; e onde de
    1 a 44 dos aminoácidos designados por Xaa são diferentes dos correspon
    5 dentes aminoácidos de íntedeucina-3 humana nativa (1-133): e (V) um fator de estimulação de colonia;
    e onde L; é um iigante capaz de ligar R< a Rl com a condição de que pelo menos R; ou è selecionado do polipeptídio de fórmula (I), (II), ou (III): e
    10 a dita proteína hematopoiética pode ser opcional imediatamente precedida por (metionina (alanina5) ou (metionia'2, alanina'1).
  3. 3. Proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 1, onde o polipephdio de (IV) é selecionado do c grupo consistindo em;
    Ala Ash Lys Ser Ils Met lie Asp Glu He He His Has Leu Lys Arg Pro Pro Ala Pre Leu Leu Asp Pro Asn Asn Asn Ala Glu Asp Vai Asp He Leu Met Glu Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Glu Ser Phe Vai Arg Ala Vai Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly lie Glu Ala lie Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser AX â Thr Ala Ala Fro Ser Arg Mis Pro He lie Xie Lys Ala Giy Asp Trp Glu QXjU Phe Arg OXix Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu Glu Gin Ala Gin •G-X Qin Gin (SEQ ID NG:225}; Ala Asn Cys j>er He Met He Asp Glu He He His Hxs Leu Lys Arg Pro Pro Asn Pre Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Ser Glu Asp Met Asp He Leu Met G1U Arg Asn Leu Arg Thr Pro Asn Leu Leu Ala Phe Vai Arg Ala Vai Lys His Leu Glu Asn Ala Ser Gly He GXu Ala lie Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Al* Ala Pro Ser Arg His Pro lie He lie Lys Ala Gly Asp Trp Qin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Leu Vai Thr Leu Glu Gin AU Gin Glu Gin Gin tSEQ ID NO;226) ; AX& Asn Cys Ser He Met He Asp Glu lie lie His Hxs Leu Lys Vai Pre Pro Ala Pro Leu Leu Asp Ser Asn Asn Leu Asn Ser Glu Asp Met Asp lie Leu Met Glu Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Ala Phe Vai Arg Vai Lys Asn Leu G1U Asn AX& Ser Gly
    He Glu Ala 11® Leu Arg Asn Leu Gin Fro Cys Leu Pro Ser Ale Thr Ala Ala Pro Ser Arg His pro He He lie Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Ph» Tyr Leu Vai Thr Leu
    Glu Gin Ale Gin Glu Gin Gin {SEQ ID NO:227
    3.2
    Aiát Pro Cy®' Pro Sei Ala lit Met He Leu Asp Glu He He Asn His Hl® Leu Lys Arg Asp Pro Leu Asp Pro Asn Leu Asp Asp Glu Val Sat life Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe Va· Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala. Ser Gly Xia Glu Ala He Leu Arg Aso Leu Sin Pro Cys Leu Pre Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg His Pro Xie He Xie Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe a rg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Gin Ala Gin G.1 u Glr* (SEQ ID NO:228J
  4. 4. Proteína hernatopoíética de acordo com a reivindicação onde o polipeptidio de (IV) é selecionado do grupo consistindo em:
    Ala Asn Cys Ger He Met lie Asp Glu Xie He His His Leu Lys Arg Pro Pro Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Ala Glu Asp Val Asp He Leu Met Glu Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe Val Val Lys Asn Leu Glu Asn Ger Gly He Glu Ala Xie Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ger Ala Thr Ala Ala Pre Ser Arg His Pro He Ila He Lys Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Leu Val Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin {EEC ID NO:225) ; Ala Asn Cys .$er. He Met Ha Asp Glu 11» XI a His His Leu Lys Arg Pro Pro Asn Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Ser Glu Asp Met Asp He Leu Met Glu Arg Asn Leu Arg Thr Pro Asn Leu Leu Ala Phe Val Arg Ala. Val. Lys His... ,<LeM... Glu Asn Ala .&ar Gly He Glu Ala Xie Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg His Pro Xie He Ils Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Girt Ala Qin Glu Gin Gin iSE? ? ID NO:226) : Ala Asn Cys Ser He Met Ha Asp Glu Xia lie His His Lys Val Pro Pro Ala Pre· Leu Leu Asp : Ser Ast t Asn Lex. i Asr t Ser Glu Asp Met Asp He Leu Mat Glu Arg Asa Leu i Arg Let . Pre > As n . Leu
    Figure BRPI9610977A2_C0008
    Leu Ala Phe Val Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Scr Gly lia Glu Ala 11« Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala A&a Pro Ser Arg Hi® Pro He He tu Lys Ala Gly Asp Try Gin í** '* Λ v xjc Lm Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Gin A.x.a G^.S Glu Gin Gin (SEQ ID NOxZ27>. ί end Asn Cys Ser Uê Mat lã® Asp Glu He He Sis His Leu Lys Arg Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Àsp Val Ser Ile Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Phe Val Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Glu. Ale He Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Ala Ala Pro Ser Arg Hiss Pro He He He Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Ly® Leu Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu CS X ϊ< Ala Gin Glu Gin Gin <SEQ ID NO;1 Í28) .
  5. 5. Proteína hematapoiétíca compreendendo; uma sequência de aminoácidos da fórmula:
    RrLrRj, Ra-U-R., R,-R2; ou R2-R, em que R< è um polipeptídeo compreendendo; uma sequência
    5 de aminoácidos G-CSF humana da fórmula:
    Figure BRPI9610977A2_C0009
    as a Xaa Xaa siy Pro Ala Ser Ser Leu Pre Gin Ser Xaa Leu Leu Xaa Xaa X&& Glu 20 Gin Val x&& Lys Xaa Gin Gly Xaa Gly À-L& 30 Xaa Leu Glh GX.ú Xaa Lev Xaa Ala - Thr Tyr 40 Lys Leu Xaa Xaa ^2 ,X%a Xaa Xaa Val Xaa 50 Xaa Gly His Ser Xaa Gly Ile Pro Trp Ala 60 Pro Leu Ser Ser Xaa Pro Ser Xaa Ala Leu 70 Leu Ala Gly Xaa t>QU Ser Gin Leu His SO Ser Gly Leu Phe Leu TyT Gin Leu Leu so Gin AXs LíSU Glu Gly lie Ser Pro Glu Leu 100 Gly Pro Thr Leu Xaa Thr Leu Gin Xaa ASp 110 Val Ala Asp Phe Ala Xaa Thr Ile
    130 em que
    Xaa o® posição 1 é 2 é Thr, Ser, Arg, Tyr Gly; Xaa na posição Pro oo Leu; V s ja r<a posição h á Leu, Arg, Tyr cu ser; Xaa na posição 13 é Phe, Ser, His, Thr «ο ρχ-Ο; Xaa na posição lê 8 Lys, Pro, Ser, Thr ou His; Xaa na posição 17 4 Cys, Ser, Gly, Ala, lie, τ Xaa na passção 18 4 Leu, Thr, Pro, His, lie ou xaa na posição 22 4 Arg, Tyr, Ser, Thr ou Ala; Xaa na posição 24 ® lie, Fro, Tyr ou Leu; Xaa ns posição 27 ê Asp, : Gly; Xaa ®s posição . 3D * Ala, XIe. Leu oo Gly; Xaa na posição 34 4 Lys ser; Xaa na posição 38 é Cys au Ser; Xaa Π3 posição 42 é Cys um ser; Xaa na posição Arg, Cys, 43 è His, Thr, Gly, Val, Lys, T ou Leu; Xaa na posição Trp, Gin, 44 è «o Pro, Gly, Arg, Asp, Val, A w * ./ xaa na posição 46 è Glu, Arg, Phe, Arg, lie ou Xaa na posição 47 é Leu ou Thr; Xaa na posição 49 4 Leu, Phe. Arg ou Ser; Xaa na posição 50 ê Leu, Xie. Ris, Pro ou Tyr; Xaa na posição 54 é Leu 00 His; Xaa. na posição 84 é Cys ou ser; Xaa na posição 87 é Gin, Lys, Leu ou Cys; Xaa f3 a pO Síçã O 70 è Gin, Pro, Leu, Arg ou Ser; Xaa ns posição 74 é Cys ou Ser; Xaa 83 posição 104 4 Asp, Gly DU Val; Xaa r<a posição 108 4 Leu. Ala, Val, Arg, Trp, > Xaa os posição 1.15 4 Thr, His, Leu ou &χ3.
    Ala,
    Gin
    120
    123
    144 & é é è &
    na na
    Ffâ
    Xaa Xaa Xaa
    Xaa
    Xaa
    Gly,
    Arg,
    His, posjçáe pssíçâa posição posição
    His
    Arg, Lysou His
    Phe Thr
    Arg, Pro, Leu, Gin
    147 na.
    Glu
    Glu
    Phe
    Arg 00 Gin; Arg ou Gin;
    Xaa na posição 158 é His, Gly ou Ser; Xaa na pa&ição ... 1.5.9. è Ser, Arg, Thr, Tyr, V Xaa Π3 pGSiÇáO 182 $ Glu, Leu, Gly oo Trp; Xaa 8® posição 163 é Val, Gly, Arg Ala,- ?Ϊ3 pGSÍÇãO 169 Arg, Ser, Leu, Arg ou Xaa Π3 posição 170 è His, Arg «ü Ser;
    Cys;
    aminoácídos do término-N e 1-5 aminoécidos do onde opcionalmente término-C podem ser suprimidos da dita sequência de ammoácidos G-CSF humana modificada; e onde o término-N está ligado ao término-C diretamente ou através de um
    5 iígante capaz da unir o término-N ao término-C e tendo novos términos C a N em aminoácidos;
    38-39 65-66 126-127 39-40 66-67 128-129 40-41 67-68 128-129 41-42 68-69 129-130 42-43 69-70 130-131 43-44 70-7^ 131-132 52-53 71-72 132-133 53-54 91-92 133-134 54-55 92-93 134-135 55-56 93-94 135-136 56-57 94-95 136-137 57-58 95-96 137-138 58-59 96-97 138-139 59-60 97-98 139-140 60-61 98-99 140-141 61-62 99-100 141-142 62-63 123-124 Ou 142-143 63-64 124-125 64-65 125-126
    ande Rj é um polipeptídio compreendendo; uma sequência de aminoácidos 11-3 humana modificada da fórmula;
    Ala Pre Met Thr Gin Thr Thr Ser Leu Lys Thr Ser Trp Vai Asn 15 1015
    Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
    20 2530
    Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
    35 4045
    Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 50 Xaa Xaa A3a Xaa Xaa 55 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 50 Xaa Xaa X * a Ajcí <5. 55 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 7C Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa SQ Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 85 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 92 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 95 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 100 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 105 Xaa Fhe Xac* Xaa Xaa 110 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 115 Xaa Xaa Xaa Xaa Xas 120 Xaa Xaa Xaa Cln Gin 125 Thr Thr Leu Ser Leu 130 Ala Í5SÇ Ile ID Phe NO-.2 }
    em q-Je X&& ns pcaiçâo n s<r- t u/Sí «Λγγ Asp, Met, Gin. qjj Ar<?r Xaa na pssiçâã U è Asn, Si», Leu, II®, phe, OU Gl»; Xaa na ^S!^° 15 é ãfest, ph«„ μ*, Arg, Ma, CU Cys; Xaa na posição Sü é *1$, duF OU Ala; Xaa 0$ poasção Λ.1 è Asp, The, Lys, Arç, Ala, Gly, Glu, Gin, Asn, Thr, $«r 8).l ' ííal; Xaa na posição 22 é Glu+ Τϊτρ, Fro. 3er, A1&, RiSí A»P, &sr„ Gin. Leu, Vai Oi; ; 31S',- Xaa os posição 23 è lie, Val, Ala, Gly, Trp, Lys, Rn®, Leu, S-er ' í’u Alg; Xaa na pos:ção i 24 t lie, Gly, Val, Arç. ·£©#, S>he< ;χ; Leu; Xaa na posição .....2$ ã Thr, Kr», Gly, Gltí, Arg, ?ro, OU Al*; Xaa Π® posição 25 {' Ris, Thr. Fhe, Gly, Arg} Ma, <$ u Try; Xaa na posição 27 é Leu. Gly, Arg, Tht, 5ar, cr Ala; Xaa ns posição 25 ¢: A,ys, Arg.. Leu, G1t*f Gly, Fra, Val CU Trp; Xaa na posição 25 é Gin, Asn, Leu, ?r<-, Arv, ou y, Xaa ns posição 30 é Pro, Ms, Thr, Gly, Asp, Ginf Ser, Leu, Oij Lys
    Xaa na posição 31 é Pro; Asp; Cly; Ala; Arg; Leu; ou Gin;
    Xaa na posição 32 é Leu; Val; Arg; glo; Acn; Gly; Ala; ou Glu;
    Xaa ns ps&ição 33 ê Ptí>. Leu, Gin, Ala, Thr. 0-U ' Glu .; na posição Ή é Leu, Vai, Gly, Ser, Lys, Glu, Qin. Thr, Arg, Α.Ή. Phe, XI® <30 Met; Xaa na po&;ção 35 è Leu, Ala, Gly, Asr Pro, Gin, DlJ Vai; Xaa ns posição M ê Xse na posição 37 ê Phe, Ser, Pro, Trp, 00 1:1«; Xaa os posição 38 ê Mr., ου Ala; Xaa'>« pooição 4P $ Leu, Τχρ,οΐ! Ms; Xaa na posição 41 ç Asn. Cys, Arg, Leu, His, Mfitijt QI-Í £1’0; Xaana posição 42 ê Gly, Asp, Ser, Cys. Asn, Lys, Thr, Leu, Va-í < Glu. Pne, Tyr, Xle. Met ou Ala * Xaar,s posição 43 é Glu, Mrs, Tyr, Leu, Ph®, Asp, Ala. Cys„ Gin, Mg, Thr, Gly du Ser; Xaa ns posição 44 é Asp, Sex', Leu, MS, Lys, Thr. Met, Trp, Glu, Asn, Gin. Ala Fro; A®ana p&sjçâo 4S è Girt, Pre, Ph®, Vai, Met, Leu, Thr. Lys, Trp. Asp, Μη, Arg, Ser, Ala, 11». i Glu OB Kis; Xaa. a posição IS é Asp, Phe, Ser, Thr, Cys, Glu, Asn, Gin, Lys,. His, Ala, *iy r, Xle, VA1 o; Gly e Xaa na posição 4? é XU, Gly, Vai, Ser, Arg, Pro, ou His; Xaa na posição 48 é Leu, Ser, Cys, Arg. Xle, His, Phe, Qlu, Lys,. Thr, Ala, Met, Vai .-.u Μη a....... Xaapa posição 48 ê Met, Mg, Ala, Gly, Pro, .Asn, Hrs,ou Asp; Xaa at pusifcior; $8 è Glu, Leu, Thr, Asp, Tyr, Lys, Asn, Sex, Ala, Ue. Vai, Hie, Ph«, Met go Glu Xaatía posição 51 é Asn, Mg, Mee, Pre, Ser Thx, 00 His; Xaaoa posição S-2 é Mn, His, Mg, Lev Gly, Ser. <jç Thr; Xaa na posição S3 è Leu, Thr, Ala, qiy.» Glu, hrs>, Lys, Ser, du wet Xaa na posição 54 e Arg, Asp, lie, Ser·, Vai. Thr, Gin, Asn, Lys, His, Ala do Leu; Xaa na posição 55 í1 Arg, Thr, Vai, Ser, Leu, gu Gly; Xaa na posição 55 ® Fro, Gly, Cys, Ser, Gin, Glu. Arg, His, Thr, Ala. Tyr, Phe, Leu, Vaiou Lys; Xaa na posição 57 0 Asn00 Gly: Xaa fia posição 58 é Lsu,. Ser, Asp, Arg, Gin. Va1,0u Cys;
    Xaa ns posição óü é Glu Tyr, His. Leu. 7r<?< > ç u Arg t Xaa rsa posição fiíi é Ala, Ser, Jtq. Tyr. Asn, OU Thr; Xaa ns posição? si é Ph« < Asm, Glu. Pro. Lys, Arg. GU s»r; Xaa na posição S2 é As ti, Bis.. Val, Arg. Fro, Thr, Asp, Ile; Xaa sts posição »3 á Arg, Tyr, Trp, Lys, ser. Hxs, Pro.OU Val; Xaa na posição 54 8 Ala. Asn, pros, Ser, t u Lys.' Xaa os posição £5 P Val, Thr, Pros, His. Iz$M * Phe, 0υ Ser; Xaa r>ã pOOiçàü 5® ® Lys, 1ia, Arg, Vai, .Asn, Glu, op sort Xaa na posição €7 é Ser,. Ala, She, Val, Gly, Asn, He, Fxc ·. «V Bis Xaa ns posição 58é Leu, Val, Trp. Ser, 11«. Phe, Thr,pu His; Xax& na posição 55 ® Gin, Ala, Pre,. Thx, . Arg, 'trp, Gly ' > 0 L: Leu Xaa na posição 7S« Asn, L«u< Val, Trp, Pr®, cu Ala; Xaa na posição 71 íi Ala, Het, Leu, í^y?£j Arg. Glu, Thr. Gin Lí.. Trp, ou Asn - Xaa na possção 73 é Sax > Glu, Met, Ala, Bis. Asn, Arg,olí Asp; Xaa na posição 73 è Ala, Gin, Asp, Ser, Gly. Thr, ou Arg;
    Xaa na 74 é 11« , Met , Thr , Pr® , Arg, Gly, Ala; Xaa i'a Qlr., OU L«u; <s Glu, Lys ,· Gly, Asp, Pro, Trp. Arg. Ser, Xaa na posiçàp 78 è sax, Val, Ala, Asn, Trp, Glu, Pr®. Gly, Asp; Xaa os posição 7? e 11«. S«r, Arg, Thr, C U Leu y Xaa na posição 7S é Leu, Ala. Ser, Glu, Phe, Gly, ou Arg; Xaa posição 7θ è Lys, Thr, Asn, Met, Axg. He, Gly,Oh Ksp; Xaa na P<1 Si Ç 3.Ϊ3 85 Á Asn, Trp, Val, Gly. Thr, Leu, Glu.PU Arg; Xaa ns possçàs 81 £ Leu, Gin, Gly. Ala, Trp, Arg, V«l,Vü ' Lys; Xaa na posição 82 e Leu. Gin, Lys, Trp, Arg, Asp, Glu. Asn, Kis, Thr, Ser, Ala, Tyr, Phe, lie, Met β u Xaa na posição 83 é tr®, Ala, Thr, Trp, Arg» p<.· Met;
    Xaa ns posição 84 è Cys, Glu, Gly, Arg, Met, Ou Val;
    Xaana posição SS è Leu, Asrt, Val, «« Gin; Xaaí?a po&ição 85 ê Pro, Cys, Arg. Ala, ou Lys; Xaana posição 87 é L«u< Ser, Tpp, S U Gly; Xaana posição 88 é Ala, Lys, Arg, Val,· ou Trp; Xaa/ía posição 8$ « Thr, Asp, cys, Bait, Vai, Glu, Mis., Asn, ou ser; Xaa r’a P8S=Çàa . 80 Ala, Pro, Ser, Thr, Gly. Asp, He, C3;j Man;
    Xaa na posição Si é Ala, Pro?, Ser, Thr, Phe, Leu, Aep, Vii His; Xaa r.e pes.çãs . 82 t í Pre, Phe, Arg, Ser, Lys, His, Ais, Gly, Xle Leu; Xaa 03 posição 9.3 é . Thr, Asp, Ser, Asn, Pm. Ala, Leu, ou Arg; Xaa na posição . 84 é Ar g, 11«, Ser, Glu, Leu, Val, Glu. Ly®. Hxs, Ala, ou .Pro; Xaa oa posição 85 é His, Glu, Pre, Arg, Val, Leu, Gly, Thr, Asn, Lys, Ser , Ala, Trp, Phe, Xle, py Tyr; Xaa posição $& ê Pro, Lys, Tyr, Gly, Π®. ou Thr; Xaa na posição 9“ é Xle, Val. Lys, Aia, oí.i Asji; Xaa r;a po&.ção 88 è His, lie, Asn, Leu, Asp, Ala, Glu, Glr, . Ser, Phe, Met, Val, Ly&,, Arg, Tyr ou Proj; Xaa na posição 00 ê Xle, Leu, Arg, Asp. Val. Pro, Glu, Gly, Ser , Phe, 00· Hi S;
    Xaa na posição 100 è Ly». Tyr, Ue, Bis., Arg, n». s«r, Gin, ou pro
    Xaa na pos-çâo jg: » Asp, Fro, Met, Lys, Hi®,. Thr. Val, < Lxlu.í ÃjS^, y AJ.A, QXy. XIj^v i OU OXíi;
    Xaa ΠΒ pG&jçào 102 é Gly. Leu, Glu, Lys, Ser, Tyr, ou Pro; X.-vJ-Ã í>S ιοί ê Asp. ou Ser; Xaa na pG&içâo 104 é Trp, Val, Gy®, Tyr, Thr, Met., Pro, Leu Sln, l>y$. Ala, Phe, o u Gly; Xaa ;FíS posiçàtt 155 é As», Pru, Âls, Phe, Ser, Trp, Gin, Tyr
    Uu, Ly#/ XÍ$> Asp> nu HÍS;
    Xaa na posição 3Õ6 é Glu, Ser, Xaa S3 poaição XU8 è Arg, Ala <*iJ Pr u* <· Xaa nd posição 108 e . Arg, Thr. XaA r.g posição 118 è Lys, Ala, Ser, ou Trp; -:·:·«Λ·:·:···/ν.·. >»<··:·<··γ.... Xaa na posição 111 è Leu, 71». Xaa ,·. £. posição 112 é Thr, Val, Xaa ns posição 112 é Phe, Ser, Lys, Leu, Xle. Val AS»; Xaa ns posição 114 è Tyr. Cys, Xaa o« posiçàã 115 0 Leu, Asfi,
    AU. Lys, Thr. II®, giy> QlJ Frs, A»P, Leu, Thr, lie. Gin, His, Ser
    Pre, Glu, Tyr. teu, Ser, »r Gly;
    Asn, Thr, Leu, Arg, gia> GJu
    Arg, Asp, o u Heç f
    Glib T/r, Glu, His, Ser, Oü Phe;
    Cys, His, Gly, Rry^ Tyr, Asspj
    Eis, Ser, Trp, Arg, ou Leu,Val. Pre, Arg, Ala, His, Thr.
    T-y, OU Het;
    kaa 116 is Lfâu, Pre, Thr, Met Asp, Val, VsÃUy Arg, Trp, Ser , Asn, H is, Ala, 'r, Ph®, G ln, ou XI® i Xa* na posição 117 é Thr, Ser. Asn. Λ, f **>< Lys, OU Pr»; X&a na posição 118 ó Leu, Ser < Vr©, A1&, Gáu t Dys, Asp. Tyr; Xaa na posição XIS e Glu, Ser, Lys, Pro, Az^fU t Thr, Tyr, OU- Arp; Xaa na pOSiÇâO 126 é Asn, Al*, Pra < His, V*X, OU G ln.; Xaa. na posição ei» 4· i è Al*, Sex, Ile, Asr>, Pr o, Lys, Asp, OU' Giy; Xaa na posição 222 é Gin, Ser, Met, Trp, Arg, Phe. Pro, Hls. Xle. Tyx, OU i 2ys<; &·&& na posçâo 127 ê Ala, M®r, Glu, Mis, Ser, Pr», iyr. OU L®u;
    onde de 1 a 14 aminoácidos podem estar opcionalmente supnrrudos do termino-N e/ou 1 a 15 aminoácidos podem estar opcionaimente suprimidos do térmíno-C da dita sequência de amindàcidos intedeucina-3~humana modifi5 cada: e onde de 0 a 44 dos aminoácidos designados por Xaa sâo diferentes dos correspondentes aminoácidos de intedeucina~3 humana nativa (1-133); e onde o término-N está iigsdo ao término-C diretamente ou através de um iigante (L2) capaz de unir o término-N ao tèrmino-C e tendo novos términos 10 C e N em aminoácidos;
    26-27 50-51 85-86 27-28 51-52 86-87 28-29 52-53 87-88 29-30 53-54 88-89 30-31 54-56 89-90 31-32 64-65 90-91 32-33 65456 91-92 33-34 66-67 92-93 34-35 67-68 97-98 35-36 68-69 98-99 36-37 69-70 99-100 37-38 70-71 100-101 38-39 71-72 101-102 39-40 72-73 102-103 40-41 82-83 ou 103-104; 41-42 83-84 49-50 84-85
    onde Lt é um ligante capaz de unir Rt a R2; e a dita proteína hematopoiétios opcionalmente pode ser írnediatamente precedida por (metiania1). (alanlna'1) ou (metionína'2, alanina’1),
  6. 6, Proteína hematopoiêtica compreendendo; uma sequência de
    5 aminoácidos da fórmula:
    RrLrfta, RrU’R; Ri-R2: ou R2~Ri onde R; é um polipsptídío compreendendo; uma sequência de aminoácidos
    10 G-CSF humana modificada da fórmula:
    Xaa Xaa GXy Pre AÍh Ser Ser Leu 10 Pro Gin Ser Xaa Leu Leu Xaa Xaa Xaa Giu 20 Gin val Xaa Lys Xaa Gin Gly Xaa Gly Ala 30 Xaa Leu Giíi GXu Xaa Leu Xaa Ala Thr Tyr 40 Lys Leu Xaa Xaa Xaa QXli x*&& Val Xaa S0 Xaa Gly His Ser Xaa Gly He Pro Trp Ai a 80 Pro Leu Ser Ser Xaa Pro Ser Xaa Ala Leu 70 X&â Leu Ala Gly Leu Ser Gin Leu His 80 Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu 93 Sir Ala Leu Glx* Gly Ile Ser Pro Glu Leu 100 Gly Pro Thr Leu Xaa Thr Leu Gin Xaa Asp 110 val Ala «isp Phe Ala Xaa Thr Xie Trp 120 Gin Met u xU xaa üly Met Ala Pro Ala 130 Leu G-jua·· Era Thr Gin Gly Ala Met Pro A.lâ 140 Phe Ala Ser Α-λτΰ Xaa Gin Xaa Xaa Ala Gly 150 Gly Val Leu val Ala Ser xaa Leu Gin Xaa 160 Phe Leu Xaa Xaa
    Ser Tyr Arg Val Leu Xaa Xaa Leu Ala Gin Pro (SEQ ID NO:1) . 30
    Xaa na posição Xaa na posição Xaa na posição Xaa os posição Xaa f?í3 posição Xaa na posição Xaa ns posição X&â na posição Xaa 88 posição Xaa nâ posição Xaa na posição Xaa na posição Xaa na posição xaa na posição Xaa na posíçáo Arg. Cys, Xaa 88 posição Trp, Gin, Xaa na posição Xaa na posição Xaa ns posição Xaa na posição Xaa 83 posição Xaa na posição Xaa pGS-içâo Xaa 83 POSIÇÃO Xaa na posição Xaa na posição Xaa na posição Xaa na posição Xaa na pGstçãc Xaa nà posição Xaa δ 0 Xaa 88 posição Xaa na posição Xaa ns posição Xaa na posição Xaa 83 posição Xaa 88 posição Xaa 88 posição Xaa 83 posição
    ό é é ®
    Thr.
    Tyr
    Ser.. Λ ou Leu;
    Arg. Tyr ou Ser;
    Thr ου
    Thr eu
    Ala, 1
    Leu. Arg
    Phe < Ser, His,
    Lys, Pro. Ser, Cys. Ser, Gly, Leu. Thr, Pro., Arg, Tyr, Ser.
    Pro;
    His;
    le, T ‘hr nu
    Leu;
    Xie, Pro. Tyr ’ Gly;
    Ala, II®, Leu Lys ou Ser ;
    Cys co Ser; Cys «ο Ser;
    Hrs
    Asp
    42 é
    43 é «υ Leu
    M ® Pro
    Thr. Gly,
    Vai
    Lys
    Vai.
    46 ã Glu. Arg, Phe, Arg, I 47 4 Leu ou Thr; 49 ® Leu r Phe. Arg 00 Ser: 50 è Leu,. Tie, His, Pro ou 54 é Leu 4 His; 64 ó Cys «o ser; 67 è Gin, Lys, Leu ou Cys; 70 é Gin, Pre, Leu, Arg eu 74 e Cys ou Ser; 104 « Aap, Gly °u vai; 108 έ Leu, Ala, Vai, Arg, 1 115 ® Thr, His, Leu «o &ia 120 è Gin, Gly. Arg. Lys ou 12 3 6 Glu, Arg, Phe Thr 144 é Phe, His, Arg, Pro. 146 * Arg °4Í Gin; 147 e Arg ou Gin; 156 è His, Gly ou Ser; 159 o Ser, Arg, Thr, Tyr, ’ 162 é Glu, Leu, Gly ou- Trp 163 έ Vai, Gly, Arg ou Ala 169 é Arg, Ser, Leu, Arg ou 170 e Hi$, Arg o^
    Cys;
    Ser;
    Trp
    Vai <31 le °u Ala;
    Leu, Gin
    Trp a
    Ala. His,
    Gly;
    onde opcionaimente 1 -11 aminoácidos do término-N e 1 -5 do término-C podem ser suprimidos da dita seqüêncía de aminoácidos G-CSF humana mo5 díficada: e onde o término-N está ügado ao térmmo-C diretamente ou através de um hgante capaz de iigaçâo de término-N ao tèrmino-C e tendo novos términos C e N em aminoácidos;
    38-39 65-66 126-127 39-40 66-67 128-129 40*41 67-68 128-129 41-42 68-69 129-130 42-43 69-70 130-131 43....44 70-71 131-132 52-53 71-72 132-133 53-54 91-92 133-134 54-55 92-93 134-135 55-56 93-94 135-136 56-57 94-95 136-137 57-58 95-96 137-138 58-59 96-97 138-139 59-60 97-98 139-140 60-61 98-99 140-141 61-62 99-100 141-142 62-63 123-124 ou 142-143 63-64 124-125 64-65 125-126
    R2 é um poiípeptídio compreendendo; urna sequência de aminoácidos IL-3 humana modificada da fórmula:
    Ala Pro Met Thr Gin Thr Thr Ser Leu Lys Thr Ser Trp Vai Asn
    5 1 5 1015
    Cvs Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
    20 2530
    Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
    35 4045
    Xaa Xaa Xaa Xaa Xa& 50 Xaa Xaa xaa Xaa Xaa 55 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 50 xaa .Xaa. Xaa y' s. Xaa 55 xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 70 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 75 X&a Xaa Xaa Xaa Xaa 80 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 85 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 90 xaa Xaa Xaa Xaa 55 xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 100 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 105 Xaa Λ& c* Xaa Xas Xaa Xaa Xaa \aa Xaa 115 Xaa x&a Xaa Xaa Xaa 120 Xaa Xaa Xaa Ola Ci in 125 Thr Thr Leu Ear Leu xa 0 Ala 11« (SEC? ID Fhe NO;. 2 ? 7
    ogi qua Xaa πa posição 17 is Ser, Ly», Gly, Asp, M&t, Gin, çn. í *rs Xaa na pastçâo lô è Asn, Kís. L«u, 13« Arg, o u u-m; Xaa n<$ posição IS é Wer, Phe, He, Arg, Qly 4 Ala, 0 li Gys ; Xaa ns p&siçáe 20 é 11«, eys. Gin, Glu, Arg, R*», OU Al»; Xaa na posição 21 é Asp, Phe. Lys Arp, Ala Gly, Glu, Gin, Asn, Thr. Ser. »« val; Xaa na posição 22 Glu. Trp, Fro, Ser, Ala, Xis, Assy,. Asn, Gin,
    Leut ValOU Gly;
    Xaa ns posição 23 í Vôi> A1.ã> Tfcpj Lyn. Fhe, Leu, Ser, ou Ars; Xaa na posição » 24 £ 11», Gly, Vai, Arg, Ser, çj jj L^&U ;· Xaa na posição 21 0 Thr, «is, Q.ly, Gin, Arg, ?ro, Ç.y Ai»;· Xaa na posição ££ & Hie, Thr, Ph®, Qly, Αχ-g, Ãl<i OU Trp; Xaa na posição 27 è Lwu, Gly, Arg, Thr, Ser, ar Ala,i Xaa íl® $3£?8ÍÇ-àO 3$ e ^ys·, Cly, ?re>< Vai OU Trp; Xaa na pü&içáü 25 é Gin, Asn, Leu, Fro, Arg, 0 0 Val,· na posição 30 ó Pr*, Kis, Thr. Gly, Asp, Gin, S«r, Leu, gu Lys;
    Xaa na posição 31 é Pro; Asp; Cly; Ala; Arg; Leu; ou Gin;
    Xaa na posição 32 é Leu; Val; Arg; gio; Acn; Gly; Ala; ou Glu;
    Χλ® ns posição
    Al*
    Thr
    Pro. Leu, Gin
    Xaa pes:ção 34 ê Leu, Val, Gly, Se.r. Ly*, Glu, Gin. Thr, Arg, Al®, Phe, Xie 00 Met; Xaa Π8 posiçãc 25 & Leu, Ala, Gly, Asn, Pro, Gin, OU Val; Xa® ns posição 3€ § Asp* i Xvtôti > o l í X*a na posição 37 é ?h«, Ser, Pro. Trp. ou Ha; Xaa ns posição 38 ê Asn, OU Al®; Xaa *3 pesiçáo 40 ê Leu, Trp,ot. Arg; Xaa pa posição 41 è Asn, Cys,. Arg, Leg, Hit, Met, 00 pro. Xaana posição 42 é Gly. Asp. Ser, Cys. Asm. Lys, Thr. Leu, Val, Glu, Phe, Tyr, 11«. Met eu Ala; Xaapa posição 43 é Glu, Asn. iyr, Leu, Phe, Asp, Ala, Cys, Gift, Arg, Thr, Gly Oã Ser; Xaa ns posição 44 è Asp, Ser, Leu, Arg, Lys, Thr, Met, Trp, Glu, Asn, Gin, Ala ôlí Pre; ^3ans posição 4S é Gin, Pro, Phe, Val, Met, Leu, Thr, Lys, Trp, Asp, Asa, Arg, Ser, Ala, : 11«. Gluou Hi» £ Xaa ns posição 45 é Asp, Phe, Ser, Thr, Cys, Glu, Asn, Gin, Ly®, Hi®, Ala, Tyr, 11®, Vaiou Gly; Xaa pa posição 57 8 11®, Gly, Vai. Ser, Arg, Pro, 0« Hit; Xaa o» posição 4B é L«u, Ser, Cys. Arg. He, Mrs, Phe, Glu < Lys, Ths, Ala, Met, Val jjy Aap; Xaapg. posição 4$ ó Het, Arg, Ala. Gly, Pro, Asn, Ηχβ,ρρ Asp. Xaa at posit lor; 5 (5 é Glu, Leu, Thr, Asp, Tyr. Lys, Asn. Ser. Ala, XI®, Val, Mis, Phe, Met ou Gin; ^*afia posição 51 é Asn, Arg, Met, Pm, Ser, Thr, O« HiS; Xaa π a posição 52 è .Asn, Mis, Arg, Leu. Gly. Ser, ou Thx; Xaa ns posição S3 é Leu, Thr, Ala, Gly, Glu. Pro, Lys, ser, ou Xaa pg. posição 54 é Arg, Asp, lie. Ser, Val, Thr, Gin, Asn, Lys, His, Ala o Xaa na posição 55 é Arg, Thr, Vai. Ser. Leu, Oo Gly,- Xa* na posição 56 é Pro, Gly, Cys, Ser, G.lnf Glu, Arg. His, Thr. Ala, Tyr. Phe. Leu, Vaiou Lys; Xaans posição 57 é ASíífcU Gly; Xaa na posição »& é Leu. Ser, A-sp, Arg, Gin, Val.i J U Oy®;
    Met;
    Xaa na posição
    5$ é Glu Tyr, His, Leu, Pro, gu Arg;
    Xaa na posição £<j ó Ala, pne. Ser. Asm, Pro ,· Tyr < Glu, Pro, Asn, 9<i Thr; Lys. Arg, Ser; Xaa na pssiçáo 81 é Xaa na posição £1 e Asn. Hl». V&l, Arg. Pro, Thr, Asp, ou Π»; Xaa na posição 53 i Arg. Tyr > Trp, Lys, Ser. Xis, Pro.ou Vai; Xaa cia posição &4 & Ala, Aso., Pro, Ser. OV Lys; Xaa na posição 5$ è Vai, Thr, Pro, His, Leu, Phe. Ser; Xaa na posição 6C 0 Lys, He. Arg. Vai. Asm, Glu, ou Ser; Xaa n-s posição 51 ê Ser, Ala, Phe. Vai, Gly, Asn, He, Pro, ou Xaa «a posição egé Leu Vai Trp, Ser, He, Phe, Thr, 00 Exs; Xaa na posição è Gin, Ala, Pro. Thr. Glu, Arg, Trp, Gly, o« Xaa fja posição 70 e Asn, Leu, Vai, Trp, Pro, ou Ala; Xaa na posição Trp. ou 71 Àsr; é Ala, Meo, Leu, Pro, Arg, Glu, Thr, Gin, Xaa na posição È Ser, Glu, Met, Ala, His, Assn, Arg,o,. Asp; Xaa na pOBíçáa 73 0 Ala, Glu, Asp, Leu, Gar, Gly, Thr, ou Arg,- Xaa na posição 74 4 11« , Met, . Thr, Pro? f Arg. Gly, Ala; Xaa na postçã» ΟΙ®, ou 7$ Leu; 4 Glu, Lys Gly, Asp, Pro. Trp. Arg, Ser, Xaa na posição ?£ é Ser, Vai, Ala, Asn. Trp, Glu, Fro, Gly, ou Xaa os posição 77 4 1'1«, Ser Arg. Thr, OU Leu;............... Xaa na posição 75 é Leu, Ala, Ser , Glu, phe, Gly, ou Arg; Xaarfa FÍJ»iÇào 7$ é Lys, Thr, Asn. Met, Arg, He, Gly, ou Asp; Xaa ns postoão SC 4 Am. Trp Vai, Gly, Thr, Leu, Glu, c g Arg ,- Xaa na postçãe 81 δ Leu, Gin. Gly. Ala, Trp, Arg, Vai,OU Lys; Xaa «a posição 82 4 Leu, Gin, Lys. Trp, Arg. Asp, Glu, Asn,
    Xis, Thr,
    Hxs;
    Leu;
    Asp,
    Ser, Ala, Tyr, Phe, II», Met q;j Vai;
    Xaa na posição S3 é Pro. Ala. Thr, Trp, Arg, <m Met; Xaa na posição 54 4 Cys, Glu, Gly, Arg, Met, ou v*l; 85 é Leu, Asn, Vai, ou Gin; Xaa «a posição 8£ Pro, Cys. Arg, Ala, ou Lys; Xaa na posição 87 é Leu. Ser. Trp. ou Gly: Xaa na pos-çâo 85 4 Ala, Lys, Arg, Vai, pu Trp; Xaa ns posição 89 ó Thr, Asp, Cys, Leu. Vai, Glu, Xis, Asn,c u Xaa na posição . 58 4 Ala. Pro. Ser, Thr, Gly. Asp, He, 0U Met;
    Ser;
    Xaa na posição SI è Ala, Pr», Ser, Thr, Pne, Leu, Asp, OU Eis; Xá* na posição S2 ê Pro, Phe Arg, Ser, Lys, His, Ala, Gly, .tie aL Leu; X** na posição . SfJ é : Thr Asp, Asn, Pr», Ala, L«u, ou Arg; Xaa na posiçào 54 è Axg, He, Glu, Leu, Vai, t*lh«. Lys, Axé,
    Ãla, a:> Pr©;
    X** na posição 95 ê Hrs, Gin, Pr», Arg, Vai, Leu. Gly. Thr, Àar,, Lys, Ser, Ara, Trp, Phe, He, o;j Tyr; Xaa f»a pssiçàa 9â é Pro. Lys. Tyr, Gly, He, ou Thr; Xaa na posição é η·. Vai, Lys, Ala. OU As»; Xaa na posição 98 ? His, 11«, Asn, L»u, Asp, Ala, Thr, Glu. Gin, Ser, Phe, . Met, Vai, Lys, Arg, Tyr ou Prot Xaa na posição 99 é lie, Leu, Arg, Àsp, Vai, Pr». Olis, Gly, Se»·, Ph®, CU’ Ria; Xaa na posiçàa 100 é Lys , Tyr, Leu, His, Arg, Bs, s«r, Sir,, ou pro Xaa na posição 10* è Asp , Pro. Met, Lys, His, Thr, Vai...
    Tyr, Glu. Àsn. Ser, Ala, G ly, X le, Leu, ou Glh-; Xaa na posição 182 é Qiy. Leu, Glu, Lys,. Se», Tyr. ©U Pr©; Xaa η a posição 143 4 Aap, <3 d Ser; Xaa na posição 204 é Trp, Vai, eys. Tyr. Thr, Met, Pr©, Deu, Gin. Lys. Ala. Phe, CD Gly Λ .Xaa <ns posiçàe 102 é As». Ps-©, Ala, Phe, Ser, Trp, CIk, Tyr, Leu, Lys, 11», Asp, Gc His Xaa na posição IS 6 δ Glu, Ser, Ala, Lys, Thr, He. Gly, ou Pr»; Xaa ©ã possção 108 è Arg, Lys Asp. Leu, Thr. 11», Gin, His, Set
    Ala 0 :J Pr»;
    Xaa na posição 109 é Arg, Thx, Pr©,. GXv ? Tyr, Leu, Ser. or Giy; Xaa na posição 116 ê Lys < Ala, Asr, Thr, Leu, Arg, Gin, HiS. Glu Ser, 0 0 Tr.©;· na posfção *4 * è Leu, ..Iley. Argf, Asp, OU Wc ; Xaa na posição 112 •é Thr. Vai, Glu. Tyr, Glu. His. Ser ou Phe; Xas ns posição 113 é Phe, Ser. Cys. Kis, Gly, Trp, Tyr. Aep, Lys,. Leu, lie. Vai 40 As©; Xa« na posição 114 ã Tyr, Cys Hia, Sei, Trp, Arg, 00 Leu; aaa »a posição 115 ® Leu, Asn. Vai, Pro. Arg, Ala, Sis, Thr,
    i^p, OU Me
    Xaa Arg, T*p, 115 Ser is Lys. , Asn, H Lau, Pr», Xte, Met. is. Ais. Tyr. Phe, G Asp. Ln, OU Vai, *1« Glu. < Xaa na posição 117 é Thr. Ser. Asn, 21«, Trp, Lys. OU P xo. Xaa na posiçdo 115 é Leu, Ser. Pr», Ala. Glu. Oys. Asp, OU Tyr; Xaa na posição 1.18 e Glu, S«r. Lys., Pro. Thr. Tyx. OU Arg. X&& Π3 pOSÍÇãO 12(3 e Asn, Ala. Pre, Leu. Hls. Vai, OU G In.· Xaa na posição 121 è Ala, Ser, lie, Asn. Fro, Lys, Asp ou Gly * Χ&α na posição 122 é Gin, Ser, Met, Τχρ. Arg, Phe, Pro, Sls Ile, Tyr, OU i Cys X Xaa na posção 133 é Ala, Met. Glu,. sir, Ser, Pr«s. Tyr, ou Leu,
    onde de 1 a 14 aminoácidos podem opcionalmente ser suprimidos do térmiπο-N e/ou 1 a 16 aminoácidos podem ser opcioanlme.nte suprimidos do término-C; e onde de 1 a 44 dos aminoácidos designados por Xaa são diferentes dos correspondentes aminoácidos de interteuqyuina-3-humana nativa (1-133);
    onde Lí è um ligante capaz de ligação de Ri a R2;e adicionalmente a dita proteína hematopoiêtica pode ser smediatamente precedida por (metionina’), (alanina^) ou (metionina'\ alanína’1),
  7. 7 Proteína hematopoiêtíca compreendendo; uma sequência de aminoácidos da fórmula;
    onde Ríê um polipêptídic compreendendo; uma sequência de
    15 aminoácidos G-CSF humana modificada da fórmula;
    Xaa Xaa Gly Pro Ala Sex' Ser Leu 10 Pro Gin Ser Xaa Leu Leu Xaa Xaa Xaa Glu 20 Gm Val Xaa Lys XoLcS Gin Giy Xaa Giy Ala 30 Xaa Leu Sin Glu Xaa Leu Xaa Ala Thr Tyr 40 Lys Leu Xaa Xaa Xaa Glu Xaa Xaa val Xaa 50 Xaa Gly Hie Ser Xaa Gly xie Pre Trp Au.a 63 Pro Leu Ser Ser Xaa Pro Ser Xaa Ala Leu 70 Xaa Leu Ala Giy xaa Leu Ser- Gin Leu Mis SO Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Girt Gly Leu Leu 90 Gin Ala Leu Glu Gly Xie Ser Pro Glu Leu 100 Gly Pro Thr Leu Xaa Thr Le« Gin Xaa ASp 110 Val Ala Asp Phe Ala Xaa Thr He Trp
    Gin 12'0 Gin Mat Glu xaa Xaa Giy Met. Ala. Pro Ala 130 Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala 140 Phe Ala Ser Ala Xaa Gin Xaa Xaa Ala Gly 150 Gly Val Leu val Ala Ser Xaa Leu Gin Xaa 160 Phe ueu xaa Xaa Ser Tyr Val Leu Xaa 170 Xaa Leu Ala Gin Pro (SEQ ID • NO; 1)
    Figure BRPI9610977A2_C0010
    Xaa na posição 1 ê 1 Xaa Ft<3 pÜSÍÇãG 2 ê Xsa na posição 3 ® : Xaa na posição 13 ® Xaa na posição 16 é Xaa na posição .17 è Xaa na posição 18 ê Xaa na posição 22 è Xaa posição 24 é Xaa na posição . 27 ê xaa na posição 30 é Xaa na posição 34 é xaa na posição 36 « Xaa H <1 pCSí 42 * Xaa na posição 43 è Arg, Cys, 0<i Leu Xaa ns posição 44 ® Trp. Gin, ou Thr ns posição 46 é Xaa na posição 47 è Xaa nç posição 49 « xaa ns posição 5Q è Xaa ns posição 54 é Xaa na posição 64 è Xáist tísí pot&içãü 67 0 Xaa 03 posição 70 é Xaa na posição 74 â Xaa na posição 104 è Xh^ na posição 108 » Xaa na posição 115 $ Xaa na posição 120 ó Xaa na posição 123 « X-Hâ na posição 144 é Xaa na posição 146 é Xaa na posição 147 é Xaa na posição 156 é Xaa na posição 159 ó Xaa na posição 162 á Xaa ns posição 163 é Xaa na pa&íçao 169 à Xaa na posição 170 é
    ends opcionalmente 1 -11
    Th:
    Leu
    Ser,
    Tyr
    Gly;
    Leu <
    Phe,
    Lys,
    Cys,
    Leu,
    Arg,
    Ile.
    Asp.
    Ala,
    Lys ou Ser,Cys ou Ser; Cys «<> Ser;
    Ris, Thr,
    Tvr
    His
    Sei
    Gly. Pro. Ser.
    Gly;
    Ile, Leu
    Pro,
    Arg a o S er;
    Thr »< <
    Thr ou
    Ala, Xle, I
    Hrs, Zre ou Thr ou Ala; Leu;
    His
    OU ciy,
    Arg
    Phe
    Vai, Lys. Trp, Al
    A&p, val. Ala,
    Glu
    Leu ou
    Leu. phe, Arg C!i
    Leu. Ile, His, ]
    Leu OLÍ His; cys <>« Ser,Gin, Lys, Leu ou
    Gin, Pro, Leu, Arg °u Ser;
    Cys &u Ser
    Gly
    Ala. Hís, Gly. Arg.
    His,
    Gin;
    Arg, He Alã;
    Ser; o ou Tyr;
    Asp, Leu,
    Gin Glu
    Phe
    Arg ou
    Arg o·
    His Ser Glu Vai otJ Vai;
    Vai, Arg. Trp
    Leu ou Ala;
    Arg, Lys
    Phe ou Thr
    Arg t Pro , Leu.
    Gly ;
    His
    Gly ou
    Arg. 1
    Leu , i Gly. . Arg, Ser, : His, Arg ou > Ser;
    Thr, Tyr, val ou Gly;
    Gly ou Trp;
    Arg ou .
    Leu. Arg au cys;
    Ser;
    aminoácidos do término-N e 1-5 do término-C podem ser suprimidos da dita sequência de aminoácidos G-CST humana modifícada; e onde o término-N está hgado ao término-C díretamente ou atra5 vés de um lígante capaz de ligar o término-N ao término-C e tendo novos términos C e N em aminoácidos:
    38-39 60-61 123-124 39-40 61-62 124-125 40-41 62-63 125-126 41-42 63-64 126-127 42-43 64-65 128-129 43-44 65-66 128-129 44-45 66-67 129-130 45-46 67-68 130-131 46-47 68-69 131-132 47-48 69-70 132-133 48-49 70-71 133-134 49-50 71-72 134-135 50-51 91-92 135-136 51-52 92-93 136-137 52-53 93-94 137-138 53-54 94-95 138-139 54-55 95-96 139-140 55-56 96-97 140-141 56-57 97-98 141-142 57 -58 98-99 ou 142-143 58-59 99-100 59-60 122-123
    ê um polipeptídio compreendendo; uma sequência de ammoác-idos iígante c~mpl humana modificada da fórmula:
    SerPrnAJ.aProFrnAlaCysAspLeuArgValLeuSarLysLeuLeuArgAspSer
    1 S 1015
    HisValLeuHi&SerArgLeu£erGlnÇysProGluValííísProX*euProThrPro
    20 25 3035 valLeuLsuProAlaValAgpPheSerLeuGlyGluTrpLysThrGlnMetGluGlu
    40 45 5055
    ThrLysAlaGlnAspIleLeuGlyAlaValThrLeuLeuLeuGluGlyValMetAla
    60 65 7075
    AlaArgGlyGlnLeuGlyProThrCysLeuSerSerLeulieuGlyGlnLeuSerGlv
    80 $5 9095
    Glnv alArgLeuLeuLeuGlyAlaLeuGlnSerLeuLeuQlyThrGlnXaaXaaxaa *00 105110
    XaaGlyArgThrThrAlaHisLysAspProÀsnAlallePheLeuSerPheGln.His 115 120 125130
    LeuLeuArgGlyLysValArgPheLeuMetLeuValGlyGlySerThrLeuCysval *3c 140 145^50
    Arg (£EQ IL NO:256)
    153 em que
    Xaa na posição Phe, Trp, 112 é deletado ou ; Met; Leu, Ala, Val, Xle, Pro, Xaa na posição 1^3 é delatado ou Pro, Phe, Ala, Val, Leu, 11®, Trp, Met; Xaa na posição ..... 114 ,.é delatado ou ’ Pro, Phe, Ala, Val, Leu, He, Trp, Met; Xaa na posição 115 Gin, Gly, Ser, Thr, Tyr,
    Asn;
    onde o término-N está ligado ao término-C diretamente ou através de um ligador (U) capaz de ligação do término-N ao término-C e tendo novos términos C a N em aminoáoidos;
    Μ—Μ—11111 ιι ιι ιι ιι ιι 11 ιι ιι mu m n r r r r r I r I r
    26-27 50-51 27-28 51-52 28-29 52-53 29-30 53-54 30-31 54-56 32-33 56-57 33-34 57-58 34-35 58-59 35-36 59-60 36-37 78-79 37-38 79-80 38-39 80-81 40-41 81-82 41-42 82-83 42-43 83-84 43-44 84-85 44-45 85-86 46-47 86-87 47-48 87-88 48-49 88-89
    108-109
    109-110
    110- 111 111 -112
    112-113
    113-11A
    114-115
    115-116
    116-117
    117-118
    118-119
    119-1.20
    120-121
    121-122
    123-124
    124-125
    125-126 onde L~1= é um lígador capaz da ligar R< a R?; e
    5 adioionalmente a dita proteína hematopoiétíca pode ser imediatamente precedida por (metionina'1), (alanína4) ou (metionina'2. alanina'').
  8. 8 Proteína hematopoiétíca compreendendo; ama sequência de aminoácidos da fórmula;
    RrLrRs, RrRs. ou R2-R,
    10 onde R5 é um polipeptídio compreendendo; uma seqüéncía de aminoácidos ligante c-mpl humana modificada da fórmula:
    SerPvoAlaPruPicAla-OysAspLeuArgValLeuSerLysLeuheuArgAspSer * . , -· . „5; . 1015
    Hi. sValLeo&isserArsLeuSerGlnCysProGluVaXHí sProLeuP^GTh^ro
    20 25 3035
    ValLeuLeuProAlaVa lAspPheSerLeuGlyGluTrpLy sThrGl nMeoGluGlu
    4S 45 5055
    ThrLysAlaGlnAspXleLeuGiyAlaValThrLeuLeuLeuGluGlyvalMetAla
    60 65 70 *75
    Al aAr gGly g InLeuGlyProThrCysleuS erSerLeuLeuGly G InLeuS *»r G * v
    30 gg §Q *' gg*
    G rhV at Ax gL euleuLeuG XyAlaLeuG Ids erLeuLeuGlyThrGlnXaaXaaXaa 100 105
    XaaGlyArgThrThrAlsHisLysAspProAsnAlaxiePheLeuSerPbeGlnH.is **5 170 125130 leuLeuArgGlyLysValArgPhaLeuMeíiLeuValGlyGlySerThrLeuCvsval
    -35 140 145
    Arg LSEQ XD NO: 256)
    153 em que
    Xaa na posição 112 édeletadoou Leu, Ala, Val, Xie, Pro, Phe, Trp, : Met; Xaa na posição 113 édeletadoou • Pro, Phe, Ala, Val, Leu, He, Trp, Meu xaa na posição 114 éddetadoou Pro, Phe, Ala, Val, Leu, ·:·:·:·:·:·'<·2··;·;ν. ... Xle, Trp, Met; Xaa na posição ......:™2............. ................................ Gin, Gly, Ser, Thr, Tyr,
    A^n;
    onde o término-N está ligado ac término-C diretamente ou através de um íigador (Ls) capaz de ligar o término-N ao término-C e tendo novos términos C e N em amínoácídos;
    26-27 48-49 109-110 2/ -28 51-52 110-111 28-29 52-53 111-112 29-30 53-54 112-113 30-31 54-56 113-114 31-32 55-56 114-115 32-33 56-57 115-116 33-34 57-58 116-117 34-35 58-59 117-118 35-36 59-60 118-119 36-37 79-80 119-120 37-38 80-81 120-121 38-39 81-82 121-122 40-41 82-83 123-124 41-42 83-84 124-125 42-43 84-85 125-126 43-44 85-86 OU 127-128; 44-4c? 86-87 40-47 87-88 47-48 108-109
    onde R2 é um polipeptídio compreendendo, uma sequência de aminoácidos
    IL-3 humana modificada da fórmula:
    5 Ala Pro Met Thr Gin Thr Thr Ser Leu Lys Thr Ser Trp Vai Asn
    1 5 1015
    Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
    20 2530
    Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
    10 35 4045
    Xaa Xaa X&& Xaa Xaa 50 Xaa Xaa XS-& Xaa Xaa 5S Xaa Xaa Xaa xaa Xaa 50 Xaa .Xaa XâSí r -a Xaa 55 Xaa xaa Xaa Xaa Xaa 70 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 75 Xaa xaa Xâsâ: Xaa Xaa 80 Xaa Xaa Xa& Xaa Xaa Ô5 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 90 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 55 Xaa Xaa Xâei Xaa Xaa 100 Xaa Xaa Xaa Xaa : Xaa 105 Xaa Fhs Xa<i Xaa Xaa 110 Xaa Xaa X&& Xaa Xaa 115 X.aa Xaa xaa xaa Xaa 120 Xaa Xaa Xaa Gin Gin 125 T^*! ·Τ Thr Sar Lau 130 Ala (SEQ He Phe NO: 2?
    S!O qu® Xaa ns posição 17 is s«r. lyB> Gly, Met{ Xaa ns posição χ$ ρ Asn. His, Leu, 11«, Arg, ou Gin; Xaa ns posiçSo y IS e mt. Ph«, n«, Arg. Gly, Ala, Gg Oys; Xaa ns posição jp g xie, cys. Gin, Glu, Arg, pre, ou λιβ; Xaa na pssiçáo gl é Asp. Phe, Lys. Arg, Ala, Gly, Giu, 6ln, Asp, TM, S«p OUVél; Xaa ns posição jç Glu, Tsp, Fra·, Ser, Ala, sis, Asp, Am, Qln, Leu, Vai OU gly ,- Xaa na posição 23 é 21«,. Vai, Ala. Gly, Trp, Lys, pp®.
    Uu. S*
    Xaa ns pos-çâo
    Xaa no poeiçâo..... 2S posição
    Xas
    Λ3
    Xaa.
    Γ53
    Xaa ns
    D0SÍÇ3Ü
    Xaa na
    Xaa na gosíçáü posição
    Arg;
    è 11« ® Thr. Ki®, Gly, Gia, Ms, Pro. é é
    Sis. Thr.
    Vai
    Fha,
    Mg.
    fc?, Sar.
    Fhs,
    Lys > Arg, Gin, Am.
    Fro, His
    L®u i4ij
    OU Lev;
    OU. Ala;
    Gly v Arg, Ale.,: G G: Typ;
    Mr. or Ala;
    Gly. Fra. Vai eu Trp;
    Arg, oi; VaiAsp. Gin. S*r. Lav, OU Lys;
    Gin,
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa:
    Xaa
    Xaa xaa
    Xaa is 0
    Xaa
    Xaa
    Xa«i xa,
    Xaa
    Xaa >aa
    Xaa
    Xas
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa xaa
    Xaa
    Xxa
    Xaa
    Xaa
    Xaa &5
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xae· .100
    Xaa
    Pha xaç,
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa
    Xaa .5
    Xaa Xaa Xaa Gin Gin Thr Thr Leu Ser Leu Ala lie Phe 12.5 130 <SEQ ID NQ;2i em que Xaa. ua porção l? i® S«r, Ly#< sly< Asp, K»t, Xsa na posição 18 é Asn, Xis, Leu, üe, phe. Xa® posição .15 6 Mat, Ph®, 11®,. Axg, Gly, Ala, ou Cys; Xaa na posrçâo 2S é Xle, Cys, Gin, GÂu, Arg, Pre-, orj AI«.; Χ&Λ BS pOSiÇSÜ 21 ê Asp, ph®, Lys, Arg, Ala, Gly, Glu, Gin, Asn, Thr, Ser íH' Vai; Xaa r;s posição Glu, Trp, yrCíf S(S.r, A1<j His, Asp, Asm. Gin, Leu, v*i «ü Giy; X*.s na posição 23 é He, Val, &;«. gly, <prp, Lys. Phe, Leu, s«r / OU À®S; Xaa na posição 4 24 ® 11», Gly,· Val, Àrg. s«j?, Phe, tni Leu; Xa» rua postç-Sa···· 25 ê Thr, Pis,. Gly, Qln,...Arg, .. XCO..>.; 0 A ¢:.-: Xaa sa posição 26 é Hxs. Thr, ph®, Gly, Arg, Ala, ou Trp; Xa« na posição 2? £ Lau, Gly, Asg, Thr, Ser, or Ala; Xaa na posição 26 é Lys, Arg, Leu, Gin, Gly, Pro, Vel ou Trp,· Xe® ns posição 23 é Gin, Asn, Leg, Pro, Arg, OU Val; Xaa na ps&rçàe 36 è Pre, His, Thr, Gly, Asp, Gin, Ser, Lav, ou Lys
    Xaa na posição 3 3 4 Fro, Leu, Gin, Ala, Thr,ou:- Glu; Xaa ns posição 34 4 Leu, Vai. Gly, Ser, Ly.e. Glu. Din, Th Arg, Ala, Phe, T1 & 0 í •J Met;
    Xaa na posição IS A Leu, Ala, Gly, Aso, F:ro. Gin, ou Val; Xaa n® posição Ιό 4 ... ., ,.f&u, 0 'U' 4hs 1;..... Xaa ng posição 37 é Pho, Ser, Pro, Trp, »u He; Xaa os posição 3ã é Aen, «« Ala; Xaa posição 4 δ φ Leu, Trp.CÍJ Arg; Xaa oa posição 41 é Asn. Cys, Αχ-g, Leu, His. Met, ου Pro; Xaana posição 42 ê Gly, Asp, Ser, Cys. Asn, Lys, Thr, Leu, Var. GλΙι, Phe, Tyr, na» Mat Ou Ala > Xaane posição 43 é Glu, Asp, Tyr, Leu., Phe, Asp, Ala, CX&, Gin, Arg, Thr, Gly nu Ser; Xaa os posição 44 e Xsp, Ser, Lsu, Axg, Lys. Thr, Met, Trp Glu, Asn, Gin, Ala Pro,- Xaa^g pc&jçâo 4S g Gln, Pre, Phe, Val, Met, Leu. Thr, Lys. Trp, Asp, As a, Arg, Gar, Ala, XIe, Glu OU His Xaa ua posição 46 4 Asp, Phe, S»r, Thr, Cys, Glu, Aen, Gin, Lys, His, Ala, Tyr, Ile. Velou Gly: Xaa n« posição 4? é He, Gly, Val, Ser, Arg, Pro, 0« H; is; Xaa ns posição 48 4 Leu, Ser, Cys. Arg, XI®, His.< Fhe, Glu, Lys, Thr, Ala, Met, Val Cíi Asn; Xaana posição 4.9 4 Man, Arg. Ala, Giy, Fro. Asn, Ris, CHI Asp Xaa at posit ion 5 C> ê Glu. Leu, Thr, Asp, Tyr, Lys. Ser, Al®, Xie, Val, His, .Phe. Meteu Gl»;
    posição Si 4 Asn, .Arg, Met, Pro, Ser, Thr, ou gj#,
    Xaana posiçàe 52 4 Ass, Hi*, Arg. Leu. Gly, Ser, cu Thr;
    JUaaapos^.... S3 é Thr, . Ma. Gly, Glu, priS, Lys, ?<r, O<J Het
    Xaana posição Si á Arg, Asp, 11«, $e£( V<i< Tkr
    Lys, His, Ala ou Leu;
    Xaa ns posição 55s
    Xa« oa posiç-ão jgé
    Thr, Ma, Tyr.
    Xaans posição s'?4
    Arg. Thr, Val, Sex, Leu, ou Gly;
    Pro, Sly. cys, Ser, Gin, Glu, Arg, His, Fh®» Leu, Val:PW Lys;
    A»»®V Gly;
    Xaa ns posição
    58 é
    Leu, Ser, Asp,
    Xrg. Gin, Val, ou Cys,·
    Xaa oa posição è Xaa t>a pos;ção 86 é Xaa ns posição 61 é Xaa na posição £2 é Xaa ns posição 6'3 è Xaa «a posição 64$ Xaa 08 poSiçãO £5 é Xaa oa posição 6é è Xaa na posição £7 § Xaa posição 6S$ Xaa os posição 6S * na 70è Xaa os posição 71 è Trp, e u Asn· Xaa os posição ?2 ê Xaa os posição 7 3. Xaa na posição ?4 é Xaa^ posição 75 é Glu, ou Leu; Xaa n® posição ?S é Xaa na posição 77 & Xaa na posição 78 * Xax ^8 PftSií3o 78 4 Xaa na posição 80 $ Xaa os posíçãa 81 é flB Xaa na posição 82 é His, Thr, Ser, Xaa na posição 83 é Xaa oa posição 84 è Xaa esposição 85 ® na posição 86 έ Xaa na posição 87 é Xaarts posição 88 é Xa»ns posição 85 8 Xaa na pcsição . 9Q é
    Glu Tyr, His, Leu, Pro, ou Arg;
    Ala, Ser, Pro. Tyr, Asn, <u; . Phe, Asn, Glu. Pre, Lys, Arg, Ser; Asn, His, Val, Arg, Pro, Thr, Asp, ou He; Arg, Tyr, Trp, Lys, Ser, Hls, Pre, <su Val; Ala, Asn, Pro. Ser. eu Lys; Val, Thr, Pro Xis, Leu, Phe. Ser; l«y & í Ile. Arg, Val. Asn, Glu, at; Ser: Sefc< Ala, Phe, Val. Gly, Asn., 11®, Pr o, ou Leu, Val, Trp, Ser, 11®, Phe, Tnr. ou Mis; Gin, Ala, Pro, Thr. Glu. Arg, Trp, G1 y. ou Mb, Leu, Val < Trp, Pro, su Ala; Ala, Met, Leu Pro, Arg, Glu, Thr. Gin. Glu. Met > Ale. His, Asn, Arg.OÜ Asp ;· Ala Glu. Asp, Leu, Ser, Gly, Thr, ou Arg;
    Sis Leu:
    U®, Met, Thcr, Pre, Arg. Gly, Ala;
    Glu, Lys, Gly.· A*p, Pro. Trp, Arg, Ser,
    Ser, Val, Ala, Asn, Trp. Glu, Pra, Glv . nu 11«, Ser.. Arg, Thr, ou Leu? Leu, Ala. Ser, Glu, Phe. Gly, OU Arg; Lys, Thr, Asn, Met, Arg, He. Gly, çu Asp; Asn, Trp. val, Gly, Thr. Leu. Glu, Oü Arg; Leu, Gin, Gly, Ala. Trp. Arg, Val, cu Lys; Leu, Gin, Ly». Trp. Arg, Asp, Glu. Asn Ala, Tyr, Phe. Xle, «♦t ou 1 Val; Fru, Ala, Thr, Trp, Arg, uu N0 & t: ,í:
    Asp;
    Cys, Glu, Gly, Arg, Met, nu Val;
    Leu, Asn, Val.. <?U Gin ;
    Pro, cys, Arg, Ala., ou Lys.,Leu, Ser, Trp, ou Gly;
    Ala, Lys, Arg, Val, ou Trp;
    Thr, Asp, Cys, Leu, Val, Glu, Xis, Asn,Oh
    Ala, Pro, Ger, Thr, Gly, Asp, He, 0\; Me t;
    Ser;
    Xaa na pcsíção 91 é Al O , Pro, Ser, Thr, Leu, Asp, OU His; Xaa J>S po&sçâo Leu: 91 é Pro. Phe, Arg, Ser, l»y s$> v Hrs, Aia, Gly, lie ou Xaa na 9 ,3 © < Tiir, ÂSp, Ser, Asn. Pro, Ale, 00 Arg; Xaa na , §4 é Ax g. Xis, Ser. Giu, Lí&m.y Val.. Gin,. Lys, Si»,
    Ala, OU PrO;
    Xaa os posição 95 0 His, Gin, Pre. Arg, Val, Lãu, Gly, Thr, Asn Lys. Ser,. Ala, Trp, Phe, 11», cu Tyy; Xaa na posição 9 *> ® Pro. Lys, Tyr, Gly, XI», ou Thr; Xaa na posição 9“ é Ile, Vai, Lys, Ala, ou Asn; Xaa os posição 93 é Eis, lie, Asn, Lee, Asp, Ala, Thr. Gru, Gin, ser, Phe, Met, Vai, Lys, Arg. Tyr ou Pia; Xaa na posição 99 P Ile, Leu, Arg, Asn, V<1, pra, Qln,. Gly, Ser, Phe 00' HÍS;
    **« ne posição 10δ é Ly», Tyr, Leu, His. Ars, n«, s.fex, Gin, oü Fr<?
    Xaa bs posição ιοί é Asp, p*ç>, Met, Lys, His, Thr, Val,
    Tyr, Glu, Asn, Se-, Ala. Gly, Xle, l«u, ou Gin;
    Xaa na posição KX é Gly, Leu, Glu, Lys, Ser, Tyr, ou Pro; Xaa na posição 103 ò ou Se t y* ·> Xaa ns posição 184 e Vai, Cys, Tyr, Thr. Met, Pres, Leu,
    Gin, Lys, Ala, Phe, ou Gly;
    Xee ;o3 posição 106 è Asn, Fro, Ale, Fhe, Ser
    Leu. Lys, II®, ÀSp, OU HÍS;
    Trp, Cl», Tyr,
    Xaa BS posição i&g ç Glu, Ser, Ala, Ly®, Thr, Ile, Gly. <5 u Prn; Xaa os posição 1&s ê Arg, Ly», Asp, Leu, Thr, 11», Gin, His, Ser, Ala vu Hre; Xaa na posição 109 ê Arg, Th-tT Pro, Tyr. Leu. Ser, nr Gly; Xaa na posição 1IC é Lys, Al-âi j Asa, Thr. Leu, Arg, Gin, His. Glu, Ser, ou Trp; Xaa ns posição m e IrôU., lie. Arg, Âsp. Ou Met; na posição 112 é Thr. Val, Oln, Tyr > Glu, His, GU Phe; Aa* na posição 113 e P3>«. Ser.. cys.. HÍS. Giy, Trp, Tyr. Asp, Ly®, Leu, lie, Val 0,-i A&n; Xaa na posição 114 è Tyr. Cys, H&s í Ser. Trp, Arg, *u Leu; Xaa na posição Leu Asn, Val. Pre, Ax §, Ala, Fsa Thr,
    Trp.. QU Men;
    Xaa Arg, Trp, 116 is Lys. Lay, Pro, Thr, Met. Ser, Asn, His, Al*. Tyr, Phe, G Asp, V*l, Glu, In. 00 lie,· X** na posição X· ®. è Thr, Ser, Asn, H®, Trp, Lys, OU Pro; Xaa no posição 1U é Leu, Ser. htô< Ala, Glu, Cys. Asp,. OU Tyr; Xaa na posição ns é Glu, Ser, Lys, Pro, Leu, Thr, Tyr, OU- Arg; Xaa na posição 12 C é Asn, Ala, Pro, Lêu, Hie, Val, 00 Gin; Xaa na posição 121 é Ala, Ser, lie, Asn, Pro, Lys.. Asp, 00' Gly; Xaa na posição λ^.Λ- j4 é Gin, Ser, Her, Trp, Arg, Phe. Pro, Hl s. He, Tyr, OU Cys; Xaa na posção 123 e Ala, Met, Glu, His, Ser Pro, Tyr. 00 Leu.
    cnde de 1 a 14 aminoácidos podem opcíonalmente ser suprimidos do término-N e/ou de 1 a 15 ammoácidos podem ser opcionalmente suprimidos do término-C da dita sequência de aminoácidos interleucina-3 humana modificada; e onde de 1 a 44 dos aminoácidos designados por Xaa são diferentes 5 dos correspondentes aminoácidos de interleucina-3 humana nativa (1 -133):
    onde L; é um ligante capaz de ligar R, a R2; e a dita proteína hematopoiéiica pode opcionalmente ser imediatamente precedida por (metionina'1). (alanina’’)ou(metionina2, aianina”).
  9. 9. Proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 6 ou
  10. 10 8, onde R2 é selecionado do grupo consistindo em:
    Ala Asn Cys Ser lie Met He Asp Glu He Jie Kis Ly£
    Arg Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asm Leu Asn Al* Olu
    Asp Va~ Asp He Leu Met Glu Arg Asn L»u Arg Leu Ere Asn Leu
    Glu Ser Ph® V<1 ArS Al* Vai Leu qiu Asn lie Glu Ala lie Leu Arg Asn Leu Gin pro Cys Leu Pro Ser Ala
    Thr Ala Ala Pro Ser Arg Ms Pro He n* n® Gly
    Trp Qin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr Leu
    CUu Gin Ala Gin Glu Gin Gin (SEQ ID NO;22S);
    Figure BRPI9610977A2_C0011
    Ala Asn Cys Ser Xie Met He Asp Glu lie He His His Arg Pro Pro Asn Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Ker Asp lie Li^u Met Glu Arg Asn Leu Arg Thr Pro Al a Ph® Val Arg Ala Val Lys His Leu Glu Asn Ala Glu Ala lie Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pre Thr Ala Ala Pro Ser Arg His Pro lie 11® II® Lys Ala Trp Gin Glu Phs Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Val Glu Gin A*a Gin Glu Gin Gin i'SEQ 1 ID NO: 2 :28) ;
    Ser
    Ser
    Ser
    Thr
    Leu
    Lys
    L®U ax
    Al®
    Ala Asn Cys Ser He Mat XI® Asp G*u XI® He His His Leu Lys Val Pro Pro Ala Pro Leu Leu ASp Ser Asn Asn Leu Asn Ser Glu Asp Met Asp He Leu Hex Glu Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Leu Ala Ph® <al Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Glu Ala He Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Fro Ser Ala Thr Ala Ala Pre Ser Arg His Pro XI® He He Lys Ala Gly Asp Trp Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu Vai Thr ueu
    Glu
    Asn
    Gin
    Cys
    Ala
    Ser
    Gin
    He
    Glu
    Met
    Gin
    Xie
    Ala
    Pro
    Leu
    Leu
    Val lie
    Leu
    Figure BRPI9610977A2_C0012
    Ser
    Phe
    Val
    Ala
    Ala
    II®
    Arg
    Leu
    Ala
    Asp
    Val
    Ala
    Se:
    Arg
    Arg
    Asn
    Gin
    Asp
    Asp
    Arg
    Lys
    Leu
    ÍSEQ ID Glu
    II®
    NO;227)r Xie
    HXS e
    His
    L®U
    Pro
    Asn
    Asn
    Gin
    Asn
    Leu
    L®u
    Pro
    Asn
    Leu
    Asn
    Arg
    Glu
    Leu
    Asn
    Pro
    Ala
    Asp
    Asn
    Ser
    Lys
    Glu
    Leu
    Arg
    Asp
    Glu
    Qin Glu
    Gin Ala
    His the Arg Glu Lys
    Gin Glu Gin Gin lie
    II®
    Cys
    II®
    Leu
    Pro
    Ser
    Ala
    Thr
    Lys
    Leu
    Phe
    Gly
    Thr
    Asp Trp
    Leu Glu
    Ala
    Tyh Leu Val (SEQ JO NO;228).
    10. Proteína hematopoiética compreendendo:
    uma sequência de aminoácidos da fórmula:
    RrLrRj. Ra-Lv^n RrRz OO R3-R1 onde Ri é um polipeptídio compreendendo; uma seqüència de aminoácidos
    5 ligante c-mpl humana modificada da fórmula:
    SerProAlaFro?rOAlaCyEAspI.®íltt9vâli.eUserI,ySt,euI,euA,gAstígei.
    Ί-S
    HxsVa.lLeuH.isEerArgLeuEerGlnCysProGiuVaLHisPrO.,euProThrFrO
    *..................™.......................35.........................
    ν3·1^^'1»«ώ8ν«1^ρρηε3βΓΐ.βπΒ;γ(31ΗΤϊρί,Χ3ΪΜ01ηΜβω11101„ ” so55
    ThrhysAlaGlnAspIlet.euGlyAlavalThri.euLeu^uGiueiyvalMetAla
    .............. .................... ?·5.
    AlaArSSl^laLeuaiyPro1.h^sl,euSerSerLe^uGly,01rXeiiSerGiji GlnValAxaieuLeuLeuGlyAlaLeuG^ertóu^^,^^^^^ xuà110
    XjAGlyAxgThrTta-MaHiaysAspProAsnAlailePhel.euSerPheGlnHx
    12513Q ^^Ar^lyLy.V.^rgPhe^uMe ^ValGlyGlySerr^^^
    ........ ......X<O....................................................
    Arg (SEQ XD NO:256(
    153 em que
    Xaa na posição 112 é dsletado oo Leu, Ala, Vai, lie, Pro, Phe, Trp, : Met; Xaa na posição 113 é deletadoou Pro, Phe, Ala, val. Leu, lie, Try. Met; Xaa na posição 114 é deletado oo Pro, Phe. Ala, Vai. Leu, lie, Trp, Het; Xaa «aposição ......... ......Gin.,.. Gly., Ser.,. Thr, Tyr,
    Asn;
    onde o término-N está ligado ao término-C diretamente ou através de um íigador (U) capaz de ligar o tènmino-N ao término-C e tendo novos términos N e C em aminoácidos'.
    26-27 49-50 108-109 77-28 50-51 109-110 28-29 51-52 110-111 29-30 52-53 111-112 30-31 53-54 112-113 32-33 54-56 113-114 33-34 58-57 114-115 34-35 57-58 115-11 Ο- 38-37 58-59 116-117 37-38 59-60 117-118 38-39 79-80 118-119 40-41 80-81 Γ19-120 41-42 81 -82 170-12’1 A 42-43 82-83 121-122 W 43-44 83-84 123-124 44-45 84-85 124-125 45-46 85-86 125-126 46-47 86-87 ou 127-128 47-48 87-88 48-49 88-89 onde Rj é G-CSF ou G-CSF Ser’z: onde Lí é urn iigador capaz de ligar R< a Ra; e
    5 a dita proteins hematopoiética pode upcionalmente ser imedíatamente precedida por (metionina'). (alanina’) ou (mationina^). alanina’).
  11. 11. Proteína hematoposétíca de acordo com a reivindicação 1 > 2, 3( 4, 5: 6, 7, 8, ou 10t onde o dito iigador (U) é selecionado do grupo consistindo ern:
    GlyGl/GlySer (SEQ ID NO:
  12. 12) ;
    GlyGiyÜlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID 80:2421; GlyGlyGiySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ 10 80:243);
    SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO:244H GluPheGlyAsmetAla (SEQ XD 80:245);
    G lu PheGlyGlyAsnMetAla (SEQ ID 80:246) ; GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMecAla ('SEQ ID NO:247); e GlyGlySerAspMetAl aGly (SEQ XD 80:248}.
    10 12. Proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 9 onde o dito hgador (L·) ê selecionado do grupo consistindo em:
    GlyGlyQlySer (EEQ ID NO;12);
    GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID 190:242); ^lyulyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO:243)SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO:244};
    OluPheGlyAsnMetAla (SEQ ID NO:245} ;
    GluPheGlyGlyAsnMecAla (SEQ ID NQ;246); uluPheGlyGiyAsnGlyGlyAsnMetAla (SEQ ID NO:247); GlyGlySerASpMatAlaGly (SEQ ID NO:248).
  13. 13. Proteína homatopoiétícs de acordo com a reivindicação 1 onde a dita proteína é seiecionada do grupo consistindo em :
    Asn Cys Ser He Met He Asp Glu lie Xie His His Leu Lys ArgPro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp
    Val Ser He Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu. Glu
    Ser Phe Val Arg Ala Val Lye Asn. Leu Glu Asn Ala Ser Gly lie
    Glu Ala He' Leu Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr
    Ala Ala Pro Ser Arg His Pro Xie Xie Xie Lys Ala Gly Asp Trp
    Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu val Thr Leu Glu
    Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
    Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn Men Ala Tyr Lys Leu Cys
    His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly His Ser Leu Gly He pro
    Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala. Leu Gin Leu Ala
    Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly
    Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly Xie Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr
    Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr He
    Trp Gin Glu Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro
    Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Αχ-g Arg
    Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Leu Glu
    Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Gly Gly
    Ser Gly Gly ser Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin Val
    Arg Lys He Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lys Leu Cys
    Ala Thr (SEQ ID NO:166);
    Asn Cys Ser Xie Met He Asp Glu He lie His H1S Leu ..Lys.. Arg Pro- Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Asn Ash Leu 'Ash' Asp Glu Asp Val Ser lie Leu Met Asp Arg Asn Leu Arg Pro Asn Leu Glu Ser Phe Val Arg Ala Val Lys Asn Leu Glu Asn Ara Ser Gly He Glu He Arg Asn Leu Gin Pro Cys Leu Pro ser Ala Thr Ala Pro Ser Arg His Pro lie lie Xie Lys Gly Asp Trp Gin G1U Phe Arg Glu Lys Leu Thr Phe Tyr Leu val Thr Leu Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Glu Pro Ser Gly Pro He Ser Thr lie Asn Pro Ser Pro Pro Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro Asn Met Ala Tyr Lys Leu Cys KÁ& Pro Glu Glu Leu val Leu Leu Gly His Ser Leu Gly He Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Fro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Leu Glu Gly Xie Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val • AjJà Asp phe Ala Thr Thr lie Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro Thr Gly Ala Met Fro Ala Phe Ala Ser Phe Gin Arg Arg
    At. a Gxy Gly vai Leu vai Ala Ser His Leu Gin Ser phe Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Vai Leu Arg Kxs Leu Ala Gin Pro Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gin val c*rg Lys 11ê Gxn u?j.y Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lvs Leu ^*vs Ala Thr {SSG ID NO:167i ;
    Asn Cys Ser lie Mee Xle Asp Glu Pro Pre Ala Pro Leu Leu Asp Pro Vai Ser Xle Leu Met Asp Arg Asn Ser Phe val Arg Ala val Ly® Asn Glu Ala lie Leu Arg Asn Leu Gin Ala Ala Pro Ser Arg His Pro Tie Gin Glu Phe Arg Glu Ly® Leu Thr Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Val Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Thr He Trp Gin Gin Mee Glu Glu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Arg Arg Ala Gly Gly val Leu Val Leu Glu Vai Ser Tyr Arg Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin Ser Gin Val Arg Lys Xle Gin Gly Asp Leu cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys Leu Gly His Ser Leu Gly lie Pro Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Xle Ser ÍSEQ id NO1I68);
    Xle He His His Leu Lys Arg Ann Asn Leu Asn Asp Glu Asp ueu Axg Leu Pro Asn Leu Glu Leu Glu Asa Ala Ser Gly He Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr He Xle Lys Ala Gly Asp Trp Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Asn Met Ala Fro Glu Leu Gly Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Arg Mis Leu Ala Gin Pro Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly
    Asn Cys Ser He Met Xle Asp Glu Pro Pre Ala Pro Leu Leu Asp Pro Val Ser Ha Leu Met Asp Arg Asn Ser Phe Val Arg Ala Val Lys asp Glu Ala Xle Leu Arg Asn Leu Gin Ala Ala Pro Ser Arg His Pro He Gin Glu phe Arg Glu Ly® Leu Thr Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Val Gly Glu Pro Ser Gly Pro He Ser Ser Lys Glu Ser Hi® Lys Ser Pro Pro Thr Leu Asp Thr- Leu Gia Leu Thr* lie Trp Gin Gin Met Glu Glu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin Ser win Val ^rg Lys lie Gin Gly Asp Leu Cys Ala Thr* Tyr Lys Leu Cys Leu Gly His Ser Leu Gly Xle Pro Px“o Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly He Ser (SEQ XL
    Xle He His His Leu Lys Arg Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr He He .Lys Ala Gly Asp Trp Phe Tyr Leu val Thr Leu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Thr· He Asn Pro Ser Pro Pro Asn Met Ala Pro Glu Leu Gly. Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Arg His Leu Ala Gin Pro Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Leu Leu Gin Ala Leu Glu Glv
    Asn Cys Ser lie Met Xle Asp
    Pre Pre Al® Pre Leu Leu Asp
    Val Ser He Leu Met Asp Arg uei Phe Val Arg Ala Vau lys
    Glu Aua He Leu Arg Asn Leu
    Ala Ala Pre Ser Arg Hus Pre
    Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu
    Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr G^y’ Guy Giy Ser Gly Glv Glv
    Leu Gin Pro Thr Gin Gly .Ale
    Gin Arg Arg Ala Gly Gly Val
    Pne Leu Glu Val Ser Tyr Arg •Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
    Glu Gin Val Arg Lys lie Gin
    Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys
    Leu Leu Gly His Ser Leu Gly
    Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin
    Hus Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gly Xle Ser Pre Glu Leu Gly
    Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Leu Gly (SEQ lb HQ;170):
    Glu lie Xle His His Leu Lys Arg Pro Asn Asn Leu .Asn Asp Glu Asp Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Asn Leu Glu Asn A.ia Ser Gly He Gin Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Xle -.le ule Lys Ara Gly Asp Try Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Val Glu Giy Gly Gly Gly Ser Pro Ser Asn Met Ala Met Ala Pro .Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Leu Vai Ala Ser His Leu Gin Ser Vai. Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Leu Cys Hus Pro Glu Glu Leu Val Xle Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser ueu Ara Guy Cys Leu Ser Gin Leu Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Thr He Trp Gin Gin Met Glu Giu
    Asn Cys Ser Xle Met Xle Asp Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Val Sex Xle Leu Met Asp Arg Ser Phe Val .Arg Ala Vai Lys Guu Ala xle Leu Arg Asn Leu Ala Ala Pro Ser Arg His Pro Gin Giu Phe Arg Glu Lys Leu Gin .Ala Gin Giu Gin Gin Tyr Gly Glu Pro Ser Gly Pro lie Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Gin Arg Arg Ala Gly Gly val Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Ser Gly Gly Ser Gly Giy Ser G^u uln \<ai Arg uys Xue Gin uys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Leu Gly His Ser Leu Gly Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Hus Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gly Xle Ser Pro Glu Leu Gly Asp Val Ala Asn Phe Ala Thr Leu Gly (SEQ rb NO:171):
    Glu Xle He His His Leu Lys Arg Pro Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Asn Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Asn ueu Glu Asn Ala Ser Gly Xle Gin Pro Cys Leu Pro Ser .Ala Thr Xle lie xle Lys Ala Gly Asp Trp Thr Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Vai Glu Guy Gly Gly Gly Ser Pro Ser Thr lie Asn Pro Ser Pro Pro Pro Asn Met Ala Met Ala Pro Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Leu Val Ala Ser His Leu Gin Ser Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Gly Asp Gly .Ala Ala Leu Gin Glu Leu Cys His Pro Glu Giu Leu Val Xle Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Leu Ala u>ly Cys Leu Ser Gin Leu Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Thr He Trp Gin Gin Met Glu Glu
    Asn Cys .Ser Xle Met xle Asp Glu Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Val Ser He Leu Met Asp Arg Asn
    Xle Xle Kus His Leu Lys Arg Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu
    Ser Phe Val Arc Ale Val Lys Asn Glu Ala He Leu Arg Asn Leu Gin Ala Ale Pro Ser Arg His pre He Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Gin Ale Gin Gin Gin Gin Tyr Val Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Me* Pro λ1λ Phe Axe Ser Ala Phe Leu Val Ala Ser His Leu Gin Ser Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Gin Sei* Phe Leu Leu Lys Ser Leu Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val He Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu um -weu lítíií uln .Ala Leu Glu Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Thr Xie Trp Gin Gin Men Glu Glu Gin Pro 'SEQ ZD MO:172i;
    Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Pro Cys Leu pro Ser Ala Thr He He Lys Ala Gly Asu Trn Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Asn Met Ala Thr Gin Gly Ala Gxn Arg Arg Ala Gly Gxy Val Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Gin Val Arg Lys He Gin Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Leu Gly His Ser Leu Glv Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Has Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gly Xie Ser Pro Glu Leu Gly Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu
    Asn Cys Ser He Met He Asp Glu Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Val Ser Xie Leu Met Asp Arg Asn Ser Phe Vai Arg Ala Val Lys Asn GXu Ala He Leu Arg Asn Leu Gin Ala Ala Pro Ser Arg His Pro He Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Val Gly Glu Pro Ser Gly Pro Tie Ser Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro Met pro Al® »he Ala Ser Ala Phe Leu Val Ala Ser His Leu Gin Ser Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Gin Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu G-iy Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val He Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Thr Xie Trp Gin Gin Met Glu Glu Gin Pro (SEQ XD NO;173 J;
    He He His His Leu Lys Arg Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu A^eu Glu Asn Ala Ser Gly Tie Pro Cys Leu Pro Sex* Ala Thr Tie Tie Lys Ala Gly Asp Trp· Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Thr rle Asn Pro Sex* Pro Pro Asn Met Ala Thr Gin Gly Ala Gin Arg Arg Ala Gly Gly Val Phe Leu Glu Val Ser Tyr Are Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gau Gin Val Arg Lys Tie Gin Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Leu Gly His Ser Leu Gly Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Hrs Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gly He £er Pro Glu Leu Gly Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Lêü Gly Met Ala Pro Ala Leu
    Asn Cys Ser lie Met He Asp Glu Pro pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro Val Ser He Leu Met Asp Arg Asn Ser Phe Val Arg Ala val Lys Asn Gru Ala He Leu Arg Asn Leu Gin Ala Ala Pro Ser Arg His Pro He Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr Gin Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Vai
    He Tie His His Leu Lys Arg Asn Asn Leu Asn Asp Glu Asp Leu Arg Leu Pro Asn Leu Glu Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Pro Cys Leu Pro Ser Ala Thr Xie Xie Lys Ala Gly Asp Trp Phe Tyr Leu Val Thr Leu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Ser Pro
    Gly Gly Glv Ser Gly Gay Gly Arg Arg Al® Gly Gly Vai Leu Leu Glu Vai Ser Tyr Arc val Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gin Gin val Arg Lys xle Qin Gly Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Leu Gly Hie Ser Leu Gly lie v $6» G..*n .‘tia ueu Gin Leu Sex' Guy Leu Pne Leu Tvr Gin Xle Ser Pro Glu Leu Gly Pre val Ala Asp Phe Ala Thr Thr Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Phe .Ala I SEQ XL NO:177ϊ Ser Asn Met Ala Per Ala Phe Gin oSx. Hxs Leu Gjw-Γι Sex* Pile Leu Arg His Leu Ala Gin Pro Ser
    Ser Phe Leu Leu Lys Ser Leu Glu
    Asp Giy Aia Ala Leu GinG'v
    Cys Has Pro Giu Glu Leu VaiLeu
    Pro Trp Pro Leu ser SerCys
    Ala Gly Cys Leu Ser Gin LeuHis
    Gly Leu Leu Gin Ala Leu GluGlv
    Thr ^su Asp Thr Leu Gin Leu Asn o»le j-X'P Gm Gin Met Glu Glu Leu
    Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala
    Asn Cys Ser Xle Met Pro Pro Ala Pro Leu Vai Ser lie Leu Met Ser Phe Vai Arg· Ala Glu Am Xie Leu Arg Ala Ala Pro Ser Arg Gin Glu Phe Arg Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gly Glu pr>' Ser Gly Ser Lys Glu Ser His Arg Arg Ala Gly Gly Leu Glu Vai Ser Tyr Gly Gly Ser Gly Gly val Arg Lys ne Leu Cys Ala Thr Tyr Leu Gly His Ser Leu Px u Ser Gm Ata Leu Sax- Gly Leu Phe Leu He Ser Pro Glu Leu Vai Ala Asp Phe Ala Giy Met Ala Pro Ala Phe Ala (SEQ id n0;1
    Xle vslu Xue r <e Leu Asp Pro Asn Asn Asp Arg Asn Leu Arg ’Vai Lys Asn Leu Giu Asn Leu Gin Pro Cys His Pro Xle ih He Lys Leu Thr Phe Tyr Gin Tyr Vai Glu Gly Pro Xle Ser Thr He Lye Ser Pro Asn Met Vai Leu Vai Ala Ser Arg Vai Leu Arg His Ser Gin Ser Phe Leu Gin Gly Asp Gly Ala Lys Leu Cys His Pre Gly He Pro Trp Ala Gin Leu Ala Gly Cys Tyr Gin Gly Leu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Thr Xie Trp Gin Leu Gin Pro Thr Gin 75 j
    His Hie Leu Lys Arg Leu Asn Asp Glu Asp Leu Pro Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly Ha Leu Pro Ser Ala Thr Lys Ala Gly Aso Tro Leu Vai Thr Leu Glu Gly üly vly Ser Pro Asn Pro Ser Pro Pro Ala Ser Ala Phe Gin His Leu Gin Sex* Phe Leu Ala Gin Pro Ser Leu Lys Ser Leu Giu Ala Leu Gin Glu Lys Giu Glu Leu Vai Leu Pro Leu Ser Ser Cvs Leu Ser Gin Leu His Gin Ala Leu Glu Gly Tnr Leu Gin Leu Asp Gin Met Glu Glu Leu Gly Ala Met Pro Ala
    8ropro Ala pro V&1Ser He Leu Ser Phe Vai Arg Giu Ala He Leu Ala Ala Pro Ser Gin Glu Phe Arg Gin Ala Gin Glu Gly Gly Gly Ser His Pro Giu Trp Ala Pro Leu Gly Cys Leu Ser Leu Leu Gin Ala
    Met He Asp Glu Leu Leu Asp Prp· Met Asp Arg Asn Ala Vai Lys Asn Arg Asn Leu Gin Arg His Pro Xle Glu Lys Leu Thr Gin Gin Tyr Vai Giy Gly Gly Ser Leu Vai Leu Leu Ser Ser Cys Pro Gin Leu His Ser Leu Glu Gly He
    He He Hrs His Asn Asn Leu Asn Leu Arg Leu Pro Leu Glu Asn Ala Pro Cys Leu Pro Xle Xle Lys Ala Phe Tyr Leu Vai Glu wly Gly Gly Asn Met Ala Tyr Gly His Ser Leu Ser Gin Ala Leu Giy Leu Phe Leu Sex- Pro Giu Leu
    Leu Lys -Arg Asp Glu Asp Asn Leu Glu Ser Gly Hg Ser Ala Thr Gly Asp Trp Thr Leu Giu Gly Ser Pro Lys Leu Cys Gly He Pro Gin Leu Ala Tyr Gin Gly Gly Fro Thr
    Leu Asp Thr Leu Gin Lay’· Asp Vai Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Thr Gin Gly Ala Met Pre Ala Phe Ala Gly Gly Vai Leu Vai Ala Ser Vat Ser Tyr Arg Vai Leu Arg His Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Glu Gin Vai Arg Lys Tie Gin Glv Lys Leu Cys Ala Thr (SEC XL NO:1
    Ala Asp Phe Ala Thr Thr Xle Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro Ala Ser Ala Phe Gin Ara Ara His Leu Gin Ser Phe Leu Glu Leu Ala Gin Pro Thr Pro Leu Ser phe usu net, Lys Ser Leu asp uiy Ara Ala Leu Gin Glu 7 6);
    Asn Cys Ser lie Meo Pro Pro Ala Pro Leu Val Ser xle Leu Met Ser Phe Vai Arg Ala •Glu Ala Xle Leu Arg Ala Ala Pro Ser Arg GW ulu Pne Arg Glu Gin Ala Gin Glu Gin Gly Glu Pro Ser Gly Ser Lys Glu Ser Has Has Pro Glu Glu Leu Trp Ala Pro Leu Ser Gly Cys Leu Ser Gin Leu Leu Gin Ala Leu Leu Asp Thr Leu Gin Trp Gin Gin Met Glu Thr Gin Gly Ala Met Aia -Gly Gly val Leu. Vai Ser Tyr Arg Val Gly Pro Ala Ser Ser um Veil .Arg Lys Lys Leu Cys Ala Thr **8 Asp uxu xle Xze Leu Asp Pro Asn Asn Asp Arg Asn Leu Arg Vai Lys Asn Leu Glu Asn Leu Gin Pro Cys His Pro Xle He χχ§ Lys Leu Thr Phe Tyr Gin Tyr Vai Glu Glv Pro lie Ser Thr Xle Lys Ser Pro Asn Met Val Leu Leu Gly His Ser Cys Pro Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Glu Gly Ils Ser Pro Leu Asp Val Ala Asp Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Phe Ala Ser Val Ala Ser His Leu Leu Arg His Leu Ala Leu Pro Gin Ser Phe Xle Gin Gly Asp Glv (SEQ XL NO:177}·
    His His Leu Lys Arg Leu Asn Asp Glu Asp Leu Pro Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly lie Leu Pro Ser Ala Thr Lys Ala Gly Asp Trp Leu Val Thr- Leu Glu Gly Gly Gly Ser Pro Asn Pro Ser Pro Pro Ala Tyr Lys Leu Cys Ser Leu Gly Xle Pro Ala Leu Gin Leu Ala Phe Leu Tyr Gin Gly Glu Leu Gly Pro Thr Phe Ala Thr Thr He Pro Ala Leu Gin. Pro Ala Phe Gin Arg Arg Gin Ser Phe Leu Glu Gin Pro Thr Pro Leu Leu Leu Lys Ser Leu Ala A.i.a Leu Gin Glu g|Asn cys Ser Xle Met Xle Asp Glu 'W'Pro Pro Ala Pro Leu Leu Asp Pro
    Vax Ser xle Leu Met Asp Arg Asn
    Ser Phe Val Arg Ala Val Lys Asn
    Glu Ala Xie Leu Arg Asn Leu Gin
    ............A.t a....Aia...Pro Ser Arg Hi s Pro Tie' Gin Glu Phe Arg Glu Lys Leu Thr
    Gxn Ala Gin Glu Gin Gin Tyr Val
    Gly Glu Pro Ser Gly Pro lie Ser
    Ser Lys Glu Ser His Lys Ser Pro
    Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu
    Tnr lie Trp Gin Gin Met Glu Glu
    Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro
    Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val
    Leu Gin val Ser Tyr Arg Val Leu
    Leu Gly .Pro Ala Ser Ser Leu Ser Leu Glu Gin Val Arg Lys Xle
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    His His Leu Lys Arg Leu Asn Asp Glu Asp Leu Pro Asn Leu Glu Asn Ala Ser Gly He Leu Pro Ser Ala Thr Lys Ala Gly Asp Trp Leu Val Thr Leu Glu Gly Gly Gly Ser Pro Ala Ser Ala phe Gin His Leu Gin Ser Phe Leu Ala Gin Pro Thr Ser phe Leu Leu Lys Asp Gly Ala Ala Leu Cys His Pro Glu Glu Pro Trp Ala Pro Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gly Leu Leu Gin Ala Thr Leu Asp Thr· Leu Xie Trp Gin Gin Met Pro Thr Gin Gly Ala
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    MetA^aAsnCysSerZleMetllôAspGlullelleHísHisLeuLysAraProProAia ^oLeuLeuAspProAsnAsnLeuAsnAspGluAspValSerlleLeuMe^AspArQAsn ^LArgL^^ProAsnLeuGluSerPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAlis^r ^^^^«^^uAiaiieLeuArgAsnLeuGlnProCysLeuProSerAlaThrAlaAlaP^o 2SíCíg?XSír?l“?lelèeLysAlaG1yAs^TrP'31nGlü.PheArgGluLyslíeuThr c2^1^?^r't^;nrçeuSíu2^faGinGXuGlnQXWrVaiGluGlyGlyGXvGiv ^nroGlyuuuProSerGlyProXleSerlhrneAsnProserProProSerLvsG^u f^HisLysSerProAsi^etAlaSerAlaPbeGlnArgArgAlaGlyGlyValL^al a*v.Ser*nsLau<^nSerPheLeuGluValSerayrArgValLeuArgHi$LeuAlaG2r -^y^y^lyGlySerAspMetAlaThrProLeuGlyProAlaSerserLeuProGlnSe^· (l^s^suLeuLysSerL·euGluGlnValArgLysXleGlnGIyAspGlyAlaAlaLeuGΊn ^^^*yl-s^QTrpAlaProDeuSerSerCysProSerGlnAXaLeuGlnLeuAla ^yCysLeuSer^inLeuHisSerGlyDeuPheLeWrGlnGlyLeuDeuGlnAlaL^u Shí £Γ °G xuLeuGiyProThrLeuAsPThrL«vGlnLeuAspA^ lAlaAsp T^lyiSeSS^
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    ArgThrThrAlaHxsLysAspProAsn (SEQ Π> NC;23S1 ; θ 4 ^^nSSSS^eSX1^SP?XUHeI1®M®KiSííeWSArgFrO?roAlÃ^0 **-u~ç.uAspPrüÀsnAsnLeuAsnAspwluAspvalSe*-ilei,euJ4ecAspArqAsnLeu ArgxeuProAsnLeuGiuSarPheValArgAlaValLysAsnLeuGluAsnAliserGlv XleG XuAlal j, eLeuArgAsnLauG ln ProCysLeuPr ©SerAlaThr Ai aAl a Ετης#» 7 ArgHisPruixexXexx^ysAlaGlyAspTMlnGluPheAraGluLvsri^íSSf I?f,rpfU^f'1'*hr^euGiuGlljA*aG^nGluG*nGlnTyrValGlUGlyGlyQlvQiySs^oGAyduProSerGXyProIleSerThrXleAsnPraSerProProSerLvsG u<?pηΐ? ^Thexetme ^e^ValGlyGXySerThrLeuTysVaXArgGluPheGlv
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  14. 14, Proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 1, 2,
    3. 4, 5. 6, 7, 8, 10 ou 11, onde o dito fator de estimulação de colonia é selecionado do grupo consistindo em GM-CSF, G-CSF. G-CSF Serv lígante c~ mpl (TPO), M-CSF. entropoietina (EPO), IL-1, ÍL-4; IL-2, IL-3, IL-5S IL-6. IL-7,
    5 IL-8, IL-9. lt-10, IL-11, IL-12, IL-13. IL-15; LIF: iigante fí.i3/fík2, hormônio de crescimento humano, fator de crescimento de célula B. fator de diferenciação de célula B fator de diferenciação de eosinofiía, e fator d® célula haste (SCF).
  15. 15. Proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 14.
    10 onde o dito fator de estimulação de colonia é selecionado do grupo consistindo em G-CSF. G-CSF Ser17 e lígante c-mpl (TPÓ).
  16. 16, Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 1,
  17. 17, Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteína he-
    15 matopoiética de acordo com a reivindicação 2.
  18. 18, Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteína hematopoiètica de acordo com a reivindicação 3.
  19. 19, Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 4.
  20. 20. Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteins hematopoiétlca de acordo com a reivindicação 5.
  21. 21. Molecule de ácido nucléico codificando a dda proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 6.
  22. 22. Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 7.
  23. 23. Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 8.
  24. 24. Molécula de ácida nucléico codificando a dita proteína hematopoiética de acordo cam a reivindicação 9.
  25. 25. Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 10.
  26. 26. Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteína, hematopoiétíca de acordo com a reivindicação 11.
  27. 27. Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 12.
  28. 28. Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 13.
  29. 29. Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteína hematopoiétíca de acordo com a reivindicação 14.
  30. 30. Molécula de ácido nucléico codificando a dita proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 15
  31. 31. Molécula de ácido nucléico de acordo com a reivindicação
    27 selecionada do grupo consistindo em;
    51 Ύ V 151
    201
    25.1
    301
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    401
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    502
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    7vl
    752
    802
    903
    ATGGCTAACT ACCACCTGCA CTATCCTGÃT AGGGCTGTCÀ TAATCTCCAA C.AATCATCAT TTCTATCTGG isyiA-U
    ACAAGCTGTG ATCCCCTGGG AGGCTGCTTG TGCAGGCCCT CTGCAGCiGG AGAÀCTGGGA CC7TCGCCTC CATCTGCAGA GCAGCCCTCT TAGAGCAAGT CTGTGTGCCA
    GCTCTATAAT GATCGATGÂA CCWGCTGG ACCCGAÀCAA GGACGGAAAC CTTCGACTTC AGAACTTAGA AAATGCATCA CCATGTCTGC CCTCTGCGAC CAAGGCAGGT GACTGGCAAG TTACCCTTGA GCAAGCGCÀG TGCCCGGGTG GTQGTTCTGG CCACCCCGAC GAGCTGUTGC CTCCCCTGAG CTCCTGCCCC AGCCAACTCC ATAGCGGCCT GGAAGGGATA TCCCCCGAGT AGGTCGCCGA CTTTGCCACC ATGGCCCCTG CCCTGCAGCC TGCTTTCCAG CGCCGGGCAG GCTTCCTGGA GGTGTQGTAC GGCGGCTCTG GCGGCTCTCA GAGÀÀAGATC CAGGGCGATG CCTAATAA (SEQ W NO:9i
    ATTATACATC ACTTÀAAGAG CCTCAATGAC GAAGACGTCT CAAÀCGTGGA GAGCTTCGTA GGTATTGAGG CAATTCTTCG GGGCGCACCC TCTCGAGATO AATTCCGGGA AAAACTGACG GAACAACAGT ACGTAGAGGG CGGCGGCTCC AAGATOGCTT TGCTCGGACA CTCTCTGGGC AGCCAGQCCC TGCAGCTGGU TTTCCTCTAC CAGGGGCTCC TGGGTCCCAC CTTGGACACA ACCATCTGGC AGCAGÀTGGA CACCGAGGGT GCCATGCCGG GAGGGGTCCT GGTTGCTAGC CGCGTTCTAC GCCACCTTGC GAGCTTCCTG CTCAAGTCTT GCGGAGCGCT CCAGGAGAAG
    101
    152
    202
    251
    301
    351
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    551
    501
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    752
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    852
    901
    ATGGCTAACT GCTCTATÀAT GATCGATGAA ACCACCTGCA CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CTATCCTGAT GGACCGAAAC CTTCGACTTC AGGGCTGTCA ÂGAACTTAGA AAATGCATCA TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTG0CAAG TTCTATCTGG TTACCCTTGA GCAAGCGCAG CGGTGGAGGC TCOTGGGTG AACCQTCTGG CGTCTCCTCC GTCTÀAAGAA TCTCATAAAT CTGTGCCACC CCGÀGGAGCT GGTGCTGCTO CTGGGCTCCC CTGAGCTCCT GCCCCAGCCA GCTTGAGCCA ACTCCATAGC GGCCTTTTCC GCCCTGGAAG GGATATCCCC CGAGTTGGGT GCTGGACOTC GCCGACTTTG CCACCACCAT TGGGAATGGÇ CCCTGCCCTG CAGCCCACCC GccTCTGcrr tccascgccg ggcaggaggg GCAGAGCTTC CTGGAGGTGT CGTACCGCGT CCTCTGGCGG CTCTGGCGGC TCTCAGAGCT CAAGTGAGAA AGATCCAGGG CGATGGCGCA TGCCÀCCTAA TAA (SEQ ID NO;95);
    ATTATACATC CCTCAATGAC CAAACCTGGA GGTATTGAGG GGCCGCACCC ÀATTCCGGGA GAACAACAGT TCCAATCTCT CTCCAAACAT GGACACTCTC GGCCCTGCAG TCTACGAGGG CCCACCTTGG CTGGCAGCAG AQGGTGCCAT GTCCTGGTTG TCTACGCCAC TCCTGCTCAÀ GCGCTCCAGG
    ACTTAAAGAG GAAGACGTCT GAGCTTCGTA CAATTCTTCG TCTCGACATC ÀAAACTGACG ACGTAGAGGG ACTATCAACC GGCTTACAAG TGGGCATCCC CTGGCAGGCT GCTCCTGCAG ACACAGTGQA ATGGAAGAAC GCCGGCCTTC CTAGCCATCT CTTGCGCAGC GTCTTTAGAG AGAAGCTGTG.
    ATGGCTAACT
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    >C1
    Figure BRPI9610977A2_C0018
    801
    851 .901 agggctgtca
    TAATCTCCAA CAATCATCAT TTCTATCTGG CGGTGGAGGC CCGAGTTGGG GCCACCACCA GCAGCCCACC wGiaCAGGAGG TCGTACCGCG CTCTCAGAGC GCGATGGCGC CACCCCGAGG tcccctgagc GCCAACTCCA GAAGGGATAT
    GCTCTATAAT GATCGATGAA CCTTTGCTGG ACCCGAACAA GGACCGAAAC CTTCGACTTC AGÀACTTAGA AAATGCATCA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC CAAGGCAGGT GACTGGCAAG TTACCCTTGA GCAAGCGCAG TCCCCGGGTG GTGGTTCTGG TCCCACCTTG GACACACTGC TCTGGCAGCA GÀTGGAAGAA CAGGGTGCCA TGCCGGCCTT GGTCCTGGTT GCTAGCCATC TTCTACGCCA CCTTGCGCAG TTCCTGCTCA AGTCTTTAGA AGCGCTCCAG GAGAAGCTGT AGCTGGTGCT GCTCGGACAC TCCTGCCCCA GCCAGGCCCT TAGCGGCCTT TTCCTCTACC CCTAATAA (SEQ XD NO:9í
    ATTATACATC ACTTAAAGAG CCTCAATGAC GAAGACGTCT CAAACCTGGA GAGCTTCGTA ggtattgagg caattcttcg GGCCGCACCC TCTCGACATC ^ATTxCGuGA aaaactgacg gaacaacagt ACGTAGAGGG CGGCGGCTCC AACATGGCTC AGCTGGACGT CGCCGACTT’’’' CTGGGÀATGG CCCCTGCCCT CGCCTCTGCT TTCCAGOGCr TGCAGAGCTT CCTGGAGGTG ccctctggcg GCTCTGGCGG GCAAGTGAGA AAGATCCAGG GTGCCACCTA CAAGCTGTGC tctctgggca tcccctggg^ gcàgctggca GGCTGCT^GA AGGGGCTCCT GCAGGCCCTG
    SI
    101
    ATGGCTAACT accacctgca ctatcctgat
    1 1
    Figure BRPI9610977A2_C0019
    7^1
    301
    Figure BRPI9610977A2_C0020
    501
    AGGGCTGTCA TAATCTCCAA CAATCATCAT TTCTA^C^GG UksGTG G AGGC
    CGTCTCCTCC * a 1CLCA
    601
    651
    701
    751
    801
    8 51
    901951
    CA.CCATCTGG xx Au u X AGGG
    GGAGGGGTCC CCGCGTTCTA AGAGCTTCCT ggcgcagcgc
    CGAGGAGCTG
    TGAGCTCCTG ctcqatagcg. gatatcctaa
    GCTCTATAAT GATCGATGAA CCTTTGCTGG ACCCGAACAA GGACCGAAAC CTTCGAOTC agaacttaga AAATGCATCA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC caaggcaggt
    TTACCCTTGA fT f** <**<**<**<** r* r*íT« gtctaaagaa CCTTGGACAC AGCAGATGG
    TGCCATGCCG GCCTTCGCCT tggttgqtag ccatctgcag CGCCÀCCTTG CGCAGCCCTC GCTQAAGTCT TTAGAGCAAG TCCAGGAGAA GCTGTGTGCC GTGCTGCTGG GACACTCTCT CCCCAGCCAG GCCCTGCAGC GC.CTTTT.CCT CTACCAGGGG TAX (SEQ id NO:97};
    GACTGGCAAG GCAÀGCGCAG AACCGTCTGG TCTCATAAAT ACTGCÀGCTG aagaactggg
    ATTATACATC CCTCAATGAC CAAACCTGGA GGTATTGAGG GGCCGCACCC AATTCCGGGA GAACAACAGT TCCAATCTCT CTCCAAACAT GACGTCGCCG AÀTGGCCCCT CTGCTTTCCA agcttcctgg TGGCGGCTCT TGAGAAAGAT ACCTACàAGC GGGCATCCCC TGGCAGGCTG CTCCTGCAGG
    ACTTAAAGAG GAAGACGTCT gagcttcgta CAATTCTTCG TCTCGACATC aaaactgacg acgtagaggg ACTATCAACC GGCTCCCGAG ACTTTGCCAC GCCCTGCAGC GCGCCGGGCA aggtgtcgta ggcggctctc CCAGGGCGAT TGTGCCACCC TGGGCTCCCC CTTGAGCCAA CCCTGGAAGG
    301
    ATGGCTAACT ACCACCTGCA CTATCCTGAT AGGGCTGTCA TAATCTCCAA CAATCATCAT TTCTATCTGG CGGTGGAGGC
    GCTCTATAAT CCTTTGCTGG ggaccgaaac AGAACTTAGA CCATGTCTGC CAAGGCAGGT TTACCCTTGA TCCCCGGGTG
    GATCGATGAA acccgaacaa CTTCGACTTC AAATGCATCA CCTCTGCCAC gactggcaàg GCAAGCGCAG GTGGTTCTGG
    ATTATACATC CCTCÀATGAC CAAACCTGGA GGTATTGAGG GGCCGCACCC AATTCCGGGA GAACAACAGT CGGCGGCTCC
    ACTTAAAGAG GAAGACGTCT gagcttcgta CAATTCTTCG TCTCGACATC AAAACTGACG ACGTAGAGGG AACATGGCTA
    CTTCCTGGAÍ
    GCGGCTCTGC AGAAAGATCÍ
    GT ACC /'CJWSWS^ uilu
    AT CT’
    GAAGAACT
    ATGGCTAACT
    AGGGCGATGG
    CGCAGCGCTÍ AGGAGCTGGt AGCTCCTGCC
    TATCCCCCGA GACTTTGCCA
    TCAAGTCTTT
    GAGGAG AAGC
    GTTGGGTC
    401
    451
    501
    553
    601
    651
    TAATCTCCAA
    CAATCATCAT *y<cr<Q jAfri
    CGGTGGAGGC CGTCTCCTCC
    CCAGCGCCGG TGGAGGTGTC TCTGGCGGCT GATCCAGGGC
    -»Λ3ς_ i LA
    WkS
    801
    851
    GGACCGAAAC AGAACTTAGA CCATGTCTGC CÀAGGCAGGT TTACCCTTGA TCCCCGGGTG GTCTAAAGAA AGCCCACCCA GCÂGGAGGGG GTACCGCGTT CTCAGAGCTT GATGGCGCAG CCOGGAGGAG CCCTGAGCTC CAACTCCATA AGGGATATCC uTTCGACTTC
    AAATGCATCA
    GACTGGCÀAG gcaagcgcag AACCGTCTGG TCTCATAAAT GGGTQCCATG TCCTGGTTGC CTACGCCACC CCTGCTCAAG CGCTCCAGGA CTGGTGCTGC CTGCCCCAGC gcggcctttt CCCGAGTTGG
    TGCCACCACC TAA (SEQ ID NQ:99);
    ATTATACATC CCTCAATGAC CAAACCTGGA GGTATTGAGG GGCCGCACCC aattccggga GAACAACAGT TCCAATCTCT
    ACTTAAAGAG
    GAAGACGTCT
    GAGCTTCGTA
    951
    CCGGCCTTCG TAGCCATCTG TTGCGCAGCC TCTTTAGAGC GAAGCTGTGT TCGGACACTC CAGGCCCTGC CCTCTACCAG GTCCCACCTT ATCTGGCAGC
    TCTCGACATC AAAACTGACG ACGTAGAGGG ACTATCAACC GGCTATGGCC CCTCTGCTTT CAGAGCTTCC CTCTGGCGGC AAGTGAG AAA GCCACCTACA TCTGGGCATC AGCTGGCAGG gggctcctgc GGACACACTG AGATGGAAGA
    ATGGCTAACT
    GCTCTATAAT
    15.1
    301
    551
    801
    651
    701
    CTATCCTGAT AGGGCTGTCÀ TAATCTCCAA CAATCATCAT TTCT ATCTG CGGTGGAGGC CCCAGGGTGC GGGGTCCTGG CGTTCTACGC GCTTCCTGCT GCAGCGCTCC GGAGCTGGTG gctcctgccc CATAGCGGCG atcccccgag
    GGACCGAAAC AGAACTTAGA
    ATTATACATC CCTCAATGAC CAAACCTGGA GGTATTGAGG uATCGATGAA
    ACCCGAACAA CTTCGACTTC AAATGCATCA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC
    CAAGGCAGGT TTACCCTTGA TCCCCGGGTG CATGCCGGCC TTGCTAGCCA CACCTTGCGC CAAGTCTTTA AGGAGAAGCT CTGCTCGGAC CAGCCAGGCC TTTTCCTCTA TTGGGTCCCA
    GACTGGCAAG <3u.AAGuGCAG gtggttctgg TTCGCCTGTG
    AGCCCTCTGG GÂGCAAGTGA GTGTGCCACC ACTCTCTGGG CTGCAGCTGG CCAGGGGCTC CCTTGGACAC acttaaagag
    GAAGACGTCT gagcttcgta
    CAATTCTTCG
    TCTCGACATC
    ÀATTCCGGGA AAAACTGACG
    ACGTAGAGGG
    AACATGGCTA
    CCGGGCAGGA
    TGTCGTACCG
    GGCTCTCAGA
    GGGCGATGGC gccaccccga
    GCTCCCCTGA
    GAGCCAACTC
    TGGAAGGGAT gacgtcgccg
    GAACAACAGT CGGCGGCTCC CTTTCCAGCG TTCCTGGAGG cggctctggc GAAAGATCCA TACAAGCTGT CATCCCCTGG CAGGCTGCTT CTGCAGGCCC ACTGCAGCTG
    851
    901
    ACTTTGCCAC -CACCATCTGG CAGCAGATGG ÀAGAACTGGG
    GCCCTGCAGC CCTAATAA ÍSEQ ID NO :100),AATGGCCC;
    101
    151
    201
    401
    4 D J.
    501
    551
    601
    651
    701 *?ςΐ
    801
    851
    901
    S51.
    ATGGCTAACT GCTCTATAAT ACCACCTGCA CCTTTGCTGG CTATCCTGAT GGACCGAAAC AGGGCTGTCA AGAACTTAGA TAATCTCCAA CCATGTCTGC CAATCATCAT CAAGGCAGGT TTCTATCTGG TTACCCTTGA CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA GGTGCGATGC CQGCCTTCGC CCTGGTTGCT AGCCATCTGC TACGCCACCT TGCGCAGCCC CTGCTCAAGT CTTTAGAGCA GCTCCAGGAG AAGCTGTGTG TGGTGCTGCT CGGACACTCT TGCCCCAGCC AGGCCCTGCA CGGCCTTTTC CTCTACCAGG CCGAGTTGGG TCCCACCTTG GCCACCACCA TCTGGCAGCA GCAGCGCTAA TAA (SEQ ΣΙ
    GATCGATGAA ATTATACATC ACCCGAACAA CCTCAATGAC CTTCGACTTC CAAACCTGGA ÀAATGCATCA GGTATTGAGG CCTCTGCCAC GGCCGCACCC GACTGGCAAG AATTCCGGGA GCAAGCGCAG GAACAÀCAGT AACCQTCTGG TCCAATCTC^ TCTCATÀÀAT CTCCAAACAT CTCTGCTTTC CÃGCGCCGGG AGAGCTTCCT GGAGGTGTCG TCTGGCGGCT CTGGCGGCTC AGTGAGAAAG ATCCAGGGGG CCACCTACAA GCTGTGCCAC CTGGGCATCC CCTGGGGTCC GCTGGCAGGC TGCTTGAGCC GGCTCCTGCA GGCCCTGGAA GACACACTGC AGCTGGACGT GATGGÀAGAA CTGGGAATGG ’ NO;101);
    acttaaagag
    GAAGACGTOT
    GAGCTTCGTA CAATTCTTCG TCTCGACATC aaaactgacg ACGTAGAGGG ACTATCAACC GGCTACCCAG CAGGAGGGGT TACCGCGTTC TCAGAGCTTC ATGGCGCAGC CCCGAGGAGC COTGAGCTCC AACTCCATAG GGGATATCCC CGCCGACTTT CCCCTGCCCT
    101
    151
    201 v*.
    301
    351
    401
    451
    501
    551
    001
    651
    701
    751
    801
    851
    S01
    ATGGCTAACT GCTCTATAÂT ACCACCTGCA CCTTTGCTGG CTATCCTGAT GGACCGAAAC AGGGCTGTCA AGAACTTAGA TAATCTCCAA CCATGTCTGC CAATCATCAT CAAGGCAGGT TTCTATCTGG TTACCCTTGA CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG CTGCTTTCCA GCGCCGGGCA AGCTTCCTGG AGGTGTCGTA TGGGGGCTCT GGCGGCTCTC TGAGAAAGAT CCAGGGCGAT ACCTACAAGC TGTGCCACCC GGGCATCCCC TGGGCTCCCC TGGCAGGCTG CTTGAGCCAA CTCCTGCAGG CCCTGGAAGG CACACTGCAG CTGGACGTCG TGGAAGAACT GGGAATGGCC CCGGCCTTCG CCTAATAA (£
    GATCGATGAA ATTATACATC ACCCGAACAA CCTCAATGAC CTTCGACTTC CAAACCTGGA AAATGCATCA GGTATTGAGG CCTCTGCCAC GGCCGCACCG GACTGGCAAG AATTCCGGGA GCAAGCGCAG GAACAACAGT GTGGTTCTGG CGGCGGCTCC GGAGGGGTCC TGGTTGCTAG CCGCGTTCTA CGCCACCPTG AGAGCTTCCT GCTCAAGTCT GGCGCAGCGC TCCAGGAGAA CGAGGAGCTG GTGCTGCTCG TGAGCTCCTG CCCCAGCCAG CTCCATAGCG GCCTTTTCCT GATATCCCCC GAGTTGGGTC CCGACTTTGC CACCACCATC CCTGCCCTGC AGCCCACCCA :EQ TD NO; 102);
    ACTTAAAGAG GAAGACGTCT GAGCTTCGTA CAATTCTTCG TCTCGACATC AAAACTGACG ACGTAGAGGG AACATGGCTT CCATCTGCAG CGCAGCCCTC TTAGAGCAAG GCTGTGTGCC GACACTCTCT GCCCTGCAGC CTACCAGGGG CCACCTTGGA TGGCAGCAGA GGGTGCCATG
    PMON25191
    101
    ATGGCTAACT
    ACCACCTGCA
    CTATCCTGAT
    GCTCTATAAT GATCGATGAA
    CCTTTGCTGG ACCCGAACAA
    GGACCGAAAC CTTCGACTTC
    ATTATACATC ACTTA^AGAG CCTCAATGAC GAAGACGTCT CAAACCTGGA GAGCTTCGTA
    Figure BRPI9610977A2_C0021
    AGGGCTGTCA AGAACTTAGA AAATGCATCA GGTATTGAGC TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCACCC CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAG AATTCCGGGA TTCTAT.TTGG TTACCCTTGA GCAAGCGCAG GAACAACAGT CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCCAATCTCT CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA TCTCATAAAT CTCCAAACAT TTGGGTCCCA CCTTGGACAC ACTGCAGCTG GACGTCGCCG CACCATCTGG CAGCAGATGG AAGAACTGGG AATGGCCCCT CCACCCAGGG TGCCATGCCG GCCTTCGCCT CTGCTTTCCA GG-AGGGGTCC TGGTTGCTAS CCATCTGCAG AGCTTCCTGG CCGCGTTCTA CGCCACCTTG CGCAGCCCAC ACCATTGGGC CCCTGCCCCA GAGCTTCCTG CTCAAGTCTT TAGAGCAAGT CAGGGCGATG GCGCAGCGCT CCAGGAGAAG CTGTGTGCCA GTGCCACCCC GAGGAGCTGG TGCTGCTCGG ACACTCTCTG GGGCTCCCCT GAGCTCCTGC CCCAGCCAGG CCCTGCAGCT TTGAGCCAÀC TCCATAGCGG CCTTTTCCTC TACCAGGGGC CCTGGAAGGG ATATCCTAAT AA ÍSEQ ID NO:107)CAATTCTTCG
    TOTC G AC AT I AAAACTGACG ACGTAGAGGG actatcaacc
    ACTTTGCCAC GCCCTGCAGC •X λ V? 1 'i* W CCTGCCAGCT G AGAAAG AT C CCTACAAGCT
    GGCATCCCCT
    GGCAGGCTGC
    TCGTGCAGGC
    1 ATGGCTAACT GCTCTATAAT
    51 ACCACCTGCA CCTTTGCTGG 101 CTATCCTGAT GGACCGAAAC 151 AGGGCTGTCA AGAACTTAGA 2Cl TAATCTCCAA CCATGTCTGC 251 CAATOATCAT CAAGGCAGGT 301 TTCTA^CTGG TTACCGTTGA 3 51 CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG 401 CGTCTCCTCC GTCTÀAAGAA 451 TTCCAGCGCC GGGCAGGAGG 501 CCTGGAGGTG TCGTACCGCG 551 GCTCTGGCGG CTCTCAGAGC 601 AAGATCCAGG GCGATGGCGC 651 CAAGCTGTGC CACCCCGAGG 701 TCCCCTGGGC TCCCCTGAGC 7 51 GGCTGCTTGA GCCAACTCCA 801 GCAGGCCCTG GAAGGGATAT 851 TGCAGCTGGA CGTCGCCGAC .901 GAACTGGGAA TGGCCCCTGC 951 CTTCGCCTAA TAA (S£Q II
    GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGCTTCGTA AAATGCATCA GGTATTGAGG CAATTCTTCG CCTCTGCCAC GGCCGCACCC TCTCGACATC GACTGGCAAG AATTCCGGGA AAAACTGACG GCAAGCGCAG GAACAACAGT ACGTAGAGGG AACCGTCTGG TCCAATCTCT ACTATCAACC TCTCATAAAT CTCCAAACAT GGCTTCTGCT GGTCCTGGTT GCTAGCCATC TGCAGAGCTT TTCTACGCCA CCTTGCGCAG CCCTCTGGCG TTCCTGCTCA AGTCTTTAGA GCAAGTGAGA AGCGCTCCAG GAGAAGCTGT GTGCCACCTA AGCTGGTGCT GCTCGGACAC TCTCTGGGCA TCCTGCCCCA GCCAGGCCCT GCAGCTGGCA TAGCGGCCTT TTCCTCTACC AGGGGCTCCT CCCCCGAGTT GGGTCCCACC TTGGACACAC TTTGCCACCA CCATCTGGCA GCAGATGGAA CCTGCAGCCC ACCCAGGGTG CCATGCCGGC NO:.103) ;
    101
    151
    201
    251
    301
    351
    401.
    451
    501
    ATGGCTAACT GCTCTATAAT GATCGATGAA ru_C/iCCTuAA CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CTATCCTGAT GGACCGAAAC CTTCGACTTC AGGGCTGTCA AGAACTTAGA AAATGCATCA TAATCTCCAA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC CAATCATCAT CAAGGCAGGT GACTGGCAAG TTCTATCTGG TTACCCTTGA GCAAGCGCAG CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG GTGGTTCTGG ACAAGCTGTG CGACCCCGAG GAGCTGGTGC ATCCCCTGGG CTCCCCTGAG CTCCTGCCCC AGGCTGCTTG ÀGCCAACTCC ATAGCGGCCT
    ATTATACATC CCTCAATGAC CAAACCTGGA GGTATTGAGG GGCCGCACCC AATTCCGGGA GAACAACAGT CGGCGGCTCC TGCTCGGACA AGCCAGGCCC TTTCCTCTAC
    ACTTAAAGAG GAAGACGTCT GAGCTTCGTA CAATTCTTCG TCTCGACATC AAAACTGACG ACGTAGAGGG AACATGGCTT CTCTCTGGGC TGCAGCTGGC CAGGGGCTCC
    551
    601
    651
    7C1
    801 ®·
    901
    101
    151
    201
    251
    301
    351
    401
    451
    Ί
    S51
    601
    851
    701
    751
    801
    851
    901 aci
    5^
    101
    151
    201
    25'
    301
    351
    401
    451
    501
    551
    60.1
    651
    701
    751
    801
    851
    901
    951
    TGCAGGCCCI
    CTGCAGCTGG
    AGAACTGGGA
    ATGGCTAACT ACCACCTGCA CTATCCTGAT AGGGCTGTCA TAATCTCCAA CAATCATCAT bc λ vs
    C Cs y £C
    CTGTGCCACC CTGGGCTCCC GCTTGAGCCA '-yOw CTGGAAG
    GCTGGACGTC
    TGGGAATGGC
    GCCTCTGCTT
    GCAGAGCTTC CCACACCATT TCTTTAGAGC GAAGCTGTGT
    GGAAGGGATA TCCCCCGAGT ACGTCGCCGA CTTTGCCACC ATGGCCCCTG CCCTGCAGCC TGCTTTCCAG CGCCGGGCAG GCTTCCTGGA GGTGTCGTAC CCATTGGGCC CTGCCAGCTC agagcaagtg ágaaagatcc TGTGTGCCAC CTAATAA (SI
    TGGGTCCCAC CTTGGACACA ACCATCTGGC AGCAGATGGA CACCOAGGGT .GGCATGCCGG GAGGGGTCCT GGTTGCTÂGC CGCGTTCTAC GCrACCTTGC CCTGCCCCAG AGCTT0GTGO AGGGCGATGG CGCAGCGC^C :Q ID NO: 104) ;
    GCTCTATAAT GATCGATGAA ATTATACATC CCTTTGCTGG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GGACCGAAAC CTTCGACTTC CAAACCTGGA AGAACTTAGA ÀAATGCATCA GGTATTGAGG CCATGTCTGC CCTCTGCCAC GGCCGCACCC CAAGGCAGGT GACTGGCAAG AATTCCGGGA TTACCCTTGA GCAAGCGCAG GAACAACAGT TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCCAATCT^T gtctaaagàa TCTCATAAAT CTCCAA^CÍ? CCGAGGAGCT GGTGCTGCTC GGACACTCTC CTGAGCTCCT GCCCCAGCCA GGCCCTOcÃg ACTCCATAGC GGCCTTTTCC TCTACCAGGG GGATATCCCC CGAGTTGGGT CCCACCTTGG GCCGACTTTG CCACCACCAT CIGGCAGCAG OCCTGCCCTG CAGCCCACOC AGGGTGGCAT TCCAGCGCCG GGCAGGAGGG GTCCTGGTTG CTGGAGGTGT CGTACCGCGT TOTACGCCAC GGGCCCTGCC AGCTCGCTGC CCCAGAGCTT AAGTGAGAAA GATCCAGGGC QATGGCGCAG GCCACC7AAT AA (SEQ ID NO:105);
    ACTTAAAGAG
    GAAGACGTCT
    GAGCTTCGTA
    TCTCGACATC aaaactgacg ACGTAGAGGG ACTATCAACC GGCTTACAAG TGGGCATCCC CTGGCAGGCT GCTCCTGCAG ACACACTGCA ATGGAAGAAC GCCGGCCTTC CTAGCCATCT CTTGGGCAGC CCTGCTCAAG CGCTCCAGGA
    ATGGCTAACT GCTCTATAAT ACCACCTGCA CCTTTGCTGG CTÀTCCTGAT GGACCGAAAC AGGGCTGTCA AGAACTTAGA TAATCTCCAA CCATGTCTGC CAATCATCAT CAAGGCAGGT TTCTATCTGG TTACCCTTGA CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA CCTGCCCTGC AGCCCACCCA CCAGCGCCGG GCA.GGAGGGG TGGAGGTGTC GTACCGCGTT GGCCCTGCCA GCTCCCTGCC AGTGAGAAAG ATCCAGGGCG CCACCTACAA GCTGTGCCAC CTGGGCATCC CCTGGGCTCC GCTGGCAGGC TGCTTGAGCC GGCTCCTGCA GGCCCTGGAA GACACACTGC AGCTGGACGT GATGGAAGAA ctgggataat gatcgatgaa attatacatc ACCCGAACAA CCTCAATGAC CTTCGÀCTTC CAAACCTGGA AAATGCATCA GGTATTGAGG CuTCTGCCAC GGCCGCACCC GACTGGCA^G AATTCCGGGA GCAAGCGCAG GAACAACAGT AACCGTCTGG TCCAATCTCT TCTCATAAAT CTCCAAACAT GGGTGCCATG CCGGCCTTCG TCCTGGTTGC TAGCCATCTG CTACGCCACC TTGCGCAGCC CCAGAGCTTC CTGCTCAAGT ATGGCGCAGC GCTCCAGGAG CCCGAGGAGC TGGTGCTGCT CCTGAGCTCC TGCCCCAGCC AACTCCATAG CGGCCTTTTC GGGATATCCC CCGAGTTGGG CGÇCGAOTTT GCCACCACCA AA (SEQ ID NO:109);
    ACTTAAAGAG GAAGACGTCT GAGCTTCGTA CAATTCTTCG TCTCGACATC AAAACTGACG ACGTAGAGGG ACTATCAACC GGCTATGGCC CCTCTGCTTT CAGAGCTTCC CACACCATTG CTTTAGAGCA AAGCTGTGTG CGGACACTCT AGGCCCTGCA CTCTACCAGG Üf^í***?*^·^*
    TCTGGCAGCA
    Figure BRPI9610977A2_C0022
    atggdtaact gctctataat ACCACCTGCA CCTTTGCTGG CTATCCTGAT GGACCGAAAC AGGGCTGTCA AGAACTTAGA TÀATCTCCAA CCATGTCTGC CAATCATCAT CAAGGCAGGT TTCTATCTGG TTACC-CTTGA CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG CCCAGGGTGC CATGCCGGCC GGGGTCCTGG TTGCTAGCCA xACGC CACCTTGCGC TGCCCCAGAG CTTCCTGCTC GGCGATGGCG CAGCGCTCCA CCACCCCGAG GAGCTGGTGC CTCCCCTGAG CTCCTGCCCC AGCCAACTCC ATAGCGGCCT GGAAGGGATA TCCCCCGAGT ACGTCGCCGA CTTTGCCACC ATGGCCCCTG CCCTGCAGCC
    GATCGATGAÀ ATTATACATC ACTTAAAGaG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GAAGACGTCT CTTCGACTTC CAAACCTGGA GAGC^~GTA AAATGCATCA GGTATTGAGG CAATTcitCG CCTCTGCCAC GGCCGCACCC TCTCGACATC GACTGGCAAG AATTCCGGGÀ AAAACTGACG GCAAGCGCAG GAACAACAGT ACGTAGAGGG GTGGTTCTGG CGGCGGCTCC AACATGG^TA TTCGCCTCTG CTTTCCAGCG ccgggcagga TCTGCAGAGC TTCCTGGAGG TGTCGTACCG AGCCCACACC ÀTTGGGCCCT GCCAGCTCCC AAGTCTTTAG AGCAAGTGAG AAAGATCCAG GGAGAAGCTG TGTGCCACCT ACAAGCTGTG TGCTCGGACA CTCTCTGGGC ATOCCCTGGG AGCCAGGCCC TGCAGCTGGC AGGCTGCTTG TTTCCTCTAC CAGGGGCTCC TGCAGGCcA'r TGGGTCCCAC CTTGGACACA CTGCAGCTGG •nCCATCTGkjL. A«r^AGATGGA AGAACTGGGA CTAATAA (SSQ ZD NO i110);
    Figure BRPI9610977A2_C0023
    ATGGCTAACT GCTCTATAAT ACCACCTGCA CCTTTGCTGG CTATCUTGAT GGACCGAÀAC AGGGCTGTCA AGAACTTAGA TAATCTCCAA CCATGTCTGC CAATCATCAT CAAGGCAGGT TTCTATCTGG TTACCCT^GA CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA GGTGCCATGC CGGCCTTCGC CCTGGTTGCT AGCCATCTGC TACGCCAGCT TGCGCAGCCC CAGAGCTTCC TGCTCAAGTC TGGGGCAGCG CTCCAGGAGA CCGAGGAGCT GGTGCTGOTO CTGAGCTCCT GCCCCAGCCA ACTCCATAGC GGCCTTTTCC GGATATCCCC CGAGTTGGGT gccgactttg ccaccaccat CCCTGCCCTG CAGCCCTAAT
    GATCGATGAA ATTATACATC ACCCGAACAA CCTCAATGAC CTTCGACTTC CAAACCTGGA AAATGCATCA GGTATTGAGG CCTCTGCCAC GGCCGCACCC GACTGGCAAG AATTCCGGGA GCAAGCGCAG GAACAACAGT AACCGTCTGG TCCAATCTCT TCTCATAAAT CTCCAAACAT CTCTGCTTTC CAGCGCCGGG AGAGCTTCCT GGAGGTGTCG ACACCATTGG GCCCTGCCAG TTTAGAGCAA GTGAGAAAGA AGCTGTGTGC CACCTACAAG GGACACTCTC TGGGCATCCC GGCCCTGCAG CTGGCAGGCT TCTACCAGGG-GCTCCTGCAG CCCACCTTGG ACACACTGCA CTGGCAGCAG ATGGAAGAAC AA ÍSHQ ID NO:111};
    ACTTAAAGAG GAAGACGTCT GAGCTTCGTA caattcttcg TCTCGACATC AAAACTGACG AC GTAGAGGG ÀCTATCAACC GGCTAGCCAG CAi^^AGGGGT TACCGCGTTC CTCCCTGCCC TCCAGGGCGA CTGTGCCACC CTGGGCTCCC GCTTGAGCCA QCCCTGGAA.G GCTGGACGTC TGGGAATGGC
    101
    151
    201
    251
    301
    ATGGCTAACT
    ACCACCTGCA
    CTATCCTGAT AGGGCTGTCA TAATCTCCAA CAATCATCAT TTCTATCTGG
    GCTCTATAAT
    CCTTTGCTGG GGACCGAAAC AGAACTTAGA CCATGTCTGC CAAGGCAGGT TTACCCTTGA
    GATCGATGAA ACCCGAACAA CTTCGACTTC ÀAATGCATCA CCTCTGCCAC GACTGGCAAG GCAAGCGCAG
    ATTATACATC CCTCAATGAC CAAACCTGGA GGTATTGAGG GGCCGCACCC AATTCCGGGA GAACAACAGT
    ACTTAAAGAG GAAGACGTCT GAGCTTCGTA CAATTCTTCG TCTCGACATC AAAACTGACG ACGTAGAGGG
    Figure BRPI9610977A2_C0024
    601
    651
    701 «WJ jn .»,
    801
    8S1
    901 <.<FAG^AGGG tlcccgggtg gtggttctgg cggcggctcc aacatggcct CTGCTTTCCA GCGCCGGGCA GGAGGGGTCC TGGTTGCTAG CCATCTGCA·^ AGCTTCCTGG AGGTGTCGTA CCGCGTTCTA CGCCACCTTG CGCAGCTCAC ACCATTGGGC CCTGCCAGCT CCCTGCCCCA GAGCTTCCTG CTCAAGTCTT TAGAGCAAGT GAGAAAGATC CAGGGCGATG GCGCAGCGCT CCAGGAGAAG CTGTGTGCCA CCTACAAGCT GTGCCACCCC GAGGAGCTGG TGC^TCGG ACACTCTCTG GGCATCCCCT GGGCTCCCCT GAGCTCCTGC CCCAG^V'r u^CTvxA^Ul GGCAGGCTGC TTGAGCCAAC TCCATAGCGG CC’^TTT'”^TACCAGGGGC TCCTGCAGGC CCTGGAAGGG ATATCCCCCG AGTTGGGCT^ CACCTTGGAC ACACTGCAGC TGGACGTCGC CGACTTTGCC ACCACTATCT GGCAGCAGAT GGAAGAACTG GGAATGGCCC CTGCCCTGCA GC^w GGTGTCATGC CGGCCTTCGC CTAATAA (SEQ ID NO-F 7 . ~
    Figure BRPI9610977A2_C0025
    3S1
    401 ,* C 1 Mr T> >
    601
    851
    CTATCCTGAT AGGGCTGTCA TÀATCTCCAA CAATCATCAT TTCTATCTGG CGGTGGAGGC CGTCTCCTCC CTGTGCCACC CTGGGCTCCC GCTTGAGCCA GCCCTGGAAG GCTGGACGTC TGGGAATGGC GCCTCTGCTT »01
    851
    901
    Q
    CCGGCGGCGG
    CCCCAGAGCT
    CGATGGCGCA
    Figure BRPI9610977A2_C0026
    GCTCTATAAT A X -A UU X
    GGATCGAAAC AGAACTTAGA CCATGTCTGC CAAGGCAGGT TTACCCTTGA TCCCCGGGTG GTCTAAAGAA CCGAGGAGCT CTGAGCTCCT ACTCCATAGC GGATATCCCC GCCGACTTTG CCCTGCCCTG TCCAGCGCCG CTGGAGGTGT CTCTGACATG TCCTGCTCAA GCGCTCCAGG
    GATCGATGAA
    ACCCGAACAA
    CTTCGACTTC
    CCTCTGCCAC GACTGGCAAG GCAAGCGCAG AACCGTCTGG TCTCATAAAT GGTGCTGCTC GCCCCAGCCA GGCCTTTTCC CGAGTTGGGT CCACCACCAT CAGCCCACCC GGCAGGAGGG
    GCTACACCAT
    GTCTTTAGAG
    AGAAGCTGTQ
    ATTATACATC CCTCAATGAC CAAACCTGGA GGTATTGAGG GGCCGCACCC AATTCCGGGA GAACAACAGT TCCÀATCTCT CTCCAAACAT GGACACTCTC GGCCCTGCAG TCTACCAGGG CCCACCTTGG CTGGCAGCAG AGGGTGCCAT GTCCTGGTTG TCTACGCCAC
    CAAGTGAGGA
    TGCCACCTAA
    ACT? AAAGAG
    GAGCTTCGTA CAATTCTTCG TCTCGACATC AAAACTGACG ACGlagaggg ÀCTATCAACC GTCTTACAAG TGGGCATCCC CTGGCAGGCT GCTCCTGCAG ACACACTGCA ATGGAAGAAC
    CTAGCCATi
    CAGCTCCCTG
    AGATCCAGGG
    TAA (SEQ ID
    251
    351
    451 atggctaact ACCACCTGCA CTATCCTGAT AGGGCTGTCA TÀATCTCCAA CAATCATGAT TTCTATCTGG CGGTGGAGGC CGTCTCCTCC TTGGGTCCCA CACCATCTGG CCACCCAGGG GGAGGGGTCÇ CCGCGTTCTA CACCATTAGG
    GCTCTATAAT
    CCTTTGCTGG GGATCGAAAC AGAACTTAGA CCATGTCTGC CAAGGCAGGT TTACCCTTGA TCCCCGGGTG
    CCTTGGACAC CAGCAGATGG TGCCATGCCG TGGTTGCTAG CGCCACCTTG CCCTGCCAGC
    GATCGATGAA ACCCGAACAA CTTCGACTTC AAATGCATCA CCTCTGCCAC GACTGGCAAG GCAAGCGCAG AACCGTCTGG TCTCATAAAT ACTGCAGCTG AAGAACTGGG GCCTTCGCCT CCATCTGCAG
    TCCCTGCCCC
    ATTATACATC CCTCAATGAC CAAACCTGGA GGTATTGAGG GGCCGCACCC AATTCCGGGA GAACAACAGT tccaatctct CTCCAAACAT
    AATGGCCCCT CTGCTTTCCA AGCTTCCTGG CGGCGGCTCT AGAGCTTCCT
    ACTTAAAGAG GAAGACGTCT GAGCTTCGTA CAATTCTTCG TCTCGACATC AAAACTGACG ACGTAGAGGG ACTATCAACC GTCTCCCGAG ACTTTGCCAC GCCCTGCAGC GCGCCGGGCA AGGTGTCGTA GACATGGCTA GCTCAAGTCT
    51 TTAGAGCAAG δ01 GCTGTGTGCC 051 GACACTCTCT 901 GCCCTGCAGC Ο ζ “ - ^. i Λ ν'-Λωυ'οϋ
    NQ:. 156/ ;
    tgaggaagat AOC^ Ac* a αογ GGGCATCCCC
    CTCCTGCAGG
    CCAGGGCGAT x r<rv·*
    TGGGCTCCCC CTTGAGCCAA í^^A^m***** a* .«λ.
    Figure BRPI9610977A2_C0027
    GGCGCAGCCC
    CGAGGAGCTG TGAGCTCCTG CTCCATAGCG GATATCCTAA ΠΛ*·* ,*\a %*>e^x jmt Λ**^.^,***»^^^
    Xi2 1 %Jf *. vJ >** Λ. S»*
    CCCCAGCCÀG
    Figure BRPI9610977A2_C0028
    51 ACCACCTG101 CTATCCTGAT
    151 AGGGCTGTCA
    201 TAATCTCCAA
    251 CAATCATCAT 3 01 TTCTATCTGG
    351 CGGTGGAGGC
    4$.*
    451 TTCCAGCGCC
    501 CCTGGAGGTG
    551 GCTCTGACAT
    601 TTCCTGCTCA
    651 AGCGCTGCAG
    701 AGCTGGTGCT
    751 TCCTGCCCC'A
    801 TAGCGGCCTT 351 CCCCCGAGTT
    901 TTTGCCACC A
    951 CCTGCAGCCC
    GCTCTATAAT GATCGATGAA CCTTTGCTGG ACCCGAACAA GGATCGAAAC CTTCGACTTC AGAACTTAGA AAATGCATCA CCATGTCTGC CCTCTGCCAC CÀAGGCAGGT GACTGGCAAG TTÀCCCTTGA GCAAGCGCAG tccccgggtg aaccgtctgg GTCTAAAGAA tctcataaat GGGCAGGAG-G GGTCCTGGTT TCGTACCGCG TTCTACGCCA GGCTACACQA TTAGGCCCTG AGTCTTTAGA GCAAGTGAGG GAGAAGCTGT GTGCCACCTA GCTCGGACAC TCTCTGGGCA GCCAGGCCCT GCAGCTGGCA TTCCTCTACC AGGGGCTCC1? GGGTCCCACC TTGGACACAC CCATCTGGCA GCAGATGGAA ACCCAGGGTG CCATGCCGGC
    ATTATACATC AGTTAAAGAG CCTCAATGAC GAAGACGTCT CAAACGTGGA GAGCTTCGTA GGTATTGAGG CAATTCTTGG GGCCGCACCC TCTCGACATC AATTCCGGGA AAAACTGACG GAACÀACAGT ACGTAGAGGG TCCAATCTCT ACTATCAACC OTCCAAACAT GTCTTCTGCT GCTAGCCATC TGCAGAGCTt CCTTGCGCAG CCCGGCGGCG CCAGOTCCCT GCCCCAGAGC AAGATCCAGG GCGATGGCGC CAAGCTGTGC CACCCCGAGG TCCCCTGGGC TCCCCTGAGC GGCTGCTTGA GCCAACTCCA GCAGGCCCTG GAAGGGATAT TGCAGCTGGA CGTCGCCGAC GAACTGGGAA TGGCCCCTGC CTTCGGCTAA TAA; (SEQ
    1 ATGGCTAACT
    51 ACCACCTGCA
    101 CTATCCTGAT
    151 AGGGCTGTCA
    201 TAATCTCCAA
    251 CAATCATCAT
    301 TTCTATCTGG
    351 CGGTGGAGGC
    401 C GTCTCCTCC
    451 CCTGCCCTGC
    501 CCAGCGCCGG
    551 TGGAGGTGTC
    601 TCTGACATGG
    651 CCTGCTCÀAG
    701 CGCTCCAGGA
    751 CTGGTGCTGC
    801 CTGCCCCAGC
    851 GCGGCCTTTT
    901 CCCGAGTTGG
    951 TGCCACCACC XL NO:15S)
    GCTCTATAAT CCTTTGCTGG GGATCGAAAC AGAACTTAGA CCATGTCTGC
    CAAGGCAGGT TTACGCTTGA TCCCCGGGTG GTCTAAAGAA AGCCCACCCA GCAGGAGGGG GTACCGCGTT CTACACCATT TCTTTAGAGC GAAGCTGTGT TCGGACACTC CAGGCCCTGC CCTCTACCAG GTCCCACCTT ATCTGGCAGC
    GATCGATGAA ACCCGAACAA CTTCGACTTC AAATGCATCA CCTCTGCCAC GACTGGCAAG GCAAGCGCAG AACCGTCTGG TCTCATAAAT GGGTGCCATG TCCTGGTTGC CTACGCCACC AGGCCCTGCC aagtgaggaa GCCACCTACA TCTGGGCATC AGCTGGCAGG GGGCTCCTGC GGACACACTG AGATGGAAGA
    ATTATACATC CCTCAATGAC CAAACCTGGA GGTATTGAGG GGCCGCACCC AATTCCGGGA GAACAACAGT TCCAATCTCT CTCCAAACAT CCGGCCTTCG TAGCCATCTG TTGCGCAGCC AGCTCCCTGC GATCCAGGGC AGCTGTGCCA CCCTGGGCTC CTGCTTGAGC AGGCCCTGGA CAGCTGGÀCG actgggataa
    ACTTAAAGAG GAAGACGTCT GAGCTTCGTA CAATTCTTCG TCTCGACATC AAAACTGACG ACGTAGAGGG ACTATCAACC GTCTATGGCC CCTCTGCTTT CAGAGCTTCC CGGCGGCGGC CCCAGAGCTT gatggcgcag CCCCGAGGAG ccctgagctc CAACTCCATA agggatatcc TCGCCGACTT TAA; (SEQ
    1 ATGGCTAACT GCTCTATAAT SX ACCACQTGCA CCTTTGCTGG 101 CTATCCTGAT GGATCGAAAC 151 AGGGCTGTCA AGAACTTAGA .201 TAATCTCCAA CCATGTCTGC 251 CAATCATCAT CAAGGCAGGT 302 TTCTATGTGG TTACCCTTGA 351 CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG 401 CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA 451 GGTGCCATGC CGGCCTTCGC 502 CCTQGTTGCT AGCCATCTGC 552. TACGCCACCT TGCGCAGCCC 602 GGCCCTGCCA GCTCCCTGCC A 651 AGTGAGGAAG ATCCAGGGGG gp 701 CCACCTACAA GCTGTGCCAC 751 CTGGGCATCC CCTGGGCTCC 802 GCTGGCAGGC TGCTTGAGCC 852 GGCTCCTGCA GGCCCTGGAA 901 GACACACTGC AGCTGGACGT 951 GÀTGGAAGAA CTGGGAATGG ID NO: .15 9)
    GATCGATGAA ATTATACATC ACTTAAAGAG ACCCGAACAA CCTCAATGAC GÀAGACGTCT CTTCGACTTC CÀAACTGGA GAGCTTCGTA AAATGCATCA GGTATTGAGG CÀATTCTTCCCTGTGCCAC GGCCGCACCC TCTCGACAIT GACTGGCAAG AATTCCGGGA AAAACTGA^G GCAAGCGCAG GAACAACAGT ACGTAGAGGG AACCGTCTGG TCCAATCTCT ACTATCAACC TCTCATAAAT CTCQAAACAT GTCTACCCAG CTCTGCTTTC CAGCGCCGGG CAGGAGGGGT AGAGCTTCCT GGAGGTGTCG TACCGCGTTC GGCGGCGGCT CTGACATGGC TACACCATTA CCAGAGCTTC CTGCTCAAGT CTTTAGAGCA ÀTGGCGCAGC GCTCCAGGAG AAGCTGTGTG CCCGAGGAGC TGGTGCTGCT CGGACACTCT CCTGAGCTCC TGCCCCAGCC AGGCCCTGCA AACTCCATAG CGGCCTTTTC CTOTACCAGG GGGATATCCC CCGAGTTGGG TCCCACCTTG CGCCGACTTT GCCACCACCA TCTGGCÀGCA CCCCTGCCCT GCAGCCCTAA TAA; (SEQ
    JC^CTGCTQTATAATGATCGATGAAATTATACATCAOTAAAGAGACCACCTGCACC^ i^CTGGACCCGAACAACCTCAATGACGAAGACGTCTCTATCCTGATGGACCGAAACC^ ^3^GCAAT1'CTTCGT^tC7CCAACCATGTCTGCCCTCTGCCACGGCCGCACCCTCT
    C^t.AxCCAATCATCATCAAGGCAGGTGACTGGCAAGAATTCCGGGAAAA^TGACGTTC
    2™?Ií;^Tcctcotq^ccc'i^<»»ct=otgsaacccagcttcctccacas • 2rrhÃ7A'A0h2ACÃAGGA’rCCCAATGCCA’:’CTTCCTGAGCTT CAACAC''T3CTC ~;2^^2?®^ÍX^c<Kct^=TOC^KÍACCTCCGACTCCTCAGTAAACTG ^JS?WA T^CCAiGTCCT?CACAG^GACTGAGCCAGTGCCCAGAGGTTCACCCm’G
    S^pi^SJ^^J^^^^^^^^^^^^’^GCTTGGGAGAATGGAAAACCCAGATG
    GCAGCâCGGGGACAACTG (SEQ XD NO: 124);
    SS™^^Exa^tgatcgatgaaattata^cacttaaagagaccacctgcaccx 7X42 ‘ J^-^^^^^GT'TCGTAAGGGCTGTCAAGAACTTAGAAAATGCA-TCAGGT ;?n^C2^^CTTCOTÂATCTCCAACCATGTCTGCCCT CTGCCACGGCCGCACCCTCT 1?y1^21^p1™A;GAAGGCAGGTGA— ^^aattccgggaaaaactgacgttc 3 1 ~ GAGC^AGGGGA<3GAACAACAGTÀCGTAGAGGGCGGTGGAGGCTCr’ .E^^^^Z2^^GGJG^CTCTACTATCAACCCGTCTCCTCCGTCTAA^AATCÍ áiÈSEa^S“'™SS2SKSSSS5
    Figure BRPI9610977A2_C0029
    GS™SZ?^T^AT^TGATCGATGAAATTATA8ATCÀCTTAAAGAGAcr<ACC'PGCA^^ TTcfGTGGACCCG^CAACCTCAATGACGAA<GACGT'C«r^^ATZnl^aX IA11S Ü11Á coACTTee^^ctggagàgctt^^ ^2íg2E?^AA?wc^^TOTe^cc^^^cSESè£ÊSèââ?A5cA2-t2^v.x3AuaTuLj!*A’rCATCATCÀAGGCAGG’rGACTGGr,A“ rrj.«Λί^Λ<ί«- xuiUíURAw/iATTCCGGGAAAAACTGACG^^r 1^X1 l<ll??ílrG *1 u,?,kU'GAAGGGCAGGA4tdAACAGTACGTAGAGGGCGGT’GGAG<'''Tr,'::' UuurwLrlúrAACCGTCTGG^CPAhTf’*©'**’^·».Vru-^wAGvau.r^i. CATAAAT-TC--AAAÍ?Ar^2S:il^ltÍF^^CGTCTCCTCCGTCTAAAG^CT Ar,^ “ ^^S^SJCAwAuuAcAGCTCACÀAGGATCCCAATGCCATGTT^^TG ^^^^^ÍXl^l^SJl^^^^^-^^CCTGATGCTTGTAGGAGGGTCCACr ™lEi;;íll^HxlEGGCAACA^GCCTCTCCGGCGCeGCCTGOTG^O^l llíl?XT^TAAACTGOTcST^^CCCATCHtCC?TCACAGr’AGA^Ti:S{;l?i;;l l™^^AAAA^^^A^GGAG^G^GG&AGGQAQAGGACATTCTGGGACrArTar^l’'F>' ;““?®22^^CAGCACSGGGACMCT^CCÍ^^?M^ r^íSJSSr^^^^^^TC^CTTGGGGCCCTGCAGÃGC-TcAí?-?? ACuCAGCTTCCTCCACAG (SEQ ID NO: 126);
    ^11Α1^1^^11^·Λ·ΑΑ^*’λ^ΑΤ0«ίΛ»Τ0ΑΑΑΤΤΑΤΑ0ΑΤ0ΑΟΊΤΑΑΑ0ΑΟΑΓ’ΩΑ^ΌΤΓ''”Α'^^ΓΤ' * i ©uTGGÀCCCGAAGAArrTra 1
    CGACWCA^^rgtílI^iSiljJJ^^^MCCTGATeGACCGAAACCTT ^GAC^ ' * J?11A Cxa ‘ AAtó^GCT<?7CAAGAACTTAGAAAATGCATCAGGT
    Λ- - ^A^wu^TTCTTCGTAATCTCCAACr ATGTrTGr^rv^'Ff'^^ > ,~.211111tl _
    CGACATCCAATCÀTCATcaAGQrA^^rãr^^S,?!!!^^^’'^^'^^^^^^! TATCTGGTTXCCC^r ao^ã s -X—1111 Íl^CAAuAAT TC^GGGAAAAACTGACGTTC , ΛílllXG^^^^-^^^^^^^CAACAGTACGTAGAGGGCGGTGGAG^^Tru^wuGtGAACCGTCTGGT^AAΤΓ'ΤΓ'ΦΧ> Lu
    CATAAATCICCAAACATm^ -TGC-ll^lllrtlAZllX^ACAAGGA^CCAATGCCATCTTCCTGAGCTTCCAA-A·1 a SllllJ?^AAAGGTGCGTTTG^SATGCTTGTAGGAGGGTC^Arn^r;i lXS?ll^lS™OiCCCATG^OTCACAG^GACTGAGCCAGT^-^CAGAGG<TÍ?Sr uuTTT^CCTACACCTGTCCTGCTGCCTG^GTGGArwTar-^;lA171r?r2GGTTCAC LAGATGGAGGAGACCAAGGCACAQrrhr'Àí¥>!l©«,r,'^'^''i\?-'/*® λ»^α -^xsGAGAATGGAAAACC GTGA-toc'A©'·-Inlwll™ílGM*Ai x à wGGAGG^TGACCCTTCTGCTGGAGGGà ^^A^^u^GACAaC4 xaGGACCCACTTGCCT^TCATG^r^^^^r^r^r** TCTGGACAGGTCCGTCTCrT^r^rrn^r*©·^^; lllXͱAi ^^^--^etGGQAGCTT CCACAGGGCAGGACCACA (SEQ j|G^F^GA^AGCvT C™G^ACCCAGCTTCCT
    GCTAACTGCTCQATAATGATCGATGAAATT^TACATr a a a- a ~
    TTGCTGCACCCGMCAACCTCAATGASÃASÈ^^il^t^i^^1 CGACTTCCAAACCTGGAGAGr^^r^a^^íUiíX^TCC^ATGGACCGAAACCTT ATTGASGCAA^rirr^T^ ,11111Λ AAGGusuTGTCAílGAACTTAGAAAATGCATCAGGT CGÍSt^J?;À^fSMOTCC^CCATOTCTG^^^TGCCACGGCC^ACcí?r4.
    ^^X^^TuAAGGCAGGIGACTGGCAAGAATTCCGGGAAAAA^TCArr^r lÍxSTvjTTACCCT?^AGC.AAGCGCAGGAACAACÀG-írrTlÍÍr7Í5-SSÍFTTC CCC^GTGAACCGTCTGGTCCAAT^T^A^Ã^rÍS^Í^™í2ÍC^GTGGAGGCTCC vvAA1 _ ϊ _ Av CAACCCGTCTCCTCCGTCTAAAGAATCT
    CATAAATCTCCAA^C^ITuGATOCCAATGCCATCTTCCTGAGCTTCCAACACCTGCTCCGA
    GGAAltGGTvTCGTTTÇCT.GATGCTTGTAGGAGGGTCCACCCTCTGCGTCAGGGAATTCGGC GGCAACATGGCGTCTCCGGCGCCGCCTGCTTGTGACCTCCGAGTCCTCAGTAAAC^GC’T' CGTGACTCCCATGTCCTTCACAGCAGACTGAGCCAGTGCCCAGAGGTTCACCCTT«rGr<A* ACACCTGTCCTGCTGCCTGCTGTGGACTTTAGCTTGGGAGAATGGAAAACCCAGATGGAG GAGACCAAGGCACAGGACATTCTGGGAGCAGTGACCCTTCTGCTGGAGGGAGTGATGGCA GCACGGGGACAACTGGGACCCACTTGCCTCTCATCCCTCCTGGGGCAGC^^CTGGA^AG GTCCGTCTCC:<\7CTTGGGGCCCTGCAGAGCCTCCTTGGAACCCAGCTTCCTCCACAGGGC AGGACCACAGCTCACAAG {SEQ XD NO:128);
    1 ATGGCTAACT GCTCTAACAT
    GCCACCGCTG CCGCTGCTGG 201 atatcctaat ggacaataac 15X CGTGCTGTCA AGTCTCTGCA 201 ÀAATCTCCTG CCATGTCTGC 2 «o — c òa λ. c CATAT CAAGG ACGGT 301 TTCTATCTGA ÀAACCTTGGA 351 CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG 401 CGTCTCCTCC GTCTAAAGAA 451 GGTGCCATGC CGGCCTTCGC 501 CCTGGTTGCT AGCCATCTGC 551 TACGCCACCT TGCGCAGCCC 601 CTGCTCAAGT CTTTAGAGCA 651 GCTCCAGGAG AAGCTGTGTG 701 TGGTGCTGCT CGGACACTCT 75'1 TGCCCCAGCC AGGCCCTGCA 801 CGGCCTTTTC CTCTACCAGG 851 CCGAGTTGGG TCCCACCTTG 901 GCCACCACCA TCTGGCAGCA 951 GCAGCCCTAA TAA {SEQ XX
    GATCGATGAA ATCATCACCC ACCTGAAGCA ACTTCAACAÀ CCTCAATGGT GAAGACCAAG CTTCGTCGTC CAAACCTCGA GGCATTCAAC GAATGCATCA GCAATTGAGA GCATTCTTAA CGCTAGCCAC GGCCGCACCC ACGCGACATC GACTGGAATG AATTCCGTCG TAAACTGACC GAACGCGCAG GCTCAACAGT ACGTAGAGGG AACCGTCTGÜ TCCAATCTCT ACTATCAACC TCTCATAAAT CTCCAAACAT GGCTACCCAG CTCTGCTTTC CAGCGCCGGG CAGGAGGGGT AGAGCTTCCT GGAGGTGTCG TACCGCGTTC TCTGGCGGCT CTGGCGGCTC TCAGAGCTTC AGTGAGAAAG ATCCAGGGCG ATGGCGCAGC CCÀCCTACAA GCTGTGQCAC CCCGAGGAGC CTGGGCATCC CCTGGGCTCC CCTGAGCTCC GCTGGCAGGC TGQTTGAGCC AACTCCATAG GG-CTCCTGCA GGCCCTGGAA GGGATATCCC GACACAQTGC AGCTGGACGT CGCCGACTTT GATGGAAGAA CTGGGAATGG CCCCTGCCCT NO:114);
    1 ATGGCTAACT GCTCTAACAT
    51 GCCACCGCTG CCGCTGCTGG 10.1 ATATCCTGAT GGAAAATAAC 151 CGTGCTGTCA AGTCTCTGCA 201 AAATCTCCTG CCATGTCTGC 251 CAATCATCAT CCGTGACGGT 301 TTCTATCTGA AAACCTTGGA 351 CGGTGGAGGC TCCCCGGGTG 401 CGTCTCCTCC GTCTAÀAGAA 451 GGTGCCATGC CGQCCTTCGC 501 CCTGGTTGCT AGCCATCTGC 551 TACGCCACCT TGCGCAGCCC 601 CAGÀGCTTCC TGCTCAAGTC 651 TGGCGCAGCG CTCCAGGAGA 701 CCGAGGAGCT GGTGCTGCTC 751 CTGAGCTCCT GCCCCAGCCA 801 ACTCCATAGC GGCCTTTTCC 851 GGATATCCCC CGAGTTGGGT
    GATCGATGAA ATCATCACCC ACCTGAAGCA ACTTCAACAA CCTCAATGGT GAAGACCAAG CTTCGTCGTC CAAACCTCGA GGCATTCAAC GAATGCATCA GCAATTGAGA GCATTCTTAA CCCTGGCCAC GGCCGCACCC ACGCGACATC GACTGGAATG AATTCCGTCG TAAACTGACC GAACGCGCAG GCTCAACAGT ACGTAGAGGG AACCGTCTGG TCCAATCTCT ACTATCAACC TCTCATÀAAT ctccaaacat ggctacccag CTCTGCTTTC CAGCGCCGGG CAGGAGGGGT AGAGCTTCCT GGAGGTGTCG TACCGCGTTC ACACCATTGG GCCCTGCCAG CTCCCTGCCC TTTAGAGCAA GTGAGAAAGA TCCAGGGCGA AGCTGTGTGC CACCTACAAG CTGTGCCACC GGACACTCTC TGGGCATCCC CTGGGCTCCC GGCCCTGCAG CTGGCAGGCT GCTTGAGCCA TCTACCAGGG GCTCCTGCAG GCCCTGGAAG CCCACCTTGG ACACACTGCA GCTGGACGTC
    Figure BRPI9610977A2_C0030
    Figure BRPI9610977A2_C0031
    Xí ' ?·< :? c ' r » /“Ύ φΤϊ
    AxwuviAftU* GCCACCGCTG ATÀTCCTGAT CGTGCTGTCA ÀÀATCTCCTG
    Figure BRPI9610977A2_C0032
    Figure BRPI9610977A2_C0033
    GCTCTAACAT GATCGATGAA ATCATCACCC CCGCTGCTGG ACTTCAACAA CCTCAATGGT GGAAAATAAC CTTCGTCGTC CAAACCTCGA AGTCTCTGCA GAATGCATCA GCAATTGAGA CCATGTCTGC CCCTGGCCAC GGCCGCACCC CCGTGACGGT GACTGGAATG AATTCCGTCG AAACCTTGQA GAACGCGCAG GCTCAACAGT TCCCCGGGTG AACCGTCTGG TCCAATrTCT GTCTAAAGAA TCTCATAAAT CTCCAAACA*7' CGGCCTTCGC CTCTGCTTTC CAGCGCCGGG AGCCATCTGC AGAGCTTCCT GGAGGTG^G TGCGCAGCCC TCTGGCGGCT CTGGCGGCTC CTTTAGAGCA AGTGAGAAAG ATCCAGGGCG AAGCTGTGTG CCACCTACAA gctgtgccao cggacactct ctgggcatcc cctgggctc; AGGCCCTGCA GCTGGCAGGC TGCTTGAGCT CTCTACCAGG GGCTCCTGCA GGCCCTGGAA TXC2£CT11G gacacactgc agctggacgt T^T^ucAGcA. uATGGAAGAA CTGGGAATGG TAA (SEQ ID NO:116};
    λ. gaagaccaag GGGATT'CA X'*' GCATTCTTAA ACGCGACATC TAAAOTGACC ACGTAGAGGG ACTATCAACC ,*-*.*«: As 4.
    CAGGAGGGGT TACCGCGTTC TCAGAGCTTC ATGGCGCAGC CCCGAGGAGC CCTGAGCTCC AACTCCATAG GGGATATCCC CGCCGACTTT CCCCTGCCCT
    Figure BRPI9610977A2_C0034
    TTCTÀTCTGA
    CAGAGCTTCC TGGCGCAGCG CCGAGGAGCT CTGAGCTCCT
    GCTCTAACAT GATCGATGAA CCGCTGCTGG ACTTCAACAA GGACAATAAC CTTCGTCGTC AGTCTCTGCA GAATGCATCA CCATGTCTGC CGCTAGCCAC CAAGGACGGT GACTGGAATG AAÀCCTTGGA GAACGCGCAG TCCCCGGGTG AACCGTCTGG GTCTAAAGAA TCTCATAAAT CGGCCTTCGC CTCTGCTTTC AGCCATCTGC AGAGCTTCCT TGCGCAGCCC ACACCATTGG TGCTCAAGTC TTTAGAGCAA CTCCAGGAGÀ AGCTGTGTGC GGTGCTGCTC GGACACTCTC GCCCCAGCCA GGCCCTGCAG GGCCTTTTCC TCTACCAGGG CGAGTTGGGT CCCACCTTGG CCACCACCAT CTGGCAGCAG CAGCCCTAAT AA (SEQ ID
    ATCATCACCC ACCTGAAGCA CCTCAATGGT GAAGACCAAG CAAACCTCGA GGCATTCAAC gcaattgaga gcattcttaa GGCCGCACCC ACGCGACATC AATTCCGTCG TAAACTGACC GCTCAACAGT ACGTAGAGGG TCCAATCTCT ACTATCAACC CTCCAAACAT GGCTACCCAG CAGCGCCGGG CAGGAGGGGT GGAGGTGTCG TACCGCGTTC GCCCTGCCAG CTCCCTGCCC GTGAGAAAGÂTCCAGGGCGA CACCTACAÀG ctgtgccacc tgggcatccc ctgggctccc CTGGCAGGCT GCTTGAGCCA GCTCCTGCAG GCCCTGGAAG ACACACTGCA GCTGGACGTC TGGGAATGGC
    U ATGGCTCTGG u GGAC CGAAAC
    Au C C GAACAA
    CTTCGACTTC
    CCTCAATGAC CAAACCTGGA
    GAAGACGTCT gagcttcgta
    CTATCCTGAT agggctgtca
    Figure BRPI9610977A2_C0035
    AGAACTTAGA AAATGCATCA GGTATTGAGG CCATGTCTGC'CCTCTGCCAC GGCCGCACCC CAAGCCAGGT GACTGGCAAG AATTCCGGGA TTACCCTTGA GCAAGCGCAG GAACAACAGG ATAATGATCG ATGAAATTAT ACATCACTTA GTACGTAGAG GGCGGTGGAG GCTCCCCGGG CTACTATCAA CCCGTCTCCT CCGTCTAAAG ATGGCTACCC AGGGTGCCAT GCCGGCCTTC GGCAGGAGGG GTCCTGGTTG CTAGCCATCT CGTACCGCGT TCTACGCCAC CTTGCGCAGC tctcagagct tcctgctcaa gtctttagag CGATGGCGCA GCGCTCCAGG AGAAGCTGTG ACCCCGAGGA GCTGGTGCTG CTCGGACACT CCCCTGAGCT CCTGCCCCAG CCAGGCCCTG CCAACTCCAT AGCGGCCTTT TCCTCTACCA AÀGGGATATC CCCCGAGTTG GGTCCCACCT GTCGCCGACT TTGCCACCAC CATCTGGCAG GGCCCCTGCC CTGCAGCCCT AATAA (SEQ
    CAATTCTTCG TAATCTCCAA TCTCGACATC CAATCATCAT AAAACTGACG TTCTATCTGG
    AAGAGACCAC CTGCACCTTT TGAACCGTCT GGTCCAATCT AATCTCATAA ATCTCCAAAC GCCTCTGCTT TCCAGCGCCG gcagagcttc ctggaggtgt CCTCTGGCGG CTCTGGCGGC CAAGTGAGAA AGATCCAGGG TGCCACCTAC AÀGCTGTGCC CTCTGGGCAT CCCCTGGGCT CAGCTGGCAG GCTGCTTGAG GGGGCTCCTG CAGGCCCTGG TGutACACal-T gcagctggac CAGATGGAÀG AACTGGGAAT XT NO:86);
    101
    5 Ί
    Γΐ -ΐ
    Ku Gj wv
    251
    301
    401
    451
    501
    551 GUI
    Figure BRPI9610977A2_C0036
    75^
    801
    851
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    ATGGCTAATG TCTGCCCTCT CAGGTGACTG
    CTTGAGCAAG gatccatgaa ACCCGAACAA CTTCGACTTC ATACGTAGAG CTACTATCAA ATGGCTACCC GGCAGGAGGG CGTACCGCGT TCTCAGAGCT CGATGGCGCA ACCCCGAGGA CCCCTGAGCT CCAACTCCAT AAGGGATATC GTCGCCGACT GGCCCCTGCC
    CATCAGGTAT TGAGGCAATT GCCACGGCCG CACCCTCTCG GCAAGAATTC CGGGAAAAAC CGQAGGAACA ACAGGGTGGT ATTATACATC ACTTAAAGAG CCTCAATGAC GAAGACGTCT CAAACCTGGA GAGCTTCGTA GGCGGTGGAG GCTCCCCGGG CCCGTCTCCT CCGTCTAAAG AGGGTGCCAT GCCGGCCTTC GTCCTGGTTG CTAGCCATCT TCTACGCCAC CTTGCGCAGC TCCTGCTCAA GTCTTTAGAG GCGCTCCAGG AGAAGCTGTG GCTGGTGCTG CTCGGACACT CCTGCCCCAG CCAGGCCCTG AGCGGCCTTT TCCTCTACCA CCCCGAGTTG GGTCCCACCT TTGCCACCAC CATCTGGCAG CTGCAGCCCT AATAA (SEQ
    CTTCGTAATC TCCAACCATG ACATCCAATC ATCATCAAGG TGACGTTCTA TCTGGTTACC 'GGCTCTAACT GCTCTATAAT ACCACCTGCA CCTTTGCTGG CTATCCTGAT GGACCGAAAC AGGGCTGTCA AGAACTTAGA TGAACCGTCT GGTCCAATCT AATCTCATAA ATCTCCAAAC GCCTCTGCTT TCCAGCGCCG GCAGAGCTTC CTGGAGGTGT CCTCTGGCGG CTCTGGCGGC CAAGTGAGAA AGATCCAGGG TGCCACCTAC ÀAGCTGTGCC CTCTGGGCAT CCCCTGGGCT CAGCTGGCAG GCTGCTTGAG GGGGCTCCTG CAGGCCCTGG TGGACACACT GCAGCTGGAC CAGATGGAAG AACTGGGAAT ID NO;87);
    K ;
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    451
    ATGGCTGCAC AGAATTCCGG AGGÀACAACA ATACATCACT CAATGACGAA acctggagag ATTGAGGCAA GTACGTAGAG CTACTATCAA ATGGCTACCC
    CCTCTCGACA GAAAAACTGA GGGTGGTGGC TAAAGAGACC GACGTCTCTA
    CTTCGTAAGG
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    GCTGTCAAGA TCTCCAACCA GCTCCCCGGG CCGTCTAAAG GCCGGCCTTC
    ATCAAGGCAG GGTTACCCTT CTATAATGAT TTGCTGGACC CCGAAACCTT ACTTAGAAAA TGTCTGCCCT TGAACCGTCT AATCTCATAA GCCTCTGCTT
    GTGACTGGCA GAGCAAGCGC CGATGAAATT CGAACAACCT CGACTTCCAA TGCATCAGGT CTGCCACGGC GGTCCAATCT ATCTCCAAAC TCCAGCGCCG
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    CTTAAAGAGA
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    ID NO:90) ;
    ACCCGAACAA CCTCAATGAC CTTCGACTTC CAAACCTGGA ÀAATGCATCA GGTATTGAGG CCTCTGCCAC GGCCGCACCC GACTGGCAAG AATTCCGGGA GCAAGCGCAG GAACÀÀCAGG GTTCTAACTG CTCTATAATG CCÀCCTGCAC CTTTGTACGT GTCTGGTCCA ATCTCTACTA ATAAATCTCC AÀÀCÀTGGCT GCTTTCCÀGC GCCGGGCAGG CTTCCTGGAG GTGTCGTACC GCGGCTCTGG CGGCTCTCAG AGAAAGATCC AGGGCGATGG CTACAAGCTG TGCCACCCCG GCATCCCCTG GGCTCCCCTG GCAGGCTGCT TGAGCCAACT CCTGCAGGCC CTGGAAGGGA CACTGCAGCT GGACGTCGCC GAAGAACTGG GAATGGCCCC
    GAAGÀCGTCT CTATCCTGAT GAGCTTCGTA AGGGCTGTCA CAATTCTTCG TAATCTCCAA TCTCGACATC CAATCATCAT AAAACTGACG TTCTATCTGG GTGGTGGCTC TGGCGGTGGC ATCGATGAAA TTATACATCA AGAGGGCGGT GGAGGCTCCC TCAACCCGTC TCCTCCGTCT ACCCAGGGTG CCATGCCGGC AGGGGTCCTG GTTGCTAGCC GCGTTCTACG CCACCTTGCG AGCTTCCTGC TCAAGTCTTT CGCAGCGCTC CAGGAGAAGC AGGAGCTGGT GCTGCTCGGA AGCTCCTGCC CCAGCCAGGC CCATAGCGGC CTTTTCCTCT TA.TCCCCCGA GTTGGGTCCC GACTTTGCCA CCACCATCTG TGCCCTGCAG CCCTAATAA
    1 ÀTGGCTAATG CATCAGGTAT
    51 TCTGCCCTCT GCCACGGCCG 101 CAGGTGACTG GCAAGAATTC 151 CTTGAGCAAG CGCAGGAACA 201 CGGCGGTTCT AACTGCTCTA 251 ÀGAGACCACC TGCACCTTTG 301 GTCTCTATCC TGATGGACCG 351 CGTAAGGGCT GTCAAGAAOT 401 CGGGTGAACC GTCTGGTCCA 451 AAÀGAATCTC ATAAATCTCC 501 CTTCGCCTCT GCTTTCCAGC 551. ATCTGCAGAG CTTCCTGGAG 601 CAGCCCTCTG GCGGCTCTGG AGAGCAAGTG AGAAAGATCC 701 TGTGTGCCAC CTACAAGCTG 751 CACTCTCTGG GCATCCCCTG 601 CCTGCAGCTG GCAGGCTGCT
    TGAGGCAATT CTTCGTAATC TCCAACCATG CACCCTCTCG ACATCCAATC ÀTCATCAÀGG CGGGAAAAAC TGACGTTCTA TCTGGTTA^C ACAGGGTGGT GGCTCTGGCG GTGGCAGCGG TAATGATCGA TGAAATTATA CATCAC^TAA CTGGACCCGA ACAACGTGAA TGACGAAGAC ÀÀACCTTCGA CTTCCAAACC TGGAGAGCTT TÀGAATACGT AGAGGGCGGT GGAGGCTCCC ATCTCTACTA TCAACCCGTC TCCTCCGTCT AÀACATGGCT ACCCAGGGTG CCATGCCGGC GCCGGGCAGG AGGGGTCCTG GTTGCTAGCC GTGTCGTACC GCGTTCTACG CCACCTTGCG CGGCTCTCAG AGCTTCCTGC TCAAGTCTTT AGGGCGATGG CGCAGCGCTC CAGGAGAAG^ TGCCACCCCG AGGAGCTGGT GCTGCTCGGA GGCTCCCCTG AGCTCCTGCC CCAGCCAGGC TGAGCCAACT CCATAGCGGC CTTTTCCTCT
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    901 ACCTTGGACA
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    2S3™CTGCTC™AA'rG*'!'CGATGAAATTATACATCACTTAAArA<'».^r'-,^m*^»^ ttgctggacccgaacaacctcaatgacgaãgacgtc^SÍÍ1SSÍS?-Sctgcm:cÃw5Ssá^§SSSSS^SSS?SS^^^*«j^c^OT TATCTGGTOAS^IS'Sr^^^^LrrcCGGGaLAACTGACTC ‘b^^CAAGCG^GGAACAACAGTACGTAGAGGGCGGTGrarir Gi^^^CoAACCGTCTGG-rcCAATCTCTACTATCAA^C-rTrírr^^Xl. ^CTCC CATÀAATCTCCAAACATGGGACCCACTTGC^TrTr;SnSSJSSEGTCTAÀAGAATCT CàGGTCCGTCTCCT-”r^rrrrr^r'r^-?íx^SCATC'CTCCTGGGGCAGGTTTCTGGA
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    ttgctggacccgaacaacctcaatgacgaagacgtctctatcctgatggaccgaaacctt vtót iTu'~AAAt ^TGGAGAGC'TTCGTAAGGGCTGTCAAGAACTTAGAAAATG'/’ATCAGG’t' ATTGAGGCAATTCTTCGTAATCTCCAACCATGTCTGCCCTCTGCCACGGrrGCACCC^^ cgâcatqcaatcatcatcaaggcaggtgactggcaagaattccgggaaaaactgaggtt-z TATCTGGTTACCOTTGAGOAAGCGCAGGAACAACAGTACGTAGAGGGCGGTGGAGScTer CCGGGTGAACCGTCTGGTCCAATGTCTACTATCAACCCGTCTCCTCCGT^aaAGAA^ CATAAATCTCCAAACATGGGAACCCAGCTTCCTCCACAGGGCAGGACCACÃGI-Trkr^í
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    102
    GAATTCGGCGGCAACGGCGGCAACATGGCGTCCCCAGCGCCGCCTGCTTGTGACCTCCGA STCCTCAGTAAAeTGCTTCGTaACTCCCATGTCCTTCACAGCAGACTGAGCCAGTGCCCA GAGGTTCACCCTTTGCCTACACCTGTCCTGCTGCCTGCTGTGGACTTTAGCTTGGGAGAA TGGAAAACCCAGATGGAGGAGACCAAGGCACAwGACATTCTGGGAGCAGTGACCCTTfTTG CTGGAGGGAGTGATGGCAGCACGGGGACAACTGGGACCCACTTGCGTCTCATCCCTCCTG GGGCAGCTTTCTGGACAGGTCCGTCTCCTCCTTGGGGCCCTGCAGAGCCTCCTTGGAACC CAGCTTÇCTÇCACAGGGCAGGACCACA (SEQ ID NO :1515 ;
    GCTAACTGCTCTATAATGATCGATGAAATTATACATCACTTAAAGAGACCACCTGCACCT TrGCTGGACCCGAACAACCTCAATGACGAAGACGTCTCTATCCTGATGGACCGAAACC^ CGACTTCCAAACCTGGAQAGCTTCGTAAGGGCTGTGAAGAACTTAGAAAATGCATCAGGT ATTGAGGCAATTCTTCGTAATCTCCAACCATGTCTGCCCTCTGCCACGGCCGCACCCTCT CGACATCCAATCATCATCAAGGCAGGTGACTGGCAAGAATTCCGGGAAAAACTGACG^C TATCTGGTTACCCTTGAGCAAGCGCAGGAACAACAGTACGTAGAGGGCGGTGGAGGrTêr CCGGGTGAACCGTCTGGTCCAATCTCTACTATCAACCCGTCTCCTCCGTCr'AAAGAA^C’T’ CATAAATCTCCÀAACATGGATCCCAATGCCATCTTCCTGAGCTTCCAACAC^GCT^^GA ggaaaggtgcgtttcctgatgcttgtaggagggtccaccctctgcgtcagggaattcggc »íGLAACGGCGGCAACATGGCGTCCCCAGeGCCGCCTGCTTGTGACCTCCGAGTC'r^AG’TS ^^Cl^^^C^SgCC^CACASCAaACTSASCCASTGCCCaSASGA^Ar SG'-&G~^ArcSr^SSSS?2^3SACmASCWSGGAQAATGGAAAACC GAG * GGA^AusACOAAGu»uAuAGk» AUiTTuTGGGAGCAGTGACCCTTCTGCTGG aggg a ^IGATGGCAGCACGGGGACAACTGGGACCCACTTGCCTQTCATCCCTCCTGGGG^mrTT TCTGGACAGGTCCGTCTCCTCCTTGGGGCCCTGCAGAGCCTCCTTGGAAQCCAGCT^CCT CCACAGGGCAGGACCACAGCTCACAAG {SEQ XO NO: 152);
    ^JJè^JJCTCTATAATGATCGATGAAATTATACAl’CACTTAAAGAGACCACCTGCACCT lA^^J^ÍJ??2^J^Sj2'lAATGACGAAGACGTC-CTATCCTGATGGACCGAAACCT,r „ wAwAv,^TTCGTAAGG« * GTC AAGAACTTAGAAAATGCATCAGGT ‘ T AATC T CCAACOATGTCTGCCCTCTGCCACGGCCGCACGCTCT ^^1Í.1^^TEATCATCAAí3GCAGGTGACT'3í5CAAGaA.TTCCGGGAAAAACTGACGTTC ^^xQuTTACCCTTGAGCAÀGCGCAGGAACAACAGTACGTAGAGGGCGGTGGAGGCT^^
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    -S-TS^r^^^SAOTGGC^MWCCOTSJ^CTGAa^
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    103
    CATâAATCTCCAAACATGGATCCCMTGCCATCTTCCTGAGCTTCCA&CACCTGCTCCGA GGAAAGGTGCGTTTCCTGATGCTTGTAGGAGGGTCCACCCTGTGCGTCAGGGAATTCGGC GGCAA.CATGGCGTCTCCCGCTCOGCCTGCTTGTGÀÚOTCCGAGTCCTCAGTAXACTGCTT CGTGACTCCCATGTCCTTCACAGQÂGACTGAGCCAGTGCCCAGAGGTTCACCCTTTGCCT ACACCTGTCC-'GCTGCCTGCTGTGGACTTTAGCTTGGQAGAATGGAAAACCCAGATGGAG gagaccaaggcacaggacattctgggaggagtgaçccttctgctggagggagtgatggca GCACGGGSACAACTGGGACCCACTTGCCTCTCATGCCTCCTGGGGCAGCTTTCTGGACAG GTCCGTCTCCTCCTTGGGGCCCTGCAGAGCCTCCTTGGAACCCAGGGCAGGACCÀffAGCT CACAAG (SEQ ID NO:154).
  32. 32. Processo de produção de uma proteína hematopoíética compreendendo: crescimento sob condições nutrientes apropriadas, uma célula hospedeira transformada ou transfectada com um vetor replicável compreendendo uma molécula de ácido nuclèico, de acordo com as reívin-
    5 dicaçôes 16, 17, 16, 19. 20. 21. 22. 23, 24, 25, 25, 27, 28, 29. 30, 31, em uma maneira permitindo expressão da dita proteína hematopoíética e recuperação da dita proteína hematopoíética.
  33. 33. Composição farmacêutica compreendendo: a proteína hematopíética. de acordo com a reivindicação 1, 2, 3, 4, 5S 6, 7, 8, 10. 11, 12,
    10 13 ou 14, e um veícuio farmaceuticamente aceitável.
  34. 34. Processo de estimulação de produção de células hematopoiéticas em um paciente compreendendo a etapa de: administração de uma quantidade efetiva da proteína hematopoíética de acordo com a reivindicação 1, 2, 3, 4, 5, 6. 7,,8,10, 11, 12, 13 ou 14 ao dito paciente.
    15
  35. 35. Processo de estimulação da produção de células hematopoiéticas em um paciente compreendendo a etapa de; administração de uma quantidade efetiva da proteína hematopoíética, de acordo com a reivindicação 9. ao dito paciente.........................
  36. 36. Processo para expansão ex vivo seletiva de células haste, 20 compreendendo as etapas de:
    (a) separação de células haste de outras células;
    (b) cultura das ditas células haste separadas com um meio de cultura selecionado compreendendo; a proteína hematopoíética de acordo com a reivindicação 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 10, 11, 12, 13, ou 14: e
    25 (c) colheita das ditas células de cultura.
    104
  37. 37. Processo para expansão :ex vivo' seletiva de céluias haste, compreendendo as etapas de-.
    (a) separação de células haste de outras células;
    (b) cultura das ditas células haste separadas com um meio da cultura selecionado compreendendo: a proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 9: e (c) colheita das ditas células de cultura..
  38. 38 Processo para tratamento de um paciente tendo uma desordem hematopoiética. compreendendo as etapas de:
    (a) remoção de células haste;
    (b) separação de células haste de outras células;
    (c) cultura das ditas células haste separadas com um meio de cultura selecionado compreendendo; a proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7. 8, 10. 11. 12, 13 ou 14;
    (d) colheita das ditas células de cultura; e (e) transplante das ditas células de cultura no dito paciente.
  39. 39. Processo para tratamento de um paciente tendo uma desordem hematopoiética, compreendendo as etapas de;
    (a) remoção de células haste;
    (b) separação de células haste de outras células;
    (c) cultura das ditas células haste separadas com um meio de cultura selecionado compreendendo; a proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 9;
    (d) colheita das ditas células cultivadas; e...........
    (e) transplante das ditas células de cultura no dito paciente.
  40. 40. Processo de terapia de gene humano, compreendendo as etapas de:
    (a) remoção de células haste de um paciente;
    (b) separação das ditas células haste de outras células;
    (c) cultura das ditas células haste separadas com um meio de cultura selecionado compreendendo; a proteína hematopoiética de acordo com a reivindicação 1, 2. 3, 4, 5, 6. 7, 8. 10, 11, 12, 13 ou 14;
    »05 (d) introdução de ADN nas ditas células de cultura;
    (e) colheita das ditas células transduzidas; e (f) transplante das ditas células transduzidas no dito paciente.
  41. 41. Processo de terapia de gene humano, compreendendo as
    5 etapas de.
    (a) remoção de células haste de um paciente;
    (b) separação das ditas células haste de outras células;
    (c) cultura das ditas células haste separadas com um meio de cultura selecionado compreendendo; a proteína hematopoiética de acordo
    10 com a reivindicação 1,2. 3. 4. 5. 6, 7. 8, 10, 11. 12,13 ou 14;
    (d) introdução de ADN nas ditas células de cultura;
    (e) colheita das ditas células transduzidas: e (f) transplante das ditas células transduzidas no dito paciente.
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