BRPI9809791B1 - compostos imuno efetores de fosfato de aminoalquil glucosamina e composições compreendendo os mesmos - Google Patents
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Abstract
patente de invenção: <b>"compostos de fosfato de aminoalquil glucosamina e seu uso como auxiliares e imuno efetores''<d>. compostos de fosfato de aminoalquil glucosamina que são auxiliares e imuno efetores são descritos e são reivindicados. os compostos têm uma 2-desóxi-2-amino glicose em ligação glicosídica com um grupo aminoalquila (aglicona). compostos são fosforilados no carbono 4 ou 6 sobre o anel de glucosamina e compreendem três resíduos de 3-alcanoiloxialcanoíla. os compostos aumentam a produção de anticorpo em animais imunizados bem como estimulam a produção de citocina e macrófagos ativados. são também revelados métodos para o uso dos compostos como auxiliares e imuno efetores.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOS* TOS IMUNO EFETORES DE FOSFATO DE AMINOALQUIL GLUCOSAMI-NA E COMPOSIÇÕES COMPREENDENDO OS MESMOS".
Fundamentos da Invenção Imunidade mediada por célula e imunidade humoral são as duas principais ramificações da resposta imune de mamífero. Imunidade humoral envolve a geração de anticorpos para antígenos estranhos. Anticorpos são produzidos por linfócitos B. Imunidade mediada por célula envolve a ativação de linfócitos T que ou agem sobre células infectadas que portam antígenos estranhos ou estimulam outras células a agirem sobre células infectadas. Ambas as ramificações do sistema imune de mamífero são importantes no combate de doença. Imunidade humoral é a linha principal de defesa contra patógenos bacterianos. No caso de doença viral, a indução de linfócitos T citotóxicos (CTLs) parece ser crucial para imunidade protetora. Uma vacina eficaz estimula ambas as ramificações do sistema imune para se proteger contra doença.
Vacinas apresentam antígenos estranhos de agentes que causam doença a um hospedeiro de modo que o hospedeiro pode montar uma resposta imune protetora. Freqüentemente antígenos de vacina são formas mortas ou atenuadas dos micróbios que causam a doença. A presença de componentes não essenciais e antígenos nestas vacinas atenuadas ou mortas encorajou esforços consideráveis para refinar componentes de vacina incluindo o desenvolvimento de antígenos sintéticos bem definidos usando-se técnicas recombinantes e químicas. O refinamento e a simplificação de vacinas microbianas, no entanto, levaram a uma perda concomitante na potência. Antígenos sintéticos de baixo peso molecular, embora destituído de contaminantes potencialmente nocivos, não são eles próprios muito imuno-gênicos. Estas observações levaram investigadores a adicionar auxiliares a composições de vacina para potencializar a atividade dos componentes de vacina refinados.
Presentemente, o único auxiliar licenciado para uso humano nos Estados Unidos é alume, um grupos de sais de alumínio (por exemplo, hi- dróxido de alumínio, fosfato de alumínio) em que antígenos de vacina sâo formulados. Veículos em partículas como alume servem para promover absorção, o processamento e a apresentação de antígenos solúveis por ma-crófago. Alume, no entanto, não é sem efeitos colaterais e aumenta apenas a imunidade humoral (anticorpo).
Um auxiliar eficaz potencializa tanto uma resposta imune humoral quanto celular em animais vacinados. Além disso, um auxiliar deve aumentar uma resposta imune natural do hospedeiro e não agravar o sistema do hospedeiro. Um auxiliar sintético bem definido livre de matéria estranha que é estável e de fácil fabricação proveria estas qualidades. Compostos que foram preparados e foram testados quanto a auxiliaridade (Shimizu e outros, 1985, Bulusu e outros, 1992, Ikeda e outros 1993, Shimizu e outros, 1994, Shimizu e outros, 1995, Miyajima e outros, 1996), no entanto, fre-qüentemente exibem propriedades tóxicas, são instáveis e/ou têm efeitos imuno estimulatórios não substanciais. A revelação e o desenvolvimento de auxiliares eficazes é essencial para o aperfeiçoamento da eficácia e segurança das vacinas existentes. Auxiliares provêem, a antígenos de carboidrato e peptídeo sintético, imunogenecidade suficiente para assegurar o sucesso da abordagem de vacina sintética. Permanece uma necessidade de novos compostos tendo efeitos imunomodulantes potentes.
Sumário da Invenção Os compostos da presente invenção são compostos de fosfato de aminoalquil glucosamina (AGPs) que são auxiliares e imuno efetores. Um grupo aminoalquila (aglicona) está glicosidicamente ligado a uma 2-desóxi-2-amino-alfa-D-glucopiranose (glucosamina) para formar a estrutura básica das moléculas reivindicadas. Os compostos são fosforilados no carbono 4 ou 6 sobre o anel de glucosamina. Além disso, os compostos possuem três resíduos de 3-alcanoiloxialcanoíla.
Os compostos da presente invenção são moléculas imuno efeto-ras que aumentam a produção de anticorpo em animais imunizados, que estimulam a produção de citocina e que ativam macrófago. De acordo com a presente invenção, métodos para o uso destes compostos como auxiliares e imuno efetores como revelados.
Descrição Detalhada da Invenção Os compostos da presente invenção são moléculas auxiliares e imuno efetoras que são fosfatos de glucosamina de aminoalquila (AGPs). Os compostos compreendem uma 2-desóxi-2-amino-alfa-D-glucopiranose (glucosamina) em ligação glicosídica com um grupo aminoalquila (aglicona). Compostos são fosforilados no carbono 4 ou 6 sobre o anel de glucosamina e têm três resíduos de alcanoiloxialcanoíla. Os compostos da presente invenção são descritos em geral pela fórmula I, em que X representa um átomo de oxigênio ou de enxofre, Y representa um átomo de oxigênio ou grupo NH, "n", "m" e "q" são número inteiros de 0 a 6, Ri, R2 e R3 representam resíduos de acila graxa normais tendo de 7 a 16 átomos de carbono, R4 e R5 são hidrogênio ou metila, R6 e R7 são hidrogênio, hidróxi, alcóxi, fosfono, fosfonoóxi, sulfo, sulfoóxi, amino, mercapto, cia-no, nitro, formila ou carbóxi e seus ésteres e amidas; R8 e R9 são fosfono ou hidrogênio. A configuração dos centros 3' esterogênicos aos quais os resíduos de acila graxa normais estão ligados é R ou S, mas de preferência R. A estereoquímica dos átomos de carbono aos quais R* ou R5 está ligado pode ser R ou S. Todos os estereoisômeros, tanto enantiômeros quanto di-astereômeros, e suas misturas, são considerados cair dentro do escopo da presente invenção. O heteroátomo X dos compostos da presente invenção pode ser oxigênio ou enxofre. Em uma concretização preferida, X é oxigênio. Embora a estabilidade das moléculas pudesse ser efetuada por uma substituição em X, a atividade de imunomodulação de moléculas com estas substituições não é esperada mudar. O número de átomos de carbono entre o heteroátomo X e o átomo de nitrogênio de aglicona é determinado por variáveis "n" e "m" Variáveis "n" e "m" podem ser números inteiros de 0 a 6. Em uma concretização, o número total de átomos de carbono entre o heteroátomo X e o átomo de nitrogênio de aglicona é de cerca de 2 a cerca de 6 e mais de preferência de cerca de 2 a cerca de 4.
Os compostos da presente invenção são compostos de gluco-samina de aminoalquila que são fosforilados. Compostos podem ser fosfo-rilados na posição 4 ou 6 (R4 ou Rg) sobre o anel de glucosamina e são mais eficazes se fosforilados sobre pelo menos uma destas posições. Em uma concretização preferida, R8 é fosforo R9 é hidrogênio.
Os compostos da presente invenção são hexaacilados, que eles contêm um total de seis resíduos de ácido graxo. A porção de aminoalquil glucosamina é acilada nos grupos 2-amino e 3-hidroxila da unidade de glucosamina e no grupo amino da unidade de aglicona com resíduos de 3-hidroxialcanoíla. Na fórmula I, estas três posições são aciladas com porções de 3-hidroxitetradecanoíla. Os resíduos de 3-hidroxitetradecanoíla estão, por sua vez, substituídos com ácidos graxos normais (R1-R3), provendo três resíduos de 3-n-alcanoiloxitetradecanoíla ou seis grupos de ácido graxo no total. O comprimento de cadeia de ácidos graxos normais R1-R3 pode ser de cerca de 7 a cerca de 16 carbonos. De preferência, R1-R3 são de cerca de 9 a cerca de 14 carbonos. Os comprimentos de cadeia destes ácidos graxos normais podem ser iguais ou diferentes. Embora, apenas ácidos gra-xos normais sejam descritos, é esperado que ácidos graxos insaturados (isto é, porções de ácido graxo tendo ligações duplas ou triplas) substituídos em R1-R3 nos compostos da presente invenção produziríam moléculas biologicamente ativas. Além disso, leves modificações no comprimento de cadeia dos resíduos de 3-hidroxialcanoíla não são esperadas para dramaticamente afetar atividade biológica.
Os compostos da presente invenção são auxiliares e imuno efetores que aumentam a geração de anticorpo em animais imunizados, estimulam a produção de citocinas e estimulam uma resposta imune mediada por célula incluindo uma resposta de linfócito T citotóxica. Em métodos para efetuar a resposta imune de um indivíduo, os compostos da presente invenção podem ser formulados com um veículo farmaceuticamente aceitável para a injeção ou ingestão. Como usado aqui, "veículo farmaceuticamente aceitável" significa um meio que não interfere com a atividade imunomodu-ladora do ingrediente ativo e não é tóxico ao paciente para quem ele é administrado. Veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem emulsões de óleo em água ou de água em óleo, composições aquosas, lipossomas, mi-crocontas e microssomas.
Formulações dos compostos da presente invenção podem ser administradas parenteralmente, isto é, subcutaneamente ou intramuscular-mente incluem os seguintes veículos preferidos. Exemplos de veículos preferidos para uso subcutâneo incluem uma solução salina tamponada com fosfato (PBS) e trietanolamina a 0,01 - 0,1% em Água de USP para injeção. Veículos adequados para injeção intramuscular etanol de USP a 10%, pro-pileno glicol a 40% e o restante uma solução isotônica aceitável tal como dextrose a 5%. Exemplos de veículos preferidos para o uso intravenoso incluem etanol USP a 10%, propileno glicol USP a 40% e 0 restante de Água USP para injeção. Um outro veículo aceitável inclui etanol de USP a 10% e Água de USP para injeção; já um outro veículo aceitável é de 0,01 - 0,1 % de trietanolamina em Água de USP para injeção. Solventes parenterais farmaceuticamente aceitáveis são tal como prover uma solução ou uma dispersão pode ser filtrada através de um filtro de 5 micra sem remover o ingrediente ativo.
Exemplos de veículos para a administração via superfícies de mucosa dependendo da rota particular. Quando administrado oralmente, graus farmacêuticos de manitol, amido, lactose, estearato de magnésio, sa-carídeo de sódio, celulose, carbono de magnésio e semelhantes, com manitol sendo preferido. Quando administrado intranasalmente, polietileno gli-col ou glicóis, sacarose, e/ou metilcelulose, e conservantes tal como cloreto de benzalcônio, EDTA, podem ser usados, com polietileno glicóis sendo preferidos, e quando administrado por inalação, veículos adequados são polietileno glicol e glicóis, metilcelulose, agentes de distribuição e conservantes, com polietileno glicóis sendo preferidos.
Os compostos da presente invenção são administrados a um indivíduo em "uma quantidade eficaz" para efetuar ou aumentar a resposta imune do indivíduo. Como usado aqui, "uma quantidade eficaz" é aquela quantidade que mostra uma resposta sobre e acima dos controles negativos e veículo. A dosagem precisa dos compostos da presente invenção a ser administrada a um paciente dependerá do AGP particular usado, da rota de administração, da composição farmacêutica e do paciente. Por exemplo, quando administrado subcutaneamente para aumentar uma resposta de anticorpo, a quantidade de AGP usado é de 1 a cerca de 250 microgramas, de preferência de cerca de 25 a cerca de 50 microgramas com base na administração a um paciente adulto de 70 kg típico.
Em composições de vacina, os AGPs da presente invenção são administrados a um animal de sangue quente, incluindo ser humano, com um antígeno. A quantidade de antígeno administrada para eliciar uma resposta desejada pode ser prontamente determinada por aquele versado na técnica e variará com o tipo de antígeno administrado, a rota de administração e o programa de imunização. Por exemplo, 0,2 pg de toxóide de tétano administrado com os compostos reivindicados subcutaneamente a um ca-mundongo em duas imunizações com intervalos de 21 dias eliciaram uma resposta imune humoral àquele antígeno.
Os compostos da presente invenção são sintetizados por acoplamento de um aminoalcanol ou aminoacanotiol (unidade de aglicona) N-protegido ou N-aciloxiacilado com uma unidade de glucosamina adequadamente protegida e/ou 3-O-aciloxiacilada. Em um método preferido para a preparação dos compostos da presente invenção (esquema 1), um haleto de glicosila 1 de N-(2,2,2-tricloroetoxicarbonil (Troc))-protegido (Z = F, Cl, Br) é acoplado com um N-[(r)-3-n-alcanoiloxitètradecanoil]aminoal-canol ou tiol 2 (processando R6 e R7 em forma adequadamente protegida) via uma reação de tipo Koenigs-Knorr na presença de sais de prato ou de mercúrio para dar intermediário glicosídeo 3. De preferência, a unidade de glucosamina 1 possui um átomo de cloreto anomérico (Z = Cl), e o catalisador de acoplagem é trifluorometanossulfonato de prata. Intermediário 3 pode ser preparado por acoplamento da unidade de aglicona 2 com um acetato de glicosila N-troc-protegido (Z = OAc) ou derivado ativado correlato na presença de um ácido de Lewis tal como eterato de trifluoreto de boro. Por "ativado" quer dizer tendo um grupo de saída deslocável apropriado "Z" ligado ao centro anomérico da unidade de glucosamina. Unidade de glucosamina 1 porta um resíduo de (R)-3-n-alcanoiloxitetradecanoíla na posição 3, e grupos de proteção adequados nas porções de 6-hidroxila e de 4-fosfonato. Grupos de proteção típicos do grupo fosfato incluem, mas não são limitados a, fenila, benzila e o-xilila. O grupo de fosfato é protegido de preferência com dois grupos fenila. A posição 6 pode ser temporariamente protegida por grupos de bloqueamento comumente usados na química de açúcar tais como ésteres de silila, de benzila, ou de benziloximetila ou, al-temativamente um carbonato de alquila. O grupo 6-hidroxila é protegido de preferência como um carbonato de 1,1-dimetil-2,2,2-tricloroetila (TCBOC). O(s) grupo(s) de proteção com base em tricloroetila no produto acoplado Koenigs-Knorr 3 são removidos com zinco e o nitrogênio de glucosamina é seletivamente acilado com um ácido (R)-3-n-alcanoiloxitetracanóico 4 na presença de um reagente de acoplamento adequado para dar o derivado de hexaacilado 5. Os grupos de proteção restantes em 5 são então clivados por hidrogenação catalítica na presença de um catalisador de paládio ou de platina ou por outros meios apropriados para dar compostos da fórmula (I).
Um material de partida adequado para a síntese de um doador de glicosila 1 é 2-(trimetilsilil)etil 2-amino-2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-beta-D-glucopiranosídeo que pode ser preparado a partir de cloridrato de D-glucosamina comercialmente disponível usando-se procedimentos publicados. A conversão do material de partida de 2-(trimetisilil)etil glicosídeo em doador de glicosila 1 pode ser conseguida por métodos conhecidos na técnica ou suas modificações que são descritos aqui. A unidade de aglicona 2 pode ser preparada por N-aciloxiacilação de materiais de partida comercialmente disponíveis com um ácido (R)-3-n-alcanoiloxitetradecanóico 4, ou materiais de partida de N-aciloxiacilação que podem ser obtidos por métodos conhecidos na literatura química. Alternativamente, o resíduo de N-aciloxiacila em 2 pode estar substituído com um grupo de proteção de amina apropriado que é removido subseqüente à reação de acoplamento tal como é descrita na segunda concretização preferida abaixo.
Em um segundo método preferido para a preparação dos compostos da presente invenção (esquema 2), introdução dos grupos (R)-3-n-alcanoiloxitetradecanoíla e fosfato nas unidades de glucosamina e de aglicona é realizada subsequente à reação de glicolisação (acoplagem) usando-se grupos de proteção N e O adequados para a diferenciação química dos grupos amino e hidroxila presentes. De preferência, o doador de glicosila N-Troc-protegido 6 é acoplado com um aminoalcanol ou tiol 7 N-aliloxicarbonila (AOC)-protegido na presença de um catalisador apropriado para dar o beta-glicosídeo de aminoalquila 8. Mais de preferência, o doador de glicosila 6 possui um grupo acetóxi anomérico (Z = OAc), e um catalisador de acoplamento é eterato de trifluoreto de boro. Outros grupos de proteção N para o grupo aglicona incluem, mas não são limitados a, carbamatos comumente empregados óbvio por aquele versado na técnica tais como t-butila (t-BOC), benzila (Cbz), 2,2,2-tricloroetila (Troe), e 9-fluorenilmetila (Fmoc).
Clivagem induzida com base nos grupos acetatos no produto de acopalmento 8 e formação de 4,6-acetonida sob condições padrão conhecidos na técnica dá intermediário 9. 3-O-Acilação de 9 com ácido (R)-3-n-alcanoiloxitetradecanóico 4, seguido por remoção mediada por paládio(O) do grupo agiicona N-AOC e N-acilação com ácido (R)-3-n-alcanoiloxitetradecanóico 4 provê intermediário 10. Funcionalização e hidró-lise de acetonida e das posições 4 e 6 como descrita aqui para a preparação do doador de glicosila 1 dá intermediário (Y=0) que é então processado como no esquema 1 para fornecer compostos da fórmula geral (I). A presente invenção é ulteriormente por meio dos seguintes exemplos de teste e exemplos não limitantes que são dados para as finalidades ilustrativas apenas. É importante observar que a introdução dos grupos (R)-3-n-alcanoiloxitetradecanoíla e o(s) grupo(s) fosfato(s) nas unidades de agiicona e glucosamina não necessariamente tem de ser realizada na ordem mostrada nos esquemas 1 e 2 ou descritos nos exemplos mostrados abaixo.
Esquema 1 Esquema 2 Exemplos 1-29 descrevem métodos de fabricação dos compostos de AGP da presente invenção. Exemplos de teste 1-7 descreve ensaios conduzidos para se determinar a imunogenicidade destes compostos. A tabela 1 lista a composição química e números de referência experimentais de cada composto nestes exemplos.
Tabela 1 Exemplo Ref. N° R1-R3 η P R6 q 1 2 BI* n-Ci3H215CO 0 1 OH 0 3 B2** n-Ci3H215CO 0 1 OH 0 4 B3 n-CnH23CO 0 1 OH 0 5 B4 n-C10H21CO 0 1 OH 0 6 B5 n-Ci9H119CO 0 1 OH 0 7 B6*** n-Ci9H119CO 0 1 OH 0 8 B7 n-C8Hi5CO 0 1 OH 0 9 B8 n-C6H13CO 0 1 OH 0 10 B9 n-C9H219CO 1 1 OH 0 11 B10 n-C9H19CO 0 2 OH 0 12 B11 n-Ci3H27CO 0 1 C02H 0 13 B12 n-CnH23CO 0 1 COzH 0 14 B13 n-Ci0H21CO 0 1 C02H 0 15 B14** n-C9H19CO 0 1 C02H 0 16 B15 n-C9H19CO 0 1 C02H 0 Tabela 1 - continuação Exemplo Ref. N° R1-R3 η P R6 q 17 B16 n-C8Hi7CO 0 0 C02H 0 18 B17 n-C7Hi5CO 0 0 COzH 0 19 B18 n-C6H13CO 0 0 C02H 0 20 B19 n-C13H27CO 0 0 H 0 21 B20 n-C9Hi9CO 0 0 H 0 22 B21 n-Ci3H27CO 1 0 H 0 23 B22 n-Ci3H27CO 2 0 H 0 24 B23 n-Ci3H27CO 4 0 H 0 25 B24 n-Ci3H27CO 0 0 CONH2 0 26 B25 n-C9H19CO 0 0 CONH2 0 27 B26 n-Ci3H27CO 0 0 C02ME 0 28 B27 n-Ci3H27CO 0 0 H 1 29 B28 n-C9H19CO 1 0 H 1 *Para todos os exemplos mostrados:_X=Yf O; R4 = R5 = H; m = O; R8 = fosfono; Rg = H. * a estereoquímica do átomo de carbono ao qual R5 está ligado é S. ** a estereoquímica do átomo de carbono ao qual R5 está ligado é R. *** R8 é H e R9 é fosfono. EXEMPLO 1 Preparação de ácidos (R)-3-n-alcanoiloxitetradecanóico (4). (1) Uma solução de metil 3-oxotetradecanoato (19 g, 0,074 mol) em MeOH (100 ml) foi desgaseificada por pulverização com argônio (15 min). [(R)-Ru(Binap)CI]2-NEt3, catalisador (0, 187 g, 0,111 mmol) e HCI aquoso a 2 N (0,5 ml) foram adicionados na mistura resultante foi hidroge-nada a (60 psig) (4,2 kg/cm2 macrométricos) e 40-50-0 por 18 h. A reação foi diluída com hexanos (250 ml), foi filtrada através de uma coluna curta de sílica gel, e foi concentrada. O produto bruto foi dissolvido em tetrahidrofu-rano (THF; 200 ml), LiOH aquoso a 2,4 N. (83 ml, 0,2 mol) e foi agitado vigorosamente a temperatura ambiente por 4 h. A lama resultante foi separada entre éter (200 ml) e HCI aquoso a 1 N (200 ml) e e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com éter (100 ml) e os extratos eterais combinados foram secos (Na2S04) e foram concentrados. O ácido hidróxi bruto foi dissolvido em acetonitrila quente (250 ml), foi tratado com diciclo-hexilamina (DCA; 17 ml, 0,085 mol) e foi tratado a 60°C por 1 h. O produto que se cristalizou após o resfriamento foi coletado e foi recristalizado a partir acetonitrila (650 ml) para fornecer 28,6 g (91%) de diciclohexilamônio (R)-3-hidroxitetradecanoato como um sólido incolor: pf 94-95-C; 1H-RMN (CDCIa): δ 0,88 (~t, 3 H, J - 6,5 Hz), 1,05 - 1,58 (m, 24 H), 1,65 (m, 2 H, 1,80 (m, 4 H), 2,01 (br d, 4 H) 2,18 (dd, 1H, J= 15,7, 9,4 Hz), 2,36 (dd, 1 H, J= 15,7, 2,6 Hz), 2,94 (m, 2 H), 3,84 (m, 1H) (2) A uma mistura do composto preparada em (1) acima (50 g, 0,117 mol) e 2,4'-dibromoacetofenona (39 g, 0, 14 mol) em EtOAc (2,3 L) foi adicionada trietilamina (19,6 ml, 0,14 mol) e a solução resultante foi agitada por 18 h a temperatura ambiente. O precipitado volumoso que se formou foi coletado e foi triturado com EtoAc quente (3 X 400 ml). Os triturados combinados e filtrado foram lavados com HCI aq. a 1 M, NaCI aq. saturado e foram secos (Na2S04). Voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o produto bruto obtido foi cristalizado a partir de EtOAc-hexanos para dar 47,2 g (91%) de éster de p-bromofenacila de ácido (R)-3-hidroxitetradecanóico como um sólido incolor; pf. 109-109,5°C; 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (-t, 3 H,J- 6,5 Ηζ) 1,15-1,70 (m, 20 Η), 2,56 (dd, 1Η, J= 15,1, 9,1 Hz),), 2,39 (dd, 1H, J= 15,1, 2,9 Hz), 3,27 (br s, 1H), 4,12 (m, 1H), 5,31 (d, 1H, J= 16,5 Hz), 5,42 (d, 1H, J= 16,5 Hz), 7,65 (d, 2 H, J= 8,5 Hz), 7,78 (d, 2 H, J = 8,51 Hz). (3) Uma solução do composto preparada em (2) acima (4,6 g, 10,4 mmoles) em CH2CI2 (50 ml) contendo 4-dimetilaminopiridina (0,12 g, 1,0 mmol) e piridina (5 ml, 62 mmoles) foi tratada a temperatura ambiente com cloreto de miristoíla (3,1 ml, 11,4 mmoles). Após a agitação por 5 h a temperatura ambiente MeOH (0,5 ml) foi adicionado, e a mistura de reação foi concentrada. O resíduo foi separado entre Et20 (150,ml) e HCI aquoso a 10% frio (50 ml) e as camadas foram separadas. A camada eteral foi seca (Na2S04) e foi concentrada e o resíduo obtido foi purificado sobre uma almofada pequena de sílica gel com EtOAc-hexanos a 5%. O diéster foi dissolvido em AcOH (42 ml) e foi tratado com três porções iguais de poeira de zinco (-6 g, 90 mmoles) a 60°C durante um período de 1 h. Depois de uma hora adicional a 60°C, a mistura de reação resfriada foi sonicada (5 min), foi filtrada através de Celite® e foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel com EtOAc-hexanos a 10% para dar 4,17 g (82%) de ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico como um sólido incolor: pf 28-29-C; 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (~t, 6 H), 1,15 - 1,40 (m, 38 H), 1,50-1,70 (m, 4 H), 2,28 (t, 2 H, J= 7,4 Hz), 2,56 (dd, 1H, J= 15,9, 5,8 Hz), 2,63 (dd, 1H, J= 15,9, 7,1 Hz), 5,21 (m, 1H). (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 1 -(3), o composto preparado no exemplo 1-(2) (2,5 g, 5,68 mmoles) foi acilado com cloreto de lauroíla (1,45 ml, 6,25 mmoles) na presença de piridina (0,57 ml, 7,0 mmoles) em CH2CI2 (60 ml) e então foi desprotegido com zinco (9,3 g, 142 mmoles) em AcOH (40 ml) para fornecer ácido (R)-3-dodecanoiloxite-tradecanóico como um óleo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,90 (t, 6 H, J = 6,5Hz), 1,0 -1,75 (m, 46 H), 2,30 (m, 2 H), 2,62 (m, 2 H), 5,22 (m, 1H).
(5) Uma solução do composto preparada no exemplo 1-(2) (2-5 g, 5,68 mmoles) foi tratada com ácido undecanóico (1,16 g, 6,25 mmoles) e EDCMel (2,08 g, 7,0 mmoles), em CH2CI2 (60 ml) e então foi desprotegida como descrito no Exemplo 1-(3) com zinco (9,3 g, 142 mmoles) em AcOH (40 ml) para fornecer ácido (R)-3-undecanoiloxiteuAdecanóico como um óleo incolor. 1H-RMN (CDCI3): δ 0,89 (t, 6 H, J= 6,7 Hz), 1,0 -1,75 (m, 44 H), 2,29 (m, 2 H), 2,61 (m, 2H), 5,22 (m, 1H). (6) Do mesmo modo que descrito no exemplo 1-(3), o composto preparado no exemplo 1-(2) (4,4 g, 10 mmol) foi acilado com cloreto de decanoíla (2,3 ml, 11 mmoles) na presença de piridina (1,2 ml, 15,0 mmoles) em CH2CI2 (100 ml) e então foi desprotegido com zinco (16,4 g, 250 mmoles) em AcOH (60 ml) para fornecer ácido (R)-3-decanoi-loxitetradecanóico como um óleo incolor. 1H-RMN (CDCI3): δ 0,89 (t, 6 H, 6,8,Hz), 1,0 - 1,75 (m, 34 H), 2,29 (t, 2 H, J = 7,4 Hz), 2,61 (t, 2 H, J = 4,2 Hz), 5,22 (m, 1H). (7) Do mesmo modo que descrito no exemplo 1-(3). o composto preparado no exemplo 1-(2) (2,5 g, 5,68 mmoles) foi acilado com cloreto de nonanoíla (1,13 ml, 6,25 mmoles) na presença de piridina (0,57 ml, 7.0 mmoles) em CH2CI2 (60 ml) e então foi desprotegido com zinco (9,3 g, 142 mmoles) em AcOH (40 ml) para fornecer ácido (R)-3- nonanoiloxitetra-decanóico como um óleo incolor: 1.0 - 1,75 (m, 32 H), 2,29 (t, 2 H, J= 7,5 Hz), 2,61 (m, 2 H), 5,22 (m, 1H). (8) Do mesmo modo que descrito no exemplo 1 -(3), o composto preparado no exemplo 1-(2) (2,5 g, 5,68 mmoles) foi acilado com cloreto de octanoíla (1,07 ml, 6,25 mmoles) na presença de piridina (0,57 ml, 7.0 mmoles) em CH2CI2 (60 ml) e então foi desprotegido com zinco (9,3 g, 142 mmoles) em AcOH (40 ml) para fornecer ácido (R)-3-octanoiloxitetradecanóico como um óleo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,92 (t, 6 H, J= 6,9 Hz), 1,0 -1,75 (m, 30 H), 2,32 (t, 2 H, J= 7,4 Hz), 2,63 (t, 2 H, J= 4,4 Hz), 5,23 (m, 1H). (9) Do mesmo modo que descrito no exemplo 1 -(3), o composto preparado no exemplo 1-(2) (2,5 g, 5,68 mmoles) foi acilado com cloreto de heptanoíla (0,97 ml, 6,25 mmoles) na presença de piridina (0,57 ml, 7.0 mmoles) em CH2CI2 (60 ml e então foi desprotegido com zinco (9,3 g, 142 mmoles) em AcOH (40 ml) para fornecer ácido (R)-3-heptanoiloxitetradecanóico como um óleo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,89 (t, 6 H, J = 6,8 Hz), 1,0 - 1,75 (m, 28 H), 2,29 (t, 2 H, J = 7,4 Hz), 2,61 (d, 2 H, J = 5,8 Hz), 5,22 (m, 1 H). EXEMPLO 2 (B1) Preparação de 3-Hidróxi-(S)-2-[(R)-3-tetradecanoiloxiletradecanoilamino) propil 2- Desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil)-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Tri-etilamônio (Composto (I), (1) A uma solução de 2-(trimetilsÍlil)etil 2-amino-2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-beta-D-glucopiranosídeo (6,46 g, 20,2 mmoles) em CHCI3 (300 ml) foram adicionados NaHC03 aquoso a 1 N (300 ml) e 2,2,2-tricloroetil cloroformiato (8,5 g, 40 mmoles). A mistura resultante foi agitada vigorosamente por 3 h a temperatura ambiente. A camada orgânica foi separada, foi seca (Na2S04) e foi concentrada para dar um xarope incolor, Cromatografia flash sobre sílica gel (eluição de gradiente, EtOAc-hexanos a 30-40%) forneceu, 9,6 g (96%) de 2-(trimetilsilil)etil 2-desóxi-4,6-0-isopropilidina-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido incolor: pf 69-70-C; 1H-RMN (CDCI3): δ 0,0 (s, 9 H), 0,94 (m, 2 H), 1,44 e 1,52 (2s, 6 H), 2,94 (br s, 1H)) 3,23 -3,37 (m, 2 H), 3,48-3,62 (m, 2 H), 3,79 (t, 1H, J = -10,5 Hz), 3,88-4,08 (m, 3 H), 4,65 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 4,74 (m, 2 H), 5,39 (d, 1H, J = 7,4 Hz). (2) Uma solução do composto preparada em (1) acima (7,5 g, 15,2 mmoles), ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (7,58 g, 16,7 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina: (0,25 g, 1,7 mmoles) em CH2CI2 (95 ml) foi tratada com 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodilmida metiodeto (EDC.Mel; 4,94 g, 16,7 mmoles) e foi agitada por 16 h a temperatura ambiente. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada pequena de Celite®, foi concentrada, e o resíduo resultante foi aquecido a 60°C em AcOH aquoso a 90% (100 ml) por 1 Η. A mistura foi concentrada e AcOH residual e água foram removidos por azeotropização com tolueno (2 x 150 ml). O diol bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (eluição de gradiente, EtOAc-hexanos a 30-40%) para dar 11,8 g (83%) de 2-(trimetilsilil)etil-2-desóxi-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCIs): δ 0,0 (s, 9 H), 0,9 (m, 8 H), 1,1-1,7 (m, 42 H), 2,30 (t, 2 H, J = 7,4 Hz), 2,52 (m, 2 H), 3,36-3-72 (m, 4 H), 3,78-4,03 (m, 3 H), 4,57 (d, 1H, J=83 Hz), 4,65 (d, 1H, J = 6,11 Hz), 4,77 (d, 1H, J = 11 Hz), 5,0-5,15 (m, 2 H), 5,20 (d, 1H, J = 7,4 Hz). (3) Uma solução do composto preparada em (2) acima (10,9 g, 12 mmoles) e piridina (2 ml, 25 mmoles) em CH2CI2 (125 ml) a 0°C foi tratada gota a gota durante 15 min com uma solução de 2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletil cloroformiato (3,17 g, 13,2 mmoles) em CH2CI2 (25 ml). A mistura de reação foi deixada se aquecer lentamente para a temperatura ambiente durante 3,5 h. 4-Pirrolidinopiridina (0,89 g, 6,0 mmoles), N,N- diisopropiletilamina (10,5 ml, 60 mmoles) e difenil clorofosfato (3,7 ml, 18 mmoles) foram adicionados seqüencialmente e a mistura resultante foi agitada por 5 h a temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com CH2CI2 (500 ml), foi lavada com HCI aquoso frio a 7,5% (2 x 250 ml), água (250 ml), NaHC03 aquoso saturado (250 ml), foi seca (Na2S04), e então foi concentrada. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo-se com EtOAc-hexanos a 12,5% para dar 15,1 g (95%) de 2-(trimetilsilil)etil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-triecloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2(2,2,2-tricloretoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um óleo viscoso: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,0 (s, 9 H), 0,8 - 1,0 (m, 8 H), 1,1- 1,65 (m, 42 H), 1,83 e 1,90 (2s, 6 H), 2,15-2,45 (m, 4 H), 3,34 (q, 1H, J= ~8 Hz), 3,37 (m, 1H), 3,81 (m, 1 H), 3,95 (m, 1H), 4,27 (dd, 1H,J=12,5 Hz), 4,34 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,58 (d, 1 H, J = 12 Hz.), 4,66 (q, 1H, J= ~9 Hz), 4,86 (d, 1H, J = 12 Hz), 5,03 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 5,21 (m, 1H), 5,54-5,70 (em, 2 H), 7,2-7,8 (m, 10 H). (4) Uma solução do composto preparada em (3) acima (1,87 g, 1,41 mmoles) em CH2CI2 (3 ml) a 0°C foi tratada gota a gota durante 10 min. com ácido trifluoroacético (TFA; 6 ml) e então foi agitada por 4 h a 0° C. A mistura de reação foi concentrada e TFA residual foi removido por aze-otropização com tolueno (2x5 ml). Uma solução do lactol e da dime-tilformamida (2,2 ml, 28,2 mmoles) em CH2CI2 (14 ml) a 0-C foi tratada com brometo de oxalila (2,0 M em CH2CI2; 2,1 ml, 4,2 mmoles) gota a gota durante 15 min e a suspensão resultante foi agitada a 0»C por 24 h. A mistura de reação foi separada entre NaHC03 aquoso saturado frio (25 ml) e éter (50 ml) e as camadas foram separadas. A camada eteral foi lavada com NaCI aquoso saturado, foi seca (Na2S04) e foi concentrada para dar 1,85 g (~100%) de brometo de 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)3-tetradecanoiloxitetradecanoil)-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil-2(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-alfa-D-glucopiranosila como um vidro incolor. (5) Uma solução de (R)-2-amino-3-benzilóxi-1-propanol (0,46 g, 2,33 mmoles) e ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (1,29 g, 2,83 mmoles) em CH2CI2 (20 ml) foi tratada com EDC-Mel (0,78 g, 2,79 mmoles) e foi agitada por 16 h a temperatura ambiente. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada pequena de Celite® e foi concentrada. Cromatografia flash sobre sílica gel com EtOAc-hexanos a 45% forneceu 1,1 g (69%) de 3-benzilóxi-(R)-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetra-decanoilamino] propanol como um sólido incolor: pf 42-44,5°C; 1H-RMN δ 0,98 (t, 6 H, J = 6,5 Hz), 1,0-1,7 (m, 42 H), 2,50 (t, 2 H, J = 7,3 Hz), 2,46 (m, 2H), 3,56 (brs, 1 H), 3,5-3,75 (m,3 H), 3,78 (dd, 1H, J = 11,4 Hz) 4,08 (m, 1H), 4,51 (s, 2 H), 5,17 (m, 1H), 6,36 (d, 1H, J67,8 Hz), 7,2-7,4 (m, 5 H). (6) A uma solução do composto preparada em (4) acima (1,00 g, 0,776 mmol) e ao composto preparado em (5) acima (0, 35 g, 0, 57 mmol) em dicloroetano (4,5 ml) foram adicionadas peneiras moleculares de 4 À em pó (1,25 g) e sulfato de cálcio (2,7 g, 20 mmoles). Após a agitação por 10 min a temperatura ambiente, a mistura foi tratada com cianeto de mercúrio (1,0 g, 4,0 mmoles) e então foi aquecida até o refluxo por 12 h foi protegida da luz. A mistura de reação foi diluída com CH2CI2 (25 ml) e foi filtrada através de uma almofada de Celite®. O filtrado foi lavado com Ki aquoso a 1 N (25 ml), foi seco (Na2S04) e foi concentrado. O resíduo foi cromatografado sobre sílica gel com EtOAc-hexanos-MeOH (80:20:0-70:30:1, eluição de gradiente) para dar 0,66 g (63%) de 3-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)tetradecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbo-nil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN δ 0,88 (t, 12 H, J = ~6,5 Hz), 1,0 -1,65 (m, 94 H), 1, 79 e 1,96 (2s, 6 H), 2,1-2,5 (m, 8 H), 3,35-3,55 (m, 3 H), 3,65-3,8 (m, 3 H), 4.1- 4,75 (m, 9 H), 5,05-5,3 (m, 2 H), 5,3-5,5 (m, 2 H), 6,04 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,05-7,45 (m, 15 H). (7) Uma solução agitada do composto preparado em (6) acima (0,60 g, 0,328 mmol) em AcOH (9 ml) a 55-C foi tratada com poeira de zinco (1,1 g, 16 mmoles) em três porções iguais durante 1 hora. A mistura de reação resfriada foi sonicada, foi filtrada através de um leito de Celite® e foi concentrada. O resíduo resultante foi separado entre CH2CI2 (60 ml) e HCI aquoso a 1 N frio (35 ml) e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com NaHCOs aquoso a 5%, foi seca (Na2S04) e foi concentrada. Uma mistura de um resíduo obtido e ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (0,18 g, 0,39 mmol) em CH2CI2 (3,5 ml) foi agitada com peneiras moleculares de 4 Â em pó (0,1 g) por 30 min a temperatura ambiente e então foi trada com 2-etóxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina (EEDQ; 0,12 g, 0,49 mmol). A mistura resultante foi agitada por 6 h a temperatura ambiente, foi filtrada através de Celite® e então foi concentrada. Cromatografia sobre sílica gel (eluição de gradiente, 0,5 - Me-OH-CHCIa a 1%) forneceu 0,31 g (50%) de 3-benzilóxi-(S) 2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradeca-noil]-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 18 H, J = ~6,5 Hz), 1,0-1,8 (m, 126 H), 2,1-2,5 (m, 12 H), 3,35-3,75 (m, 6 H), 3,80 (m, 2 H), 4,23 (m, 1 H), 4,46 (d, 1H, J = 2 Hz), 4,51 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,65 (q, 1H, J= ~9,5 Hz), 4,82 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 5,05-5,25 (m, 3 H), 5,47 (t, 1H, J = ~9,5 Hz), 6,16 (d, 1 H, J = 8,1 Hz), 6,31 (d, 1H,J = 8,4 Hz), 7.1- 7,4 (m, 15 H). (8) Uma solução do composto preparada em (7) acima (0,26 g, 0,138 mmol) em THF (25 ml) foi hidrogenada na presença de 5% de paládio sobre carbono (50 mg) a temperatura ambiente e pressão atmosférica por 16 h. Após a remoção do catalisador por filtração, AcOH (3 ml) e oxido de platina (0,14 g) foram adicionados e a hidrogenação foi continuada a temperatura ambiente e (75 psig) 5,25 kg/cm2 macrométricos por 24 h. A mistura de reação opalina foi diluída com 2:2 CHCI3-MeOH (20 ml) e foi so-nicada sumariamente para dar uma solução clara. O catalisador foi coletado, foi lavado com 2:2 CHCI3-MeOH (2x5 ml) e as lavagens e o filtrado combinados foram concentrados. O resíduo foi dissolvido em trietilamina aquosa a 1% (10 ml) por sonicação por 5 min a 35°C e a solução resultante foi liofilizada. Cromatografia flash sobre sílica com clorofôrmio-metanol-água-trietilamina (94:6:0,5:0,5-88:12:1-0:1,0, eluição de gradiente) forneceu 0,20 g (84%) de produto como um pó incolor. Uma porção do produto de cromatografia (0,166 g) foi dissolida em 2:1 CHCI3-MeOH frio (33 ml) e foi lavada com HCI aquoso a 0,1 N frio (14 ml). A camada orgânica inferior foi filtrada e foi concentrada e o ácido livre obtido foi liofilizado a partir de trie-tilamina aquoso a 1% (livre de pirogênio, 15 ml) para dar 0,160 g de 3-hidróxi-(S)-2-[(R)-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradcanoil)-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um sólido incolor: pf 178-180-C (dec); IV (película), 3293, 3103, 2959, 2924, 2855, 1732, 1654, 1640, 1553, 1467, 1377, 1259, 1175, 1106, 1086, 1050, 803, 720 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J= -7 Hz), 1,0-1,7 (m, 135 H), 2,15-2,75 (m, 12 H), 3,02 (q, 6 H, J = 7 Hz), 3,35-4,1 (m, 7 H), 4,22 (q, 1H, J = ~9,5 Hz), 4,77 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,05-5,35 (m, 4 H), 6,58 (d, 1 H, J= 6 Hz), 6,73 (d, 1 H, J= 7,5 Hz, NH); 13C RMN (CDCI3) δ 173,5, 173,2, 170,7, 170,5, 170,0, 100,7, 75,9, 72,7, 71,2, 71,0, 70,8, 70,6, 67,9, 61,7, 60,5, 55,0, 50,4, 45,6, 41,4, 39,5, 34,5, 34,4, 32,0, 31,8, 30,3, 29,8, 29,4, 29,3, 25,3, 25,1,22,7, 14,2, 8,6.
Análise calculada para Ci9Hi92N30i8P.5 H20: C, 64,94; H, 11,10; N, 2,29; P, 1 ftQ
Encontrado: C, 64,69; H, 11,24; N, 1,93, P, 1,44. EXEMPLO 3 (B2) Preparação de 3-Hidróxi-(R)-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilami-no]Propil 2-Desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilami-no]-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio(Composto (I), Ri=R2=R3=n-Ci3H27C0,X=Y=0, n=m=q=0, R4=R5=R7=R9= H,R6=0H, p=l, R8=P03H2). (1) Uma solução do composto preparada em Exemplo 2-(S) (0,63 g, 1,02 mmoles) em CH2CI2 (7 ml) foi tratada seqüencialmente com pi-ridina (0,4 ml, 5 mmoles) 4-dimetilaminipiridina (cat) e 2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletila cloroformiato (0,307 g, 1,23 mmoles) e foi agitada por 16 h a temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com CH2CI2 (25 ml), foi lavada com NaHC03 aquoso saturado (25 ml) e foi seca (Na2S04). Remoção dos voláteis em vácuo deu um resíduo que foi dissolvido em THF-AcOH (10 ml, 9:1,) e foi hidrogenado na presença de 5% de paládio sobre carbono (150 mg) a temperatura ambiente e pressão atmosférica por 24 h. Depois da remoção do catalisador por filtração e concentração do filtrado, o resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gal com EtOAc-hexanos a 35% para dar 0,536 g (72%) de 3(2,2,2 -tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonilóxi)-(S)-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradeconoilamino] pro-panol como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J= ~6,5 Hz), 1,1 - 1,7 (m, 42 H), 1,94 (s, 6 H), 2,30 (t, 2 H, J = 7,5 Hz), 2,47 (d, 2 H, J=6 Hz), 3,50 (br s, 1H), 3,72 (m, 2 H), 4,15-4,35 (m, 3 H), 5,15 (m, 1H), 6,18 (d, 1H, J = 7,2 Hz), (2) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(6), o com- posto preparado em (1) acima (0,3 1 0 g, 0,426 mmol) e o composto preparado no exemplo 2(4) (0,961 g, 0,745 mmol) foram acoplados na presença de cianeto de mercúrio (0,43 g, 1,7 mmoles) para dar 0,644 g (78%) de 3-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletiloxicarbonÍlóxi)(S)-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetra-decanoilaminojpropil 2-desóxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)-tetradecanoiloxiteirade-canoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)2-(2,2,2-tricloroetoxicarbo-nilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: ^-RMN (CDCIs): δ 0,88 (t, 12 H, J = -6,5 Hz), 1,0-1,7 (m, 84 H), 1,81 e 1,89 (2s, 6 H), 1,93 (s, 6 H), 2,15-2,55 (m, 8 H), 3,45-3,7 (m, 2 H), 3,80 (br d, 1H, J = 9 Hz), 3,9-4,45 (m, 6 H), 4,6-4,8 (m, 3 H), 4,87 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 5,0-5,25 (m, 2 H), 5,48 (t, 1H, J -9,5 Hz), 6,1-6,3 (m, 2 H). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (2) acima (0,602 g, 0,3 10 mmoles) foi desprotegido com zinco (1,5 g, 23 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico, (0,17 g, 0,37 mmol) na presença de EEDQ (0,115 g, 0,467 mmol) para dar 0,3 65 g (66%) de 3-hidróxi-(R)-2-[(3)-tetradecanoiloxitetradecanoilaminojpropil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)3-tetradecanoiloxitetrademoilamino]-3-0-[(R)-3- tetradecanoiloxitetradecanoil)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 18 H, J = -6,5 Hz), 1,0-1,7 (m, 126 H), 2,15-2,55 (m, 12 H), 3,18 (br s, 1H), 3,45-3,8 (m, 8 H), 3,95-4,05 (m, 2 H), 4,69 (q, 1 H, J = -9,51 Hz), 5,05-5,25 (m, 3 H), 5,42 (t, 1H, J = -9,5 Hz), 6,42 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 6,59 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,1-7,4 (m, 10 H). (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (3) acima (0,355 g, 0,196 mmol) foi hidrogenado na presença de oxido de platina (175 mg) para dar 0,265 g (77%) de 3-hidróxi-(R)-2-(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino)-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxite-tradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um sólido incolor: pf 159-160-C; IV (película) 3291, 2956, 2922, 2853P 1738, 1732, 1716, 1650, 1643, 1556, 1468, 1171, 1109, 1083, 1051 cm’1, 1H-RMN (CDCIs - CDsOD): δ 0,88 (t, 18 H, J = - 6,5 Hz), 1,0-1,7 (m, 135 H), 2,15- 2,75 (m, 12 H), 3,06 (q, 6 H, J = -7 Hz), 3,25-3,45 (m 2 H), 3,5-4,05 (m, 12 H), 4,19 (q, 1H, J = - 9,5 Hz), 4,49 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 5,04-5,26 (m, 4 H), 7,18 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,27 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 13C RMN (CDCI3) δ 173,5, 173.4, 170,7, 170,6, 170,1, 101,0, 76,0, 72,6, 71,4, 71,0, 70,8, 70,6, 68,7, 61,8, 60,5, 55,3, 50,5, 45,6, 41,5, 41,4, 39,5, 34,6, 34,4, 34,3, 32,0, 29,8, 29.4, 25,4, 25,1,22,7, 14,1,8,6, Análise calculada para C99H192N3O18P. H2O: C, 67,50; H; 11,10; N, 2,39; P 1,76, Encontrado: C, 67,40; H, 11,22; N, 2,34; P, 2,11. EXEMPLO 4 (B3) Preparação de 3-Hidróxi-(S)-2-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-Desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto (1) , Ri=R2=R3=n-CiiH23CO, X—Y—O, n=m=q=0, R4—R5 — R7—R9—H, R6=OH, p=l, r8=po3h2). (1) Uma solução de cloridrato de D-glucosamina (20 g, 92,8 mmo- les) em H20, (250 ml) foi tratada com um NaHC03aquoso saturado, (250 ml) e 2,2,2-tricloroetil cloroformiato (14,05 ml, 102 mmoles) e foi agitada vigorosamente por 19 h. O sólido branco que se formou foi coletado em um funil calcinado e foi seco sob vácuo 24 h. Uma solução do sólido em piridina (100 ml) foi resfriada para 0°C e foi tratada com anidrido acéticoe (100 ml) via funil de adição. A solução foi agitada por 18 h a temperatura ambiente, foi despejada para dentro de 1 L de água e foi extraída com CHCI3(3 x 500 ml). O solvente foi removido em vácuo para fornecer 45 g (quant,) de N-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-1,3,4,6-tetra-0-acetil-2-desóxi-alfa-D-glucopiranosídeo que foi usado sem ulterior purificação. 1H-RMN (CDCI3): δ 2,06 (s, 6 H), 2,12 (s, 3 H), 2,22 (s, 3 H), 4,03 (m, 1H), 4,07 (d, 1H, J = 12,4 Hz), 4,22 (dt, 1H, J = 9,9, 3,6, Hz), 4,30 (dd, 1 H, J = 12,4, 4,0 Hz), 4,64 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 5,28 (dt, 1H, J = 10,2, 9,9 Hz), 6,25 (d, 1 H, J-3,6 Hz). (2) Uma solução de (R)-2-amino-3-benzilóxi-1-propanol (5 g, 27,6 mmoles) em CH2CI2 (250 ml) foi tratada com allil cloroformiato (3,2 ml, 30 mmoles) e NaHC03 aquoso saturado (250 ml) por 19 h. A camada orgânica foi separada e foi concentrada em vácuo. Purificação por cromato-grafia eluindo-se com EtOAc-Hexanos a 30% forneceu 6,9 g (94%) de (R)-2-(aliloxicarbonilamino)-3-benzilóxi-1-propanol como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 2,56 (br s, 1H), 3,69 (m, 3 H), 3 88 (m, 2 H), 4,54 (s, 2 H), 4,58 (d, 2 H, J = 5,6 Hz), 5,23 (dd, 1H, J - 10,4, 1,1 Hz), 5,33 (do 1H, J = 17,1, 1,1 Hz), 5,42 (m, 1H), 5,93 (m, 1H), 7,35 (m, 5 H). (3) Uma solução dos compostos preparado em (1) e (2) acima (8,9 g, 1,7 mmoles e 3,6 g, 10 mmoles, respectivamente) em CH2CI2 foi tratada com eterato de trifluoreto de boro (4,3 ml, 34 mmoles) a temperatura ambiente por 16 h. A mistura de reação foi brucamente resfriada com NaHC03 aq. saturado (100 ml) e foi extraída com EtOAc (3 x 100 ml). Os extratos de EtOAc combinados foram secos (Na2S04) e foram concentrados. O resíduo obtido foi cromatografado com EtOAc/hexanos a 20% para fornecer 6,03 g (83%) de 3-benzilóxi-(S)-2-(aliloxicarbo-nilamino)propil 2-desóxi-3,4,6-tri-0-acetil-2-(2,2,2-triocloroetoxi-carbonila-mino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: ^-RMN (CDCI3): δ 2,02 (s, 3 H), 2,03 (s, 3 H), 2,08 (s, 3 H), 3,45 (m, 1H), 3,54 (m, 1H), 3,64 (m, 1 H), 3,76 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 3,91 (m, 2 H), 4,12 (d, 1 H, J = 12,2 Hz), 4,26 (dd, 1 H, J = 12,4, 4,7 Hz), 4,37 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 4,43 (d, 1H, J = 12,1 Hz), 4,55 (m, 2 H), 4,68 (m, 2 H), 4,87 (d, 1 H, J = 9,0 Hz), 5,07 (m, 2 H), 5,21 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 5,29 (d, 1H, J = 17,3 Hz), 5,91 (m, 1H), 7,36 (m, 5 H). (4) Uma solução do composto preparada em (3) acima (6,0 g, 8,3 mmoles) em metanol (83 ml) foi tratada com hidróxido de amônio (8,3 ml) a temperatura ambiente por 2 h. O solvente foi removido e foi substituído com 2,2-dimetoxipropano (50 ml) e ácido canforsulfônico (100 mg) foi adicionado. A reação foi agitada por 18 h, foi neutralizada com NaHC03 sólido (1 g), foi filtrada e foi concentrada em vácuo. Purificação por cromatografia com EtOAc/hexanos a 50% forneceu 4,58 g (86%) de 3 -benzilóxi-(S)2-(aliloxicarbonilamino)propil 2-desóxi-4,6-0-isopropilidina-2-(2,2,2-tricloroeto-xicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo. 1H-RMN (CDCI3): δ 1,46 (s, 3 H), 1,53 (s, 3 H), 2,94 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,55 (m, 4 H), 3,83 (m, 3 H), 3,93 (m, 3 H), 4,52 (m, 5 H), 4,68 (d, 1H, J = 12,1 Hz), 4,77 (d, 1H, J = 12,1 Hz), 5,07 (m, 1H), 5,26 (m 2 H), 5,92 (m, 1H), 7,37 (m, 5 H). (5) Uma solução do composto preparada em (4) acima (1,0 g, 1,56 mmoles) em CH2CI2 (20 ml) foi tratada com ácido (R)-3-dodecanoiloxitetradecanóico (730 mg, 1,71 mmoles) na presença de EDC- Mel (560 mg, 1,87 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (50 mg). A reação foi agitada a temperatura ambiente por 18 h e foi filtrada através de um tampão de 6 x 8 cm de sílica gel usando-se EtOAc/hexanos a 20% como eluente para fornecer 1,33 g (92%) de 3-benzilóxi-(S)-2-(aliloxicarbonilamino)propil 2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)3-dodecanoiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 'H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6H, J = 6,8 Hz), 1,1-1,6 (m, 38 H), 1,37 (s, 3 H), 1,46 (s, 3 H), 2,28 (t, 2 H, J = 7,4 Hz), 2,49 (dd, 1H, J = 15,1, 6,0 Hz), 2,61 (dd, 1H, J = 15,1, 6,6 Hz), 3,25 - 4, 0 (m, 9 H), 4,38 (m, 2 H), 4,54 (m, 2 H), 4,65 (m, 2 H), 4,97 (m, 2 H), 5,25 (m, 5 H), 5,88 (m, 1H), 7,34 (m, 5 H). (6) A uma solução do composto preparada em (5) acima (1,31 g, 1,25 mmoles) em THF (20 ml) foi adicionado dimetil malonato (1,0 ml, 0,88 mmoles) e a solução foi desgaseificada em uma corrente de argô-nio por 30 min. Tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (200 mg) foi adicionado e a reação foi agitada a temperatura ambiente por 2 h, e então foi concentrada em vácuo. O resíduo obtido foi cromatografado sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/CHCU a 5-10%. A amina livre obtida foi acilada com ácido (R-)-3-dodecanoiloxitetradecanóico (560 mg, 1,38 mmoles) na presença de EEDQ (370 mg, 1,5 mmoles) em CH2CI2 (15 ml). Depois da agitação a temperatura ambiente por 18 h, o solvente foi removido em vácuo e o óleo resultante foi cromatografado sobre sílica gel eluindo-se com EtOAc/hexanos a 20 para fornecer 1,02 g (63%) de 3-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-dodeca-noiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor: ^-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H, J = 6,9 Hz), 1,1 - 1,7 (m, 78 H), 1,38 (s, 3 H), 1,46 (s, 3 H), 2,26 (m, 4 H), 2,49 (dd, 1H, J = 15,1,6,0 Hz), 2,61 (dd, 1H, J = 15,1, 6,6 Hz), 3,25-4,0 (m, 9 H), 5,01 (m, 2 H), 6,02 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 7,34 (m, 5 H). (7) O composto preparado em (6) acima (1,0 g, 0,78 mmol) foi tratado com AcOH aquoso a 90% (20 ml) por 1H a 60°C. A solução foi concentrada em vácuo e AcOH residuo e H20 foram removidos por azeotro-pização com tolueno (10 ml). O residuo foi dissolvido em CH2CI2, foi resfria- do para 0°C, e foi tratado com piridina (0,076 ml, 0,94 mmol) e uma solução de 2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletil cloroformiato (205 mg, 0,86 mmol) em CH2CI2 (5 ml). A mistura de reação foi então deixada se aquecer e se agitar a temperatura ambiente por 18 h. A solução amarela clara resultante foi tratada com difenil clorofosfato (0,24 ml, 1,17 mmoles), trietilamina (0,22 ml, 1,56 mmoles), e 4-pirrolidinopiridina catalítica (50 mg), e então foi agitada por adicional de 24 horas a temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com Et20 (100 ml) e foi lavada com HCI aq. a 10% (50 ml). A fase orgânica foi separada, foi seca sobre Na2S04 e foi concentrada em vácuo. Cro-matografia sobre sílica gel usando-se EtOAc/hexanos a 10% forneceu 1,13 g (85%) de 3-benzilóxi-(S)-2-(R)-3-dodecanoiloxitetrade-canoilaminoJpropil-2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-dodecanoiloxite-tra-decanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroeto-xicarbonilamino)-beta-D-glucopira-nosídeo como um sólido amorfo incolor. ^-RMN (CDCI3): δ 0,87 (t, 12 H, J = 6,9 Hz), 1,1 - 1,6 (m, 78 H), 1,78 (s, 3 H), 1,86 (s, 3 H), 2,01 (m, 1H), 2,18 (m, 3 H), 2,40 (m, 2 H), 2,67 (m, 1H), 2,88 (d, 1H, J = 6,6 Hz), 2,97 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 3,41 (m, 2 H), 3,72 (m, 1H), 3,82 (m, 1H), 4,24 (m, 1 H), 4,42 (d, 1H, J = 11,8 Hz), 4,64 (m, 3 H), 5,16 (m, 1H), 5,39 (m, 2 H), 5,75 (d, 1 H, J = 4,3 Hz), 6,05 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,23 (m, 15 H). (8) Da mesma maneira que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (7) acima (1,1 g, 0,65 mmol) foi desprotegido com zinco (2-1 g, 32 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-dodecanoiloxite-tadecanóico (330 mg, 0,78 mmol) na presença de EEDQ (230 mg, 0,94 mmol) para fornecer 399 mg (37%) de 3-benzilóxi-(S)-2[(R)-3-dodeda-noiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2[(R)-3-dodeca-noiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-dodecanoiltetradecanoil]-beta-D-glu-copiranosídeo como um sólido amorfo incolor. (9) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (8) acima (399 mg, 0,24 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio (150 mg) sobre carbono em EtOH (10 ml) e óxido de platina (300 mg) em MOH/AcOH (10:1) para fornecer 65 mg (16%) de 3-hidrÓxi-(S)-2-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4- 0-fosfano-2-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 181 - 184-C (dec): IV (película) 3306, 2956, 2922, 2852, 1732, 1644, 1549, 1467, 1377, 1164, 1106, 1051F 721 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,7 Hz), 1,1 - 1,7 (m, 123 H), 2,2,- 2,7 (m, 12 H), 3,06 (q, 6 H, J = 7,1 Hz), 3,3 - 4,0 (m, 13 H), 4,23 (m, 1 H), 4,44 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 5,0 - 5,3 (m, 4 H); 13C RMN (CDCI3) δ 173,9, 173,5, 173,3, 170,8, 170,5, 170,1, 101,0, 75,5, 73,0, 71,1, 70,9, 70,6, 67,9, 61,6, 60,7, 54,4, 50,4, 45,8, 41,6, 41,4, 39,6, 34,6, 31,9, 29,7, 29,4, 29,3, 25,4, 25,1, 22,7, 14,2, 8,6.
Análise calculada para C93H180N3O18P.H2O: C, 66,59; H, 10,94; N, 2,50; P, 1,85.
Encontrado: C, 66,79; H, 10,65; N, 2,36; P, 1,70. EXEMPLO 5 (B4) Preparação de 3-Hidróxi-(S)-2-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-Desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoil)-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto (I), (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(5), o composto preparado no Exemplo 4-(4) (1,0 g, 1,56 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3- undecanoiloxitetradecanóico (705 mg, 1,71 mmol) na presença de EDC-Mel (560 mg, 1,87 mmol) e 4-pirrolidinopiridina (50 mg) em CH2CI2 (20 ml) para fornecer 1,23 g (77%) de 3-benzilóxi-(S)-2-(aliloxicarbonilami-no)propil 2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)-3-undecanoiloxitetradeca-noil]-2-(2,2 2,- tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,9 Hz), 1,1 - 1,6 (m, 36 H), 1,3 (s, 3 H), 1,46 (s, 3 H), 2,28 (m, 2 H), 2,52 (dd, 1 H, J = 15,1, 6,0 Hz), 2,61 (dd, 1H, = 15,5, 6,8 Hz), 3,25, 1H), 3,35 - 4,0 (m, 9 H), 4,31 (m, 2 H), 4,54 (m, 2 H), 4,64 (m, 2 H), 5,02 (m, 2 H), 5,18 (m, 2 H), 5,25 (m, 1H), 5,86 (m, 1 H), 7,34 (m, 5 H). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(6) o composto preparado em (1) acima (1,21 g, 1,17 mmoles) foi desprotegido em THF (20 ml) na presença de dimetil malonato (1,0 ml, 0,88 mmol) e tetra-quis(trifenilfosfina)paládio(0) (200 mg) e então foi acilado com ácido (R)-3-undecanoiloxitetradecanóico (540 mg, 1,30 mmoles) na presença de EEDQ (370 mg, 1,5 mmoles) para fornecer 921 mg (61%) de 3-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H, J = 6,6 Hz), 1,1-1,7 (m, 72 H), 1,38 (s, 3 H), 1,46 (s, 3 H), 2,26 (m, 3 H), 2,38 (m, 5 H), 2,49 (dd, 1H, J = 15,2, 6,0 Hz), 2,61 (dd, 1H, J = 15,0, 6,5 Hz), 3,25 - 4,0 (m, 9 H), 4,30 (m, 2 H) 4,59 (m, 3 H), 6,03 (d, 1 H, J = 8,2 Hz) 7,34 (m, 5 H). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(7) o composto preparado em (2) acima (910 g, 0,71 mmol) foi desprotegido em AcOH aquoso a 90% (20 ml) e então foi tratado com piridina (0,071 ml, 0,88 mmol) e 2,2,2-tricloro-l,l-dimetiletilcloroformiato (195 mg, 0,80 mmol) em CH2CI2 seguido por difénil clorofosfato (0,23 ml, 1,10 mmoles), trietilamina (0,20 ml, 1,46 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina catalítica (50 mg) para fornecer 1,10 g (89%) de 3-benzilóxi-(S)-2-(R)-3-undecanoiloxitetradecanoilamino)propil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-undecanoiltetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tri-cloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilanlino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,87 (t, 12 H, J = 6,7 Hz), 1,1-1,6 (m, 72 H), 1,78 (s, 3 H), 1,86 (s, 3 H), 2,01 (m, 1 H), 2,18 (m, 3 H), 2,40 (m, 2 H), 2,67 (m, 1H), 2,88 (d, 1H, J = 6,7 Hz), 2,97 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 3,41 (m, 2 H), 3,72 (m, 1H), 3,82 (m, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,42 (d, 1H, J = 11,9 Hz), 4,64 (m, 3 H), 5,16 (m, 1H), 5,39 (m, 2 H), 5,75 (d, 1H, J = 4,6 Hz), 6,05(d, 1H, J = 8,41 Hz), 7,22 (m, 15 H). (4) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(7), o composto preparado em (3) acima (1,0 g, 0,59 mmol) foi desprotegido com zinco (2,0 g, 30 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-undecanoiloxitetra-decanóico (292 mg, 0,71 mmol) na presença de EEDQ (210 mg, 0,85 mmol) para fornecer 388 mg (40%) de 3-benzilóxi-(S)-2[(R)-3-undecanoiloxitetrade-canoilaminojpropil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-undecanoiloxitetra-decanoilamino]-3-0-[(R)-3-undecanoiltetradecanoil]-beta-D-glucopiranosí-deo como um sólido amorfo incolor. (5) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (4) acima (388 mg, 0,24 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio (150 mg) sobre carbono em EtOH (10 ml) e óxido de platina (300 mg) em EtOH/AcOR (10:1) para fornecer 65 mg (17%) de 3-hidróxi-(S)-2-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoilaminol-3-0-[(R)-3-undeca-noiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 183-184»C; IV (película) 3306, 2956, 2922, 2852, 1732, 1644, 1550, 1467, 1377, 1164, 1106, 1052, 721 cm'1, 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,8 Hz), 1,1 - 1,7 (m, 117 H), 2,2 -2,7 (m, 12 H), 3,07 (q, 6 H, J = 7,1 Hz), 3,3-3,9 (m, 13 H), 4,23 (m, 1H), 4,45 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,0 - 5,3 (m, 4 H); 13C RMN (CDCI3) δ 173,8, 173,5, 173,3, 170,8, 170,5, 170,1, 101,0, 75,5, 73,1, 71,5, 71,3, 70,9, 70,6, 67,8, 61,6, 60,7, 54,4, 50,5, 45,8, 41,5, 41,4, 39,5, 34,6, 34,4, 32,0, 31,2, 29,8, 29,7, 29,4, 28,6, 26,1, 25,4, 25,1,22,7, 14,1,8,6.
Análise calculada para C90Ci74N3Oi8P. H20: C, 66,10; H, 10,85; N, 2,57; P, I, 89, Encontrado: C, 66,34; H, 10-69; N, 2,32; P, 1,99. EXEMPLO 6 (B5) Preparação de 3-Hidróxi-(S)-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-Desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino)-3-0-[(R)-3 decanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto (I), R9=H, Re=OH p=1, Rb=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 4-(5), o composto preparado no exemplo 4-(4) (2,0 g, 3,12 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (1,36 g, 3,42 mmoles) e na presença de EDC-Mel (1,12 g, 3,74 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (100 mg) em CH2CI2 (40 ml) para fornecer 2,49 (79%) de 3-benzilóxi-(6)-2-(aliloxicarbonila-mino)propil 2-desóxi-4,6-isopropilideno-3-0-[(R)-3-deca-noiloxitetradeca-noil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopira-nosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = ~6,7 Hz), 1,1-1,6 (m, 34 H), 1,36 (s, 3 H), 1,46 (s, 3 H), 2,27 (t, 2 H, J = 6,9 Hz), 2,48 (dd, 1H, J = 15,1, 6,0 Hz), 2,60 (dd, 1H,J = 15,1, 6,7 Hz), 3,25 (m, 1H), 3,35 - 4,0 (m, 9 H), 4,23 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,52 (m, 4 H), 4,95 (m, 2 H), 5,17 (m, 3 H), 5,88 (m, 1H), 7,36 (m, 5 H). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(6) o composto preparado em (1) acima (2,47 g, 2,42 mmoles) foi desprotegido em THF (40 ml) e na presença de dimetil malonato (2,0 ml, 1,75 mmoles) e te-traquis(trifenilfosfina)paládio(0) (400 mg) e então foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (1,06 g, 2,66 mmoles) na presença de EEDQ (740 mg, 3 mmoles) para fornecer 1,86 g (60%) de 3-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilaminojpropil 2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,87 (t, 12 H, J = 6,7 Hz), 1,1-1,7 (m, 68 H), 1,37 (s, 3 H), 1,46 (s, 3 H), 2,3 (m, 4 H), 2,50 (dd, 1H, J = 15,1,6,0 Hz), 2,62 (dd, 1H, J = 15,1, 6,8 Hz), 3,29 (m, 2 H), 3,44 (m, 1H), 3, 55 (m, 1 H), 3,74 (m, 3 H), 3,93 (m, 1 H), 4,18 (m, 1H), 4,34 (m, 1 H), 4,57 (d, 1 H, J- = 11,8 Hz), 4,65 (m, 2H), 5,0I (m, 2H), 6,04 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 7,36 (m, 5 H), (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(7) o composto preparado em (2) acima (900 mg, 0,72 mmol) foi deprotegido em AcOH aquoso a 90% (40 ml), e então foi tratado com piridina (0,071 ml, 0,88 mmol) e 2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletil cloroformiato (195 mg, 0,80 mmol) em CH2CI2 seguido por difenil clorofosfato (0,23 ml, 1,10 mmoles), trietilamina (0,20 ml, 1,46 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina catalítica (50 mg) para fornecer 1,05 g (86%) de 3-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilami-no]propil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil)-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilami-no)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,87 (t, 12 H, J = 6,3 Hz), 1,1 -1,6 (m, 68 H), 1,78 (s, 3 H), 1,86 (S, 3 H), 2,01 (m, 1H), 2,18 (m, 3 H, 2,40 (m, 2 H), 2,67 (m, 1H), 2,88 (d, 1H, J = 6,5 Hz), 2,97 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 3,41 (m, 2 H), 3,72 (m, 1H), 3,82 (m, 1H), 4,24 (m, 1H) 4,42 (d, 1 H, J = 11,8 Hz), 4,64 (m, 3 H), 5,16 (m, 1H), 5,39 (m, 2 H), 5,75 (d, 1H, J = 4,3 Hz), 6,05 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 7,22 (m, 15 H). (4) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(7), o composto preparado em (3) acima (1,0 g, 0,60 mmol) foi desprotegido com zinco (2,0 g, 30 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (285 mg, 0,72 mmol) na presença de EEDQ (210 mg, 0,96 mmol) para fornecer 332 mg (34%) de 3-benzilóxi-(S)-2-(R)-3-decanoiloxitetradeca-noilamino]propil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradeca-noilaminoJ-3-0-[(R)-3-decanoiltetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor. (5) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (4) acima (332 mg, 0,20 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio (150 mg) sobre carbono em EtOH (10 ml) e óxido de platina (300 mg) em EtOH/AcOH (10:1) para fornecer 173 mg (55%) de 3-hidróxi-(S)-2-(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 179-181 °C IV (película) 3295, 2956, 2923, 2853, 1732, 1650, 1555, 1467, 1377, 1320, 1169, 1134, 1104, 1051, 979, 801, 721 cm'1; 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,9 H2), 1,1-1,7 (m, 111 Hz), 2,2 -2,7 (m, 12 H), 3,07 (q, 6 H, J = 6,5 Hz), 3,3 - 4,3 (m, 14 H), 4,45 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 5,0 - 5,3 (m, 4 H), 7,39 (m, 1H),7,53 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 13C RMN (CDCI3)Ô 173,7, 173,4, 173,2, 170,7, 170,5, 170,1, 101,0, 75,4, 73,1, 71,6, 71,1, 70,8, 70,5, 67,8, 61,4, 60,8, 54,3, 50,4, 45,8, 41,3, 39,5, 34,5, 31,9, 29,8, 29,7, 29,4, 25,4, 25,1, 22,7, 14,1, 8,6, Análise calculada para Ce/HieeNsOieP.^O: C, 65,58; H, 10,75; N, 2,64; P, 1,94, Encontrado: C, 65,49; H, 10,75; N, 2,64; P, 1,97. EXEMPLO 7 (B6) Preparação de 3-Hidróxi-(S)-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-Desóxi-6-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiltetradecanoil]-3-0-[(R)-3-decanoilo-xitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto de Ri = R2 = R3— n-C9H19CO, X=Y=0, n=p=1, m=q=0, R4=Rs=R7=R9=H, R6=OH, R9=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(7) o composto preparado no exemplo 6-(2) (900 mg, 0,72 mmol) foi desprotegido em AcOH aquoso a 90% (20 ml). O resíduo foi dissolvido em CH2CI2 (20 ml), foi resfriado para 0°C, e foi tratado com trietilamina (0,14 ml, 1,0 mmol) e difenil clorofosfato (0,17 ml, 0,8 mmol). A mistura foi agitada por um adicional de 6 h, e então foi bruscamente resfriada com 50 ml de HCI a 10%. O produto foi extraído com EtOAc (3 x 50 ml) e foi seco sobre Na2S04. Cromatografia sobre sílica gel com EtOAc/hexanos a 50% forneceu 636 mg (63%) de 3-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-6-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-triclo-roetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopironasídeo como um sólido amorfo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,87 (t, 12 H, J = 6,0 Hz), 1,1-1,6 (m, 68 H), 1,79 (s, 3 H), 1, 86 (s, 3 H), 2,01 (m, 1H), 2,18 (m, 3 H), 2,40 (m, 2 H, 2,67 (m, 1H), 2,89 (d, 1H, J = 6,5 Hz), 2,97 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 3,41 (m, 2 H), 3,75 (m, 1H), 3,82 (m, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,42 (d, 1H, J = 11,8 Hz), 4,65 (m, 3 H), 5,16 (m, 1H), 5,39 (m, 2 H), 5,75 (d, 1 H, J = 4,3 Hz), 6,05 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,22 (m, 15 H). (2) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(7), o composto preparado em (1) acima (620 g, 0,44 mmol) foi desprotegido com zinco (722 mg, 11 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-decanoilo-xitetradecanóico O 90 mg, 0,49 mmol) na presença de EEDQ (170 mg, 0,58 mmol) para fornecer 254 mg (36%) de 3-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-decanoi-loxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-6-0-difenilfosfono-2-[(R)-3 - decanoi-loxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiltetradecanoil]-beta-D-glucopira-nosídeo como um sólido amorfo incolor. (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8)f o composto preparado em (2) acima (254 mg, 0,16 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio (150 mg) sobre carbono em EtOH (10 ml) e óxido de platina (300 mg) em EtOH/AcOH (10:1) para fornecer 34 mg (13%) de 3-hidróxi-(S)-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-6-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 169 - 171-C; IV (película) 3306, 2922, 2853, 1732, 1644, 1548, 1467, 1377, 1316, 1165, 1106, 1053, 856, 722 cm'1; 1H-RMN (CDCIa - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,7 Hz), 1,1 -1,7 (m, 111 H), 2,2 - 2,7 (m, 12 H), 3,05 (m, 6 H), 3,3 - 3,95 (m, 12 H), 4,11 (m, 1H), 4,34 (m, 1H), 4,89 (m, 1H), 5,0-5,3 (m, 4H). 13C RMN (CDCI3) δ 173,8, 173,4, 171,1 170,5, 101,3, 75,3, 74,9, 71,2, 71,0, 70,6, 68,8, 67,3, 65,1, 61,4, 53,4, 50,7, 45,9, 41,5, 41,3, 39,6, 34,6, 32,0, 29,8, 29,6, 29,4, 25,3, 25,1,22,7, 14,1, 8,7. Análise calculada para C87Ci68N3Oi8P. H20: C, 65,58; H, 10,75; N, 2,64; P, 1,94, Encontrado: C, 65,60; H, 10,34; N, 2,36; P, 2,01. EXEMPLO 8 (B7) Preparação de 3-Hidróxi-(S)-2-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoilamino]propil 2- Desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoil)-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto (I). R4=R5=R7=R9=H, R6=OH p=1, R17=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(5), o composto Preparado no exemplo 4-(4) (1,0 g, 1,56 mmoles) foi acilado com ácido (R)- 3- nonanoiloxitetradecanóico (660 mg, 1,71 mmoles) e na presença de EDC-Mel (560 mg, 1,97 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (50 mg) em CH2CI2, (20 ml) para fornecer 1,31 g (83%) de 3-benzilóxi-(S)-2-(aliloxicarbonilami-no)propil 2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)-3-nonanoiloxitetradeca-noil]-2-(2,2,2 tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,87 (t, 6 H, J - 6,8 Hz), 1,1-1,6 (m, 32 H), 1,37 (s, 3 H), 1,46 (s, 3 H), 2,27 (t, 2 H, J = 7,4 Hz), 2,50 (dd, 1H, J = 15,1, 6.0 Ηζ), 2,63 (dd, 1 Η, J = 15,1, 6,8 Ηζ), 3,26, (m, 1 Η), 3,35 - 4,0 (m,9 Η), 4,32 (d, 1Η, J = 7,8 Ηζ), 4,41 (d, 1H, J = 12,0 Hz), 4,51 (m, 4 H), 4,95 (m, 2 H), 5,18 (m, 2 H), 5,29 (d, 1H, J = 17,2 Hz), 5,88 (m, 1H), 7,36 (m, 5 H). (2) do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(6) o composto preparado em (1) acima (1,29 g, 1,28 mmoles) foi desprotegido em THF (20 ml) na presença de dimetil malonato (1,0 ml, 0,88 mmol) e tetra-quis(trifenilfosfina)paládio(0) (200 mg) e então foi acilado com ácido (R)-3-nonanoiloxitetradecanóico (540 mg, 1,41 mmoles) na presença de EEDQ (370 mg, 1,5 mmoles) para fornecer 1,02 g (65%) de 3-benzilóxi-(S)-2-[(R)- 3-nonanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor: ^-RMN (CDCI3): δ 0,87 (1,12 H, J = 6,1 Hz), 1,1 - 1,7 (m, 64 H), 1,37 (s, 3 H), 1,46 (s, 3 H), 2,28 (m, 4 H), 2,50 (dd, 1 H, J = 15,5, 6,0 Hz), 2,62 (dd, 1H, J = 14,8, 6,3 Hz), 3,27 (m, 2 H), 3,44 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,74 (m, 3 H), 3,93 (m, 1 H), 4,18 (m, 1 H), 4,34 (m, 2 H), 4,57 (d, 1H, J = 11,8 Hz), 4,65 (m, 2 H), 4,97 (t, 1 H, J = 9,6 Hz), 5,06 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 5,15 (m, 2 H), 6,05 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,35 (m, 5 H). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(7) o composto pre- parado em (2) acima (1,0 g, 0,81 mmol) foi desprotegido em AcOH aquoso a 90% (20 ml), foi tratado com piridina (0,080 ml, 0,98 mmol) e 2,2,2-tricloro- 1.1 -dimetiletil cloroformiato (215 mg, 0,89 mmol) em CH2CI2 seguido por di-fenil clorofosfato (0,25 ml, 1,22 mmoles), trietilamina (0,21 ml, 1,52 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina catalítica (50 mg) para fornecer 1,17 g (87%) de 3-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopirano-sídeo como um sólido amorfo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,87 (t, 12 H, J = 6.1 Hz), 1,1 -1,6 (m, 64 H), 1,78 (s, 3 H), 1,86 (s, 3 H), 2,01 (m, 1 H), 2,18 (m, 3 H), 2,40 (m, 2 H), 2,67 (m, 1H), 2,88 (d, 1H, J = 6,5 Hz), 2,97 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 3,41 (m, 2 H), 3,72 (m, 1 H), 3,82 (m, 1H), 4,24 (m, 1 H), 4,42 (d, 1H, J = 11,8 Ηζ), 4,64 (m, 3 Η), 5,16 (m, 1Η), 5,39 (m, 2 Η , 5,75 (d, 1Η, J = 4,3 Ηζ), 6,05 (d, 1H, J - 8,4 Hz), 7,22 (m, 15 H). (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (3) acima (1,1 g, 0,66 mmol) foi desprotegido com zinco (2,2 g, 33 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-nonanoiloxitetra-decanóico (305 mg, 0,79 mmol) na presença de EEDQ (235 mg, 0,95 mmol) para fornecer 373 mg (35%) de 3-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-nonanoiloxitetra-decanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-nonanoiloxitetra-decanoilamino]-3-0-[(R)-3-nonanoiltetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor. (5) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(8), o composto preparado em (4) acima (373 mg, 0,23 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio (150 mg) sobre carbono em EtOH (10 ml) e oxido de platina (300 mg) em EtOH/AcOH (10:1) para fornecer 43 mg (12%) de 3-hidróxi-(S)-2-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-no-nanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 176-179-C; IR (película) 3298, 2956, 2923, 2853, 1733, 1646, 1551, 1467, 1337, 1316, 1254, 1166, 1106, 1053, 722 cm'1; 1H-RMN (CDCI3-CD3OD): δ 0,87 (t, 18 H, J = 6,7 Hz), 1,1 - 1,7 (m, 105 H), 2,2 - 2,7 (m, 12 H), 3,03 (q, 6 H, J = 7,0 Hz), 3,3 - 4,3 (m, 14 H), 4,43 (d, 1 H, J = 7,1 Hz), 5,0 - 5,3 (m, 4 H), 7,12 (d, 1 H, J = 7,7 Hz), 7,17 (d, 1H, J = 8,2 Hz). 13C RMN (CDCI3) δ 173,9, 173,5, 173,3, 170,8, 170,5, 170,1, 100,9, 75,5, 73,1, 71,4, 71,1, 70,9) 70,6, 67,8, 61,6, 60,7, 54,3, 50,5, 45,8, 41,6, 41,4, 39,5, 34,6, 34,4,32,0, 31,9, 29,8,29,4, 29,3, 25,4, 25,1, 22,7, 14,1, 8,6, Análise calculada para CesHi^NsOieP: C, 65, 81; H, 10, 65; N, 2,74; P, 2,02, Encontrado: C, 66,14; H, 10,46; N, 2,58; P, 1,84. EXEMPLO 9 (B8) Preparação de 3-Hidróxi-(S)-2-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoilamino)propil 2-Desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto (I), R: = R2 = R3= n-C6Hi3CO, X=Y=0, n=m=q=0, r4=r5=r7=R9=H, R6=OH, p=1, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(5), o composto preparado no exemplo 4-(4) (1,0 g, 1,56 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3- heptanoiloxitetradecanóico (610 mg, 1,71 mmoles) na presença de EDC-Mel (560 mg, 1,87 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (50 mg) em CH2CI2 (20 ml para fornecer 1,24 g (82%) de 3-benzilóxi-(S)-2-aliloxicarbonilamino)propil 2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)-3-hepta-noiloxitetradecanoil)-2-(2,2,2 tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopirano-sídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3) δ 0,88 (t, 6H, J = 6,0 Hz), 1,1-1,6 (m, 28 H), 1,38 (s, 3H), 1,47 (s, 3 H), 2,29 (t, 2 H, J = 7,4 Hz), 2,51 (dd, 1H, J = 15,1, 6,0 Hz), 2,63 (dd, 1H, J = 15,1, 6,8 Hz), 3,26 (m, 1H), 3,35 - 4,0 (m, 9 H), 4,32 (d, 1H, J = 7,3 Hz), 4,41 (d, 1H, J = 12,0 Hz), 4,51 (m, 4 H), 4,95 (m, 2 H), 5,18 (m, 2 H), 5,29 (d, 1H), J = 17,3 Hz), 5,88 (m, 1 H), 7,36 (m, 5 H). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(6) o composto preparado em (1) acima (1,22 g, 1,25 mmoles) foi desprotegido em THF (20 ml) na presença de dimetil malonato (1,0 ml, 0,88 mmol) e tetra-quis(trifenilfosfina)paládio(0) (200 mg) e então foi acilado com ácido (R)-3-heptanoiloxitetradecanóico (490 mg, 1,38 mmoles) na presença de EEDQ (370 mg, 1,5 mmoles) para fornecer 925 mg (62%) de 3-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-heptanoiloxítetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopironasídeo como um sólido amorfo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,87 (t, 12 H, J m6,7 Hz), 1,1-1,7 (m, 56 H), 1,37 (s, 3 H), 1,46 (s, 3 H), 2,32 (m, 4H), 2,50 (dd, 1H, J = I5,l, 6,0 Hz), 2,62 (dd, 1H,J = 15,1, 6,8 Hz), 3,29 (m, 2 H), 3,44 (m, 1 H), 3,55 (m, 1H), 3,74 (m, 3 H), 3,93 (m, 1 H), 4,18 (m, 1H), 4,34 (m, 1H), 4,57 (d, 1H, J = 11,8 Hz), 4,65 (m, 2 H), 5,01 (m, 2 H), 6,04 (d, 1 H, J = 9,3 Hz), 7,36 (m, 5 H). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(7) o composto preparado em (2) acima (920 mg, 0,76 mmol) foi desprotegido em AcOH aq. a 90% (20 ml), e então foi tratado com piridina (0,075 ml, 0,92 mmol) e 2,2,2-tricloro-l, 1 -dimetiletil cloroformiato (200 mg, 0,84 mmol) em CH2CI2 seguido por difenil clorofosfato (0,24 ml, 1,14 mmoles), trietilamina (0,21 ml, 1,52 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina catalítica (50 mg) para fornecer 1,03 g (83%) de 3-benzilóxi-(S)-2-(R)-3-heptanoiloxitetradeca-noilamino]propil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-heptanoiloxitetra-decanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro- 1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2, tricloroetoxi-carbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,87 (t, 12 H, J = 6,3 Hz), 1,1-1,6 (m, 56 H), 1,78 (s, 3 H), 1,86 (s, 3 H), 2,01 (m, 1H), 2,18 (m, 3 H), 2,40 (m, 2 H), 2,67 (m, 1H), 2,88 (d, 1H, J = 6,5 Hz), 2,97 (d, 1 H, J = 6,9 Hz), 3,41 (m, 2 H), 3,72 (m, 1H), 3,82 (m, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,42 (d, 1H, J = 11,8 Hz), 4,64 (m, 3 H), 5,16 (m, 1H), 5,39 (m, 2 H), 5,75 (d, 1H, J = 4,3 Hz), 6,05 (d, 1H,J = 9,4 Hz), 7,22 (m, 15 H). (4) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(7), o composto preparado em (3) acima (1,0 g, 0,61 mmol) foi desprotegido com zinco (2,0 g, 31 mmoles) e foi aciladò com ácido (R)-3-heptanoiloxitetradecanóico (260 mg, 0,73 mmol) na presença de EEDQ (220 mg, 0,88 mmol) para fornecer 203 mg (21%) de 3-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoilamino)-3-0-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor. (5) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(8), o composto preparado em (4) acima (203 mg, 0,13 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio (100 mg) sobre carbono em EtOH (10 ml) e óxido de platina (200 mg) em EtOH/AcOH (10:1) para fornecer 39 mg (21%) de 3-hidróxi-(S)-2-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-hep-tanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 171-172-C; IV (película) 3305, 2855, 2924, 2953, 1734, 1644, 1553, 1466, 1377, 1170,1102, 1052, 722 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 -CD3OD): δ 0,88 (m, 18 H), 1,1 -1,7 (m, 93 H), 2,2-2,7 (m, 12 H), 3,06 (q, 6 H, J + 7,1 Hz), 3,3 - 4,0 (m, 13 H), 4,23 (q, 1H, J - 9,3 Hz), 4,43 (d, 1H, J = 8,2 Ηζ), 5,0 - 5,3 (m, 4Η), 7,30 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,43 (d, 1H, J= 8,5 Hz); 13C RMN (CDCI3) δ 173,8, 173,5, 173,2, 170,8, 170,5, 170,2, 101,0, 77,2, 75.5, 73,1, 71,6,71,1, 70,9, 70,6, 67,8, 61,6,60,8, 54,4, 50,5, 45,8, 41,6, 41,4, 39,5, 34,6, 34,4, 32,0, 31,6, 29,8, 29,6, 29,4, 28,9, 25,4, 25,1, 22,7, 22.6, 14,1, 8,6.
Análise calculada para C78H150N3O18P. H20: C, 63,86; H, 10,44; N, 2,86; P, 2,11.
Encontrado: C, 63,47; H, 10,20; N, 2,59; P, 2,02. EXEMPLO 10 (B9) Preparação de 4-Hidróxi-(S)-3-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]butila 2-Desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino)- 3-0-[(R)-3-decanoiltetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto (I), R4=R5=R7=R9=H, κ6=υη ρ=π, κ8=κυ3ι-ι2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(3) o composto preparado no Exemplo 4-(1) (3,1 g, 5,9 mmoles) e (R)-3-(aliloxicarbonilamino)- 4- benzilóxi-1-butanol (1,1 g, 3,94 mmoles) foram acoplados na presença de eterato de trifluoreto de boro (3,0 ml, 23,6 mmoles) para fornecer 1,96 g (67%) de 4-benzilóxi-(S)-3-(aliloxicarbonilamino)butil 2-desóxi-3,4,6-tri-0-acetil-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo. Do mesmo modo que descrito no Exemplo 4-(4) o composto preparado acima (1,8 g, 2,43 mmoles) foi desacilado em metanol (25 ml) com hidróxido de amônio (5 ml) e então foi tratado com 2,2-dimetoxipropano (25 ml) e ácido canforsulfônico (100 mg) para fornecer 1,34 (84%) de 4-benzilóxi-(S)-3-(aliloxicarbonilamino)butil 2-desóxi-4,6-0-isopropilidina-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo. (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(5), o composto preparado em (1) acima (1,0 g, 1,53 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (670 mg, 1,68 mmoles) na presença de EDC-Mel (550 mg, 1,85 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (50 mg) em CH2CI2 (15 ml) para fornecer 1,03 g (65%) de 4-benzilóxi-(S)-3-(aliloxicarbonilamino)butil 2- desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)-3-decano[loxitetradecanoil]-2- (2,2,2 tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo. 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,9 Hz), 1,1 - 1,6 (m, 34 H), 1,37 (s, 3 H), 1.47 (s, 3 H), 1,85 (m, 2 H), 2,28 (t, 2 H, J = 7,6 Hz), 2,50 (dd, 1H, J = 15,1, 6,0 Hz), 2,63 (dd, 1H, J = 15,1, 6,7 Hz), 3,30 (m, 1H), 3,49 (m, 4 H), 3,68 (t, 1 H, J = 9,4 Hz), 3,77 (t, 1H, J = 10,4 Hz), 3,92 (m, 3 H), 4,54 (m, 5 H), 4,69 (m, 2 H), 5,1 - 5,4 (m, 4 H), 5,91 (m, 1 H), 7,33 (m, 5 H). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(6) o composto preparado em (2) acima (1,0 g, 0,97 mmol) foi desprotegido em THF (20 ml) na presença de dimetil malonato (1,0 ml, 0,88 mmol) e tetra-quis(trifenilfosfina)paládio(o) (200 mg) e então foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (425 mg, 1,07 mmoles) na presença de EEDQ (317 mg, 1,28 mmoles) para fornecer 660 mg (51%) de 4-benzilóxi-(S)-3-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H, J = 6,6 Hz), 1,1 - 1,7 (m, 68 H), 1,37 (s, 3 H), 1,47 (s, 3 H), 2,26 (q, 2 H, J = 7,1 Hz), 2,41 (m, 2 H), 2,62 (dd, 1H, J = 14,9, 6,4 Hz), 3,29 (m, 1 H), 3.48 (m, 3 H), 3,71 (m, 2 H), 3,92 (m, 2 H), 4,18 (m, 1 H), 4,49 (m, 2 H), 4,68 (q, 2 H, J = 11,5 Hz), 5,15 (m, 2 H), 5,55 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 6,17 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,32 (m, 5 H). (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(7) 0 composto preparado em (3) acima (640 mg, 0,48 mmol) foi desprotegido em AcOH aq a 90% (20 ml), e então foi tratado com piridina (0,047 ml, 0,58 mmol) e 2,2,2-tricloro-1,1 -dimetíletil cloroformiato (127 mg, 0,53 mmol) em CH2CI2 seguido por difenil clorofosfato (0,15 ml, 0,72 mmol), trietilamina (0,13 ml, 0,96 mmol) e 4, pirrolidinopiridina catalítica (50 mg) para fornecer 389 mg (47%)de 4-benzilóxi-(S)-3-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]butil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-trietoxietoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor: 1H-RMN (CDCI3) δ 0,88 (t, 12 H, J = 6,6 Hz), 1,1-1,6 (em, 68 H), 1,79 (s, 3 H), 1,86 (s, 3 H), 2,22 (m, 4 Η), 2,40 (m, 4 Η), 3,49 (m, 4 Η), 3,78 (m, 1Η), 3,93 (m,1H), 4,1 - 4,5 (m, 5 H), 4,9 - 4,6 (m, 4 H), 5,13 (m, 2 H), 5,51 (t, 1 H, J = 8,9 Hz), 5,84 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 6,09 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,26 (m, 15 H). (5) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (4) acima (375 g, 0,23 mmol) foi desprotegido com zinco (752 mg, 11,5 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (101 mg, 0,25 mmol) na presença de EEDQ (70 mg, 0,28 mmol) para fornecer 270 mg (67%) de 4-benzilóxi-(5)-3-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoiljbutil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-decanoi-loxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiltetradecanoil]-beta-D-glucópira-nosídeo como um sólido amorfo incolor. (6) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (5) acima (270 mg, 0,15 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio (150 mg) sobre carbono em EtOH (10 ml) e óxido de platina (300 mg) em EtOH/AcOH (10:1) para fornecer 93 mg (39%) de 4-hidróxi-(S)-3-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]butil 2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiltetra-decanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 179-181-C (dec). IV (película) 3287, 2956, 2923, 2853, 1734, 1654, 1552, 1466, 1378, 1246, 1164, 1106, 1085, 1052, 721 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,9 Hz), 1,1 -1,7 (m, 111 H), 2,2-2,7 (m, 14 H), 3,06 (q, 6 H, J = 6,9 Hz), 3,2-4,0 (m, 13 H), 4,21 (m, 1H), 4,50 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 5,0 - 5,3 (m, 4 H), 7,11 (m, 2 H); 13C RMN (CDCI3) δ 173,8, 173,5, 173,3, 170,9, 170,5, 170,1, 101,1, 77,2, 75,5, 72,8, 71,3, 71,0, 70,6, 66,4, 64,0, 60,7, 54,8, 50,2, 45,8, 41,6, 39,5, 34,6, 34,5, 34,4, 32,0, 30,6, 29,8, 29,7, 29,6, 29,5, 29,4, 25,4, 25,1,22,7,14,2, 8,6.
Análise calculada para C8eHi7oN3Oi8P: C, 66,65; H, 10,78; N, 2,64; P, 1,95, Encontrado: C, 66,65; H, 10,68; N, 2,50, P, 1,94. EXEMPLO 11 (B10) Preparação de 4-Hidróxi-(S)-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]butil 2-Desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3- decanoiltetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto (I), R-ι = R2 = R3= n-C9Hi9CO, X=Y=0, n=m=q=0, R4=R5=R7= R9=H, R6=OH p=2, r8=po3h2). (1) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 4-(3) o composto preparado no exemplo 4-(1) (5,1 g, 9,7 mmoles) e (R)-2-(aliloxicarbonilamino)-4-benzilóxi-l-butanol (1,8 g, 6,45 mmoles) foram acoplados na presença de eterato de trifluoreto de boro (4,9 ml, 38,0 mmoles) para fornecer 2,92 g (61%) de 4-benzilóxi-(S)-2-(aliloxicarbonilamino)propil 2-desóxi-3,4,6-tri-0-acetil-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-gluco-piranosídeo como um sólido amorfo. Do mesmo modo que descrito no Exemplo 4-(4) o composto preparado acima (2,6 g, 3,51 mmoles) foi desa-cilado em metanol (35 ml) com hidróxido de amônio (7 ml) e então foi tratado com 2,2-dimetoxipropano (35 ml) e ácido canforsulfônico (100 mg) para fornecer 1,9 g (72%) de 4-benzilóxi-(S)-2-(aliloxicarbonilamino)butil 2-desóxi-4,6-0-isopropilidina-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo. (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(5), o composto preparado em (1) acima (1,0 g, 1,53 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (670 mg, 1,68 mmoles) na presença de EDC-Mel (550 mg, 1,85 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (50 mg) em CH2CI2 (15 ml) para fornecer 1,28 g (81%) de 4-benzilóxi-(S)-2-(aliloxicarbonilamino)butil 2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)-3-deca-noiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopirano-sídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,9 Hz), 1,1 -1,7 (m, 34 H), 1,37 (s, 3 H), 1,47 (s, 3 H), 1,82 (m, 2 H), 2,28 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,50 (dd, 1 H, J = 15,3, 6,0 Hz), 2,63 (dd, 1H, J = 15,2, 6,7 Hz), 3,16 (m, 1H), 3,56 (m, 3 H), 3,65 (t, 1 H, J = 9,6 Hz), 3,75 (t, 1H, J = 10,4 Hz), 3,88 (m, 4 H), 4,32 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 4,46 (s, 2 H), 4,54 (m, 2 H), 4,67 (m, 2 H), 4,90 (m, 1H), 5,26 (m, 3 H), 5,89 (m, 1H), 7,33 (m, 5 H). (3) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 4-(6) o composto preparado em (2) acima (1,25 g, 1,21 mmoles) foi desprotegido em THF (20 ml) na presença de dimetil malonato (1,0 ml, 0,88 mmol) e tetra- quis(trifenilfosfina)paládio(0) (200 mg) e então acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (530 mg, 1,33 mmoles) na presença de EEDQ (362 mg, 1,46 mmoles) para fornecer 1,16 g (72%) de 4-benzilóxi-(S)-3-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4,6-0-isopropilideno-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H, J = 6,4 Hz), 1,1 - 1,7 (m, 68 H), 1,37 (s, 3 H), 1,45 (s, 3 H), 2,26 (q, 2 H, J = 7,4 Hz), 2,34 (m, 1H), 2,50 (dd, 1H, J = 15,1, 6,0 Hz), 2,62 (dd, 1H, J = 15,4, 6,3 Hz), 3,12 (m, 1 H), 3,5 - 3,95 (m, 7 H), 4,14 (m, 1H), 4,29 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 4,67 (m, 2 H), 4,86 (t, 1H, J = 9,6 Hz), 5,15 (m, 2 H), 6,16 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,35 (m, 5 H). (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 4-(7) o composto preparado em (3) acima (1,1 g, 0,83 mmol) foi desprotegido em AcOH aq. a 90% (20 ml), e então foi tratado com piridina (0,080 ml, 1,0 mmol) e 2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletilcloroformiato (220 mg, 0,91 mmol) em CH2CI2 seguido por difenil clorofosfato (0,26 ml, 1,25 mmoles), trietilamina (0,23 ml, I, 66 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina catalítica (50 mg) para fornecer 802 mg (56%) de 4-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil)butil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo incolor: ’Η-RMN (CDCI3): δ 0,87 (t, 12 H, J = 6,8 Hz), 1,1 -1,6 (m, 68 H), 1,79 (s, 3 H), 1,88 (s, 3 H), 2,23 (m, 4 H), 2,37 (m, 4 H), 3,57 (m, 4 H), 3,83 (m, 1 H), 4,29 (m, 3 H), 4,44 (m, 2 H), 4,69 (m, 4 H), 5,14 (m, 4 H), 5,62 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 6,15 (d, 1 H, J - 8,3 Hz), 7,25 (m, 15 H). (5) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (4) acima (750 mg, 0,43 mmol) foi desprotegido com zinco (1,42 g, 21,7 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (190 mg, 0,48 mmol) na presença de EEDQ (1,30 mg, 0,53 mmol) para fornecer 483 mg (64%) de 4-benzilóxi-(S)-2-[(R)-3-decanoi loxitetradecanoil]buti I 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-decanoi- loxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiltetradecanoil]-beta-D-glucopira-nosídeo como um sólido amorfo incolor. (6) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (5) acima (483 mg, 0,27 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio (150 mg) sobre carbono em BtOH (10 ml) e óxido de platina (300 mg) em EtOH/AcOH (10:1) para fornecer 238 mg (55%) de 4-hidróxi-(S)-2-(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]butil 2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiltetrade-canoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 181-183°C (dec): IV (película) 3294, 2956, 2823, 2953, 1732, 1650, 1556, 1466, 1377, 1320, 1246, 1172, 1108, 1082, 1058, 859, 721 cm*1; 1H-RMN (CDCI3-CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,9 Hz), 1,1 - 1,7 (m, 111 H), 2,2 - 2,7 (m, 14 H), 3,06 (q, 6 H, J = 7,1 Hz), 3,2 - 4,0 (m, 13 H), 4,21 (m, 1 H), 4,46 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 5,0 - 5,3 (m, 4 R); 13C RMN (CDCI3) δ 173,9, 173,4, 173,2, 171,2, 170,7, 101,0, 77,2, 75,4, 73,1, 71,4, 71,3, 71,1, 70,9, 70,6, 60,7, 58,4, 54,7, 46,3, 45,9, 41,6, 41,1, 39,7, 34,8, 34,6, 34,4, 31,9, 29,8, 29,6, 29,5, 29,3, 25,4, 25,3, 25,1, 22,7, 14,1, 8,6.
Análise calculada para θ8βΗΐ7οΝ3ΟιβΡ: C, 66,51; H, 10,78; N, 2,64; P, 1,95, Encontrado C, 66,81; H, 10,68; N, 2,53; P, 1,79. EXEMPLO 12 (B11) Preparação de N-[( R)-3-tetradecanoi loxitetradecanoi l]-0-[2-desóxi-4-0- fosfono-2[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-tetradeca-noiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio (Composto (I), Ri = R2 = R3= n-C13H27CO, X=Y=0, n=m=p=q=0, R4=R5=R7=R9=H, r6=co2h, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(5), éster de benzila de L-serina (0,212 g, 1,08 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (0,541 g, 1,19 mmoles) na presença de EDC-Mel (0,353 g, 1,19 mmoles) para dar 0,642 g (94%) de éster de benzila de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-L-serina como um sólido ceroso: p.f. 56 -61»C; 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H = -7 Hz), 1,1-1,7 (m,42 H), 2,29(t, 2 H, J = -7,5, Ηζ), 2,50 (m, 2 Η), 3,87 (br t, 1H), 3,95 (m, 2 H), 4,65 (m, 1H), 5,1-5,25 (m, 3 H), 6,69 (d, 1H, J = -7 Hz), 7,34 (br s, 5 H). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(6), o composto preparado em (1) acima (0, 19 g, 0,30 mmol) e o composto preparado no exemplo 2-(4) (0-635 g, 0,478 mmol) foram acoplados na presença de cianeto de mercúrio (0,3 g, 1,2 mmoles) para dar 0,425 g (77%) de éster de benzila de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenil-fosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbnil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopira-nosil]-L-serina como um sólido amorfo. (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7). o composto preparado em (2) acima (0,405 g, 0,22 mmol) desprotegido com zinco (0,72 g, 11 mmoles) e acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxi-tetra-decanóico (0,12 g, 0,26 mmol) na presença de EEDQ (0,082 g, 0,33 mmol) para dar 0,277 h (66%) de éster de benzila de N-[(R)-3-tetrade-canoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-tetradeca-noiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil)-L-serina como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 18H, J = -6,5 Hz), 1,0-1,75(m, 126H), 2,15-2,45(m, 10 H),2,53 (dd, 1H, J = 14,7, 6,0 Hz), 2,67 (dd, 1 H, J = 14,6,0 Hz), 3,25 (br t, 1H, J =7 Hz), 3,35- 3.75 (m,4 H), 3,88 (dd, 1H, J = 11,1 Hz), 4,23 dd, 1 H, J = 11,1,3 Hz), 4,6- 4.75 (m, 2 H), 5,03 (d, 1 H J = 8,1 Hz), 5,05-5,25 (m, 4 H), 5,48 (t, 1H, J = -10 Hz), 6,40 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,01 (d, 1H, J =8,1 Hz), 7,1-7,4 (m, 15 H). (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (3) acima (0,253 g, 0,133 mmol) foi hidrogenado na presença de 5% de paládio sobre carbono (50 mg) e óxido de platina (120 mg) para dar 0,155 g (62%) de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3 tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trieti-lamônio como um sólido incolor: pf 180°C (dec); IV (película) 3322, 2956, 2924, 2852, 1736, 1732, 1681, 1673, 1667, 1660, 1651, 1467, 1456, 1247, 1174, 1110, 1081 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = - 7 Ηζ), 1,0-1,7 (m, 135 Η), 2,2-2,75 (m, 12 Η), 3,05 (q, 6 Η, J = ~7 Ηζ), 3,30 (br s, 13 Η), 3,7-3,9 (m, 3 Η, 3,96 (d, 1Η, J =12 Ηζ), 4,05-4,3 (m, 2 Η), 4,34 (m, 1H), 4,53 (d, 1H, J =7,8 Hz), 5,05-5,3 (m, 4 H), 7,25-7,35 (m, 2 H); 13C RMN (CDCI3) δ 173,4, 173,2, 171,0, 170,3, 170,2, 169,9, 169,8, 100,8, 75,1, 73,4, 71,1, 70,7, 70,4, 70,3, 60,2, 54,3, 45,6, 41,2, 41,1, 39,2, 34,6, 34,4, 34,2, 32,0, 29,8, 29,5, 25,4, 25,2, 22,7, 14,2, 8,6, Análise calculada para Cg9HigoN30i9P.5H20: C, 64,35; H, 10,91; N, 2,27; P, 1,68, Encontrado: C, 64,16; H, 10,92; N. 2,37; P, 1,91. EXEMPLO 13 (B12) Preparação de N-[(R)-3-Dodecanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-Fosfo-no-2[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-dodecanoiloxitetra-decanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio (Composto (I), R1 = R2 = R3= n-CnH23CO, X=Y=0, n=m=p=q=0, R4=R5=R7=R9=H, R6=C02H, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(5), éster de benzila de L-serina (390 mg, 2,0 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-dodecanoiloxitetradecanóico (935 mg, 2,2 mmoles) na presença de EDC-Mel (743 mg, 2,5 mmoles) em CH2CI2 para fornecer 1,08 g (90%) de éster de benzila de N-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-L-serina: pf 53-54»C. 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,5 Hz), 1,1 - 1,6 (m, 46 H), 2,30 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,50 (d, 2 H, 5,6 Hz), 2,62 (t, 1H, J = 6,2 Hz), 3,97 (m, 2 H), 4,65 (m, 1H), 5,19 (m, 3 H), 6,63 (d, 1 H, J - 6, 8 Hz), 7,35 (br s, 5 H). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(2), o composto preparado no exemplo 2-(l) (1,0 g, 2,02 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-dodecanoiloxitetradecanóico (946 mg, 2,22 mmoles) na presença de EDC-Mel (720 mg, 2,4 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (100 mg) em CH2CI2, e então foi desprotegido em AcOH aq. (25 ml) para fornecer 1,30 g (81%) de 2-(trimetilsilil)etil 2-desóxi-3-0-[(R)-3-dodecanoiloxitetra-decanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amor-fo:1H-RMN (CDCI3): δ 0,00 (s, 9H), 0,88 (m, 8H), 1,25 (m, 28 H), 1,59 (m, 4 H), 2,30 (t, 2 H, J = 7,5 Hz), 2,52 (m, 2 H), 3,42 (m, 1H), 3,55 (m, 1 H), 3,66 (m, 1H), 3,83 (dd, 1H, J = 11,8, 4,6 Hz), 3,94 (m, 2 H), 4,57 (d, 1 H, J = 8,2 Hz), 4,71 (m, 2H), 5,07 (m, 2H), 5,27 (d, 1 H, J = 8,8 Hz). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(3), o composto preparado em (2) acima (1,30 g, 1,51 mmoles) foi tratado com 2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletil cloroformiato (398 mg, 1,66 mmoles) e piridina (0,15 ml, 1,83 mmoles) em CH2CI2 (25 ml) seguido por trietilamina (0,42 ml, 3,02 mmoles), difenil clorofosfato (0,47 ml, 2,27 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (100 mg) para fornecer 1,39 g (71%) de 2-(trimetilsilil)etil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2 2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-be-ta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo 1H-RMN (CDCI3): δ 0,0 (s, 9 H), 0,88 (m, 8 H), 1,1-1,7 (m, 46 H), 1,77 (s, 3 H), 1,85 (s, 3 H),2,23 (m, 6 H), 3,34 (m, 1H), 3,59 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,96 (m, 1 H), 4,32 (m, 2 H), 4,63 (m, 2 H), 4,83 (d, 1H, J = 11,9 Hz), 5,02 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,20 (m, 1 H), 5,65, (m, 2 H), 7,29 (m, 10 H). (4) O composto preparado em (3) acima (1,30 g, 1,0 mmol) em CH2CI2 (15 ml) foi tratado a 0°C com TFA (5 ml) e então foi deixado se aquecer para a temperatura ambiente por 18 h. O solvente foi removido em vácuo e o TFA restante foi removido por azeotropização com tolueno. O lactol foi tratado com o reagente de Vilsmeier preparado a partir de DMF (0,39 ml, 5,0 mmoles) e cloreto de oxalila (0,22 ml, 2,5 mmoles) em CH2CI2 (20 ml) a 0°C. A reação foi deixada se aquecer lentamente para a temperatura ambiente de um dia para o outro e foi separada entre 50 ml de NaHC03 aq. saturado e éter (50 ml). As camadas foram separadas e a fase orgânica foi seca sobre Na2S04 e foi concentrada em vácuo. Purificação por croma-tografia flash sobre sílica gel com EtOAc/hexanos a 10% forneceu 1,09 g (90%) de cloreto de 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-alfa-D-glucopiranosila como uma espuma branca: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,8 Hz), 1,2 - 1,70 (m, 46 H), 1,78 (s, 3 H), 1,88 (s, 3 H), 2,18 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,43 (m, 2 H), 4,30 (m, 4 Η), 4,72 (m, 3 Η), 5,09 (m, 1Η), 5,50 (t,1H, J = 9,5 Hz), 5,79 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,27 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 7,19 (m, 10 H). (5) A uma solução de compostos preparada em (1) e (4) (540 mg, 0,90 mmol, e 1,0 g, 0,82 mmol, respectivamente) em 1,2-dicloroetano (20 ml), peneiras moleculares de 4 Á em pó (300 mg) foram adicionadas e a suspensão foi agitada por 30 min. AgOTf (1,16 g, 4,5 mmoles) foi adicionado em uma porção, depois de 30 min a lama foi filtrada através de sílica gel e foi eluída com EtOAc/hexanos a 30% para fornecer 1,10 g (75%) de éster de benzila de N-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-0-(2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3 dodecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro- 1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopimnosil]-L-serina: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H, J = 6,5 Hz), 1,1 -1,65 (m, 92 H), 1,77 (s, 3 H), 1,85 (s, 3 H), 2,1 -2,5(m,8H), 3,67 (m, 2 H), 4,30 (m, 3 H), 4,72 (m, 5 H), 5,18 (m, 4 H), 5,46 (m, 1H), 6,07 (m, 1H), 6,62 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,05 - 7,45 (m, 15 H). (6) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (5) acima (1,0 g, 0,56 mmol) foi desprotegido com zinco (1,83 g, 28 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-dodecanoiloxitetradecanóico (285 mg, 0,67 mmoles) na presença de EEDQ (185 mg, 0,74 mmoles) para fornecer 420 mg (44%) de éster de benzila de N-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil)-beta-D-glucopiranosil]-L-serina como um sólido amorfo. (7) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (6) acima (420 mg, 0,24 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio sobre carbono em EtOH (10 ml) e óxido de platina (400 mg) em EtOH/AcOH (10:1) para fornecer 240 mg (60%) de N-[(R)-3 -dodecanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-do-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 181-182-C; IV (película) 3289, 2956, 2920, 2851, 1731, 1656, 1557, 1467, 1378, 1182, 1108, 1080, 1052, 852, 721 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,7 Ηζ), 1,1 - 1,7 (m, 123 Η), 2,2 - 2,7 (m, 12 Η), 3 06 (q, 6 Η, J = 7,2 Ηζ), 3,35 (m, 1Η), 3,70 (m, 6 Η), 3,88 (m, 2 Η), 4,20 (m, 1 Η), 4,56 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 4,59 (br s, 1H), 5,16 (m, 4 H); 13C RMN (CDCI3) δ 176,9, 173,3, 173,2, 172,7, 169,6, 169,1, 101,5, 74,8, 71,2, 70,9, 69,2, 60,5, 53,1, 51,4, 46,1, 41,5, 41,0, 39,2, 34,3, 34,2, 34,0, 32,0, 29,8, 29,7, 29,4, 29,2, 25,6, 25,3, 25,2, 25,1,22,7,14,1,8,7 Análise calculada para C93H178N3O19P.H2O: C, 66,04; H, 10,73; N, 2,48; P, 1,83.
Encontrado: C, 66,04; H, 10,73; N, 2,48; P, 1,86. EXEMPLO 14 (B13) Preparação de N-[(R)-3-Undecanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfo-no-2-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-undecanoiloxitetra-decanoil)-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal deTrietilamônio (Composto (I), R1 = R2 = R3— n-Ci0H2iCO, X=Y=0, n=m=p=q=0, R4—R5=R7—Rg—H, R6=C02H, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(5), éster de benzila de L-serina (390 mg, 2,0 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-undecanoiloxitetradocaneico (905 mg, 2,2 mmoles) na presença de EDC.Mel (745 mg, 2,5 mmoles) em CH2CI2 para fornecer 1,08 g (92%) de éster de benzila de IM-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoil]-L-serina: pf 53-54° C; 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6H, J = 6,9 Hz), 1,1-1,7 (m, 44 H), 2,30 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,49 (d, 2 H, J = 5,8 Hz), 3,99 (m, 2 H), 4,65 (m, 1H), 5 - 19 (m, 3 H), 6,58 (d, 1 H, J = 6,9 Hz), 7,35 (br s, 5 H). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(2), o composto preparado no Exemplo 2-(1) (1,0 g, 2,02 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-undecanoiloxitetradecanóico (915 mg, 2,22 mmoles) na pre-sença de EDC-Mel (720 mg, 2,4 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (100 mg) em CH2CI2, e então foi desprotegido em AcOH aq. (25 ml) para fornecer 1,41 g (82%) de 2-(trimetilsilil)etil 2-desóxi-3-0-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo., 1H-RMN (CDCI3): δ 0,00 (s, 8 H), 0,88 (m, 9 H), 1,25 (m, 32 H), I, 60 (m, 4 H), 2,31 (t, 2 H, J = 7,5 Hz), 2,52 (m, 2 H), 3,42 (m, 1 H), 3,55 (m, 1 Η), 3,66 (m, 1Η), 3,83 (dd, 1H, J = 11,8, 4,6 Hz), 3,94 (m, 2 H, 4,5,7 (d, 1H, J - 8,2 Hz), 4,71 (m, 2 H), 5,07 (m, 2 H), 5,27 (d, 1 H, J = 8, 7 Hz). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(3), o composto preparado em (2) acima (1,30, 1,53 mmoles) foi tratado com 2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletil cloroformiato (403 mg, 1,68 mmoles) e piridina (0,15 ml, 1,85 mmoles) em CH2CI2 (25 ml) seguido por trietilamina (0,43 ml, 3,06 mmoles), difenil clorofosfato (0,48 ml, 2,30 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (100 mg) para fornecer 1,37 g (70%) de 2-(trimetilsilil)etil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopirano-sídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,0 (s, 9 H), 0,88 (m, 8 H), 1,1-1,7 (m, 44 H), 1,80 (s, 3 H), 1,89 (s, 3 H), 2,23 (m, 6 H), 3,58 (m, 3 H), 4,32 (m, 1H), 4,71 (m, 2 H), 4,83 (d, 1H, J = 12,1 Hz), 5,01 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 5,20 (m, 1H), 5,62 (m, 2 H), 7,25 (m, 10 H). (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(4), o composto preparado em (4) acima (1,28 g, 1,0 mmol) foi desprotegido com TFA (5 ml) e então foi tratado com o reagente de Vilsmeier gerado a partir de DMF (0,39 ml, 5,0 mmoles) e cloreto de oxalila (0,22 ml, 2,5 mmoles) para dar 1,12g (93%) de cloreto de 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0- [(R)-3 -undecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-alfa-D-glucopiranosila como uma espuma branca: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,7 Hz), 1,1 - 1,55 (m, 44 H), 1,78 (s, 3 H), 1,88 (s, 3 H), 2,18 (m, 2H), 2,43 (m, 2 H), 4,34 (m, 4 H), 4,72 (m, 3 H), 5,09 (m, 1H), 5,50 (t, 1H, J = 9,6 Hz), 5,80 (d, 1H, J = 8, 0 Hz), 6,26 (d, 1H, J = 3,4 Hz), 7,26 (m, 10 H). (5) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13 -(5), compostos preparados em (1) e (4) acima (530 mg, 0,90 mmol, e 1,0 g, 0,83 mmol, respectivamente) foram acoplados na presença de AgOTf (1,16 g, 4,5 mmoles) para fornecer 1,11 g (76%) de éster de benzila de N-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoil]-0-(2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-unde-canoiloxitetradecanoil)-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosil]-L-serina: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (m, 12 Η), 1,0 - 1,65 (m, 88 Η), 1,77 (s, 3 Η), 1,85 (s, 3 Η), 2,1 - 2,5 (m, 8 Η), 3,37 (m, 1 Η), 3,64 (m, 1Η), 3,85 (m, 1H), 4,30 (m, 3 H), 4,78 (m, 5 H), 5,18 (m, 4 H), 5,46 (m, 1H), 6,07 (m, 1H), 6,62 (d, 1H, J = 77 Hz), 7,05 -7,45 (m, 15 H). (6) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o com- posto preparado em (5) acima (1,0 g, 0,57 mmol) foi desprotegido com zinco (2,0 g, 30,5 mmoles) e acilado com ácido (R)-3-undecanoiloxitetradecanóico (280 mg, 0,68 mmol) na presença de EEDQ (185 mg, 0,75 mmol) para fornecer 470 mg (50%) de éster de benzila de N-[(R)-3- undecanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoil)-beta-D-glucopiranosil]-L-serina como um sólido amorfo. (7) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (6) acima (470 mg, 0,27 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio sobre carbono em EtOH (10 ml) e óxido de platina (400 mg) em EtOH/AcOH (10: 1) para fornecer 130 mg (30%) de N-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoil)-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-undecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3 undecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 181-183-C; IV (película.) 3294, 2923, 2853, 1734, 1655, 1466, 1377, 1163, 1080, 721 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,8 Hz), 1,1 -1,7 (m, 117 H), 2,2 - 2,7 (m, 12 H), 3,06 (q, 6 H, J = 7,1 Hz), 3,4 - 3,2 (m, 5 H), 3,6 - 3-9 (m, 4 H), 4,20 (d, 1H, 9,8 Hz), 4,54 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 4,62 (br, s, 1H), 5,17 (m, 4 H); 13C RMN (CDCI3) δ 173,5, 173,3, 172,8, 172,2, 169,6, 169,1, 101,5, 77,2, 74,8, 70,9, 69,2, 60,5, 58,5, 53,1, 51,5, 46,1, 41,5, 41,1, 39.2, 34,6, 34,4,34,1, 32,0, 29,8, 29,7, 29,4, 29,2, 25,6, 25,2, 25,1, 22,7, 18.5.14.2, 8,7.
Análise calculada para C90Hi72N3Oi9P: C, 66,26, H, 10,63; N, 2,58; P, 1,90, Encontrado C, 66,56; H, 10,57; N, 2,47; P, 1,91. EXEMPLO 15 (B14) Preparação de N-[(R)-3-Decanoiloxitetradecanoil]-0-(2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradeca-noil]-beta-D-glucopiranosil]-D-serina Sal de Trietilamônio (Composto (I), R1 — R2 = R3— n-C9H19CO, X—Y—O, n=m=p=q=0, R4=Rs=R7=R9=H, Rg—CC^H, r8=po3h2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(5), éster de benzila de D-serina (390 mg, 2,0 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (875 mg, 2,2 mmoles) na presença de EDC-Mel (745 mg, 2,5 mmoles) em CH2CI2 para fornecer 1,05 g (91%) de éster de benzila de N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-D-serina: pf 51-52-C; 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (m, 6 H), 1,1 - 1,7 (m, 34 H), 2,30 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,50 (m, 2 H), 3,68 (s, 1H), 3,93 (d, 2 H, J = 3,1 Hz), 4,62 (m, 1H), 5,22 (m, 3 H), 6,63 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,35 (br s, 5 H). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(2). 0 composto preparado no exemplo 2-(l) (1,0 g, 2,02 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (884 mg, 2,22 mmoles) na presença de EDC.Mel (720 mg, 2,4 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (100 mg) em CH2CI2, e então foi desprotegido em AcOH aq. (25 ml) para fornecer 1,30g (77%) de 2-(trimetilsilil)etil 2-desóxi-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo, 1H-RMN (CDCb): δ 0,00 (S, 9 H), 0,88 (m, 8 H), 1,25 (m, 30 H), 1,59 (m, 4 H), 2,30 (t, 2 H, J = 7,5 Hz), 2,52 (m, 2 H), 3,42 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,83 (dd, 1 H, J = 11,8, 4,6 Hz), 3,94 (m, 2 H), 4,57 (d, 1 H, J = 8,2 Hz), 4,71 (m, 2 H), 5,07 (m, 2 H), 5,27 (d, 1H, J = 8,8 Hz). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(3), 0 composto preparado em (2) acima (1,25 g, 1,50 mmoles) foi tratado com 2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletil cloroformiato (396 mg, 1,65 mmoles) e piridina (0,15 ml, 1,81 mmoles) em CH2CI2 (25 ml) seguido por trietilamina (0,42 ml, 3,00 mmoles), difenil clorofosfato (0,47 ml, 2,25 mmoles) e 4-pirrolidino-piridina (100 mg) para fornecer 1,31 g (69%) de 2-(trimetiIsiIil]etiI 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopirano- sídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,0 (s, 9 H), 0,89 (m, 8 H), 1,1 -1,7 (m, 34 H), 1,82 (s, 3 H), 1,90 (s, 3 H), 2,30 (m, 4 H), 3,40 (q, 1H, J = 9,6 Hz), 3,65 (m, 1H), 3,89 (m, 1H), 4,32 (m, 2 H), 4,63 (m, 2H), 4,82 (d, 1H,J = 12,1 Hz), 5,01 (d, 1H,J = 8,2 Hz), 5,63 (m, 2H), 7,29 (m, 10 H). (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(4), o composto preparado em (3) acima (1,27 g, 1,0 mmol) foi desprotegido com TFA (5 ml) e então foi tratado com reagente de Vilsmeier gerado a partir de DMF (0,39 ml, 5,0 mmoles) e cloreto de oxalila (0,22 ml, 2,5 mmoles) para dar 1,06 g (89%) de cloreto de 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2, 2-tricloroetoxicarbonilamino)-alfa-D-glucopiranosila como uma espuma branca: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,6 Hz), 1,1 - 1,55 (m, 34 H), 1,78 H), 1,88 (s, 3 H), 2,18 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,43 (m, 2 H), 4,32 (m, 4 H), 4,71 (m, 3 H), 4,83 (m, 3 H), 5,09 (m, 1 H, 5,50 (t, 1 H, J = 9,5 Hz), 5,77 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,26 (d, 1H, J = 3,4 Hz), 7,20 (m, 1 0 H). (5) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(5), compostos preparados em (1) e (4) acima acima (520 mg, 0,90 mmol, e 1,0 g, 0,84 mmol, respectivamente) foram acoplados na presença de AgOTf (1,16 g, 4,5 mmoles) para fornecer 1,13 g (79%) de éster de benzila de N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3 deca-noiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tri-cloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosil]-D-serina: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H, J = 6,6Hz), 1,1 - 1,65 (m, 68 H), 1,82 (s, 3 H), 1,89 (s, 3 H), 2,2 - 2,6 (m, 8 H), 3,40 (m, 1H), 3,64 (m, 1H), 4,01 (m, 2 H), 4,27 (m, 2 H), 4,44 (d, 1H, J = 7,1 Hz), 4,60 (m, 2 H), 4,77 (m, 2 H), 5,19 (m, 6 H), 6,61 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,05 - 7,45 (m, 15 H). (6) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(7), o composto preparado em (5) acima (1,0 g, 0,58 mmol) foi desprotegido com zinco (1,9 g, 29 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (280 mg, 0,70 mmol) na presença de EEDQ (190 mg, 0,77 mmol) para fornecer 420 mg (44%) de éster de benzila de N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil)-0-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)- 3-decanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-D-serina como um sólido amorfo. (7) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (6) acima (420 mg, 0,25 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio sobre carbono em EtOH (10 ml) e óxido de platina (400 mg) em EtOH/AcOH (10:1) para fornecer 118 mg (30%) de N- [(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-D-serina Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 179-181-C; IV (película) 3283, 3100, 2921, 2852, 1732, 1660, 1651, 1564, 1556, 1464, 1417, 1378, 1322, 1181, 1061, 856, 722 cm*1; 1H-RMN (CDCI3 -CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,8 Hz), 1,1 -1,7 (m, 111 H), 2,2-2,7 (m, 12 H), 3,06 (m, 6 H), 3,33 (m, 5 H), 3,78 (m, 2 H), 3,95 (m, 2 H), 4,22 (m, 1H), 4,45 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 4,68 (br, s, 1 H), 5,13 (m, 3 H), 5,26 (m, 1H); 13C RMN (CDCI3) δ δ 173,7, 173,5, 173,1, 171,1, 169,9, 100,3, 75,1, 73,9, 71,9, 71,1, 70,9, 70,2, 60,9, 53,9, 52,7, 46,0, 41,3, 40,8, 39,4, 34,6, 34,4, 31,9, 29,8, 29,7, 29,5 29,4, 25,6, 25,4, 25,2, 25,1, 22,7, 14,1, 8,6.
Análise calculada para C87H166N3O19P: C, 65,75; H, 10,53; N, 2,64; P, 1,95, Encontrado: C, 65,32; H, 10,28; N,2,53; P, 1,89. EXEMPLO 16 (B15) Preparação de N-[(R)-3-Decanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradeca-noil)-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio, (Composto (I), R, = R2 = R3= n-C9Hi9CO, X=Y=0, n=m=p=q=0, R4=Rs=R7=R9=H, R6=C02H, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(5), éster de benzila de L-serina (250 mg, 1,08 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (478 mg, 1,2 mmoles) na presença de EDC.Mel (357 mg, 1,2 mmoles) em CH2CI2 para fornecer 0,52 g (84%) de éster de benzila de N-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoil]-L-serina pf. 52-53-C; 1H-RMN (CDCI3): δ 0,87 (t, 6 H, J = 6,9 Hz), 1,1-1,7 (m, 34 H), 2,29 (t, 2 H, J = 7,5 Ηζ), 2,49 (d, 2 Η, J = 5,8 Ηζ), 3,67 (s, 1 Η), 3,97 (m, 2 Η), 4,63 (m, 1Η), 5,19 (m, 3 Η), 6,61 (d, 1H, J = 7,1 Ηζ), 7,3 5 (br s, 5 H). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(5), o composto preparado em (1) acima (500 mg, 0,87 mmol), e o composto preparado no exemplo 15-(4) (1,09 g, 0,90 mmol) foram acoplados na presença de AgOTf (1,16 g, 4,5 mmoles) para fornecer 1,35 g (89%) de éster de ben-zila de N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopirano-sil]-L-serina: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H, J = 6,6 Hz), 1,0 - 1,65 (m, 68 H), 1,77 (s, 3. H), 1,85 (s, 3 H), 2,1 - 2,5 (m, 8 H), 3,38 (q, 1H, J = 9,1 Hz), 3,65 (m, 1H), 3,84 (m, 1H), 4,27 (m, 3 H), 4,70 (m, 5 H), 4,84 (m, 4 H), 5,14 (m, 3 H), 5,46 (t, 1H, J = 9,7 Hz), 6,07 (m, 1H), 6,62 (d, 1 H, J = 8,0 Hz), 7,05 - 7,45 (m, 15 H). (3) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(7), o composto preparado em (2) acima (600 mg, 0,34 mmol) foi desprotegido com zinco (1,13 g, 17,2 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (150 mg, 0,38 mmol) na presença de EEDQ (124 mg, 0,50 mmol) para fornecer 362 mg (60%) de éster de benzila de N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil)-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R),3-decanoilo-xitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopi-ranosil]-L-serina como um sólido amorfo. (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (3) acima (300 mg, 0, 17 mmol) foi hidrogenado na presença de paládio sobre carbono (100 mg) e óxido de platina (200 mg) em THF/AcOH (10:1) para fornecer 120 mg (44%) de N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono -2-[(R)-3 -decanoilo-xitetra-decanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopi-ranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf. 175-176-C; IV (película) 3304, 2956, 2923, 2853, 1733, 1654, 1541, 1466, 1377, 1164, 1107, 1080, 845, 721 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,9 Hz), 1,1 -1,7 (m, 111 H), 2,2-2,75 (m, 12 H), 3,07 (q, 6 H, J = 7,2 Hz), 3,37 (m, 1H), 3,5 - 3,95 (m, 8 H), 4,21 (q, 1 H, 11,0 Hz), 4,54 (d, 1 H, J= 8,9 Hz), 4,61 (br, s, 1H), 5,17 (m, 4 H), 7,10 (d, 1 H, J = 9,0 Hz), 7,43 (d, 1 H, J = 7,9 Hz); 13C RMN (CDCI3) δ 176,3, 173,4, 173,2, 172,8, 172,0, 169,6, 169,2, 101,4, 74,7, 70,9, 69,3, 604. 53,2, 51,6, 46,1, 41,4, 41,0, 39,1, 34,5, 34,3, 34,2, 34,1, 31,9, 29,8, 29,7, 29,6, 29,4, 29,3, 29,2, 25,5, 25,1, 25,0, 22,7, 14,1,8,6.
Análise calculada para C87H166N3O19P. H20: C, 65,01; H, 10,54; N, 2,61; P, 1,93.
Encontrado: C, 64,92; K 10,38; N, 2,58; P, 2,06. EXEMPLO 17 (B16) Preparação de N-[(R)-3-Nonanoiloxitetradecanoil)-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[( R)-3-nonanoi loxitetradecanoi lamino]-3-0-[( R)-3-nonanoi loxitetradecano-il]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio. (Composto (I), Rt = R2 = R3= n-C8H17CO, X=Y=0, n=m=p=q=0, R4=Rs=R7=R9=H, R6=C02H, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(5), éster de benzila de L-serina (390 mg, 2,0 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-nonanoiloxitetradecanóico (780 mg, 2,2 mmoles) na presença de EDC-Mel (845 mg, 2,5 mmoles) em CH2CI2 para fornecer 1,0 g (89%) de éster de benzila de N-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoil]-L-serina: pf 52-53-C, 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,6 Hz), 1,1-1,7 (m, 32 H), 2,30 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,51 (d, 2 H, J = 5,8 Hz), 2,62 (t, 1H, J = 6,0 Hz), 3,98 (m, 2 H), 4,65 (m, 1H), 5,19 (m, 3 H), 6,58 (d, 1H, J - 6,8 Hz), 7,35 (br s, 5 H). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(2), o composto preparado no exemplo 2-(1) (1,0 g, 2,02 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3- nonanoiloxitetradecanóico (8,52 mg, 2,22 mmoles) na presença de EDC-Mel (720 mg, 2,4 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (100 mg) em CH2CI2, e então foi desprotegido em AcOH aq. (25 ml) para fornecer 1,31 g (79%) de 2-(trimetilsilil)eti1 2-desóxi-3-0-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,00 (s, 9 H), 0,88 (m, 8 H), 1,25 (m, 28 H), 1,59 (m, 4 H), 2,30 (t, 2 H, J = 7,5 Hz), 2,52 (m, 2 H), 3,42 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,66 (m, 1 Η), 3,83 (dd, 1 Η, J = 11,8, 4,6 Ηζ), 3,94 (m, 2 Η), 4,57 (d, 1 Η, J = 8,2 Ηζ), 4,71 (m, 2 Η), 5,07 (m, 2 Η), 5,27 (d, 1Η, J = 8,8 Ηζ). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(3), o composto preparado em (2) acima (1,25 g, 1,52 mmoles) foi tratado com 2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletiletil cloroformiato (400 mg, 1,67 mmoles) e piridina (0,15 ml, 1,84 mmoles) em CH2CI2 (25 ml) seguido por trietilamina (0,42 ml, 3,04 mmoles), difenil clorofosfato (0,47 ml, 2,28 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (100 mg) para fornecer 1,30 g (67%) de 2-(trimetilsiIiI)-eti 1 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoil)-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: ^-RMN (CDCI3): δ 0,0 (s, 9 H), 0,88 (m, 8 H), 1,1 - 1,7 (m, 32 H), 1,82 (s, 3 H), 1,89 (s, 3 H), 2,22 (m, 6 H), 3,33 (m, 1H), 3,53 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,96 (m, 1H), 4,31 (m, 2 H), 4,55 (m, 2H), 4,83 (d, 1H, J = 12,0 Hz), 5,01 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,62 (m, 1 H), 7,28 (m, 10 H). (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(4), o composto preparado em (3) acima (1,26 g, 1,0 mmol) foi desprotegido com TFA (5 ml) e então foi tratado com reagente de Vilsmeier gerado a partir de DMF (0,39 ml, 5,0 mmoles) e cloreto de oxalila (0,22 ml, 2,5 mmoles) para dar 1,07 g (91%) de cloreto de 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-alfa-D-glucopiranosila como uma espuma branca: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,9 Hz), 1,25 - 1,55 (m, 32 H), 1,78 (s, 3 H), 1,88 (s, 3 H), 2,18 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,43 (m, 2 H), 4,34 (m, 4 H), 4,70 (m, 3 H), 4,83 (m, 3 H), 5,09 (m, 1 H), 5,51 (t, 1H, J = 10,2 Hz), 5,78 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,25 (d, 1 H, J = 3,6 Hz), 7,19 (m, 10 H). (5) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(5), compostos preparados em (1) e (4) acima (505 mg, 0,90 mmol, e 1,0 g, 0,85 mmol, respectivamente) foram acoplados na presença de AgOTf (1,16 g, 4,5 mmoles) para fornecer 1,03 g (71%) de éster de benzila de N-[(R)-3-nonanoi loxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-d ifen ilfosfono-3-0-[( R)-3-nona-noiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro- 1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tri- cloroetoxicarbonilamino]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H, J = 6,9 Hz), 1,0 - 1, 65 (m, 64 H), 1,78 (s, 3 H), 1,82 (s, 3 H), 2,1 - 2,5 (m, 8 H), 3,38 (m, 1 H), 3,64 (m, 1H), 3,83 (m, 1H), 4,25 (m, 3 H), 4,73 (m, 5 H), 5,1 8 (m, 5 H), 6,07 (m, 1 H), 6,60 (d, 1H, J = 7, 8 Hz), 7,05 -7,45 (m, 15 H). (6) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (5) acima (1,0 g, 0,59 mmol) foi desprotegido com zinco (1,93 g, 29,5 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-nonanoiloxitetradecanóico (273 mg, 0,71 mmol) na presença de EEDQ (195 mg, 0,78 mmol) para fornecer 405 mg (42%) de éster de benzila de N-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoil]-0-[desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-nonanoilo-xitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-noinanolanoiloxitetradecanoil)-beta-D-glucopiranosil)-L-serina como um sólido amorfo. (7) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (6) acima (405 mg, 0,25 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio sobre carbono em EtOH (10 ml) e óxido de platina (400 mg) em EtOH-AcOH (10:1) para fornecer 185 mg (48%) de N-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-nona-noiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-nonanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 177-179 °C; IV (película) 3306, 2955, 2923, 2853, 1732, 1600, 1538, 1467, 1378, 1252, 1165, 1106, 1080, 960, 844, 722 cm'1, 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,8 Hz), 1,1-1,7 (m, 105 H), 2,2 - 2,75 (m, 12 H), 3,07 (q, 6 H, J = 7,1 Hz), 3,2 - 3,5 (m, 5 H), 3,85 (m, 4 H), 4,23 (d, 1H, 10,2 Hz), 4,51 (d, 1H, J - 8,0 Hz), 4,64 (br, s, 1 H), 5,18 (m, 4 H); 13C RMN (CDCI3) δ 173,3, 172,8, 172,2, 169,6, 169,1, 101,5, 74,8, 70,9, 70,8, 69,3, 60,5, 53,2, 51,5, 46,1, 41,5, 41,0, 39,2, 34,5, 34,3, 34,1, 32,0, 31,9, 29,8, 29,6, 29,4, 29,3, 25,6, 25,2, 25,1,22,7,14,1,8,7.
Análise calculada para C84H16oN3Oi9P: C, 65,21; H, 10,42; N, 2,72; P, 2,00, Encontrado; C, 65,48; H, 10,32; N, 2,62; P, 2,12. EXEMPLO 18 (B17) Preparação de N-[(R)-3-Octanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desoxi-4-0-fosfono-2-{(R)3-octanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-octanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio (Composto (I), R, = R2 = R3= n-C7H15CO, X=Y=0, n=m=P=P=0, R4=R5=R7=R9=H, R6=C02H, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(5), éster de benzila de L-serina (390 mg, 2,0 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-octanoiloxitetradecanóico (815 mg, 2,2 mmoles) na presença de EDC-Mel (745 mg, 2,5 mmoles) em CH2CI2 para fornecer 1,02 g (93%) de éster de benzila de N-[(R)-3-octanoiloxitetradecanoil]-L-serina: pf. 50-51 °C; 1H-RMN (CDCIs): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,8 Hz), 1,1-1,7 (m, 30 H), 2,30 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,51 (d, 2 H, J = 5,8 Hz), 2,60 (t, 1H, J = 6,0 Hz), 3,97 (m, 2 H), 4,65 (m, 1H), 5,22 (m, 3 H), 6,61 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,3 5 (br s, 5 H). (2) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(2), o composto preparado no exemplo 2-(1) (1,0 g, 2,02 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-octanoiloxitetradecanóico (821 mg, 2,22 mmoles) na presença de EDC-Mel (720 mg, 2,4 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (100 mg) em CH2CI2, e então foi desprotegido em AcOH aq. a 90% (2 5 ml) para fornecer 1,3 g (83%) de 2-(trimetilsilil)etil 2-desóxi-3-0-[(R)-3-octanoiloxite-tradecanoil]-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,00 (s, 9 H), 0,88 (m, 8 H), 1,25 (m, 26 H), 1,60 (m, 4 H), 2,30 (t, 2 H, J = 75 Hz), 2,53 (m, 2 H), 3,42 (m, 1 H), 3,53 (m, 1 H), 3,66 (m, 1H), 3,83 (dd, 1H, J = 11,8, 4,4 Hz), 3,94 (m, 2 H), 4,56 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 4,64 (d, 1H, J = 11,8 HZ), 4,77 (d, 1H, J = 11,8 Hz), 5,08(m, 2 H), 5,30 (br, s, 1H). (3) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(3), o composto preparado em (2) acima (1,30 g, 1,61 mmoles) foi tratado com 2,2,2-tricloro-1,1- dimetiletil cloroformiato (425 mg, 1,77 mmoles) e piridina (0,16 ml, 1,95 mmoles) em CH2CI2 (25 ml) seguido por trietilamina (0,45 ml, 3,22 mmoles), difenil clorofosfato (0,50 ml, 2,42 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (100 mg) para fornecer 1,42 g (71%) de 2-(trimetilsilil)etil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-octanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 - dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino]-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo; 1H-RMN (CDCI3): δ 0,0 (s, 9 H), 0,88 (m, 8 H), 1,1-1,7 (m, 30 H), 1,82 (s, 3 H), 1,89 (s, 3 H), 2,23 (m, 6 H), 3,37 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,83 (m, 1H), 3,96 (m, 1H), 4,55 (m, 2 H), 4,83 (d, 1H, J = 11,8 Hz), 5,01 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,20 (m, 1 H), 7,29 (m, 10 H). (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(4), o composto preparado em (3) acima (1,24 g, 1,0 mmol) foi desprotegido com TFA (5 ml) e então foi tratado com o reagente de Vilsmeier gerado a partir de DMF (0,39 ml, 5,0 mmoles) e cloreto de oxalila (0,22 ml, 2,5 mmoles) para dar 1,0 g (87%) de cloreto de 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-octanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilaminoJ-alfa-D-glucopiranosila como uma espuma branca. 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,7 Hz), 1,25 - 1,55 (m, 30 H), 1,78 (s, 3 H), 1,88 (s, 3 H), 2,18 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,43 (m, 2 H), 4,29 (m, 4 H), 4,72 (m, 3 H), 5,09 (m, 1H), 5,51 (t, 1H, J = 9,9 Hz), 5,79 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 6,25 (d, 1H, J = 3,5 Hz), 7,29 (m, 10 H). (5) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(5), compostos preparados em (1) e (4) acima (490 mg, 0,90 mmol, e 1,0 g, 0,86 mmol, respectivamente) foram acoplados na presença de AgOTf (1,16 g, 4,5 mmoles) para fornecer 0,99 g (69%) de éster de benzila de N-[(R)-3-octanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-octanoi-loxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-triclo-roetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosil]-L-serina: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12H, J = 6,9 Hz), 1,0- 1,65 (m,60 H), 1,77 (s,3 H), 1,85 (s, 3H), 2,1 -2,5 (m, 8 H), 3,37 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,83 (m, 1 H), 4,27 (m, 3 H), 4,72 (m, 5 H), 5,18 (m, 4 H), 5,46 (t, 1H, (J = 9,8 Hz), 6,06 (m, 1 H), 6,60 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,05-7,45 (m, 15 H). (6) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (5) acima (0,95 g, 0,57 mmol) foi desprotegido com zinco (1,86 g, 28,5 mmoles) e acilado com ácido (R)-3-octanoiloxite-tradecanóico (252 mg, 0,68 mmol) na presença de EEDQ (185 mg, 0,75 mmol) para fornecer 433 mg (47%) de éster de benzila de N-[(R)-3-octanoi- loxitetradecanoil)-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-octanoiloxitetrade-canoilamino]-3-0-[(R)-3-octanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina como um sólido amorfo. (7) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (6) acima (433 mg, 0,27 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio sobre carbono (250 mg) em EtOH (10 ml) e óxido de platina (400 mg) em EtOH/AcOH (10:1) para fornecer 196 mg (48%) de N-[(R)-3-octanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-octanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-octanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina sal de trietilamônio como um pó branco: pf 177-178°C; IV (película) 3296, 2956, 2923, 2853, 1732, 1645, 1546, 1466, 1378, 1315, 1170, 1082, 1056, 961, 846, 722 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,6 Hz), 1, 1 - 1,7 (m, 99 H), 2,2 - 2,75 (m, 12 H), 3,08 (q, 6 H, J = 7,1 Hz), 3,39 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 3,6 - 4,0 (m, 8 H), 4,22 (q, 1H, 10,3 Hz), 4,53 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 4,63 (m, 1H), 5,18 (m, 4 H), 7,04 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,42 (d, 1H, J = 8,0 Hz); 13C RMN (CDCI3) δ 176,8, 173,3, 173,2, 172,7, 172.2, 169,6, 169,1, 101,5, 74,8, 70,9, 70,8, 69,3, 60,5, 53,2, 51,5, 46,2, 41,5, 41,1, 39,2, 34,5, 34,3, 34,1, 34,0, 32,0, 31,8, 29,8, 29,6, 29,4, 29,3, 29.2, 29,1, 25,6, 25,3, 25,2, 25,0, 22,7, 14,1, 9,7.
Análise calculada para C81H154N3O19P. H20: C, 63,87; H, 10,32; N, 2,76; P, 2,03.
Encontrado: C, 63,96; H, 10,29, N, 2,69; P, 1,67. EXEMPLO 19 (B18) Preparação de N-[(R)-3 -Heptanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfo-no-2-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-heptanoiloxitetrade-canoil)-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio (Composto (I), R1 = R2 = R3= n-C6Hi3CO, X—Y—O, n=m=p=q=0, R4=R5=R7=R9=H, R6=C02H, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(5), éster de benzila de L-serina (390 mg, 2,0 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-heptanoiloxitetradecanóico (780 mg, 2,2 mmoles) na presença de EDC-Mel (745 mg, 2,5 mmoles) em CH2CI2 para fornecer 0,97 g (91%) de éster de benzila de N-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoil]-L-serina: pf 46-48=0. 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,9 Hz), 1,1-1,7 (m, 28 H), 2,30 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,50 (d, 2 H, J = 5,8 Hz), 2,62 (m, 1H, J = 6,0 Hz), 3,97 (m, 2 H), 4,65 (m, 1 H), 5,19 (m, 3H), 6,61 (d, 1 H, J = 6,9 Hz), 7,35 (br s, 5 H). (2) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(2), o composto preparado no Exemplo 2-(1) (1,0 g, 2,02 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-heptanoiloxitetradecanóico (790 mg, 2,22 mmoles) na presença de EDC-Mel (720 mg, 2,4 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (100 mg) em CH2CI2, e então foi desprotegido em AcOH aq. a 90% (25 ml) para fornecer 1,30 g (81%) de 2-(trimetilsilil)etil 2-desóxi-3-0-[(R)-3-heptanoiloxitetrade-canoil]-2-(2,2,2-triclo-roetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,00(s, gH), 0,88 (m, 8 H), 1,25 (m, 24H), 1,59 (m, 4 H), 2,30 (t, 2H, J = 7,5Hz), 2,52 (m, 2H), 3,42 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,83 (dd, 1 H, J = 11,5, 4,2 Hz), 3,94 (m, 2 H), 4,57 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 4,64 (d, 1H, J = 12,1 Hz), 4,76 (d, 1H, J = 11,9 Hz), 5,09 (m, 2H), 5,31 (d, 1H, J = 8,7 Hz). (3) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(3), o composto preparado em (2) acima (1,25 g, 1,58 mmoles) foi tratado com 2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletil cloroformiato (417 mg, 1,74 mmoles) e piridina (0,15 ml, 1,91 mmoles) em CH2CI2 (25 ml) seguido por trietilamina (0,44 ml, 3,16 mmoles), difenil clorofosfato (0,49 ml, 2,37 mmoles) e 4-pirrolidinopiridina (100 mg) para fornecer 1,34 g (69%) de 2-(trimetiIsiIiI)etiI 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo, 1H-RMN (CDCI3): δ 0,0 (s, 9 H), 0,88 (m, 8 H), 1,1-1,7 (m, 28 H), 1,82 (s, 3 H), 1,89 (s, 3 H), 2,35 (m, 4H), 3,37 (m, 1H), 3,61 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 4,32 (m, 2 H), 4,63 (m, 2H), 4,83 (d, 1H, J = 12,0 Hz), 5,01 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,62 (m, 2H), 7,29 (m, 10 H). (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(4), o composto preparado em (3) acima (1,23 g, 1,0 mmol) foi desprotegido com TFA (5 ml) e então foi tratado com o reagente de Vilsmeier gerado a partir de DMF (0,39 ml, 5,0 mmoles) e cloreto de oxalila (0,22 ml, 2,5 mmoles) para dar 1,0 g (87%) de cloreto de 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoil)-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-alfa-D-glucopiranosila como uma espuma branca: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,9 Hz), 1,25 - 1,55 (m, 28H), 1,78 (s, 3 H), 1,88 (s, 3 H), 2,18 (t, 2 H, J = 7,6 Hz), 2,43 (m, 2 H), 4,26 (m, 4 H), 4,73 (m, 3 H), 5,09 (m, 1H), 5,51 (t, 1H, J = 10,2 Hz), 5,77 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,25 (d, 1H, J = 3,3 Hz), 7,19 (m 10 H). (5) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(5), compostos preparados em (1) e (4) acima (480 mg, 0,90 mmol, e 0,98 g, 0,86 mmol, respectivamente) foram acoplados na presença de AgOTf (1,16 g, 4,5 mmoles) para fornecer 1,06 g (75%) de éster de benzila de N-[(R)-3-heptanoiloxitetradeconoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-hepta-noiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosil]-L-serina: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (m, 12 H), 1,0 - 1,65 (m, 56 H), 1,77 (s, 3 H), 1,85 (s, 3 H), 2,1 - 2,5 (m, 8 H), 3,38 (m, 1H), 3,64 (m, 1H), 3,83 (m, 1H), 4,25 (m, 3 H), 4,78 (m, 5 H), 5,16 (m, 4 H), 5,46 (t, 1H, J = 9,9 Hz), 6,06 (m, 1 H), 6,60 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,05-7,45 (m, 15 H). (6) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (5) acima (1,0 g, 0,61 mmol) foi desprotegido com zinco (2,0 g, 30,5 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-heptanoiloxite-tradecanóico (260 mg, 0,73 mmol) na presença de EEDQ (200 mg, 0,80 mmol) para fornecer 440 mg (45%) de éster de benzila de N-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-hepta-noiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina como um sólido amorfo. (7) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(8), o composto preparado em (6) acima (440 mg, 0,28 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio sobre carbono (250 mg) em EtOH (10 ml) e óxido de platina (400 mg) em EtOH/AcOH (10:1) para fornecer 208 mg (51 %) de N-[(R)-3-heptanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-heptanoi loxitetradecanoilami no)-3-0-[( R)-3-heptanoi loxitetradeca- noil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio, como um pó branco: pf 176-177-C; IV (película) 3307, 2956, 2924, 2854, 1732, 1650, 1545, 1466, 1378, 1316, 1170, 1080, 956, 841, 722 cm'1; ’Η-RMN (CDCI3 -CD3OD): Ô 0,88 (m, 18 H), 1,1 -1,7 (m, 93 H), 2,2 - 2,75 (m, 12 H), 3,08 (q, 6 H, J = 7,2 Hz), 3,40 (d, 1H, J = 10,2 Hz), 3,6 - 4,0 (m, 7 H), 4,24 (m, 2 H), 4,52 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 4,63 (m, 1H), 5,19 (m, 4 H), 7,04 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,40 (d, 1H, J = 8,4 Hz); 13C RMN (CDCI3) δ 177,1, 173,2, 173,1, 172,7, 172,3, 169,5, 168,9, 101,5, 75,0, 74,8, 71,2, 70,9, 69,1, 60,5, 53,1, 51,4, 46,1, 41,5, 41,0, 39,2, 34,5, 34,3, 34,1, 34,0, 31,9, 31,6, 31,5, 29,8, 29,6, 29,4, 29,0, 28,9, 28,8, 25,6, 25,3, 25,1, 25,0, 22,7, 22,6, 14,1, 8,7.
Análise calculada para C78H148N3O19P: C, 64,04; H, 10,20; N, 2,87, P, 2,12. Encontrado: C, 63,77; H, 10,11; N, 2,8 5; P, 2,02. EXEMPLO 20 (B19) Preparação de 2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]etil 2-desóxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-2-[(R)-3-tetradecanoilo-xitetracanoilamino]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto (I). R1 — R2 = R3= n-Ci3H27CO, X—Y—O, n=m=P=q=0, R4—R5—R6=R7=Rg=H, R8=P03H2). (1) 2-Amino-1-(t-butildifenilsililóxi)etano (330 mg, 1,1 mmo-les) e ácido (R)3-tetradecanoiloxitetradecanóico (500 mg, 1,1 mmoles) foram dissolvidos em CH2CI2 (10 ml) e foram tratados com peneiras moleculares de 4 À A em pó (500 mg). Depois da 1 h EEDQ (297 mg, 1,2 mmoles) foi adicionado e a reação foi agitada por 18 h, foi filtrado através de Celite® e foi concentrado em vácuo. O resíduo foi cromatografado sobre sílica gel usando-se EtOAc/hexanos a 15% para dar 675 mg (92%) de um sólido incolor. Uma porção deste material (500 mg, 0,68 mmol) foi desprotegido com TBAF (1 M em THF, 1 ml, 1 mmol) em THF (5 ml) por agitação À temperatura ambiente por 2 h. A mistura de reação foi diluída com Et20 (50 ml) e foi lavada com salmoura (2 x 50 ml). A salmoura foi retro-extraída com Et20 (2 x 50 ml) e os extratos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e foram concentrados em vácuo para fornecer 338 mg (62%) de 2-[(R)-3 tetra-decanoiloxitetradecanoilaminojetanol como um sólido esbranquiçado. (2) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(6), o composto preparado em (I) acima (338 mg, 0,68 mmol) e o composto preparado no exemplo 2-(4) (786 mg, 0,61 mmol) foram acoplados na presença de cianeto de mercúrio (770 mg, 3,05 mmoles) para dar 245 mg (24%) de 2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilaminojetil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-gluco-piranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H, J = 6,9 Hz), 1,1, 1,8 (m, 84 H), I, 81 (s, 3 H), 1,89 (s, 3 H), 2,15-2,55 (m, 8 H), 3,25 (m, 1H), 3,47 (m, 2 H), 3,67 (m, 1H), 3,83 (m, 2 H), 4,28 (dd, 1H, J - 12,2, 4,9 Hz), 4,36 (d, 1 H, J = II, 0 Hz), 4,68 (m, 2 H), 4,78 (d, 1H, J = 11,6 Hz), 4,94 (d, 1H, J = 11,6 Hz), 5,16 (m, 2 H), 5,53 (t, 1H, J = 10,0 Hz), 6,06 (d, 1H, J = 4,9 Hz), 6,19 (m, 1H), 7,25 (m, 10 H). (3) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(7), o composto preparado em (2) acima (500 mg, 0,29 mmol foi desprotegido com zinco (980 mg, 15 mmoles) e foi então acilado com ácido (R)-3-tetradecanoi-loxitetradecanóico (155 mg, 0,34 mmol) na presença de EEDQ (110 mg, 0,44 mmoles) para dar 315 mg (62%) de 2-[(R)-3-tetradecanoilo-xitetradecanoilamino]etil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-tetradeca-noiloxitetradecanoil]-2-[(R)-3-tetradecanoiltetradecanoilamino]-beta-D-gluco-piranosídeo como um sólido amorfo. (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (3) acima (200 mg, 0,113 mmol) foi hidrogenado na presença de óxido de platina (100 mg) para dar 142 mg (76%) de 2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]etil 2-desóxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoioxitetradecanoil]-2-[(R)-3-tetradecanoioxitetradecanoilamino)-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um sólido branco: pf 175-176°C; IV (película) 3285, 3098, 2955, 2919, 2851, 1731, 1659, 1642, 1556, 1468, 1379, 1250, 1228, 1174, 1110, 1093, 1046, 962, 857 cm'1; 1H-RMN (CDCIa): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,0 Hz), 1,1 -1,7 (m, 135 H), 2,2-2,7 (m, 15 H), 3,06 (q, 6 H, J = 7,1 Hz), 3,2 - 4,1 (m, 8 H), 4,21 (q, 1 H, J = 9,9 Hz), 4,51 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,05 - 5,25 (m, 4 H), 7,33 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,50 (br t, 1H, J = 4,8 HZ); 13C RMN (CDCI3) δ 173,7, 173,3, 170,6, 170,3,169,9, 100,9, 75,8, 73,0, 71,3, 71,1, 70,9, 70,6, 68,3, 60,6, 55,1, 45,7, 41,6, 41,2, 39,5, 34,6, 34,5, 34,4, 32,01,29,8, 29,4, 29,3, 25,4, 25,1, 22,7, 14,2, 8,6. Análise calculada para C98H190N3O17P H2O: C, 67,28; H, 11,18; N, 2,40; P, 1,77.
Encontrado: C, 67,01, 14, 11,18; N, 2,15; P, 2,01. EXEMPLO 21 (B20) Preparação de 2-[(R)-3-Decanoiloxitetradecanoilamino]etil 2-Desóxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)-3-decanoioxitetradecanoil]-2-[(R)-3-decanoiloxitetradeca-noilamino]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto (I), Ri = R2 = R3= n-CgHigCO, X=Y=0, n=m=p=q=0, R4=R5=R6=R7=R9=H, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 20-(1), 2-amino-l-(t-butildifenilsililóxi)etano (450 mg, 1,5 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (600 mg, 1,5 mmoles) na presença de EDC-Mel (594 mg, 2,0 mmoles) e então foi desprotegido com TBAF (1,0 M em THF, 2,5 ml, 2,5 mmoles) em THF (10 ml) para fornecer 488 mg (81%) de 2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]etano como um sólido esbranquiçado. (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(5), o composto preparado em (1) acima (385 g, 0,87 mmol) e o composto preparado no exemplo 15-(4) (1,05 g, 0,87 mmol) foram acoplados na presença de AgOTf (560 mg, 2,2 mmoles) para dar 1,04 g (74%) de 2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilaminojetil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-decanoioxitetradecanoill-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H, J = 6,9 Hz), 1,1 - 1,6 (m, 68 H), 1,78 (s, 3 H), 1,88 (s, 3 H), 2,18 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,44 (m, 2 H), 4,34 (m, 5 H), 4,72 (m, 2 H, 4,83 (q, 1H, J = 9,3 Hz), 5,09 (m, 1H), 5,51 (t, 1H, J = 10,2 Hz), 5,79 (d, 1 H J = 8,0 Hz), 6,26 (d, 1 H, J = 3,4 Hz), 7,31 (m, 10 H). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), 0 composto preparado em (2) acima (700 mg, 0,44 mmol) foi desprotegido com zinco (1,42 g, 21,7 mmoles) e foi então acilado com ácido (R)-3- decanoiloxitetradecanóico (190 mg, 0,48 mmol) na presença de EEDQ (148 mg, 0,6 mmol) para dar 432 mg (62%) de 2-[(R)-3-decanoioxitetra-decanoilamino]etil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-decanoiloxite-tradecanoill-2-[(R)-3 -decanoiloxitetradecanoilamino]-beta-D-glucopiranosí-deo como um sólido amorfo. (4) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(8), o composto preparado em (3) acima (400 mg, 0,25 mmol) foi hidrogenado na presença de óxido de platina (200 mg) para dar 200 mg (52%) de 2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilaminol]etil 2-desóxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)-3-deca-noioxitetradecanoil]-2-[(R)-3- decanoiloxitetradecanoilanino]-beta-D-glucopi-ranosídeo Sal de Trietilamônio como um sólido branco: pf 165-166°C; IV (película) 3289, 3094, 2956, 2922, 2853, 1732, 1658, 1644, 1556, 1467, 1379, 1247, 1164, 1107, 1081, 1048 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): 5 0,88 (t, 18 H, J = 6,9 Hz), 1,1 - 1,7(m, 111 H), 2,2 -2,7 (m, 15 H),3,05 (q, 6H, J = 7,1 Hz), 3,2 - 3,85,(m, 9 H), 4,52 (d, 1 H, J = 8,2 Hz), 5,05 - 5,25 (m, 4 H), 7,21 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,42 (br t, 1H); 13C RMN (CDCI3) 5 173,8, 173,3, 170,7, 170,3, 170,0, 100,9, 75,6, 73,0, 71,3, 70,9, 70,6, 68,3, 60,7, 55,0, 45,8, 41,6, 41,2, 39,5, 34,5, 34,4, 34,1, 31,9, 29,8, 29,6, 29,5, 29,4, 25,4, 25,1,22,7,14,2, 8,6.
Análise calculada para ΟββΗιββ^Ο^Ρ. H20: C, 66,08; H, 10,83; N, 2,69; P, 1,98.
Encontrado: C. 65,80; H, 10,63; N, 2,63; P, 2,04. EXEMPLO 22 (B21) Preparação de 3-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-Desóxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-2-[(R)-3-tetradeca-noiloxitetradecanoilamino]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto (I), Ri = R2 = R3= n-C13H27CO, X=Y=0, n=1=m=p=q=0, R4=R5=Re= R7=Rg= H, R8=P03H2).
(1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 20-(l), 3-amino-l-(t-butildifenilsililóxi)propano (470 mg, 1,5 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (680 mg, 1,5 mmoles) na presença de EDC-Mel (595 mg, 2,0 mmoles) e então foi desprotegido com TBAF (1,0 M em THF, 2,0 ml, 2,0 mmoles) em TKF (10 ml) para fornecer 698 mg (91¾) de 3-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-1-propanol como um sólido esbranquiçado. (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(4). o composto preparado no exemplo 2-(3) (7,9 g, 5,88 mmoles) foi desprotegido com TFA (10 ml) e então foi tratado com o reagente de Vilsmeier gerado a partir de DMF (1,8 ml, 23,5 mmoles) e cloreto de oxalila (1,03 ml, 11,76 mmoles) em CH2CI2 (60 ml) para dar 6,32 g (85%) de cloreto de 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-alfa-D-glucopi-ranosila como uma espuma branca: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,8 Hz), 1,2 - 1,55 (m, 42 H), 1,78 (s, 3 H), 1,88 (s, 3 H), 2,18 (t, 2 H, J - 7,5 Hz), 2,43 (m, 2 H), 4,31 (m, 4 H), 4,68 (d, 1H, J = 11,9 Hz), 4,74 (d, 1H, J = 11,9 Hz), 4,83 (q, 1 H, J = 9,3 Hz), 5,09 (m, 1 H), 5,51 (t, 1H, J = 9,7 Hz), 5,78 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,26 (d, 1H, J = 3,4 Hz), 7,31 (m, 10 H). (3) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 13-(5), o composto preparado em (1) acima (613 mg, 1,2 mmoles) e o composto preparado em (2) acima (1,5 g, 1,2 mmoles) foram acoplados na presença de AgOTf (642 mg, 2,5 mmoles) para dar 1,43 g (68%) de 3-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-l,1-dimetiletoxicar-bonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12H, J = 6,9 Hz), 1,1-1,8 (m, 86 H), 1,82 (s, 3 H), 1,89 (s, 3 H), 2,20 (t, 2 H, J = 7,6 Hz), 2,29 (t, 2 H, J = 7,7 Hz), 2,44 (m, 4 H), 3,21 (m, 1H), 3,42 (m, 1 H, 3,54 (m, 2 H), 3,80 (m, 1H), 3,94 (m, 1H), 4,28 (dd, 1H, J = 12,3, 5,2 Hz), 4,38 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 4,70 (m, 3 H), 4,81 (d, 1 H, J = 8,2 Hz), 5,14 (m, 2 H), 5,47 (t, 1H, J = 9,6 Hz), 6,13 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 6,22 (brs, 1H), 7,25 (m, 10 H).
(4) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(7), o composto preparado em (3) acima (700 mg, 0,40 mmol) foi desprotegido com zinco (1,32 g, 20,1 mmoles) e então foi acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (200 mg, 0,44 mmol) na presença de EEDQ (125 mg, 0,5 mmol) para dar 435 mg (60%) de 3-[(R)-3-tetradecanoiloxitetra-decanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)3-tetradecanoioxi-tetradecanoil]-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-beta-D-glucopi-ranosídeo como um sólido amorfo. (5) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (4) acima (400 mg, 0,22 mmol) foi hidrogenado na presença de óxido de platina (200 mg) para dar 170 mg (45%) de 3-[(R)-3- te-tradecanoiloxitetradecanoilamino]propil 2-desóxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um sólido branco: pf 171-172-C; IV (película) 3288, 3094, 2955, 2919, 2850, 1731, 1658, 1344, 1556, 1468, 1378, 1320, 1251, 1226, 1172, 1106, 1083, 1044 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,0 Hz), 1,1 - 1, 7 (m, 135 H), 2,2 - 2,7 (m, 15 H), 3,06 (q, 6 H, J = 7,1 Hz), 3,2 - 4,1 (m, 8 H), 4,21 (q, 1H, J m 9,9 Hz), 4,51 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 5,05 - 5,25 (m, 4 H), 7,23 (t, 1 H, J = 5,3 Hz), 73,3 (d, 1H, J - 8,6 Hz); 13CRMN (CDCI3) δ 173,5, 173,4, 170,6, 170,2, 169,9, 100,6, 75,8, 71,5, 70,9, 70,5, 66,8, 60,4, 55,3, 45,6, 41,4, 39,4, 36,3, 34,6, 34,5, 34,2, 31,9, 29,7, 29,4, 29,3, 29,1,25,4, 25,1, 22,7, 14,1, 8,5.
Análise calculada para C99H192N3Oi7P.2H20: C, 67,42; H, 11,20; N, 2,38; P, 1,76.
Encontrado: C, 66,97; H, 11,01; N, 2,38; P, 1,95. EXEMPLO 23 (B22) Preparação de 4-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]butil 2-Desóxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-2-[(R)-3-tetradecanoiloxi-tetradecanoilamino]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto (I), R1 = R2 = R3= n-Ci3H27CO, X=Y=0, n=2=m=p=q=0, R4=R5=R6=R7=R9=H, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 20-(1), 4-amino-l-(t-butildifenilsililóxi)butano (500 mg, 1,53 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (695 mg, 1,53 mmoles) em na presença de EDC-Mel (595 mg, 2,0 mmoles) e foi desprotegido comm TBAF (1,0 M em THF, 2,5 ml, 2,5 mmoles) em THF (15 ml) para fornecer 651 mg (81%) de 4-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-l-bufanol como um sólido esbranquiçado. (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(5), o composto preparado em (1) acima (650 mg, 1,25 mmoles) e o composto preparado no Exemplo 22-(2) (1,6 g, 1,25 mmoles) foram acoplados na presença de AgOTf (1,16 g, 4,5 mmoles) para dar 1,65 g (75%) de 4-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanilamino]butil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoioxitretradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12H, J = 6,9 Hz),1,1-1,8(m, 88 H), 1.82 (s, 3 H), 1,89 (s, 3 H), 2,15 - 2,55 (m, 8 H), 3,24 (m, 2 H), 3,50 (m, 2 H), 3.83 (m, 2H), 4,27 (dd, 1H, J = 12,1, 3,8 Hz), 4,32 (d, 1 H, J = 11,5 Hz), 4,66 (m, 2H),4,78 (d, 1 H, J = 12,1 Hz), 4,89 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 5,15 (m,2 H), 5,54 (t, 1 H, J = 9,7 Hz), 5,95 (m, 2 H), 7,25 (m, 10 H). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (2) acima (700 mg, 0,39 mmol) foi desprotegido com zinco (1,30 g, 19,8 mmoles) e foi então acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (195 mg, 0,43 mmol) na presença de EEDQ (125 mg, 0,5 mmol) para dar 421 mg (60%) de 4-[(R)-3-tetradecanoiloxite-tradecanoilamino]butil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoio-xitetradecanoil]-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-beta-D-gluco-piranosídeo como um sólido amorfo. (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (3) acima (400 mg, 0,22 mmol) foi hidrogenado na presença de óxido de platina (200 mg) para dar 212 mg (55%) de 4-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]butil 2-desóxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoioxitetradecanoil]-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino])-beta-D glucopiranosídeo sal de trietilamônio como um sólido branco: pf 171 -172-C; IV (película) 3298, 2955, 2920, 2851, 1732, 1645, 1550, 1467, 1378, 1181, 1107, 1083, 1044, 721 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H J = 6,9 Hz), 1,1 -1,7 (m, 135 H), 2,2- 2,7 (m, 19 H), 3,05 (q, 6 H, J - 7,1 Hz), 3,18 (m, 2 H), 3,3 - 3,5 (m, 6 H), 3,78 (m, 3 H), 3,97 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 4,23 (q, 1H, J = 10,0 Hz), 4,50 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 5,13 (m, 4 H), 7,12 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 13C RMN (CDCfe) δ 173,9, 173,4, 173,3, 170,8, 169,8, 169,9, 101,0, 75,6, 73,2, 71,4, 71,1, 70,6, 68,9, 60,7, 54,8, 45,9, 41,5, 39,6, 38,9, 34,6, 34,3, 32,0, 29,8, 29,5, 29,0, 28,9, 26,3, 25,4, 25,1, 22,7, 14,2, 8,7. Análise calculada para C10oHi94N30i7P.H20: C, 68,26; H, 11,23; N, 2,39; P, 1,76.
Encontrado: C, 68,21; H, 11,03; N, 2,26; P, 1,73. EXEMPLO 24 (B23) Preparação de 4-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]hexil 2-Desóxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoioxitetradecanoil)-2-[(R)-3- tetradecailoxi-tetradecanoilamino]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto(l), Ri = R2 = Rs= n-Cn3H27CO, X=Y=0, n=4,m=p=q=0, R4=Rs=R6=R7=R9=H, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo 20-(1), 6-amino-1-(t-butildifenilsililóxi)hexano (1,48 g, 4,15 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (2,07 g, 4,56 mmoles) na presença de EDC-Mel (1,35 g, 4,56 mmoles) e então foi desprotegido com TBAF (1,0 M em THF, 1,53 ml, 1,53 mmoles) em THF (46 ml) para fornecer 700 mg (30%) de 6-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-l-hexanol como um sólido esbranquiçado. (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(5), o composto preparado em (1) acima (689 mg, 1,20 mmoles) e o composto preparado no exemplo 22(2) (1,25 g, 1,00 mmol) foram acoplados na presença de AgOTf (1,28 g, 5,0 mmoles) para dar 1,59 g (94%) de 4-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]hexil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoioxitetradecanoil)-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicar-bonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopironídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12H, J = 6,6 Hz), 1,1-1,8 (m, 92 H), 1,82 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 2,22 (t, 2H, J = 7,6 HZ), 2,29 (t, 2H, J = 7,4 Hz), 2,45 (m, 4 H), 3,22 (m, 1 H), 3,46 (m, 2 H), 3,83 (m, 2 H), 3,94 (m, 1H), 4,31 (m, 2 H), 4,64 (m, 2 H), 4,83 (d, 1 H, J = 12,1 Hz), 4,97 (d, 1H, J = 7,8 Ηζ), 5,17 (m, 2 Η), 5,59 (t, 1 Η, J = 8,8 Ηζ), 5,75 (m, 1 Η), 5,84 (d, 1 Η, J - 7,6 Ηζ), 7,25 (m, 10 Η). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o com- posto preparado em (2) acima (1,57 g, 0,88 mmol) foi desprotegido com zinco (2,88 g, 44,1 mmoles) e então foi acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (481 mg, 1,06 mmoles) na presença de EEDQ (327 mg, 1,32 mmoles) para dar 1,57 g (97%) de 4-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]hexil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0- [(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoi-lamino))-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo. (4) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(8), o com- posto preparado em (3) acima (1,57 g, 0,85 mmol) foi hidrogenado na presença de óxido de platina (157 mg) para dar 130 mg (10%) de 4-[(R)-3- te-tradecanoiloxitetradecanoilamino]hexil 2-desóxi-4-0-fosfono-3-0-[(R)-3- tetradecanoiloxitetradecanoil]-2-[(R)-3-tetradecanoioxitetradecanoilamino]-beta-D-glucopiranosídeo sal de trietilamônio como um sólido branco: pf 150-152°C; IV (película) 3284, 3099, 2954, 2920, 2851, 1731, 1657, 1637, 1557, 1467, 1418, 1378, 1320, 1249, 1179, 1108, 1083, 1044, 856, 721 cm’1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,89 (t, 18 H, J = 6,6 Hz), 1,1-1,7 (m, 135 H), 2,2 - 2,7 (m, 23 H), 3,05 (q, 6 H, J = 7,1 Hz), 3,18 (m, 2 H), 3,39 (d, 1 H, J = 8,2 Hz), 3,49 (q, 1 H, J = 7,5 Hz), 3,82 (m, 2 H), 3,99 (d, 1H, J = 11,9 Hz), 4,25 (q, 1 H, J = 8,9 Hz), 4,59 (m, 2 H), 5,18 (m, 4 H); 13C RMN (CDCI3) δ 173,7, 173,3, 170,6, 169,7, 169,4, 100,6, 75,5, 73,1, 71,3, 70,9, 70,6, 69,2, 60,6, 55.2, 45,8, 41,7, 41,4, 39,5, 39,4, 34,6, 34,3, 34,2, 34,1, 31,9, 29,7, 29,4, 29.2, 26,5, 25,5, 25,3, 25,11,22,7, 14,1, 8,6.
Análise calculada para C102H198N3O17P. H20: C, 68,53; H, 11,28; N, 2,33; P, 1,73.
Encontrado: C, 68,63; H, 11,12; N, 2,26; P, 1,66. EXEMPLO 25 (B24) Preparação de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-0-fosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3- tetradecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serinamida Sal de Trietilamônio (Composto (I), R1 = R2 = R3= n-Ci3H27CO X=Y=0, n=m=p=q=0, R4=Rs=R7=R9=H, R6=CONH2, R8=P03H2). (1) Uma suspensão de cloridrato de L-serinamida (0,157 g, 1,18 mmoles) e (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (0,61 g, 1,34 mmoles) em CH2CI2 (6 ml) foi tratada com trietilamina (0,18 ml, 1,3 mmoles) e a solução resultante foi agitada com peneiras moleculares de 4 Á por 30 min. EEDQ (0,437 g, 1,77 mmoles) foi então adicionada e a mistura foi agitada por 16 h à temperatura ambiente. O produto que se precipitou foi coletado e foi lavado com CH2CI2 (2 x 25 ml) para dar 0,455 g (71%) de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-L-serinamida como um pó incolor: pf 126-130° C; 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6H,J = ~7 Hz), 1,15-1,7 (m, 42 H), 2,31 (t, 2 H, J =7,5 Hz), 2,51 (d, 2 H, J = 6,3 Hz), 3,56 (br s, 1H), 3,65 (dd, 1H, J = 11,2, 5,5 Hz), 3,86 (dd, 1H, J = 11,2, 4,5 Hz), 4,21 (s, 2 H), 4,40 (m, 1H), 5,22 (m, 1H). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(6), o composto preparado em (1) acima (0,23 g, 0,246 mmol) e o composto preparado no exemplo 2-(4) (0,961 g, 0,745 mmol) foram acoplados na presença de cianeto de mercúrio (0,43 g, 1,7 mmoles) para dar 0,527 g (71%) de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil)-0-[2-desóxi-4-0-difenilfos-fono-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dime-tiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosil]-L-serinamida como um sólido amorfo; 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H, J= -7 H), 1,0-1,7 (m, 84 H), 1,80 e 1,89 (2s, 6 H), 2,21 (t, 2 H, J = 7,5 Hz), 2,30 (t, 2 H, J = 7,5 Hz), 2,37 (m, 2 H), 2,47 (m, 2 H), 3,54 (m, 1H), 3,68 (dd, 1H, J =8, J = 11 Hz), 3,86 (br d, 1 H, J = 11 Hz), 4,16 (dd, 1H, J = 11, 4 Hz), 4,24 (dd, 1 H, J = 12, 4,3 Hz), 4,40 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,6-4,8 (m, 4 H), 5,00 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,1-5;25 (m 2 H), 5,4-5,55 (m, 2 H), 5,84 (br s, 1H), 6,61 (br s, 2 H), 7,1-7,35 (m, 10 H).
(3) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(7), o composto preparado em (2) acima (0,44 g, 0,254 mmol) foi desprotegido com zinco (0,83 g, 13 mmoles) e foi então acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (0,14 g, 0,31 mmol) na presença de EEDQ (0,095 g, 0,38 mmol) para dar 0,271 g (59%) de N-[(R)-3 tetradecanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-tetra-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil)-beta-D-glucopiranosil-L-serinamida como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 18 H, J = ~6,5 Hz), 1,0-1,7 (m, 126 H), 2,03 (br s, 1H), 2,15-2,55 (m, 12 H), 3,5-4,05 (m, 5 H), 4,14 (dd, 1H, J = 10, 3,5 Hz), 4,5-4,65 (m, 2 H), 4,68 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 5,05-5,25 (m, 3 H), 5,31 (t, 1H, J = ~10 Hz), 5,58 (br s, 1 H), 6,31 (d, 1 H, J = 8 Hz), 6,85-6,95 (m, 2 H), 7,1-7,4 (m, 10 H). (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (3) acima (0,25 g, 0,14 mmol) foi hidrogenado na presença de óxido de platina (0,125 g) para dar 0, 195 (80%) de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-tetradeca-noiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(-R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serinamida Sal de Trietilamônio como um sólido incolor; pf 190-191 °C (dec); IV (película) 3418, 3293, 2921, 2850, 1732, 1717, 1651, 1636, 1557, 1540, 1458, 1165, 1033 cm’1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 1 8 H, J = ~7 Hz), 1,0-1,7 (m, 135 H), 2,2-2,7 (m, 12 H), 3,05 (q, 6 H, J = ~7,2 Hz), 3,2-3,45 (m), 3,5-4,15 (m, 5 H), 4,21 (q, 1H, J = - 10 Hz), 4,53 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 4,58 (m, 1H), 5,0-5,3 (m, 4 H), 7,25 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 7,40 (d, 1H, J = 7,2 Hz); 13C RMN (CDCI3-CD3OD) δ 173,7, 173,5, 172,5, 170,7, 170,5, 170,4, 101,4, 75,5, 73,4, 71,1,70,9, 70,2, 68,6, 60,0, 53,9, 52,2, 45,6, 41,2, 41,0, 38,9, 34,4, 34,2, 31,8, 29,6, 29,5, 29,3, 29, 1,25, 2,24,9, 22,6, 14,0, 8,3.
Análise calculada para C99H19iN4Oi8P.2,5 H20: C, 66,00; H, 10,97; N, 3,11, P, 1,72, Encontrado: C, 66,04; H, 10,99; N, 3,03; P, 1,95. EXEMPLO 26 (B25) Preparação de N-[(R)-3-Decanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serinamida Sal de Trietilamônio (Composto (I), Ri = R2 = R3= n-C9Hi9CO, X=Y=0, n=m=p=q=0, R4=R5=R7=R9=H, R6=CONH2i R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 25-(l), clori-drato de L-serinamida (169 mg, 1,2 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (478 mg, 1,2 mmoles) na presença de EEDQ (371 mg, 1,5 mmoles) em CH2CI2 para fornecer 428 mg (74%) de N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-L-serinamida como um sólido branco: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H), 1,1 -1,7 (m, 34 H), 2,33 (t, 2 H, J = 7,5 Hz), 2,54 (d, 2 H, J = 6,6 Hz), 3,35 (s, 2 H), 3,72 (dd, 1H, J = 11,0, 5,2 Hz), 3,84 (dd, 1H, J = 11,3, 5,0 Hz), 4,20 (t, 1H, J = 5,1 Hz), 5,26 (t, 1H, J = 6,4 Hz). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(5), o composto preparado em (1) acima (410 mg, 0, 85 mmoles) e o composto preparado no exemplo 15-(4) (1,05 g, 0,87 mmoles) foram acoplados na presença de AgOTf (560 mg, 2,2 mmoles) para fornecer 780 g (56%) de N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenil fosfono-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2, 2-tricloroetoxicarbonilmino)-beta-D-glucopiranosil)L-serinamida como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H), 1,1-1,6 (m, 68 H), 1,80 (s, 3 H), 1,89 (s, 3 H), 2,30 (m, 8 H), 3,53 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,85 (br d, 1 H, J = 9,4 Hz), 4,15 (dd, 1H, J = 10,8, 3,7 Hz), 4,24 (dd, 1H, J = 12,3, 4,6 Hz), 4,40 (d, 1H, J = 10,8), 4,65 (m, 4 H), 5,00 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,18 (m, 2 H), 5,46 (m, 2 H), 5,83 (m, 1H), 6,60 (m, 2 H), 7,30 (m, 10 H). (3) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(7), o composto preparado em (2) acima (600 mg, 0,36 mmol) foi desprotegido com zinco (1,19 g, 18,2 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-ecanoiloxitetradecanóico (160 mg, 04 mmol) na presença de EEDQ (124 mg, 0,50 mmol) para fornecer 371 mg (62%) de N-[(R)-3-decanoiloxitetra-decanoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoi-lamino]-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina-mida como um sólido amorfo. (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (3) acima (330 mg, 0,20 mmol) foi hidrogenado na pre- sença de óxido de platina (200 mg) para fornecer 120 mg (44%) de N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoi-loxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-beta-D-gluco-piranosil]-L-serinamida Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf. 187-189° C; IV (película) 3419, 3286, 3220, 3098, 2955, 2922, 2852, 1732, 1680, 1662, 1644, 1559, 1467, 1247, 1167, 1107, 1080, 1051, 965, 913 cm'1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,89 (t, 18 H, J = 7,0 Hz), 1,1 - 1,7 (m, 111 H), 2,2 - 2,7 (m, 12 H), 3,07 (q, 6 H, J = 7,1 Hz), 3,68 (m, 1 H), 3,87 (m, 1H), 4,09 (dd, 1 H, J = 10,8, 3,6 Hz), 4,22 (m, 1 H, 4,53 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 4,58 (m, 1H), 5,13 (m, 3 H), 5,28 (m, 1H), 7,53 (d, 1 H, J = 9,0 Hz), 7,56 (d, 1H, J = 7,7 Hz); 13C RMN (CDCI3) δ 173,5, 173,2, 170,2, 169,8, 102,3, 75,7, 73,5, 71,3, 70,7, 70,1, 68,8, 60,8, 53,9, 51,7, 45,9, 41,5, 41,13, 39,1, 34,6, 34,5, 34,2, 32,0, 29,7, 29,6, 29,5, 29,4, 25,7, 25,4, 25,1, 22,7, 14,1, 8,6.
Análise calculada para C87H167N4O18P. H20: C, 65,05; H, 10,60; N, 3,49; P, 1,93, Encontrado: C, 65,06; H, 10,40; N, 3,31; P, 2,00. EXEMPLO 27 (B26) Preparação de Éster de metila de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio (Composto (I), R1 = R2 = R3= n-Ci3H27CO, X=Y=0, n=m=p=q=0, R4=Rs=R7=R9=H, R6=C02Me, Re=P03H2). (1) Uma solução do composto preparada em Exemplo 12- (2) (0,290 g, 0,157 mmoles) em THF (20 ml) foi hidrogenado na presença de 5% de paládio sobre carbono (50 mg) a temperatura ambiente e pressão atmosférica por 3 h. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado. Uma solução do resíduo em CHCI3 (5 ml) a 0°C foi tratada com uma solução de diazometano (0,5 mmol) em éter (5 ml) e então foi agitada por 30 min a 0°C. AcOH (0,5 ml) foi adicionado e a solução incolor resultante foi diluída com éter (50 ml), foi lavada com NaHC03 aq. saturado (25 mL), foi seca (Na2S04) e foi concentrada. Cromatografia flash sobre sílica gel (eluição de gradiente, EtOAcs-hexanos a 20 - 25%) forneceu 0,199 g (72%) de éster de metila de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino]-beta-D-gluco-piranosil)-L-serina como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H,J = ~6,5 Hz), 1,1-1,75 (m, 84 H), 1,81 e 1,89 (2s, 6 H), 2,36 (t, 2 H, J =7,5 Hz), 2,25-2,6 (m, 6 H), 3,48 (q, 1H, J = ~8 Hz), 3,7-3,9 (m, 5 H), 4,2-4,4 (m, 3 H), 4,6-4,85 (m, 4 H), 4,88 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 5,03-5,22 (m, 2 H), 5,49 (t, 1H, J = -9,5 Hz), 6,21 (brs, 1H), 6,59 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,1-7,4 (m, 10H). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (1) acima (0,195 g, 0,111 mmol) foi desprotegido com zinco (0,36 g, 5,5 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (0,060 g, 0,13 mmol) na presença de EEDQ (0,041 g, 0,17 mmol) para dar 0,138 g (69%) de éster de metila de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-0-[(R)-4-0- difenilfosfono-2-[(R)-3-tetradeca-noiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil-beta-D-glucopiranosil]-L-serina como um sólido amorfo. 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 18 H, J = ~6,5 Hz), 1,0 - 1,75 (m, 126 H), 2,15-2,45 (m, 10 H), 2,52 (dd, 1H, J =14,7, 6 Hz), 2,66 (dd, 1 H, J = 14,7, 6 Hz), 3,35 (br s, 1 H), 3,4-3,8 (m, 7 H), 3,88 (dd, 1H, J = 11 Hz), 4,18 (dd, 1H, J = 11 Hz), 4,6-4,75 (m, 2 H), 5,03 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 5,1-5,25 (m, 3 H), 5,50 (t, 1H, J = ~9,5 Hz), 6,50 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 6,97 (d, 1H, J =7-8 Hz), 7,1 - 7,4 (m, 10 H). (3) Do mesmo modo que descrito no 2-(8), o composto preparado em (2) acima (0,100 g, 0,055 mmol) foi hidrogenado na presença de óxido de platina (50 mg) para dar 0,055 g (57%) de éster de metila de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-0-[2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-tetra-decanoiloxitetradecarbonilamino)-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosil]-L-serina Sal de Trietilamônio como um sólido incolor: pf 142-143-C (dec), IV (película) 3289, 2955, 2921, 2852, 1733, 1718, 1699, 1652, 1558, 1540, 1521, 1506, 1469, 1457, 1375, 1360,1259 cm'1: 13C-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = -6,5 Hz), 1,0-1,7 (m, 135 H), 2,2-2,7 (m, 12 H), 3,05 (q, 6 H, J = 7,5 Hz), 3,31 (d, 1 H, J = 9,3 Hz), 3,37 (s, 1 H), 3,55-3,9 (m, 10 H), 3,97 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,1-4,25 (m, 2 H), 4,55-4,65 (m, 2 Η), 5,05-5,25 (m, 3 Η), 7,23 (d, 1 Η, J = -8,1 Ηζ), 7,47 (d, 1 Η, J = 7,2 Hz); 1H-RMN (CDCI3): δ 173,6, 173,4, 170,5, 170,4, 170,1, 100,7, 75,9, 72,8, 71,2, 70,8, 70,6, 68,5, 60,3, 55,3, 52,7, 52,4, 47,7, 41,5, 40,9, 39,7, 34,6, 34,5, 34,3, 32,0, 29,8, 29,4, 25,4, 25,1, 22,7, 14,2, 8,5.
Análise calculada para C100H192N3O19P.H2O: C, 67,11; H, 10,93; N, 2,35; P, 1,73, Encontrado: C. 66,91; H, 10,93; N, 2,31; P, 2,11. EXEMPLO 28 (B27) Preparação de N-(Carboximetil)-N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil)-2-aminoetil 2-Desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilami-no]-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glicopiranosídeo Sal de Trietilamônio (Composto (I), R1 = R2 = R3= n-Ci3H27CO, X=Y=0, n=m=p=0, R4=R5=R6=R9=H, R7=C02H, q=1, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no exemplo éster de t-butila de 2-(5), N-(2-hidroxietil)glicina (0,25 g, 1,43 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (0,714 g, 1,57 mmoles) na presença de EDC-Mel (0,466 g, 1,57 mmoles) para dar 0,46 g (31%) de éster de t-butila de N-(2-hidroxietil)-N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetrade-canoi!]glicina como um sólido amorfo. 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 6 H, J - 6,5 Hz), 1,15-1,7 (m, 51 H), 2,26 (t, 2 H, J = 7,5 Hz), 2,60 (dd, 1H, J = 6,5, 15 Hz), 2,86 (dd, 1H, J = 6,7, 15 Hz), 3,40-4,15 (m, 7 H), 5,25 (m, 1H). (2) Do mesmo modo que descrito no 13-(5), o composto preparado em (1) acima (0,21 g, 0,334 mmol) e o composto preparado no exemplo 22-(2) (0,458 g, 0,368 mmol) foram acoplados na presença de AgOTf (0,689 g, 2,68 mmoles) para dar 0,39 g (64%) de N-(t-butiloxicarbonilmetil)-N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-2-aminoetil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-6-0-(2,2, 2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-triclotetraetoxicarbonilamino)-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo: 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 12 H, J = ~6,5 Hz), 1,0 - 1,95 (m, 99 H), 2,1-2,6 (m, 7 H), 2,84 (dd, 1H, J = 5,15 Hz), 3,2 - 4,15 (m, 8 H), 4,15-4,45 (m, 2 H), 4,55-4,9 (m, 3 H), 5,00 (d, 1Η, J = 8Hz), 5,13 (m, 2 Η), 5,4-5,65 (m, 1H), 6,16 (d, 1H, J = 7 Hz), 7,05- 7,4 (m, 10 H). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (2) acima (0,339 g, 0,185 mmol) foi desprotegido com zinco (0,36 g, 5,54 mmoles) e foi então acilado com ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanóico (0,100 g, 0,221 mmol) na presença de EEDQ (0,068 g, 0,276 mmol) para dar 0,25 g (71%) de N-(t-butiloxicarbonilmetil)-N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-2-aminoetil 2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetra-decanoil]-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido incolor. (4) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(8), o composto preparado em (3) acima (0,25 g, 0,131 mmol) foi hidrogenado na presença de óxido de platina (125 mg) em 9:1 TEF-AcOH (15 ml). O produto de hidrogenólise bruto foi dissolvido em CH2CI2 (1 ml), foi resfriado para 0”C, e foi trada gota a gota com TFA (0,5 ml). Após a agitação por 2 h a 0°C, a mistura de reação foi concentrada e TFA residual foi removido por azeotro-pismo com tolueno. O resíduo resultante (0,23 g) foi dissolvido em trietilami-na aq. a 1% (12 ml) e foi liofilizado. Cromatografia flash sobre sílica gel com clorofôrmio-metanol-água-trietilamina (91:8:0,5:0,5 - 85:15:0,5:0,5, eluição de gradiente) e ulteriormente purificação por meio ácido, extração como descrito no exemplo 2-(8) e liofilização a partir de trietilamina aq. a 1% (6 ml) forneceu 99 mg (43%) de N-(carboximetil)-N-[(R)-3-tetradecanoilo-xitetradecanoil]-2-aminoetil 2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxite-tradecanoilamino]-3-0-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopi-ranosídeo Sal de Trietilamônio como um sólido incolor: pf 162-163-C (dec); IV (película) 3286, 2922, 2852, 1732, 1651, 1556, 1455, 1434, 1378, 1260,1088, 801 cm'1; 1H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (t, 5H, J = -6,5 Hz), 1,0-1,75 (m, 135H), 2,2-3,0 (m, 14 H), 3,04 (q, 6H, J = 7,2 Hz), 3,25-3,8 (m, 5H), 3,85-4,3 (m,5H), 4,55 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 4,69 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 5,05-4,35 (m, 4 H).
Análise calculada para CiooHi92N3Oi9P. 3H20; C, 65,79, H, 10,60; N, 2,30; P, 1,70, Encontrado: C, 65,82; H, 10,44; N, 2,40; P, 1,79, 75 EXEMPLO 29 (B28) Preparação de N-Carboximetil-N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-3-amino-propil-2-Desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino])-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamô-nio (Composto (I), Ri = R2 = R3= n-C9H19CO, X=Y=0, n=1,m=p=0, R4—Rs=R6~R9=H, R7=C02H, q=1, R8=P03H2). (1) Do mesmo modo que descrito no Exemplo 2-(5), éster de benzila de N-(3-hidroxipropil)glicina (450 mg, 2,0 mmoles) foi acilado com ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanóico (1,09, 2,5 mmoles) na presença de EDC.Mel (900 mg, 3,0 mmoles) em CH2CI2 para fornecer 0,76 g (63%) de éster de benzila de N-(3-hidroxipropil)-N-[(R)-3-decanoiloxitetradeca-noil]glicina como um óleo incolor: 1H-RMN (CDCI3) (mistura de 1:1 de rotô-meros) δ 0,88 (t, 6 H, J = 6,6 Hz), 1,1 -1,7 (m, 35 H), 1,78 (m, 1 H), 2,26 (9, 2 H, J = 7,6 Hz), 2,37 e 2,54 (2 dd, 1H, J = 14,9, 6,9 Hz), 2,60 e 2,89 (2 dd, 1H, J = 14,8, 6,0 Hz), 3,51 (m, 4 H), 3,70 (m, 1H), 3,95 - 4,25 (m, 2 H), 5,1 -5,25 (m, 3 H), 7,35 (m, 5 H). (2) Do mesmo modo que descrito no exemplo 13-(5), o composto preparado em (1) acima (500 mg, 0,83 mmol), e o composto preparado no exemplo 15-(4) (1,0, 0,83 mmoles) foram acoplados na presença de AgOTf (1,07 g, 4,15 mmoles) para fornecer 1,27 g (72%) de éster de benzila de N-(benziloxicarbonilmetil)-N-[(R)-3-decanoiloxitetra-decanoil]-3-aminopropil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradeca-noil]-6-0-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloro-etoxicarbo-nilamino)-beta-D-glucopiranosídeo: 1H-RMN (CDCI3) (mistura de 2:1 de ro-tômero) δ 0,88 (t, 12 H, J = 6,9 Hz), 1,1 -1,7(m, 69 H), 1,80 (s, 3 H), 1,88 (s, 3 H), 2,1 - 2,6 (m, 11 H), 2,81 (dd, 1 H, J = 14,8, 6,2 Hz), 3,37 (m, 1H), 3,52 (m, 2 H), 3,76 (m, 1H), 3,87 (m, 1H), 4,05 (m, 2 H), 4,28 (m, 3 H), 4,62 (m, 3 R), 4,77 (m, 1H), 4,93 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,15 (m, 4 H), 5,46 e 5,61 (2 t, 1H, J = 9,5 Hz), 5,95 e 6,05 (2 d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,1 -7,4 (m, 15 H). (3) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(7), o composto preparado em (2) acima (1,25 g, 0,71 mmol) foi desprotegido com zinco (2,31 g, 3,53 mmoles) e foi acilado com ácido (R)-3-decanoiltetra- decanóico (3,53 mg, 0,89 mmol) na presença de EEDQ (264 mg 1,07 mmoles) para fornecer 670 mg (54%) de N-benziloxicarbonilmetil-N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-3-aminopropil 2-desóxi-4-0-difenilfosfono-3-0-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino))-beta-D-glucopiranosídeo como um sólido amorfo. (4) Do mesmo modo que descrito no exemplo 2-(8), o composto preparado em (3) acima (670 mg, 0,38 mmol) foi hidrogenado na presença de hidróxido de paládio sobre carbono (270 mg) e óxido de platina (200 mg) em EtOH.AcOH (10:1) para fornecer 240 mg (39%) de N-carboximetil-N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-3-aminopropil 2-desóxi-4-0-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino])-3-0-[(R)-3-decanoiloxite-tradecanoil]-beta-D-glucopiranosídeo Sal de Trietilamônio como um pó branco: pf 156 - 157»C; IV (película) 3284, 2929, 2853, 2729, 1732, 1655, 1628, 1551, 1466, 1378, 1314, 1164, 1108, 10472 955, 844, 722 cm*1; 1H-RMN (CDCI3 - CD3OD): δ 0,88 (t, 18 H, J = 6,9 Hz), 1,1 - 1,7 (m, 111 H), 2,27 (q, 6 H, J = 6,2 Hz), 2,35 - 2,80 (m, 9 H) 3,05 (q, 6 H, J = 7,2 Hz), 3,25 - 3,60 (m, 4 H), 3,75 - 4,10 (m, 4 H), 4,23 (m, 2 H), 4,47 (d, 1 H, J = 8,2 Hz), 4,61 (d, 1H, J = 8,3Hz), 5,05-5,25 (m,4H); 13C RMN (CDCI3) δ 173,4, 173.0, 171,1, 170,6, 170,3, 169,6, 100,5, 74,5, 73,9, 71,4, 71,2, 70,7, 70,2, 67.0, 65,8, 60,7, 54,6, 54,3, 51,4, 49,2, 46,0, 45,4, 42,1, 41,2, 39,4, 38,0, 37,7, 34,5, 34,3, 34,2, 31,9, 29,8, 29,7, 29,6, 29,5, 29,2, 28,1, 25,4, 25,3, 25,1,22,7,14,1,11,1,8,6.
Análise calculada para C89H170N3O19P. H20: C, 65,37, H, 10,60; N, 2,57; P, 1,89.
Encontrado: C, 65,35; H, 10,42; N, 2,43, P, 2,05. EXEMPLO DE TESTE 1 Estimulação de Produção de Anticorpo de Toxóide de Antitétano Os AGPs do presente invenção aumentaram a produção de anticorpo para toxóide de tétano purificado em um modelo de camundongo. Dez mg de cada amostra de AGP foram adicionados a 1 ml de um mistura de óleo-lecitina contendo óleo de esqualeno mais 12% de lecitina. As misturas foram aquecidas em um banho maria a 56°C e foram sonicadas para se conseguir soluções claras. Cinqüenta (50) μΙ de cada solução foram emulsi-ficadas por turbilhonamento em 2 ml de salmoura de Tween-80 a 0,1%, pré-aquecida, estéril contendo 1,0 pg de antígeno de toxóide de tétano/ml. Preparações foram turbilhonadas novamente exatamente antes da administração a camundongos. Camundongos C57BL/6 x DBA/2 Fi fêmeas (8 por grupo) foram tratados com 0,2 ml da preparação apropriada distribuída como uma injeção subcutânea de 0,1 ml em cada flanco. A dosagem de camun-dongo final do toxóide de tétano e compostos de AGP foi de 0,2 pg e 50 pg, respectivamente. Camundongos de controle receberam toxóide de tétano em veículo (salmoura de óleo-Tween). Todos os camundongos foram tratados no dia 0 seguido por uma segunda imunização no dia 21. Quatoze dias após a segunda imunização camundongos foram sangrados e soros foram isolados por centrifugação.
Amostras de soro de cada camundongo foram avaliados quanto aos anticorpos de toxóide de antitétano por análise de imunoensaio de enzima (EIA) usando-se placas de microtítulo revestidas com toxóide de tétano. Títulos de anticorpo de antitétano foram avaliados quanto a IgM, Ig tota, bem como, isótipos IgGi, lgG2, e lgG2b. Cada amostra de soro foi diluída duas vezes por 11 diluições partindo com uma diluição de soro inicial de 1:200. Resultados são mostrados nas tabelas 2-4.
Tabela 2 Títulos de anticorpo de toxóide de antitétano de camundongos tratados Material IgG total IgGi lgG24 lgG2b T/C* Título T/C Título T/C Título T/C Título B11 3,6 23,200 1,86 400,000 2,06 10,450 0,93 26,800 B2 3,84 24,800 2,16 464,000 4,28 21,700 1,57 45,200 B1 3,97 25,600 3,42 736,000 3,78 19,200 2,45 70,400 B25 8,93 57,600 2,68 576,000 1,67 8,500 3,28 94,400 B21 4,71 30,400 2,23 480,000 5,83 29,600 6,07 174,400 B15 18,85 121,600 4,17 896,000 6,80 34,500 2,79 80,256 Veículo 6,450 215,000 5,075 28,750 * razão de T/C = título de teste experimental + título de controle de veículo Tabela 3 Títulos de anticorpo de toxóide antitétano de camundongos tratados Material T/C* IgM T/C lgG28 T/C lgG2b B12 3,1 4800 139,4 2370 149 9840 B16 1,6 2560 66,8 1135 104 6880 B13 3,9 6080 220 3740 >208 >13,760 B11 3,3 5120 347 5900 127,3 8400 Veículo - 1760 25 - 98 * razão de T/C = título de teste experimental + título de controle de veículo Tabela 4 Títulos de anticorpo de toxóide de antitétano de camundongos tratados Material Total Ig IgM IgGi lgG2a lgG2b T/C Título T/C Título T/C Título T/C Título T/C Título B26 10,5 2,490 1,1 600 16,9 25,200 29,3 440 42,6 2,260 B15 144,5 34,400 2,7 1,520 118,3 176,000 259,3 3,890 603,8 32,000 B22 60,0 19,050 0,8 440 18,4 27,400 345,8 5,187 59,6 3,160 B28 228,6 54,500 3,7 2,080 92,5 137,600 664,7 9,970 519,2 27,520 Veículo 238 560 1,488 15 53 * razão de T/C = título de teste experimental + título de controle de veículo Compostos da presente invenção mostraram uma resposta de dose quando administrados com toxóide de tétano. Camundongos fêmeas BFD1 (C57B1/6 X DBA/2' (8 por grupo) foram imunizados com 0,2 ml de emulsões contendo AGP + 0,2 pg de toxóide de tétano. Uma segunda imunização foi administrada 21 dias após a imunização primária. Cada camun-dongo foi sangrado 21 dias depois da segunda injeção. Os resultados são mostrados nas tabelas 5 e 6.
Tabela 5 Resposta de dose de AGPs em camundongos imunizados com toxóide de tétano Material Total Ig IgM IgGi lgG2a lgG2b Razão Título Razão Título Razão Título Razão Título Razão Título de T/C* de T/C de T/C de T/C de T/C B15 50 pg 3,3 7,000 13,4 37,600 4.1 26,300 150,0 11,225 3,2 2500 B15 25 pg 5,8 12,400 2,1 6,000 4,5 28,800 52,0 3900 7,0 5400 B15 10 pg 5,3 11,450 1,4 4,000 5,5 35,100 33,8 2538 9,9 7650 B27 50 ug 3,2 6,800 4,0 11,200 1,6 10,400 12,0 900 11,6 9,000 Veículo 2150 2800 6350 75 775 * razão de T/C = título de teste experimental + título de controle de veículo Tabela 6 Resposta de dose de AGPs em camundongos imunizados com toxóide de tétano Material IgM Ig total IgGi lgG2a lgG2b T/C* Título T/C Título T/C Título T/C Título T/C Título B12 50 pg 5,43 869 368,55 47,543 141,22 259,429 nd 499,35 12,983 B12 25 pg 3,14 503 403,98 52,114 145,21 266,743 16,86 354 196,92 5,120 B12 10 pg 3,71 594 248,06 32,000 81,12 149,029 6,81 143 181,12 4,709 B12 5 pg 3,43 549 489,92 63,200 84,11 154,514 34,14 717 352,54 9,166 B12 1 pg 1,71 274 326,02 42,057 90,08 165,486 73,71 1,548 175,81 4,571 B15 50 pg 3,14 503 233,88 30,171 90,08 165,486 50,05 1,051 235,62 6,126 B15 25 pg 2,29 366 181,91 23,467 106,14 194,971 10,43 219 158,23 4,114 B15 10 pg 2,86 457 170,10 21,943 39,07 71,771 2,57 54 84,38 2,194 B15 5 pg 1,71 274 248,06 32,000 103,15 189,486 3,00 63 210,88 5,483 B151 pg 1,57 251 166,56 21,486 72,04 132,343 7,62 160 114,27 2,971 Veículo 160 129 1837 21 26 * razão de T/C = título de teste experimental + título de controle de veículo nd-não feito Exemplo de Teste 2 Estimulação de Produção de Anticorpo de Antiovalbumina Camundogos fêmeas BDF1 (8 por grupo) foram imunizados com 0,2 ml de emulsões contendo 50 pg da AGPs + 50 pg de ovalbumina. Uma segunda imunização foi administrada 21 dias após imunização primária. Cada camundongo foram sangrados 14 dias depois da segunda injeção. Títulos de anticorpo de camundongos imunizados mostrando IgG e IgM totais bem como títulos para os subgrupos de IgG incluindo IgGi, lgG2a, e lgG2b são dados na tabela 7.
Tabela 7 Atividade de auxiliar em camundongos BDF1 imunizados com ovalbumina Material Ig total IgM T/C* Título T/C Título B11 0,7 150 1,3 250 B2 2,5 563 0,9 175 B1 0,5 119 0,8 150 B25 1,9 438 0,8 150 B21 0,5 113 1,3 250 B15 4,1 925 2,3 438 B27 0,6 138 1,6 300 Veículo - 225 - 188 * razão de T/C = título de teste experimental + título de controle de veículo B11 1,6 2650 1,7 550 1,6 375 B2 5,0 8300 2,5 825 2,3 550 B1 0,5 763 0,2 56 0,8 188 B25 5,2 8500 0,5 163 5,0 1188 B21 0,6 1000 0,1 25 0,8 200 B15 0,6 950 0,3 113 16,7 3963 B27 0,8 1275 0,1 38 0,5 113 Veículo - 1650 - 325 - 238 * razão de T/C = título de teste experimental + título de controle de veículo Os compostos de AGP da invenção quando administrados a um animal de sangue quente com o antígeno albumina estimula a produção de anticorpo para aquele antígeno.
Exemplo de Teste 3 Geração de uma Resposta Imune Protetora a Influenza Infecciosa Camundongos vacinados com influenza inativada por formalina e os compostos de AGP da presente invenção montaram uma resposta imune protetora a um desafio de influenza bem como anticorpo produzido para aquele antígeno. Animais foram vacinados com o antígeno e compostos de AGP em vários veículos. O grau de proteção foi determinado por desafio dos camundongos com administração intranasal (IN) de cerca de 10 LD50 de Influenza infecciosa A/HK/68. A mortalidade foi analisada por 21 dias após o desafio. O número de camundongos que sobreviveram a dose de desafio é uma avaliação direta da eficácia da vacina. Para as experiências providas estes dados não necessariamente se correlacionam com a quantidade de anticorpo produzido. 1) Vacinas foram formuladas em trietanolamina a 0,2% (solução de Te-oAVágua contendo: 1 unidade de hemaglutinação (HAU) de Influenza A/HK/68 inativada por formalina (Fl-Flu), e 50 pg de AGP exceto as vacinas de controle de veículo que não continham nenhum AGP. Camundongos ICR (10/grupo) foram vacinados apenas uma vez. As vacinas foram administradas por injeção subcutânea (SQ) de 0,1 ml/sítio em 2 sítios distintos perto dos nódulos de linfa inguinal para um total de 0,2 ml de vaci-na/camundongo. Camundongos (apenas 5 camundongos/grupo) foram sangrados a partir do plexo orbital 14 dias após a vacinação. Soros foram coletados e foram congelados a -20°C até que fossem usados para ensaio de imunossorvente ligado a enzima (ELISA). Todos os camundongos foram desafiados 30 dias após a vacinação por adminsitração intransal (IN) de cerca de lOLDsode Influenza infecciosa A/HK/68. A mortalidade foi analisada por 21 dias após o desafio. Títulos de anticorpo de anti-influenza obtidos a partir de vacinações com formulações de TEoA e taxas de sobrevivência corres- pondentes de camundongos vacinados com esta formulação são mostrados na tabela 8.
Tabela 8 Títulos de Anticorpo de Anti-influenza e Taxas de Sobrevivência de Camundongos Tratados Material Título'1 IgG Total Sobrevivência em por cento Não imune <100 0 Veículo <100 0 B9 6400 44 B10 1600 40 B7 200 33 B3 1600 33 B14 6400 44 B15 6400 50 2) Vacinas foram formuladas em solução de Esqualeno a 2% contendo: 1 unidade hemaglutinação (HAU) de Influenza A/HK/68 inativada por formali-na (Fl-Flu), e 25 μ9 de AGP exceto a salmoura e vacinas de controle de veículo que não continham nenhum AGP. Camundongos BALB/c foram vacinados apenas uma vez. As vacinas foram administradas por injeção subcutâ-nea (SQ) de 0,1 ml/sítio em 2 sítios distintos perto dos nódulos de linfa in-guinal para um total de 0,2 ml de vacina/camundongo. Camundongos (apenas 5 camundongos/grupo) foram sangrados a partir do plexo orbital 14 dias após a vacinação. Soros foram coletados e foram congelados a -20°C até que fossem usados para ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA). Todos os camundongos foram desafiados 35 dias após a vacinação por adminsitração intransal (IN) de cerca de 10LDsode Influenza infecciosa A/HK/68. A mortalidade foi analisada por 21 dias após o desafio. Títulos de anticorpo de anti-influenza obtidos a partir de vacinações com formulações de esqualeno bem como as taxas de sobrevivência correspondentes de animais vacinados são mostrados na tabela 9.
Tabela 9 Títulos de Anticorpo de Anti-influenza e Taxas de Sobrevivência de Camundongos Tratados Material IgG Total IgGi lgG2a lgG2b Sobrevivência em por cento Não imune <100 <100 <100 <100 0 Salmoura 800 100 800 100 62,5 Veículo 1600 1600 1600 1600 100 B25 3200 1600 6400 1600 100 B15 1600 3200 3200 400 100 B9 1600 1600 3200 800 87,5 610 400 400 400 400 62,5 B3 3200 3200 6400 800 87,5 B6 800 800 400 1600 75 B14 3200 6400 3200 6400 87,5 B28 800 400 400 100 50 3) Os títulos de anticorpo e a taxa de sobrevivência de camundongos vacinados foram comparados depois de uma vacinação primária então uma vacinação secundária. Vacinas foram formuladas em solução de TEoA/água a 0,2%: 1 unidade hemaglutinação de influenza A/HK/68 inativada por forma-lina, e 25 pg de AGP, exceto a vacina de controle de veículo que não continha nenhum AGP. A camundongos ICR (20/grupo) foram administrados vacinas por injeção subcutânea de 0,1 ml/sítio em 2 sítios distintos perto dos nódulos de linfa inguinal para um total de 0,2 ml de vacina/camundongo. Cada grupo foi divididos em 2 subgrupos 35 dias depois da vacinação primária. Um de cada subgrupo foi desafiado neste momento, os subgrupos restantes receberam uma vacinação secundária. Camundongos (apenas 5/subgrupo) foram sangrados a partir do plexo orbital 14 dias após a vacinação (primária ou secundária). Soros foram coletados e foram congelados a -20»C até que fossem usados para ELISA. Camundongos foram desafiados 35 dias após a vacinação primária ou secundária por administração in- transai de cerca de 10LD5o ou 4OLD50 de Influenza infecciosa A/HK/68, respectivamente. A mortalidade foi analisada por 21 dias após 0 desafio. Títulos de anticorpo de anti-influenza e taxas de sobrevivência de camundongos após a vacinação primária e após a vacinação secundária são mostrados na tabela 10. Títulos de anticorpo bem como taxas de sobrevivência de camundongos vacinados uma segunda vez eram mais altos.
Tabela 10 Títulos de Anticorpo e Taxas de Sobrevivência de Camundongos Tratados Título de IqG Sobrevivência em por cento Material após 1o após 2o após 1o após 2o Não imune 200 100 0 0 Veículo 800 102,400 20 40 B9 6400 12,800 80 50 B10 1600 25,600 60 90 B7 3200 >102,400 60 60 B4 800 25,600 50 70 B3 3200 102,400 70 60 B5 1600 >102,400 60 90 B6 1600 102,400 80 70 B14 800 51,200 33 70 Exemplo de Teste 4 O Efeito de Comprimento de Cadeia de Ácido Graxo sobre Auxiliaridade. O efeito do comprimento de cadeias de ácido graxo R1-R2 sobre a atividade foi testado. Vacinas foram formuladas em solução de TEoA/água a 0,2% contendo: 1 unidade hemaglutinação de A/HK/68 de influenza inati-vada por formalina, e 25 pg de AGP, exceto a vacina de controle de veículo que não continha nenhum AGP. A camundongos ICR (10/grupo) foram vacinados apenas uma vez. AS vacinas foram administradas por injeção sub-cutânea de 0,1 ml/sítio em 2 sítios distintos perto dos nódulos de linfa ingui-nal para um total de 0,2 ml de vacina/camundongo. Camundongos (apenas 5/grupo) foram sangrados a partir do plexo orbital 14 dias após a vacinação.
Soros foram coletados e foram congelados a -20°C até que fossem usados para ELISA. Todos os camundongos foram desafiados 35 dias após a vacinação por administração intransal de cerca de lOLDsode Influenza infecciosa A/HK/68. A mortalidade foi analisada por 21 dias após o desafio. O comprimento de cadeia de ácido graxo parece bandamente afetar a atividade biológica. Resultados são mostrados nas tabelas 11 e 12.
Tabela 11 Títulos de Anticorpo e Taxas de Sobrevivência de Camundongos Tratados Material Comprimento de Cadeia IgC Total IgGí lgG2a lgG2b Sobrevivência em por cento Não imune — 200 100 100 800 0 Veículo — 200 100 100 200 11 B18 7 800 800 800 400 20 B17 8 6400 3200 3200 1600 40 B16 9 800 1600 100 800 40 B15 10 3200 200 3200 6400 70 B14 10 800 1600 100 400 30 B13 11 1600 800 400 800 50 B12 12 200 200 100 200 0 B11 14 1600 200 1600 400 30 Tabela 12 Títulos de Anticorpo e Taxas de Sobrevivência de Camundongos Tratados Material Comprimento de Cadeia IgC Total IgGi lgG2a lgG2b Sobrevivência em por cento Não imune — 100 100 50 800 0 Veículo — 100 200 50 100 30 B8 7 6400 3200 400 1600 80 B7 9 3200 3200 100 1600 70 B5 10 800 200 50 400 44 B4 11 3200 400 100 1600 60 >B3 12 1600 1600 50 800 0 B1 14 12,800 6400 1600 15600 40 Exemplo de Teste 5 O Efeito de Variações no Comprimento de Cadeia de Carbono entre o Hete-roátomo X e o Átomo de Nitrogênio de Aglicona sobre Auxiliaridade O comprimento da cadeia de carbono entre X e o átomo de nitrogênio foi prolongado progressivamente por um único átomo. O efeito de aumento da cadeia entre estes dois componentes sobre auxiliaridade foi explorado. Vacinas foram formuladas em solução de TEoA/água a 0,2% contendo: 1 unidade hemaglutinação de A/HK/68 de influenza inativada por formalina, e 25 pg de AGP, exceto a vacina de controle de veículo que não continha, nenhum AGP. A camundongos ICR (10/grupo) foram vacinados apenas uma vez. As vacinas foram administradas por injeção subcutânea de 0,1 ml/sítio em 2 sítios distintos perto dos nódulos de linfa inguinal para um total de 0,2 ml de vacina/camundongo. Camundongos (apenas 5/grupo) foram sangrados a partir do plexo orbital 14 dias após a vacinação. Soros foram coletados e foram congelados a -20°C até que fossem usados para ELISA. Todos os camundongos foram desafiados 35 dias após a vacinação por administração intransal de cerca de IOLD50 de Influenza infecciosa A/HK/68. A mortalidade foi analisada por 21 dias após 0 desafio. A atividade auxiliar parece diminuir quando o comprimento da cadeia carbono entre o heteroátomo X e o átomo de nitrogênio de aglicona aumenta. No entanto, dependendo dos resíduos ligados a esta cadeia de carbono a estabilidade biológica e metabólica das molécula pode ser afetada. Resultados são mostrados na tabelas 13.
Tabela 13 Títulos de Anticorpo e Taxas de Sobrevivência de Camundongos Tratados Material Cadeia de carbono IgC Total IgGi lgG2a lgG2b Sobrevivência em por cento Não imune — <50 <50 <50 <50 0 Veículo — 200 200 50 200 25 B19 2 12,800 100 800 6400 50 B21 3 6400 800 100 1600 40 B22 4 3200 100 3200 200 40 Exemplo de Teste 6 Indução de Citocina pelos Compostos de AGP
Os compostos de AGP da presente invenção induziram citocinas em ensaios de cultura ex vivo de sangue total de ser humano. Compostos de AGP foram solubilizados em EtOH-água a 10% e foram diluídos em várias concentrações. Cinqüenta μΙ de cada diluição foram adicionados a 450 μΙ de sangue humano total. Controles foram tratados com meios de cultura (RPMI). A mistura de reação foi incubada a 37°C por 4 h com misturação constante sobre um rotor. PBS estéril (1,5 ml) foi adicionado à mistura de reação, as células foram centrifugadas e os sobrenadantes foram removidos para testagem de citocina. A concentração de TNF-alfa e IL-1beta em cada sobrenadante foi determinada usando-se kits de ELISA de imunoensaio da R&D Systems. Resultados destas pesquisas são mostrados nas tabelas 14-19.
Tabela 14 Estimulação de Secreção de Citocina em um Ensaio Ex Vivo Material Dosagem TNF-a IL-Ιβ (μ9) (pg/mi) (pg/mi) B26 20 498,90 33,25 10 254,94 25,34 5 75,62 9,89 1 38,85 3,90 B2 20 1338,42 155,07 10 817,67 114,41 5 235,32 34,72 1 105,52 14,53 RPMI - 2 0 Tabela 15 Estimulação de Citocinas em um Ensaio Ex Vivo Material Dosagem (ng/ml) TNF-a(pg/ml) IL-ip(pg/ml) B16 10.000 291 55 5000 277 53 1000 155 39 B13 10.000 775 THTC* 5000 716 187 1000 740 177 B9 10.000 449 96 5000 247 84 1000 145 53 B10 10.000 207 43 5000 127 61 1000 73 17 B7 10.000 83 16 5000 57 14 1000 26 6 RPMI - 2 0 *THTC- alta demais para contar Tabela 16 Estimulação de Citocinas em um Ensaio Ex Vivo Material Dosagem (ng/ml) TNF-α (pg/ml) IL-13(pg/ml) B4 10.000 432 213 5000 205 164 1000 94 70 B3 10.000 567 269 5000 390 342 1000 189 204 B5 10.000 169 79 5000 143 162 1000 43 36 B6 10.000 94 52 5000 59 29 1000 30 13 B14 10.000 249 91 5000 120 71 1000 56 46 RPMI - 2 0 Tabela 17 Estimulação de Secreção de Citocinas em um Ensaio Ex Vivo Material Dosagem (ng/ml) TNF-ot(pg/ml) IL-1 β (pg/ml) B11 10.000 181 62,3 5000 139 61,7 1000 115 54,5 500 125 55,8 100 127 59,8 B13 10.000 583 282 5000 592 390 1000 478 327 500 411 352 100 302 261 B15 10.000 320 153 5000 280 126 1000 209 94,4 500 183 104 100 133 51,6 B16 10.000 121 41,0 5000 114 34,0 1000 72 19,5 500 55 17,1 B14 10.000 114 24,6 5000 87 19,0 1000 51 10,0 500 49 19,9 RPMI - 2 0 Tabela 18 Estimulação de Secreção de Citocinas em um Ensaio Ex Vivo Material Dosagem (ng/ml) TNF-α (pg/ml) IL-1 β (pg/ml) B2 10.000 100 22,2 5000 75 14,0 1000 38 9,0 500 28 8,3 100 6,1 3,5 B1 10.000 20 10,0 5000 11 5,5 1000 2,8 4,0 500 1,1 0 100 0 0 B7 10.000 61 14,7 5000 44 8,3 1000 30 4,3 500 27 3,8 100 10 5,1 B4 10.000 232 66,9 5000 173 66,5 1000 130 32,0 500 116 19,3 100 89 65,2 B3 10.000 433 151,9 5000 316 200,4 1000 229 75,1 500 212 67,9 100 130 35,9 Tabela 18 - continuação Material Dosagem (ng/ml) TNF-a(pg/ml) IL-1 β (pg/ml) B5 10.000 142 24,1 5000 99 23,0 1000 96 10,5 500 59 16,9 100 33 5,4 RPMI - 2 0 Tabela 19 Estimulação de Secreção de Citocinas em um Ensaio Ex Vivo Material Dosagem (ng/ml) TNF-α (pg/ml) IL-1 β (pg/ml) B17 10.000 2,8 0 5000 2,2 0 1000 2,6 0,2 B8 10.000 2,8 0 5000 0,7 0,5 1000 1,5 0,1 B22 10.000 287 17 5000 11 1,9 1000 2,2 0,1 B28 10.000 198 13 5000 197 13 1000 139 8 B12 10.000 1017 135 5000 957 153 1000 863 175 RPMI 3,9 0 Exemplo de Teste 7 Estimulação de uma Resposta de Linfócito T A indução de uma resposta de linfócito T depois da administração dos compostos de AGP da presente invenção e um antígeno de proteína foi detectada por um ensaio de citotoxicidade. A Grupos de camundon-gos C57BL/6 foram dados uma imunização primária subcutaneamente (região inguinal) com 25 pg de ovalbumina (OVA) formulados em preparações de AGP. O volume injetado foi de 200 μΙ. Vinte e um dias mais tarde três camundongos por grupo experimental foram mortos e baços foram removidos e foram combinados como suspensões de única célula e foram contados. Células de baço (75 x 106 células em meios de 3 - 4 ml) dos grupos experimentais foram colocadas em um frasco T de 25 cm2. A seguir, 1,0 ml de células de E.GT (OVA) irradiadas (20.000 rads) em 5 x 106/ml foi adicionado ao frasco. O volume foi trazido para 10 ml. As culturas foram mantidas por colocação dos frascos T retos em uma incubadora de C02 a 5%, a 37°C por quatro dias. No dia 4 as células sobreviventes foram recuperadas a partir dos frascos, foram lavadas 1X em meios frescos ressuspen-sos em 5,0 ml, e foram contadas. Células efetoras recuperadas foram ajustadas a 5 x 106 células disponíveis/ml e volumes de 100 μΙ foram diluídos em série em triplicata em cavidades de placas de fundo redondo de 96 cavidades (Corning 25850) usando-se 100 μΙ/cavidade de meio como um diluente. A seguir, volumes de 100 μΙ de alvos 51Cr-marcados (ver abaixo) [linha de célula EL-4 transfecta-da por um gene de ovalbumina E.G7 (OVA) em 1 x 105 células/ml foram adicionados às cavidades. Cavidades de liberação espontânea (SR) continham 100 μΙ de alvos e 100 μΙ de meios. Cavidades de liberação máxima (MR) continham 100 μΙ de alvos e 100 μΙ de detergente (Tween 20 a 2%). Razões de efetor/alvo (E/T) foram de 50:1, 25:1, 12,5:1. As placas foram centrifugadas em 400 Xg e foram incubadas a 37°C, C02 a 5% por 4 h. Depois da incubação os sobrenadantes da cavidade foram coletados usando-se um Sistema de Coleta de Sobrenadante Skatron.
Lise específica em por cento Células alvos, E.G7 (OVA), foram marcadas com 51 Cr (cromato de sódio) como se segue. Em um volume total de 1,0 ml foi misturado 5 x 106 células alvos e 250 μΰΐ 51Cr em tubo cônico de 15 ml. As suspensões de célula foram incubadas em um banho maria a 37°C por 90 min, com leve misturação a cada 15 minutos. Depois da incubação as células marcadas foram lavadas 3X por centrifugação e decantação com volumes de 15 ml de meios. Depois da terceira centrifugação as células foram ressuspensas em 10 ml de meios frescos e foram deixadas repousar a temperatura ambiente por 30 min, então foram centrifugadas. As células foram finalmente ressuspensas em meios em 1 x 105 células/ml.
Camundongos imunizados de acordo com o procedimento acima com os AGPs da presente invenção exibiram uma resposta de linfócito T citotóxica ao antígeno de OVA como mostrado na tabela 20.
Tabela 20 Resposta de Linfócito T Citotóxica de Células Tratadas % de Citotoxicidade E:T
Material 50:1 25:1 12,5:1 B11 14 8 5 B12 13 7 4 B13 28 15 10 B15 58 49 30 B16 42 29 20 B17 39 26 15 B18 36 20 15 B14 45 36 25 B28 28 15 9 B27 17 9 5 B1 34 24 15 Tabela 20 - continuação Material 50:1 25:1 12,5:1 B3 65 54 42 B4 72 66 60 B5 28 18 11 B7 57 44 29 B8 36 20 15 B10 65 56 38 B9 65 55 36 B6 54 41 37 B2 21 12 6 B25 65 55 43 B26 14 8 4 B22 58 42 31 B21 38 26 15 B19 59 42 33 B20 36 25 13 Controle de veículo <10 Exemplo de Teste 8 Geração de Títulos de Anticorpo de Mucosa e de Soro para Toxóide de Tétano Os AGPs da presente invenção eliciaram tanto resposta imune de mucosa quanto de soro a toxóide de tétano purificado quando administrados intransalmente. A grupos de camundongos BALB/c foram dados um imunização primária (1o) intransalmente com 10 μg de toxóide de tétano (TT) + 20 μg de AGP formulado em uma formulação aquosa (AF) em um volume de 20 μΙ. Uma imunização secundária (2o) foi dada 14 dias mais tarde e uma imunização terciária (3o) idêntica em composição à primeira e à segunda foi administrada 14 dias mais tarde. Camundongos foram sangrados no dia 21 (7 dias após a 2o) e no dia 38 (10 dias após a 3o) e no dia 48 (20 dias após a 3o). Amostras de extrato de lavagem vaginal/fecal foram tomados no dia 7 após a 2o e no dia 7 após a 3a. Amostras de soro e de lava- gem foram analisadas quanto a anticorpo de anti-TT por métodos ELISA padrão. Os resultados destes ensaios são mostrados nas tabelas 21 e 22 abaixo. A formulação aquosa compreende os AGPs da presente invenção e um ou mais tensoativos. Tensoativos úteis em uma composição aquosa incluem glicodesoxicolato, desoxicolato, esfingomielina, esfingosina, fos-fatidilcolina, 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina, L-alfa-fosfatidileta-nolamina e 1,2-Dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina ou uma sua mistura. A formulação aquosa usada neste exemplo compreende o tensoativo 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPPC) e foi preparada como se segue: resumidamente; uma solução de 4 mg/ml de DPPC foi preparada em etanol. Uma alíquota da solução de etanol é adicionada aos AGPs secos e é rodada levemente para molhar o AGP. O etanol é removido por sopramento de uma corrente de nitrogênio filtrado levemente sobre o frasco. Água para injeção é adicionada e a suspensão é sonicada por 10 min a 60°C até que esteja clara. A formulação aquosa resultante contém cerca de 118 pg/ml de DPPC, tem parículas de cerca de 70 nm e foi esterilizado por filtragem.
Tabela 21 Títulos de Anticorpo de Toxóide de Antitétano em Camundongos Tratados Título de Toxóide de Antitétano1 Lavagem vaginal Extrato fecal IgG IgA IgG IgA
Material 2o 3o 2o 3o 2o 3o 2o 3o B25 800 6400 6400 6400 50 200 3200 6400 B15 400 800 6400 6400 50 100 6400 12.800 B19 200 400 1600 3200 25 25 3200 6400 B4 1600 400 1600 6400 25 50 3200 12.800 B5 3200 800 3200 3200 50 100 3200 6400 B3 1600 1600 6400 6400 50 100 3200 6400 Tabela 21 - continuação Lavagem vag i nal Extrato feca I
IgG IgA IgG IgA
Material 2o 3o 2o 3o 2o 3o 2o 3o B22 400 800 800 3200 25 50 1600 6400 PBS <25 <25 <25 <25 <25 <25 <25 <25 Soros <25 <25 <25 <25 <25 <25 <25 <25 normais Tabela 22 Títulos de Anticorpo de Toxóide de Antitétano no Soro em Animais Tratados Título de Toxóide de Antitétano1 Combinações de Soro Material IgGi lgG2a IgA d21 d38 d48 d21 d38 d48 d21 d38 d48 B25 1M* 8M 8M 512K 4M 4M 12.800 102.400 102.400 B15 2M 8M 8M 512K 1M 2M 12.800 51.200 25.600 B19 2M 4M 4M 64K# 256K 128K 6.400 25.600 12.800 B4 1M 8M 8M 1M 2M 2M 25.600 102.400 102.400 B5 2M 8M 8M 512K 2M 2M 25.600 102.400 102.400 B3 512K 4M 8M 512K 2M 2M 12.800 51.200 51.200 B22 1M 2M 4M 64K 256K 256K 6.400 25.600 25.600 PBS 1.000 16K 16K 1.000 1.000 1.000 200 200 200 Soros 200 200 200 100 100 100 200 200 200 normais *M=106, #K=103 Administração intranasal de TT formulado em AGP-AF induziu tanto uma rsposta imune humoral específica de antígeno (tabela 22) quanto uma resposta imune de mucosa (tabela 21) àquele antígeno.
Exemplo de Teste 9 Estimulação de uma Resposta Imune a Antígeno de Superfície de Hepatite B por Administração Intranasal A camundongos administraram antígeno de superfície de hepatite B (HBsAg) intranasalmente com os compostos da presente invenção produziram títulos de IgG e IgA de soro para aquele antígeno. IgA secretória foi detectada em lavagens de vagina e a indução de uma reposta de linfó-cito T citotóxica foi detectada por um ensaio de citotoxicidade. A grupos de camundongos de BALB/c foram dados uma imunização primária (1o) intranasalmente com 2,5 pg de HBsAg + 10 pg de AGP-AF em um volume de 20 pl. AGP-AF foi protegido como no EXEMPLO DE TESTE 8. Vinte e um dias mais tarde a camundongos foram dados uma segunda imunização uma segunda imunização (2o) de 7,5 pg HBSAG + 10 pg de AGP-AF intranasalmente em volume de 20 pl. Uma terceira imunização (3o) idêntica em composição à imunização secundária foi administrada 28 dias depois da imunização secundária. Ensaios foram conduzidos para detectar a atividade de linfócito T em 16 dias após a imunização secundária (16 d após a 2a) e 8 dias após a terceira imunização (8 d após a 3a). Títulos de anticorpo de mucosa e de soro foram analisados em 22 dias após a imunização secundária (22 d após a 2o) e 21 dias após a imunização terciária (21 d após a 3o). Ensaios de anticorpo foram conduzidos por métodos ELISA padrão. Ensaios de citotoxicidade foram conduzidos como descrito no EXEMPLO DE TESTE 7. Os resultados desta experiência são mostrados nas tabelas 23-26 Tabela 23 Resposta de Linfócito T Citotóxica de Células Tratadas % de Citotoxicidade (16 d, após a 2o) E/T
Material 50:1 25:1 12,5:1 6,25:1 B25 36 20 13 9 B15 13 5 4 4 B19 26 20 11 9 B4 28 17 9 7 B3 43 26 17 11 B5 43 30 20 11 B22 33 21 15 8 Veículo 3 2 0 0 Células normais 3 3 0 0 Tabela 24 Resposta de Linfócito T Citotóxica de Células Tratadas % de Citotoxicidade (8 d, após a 3o) E/T
Material 50:1 25:1 12,5:1 6,25:1 B25 30 19 13 8 B15 56 42 25 16 B19 71 54 33 24 B4 23 15 9 5 B3 54 45 32 20 B5 44 30 19 12 B22 22 13 7 5 Veículo 5 2 11 Células normais 7 5 3 3 Tabela 25 Títulos de Anticorpo de Anti-hepatite em Camundongos Tratados Título de Anti HBsAg1* Material IgGi lgG2a IgA B25 256K# 500K 3.200 B15 256K 500K 6.400 B19 500K 64K 1.600 B4 500K 1000K 6.400 B3 1000K 500K 6.400 B5 256K 500K 3.200 B22 256K 64 K 1.600 Veículo <2K <2K <200 *22 dias após a 2o, #K=103 Tabela 26 Títulos de Anticorpo de Anti-hepatite em Camundongos Tratados Título de Anti HBsAg1* Material IgG! lgG2a IgA B25 1000K# 1000K 25.600 B15 2000K 2000K 25.600 B19 2000K 500K 12.800 B4 1000K 2000K 25.600 B3 1000K 1000K 25.600 B5 500K 1000K 12.800 B22 500K 500K 12.800 Veículo <2K <2K <200 * 21 dias após a 3o, #K=103 Grupos de camundongos BALB/c foram imunizados com 2,5 pg de HBsAg + 10 pg AGP-AF intranasalmente e foram reforçados intranasal-mente com 7,5 pg de HBsAg + 10 pg de AGP-AF 21 dias mais tarde. Amostras vaginais foram coletadas 10 dias depois da imunização de reforço e fo- ram analisadas quanto a anticorpo de anti-HBsAg. Os resultados deste ensaio são mostrados na tabela 27.
Tabela 27 Título de Anti-HBsAg de Lavagem Vaginal Material IgG IgA B25 100 800 B15 50 3200 B19 <50 400 B4 1600 6400 B3 800 1600 B5 1600 1600 B22 100 800 Veículo <50 <50 A administração intranasal de HBsAg com os compostos da presente invenção estimularam tanto resposta imunde celular quanto humoral àquele antígeno. Imunização intranasal com o antígeno formulado em AGP-AF induziu uma resposta de linfócito T citotóxica (tabelas 23-24) e respostas imunes humorais específicas de antígeno (tabelas 25 e 26) e de mucosa (tabela 27).
Exemplo de Teste 10 Geração de Resposta Imune Protetora a Influenza Camundongos imunizados intranasalmente com vacina de influenza FLUSHIELD contendo antígeno de hemaglutinina e os AGPs da presente invenção produziram tanto IgG quanto IgA que foram recuperadas em lavagens vaginais. Camundongos imunizados foram também protegidos contra desafio de influenza subseqüente.
Camundongos ICR foram imunizados três vezes em intervalos de 21 dias intranasalmente com vacina de influenza FLUSHIELD (Wyeth-Lederle) contendo 0,3 μg de antígeno de hemaglutinina (HA) + 10 μg de AGP-AF ou enterotoxina instável quente de E. coli recombinante (LT). AGP-AF foi preparado como no EXEMPLO DE TESTE 8. LT foi solubilizada em salmoura em 1 pg/ml. Lavagens vaginais foram coletadas 14 dias depois da segunda e da terceira imunização. Amostras de soro foram coletadas 14 dias depois da terceira imunização. Camundongos foram desafiados com 10LDso (dose letal 50) de Influenza infecciosa A/HK/68 trinta e cinco dias depois da imunização final e foram monitorados quanto a mortalidade. As tabelas 28 e 29 mostram os resultados de ensaios conduzidos por métodos ELISA padrão para detectar títulos de anticorpo de anti-influenza em soros e lavagens vaginais.
Tabela 28 Amostras de Lavagem Vaginal Material IgA IgG Proteção Secundário Terciário Secundário Terciário em por cento Não imune <20 <20 <20 <20 22 Veículo 80 160 160 160 50 B25 1280 1280 640 2560 100 B19 320 5120 1280 1280 70 B3 1280 2560 1280 1280 100 B22 640 2560 320 640 75 LT 2560 2560 2560 640 100 Tabela 29 Material Títulos de soro Proteção em IgG total IgGi lgG2a lgG2b por cento Não imune <400 <400 <400 <400 22 Veículo 102.400 256.000 12.800 102.400 50 B25 >819,200 102,400 819,200 >819,200 100 B19 819.200 51.200 102.400 819.200 70 B3 >819,200 51,200 819,200 >819,200 100 B22 819,200 51,200 102.400 819,200 75 LT >819,200 >819,200 >819,200 >819,200 100 Estes dados demonstram que AGPs em AF quando administrados intranasalmente atuam como auxiliares de mucosa causando a produ- ção de IgA em sítios de mucosa. Proteção aumentada é também induzida contra um patógeno respiratório superior que invade através da mucosa. EXEMPLO DETESTE 11 Geração de Respostas Imune de Formulações de Emulsão Estáveis Os compostos de AGP da presente invenção estimularam tanto respostas de linfócito T citotóxicas quanto humorais quando formuladas em emulsão estável (SE). AGPs foram testados em níveis de dose de 25 pg para auxiliar antígeno de superfície de hepatite B (HBsAg) para a indução de respostas de anticorpo e CTL. Camundongos de BALB/c foram imunizados subcutaneamente com 2,0 pg de HBsAg mais 25 μg de AGP/SE no dia 0 e no dia 21. O ensaio de CTL foi conduzido como no EXEMPLO DE TESTE 7. Os AGPs foram formulados em uma emulsão estável (SE) e as composições foram designadas AGP-SE. Métodos para a preparação da emulsão estável contendo 10% de v/v de esqualeno, 0,091 de p/v de copolímero por bloco PLURONIC-F68, 1,909% de p/v de colina de fosfatidila de ovo, 1,8% de v/v de glicerol, 0,05% de p/v de alfa tocoferol, tampão de fosfato de amônio a 10% e 78,2% de v/v de água para injeção estariam prontamente evidente por aquele versado na técnica. A emulsão foi homogeneizada para um tamanho de partícula de = 0,2 μιη. A tabela 30 mostra que os AGPs da presente invenção induziram uma resposta de linfócito T citotóxica a HBsAg.
Tabela 30 Resposta de Linfócito T Citotóxica de Células Tratadas % de Citotoxicidade E:T
Material “Õiã 5Õ1 2&Ϊ 12.5:1 6.25:1 B25 17 dias, apóso1° 27 12 9 5 B19 74 48 34 24 B3 28 15 9 5 B22 42 24 17 7 Veículo-SE 32 16 9 6 16 dias, após o 2o Tabela 30 - continuação % de Citotoxicidade E:T
Material Dia 50:1 25:1 12.5:1 6.25:1 ~B25 49 28 2Õ 13 B19 73 62 42 31 B3 81 47 32 22 B22 78 69 58 39 Veículo-Se 38 23 14 8 Os resultados do título de anticorpo a HBsAg são mostrados na tabela 31. Soros de sangrias tomados no dia 28 após a 2o foram titulados sobre placas ELISA revestidas ou com HBsAg ou um peptídeo de 28 amino-ácidos (p72) que contém epítopos de célula B encontrados na região de an-tígeno S, resíduos 110-137, do HBsAg.
Tabela 31 Título de Anti-HBsAg de Camundongos Tratados Título de Anti-HBsAg1 HBsAg p72-Peptídeo Material IgGi lgG2a igGi lgG2a B25 2048 K* 2048 K 128 K 64K
B19 1024 K 1024 K 64 K 128 K
B3 512 K 1024 K 16 K 128 K
B22 1024 K 1024 K 128 K 128 K
Veículo-SE 1024 K 64 K 64 K 4K
Camundongos tratados com AGP-SE exibiram tanto respostas de linfócito T citotóxica (tabela 30) quanto humorais (tabela 31) ao antígeno de superfície de hepatite B. Camundongos tratados com AGP-SE, de interesse em soro exibiram um título de anticorpo específico de lgG2a detectado por ambos os antígenos, enquanto que o SE de veículo induziu apenas uma resposta de lgG2a modesta. É entendido que os exemplos precedentes são meramente ilus- trativos da presente invenção. Certas modificações das composições e/ou dos métodos empregados podem ser produzidos e ainda alcançam os objetivos da invenção. Tais modificações são contempladas como dentro do escopo da invenção reivindicada.
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Claims (48)
1. Composto imuno efetor, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte estrutura: em que, X é selecionado do grupo que consiste de O e S; Y é selecionado do grupo que consiste de O e NH; n, m,peq são números inteiros de 0 a 6; Ri, R2 e R3 são iguais ou diferentes e são resíduos de acila graxa tendo de 7 a 16 átomos de carbono; R4 e R5 são iguais ou diferentes e são selecionados do grupo que consiste de H e metila; R6 e R7 são iguais ou diferentes e são selecionados do grupo que consiste de H, hidróxi, alcóxi, fosfono, fosfo-noóxi, sulfo, sulfoóxi, amino, mercapto, ciano, nitro, formila e carbóxi, e seus ésteres e amidas; e R8 e R9 são iguais ou diferentes e são selecionados do grupo que consiste de fosfono e H, e pelo menos um de R8 e R9 é fosfono.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Re é carbóxi.
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; n, m, p e q são 0; Ri, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; R9 é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
4. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; n, m, p e q são 0; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 12 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; R9 é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
5. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; n, m, p e q são 0; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; R9 é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
6. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; n, m, p e q são 0; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 8 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; R9 é H; Ri, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
7. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R6 é H.
8. Composto de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; n é 2; m, p e q são 0; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 14 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; R9 é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
9. Composto de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que XéO; YéO; né 1, m, p são 0; q é 1; Ri, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4 e R5 são H; R7 é car-bóxi; R8 é fosfono; R9 é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
10. Composto de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; n, m, p e q são 0; Ri, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 14 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R-ι, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
11. Composto de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; m, n, p e q são 0; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4) R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; Ri, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
12. Composto de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; m, p e q são 0; n é 1; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 14 carbonos; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
13. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R6 é hidróxi.
14. Composto de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; m, n, e q são 0; p é 1; Ri, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 12 átomos de carbono; R4 e R5 são H; R7 é H; R8 é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
15. Composto de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que XéO;YéO;meq são 0; n e p são 1; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
16. Composto de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; m, n e q são 0; p é 2; R-ι, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R1; R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogêni-co tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
17. Composto de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; m, n e q são 0; p é 1; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 14 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R-ι, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
18. Composto de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; m, n e q são 0; p é 1; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 14 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg éH; R1, R2e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
19. Composto de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; m, n e q são 0; p é 1; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 11 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R-ι, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
20. Composto de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; m, n e q são 0; p é 1; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R-ι, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
21. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é O; Y é O; m, n, p e q são 0; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4 e R5 são H; R6 é amino carboni-la; R7 é H; R8 é fosfono; Rg é H; Rt, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um cen- tro estereogênico tendo uma configuração S.
22. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende o composto tendo a seguinte estrutura: em que, X é selecionado do grupo que consiste de O e S; Y é selecionado do grupo que consiste de O e NH; n, m, p e q são números inteiros de 0 a 6; R-ι, R2 e R3 são iguais ou diferentes e são resíduos de acila graxa tendo de 7 a 16 átomos de carbono; R4 e R5 são iguais ou diferentes e são selecionados do grupo que consiste de H e metila; R6 e R7 são iguais ou diferentes e são selecionados do grupo que consiste de H, hidróxi, alcóxi, fosfono, fosfo-noóxi, sulfo, sulfoóxi, amino, mercapto, ciano, nitro, formila e carbóxi, e seus ésteres e amidas; e Rs e Rg são iguais ou diferentes e são selecionados do grupo que consiste de fosfono e H, e pelo menos um de Re e Rg é fosfono, um antígeno e um veículo adequado.
23. Composição de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende 0 dito composto onde R6 é carbóxi.
24. Composição de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende 0 dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; n, m, p e q são 0; Ri, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
25. Composição de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; n, m, p e q são 0; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 12 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
26. Composição de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; n, m, p e q são 0; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
27. Composição de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; n, m, p e q são 0; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 8 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
28. Composição de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto onde R8 é H.
29. Composição de acordo com a reivindicação 28, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; n é 2; m, p e q são 0; R1, R2 e R3 são resí- duos de acila graxa tendo 14 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; Rs é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogêni-co tendo uma configuração R.
30. Composição de acordo com a reivindicação 28, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: XéO;YéO;né1,mep são 0; q é 1; R-ι, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4 e R5 são H; R7 é carbóxi; R8 é fosfono; Rg é H; R^ R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
31. Composição de acordo com a reivindicação 28, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende 0 dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; m, n, p e q são 0; R-ι, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 14 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
32. Composição de acordo com a reivindicação 28, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; m, n, p e q são 0; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
33. Composição de acordo com a reivindicação 28, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; m, p e q são 0; n é 1; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 14 carbonos; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
34. Composição de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que a dita composição o dito composto onde R6 é hidróxi.
35. Composição de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; m, n, e q são 0; p é 1; R1, R2 e R3 são resí- duos de acila graxa tendo 12 átomos de carbono; R4 e R5 são H; R7 é H; Re é fosfono; R9 é H; Ri, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereo-gênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogêni-co tendo uma configuração S.
36. Composição de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: XéO;YéO;meq são 0; n e p são 1; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; Re é fosfono; R9 é H; Ri, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereo-gênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogêni-co tendo uma configuração S.
37. Composição de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; m, n e q são 0; p é 2; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R*, R5 e R7 são H; Re é fosfono; R9 éH; Ri,R2e R3 estão cada um ligados a um centro estereogêni-co tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
38. Composição de acordo com a reivindicação 34, caracteriza- da pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; m, n e q são 0; p é 1; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 14 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R3 é fosfono; R9 é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração R.
39. Composição de acordo com a reivindicação 34, caracteriza- da pelo fato de que a dita composição compreende 0 dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; m, n e q são 0; p é 1; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 14 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R3 é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
40. Composição de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; m, n e q são 0; p é 1; R-ι, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 11 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; Rs é fosfono; Rg é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogêni-co tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
41. Composição de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende 0 dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; m, n e q são 0; p é 1; R^ R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4, R5 e R7 são H; R8 é fosfono; R9 é H; R1, R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
42. Composição de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que a dita composição compreende o dito composto tendo a seguinte estrutura: X é O; Y é O; m, n, p e q são 0; R1, R2 e R3 são resíduos de acila graxa tendo 10 átomos de carbono; R4 e R5 são H; Re é amino car-bonila; R7 é H; Re é fosfono; Rg é H; R^ R2 e R3 estão cada um ligados a um centro estereogênico tendo uma configuração R; e R5 está ligado a um centro estereogênico tendo uma configuração S.
43. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 42, caracterizada pelo fato de que o dito veículo farmaceuticamen-te aceitável é uma composição aquosa compreendendo água e um ou mais tensoativos selecionados do grupo que consiste de glicodesoxicolato, deso-xicolato, esfingomielina, esfingosina, fosfatidilcolina, 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina, L-alfa-fosfatidiletanolamina e 1,2-Dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina ou uma sua mistura.
44. Composição de acordo com a reivindicação 43, caracterizada pelo fato de que o dito um ou mais tensoativos é 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina.
45. Composição de acordo com a reivindicação 43, caracteriza- da pelo fato de que a razão molar do dito composto para o tensoativo é de 10:1 a 10:5.
46. Composição de acordo com a reivindicação 43, caracterizada pelo fato de que a razão molar do dito composto para o tensoativo é 4:1.
47. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 42, caracterizada pelo fato de que o dito veículo é uma emulsão adequada compreendendo um óleo metabolizável, um ou mais tensoativos, um antioxidante e um componente para produzir a emulsão isotônica.
48. Composição de acordo com a reivindicação 47, caracterizada pelo fato de que a dita emuslão estável compreende 10% de v/v de es-qualeno, 0,9% de p/v de copolímero por bloco PLURONIC-F68, 1,9% de p/v de colina de fosfatidila de ovo, 1,75% de v/v de glicerol, 0,05% de p/v de alfa tocoferol.
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