ES2256955T3 - Composicion que contiene alfa-glicosilceramids, para potenciar la inmunogenicidad. - Google Patents

Composicion que contiene alfa-glicosilceramids, para potenciar la inmunogenicidad.

Info

Publication number
ES2256955T3
ES2256955T3 ES98943077T ES98943077T ES2256955T3 ES 2256955 T3 ES2256955 T3 ES 2256955T3 ES 98943077 T ES98943077 T ES 98943077T ES 98943077 T ES98943077 T ES 98943077T ES 2256955 T3 ES2256955 T3 ES 2256955T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
group
cells
substituent selected
tumor
baselineskip
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES98943077T
Other languages
English (en)
Inventor
Kazuhiro Kirin Beer Kabushiki Iyaku Motoki
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kirin Brewery Co Ltd
Original Assignee
Kirin Brewery Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kirin Brewery Co Ltd filed Critical Kirin Brewery Co Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2256955T3 publication Critical patent/ES2256955T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
    • C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Empleo in vitro de un compuesto de fórmula (I) ó una sal o solvato del mismo para la elaboración de un agente para la potenciación de la inmunogenicidad de células tumo- rales o células infectadas con patógenos: en donde R1 representa H ó OH, X representa un número entero entre 7 y 27, R2 representa un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes (a) a (e) (en donde Y representa un número entero entre 5 y 17): (a) -CH2(CH2)YCH3, (b) -CH(OH)(CH2)YCH3 (c) -CH(OH)(CH2)YCH(CH3)2 (d) -CH=CH (CH2)YCH3 (e) -CH(OH)(CH2)YCH(CH3)CH2CH3, y R3 a R9 representan substituyentes como se definen en una cualquiera de las siguientes i) e ii): i) cuando R3, R6 y R8 representan H, R4 representa H, OH, NH2, NHCOCH3, ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D): R5 representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (E) y (F): R7 representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D): R9 representa H, CH3, CH2OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos siguientes (A'') a (D''): ii) cuando R3, R6 y R7 representan H, R4 representa H, OH, NH2, NHCOCH3 ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D): R5 representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos (E) y (F): R8 representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos siguientes (A) a (D): R9 representa H, CH3, CH2OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A'') a (D''):

Description

Composición que contiene \alpha-glicosilceramidas, para potenciar la inmunogenicidad.
Antecedentes de la invención Campo de la invención
La presente invención se refiere al empleo de un compuesto para la elaboración de un agente que potencia la inmunogenicidad de células tumorales o células patógenas infectadas, un método de potenciar la inmunogenicidad de células tumorales y células patógenas infectadas empleando un compuesto que tiene una estructura \alpha-glicosilceramida, y más particularmente, a una terapia de un tumor empleando células tumorales cuya inmunogenicidad está potenciada.
Técnica anterior
Con el fin de tratar tumores que incluyen el melanoma (Mitchell, M.S. et al., J. Clin. Oncol., 8, 409 (1990)), cáncer de riñón (Neidart, J. A. et al., Cancer, 46, 1128 (1980)), cáncer de ovario (Freedman, R.S. et al., Gynecol. Oncol., 29, 337 (1988)), y cáncer de colon (Hoover, H. C., Cancer, 55, 1236 (1985)), se hicieron tentativas para inducir la inmunidad específica para tumores en hospedadores porta-dores de cáncer inmunizando los pacientes con células tumorales autólogas o alogénicas previamente inactivadas por agentes quimioterapéuticos o por radiación. Sin embargo, la inmunogenicidad de las células tumorales es relativamente poco diferente de la de substancias extrañas tales como las bacterias puesto que éstas están originalmente transformadas a partir de las células hospedadoras. Así, la efectividad no fue la esperada y solamente se observó un efecto poco importante en cánceres tales como el melanoma o cáncer de riñón cuya inmunogenicidad es relativamente alta (Mullen, C. A. et al., en Cancer Chemotherapy and Biological Response Modifiers ("Quimioterapia del cáncer y modificadores de la respuesta biológica"), eds. Pinedo, H. M. et al., Elsevier Science B. V.), pp 285-294 (1996)).
Recientes descubrimientos en biología molecular e ingeniería genética han hecho posible introducir genes, y se ha intentado aplicar células tumorales genéticamente modificadas que expresan un antígeno que guarde relación con el cáncer para la terapia del cáncer. Por ejemplo, genes del antígeno del tumor se transdujeron en células tumorales autólogas o de otra manera, células tumorales no propias si es difícil obtener el tumor autólogo, y las células tumorales obtenidas cuya inmunogenicidad se aumentó sobre las células tumorales originales, fueron empleadas en la terapia tumoral. Sin embargo, en este momento, dado que solamente un pequeño número de antígenos están identificados como antígenos que guardan una relación con el tumor, tales ensayos se han efectuado solamente para limitadas clases de cánceres (Conry, R. M. et al., Cancer Res., 54, 1164 (1994)). Además, se ha informado que la eficacia terapéutica no pudo lograrse como se esperaba mediante el simple potenciamiento de la antigenicidad de las células tumorales debido a que la inmunidad de los hospedadores portadores de cánceres a menudo es marcadamente perjudicada por factores producidos por las células tumorales, o similares, de manera que es más bien importante restaurar la inmunidad de los hospedadores portadores del cáncer. Consecuentemente, estudios recientes se han concertado en ensayos para restaurar la inmunidad deteriorada de los hospedadores mediante inmunización de los mismos con células a las cuales genes de citocinas, principalmente genes de antígenos histocompatibles, molécula coestimuladoras o similares, se introducen con el fin de aumentar el efecto terapéutico. Ejemplos de células tumorales empleadas en estudios de los que se ha informado, incluyen aquellas en las cuales se introdujeron genes de citocinas tales como la IL-2 (Connor, J. et al., J. Exp. Med., 177, 1127 (1993)), IL-4 (Golumbek, P. T. et al., Science 254, 713 (1991)), IL-6 (Porgador, A. et al., Cancer Res., 52, 3679 (1992)), IFN-g (Belldegrun, A. et al., J. Natl. Cancer Inst., 85, 207 (1993)), GM-CSF (Dranoff, G. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90, 3539 (1993)), IL-12 (Tahara, H. et al., Gene Therapy, 2, 96 (1995)), y aquellos en los cuales se introdujeron genes MHC clase II y B7-1 (Travis, J. et al., Science, 259, 310 (1993)); Basker, S. et al., J. Exp. Med., 181, 619 (1995)).
Así, se ensaya la terapia tumoral empleando células tumorales modificadas por transferencia génica, para la aplicación clínica en todo el mundo (Roth, J. A. et al., J. Natl. Cancer Inst., 89, 21 (1997). Sin embargo, la manipulación genética para este procedimiento es complicada (Pardoll, D. M., Immunol. Today, 14, 310 (1993)). Además, no se han desarrollado vectores que introduzcan genes eficientemente para obtener suficiente eficacia terapéutica. Así pues, existe una necesidad para mejorar más la terapia tumoral descrita más arriba (Mullen, C. A. et al., en Cancer Chemotherapy and Biological Response Modifiers (“Quimioterapia del Cáncer y Modificadores de la Respuesta Biológica”, eds. Pinedo, H. M. et al. (Elsevier Science B.V.), pp 285-294 (1996).
Las \beta-glicosilceramidas, en las cuales varios azúcares se unen a las ceramidas por medio de un enlace \beta pueden encontrarse en el cuerpo (Svennerholm, L. et al., Biochem. Biophys. Acta, 280, 626 (1972); Karlsson, K. et al., Biochem. Biophys. Acta, 316, 317 (1973)). Por otra parte, es sabido que las \alpha-glicosilceramidas han marcado actividad inmunoestimuladora y actividad antitumoral (Morita, M. et al., J. Med. Chem., 38, 2176 (1995)). Es sabido que estas actividades de las \alpha-glicosilceramidas son mucho más fuertes que las de las \beta-glicosilceramidas (Motoki, K et al., Biol. Pharm. Bull., 18, 1487 (1995)). Además, es sabido que los compuestos que tienen una estructura \alpha-glicosilceramida pueden aumentar la función de presentación del antígeno de las células que presentan el antígeno, y la terapia del tumor empleando las células que presentan el antígeno, estimuladas por compuestos que tienen una estructura \alpha-glicosilceramida, es muy efectiva. También es sabido que la administración de compuestos que tienen una estructura de \alpha-glicosilceramida protege el cuerpo de la radiación (Motoki, K et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 5, 2413 (1995)), y aumenta el número de plaquetas y leucocitos (Motoki, K. et al., Biol. Pharm. Bull., 19, 952 (1996)).
Sin embargo, que sepan los presentes autores, no hay nada informado de que las células tumorales tratadas con \alpha-glicosilceramidas sean útiles en la terapia tumoral y que las \alpha-glicosilceramidas potencien la inmunogenicidad de las células tumorales.
La patente EP 0 988 860 describe que los activadores de células NKT que contienen \alpha-glicosilceramidas, mientras que la presente solicitud se refiere al empleo de los compuestos de fórmula I para potenciar la inmunogenicidad de células tumorales o células infectadas por patógenos. Ni los tumores de células no infectados por patógenos están descritos en EP 0 988 860 A. La patente EP 0 957 161 A describe que las células que presentan los antígenos tales como las células déndricas que han sido tratadas con \alpha-glicosilceramidas inducen la actividad antitumoral in vivo. Sin embargo, este fenómeno no tiene nada que ver con la potenciación de la inmunogenicidad de las células diana, lo cual constituye la esencia de la presente invención. Además, las células tumorales sometidas al tratamiento inducen efectivamente la actividad antitumoral in vivo. La patente EP 0 694 558 A se refiere a un esfingoglicolípido. Los compuestos descritos en la patente EP 0 694 558 pueden emplearse como ingredientes activos en medicamentos. Pueden emplearse como agente antitumoral, acelerador del crecimiento de células de mieloma y potenciador inmunológico.
Resumen de la invención
Los presentes inventores han descubierto que las células tumorales que han sido cultivadas in vitro en un medio conteniendo un compuesto que tiene una estructura de \alpha-glicosilceramida, muestran una alta inmunogenicidad, de forma que se ha observado un marcado efecto antitumoral cuando se administran las células mencionadas más arriba o las células modificadas por radiación de los animales portadores de cáncer, y que las células son altamente seguras en la terapia tumoral debido a que su tumorigenicidad se ha perdido. La presente invención tiene su base en estos descubrimientos.
Un objeto de la presente invención es el de potenciar la inmunogenicidad de las células tumorales, por lo cual las células tumorales efectivas pueden prepararse realmente para la terapia tumoral; un método para potenciar la inmunogenicidad de las células; células cuya inmunogenicidad está potenciada por una \alpha-glicosilceramida; una composición farmacéutica que comprende las células mencionadas más arriba para el tratamiento de enfermedades, particularmente tumores, asociados con las células; el empleo de las células para la elaboración de la composición farmacéutica, y un método para el tratamiento de enfermedades, particularmente tumores, asociados con las células.
Para potenciar la inmunogenicidad de las células tumorales o células infectadas por patógenos, de acuerdo con la presente invención, se emplea in vitro un compuesto de fórmula (I):
1
n donde
R^{1} representa H ó OH,
x representa un número entero entre 7 y 27,
R^{2} representa un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes (a) a (e) (en donde Y representa un número entero entre 5 y 17):
(a) -CH_{2}(CH_{2})_{Y}CH_{3},
(b) -CH(OH)(CH_{2})_{Y}CH_{3}
(c) -CH(OH)(CH_{2})_{Y}CH(CH_{3})_{2}
(d) -CH=CH(CH_{2})_{Y}CH_{3}
(e) -CH(OH)(CH_{2})_{Y}CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3}, y
R^{3} a R^{9} representan substituyentes como se definen en una cualquiera de las siguientes i) e ii):
i) cuando R^{3}, R^{6} y R^{8} representan H,
R^{4} representa H, OH, NH_{2}, NHCOCH_{3} ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D):
2
R^{5} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (E) y (F):
3
R^{7} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D):
4
R^{9} representa H, CH_{3}, CH_{2}OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos siguientes (A') a (D'):
5
ii) cuando R^{3}, R^{6} y R^{7} representan H,
R^{4} representa H, OH, NH_{2}, NHCOCH_{3} ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D):
6
R^{5} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos (E) y (F):
7
R^{8} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos siguientes (A) a (D):
8
R^{9} representa H, CH_{3}, CH_{2}OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A') a (D'):
9
o una sal o solvato del mismo.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 muestra el efecto de las \alpha-glicosilceramidas sobre la inmunogenicidad de las células tumorales. La inmunogenicidad se evalúa con la actividad citotóxica de las células de bazo de ratón. \circ: control, \bullet: EL-4/V, \Box: EL-4/KRN, \vartriangle: EL-4/583.
La figura 2 muestra el efecto antitumoral de las células tumorales tratadas con la \alpha-glicosilceramida en ratones modelo para metástasis de EL-4 en el hígado. \circ: control, \bullet: EL-4/V, \Box: EL-4/KRN, \vartriangle: EL-4/583.
La figura 3 muestra el efecto antitumoral de las células tumorales tratadas con \alpha-glicosilceramida en ratones modelo para metástasis del melanoma B16 en el pulmón. \circ: control, \bullet: B16/V, \Box: B16/KRN.
La figura 4 muestra el efecto de las \alpha-glicosilceramida sobre la tumorigenicidad de varios tumores severos en ratones. \circ: células tumorales sin tratar, \bullet: células tumorales tratadas con un vehículo, \sqbullet: células tumorales tratadas con KRN 7000.
La figura 5 muestra el efecto de células tumorales, irradiadas o no irradiadas, tratadas con \alpha-glicosilceramida en ratones modelo para metástasis del melanoma B16 en el pulmón. \circ: control, \vartriangle: B16/V no irradiados, \Box: B16/V irradiados, \blacktriangle: B16/K no irradiados, \sqbullet: B16/K irradiados.
La figura 6 muestra el perfil de las reacciones para la síntesis de KRN 7000, el compuesto de \alpha-glicosilceramida representativo empleado en la presente invención. En el dibujo, pyr representa piridina, BrPPh_{3}, (CH_{2})_{12}CH_{3} representa bromuro de tridecanotrifenilfosfonio, nBuLi representa n-butil litio, MsCl representa cloruro de metansulfonilo, BnBr representa bromuro de bencilo y 1-PrOH representa propil alcohol.
La figura 7 es la continuación de las reacciones para la síntesis como muestra la figura 6. WSC-HCl representa el hidrocloruro de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)-carbodiimida, MS4A representa tamices moleculares 4A, y Hex4NBr representa bromuro de tetrahexilamonio.
La figura 8 muestra las fórmulas químicas de los compuestos en los ejemplos 1 a 3.
La figura 9 muestra las fórmulas químicas de los compuestos en los ejemplos 1 a 3, y es la continuación de la figura 8.
Descripción detallada de la invención Compuestos de fórmula (I)
En los compuestos de fórmula (I), X en el grupo ceramida representa de preferencia un número entero entre 11 y 25.
Y en R^{2} representa de preferencia un número entero entre 9 y 17, con más preferencia, entre 11 y 15.
De preferencia, las combinaciones para X y R^{2} en el grupo ceramida de fórmula (I) son compuestos en los cuales X es un número entero entre 21 y 25 y R^{2} es un substituyente (b) (en donde Y es un número entero entre 11 y 15).
Combinaciones preferentes para R^{3} a R^{9} en el grupo azúcar de fórmula (I) son compuestos en los cuales R^{3} y R^{6} son H, R^{4} es OH ó cualquier substituyente de los grupos (A) a (D), R^{5} es OH ó cualquier substituyente del grupo (E) ó (F), R^{7} y R^{8} son cada uno H ó OH (R^{7} y R^{8} no representan el mismo substituyente), y R^{9} es CH_{2}OH, CH_{3}, H ó cualquier substituyente de grupos (A') a (D').
Las combinaciones más preferidas incluyen compuestos en los cuales R^{3} y R^{6} son H, R^{4} y R^{5} son OH, R^{7} y R^{8} son cada uno H ó OH (R^{7} y R^{8} no representan el mismo substituyente), y R^{9} es CH_{2}OH ó cualquier substituyente de grupos (A') a (D'), y compuestos en los cuales R^{3}, R^{6} y R^{8} son H, R^{4}, R^{5} y R^{7} son OH y R^{9} es CH_{2}OH.
Ejemplos preferidos de compuestos de fórmula (I) incluyen compuestos en los cuales
X es un número entero entre 21 y 25,
R^{2} es el substituyente (b) (en donde Y es un número entero entre 11 y 15),
R^{3} y R^{6} son H,
R^{4} es OH ó un grupo seleccionado del grupo formado por los grupos (A) y (D),
R^{5} es OH ó un grupo seleccionado del grupo formado por los grupos (E) y (F),
R^{7} y R^{8} son cada uno H ó OH (R^{7} y R^{8} no representan el mismo substituyente), y
R^{9} es CH_{2}OH ó un grupo seleccionado del grupo formado por los grupos (A') a (D');
compuestos en los cuales
X es un número entero entre 21 y 25,
R^{2} es el substituyente (b) (en donde Y es un número entero entre 11 y 15),
R^{3} y R^{6} son H,
R^{4} y R^{5} son OH,
R^{7} y R^{8} son cada uno H ó OH (R^{7} y R^{8} no representan el mismo substituyente), y
R^{9} es CH_{2}OH ó un grupo seleccionado del grupo formado por los grupos (A') a (D'); y
compuestos en los cuales
X es un número entero entre 21 y 25,
R^{2} es el substituyente (b) (en donde Y es un número entero entre 11 y 15),
R^{3}, R^{6} y R^{8} son H,
R^{4}, R^{5} y R^{7} son OH, y
R^{9} es CH_{2}OH.
Los compuestos preferidos incluyen el (2S,3S,4R)-1-(\alpha-D-galactopiranosiloxi)-2-hexacosanoilamino-3,4-octadecanodiol (KRN 7000).
Los compuestos de fórmula (I) pueden estar en forma de sales no tóxicas farmacéuticamente aceptables, de los mismos. Las sales de fórmula (I) incluyen las sales de adición ácida, tales como las sales con ácidos inorgánicos (p. ej., ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico y ácido fosfórico) o con ácidos orgánicos (p. ej., ácido acético, ácido propiónico, ácido maleico, ácido oleico, ácido palmítico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido fumárico, ácido glutámico, ácido pantoténico, ácido laurilsulfónico, ácido metansulfónico y ácido ftálico).
Los compuestos de fórmula (I) pueden estar en forma de solvatos de los mismos (p. ej., hidratos).
Los compuestos de fórmula (I) pueden obtenerse mediante cualquier método adecuado para la síntesis de las \alpha-glicosilceramidas.
En primer lugar se sintetiza un grupo ceramida empleando la D-lixosa como material de partida, a continuación, se introduce un azúcar en esta ceramida para preparar compuestos de fórmula (I). Un método general para sintetizar dichas \alpha-glicosilceramidas puede encontrarse, por ejemplo, en las patentes WO93/5055, WO94/2168, WO/9020 y WO94/24142.
Los compuestos de fórmula (I) pueden también aislarse a partir de productos naturales (p. ej., organismos biológicos), y purificarse mediante cromatografía de columna o similar.
Composiciones para potenciar la inmunogenicidad celular
Los compuestos de fórmula (I) se demostró que eran útiles para potenciar la inmunogenicidad celular (Pharmacological Test Examples 1 a 5 ("Ensayo Farmacológico, ejemplos 1 a 5"). El término "inmunogenicidad" empleado aquí se refiere a una actividad de las células de inducir una respuesta inmunológica en el cuerpo y a una actividad para ser reconocida por el sistema inmunológico inducido del mismo.
La inmunogenicidad, de acuerdo con la presente invención, se potencia poniendo en contacto in vitro, células cuya inmunogenicidad hay que potenciar, con un compuesto de formula I. Por ejemplo, un compuesto para potenciar la inmunogenicidad de acuerdo con la presente invención, se añadió al medio de cultivo a una concentración final del compuesto de fórmula (I) de 0,1 a 10.000 ng/ml (de preferencia 1 a 1.000 ng/ml), y las células se cultivaron en el medio durante 30 minutos a 4 días (de preferencia 3 horas a 2 días) para potenciar la inmunogenicidad de las células. Las condiciones para el cultivo de las células y el medio de cultivo a emplear, pueden seleccionarse de acuerdo con técnicas convencionales.
Para potenciar la inmunogenicidad celular de acuerdo con la presente invención, pueden añadirse a un cultivo celular los compuestos en forma de una solución, suspensión o emulsión.
El compuesto puede incluirse en una composición que contiene soportes o aditivos farmacéuticamente aceptables tales como diluyentes, más específicamente, disolventes (p. ej., agua y solución salina fisiológica), agentes solubilizantes (p. ej., etanol y polisolvatos), agentes isotónicos, conservantes, antioxidantes, excipientes (p. ej., lactosa, almidón, celulosa cristalina, manitol, maltosa, fosfato ácido de calcio, anhídrido blando de ácido silícico y carbonato de calcio), agentes aglomerantes (p. ej., almidón, polivinil pirrolidona, hidroxipropilcelulosa, etilcelulosa, carboximetilcelulosa y goma arábiga), agentes estabilizantes (p. ej., lactosa, manitol, maltosa, polisolvatos, macrogols, y polioxietileno aceite de ricino hidrogenado), agentes disgregantes (p. ej., almidón y carboximetilcelulosa de calcio), y agentes lubricantes (p. ej., estearato de magnesio, talco y aceite hidrogenado.
Si es necesario, pueden también añadirse, glicerina, dimetiacetamida, lactato de sodio al 70%, tensioactivos y substancias alcalinas (p. ej., etilendiamina, etanolamina, carbonato desoído, arginina, meglumina y trisaminmometano).
Cuando las células tumorales contactadas con el compuesto de fórmula (I) se inmunizan en ratones, se induce inmunidad a las células tumorales (actividad citotóxica). Sorprendentemente, se induce inmunidad a otras células tumorales distintas del propio tumor inmunizado, (ver Pharmacological Test ejemplo 1).
Las células cuya inmunogenicidad hay que potenciar, pueden ser células tumorales o células infectadas con patógenos. Estas células pueden aislarse a partir de pacientes que tienen tumores o pacientes infectados con patógenos o producidos artificialmente in vitro.
Ejemplos de células tumorales cuya inmunogenicidad hay que potenciar, incluyen virtualmente todas las células de cánceres, incluyendo el melanoma, cáncer de riñón, cáncer uterino, cáncer pancreático, tumor cerebral, glioblastoma, cáncer de colon, cáncer de pulmón, hepatoma, linfoma, leucemia y fibrosarcoma. En particular, se prefieren las células de melanoma y de cáncer de riñón.
Ejemplos de células infectadas con patógenos incluyen las infectadas con virus. El término "patógeno" incluye aquí, agentes patogénicos tales como Chlamydiae, Rickettsiae, Listeria monocytogenes, Leishmaniae, Tripanosomas y proteína prion.
La presente invención proporciona un método de potenciación de la inmunogenicidad celular, la cual comprende el paso de contactar las células con el compuesto de fórmula (I), ó una sal o solvato del mismo in vitro. El contacto de las células con el compuesto de fórmula (I) in vitro puede efectuarse de la misma manera descrita más arriba.
Células con inmunogenicidad potenciada
Las células con inmunogenicidad potenciada, de acuerdo con la presente invención, pueden obtenerse por contacto in vitro del compuesto de fórmula (I) ó una sal o solvato del mismo, con células cuya inmunogenicidad hay que potenciar. Las células con inmunogenicidad potenciada pueden prepararse en las condiciones que se han descrito más arriba.
La administración de células de inmunogenicidad potenciada a los mamíferos como un antígeno, induce una fuerte inmunidad a las células, y puede tratarse una enfermedad asociada a las células.
En consecuencia, la presente invención proporciona un agente terapéutico para el tratamiento de enfermedades, que comprende células de inmunogenicidad potenciada, las cuales pueden obtenerse mediante el contacto de células asociadas con las enfermedades, con el compuesto de fórmula (I) ó una sal o solvato del mismo. El término "terapia" como se emplea aquí, significa también "prevención".
La presente invención proporciona también el empleo de las células como se ha reivindicado, para el tratamiento de enfermedades asociadas con la célula.
Los tumores pueden ser tratados empleando células tumorales de inmunogenicidad potenciada, como ingrediente activo. Las enfermedades infecciosas pueden ser tratadas empleando células infectadas con patógenos cuya inmunogenicidad está potenciada, como ingrediente activo.
Una fuerte inmunidad para las células tumorales se induce mediante la inmunización del cuerpo con células tumorales, cuya inmunogenicidad está potenciada por el compuesto de fórmula (I). Como resultado, los tumores son atacados por el sistema inmune, llevando a la regresión o erradicación del tumor. Las células tumorales de acuerdo con la presente invención, inducen una fuerte inmunidad no solamente a los tumores tales como el melanoma cuya inmunogenicidad ya es sabido que es alta, sino también a tumores como el linfoma T (ver Pharmacological Test Examples 2 y 3) (ver ejemplos 2 y 3 del Ensayo Farmacológico).
Así, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para el tratamiento de tumores, que contiene células tumorales de inmunogenicidad potenciada, obtenidas mediante la puesta en contacto de células tumorales con el compuesto de fórmula (I) ó una sal o solvato del mismo, in vitro.
La presente invención proporciona también el empleo de células tumorales de inmunogenicidad potenciada, para la administración de un medicamento para el tratamiento de tumores.
El término "tumor" como se emplea en la presente, significa cánceres, incluyendo el melanoma, cáncer de riñón, cáncer uterino, cáncer pancreático, tumor cerebral, glioblastoma, cáncer de colon, cáncer de pulmón, hepatoma, linfoma, leucemia, fibrosarcoma, y similares.
El término "composición farmacéutica para el tratamiento de tumores" como se emplea en la presente, incluye agentes para el tratamiento del cáncer como vacunas de cáncer o vacunas de células de cáncer.
En la presente invención, las células de inmunogenicidad potenciada pueden ser administradas por cualquier ruta adecuada, por ejemplo, por administración intraperitoneal o subcutánea, administración intravenosa o intraarterial y administración local mediante inyección. Además, cuando se administra a los humanos, puede emplearse la administración intravenosa o intraarterial, administración local mediante inyección, administración intraperitoneal o intratorácica, administración subcutánea, o administración intramuscular. La administración intravenosa es la más preferida.
En la presente invención, las células de inmunogenicidad potenciada pueden ser administradas en formas de dosificación tales como agentes inyectables, suspensiones y emulsiones basadas en métodos convencionales. Si es necesario, con el fin de potenciar además la inmunogenicidad de las células, las células pueden suspenderse en coadyuvantes como el coadyuvante completo de Freund, o bien las células pueden administrarse con substancias que tienen una actividad coadyuvante, tal como el BCG. Las composiciones farmacéuticas para el tratamiento de tumores de acuerdo con la presente invención, pueden contener los antes mencionados soportes y auxiliares farmacéuticamente aceptables.
Un ingrediente activo de las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden administrarse continuamente o intermitentemente en función de las condiciones específicas. Pueden determinarse las dosis reales en función de una variedad de factores tales como las rutas de administración, las condiciones de los pacientes tales como su edad, peso corporal, sexo y sensibilidad, período de administración, y otros fármacos tomados en combinación. Una dosis diaria requerida para ejercer la actividad de las células tumorales de inmunogenicidad potenciada para un humano adulto, por ejemplo para administración intravenosa, es generalmente de 1 x 10^{5} a 1 x 10^{9} células/kg de peso corporal, de preferencia de 1 x 10^{6} a 5 x 10^{8} células/kg de peso corporal. Las células de inmunogenicidad potenciada están formuladas de preferencia en agentes inyectables, los cuales pueden administrarse sin ningún procesado a una concentración especificada ajustada previamente, o diluida a una concentración especificada con solución salina fisiológica de calidad específica para inyecciones, inmediatamente antes de la administración a los pacientes.
Las células de inmunogenicidad potenciada de acuerdo con la presente invención, pueden ser aniquiladas o bien su capacidad proliferativa puede ser anulada por radiación o tratamiento con un agente citotóxico, antes de la administración a los pacientes.
Ejemplos
La presente invención se ilustra además con los siguientes ejemplos.
Síntesis, aislamiento y purificación de los compuestos Ejemplo 1 Síntesis de (2S,3S,4R)-1-(\alpha-D-galactopiranosiloxi)-2-hexacosanoilamino-3,4-octadecanodiol (KRN 7000)
Los pasos de la síntesis están mostrados en las figuras 6 y 7.
(1) Síntesis del compuesto G1
Se añadió ácido sulfúrico (0,5 ml) a una solución de D-lixosa (200 g, 1,33 moles) en acetona (3,0 litros), previamente secada con cloruro de calcio, y la mezcla se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. Se añadió polvo de tamices moleculares 4A (100 g), se neutralizó la mezcla de reacción, a continuación se filtró con Celite, y el residuo resultante se lavó con acetona. El filtrado y el líquido del lavado se combinaron y concentraron al vacío para obtener el producto G1 en crudo. Rendimiento 240 g (95%). El producto se empleó para el próximo paso sin necesidad de purificación. Una muestra para ensayo se purificó mediante cromatografía sobre silicagel empleando hexano:acetona (9:1) como disolvente para la elución.
P.f. 76-78ºC; FDMS m/z 191 (M+1)^{+}; H^{1}-RMN (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 5,45 (1H, d, J = 1,8Hz), 4,83 (1H, dd, J = 3,7, 5,5Hz), 4,64 (1H, d, J = 6,1Hz), 4,27 -4,30 (1H, m), 3,90-3,99 (2H, m), 1,48 (3H, s), 1,32 (3H, s).
(2) Síntesis del compuesto G2
Se añadieron piridina (10 ml) y cloruro de tritilo (39,0 g) a una solución en cloruro de metileno (168 ml) del compuesto G1 (239 g, aproximadamente 1,26 mmoles), y la mezcla se agitó durante 4 horas a 32ºC. Se añadió etanol (8 ml) gota a gota, y la mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de lavar con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y una solución salina, se efectuó una concentración al vacío. El residuo resultante se disolvió en acetato de etilo, se enfrió a 0°C y a continuación se cristalizó. Rendimiento 501 g (87% con D-lixosa).
P.f. 174 - 176ºC; FDMS m/z 432 M^{+}; H^{1}-RMN (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,21 - 7,49 (15H, m), 5,38 (1H, d, J = 2,4Hz), 4,75 (1H, dd, J = 3,7, 6,1Hz), 4,59 (1H, d, J = 6,1Hz), 4,31 - 4,35 (1H, m), 3,43 (1H, dd, J = 4,9, 9,8Hz), 3,39 (IH, dd, J = 6,7, 9,8Hz), 1,29 (3H, s), 1,28 (3H, s).
(3) Síntesis del compuesto G3
A una solución en THF (1500 ml) de bromuro de tridecanotrifenilfosfonio (962 g, 1,16 moles), preparada calentando 1-bromotridecano y trifenilfosfina durante 4,5 horas a 140ºC), una solución 2,5 M de hexano de n-butil litio (462 ml, 366 mmoles) se añadió gota a gota a 0ºC en atmósfera de argón. La mezcla se agitó durante 15 minutos, a continuación se añadió gota a gota una solución en THF (450 ml) del compuesto G2 (250 g, 579 mmoles). Esta mezcla se agitó durante 18 horas a la vez que la temperatura subía gradualmente hasta la temperatura ambiente. La solución de reacción se concentró al vacío, se añadió al residuo una mezcla de hexano:metanol:agua (10:7:3, 1000 ml), y la mezcla se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio. La capa de agua se extrajo con hexano (500 ml). Se combinaron todas las capas orgánicas, se secaron con sulfato de magnesio anhidro y a continuación se concentraron al vacío obteniéndose un producto crudo del compuesto G3. El producto se empleó para el próximo paso sin posterior purificación. Rendimiento 339 g (98%). Una muestra para ensayo se purificó mediante cromatografía sobre silicagel empleando hexano:acetato de etilo (9:1) como disolvente para la elución.
FDMS m/z 598 M^{+}; H^{1}-RMN (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,21 - 7,45 (15H, m), 5,48 - 5,59 (2H, m), 4,91 (0,7 H, t, J = 7,3Hz), 4,44 (0,3H, t, J = 7,3Hz), 4,26 (0,3H, dd, J = 4,3, 7,3Hz), 4,21 (0,7H, dd, J = 4,3, 6,7Hz), 3,75 (0,7H, m), 3,69 (0,3H, m), 3,24 (0,3H, dd, J = 4,9, 9,8Hz), 3,17 (0,7H, dd, J = 4,9, 9,8Hz), 3,09-3,14[1H, (3,11, dd, J = 4,9, 9,2Hz), H1bE solapado], 1,75 - 2,03 (2H, m), 1,49 (3H, s), 1,39 y 1,38 (3H, cada uno s), 1,21 - 1,34 (20H, m), 0,88 (3 H, t, J = 6,7Hz).
(4) Síntesis del compuesto G4
A una solución en cloruro de metileno (1500 ml) del compuesto G3 (338 g, aproximadamente 565 moles), se añadió piridina (500 ml), y cloruro de metansulfonilo (49 ml, 633 mmoles), gota a gota. La mezcla se agitó durante 24 horas a 31°C. Se añadió etanol (40 ml) gota a gota y la mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de concentrar al vacío se añadió una mezcla de hexano: metanol: agua (10:7:3, 1000 ml) al residuo para la separación. La capa del agua se extrajo 3 veces con hexano (200 ml). Se reunieron todas las capas orgánicas, se secaron con sulfato de magnesio anhidro, y se concentró al vacío obteniéndose un producto en crudo del compuesto G4. El producto se empleó para el próximo paso sin posterior purificación. Rendimiento 363 g (95%). Se purificó una muestra
para ensayo mediante cromatografía sobre silicagel empleando hexano: acetato de etilo (9:1) como disolvente eluyente.
FDMS m/z 676M^{+}; H^{1}-RMN (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,21 - 7,47 (15H, m), 5,41 (0,7H, ddd, J = 5,5, 9,2, 11,0Hz), 5,32 (0,7 H, bt, J = 11,0Hz), 5,22 (0,3H bdd, J = 9,2, 15,0Hz), 5,02 (0,3H, dt, Jt = 7,3Hz, Jd = 15,0Hz), 4,8 (0,7H, ddd, J = 3,1, 5,5, 7,9Hz), 4,73 (0,7H, dd, J = 5,5, 9,8Hz), 4,64 4,67 (0,3H, m), 4,61 (0,3H, dd, J = 5,5, 9,2Hz), 4,48 (0,7H, dd, J = 5,5, 7,9Hz), 4,22 (0,3H, dd, J = 5,5, 9,2Hz), 3,55 (0,3H, dd, J = 2,4, 11, 6Hz), 3,45 (0,7H, dd, J = 3,2, 11,0Hz), 3,06 - 3,12 [4H, (3,12, s), (3,11, s), (3,09, dd, J = 3,1, 11,0Hz)], 1,66 - 1,82 (2H, m), 1,47 y 1,46 (3H, cada s), 1,39 (3H, s), 1,13 - 1,35 (20H, m), 0,88 (3H, t, J = 6,8Hz).
(5) Síntesis del compuesto G5
A una solución en cloruro de metileno (1500 ml) del compuesto G4 (362 g, aproximadamente 536 moles), se añadió metanol (350 ml), a continuación se añadió gota a gota, ácido clorhídrico concentrado (200 ml). La mezcla se agitó durante 5 horas a temperatura ambiente. La solución de reacción se neutralizó añadiendo bicarbonato de sodio y a continuación se filtró. El filtrado se concentró al vacío y se añadió acetato de etilo al residuo resultante y el lavado se efectuó con una solución salina. La capa del agua se extrajo con acetato de etilo, se juntaron todas las capas orgánicas, se secaron con sulfato de magnesio anhidro y a continuación se concentraron al vacío. La cristalización se efectuó con hexano. Rendimiento 161 g (70% de G2).
P.f. 66-67ºC; FDMS m/z 377 (M-H_{2}O)^{+}; H^{1}-RMN (500 MHz, CDCl_{3}+D_{2}O) \delta 5,86 (0,3H, dt, Jt = 7,3Hz, Jd = 14,7Hz), 5,77 (0,7H, dt, Jt = 7,3, Jd = 10,4Hz), 5,55 (0,3H, br, dd, J = 7,3, 14,7Hz), 5,49 (0,7H, bt, J = 9,8Hz), 4,91-4,97 (1H, m), 4,51 (0,7H, bt, J = 9,8Hz), 4,11 (0,3H, bt, J = 7,3Hz), 3,94 - 4,03 (2H, m), 3,67-3,73[1H, (3,70, dd, J = 3,1, 6,7Hz), (3,69, dd, J = 3,1, 7,3Hz)], 3,20 y 3,19 (3H, cada s), 2,05 - 2,22 (2H, m), 1,22 - 1,43 (20H, m), 0,88 (3H, t, J = 6,7Hz).
(6) Síntesis del compuesto G6
A una solución en THF (780 ml) del compuesto G5 (160 g, aproximadamente 405 moles), se añadió 5% de paladio-sulfato de bario (16 g). Después de reemplazar el aire en una cámara de reacción con hidrógeno gas, se agitó la mezcla durante 20 horas a temperatura ambiente. La solución de reacción se filtró empleando Celite, a continuación se lavó con una mezcla de cloroformo:metanol (1:1). El filtrado y líquidos de lavado se juntaron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se cristalizó con acetato de etilo. Rendimiento 146 g (91%).
[\alpha]^{23}_{D}+12º (cl, CHCl_{3},/MeOH=1:1); P.f. 124-126ºC; FDMS m/z 397 (M+1)^{+}; H^{1}-RMN (500 MHz, CDCl_{3}/
CD_{3}OD=1:1) \delta 4,93-4,96 (1H, m, H2), 3,91 (1H, dd, J = 6,7, 12,2Hz), 3,85 (1H, dd, J = 4,9, 12,2Hz), 3,54 - 3,60 (1H, m), 3,50 (1H, dd, J = 1,8, 8,5Hz), 3,19 (3H, s), 1,75 - 1,83 (1H, m), 1,53 - 1,62 (1H, m), 1,21 - 1,45 (24H, m), 0,89 (3H, t, J = 6,7Hz).
(7) Síntesis del compuesto G7
A una solución en DMF (1000 ml) del compuesto G6 (145 g, 365 moles), se añadió azida de sodio (47 g, 730 mmoles), y la mezcla se agitó durante 4 horas a 95ºC. Se concentró la solución de reacción, se añadió acetato de etilo al residuo resultante, y se efectuó el lavado con agua. La capa de agua se extrajo de nuevo con acetato de etilo. Se juntaron todas las capa orgánicas, se lavaron con una solución salina, se secaron con sulfato de magnesio anhidro y a continuación, se concentraron al vacío obteniéndose un producto en crudo del compuesto G7. Rendimiento 122 g (97%). El producto se empleó para el próximo paso sin posterior purificación. Rendimiento 126 g (95%). Se purificó una muestra para ensayo mediante cromatografía sobre silicagel empleando hexano:acetato de etilo (9:1) como disolvente para la elución.
[\alpha]^{23}_{D} + 16,5° (c 0,5, CHCl_{3}-MeOH, 1:1); P.f. 92-93ºC; FDMS m/z 344 (M+1)^{+}; H^{1}-RMN (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 3,91 (1H, dd, J = 3,7, 11,6Hz), 3,75 (1H, dd, J = 7,9, 11,6Hz), 3,49 - 3,61 (3H, m), 1,50 - 1,71 (2H, m), 1,22 - 1,46 (24H, m), 0,90 (3H, t, J = 6,7Hz).
(8) Síntesis del compuesto G8
A una solución en cloruro de metileno (750 ml) del compuesto G7 (121 g, aproximadamente 352 mmoles), se añadieron piridina (250 ml) y cloruro de tritilo (124 g, 445 mmoles), y la mezcla se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. Se añadió etanol (30 ml) gota a gota. La mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente, se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y una solución salina, se secó con sulfato de magnesio anhidro y a continuación se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre silicagel empleando hexano: acetato de etilo (10:1) como disolvente para la elución. Rendimiento 34,4 g (52% de G6),
[\alpha]^{24}_{D}+11,9° (c 0.9, CHCl_{3}), FDMS m/z 585M^{+}; H^{1}-RMN (500 MHz, CDCl_{3}+D_{2}O) \delta 7,24-7,61 (15H, m), 3,62-3,66 (2H, m), 3,51 - 3,57 (2H, m), 3,42 (1H, dd, J = 6,0, 10,4Hz), 1,23-1,56 (26H, m), 0,88 (3H, t, J = 6,7Hz).
(9) Síntesis del compuesto G9
A una solución de DMF (300 ml) del compuesto G8 (33,5 g, 57,3 mmoles), se añadió 60% de sodio hidrogenado (5,5 g, aproximadamente 138 mmoles como NaH), y la mezcla se agitó durante 40 minutos a temperatura ambiente. La solución de reacción se enfrió a 0ºC y se añadió gota a gota, cloruro de bencilo (15 ml, 120 mmoles). La mezcla se agitó durante 18 horas mientras subía gradualmente la temperatura a la temperatura ambiente. Se añadió agua de hielo (100 ml) a la solución de reacción. Una vez la reacción hubo terminado, se efectuó la extracción empleando acetato de etilo. El extracto se lavó 3 veces con una solución salina, y se juntaron todas las capas orgánicas, se secaron con sulfato de magnesio anhidro y a continuación, se concentraron al vacío para obtener un producto crudo del compuesto G9. El producto se empleó para el próximo paso sin posterior purificación. Rendimiento 42,2 g (96%). Se purificó una muestra de ensayo mediante cromatografía sobre silicagel empleando hexano: acetato de etilo (100:1) como disolvente para la elución.
[\alpha]^{24}_{D} + 9,8º (c 1,0, CHCl_{3}), FDMS m/z 738 (M-N_{2})^{+}; H^{1}-RMN (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,07 - 7,48 (25H, m), 4,57 (1H, d, J = 11,6Hz), 4,44 (1H, d, J = 11,6Hz), 4,41 (2H, s), 3,73 - 3,79 (1H, m), 3,46 - 3,56 (2H, m), 3,37 (1H, dd, J = 8,6, 10,4Hz), 1,20 - 1,64 (26H, m), 0,88 (3H, t, J = 6,7Hz).
(10) Síntesis de compuestos G10 y G11
A una solución en 1-propanol (250 ml) del compuesto G9 (41,2 g, aproximadamente 54 mmoles), se añadió metanol (30 ml) y además se añadió 5% de paladio carbón (4,1 g) y formiato de amonio (27,1 g, 4,3 moles). Después de agitar durante 16 horas a temperatura ambiente, se diluyó la mezcla con acetato de etilo y se filtró con Celite. El filtrado se concentró al vacío y el residuo resultante se disolvió con acetato de etilo y se lavó 3 veces con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y una solución salina. Se juntaron todas las capas orgánicas, se secaron con sulfato de magnesio anhidro y a continuación, se concentraron al vacío para obtener un producto crudo de G10. Rendimiento 38,9 g (98%). El G10 así obtenido se empleó para el próximo paso sin posterior purificación.
A una solución en cloruro de metileno (300 ml) del compuesto G10, se añadió ácido hexacosanoico (22,4 g, 56,5 mmoles) e hidrocloruro de WSC (12,6 g, 64,6 mmoles) y la mezcla se agitó durante 2 horas mientras se calentaba. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. Se añadió acetato de etilo (500 ml) al residuo y el lavado se efectuó con una solución acuosa de ácido clorhídrico 0,5 M, una solución salina, y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, y además, con una solución salina. Se juntaron todas las capas orgánicas, se secaron con sulfato de magnesio anhidro, y a continuación se concentraron al vacío obteniéndose un producto crudo del compuesto G11. Rendimiento 53,2 g (88%). El G11 así obtenido se empleó para el nuevo paso sin una posterior purificación. Se purificó una muestra para análisis mediante cromatografía sobre silicagel empleando hexano:acetato de etilo (100:1) como disolvente para la elución.
[\alpha]^{24}_{D} + 5,3º (c 0,4, CHCl_{3}); FDMS m/z 1118M^{*}; ^{1}H-RMN (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,20-7,38 (25H, m), 5,57 (1H, d, J = 9,1Hz), 4,80 (1H, d, J = 11,6Hz), 4,48-4,50 (3H, m), 4,24-4,32 (1H, m), 3,83 (1H, dd, J = 3,0, 6,7Hz), 3,43-3,51 (2H, m, H1a), 3,29 (1H, dd, J = 4,3, 9,8Hz), 1,92 (2H, t, J = 7,3Hz), 1,28-1,60 (72H, m), 0,88 (6H, t, J = 6,7Hz).
(11) Síntesis del compuesto G12
A una solución en cloruro de metileno (180 ml) del compuesto G11 (52,2 g, aproximadamente 47 mmoles), se añadió metanol (36 ml), a continuación se añadió gota a gota una solución de cloruro de metanol al 10% (3,0 ml), y la mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. La solución de reacción se neutralizó con bicarbonato de sodio en polvo (18 g) y se filtró con Celite. El residuo se lavó con cloruro de metileno. El filtrado y los líquidos de lavado se juntaron y se lavaron con una solución salina. La capa orgánica se secó con sulfato de magnesio anhidro, y a continuación, se concentró al vacío. El residuo se disolvió en acetona a la vez que se calentaba, y la solución se enfrió a 0°C y se purificó por precipitación. Rendimiento 38,6 g (77% de G9).
[\alpha]^{24}_{D}- 29,7º (c 0,7, CHCl_{3}); p.f. 75 - 76,5ºC; FDMS m/z 876M^{+}; H^{1}-RMN (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,30-47 (10 H, m), 6,03 (1H, d, J = 7,9Hz), 4,72 (1H, d, J = 11,6Hz), 4,66 (1H, d, J = 11,6Hz), 4,61 (1H, d, J = 11,6Hz), 4,45 (1H, d, J = 11,6Hz), 4,12 - 4,17 (1H, m), 4,00 (1H, dt, Jt = 4,3, Jd = 7,3Hz), 3,67 3,72 (2H, m), 3,61 (1H, ddd, J = 4,3, 8,6, 11,6Hz), 1,94 - 2,05 (2H, m), 1,15 - 1,69 (72H, m), 0,88 (6H, t, J = 6,1Hz).
(12) Síntesis del compuesto G13
1) Se disolvió acetato de 2,3,4,6-tetra-O-bencil-D-galactopiranosilo (79,8 g) en una mezcla de tolueno (160 ml) e isopropiléter (520 ml), y la solución se enfrió de -10 a 0ºC. A esta solución se añadió, una solución de isopropiléter (2,8 mmoles/ml, aproximadamente 100 ml) conteniendo 2,0 volúmenes equivalentes de HBr. Después de agitar durante 90 minutos de -10ºC a 0ºC, se vertió en la solución de reacción, una solución acuosa al 5% de bicarbonato de sodio, y el exceso de HBr se neutralizó mientras se agitaba. El volumen total se transfirió a un embudo de separación para la separación, a continuación se desechó la capa acuosa y se lavó 2 veces con una solución acuosa al 10% de cloruro de sodio. Después de concentrar al vacío, se obtuvo el bromuro de 2,3,4,6-tetra-O-bencil-\alpha-D-galactopiranosilo (GalBr) en forma de un jarabe.
2) Se añadieron DMF (140 ml) y a continuación una solución en tolueno (250 ml) de GalBr (aproximadamente 137 ml), a una solución en tolueno (420 ml) del compuesto G12 (60,0 g, 68,6 mmoles), bromuro de tetrahexilamonio (89,4 g, 206 mmoles) y tamices moleculares 4A (60 g). La mezcla se agitó durante 72 horas a temperatura ambiente. Se añadió metanol (12 ml) a la solución de reacción y la mezcla se agitó durante 2 horas. La filtración con Celite y el lavado con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y una solución salina, fueron seguidos por el secado sobre sulfato de magnesio anhidro y la concentración al vacío. El acetonitrilo se añadió al residuo resultante y la mezcla se agitó durante 2 horas. El precipitado resultante se secó al vacío obteniéndose un polvo seco. Este polvo se purificó mediante cromatografía sobre silicagel empleando hexano: acetato de etilo (8:1) como disolvente para la elución. Rendimiento 70,9 g (74%).
[\alpha]^{24}_{D} + 18,8º (c 0,9, CHCl_{3}); p.f. 74 - 75ºC; FDMS m/z 1399 (M+1)^{+}; H^{1}-RMN (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,21 - 7,37 (30H, m), 6,12 (1H, d, J = 9,0Hz), 4,91 (1H, d, J = 11,6Hz), 4,84 (1H, d, J = 3,7Hz), 4,72 - 4,80 (4H, m), 4,35-4,65 (7H, m), 4,12 -4,18 (1H, m), 3,99 - 4,05 (2H, m), 3,84 - 3,93 (4H, m), 3,73 (1H, dd, J = 3,7, 11,0Hz), 3,47 - 3,51 (2H, m), 3,42 (1H, dd, J = 6,1, 9,1Hz), 1,87 - 1,99 (2H, m), 1,18 - 1,70 (72H, m), 0,88 (6H, t, J = 7,4Hz).
(13) Síntesis del compuesto KRN 7000
Se añadió el compuesto G13 (60,0 g, 42,9 mmoles) a etanol (960 ml) para obtener una suspensión, a la cual se añadió una suspensión en etanol de hidroxi paladio al 20% (6,0 g). Además, se añadió una fuente de hidrógeno, el 4-metilciclohexeno (120 ml, 93,5 mmoles). Después de agitar durante 4 horas mientras se calentaba, se efectuó la filtración y se eliminó el disolvente. El residuo se lavó con etanol caliente. El filtrado se dejó en reposo a temperatura ambiente obteniéndose un precipitado de color blanco, y el precipitado se filtró y se secó al vacío. El polvo resultante se suspendió en etanol:agua (92:8, 3,5 litros) y se disolvió calentando mientras se agitaba. La solución se dejó en reposo para obtener de nuevo un precipitado. La solución con el precipitado se filtró, y la torta de filtración se secó al vacío para obtener un polvo de color blanco. Rendimiento 35,0 g (95%),
[\alpha]^{23}_{D} + 43,6º (c 1,0, piridina); p.f. l89,5 - 190,5ºC; FABMS negativa m/z 857 (M-H)^{-}; IR (cm^{-1}, KBr) 3300, 2930, 2850, 1640, 1540, 1470, 1070; H^{1} RMN (500 MHz, C_{5}D_{5}N) \delta 8,47 (1H, d, J = 8,5Hz), 5,58 (1H, d, J = 3,7Hz), 5,27 (1H, m), 4,63 - 4,70 (2H, m), 4,56 (1H, m), 4,52 (1H, t, J = 6,1Hz), 4,37 - 4,47 (4H, m), 4,33 (2H, m), 2,45 (2H, t, J = 7,3Hz), 2,25 - 2,34 (1H, m), 1,87 - 1,97 (2H, m), 1,78 - 1,85 (2H, m), 1,62 - 1,72 (1H, m), 1,26 - 1,45 (66H, m), 0,88 (6H, t, J = 6,7Hz), C^{13} RMN (125 MHz, C_{5}D_{5}N) \delta 173,2 (s), 101,5 (d), 76,7 (d), 73,0 (d), 72,5 (d), 71,6 (d), 71,0 (d), 70,3 (d), 68,7 (t), 62,7 (t), 51,4 (d), 36,8 (t), 34,4 (t), 32,1 (t), 30,4 (t), 30,2 (t), 30,03 (t), 30,00 (t), 29,93 (t), 29,87 (t), 29,81 (t), 29,76 (t), 29,6 (t), 26,5 (t), 26,4 (t), 22,9 (t), 14,3 (q).
Ejemplo 2 Aislamiento y purificación del O-\alpha-D-galacto-piranosil-(1\rightarrow2)-O-\alpha-D-galactopiranosil- (1\rightarrow1)-(2S,3S,4R)-2-amino-N-[(R)-2-hidroxitetracosanoil]-1,3,4-octadecanotriol (S1140B-9)
Un polvo liofilizado (447,1 g) de esponjas, que fueron recogidas a una profundidad de 15 a 25 metros del mar, en un lugar próximo a Kume Island de la Prefectura de Okinawa, se extrajo con una mezcla de cloroformo y metanol, a continuación se concentró el líquido extraído al vacío obteniéndose 51,28 g de extracto. El extracto se repartió con acetato de etilo y agua, y la capa superior y la central se secaron con sulfato de sodio anhidro y se concentraron al vacío obteniéndose 18,37 g y 9,44 g de fracciones, respectivamente. Se juntaron la capa de alcohol obtenida por reparto de la fracción obtenida de la capa superior con 10% de metanol acuoso y n-hexano, y la fracción obtenida de la capa central, y se concentraron. Repitiendo la cromatografía sobre silica-gel, se obtuvieron 169,9 mg de un único componente activo sobre la fase normal de TLC. Se efectuó otra purificación mediante HPLC de fase invertida empleando una columna ODS-AM (un producto de la firma YMC, 250 mm x 20 mm de diámetro, metanol, 9,0 ml/minuto) (tiempo de retención: 30,3 minutos) obteniéndose 10,2 mg del compuesto del título purificado (S1140B-9).
El compuesto del título puede también aislarse y purificarse mediante el método descrito en F. Cafieri et al., Liebigs Ann. Chem. 1995, 1477-1481.
FABMS negativa m/z 1007[(M-H)^{-}]; IR; H^{1} RMN (500 MHz, C_{5}D_{5}N, 24ºC) \delta (ppm) 8,55 (1H, d, J = 9,2Hz, NH), 5,60 (1H, d, J = 3,7Hz, H1''), 5,57 (1H, d, J = 3,7Hz, H1'''), 5,13 (1H, m, H2), 4,75 (1H, dd, J = 3,7, 10,4Hz, H2''), 4,62 (2H, m), 4,54 (4H, m), 4,25 - 4,47 (10H, m), 2,17 (2H, m), 1,99 (1H, m), 1,87 (2H, m), 1,75 (1H, m), 1,65 (2H, m), 1,12 - 1,49 (60H, m), 0,85 (6H, m, metilo terminal); C^{13} RMN (125 MHz, C_{5}D_{5}N, 45ºC) \delta (ppm) 175,5 (s, C1'), 99,5 (d, C1'''), 98,6 (d, C1''), 76,7 (d, C2''), 76,0 (d, C3), 72,6 (d, C4), 72,6 (d, C5''), 72,6 (d, C4''), 72,5 (d, C2), 71,3 (d, C3'''), 71,0 (d), 70,8 (d), 70,5 (d, C2'''), 69,7 (d, C3''), 68,6 (t, Cl), 62,7 (t), 62,5 (t), 51,2 (t, C2), 39,4 (t), 35,6 (t), 33,7 (t), 32,2 (t), 30,5 (t), 30,3 (t), 30,1 (t), 30,0 (t), 29,7 (t), 29,6 (t), 26,7 (t), 26,0 (t), 23,0 (t), 22,9 (t), 14,3 (q, metilo terminal).
Ejemplo 3
Los siguientes compuestos fueron sintetizados de acuerdo con los métodos descritos en las referencias dadas en la columna de la derecha.
10
11
Las relaciones entre los compuestos de fórmula (I) y los compuestos descritos en el ejemplo mencionado anteriormente, están mostradas en la tabla 1.
TABLA 1
X R1 R2 R3 R4 R5 R6 R7 R8 R9
KRN7000 23 H (b)Y=13 H OH OH H OH H CH_{2}OH
AGL517 11 H (a)Y=13 H OH OH H OH H CH_{2}OH
AGL563 11 H (a)Y=13 H OH OH H H OH CH_{2}OH
AGL571 11 H (a)Y=13 H OH OH H OH H CH_{3}
AGL577 11 H (a)Y=13 H OH OH H OH H H
AGL586 23 H (b)Y=13 H OH OH H OH H Grupo(A')
AGL584 23 H (b)Y=13 H OH OH H H OH Grupo (A')
S1140B-9 21 OH (b)Y=13 H Grupo(A) OH H OH H CH_{2}OH
719-7 21 OH (b)Y=13 H OH Grupo(E) H OH H CH_{2}OH
STL-8 23 OH (b)Y=13 H Grupo(B) Grupo(F) H OH H CH_{2}OH 
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo biológico
Ensayo farmacológico 1
Efecto de la \alpha-glicosilceramida sobre la inmunogenicidad de las células tumorales
El experimento se efectuó empleando ratones C57BL/6 adquiridos en Japan SLC, Inc. El compuesto sintetizado en el ejemplo 1 (KRN 7000), se empleó en el siguiente experimento como un compuesto representativo con una estructura \alpha-glicosilceramida. AGL-583, el compuesto sintetizado en el Ejemplo 3 con una estructura \beta-glicosilceramida, se empleó como control negativo.
Primeramente se estudió el efecto de un vehículo, el de KRN 7000, y el de AGL-583, sobre la inmunogenicidad de células tumorales. Las células tumorales, células EL-4 del linfoma T del ratón (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.), se suspendieron en un medio RPM 11640 que contenía 10% de FCS ("suero bovino fetal"), glutamina y antibióticos, y se cultivaron in vitro. Antes de empezar el tratamiento con cada fármaco, se recuperaron las células EL-4 y se suspendieron de nuevo en un medio recién preparado, a continuación se empezó inmediatamente la incubación con una adición de un vehículo (0,1% en DMSO), KRN 7000 (100 ng/ml) ó AGL-583 (100 ng/ml). Un día después de la incubación, se retiraron tres clases de células tumorales, a saber, EL-4/V, EL-4/KRN y EL-4/583, cultivadas en presencia del vehículo, KRN 7000 y AGL 583, respectivamente, se lavaron dos veces con el medio, a continuación se suspendieron de nuevo en medio recién preparado. Las suspensiones se inmunizaron intravenosamente en la cola de ratones C57BL/6 (hembras de 8 semanas de edad), a 5 x 10^{5} células/ratón. Tres días más tarde, se prepararon fracciones de células del bazo como células efectoras de (1) ratones sin inmunización (control sano), (2) ratones inoculados con EL-4/V, (3) ratones inmunizados con EL-4/KRN y (4) ratones inmunizados con EL-4/583. Como células diana, se emplearon células tumorales YAC-1 de ratón marcadas con Cr^{51} (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) y células tumorales EL-4 de ratón. Las células efectoras y las células diana fueron plaqueadas en un ratio E/T (efectoras/diana) de 25:1, 50:1 y 100:1. Después de una incubación de 4 horas, se midió el Cr^{51} mediante un contador \gamma para calcular la actividad citotóxica de las respectivas células de bazo empleando la siguiente fórmula:
\text{Actividad citotóxica} (%) = \frac{\text{liberación experimental} - \text{liberación espontánea}}{\text{liberación máxima} - \text{liberación espontánea}} \ x \ 100
"liberación máxima" significa la cantidad de Cr^{51} liberado cuando se cultiva con una adición de HCl, "liberación espontánea" significa la cantidad de Cr^{51} liberado cuando el cultivo se hace sin ninguna adición, y "liberación experimental" significa la cantidad de Cr^{51} liberado cuando se añaden células individuales de bazo. Los resultados están mostrados en la figura 1.
Como se muestra en la figura 1A, la actividad citotóxica a la YAC-1 en las células de bazo de ratones inmunizados con EL-4/V y EL-4/583 fue casi la misma que en ratones sanos. En contraste, las células de bazo de ratones inmunizados con EL-4/KRN mostraron una actividad citotóxica notablemente alta.
Por otro lado, como se muestra en la figura 1B, la actividad citotóxica a la EL-4 fue mayor en las células del bazo de ratones inmunizados con EL-4/V ó EL-4/583 que en los ratones de control sanos, pero la actividad citotóxica fue todavía mayor en las células de bazo de ratones inoculados con EL-4/KRN.
Los resultados anteriores indican que la incubación de células tumorales con la adición de una \alpha-glicosilceramida potencia la inmunogenicidad de las células tumorales de manera que se induce una inmunidad al tumor extremadamente fuerte en ratones inoculados con las células tumorales resultantes. Además, aunque una inmunidad a la EL-4, a saber, una inmunidad antitumoral solamente para un tumor específico, se indujo a bajo nivel en células de bazo de ratones inmunizados con EL-4/V ó EL-4/583, una inmunidad tumoral extremadamente fuerte contra no solamente EL-4 sino también contra las células YAC-1 sensibles a las NK, se indujo en células de bazo en ratones inmunizados con EL-4/KRN. En consecuencia, se descubrió que, mediante la inmunización con EL-4/KRN, no solamente se inducía la inmunidad específica del tumor sino que también se inducía la inmunidad no específica.
Ensayo farmacológico 2
Efecto terapéutico de células tumorales tratadas con \alpha-glicosilceramida sobre ratones modelo de metástasis de EL-4 en el hígado
Puesto que los resultados del ensayo farmacológico 1 demostraron que las \alpha-glicosilceramidas eran efectivas para potenciar la inmunogenicidad de las células tumorales, estudiamos a continuación si la inmunización de las células tumorales tratadas con \alpha-glicosilceramidas, ejerce un efecto antitumoral sobre los tumores existentes, es decir, si la inmunización de células tumorales de inmunogenicidad potenciada es efectiva también en la terapia tumoral.
Células EL-4 del linfoma T de ratón (4 x 10^{5} células/ratón) fueron implantadas intravenosamente en la cola de ratones BDF1 (hembras, 6 meses de edad, Japan SLC, Inc.), 6 animales en un grupo, para preparar ratones portadores de cáncer. Los días de implantación del tumor fueron registrados como el día 0. El mismo día, se añadió un vehículo (0,1% de DMSO), KRN 7000 (100 ng/ml) ó AGL-583 (100 ng/ml) a las células EL-4 que habían sido inoculadas en medio recién preparado, de la misma manera que en el Ensayo Farmacológico 1 de más arriba. Un día después del principio de la incubación, las células de EL-4/V, EL-4/KRN y EL-4/583 cultivadas en presencia del vehículo, KRN 7000 y AGL-583, respectivamente, fueron recuperadas y lavadas dos veces con el medio, después de lo cual las células recuperadas fueron inmunizadas intravenosamente en la cola de los ratones portadores del cáncer, a 1 x 10^{5} células/ratón. Se comparó el efecto antitumoral resultante.
Los ratones implantados con EL-4 murieron generalmente en aproximadamente 30 días debido a la formación del tumor y crecimiento en varios órganos, particularmente en el hígado. Por lo tanto, el efecto antitumoral se evaluó observando el período de supervivencia de los hospedadores portadores de cáncer. Los resultados están mostrados en la figura 2.
Como se muestra en la figura 2, en los ratones portadores de EL-4 inmunizados con EL-4 tratadas con vehículo o AGL-583, el período de supervivencia no fue en absoluto tan prolongado y no se observó ningún efecto antitumoral evidente comparado con los ratones de control a los cuales solamente se implantaron tumores. Por el contrario, en ratones portadores de EL-4 inmunizados con EL-4 tratadas con KRN 7000, el período de supervivencia fue marcadamente prolongado y 33,3% de los ratones tratados sobrevivieron durante un largo plazo.
Los resultados anteriores muestran que mientras las células tumorales tratadas con el vehículo ó AGL-538, un compuesto que tiene una estructura \beta-glicosilceramida, no tienen ningún efecto cuando se aplican en la terapia del tumor, las células tumorales cultivadas con una adición de KRN 7000, un compuesto que tiene una estructura de \alpha-glicosilceramida, tienen una marcada actividad antitumoral cuando se aplican en la terapia tumoral. Así, se descubrió que las células tumorales tratadas con una \alpha-glicosilceramida eran efectivas en la terapia tumoral.
Ensayo farmacológico 3
Efecto terapéutico de las células tumorales tratadas con \alpha-glicosilceramida, sobre ratones modelo para metástasis del melanoma B16 en el pulmón
Células tumorales distintas de las empleadas en el Ensayo Farmacológico 2, a saber, del melanoma B16 (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.), fueron tratadas con una \alpha-glicosilceramida para estudiar la efectividad de estas células tumorales en la terapia de tumores.
Células del melanoma B16 del ratón (4 x 15^{5} células/ratón) fueron implantadas intravenosamente en la cola de ratones BDF1 (hembras, 6 semanas de edad), 6 animales en un grupo, para preparar ratones portadores de cáncer. El día de la implantación tumoral se registró como el día 0. La incubación de las células B16 empezó el mismo día con la adición de un vehículo (0,1% de DMSO) ó KRN 7000 (100 ng/ml) de la misma manera que en el Ensayo Farmacológico 2. Un día después de la incubación, las células de B16/V y B16/KRN cultivadas en presencia del vehículo y de KRN 7000, respectivamente, se recogieron y se lavaron dos veces con el medio. A continuación, las células recogidas fueron inmunizadas intravenosamente en la cola de los ratones portadores de cáncer mencionados más arriba, a 1 x10^{5} células/ratón. Se comparó el efecto antitumoral resultante.
Los ratones implantados con B16 murieron generalmente en aproximadamente 60 días debido a la formación y crecimiento de nódulos metastásicos en el pulmón. De acuerdo con ello, el efecto antitumoral se evaluó observando el período de supervivencia de los hospedadores portadores de cáncer. Los resultados están mostrados en la figura
3.
Como se muestra en la figura 3, en los ratones portadores de cáncer inmunizados con células B16/V, el efecto antitumoral no se observó en absoluto y el período de supervivencia tendió más bien a acortarse si se compara con los ratones de control en los cuales se habían implantado solamente células tumorales. En cambio, en los ratones inoculados con B16/KRN se observó un marcado efecto antitumoral y el 50% de los ratones sobrevivieron durante 70 días después de la implantación del tumor.
Los resultados anteriores demuestran que las células tumorales distintas de las empleadas en el Ensayo Farmacológico 2, tratadas con un \alpha-glicosilceramida ejercían efectos marcadamente antitumorales cuando se inmunizaban en ratones portadores de cáncer. Así, se descubrió que las células tumorales tratadas con una \alpha-glicosilceramida eran efectivas en la terapia tumoral.
Ensayo farmacológico 4
Efecto de la \alpha-glicosilceramida sobre la genicidad tumoral de las células tumorales
Los resultados de los ensayos farmacológicos 2 y 3 revelaron que las células tumorales tratadas con una \alpha-glicosilceramida tenían actividad antitumoral sobre los ratones portadores del cáncer. En general, en la terapia tumoral convencional, la actividad proliferadora de las células tumorales se suprime por radiación u otro tratamiento antes de la inmunización, o de otra manera, el propio tumor inmunizado empleado como vacuna, podría ser el encargado de eliminar el tumor formado. De hecho, los resultados del Ensayo Farmacológico 3, demostraron que el período de supervivencia de los ratones inmunizados con células tumorales tratadas con el vehículo tendía a acortarse, aunque muy ligeramente. Sin embargo, las células tratadas con una \alpha-glicosilceramida no solamente prolongaban el período de supervivencia sino que se observaron incluso casos de una curación virtual. Por lo tanto, las células tumorales tratadas con \alpha-glicosilceramida fueron tenidas en cuenta para emplear sin eliminar su capacidad de proliferación por irradiación o similar, pero su tumorigenicidad (capacidad para formar una carga tumoral) quedaba por ser confirmada. Por lo tanto, se estudió el efecto de una \alpha-glicosilceramida sobre la tumorigenicidad de varios tumores de ratones, como sigue.
Se cultivaron seis clases de células tumorales de ratón, a saber, tres clases de células tumorales derivadas del ratón C57BL/6, a saber células de melanoma B16 de ratón (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.), células EL-4 de linfoma T de ratón (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) y células de carcinoma Lewis de pulmón de ratón (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.), y tres clases de células tumorales derivadas de ratones BALB/c, a saber, células de colon 26 de cáncer de colon de ratón (Fundación Japonesa para la Investigación del cáncer), células de leucemia L1210 de ratón (Fundación Japonesa para la Investigación del cáncer), y células de fibrosarcoma Meth A de ratón (Fundación Japonesa para la Investigación del cáncer), con o sin adición de un vehículo (0,1% de DMSO) ó KRN 7000 (100 ng/ml) durante un día como se describe en los Ensayos Farmacológicos de más arriba. Las células tumorales resultantes se lavaron dos veces con un medio, se suspendieron de nuevo en un medio recién preparado y se implantaron intravenosamente en la cola de los correspondientes ratones. Esto es, las células B16, EL-4 y LLC se implantaron a ratones C57BL/6 (hembras, 9 semanas de edad) a 5 x 10^{5} células/ratón, 1 x 10^{5} células/ratón y 5 x 10^{5} células/ratón, respectivamente; y células de Colon 26, Meth A y Ll210, se implantaron a ratones BALB/c (hembras, 9 semanas de edad) a 2 x 10^{6} células/ratón, 1 x 10^{5} células/ratón y 5 x 10^{5} células/ratón, respectivamente.
Las células tumorales implantadas intravenosamente en la cola formaron nódulos metastatizados en varios órganos, particularmente en el hígado o pulmones, y finalmente mataron a los animales.
De acuerdo con ello, se evaluó el efecto de las células tumorales sobre la tumorigenicidad (velocidad de formación del tumor, capacidad para formar una carga tumoral), observando el período de supervivencia.
Como se muestra en la figura 4, todos los ratones implantados con células tumorales que habían sido cultivadas en un medio común sin ningún fármaco, murieron y su tumorigenicidad fue del 100%. De forma similar, todos los ratones inmunizados con células tumorales, que habían sido cultivadas con vehículo durante 1 día, murieron y su tumorigenicidad fue del 100%. En cambio, del 40 al 100% de ratones implantados con células tumorales que habían sido cultivadas con KRN 7000 durante 1 día, sobrevivieron y su tumorigenicidad disminuyo o quedó eliminada por completo.
Los resultados anteriores muestran que la tumorigenicidad de las células tumorales disminuye marcadamente cuando se cultivan con una adición de \alpha-glicosilceramidas representadas por KRN 7000. Se efectuó un estudio por separado para descubrir si el KRN 7000 tenía actividad citostática contra las células tumorales. Los resultados mostraron que las células tumorales cultivadas con una adición de KRN 7000 de la misma manera que en el Ensayo Farmacológico 4, tienen una capacidad proliferativa similar a las células tumorales cultivadas sin ninguna adición o con una adición del vehículo. Así, se descubrió que el efecto observado no era inducido por la directa citotoxicidad del propio KRN 7000 contra las células tumorales, sino que era debido a otras actividades biológicas.
Así se descubrió que las células tumorales tratadas con una \alpha-glicosilceramida pueden ser inmunizadas como una útil vacuna contra el cáncer, sin posterior irradiación para deteriorar su capacidad de proliferación. De acuerdo con esto, los resultados de los Ensayos Farmacológicos 1 a 4 sugieren que cuando las células tumorales tratadas con una \alpha-glicosilceramida son inmunizadas, la inmunidad del hospedador erradica casi completamente las propias células tumorales inmunizadas, y al mismo tiempo se activan las células inmunocompetentes del hospedador para inducir la inmunidad antitumoral en los tumores existentes originales.
Células tumorales distintas de las empleadas en los Ensayos Farmacológicos 1 a 3 se emplearon también en este estudio. Se descubrió que la tumorigenicidad de todas las células tumorales se redujo tratándolas con una \alpha-glicosilceramida. Considerando que el efecto terapéutico de las células B16 y las EL-4 tratadas con una \alpha-glicosilceramida estaba íntimamente asociado con la reducción de la tumorigenicidad, la terapia tumoral con células tumorales distintas de las B16 y EL-4 se ha considerado también como posible.
Ensayo Farmacológico 5
Efecto terapéutico de células tumorales tratadas con \alpha-glicosilceramida e irradiadas, sobre ratones modelo para la metástasis del melanoma B16 en el pulmón
Los resultados de los Ensayos farmacológicos 2 a 4 revelaron que las células tumorales tratada con una \alpha-glicosilceramida eran útiles como vacuna contra el cáncer sin más tratamiento por irradiación o por agentes quimioterapéuticos o similares, para matar las células. Sin embargo, vacunas para tumores más seguras, en las cuales las células son muertas por irradiación o similar, se emplean generalmente en la terapia de tumores ordinarios. De acuerdo con esto se efectuó un estudio para ver si las células tumorales tratadas con \alpha-glicosilceramida presentaban actividad terapéutica cuando éstas se irradiaban antes de la inmunización.
Se implantaron células de melanoma B16 de ratón (5 x 10^{5} células/ratón) intravenosamente en la cola de ratones C57BL/6 (hembras, 9 semanas de edad), 7 animales en un grupo, para preparar ratones portadores de cáncer. El día de la implantación del tumor se registró como día 0. En el mismo día, se suspendieron células B16 en un medio recién preparado, se incubaron in vitro con una adición de un vehículo (0,1% de DMSO) ó KRN 7000 (100 ng/ml) de la misma manera que en el Ensayo Farmacológico 4. Un día después de la incubación, se cultivaron las células B16/V y las B16/KRN en presencia del vehículo y KRN 7000, respectivamente, se recogieron y lavaron dos veces con PBS (solución salina tamponada con fosfato). A continuación, las células resultantes se dividieron en dos grupos: irradiadas con 200 Gy y no irradiadas, y se inmunizaron intravenosamente en la cola de los anteriormente mencionados, ratones portadores de cáncer a 1 x 10^{5} células/ratón. Se compararon los efectos antitumorales de los dos grupos de células.
Como se muestra en la figura 5, independientemente de la irradiación o de la no irradiación, no se observó ningún efecto antitumoral en los ratones inoculados con células V16/V, cuando se comparó con ratones de control inoculados con células tumorales sin tratar. Inversamente, con independencia de la irradiación o de la no irradiación, se observó un marcado efecto antitumoral, en ratones inoculados con células V16/KRN, y aproximadamente del 60% al 70% de los ratones sobrevivieron hasta 50 días después de la implantación del tumor.
Los resultados anteriores muestran que las células tumorales tratadas con \alpha-glicosilceramida, irradiadas, tienen una marcada actividad antitumoral similar a aquellas sin irradiación, como en los Ensayos Farmacológicos 2 y 3. Así, se descubrió que las células tumorales tratadas con \alpha-glicosilceramida, pueden ser posteriormente irradiadas para hacerlas aplicables para una terapia tumoral más segura.

Claims (14)

1. Empleo in vitro de un compuesto de fórmula (I) ó una sal o solvato del mismo para la elaboración de un agente para la potenciación de la inmunogenicidad de células tumorales o células infectadas con patógenos:
12
en donde
R^{1} representa H ó OH,
X representa un número entero entre 7 y 27,
R^{2} representa un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes (a) a (e) (en donde Y representa un número entero entre 5 y 17):
(a) -CH_{2}(CH_{2})_{Y}CH_{3},
(b) -CH (OH)(CH_{2})_{Y}CH_{3}
(c) -CH (OH)(CH_{2})_{Y}CH(CH_{3})_{2}
(d) -CH=CH (CH_{2})_{Y}CH_{3}
(e) -CH (OH)(CH_{2})_{Y}CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3}, y
R^{3} a R^{9} representan substituyentes como se definen en una cualquiera de las siguientes i) e ii):
i) cuando R^{3}, R^{6} y R^{8} representan H,
R^{4} representa H, OH, NH_{2}, NHCOCH_{3}, ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D):
13
R^{5} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (E) y (F):
14
R^{7} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D):
\vskip1.000000\baselineskip
15 
\vskip1.000000\baselineskip
R^{9} representa H, CH_{3}, CH_{2}OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos siguientes (A') a (D'):
\vskip1.000000\baselineskip
16 
\vskip1.000000\baselineskip
ii) cuando R^{3}, R^{6} y R^{7} representan H,
R^{4} representa H, OH, NH_{2}, NHCOCH_{3} ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D):
\vskip1.000000\baselineskip
17 
\vskip1.000000\baselineskip
R^{5} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos (E) y (F):
\vskip1.000000\baselineskip
18 
\newpage
R^{8} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos siguientes (A) a (D):
19
R^{9} representa H, CH_{3}, CH_{2}OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A') a (D'):
20
2. Empleo in vitro, como se ha reivindicado en la reivindicación 1, en donde en la fórmula (I), R^{3} y R^{6} representan H, R^{4} representa OH ó un substituyente de uno cualquiera de los grupos (A) a (D), R^{5} representa OH ó un substituyente del grupo (E) ó (F), R^{7} y R^{8} representan cada uno H ó OH (R^{7} y R^{8} no representan el mismo substituyente), y R^{9} representa CH_{2}OH, CH_{3}, H ó un substituyente de uno cualquiera de los grupos (A') a (D').
3. Empleo in vitro como se ha reivindicado en la reivindicación 1 ó 2, en donde en la fórmula (I) X es un número entero entre 21 y 25, y R^{2} represente el grupo (b) en donde Y es un número entero entre 11 y 15.
4. Empleo in vitro como se ha reivindicado en la reivindicación 1, en donde un compuesto de fórmula (I) es el (2S,3S,4R)-1-(\alpha-D-galactopiranosiloxi)-2-hexacosanoilamino-3,4-octadecanodiol.
5. Empleo in vitro como se ha reivindicado en la reivindicación 1, en donde el agente se emplea para potenciar la inmunogenicidad de las células tumorales.
6. Empleo in vitro como se ha reivindicado en la reivindicación 1, en donde el agente se emplea para preparar células tumorales para la terapia de tumores.
7. Un método para potenciar la inmunogenicidad de células tumorales o células infectadas con patógenos, que comprende el paso de poner en contacto las células tumorales o células infectadas con patógenos, con un compuesto de fórmula (I) in vitro:
21
en donde
R^{1} representa H ó OH,
X representa un número entero entre 7 y 27,
R^{2} representa un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes (a) a (e) (en donde Y representa un número entero entre 5 y 17):
(a) -CH_{2}(CH_{2})_{Y}CH_{3}
(b) -CH (OH)(CH_{2})_{Y}CH_{3}
(c) -CH (OH)(CH_{2})_{Y}CH(CH_{3})_{2}
(d) -CH=CH (CH_{2})_{Y}CH_{3}
(e) -CH (OH)(CH_{2})_{Y}CH (CH_{3})CH_{2}CH_{3}, y
R^{3} a R^{9} representan substituyentes como se definen en una cualquiera de las siguientes i) e ii):
i) cuando R^{3}, R^{6} y R^{8} representan H,
R^{4} representa H, OH, NH_{2}, NHCOCH_{3} ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D):
22
R^{5} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (E) y (F):
23
R^{7} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D):
24
R^{9} representa H, CH_{3}, CH_{2}OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos siguientes (A') a (D'):
25
ii) cuando R^{3}, R^{6} y R^{7} representan H,
R^{4} representa H, OH, NH_{2}, NHCOCH_{3} ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D):
\vskip1.000000\baselineskip
26 
\vskip1.000000\baselineskip
R^{5} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos (E) y (F):
27
R^{8} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos siguientes (A) a (D):
\vskip1.000000\baselineskip
28
R^{9} representa H, CH_{3}, CH_{2}OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A') a (D'):
\vskip1.000000\baselineskip
29 
\vskip1.000000\baselineskip
o una sal o solvato del mismo, in vitro.
8. Un método como se ha reivindicado en la reivindicación 7, en donde las células son células tumorales.
9. Una célula tumoral ó célula infectada con un patógeno, en donde la célula puede obtenerse poniéndola en contacto con un compuesto de fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
30 
\vskip1.000000\baselineskip
en donde
R^{1} representa H ó OH,
X representa un número entero entre 7 y 27,
R^{2} representa un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes (a) a (e) (en donde Y representa un número entero entre 5 y 17):
(a) -CH_{2}(CH_{2})_{Y}CH_{3}
(b) -CH (OH)(CH_{2})_{Y}CH_{3}
(c) -CH (OH)(CH_{2})_{Y}CH(CH_{3})_{2}
(d) -CH=CH (CH_{2})_{Y}CH_{3}
(e) -CH (OH)(CH_{2})_{Y}CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3}, y
R^{3} a R^{9} representan substituyentes como se definen en una cualquiera de las siguientes i) e ii):
i) cuando R^{3}, R^{6} y R^{8} representan H,
\newpage
R^{4} representa H, OH, NH_{2}, NHCOCH_{3} ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D):
31
R^{5} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (E) y (F):
32
R^{7} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D):
\vskip1.000000\baselineskip
33 
\vskip1.000000\baselineskip
R^{9} representa H, CH_{3}, CH_{2}OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos siguientes (A') a (D'):
\vskip1.000000\baselineskip
34 
\vskip1.000000\baselineskip
ii) cuando R^{3}, R^{6} y R^{7} representan H,
R^{4} representa H, OH, NH_{2}, NHCOCH_{3} ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A) a (D):
35
R^{5} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos (E) y (F):
36
R^{8} representa OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los grupos siguientes (A) a (D):
\vskip1.000000\baselineskip
37 
\vskip1.000000\baselineskip
R^{9} representa H, CH_{3}, CH_{2}OH ó un substituyente seleccionado del grupo formado por los siguientes grupos (A') a (D'):
38
o una sal o solvato del mismo, in vitro.
10. Una célula como se ha reivindicado en la reivindicación 9, en donde la célula es una célula tumoral.
11. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de la célula como se ha reivindicado en la reivindicación 9, para emplear en el tratamiento de enfermedades asociadas con la célula.
12. Una composición farmacéutica para emplear en el tratamiento de tumores, la cual contiene una cantidad efectiva de la célula como se ha reivindicado en la reivindicación 9.
13. Empleo de la célula como se ha reivindicado en la reivindicación 9, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de enfermedades asociadas con la célula.
14. Empleo de la célula como se ha reivindicado en la reivindicación 10, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumores.
ES98943077T 1997-09-22 1998-09-22 Composicion que contiene alfa-glicosilceramids, para potenciar la inmunogenicidad. Expired - Lifetime ES2256955T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP9-257188 1997-09-22
JP25718897 1997-09-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2256955T3 true ES2256955T3 (es) 2006-07-16

Family

ID=17302909

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES98943077T Expired - Lifetime ES2256955T3 (es) 1997-09-22 1998-09-22 Composicion que contiene alfa-glicosilceramids, para potenciar la inmunogenicidad.

Country Status (11)

Country Link
US (1) US6555372B1 (es)
EP (1) EP1018548B1 (es)
KR (1) KR100734643B1 (es)
CN (1) CN100352918C (es)
AT (1) ATE316134T1 (es)
AU (1) AU749277B2 (es)
CA (1) CA2304378A1 (es)
DE (1) DE69833260T2 (es)
ES (1) ES2256955T3 (es)
TW (1) TW575420B (es)
WO (1) WO1999015627A1 (es)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001098317A2 (en) * 2000-06-22 2001-12-27 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Alpha-glycosylceramides for treating bacterial and fungal infections
EP1372668B1 (en) 2001-03-26 2011-12-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Method of attenuating reactions to skin irritants
EP1434859A2 (en) 2001-07-25 2004-07-07 New York University Use of glycosylceramides as adjuvants for vaccines against infections and cancer
EP1437358B1 (en) 2001-08-16 2006-10-18 Daiichi Asubio Pharma Co., Ltd. Novel glycolipid and remedial agent for autoimmune disease containing the same as active ingredient
US20040171522A1 (en) * 2003-02-27 2004-09-02 Yaron Ilan Regulation of immune responses by manipulation of intermediary metabolite levels
US7771726B2 (en) 2003-10-08 2010-08-10 New York University Use of synthetic glycolipids as universal adjuvants for vaccines against cancer and infectious diseases
WO2006042177A2 (en) * 2004-10-07 2006-04-20 Argos Therapeutics, Inc. Mature dendritic cell compositions and methods for culturing same
US8513008B2 (en) 2004-10-07 2013-08-20 Argos Therapeutics, Inc. Mature dendritic cell compositions and methods for culturing same
WO2006060117A2 (en) 2004-11-02 2006-06-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for inhibition of nkt cells
WO2006058243A2 (en) * 2004-11-24 2006-06-01 Yale University Leishmania antigens and related compositions and uses
US20070231344A1 (en) * 2005-10-28 2007-10-04 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Conjugate vaccines for non-proteinaceous antigens
US20100256346A1 (en) 2005-12-27 2010-10-07 Hirosuke Oku Anti-Tumor Agent and Immunostimulating Agent
EP2060252A1 (en) 2007-11-19 2009-05-20 Wittycell New formulation of galactosylceramide derivatives
WO2009119692A1 (ja) * 2008-03-25 2009-10-01 独立行政法人理化学研究所 新規糖脂質及びその用途
JP5095683B2 (ja) * 2009-07-06 2012-12-12 壽製薬株式会社 新規糖脂質誘導体及びこれを有効成分とする製剤
JP5025692B2 (ja) * 2009-07-06 2012-09-12 壽製薬株式会社 糖脂質誘導体の製造方法
CN102573802A (zh) 2009-08-12 2012-07-11 希格默伊德药业有限公司 包含聚合物基质和油相的免疫调节组合物
GB201212010D0 (en) 2012-07-05 2012-08-22 Sigmoid Pharma Ltd Formulations
CN104497065B (zh) * 2014-11-24 2017-10-24 浙江大学 α‑半乳糖神经酰胺新异构体及其用途
CN104497064B (zh) * 2014-11-24 2017-10-24 浙江大学 α‑半乳糖神经酰胺新异构体及其合成方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3806565A1 (de) * 1988-03-01 1989-09-14 Deutsches Krebsforsch Virusmodifizierte tumorvakzinen fuer die immuntherapie von tumormetastasen
JPH0559081A (ja) * 1991-08-29 1993-03-09 Kirin Brewery Co Ltd 新規スフインゴ糖脂質、その製造法および使用
TW261533B (es) * 1992-07-16 1995-11-01 Kirin Brewery
EP0694558B1 (en) 1993-04-15 1999-01-27 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Novel sphingoglycolipid and use thereof
US5858776A (en) * 1993-11-03 1999-01-12 Repligen Corporation Tumor cells with increased immunogenicity and uses therefor
TW555562B (en) 1996-12-27 2003-10-01 Kirin Brewery Method for activation of human antigen-presenting cells, activated human antigen-presenting cells and use thereof
JP3495740B2 (ja) 1997-04-10 2004-02-09 麒麟麦酒株式会社 α−グリコシルセラミドを含有するＮＫＴ細胞活性化剤

Also Published As

Publication number Publication date
TW575420B (en) 2004-02-11
CN1279713A (zh) 2001-01-10
DE69833260D1 (de) 2006-04-06
AU749277B2 (en) 2002-06-20
KR100734643B1 (ko) 2007-07-02
CA2304378A1 (en) 1999-04-01
AU9096098A (en) 1999-04-12
DE69833260T2 (de) 2006-09-28
CN100352918C (zh) 2007-12-05
ATE316134T1 (de) 2006-02-15
WO1999015627A1 (en) 1999-04-01
KR20010030649A (ko) 2001-04-16
EP1018548A4 (en) 2001-03-21
EP1018548B1 (en) 2006-01-18
EP1018548A1 (en) 2000-07-12
US6555372B1 (en) 2003-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2256955T3 (es) Composicion que contiene alfa-glicosilceramids, para potenciar la inmunogenicidad.
CN108290845B (zh) 嘧啶化合物
ES2318236T3 (es) Agentes activadores de celulas nkt que contienen alfa-glucosilceramidas.
JP6548579B2 (ja) コンジュゲート化合物
ES2791957T3 (es) Inmunomodulación mediante inhibidores de IAP
JPWO1998029534A1 (ja) ヒト抗原提示細胞の活性化法、活性化されたヒト抗原提示細胞およびその使用
HUP0004147A2 (hu) Amino-alkil-glükózamin-foszfát vegyületek és adjuvánsként, valamint immuneffektorként való alkalmazásuk
ES2397854T3 (es) Inmunoterapia para pacientes con inmunosupresión
CN104736550A (zh) 有机化合物
CN114040918A (zh) 皂苷缀合物及含其的疫苗或药物组合物
JP2011503034A (ja) 免疫反応の増加、及び抗原及び／又は薬物結合による標的化
EA016042B1 (ru) С-гликолипиды с улучшенным профилем th-1
BRPI0618050A2 (pt) uso de peptìdeo egfrviii e vacina antitumor em combinação com outros componentes para o tratamento de tumor
WO2004026318A1 (ja) α-グリコシルセラミドを有効成分とするＣ型肝炎ウイルス抑制剤
ES2221147T3 (es) Composiciones liofilizadas conteniendo glicoesfingolipidos.
JPWO1998034623A1 (ja) スフィンゴ糖脂質含有凍結乾燥組成物およびその製造法
JP2025072463A (ja) 動力学的に作用するアジュバントアンサンブル
ES2331025T3 (es) Hexosilceramidas como adyuvantes y sus usos en composiciones farmaceuticas.
JP2004131481A (ja) α−グリコシルセラミドを含有するＮＫＴ細胞活性化剤
US12564631B2 (en) Phytosphingosine derivatives as adjuvants in immune stimulation
JPWO1999015627A1 (ja) α‐グリコシルセラミドを含有する細胞免疫原性増強用組成物
WO2024125676A1 (es) Variantes sintéticas del gangliósido ngcgm3 y su uso en el tratamiento del cáncer
HK40064797A (en) Saponin conjugate and vaccine or pharmaceutical composition comprising the same
JPWO1998016235A1 (ja) 配糖体含有未梢血幹細胞増加剤
JP2002226377A (ja) 配糖体含有末梢血幹細胞増加剤