CA1065851A - Procede pour l'obtention du compose 17-alpha-ethinyl (5 alpha) 2-androstene 17 beta-ol a l'etat pur et applications therapeutiques du compose obtenu par ce procede - Google Patents

Abstract

Le composé 17.alpha.-éthinyl-(5.alpha.)-2-androstène-17-.beta.-ol est obtenu en soumettant un mélange de 17-céto (5.alpha.)-2-andros-tène et de 17-céto (5.alpha.)-3-androstène à l'action oxydante du réactif de Jones, en faisant passer le mélange réactionnel oxydé sur une colonne de chromatographie sur silice, en recueillant ensuite l'éluat benzénique de cette colonne puis en faisant réagir cet éluat avec l'acétylène au sein d'une solution de potassium dans l'alcool t-amylique. Le produit de la réaction est finallement recueilli par extraction et recristallisation. Ce produit trouve son application en thérapeutique humaine.

Description

~0658S1 ~ a pr~sente invention concerne~ au titre de produit industxiel nouveau, le composé 17~-~thinyl (5a) 2-androst~ne 17~-ol (et son acétate 17 ~) correspondant à la structure sui-vante:
OR
C CH
~ ~ R-H; R=Ac H
llétat pur, ainsi qu'un procédé permettant dlobtenir ce pro-duit ~ l'état pur, et les applicat1ons de ce produit en thé-rapeutique ~umaine.
Certains suteurs~ et notamment Mo HUF~MAN (brevet US N~ 2.996 524 et P. 3084 M), J.S. EDWARDS & A. BOWERS (Chemistry and Industry 1961, pp. 1962-63); G POMO~IS & al (Cancer Chemothera-py Reports, 1962 (sept.) 31-32), ont décrit un procédé permet-tant d'obtenir une substance ~ laquelle ils ont cru pouvoir attribuer la structure et la dénomination cbimique de 17 a-éthinyl (5 a) 2-androstène 17 ~-ol (et de so~ acétate) et qui possèderait des propriétés--stimulantes sur le système réticulo-endoth~lial -inhibitrices gonadiques, par suppression des gondanotrophines hypophysaires ~a Demanderesse a ~ait la découverte, surpren&nte, qu'en réalité cette ~ubstance, en raison mame de la natur~ du procédé en questlo~, n'est pas le composé chimique 17a-éthinyl (5a) 2-andro~tène 17~-ol, mais en ~ait un m~lange d'isomères - d'activités biologiques très in~gales, mais de polarité iden-tique, et de ce fait, impossibles à séparer par les méthodes chromatographiques usuelles.

A r ~ 1065851 La pr~sente invention r~ide, en premier lieu, en un mode de pr~paration qui permet r~ellement d'obtenir le com-pos~ 17~-éthinyl (5~) 2-androstène~ 17~-ol non contamin~ d'iso-mares.
Elle réside, en second lieu, en ce corps lui-mame9 en tant que produit industriel nouveau, obtenu ainsi pour la première fois ~ l'état pur.
Il a été, au surplus, découvert que les propriétés de ce corps sont di~férentes, voire m8me contradictoires, de celles initialement attribuées au mélange pr~cit~0 Dans ce mélange, outre le 17~-~thinyl (5~) 2-an-drost~ne, ~7~-ol, (qui sera désigné ci-après par l'abréviation "IE~TA-2"), on trouve l'isomère 17 a-~thinyl (5~) 3-andro~tène, 17~-olp en proportions ~on négligeables (ce composé sera dési-gné ci-après par l'abréviation "DE~A-3"): le mélange des 2 isomères tel que décrit par les auteurs précités, sera désign~
par l'abréviation "MIX"o : ~'invention réside également dans la démonstratio~
. de la supériorité biologique de l'isomère ~2sur son analogue et, par conséquent, dans l~intérêt supplémentaire qu'il y a à
obtenir le.produit.désigné, ~ tat pur.
- ~'invention concerne, enfin, l'utilisation théra-peutique du corps, tel qu'obtenu selon l'invention dans les domaines d~crits par llinvention.
~'invention va mainten~nt être décrite plus en détail en se référant ~ chacun des ob;ets précitésO
~ ~ A. Pré~aration du composé selon l'invention Ia polarité quasi identique des deux isomères delta_2 et del-ta-3 rend impossible la séparation de ces corps par les méthodes classiques de chromatographie et c'est pourquoi le mode de pré-paration indiqué par exemple dans le brevet US 2.996.524 conduit ~ inévitablement ~ un mélange d'isomèresO
~ . -2-' ~'invention repose ur la découverte de la grande sensibilit~ de l'isomère delta-3 ~is ~ vis du r~acti~ de JonesS
- contrastant en cels avec l'inertie de l'isombre delta-2 à
l'égard du mame réacti~ (qui est une solution d'anhydride - chromique dans l'acétone, en présence de H2S04; cf BODEN, K., B ILBRON? ~.N.JONES E~R~Ho ~ WEEDON, E.Journal-Chem. Soc.
1946:39).
~e procédé de préparation du corps delta-2 à l'état pur~ aelon la pr~sente invention, consiste donc dans sa premi~-re étape dans le traitement de la mati~re premi~re, qui est elle même un mélange d~isomares~ par le réactif de Jones; l'iso-- m~re delta-3 du 17 céto-(5-alpha) 2-androstène est o~ydé vrai-semblablement en diacide ou en la dialdéhgde correspondants et acquiert ainsi une polarité très differente de celle de l'iso-m~re de1ta-2; ceci permet de recueillir ce der~ier ~ l'état pratiquement pur, par chromatographie sur silice.
D~s lors, le delta-2, 17-céto (5 alpha)-2-androstè-ne pur, soumis dans une seconde étape à la réaction décrite l'exemple N~ 8 du brevet US 2.966.524 conduit au 17~-éthinyl (5 alpha)-2-androstène 17-019 mais ~ tat pur, qui constitue le produit selon l'inventionO
On donne ci-après un mode opératoire illustrant dans une premi~re étape~ selon l'invention~ la mise en oeuvre du processus de s~paration des isom~res 17-c~to (5 alpha) sndrostène-2 et -3~ puis dans une ~econde étape la préparation du prodult proprement dit et enfin, dans une 3ème étape, celle de son acétate, qui a l'avantage d'~tre plus actif lorsqu'il est utilis~ par ~oie orale .
EXEMP~E
Etape t: Séparation d'un mélan~e d'isomère~s_17-ceto (5 alpha)-androst~ne-2 et 3 "' 106585~
Dans un ballon de 1 litre muni d'une agitation magn~tique, on introduit 20 g du stéroide en solution dans 400 cc d'acétone.
~e mil1eu est refroidi ~ -20~ et on y introduit 60 cc de réacti~ de Jones, goutte à goutte. On laisse le ballon reve-nir ~ temp~rature ordinaire en agitant pendant 1 h. 15 mn. On ajoute ensuite 100 cc de méthanol et on agite pendant 15 mn.
~es sol~ants sont distillés et le résidu est repris par 700 cc d'eau. ~e précipité est essor~ et lav~ avec de l'eau~ puis dis~ous dans 500 cc de chlorure de méthyl~ne. ~a solution or-ganique est séchée au sulfate de soude et distillée. ~e rési-du (18,5 g) est purifié par chromatographie sur eolonne de si-lice. ~'~lution par le benz~ne fournit 11 g de dérivé ~2pur.
~'examen du spectre RMN (CDCl~, tétraméthyls~lane) de ce d~ri-montre les protons oléfinique~ en C2 et C3 sous ~orme d'un singulet élargi à 334 Hz (largeur à mi-hauteur 5 Hz) alors que dans le dérivé ~3 les protons oléfiniques apparaissent sous forme de 4 massifs entre 312 et 348 Xz.
Etape 2: PréParation du 17-alPha éthinyl (5 alpha)-2-andros-tène 17-bêta-ol exempt d'isomère delta-3 On dissout 1,2 g de potassium dans 30,5 ml d'alcool amyllque anhydre. Qn ajoute une solution de 1,1g de 2-androstbne-17-one pur, obtenue comme cela est indiqué à llétape 1 ci-dessu~, dans 40 ml de toluène anhydre et on fait passer de l'azote à travers le mélange afin d'éliminer l'air. ~a solution qui en résulte est agitée pendant 15 heures pendant qu'on fait passer de l'a-zote à traver~ le mélange afin d'éliminer l'air. ~a solution qui en r~sulte est agit~e pendant 15 heures tandis qu'on y fait passer un flux lent d'acétylène anhydre purifié. A la fin de ce laps de temps, on ajoute 300 ml d'eau glacéeO ~e pH est a~usté à 1 avec une solution aqueuse à 50~ d'Qcide chlorhydri-que. ~a solution qui en résulte est distillée afin d'éliminer toutes les matières organiques volatiles. Elle est ensuite ~ -4-'~ 1065851 re~rigérée ~ 0~c, extraite ~ l~éther et cet extrait est lavé
l'eau~ séch~ au sulfate de sodium et évaporé. Le résidu de 17 alpha-~thinyl (5 alpha)-2-androstène 17 bata ol est recris-tallisé dans llhèxaneO
Etape ~ : éParatiOn du 17 ~ acétate du 17 a-éthinyl (5~)

2-androstène 17 ~-ol Dans une solution de 600 mg de 17-éthinyl-2-androst~ne 17-~-ol, dans 10 cm' d'anhydride acétique, on aJoute 600 mg d'acide p-toluène sulfoniqueO Cn laisse reposer la solution ainsi obte-nue ~ 20~C pendant 18 ~eure~ ~ l'abri de l'air. Elle est ver-sée en~uite dans 200 cm3 d'eau glacée et le mélange e~t ré~ri-géré pendant 3 heures. On recueille sur filtre le précipité
d'acétate de 17 ~-éthinyl (5~) 2-androstène 17 ~-ol. Il est lavé à l'eau, puis aéché et recristallis~ dan~ du méthanol.
B, Caractéristiques du composé selon l'invention ~e produit obtenu à l'étape 2 ci-dessus se présente sous ~or-me de cristaux blancs en plaquettes fondant ~ 160-162~ (Kofler).
Ces caractéristiques sont ~ con~ronter avec celles du mé-lange obtenu au moyen du processus d~crit par les auteurs pré-¢~tés: suiv&nt la proportion plus ou moins grande de-l'isomère delta-3, le point de fusion mesuré dans les m~mes conditions 8~ élève~ variant entre 158~ et 168~~ se rapprochant ainsi du point de ~usion de l'isomère delta-3 pur, qui est de 198~-199~C (Kofler). De la même manière, l'acétate de l'isomère ~2 obtenu ~ l'étape 3 ci-des~us de présente sou~ forme de cristaux blancs ~ondant à 130~-131~C (Eo~ler).
Il est bien entendu que, dan~ toutes la présente descrip-tlon, on se réfère sous l'abréviation unique "D~A-2", indi~-iéremment au 17 ~-éthinyl (5a) 2-androstène, 17 ~-ol et ~ ~on - 30 17 ~ acétate.
. .
. . .

1~6585 aO ~
Sur le plan biologique et thérapeutique, 10 produit, selon l~invention, doit 8tre considéré comme nouveau dans la mesure où
a) la substance (ainsi ~ue son ester acétique), décrite ~ous la même dénomination dans le brevet US préci-t~, était en réalité un mélange pouvant contenir ~usqu'à
2~ do l'isom~re ~ , qui est de loin, le moins actif, et où
b) le composé, selon l!invention, est utile dans des domaines thérapeutiques inattendus, différents et même contrair~ de ceux qui lui ont été attribués par les travaux antérieurs précités~
- Ia demanderesse apporte iei une sélection dë travaux biolo-giques sur lesquels sont ~ondée~ les propriét~s thérapeuti-ques du composé selon l~invention.
I. ~e com~osé D~LqA-2, contrairement ~ ce qu'affirment les publications ant~rieures (qui concernent~ en fait le "NIX"), est un s imulant ~onadique possèdant donc dans le8 conditions déterminées et quoique par des voies dif-; férentes, un e~fet ciomiphène-like de stimulation de go-nadotrophines pituitaires.
Cette découverte est utile pour le traitement des trou-bl6s du fonctionnement ovarien ou testiculaire, y c~mpris certainee ~ormes de stérilité.
- ~e clomiph~ne, stimulant gonadotrope classique, utilisé
dans le traitement des troubles hypophysogonadiques, dont les ~térilit~s *éminines par anovulation, a été naturel-lement utilisé comme standard de r~érence dans plusieurs séries d'expérimentations destinées ~ rechercher l~acti-vit~ clomiphène-like du 17 ~-éthinyl, (5 Q) 2-androst~ne 17 ~ acétateO

i/ Chez la ratte adulte une dose appropriée de clomiphène injectée ~ un moment précis du cycle~ empache l'ovulation de se produire chez 100 p. cent des animaux (DOCKE J. Re-prod. ~ertility 1971~ 24 : 45-54).
~e tableau ci-après montre que le composé DE~TA-2 manifes-te dans cette méthodologie~ des effets qualitati*s analo-gues ~ ceux du clomiphène.
% d'animaux Nombre d~oeu~s ~AB~EAU I ~vulatoires ovaire o~aire total ~auche droit moyenne . .. . ~ ., 4 animaux 100% 5 ~ 9 5 à 9 13,5 t~moin l - .
clomiph~ne S-CO

3 mg/kg dose uni- O 0 O
que (4 animaux) . . . I . . . . , .
D~TA-2: 1 ,8mg/ . .
kg/; x 3 voie 40% 7 ~ 8 6 à 8 14~5 S.CO (5 animaux) . ~ .. . , ~E~A-2 : 5, 4mg/
kg/~ x 3 voie S.C. 60% 6 à 10 5 à 8 14 ~5 animaux) Cette premiare expérience, réalisée en fait ini-tialement dans un but de screenlng, a permis de constater outre la réalité de l~eifet clomiphène-like qualitatif, le fait que, du point de quanti-tati~ la dose de 3 jours x 1,8 mg/kg produit d~-j~ un effet maximal. ~a reprise de l~tude avec des in~ections uniques de DELTA-2 de seulement 1,8 mg et 5,4 mg/kg administrée ~ des moments dif-f~rents du cycles, a permis de constater que l~ ef-iicacité du DEL~A-2 se rapproche encore plus de celle du clomiph~ne, du double po1nt de vue qua---~,~
i --'' 1065851 litati~ et quantitati~, si le st~roide est adminis-tré en metestrus et en proestus:
TAB~AU II ¦ % d.~ovulation 8i inject~:
en metestrus en proestrus ¦)J~TA-2 ~ ,e~/4~ ¦ 25 ~ ¦ 80 i 5,4mg/kg ¦ 40 ~ 20 i .
i~/Chez la ratte imPubare, on peut déclencher llovulation ~ 10 chez 80 p. cent des animaux, en i~jectant une quantité
relativement faible (4 U. I.) de gonadotrophines (P~S)0 Dans cette méthodologie aus~i bien que le clomiph~ne, . que le DEL~A-2 ~ faible dose, pro~oquent une réduction . . du pourcentage des animaux ovulatoires:
~AB~EAU III
: .
~moins: 4 UI.2MS o.... 80% diovulatio . .4 UI.PMS +Clomiphène (3mg/
kg) ... 30% d'orulatio

4 UI.P~S DELTA-2(o,6 mg/
. kg ) ... 20% d'ovulatior 4 UI.PMS IDELTA-2(1,8 mg/
. kg ) o~100% d'ovulatlon .
~e mécanisme du phénom~ne est le suivant s le PMS pro-. voque la sécrétion par l'ovaire d'une quantité adé-quate d' estrogènes qui entra~nent la libération de la ~ gonadotrophine hypophysai~e ~H~ laquelle déclenche l'ovulation.
~e clomiphane, anti-estrogène, empêche les estrogènes secr~tés sous l'effet de la PMS, d'agir sur l~hypophy-~e: il n'y a pas de décharge de IH, donc pas llovula-tion.
. -8-1~6585~
~e DEL~A-2 n'est pas un anti-estrogène. ~h~oriquement donc9 l~effet anti-ovulatoire qu'il exerce ~ la ~ai-ble dose (0~6 mg/kg) ns peut 8~expliquer que par l~un des trois mécanismes suivants:
a) ~reinage-de la libération par l~hypophyse, de.la . gonadotrophine ~H;
b) inhibition~ au niveau de l'ovaire, de la r~ponse.
sécrétoire, à la sollicitation PMS . --¢) et/ou inhibition, toujours au niveau de l'ovaire, ~ 10 de la réponse ovulatoire, à l'~gard de la IH, - éventuellement libér~e après stimulation estrogèni-que.On notera qu'à la dose forte (1,8 mg/kg), le com-posé DELI~.-2 maintient~ voire même favorise l'ovula-tion~ ce en quoi il se comporte comme un libérateur de ~SH et de ~H, soit comme un libérateur de l'hormone hypothalamique LH-RH.
Or, en clinique humaine, le composé DE~IA-2 se Compor-te comme le ~H-RH, en majorant, de mani~re spectacu-. laire, la libération de FSH et de ~H, mame 1~ où
elle est excessive (maladie dé Kline~elter) et m~me la ou son excès est en rapport avec l'abRence généti-que des gonades (maladie de ~urner), . Une varlante de la m8me méthodoloeie, qui met en ~ oeuvre des doses plus forte~ de PMS (8 U.I.) permet ~ de con~irmer, dans le sens inverse, l~e~et clomi-phène-like du DE~TA-2 et de retenir comme étant le plus probable, le second des trois mécanismes théo-riques ~voqués ci dessus, à savoir l~inhibition au niYeau de l'ovaire, de la r~ponse sécr~toire à la sollicitation par la PMSo . ~e tableau ci-apr~s réun~t les résultats de 4 s~ries : d'expérie~ces .
' ' _g_ .
, - -'' 1065851 TABLEAU IV POURCENTAGE DE RATTES OVVLA-TOIRES
Résul- Nom- No~-njection SC lare 2ème 3ame 4ame tats bre bre unique Série Série Série Série cumu- d'a- moyen lés nimaux d'-- _ _ _ . oeufs TEMOINS
PMS 8 UI O O 25 14 9,5 21 # 1 0,75mg/kg _ 50 25 14 27 15 # 7 1,5 mg/kg _ 25 _ _ 25 4 3 10+CLOMI 3 mg/kg 20 O _ _ 11 3 6 mg/kg _ O _ _ O 4 O
...
~DEL- 0,6mg/kg O _ 75 43 37 16 5 . _ ___ _ 1,8mg/kg 20 _ 50 _ 30 10 8 _.................... .

5,4mg/kg O _ 50 _ 50 4 1,5 _ L'analogie est parfaite entre les deux corps.
Quant au mode d'action.
- le clomiphène, en tant qu'anti-estrogène, réduit l'effet inhibiteur des estrogènes à l'égard de la libération de la gonadotrophine LH, - le stéroide DELTA-2 empêche l'ovaire de sécréter la quantité d'estrogènes sollicitée par l'impor-tante stimulation FSH.
II. Le comPosé 17a-éthinYl (5~-2-androstène~ 17~-ol (sous forme d'acétate) est un inhibiteur qonadiaue direct, dans certaines circonstances, et contrairement a ce à quoi on Pourrait s'atten-dre selon les mécanismes physioloai~ues de rétroaction~ fee _back)L_l'effet qonado-inhibi-teur de DELTA-2 s'accompaane d'une inhibition des qonadotrophines pituitaires.

'~ 1065851 .
~'application pratique d~ ces ~ctivités concerne le traitement de certains tumeurs endocrines~ non seule-ment hypophyso-dépendantes (ce qui découlerait logique-ment des publications antérieures) aussi non hypophyso-dépendantes.
a. I~s effets ~onado-inhibiteurs directs de DE~A-2 co-existent avec le freinage de la ~onctlon gonadotro~e ~'autogreffe, chez la ratte,d'un fra~ment d'ovaire dans l'~piploon, sit8t après l'ovariectomiè bilatéra-le, entra~ne la dérivation hépatique des hormones 8~-nadiques et leur destruction dans cet organe. Il s'en-~uit une augmentation réactionnelle, intense et perma-nente, de la production des gonadotropines pituitaires I qui provoquent la prolifération tumorale du gref~on ovarien (les image~ hi~tologiques de l'hypophyse ainsi ~t~mulée sont caractéristiques)0 ~'introductionj dans ce modèle exp~rimental, d'une ~ubstance spéci~iquement hypophyso freinatrice, comme le méthallibure, a pour résultat l'arr~t du développe-ment du greffon et la disparition des aspects micros-copiques d'hyperstimulation au niveau de l'hypophyse (BER,A.Endokrinologie~ 1968~ 53: 62; ibid.1958,53:
! 237; Acta Endoorinologica 1972,70 : 167) ; ~'adjonction d'une quantité appropriée de gonadotro-phines hypophysaires exogènes (P.M.S.) entra~ne la reprise du déYeloppement tumoral qui avait été arraté
par le méthaliibure.
~'introductionj dans ce modèle expérimental, d'une substance "X" dont l'ef~et est gonado-inhibiteNr di-~0 rect, provoque l'involution du gref~on tumoral et empêche la reprise de son activité apr~s stimulation par P~M~So _ 1 1 -1~5851 ~e composé DELTA-2 a ét~ testé dans cette m~thodolo-gie. ~es résultats ~igurent au tableau ei-après:
. AB3EAU V
. . I .
. ~raitement Dose/;our Poids du ¦ ioids de .
(mg/kg ou gre~fon/mg llutérus (mg) U.I. animal) .
q~moins _ 217,4 + 16,4 58~6 + 8 ~re~é B .
_ . ' ~ ... .. _, _, .
~m~thallibure 120 22,6 + 2,4~** 29 + 4,5**
tO . ~_ _ . . ~ .
+m~thallibure . 120 ~36~5 + 2~5* 77 + 9~7 r PoM~ So ;~0 .. .
~ . ~ . . . .
~' 3 .136~7 + 10~7** 11~,5 + 14,9**
.' . ' . _ _. . ' ~2 6 62,4 1 9'9 139,4 + 10,4***
- .
m~thallibure 120 (1) . _ _ ................... 20 3 153~7 + 35j2 128 + 23~8 . ~méthallibure 120 . *
20P.M.S. +~ 2 20 669,7 + 9,8 124,8 + 9,7 (1) ~a compara~son est faite par rapport au lot:
"méthallibure ~ PoM~S.ll ~es conclusions suivantes peuvent ~tre tirées:
1~. DEL~A-2~ seul entra~ne une involution du gre~fon ovarien, statistiquement significative et proportionnelle aux ~ doses; .
20 DEL~A-2~ajouté au syst~me m~thallibure + P~M~So entraine également l'lnvol~tion statistiquement significative d~
greffon.

-- 106S8Sl Et ceci prouve que ce composé possède bien l'e~fet gonado inhibiteur direct~ revendiqu~ comme une dé-couverte inattendue, par la présente inve~tion.
Des con~irmations en sont dlailleurs fourDies par l~examen histologique du greffon ovarien et des hypo-physes des animaux de cette expérience.
Ce m~canisme antigonadique direct du composé DEL~A-?
¢oexiste de manière surprenante avec un ef~et d~inhi-ljition gonadotrope h;ypophysaire.
Ceci est un autre ~lément, nou eau et inattendu, de car c~est le contraire ce oe qu~on aurait pu attendre: selon les lois physiologi-~ues toute freination directe de la gonade déclenche ¦ automatiquement~ par ~eed-back positif~ la stimulation de la production et/ou libération des gonadotrophines h~rpoph;ysaire s O
b. R0cheroh9 d~aotl~it~s antitumorales directe~. par aes techniques dloncog~nèse expérimentale non ~e composé D~TA-2 s'est avéré très acti~ contre cer-taines tumeurs gonadiques expérimentales~ induites par des techniques de stimulation gonadotrophe hypo-physaire prolongés, analogues à celle d~crite ci-des-~us.
Après 45 jours de traitement par voie orale, le poids moyen de la tumeur testiculaire développée chez le rat après 1 an de latence était de 45 + 18,9 mg con-tré 2533,3 + 260S3 mg~ poids moyen de la tumeur ch~z le t~moin (p < 0~001) et la disparition totale en était constatee dan~ la moitié des cas traités, alors que tous les témoins conservai~nt leur tu~eurO
- ' 1065851 Cette différence entre les tumeurs du témoin et de l'a-nimal traité (poids et disparition) est si considéra-ble qu'elle s'expliquerait difficilement par le seul ef~et de freinage gonadotrope; elle suggère ~ortement l'intervention complémentaire d'un mécanisme anti-tumoral direct~ tel qu'il a été démontré lors des essais rapportés ci-dessus.
~'exi~tence de cet effet direct a d'ailleurs ~té prou-,~ .
~é sur des tumeurs transplantées ou inoculées~ ayant un caractère malin certain, et dont le développement n'exige pas l'intervention des gonadotrophines hypo-physairesO
~'un de-ces modèles est l'adénocarcinome mammaire de la souri~ (.A. RIVENZON & A,, MACRINEANU -Néoplasm~
1968 15 : 2) qui, sous l'action de DEL~A-2 a disparu chez ~,3% des animaux (présent chez tous les témoins) et a eu son poids moyen réduit à 436~66+ 147~23 mg (contre 1?13,33 + 1~9,19 mg chez les témoins;
' p< 0,001).
Un autre modale est une tumeur ovarienne ascitique, d'évolution suraigue qui~ chez la ratte~ tue générale-ment la totalité des témoins dans les 16 ~ours qui suivent l'inoculation intra-péritonéale (E. POGOSIAN~ &
al., Voprosi Onkologii~ 1962~ 8~ 11 29-26)o SOU8 ll effet du composé DE~A-2, il y a, au 16~me ~our~ 93,3% de survivants (contre 20~6% parmi les témoins) et après sacrifice des survivants traités au 27ème ~our, on a constaté la rareté des cellules tumo-rales dans le péritoine et de l'épiploon et l'absence de métastases ganglionnaires, de mame que la dispari-tion de la ~luorescence qui~ i~tense chez les témoins, at~este l'importance de l'acti~ité enzymatique liée à
l'oncogén.èse.
' ' , .

-' 10~5851 III. ~e composé 17~-éthinyl (5Q) 2-androstène, 17~-ol (SOU8 forme d'acétate) ~roduit, au niveau de l'utérus, des modi~ications morphologi~ues, qu~litatives et quan titative8~ différentes de celles entra~nées par le~
~ hormones sexuelles; elles sont susceptibles d'être ~ utilis~es en pratiquement comme une méthode contracep-tive d'un type nouveau. ~a dernière colonne du tableau V ci-dessus, montre que "DEL~A-2" qui ne possède pas des ~opriété~ estrogènes, entra~ne une augmentation du poids de l'Ntérus, nette, proportionnelle aux doses, ; et hautement significatiYe, chez des animaux dont les gre~ons ovariens, par ailleurs fortement inhib~s, ne peuvent en tout état de cause, libérer des estrogènes . qui n'échapperaient pas ~ l'inactivation hépatique.
I ~ette sti~ulation de l~utéru~ qui concerne à la ~ois~ . le muscle, le stroma et la muqueuse, n'e~t caractéris-tique ni des aspects fournis par les estro~enes, ni de ceux produits par les androg~es ou les progesta-. tifs; elle s9associe à des modifications histo-enzy-mologiques particulières. Il apparait donc A l'~viden-. ce que le composé DE~TA-2 exerce sur l'utérus de cer-tains animaux de laboratoire des e~ets qualitati~s 6usceptibles de modl~ier les conditions requises pour une fertilité normale.
IVo ~es proPriét~s anti-Parat~y~oidiennes de l'acetate de 17~-éthinYl (5~)_?-androstène, 17~-ol ~e manifestent aussi bien sur l'hyperplasie expérimentale des glande~
parathyroides qu9au niveau de l'osO
A ce dernier égard~ on sait que l'hormone parathyroi-dienne (PTH) produit la destrùction de llos avec, com-me conséquence, la libération d'une quantité propor-tionnelle de calcium. ~'effet et son éventuelle inhi--~5-~065851 bition peuvent ~tre mesurés dans un sys~me de cultu-re de tiRsu osseuxO (h'~L~9 H.B. & ~O WEIS~ J~ Exp.
MedO 1965, 121 551-560).
Parmi les corps susceptibles de s'oppo~er à l'effet de la PTH sur l'os, il y a certain~ estrog~nes (D.A~KINS & al JO EndocrO 1972, 54 : 107-117), le plus puissant d'entre eux ~ cet égard, l'éthinyl-estradiol, est utilisé comme standard de préférence .lor~qu'on ~eut évaluer l'activité anti-ostéolytique d'une autre substance.
La libération du calcium, par la vo~te cr~nienne de 80uris, SOU8 l'effet de 0,6 U de PTH, dans le milieu de culture de tis~u osseux e~t inhibée - de 137 p. ~ent + 2 p. cent par 200 ~g d'éthinyl-estradiol~ et - de 96 p. cent + 6 p. cent par 200 ~g de "DE~IA-2"
.
~'apparente supériorité du standard dlsparait lorsque l'on compare les posologies humaines usuelles des deux stéroides confrontés ici~
- ~0 à 100 JUg par jour, pour l'éthinyl-estradiol - 5 ~ 50 mg par ~our, pour DE~TA-2 En cli~ique humaine~ des dose~ quotidi ~nes de l'or-dre de 10 mg de "DE~A-2" ont permis dlatténuer la destruotion excessive de 1' 08, ce qui s'est traduit par la r~ductlon de la valeur du rapport entre cal-cium et créatinine urinaires à je~n (B. NORDIN & al) . et par la diminution du taux sérique du calcium~ en ~essous de 100 mg/l.

.

; VO e corps "DE~TA_?" exerce des ef~ets ~nti-sébor-rhéiques qui concernent essentiellement le~ paramè-.
tres histologi~ues: le produit agit donc davantage comme les anti-androgènes que comme les estrogenes.
Ceci est une autre propriété inattendue car "DE~TA-2"
est dépourvue de toute actiYité anti-androgène (comme de toute activité estrogane).
~a recherche antis~borrhéique a été ~aite selon la - méthode de D.J.E~ G (7.EmbryolO exp. Morph. 1957, 59 1 : 74 -82; chap. XIII, tome 4 pageB 200-219 in "Hormonal control of sebaceous glands in experimen-tal animals" , "Adva~ce~ in biology o~ the skin", it~ par N.Monta~na, RoA~ Ellis, Ao~ Sil~er 1964, j etc... ), dont le principe con8iste ~ provoquer~
chez le rat m~le adulte castré, un ap~ort androgéni-que d'inten~ité connue qui stimule les di~férents - paramètres cutanés, que la castration avait e~ondré 8S
- a- production de lipides cutanés b- proli~ération deR cellules dans les glandes sé-bacées, se traduisant par le nombre des images de mitose c- nombre de cellules spumeuses qui composent le8 glandes sebacées, déterminé par le nombre des noysux d- nombre des mitoses dans l~épithélium épidermique e- épaisseur de l'épithélium épidermique - ~e tableau ci-après résume les résultats obtenus dans l'une des expériences ef~ectuées.

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1065~35~
C. Supériorité biologique du composé "DELTA-2" sur son i80m~re "DE~TA-3" et~ par conséquent, sur le mélan-- ge des deux isomères ("MIX"~ tel~ qu'obtenus Par , ~'ovariectomie unilatérale produit, che~ la ratte ~eune, une hypertrophie compensatrice de l'ovaire restant, conséquence du ieed-back positi~ déclench~
par l'interventionO
~e traitement par une substance exclusivement anti-gonadotrope peut, au maximum, annuler la totalité
de l'hypertrophie réactionnelle: le poids de l'o-vaire restant est alors ramené au poids d!un ovaire de ratte témoin entière, ce qui revient ~ chifirer à 100% la valeur de l'inhibitio~. Une ~ubstance qui - abaisse le poids de l'ovaire restant, en dessous du poid~ d'un ovaire témoin (inhibition lOO~o) agit ne-ce~sairement, ne ~erait-ce qu'en partie, au niveau de l'ovaire; c'est ainsi que se comporte le stéroide DE~TA-2~ confirmant en cela que son activité s'exer-20 - ce aux deux pôles de l'axe hypophyso-gonadique.
Cette méthodologie a été choisie pour l'évaluation comparative des effets des isomères 2 et 3 car elle fournib des résultats particuli~rement repro-ductibles, homog~nes et quantifiablesO ~ors d'un premier travail, il a été possible dlétablir que "MIX", tel qu'il ré~lte de la méthode de prépara-tion indiquée dans la littérature précitée, produit, dès la dose 120 ,ug/animal/jour per os, une inhibi-tion de 121% de l'ovaire restant, qui est hautement ~0 signi~icative (p <0,001) alors que l'isomère ~3 à
l'état pur n'entra~ne ~usqu'à la dose de 240 ~g que des inhibit~ons inférieures ~ 50% et qui ne sont ~ ;
.~ ~

pas statistiquement significatives.
Un second travail a con~ronté, toujours per os, les effets de "MIX" et ceux de chacun des deux iso~ères 2 et ~ 3 administrés à l'état pur.
Le tableau ci-après en donne les résultats:
TABLEAU VII
_ TRAITEMENT POIDS MOYEN %
(~ug/animal/ du corps des cornes de d'inhibi-~our) tg) utérines l'ovaire tion (mg) (mg) - . .
Témoins 1/2 castrés 108,6 103,0 20,7 Té~oins entiers106,8 81,3 12,4** 100 _ Estradiol sous-cutané113,2 131,9 13,9* 81,9 , Mélange 120104,1 113,5 12,5 99,1 240 104,4 114,3 9,4*** 136,5 ~3 pur -110,0 122,1 16,2(ns) 54,9 240106,7 110,0 15,2(ns) 66,9 ~
~2 pur -98,3** 103,2 _ _ 153,2 240101,6 116,9 9,7*** 132,8 _ La supériorité du composé /\2 pur ressort à
l évidence; elle est confirmée par la moindre activité du mélange des isomères "MIX" et par 1'inactivité du composé ~3, aux doses utilisées.

D. A~plication de 17a-éthinYl (SQ! 2-andro~t~ne 17~_ ol (acétate) en th~raPeutique ~e 17~-éthinyl (5~) 2-androstène 17~-ol, particu-lièrement sous forme de 17~-acétate, tel qu~il est-décrit dans la présente invention est utile en théra-peutique dans les indications suivantes, cette liste n~étant pas limitatiYe:
a/troubles du ~onctionnement ovarien ou testiculaire , y compri6 certaine~ ~ormes de stérilité;
b/certaines tumeurs hormono-sensibles, de nature bé-nigne (adénome prostatique, adénome ou fibro-adéno-me mamm~ire) ou maligne (sein, o~aire~ utérus, tes-ticule, prostate etc.00) c/une modalité nouvelle de contraception médicamen-teuse par ~oie orale d/certains états de destruction osseuse (ostéoporose par exemple) liés ~ une hyperparathyroidie primi-tive ou ~econdaire;
e/l~hyperfonctionnement des glandes sébacées (sébor-rhée~ acné) ~e compos~ selon l~invention est~ es~entiellement mais non exclusivement~ destiné à l~administration par voie orale, sous l~une ~es iormes usuelles:
comprim~s, dragées~ capsules, pilules ou encore en un v~hicule liquide, sous forme de suspension ou solution dans l~huila d~olive, SOU8 capsules de gé-latine ou en sirop ou potion.
~es concentrations par unité de prise seront de pré-~érence: 5 mg, 10 mg, 25 mg.
~e composé peut également, mais accessoirement, être . ~1 .
. -' 10658Sl administr~ sous forme de supp~sitoires contenant.
5 et 10 mg, à utilisation rectale ou vaginale ou - sous forme de lotion ou spray contenant, dans un . . véhicule adéquat (alcool, essences volatiles) 10 mg/ml; ces formes seront reservées de préféren-ce au traitement de~ affectio~s de la peau. Ex-¢eptionnellement enfin, le composé pourra être ~ utilisé sous une forme in;ectable, pour la voie intramusculaire,-~ la concentration de 10 à 25 mg par ampoule incorporés dans un solvant lipidique ~ convenable (huile d'olive', alcool benzylique, hui-le de sésame etc...~
Quelle ~ue soit la voie d~administration choisie, les doses quotidiennes nécessaires se situent entre 10 et 50 mg, exceptionnellement plus, la quantité adéquate et la durée des traitements ~tant fonction de lla~fection ~ traiterO
' Ainsi, par e~emple;
D~ns certains troubles fonctionnels ovariens~ , arec ou sans ~térilité~ les traitements dureront 3 de 5 ~ 10 jours par cycle et la dose quotidienne moyenne sera de l'ordre de 40 mg~
- les traitements des tumeurs seront nécessaire-~ ment prolongés, ou même de durées indéterminées . dans les cas de tumeurs malignes, et les doses . quotidiennes seront habituellement de llordre ' de 30 à 50 mg.
- pour la contrsception (traitements cycliques) . et les hyperparathyro'idies (traitements très prolongés~ ininterrompus), les doses ne dépas- .
seront paB 15 ou 20 mg par jour; :
. .

~06S8Sl le traitement des manife~tations sébrorrhéiques sera de longue dur~e et la posologie quotidien-ne se situera entre 10 et 30 mg, sans distinc-tion de la voie d'administration choisie: orale, rectale ou percutanée, ~e composé 17a-éthinyl (5a) 2-androst~ne 17~-ol (acétate) peut 8tre également utile en médecine v~térinaire~ dans des indications~ sous des ~ormes pharmaeeutiques et ~ des posologies ana-loguesaux utilisations décrites ci-des~us pour la thérapeutiquè humaine.

Claims (6)

Les réalisations de l'invention, au sujet desquelles un droit exclusif de propriété ou de privilèges est revendiqué, sont définies comme il suit:

1. Procédé pour la préparation du 17.alpha.-éthinyl-(5.alpha.)-2-androstène-17.beta.-ol à l'état pur et son 17.beta.-acétate, caractérisé en ce que:
a) l'on soumet un mélange de 17-céto-(5.alpha.)-2-androstène et de 17-céto-(5.alpha.)-3-androstène à l'action oxydante du réactif de Jones, fait passer le mélange réactionnel oxydé sur une colonne de chromatographie sur silice en recueillant l'éluat benzénique de cette colonne, et fait réagir ensuite cet éluat avec l'acétylène au sein d'une solution de potassium dans l'alcool t-amylique en recueillant le produit de la réaction par extraction et recristallisation, et b) le cas échéant, soumet le produit obtenu à l'action de l'anhydride acétique pour obtenir le 17.beta.-acétate correspondant.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on soumet un mélange de 17-céto-(5.alpha.)-2 androstène et de 17-céto-(5.alpha.)-3-androstène à l'action oxydante du réactif de Jones, fait passer le mélange réactionnel oxyde sur une colonne de chromatographie sur silice en recueillant l'éluat benzénique de cette colonne, et fait réagir ensuite cet éluat avec l'acétylène au sein d'une solution de potassium dans l'alcool t-amylique en recueillant le produit de la réaction par extraction et recristallisation.

3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on soumet un mélange de 17-céto-(5.alpha.)-2-androstène et de 17-céto-(5.alpha.)-3-androstène à l'action oxydante du réactif de Jones, fait passer le mélange réactionnel oxyde sur une colonne de chromatographie sur silice en recueillant l'éluat benzénique de cette colonne, fait réagir cet éluat avec l'acétylène au sein d'une solution de potassium dans l'alcool t-amylique en recueillant le produit de la réaction par extraction et recristallisation, et soumet ensuite le produit obtenu à l'action de l'anhydride acétique pour obtenir le 17.beta.-acétate correspondant.

4. Le 17.alpha.-éthinyl-(5.alpha.)-2-androstène-17.beta.-ol à l'état pur et son 17.beta.-acétate, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 1, ou ses équivalents chimiques manifestes.

5. Le 17.alpha.-éthinyl-(5.alpha.)-2-androstène-17.beta.-ol à l'état pur, chaque fois qu'il est obtenu par un procédé selon la revendication 2, ou ses équivalents chimiques manifestes.

6. Le 17.beta.-acétate du 17.alpha.-éthinyl-(5.alpha.)-2-androstène-17.beta.-ol, chaque fois qu'il est obtenu par un procédé selon la revendication 3, ou ses équivalents chimiques manifestes.