CA2832158C

CA2832158C - Inhibiteur de tnf-.alpha.

Info

Publication number: CA2832158C
Application number: CA2832158A
Authority: CA
Inventors: Christophe BINACHON
Original assignee: Esprit Dethique SAS
Priority date: 2011-04-06
Filing date: 2012-04-02
Publication date: 2019-12-31
Anticipated expiration: 2032-04-02
Also published as: US20140065251A1; EP2694081A1; FR2973705B1; WO2012136634A1; CA2832158A1; FR2973705A1; US9987318B2

Abstract

Composition anti-inflammatoire par inhibition de sécrétion de cytokines, à base de décoction de feuilles de papayer et procédé d'obtention d'une telle composition comportant les étapes suivantes : a- réalisation d'une décoction à partir de feuilles de papayer, b- filtration de la décoction pour obtenir un filtrat, c- atomisation du filtrat Méthode de fabrication d'un remède anti-inflammatoire par inhibition de sécrétion de cytokines, ayant comme principe actif la composition, objet de l' invention.

Description

CA 02832158 2013-10-01 WO 2012/136634 PCT/EP2012/056001 1 INHIBITEUR DE INF-a. L'invention a trait à une composition, notamment une poudre d'extrait de feuilles de papayer, utilisée pour inhiber la sécrétion de cytokine, et plus particulièrement inhiber la sécrétion de INF-a. ARRIERE-PLAN DE L'INVENTION Face à une agression physique (blessure), chimique (brûlure) ou pathogène, l'organisme répond par une réaction inflammatoire. Les symptômes d'une réaction inflammatoire sont multiples et comprennent les rougeurs, saignements, fièvre, fatigue, perte d'appétit et douleurs. Ces mécanismes mettent en uvre des processus de défenses immunologiques locaux et systémiques qui font intervenir de nombreux types cellulaires (macrophages, lymphocytes, cellules épithéliales) et plusieurs voies biochimiques. Parmi les effecteurs de la réponse inflammatoire, les cytokines jouent un rôle particulièrement important. Elles interviennent dans les échanges intercellulaires et permettent la transmission des signaux liés à l'inflammation et la réaction de l'organisme face à l'agression. On distingue deux groupes de cytokines, les cytokines anti-inflammatoires (TGF-13 ; IL6) qui ont pour rôle de diminuer l'inflammation et les cytokines pro- inflammatoires (INF-a, IL6, ILU) qui interviennent dans l'amplification et la systémisation de la réponse de l'organisme. Pour lutter contre les symptômes liés à l'inflammation, notamment la douleur et la fièvre, on utilise principalement des substances anti-inflammatoires soit à base de glucocorticoïdes soit non stéroïdiens tels que l'aspirine. Ces substances anti-inflammatoires agissent notamment en inhibant la synthèse de prostaglandines, CA 02832158 2013-10-01 WO 2012/136634 PCT/EP2012/056001 2 médiateurs importants des phénomènes inflammatoires. Que les anti-inflammatoires soient stéroïdiens ou non, ils fragilisent la paroi stomacale, et sont responsables, même à faible dose, de maux d'estomac, ce qui est un effet secondaire parfois mal supporté. Ainsi, des alternatives à ces substances anti- inflammatoires agissant sur d'autres voies métaboliques sont recherchées. Depuis quelques années, des anticorps monoclonaux ou des protéines recombinantes bloquant les cytokines pro-inflammatoires ont été mis au point. Cependant leur production et leur administration restent très difficiles et très coûteuses. Ces nouveaux traitements sont donc réservés aux maladies inflammatoires chroniques. OBJET DE L'INVENTION Un but de l'invention est de proposer une composition anti-inflammatoire par inhibition de la sécrétion de cytokines, facile à produire et à administrer, permettant d'agir sur la réaction anti-inflammatoire et donc sur les symptômes de l'inflammation. RESUME DE L'INVENTION En vue de la réalisation de ce but, on propose selon l'invention une composition à base d'une décoction de feuilles de papayer utilisée comme agent anti- inflammatoire. La composition est de préférence utilisée comme agent inhibiteur de sécrétion de cytokines, en particulier de facteur INF-a. La composition de l'invention est efficace sur les réactions inflammatoires touchant les muqueuses, les conjonctives, ou la peau. La composition de l'invention peut être utilisée contre les réactions inflammatoires de tous organismes, en particulier celles de l'organisme humain, mais elle peut aussi être utilisée pour diminuer les réactions inflammatoires d'autres organismes tels que CA 02832158 2013-10-01 WO 2012/136634 PCT/EP2012/056001 3 les mammifères (par exemple, les chiens, chats, chevaux, etc...) L'application d'une composition, objet de l'invention, est particulièrement efficace comme agent anti-inflammatoire de la sphère ORL, regroupant le nez, la bouche, la gorge et les oreilles. Elle est particulièrement efficace pour réduire, limiter, ou freiner les réactions inflammatoires de la bouche telles que les gingivites ou les parodontites, ou du nez telles que les sinusites ou les rhinites. Avantageusement, la composition est conditionnée de telle façon qu'elle puisse être nébulisée ou instillée sur la zone enflammée. La composition objet de l'invention peut se présenter sous forme de poudre, de comprimé, ou sous forme de suspension dans une solution aqueuse. La présente invention a également pour objet un procédé d'obtention de ladite composition consistant en la réalisation d'une décoction à partir de feuilles de papayer, en la filtration de la décoction ainsi obtenue puis en l'atomisation du filtrat. Plus précisément, le procédé objet de l'invention comprend les étapes de sécher les feuilles de papayer, de les broyer. Le broyat est ensuite trempé dans un volume d'eau correspondant en masse, à 30 fois la masse du broyat. On réalise ensuite une décoction du mélange eau et broyat de feuilles de papayer séchées pendant au moins une heure à une température d'au moins 90 C, de préférence de 95 C. Il est ensuite possible de filtrer à 100 pm la décoction. Ce procédé de fabrication est particulièrement commode pour l'obtention d'une composition anti- inflammatoire efficace. Dans l'un des modes privilégiés de mise en uvre du procédé de l'invention, la décoction est ensuite atomisée dans un atomiseur à buses avec comme température d'entrée CA 02832158 2013-10-01 WO 2012/136634 PCT/EP2012/056001 4 300 C et comme température de sortie 105 C. Cette étape peut être précédée d'une étape de concentration ou évaporation sous vide du filtrat. La présente invention concerne aussi une méthode de fabrication d'un remède anti-inflammatoire, en particulier par inhibition de sécrétion de cytokines, ayant comme principe actif la composition, objet de l'invention. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Le papayer (Carica papaya L.) est une plante connue pour ces nombreux bienfaits nutritionnels et thérapeutiques apportés principalement par sa richesse en vitamine A et E et en enzymes protéolytiques. Ainsi, il est parfaitement connu que le fruit comme le latex contenu dans la sève de la plante présentent de fortes concentrations en papaïne et en chymopapaïne, qui sont des enzymes protéolytiques. De ce fait, les fruits et les feuilles fraîches sont couramment utilisés pour faciliter la digestion. Dans les médecines traditionnelles, les feuilles fraîches sont aussi parfois utilisées comme anti-inflammatoires locales. En effet, la papaïne et la chymopapaïne ont une activité fibrinolytique, ce qui permet de réduire l'oedème formé lors de certaines réactions inflammatoires. Ainsi, toutes les compositions à base de parties de papayer visent à conserver et à concentrer ces deux enzymes protéolytiques. La composition, objet de l'invention, est une décoction de feuilles de papayer utilisée comme agent anti- inflammatoire. La décoction réalisée à 95 C a pour effet de détruire les enzymes protéolytiques, les rendant ainsi inactives. De manière préférée, ladite composition est un extrait sec obtenu après une décoction de feuilles de papayer et est utilisée comme agent anti-inflammatoire. Les inventeurs ont constaté que l'application sur les régions enflammées de la composition de l'invention, à base d'extrait sec obtenu par décoction de feuilles de CA 02832158 2013-10-01 WO 2012/136634 PCT/EP2012/056001 papayer séchées, avait pour conséquence de freiner la propagation de l'inflammation et d'en limiter les symptômes, puis après plusieurs applications quotidiennes de réduire voire supprimer l'inflammation. 5 L'inflammation comprend l'ensemble des réactions inflammatoires de l'organisme en réponse à une agression extérieure mécanique comme par exemple une blessure ou un coup, chimique comme par exemple une brûlure, ou biologique comme par exemple une infection par des agents pathogènes telles qu'une infection provoquée par des bactéries, des virus ou des champignons. Les inventeurs ont montré que la composition objet de l'invention inhibait les sécrétions de cytokines pro- inflammatoires, de manière préférée les sécrétions de TNF- cx, et ainsi permettait d'atténuer voire de complètement résorber l'inflammation, et ce en l'absence d'enzymes protéolytiques telles que la papaïne ou la chymopapaïne. Ils ont également montré que l'application de cette composition augmentait le pH de la zone enflammée et limitait ainsi la prolifération bactérienne et donc l'inflammation en particulier dans la bouche. Par freiner , on entend que la propagation de l'inflammation est ralentie. On entend par limiter les réactions inflammatoires, le fait d' empêcher la propagation de l'inflammation à la fois dans le temps et dans l'étendue. On entend par atténuer ou réduire l'inflammation, le fait de réduire de manière apparente les manifestations ou symptômes de l'inflammation comme l'hypersensibilité de la zone enflammée, la douleur, les rougeurs et saignements dues à l'hypervascularisation. L'atténuation ou la réduction peuvent aller jusqu'à la complète disparition ou résorption des symptômes de l'inflammation. CA 02832158 2013-10-01 WO 2012/136634 PCT/EP2012/056001 6 De manière particulièrement efficace, la composition, objet de l'invention, peut être utilisée comme agent anti-inflammatoire dans les inflammations de la sphère ORL, c'est-à-dire les inflammations affectant la bouche, la gorge, le nez et les oreilles. En particulier, la présente composition permet de réduire, limiter ou freiner les réactions inflammatoires de la bouche telles que par exemple et de façon non limitative les gingivites, les parodontites, du nez telles que par exemple et de façon non limitative les rhinites ou les sinusites ou des oreilles telles que par exemple et de façon non limitative les otites. La composition peut également être utilisée dans les inflammations d'autres organes, parmi ceux-ci on peut citer de manière non limitative, les muqueuses, les conjonctives, l'oeil, la peau, les articulations, etc_ De manière préférée, la composition à base d'extrait sec de décoction de papayer, objet de l'invention, se présente sous forme de poudre. La poudre peut être utilisée telle quelle, mise en gélules ou être compactée pour réaliser des comprimés. L'homme du métier sera à même d'ajouter d'autres composés, tels que par exemple et de manière non limitative des vitamines, des antibiotiques, des arômes, des conservateurs, ou tout autre composé actif. De manière préférée, la poudre pourra être compactée pour réaliser des comprimés dispersibles (hydro ou orodispersibles), ce qui en facilite la prise. L'homme du métier sera à même de choisir l'agent désintégrant le plus adapté. A titre d'exemple, il pourra choisir parmi le glycolat d'amidon sodique, l'amidon de blé ou de maïs, l'amidon prégélatinisé. De manière tout à fait préférée, la poudre sera mise en suspension dans une solution aqueuse. Cette solution pourra ensuite être utilisée, par exemple comme bain de bouche ou gargarisme. L'homme du métier saura CA 02832158 2013-10-01 WO 2012/136634 PCT/EP2012/056001 7 adapter la concentration de la solution à l'usage désiré, en particulier s'il s'agit d'un traitement d'attaque ou d'un traitement de fond En fonction de la zone enflammée concernée, la composition pourra être conditionnée sous forme de pommade ou de gel, pour être directement appliquée sur la zone enflammée. Elle pourra également être conditionnée sous forme de spray, nébulisateur ou aérosol pour une meilleure application dans le nez, la bouche ou la gorge. La composition peut également être mise en solution afin d'être instillée dans les organes enflammés telles que l'oreille ou l'oeil. La présente invention concerne également un procédé d'obtention de la composition à base de décoction de feuilles de papayer utilisée comme agent anti- inflammatoire. Ledit procédé comporte les étapes suivantes : - réaliser une décoction à partir de feuilles de papayer, - filtrer la décoction, - atomiser le filtrat. La réalisation de la décoction comprend les étapes de faire sécher les feuilles de papayer, puis de les broyer. Le broyat ainsi obtenu est ensuite pesé puis trempé dans un volume d'eau équivalent en masse à 30 fois la masse de broyat. Le mélange eau et broyat de feuilles de papayer séchées est ensuite chauffé à une température d'au moins 90 C, de préférence 95 C pendant environ une heure. Cette étape correspond à l'étape de décoction. Une filtration à 100 pm est ensuite réalisée. L'étape de filtration peut être précédée d'une étape de centrifugation. Le surnageant sera alors filtré. La filtration peut être réalisée sous vide d'air afin d'en accélérer le processus. De manière privilégiée, le procédé selon l'invention comprend une étape de concentration du filtrat. L'étape de concentration CA 02832158 2013-10-01 WO 2012/136634 PCT/EP2012/056001 8 peut être réalisée sous vide jusqu'à obtenir une concentration de 20% à 30% supérieure par rapport au filtrat. Il est possible après cette étape d'ajouter un support inerte permettant l'adsorption de la composition, objet de l'invention. De manière non limitative, ce support peut être constitué par de la pierre ponce, de l'argile, de la gomme arabique, des polysaccharides en fonction des applications envisagées et du mode d'administration correspondant. Le support est de préférence constitué de grains enrobés par la composition de l'invention. Le filtrat, le filtrat concentré ou le filtrat additionné est ensuite atomisé dans un évaporateur à buses avec une température d'entrée comprise entre 200 C et 300 C et comme température de sortie une température maximale de 105 C. De manière équivalente, cette étape d'atomisation peut être réalisée dans un évaporateur rotatif à haute vitesse avec des températures d'entrée et de sortie identiques. Si la composition n'est pas destinée à être utilisée dans les jours qui suivent sa fabrication, il est nécessaire de la stériliser par exemple par chauffage et notamment pasteurisation. La présente invention concerne enfin une méthode de fabrication d'un remède anti-inflammatoire, en particulier par inhibition de sécrétion de cytokines, ayant comme principe actif la composition, objet de l'invention. EXEMPLES 1-Obtention de la composition à base de décoction de feuilles de papayer utilisée comme agent anti- inflammatoire. CA 02832158 2013-10-01 WO 2012/136634 PCT/EP2012/056001 9 On fait tremper 5 kg de feuilles de papayer séchées et broyées dans 150 L d'eau. Cette solution est ensuite chauffée pendant 1 heure à 95 C puis filtrée à 100 pm. Le filtrat ainsi obtenu est concentré afin d'obtenir une teneur en matière sèche comprise entre 25 et 30% puis atomisé dans un évaporateur à buses avec comme température d'entrée 300 C et comme température de sortie 105 C. On obtient un peu plus d'un kilogramme de la composition objet de l'invention. 2- Mesure de l'activité anti-inflammatoire par inhibition de la sécrétion de TNF-a L'activité anti-inflammatoire de la composition (ci-après appelée G1B) ainsi obtenue, est mesurée sur des cellules d'origine humaine THP-1 issues d'une leucémie monocytaire aigüe. Les cellules THP-1 sont ensemencées à forte densité sur des microplaques de culture en présence d'une gamme de concentration de la composition objet de l'invention (2 - 1 - 0,5 - 0,25 - 0,125 - 0,0625 - 0,0313 mg/ml) et placées en incubateur à 37 C et sous 5% de CO2. Après une nuit d'incubation, les cellules THP-1 sont stimulées par addition de LPS à 5 pg/ml final. Après 4 heures d'incubation, le surnageant est récupéré et la quantité de TNF-a qui s'y trouve est dosée par un test ELISA. Les résultats sont exprimés en % d'inhibition par rapport au contrôle non traité et sont résumés dans le tableau 1. Tableau 1 : pourcentage d'inhibition de la sécrétion de TNF-a par les cellules THP-1 stimulées au LPS en fonction de la concentration de G1B Concentration en G1B Pourcentage de INF-a sécrété (mg/mL) par rapport au contrôle Contrôle (sans G1B) 100 CA 02832158 2013-10-01 WO 2012/136634 PCT/EP2012/056001 0,0313 90 0,0625 74 0,125 49 0,25 22 0,5 6 1 3 2 4 Une forte inhibition de la sécrétion de TNF-a par les cellules THP-1 stimulées au LPS par la composition objet de l'invention est observée. L'inhibition est dose- 5 dépendante et est décelable dès la dose de 0,03 mg/ml. Elle atteint 50% à la dose de 0,125 mg/ml. Lorsque la concentration en composition objet de l'invention est de 0,5 mg/ml, l'inhibition de la sécrétion de TNF-a est quasi- totale. 10 Un test de viabilité cellulaire MIT est réalisé sur les cellules correspondantes afin de valider les résultats. Les analyses confirment la viabilité des cellules pour l'ensemble des conditions expérimentales. 3- Mesure de l'activité anti-inflammatoire de la composition objet de l'invention sur une gingivite On réalise une solution de bain de bouche composée d'une pincée de poudre obtenue dans l'exemple 1 dans un verre d'eau. Le pH mesuré dans la bouche avant le traitement est inférieur à 5. Le patient atteint de gingivite procède à des bains de bouche quotidiens avec la solution aqueuse ainsi obtenue. Après ce traitement, le pH de la bouche mesuré est supérieur à 5. CA 02832158 2013-10-01 WO 2012/136634 PCT/EP2012/056001 11 On constate une réduction significative de l'indice de saignement au niveau gingival. Les saignements disparaissent au bout de deux - trois jours. 4- Mesure de l'activité anti-inflammatoire de la composition objet de l'invention sur une rhinite La composition objet de l'invention est inhalée soit directement soit dispersée dans les narines à l'aide d'un pulvérisateur à raison de deux pulvérisations par jour. Après quelques minutes, l'inflammation est sensiblement réduite. Bien entendu, l'invention n'est pas limitée à ce qui vient d'être décrit, mais au contraire englobe toute variante entrant dans le cadre défini par les revendications.

Claims

12 REVENDICATIONS 1. Utilisation d'une composition à base de décoction de feuilles de papayer, ladite décoction étant réalisée à une température d'au moins 95.degree.C, pour préparer un agent anti- inflammatoire destiné à (i) inhiber la sécrétion du facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-.alpha.); (ii) augmenter le pH au moins dans une zone enflammée; (iii) réduire, limiter ou freiner une inflammation de la sphère ORL, regroupant le nez, la bouche, la gorge et les oreilles; (iv) réduire, limiter, ou freiner, une réaction inflammatoire provoquée par une infection de la bouche; (v) réduire, limiter, ou freiner, une réaction inflammatoire provoquée par une infection du nez; (vi) réduire, limiter, ou freiner, une réaction inflammatoire de l'oeil; ou (vii) n'importe quelle combinaison de (i) à (vi).

2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle l'agent anti-inflammatoire est destiné à inhiber la sécrétion du TNF-.alpha..

3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle l'agent anti-inflammatoire est destiné à augmenter le pH au moins dans une zone enflammée.

4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle l'agent anti-inflammatoire est destiné à réduire, limiter ou freiner une inflammation de la sphère ORL, regroupant le nez, la bouche, la gorge et les oreilles.

5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle l'agent anti-inflammatoire est destiné à réduire, limiter, ou freiner, une réaction inflammatoire provoquée par une infection de la bouche.

6. Utilisation selon la revendication 5, l'infection de la bouche étant gingivite ou parodontite.

7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle l'agent anti-inflammatoire est destiné à réduire, limiter, ou freiner, une réaction inflammatoire provoquée par une infection du nez.

8. Utilisation selon la revendication 7, l'infection du nez étant rhinite ou sinusite. 13

9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle l'agent anti-inflammatoire est destiné à réduire, limiter, ou freiner, une réaction inflammatoire de

10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, la composition étant à base d'un extrait sec de la décoction.

11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, la composition étant sous forme d'une poudre.

12. Utilisation selon la revendication 11, dans laquelle la poudre est en suspension dans une solution aqueuse.

13. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, la composition étant conditionnée sous forme de comprimés.

14. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, la composition étant conditionnée pour être nébulisée.

15. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, la composition étant conditionnée pour être instillée.

16. Utilisation d'une composition à base de décoction de feuilles de papayer, ladite décoction étant réalisée à une température d'au moins 95.degree.C, pour préparer un agent inhibiteur de sécrétion du facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-.alpha.) destiné à réduire, limiter ou freiner une réaction inflammatoire provoquée par une infection de la bouche.

17. Utilisation selon la revendication 16, l'infection de la bouche étant gingivite ou parodontite.

18. Utilisation d'une composition à base de décoction de feuilles de papayer, ladite décoction étant réalisée à une température d'au moins 95.degree.C, pour préparer un agent inhibiteur de sécrétion du facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-.alpha.) destiné à réduire, limiter ou freiner une réaction inflammatoire provoquée par une infection du nez.

19. Utilisation selon la revendication 18, l'infection du nez étant rhinite ou sinusite.

20. Utilisation d'une composition à base de décoction de feuilles de papayer, ladite décoction étant réalisée à une température d'au moins 95.degree.C, pour préparer un agent inhibiteur de sécrétion du facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-.alpha.) destiné à réduire, limiter ou freiner une réaction inflammatoire de 14

21. Procédé d'obtention d'une composition pour préparer un agent anti-inflammatoire destiné à inhiber la sécrétion du facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-.alpha.), le procédé comprenant les étapes suivantes : a-réalisation d'une décoction à partir de feuilles de papayer comprenant: - séchage des feuilles de papayer, - broyage des feuilles de papayer, - trempage d'une poudre de feuilles de papayer séchées dans un volume d'eau correspondant en masse à 30 fois la masse de poudre, et - chauffage à une température d'au moins 95.degree.C pendant au moins 1 heure; b-filtration de la décoction pour obtenir un filtrat, et c-atomisation du filtrat.

22. Procédé selon la revendication 21, dans lequel la filtration est réalisée à 100 .mu.m.

23. Procédé selon la revendication 21 ou 22, comportant préalablement à l'atomisation une étape de concentration ou évaporation sous vide du filtrat pendant un temps prédéterminé et dans lequel l'atomisation de la décoction est effectuée dans un atomiseur avec comme température maximale de sortie 105.degree.C environ.

24. Méthode de fabrication d'un remède anti-inflammatoire, par inhibition de sécrétion du facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-.alpha.), comprenant les étapes de : - réaliser une décoction à une température d'au moins 95.degree.C à partir de feuilles de papayer séchées et broyées, - filtrer la décoction pour obtenir un filtrat, - atomiser le filtrat, et - conditionner la poudre obtenue.

25. Utilisation selon la revendication 3, la composition étant conditionnée pour être nébulisée sur la zone enflammée.

26. Utilisation selon la revendication 3, la composition étant conditionnée pour être Instillée sur la zone enflammée.