CH131281A - Verfahren zur Reindarstellung von spezifischem Diphterie-Pseudoglobulin aus Blutserum, sowie aus Exsudaten und Transsudaten erkrankter Individuen. - Google Patents

Description

      Verfahret    zur     Reindarstellung    von     spezifischem        Diphtlierie-Pseudoglobulin    aus Blut  serum, sowie aus     Exsndaten    und     Transsudaten    erkrankter Individuen.    Es ist bekannt, dass sich im Blutserum  von     Patienten    nach dem Überstehen einer  Infektionskrankheit nicht unwesentliche  Mengen von spezifischen Immunstoffen vor  finden.

   Aus dieser Tatsache wurde eine  praktische Folgerung dadurch gezogen, dass  man das Blutserum von Individuen nach  überstandener Krankheit, also sogenanntes       Rekonvaleszentenserum,    als Schutzmittel ge  gen die betreffende     Krankheit    bei     gesunden     und als Heilmittel bei an derselben Krank  heit erkrankten Individuen verwandte.

   Es  ist fernerhin bekannt, dass im Blutserum von  Individuen, welche an einer Infektions  krankheit leiden oder überhaupt der Ein  wirkung von Antigenen unterliegen, Stoffe  enthalten sind, welche entweder die Infek  tion auf andere Individuen zu übertragen  befähigt sind, oder welche zum mindesten  bei gesunden Individuen     K'ranli-heitserschei-          nungen    derselben Art auszulösen vermögen.  Im ersten Falle handelt es sich um belebte    Stoffe, also unmittelbar um Krankheits  erreger (Bakterien oder andere Virusarten)  im letzteren Falle um     sogenannte    Toxine,  welche im Blute und in dem übrigen Säfte  strom erkrankter Individuen zu kreisen  pflegen.

   Man weiss auch, dass die gleichen  Stoffe sich in pathologischen Ergüssen,  nämlich in     Exsudaten    und     Transsudaten,     vorfinden, die sich infolge von Infektions  krankheiten in vielen Fällen in den Körper  höhlen erkrankter Individuen ansammeln. Es  wurde nun die Beobachtung gemacht, dass  die Menge von Antikörpern und Antigenen  in derartigen pathologischen Ergüssen im  allgemeinen grösser ist als die Menge an die  sen spezifischen Stoffen im Blutserum der  gleichen     Patienten.     



  Es ist verständlich, dass die gleich  zeitige Anwesenheit von lebenden Erregern  und von unbelebten Antigenen (Toxinen)  neben den eigentlichen Immunstoffen die  Anwendung des Blutserums und ebenso die           Anwendung    von Ei     xsudaten    und     Trans-          sudaten    als Schutz- und Heilmittel bei an       dern    Individuen sehr beträchtlich erschwert,  ja sogar in vielen Fällen vollkommen un  möglich macht, da mit ihrer Anwendung  stets die Gefahr der krankmachenden Wir  kung verbunden sein muss.  



  Es wurde nun gefunden, dass eine Rein  darstellung von spezifischem     Diphtherie-          Pseudoglobulin    aus     Blutserum,    sowie aus       Exsudaten    und     Transsudaten    erkrankter In  dividuen dadurch ermöglicht ist, dass nach  der durch     elektroosmotische    Behandlung und  Filtrieren erfolgten Abtrennung des     Euglo-          bulins    und der in diesem enthaltenen Anti  gene das Pseudoglobulin aus der vom  Niederschlage befreiten Lösung durch Fäl  lung mit     Neutralsalzen    abgetrennt,

   der  erhaltene Niederschlag in Wasser gelöst  und diese Lösung auf     elektroosmotischeni     Wege gereinigt wird.  



  Zur Durchführung dieses Verfahrens  verfährt man beispielsweise folgendermassen:  Die betreffenden Flüssigkeiten werden  zunächst durch Zentrifugieren oder Filtrieren  von den in ihnen enthaltenen festen Bestand  teilen getrennt. Hierauf werden dieselben in  den Mittelraum eines     elektroosmotischen          Dreizellenapparates    gebracht, dessen     katho-          disches        Diaphragma    aus Futtertuch (dicht  gewebtes Segeltuch), während das     anodische          Diaphragma    aus Chromgelatine. auf Wolle  oder     Chinonleder    besteht.

   Durch die     elektro-          osmotische    Behandlung entzieht man den  betreffenden Flüssigkeiten zunächst alle  Elektrolyte, wodurch das unlösliche Globu  lin, nämlich das     Euglobulin,    im     isoelektri-          se.hen    Punkt zur     Abscheidung    kommt. Mit  diesem     Euglobulin    werden alle Antigene und  alle in den     Exsudaten    ursprünglich vorhan  denen Krankheitserreger zur     Abscheidung     gebracht.

   Man trennt dann in der salzfreien  Flüssigkeit den Bodensatz, also das     Eu-          globulin,    von den flüssigen Bestandteilen  durch Filtrieren oder Zentrifugieren. Letz  tere enthalten nur noch Pseudoglobulin und  Albumin. Die durch das Filtrieren oder  Zentrifugieren erhaltene völlig klare Flüs-         sigkeit    wird nach bekannten Methoden einer  Salzfällung unterworfen, durch welche eine  Trennung von Albumin und Pseudoglobulin  herbeigeführt werden kann. Der erhaltene,  aus Pseudoglobulin bestehende Niederschlag  wird hierauf in Wasser gelöst und wiederum  der Einwirkung des elektrischen     Stromes     in dem oben beschriebenen     Dreizellenapparat     unterworfen.

   Man erhält hierbei eine voll  kommen klare, salzfreie Flüssigkeit, welche  im chemischen Sinne nur Pseudoglobulin  in Lösung und damit verbunden spezifische  Immunstoffe in reichlicher Menge enthält.    <I>Ausführungsbeispiel:</I>  In dem Blutserum von     Diphtherie-Rekon-          valeszenten    oder von mit     Dipththerie-Toxinen     behandelten Tieren finden sich grosse     Mengen     von Antikörpern.

   Zur     Reindarstellung        der     diese Antikörper beinhaltenden     Pse        udo-          globulinfraktion    des gesamten     Serumeiweisses     wird folgenderweise vorgegangen: 3 Liter  Blutserum werden in den     Mittefraum    eines       Dreizellenappa.rates    gebracht und der Ein  wirkung des elektrischen Stromes unter  worfen. Die Spannung beträgt     anfänglieli          .nur    20 bis 30 Volt, während die Strom  stärke zirka. 10 bis 12     Amp..    beträgt.

   Inner  halb von etwa zwei Stunden sinkt die       Stromstärke    auf 0,5 bis 0,2     Amp.,    während  die Spannung auf 220 Volt ansteigt. In  der Flüssigkeit scheidet sich nunmehr, und  zwar bei einer     Wasserstoffionenkonzen-          tration    von etwa 6,4     p$.,    ein flockiger Nieder  schlag ab, welcher mit Hilfe der Zentrifuge  gesammelt wird.  



  Die vom Bodensatz befreite, völlig klare  Flüssigkeit wird mit kristallinischem Mag  <B>'0</B>  gesättigt oder mit so viel  gesättigter     Ammoniumsulfatlösung    versetzt,  dass alle Pseudoglobuline abgeschieden wer  den. In beiden Fällen erhält man einen  reichlichen Niederschlag, welcher mit Hilfe  der Zentrifuge oder durch Filtration von  der     überstehenden    Lösung getrennt werden  kann. Der Niederschlag wird in wenig  Wasser gelöst und wird zur Beseitigung  der     überschüssigen        Schwefelsäure    in be-           kannter    Weise mit     Bariumacetat    versetzt  und vom abgeschiedenen     Bariumsulfat    ab  filtriert.

   Die klare Lösung wird dann er  ueut in dem oben beschriebenen Dreizellen  apparat der Elektroosmose unterworfen.  Man erhält eine völlig klare Flüssigkeit,  welche gegebenenfalls im Vakuum unter  Vermeidung hoher Temperaturen konzen  triert oder zur Trockne eingedampft werden kann. Aus den     -angewandten    3 Litern  Blutserum     erhält    man im Durchschnitt       (1,5        -r        Euglobulin    und etwa 1     gr    trockenes       Paraglobulin,    welches zum Gebrauch als  Heilmittel     gegen    Diphtherie in physiolo  gischer     Kochsalzlösung    aufzulösen ist.

Claims (1)

1. . PATENTANSPRUCH: Verfahren zur Reindarstellung von spe zifischem Diphtherie-Pseudoglobulin aus Blutserum, sowie aus Exsudaten uncl Trans sudaten erkrankter und behandelter Indi viduen, dadurch gekennzeichnet, class nach der durch elektroosmotische Behandlung und Filtrieren erfolgten Abtrennung des Euglobulins und der in diesem enthaltenen Antigene das Pseudoglobulin aus der vom Niederschlag befreiten Lösung durch Fäl lung mit Neutralsalzen abgeschieden,

   der erhaltene Niederschlag in Wasser gelöst, und diese Lösung auf elektroosmotischem Wege gereinigt wird.