Procédé de préparation d'acide Nl -nitrosoptéroylg1utamique. La présente invention a. pour objet un procédé de préparation d'une nouvelle qub.s- tance, L'acide Nlo-nitrosoptér-oylglutamiqtie avant la formule suivante:
EMI0001.0006
Ce procédé est caractérisé en ce qu'on fait réagir (le l'acide ptéroylglutarnique avec de l'acide nitreux dans un solvant aqueux.
L'acide ptéroylglutairrique utilisé pour réaliser la présente invention peut se prépa rer suivant de nombreuses méthodes décrites dans la littérature chimique, par exemple par réaction entre de la 2,-1,.i-triamiiio-6-llydroxy- pyrimidine, un dilialopropionaldéhyde et de l'acide p-arninobelrzoylglutamiqtle.
La réaction entre cet, acide et l'acide ni- ireux a lien dans de larges limites d'acidité. I1 est préférable d'utiliser pour acidifier le milieu réactionnel un acide minéral. tel que l'acide eblorliyclrique on l'acide sulfurique â crie concentration telle que l'acide ptéroyl- glutamique soit entièrement. en solution à 0 C environ.
La réaction est d'ordinaire effectuée par addition -i 1 < i solution acide clé l'acide ptéroylmltitamiqne d'un équivalent d'acide nitreux,' par exemple sous forme d'un sel de métal alcalin, de métal alcalino-terreux ou d'ammonium.
La réaction est. effectuée de préférence à, une température comprise entre -10 C et + 10 C, par exemple entre - 5 C et + 5 C.
La réaction prend habituellement fin après quelques minutes. On peut constater la fin de la réaction au moyen de pâte ou papier à l'iodure et à l'amidon. Le composé Nlo-nitroso est moins soluble que le composé initial et précipite le plus souvent directement de la solution froide.
L'acide Nle-nitrosoptéroylglutamique pos sède sensiblement la même activité biologique que l'acide ptéroylglutamique. Il constitue un agent précieux pour le traitement de certaines maladies du système circulatoire et pour la nutrition.
Des réalisations du procédé suivant l'in vention sont décrites dans les exemples sui- vants. Sauf indications contraires, les parties désignent des parties en poids.
Exemple <I>1:</I> Une solution de 5,069 parties d'acide ptéroylglutamique (présentant une teneur de 901/o environ et contenant 0,771/o d'acide p-aminobenzoy lglutamique) dans de l'acide chlorhydrique 2 N est refroidie entre<B>-50</B> et + 5 C et traitée par 107,8 parties en volume d'une solution de nitrite de sodium 0,1 N, la fin de la réaction étant déterminée au moyen d'amidon et d'iodure de potassium.
On laisse reposer la solution pendant quelque temps à 0 C ou à une température inférieure, le pré cipité d'acide Nlo-nitrosoptéroylglutamique formé étant ensuite isolé par filtrage et séché. Le produit présente une réaction fortement positive lorsqu'il est soumis à l'épreuve Lie- bermann. Le produit est. équivalent à l'acide ptéroylglutaniique quant à l'activité exercée sur la, croissance de S, faecalis R. et. la crois sance d'organismes plus évolués tels que les poussins.
<I>Exemple</I> Une solution de 5,<B>2</B>93 parties d'acide ptéroy lglutamique dans 2000 parties en vo lume d'acide chlorhydrique 2,5 N est refroidie au-dessous de 5 C et traitée par 114,8 parties en volume d'une solution de nitrite de sodium 0,1. N. On précipite l'acide Nlo-nitrosoptéroyl- glutamique par refroidissement entre -2 et 0 C pendant 40 minutes. Exemple <I>3:</I> On opère suivant les indications de l'exem ple 1, à l'exception près qu'on utilise de l'acide chlorhydrique 6 N au lieu d'acide chlorhydri que ? N.
Le poids d'acide ptéroylglutaniique est. de 5,999 parties, la quantité de solution de nitrite de sodium 0,1 N étant. de 1.25,6 par ties en volume. Le degré de pureté de l'acide ptéroylglutamique est donc de 92,4%.
Exemple <I>-1:</I> Une solution de 4,41 parties d'acide ptéroy I- grlutamique dans 58,5 parties d'acide ehlor- hydrique concentré est refroidie au-dessous de 5 C par addition de glace ainsi que par refroidissement externe. On ajoute graduelle ment une solution de 0,7 partie de nitrite de sodium clans 10 parties d'eau à. une tempé rature inférieure à 5 C. Le solide blanc qui commence à. précipiter pendant l'addition du nitrite est isolé par filtrage après refroidisse ment pendant un court instant. On obtient 3,2 parties de produit sec.
On purifie ce pro duit en dissolvant 1. partie dans 25 parties en volume d'une solution d'hydroxyde de sodium 5 N et en clarifiant la solution au moyen de charbon activé. Le sel sodique cris tallise lorsqu'on laisse reposer la solution. Ce sel est ensuite recueilli, dissous dans de l'eau. précipité par de l'acide, filtré, lavé et séché à 100 C pendant deux heures sous ? nim < le pression.
Les résultats de l'analyse micro chimique du produit quant à. sa teneur en car bone, hydrogène et azote correspondent assez exactement aux valeurs théoriques pour l'acide Nlo-nitrosolitéroylglutaniique.
L'acide Nlo-nitrosoptéroylglutamique ne possède pas de point de fusion net.; il donne une réaction nitroso positive dans l'épreuve Liebermann. On peut éliminer le groupement nitroso au moyen de phénol et cl'acicle ehlor- hydrique et, régénérer ainsi l'acide ptéroyl- glutamique. Le composé nitroso possède une faible solubilité dans l'acide chlorhydrique dilué; par contre, il est très soluble dans des alcalis aqueux.
Dans un essai, on a dissout 1. g du composé nitroso dans ?5 enia d'Inydroxyde de sodium 5N. Après elarifica- tion au moyen de charbon, on a fait cristalli ser le sel sodique en laissant reposer la solu tion.
Dans une solution cl'livdi.-o:xycle de sodiuiii N/10, l'acide Nlo-nitrosoptéroyltlutamique pré sente des maxima d'absorption à 257 et 365 ni,z lorsqu'on effectue rapidement. le mesurage. Cependant, après une irradiation d'une durée de 5 minutes seulement par de la lumière ultra violette à. 365 mu, la courbe d'absorption change rapidement.
La courbe présente alors un large maximum de 260 à<B>270</B> in ic et à 367 mci. Ce phénomène indique qu'un nou veau composé chimique est en train de se former.
Dans les essais de chromatographie sur pa pier avec utilisation d'un solvant consistant en un mélange de n-butanol, cyelohexylamine et d'eau, on a constaté que, lorsque l'essai est effectué dans l'obscurité, on obtient. une tache non-fluorescente qui voyage lentement. Lois de l'exposition à la lumière ultraviolette, cette tache se transforme rapidement dans l'espace d'une minute ou de moins d'une minute en une tache fortement fluorescente qui, lors du développement ultérieur par le solvant, se comporte comme le 6-ptérinecarboxaldéhyde.
Les résultats de l'analyse d'un échantillon du produit obtenu, séché pendant 2 heures à 100 C (2 mm), sont les suivants Calculé pour Cr9Hi8N807: C 18,5; H 3,83; N 23,8 Trouvé: C .18,9; H 4,77; N 24,05 (corrigé pour 3,8% de cendre)
Process for the preparation of Nl -nitrosopteroylglutamic acid. The present invention a. for object a process for preparing a new quantity, Nlo-nitrosopter-oylglutamiqtie acid before the following formula:
EMI0001.0006
This process is characterized by reacting (pteroylglutarnic acid with nitrous acid in an aqueous solvent.
The pteroylglutairric acid used to carry out the present invention can be prepared according to many methods described in the chemical literature, for example by reaction between 2, -1, .i-triamiiio-6-llydroxy-pyrimidine, a dilialopropionaldehyde and p-arninobelrzoylglutamiqtle acid.
The reaction between this acid and the nitric acid has a wide range of acidity. It is preferable to use a mineral acid to acidify the reaction medium. such as cyclic acid or sulfuric acid in such a concentration that pteroyl-glutamic acid is completely. in solution at approximately 0 C.
The reaction is usually carried out by adding a key acid solution of pteroylmltitamene acid to one equivalent of nitrous acid, for example as an alkali metal, alkaline earth metal or salt. 'ammonium.
The reaction is. preferably carried out at a temperature between -10 C and + 10 C, for example between - 5 C and + 5 C.
The reaction usually ends after a few minutes. The end of the reaction can be seen by means of pulp or paper with iodide and starch. The Nlo-nitroso compound is less soluble than the initial compound and most often precipitates directly from cold solution.
Nle-nitrosopteroylglutamic acid has substantially the same biological activity as pteroylglutamic acid. It is a valuable agent for the treatment of certain diseases of the circulatory system and for nutrition.
Embodiments of the process according to the invention are described in the following examples. Unless otherwise indicated, parts refer to parts by weight.
Example <I> 1: </I> A solution of 5.069 parts of pteroylglutamic acid (having a content of approximately 901 / o and containing 0.771 / o of p-aminobenzoylglutamic acid) in 2N hydrochloric acid is cooled between <B> -50 </B> and + 5 C and treated with 107.8 parts by volume of a 0.1 N sodium nitrite solution, the end of the reaction being determined by means of starch and potassium iodide.
The solution is left to stand for some time at 0 ° C. or at a lower temperature, the precipitate of Nlo-nitrosopteroylglutamic acid formed then being isolated by filtration and dried. The product shows a strong positive reaction when subjected to the Liebermann test. The product is. equivalent to pteroylglutaniic acid with respect to the activity exerted on the growth of S, faecalis R. et. the growth of more evolved organisms such as chicks.
<I> Example </I> A solution of 5. <B> 2 </B> 93 parts of pteroylglutamic acid in 2000 parts by volume of 2.5 N hydrochloric acid is cooled below 5 C and treated with 114.8 parts by volume of 0.1 sodium nitrite solution. N. Nlo-nitrosopteroyl-glutamic acid is precipitated by cooling between -2 and 0 C for 40 minutes. Example <I> 3: </I> The operation is carried out according to the indications of example 1, except that 6N hydrochloric acid is used instead of hydrochloric acid? NOT.
The weight of pteroylglutaniic acid is. of 5.999 parts, the amount of 0.1 N sodium nitrite solution being. of 1.25.6 parts by volume. The degree of purity of pteroylglutamic acid is therefore 92.4%.
Example <I> -1: </I> A solution of 4.41 parts of pteroy I-grlutamic acid in 58.5 parts of concentrated hydrochloric acid is cooled below 5 C by adding ice as well. than by external cooling. A solution of 0.7 part of sodium nitrite in 10 parts of water is gradually added to. a temperature below 5 C. The white solid which begins at. precipitate during addition of nitrite is isolated by filtering after cooling for a short time. 3.2 parts of dry product are obtained.
This product is purified by dissolving 1 part in 25 parts by volume of 5N sodium hydroxide solution and clarifying the solution with activated charcoal. The sodium salt crystallizes when the solution is allowed to stand. This salt is then collected, dissolved in water. precipitated with acid, filtered, washed and dried at 100 C for two hours under? nim <the pressure.
The results of the micro chemical analysis of the product as to. its carbon, hydrogen and nitrogen content correspond fairly exactly to the theoretical values for Nlo-nitrosoliteroylglutaniic acid.
Nlo-nitrosopteroylglutamic acid does not have a sharp melting point .; it gives a positive nitroso reaction in the Liebermann test. The nitroso group can be removed by means of phenol and hydrochloric acid and thereby regenerate the pteroyl-glutamic acid. The nitroso compound has low solubility in dilute hydrochloric acid; on the other hand, it is very soluble in aqueous alkalis.
In one test, 1.g of the nitroso compound was dissolved in 5% 5N sodium hydroxide. After elarification with charcoal, the sodium salt was crystallized leaving the solution to stand.
In a cl'livdi.-o: sodium xycle N / 10 solution, Nlo-nitrosopteroyltlutamic acid exhibits absorption maxima at 257 and 365 ni, z when performed rapidly. measurement. However, after irradiation for only 5 minutes with ultra violet light at. 365 mu, the absorption curve changes rapidly.
The curve then shows a wide maximum of 260 at <B> 270 </B> in ic and 367 mci. This phenomenon indicates that a new chemical compound is being formed.
In paper chromatography tests using a solvent consisting of a mixture of n-butanol, cyelohexylamine and water, it was found that when the test is carried out in the dark, it is obtained. a non-fluorescent spot that travels slowly. Laws of exposure to ultraviolet light, this stain rapidly transforms within a minute or less than a minute into a strongly fluorescent stain which, upon further development by the solvent, behaves like the 6 -pterinecarboxaldehyde.
The results of the analysis of a sample of the product obtained, dried for 2 hours at 100 C (2 mm), are as follows Calculated for Cr9H18N807: C 18.5; H 3.83; N 23.8 Found: C, 18.9; H 4.77; N 24.05 (corrected for 3.8% ash)