Procédé de préparation d'une composition thérapeutique stable et limpide, à action antibiotique. Le ehloramphénicol est. un antibiotique plue l'on peut obtenir par synthèse chimique ou par culture de Streptomyces v enezuelae sur un milieu nutritif ou au sein de ce milieu dans des conditions aérobies.
Chimiquement, c'est le (1)-trans-1-p-nitrophényl-?-dichloro- acétaniido-propane-1,3-diol, dont' la formule développée est
EMI0001.0010
Ce composé porte également d'autres noms chimiques tels que D-(-)-thréo 2-dichloracét- amido-1-p-nitrophényl-1,3-propanediol et D thréo-N- (1,1'-dihydroxy-1-p-nitrophényl-iso- propyl) dichloroacétamide.
Le ehloramphénicol et son dérivé racémi que optique (dl)-trans sont d'une grande va leur pour le traitement de nombreuses infec tions et de nombreuses maladies qui, avant qu'ils ne fussent connus, étaient fatales etiou s'accompagnaient d'un état maladif prolongé et persistant.
Parmi ces infections et maladies, on petit citer la fièvre typhoïde, la fièvre de Malte, la fièvre tachetée des 1\lontagnes Ro cheuses, le typhus, le pian, la. pneiunonie, la coqueluche, la brucellose, les infections uri naires, la gonorrhée, certains types de syphi lis, etc. On traite ces maladies généralement à la dose de 1 à. 3 g de chloramphénicol par voie bucale, par jour, les quantités étant ordi nairement un peu plus grandes quand on uti lise le dérivé racémique optique. Dans de nombreux cas, l'administration par voie bucale de ces produits est impossible en raison de l'âge ou de l'état du patient.
Dans ces cas-là et de nombreux antres, le mode préféré d'ad ministration est la voie parentérale et en par ticulier la voie intraveineuse. Malheureuse- ment, l'insolubilité virtuelle dans l'huile et dans l'eau du chloramphénicol et du chlor- amphénicol racémique optique ne permet pas d'utiliser cette autre méthode d'administra tion, de telle sorte que quantité de malades ont été privés, avant la présente invention, des effets thérapeutiques de ces antibiotiques in téressants.
La présente invention a pour but de pro duire des solutions limpides contenant une forte concentration de chloramphénicol ou de son racémique optique convenant à l'adminis tration intraveineuse ou par voie parentérale, solutions qui sont physiquement et chimique ment stables et desquelles le chloramphénicol ou son racémique optique ne se séparent pas, même après un stockage prolongé.
La présente invention concerne un procédé de préparation d'une composition thérapeu tique stable et limpide, à action antibiotique, ainsi que la composition thérapeutique obte nue par ce procédé. Le procédé selon l'invention est caracté risé en ce que l'on prépare, par voie chimique, l'isomère optique lévogyre 011 racémique du trans-1-p-nitrophényl-2-dichloroa.cétamido-pro- pane-1,3-diol, et en ce que l'on dissout. ce corps dans un solvant.
comprenant au moins 30 % en volume d'une amide soluble dans l'eau, de formule:
EMI0002.0014
dans laquelle R et Rl sont, de l'hydrogène ou un radical alcoyle contenant au plus deux atomes de carbone, et R@ est. un radical alcoyle contenant au plus deux -atomes de carbone.
En solution diluée, c'est-à-dire en solution dans laquelle le solvant n'est pas uniquement. composé d'amide soluble dans l'eau, le reste du solvant est formé d'eau pouvant contenir, si on le veut, du chlorure de sodium, du sac charose, du glucose, etc.
La composition obtenue par le procédé selon la présente invention est stable chimi quement, c'est-à-dire qu'elle conserve son titre de chloramphénicol après stockage prolonmé et que les amides solubles dans l'eau ne subis sent pas de modification chimique.
Ces solu tions sont. également stables physiquement. et ne déposent. pas des cristaux de chloramphé- nicol par stockage ou par dilution au moyen de solvants aqueux tels que l'eau, une solu tion de NaCl, une solution isotonique de glu cose ou par adjonction de plasma, même si la solution d'amide diluée contient une concen tration en chloramphénicol ou son racémique optique supérieure à celle que l'on peut, obtenir dans une solution aqueuse par ailleurs iden tique, mais ne contenant pas d'amide soluble dans l'eau.
Cette stabilité à la dilution est extrêmement importante en thérapeutique intraveineuse en ce qu'elle évite le danger de la formation de cristaux d'antibiotique dans le courant sanguin quand on utilise les prépa rations non diluées. Elle est. également impor tante en ce qu'elle permet de fournir le chlor- amphénicol ou son racémique optique sous une forme concentrée susceptible d'être diluée au cas où le médecin désire administrer la drogue par vénoclyse.
La composition selon la présente inven tion, comme d'ailleurs le chloramphénicol lui- même et son racémique optique, est. relative ment non toxique. C'est. ainsi qu'une solution contenant 25% en poids de ehloramphénieol dans un solvant composé de parties égales d'eau et de N,N-diméthyl-aeétamide est. utili sable jusqu'à. la dose maximum tolérable par voie intraveineuse chez le rat, albinos de 0,767 cm-ikg, la dose léthale LD50 étant de 1,109 cmslkg. Une solution de même compo sition, administrée pendant six jours par voie intraveineuse à la.
dose de 4- cm3 par jour à des malades atteints du pian, n'a provoqué chez aucun des patients de manifestations toxiques à la, fin des six jours.
La concentration de l'antibiotique que l'on peut obtenir dans la composition selon la pré sente invention varie avec l'amide utilisée et la quantité d'eau éventuellement présente dans la préparation. Toutefois, même quand on utilise une amide à pouvoir de dissolution très faible pour le chloramphénicol (ou son racémique) et une solution contenant de 65 à 70% d'eau,
on peut préparer des solutions contenant au moins 1.0% en poids d'anti- biotique. On a trouvé à ce sujet cl-Lie les amides tertiaires, c'est-à-dire celles dans les quelles Ri est.
un radical alcoyle, permettent de préparer des solutions plus concentrées de chloramphénieol (ou de son racémique) que ne le font les amides secondaires correspon dantes dans lesquelles Rl est. de l'hydrogène; les amides tertiaires sont donc préférées pour l'utilisation dans le procédé selon l'invention.
Quand on utilise des amides tertiaires sous forme anhydre, on peut. préparer des solu tions contenant. environ 50 à 651/o en poids de ehloramphénieol. Les concentrations rela tives en chloramphénicol que l'on peut obtenir avec certaines des amides solubles dans l'eau définies ci-dessus et avec diverses propor tions d'eau sont indiquées dans le tableau suivant:
EMI0003.0001
Milligrammes <SEP> de <SEP> chloramphénicol <SEP> pouvant <SEP> être
<tb> en <SEP> vo <SEP> ume <SEP> dissous <SEP> dans <SEP> 1 <SEP> cm3 <SEP> de <SEP> solution <SEP> d'amide
<tb> de <SEP> l'amide
<tb> présente <SEP> das <SEP> p <SEP> II <SEP> II <SEP> 0 <SEP> II <SEP> 0 <SEP> II <SEP> 0 <SEP> II <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> le <SEP> <U>solvant*</U> <SEP> <B>il</B>
<tb> HC-N(QH3)2 <SEP> CH3Q-NHCH3 <SEP> CH,C-N(CHg)2 <SEP> QH3Q-NH-C2HS <SEP> CH@C-N(CZHb)2 <SEP> CH@CHZC-N(CH3)2
<tb> 5 <SEP> Amide <SEP> pure
<tb> 100 0 <SEP> 1333 <SEP> 1000 <SEP> 1333 <SEP> 800 <SEP> 870 <SEP> 1000
<tb> <B>85-/,,</B> <SEP> 670 <SEP> 600
<tb> <B>75-/,,
</B> <SEP> 1000 <SEP> 560 <SEP> 1000 <SEP> 600
<tb> <B>67%</B> <SEP> 420
<tb> <B>60%</B> <SEP> 800 <SEP> 800 <SEP> 330 <SEP> 540
<tb> <B>500/0</B> <SEP> 500 <SEP> 500 <SEP> 182 <SEP> 440 <SEP> 500
<tb> 400/0 <SEP> 275 <SEP> 280 <SEP> 250
<tb> Eau <SEP> pure
<tb> 0% <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 3
<tb> * <SEP> Le <SEP> complément <SEP> pour <SEP> atteindre <SEP> 100 <SEP> % <SEP> est <SEP> constitué <SEP> par <SEP> de <SEP> Peau <SEP> distillée.
La présente invention est illustrée par les exemples suivants <I>Exemple 2:</I> Un mélange de 144 g de maltose, 72 g de solubles de distillation (fraction hydro soluble du résidu de distillation de l'alcool d'un bouillon de fermentation), 72 g d'hydro- lysat de caséine, 72 g de chlorure de sodium et de suffisamment d'eau du robinet pour amener le volume à 14,4 litres est ajusté à un pH de 7,5-7,7 avec une solution d'hydroxyde de sodium 10 N, et réparti à rai son de 300 em3 dans 48 flacons d'Erlen- meyer à large col de 1 litre.
Les flacons sont bouchés avec deux couches de disques fil trants de gaze et de coton, et les bouchons sont. fixés avec des pinces à ressort. Les fla cons sont placés dans un autoclave et stéri lisés à 121 C pendant 20 minutes. Après re froidissement, on ouvre les flacons et on les ensemence avec 5 cm3 par flacon d'une cul ture en flacon secouée de trois jours de Streptomyces venezuelae . Les flacons inocu lés sont bouchés et incubés ensuite pendant trois jours à 2224 C, placés sur une machine à secouer du type rotatif (150 t/min., rayon ciu cercle 5 cm).
On acidifie 12 litres de culture (pH 7,39), qui contiennent un total de 600 mg de l'anti biotique recherché, avec 190 cm3 d'acide chlorhydrique 3 N, à un pu de 2. On ajoute 304 g de silicate d'aluminium absorbant et on brasse la suspension pendant 30 à 60 minutes. On ajoute encore 304 g de l'adsorbant et on filtre le mélange sur une couche de 50 g de silicate d'aluminium. On lave le précipité avec 1212 cm3 d'eau distillée et on l'élimine. On réunit le filtrat et les portions de lavage et on les traite en brassant pendant 10 mi nutes avec un quart de volume d'acétate d'éthyle. On recueille la couche d'acétate d'éthyle et on répète l'extraction.
On élimine la couche aqueuse et on sèche les extraits d'acétate d'éthyle réunis sur 50 g de sulfate de sodium anhydre à 5 C.
On élimine le sulfate de sodium par filtra tion et on distille l'acétate d'éthyle sous vide à une température du bain de 30 C. On traite le résidu brun avec de petites portions d'éther diéthylique, au total 300 cm3. L'extrait éthéré contient 504 mg de l'antibiotique, soit les 841/o de l'antibiotique présent dans la cul ture.
On divise l'extrait éthéré en trois portions, et on verse chacune d'elles dans une colonne (16,5 X 1,9 cm) de 15 g d'oxyde d'aluminium qui a été ajustée au préalable au pH 4,7 avec de l'acide chlorhydrique. Dans chaque colonne, on fait passer 120 cm3 d'éther diéthylique, par portions de 20 cm3. On change les réci pients récepteurs sous chaque colonne pour obtenir au total cinq fractions dans chaque colonne. Les premières fractions réunies con tiennent -118 mg de l'antibiotique, les secondes 65 mg et les fractions restantes 17 mg.
On réunit les premières et les secondes fractions des colonnes et on distille l'éther sous vide. On traite le résidu brun plusieurs fois avec de l'eau distillée, en utilisant au total 6\35 cm3. On secoue les extraits aqueux réunis avec un demi-volume d'éther de pétrole et on répète l'extraction encore une fois. On élimine les extraits à l'éther de pétrole et on concentre la phase aqueuse sous vide à. une température du bain de 30 C jusqu'au point.
de cristallisation (environ 20 em3). On refroi dit la solution à 5 C pendant une nuit, on recueille les erista.ux, on les lave avec une pe tite quantité d'eau froide et on les sèche sous vide sur du chlorure de calcium. Point de fusion après purification par recristallisation: 150 à 151 C. L'antibiotique ainsi obtenu est. le chloramphénicol ou (1)-trans-1-p-nitrophényl- 2-dichloroacétaniido-propane-l,3-diol.
On ajoute 25 g de ce chloramphénieol à 80 cms d'un solvant constitué par un mélange de volumes égaux de N,N-diméthylacétamide et d'eau distillée, à la température ambiante, et on agite le mélange ou on le secoue jus qu'à ce que la dissolution soit complète. On stérilise la solution par filtration sur de la porcelaine ou une pierre filtrante poreuse et on en remplit des ampoules. Chaque centi mètre cube de la solution ainsi obtenue con tient 25% en poids, soit. 250 mg de chlor- amphénicol. Cette solution est chimiquement et physiquement stable pendant longtemps.
Par dilution au moyen d'eau, d'une solution normale de NaCI, d'une solution isotonique de glucose ou de plasma, il ne se forme pas de troubles ou de cristaux. Elle est relative ment non toxique et peut être administrée sans danger par voie intraveineuse à. l'homme pendant. au moins six jours, à des doses attei gnant 2 cm3 par jour.
Exemple N: On chauffe sur un bain à vapeur, pendant une heure et demie, un mélange composé de 0,35 g de (dl)-trans-1-p-nitroliliényl-2-amino- propane-l,3-diol et de \?,5 eni3 de dichlor- acétate de méthyIe. On extrait le mélangre ob tenu trois fois avec 15 em3 d'éther de pétrole et on cristallise le résidu deux fois dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pé trole.
Par recristallisation dans de l'eau, on obtient finalement le (dl)-trans-1-p-nitro- phényl-2-diehloroacétamido-propane-l,3-cliol (chlorainphénicol racémique) recherché sous forme pure; point. de fusion: 150 5-151 5 C.
Pour obtenir le (dl) -t.rans-1-p-nitrophényl- 2-amiiiopropaiie-l,â-diol de départ, on peut, par exemple, procéder de la faeon suivante: On condense de la benzaldéhyde avec du fi- nitroéthanol pour obtenir le 1-phényl-2-nitro- propane-1,3-diol. Ce dernier est ensuite réduit catalytiquement en 1-pliényi-2-aniinopropane- 1,
3-diol et on sépare la forme cis de la forme trans par cristallisation fractionnée clans le chloroforme par exemple. On convertit ensuite le trans-1-pliényl-2-aniinopropane-1,3-diol en un aminodiol correspondant. complètement acylé (par exemple acéty lé) et. on soumet le dérivé O,O,N-triaeylé à.
une nitration du noyau phény ligue à l'aide d'acide nitrique concentré ou fumant ou à l'aide d'un mélange de HN03 et 1I-SO.i concentrés, le groupe nitro se fixant dans la position para du noyau phénylique. Ensuite, on soumet. le dérivé nitré à une hydrolyse complète de ces groupes acyle pour obtenir le trans-1-p-nitrophényl-2- aminopropane-1,3-diol racémique servant de corps de départ.
On ajoute 10 g du chloramphénieol racé mique obtenu comme décrit ci-dessus à. 32 em3 d'un solvant formé d'un mélange de volumes égaux de N,N-dimétliylacétainide et d'eau dis tillée, à. la température ordinaire. On secoue le mélange jusqu'à. ce que la dissolution soit complète et on le stérilise par filtration sur un filtre en pierre poreuse. La solution ainsi obtenue contient 251/o en poids de chloram- phénicol racémique (270 nlg/cni3) et convient à. l'administration à, l'homme par voie intra veineuse.
La solution reste parfaitement. lim pide si on la dilue au moyen d'eau, d'une so lution normale de NaCI ou d'une solution isotonique de glucose. La préparation non di luée est à la fois chimiquement et physique ment stable pendant longtemps.
Exemple <I>3:</I> On prépare du chloramphénicol de la faon décrite dans l'exemple 1 et on ajoute 26,6 g de ce chloramphénicol à 20 cm3 de N,N-di- méthylacétamide et on secoue le mélange jus qu'à ce que la dissolution soit complète. La solution ainsi obtenue, après stérilisation par filtration sur un filtre en pierre poreuse, con vient à l'administration par voie intraveineuse ou à l'emploi pour préparer dans ce but des solutions plus diluées. La solution est stable sous sa forme non diluée et aussi sous sa forme diluée à l'aide d'eau, d'une solution nor male de NaCI, etc.
Elle contient. environ 645 mg de ehloramphénicol par em3.
<I>Exemple 4:</I> On chauffe à, 100 C, pendant une heure et demie, un mélange de 1,5 g de la base libre du (1)-trans-1-p-nitrophényl-2-aminopropane- 1,3-diol (p. d. f. = 157 C) et de 1,5 g de di- chloracétate de méthyle. Le mélange est en suite refroidi et traité avec 25 cm3 d'éther de pétrole. On recueille la partie du résidu qui demeure insoluble, on la lave avec deux autres portions d'éther de pétrole de 10 em3 cha cune, puis on la sèche.
Le produit ainsi obtenu est le (1)-trans-1-p-nitrophényl-2-dichloroacét- amido-propane-1,3-diol ou chloramphénicol. Le produit de départ peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 2, après avoir dédoublé le trans-1-phényl-2-amino-propane-1,3-diol en ses isomères optiques selon un procédé de dé doublement connu, et en utilisant l'isomère lévogyre pour la suite de la synthèse.
On ajoute 10 g du chloramphénicol ainsi obtenu à 22 cm3 d'un solvant formé d'un mé lange de trois volumes de N,N-diméthylform- amide et un volume de solution saline isotoni- que. On secoue le mélange jusqu'à ce que la dissolution soit complète, on le stérilise par filtration sur un filtre en pierre poreuse et on en emplit des ampoules.
La solution ainsi obtenue contient 93-Y /o en poids, soit 333 mg/cms de chloramphénicol. Elle convient pour l'administration par voie intraveineuse et possède les mêmes propriétés que les solu tions des exemples précédents.
<I>Exemple 5:</I> On ajoute 16 g de p-nitro-a-dichloroacét- amido-,B-hydroxypropiophénone à 10 g d'iso- propylate d'aluminium dans 250 cms d'isopro- panol sec et on traite le mélange à reflux pen dant six heures. Pendant cette période de chauffage, on fait passer un courant d'azote dans la solution et une petite quantité du mé lange réactionnel s'élimine continuellement par distillation. On élimine l'isopropanol par distillation dans le vide, on traite le résidu avec 250 cm3 d'eau et on chauffe le mélange à ébullition.
On élimine l'hydroxyde d'alumi nium par filtration et on évapore le filtrat à siccité dans le vide. On lave le résidu avec plusieurs petites portions d'acétate d'éthyle, et le solide cristallin contenant le (dl)-trans-1-p- nitrophényl- 2 - dichloroacétamido-propane-1,3- diol qui ne se dissout pas est recueilli puis recristallisé dans l'eau pour obtenir l'isomère (dl)-trans (ou dl-U) sous forme pure; point de fusion: 150 5-151 5 C.
On ajoute 10 g du chloramphénicol racé mique ainsi obtenu à 35 cm3 d'un mélange solvant formé de vol-Lunes égaux de N,N-di- éthylacétamide et d'eau distillée. On secoue le mélange jusqu'à ce que la dissolution soit com plète, puis on ajoute 1 g de-glucose. On secoue le mélange jusqu'à ce que le glucose soit dis sous, puis on complète le volume à 50 cm3 par addition du mélange solvant de l'amide. On stérilise la solution limpide par filtration sur de la porcelaine et on en remplit des am poules. La solution ainsi obtenue convient à l'administration par voie intraveineuse.
Elle contient 20 % en poids, soit 200 mg/cms de chloramphénicol racémique et est à la fois physiquement et chimiquement stable. Elle peut être diluée au moyen d'une quantité quelconque d'eau sans que le chloramphénicol se sépare de la solution. .
<I>Exemple 6:</I> On prépare du chloramphénicol comme dé crit dans l'exemple 4 et on ajoute 10 g de ce chloramphénicol à 32 cm3 d'un solvant formé d'un mélange de volume égaux de N,N-dimé- thyl-propionamide et d'eau distillée et on se coue le mélange ainsi obtenu à la température ambiante jusqu'à ce que la dissolution soit complète. On stérilise la solution par filtration sur un filtre en pierre poreuse et on en emplit des ampoules.
Cette solution convient à l'ad ministration par voie intraveineuse et con- tient 25 % en poids, soit 250 nig/em3 de chlor- amphénicol. Le chloramphénicol présent dans la solution ne se sépare pas par cristallisation par repos ou dilution au moyen d'eau, d'une solution normale de NaCl, de plasma ou d'une solution isotonique de glucose.
Process for preparing a stable and clear therapeutic composition with antibiotic action. Ehloramphenicol is. a larger antibiotic can be obtained by chemical synthesis or by culturing Streptomyces v enezuelae on a nutrient medium or within this medium under aerobic conditions.
Chemically, it is (1) -trans-1-p-nitrophenyl -? - dichloroacetaniido-propane-1,3-diol, the structural formula of which is
EMI0001.0010
This compound also has other chemical names such as D - (-) - threo 2-dichloracet- amido-1-p-nitrophenyl-1,3-propanediol and D threo-N- (1,1'-dihydroxy-1 -p-nitrophenyl-isopropyl) dichloroacetamide.
Ehloramphenicol and its racemic optic derivative (dl) -trans are of great value in the treatment of many infections and diseases which, before they were known, were fatal and / or were accompanied by a prolonged and persistent disease state.
Among these infections and diseases, we may mention typhoid fever, Malta fever, Rocky mountain spotted fever, typhus, yaws, la. pneumonia, whooping cough, brucellosis, urinary tract infections, gonorrhea, certain types of syphilis, etc. These diseases are usually treated at a dose of 1 to. 3 g of chloramphenicol by oral route, per day, the amounts usually being a little larger when the optical racemic derivative is used. In many cases, oral administration of these products is not possible due to the age or condition of the patient.
In these cases and many others, the preferred mode of administration is the parenteral route and in particular the intravenous route. Unfortunately, the virtual insolubility in oil and water of chloramphenicol and optic racemic chlor- amphenicol does not allow this alternative method of administration to be used, so that many patients have been deprived of. , prior to the present invention, the therapeutic effects of these interesting antibiotics.
The object of the present invention is to produce clear solutions containing a high concentration of chloramphenicol or its optical racemic suitable for intravenous or parenteral administration, solutions which are physically and chemically stable and of which chloramphenicol or its racemic. optics do not separate, even after prolonged storage.
The present invention relates to a process for preparing a stable and clear therapeutic composition with antibiotic action, as well as to the therapeutic composition obtained by this process. The process according to the invention is characterized in that the racemic levorotatory 011 optical isomer of trans-1-p-nitrophenyl-2-dichloroa.cétamido-propane-1,3 is prepared chemically. -diol, and in what is dissolved. this body in a solvent.
comprising at least 30% by volume of a water soluble amide, of formula:
EMI0002.0014
in which R and R 1 are hydrogen or an alkyl radical containing at most two carbon atoms, and R @ is. an alkyl radical containing at most two carbon atoms.
In dilute solution, that is to say in solution in which the solvent is not only. compound of amide soluble in water, the remainder of the solvent is formed by water which may contain, if desired, sodium chloride, charose sac, glucose, etc.
The composition obtained by the process according to the present invention is chemically stable, that is to say that it retains its chloramphenicol content after prolonged storage and that the water-soluble amides do not undergo chemical modification.
These solutions are. also physically stable. and do not file. not crystals of chloramphenicol by storage or by dilution with aqueous solvents such as water, NaCl solution, isotonic glue solution or by addition of plasma, even if the dilute amide solution contains a concentration of chloramphenicol or its optical racemate greater than that which can be obtained in an aqueous solution which is otherwise identical, but which does not contain a water-soluble amide.
This stability to dilution is extremely important in intravenous therapy in that it avoids the danger of formation of antibiotic crystals in the blood stream when the undiluted preparations are used. She is. also important in that it makes it possible to supply chloramphenicol or its optical racemate in a concentrated form which can be diluted in the event that the doctor wishes to administer the drug by venoclysis.
The composition according to the present invention, like moreover chloramphenicol itself and its optical racemate, is. relatively non-toxic. It is. as well as a solution containing 25% by weight of ehloramphenol in a solvent composed of equal parts of water and N, N-dimethyl-aeetamide is. used sand up. the maximum tolerable dose intravenously in the rat, albino of 0.767 cm-ikg, the lethal LD50 dose being 1.109 cmslkg. A solution of the same composition, administered over six days intravenously to the.
dose of 4-cm3 per day in patients with yaws did not cause toxic manifestations in any of the patients at the end of the six days.
The concentration of the antibiotic which can be obtained in the composition according to the present invention varies with the amide used and the amount of water optionally present in the preparation. However, even when using an amide with very low dissolving power for chloramphenicol (or its racemic) and a solution containing 65 to 70% water,
Solutions containing at least 1.0% by weight of antibiotic can be prepared. Tertiary amides were found in this connection, ie those in which R 1 is.
an alkyl radical, make it possible to prepare more concentrated solutions of chloramphenol (or its racemic) than do the corresponding secondary amides in which Rl is. hydrogen; tertiary amides are therefore preferred for use in the process according to the invention.
When using tertiary amides in anhydrous form, one can. prepare solutions containing. about 50 to 651% by weight of ehloramphenol. The relative concentrations of chloramphenicol obtainable with some of the water-soluble amides defined above and with various proportions of water are given in the following table:
EMI0003.0001
Milligrams <SEP> of <SEP> chloramphenicol <SEP> that can <SEP> be
<tb> in <SEP> vo <SEP> ume <SEP> dissolved <SEP> in <SEP> 1 <SEP> cm3 <SEP> of <SEP> solution <SEP> of amide
<tb> of <SEP> amide
<tb> present <SEP> das <SEP> p <SEP> II <SEP> II <SEP> 0 <SEP> II <SEP> 0 <SEP> II <SEP> 0 <SEP> II <SEP> 0 <SEP > 0
<tb> the <SEP> <U> solvent * </U> <SEP> <B> it </B>
<tb> HC-N (QH3) 2 <SEP> CH3Q-NHCH3 <SEP> CH, CN (CHg) 2 <SEP> QH3Q-NH-C2HS <SEP> CH @ CN (CZHb) 2 <SEP> CH @ CHZC -N (CH3) 2
<tb> 5 <SEP> Amide <SEP> pure
<tb> 100 0 <SEP> 1333 <SEP> 1000 <SEP> 1333 <SEP> 800 <SEP> 870 <SEP> 1000
<tb> <B> 85- / ,, </B> <SEP> 670 <SEP> 600
<tb> <B> 75- / ,,
</B> <SEP> 1000 <SEP> 560 <SEP> 1000 <SEP> 600
<tb> <B> 67% </B> <SEP> 420
<tb> <B> 60% </B> <SEP> 800 <SEP> 800 <SEP> 330 <SEP> 540
<tb> <B> 500/0 </B> <SEP> 500 <SEP> 500 <SEP> 182 <SEP> 440 <SEP> 500
<tb> 400/0 <SEP> 275 <SEP> 280 <SEP> 250
<tb> Pure <SEP> water
<tb> 0% <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 3
<tb> * <SEP> The <SEP> complement <SEP> for <SEP> to reach <SEP> 100 <SEP>% <SEP> is <SEP> made up <SEP> by <SEP> of <SEP> Skin <SEP > distilled.
The present invention is illustrated by the following examples <I> Example 2: </I> A mixture of 144 g of maltose, 72 g of distillation solubles (water soluble fraction of the alcohol distillation residue of a broth of fermentation), 72 g of casein hydrolysate, 72 g of sodium chloride and enough tap water to bring the volume to 14.4 liters is adjusted to a pH of 7.5-7.7 with a 10 N sodium hydroxide solution, and distributed at an area of 300 em3 in 48 1 liter wide-neck Erlenmeyer flasks.
The bottles are stoppered with two layers of gauze and cotton thread discs, and the stoppers are. secured with spring clips. The flasks are placed in an autoclave and sterilized at 121 ° C. for 20 minutes. After cooling, the vials are opened and inoculated with 5 cc per vial of a three-day-old shaken flask culture of Streptomyces venezuelae. The inoculated flasks are stoppered and then incubated for three days at 2224 ° C., placed on a shaking machine of the rotary type (150 rpm, circle radius 5 cm).
12 liters of culture (pH 7.39), which contain a total of 600 mg of the desired antibiotic, are acidified with 190 cm3 of 3N hydrochloric acid, to a pu of 2. 304 g of d-silicate are added. absorbent aluminum and stir the suspension for 30-60 minutes. Another 304 g of the adsorbent is added and the mixture is filtered through a layer of 50 g of aluminum silicate. The precipitate is washed with 1212 cm3 of distilled water and removed. The filtrate and the washings were combined and treated by stirring for 10 minutes with a quarter volume of ethyl acetate. The ethyl acetate layer is collected and the extraction is repeated.
The aqueous layer is removed and the combined ethyl acetate extracts are dried over 50 g of anhydrous sodium sulfate at 5 ° C.
The sodium sulfate was filtered off and the ethyl acetate was distilled off in vacuo at a bath temperature of 30 ° C. The brown residue was treated with small portions of diethyl ether, totaling 300 cm3. The ethereal extract contains 504 mg of the antibiotic, which is 841% of the antibiotic present in the culture.
The ethereal extract is divided into three portions, and each of them is poured into a column (16.5 X 1.9 cm) of 15 g of aluminum oxide which has been previously adjusted to pH 4.7. with hydrochloric acid. 120 cm3 of diethyl ether are passed through each column in 20 cm3 portions. The receiving vessels under each column were changed to give a total of five fractions in each column. The first fractions combined contain -118 mg of the antibiotic, the second 65 mg and the remaining fractions 17 mg.
The first and second fractions of the columns are combined and the ether is distilled off in vacuo. The brown residue is treated several times with distilled water, using a total of 6/35 cm3. The combined aqueous extracts are shaken with half a volume of petroleum ether and the extraction repeated once more. The petroleum ether extracts are removed and the aqueous phase is concentrated in vacuo to. a bath temperature of 30 C up to the point.
crystallization (about 20 em3). The solution is cooled to 5 ° C. overnight, the eristas are collected, washed with a small amount of cold water and dried in vacuo over calcium chloride. Melting point after purification by recrystallization: 150 to 151 C. The antibiotic thus obtained is. chloramphenicol or (1) -trans-1-p-nitrophenyl-2-dichloroacetaniido-propane-1,3-diol.
25 g of this chloramphenol is added to 80 cms of a solvent consisting of a mixture of equal volumes of N, N-dimethylacetamide and distilled water, at room temperature, and the mixture is stirred or it is shaken until that the dissolution is complete. The solution is sterilized by filtration through porcelain or a porous filter stone and filled into ampoules. Each hundred cubic meter of the solution thus obtained contains 25% by weight, ie. 250 mg of chloramphenicol. This solution is chemically and physically stable for a long time.
On dilution with water, normal NaCl solution, isotonic glucose or plasma solution, no cloudiness or crystals are formed. It is relatively non-toxic and can be safely administered intravenously to. man hanging. at least six days, at doses up to 2 cm3 per day.
Example N: A mixture composed of 0.35 g of (dl) -trans-1-p-nitroliliényl-2-amino-propane-l, 3-diol and a steam bath is heated for one and a half hours. of \?, 5 eni3 of methyl dichloroacetate. The resulting mixture was extracted three times with 15 ml of petroleum ether and the residue crystallized twice from a mixture of ethyl acetate and petroleum ether.
By recrystallization from water, the desired (dl) -trans-1-p-nitro-phenyl-2-diehloroacetamido-propane-1,3-cliol (racemic chlorainphenicol) is finally obtained in pure form; point. melting point: 150 5-151 5 C.
To obtain the starting (dl) -t.rans-1-p-nitrophenyl-2-amiiiopropaiie-l, â-diol, one can, for example, proceed as follows: One condenses benzaldehyde with fi- nitroethanol to obtain 1-phenyl-2-nitro-propane-1,3-diol. The latter is then catalytically reduced to 1-plienyi-2-aniinopropane-1,
3-diol and the cis form is separated from the trans form by fractional crystallization in chloroform, for example. The trans-1-plienyl-2-aniinopropane-1,3-diol is then converted to a corresponding aminodiol. completely acylated (eg acetylated) and. the O, O, N-triaeylé derivative is subjected to.
nitration of the phenyl ring with the aid of concentrated or fuming nitric acid or with the aid of a mixture of concentrated HN03 and 1I-SO.i, the nitro group being fixed in the para position of the phenyl ring. Then we submit. the nitro derivative to complete hydrolysis of these acyl groups to obtain the racemic trans-1-p-nitrophenyl-2-aminopropane-1,3-diol serving as the starting material.
10 g of the racemic chloramphenol obtained as described above are added to. 32 em3 of a solvent formed from a mixture of equal volumes of N, N-dimethylacetainide and distilled water, to. room temperature. We shake the mixture until. that the dissolution is complete and sterilized by filtration through a porous stone filter. The solution thus obtained contains 251% by weight of racemic chloramphenicol (270 nlg / cni3) and is suitable for. administration to man by the intravenous route.
The solution remains perfectly. clear if diluted with water, normal NaCl solution or isotonic glucose solution. The undiluted preparation is both chemically and physically stable for a long time.
Example <I> 3: </I> Chloramphenicol is prepared as described in Example 1 and 26.6 g of this chloramphenicol are added to 20 cm3 of N, N-dimethylacetamide and the mixture is shaken to juice until the dissolution is complete. The solution thus obtained, after sterilization by filtration through a porous stone filter, is suitable for intravenous administration or for use in preparing more dilute solutions for this purpose. The solution is stable in its undiluted form and also in its diluted form with water, normal NaCl solution, etc.
It contains. about 645 mg of ehloramphenicol per em3.
<I> Example 4: </I> A mixture of 1.5 g of the free base of (1) -trans-1-p-nitrophenyl-2-aminopropane is heated at 100 ° C. for an hour and a half - 1,3-diol (mp = 157 C) and 1.5 g of methyl dichloroacetate. The mixture is then cooled and treated with 25 cm3 of petroleum ether. The part of the residue which remains insoluble is collected, washed with two more portions of petroleum ether of 10 em3 each, and then dried.
The product thus obtained is (1) -trans-1-p-nitrophenyl-2-dichloroacet-amido-propane-1,3-diol or chloramphenicol. The starting product can be obtained as described in Example 2, after having resolved the trans-1-phenyl-2-amino-propan-1,3-diol into its optical isomers according to a known doubling process, and in using the levorotatory isomer for the remainder of the synthesis.
10 g of the chloramphenicol thus obtained are added to 22 cm3 of a solvent formed from a mixture of three volumes of N, N-dimethylformamide and one volume of isotonic saline solution. The mixture is shaken until complete dissolution, sterilized by filtration through a porous stone filter and filled into ampoules.
The solution thus obtained contains 93-Y / o by weight, ie 333 mg / cms of chloramphenicol. It is suitable for intravenous administration and has the same properties as the solutions of the preceding examples.
<I> Example 5: </I> 16 g of p-nitro-a-dichloroacet- amido-, B-hydroxypropiophenone are added to 10 g of aluminum isopropoxide in 250 cms of dry isopropanol and the mixture is refluxed for six hours. During this heating period, a stream of nitrogen is passed through the solution and a small amount of the reaction mixture is continuously removed by distillation. Isopropanol is removed by vacuum distillation, the residue is treated with 250 cm3 of water and the mixture is heated to a boil.
The aluminum hydroxide is removed by filtration and the filtrate is evaporated to dryness in vacuo. The residue is washed with several small portions of ethyl acetate, and the crystalline solid containing the (dl) -trans-1-p-nitrophenyl-2-dichloroacetamido-propane-1,3-diol which does not dissolve is collected and then recrystallized from water to obtain the (dl) -trans (or dl-U) isomer in pure form; melting point: 150 5-151 5 C.
10 g of the racemical chloramphenicol thus obtained are added to 35 cm3 of a solvent mixture formed of equal vol-moons of N, N-di-ethylacetamide and distilled water. The mixture is shaken until the dissolution is complete, then 1 g of glucose is added. The mixture is shaken until the glucose is dissolved, then the volume is made up to 50 cm3 by adding the solvent mixture for the amide. The clear solution is sterilized by filtration through porcelain and filled into hens. The solution thus obtained is suitable for intravenous administration.
It contains 20% by weight or 200 mg / cms of racemic chloramphenicol and is both physically and chemically stable. It can be diluted with any amount of water without the chloramphenicol separating from solution. .
<I> Example 6: </I> Chloramphenicol is prepared as described in Example 4 and 10 g of this chloramphenicol are added to 32 cm3 of a solvent formed from a mixture of equal volumes of N, N- dimethylpropionamide and distilled water, and the resulting mixture is poured at room temperature until dissolution is complete. The solution is sterilized by filtration through a porous stone filter and filled into ampoules.
This solution is suitable for intravenous administration and contains 25% by weight, or 250 nig / m³ of chloramphenicol. Chloramphenicol in solution does not separate by crystallization on standing or dilution with water, normal NaCl solution, plasma or isotonic glucose solution.