Verfahren zur Herstellung einer Steroidverbindung. Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 14a-Oxy-d4-androsten-3,17- dion, welches sowohl in chemischer als auch in pharmakologischer Hinsicht wertvoll ist.
Die neue Verbindung wird erfindungsge mäss durch Oxydation von 14a,17a,21-Tri- oXy-d4-pregnen-3,20-dion, z. B. mit Chrom säure oder einem andern Oxydationsmittel, dargestellt. Vorzugsweise kommt bei der Oxy dation etwa 1 Mal des Oxydationsmittels, z. B. Chromsäure, je Mol des Ausgangssteroids zur Anwendung. Die Gewinnung des Produktes aus dem Reaktionsgemiseh kann nach einer Standardmethode erfolgen.
<I>Beispiel: '</I> Darstellung von 14a,17a,21-Trioxy-d4- pregnen-3,20-didn 20 g enzymhaltiger Lactalbuminauszug, 3 g Maisquellwasser und 50 g technische Dextrose wurden mit Leitungswasser auf 1 Liter ver dünnt und mit Natriumhydroxyd auf ein p$ von 4,3-4,5 eingestellt.
12 Liter von dieser sterilen Nährlösung wurden mit Sporen von Helicostylum piriforme beimpft und sodann durch 24 Stunden bei 28 C unter Rühren be brütet, wobei in der Weise gelüftet wurde, dass eine vergleichsweise Sauerstoffaufnahme durch Na2S03 von 6,3-7 Millimol Sauerstoff pro Stunde und Liter dieser Lösung entspre chend den Angaben von Cooper, Fernstrom und Miller, Ind. Eng. Chem., Band 36, Seite 504, gegeben war.
Darnach wurden 2 g 17a, 21-Dioxy-d4-pregnen-3,20-dion (Verbindung S), welche zur Erzielung einer Suspendierung des Steroids in der Nährlösung in sehr wenig Äthanol gelöst waren, zugefügt.
Nunmehr wurde durch weitere 24 Stunden unter den selben Bedingungen. von Temperatur und Be lüftung weiter bebrütet und .anschliessend Nährlösung und Mycel extrahiert. Das Mycel wurde abfiltriert und zweimal mit Aceton un gefähr im Volumen des Mycels gewaschen und anschliessend zweimal mit ebensolchen Volu mina Methylenchlorid extrahiert. Diese Ace ton- und Methylenehloridauszüge <RTI
ID="0001.0059"> wurden nein zur filtrierten Nährlösung hinzugefügt. Die gesamte so erhaltene Flüssigkeitsmenge wurde nun nacheinander portionsweise zweimal mit dem halben Volumen Methylenchlorid und zweimal mit ihrem Viertel Volumen Methy- lenehlorid extrahiert. Die so erhaltenen ver einigten hIethylenchloridauszüge wurden nach einander
zweimal mit einem Zehntel ihres Volumens wässriger Natriumbicarbonatlösung und zweimal in. der gleichen Weise mit Was ser gewaschen.
Die Methylenchloridauszüge wurden sodann mit 3-5g wasserfreiem Na.- triiunsuLfat pro Liter getrocknet,
filtriert und zur Entfernung des Lösungsmittels destilliert. Der Rückstand wurde aus Methylenchlorid umkristallisiert. Die erhaltenen Rohkristalle würden getrocknet, fünfmal mit je 5 cm3 Äther je Gramm Rohkristalle gewaschen und wogen sodann 5,354 g.
Diese Rohkristalle wurden in 10 cm3 Äthylendichlorid gelöst und über 350 g Florisil (synthetisches Magne- siumsilicat) chromatographiert, wobei zur Entwicklung portionsweise je 550 ems Lö- sungsmittel verwendet wurden.
In der nach folgenden Tabelle sind die auf diese Weise er haltenen Fraktionen zusammengestellt.
EMI0002.0010
<U>Fraktion <SEP> Lösungsmittel <SEP> Ausbeute <SEP> in <SEP> mg</U>
<tb> 1. <SEP> Äthylendichlorid <SEP> 479,5
<tb> 2 <SEP> Äthylendichlorid <SEP> 403,0
<tb> 3 <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> 15:1 <SEP> 815,5
<tb> 4 <SEP> Äthylendichloiid-Aceton <SEP> 15:1 <SEP> 36,5
<tb> 5 <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> 12:1 <SEP> 36,0
<tb> 6 <SEP> Äthylendichlo#rid>Aceton <SEP> 12:1 <SEP> - <SEP> 50,0
<tb> 7 <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> 12:1 <SEP> 109,5
<tb> 8 <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> 10:1 <SEP> 159,0
<tb> 9 <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> 10:1 <SEP> 148,0
<tb> 10 <SEP> Äthylendichlarid-Aceton <SEP> 8:1 <SEP> 145,0
<tb> 11 <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> 8:
1 <SEP> 104,5
<tb> 12 <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> 8:1 <SEP> 98,0
<tb> 13 <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> 5:1 <SEP> 170,0
<tb> 14 <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> 5:1 <SEP> 123,0
<tb> 15 <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> 5:1 <SEP> <B>123,5</B>
<tb> 16 <SEP> Äthylend.ichlorid-Aceton <SEP> 3:1 <SEP> 127,5
<tb> 17 <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> 3:1 <SEP> 200,0
<tb> 18 <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> 1:1 <SEP> 456,0
<tb> 19 <SEP> Äthylendiehlarid-Aceton <SEP> 1:
1 <SEP> 356,0
<tb> <B>20</B> <SEP> Äthylendichlorid-Aceton <SEP> !226,5 Die Rückstände der Fraktionen 13-16 einschliesslich wurden aus 10 cm3 Äther um- kristallisiert, wobei der Äther ganz allmählich bei Raumtemperatur abgedunstet wurde. Da bei wurden 228,6 mg Kristalle mit einem Schmp. 218-226 C erhalten. Nach weiterem zweimaligem Umkristallisieren aus je 10 cm3 Äther-Aceton 1:1 wurden Kristalle mit einem Schmp. 232-235 C erhalten.
Eine Probe da von, 57 mg, erwies sich nach erneutem Um kristallisieren aus 5 cm3 Methanol als 14a, 17a,21-Trioxy-44-pregnen 3,20-dion. Sehmp. 234-237<B>0</B> C. [a]D = -1- 155'(1,13 in Me thanol). Das-Infrarotspektriun ist einheitlich. Analyse: /o berechnet für C21H3005 C =<B>69,58;</B> H = 8,34 /o gefunden :
C = 69,42;H = 8,40 Darstellung von 14a-Oxy-44-androsten- 3,17-dion: Zu 129,5 mg d4-Pregnen-14a,17a,21-triol- 3,20-dion, gelöst in 10 ems Eisessig wurde eine Lösung von 103,5 mg Chromtrioxyd in 1 ems Wasser und 5 cm?, Essigsäure tropfen weise zugefügt. Die Reaktionsmischung wurde nach 20stündigem Stehen bei Raumtempera tur mit 25 cm3 Methanol verdünnt, im Va kuum zur Entfernung des überschüssigen Methanols .abgedunstet,
mit 70 em3 Wasser verdünnt und dreimal mit j e 50 em3 Äther Methylendichlorid im Verhältnis 5:1 extra hiert.
Die vereinigten Extrakte wurden mit 15 cm3 Portionen gewaschen wie folgt: Ein mal .mit Wasser, zweimal mit. 5 1/oigem Na triwnhydroxyd und viermal mit Wasser.
Der gewaschene Extrakt wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und abge- dunstet. Die so gewonnenen 71,7 mg Kristalle wurden aus 2 ems Aceton umkristallisiert. Dabei wurde die Kristallisätion durch Zu- tropfen von Hexan zur siedenden Lösung ein geleitet.
Das so dargestellte 14a-Oxy-d4-an- drosten-3,17-dion hatte einen Schmp. von 259 bis 265 C; [a]D = + 171 (0,6660 in Chloro form). Die Struktur wurde durch Infrarot analyse bestätigt. Analyse: /o berechnet für C19H2603 : C = 75,46;H = 8,66 /o gefunden : C = 75,21;H = 8,64
Method of making a steroid compound. The invention relates to a process for the preparation of 14a-oxy-d4-androstene-3,17-dione, which is valuable both chemically and pharmacologically.
The new compound is according to the invention by oxidation of 14a, 17a, 21-trioXy-d4-pregnen-3,20-dione, z. B. with chromic acid or another oxidizing agent shown. Preferably, about 1 time of the oxidizing agent, z. B. chromic acid, per mole of the starting steroid for use. The product can be recovered from the reaction mixture using a standard method.
<I> Example: '</I> Illustration of 14a, 17a, 21-trioxy-d4-pregnen-3,20-didn 20 g of enzyme-containing lactalbumin extract, 3 g of corn steep liquor and 50 g of technical dextrose were diluted to 1 liter with tap water and adjusted to a p $ of 4.3-4.5 with sodium hydroxide.
12 liters of this sterile nutrient solution were inoculated with spores of Helicostylum piriforme and then incubated for 24 hours at 28 C with stirring, ventilation being carried out in such a way that a comparative oxygen uptake by Na 2 SO 3 of 6.3-7 millimoles of oxygen per hour and Liters of this solution according to the information from Cooper, Fernstrom and Miller, Ind. Eng. Chem., Volume 36, page 504 was given.
Then 2 g of 17a, 21-dioxy-d4-pregnen-3,20-dione (compound S), which had been dissolved in very little ethanol to achieve suspension of the steroid in the nutrient solution, were added.
Now was through a further 24 hours under the same conditions. further incubated by temperature and ventilation and then extracted nutrient solution and mycelium. The mycelium was filtered off and washed twice with acetone approximately in the volume of the mycelium and then extracted twice with the same volume of methylene chloride. These acetone and methylene chloride extracts <RTI
ID = "0001.0059"> no were added to the filtered nutrient solution. The entire amount of liquid thus obtained was then successively extracted in portions twice with half the volume of methylene chloride and twice with its quarter volume of methylene chloride. The thus obtained combined methylene chloride extracts were successively
Washed twice with one tenth of its volume aqueous sodium bicarbonate solution and twice in the same manner with water.
The methylene chloride extracts were then dried with 3-5 g of anhydrous sodium sulfate per liter,
filtered and distilled to remove the solvent. The residue was recrystallized from methylene chloride. The raw crystals obtained were dried, washed five times with 5 cm3 of ether per gram of raw crystals and then weighed 5.354 g.
These crude crystals were dissolved in 10 cm3 of ethylene dichloride and chromatographed over 350 g of Florisil (synthetic magnesium silicate), 550 ems of solvent being used in portions for development.
The fractions obtained in this way are compiled in the table below.
EMI0002.0010
<U> Fraction <SEP> Solvent <SEP> Yield <SEP> in <SEP> mg </U>
<tb> 1. <SEP> ethylene dichloride <SEP> 479.5
<tb> 2 <SEP> ethylene dichloride <SEP> 403.0
<tb> 3 <SEP> ethylene dichloride acetone <SEP> 15: 1 <SEP> 815.5
<tb> 4 <SEP> ethylene dichloride acetone <SEP> 15: 1 <SEP> 36.5
<tb> 5 <SEP> ethylene dichloride acetone <SEP> 12: 1 <SEP> 36.0
<tb> 6 <SEP> ethylene dichloride> acetone <SEP> 12: 1 <SEP> - <SEP> 50.0
<tb> 7 <SEP> ethylene dichloride acetone <SEP> 12: 1 <SEP> 109.5
<tb> 8 <SEP> ethylene dichloride acetone <SEP> 10: 1 <SEP> 159.0
<tb> 9 <SEP> ethylene dichloride-acetone <SEP> 10: 1 <SEP> 148.0
<tb> 10 <SEP> ethylene dichloride acetone <SEP> 8: 1 <SEP> 145.0
<tb> 11 <SEP> ethylene dichloride-acetone <SEP> 8:
1 <SEP> 104.5
<tb> 12 <SEP> ethylene dichloride-acetone <SEP> 8: 1 <SEP> 98.0
<tb> 13 <SEP> ethylene dichloride acetone <SEP> 5: 1 <SEP> 170.0
<tb> 14 <SEP> ethylene dichloride acetone <SEP> 5: 1 <SEP> 123.0
<tb> 15 <SEP> ethylene dichloride-acetone <SEP> 5: 1 <SEP> <B> 123.5 </B>
<tb> 16 <SEP> ethylene dichloride acetone <SEP> 3: 1 <SEP> 127.5
<tb> 17 <SEP> ethylene dichloride-acetone <SEP> 3: 1 <SEP> 200.0
<tb> 18 <SEP> ethylene dichloride-acetone <SEP> 1: 1 <SEP> 456.0
<tb> 19 <SEP> ethylene dichloride acetone <SEP> 1:
1 <SEP> 356.0
<tb> <B> 20 </B> <SEP> Ethylene dichloride-acetone <SEP>! 226.5 The residues from fractions 13-16 including were recrystallized from 10 cm3 ether, the ether being evaporated very gradually at room temperature . 228.6 mg of crystals with a melting point of 218-226 ° C. were obtained there. After further recrystallization from 10 cm3 ether-acetone 1: 1 each time, crystals with a melting point of 232-235 ° C. were obtained.
A sample of 57 mg there was found to be 14a, 17a, 21-trioxy-44-pregnene 3,20-dione after renewed recrystallization from 5 cm3 of methanol. Sehmp. 234-237B0C. [A] D = -1-155 '(1.13 in methanol). The infrared spectrum is uniform. Analysis: / o calculated for C21H3005 C = <B> 69.58; </B> H = 8.34 / o found:
C = 69.42; H = 8.40 Preparation of 14a-oxy-44-androstene-3,17-dione: To 129.5 mg d4-pregnen-14a, 17a, 21-triol-3,20-dione, dissolved in 10 em of glacial acetic acid, a solution of 103.5 mg of chromium trioxide in 1 em of water and 5 cm? of acetic acid was added dropwise. After standing for 20 hours at room temperature, the reaction mixture was diluted with 25 cm3 of methanol and evaporated in vacuo to remove the excess methanol.
diluted with 70 em3 water and extracted three times with each 50 em3 ether methylene dichloride in a ratio of 5: 1.
The combined extracts were washed with 15 cm3 portions as follows: once with water, twice with. 5% sodium hydroxide and four times with water.
The washed extract was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and evaporated. The 71.7 mg crystals obtained in this way were recrystallized from 2 ems acetone. The crystallization was initiated by adding hexane dropwise to the boiling solution.
The 14a-oxy-d4-anrostene-3,17-dione thus prepared had a melting point of 259 to 265 C; [a] D = + 171 (0.6660 in chloro form). The structure was confirmed by infrared analysis. Analysis: / o calculated for C19H2603: C = 75.46; H = 8.66 / o found: C = 75.21; H = 8.64