Verfahren zur HersteHung von Estern eines neuen Wirkstoffes aus Nebennieren Es ist kürzlich über die Isolierung und teinda,rstellung einer biologisch hochwirksa- T jnen Verbindung aus Nebennieren berichtet-.
worden (Experientia <B>-</B> Vol. IX/9, <B>1953 --</B> Seite<B>333).</B> Die Konstitution dieses Wirkstoff ies wurde erst päter '[E.xpeiientia <B>10, 132</B> (1954)] aufgeklärt, wobei sich herausstellte, dass es sieh -um ein Steroid mit einer Aldehyd-. gruppe in 18-Stellung handelte, weswegen die <B>Z-,</B> Verbindung auch Aldosteron getauft wurde.
Die Konstitution des Aldosterons wird durch die beiden folgenden, miteinander offenbar im Gleichgewicht stehenden Formeln wieder gegeben, wobei bei den meisten Umsetzungen die Halbacetalforin reagiert:
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Gegenstand dex vorliegenden Erfindung ist nun die Herstellung von Estern des neuen WUrkstoffes, wobei die Oxygruppen vollstän dig oder teilweise verestert sein können.
Die Säurereste können solche beliebiger organi- seher und anorganischer Säuren sein, wie ali- phatischer, alieyelischer, araliphatiseher, aro- matiseher oder heteroeyeliseher Carbon-, Thion- earbon-, Thiolearbon- oder Sulfonsäuren, vor- zugsw-eise der Ameisensätire, Essigsäure,
Chloressigsäuren, Trifluoressigsäure, Propion- slure, Buttersäuren, Valeriansäuren, Tri- methylessigsäure, Diäthylessigsäure, Capron- säLiren, Oenanthsäuren, Caprylsä-Liren, Pal- mitinsäuren, Crotonsäare, Undecansäure, Un- cleeylensä-Lire,
Oxalsäure, Bernsteinsäure, Pi- melinsäure, Maleinsäure, Milchsäure, Carb- aminsäuren, Alkoxycarbonsä-Liren, fl-Cyclopen- tylpropionsäure, Benzoesäure, Phenylessig- säure, Phenylpropionsäuren, Trimethylgallus- säLtre, Phthalsäure, Furaii-2-earbonsä-Lire,
Iso- nicotinsäure, 3/Iethans-Lilfonsä-Lire, Toluolsulion- säure, Schwefelsäuren oder Phosphorsäuren.
Die Veresterung kann in an sich bekann ter Weise erfolgen. Als Veresterungsmittel .dienen. zum Beispiel die vorstehend genann- ten Säuren als solche oder ihre Halogenide, Anhydride oder Thiolderivate sowie Ketone; auch Umesterung kommt in Betracht.
Je nach den angewendeten Mitteln arbeitet man in Gegenwart von sauren oder basisehen Kon- densationsmitteln bzw. Katalysatoren, bei spielsweise Sulfonsäuren, Mineralsäuren, wie ChlorwasserstoffsiLuren oder Schwefelsä-Liren, oder organischen Basen, insbesondere tertiären Aminen.
Durch geeignete Wahl der Reaktions bedingungen und Menge der Mittel gelingt es, die vorhandenen Oxygrupen vollständig oder auch nur partiell zu verestern. Falls man par tielle Ester herstellen will, so kann man auch zuerst vollständig verestern und nachträglich einen Teil der veresterten Oxyor-Lippe wieder in freie Oxygi-appen überführen.
Dies erfolgt zum Beispiel durch chemische oder enzyma tische Hydrolyse, beispielsweise unter Ver- wendLing saurer oder basischer Mittel, oder, insbesondere im Falle araliphatischer Säure reste, auch durch HyArierung. Aus den auf diese Weise oder auch direkt erhaltenen, nur partiell veresterten Derivaten lassen sich durch anschliessende Veresterung mehrfach veresterte Derivate, insbesondere auch ge mischte Ester, -herstellen.
Die Verfahrensprodukte stellen für die Therapie mit Nebennierenrindenhormonen einen grossen Fortschritt dar und können als Heilmittel Verwendung finden oder als Zwi schenprodukte ni deren Herstellung dienen.
In den nachstehenden Beispielen sind die Temperaturen in Celsiusgraden angegeben. <I>Beispiel<B>1</B></I> 20 mg Aldosteron werden in<B>0,3</B> CM3 trok- kenem Pyridin gelöst, bei<B>00</B> mit 200 mg Acet- anhydrid versetzt und 2 Tage bei 2511 stehen- -gelassen. Dann wird in reinem Älther gelöst, mehrmals mit<B>je 1,5</B> ems kalter, verdünnter Salzsäure, Wasser,
Natriumbicarbonatlös-ung und Wasser gewaschen, über Natriumsulfate getrocknet und im Vaku-Lun eingedampft. Den Rückstand<B>(23</B> mg) ehromatographiert man all 1,2<B>g</B> Aluminiumoxyd der Aktivität II. Die ersten Eluate mit Benzol-Petroläther <B>(1 : 1)</B> werden verworfen, die letzten<B>-</B> sowie diej eni- geil mit Benzol enthalten das Polyacetat des Wirkstoffes, das daraus in Form eines farb losen Glases gewonnen wird.
Die nach der Hydroxamat-Methode <B>[A.</B> Zaffaroni, Recent Progress in Hormone Researchsscl. <B>8, S. 78 ff.</B> (1953)] durchgeführte Acyloxybestimmung weist, -unter der Voraussetzung eines ungefäh ren Molekulargewichtes von 430, auf das Vor liegen von 2 Acetoxygruppen hin.
Das in Schwefelkohlenstoff aufgenommene IMpektrum der Verbindung zeigt im Dop- pelbindungsbereieli bei<B>5,67 y, 5,75</B> /,t, <B>5,93</B> it und 6,17,u sowie im Fingersprintbereich u. a. bei<B>9,36</B> u,<B>9,52</B> u,<B>9,98</B> u,<B>10,23 g,</B> 10,41 <B>10,55</B> #t, <B>11,08</B> y und<B>11,58</B> it ausgeprägte Ban den, hingegen keine solchen mehr im Ily- droxylbereich.
Zur Reinigung des beschriebenen Acetates kann statt der Chroma-tographie an Alumi niumoxyd auch eine Verteilungsehromatogra- phie an Kieselgur verwendet werden. Dabei benützt man als stationäre Phase Wasser- Methanol <B>(1 : 1)</B> und als mobile Phase Ben- zol-Petrolät.her (2:<B>3).</B>
Zu derselben Verbindung gelangt man auch, wenn man den neuen Wirkstoff statt mit Acetanhydrid mit Acetylehlorid oder mit Keten acetyliert, oder wenn man eines der in den Beispielen 2 und 4 beschriebenen partiel len Acetate unter den angegebenen Bedingun gen nachaeetyliert.
Analog lässt sich zum Beispiel auch das entsprechende Polyisobutyrat oder Poly-ben- zoat des neuen Wirkstoffes herstellen. <I>Beispiel 2</I> 20 mg Aldosteron werden in wenig Aee- toll gelöst, mit etwas abs. Benzol versetzt und durch Abdampfen im Vakuum bei<B>500</B> gut getrocknet.
De r Rückstand wird in<B>0,15</B> em3 trockenem Pyridin gelöst, mit<B>10</B> mg Acet- anhydrid vermischt und<B>7</B> Stunden bei 2011 stehengelassen. Dann wird im Vakuum bei <B>500</B> eingedampft, der Rückstand in<B>5</B> em3 Chloroforni-Ätlier-Gemisch <B>(1 - 3)</B> gelöst und bei<B>00</B> mehrmals mit<B>je 1</B> ems 0,5-n. Salzsäure, Sodalösung und Wasser gewaschen.
Die Waschflüssigkeiten passieren jeweils einen zweiten Scheidetrichter mit<B>3</B> em3 Chloroform- Äther, wo sie nochmals geschüttelt werden. Die vereinigten Auszüge werden über wenig Natriumsulfat getrocknet und bei<B>501></B> einge dampft. Der Rüekstand (etwa<B>22,5</B> mg) wird mit<B>0,1</B> erns Aceton lind<B>1</B> em3 Äther versetzt und bei 011 kristallisiert.
Man erhält farblose, zu kugeligen Drusen vereinigte Kristalle vom <B>F. =</B> 190-192o, die alkalische Silberdiainin- lösung bei 200 rasch und stark reduzieren.
Mit Hilfe der Hydroxamat-Methode lässt sich in dieser Verbindung eine Acetoxygruppe nachweisen.
Das in Chloroform aufgenommene IR- Spektrum zeigt charakteristische Banden u.a. bei<B>2,78</B> (freie Hydroxylgruppe!), bei<B>5,72 '</B> /i, <B>5,82</B> ji, 5,97,u und 6,16,a im Doppelbindungs- bereich und bei<B>8,83 y,</B> 9,41,u,<B>9,66</B> p-, 10,00,u, 10,18,u, 10,41<B>p, 11,15</B> u und 11,55,a im Fin- gersprintbereieli.
Aus den Mutterlaugen der reinen Kristalle lässt sieh durch Chromatographie an Alumi niumoxyd oder Magnesiumsilikat oder durch Verteilungsehromatographie neben wenig Poly acetat des -Wirkstoffes noch etwas der reinen, partiell acetylierten Verbindung gewinnen.
An Alumini-Limoxyd -wird das Polyacetat mit reinem Benzol und Benzol-Äther <B>(1 . 1)</B> eluiert. Das partielle Acetylierungsprodukt folgt mit reinem Äther sowie mit Äther-Essinsäure- äthylester oder Äther-Methanol.
In analoger Weise können auch die mit Propionsäure, Trimethylessigsäure, #Cyclopen- tylpropionsäure, Phenylessigsäure oder Ben- zoesäure partiell veresterten Verbindungen er halten werden.
<I>Beispiel<B>3</B></I> <B>10</B> mg der im Beispiel 2 beschriebenen par- tiel acetylierten Verbindung vom F.<B>= 190</B> bis <B>1920</B> werden in<B>50</B> mg trockenem Pyridin ge löst und mit<B>6</B> mg Benzoylchlorid in wenig Ohloroforin bei<B>00</B> versetzt.
Nach 12stündigem Stehen bei 2411 arbeitet man wie im Beispiel<B>1</B> beschrieben auf -und reinigt das rohe Acetat- Benzoat durch Chromatograpliie an Alumi niumoxyd unter Verwendung von Petroläther, ZD Benzol -und Äther als Elutionsmittel,
Das mit Petrolätlier-Benzol-Gemisch el-nierte amorphe Acetat-Benzoat gibt bei der Bestimmung der cl Acylgruppen nach der Hydroxamat-Methode einen auf ein Menoaectat-Monobenzoat gut stimmenden Wert.
In analoger Weise lassen sich auch das Acotat-Valerat und das Acetat-Trimethylace- tat gewinnen.
<I>Beispiel 4</I> <B>10</B> mg Aldosteron werden wie in Beispiel<B>1</B> angegeben acetyliert und a-Lifgearbeitet. Zur partiellen Verseifung lässt man das amorphe Rohprodukt mehrere Tage in einem feuchten Lösungsmittel, wie wasserhaltigem Äther oder Aceton, stehen und engt dann im Vakuum ein.
Der Rückstand wird einer Verteilungs- ehromatographie an Kieselgur unterzogen un ter Verwendung von Benzol-Petroläther (2:<B>3)</B> als mobile Phase und Methanol-Wasser <B>(1 -</B> l# als stationäre Phase.
Hierbei erhält man ein amorplies O'xy-acetat. Die nach der Hy- droxamat-Methode bestimmte Anzahl der Acetoxygruppen ergab, berechnet für ein Mo- Jekulargewicht <B>388,5,</B> einen auf. -ein Monoace-. tat gut stimmenden Wert.
Im IR-Spektrum in Chloroformlösung treten -unter anderem die für die Hydroxylgrupp# und die für die Acetoxygruppe (im Doppelbindungsbereic11,1) typischeu Banden auf.
Die partielle Verseilung des Polyacetates und anderer, auch gemischter Polyester, kann auch mit Kaliumbiearbonat in wässerig-metha- nolischem -T#Iediuni unter milden Bedingungen durchgeführt werden, ferner mittels enzyma tischer Methoden.
In analoger Weise werden zum Beispiel das Oxy-propionat -und das Oxy-beDzoat des neuen 'Wirkstoffes gewonnen.
Die beschriebenen partiellen und Polyace tate sowie der.freieWirkstoff selbst geben bei ein- bis zweistündigern Kochen mit 10/eiger methanoliseher oder wässeriger Salzsäure oder durch ein- bis zweitägiges Stehenlassen bei 200 ein Gemisch von Verbindungen, aus dem sieh mittels Aceton-Äther farblose Nadeln vom <I>F.</I><B>=</B> 218-9-240 kristallisieren lassen.
Sie sind im Vakuum von<B>0,05</B> mm bei etwa 16011 unzer- setzt sublimierbar, <I>Beispiel<B>5</B></I> <B>5</B> mg des im Beispiel 4 beschriebenen par tiellen Acetates des neuen Wirkstoffes wer den in<B>25</B> mg trockenem Pyridin gelöst, bei 01' mit<B>2,8</B> mg Trimethylessigsäure#chlorid in wenig Chloroform versetzt und 24 Stunden bei<B>250</B> stehengelassen. Nach der üblichen Anfarbeitung und Chromatographie, wie sie in Beispiel<B>1</B> beschrieben ist,
erhält man das gemischte Trimethylacetat-acetat. Die Acyl- gruppen-Bestimmung nach der Hydroxamat- 'Wetliode spricht für das Vorliegen eines sol- eben Diesters.
In analoger Weise lassen sich züm Beispiel auch das Valerat, Benzoat '. Oenanthat, Unde-- cylenat oder Cyclopentylpropionat des im Bei spiel 4 beschriebenen Oxy-aeetates herstellen.
Das Aldosteron lässt sich beispielsweise wie folgt gewinnen.- 500 <B>kg</B> frische oder tiefgekühlte Rinder- Nebennieren werden nach<B>-</B>einem der bekann ten Verfahren, vorzugsweise nach Cartland und Kuizenga <B>[J.</B> Biol. Chem. <B>116, 57 (1936) ]</B> extraliiert. Je nach der -Qualität der Drüsen erhält man so<B>100-500 g</B> Rohextrakt, der so dann durch Verteilung zwischen wässerigem Alkohol, z.
B. 301/oigem Methanol, und Petrol- äther gründlich entlettet wird. Die wässerige Phase extrahiert man nach Entfernen des<B>Al-</B> kohols (alle Operationen erfolgen bei einer Temperatur von weniger als 501') viermal mit dem. gleichen VolLimen eines Gemisches von Äther-Chloroform (2<B>: 1</B> oder<B>3 : 1;</B> die Lö- sangsmittel müssen vorher gründlich gereinigt würden).
Die vereinigten Äther-Chloroform- Lös-Lmgen werden als solche oder nach Wa- sehen mit verdünnter Salzsäure und Hydro- gen-carbonat-Lösung und Trocknen über Na triumsulfat im Vakutun eingedampft. Man er hält auf diese Art<B>23-30 g</B> gereinigten Ex trakt.
Der genannte Extrakt wird auf einer gro ssen Säule einer Verteilungschromatographie unterworfen, wobei als stationäre Phase die 100-200fache Menge Kieselg-Lir#-#Vasser im Gewichtsverhältnis<B>1 : 1</B> und als mobile Phase Petroläther, Benzol und Chloroform dienen. Die Laufgeschwindigkeit der Eliaate soll etwa <B>90-100</B> em3 pro Stunde betragen, das Volu men jeder Fraktion 1000-1200 cm,.
Die durch Eindampfen im Vakaum gewonnenen Rückstände der einzelnen Fraktionen, aus denen zum Teil einige der bekannten Cortico- steroide bereits kristallisiert anfallen, werden papierehromatogra.phiseh analysiert. Die neue Verbindung lässt sich dabei zum Beispiel mit Hilfe der R.r-Werte, der UV-Absorption und des Reduktiansvermögens gegen Silberdiamiii- Lösung in solchen Fraktionen lokalisieren, welche durch Eluation mit Benzol-Petroläther <B>7: 3</B> bis<B>9: 1</B> erhalten -werden.
Die betreffen den Fraktionen (300-400 mg) werden hier auf vereinigt und an einer zweiten Säule aus gereinigtem Cell-Lilosepulver durch Verteilung zwischen 601/eigem wässerigem Methanol und Petrolät,her-Toluol-Gemisch (1:2 bis<B>1:3)</B> aufgetrennt. Das Gewichtsverhältnis von Sub stanz zu Cellulose beträgt dabei etwa<B>1 : 100</B> und dasjenige von stationärer Phase zu Cel- lulose <B>1 :</B> 2. Zum Durchlauf einer einzelnen Fraktion (40 ems) benötigt man etwa<B>5</B> Stun den.
Die: durch Eindampfen erhaltenen Frak tionen werden wiederum papierehromatogra- phisch analysiert. Aus den ausgewählten und vereinigten Fraktionen lässt sieh das Aldoste- ron nun mittels Aceton-Äther, vorteilhaft in Gegenwart von wenig Wasser, kristallisieren.
Durch Umkristallisieren gewinnt man farblose Kristalle des Elektrocortins in Form des Hy- drates vom doppelten Schmelzpunkt 104 bis 112 und 153-15811, die sich als einheitlich er weisen Lind eine hohe biologische Wirksamkeit auf den Mineralstoffwechsel besitzen.
Die C,11.-Bestimmung des im Hoehvakuum bei<B>501></B> getrockneten Präparates lieferte die folgen den Werte: Kohlenstoff<B>69,68</B> '/o, Wasserstoff 8,39 %; berechnet für C#>,I-I2805: Kohlenstoff 69,971/9, Wasserstoff<B>7,83</B> %. Die übrigen Ei genschaften der getrockneten Verbindung wei chen nicht wesentlich von denjenigen des Hy- drates ab.
Process for the production of esters of a new active ingredient from the adrenal glands It has recently been reported on the isolation and preparation of a biologically highly effective compound from the adrenal glands.
(Experientia <B> - </B> Vol. IX / 9, <B> 1953 - </B> page <B> 333). </B> The constitution of this active ingredient was only later '[E. xpeiientia <B> 10, 132 </B> (1954)], which turned out to be a steroid with an aldehyde. group acted in the 18-position, which is why the <B> Z-, </B> compound was also christened aldosterone.
The constitution of aldosterone is given by the following two formulas, which are apparently in equilibrium with each other, with the hemiacetalforin reacting in most reactions:
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The present invention now relates to the production of esters of the new active ingredient, it being possible for the oxy groups to be fully or partially esterified.
The acid residues can be those of any organic and inorganic acids, such as aliphatic, allyelic, araliphatic, aromatic or heteroeyelic carboxylic, thion, earbon, thiol arbon or sulfonic acids, preferably formic acid, acetic acid,
Chloroacetic acids, trifluoroacetic acid, propionic acid, butyric acids, valeric acids, trimethyl acetic acid, diethylene acetic acid, caproic acids, oenanthic acids, caprylic acids, palmitic acids, crotonic acids, undecanoic acid, uncleeylensä-lire,
Oxalic acid, succinic acid, picelic acid, maleic acid, lactic acid, carbamic acids, alkoxycarboxylic acids, fl-cyclopentylpropionic acid, benzoic acid, phenylacetic acid, phenylpropionic acids, trimethylgallic acid, phthalic acid, furai-2-ear,
Isonicotinic acid, 3 / ethane-Lilfonsä-Lire, toluenesulionic acid, sulfuric acids or phosphoric acids.
The esterification can take place in a manner known per se. Serve as an esterifying agent. For example, the acids mentioned above as such or their halides, anhydrides or thiol derivatives and ketones; transesterification is also possible.
Depending on the agents used, acidic or basic condensing agents or catalysts are used, for example sulfonic acids, mineral acids such as hydrochloric acids or sulfuric acids, or organic bases, especially tertiary amines.
A suitable choice of the reaction conditions and the amount of agent make it possible to completely or even partially esterify the oxy groups present. If you want to produce partial esters, you can first completely esterify and then convert part of the esterified Oxyor lip back into free Oxygi appen.
This is done, for example, by chemical or enzymatic hydrolysis, for example using acidic or basic agents, or, especially in the case of araliphatic acid residues, also by hydrogenation. From the only partially esterified derivatives obtained in this way or directly, multiple esterified derivatives, in particular also mixed esters, can be prepared by subsequent esterification.
The products of the process represent a major step forward for therapy with adrenal cortex hormones and can be used as remedies or as intermediates in their manufacture.
In the examples below, the temperatures are given in degrees Celsius. <I>Example<B>1</B> </I> 20 mg aldosterone are dissolved in <B> 0.3 </B> CM3 dry pyridine, with <B> 00 </B> with 200 mg Acetic anhydride was added and left at 2511 for 2 days. Then it is dissolved in pure elder, several times with <B> 1.5 </B> ems cold, diluted hydrochloric acid, water,
Washed sodium bicarbonate solution and water, dried over sodium sulfate and evaporated in a vacuum. The residue <B> (23 </B> mg) is chromatographed every 1.2 <B> g </B> aluminum oxide of activity II. The first eluates with benzene petroleum ether <B> (1: 1) </ B > are discarded, the last <B> - </B> and the ones with benzene contain the polyacetate of the active ingredient, which is obtained from it in the form of a colorless glass.
According to the hydroxamate method <B> [A. </B> Zaffaroni, Recent Progress in Hormone Researchsscl. <B> 8, p. 78 ff. </B> (1953)] indicates the presence of 2 acetoxy groups, assuming an approximate molecular weight of 430.
The I spectrum of the compound recorded in carbon disulfide shows in the double bond range i at <B> 5.67 y, 5.75 </B> /, t, <B> 5.93 </B> it and 6.17, u and in the fingerprint area and a. at <B> 9.36 </B> u, <B> 9.52 </B> u, <B> 9.98 </B> u, <B> 10.23 g, </B> 10 , 41 <B> 10.55 </B> #t, <B> 11.08 </B> y and <B> 11.58 </B> it have pronounced bands, but none in the ilydroxyl area .
To purify the described acetate, instead of chromatography on aluminum oxide, distribution chromatography on diatomaceous earth can also be used. Water-methanol <B> (1: 1) </B> is used as the stationary phase and benzene-petroleum ether (2: <B> 3) </B> as the mobile phase
The same compound is also obtained if the new active ingredient is acetylated with acetyl chloride or with ketene instead of acetic anhydride, or if one of the partial acetates described in Examples 2 and 4 is nachaeetyliert under the specified conditions.
For example, the corresponding polyisobutyrate or polybenzoate of the new active ingredient can also be produced analogously. <I> Example 2 </I> 20 mg of aldosterone are dissolved in a little aerosol, with a little abs. Benzene was added and dried thoroughly by evaporation in a vacuum at <B> 500 </B>.
The residue is dissolved in <B> 0.15 </B> em3 dry pyridine, mixed with <B> 10 </B> mg of acetic anhydride and left to stand for <B> 7 </B> hours at 2011. Then it is evaporated in a vacuum at <B> 500 </B>, the residue is dissolved in <B> 5 </B> em3 Chloroforni-Etlier mixture <B> (1 - 3) </B> and at <B> 00 </B> several times with <B> each 1 </B> ems 0.5-n. Hydrochloric acid, soda solution and water.
The washing liquids each pass through a second separating funnel with <B> 3 </B> em3 chloroform ether, where they are shaken again. The combined extracts are dried over a little sodium sulfate and evaporated at <B> 501> </B>. The residue (about <B> 22.5 </B> mg) is mixed with <B> 0.1 </B> ers acetone and <B> 1 </B> em3 ether and crystallized at 011.
Colorless crystals of <B> F. are obtained which are combined to form spherical drusen. = </B> 190-192o, reduce the alkaline silver diainine solution rapidly and strongly at 200.
An acetoxy group can be detected in this compound using the hydroxamate method.
The IR spectrum recorded in chloroform shows characteristic bands i.a. at <B> 2.78 </B> (free hydroxyl group!), at <B> 5.72 '</B> / i, <B> 5.82 </B> ji, 5.97, u and 6.16, a in the double bond area and at <B> 8.83 y, </B> 9.41, u, <B> 9.66 </B> p-, 10.00, u, 10, 18, u, 10.41 <B> p, 11.15 </B> u and 11.55, a in the finger sprint area.
From the mother liquors of the pure crystals can be obtained by chromatography on aluminum oxide or magnesium silicate or by partition chromatography in addition to a little poly acetate of the active ingredient, some of the pure, partially acetylated compound.
The polyacetate is eluted on aluminum limoxide with pure benzene and benzene ether <B> (1. 1) </B>. The partial acetylation product follows with pure ether as well as with ether-ethyl acetate or ether-methanol.
In an analogous manner, the compounds partially esterified with propionic acid, trimethyl acetic acid, cyclopentyl propionic acid, phenylacetic acid or benzoic acid can also be obtained.
<I>Example<B>3</B> </I> <B> 10 </B> mg of the partially acetylated compound from F. <B> = 190 </B> to <B> described in Example 2 > 1920 </B> are dissolved in <B> 50 </B> mg dry pyridine and mixed with <B> 6 </B> mg benzoyl chloride in a little ohloroforin at <B> 00 </B>.
After standing for 12 hours at 2411 one works as described in Example <B> 1 </B> and the crude acetate benzoate is purified by chromatography on aluminum oxide using petroleum ether, ZD benzene and ether as eluent,
The amorphous acetate-benzoate el-nated with a petroleum ether-benzene mixture gives, in the determination of the acyl groups by the hydroxamate method, a value which is good for a menoaectate monobenzoate.
The acetate-valerate and the acetate-trimethyl acetate can also be obtained in an analogous manner.
<I> Example 4 </I> <B> 10 </B> mg of aldosterone are acetylated as indicated in Example <B> 1 </B> and a-Lif worked. For partial saponification, the amorphous crude product is left to stand for several days in a moist solvent, such as aqueous ether or acetone, and then concentrated in vacuo.
The residue is subjected to a partition chromatography on kieselguhr using benzene petroleum ether (2: 3) as the mobile phase and methanol-water (1–1) as the stationary phase Phase.
This gives an amorphous O'xy acetate. The number of acetoxy groups determined by the hydroxamate method, calculated for a molecular weight of <B> 388.5, </B> resulted in one. -a Monoace-. did good tuning value.
In the IR spectrum in chloroform solution, the bands typical for the hydroxyl group and those for the acetoxy group (in the double bond range 11,1) appear, among other things.
The partial stranding of the polyacetate and other, also mixed polyesters, can also be carried out with potassium carbonate in aqueous-methanolic T # Iediuni under mild conditions, also by means of enzymatic methods.
In an analogous manner, for example, the oxy-propionate and the oxy-beDzoate of the new 'active ingredient are obtained.
The partial and polyacetates described as well as the free active ingredient itself give a mixture of compounds when boiled for one to two hours with 10% methanolic or aqueous hydrochloric acid or when left to stand for one to two days at 200, from which you can see colorless needles from the acetone-ether <I>F.</I> <B> = </B> 218-9-240 let crystallize.
They can be sublimated without decomposition in a vacuum of <B> 0.05 </B> mm at around 16011, <I>Example<B>5</B> </I> <B> 5 </B> mg des Partial acetate of the new active ingredient described in Example 4 who dissolved in 25 mg of dry pyridine, treated with 2.8 mg of trimethylacetic acid chloride in a little chloroform at 01 ', and 24 Hours left at <B> 250 </B>. After the usual preparation and chromatography, as described in example <B> 1 </B>,
the mixed trimethyl acetate is obtained. The determination of acyl groups according to the hydroxamate wetliode indicates the presence of such a diester.
The valerate 'benzoate' can also be used in an analogous manner. Oenanthate, undecylenate or cyclopentyl propionate of the oxy-acetate described in Example 4 produce.
The aldosterone can be obtained, for example, as follows: - 500 <B> kg </B> fresh or frozen beef adrenal glands are <B> - </B> one of the known methods, preferably according to Cartland and Kuizenga <B> [ J. Biol. Chem. 116, 57 (1936)] extralated. Depending on the quality of the glands, this gives <B> 100-500 g </B> of raw extract, which is then distributed by partitioning between aqueous alcohol, e.g.
B. 301 / oigem methanol, and petroleum ether is thoroughly degassed. After removing the <B> Al </B> alcohol (all operations take place at a temperature of less than 501 '), the aqueous phase is extracted four times with the. equal volumes of a mixture of ether-chloroform (2 <B>: 1 </B> or <B> 3: 1; </B> the solvents must be thoroughly cleaned beforehand).
The combined ether-chloroform solutions are evaporated as such or after washing with dilute hydrochloric acid and hydrogen carbonate solution and drying over sodium sulfate in vacuo. In this way you get <B> 23-30 g </B> purified extract.
The extract mentioned is subjected to partition chromatography on a large column, the stationary phase being 100-200 times the amount of kieselg-Lir # - # water in a weight ratio of 1: 1 and petroleum ether, benzene and chloroform as the mobile phase serve. The running speed of the Eliaate should be about <B> 90-100 </B> em3 per hour, the volume of each fraction 1000-1200 cm.
The residues of the individual fractions obtained by evaporation in a vacuum, from which some of the known cortico-steroids are partially already crystallized, are analyzed on paper. The new compound can be localized in such fractions, for example with the help of the Rr values, the UV absorption and the reduction capacity against silver diamond solution, which by elution with benzene petroleum ether <B> 7: 3 </B> to < B> 9: 1 </B> -be obtained.
The fractions concerned (300-400 mg) are combined here and on a second column of purified Cell-Lilose powder by distributing between 60 liters of aqueous methanol and petroleum ether, her-toluene mixture (1: 2 to 1: 3) </B> separated. The weight ratio of substance to cellulose is about <B> 1: 100 </B> and that of stationary phase to cellulose is <B> 1: </B> 2. Required for the passage of a single fraction (40 ems) about <B> 5 </B> hours.
The fractions obtained by evaporation are again analyzed by paper chromatography. The aldosteron can now be crystallized from the selected and combined fractions using acetone-ether, advantageously in the presence of a little water.
Recrystallization gives colorless crystals of electrocortin in the form of hydrates with double melting points 104 to 112 and 153-15811, which are found to be uniform and have a high biological effectiveness on mineral metabolism.
The C, 11 determination of the preparation dried in a high vacuum at <B> 501> </B> yielded the following values: carbon <B> 69.68 </B> '/ o, hydrogen 8.39%; calculated for C #>, I-I2805: carbon 69.971 / 9, hydrogen 7.83%. The other properties of the dried compound do not differ significantly from those of the hydrate.