CH399653A - Verfahren zur Inaktivierung von Poliomyelitisviren - Google Patents

Description

  
 



  Verfahren zur Inaktivierung von   Poliomyelitisviren   
Es sind Verfahren bekannt, bei denen man Polio  myelitisviren    mit Formaldehyd inaktiviert. Diese Verfahren haben auch Eingang in die industrielle Herstellung einer Vaccine gegen das   Poliomyelitisvirus    aller drei Typen gefunden. Es hat sich gezeigt, dass in vielen Fällen die Antigenität nach der Inaktivierung mit Formaldehyd niedrig ist. Es hat daher nicht an Versuchen gefehlt, die Inaktivierung unter anderen Bedingungen auszuführen, sei es durch änderung des   Inaktivierungsreagenzes,    sei es durch thermische oder Strahlungsenergie.



   So haben z. B. Haas und Mitarbeiter das Poliomyelitisvirus durch Erwärmen auf 450 ohne Verwendung von Formaldehyd inaktiviert und beobachtet, dass diese thermische Inaktivierung in Anwesenheit von   Dinatrium- dihydrogen-äthylendiamin-N,N'-    tetraacetat verzögert wird. (Thomssen, R. V. Dostal, R.



  Haas und E. Ruschmann, Vortrag auf dem VI. Symposium der Europäischen Vereinigung zur Bekämpfung der Kinderlähmung vom 6.-9. September 1959 in München.)
Es wurde nun ein Verfahren zur Inaktivierung von   Poliomyelitisviren    mittels Formaldehyd gefunden, das überraschenderweise zu einer besseren Antigenität und einer höheren Immunisierungsfähigkeit der inaktiven Viren führt. Dieses Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man einer Virussuspension   For-    maldehyd und einen Chelatbildner, der nicht zu Fällungen Anlass gibt, in einer Konzentration von 2 bis 100 mg Chelatbildner pro   100 ccm    Virussuspension zufügt. Die Reaktion wird in der Regel bei einem pH-Wert von 5 bis 9, vorzugsweise 7, durchgeführt.



  Die Inaktivierung erfolgt vorteilhaft bei   0-60 ,    vorzugsweise bei   37 ,    und zwar in einer Zeit von 3 bis 60 Tagen.



   Als Chelatbildner dienen z. B. das Natriumsalz der Nitrilotriessigsäure, Diaminocyclohexantetraessigsäure,   Uramildiessigsäure,    vorzugsweise Dinatrium  dihydrogen-äthylendiamin-N,N'-tetraacetat,    Acetessigsäureester und Siderophilin (Transferin), ausserdem Aminosäurengemische, wie sie z. B. in Lactalbuminhydrolysat vorliegen.



   Man geht meistens so vor, dass man eine Formal  dehydlösung    gleichzeitig mit einer Lösung eines Chelatbildners der Virussuspension zufügt.



   Die nach dem erfindungsgemässen Verfahren inaktivierten Viren dienen gegebenenfalls nach Adsorption an Aluminiumhydroxyd oder andere Trägerstoffe als Impfstoffe. Wie an Meerschweinchen und Hühnchen, die mit diesem Impfstoff immunisiert werden, gezeigt werden kann, vermitteln diese Impfstoffe eine erheblich bessere Antikörperbildung als solche, deren Virus anteil nur mit Formaldehyd ohne Chelatbildner inaktiviert wurde.



   Beispiel 1
Eine in der üblichen Weise hergestellte Suspension von Poliomyelitisvirus wird wie gewöhnlich filtriert und in zwei gleiche Teile A und B aufgeteilt. Der Titer, d. h. die Anzahl Viruspartikel, beträgt in beiden Teilen je   107X4      ID50    pro ml Virus Typ 1. Teil A wird sodann mit konzentrierter wässriger Formal  dehydlösung    in der üblichen Konzentration sowie ausserdem mit 20 mg Dinatrium-dihydrogen-äthylendiamin-N,N'-tetraacetat/100 ml versetzt. Teil B erhält die gleiche Formaldehydkonzentration, jedoch kein Dinatrium-dihydrogen-äthylendiamin-N,N'-tetraacetat.



   Beide Suspensionen werden in gleicher Weise und gleich lang bei   37     inaktiviert. Nach Beendigung der Inaktivierung und der für beide Teile gleichartig durchgeführte Zwischenfiltration werden die Suspensionen auf ihre Wirksamkeit analog den    Vor-     schriften für die staatliche Prüfung von Impfstoffen gegen Kinderlähmung (Poliomyelitis)   vorgesehenen Verfahren geprüft.



   Teil A zeigt einee Wirksamkeit von 533 328 ID50 pro ml Serum (Titer 1:1626 bei 82 ID50 pro 0,25 ml).



   Die Wirksamkeit von Teil B beläuft sich auf 41 948   IDXo    pro ml Serum (Titer 1:128 bei 82   IDi,    pro 0,25 ml).



   Die Wirksamkeitssteigerung der Dinatrium-dihydrogen-äthylendiamin-N, N' -tetraacetat enthaltenden Suspensionen im Vergleich zur Kontrolle beträgt demnach das   12,7fache.   



   Beispiel 2
In einem Versuchsverfahren, das dem unter Beispiel 1 entspricht, werden zwei gleich grosse Volumina aus gleichem Material inaktiviert, von denen der eine statt Dinatrium-dihydrogen-äthylendiamin-N,N'-tetraacetat das Natriumsalz der Nitrilotriessigsäure (Tri  methylamino-α,α',α''-tricarbonsäure)    enthält. Die Wirksamkeitsprüfung nach gleichartiger Behandlung der beiden inaktivierten Virussupensionen zeigt folgendes Ergebnis:
Teil A:   1 080 824 ID50    pro ml Serum (Titer 1:1618 bei 167 ID50 pro 0,25 ml).



   Teil B: 85 504 ID50 pro ml Serum (Titer 1:128 bei 167 ID50 pro 0,25 ml).



   Teil A ist also   12,6mal    wirksamer als Teil B.



   Beispiel 3
Um den Effekt der löslichen chelatbildenden Substanzen noch eindeutiger nachzuweisen, wird in einem Versuch ein an sich unwirksames Material (Titer  <  107 ID50 pro ml) in gleicher Weise wie oben mit Dinatrium-dihydrogen-äthylendiamin-N,N'-tetraacetat behandelt.



   Die Wirksamkeitsprüfung ergibt für Teil A (mit Dinatrium- dihydrogen- äthylendiamin-   N,N'- tetraace-    tat): 339 968 ID50 pro ml Serum (Titer 1:1024 bei 83 ID50 pro 0,25 ml).



   Teil B (ohne   Dinatrium-dihydrogen-äthylendi-      amin-N,N'-tetraacetat):     < 5312   IDJ,    pro ml Serum (Titer schlechter als 1:16 bei 83 ID50 pro 0,25 ml).



   Teil A ist also mehr als 64mal so wirksam wie Teil B.   

Claims (1)

1. PATENTANSPRUCH Verfahren zur Inaktivierung von Poliomyelitisviren mittels Formaldehyd, dadurch gekennzeichnet, dass die Inaktivierung mittels Formaldehyd unter Zusatz eines Chelatbildners, der nicht zu Fällungen Anlass gibt, in einer Konzentration von 2-100 mg des Chelatbildners pro 100 ccm der Virussuspension ausgeführt wird.

   UNTERANSPRÜCHE 1. Verfahren gemäss Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass Dinatrium-dihydrogen-äthylen- diamin-N,N'-tetraacetat als Chelatbildner verwendet wird.

   2. Verfahren gemäss Patentanspruch, dadurch ge kennzeichnet, dass das Natriumsalz der Nitrilotriessigsäure als Chelatbildner verwendet wird.

   3. Verfahren gemäss Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man 20 mg Chelatbildner pro 100 ccm der genannten Virussuspension verwendet wird.