CH412405A

CH412405A - Procédé de séparation du liquide contenant des éléments du sang d'autres éléments et dispositif pour sa mise en oeuvre

Info

Publication number: CH412405A
Application number: CH1097563A
Authority: CH
Inventors: Hanna Brewer John
Original assignee: Hanna Brewer John
Priority date: 1963-06-14
Filing date: 1963-09-05
Publication date: 1966-04-30
Also published as: DE1498577A1; US3146163A; DE1498577B2; FR1361738A; GB969741A

Description

Procédé de séparation du liquide contenant des éléments du sang d'autres éléments et dispositif pour sa mise en ouvre La présente invention a pour objets un procédé de séparation du liquide contenant des éléments du sang, tels le plasma et le sérum, d'autres éléments, dans un échantillon de sang, ainsi qu'un dispositif pratique, simple, rapide et peu coûteux pour la mise en ouvre de ce procédé.

Il est nécessaire, dans la plupart des essais et réactions immunologiques, sérologiques et chimiques effectués avec le sang de disposer de plasma et de sérum. Ce sang a été obtenu jusqu'à présent d'une manière générale par prélèvement dans une veine du bras et on sépare les globules du sérum ou du plasma par centrifugation. En raison des perfectionnements des techniques micro-chimiques, ces essais peuvent s'effectuer avec des échantillons très petits de sang, prélevés en piquant le doigt ou le lobe de l'oreille. Cette opération s'effectue généralement au moyen d'une lancette avec laquelle on prélève deux ou trois gouttes de sang permettant de recueillir une quantité utilisable de sérum ou de plasma.

On sépare alors le sérum ou le plasma en faisant couler le sang dans un tube capillaire, puis en le centrifugeant pour sé parer les globules du sang du liquide contenant les éléments. Dans ces deux opérations, la centrifugation prend beaucoup de temps et elle exige en outre un équipement spécial, du courant électrique et d'autres facilités de laboratoire.

L'invention a pour but de remédier aux diffi cultés et inconvénients des procédés antérieurs, au moyen d'un procédé de séparation du liquide conte nant les éléments tels que le sérum et le plasma à partir d'un petit échantillon de sang, dont il est facile de se servir, requérant aussi peu de temps que possible et permettant de se passer d'un appareil de centrifugation ou d'un équipement de laboratoire en se servant d'un dispositif de petites dimensions, peu encombrant et peu coûteux, et qui supprime les problèmes de la contamination et de la stérilisation.

Le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que l'on dépose un échantillon de sang dans une portion principale d'un évidement d'un élément plan, en ce qu'on agite cet échantillon en le mélangeant avec un agent de précipitation qui s'y trouve jusqu'à ce que les éléments se séparent du sang, puis en ce qu'on incline l'élément plan pour faire couler le liquide contenant les éléments du sang de la portion principale dans la portion auxiliaire de l'évidement.

Le dispositif pour la mise en ouvre du procédé est caractérisé en ce qu'il comporte un élément plan dans la surface supérieure duquel est formé un évide ment dont la surface en retrait par rapport à la sur face supérieure est imperméable aux liquides et qui comporte une portion principale destinée à recevoir d'abord l'échantillon de sang et contient un agent de précipitation de certains éléments du sang, et une portion auxiliaire qui communique avec la portion principale et destinée à recevoir ensuite les éléments non précipités et les liquides du sang.

Le dessin annexé représente, à titre d'exemple, un mode d'exécution du dispositif pour la mise en ouvre du procédé, objet de l'invention. La fig. 1 en est une vue en perspective.

La fig. 2 est la coupe partielle suivant 2-2 de la fig. 1 observée dans la direction des flèches. La fig. 3 est la vue perspective du dispositif en position horizontale en surplomb sur le bord d'une surface de support et indiquant de quelle manière s'effectuent la première et la seconde opération du procédé de l'invention, La fig. 4 est la vue perspective analogue sur la quelle le dispositif est incliné sur la même surface de support et indiquant de quelle manière s'effectue la troisième opération du procédé de l'invention.

Le dispositif représenté dans les fig. 1 et 2 du dessin comporte un élément plan, mince, relativement peu encombrant 10, de préférence sous forme de palette ou de carte, dont la surface supérieure rela tivement plane 11 présente un évidement 12.

La surface de l'évidement en retrait au-dessous de la surface supérieure 11 de la palette est imper méable aux liquides. L'évidement comporte une por tion principale relativement grande 13, disposée plus près d'une extrémité de la palette et une portion auxiliaire relativement petite 14 communiquant avec la première et disposée plus près de l'autre extrémité de la palette.

La palette est établie en une matière elle-même inerte à l'égard des éléments du sang et imperméable aux éléments liquides ou en toute autre matière appropriée sur laquelle, ou tout au moins sur la sur face de l'évidement 12, est appliquée une couche de matière inerte à l'égard des éléments du sang et im perméable aux liquides. La palette peut être ainsi en une matière plastique, telle que le polypropylène, le polyéthylène, le polystyrène, ou en une matière plas tique polyvinylique contenant un plastifiant inerte à l'égard des éléments du sang. Cependant la palette est de préférence en une matière fibreuse, telle que le carton ou le papier journal encollé recouvert d'une couche de caséine par exemple.

La surface supé rieure totale ou au moins la portion de son évidement sont recouvertes d'une couche inerte à l'égard des éléments du sang et imperméable à ses éléments li quides, par exemple en polyéthylène, polypropylène, polystyrène ou matière plastique polyvinylique du type indiqué.

La profondeur de l'évidement 12 est suffisante pour recevoir l'échantillon initial de sang dans sa portion principale 13 lorsque la palette est horizon tale et à transférer le liquide contenant les éléments dans sa portion auxiliaire lorsqu'on l'incline suivant un certain angle, ainsi qu'on le verra plus loin.

La surface de la portion principale de l'évidement est assez étendue pour que en raison de la cohésion du sang, l'échantillon initial y reste sans couler dans sa portion auxiliaire lorsque la palette est hori zontale. La surface de la portion auxiliaire est assez étendue pour retenir le liquide contenant les élé ments du sang lorsqu'on incline la palette suivant un certain angle ainsi qu'on le verra plus loin.

Le dispositif décrit est destiné à être utilisé avec des échantillons de sang relativement petits, que l'on prélève en piquant un doigt ou le lobe de l'oreille avec une lancette. Il suffit généralement à cet effet de deux à cinq gouttes de sang. On a constaté que l'on obtient des résultats satisfaisants avec le dis- positif décrit en donnant à l'évidement une profon deur d'au moins 0,1 mm, à la surface de la portion principale de l'évidement une étendue d'environ 300 mm2 au moins et à la surface de sa portion auxi liaire une étendue d'environ 75 mm2 au moins. On verse l'échantillon initial de sang de deux à cinq gouttes, de préférence d'environ trois gouttes dans la portion principale 13 de l'évidement, dans laquelle certains de ses éléments se séparent par agglutination, coagulation ou précipitation.

A cet effet on dispose dans cette portion principale des agents qui provoquent la séparation, l'agglutination, la formation de caillots ou la précipitation de cer tains de ces éléments. Ces agents sont disposés de préférence sous forme de couche sur la surface de la portion principale 13. On désire dans certains cas recueillir le sérum, c'est-à-dire le liquide contenant les éléments du sang, sans les globules et le fibrinogène. Dans d'autres cas, on désire recueillir le plasma qui comprend le liquide contenant les éléments sans les globules mais avec le fibrinogène.

La couche servant à recueillir le sérum ou le plasma doit contenir une hémagglu- tinine appropriée, telle que la phytohémagglutinine, ou celle que l'on obtient par des procédés immuno- logiques. Si l'on désire recueillir le sérum, la couche doit aussi contenir un agent coagulant accélérant la formation du caillot de fibrinogène tel que la throm bine, ou bien cette opération peut s'effectuer plus lentement en agitant rapidement.

Lorsque l'on désire recueillir le plasma, la couche doit contenir, outre l'hémagglutinine, un agent anticoagulant, tel que l'héparine, le dicumarol, le citrate de sodium, l'oxa- late de potassium, d'ammonium, de lithium ou de sodium, ou le diamino-tétra acétate d'éthylène.

L'hémagglutinine à choisir de préférence consiste en phytohémagglutinine sensiblement pure, telle que celle que l'on prépare à partir des graines de légu mineuses. Une phytohémagglutinine qui donne d'excellents résultats est celle obtenue à partir des haricots. Mais on ne doit pas choisir d'hémaggluti- nine qui précipite la fraction de globuline. On a cons taté que l'on obtient des résultats satisfaisants en in corporant dans la portion principale de l'évidement ayant les dimensions indiquées ci-dessus, convenant à un petit échantillon de sang, c'est-à-dire de 2 à 5 gouttes, une couche d'au moins 0,3 et de préférence de 0,5 mg environ.

On peut appliquer cette couche en mélangeant une proportion d'environ 0,5 mg de phytohémagglutinine avec 0,1 cm3 de liquide salin physiologique, puis en l'étalant uniformément sur la surface de la portion principale de l'évidement et en la laissant sécher.

Lorsque l'on désire recueillir le plasma, l'agent anticoagulant à choisir de préférence consiste en héparine avec un échantillon de sang du volume pré cité. On a constaté que l'on obtient des résultats satisfaisants dans un évidement des dimensions pré citées en incorporant à la couche une proportion d'au moins 0,02 et de préférence de 0,1 mg environ d'hé parine. On peut mélanger l'héparine avec le liquide physiologique salin en même temps que la phyto- hémagglutinine et l'appliquer sur la surface de la portion principale de l'évidement.

Lorsque la palette doit servir à recueillir le sérum, l'agent de coagulation consiste de préférence en thrombine. On a constaté que l'on obtient de bons résultats en incorporant à la couche au moins 10 et de préférence 12 unités de cet agent. Ces unités sont dites unités N.I.H. et ont été établies par le National Institute of Health . On peut mélanger la thrombine avec la phytohémagglutinine dans le liquide physio logique salin et l'appliquer sur la surface de la por tion principale de l'évidement.

Les exemples suivants indiquent de quelle ma nière on peut préparer et appliquer les couches sur les palettes servant à prélever le sang et à en séparer le plasma.

Exemple 1 On prépare la couche en mélangeant les subs tances suivantes
EMI0003.0002

Phytohémagglutinine <SEP> sensiblement <SEP> pure <SEP> . <SEP> . <SEP> 0,3 <SEP> mg
<tb> Héparine <SEP> ... <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> .................. <SEP> . <SEP> . <SEP> 0,1 <SEP> mg
<tb> Liquide <SEP> salin <SEP> physiologique <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> 0,1 <SEP> ce Après avoir intimement mélangé les substances, on étale le mélange uniformément sur la surface de la portion principale de l'évidement, puis on fait sécher la couche, en y formant une couche uniformé ment répartie du mélange de phytohémagglutinine, d'héparine et des sels.

On peut alors emballer la palette, avec une lancette appropriée, une tige appro priée pour agiter et une boucle ou pipette dans une enveloppe fermée, obtenant ainsi une palette prête à servir pour prélever un petit échantillon de sang et en séparer le plasma.

Exemple 2 On prépare la couche en mélangeant les subs tances suivantes
EMI0003.0003

Hémagglutinine <SEP> ....... <SEP> ....... <SEP> 0,5 <SEP> mg
<tb> Citrate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> ... <SEP> ... <SEP> 1,0 <SEP> mg
<tb> Liquide <SEP> salin <SEP> normal <SEP> ....... <SEP> . <SEP> ... <SEP> .... <SEP> 0,1 <SEP> cm3 On mélange les substances et on applique ce mélange sur la surface de la portion principale de l'évidement, puis on emballe la palette comme dans l'exemple 1.

Exemple 3 Les proportions des substances de la couche des exemples 1 et 2 donnent toute satisfaction dans les essais du sang humain et de la plupart des animaux de laboratoire. Mais lorsqu'il s'agit du sang des bo vins, on a besoin d'une quantité beaucoup plus grande. Le présent exemple convient particulièrement à l'essai du sang des bovins.

On prépare la couche en mélangeant les subs tances suivantes
EMI0003.0004

Hémagglutinine <SEP> ..... <SEP> .............. <SEP> 3,0 <SEP> mg
<tb> Héparine <SEP> .................... <SEP> . <SEP> ..... <SEP> 0,2 <SEP> mg
<tb> Liqueur <SEP> saline <SEP> normale <SEP> .............. <SEP> 0,1 <SEP> cm3 Après avoir mélangé les substances, on applique la couche et on emballe la palette comme dans l'exemple 1. Mais pour se servir de la palette, on ajoute une goutte de plus de liquide salin au moment où l'on dépose le sang dans la portion principale de l'évidement.

Les exemples suivants indiquent de quelle ma nière on peut préparer et appliquer les couches sur les évidements des palettes servant à prélever de petits échantillons de sang et à en séparer le sérum. <I>Exemple 4</I> On mélange les substances suivantes
EMI0003.0005

Phytohémagglutinine
<tb> sensiblement <SEP> pure <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> 0,5 <SEP> mg
<tb> Thrombine <SEP> ....... <SEP> . <SEP> ...... <SEP> 10 <SEP> unités <SEP> N.I.H.
<tb> Liquide <SEP> salin <SEP> physiologique <SEP> . <SEP> . <SEP> 0,1 <SEP> cm3 Après avoir mélangé les substances intimement, on étale le mélange uniformément sur la portion principale de l'évidement de la palette, puis on fait sécher la couche, qui consiste en un mélange uni forme de phytohémagglutinine, d'alun et de sel.

On peut emballer la palette ainsi préparée dans une enveloppe fermée avec une lancette, une tige pour agiter et une boucle ou pipette, en obtenant ainsi une trousse pouvant servir à prélever le sang et à en séparer le sérum.

<I>Exemple 5</I> On mélange les substances suivantes
EMI0003.0006

Hémagglutinine <SEP> .................... <SEP> 0,5 <SEP> mg
<tb> Liquide <SEP> salin <SEP> normal <SEP> ................ <SEP> 0,1 <SEP> cm3 Après avoir ainsi mélangé les substances, on les applique à la surface de la portion principale de l'évidement et on emballe la palette de la manière décrite dans l'exemple 4. Mais lorsqu'on se sert de cette palette, il est nécessaire d'agiter l'échantillon de sang plus rapidement et pendant plus longtemps (une ou deux minutes) pour former un caillot avec le fibrinogène puisque la couche ne contient pas d'agent de formation de caillot.

Il doit être bien entendu que les substances énumérées dans les exemples 1 à 5 peuvent être remplacées par d'autres hémagglutinines, agents de formation de caillots et anticoagulants. De même, il doit être bien entendu que lorsque l'on traite des échantillons de sang plus importants et que les évi dements sont plus grands, la quantité des substances de la couche doit augmenter proportionnellement. Le dispositif est employé de la manière suivante On dépose un petit échantillon de sang de 2 à 5 et de préférence de 3 gouttes, dans la portion princi pale 13 de l'évidement de la palette 10. Puis on pose la palette sur une surface horizontale telle que le dessus 26 d'une table 27.

Puis on se sert d'une tige à agiter pour agiter l'échantillon de sang tout autour de la portion principale 13 de l'évidement, en le mélangeant ainsi intimement avec l'hémagglu- tinine de la couche. Il faut avoir soin à ce propos de ne pas faire passer de sang dans la portion auxi liaire 14 de l'évidement. On continue à agiter pen dant environ 30 à 50 secondes. Pendant que l'on agite, il y a lieu d'incliner la palette et de la faire tourner pour que les globules du sang se répartissent uniformément et permettre au plasma ou au sérum de commencer à se séparer. Mais ainsi qu'il a déjà été dit, il faut avoir soin d'empêcher le sang de cou ler dans la portion auxiliaire de l'évidement.

Lorsque la palette a été préparée en vue de re cueillir le plasma, le sang se mélange aussi pendant l'opération d'agitation avec l'agent anticoagulant en évitant ainsi la formation d'un caillot de fibrinogène. Par contre, lorsque la palette a été préparée en vue de recueillir le sérum, le sang se mélange avec l'a gent coagulant, accélérant ainsi la formation du cail lot de fibrinogène.

L'hémagglutinine a pour effet, pendant l'opéra tion d'agitation d'agglutiner les globules du sang et de les précipiter dans la portion principale de l'évide ment. Si la palette a été préparée en vue de re cueillir le sérum, le fibrinogène forme aussi des caillots et se précipite pendant cette période dans la portion principale de l'évidement. Puis on pousse la palette vers le bord de la table ou surface de sup port de façon à amener la patte 17 en surplomb sur le bord en faisant coïncider la ligne de pliage 16 avec ce bord (fig. 3). Puis on rabat la patte 17 vers le bas à angle droit avec la portion principale de la palette, et on la fait revenir en arrière pour la reposer complètement sur la table (fig. 4) sur laquelle elle est ainsi supportée en position inclinée.

Le liquide contenant les éléments du sang, c'est-à-dire le plasma ou le sérum coule alors de haut en bas de la por tion principale dans la portion auxiliaire de l'évide ment. Lorsque la totalité du sérum ou du plasma s'est rassemblée dans la portion auxiliaire de l'évi dement on peut en prélever la quantité que l'on désire avec une pipette ou un tube capillaire ou avec une boucle pour effectuer les essais ou réactions immunologiques, sérologiques ou chimiques désirées. On peut faire varier la longueur de la patte de pliage 17 et l'angle d'inclinaison de la patte sur la table, lorsqu'on rabat la patte de haut en bas.

On a constaté qu'avec la palette du type représenté et décrit et présentant les dimensions indiquées, on obtient des résultats satisfaisants en prélevant des petits échantillons de sang, et en supportant la palette suivant un angle d'inclinaison d'environ 5 à 20 et de préférence de 10 à 15 .

On voit donc que le procédé a l'avantage de permettre de séparer facilement le sérum et le plasma à partir de petits échantillons de sang sans avoir besoin de dispositifs de centrifugation ou d'un équipement de laboratoire. Le dispositif pour la mise en ouvre du procédé à l'avantage de pouvoir servir en dehors du laboratoire puisque le dispositif est facile à transporter et peut servir dans un bureau ou sur place.

Claims

REVENDICATIONS I. Procédé de séparation du liquide contenant des éléments du sang d'autres éléments à partir d'un échantillon de sang, caractérisé en ce que l'on dépose l'échantillon de sang dans une portion principale d'un évidement d'un élément plan, en ce qu'on agite cet échantillon en le mélangeant avec un agent de précipitation qui s'y trouve jusqu'à ce que les élé ments se séparent du sang, puis en ce qu'on incline l'élément plan pour faire couler le liquide contenant les éléments du sang de la portion principale dans une portion auxiliaire de l'évidement. II.

Dispositif pour la mise en ouvre du procédé selon la revendication I, caractérisé en ce qu'il com prend un élément plan dans la surface supérieure duquel est formé un évidement dont la surface en retrait par rapport à la surface supérieure est im perméable aux liquides et qui comporte une portion principale destinée à recevoir d'abord l'échantillon de sang et contient un agent de précipitation de certains éléments du sang, et une portion auxiliaire qui communique avec la portion principale et des tinée à recevoir ensuite les éléments non précipités et les liquides du sang. SOUS-REVENDICATIONS 1.

Dispositif selon la revendication II, caractérisé en ce que l'élément plan a la forme d'une palette plane, relativement mince, la portion principale de l'évidement étant plus près d'une des extrémités de la palette et la portion auxiliaire, plus près de son autre extrémité, la première extrémité de la palette comportant une patte qui peut se plier de haut en bas pour supporter la palette en position in clinée, pour permettre aux éléments non précipités et liquides du sang de couler de la portion princi pale dans la portion auxiliaire de l'évidement. 2.

Dispositif selon la sous-revendication 1, ca ractérisé en ce que l'agent de précipitation contenu dans la portion principale de l'évidement consiste en une couche d'hémagglutinine, dans le but d'y pré cipiter certains des éléments du sang y compris les globules. 3. Dispositif selon la sous-revendication 2, ca ractérisé en ce que ladite couche contient aussi un agent empêchant le fibrinogène de former des cail lots, pour que le plasma se rassemble dans la portion auxiliaire. 4. Dispositif selon la sous-revendication 2, ca ractérisé en ce que ladite couche contient aussi un agent coagulant qui accélère la formation des caillots du fibrinogène, pour que le sérum se rassemble dans la portion auxiliaire. 5.

Dispositif selon la revendication II, caractérisé en ce que la surface de la portion principale est assez étendue pour y retenir l'échantillon de sang par sa cohésion. 6. Dispositif selon la sous-revendication 2, ca ractérisé en ce que l'hémagglutinine consiste en phytohémagglutinine. 7. Dispositif selon la revendication II, caractérisé en ce que la surface de l'évidement est à une distance d'au moins 0,1 mm environ au-dessous de la surface principale. 8. Dispositif selon la sous-revendication 1, ca ractérisé en ce que la surface de la portion princi pale de l'évidement est d'au moins 300 mm2 environ et celle de la portion auxiliaire d'au moins 75 mm2 environ.