CH426699A - Procédé de préparation d'une composition contenant du lysozyme stable thermiquement - Google Patents

Description

  Procédé de préparation d'une     composition    contenant du lysozyme stable     thermiquement       La présente invention a     pour    objet un     procédé     pour la préparation d'une     composition        contenant    du  lysozyme, stable     thermiquement,    caractérisé en ce  qu'on soumet une matière naturelle contenant du  lysozyme à une     extraction    au moyen d'un acide et  qu'on mélange la solution aqueuse de sel d'acide de  lysozyme     ainsi    obtenue avec un agent stabilisant  constitué par au     moins    un     diol,    ou un polyol.  



  Le lysozyme est un produit naturel sensible  aux variations des     conditions    extérieures ; il est ins  table et se dégrade en présence d'eau, d'autant plus  vite que les solutions en sont plus diluées.     Le    lyso  zyme est également instable à la chaleur,     cette    ins  tabilité étant d'ailleurs     différente    selon l'état d'humi  dité du     lysozyme    : à sec le lysozyme résiste jusqu'à  1200 C à la décomposition; tandis qu'en     solution     aqueuse, il reste stable jusqu'à 65 - 700 C, se dégrade  lentement vers     80o    C, puis se dégrade brutalement  vers 1000 C.  



  Or, on a fait la     constatation    que des solutions  de lysozyme mélangées à l'un des agents     précités     sont plus stables que les solutions aqueuses simples.  La solution aqueuse de lysozyme est de     préférence     obtenue par extraction à partir de blanc     d'#uf    et  la stabilisation de cette solution     s'effectue    de pré  férence en ajoutant une quantité de sucre portant  sa     concentration    jusqu'à     celle    du sirop du Codex       pharmaceutique,    à     savoir        environ        65%.     



  L'eau de ce sirop peut être évaporée par des  procédés bon marché, pour donner une poudre sucrée  d'excellente conservation.  



  Dans les deux cas, la     composition    obtenue à  savoir le lysozyme en sirop ou en poudre sucrée,  est vraiment concentrée et     parfaitement    stable.    Cette     composition    peut être associée à du sucre  en vue d'obtenir un sucre dont la     concentration    en  lysozyme est au maximum de 100 parties par       million.     



  A cet effet on peut pulvériser la solution sucrée  de     lysozyme    en particules très divisées sous     faible     pression. Cette pulvérisation a lieu sur du sucre en  mouvement lui-même de façon que les     particules     très fines de la pulvérisation     permettent    une répar  tition homogène du lysozyme qui se fixe sur chaque  grain de sucre sous     forme    d'une fine particule de  sirop par     adsorption,        particule    qui devient     elle-          même    du sucre     lysozymé    par évaporation de l'eau  dans la tour de séchage,

   sans que la chaleur ait pu  détruire l'enzyme car     l'évaporation    de l'eau du sirop  absorbe les calories qui auraient pu dégrader le  lysozyme.  



  Le moment de     cette    pulvérisation, pour tenir  compte des risques de perte de solution, est choisi  à la sortie des     turbines,    juste à l'entrée de la tour  de séchage.  



  La pulvérisation     des    solutions de lysozyme dans  ces     conditions    n'augmente l'humidité du sucre que  de     2'%,    ce qui ne provoque aucune     surcharge     importante à l'appareillage de séchage.  



  Dans     certains    cas, la     présence    de sucre commu  nique à la     composition    un goût parfois peu     compa-          tible    ou même incompatible avec l'emploi envisagé  pour celle-ci, par exemple l'incorporation dans un       dentifrice    ou bien peut rendre difficile la réalisation  d'émulsions, ou nuire à la solubilité de     principes     actifs, par exemple     dans    le cas de la préparation de  pommades et/ou d'onguents et de solutions.

        Dans ce cas, on     utilisera    comme agent stabilisant  au lieu du sucre, un     diol    ou un polyol tel que     l'éthy-          lène-glycol,    le     propylène-glycol,    le     glycérol,    le     pen-          taérythritol,    le sorbitol, le     mannitol,        l'inositol    et le       quercitol.     



  Pour démontrer l'efficacité des agents     envisagés     sur la stabilisation des     solutions    de     lysozyme,    on a       effectué    une     comparaison    de     stabilité    à     différentes     températures et pendant     différentes    durées entre une  solution aqueuse témoin contenant 100     Etg/ml    de  lysozyme et des     solutions        identiques    contenant en       outre        35        %        (p/v)

          de        chacun        des        agents        étudiés.        La     technique d'essai est celle     décrite    par     SMOLELIS      &      HART-SELL    (J.

       Bact.    1949,<I>58,</I> 731) et consiste  à évaluer la lyse d'une     culture    fraîche centrifugée  et lavée de     Micrococcus        Lysodekticus    à pH 6,2 et  à température ambiante,

   après     addition    des diffé  rentes     solutions        lysozymées.        Les        conditions    de trai  tement préalable de ces     solutions    en vue de     l'appré-          ciation    de la stabilité du lysozyme     sont    les suivantes  
EMI0002.0049     
  
    <I>Température <SEP>   <SEP> C <SEP> Durée</I>
<tb>  45 <SEP> 8 <SEP> jours
<tb>  60 <SEP> 3 <SEP> 'heures     
EMI0002.0050     
  
    <I>Température <SEP>   <SEP> C <SEP> Durée</I>
<tb>  80 <SEP> 2 <SEP> heures
<tb>  100 <SEP> 1 <SEP> heure       Le calcul permettant la     comparaison        

  entre        .les    dif  férentes activités se fait d'après la formule  
EMI0002.0054     
  
EMI0002.0055     
  
    dans <SEP> laquelle <SEP> Al. <SEP> = <SEP> activité <SEP> relative,
<tb>  Te <SEP> = <SEP> temps <SEP> en <SEP> secondes <SEP> nécessaire
<tb>  à <SEP> la <SEP> solution <SEP> étalon <SEP> pour <SEP> abais  ser <SEP> d'environ <SEP> 400/1000 <SEP> la <SEP> i
<tb>  densité <SEP> optique <SEP> du <SEP> substrat.
<tb>  T@ <SEP> = <SEP> temps <SEP> mis <SEP> <I>par</I> <SEP> la <SEP> solution
<tb>  essayée <SEP> pour <SEP> obtenir <SEP> le <SEP> même
<tb>  résultat.

         II est bien évident qu'il y aura action protec  trice quand     Ar    sera supérieure à 1 et que cette action  sera d'autant plus     efficace    que     Ar    sera élevée.  



  Les résultats obtenus pour un     certain    nombre  des agents indiqués ont été les suivants  
EMI0002.0060     
  
    Valeur <SEP> de <SEP> Ar
<tb>  Produits <SEP> essayés <SEP> Températures
<tb>  45o <SEP> 60,, <SEP> 800 <SEP> 1000
<tb>  Ethylène <SEP> glycol <SEP> .<B>...................... <SEP> .....</B> <SEP> ...- <SEP> 1,88 <SEP> 1,41 <SEP> 1,76 <SEP> 4,3
<tb>  Propylène <SEP> glycol <SEP> <B>.....................</B> <SEP> .<B>.......</B> <SEP> .<B>------</B> <SEP> 2,1 <SEP> 1,46 <SEP> 2,22 <SEP> 4,3
<tb>  Glycérol <SEP> ..<B>.....</B> <SEP> __<B>-------------</B> <SEP> ..........................._ <SEP> 1,46 <SEP> 1,82 <SEP> 1,15 <SEP> 2,22
<tb>  Sorbitol <SEP> <B>--------</B> <SEP> . <SEP> <B>-------------</B> <SEP> ._-. <SEP> ......... <SEP> -. <SEP> ..........

   <SEP> 1,37 <SEP> 1,11 <SEP> 1,54 <SEP> 2,67
<tb>  Pentaérythritol<B>............</B> <SEP> .<B>........</B> <SEP> .<B>-------------</B> <SEP> -<B>------</B> <SEP> 1,41 <SEP> 0,37 <SEP> 0,48 <SEP> 0,66
<tb>  Mannitol <SEP> <B>------</B> <SEP> ...-_<B>...... <SEP> ...... <SEP> ......</B> <SEP> .........<B>......</B> <SEP> 1,75 <SEP> 1,00 <SEP> 1,00 <SEP> 1,00       Il ressort clairement de ces     résultats    que l'addition  de     diols    et de polyols, aux     solutions    de lysozyme a  un effet stabilisateur     spectaculaire    sur     celles-ci,    et  cela spécialement aux     températures    plus élevées,  auxquelles, comme indiqué dans le préambule,

   ces       solutions    ont     précisément    une     forte    tendance à se  dégrader.  



  La proportion de ces agents stabilisateurs pour  laquelle les     résultats    reportés ci-dessus ont été     obte-          nus        est        de        35%.        Toutefois,        cette,        proportion        peut     être plus basse ou plus élevée, à la fois selon la  nature de l'agent protecteur     choisi    et selon 1e, tem  pérature et/ou la durée     de        conservation    de la solu  tion de lysozyme à protéger.

   Le nombre de variables       intervenant    dans cette évaluation de la     concentration     pour un cas     particulier    est     tel    qu'il     n'est    pas possi  ble de donner une règle précise pour le choix de la       proportion    à     utiliser.    On peut cependant indiquer  d'une manière très générale que l'on peut dans    l'ensemble     utiliser    des     proportions    de 10 à 75     b/9    et       de        préférence        de        20    à  <RTI  

   ID="0002.0097">   40'%        de        l'agent        protecteur     choisi dans les classes définies plus haut. On     obtient,     en fait, une stabilisation à toutes les     concentrations.     Seul le degré de cette     stabilisation    peut varier en  fonction     de    la     concentration    en agent stabilisateur.  



  L'association du sucre avec le lysozyme,     réalisée     par l'intermédiaire     d'une    composition obtenue con  formément à l'invention a démontré une     surprenante          efficacité    contre la     carie        dentaire.    On a constaté  que l'association de 10 à 25     gamma    de lysozyme  par gramme de sucre     ordinaire        empêche        l'apparition     de la carie     dentaire    et l'ostéolyse     alvéolaire    (voir  en     particulier    l'article du Dr R.

       DUBOIS-PREVOST     dans   Hygie  , 18 juin 1961, pages 5 à 16).  



  De très nombreuses préparations à     usage    sani  taire ou thérapeutique, peuvent être préparées à par  tir des     compositions    obtenues conformément à l'in  vention, telles que     dentifrices,    pommades, solutés ou      onguents, et     contenant    du lysozyme dont la     stabilité     est assurée grâce à la     présence    d'un     diol    ou d'un  polyol, y     compris    le sucre,

   ces préparations bénéfi  ciant alors en outre éventuellement     des    propriétés       adoucissantes        ete        émollientes    de l'agent     stabilisateur     compris dans la composition utilisée pour réaliser  ces préparations.

Claims (1)

1. REVENDICATION Procédé pour la préparation d'une composition contenant du lysozyme stable thermiquement, carac térisé en ce qu'on soumet une matière naturelle con tenant du lysozyme à une extraction au moyen d'un acide et qu'on mélange la solution aqueuse de sel d'acide de lysozyme ainsi obtenue avec un agent stabilisant constitué par au moins un diol ou un polyol. SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le stabilisateur est employé à raison de 10 à 75 % (p/v). 2.

   Procédé selon la revendication et la sous- revendication 1, caractérisé en ce que l'agent sta bilisateur est le sucre. 3. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que l'agent stabilisateur est l'éthylène-glycol, le propylène-glycol ou le glycérol, à une concentration comprise entre 20 et 40%. 4.

   Procédé selon la revendication et les sous revendications 1 et 2, caractérisé en ce que la solu tion de lysozyme stabilisée avec du sucre est des- sédhée.