Procédé de préparation d'une composition cosmétique
permettant de lutter contre la chute des cheveux
La présente invention est relative à un procédé de préparation d'une nouvelle composition cosmétique qui permet de lutter efficacement contre la chute des cheveux et l'aspect graisseux de la chevelure.
La titulaire a déjà proposé de lutter contre la chute des cheveux et contre l'aspect graisseux de la chevelure à l'aide d'une composition cosmétique contenant du liquide amniotique prélevé sur un ruminant à une période de la gestation qui est inférieure à environ 40 o/o de la période complète de gestation.
De telles compositions, qui ont été préparées par la titulaire peuvent contenir par exemple avantageusement un liquide amniotique prélevé sur une vache à un stade de la gestation qui est d'environ 75 jours.
La titulaire a également proposé de lutter contre la chute des cheveux à l'aide d'une composition cosmétique contenant comme produit actif des extraits aqueux de peau de foetus de bovinés ou d'ovinés.
Dans ces compositions, les produits actifs sont obtenus à partir de foetus de bovinés d'un poids de 0,8 à 2kg ou de foetus d'ovinés d'un poids de 0,5 à 0,9kg, dont les peaux, après avoir été broyées, sont traitées à l'eau pure pour en extraire les produits actifs.
La présente invention a pour objet un procédé de préparation d'une composition cosmétique permettant de lutter contre la chute des cheveux et l'aspect graisseux de la chevelure, caractérisé par le fait que l'on prélève dans des conditions stériles, sur des foetus de bovinés ou d'ovinés, des téguments cutanés et/ou des tissus du cordon ombilical, I'on soumet la substance prélevée, ou un produit de digestion enzymatique de celle-ci, à une extraction dans une solution ionique, I'on isole de l'extrait un produit actif et on l'incorpore à un excipient.
Une telle solution aqueuse ionique peut être constituée par une simple dissolution dans l'eau d'un sel, d'un acide ou d'une base, ou encore d'un composé organique ionisable tel qu'un phénol.
Dans un mode de mise en oeuvre particulier, on peut utiliser une solution de sérum physiologique.
Parmi les composés ionisables susceptibles d'être utilisés, on peut citer:
- des sels neutres tels que le chlorure de sodium, le chlorure de potassium, le chlorure de lithium, le chlorure de calcium, le chlorure de magnésium, en solution 0,1 M à 2,5 M et de préférence 0,4 M,
- des sels acides tels que le phosphate de potassium ou de sodium en solution 0,1 M de pH compris entre 6 et 8, ou le citrate de sodium ou de potassium en solution 0,1 M de pH compris entre 3 et 5,
- des acides tels que les acides chlorhydrique, sulfurique, acétique en solution 0,5 N de pH 1,5,
- des bases telles que la soude, la potasse, l'ammoniaque, l'hydroxyde de calcium ou de baryum en solution 0,3 à 0,5N de pH 8 à 9,
- des composés organiques tels que l'urée en solution 6 à 8 M de pH 6 ou le phénol en solution à 2 /o.
On voit donc que le procédé selon la présente invention se distingue de celui qui a été rappelé ci-dessus par le fait que l'on peut également utiliser le cordon ombilical, qu'il n'est pas nécessaire de prélever les téguments de foetus à un stade particulier de la gestation, et enfin par le fait que le produit actif est obtenu par extraction à l'aide de solution ionique et non à l'aide d'eau pure.
Par contre, il reste essentiel, selon la présente invention, d'extraire les composés actifs à partir de téguments cutanés et de cordons ombilicaux car les extraits obtenus dans les mêmes conditions mais ayant une autre origine, ne présenteraient pas le même intérêt cosmétique, même s'ils étaient obtenus à partir de foetus de bovinés ou d'ovinés.
Selon un premier mode de mise en oeuvre du procédé selon l'invention, on procède tout d'abord à la congélation des téguments de foetus, puis on procède à leur broyage et à leur digestion enzymatique dans une solution ionique.
Une telle digestion peut être avantageusement effectuée à l'aide d'enzymes choisis dans le groupe des enzymes protéolytiques tels que la pronase, la papaine, les pepsines, la trypsine.
Cette digestion doit être de préférence effectuée sans délipidation. Elle a essentiellement pour but de provoquer la séparation des substances protéiniques, de manière à libxrer les mucopolysaccharides qui doivent être extraits ultérieurement.
La bouillie obtenue à la suite de la digestion enzymatique est ensuite soumise à une dialyse contre l'eau distillée, après avoir été de préférence soumise à une centrifugation pour éliminer les parties solides.
Après avoir filtré la solution contenant les composés actifs, on précipite ces derniers par une adjonction d'alcool absolu et d'acétate de sodium.
Le précipité peut être ensuite purifié, par exemple par lavages successifs avec de l'alcool, avec un mélange d'alcool et d'éther, et avec de l'éther, puis il est soumis à dessiccation.
Le composé actif ainsi obtenu se présente sous la forme d'une poudre blanche soluble dans l'eau et dans les solutions de sérum physiologique.
Dans un second mode de mise en oeuvre du procédé selon l'invention, on procède à la congélation des téguments cutanés et des cordons ombilicaux, puis à leur broyage dans une solution ionique telle que du sérum physiologique, sans avoir procédé à une délipidation préalable. On procède ensuite à une centrifugation et on précipite les principes actifs contenus dans le liquide surnageant avec des solvants tels que de l'alcool absolu, de l'acétone, etc., ou des dérivés d'ammonium quaternaire tels que du bromure de cétyl-triméthyl-ammonium ou du chlorure de cétyl-pyridinium.
On purifie le précipité par lavage avec de l'alcool absolu puis avec un mélange alcool-éther et l'on obtient après dessiccation, une poudre blanche soluble dans l'eau et les solutions physiologiques.
Conformément au procédé toutes les phases de préparation doivent être effectuées dans des conditions stériles et à une basse température, par exemple une température de + 4O C.
Le composé actif, obtenu comme il vient d'être dit, peut être introduit dans un support cosmétique approprié, à une concentration qui peut varier dans d'assez larges limites et qui est par exemple comprise entre 1 et 4 solo.
Les compositions cosmétiques peuvent se présenter sous forme de solution aqueuse de composé actif ou encore sous forme d'émulsion, de crème ou de gel.
Les compositions peuvent également contenir d'autres adjuvants cosmétiques, tels que par exemple des colorants, des parfums, des agents de pénétration et des émulsionnants.
Il est également avantageux d'ajouter aux compositions des conservateurs qui peuvent être par exemple à base de merthiolate de sodium, de dérivés oxydés de benzoates, ou d'hexachlorophène.
D'après les analyses qui ont été effectuées, il semble que -l'on puisse identifier les composés actifs comme des mucopolysaccharides, puisque ces composés donnent des réactions caractéristiques avec l'acridine orange et le bleu de toluidine, après électrophorèse.
Toutefois, il n'est pas possible de définir précisément la nature chimique de tous les constituants du produit actif et, de plus, des résultats très inférieurs sont obtenus lorsqu'on procède à une extraction à partir d'autres tissus animaux, tels que, par exemple, le rein ou le foie, qui permettent eux aussi d'obtenir des produits actifs différents que l'on peut toutefois identifier aussi comme des cucopolysaccharides.
On est donc amené à penser que le seul fait d'être des mucopolysaccharides ne permet pas de définir les composés actifs, car d'une part, le produit actif contient vraisemblablement d'autres constituants et, d'autre part, l'origine des cellules embryonnaires s'est révélée avoir une grande importance sur les propriétés cosmétiques des compositions et ceci, indépendamment de toute identification chimique des composés actifs.
Dans le but de mieux faire comprendre l'invention, on va en décrire maintenant, à titre d'illustration, plu .sieurs modes de mise en oeuvre.
Exemple 1
On prélève dans des conditions aseptiques 1746 g de peau de foetus de vaches.
Les foetus sur lesquels les prélèvements sont effectués sont à des stades de gestation variant de 20 à 120 jours, les foetus étant indifféremment de l'un ou de l'autre sexe.
Immédiatement après prélèvement, les téguments sont congelés à une température de - 200 C, puis sont broyés en présence de la solution saline (15 ml/g) dans un appareil U-Turrax TP 45/2 tournant à 10000 tours/minute pendant 15 minutes environ, ces opérations étant pratiquées dans des conditions stériles.
Pendant toute la durée du broyage, on procède au refroidissement de l'ensemble à l'aide de glace et de neige carbonique, pour éviter tout risque d'échauffement.
La solution saline d'extraction est constituée, dans ce cas, de tampon phosphate 0,1 M à pH 6,5. Le broyat ainsi obtenu est additionné de:
300 mg de papaine,
788 mg de chlorhydrate de cystéine,
18,6mg d'acide d'éthylène diamine tétracétique pour 100 ml de solution, et l'on procède à la digestion des protéines durant 15 heures à 650 C.
Pendant cette phase, la stérilité du milieu est assurée par l'addition d'un petit cristal de toluène.
La bouillie ainsi obtenue est traitée avec l'acide trichloracétique à la concentration finale de 7,5 /o. On procède ensuite à la centrifugation de la bouillie dans une centrifugeuse Jouan type C 60 TS tournant à 4500 tours/minute pendant 30 minutes et l'on isole le surnageant.
Ce dernier est ensuite soumis à une dialyse contre l'eau distillée pendant 18 heures à 40C, la poche de dialyse étant constituée par des boyaux cellulosiques.
Le dialysat est ensuite filtré sur une poudre adsorbante connue sous la dénomination Célite et on précipite ensuite le produit actif en ajoutant 2 litres d'alcool éthylique absolu et 50 g d'acétate de sodium ou de potassium par litre de solution.
Le précipité est ensuite purifié par trois lavages successifs à l'alcool absolu, au mélange alcool-éther et à loéther puis est soumis à dessiccation.
Toutes les phases du procédé qui viennent d'être décrites sont effectuées à une température au plus égale à 40 C (sauf, bien entendu, la digestion enzymatique).
Le produit actif obtenu se présente sous la forme d'une poudre blanche soluble dans l'eau et dans les solutions de sérum physiologique.
On obtient 16g de produit actif se présentant sous forme de poudre, soit 9,2 g par kilo de peau.
La poudre ainsi obtenue qui constitue le produit actif contient environ 2,6 mu d'hexosamines par g de mucopolysaccharides.
Dans une variante, on peut également mettre en ceuvre le même procédé dans les conditions qui ont été décrites ci-dessus en utilisant comme matière première 1 881 g de cordon ombilical de foetus de vache.
On obtient dans ce cas 4,25 g de produit actif se présentant sous forme de poudre, soit 2,25g de produit actif par kg de cordon ombilical.
Dans ce cas, la poudre contient 18,5 mg d'hexosamines par g de muco-polysaccharides.
Exemple 2
On prélève, dans des conditions aseptiques, des peaux d'embryons de vache, la peau étant finement broyée en présence d'acétone puis d'éther, après quoi le broyat est séché.
On met ensuite le produit obtenu en suspension dans du chlorure de sodium 0,14N à raison de 10 ml/g de produit sec.
On agite pendant 48 heures à 40 C puis on centrifuge à froid pendant 90 minutes à une vitesse de 9000 tours/ minute.
On recueille ensuite le surnageant après quoi on procède à une dialyse contre l'eau courante pendant 24 heures.
On procède ensuite à une distillation sous pression réduite à 500 C pour concentrer la solution obtenue en la réduisant au quart de son volume initial.
On procède ensuite à une lyophilisation, ce qui permet d'obtenir le produit actif.
Dans une variante, on peut également précipiter le composé actif contenu dans le surnageant en introduisant une solution à 1 0/o de chlorure de cétyl-pyridinium et en maintenant le tout pendant trois heures à 380 C.
Exemple 3
On prélève les peaux et les cordons ombilicaux sur des embryons de brebis prélevés à n'importe quel stade de la gestation et indifféremment de l'un et l'autre sexe.
On dispose ainsi de 500 g de téguments de peau et de 1650 g de cordons ombilicaux.
Ces prélèvements, qui ont été effectués dans des conditions stériles, sont ensuite congelés à une température de - 200 C puis sont broyés dans une solution de 15 litres de solution saline par kilo de tissus, contenant 9 g de ClNa par litre d'eau, sans délipidation préalable.
On centrifuge le broyat pendant 90 minutes dans une centrifugeuse Wifug XI , tournant à une vitesse de 9000 tours/minute et on précipite le surnageant par apport de 2 1 d'alcool éthylique par litre. On laisse reposer quatre jours à 40 C et on recueille le précipité formé que l'on purifie par un lavage à l'alcool absolu, suivi d'un lavage par un mélange de 50 0/o d'alcool et 50 4'/o d'éther, et d'un lavage à l'éther.
Le précipité est ensuite soumis à une dessiccation, ce qui permet d'obtenir une poudre blanche soluble dans l'eau et dans le sérum physiologique.
Toutes les différentes phases du procédé qui vient d'être décrit sont effectuées à une température au plus égale à 4O C.
On obtient 2,20 g de composé actif dans le cas où le prélèvement est constitué par la peau du foetus et 3,20 g de composé actif dans le cas où l'on prélève des cordons ombilicaux.
Exemple 4
On prélève, dans des conditions aseptiques, 250 g de peau sur des embryons de bovins de 4 à 5 mois.
Cette peau, après avoir été congelée, est broyée dans de l'acétone puis séchée à - 200 C.
On procède à l'extraction de ce broyat avec une solution de chlorure de sodium 0,14 M à raison de 5 mi de solution par g de broyat en procédant à quatre extractions successives dans les mêmes conditions, puis on agite pendant 24 heures à une température de 40 C.
On filtre la solution obtenue sur gaz puis on centrifuge pendant une heure à une vitesse de 6000tours/ minute.
On ajoute ensuite une solution d'acide perchlorique 1,8 M, en volume égal à la moitié du volume de l'extrait salin, de manière à précipiter les protéines libres se trouvant dans le surnageant.
Après avoir laissé reposer 4 minutes à 40 C, on filtre sur un filtre Whatman No 4 .
On ajoute ensuite au filtrat clair ainsi obtenu la moitié de son volume d'une solution d'acide phosphotungstique à 5 oxo dans ClH 2N.
On laisse précipiter durant une nuit en maintenant une température de 4O C.
On centrifuge et on recueille le précipité qui est lavé successivement trois fois à l'acétone, puis est séché sous vide.
Le résidu est repris par une solution de bicarbonate de sodium 0,1 M à raison de 3 ml/5 g de peau fraîche.
On ajoute ensuite 1 mg pour 5 g de peau fraîche de trypsine dissoute dans 1 mi d'acide chlorhydrique 0,001 N.
Après avoir ajouté un petit cristal de thymol, on laisse digérer pendant environ 18 heures à 37O C.
On précipite ensuite les protéines qui peuvent se trouver combinées aux muco-polysaccharides par adjonction d'un ml par g de peau fraîche d'acide trichloracétique 3,1 N.
Après avoir laissé reposer pendant une nuit à 4O C, on centrifuge pendant 1 heure à 4500 tours/minute.
Dans le surnageant, on précipite les muco-polysaccharides par adjonction d'acétate de sodium anhydre (7,5 millimoles par g de solution).
On ajoute ensuite à la solution deux fois son volume d'alcool absolu et on laisse floculer pendant une nuit à 4çC.
Enfin, on centrifuge pendant 30 minutes à 4500 tours/ minute et on lave le précipité à l'alcool, puis au mélange alcool-éther, puis à l'éther, après quoi on le sèche.
On obtient de cette manière 135 mg de produit actif se présentant sous forme de poudre, ce qui correspond à un rendement d'environ 0,5 g par kg de peau fraîche.
Essais de toxicité:
Des essais de toxicité ont été effectués à l'aide des composés actifs sur des rats Wistar des deux sexes pris en nombre égal et pesant 150 g + 10 g, des souris Swiss des deux sexes en nombre égal, pesant 25 g + 2 g, des lapins albinos Bouscat des deux sexes en nombre égal, pesant 2,5 kilos + 100 g.
On n'a enregistré aucune mortalité en injectant par voie intrapéritonéale sur 10 rats et 10 souris le composé actif extrait de téguments embryonnaires de vaches et de moutons à raison de 3 g par kilo.
On n'a enregistré aucune mortalité ni aucune trace de trouble en injectant par voie intraveineuse les mêmes composés actifs sur 10 lapins à raison de 100 g par kilo.
Essais de tolérance:
On a tondu, sur une aire dorsale de 5 cm X 3 cm, 30 rats Wistar dont 15 mâles et 15 femelles, pesant environ 180 g + 10 g et appartenant à un lot destiné à être traité par le produit actif.
Sur les aires tondues, il a été appliqué quotidiennement pendant 3 semaines 0,5 ml d'une solution aqueuse à 40/o de produit actif dont la préparation est décrite dans l'exemple 1.
A la fin de cette période, on a pu constater que la croissance des animaux s'est poursuivie normalement par rapport à un lot témoin de 30 animaux provenant du même élevage et ne recevant que le volume correspondant de solvant du produit actif sur la même aire tondue.
Il n'a pu être enregistré aucun malaise ni aucune lésion sur les animaux du lot traité par rapport aux animaux du lot non traité.
En conclusion, on peut dire que les composés actifs préparés à partir de téguments cutanés embryonnaires et de cordons ombilicaux de brebis ou de vaches, possèdent une activité pilogénétique et permettent d'améliorer l'aspect graisseux de la chevelure.
Exemples de compositions cosmétiques:
Exemple A
On prépare une composition cosmétique ayant la composition suivante: Produit actif préparé selon l'exemple 1 . 1 g - Excipient aqueux q.s.p. 100 ml
On applique quotidiennement quelques gouttes de cette solution, avec massages, sur la chevelure présentant un aspect plus ou moins gras et celle-ci ne présente plus cet aspect plus ou moins gras.
Exemple B
On prépare une composition cosmétique ayant la composition suivante: - Produit actif préparé selon l'exemple 2 1 g - Excipient aqueux q.s.p. . 100 ml
Cette composition permet, par application quotidienne de quelques gouttes de solution, de combattre la chute des cheveux présentant un aspect graisseux.
Exemple c
On prépare une composition cosmétique ayant la composition suivante: - Produit actif préparé selon l'exemple 1 4 g - Excipient aqueux q.s.p. 100 ml
Par application quotidienne ou tous les deux jours de quelques gouttes de cette solution, on peut améliorer l'aspect d'une chevelure présentant un aspect graisseux et diminuer la chute des cheveux.
Exemple D
On prépare une composition cosmétique ayant la composition suivante: - Citrate choline 1 g - Produit actif préparé selon l'exemple 1 1 g - Excipient aqueux q.s.p. 100 ml
Par application quotidienne sur le cuir chevelu de quelques gouttes de solution, on fait régresser d'une manière durable l'aspect graisseux de la chevelure.
Exemple E
On prépare une composition cosmétique ayant la composition suivante: - Citrate choline 1 g - Allantoïde 0,5 g - Produit actif préparé selon l'exemple 1 1 g - Excipient aqueux q.s.p. 100 ml
Par application quotidienne sur le cuir chevelu de quelques gouttes de solution, on lutte efficacement contre les cheveux gras accompagnés de pellicules grasses.
Exemple F
On prépare une composition cosmétique ayant la composition suivante: - Allantoïne 0,5 g - Acide salicylique - 0,5 g - Produit actif préparé selon l'exemple 1 1 g - Excipient aqueux q.s.p. 100 ml
Par application quotidienne sur le cuir chevelu de quelques gouttes de solution, on lutte efficacement contre les cheveux gras et les pellicules.
Exemple G
On prépare une composition cosmétique ayant la composition suivante: Acide lactique lg - Vitamine E îOmg - Produit actif préparé selon l'exemple 2 1 g - Excipient émulsionnant q.s.p. 100 ml
Après application quotidienne sur le cuir chevelu de quelques gouttes de solution, on fait régresser d'une manière durable l'aspect graisseux et la chute des cheveux.
Exemple H
On prépare une composition cosmétique ayant la composition suivante: - Acide lactique lg - Choline lg - Produit actif préparé selon l'exemple 1 1 g - Excipient aqueux q.s.p. - 100 ml
Par application quotidienne sur le cuir chevelu de quelques gouttes de solution, on lutte d'une façon durable contre les cheveux gras.
Exemple I
On prépare une composition cosmétique ayant la composition suivante: acide lactique 1 g - Allantoïne 0,5 g - Produit actif préparé selon l'exemple 2 1 g - Excipient aqueux q.s.p. 100 ml
Par application quotidienne sur le cuir chevelu de quelques gouttes de solution, on lutte efficacement contre les cheveux gras avec pellicules.
Exemple J
On prépare une composition cosmétique ayant la composition suivante: - Choline 0,50 g - Inositol 0,50g - Méthionine 0,50g - Produit actif préparé selon l'exemple 1 1 g - Excipient aqueux q.s.p. 100 mi
Après application quotidienne sur le cuir chevelu de quelques gouttes de solution, on fait régresser d'une manière durable l'aspect graisseux de la chevelure.
REVENDICATION I
Procédé de préparation d'une composition cosmétique, permettant de lutter contre la chute des cheveux et l'aspect graisseux de la chevelure, caractérisé par le fait que l'on prélève dans des conditions stériles, sur des foetus de bovinés ou d'ovinés, des téguments cutanés et/ou des tissus du cordon ombilical, l'on soumet la substance prélevée, ou un produit de digestion enzymatique de celle-ci, à une extraction dans une solution ionique, I'on isole de l'extrait un produit actif et on l'incorpore à un excipient.
SOUS-REVENDICATIONS
1. Procédé selon la revendication I, caractérisé par le fait qu'on extrait le produit actif en procédant à une congélation de la substance prélevée puis au broyage de celle-ci dans la solution ionique.
2. Procédé selon la sous-revendication 1, caractérisé par le fait que la bouillie de tissus broyés dans la solution ionique est soumise à une centrifugation dont on prélève le liquide surnageant contenant le produit actif.
3. Procédé selon la revendication I, caractérisé par le fait que la solution ionique est choisie parmi les solutions de sels neutres tels que chlorure de sodium, chlorure de potassium, chlorure de lithium, chlorure de calcium, chlorure de magnésium; des sels acides tels que phosphate de potassium, phosphate de sodium, citrate de potassium, citrate de sodium; d'acides tels que l'acide chlorhydrique, I'acide sulfurique ou l'acide acétique: de bases telles que la soude, la potasse, l'ammoniaque, l'hydroxyde de calcium ou l'hydroxyde de baryum ou des composés organiques ionisables tels que l'urée ou le phénol.
4. Procédé selon la sous-revendication 2, caractérisé par le fait que le liquide surnageant après centrifugation et contenant le produit actif est soumis à une dialyse contre l'eau distillée.
5. Procédé selon la sous-revendication 2, caractérisé par le fait que le produit actif dissous dans le liquide surnageant après centrifugation est précipité par adjonction d'alcool absolu puis d'un mélange d'alcool et d'éther, puis d'éther.
6. Procédé selon la sous-revendication 6, caractérisé par le fait que l'alcool servant à la précipitation du composé actif est additionné d'acétate de potassium, d'acétate de sodium, d'acétate de baryum ou d'acétate de zinc.
7. Procédé selon la revendication I, caractérisé par le fait que le procédé actif est purifié par lavage à l'alcool absolu puis à l'aide d'un mélange d'alcool et d'éther, puis à l'éther.
8. Procédé selon la revendication I, caractérisé par le fait que toutes ces phases sont effectuées dans des conditions stériles.
9. Procédé selon la revendication I, caractérisé par le fait que lesdites phases sont effectuées à une temp o rature inférieure à 40 C.
REVENDICATION II
Composition cosmétique pour lutter contre la chute des cheveux et l'aspect graisseux de la chevelure obtenue par le procédé selon la revendication I.
SOUS-REVENDICATIONS
10. Composition cosmétique selon la revendication TI, caractérisée par le fait qu'elle contient le produit actif précité à une concentration comprise entre 1 et 40/o dans un support cosmétique approprié.
11. Composition cosmétique selon la revendication
II, caractérisée par le fait qu'elle se présente sous forme d'émulsion, de gel ou de crème.
12. Composition cosmétique selon la revendication II, caractérisée par le fait qu'elle contient d'autres adjuvants usuels tels que par exemple colorants, parfums ou agents de pénétration.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.