CH527150A

CH527150A - Verfahren zur Herstellung von Derivaten von 3-Hydroxycyclopentanonen und deren Verwendung

Info

Publication number: CH527150A
Application number: CH231868A
Authority: CH
Inventors: Karel Beerthuis Roedolf; Adriaan Van Dorp David; Hendrik Nugteren Diederik
Original assignee: Unilever Nv
Priority date: 1967-02-16
Filing date: 1968-02-16
Publication date: 1972-08-31
Also published as: FR7885M; FR1560642A; BE710918A; DE1668809C3; DE1668809A1; NL159375B; GB1156465A; NL6802212A; DE1668809B2

Description


  
 



  Verfahren zur Herstellung von Derivaten von 3-Hydroxycyclopentanonen und deren Verwendung
Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von Derivaten von 3-Hydroxycyclopentanonen.



   Eine Reihe von verwandten Substanzen, die als Prostaglandine bekannt sind und bei Menschen und anderen   Säuge-    tieren gefunden worden sind, zeigen einen weiten Bereich von pharmakologischen Wirksamkeiten. Diese Substanzen haben sämtlich Strukturen auf der Basis derjenigen von   Prostansiiure    (PA), die   1&alpha;-Carboxyhexyl)-5ss-octylcyclo-    pentan und eine geradkettige Carbonsäure mit 20 Kohlenstoffatomen in dem Molekül, das eng zur Bildung des Cyclopentanrings vernetzt ist, der folgeden Strukturformel darstellen:
EMI1.1     

Ein typisches Prostaglandin ist Prostaglandin E1,   gewöhn-    lich als PGE1 bezeichnet, das die nachstehende Strukturformel hat:
EMI1.2     

Das genannte Prostaglandin E1   enthilt    zwei Hydroxygruppen, eine Oxogruppe und eine Carboxylgruppe.

  Es ist anzunehmen, dass PGE1 die nachstehende stereochemische Konfiguration XI hat
EMI1.3     

Das strukturelle Verhältnis zwischen den Prostaglandinen und Fettsäuren legt nahe, dass die letzteren Vorläufer für Prostaglandine waren und fiihrt z. B. zu der biochemischen Synthese von   PGE1    aus   Bis-Homo-y-linolensäure    (Eicosa8c,11c,14c-triensäure), beschrieben von Van Dorp, Beerthuis, Nugteren und Vonkeman, Biochem. Biophys. Acta, 1964, 90, 204; Nature, 1964, 203, 839, und auch von Bergström und Mitarbeitern, unter Verwendung von in   Schafsvesiculardriisen    vorhandenen Enzymen. Die   S ure-      vorl ufer    sind dadurch gekennzeichnet, dass man ein  verkapseltes  Doppelbindungssystem hat, in dem drei Doppelbindungen durch einzelne Methylengruppen getrennt sind.



   Da die pharmakologischen   Aktivititen    von   natiirlichen    Prostaglandinen verschiedenartig sind, einschliesslich einer Wirkung auf glatte Muskeln, auf das Cardiovascularsystem, auf das zentrale Nervensystem und hinsichtlich der Mobilisation von Lipiden sind Versuche gemacht worden, Prostaglandine aus   Siren    mit mehr und mit weniger als 20 Kohlenstoffatomen herzustellen, um ihre Eigenschaften zu untersuchen. In vielen Fallen misslang bei Verwendung von   Siren    mit verkapselten Doppelbindungssystemen die enzymatische Synthese infolge spezifischer Enzymwirksamkeit.

  Unter den versuchten Varianten befinden sich synthetische   Siren    mit einer ungeraden Anzahl von Kohlenstoffatomen in dem Molekül (anders als   natiirliche      Fettsiuren,    die gerade Zahlen von Kohlenstoffatomen haben), was Veranlassung zu unna   tiirlichen    Prostaglandinen geben mag.

  Zwei solche Sauren, die erfolgreich zu Gliedern der Prostaglandinreihe umgewandelt wurden, sind allgemein Cis-Konfiguration aufweisende   Heneicosa-9,12,15-triensiure    und   Nonadeca-7,10,13-trien-      sure,    die jeweils ein verkapseltes Doppelbindungssystem, das  bei dem sechsten Kohlenstoffatom von der   endständigen    Methylgruppe beginnt, wie dies bei den natürlichen   Vorl u-      fersäuren    der Fall ist, haben und die sich von der Bis-Homo   y-linolensäure    dadurch unterscheiden,

   dass sie eine Methylengruppe mehr und eine weniger an der Carbonsäuregruppen- seite des verkapselten Doppelbindungssystems haben und die daher als a-Homo- und   a-Norsäuren    bezeichnet werden und wobei Prostaglandine   a-Homo-PGE1    und   a-Nor-PGE1    entstehen, wie dies aus den nachstehenden Strukturformeln VI und VII ersichtlich ist.
EMI2.1     


<tb>



  O=C <SEP> - <SEP> CH-(CH2)7-COOH
<tb>  <SEP> I <SEP> 0'H011=0H0H0H(0112)40113 <SEP> (vi)
<tb> H2C <SEP> CH-CH=CH-CROH-(CH3
<tb>  <SEP> OH
<tb> O=C <SEP> - <SEP> CH-(CH2)5-COOH <SEP> (VII)
<tb>  <SEP> I <SEP> I
<tb> H2C <SEP> CH-CH=CH-CHOH-( <SEP> CH, <SEP> -CH, <SEP> ( >  <SEP> -Nor-PGE1)
<tb>  <SEP> OH
<tb> 
Die pharmakologischen Aktivitäten von Prostaglandinen sind spezifisch, und viele Verbindungen besitzen nischt die Eigenschaften, welche ihre nächsten Homologen zelgen.



   Es ist nun nicht nur eine Klasse von allgemein Cis-Konfiguration aufweisenden Trienverbindungen gefunden worden die durch Enzymsynthese zu Prostaglandinen umgewandelt werden kann, sondern die Produkte und ihre Derivate zeigen auch starke pharmakologische Aktivität und in vielen Fallen Trennung und/oder Erhöhung von Eigenschaften im Vergleich mit den natürlichen Prostaglandinen und anderen syn   thetischen    Prostaglandinen, die untersucht worden sind, einschliesslich von a-Homo-PGEl und   a-Nor-PGE.    Diese allgemein Cis-Konfiguration aufweisenden Trienverbindungen haben die allgemeine Formel
CH3-(CH2)2n+1 (CH=CH-CH2)3-(CH2)5-COOM, in der n eine Zahl von 1 bis 2 und M ein Wasserstoffatom oder ein Alkali- oder Erdalkaliatom darstellt.

  Unter den Verbindungen entsprechend dieser Formel befinden sich Heneicosa-8c,11c,14c-triensäure und Nonadeca-8c,11c,14c-triensäure (die Bezeichnungen   #c#    und   #t#   kennzeichnen die Cis- bzw. Trans-Konfigurationen der Doppelbindung an einer angegebenen Stelle, die ein verkapseltes Doppelbindungssystem haben und sich von   Bis-Homo-&gamma;-linolensäure    dadurch unterscheiden, dass sie eine Methylengruppe mehr und eine weniger auf der Seite des verkapselten Doppelbindungssystems haben, das von der Carbonsäuregruppe entfernt ist, und können daher als w-Homo- bzw.   w-Norsauren    bezeichnet werden.



   Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist nun ein Verfahren zur Herstellung von therapeutisch wirksamen Verbindungen der Formel
EMI2.2     
 worin n die Zahl 1 oder 2 darstellt und M Wasserstoff, ein Alkalimetall, den Ammoniumrest oder das   Equivalent    eines Erdalkalimetalls bedeutet, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man eine Verbindung der Formel    CH3(CH2)2n    +   r(CH = CH-CH2)3-(CH2)-COOM    mit einem Prostaglandin-Synthese-Enzymsystem unter aeroben Bedingungen incubiert.

 

   Ferner betrifft die Erfindung die Verwendung der nach dem   erfindungsgemässen    Verfahren   erh altenen    Verbindungen zur Herstellung von Verbindungen der Formel
EMI2.3     
 worin R eine Alkylgruppe mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen bedeutet. Bei dieser Verwendung werden die Verbindungen der Formel IIIa entsprechend verestert.



   Verbindungen dieser allgemeinen Formeln sind Prostaglandine und Derivate davon, mit einem Kohlenstoffatom mehr (n = 2) oder weniger (n = 1) in der Seitenkette, die  nicht die Carbonsäuregruppe trägt, als PGE1, und die als   -Homo-PGEt    bzw.   #-Nor-PGE1   und ihre Derivate bezeichnet werden   k6nnen,    wie sie in den allgemeinen Formeln IV und V dargestellt sind.
EMI3.1     


<tb>



  O=C <SEP> - <SEP> ICH-(CH2)6-COOR
<tb>  <SEP> I <SEP> OH-OH=OH-OHoH-(cH2) <SEP> I <SEP> (iV)
<tb> H2C <SEP> CH-CH=CH-CHoH-(CH2)5-CH3 <SEP> (IV)
<tb>  <SEP> CH <SEP> z <SEP> -Homo-PGE1 <SEP> )R=H
<tb>  <SEP> 0E
<tb> O=O <SEP> - <SEP> CH-(CH2)6-COOR <SEP> (V)
<tb>  <SEP> 1 <SEP> I
<tb> H2C <SEP> CH-CH=CH-CHOH-(CH,),-CH.,
<tb>  <SEP> \CH <SEP> (4 <SEP> -Nor-PGE1)R=H
<tb>  <SEP> OH
<tb> 
Es ist anzunehmen, dass die Verbindungen dieser Erfindung als Derivate von 4a-Hydroxycyclopentan-2-onen, die in der la-Stellung eine 6-Carboxyhexyl- oder 6-Alkoxycarbonylhexylgruppe und in der 5ss-Stellung eine 3S-Hydroxyalkyl-lt-enylgruppe von 7 oder 9 Kohlenstoffatomen haben (wobei S die Bezeichnung der stereochemischen Konfiguration in dem Cahn-Ingold-Prelog-System ist).

  Unter diesen befinden sich   -Homo-PGEj    und   ev-Nor-PGEl,    deren systematische Namen vermutlich la-(6-Carboxyhexyl)   4a-hydroxy-5P-(3S-hydroxynon-1t-enyl)-cyclopentan-2-on    (XII, R = H) bzw.   in-(6-Carboxyhexyl)-4&alpha;-hydroxy-5ss-    (3S-hydroxyhept-lt-enyl)-cyclopentan-2-on (XIII, R = H) sind.

  Die stereochemischen Konfigurationen dieser Verbindungen sind wie folgt:
EMI3.2     


<tb> o <SEP> H
<tb> Ct: <SEP> COOR
<tb> (xii)
<tb> OH <SEP> H <SEP> OH
<tb>  <SEP> OH
<tb> S <SEP> ÓOR <SEP> (xiii)
<tb> (CA) <SEP> ¯N r¯PGE1 <SEP> )
<tb>  <SEP> OH <SEP> H <SEP> H <SEP> OH
<tb>    #-Homo-PGE1    und   #-Nor-PGE1    können so dadurch hergestellt werden, dass man unter aeroben Bedingungen eine allgemeine Cis-Konfiguration aufweisende Trienverbindung, wie oben angegeben, mit Prostaglandin-Syntheseenzym enthaltendem System, z. B. zerkleinerter Schafs-vesiculardrüse, einer Incubation unterwirft. Vorzugsweise wird   Glutathion    als Co-Faktor zugegeben. Ferner ist der Zusatz eines Antioxydationsmittels, z. B. Hydrochinon, giinstig.



   Nach der enzymatischen Umwandlung wird das Reak tionsprodukt in ein geeignetes Derivat umgewandelt. Aus der Reaktionsmischung kann die freie   Azure    isoliert und als solche verwendet werden, oder sie kann in ein Salz, z. B. ihr Natrium-, Kalium-, Ammonium- oder Calciumsalz, oder in einen Ester eines niederen Alkohols, z. B. den Methyl- oder den   Athylester,    umgewandelt werden. Solche Ester können nach in der Technik bekannten Methoden hergestellt werden die Alkylester der Verbindung   gemass    der Erfindung können durch die Wirkung des entsprechenden Alkanols und eines bekannten Katalysators oder durch die Wirkung einer   ätheri-    schen Lösung, z. B. von Diazomethan oder   Diazoäthan,    hergestellt werden.



   Die Prostaglandine   gemäss    der Erfindung können sich in der Form der freien Säuren oder in Salzform, z. B. als das Natrium-, Kalium- oder Ammoniumsalz, oder als ein Ester zwischen der Carbonsäuregruppe und einem niederen Alkohol, z. B. Methanol oder   Methanol,    befinden.



   Die Ausgangssäuren können durch die selektive partielle Hydrierung der entsprechenden   Triinsiiuren,    die selbst durch die Anwendung von klassischen synthetischen Methoden erhältlich sind, oder durch Kettenverlängerung von entsprechenden Triensäuren mit einem Kohlenstoff weniger unter Verwendung der Arndt-Eistert-Reaktion hergestellt werden.



  Sowohl die Trünsäuren als auch   Heneicosa-8c,1 1c,14c-trien-    säure sind neue Verbindungen.



   Die Prostaglandine gemäss der Erfindung zeigen Kontraktionsaktivität auf glatte Muskeln, hypotensive oder hyperten  sive Wirksamkeit, Herzanregungsaktivität und Wirksamkeit hinsichtlich der Inhibierung von blutplättchenanhäufung.



  Die folgende Tabelle fasst die Wirksamkeiten zusammen, die   far      #-Homo-PGE1   und   co-Nor-PGEl    im Vergleich mit ihren nahen Homologen, a-Homo-PGEl,   a-Nor-PGEj,    a-Nor   #-Homo-PGE1,      &alpha;-Blanor-PGE1    und   &alpha;-Bishomo-PGE1   gefunden wurden, die in den Strukturformeln VI und VII und den nachstehenden Strukturformeln VIII bis X angegeben sind.
EMI4.1     


<tb>



  O=C <SEP> - <SEP> XH-(CH2)8-COOH <SEP> (viii)
<tb> H20 <SEP> CH-CH=CH-0HOH-(E2)4-5E3 <SEP> (a-si8homo-Sss1 <SEP> )
<tb>  <SEP> CR
<tb>  <SEP> OH
<tb> O=C <SEP> - <SEP> CH-(CH2)4-COOH <SEP> (IX)
<tb>  <SEP> I <SEP> I
<tb> H2aN <SEP> /CH-CH=CH-CHOH-(0z2)4-aH3 <SEP> (cC-Bisnor-PGE1)
<tb>  <SEP> L\ <SEP> /
<tb>  <SEP> CH
<tb>  <SEP> OH
<tb> O=C <SEP> CK-(C,),-COOH <SEP> - <SEP> OH-(OH
<tb>  <SEP> I <SEP> I <SEP> 2)5-COOH <SEP> (x)
<tb> H2CX <SEP> CH-CX=CH-CHOH-(CH2)5-CH) <SEP> (oc-Nor- <SEP> W-Homo-PGES
<tb>  <SEP> CH/
<tb>  <SEP> OH
<tb> 
Die Substanzen wurden in Form einer Lösung des Natriumsalzes oder des Esters in einer physiologischen Kochsalzlösung im Vergleich mit PGE1 als Kontrollmuster gepriift.



   Kontraktionsaktivität für glatte Muskeln (A) wurde durch die Einwirkung auf den isolierten Meerschweinchen Krummdarm (Meerschweinchen ileum) unter Anwendung der Arbeitsweise von Magnus gemessen. Blutdruck-Erniedrigungswirksamkeit (B) wurde unter Verwendung von Wistar Ratten bei einer Dosierung von 3  g/kg   Körpergewicht    gemessen. Die Herzanregungsaktivität wurde mittels Durchströmen eines isolierten Rattenherzes durch Verwendung der Langendorff-Methode gemessen, die dadurch modifiziert war, dass das Herz in der Luft aufgehängt und die Corona   durchströmungsrate    (C1) gleichzeitig wie die Kontraktionskraft (C2) bei   Dosierungshöhen    in   g/ml    (Cc) gemessen wurde.

  Die Inhibierung von Blutplättchenanhäufungen (D) wurde in vitro unter Verwendung von   Rattenblut    nach der Methode von Born und O'Brien bei Dosierungen von 0,5 bis 1  g/ml gemessen.



  Verbindung A B C0 C1 C2 D   oo-Homo-PGEl(IV,    R = H) 120-130 60-70 0,3 200 100-200 400-500 o-Nor-PGEl   (v,R    = H) 40-50 70-80 1 180 50-200 50-80 PGE1 (II) 100 70 1 200 50-200 100 a-Homo-PGE1 (VI) 2 1 100 100 1   a-Nor-PGEl    (VII) 1 1 100 100 0   &alpha;-Nor-#-homo-PGE1,    (X) 2 1 100 100 1   &alpha;

  ;-Bisnor-PGE1(IX)    1 120 100 2 a-Bishomo-PGE1   (VIII)    1 100 100 1 PGEl-Methylester 125-175   #-Homo-PGE1-Methylester (IV,    R = CH3) 200   co-Nor-PGEl-Methylester    (V, R = CH3) 60 Es ist ersichtlich, dass   co-Nor-PGE1    eine wirksame Verbindung ist und dass   #-Homo-PGE1   4- bis Smal so wirksam wie PGE1 als Plättchenanhäufungsinhibitor und wenigstens 3mal so wirksam als Coronavasodilator ist.

 

   Die   Fiihigkeit,    die Blutplättchenanhäufung oder -aggregation zu inhibieren, ist sehr bemerkenswert, da es bekannt ist, dass eine solche Aggregation Thrombose und vielleicht auch Arteriosklerose ergeben kann.   #-Homo-PGE1    inhibiert auch durch Adenosindiphosphat   herbeigeffihrte      Blutpliitt    chenaggregation in vivo, z. B. in Ratten.



   Die erfindungsgemäss erhaltenen Verbindungen werden für pharmazeutische Zubereitungen verwendet, die noch einen inerten pharmazeutisch annehmbaren   Trigger    umfassen.



  Dieser   Trigger    kann aus einem Feststoff oder einer   Flussig-    keit bestehen, in der die Verbindung gelöst, dispergiert oder suspendiert wird. Die Zubereitungen befinden sich vorzugs  weise in Dosierungseinheiten und können die Form von Tabletten, Pulvern, Kapseln,   Lösungen,    Emulsionen und   fitissi-    gen Suspensionen, insbesondere in injizierbarer Form, an nehmen.



   Die Erfindung wird nachstehend anhand von Beispielen näher erläutert. in denen sämtliche Temperaturen in        C angegeben sind und TLC, RPPC und   GLC      Dtinnschicht-    chromatographie, Umkehrphasen-Verteilungschromatogra phie bzw.   Gasflüssigkeitschromatographie    bedeuten.



   Beispiel 1
Herstellung von Heneicosa-8c,11c,14c-triensäure durch
Arndt-Eistert-Synthese
Zu 127 mg (0,41 mMol) Eicosa-7c,10c,13c-triensäure  (Struyk u. a., Rec. trav. chim., 1966, 85, 1233, in 0,3 ml
Benzol wurden 127 mg (1 mMol) Oxalylchlorid zugegeben; die Mischung wurde bei Raumtemperatur 4 Stunden stehen gelassen, wonach Benzol und   aberschussiges    Oxalylchlorid durch einen Stickstoffstrom entfernt   warden.    Das zurück- bleibende Eicosa-7c,10c,13c-trienoylchlorid wurde in 0,4 ml
Benzol gelöst, und die Lösung wurde tropfenweise zu 5 ml einer   geschiittelten    0,4 m-Lösung von Diazomethan in Ather    bei 0   C zugegeben.

  Nach Stehenlassen während 30 Minuten    bei   0     C wurden   iiberschiissiges    Diazomethan, Benzol und    Anther    durch einen Stickstoffstrom entfernt. Das   zurii.ckblei-    bende Diazoketon wurde in 1 ml wasserfreiem Methanol gelöst und es wurden 44 mg Silberbenzoat in 0,55 ml Tri  äthylamin während 90 Minuten zugegeben, und die Mischung wurde dann 2 Minuten zum Sieden erhitzt. Die sich erge bende Mischung wurde filtriert, der Rückstand wurde mit
1 ml   Ather    gewaschen, und die vereinigten Filtrate wurden zur Trockene eingedampft.

  Das Produkt wurde durch TLC nach der Arbeitsweise von Morris, Chem. and Ind., 1962,
1238, unter Verwendung von zwei Platten aus Silicium dioxydgel G (silica gel G) von einer Dicke von 1 mm, die mit 26 % Silbernitrat, bezogen auf das trockene Siliciumdi oxyd, imprägniert waren und einem Gemisch von Benzol und    anther    (90:10 Vol.) als Eluierungsmittel gereinigt, wobei sich 70 mg Methylheneicosa-8c,11c,14c-trienoat in Form eines   ijls    von 99% Reinheit ergaben, wie dies durch   GLC    gezeigt wurde.

  Dieser Ester wurde durch Behandlung mit
2 ml 0,5m wässrigem methanolischem Kaliumhydroxyd bei    70     C während 1 Stunde unter Stickstoff verseift, wobei sich
Kaliumbeneicosa-8c,11c,14c-trienoat ergab, von dem die freie Säure durch Zusatz von verdünnter Schwefelsäure, bis eine Mischung mit einem pH-Wert von 3 erhalten wurde, frei gesetzt wurde, wobei die organische Säure mit Leichtpetro leum ausgezogen, das Lösungsmittel abgedampft und die freie   Azure    in Form eines Öls zurückgelassen wurde.



   Herstelung von Heneicosa-8,11,14-triinsäure
Zu einer Lösung von 30,8 g (0,2 Mol) Non-8-insäure  (nD25 1,4529, F. 20-2  C) in 100 ml Tetrahydrofuran wur den 275 ml   1,45m-Lösung    von Äthylmagnesiumbromid in
Tetrahydrofuran während 30 Minuten bei   0     C zugegeben.



   Die sich ergebende Mischung wurde 21/2 Stunden gerührt, wonach 720 mg (4 mMol) Kupfer(I)-cyanid zugegeben wur den und das Riihren 10 Minuten fortgesetzt wurde. Eine
Lösung von 36,2 g (0,15 Mol) 1-Bromdodeca-2,5-diin  (Struyk u. a., loc. cit., Kp. 78-80  C/0,001 mm Hg, nD25.



   1,5055 in 75 ml Tetrahydrofuran wurde dann während 10
Minuten zugesetzt, und die   geriihrte    Mischung wurde zum
Sieden erhitzt und 15 Stunden unter Rückfluss gekocht; am
Ende der ersten 4 Stunden wurde eine andere Teilmenge von
Kupfer(I)-cyanid (360 mg) zugegeben. Nachdem die Rück- flussbehandlung beendet war, wurde die Hauptmasse des vorhandenen Lösungsmittels unter verringertem Druck ab destilliert, und zu dem   abgekuhlten      Riickstand    wurden 100 ml   Ather    und wässrige 2n-Schwefelsäure zugegeben.

  Die Mischung wurde gründlich geschüttelt, die Ätherschicht, die sich beim Stehen bildete, wurde abgetrennt, und die wässrige Schicht wurde mit   Ather    extrahiert, die vereinigten   Ather-    schichten wurden mit gesättigter wässriger Ammoniumchlordlösung und dann mit Wasser gewaschen, danach mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wurde in einer kleinen Menge Leichtpetroleum gelöst, und die Lösung wurde auf einer Säule (30 cm Lunge und 2,2 cm Durchmesser) von Siliciumdioxydgel chromatographiert, wobei als Eluierungsmittel Mischungen von Leichtpetroleum und   anther    verwendet wurden, die mit einem Volumverhältnis von 95 : 5 begonnen und mit steigenden Anteilen von   Anther    bis zu einem endgültigen Verhältnis von 40:60 fortgesetzt wurden.

  Die eluierten Fraktionen, die, wie gefunden wurde, Säure enthielten, wurden vereinigt und eingedampft; der Rückstand wurde aus einem Gemisch von Leichtpetroleum und   Anther    (85   15    Vol.) bei -5  C kristallisiert und ergab 22,7 g   (48 %)      Heneicosa-8,11,14-triinsäure,    F. 56-57,5  C, Infrarotabsorptionsspitzen bei 1690 (-COOH) und 1309   cm-9    (-CH2-C=C-). Kernmagnetisches Resonanzspektrum (NMR, in Klammern ist die relative intensität und die Bezeichnung angegeben): Verzerrtes Triplett bei 6 0,90 (3; CH3-), Komplex bei 6 1,1 bis 1,85 (16; -CH2-), Komplex bei 6 1,85 bis 2,5 und ein Triplett bei 6 2,32 (6; -CH2-C=C- und -CH2-COO-), Komplex bei 6 3,03   (4; -C=C-CH2-C=C-)    und ein breites Singulett (1;-COOH).

  Die Siiure wurde durch Umsetzung mit einer Ätherlösung von Diazomethan in ihren Methylester umgewandelt, der einer   GLC    unterworfen wurde und eine Reinheit von   99,5 %    zeigte; Massenspektrumstammspitze m/e = 328.



   Herstellung von Heneicosa-8c,11c,14c-triensäure und deren Methylester
100 mg Lindlar-Katalysator und 0,05 ml Chinolin wurden zu einer Lösung von 674 mg (2,15 mMol) Heneicosa-8,11, 14-triinsäure in 30 ml Methanol gegeben, und die Mischung wurde in Wasserstoff bei   0     C   geschtittelt,    bis das berechnete Volumen von Wasserstoff zur Umwandlung der gesamten acetylenischen Ungesättigthei in äthylenische Ungesättigtheit absorbiert worden war. Die Lösung wurde filtriert und in eine Mischung von 50 ml Wasser und 3 ml   Schwefelsiiure    gegossen.

  Die sich ergebende Mischung wurde mit 3 Teilen optisch reinem Leichtpetroleum extrahiert, und der Extrakt wurde mit Wasser gewaschen und mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, und das Lösungsmittel wurde durch Verdampfen entfernt, wobei als   Rdckstand    677 mg (98 %) rohe Heneicosa-8c,11c,14c-triensäure   zuriickblieb;      nD25    1,4765;   GLC    des Methylesters zeigte die Anwesenheit von 1% Monoen-, 9% Dien- und   90%    Triensäure.

  Die Säure (246 mg, 0,77 mMol) wurde in ihrem Methyl ester durch den Zusatz einer ätherischen Lösung von Diazomethan umgewandelt, und der Ester wurde durch TLC gemäss der Methode von Morris 1. c. unter Verwendung von Platten aus Siliciumdioxyd (Silicagel G) mit einer Dicke von 1 mm, die mit   26 %    Silbernitrat, bezogen auf das Gewicht des trockenen Siliciumdioxyds,   imprigniert    waren, und einer Mischung von Benzol und   Ather      (Volumverhiltnis      5:1)    als Eluierungsmittel gereinigt, wobei sich 174 mg   (68%)    Methyl-heneicosa-8c,11c,14c- trienoat in Form eines   tils    von   99,5 %    Reinheit, wie dies durch   GLC    gezeigt wurde, ergaben; nD25 1,4695; 

  Infrarotabsorptionsspitzen bei 3000, 1400, 720   (Cis-CH=CH-),    1743   cm-    (-COOCH3); Massenspektrum: Stammspitze m/e 334, letzte Doppelbindung zwischen C-Atomen Nr. 14 und 15; NMR: verzerrtes Triplett bei 6 0,89 (3; CH3-), Komplex bei 6 1,1-1,8 (16;   -CH2-),    Komplex bei 6 1,8-2,4 und Triplett bei 6 2,20 (6; -CH2-CH=CH- und -CH2-COO-), Komplex bei 6 2,75 (4; -CH=CH-CH2-CH=CH-), Singulett bei     # 3,57    (3;-COOCH3) und Komplex bei   #    5,29 (6; -CH=CH-).



   Der Methylester (150 mg, 0,45 mMol) wurde durch Erhitzen mit 20 ml einer   0,35n-Lösung    von Natriumhydroxyd in 85% Methanol bei   60     C während einer Stunde unter einer Stickstoffdecke hydrolysiert. Die Reaktionsmischung wurde in 100 ml Wasser gegossen, mit 4n-Schwefelsäure bis zu einem pH-Wert von 3 angesäuert und mit   Anther    extrahiert.



  Der ätherische Auszug wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und eingedampft, wobei fast reine Heneicosa8c,11c,14c-triensäure in Form eines   dIs      zurtlckblieb; nD25    1,4788, mit einem Gehalt gemäss ihres Ultraviolettspektrums von 5% konjugiertem Dien; Infrarotabsorptionsspitzen bei   1715 und 3010 cm1; Ú; Massenspektrum: Stammspitze bei    m/e 320, Doppelbindung zwischen den C-Atomen Nm. 14 und 15; Doppelbindungen zwischen C-Atomen Nrn. 8 und 9, und 14 und 15 gemäss Analyse mittels Ozonolyse.



   Herstellung von   #-Homo-PGE1   
Eine Mischung von 24 mg Heneicosa-8c,11c,14c-trien   sure,    120 mg   Glutathion,    12 mg Hydrochinon und 600 mg Protein aus der teilchenförmigen Enzymfraktion der Vesicu   lardriisen    von Schafen (erhalten wie von Struyk u. a. 1. c.



  beschrieben), suspendiert in wässriger 0,2m-Tris-(hydroxymethyl)-aminomethanhydrochlorid-PUfferlösung, pH-Wert 8,0, wurde auf ein Gesamtvolumen von 300 ml aerob durch   Rflhren    der Mischung in einem grossen, gegenüber der Luft offenen Behälter bei   30     C während 20 Minuten inkubiert.



  Die Enzymreaktion wurde dann durch Ansäuern mit Citronensiure auf einen pH-Wert von 4 beendet, und die Mischung wurde mit 2 Teilmengen von 300 ml   Ather    extrahiert. Der   Riickstand    von der Verdampfung des Extraktes wurde in Chloroform gelöst, und die Lösung wurde auf einer Siule von Siliciumdioxydgel (25 g) chromatographiert, wobei nacheinander als Eluierungsmittel 150 ml Chloroform,
150 ml Chloroform mit einem Gehalt von 3 % Methanol und 150 ml Chloroform mit einem Gehalt von   5%    Methanol verwendet   warden,    und es wurden 10-ml-Fraktionen von Eluat gesammelt. Kleine Proben der Fraktionen (0,1 ml) wurden auf die Anwesenheit eines Prostaglandins durch Behandlung mit Alkali (0,5 ml 3n-KOH in 75 % Methanol) und Untersuchung hinsichtlich einer Ultraviolettabsorptionsspitze bei 278 nm geprüft.

  Die letzten Fraktionen des Eluierungsmittels mit 3 % Methanol und die ersten Fraktionen des Eluierungsmittels mit   5%    Methanol enthielten, wie gefunden wurde, die   gewanschte    Substanz; sie wurden eingedampft und ergaben 12 mg Produkt. Dieses Produkt wurde dann weiter durch RPPC gereinigt, und zwar unter Verwendung einer Diatomeenerde (2,5 g), die wasserabstossend durch die Wirkung eines Methylchlorsilans gemacht worden war, als   Trigger,    einer Mischung (1,8 ml) von gleichen Volumina von Isooctanol und Chloroform als   stationire    Phase und   wässrigem    Methanol mit einem Gehalt von 9 Volumina Methanol auf 10 Volumina Wasser als Eluierungsmittel.

  Alle diejenigen Fraktionen (jeweils 2 ml), welche die obengeschilderte Alkalireaktion zeigten, mit Ausnahme der ersten und der letzten, wurden vereinigt und eingedampft und ergaben 7,2 mg    la-(6-Carboxyhexyl) -4a -hydroxy-5,B -(3S-hydroxynon- lt-    enyl)-cyclopentan-2-on   (#-Homo-PGE1)    in Form einer kristallinen Substanz, F.   115-116     C (aus Leichtpetroleum/ Äther). Ein Vergleich mit PGE1 durch TLC auf Siliciumdioxydgel unter Verwendung einer Mischung von Chloroform, Methanol,   Essigsiure    und Wasser in den entsprechenden Volumanteilen von 90:8:1:0,75 ergaben einen Rf-Wert   fiir      #-Homo-PGE1   von 0,34 im Vergleich mit 0,32   far    PGE1, wobei die beiden Substanzen gerade getrennt sind.

  Die Drehung, gemessen in einer   l-g/l-Lösung    in Methanol bei   20     C,   betrug-690.   



   Durch Behandlung mit 0,5n-Alkali bei   20     C   wihrend   
10 Minuten wurde das   #-Homo-PGE1    (1 mg) erhalten, wie oben beschrieben zu einer   Siure    dehydratisiert, die ein Ultraviolettabsorptionsmaximum bei 278 nm zeigte. Das Produkt wurde in seinen Methylester durch Umsetzung mit einer    itherischen    Lösung von Diazomethan umgewandelt.



   Das Massenspektrum des Methylesters hatte eine Stamm spitze m/e = 364 und eine   Grundspitze    m/e = 219. Nach
Umwandlung des Methylesters in seinen   Trimethylsilylither    schien er homogen zu sein (durch   GLC    bei   200     C unter
Verwendung einer Diatomeenerde, die mit 1%   Polyithylen-    glykoladipat beladen war, als   Trigger    zeigte sich eine Zuriick haltezeit von 1,25 im Vergleich zu derjenigen von PGE1  = 1,0).



   Beispiel 2
3 mg   #-Homo-PGE1    wurden in 1 ml   Anther    gelöst, und es wurde dazu ein Überschuss einer ätherischen Lösung von Diazomethan bei   0     C zugegeben. Nach 5 Minuten wurde die Mischung zur Trockene durch einen Stickstoffstrom eingedampft, wobei der Methylester von   -Homo-PGEl    (Formel IV, R = CH3) in Form eines   Isles      zurlckgelassen    wurde.



  Sein Rf-Wert   betrigt    1,05 im Vergleich zu demjenigen von PGEl-Methylester (1,00) in TCL   tiber    Siliciumdioxydgel; das Eluierungsmittel bestand aus einem Gemisch von Chloroform und Methanol im   Volumverhiltnis    von 96:4.



   Beispiel 3
Herstellung von   Nonadeca-8 ,11,14-triins5iure   
Zu einer Lösung von   Non-8-insiure    (3,3 g, 21 mMol) in
10 ml Tetrahydrofuran wurden 42 ml einer   1,03m-Lösung    von Äthylmagnesiumbromid in Tetrahydrofuran während
5 Minuten gegeben. Die sich ergebende Mischung wurde bei   30     C 45 Minuten   geruhrt,    wonach 75 mg (0,4 mMol) Kupfer(I)-chlorid zugegeben wurden und das   Riihren    5 Minuten fortgesetzt wurde. Eine Lösung von 2,9 g (14 mMol) l-Bromdeca-2,5-diin (Struyk u. a. 1. c.) in 10 ml Tetrahydrofuran wurden dann während 3 Minuten hinzugegeben, und die gerührte Mischung wurde 19 Stunden lang auf   60     C erhitzt. Am Ende der ersten 3 Stunden wurden 30 mg Kupfer(I)-chlorid zugegeben.

  Nachdem die Erhitzung vollendet war, wurde die Mischung   gekühlt,    und es wurden 100 ml   Anther    und n-Salzsäure zugegeben. Die Mischung wurde gründlich   geschüttelt,    die Ätherschicht, die sich beim Stehen bildete, wurde abgetrennt, und die   wissrige    Schicht wurde mit   anther    extrahiert; die vereinigten Ätherschichten wurden mit gesättigter Ammoniumchloridlösung und dann mit Wasser gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und eingedampft.



   Der   Riickstand    65,5 g) wurde in einer kleinen Menge von Leichtpetroleum gelöst und auf einer Siliciumdioxydgel Siiule   (Linge    30 cm, Durchmesser 2,2 cm) unter Verwendung von Mischungen von Leichtpetroleum und   Ather,    beginnend mit   einera    Volumenverhältnis von   80 : 20    und fort schreitend mit steigenden Anteilen von   Anther    bis zu einem endgültigen Verhältnis von 20:80, als Eluierungsmittel chromatographiert, und es wurden Fraktionen des Eluats gesammelt.

  Die eluierten Fraktionen, welche, wie gefunden wurde, Siiure enthielten, wurden vereinigt und eingedampft; der   Rflckstand    wurde aus einer Mischung von Leichtpetroleum und Aceton (85 : 15 Vol.) kristallisiert und ergab
1,9 g   (48%)      Nonadeca-8,11,14-triinsiure;    F. 48,5-49,5  C; Infrarotabsorptionsspitzen bei 1692 (-COOH) und
1310   cm-l    (-CH2-C=C-); NMR: verzerrtes Triplett bei   #    0,91 (3;   CH3-),    Komplex bei   #    1,1-1,8 (12;   -CH2-),   
Komplex bei   #    1,8-2,5 und Triplett bei   #    2,29 (6;   -CH2-C=C-    und -CH2-COO-), Komplex bei   #    3,00 (4; -C=C-CH2-C=C-), und breites Singulett (1; -COOH). 

  Die   Siure    wurde durch Umsetzung mit einer ätherischen Lösung  von Diazomethan in ihren Methylester umgewandelt, der einer   GLC    unterworfen wurde und eine 99,7 %ige Reinheit zeigte; Massenspektrum: Stammspitze bei m/e 300.



   Herstellung von Nonadeca-8c,11c,14c-triensäure und ihres Methylesters
100 mg Lindlar-Katalysator und 0,05 ml Chinolin wurden zu einer   Ldsung    von 430 mg (1,5 mMol) Nonadeca-8,11,14triinsäure in 30 ml Methanol gegeben, und die Mischung wurde in Wasserstoff bei   0     C geschüttelt, bis das berechnete Volumen an Wasserstoff zur Umwandlung der gesamten acetylenischen   Ungesättigtheit    in   äthylenische      Ungesättigtheit    absorbiert worden war. Die Lösung wurde filtriert, in eine Mischung von 50 ml Wasser und 3 ml 4n-Schwefelsäure gegossen und mit 3 Teilmengen von optisch reinem Leichtpetroleum extrahiert.

  Der Extrakt wurde mit Wasser gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, und das   Lbsungsmittel    wurde durch Verdampfen entfernt, wobei als   Rtickstand    rohe   Nonadeca-8c,11c,14c-triensäure,      nD25    1,4781,   zurückblieb.    Die   Sauce    wurde in ihren Methylester (nD25 1,4694) durch den Zusatz einer ätherischen Lösung von Diazomethan umgewandelt, einer   GLC    unterworfen und zeigte eine   92 %ige    Reinheit.

  Der Ester wurde ferner durch TLC nach der Methode von Morris, 1. c., gereinigt, wobei Platten von Siliciumdioxydgel G (silica gel G) mit einer Dicke von 1 mm, die mit   26 %    Silbernitrat, bezogen auf das Gewicht des trockenen Siliciumdioxyds,   impragniert    waren, und eine Mischung von Benzol und   Ather      (85:15   
Vol.) als Eluierungsmittel verwendet wurden.

  Nach Ver dampfen des Eluats wurden 308 mg   (67%)    Methylnonadeca    8c,iic,14c-trienoat    in Form eines Öls erhalten, nD25 1,4696; Infrarotabsorptionsspitzen bei 3000, 1400, 720 (breit) (cis -CH=CH-) und 1743 cm- 1 (-COOCH3);   GLC    zeigte, dass der Ester eine Reinheit von mehr als   99,5%    aufwies; Massenspektrumstammspitze m/e = 306; das Massenspektrum zeigte, dass die von der Methoxycarbonylgruppe entfernteste   Dop-    pelbindung sich in der 14,15-Stellung befand.

  NMR: Verzerrtes Triplett bei 6 0,90 (3; CH3-), Komplex bei 6 1,1 bis 1,8 (12; -CH2-), Komplex bei   6    1,8 bis 2,4 und Triplett bei 6 2,20 (6;   -CH2-CH=CH- und -CH2-COO-),    Komplex bei 6 2,74 (4;   -CH=CHH2-CH=CH-),    Singulett bei 6 3,58 (3; -COOCH3) und Komplex bei 6 5,28 (6; -CH=CH-).



   Der Ester wurde durch Behandlung mit einem 200 %igen   Qberschuss    einer   0,5m-Lösung    von Kaliumhydroxyd in 70%igem wässrigem Methanol bei   70     C während 1 Stunde unter Stickstoff verseift und ergab das Kaliumsalz, aus dem die freie Nonadeca-8c,11c,14c-triensäure durch Zusatz von verdünnter Schwefelsäure, bis eine Mischung mit einem pH-Wert von 3 erhalten wurde, freigesetzt wurde, wobei die organische Säure mit Leichtpetroleum extrahiert, das   Lö-    sungsmittel abgedampft und die freie   Shore    in Form eines Öls zurückgelassen wurde.



   Herstellung von   -Nor-PGEl   
Eine Mischung von 100 mg Nonadeca-8c,11c,14c-trien-   sabre,    500 mg   Glutathion,    30 mg Hydrochinon und 1,33 g Protein aus der teilchenförmigen Enzymfraktion der Vesiculardrüssen von Schafen (erhalten, wie von Struyk u. a., 1. c.



  beschrieben) in einer wässrigen 0,2m tris-(Hydroxymethyl)aminomethanhydrochlorid-pufferlösung. pH-Wert 8,0, auf ein Gesamtvolumen von 1200 ml suspendiert, wurde durch Riihren der Mischung in   einera    grossen,   gegenaber    der Luft offenen Becher bei   30     C während 30 Minuten aerob incubiert. Die Enzymreaktion wurde dann durch Ansäuern mit Zitronensäure auf einen pH-Wert von 4 beendet, und die Mischung wurde mit 2 Teilmengen von 300 ml   Ather    extrahiert.

  Der   Rtickstand    aus der Verdampfung des Extrakts wurde in Chloroform gelöst, und die Lösung wurde auf einer   Saule    von Siliciumdioxydgel (25 g) chromatographiert, wobei nacheinander als Veresterungsmittel 150 ml Chloroform,
150 ml 3% Methanol enthaltendes Chloroform und 150 ml 5% Methanol enthaltendes Chloroform verwendet wurden, und die Eluatfraktionen wurden gesammelt.

  Das   gewünschte    Produkt, wie dies durch Prüfung einer kleinen Probe mit Alkali zur Bildung von Material, das eine Ultraviolettabsorptionsspitze bei 278 nm aufwies, gezeigt wurde, wurde durch die 5 %ige Methanolmischung eluiert, und dieses Eluat wurde eingedampft und ergab 6,0 mg rohes la-(6-Carboxyhexyl)    4&alpha;-hydroxy-5ss-(3S-hydroxyhept-lt-enyl)-cyclopentan-2-on      (co-Nor-POE1).    Dieses wurde dann durch RPPC unter Verwendung einer Diatomeenerde (2,5 g), die durch die Einwirkung von Methylchlorsilan wasserabweisend gemacht worden war, als Trigger einer Mischung (1,8 ml) von gleichen Volumina Isooctanol und Chloroform als   stationarer    Phase und von wässrigem Methanol mit einem Gehalt von 9 Volumina Methanol auf 10 Volumina Wasser als Eluierungsmittel weiter gereinigt.

  Es wurden Fraktionen von 2 ml gesammelt, und es wurden   0,01-ml-Proben    auf die Gegenwart von Prostaglandin durch die oben genannte Alkalireaktion   gepruft.    Alle diejenigen, welche die Reaktion ergaben, mit Ausnahme der ersten und der letzten Fraktion, wurden vereinigt und eingedampft, wobei sich 3,3 mg eines reinen   cv-Nor-PGEl    in Form einer kristallinen Substanz, F. 92-93  C (aus Leichtpetroleum/Äther) ergaben. Ihre Drehkraft, gemessen in einer 1-g/l-Lösung in Methanol betrug-81 . Ein Vergleich mit PGE1 durch TLC, wie in Beispiel 1 beschrieben, ergab einen Rf-Wert   fur    o-Nor-PGEl von 0,31 im Vergleich mit 0,32   fiir    PGE1.

  Eine bessere Trennung wurde durch Beladung des Siliciumdioxydgels mit 10% Silbernitrat (Rf-Wert -von   #-Nor-PGE1,   0,93 mit Bezug auf denjenigen von   PGEI    = 1,00) erhalten.



   Durch Behandlung mit 0,5n Alkali bei   20     C während 10 Minuten wurde das   -Nor-PGEl    (1 mg), erhalten wie in dem vorhergehenden Beispiel, zu einer   SBure    dehydratisiert, die ein Ultraviolettabsorptionsmaximum bei 278 nm zeigte.



  Das Produkt wurde in seinen Methylester durch Umsetzung mit einer ätherischen Lösung von Diazomethan umgewandelt.



  Das Massenspektrum dieses Methylesters hatte eine Stammspitze m/e 336 und eine   Grundspitze    m/e 219. Nach Um- wandlung des Methyl esters in seinen Trimethylsilyläther erschien er homogen zu sein (durch   GLC,    wie in Beispiel 1 beschrieben) und zeigte eine   Riickhaltezeit    von 0,76 mit Bezug auf diejenige von   PGEt    = 1,00.



   Beispiel 4
3 mg   co-Nor-PGEl    wurden in 1 ml   Ather    gelöst, und es wurde ein   flberschuss    einer ätherischen Lösung von Diazomethan bei   0     C zugegeben. Nach 5 Minuten wurde die Mischung zur Trockene durch einen Stickstoffstrom eingedampft, wobei der Methyl ester von   #-Nor-PGE1   (Formel V, R=CH3) in Form eines   tXls      zurückblieb.   

 

   Sein Rf-Wert ist 0,97 mit Bezug auf denjenigen von PGEl-Methylester (1,00) in TLC auf Siliciumdioxydgel; das Eluierungsmittel bestand aus einer Mischung von Chloroform und Methanol im Volumenverhältnis von   96 :4.   



   PATENTANSPRÜCHE



   I. Verfahren zur Herstellung von therapeutisch wirksamen Verbindungen der Formel
EMI7.1     
 

**WARNUNG** Ende DESC Feld konnte Anfang CLMS uberlappen**.

Claims

**WARNUNG** Anfang CLMS Feld konnte Ende DESC uberlappen **. von Diazomethan in ihren Methylester umgewandelt, der einer GLC unterworfen wurde und eine 99,7 %ige Reinheit zeigte; Massenspektrum: Stammspitze bei m/e 300.

Herstellung von Nonadeca-8c,11c,14c-triensäure und ihres Methylesters 100 mg Lindlar-Katalysator und 0,05 ml Chinolin wurden zu einer Ldsung von 430 mg (1,5 mMol) Nonadeca-8,11,14triinsäure in 30 ml Methanol gegeben, und die Mischung wurde in Wasserstoff bei 0 C geschüttelt, bis das berechnete Volumen an Wasserstoff zur Umwandlung der gesamten acetylenischen Ungesättigtheit in äthylenische Ungesättigtheit absorbiert worden war. Die Lösung wurde filtriert, in eine Mischung von 50 ml Wasser und 3 ml 4n-Schwefelsäure gegossen und mit 3 Teilmengen von optisch reinem Leichtpetroleum extrahiert.

Der Extrakt wurde mit Wasser gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, und das Lbsungsmittel wurde durch Verdampfen entfernt, wobei als Rtickstand rohe Nonadeca-8c,11c,14c-triensäure, nD25 1,4781, zurückblieb. Die Sauce wurde in ihren Methylester (nD25 1,4694) durch den Zusatz einer ätherischen Lösung von Diazomethan umgewandelt, einer GLC unterworfen und zeigte eine 92 %ige Reinheit.

Der Ester wurde ferner durch TLC nach der Methode von Morris, 1. c., gereinigt, wobei Platten von Siliciumdioxydgel G (silica gel G) mit einer Dicke von 1 mm, die mit 26 % Silbernitrat, bezogen auf das Gewicht des trockenen Siliciumdioxyds, impragniert waren, und eine Mischung von Benzol und Ather (85:15 Vol.) als Eluierungsmittel verwendet wurden.

Nach Ver dampfen des Eluats wurden 308 mg (67%) Methylnonadeca 8c,iic,14c-trienoat in Form eines Öls erhalten, nD25 1,4696; Infrarotabsorptionsspitzen bei 3000, 1400, 720 (breit) (cis -CH=CH-) und 1743 cm- 1 (-COOCH3); GLC zeigte, dass der Ester eine Reinheit von mehr als 99,5% aufwies; Massenspektrumstammspitze m/e = 306; das Massenspektrum zeigte, dass die von der Methoxycarbonylgruppe entfernteste Dop- pelbindung sich in der 14,15-Stellung befand.

NMR: Verzerrtes Triplett bei 6 0,90 (3; CH3-), Komplex bei 6 1,1 bis 1,8 (12; -CH2-), Komplex bei 6 1,8 bis 2,4 und Triplett bei 6 2,20 (6; -CH2-CH=CH- und -CH2-COO-), Komplex bei 6 2,74 (4; -CH=CHH2-CH=CH-), Singulett bei 6 3,58 (3; -COOCH3) und Komplex bei 6 5,28 (6; -CH=CH-).

Der Ester wurde durch Behandlung mit einem 200 %igen Qberschuss einer 0,5m-Lösung von Kaliumhydroxyd in 70%igem wässrigem Methanol bei 70 C während 1 Stunde unter Stickstoff verseift und ergab das Kaliumsalz, aus dem die freie Nonadeca-8c,11c,14c-triensäure durch Zusatz von verdünnter Schwefelsäure, bis eine Mischung mit einem pH-Wert von 3 erhalten wurde, freigesetzt wurde, wobei die organische Säure mit Leichtpetroleum extrahiert, das Lö- sungsmittel abgedampft und die freie Shore in Form eines Öls zurückgelassen wurde.

Herstellung von -Nor-PGEl Eine Mischung von 100 mg Nonadeca-8c,11c,14c-trien- sabre, 500 mg Glutathion, 30 mg Hydrochinon und 1,33 g Protein aus der teilchenförmigen Enzymfraktion der Vesiculardrüssen von Schafen (erhalten, wie von Struyk u. a., 1. c.

beschrieben) in einer wässrigen 0,2m tris-(Hydroxymethyl)aminomethanhydrochlorid-pufferlösung. pH-Wert 8,0, auf ein Gesamtvolumen von 1200 ml suspendiert, wurde durch Riihren der Mischung in einera grossen, gegenaber der Luft offenen Becher bei 30 C während 30 Minuten aerob incubiert. Die Enzymreaktion wurde dann durch Ansäuern mit Zitronensäure auf einen pH-Wert von 4 beendet, und die Mischung wurde mit 2 Teilmengen von 300 ml Ather extrahiert.

Der Rtickstand aus der Verdampfung des Extrakts wurde in Chloroform gelöst, und die Lösung wurde auf einer Saule von Siliciumdioxydgel (25 g) chromatographiert, wobei nacheinander als Veresterungsmittel 150 ml Chloroform, 150 ml 3% Methanol enthaltendes Chloroform und 150 ml 5% Methanol enthaltendes Chloroform verwendet wurden, und die Eluatfraktionen wurden gesammelt.

Das gewünschte Produkt, wie dies durch Prüfung einer kleinen Probe mit Alkali zur Bildung von Material, das eine Ultraviolettabsorptionsspitze bei 278 nm aufwies, gezeigt wurde, wurde durch die 5 %ige Methanolmischung eluiert, und dieses Eluat wurde eingedampft und ergab 6,0 mg rohes la-(6-Carboxyhexyl) 4α-hydroxy-5ss-(3S-hydroxyhept-lt-enyl)-cyclopentan-2-on (co-Nor-POE1). Dieses wurde dann durch RPPC unter Verwendung einer Diatomeenerde (2,5 g), die durch die Einwirkung von Methylchlorsilan wasserabweisend gemacht worden war, als Trigger einer Mischung (1,8 ml) von gleichen Volumina Isooctanol und Chloroform als stationarer Phase und von wässrigem Methanol mit einem Gehalt von 9 Volumina Methanol auf 10 Volumina Wasser als Eluierungsmittel weiter gereinigt.

Es wurden Fraktionen von 2 ml gesammelt, und es wurden 0,01-ml-Proben auf die Gegenwart von Prostaglandin durch die oben genannte Alkalireaktion gepruft. Alle diejenigen, welche die Reaktion ergaben, mit Ausnahme der ersten und der letzten Fraktion, wurden vereinigt und eingedampft, wobei sich 3,3 mg eines reinen cv-Nor-PGEl in Form einer kristallinen Substanz, F. 92-93 C (aus Leichtpetroleum/Äther) ergaben. Ihre Drehkraft, gemessen in einer 1-g/l-Lösung in Methanol betrug-81 . Ein Vergleich mit PGE1 durch TLC, wie in Beispiel 1 beschrieben, ergab einen Rf-Wert fur o-Nor-PGEl von 0,31 im Vergleich mit 0,32 fiir PGE1.

Eine bessere Trennung wurde durch Beladung des Siliciumdioxydgels mit 10% Silbernitrat (Rf-Wert -von #-Nor-PGE1, 0,93 mit Bezug auf denjenigen von PGEI = 1,00) erhalten.

Durch Behandlung mit 0,5n Alkali bei 20 C während 10 Minuten wurde das -Nor-PGEl (1 mg), erhalten wie in dem vorhergehenden Beispiel, zu einer SBure dehydratisiert, die ein Ultraviolettabsorptionsmaximum bei 278 nm zeigte.

Das Produkt wurde in seinen Methylester durch Umsetzung mit einer ätherischen Lösung von Diazomethan umgewandelt.

Das Massenspektrum dieses Methylesters hatte eine Stammspitze m/e 336 und eine Grundspitze m/e 219. Nach Um- wandlung des Methyl esters in seinen Trimethylsilyläther erschien er homogen zu sein (durch GLC, wie in Beispiel 1 beschrieben) und zeigte eine Riickhaltezeit von 0,76 mit Bezug auf diejenige von PGEt = 1,00.

Beispiel 4 3 mg co-Nor-PGEl wurden in 1 ml Ather gelöst, und es wurde ein flberschuss einer ätherischen Lösung von Diazomethan bei 0 C zugegeben. Nach 5 Minuten wurde die Mischung zur Trockene durch einen Stickstoffstrom eingedampft, wobei der Methyl ester von #-Nor-PGE1 (Formel V, R=CH3) in Form eines tXls zurückblieb.

Sein Rf-Wert ist 0,97 mit Bezug auf denjenigen von PGEl-Methylester (1,00) in TLC auf Siliciumdioxydgel; das Eluierungsmittel bestand aus einer Mischung von Chloroform und Methanol im Volumenverhältnis von 96 :4.

PATENTANSPRÜCHE

I. Verfahren zur Herstellung von therapeutisch wirksamen Verbindungen der Formel EMI7.1

worin n die Zahl 1 oder 2 darsteilt und M Wasserstoff, ein Alkalimetall, den Ammoniumrest oder das Equivalent eines Erdalkalimetalls bedeutet, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel CH3(CH2)2n + r(CH=CH-CH2)3-(CH2)sCO OM mit einem Prostaglandin-Synthese-Enzymsystem unter aeroben Bedingungen incubiert.

II. Verwendung der nach dem Verfahren gemass Patentanspruch I erhaltenen Verbindungen zur Herstellung von Verbindungen der Formel EMI8.1 worin R eine Alkylgruppe mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen bedeutet, dadurch gekennzeichnet, dass die erhaltene Verbindung entsprechend verestert wird.

UNTERANSPRÜCHE 1. Verfahren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das 1α-(6-Carboxyhexyl)-4α-hydroxy-5ss-(3S- hydroxyhept-1-trans-enyl)-caclopentan-2-on hergestellt wird 2. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass das Natrium-la-(6-carboxylatohexyl)-4a- hydroxy-5,8-(3S -hydroxynon- 1-trans-enyl) -cyclop entan-2-on hergestelit wird.

3. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass das Kalium-1α-(6-carboxylatohexyl)-4α- hydroxy-5ss-(3S-hydroxynon-1-trans-enyl)-cyclopentan-2-on hergestellt wird.

4. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass das Ammonium- la-(6-carboxylatohexyl)-4a hydroxy-5,B-(3S-hydroxy-non-1 -trans-enyl)-cyclopentan-2-on hergestellt wird.

5. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass das Natrium-la-(6-carboxylatohexyl)-4a hydroxy-Sss-(3S-hydroxy-hept-l-trans-enyl)-cyclopentan-2- on hergestellt wild.

6. Verfahren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Kalium-1α-(6-carboxylatohexyl)-4α- hydroxy-5ss-(3S-hydroxyphept-1-tans-enyl)-cyclopentan-2on hergestellt wird.

7. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass das Ammonium-1α-(6-carboxylatohexyl)- 4-αhydroxy-5ss-(3S-hydroxyhept-1-trans-enyl)-cyclopentan- 2-on hergestellt wird.

8. Verwendung nachPatentanspruch II, dadurch gekennzeichnet, dass das 1α-(6-Methoxycarbonyl-hexyl)-4α-hydr- oxy-5ss-(3S-hydroxynon-1-trans-enyl)-cyclopentan-2-on hergestellt wird.

9. Verwendung nach Patentanspruch II, dadurch gekennzeichnet, dass das 1α-(6-Methoxycarbonyl-hexyl)-4α-hydr- oxy-5ss-(3S-hydroxyhept-1-trans-enyl)-cyclopentan-2-on hergestellt wild.