Verfahren zur Herstellung neuer Derivate der 7-Aminocephalosporansäure
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung neuer therapeutisch wirksamer Derivate der 7-Aminocephalosporansäure (ACA) der Formel I
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worin Ri einen über eines seiner Stickstoffatome gebundenen Tetrazolylrest bedeutet und R2 eine quaternäre Aminogruppe ist, und ihrer Salze.
R2 bedeutet eine quaternäre Aminogruppe in der das quaternäre Stickstoffatom z. B. Teil eines aromatischen Ringes, wie eines Chinolin-, Isochinolin- oder Pyrimidinringes, insbesondere aber eines unsubstituierten oder substituierten Pyridinirnges, z. B. der Formel
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worin R5 für Wasserstoff oder eine oder mehrere Niederalkyl-, Niederalkoxycarbonyl-, Carbamoyl- oder Carboxylgruppen oder ein oder mehrere Halogenatome steht.
Die Salze der neuen Verbindungen sind Metallsalze, vor allem solche von therapeutisch anwendbaren Alka li- oder Erdalkalimetallen, wie Natrium, Kalium, Am monium, Calcium, oder Salze mit organischen Basen, z. B. Triäthylamin, N-Äthylpiperidin, Dibenzylamin, N-Benzyl-ss-phenetylamin, N,N'-Dibenzyläthylendiamin,
Procain, Ephenamin, oder innere Salze.
Die neuen Verbindungen weisen eine besonders gute antibakterielle Wirkung auf. Sie sind sowohl gegenüber grampositiven wie vor allem auch gegenüber gram-negativen Bakterien wirksam, z. B. gegen Staphylococcus aureus penicillin-resistent, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhosa und Bacterium proteus, wie sich auch im Tierversuch, z. B. an Mäusen, zeigt. An diesen sind bei subcutaner Anwendung, je nach Art der bakteriellen Infektion, 0,1-100 mg/kg chemotherapeutisch wirksam. Die Verbindungen können daher zur Bekämpfung von Infektionen, die durch solche Mikroorganismen hervorgerufen werden, verwendet werden, ferner als Futtermittelzusätze, zur Konservierung von Nahrungsmitteln oder als Desinfektionsmittel.
Diese Verbindungen können nach an sich bekannten Methoden hergestellt werden. Sie werden erfindungsgemäss erhalten, wenn man eine Verbindung der Formel II
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oder ein Salz davon, worin R1 die angegebene Bedeutung hat und R'2 für eine durch eine Carbonsäure oder Thiocarbonsäure veresterte Hydroxyl- bzw. Mercaptogruppe steht, mit einem tertiären Amin oder einem Salz davon, umsetzt.
Wenn erwünscht, kann man die erhaltenen Verbindungen in ihre therapeutisch verwendbaren Metall-, wie Alkali- oder Erdalkalimetallsalze, oder Salze mit Ammoniak oder organischen Basen überführen oder aus erhaltenen Salzen die inneren Salze bilden.
Die als Ausgangsstoffe verwendeten Cephalosporinderivate sind bekannt oder können nach an sich bekannten Verfahren hergestellt werden. Eine durch eine Carbonsäure oder Thiocarbonsäure veresterte Hydroxylbzw. Mercaptogruppe R'2 ist beispielsweise eine gegebenenfalls z. B. durch Halogenatome, besonders Chlor, substituierte Niederalkanoyloxygruppe wie Formyloxy, Acetoxy, Propionyloxy, Butyryloxy, Pivaloyloxy, Chloracetoxy, oder eine gegebenenfalls z. B. durch Niederalkyl-, Niederalkoxy- oder Niederalkylmercaptoreste, Halogenatome oder die Nitrogruppe substituierte monooder dicyclische Arylcarbonyloxy- oder -thiocarbonyloxy-, Arylcarbonylmercapto- oder -thiocarbonylmercaptogruppe, insbesondere die Benzoylmercaptogruppe.
Verbindungen der Formel II, worin R'2 eine andere Estergruppe als die Acetoxygruppe ist, werden vorteilhaft nach dem im Schweizer Patent Nr. 507 983 beschriebenen Verfahren hergestellt.
Die Überführung der Verbindung der Formel II in Verbindungen, worin R2 eine quaternäre Aminogruppe ist, erfolgt in an sich bekannter Weise.
Die Erfindung betrifft auch diejenigen Ausführungsformen des Verfahrens, bei denen die Reaktionskomponenten gegebenenfalls in Form ihrer Salze vorliegen.
Die neuen Verbindungen können als Heilmittel, z. B.
in Form pharmazeutischer Präparate, Verwendung finden. Diese enthalten die Verbindungen in Mischung mit einem für die enterale, topicale oder parenterale Applikation geeigneten pharmazeutischen organischen oder anorganischen, festen oder flüssigen Trägermaterial.
Die Erfindung wird in den folgenden Beispielen beschrieben. Die Temperaturen sind in Celsiusgraden angegeben.
In der Dünnschichtchromatographie auf Silicagelplatten werden die folgenden Systeme verwendet: System 52 = n-Butanol-Eisessig-Wasser (75:7,5:21) System 10 1A = n-Butanol-Pyridin-Eisessig-Wasser (42:24:4:30).
Beispiel 1
8,8 g 7-[Tetrazolyl(1)-acetylamino]-cephalosporan- säure und 5,0 g Kaliumthiocyanat werden in einer Stickstoffatmosphäre in 35 ml Wasser suspendiert und unter intensivem Rühren durch Aufheizen auf 60 in Lösung gebracht. Dann werden 5,0 ml Pyridin zugegeben und bei 60 unter Stickstoff während 6t/2 Stunden weitergerührt. Das erhaltene Reaktionsgemisch wird zuerst mit 300, dann 200 ml Methyl-isobutylketon extrahiert.
Anschliessend folgt eine sechsfache Extraktion mit je 120 ml einer Lösung von Amberlite LA-1-acetat in Methyl-isobutylketon, die hergestellt wird, indem man ein Gemisch aus 200 ml Amberlite LA-1, 24 ml Eisessig und 600 ml Methyl-isobutylketon während einer halben Stunde mit 160 ml Wasser verrührt und die organische Phase abtrennt. Dann wird noch zweimal mit je 120 ml Methyl-isobutylketon extrahiert. Die wässerige Lösung wird zuerst in einem Vakuum von ca. 0,5 mm Hg auf die Hälfte ihres Volumens eingeengt, dann werden 70 ml Dimethylformamid zugegeben und das Gemisch im gleichen Vakuum auf ca. 20 ml Volumen eingeengt Dabei entsteht ein Niederschlag, der abgenutscht und im Hochvakuum getrocknet wird.
Die 3-(Desacetoxyme thyl)-3-pyridiniomethyl-7) [tetrazolyl(1)-acetylamino]- cephalosporansäure kann kristallisiert werden, indem man sie in wenig Wasser löst und bei 0 stehen lässt.
20 [a] D = + 400 + 10 (c = 0,92 in Wasser). UV.- Spektrum: imax = 256 m, (e = 13700). Rfs2 = 0,01; Rftot A = 0,11.
Das Ausgangsmaterial kann wie folgt hergestellt werden:
3,93 g 7-Bromacetylaminocephalosporansäure werden in 25 ml Methylenchlorid unter Zugabe von 3,45 ml N,N-Düsopropyläthylamin gelöst. Dazu gibt man eine Lösung, die durch Auflösen von 0,84 g Tetrazol in 5 ml Dimethylformamid und anschliessendes Verdünnen mit 10 ml Methylenchlorid hergestellt worden ist.
Mit 7 ml Methylenchlorid wird nachgespült.
Nach 30 Stunden wird das Reaktionsgemisch mit 40 ml einer 100/oigen Kaliumdihydrogenphosphat-Lösung versetzt und das pH in der wässerigen Phase durch Zugabe von wenig 2n-Natriumcarbonat-Lösung auf 5,2 eingestellt. Man schüttelt durch und trennt dann die beiden Phasen. Die wässerige Phase wird noch einmal mit 100 ml Essigester extrahiert und die beiden organi schen Lösungen werden verworfen, nachdem sie zuvor zweimal mit je 20 ml 15 m. Phosphatpuffer pH 5 gewaschen worden sind.
Die vereinigten wässerigen Phasen werden mit 500 ml Essigester überschichtet, mit n-Salzsäure unter Schütteln auf pH 2,6 gestellt und mit Kochsalz gesättigt. Nach Abtrennung der organischen Phase wird die wässerige Lösung noch weiter mit 200, 100 und 100 ml Essigester nachextrahiert. Die Essigester-Lösungen werden nacheinander mit 40 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Man erhält zunächst 3,5 g eines gelblichen Harzes. Dieses wird in 15 ml Methanol gelöst, mit 4,0 ml einer 3-ml methanolischen Lösung von Natriuma-äthylhexanoat und anschliessend langsam mit Ather versetzt. Nach halbstündigem Stehen bei 0 lassen sich 3,6 g kristallines Natriumsalz der 7 [Tetrazolyl(1)-acetylamino]-cephalosporansäure durch Filtration isolieren.
Die kristalline Säure gewinnt man durch Rückextraktion in Essigester bei pH2.
Ruf52 = 0,17; RftotA = 0,47
20 [a] D = + 157O + 10 (c = 1, im Wasser als Natriumsalz) U-V.-Spektrum im Wasser als Natriumsalz: R,,,, = 260 my (E = 7900)
NMR-Spektrum in Deutero-Dimethylsulfoxyd (100 Me): Ausser den für die 7-ACA charakteristischen Signale tritt ein Singlett bei 8 = 5,35 PPM auf, welches der -CH2-Gruppe des Tetrazolylacetylrestes zugeordnet werden kann, und ein Singlett bei a = 9,35 PPM für die = CH-Gruppe im Tetrazolring. Kein Austausch mit D2O im Tetrazolylrest.
Beispiel 2
4,32 g Natriumsalz der 3-(Desacetoxymethyl)-3-ben zoylthiomethyl-7-[tetrazolyl-(1)-acetylamino] -cephalosporansäure werden in 35 ml Pyridin gelöst und anschliessend mit 35 ml Dioxan versetzt. Dann gibt man 20,9 ml einer 400/oigen Quecksilberperchloratlösung dazu und lässt bei 45" unter kräftigem Rühren während 45 Minuten reagieren (Stickstoffatmosphäre). Man kühlt ab, versetzt mit 11,1 ml Thiobenzoesäure und schüttelt 5 Minuten. Die Lösungsmittel werden im Vakuum abdestilliert und eine Lösung des Rückstandes in 140 ml Wasser durch Celite abfiltriert. Das Filtrat wird nacheinander mit 90 ml Toluol, 2 mal mit je 55 ml Amberlite LA-2 in 115 ml Toluol und 2malmitje 90ml Toluol gewaschen.
Anschliessend filtriert man die wässerige Phase durch eine Säule, die von unten nach oben 8,5 ml Sephadex CM-25 (H+-form), 34 ml Alox , 8,5 ml Zeo-Karb 226 (H+-fornf), 34 ml Alox , 8,5 ml Dowex-1 (Acetatform) und 8,5 ml Sephadex CM C-25 (H+-form) enthält. Celite , organische Phasen und die Säule werden 2 mal mit je 30 ml Wasser nachextrahiert, die Säule zudem mit weiteren 200 ml Wasser eluiert. Man engt die vereinigten Eluate im Vakuum ein, entfernt eine kleine Menge von Präcipitat durch Filtration und dampft zur Trockene ein.
Der Rückstand wird in 10 ml Alkohol digeriert und ergibt die reine 3-(Des acetoxymethyl)-3-pyridino-methyl-7- [tetrazolyl(1)-acetylamino-cephalosporansäure.
[a] 20 = + 40o 1 1" (c = 0,92 in Wasser)
D
U-V.-Spektrum: imax 257 m,z, e = 13 700 Ruf52 = 0,01; RftotA = 0,11.
Das Ausgangsmaterial kann wie folgt hergestellt werden: Eine Lösung von 17,5 g 3-(Desacetoxymethyl)3-benzoylthiomethyl)-7-amino-cephalosporansäure (vgl.
belg. Patent 650 444) und 12,5 ml Triäthylamin in 1 1 Dimethylformamid wird während einer Stunde in eine gut gerührte und bei - 130 bis - 15" gehaltene Lösung von 9,2 ml Bromacetylbromid in 100 ml Methylenchlorid eingetropft (Stickstoffatmosphäre). Man lässt die Temperatur während 11/2 Stunden langsam auf 100 steigen und hält sie dort noch während einer halben Stunde. Dann wird der grösste Teil der Lösungsmittel im Vakuum bei 0,5-1 mm Hg gegen einen Kühler von Trockeneis-Aceton abdestilliert. Das ölige Produkt wird auf einen Phosphatpuffer von pH 6 gegossen und mit 1 1 Essigester geschüttelt. An der Grenze der beiden Phasen entsteht ein Präcipitat, das durch Filtration oder Zentrifugieren abgetrennt wird. Dann stellt man das pH der wässerigen Phase auf 2 ein, sättigt diese mit Kochsalz und trennt die organische Phase ab.
Die wässerige Phase wird mit 600 und 400 ml Essigester nachextrahiert. Nach dem Waschen mit gesättigter Kochsalzlösung werden die organischen Phasen über Natriumsulfat getrocknet und nacheinander durch eine Säule von 100 mg Silicagel filtriert. Die Filtrate werden im Vakuum zur Trockne eingeengt, der Rückstand mit 30 ml Sitha- nol versetzt und bei 200 auskristallisiert. Man erhält 7,8 g 3-(Desacetoxymethyl)-3-benzoylthiomethyl-7bromacetylamino-cephalosporansäure vom Schmelzpunkt 137138 . Rf52 = 0,55. Das Natriumsalz zeigt im U-V.-Spektrum in Wasser: imax 243 zu (E = 16 800) und 275mm (e = 20 600).
[a] D20 D -47 + 10 (c = 1; in 0,1 mol. Natriumbicarbonat-Aceton (1:1).
14,1 g 3-(Des acetoxymethyl)-3-benzoylthiomethyl-7- bromacetylamino-cephalosporansäure werden unter Zugabe von 10,5 ml N,N-Diisopropyläthylamin in 600 ml Dimethylformamid gelöst. Dazu gibt man eine Lösung von 2,52 g Tetrazol in 10 ml Dimethylformamid. Mit 5 ml Dimethylformamid wird nachgespült.
Nach 46-stündigem Stehen bei Raumtemperatur trägt man unter intensivem Rühren in das nun mit Eis n gekühlte Reaktionsgemisch 95 ml 12 -Salzsäure ein. DiG dabei entstandene braune, flockige Fällung wird durch eine dünne Hyflo -Schicht abfiltriert und verworfen.
Das Filtrat wird in der oben beschriebenen Weise mit weiteren 505 ml 12 Salzsäure versetzt und das fast farblose Präcipitat durch Filtration und Waschen mit 20 ml Wasser abgetrennt. Dieses Rohmaterial wird durch Chromatographie an einer Säule von 340 g Silicagel (Durchmesser 5 cm) mit Chloroform-Aceton-Gemischen gereinigt. Die Eluate mit Volumen-Verhältnissen von Chloroform : Aceton = 3:1 bis 1:1 werden im Vakuum zur Trockne eingedampft, in Methanol wieder gelöst und mittels Natrium-a-äthylhexanoat in das reine Natriumsalz der 3-(Desacetoxymethyl)-3 -benzoyl-thiome thyl-7- [tetrazolyl-(1)-acetylatmino]-cephalosporansäure übergeführt.
UV-Spektrum in Wasser: ax: 243 m,u (e = 15 800) und 275 m,u (e = 20 100).
Ruf52 = 0,36; Rf101A= 0,48.
Process for the preparation of new derivatives of 7-aminocephalosporanic acid
The invention relates to a process for the production of new, therapeutically effective derivatives of 7-aminocephalosporanic acid (ACA) of the formula I
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where Ri denotes a tetrazolyl radical bonded via one of its nitrogen atoms and R2 is a quaternary amino group, and its salts.
R2 means a quaternary amino group in which the quaternary nitrogen atom z. B. part of an aromatic ring, such as a quinoline, isoquinoline or pyrimidine ring, but especially an unsubstituted or substituted Pyridinirnges, z. B. the formula
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wherein R5 represents hydrogen or one or more lower alkyl, lower alkoxycarbonyl, carbamoyl or carboxyl groups or one or more halogen atoms.
The salts of the new compounds are metal salts, especially those of therapeutically applicable Alka li- or alkaline earth metals, such as sodium, potassium, Am monium, calcium, or salts with organic bases, eg. B. triethylamine, N-ethylpiperidine, dibenzylamine, N-benzyl-ss-phenetylamine, N, N'-dibenzylethylenediamine,
Procaine, ephenamine, or internal salts.
The new compounds have a particularly good antibacterial effect. They are effective against both gram-positive and especially against gram-negative bacteria, e.g. B. against Staphylococcus aureus penicillin-resistant, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhosa and Bacterium proteus, as has also been found in animal experiments, e.g. B. on mice shows. With subcutaneous application, 0.1-100 mg / kg are chemotherapeutically effective on these, depending on the type of bacterial infection. The compounds can therefore be used to combat infections caused by such microorganisms, and also as feed additives, for the preservation of food or as disinfectants.
These compounds can be prepared by methods known per se. According to the invention, they are obtained when a compound of the formula II
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or a salt thereof, in which R1 has the meaning given and R'2 is a hydroxyl or mercapto group esterified by a carboxylic acid or thiocarboxylic acid, with a tertiary amine or a salt thereof.
If desired, the compounds obtained can be converted into their therapeutically useful metal salts, such as alkali or alkaline earth metal salts, or salts with ammonia or organic bases, or the internal salts can be formed from the salts obtained.
The cephalosporin derivatives used as starting materials are known or can be prepared by processes known per se. A hydroxyl or ester esterified by a carboxylic acid or thiocarboxylic acid. Mercapto group R'2 is, for example, an optionally z. B. by halogen atoms, especially chlorine, substituted lower alkanoyloxy such as formyloxy, acetoxy, propionyloxy, butyryloxy, pivaloyloxy, chloroacetoxy, or an optionally z. B. mono- or dicyclic arylcarbonyloxy or thiocarbonyloxy, arylcarbonyl mercapto or thiocarbonyl mercapto group, in particular the benzoyl mercapto group, substituted by lower alkyl, lower alkoxy or lower alkyl mercapto radicals, halogen atoms or the nitro group.
Compounds of the formula II in which R'2 is an ester group other than the acetoxy group are advantageously prepared by the process described in Swiss Patent No. 507,983.
The conversion of the compound of the formula II into compounds in which R2 is a quaternary amino group is carried out in a manner known per se.
The invention also relates to those embodiments of the process in which the reaction components are optionally present in the form of their salts.
The new compounds can be used as remedies, e.g. B.
in the form of pharmaceutical preparations, use. These contain the compounds in a mixture with a pharmaceutical, organic or inorganic, solid or liquid carrier material suitable for enteral, topical or parenteral administration.
The invention is described in the following examples. The temperatures are given in degrees Celsius.
The following systems are used in thin-layer chromatography on silica gel plates: System 52 = n-butanol-glacial acetic acid-water (75: 7.5: 21) System 10 1A = n-butanol-pyridine-glacial acetic acid-water (42: 24: 4: 30).
example 1
8.8 g of 7- [tetrazolyl (1) -acetylamino] -cephalosporanic acid and 5.0 g of potassium thiocyanate are suspended in 35 ml of water in a nitrogen atmosphere and brought into solution by heating to 60 ° while stirring vigorously. Then 5.0 ml of pyridine are added and stirring is continued at 60 under nitrogen for 6t / 2 hours. The reaction mixture obtained is extracted first with 300, then 200 ml of methyl isobutyl ketone.
This is followed by a six-fold extraction with 120 ml each of a solution of Amberlite LA-1 acetate in methyl isobutyl ketone, which is prepared by adding a mixture of 200 ml Amberlite LA-1, 24 ml of glacial acetic acid and 600 ml of methyl isobutyl ketone for one Stirred for half an hour with 160 ml of water and the organic phase is separated off. Then it is extracted twice with 120 ml of methyl isobutyl ketone each time. The aqueous solution is first concentrated to half its volume in a vacuum of approx. 0.5 mm Hg, then 70 ml of dimethylformamide are added and the mixture is concentrated to approx. 20 ml volume in the same vacuum. A precipitate is formed which is suction filtered and is dried in a high vacuum.
The 3- (Desacetoxyme thyl) -3-pyridiniomethyl-7) [tetrazolyl (1) -acetylamino] - cephalosporanic acid can be crystallized by dissolving it in a little water and leaving it to stand at 0.
20 [a] D = + 400 + 10 (c = 0.92 in water). UV spectrum: imax = 256 m, (e = 13700). Rfs2 = 0.01; Rftot A = 0.11.
The starting material can be made as follows:
3.93 g of 7-bromoacetylaminocephalosporanic acid are dissolved in 25 ml of methylene chloride with the addition of 3.45 ml of N, N-diisopropylethylamine. A solution is added which has been prepared by dissolving 0.84 g of tetrazole in 5 ml of dimethylformamide and then diluting with 10 ml of methylene chloride.
It is rinsed with 7 ml of methylene chloride.
After 30 hours, 40 ml of a 100% potassium dihydrogen phosphate solution are added to the reaction mixture and the pH in the aqueous phase is adjusted to 5.2 by adding a little 2N sodium carbonate solution. Shake well and then separate the two phases. The aqueous phase is extracted once more with 100 ml of ethyl acetate and the two organic solutions are discarded after they have previously been mixed with 20 ml of 15 ml. Phosphate buffer pH 5 have been washed.
The combined aqueous phases are covered with a layer of 500 ml of ethyl acetate, adjusted to pH 2.6 with n-hydrochloric acid with shaking and saturated with sodium chloride. After the organic phase has been separated off, the aqueous solution is further extracted with 200, 100 and 100 ml of ethyl acetate. The ethyl acetate solutions are washed successively with 40 ml of saturated sodium chloride solution, dried with sodium sulfate and evaporated to dryness in vacuo. First 3.5 g of a yellowish resin are obtained. This is dissolved in 15 ml of methanol, 4.0 ml of a 3 ml methanolic solution of sodium ethylhexanoate and then slowly ether are added. After standing at 0 for half an hour, 3.6 g of crystalline sodium salt of 7 [tetrazolyl (1) acetylamino] cephalosporanic acid can be isolated by filtration.
The crystalline acid is obtained by back-extraction in ethyl acetate at pH2.
Ruf52 = 0.17; RftotA = 0.47
20 [a] D = + 157O + 10 (c = 1, in water as sodium salt) U-V. spectrum in water as sodium salt: R ,,,, = 260 my (E = 7900)
NMR spectrum in deutero-dimethylsulfoxide (100 Me): In addition to the signals characteristic of 7-ACA, there is a singlet at 8 = 5.35 PPM, which can be assigned to the -CH2 group of the tetrazolylacetyl radical, and a singlet at a = 9.35 PPM for the = CH group in the tetrazole ring. No exchange with D2O in the tetrazolyl radical.
Example 2
4.32 g of the sodium salt of 3- (desacetoxymethyl) -3-benzoylthiomethyl-7- [tetrazolyl- (1) -acetylamino] -cephalosporanic acid are dissolved in 35 ml of pyridine and then mixed with 35 ml of dioxane. Then 20.9 ml of a 400% mercury perchlorate solution are added and the mixture is left to react at 45 "with vigorous stirring for 45 minutes (nitrogen atmosphere). It is cooled, mixed with 11.1 ml of thiobenzoic acid and shaken for 5 minutes. The solvents are reduced in vacuo The filtrate is washed successively with 90 ml of toluene, twice with 55 ml of Amberlite LA-2 in 115 ml of toluene and twice with 90 ml of toluene each time.
The aqueous phase is then filtered through a column containing, from bottom to top, 8.5 ml Sephadex CM-25 (H + form), 34 ml Alox, 8.5 ml Zeo-Karb 226 (H + form), 34 ml Alox , 8.5 ml Dowex-1 (acetate form) and 8.5 ml Sephadex CM C-25 (H + form) contains. Celite, organic phases and the column are extracted twice with 30 ml of water each time, and the column is also eluted with a further 200 ml of water. The combined eluates are concentrated in vacuo, a small amount of precipitate is removed by filtration and evaporated to dryness.
The residue is digested in 10 ml of alcohol and gives the pure 3- (De acetoxymethyl) -3-pyridino-methyl-7- [tetrazolyl (1) -acetylamino-cephalosporanic acid.
[a] 20 = + 40o 1 1 "(c = 0.92 in water)
D.
U-V. spectrum: imax 257 m, z, e = 13 700 Ruf52 = 0.01; RftotA = 0.11.
The starting material can be prepared as follows: A solution of 17.5 g of 3- (desacetoxymethyl) 3-benzoylthiomethyl) -7-aminocephalosporanic acid (cf.
Belgian Patent 650 444) and 12.5 ml of triethylamine in 1 l of dimethylformamide are added dropwise over a period of one hour to a well-stirred solution of 9.2 ml of bromoacetyl bromide in 100 ml of methylene chloride (nitrogen atmosphere) kept at - 130 to - 15 " lets the temperature rise slowly to 100 over the course of 11/2 hours and holds it there for half an hour. Then most of the solvents are distilled off in vacuo at 0.5-1 mm Hg against a condenser from dry ice acetone The product is poured onto a phosphate buffer of pH 6 and shaken with 1 liter of ethyl acetate.A precipitate is formed at the boundary between the two phases, which is separated off by filtration or centrifugation. The pH of the aqueous phase is then adjusted to 2 and saturated with sodium chloride and separates the organic phase.
The aqueous phase is extracted with 600 and 400 ml of ethyl acetate. After washing with saturated sodium chloride solution, the organic phases are dried over sodium sulfate and successively filtered through a column of 100 mg of silica gel. The filtrates are concentrated to dryness in vacuo, 30 ml of sithanol are added to the residue and the residue is crystallized at 200. 7.8 g of 3- (desacetoxymethyl) -3-benzoylthiomethyl-7-bromoacetylamino-cephalosporanic acid with a melting point of 137138 are obtained. Rf52 = 0.55. The sodium salt shows in the U-V. spectrum in water: imax 243 to (E = 16 800) and 275 mm (e = 20 600).
[a] D20 D -47 + 10 (c = 1; in 0.1 mol. sodium bicarbonate-acetone (1: 1).
14.1 g of 3- (Des acetoxymethyl) -3-benzoylthiomethyl-7-bromoacetylamino-cephalosporanic acid are dissolved in 600 ml of dimethylformamide with the addition of 10.5 ml of N, N-diisopropylethylamine. A solution of 2.52 g of tetrazole in 10 ml of dimethylformamide is added. Rinse with 5 ml of dimethylformamide.
After 46 hours of standing at room temperature, 95 ml of 12 hydrochloric acid are introduced into the reaction mixture, which has now been cooled with ice, with vigorous stirring. The resulting brown, flaky precipitate is filtered off through a thin layer of Hyflo and discarded.
A further 505 ml of 12 hydrochloric acid are added to the filtrate in the manner described above and the almost colorless precipitate is separated off by filtration and washing with 20 ml of water. This raw material is purified by chromatography on a column of 340 g of silica gel (diameter 5 cm) with chloroform-acetone mixtures. The eluates with a volume ratio of chloroform: acetone = 3: 1 to 1: 1 are evaporated to dryness in vacuo, redissolved in methanol and converted into the pure sodium salt of 3- (deacetoxymethyl) -3-benzoyl using sodium a-ethylhexanoate -thiomethyl-7- [tetrazolyl- (1) -acetylatmino] -cephalosporanic acid transferred.
UV spectrum in water: ax: 243 m, u (e = 15 800) and 275 m, u (e = 20 100).
Ruf52 = 0.36; Rf101A = 0.48.