CH622515A5

CH622515A5 -

Info

Publication number: CH622515A5
Application number: CH814977A
Authority: CH
Inventors: Philip Nicholas Sawyer; Leon David Freeman
Original assignee: Philip Nicholas Sawyer; Leon David Freeman
Priority date: 1976-07-01
Filing date: 1977-07-01
Publication date: 1981-04-15
Also published as: DE2729903A1; FR2361873A1; NO772275L; GB1585887A; CA1113951A; SE7707511L; US4164585A

Description

Un des buts de l'invention est de fournir une association synergique d'acide para-aminobenzoïque et d'acide L-ascorbique.

Selon l'invention, on prépare un sel de l'acide L-ascorbique et de l'acide para-aminobenzoïque en faisant réagir ces deux acides

2

5

10

15

20

25

30

35

40

45

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60

65

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l'un avec l'autre. On peut administrer le composé ainsi obtenu à une dose de 1 à 100 mg/kg de poids du corps. La dose est souvent administrée par voie orale, bien qu'elle puisse l'être par voie parentérale.

On peut préparer le sel en mélangeant des solutions d'acide L-ascorbique et d'acide para-aminobenzoïque, puis en évaporant le mélange ainsi obtenu suivi de l'isolement de la substance solide obtenue. De préférence, on utilise les acides en un rapport de 1:1 (molaire). On peut isoler la substance solide sous forme cristalline ou sous la forme d'un dépôt de filtration.

Le dessin annexé est un schéma montrant, à titre d'exemple, l'activité prolongée après des doses du présent composé.

Ci-dessus, on s'est référé à l'acide para-aminobenzoïque. Il a la formule suivante:

.cooh

L'acide L-ascorbique ou vitamine C a la formule suivante :

I

hoc

II

hoc I

h - c I

ho - c - h I

chjoh

O

J

La formule du sel est la suivante :

ho2v iC-<0-NH3

choh-

-ch2oh

La première synthèse consistait à préparer un sel d'acide ascorbique avec l'acide para-aminobenzoïque. On peut présenter un tel sel sous deux formes : un sel utilisant la forme ouverte de l'acide ascorbique et l'autre la forme énolique. En plus des sels, on peut avoir deux autres sortes de dérivés, c'est-à-dire l'amide et des esters. Du moment qu'il y a deux groupes hydroxyle sur l'acide ascorbique qu'on pourrait facilement estérifier, l'ester serait probablement en position 6 ou 5. Il est moins probable mais il est aussi possible de former un ester avec un des groupes 5 hydroxyle énolique en position 3 ou 4, de sorte que, théoriquement, quatre esters sont possibles.

Dans les exemples ci-dessous, à cause de la facilité de l'oxydation de l'acide ascorbique, il est essentiel de conduire toutes les opérations sous de l'azote et en l'absence d'eau et d'air. Dans un io cas, on a obtenu un produit assez foncé. On croit que cela était dû à la présence d'humidité.

Exemple 1 :

1) On a préparé une solution d'acide para-aminobenzoïque i5 dans un mélange de 50% d'acétone et 50% de méthanol en chauffant doucement. La concentration était approximativement de 100 g/1.

2) On a préparé une solution analogue avec l'acide L-ascorbique.

20 3) On a mélangé les deux solutions, on a exclu l'eau dans la mesure du possible.

4) On a évaporé le mélange sous vide en utilisant de l'azote pour purger le système. Tandis que la substance se concentrait, des cristaux ont commencé à apparaître.

25 5) Lorsqu'on a évaporé la solution jusqu'à ce qu'on obtienne une suspension épaisse, on a filtré la substance à travers un papier-filtre grossier et on l'a laissé s'égoutter pour qu'elle devienne aussi sèche que possible. On a protégé la surface avec de l'azote en prenant grand soin d'exclure toute eau filtrée. 3o 6) On a séché la substance solide obtenue sous un vide poussé à la température ordinaire. Le rapport acide L-ascorbique : acide para-aminobenzoïque utilisé était 1:1 (molaire).

Exemple 2:

35 1) En variante, le procédé de préparation consistait à évaporer le solvant en excluant avec soin l'eau et l'air jusqu'à ce qu'on obtienne un gâteau demi-sec dans le récipient dans lequel on a conduit l'évaporation.

2) On a alors transféré ce gâteau humide dans un récipient 40 approprié et on l'a séché sous un vide poussé. Toutes les opérations sont protégées contre l'exposition à l'air et à l'humidité.

Sans doute, d'autres mélanges de solvants pourraient-ils être utilisés aussi. On a utilisé les précités surtout pour des raisons de commodité. Pendant le procédé, il se forme une odeur qu'on 45 enlève avec un séchage sous un vide poussé, mais qui doit être due à un sous-produit formé au cours du procédé. Il doit être également volatil du moment qu'on peut l'enlever.

Le sel indiqué plus haut, théoriquement, ne nécessite que la séparation d'une molécule d'eau pour former l'amide. En général, so cela ne se produit pas trop facilement. Il est possible que la distillation aide à enlever l'eau.

Les premières études étaient dirigées vers la détermination de la toxicité du composé indiqué ci-dessus chez les mammifères. On a montré qu'une dose très élevée par kilo de poids du corps chez 55 les rats et les chiens était pratiquement non toxique.

Ensuite, on a essayé le composé pour déterminer son effet lors d'études d'occlusion mésentérique chez le rat. On a montré que la période de l'acide para-aminobenzoïque est approximativement de 1 j. Les périodes de la vitamine C sont approximativement de 60 12 h jusqu'à un maximum de 1 j. On a montré que les périodes du présent composé étaient approximativement de 4 à 5 j avec une «tail». Une dose unique dure approximativement 14 j. On a montré que le mélange mécanique de l'acide para-aminobenzoïque et de l'acide L-ascorbique a une «tail» maximale d'ap-65 proximativement 5 à 6 j, ce qui indique, d'après la simple logique, que le présent composé est biologiquement différent des deux composants mélangés ensemble mécaniquement. Plus particulièrement, le composé dérivé semble plus puissant que les matières de

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départ mélangées ensemble en un rapport 50/50. Si on mélange ensemble les agents dans le même rapport que celui utilisé pour la préparation du nouveau composé, le mélange mécanique n'est toujours pas aussi puissant que le composé dérivé.

On a évalué le nouveau composé lors d'études mésentériques chez le rat. On a montré au cours de ces études que le présent composé prolonge le temps de coagulation de 3 à 4 fois le temps de thrombose normale mésentérique du rat. Ce résultat est remarquable et prolongé du moment que l'effet d'une dose unique semble se prolonger jusqu'à 14 j avant que le temps d'occlusion mésentérique du rat retourne à un taux normal. Ce résultat est fondé sur les études concernant 26 rats.

Les globules sanguins de chiens mâles auxquels on a administré oralement le présent composé présentent une augmentation de la charge de surface négative qui augmente séquentiellement depuis le troisième jour jusqu'à approximativement le quatorzième jour, de sorte qu'après 14 j, la mobilité électrophorétique est doublée par rapport aux effets observés les 5e, 6e et T jours.

Les preuves dont on dispose laissent penser qu'avec la plupart des agents pharmacologiques normaux, le nouveau composé ne produit pas une supernormalité. Cependant, il rétablit vers la normale toute mesure grossièrement anormale concernant les s propriétés électrocinétiques des globules sanguins et des vaisseaux sanguins chez les chiens.

Les preuves dont on dispose indiquent que le présent composé, qui est dérivé de l'acide L-ascorbique et de l'acide para-aminobenzoïque, est un agent antithrombotique assez puissant, io Son effet est plus grand cumulativement que l'effet de l'un ou l'autre de ses composants, même lorsqu'ils sont mélangés ensemble mécaniquement et administrés par voie orale à des rats et/ou à des chiens. Le composé est un exemple élégant d'un donneur d'électrons qui est utile pour le traitement du système 15 vasculaire.

Ci-après, on indique quelques résultats d'essais comparant le présent composé à un mélange des substances de départ et aux substances de départ prises individuellement:

Tableau I Doses par voie orale

Substances

Gamme

Durée

(mg/kg/j)

d'administration

Toxicité

Effet

Minimum Maximum

PABA* (X)

1

10

Indéfinie

Manifestation cutanée faible

Relativement limité

Acide

0,25 mg 10

Indéfinie

Manifestation cutanée faible.

Maintien critique de l'intégrité des

L-ascor

Gastrite. Une certaine évidence de tissus, notamment de l'arbre bique (Y)

trouble du pool de gène en dose massive. Oxydant catalytique des vitamines essentielles pour le cycle Krebs vasculaire

X+Y

1

100 mg/kg

Inconnue à

Très faible gastrite chez un rat à

Temps d'occlusion mésentérique

(mélange)

(rats)

long terme une dose élevée de 1 mg/g de poids du corps prolongé. Essai avec une dose (jour 1): 170±20mn. «Tail»=7 j

X-Y

2

100 mg/kg

Peut être

Très faible gastrite

Prolongé. «Tail» plus longue que

(composé)

administré à long terme

la «tail» avec X+Y : 14 j. Temps d'occlusion: 206 =24 mn

* PABA=acide para-aminobenzoïque.

«Tail» X—Y: minimum 14 j chez les animaux expérimentaux. «Tail» X+Y: minimum 7 j chez les animaux expérimentaux. «Tail»=effet prolongé.

On a obtenu les données additionnelles suivantes pour ce qui est de l'utilité du présent composé:

Effet du présent composé sur une thrombose induite électriquement dans les vaisseaux mésentériques du rat Dose unique

20 mg/100 g de poids du corps (mâle).

Point de fusion = 147° C.

1 j après la dose unique

1 rat Le temps d'occlusion était de 240 mn.

3 j après une dose unique

1 rat Le temps d'occlusion était de 150 mn.

2 rats Le temps d'occlusion était de 195 mn.

Les données suivantes se rapportent au temps d'occlusion mésentérique chez le rat: ^

Temps d'occlusion mésentérique pour le rat

PABA

Temps d'occlusion Témoin

35 mg p.o./j x 3 j(F) 35 mg p.o./j x 3 j (M)

55 Acide L-ascorbique

10 mg/100 g de poids du corps par jour x 3 j (F) 10 mg/100 g poids du corps/jour x 3 j (M)

60

95 mn (1F) 53 + 13 mn(7M)

112+18 mn (5F) 135+14 mn (2M)

PABA + acide L-ascorbique

35 mg+10 mg/100 g de poids du corps 10 mg+10 mg (3M+3F)

108+23,0 mn (6F) 128 + 18,0 mn(2M) 160 mn (2F) 175 mn (3M) 1F-K3M

45+5 mn (3F)

45 ±5 mn (2F) 38±10mn(3M)

45 + 5 mn (2F) 38 ±10 mn (3M) 50 mn (1F) 55 mn (1M)

5

Temps d'occlusion mésentérique pour le rat (suite)

PABA Temps d'occlusion

5

Sel d'acide p-amino-benzoìque et d'acide L-ascorbique (présent composé)

10

20 mg/100 g 1 j après une dose unique

240 mn (1F)

3 j après une dose unique

150 mn (1M)

195 mn (2F)

M=mâle F=femelle

Les données suivantes se rapportent à la «tail» du temps d'occlusion chez les rats femelles:

(X—Y) - présent composé - dose unique p.o.

100 mg/100 g de poids du corps

Temps d'occlusion moyen lj

206 + 24,0 mn (5F)

5j

143 ±9,5 mn (5F)

9j

137+12,0 mn (5F)

11 j

127 ± 34,0 mn (4F)

14 j

67 ±4,5 mn (4F)

témoin 48 ±1,1 mn (5F)

On indique dans le tableau ci-dessous certaines propriétés physiques de lots du composé qu'on a préparé:

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Point de fusion

Solubilité

Lot 1

157°C

J peu soluble;

Lot 2

157°C

V 1 gm/100 ml

Lot 3

147° C

J h2o

Dans le dessin annexé, on illustre à titre d'exemple les effets d'une dose unique sur divers nombres de rats. Le témoin consiste en cinq animaux et on voit, d'après ce schéma du dessin, que le témoin donne un temps d'occlusion mésentérique chez le rat en relation avec une thrombose induite électriquement qui, au début, est en dessous d'une dose unique du présent composé après 14 j.

Plus particulièrement, on remarque qu'on a sacrifié cinq animaux 1 j après l'administration du présent composé, cinq animaux étaient sacrifiés après 5 j, cinq autres animaux étaient sacrifiés après 9 j, quatre autres animaux étaient sacrifiés après 11 j et, enfin, on a sacrifié quatre animaux après 14 j. Le temps d'occlusion (en minutes) après le premier jour est bien plus grand que celui des témoins. Après 5 j, le temps d'occlusion est réduit, mais il est encore le double de celui des témoins. De manière analogue, après 9 j, le temps d'occlusion est sensiblement plus grand que pour les témoins et il n'a diminué que très peu d'après les mesures du cinquième jour. De manière analogue après 11 j, il y a très peu de réduction du temps d'occlusion qui est encore au moins deux fois celui des témoins.

Après 14 j, la mesure de quatre animaux sacrifiés montre encore un temps d'occlusion qui est supérieur à celui des témoins.

Les mesures dans le dessin sont fondées sur l'administration du composé en une dose de 100 mg/100 g du poids du corps et on utilise des doses uniques à la fois pour les témoins et pour les animaux auxquels on administre le présent composé. Ce composé présente une «tail» importante et assure le bénéfice de l'administration du présent composé, et cela est important pour le traitement des humains chez lesquels on s'attend que l'administration du présent composé conduira à un programme d'administration prévoyant des doses orales espacées au cours de plusieurs jours, par exemple une administration orale par semaine.

R

1 feuille dessins

Claims

622 515 REVENDICATIONS

1. C'est une coenzyme du cycle de Krebs.

1. Il est peu coûteux.

2. On sait qu'il est non toxique pour les humains.

3. On peut l'utiliser pendant des périodes de temps prolongées sans incidence importante de manifestations pathologiques.

4. La substance peut être prise par voie orale en des doses importantes sans toxicité importante.

Chez l'homme, on a administré des doses, par exemple aussi élevées que 12 à 24 g/j, sans effet secondaire important. On l'a utilisé en outre pour un grand nombre de maladies de l'homme, y compris la thérapie des maladies rickettsiales avant le développement des antibiotiques, contre la tuberculose en des doses très élevées et pour le traitement de certaines maladies protozoaires et d'autres infestations. On a longtemps pensé que c'était un agent anti-inflammatoire léger.

Chez les humains atteints de maladies vasculaires artériosclé-rotiques périphériques, on a montré que l'acide para-aminobenzoïque augmente le débit sanguin dans les membres ischémiques, comme mesuré par les études pléthysmographiques de Barcroft et les mesures du débit sanguin Doppler. Il a résulté des études conduites chez approximativement 50 patients le doublage approximatif du débit sanguin chez ceux pour lesquels un sel d'acide para-aminobenzoïque était efficace. Le brevet US N° 3722504 a pour objet l'effet de l'acide para-aminobenzoïque sur le débit sanguin chez l'homme.

Les effets à long terme de la vitamine C sur le scorbut chez l'homme est un événement d'un intérêt historique primordial en médecine. Les effets de la vitamine C pour empêcher le scorbut sont très bien documentés dans le monde entier. L'homme, lorsqu'il est privé de la vitamine C pendant des périodes plus longues qu'approximativement 60 j, commence à présenter des preuves de fragilité capillaire et de saignements dans tous les tissus et les organes.

La vitamine C a les propriétés suivantes :

1. Procédé de préparation d'un sel d'acide L-ascorbique et d'acide para-aminobenzoïque de formule:

+ -

CHOH—CHjPH (I)

NHj

HO'

O

caractérisé en ce qu'on fait réagir l'acide L-ascorbique avec l'acide para-aminobenzoïque.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on mélange des solutions d'acide L-ascorbique et d'acide para-aminobenzoïque, en ce qu'on évapore le mélange ainsi obtenu et en ce qu'on isole la substance solide.

3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on utilise les acides dans un rapport molaire de 1:1.

Le brevet US N° 3722504 décrit une méthode de sélection pour des composés pharmaceutiques fondée au moins partiellement sur leur pouvoir d'augmenter la charge négative de surface du système vasculaire. A titre d'exemple, ce brevet divulgue un composé pharmaceutique qui empêche une thrombose en modifiant la charge de surface de l'intima du système vasculaire.

L'acide para-aminobenzoïque augmente la charge négative de surface nette des vaisseaux sanguins et des globules sanguins. Il produit une augmentation marquée du temps d'occlusion induite par un courant dans les vaisseaux mésentères chez le rat (voir brevet US précité). Il ne produit pas d'effet mesurable lors d'études sur la coagulation du sang. Il a un effet limité sur les pores des parois des vaisseaux sanguins, ce qui est montré par des études électro-osmotiques.

En outre, l'acide para-aminobenzoïque possède de bonnes propriétés antithrombotiques, mais il a tendance à posséder une activité anticoagulante relativement faible, ce qui est montré par son manque d'effet sur les études de coagulation, y compris le temps de thromboplastine partiel, le temps de thrombine et le temps de recalcification. Donc, c'est un médicament antithrombo-tique très utile.

L'acide para-aminobenzoïque possède plusieurs propriétés très importantes comme médicament:

2. C'est un agent réducteur et un donneur d'électrons dans tous les systèmes biologiques bien connus.

L'acide L-ascorbique ou la vitamine C possède diverses fonctions biologiques dont certaines ne sont pas complètement comprises (Ziten et al. 1964). Il semble que de fortes doses d'acide L-ascorbique ont une valeur pour la prévention et la diminution des symptômes pour le rhume ordinaire et d'autres maladies virales (Linus Pauling 1974). Des témoignages expérimentaux récents indiquent que l'acide L-ascorbique est efficace pour réduire les taux du cholestérol du sérum. C. Spittle («The Lancet», 28 juillet 1973, p. 199-201, et 11 décembre 1971, pp. 1280-1281) a proposé que des doses de 1 à 2 g de vitamine C par jour peuvent être bénéfiques pour empêcher la thrombose des veines profondes ainsi que pour réduire l'incidence des complications athéro-sclérotiques chez l'homme. Des recherches récentes indiquent que l'acide ascorbique peut réduire l'incidence de l'infarctus du myocarde (Knox, E.G., «The Lancet», p. 1465, 30 juin 1973). En outre, l'acide L-ascorbique semble compenser les effets thrombogéniques des contraceptifs oraux comme démontré par le prolongement des temps d'occlusion dans les vaisseaux mésentériques.

On a obtenu de bons résultats lors d'une étude pilote en utilisant sept volontaires pour déterminer les effets de l'acide ascorbique sur: 1) les propriétés de coagulation du plasma, 2) les taux du cholestérol dans le sérum, 3) l'agrégabilité des plaquettes, et 4) les propriétés de la charge à la surface des globules sanguins et des plaquettes. On a montré que, chez ces sujets, la vitamine C diminuait l'agrégabilité des plaquettes et augmentait la mobilité électrophorétique de tous les globules soumis aux essais.

Il y a peu de preuves pour indiquer que la vitamine C ait un effet sur la coagubilité mesurée du sang comme démontré par le temps de thromboplastine partiel, les temps de thrombine et les temps de recalcification de la thrombine.

Spittle et al. ont soumis un groupe statistique de patients atteints de thrombophlébite avec la vitamine C. L'effet protecteur de la vitamine C contre la thrombose a été mis en évidence par un essai statistique double-aveugle. Chez un total de 53 patients, on a observé que l'incidence d'une thrombose veineuse profonde était de 33% chez les patients auxquels on avait administré l'acide L-ascorbique, mais de 60% chez les groupes témoins (Spittle, C.R., «The Lancet», p. 199, 28 juillet 1973). La dose administrée était de 1 g/j. Cette corrélation entre l'absorption de la vitamine C et la réduction du nombre d'incidences thrombotiques a été confirmée par d'autres sources. Chez des patients atteints de brûlures, où couramment on utilise de fortes doses de vitamine C pour accélérer la cicatrisation, il y a apparemment une demande pour le traitement d'une thrombose des veines profondes. Cette information est fondée sur l'expérience d'un hôpital au cours d'une période de 5 Vi ans et, pendant ce temps, 159 patients âgés de plus de 40 ans étaient traités avec de fortes doses de vitamine C (Spittle, C.R., «The Action of Vitamin C on Blood Vessels», «Amer. Heart J.», 88:387, 1974).