NO772275L - Fremgangsm}te ved fremstilling av terapeutisk aktivt carboxylsyrederivat - Google Patents

Description

Fremgangsmåte ved fremstilling av tera-

peutisk aktivt carboxylsyrederivat

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte ved fremstilling av forbindelser ved omsetning av p-aminobenzoesyre og L-ascorbinsyre.

US patent 3 722 504 beskriver en sikt for å undersøke farmasøytiske forbindelser basert i det minste delvis på deres . evne til å øke den negative overflateladning av det vaskulære system. US patent 3 722 504 angir ved ,et eksempel en farmasøy-tisk forbindelse som forhindrer trombose ved å modifisere over-flateladningen på intima i det vaskulære system.

p-aminobenzoesyre øker den.netto negative overflateladning av blodkar og blodceller. Den frembringer en markert økning i den strømningsbevirkede okklus jonstid i rotte mesenterialkar (se US patent 3 722 504). Den frembringer ingen målbar virkning på blodkoaguleringsundersøkelser. Den har en begrenset virkning på blodkarveggporer som vist ved elektroosmotiske undersøkelser.

p-aminobenzoesyre har dessuten gode anti-tromboseegen-skaper, men er tilbøyelig til å ha relativt liten anti-koagule-rende aktivitet som vist av dens mangel på virkning på koagule-. ringsundersøkelsene innbefattende partiell tromboplastintid,

trombintid og recalsifiseringstid. Det er derfor en meget nyttig antitrombosedroge.

p-aminobenzoesyre har forskjellige meget betydnings-fulle egenskaper som en droge:

1. Den er.billig,

2. Den er kjent for å være ikke giftig i mennesker, 3. Den kan anvendes over lange tidsrom uten betydnings-full forekomst av patologiske manifestasjoner, 4. Materialet kan inntaes oralt i store doser uten særlig toksisitet.

I mennesker har doser vært administrert, f.eks. så høye

som 12 - 24 g pr. dag uten bivirkninger av betydning. Det har dessuten vært anvendt for et stort antall sykdommer i mennesker innbefattende terapien av Rickettsioser før utviklingen av anti-biotica, for tuberkulose i meget store doser og ved behandlingen av visse protozoiske sykdommer og andre angrep av skadedyr. Det har lenge vært antatt.å være et mildt anti-inflammatorisk middel.

I mennesker med arteriosclerotisk periferal vasculær sykdom, har p-aminobenzoesyr.e vist seg å øke blodstrømmen i ische-miske lemmer som målt ved Barcroft plethysmografiske undersøkel-

ser og doppler-blodstrømmålinger. Undersøkelser som ble utført på ca. 50 pasienter førte til ca. fordobling av blodstrømmen i pasientene i- hvilke p-aminobenzoesyre var effektiv. US patent 3.722.534

er bevilget på virkningen av p-aminobenzoesyre på blod-, strømmen i mennesker.

Langtidsvirkningene av vitamin C på skjørbuk i mennes-

ker er en vesentlig begivenhet av historisk interesse, i medisi-

nen. Virkningen av vitamin C til å forhindre skjørbuk er over-ordentlig vel dokumentert i hele verden. Mennesket, fratatt vitamin C i perioder lengre enn ca. 60 dager, begynner å oppvise tegn på kapillarsprøhet og bløding i alle vev og organer.

Vitamin C har følgende egenskaper:

1. Det er co-enzym i Krebs-syklusen.

2. Det er- et reduksjonsmiddel og elektrondonor i alle kjente biologiske systemer. L-ascorbinsyre eller vitamin C har en rekke biologiske funksjoner hvorav noen ikke fullstendig forståes (Ziten et al 1964). Store doser av L-ascorbinsyre synes å ha.verdi til å forhindre og redusere symptomene i vanlig forkjølelse og andre virussykdommer (Linus Pauling 1974). Nylig fremkomne forsøks-resultater indikerer at L-ascorbinsyre er virksom til å nedsette serum-cholesterolnivåer. C. Spittle (The Lancet, juli 28, 1973;

s. 199 - 201 og desember 11, 1971, s. 1280 - 1281) foreslår at doser på 1 til 2 g vitamin C pr. dag kan være gunstig til å forhindre dypåretrombose såvel som til å nedsette forekomsten av atherosclerotiske komplikasjoner i mennesker. Nylig utførte

undersøkelser indikerer at ascorbinsyre kan redusere forekomsten av myocardialinfarkt (Knox.E.G., The Lancet, s. 1465, 30. juni 1973). L-ascorbinsyre synes vider.e å motvirke de trombogene virkninger av orale antikonsepsjonsmidler som vist ved forlengel-se av okklusjonstider i mesenteriske kar.

Gode resultater ble erholdt i en undersøkelse i halv-teknisk målestokk under anvendelse av flere frivillige for å bestemme virkningene av ascorbinsyre på (1) plasma-koagulerings-egenskaper, (2) serum-cholesterolnivåer, (3) plateaggregerbar-het, og (4) overflateladningsegenskaper av røde blodceller og plater. Vitamin C i disse pasienter viste seg å nedsette plate-aggregerbarheten og øke den elektroforetiske bevegelighet av alle de undersøkte celler.

Det har vært få bevis som peker på at vitamin C bevir-ker målt blodkoagulerbarhet som demonstrert av partiell thrombo-plastintid, thrombintider og thrombin-recalsifiseringstider.

Spittle et al har undersøkt vitamin C på'en tilfeldig sammensatt gruppe av pasienter med thrombophlebitis. Den beskyt-tende virkning av vitamin C mot trombose er blitt påvist ved en tilfeldig, dobbel-blindprøve under anvendelse av pasienter som var vist å være utsatt for dyp-vene-trombose. I tilsammen 53 pasienter, ble det iakttatt at forekomsten av dyp-vene-trombose var 33 % i pasienter som fikk L-ascorbinsyre sammenlignet med 60 % i placebogruppene (Spittl<p>, C.R., The Lancet s. 199, 28.

juli 1973). Den gitte dose var 1 g/dag. Denne overensstemmelse mellom inntakelsen av vitamin C og nedsettelse i antallet av

tromboseepisoder er blitt bekreftet fra andre kilder. I for-brenningspasienter hvor det er vanlig å anvende store doser vitamin C for å påskynde legingen, har det vært et åpenbart krav på behandling av dyp-vene-trombose. Disse opplysninger bygger på erfaringen i et sykehus i løpet av en 5,5 års periode i løpet av hvilken tid 159 pasienter over 40 år gamle ble behandlet med store doser av vitamin C (Spittle, C.R., The Action of Vitamin C on Blood Vessels, Amer. Heart J. 88:387, 1974).

Det er et mål ved foreliggende oppfinnelse å fremskaffe

en synergisk kombinasjon av p-aminobenzoesyre og L-ascorbinsyre.

Det er et annet mål ved oppfinnelsen å fremskaffe en forbedret farmasøytisk forbindelse med forbedret anvendelse for lengre tidsrom etter administrasjon.

Nok et mål ved foreliggende oppfinnelse er å fremskaffe forbedrede fremgangsmåter for behandling av verter, og forhind-ringen av vaskulære tilstander.

Nok et mål er å fremme utviklingen av nyttige forbindelser basert på organiske syrer og lignende.

Nok et mål ved oppfinnelsen er å fremskaffe nye fremgangsmåter for å utvikle farmasøytiske forbindelser.

For å oppnå de ovenstående andre mål ved oppfinnelsen fremskaffes det en fremgangsmåte som går ut på å redusere trom-bosetilbøyelighetene i en vert ved å administrere til verten en forbindelse avledet av to organiske syrer.

I henhold til en utførelsesform.av oppfinnelsen er en av syrene L-ascorbinsyre og den andre er p-aminobenzoesyre.

Forbindelsen som erholdes kan være en ester, et salt eller et amin, og denne forbindelse' kan administreres i en dose på 1 - 100 mg/kg legemsvekt. Dosen administreres fortrinnsvis oralt, skjønt den kan administreres parenteralt.

Forbindelsen kan fremstilles- ved å blande oppløsninger av L-ascorbinsyre og p-aminobenzoesyre og inndampe den således dannede blanding og utvinne det således dannede fast stoff. Syrene anvendes fortrinnsvis i et molforhold på 1:1. Det faste stoff kan utvinnes i krystallform eller kan utvinnes som en kake.

Oppfinnelsen omfatter, som et spesielt trekk, forbindelser fremstilt i henhold til ovenstående fremgangsmåte eller spesielt salter, estere eller amider av L-ascorbinsyre og p-aminobenzoesyre.

Det vedlagte diagram viser den forlengede aktivitet av doser av forbindelsen ifølge oppfinnelsen.

Ovenfor er omtalt p-aminobenzoesyré. Formelen for denne organiske syre er:

L-ascorbinsyre eller vitamin C er også omtalt, og denne forbindelse av formelen:

Foreliggende oppfinnelse angår forbindelser avledet fra disse organiske syrer, nemlig salter, estere og amider derav, syntesen av disse og anvendeligheten derav til å behandle det vaskulære system, særlig i rotter, hunder og mennesker som krever slik behandling.

Formelen for 6-esteren er som følger:

Formelen for amidet er som følger:

Formelen for et salt er som følger:

Formelen for et annet salt er:

Det første angrep på problemet var å fremstille et salt av ascorbinsyre med p-aminobenzoesyre. Et slikt salt kan vises å ha to former, ett under anvendelse av den åpne form for ascorbinsyre, og den annen under anvendelse av enolformen. Foruten sal-tene er det mulig å ha to andre slags derivater, amidet og estere. Da der. er to hydroxylgrupper i ascorbinsyre som lett kan fores-tres, vil esteren antagelig være enten i 6- eller 5-stillingen. Det er mindre sannsynlig, men det er også mulig, å danne en ester med en av de enoliske hydroxyler (3- eller 4-stillingen) slik at fire estere er teoretisk mulige.

En anvendt fremstillingsmetodé er beskrevet nedenfor.

På grunn av lettheten med'hvilken ascorbinsyre oxyderes, er det vesentlig å utføre alle operasjoner under nitrogen og under fravær av vann og luft. I et tilfelle fikk man vesentlig mørkning av produktet. Det ble antatt å skyldes nærværet av fuktighet.

Eksempel 1

1. En oppløsning av p-aminobenzoesyre i en blanding av 50 % aceton--og '50 % methanol ble fremstilt ved forsiktig oppvarming. Konsentrasjonen var ca. 100 g/l. 2. En lignende oppløsning ble fremstilt med L-ascorbinsyre. 3. De to oppløsninger ble blandet. Vann ble utelukket i den grad det er mulig. 4. Blandingen ble inndampet under vakuum, idet nitrogen ble anvendt for å flusne systemet. Etter som materialet ble kon-sentrert, begynte krystaller å vise seg. 5. Når oppløsningen ble inndampet inntil den var en tykk

oppslemning, ble materialet filtrert gjennom et grovt.filtrer-papir og tillatt å renne av så meget som mulig. Overflaten ble dekket med nitrogen, idet man var meget omhyggelig.med å utelukke alt filtrert vann.

6. Det erholdte faste stoff ble tørket under høyvakuum ved

værelsetemperatur. Molforholdet av L-ascorbinsyré til p-aminobenzoesyre som ble anvendt var 1:1.

Eksempel 2

1. En alternativ fremgangsmåte ved fremstilling som ble

anvendt, var å fordampe oppløsningsmidlet under omhyggelig ute-lukkelse av vann og luft til det punkt hvor fast halvtørr kake ble dannet i beholderen hvori inndampningen ble utført. 2. Denne fuktige kake ble så overført til en passende be-holder og tørret under høyvakuum. Alle operasjoner ble.beskyttet mot utsettelse for luft og fuktighet.

Andre oppløsningsmiddelsystemer vil utvilsomt kunne anvendes. De ovenstående ble anvendt hovedsakelig av bekvemmelig-hetshensyn. En lukt utvikles i fremgangsmåten som fjernes ved høyvakuumtørring, men må representere et biprodukt som dannes under prosessen. Det må også være flyktig da det kan fjernes.

Det første salt vist ovenfor krever teoretisk bare fjernelse av et molekyl vann for å danne amidet. I alminnelighet skjer ikke dette for lett. Avdestillasjonen av oppløsningsmid-lene kan hjelpe til å trekke med vann.

Det er også mulig å danne esterne vist ovenfor. Dette vil antagelig kreve anvendelsen av acylkloridet av p-aminobenzoesyre og omsetning av dette med L-ascorbinsyre.

•Forundersøkelser ble rettet på å bestemme toksisiteten av den ovenfor angitte forbindelse i pattedyr. En meget høy

dose pr. kg legemsvekt i rotter og hunder har vist i det vesent-lige ingen giftighet.

Den nye forbindelse ble undersøkt for å bestemme dens virkning på rotte-mesenteriske okklusjonsundersøkelser. Halveringstiden for p-aminobenzoesyre har vist seg å være ca. 1 dag. Halveringstiden for vitamin C ca. 12 timer til maksimalt 1 dag. Halveringstiden for den nye forbindelse har vist seg å være ca. 4-5 dager med en hale. En enkelt dose varer ca. 14 dager. Mekanisk blanding av p-aminobenzoesyre og L-ascorbinsyre har vist seg å ha en maksimal hale på ca. 5-6 dager hvilket indikerer ved ren logikk at den nye forbindelse er biologisk forskjellig fra de to bestanddeler blandet sammen mekanisk. Spesielt synes den erholdte forbindelse å være sterkere enn utgangsmaterialene

blandet sammen i et 50/50 forhold. Hvis midlene blandes sammen i samme forhold som anvendt ved fremstilling av den nye forbindelse, er' den mekaniske blanding fremdeles ikke så sterk som den erholdte forbindelse.

Den nye forbindelse er blitt bedømt i rotte-mesente-riumundersøkelser. I rotte-mesenteriet har den nye forbindelse vist seg å forlenge koagulasjon 3 til 4 ganger den normale rotte-mesenterium-trombosetid. Resultatet er dramatisk og langvarig da

. virkningen av en enkelt dose synes å strekke seg til 14 dager før rotte-mesenterium-okklusjonstider vender tilbake til det normale

nivå. Dette resultat bygger på 26 rotter.

Blodceller av hanhunder matet med den nye forbindelse, oppviser enøkning i negativ-overflateladning som øker fortløpen-de fra den tredje dag til.ca. den 14. dag, slik.at.ved den 14.dag er det en fordobling av elektroforetisk mobilitet over virkningene som sees på den femte, sjette og syvende dag.

Tilgjengelige beviser antyder at, som ved de fleste normale farmakologiske midler, vil den nye forbindelse ikke be-virke super-normalitet. Den vil imidlertid bringe tilbake til normal eventuelle sterkt abnormale målinger angående de elektro-kinetiske egenskaper hos blodceller og blodkar i hunder.

Det tilgjengelige materiale indikerer at den nye forbindelse avledet av L-ascorbinsyre og p-aminobenzoesyre er et temmelig sterkt anti-trombotisk middel. Dens virkning er kumula- tivt større enn virkningen av hver enkelt av dens bestanddeler

selv når de blandes ■ sammen mekanisk og gies oralt til rotter ocyéller hunder. Forbindelsen er et elegant eksempel på en elektro-donor-forbindelse som er nyttig for behandling av det vaskulære system.

Det følgende er resultater av forsøk ved sammenligning av den nye forbindelse med en blanding av utgangsmaterialene og med utgangsmaterialene individuelt:

De følgende ytterligere data erholdt angående nytten av den nye forbindelse: Virkning av ny forbindelse på elektrisk indusert trombose i mesenterialkar Enkelt belastningsdose 20 mg/100 g legemsvekt HAN Smeltepunkt - 147° C

1 dag etter enkelt belastningsdose

1 rotte Okklusjonstiden var 240 minutter

3. dager etter enkelt belastningsdose

1 rotte Okklusjonstiden var 150 minutter

2 rotter "19 5 "

De følgende data refererer seg til rotte-mensenterial-okklusjonstid:

Rotte- mesenterial- okkLus jons tid

Rot te- mesenter ia 1 - okklus jonstid PABÅ + L-ascorbinsyre

De følgende data angår okklus jonstid-virkningsvarigheten i hunrotter:

( X - Y) - ny forbindelse - enkeltdose P.O.

Nedenfor er tabulert noen fysikalske egenskaper for satser av forbindelsen som ble fremstilt:

Vedlagte diagram illustrerer virkningen av en enkelt belastningsdose på en rekke rotter. En kontroll ble anvendt i form av 5 dyr og det fremgår av diagrammet at kontrollen gir en rotte-mesenterial-okklusjonstid i forhold til elektrisk indusert trombose som til å begynne med.er mindre enn en enkelt belastningsdose av den nye forbindelse etter 14 dager.

Mere spesielt vil det sees at 5 dyr ble avlivet etter

1 dag etter administrasjon av den nye forbindelse, 5 dyr ble avlivet etter 5 dager, 5 ytterligere dyr ble avlivet etter 9 dager, 4 ytterligere dyr ble avlivet etter 11 dager og tilslutt ble 4 dyr avlivet etter 14 dager. Okklusjonstiden (i minutter) etter

den første-dag er tydelig større enn den for kontrolldyrene.

Etter 5 dager er okklusjonstiden redusert, men er fremdeles mere enn det dobbelte av den for kontrolldyrene. Likeledes er etter 9 dager okklusjonstiden betraktelig større enn kontrollene og har avtatt bare meget lite fra målingene den femte dag. Likeledes er der etter 11 dager meget liten reduksjon i okklusjonstiden som fremdeles er minst to ganger så stor som den for kontrollene.

Etter 14 dager viser måling av 4 avlivede dyr fremdeles

en okklusjonstid som er større enn den for kontrollene.

Målingene på tegningen er basert på en administrasjon

av forbindelsen i en dose på 100. mg/100 "g legemsvekt og enkelte belastningsdoser anvendes for både kontrollene og dyrene til hvilke den nye forbindelse er blitt administrert. Dette viser at den betraktelige virkningsvarighet knytter seg til fordelen ved administrering av den nye forbindelse og dette er riktig med hen-syn til behandling av mennesker hvor oral administrasjon av den nye forbindelse ventes å føre til en programmert administrasjon som krever oral dosering med mellomrom over tidsrom på dager,

som f.eks. en oral administrasjon pr. uke.

Mange modifikasjoner og variasjoner av ovenstående me-toder og forbindelser vil nu være åpenbare for fagfolk. Disse modifikasjoner og variasjoner vil ikke avvike fra rammen for oppfinnelsen hvis de dekkes av de følgende krav eller er generelt ekvivalente dermed.

Claims (4)

1. Fremgangsmåte ved fremstilling av et terapeutisk aktivt middel, karakterisert ved at oppløsninger av L-ascorbinsyre og p-aminobenzoesyre blandes, og den således dannede blanding inndampes jog— der utvinnes et fast . sJLQf_f-*|'

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at syrene anvendes i et molforhold på 1:1.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at det faste stoff utvinnes'i krystallform.

4. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at det faste stoff utvinnes i form av en kake.