CH622619A5 - Isotonic, osmotically balanced aqueous solution which can be used in haematological determinations - Google Patents
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Description
La présente invention a pour objet une solution aqueuse isotonique, équilibrée osmotiquement, utilisable dans les déterminations hématologiques.
Dans d'autres brevets de la même titulaire, il a été décrit une solution électrolytique à buts multiples utilisable dans les processus hématologiques, principalement dans l'énumération des cellules sanguines et la détermination de la concentration d'hémoglobine et d'autres paramètres importants d'échantillons de sang au moyen d'appareils électroniques automatiques d'analyse de particules du type de Coulter. La solution était équilibrée osmotiquement pour une stabilité du volume moyen des cellules, était dépourvue d'azides et utilisait du 2-phénoxyéthanol comme agent bactériostatique et fongistatique.
Le fluorure de sodium était employé pour contrebalancer l'activité affaiblissante de la paroi de la cellule sur le 2-phénoxyéthanol et ainsi stabiliser le volume moyen des globules rouges. Le fluorure de sodium a servi également à favoriser la conversion de l'hémoglobine en cyanméthémoglobine pour la détermination colorimétrique de l'hémoglobine.
L'utilisation d'un agent bactériostatique et fongistatique s'accompagne de variations indésirables dans le volume moyen des cellules des globules rouges conduisant à une absence de stabilité du volume moyen des globules rouges. Dans le but d'utiliser un agent bactériostatique remplaçant l'azide de sodium, comme expliqué dans un autre brevet, le 2-phénoxyéthanol a été choisi quoiqu'il n'ait jamais été utilisé précédemment à cette fin.
Cependant, le 2-phénoxyéthanol peut conduire à la destruction des parois des cellules ou à une modification de leur volume. Afin d'éviter les problèmes d'hémolyse ou de crénation, un agent stabilisant a été utilisé dans le système résultant. Quoique le fluorure de sodium ait longtemps été considéré comme un agent préservatif, apte, par exemple, à préserver le glucose dans les échantillons de sang, son utilité comme stabilisant dans le système résultant était inattendue.
Il a été découvert que le 2-phénoxyéthanol et le fluorure de sodium pourraient être utilisés dans un système résultant ou en combinaison dans un réactif de lyse des globules rouges. Un tel réactif de lyse doit être apte à effectuer la lyse des globules rouges rapidement, à détruire la membrane des globules rouges jusqu'à une dimension de particule suffisamment faible telle que les globules blancs puissent être repérés et comptés, par exemple. Simultanément, l'agent de lyse doit lâcher l'hémoglobine des globules rouges et l'hémoglobine convertie en cyanméthémoglobine de façon à permettre que soient effectuées des déterminations colorimétriques. La combinaison des deux agents susmentionnés a réalisé des fonctions extrêmement actives antibactérielles et antifongiques, en particulier lorsqu'ils sont combinés avec un composé quaternaire d'ammonium. L'utilisation du fluorure de sodium a maintenu la concentration en fluorure et a également contribué à la conversion de l'hémoglobine en cyanméthémoglobine.
Les déterminations colorimétriques de l'hémoglobine nécessitent une solution de calibration qui est utilisée pour étalonner le colorimètre. Plus spécifiquement, une solution d'étalonnage est préparée à partir de globules rouges humains frais, rincés dans une solution saline dont la lyse est effectuée pour détruire les parois des globules rouges. Après une lyse complète de ces cellules, l'hémoglobine libérée est convertie en cyanméthémoglobine et diluée à la concentration désirée pour être utilisée dans les déterminations colorimétriques. Un problème qui se pose est celui du penchant que présente la solution d'hémoglobine à faire croître des bactéries, particulièrement les bactéries du type dont la croissance est favorisée par la présence d'ions cyanure, ceux-ci étant nécessaires pour la formation de la cyanméthémoglobine. Du 2-phénoxyéthanol et du fluorure de sodium peuvent être utilisés, le 2-phénoxyéthanol servant d'agent bactériostatique très actif, particulièrement en présence d'un composé quaternaire d'ammonium.
Les cellules sanguines, humaines ou animales, lorsqu'elles sont en suspension dans un milieu convenable ou dans un plasma synthétique, sont utilisées comme agent de contrôle ou d'étalonnage dans les instruments de comptage des globules. Les globules sont obtenus de source humaine, leur coagulation étant empêchée par des anticoagulants. Le plasma est éliminé par centrifugation et les globules rouges rincés dans des conditions stériles à l'aide d'une solution saline stérile, les cellules étant ensuite emballées pour une suspension subséquente dans un milieu de préservation. En conséquence, un milieu tel qu'un plasma artificiel est réalisé, qui est formulé pour être ajouté à de tels globules rouges séparés. Ce milieu comprend un diluant tel que décrit dans le brevet N° 612010 et contient également de l'albumine bovine, de la lactose et du 2-phénoxyéthanol additionnel. La solution est mélangée complètement, son osmolalité étant réglée à l'aide de chlorure de sodium à environ 370 mmol/kg d'eau. Après réglage de l'osmolalité, la solution est filtrée et le filtrat stocké dans des bouteilles de verre stériles. Le fluorure de sodium est présent dans la solution, fonctionnant comme agent stabilisateur du volume des cellules. L'addition d'albumine bovine et de lactose a pour but d'améliorer l'équilibre physico-chimique du passage de l'eau à travers la membrane des cellules vers l'intérieur de celles-ci. Le 2-phénoxyéthanol est utilisé comme agent bactériostatique et fongistatique. Le milieu ou la solution peut alors être ajouté aux globules rincés, comme cela est requis pour que puisse être effectué le comptage désiré.
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L'utilisation de 2-phénoxyéthanol comme réactif tampon dans les déterminations hématologiques est envisagée.
Des exemples de formes d'exécution préférées de l'invention sont les suivants:
Poids unitaire approximatif
A) Comme agent de lyse Exemple 1
Chlorure de sodium 7,936 g/1
Chlorure de potassium 0,4 g/1
Phosphate dihydrogène de sodium .. 0,342 g/1
Phosphate de disodium 1,922 g/1
Acide éthylènediaminotétracétique de sodium (EDTA) 0,3 g/1
Fluorure de sodium 0,5 g/1
2-PhénoxyéthanoI 3,3 g/1
Eau distillée Quantité pour produire 11
Composé d'ammonium quaternaire
(Bretol) 10,0 g/1
Nitrite de sodium 0,20 g/1
Cyanure de potassium 0,6 g/1
Alkylephénol polyoxyéthylé 8,0 ml/1
Eau distillée Jusqu'à 1000 ml
B) Comme agent tampon Exemple 2
Chlorure de sodium 7,847 g/1
Chlorure de potassium 0,396 g/1
Phosphate monohydrate de monosodium 0,188 g/1
Phosphate anhydre de disodium 2,071 g/1
Dihydrate de disodium (EDTA) 0,376 g/1
2-Phénoxyéthanol 2,20 g/1
Fluorure de sodium 0,495 g/1
Nitroferricyanure de sodium 0,010 g/1
Nitrite de sodium 0,010 g/1
Alkylephénol polyoxyéthylé de la General Analine New York Film
(C.C.S.S.) 0,40 ml
Bretol (Fine Organics Co. New York) 0,500 g/1
Eau distillée Jusqu'à 1000 ml
C) Comme détergent nettoyant ayant des caractéristiques bactério-statiques,fongistatiques et de stabilisation
Exemple 3
Chlorure de sodium 7,506 g/1
Chlorure de potassium 0,379 g/1
Phosphate monohydrate de monosodium 0,180 g/1
Phosphate anhydre de disodium 1,846 g/1
Dihydrate de disodium (EDTA) 0,360 g/1
2-Phénoxyéthanol (Dowanol EPh) .. 2,10 g/1
Fluorure de sodium 0,474 g/1
Alkylephénol polyoxyéthylé
(C.C.S.S.) 14,9 ml
Huile de chaux 0,08 ml
Teinture verte 0,56 ml
Eau distillée Jusqu'à 1000 ml
D) Comme solution de contrôle ou de calïbration Exemple 4
Chlorure de sodium 7,936 g/1
5 Chlorure de potassium 0,4 g/1
Phosphate dihydrogène de sodium .. 0,19 g/1
Phosphate de disodium 1,922 g/1
Acide éthylènediaminotétracétique de sodium (EDTA) 0,3 g/1
10 Fluorure de sodium 0,5 g/1
2-Phénoxyéthanol 3,3 g/1
Eau distillée Quantité jusqu'à produire
1000 ml
15 On ajoute à 1000 ml de cette solution ce qui suit:
Albumine bovine 3,4% en poids
Lactose 4,3% en poids
2-Phénoxyéthanol Jusqu'à 0,34%
20
L'osmolalité est ajustée à approximativement 370 mmol/kg d'eau.
Les solutions spécifiées ci-dessus sont réglées à un pH se situant entre 7 et 8, de préférence 7,2 à 7,5, par un agent tampon 2s convenable, EDTA et sel de phosphate. L'osmolalité des solutions est de préférence maintenue à 320-340 mmol. La concentration du fluorure de sodium varie de 0,03 à 0,1% en poids de la solution totale, avec une préférence pour 0,05%, et la concentration du 2-phénoxyéthanol varie de 0,2 à 1,0% en poids de la solution totale, 30 avec une préférence de 0,34% dans la solution d'étalonnage ou de contrôle et de 0,2% dans les solutions utilisées à d'autres fins.
L'équilibre osmotique désiré est obtenu par l'emploi judicieux à la fois de chlorure de sodium et de potassium. Le tamponnage par utilisation d'hydroxyde de sodium est ainsi éliminé. 35 L'utilisation d'agents d'équilibrage osmotique tels que le chlorure de sodium et le chlorure de potassium et d'agents tampons tels que l'hydroxyde de sodium dans de tels réactifs est connue. Il est également connu d'utiliser un agent de chélation qui, en coopérant avec le sel de phosphate employé, sert d'agent 40 tampon pour que soit obtenue une gamme désirée de pH dans laquelle le diluant est actif. Un tel agent de chélation est l'acide éthylènediaminotétracétique (EDTA).
La préparation de la solution ne nécessite pas de processus spéciaux ou un ordre spécial dans l'addition des ingrédients à 45 l'eau. En conséquence, l'invention ne se rapporte à aucune formulation méthodologique du diluant. Le mélange des ingrédients est réalisé mécaniquement, sous brassage modéré, pendant 1 ou 2 h. La solution est ensuite filtrée dans un filtre à 0,2 |i et est stockable directement dans des récipients en matière plastique.
so Bien que des formulations préférées aient été spécifiées ci-dessus, la gamme du pH et l'osmolalité peuvent être élargies si besoin. Ainsi, la gamme du pH peut être maintenue entre 7,0 et 8,0. De même, la gamme utile de l'osmolalité peut se situer entre 300 et 380 mmol. Cela peut être obtenu en faisant varier la quan-55 tité des ingrédients actifs.
Les spécialistes relèveront que les solutions décrites ci-dessus peuvent être utilisées de la même manière que les solutions isotoniques qu'on pouvait obtenir précédemment pour les buts décrits, mais qu'elles éliminent les désagréments que présente l'utilisation 60 de telles solutions connues.
R
Claims (7)
1. du chlorure de sodium, du chlorure de potassium et du phosphate de disodium, dans des teneurs équilibrées osmotiquement,
II. un fluorure métallique alcalin,
III. du 2-phénoxyéthanol,
IV. de l'acide éthylènediaminotétracétique ou un de ses sels métalliques alcalins, et une ou plusieurs des substances suivantes :
V. un alkylphénol polyoxyéthylé,
VI. un composé quaternaire d'ammonium, du cyanure de potassium et du nitrite de sodium,
VII. un sérum d'albumine bovine et de la lactose, et
VIII. un composé quaternaire d'ammonium, du nitrite de sodium et du nitroferricyanure de sodium.
2. Solution suivant la revendication 1, caractérisée par le fait que le fluorure métallique alcalin est un fluorure de sodium.
2
REVENDICATIONS
I. Solution aqueuse isotonique, équilibrée osmotiquement, utilisable dans les déterminations hématologiques, caractérisée par le fait qu'elle comprend:
3. Solution suivant l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée par le fait que le fluorure métallique alcalin est présent en une concentration se situant entre 0,03 et 0,1% en poids.
4. Solution suivant l'une des revendications 1 à 3, caractérisée par le fait que le 2-phénoxyéthanol est présent en une concentration se situant entre 0,2 et 1,0% en poids.
5. Solution suivant l'une des revendications 1 à 4, caractérisée par le fait que le composant (I) comprend du chlorure de sodium, du chlorure de potassium, du phosphate dihydrogène de sodium et du phosphate de disodium en des teneurs équilibrées osmotiquement.
6. Solution suivant la revendication 1, caractérisée par le fait qu'elle comprend le composant (V) ainsi qu'un pigment dispersé.
7. Solution suivant l'une des revendications 1 à 6 ayant un pH se situant entre 7,0 et 8,0 et une osmolalité se situant entre 300 et 380 mmol.
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