CH640145A5 - Beschichtetes traegermaterial mit konzentrierungszone fuer die duennschichtchromatographie. - Google Patents

Beschichtetes traegermaterial mit konzentrierungszone fuer die duennschichtchromatographie. Download PDF

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CH640145A5 CH595978A CH595978A CH640145A5 CH 640145 A5 CH640145 A5 CH 640145A5 CH 595978 A CH595978 A CH 595978A CH 595978 A CH595978 A CH 595978A CH 640145 A5 CH640145 A5 CH 640145A5
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Karl-Friedrich Dr Krebs
Hans Heinz
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Merck Patent Gmbh
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Description

Gegenstand der Erfindung ist das im Patentanspruch 1 definierte, beschichtete Trägermaterial.
Besonders vorteilhaft weist das Siliciumdioxid der Konzentrierungszone eine Korngrössenverteilung im Bereich von 10 bis 50 um auf. Es ist weiterhin besonders vorteilhaft, die Schichtdicke der Konzentrierungszone auf 100 bis 200 um, vorzugsweise etwa 150 um, einzustellen.
Das für die Konzentrierungszone zu verwendende Siliciumdioxid kann in bekannter Weise hergestellt werden. Man geht z.B. von den für Chromatographiezwecke handelsüblichen, synthetisch hergestellten Kieselgelen aus. Hier können insbesondere eng- und mittelporige Typen eingesetzt werden. Ein sehr häufig verwendetes Kieselgel (Kieselgel 60) hat z. B. Porenweiten von etwa 5 bis 7 nm. Die Teilchengrös-se des Ausgangsmaterials kann beliebig gewählt werden, entspricht aber im allgemeinen ungefähr der Teilchengrösse des z.B. für die Chromatographieschicht gewählten Kieselgels.
Die für die erfmdungsgemässe Verwendung erforderliche Aufweitung der Poren erfolgt in bekannter Weise, z. B.
durch Tränken der Kieselgele mit Salzlösung und anschliessendes Glühen. Nach dem Auswaschen werden die so erhaltenen weitporigen Siliciumdioxide in üblicher Weise klassiert. Für die Konzentrierungszone geeignete weitporige Kieselgele sollten eng klassiert sein, ein mittleres Porenvolumen und eine extrem hohe Porenweite sowie eine damit verbundene äusserst geringe spezifische Oberfläche aufweisen.
Besonders gut geeignet sind Siliciumdioxide mit den folgenden Kenndaten:
a) Porenweite
Die Porenweite soll 2 bis 15 um, vorzugsweise 2 bis 8 um betragen. Bevorzugt sind Porenweiten über 4 (im. Die Porenweiten werden in üblicher Weise bestimmt, vorzugsweise mit dem Quecksilber-Porosimeter.
b) Spezifische Oberfläche
Diese wird nach der bekannten BET-Methode bestimmt. Die spezifische Oberfläche der erfindungsgemäss einzusetzenden Siliciumdioxide sollte < 1 m2/g sein, vorzugsweise 0,2 bis 0,8 m2/g.
c) Porenvolumen
Das Porenvolumen wird mit dem Quecksilber-Porosime-ter bestimmt. Das erfindungsgemäss einzusetzende Siliciumdioxid soll ein Porenvolumen von 0,5 bis 1,5 ml/ g, vorzugsweise 0,5 bis 1,0 ml/g, besitzen.
Diese synthetisch hergestellten Siliciumdioxide weisen einen sehr hohen Reinheitsgrad auf. Als Typanalyse für den Maximalgehalt an Verunreinigungen gilt z.B. folgendes:
Chlorid (Cl): 0,008%
Sulfat (S04): 0,003%
Nitrat (N03): 0,005%
Blei (Pb): 0,0005%
Kupfer (Cu): 0,0005%
Eisen (Fe): 0,002%
Zink (Zn): 0,0005%
Ob ein weitporiges Siliciumdioxid zur erfindungsgemäs-sen Verwendung geeignet ist, lässt sich z.B. auch durch folgenden Test feststellen:
Nach der in den Beispielen angegebenen Methode werden DC-Platten oder -Folien mit Konzentrierungszone hergestellt. 10 jd der Lösung der Farbstoffe «Ceresviolett» BRN rein, «Ceresgrün» BB und Blau 18.90 Sandoz, je 0,01 % (G/V) in Toluol, werden mit Hilfe einer geeichten Mi-krometer-Spritzen-Kombination innerhalb von 10 s auf die in horizontaler Position befindliche Konzentrierungszone aufgegeben, wobei sich die Lösung kreisförmig ausbreitet. Nach Ablauf von weiteren 10 s wird das Lösungsmittel mit einem kalten Luftstrahl abgetrocknet. Es hat sich eine Kreisfläche ausgebildet, deren äusserster schmaler Rand in der Intensität verstärkt ist. Die Kreisfläche soll einen Durchmesser von mindestens 16 mm aufweisen.
Die Verarbeitung dieser Siliciumdioxide zu der an sich bekannten Konzentrierungszone von DC-Platten oder -Folien erfolgt in üblicher Weise. Als Träger können alle üblichen Materialien verwendet werden, wobei Glasplatten bevorzugt sind. Gebräuchlich sind jedoch auch Folien, z.B. aus
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Aluminium oder auch Kunststoffolien. Die Sorptionsmittel werden in streichfähigen, meist wässrigen Suspensionen angeschlämmt und nach intensivem Vermischen und gegebenenfalls Entgasen mit üblichen Streichgeräten bzw. an Be-schichtungsanlagen auf die Trägermaterialien aufgebracht. Für die Chromatographieschicht können alle auch sonst üblicherweise verwendeten Sorptionsmittel eingesetzt werden, z.B. Kieselgele (mit unterschiedlichen Porenweiten zwischen
4 und 1000 nm), Aluminiumoxide, Cellulosen, Magnesiumsilikate und Polyamide. Die Kieselgele können auch modifizierte (z. B. silanisierte) Oberflächen besitzen. Üblicherweise werden den Sorptionsmitteln noch Bindemittel, die die Haft-und Abriebfestigkeit erhöhen, und/oder Indikatoren zugesetzt. Als Bindemittel sind bevorzugt die in der DE-PS
1 442 446 oder die in der DE-AS 1 517 929 genannten organischen Bindemittel. Der am häufigsten verwendete Indikator ist ein Fluoreszenzindikator, vorzugsweise das bei 254 nm im UV absorbierende manganaktivierte Zinsilikat. Die Bindemittel werden in der Regel in Mengen von 0,1 bis 10 Gew.-% zugesetzt, die Indikatoren in Mengen von 0,5 bis
5 Gew.-%, jeweils bezogen auf die fertige Schicht.
Die Streichgeräte bzw. Beschichtungsanlagen sind so eingerichtet, dass die für die Chromatographie vorgesehenen Sorptionsmittelschichten direkt an die schmalere Schicht der Konzentrierungszone angrenzen. Bei einer Beschichtung von z. B. Glasplatten des üblichen Formats 20 x 20 cm kann z. B. die Chromatographieschicht eine Breite von 175 mm besitzen, während für die Konzentrierungszone eine Breite von 25 mm vorgesehen wird.
Sehr häufig wird die Schichtdicke der beiden Zonen variiert. So kann z.B. in einer bevorzugten Ausführungsform die eigentliche Chromatographieschicht 250 (im dick sein, während die Schichtdicke der Konzentrierungszone etwa 150 um beträgt.
Nach der Beschichtung werden die Trennmaterialien in üblicher Weise getrocknet. Die Beschichtungsanlagen sind in der Regel so eingestellt, dass die nach dem Trocknen erhaltenen Schichtdicken zwischen 100 und 300 um liegen. Die Trocknung erfolgt meist in Trockenkanälen bei einer Temperatur von 120 bis 150 °C. Die Dauer der Trocknung hängt von der Länge des Trockenkanals ab.
Bei einem Vergleich des erfindungsgemässen Materials mit den bisher üblichen DC-Fertigpräparationen mit Kombinationsschichten zeigt sich eine deutlich verbesserte Trennleistung bei gleicher Qualität der Chromatographieschicht. Es war nicht vorherzusehen, dass sich diese Vorteile mit den Siliciumdioxiden der angegebenen Charakteristika erreichen lassen würden. Deshalb ist bisher auch die Fachwelt stets bei anderen Materialien, insbesondere Kieselgur, geblieben, obwohl deren Nachteile hinlänglich bekannt waren.
Ein besonderer Vorteil des erfindungsgemässen Materials besteht auch darin, dass sehr gute Durchlaufgeschwindigkeiten erzielt werden können. Die beiden Schichtanteile grenzen scharf aneinander, gehen aber trotzdem ineinander über, so dass das Elutionsmittel beim Durchlaufen der Grenzlinie keinen Widerstand erfährt. Auch die nun erstmals mögliche Übereinstimmung der Schichten hinsichtlich Zusätzen, wie Bindemittel und Indikatoren, ist ein erheblicher Vorteil.
Bei der Anwendung besitzt das erfindungsgemässe Material mit Konzentrierungszone erhebliche Vorteile. Nach punkt- bzw. kreisflächenförmigem Auftragen der Proben erfolgt während des Entwicklungsvorganges automatisch ein Konzentrieren zu einer schmalen Startlinie, von der aus die eigentliche Chromatographie ohne Unterbrechung beginnt. In jedem Fall erscheinen die getrennten Substanzen nach der Konzentrierung zu einer schmalen Linie mit identischen Rf-Werten in der Chromatographieschicht. Ausser dem Konzentrierungseffekt findet unmittelbar auf der Platte in der Konzentrierungszone noch eine Aufreinigung statt, was die sonst unter Umständen notwendige Extraktion der zu chro-matographierenden Wirkstoffe ersetzen kann. Anorganische und organische Salze werden gebunden, z.T. auch polare Neutralstoffe wie etwa Zucker. Das Auftragen kann ohne besondere Sorgfalt hinsichtlich Geometrie und Ausdehnung des Auftragefleckens vorgenommen werden. Mithin bringen die Platten bzw. Folien mit Konzentrierungszone eine erhebliche Zeitersparnis mit sich. Ferner wird eine Zersetzung oder irreversible Adsorption empfindlicher Substanzen durch das hochaktive Kieselgel beim Antrocknen des Aufgabefleckens in der Konzentrierungszone vermieden. Die Berührung mit dem eigentlichen Sorptionsmittel erfolgt erst nach Durchlaufen der Konzentrierungszone und dort nur in gelöstem Zustand. In diesem Sinne liegt hier praktisch eine Nassdosierung wie in der HPLC vor. Die Möglichkeit des Auftragens durch Tauchen kann ein strichförmiges Auftragen mit einem Auftragegerät ersetzen. Mit einem automatischen Auftragegerät kann ein besserer strichförmiger Auftrag nicht erzielt werden. Bei Verwendung einer stark verdünnten Lösung müsste man unter jeweiligem Zwischentrocknen mehrmals strichförmig auftragen, um die gleiche Substanzmenge zur chromatographischen Entwicklung zu bringen. Das Auftragen durch Tauchen ermöglicht es, auch von sehr verdünnten Lösungen auszugehen. Wollte man die Methode des Auftragens durch Tauchen auch mit herkömmlichen Kieselgel-Fertigplatten ohne Konzentrierungszone anwenden, Hesse sich die Konzentrierung zu einem Band nur erreichen, indem man mehrmals mit einem stark polaren Elutionsmittel auf eine neue Front über dem Eintauchspiegel entwickelt, ehe mit der eigentlichen Chromatographie begonnen werden könnte. Die DC-Fertigpräparationen mit Konzentrierungszone bieten im Gegensatz hierzu den Vorteil des kontinuierlichen Arbeitens. Ausserdem werden Ballaststoffe wie anorganische oder organische Salze oder gewisse polare Neutralstoffe in der Konzentrierungszone zurückgehalten. Dank der günstigeren Ausgangspositionen bei Beginn der eigentlichen Chromatographie sind auch die Trennleistungen signifikant verbessert. Dies macht sich besonders bei grösseren Auftragmengen, aber auch bei sehr verdünnten Lösungen bemerkbar. Besonders geeignet ist das erfindungsgemässe Material für Trennprobleme, bei denen unterschiedliche Wirkstoff- und Begleitstoffmengen vorkommen, so dass eine Anwendung in der Biochemie, in der klinischen Chemie und in der Pharma-Qualitätskontrolle besonders erfolgreich verläuft.
Das beschriebene beschichtete Trennmaterial soll überall dort und in gleicher Weise Verwendung finden wie die bisher üblichen DC-Platten oder -Folien.
Beispiel 1
a) Zu 881 entsalztem Wasser werden 800 g Natriumpoly-acrylat unter Rühren zugegeben. Dann werden 38,4 kg eines mittelporigen Kieselgels (mittlere Porenweite 6 nm) mit einer mittleren Korngrösse von 15 um sowie 800 g eines mit Mangan aktivierten Zinksilikats eingerührt. Die Suspension wird mit Natronlauge auf einen pH-Wert von etwa 6,5 eingestellt. Unter Rühren wird mit Wasser bis zu einem Gesamtgewicht von 136 kg aufgefüllt.
b) Zu 7,81 entsalztem Wasser werden 60 g Natriumpoly-acrylat unter Rühren zugegeben. Dann werden 60 g eines mit Mangan aktivierten Zinksilikats sowie 2,88 kg eines porösen Siliciumdioxids mit folgenden Charakteristika unter Rühren zugeführt:
mittlere Korngrösse 15 bis 20 um mittlere Porenweite 4 bis 15 um
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Porenvolumen 0,5 fais 1,0 ml/g spezifische Oberfläche 0,4 bis 0,8 m2/g c) Die beiden nach a) und b) erhaltenen Suspensionen werden entgast. Sie werden in eine Beschichtungsanlage eingefüllt, mit deren Hilfe Glasplatten des Formats 20 x 20 cm derart beschichtet werden können, dass die aus der Suspension a) resultierende Schicht von 175 mm Breite unmittelbar an die aus der Suspension b) erhaltene Schicht von 25 mm Breite grenzt. Die Beschichtungsanlage ist so eingestellt, dass nach dem Trocknen Schichtdicken von etwa 250 um für die Chromatographieschicht und von etwa 150 |im für die Konzentrierungszone resultieren. Die Trocknung der Platten erfolgt im Trockenkanal für etwa 10 min bei 150 °C.
Beispiel 2
Analog Beispiel 1 werden die Suspensionen a) und b) hergestellt.
An der Beschichtungsanlage werden mit den entgasten Suspensionen 200 mm breite Rollen eines Aluminiumbandes oder einer Kunststoffolie (Terephthalatfolien von 0,2 mm Dicke) beschichtet. Die Chromatographieschicht von 175 mm Breite grenzt unmittelbar an die Konzentrierungszone von 25 mm Breite.
Beispiel 3
a) Analog Beispiel 1 a) wird unter Verwendung von 39,2 kg eines mittelporigen Kieselgels (Porenweite 5 bis 7 nm) mit einer mittleren Korngrösse von 5 bis 10 um eine Suspension hergestellt.
b) Analog Beispiel 1 b) wird unter Verwendung von 2,94 eines weitporigen Siliciumdioxids mit mittlerer Korngrösse 15 bis 20 |xm mittlerer Porenweite um 8 um Porenvolumen um 0,8 ml/g spezifischer Oberfläche um 0,7 m2/g eine Suspension hergestellt.
c) Die Weiterverarbeitung und Beschichtung erfolgt analog Beispiel 1 c).
Auf den erhaltenen Platten grenzt die Chromatographieschicht von 175 mm Breite unmittelbar an die Konzentrierungszone von 25 mm Breite. Die Platten werden anschliessend halbiert zu Platten des Formats 10 x 20 cm.
Beispiel 4
a) 1000 g einer handelsüblichen, mikrokristallinen Cellulose für die Dünnschichtchromatographie, 3,451 entsalztes Wasser und 50 ml einer 1 %igen wässerigen Lösung des Natriumsalzes von Carboxymethylcellulose werden intensiv gemischt.
b) Zu 520 ml entsalztem Wasser werden 4 g Natriumpoly-methacrylsäure unter Rühren zugegeben. Dann werden 196 g des in Beispiel 3 b) beschriebenen Siliciumdioxids eingerührt. Die Suspension wird unter Rühren mit Natronlauge auf einen pH-Wert von 6,5 eingestellt.
c) Die Beschichtung erfolgt analog Beispiel 1 c). Die für die Chromatographie vorgesehene Celluloseschicht grenzt unmittelbar an die Konzentrierungszone von 25 mm Breite.
Anwendungsbeispiele Versuch A
Auf die nach Beispiel 1 erhaltenen Platten werden 6 beliebige Flächen einer 0,l%igen Lösung eines Gemisches lipo-philer Farbstoffe aufgetragen. Dabei spielt es keine Rolle, in welcher Höhe auf der Konzentrierungszone die Auftragung erfolgt. In jedem Fall erscheinen die getrennten Substanzen nach der Konzentrierung zu einer schmalen Linie mit identischen Rf-Werten in der Chromatographieschicht.
Es werden unterschiedliche Auftragemengen, nämlich 2, 4,8,12,16 und 20 jil (entsprechend je jig), punktförmig etwa 12 mm vom unteren Rand aufgegeben. Die Entwicklung erfolgt in einer Normalkammer ohne Kammersättigung mit Toluol bis zu einer Laufhöhe von 10 cm in der Kieselgel-Schicht ( = Trennstrecke von der Grenzlinie bis zur Elu-tionsmittelfront).
Die in verhältnismässig grosser Menge auf die Konzen-trierungszone aufgetragenen Proben nehmen eine recht grosse Kreisfläche ein. Die gleichmässige Färbung der inneren Kreisfläche beruht auf der praktisch ideal inerten Eigenschaft dieser Schicht. Je nach Kreisdurchmesser wird das Substanzgemisch an der Grenze zu einer schmalen Linie in der Länge des Durchmessers konzentriert. Die bei den grossen Auftragemengen sehr deutliche, bei den geringeren Mengen schwach sichtbare Schwanzbildung nach einmaliger Entwicklung bis zur Grenzlinie ist bei dem grösseren Fiiessmit-teldurchlauf während der eigentlichen Chromatographie völlig behoben. Alle Substanzen weisen identische Rf-Werte auf. Mit steigenden Auftragsmengen nimmt selbstverständlich die Auflösung zwischen benachbarten Substanzpaaren etwas ab, jedoch ist diese selbst bei dem Auftrageflecken von 20 jxg noch völlig ausreichend.
Versuch B
Falls sehr verdünnte Lösungen vorliegen, kann es von Vorteil sein, die Platte mit Konzentrierungszone einfach in die verdünnte Lösung zu tauchen. Hierzu wird eine nach Beispiel 3 erhaltene Platte verwendet. Die maximale Tauchhöhe darf die Höhe der Konzentrierungszone nicht überschreiten. Die eigentliche Entwicklung beginnt nach dem Antrocknen der Aufgabelösung. Es bildet sich an der Grenze zur Kieselgelschicht zunächst eine schmale Bande, von der ausgehend dann die eigentliche Chromatographie beginnt
Mit einem automatischen Auftragegerät könnte ein besserer strichförmiger Auftrag nicht erzielt werden. Bei Verwendung einer ebenso stark verdünnten Lösung müsste man unter jeweiligem Zwischentrocknen mehrmals strichförmig auftragen, um die gleiche Substanzmenge zur chromatographischen Entwicklung zu bringen.
Versuch C
Auch bei sehr stark verdünnten Lösungen ist dank der Konzentrierung an der Grenzlinie zur Chromatographie-schicht der Nachweis der getrennten Substanzen noch möglich. So wurden z. B. auf einer nach Beispiel 1 erhaltenen Platte von links nach rechts 2,6,10,14 und 18 jil einer 0,001 %igen Lösung lipophiler Farbstoffe, entsprechend 0,02,0,06,0,10,0,14und0,18 jxg, aufgetragen. Nach erfolgter Entwicklung waren selbst 20 ng auf der äussersten linken Bahn noch erfassbar.
Versuch D
Auch für die Trennung von lipophilen Farbstoffen, die in sehr unterschiedlichen Konzentrationen vorliegen, ist das erfindungsgemässe Material hervorragend geeignet. Auf eine nach Beispiel 2 hergestellte beschichtete Alu-Folie wird folgendes aufgetragen:
Testgemischl: 0,005% eines blauen Farbstoffes mit höherem Rf-Wert 0,5% eines roten Farbstoffes mit niedrigerem Rf-Wert Testgemisch II. 0,5% des blauen Farbstoffes mit höherem Rf-Wert 0,005% des roten Farbstoffes mit niedrigerem Rf-Wert
Auftragemengen 2,4, 8 und 16 jil (entsprechend 0,1/10, 0,2/20, 0,4/40 und 0,8 (ig/80 ng bzw. umgekehrt).
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Die Entwicklung erfolgte in einer Normalkammer ohne Kammersättigung mit Toluol bis zu einer Laufhöhe von 10 cm in der Kieselgelschicht.
Nach der Entwicklung zeigt sich, dass bei Trennung von Substanzen mit nahe beieinanderliegenden Rf-Werten kleine Substanzmengen mit höheren Rf-Werten leichter abzutrennen sind als kleine Substanzmengen mit niedrigeren Rf-Werten. Die jeweils bessere Trennqualität auf den Folien mit Konzentrierungszone ist deutlich nachweisbar.
Versuch E
Auch bei der Trennung von Aminosäuren lassen sich die vorteilhaften Eigenschaften gut erkennen. Auf eine nach Beispiel 1 erhaltene Platte wird ein Gemisch von Aminosäuren, Reihenfolge nach abnehmenden Rf-Werten, aufgetragen.
L-Leucin DL-Threonin
DL-Valin Glycin a-Aminobuttersäure Glutamin a-Alanin Arginin
Auftragsmenge: 0,75; 2; 4; 6; 8 nl einer 0,02%igen Lösung je Aminosäure, entsprechend 0,15; 0,4; 0,8; 1,2; 1,6 Hg. Entwicklung ohne Kammersättigung in Normalkammer. Elutionsmittel: n-Propanol/Wasser (80/20).
Laufstrecke des Fliessmittels in der Kieselgel-Schicht: 10 cm.
Detektion: Ansprühen mit Ninhydrin, 3 min lang auf 120 °C erhitzen.
Im Vergleich zu einer normalen DC-Fertigplatte mit Kieselgel ist die Trennung auf der DC-Fertigplatte Kieselgel mit Konzentrierungszone besonders im niedrigen Rf-Bereich deutlich günstiger.
Versuch F
Im Vergleich zu handelsüblichen Platten mit Konzentrierungszone aus Kieselgur zeigt das erfindungsgemässe Material eine deutliche Überlegenheit.
Verglichen wurden
A: Eine TLC-Platte Kieselgel/Diatomeenerde B: Eine DC-Fertigplatte Kieselgel/Kieselgur C: Eine Platte nach Beispiel 1
Aufgetragen wurde als Farbstofflösung «Ceresviolett» BRN rein, «Ceresgrün» BB und Blau 18.90 Sandoz je als 0,1 %ige Lösung (G/V) in Benzol.
a) Durchmesser der Auftragekreisflächen bei mehrmaligem punktförmigem Auftrag mit einer 2 ^1-Kapillare auf die jeweiligen Konzentrierungszonen:
Auftragmenge in nl ABC
Durchmesser in mm
4
9
10
11,5
8
12,5
13,5
15
12
14,5
16
18
16
15,5
19
20,5
20
16
21
22,5
Mittelwert der
Durchmesser
relationen
78
90
100
b) Durchmesser der Auftragekreisflächen bei punktförmigem Auftrag in einem Zug ohne Zwischentrocknen mit einer 5 |il- und einer 20 |j.l-Spritze auf die jeweiligen Konzenrierungszonen:
Auftragmenge in (il
A B
Durchmesser in mm io 5
10 20
Mittelwert der Durchmesser-15 relationen
10 13 18
76
11,5
15
22
89
12,5
17
25
100
20
25
Die Zahlen zeigen, dass die handelsübliche Platte B einen im Durchschnitt um 10%, die Platte A einen um 23% geringeren Ausbreitungseffekt als die Platte C aufweist, was durch die geringere Inertheit der Konzentrierungszonen in A und B hervorgerufen wird. Je grösser der Durchmesser der Auftragskreisfläche ist, desto günstiger ist bei gleicher Qualität der Chromatographieschicht die chromatographische Trennleistung der Platte.
Versuch G
Besonders vorteilhaft lassen sich die Platten oder Folien mit Konzentrierungszone auch bei der Untersuchung biolo-30 gischer Flüssigkeiten anwenden. Häufig kann hierbei ein bei der normalen Chromatographie notwendiger Extraktions-prozess (clean-up) fortfallen, der naturgemäss mit Verlusten bzw. Ungenauigkeiten behaftet ist. So sind z.B. direkte Untersuchungen von Körperflüssigkeiten, beispielsweise Harn, 35 möglich.
Eine analog Beispiel 3 hergestellte DC-Fertigplatte, deren Kieselgel der Chromatographieschicht den in der DE-OS 2 524 065 beschriebenen Charakteristika entspricht, wird im Format 100 x 100 mm verwendet, davon Konzentrierungs-40 zone 25 x 100 mm. Die Schichtdicke der Chromatographieschicht beträgt 200 jxm, die der Konzentrierungszone etwa 150 |im. Die Konzentrierungszone wird etwa 15 mm tief in den Rattenharn getaucht, der freie Biphenylmetaboliten enthält. Unmittelbar anschliessend wird die Schicht warm ge-45 trocknet. An zwei Stellen der Konzentrierungszone werden dann je 2 jxl eines Gemisches von Biphenylol-(2), Biphenylol-(4), Biphenyldiol-(2,2') und Biphenyldiol-(4,4') in je 0,01%iger Lösung aufgegeben und getrocknet. Die Entwicklung erfolgt in einer Normalkammer ohne Kammersättigung so mit dem Fliessmittelgemisch Toluol/Chloroform/Methanol (70/15/15) bis zu einer Höhe von 50 mm in der Kieselgelschicht. Nach dem Trocknen sind in der genauen Position der Vergleichssubstanzen im UV oder nach dem Besprühen mit Kaliumhexacyanoferrat (III)/Eisenchlorid die vier Meta-55 bolitenbänder im Harn erkennbar (hRf-Werte Biphenylol-(2) etwa 65, Biphenylol-(4) etwa 50, Biphenyldiol-(2,2') etwa 40 und Biphenyldiol-(4,4') etwa 20-25).

Claims (3)

640145 PATENTANSPRÜCHE
1. Beschichtetes Trägermaterial für die Dünnschichtchromatographie mit der Chromatographieschicht vorgeschalteter Konzentrierungszone, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentrierungszone im wesentlichen aus einem synthetisch hergestellten, porösen Siliciumdioxid mit mittlerem Porenvolumen von 0,5 bis 1,5 ml/g und mit einer Porenweite von 2 bis 15 um besteht.
2. Material nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Siliciumdioxid der Konzentrierungszone eine Korn-grössenverteilung im Bereich von 10 bis 50 (im aufweist.
3. Materialien nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Schichtdicke der Konzentrierungszone 100 bis 200 um, vorzugsweise etwa 150 um, beträgt.
Es sind eine Reihe von Trägermaterialien im Handel, vorzugsweise Glasplatten oder auch Kunststoff- bzw. Aluminiumfolien, die mit für die Chromatographie, insbesondere für die Dünnschichtchromatographie (DC), geeigneten Schichten überzogen sind. Es ist auch bereits bekannt, derartige Präparationen mit Kombinationsschichten Kieselgel/ Kieselgur auszustatten, wobei die unterschiedlichen Adsorptionseigenschaften der beiden Sorptionsmittel auf einer gemeinsamen Unterlage ausgenutzt werden. Dadurch wird es möglich, Chromatogramme auch dann noch exakt auszuwerten, wenn die Proben ungleichmässig aufgetragen wurden. Bei den bekannten DC-Platten grenzen eine praktisch inaktive Schicht und das chromatographisch aktive Material aneinander. Der eigentlichen Chromatographie schaltet man dadurch eine Konzentrierung vor, die durch die der Chromatographieschicht vorgelagerte Schicht erreicht wird. Der Konzentrierungseffekt beruht auf dem Unterschied im Adsorptionsvermögen der beiden Schichtanteile. Während man für die Chromatographieschicht bevorzugt die bewährten Kieselgelschichten verwendet, wird bisher für die inaktive Zone Kieselgur als Schichtmaterial benutzt. Normales Kieselgel ist für diesen Zweck aufgrund seiner Aktivität nicht geeignet. Die bekannten Präparationen mit Kieselgurschicht besitzen aber erhebliche Mängel, die sich aus den Eigenschaften der Kieselgur ergeben. Kieselgur als Naturprodukt ist in seiner Qualität und Beschaffenheit abhängig von den Lagerstätten und bedarf zudem sehr aufwendiger Reinigungsmethoden, um ein für diesen Zweck brauchbares Material zu erhalten. Die färbenden Bestandteile müssen entfernt werden; sehr häufig ist jedoch nicht ganz zu vermeiden, dass die Chromatographie störende Reste anorganischer Salze oder Schwermetallspuren noch in der Kieselgur verbleiben.
Es wurde nun gefunden, dass man besonders vorteilhaft beschichtete Trägermaterialien für die Schichtchromatographie erhält, wenn man für die Konzentrierungszone ein synthetisch hergestelltes, poröses Siliciumdioxid mittleren Porenvolumens mit sehr hoher Porenweite verwendet. Auf diese Weise wird eine extrem gute Ausbreitung der aufgetragenen Probe in der Konzentrierungszone erreicht, die sich sehr günstig auf die nachfolgende Chromatographie auswirkt.
CH595978A 1977-05-31 1978-05-31 Beschichtetes traegermaterial mit konzentrierungszone fuer die duennschichtchromatographie. CH640145A5 (de)

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