CH646439A5 - Preparation of albumin from plasma - Google Patents
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Description
Die Erfindung betrifft die Herstellung von Albumin aus menschlichem oder tierischem Plasma. Der Weltbedarf an Albumin ist auf Grund neuer Heilverfahren insbesondere auf dem Gebiet der Organtransplantationen im ständigen Steigen begriffen.
Das bekannteste, derzeit weltweit überwiegend angewendete Verfahren zum Fraktionieren von menschlichem Plasma ist das Verfahren von Cohn (E J. Cohn und Mitarbeiter, J. Amer. ehem. Soc. 68,459, 1946 und 72,465,1950). Nach diesem Verfahren wird menschliches Plasma in fünf Fraktionen geteilt, die aus dem Plasma bei verschiedenen pH-Werten mit Äthylalkohol unterschiedlicher Konzentration ausgefällt werden.
Bei diesem Verfahren müssen sämtliche Verfahrensstufen zwecks Vermeidung einer Denaturierung der Proteine bei einer Temperatur von etwa -2° bis -7°C vorgenommen werden. Ferner sind von den fünf, nach diesem Verfahren zu isolierenden Fraktionen, das sind vorwiegend Fibrinogen, ß-und y-Globuline, Lipoproteide, restliche Globuline und schliesslich Albumin, für medizinische Zwecke heute nur das Albumin von überragender Bedeutung. Vor kurzer Zeit wurde noch unspezifisches y-Globulin bei verschiedenen Infektionen injiziert, wogegen derzeit hauptsächlich Hyper-
immunoglobuline für spezifische Krankheiten verwendet werden.
Daraus ist zu ersehen, dass die Herstellung von Albumin nach dem Verfahren von Cohn wegen der zur Ausführung desselben erforderlichen Kühlausrüstung, der Kältebelastung des Personals und der langwierigen Isolierung von vier kaum oder nicht verwendeten Fraktionen umständlich und mit grossen Nachteilen verbunden ist.
Es ist bekannt, dass zur Stabilisierung von Albumin häufig Caprylsäure oder Caprylate eingesetzt werden und in einer neueren Veröffentlichung wird mitgeteilt, dass in einem Plasma, das auf etwa 70°C erhitzt wird, das Albumin durch Caprylate geschützt bleibt, wogegen die meisten Globuline hiebei denaturiert und ausgefällt werden.
Auf dieser Erkenntnis beruht ein vor kurzem veröffentlichtes Verfahren zur Herstellung von Albumin; nach diesem Verfahren wird ein mit 0,004 m Natriumcaprylat stabilisiertes Plasma zusammen mit Äthanol, wobei die Alkoholkonzentration im Plasma 9% beträgt, bei einem pH-Wert von 6,5 unter Rühren erhitzt und nach Erreichung einer Temperatur von 68°C auf 10°C abgekühlt, wonach der pH-Wert auf 4,4 gebracht, das Gemisch zentrifugiert, das Sediment mit einem Puffer bei einem pH-Wert von 4,8 durch Zentrifugieren nachgewaschen wird und schliesslich die das Albumin enthaltenden überstehenden Lösungen zwecks Entfernung von Lipiden und denaturierten Proteinen abfiltriert werden, bevor das Albumin aus dieser Flüssigkeit mit Polyäthylen-glykol ausgefällt wird.
Es wurde bisher angenommen, dass bei diesem Verfahren ein Zusatz von 0,004 m Natriumcaprylat zu dem Plasma zu den besten Resultaten führt, dass dem Plasma ausserdem Äthanol zugesetzt werden muss, um Schwierigkeiten bei der Globulinabtrennung zu vermeiden, dass die nach dem Zentrifugieren erhaltene Albuminlösung filtriert werden muss, und dass schliesslich das Plasma, von dem ausgegangen wird, nicht oder nur leicht hämolytisch sein darf.
Es konnte nunmehr festgestellt werden, dass, wenn von Plasma mit einer Caprylatkonzentration von wenigstens 0,03 m ausgegangen wird, folgende wesentliche Vorteile erzielt werden können: Vor allem wird das Filtrieren der abzentrifugierten Albuminlösung nicht erforderlich, womit eine wesentliche Verfahrensvereinfachung und Kostenersparnis erreicht wird; ferner ist die Verwendung von Äthanol in dem Plasma-Caprylatgemisch, die leicht zu einem Denaturieren von Albumin führen kann, nicht erforderlich und schliesslich kann noch überraschenderweise bei Vorliegen von einer Caprylatkonzentration von zumindest 0,07 m auch aus stark hämolytischem Plasma reines Albumin erhalten werden.
Vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Albuminisolierung aus menschlichem Plasma oder tierischem Plasma, insbesondere Rinderplasma, wobei das Plasma mit einem Caprylat, insbesondere Natrium- oder Kaliumcaprylat, auf eine Temperatur von 65 bis 75°C erhitzt, dann auf eine unter Raumtemperatur gelegene Temperatur von z.B. 10 bis 12°C abgekühlt, und nach Ansäuern zentrifugiert und gewünsch-tenfalls das Sediment nachgewaschen wird, wonach das Albumin aus den überstehenden Lösungen gewonnen wird. Das erfindungsgemässe Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass ein Plasma mit einer zumindest 0,03 m Caprylatkonzentration und einem pH-Wert von 5 bis 8 erhitzt, vor dem Zentrifugieren der pH-Wert auf 3,5 bis 4,5 eingestellt, zum Nachwaschen des nach dem Zentrifugieren erhaltenen Sedimentes vorzugsweise eine Natriumchloridlösung verwendet und das Albumin aus der Albuminlösung direkt z.B. mit Polyäthylenglykol, in an sich bekannter Weise ausgefällt oder durch Vakuumdestillation konzentriert wird.
Gemäss einer bevorzugten Ausführungs weise dieses Ver5
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fahrens wird ausgehend von einem stark hämolytischen Plasma ein Plasma mit einer mindestens 0,07 m, vorzugsweise 0,08 m Caprylatkonzentration eingesetzt. Im allgemeinen ist die einzusetzende Caprylatkonzentration bei hämolytischem Plasma vom Ausmass der Hämolyse abhängig, das in diesem Fall nur bei genügend hoher Caprylatkonzentration (zumindest 0,07 m) eine helle Albuminlösung erhalten wird.
Zu den vorstehend angeführten erfindungsgemäss erzielbaren Vorteilen kommt noch die vorstehend als bevorzugte Ausführungsweise aufgezeigte Waschung des Sedimentes mit Natriumchloridlösung, die, verglichen mit der bekannten Waschung mit einem den pH-Wert der Lösung auf 4,8 einstellenden Puffer, zeit- und kostensparend ist.
Von ganz besonderer wirtschaftlicher und medizinischer Bedeutung ist, dass erfindungsgemäss Albumin erstmalig nach einem einfachen Verfahren aus hämolytischem, auch stark hämolytischen Plasma erhalten werden kann. Es kann erfindungsgemäss sogar ein stark hämolytisches Plasma mit geringer Proteinkonzentration, wie z.B. eine Nachwaschflüs-5 sigkeit von Erythrocyten verarbeitet werden, wenn man die Caprylatkonzentration auf mindestens 0,07 m, vorzugsweise auf 0,08 m anhebt.
In der Figur sind bevorzugte Ausführungsweisen des erfin-dungsgemässen Verfahrens schematisch angezeigt.
io Ein Zusatz von 0,04 Mol Natriumcaprylat entspricht 0,664 g/100g.
Bei kleineren Ansätzen wird das das Caprylat enthaltende Plasma auf die Temperatur von 73°C in etwa 11 Minuten gebracht, wonach 15 min bei dieser Temperatur gehalten 15 wird. Das Abkühlen kann mit Fliess wasser und die Einstellung des pH-Wertes mit Salzsäure vorgenommen werden.
B
1 Blatt Zeichnungen
Claims (10)
1. Verfahren zur Albuminisolierung aus menschlichem oder tierischem Plasma, wobei das Plasma mit einem Caprylat auf eine Temperatur von 65-75°C erhitzt, auf eine unter Raumtemperatur liegende Temperatur abgekühlt, nach Ansäuern zentrifugiert wird, wonach das Albumin aus den überstehenden Lösungen gewonnen wird, dadurch gekennzeichnet, dass man Plasma mit einer Caprylatkonzentration von mindestens 0,03 m und einem pH-Wert von 5 bis 8 erhitzt, vor dem Zentrifugieren den pH-Wert auf 3,5 bis 4,5 einstellt und das Albumin aus der Albuminlösung direkt ausfällt oder durch Vakuumdestillation konzentriert.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man Natrium- oder Kaliumcaprylat verwendet.
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PATENTANSPRÜCHE
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass man nach dem Erhitzen auf 10 bis 12°C abkühlt.
4. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass man nach dem Zentrifugieren das Sediment, vorzugsweise mit einer Natriumchloridlösung, nachwäscht.
5. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass man das Albumin mit Poly-äthylenglykol ausfällt.
6. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass man ein stark hämolytisches Plasma mit einer Caprylatkonzentration von mindestens 0,07 verwendet.
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass man ein stark hämolytisches Plasma mit einer Caprylatkonzentration von 0,08 m verwendet.
8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass man ein nicht hämolytisches Plasma mit einer Caprylatkonzentration von 0,4 m verwendet.
9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass man das Plasma mit dem Caprylat bei einem pH-Wert von 6,5 bis 8 erhitzt.
10. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass man das Plasma mit dem Caprylat auf 70 bis 75°C, vorzugsweise 73°C, erhitzt.
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