CH679209A5 - New neutral glyco-sphingolipid derivs. - Google Patents

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CH679209A5
CH679209A5 CH6493/83A CH649383A CH679209A5 CH 679209 A5 CH679209 A5 CH 679209A5 CH 6493/83 A CH6493/83 A CH 6493/83A CH 649383 A CH649383 A CH 649383A CH 679209 A5 CH679209 A5 CH 679209A5
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acid
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CH6493/83A
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Roland Dr Tschannen
Wolfgang Prof Dr Fraefel
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Solco Basel Ag
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Description


  
 



  Bei den bisher bekannten, im menschlichen Organismus vorkommenden Lipiden unterscheidet man zwei Gruppen: die humoralen, nicht strukturgebundenen Lipide und solche, welche Bestandteile von Zellstrukturen sind. 



  Zu den humoralen Lipiden, welche bei höheren Organismen eine biologische Funktion ausüben, gehören beispielsweise Steroidhormone und Prostaglandine. Letztere spielen bei entzündlichen Reaktionen der Gewebe eine Rolle. 



  Die strukturgebundenen Lipide spielen, neben der Energiespeicher-Funktion, vor allem in den Zellstrukturen, welche verschiedene Kompartimente der Zellen trennen, eine wichtige Rolle. In zunehmendem Mass wird erkannt, wie einzelne Lipide die Signalübertragung durch diese Membranen, z.B. durch die Veränderung der Membranfluidität (laterale Diffusionsgeschwindigkeit der Membranlipide) beeinflussen und steuern können. Im Verlauf eines Teilungszyklus der Zellen ändern sich die Membranzusammensetzung und damit die physikalischen Eigenschaften kontinuierlich. Als Komponenten dieser Membranen gelten vor allem Phospholipide, Sterine und Glykosphingolipide. 



  Die Glykosphingolipide sind Abkömmlinge der Ceramide, welche aus einem Aminodiol wie das Sphingosin 
EMI1.1
 



  und einem langkettigen Fettsäurerest (RCO-) bestehen und der folgenden allgemeinen Formel entsprechen: 
EMI2.1
 



  An die mit * bezeichnete Hydroxylgruppe der Ceramide ist ein Kohlehydratanteil gebunden, welcher aus 1 bis 20 oder sogar mehr Zuckereinheiten bestehen kann. 



  Je nach der Natur des Kohlehydratanteils fallen die Glykosphingolipide in zwei Hauptklassen. Bei Verknüpfung des Ceramids mit einem oder mehreren Monosacchariden sind es die neutralen Glykosphingolipide - auch Cerebroside genannt, während die Verknüpfung mit einem Oligosaccharid, welches durch Acylneuraminsäuren (auch Sialinsäuren genannt) substituiert ist, die sauren Glykosphingolipide - auch Ganglioside genannt - ergibt. Letzteren werden Rezeptorfunktionen, z.B. für Viren und Toxine zugeschrieben; ferner sollen sie eine neuro-regenerative Wirkung haben. 



  Dieser Stand der Technik wird insbesondere durch folgende Abhandlungen veranschaulicht:
 - K. Jungermann und H. Möhler: Biochemie, Springer-Verlag, Berlin Heidelberg New York 1980, 448-452;
 - S. Hakomori, Annual Review of Biochemistry 52 (1981), 733-764. 



  Bei den eigentlichen, aus dem Hirn stammenden Cerebrosiden besteht die Fettsäurekomponente meistens aus einer C24-Carbonsäure, welche eine Hydroxylgruppe in  alpha -Stellung oder eine Doppelbindung tragen kann. Beispielsweise findet sich im Kerasin die Lignocerinsäure C24H48O2, im Nervon die Nervonsäure C24H46O2, im Cerebron oder Phrenosin die Cerebronsäure C24H48O2 und im Hydroxynervon die Hydroxynervonsäure C24H46O3. In diesen und in den meisten Cerebrosiden besteht der Kohlehydratanteil aus 1 Mol Galaktose. 



  In neuerer Zeit sind weitere neutrale Glykosphingolipide entdeckt worden, welche eine Fettsäurekomponente mit kürzerer aliphatischer Kette und einen aus mehreren Zuckereinheiten bestehenden Kohlehydratanteil aufweisen. Diese Verbindungen sind aber nicht im Gehirn, sondern in anderen Organen, beispielsweise im Darm, in der Milz, in der Leber und in den Erythrozyten, gefunden worden, weshalb der Name Cerebroside nicht mehr oder nur für die zuvor erwähnte Gruppe verwendet werden sollte. 



  Überraschenderweise wurde nun eine neue Gruppe der neutralen Glykosphingolipide gefunden, welche sich gegenüber den oben erwähnten, bereits bekannten Verbindungen durch eine andere Fettsäurekomponente und/oder einen anderen Kohlehydratanteil, nämlich 1 Mol D-Glukose, auszeichnen. Diese neue chemische Struktur wiederspiegelt sich in einer bei den Glykosphingolipiden bisher ebenfalls unbekannten wundheilungsfördernden bzw. einer zell- und geweberegenerierenden Wirkung. 



  Diese Verbindungen lassen sich durch folgende Formel wiedergeben: 
EMI4.1
 



  in welcher R<1> den Acylrest der Myristin-, Palmitin- oder Stearinsäure oder die entsprechenden Acylreste mit einer Hydroxylgruppe in  alpha -Stellung oder mit einer oder zwei Doppelbindungen in cis-Konfiguration und R2 den Pentadecanyl- oder Heptadecanylrest oder die entsprechenden C15- und C17-Reste mit einer, zwei oder drei Doppelbindungen, von welchen jeweils eine in 1,2-Stellung sitzt und trans-Konfiguration aufweist, die andere oder anderen, wenn vorhanden, cis-Konfiguration aufweisen, bedeutet. 



  Die chemische Struktur ist im Kohlehydratanteil homogen; dennoch ist die Vielfalt der wundheilungsfördernden Glukosphingolipide bemerkenswert. Dabei ist jedoch zu beachten, dass diese Vielfalt alleine durch Variation des Lipidanteils zustandekommt. Das erscheint biologisch sinnvoll, denn hauptsächlich die aus einer Membran nach aussen exponierten Teile eines Moleküls sind für die biologische Aktivität bestimmend. Die Fluidität von Membranen wird z.B. von Glukosphingolipiden beeinflusst, indem das Amidproton des Ceramids mit den Phosphatgruppen von Phospholipiden in Wechselwirkung treten kann und somit einer Lipidmembran mehr Stabilität verleiht als sie nur durch eine Phospholipid/Steroid-Wechselwirkung allein zustande kommen kann. 



  Als Quelle für die Glukosphingolipide eignen sich  Organe und Körperflüssigkeiten von Säugetieren, z.B. Herz, Lunge, Muskeln, Milz, Eingeweide und Blut, vorzugsweise jedoch letzteres. Dabei ist zu beachten, dass dieses Ausgangsmaterial zur Anreicherung des Glukosphingolipids einer Autolyse unterworfen wird, wobei aber schnellwachsende Mikroorganismen zuerst entfernt, abgetötet oder zumindest deren Wachstum durch Zugabe von bakteriostatisch wirkenden Mitteln verhindert werden muss. Im Verlaufe dieser Autolyse werden durch nicht gesteuerte Enzymaktivitäten, wie z.B. Hydrolyse, längere Zuckerketten bis auf das beschriebene Grundgerüst abgebaut, so dass die Anwendung der Autolyse zu einer wesentlich höheren Ausbeute an den Glukosphingolipiden führt. 



  Die Verbindungen entfalten in vivo eine fördernde Wirkung auf die Zell- und Geweberegeneration. Diese Wirkung lässt sich auch in vitro, mit Hilfe von Zellkulturen, nachweisen. Wird nämlich in einer Zellkultur, beispielsweise eine Fibroblastenkultur, vorerst die Teilungsrate durch Einwirkung eines schädigenden Agens künstlich herabgesetzt und wird die Kultur danach mit den Verbindungen behandelt, so wird die Teilungsrate in kurzer Zeit wieder auf einen normalen, mit jenem einer gesunden, unbeschädigten Kultur vergleichbaren oder identischen Wert gebracht. Dieselbe Behandlung einer parallel geführten, aber gesunden Zellkultur bewirkt hingegen keine Veränderung der Teilungsrate. Es handelt sich also dabei nicht etwa um eine blosse mitotische Wirkung. 



   Infolge der beschriebenen fördernden Wirkung auf die Regenerationsmechanismen geschädigter Zellen eignen sich die Verbindungen für eine therapeutische Anwendung bei Wunden jeglicher Genese, insbesondere bei schlecht oder langsam heilenden Wunden oder Ulzerationen. In der Tat führen sie insbesondere bei topischer Anwendung auf Wunden, wie  Ulcus cruris, diabetischer Gangrän, Strahlenschäden, Verbrennungen und Hauttransplantationen zur Bildung von gesundem, gut durchblutetem neuen Gewebe ohne störende Narben. 



  Die beschriebenen Glukosphingolipide besitzen die gleiche wundheilungsfördernde Aktivität, ob sie nun in einer angereicherten Fraktion oder in gereinigter Form appliziert werden. 



  Im Tierversuch kann die erwähnte Heilwirkung wie folgt gezeigt werden: 


 Versuch 1 
 



  Ratten werden narkotisiert und die Fellhaare werden ihnen entfernt. Durch flaches Auflegen einer Metallscheibe von 2 cm Durchmesser und einer Temperatur von 270 DEG C während 17 Sekunden wird beidseitig am Rumpf eine Verbrennungswunde verursacht. Die an Glukosphingolipiden angereicherte Fraktion oder die gemischten, im Lipidanteil heterogenen Glukosphingolipide werden in eine Geléegrundlage eingearbeitet und diese wird täglich zweimal auf die Wunde gestrichen. Es wird die Dauer bis zur Endabheilung der Wunden gemessen. Gelées, welche die Glukosphingolipide enthalten, ergeben gegenüber der Kontrollgruppe eine Verkürzung der Abheilungsdauer um bis zu 21%. 


 Versuch 2 
 



  An Minipigs werden dorsal je vier Verbrennungswunden wie in Versuch 1 beschrieben und mit einem Hohlzylinder-Bohrer 4 Stanzwunden mit einem Durchmesser von 2,5 cm gesetzt. Die Wirkstoffe werden in eine Geléegrundlage eingearbeitet und die Wunden werden zweimal täglich mit dem Gelée bestrichen. Die Dauer bis zur Endabheilung wird festgehalten. Die Dauer  bis zur Endabheilung wird durch die Glukosphingolipide um bis zu 18% verkürzt. 


 Versuch 3 
 



  An Minipigs werden, wie in Versuch 1 beschrieben, Verbrennungswunden gesetzt. Nach 6, 12, 18 und 22 Tagen täglicher Wundbehandlung werden aus der Behandlungsgruppe Tiere entfernt und in Narkose getötet. Die Wunden werden ausgeschnitten, halbiert und in 4% gepuffertem Formalin fixiert. Diese Gewebestücke werden zu 4  mu m dicken histologischen Paraffinschnitten verarbeitet. Folgende Parameter werden quantitativ erfasst: 
 
   1. Länge der epithelialisierten Wundoberfläche 
   2. Länge der nicht-epithelialisierten Wundoberfläche 
   3. Länge des Stratum basale der Epidermis 
   4. Fläche der neugebildeten Epidermis 
   5. Fläche von Haarfollikeln und Talgdrüsen 
 



  Die Auswertung der Parameter ergibt, dass die mit Glukosphingolipid-haltigem Gelée behandelten Tiere eine längere epithelialisierte Wundoberfläche und eine kürzere nicht-epithelialisierte Wundoberfläche haben als die mit einer wirkstofflosen Geléegrundlage behandelten Tiere. 


 Versuch 4 
 



  An narkotisierten Ratten werden 1 cm breite und 5 mm tiefe Stanzwunden gesetzt. In diese Wundlöcher werden Viskose-Zellulose-Hohlzylinder-Schwämme eingesetzt. In die innere Aushöhlung der Hohlzylinder werden täglich 100  mu l einer glukosphingolipid-haltigen Lösung mit einem Gehalt an Glukosphingolipiden von 0,1 bis 15  mu g/ml eingespritzt. 16 und 24 Tage nach der Implantation werden die Schwämme entnommen und auf den Gehalt an Hämoglobin, Desoxyribonukleinsäure und Hydroxyprolin untersucht. Die Wunden, welche mit  den Glukosphingolipiden behandelt worden sind, haben einen signifikant höheren Hämoglobin-, DNS- und Hydroxyprolin-Gehalt in den Schwämmen als jene der Kontrolltiere. 


 Versuch 5 
 



  Fibroblasten-Zellkulturen, welche in einem Nährmedium, das mit Bicarbonat und CO2-haltiger Atmosphäre bei pH 7,2 gepuffert ist, gewachsen sind, werden einem neuen Nährmedium ausgesetzt, das kein Bicarbonat enthält und das normaler Atmosphäre ausgesetzt ist, wobei der pH 7,2 durch Zugabe eines geeigneten, nicht-toxischen Puffers, wie 2-[4-(2-Hydroxyäthyl)-piperazin-1-yl]-äthansulfonsäure/NaOH-Lösung (HEPES), stabilisiert wird. Zellen, welche im Nährmedium kein Glukosphingolipid zur Verfügung haben, stellen das Wachstum nahezu ein, während sich Zellen in wirkstoffhaltigem Medium rasch erholen und die gleiche Wachstumsrate erlangen, wie Kontrollkulturen in bicarbonathaltigem Medium. 



  Gemessen wird die Wachstumsrate z.B. nach dreitägiger Glukosphingolipid-Wirkung, indem den Zellen während 5 Stunden <3>H-Thymidin angeboten wird. Die Zellen werden danach durch osmotischen Schock aufgeschlossen und die DNS wird auf einem Diäthylaminoäthyl-Filterpapier zurückgehalten. Die Radioaktivität dieser Filter wird gemessen. 


 Beispiel 1 
 



  Geschlachteten Kälbern wird das Blut entnommen und an Ort und Stelle sogleich mit Äthanol bis zu einer Konzentration von 20% behandelt, worauf die Bakteriostatika Methylparaben und Propylparaben - d.h. p-Hydroxybenzoesäure-methylester und -n-propylester - bis zu einer Konzentration von je 0,02% zugegeben werden. Während drei Tagen wird das Blut dann der Autolyse bei Raumtemperatur überlassen; es erfolgt dabei eine weitgehende Hämolyse und ein teilweiser Abbau von nicht beständigen Be-  standteilen, gleichzeitig werden aus den Membranen Membrankomponenten herausgelöst. Das Autolysat wird nun vom Sediment durch Dekantieren befreit und die überstehende Flüssigkeit wird während drei Tagen statisch oder dynamisch durch eine Membran mit der Ausschlussgrenze 10 000 Daltons dialysiert.

  Bei Anwendung der dynamischen Dialyse werden das Dialysat und das Gegendialysat während drei Tagen im Gegenstromverfahren durch die Dialysemembran gepumpt, so dass immer ein optimales, d.h. möglichst grosses, Konzentrationsgefälle zugunsten der Substanzen mit einem Molekulargewicht unterhalb 10 000 Daltons, besteht. 



  Das Hämodialysat mit einem Trockengewicht von 5-80 mg/ml enthält Glukosphingolipide bis zu einem Gehalt von 15  mu g/ml. 



  1,5 Liter Hämodialysat wird mit dem fünffachen Volumen einer Lösung von Chloroform und Methanol im Verhältnis 2:1 während 2 Stunden heftig vermischt. Die Phasen werden getrennt und die organische Phase wird in einem Rotationsverdampfer unter Vakuum getrocknet. Die trockene Substanz wird in 1,5 Liter Wasser gelöst und der Extraktionsvorgang wird weitere zwei Mal in gleicher Weise wiederholt. Das resultierende trockene Material (1,5 bis 5 g) wird in 20 ml Chloroform: Methanol = 2:1 gelöst und auf eine Kieselgelsäule, welche 1 cm Durchmesser hat und 60 cm lang ist, aufgetragen. Die Kieselgelsäule wurde vorher in Hexan äquilibriert. Nach der Probenauftragung wird die Säule während 2 Stunden mit Hexan gespült mit einem Durchfluss von 3 ml/min. Danach wird mit einem linearen Gradienten über 4 Stunden von 100% Hexan noch 80% Hexan/20% Isopropanol mit 2 ml/min. Durchfluss eluiert.

   Die Glukosphingolipide werden bei 19% bis 20% Isopropanol eluiert. 


 Beispiel 2 
 



  Die gemäss dem Beispiel 1 gereinigten Glukosphingolipide werden getrocknet und in 1 ml Chloroform: Methanol = 2:1 gelöst. Von dieser Lösung werden 20  mu l in einem Hochdruck-Flüssigchromatographen mit einer C18-Umkehrphasen-Säule eingespritzt und mit 2 ml/min. 98% Methanol/2% Wasser eluiert. 



  Die Glukosphingolipide werden mit diesem Verfahren anhand des unterschiedlichen Lipidanteils aufgetrennt. Die Absorption des Eluates wird bei 206 nm gemessen. Es werden dabei mindestens 6 verschiedene Glukosphingolipid-Gruppen festgestellt. 


 Strukturaufklärung 
 



  a) Die gemäss Beispiel 1 gereinigten Glukosphingolipide werden im Rotationsverdampfer getrocknet und in 5 ml 1-normaler Salzsäure in 80% Methanol gelöst. Die Lösung wird in einem stabilen verschlossenen Röhrchen während 18 Stunden auf 70 DEG C erhitzt. Die Glukosphingolipide werden dabei in die Komponenten Fettsäuren, Sphingosine und Glukose hydrolysiert. 



  Das saure abgekühlte Hydrolysat wird 3 mal mit je 10 ml Diäthyläther intensiv gemischt und die organische Phase jeweils entfernt. Die Ätherphasen werden vereinigt, unter Stickstoffatmosphäre getrocknet und in einem kleinen Volumen Chloroform/Methanol gelöst. 



  Diese Lösung wird mit p-Brom-phenacylbromid verestert und das Produkt in einem Hochdruckflüssigchromatographen mit einer C-18-Umkehrphasen-Säule injiziert. Die Säule (25 cm x 0,4 cm) wird mit 1 ml/min. Methanol: Acetoni tril: Wasser = 82:9:9 eluiert und die Absorption des Eluates bei 254 nm wird gemessen. Ein Vergleich der Retentionszeiten der eluierten Substanzen mit denjenigen von käuflichen Fettsäuren, welche in gleicher Weise mit p-Bromphenacylbromid verestert wurden, ergibt, dass die ursprünglich an das Glukosphingolipid gebundenen Fettsäuren folgende Moleküle sind: 
<tb><TABLE> Columns=2 
<tb> <SEP>Myristinsäure C14H28O2 
<tb> <SEP>Palmitinsäure C16H32O2 <SEP>Palmitoleinsäure C16H30O2 
<tb> <SEP>Stearinsäure C18H36O2 <SEP>\lsäure C18H34O2 
<tb> <SEP>Linolsäure C18H32O2 
<tb> <SEP> alpha -Hydroxypalmitinsäure C16H32O3 
<tb> <SEP> alpha -Hydroxystearinsäure C18H36O3 
<tb></TABLE> 



  b) Die bei der Hydrolyse gemäss Abschnitt (a) verbleibende wässrige Phase wird mit 0,2 M Natriumboratpuffer auf pH 8,5 eingestellt und in gleicher Weise 3 mal mit je 10 ml Diäthyläther extrahiert. Die gesammelten Ätherphasen werden vereinigt und unter Stickstoffatmosphäre auf 1 ml eingeengt. Dazu wird 1 ml einer Lösung von 1 mg/ml Fluorescamin in Diäthyläther gegeben. Das Fluorescamin bindet die durch die Hydrolyse freigesetzte Aminogruppe der Sphingosine und ergibt ein Produkt, welches durch Anregung bei 380 nm bei 480 nm fluoresziert. 



  10  mu l dieser Lösung werden in einen Hochdruckflüssig-Chromographen mit einer C18-Umkehrphasen-Säule eingespritzt. Die Säule wird mit einem linearen Gradienten von 60/40 Methanol: Wasser bis 100% Methanol, 1 ml/min während 15 Minuten, eluiert und die Fluoreszenz des Eluates bei 380 nm Exitationswellenlänge und 480 nm Emissionswellenlänge gemessen. 



  Es werden peaks festgestellt, deren Retentionszeiten den Sphingosinen mit folgenden aliphatischen Ketten entsprechen: 
<tb><TABLE> Columns=3 
<tb> <SEP>C18-Kette <SEP>4-Hydroxy-C18-Kette 
<tb> <SEP>C20-Kette <SEP>4-Hydroxy-C20-Kette 
<tb> <SEP>C18-Kette mit 2 Doppelbindungen 
<tb> <SEP>C20-Kette, gesättigt (Phytosphingosin) 
<tb></TABLE> 



  c) Die verbleibende wässrige Phase aus den Abschnitten (a) und (b) wird mit 0,3 m Triäthanolamin-Puffer auf pH 7,5 eingestellt. Zu dieser Lösung werden 6,8  mu g/ml Hexokinase (1,0 Einheit/ml), 10 mM Adenosintriphosphat, 6,8,  mu g/ml Glukose-6-Phosphat-Dehydrogenase (1,0 Einheit/ml) und 0,8 mM Nicotinsäureamid-adenin-dinucleotid-phosphat (NADP) gegeben. Nach 10-minütiger Inkubation wird die Absorption bei 340 nm gemessen. Dieser Wert ist ein Mass für die vorhandene Glukosemenge. 


 Charakterisierung 
 



  a) Von den gemäss Beispiel 1 gereinigten Glukosphingolipiden werden 5-50  mu g auf eine Kieselgel-Dünnschichtplatte punktförmig aufgetragen. Die Platte wird in Chloroform: Methanol: Wasser = 85:14:1 entwickelt und dann getrocknet. Daraufhin wird sie um 90 DEG  gewendet in einem neuen Fliessmittel, nämlich 90% Ameisensäure: Methanol: Chloroform = 12:18:90 entwickelt. Die Dünnschicht-Platte wird nach dem Trocknen mit einer Lösung von 0,1% Orcinol, 2 m H2SO4 und 50%igem Äthanol besprüht und dann während 2 bis 10 Minuten bei 120 DEG C getrocknet. Die Glukosphingolipide erscheinen als violettblauer Fleck bei RfI / RfII = 0,20 / 0,42. 



  b) 1 mg der nach Beispiel 1 gereinigten Glukosphingolipide wird in 0,5 ml Dimethylsulfoxid gelöst. In einen Protonen-Kernresonanz-Spektrometer werden die chemischen Verschiebungen bei einer Anregung mit 360 MHz gemessen. Das Spektrum ergibt folgende, für Glukosphingolipide charakteri stische funktionelle Gruppen: 
<tb><TABLE> Columns=2 
<tb>Title: Tabelle I 
<tb>Head Col 01 AL=L: Proton(en) 
<tb>Head Col 02 AL=L:  delta  (ppm) 
<tb> <SEP>Amidproton von Ceramid <SEP>7,5 
<tb> <SEP>Olefinische Protonen <SEP>5,4-5,6 
<tb> <SEP>1-H der Glukose <SEP>4,1 
<tb> <SEP>Methylengruppen <SEP>1,2 
<tb> <SEP>terminale Methylgruppen <SEP>0,85 
<tb></TABLE> 



  c) Eine Lösung von 5 mg/ml der nach Beispiel 1 gereinigten Glukosphingolipide wird in Chloroform:Methanol = 2:1 gelöst und ein Teil dieser Lösung wird auf den Probenträgerdraht eines Felddesorptions-Massenspektrometers gebracht. Das Massenspektrum wird unter folgenden Bedingungen aufgenommen:
 Gerät: MAT 212
 Beschleunigungsspannung: + 3 kV
 Kathoden-Potential: - 5,2 kV
 Ionenquellen-Temperatur: 90 DEG C
 Emitter-Heizstrom: 23-26 mA 



  Es werden peaks mit folgenden Massenzahlen festgestellt: 
<tb><TABLE> Columns=4 
<tb> 
<tb>Title: Tabelle II 
<tb>Head Col 01 AL=L: Fettsäuren 
<tb>Head Col 02 AL=L: Sphingosin 
<tb>Head Col 03 AL=L: Doppel
bindung(en) 
<tb>Head Col 04 AL=L: Massenzahl 
<tb> <SEP>C14 <SEP>C18 <SEP>1 <SEP>671 
<tb> <SEP>C16 <SEP>C18 <SEP>1 <SEP>699 
<tb> <SEP>C18 <SEP>C18 <SEP>1 <SEP>727 
<tb> <SEP>C20 <SEP>C18 <SEP>1 <SEP>755 
<tb> <SEP>C14 <SEP>C20 <SEP>1 <SEP>699 
<tb> <SEP>C16 <SEP>C20 <SEP>1 <SEP>727 
<tb> <SEP>C18 <SEP>C20 <SEP>1 <SEP>755 
<tb> <SEP>C20 <SEP>C20 <SEP>1 <SEP>783 
<tb> <SEP>C14 <SEP>C18 <SEP>2 <SEP>669 
<tb> <SEP>C16 <SEP>C18 <SEP>2 <SEP>697 
<tb> <SEP>C18 <SEP>C18 <SEP>2 <SEP>725 
<tb> <SEP>C20 <SEP>C18 <SEP>2 <SEP>753 
<tb> <SEP>C14 <SEP>C20 <SEP>2 <SEP>697 
<tb> <SEP>C16 <SEP>C20 <SEP>2 <SEP>725 
<tb> <SEP>C18 <SEP>C20 <SEP>2 <SEP>753 
<tb> <SEP>C20 <SEP>C20 <SEP>2 <SEP>781 
<tb> 

   <SEP>C14 <SEP>C18 <SEP>3 <SEP>667 
<tb> <SEP>C16 <SEP>C18 <SEP>3 <SEP>695 
<tb> <SEP>C18 <SEP>C18 <SEP>3 <SEP>723 
<tb> <SEP>C20 <SEP>C18 <SEP>3 <SEP>751 
<tb> <SEP>C14 <SEP>C20 <SEP>3 <SEP>695 
<tb> <SEP>C16 <SEP>C20 <SEP>3 <SEP>723 
<tb> <SEP>C18 <SEP>C20 <SEP>3 <SEP>751 
<tb> <SEP>C20 <SEP>C20 <SEP>3 <SEP>679 
<tb> <SEP>C14 <SEP>C18 <SEP>0 <SEP>673 
<tb> <SEP>C16 <SEP>C18 <SEP>0 <SEP>701 
<tb> <SEP>C18 <SEP>C18 <SEP>0 <SEP>729 
<tb> <SEP>C20 <SEP>C18 <SEP>0 <SEP>757 
<tb> <SEP>C14 <SEP>C20 <SEP>0 <SEP>701 
<tb> <SEP>C16 <SEP>C20 <SEP>0 <SEP>729 
<tb> <SEP>C18 <SEP>C20 <SEP>0 <SEP>757 
<tb> <SEP>C20 <SEP>C20 <SEP>0 <SEP>785 
<tb> <SEP>C14, -OH <SEP>C18 <SEP>0 <SEP>687 
<tb> <SEP>C16, -OH <SEP>C18 <SEP>0 <SEP>715 
<tb> <SEP>C18, -OH <SEP>C18 <SEP>0 <SEP>743 
<tb> <SEP>C20, -OH <SEP>C18 <SEP>0 <SEP>771 
<tb> <SEP>C14, -OH <SEP>C20 <SEP>0 <SEP>715 
<tb> <SEP>C16,

   -OH <SEP>C20 <SEP>0 <SEP>743 
<tb> <SEP>C18, -OH <SEP>C20 <SEP>0 <SEP>771 
<tb> <SEP>C20, -OH <SEP>C20 <SEP>0 <SEP>799 
<tb></TABLE>

Claims (2)

1. Als wundheilungsfördernde bzw. zell- und geweberegenerierende Stoffe die Verbindungen der Formel: EMI14.1 in welcher R<1> den Acylrest der Myristin-, Palmitin- oder Stearinsäure oder die entsprechenden Acylreste mit einer Hydroxylgruppe in alpha -Stellung oder mit einer oder zwei Doppelbindungen in cis-Konfiguration und R2 den Pentadecanyl- oder Heptadecanylrest oder die entsprechenden C15- und C17-Reste mit einer, zwei oder drei Doppelbindungen, von welchen jeweils eine in 1,2-Stellung sitzt und trans-Konfiguration aufweist, die andere oder anderen, wenn vorhanden, cis-Konfiguration aufweisen, bedeutet.
2. Pharmazeutische Zubereitung zur Behandlung von Wunden, insbesondere Ulcus cruris, diabetische Gangrän, Strahlenschäden, Verbrennungen und Hauttransplantationen, dadurch gekennzeichnet, dass sie als Wirkstoff eine Verbindung der Formel I gemäss Anspruch 1 enthält.
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