CH685325A5

CH685325A5 - Ultramikroemulsionen aus spontan dispergierbaren Konzentraten mit schwer löslichen Carotinen.

Info

Publication number: CH685325A5
Application number: CH19494A
Authority: CH
Inventors: Carl Dr Eugster; Conrad Hans Prof Dr Eugster; Walter Dr Haldemann; Giorgio Prof Dr Rivara
Original assignee: Marigen Sa
Priority date: 1994-01-04
Filing date: 1994-01-04
Publication date: 1995-06-15
Also published as: WO1995018605A1; EP0719136A1

Description

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Beschreibung

Die vorliegende Erfindung betrifft Ultramikroemulsionen aus spontan dispergierbaren Konzentraten mit schwer löslichen Carotinen, ihre Zusammensetzung, sowie ihre Verwendung als Mittel zur Herstellung von Präparaten mit verbesserter Bioverfügbarkeit für die Behandlung von Tumoren, Psoriasis und Ekzemen.

Ausgewählte, in Wasser schwer lösliche Carotine haben überraschenderweise eine sehr gute Wirkung gegen Tumore, Psoriasis und Ekzeme, insbesondere dann, wenn sie in spontan dispergierbare Konzentrate eingearbeitet worden sind, welche mit Wasser, Glucoselösung oder physiologischer Kochsalzlösung verdünnt thermodynamisch stabile Ultramikroemulsionen ergeben mit Mizellen, die einen hydrodynamischen Radius im untersten Nanometerbereich aufweisen. (Messungen ausgeführt mit dynamischer, d.h. quasielastischer Lichtstreuung und stark verbesserter Laserdetektion haben Grössenordnun-gen aufgezeigt von einheitlich 1,5-3 nm.)

BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Die für die Einarbeitung in die erfindungsgemässen Konzentrate ausgewählten Carotine haben die Formeln (I) bis (XIX):

h2oh

(I)

ß-Apo-12-carotin-12'-ol

Totalsynthese: R. Rüegg et al., Helv. Chim. Acta 42. 847-864 (1959)

ch2oh

(ii)

ß-Apo-10-carotin-10'-ol

Totalsynthese: R. Rüegg et al., Helv. Chim. Acta 42. 847-864 (1959)

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ß-Apo-8'-carotin-8'-ol

Totalsynthese: R. Rüegg et al., Helv. Chim. Acta 42, 847-864 (1959)

(IV)

ß-Apo-6'-carotin-6'-ol

Totalsynthese: R. Rüegg et al., Helv. Chim. Acta 42, 847-864 (1959)

(V)

ß-Apo-4'-carotin-4'-ol

Totalsynthese: R. Rüegg et al., Helv. Chim. Acta 42, 847-864 (1959)

(VI)

ß-Apo-2'-carotin-2'-ol

Totalsynthese: R. Rüegg et ai., Helv. Chim. Acta 42, 847-864 (1959)

ch3

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AZAFRINOL (5R, 6R)-5,6-Dihydroxy-5,6-dihydro-10'-apo-carotin-10'-ol

Totalsynthese: W. Eschenmoser und C.H. Eugster, Helv. Chim. Acta SI, 822 (1978). Merck-Index 11.911

(VIII)

ß-CITRAUROL; ß-Citraurinol

Synthese: H. Pfander et al., Helv. Chim. Acta §2. 716-727, (1980)

(IX)

ß-CITRAURIN; ß-Citraurinin, Apo-2-Zeaxanthinal, (3R)-3-Hydroxy-8'-apo-ß-carotin-8'-al

(X)

(3R)-ß,ß-CAROTIN-3-ol; CRYPTOXANTHIN, Cryptoxanthol, Caricaxanthin, Hydroxy-ß-carotin, ß-Caro-tin-3-ol, Physoxanthin-neo-ß-cryptoxanthin;

Merck-Index 11.2612

Total-Synthese: Isler et al., Helv. Chim. Acta 4Q, 456-467 (1957),

Ali-trans-Cryptoxanthin. Smp. 158-159°C

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(XI)

ß,ß-Carotin-4-ol; ISOZEAXANTHIN; 4-Hydroxy-ß-carotin; Myxoxanthol; Aphanol. Synthesen: J. D. Surmatis et al., Helv. Chim. Acta 52, 974-990 (1970).

F. J. Petracek und L. Zechmeister, J. Am. Chem. Soc. 78, 3188 (1956).

R. Entschel und P. Karrer, Helv. Chim. Acta 41, 983 (1958).

(XII)

(3R, 3R')-ß,ß-CAROTIN-3,3'-diol; ZEAXANTHIN, ZEAXANTHOL, Anchovyxanthin. Smp. 207°C (Zechmeister, Kuhn). Merck-Index 11.10019 Synthesen: R. Buchecker und C. H. Eugster, Helv. Chim. Acta SS, 2531 (1980).

O. Isler et al., Helv. Chim. Acta 40, 456 (1957). O. Isler et al., Helv. Chim. Acta 39, 2041 (1956). E. Widmer et al., Helv. Chim. Acta S5, 958 (1982)

oh

(XIII)

ß,ß-CAROTIN-4,4'-diol; ISOZEAXANTHIN, Aphanicol.

Synthesen: O. Isler et al., Helv. Chim. Acta 2S, 449-445 (1956)

A. Haag und C. H. Eugster, Helv. Chim. Acta 65, 1795-1803 (1982)

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(XIV)

(3R, 3'R, 6'R)-ß,e-CAROTIN-3,3'-diol; LUTEIN, XANTHOPHYLL, LUTEOL, CUCURBITAXAN-THIN,3,3'-Dihydroxy-a-carotin. Merck-Index 11.9972

Synthese: H. Mayer und A. Rüttimann, Helv. Chim. Acta £2, 1451-1455 (1980)

(XV)

(3S, 5R, 6S, 3'S, 5'R, 6'S)-5,6,5',6'-Diepoxy-5,6,5',6'-tetrahydro-ß,ß-CAROTIN-3,3'-diol; VIOLAXAN-THIN, Diepoxy-ZEAXANTHIN, 9-cis-Violaxanthin.

Merck-Index 11.9902

Teilsynthese: P. Karrer et al., Helv. Chim. Acta 2Ü, 300 (1945)

(XVI)

ß-CAROTIN; Carotin, Pseudo-a-carotin; ly-a-carotin-neo-ß-Carotin Synthesenbeispiele:

R. Buchecker; U. Marti; C. H. Eugster, Helv. Chim. Acta fiZ, 2043 (1984)

C. H. Eugster et al., Helv. Chim. Acta 2S, 1378 (1953)

O. Isler et al., Helv. Chim. Acta 22, 1953, 454 (1956)

O. Isler et al., Helv. Chim. Acta 2S. 2041 (1956)

O. Isler et ai., Helv. Chim. Acta 2S> 249 (1956)

O. Isler et al., Ann. Chem. 603, 129 (1957)

O. Isler et al., Helv. Chim. Acta 4Q, 1256 (1957)

P. Karrer et al. Helv. chim. Acta 21. 1055 (1948)

Surmatis et al., J. Org. Chem, 2Ê. 1171 (1961)

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(XVII)

a-CAROTIN, (6'R)-ß-e-Carotin

Synthesebeispiele: R. Buchecker, R. Egli, H. Regel-Wild, Ch. Tscharner,

C. H. Eugster, Helv. Chim. Acta 52, 2899 (1973)

C. H. Eugster, P. Karrer, Helv. Chim. Acta 22, 610 (1955)

C. H. Eugster et al., Helv. Chim. Acta 52, 1729 (1969)

P. Karrer, C. H. Eugster, Helv. Chim. Acta 22, 1952 (1950)

R. Rüegg et al., Helv. Chim. Acta 44. 985 (1961)

Ch. Tscharner, C. H. Eugster, P. Karrer, Helv. Chim. Acta 40, 1676 (1957)

LYCOPIN, y,-^Carotin Synthesebeispiele:

O. Isler et al., Helv. Chim. Acta 3E, 463 (1956)

J. H. Kabbe et al., Am. Chem., 684, 14 (1965)

P. Karrer, C. H. Eugster, E. Tobler, Helv. Chim. Acta, 22, 1349 (1950)

P. S. Manchand et al., J. Chem. Soc., 2019 (196)

Surmatis et al., J. Org. Chem., 22, 2785 (1963)

(XIX)

CANTHAXANTHIN; 4,4'-Diketo-ß-carotin; ß,ß-Carotin-4,4'-dion Synthesebeispiele:

P. Karrer et al., Helv. Chim. Acta 12, 287 (1933)

O. Isler et al., Chimia 12, 89 (1958)

J. D. Surmatis et al., Helv. Chim. Acta 52, 974 (1970)

S. Higgen-Jensen et al., Nature 192. 1168 (1961)

P. Zeller et al., Helv. Chim. Acta 42, 841 (1959)

Die Carotine der Formeln (I) bis (XIX) sind nahezu wasserunlösliche und polymer agglomerierte Verbindungen. Damit die Moleküle dieser Verbindungen aber durch die Membranbarriere der Tumorzellen

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diffundieren und im Innern der Zelle wirksam werden können, müssen derartige Verbindungen vorerst in geeigneter Weise im wässrigen Medium solubilisiert werden. Im Wege der Bildung von thermodyna-misch stabilen Öl-in-Wasser-Ultramikroemulsionen mit Hilfe von besonders ausgewählten Cotensiden oder Lösungsvermittlern einerseits und geeigneten Tensiden anderseits gelingt es, einen optimalen So-lubilisierungsgrad der Carotine zu erzielen.

Alle experimentellen Beobachtungen an dergestalt ausgebildeten Ultramikroemulsionen lassen sich einheitlich durch die Annahme deuten, dass die ausgewählten Tenside und Cotenside als ausgewogenes System genommen in der wässrigen Phase organisierte Aggregate, sog. Mizellen bilden. Sie besitzen mehr oder weniger kugelförmige Gestalt, mit einem hydrodynamischen Radius von 1,5 bis 3 nm. Die Tenside und Hydrotrope (Cotenside) lassen zwischen der äusseren, wässrigen Phase und der inneren, öligen Phase der Mikroemulsion [enthaltend die Carotine der Formeln (I) bis (XIX), gelöst im bio-tensiden Lösungsvermittler] eine Grenzschicht entstehen, wodurch die Mischung dieser beiden Phasen unterbleibt. In der öligen, inneren Phase liegen die Moleküle der Carotine in monomerer oder in oligo-mer agglomerierter Form vor.

Die Mizellen der carotinhaltigen inneren Phase der erfindungsgemässen Ultramikroemulsionen sind an der Grenzschicht mit einem Tensidmantel geschützt, was sie instand setzt, leicht durch die Zellmembran ins Innere der Tumorzelle zu diffundieren. Die Diffusion durch die Plasmamembran von Tumorzellen erfolgt ausschliesslich aufgrund thermischer Molekularbewegungen.

Die Richtung, die ein konkreter Diffusionsvorgang einschlägt, wird vom Konzentrationsunterschied bestimmt, welcher an der Plasmamembran zwischen ausserhalb und innerhalb der Tumorzelle besteht. Die Diffusion verläuft solange entlang dem Konzentrationsgefälle, bis es abgebaut ist. Zwischen der extrazellulären Zone und dem Inneren der einzelnen Tumorzelle wird die Konzentration an Wirksubstanz, bzw. am Wirkstoffsystem («multiple drug system») ausgeglichen, wobei auch verzögerte Abgabeeffekte («slow release effects») auftreten können. Derartige Diffusionsvorgänge verlaufen unabhängig von jeglicher Energiezufuhr. Sie haben keinen Bezug auf die zelluläre Stoffwechselenergie.

Die Diffusiongeschwindigkeit gehorcht dem Fick'schen Gesetz für Diffusionsvorgänge in Richtung eines Konzentrationsgefälles:

— — = -D — GLEICHUNG (A)

dt q dx wobei dm die Menge in Mol der eine Zellmembranoberfläche q (in cm2) durchdringenden Wirkstoffmoleküle pro Zeit dt (in Sekunden) ist. D ist der Diffusionskoeffizient und de der Konzentrationsunterschied über die Distanz dx.

Nach Nernst ist der Diffusionskoeffizient abhängig von der absoluten Temperatur und dem Reibungswiderstand f

R T kT

D = — — = GLEICHUNG (B)

N f f

Der Reibungswiderstand hängt gemäss dem Stoke'schen Gesetz f = 6 k t| r GLEICHUNG (C)

von der Viskosität der diffundierenden Lösung und vom Radius der diffundierenden Partikel ab. Durch Substitution von f mit 6 ïc ti r in der Nernst-Gleichung erhält man die Sutherland-Einstein-Gleichung für den Diffusionskoeffizienten

RT 1 kT

D = = GLEICHUNG (D)

N 6 n r] r 6 it n r worin k die Boltzmann-Konstante darstellt.

Wird bei einem Diffusionsvorgang ein gleichmässiger Konzentrationsabfall in der Membran der de

Tumorzelle angenommen, so kann der Ausdruck

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Ä C

im Diffusionsgesetz durch ersetzt werden. [Konzentrationsunterschied Ac über der Zellmem-

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bran der Dicke x], x ist für eine bestimmte Zellmembran eine konstante Grösse, weshalb man sie zusammen mit dem Diffusionskoeffizienten zu einer neuen Konstanten, dem Permeabilitätskoeffizienten P, vereinigen kann

D

P = — GLEICHUNG (E)

X

dm 1

Der Ausdruck — in der Diffusionsgleichung wird der Flux J genannt und hat die Dimen-

dt q sion Mol pro Sekunde pro cm2. Das negative Vorzeichen auf der rechten Seite der Diffusionsgleichung deutet an, dass der Transport der Wirkstoffmoleküle oder des Wirkstoffsystems in Richtung von der abnehmenden Konzentration weg abläuft.

Es ist somit

RT 1 4 kT 1

J = -FAc = — Äc = — -Ac

Nx 6 i i] r x 6 rc t| r

GLEICHUNG (F)

Aus dieser Gleichung folgt, dass die Geschwindigkeit des Diffusionsvorganges, bzw. die Stärke des Wirkstofftransportes durch die Membran der Tumorzelle bestimmt wird: . 1 : vom Konzentrationsunterschied ac in den beiden Kompartimenten . 2: vom Teilchenradius des diffundierenden Wirkstoffmoleküls oder Wirkstoffsystems . 3: von der Viskosität der diffundierenden wässrigen Lösung (Emulsion)

. 4: von der Temperatur.

Die erfindungsgemäss spontan dispergierbaren Konzentrate enthalten:

0,1 bis 10 Gew.-% einzelner Carotine der Formeln (I) bis (XIX), bzw. Kombinationen solcher Carotine, sowie

0 bis 10 Gew.-% einzelner oder mehrerer pharmazeutischer Wirkstoffe,

0 bis 40 Gew.-% eines als Hydrotrop, bzw. Co-Emulgator dienenden, pharmaverträglichen Lösungsmittels oder Lösungsmittelgemisches,

0,1 bis 90 Gew.-% eines pharmaverträglichen Tensides oder Tensidgemisches,

0 bis 10 Gew.-% eines Vitamins oder Provitamins,

0 bis 10 Gew.-% Trägerstoffe und/oder Verdünnungsmittel.

Unter pharmazeutischen Wirkstoffen sind im vorliegenden Falle alle üblicherweise in der Humanmedizin verwendbaren Wirkstoffe zu verstehen. Hiezu zählen z.B.:

Beta-Blocker

Pindolol [1-(4-lndolyloxy)-3-isopropylamino-2-propanol]

Propanolol [1 -lsopropylamino-3-(1 -naphthyloxy)-2-propanol]

Oxprenolol [1 -(o-Allyloxyphenoxy)-3-isopropylamino-2-propanol]

Metoprolol [Di-{(+-)-1 -(isopropylamino)-3-[p~[2-methoxyäthyl)-phenoxy-2-propanol]-L (+) tartrat}] Labetalol [5-[1-Hydroxy-2{(1-methyl-3-phenylpropyl-aminoäthyl}salicylamid]

Diuretica

Acetazolamid [5-Acetamido-1,3,4-thiadiazol-2-sulfonamid]

Hydrochlorothiazid [6-Chlor-3,4-dihydro-2H-1,2,4-benzothiadiazin-7-sulfonamid-1,1-dioxid]

Chlortalidon [1-Oxo-3-(3-sulfamyl-4-chlorphenyl)-3-hydroxyisoindolin]

Metolazon [7-Chlor-1,2,3,4-tetrahydro-2-methyl-4-oxo-3-o-tolyl-6-chinazolinsulfonamid]

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Schwache Beruhingungsmittel

Diazepam [7-Chlor-1,3-dihydro-1 -methyl-5-phenyl-2H-1,4-benzodiazepin-2-on]

Medazepan [7-Chlor-2,3-dihydro-1 -methyl-5-phenyl-2H-1,4-benzodiazepin-2-on]

Starke Beruhigungsmittel

Sulpirid [N-(1-Äthyl-2-pyrrolidinyl-methyl)-2-methoxy-5-sulfamoylbenzamid]

Muskelentspannende Mittel

Baclofen [ß-(Aminoaethyl)-p-chlorhydrozimtsäure]

Antibiotica

Sulfamethoxazol t5-Methyl-3-sulfanilamido-isoxazol]

Trimethoprim [2,4-Diamino-5-(3,4,5-trimethoxybenzyl)-pyrimidin]

Chloramphenicol [D (-)-threo-2-dichlor-acetamido-1-(4-nitrophenyI)1,3-propandiol]

Cefaclor [3-Chloro-7-D(2-phenyl-glycinamido)-cephalosporansäuremonohydrat]

Cefradin [7-{D-2-Amino-2-(1,4-cyclohexadien-1 -yl)-acetamido}-3-methyl-cephalosporansäure]

Bacampicillin [1-Äthoxycarbonyloxy-aethyl-6-(D-a-aminophenylacetat-amido)-penicillinat]

Minocyclin [7-DiäthyIamino-6-desoxy-6-desmethyltetracycIin]

Sulfadoxin [N-(5,6-Dimethoxy-4-pyrimidinyl)-sulfanilamid]

Sulfamethoxazol [3-Methyl-3-sulfanil-amido-isoxazol]

Sulfisoxazol [3,4-Dimethyl-5-sulfanil-amido-isoxazol]

Sulfadimethoxin [2,4-Dimethoxy-6-sulfanilamido-1,3,diazin]

Dermatologica

Chlorquinaldol [5,7-Dichlor-8-hydroxy-chinaldin]

Crotamiton [N-Crotonyl-N-äthyl-o-toluidin]

Diamthazol [6(-)2-DimethyIamino-äthoxy-(ß-diaethyIamino-)-benzothiazol-dihydrochIorid] Flumethason-pivalat [6a,9-Difluor-11 ß,17,21-trihydroxy-16a-methylpregna-1,4-dien-3,20,dion-21-pivalat] Tretinoin [Vitamin-A-Säure]

Corticosteroide

Cortison [17a-21 ,Dihydroxy-pregn-4-en-3,11,20-trien-21 -acetat]

Prednison [11ß-17,21-Trihydroxy-pregna-1,4-dien-3,20-dion]

Dexamethason [9-Fluor-11 ß,17,21-dihydroxy-16a-methyl-pregna-1,4-dien-3,20-dion] Desoxycorton-acetat [21 -Hydroxy-pregn-4-en-3,20-dion-acetat]

Coronarmittel

Pentaerythrityltetranitrat (PETN)

Nitroglycerin (Glyceryltrinitrat)

Pindolol [1 -(4-lndolyloxy-3-isopropylamino-2-propanol]

Cytostatica

Melphalan [p-Di-(2-chloräthyl)-amino-L-phenylalanin]

Procarbazin [p-(N'-Methyl-hydrazinomethyl)-N-isopropyl-benzamid]

Dactinomycin [Actinomycin D]

Polyöstradiolphosphat

Cyclophosphamid [N,N-bis-(ß-Chloräthyl)-amino-1-oxa-3-aza-2-phosphocyclohexan-2-oxid] Entzündungshemmende Mittel Mefenaminsäure [3-Xylyl-2-aminobenzoesäure]

Dexamethason [9-Fluor-11 ß,17,21-trihydroxy-16a-methyl-pregna-1,4-dien-3,20-dion]

Hydrocortison [17a-Hydroycorticosteron]

Coronardilatoren

Nifedipin [1,4-Dihydro-2,6-dimethyl-4-(o-nitrophenyl)-pyridin-3,5-dicarbonsäure-dimethyiester]

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Isosorbid-dinitrat [1,4;3,6-Dianhydrosorbit-2,5-dinitrat]

Nitroglycerin (Glyceryl-trinitrat)

Dipyramidol [2,6-Bis-(diäthanolamino)-4,8-dipiperidino (5,4-dipyrimidin)]

Periphere Vasodilatoren

Cinepazid [4-(-3,4,5-Trimethoxy-cinnamoyl)-1-piperazin-essigsäurepyrrolidid]

Cyclandelat [3,3,5-Trimethyl-cyclohexylmandelat]

Cinnazarin [1 -trans-Cinnamyl-4-diphenylmethyl-piperazin]

Pentoxyfyllin [3,7-Dimethyl-1 -(5-oxo-hexyl)-xanthin]

Antirythmica

Procainamid [4-Aminobenzoesäure-ß-diäthylaminoäthyiamid]

Disopyramid [4-Diisopropylamino-2-phenyl-2-(2-pyridyf)-butyramid]

Antigichtmittel

Allopurinol [1 H-Pyrazolo-(3,4-d)-pyrimidin-4-ol]

Antiepileptica

Phenytoin {Diphenylhydantoin}; [5,5-Diphenyl-2,4-imidazolidin-dion]

Carbamazepin [5-Carbamoyl-5H-dibenz(b,f)azepin]

Antihistaminica

Chlorphenamin [{3-(p-Chlorphenyl)-3-(2-pyridyl)-propyldimethylamin]

Clemastin {Hydrogenfumarat}; [1 -Methyl-2-{2-(a-methyl-p-chlor-diphenyImethoxy) äthyl}pyrrolidin] Mequitazin [10-(3-Chinuclidinylmethyl) phenothiazin]

Alimemazin [10-(3-Dimethylamino-2-methyl-propyl)-phenothiazin]

Mittel gegen Übelkeit und Schwindel

Domperidon [5-Chlor-1-{1-(3-[2-oxo-1-benzimidazolinyl]-propyl)-4-piperidyl}2-benzimidazolinon] Betahistin [2-{2-Methylaminoäthyl} pyridin]

Metoclopramid [4-Amino-5-chlor-N-(2-diäthylaminoäthyl)-2-methoxybenzamid]

Blutdrucksenkende Mittel

Reserpin [3,4,5-Trimethoxybenzoyl-methylreserpat]

Rescinnamin [3,4,5-Trimethoxy-methylreserpat]

Methyldopa {L-a-Methyldopa}; [L-3-(3,4-Dihydroxyphenyl)-2-methylalanin]

Clomidinhydrochlorid [2,6-Dichlor-N-2-imidazoidinyliden-benzaminhydrochlorid]

Sympathomimetica

Isoproterenol [N-lsopropyl-nor-adrenalin]

Etilefrin [DL-1 -{a-Äthylaminomethyl}-m-hydroxy-benzylalkohol]

Expectorantien

Carbocystein [(S-Carboxymethyl) cystein]

Bromhexin [N-Cyclohexyl-N-methyl-(2-amino-3,5-dibrom-benzyi) amin HCL]

L-Äthylcystein

L-Methylcystein

Orale Antidiabetica

Glibenclamid [N-4-2-(5-Chlor-2-methoxy-benzamido)-äthyl-phenylsulfonyl-N'-cyclohexyl-harnstoff] Tolbutamid [N-(4-Tolylsulfonyl)-N'-n-butyl-harnstoff]

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Cardiovasculäre Mittel Ubidecarenon

Adenosin [6-Amino-9-ß-D-ribo-furanosyl-9H-purin]

Immunsuppressivum

Ciclosporin

Antitumoral wirksame Mittel

Taxol Baccatin Taxusin Taxinin

Verbindungen zur Bekämpfung von Tumoren, Psoriasis und Ekzemen

Ergosta-5,7-dien-3-ol-9-hexadecenoat

(Ergosta-5,7-dienylpalmitoelat)

Ergosta-8,22-dien-3-OI14-methyl-4,9-octadecenoat

(14a-Methylergosta-8,22-dienyloleat)

Lanost-8-en-3-ol-9-octadecenoat

(Dihydrolanosteryl-oleat)

Ergost-5-en-3-ol-9,12,15-octadecatrienoat

(Dihydrobrassicasteryl-Iinolenat)

Ergost-5-en-3-ol-9,12-octadecadienoat

Ergost-5-en-3-ol-9-octadecenoat

(Dihydrobrassicasteryl-oleat)

Ergosta-7,24(28)-dien-3-ol-4-methyl-9-octadecenoat

(Gramisteryl-oleat)

Stigmasta-8,24(28)-dien-3-oI-9,12-octadecadienoat (a7-Avenasteryl-linoleat)

Ergosta-7,24(28)-dien-3-ol-4-methyl-9,12-octadecadienoat (Gramisteryl-Iinoleat)

Stigmast-24(28)-en3-ol-9,12-octadecadienoat

Ergosta-5,22-dien-3-ol-4,23-dimethyl-9-octadecenoat

Ergostan-3-ol-4-methyl-9-octadecenoat

5a-Stigmastan-3-ß-ol-linolenat

5a-Stigmastan-3-ß-ol-oleat

Stigmastan-3-ol-9,12-octadecadienoat

(5a-Stigmastan-3-ß-ol-linoleat)

22-Dihydrospinasteryl-linoleat

Ergosta-5,7,22-trien-3-ol-9,12-octa-decadienoat

(Ergosteryl-Linoleat)

Stigmasta-5,24(28)-dien-3-ol-9-octadecenoat

Stigmasta-5,24(28)-3-oI-9,12-octadecadienoat

Stigmasta-5-en-3-ol-5,8,11,14-eicosatetraenoat

(ß-Sitosteryl-Arachidonat)

Ergost-5-en-3-ol-5,8,11,14-eicosatetraenoat

Stigmasta-7,24(28)-dien-ol-4-methyl-9,12-octadecadienoat

Cholest-5-en-3-ol-(3ß)-9-hexadecenoat

(Cholesteryl-trans-9-hexadecenoat)

Ergost-7-en-3-ol-9,12,15-octadecatrienoat

Ergost-5-en-3-oi-9,12,15-octadecatrienoat

(Campesteryl-Iinolenat)

Ergostan-3-ol-9,12-octaoctadecadienoat

Cholest-7-en-3-ol-9,12-octaoctadecadienoat

Ergosta-5,24-(28)-dien-3-ol-9-hexadecenoat

Cholestan-3-ol-9-hexadecenoat

Ergosta-5,22-dien-3-ol-octadecenoat

(Brassicasteryl-oleat)

Cholest-7-en-3-ol-9-octadecenoat

(Lathosteryl-oleat)

Lanosta-8,24-dien-3-ol-9-octadecenoat

12

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

CH 685 325 A5

(Lanosteryl-oleat)

Stigmasta-5,24(28)-dien-3-ol-9-octadecenoat (Fucosteryl-oleat)

Cholesta-5,22-dien-3-ol-9-octadecenoat

(Desmosteryl-oleat)

Ergost-5-en-3-ol-12-octadecadienoat

(Campesteryl-linoelat)

Ergosta-5,22-dien-3-ol-9-octadecenoat

Ergost-22-en-3-ol-9-hexadecenoat

Cholesta-5,22-dien-3-ol-9-hexadecenoat

Ergosta-5,22-dien-3-ol-9,12-octadecadienoat

(Brassicasteryl-linoleat)

Ergosta-7,24(2ß)-dien-3-ol-9,12-octadecadienoat Stigmasta-5,22-dien-3-oi-9,12,15-octadecatrienoat (Stigmasteryl-linolenat)

Stigmasta-5,22-dien-3-ol-9,12-octadecadienoat (Stigmasteryl-linoleat)

Cholest-5-en-3-ol-(3ß)-5,8,11,14-eicosatetraenoat

Cholest-5-en-3-oi-(3ß)-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoat

Cholest-5-en-3-ol-(3ß)-9,12-octadecadienoat

Cholesta-8,(14),24,dien-3-ol-9-octadecenoat

(Zymosteryi-oleat)

Ergost-5-en-3-ol-9-octadecenoat

(Campesteryi-oleat)

Cholest-5,7,9(11 )-trien-3-ol-9-octadecenoat

(Cholesta-5,7,9(11 ))-trien-3ß-yl-oieat)

Ergosta-5,7,22-trien-3-oi-9-hexadecenoat

(Ergosteryl-9-hexadecenoat)

Cholest-5-en-3-ol-(3ß)-11 -octadecenoat

(Cholesteryi-11-octadecenoat)

Cholest-5-en-3-ol-(3ß)-9,12-octadecadienoat

(Cholesteryi-9,12-octadecadienoat)

Choiest-5-en-3-oi-(3ß)-9-octadecenoat

(Cholesteryl-elaidat)

5a-Stigmasta-7,22-dien-3ß-ol-oleat

(a-Spinasteryi-oieat)

Cholest-5-en-3-ol-(3ß)-9-hexadecenoat

(Cholesteryl-palmitoleat)

Cholestan-3-ol-9,12,15-octadecatrienoat

(Cholestanyl-linolenat)

Cholest-5-en-3-ol-(3ß)-11 -octadecenoat

(Cholesteryi-11-octadecenoat)

Cholesta-5,7-dien-3-ol-9-octadecenoat

Choiesta-5,7-dien-(3ß)-ol-linoieat

(Cholecalciferon-linoleat; Cholecalciol-linoleat)

Ergosta-5,7,22-trien-3-ol-9-octadecenoat

(Ergosteryl-oleat)

Stigmast-5-en-3-ol-9-octadecenoat (ß-Sistosteryl-oleat)

Stigmast-5-en-3-oi-9,12-octadecadienoat (ß-Sistosteryl-linoleat)

Stigmast-5-en-3-ol-9,12,15-octadecatrienoat (ß-Sistosteryl-linolenat)

Cholest-5-en-3-ol-(3ß)-9,12,15-octadecatrienoat

(Cholesteryl-Iinolenat)

Cholestan-3-ol-9-octadecenoat

(Cholestanyl-oleat)

Cholestan-3-ol-9,12-octadecadienoat

(Cholestanyl-linoleat)

Cholest-5-en-3-ol-(3ß)-9-hexadecenoat

(Cholesteryl-9-hexadecenoat)

Cholest-5-en-3-ol-(3ß)-5,8,11,14-eicosatetraenoat

(Cholesteryl-arachidonat)

Cholest-5-en-3-ol-(3ß)-9,12-octadecadienoat

13

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

CH 685 325 A5

(Cholesteryl-linoleat)

Cholest-5-en-3-ol-(3ß)-9-octadecenoat

(Cholesteryl-oleat)

ß-Sitosteryl-10-undecenoat

ß-Sitosteryl-laurat

ß-Sitosteryl-palmitat

Stigmasteryl-undecenoat

Stigmasteryl-Iaurat

Stigmasteryl-palmitat

■y-sitostanyl-oleat

7-Sitostanyl-linolat

7-sitostanyl-linolenat

7-Sitosteryl-oleat

Cholest-5-en-3a-ol-oleat

5-a-Stigmastan-3ß-ol-oleat

5-a-Stigmastan-3ß-ol-linoIenat

ChoIesta-5,7-dien-3ß-ol-linolat

Cholecalciferyl-Iinolenat (Cholecalciol-Iinolenat)

10-a-Ergosta-5,7,22-trien-3ß-oi-linoiat

Stigmast-5-en-3-ol-dodecenoat

(ß-Sitosteryl-2-dodecenoat)

Ergost-5-en-3-ol-dodecenoat

(Campesteryl-2-dodecenoat)

Choiest-7-en-3-ol-dodecenoat

Stigmasta-5,22-dien-3-ol-dodecenoat

(Stigmasteryi-2-dodecenoat)

■y-SitosteryI-2-dodecenoat

ChoIest-5-en-3-ol-10-undecenoat

Cho!est-5-en-3-ol-2-dodecenoat

5-Cholestan-3ß-ol-2-dodecenoat

Ergosta-5,7,22-trien-3-ol-alI-trans-retinat

Ergosta-5,7,22-trien-3-ol-13-cis-retinat

Cholest-5-en-13-cis-retinat

Stigmast-5-en-3-ol-all-trans-retinat

(ß-Sitosteryl-all-trans-retinat)

Stigmast-5-en-3-ol-13-cis-retinat

(ß-Sitosteryl-13-cis-retinat)

Stigmast-5-en-3-ol-azafrinat

Stigmasta-5,22-dien-3-ol-ali-trans-retinat

(Stigmasteryi-ali-trans-retinat)

Stigmasta-5,22-dien-3-oi-13-cis-retinat

(Stigmasteryl-13-cis-retinat)

Stigmasta-5,22-dien-3-o!-arachidonat

Stigmasta-5,22-dien-3-oi-azafrinat

Stigmasta-5,22-dien-3-oi-1,2-dipaimitoyI-giycero-phosphatid

Stigmasta-5,22-dien-3-ol-1,2-dipalmitoyl-glycero-thiophosphatid

Ergosta-5,7,22-trien-3-ol-1,2-dipaimitoyi-glycero-phosphatid

Ergosta-5,7,22-trien-3-ol-crotonat

Ergosta-5,7,22-trien-3-ol-caproylat

Ergosta-5,7,22-trien-3-oi-10-undecenoat

Ergosta-5,7,22-trien-3-oi-2-trans-dodecenoat

Ergosta-5,7,22-trien-3-ol-palmitat

Ergosta-5,7,22-trien-3-ol-oleat

Ergosta-5,7,22-trien-3-ol-linolat

Ergosta-5,7,22-trien-3-oi-iinolenat

Ergosta-5,7,22-trien-3-ol-arachidonat

Ergosta-5,7,22-trien-3-ol-azafrinat

ß-Oestradiol-3,17-di-ali-trans-retinat

ß-Oestradiol-3-benzoat-17-ali-trans-retinat

Cholecalciferyi-caproylat Ergocalciferyl-caproylat Cholecaiciferyi-10-undecenoat Ergocaiciferyi-10-undecenoat

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CH 685 325 A5

Cholecalciferyl-laurat Ergocalciferyl-laurat Cholecalciferyl-palmitat Ergocalciferyl-palmitat

Cholecalciferyl-linolat

E rgocal cif e ry l-l i n o l at

Cholecalciferyl-linolenat

Ergocalciferyl-linolenat

Cholecalciferyl-all-trans-retinat

Ergocalciferyl-all-trans-retinat

Cholecalciferyl-3-ol-1,2 ,-dipalmitoylglycero-phosphatid Cholecalciferyl-3-ol-1,2,-dipalmitoylglycero-thiophosphatid Cholecalciferyl-geranyl-phosphatid Cholecalciferyl-farnesyl-phosphatid

Ergocalciferyl-3-ol-1,2,-dipalmitoyl-glycero-phosphatid Ergocalciferyl-3-ol-1,2,-dipalmitoyl-glycero-thiophosphatid Ergocalciferyl-geranyl-phosphatid Ergocalciferyl-farnesyl-phosphatid

DL-a-T ocopheryl-10-undecenoat DL-a-Tocopheryl-palmitat DL-a-Tocopheryl-all-trans-retinat DL-a-Tocopheryl-13-cis-retinat

Malonsäure-bis-Stigmasterylester

Bernsteinsäure-bis-Stigmasterylester

Glutarsäure-bis-Stigmasteryiester

Adipinsäure-bis-Stigmasterylester

Pimelinsäure-bis-Stigmasterylester

Suberinsäure-bis-Stigmasterylester

Azelainsäure-bis-Stigmasterylester

Sebacinsäure-bis-Stigmasterylester

Azelainsäure-bis-ß-Sitosterylester

Sebacinsäure-bis-ß-Sitosterylester

Azelainsäure-bis-Ergosterylester Sebacinsäure-bis-Ergosterylester Azelainsäure-bis-Cholesterylester Sebacinsäure-bis-Cholesterylester

Maleinsäure-bis-Stigmasterylester

Fumarsäure-bis-Stigmasterylester

Maleinsäure-bis-ß-Sitosterylester

Fumarsäure-bis-ß-Sitosterylester

Maleinsäure-bis-Ergosterylester

Fumarsäure-bis-Ergosterylester

Maleinsäure-bis-Cholesterylester

Fumarsäure-bis-Cholesterylester

Azelainsäure-Calciferyl-diester

Sebacinsäure-Calciferyl-diester

Azelainsäure-Cholecalciferyl-diester

Sebacinsäure-Cholecalciferyl-diester

Azelainsäure-DL-a-Tocopheryl-diester

Sebacinsäure-DL-a-Tocopheryi-diester

Die erfindungsgemäss einzusetzenden Tenside oder Tensidgemische können anionaktiv, kationaktiv, amphoter oder nicht-ionogen sein.

Bevorzugt sind sie amphoter oder nicht-ionogen und haben ein HLB-Verhältnis (d.h. eine «hydro-philic-lipophilic-balance») zwischen 2 und 18; vorzugsweise liegt er zwischen 2 und 6 einerseits und 10 und 15 anderseits. HLB-Werte geben Auskunft über die hydrophilen und lipophilen Eigenschaften eines Emulgators. Vgl. dazu «Hydrophile-Lipophile Balance: History and recent Developments» von Paul Becher im Journal of Dispersion Science and Technology. 5 (1), 81-96 (1984).

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Geeignete anionische Tenside können sowohl sog. wasserlösliche Seifen als auch wasserlösliche synthetische Verbindungen sein.

Als Seifen eignen sich die Alkali-, Erdalkali- oder gegebenenfalls substituierten Ammoniumsalze von höheren Fettsäuren (Ciò bis C22), wie z.B. die natürlichen Na- oder K-Salze der Öl- oder Stearinsäure, oder von natürlichen Fettsäuregemischen, welche sich u.a. aus Kokosnuss- oder Talgöl gewinnen lassen. Ferner sind als Tenside auch die Fettsäure-Methyltaurinsalze, sowie modifizierte und nicht-modifi-zierte Phospholipide zu erwähnen.

Häufiger werden jedoch sogenannte synthetische Tenside verwendet, insbesondere Fettsulfonate, Fettsulfate, sulfonierte Benzimidazol-Derivate oder Alkylarylsulfonate.

Die Fettsulfonate und -sulfate liegen in der Regel als Alkali-, Erdalkali- oder gegebenenfalls substituierte Ammoniumsalze vor und weisen im allgemeinen einen Aikylrest mit 8 bis 22 C-Atomen auf, wobei Alkyl auch den Alkyltei! von Acylresten einschliesst. Beispiele hiefür sind das Na- oder CaSalz der Li-gninsulfosäure, des Dodecylschwefelsäureesters und Sulfonsäuren von Fettalkohol-Äthylenoxyd-Adduk-ten. Die sulfonierten Benzimidazol-Derivate enthalten vorzugsweise zwei Sulfonsäuregruppen und einen Fettsäurerest mit etwa 8 bis 22 C-Atomen. Alkylaryl-Sulfonate sind z.B. die Na-, Ca- oder Triäthanola-minsalze der Dodecylbenzolsulfonsäure, der Dibutylnaphthalinsulfonsäure oder eines Naphthalinsulfon-säure-Formaldehyd-Kondensationsproduktes.

Als nichtionische Tenside stehen in erster Linie zur Wahl die Polyglykolätherderivate von aliphatischen oder cycloaliphatischen Alkoholen, gesättigten oder ungesättigten Fettsäuren und Alkylphenolen, welche 3 bis 30 Glykoläthergruppen und 8 bis 20 C-Atome im (aliphatischen) Kohlenwasserstoffrest und 6 bis 18 C-Atome im Aikylrest enthalten können. Weiterhin kommen als nichtionische Tenside in Frage die wasserlöslichen, 20 bis 250 Äthylenglykoläthergruppen und 10 bis 100 Propylenäthergruppen enthaltenden Polyäthylenoxydaddukte an Polypropylenglykol und Alkylpolypropylenglykol mit 1 bis 10 C-Atomen in der Alkylkette. Die genannten Verbindungen enthalten üblicherweise pro Propylenglykolein-heit 1 bis 5 Äthylenglykoleinheiten.

Als Beispiele nicht-ionischer Tenside seien erwähnt:

Nonylphenolpolyäthoxyäthanole, Ricinusölpolyglykoläther, Polypropylenpolyäthylenoxyd-Addukte, Tributylphenoxypolyäthoxyäthanol, Polyäthylenglykol und Octylphenoxypolyäthoxyäthanol. Überdies kommen auch Fettsäureester von Polyoxyäthylensorbitan, wie das PolyoxyäthylensorbitanTrioleat, in Betracht.

Bei den kationischen Tensiden handelt es sich vor allem um quaternäre Ammoniumsalze, welche als N-Substituenten mindestens einen Aikylrest mit 8 bis 22 C-Atomen enthalten und als weitere Substitu-enten niedrige, gegebenenfalls halogenierte Alkyl-, Benzyl- oder niedrige Hydroxyalkylreste aufweisen. Die Salze liegen vorab als Halogenide, Methylsulfate oder Äthylsulfate vor, z.B. das Stearyltrimethylam-moniumchlorid oder das Benzyl- di(2-ch!oräthyl)äthylammoniumbromid.

In hohem Masse bevorzugt zur Herstellung von erfindungsgemässen, spontan dispergierbaren Konzentraten sind einerseits Phosphorsäureestertenside, wie z.B.

Tristyrylphenolpolyoxyäthylen-1 8-mono/dimethyl-phosphorsäureester

II

(—ch2—ch2—o p—och3

oh h-chg

(Soprophor® FL, Rhône-Poulenc);

Diphasol® 3873 (CIBA-GEIGY), bzw. das identische Sermul® EA 188 (SERVO), ein Mischemulgator, bestehend aus je 50% der beiden Verbindungen mit den Formeln:

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CH 685 325 A5

C9H19

c9 h-, j

(—ch2-ch2-o )^-p—och3

och,

Diphasol® 3873 (CIBA-GEIGY)

Tensid 508 (CIBA-GEIGY)

(~ch2—ch2—o )2—p.

-och,

och,

(Tensid 508, CIBA-GEIGY);

Tinovetin® JU (CIBA-GEIGY), ein Hydroxybiphenyl-10-Äthoxy-Phosphorsäureester Butyl-mono-4-Äthoxy-Phosphorsäureester (Zerostat® AT, CIBA-GEIGY), bzw.

ch3-< ch2 )j—(jîh—ch2—o (-ch2—ch2—o )5-

-och,

c2h5

och,

(Zerostat ® AN , CIBA-GEIGY)

und anderseits Betainverbindungen, d.h. amphotere, salz- und wasserfreie Imidazolderivate, welche möglichst einen isoelektrischen/isoionischen Punkt um 7 aufweisen, wie z.B.:

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ch2 ch2 oh n

ch2

worin Me[+] für Wasserstoff, Alkali- und Erdalkaliatome und Rx für Cr bis C32-Alkyl oder C2- bis C32-Alkenyigruppen stehen.

Verwendung finden auch sog. «multi-functional Glucose Derivatives», wie z.B. Glucate- SS (Methyl-Glucose-Sesquistearat) und Glucamatet® SSE-20 (PEG-20 Methyl-Glucose-Sesquistearat) von Amer-chol, Edison, N. J.

Als Hydrotrop, bzw. als Co-Emulgator dienende, pharmaverträgliche Lösungsmittel lassen sich einsetzen, z.B.:

Ester eines aliphatischen Alkohols (C3 bis Cis) mit einer aliphatischen Carbonsäure (C10 bis C22), wie etwa Isopropyllaurat, Hexyilaurat, Decyllaurat, Isopropylmyristat, Isopropylpalmitat und Laurylmyristat; Kohlenwasserstoffe mit einer geraden Kohlenstoffkette (C12 bis C32), welche mit 6 bis 16 Methylgruppen substituiert ist und 1 bis 6 Doppelbindungen aufweisen kann, wofür Terpene wie Polymethylbutane und Polymethylbutene als Beispiele dienen mögen.

Mono-Ester aus Äthylenglykol oder Propylenglykol mit einer aliphatischen Carbonsäure (Ce bis C22), wie etwa Propylenglykolmonolaurat und Propylenglykolmonomyristat.

Ester aus einem aliphatischen Alkohol (C12 bis C22) mit Milchsäure, wie z.B. Myristyl- oder vorzugsweise Lauryl-Lactat; Mono-, Di- oder Triester des Glycerins mit einer aliphatischen Carbonsäure (C6 bis C22), wie z.B. Glyceryl-Caprylat, oder Miglyol® 812 Neutralöl (Oleum neutrale).

Ester aus einem Poly(2-7)äthylenglykolglyzerinäther mit mindestens einer freien Hydroxylgruppe mit einer aliphatischen Carbonsäure (C6 bis C22), wie z.B. aliphatische Alkohole (C12 bis C22), somit u.a. Dodecanol, Tetradecanol, Oleylalkohol, 2-HexyIdecanol und 2-Octyldecanol.

Ester mit mindestens einer freien Hydroxylgruppe, aus Poly-(2-10)glykol mit einer aliphatischen Carbonsäure (Cö bis C22), Monoäther aus einem Polyäthylenglykol mit einem aliphatischen Alkohol (C12 bis Cis), wie z.B. Polyoxyäthylen (Cio)-octyläther.

Heterocyclische Verbindungen, wie z.B. 1 -Methyl-2-Pyrrolidon.

Biotenside Ester der allgemeinen Formel:

worin R1 Citronellyl, Geranyl, Farnesyl, Phytyl oder Isophytyl und R2 eine Ci- bis C32-Akyl, bzw. C2- bis C32-Alkenyl- oder Alkapolyengruppe bedeuten.

Als Hydrotrope, bzw. Co-Emulgatoren eignen sich auch Vitamin-E-Verbindungen. Als besonders geeignet erweisen sich Vitamin-E-Verbindungen, deren Hydroxylgruppe mit einer C1- bis C32-Akyl, bzw. C2- bis C32-Alkenyl- oder Alkapolyengruppe verestert ist. Unter Vitamin-E-Verbindungen sind alle Tocol-und Tocotrienolverbindungen, wie z.B.:

Tocol [2-Methyl-2(4,8,12-Trimethyltridecyl)chroman-6-ol]

a-Tocopherol [5,7,8-Trimethyltocol],

welches in folgenden Konfigurationen vorliegen kann:

12,12,12-a-Tocopherol

2-epi-a-T ocopherol

2-ambo-a-Tocopherol all-rac-a-T ocopherol

4-ambo-8-ambo-a-Tocopherol

ß-Tocopherol [5,8-Dimethyltocol]

•y-Tocopherol [7,8-Dimethyltocol]

8-Tocopherol [8-Methyltocol]

Tocotrienol [2-Methyl-2-(4,8,12-Trimethyldeca-3,7,11-trianyl)chroman-6-ol]

p1- oder p2-Tocopherol [5,7,8-Trimethyltocotrienol] und e-Tocopherol [5,8-Dimethyltocotrienol oder e-Tocotrienol] zu verstehen.

r1 eoo r2

(XX)

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Alle technischen Tenside wurden vor dem Eintrag in die spontan dispergierbaren Konzentrate mittels Filtration, bzw. Chromatographie über neutralem Aluminiumoxyd mit einem inerten Lösungsmittel wie z.B. Tetrahydrofuran, Äthylalkohol oder Methylenchlorid gereinigt.

Als Zusätze in die erfindungsgemässen, spontan dispergierbaren Konzentrate eignen sich auch ausgewählte Penetrationsverbesserer («Flux enhancers») und Radikalfänger.

Die zur pharmazeutischen Anwendung erforderliche Tagesdosis beträgt 0,001 bis 25 mg/kg Körpergewicht, wenn möglich verteilt auf 2 bis 3 Einzeldosen. Hiefür lassen sich die spontan dispergierbaren Konzentrate mit den Carotinen der Verbindungen (I) bis (XIX) in die gängigen pharmazeutischen Zubereitungen und Darreichungsformen wie Dragées, Tabletten, Kapseln, Pulver, Granulate, Pellets, Lösungen, Ampullen, Emulsionen, Crèmes oder Zäpfchen zusammen mit den üblichen Trägerstoffen und/oder Verdünnungs- und Stabilisierungsmitteln einarbeiten.

Die Gegenstand der Erfindung bildenden spontan dispergierbaren Konzentrate, können dem Menschen oral, durch Injektion (intravenös, subkutan oder intramuskulär) oder in anderer Weise verabreicht werden. Wenn sie als feste Darreichungsformen für die orale Verwendung aufbereitet werden, kann dies in Form von Tabletten, Granulaten, Pellets, Pulvern oder Kapseln, usw. geschehen. Die Aufbereitungen können Zusatzstoffe enthalten, z.B. einen Arzneimittelträger wie eine Saccharid- oder Cellulose-Grundlage, ein Bindemittel wie Stärkepaste oder Methylcellulose, ein Füllmittel oder ein Desintegriermit-tel, usw. - wobei Zusatzstoffe eingesetzt werden, wie sie üblicherweise bei der Herstellung medizinischer oder paramedizinischer Formulierungen verwendet werden. Wenn die erfindungsgetreuen Wirkstoffe oder Wirkstoffmischungen als flüssige Darreichungsformen zu oraler Verabreichung gelangen, so können sie irgend eine aus wässrigen Zubereitungen für innere Verwendung, aus Suspensionen, Emulsionen und Sirups usw. ausgewählte Form haben, und sie können ausserdem in der Form Vacuum-getrockneter Präparate vorliegen, welche vor ihrer Verwendung in Lösung oder Emulsion gebracht werden.

Wenn die erfindungsgemässen Konzentrate in der Form wässriger Lösungen, Suspensionen oder öliger, bzw. wässriger Emulsionen, vorzugsweise als Mikroemulsionen aufbereitet sind, können sie auch injiziert werden. Die Injektionslösungen werden jedoch üblicherweise erst kurz vor der Anwendung hergestellt, indem man die Konzentrate in wässrigen, flüssigen Medien wie sterilem Wasser, Glucoselö-sung oder physiologischer Kochsalzlösung auflöst oder suspendiert.

Falls erforderlich, können zu einem Injektionspräparat üblicherweise verwendete Lösungsmittel, Stabilisierungsmittel, Konservierungsmittel und Zusätze für die Herstellung isotonischer Lösungen hinzugegeben werden. Die auf diese Weise erhaltenen Injektions-Präparate werden intravenös, intramuskulär, subkutan oder in einer anderen geeigneten Weise verabreicht.

Die vorliegende Erfindung betrifft ebenfalls pharmazeutische Präparate, welche spontan dispergierba-re Konzentrate mit den ausgewählten Carotinen der Formeln (I) bis (XIX) zur Bekämpfung des Wachstums von Tumorzellen enthalten. Bei den der Erfindung entsprechenden pharmazeutischen Präparaten handelt es sich um solche zur enteralen (wie oralen oder rektalen), sowie zur parenteralen oder topischen Verabreichung an Warmblüter, welche das spontan dispergierbare Konzentrat allein oder zusammen mit einem pharmazeutisch anwendbaren Trägermaterial enthalten.

Die Dosierung der erfindungsgemässen Konzentrate hängt von der Warmblüterspezies, dem Alter und dem individuellen Zustand, sowie von der Verabreichungsart ab. So werden z.B. zur Erzielung eines Abtötungseffektes von Tumorzellen an Warmblütern mit geringem Körpergewicht, wie z.B. Mäusen, Ratten und Hamstern, bei sukutaner Verabreichung Dosen im Bereich von ca. 0,1 bis 50 mg/kg Körpergewicht, und bei intraperitonealer Verabreichung Dosen im Bereich von 0,05 bis 5 mg/kg Körpergewicht angewandt.

Die oralen und rektalen Formen der neuen pharmazeutischen Präparate enthalten zwischen 1-95%, vorzugsweise zwischen 10-95%, insbesondere zwischen 20-95% des erfindungsgemässen, spontan dispergierbaren Konzentrates. Sie können z.B. in Dosis-Einheitsform vorliegen, also als Dragées, Micropellets, Tabletten, Suppositorien oder Ampullen und vor allem als Kapseln.

Geeignete pharmazeutisch anwendbare Trägerstoffe für die oralen Formen sind hauptsächlich Füllstoffe, wie Zucker (z.B. Lactose, Saccharose, Mannit oder Sorbit), Cellulosepräparate und/oder Calcium-phosphate (z.B. Tricalcium- oder Calciumhydrogenphosphat), ferner Bindemittel wie Stärkekleister unter Verwendung von u.a. Mais-, Weizen-, Reis- oder Kartoffelstärke, Gelatine, Traganth, Methylcellulose, Hydroxyl-Methylcellulose, Hydroxypropyl-Methylcellulose, Natriumcarboxymethylcellulose und/oder Po-lyvinylpyrrolidon und/oder Sprengmittel (wenn erwünscht), wie die obgenannten Stärken, ferner Car-boxymethylstärke, quervernetztes Polyvinylpyrrolidon, Agar, Alginsäure oder ein Saiz davon, wie z.B. Natriumalginat. Als Fliessreguliermittel sind z.B. die Polyäthylenglykole Nr. 200 bis 600 und höher geeignet.

Die beim Menschen als Darreichungsform bevorzugten Gelatinekapseln werden mit geeigneten Überzügen versehen, wobei man u.a. konzentrierte Zuckerlösungen - welche gegebenenfalls arabischen Gummi, Talk, Polyvinylpyrrolidon, Polyäthylenglykol und/oder Titandioxid enthalten - Lacklösungen (wässrige oder solche, die unter Verwendung organischer Lösungsmittel aufbereitet worden sind), oder magensaftresistente Überzüge aus Lösungen von geeigneten Cellulosepräparaten, wie mikrokristalliner Cellulose (Avicel®), Acetylcellulosephthalat, Hydroxylmethylcellulosephthalat (Metolose®), Hydroxylpropylmethylcel-lulose-Acetatsuccinat (AQOAT®) oder einem Copolymerisat wie Eudragit® L30D verwendet.

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CH 685 325 A5

Ais erfindungsgemäss besonders geeignete, oral anwendbare pharmazeutische Darreichungsform eignen sich Steckkapseln aus Gelatine und einem Weichmacher, wie Glyzerin oder Sorbitol. Die Weichbzw. Hartgelatine-Kapseln, sowie solche aus AQOAT® (Hydroxypropyl-Methylcellulose-Acetat-Succinat) können das der Erfindung entsprechende, spontan dispergierbare Konzentrat im Gemisch mit Füllstoffen, wie Laktose, Bindemitteln wie Stärke und/oder Gleitmitteln wie Talk oder Magnesium-Stearat und gegebenenfalls mit Stabilisatoren und Antioxydantien wie z.B. a-, ß- oder 7-Tocopherol enthalten. Der Einsatz von geeigneten Flüssigkeiten wie flüssigen Polyäthylenglykolen No. 200 bis 600 als Verdünnungsmittel kann sich empfehlen, wobei sich ebenfalls Stabilisatoren und Antioxydantien zufügen lassen.

Zur parenteralen Verabreichung werden die erfindungsgemässen Konzentrate mit destilliertem Wasser versetzt. Der entstehenden wässrigen Injektions-Mikroemulsion können Viskositätserhöhende Stoffe, wie z.B. Na-Carboxymethylcellulose, Sorbit, Mannit und/oder Dextran, und gegebenenfalls auch Stabilisatoren und Antioxydantien zugefügt werden.

Die pharmazeutischen Präparate für die parenterale Anwendung enthalten vorzugsweise zwischen 0,1 bis 60%, und hauptsächlich zwischen 1 bis 40% des erfindungskonformen, spontan dispergierbaren Konzentrates.

Als topisch anwendbare Präparate, welche sich vornehmlich zur Prophylaxe und Therapie von Hautkrebsarten eignen, kommen z.B. Cremen, Salben, Pasten, Pomaden, Schäume, Tinkturen und Lösungen in Betracht, welche zwischen 0,01 bis 70% des erfindungsgemässen Konzentrates enthalten. Für Cremen und ÖI-in-Wasser-Emulsionen, welche mehr als 50% Wasser aufweisen, verwendet man als ölige Grundlage in erster Linie Fettalkohole, z.B. Lauryl-, Cetyl- oder Stearylalkohol, flüssige bis feste Wachse, z.B. Isopropylmyristat, Woll- oder Bienenwachs und/oder Kohlenwasserstoffe wie z.B. Vaseline (Petrolatum) oder Paraffinoel. Zur Emulgierung dieser öligen Grundlagen eignen sich in erster Linie oberflächenaktive, pharmaverträgliche Substanzen mit vorwiegend hydrophilen Eigenschaften, wie z.B. nicht-ionogene Emulgatoren, vorab Fettsäureester von Polyalkoholen oder Äthylenoxydaddukten (etwa Polyglycerinfettsäureester oder Polyäthylensorbitan-Fettsäureester) mit einem HLB-Wert von unter 8. Zusätze zur Wasserphase sind u.a. Mittel, welche die Austrocknung der Cremen vermindern, z.B. Poly-alkohole wie Glyzerin, Sorbit, Propylenglykol und/oder Polyäthylenglykole No. 200 bis 600, ferner Konservierungsmittel, Riechstoffe, etc.

Salben sind Wasser-in-ÖI Emulsionen, die bis zu 70%, vorzugsweise jedoch zwischen 20 und 50% Wasser oder wässrige Phasen enthalten. Als Fettphase kommen in erster Linie Kohlenwasserstoffe, z.B. Vaselin, Paraffinoel und/oder Hartparaffine in Frage, welche zur Verbesserung des Wasserbindungsvermögens geeignete Hydroxydverbindungen, wie z.B. Fettalkohole oder Ester, davon etwa Cetylalkohoi oder Wollwachsalkohole, enthalten.

Fallweise werden noch Emulgatoren mit einem HLB-Wert von 8 bis 16, wie z.B. Sorbitan-Fettsäure-ester (etwa Sorbitanisostearol) zugesetzt. Zusätze zur Wasserphase sind u.a. Feuchthaltungsmittel, wie Polyalkohole (Glycerin, Propylenglykol, Sorbit und/oder Polyäthylenglykole No. 200, 400, 600); ferner Konservierungsmittel, Riechstoffe, etc.

Fettsalben sind wasserfrei und enthalten als Grundlage vornehmlich Kohlenwasserstoffe, z.B. Paraffin, Vaselin und/oder flüssige Paraffine; über dies natürliche oder partial synthetische Fette wie z.B. Kokos-fettsäuretriglycerid, ferner: Fettsäurepartialester des Glycerins, wie z.B. die im Zusammenhang mit den Salben erwähnten, die Wasser-Aufnahmefähigkeit steigernden Fettalkohole, Emulgatoren und/oder Zusätze.

Pasten sind Cremen und Salben mit sekretabsorbierenden Puderbestandteilen, wie beispielsweise Metalloxide (etwa Titanoxid oder Zinkoxid), ferner Talk und/oder Aluminiumsilikate, welche die Aufgabe haben, vorhandene Feuchtigkeit oder Sekrete zu binden.

Schäume werden aus Druckbehältern verabreicht und sind in Aerosolform vorliegende Öl-in-Wasser Emulsionen der erfindungsgemässen, spontan dispergierbaren Konzentrate, wobei halogenierte Kohlenwasserstoffe (wie z.B. Chlorfluorniederalkane: etwa Dichlordifluormethan und Dichlortetrafluoräthan) als Treibmittel verwendet werden. Dazu kommen gegebenenfalls die üblichen Zusätze wie Konservierungsmittel, usw.

ZUSAMMENSETZUNGSBEISPIELE von erfindungsgemässen, spontan dispergierbaren KONZENTRATEN

a) 0,5 bis 10 Gew.-% eines oder mehrerer Carotine der Formeln (I) bis (XIX)

0 bis 10 Gew.-% einzelner oder mehrerer pharmazeutischer Wirkstoffe,

1 bis 40 Gew.-% eines als Hydrotrop, bzw. Co-Emulgator dienenden, pharmazeutischen Lösungsmittels oder Lösungsmittelgemisches

0 bis 45 Gew.-% eines Phosphorsäureester-Tensides, wie z.B. Diphasol® 3873 (CIBA-GEIGY), Tensid 508 (CIBA-GEIGY), Zerostat® AN oder AT (CIBA-GEIGY), Tinovetin® JU (CIBA-GEIGY), Sopro-phor® FL (Rhône-Poulenc)

5 bis 90 Gew.-% Invadin JFC 800% (CIBA-GEIGY).

Invadin® JFC 800% (CIBA-GEIGY) ist ein pharmaverträglicher Wert. Octylphenylpolyoxyäthylenäther mit 9 bis 10 Oxyäthylengruppen.

20

5

10

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20

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65

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Diphasol® 3873 (CIBA-GEIGY), bzw. das identische Sermul® EA 188 (SERVO) ist ein Mischemulga-tor, bestehend aus je 50% der beiden Verbindungen mit den Formeln:

c9H19

>/ v

(—ch2-ch2-0 ^-p—och3 oh c9h19

<J v o II

(-ch2-ch20 frj-p—och3 och3

DIPHASOL® 3873 (CIBA-GEIGY)

Tensid 508 (CIBA-GEIGY) ist ein Emulgator der Formel:

(—ch2— ch2—0 )2—p

-och,

och,

(Tensid 508, CIBA-GEIGY);

Tinovetin® JU (CIBA-GEIGY), ist ein Hydroxybiphenyl-10-Äthoxy-Phosphorsäureester; Zerostat® AT (CIBA-GEIGY) ist ein Butyl-mono-4-Äthoxy-Phosphorsäureester; Zerostat® AN (CIBA-GEIGY) ist ein Emulgator der Formel:

I

ch3-( ch2 )3-<j:h-ch2-0 (~ch2—ch2—o )5-p och3

c2h5

och,

(Zerostat ® AN , CIBA-GEIGY)

Soprophor® FL (Rhône-Poulenc) ist ein Tristyrylphenol-polyoxyäthylen 18-phosphorsäureester der Formel:

21

5

10

15

20

25

30

35

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45

50

55

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O

II

(—CH2—CH2—O )18 P OCHg oh h-ch3

SOPROHPOR FL (Rhône-Poulenc)

b) 0,5 bis 10 Gew.-% eines oder verschiedener Carotine der Formeln (I) bis (XIX)

1 bis 40 Gew.-% eines als Hydrotrop, bzw. Co-Emulgator dienenden, pharmazeutisch verträglichen Lösungsmittels oder Lösungsmittelgemisches

0 bis 90 Gew.-% einer Betainverbindung, d.h. eines amphoteren, salz- und wasserfreien Imidazolderi-vates der Formel worin Me[+] für Wasserstoff, Alkali- und Erdalkaliatome und Rx für Cr bis C32-Alkyl oder C2- bis C32-Alkenylgruppen stehen, wobei als Beispiel das Amphonyl® CAA (Oranienburger Chemikalien A.G.), ein Imidazolderivat auf Basis von Cocosfettsäure genannt sei.

c) 0,5 bis 2 Gew.-% eines oder mehrerer Carotine der Formeln (I) bis (XIX)

0 bis 20 Gew.-% eines biotensiden Esters der Formel (XX) und/oder einer Vitamin-E-Verbindung, deren Hydroxylgruppe mit einer Cr bis C32-Alkyl- oder einer C2- bis C32-Alkenyl-, bzw. Alkapolyengruppe verestert ist

0 bis 45 Gew.-% eines Phosphorsäureester-Tensides, wie insbesondere Diphasol® 3873 oder Sopro-phor® FL oder einer Betainverbindung wie Amphonyl® CAA 5 bis 90 Gew.-% Invadin® JFC 800%

d) 0,5 bis 2 Gew.-% eines Carotins der Formeln (XVI), (XVII) oder (XIX)

0 bis 10 Gew.-% Cholecalciferyl-10-Undecenoat, Ergocalciferyl-10-undecenoat, Ergosteryl-10-undece-noat oder DL-a-Tocopheryl-10-undecenoat

5 bis 20 Gew.-% Isopropylmyristat, Citronellyl-10-Undecenoat, Phytyl-10-undecenoat oder Farnesyl-palmitat

0 bis 45 Gew.-% Diphasol® 3873 oder Soprophor® FL oder Amphonylt® CAA 5 bis 90 Gew.-% Invadin® JFC 800%

ch2 ch2 oh

22

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55

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e) 2 Gew.-% ß-Carotin oder Lycopin

3 Gew.-% ß-Oestradiol, ß-Oestradiol-3,17-di-all trans-retinat, ß-Oestradiol-3-benzoat-17-retinat oder DL-a-Tocopheryl-all trans-retinat 5 Gew.-% einer Vitamin-E-Verbindung, bzw. ihres Esters 20 Gew.-% C 11:1-Citronellylester oder Fumarsäure-di-Phytylester 35 Gew.-% Invadin JFC 800%

35 Gew.-% Soprophor FL

f) 10 Gew.-% ß-Carotin oder Lycopin

10 Gew.-% einer Vitamin-E-Verbindung, bzw. eines ihrer Ester 10 Gew.-% C 12:0-Phytylester 35 Gew.-% Invadin JFC 800%

35 Gew.-% Soprophor FL

BEISPIEL für die pharmazeutische Herstellung eines Systempräparates mit erfindungsgemässen Konzentraten in der Form von «multiple units».

a) Granulierung

Granulieren/formen im Schnellmixer oder im Rotationsbett unter Zusatz von 110 g Ethanol, brechen, sieben 18 bis 42 mesh, trocknen 24 h bei 40°C.

b) MSR- und RETARD-Ausrüstung im Rotationsbett mit AQOAT® AS-HG (Shin-Etsu Chemical) und Talk c) Zusammensetzung fertiges Granulat/bzw. Micropellets

N.B.: MSR = Magensaft-Resistenz. Die Pellets/Granulate gemäss a) können auch ohne Befilmung unmittelbar in Kapseln abgefüllt werden, welche aus AQOAT® (HPMC-AS-M oder HPMC-AS-N) hergestellt sind, mit Aceton/Ethanol 1:1 verschlossen werden und so die Funktionen der MSR und der verzögerten Abgabe (Retard) angemessen steuern.

Metolose® 90 SH-4000 (Shin-Etsu Chemical) Avicel® PH-101

Erfindungsgemässes KONZENTRAT Aerosil® 200 E

90.0 g 80.3 g 139.4 g 80.3 g 390.0 g

Kernmaterial

Erfindungsgemässes KONZENTRAT

MSR-Beschichtung

Z

44% 25% 31% 100%

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30

35

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45

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60

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Biologische Prüfungen

VITALITÄTSTEST

mit humanen Tumorzell-Linien

A

HL 60 promyelytische LEUKÄMIE Proliferationstest (Tritium) 1 nCi/well H+ 2 x 104 Zellen pro well Inkubation: 48 h

W.S./HYDROTROP PRÄPARAT

KONZENTRATION 10 ppm Konz.

KONZENTRATION 100 ppm Konz.

A 5/5%

14.7%

1.2%

B 5/10%

12.1%

0.87%

C 10/10%

5.5%

1.9%

D 5/5%

5.7%

1.18%

Proben durchgeführt von Dottoressa Anna GUARINI, Clinica medica, Università degli Studi di Torino, 24.-27.1.1994. Kontrollen: 155 421 cpm.

VITALITÄTSTEST

mit humanen Tumorzell-Linien

B

K 562 Chron. LEUKÄMIE (Crisi biastica)

Proliferationstest (Tritium): 1 p-Ci/well H+

2 x 104 Zellen pro well Inkubation: 48 h

W.S./HYDROTROP PRÄPARAT KONZENTRATION KONZENTRATION

10 ppm Konz. 100 ppm Konz.

A 5/5%

24,2%

0,63%

B 5/10%

23,7%

0,54%

C 10/10%

17,0%

0,54%

D 5/5%

15,09%

1,82%

Proben durchgeführt von Dottoressa Anna GUARINI, Clinica medica, Universita degli Studi di Torino, 24. - 27.1.1994. Kontrollen: 501 937 cpm.

VITALITÄTSTEST

mit humanen Tumorzell-Linien

C

ADK humanes pulmonares Carcinom Proliferationstest (Tritium) 1 )iCi/well H+

2 x 104 Zellen pro well Inkubation: 48 h

W.S./HYDROTROP PRÄPARAT

KONZENTRATION 10 ppm Konz.

KONZENTRATION 100 ppm Konz.

A 5/5%

36,6%

5,2%

B 5/10%

24,1%

4,0%

C 10/10%

13,8%

4,3%

D 5/5%

11,7%

6,7%

Proben durchgeführt von Dottoressa Anna GUARINI, Clinica medica, Università degli Studi di Torino, 14.-17.2.1994. Kontrollen: 57 816 cpm.

24

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

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Zusammensetzung der Konzentrate:

Präparat A

5 Gew.-% ß-Carotin

5 Gew.-% DL-a-Tocopherol

Präparat B

5 Gew.-% ß-Carotin

10 Gew.-% DL-a-Tocopherol

Präparat C

10 Gew.-% ß-Carotin

10 Gew.-% DL-a-Tocopherol

Präparat D

5 Gew.-% C 11:1-8'-Apo-ß-Carotin-8'-ester

5 Gew.-% DL-a-Tocopherol

Als Hydrotrop für die innere Phase wurde eingesetzt:

Präparat A: C 11:1-CITRONELLYLESTER, 20 Gew.-%

Präparat B: Fumarsäure-di-Phytylester, 15 Gew.-%

Präparat C: C 12:0-Phytyiester, 10 Gew.-%

Präparat D: C 12:0-Phytylester, 20 Gew.-%

Tenside: Invadin JFC 800%/Soprophor FL 1:1

Zelltoxizität der MARIGENOL®-KONZENTRATE, geprüft an Py6-Zellen (Virus infizierte 3T3 Maus-Fibroblasten)

SUBSTANZ

PRÄPARATE IM TEST

EXPOSITION 48 h In Verdünnung wirksam bis zu 1 :

EXPOSITION 120 h In Verdünnung wirksam bis zu 1 :

2% TAXOL

MIKROEMULSION 1:1000 AKTIVSUBST.

160 000 8 Mio.

320 000 16 Mio.

2% TAXOL

ME 1:500 AKTIVSUBST.

20 000 1 Mio.

320 000 16 Mio.

2% RETINSÄURE (Chlorid)

ME 1:1000 AKTIVSUBST.

40 000 2 Mio.

80 000 4 Mio.

5% ZEAXANTHIN-di-Undecenoat

ME 1:1000 AKTIVSUBST.

40 000 800 000

160 000 3,2 Mio.

5% PHYSALIEN

20 000 400 000

160 000 3,2 Mio.

5% C 11:1 - AZA-FRINYL ESTER

40 000 800 000

160 000 3,2 Mio.

SUBSTANZ

PRAPARATE IM TEST EXPOSITION 48 h EXPOSITION 120 h

In Verdünnung In Verdünnung wirksam bis zu 1 : wirksam bis zu 1 :

5% 8-APO-CAROTINOL (Cao-ALKOHOL)

5% 8-APO-CAROTIN-METHYL ESTER

5% C 11:1-8'-APO-CARORIN ESTER

5% VITAMIN D3-UNDECENOAT

ME 1:500 AKTIVSUBST. 160 000 3,2 Mio. 1,28 Mio. 25,6 Mio.

1:1000 AKTIVSUBST. 80 000 1,6 Mio. 320 000 6,4 Mio.

ME 1:1000 AKTIVSUBST. 40 000 800 000 320 000 6,4 Mio.

ME 1:500 AKTIVSUBST. 80 000 1,6 Mio. 320 000 6,4 Mio.

Verdünnungen: Erste Zeile auf Konzentrat berechnet Zweite Zeile auf Aktivsubstanz-Gehalt berechnet

N.B.: TAXOL-Reinsubstanz (isoliert aus Himalayan Yew) beigestellt von DABUR INDIA Ltd., Harsha Bhawan, Block «E», Connaught Place, New Delhi. 31. Mai 1994.

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5

10

15

20

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30

35

40

45

50

55

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Versuchswiederholung mit den gleichen MARIGENOL®-Konzentraten wie unter 2), aber mit verschiedenen Expositionszeiten. Py6-Zellen.

SUBSTANZ

PRÄPARATE IM TEST

EXPOSITION 24 h In Verdünnung wirksam bis zu 1:

EXPOSITION 72 h In Verdünnung wirksam bis zu 1 :

2% TAXOL

MIKROEMULSION 1:1000 AKTIVSUBST.

40 000 2 Mio.

160 000 8 Mio.

2% TAXOL

ME 1

500 AKTIVSUBST.

80 000 4 Mio.

1 280 000 64 Mio.

2% RETINSÄURE (Chlorid)

ME 1

1000 AKTIVSUBST.

40 000 2 Mio.

640 000 32 Mio.

5% ZEAXANTHI N-di-Undecenoat

ME 1

1000 AKTIVSUBST.

20 000 400 000

320 000 6,4 Mio.

MAT 5 5% PHYSALIEN

ME 1

500 AKTIVSUBST.

10 000 200 000

80 000 1,6 Mio.

5% C 11:1 - AZA-FRINYL ESTER

ME 1

500 AKTIVSUBST.

20 000 400 000

640 000 12,8 Mio.

SUBSTANZ

PRÄPARATE IM TEST

EXPOSITION 24 h In Verdünnung wirksam bis zu 1 :

EXPOSITION 72 h In Verdünnung wirksam bis zu 1 :

5% 8-APO-CAROTINOL (Cso-ALKOHOL)

ME 1:500 AKTIVSUBST.

20 000 400 0000

320 000 6,4 Mio.

5% 8'-APO-CAROTIN-METHYL ESTER

ME1:1000 AKTIVSUBST.

20 000 400 000

80 000 1,6 Mio.

5% C 11:1 -8-APO-CAROTIN ESTER

ME 1:1000 AKTIVSUBST. 20 000 400 000

80 000 1,6 Mio.

5% VITAMIN D2-RETINAT

ME 1:500 AKTIVSUBST.

20 000 400 000

160 000 3,2 Mio.

5% VITAMIN D3-RETINAT

ME 1:500 AKTIVSUBST.

10 000 200 000

640 000 12,8 Mio.

5% VITAMIN Ds-UNDECENOAT

ME 1:500 AKTIVSUBST.

40 000 800 000

160 000 3,2 Mio.

N.B.: TAXOL-Reinsubstanz (isoliert aus Himalayan Yew) beigestellt von DABUR INDIA Ltd., Harsha Bhawan, Block «E», Connaught Place, New Delhi. 22. Juni 1994

Wirkung auf humane Tumorzell-Linien (in vitro)

VITALITÄTSTEST

mit humanen Tumorzell-Linien

A

HL 60 promyeloische LEUKÄMIE Proliferationstest (Tritium 1nCi/well H+)

2 x 104 Zellen pro well cpm = 82 667

PRÄPARAT

(2%-MARIGENOL®-KONZENTRAT)

10-4

2 ppm W.S.

10-3

20 ppm W.S.

C-30-ALKOHOL (APOCAROTIN)

2,3

0,99

C 30-SÄURE (APOCAROTIN)

1,7

0,75

C 11:1-8'-APOCAROTINYL-ESTER

1,7

1,5

ZEAXANTHIN-di-10-UNDECENOAT

3,5

1,2

ß-CAROTIN

3,2

1,1

AUSWEIS: %-Vitalität nach 48 Stunden mit 2-% MARlGENOL®-KONZENTRATEN, als wässrige Ultramikroemulsion dem Medium einmalig beigegeben. Bei der Beurteilung beachte man die verhältnismässig kurze Expositionszeit von 48 h. Kontrollen: 82 667 cpm.

Tests durchgeführt am 7.-10.6.1994 von Dottoressa Anna Guarini, Università degli Studi di Torino, Clinica medica.

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55

60

65

CH 685 325 A5

VITALITÄTSTEST

mit humanen Tumorzell-Linien

B

K 562 Chronische LEUKÄMIE (Leucemia mieloide cronica, crisi blastica) Proliferationstest (Tritium: 1 nCi/well H+) 2 x 104 Zellen pro Well cpm = 138 833

PRÄPARAT (2%-MARIGENOL®-KONZENTRAT)

10-4

10-3

2 ppm W.S.

20 cpm W.S.

C-30-ALKOHOL (APOCAROTIN)

37,1

0,7

C 30-SÄURE (APOCAROTIN)

18,6

0,5

C 11:1-8'-APOCAROTINYL-ESTER

17,4

0,4

ZEAXANTHIN-di-UNDECENOAT

38,6

1,0

ß-CAROTIN

18,5

0,6

AUSWEIS: %-Vitalität nach 48 Stunden mit 2-% MARIGENOL®-KONZENTRATEN, als wässrige Ultramikroemulsion dem Medium einmalig beigegeben. Bei der Beurteilung beachte man die verhältnismässig kurze Expositionszeit von 48 h. Kontrollen: 138 833 cpm.

Tests durchgeführt am 7-10.6.1994 von Dottoressa Anna Guarini, Università degli Studi di Torino, Clinica medica.

ZELLTOXIZITÄT in-vitro auf Py6-Mausfibroblasten

PRÄPARAT

KONZENTRAT wirksam bis 1:

WIRKSUBSTANZ wirksam bis 1:

2% Lycopin

256 000

12,8 Mio.

2% ß-CAROTIN

64 000

3,2 Mio.

1% 8--APOCAROTINOLEAT

160 000

16 Mio.

2% 8'-APOCAROTIN-UNDECCENOAT

640 000

32 Mio.

1% 8-APOCAROTINLAURAT

512 000

51,2 Mio.

1% 8-APOCAROTIN-STEARAT

128 000

12,8 Mio.

1% AZAFRINYL-10-UNDECENOAT

256 000

25,6 Mio.

1 % ISOZEAXANTHIN-DI-10-UNDECENOAT

256 000

25,6 Mio.

EXPOSITION: 72 h.

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5

10

15

20

25

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CH 685 325 A5

WIRKUNG AUF HUMANE TUMORZELL-LINIEN (IN VITRO)

VITALITÄTSTEST

mit humanen Tumorzell-Linien

C

ADP-K

(Pulmonares Adenocarcinom)

Proliferationstest (Tritium: 1 jLtCi/well H+)

2 x 104 Zellen pro Well cpm = 164 334

PRÄPARAT

Verdünnung 10

I-5

Verdünnung 10

I-4

Verdünnung 10

I-3

cpm

%

cpm

%

cpm

%

No. 200

157 531

95.8

82 154

49.9

15 791

9.6

No. 201

167 631

102.0

109 416

66.5

25 217

15.3

No. 202

166 361

101.0

56 338

34.2

16 116

9.8

No. 203

147 518

89.7

77 247

47.0

39 696

24.1

D

HL 60 promyeloische LEUKÄMIE Proliferationstest (Tritium: I^Ci/well H+) 2 x 104 Zellen pro well cpm = 188 914

PRÄPARAT Verdünnung 10-5 Verdünnung 10~4 Verdünnung 10-3

cpm

%

cpm

%

cpm

%

No. 200

183 783

98.8

5 174

2.7

913

0.48

No. 201

177 834

94.1

101 640

53.8

8 759

4.6

No. 202

169 290

89.6

57 746

30.5

15 894

8.4

No. 203

174 054

92.1

123 259

65.2

70 660

37.4

E

K 562 Chronische LEUKÄMIE (Leucemia mieloide cronica, crisi blastica) Proliferationstest (Tritium: 1|iCi/well H+) 2 x 104 Zellen pro Well cpm = 15 338

PRÄPARAT Verdünnung 10~5 Verdünnung 10~4 Verdünnung 10~3

cpm

%

cpm

%

cpm

%

No. 200

12 546

81.7

4 251

27.7

1 148

7.4

No. 201

13 153

85.7

8 741

56.9

3 837

25.0

No. 202

13 112

85.4

5 975

38.9

5 125

33.4

No. 203

14 772

96.3

13 388

87.2

8 876

57.8

AUSWEIS: %-Vitalität nach 48 Stunden mit 1-%, bzw. 2-% MARIGENOL®-KONZENTRATEN, als wässrige Ultramikroemulsion dem Medium einmalig beigegeben. Bei der Beurteilung beachte man die verhältnismässig kurze Expositionszeit von 48 h. Kontrollen: 138 833 cpm.

Tests für die Konzentrate C-E durchgeführt am 14.-17. November 1994 von Dottoressa Anna Guarini, Università degli Studi di Torino, Clinica medica.

28

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

CH 685 325 A5

Bezeichnung der Proben:

No. 200: 2% LYCOPIN-Konzentrat

No. 201: 2% ß-CAROTIN-Konzentrat

No. 202: 1% C 18:0-C3o APOCAROTINYLESTER-Konzentrat

No. 203: 1% C 11:1-C3o APOCAROTINYLESTER-Konzentrat

Gleiche Zusammensetzung der Konzentrate wie bei Py6 Test, Seite 43.

UNTERSUCHUNG DES BLUTBILDES

Auswirkung der MARIGENOL®-KONZENTRATE auf normale humane Lymphomonocyten Zellen: normale humane phagozytische weisse Blutzellen (Macrophagen); 2 x 105 Zellen pro well Stimulation der Kontrollen: 1% PHA (Phytohemagglutinin)

PRÄPARAT

VERDÜNNUNG

TEST 1

TEST 2

TEST 3

KONTROLLEN PHA 1%

(stimuliert)

cpm cpm cpm

2682

3386

80 981

61 966

KONZENTRATE als wässrige

10-1

1076

3826

3936

MIKROEMULSIONEN

10-2

1396

3726

3845

10-3

1431

2141

2939

10-4

1386

3221

2752

10-5

1656

2888

3093

10-e

2536

2105

3046

Test 1: 2%-Konzentrat enthaltend C 12:0-Cholesteryl Ester Test 2: 2%-Konzentrate enthaltend C 16:0-Ergosteryl Ester

Test 3: 2%-Konzentrate enthaltend C 5:0-CholecalciferyI Ester (Vitamin D3-iso-Valerat)

Tests durchgeführt von Dottoressa Anna GUARINI, Università di Torino, Clinica medica, 1-10 126 TORINO, 21. bis 24. März 1994.

29

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

CH 685 325 A5

TOXIZITÄT von MARIGENOL®-KONZENTRATEN an der BALB/c-Maus %-Verteilung der Blutbestandteile

Präparat

L

M

N

E

B

G 17

10-7

70 ± 6

11 ± 3

13 ±4

6 ± 4

0

10-s

77 ± 6

6 ± 3

11 ± 4

5 ± 4

1 ± 1

10-3

69 ± 10

7 ±5

22 ± 8

2 + 2

0

G 41

10-7

77 + 6

6 ± 3

13 ± 5

3 ± 3

0

10-s

78 ±4

10 ±2

10 ±4

1 + 1

10"3

80 + 6

8 ±2

10 + 6

12 ± 1

0

G 44

10-7

74 ± 17

10 ± 1

20 ± 9

1 ± 1

0

10-s

74 + 6

9 ±4

14 ±7

4 ± 3

0

10-3

76 ±5

6 ±4

16 ± 8

2 ± 1

0

G 55

10-7

78 ± 4

10 ± 4

2 + 1

0

10-5

69 ± 10

11 ± 3

18 ± 4

1 ± 1

0

10"3

77 ± 5

6 ±4

14 + 2

2 + 1

1 + 1

KONTROLLEN

76 ± 5

8 ±2

15 ±4

1 ± 1

0

(Physiologischer Puffer)

G 17 2%-Konzentrat enthaltend C 5:0-CHOLESTERYL ESTER (Cholesteryl-iso-Valerat) G 41 2%-Konzentrat enthaltend C 11:1-ERGOSTERYL ESTER (Ergosteryl-10-Undecenoat) G 44 2%-Konzentrat enthaltend C 18:2-CHOLECALCIFERYL ESTER (C 18:2-D3; Vitamin-D3-Linoleat) G 55 2%-Konzentrat enthaltend C 4:1-CHOLECALCIFERYL ESTER (C 4:1-D3; Vitamin-D3-Crotonat) Verdünnungen:

10-7 = 0,1 ppm Konzentrat; 0,002 ppm Aktivsubstanz IO-5 =10 ppm Konzentrat; 0,200 ppm Aktivsubstanz 10-3 =1000 ppm Konzentrat; 20 000 ppm Aktivsubstanz

Legende:

L = Lymphocyten M = Monocyten (Macrophagen)

N = Neutrophile Granulocyten E = Eosinophile Granulocyten B = Basophile Granulocyten

Tests durchgeführt von: Prof. Dott. Guido FORNI, Dotta Stefania VAI, Università di Torino, Dipartimento di Scienze Cliniche e Biologiche, Ospedale San Luigi Gonzaga, 1-10 043, ORBASSANO (TO), August/September 1993.

Eingesetzt wurden normale 8-wöchige weibliche BALB/c nAncr (H-2d)-Mäuse; LIEFERANT: Charles River Laboratories, Calco (Italien). Während 4 Wochen wurden täglich zweimal 250 jxl einer wässrigen Mikroemulsion der angegebenen MARIGENOL®-KONZENTRATE uv. (Schwanzvene) injiziert, bzw. die gleiche Menge physiologischen Puffers für die Kontrollen. Färbung mit May Grünwald-Giemsa.

Dauer des Experimentes: 28 Tage

Blutanalyse nach der letzten Injektion

Anzahl der Versuchstiere: 13 Gruppen zu je 5 Tieren

ERGEBNIS: Es traten keine signifikanten Unterschiede auf zwischen den Testgruppen und den Kontrollen. Die MARIGENOL®-KONZENTRATE weisen keinerlei Toxizität auf gegenüber der im Versuch eingesetzten Leucocyten-Population. Alle Versuchstiere waren und blieben während des ganzen Versuches gesund.

30

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

CH 685 325 A5

AUSWEIS des PENETRATIONSVERMÖGENS der MARIGENOL®-KONZENTRATE an der PLASMAMEMBRAN von TUMORZELLEN

Analytische Nachweise

1) Identifikation von CAROTIN-ESTERN

Kapillarzonen-Elektrophorese mit einem Gerät von Beckman Instruments, bzw. von BIORAD. Bedingungen: DL-a-Tocopherol 50 mM; Puffer pH = 9,5 Na-tetra-Borat Run 15 kV, Messung bei 195 nm Der Wirksubstanz-Peak erscheint nach ca. 4 Minuten. Auflösung bis 0,5 ppm.

2) Identifikation der Konzentrat-Mizellen in der wässrigen Mikroemulsion/bzw. im Zellplasma der Tumorzellen.

Gleiche Methodik wie 1).

Der charakteristische Peak für die Carotin-Ester erscheint nach ca. 8 Minuten; die Verzögerung gegenüber der reinen W.S.-Messung ist eine Folge der Ummantelung der inneren Phase der Konzentrate mit Tensiden. Sie gibt einen wichtigen Hinweis auf das Diffusionsverhalten der Ultramikroemulsion. 3) Nachweis der Membran-Penetration an der Tumorzelle

Am Lichtmikroskop (wie auch am Elektronenmikroskop) lässt sich aufzeigen, dass wenige Stunden nach der Inkubation (Beispiel 3T3 Py6-Zellen der Maus; dünn ausgesät, mittlere Verdünnung der Wirkstoff-Konzentrate) sich ein Kranz von Vakuolen um den Zellkern herum ausbildet.

Claims

Patentansprüche 1. Spontan dispergierbares Konzentrat, welches - wenn es mit Wasser oder 5%-Glucoselösung verdünnt wird - eine stabile Ultramikroemulsion ergibt und welches zur Bekämpfung von Tumoren, Psoriasis oder Ekzemen eingesetzt werden kann, dadurch gekennzeichnet, dass folgende Bestandteile zu einem System gefügt sind: 0,1 bis 10 Gew.-% einzelner Carotine der Formeln (I) bis (XIX) 31 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 CH 685 325 A5 (I) (ii) (III) (IV) (v) 32 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 CH 685 325 A5 HzOH 33 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 CH 685 325 A5 (XII) oh (XIII) (XIV) (XV) (XVI) 34 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 CH 685 325 A5 (XVII) (XVIII) O (XIX) 0 bis 10 Gew.-% einzelner oder mehrerer pharmazeutischer Wirkstoffe,

1 bis 40 Gew.-% eines als Hydrotrop, bzw. Co-Emulgator dienenden, pharmaverträglichen Lösungsmittels oder Lösungsmittelgemisches,

0,1 bis 90 Gew.-% eines pharmaverträglichen Tensides oder Tensidgemisches,

0 bis 10 Gew.-% eines Vitamins oder Provitamins,

0 bis 10 Gew.-% Trägerstoffe und/oder Verdünnungsmittel.

2. Spontan dispergierbares Konzentrat, enthaltend schwer lösliche Carotine der Formeln (I) bis (XIX) gemäss Anspruch 1, zur Verwendung als Mittel zur Herstellung von Präparaten mit verbesserter Bioverfügbarkeit für die Behandlung von Tumoren, Ekzemen und Psoriasis.

3. Spontan dispergierbares Konzentrat gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass folgende Bestandteile zusammengefügt sind:

0,5 bis 10 Gew.-% eines oder verschiedener Carotine der Formeln (I) bis (XIX),

0 bis 45 Gew.-% eines Phosphorsäureester-Tensides,

5 bis 90 Gew.-% eines hochkonzentrierten, wasserfreien, pharmaverträglichen Octylphenylpolyoxyä-thylenäthers mit 9 bis 10 Oxyäthylengruppen.

4. Spontan dispergierbares Konzentrat gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass folgende Bestandteile zusammengefügt sind:

0,5 bis 10 Gew.-% eines oder verschiedener Carotine der Formeln (I) bis (XIX),

0 bis 45 Gew.-% eines Phosphorsäureester-Tensides,

0 bis 90 Gew.-% einer Betainverbindung der Formel

35

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

CH 685 325 A5

OH

[-] I + ]

eoo Me worin Me[+] für Wasserstoff, Alkali- und Erdalkaliatome und Rx für Cr bis C32-Alkyl- oder C2- bis C32-Alkenylgruppen stehen.

5. Spontan dispergierbares Konzentrat gemäss Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass folgende Bestandteile zusammengefügt sind:

0,5 bis 2 Gew.-% eines oder verschiedener Carotine der Formeln (I) bis (XIX),

5 bis 20 Gew.-% eines biotensiden Esters der Formel (XX),

R1 COO R2

worin R1 Citronellyl, Geranyl, Farnesyl, Phytyl oder Isophytyl und R2 eine Cr bis C32-Akyl, bzw. C2- bis C32-Alkenyl- oder Alkapolyengruppe bedeuten,

0 bis 45 Gew.-% eines Phosphorsäureester-Tensides,

5 bis 90 Gew.-% eines hochkonzentrierten, wasserfreien, pharmaverträglichen Octylphenylpolyoxyäthy-lenäthers mit 9 bis 10 Oxyäthylengruppen.

6. Spontan dispergierbares Konzentrat gemäss Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass folgende Bestandteile zusammengefügt sind:

0,5 bis 2 Gew.-% eines Carotins der Formeln (XVI), (XVII) oder (XVIII),

0 bis 20 Gew.-% eines biotensiden Esters der Formel (XX) und/oder einer Vitamin-E-Verbindung, deren Hydroxylgruppe mit einer Cr bis C32-Alkyl- oder einer C2- bis C32-Alkenyl-, bzw. Alkapolyengruppe ver-estert ist,

0 bis 45 Gew.-% eines Phosphorsäureester-Tensides,

7. Spontan dispergierbares Konzentrat gemäss Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass folgende Bestandteile zusammengefügt sind:

5 Gew.-% ß-Carotin und/oder ß-Oestradiol, ß-Oestradiol-3,17-di-alI trans-retinat, ß-Oestradiol-3-benzoat-17-retinat oder DL-a-Tocopheryl-all trans-retinat,

5 Gew.-% einer Vitamin-E-Verbindung, bzw. eines Tocopherylesters,

20 Gew.-% C 11:1-Terpenester, Fumarsäure-di-Phytylester oder Azelainsäure-di -Phytylester, 35 Gew.-% wasserfreies Octylphenylpolyoxyäthylenäther-Tensid mit 9 bis 10 Oxyäthylengruppen, 35 Gew.-% Tristyrylphenolpolyoxyäthylen 1 8-phosphorsäureester-Tensid.

8. Spontan dispergierbares Konzentrat gemäss Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass folgende Bestandteile zusammengefügt sind:

Gew.-% ß-Carotin,

10 Gew.-% einer Vitamin-E-Verbindung, bzw. eines Tocopherylesters,

10 Gew.-% C 12:0-Phytylester,

35 Gew.-% wasserfreies Octylphenylpolyoxyäthylenäther-Tensid mit 9 bis 10 Oxyäthylengruppen, 35 Gew.-% Tristyrylphenol-polyoxyäthylen 18-phosphorsäureester-Tensid.

9. Therapeutisches Systempräparat, welches 1 bis 95 Gew.-% des spontan dispergierbaren Konzentrates gemäss einem der Ansprüche 1 und 3 bis 8 und bis zu 10 Gew.-% eines pharmaverträglichen Zusatzstoffes, Lösungsmittels oder Stabilisators oder eines Gemisches davon enthält und welches in Dosis-Einheitsform als Micropellets, Granulat, Dragées, Suppositorien, Ampullen oder als Kapseln vorliegt.

10. Therapeutisches Systempräparat gemäss Anspruch 9, welches 44 Teile Kernmaterial für die Gra-nulat-, bzw. Pellet-Bildung, 25 Teile eines erfindungsgemässen Konzentrates laut einem der Ansprüche

1 und 3 bis 8 und 31 Teile magensaftresistente und retardierende Beschichtung mit Hydroxylpropyl-Me-thylcellulose-Acetat-Succinat enthält.

11. Therapeutisches Systempräparat gemäss Anspruch 9, welches 64 Teile Kernmaterial für die Granulat-, bzw. Pelletbildung und 36 Teile eines erfindungskonformen Konzentrates laut einem der Ansprüche 1 und 3 bis 8 enthält und in Kapseln aus Hydroxylpropyl-Methylcellulose-Acetat-Succinat abgefüllt ist.

CH2 CHj

Rx—C [ + ]

N ÇH2

N CH,

H2—CH2

36