CH686521A5

CH686521A5 - Support for compartmentalized culture media and additional elective culture media.

Info

Publication number: CH686521A5
Application number: CH152391A
Authority: CH
Inventors: Eduard Dr Engelbrecht
Original assignee: Eduard Dr Engelbrecht
Priority date: 1991-05-23
Filing date: 1991-05-23
Publication date: 1996-04-15
Also published as: WO1992021748A3; WO1992021748A2; EP0606207A1; CA2087950A1

Description

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Description Description

Bon nombre d'analyses de microbiologie, notamment de microbiologie clinique, sont compliquées par la présence de germes d'espèces différentes, souvent en grands nombres. Quand les différentes colonies qui apparaissent alors dans la culture, ont un aspect assez identique, ou quand la croissance est très dense, la reconnaissance et l'isolement du ou des germe(s) en cause deviennent difficiles et prennent beaucoup de temps. Par conséquent, dans certains cas le(s) germe(s) en cause sont manqué(s), tandis que dans d'autres cas le diagnostic et l'antibiogramme sont obtenus trop tard pour avoir encore une utilité. Many microbiology analyzes, especially clinical microbiology, are complicated by the presence of germs of different species, often in large numbers. When the different colonies which then appear in the culture have a fairly identical appearance, or when the growth is very dense, recognition and isolation of the germ (s) in question becomes difficult and takes a long time. Consequently, in certain cases the germ (s) in question are missed, while in other cases the diagnosis and the antibiogram are obtained too late to have any further utility.

Afin d'obtenir un meilleur discernement des germes recherchés et d'améliorer ainsi l'efficacité des analyses microbiologiques, nous avons entrepris des recherches qui ont abouti dans l'élaboration d'un nouveau milieu de culture, dont les diverses variantes peuvent être utilisées seules, ou dans des combinaisons de milieux qui, par électivité, permettent de séparer les germes présents dans l'inocu-lum en catégories distinctes et du fait que chacun des milieux présente alors un nombre limité de colonies microbiennes qui, de plus, appartiennent à une catégorie déterminée, de reconnaître et d'isoler directement les germes importants. In order to obtain a better discernment of the germs sought and thus to improve the efficiency of the microbiological analyzes, we undertook research which resulted in the development of a new culture medium, the various variants of which can be used alone. , or in combinations of media which, by electivity, make it possible to separate the germs present in the inocu-lum into distinct categories and the fact that each of the media then presents a limited number of microbial colonies which, moreover, belong to a determined category, to recognize and isolate important germs directly.

Afin de faciliter l'examen de la culture nous avons encore conçu des boîtes dans le genre de la boîte dite de pétri, divisées en plusieurs compartiments afin de pouvoir contenir plusieurs milieux électifs complémentaires. Puis, nos recherches ont démontré que certains substances sont en mesure de diffuser à travers le plastic, polystyrène par exemple, et d'influencer le milieu contenu dans le compartiment avoisinant. Pour les combinaisons de milieux où une telle diffusion de substances pourrait gêner nous avons mis au point des boîtes à plusieurs compartiments, ayant des cloisons intérieures doublées, séparées par une fente, qui peut être fermée soit en bas au niveau du fond de la boîte (fig. 1), soit en haut (fig. 2). Nous préférons la dernière solution pour la raison qu'elle permet l'orientation de la boîte dans un appareil de remplissage automatique par l'enfilement de plaquettes tatrices orientables. In order to facilitate the examination of culture, we have also designed boxes in the genre of the so-called petri dish, divided into several compartments in order to be able to contain several complementary elective media. Then, our research has shown that certain substances are able to diffuse through plastic, polystyrene for example, and to influence the medium contained in the neighboring compartment. For combinations of environments where such a diffusion of substances could interfere we have developed boxes with several compartments, having lined interior partitions, separated by a slot, which can be closed either at the bottom at the bottom of the box ( fig. 1), or at the top (fig. 2). We prefer the latter solution for the reason that it allows the orientation of the box in an automatic filling device by threading orientable trice plates.

Parmi les milieux électifs il y en a qui sont convenablement appelés sélectifs pour la raison qu'ils inhibent la croissance de presque toutes les espèces de germes en faveur de quelques espèces bien déterminées. Pour l'isolement de ces dernières il suffit de ce fait d'une surface très réduite. Pour les combinaisons qui comportent un ou plusieurs de ces milieux nous avons inventé des boîtes qui ont des compartiment de dimensions différentes. Les fig. 3, 4, 5 et 6 montrent de manière non limitative quatre exemples. La boîte de la fig. 3 est de forme ronde et contient un compartiment qui occupe environ un quart de la surface. A partir de l'endroit où les deux cloisons qui la délimitent se joignent, part une cloison qui divise la partie restante de la boîte en deux parties de surfaces égales. Les compartiments peuvent être séparés par des cloisons simples, ou doublés conformément aux fig. 1 ou 2. La conception de la boîte de la fig. 4 est identique à cette différence près que la boîte est de forme carrée avec le petit compartiment situé dans un des quatre coins. La boîte de la fig. 5 est une boîte ronde divisée par une cloison de bord en bord située dans l'axe et une cloison perpendiculairement à la première. La boîte comporte ainsi un grand compartiment occupant environ la moitié de la surface, et deux petits compartiments occupant chacun environ un quart de la surface. Ici aussi, les cloisons peuvent être simples, ou doublées conformément aux fig. 1 ou 2. La fig. 6 montre une boîte basée sur la même conception à cette différence près qu'elle est de forme carrée. Dans le cas d'une boîte carrée il est évident que les cloisons peuvent aussi être situées dans les diagonales. Dans tous les exemples les cloisons ont une hauteur qui est choisie telle que les cloisons dépassent d'un millimètre au moins le niveau de la surface des milieux de culture contenus dans les compartiments, qui ont de préférence une épaisseur de quatre millimètres. Among the elective mediums there are some which are suitably called selective for the reason that they inhibit the growth of almost all species of germs in favor of a few well-defined species. For the isolation of the latter it is sufficient therefore a very small surface. For combinations which include one or more of these media, we have invented boxes which have compartments of different dimensions. Figs. 3, 4, 5 and 6 show, without limitation, four examples. The box of fig. 3 is round in shape and contains a compartment which occupies about a quarter of the surface. From the place where the two partitions which delimit it join, leaves a partition which divides the remaining part of the box into two parts of equal surfaces. The compartments can be separated by simple partitions, or lined in accordance with fig. 1 or 2. The design of the box in fig. 4 is identical except that the box is square with the small compartment located in one of the four corners. The box of fig. 5 is a round box divided by a partition from edge to edge located in the axis and a partition perpendicular to the first. The box thus comprises a large compartment occupying approximately half of the surface, and two small compartments each occupying approximately a quarter of the surface. Here too, the partitions can be simple, or doubled in accordance with figs. 1 or 2. Fig. 6 shows a box based on the same design except that it is square. In the case of a square box it is obvious that the partitions can also be located in the diagonals. In all the examples, the partitions have a height which is chosen such that the partitions exceed by at least one millimeter the level of the surface of the culture media contained in the compartments, which preferably have a thickness of four millimeters.

Les exemples suivants décrivent de manière non limitative comment il est possible de séparer les germes présents dans Pinoculum en plusieures catégories distinctes par une combinaison judicieusement choisie de milieux de culture électifs: The following examples describe in a nonlimiting manner how it is possible to separate the germs present in Pinoculum into several distinct categories by a judiciously chosen combination of elective culture media:

premier exemple: dans les cultures oto-rhino-la-ryngologiques, gynécologiques, urologiques et de certains pus, notamment d'origine chirurigicale, on a avantage, compte tenue de la multiplicité de germes présents dans Pinculum, de pouvoir séparer dès le début les germes à gram positifs des germes à gram négatifs et d'obtenir isolément les Neisseria et levures pathogènes, vu leur intérêt particulier. Certains des germes présents dans ces prélèvements ont besoin de sérum sanguin pour pouvoir former des colonies, tandis que pour la mise en évidence de la formation d'hémolysine par certains germes à gram positifs la présence de sang complet est de rigueur. Nos recherches nous ont alors mené à composer un jeu de trois milieux électifs contenus dans une boîte à trois compartiments: first example: in oto-rhino-la-ryngologic, gynecologic, urologic and certain pus cultures, notably of surgical origin, it is advantageous, taking into account the multiplicity of germs present in Pinculum, to be able to separate from the start gram positive germs gram negative germs and to obtain the Neisseria and pathogenic yeasts in isolation, given their particular interest. Some of the germs present in these samples require blood serum to be able to form colonies, while for the demonstration of hemolysin formation by certain gram-positive germs the presence of whole blood is required. Our research then led us to compose a set of three elective media contained in a box with three compartments:

le premier compartiment contient une gélose au sang, préparée à partir du milieu dit Columbia agar base, et enrichie avec 4 à 6 pour cent de sang dé-fibriné. Pour la rendre élective nous ajoutons de la nystatine à raison de 2 unités par millilitre pour empêcher la croissance de levures, et de la colimycine en forme de Colistine méthane sulfonate à raison de 20 unités internationales, soit 1,7 microgramme par millilitre. A cette concentration de la colimycine il n'y a que les germes à gram positifs qui poussent, à l'exception des Proteus species, reconnais-sables aux grandes colonies dont l'essaimage est inhibé, ainsi que de Neisseria meningitidis et Neisseria gonorrhoeae, qui se distinguent nettement par leurs colonies translucides. the first compartment contains blood agar, prepared from the medium known as Columbia agar base, and enriched with 4 to 6 percent of de-fibrinated blood. To make it elective we add nystatin at the rate of 2 units per milliliter to prevent the growth of yeasts, and colimycin in the form of Colistin methane sulfonate at the rate of 20 international units, or 1.7 micrograms per milliliter. At this concentration of colimycin there are only gram positive germs which grow, with the exception of Proteus species, recognizable to large colonies whose swarming is inhibited, as well as Neisseria meningitidis and Neisseria gonorrhoeae, which are clearly distinguished by their translucent colonies.

Le deuxième compartiment est destiné à recevoir un milieu qui favorise non seulement élective-ment la croissance de germes à gram négatifs, mais qui permet en plus d'identifier les Haemophilus species et Neisseria species pathogènes. Puisqu'il n'existe pas de milieu qui répond à ces exigences, nous avons inventé un milieu ad hoc, qui The second compartment is intended to receive a medium which not only actively promotes the growth of gram-negative germs, but which also makes it possible to identify the pathogenic Haemophilus species and Neisseria species. Since there is no medium which meets these requirements, we have invented an ad hoc medium which

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contient approxativement pour un litre 12 gram de gélose, 4 gram de chlorure de sodium, 10 gram de peptone, 2 gram d'extrait de viande, 2 gram d'extrait de levure, 10 gram de saccharose, 2 unités internationales de nystatine et 15 ml d'une solution de rouge neutre à 0,25 pour cent. Après stérilisation on y ajoute encore 10 ml d'isovitalex, mélange enrichissant contenant les facteurs V et X, 40 ml de sérum stérile de cheval, et de la clindamycine en forme de clindamycinephosphate à raison de 6 milligramme par litre. En plus du saccharose on peut encore l'additionner de 10 gram de lactose par litre. A la concentration donnée de la clindamycine il n'y a que les germes à gram négatif qui poussent sur ce milieu, à l'exception de certains Proprionibacterium species, qui y développent des colonies typiquement plates et petites, et d'entéro-coques, immédiatement reconnaissantes à leurs colonies petites, bombées et rouge foncé. Parmi les germes à gram négatifs, les espèces banales de Neisseria et d'Haemophilus forment des colonies rouges à cause de la transformation en acide du saccharose et, éventuellement du lactose. N'ayant pas la faculté de s'attaquer à l'un ou l'autre des ces deux sucres, les Neisseria partho-gènes développent des colonies incolores, translucides et galbées, tandis que les différents biotypes de Haemophilus influenzae forment des colonies incolores, translucides et plates. En poussant plus rapidement, les entérobactéries et les bâtonnets à gram négatifs, oxydase positifs, développent des colonies nettement plus grandes et opaques et qui sont blanches ou rouges suivant la formation ou non d'acide. contains approximately for a liter 12 gram of agar, 4 gram of sodium chloride, 10 gram of peptone, 2 gram of meat extract, 2 gram of yeast extract, 10 gram of sucrose, 2 international units of nystatin and 15 ml of 0.25 percent neutral red solution. After sterilization, another 10 ml of isovitalex, an enriching mixture containing factors V and X, 40 ml of sterile horse serum, and clindamycin in the form of clindamycin phosphate are added at the rate of 6 milligrams per liter. In addition to sucrose, it is also possible to add 10 grams of lactose per liter. At the given concentration of clindamycin there are only gram negative germs which grow on this medium, with the exception of certain Propionbacterium species, which develop there typically flat and small colonies, and entero-shells, immediately grateful for their small, bulging, dark red colonies. Among the gram negative germs, the common species of Neisseria and Haemophilus form red colonies due to the transformation of sucrose and possibly lactose into acid. Not having the ability to attack one or the other of these two sugars, the Neisseria partho-genes develop colorless, translucent and curved colonies, while the different biotypes of Haemophilus influenzae form colorless colonies, translucent and flat. By growing faster, enterobacteria and gram negative rods, oxidase positive, develop significantly larger and opaque colonies which are white or red depending on whether or not acid is formed.

Quand on désire empêcher la croissance de Pro-prionibactérium species et d'entérocoques, on peut remplacer la clindamycine par du cristal-violet à raison de 1 millilitre d'une solution à 0,1 pour cent par litre de milieu. On peut encore incorporer un sel ferrique dans ce milieu au cas où il est souhaitable de mettre en évidende une éventuelle formation de hydroxyde de soufre. When it is desired to prevent the growth of Pro-prionibacterium species and enterococci, clindamycin can be replaced by crystal-violet at the rate of 1 milliliter of a 0.1 percent solution per liter of medium. It is also possible to incorporate a ferric salt in this medium in the event that it is desirable to demonstrate any possible formation of sulfur hydroxide.

Le troisième compartiment contient un milieu généralement appelé «gélose chocolat», préparé à partir du milieu de base gélosé selon Thayer-Martin à raison de 40 gram pour un litre. Après stérilisation on y ajoute du sang défibriné lysé à raison de 4 à 6 pour cent, puis le milieu est réchauffé à 80°C pendant 30 minutes en agitant régulièrement la bouteille. Par la suite on y ajoute encore une quantité adéquate d'un mélange enrichissant, 10 ml de VITOX par exemple, et 10 milligramme de van-comycine, 2500 unités internationales de polymyxi-ne B, ainsi que 5 milligramme de triméthoprim par litre. Ainsi composé ce milieu ne permet la croissance que de Neisseria méningitidis, Neisseria Go-norrhoeae, Candida et Saccharomyces species, Campylobacter species et Bacilus species, notamment Bacillus fusiformis, suivant la composition de l'atmosphère de la culture lors de l'incubation. Ainsi, il ne peut y avoir croissance que de Neisseria pathogènes, de Candida et Saccharomyces species et de certaines souches de Bacillus fusiformis quand l'incubation a lieu dans l'air enrichi de 5 à 7 pour cent de dioxyde de carbone, tandis que l'on n'obtient la croissance que de levures et de bacilles anaérobies, y compris Campylobacter species, quand la culture est incubée en atmosphère anaérobie. The third compartment contains a medium generally called “chocolate agar”, prepared from the basic agar medium according to Thayer-Martin at a rate of 40 grams for one liter. After sterilization, lysed defibrinated blood is added to it at a rate of 4 to 6 percent, then the medium is warmed to 80 ° C. for 30 minutes, with regular shaking of the bottle. Subsequently, an adequate amount of an enriching mixture is added to it, 10 ml of VITOX for example, and 10 milligrams of van-comycin, 2,500 international units of polymyxin-B, as well as 5 milligrams of trimethoprim per liter. Thus composed this medium only allows the growth of Neisseria meningitidis, Neisseria Go-norrhoeae, Candida and Saccharomyces species, Campylobacter species and Bacilus species, in particular Bacillus fusiformis, depending on the composition of the culture atmosphere during incubation. Thus, growth can only occur from pathogenic Neisseria, Candida and Saccharomyces species and certain strains of Bacillus fusiformis when incubation takes place in air enriched with 5 to 7 percent carbon dioxide, while l 'growth is obtained only from anaerobic yeasts and bacilli, including Campylobacter species, when the culture is incubated in an anaerobic atmosphere.

Ces trois milieux, contenus dans une même boîte, permettent d'identifier directement dans les cultures oto-rhino-laryngologiques sur la gélose au sang à la colimycine Streptococcus pyogenes, colonies grises béta-hémolytiques, Streptococcus pneumoniae, colonies translucides alpha-hémolytiques, Neisseria méningitidis et Neisseria gonorrhoeae, colonies galbées, dépolies, et les Corynebacterie species pathogènes, colonies blanchâtres, généralment plus ou moins nettement béta-hémolytiques, ainsi que les Staphyloccus species, en particulier Sta-phyloccus aureus, assez grandes colonies béta-hé-molytiques plates et grises, ou galbées et jaunâtres; These three media, contained in the same box, allow direct identification in otolaryngological cultures on colimycin blood agar Streptococcus pyogenes, beta-hemolytic gray colonies, Streptococcus pneumoniae, alpha-hemolytic translucent colonies, Neisseria meningitidis and Neisseria gonorrhoeae, shapely, frosted colonies, and the pathogenic Corynebacterie species, whitish colonies, generally more or less clearly beta-hemolytic, as well as the Staphyloccus species, in particular Sta-phyloccus aureus, fairly large flat beta-heymytic colonies and gray, or curved and yellowish;

- sur le milieu au sérum à la clindamycine on reconnaît Neisseria méningitidis et Neisseria gonorrhoeae, colonies galbées, translucides et incolores, Haemophilus influenzae, colonies plates, transparantes et incolores, ainsi que Haemophilus para-in-fluenzae, colonies plates, transparantes et rouges, tandis que les Neisseria banales se présentent sous forme de colonies galbées, translucides et rouges; - on the clindamycin serum medium, we recognize Neisseria meningitidis and Neisseria gonorrhoeae, curved, translucent and colorless colonies, Haemophilus influenzae, flat, transparent and colorless colonies, as well as Haemophilus para-in-fluenzae, flat, transparent and red colonies, while the common Neisseria appear in the form of curved, translucent and red colonies;

- sur le milieu chocolat-VCT on peut trouver les colonies de Neisseria méningitidis et Neisseria gonorrhoeae, transparantes, de levures, blanches et échancrées, ainsi que de Bacillus fusiformis, opaques et brunâtres. - on the chocolate-VCT medium we can find the colonies of Neisseria meningitidis and Neisseria gonorrhoeae, transparent, yeast, white and indented, as well as Bacillus fusiformis, opaque and brownish.

Inoculés avec des prélèvement gynécologiques ou urologiques on peut directement identifier sur la gélose au sang à la colimycine Streptococcus aga-lacteae, colonies blanchâtres, béta-hémolytiques, Streprococcus faecalis, colonies galbées, grises, non hémolytiques, Gardnerella vaginalis, petites colonies plates, translucides, hémolytiques ou non, suivant l'origine humain ou ovin du sang incorporé dans le milieu, les Corynebacterium species, y compris Listeria monocytogenes, colonies blanches ou grisâtres, généralement plus ou moins nettement hémolytiques quand il, s'agit d'espèces pathogènes, les Neisseria pathogènes, colonies galbées, translucides, et les Staphylococcus species, notamment Staphylococcus aureus, assez grandes colonies béta-hémolytiques, plates et grises, ou galbées et jaunâtres, tandis que les Lactobacillus species et Proprionibacterium species se présentent sous forme de petites colonies généralement alphahémolyti-ques, et les Proteus species, rarement présentes, de grandes colonies blanches grisâtres: Inoculated with gynecological or urological samples, it can be directly identified on colimycin blood agar Streptococcus aga-lacteae, whitish, beta-hemolytic colonies, Streprococcus faecalis, shapely, gray, non-hemolytic colonies, Gardnerella vaginalis, small flat, translucent colonies , hemolytic or not, depending on the human or ovine origin of the blood incorporated into the medium, the Corynebacterium species, including Listeria monocytogenes, white or grayish colonies, generally more or less clearly hemolytic when it comes to pathogenic species, the pathogenic Neisseria, curved, translucent colonies, and the Staphylococcus species, in particular Staphylococcus aureus, fairly large beta-hemolytic colonies, flat and gray, or curved and yellowish, while the Lactobacillus species and Proprionibacterium species generally appear in the form of small colonies alphahemolytics, and the Proteus speci are, rarely present, large grayish white colonies:

- sur le milieu au sérum à la clindamycine on reconnaît les colonies des bâtonnets à gram négatifs, grandes, galbées, et rouge lorsqu'ils sont capables de former de l'acide à partir du saccharose et/ou du lactose quand ce dernier sucre a été incorporé dans le milieu, ou blanchâtres en absence de formation d'acide, des Neisseria species pathogènes, galbées, incolores et translucides, de Streptococcus faecalis, petites, bombées et rouge foncé et bien que peu fréquemment, de Proprionibacterium species, petites, plates et rouge ou blanchâtres et translucides; - on the medium with clindamycin serum, the colonies of gram negative rods, large, curved and red, are recognized when they are capable of forming acid from sucrose and / or lactose when the latter sugar has has been incorporated into the medium, or whitish in the absence of acid formation, of pathogenic, curved, colorless and translucent Neisseria species, of Streptococcus faecalis, small, bulging and dark red and, although infrequently, of Proprionibacterium species, small, flat and red or whitish and translucent;

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- sur le milieu chocolat-VCT on peut trouver les colonies des Neisseria species pathogènes, Neisseria gonorrhoeae en particulier, galbées et transparantes, ainsi que de levures, notamment Candida albicans, blanches et échancrées. - on the chocolate-VCT medium we can find the colonies of pathogenic Neisseria species, Neisseria gonorrhoeae in particular, curved and transparent, as well as yeasts, especially Candida albicans, white and indented.

Les germes recherchés sont ainsi répartis sur les trois milieux en catégories distinctes et, de par les aspects que présentent leurs colonies sur le milieu particulier, y sont directement identifiables. The germs sought are thus distributed over the three environments in distinct categories and, by the aspects that their colonies present on the particular environment, are directly identifiable there.

Sans modifier l'électivité des milieux on peut remplacer dans la gélose au sang la colimycine par de la polymyxine B à raison de 2500 unités internationales par litre, dans la gélose au sérum la clindamycine par de la lincomycine à raison de 1 milligramme par litre, ou par un millilitre par litre d'une solution à 0,1 pour cent de crystal-violet, et dans le milieu chocolat-VCT le triméthoprim par de la néo-mycine à raison de 2 mg par litre. Without modifying the electivity of the media, colimycin can be replaced in blood agar with polymyxin B at the rate of 2500 international units per liter, in serum agar clindamycin with lincomycin at the rate of 1 milligram per liter, or with one milliliter per liter of a 0.1 percent solution of crystal-violet, and in the chocolate-VCT medium trimethoprim with neomycin at the rate of 2 mg per liter.

Exceptionnellement certaines Pseudomonas species résistantes à la colimycine peuvent se développer sur la gélose la colimycine. Toutefois, elles produisent de l'oxydase, ce qui permet de les diffé-rentier des Proteus species, qui sont oxydase négatives, en étalant un peu d'une colonie sur un morceau de papier imbibé du réactif ad hoc. Exceptionally, certain Pseudomonas species resistant to colimycin can develop on colimycin agar. However, they produce oxidase, which makes it possible to differentiate them from Proteus species, which are oxidase negative, by spreading a bit of a colony on a piece of paper soaked in the ad hoc reagent.

Si l'on désire empêcher les membres colimycine-résistants de ces deux familles de se développer sur ce milieu, il suffit d'ajouter en plus de la colimycine de l'acide nalidixique à raison de 15 mg par litre. On n'obtiendra alors que la croissance de germes à gram positifs dans ce compartiment. If one wishes to prevent the colimycin-resistant members of these two families from developing on this medium, it suffices to add, in addition to the colimycin, nalidixic acid at a rate of 15 mg per liter. Only the growth of gram-positive germs will be obtained in this compartment.

Deuxième exemple: les germes généralement responsables d'infections urinaires sont les Entero-bacteriaceae, les Pseudomonas species, les différentes espèces de staphylocoque et les entéroco-ques. Dans des cas particuliers on cherche, outre les germes cités, le Neisseria gonorrhoeae, les Candida species et les levures pathogènes. Il existe plusieurs milieux pour l'isolement des Enterobac-teriaceae et des Pseudomonas species. Toutefois, nos recherches ont montré que le milieu a la clindamycine de l'exemple précédent, avec ou sans sérum, convient particulièrement bien ceci d'autant plus qu'on peut lui additionner d'un sel ferrique pour la mise en évidence de formation de hydroxy-de de soufre, ce qui permet d'identifier directement Proteus vulgaris et Proteus mirabilis. Second example: the germs generally responsible for urinary tract infections are Enterobacteriaceae, Pseudomonas species, different species of staphylococcus and enterococci. In special cases, in addition to the bacteria mentioned, Neisseria gonorrhoeae, Candida species and pathogenic yeasts are sought. There are several media for the isolation of Enterobac-teriaceae and Pseudomonas species. However, our research has shown that the clindamycin medium of the previous example, with or without serum, is particularly suitable, especially since it can be added with a ferric salt to demonstrate the formation of Hydroxy-sulfur, which directly identifies Proteus vulgaris and Proteus mirabilis.

Puisque l'acidification ou non des colonies par la dégradation du seul lactose, mise en évidence par le virement de l'indicateur, est un critère généralement admis, il suffit d'incorporer uniquement du lactose à raison de 10 gram par litre et de faire abstention du saccharose. Pour la mise en évidence d'une éventuelle formation de hydroxyde de soufre on peut ajouter 1 gram de citrate de fer ainsi que 6 gram de thiosulphate de sodium par litre, et ajuster le pH à 7,2. La nystatine n'est supprimée et le sérum n'est ajouté que si le milieu devra également servir à la mise en évidence des levures et Candida species, et de Neisseria gonorrhoeae, respectivement. L'avantage de la clindamycine par rapport au méthylviolet est que la première ne gène en rien la croissance desdits germes. Ce milieu est alors coulé dans le grand compartiment d'une boîte comportant un grand et deux petits compartiments. L'un des deux petits compartiments reçoit soit le milieu dit mannitol-salt agar destiné à mettre en évidence les Staphylococcus species, soit la gélose au sang à la colimycine du premier exemple, avec de l'acide nalidixique et de la nystatine ou de Pamphotericine-B, afin de mettre en évidence non seulement les Staphylococcus species, mais aussi les Streptococcus species, y compris les béta-hémolytiques et les entérocoques, ainsi que les Neisseria pathogènes. Quand ce compartiment est muni du manitol-salt agar, le deuxième compartiment reçoit le milieu selon Slanetz et Bartley, qui permet de mettre sélectivement en évidence les entérocoques. Par contre, si le premier petit compartiment reçoit la gélose au sang citée, le deuxième petit compartiment est rempli d'un milieu pour l'isolement de levures et de Candida species, le milieu de Sabouraud, par exemple, ou le milieu chocolat-VCT du premier exemple. Since the acidification or not of the colonies by the degradation of the lactose alone, highlighted by the transfer of the indicator, is a generally accepted criterion, it suffices to incorporate only lactose at a rate of 10 grams per liter and to make abstention from sucrose. For the demonstration of a possible formation of sulfur hydroxide, 1 gram of iron citrate and 6 grams of sodium thiosulphate per liter can be added, and the pH adjusted to 7.2. The nystatin is not removed and the serum is only added if the medium must also be used for the detection of yeasts and Candida species, and of Neisseria gonorrhoeae, respectively. The advantage of clindamycin compared to methylviolet is that the former does not hinder the growth of said germs in any way. This medium is then poured into the large compartment of a box comprising a large and two small compartments. One of the two small compartments receives either the so-called mannitol-salt agar medium intended to highlight the Staphylococcus species, or the colimycin blood agar of the first example, with nalidixic acid and nystatin or Pamphotericine -B, in order to highlight not only the Staphylococcus species, but also the Streptococcus species, including beta-hemolytics and enterococci, as well as the pathogenic Neisseria. When this compartment is equipped with the manitol-salt agar, the second compartment receives the medium according to Slanetz and Bartley, which makes it possible to selectively highlight the enterococci. On the other hand, if the first small compartment receives the blood agar mentioned, the second small compartment is filled with a medium for the isolation of yeasts and of Candida species, the medium of Sabouraud, for example, or the medium chocolate-VCT of the first example.

On a ainsi dans la même boîte trois milieux qui permettent d'isoler séparément soit les bâtonnets à gram négatifs et les levures et Candida species, les Staphylococcus species, et les entérocoques, respectivement, soit les bâtonnets gram négatifs, les Neisseria pathogènes et les cocci à gram positifs, y compris les entérocoques et les streptocoques béta-hémolytiques, et les levures et Candida species, respectivement. We thus have in the same box three media which make it possible to separately isolate either the gram negative rods and the yeasts and Candida species, the Staphylococcus species, and the enterococci, respectively, or the gram negative rods, the pathogenic Neisseria and the cocci gram positive, including enterococci and beta-hemolytic streptococci, and yeasts and Candida species, respectively.

Les deux combinaisons préférées sont: The two preferred combinations are:

1. dans le grand compartiment le milieu à la clindamycine, comprennant lactose, sel ferrique, thiosulphate de sodium, indicateur de pH, rouge de phénol par exemple, avec ou sans sérum sanguin, et dans les petits compartiments le milieu selon Slanetz et Bartley, et le mannitol-salt agar, respectivement; 1. in the large compartment the medium with clindamycin, comprising lactose, ferric salt, sodium thiosulphate, pH indicator, phenol red for example, with or without blood serum, and in the small compartments the medium according to Slanetz and Bartley, and mannitol-salt agar, respectively;

2. dans le grand compartiment le milieu à la clindamycine, comprennant lactose, sel ferrique, thiosulphate de sodium, indicateur de pH, rouge de phénol par exemple, et sérum sanguin, et dans les petits compartiments le milieu dit chocolat-VCT à la vancomycine, colimycine et triméthoprim, additionné de nystatine, et la gélose au sang à la colimycine et l'acide nalidixique, également additionnée de nystatine, respectivement. Cette dernière combinaison peut également servir aux cultures urologiques et gynécologiques. 2. in the large compartment the medium with clindamycin, comprising lactose, ferric salt, sodium thiosulphate, pH indicator, phenol red for example, and blood serum, and in the small compartments the medium known as chocolate-VCT with vancomycin , colimycin and trimethoprim, supplemented with nystatin, and blood agar with colimycin and nalidixic acid, also supplemented with nystatin, respectively. This latter combination can also be used for urological and gynecological cultures.

Les germes responsables de troubles de la voie digestive se comptent parmi les bâtonnets à gram négatifs, oxydase négatifs, soit les salmonelles, shi-gelles, Yersinia entérocolitica, Yersinia pseudotu-berculosis, et les souches entérotoxiques et entéro-pathogènes d'Escherichia coli, les bâtonnets à gram nésatifs, oxydase positifs, soit Aeromonas hy-drophila, Pleisiomonas shigelloides, Pseudomonas aeruginosa, Vibrio choiera et Vibrio parallaemolyti-cus, plusieures Candida species, notamment Candida albicans, plusieures espèces de moisissures, ainsi que les espèces de staphylocoques productrices d'alpha-toxine. Parce qu'aucun des bâtonnets à gram négatifs cités n'est en mesure de former de l'acide à partir du lactose pendant les premières 24 heures d'incubation, ledit sucre est généralement incorpore dans les milieux destinés à isoler les bâtonnets à gram négatifs cités. Afin d'empêcher la The germs responsible for digestive tract disorders are among the gram negative, oxidase negative rods, namely salmonella, shigella, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotu-berculosis, and the enterotoxic and enteropathogenic strains of Escherichia coli, positive gram rods, positive oxidase, namely Aeromonas hy-drophila, Pleisiomonas shigelloides, Pseudomonas aeruginosa, Vibrio choiera and Vibrio parallaemolyti-cus, several Candida species, notably Candida albicans, several species of mold, as well as species of staphylococci 'alpha toxin. Because none of the gram negative rods mentioned are able to form acid from lactose during the first 24 hours of incubation, said sugar is generally incorporated in the media intended to isolate the gram negative rods. cited. In order to prevent the

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croissance de germes à gram positifs, on les additionne de sels biliaires et de méthyl-violet (violet de gentiane). Toutefois, certains des bâtonnets à gram négatifs, notamment les shigelles, y sont également sensibles. Or, ces derniers se développent aussi bien que les autres germes à gram négatifs sur le milieu que nous avons inventé. growth of gram positive germs, they are added with bile salts and methyl violet (gentian violet). However, some of the gram negative sticks, notably the shigelles, are also sensitive to it. However, the latter develop as well as the other gram negative germs on the medium that we invented.

Dans l'exemple précédent l'éventuelle croissance de l'entérocoque sur notre milieu à la clyndamycine constitue un avantage: l'apect typique de ses colonies permet d'identifier immédiatement ce pathogène des voies urinaires. Par contre, sa mise en évidence dans les cultures de selles n'a aucun intérêt du fait qu'il appartient à la flore physiologique de l'intestin. Nous avons alors testé différents antibiotiques et chimiothérapeutiques susceptibles d'en empêcher électivement la croissance, pour constater qu'il suffit d'additionner le milieu d'un macrolide, de l'érythromycine à raison de 4 milligrammes par litre par exemple. Adapté aux cultures de selles, notre milieu contient donc, outre la clindamycine ou la lin-comycine, du lactose, de l'érythromycine ou de la rovamycine, et un sel ferrique, ce dernier pour que les colonies de salmonelles se font remarquer par leur noircissement dû à l'interaction entre le fer et le hydroxyde de soufre formé par la majorité des espèces de salmonelles. Ce milieu est coulé dans le grand compartiment de la boîte de pétri divisé en un grand et deux petits compartiments. Les deux petits reçoivent respectivement le mannitol-salt agar, pour la mise en évidence de staphylocoques mannitol positifs, et le milieu selon Sabouraud, ce dernier rendu électif à l'égard des mycoses, Candida compris, par l'adjonction d'un ou plusieures produits à action antibactérienne. On a ainsi un ensemble de milieux qui permet d'isoler et d'identifier les germes responsables de troubles de la voie digestive. In the previous example, the possible growth of enterococcus on our environment with clyndamycin constitutes an advantage: the typical aptitude of its colonies makes it possible to immediately identify this pathogen of the urinary tract. On the other hand, its highlighting in stool cultures has no interest because it belongs to the physiological flora of the intestine. We then tested various antibiotics and chemotherapeutics capable of electively preventing their growth, to find that it suffices to add the medium of a macrolide, erythromycin at the rate of 4 milligrams per liter for example. Adapted to stool cultures, our environment therefore contains, in addition to clindamycin or lin-comycin, lactose, erythromycin or rovamycin, and a ferric salt, the latter so that salmonella colonies are noticed by their blackening due to the interaction between iron and sulfur hydroxide formed by the majority of salmonella species. This medium is poured into the large compartment of the petri dish divided into a large and two small compartments. The two young receive respectively the mannitol-salt agar, for the demonstration of positive mannitol staphylococci, and the medium according to Sabouraud, this last made elective with regard to the mycoses, Candida included, by the addition of one or more antibacterial products. We thus have a set of environments which makes it possible to isolate and identify the germs responsible for disorders of the digestive tract.

Les exemples donnés ne sont pas limitatifs: les poids et les volumes mentionnés peuvent varier suivant l'origine des produits, le degré d'électivité et l'intensité de réaction que l'on désire obtenir. Ainsi, pour les daltoniens il peut être utile de choisir le bleu de chine comme indicateur d'acidité. Aussi, la conception de la doublure des cloisons est applicable à tous les supports pour milieux de culture compartimentés et les supports peuvent avoir un nombre plus grand de secteurs. The examples given are not limiting: the weights and volumes mentioned may vary depending on the origin of the products, the degree of electivity and the reaction intensity which it is desired to obtain. Thus, for color blind people it may be useful to choose china blue as an indicator of acidity. Also, the design of the partition lining is applicable to all supports for compartmentalized culture media and the supports can have a greater number of sectors.

Claims

1. Support for microbiological culture media, characterized in that its surface is divided into several sectors delimited by straight edges and that there is a slit between the adjacent sectors.

2. Support for microbiological culture media, consisting of a petri dish, characterized in that its surface is divided into several sectors by two straight partitions, rising from the bottom of the dish without reaching the upper level of the edge of this, one of which crosses the box in the middle, or near the middle and the other extends from the first perpendicularly.

3. Support for microbiological culture media, consisting of a petri dish, characterized in that its surface is divided into several sectors by three straight partitions, rising from the bottom of the dish without reaching the upper level of the edge of this, two of which extend from the edge of the box to meet perpendicular to the middle of the box and a third which extends between their junction and the opposite edge of the box, so as to divide the rest of the surface at middle in two big sectors.

4. Support for microbiological culture media, consisting of a square petri dish, characterized in that its surface is divided into several sectors by three straight partitions, which rise from the bottom of the dish without reaching the upper level of the edge of this, one of which crosses the box in the middle, or near the middle and the other two each extend perpendicularly from the first to about a third of its length.

5. Support according to one of the preceding claims, characterized in that it is provided with lined straight partitions, bordering slots between the sectors.

6. Support for microbiological culture media, consisting of a petri dish, characterized in that its surface is divided into two sectors by a straight lined partition, bordering a slot between the two sectors and which rises from the bottom of the box without reaching the upper level of the edge of the latter.

7 Support according to one of claims 5 and 6, characterized in that the opposite faces of the lined partitions are bridged lengthwise, so that the slot is closed.

8. Use of the support according to one of the preceding claims, characterized in that the sectors are provided with complementary elective and / or selective culture media, intended to obtain the separation into different groups of the different kinds of germs possibly present in the inoculum .

9. Use of the support according to claim 8, characterized in that the electivity or the selectivity of at least one of the culture media is obtained by the addition of one or more antibiotic (s) and / or chemotherapeutic (s) ) and / or other suitable inhibitory substance (s).

10. Use of the support according to claim 8, characterized in that the, or one of the large (s) sector (s) is provided with a medium enriched or not with blood serum and containing sucrose and / or lactose, as well a pH indicator dye, with or without the addition of components making it possible to detect colonies of germs capable of producing PH2S and which is made elective with regard to gram-negative germs by the addition of one or more antibiotics ( s) and / or chemotherapeutics and / or other appropriate inhibitory substance (s).

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