CH687080A5

CH687080A5 - Combinaisons de milieux de cultures microbiologiques complémentaires.

Info

Publication number: CH687080A5
Application number: CH327092A
Authority: CH
Inventors: Eduard Dr Engelbrecht
Original assignee: Eduard Dr Engelbrecht
Priority date: 1992-10-22
Filing date: 1992-10-22
Publication date: 1996-09-13

Description


  
 



  Dans bon nombre de cultures microbiologiques, notamment dans le domaine médical, le technicien est confronté à l'apparition sur le(s) milieu(x) de culture d'un multitude de colonies appartenant à des espèces différentes, parmi lesquelles il doit chercher le(s) germe(e) pathogène(s) en cause en se basant sur l'aspect des colonies. Du fait que les colonies de germes non pathogènes présentent souvent les mêmes aspects que les colonies du/des germe(s) recherché(s), il est obligé de prélever un nombre parfois assez grand de colonies présentant le même aspect, pour inoculer par la suite avec chacun des prélèvements un ou plusieurs milieux spéciaux, afin de pouvoir identifier le(s) germe(s) pathogène(s) à l'origine de l'infection. Cette façon de travailler est non seulement fastidieuse, mais comporte aussi le risque de manquer le germe en cause.

  Nous avons alors mené des recherches afin d'obtenir des combinaisons de milieux de culture microbiologiques électifs et/ou sélectifs permettant la séparation en de différents groupes des germes présents dans l'échantillon, voire d'isoler directement le germe en cause, suivant le caractère électif ou sélectif des milieux utilisés. Nos recherches ont abouti à un nombre de combinaisons de milieux, dont certains sont marqués par l'addition d'un inhibiteur électif de croissance bactérienne original. Les milieux sont soit coulés dans les différents compartiments de boîtes de pétri divisées en deux, trois, ou quatre compartiments, soit coulés dans des boîtes de pétri individuelles, qui sont présentées sous forme d'ensembles, soit encore distribués groupés dans des récipients fermés hermétiquement au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon, en fonction de la nature du prélèvement. 



  La coloration des germes suivant la technique selon Gram,  permet de les diviser en deux grands groupes: de l'une part les germes dits "à gram positifs", qui retiennent le méthyl-violet lors d'un bref rinçage à l'alcool et qui apparaissent bleu foncé à l'examen microscopique, de l'autre part les germes dits "à gram négatifs", qui perdent le méthyl-violet lors du rinçage à l'alcool et qui prennent la couleur rouge quand ils sont ensuite colorés avec de la safranine ou de la fuchsine. L'intérêt en est qu'on peut inhiber électivement la croissance des germes de l'une ou de l'autre groupe en ajoutant aux milieux de culture une ou plusieurs substance(s) à action inhibitrice élective.

  A titre d'exemples: en ajoutant par litre de milieu environ 5 mg de colimycine, ou 0,3 mg de polymyxine-B, ou de l'azide de sodium à une concentration de 1:15 000, on empèche la croissance de la quasi totalité des germes à gram négatifs en faveur des germes à gram positifs. Lorsqu'on ajoute l'azide de sodium à une concentration de 1:5000, seuls les streptocoques et les staphylocoques poussent encore sur le milieu, et ajouté à une concentration de 1:2500 le milieu devient électif à l'égard des streptocoques. Par contre, quand on ajoute au litre de milieu quelques mg de vancomycine, ou 1 mg de méthyl-violet, la croissance de la quasi totalité des germes à gram positifs est inhibée en faveur des germes à gram négatifs.

  Par l'adjonction par litre de milieu de quelques mg de vancomycine, ou de lincomycine, d'environ 7 mg de colimycine, ou 0,3 mg de polymyxine-B, et de 3 à 5 mg de triméthoprim, seules les levures et les Candida species peuvent pousser. En enrichissant ce milieu avec 4 à 7 pour cent d'effusion d'ascite, ou de sérum sanguin, ou du sang frais ou dénaturé, les espèces pathogènes de Neisseria peuvent pousser en plus, si l'atmosphère contient 5 à 7 pour cent de dioxyde de carbone, tandis que plusieurs espèces de bacilles à gram négatifs anaérobies, notamment Bacillus subtilus et Campylobacter jejuni, peuvent développer des colonies quand l'incubation se fait en l'absence quasi totale d'oxygène. S'il est préférable d'empêcher la croissance de levures et de Candida species, on ajoute encore 1 mg d'amphotéricine-B, ou 12 500 unités internationales de nystatine. 



  Bien que la colimycine et la polymyxine-B inhibent la croissance de la quasi totalité des germes à gram négatifs, certaines Proteus species peuvent encore pousser en leur présence. Au cas où leur croissance peut gêner, on peut encore additionner le milieu d'environ 10 mg d'acide nalidixique par litre. 



  La croissance de l'ensemble des bactéries anaérobies peut être favorisée au détriment de la plupart des autres germes en additionnant les milieux de culture de 100 mg de néomycine par litre, en plus de 10 mg de vitamine K 1. 



  Pour obtenir un milieu qui ne permet que la croissance de staphylocoques, il suffit de l'additionner de 7,5 à 8 pour cent de chlorure de sodium, et un milieu électif à l'égard des Vibrio species est obtenu en ajustant le pH entre 8,5 et 9. 



  En prenant en considération les différents germes recherchés dans les divers échantillons et en nous basant sur les principes énoncés ci-dessus, nous avons élaboré des combinaisons de milieux de culture électifs et/ou sélectifs complémentaires, dont voici quelques exemples non limitatifs: 


 Premier exemple: 
 



  Un milieu à base de gélose nutritive, Columbia agar ou autre, contenant 4 à 6 pour cent de sang stérile de mouton et 5 mg de colistine méthane sulfonate ainsi qu'un antimycotique, 8 mg de nystatine par exemple, par litre, auquel on peut encore ajouter 10 mg d'acide nalidixique, combiné avec un milieu à base de gélose nutritive, Columbia agar ou autre, additionné de 30 ml de sérum stérile de cheval, 10 grammes de saccharose, des "facteurs de croissance" (Merck 10 730, par exemple) et un colorant indicateur de pH, 35 mg de rouge neutre par exemple, par litre, auquel on peut ajouter 10 grammes de lactose, ou encore un produit sulfuré et un sel ferreux pour la détection d'une production de H2S.

  Le milieu est rendu électif à l'égard des germes à gram négatifs au détriment des germes à gram positifs, à l'exception des levures et Candida species et, éventuellement, de l'entérocoque, par l'adjonction d'une  substance inhibitrice élective, 10 mg de clindamycine, ou 3 mg de vancomycine, ou 1 mg de méthylviolet, par exemple. De par la présence de colimycine les germes à gram négatifs ne peuvent pas se développer sur la gélose au sang, à l'exception toutefois des Neisseria species et de certaines Proteus species dans la mesure où le milieu ne contient pas de l'acide nalidixique. Les levures et les Candida species sont les seuls germes à gram positifs qui ne peuvent pas pousser sur ce milieu, puisque leur croissance est inhibée par la nystatine.

   La taille, la forme, la couleur et la présence ou non d'une zone d'hémolyse complète ou partielle autour des colonies de certaines espèces, permet de reconnaître les colonies des différentes espèces capables de se développer sur ce milieu. 



  La croissance des germes à gram positifs est inhibée sur le milieu au sérum de cheval, à cause de la présence de la substance inhibitrice, à l'exception des levures et Candida species et, éventuellement, l'entérocoque. Par contre, toutes les espèces de germes à gram négatifs peuvent former des colonies sur ce milieu, y compris les Neisseria et Haemophilus species, qu'on peut différencier d'après leur taille, leur forme et degré d'opacité. De plus, les colonies dégradant un sucre présent dans ce milieu, deviennent acide et prennent la couleur correspondante du colorant indicateur de pH, tandis que si le milieu contient les détecteurs de H2S, les colonies H2S-positives se noircissent.

  Or, l'Haemophilus influenzae et les Neisseria meningitidis et gonorrhoea ne sont pas capables de dégrader le saccharose, ni le lactose, ceci contrairement aux souches considérées comme non pathogènes de ces espèces. Par conséquent, en combinant ces deux milieux électifs on obtient un ensemble qui se prête spécialement à l'examen des prélèvements de l'urètre, du cervix, d'expectoration, de plaies, ainsi que d'origine oto-rhino-laryngologique et ophthalmologique. 


 Deuxième exemple: 
 



  Afin de mieux déceler les gonocoques éventuellement présents dans les prélèvements génitaux, on désire souvent pouvoir  également inoculer un milieu qui ne permet que la croissance de ce germe. Le milieu préféré est le milieu selon Thayer et Martin, enrichi de sang de mouton lysé ou dénaturé par chauffage pendant 30 minutes à 80 DEG C, additionné de facteurs de croissance et d'un mélange de 2 à 3 mg de vancomycine, 7,5 mg de colistine-(méthane)-sulphonate, 5 mg de triméthoprim et 12 500 unités internationales de nystatine, ou 1 mg d'amphotéricine-B. On peut alors couler les deux milieux de l'exemple précédent dans deux compartiments d'une boîte de pétri à 3 compartiments et munir le troisième compartiment du dit milieu. 


 Troisième exemple: 
 



  Listeria monocytogenes, Streptococcus pyogenes sérotype B, Neisseria gonorrhoea et Staphylococcus aureus, quand ils colonisent le cervix, peuvent se transmettre à l'enfant lors de l'accouchement et provoquer une infection grave. C'est pourquoi les obstétriciens demandent souvent la recherche de ces germes peu avant la date prévue de l'accouchement. En choisissant des milieux électifs à l'égard de ces germes, on peut les répartir dans une boîte de pétri à quatre compartiments.

  Les milieux préférés sont:
 - la gélose sélective à l'égard de Listeria monocytogenes selon Feindt (Merck 10986),
 - pour l'isolement de streptocoques le milieu de Slanetz et Bartley, comprenant de l'azide de sodium à une concentration de 1:2.500, enrichi de 3 à 4 pour cent de sérum de cheval ou, pour mieux déceler Streptococcus pyogenes, avec 4 à 6 pour cent de sang de mouton,
 - pour la mise en évidence de Neisseria gonorrhoea, le milieu de Thayer et Martin, enrichi de la manière décrite dans le deuxième exemple,
 - pour l'identification de Staphylococcus aureus, le milieu de Chapman, électif à l'égard des staphylocoques par la présence de chlorure de sodium à une concentration de 7,5 pour cent, sur lequel Staphylococcus aureus forme des colonies jaunes de par la formation d'acide à partir du mannitol, provoquant un virement au jaune du rouge de phénol. 



  On peut évidemment aussi présenter ces quatre milieux en forme d'un jeu composé de deux boîtes de pétri comportant deux compartiments chacune, en les répartissant sur les deux boîtes, par exemple en combinant les milieux pour Listeria monocytogenes et Neisseria gonorrhoea dans une boîte et les milieux de Chapman et de Slanetz et Bartley dans l'autre. 


 Quatrième exemple: 
 



  Les germes responsables des infections de la voie urinaire sont notamment les bacilles à gram négatifs aérobies, les staphylocoques et l'entérocoque. Pour leur isolement on peut combiner un milieu lactosé rendu électif à l'égard des germes à gram négatifs, Mc Conkey par exemple, qui contient du crystalviolet, auquel on peut encore ajouter un produit sulfuré et un sel ferreux afin de détecter une formation de H2S, ainsi qu'un milieu sélectif pour l'entérocoque, celui de Slanetz et Bartley par exemple, et un milieu sélectif pour les staphylocoque, comme le milieu de Chapman. 



  Un autre possibilité consiste à combiner le milieu électif lactosé avec la gélose Columbia agar additionné de 3 mg de colimycine ou 0,3 mg de polymyxine-B par litre, enrichi ou non de 3 à 6 pour cent de sang de mouton, auquel on peut encore ajouter 10 mg d'acide naladixique. Cette combinaison permet la séparation entre bâtonnets à gram négatifs et germes à gram positifs. 


 Cinquième exemple: 
 



  En cas de troubles (gastro)-intestinaux le laboratoire fait la recherche dans les selles de certains germes aérobies, notamment des salmonelles, des shigelles, de Yersinia enterocolitica, ainsi que des colibacilles entéropathogènes lorsqu'il s'agit d'un bébé, de staphylococcus aureus et, eventuellement, de Candida albicans. 



  Pour l'isolement de salmonelles et de shigelles on utilise le plus souvent le milieu dit "SS", pour la raison que les autres germes sont pour la plupart inhibés. Sur les milieux solidifiés lactosés à colorant indicateur de pH, les salmonelles, shigelles et Yersinia enterocolitica forment des  colonies incolores du fait qu'ils ne dégrade pas le lactose et, de ce fait, ne deviennent pas acide, ce qui est aussi le cas pour Pseudomonas aeruginosa, les espèces pathogènes de Vibrio et d'Aeromonas et les Proteus species, germes qui sont parfois la cause de diarrhée aigues. Les milieux lactosés à indicateur de pH permettent ainsi de reconnaître les bacilles lactose-négatifs et, lorsque le milieu contient en plus un produit sulfuré et un sel ferreux, les bacilles H2S-positifs.

  Dans les cas de diarrhée infantile la culture montre un nombre important de colonies lactose positives, formées par les colibacilles entéropathogènes, que l'on peut alors identifier par séro-agglutination directe sur lame. 



   Pour la recherche de Staphylococcus aureus on peut utiliser le milieu de Chapman, qui présente encore l'avantage qu'il permet aussi la croissance de Bacillus cereus, qui peut, lui-aussi, provoquer des troubles gastro-intestinaux. 



  Pour l'isolement de Candida albicans on préfère généralement le milieu de Sabouraud, qu'on peut rendre électif à l'égard des Candida, levures et moisissures par l'adjonction de 2 mg de vancomycine, 5 mg de colistine et 3 mg de triméthoprim. Contrairement aux moisissures, les levures et les Candida species développent des colonies dans une vingtaine d'heures. Les colonies de Candida albicans se distinguent par la forme "en étoile" de leurs colonies. 



  Pour l'examen des selles nous proposons de combiner dans deux boîtes de pétri, dont un au moins est divisées en deux, le milieu de Chapman, celui de Sabouraud aux trois composants anti-bactériens et celui de Mc Conkey avec ou sans produits pour la détection de H2S et/ou un milieu sélectif pour salmonelles et shigelles, "SS" par exemple. Ce jeu convient aussi pour l'examen microbiologique des denrées alimentaires.

  Lorsque l'analyse se limite à la recherche de salmonelles et de shigelles, de staphylocoque doré et de Bacillus cereus, des espèces de Candida et de levures, et de Listeria monocytogenes, nous proposons un ensemble de quatre milieux contenus dans une boîte de pétri divisée en quatre compartiments, en combinant le milieu "SS", enrichi de 2 à 3 gram par litre d'extrait de viande supplémentaires pour  favoriser la croissance des shigelles, le milieu de Chapman, le milieu de Sabouraud aux antibiotiques, ainsi qu'un milieu sélectif à l'égard de Listeria monocytogenes, le milieu de Feindt, par exemple, qui est sélectif par la présence de 10 mg de trypaflavine, en plus de 40 mg d'acide nalidixique par litre, auquel on peut encore ajouter 7 à 8 mg de colimycine.

  Comme le jeu précédent cet ensemble peut également servir à la recherche des principaux germes entéropathogènes dans les denrées alimentaires. 


 Sixième exemple: 
 



  Dans l'eau potable, l'eau de surface et l'eau des piscines on fait la recherche des germes coliformes, par lesquels on entend les bâtonnets à gram négatifs capables de fermenter le lactose au cours de 24 heures d'incubation, ainsi que les salmonelles, les shigelles, l'entérocoque et, pour l'eau de piscine, les principales espèces de Pseudomonas. A l'opposé des bacilles coliformes, ces dernières, ainsi que les salmonelles et les shigelles ne dégradent pas le lactose. De plus les espèces courantes de salmonelles sont en mesure de dégrader des composés sulfurés avec formation de H2S, ce qui aboutit dans le noircissement du centre de leurs colonies quand le milieu contient un sel ferreux.

  Nous proposons alors la combinaison du milieu de Slanetz et Bartley pour la détection de l'entérocoque, avec un milieu à un pour cent de lactose et un colorant indicateur d'acidité, Mc Conkey, China blue lactose agar, ou bromothymol lactose agar, tous livrables par Merck, additionné ou non d'une substance inhibitrice de germes à gram positifs, 1 mg de cristal-violet par litre, par exemple, du thiosulfate de sodium à raison de 4 à 6 grammes par litre et environ 2 grammes de citrate de fer, ou 200 à 400 mg de sulfate de fer par litre, complétée ou non avec le milieu "SS", éventuellement enrichi de 2 à 3 grammes supplémentaires d'extrait de viande par litre et/ou le milieu de Chapman. 


 Septième exemple: 
 



  Campylobacter gastrii peut provoquer une gastrite résultant  en la formation d'ulcères et Campylobacter jejuni peut être à l'origine d'une entérocolite aiguë, tandis que Clostridium difficile peut causer une colite membraneuse dangereuse au cours d'un traitement aux certains antibiotiques. Pour la détection de ces germes anaérobies nous proposons un jeu composé d'un milieu solidifié enrichi de facteurs de croissance et de 4 à 7 pour cent de sérum ou de sang lysé ou dénaturé par chauffage à 80 DEG C pendant 30 minutes et rendu sélectif à l'égard des différentes Campylobacter species par l'adjonction de 3 mg de vancomycine, 7,5 mg de colimycine et 5 mg de triméthoprim par litre, combiné avec un milieu solidifié enrichi de 5 à 7 pour cent de sang de mouton ou de cheval et rendu sélectif à l'égard de Clostridium difficile par l'adjonction de 2 grammes de phénol ou de paracrésol,

   ou de 500 mg de D-cyclosérine et 8 mg de céfoxitine par litre. Suite à l'inoculation, l'incubation à lieu dans un atmosphère anaérobie comprenant 5 pour cent de dioxyde de carbone. 



  Certains des germes pathogènes d'origine fécale perdent assez rapidement leur viabilité pendant le temps qui s'écoule entre le moment du prélèvement de l'échantillon et sa mise en culture à cause de l'exposition à l'air, le déssèchement et la présence ou la formation d'acide. Il est donc souhaitable de recueillir l'échantillon dans un milieu stabilisant. A cet effet, nous avons mis au point un milieu composé d'un soluté tamponné neutralisant, celui fourni par Difco, par exemple (Difco B362), auquel nous ajoutons 2 mg par litre de griséofulvine pour empêcher la prolifération de dermatophytes, et 10 à 12 grammes par litre de gélatine. De par la présence de la gélatine le milieu est solide tant que la température ne dépasse pas les 28 DEG C.

  Le prélèvement est introduit dans le récipient qui est ensuite placé dans de l'eau chaude à la main pour faire fondre la gélatine afin que l'échantillon puisse descendre au fond, ou se disperser. Après solidification de la gélatine par refroidissement, le récipient est envoyé au laboratoire, où la gélatine est de nouveau fondue et aspirée. 



   Les exemples donnés ne sont pas limitatifs: le laboratoire peut préférer d'autres fournisseurs, ou choisir d'autres milieux de culture qui présentent l'électivité ou la sélectivité exposées. Aussi, on peut modifier le choix, ou la concentration des constituants, des milieux en fonction du degré d'intensité des réactions ou de l'électivité qu'on désire obtenir, que ce soit déjà pour la raison que les mêmes produits fournis par les différents fournisseurs n'ont pas toujours les mêmes caractéristiques, ou pour la détection d'une éventuelle formation d'H2S comme exposé dans le sixième exemple. On peut également préféré de présenter les combinaisons sous forme d'ensembles composés de boîtes de pétri non compartimentées qui contiennent chacune un des milieux complémentaires, ou de récipients bouchonnés ou capuchonnés, munis des dits milieux complémentaires.

Claims

1. Combinaison d'au moins deux milieux de culture microbiologique, caractérisés en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une électivité ou sélectivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenues par l'adjonction d'une ou de plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s) et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîtes de pétri divisées en compartiments et/ou de récipients fermés au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon, dont l'un est un milieu solidifié enrichi de sang et rendu électif à l'égard des germes à gram positifs, à l'exclusion ou non des levures et Candida species, combiné avec un milieu solidifié, enrichi de sérum sanguin et/ou de facteurs de croissance et qui contient un colorant indicateur de pH,

du saccharose et/ou du lactose et/ou un produit sulfuré ensemble avec un sel ferreux à des concentrations permettant de déceler une formation de H2S, rendu électif à l'égard des germes à gram négatifs et/ou avec un milieu enrichi de facteurs de croissance et/ou de sérum sanguin, ou de sang frais, lysé, ou dénaturé, ou d'effusion d'ascite stérile, rendu sélectif à l'égard des Neisseria pathogènes.

2.

Combinaison d'au moins quatre milieux de culture microbiologique solidifiés, caractérisée en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une électivité ou sélectivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenues par l'adjonction d'une ou plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s) et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîtes de pétri divisées en compartiments et/ou de récipients fermés au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon, dont un est rendu sélectif à l'égard des streptocoques, enrichi de sérum sanguin ou de sang, un est rendu sélectif à l'égard des Neisseria pathogènes, enrichi de sérum sanguin ou de sang frais, lysé, ou dénaturé, ou d'effusion d'ascite,

un est rendu sélectif à l'égard de Listeria monocytogenes et un est rendu sélectif à l'égard des staphylocoques.

3. Combinaison d'au moins trois milieux de culture microbiologique, caractérisés en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une électivité ou sélectivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenues par l'adjonction d'une ou de plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s) et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîtes de pétri divisées en compartiments et/ou de récipients fermes au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon comprenant un milieu solidifié rendu électif à l'égard des germes à gram négatifs contenant du lactose et un colorant indicateur de pH ou du lactose et un colorant indicateur de pH,

ainsi qu'un produit sulfuré et un sel ferreux à des concentrations permettant de déceler une formation de H2S, un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard de l'entérocoque et un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des staphylocoques.

4. Combinaison d'au moins deux milieux de culture microbiologique, caractérisée en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une électivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenue par l'adjonction d'une ou de plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s) et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîtes de pétri divisées en compartiments et/ou de récipients fermés au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon, sont l'un est un milieu solidifié, enrichi ou non de sang,

qui est rendu électif à l'égard des germes à gram positifs et l'autre est un milieu solidifié contenant du lactose et un colorant indicateur de pH, ainsi qu'un produit sulfuré et un sel ferreux à des concentrations permettant de déceler une formation de H2S et rendu électif à l'égard des germes à gram négatifs.

5.

Combinaison d'au moins trois milieux de culture microbiologique, caractérisés en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une électivité ou sélectivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenues par l'adjonction d'une ou de plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s) et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîtes de pétri divisées en compartiments et/ou de récipients fermés au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon, combinant un milieu solidifié, rendu électif à l'égard des germes à gram négatifs, contenant du lactose et un colorant indicateur de pH, ou du lactose un colorant indicateur de pH ainsi qu'un produit sulfuré ensemble avec un sel ferreux permettant de déceler une formation de H2S,

avec un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des staphylocoques et de Bacillus cereus et un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des levures et Candida species et/ou un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des salmonelles et shigelles.

6. Combinaison d'au moins quatre milieux de culture microbiologique, caractérisée en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une sélectivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenue par l'adjonction d'une ou de plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s), et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîtes de pétri divisées en compartiments et/ou de récipients fermés au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon,

dont un est un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des salmonelles et shigelles et contenant un produit sulfuré et un sel ferreux permettant de reconnaître les colonies de salmonelles formatrices de H2S un est un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des staphylocoques et de Bacillus cereus, un est un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard de Listeria monocytogenes et un est un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des levures et Candida species.

7.

Combinaison d'au moins deux milieux de culture microbiologique, caractérisés en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une électivité ou sélectivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenues par l'adjonction d'une ou de plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s) et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîte de pétri divisées en compartiments et/ou de récipients fermés au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon, dont l'un est un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard de l'entérocoque et l'autre est un milieu solidifié contenant du lactose et un colorant indicateur de pH,

ainsi qu'une ou plusieurs substances inhibant la croissance des germes à gram positifs et/ou un produit sulfuré ensemble avec un sel ferreux permettant de déceler une formation de H2S, combinés ou non avec un milieu solidifié sélectif à l'égard des salmonelles et shigelles, additionné d'un produit sulfuré et un sel ferreux permettant de déceler une formation de H2S et/ou un milieu solidifié sélectif à l'égard des staphylocoques et de Bacillus cereus.

8.

Combinaison d'au moins deux milieux de culture microbiologique, caractérisés en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une électivité ou sélectivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenues par l'adjonction d'une ou de plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s) et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîtes de pétri divisées en compartiments et/ou de récipients fermés au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon dont un est un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des Vibrio species et que ce milieu sélectif à l'égard des Vibrio species est combiné avec un milieu solidifié contenant du lactose et un colorant indicateur de pH,

ou du lactose et un colorant indicateur de pH ainsi qu'un produit sulfuré et un sel ferreux à des concentrations permettant de déceler une formation de H2S, rendu électif à l'égard des germes à gram négatifs et/ou avec un milieu solidifié contenant du lactose et un colorant indicateur de pH ainsi qu'un produit sulfuré et un sel ferreux à des concentrations permettant de déceler une formation de H2S, rendu sélectif à l'égard des salmonelles et shigelles.

9.

Combinaison d'au moins deux milieux de culture microbiologique, caractérisés en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une électivité ou sélectivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenues par l'adjonction d'une ou de plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s) et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîtes de pétri divisés en compartiments et/ou de récipients fermés au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon, dont l'un est un milieu solidifié, enrichi de sérum sanguin, ou d'effusion d'ascite,

ou de sang frais ou lysé ou dénaturé par chauffage et/ou de facteurs de croissance et/ou d'une ou de plusieurs substance(s) inhibant la croissance de levures et de Candida species et qui est rendu sélectif à l'égard des Campylobacter species et l'autre est un milieu enrichi de sang et qui est rendu sélectif à l'égard de Clostridium difficile.

10.

Milieu de survie de germes, destiné à assurer la mise en culture des germes recherchés éventuellement présents dans le prélèvement par l'inoculation d'une des combinaisons de milieux de culture selon une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il est tamponné à un pH d'environ 7,2 et qu'il contient au moins une substance capable de neutraliser les base ammoniacales quaternaires et les produits chlorés, ainsi que de la griseofulvine à une concentration suf fisante pour empêcher la prolifération des dermatophytes et qu'il est solide jusqu'à une température d'environ 28 DEG centigrades et liquide à une température plus élevée. 1. Combinaison d'au moins deux milieux de culture microbiologique, caractérisés en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une électivité ou sélectivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenues par l'adjonction d'une ou de plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s) et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîtes de pétri divisées en compartiments et/ou de récipients fermés au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon, dont l'un est un milieu solidifié enrichi de sang et rendu électif à l'égard des germes à gram positifs, à l'exclusion ou non des levures et Candida species, combiné avec un milieu solidifié, enrichi de sérum sanguin et/ou de facteurs de croissance et qui contient un colorant indicateur de pH,

du saccharose et/ou du lactose et/ou un produit sulfuré ensemble avec un sel ferreux à des concentrations permettant de déceler une formation de H2S, rendu électif à l'égard des germes à gram négatifs et/ou avec un milieu enrichi de facteurs de croissance et/ou de sérum sanguin, ou de sang frais, lysé, ou dénaturé, ou d'effusion d'ascite stérile, rendu sélectif à l'égard des Neisseria pathogènes. 2.

un est rendu sélectif à l'égard de Listeria monocytogenes et un est rendu sélectif à l'égard des staphylocoques. 3. Combinaison d'au moins trois milieux de culture microbiologique, caractérisés en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une électivité ou sélectivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenues par l'adjonction d'une ou de plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s) et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîtes de pétri divisées en compartiments et/ou de récipients fermes au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon comprenant un milieu solidifié rendu électif à l'égard des germes à gram négatifs contenant du lactose et un colorant indicateur de pH ou du lactose et un colorant indicateur de pH,

ainsi qu'un produit sulfuré et un sel ferreux à des concentrations permettant de déceler une formation de H2S, un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard de l'entérocoque et un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des staphylocoques. 4. Combinaison d'au moins deux milieux de culture microbiologique, caractérisée en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une électivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenue par l'adjonction d'une ou de plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s) et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîtes de pétri divisées en compartiments et/ou de récipients fermés au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon, sont l'un est un milieu solidifié, enrichi ou non de sang,

qui est rendu électif à l'égard des germes à gram positifs et l'autre est un milieu solidifié contenant du lactose et un colorant indicateur de pH, ainsi qu'un produit sulfuré et un sel ferreux à des concentrations permettant de déceler une formation de H2S et rendu électif à l'égard des germes à gram négatifs. 5.

avec un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des staphylocoques et de Bacillus cereus et un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des levures et Candida species et/ou un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des salmonelles et shigelles. 6. Combinaison d'au moins quatre milieux de culture microbiologique, caractérisée en ce qu'ils sont choisis pour être complémentaires par une sélectivité à l'égard des différents germes recherchés, obtenue par l'adjonction d'une ou de plusieurs antibiotique(s) et/ou chimiothérapeutique(s) et/ou autre(s) substance(s) inhibitrice(s) appropriée(s) à concentration(s) optimale(s), et combinés dans des ensembles constitués de boîtes de pétri individuelles et/ou de boîtes de pétri divisées en compartiments et/ou de récipients fermés au moyen d'un bouchon ou d'un capuchon,

dont un est un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des salmonelles et shigelles et contenant un produit sulfuré et un sel ferreux permettant de reconnaître les colonies de salmonelles formatrices de H2S un est un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des staphylocoques et de Bacillus cereus, un est un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard de Listeria monocytogenes et un est un milieu solidifié rendu sélectif à l'égard des levures et Candida species. 7.

ainsi qu'une ou plusieurs substances inhibant la croissance des germes à gram positifs et/ou un produit sulfuré ensemble avec un sel ferreux permettant de déceler une formation de H2S, combinés ou non avec un milieu solidifié sélectif à l'égard des salmonelles et shigelles, additionné d'un produit sulfuré et un sel ferreux permettant de déceler une formation de H2S et/ou un milieu solidifié sélectif à l'égard des staphylocoques et de Bacillus cereus. 8.

ou du lactose et un colorant indicateur de pH ainsi qu'un produit sulfuré et un sel ferreux à des concentrations permettant de déceler une formation de H2S, rendu électif à l'égard des germes à gram négatifs et/ou avec un milieu solidifié contenant du lactose et un colorant indicateur de pH ainsi qu'un produit sulfuré et un sel ferreux à des concentrations permettant de déceler une formation de H2S, rendu sélectif à l'égard des salmonelles et shigelles. 9.

ou de sang frais ou lysé ou dénaturé par chauffage et/ou de facteurs de croissance et/ou d'une ou de plusieurs substance(s) inhibant la croissance de levures et de Candida species et qui est rendu sélectif à l'égard des Campylobacter species et l'autre est un milieu enrichi de sang et qui est rendu sélectif à l'égard de Clostridium difficile. 10.

Milieu de survie de germes, destiné à assurer la mise en culture des germes recherchés éventuellement présents dans le prélèvement par l'inoculation d'une des combinaisons de milieux de culture selon une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il est tamponné à un pH d'environ 7,2 et qu'il contient au moins une substance capable de neutraliser les base ammoniacales quaternaires et les produits chlorés, ainsi que de la griseofulvine à une concentration suf fisante pour empêcher la prolifération des dermatophytes et qu'il est solide jusqu'à une température d'environ 28 DEG centigrades et liquide à une température plus élevée.